MXPA05011268A - Sistemas de expresion de virus de parainfluenza recombinante y vacunas que comprenden antigenos heterologos derivados del metaneumovirus. - Google Patents

Sistemas de expresion de virus de parainfluenza recombinante y vacunas que comprenden antigenos heterologos derivados del metaneumovirus.

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Abstract

La presente invencion se refiere al ADNc o ARN del virus de parainfluenza de bovino recombinante (Bpiv) que se pueden usar para expresar los productos de genes heterologos en sistemas celulares hospederos apropiados y/o rescatar los virus recombinantes del ARN de la hebra negativa que expresan, empacan y/o presentan el producto del gen heterologo. En particular, los productos de genes heterologos incluyen productos de genes de otra especie de PIV o de otro virus de ARN de hebra negativa, que incluyen pero no se limita a, virus de influenza, virus sincitial respiratorio, metaneumovirus humano y neumovirus aviar. Se pueden usar ventajosamente los virus quimericos y los productos de expresion en la formulacion de vacunas, que incluyen vacunas contra un amplio rango de patogenos y antigenos.

Description

SISTEMAS DE EXPRESIÓN DE VIRUS DE PARAINFLUENZA RECOMBINANTE Y VACUNAS QUE COMPRENDEN ANTIGENOS HETEROLOGOS DERIVADOS DEL METANEUMOVIRUS Esta solicitud reivindica la prioridad de la Solicitud Provisional Norteamericana No. 60/466,181, expedida el 25 de Abril del '2003, la Solicitud Provisional Norteamericana No. 60/499,274, expedida el 28 de Agosto del 2003, y la Solicitud Provisional Norteamericana No. 60/550,931, expedida el 25 de Marzo del 2004, cada una de las cuales esta incorporada aquí como referencia. 1. CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere al ADNc o ARN del virus de parainfluenza recombinante (PIV) que se pueden usar para expresar los productos de genes heterólogos en sistemas celulares hospederos apropiados y/o rescatar los virus reco binantes del ARN de la hebra negativa que expresan, empacan y/o presentan el producto del gen heterólogo. En particular, la presente invención abarca formulaciones de vacunas que comprenden PIV quimérico que expresa un producto del gen heterólogo, en donde el producto del gen heterólogo es preferiblemente un péptido o polipéptido antigénico. En una modalidad, el vector de PIV de la invención expresa una, dos o tres productos del gen heterólogo que pueden ser codificados por el mismo o diferentes virus. En una modalidad preferida la 2 secuencia heteróloga codifica un producto del gen heterólogo que es un polipéptido antigénico de otra especie de PIV o de otro virus de AKN de hebra negativa, que incluye pero no se limita a virus de influenza, virus sincitial respiratorio (RSV) , metaneumovirus de mamífero y neumovirus aviar. Las preparaciones de vacunas de la invención incorporan vacunas multivalentes , que incluyen preparaciones de vacunas bivalentes y trivalentes. Las vacunas multivalentes de la invención se pueden administrar en la forma de un vector PIV que expresa cada secuencia antigénica heteróloga de dos o más vectores PIV que codifica cada uno diferentes secuencias antigénicas heterólogas . Las formulaciones de vacunas de la invención pueden administrarse solas o en combinación con otras vacunas, agentes profilácticos u agentes terapéuticos. 2.ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La infección viral de parainfluenza resulta en serias enfermedades de la zona o tracto respiratorio en infantes y niños. (Tao et al., 1999, Vaccine:17: 1100-08). Las infecciones virales de parainfluenza infecciosa representan aproximadamente 20% de todas las hospitalizaciones de pacientes pediátricos que sufren de infecciones de la zona respiratoria a nivel mundial. Id. Una terapia antiviral efectiva no está disponible para tratar enfermedades relacionadas al PIV, y aún no se ha aprobado una vacuna para prevenir la infección del PIV. El PIV es un miembro del género respirovirus (PIV1, PIV3) o rubulavirus (PIV2, PIV4) de la familia paramixoviridae . El PIV se compone de dos módulos estructurales: (1) un núcleo de ribonucleoproteina interno, o nucleocapside, que contiene el genoma viral, y (2) una envoltura de lipoproteína aproximadamente esférica, exterior. Su genoma consiste de una hebra individual de AR de sentido negativo, que es de aproximadamente 15,456 nucleótidos de longitud y codifica por lo menos ocho polipéptidos . Estas proteínas incluyen la proteína estructural nucleocapside (NP, NC, o N dependiendo del género) , la fosfoproteína (P) , la proteína matriz (M) , la glicoproteína de fusión (F) , la glicoproteína de hemaglutinin-neuraminidasa (HN) , la proteína de polimerasa larga (L) , y las proteínas C y D de función desconocida. Id. La proteína de nucleocapside de parainfluenza (NP, NC, o N) contiene dos dominios en cada una unidad de proteína. Estos dominios incluyen: un dominio terminal amino, que comprende casi dos tercios de la molécula e interactúa de manera directa con el ARN, y un dominio terminal carboxilo, que yace en la superficie de la nucleocapside ensamblada. Se piensa que existe una articulación en la unión de estos dos dominios, por la cual se imparte alguna flexibilidad en esta proteína (vea Fields et al. (ed) , 1991, FUNDAMENTAL VIROLOGY, 2a ed, editorial Raven, Nueva York, incorporado aquí como referencia en su totalidad) . La proteína de matriz (M) aparentemente esta involucrada en el montaje viral, e interactúa con ambas la membrana viral y las proteínas de nucleocápside. La osfoproteína (P) se somete a fosforilación y se ha implicado en la regulación de trascripción, mutilación, fosforilación y poliadenilación. Inicialmente producido como un precursor inactivo, la glicoproteína de fusión (F) se escinde luego de la traslación para producir dos polipéptidos de disulfuro enlazados . La proteína F activa interactúa con la membrana viral donde ésta facilita la penetración del virión de parainfluenza en células hospederas promoviendo la fusión del desarrollo viral con la membrana de plasma de la célula hospedera. Id. La glicoproteína, hemaglutinin-neuraminidasa (HN) resalta de la envoltura o envuelta e imparte actividades de hemaglutinina y neuraminidasa en el virus. El HN tiene un termino amino fuertemente hidrofóbico que funciona para anclar la proteína HN en la bicapa lípida. Id. Finalmente, la proteína de polimerasa grande o larga (L) juega un papel importante en ambas la trascripción y la replicación. Id. El virus de parainfluenza de bovino se aisló primero en 1959 a partir de terneros que mostraron signos de tifo. Éste se ha aislado a partir de fetos abortados de ganado normal, y ganado que presenta signos de enfermedades respiratorias (Broker-Klassen et al., 1996, Can. J. Vet . Res. 60: 228-236. Vea también Shibuta, 1977, Microbiol. Immunol . 23 (7), 617-628) . El PIV3 humano y bovino distribuye epitopes de neutralización pero muestra distintas propiedades antigénicas. Existen diferencias significativas entre las cepas virales de bovino y humano en la proteína HN. De hecho, una cepa bovina induce algunos anticuerpos de neutralización a la infección del PIVh mientras que una cepa humana parece inducir un espectro de anticuerpos de neutralización más amplio contra el PIV3 humano (Van yke Coelingh et al., 1990, J. Virol . 