PREPARACION FARMACEUTICA QUE COMPRENDE UN ANTICUERPO CONTRA EL RECEPTOR EGF
Campo de la invención La presente invención se refiere a una preparación farmacéutica estable que comprende un anticuerpo dirigido contra el receptor de factor de crecimiento epidérmico (EGFR) , y a su preparación y a su uso. Antecedentes de la invención Diversos estudios in vitro e in vivo han demostrado que el bloqueo de EGFR por anticuerpos actúa contra los tumores a varios niveles, por ejemplo por inhibición de la proliferación de las células cancerosas, la reducción de la angiogénesis mediada por tumor, la inducción de la apoptosis de las células cancerosas y el aumento de los efectos tóxicos de la radioterapia y la quimioterapia convencionales . MAB c225 (INN: cetuximab) es un anticuerpo clínicamente probado que se une al receptor de EGF. Cetuximab es un anticuerpo quimérico cuyas regiones variables tienen origen murino y cuyas regiones constantes tienen origen humano. Cetuximab fue descrito por primera vez por Naramura et(al., Cáncer Immunol. I munotherapy 1993, 37: 343-349 y en el documento WO 96/40210 Al. MAB 425 es un anticuerpo originalmente murino que se dirige contra EGFR con expresión excesiva en células
REF . : 172315 turaorales, en particular células A431 de carcinoma. Sus formas humanizada y quimérica se describen, por ejemplo, en el documento EP 0 531 472 Al; Kettleborough et al., Protein Engineering 1991, 4: 773-783; Bier et al .,. Cáncer Chempther. Pharmacol. 2001, 47: 519-524; Bier et al., Cáncer Immunol . Immunother. 1998, 46: 167-173. E D 72000 (b.425) es una forma de MAB 425 que está en fase clínica I/II y cuya región constante se compone de una cadena K y una cadena humana ?-l . Se pueden proveer anticuerpos anti-EGFR humanos mediante tecnología XenoMouse, como se describe en los documentos WO 91/10741 Al, WO 94/02602 Al y WO 96/33735 Al. Un anticuerpo específico producido mediante esta tecnología que en la actualidad es sometido a estudios clínicos es ABX-EGF (Abgenix, Crit. Rev. Oncol . Hematol . 2001, 38: 17-23; Cáncer Research 1999, 59: 1236-43) . Otros anticuerpos dirigidos contra EGFR se describen, por ejemplo, en el documento EP 0 586 002 Bl y en J. Nati. Cáncer Inst . 1993, 85: 27-33 (MAB 528). Al igual que otros anticuerpos, los anticuerpos anti-EGFR también se aplican por vía parenteral como una solución para uso terapéutico. Un problema particular de las soluciones que comprenden estos anticuerpos es su tendencia a la agregación y la formación de multímeros de proteína. En el caso de multímeros reducibles, esto se puede atribuir a la formación no intencional de puentes de disulfuro intermoleculares debido a una interacción entre partes de moléculas cercanas . También son posibles las interacciones idrofóbicas y la consecuente formación de multímeros no reducibles. Además, también se producen reacciones de desamidación, que luego dan por resultado reacciones de degradación de proteínas. Las reacciones de desnaturalización antes descritas tienen lugar, en particular, durante el almacenamiento a alta temperatura o durante el esfuerzo de cizallamiento, como ocurre, por ejemplo, durante el transporte. Como consecuencia de dicha tendencia a la agregación, se forman productos de precipitación durante el almacenamiento de soluciones de anticuerpo, lo que implica que es dudosa la extracción reproducible del contenedor que contiene la solución. Además, se pueden producir embolias con la administración parenteral de la solución que contiene partículas. En consecuencia, no siempre se garantiza la administración de los anticuerpos