MXPA06003996A - Compuestos y composiciones como inhibidores de la proteina cinasa. - Google Patents

Abstract

La invencion proporciona una clase novedosa de compuestos, composiciones farmaceuticas que comprenden tales compuestos y metodos de uso de tales compuestos para tratar o prevenir enfermedades o trastornos asociados con la actividad anormal o desregulada de la cinasa, particularmente enfermedades o trastornos que involucran la activacion anormal de las cinasas Abl, BCR-Abl, CSK, JNK1, JNK2, PDGF-R, p38, p70S6K, TGF??, SRC, EGFR, c-kit, trkB, FGFR3, Fes, Lck, Syk, RAF, MKK4, MKK6 y SAPK2??.

Description

COMPUESTOS Y COMPOSICIONES COMO INHIBIDORES DE LA PROTEÍNA CINASA REFERENCIA CRUZADA PARA SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reclama el beneficio de la prioridad de la Solicitud de Patente Provisional US 60/509,572 presentada el 8 de octubre de 2003. La descripción completa de esta solicitud esta incorporada a la presente como referencia en su totalidad para todos los propósitos. Campo de la Invención La presente invención proporciona una clase novedosa de compuestos, composiciones farmacéuticas que comprenden tales compuestos y métodos de uso de tales compuestos para tratar o prevenir enfermedades o trastornos asociados con la actividad anormal o desregulada de la cinasa, particularmente enfermedades o trastornos que involucran la activación normal de las cinasas Abl, BCR-Abl, CSK, JN 1 , JNK2, PDGF-R, Bmx, p70S6K, TGFp. SRC, trkB, FGFR3, Fes, Lck, RAF, KK4, KK6 y SAPK2ct, SAPK2p. Antecedentes Las proteína cinasas representan una gran familia de proteínas, que tienen un papel central en la regulación de una amplia variedad de procesos celulares y mantienen el control sobre la función celular. Una lista parcial, no limitante de estas cinasas incluye: tirosina cinasas recptoras tales como la cinasa receptora del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF-R), la cinasa receptora para el factor de células madre, c-kit, el receptor del factor de crecimiento nervioso, trkB, y el receptor del factor de crecimiento de fibroblastos, FGFR3; tirosina cinasas no receptoras tales como Abl y la cinasa de fusión BCR-AbI, Fes, Lck y Syk; y serina/treonina cinasas tales como b-RAF, MAP cinasas (e.g. , MKK6) y SAPK2 . La actividad de la cinasa aberrante ha sido observada en muchos estados de enfermedad incluyendo trastornos proliferativos benignos y malignos así como en enfermedades que resultan de la activación inaprppiada de los siste,mas inmune y nervioso. Los compuestos novedosos de esta invención inhiben la actividad de una o más proteína cinasas y, por lo tanto, se espera que sean útiles en el tratamiento de. enfermedades asociadas con la cinasa.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En un aspecto, la presente invención proporciona compuestos de fórmula I: en la cual: n es 0, 1 ó 2; Y se selecciona a partir de -C(H)= y -N=; Z se selecciona a partir de -C(H)= y -N=; se selecciona a partir de hidrógeno, halo y R2 se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de C1-6; R3 se selecciona a partir de halo, nitro, alquilo de d-6 y alcoxi de C1 -6; R4 se selecciona a partir de heterocicloalquilo de C3.8 l -XN R5R6, -XNR5C(0)R6 j -XC(0)NR5R6 y -XN R5S(0)o-2 R6 ; en donde X es un enlace o alquileno de C -4; R5 se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de Ci-6; R6 se selecciona a partir de alquilo de C1 -6, arilo de C3-i0-alqu¡lo de C0-4, heteroarilo de C5. 0— alquilo de C0 -4 , cicloalquilo de C3.i2— alquilo de C0 -4 y heterocicloalquilo de C3-8-alquilo de C0 -4 ; en donde cualquier arilo, heteroarilo, cicloalquilo y heterocicloalquilo de R4 está opcionalmente substituido por 1 a 3 radicales independientemente seleccionados a partir de halo, hidroxi, nitro, ciano, alquilo de C1-6 opcionalmente substituido con hidroxi, alcoxi de C1 -6, alquilo de C1 -6 substituido por halo, alcoxi de C1-6 substituido por halo, -XOXN R7R8, -XS(O)0.2R , -XS(O)0-2NR7R8, -XOR7, -XC(0)NR7R8, -XNR7R8, -XNR7S(O) 0.2 R7 y -XR_; en donde X es un enlace o alquileno de C1 -4; R7 y R8 se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de C1 -6; R9 se selecciona a partir de arilo de C6-io, heteroarilo de C5-10, cicloalquilo de C3_12 y heterocicloalquilo de C3-8; en donde cualquier arilo, heteroarilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo de R9 está opcionalmente substituido con 1 a 3 radicales alquilo de C1 -6; Rí o está seleccionado a partir de hidrógeno, halo y alquilo de C1-6; y los derivados de N-óxido, derivados de profámaco, derivados protegidos, isómeros individuales y mezclas de isómeros de los mismos; y las sales famacéuticamente aceptables y solvatos (e.g. hidratos) de tales compuestos. En un segundo aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que contiene un compuesto de formula I o un derivado de N-óxido, isómeros individuales y mezclas de isómeros de los mismos; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en mezcla con uno o más excipientes adecuados. En un tercer aspecto, la presente invención proporciona un método para el tratamiento de una enfermedad en un animal en el cual la inhibición de la actividad de la cinasa, particularmente la actividad de Abl, BCR-Abl, CSK, JNK1 , JNK2, PDGF-R, p38, p70S6K, TGFp, SRC, EGFR, c-Kit, trkB, FGFR3, Fes, Lck, Syk, RAF, MKK4, MKK6 y/o SAPK2p, puede prevenir, inhibir o aliviar la patología y/o sintomatología de las enfermedades, el método comprende administrar al animal una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula 1 o un derivado de N-óxido, isómeros individuales y mezclas de isómeros del mismo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.. En un cuarto aspecto, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula I en la reparación de un medicamento para tratar una enfermedad en un animal en el cual la actividad de la cinasa, particularmente la actividad de Abl, BCR-Abl, CSK, JNKI, JNK2, PDGF-R, p38, D70S6K, TGF , SRC, EGFR, c-Kit, trkB, FGFR3, Fes, Lck, Syk, RAF, MKK4, MKK6 y/o SAPK2 , contribuye a la patología y/o sintomatología de la enfermedad. En un quinto aspecto, la presente invención proporciona un proceso para preparar compuestos de fórmula I y los derivados de N-óxido, derivados de profármaco, derivados protegidos, isómeros individuales y mezclas de isómeros de los mismo; y las sales famacéuticamente aceptables de los mismos.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Definiciones "Alquilo" como un grupo y como un elemento estructural de otros grupos, por ejemplo alquilo y alcoxi substituidos por halo, pueden ser ya sea de cadena lineal o ramificada. Alcoxi de C -4 incluye, metoxi, etoxi, y los similares. Alquilo substituido por halo incluye trifluorometilo, pentafluoroetilo, y los similares. "Arilo" significa un montaje de anillo aromático monocíclico o bicíclico fusionado que contiene seis a diez átomos de carbono. Por ejemplo, arilo puede ser fenilo o naftilo, preferiblemente fenilo. "Arileno" significa un radical divalente derivado de un grupo arilo. "Heteroarllo" es como se definió para arilo en donde uno o más de los miembros del anillo son un heteroátomo. Por ejemplo heteroarilo incluye piridilo, indolilo, indazolilo, quinoxalinilo, quinolinilo, benzofuranilo, benzopíranilo, benzotiopiranilo, benzo[1 ,3]dioxol, imidazolilo, benzo-imidazolilo, pirimidinilo, furanilo, oxazolilo, isoxazolilo, triazolilo, tetrazolilo, pirazolilo, tienilo, etc. "Cicloalquilo" significa un montaje de anillo saturado o parcialmente insaturado, monocíclico, bicíclico fusionado o policíclico en puente, que contiene el número de átomos de anillo indicado. For ejemplo, cicloalquilo de C3-i o incluye ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, etc. "Heterocicloalquilo" significa cicloalquilo, como se definió en esta solicitud, con la condición de que uno o más de los carbonos del anillo indicados, están reemplazados por una porción seleccionada a partir de -O-, -N=, -NR-, -C(O)-, -S-, -S(O)- o -S(0)2-, en donde R es hidrógeno, alquilo de C1 -4, o un grupo protector de nitrógeno. Por ejemplo, heterocicloalquilo de C3 -8 como se utiliza en esta solicitud para describir los compuestos de tal invención incluye morfolino, pirrolidinilo, piperazinilo, piperidinilo, piperidinilona, 1 ,4-dioxa-8-aza-espiro [4.5] dec-8-ilo, etc. "Halógeno" (o halo) preferiblemente representa cloro o flúor, pero también puede ser bromo o yodo. "Tratar" y "tratamiento" se refieren a un método para mejorar o abatir una enfermedad y/o sus síntomas concomitantes. Descripción de las Modalidades Preferidas La proteína de fusión BCR-Abl es el resultado de una translocación reciproca que fusiona el proto-oncogen de Abl con el gen Bcr. El BCR-Abl es entonces capaz de transformar las células B a través del incremento de la actividad mitogénca. Este incremento da por resultado una reducción de la sensibilidad a la apoptosis, así como la alteración de la adhesión y autodirección de las células progenitores de CML. La presente invención proporciona compuestos, composiciones y métodos para el tratamiento de enfermedades relacionadas con cinasa, particularmente las enfermedades relacionadas con la cinasa Abl, BCR-Abl, CSK, JNK1 , JNK2, PDGF-R, p38, p70S6 , ?T?ß, SRC, EGFR, c-Kit, trkB, FGFR3, Fes, Lck, Syk, RAF, MKK4, MKK6 y/o =???2ß. Por ejemplo, la leucemia y otros trastornos de proliferación relacionados con BCR-Abl pueden ser tratados a través de la inhibición de las formas tipo silvestre y muíante de Bcr-Abl. En una modalidad, con referencia a los compuestos de Fórmula I , n es 0, 1 ó 2; Y se selecciona a partir de -C(H)= y -N=; Z se selecciona a partir de -C(H)= y -N=; R-, se selecciona a partir de hidrógeno, halo y -R4; R2 se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de C1-6; R3 se selecciona a partir de halo, alquilo de C1-6 y alcoxi de C1-6; R4 se selecciona a partir de heterocicloalquilo de C3-8, -XNR5R6, -XNR5C(0)R6 y -XNR5S(O)0-2R6; en donde X es un enlace o alquileno de Ci_4; R5 se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de C1-6; R6 se selecciona a partir de alquilo de C1-6, arilo de C6-io-alquilo de C0-4, heterocicloalquilo de C3-8-alquilo de C0-4, heteroarilo de C5-io-alquilo de C0-4 y cicloalquilo de C3. 2-alquilo de ??-4; en donde cualquier arilo, heteroarilo y cicloalquilo de R4 está opcionalmente substituido por 1 a 3 radicales independientemente seleccionados a partir de halo, hidroxi, nitro, alquilo de C1-6 opcionalmente substituido con hidroxi, alcoxi de C1-6, alquilo C -6 substituido por halo, alcoxi de C1-6 substituido por halo, -XS(O)0-2R7, -XOXNR7R8l -XS(O)0-2NR7Re, -XOR7, -XC(0)NR7R8, -XNR7R8 y -XRg; en donde X es un enlace o alquileno de C1-4; R7 y R8 se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de C -6; Rg se selecciona a partir de heteroarilo de C5- 0 y heterocicloalquilo de C3-8; en donde cualquier heteroarilo o heterocicloalquilo de R9 está opcionalmente substituido con 1 a 3 radicales alquilo de C1-6; y R10 es hidrógeno. En otra modalidad R1 se selecciona a partir de hidrógeno, halo, pirrolidinilo y -NHR6; en donde R6 se selecciona a partir de hidrógeno, metilo, etilo, dietil-amino-propilo, morfolino-etilo, hidroxi-etilo, benzo[1,3] dioxolilo, pirazoliio, piridinilo, pirazinilo, piridinil-metilo, 2-(2-oxo-pirrolidin- 1 -ilo)-etilo y fenilo; en donde el pirrolidinilo, piridinilo, pirazoliio, pirazinilo, piridinil-metilo, 2-(2-oxo-pirrolidin-1 -il)-etilo o fenilo esta opcionalmente substituido por 1 a 2 radicales independientemente seleccionados a partir de am ino, metoxi , dimetilam ino, dimetilamino-metilo , dimetilamino-etilo, dimetilamino-propilo, dimetilamino-etoxi, metil-sulfanilo, hidroxi , metilsulfonilo, hidroximetilo, 1 -hidroxi-etilo, metano-sulfonil-amino, morfolino, morfolino-etilo, furanilo-metilo, 4-metil-piperazin-1 -ilo, 4-metil-piperazin-1 -ilmetilo, bencilo, metil-aminocarbonilo, metil-carbonil-amino, metilo-pirazolilo, aminocarbonilo y amino-sulfonilo. En aún otra modalidad, R se selecciona a partir de -NHC(0) R6 y -N HS(0)2Re; en donde R6 se selecciona a partir de metilo, isobutilo, ter-butilo, ciclohexilo, furanilo, pirrolilo, fenilo , piridinilo, piridazinilo, pirazinilo , pirazoliio, tetrazolil-metilo y bencilo; en donde el ciclohexilo, furanilo, pirrolilo, fenilo, piridinilo, piridazinilo, pirazinilo, pirazoliio, tetrazolil-metilo o bencilo de R6 está opcionalmente substituido por 1 a 3 radicales seleccionados a partir de 4-metil-p¡peraz¡n-1 -¡lmetilo, 4-metil-piperazin-1 -ilo, 4-etil-piperazin-1 -ilmetilo, 4-etil-piperazin-1 -iIo, fenilo, etilo, trifluorometilo, morfolino, dimetilamino, halo, nitro, trifluorometoxi, 1 -metil-pirroI-2-ilo, 4-metil-imidazol-1 -ilo, 4-metil-piperazin- 1 -¡lo, 4-metil-piperazin-1 -ilmetilo, isobutilo y ter-butilo. Los compuestos preferidos de fórmula I están detallados en los ejemplos y en la tabla 1 , infra. Farmacología y Utilidad Los compuestos de la invención regulan la actividad de la proteína tirosina cinasas y, como tal, son útiles para el tratamiento de enfermedades o trastornos en los cuales las proteína tirosina cinasas, particularmente las cinasas Abl, BCR-Abl, CSK, JN 1 , JNK2, PDGF-R, p38, p70S6K, TGF , S RC , EGFR, c-Kit, trkB, FGFR3, Fes, Lck, Syk, RAF, KK4, KK6 y/o SAPK2p, contribuyen a la patología y/o sintomatología de la enfermedad. La tirosina cinasa Abelson (i. e. Abl , c-Abl) está involucrada en la regulación del ciclo celular, en la respuesta celular al estrés genotóxico, y en la transmisión de la información acerca del ambiente celular a través del señalamiento de la integrina. En total, parece que la proteína Abl tiene un papel complejo como un modulo celular que integra las señales a partir de varias fuentes extracelulares e intracelulares y que influencia las decisiones con respecto al ciclo celular y la apoptósis. La tirosina cinasa de Abelson incluye derivados de subtipos tales como la fusión quimérica (oncoproteína) BCR-Abl con una actividad desregulada de la tirosina cinasa o el v-Abl. El BCR-Abl es crítico en la patogénesis del 95% de leucemia mielogena crónica (CML) y 10% de leucemia linfocítica ag uda. El STI-571 (Gleevec) es un inhibidor de la tirosina cinasa BCR-Abl oncogénica y es usada para el tratamiento de leucemia mieloide crónica (CML). Sin embargo, alg unos pacientes en la etapa de crisis de blastos de la CML, son resistentes al STI-571 debido a las mutaciones en la BCR-Abl cinasa. A la fecha se han reportado por encima de 22 mutaciones siendo los más comunes G250E, E255V, T315I , F317L y M351 T. Los com puestos de la presente invención inhiben la cinasa Abl , especialmente la cinasa v-Abl. Los compuestos de la presente invención 9 tirosina cinasas y, como tal, son útiles para el tratamiento de enfermedades o trastornos en los cuales las proteína tirosina cinasas, particularmente las cinasas Abl, BCR-Abl , CSK, J N K1 , JNK2 , PDGF-R, p38, p70S6K, TG Fp, SRC , EGFR, c-Kit, trkB, FG FR3, Fes, Lck, Syk, RAF, M KK4, MKK6 y/o SAPK2P, contribuyen a la patología y/o sintomatología de la enfermedad. La tirosina cinasa Abelson (i. e. Abl, c-Abl) está involucrada en la regulación del ciclo celular, en la respuesta celular al estrés genotóxico, y en la transmisión de la información acerca del ambiente celular a través del señalamiento de la integrina. En total, parece que la proteína Abl tiene un papel com plejo como un modulo celular que integra las señales a partir de varias fuentes extracelulares e intracelulares y que influencia las decisiones con respecto al ciclo celular y la apoptósis. La tirosina cinasa de Abelson incluye derivados de subtipos tales como la fusión quimérica (oncoproteína) BCR-Abl con una actividad desregulada de la tirosina cinasa o el v-Abl. El BCR-Abl es crítico en la patogénesis del 95% de leucemia m ielogena crónica (CML) y 1 0% de leucemia linfocítica aguda. El STI-571 (Gleevec) es un inhibidor de la tirosina cinasa BCR-Abl oncogénica y es usada para el tratamiento de leucem ia mieloide crónica (CM L). Sin embargo, algunos pacientes en la etapa de crisis de blastos de la CML, son resistentes al STI-571 debido a las mutaciones en la BCR-Abl cinasa. A la fecha se han reportado por encima de 22 mutaciones siendo los más com unes G250E, E255V, T31 5I , F31 7L y M351 T. Los compuestos de la presente invención inhiben la cinasa Abl, especialmente la cinasa v-Abl. Los compuestos de la presente invención 10 también inhiben la cinasa BCR-Abl de tipo silvestre y mutaciones de la cinasa BCR-Abl y son por lo tanto adecuados para el tratamiento de cáncer Bcr-abl-positivo y