KR20060110305A

KR20060110305A - Ｅｇｆ 수용체에 대한 항체를 함유하는 약학적 제제

Info

Publication number: KR20060110305A
Application number: KR1020067010225A
Authority: KR
Inventors: 한스-크리스티안 말러; 로베르트 뮐러
Original assignee: 메르크 파텐트 게엠베하
Priority date: 2003-11-26
Filing date: 2004-10-26
Publication date: 2006-10-24
Also published as: TWI322693B; CN1886158B; DK1687031T3; CN1886158A; DE502004010783D1; US20050175611A1; BRPI0416986A; EP1687031B1; AU2004298728B2; JP2007512266A; CA2547060A1; ES2339671T3; DE10355251A1; PE20050586A1; AR047949A1; CO5690620A2; RU2381036C2; TW200531702A; SG150550A1; PL1687031T3

Abstract

본 발명은 표피 성장 인자 수용체 (EGF 수용체) 에 대한 항체를 함유하는 수성 약학적 제제에 관한 것이다. 상기 제제는 상승된 온도에서도 증가된 저장 안정성을 가지며, 종양의 치료를 위해 사용될 수 있다.

표피 성장 인자 수용체, 항체, 수성 약학 제제

Description

ＥＧＦ 수용체에 대한 항체를 함유하는 약학적 제제 {PHARMACEUTICAL PREPARATION COMPRISING AN ANTIBODY AGAINST THE EGF RECEPTOR}

본 발명은 표피 성장 인자 수용체 (epidermal growth receptor: EGFR) 에 대한 항체를 함유하는 안정한 약학적 제제 및 이의 용도와 제조방법에 관한 것이다.

시험관 내 및 생체 내의 다양한 연구는, 항체에 의한 EGFR 의 방해물이, 예를 들어, 암세포 증식을 저해하고, 종양 매개의 혈관신생 (angiogenesis) 을 감소시키고, 암세포 세포자멸사 (apoptosis) 를 유도하고, 방사선 및 전통적인 화학요법의 독성 효과를 증가시킴으로써, 다양한 수준에서의 종양에 대항하여 작용한다는 것을 보여주고 있다.

MAB c225 (INN: 세툭시마브: cetuximab) 는 임상적으로 검증된, EGF 수용체와 결합하는 항체이다. 세툭시마브는 변이부가 마우스 유래이고, 불변부가 인간 유래인, 키메라 항체이다. 세툭시마브는 Naramura 등, Cancer lmmunol. Immunotherapy 1993, 37: 343-349 및 WO 96/40210 Al 에 최초로 기재되었다.

MAB 425 는, 종양 세포 내에서, 특히 A431 암세포에서 과도 발현되는 EGFR 에 대한 원조 마우스 항체이다. 이의 인간화 및 키메라 형태가, 예를 들어, EP 0 531 472 A1; Kettleborough 등, Protein Engineering 1991, 4: 773-783; Bier 등 , Cancer Chemother. Pharmacol. 2001, 47: 519-524; Bier 등, Cancer lmmunol. lmmunother. 1998, 46: 167-173 에 개시되어 있다. 여기서, EMD 72000 (h425) 는, 임상적 상 I/II 내에 있고, 이의 불변부가 κ 및 인간 γ-1 사슬로 이루어지는 MAB 425 의 형태이다.

인간 항-EGFR 항체는 WO 91/10741 Al, WO 94/02602 Al 및 WO 96/33735 Al 에 기술된 바와 같이 제노마우스 (XenoMouse) 기술에 의해 제공될 수 있다. 이 기술에 의해 제조되고, 최근 임상적으로 시도되는 특정 항체는 ABX-EGF 이다(Abgenix, Crit. Rev. Oncol. Hematol., 2001, 38: 17-23; Cancer Research 1999, 59: 1236-43).

EGFR 에 대한 다른 항체들이, 예를 들어, EP 0 586 002 B1 및 J. Natl. Cancer Inst., 1993, 85: 27-33 (MAB 528) 에 기재되어 있다.

