MXPA06005675A

MXPA06005675A - Derivados de hidronoponol como agonistas sobre los receptores orl1 de humano.

Info

Publication number: MXPA06005675A
Application number: MXPA06005675A
Authority: MX
Inventors: Bartholomeus J Van Steen
Original assignee: Solvay Pharm Gmbh
Priority date: 2003-12-12
Filing date: 2004-12-09
Publication date: 2006-08-17
Also published as: US7241770B2; AR046756A1; CA2547633A1; RU2006124856A; WO2005058890A3; US20050131004A1; UA84896C2; ZA200604791B; TW200522949A; AU2004298436A1; CN1890238A; WO2005058890A2; BRPI0417161A; JP2007513922A; EP1694675A2; RU2351600C2

Abstract

La invencion se refiere a un grupo de derivados de hidronopol los cuales son agonistas sobre los receptores ORL1 (nociceptina) de humano; la invencion se refiere a la preparacion de estos compuestos, a composiciones farmaceuticas que contienen una cantidad farmacologicamente activa de al menos uno de estos derivados de hidronopol novedosos como un ingrediente activo, asi como al uso de estas composiciones farmaceuticas para el tratamiento de trastornos en los cuales participan los receptores ORL1; la invencion se refiere a compuestos de la formula general (1) (ver formula I) en donde los simbolos tienen los significados que se proporcionan en la descripcion.

Description

DERIVADOS DE HIDRONOPOL COMO AGONISTAS SOBRE LOS RECEPTORES ORL1 DE HUMANO MEMORIA DESCRIPTIVA La presente invención se refiere a un grupo de derivados de hidronopol los cuales son agonistas sobre los receptores ORL1 de humano (nociceptina). La invención también se refiere a la preparación de estos compuestos, a composiciones farmacéuticas que contienen una cantidad farmacológicamente activa de al menos uno de estos derivados de hidronopol novedosos como un ingrediente activo, así como al uso de estas composiciones farmacéuticas para el tratamiento de trastornos en las cuales participan los receptores ORL1. El receptor "semejante al receptor opioide 1" (ORL1 ) se identificó a partir de una librería de ADNc de humano. Se estableció que este "receptor huérfano" tiene una homología cercana con los receptores opioides µ, K y d (Mollereau eí al., FEBS Lett., 341 , 33-38, 1994; Bunzow eí al., FEBS Lett.. 347, 284-288, 1994). A pesar de su semejanza secuencial y estructural cercana con los receptores opioides, los ligandos clásico del receptor opioide no interactúan con los receptores ORL1. En 1995 se purificó un neuropéptido de 17- aminoácidos a partir de extractos cerebrales, y subsecuentemente se mostró que era un ligando natural del receptor ORL1 acoplado a la proteína G (Reinscheid eí ai, Science, 270, 792-794, 1995; Meunier eí al., Nature, 377, 532-535, 1995). Este péptido fue denominado orfanina FQ o nociceptina y no se une a los tres receptores esteroides tradicionales. Estos hallazgos activaron la investigación sustancial hacia el papel funcional de, y ligandos novedosos para, el receptor ORL1. Que resultó en varios cientos de publicaciones, incluyendo varias revisiones (véase por ejemplo Grond eí al., Anaesthesist, 51, 996-1005, 2002), y docenas de solicitudes de patentes, que describen tanto ligandos peptídicos como ligandos no peptídicos, variando en potencia y selectividad (ORL-1 contra opioide µ). Puesto que los receptores opioides µ se encuentran ampliamente distribuidos a lo largo del cuerpo, una falta de selectividad podría llevar a un intervalo de efectos laterales no deseados semejantes a opioide por ejemplo sedación, depresión respiratoria, constipación, tolerancia y dependencia (Druq News Perspect 14, 335, 2001). Los derivados de 1 ,3,8-triazaespiro[4,5]decan-4-ona se describen en JP-A-2000/ 169476, publicado el 20 de junio de 2000; en el documento WO 01/07050 A1 , publicado el 1 de febrero de 2001 y en el documento US 2003/0109539 A1 , publicado el 12 de junio de 2003. No obstante, en ninguna de las solicitudes anteriormente mencionadas se mencionan a los receptores opioides µ. En el documento EP 0 997 464 A1 , publicado el 3 de mayo de 2000, los compuestos de 1 ,3,8-triazaespiro[4,5]decanona como agonistas del receptor ORL-1 se dice que poseen afinidad selectiva para los receptores ORL1 , pero la información real sobre la afinidad del receptor opioide µ se limitó a la declaración de que: "los compuestos particularmente preferidos demuestran una mayor afinidad para los receptores ORL-1 que para los receptores mu(por ejemplo, IC5o para los receptores ORL1/IC50 para los receptores mu fue menor de 1.0". Más específicamente en el documento US 2001/0041711 , publicado el 15 de noviembre de 2001. Esta solicitud de patente describe compuestos triazoespiro que tienen afinidad por el receptor de nociceptina. Los compuestos también se evaluaron sobre los receptores µ-, K-, y d pero con unas pocas excepciones solamente, se ha encontrado que son más potentes sobre los receptores opioides µ que sobre los receptores ORL-1. Las excepciones fueron selectivas a ORL-1 en menos de un factor 2. Por lo tanto la técnica previa más cercana no enseña cómo diseñar ligandos ORL-1 potentes con una selectividad no ambigua sobre los receptores opioides µ, es decir una selectividad de al menos un factor 10, no toca a estos compuestos, los cuales también tienen una buena biodisponibilidad. Finalmente, los derivados de 1 ,3,8-triazaespiro[4,5]decan-4-ona sustituidos con hidroxi alquilo útiles para el tratamiento de los trastornos mediados por el receptor ORL-1 se publicaron el 18 de marzo de 2004 en el documento WO 2004/022558, presentado el 5 de septiembre de 2003. De manera sorprendente, se ha encontrado que en una serie de derivados de hidronopol, se mostró que un grupo de compuestos tiene una afinidad muy alta para los receptores ORL1 de humano. Además, estos compuestos muestran una buena selectividad para los receptores ORL1 en relación con los receptores opioides µ, y están fácilmente disponible después de la administración oral.

La invención se refiere a compuestos de la fórmula general (1 ) en donde: R-i representa hidrógeno, halógeno, CF3, alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6, fenilo, amino, alquilamino de C1-3, dialquilamino de C1-3, hidroxi, hidroxialquilo de C1-3, alcoxi de C1-3, OCF3, carboxilo, aminocarbonilo o alquilsulfonilo de C1-3, m es un entero de 1 - 4, con la condición de que cuando m es 2, 3 ó 4, los sustituyentes R-i pueden ser ya sea los mismos o pueden ser diferentes, R2 representa hidrógeno, alquilo de C1-6 opcionalmente sustituido, cicloalquilo de C3-6, -CH2OH, -CH2OCH3, carboxilo, acetilo, bencilo opcionalmente sustituido o un grupo Q de la siguiente estructura (2): en donde: [ ]n simboliza -(CH2)n- en donde n es un entero de 0 - 7, R3 representa hidrógeno o alquilo de C1-3, R4 representa hidrógeno, opcionalmente sustituido alquilo de C1- 6, un anillo mono-, di- o tricíclico saturado, no saturado o parcialmente saturado opcionalmente sustituido, o un grupo alquilo de C1-3 sustituido con un anillo de cinco o seis miembros saturado, no saturado o parcialmente saturado opcionalmente sustituido el cual opcionalmente contiene uno o más heteroátomos, o (R3 + R ) junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, representan un anillo mono-, di- o tricíclico saturado, no saturado o parcialmente saturado opcionalmente sustituido, y sales farmacológicamente aceptables y profármacos de los mismos. En la descripción de los sustituyentes la abreviatura "alquilo de C1-3" significa "metilo, etilo, n-propilo o isopropilo". Opcionalmente sustituido" significa que un grupo pueden o no estar sustituidos adicionalmente por uno o más grupos seleccionados a partir de alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, fluoro, cloro, bromo, hidroxilo, alquiloxi, alqueniloxi, ariloxi, aciloxi, amino, alquilamino, dialquilamino, arilamino, tío, alquiltio, ariltio, ciano, oxo, nitro, acilo, amido, alquilamido, dialquilamido, carboxilo, o dos sustituyentes opcionales pueden formar junto con los átomos de carbono a los cuales están unidos un anillo aromático o no aromático de 5 ó 6 miembros que contiene 0, 1 ó 2 heteroátomos seleccionados a partir de nitrógeno, oxígeno o azufre. Dentro del contexto de la explicación de "opcionalmente sustituido", "alquilo" significa alquilo de C1-3, "Alquenilo" significa alquenilo de C1-3, "alquinilo" significa alquinilo de C1-3, "acilo" significa acilo de C1-3 y "arilo" significa furilo, tienilo, pirrolilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, piridilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, 1 ,3,5-triazinilo, fenilo, indazolilo, indolilo, indolizinilo, isoindolilo, benzi[bJfuranilo, benzo[b]tiofenilo, benz-imidazolilo, benztiazolilo, purinilo, quinolinilo, ¡soquinolilo, quinolilo, ftalazinilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, 1 ,8-naftiridinilo, pteridinilo, naftilo o azulenilo, preferiblemente fenilo, piridilo o naftilo. Los sustituyentes opcionales pueden contener éstos mismos sustituyentes opcionales adicionales. Los sustituyentes opcionales preferidos incluyen alquilo de C1-3 tales como por ejemplo metilo, etilo, y trifluorometilo, fluoro, cloro, bromo, hidroxilo, alquiloxi de C1-3 tales como por ejemplo metoxi, etoxi y trifluorometoxi, y amino. "Heteroátomo" significa un átomo tales como N, O o S. "Anillos de cinco o seis miembros" son por ejemplo: anillos furano, tiofeno, pirrol, oxazol, tiazol, imidazol, pirazol, isoxazol, isotiazol, 1 ,2,3-oxadiazoI, 1 ,2,3-triazol, 1 ,3,4-tiadiazol, piridina, piridazina, pirimidina o pirazina. A la invención pertenecen todos los compuestos que tienen la fórmula (1), racematos, mezclas de diaestereoméros y los estereoisómeros individuales. Por lo tanto los compuestos en los cuales los sustituyentes sobre los átomos de carbono potencialmente asimétricos se encuentran en la configuración R o en la configuración S pertenecen a la invención. Los profármacos son agentes terapéuticos los cuales son inactivos per se pero se transforman hacia uno o más metabolitos activos. Los profármacos son derivados bioreversibles de las moléculas fármaco utilizadas para superar algunas barreras para la utilidad de la molécula del fármaco parental. Estas barreras incluyen, pero no se limitan a, solubilidad, permeabilidad, estabilidad, metabolismo presistémico y limitaciones en direccionamiento (Medicinal Chemistry: Principies and Practice, 1994, ISBN 0- 85186-494-5, Ed.: F. D. King, p. 215; J. Stella, "Prodrugs as therapeutics", Expert Opin. Ther. Patents. 14 (3), 277-280, 2004; P. Ettmayer et al., "Lessons learned from marketed and investigational prodrugs", J. Med. Chem., 47, 2393-2404, 2004). Los profármacos, por ejemplo los compuestos los cuales cuando se administran a humanos mediante cualquier ruta conocida, se metabolizan hacia compuestos que tienen la fórmula (1), pertenecen a la invención. En particular esto se refiere a compuestos como grupos amino primarios o secundarios o grupos hidroxi. Dichos compuestos se pueden hacer reaccionar con ácidos orgánicos para producir compuestos que tienen la fórmula (1) en donde un grupo adicional está presente el cual es fácilmente removido después de la administración, por ejemplo, pero no se limita a amidina, enamina, una base de Mannich, un derivado de hidroxil-metileno, un derivado de 0-(ac¡loximetileno carbamato), carbamato, éster, amida o enaminona. La ¡nvención particularmente se refiere a compuestos que tienen la fórmula (1) en donde: R-i representa hidrógeno, halógeno, CF3, alquilo de C1-6, hidroxi, alcoxi de C1-3 o OCF3, m = 1 , y todos los otros símbolos tienen los significados que se proporcionaron anteriormente.