enfermedades tumorales, tales como leucemias (especialmente la leucemia mieloide crónica y la leucemia linfoblástica aguda, en donde se encuentran especialmente los mecanismos apoptóticos de acción), y también muestran efectos en el subgrupo de células madre leucémicas así como potencial para la purificación de estas células in vitro después de la eliminación de dichas células (por ejemplo, la eliminación de la médula ósea) y la reimplantación de las células una vez que se han eliminado las células cancerosas (por ejemplo re-implantación de células purificadas de la médula ósea). El PDGF (factor de crecimiento derivado de las plaquetas) es un factor de crecimiento que ocurre muy comúnmente, y el cual tiene un papel importante tanto en el crecimiento normal como también en la proliferación celular patológica, tal como se observa en la carcinogénesis y en las enfermedades de las células de músculo liso de los vasos sanguíneos, por ejemplo en ateroesclerosis y trombosis. Los compuestos de la invención pueden inhibir la actividad del receptor de PDGF (PDGFR) y son, por lo tanto, adecuados para el tratamiento de enfermedades tumorales, tales como gliomas, sarcomas, tumores de próstata y tumores del colon, mama, y ovarios. Los compuestos de la presente invención, pueden ser usados no solo como una sustancia que inhibe un tumor, por ejemplo en el cáncer de pulmón de células pequeñas, sino también como un agente para tratar trastornos proliferativos no malignos, tales como ateroesclerosis, 11 trom bosis, soriasis, escleroderma y fibrosis, así como para la protección de células madre, por ejemplo para combatir el efecto hemotóxico de los agentes quimoterapéuticos, tales como el 5-fluoruracilo, y en asma. Los com puestos de la invención pueden ser especialmente usados para el tratamiento de enfermedades, que responden a una inhibición de la cinasa receptora de PDGF. Los compuestos de la presente invención muestran efectos útiles en el tratamiento de trastornos que aparecen como resultado de un transplante, por ejemplo, transplante alogénico, especialmente el rechazo de tejido, tal como bronquiolitis especialmente obliterativa (OB) , i. e. un rechazo crónico de transplantes alogénicos de pulmón . En contraste con los pacientes sin OB, aq uellos con OB frecuentemente muestran una concentración de PDGF elevada en fluidos de lavado broncoalveolar. Los compuestos de la presente invención también son efectivos en enfermedades asociadas con la proliferación y m igración de células vasculares de músculo liso (en donde el PDGF y PDGF-R también participan frecuentemente) , tal como restenosis y ateroesclerosis. Estos efectos y las consecuencias de los mismos para la proliferación o migración de células vasculares de m úsculo liso in vitro e in vivo pueden ser demostrados administrando los compuestos de la presente invención y también investigando sus efectos en el espesamiento de la intima vascular después de una lesión mecánica in vivo. Los compuestos de la presente invención también inhiben los procesos celulares que involucran el factor de la célula madre (SCF, tam bién conocido como el ligando c-kit o factor de acero) , tales como la 12 inhibición de la autofosforilación (kit) del receptor del SCF y la activación estimulada por el SCF de la cinasa MAPK (proteína cinasa activada con mitógenos). Las células M07e son una línea celular de leucemia promegacariocítica humana, la cual depende del SCF para la proliferación. Los com puestos de la invención pueden inhibir la autofosforilación de los receptores del SCF. La familia trk de los receptores de neutrofina (trkA, trkB, trkC) promueve la supervivencia, crecimiento y diferenciación de los tejidos neuronales y no neuronales. La proteína trkB está expresada en las células tipo neuroendocrinas en el intestino delgado y colon, en las células alfa del páncreas, en los monocitos y macrófagos de los gang lios linfáticos y del bazo, y en las capas granulares de la epidermis (Shibayama y Koizumi, 1996) . La expresión de la proteína trkB ha sido asociada con una progresión desfavorables de los tumores Wilms y de neuroblastomas. La trkB se expresa además en células cancerosas de próstata pero no en células normales. La trayectoria de señalización corriente debajo de los receptores trk involucra la cascada de activación de MAPK a través de Shc, Ras activado, genes ERK-1 y ERK-2 y la trayectoria de transducción gamal de PCL (Sugimoto et al . , 2001 ) . Las proteína cinasas activadas con mitógeno (MAPKs) son miembros de trayectorias de transducción de señales conservadas que activan los factores de transcripción, factores de translación y otras moléculas de objetivo en respuesta a una variedad de señales extracelulares. Las MAPKs son activadas por la fosforilación en una motivo dual de fosforilación que tiene la secuencia Thr-X-Tyr por las cinasas de la 13 proteínas cinasa activadas con mitógeno (MKKs). En eucariotes superiores, el papel fisiológico de la señalización de MAPK ha sido correlacionado con eventos celulares tales como proliferación, oncogénesis, desarrollo y diferenciación. De conformidad, la capacidad para regular la transducción de señales vía estas trayectorias (particularmente vía MKK4 y MKK6) podría conllevar al desarrollo de tratamientos y terapias preventivas para enfermedades en humanos asociadas con la señalización de MAPK, tal como enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunes y cáncer. Syk es una tirosina cinasa que tiene un papel crítico en la desgranulación de mastocitos y en la activación de eosinófilos. De conformidad, la cinasa Syk está implicada en varios trastornos alérgicos, en particular asma. Se ha mostrado que la Syk se une a la cadena gama fosforilada del receptor FcsR1 vía los dominios SH2 N-terminales y es esencial para la señalización corriente abajo. La trayectoria de señalización de Ras-Raf-MEK-ERK transmite la respuesta celular para las señales de crecimiento. La Ras es mutada a una forma oncogénica en ~15% de cáncer humano. La familia Raf pertenece a la serina/treonina proteína cinasa e incluye tres miembros, A-Raf, B-Raf y c-Raf (o Raf-1 ). El enfoque en Raf siendo un objetivo del fármaco se ha centrado en la relación de Raf como un efector corriente debajo de Ras. Sin embargo, datos recientes sugieren que la B-Raf puede tener un papel prominente en la formación de ciertos tumores sin ningún requerimiento para un alelo de Ras activado (Nature 417, 949-954 (1 de julio de 2002)). En particular, las mutaciones de B-Raf han sido detectadas en un gran 14 porcentaje de melanomas malignos. Los tratamientos médicos existentes para el melanoma están limitados en su efectividad, especialmente para melanomas en la última etapa. Los compuestos de la presente invención también inhiben los procesos celulares que involucran la b-Raf cinasa, proporcionando una nueva oportunidad terapéutica para el tratamiento de cánceres humanos, especialmente para melanoma. Las múltiples formas de p38 MAPK (a, ß, ?, d), cada una codificada por un gen separado, forman parte de una casada de cinasa involucrada en la respuesta de las células a una variedad de estímulos, incluyendo tensión osmótica, luz UV y eventos mediados por citosina. Se considera que estas cuatro isoformas de p38 regulan diferentes aspectos de señalización intracelular. Su activación es parte de una cascada de eventos de señalización que conllevan a la síntesis y producción de citocinas pro-inflamatorias como la TNF . La p38 funciona mediante la fosforilación corriente debajo de substratos que incluyen otras cinasas y factores de transcripción. Los agentes que inhiben la cinasa p38 han sido mostrados por bloquear la producción de citocinas que incluyen pero no están limitadas a TNFa, I L-6, IL-8 e IL-? ß. Los monocitos de la sangre periférica (PBMCs) han sido mostrados por expresar y secretar citocinas inflamatorias cuando se estimulan con lipopolisacáridos (LPS) in vitro. Los inhibidores de p38 bloquean eficientemente este efecto cuando los PBMCs son pre-tratados con tales compuestos antes de la estimulación con LPS. Los inhibidores de p38 son eficaces en modelos de animales con una enfermedad inflamatoria. Los efectos destructivos de muchos estados de 15 enfermedad son causados por la sobreproducción de citocinas pro- inflamatorias. La capacidad de los inhibidores de p38 para regular esta sobreproducción los hace útiles como agentes modificadores de la enfermedad. Las moléculas que bloquean la función de los p38 han sido mostradas por ser efectivas en inhibir la reabsorción de los huesos, inflamación y otras patologías basadas en inflamación e inmunes. Así un inhibidor de p38 seguro y efectivo proporcionaría un medio para tratar enfermedades debilitantes que pueden ser reguladas mediante la modulación de señalización de p38 como, por ejemplo, RA. Por lo tanto, los compuestos, de la invención que inhiben la actividad de p38 son útiles para el tratamiento de inflamación, osteoartritis, artritis reumatoide, cáncer, enfermedades autoinmunes, y para el tratamiento de otras enfermedades mediadas por citosina. El factor beta de desarrollo transformante (TGFG) denota una superfamilia de proteínas que incluye, por ejemplo, TGFn l , TGFD2 y TGFG3, los cuales son moduladores pleotrópicos del crecimiento celular y diferenciación, desarrollo óseo y embriónico, formación de matriz extracelular, hematopoyesis, respuestas inmunes e inflamatorias. Los miembros de la familia TGFD inician las trayectorias de señalización intracelular dirigiendo finalmente a la expresión de los genes que regulan el ciclo celular, controlan las respuestas proliferativas o relacionan las proteínas de matriz extracelular que median la señalización celular exterior-interna, la adhesión celular, la migración y la comunicación intercelular. Consecuentemente, los compuestos de la invención que son 16 inhibidores de la trayectoria de señalización intracelular TGF son tratamientos útiles para las enfermedades fibroproliferativas, incluyendo trastornos del riñon asociados con la actividad no regulada de TGFp y la fibrosis excesiva que incluye la glomerulonefritis (GN), tal como GN proliferativa mesangial, GN inmune, y GN creciente. Otras condiciones renales incluyen la nefropatia diabética, fibrosis intersticial renal, fibrosis renal en pacientes con transplante que reciben ciclosporina, y nefropatia asociada con HIV. Los trastornos vasculares de colágeno incluyen esclerosis sistémica progresiva, polimiositis, escleroderma, dermatomiositis, fascitis eosinofílica, morfea o aquellas asociadas con la incidencia del Síndrome de aynaud. La fibrosis pulmonar resultante de la actividad excesiva de TGFQ incluye el síndrome de dificultad respiratoria del adulto, EPOC, fibrosis pulmonar idiopática, y fibrosis pulmonar intersticial frecuentemente asociada con trastornos autoinmunes, tales como lupus eritematoso sistémico y escleroderma, contacto químico o alergias. Otros trastornos autoinmunes asociados con características fibroproliferativas es la artritis reumatoide. Las condiciones fibroproliferativas pueden estar asociadas con procedimientos quirúrgicos de los ojos. Tales procedimientos incluyen cirugía de refijación de la retina que acompaña la vitreoretinopatia proliferativa, extracción de cataratas con implantación de lentes intraoculares y cirugía de drenaje post-glaucoma, El receptor 3 del factor de crecimiento de fibroblastos fue mostrado por ejercer un efecto regulatorio negativo en el crecimiento de los huesos y una inhibición de la proliferación de condrocitos. La displasia 17 tanatofórica es causada por diferentes mutaciones en el receptor 3 del factor de crecimiento de fibroblastos y una mutación, FGFR3 de TDI I, tiene una actividad constitutiva de la tirosina cinasa la cual activa el factor de transcripción Statl , que conlleva a la expresión de un inhibidor del ciclo celular, interrupción del crecimiento y desarrollo anormal de huesos (Su et al. , Nature, 1997, 386, 288-292). El FGFR3 también es frecuentemente expresado en un múltiples cánceres del tipo mieloma. La cinasa, c-Src transmite señales oncogénicas de muchos receptores. Por ejemplo, la sobre-expresión de EGFR o HER2/neu en tumores conlleva a la activación constitutiva de la c-src, la cual es característica para la célula maligna pero ausente de la célula normal, por otro lado, los ratones deficientes en la expresión de c-src muestran un fenotipo osteopetrótico, indicando una participación clave de la c-src en la función osteoclástica y una posible inclusión en trastornos relacionados. La familia de las proteína cinasas S6 ribosomal consiste de por lo menos 8 miembros (RSK1 , RS 2, RSK3, RSK4, MSK1 , S 2, P70S6K y P70S6Kb). Las proteína cinasas S6 de la proteína ribosomal tienen funciones pleotrópicas importantes, entre ellas un papel clave en la regulación de la translación de ARNm durante la biosíntesis de la proteína (Eur. J. Biochem. 2000 Noviembre; 267 (21 ): 6321-30, Exp Cell Res. Nov. 25, 1999; 253(1 ): 1 00-9, Mol Cell Endocrinol. Mayo 25, 1999; 151 (1 -2): 65-77), la fosforilación de la proteína ribosomal S6 por p70S6 también ha sido implicada en la regulación de la motilidad celular (Immunol. Cell Biol. 2000 Agosto; 78(4):447-51 ) y el desarrollo celular (Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. , 2000; 65: 1 01 -27), y por tanto, puede ser importante en la 18 metástasis del tumor, la respuesta inmune y la reparación del tejido así como otras condiciones de enfermedad. La SAPK's (también llamadas cinasas N-terminal jun o J N 's) son una familia de proteína cinasas que representan la penúltima etapa en las trayectorias de transducción de señales que resultan en la activación del factor de transcripción c-jun y la expresión de genes regulados por c-jun. En particular, la c-jun está involucrada en la transcripción de genes que codifican las proteínas involucradas en reparar el ADN que está dañado debido a ataques genotóxicos. Los agentes q ue inhiben la actividad de SAPK en una célula evitan que el ADN repare y sensibilice la célula para aquellas modalidades de cáncer que actúan induciendo el daño del ADN. El Lck participa en la señalización de las células T. Los ratones que carecen del gen Lck tienen una escasa capacidad para desarrollar timocitos. La función de Lck como un activador positivo de la señalización de las células T sugieren que los in hibidores de Lck pueden ser útiles en el tratamiento de enfermedades autoinmunes tales como artritis reumatoide. Fes es fuertemente expresada en las células hematopoyéticas mieloides y está implicada tanto en ambas trayectorias de señalización de supervivencia y diferenciación en leucocitos mieloides. CSK está implicada en cánceres, particularmente cánceres de mama y colorectal. De conformidad con lo anterior, la presente invención proporciona además un método para prevenir o tratar cualquiera de las enfermedades o trastornos descritos anteriormente en un sujeto en necesidad de tal tratamiento, el método comprende administrar a dicho sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva (ver, "Administration and Pharmaceutical 19 Compositions" , infra) de un com puesto de fórmula I o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo. Para cualquiera de los usos anteriores, la dosis requerida variará dependiendo del modo de administración , la condición particular a ser tratada y el efecto deseado. Admi nistración de Com posiciones Farmacéuticas En general, los compuestos de la presente invención serán administrados en cantidades terapéuticamente efectivas vía cualquiera de los modos usuales y aceptables conocidos en el arte, ya sea solos o en combinación con uno o más agentes terapéuticos. Una cantidad terapéuticamente efectiva puede variar ampliamente dependiendo de la severidad de la enfermedad , la edad y la salud relativa del sujeto, la potencia del compuesto usado y otros factores. En general, se indican resultados satisfactorios a ser obtenidos sistémicamente en dosificaciones diarias de desde aproximadamente 0.03 a 2.5 mg/kg del peso corporal. Una dosis diaria indicada en mamíferos grandes, e.g. humanos, está en el intervalo de aproximadamente 0.5 mg a aproximadamente 100 mg, convenientemente administrados, e.g . en dosis divididas de hasta cuatro veces al día o en forma retardada. Las formas adecuadas de dosis unitarias para administración oral com prenden de ca. 1 a 50 mg del ingrediente activo. Los com puestos de la invención pueden ser administrados como com posiciones farmacéuticas mediante cualquier ruta convencional, en