다른 항체처럼, 항-EGFR 항체 또한 치료적 용도를 위해 용액으로서 비경구 적용된다. 이러한 항체를 함유하는 용액의 두드러진 문제점은 이들의 응집 경향 및 단백질 다량체 (multimer) 의 형성이다. 환원성 다량체의 경우, 이는 근접하는 부분간의 상호작용을 통한 계획하지 않은 분자간 이황화 다리 형성에 의한 것으로 여겨진다. 비환원성 다량체의 소수성 상호작용 및 연속 형성 역시 가능하다. 더욱이, 단백질 분해 반응을 결과로서 초래하는 탈아미노 반응 역시 발생한다. 상기 변성 반응은, 예를 들어, 수송 (transport) 동안 발생하는 것과 같이, 특히, 상승된 온도에서 저장하거나 전단 응력 (shear stress) 동안 발생한다.

상기 응집 경향의 결과로서, 생성물의 침전이 항체 용액의 저장 동안 발생하고, 이는 용액을 함유하는 용기로부터의 재생가능한 회수가 불확실함을 의미한다. 더욱이, 입자 함유 용액의 비경구 투여로 인해 색전증이 발생할 수 있다. 이는 각 사례에서 환자에게 항-EGFR 항체를 필수 투여량으로 투여하는 것이 항체 용액에 의해 재현가능한 방식으로 항상 보장되는 것이 아니고, 이러한 투여가 필수적 신뢰도를 수반할 수 없다는 결론을 보이는 것이다.

주사하기 전의 여과는 응집이 방지되는 것을 가능하게 하지만, 이 방법은 추가의 단계를 포함하고, 따라서, 복잡하고, 임상 시험에 매우 부적합하다. 더욱이, 투여량 재현성의 문제가 미해결로 남는데, 이는 항체의 미확인 분획이 각 경우에서 용액으로부터 분리 제거되고, 여과 후에도 입자 형성이 지속되어 안정성에 위험을 나타내기 때문이다.

단클론항체를 안정화시키는 통상의 방법은 항체 및 보조제를 함유하는 용액의 동결 건조 (freeze-drying) 이다. 그러나, 동결 건조 (Iyophilisation) 에는 시간 및 에너지가 많이 소요되며, 따라서, 비용이 많이 든다. 더욱이, 동결건조물은 투여 전에 먼저 원상태로 되돌려져야 한다.

EP 0 073 371 은, 안정화를 위해, pH 가 3.5 내지 5.0 인 면역글로불린을 함유하는, 정맥내 투여용 제제를 기술한다. 그러나, 그러한 낮은 pH 값은 주사 지점에서 바람직하지 않은 부적합 반응을 야기한다.

US 6,171,586 B1 은 항체의 수성 제형에서 pH 가 4.48 내지 5.5 인 아세테이트 완충액, 계면활성제 및 폴리올의 용도를 개시하는데, 여기서 등장성 조절을 위 한 NaCl 은 배제된다. 등장성 조절의 부족으로 인해, 주사 지점에서의 부적합 반응이 유사하게 발생할 수 있다.

특정 항체를 함유하는 추가적 제형의 예를 위해, EP 0 280 358, EP 0 170 983 및 US 5,945,098 이 현 시점에서 참조될 수 있다.

이 중, EP 0 280 358 은, 특정 호르몬에 대한 안정화를 위해 항체 용액에 덱스트란을 첨가하는 것을 기술하는데, 여기서 안정성은 9 개월에 걸쳐 달성되었다.

EP 0 170 983 은, 열불안정성 단클론 항체가 가수분해된 오발부민과 함께 가열됨으로써 안정화되는 것을 기술하는데, 그 결과로서 상기 항체는 45 ℃ 에서 7 일간의 저장 후에도 여전히 안정했다. 그러나, 비경구 투여용으로 고안된 제형에 기타 종의 단백질을 첨가하는 것은, 이들과 연관된 문제, 특히 이들의 가능한 항원성으로 인해 바람직하지 않다.

US 5,945,098 은, 면역글로불린 G 의 수성 용액의 안정화를 위한, 글리신, 폴리소르베이트 80 및 폴리에틸렌 글리콜의 용도를 기술한다.