anti-EGFR a un paciente en la dosis requerida en cada caso de una forma reproducible mediante las soluciones de anticuerpo, y la administración no se puede realizar con la confiabilidad exigida. Aunque la filtración antes de la inyección permite retener los agregados, este método, sin embargo, comprende una etapa adicional y, por ello, es complejo y no muy adecuado para la práctica clínica. Además, el problema de la reproducibilidad de la dosis se mantiene sin resolución, dado que en cada caso una fracción desconocida de anticuerpos se separa de la solución, y la formación de partículas después de la filtración continúa representando un riesgo de seguridad. Un método común para la estabilización de anticuerpos monoclonales es la liofilización de soluciones que comprenden anticuerpos y auxiliares. No obstante, la liofilización tiene alto consumo de tiempo y energía, por lo que tiene un alto costo. Además, primero se deben reconstituir los liofilizados, antes de la administración. El documento EP 0 073 371 describe las preparaciones para la administración intravenosa que comprenden inmunoglobulinas que tienen un pH de 3,5 a 5,0 para la estabilización. No obstante, dichos valores de pH bajos dan por resultado reacciones de incompatibilidad no deseadas en el punto de inyección. El documento US N° 6.171.586 Bl describe el uso de un tampón de acetato de pH 4,48 a 5,5, un tensioactivo y un poliol en una formulación acuosa de anticuerpos, donde se excluye la modificación con NaCl para isotonicidad. Debido a la falta de modificación de isotonicidad, es probable que se produzcan reacciones de incompatibilidad en el punto de inyección. Como ejemplos de otras formulaciones que comprenden anticuerpos específicos se debe hacer referencia en este punto a los documentos EP 0 280 358, EP 0 170 983 y US 5.945.098. De ellos, el documento EP 0 280 358 describe el agregado de "dextrano a una solución de anticuerpo para la estabilización contra ciertas hormonas, en donde se logró la estabilidad durante nueve meses. El documento EP 0 170 983 describe la estabilización de un anticuerpo monoclonal termolábil por calentamiento conjunto con ovalbúmina hidrolizada, por lo cual el anticuerpo aún era estable después de un almacenamiento durante 7 días a 45° C. No obstante, no se desea la adición de proteínas de otras especies a las formulaciones previstas para la administración parenteral, debido a los problemas asociados, en particular su posible antigenicidad . El documento US 5.945.098 describe el uso de glicina, polisorbato 80 y polietilehglicol para la estabilización de una solución acuosa de inmunoglobulina G. El documento DE 10133394 Al describe el uso de un tampón de fosfato en el rango de pH 6 a pH 8 y un éster de ácido graso de polioxietilen-sorbitano para la estabilización de una solución acuosa del anticuerpo cetuximab. Si bien esto reduce significativamente la formación de agregados visibles, hay significativo deterioro de la estabilidad química, en particular bajo condiciones de estrés. Además, la formulación no muestra estabilidad a estrés térmico (extremo) , por ejemplo almacenamiento a largo plazo a 40° C. Breve descripción de la invención El objeto "de la invención era hallar una formulación acuosa específica para los anticuerpos dirigidos contra EGFR que son adecuados para la administración parenteral, que sea bien tolerada y estable en almacenamiento a temperatura ambiente durante al menos 24 meses. La estabilidad de almacenamiento también se debería retener en el caso de fuerzas de cizallamiento que actúan durante el transporte