64: 3833-3843) . La replica de todos los virus de ARN de hebra negativa, que incluyen PIV, se complica por la ausencia de maquinaria celular que se requiere para la replica de ARN. De manera adicional, el genoma de hebra negativa debe transcribirse en una copia de hebra positiva (ARNm) antes de que pueda ocurrir la traducción. Consecuentemente, el ARN genómico solo no puede sintetizar la polimerasa de ARN dependiente del ARN luego de entrar en la célula. Las proteínas L, P, y N deben entrar a la célula huésped con el ARN genómico. Se presume que la mayoría o todo de las proteínas virales que transcriben ARNm del PIV también pueden llevar a cabo la replica del genoma. El mecanismo que regula los usos alternativos (por ejemplo, trascripción o replica) del mismo complemento de proteínas no ha sido claramente identificado, pero el proceso parece involucrar la abundancia de formas libres de uno o más de las proteínas de nucleocápside . Directamente después de la penetración del virus, la trascripción se inicia por la proteína L que usa el RNA de sentido negativo en la nucleocápside como una plantilla. La síntesis del RNA viral se regula de manera que ésta produce ARNms monocistrónico durante la trascripción. Siguiendo la trascripción, la réplica del genoma del virus es el segundo evento esencial en la infección por virus de ARN de hebra negativa. Como con otros virus de ARN de hebra negativo, la replica del genoma del virus en PIV es mediada por proteínas de virus específicas. Los primeros productos de la síntesis de ARN replicativo son copias complementarias (por ejemplo, más polaridad) del ARN (ARNc) del PIV genómico. Estas copias de más hebras (anti-genomas) difieren de las transcripciones del ARNm de más hebras en la estructura de su término. Al contrario de las transcripciones de ARNm, los ARNcs an i-genómicos no están rematados o metilados en el termino 5" y no están truncados ni poliadenilados en el termino 3 " . Los ARNcs son co-terminales con sus plantillas de hebra negativa y contienen toda la información genética en la forma complementaria. Los ARNcs sirven como plantillas para la síntesis de genomas virales de hebra negativa (ARNvs) del PIV. Los genomas (ARNvs) y anti-genomas (ARNcs) de hebra negativa del PIV están encapsidados por proteínas de nucleocápside; las especies de ARN únicamente no encapsidadas son ARNms virales . La replica y trascripción de ARN del bPIV ocurre en el citoplasma de la célula hospedera. El montaje de los componentes virales parece tener lugar en la membrana de plasma de la célula hospedera donde el virus maduro se libera mediante brotes. 2.1 PARAMIXOVIRUS De manera clásica, como agentes de devastación de la enfermedad, los paramixovirus son responsables de muchas muertes animales y humanas a nivel mundial cada año. El Paramixoviridae forma una familia en el orden de Mononegavirales (virus de ARN individuales de hebra negativa de sentido negativo) , que consiste de sub-familias Paramixovirinae y Neumovirinae . La última sub-familia está en el presente dividida de manera taxonómica en el genero Neumovirus y Metaneumovirus (Pringle, 1999, Arch. Virol 144/2, 2065-2070) . El virus sincitial respiratorio humano (hRSV) , una especie del género Neumovirus, es la causa individual más importante de las infecciones de la zona respiratoria inferior durante la infancia y la niñez temprana a nivel mundial (Domachowske, & Rosenberg, 1999, Clin. Microbio. Rev. 12(2): 298-309) . Otros miembros del género Neumovirus incluyen los virus sincitial respiratorio bovino y ovino y virus de neumonía de ratones (PVM) . En décadas pasadas se han identificado varios agentes etiológicos de enfermedades de mamífero, en particular de enfermedades de la zona respiratoria (RTI) , en particular de humanos, (Evans, In: Viral Infections of Humans, Epidemiology and Control. 3er edición, (ed. Evans, S.A) 22-28 (Plenum Publishing Corporation, New Cork, 1989) ) . Agentes etiológicos clásicos de RTI de mamíferos son los virus sincitial respiratorios que pertenecen al género Neumovirus encontrado con humanos (hRSV) y rumiantes tal como ganado o ovejas (bRSV y/o oRSV) . En diferencias de RSV humano en ensayos de neutralización transversal recíproco, la reactividad de las proteínas G en ensayos inmunológicos y secuencias de nucleótidos del gen G se utilizan para definir dos subgrupos de hRSV antigénicos. En los subgrupos, las secuencias de amino ácido muestran 94% (subgrupo A) o 98% (subgrupo B) de identidad, mientras que únicamente 53% de la identidad de la secuencia de amino ácido se encuentra entre los subgrupos . Se observa variabilidad adicional dentro de los subgrupos basados en anticuerpos monoclonales, ensayos RT-PCR y ensayos de protección de ARNse . Los virus de ambos subgrupos tienen una distribución a nivel mundial y pueden ocurrir durante una sola estación. La infección puede ocurrir en la presencia de inmunidad pre-existente y la variación antigénica no es estrictamente requerida para permitir la re-infección. Vea, por ejemplo Sullender, 2000, Clinical Microbiology Reviews 13 (1) :1-15; Collins et al. Fields Virology, ed. B.N. Knipe, Howley, P.M. 1996, Philadelphi : Lippencott-Raven. 1313-1351; Jonson et al., 1987, (Proc Nati Acad Sci USA, 884(16): 5625-9; Collins, in The Paramixoviruses, D.W. Kingsbury, Editor. 1991, Plenum Press: New Cork. P. 103-153. Otro neumovirus clásico es el virus de neumonía de ratón (PVM) , en general solamente encontrado con ratones de laboratorio. Sin embargo, una proporción de enfermedades observadas entre mamíferos puede aún no atribuirse a patógenos conocidos . 2.2 INFECCIONES DE RSV El virus sincitial respiratorio (RSV) es la causa principal de serias enfermedades del tracto o zona respiratoria inferior en infantes y niños (Feigen et al . , eds., 1987, En: Textbook of Pediatric Infectious Diseases, WB Saunders, Philadelphia en las paginas 1653-1675; New Vaccine Development, Establishing Priorities, Vol . 1, 1985, National Academy Press, Washington DC en las paginas 397-409; y Ruuskanen et al., 1993, Curr. Probl . Pediatr. 23:50-79). La naturaleza epidémica anual de la infección de RSV es evidente a nivel mundial, pero la incidencia y severidad de la enfermedad del RSV en una estación dada varia por región (Hall, 1993, Contemp. Pediatr. 10:92-110). En regiones templadas del hemisferio norte, usualmente comienza a finales de otoño y termina al final de la primavera. La infección de RSV primaria ocurre más frecuentemente en niños de 6 semanas a 2 años de edad y de manera menos común en las primeras cuatro semanas de vida durante epidemias de nosocomios (Hall et al . , 1979, New Engl . J. Med. 300: 393-396). Niños en riesgo creciente de la infección del RSV incluyen, pero no se limitan a, infantes de nacimiento antes de tiempo (Hall et al., 1979, New Engl. J. Med. 300:393-396) y niños con displasia broncopulmonar (Groothuis et al., 1988, Pediatrics 82: 199-203), enfermedad cardiaca congénita (MacDonald et al., New Engl. J. Med. 307: 397-400), inmunodeficiencia adquirida o congénita (Ogra et al., 1988, Pediatr. Infect Dis. J. 7:246-249; y Pohl et al., 1992, J. Infect. Dis. 165:166-169), y fibrosis quística (7Abman et al., 1988, J. Pediatr. 113: 826-830) . La proporción de fatalidad en infantes con enfermedades cardiacas o de pulmón quienes son hospitalizados con infección de RSV es de 3% a 4% (Navas et al., 1992, J. Pediatr. 