DE 10133394 Al 은, 항체 세툭시마브의 수성 용액의 안정화를 위한, pH 가 6 내지 pH 8 인 포스페이트 완충액 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르의 용도를 개시한다. 비록 이것이 육안으로 관찰되는 응집물의 형성을 현저히 감소시킨다고 할지라도, 화학적 안정성, 특히 응력 조건 하에서의 화학적 안정성이 현저히 감소된다. 더욱이, 상기 제형은 (극도의) 열적 응력, 예를 들어, 40 ℃ 에서의 장기 저장에 대한 안정성을 나타내지 않는다.

본 발명의 목적은, 비경구 투여에 적합하고, 내약성 (tolerance) 이 우수하고, 실온에서 24 개월 이상에 걸친 저장에 대해 안정한, 특히 EGFR 에 대한 항체용 수성 제제를 찾는 것이었다. 저장 안정성은 또한, 변화된 기후 조건 하, 특히 상승된 온도 및 대기 습도에서, 및 수송 동안 작용하는 전단력의 경우에서도 유지되어야 한다. 또한, 상기 제형은 단순한 구조를 가져야하고, 독물학상 관점에서 의심스러운 임의의 보조제를 함유하지 않아야한다.

놀랍게도, 이러한 요구를 충족하는 제형이, 표피 성장 인자에 대한 항체 (항-EGFR 항체) 이외에 완충액, 아미노산 및 계면활성제를 함유하는 용액의 형태로 발견되었다. 따라서, 본 발명은 항-EGFR 항체 이외에 완충액, 아미노산 및 계면활성제를 함유하는, 수성 약학적 제제에 관한 것이다.

본 발명의 목적을 위하여, 수성 제제는 존재하는 용매 중 적어도 일부가 물로 이루어진다. 존재할 수 있는 추가의 용매 구성체는 비경구 용도에 적합한 모든 용매이고, 특히, 예를 들어, 에탄올, 프로판올, 프로판디올 또는 글리세롤과 같은 알콜이다. 수성 제제는 바람직하게는, 용매로서, 물 또는 에탄올/물 혼합물을 함유하고; 상기 용매는 특히 바람직하게는 물로 이루어진다.

존재하는 항체는 임의의 항-EGFR 항체, 특히 앞서 언급된 마우스, 인간화 또는 키메라 항체일 수 있고, 이 중 인간 항-EGFR 항체는 상기 제노마우스 기술에 의해 제조되어 왔고, 제조될 수 있다. 바람직하게는 항-EGFR 항체가 세툭시마브 또는 EMD 72000, 또는 이에 대응하는 마우스, 인간화 또는 키메라 항체 유사체 (analogue) 중 하나이다. 항체로서 세툭시마브 또는 EMD 72000 을 함유하는 수성 제제가 특히 바람직하다.

항-EGFR 항체는 본 발명에 따른 제형에서 0.1 ㎎/㎖ 내지 50 ㎎/㎖, 바람직하게는 2 ㎎/㎖ 내지 10 ㎎/㎖, 특히 바람직하게는 약 5 ㎎/㎖ 의 농도로 존재할 수 있다.

사용될 수 있는 완충액은, 예를 들어, 시트레이트 염, 아세테이트 염, 히스티딘 염, 숙시네이트 염, 말레이트 염, 포스페이트 염 또는 락테이트 염 및/또는 이의 각각의 유리산 또는 염기, 및 다양한 염 및/또는 이들의 산 또는 염기의 혼합물과 같은, 바람직한 pH 설정에 적절한, 원칙적으로 생리학적 내약성을 갖는 모든 물질이다. 완충액은 바람직하게는 시트레이트 염(들), 아세테이트 염(들), 히스티딘 염(들), 숙시네이트 염(들), 말레이트 염(들), 포스페이트 염(들) 또는 락테이트 염(들) 및/또는 이의 각각의 유리산(들) 또는 염기(들) 또는 다양한 염 및/또는 이의 산(들) 또는 염기(들) 중 하나 이상의 혼합물 중 하나 이상으로 이루어진다. 여기서, 혼합물이란 용어는, 예를 들어, 시트레이트 염 및 아세테이트 염의 혼합물과 같은 상이한 산의 염의 혼합물, 또한, 예를 들어, 상이한 시트레이트 염의 혼합물과 같은 동일한 산의 상이한 염의 혼합물 모두를 포함한다. 완충액은 바람직하게는 시트레이트 염(들) 및/또는 이의 유리산 (예를 들어, 시트르산, 시트르산 모노하이드레이트, 트리소듐 시트레이트 디하이드레이트, 트리칼륨 시트레이트 모노하이드레이트), 아세테이트 염(들) 및/또는 이의 유리산 (예를 들어, 아세트산, 소듐 아세테이트, 소듐 아세테이트 트리하이드레이트) 또는 L-히스티딘 및/또는 이의 산부가염 (예를 들어, L-히스티딘 모노히드로클로라이드 모노하이드레이트) 중 하나 이상으로 이루어진다. 본 발명에 따른 제제는 유리하게는 완충액을 10 내지 100 mmol/ℓ, 바람직하게는 2 내지 20 mmol/ℓ, 특히 바람직하게는 약 10 mmol/ℓ 의 농도로 함유한다.