y bajo condiciones climáticas modificadas, en particular a temperatura elevada y con humedad atmosférica. Además, la formulación debería tener una estructura simple y no deberxa comprender ningún auxiliar dudoso desde un punto de vista toxicológico . Sorprendentemente, se ha hallado una formulación que cumple con estos requerimientos en la forma de una solución que, además de un anticuerpo dirigido contra el factor de crecimiento epidérmico (anticuerpo anti-EGFR) , comprende un tampón, un aminoácido y un tensioactivo . En consecuencia, la presente invención, se refiere a una preparación farmacéutica acuosa que, además de un anticuerpo anti-EGFR, comprende un tampón, un aminoácido y un tensioactivo. Descripción detallada de la invención A los fines de la invención, una preparación acuosa es aquella en donde al menos parte del solvente presente está compuesta por agua. Otros solventes constituyentes que pueden estar presentes son todos solventes adecuados para uso parenteral, .en. particular alco olea tales como, por. ejemplo, etanol, propanol, propanodiol o glicerol. La preparación acuosa preferentemente comprende, como solvente, agua o mezclas de etanol/agua; el solvente de particular preferencia está compuesto por agua. El anticuerpo presente puede ser cualquier anticuerpo anti-EGF , en particular los anticuerpos murino, humanizado o quimérico mencionados al inicio y los anticuerpos anti-EGFR humanos que se han preparado y se pueden preparar por medio de dicha tecnología XenoMouse. Se da preferencia al anticuerpo anti-EGFR cetuximab o EMD 72000 o uno de los análogos de anticuerpos murinos, humanizados o quiméricos correspondientes . Se da particular preferencia a las preparaciones acuosas que comprenden cetuximab o EMD 72000 como anticuerpo . El anticuerpo anti-EGFR puede estar presente en la formulación de acuerdo con la invención en una concentración de 0,1 mg/ml a 50 mg/ml, preferentemente de 2 mg/ml a 10 mg/ml, con particular preferencia aproximadamente 5 mg/ml. Los tampóns que se pueden emplear son básicamente todas las sustancias fisiológicamente toleradas adecuadas para ajustar el pH buscado, tales como, por ejemplo, sales de citrato, sales de acetato, sales de histidina, sales de succinato, sales de malato, sales de fosfato o sales de lactato, y/o sus respectivos ácidos o bases libres, así como mezclas, de las diversas . sales y/o ácidos o bases de ellos. _ De preferencia, el tampón está compuesto por una o varias sales de citrato, sales de acetato, sales de histidina, sales de succinato, sales de malato, sales de fosfato o sales de lactato y/o sus respectivos ácidos o bases libres o una mezcla de una o varias de las diversas sales y/o sus ácidos o bases. Aquí, el término mezcla abarca las mezclas de distintas sales del mismo ácido, tales como, por ejemplo, mezclas diferentes sales de citrato, y mezclas de sales de distintos ácidos, tales como, p.ej., mezclas de sales de citrato y acetato. Preferentemente, el tampón está compuesto por una o varias sales de citrato y/o su ácido libre (p.ej. ácido cítrico, ácido cítrico monohidrato, citrato trisódico dihidrato, citrato tripotásico monohidrato) , sales de acetato y/o su ácido libre (por ejemplo ácido acético, acetato de sodio, acetato de sodio trihidrato) o L-histidina y/o su sal por adición de ácidos, tales como, p.ej., monoclorhidrato de L-histidina monohidrato. La preparación de acuerdo con la invención comprende ventajosamente el tampón en una concentración de 10 a 100 mmol/1, preferentemente de 2 a 20 mmol/1, de particular preferencia de aproximadamente 10 mmol/1.