121:348-354) . El RSV infecta adultos además de infantes y niños . En adultos sanos, el RSV provoca de manera predominante enfermedad de la zona respiratoria superior. Ha sido recientemente evidente que algunos adultos, especialmente los mayores, tienen infecciones de RSV sintomáticas más frecuentemente que los que previamente se han reportado (Evans, S. A., eds., 1989, Viral Infections of Humans . Epidemiology and Control, 3er ed., Plenum Medical Book, New Cork en las paginas 525-544) . Varias epidemias también han sido reportadas entre pacientes de clínicas de reposo y adultos jóvenes institucionalizados (Falsey, A. R., 1991, Infect . Control Hosp. Epidemiol . 12:602-608; y Garvie et al., 1980, Br. Med. J. 281:1253-1254) . Finalmente, el RSV puede causar serias enfermedades en personas inmunosuprimidas, particularmente pacientes con trasplante de médula ósea (Hertz et al., 1989, Medicine 68:269-281). Opciones de tratamiento para la enfermedad del RSV establecida son limitadas. La enfermedad de SRV severa de la zona respiratorio inferior a menudo requieren cuidado de apoyo considerable, que incluye la administración de oxígeno humidificado y asistencia respiratoria (Fields et al., eds., 1990, Fields Virology, 2a ed. , Vol . 1, Prensa Raven, New York en las paginas 1045-1072) . Mientras que una vacuna puede prevenir la infección del RSV, y/o enfermedades relacionadas al RSV, aún no existe vacuna autorizada para esta indicación. Un obstáculo mayor para el desarrollo de una vacuna es la seguridad. Una vacuna con formalina inactiva, aunque es inmunogenética, inesperadamente provoca una incidencia más alta y más severa de enfermedad del tracto respiratorio inferior debido al RSV en infantes inmunizados que en infantes inmunizados con una vacuna de parainfluenza trivalente preparada de manera similar ( im et al., 1969, Am. J. Epidemiol . 89: 422-434; y Kapikian et al., 1969, Am. J. Epidemiol. 89:405-421). Varias vacunas candidatas de RSV han sido abandonadas y otras están bajo desarrollo (Murphy et al., 1994, Virus Res. 32:13-36), pero aunque las ediciones de seguridad están resueltas, la eficacia de la vacuna también debe ser mejorada. Un número de problemas permanecen para ser resueltos. La inmunización se requerirá en el inmediato periodo neonatal a partir de que ocurre la máxima incidencia de la enfermedad de la zona respiratoria inferior a los 2 a 5 meses de edad. La inmadurez de la respuesta inmune neonatal junto con altas titulaciones de anticuerpos de RSV adquiridos de manera maternal puede esperarse que reduzca el vaccíneo de la inmunogenicidad el período neonatal (Murphy et al., 1988, J. Virol. 62:3907-3910; y Murphy et al., 1991, Vaccine 9:185-189). Finalmente, la infección y la enfermedad de RSV primaria no protege bien contra enfermedades de RSV subsecuentes (Henderson et al., 1979, New Engl . J. Med. 300: 530-534) .
Actualmente, la única propuesta aprobada para la profilaxis de la enfermedad del RSV es la inmunización pasiva. Evidencia inicial sugiere que un papel protectivo para el IgG se obtuvo a partir de observaciones que involucran anticuerpo material en hurones (Price, G.A. Ph.D.diss., University of California, Los Angeles, 1975) y en humanos (Lambrecht et al., 1976, J. Infect. Dis. 134:2111-217; y Glezen et al., 1981, J. Pediatr. 98:708-715). Hemming et al., eds . , 1986, Clinical Use of Intravenous Immunoglobulins, Academic Press, London en las paginas 285-294) reconoce la posible utilidad del anticuerpo de RSV en el tratamiento o en la prevención de la infección del RSV durante estudios que involucran la farmacocinética de la globulina inmune intravenosa (IVIG) en recién nacidos que se sospecha que tienen sepsis neonatal. En este estudio, se notó que un infante, cuyas secreciones respiratorias que produce el RSV, se recupero rápidamente después de la infusión de la IVIG. Análisis posteriores de la cantidad del IVIG revelaron una titulación inusualmente alta de RSV que neutraliza el anticuerpo. El mismo grupo de investigadores examinaron entonces la capacidad del suero hiperinmune o globulina inmune, enriquecido para el anticuerpo que neutraliza el RSV, para proteger las ratas del algodón y primates contra la infección del RSV (Prince et al., 1985, Virus Res. 3:193-206; Prince et al., 1990, J. Virol . 64:3091-3092; Hemming et al., 1985. J. Infect . Dis. 152:1083-1087; Prince et al . , 1983, Infect . Immun. 42:81-87 ; y Prince et al., 1985. J. Virol. 55 : 517-520). Resultados de estos estudios indican que el IVIG puede utilizarse para prevenir la infección del RSV, además de tratar o prevenir trastornos relacionados al RSV. Estudios clínicos recientes han demostrado la capacidad de esta globulina hiperinmune del RSV pasivamente administrada (RSV IVIG) para proteger niños en riesgo de infección respiratoria inferior severa por el RSV (Groothius et al., 1993, New Engl . J. Med. 329:1524-1530; y The Prevent Study Group, 1997, Pediatrics 99:93-99). Mientras que esto es un mayor avance en la prevención de la infección del RSV, este tratamiento posee ciertas limitaciones en su uso extendido. Primero, el IVIG del RSV debe infundirse de manera intravenosa durante varias horas para lograr una dosis efectiva. Segundo, las concentraciones de material activo en globulinas hiperinmunes son insuficientes para tratar adultos en riesgo o más niños con función cardiopulmonar comprendida. Tercero, la infusión intravenosa necesita visitas al hospital mensuales durante la estación del RSV. Finalmente, puede resultar difícil seleccionar donadores suficientes para producir una globulina hiperinmune para el RSV para satisfacer la demanda de este producto.' Actualmente, únicamente aproximadamente 8% de los donadores normales tienen titulaciones de anticuerpos que neutralizan el RSV suficientemente altas para calificar para la producción de la globulina hiperinmune. Una manera de mejorar la actividad específica de la inmunoglobulina seria desarrollar uno o más anticuerpos monoclonales que neutralizan el RSV altamente potentes (MAbs) . Tales MAbs deben ser humanos o humanizados para retener farmacocinéticas favorables y para evitar generar una respuesta de anticuerpos anti-ratón humana, que repita la dosificación que se requeriría por toda la estación del RSV. Dos glicoproteínas , F y G, sobre la superficie del RSVhan mostrado ser objetivos de anticuerpos de neutralización (Fields et al., 1990, Supra; y Murphy et al., 1994, Supra). Un anticuerpo humanizado dirigido a un epítope en el sitio antigénico A de la proteína F del RSV, SYNAGIS®, se aprobó para la administración intramuscular a pacientes pediátricos para la prevención de enfermedades de la zona respiratorio inferior serias causadas por el RSV en dosis mensualmente recomendadas de 15 mg/kg de peso del cuerpo en toda la estación del RSV (de Noviembre a Abril en el hemisferio norte) . SYNAGIS® es un compuesto de secuencias de anticuerpos de humano (95%) y murino (5%). Vea, Jonson et al., 1997, J. Infect. Diseases 176:1215-1224 y la Patente Norteamericana No. 5,824,307, los contenidos totales los cuales están incorporados aquí como referencia. La secuencia de la cadena pesada humana se derivo a partir de los dominios constantes de IgGl humano y las regiones de modelo de trabajo variable de los genes VH de Cor (Press et al., 1970, Biochem. J. 117: 641-660) y Cess (Takashi et al., 1984, Proc . Nati. Acad. Sci . USA 81:194-198). La secuencia de cadena ligera humana se derivo a partir del dominio constante de C y las regiones de modelo de trabajo variable del gen K104 VL con J-4 (Bentley et al., 1980, Nature 288:5194-5198). Las secuencias de murino derivadas de un anticuerpo monoclonal de murino, Mab 1129 (Beeper et al., 1989, J. Virology 63:2941:2950), en un proceso en el que involucro el injerto del murino complementario determina regiones en el modelo de trabajo de anticuerpos humanos . 