particularmente enteralmente, e.g . , oralmente, e.g . en la forma de tabletas o cápsulas, o parenteralmente, e.g . , en la forma de soluciones inyectables o suspensiones, tópicamente, e. g . , en la forma de lociones, geles , 20 ungüentos o cremas, o en una forma nasal o de supositorio. Las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la presente invención en forma libre o en una forma de sal farmacéuticamente aceptable en asociación con por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable o diluyente puede ser fabricado de una manera convencional mediante métodos de mezclado, granulación o revestimiento. Por ejemplo, las composiciones orales pueden ser tabletas o cápsulas de gelatina que comprenden el ingrediente activo junto con a) diluyentes, e.g. , lactosa, dextrosa, sucrosa, manitol, sorbitol, celulosa, y/o glicina; b) lubricantes, e.g. sílice, talco, ácido estéarico, su sal de magnesio o calcio y/o polietilénglicol; para tabletas también c) aglutinantes, e.g. , silicato de magnesio aluminio, pasta de almidón, gelatina, tragacanto, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio y/o polivinilpirrolidona; si se desea d) agentes de disgregación, e.g. , almidones, agar, ácido algínico o su sal de sodio, o mezclas efervescentes y/o e) absorbentes, colorantes, saborizantes y edulcorantes. Las composiciones inyectables pueden ser soluciones isotónicas acuosas o suspensiones y se pueden preparar supositorios a partir de emulsiones grasas o suspensiones. Las composiciones pueden ser esterilizadas y/o contener adyuvantes, tales como conservadores, estabilizantes, agentes de humidificación o emulsificantes, promotores de solución, sales para regular la presión osmótica y/o amortiguadores. Además, pueden contener también otras substancias terapéuticamente valiosas. Las formulaciones adecuadas para aplicaciones transdérmicas incluyen una cantidad efectiva de un compuesto de la presente invención con un portador. Un portador puede 21 incluir solventes absorbibles farmacológicamente aceptables para ayudar en el paso a través de la piel del huésped. Por ejemplo, los dispositivos transdérmicos están en la forma de vendajes que comprenden un miembro de respaldo, un depósito que contiene el compuesto opcionalmente con portadores, opcionalmente una barrera que controla la velocidad de suministro del compuesto a la piel del huésped a una velocidad predeterminada y controlada por un periodo de tiempo prolongado, y medios para asegurar al dispositivo a la piel. También se pueden usar las formulaciones de matriz transdérmicas. Las formulaciones adecuadas para aplicación tópica, e.g. a la piel y ojos, son preferiblemente soluciones acuosas, ungüentos cremas o geles bien conocidos en el arte. Tales pueden contener solubilizadores, estabilizadores, agentes intensificadores de la tonicidad, amortiguadores y conservadores. Los compuestos de la invención pueden ser administrados en cantidades terapéuticamente efectivas en combinación con uno o más agentes terapéuticos (combinaciones farmacéuticas). Por ejemplo, los efectos sinergísticos pueden ocurrir con otras substancias inmunomoduladoras o anti-inflamatorias, por ejemplo cuando se usan en combinación con ciclosporina, rapamicina o ascomicina o inmunosupresores análogos de los mismos, por ejemplo ciclosporina A (CsA), cilclosporina G, FK-506, rapamicina o compuestos comparables, corticoesteroides, ciclofosfamida, azatioprina, metotrexato, , brequinar, leflunomida, mizoribina, ácido micofenólico, micofenolato mofetilo, 15-desoxispergualina, anticuerpos inmunosupresores, especialmente anticuerpos monoclonales para receptores de leucocitos, por ejemplo 22 MHC, CD2, CD3, CD4, CD7, CD25, CD28, B7, CD45, CD58, o sus ligandos, u otros compuestos inmunomoduladores, tales como CTLA41 g. En donde los compuestos de la invención son administrados en conjunción con otras terapias, las dosificaciones de los compuestos co-administrados variarán por supuesto dependiendo del tipo de co-fármaco empleado, en el fármaco específico empleado, en la condición qe está siendo tratado y etc. La invención también proporciona combinaciones farmacéuticas, e.g. un estuche, que comprende a) un primer agente que es un compuesto de la invención como el aquí descrito, en forma libre o en forma de sal aceptable farmacéuticamente, y b) por lo menos un co-agente. El estuche puede comprender instrucciones para su administración. Los términos "co-administración" o "administración combinada" o similares como se utilizan aquí comprenden la administración de los agentes terapéuticos seleccionados a un solo paciente, y tienen el propósito de incluir regímenes de tratamiento en los cuales los agentes no son necesariamente administrados por la misma vía de administración o al mismo tiempo. El término "combinación farmacéutica" como se utiliza aquí significa un producto que resulta de mezclar o combinar más de un ingrediente activo e incluye ambas combinación fijas y no fijas de los ingredientes activos. El término "combinación fija" significa que los ingredientes activos, e.g. un compuesto de fórmula I y un co-agente, ambos, son administrados a un paciente simultáneamente en la forma de una sola entidad o dosificación. El término "combinación no fija" significa que los ingredientes activos, e.g . un compuesto de fórmula I y un co-agente, son ambos 23 administrados a un paciente como entidades separadas ya sea simultáneamente, concurrentemente o consecutivamente sin límites de tiempo específicos, en donde tal administración proporciona niveles terapéuticamente efectivos de los 2 compuestos en el cuerpo del paciente. El último también se aplica para terapia de coctel, e.g. la administración de 3 o más ingredientes activos. Procesos para Preparar los Compuestos de la Invención La presente invención también incluye procesos para preparar los compuestos de la invención. En las reacciones descritas, puede ser necesario proteger los grupos funcionales reactivos, por ejemplo grupos hidroxi, amino, imino, tio o carboxi, en donde estos son deseados en el producto final, para evitar su participación no deseada en las reacciones. Los grupos protectores convencionales pueden ser usados de conformidad con la práctica estándar, por ejemplo, ver T. W. Greene and P. G. M. Wuts in "Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley and Sons, 1 991 . En cada uno de los siguientes tres esquemas de reacción, R10 se muestra como hidrógeno. Los compuestos de fórmula I , en la cual R2 es hidrógeno, pueden ser preparados procediendo como en el siguiente Esquema de Reacción I: Esquema de Reacción I: 24 en el cual R t R3, R4, Y, Z y n son como se definieron para la Fórmula I en la breve descripción de la I nvención . Un compuesto de Fórm ula I puede ser preparado haciendo reaccionar un compuesto de fórm ula 2 con un agente de oxidación adecuado (e. g . , NaN02, y los similares) en la presencia de un ácido adecuado (e.g. , TFA, y los similares) . La reacción se lleva a cabo a 20 a 40°C y puede tomar hasta 4 horas para completarse. Los compuestos de fórmula I , en los cuales R2 es alquilo de Ci-6, pueden ser preparados procediendo como en el siguiente Esquema de Reacción I I: Esquema de Reacción II en el cual R-i , R3, R4, Y, Z y n son como se definieron para la fórmula I en la breve descripción de la I nvención. U n com puesto de Fórmula I puede ser preparado haciendo reaccionar un com puesto de Fórmula I , en la cual R2 es hidrógeno, con R2I o R2Br en presencia de un solvente adecuado (e.g., DMF, y los similares) y un agente de oxidación adecuado (e.g. , NaH , y los similares). La reacción se lleva a cabo a 0 a 25°C y puede tomar hasta 4 horas para completarse.. 25 Esquema de Reacción III en el cual R2, R3, R4, Re, Y, Z y n son como se definieron para la Fórmula I en la breve descripción de la Invención . Un compuesto de fórmula I puede ser preparado haciendo reaccionar un compuesto de Fórmula I con R6NH2 en presencia de un solvente adecuado (e.g . , dioxano, y los similares) , una base adecuada (e.g . , fosfato de potasio, ter-butanóxido de potasio, y los similares) , un ligando adecuado (e.g . , Xantfos, ligando de imidazolio (ver Ejemplo 8) , y los similares) y un catalizador adecuado (e.g . , Pd2(dba)3, Pd(OAc)2 y los similares). La reacción se lleva a cabo a aproximadamente 80 a aproximadamente 1 20°C y puede tomar hasta 24 horas para com pletarse. La descripción detallada de la síntesis de un compuesto de Fórmula I puede ser encontrada en los Ejemplos, infra. Procesos Adicionales para Preparar los Compuestos de Invención Un compuesto de la invención puede ser preparado como una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable haciendo reaccionar la forma de base libre del compuesto con un ácido orgánico o inorgánico farmacéuticamente aceptable. Alternativamente, una sal de adición de base farmacéuticamente aceptable de un com puesto de la invención puede ser preparado haciendo reaccionar la forma de ácido libre del compuesto 26 con una base orgánica o inorgánica farmacéuticamente aceptable. Alternativamente, las formas de sal de los compuestos de la invención pueden ser preparados usando sales de los materiales iniciales o intermediarios. Las formas de ácido libre o base libre de los compuestos de la invención pueden ser preparados a partir de la sal de adición de base o sal de adición de ácido correspondiente, respectivamente. Por ejemplo un compuesto de la invención en una forma de sal de adición de ácido puede ser convertido a la base libre correspondiente tratando con una base adecuada (e.g ., solución de hidróxido de amonio, hidróxido de sodio, y los similares). Un compuesto de la invención en una forma de sal de adición de base puede ser convertido al ácido libre correspondiente tratando con un ácido adecuado (e.g., ácido clorhídrico, etc). Los compuestos de la invención en forma no oxidada pueden ser preparados a partir de los N-óxidos de los compuestos de la invención tratando con un agente de reducción (e.g., azufre, dióxido de azufre, trifenil fosfina, borohidróxido de litio, borohidróxido de sodio, tricloruro de fósforo, tribromuro, o los similares) en un solvente orgánico inerte adecuado (e.g., acetonitrilo, etanol, dioxano acuoso, o los similares) a 0 a 80°C. Los derivados de profármaco de los compuestos de la invención pueden ser preparados mediante métodos conocidos para aquellos expertos ordinarios en la materia (e.g., para detalles adicionales ver Saulnier et al. , (1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1 985). Por ejemplo, los profármacos apropiados pueden ser preparados 27 haciendo reaccionar un compuesto no derivado de la invención con un agente de carbamilación adecuado (e.g. , 1 , 1 -aciloxiaIquilcarbanocloridato, carbonato de para-nitrofenilo, o los similares). Los derivados protegidos de los compuestos de la invención pueden ser preparados mediante medios conocidos para aquellos expertos ordinarios en el arte. Una descripción detallada de las técnicas aplicables para la creación de los grupos protectores y su eliminación puede ser encontrada en T.W. Greene, "Protecting Groups in Organic chemistry", 3a. edición, John Wiley and Sons, Inc. , 1999. Los compuestos de la presente invención pueden ser convenientemente preparados o formados durante el proceso de la invención, como solvatos (e.g. , hidratos). Los hidratos de los compuestos de la presente invención pueden ser preparados convenientemente por recristalización a partir de una mezcla de solvente orgánico/acuoso, usando solventes orgánicos tales como dioxina, tetrahidrofurano o metanol. Los compuestos de la invención pueden ser preparados como sus estereoisómeros individuales haciendo reaccionar una mezcla racémica de los compuestos con un agente de resolución ópticamente activo para formar un par de compuestos diastereoisoméricos, separando los diastereómeros y recuperando los enantiomeros ópticamente puros. Aunque la resolución de 'los enantiomeros puede ser llevada a cabo usando derivados diastereoméricos covalentes de los compuestos de la invención, los complejos disociables son los preferidos (e.g. , sales diastereoméricas cristalinas). Los diastereómeros tienen propiedades 28 físicas distintas (e.g. , puntos de fusión, puntos de ebullición, solubilidades, reactividad, etc.) y pueden ser fácilmente preparados tomando ventaja de sus diferencias. Los diastereómeros pueden ser preparados mediante cromatografía o preferiblemente por técnicas de separación/resolución basadas en las diferencias en solubilidad. El enantiómero ópticamente puro es entonces recuperado, junto con el agente de resolución, por cualquier medio práctico que no resulte en racemización. Una descripción más detallada de las técnicas aplicables a la resolución de los estereoisómeros de los compuestos a partir de su mezcla racémica puede ser encontrada en Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, "Enantiomers, Racemates and Resolutions"; John Wiley and Sons, Inc., 1981 . En resumen, los compuestos de Fórmula I pueden ser preparados mediante un proceso, que involucra: a) el de los esquemas de reacción I , I I ó I II ; y b) convertir opcionalmente un compuesto de la invención en una sal farmacéuticamente aceptable; c) convertir opcionalmente una forma de sal de un compuesto de la invención a una forma que no es sal; d) convertir opcionalmente una forma no oxidada de un compuesto de la invención en un N-óxido farmacéuticamente aceptable; e) convertir opcionalmente una forma de N-óxido de un compuesto de la invención a su forma no oxidada; f) resolver opcionalmente un isómero individual de un compuesto de la invención a partir de una mezcla de isómeros; 29 g) convertir opcionalmente un compuesto no derivado de la invención en un derivado de profármaco farmacéuticamente aceptable; y h) convertir opcionalmente un derivado de profármaco de un compuesto de la invención a su forma no derivada. En lo que respecta a la producción de los materiales de partida no está particularmente descrita, los compuestos son conocidos o pueden ser preparados análogamente a los métodos conocidos en el arte o como se describe en los siguientes Ejemplos. Un experto en el arte apreciará que las transformaciones anteriores son solo representativas de métodos para preparar los compuestos de la presente invención, y que otros métodos bien conocidos pueden ser usados de manera similar. Ejemplos La presente invención está ejemplificada además, pero no limitada, por los siguientes ejemplos que ilustran la preparación de los compuestos de Fórm ula I (Ejemplos) e intermediarios (referencias) de conformidad con la invención. Ejemplo 1 N-r2,4-dicloro-3-(1 -metil-2-oxo-1 , 2-dihidro-f 1 .61 naftíridin-3-iO- fenill-4-(4-metil-piperazin-1 -ilmetiP-benzamida Paso A: Preparación de 2 , 6-dicloro-3-nitrofenil-acetonitrilo 30 A una solución de 2,6-dicloro-fenil-acetonitrilo (1 5. Og, 80.62 mmol) en diclorometano (50 mL) y H2S04 (40 mL) se agregó (lentamente) una mezcla de H2S04 (14 mL) y HN03 (5.5 mL) a 0°C. la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 20 minutos, se calentó a temperatura ambiente durante media hora, y posteriormente se concentró para eliminar el solvente orgánico. La solución se vertió en un vaso de laboratorio que contenía hielo-agua (400 mL) para dar un precipitado cristalino, el cual se recolectó mediante filtración al vacío y se lavó con agua para proporcionar el producto (20.44 g, 82.4%). Paso B: Preparación de 3-(2,6-dicloro-3-nitro-fenil)-[1 ,6]naftiridin-2-¡lamina Una solución de 2,6-dicloro-3-nitrofenil-acetonitrílo (1.02 g, 4.42 mmol), 4-amino-piridina-3-carbaldehido (0.4 g , 3.28 mmol) y NaOH (52 mg, 1 .31 mmol) en EtOH (2.0 mL) se calentó a 105°C por 24 horas. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (50 mi) y se lavó con K2C03 saturado y salmuera. La capa orgánica se secó, se filtró y se concentró para dar el producto crudo. La purificación en columna de gel de sílice instantánea, eluyendo con gradiente de CH2CI2 (100%) a CH2CI2/Me0H (2N NH3) (100/6) 31 proporcionó el intermediario del título como un sólido (257 mg , 23.4%) . Paso C: Preparación de 3-(2,6-dicIoro-3-n¡tro-fenil)-IH-[1 , 6]naftiridin- 2-ona A una solución de 3-(2,6-dicloro-3-nitro-fenil)-[1 , 6]naftiridin-2-ilamina (50 mg , 0.149 m mol) en TFA (3.0 mL) se agregó lentamente NaN02 a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 5 min utos, se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante tres horas. La solución se vertió en un vaso de laboratorio que contenía hielo-ag ua (50 mL) y NaC03, posteriormente se extrajo con EtOAc (3x50 mi) y se lavó con K2C03 saturado y salmuera . La capa orgánica se secó, se filtró y se concentró para dar el intermediario del título como un sólido (50 mg , 1 00%) . Método Alternativo para la preparación de 3-(2, 6-dicloro-3-nitro-fenil)-IH-[1 , 6] naftiridin-2-ona: Paso A' : Preparación de ácido (2 ,6-dicloro-3-nitro-fenil)-acético Una solución de 2,6-dicloro-3-nitrofenil-acetonitrilo (15. Og, 64.94 mmol) en ag ua ( 1 00 mL) y H2S04 (conc. 1 00 mL) se calentó a 120°C durante tres horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se vertió en un vaso de laboratorio que contenía hielo-agua (250 m L) para dar un precipitado cristalino , el cual se recolectó mediante 32 filtración al vacío y se lavó con agua para proporcionar el producto (16. Og, 98.6%). Paso B': Preparación de 2-(2, 6-dicloro-3-nitro-fenil)-N-(3-formil-piridin-4-il)-acetamida Una solución de ácido (2,6-dicloro-3-nitro-fenil)-acético (15.0 g, 60.0 mmol) en cloruro de tionilo (60 mL) se sometió a reflujo durante una hora. El solvente se eliminó por concentración; se agregó tolueno seco y se concentró para eliminar totalmente el cloruro de tionilo. A la solución de cloruro ácido en diclorometano seco (200 mL) se agregó (gota a gota) una solución de 4-amino-piridina-3-carbaldehído (6.6 g , 54 mmol) en diclorometano (50 mL) y DI EDA (10.7 mL, 60 mmol). La mezcla se mantuvo a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (300 mi) y se lavó con K2C03 saturado y salmuera. La capa orgánica se secó, se filtró y se concentró para dar el producto crudo. La recristalización con diclorometano/hexano da por resultado el compuesto del título como un sólido (18.2g, 95.2%). Paso C: Preparación de 3-(2,6-dicloro-3-nitro-fenil)-IH-[1 ,6] naftiridin-2-ona Una solución de 2-(2,6-dicloro-3-nitro-fenil)-N-(3-formil-piridin-4-¡l)-acetamida (5.0g, 14.12 mmol) y Na2C03 (2.5 g) en MeOH (300 mL) se calentó durante 15 minutos a 70°C. Después de filtrar la mezcla de reacción, el solvente se eliminó por concentración para dar el producto 33 crudo, el cual se purificó mediante columna de gel de sílice instantánea, se eluyó con gradiente de CH2CI2 (100%) a CH2CI2/MeOH (2N NH3) (93/7 %) para dar el intermediario del título como un sólido (3.75 g, 77.7 %). Paso D: Preparación de 3-(2,6-dicloro-3-nitro-fenil)-1 -metil-IH-[1 ,6] naftiridin-2-ona A una solución de 3-(2,6-dicloro-3-nitro-fenil)-IH-[ ,6]naftiridin-2-ona (2.0g, 5.95 mmol) en DMF (50 mL) se agregó HNa (286mg, 60%, 7.14 mmol) y I Me (0.5 mL, 8.03 mmol) a 0°C. La mezcla se agitó por dos horas a 0°C, se diluyó con EtOAc (300 mi) y se lavó con K2C03 saturado, salmuera y agua. La capa orgánica se secó, se filtró y se concentró para dar el producto crudo, el cual se purificó mediante una columna de gel de sílice instantánea eluyendo con un gradiente de CH2CI2 (100%) a CH2CI2/ eOH (2N NH3) (98.5/1 .5) para dar el intermediario del título como un sólido (1 .67 g, 80.3 %). Paso E: Preparación de 3-(3-amino-2,6-dicloro-fenil)-1 -metil-IH-[1 ,6] naftiridin-2-ona A una . solución suspendida de 3-(2,6-dicloro-3-n¡tro-fenil)-1 -metil-IH-[1 ,6] naftiridin-2-ona (1 .55 g, 4.427 mmol) en EtOH (12 mL) se agregó una solución de Sn (II) Cl2 (3.80 g, 19.92 mmol) en HCI (con. 16 mL) a 75°C. 34 Después de agitar durante 30 minutos a 75°C, la mezcla se diluyó con EtOAc y se neutralizó con K2C03 a un pH de 8. La capa orgánica se lavó con K2C03 saturado, salmuera y se secó, se filtró y concentró para dar el producto crudo. El producto crudo se purificó mediante recristalización con CH2CI2/EtOAc/Hexano para dar el intermediario del título como un sólido (1 .32 g, 93.15 %). Paso F: Preparación de 4-clorometil-N- [2,4-d¡cloro-3-(1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidro-[1 ,6] naftiridln-3-il)-fenil]-benzamida A una solución de 3-(3-amino-2,6-dicloro-fenil)-1 -metil-IH-[1 ,6]-naftiridin-2-ona (30 mg, 0.0937 mmol) en el diclorometano (7 mL) se agregó cloruro de 4-(clorometil) benzoilo (53.2 mg, 0.28mmol). Después de que la mezcla se agitó durante 24 horas a temperatura ambiente, se diluyó con EtOAc y se lavó con K2C03 saturado, salmuera y agua. La capa orgánica se secó, filtró y concentró para dar el producto crudo, el cual se purificó mediante columna de gel de sílice instantánea (flash), eluyendo con gradiente de CH2CI2 (100%) a CH2CI2/MeOH (NH3,2N) (95/5 %) para dar el intermediario del título como un sólido (32.4 mg , 73.1 %). Paso G: Preparación de N-[2,4-dicloro-3-(1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidro-[1 ,6] naftiridin-3-il)-fenil 1 -4-(4-metil-piperazin-l-ilmetil)-benzamida 35 A una solución de 4-clorometil-N-[2,4-dicIoro-3-(1-metil-2-oxo-1 ,2-dihidro-[1,6] naftiridin-3-il)-fenil]-benzamida (25 mg, 0.0529 mmol) en DMF (2.5 m!_) se agregó CsC03 (51.7 mg, 0.1587 mmol) y (53.2 mg, 0. 28mmol). Después de que la mezcla se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente, se diluyó con EtOAc y se lavó con 2C03 saturado y salmuera. La capa orgánica se secó, filtró y concentró para dar el producto crudo, el cual se purificó mediante columna de gel de sílice instantánea (flash), eluyendo con un gradiente de CH2CI2 (100%) a CH2CI2/MeOH (NH3, 2N) (98/8) para dar N-[2,4-dicloro-2-(1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidro-[l,6]naftirid¡n-3-il)-fenil]-4-(4-metil-piperazin-l-ilmetil)-benzamida como un sólido (21 mg, 73.9 %): RMN 1H 400 MHz (CDCI3) d 8.86 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.63 (d, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.84-7.86 (m, 2H), 7.77 (s, 1H), 7.46-7.52 (m, 3H), 7.29 (d, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.58 (s, 2H), 2.50 (m, 8H), 2.30 (s, 3H); EM m/z 537.2 (M+1). Ejemplo 2 N-f2.4-dicloro-3-í1-metil-2-oxo-1 ,2-dihidro-M .61naftiridin-3-il-fen¡n-3- trifluorometil-bencensulfonamida La 3-(3-Amino-2,6-dicloro-fenil)-1-metil-IH-[1,6]naftiridin-2-ona (35mg, 0.1093 mmol) se disolvió en THF seco (2mL). Se agregaron cloruro de 4-trifluorometilbencensulfonil (26.74mg, 0.1093mmol) y piridina (12.95mg, 0.1640mmol). La reacción se sometió a reflujo durante 2 horas, se diluyó con acetato de etilo (150mL) y se lavó con K2C03 saturado y 36 salmuera. La fase orgánica se secó usando MgS04 y el producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice y se eluyó con un gradiente de 0-4% metanol/cloruro de metileno para dar N-[2,4-dicloro-3-1-metil-2-oxo-1 ,2-dihidro-[1 ,6]naftiridin-3-il-feni-3-trifluorometil-bencensulfonamida como un sólido blanco (20.6mg): RMN de 1H (CD3OD): 5 3.70 (s, 3H), 7.44 (d, 1H), 7.53 (d, 1H), 7.63 (t, 1h), 7.82 (m, 3H), 7.91 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 8.62 (d, 1H), 9.03 (s, 1H); E m/z 528.1 (M + 1). Ejemplo 3 N- f2, 4-Dicloro-3-(1-metil-2-oxo- ,2-dihidro-quinolin-3-il)-fenin-3- trifluorometil-benzamida Paso A: Preparación de 2-(2,6-dicloro-3-nitro-fenil)-N-(2-formll-fenil)-acetamida Una solución de ácido (2,6-dicloro-3-nitro-fenil)-acético (0.90g, 3.35 mmol) en cloruro de tionilo (15 ml_) se sometió a reflujo durante una hora. El solvente se eliminó por concentración y se agregó tolueno seco para eliminar completamente el cloruro de tionilo. A la solución de cloruro ácido en diclorometano seco (30 mL) se agregó (gota a gota) una solución de 2-aminobenzaldehído (0.365g, 3.02mmol) en diclorometano (5.0ml_). La mezcla de agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de 37 reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con K2C03 saturado y salmuera. La capa orgánica se secó, se filtró y se concentró para dar el producto crudo (0.94 g , 88. 6%). Paso B: Preparación de 3-(2,6-dicloro-3-nitro-fenil)-IH-quinolin-2-ona Una solución de 2-(2,6-dicloro-3-nitro-fenil)-N-(2-formil-fen¡I)-acetamida (0.7g, 1 .99mmol) y Na2C03 (1 .0g) en MeOH (150mL) se calentó durante 30 minutos a 70°C. Después de filtrar la mezcla de reacción, el solvente se eliminó mediante concentración para dar el producto crudo. El producto crudo se purificó mediante columna de gel de sílice instantánea, eluyendo con gradiente de CH2CI2 (1 00%) a CH2CI2/MeOH (2N NH3) (97/3 %), dando por resultado el intermediario del título como un sólido (0.288 g, 41 .3 %). Paso C: Preparación de 3-(2,6-dicloro-3-n¡tro-fenil)-1 -metil-IH-quinolin-2-ona A una solución de 3-(2,6-dicloro-3-nitro-fenil)-IH-quinolin-2-ona (0.21 g, 0.6266 mmol) en DMF (5.0 mL) se agregó HNa (30.1 mg , 60%, 0.752 mmol) y I Me (120.1 mg , 0.846 mmol) a 0°C. Después de que la mezcla se agitó durante dos horas a 0°C, la mezcla se diluyó con EtOAc y se lavó con K2C03 saturado, salmuera y agua. La capa orgánica se secó, filtró y 38 concentró para dar el producto crudo, el cual se purificó mediante columna de gel de sílice instantánea, eluyendo con gradiente de CH2CI2 (100%) a CH2CI2/ eOH (2N NH3) (95/5), para dar el intermediario del título como un sólido (78 mg, 35.8 %). Paso D: Preparación de 3-(3-amino-2,6-dicloro-fenil)-1 -metil-1 H- quinolin-2-ona A una solución suspendida de 3-(2,6-dicloro-3-nitro-fenil)-1 -metil-IH- quinolin-2-ona (50 mg, 0.143 mmol) en EtOH (3.0 mL) se agregó una solución de Sn (II) Cl2 (122 mg, 0.644 mmol) en HCI concentrado (2.0 mL) a 75°C. Después de agitar la mezcla durante 30 minutos a 75°C, la mezcla se diluyó con EtOAc y se neutralizó con K2C03 hasta que se alcanzó un pH de 8. La capa orgánica se lavó con K2C03 saturado, salmuera y se secó, se filtró y concentró para dar el producto crudo (44.2 mg, 96.7 %). Paso E: Preparación de N-[2,4-dicloro-3-(1 -metil-2-oxo-1 ,2-d¡hidro- quinolin-3-il)-fenil]-3-trifluorometil-benzamida A una solución de 3-(3-amino-2,6-dicloro-fenil)-1 -metil-1 H-quinolin-2- ona (30 mg, 0.094 mmol) en diclorometano (5.0 mL), se agregó cloruro de 4-(clorometil) benzoilo (58.7 mg, 0.283 mmol). Después de agitar la mezcla durante 24 horas a temperatura ambiente, se diluyó con EtOAc y se lavó 39 con K2C03 saturado, salmuera y agua. La capa orgánica se secó, filtró y concentró para dar el producto crudo, el cual se purificó mediante comuna de gel de sílice instantánea eluyendo con gradiente de CH2CI2 (100%) a CH2CI2/MeOH (NH3, 2N) (95/5) para dar N-[2,4-dicloro-3-(1-met¡l-2-oxo-1 ,2-dihidro-quinolin-3-il)-fenil]-3- trifluorometil-benzamida como un sólido (34.5 mg, 75.0 %): RMN H 400 Hz (CDCI3) d 8.53 (d, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.05 (d, 1H), 7.84 (d, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.61-7.69 (m, 3H), 7. 51 (d, 1H), 7.46 (d, 1H), 7.30 (m, 1H), 3.83 (s, 3H); EM m/z 491.20 (M + 1). Ejemplo 4 N-r3,5-Dicloro-4-(1-metil-2-oxo-1,2-dihidro-f1,61naftiridin-3-¡l-fenin-3- A una solución de 3,5-dicloronitrobenceno (50.00g, 260.6mmol) y tioacetonitrilo de metilo (22.71g, 260.6 mmol) en DMSO (400 mL) se agregó NaOH (20.84g, 521.2 mmol) a 0°C. La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, con agitación durante 24 horas, a temperatura ambiente bajo N2. la reacción se diluyó con agua helada y se acidificó con HCI 3N a un pH de 1. la mezcla se extrajo con acetato de etilo (3x500 mL), se lavó con H20, secó con MgS04 y concentró para obtener un aceite negro. El aceite se purificó mediante cromatografía de columna sobre una columna de gel de sílice, eluyendo con un gradiente de 0-10% acetato de etilo/hexanos, para dar 2,6-dicloro-4-nitrobencilnitrilo 40 como un sólido amarillo (11.00g). Una suspensión agitada de 2,6-dicloro-4-nitrobencilnitrilo (10.86g, 47.0 mmol) en H2S04 concentrado (45 mL) y H20 (50 mL), se calentó durante 2.5 horas a 150°C. La mezcla de reacción se vertió entonces en agua (300 mL). El precipitado se recolectó por filtración para dar el ácido 2,6-dicloro-4-nitrobencil-carboxílico como un sólido blanco (10.41g). El ácido 2,6-dicloro-4-nitrobencil-carboxílico (3.00 g, 11.98mmol) se suspendió en cloruro de tionilo (12 mL). La suspensión se calentó a 80°C y se sometió a reflujo durante 30 minutos. El exceso del cloruro de tionilo se evaporó completamente agregando tolueno seco. El residuo se disolvió en cloruro de metileno seco (50mL) y después se agregó a una solución de 4-amino-3-piridilcarboxialdehído (1.76g, 14.38mmol) en cloruro de metileno seco (5mL) y trietilamina (2.91g, 28. 76mmol). Después de agitar por 2 horas a temperatura ambiente, la mezcla de diluyó con acetato de etilo (500mL), se lavó con una solución saturada K2C03 y salmuera. La fase orgánica se secó con MgS04 y el producto crudo se purificó mediante cromatografía de columna sobre una columna de gel de sílice, eluyendo con un gradiente de 0-4% metanol/cloruro de metileno, para dar 2-(2,6-dicloro-4-nitro-fenil)-N-(3-formil-piridin-4-il)-acetamida como un sólido blanco (3.00g). La 2-(2,6-Dicloro-4-nitro-fenil)-N-(3-formil-p¡rid¡n-4-il)-acetamida (3.0 g, 8.47 mmol) se disolvió en metanol seco (240mL). Se agregó Na2C03 (1.80g, 16.94mmol). La reacción se sometió a reflujo durante 30 minutos, se diluyó con acetato de etilo (210mL) y se filtró. Los solventes se evaporaron para dar el producto crudo, el cual se recristalizó con acetato 41 de etilo/hexanos dar 3-(2,6-dicloro-4-n¡tro-fenil)-IH-[1 , 6] naftiridin-2-ona como un sólido ligeramente amarillo (3.07g) . La 3-(2,6-Dicloro-4-nitro-fenil)-IH-[1 ,6]-naftiridin-2-ona (1 .50g, 4.46mmol) se disolvió en DMF seco (60m l_) y se enfrió a 0°C. se agregaron NaH (0.20g , 60% en aceite mineral, 4.91 mmol) y yodometano (0.76g , 5. 35mmol) con agitación durante 1 .5 horas a 0°C. el solvente se eliminó por evaporación , el residuo se disolvió en acetato de etilo (300mL), se lavó con K2C03 saturado y salm uera, se secó con gS04 y se concentró para obtener el producto crudo (1 .30g) , el cual fue usado en el sig uiente paso directamente sin purificación adicional . El crudo del último paso (437mg) se suspendió en etanol anhidro (45ml_) . Se agregó SnCI2 (946mg, 4.99m mol) disuelto en HCI concentrado (6mL) en la suspensión . La reacción se calentó a 75°C y se mantuvo a reflujo durante 30 minutos. La reacción se diluyo con acetato de etilo (200mL) y se lavó con 2C03 saturado y salm uera. La fase orgánica se secó con MgS04 y el producto crudo se purificó mediante cromatografía de columna sobre una columna de gel de sílice, eluyendo con un gradiente de 0-4% de solución 2.0N de cloruro de amoniaco metanol /cloruro de metileno, para dar 3-(4-amino-2,6-dicloro-fenil)-l-metil-IH-[1 ,6] naftiridin-2-ona como un sólido amarillo (265mg) . A una solución de 3-(4-amino-2,6-dicloro-fenil)-1 -metil-IH-[1 ,6] naftiridin-2-ona (30mg , 0.0937mmol) en cloruro de metileno seco (1 2mL) se agregó cloruro de 3-trifluorometilbenzoilo (39.08 mg , 0.1874 mmol) . La reacción se mantuvo en agitación durante 2 horas a temperatura ambiente. La reacción se diluyó con acetato de etilo (I00 m L), y se lavó con K2C03 42 saturado y salmuera. La fase orgánica se secó con gS04 y el producto crudo se purificó mediante cromatografía de columna sobre columna de gel de sílice, eluyendo con un gradiente de 0-4% de metanol/cloruro de metileno, para dar N[3,5-dicloro-4-(l-metil-2-oxo-1 ,2-dihidro-[1 ,6]naftiridin-3-iI-fenill-3-trifluorometil-benzamida como un sólido blanco (42mg). RMN de 1 H 400 MHz (CD3OD): d 3.80 (s, 3H), 7.62 (d, 1 H), 7.76 (t, 1 H), 7.92 (d, 1 H), 8.01 (s, 2H), 8.06 (s, 1 H), 8.23 (d, 1 H) , 8.30 (s, 1 H), 8.64 (d, 1 H), 8.92 (s, 1 H). EM miz 492.2 (M + 1 ). Ejemplo 5 N-r4-cloro-3-(2-oxo-1 ,2-dihidroM ,61naftiridin-3-il)-fenil-3- trifluorometil-benzamida A una solución de ácido 2-cloro-5-nitro-fenilacético (3.08g, 14.28 mmol) en diclorometano (150 mL) se agregó cloruro de oxalilo (6.2mL, 71 .00 mmol) y la mezcla se sometió a reflujo durante 1 hora. Después de enfriar a temperatura ambiente, se concentró y el residuo se co-evaporó con tolueno anhidro (2x30 mL). Este residuo se disolvió después en diclorometano (60 mL) y se agregó una solución de 4-amino-piridina-3-carbaldehído (1 .744 g , 14.28 mmol) en diclorometano (30 mL). Esta mezcla se agitó durante 20 minutos antes de que se agregara N ,N-düsopropiletilamina (2.56 mL, 14.28 mmol). Se continuó agitando durante otras dos horas antes de diluir con diclorometane (500 mL). La mezcla se 43 lavó con agua (100 mL), salmuera (100 mL), se secó sobre MgS04, se filtró y concentró. Este producto crudo se utilizó sin purificación adicional. El producto crudo anterior y carbonato de sodio (3.0 g. 28.3 mmol) en metanol (50 mL) se sometieron a reflujo durante 30 minutos. El sólido se eliminó por filtración y el filtrado se concentró. El residuo se disolvió en EtOAc (500 mL), se lavó con agua (2x50 mL), la fase orgánica se separó y concentró. El producto final se obtuvo después de la cristalización (2.78g).