El H de la preparación está en el rango de 5,0 a 6,0, preferentemente de 5,2 a 5,8, con particular preferencia de aproximadamente 5,5. La preparación de. acuerdo con la invención, es fisiológicamente bien tolerada, se puede preparar con facilidad, se puede dispensar con precisión y es estable con respecto al ensayo, los productos de descomposición y los agregados durante el almacenamiento, durante repetidos procesos de congelación y descongelación, y el estrés mecánico. Es estable en almacenamiento durante un periodo de al menos 3 meses hasta un período de 4 años a temperatura de refrigerador (2-8°C). Sorprendentemente, la preparación de acuerdo con la invención también es estable en almacenamiento durante un período de hasta 2 años a temperaturas elevadas y mayores niveles de humedad ambiente, p.ej. a una temperatura de 25°C y 60 % de humedad relativa ambiente, o durante un período de 3 meses a una temperatura de 40 °C y 75 % de humedad relativa ambiente . Los aminoácidos presentes en la preparación pueden ser aminoácidos básicos, tales como, p.ej., arginina, histidina, ornitina, lisina, o aminoácidos neutros tales como, p.ej., glicina, metionina, isoleucina, leucina y alanina, o aminoácidos aromáticos, tales como, p.ej., fenilalanina, tirosina o triptófano. Los aminoácidos básicos se emplean preferentemente en forma de sus sales inorgánicas (de preferencia en forma de las sales de ácido clorhídrico, es decir, como clorhidratos de aminoácido) . Los aminoácidos empleados están preferentemente, en cada caso, en la forma L. El aminoácido presente en la preparación de acuerdo con la invención es, con particular preferencia, L-arginina, glicina o L-metionin . La preparación comprende el aminoácido en una concentración de 2 a 200 mmol/1, preferentemente de 50 a 150 mmol/1, con particular preferencia de aproximadamente 100 mmol/1. Los tensioactivos que se pueden usar son todos los tensioactivos usados habitualmente en preparaciones farmacéuticas, preferentemente esteres de ácidos grasos de polietilen-sorbitano y copollmeros de polioxietileno-polioxipropileno . Los ésteres de ácidos grasos de polietilen-sorbitano también se conocen bajo el nombre de comercial Tween. Ésteres de ácidos grasos de polietilen-sorbitano adecuados son, en particular, monolaurato de polioxietilen (20) -sorbitano, monopalmitato de polioxietilen (20) -sorbitano y monoestearato de polioxietilen (20) -sorbitano. Se da preferencia al monolaurato de polioxietilen (20) -sorbitano y al monooleato de polioxietilen (20) -sorbitano, dando particular preferencia al monooleato de polioxietilen (20)-sorbitano. Los copollmeros de polioxietileno-polioxipropileno también se conocen bajo el nombre comercial de Poloxamer.
Un copolimero de particular preferencia de polioxietileno-polioxipropileno es Poloxamer 407 (CAS 9003-11-6) . Los tensioactivos pueden estar presentes en la formulación en una concentración de 0,001 % hasta 1,0 % en peso. Si los ásteres de ácidos grasos de polioxietilen-sorbitano están presentes como tensioactivos, preferentemente están presentes en una cantidad de 0,005 a 0,1% en peso, con particular preferencia en una cantidad de aproximadamente 0,01% en peso. Si están presentes copolimeros de polioxietileno-polioxipropileno, de preferencia están presentes en una cantidad de 0,01 a 0,5 % en peso, con particular preferencia de aproximadamente 0,1 % en peso. A fin de aumentar la tolerabilidad de la administración parenteral, de preferencia la osmolalidad está en el" rango isotónico, es decir, con una osmolalidad de aproximadamente 250 a 350 mOsmol/kg. Entonces, la preparación se puede administrar directamente por via intravenosa, intraar erial y también subcutánea, substancraímente sin dolor. En consecuencia, de acuerdo con una forma de realización ventajosa, la preparación de acuerdo con la invención comprende, además, un modificador de la isotonicidad, preferentemente una sal fisiológicamente tolerada, tales como, por ejemplo, cloruro de sodio o cloruro de potasio, o un poliol fisiológicamente tolerado, tales como, por