상기 제제의 pH 는 5.0 내지 6.0, 바람직하게는 5.2 내지 5.8 의 범위, 특히 바람직하게는 약 5.5 이다.

본 발명에 따른 제제는 생리학적으로 내약성이 우수하고, 쉽게 제조될 수 있고, 정확하게 투여될 수 있고, 반복되는 동결 및 해동 과정과 기계적 응력 동안 저장 기간에 걸쳐 검사, 분해 생성물 및 응집물에 대하여 안정하다. 이는 냉장고 온도 (2 ~ 8 ℃) 에서 3 개월 이상의 기간 내지 4 년의 기간에 걸쳐 저장에 대하여 안정하다. 놀랍게도, 본 발명에 따른 제제는 또한 상승된 온도 및 높아진 대기 습도 수준에서, 예를 들어, 25 ℃ 의 온도 및 60 % 의 상대 대기습도에서, 최대 2 년의 기간에 걸쳐, 또는 40 ℃ 의 온도 및 75 % 의 상대 대기습도에서 3 개월의 기간에 걸쳐 저장에 대하여 안정하다.

제제에 존재하는 아미노산은, 아르기닌, 히스티딘, 오르니틴, 리신과 같은 염기성 아미노산, 또는, 예를 들어, 글리신, 메티오닌, 이소류신, 류신 및 알라닌과 같은 중성 아미노산, 또는, 예를 들어, 페닐알라닌, 티로신 또는 트립토판과 같은 방향족 아미노산일 수 있다. 염기성 아미노산은 바람직하게는 이들의 무기염 (유리하게는 염산염, 즉 아미노산 히드로클로라이드의 형태) 의 형태로 사용된다. 사용되는 아미노산은 바람직하게는 각 경우에 L-형태이다. 본 발명에 따른 제제 중에 존재하는 아미노산은 특히 바람직하게는 L-아르기닌, 글리신 또는 L-메티오닌이다.

상기 제제는 아미노산을 2 내지 200 mmol/ℓ, 바람직하게는 50 내지 150 mmol/ℓ, 특히 바람직하게는 약 100 mmol/ℓ 의 농도로 함유한다.

사용될 수 있는 계면활성제는 약학적 제제에서 통상 사용되는 모든 계면활성제로서, 바람직하게는 폴리에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르 및 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체이다. 폴리에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르는 또한 Tween 이라는 상품명으로 알려져있다. 적절한 폴리에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르로는 특히, 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노라우레이트, 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노팔미테이트 및 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노스테아레이트가 있다. 이 중 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노라우레이트 및 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레이트가 바람직하고, 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레이트가 특히 바람직하다. 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체는 또한 Poloxamer 라는 상품명으로 알려져있다. 특히 바람직한 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체는 Poloxamer 407 (CAS 9003-11-6) 이다.

계면활성제는 0.001 중량% 내지 1.0 중량% 의 농도로 제형 내에 존재할 수 있다. 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르가 계면활성제로서 존재하는 경우, 이들은 바람직하게는 0.005 내지 0.1 중량% 의 양으로, 특히 바람직하게는 약 0.01 중량% 의 양으로 존재한다. 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체가 존재하는 경우, 이들은 바람직하게는 0.01 내지 0.5 중량% 의 양으로, 특히 바람직하게는 약 0.1 중량% 의 양으로 존재한다.