Más particularmente, la ¡nvención se refiere a compuestos que tienen la fórmula (1 ) en donde: R-i representa hidrógeno, halógeno, CF3, alquilo de C1-6, hidroxi, alcoxi de C1-3 o OCF3, m = 1 , R2 representa un grupo Q que tiene la general formula (2), y todos los otros símbolos tienen los significados que se proporcionaron anteriormente. Incluso más particularmente, la ¡nvención se refiere a compuestos que tienen la fórmula (1) en donde: R-i representa hidrógeno, halógeno, CF3, alquilo de C1-6, hidroxi, alcoxi de C1-3 o OCF3, m = 1 , R2 representa un grupo Q que tiene la fórmula general (2), R3 representa un grupo metilo, R4 representa un grupo alquilo de C1-3 sustituido con un anillo de seis miembros saturado, opcionalmente sustituido el cual opcionalmente contiene uno o más heteroátomos, y [ ]n tiene los significados anteriormente proporcionados. Los compuestos más preferidos de la invención son aquellos que tienen la fórmula (1 ) en donde: R-i representa hidrógeno, halógeno, CF3, alquilode C1-6, hidroxi, alcoxi de C1-3 o OCF3, m = 1 , R representa un grupo Q que tiene la fórmula general (2), R3 representa un grupo metilo, R4 representa un grupo metileno sustituido con un anillo piperidina opcionalmente sustituido, y [ ]p tiene los significados anteriormente proporcionados. Las sales farmacéuticamente aceptables se pueden obtener utilizando procedimientos estándares bien conocidos en la técnica, por ejemplo mediante la mezcla de un compuesto de la presente invención con un ácido adecuado, por ejemplo un ácido inorgánico tal como ácido clorhídrico, o con un ácido orgánico. Los compuestos de la invención de la fórmula general (1 ), así como las sales de los mismos, tienen actividad agonística ORL1. Estos son útiles en el tratamiento de trastornos en los cuales participan los receptores ORL1 , o los cuales se pueden tratar vía manipulación de esos receptores especialmente, pero no limitados a, condiciones de dolor agudo y crónico, trastornos metabólicos semejantes a anorexia nerviosa y bulimia nerviosa, obesidad; trastornos gastrointestinales en particular síndrome de intestino irritable, enfermedad de intestino inflamatorio (enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa), diarrea, constipación, dolor visceral, inflamación del tracto urinario, trastornos renales caracterizados por desbalances de retención/excreción de agua o excreción de sal; trastornos cardiovasculares tales como infarto del miocardio, arritmias, hipertensión, trombosis, anemia, arteriosclerosis, angina de pecho, trastornos oftalmológicos semejantes a glaucoma; trastornos respiratorios incluyendo enfermedad pulmonar obstructiva crónica, bonquitis y fibrosis quística; enfermedades del sistema inmune, e infecciones virales. Las propiedades agonísticas del receptor ORL1 in vitro e in vivo de los compuestos de la invención se determinaron utilizando los métodos descritos a continuación.

Afinidad por los receptores QRL1 de humano La afinidad de los compuestos para los receptores ORL1 de humano se determinó utilizando el ensayo de unión al receptor in vitro descrito por Ardati eí al., Mol. Pharmacol., 5_ , 816, 1997. Brevemente, las preparaciones de membrana se obtuvieron a partir de células CHO (ovario de hámster chino) en las cuales el receptor ORL1 de humano se expresa establemente. Las membranas se incubaron con [3H]-nociceptina en la ausencia o presencia de los compuestos prueba en diferentes concentraciones, diluidos en un regulador de pH adecuado. La unión no específica se define como la unión remanente en la presencia de nociceptina 10"6 M. La separación de la radioactividad unida a partir de la radioactividad libre se realizó mediante filtración a través de filtros de fibra de vidrio Packard GF/B con varios lavados con regulador de pH enfriado en hielo utilizando un cosechador de células Packard. La radioactividad unida se midió con un contador de centelleo (Topcount, Packard) utilizando u cóctel de centelleo líquido (Microscint 0, Packard). La radioactividad medida se gráfico en contra de las curvas de desplazamiento de la concentración del compuesto prueba y se calcularon las curvas de desplazamiento mediante regresión logística de cuatro parámetros, resultando en los valores IC5o, es decir aquella concentración de desplazamiento del compuesto por medio del cual se desplaza 50% de los radioligandos. Se calcularon los valores de afinidad pK| mediante la corrección de los valores IC5o para la concentración de radioligando y su afinidad para el receptor ORL1 de humano de conformidad con la ecuación Cheng-Prusoff: pK, = -log (IC50 / (1+ S/Kd) ) en la cual la IC50 es como se describió anteriormente, S es la concentración de [3H]-nociceptina utilizada en el ensayo expresada en moles/l (típicamente de 0.2 nM), y K es la constante de disociación en equilibrio de la [3H]-nociceptina para los receptores ORL1 de humano (0.4 nM). Los compuestos de la invención tienen una alta afinidad para los receptores ORL1 en el ensayo de unión anteriormente descrito. Esta propiedad los hace útiles en el tratamiento de trastornos en los cuales participan los receptores ORL1 , o que se pueden tratar vía la manipulación de estos receptores.

Afinidad para los receptores opioides u. La afinidad de los compuestos para los receptores opioides µ se determinó utilizando el ensayo de unión al receptor in vitro descrito por Wang eí al., FEBS Letters, 338, 217, 1994. Brevemente, las preparaciones de membrana se obtuvieron a partir de células CHO en las cuales el receptor opioide µ de humano se expresaba establemente, y se combinaron con el ligando específico del opioide µ [3H]-DAMGO (D-Ala2, N-Me-Phe4, glicinol5-Encefalina) en la ausencia o presencia de compuestos prueba en diferentes concentraciones, diluidos en un regulador de pH adecuado. La unión no específica se definió como la unión remanente en la presencia de naloxona 10"6 M. La separación de la radioactividad unida a partir de la radioactividad libre se realizó como se describió anteriormente, y la afinidad de los compuestos se calculó de manera similar. Los compuestos de la invención tienen una baja afinidad para los receptores opioides µ en el ensayo de unión anteriormente descrito. Por lo tanto probbalemente no evocan los efectos laterales no deseados que se sabe que se presentan con los opioides semejantes a la morfina.

Agonismo del receptor ORL1 in vitro La activación del receptor ORL1 acoplado a la proteína G inhibe la actividad adenilato ciclasa y reduce la concentración intracelular del segundo mensajero AMPc. Utilizando un ensayo como se describe por Jenck eí al., Proc. Nati. Acad. Sci USA. 97. 4938-4943, 2000, se midió la actividad de los compuestos sobre los receptores ORL1. Se demostró que éstos son agonistas potentes con valores pEC50 coincidentes con sus valores pK¡.

Diarrea inducida por aceite de ricino en ratones conscientes Se mostró que los compuestos de la ¡nvención son capaces de reducir la diarrea inducida por aceite de ricino en ratones, como lo hizo el péptido nociceptina después de la administración subcutánea. Puesto que un péptido periféricamente administrado no penetra la barrera hematoencefálica, se indica que la reducción en diarrea mediada por ORL1 se media periféricamente.

Animales utilizados: Los ratones de NMRI se utilizaron para este modelo en el modelo de diarrea inducida por aceite de ricino. En todos los experimentos, un grupo consistió de 10 a 12 animales. Procedimientos experimentales: Al día del experimento, los ratones recibieron ya sea el compuesto o el vehículo (a intervalos de dos semanas). El aceite de ricino (8 ml/kg de peso corporal) se administró oralmente 30 minutos después y los animales se colocaron individualmente en jaulas con acceso libre a agua. Las heces se recolectaron después de un período de 5 horas. Durante este tiempo se determinó la calidad de las heces cada 20 minutos mediante inspección visual. Esta evaluación de la diarrea tiene un intervalo de 0 = sin producción, 1 = producción normal, 2 = diarrea ligera, 3 = diarrea moderada a 4 = diarrea severa. Por lo tanto, esta evaluación refleja el inicio y la intensidad de la diarrea. En estos experimentos se determinaron la evaluación media de diarrea y el peso seco de las heces. Análisis de datos: Los efectos de los compuestos se proporcionan como números relativos (porcentaje de valores control). Los datos originales registrados en los experimentos se compararon con los controles (sin compuesto) en los mismos animales mediante el apareamiento de dos pruebas t de dos lados o a un grupo control mediante una prueba t no apareada. Los valores de p<0.05 se tomaron como de importancia estadística.

Tránsito en el colon en ratas conscientes Se muestra que los compuestos de la invención no influyen sobre el tránsito normal del colon en las ratas. Esto también fue el caso para el péptido nociceptina después de la administración subcutánea. Puesto que el péptido periféricamente administrado no penetra la barrera hematoencefálica, se indica que la activación del receptor ORL1 periférico no altera el tránsito gastrointestinal normal. En contraste la activación del receptor opioide µ periférico es capaz de alterar fuertemente el tránsito en este modelo. Por lo tanto, esta prueba muestra la selectividad de los compuestos de la invención por el receptor ORL1. Animales utilizados: Para los experimentos se utilizaron ratas macho Sprague Dawley. En todos los experimentos, un grupo consistió de 10 a 12 animales. Procedimientos experimentales: Antes de los experimentos las ratas fueron equipadas con una fístula en ciego crónica de titanio bajo anestesia general. Los animales se dejaron recuperar de la cirugía y se entrenaron para un régimen de alimentación de acceso libre a croquetas durante 3 horas por día. Al día de los experimentos después del periodo de alimentación, se inyectó una sustancia marcadora (2 ml de una suspensión que contenía 80% de sulfato de bario) vía la fístula dentro del ciego y los animales recibieron ya sea el compuesto o el vehículo. Subsecuentemente éstos se colocaron en jaulas metabólicas y los concentrados fecales se recolectaron a intervalos de una hora por un período de 21 horas utilizando un sistema de recolección automatizada. Durante este tiempo los animales tuvieron acceso libre al agua. El contenido de sulfato de bario en las heces se analizó radiográficamente y las heces fueron pesadas. La función del marcador contenido en las heces contra el tiempo y la cantidad de las heces permitieron el análisis del tiempo de retención medio del sulfato de bario, por ejemplo el tiempo de tránsito en el colon. Se determinaron el tiempo de retención medio de los concentrados que contenían BaS04 y el producto de heces total. Análisis de datos: Los efectos de los compuestos se proporcionan como números relativos (porcentaje de los valores control). Los datos originales registrados en los experimentos se compararon con los controles (sin el compuesto) en los mismos animales mediante las pruebas t apareada de dos lados. Los valores de p<0.05 se tomaron como de importancia estadística. En el modelo de tránsito en el colon, los datos control representan la media de dos experimentos control (antes y después del compuesto, a intervalos semanales).

Hipersensibilidad visceral inducida por ácido acético en ratas conscientes Se mostró que los compuestos de la invención eran capaces de reducir la hipersensibilidad visceral en ratas, como lo hizo el péptido nociceptina después de la administración subcutánea. Puesto que un péptido periféricamente administrado no penetra la barrera hematoencefálica, se indica que la reducción mediada por ORL1 en la hipersensibilidad visceral se media periféricamente. Animales utilizados: Ratas Sprague Dawley adultas, peso corporal: en el intervalo de 200 - 250 g. Un grupo consiste de 5 a 10 animales. Procedimiento experimental: Los animales se mantuvieron en ayuno por 24 horas antes de los experimentos con acceso libre al agua. Se inyectó ácido acético (0,6%, 1.5 ml) dentro del colon (10 cm proximales al ano). Después de 50 minutos un balón de goma de 5 cm de longitud (6-7 ml de volumen) se insertó rectalmente dentro del colon distal y se aseguró mediante cinta el tubo unido a la cola de la rata. La distensión colorectal se llevó a cabo mediante el establecimiento de la presión del balón a 0.098 atmósferas por 10 minutos. Durante este tiempo el número de constricciones abdominales se monitoreó mediante inspección visual. Los experimentos se continuaron solamente en animales que respondieron a la distensión colorectal con más de 10 constricciones abdominales. Estos animales recibieron una dosis particular de la sustancia o del vehículo y se repitió el protocolo de distensión colorectal a los 30, 60, 90 y 120 minutos después de la administración. Análisis de datos: Los resultados se proporcionan como media ± SD. El número de constricciones abdominales a los 30, 60, 90 y 120 minutos después de la administración de la sustancia o del vehículo así como los valores medios (30-120 minutos) se compararon con los valores previos mediante pruebas t apareada de dos lados. Los números relativos de constricciones abdominales (% de los valores previos) a los 30, 60, 90 y 120 minutos y los valores medios relativos (30-120 minutos) se compararon entre la sustancia y el vehículo mediante pruebas t no apareada de dos lados. Los valores de p<0.05 se tomaron como estadísticamente significativos.