ejemplo, glucosa o glicerol, en una concentración necesaria para la modificación de la isotonicidad. En consecuencia, la invención también se refiere a una preparación acuosa que comprende un anticuerpo anti-EGFR, .un tampón, un aminoácido, un tensioactivo y un modificador de la isotonicidad en una concentración necesaria para modificar la isotonicidad. Con particular preferencia está presente el cloruro de sodio como modificador de la isotonicidad. Además, las soluciones de acuerdo con la invención pueden comprender también auxiliares fisiológicamente tolerados, tales como, por ejemplo, antioxidantes tales como ácido ascórbico o glutatión, conservantes tales como fenol, m-cresol, metil- o propilparabeno, clorobutanol, tiomersal o cloruro de benzalconio, polietilenglicoles (PEG) tales como PEG 400, PEG 3000, 3350, 4000 o 6000', disacáridos tales como trehalosa o sacarosa, o ciclodextrinas, tales como hidroxipropil-B-ciclodextrina, sulfobutiletil-ß-ciclodextrina, -ciclodextrina o ?-ciclodextrina. De acuerdo con una forma de realización particularmente ventajosa de la invención, la preparación acuosa comprende aproximadamente 5 g/ml de cetuximab o EMD 72000, aproximadamente 10 mmol/1 de tampón de citrato o histidina con un pH de aproximadamente 5,5, aproximadamente 100 mmol/1 de glicina, arginina o L-metionina, aproximadamente 100 mmol/1 de cloruro de sodio y aproximadamente 0,01 % de monooleato de polioxietilen (20 ) -sorbitano . La preparación acuosa se puede preparar mediante la adición de dichos auxiliares a una solución que comprende el anticuerpo. anti-EGFR. Con este fin, se. pueden agregar ventajosamente volúmenes definidos de soluciones madre que comprenden dichos otros auxiliares en una concentración definida a una solución con una concentración definida de un anticuerpo anti-EGFR, como la obtenida a partir de su preparación, y si se desea, la mezcla se diluye a la concentración antes calculada con agua o solución tampón. Como alternativa, también se pueden agregar los auxiliares como sólidos a la solución de inicio, que comprende el anticuerpo anti-EGFR. Si el anticuerpo anti-EGFR está en la forma de un sólido, p.ej. en forma de un liofilizado, la preparación de ' acuerdo con la invención se puede preparar mediante la disolución inicial de los respectivos anticuerpos en agua o una solución acuosa que comprende uno o varios de los otros auxiliares, y luego se agregan las cantidades requeridas en cada caso de soluciones madre que comprenden los demás auxiliares, con los demás auxiliares en forma sólida y/o agua. El anticuerpo anti-EGFR se puede disolver ventajosamente de manera directa en una solución que comprende todos los demás auxiliares . Uno o varios de los auxiliares presentes en la preparación de acuerdo con la invención se puede haber agregado ya ventajosamente durante o al final del procedimiento para la preparación del anticuerpo anti-EGFR en particular. Con preferencia, esto se realiza mediante la disolución del anticuerpo anti-EGFR directamente en una solución acuosa que comprende uno, más de uno o todos los demás auxiliares en la etapa final de la purificación que se realiza después de la preparación. A fin de producir la preparación, sólo se requiere entonces que los demás ingredientes respectivos se agreguen en una cantidad menor en cada caso y/o no se agreguen. Particularmente, se prefiere que los respectivos ingredientes se disuelvan directamente en una solución acuosa que comprende todos los demás auxiliares en la etapa final de la purificación que se lleva a cabo después de su preparación. Si la solución que comprende el respectivo anticuerpo y los auxiliares todavía no presenta el pH deseado, éste se ajusta con la adición de un ácido o una base, preferentemente usando el ácido, o la base ya presente en el sistema tampón. A continuación se filtra bajo esterilidad. La preparación acuosa de acuerdo con la invención se puede emplear ventajosamente para el tratamiento de enfermedades tumorales . Los ejemplos explican la invención sin estar limitada a ellos .