La 3-(2-cloro-5-nitro-fenil)-1 H-[1 ,6]-naftiridin-2-ona (0.96g, 3.18 mmol) se suspendió en etanol (15mL). Se agregó SnCI2 (2.71 g, 14.3mmol) y HCI (20mL) y la mezcla se sometió a reflujo por dos horas antes de enfriar a temperatura ambiente. Se agregó EtOAc (100 mL) y la mezcla se neutralizó con la adición de carbonato de sodio. Extraídos con EtOAc (3x100 mL), los orgánicos combinados se lavaron con salmuera (50 mL), se secó sobre MgS0 , para obtener el producto final como un sólido ligeramente amarillo (0.62g , 71.7%). A una solución de 3-(5-amino-2-cloro-fenil)-IH- [1 ,6]-naftir¡din-2-ona (60 mg, 0.23 mmol) y DIPEA (82 µ|, 0.46 mmol) en THF anhdro (2.5 mL), se agregó una solución de cloruro de 3-trifluorometil-benzoilo (44 µ?). Esta mezcla de agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente, se diluyó con EtOAc (50 mL), se lavó con agua (10mL) y salmuera (10mL), se secó sobre MgS04 l concentró y purificó con HPLC preparativo, para dar N-[4-cloro-3-(2-???-1 ,2-dihidro-[1 ,6]naftiridin-3-il)-fenil]-3-trifluoro-metil-benzamida (18.3mg). Ejemplo 6 N-(2,4-Dicloro-3-(2-r3-(1 -hidroxi-etin-fenilaminol-8-metil-7-oxo-7.8-dihidro- 44 pirido f2, 3-d] pirimidin-6-il}-fenil)-3-trifluorometil-benzamida Paso A: Preparación de 4-Amino-2-metilsulfan¡l-pirimidina-5-carbaldehído A una solución de 4-amino-2-(metiltio)pir¡midina-5-carbonitrile (3.0 g, 18.05 mmol) en THF (100 ml_) se agregó hidruro de diisobutilaluminio (41 .52 ml_, 1 .0 M in CH2CI2, 41.52 mmol) a 0°C. Después de agitar la mezcla durante 2.5 horas a 0°C, se agregó ácido clorhídrico (2N, 30mL) y se continuó agitando por 20 minutos. A la mezcla de reacción se le agregó Na2C03 hasta alcanzar un pH de 8. El material suspendido se filtró a través de una almohadillas de Celita y se lavó con una solución de K2C03. la solución se diluyó con EtOAc y se lavó con K2C03 saturado, salmuera y se secó, se filtró y concentró para dar el producto crudo, el cual se purificó mediante una columna instantánea de gel de sílice, eluyendo con gradiente de hexano (1 00%) a hexano/éter (60/40 %), para dar el intermediario del titulo como un sólido (1.62 g, 53.1 %). Paso B: Preparación de 6- (3-Amino-2,6-d¡cloro-fenil)-2-rnetilsulfan¡I-pirido[2, 3-d]pirimidin-7-ilamina 45 Una mezcla de 4-am¡no-2-met¡lsulfanil-pirim¡d¡na-5-carbaldehído (2.0 g, 1 1.82 mmol), (3-amino-2,6-d¡cloro-fenil)-acetonitr¡lo (2.85 g, 14.1 8 mmol) y K2C03 (4.9 g, 35.49 mmol) en DMF (20 mL) se calentó a 1 10°C por 30 horas. La solución se enfrió a temperatura ambiente y el sólido se elimino con papel filtro y se concentró para dar el producto crudo. La purificación en columna de gel de sílice instantánea, eluyendo con gradiente de CH2CI2 (1 00%) a CH2CI2/MeOH (2N NH3) (1 00/7 %), dio el intermediario del título como un sólido (3.31 g, 80.0 %). Paso C: Preparación de N-[3-(7-Amino-2-metilsulfanil-pirido [2,3-d] pirimidin-6-il)-2,4-dicloro-fenil]-3-trifluorometil-benzamida A una solución de 6-(3-amino-2,6-dicloro-fenil)-2-metilsulfanil-pirido í2,3-d]-pirimidin-7-ilamina (0.5 g, 1.42 mmol) en CH2CI2 (40 mL) se agregó cloruro de 3-(trifluorometil) benzoilo (1 .07 mL, 7.1 mmol). Después de agitar la mezcla durante 24 horas a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con EtOAc y se lavó con K2C03 saturado, salmuera y agua. La capa orgánica se secó, se filtró y concentró para dar el producto crudo, el cual se purificó mediante columna de gel de sílice instantánea, eluyendo con gradiente de CH2CI2 (1 00%) a CH2CI2/MeOH (NH3, 2N) (95/5 %), para dar el intermediario del título como un sólido (0.591 g, 79.4 %). Paso D: Preparación de N-[2,4-Dicloro-3-(2-metilsulfanil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido [2,3-d] pirimidin-6-il)-fenil]-3-trifluorometil-benzamida 46 A una solución de N-[3-(7-amino-2-metiIsulfanil-pirido[2, 3-d] pirimidin- 6-il) -2, 4-dicloro-fenil]-3-trifluorometil-benzamida (1 .7 g , 3.24 mmol) en TFA (1 5 m L) se agregó lentamente NaN02 (783 mg , 1 1 .35 mmol) at 0°C con agitación durante 20 minutos. Los solventes se evaporaron y diluyeron con EtOAc y se lavó con K2C03 saturado, salm uera y ag ua. La capa orgánica se secó, se filtró y concentró para dar el producto crudo. El producto crudo se purificó mediante una columna de gel de sílice instantánea, eluyendo con gradiente de CH2CI2 (100%) a CH2CI2/MeOH (NH3, 2N) (93/7 %), para dar el intermediario del título como un sólido (1 .64 g , 96.5 %) . Paso E: Preparación de N-[2,4-dicloro-3-(8-metil-2-metilsulfanil-7-oxo-7 ,8-dihidro-pirido[2 ,3-d] pirimidin-6-il)-fenil]-3-trifluorometil-benzamida A una solución de N-[2,4-dicloro-3-(2-metilsulfanil-7-oxo-7, 8-d¡hidro-pirido [2, 3-d] pirimidin-6-il)-fenil]-3-trifluorometil-benzamida (1 .14g , 2.17 mmol) in DMF (35 mL) se ag regó lentamente NaH (1 1 7.2 mg , 60%, 2.93 m mol) con agitación durante 30 minutos a 0°C. se ag regó yodometano (369 mg , 2.60 mmol) a la solución anterior con agitación durante 40 minutos a 0°C. Los solventes se evaporaron y diluyeron con EtOAc y se lavaron con K2C03 saturado, salmuera y agua. La capa orgánica se secó, filtró y 47 concentró para dar el producto crudo, el cual se purificó en columna de gel de sílice instantánea, eluyendo con gradiente de CH2CI2 (100%) a CH2CI2/ eOH (NH3, 2N) (93/7), para dar el intermediario del título como un sólido (1 .14 g, 98. 0 %). Paso F: Preparación de N-[2,4-Dicloro-3-(2-metansulfonll-8-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d] pirimidin-6-il)-fenil]-3-trifluorometil-benzamida Una solución de N-[2,4-dicloro-3-(8-metil-2-metilsulfanil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido [2,3-d] pirim¡din-6-il)-fen¡l]-3-trifluorometil-benzamida (1 .1 g, 2.04 mmol) y MCPBA (983 mg, 60%, 4.38 mmol) en CH2CI2 (50 mL) se agitó durante una hora a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con EtOAc y se lavó con K2C03 saturado, salmuera y agua. La capa orgánica se secó, se filtró y concentró para dar el producto crudo, el cual se purificó mediante una columna de gel de sílice instantánea, eluyendo con gradiente de hexano (100%) a hexano /EtOAc (65/35), para dar el intermediario del título como un sólido (472 mg, 40.7 %). Paso G: Preparación de N-(2,4-Dicloro-3-{2-[3-(1 -hidroxi-etil)-fenilamino]-8-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-6-il}-fenil)-3-trifluorometil-benzamida Una mezcla de N-[2,4-dicloro-3-(2-metansulfonil-8-met¡l-7-oxo-7,8- 48 dihidropirido [2, 3-d] pirimidin-6-il) -fenil] -3-trifluorometil-benzamida (20mg, 0. 035mmol) y 3-(1-hidroxietil)-anilina (50mg, 0.364mmol) se calentó a 120°C por diez minutos. La mezcla de diluyó con EtOAc y se lavó con K2C03 saturado, salmuera y agua. La capa orgánica se secó, se filtró y concentró para dar el producto crudo, el cual se purificó mediante HPLC preparativa para dar N-(2,4-dicloro-3-{2-[3-(1-hidroxi-etil)-fenilamino]-8-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-6-il}-fenil)-3-trifluorometil-benzamida como un sólido blanco (17.9 mg, 81.4%). R N 1H (CD3OD) : d 10.50 (s, 1H), 8.57 (d, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.06 (d, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.86 (d, 1H), 7.68 (t, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.52 (d, 1H), 7.41 (t, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.20 (d, 1H), 4.98 (q, 1H), 3. 83 (s, 3H), 1.54 (d, 2H); EM m/z 629.10 ( + 1). Ejemplo 7 N-{3-f2-(3-Amino-fenilam¡no)-8-metil-7-oxo-7,8-dih¡dro-piridor2,3- pirimidin-6-in- 4-cloro-fenil)-3-trifluorometil-benzamida Paso A: Preparación de (2-Cloro-5-nitro-fenil)-acetonitrilo A una solución de 2-cloro-fenil-acetonitrilo (15. Og, 99.0 mmol) en 49 diclorometano (50 mL) y H2S0 (40 mL), se agregó lentamente una mezcla de H2S04 (14 mL) y HN03 (5.5 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a 0°C por 20 minutos, se calentó a temperatura ambiente durante 30 minutos y después de concentró para eliminar el solvente orgánico. La solución se vertió en un vaso de laboratorio que contenía hielo-agua (400 mL) para dar un precipitado cristalino, el cual se colectó por filtración al vacío y se lavó con agua para dar el intermediario del título (13.4 g, 69.0%). Paso B: Preparación de (5-Amino-2-cloro-fenil)-acetonitrilo A una solución suspendida de (2-cloro-5-nitro-fenil)-acetonitrilo (4.0 g, 20.0 mmol) en EtOH (1 0 mL) se agregó una solución de Sn(l l)CI2 (15.36 g, 81 .0 mmol) en HCI concentrado (14 mL) a 75°C. Después de que la mezcla se agitó durante 30 minutos a 75°C, la mezcla se diluyó con EtOAc y se neutralizó con K2C03 hasta alcanzar un pH de 8. La capa orgánica se lavó con K2C03 saturado, salmuera y se secó, filtró y concentró para dar el producto crudo, el cual se purificó por recristalización con CH2CI2/EtOAc/Hexano para dar el intermediario del título como un sólido (3.04 g , 89.7 %). Paso C: Preparación de 6-(5-amino-2-cloro-fenil)-2-metilsulfanilpirido [2,3d] pirimidin-7-ilamina Una solución de 4-amino-2-metilsulfanil-pirimidina-5-carbaldehído 50 (1 .8 g, 10.64 mmol), (5-Am¡no-2-cloro-fenil)-acetonitrilo (2.3 g, 1 3.83 mmol) y K2C03 (4.41 g, 31 .92 mmol) en DMF (20 mL) se calentó a 1 1 0°C por 36 horas. La solución se enfrió a temperatura ambiente y el sólido se eliminó con papel filtro. Posteriormente la mezcla se concentró para dar el producto crudo. La purificación en columna instantánea de gel de sílice eluyendo con gradiente de CH2CI2 (100%) a CH2CI2/MeOH (2N NH3) (97/3 %) dio el intermediario del título como un sólido (1 .24 g, 36. 