Agonismo del receptor ORL1 in vivo: falta de penetración al SNC Se mostró que la mayoría de los compuestos de la invención carecen de actividad en el procedimiento de vocalización ultrasónica inducida por estrés en adultos (AUV) como se describió previamente por Van der Poel eí al., Psvchopharmacoloqy, 97, 147-148, 1989. Esto demuestra que los compuestos no penetran la barrera hematoencefálica. El péptido nociceptina también es activo en este ensayo, pero con el objeto de demostrar su efecto, necesita administrase diariamente dentro del cerebro (mediante inyección intracerebroventricular).

Ejemplos de síntesis de intermediarios y productos finales (-)-trans-2-(6.6-Dimetil-bic¡clor3.1.nhept-2-¡l)-etanol (5) -^O U3 HO Y3r Bromuro de mirtanilo (2) La trifenilfosfina (116 g, 0.44 moles) se disolvió en acetonitrilo (1 I) y se enfrió en un baño con hielo bajo atmósfera de N2. Bromo (22.5 ml, 0.44 moles) se añadió gota a gota. La temperatura de la reacción exotérmica se mantuvo por debajo de 10°C. Después del término de la adición, el baño con hielo se removió y lentamente se añadió (-)-trans-mirtanol (1) (2,686 g, 0.44 moles) disuelto en acetonitrilo (250 ml). Después del término de la adición, la solución de color amarillo claro se sometió a reflujo por 3 horas utilizando un equipo Dean-Stark. Durante la reacción, se removió el solvente en la trampa de agua 20 veces (casi 200 ml de solventes en total). El análisis GC reveló una conversión completa de la materia prima. La mezcla se evaporó hasta secarla. La mezcla sin purificar se purificó sobre columna de sílice (eluyente: diclorometano/éter dietílico 1/1 , v/v). Esto resultó en 87.8 g de bromuro 2 (91 %) como aceite amarillo claro.

Cianuro de mirtanilo (3) El bromuro de mirtanilo (2) (87.8 g, 0.41 moles) se disolvió en dimetilformamida (1 I). Se añadió cianuro de sodio (40 g, 0.81 moles) y la mezcla se agitó a reflujo por 5 horas. El análisis GC reveló una conversión completa. La mezcla se diluyó con agua (3 I) y se extrajo con éter ter-butil metílico (TBME, 3x 1.5 I). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S?4 y se concentró hasta secarla. La mezcla sin purificar se purificó sobre columna de sílice (eluyente: heptano/diclorometano, 1/1 , v/v) para producir 52.4 g (80%) de cianuro (3) como líquido incoloro.

Ester etílico (4) El etanol (500 ml) se enfrió en un baño con hielo. Se añadió ácido sulfúrico (190 ml) gota a gota. Se añadió el cianuro (3) (52.4 g, 0.32 moles) disuelto en etanol (100 ml) y la mezcla se agitó a reflujo durante toda la noche. El análisis GC reveló una adición completa. La mezcla se enfrió y se añadió agua (1.5 I). La mezcla se extrajo con TBME (3x 1.5 I). La capa orgánica se lavó con NaHC?3 (satuurado 1 I), se secó sobre Na2S04 y se concentró. Rendimiento: 54.2 g de éster 5 (80%) como un líquido casi incoloro. El producto sin purificar (4) se utilizó en la siguiente reacción sin purificación. (-)-trans-2-(6,6-Dimetil-biciclor3.1.nhept-2-¡l)-etanol (5) A una suspensión de hidruro de litio aluminio (20 g, 0,52 moles) en tetrahidrofurano (1 I) se le añadió éster (4) (54.2 g, 0.26 moles) disuelto en tetrahidrofurano (500 ml). Después del término de la adición la mezcla se sometió a reflujo por 1 hora. El análisis GC reveló una conversión completa de la materia prima. La mezcla se enfrió en un baño con hielo y se añadió cuidadosamente HCl (1M, 1 I). Después del término de la adición, la mezcla se diluyó con agua (1 I) y se extrajo con TBME (3x 1.5 I). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04 y se concentró hasta secarla. La mezcla sin purificar se purificó mediante destilación de Kugelrohr (p.e. 85°C, 2.9x10"2 matmósferas). Rendimiento: 35.9 g del compuesto 1 (65%) como aceite incoloro. (+)-trans-2-(6.6-Dimetil-biciclor3.1.11hept-2-¡n-etanol (10) 9 10 Mesilato de mirtanilo (7) Se añadieron 18.1 g (0.12 moles) de (+)-trans-mirtanol (6) a una solución de 18.5 ml de cloruro de mesilo (2 equivalentes, 0.24 moles, 27.5 g) y 49 ml de piridina (5 equivalentes, 0.60 moles, 47.5 g) en 400 ml de DCM. La mezcla de reacción se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. Se añadió agua y la mezcla de reacción se agitó por 1 hora. La capa orgánica se extrajo y la capa acuosa se extrajo dos veces más. Las capas orgánicas combinadas se lavaron (NaHC03 saturado, agua, salmuera), se secaron (Na2S0 ) y se evaporaron in vacuo para producir 25,9 g (91%) de mesilato (7) como un aceite incoloro.

Cianuro de mirtanilo (8) El mesilato de mirtanilo (7) (25,9 g, 0.11 moles) se disolvió en DMSO (250 ml). Se añadió cianuro de potasio (4 equivalentes, 29.2 g, 0.45 moles) y la mezcla se agitó a 70°C por 2 días. El análisis GC reveló una conversión completa. La mezcla se diluyó con agua (750 ml) y se extrajo con TBME (3x 300 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04 y se concentró hasta secarla para producir 17,7 g (rendimiento cuantitativo) de cianuro (8) como un aceite incoloro.

Ester etílico (9) El etanol (200 ml) se enfrió en un baño con hielo. Se añadió ácido sulfúrico (80 ml) gota a gota. Se añadió el cianuro (8) (17.7 g, 0.11 moles) disuelto en etanol (40 ml) y la mezcla se agitó a reflujo durante toda la noche. El análisis GC reveló una adición completa. La mezcla se enfrió y se añadió agua (1 I). La mezcla se extrajo con TBME (3x 500 ml). La capa orgánica se lavó con NaHC03 (saturado, 500 ml), se secó sobre Na2S04 y se concentró. Rendimiento: 20.4 g de éster (9) (88%) como un aceite amarillo. El producto sin purificar (9) se utilizó en la siguiente reacción sin purificación. (+)-trans-Dihidronopol (10) A una suspensión de hidruro de litio aluminio (7.4 g, 0.19 moles) en tetrahidrofurano (350 ml) se le añadió éster (9) (20.1 g, 0.09 moles) disuelto en tetrahidrofurano (200 ml). Después del término de la adición la mezcla se sometió a reflujo por 2 horas. La mezcla se enfrió en un baño con hielo y cuidadosamente se añadió HCl (1 M, 1 I). Después del término de la adición, la mezcla se diluyó con agua (300 ml) y se extrajo con TBME (3x 500 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04 y se concentró hasta secarlo. La mezcla sin purificar se purificó mediante destilación de Kugeirohr (p.e. 85°C, 7.84 x10"2 matmósferas). Rendimiento: 9.2 g del compuesto (10) (61 %) como aceite incoloro. (-)-cis-2-(6,6-D¡met¡l-b¡ciclor3.1.11hept-2-il)-etanol (11) La síntesis del análogo cis con (-)-yS-pineno como materia prima se describe en J. Amer. Chem. Soc. 68, 638, 1946 y en las patentes de E.U.A. 2,427,343, 2,427,344 y 2.427.345(+)-cis-2-(6,6-dimetil-biciclo[3.1.1]hept-2-il)- etanol (18) 15 1 6 17 HO' 18 (+)-ß-pineno (13) En cristalería seca, se añadió óxido de í-butil potasio (KOí-Bu, 49.4 g; 0.44 moles) a n-BuLi (176 ml; 2.5 M en hexano). La suspensión se enfrió a -78°C. El (+)-a-pineno (12) (50 g; 0.37 moles) se añadió gota a gota. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó por 45 horas. La mezcla de reacción se enfrió a -78°C y se añadió B(OMe)3 (137 ml; 1.20 moles) gota a gota. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente (exotérmica). Se añadió HCl al 10% (acuoso, 250 ml) gota a gota y la mezcla de reacción se agitó por 1 hora. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con heptano (2 x 200 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S04 y se evaporaron hasta secarlas para producir 36.7 g de aceite amarillo. El producto sin purificar se purificó utilizando destilación de Kugeirohr (7.8-11.76 mbar; 50-60DC) para producir 36.6 g (0.27 moles, rendimiento = 73%, 88% puro) de (+)-D-pineno (13) como un aceite incoloro.

Mirtanol (14) Se disolvió (+)-ß-pineno (13) (36.6 g; 0.27 moles) en THF (100 ml) y se enfrió a 0°C. Se añadió BH3 DMS en THF (2 M; 47.3 ml) gota a gota. La mezcla de reacción se agitó por 0.5 horas. Se añadió etanol (90 ml). Se añadió NaOH 1 M (acuoso) (95 ml). La mezcla de reacción se enfrió a 0°C. Se añadió 33 ml H2O2 al 30% gota a gota mientras que la temperatura no se dejó elevar por arriba de 35°C. La mezcla de reacción se sometió a reflujo por 1 hora y se vertió en agua (1 I). La solución se extrajo con TBME. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre Na2S04 y se evaporaron hasta secarlas. El c -pineno remanente se destiló utilizando estimulación de Kugeirohr (7.8-11.76 mbar; 50-60°C), produciendo 38.6 g (0.25 moles, rendimiento = 93%) de (+)-cis-mirtanol (14) como un aceite incoloro.

Mesilato de mirtanilo (15) Se añadieron 15.0 g (0.10 moles) de (+)-cis-mirtanol (14) a 15 ml de una solución de cloruro de mesilo (2 equivalentes, 0.20 moles) y 40 ml de piridina (5 equivalentes, 0.50 moles) en 300 ml de DCM. La mezcla de reacción se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. Se añadió agua y la mezcla de reacción se agitó por 1 hora. La capa orgánica se extrajo y la capa acuosa se extrajo dos veces más. Las capas orgánicas combinadas se lavaron (NaHC?3 saturado, agua, salmuera), se secaron (Na2S04) y se evaporaron in vacuo para producir 21.6 g (rendimiento = 93 %) de mesilato (15) como un aceite incoloro.

Cianuro de Mirtanilo (16) Se disolvió mesilato de mirtanilo (15) (21.6 g, 0.093 moles) en DMSO (230 ml). Se añadió cianuro de potasio (4 equivalentes, 24.2 g, 0.37 moles) y la mezcla se agitó a 70°C por 8 días. El análisis GC reveló una conversión completa. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con heptano. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04 y se concentró hasta secarlo para producir 15.8 g (cuantitativamente) de cianuro (16) como un aceite incoloro.