2.3 NEUMOVIRUS AVIAR La enfermedad respiratoria causada por un Neumovirus aviar (APV) fue primero descrita en África del Sur a finales de 1970 (Buys et al., 1980, Pavo 28:36-46) donde tuvo un efecto devastador en la industria del Pavo. Esta enfermedad en los pavos se caracterizó por sinusitis y rinitis y fue nombrada rinotraqueitis del pavo (TRT) . Los aislados Europeos del APV también han sido fuertemente implicados como factores en el síndrome de cabeza hinchada (SHS) en pollos (O'Brien, 1985, Vet. Rec. 117:619-620). Originalmente, la enfermedad apareció en multitudes de pollo tomatero infectado con el virus de la enfermedad de Ne castle ( DV) y se asumió como un problema secundario asociado con la enfermedad de Newcastle (ND) . El anticuerpo contra el APV Europeo se detectó en pollos afectados después del inicio del SHS (Cook et al., 1988, Avian Pathol. 17:403-410), implicando así al APV como la causa. El Neumovirus Aviar (APV) también conocido como el virus de rinotragueitis del pavo (TRTV) , el agente etiológico de la rinotraqueitis aviar, una infección del tracto respiratorio superior de los pavos (Giraud et al., 1986, Vet . Res. 119:606-607) , es el miembro único del género etaneumovirus recientemente asignado, el cual, como se dijo no se asoció hasta ahora con las infecciones, lo que es más, con enfermedades de mamíferos . Subgrupos serológicos de APV pueden diferenciarse en la base de las secuencias del nucleótido o aminoácido de la glicoproteína G y pruebas de neutralización que usan anticuerpos monoclonales que también reconocen la glicoproteína G. Sin embargo, otras diferencias en las secuencias del nucleótido y aminoácido pueden usarse para distinguir subgrupos serológicos de APV. Dentro de loas subgrupos A, B y D, y la proteína G muestra una identidad de secuencia de 98.5 a 99.7% aa dentro de los subgrupos mientras que entre los subgrupos únicamente se observa identidad del 31.2 al 38% aa . Vea por ejemplo Collins et al., 1993, Avian Pathology, 22 :p. 469-479; Cook et al . , Avian Pathology, 22:257-273; Bayon-Auboyer et al . , J Gen Virol, 81 (Pt 11) :2723-33; Seal , Virus Res, 58(1-2): 45-52; Bayon-Auboyer et al., 1999, Arch Virol, 144(6): 91-109; Juhasz, et al., 1994, J Gen Virol, 75 (Pt 11): 2873-80. Un serotipo más del APV se proporciona en WOO0/20600, incorporado aquí como referencia, que describe el aislado Colorado del APV y compara a APV o cepa de TRT conocidos con pruebas de neutralización de suero in vitro. Primero, el aislado Colorado se probó contra antisuero policlonal monoespecifico para reconocer aislados de TRT. El aislado Colorado no se neutralizó por antisuero monoespecifico en ninguna de las cepas de TRT. Éste sin embargo, se neutralizo por un suero hiperinmune elevado contra una cepa del subgrupo A. este antisuero neutralizo el virus homologo a una titulación de 1:400 y el aislado colorado a una titulación de 1:80. Usando el método anterior, el aislado Colorado se probo entonces contra anticuerpos monoclonales de TRT. En cada caso, la titulación de neutralización reciproca fue <10. El antisuero monoespecifico elevado al aislado colorado se probó entonces contra cepas de TRT de ambos subgrupos . Ninguna de las cepas de TRT probadas se neutralizó por el antisuero al aislado Colorado.
La cepa Colorado de APV no protege a los pollos de SPF contra la estimulación con ya sea una cepa del subgrupo A o una cepa del subgrupo B del virus de TRT. Estos resultados sugieren que el aislado Colorado puede ser el primer ejemplo de un serotipo más de neumovirus aviar (Vea, Bayon-Auboyer et al., 2000, J. Gen. Vir. 81:2723-2733). El neumovirus aviar es un virus de AR no segmentado, de una sola hebra, que pertenece a la sub-familia Pneumovirinae de la familia Paramixoviridae, del género metaneumovirus (Cavanagh and Barret, 1988, Virus Res. 11:241-256; Ling et al., 1992, J. Gen. Virol . 73:1709-1715; Yu et al., 1992, J. Gen Virol. 73:1355-1363). La familia Paramixoviridae se divide en dos subfamilias: la Paramixovirinae y la Pneumovirinae. La subfamilia Paramixovirinae incluye, pero no se limita a, el género: Paramixovirus , Rubulavirus, y Morbillivirus . Recientemente, la subfamilia neumovirinae se dividió en dos géneros en base al orden del gen y la homología de la secuencia, por ejemplo, neumovirus y metaneumovirus (Naylor et al., 1998, J. Gen. Virol., 79: 1393-1398; Pringle, 1998, Arch. Virol. 143:1449-1159). El género neumovirus incluye, pero no se limita a, el virus sincitial respiratorio humano (hRSV) , el virus sincitial respiratorio bovino (bRSV) , el virus sincitial respiratorio ovino, y el neumovirus de ratón. El género metaneumovirus incluye, pero no se limita a el neumovirus aviar europeo (subgrupos A y B) que se distingue del hRSV, las especies de tipo para el género neumovirus (Taylor et al . , 1998, J. Gen. Virol . , 79:1393-1398, Pringle, 1998, Arch. Virol. 143:1449-1159). El aislado US de APV representa un tercer subgrupo (subgrupo C) dentro del género neumovirus debido que se ha encontrado que es antigénicamente y genéticamente diferente de aislados europeos (Seal, 1998, Virus Res. 58:45-52; Senne et al., 1998, En: Proc . 47th WPDC, California, pp. 67-68) . El examen con el microscopio electrónico de APV negativamente manchado revela, viriones pleomórficos, algunas veces esféricos, que varían de 80 a 200 nm de diámetro con largos filamentos que varían de 1000 a 2000 nm de longitud (Collins and Gough, 1988, J. Gen. Virol. 69:909-916). La envoltura está hecha de una membrana tachonada con púas de 13 a 15 nm de longitud. La nucleocapside es helicoidal, de 14 nm de diámetro y tiene separación de 7 nm. El diámetro de la nucleocapside es más pequeña que aquella del género Paramixovirus y orbilivirus, que usualmente tienen diámetros de aproximadamente 18 nm. La infección del neumovirus aviar es una enfermedad que emerge en E.U.A a pesar de su presencia también en el mundo en aves de corral por muchos años. En Mayo de 1996, una enfermedad respiratoria de pavos altamente contagiosa apareció en Colorado, y subsecuentemente se aisló un APV en The Nacional Veterinary Services Laboratory (NVSL) en Ames, Iowa (Senne et al., 1997, Proc . 134th Ann. Mtg., AVMA, pp. 190) . Antes de esta fecha, los Estados unidos y Canadá se consideraron libres del neumovirus aviar (Pearson et al., 1993, En: Newly Emerging and Re-emerging Avian Diseases: Applied Research and Practical Applications for Diagnosis and Control, pp. 78-83, Heckers and Myers, 1993, Vet. Rec . 