비경구 투여에 대한 내약력 (tolerability: 참을 수 있을 정도) 을 증가시키기 위하여, 몰삼투압농도 (osmolality) 가 바람직하게는 등장 범위 (isotonic range), 즉, 약 250 내지 350 mOsmol/kg 의 몰삼투압농도이다. 이로써, 상기 제제를 직접적으로 정맥 내, 동맥 내 및 피하까지도 실질적인 고통없이 직접 투여할 수 있다.

유리한 구현예에 따라, 본 발명에 따른 제제는, 그러므로 등장성 조절제, 바람직하게는, 예를 들어, 염화나트륨 또는 염화칼륨과 같은 생리학적으로 내약성을 갖는 염 또는, 예를 들어, 글루코오스 또는 글리세롤과 같은 생리학적으로 내약성을 갖는 폴리올의 등장성을 조절하기 위해 필요한 농도로 추가 함유한다. 그러므로, 본 발명은 또한 항-EGFR 항체, 완충액, 아미노산, 계면활성제 및 등장성 조절제를 등장성 조절에 요구되는 농도로 함유하는 수성 제제에 관한 것이다. 염화나트륨이 등장성 조절제로서 특히 바람직하게 존재한다.

덧붙여, 본 발명에 따른 용액은 생리학적으로 내약성을 갖는 보조제, 예를 들어, 아스코르브산 또는 글루타티온과 같은 산화방지제, 페놀, m-크레졸, 메틸- 또는 프로필파라벤, 클로로부탄올, 티오메르살 또는 벤즈알코늄클로리드과 같은 보존제, PEG 400, PEG 3000, PEG 3350, PEG 4000 또는 PEG 6000 과 같은 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 트레할로스 또는 사카로오스와 같은 디사카라이드, 또는 히드록시프로필-β-시클로덱스트린, 술포부틸에틸-β-시클로덱스트린,α-시클로덱스트린 또는 γ-시클로덱스트린과 같은 시클로덱스트린을 추가로 함유할 수 있다.

본 발명의 특히 유리한 구현예에 따라, 상기 수성 제제는 약 5 ㎎/㎖ 의 세툭시마브 또는 EMD 72000, 약 10 mmol/ℓ 의, pH 가 약 5.5 인 시트레이트 또는 히스티딘 완충액, 약 100 mmol/ℓ 의 글리신, 아르기닌 또는 L-메티오닌, 약 100 mmol/ℓ 의 염화나트륨 및 약 0.01 % 의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레이트를 함유한다.

상기 수성 제제는 항-EGFR 항체를 함유하는 용액에 상기 보조제를 첨가함으로써 제조할 수 있다. 마지막에, 상기 추가의 보조제가 일정 농도로 함유된 저장 용액의 일정 용량을, 유리하게는, 그의 제조로부터 수득된, 일정 농도의 항-EGFR 항체를 갖는 용액에 첨가하고, 상기 혼합물은, 필요한 경우, 물 또는 완충액 용액을 이용하여 미리 계산된 농도로 희석한다. 대안적으로는, 항-EGFR 항체를 함유하는 출발 용액에 상기 보조제를 고체로서 첨가할 수도 있다. 항-EGFR 항체가 고체 형태인 경우, 예를 들어, 동결건조물인 경우, 본 발명에 따른 제제는 먼저 각 항체를 물, 또는 하나 이상의 추가 보조제를 함유하는 수성 용액에 용해시키고, 이어서 상기 추가 보조제, 고체 형태의 추가 보조제 및/또는 물을 함유하는 저장 용액을 각 경우에 요구되는 양으로 첨가함으로써 제조할 수 있다. 항-EGFR 항체는 유리하게는 모든 추가 보조제를 함유하는 용액에 직접 용해될 수도 있다.

본 발명에 따른 제제 중에 존재하는 하나 이상의 보조제는 유리하게는 특정 EGFR 항체의 제조 과정 동안 또는 마지막에 이미 첨가되었다. 이는 바람직하게는, 항-EGFR 항체를, 이의 제조 후에 수행되는 정제의 최종 단계에서 하나 이상, 또는 모든 추가 보조제를 함유하는 수성 용액에 직접 용해시킴으로써 수행될 수 있다. 제제의 제조를 위해, 필요 이외의 각 추가 보조제(들) 은 각 경우에 단지 적은 양으로 첨가되고/되거나, 전혀 첨가되지 않는다. 각 성분을, 이의 제조 후에 수행되는 정제의 최종 단계에서, 모든 추가 보조제를 함유하는 수성 용액에 직접 용해시키는 것이 특히 바람직하다.