Ejemplo 1 (Ejemplo comparativo 1) Solución acuosa que comprende: 2 mg/ml de cetuximab 10 mmol/l de .tampón de fosfato de sodio. pH 7 L2 145 mmol/l de cloruro de sodio La preparación se lleva a cabo mezclando volúmenes definidos de soluciones acuosas que comprenden los respectivos auxiliares en una concentración definida. Se utilizan las siguientes soluciones: Solución A (solución con ingrediente activo) que comprende: 18 mg/ml de cetuximab 10 mmol/l de tampón de fosfato de sodio pH 7,2 (compuesto por 2,07 g/1 de hidrógeno-fosf to disódico 7-hidrato y 0,31 g/1 de dihidrógeno-fosfato de sodio monohidra o) 145 mmol/l de cloruro de sodio (La solución se obtiene reamortiguando el ingrediente activo respecto de la solución B con la ayuda de filtración de flujo tangencial en la etapa final de la purificación del ingrediente activo que tiene lugar después de su preparación. ) Solución B (tampón/solución de sales) Corresponde a la solución A, pero no contiene ingrediente activo. Para preparar la Solución comparativa 1, se combinan 1,11 partes en volumen de solución A y 8,89 partes en volumen de solución B entre sí. La solución preparada se filtra usando un filtro estéril antes de la transferencia y se transfiere a viales para inyección. Los viales para inyección se sellan posteriormente con tapones y reborde. Ejemplo 2 (Ejemplo comparativo 2) Solución acuosa que comprende: 2 mg/ml de cetuximab 10 mmol/1 de tampón de fosfato de sodio pH 7,2 145 mmol/1 de cloruro de sodio 0,01 % en peso de monooleato de polioxietilen (20) -sorbitano La preparación se lleva a cabo mezclando volúmenes definidos de soluciones acuosas que comprenden los respectivos ingredientes en una concentración definida. Además de la solución A, se usa la siguiente solución. Solución C (tampón/solución de sales que comprende monooleato de polioxietilen (20) -sorbitano) Corresponde a la solución B, pero adicionalmente comprende 0,0125 % en peso de monooleato de polioxietilen (20) -sorbitano . Para preparar la solución comparativa 2, se combinan 1,11 partes en volumen de solución A y 8,89 partes en volumen de solución C entre sí . La solución preparada se filtra usando un filtro estéril .
antes ele la transferencia y se transfiere a viales para inyección. Los viales para inyección se sellan posteriormente con tapones y reborde . Ejemplo 3 (formulación de acuerdo con la invención) 5 mg/ml de cetuximab 10 mmol/1 de tampón de citrato pH 5,5 100 mmol/1 de glicina 100 mmol/1 de cloruro de sodio 0,01 % en peso de monooleato de polioxietilen (20) -sorbitano
La preparación se lleva a cabo mezclando volúmenes definidos de soluciones acuosas que comprenden los respectivos ingredientes en- concentraciones definidas . Solución D (solución con ingrediente activo · en un tampón de citrato) 16 mg/ml de cetuximab 10 mmol/1 de tampón de citrato pH 5,5 (compuesto por 2,1014 g/1 de ácido cítrico monohidrato) (La solución se obtiene reamortiguando el ingrediente activo respecto de la solución E con la ayuda de filtración de flujo tangencial en la etapa final de la purificación del ingrediente activo que tiene lugar después de su preparación. ) Solución E (solución tampón) : Corresponde a la solución D, pero no contiene ingrediente activo .
Solución F (tampón/solución de sales) : Corresponde a la solución E, pero comprende 145,5 mmol/1 de glicina, 145,5 mmol/1 de cloruro de sodio y 0,015 % en peso de monooleato de polioxietilen (20)-sorbitano . Para la preparación de la fórmula de acuerdo con la invención, se combinan 3,125 partes en volumen de solución D y 6,875 partes en volumen de solución F entre sí. La solución preparada se filtra usando un filtro estéril, antes de la transferencia y se transfiere a viales para inyección. Los viales para inyección se sellan posteriormente con tapones y reborde . Ejemplo 4 Las siguientes soluciones se preparan de modo análogo al método de los ejemplos descritos con anterioridad: Ejemplo 4.1, solución que comprende: 5 mg/ml de cetuximab 100 mmol/1 de glicina 0,01 % en peso de monooleato de polioxietilen (20) -sorbitano