132:172) . A principios de 1997, se detectó la presencia del APV de manera sexológica en pavos en Minnesota. Con el tiempo se hizo la primera diagnosis confirmada, las infecciones del APV ya se habían expandido por muchas granjas. La enfermedad se asocio con signos clínicos en la zona respiratoria superior, ojos espumosos, descarga nasal e hinchamiento de los tejidos. Estos se exacerban por infecciones secundarias. Morbosidad en aves infectadas puede ser tan alta como el 100%. La mortalidad puede variar de 1 a 90% y es más alta en pollos de seis a doce semanas de edad. El neumovirus aviar se trasmite por contacto . Descarga nasal, movimiento de aves contaminadas, agua contaminada, equipo contaminado; camiones con alimento contaminado y actividades de carga externa pueden contribuir a la transmisión del virus . Pavos recuperados se consideran como portadores. Ya que se muestra infectado el epitelio del oviducto por el virus de los pavos en postura y porgue se ha detectado el APV en pollos jóvenes, la transmisión por los huevos se considera una posibilidad. Una porción significativa de la enfermedad respiratoria humana es causada por los miembros de las subfamilias virales Paramixovirinae y Pneumovirinae, todavía sigue habiendo una necesidad por una vacuna efectiva para conferir protección contra una variedad de virus que resultan en la infección de la zona respiratoria. La citación o la discusión de una referencia adjunta no se interpreta como una admisión de que tal es arte previo a la actual invención. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere al ADNc y al ARN del virus de parainfluenza recombinante que pueden diseñarse por ingeniería para expresar productos de gen no nativo o heterólogo, en particular, para expresar péptidos y polipéptidos antigénicos. En una modalidad, la presente invención se refiere a virus de parainfluenza humana o bovina recombinante que se diseñan por ingeniería para expresar antígenos heterologos o fragmentos inmunogénicos y/o antigénicos de antígenos heterologos. En otra modalidad de la invención, los virus de parainfluenza humana o bovina recombinante se diseñan por ingeniería para expresar secuencias que son no nativas al genoma del PIV, que incluyen secuencias de nucleótidos del PIV mutadas . En particular, la invención se refiere al virus de tipo 3 de parainfluenza bovina de la cepa de ansas recombinante además de moléculas de ADNc y ARN codificadas por los mismos. La presente invención también se refiere a PIV recombinante que contiene modificaciones que resultan en virus quiméricos con fenotipos más convenientes para usarse en formulaciones de vacunas . La presente invención proporciona por primera vez un PIV quimérico formulado como una vacuna que es capaz de conferir protección contra varias infecciones virales, en particular, virus que resultan en infecciones de la zona respiratoria. En una modalidad específica, la presente invención proporciona una vacuna que es capaz de conferir protección contra la parainfluenza, influenza o infección viral sincitial respiratoria. La presente invención proporciona para la primera vez una vacuna que es capaz de conferir protección contra la infección del metaneumovirus en un huésped mamífero. De acuerdo con la presente invención, un virus recombinante es uno derivado de un virus de parainfluenza bovino o un virus de parainfluenza humano que se codifica por secuencias genomitas nativas o endógenas o secuencias genomitas no nativas. De acuerdo con la invención, una secuencia no nativa es una que es diferente de la secuencia genomica endógena o nativa debido a una o más mutaciones, que incluyen, pero no se limitan a, mutaciones, rearreglos, inserciones, deleciones o eliminaciones, etc., a la secuencia genomica que puede o no resultar en un cambio fenotipico. De acuerdo con la presente invención, un virus quimérico de la invención es un bPIV o hPIV recombinante que comprende además una o más secuencias de nucleótidos heterólogos . De acuerdo con la invención, un virus quimérico puede codificarse mediante una secuencia de nucleótidos en la que las secuencias de nucleótidos se han remplazado con secuencias de nucleótidos heterólogos . La presente invención también se refiere a virus y vectores virales de parainfluenza recombinante diseñados por ingeniería que codifican combinaciones de secuencias eterólogas que codifican productos del gen, que incluyen pero no se limitan a, genes de diferentes cepas de PIV, virus de parainfluenza, virus sincitial respiratorio, metaneumovirus de mamífero (por ejemplo, metaneumovirus humano) , neumovirus aviar, sarampión, paperas, otros virus, patógenos, genes celulares, antígenos tumorales, o combinaciones de los mismos. Además, la invención se refiere a virus de parainfluenza recombinante diseñados por ingeniería que contienen una secuencia de nucleótidos derivada de un neumovirus en combinación con una secuencia de nucleótido derivada de un virus sincitial respiratorio, y además en combinación con una secuencia de nucleótido derivado de un virus de parainfluenza humano. La invención también abarca vectores de parainfluenza recombinante y virus que se diseñan por ingeniería para codificar genes de diferentes especies y cepas del virus de parainfluenza, que incluyen los genes F y HN del PIV3 humano.
En una modalidad, el vector PIV de la invención se diseña por ingeniería para expresar una o más secuencias heterologas, en donde las secuencias heterologas productos del gen que son preferiblemente productos de gen antigénicos. En una modalidad preferida, el vector PIV de la invención expresa una, dos o tres secuencias heterologas que codifican polipéptidos y péptidos antigénicos. En algunas modalidades, las secuencias heterologas se derivan de los mismos virus o de diferentes virus. En una modalidad preferida, las secuencias heterologas codifican productos de gen heterólogos que son polipéptidos antigénicos de otras especies de PIV, tal como un PIV humano, una cepa mutante de PIV, o de otro virus de ARN de cepa negativa, que incluye pero no se limita a, virus de influenza, virus sincitial respiratorio (hMPV) y neumovirus aviar. En una modalidad, la secuencia heteróloga codifica un fragmento inmunogenico y/o antigénico de un producto de gen heterólogo.
En una modalidad preferida, el PIV recombinante es un PIV bovino de tipo 3 , o un PIV humano de tipo 3 atenuado . En una modalidad, las secuencias que codifican la proteina de fusión (F) , la glicoproteína hemaglutinina (HN) , u otros genes no esenciales del genoma del PIV se eliminan y se sustituyen por secuencias antigénicas heterólogas . En otra modalidad aún, el genoma del PIV contiene mutaciones o modificaciones, además de las secuencias de nucleótidos heterólogos , que resultan en un virus quimérico que tiene un fenotipo que es más conveniente usar en formulaciones de vacunas, por ejemplo. , un fenotipo atenuado o un fenotipo con antigenicidad reforzada. En una modalidad específica, las secuencias de nucleótidos heterólogos a insertarse en el genoma del PIV se deriva de las secuencias de nucleótidos que codifican una proteína F, una proteína G, o una proteína HN. En ciertas modalidades, la secuencia de nucleótido a insertarse codifica una proteína F quimérica, una proteína G quimérica, o una proteína HN quimérica. En una modalidad específica, la proteína F comprende un ectodominio de una proteína F de un metaneumovirus, un dominio de transmembrana de una proteína F de un virus de parainfluenza, y un dominio lumínal de una proteína F de un virus de parainfluenza . En ciertas modalidades, las secuencias de nucleótidos a insertarse codifica una proteína F, en donde el domino de la trasmembrana de la proteína F se elimina de modo que se exprese una proteína soluble F.