그러나, 각 항체 및 보조제를 함유하는 용액이 원하는 pH 를 갖지 않는 경우, 이는 산 또는 염기를 첨가함으로써, 바람직하게는 완충액계에 이미 존재하는 산 또는 염기를 사용함으로써 조절한다. 이 후 살균 여과를 수행한다.

본 발명에 따른 수성 제제는 유리하게는 종양 질환의 치료를 위해 사용될 수 있다.

하기 실시예로서 본 발명을 설명하지만, 이에 한정되지는 않는다.

실시예 1 (비교예 1)

하기를 함유하는 수성 용액:

2 ㎎/㎖ 의 세툭시마브

10 mmol/ℓ 의 인산나트륨 완충액, pH 7.2

145 mmol/ℓ 의 염화나트륨

각 보조제를 일정 농도로 함유하는 수성 용액의 일정 용량을 혼합함으로써 제조를 수행하였다. 하기 용액을 사용하였다:

하기를 함유하는 용액 A (활성 성분 용액):

18 ㎎/㎖ 의 세툭시마브

10 mmol/ℓ 의 인산나트륨 완충액, pH 7.2

(2.07 g/ℓ 의 디소듐 하이드로겐포스페이트 7-히드레이트 및 0.31 g/ℓ 의 소듐 디하이드로겐포스페이트 모노하이드레이트로 이루어짐)

145 mmol/ℓ 의 염화나트륨

(이 용액은, 이의 제조 후에 수행되는 활성 성분 정제의 최종 단계에서 접선 흐름 여과 (tangential flow filtration) 를 통해 용액 B 에 대한 활성 성분을 재완충 (re-buffering) 함으로써 수득됨)

용액 B (완충액/염 용액)

용액 A 에 해당하나, 활성성분을 함유하지 않음.

비교 용액 1 의 제조를 위해, 1.11 체적부의 용액 A 및 8.89 체적부의 용액 B 를 서로 배합하였다.

제조된 용액을 수송 전에 살균 여과기로 여과하고, 주사 바이얼로 수송하였다. 이어서, 주사 바이얼을 마개로 밀봉하고, 크림프 (crimp) 하였다.

실시예 2 (비교예 2)

하기를 함유하는 수성 용액:

2 ㎎/㎖ 의 세툭시마브

10 mmol/ℓ 의 인산나트륨 완충액, pH 7.2

145 mmol/ℓ 의 염화나트륨

0.01 중량% 의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레이트

각 성분을 일정 농도로 함유하는 수성 용액의 일정 용량을 혼합함으로써 제조를 수행하였다. 용액 A 에 더하여, 하기 용액을 사용하였다.

용액 C (폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레이트를 함유하는 완충액/염 용액)

용액 B 에 해당하나, 0.0125 중량% 의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레이트를 추가적으로 함유함.

비교 용액 2 의 제조를 위해, 1.11 체적부의 용액 A 및 8.89 체적부의 용액 C 를 서로 배합하였다.

제조된 용액을 수송 전에 살균 여과기로 여과하고, 주사 바이얼로 수송하였다. 이어서, 주사 바이얼을 마개로 밀봉하고, 크림프하였다.

실시예 3 (본 발명에 따른 제형)

5 ㎎/㎖ 의 세툭시마브

10 mmol/ℓ 의 시트레이트 완충액, pH 5.5

100 mmol/ℓ 의 글리신

100 mmol/ℓ 의 염화나트륨

0.01 중량% 의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레이트

각 보조제를 일정 농도로 함유하는 수성 용액의 일정 용량을 혼합함으로써 제조를 수행하였다.