Ester etílico (17) El etanol (150 mL) se enfrió en un baño con hielo. Se añadió ácido sulfúrico (60 ml) gota a gota. El cianuro (16) (16 g) disuelto en etanol (30 ml) se añadió y la mezcla se agitó a reflujo durante toda la noche. El análisis GC reveló una conversión completa. La mezcla se enfrió y se añadió agua (1 I). La mezcla se extrajo con TBME (3x 500 ml). La capa orgánica se lavó con NaHC?3 saturado (acuoso, 500 ml), se secó sobre Na2S04 y se evaporó hasta secarla. Rendimiento: 20.6 g de éster (17) (cuantitativamente) como un aceite amarillo. El producto sin purificar (17) se utilizó en la siguiente reacción sin purificación. (+)-cis-Dihidronopol (18) A una suspensión de hidruro de litio aluminio (8.3 g, 0.22 moles) en tetrahidrofurano (400 ml) se le añadió éster (17) (23.6 g, 0.11 moles) disuelto en tetrahidrofurano (200 ml). Después del término de la adición la mezcla se sometió a reflujo por 2 horas. La mezcla se enfrió en un baño con hielo y se añadió cuidadosamente HCl (1 M, 1 I). Después del término de la adición, la mezcla se diluyó con agua (300 ml) y se extrajo con TBME (3x 500 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04 y se concentró hasta secarla, produciendo un aceite amarillo (13.4 g). La mezcla sin purificar se purificó mediante destilación de Kugeirohr (p.e. 85°C, 7.84 x 10"2 mbar). Rendimiento: 8.7 g (51 milimol; y = 47%) del compuesto (18) como aceite incoloro. 1 -Mesil-2-(6.6-d¡met¡l-biciclor3.1. phept-2-íl)-etanol (20) (para todos los estereoisómeros de dihidronopol) 19 20 A una suspensión de 67 g (0.4 moles) de (-)-cis-2-(6,6-Dimetil-biciclo[3.1.1]hept-2-il)-etanol (19) en 300 ml de CH2CI2 a 0°C se le añadieron 139 ml (1 mol) de trietilamina. A esta mezcla 55.2 g (0.48 moles) se le añadió cloruro de mesilo gota a gota en 100 ml de diclorometano. Después de 5 horas a temperatura ambiente la reacción se completó y se añadieron 300 ml de solución acuosa de HCl 1 N acuoso. Después de la separación la capa acuosa se lavó con diclorometano dos veces y las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentró in vacuum produciendo 91.6 g (0.37 moles al 91%) de un producto oleoso sin purificar color naranja. Este material sin purificar se utilizó para el siguiente paso sin purificación adicional. 8-r2-(6.6-Dimet¡l-biciclor3.1.nhept-2-¡n-etin-3-(3-metilamino- propil)-1-fenil-1 ,3,8-triaza-espiror4.51decan-4-ona (24) 8-r2-(6,6-Dimetil-bic¡clor3.1.11hept-2-il)-et¡n-1 -fenil-1 ,3,8-triaza-espirof4.51decan-4-ona (22) feiemplo no. 1 en los cuadros a continuación] El compuesto espiro (21) (310 g; 1.34 moles) y mesilato de (di)hidroponol (20) (371 g; 1.51 moles) se disolvieron en metil etil cetona (MEK, 15 I). Se añadieron carbonato de potasio (735 g; 5.33 moles) y yoduro de sodio (226 g; 1.51 moles) y la mezcla se sometió a reflujo durante toda la noche. Después de enfriar la mezcla de reacción el solvente se evaporó. El residuo se tomó en CH2CI2 (5 I) y se agitó con agua (4 I). Las capas se separaron, la capa orgánica se secó sobre Na2S04, y el solvente se evaporó.

El sólido remanente se lavó con Et20 (3 I) y se filtró. El filtrado de evaporó y se lavó con Et20 (300 ml). El sólido se filtró. (466.3 g; 1.22 moles; 91%). 3-(3-Cloro-prop¡l)-8-r2-(6,6-dimetil-biciclor3.1.1lhept-2-in-etin-1- fenil-1 ,3,8-triaza-espiror4.51decan-4-ona (23) El THF (1500 ml) se enfrió en un baño de hielo/agua. El compuesto espiro (22) (150.8 g; 0.40 moles) y el íer-butóxido de potasio (49 g; 0.44 moles) se añadieron y la mezcla resultante se agitó a 0°C por 30 minutos. La mezcla se volvió clara. 1-bromo-3-cloropropano (43 ml; 0.44 moles) en THF (150 ml) se añadió gota a gota a la solución a 0°C. Después del término de la adición el enfriamiento se removió y la solución se agitó a 50°C por 4 horas. Luego del enfriamiento la mezcla se vertió dentro del KHSO4 saturado (acuoso, 1000 ml) y se diluyó con EtOAc (500 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 750 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera (1x 500 ml cada uno). Después de secado sobre Na2S04 el solvente se evaporó para producir un aceite amarillo (205.6 g; 0.45 moles; rendimiento cuantitativo). 8-r2-(6.6-Dimetil-b¡ciclor3.1.nhept-2-il)-etil1-3-(3-met¡lamino-prop¡l)-1-fenil-1 ,3,8-triaza-esp¡ro|4.51decan-4-ona (24) feiemplo no. 13 en los cuadros a continuación] El compuesto spiro sin purificar (23) (162.8 g; 0.36 moles) se disolvió en solución de metilamina/ EtOH (Fluka, 8M; 1154 ml; 9.23 moles). El yoduro de sodio (2.16 g; 0.014 moles) se añadió y la solución se agitó a 70°C bajo una atmósfera de N2 por 3 días. Después del enfriamiento la mezcla de reacción se diluyó con agua y EtOAc (500 ml cada uno). La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3x 800 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera (500 ml). Después de secado sobre Na2S04 el solvente se evaporó para producir un aceite amarillo. Este aceite se purificó mediante cromatografía en columna (Si02; CH2CI2/MeOH 90:10; que contenía 1% de NH37N/MeOH) para producir 30 g de (24) con una pureza de 93% (de conformidad con CLAR/EM) y 85 g de (24) con una pureza de 96% (115 g; 0.25 moles; 70%).

Variación del patrón de sustitución de anillo de fenilo en el núcleo espiro 8-r2-(6,6-Dimetil-biciclor3.1.nhept-2-il)-et¡p-1 -fenil- 1 ,3,8-triaza-espiro[4.51decan-4-ona (22) (En el esquema anteriormente mencionado TMSCN = cianuro de trimetilsililo ) 1-r2-(6.6-D¡met¡l-b¡c¡clor3.1.nhept-2-il)-et¡n-piperidin-4-ona (26): Una mezcla de 61.1 g (0.40 moles) de clorhidrato de hidrato de piperidona (25), 112.8 g (0.46 moles) de mesilato de dihidronopol (20), 69.0 g (0.46 moles) de Nal, 273 g (1.97 moles) de K2C03 y 4.3 I de MEK se sometió a reflujo durante toda la noche. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se concentró in vacuo. El residuo se disolvió en diclorometano (1.5 I) y agua (1.5 I) y las capas se separaron. La capa orgánica se lavó con agua (1 I) y se secó sobre Na2S04. La capa se concentró in vacuo para producir 113 g de productos sin purificar, el cual se purificó mediante cromatografía en columna (Si02> heptano: EtOAc, 6:1^1 :1 ) para producir 77.7 g (0.31 moles, 78 %) del compuesto (26) como un aceite color naranja. 1 -r2-(6.6-Dimetil-biciclor3.1.11hept-2-il)-etin-4-(3-fluoro-fenilamino)-piperidina-4-carbonitrilo (28a): Una solución de 20.0 g (80.2 milimoles) de (26) y 8.4 ml (87 milimoles) de 3-fluoroanilina (27a) en 65 ml de ácido acético se enfrió con un baño de agua fría. 10.7 ml (80.2 milimoles) de cianuro de trimetilsililo se añadieron gota a gota durante un periodo de 10 minutos manteniendo la temperatura por debajo de 40°C. La mezcla se agitó por 2 horas a temperatura ambiente y se vertió en una mezcla de amoniaco acuoso (80 ml) y hielo (80 g). El pH se ajustó a 10 con NH3 concentrado. La mezcla se extrajo con cloroformo (3 x 200 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S04 y se concentraron in vacuo para producir 40.0 g de productos sin purificar, los cuales se purificaron mediante cromatografía en columna (S¡02, heptano: EtOAc, 1 :1 ) para producir 28.7 g (77.7 milimoles, 97%) de (28a). También es posible utilizar el producto sin purificar en el siguiente paso sin purificación.

Amida del ácido 1-r2-(6.6-D¡metil-b¡c¡clor3.1.1lhept-2-¡l)-etin-4-(3- fluoro-fen¡lam¡no)-piperid¡na-4-carboxíl¡co (29a): Una mezcla de 28.7 g (78 milimoles) (28a), 135 ml de ácido fórmico y 135 ml de anhídrido acético se agitaron a temperatura ambiente por 1 día. La reacción se monitoreó mediante 1H-RMN y EM. Después del término de la reacción, la mezcla de reacción se vertió dentro de hielo-agua (800 ml). El pH se ajustó a 10 mediante la adición de 33% de NaOH (acuoso). La capa acuosa se extrajo con DCM (3x 1 I). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S?4 y se concentraron in vacuo. El residuo se disolvió en 550 ml de alcohol íer-butílico, 45 ml de agua y 45 ml de amoniaco acuoso concentrado. Los 90 ml de peróxido de hidrógeno al 35% se añadieron gota a gota a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante toda la noche. La reacción se monitoreó mediante TLC. Se añadieron 900 ml de agua y la mezcla se extrajo con DCM (3 x 500 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S04 y se concentraron in vacuo para producir 29.3 g (76 milimoles, 98 %) de (29a) como un sólido amarillo, el cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación. 8-r2-(6,6-Dimet¡l-b¡ciclor3.1.nhept-2-il)-et¡n-1-(3-fluoro-fen¡l)- 1 ,3,8-triaza-espiror4.5ldecan-4-ona (30a): feiemplo no. 9 en los cuadros a continuación] Una solución de 29.3 g (76 milimoles) de (29a) en 400 ml de formamida se calentó por 2 horas a 200°C. La solución se volvió de amarilla a negra. La reacción se monitoreó mediante 1H-RMN. Después del término de la reacción, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se vertió en hielo-agua (800 g). La mezcla se extrajo con DCM (6x 1 I). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SÜ4 y se concentraron in vacuo. El residuo se disolvió en 1.2 I de metanol y se añadieron 4.3 g (114 milimoles) de borohidruro de sodio porción a porción. La mezcla se agitó por 1 hora a temperatura ambiente y otra hora a 60°C. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se detuvo con 25 ml de agua. El solvente se evaporó in vacuo. El residuo se disolvió en 750 ml de amoniaco y se extrajo con DCM (7x 1.5 I). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S04 y se concentraron in vacuo para producir 24.8 g de productos sin purificar, los cuales se purificaron mediante cromatografía en columna (Si02> heptano:EtOAc, 1 :1 -> 1:3). La trituración con Et20 del producto eluído produjo 3.44 g (8.6 milimoles, 11.3% a partir del compuesto (26)) del compuesto (30a) como un sólido blanco. 8-r2-(6,6-Dimet¡l-biciclof3.1.nhept-2-il)-etin-1-(3-metoxi-fen¡n- 1 ,3,8-triaza-espiro[ .5ldecan-4-ona (30b): feiemplo no. 8 en los cuadros a continuación] La secuencia se repitió iniciando a partir de 68.0 g (0.27 moles) de (26); el compuesto (30b) se purificó mediante cromatografía en columna y la trituración con éter dietílico para producir 13.9 g (34 milimoles, 12% producido partir de (26)) como un sólido blancuzco. 8-r2-(6,6-Dimet¡l-bic¡clor3.1.nhept-2-il)-et¡n-1-(3-cloro-fen¡l)-1.3.8- triaza-espiro["4.51decan-4-ona (30c): fejemplo no. 7 en los cuadros a continuación] La secuencia se repitió iniciando a partir de 67.4 g (0.27 moles) de (26); el compuesto (30c) se purificó mediante cromatografía en columna y la trituración con éter dietílico para producir 7.42 g (17.8 milimoles, 6.6% producido partir de (26)) como un sólido blancuzco. 8-r2-(6,6-D¡metil-b¡ciclor3.1.nhept-2-il)-etin-1-(3-trifluorometil-fenil)-1 ,3.8-triaza-espiror4.51decan-4-ona (30d): feiemplo no. 10 en los cuadros a continuación] Para el compuesto (30d) se llevó a cabo la misma secuencia, pero en lugar del producto deseado, se aisló el compuesto (29d). Por lo tanto la secuencia se repitió parcialmente. El compuesto se formiló con ácido fórmico y anhídrido acético, se calentó en formamida y finalmente se redujo con borohidruro de sodio. El producto sin purificar se purificó mediante cromatografía en columna (S¡02, EtOAc) y subsecuentemente la trituración con éter dietílico produjo 7.39 g (6.6% rendimiento general a patir de (26)) como un sólido blanco. 8-r2-(6,6-Dimetil-biciclof3.1.nhept-2-¡l)-etin-1-(4-fluoro-fen¡l)- 1 ,3,8-triaza-espiroí4.51decan-4-ona (30e): feiemplo no. 5 en los cuadros a continuación] La secuencia se repitió iniciando a partir de 45.0 g (0.18 moles) de (26); el compuesto (30e) se purificó mediante cromatografía en columna y la trituración con éter dietílico produjo 9.82 g (24.5 milimoles, 13.6% rendimiento a partir de (26)) como un sólido color gris. 8-r2-(6,6-D¡met¡l-biciclor3.1.1lhept-2-¡l)-et¡n-1-(4-metoxl-fen¡l)-1 ,3,8-triaza-espiror4.5ldecan-4-ona (30f): feiemplo no. 6 en los cuadros a continuación] La secuencia se repitió iniciando a partir de 45.0 g (0.18 moles) de (26); el compuesto (30f) se purificó mediante cromatografía en columna y la trituración con éter dietílico produjo 8.94 g (21.7 milimoles, 12.1% rendimiento a partir de (26)) como un sólido blanco.