En otra modalidad específica, la invención proporciona un virus quimérico que comprende un genoma del PIV que comprende una secuencia de nucleotidos heteróloga derivada de un metaneumovirus. En una modalidad específica, el virus de PIV, es un virus de tipo 3 de parainfluenza bovino de la cepa de Kansas . En otras modalidades, el virus de PIV, es un virus de parainfluenza humano con un fenotipo atenuado. En otras modalidades más, la invención proporciona un virus de parainfluenza bovino quimérico de tipo 3/virus de parainfluenza humano diseñados por ingeniería para contener genes F y H de parainfluenza humano en una cadena principal de parainfluenza de bovino. El virus quimérico puede además comprender una secuencia de nucleotidos heteróloga derivada de un metaneumovirus, y/o comprender además una secuencia de nucleotidos heteróloga derivada de un virus sincitial respiratorio . En ciertas modalidades, el virus de la invención comprende, secuencias de nucleotidos heterólogas derivadas de por lo menos dos diferentes genes de un metaneumovirus . En una modalidad específica, la secuencia heteróloga se deriva de un metaneumovirus, por ejemplo, neumovirus aviar y metaneumovirus humano. De manera más específica, la secuencia heteróloga se deriva de un neumovirus aviar, que incluye neumovirus aviar de tipo A, B, C, o D, preferiblemente C.
La presente invención también proporciona preparaciones de vacunas y composiciones inmunogénicas que comprenden PIV quimérico que expresa una o más secuencias antigénicas heterólogas . En una modalidad específica, la presente invención proporciona vacunas multivalen es , que incluyen vacunas bivalentes y trivalentes. Las vacunas multivalentes de la invención pueden administrarse en la forma de un vector de PIV que expresa cada uno secuencias antigénicas heterólogas o dos o más vectores de PIV que codifican cada uno diferentes secuencias antigénicas heterólogas. En una modalidad, la preparación de la vacuna de la invención comprende PIV quimérico que expresa uno, dos o tres polipéptidos heterólogos, en donde los polipéptidos heterólogos pueden codificarse por secuencias derivadas de una cepa del mismo virus, cepas diferentes del mismo virus, o virus diferentes. Preferiblemente, las secuencias antigénicas heterólogas se derivan de un virus de ARN de cepa negativa, que incluye pero no se limita a, virus de influenza, virus de parainfluenza, virus sincitial respiratorio (RSV) , metaneumovirus de mamífero (por ejemplo, metaneumovirus humano (hMPV) ) , y neumovirus aviar (APV) . Las secuencias antigénicas heterólogas incluyen, pero no se limitan a, secuencias que codifican la proteína F o HM del virus de parainfluenza humano, la proteína F del RSV, la proteína HA del virus de influenza de tipo A, B, y C, y la proteína F de MPV humano y neumovirus aviar. Más preferiblemente, la preparación de la vacuna de la invención comprende virus quiméricos atenuados que son viables e infecciosos. En una modalidad preferida, el PIV recombinante, es un PIV de bovino de tipo 3, o una cepa atenuada de PIV humano . En una modalidad, la preparación de la vacuna comprende el virus quimérico de la presente invención, en donde el F, H , o algunos otros genes no esenciales del genoma del PIV han sido sustituidos o eliminados. En una modalidad preferida, la preparación de la vacuna de la presente invención se prepara mediante el diseño por ingeniería de una cepa del PIV con un fenotipo atenuado en un huésped previsto. En otra modalidad preferida, la preparación de la vacuna de la presente invención se prepara mediante el diseño por ingeniería de una cepa de PIV atenuada. En otra modalidad, la secuencia de nucleótidos heteróloga se agrega al genoma del PIV completo. En ciertas modalidades, el genoma del PIV se diseña por ingeniería de manera que las secuencias eterólogas se inserten en la posición uno, dos, tres o cuatro, cinco o seis de manera que las secuencias heterólogas se expresen como el primer, segundo, tercer, cuarto, quinto o sexto gen del genoma viral. En modalidades específicas, las secuencias heterólogas se insertan en la posición uno, dos o tres del genoma viral. En ciertas modalidades, se altera la región intergenica entre el extremo de la secuencia codificada de un gen heterologo insertado y el inicio de la secuencia de codificación del gen corriente abajo a una longitud deseable, que resulta en la expresión reforzada de la secuencia heteróloga o el crecimiento reforzado del virus quimérico. Alternativamente, la región intergenica se altera a una longitud deseable, con un potencial para alterar la expresión de la secuencia heteróloga o el crecimiento del virus recombinante o quimérico, por ejemplo, el fenotipo atenuado. En algunas modalidades, ambas, la posición de la inserción y la longitud de la región intergenica que flanquea una secuencia de nucleótidos heteróloga se diseñan por ingeniería para seleccionar un virus quimérico o recombinante con niveles deseables de expresión de la secuencia heteróloga y características de crecimiento viral deseable. En ciertas modalidades, la invención proporciona una formulación de vacuna que comprende el virus recombinante o quimérico de la invención y un excipiente aceptable farmacéuticamente. En modalidades específicas, la formulación de la vacuna se usa para modular la respuesta inmune de un sujeto, tal como un humano, un primate, un caballo, una vaca, una oveja, un cerdo, una cabra, un roedor o un sujeto de la especie aviar. En una modalidad más específica, la vacuna se usa para modular la respuesta inmune de un infante o un niño humano. En otra modalidad, la presente invención se refiere a formulaciones de vacunas para usos veterinarios . La . preparación de la vacuna de la invención puede administrarse sola o en combinación con otras vacunas u otros agentes profilácticos o terapéuticos. 3.1. CONVENCIONES Y ABREVIACIONES POI Punto de infección RSV Virus sincitial respiratorio SFM Medio libre de suero TCID50 Dosis contagiosa del cultivo de tejido al 50% Cuando se usa la posición con respecto al diseño por ingeniería de cualquier virus, esto se refiere a la posición del gen del genoma viral a transcribirse. Por ejemplo, Posición si un gen se localiza en la posición 1, éste es el primer gen del genoma viral a transcribirse; si un gen se localiza en la posición 2, éste es el segundo gen del genoma viral a transcribirse. Posición 1 de bPIV3, b/h La posición 104 del nucleótido del genoma, PIV3 y 0 alternativamente, la posición del primer derivados de gen del genoma viral a transcribirse. los mismos La posición 1774 del nucleótido del Posición 2 de genoma, 0 alternativamente, la posición bPIV3, b/h entre la primera y segunda estructura de PIV3 y lectura abierta del virus de parainfluenza derivados de nativo, 0 alternativamente, la posición los mismos del segundo gen del genoma viral a transcribirse . La posición 3724 del nucleótido del Posición 3 de genoma, 0 alternativamente, la posición bPIV3, b/h entre la segunda y la tercera estructura PIV3 y de lectura abierta del virus de derivados de parainfluenza nativo, 0 alternativamente, los mismos la posición del tercer gen del genoma viral a transcribirse. La posición 5042 del nucleótido del Posición 4 de genoma, 0 alternativamente, la posición bPIV3, b/h entre la tercera y la cuarta estructura de PIV3 y lectura abierta del virus de parainfluenza derivados de nativo, 0 alternativamente, la posición los mismos del cuarto gen del genoma viral a transcribirse La posición 6790 del nucleótido del Posición 5 de genoma, 