용액 D (시트레이트 완충액 중의 활성 성분 용액)

16 ㎎/㎖ 의 세툭시마브

10 mmol/ℓ 의 시트레이트 완충액, pH 5.5

(2.1014 g/ℓ 의 시트르산 모노하이드레이트로 이루어짐)

(이 용액은, 이의 제조 후에 수행되는 활성 성분 정제의 최종 단계에서 접선 흐름 여과를 통해 용액 E 에 대항하는 활성 성분을 재완충 (re-buffering) 함으로써 수득됨)

용액 E (완충액 용액):

용액 D 에 해당하나, 활성 성분을 함유하지 않음.

용액 F (완충액/염 용액):

용액 E 에 해당하나, 하기를 함유함:

145.5 mmol/ℓ 의 글리신,

145.5 mmol/ℓ 의 염화나트륨 및

0.015 중량% 의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레이트.

본 발명에 따른 제형의 제조를 위해, 3.125 체적부의 용액 D 및 6.875 체적부의 용액 F 를 서로 배합하였다.

실시예 4

상기 실시예들의 방법과 유사하게 하기 용액을 제조하였다.

실시예 4.1, 하기를 함유하는 용액:

5 ㎎/㎖ 의 세툭시마브

100 mmol/ℓ 의 글리신

0.01 중량% 의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레이트

10 mmol/ℓ 의 시트레이트 완충액, pH 5.5

(2.9410 g/ℓ 의 트리소듐 시트레이트 디하이드레이트로 이루어짐)

실시예 4.2, 하기를 함유하는 용액:

5 ㎎/㎖ 의 세툭시마브

100 mmol/ℓ 의 글리신

100 mmol/ℓ 의 염화나트륨

0.01 중량% 의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레이트

10 mmol/ℓ 의 시트레이트 완충액, pH 5.5

(2.1014 g/ℓ 의 시트르산 모노하이드레이트로 이루어짐)

실시예 4.3, 하기를 함유하는 용액:

5 ㎎/㎖ 의 EMD 72000

100 mmol/ℓ 의 글리신

100 mmol/ℓ 의 염화나트륨

0.01 중량% 의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레이트

10 mmol/ℓ 의 시트레이트 완충액, pH 5.5

(2.1014 g/ℓ 의 시트르산 모노하이드레이트로 이루어짐)

실시예 4.4, 하기를 함유하는 용액:

5 ㎎/㎖ 의 세툭시마브

100 mmol/ℓ 의 L-메티오닌

0.01 중량% 의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레이트

10 mmol/ℓ 의 시트레이트 완충액, pH 5.5

(2.1014 g/ℓ 의 시트르산 모노하이드레이트로 이루어짐)

실시예 4.5, 하기를 함유하는 용액:

5 ㎎/㎖ 의 세툭시마브

100 mmol/ℓ 의 글리신

0.01 중량% 의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레이트

10 mmol/ℓ 의 아세테이트 완충액, pH 5.5

(1.3608 g/ℓ 의 소듐 아세테이트 트리하이드레이트로 이루어짐)

실시예 4.6, 하기를 함유하는 용액:

5 ㎎/㎖ 의 세툭시마브

100 mmol/ℓ 의 글리신

0.01 중량% 의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레이트

10 mmol/ℓ 의 히스티딘 완충액, pH 5.5

(2.069 g/ℓ 의 L-히스티딘 모노하이드로클로라이드 모노하이드레이트로 이루어짐)

실시예 4.7, 하기를 함유하는 용액:

5 ㎎/㎖ 의 세툭시마브

100 mmol/ℓ 의 글리신

0.01 중량% 의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노라우레이트

10 mmol/ℓ 의 시트레이트 완충액, pH 5.5

(2.1014 g/ℓ 의 시트르산 모노하이드레이트로 이루어짐)

실시예 4.8, 하기를 함유하는 용액:

5 ㎎/㎖ 의 세툭시마브

100 mmol/ℓ 의 글리신

0.1 중량% 의 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체 407

(Poloxamer 407)

10 mmol/ℓ 의 시트레이트 완충액, pH 5.5

(2.1014 g/ℓ 의 시트르산 모노하이드레이트로 이루어짐)