mmol/1 de tampón de citrato pH 5,5 (compuesto por 2,9410 g/l de citrato trisódico dihidrato) Ejemplo 4.2, solución que comprende: 5 mg/ml de cetuximab 100 mmol/1 de glicina 100 mmol/1 de cloruro de sodio 0,01 % en peso de monooleato de polioxietilen (20) -sorbitano 10 mmol/1 de tampón de citrato pH 5,5 (compuesto por 2,1014 g/1 de ácido cítrico monohidrato) Ejemplo 4.3, solución que comprende: 5 mg/ml de "EMD 72000 100 mmol/1 de glicina 100 mmol/1 de cloruro de sodio 0,01 % en peso de monooleato de polioxietilen (20) -sorbitano 10 mmol/1 de tampón de citrato pH 5,5 (compuesto por 2,1014 g/1 de ácido cítrico monohidrato)
Ej emplo 4.4, solución que comprende : 5 mg/ml de cetuximab 100 mmol/1 de L-metionina 0,01 % en peso de monooleato de polioxietilen (20) -sorbitano
mmol/1 de tampón de citrato pH 5,5 (compuesto por 2,1014 g/1 de ácido cítrico monohidrato) Ejemplo 4.5, solución que comprende: 5 mg/ml de cetuximab 100 mmol/1 de glicina 0,01 % en peso de monooleato de polioxietilen (20) -sorbitano 10 mmol/1 de tampón de acetato pH 5,5 (compuesto por 1,3608 g/1 de acetato de sodio trihidrato) Ejemplo 4.6, solución que comprende: 5 mg/ml de cetuximab 100 mmol/1 de glicina 0,01 % en peso de monooleato de - polioxiet ilen (20)-sorbitano 10 mmol/1 de tampón de histidina pH 5,5 (compuesto por 2,069 g/1 de monoc lorhidrato de L-histidina monohidrato) Ejemplo 4.7, solución que comprende: 5 mg/ml de cetuximab 100 mmol/1 de glicina 0,01 % en peso de monolaurato de polioxietilen (20)-sorbitano 10 mmol/1 de tampón de citrato pH 5,5 (compuesto por 2,1014 g/1 de ácido cítrico monohidrato) Ejemplo 4.8, solución que comprende: 5 mg/ml de cetuximab 100 mmol/1 de glicina 0,1 % en peso de copolímero de polioxietileno-polioxipropileno 407 (Poloxamer 407) 10 mmol/1 de tampón de citrato pH 5,5 (compuesto por 2,1014 g/1 de ácido cítrico monohidrato ) Ej emplo 5 La estabilidad de la formulación de acuerdo con la invención se ensayó en una prueba de estrés . Para ello, los viales que contenían la solución de acuerdo con Ejemplo 3 y, con fines comparativos, viales que contenían la solución de acuerdo con Ejemplos 1 y 2, se almacenaron a 25° C y 60 % de humedad relativa ambiente y a 40° C y 75 % de humedad relativa ambiente. Además, los viales que contenían soluciones de acuerdo con Ejemplos 1,- 2 y 3 se agitaron durante cinco días en un equipo agitador a una frecuencia de agitación de 150 min"1 a temperatura ambiente y se congelaron tres veces sucesivamente a -20° C y luego se volvieron a descongelar a +5° C. Antes de almacenar y después de tiempos de almacenamiento definidos, se evaluaron visualmente los viales con iluminación directa con una fuente de luz fría, y se determinó la absorción de las soluciones a 350 nm, lo cual representa una medida de turbidez. A fin de ilustrar la influencia · del almacenamiento o tratamiento, se calculó en cada caso la turbidez relativa respecto del valor inicial. Además, se analizaron los viales por medio de filtración por HPLC en gel con respecto al contenido de cetuximab, agregados y productos de descomposición. Los resultados de las investigaciones de estabilidad se indican en la Tabla 1.
Tabla 1: Síntesis de los datos de estabilidad de la formulación de acuerdo con la invención (Ejemplo 3) y las dos soluciones comparativas (Ejemplos 1 y 2) Los resultados muestran claramente que la formulación de acuerdo con la invención tiene una estabilidad significativamente más elevada en comparación ~ con las soluciones comparativas del arte previo. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.