Ester ter-butílico del ácido 1-oxa-6-aza-espiro[2.51octano-6-carboxílico (32): A una solución de 44.9 g (0.225 moles) de éster íer-butílico del ácido 4-oxo-piperidina-1 -carboxílico (31) en 500 ml de acetonitrilo se le añadieron sucesivamente 59.5 g (0.27 moles) de yoduro de trimetil sulfoxonio y 18.9 g (0.338 moles) de hidróxido de potasio finamente fragmentado. La mezcla de reacción se agitó vigorosamente por dos días bajo una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente. Después de la conversión total el solvente se evaporó in vacuo y el residuo se tomó en diclorometano. La capa orgánica se lavó con una solución acuosa de ácido cítrico (6x), se secó sobre sulfato de sodio y se concentró in vacuo. Este producto sin purificar se utilizó sin purificación adicional para el siguiente paso (43.5 g, 0.204 moles, rendimiento del 90.6%).

Ester ter-butílico del ácido 4-(r(3-(8-r2-(6,6-Dimetil- b¡ciclor3.1.nhept-2-il)-etin-4-oxo-1-fen¡l-1.3.8-triaza-espiror4.5ldec-3-il}prop¡l)- metil-am¡no1-metil)-4-hidroxi-p¡peridina-1 -carboxílico (33): feiemplo no. 35 en los cuadros a continuación] 2.6 g (5.74 milimoles) del compuesto (24) se colocaron en un matraz y se diluyeron con 20 ml de etanol. A esta solución se le añadieron 1.88 g (8.81 milimoles) del epóxido (32) y la mezcla se calentó a reflujo hasta que la CCF mostró una conversión completa. Para trabajar el solvente se evaporó y el residuo se tomó con acetato de etilo. Después de lavar con solución acuosa de carbonato de potasio, secar sobre sulfato de sodio y concentrar in vacuo, el material sin purificar se purificó vía cromatografía instantánea en columna produciendo un aceite viscoso amarillo claro (3.51 g, 5.15 milimoles, rendimiento del 89.8%). 8-r2-(6.6-D¡metil-biciclor3.1.11hept-2-il)-etin-3-(3-r(4-hidroxi-piperidin-4-¡lmetil)-met¡l-am¡noj-propil)-1-fen¡l-1.3,8-triaza-esp¡ror4.51decan-4-ona (34): feiemplo no. 37 en los cuadros a continuación] El derivado Boc (33) (2.79 g, 4.19 milimoles) se disolvió en tetrahidrofurano (25 ml). A esta solución se le añadieron 2 ml de solución acuosa concentrada de HCl y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. Después de que el análisis de CCF indicó una conversión completa el solvente se removió bajo presión reducida y el residuo resultante se disolvió en acetato de etilo. El lavado con solución de carbonato de potasio, secado de la capa orgánica con sulfato de sodio y la concentración in vacuo proveyeron el compuesto del título puro como un aceite viscoso amarillo claro (2.37 g, 3.8 milimoles, rendimiento de 90.7%).

Ester ter-butílico del ácido 4-|"(bencil-metil-amino)-met¡p-4-h¡droxi- piperidina-1 -carboxílico (35) El epóxido (32) (46 g, 216 milimoles) se disolvió en dioxano (300 ml). Se añadió bencil metilamina (75 ml, 583 milimoles) y la mezcla se agitó a reflujo por 90 horas. El análisis de CCF reveló conversión completa. La mezcla se evaporó hasta secarla. El exceso de bencil metilamina se removió mediante evaporación in vacuo (0.049 matmósferas, 80°C). Rendimiento: 69.3 g de aminoalcohol (35) (96%) como un aceite color naranja.

Ester ter-butílico del ácido 4-r(bencil-met¡l-amino)-met¡p-4-metoxi- piperidina-1 -carboxílico (36) El alcohol (35) (69.3 g, 200 milimoles) se disolvió en dimetil formamida (500 ml). NaH (9.2 g 230 milimoles), se lavó con pentano, se añadió en 5 porciones durante 30 minutos. Después del término de la adición la mezcla se agitó a temperatura ambiente por 45 minutos. Se añadió yoduro de metilo (14.8 ml, 240 milimoles) durante 1.5 minutos. La mezcla se agitó por .5 horas a temperatura ambiente. El análisis de CCF reveló una conversión de cerca del 80-90%. Extra NaH, 0.8 g, 20 milimoles) y se añadió yoduro de metilo (1.2 ml, 20 milimoles) y la mezcla se agitó por otras 2 horas a temperatura ambiente. El exceso de NaH se destruyó con agua (100 ml) y la mezcla se diluyó adicionalmente con agua (3.5 I). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (2x 1 I, 500 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera (1 I), se secó sobre Na2S04 y se concentró hasta secarla. Las trazas de dimetil formamida se removieron mediante evaporación in vacuo (0.39 atmósferas, 80°C). La mezcla remanente se purificó sobre sílice (eluyente: heptano/acetato de etilo, 4/1 a 3/1 v/v). Rendimiento: 55.2 g de amina (36) (80%) como aceite amarillo claro.

Ester ter-butílico del ácido 4-metoxi-4-metilaminometil-piperidina- 1 -carboxílico (37) La amina (36) (55 g, 158 millmoles) se disolvió en acetato de etilo (500 ml). Se añadió Pd-C (10%, en húmedo, 5 g) y la mezcla se agitó por 23 horas bajo una atmósfera de hidrógeno (0.98 atmósferas). El análisis de CCF reveló conversión completa. Extra Pd-C (2.5 g) se añadió y la mezcla se agitó bajo H2 (0.98 atmósferas) por 110 horas. El análisis de RMN reveló conversión completa. La mezcla se filtró sobre Celite, la cosecha de Celite se lavó con acetato de etilo y el filtrado se evaporó hasta secado. El residuo se purificó mediante destilación (bulbo a bulbo, 0.039 atmósferas, 130°C) produciendo 35 g del compuesto (37) (86%) como aceite incoloro. La síntesis de 8-[2-(6,6-Dimetil-bic¡clo[3.1.1]hept-2-il)-etil]-3-{3-[(4-metoxi-piperidin-4-ilmetil)-metil-amino]-propil}-1-fenil-1 ,3,8-triaza-espiro[4.5]decan-4-ona 39 [ejemplo no. 45 en los cuadros a continuación] iniciando con cloro (23) y amina (36) se llevó a cabo de manera similar a como se describe a continuación (métodos generales).

Diseño de librería con 8-[2-(6,6-Dimetil-biciclo[3.1.1]hept-2-il)- etil]-3-(2-metilamino-etil)-1-fenil-1 ,3,8-triaza espiro[4.5]decan-4-ona como materia prima Librería de amida, método I: La N-metil amina (40) (1.832 g, 4.24 milimoles) se disolvió en 170 ml de dicloro-metano. Esta solución núcleo se utilizó para producir amidas con diversas soluciones de cloruro ácido de la siguiente manera: 2 ml de la solución núcleo (0.05 milimoles de (40)) se trató con morfolina unida al polímero (0.162 milimoles). Después de agitar por 20 minutos a temperatura ambiente se añadió una solución del cloruro ácido correspondiente (0.06 milimoles) en 2 ml de diclorometano y la agitación se continuó por 1 día a temperatura ambiente. La reacción se monitoreó mediante análisis de CCF. Para eliminar el cloruro ácido remanente y el derivado de N-metil amina se añadieron los reactivos trisamina unida al polímero e isocianato (ambos se utilizan como eliminadores), respectivamente. De nuevo se continuó la agitación a temperatura ambiente durante toda la noche antes de que los polímeros fueran removidos mediante filtración. Los filtrados se concentraron bajo presión reducida. Utilizando este protocolo se han sintetizado 69 compuestos. La afinidad de cada amida sintetizada a los receptores ORL1 de humano se midió en el ensayo de unión in vitro.

Librería de amida, método II: A 200 µl de las soluciones de almacenamiento de los núcleos (0.25 M en THF) se les añadieron 200 µl de las soluciones de almacenamiento de los cloruros ácidos (0.25 M en THF), seguido por 50 µl de la solución de trietilamina (1.0 M en THF). Después de agitar durante toda la noche (17 horas) a 30°C el solvente se evaporó y los productos sin purificar se tomaron en DMSO para análisis, (nota: los reactivos insolubles se añadieron a mano). Utilizando este protocolo se han sintetizado 26 compuestos. La afinidad de cada amida sintetizada a los receptores ORL1 de humano se midió en el ensayo de unión al receptor in vitro.

Librería de abertura de epóxido: La N-metil amina (40) (1.316 g, 3.0 milimoles) se disolvió en 120 ml de alcohol isopropílico. Esta solución núcleo se utilizó para producir amino alcoholes con diversas soluciones de epóxido de la siguiente manera: a 2 ml de la solución núcleo (0.05 milimoles de (40)) se les añadió una solución del epóxido correspondiente (0.075 milimoles) en 2 ml de alcohol isopropílico. Está mezcla se calentó a 80°C por 2 días. El análisis de CCF se utilizó para monltorear las reacciones. Para el procesamiento se añadieron respectivamente, la trisamina unida al polímero y los reactivos de isocianato (ambos se utilizan como eliminadores). De nuevo se continuó la agitación a temperatura ambiente por dos días antes de que los polímeros se removieran mediante filtración simple. Los filtrados se concentraron bajo presión reducida. Utilizando este protocolo se han sintetizado 27 compuestos. La afinidad de cada aminoalcohol sintetizado al receptor ORL1 de humano se midió en el ensayo de unión al receptor in vitro.

Librería de urea: A 200 µl de las soluciones de almacenamiento de los núcleos (0.25 M en THF) se les añadieron 200 µl de las soluciones de almacenamiento de los isocianuros (0.25 M) en THF. Los viales se taparon y después de agitar durante toda la noche (17 horas) a 30°C el solvente se evaporó y los productos sin purificar se tomaron en DMSO para análisis. Utilizando este protocolo se han sintetizado 71 compuestos.