실시예 5

본 발명에 따른 제형의 안정성은 응력 시험에서 테스트되었다. 마지막에, 실시예 3 에 따른 용액을 포함하는 바이얼 및, 비교의 목적을 위해, 실시예 1 및 2 에 따른 용액을 포함하는 바이얼을 25 ℃, 60 % 의 상대 대기습도에서와 40 ℃, 75 % 의 상대 대기습도에서 저장하였다. 또한, 실시예 1, 2 및 3 에 따른 용액을 포함하는 바이얼을 실온에서 진탕 장치를 이용하여 150/분의 진탕 빈도로 5 일 동안 진탕하고, -20 ℃ 에서 3 회 동결시킨 후, 이어서 +5 ℃ 에서 다시 해동시켰다. 저장 전 및 일정 저장 시간 후, 냉광원 (cold light source) 을 이용한 직접 조명을 통해 육안으로 평가하였고, 탁도를 나타내는 350 nm 에서 용액의 흡광도를 검출하였다. 저장 또는 처리의 영향을 설명하기 위해, 상대 탁도를 각 경우에 개시값과 비교하여 계산하였다. 또한, 상기 바이얼에서 세툭시마브, 응집물 및 분해생성물의 함량을 HPLC 겔 여과에 의해 분석하였다.

안정성 조사의 결과를 하기 표 1 에 나타내었다.

[표 1]

본 발명에 따른 제형 (실시예 3) 및 2 개의 비교 용액 (실시예 1 및 2) 의 안정성 데이터의 정리.

상기 결과는 본 발명에 따른 제형이 선행 기술의 비교 용액과 비교하여 현저히 증가된 안정성을 갖는다는 것을 명확히 보여준다.

Claims

항-EGFR 항체, 완충액, 아미노산 및 계면활성제를 함유하는 수성 제제.
제 1 항에 있어서，항체는 세툭시마브 (cetuximab) 또는 EMD 72000, 또는 대응하는 마우스, 인간화 또는 키메라 항체 유사체 중 하나인 것을 특징으로 하는 제제.
제 2 항에 있어서, 항체는 세툭시마브 또는 EMD 72000 인 것을 특징으로 하는 제제.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 완충액은 시트레이트 염(들), 아세테이트 염(들), 히스티딘 염(들), 숙시네이트 염(들), 말레이트 염(들), 포스페이트 염(들) 또는 락테이트 염(들) 및/또는 이의 각각의 유리산(들) 또는 염기(들), 또는 하나 이상의 다양한 염들 및/또는 이의 산(들) 또는 염기(들) 의 혼합물 중 하나 이상으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 제제.
제 4 항에 있어서, 완충액은 시트레이트 염(들) 및/또는 이의 유리산, 아세테이트 염(들) 및/또는 이의 유리산, 또는 L-히스티딘 및/또는 이의 산부가염 중 하나 이상으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 제제.
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산이 L-아르기닌, 글리신 또는 L-메티오닌인 것을 특징으로 하는 제제.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 계면활성제가 폴리에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르 또는 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체인 것을 특징으로 하는 제제.
제 7 항에 있어서, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레이트 또는 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노라우레이트인 것을 특징으로 하는 제제.
제 7 항에 있어서, 계면활성제는 Poloxamer 407 인 것을 특징으로 하는 제제.
제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서, 등장성 조절제가 등장성 조절에 필요한 농도로 추가적으로 존재하는 것을 특징으로 하는 제제.
제 10 항에 있어서, 등장성 조절제가 염화나트륨인 것을 특징으로 하는 제제.
제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서, pH 가 5 내지 7, 바람직하게는 pH 가 5.2 내지 6.0 인 것을 특징으로 하는 제제.
제 12 항에 있어서, pH 가 약 5.5 인 것을 특징으로 제제.
제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 약 5 ㎎/㎖ 의 세툭시마브 또는 EMD 72000, 약 10 mmol/ℓ 의 시트레이트 또는 히스티딘 완충액, 약 100 mmol/ℓ 의 글리신, L-아르기닌 또는 L-메티오닌, 약 100 mmol/ℓ 의 염화나트륨 및 약 0.01 % 의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레이트를 함유하고, pH 약 5.5 인 것을 특징으로 하는 제제.
항-EGFR 항체를 함유하는 수성 제제가 상기 보조제 중 하나에 첨가되는 것을 특징으로 하는, 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 따른 약학적 제제의 제조 방법.
종양 질환의 치료를 위한, 제 1 항 내지 14 항 중 어느 한 항에 따른 제제의 용도.