7 %). Paso D: Preparación de N-[3-(7-Amino-2-metilsulfanil-pirido[2,3-d] pirimidin-6-il)-4-cloro-fenil]-3-trifluorometil-benzamida A una solución de 6-(5-amino-2-cloro-fenil)-2-metilsulfanilpirido [2,3d]-pirimidin-7-ilamina (0.65 g, 2.046 mmol) in CH2CI2 (80 mL) se agregó cloruro de 3-(trifluorometil) benzoilo (2.13 g, 10.23 mmol). Después de que la mezcla se agitó durante 24 horas a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con EtOAc y se lavó con K2C03 saturado, salmuera y agua. La capa orgánica se secó, filtró y concentró para dar el producto crudo como un sólido (1 .0 g, -100 %). Paso E: Preparación de N-[4-cloro-3-(2-metilsulfanil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido [2,3-d] pirimidin-6-il)-fenil]-3-trifluorometil-benzamida 51 A una solución de N-[3-(7-amino-2-metilsulfanil-p¡rido[2,3-d] pirimidin- 6-il) -4-cloro-fenil] -3-trifluorometil-benzamida (1 .0 g, 2.04 mmol) en TFA (10 ml_) se agregó lentamente NaN02 (423 mg, 6.12 mmol) a 0°C con agitación durante 20 minutos. Los solventes se evaporaron, diluyeron con EtOAc y se lavó con K2C03 saturado, salmuera y agua. La capa orgánica se secó, filtró y concentró para dar el producto crudo, el cual se purificó mediante una columna instantánea de gel de sílice, eluyendo con gradiente de CH2CI2 (100%) a CH2CI2/MeOH (NH3, 2N) (93/7 %), para dar el intermediario del título como un sólido (0.644 g, 64.4 %). Paso F: Preparación de N-[4-Dicloro-3-(8-metil-2-metilsulfaniI-7-oxo- 7,8-dihidro-pirido[2, 3-d]pirimidin-6-il)-fenil]-3-trifluorometil-benzamida A una solución de N-[4-dicloro-3-(2-metilsulfanil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido [2, 3-d] pirimidin-6-il)-fenil]-3-trifluoromet¡l-benzamida (370 mg, 0.75 mmol) en DMF (35 mL) se agregó lentamente NaH (40.7 mg, 60%, 1 .02 mmol) con agitación durante 30 minutos a 0°C. Se agregó yodometano (133.7 mg, 0.94 mmol) a la solución anterior, agitando durante 40 minutos a 0°C. Los solventes se evaporaron y diluyeron con EtOAc y se lavaron con K2C03 saturado, salmuera y agua. La capa orgánica se secó, filtró y concentró para dar el producto crudo, el cual se utilizó en la siguiente reacción sin purificación adicional. Paso G: Preparación de N-[4-Dicloro-3 (2-metansulfonil-8-metil-7- 52 oxo-7, 8-dih¡dro-pir¡do[2,3-d]pirimidin-6-iI) -fenil]-3-trifluorometil-benzamida Una solución de N-[4-dicloro-3-(8-metil-2-metilsulfanil-7-oxo-7,8- dihidro-pirido [2,3-d] pirimidin-6-il)-fenil]-3-trifluorometil-benzamida (380 mg, 0.75 mmol) y MCPBA (386 mg, 60%, 1.72 mmol) en CH2CI2 (25 mL) se agitó durante una hora a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con EtOAc y se lavó con K2C03 saturado, salmuera y agua. La capa orgánica se secó, se filtró y concentró para dar el producto crudo, el cual se purificó mediante una columna instantánea de gel de sílice, eluyendo con gradiente de hexano (100%) a hexano/EtOAc (65/35 %), para dar el intermediario del título como un sólido (126 mg, 31.1 %). Paso H: Preparación de N-{3-[2-(3-amino-fenilamino)-8-metil-7-oxo- 7, 8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-6-il] -4-cloro-fenil}-3-trifluorometil-benzamida La 3-aminoanilina (121.1 mg, 1 .12mmonl) se calentó a 1 10°C, cuando se fundió, se agregó la N-[4-cloro-3-(2-metansulfonil-8-metil-7-oxo-7,8-dihidro-p¡rido[2,3-d]pirimidin-6-il)-fenil]-3-trifluorometil-benzamída 34 (15 mg, 0.028mmol). la reacción se agitó a 1 10°C durante 25 minutos. La reacción se diluyó MeOH (1 mL) y se purificó mediante HPLC preparativa para dar el producto final como un sólido amarillo: RMN1H (CDCI3): d 3.64 (s, 3H), 6.66 (d, 1 H), 7.17 (t, 1 H), 7.28 (d, 1 H), 7.42 (m, 2H), 7.48 (t, 1 H), 7.50 (dd, 1 H), 7.57 (s, 1 H), 7.63 (m, 2H), 7.97 (d, 1 H), 8.07 (s, 1 H), 8.49 (s, 1 H); EM m/z 565.0 (M+1 ). 53 Ejemplo 8 N-{3-r7-(6-Metoxi-piridin-3-i[amino)-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidro-ri ,6lnaftiridin-3- ill-4-metil-fenil-3-trifluorometil-benzamida h Para el esquema de reacción anterior, R6NH2 es 6-metoxi-p¡ridin-3-ilamina. Se mezcla 1 ,3-acetonadicarboxilato de dietilo (10.1 1 g, 50 mmol) con ortoformato de trietilo (8.14 g , 55 mmol) y anhídrido acético (10.20 g, 100 mmol) en un matraz de 1 00 mi y calentarlo hasta 120°C durante 1 .5 54 horas. El producto crudo se destiló bajo vacío (150-200 mm Hg) alrededor de 90-100°C, la solución de aceite amarillo claro será recolectada en el condensador. El residuo q ue q uedó se enfrió en hielo y se mezcló con 30% de amoníaco (4 mi) . Se continuó la reacción en un baño de hielo durante 1 hora y luego se acidificó con HCI 2N a pH <5. Se eliminó el solvente bajo vacío. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea utilizando EA/Hexano ( 1 : 1 ). El compuesto (2) de producto final etil éster de ácido 4,6-dihidroxi-nicotínico es el aceite claro, 2.85 g . Se mezcló etiléster de ácido 4, 6-dihidroxi-nicotínico (2.85 g) con 25 mi de POCI3 puro en un matraz de 1 00 mi y se calentó hasta 1 10°C durante 2 horas. Después de enfriar, se eliminó la mayor parte de POCI3 bajo vacío. Eí producto de color oscuro crudo se mezcló en una cantidad pequeña de la mezcla de hielo-agua, y se neutralizó con una solución saturada de carbonato de sodio. Se extrajo el producto utilizando 200 mi de acetato de etilo durante un acoplamiento de tiempos . La capa orgánica combinada se lavó por una solución saturada de cloruro de sodio y se secó por Na2S04. Después de eliminar el solvente, se purificó el producto crudo por cromatografía instantánea utilizando EA/Hexano (1 5% : 85%). El compuesto final (3) etil éster de ácido 4, 6-dicloro-nicotínico es un sólido blanco, 3.05 g. El etil éster de ácido 4,6-dicloro-nicotínico (2.1 9 g , 1 0 mmol) se disolvió en 30 mi de acetonitrilo y se enfrió a 0°C, se agregaron lentamente 4 mi de solución de metilamina (40% de solución acuosa de metilamina , 50 mmol) . La reacción se agitó a 0°C durante 30 minutos y se calentó hasta la temperatura ambiente durante otras 2 horas. Se eliminó el 55 solvente bajo vacío y se purificó el producto crudo por cromatografía instantánea utilizando EA/Hexano (30%:70%). El compuesto final (4) etil éster del ácido 6-cloro-4-metilamino-nicotínico es un sólido blanco, 2.03 g. El etiléster de ácido 6-cloro-4-metilamino-nicotínico (2.03 g , 9.5 mmol) se disolvió en 30 mi de THF anhidro y se enfrió a -78°C. Se agregó lentamente 20 mi de solución de THF-LAH (solución de THF 1 M, 20 mmol) y se continuó la reacción durante 3 horas a -78°C. Se calentó lentamente la reacción hasta la temperatura ambiente y se verificó la CCF (cromatografía de capa fina) hasta asegurar que no se dejaran materiales de partida. Se agregó lentamente una cantidad pequeña de la mezcla de MeOH/EA (1 : 1 ) para destruir el exceso de LAH. El producto crudo pasó por un tapón de celita y se lavó por EA durante un acoplamiento de tiempos. Después de eliminar el solvente bajo vacío, se purificó el producto crudo por cromatografía instantánea utilizando MeOH/DCM (5%:95%). El compuesto (5) final (6-cloro-4-metilamino-piridin-3-il)-metanol es un sólido blanco, 1 .40 g. El (6-cloro-4-metilamino-piridin-3-il)-metanol (1 .40 g , 8.1 mmol) se disolvió en 40 mi de DC y se agregaron 7.0 g de Mn02 (81 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después la solución de la reacción pasó por un tapón de celita y se lavó por EA. Después de eliminar el solvente bajo el vacío, se purificó el producto crudo por cromatografía instantánea utilizando EA/Hexano (3:7) . El compuesto final (6) 6-cloro-4-meti!amino-piridina-3-carbaldehído es el sólido blanco, 1 .30 g . 56 El ácido 2-metil-5-nitrobenzóico (5.0 g, 27.5 mmol) se disolvió en 50 mi de THF anhidro. Después de agregar 41 .3 mi de borano en una solución de THF (41 .3 mmol), se agitó la reacción a TA durante 18 horas. La reacción se enfrió rápidamente por una solución de carbonato de potasio (4.5 g) en 100 mi de agua. Después de eliminar THF bajo vacío, se extrajo la solución acuosa con DC y la capa orgánica combinada se lavó mediante salmuera y se secó sobre sulfato de sodio. Después de filtrar y eliminar el solvente bajo vacío, el compuesto (12) del producto final (2- metil-5-nitrofenil)-metanol es el sólido amarillo pálido, 4.3 g . El (2-metil-5-nitrofenil)-metanol (4.3 g , 25.7 mmol) se disolvió en 100 mi de DCM anhidro y se enfrió a 0°C y se trató con cloruro de metansulfonilo (3.22 g, 28.3 mmol) y DI EA (5.36 mi, 30.8 mmol) durante 30 minutos. La reacción se calentó hasta la temperatura ambiente y se agitó durante otros 30 minutos. La reacción se enfrió rápidamente al agregar 30 mi de agua. La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de sodio y se filtró. Después de eliminar el solvente bajo vacío, el compuesto (13) de producto final metilsulfonato de (2-metil-5-nitrofenil)- 57 metilo es el aceite amarillo, 6.2 g. El metilsulfonato de (2-metil-5-nitrofenil)-metilo (6.2 g, 25.3 mmol) y el cianuro de potasio (5.0 g, 76 mmol) se sometieron a reflujo en 200 mi de acetonitrilo durante 8 horas y se enfriaron hasta temperatura ambiente. Después de eliminar el solvente bajo el vacío, se disolvió el producto crudo en DCM y se filtró. El filtrado se lavó mediante salmuera y se secó sobre sulfato de sodio. Después de eliminar el solvente bajo el vacío, el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea utilizando EA/Hexano (1 : 1 ). El compuesto (14) de producto final 2-(2-metil-5-nitrofenil)-etanonitrilo es el sólido amarillo, 3.1 g . El 2-(2-metil-5-nitrofenil)-etanonitr¡Io (2.5 g, 14.2 mmol) se disolvió en 50 mi de metanol. Se agregó hidróxido de potasio (8.0 g, 142 mmol) en 50 mi de agua y la reacción se calentó a reflujo durante 14 horas. Después de enfriar y eliminar el metanol, se lavó la capa acuosa con DCM y éter. La capa orgánica combinada se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de sodio y se filtró. Después de eliminar el solvente bajo el vacío, el compuesto (15) de producto final ácido 2-(2-metil-5-nitrofenil)-acético es el sólido anaranjado, 1 .9 g. El ácido 2-(2-metil-5-nitrofenil)-acético (1 .9 g , 9.7 mmol) se disolvió en 50 mi de metanol y se agregaron 5 mi de HCI 4M en 1 ,4-dioxano. La reacción se calentó a reflujo durante 14 horas. Después de enfriar y eliminar el solvente, se disolvió el producto crudo en 50 mi de agua y se basificó por una solución acuosa de hidróxido de sodio 2N a pH> 12. La solución se extrajo por acetato de etilo, y la capa orgánica combinada se lavó por salmuera y se secó sobre sulfato de sodio y se filtró. Después de 58 eliminar el solvente, el compuesto (16) de producto final metiléster de ácido 2-(2-metil-5-nitrofenil)-acético es el sólido amarillo oscuro, 1 .85 g. El metiléster del ácido 2-(2-metil-5-nitrofenil)-acético (1.85 g, 8.85 mmol) se disolvió en 40 mi de etanol. Se agregaron 1 80 mg de carbón sobre paladio al 10% y se utilizó un balón de hidrógeno. La reacción se agitó a TA durante 16 horas. Después de eliminar el carbón sobre paladio pasando un tapón de celita y eliminar el solvente, se purificó el producto crudo por cromatografía instantánea utilizando MeOH/DCM (7%:93%). El compuesto (7) de producto final metiléster de ácido 2-(5-amino-2-metil-fenil)-acético es el aceite amarillo, 1 .5 g. El 6-cloro-4-met¡lamino-piridin-3-carbaldehído (850 mg , 5 mmol) se mezcló con metiléster del ácido 2-(5-amino-2-metil-fenil)-acético (compuesto 7, 1 .35 g, 7.5 mmol) y carbonato de potasio (2.07 g, 15 mmol) en 1 5 mi de DMF, calentando hasta 100°C durante 16 horas. Después de enfriar y eliminar el solvente bajo el vacío, el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea utilizando EA/Hexano (6:4). El compuesto (8) final 3-(4-amino-2-metil-fenil)-7-cloro-1-metil-1 H-[1 ,6]naftiridin-2-ona es el sólido pálido, 1 .30 g.