Librería de sulfonamida: Las soluciones de almacenamiento se prepararon a partir de los núcleos (0.25M) en THF y otros cloruros de sulfonilo (0.25 M) en THF. A 200 µl de la solución núcleo se le añadierob 200 µl de los cloruros de sulfonilo, seguido por 50 µl de una solución de DIPEA 1.0 M en THF. Los viales se taparon y calentaron a 30°C por 16 horas. Los productos se purificaron mediante medios de extracción en fase sólida por intercambio de ion catiónico. El solvente se evaporó y los productos sin purificar se tomaron en DMSO para análisis. Utilizando este protocolo se han sintetizado 69 compuestos.

Librería de alquilación: Las soluciones de almacenamiento se prepararon a partir de los núcleos (0.25 M) en DMF y de los haluros (0.25 M) en DMF. A 200 µl de solución núcleo se le añadieron 200 µl de la solución de haluro que incluía 1 equivalente de Kl, seguido por 50 µl de una solución de diisopropiletilamina (1.0 M). Los viales se taparon y calentaron por 17 horas. Modificaciones específicas: alfa-halo cetonas a 30°C; los otros a 60°C. Los productos se purificaron mediante medios de extracción en fase sólida por intercambio de ion catiónico. El solvente se evaporó y los productos sin purificar se tomaron en DMSO para análisis. Utilizando este protocolo se han sintetizado 61 compuestos.

Librería de carbamato: A una solución de núcleos (200 µL, 0.25M) en tetrahidrofurano se le añadió una solución de diisopropiletilamina (50 µL, 2M) en THF seguido por una solución de almacenamiento de cloroformoato (200 µL, 0.25 M) en THF. Los viales se taparon y se agitaron por 24 horas a 30 grados. Los productos se purificaron mediante medios de extracción en fase sólida por intercambio de ion catiónico. El solvente se evaporó y los productos sin purificar se tomaron en DMSO para análisis. Utilizando este protocolo se han sintetizado 21 compuestos.

Librería de íer-Urea: Procedimiento: Este procedimiento se siguió por la reacción del cloruro de carbamoilo y 2 x 75 aminas secundarias. Todos los viales y las botellas se tienen que secar a 100°C bajo vacío. Todos los solventes tienen que estar secos (tamices moleculares para CH2CI2 y K C03 para CH3CN).

Paso 1 9.2 milimoles del núcleo se disolvieron en 92 ml de CH2CI2 (tamiz molecular 4Á) = solución 0.1 M. A esta solución se le añadieron 5.68 ml de DIPEA (3.5 equivalentes). La mezcla se enfrió a 0°C (baño con hielo) y se añadió en una sola porción una solución de 2.728 g (4.6 milimoles) de trifosgeno en 36.8 ml de CH2CI2. El baño con hielo se removió y la mezcla se agitó por 30 minutos.

La reacción se monitoreó mediante CCF y LC-EM. La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida por 1 hora a 40°C y 19.6 matmósferas. El producto sin purificar se disolvió en 36.8 ml de CH3CN (secado sobre K2CO3) y se añadieron 1.92 ml de DIPEA, obteniendo una solución 0.25 M de cloruro de carbamoilo (B).

Paso 2 A 200 µl (0.25 M) de aminas secundarias en CH3CN se añadieron 200 µl (0.25 M) de cloruro de carbamoilo (B) en CH3CN, seguido por 1 equivalente de diisopropilamina. Los viales se taparon y se agitaron por 17 horas a 30°C. Las mezclas de reacción se concentraron, se disolvieron en EtOAc y se lavaron con solución al 5% de NaHC03. El solvente se evaporó y los productos sin purificar se tomaron en DMSO para análisis. Utilizando este protocolo se han sintetizado 49 compuestos.

Síntesis de compuestos individuales Elementos sintéticos utilizados para la preparación de los ejemplos descritos: Reacciones de alguilación con los compuestos (24)/(40): procedimiento general: El compuesto metil amina se disolvió en THF y se añadieron 1.1 equivalentes de düsopropll etil amina. A esta mezcla se le añadió el reactivo de alquilación apropiado (1 equivalente) y la solución se calentó a reflujo y se monitoreó mediante TLC. Después de la conversión total la solución se concentró y el residuo se tomó con solución acuosa de carbonato de sodio. La capa acuosa se extrajo varias veces con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se concentraron y el producto sin purificar se purificó adicionalmente vía cromatografía en columna (Si02, acetato de etilo o CH2Cl2/MeOH como eluyentes). 3-(3-f(2.4-Difluoro-bencil)-metil-amino1-propil)-8-f2-(6,6-dimetil- biciclo|"3.1.nhept-2-¡l)-et¡n-1-fenil-1 ,3,8-triaza-espiror4.51decan-4-ona Rendimiento: 52% [ejemplo no. 23 en los cuadros a continuación] 8-r2-(6,6-D¡met¡l-bic¡clor3.1.11hept-2-¡l)-etin-3-r3-(metil-piridin-4- ilmetil-amino)-prop¡l1-1-fenil-1.3.8-triaza-espiror4.5ldecan-4-ona Rendimiento: 32% [ejemplo no. 25 en los cuadros a continuación] 8-r2-(6,6-D¡met¡l-b¡ciclor3.1.11hept-2-il)-etin-3-r3-(metil-piridin-3-¡lmetil-am¡no)-propip-1-fenil-1 ,3,8-triaza-espiror4.51decan-4-ona. rendimiento: 15% [ejemplo nr. 26 en los cuadros a continuación] Variación: 8-r2-(6.6-Dimeti)-biciclor3.1.nhept-2-in-etill-3-r3-(metil-p¡ridin-2-¡l-am¡no)-prop¡p-1-fenil-1,3,8-triaza-espiror4.51decan-4-ona 1.7 g del compuesto metil amina 24 se disolvieron en 4 ml de 2-Fluoroplrldina y se sometieron a reflujo a 150°C. Después de la conversión total la mezcla de reacción se vertió dentro de agua y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo varias veces. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se concentraron in vacuo y se purificaron vía cromatografía en columna (SI02, acetato de etilo) Rendimiento: 60% [ejemplo no. 83 en los cuadros a continuación] Reacciones de abertura de epóxido con el compuesto (24)/(40): Procedimiento general: El compuesto metilamina se disolvió en EtOH/H20 (v/v = 10/1 , 2 milimoles/ml). Después de la adición del epóxido (1.5 equivalentes) la mezcla se calentó a reflujo y la reacción se monitoreó mediante TLC. Después de la conversión total la solución se concentró y el residuo se tomó con una solución acuosa de carbonato de potasio. La capa acuosa se extrajo varias veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se concentraron y el producto sin purificar se purificó adicionalmente vía cromatografía en columna (S¡02, C^Ck/MeOH como eluyentes). 3-(3-r(2.3-Dihidroxi-propil)-met¡l-amino1-propil)-8-r2-(6.6-d¡metil- b¡c¡clor3.1.11-hept-2-¡l)-etin-1-fen¡l-1 ,3,8-triaza-espiror4.5ldecan-4-ona rendimiento: 31% [ejemplo no. 92 en los cuadros a continuación] 3-(2-r(2.3-D¡hidroxi-prop¡l)-metil-amlno1-et¡IV8-r2-(6.6-d¡metil- bicicloí3.1.n-hept-2-¡l)-et¡ll-1-fenil-1 ,3,8-triaza-espiro[4.51decan-4-ona rendimiento:46% [ejemplo no. 178 en los cuadros a continuación] 8-r2-(6.6-Dimetil-b¡ciclo[3.1.11hept-2-il)-et¡n-3-(3-r(2-hidroxi- ciclohexil)-metil-amino1-propil)-1-fenil-1 ,3,8-triaza-esp¡ror4.51decan-4-ona [ejemplo no. 29 en los cuadros a continuación] rendimiento: 80% (nota: se utilizó carbonato de potasio como base adicional (2.5 equivalentes) en la síntesis) 8-r2-(6.6-D¡met¡l-bicicloí3.1.11hept-2-il)-etin-3-(3-r(2-h¡drox¡-3-morfol¡n-4-il-prop¡p-metil-amino1-propil)-1-fenil-1 ,3.8-triaza-espiror4.51decan-4-ona [ejemplo no. 93 en los cuadros a continuación] rendimiento: 65% Reacciones de sustitución con el compuesto (23): Generalmente, las sustituciones se llevaron a cabo en un solvente polar aprótico (por ejemplo acetonitrilo, dimetiisulfóxido o N-dimetil formamida) de la siguiente manera: La materia prima se disolvió en el solvente apropiado. 0.1 equivalentes de yoduro de sodio y 2 equivalentes de una base (por ejemplo carbonato de potasio o diisopropil etil amina) se colocaron dentro del matraz para reacción antes de la amina correspondiente (2 a 4 equivalentes) se añadiera a esta solución. La mezcla de reacción se calentó y se monitoreó mediante análisis de CCF. Después de los procedimientos de procesamiento acuoso estándar los residuos se purificaron adicionalmente vía cromatografía en columna (S¡02, CH2CI2/MeOH como eluyentes).