0 alternativamente, la posición bPIV3, b/h entre la cuarta y la quinta estructura de PIV3 y lectura abierta del virus de parainfluenza derivados de nativo, 0 alternativamente, la posición los mismos del quinto gen del genoma viral a transcribirse La posición 8631 del nucleótido del Posición 6 de genoma, o alternativamente, la posición bPIV3, b/h entre la quinta y la sexta estructura de PIV3 y lectura abierta del virus de parainfluenza derivados de nativo, o alternativamente, la posición los mismos del sexto gen del genoma viral a transcribirse 4. DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Figura 1. Alineamientos en parejas de la secuencia de aminoácido de la proteína F del metaneumovirus humano con diferentes proteínas F a partir de diferentes neumovirus aviar. Se indican aminoácidos idénticos entre las dos secuencias mediante el símbolo de una letra para el aminoácido. Se indican intercambios de aminoácidos conservados entre las dos secuencias de aminoácidos por un signo ?,+" , y un espacio indica un intercambio de aminoácido no conservado. A) alineamiento de la proteína F metaneumoviral humana con la proteína F de un neumovirus aviar aislado de Pato de Mallard (85.6% de identidad en el ectodominio) . B) Alineamiento de la proteína F metaneumoviral humana con la proteína F de un neumovirus aviar aislado de Pavos (subgrupo B; 75% de identidad en el ectodominio) . Figura 2. Se amplificaron fragmentos de PCR de nt 5255 a nt 6255 derivados de tres diferentes aislados del virus quimérico b/h PIV3. Los fragmentos de ADN de 1 kb resultantes fueron digeridos con enzimas específicas para el gen F del PIV3 humano. Estas enzimas no cortan en el fragmento correspondiente de PIV3 bovino . El gel de agarosa al 1% muestra el fragmento no digerido (carriles 2, 5, y 6) y los fragmentos de Sacl o BglII digeridos (carriles 4, 6, y carriles 9, 10, y 11, respectivamente) . La muestra en el carril 10 no esta digerida, sin embargo, luego de una repetición de digestión con BglII, esta muestra se cortó (no se muestran datos) . Los carriles 1 y 8 muestran un marcador del tamaño del ADN. Figura 3. Se amplificaron fragmentos de PCR de nt 9075 a nt 10469 derivados de tres diferentes aislados del virus quimérico b/h PIV3. Los fragmentos de ADN de 1.4 kb resultantes fueron digeridos con enzimas específicas para el gen L de PIV3 bovino. Estas enzimas no cortan en el fragmento correspondiente de PIV3 humano. El gel de agarosa al 1% muestra el fragmento de 1.4 kb no digerido (carriles 2, 5, y 8) . Los fragmentos de ADN más pequeños producidos mediante digestión con BamHl y Pvull se muestran en los carriles 3, 4, 6, 7, 9 y 10) . El carril 1 muestra un marcador de tamaño de ADN. Figura . Se demuestran seis construcciones que incluyen el vector bPIV3/hPIV3 y ADNc G o RSV F transportados con vector b/h PIV3. El gen F y el gen HN del PIV3 bovino se eliminan y remplazan con genes F y HN del PIV3 humano respectivamente . Los genes F o G del RSV se clonan ya sea en la posición 1 o en la posición 2. Todos los genes del RSV están enlazados a la región intergénica N-P de del bPIV3 con la excepción del Fl* (N-N) del RSV, que se continua por las secuencias más cortas de detención del gen bPIV3 N/inicio del gen N. Figura 5. El gen F o G del RSV transportado con vector b/h PIV3 exhibe un efecto de posición. (A) es un análisis de manchado Western de Usados de células infectadas con el virus quimérico. Se detectó la proteina F usando anticuerpos monoclonales (MAbs) contra la proteina F del RSV, y la proteína G se detectó usando anticuerpos policlonales (PAbs) contra la proteína G del RSV. Una banda de 50 kDa que representa el fragmento Fl se detectó en células infectadas con todos los virus quiméricos además del RSV de tipo nativo. Hubo una acumulación mayor de un fragmento F de 256 kDa en Usados de células infectadas de virus quiméricos comparados al RSV de tipo nativo. El experimento se hizo a una OI de 0.1, excepto que en el carril 1, se repitieron las infecciones por RSV Fl* N-N transportadas con vector b/h PIV3 a una MOI de 0.1 más alta. Se detectaron ambas, las formas inmadura y glicosilada de la proteína G del RSV que migró en aproximadamente 50kDa y 90kDa. (B) es un análisis de manchado Northern, que muestra que la trascripción de ARNm esta correlacionada con el resultado de la expresión de la proteína demostrada en la figura 5A. Se separaron cantidades iguales de ARN total en geles de agarosa al 1% que contienen formaldehído al 1% y se trasfirieron a membranas de nylon. Los manchados se hibridizaron con ribosondas etiquetadas con digoxigenina (DIG) -UTP sintetizadas mediante trascripción in Vitro usando un equipo de ARN DIG etiquetado. (C) - (D) son curvas de crecimiento de virus quiméricos que comprenden proteína F o G trasportadas con el vector b/h PIV3 en células Vero. Las células Vero crecieron a una confluencia del 90% y se infectaron a una MOI de 0.01 a 0.1. Las monocapas infectadas se incubaron a 37 °C. Las titulaciones de los virus en cada cosecha se determinaron mediante ensayos TCID50, que se ejecutaron por inspección visual por CPE que siguen de la incubación a 37 °C por 6 días. Figura 6. Las construcciones de la proteína fluorescente verde (eGFP) mejorada transportada con vector b/h PIV3. El gen del eGFP se introduce en el vector del b/h PIV3 de manera secuencial entre todos los genes de PIV3 (únicamente se muestran en la posición 1, 2, 3, y 4) . El gen del eGFP se enlazó a la región intergénica N-P del bPIV3. La construcción b/h GFP 1 aloja el cásete del gen eGFP en la posición 3" más próxima del genoma b/h PIV3. La construcción b/h eGFP 2 contiene el cásete del gen eGFP entre los genes N y P. La construcción b/h GFP 3 contiene el cásete del gen eGFP entre el gen P y M, y la construcción b/h GFP 4 contiene el gen eGFP entre M y F del b/h PIV3. Figura 7. Efecto posicional de las inserciones de proteina fluorescente verde (eGFP) mejorada en el genoma b/h PIV3. (A) Muestra la cantidad de células verdes producidas luego de infectar células Vero con eGFP 1, 2, o 3 transportada con vector b/h PIV3 a una MOI de 0.1 y MOI de 0.01 por 20 horas. (B) es un análisis de manchado Western de Usados de células infectadas . Los manchados se prueban con un M&b de GPF además de con un PAb de PIV3. El anticuerpo de PIV3 también se utilizo para mostrar que las manchas tenían la misma carga de volumen. (C) son curvas de crecimiento de construcciones de GFP trasportadas con el vector b/h PIV3 (en la posición 1, 2, y 3) en células Vero. Figura 8. Construcciones del gen F del RSV trasportado con el vector b/h PIV3 con diferentes regiones intergénicas, las tres construcciones RSV Fl* N-N, RSV F2 N-P, y RSV Fl N-P son los mismos que el RSV F* (N-N), RSV F2 , y RSV Fl en la figura 4 respectivamente. La distancia entre la secuencia de inicio del gen N y el codon de inicio en la traslación del gen N en la RSV Fl* N-N es únicamente de 10 (nts) de largo. En contraste, esta distancia es de 86 nts de largo en la construcción de RSV F2. El RSV Fl* N-N también utiliza la secuencia de inicio del gen N en lugar de la secuencia de inicio del gen P como se hace en la construcción RSV F2. Figura 9. La longitud y/o naturaleza de la región intergénica corriente abajo del gen del RSV insertado tiene un efecto en la réplica del virus. (A) análisis de manchado Western de la expresión de la protelna F del RSV en virus quiméricos. Los manchados se probaron con anticuerpos monoclonales contra la proteína F del RSV. Los niveles de protelna Fl expresados por la construcción