La 3-(4-amino-2-meti[-fenil)-7-cloro-1 -metil-1 H-[1 ,6]naftiridin-2-ona (600 mg, 2.0 mmol) se mezcló con cloruro de 3-trifluorometil-benzoilo (440 mg, 2.1 mmol) y 520 µ? de DIEA (3.0 mmol) en 20 mi de DCM anhidro. La 59 reacción se agitó a TA durante 4 horas. Después de eliminar el solvente bajo el vacío, el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea utilizando EA/Hexano (1:1). El compuesto (9) final N-[3-(7-Cloro-1-metil-2-oxo-1 ,2-dihidro-[1 ,6]naftiridin-3-il)-4-metiI-fenil]-3-tr¡fluorometil-benzam¡da es el sólido blanco, 900 mg: RMN de H 400 MHz (CDCI3) d 8.58 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.08 (d, 1 H, J=7.8Hz), 7.78 (d, 1H, J=7.8Hz), 7.71 (s, 1H), 7.62 (m, 2H), 7.44 (d, 1H, J=5.8Hz), 7.31 (s, 1H), 7.20 (d, 1H, J=8.2Hz), 3.76 (s, 3H), 2.03 (s, 3H); EM m/z 477.2 (M + 1). La N-[3-(7-Cloro-1-metil-2-oxo-1,2-dihidro-[1,6]naftiridin-3-il)-4-metil-fenil]-3-trifluorometil-benzamida (50 mg, 0.106 mmol) se mezcló con 6-metoxi-piridin-3-ilamina (20 mg, 0.16 mmol), Pd2(dba)2 (2.4 mg, 2.5%), cloruro de 1 ,3-Bis(2,6-di-i-propilfenil)imidazolio (2.3 mg, 5%) y ter-butanóxido de potasio (17.8 mg, 0.159 mmol) bajo un ambiente de argón. Se agregaron 6 mi de 1,4-dioxano anhidro y la reacción se continuó a 100°C durante 14 horas. Después de enfriar y eliminar el solvente bajo vacío, se disolvió el producto crudo en DMSO y se purificó por HPLC preparativa de fase inversa para dar el producto final como un sólido pálido: RMN de H 400 MHz (CDCI3) d 11.61 (s, 1H), 8.26 (d, 1H, J=2.6Hz), 8.16 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 8.05 (d, 1H, J=7.9Hz), 7.95 (s, 1H), 7.80 (d, 1H, J=7.7Hz), 7.69 (d, 1H, J=2.1Hz), 7.61 (m, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.42 (dd, 1H, J=6.0Hz), 6.89 (d, 1H, J = 8.7Hz), 6.38 (s, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.52 (s, 3H), 2.15 (s, 3H); EM m/z 560.3 (M+1). Ejemplo 9 N-f3-(7-Etilamino-1-metil-2-oxo-1.2-dihidro-f 1.61naftiridin-3-in-4-metil- fenill-3-trifluorometil-benzamida 60 N-[3-(7-Cloro-1 -metil-2-oxo-1 ,2-di iclro-[1 ,6]naftir¡din-3-¡l)-4-metil-fenil]-3-trifIuorometil-benzamida (50 mg, 0.106 mmol) se mezcló con etilamina (0.14 mi, 70% en agua, 2.2 mmol) en un tubo sellado. Se agregó 1 mi de n-butanol y la reacción se agitó a 100°C durante 16 horas. Después de enfriar y eliminar el solvente bajo vacío, se disolvió el producto crudo en DMSO y se purificó por HPLC preparativa de fase inversa para dar el producto final como un sólido blanco: RMN de H 400 MHz (D SO-d6) 5 10.47 (s, 1 H), 8.48 (s, 1 H), 8.29 (s, 1 H), 8.25 (d, 1 H, J=8.0Hz), 7.96 (d, 1 H, J=7.8Hz), 7.78 (m, 2H), 7.66 (m , 2H), 7.26 (d, 1 H, J=9.0Hz), 6.46 (s, 1 H), 3.57 (s, 3H), 3.39 (q, 2H, J=7.1 Hz), 2.1 3 (s, 3H), 1 .22 (t, 3H, J=7.1 Hz); EM m/z 481 .2 (M + 1 ). Ejemplo 10 N-(4-Metil-3-f1 -metil-2-oxo-7-f(piridin-3-ilmetil)-amino1-1 .2-dihidro- G1 ,61naftiridin-3-il}-feni0-3-trifluorometil-benzamida N-[3-(7-Cloro-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidro-[1 ,6]naftiridin-3-il)-4-metil-fenil]-3-trifluorometil-benzamida (50 mg, 0.106 mmol) se mezcló con 3-(aminometil)-piridina (18 mg, 0.16 mmol), Pd2(dba)2 (2.4 mg, 2.5%), cloruro de 1 ,3-Bis(2,6-di-i-propilfenil)-imidazolio (2.3 mg , 5%) y ter-butanóxido de potasio (17.8 mg , 0.159 mmol) bajo un ambiente de argón. Se agregaron 6 61 mi de 1,4-dioxano anhidro y se continuó la reacción a 100°C durante 14 horas. Después de enfriar y eliminar el solvente bajo vacío, se disolvió el producto crudo en DMSO y se purificó por HPLC preparativa de fase inversa para dar el producto final como un sólido pálido: RMN de 1H 400 MHz (DMSO-ds) d 10.46 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.68 (d, 1H, J=4.6Hz), 8.44 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.24 (t, 2H, J=7.5Hz), 7.96 (d, 2H, J=7.8Hz), 7.76 (m, 3H), 7.65 (m, 2H), 7.24 (d, 1H, J=8.3Hz), 6.46 (s, 1H), 4.74 (s, 2H), 3.52 (s, 3H), 2.11 (s, 3H); E m/z 544.3 (M + 1). Ejemplo 11 N-(3-r7-(3-Dimetilaminometil-fenilamino)-1-metil-2-oxo-1 ,2-dihidro- f 1 ,61naftiridin-3-il1-4-met¡l-fen¡l)-3-trifluorometil-benzamida fenil]-3-trifluorometil-benzamida (50 mg, 0.106 mmol) se mezcló con 3- dimetil-aminometil-fenilamina (24 mg, 0.16 mmol), Pd2(dba)2 (2.4 mg, 2.5%), cloruro de 1 ,3-Bis(2,6-di-i-propilfenil)imídazolio (2.3 mg, 5%) y ter- butanóxido de potasio (17.8 mg, 0.159 mmol) bajo un ambiente de argón. Se agregaron 6 mi de 1,4-dioxano anhidro y se continuó la reacción a 100°C durante 14 horas. Después de enfriar y eliminar el solvente bajo vacío, se disolvió el producto crudo en DMSO y se purificó por HPLC preparativa de fase inversa para dar el producto final como un sólido pálido: RMN de H 400 MHz (DMSO-d6) d 10.48 (s, 1H), 9.64 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.26 (d, 1H, J=8.9Hz), 7.96 (d, 1H, J=7.8Hz), 7.87 (s, 62 2H), 7.79 (t, 1H, J=7.8Hz), 7.67 (m, 3H), 7.41 (t, 1H, J=7.8Hz), 7.27 (d, 1H, J=9.1Hz), 7.08 (d, 1H, J=7.7Hz), 6.78 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=5.0Hz), 3.58 (s, 3H), 2.77 (d, 6H, J=4.6Hz), 2.14 (s, 3H); EM m/z 586.3 (M+1). Ejemplo 12 N-(4-Metil-3-(1-metil-7-f3-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamino1-2-oxo-1,2- dihidro-G? ,61naftiridin-3-il}-fenil)-3-trifluorometil-benzamida N-[3-(7-Cloro-1-metil-2-oxo-1,2-dihidro-[1,6]naftiridin-3-il)-4-metil-fenil]-3-trifluorometil-benzamida (50 mg, 0.106 mmol) se mezcló con 3-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamina (31 mg, 0.16 mmol), Pd2(dba)2 (2.4 mg, 2.5%), cloruro de 1 ,3-Bis(2,6-di-i-propilfenil)imidazolio (2.3 mg, 5%) y ter-butanóxido de potasio (17.8 mg, 0.159 mmol) bajo un ambiente de argón. Se agregaron 6 mi de 1,4-dioxano anhidro y se continuó la reacción a 100°C durante 14 horas. Después de enfriar y eliminar el solvente bajo vacío, se disolvió el producto crudo en DMSO y se purificó por HPLC preparativa de fase inversa para dar el producto final como un sólido pálido: RMN 1H 400 MHz (DMSO-dB) d 10.47 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.26 (d, 1H, J=8.1Hz), 7.97 (d, 1H, J=7.9Hz), 7.83 (s, 1H), 7.79 (t, 1H, J=7.8Hz), 7.69 (m, 2H), 7.37 (s, 1H), 7.21 (m, 3H), 6.74 (s, 1H), 6.65 (d, 1H, J=6.5Hz), 3.80 (d, 2H, J = 13.9Hz), 3.56 (s, 3H), 3.54 (d, 2H, J = 13.9Hz), 3.18 (m, 2H), 2.98 (m, 2H), 2.88 (d, 3H, J=3.8Hz), 2.14 (s, 3H); EM m/z 627.3 (M+1). 63 Ejemplo 13 N-r3-(7-Amino-1-metil-2-oxo-1,2-dihidro-ri,6lnaftiridín-3-ii)-4-metil-fenil1-3- trifluorometil-benzamida Se mezcló N-[3-(7-Cloro-1-metil-2-oxo-1,2-di idro-[1,6]nafíiridin-3-¡l)-4-metil-fenil]-3-trifluorometil-benzamida (100 mg, 0.21 mmol) con bencilamina (35 mg, 0.32 mmol), Pd2(dba)2 (4.8 mg, 2.5%), cloruro de 1,3-B¡s(2,6-di-i-propilfenil)imidazolio (4.6 mg, 5%) y ter-butanóxido de potasio (35.6 mg, 0.32 mmol) bajo un ambiente de argón. Se agregaron 6 mi de 1,4-dioxano anhidro y se continuó la reacción a 100°C durante 14 horas. Después de enfriar y eliminar el solvente bajo vacío, se disolvió el producto crudo en DMSO y se purificó por HPLC preparativa de fase inversa para dar el producto N-[3-(7-Bencilamino-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihldro-[1 ,6]naftiridin-3-il)-4-metil-fenil]-3-trifluorometil-benzamida como sólido pálido. Este producto se disolvió en 10 mi de etanol y se agregaron 8 mg de polvo de carbón sobre paladio al 10%. La reacción se agitó a temperatura ambiente bajo un ambiente de hidrógeno 3.51 kg/cm2 (50 psi) durante 16 horas. Después que pasó a través de un tapón de celita para eliminar el carbón sobre paladio y eliminar el solvente, se disolvió el producto crudo en DMSO y se purificó por HPLC preparativa de fase inversa para dar el producto final como un sólido blanco: RMN 1H 400 MHz (D SO-d6) d 10.42 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.26 (d, 1H, J=7.8Hz), 7.96 (d, 1H, J=7.7Hz), 7.78 (t, 1H, J=7.8Hz), 7.69 (m, 2H), 7.61 64 (s, 1H), 7.24 (d, 1H, J=8.1Hz), 6.53 (s, 2H), 6.29 (s, 1H), 3.49 (s, 3H), 2.12 (s, 3H); EM m/z 453.2 (M+1). Repitiendo los procedimientos descritos en los ejemplos anteriores, utilizando materiales de partida apropiados, se obtuvieron los siguientes compuestos de Fórmula I, como se identifican en la Tabla 1.

Tabla 1 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 Ensayos Los compuestos de la presente invención fueron evaluados para determinar sus capacidades para inhibir la proliferación celular de células 32D que expresan BCR-AbI (32D-p210) en comparación con células originales 32D. Los compuestos que inhiben selectivamente la proliferación de estas células transformadas BCR-AbI son examinados para determinar su actividad anti-proliferativa en células Ba/F3 que se expresan ya sea en 85 formas silvestres o mutadas de Bcr-abl. Además, los compuestos son examinados para determinar sus capacidades para inhibir b-Raf. Inhibición de la Proliferación Celular Dependiente de BCR-Abl (Método de Alto Rendimiento) La línea celular murina usada es la línea celular 32D hematopoyética progenitora transformada con ADNc de BCR-Abl (32D-p210). Estas células se mantuvieron en suero bovino fetal RPMI/10% (RPMI/FCS) adicionado con penicilina 50 µ9/???-, estreptomicina 50 µ9/?? ?_ , y L-glutamina 200 mM. Las células 32D no transformadas se mantuvieron de manera similar con la adición de medio acondicionado WEHI 15% como una fuente de IL3. 50 µ? de una suspensión de células 32D o 32D-p210 se plaquearon en microplacas Greiner con 384 pozos (negra) a una densidad de 5000 células por pozo. Se agrgó 50nl del compuesto de prueba (1 mM en solución madre de DMSO) a cada pozo (STI571 se incluye como control positivo) . Las células se incubaron durante 72 horas a 37°C, 5% C02. 10µ| de una solución Alamar Blue al 60% (Tek diagnostics) se agregó a cada pozo y las células se incubaron durante 24 horas adicionales. Se cuantificó la intensidad de la fluorescencia (Excitación a 530 nm, Emisión a 580 nm) usando el sistema Acquest® (Molecular Devices). Inhibición de la Proliferación Celular Dependiente de BCR-Abl Se plaquearon células 32D-p210 en placas TC de 96 pozos a una densidad de 15,000 células por pozo. 50 µ? de diluciones dobles en serie del compuesto de prueba (Cmax es 40 µ?) se agregaron a cada pozo (se incluye STI571 como control positivo). Después de incubar las células durante 48 horas a 37 °C, 5% C02, se agregó 15 µ? de MTT (Promega) a 86 cada pozo y se incubaron las células durante otras 5 horas. La densidad óptica a 570nm se cuantificó espectrofotométricamente y se determinaron los valores IC50, la concentración del compuesto requerido para una inhibición del 50%, determinada a partir de la curva de respuesta de dosis. Efecto en la distribución del ciclo celular Se plaquearon células 32D y 32D-p21 0 en placas TC de 6 pozos a 2.5x106 células por pozo en 5 mi de medio y se agregó el compuesto de prueba a 1 ó 1 0 µ? (STI571 se incluye como control). Las células se incubaron entonces durante 24 o 48 horas a 37°C, 5% C02. Se lavó 2 mi de la suspensión celular con PBS, se fijó en 70% EtOH durante 1 hora y se trató con PBS/EDTA/RNasa A durante 30 minutos. Se agregó yoduro de propidio (Cf=10 µg/ml) y se cuantificó la intensidad de fluorescencia por citometría de flujo en el sistema FACScalibur™ (BD Biosciences). Los compuestos de la presente invención demostraron un efecto apoptotico en las células 32D-p210 pero no inducen la apoptósis en las células 32D originales. Efecto en la Autofosforilación Celular de BCR-Abl Se cuantificó la autofosforilación de BCR-Abl por ELISA de captura usando un anticuerpo c-abl específico de captura y un anticuerpo de antifosfotirosina. Las células 32D-p210 se plaquearon en placas TC de 96 pozos a 2xl05 células por pozo en 50 ? del medio. 50 µ? de diluciones dobles en serie de compuestos de prueba (Cmax es 1 0 µ?) se agregaron a cada pozo (STI571 está incluido como un control positivo). Las células se incubaron durante 90 minutos a 37 °C, 5% C02. Posteriormente, las células se trataron durante 1 hora en hielo con 1 50 µL· de amortiguador de 87 lísis (50 mM Tris-HCI , pH 7.4, 150 m NaCI, 5 m EDTA, 1 mM EGTA y 1 % NP-40) que contiene proteasa e inhibidores de la fosfatasa. Se agregaron 50 µL· de lisado celular a optiplacas de 96 pozos previamente revestidas con anticuerpo anti-abl específico y se bloquearon. Las placas se incubaron durante 4 horas a 4°C. Después de lavar con amortiguador TBS-Tween 20, se agregaron 50 µ?_ de fosfatasa alcalina conjugada con anticuerpo anti-fosfotirosina y la placa se incubó adicionalmente durante toda la noche a 4°C. Después de lavar con amortiguador 20 TBS-Tween, se agregaron 90 µ?. de un sustrato luminiscente y se cuantificó la luminiscencia usando el sistema Acquest® (Molecular Devices). Los compuestos de prueba de la invención que inhiben la proliferación de las células de expresión BCR-AbI, inhiben la autofosforilación celular BCR-AbI en una manera dependiente de la dosis. Efecto de la proliferación de células que expresan formas mutantes de Bcr-abl Los compuestos de la invención se probaron para determinar su efecto antiproliferativo en células Ba/F3 que se expresan ya sea en formas de tipo silvestre o en formas mutantes de BCR-AbI (G250E, E255V, T315I , F317L, 351 T) que confieren resistencia o disminuyen la sensibilidad a STI571 . El efecto antiproliferativo de estos compuestos en las células que expresan BCR-AbI mutantes y en las células no transformadas fue probado en 10, 3.3, 1 .1 y 0.37 µ? como antes se describe (en medio carente de IL3). Los valores ICS0 de los compuestos carentes de toxicidad en células no transformadas se determinaron a partir de curvas de respuesta a dosis obtenidas como antes se describió. 88 FGFR3 (Prueba Enzimática) La prueba de la actividad de la cinasa con FGFR3 (Upstate) purificado se llevó a cabo en un volumen final de 10 µ? q ue contenía 0.25 9/?t? ?