Preparación de materias primas ópticamente puras de conformidad con los procedimientos en la literatura fJ. Prakt. Chem. 329, 235 (1987)1 2-Metilamino-ciclohexanol El óxido de ciclohexeno (147 g, 1.5 moles) se disolvió en una solución etanólica 8 M de metilamina (750 ml) y se agitó a 40°C por 16 horas. La mezcla de reacción se concentró in vacuo para producir 2-metilaminociclohexanol racémico como un aceite ligeramente café (195 g, 100%). De conformidad con el análisis GC este producto fue 99+% puro y se utilizó sin purificación adicional. (7 2/?)-2-metilamino-ciclohexanol-sal del ácido (/?)-mandélico y (1S. 2S)-2-metilamino ciclohexanol-sal del ácido (S)-mandélico 2-metilamino-ciclohexanol racémico (195 g, máximo 1.5 moles) y ácido (R)-(-)-mandélico (228 g, 1.5 moles) se añadieron a 2-propanol (1.2 I) y se calentaron a temperatura de reflujo. La solución se dejó enfriar lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante toda la noche. El precipitado formado se recolectó mediante filtración, se lavó con 2-butanona se secó sobre aire dando un sólido blanco (160 g, exceso enantiomérico (e.e.) = 92%). El licor madre se concentró produciendo un aceite café (275 g) el cual se solidificó después de reposo. El sólido blanco se calentó por 10 minutos a temperatura de reflujo en 2-butanona (1.7 I). La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente bajo agitación y se agitó a temperatura ambiente por 16 horas. El precipitado se recolectó mediante filtración y se secó sobre aire dando (íf?,2f?)-2-metilamino ciclohexanol sal del ácido (R)-mandélico (151.5 g, 538 milimoles, 36%) como un sólido blanco con un e.e. de 99%. El primer líquido madre (275 g, 0.98 moles) se añadió a una solución de NaOH (200 g, 5 moles) en agua (800 ml) y salmuera (800 ml). Se añadió diclorometano (400 ml) y las capas se separaron después de agitar por 15 minutos. La capa acuosa se extrajo de nuevo con diclorometano (3 x 400 ml). Las capas combinadas de diclorometano se secaron (Na2S?4) y se concentraron para producir un aceite café (118.5 g, rendimiento de 93.5%). Este aceite se destiló mediante Kugeirohr (p = 0.29 matmósferas, T = 70- 80°C) para producir (7S,2S)-2-metilamino ciclohexanol (105 g, 813 mílimoles, rendimiento de 83%) con un e.e. de 66%. Este material enriquecido se disolvió en 2-propanol (700 mL). El ácido (S)-(+)-mandélico (124 g, 815 milimoles) se añadió y la mezcla se calentó a temperatura de reflujo. La solución resultante se dejó enfriar lentamente a temperatura ambiente y se agitó por 16 horas a esa temperatura. El precipitado formado se recolectó mediante filtración, se lavó con 2-butanona y se secó en aire para producir un sólido blanco (172 g). Esta primera sal se calentó a reflujo por 15 minutos en 2-butanona (2.0 I). La mezcla (no se formó una solución clara) se dejó enfriar lentamente a temperatura ambiente y se agitó por 16 horas. El precipitado se recolectó mediante filtración y se secó para producir ("/S,2S)-2-metilamino ciclohexanol-sal del ácido (S)-mandéllco (160 g, 569 milimoles, 38%) como un sólido blanco con un e.e. >99%. (1 R.2R)-(-)-2-Metilamino-ciclohexanol [para relación de configuración/rotación véase J. Prakt. Chem. 329, 235 (1987), y Tetrahedron Asymm., 10, 4619 (1999)] NaOH (108 g, 2.69 moles) se disolvió en agua (350 ml). Se añadió salmuera (400 ml) y se enfrió a temperatura ambiente. Se añadieron diclorometano (300 ml) y (íf?,2f?)-2-met¡lam¡no ciclohexanol- sal del ácido (R)- mandélico (151.5 g, 538 milimoles) y la mezcla se agitó vigorosamente por 10 minutos. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo de nuevo con diclorometano (3 x 200 ml). (la separación de las capas es un proceso que consume tiempo). Las capas combinadas de diclorometano se secaron (Na2S04) y se concentraron para producir un aceite (67.7 g, rendimiento del 97%). Este aceite se combinó con otros dos lotes de 2.3 g y 6.4 g (ambos con e.e. = 99+%) y se purificó mediante destilación de Kugeirohr (p = 0.49 matmósferas, T = 80-90°C) produciendo un aceite incoloro (72.0 g, 92%) con una pureza del 94% de conformidad con GC. Este aceite se destiló de nuevo por Kugeirohr (p = 0.29 matmósferas) produciendo dos productos que contenían las fracciones: Fracción 1 ; T = 40-60°C: 11.6 g con una pureza del 89% de conformidad con GC, Fracción 2; T = 60-65°C: 60.1 g GI0302-1 como un aceite incoloro con una pureza del 99% y un e.e. de 99.5%. [a]670= -51.5 (c = 0.14, metanol). (1S.2S)-(+)-2-Metilamino-c¡clohexanol [para relación de configuración/rotación véase J. Prakt. Chem. 329, 235 (1987), y Tetrahedron Asymm., 10, 4619 (1999)] NaOH (108 g, 2.69 moles) se disolvió en agua (400 ml). Se añadió salmuera (400 ml) y se enfrió a temperatura ambiente. Se añadieron cloroformo (300 ml) y (1S, 2S)-2-metilam¡no ciclohexanol-sal del ácido (S)- mandélico (160 g, 569 milimoles) y la mezcla se agitó vigorosamente por 5 minutos. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo de nuevo con cloroformo (3 x 350 ml). Las capas combinadas de cloroformo se secaron (Na2S04) y se concentraron para producir un aceite (68 g, rendimiento de 93%). Este aceite se purificó mediante destilación de Kugeirohr (p = 0.09 matmósferas) produciendo dos productos que contenían las fracciones: Fracción 1 ; T = 40-55°C: 17.5 g como un aceite incoloro con una pureza del 99% de conformidad con GC, Fracción 2; T = 55-60°C: 48.8 g como un aceite incoloro con una pureza del 99.9% de conformidad con GC. Ambas fracciones se combinaron produciendo 66.2 g (512 milimoles, 90%) como un aceite incoloro con un e.e. de 99.9% [s]670= +53.6 (c=0.14, metanol). 8-r2-(6.6-Dimetil-biciclof3.1.1lhept-2-¡l)-etin-3-(3R-r(2R-h¡droxi-ciclohexil)-metil-amino1-propil)-1-fen¡l-1 ,3,8-triaza-espiror4.51decan-4-ona [ejemplo no. 30 en los cuadros a continuación] 2.5 g del compuesto cloro bícíclíco (23) se disolvieron en 5 ml de acetonitrilo. A esta solución se le añadieron exitosamente 1.5 g (2 equivalentes) de carbonato de potasio, 90 mg (0.1 equivalentes) de yoduro de sodio, 780 mg de 1 R,2R)-(-)-2-Metilamino-ciclohexanol y finalmente 3 gotas de H20. Está mezcla se calentó a reflujo por 8 horas. Para el procesamiento la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y se lavó ¡nicíalmente con ácido nítrico acuoso y posteriormente con una solución acuosa de carbonato ácido de sodio. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se concentró y el residuo se purificó inicialmente vía cromatografía en columna (S¡02, CH2CI2/MeOH como eluyente) produciendo 1.75 g (58%) de un aceite amarillo claro. 8-r2-(6.6-Pimetíl-biciclor3.1. nhept-2-il)-etin-3-(3S-r(2S-hidroxi-ciclohexip-metil-amino1-propil}-1-fenil-1 ,3.8-triaza-espirof4.5ldecan-4-ona [ejemplo no. 31 en ios cuadros a continuación] El compuesto se preparó de conformidad con el protocolo dado anteriormente para el estereoisómero. Rendimiento: 48% como un aceite amarillo claro.

Reacciones de Mannich con ácido borónico: El siguiente protocolo experimental se utilizó para sintetizar varios compuestos de la misma manera iniciando con el compuesto (40) y el compuesto (24), respectivamente 8-r2-(6,6-Dimetil-bic¡clor3.1.nhept-2-il)-et¡n-3-(3-r(1-furan-2-¡l- 2,3,4,5-tetrah¡droxi-pent¡l)-met¡l-amino1-propil)-1-fenil-1 ,3,8-triaza-esp¡rol"4.5"| decan-4-ona [ejemplo no. 52 en los cuadros a continuación] Una solución de la amina (24) (2.66 g, 5.876 milimoles) y ácido 2-furanil borónico (920 mg, 8.22 milimoles) en 30 ml de EtOH y 0.5 ml de H20 se calentó a 40°C bajo agitación vigorosa. A esta solución se le añadieron 1.06 g, (7.05 milimoles) de D-(+)-xilosa en pequeñas porciones durante 15 minutos a 40°C. Después de 2.5 horas la mezcla de reacción se vertió dentro de una solución acuosa de NaHC03 y la capa acuosa se extrajo 3 veces con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se concentraron y se tomaron en acetato de etilo. Esta capa orgánica se lavó con ácido crítico acuoso (10%) varias veces. Posteriormente se neutralizaron las capas acuosas combinadas con una solución acuosa de NaHC?3 y la capa acuosa neutra se extrajo con CH2CI2. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron in vacuo para proveer un aceite amarillo sin purificar el cual se purificó mediante cromatografía en columna (SÍO2, acetato de etilo/metanol: 20/1 a 10/1). La purificación produjo el compuesto del título como un sólido blanco amorfo (1.40 g, 2.14 milimoles, 37%).

Procedimiento de procesamiento alternativo: Después de la conversión total (CCF) la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se añadió 1 ml de ácido trifluoroacético y la solución remanente se agitó por 10 minutos a temperatura ambiente. La concentración in vacuo se siguió por purificación adicional del producto sin purificar vía cromatografía en columna. Utilizando el mismo procedimiento como se describió anteriormente, se sintetizaron los siguientes ejemplos: 8-[2-(6,6-Dimetil-biciclo[3.1.1]hept-2-il)-etil]-3-{3-[metil-(2,3,4,5-tetrahidroxi-1-tiofen-2-¡l-pent¡l)-amino]-propil}-1-fenil-1 ,3,8-triaza-espiro[4.5]decan-4-ona [ejemplo no. 59 en los cuadros a continuación] rendimiento: 80% (D-xilosa y ácido 2-tiofenil borónico como materias primas) 8-[2-(6,6-Dimetil-b¡c¡clo[3.1.1]hept-2-il)-etil]-3-{2-[met¡l-(2,3,4,5-tetrahidrox¡-1 -tiofen-2-il-pentil)-amino]-etil}-1 -fenil-1 ,3,8-triaza-espiro[4.5]decan-4-ona [ejemplo no. 58 en los cuadros a continuación] rendimiento: 13% (D-xilosa y ácido 2-tiofenil borónico como materias primas) 8-[2-(6,6-Dimetil-biciclo[3.1.1]hept-2-il)-etil]-3-{2-[(1-furan-2-il-2,3,4,5,6-pentahidroxi-hexil)-metil-amino]-etil}-1-fenil-1 ,3,8-triaza- espiro[4.5]decan-4-ona [ejemplo no. 55 en los cuadros a continuación] rendimiento: 75% (D-glucosa y ácido 2-furanil borónico como materias primas) 8-[2-(6,6-Dimetil-biciclo[3.1.1]hept-2-il)-etil]-3-{2-[(1-furan-2-il- 2,3,4,5-tetrahidroxi-pentil)-metil-amino]-et¡l}-1-fenil-1 ,3,8-triaza- espiro[4.5]decan-4-ona [ejemplo no. 53 en los cuadros a continuación] rendimiento: 42% (D-xilosa y ácido 2-furanil borónico como materias primas) 8-[2-(6,6-Dimetil-biciclo[3.1.1]hept-2-il)-etil]-3-{2-[(1-furan-2-il- 2,3,4,5-tetrahidroxi-pentil)-metil-amlno]-etil}-1-fenil-1 ,3,8-triaza- espiro[4.5]decan-4-ona [ejemplo no. 52 en los cuadros a continuación] rendimiento: 60% (L-xilosa y ácido 2-furanil borónico como materias primas) 8-[2-(6,6-Dimetil-biciclo[3.1.1]hept-2-il)-etil]-3-{2-[(1-furan-2-il-2,3-dihidroxi-propil)-metíl-amino]-etil}-1-fen¡l-1 ,3,8-triaza-espiro[4.5]decan-4-ona [ejemplo no. 49 en los cuadros a continuación] rendimiento: 66% (D,L-glicerina aldehido y ácido 2-furanil borónico como materias primas) 3-{2-[(2,3-Dihidroxi-1-tiofen-3-il-propil)-metil-amino]-etil}-8-[2-(6,6-dimetil-b¡c¡clo[3.1.1]hept-2-il)-etil]-1-fenil-1 ,3,8-tr¡aza-espiro[4.5]decan-4-ona [ejemplo no. 47 en los cuadros a continuación] rendimiento: 39% (D,L-glicerin aldehido y ácido 3-tiofenil borónico como materias primas) 8-[2-(6,6-Dimetil-biciclo[3.1.1]hept-2-il)-etil]-3-{2-[metil-(2,3,4,5-tetrahidroxi-1 -tiofen-3-il-pentil)-amino]-etil}-1 -fenll-1 ,3,8-triaza-espiro[4.5]decan-4-ona [ejemplo no. 48 en los cuadros a continuación] rendimiento: 28% (L-arabinosa y ácido 3-tiofenil borónico como materias primas) 8-[2-(6,6-Dimetil-biciclo[3.1.1]hept-2-il)-etil]-3-{2-[metil-(2,3,4,5- tetrahidroxi-1 -tiofen-3-il-pentil)-amino]-etil}-1 -fenll-1 ,3,8-triaza- espiro[4.5]decan-4-ona [ejemplo no. 55 en los cuadros a continuación] rendimiento: 21 % (L-xilosa y ácido 3-tiofenil borónico como materias primas) 8-[2-(6,6-Dimetil-biciclo[3.1.1]hept-2-il)-etil]-3-{2-[metil-(2,3,4,5,6- pentahidroxi-1-tiofen-3-il-hexil)-amino]-etil}-1-fenil-1 ,3,8-triaza- espiro[4.5]decan-4-ona [ejemplo no. 54 en los cuadros a continuación] rendimiento: 16% (D-glucosa y ácido 3-tiofenil borónico como materias primas) La invención se ilustra adicionalmente por medio de los siguientes ejemplos específicos (solamente se pretende ilustrar adicionalmente la invención con mayor detalle, y por lo tanto no se considera que se restringe el alcance de la invención de ninguna forma) listados en el cuadro a continuación y representados por las fórmulas generales (1) y (2): En donde en el cuadro a continuación bajo el encabezado "estereoquímica " se proporciona el nombre de un compuesto (por ejemplo (-)-cis-hidronopol o D-xílosa), que significa que el compuesto en cuestión se utilizó en el paso de reacción final. (1)* R2 = (2-metoxi-etoximetil) (2)* R2 = 4-hidroxi-piperidin-4-ilmetilo (3)* R2 = 1-bencil-piperid¡n-4-ilmet¡lo (4)* R2 = Piperidin-4-ilmetilo (5)* R2 = 4-bencil-morfoIin-2-ilmetilo (6)* R2 = acetilo (7)* R2 = 3-aminobencilo Los datos analíticos de los ejemplos en el cuadro anteriormente mencionado, se proporcionan en el cuadro a continuación. Los detalles de los métodos analíticos se listan en el cuadro, viz. "BASIS", "STANDARD", "CURVE 4", "AMAP 2", y "AMAP 3" se explican a continuación.

Métodos analíticos (GC-EM) Método BASIS API 100 95: MassChrom Solventes: A% regulador de pH de 95% NH4OAc + 5% acetonitrilo B% 100% acetonitrilo Rampa de flujo 5.00 Flujo (ml/min) 1.000 Tiempo de paro (minutoss) 20.00 Presión mínima (kg/cm2) 0 Presión máxima (kg/cm2) 428.83 Bomba LC-200 Quad (Versión 1.08) Columna: XTerra (2.5 µm, 4.5 x 50 mm) Temperatura de columna (°C) 20 Temperatura límite de columna (°C) 20 Horario de gradiente: 0.00 = ¡socrático, 1.00 = lineal Número de canales: 2 Velocidad de la muestra: 0 puntos por segundo por canal Intervalo de voltaje: 0 hasta 0.1 volts Polaridad: UNIPOLAR Canal A: (A) UV 225 nm Canal B: (B) ELS Sedex 75 (Temperatura 37°C) Método STANDARD LC de Fase móvil Waters Alliance 2790 Solventes: C% regulador de pH de 95% NH4OAc +5% ACN (pH = ±5) D% 100% acetonitrilo (ACN) Rampa de flujo 5.00 Flujo (ml/min) 1.000 Tiempo de paro (minutos) 11.00 Presión mínima (atmósferas) 0 Presión máxima (atmósferas) 294 Longitud Degasser OnStroke Auto Columna Waters Alliance 2790 LC Columna posición columna tiempo de equilibrio (mins) 0.00 Temperatura de columna (°C) 20 Temperatura límite de columna (°C) 20 LC de equilibrio rápido Waters Alliance 2790 Sistema Path OffSystem Flujo (ml/min) 0.00 Tiempo de sistema (minutos) 0.00 Tiempo de re-equilibrio (minutos) 0.00 Volumen de pre columna (µl) 0.00 Waters Alliance 2790 l/O desplazamiento 1: sin cambio; desplazamiento 2: sin cambio; desplazamiento 3: sin cambio; desplazamiento 4: sin cambio Establecimiento análogo de salida: Velocidad de Flujo Horario de Gradiente Waters Alliance 2790 LC El horario de gradiente contiene 6 entradas las cuales son: Longitud de onda inicial (nm) 225.00 Longitud de onda final (nm) 260.00 Resolución (nm) 1.2 Velocidad demuestra (spectro/segundo) 1.000 Respuestas de filtro 1 Tiempo de exposición (ms) interpolación automática 656 Tiempo de paro Yesacquisition (minutos) 10.75 Canal análogo 1 Waters996 PDA ELS PL ELS 1000 (Temp. 80°C) Método CURVE 4 LC de fase móvil Waters Alliance 2790 Solventes C% regulador de pH de 95% NH OAc +5% ACN (pH = ±5) D% 100% acetonitrilo Rampa de flujo 5.00 Flujo (ml/min) 1.000 Tiempo de paro (minutos) 11.00 Presión mínima (atmósferas) 0 Presión máxima (atmósferas) 313.6 Longitud de Degasser OnStroke Auto Columna LC Waters Alliance 2790 Columna posición de columna 1 tiempo de equilibrio (minutos) 0.00 Temperatura de columna (°C) 20 Temperatura límite de columna (°C) 20 LC de equilibrio rápido Waters Alliance 2790 Sistema Path OffSystem de Flujo (ml/min) 0.00 Tiempo de sistema (minutos) 0.00 Tiempo de re-equilibrio (minutos) 0.00 Volumen de pre columna (µl) 0.00 Waters Alliance 2790 l/O Desplazamiento 1 sin cambio desplazamiento 2 sin cambio desplazamiento 3 sin cambio desplazamiento 4 sin cambio establecimiento análogo de salida: Velocidad de Flujo Horario de Gradiente LC Waters Alliance 2790 El horario de gradiente contiene 6 entradas las cuales son: Longitud de onda inicial (nm) 205.00 Longitud de onda final (nm) 350.00 Resolución (nm) 1.2 Velocidad de la muestra (spectro/s) 1.000 Respuestas de filtro 1 Tiempo de exposición (ms) Interpolación Automática 656 Tiempo de paro Yesacquisition (minutos) 10.75 Análogo del canal 1 Waters996 PDA ELS PL ELS 1000 (Temp. 80°C) Método AMAP 2 El sistema LC-EM consiste de series de 200 micro bombas 2 Perkin Elmer. Las bombas se conectan entre sí mediante un mezclador de punto de partida a 50 µ\. El mezclador se conectan al auto muestra Gilson 215. El método LC es: A= 100% agua con 0.025% HCOOH y NH4HCOO 10 milimoles pH = ± 3 B= 100% ACN con 0.025% HCOOH El auto muestra tiene una asa de inyección de 2 µl. El auto muestra se conecta a una columna Phenomenex Luna C18(2) 30*4.6 mm con partículas de 3 um. La columna se termo estabiliza en un horno de columna Perkin Elmer serie 200 a 40°C. La columna se conectó a un medidor de UV Applied biosystems ABI 785 con un flujo celular de 2.7 µl. La longitud de onda se estableció a 254 nm. El medidor de UV se conectó a un espectrómetro de masas Sciex API 150EX. El espectrómetro de masas tiene los siguientes parámetros: Intervalo de registro: 150-900 Amu Polaridad: positivo Modo de registro: perfil Resolución Q1: UNIDAD Tamaño de paso: 0.10 amu Tiempo por registro: 0.500 segundos Nebulizador (NEB): 10 Cortina de gas (CUR): 10 Fuentes de iones (IS): 5200 volts Temperatura (TEM): 325°C Deflector (DF): 30 volts Potencial de enfoque (FP): 225 volts Potencial de entrada (EP): 10 volts El detector de diseminación de luz se conectó al Sciex API 150. El detector de diseminación de luz es un Sedere Sedex 55 que opera a 50°C y a una presión de N2 de 2.94 atmósferas.EI sistema completo se controló mediante una computadora Dell optiplex GX400 que opera bajo Windows NT.

Método AMAP 3 Idéntico que el método AMAP 2, excepto por el método LC, el último siendo: Ejemplos de formulación del compuesto como se utilizaron en los estudios animales Para administración oral (p.o.) la cantidad deseada (hasta 20 µmoles) del sólido del Ejemplo 1 se añadió a 1 ml de metil hidroxietil celulosa al 1 % (p/v) y poloxámero en agua al 0.1 % (p/v). El compuesto se suspendió mediante agitación en vórtex por 10 minutos. Para administración subcutánea (s.c.) la cantidad deseada (hasta 15 µmoles) del sólido del ejemplo 1 se disolvió o se suspendió en 1 ml de solución salina.

Datos farmacológicos

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Compuestos de la fórmula general (1 ) en donde: R-i representa hidrógeno, halógeno, CF3, alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6, fenilo, amino, alquilamino de C1-3, dialquilamino de C1-3, hidroxi, hidroxialquilo de C1-3, alcoxi de C1-3, OCF3, carboxilo, aminocarbonilo o alquilsulfonilo de C1-3, m es un entero de 1 - 4, con la condición de que cuando m es 2, 3 ó 4, los sustituyentes R-i pueden ser ya sea los mismos o pueden ser diferentes, R2 representa hidrógeno, alquilo de C1-6 opcionalmente sustituido, cicloalquilo de C3-6, -CH OH, -CH2OCH3, carboxilo, acetilo, bencilo opcionalmente sustituido o un grupo Q de la siguiente estructura (2): R3

,N. Q = U R, (2) en donde: [ ]n simboliza -(CH2)n- donde n es un entero de 0 - 7, R3 representa hidrógeno o alquilo de C1-3, R4 representa hidrógeno, alquilo de C1-6 opcionalmente sustituido, un anillo mono-, di- o tricíclico saturado, no saturado o parcialmente saturado opcionalmente sustituido, o un grupo alquilo de C1-3 sustituido con un anillo de cinco o seis miembros saturado, no saturado o parcialmente saturado opcionalmente sustituido el cual opcionalmente contiene uno o más heteroátomos, o (R3 + R4) junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, representan un anillo mono-, di- o tricíclico saturado, no saturado o parcialmente saturado opcionalmente sustituido, y todos los estereoisómeros, así como sales farmacológicamente aceptables. 2.- Los compuestos de conformidad con la reivindicación 1 de la fórmula general (1), caracterizados además porque R1 representa hidrógeno, halógeno, CF3, alquilo de C1-6, hidroxilo, alcoxi de C1-3 u OCF3) m = 1 , y todos los otros símbolos tienen los significados que se proporcionan en la reivindicación 1.

3.- Los compuestos de conformidad con la reivindicación 2 de la fórmula general (1), caracterizados además porque: R2 representa un grupo Q que tiene la fórmula general (2), y todos los otros símbolos tienen los significados que se proporcionan en la reivindicación 2.

4.- Los compuestos de conformidad con la reivindicación 3 de la fórmula general (1), caracterizados además porque R3 representa un grupo metilo, R4 representa un grupo alquilo de C1-3 sustituido con un anillo de seis miembros saturado, opcionalmente sustituido el cual opcionalmente contiene uno o más heteroátomos, y todos los otros símbolos tienen los significados que se proporcionan en la reivindicación 3.

5.- Los compuestos de conformidad con la reivindicación 4 de la fórmula general (1), caracterizados además porque R4 representa un grupo metileno sustituido con un anillo piperidina opcionalmente sustituido, y todos los otros símbolos tienen los significados que se proporcionan en la reivindicación 4.

6.- Los compuestos de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-5, caracterizados además porque incluyendo todos los estereoisómeros, sales farmacéuticamente aceptables y profármacos de los mismos, para su uso en medicina.

7.- Composiciones farmacéuticas que contienen una cantidad farmacológicamente activa de al menos uno de los compuestos que se definen en cualesquiera de las reivindicaciones 1-5 como un ¡ngrediente activo.

8.- El uso de un compuesto como el que se define en cualesquiera de las reivindicaciones 1-5 para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de condiciones de dolor agudo y crónico, trastornos metabólicos, obesidad; trastornos gastrointestinales, inflamación del tracto urinario, trastornos renales caracterizados por desbalances de retención/excreción de agua o excreción de sal, trastornos cardiovasculares, trastornos oftalmológicos, trastornos respiratorios, enfermedades del sistema inmune, e infecciones virales.

9.- El uso que se reclama en la reivindicación 8, en donde dichos trastornos metabólicos son anorexia nerviosa y bulimia nerviosa, dichos trastornos gastrointestinales son síndrome de intestino irritable, enfermedad de intestino inflamatorio (enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa), diarrea, constipación y dolor visceral, dichos trastornos cardiovasculares son infarto del miocardio, arritmias, hipertensión, trombosis, anemia, arteriosclerosis y angina de pecho; dicho trastorno oftalmológico es glaucoma; dichos trastornos respiratorios son enfermedad pulmonar obstructiva crónica, bronquitis y fibrosis quística.