- de enzima en amortiguador de cinasa (30 mM Tris-HCI pH 7.5, 1 5 mM MgCI2, 4.5 mM MnCI2, 1 5 µ? Na3V04 y 50 µg/mL BSA) , y sustratos (5 µg/mL biotin-poly-EY (Glu, Tyr) (CIS-US, Inc. ) y 3 µ? ATP). Se prepararon dos soluciones: la primera solución de 5 µ? contiene la enzima FGFR3 en amortiguador de cinasa fue dispensada primero en ProxiPlate (Perkin-Elmer) formato de 384 seg uido por la adición de 50 nL de compuestos disueltos en DMSO, entonces se agregó 5 µ? de la segunda solución que contiene el sustrato (poli- EY) y ATP en amortiguador de cinasa a cada pozo. Las reacciones se incubaron a temperatura ambiente durante una hora, se detuvieron agregando 1 0 µ? de la mezcla de detección HTRF, que contiene 30 mM Tris-HCI pH 7.5 , 0.5 M KF, 50 mM ETDA, 0.2 mg/mL BSA, 15 µg/mL estreptavidina-XL665 (CIS-US, Inc.) y 1 50 ng/m L de criptato conjugado con anticuerpo anti-fosfotirosina (CI S-US , Inc.). Después de una hora de incubación a temperatura ambiente para permitir la interacción entre la estreptavidina-biotina, se leyeron las señales fluorescentes resueltas en función del tiempo en un Analyst GT (Molecular Devices Corp.). Los valores IC50 se calcularon por análisis de regresión lineal del porcentaje de inhibición de cada compuesto en 12 concentraciones (dilución 1 : 3 de 50 µ? a 0.28 nM) . En esta prueba , los compuestos de la invención tienen un I C50 en el intervalo de 1 0 nM a 2 µ? . FGFR3 (Anál isis Celular) Los compuestos de la invención se evaluaron para determ inar su 89 capacidad de inhibir la proliferación de células Ba/F3-TEL-FGFR3 transformadas, que depende de la actividad de la cinasa FGFR3 celular. Se cultivaron Ba/F3-TEL-FGFR3 hasta 800, 000 células/mL en suspensión , con RPM 1 1 640 adicionado con suero bovino fetal 1 0% como medio de cultivo. Las células se dispensaron en placas con un formato de 384 pozos a 5000 células/pozo en 50 µ?. de medio de cultivo. Los compuestos de la invención se disolvieron y se diluyeron en dimetilsufóxido (DMSO) . Se hicieron diluciones 1 : 3 en serie en doce puntos en DMSO para crear un gradiente de concentraciones en el intervalo de típicamente desde 1 0 mM a 0.05 µ?. Se agregaron las células con 50 nL de com puestos diluidos y se incubaron durante 48 horas en un incubador de cultivo de células. Se agregó AlamarBIue (TREK Diagnostic Systems), q ue puede usarse para monitorear el ambiente reductor creado por las células en proliferación , a células a una concentración final del 1 0%. Después de cuatro horas más de incubación a 37°C en el incubador de cultivo de células, se cuantificaron las señales de fluorescencia a partir de AlamarBIue reducido (Excitación a 530 nm , Emisión a 580 nm) en un Analyst GT (Molecular Devices Corp.) . Los valores de I C50 se calcularon por análisis de regresión lineal del porcentaje de inhibición de cada compuesto en las 12 concentraciones. b-Raf Se evaluaron los compuestos de la invención para determinar su capacidad de inhibir la actividad de b-Raf. El ensayo se llevó a cabo en placas de 384-pozos MaxiSorp (N UNC) con pozos neg ros y fondo claro. El sustrato, ???a se diluyó en DPBS (1 :750) y se agregaron 1 5 µ? a cada 90 pozo. Las placas se incubaron a 4°C durante toda la noche y se lavaron 3 veces con TBST (25 mM Tris, pH 8.0, 150 mM NaCI y 0.05% Tween-20) usando el lava placas E BLA. Se bloquearon las placas con Superblock (15 µ?/????) durante 3 horas a temperatura ambiente, se lavaron 3 veces con TBST y se secaron a golpes. El amortiguador de prueba que contenía 20 µ? de ATP ( 10 I) se agregó a cada pozo seguido de lOOnl o 500nl de compuestos. Se diluyó B-Raf en el amortiguador de prueba (1 µ? en 25µ?) y se agregó 10 µ? de b-Raf diluido en cada pozo (0.4 µ9 ????). Las placas se incubaron a temperatura ambiente durante 2.5 horas. La reacción de la cinasa se detuvo lavando la placa 6 veces con TBST. Se diluyó el anticuerpo (Ser32/36) Fosfo ???a en Superblock (1 : 10,000) y se agregó 15 µ? a cada pozo. Las placas se incubaron a 4°C durante la noche y se lavaron 6 veces con TBST. La IgG anti-ratón conjugada con AP antiintestino se diluyó en Superblock (1 : 1 ,500) y se agregó 15 µ? a cada pozo. Las placas se incubaron a temperatura ambiente durante 1 hora y se lavaron 6 veces con TBST. Se agregó 15 µ? de sustrato Attophos AP a cada pozo y las placas se incubaron a temperatura ambiente durante 15 minutos. Las placas se leyeron en Acquest o Analyst GT usando un dispositivo para medir la Intensidad de Fluorescencia Nanxin BBT anión (505 de espejo dicroíco). Prueba de Unión de filtro-Radio Enzimático- Upstate KinaseProfiler® Los compuestos de la invención se valoraron para determinar su capacidad de inhibir miembros individuales de un panel de cinasas (una lista parcial, no-limitativa de cinasas incluye: Abl, BCR-Abl, CSK, JN 1 , JN 2, PDGF-R, p38, p70S6K, TGFp, SRC, EGFR, c-Kit, trkB, FGFR3, Fes, 91 Lck, Syk, RAF, MKK4, M K6 y SAPK2p). Los compuestos se evaluaron por duplicado a una concentración final de 1 0 µ? siguiendo el protocolo genérico. Nótese q ue la composición de amortiguador de cinasa y los sustratos varían para las diferentes cinasas incluidas en el panel del "Upstate KinaseProfiler®". Los compuestos se ensayaron por duplicado a una concentración final de 1 0 µ? siguiendo este protocolo genérico. Nótese que la composición del amortiguador de cinasa y los sustratos varían para las diferentes cinasas incluidas en el panel del "Upstate KinaseProfiler". El amotiguador de cinasa (2.5 µ?, I0x- q ue contiene MnCI2 cuando es necesario) , la actividad de la cinasa (0.001 -0.01 Unidades; 2.5 µ?), específicos o Poli (Glu4-Tyr) péptidos (5-500 µ? ó 0.0I mg/ml) en amortiguador de cinasa y amortiguador de cinasa (50 µ?; 5µ?) se mezclaron en un eppendorf sobre hielo. Se agregó una mezcla de Mg/ATP (10 µ?; 67.5 (o 33.75) m M gCI2, 450 (o 225) µ de ATP y 1 µ??'/µ? [y-32P]-ATP(3000 Ci/mmol)) y entonces la reacción se incubó a alrededor de 30°C durante aproximadamente 10 minutos. La mezcla de reacción es transfirió a papel formando manchas (20µ?) sobre papel cuadrado 2cm x 2cm P81 (fosfocelulosa, para sustratos de péptido cargados positivamente) o Whatman No. 1 (para substrato de Poli (Glu4-Tyr) péptido) . Las pruebas en papel cuadrado se lavaron cuatro veces, por 5 minutos cada vez, con 0.75% de ácido fosfórico y se lavaron una vez con acetona durante 5 minutos. Las pruebas en papel cuadrado se transfieren a un frasco vial de centelleo, se agregó 5 mi de coctel de centelleo y se cuantificó la incorporación de 32P (cpm) al sustrato de péptido con un contador de centelleo Beckman. Se calculó el porcentaje de inhibición para cada 92 reacción. Los compuestos de Fórmula I, en forma libre o en forma de una sal aceptable farmacéuticamente, muestran valiosas propiedades farmacológicas, por ejemplo, como se indicó en las pruebas in-vitro descritas en esta solicitud. Por ejemplo, los compuestos de la fórmula 1 de preferencia muestran un IC50 en el intervalo de 1 x 10"10 a 1 x 10"5 M, de preferencia menos de 50nM para el tipo silvestre BCR-AbI y mutantes G250E, E255V, T315I , F317L y M351 T BCR-Abl. Por ejemplo: a) N-f3-f7(6-metoxi-p¡rid¡n-3-ilamino-l-metil-2-oxo-1 ,2-dihidro-11 ,61naftir¡din-3-in-4-metil-fenil)-3-trifluorometil-benzam¡da (Ejemplo 8) tiene un IC50 de <0.5 nM, 43 nM, 48 nM, 122 nM, <0.5 nM y 9 nM para el tipo Silvestre, G250E, E255V, T315I, F317L y M351 T Bcr-abl, respectivamente; b) N-{3-f7-(6-metoxi-piridin-3-ilamino)1 -rnetil-2-oxo-1 ,2-dihvdro-H , 61naftiridin-3-in-4-metil-fenil -3-trifluorometil-benzamida (Ejemplo 8) tiene un IC50 de 107nM y 3nM para la enzima FGFR3 y las pruebas celulares respectivamente, y 500nM y 17nM para las pruebas enzimáticas de b-Raf y c-Raf, respectivamente; Los compuestos de la formula I, a una concentración de 10 µ , de preferencia muestran un porcentaje de inhibición de más del 50%, de preferencia mayor de alrededor del 70%, contra las cinasas Abl, Bcr-abl, Bmx, c-RAF, CSK, Fes, FGFR3, Flt3, GSK3p, I R, JNK1 cc1 , JNK2a2, Lck, MKK4, MKK6, p70S6K, PDGFRcc, Rskl, SAPK2a, SAPK2p, Syk y TrkB. Por ejemplo: c) N-f3-r7-(6-metoxi-piridin-3-¡lamino)-l-metill-2-oxo-1 ,2-d¡hidro-f1 ,6l 93 naftiridin-3-il1-4-metil-fenil)-3-trifluorometil-benzamida (Ejemplo 8), a una concentración de 1 0 µ?, inhibe las siguientes cinasas por el porcentaje que se muestra entre corchetes (por ejemplo, 100% significa una inhibición completa, 0% significa que no hay inhibición): tipo silvestre Abl (100%), Bmx (100%), c-RAF (90%), CS (1 00%), FGFR3 (96%), JN 1 a1 (89%), JNK2cc2 (99%), Lck (99%), MKK4 (91 %), MKK6 (97%) , p70S6K (86%), SAP 2 (95%), SAPK2p (98%) y TrkB (97%). Debe entenderse que los ejemplos y modalidades descritas en la presente solamente tienen propósitos ilustrativos y que varias modificaciones o cambios en vista de los mismos serán aparentes a personas versadas en el arte y deben estar incluidos dentro del espíritu y alcance de esta solicitud y al alcance de las reivindicaciones anexas. Todas las publicaciones, patentes, y solicitudes de patente citadas en la presente se incorporan a la misma en referencia a todo propósito.

Claims (1)

1. 94 REIVINDICACIONES 1. Un compuesto de fórmula I: en la cual: n es 0, 1 ó 2; Y se selecciona a partir de -C(H)= y -N=; Z se selecciona a partir de -C(H)= y -N = ; Ri se selecciona a partir de hidrógeno, halo y -R4; R2 se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de C -6; R3 se selecciona a partir de halo, nitro, alquilo de y alcoxi de R4 se selecciona a partir de heterocicloalquilo de C3-8> -XNR5R6, -XNR5C(0)R6, -XC(0)NR5R6 y -XNR5S(O)0-2R6; en donde X es un enlace o alquileno de C -4; R5 se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de C1-6; R6 se selecciona a partir de alquilo de Ci-6, arilo de C6-io-alquilo de C0-4, heteroarilo de C5- 0-alquilo de C0-4, cicloalquilo de C3-|2-alquilo de C0-4 V heterocicloalquilo de C3-8-alquilo de ?0-4; en donde cualquier arilo, heteroarilo, cicloalquilo y heterocicloalquilo de R4 está opcionalmente substituido por 1 a 3 radicales independientemente seleccionados a partir de halo, hidroxi, nitro, ciano, alquilo de C1-6 opcionalmente substituido con hidroxi, alcoxi de C1-6, alquilo de C1-6 substituido por halo, alcoxi de C1-6 substituido por halo, -XOXNR7R8, -XS(O)0-2R7, -XS(O)0-2NR7R8, -XOR7, 95 -XC(0)NR7 8, -XNR7R8, -XNR7S(O)0-2R7 y -XRg; en donde X es un enlace o alquileno de Ci-4; R7 y R8 se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de C1-6; R9 se selecciona a partir de arilo de C6- 0, heteroarilo de C5-10, cicloalquilo de C3-i2 y heterocicloalquilo de C3-8,' en donde cualquier arilo, heteroarilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo de R9 está opcionalmente substituido con 1 a 3 radicales alquilo de C1-6; R-io está seleccionado a partir de hidrógeno, halo y alquilo de C1-6; y las sales famacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos e isómeros de los mismos. 2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque n es 0, 1 ó 2; Y se selecciona a partir de -C(H)= y -N=; Z se selecciona a partir de -C(H)= y -N=; Ri se selecciona a partir de hidrógeno, halo y -R4; R2 se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de C1-6; R3 se selecciona a partir de halo, alquilo de C1-6 y alcoxi de C1-6; R4 se selecciona a partir de heterocicloalquilo de C3-8, -XNR5R6l -XNR5C(0)R6 y -X R5S(0)o-2R6; en donde X es un enlace o alquileno de C -4; R5 se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de C1-6; e se selecciona a partir de alquilo de C1-6, arilo de C6-io-alqu¡lo de C0-4. heterocicloalquilo de C3.8-alquilo de C0-4, heteroarilo de C5.10-alquilo de Co-4 y cicloalquilo de C3-12-alquilo de C0-4; en donde cualquier arilo, heteroarilo y cicloalquilo de R4 está opcionalmente substituido por 1 a 3 radicales independientemente seleccionados a partir de halo, hidroxi, nitro, 96 alquilo de C1 -6 opcionalmente substituido con hidroxi, alcoxi de Ci.6, alquilo C1 -6 substituido por halo, alcoxi de C1 -6 substituido por halo, -XS (O)0-2R7, -XOXN R7R8, -XS (O)0-2NR7R8, -XOR7, -XC(0) N RrR8, -XN R7R8, y -XRg; en donde X es un enlace o alquileno de C1 -4; R7 y R8 se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno y alquilo de C1 -6; Rg se selecciona a partir de heteroarilo de C5.10 y heterocicloalquilo de C3-8; en donde cualquier heteroarilo o heterocicloalquilo de R9 está opcionalmente substituido con 1 a 3 radicales alquilo de C1 -6; y Rí o es hidrógeno. 3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque Ri se selecciona a partir de hidrógeno, halo, pirrolidiniio y -N H R6; en donde R6 se selecciona a partir de hidrógeno, metilo, etilo, dietil-amino-propilo, morfolino-etilo, hidroxi-etilo, benzo[1 ,3] dioxolilo, pirazolilo, piridinilo, pirazinilo, piridinil-metilo, 2-(2-oxo-pirrolidin-1 -ilo)-etilo y fenilo; en donde el pirrolidiniio, piridinilo, pirazolilo, pirazinilo, piridinil-metilo, 2-(2-oxo-pirrolidin-1 -il)-etilo o fenilo esta opcionalmente substituido por 1 a 2 radicales independientemente seleccionados a partir de amino, metoxi, dimetilamino, dimetilamino-metilo, dimetilamino-etilo, dimetilamino-propilo, dimetilamino-etoxi, metil-sulfanilo, hidroxi, metilsulfonilo, hidroximetilo, 1 -hidroxi-etilo, metano-sulfonil-amino, morfolino, morfolino-etilo, furanil-metilo, 4-metil-piperazin-1 -ilo, 4-metil-piperazin-1 -ilmetilo, bencilo, metil-aminocarbonilo, metil-carbonil-amino, metil-pirazolilo, aminocarbonilo y aminosulfonilo. 4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque R se selecciona a partir de -N HC(0)R6 y 97 -NHS(0) 2 R6 ; en donde R6 se selecciona a partir de metilo, isobutilo, ter-butilo, ciclohexilo, furanilo, pirrolilo, fenilo, piridinilo, piridazinilo, pirazinilo, pirazolilo, tetrazolil-metilo y bencilo; en donde el ciclohexilo, furanilo, pirrolilo, fenilo, piridinilo, piridazinilo, pirazinilo, pirazolilo, tetrazolil-metilo o bencilo de R6 está opcionalmente substituido por 1 a 3 radicales seleccionados a partir de 4-met¡l-piperazin-1 -ilmetilo, 4-metil-piperazin-1 -ilo, 4-etil-piperazin-1 -ilmetilo, 4-etil-piperazin-1 -ilo, fenilo, etilo, trifluorometilo, morfolino, dimetilamino, halo, nitro, trifluorometoxi, 1 -metil-pirrol-2-ilo, 4-metil-imidazol-1 -ilo, 4-metil-piperazin-1 -ilo, 4-metil-piperazin-1 -ilmetilo, isobutilo y ter-butilo. 5. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 en combinación con un excipiente farmacéuticamente aceptable. 6. Un método para tratar una enfermedad en un animal en el cual la inhibición de la actividad de la cinasa puede prevenir, inhibir o aliviar la patología y/o sintomatología de la enfermedad, el método comprende administrar al animal una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1. 7. El método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la cinasa se selecciona a partir de Abl, BCR-AbI, CSK, JNK1 , JNK2, PDGF-R, p38, p70S6K, TGFp, SRC, EGFR, c-Kit, trkB, FGFR3, Fes, Lck, Syk, RAF, MKK4, MKK6 y e???2ß. 8. El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , en la preparación de un medicamento para tratar una enfermedad en un 98 animal en el cual la actividad de la cinasa de Abl, BCR-Abl, CSK, JNK1 JNK2, PDGF-R, p38, p70S6K, TGFp, SRC, EGFR, c-Kit, trkB, FGFR3, Fes Lck, Syk, RAF, KK4, MKK6 y/o SAPK2p contribuye a la patología y/c sintomatología de la enfermedad. 99 RES UM EN La invención proporciona una clase novedosa de compuestos, composiciones farmacéuticas que comprenden tales compuestos y métodos de uso de tales compuestos para tratar o prevenir enfermedades o trastornos asociados con la actividad anormal o desregulada de la cinasa, particularmente enfermedades o trastornos que involucran la activación anormal de las cinasas Abl, BCR-Abl, CSK, JNK1 , JNK2, PDGF-R, p38, p70S6K, TGFp, SRC, EGFR, c-Kit, trkB, FGFR3, Fes, Lck, Syk, RAF, MKK4, KK6 y SAPK2 .