del RSV Fl y medidos a 24 y 48 horas después de la infección fueron cercanos a los niveles observados para la construcción del RSV F2 , pero mucho más altas que aquellos de la construcción del RSV Fl N-N. (B) son curvas de crecimiento multiciclo que comparan la cinética de la replica del virus de las construcciones RSV Fl, RSV Fl N-N, y RSV F2 en células Vero a una MOI de 0.1. Titulaciones de los virus para cada ocasión de cosecha se determinaron mediante ensayos de placas, que se ejecutaron mediante inmunoteñido con antisuero policlonal de RSV para la cuantificacion después de 5 días de incubación. Figura 10. Construcciones de RSV F y hMPV F transportados con el vector b/h PIV3 trivalente. Se muestran aquí, dos genomas de virus, que comprenden cada uno un vector de b/h PIV3 quimérico y una primer secuencia heteróloga derivada de un gen F de metaneumovirus y una segunda secuencia heteróloga derivada del gen F del virus sincitial respiratorio. Se ha amplificado el virus con cualquiera de las construcciones en células Vero. El virus diseñado por ingeniería como se describe puede usarse como una vacuna trivalente contra la infección del virus de parainfluenza, la infección de metaneumovirus y la infección del virus sincitial respiratorio . Figura 11. Una construcción que aloja dos genes RSV F. Esta construcción puede usarse para determinar la cinética de crecimiento del virus, para la producción de proteína RSV F, y para la replica e inmunogenicidad en hámsteres . Figura 12. Las construcciones de hMPV F transportados con el vector b/h PIV3 quimérico. El gen F de metaneumovirus humano (hMPV) se insertó en la posición 1 o en la posición 2 del genoma del b/h PIV3. El cásete del gen del hMPV se aloja en la región intergénica bPIV3 N-P. Figura 13. Ensayos de inmunoprecipitación y réplica del gen F del hMPV trasportado con el vector b/h PIV3 (en la posición 1 o en la posición 2) . (A) muestra la inmunoprecipitación de la proteína F del hMPV usando un antisuero anti-hMPV de conejillo de indias o humano. Se observó una banda especifica que migra a aproximadamente 80kDa en los lisados de F2 de hMPV y Fl de hMPV transportados con el vector b/h PIV3. Este tamaño corresponde a la proteína precursora F, F0. También se observaron bandas no específicas de diferentes tamaños en el b/h PIV3 y simulan los carriles de control. (B) muestra las curvas de crecimiento que se ejecutaron para determinar la cinética de la replica del virus de F2 del h/b PIV3/hMPV y compara éstas a aquellas observadas para el F2 del b/h PIV3 y b/h PIV3/RSV en células Vero a una MOI de 0.1. (C) - (D) son curvas de crecimiento que se ejecutaron para determinar la cinética de la réplica del virus de Fl del b/h PIV3/hMPV para compararlo a aquellos observados para F2 de b/h PIV3/hMPV y b/h PIV3 en células Vero a un MOI de 0.01 o 0.1. Figura 14. (A) y (B) : Un diagrama de los genomas de AR virales de los candidatos de vacunas de RSV F trasportados con el vector b/h PIV3. El b/h PIV3/RSV F2 contiene el gen F del RSV nativo en la posición 2 del genoma del PIV3 , mientras que el F2 del b/h PIV3/sol RSV expresa un RSV F soluble que carece de los dominios de la tras-membrana y el citosólico. La eliminación del dominio de la tras-membrana y la cola citosólica de la proteína F del RSV se complementó mediante la eliminación de 50 aminoácidos en el C terminal. Las secuencias de inicio del gen y de paro del gen del PIV3 del cásete del gen de sol RSV F no se alteraron de manera que los casetes del gen RSV F2 y sol RSV F2 fueron idénticos con la excepción de la deleción de 50 aminoácidos. Se esperaba que la proteína de sol RSV F no se pudiera incorporar a la envoltura del virión. Figura 15. b/h PIV3/h PV Fl y b/h PIV3/hMPV F2 inmunoteñidos . (A) el virus b/h PIV3/hMPV Fl se diluyó y utilizo para infectar células Vero subconfluentes . Las células infectadas se superpusieron con medio optiME que contiene gentamicina y se incubaron a 35 °C por 5 días. Las células se fijaron y se inmunotiñeron en suero anti-hMPV de conejillo de indias. La expresión de hMPV F se visualizó mediante el desarrollo de color específico en la presencia del sistema de sustrato AEC. (B) los virus b/h PIV3/hMPV F2 se diluyeron y usaron para infectar células Vero. Las células infectadas se sobrepusieron con metil celulosa al 1% en medio EMEM/L-15 (JHR-Biosciences ; Lenexa, KS) . Las células se incubaron, fijaron y entonces se inmunotiñeron con suero anti-hMPV de conejillo de indias. El suero anti-hMPV de conejillo de indias es específico para la proteína hMPV 001. Figura 16. Fraccionamiento de virión de los genes del RSV trasportados con el vector b/h PIV3 en gradientes de sucrosa. Estos experimentos de la serie investigan si las proteínas del RSV se incorporaron en el virión del b/h PIV3. (A) muestra el gradiente de control de RSV F libre (generado en baculovirus y terminalmente truncado en C) . La mayoría de RSV F libre estuvo presente en fracciones de 3 , 4, 5, y 6. (B) muestra que la concentración más alta de viriones del RSV se observaron en fracciones de 10, 11, y 12. Las fracciones del RSV se probaron con antisuero policlonal del RSV además de Ab del RSV F. Las fracciones que contienen las cantidades más grandes de viriones del RSV también mostraron la señal más fuerte para el RSV F, sugiriendo que la proteína F del RSV esta co-migrada y asociada con el virión del RSV. La última figura en (B) muestra también que las fracciones 10, 11, y 12 presenta la titulación de virus más alto mediante ensayo con placa. (C) los viriones del b/h PIV3 pueden ser más pleiomórficos y de esta manera la extensión de las fracciones máximas que contienen los viriones del b/h PIV3 fueron más amplios. (D) las fracciones gradiente de sucrosa del b/h PIV3/RSV F2 se analizaron con ambas, un antisuero policlonal de PIV y un RSV F MAb. Las fracciones que contienen la mayoría de los viriones fueron las fracciones 11, 12, 13, y 14 como se muestra por Western que utiliza el antisuero del PIV3. De manera correspondiente, estas fueron también las fracciones que presentaron las cantidades más altas de la proteina F del RSV. Algo de la RSV F libre también estuvo presente en las fracciones 5 y 6. Las fracciones 11, 12, 13 y 14 exhibieron las titulaciones de virus máximas. (E) las fracciones que contienen la mayoría de los viriones del b/h PIV3/RSV G2 (9, 10, 11, y 12) también mostraron la señal más fuerte para la proteína G del SV. Nuevamente, estas fueron las fracciones con os títulos de virus más altas . Figura 17. Un esbozo esquemático del diseño del estudio del primate de AGM a partir del día 14 al día 56. El suero se colectó en los puntos indicados de tiempo (flecha) . Se indican vacunaciones iniciales en el día 1 y administración del desafío del RSV en el día 28. Figura 18. Efectos de la MOI en titulaciones de virus infecciosos. Se incubaron cultivos a 37 + 1°C y C02 al 5 ± 1% después de la infección. Figura 19. Efectos de POI y temperatura de pos-infección en titulaciones de virus infecciosos . Se infectaron cultivos de células Vero con el Virus b/h PIV3/RSV F2 a un MOI de 0.01 a ya sea (a) tres días después de la sembradura (l.lxlO7 células/frasco), o (b) 5 días después de la siembnra (3.3xl07 células/frasco) . Figura 20. Efectos de la adición de suero antes de la infección en títulos de virus infecciosos. Se cultivaron células Vero por 3 días antes de la infección, en una de las siguientes condiciones: (a) OPTI PRO SFM suplementado con 4mM de glutamina, (b) OPTI PRO SFM suplementado con 4mM de glutamina y suero al 0.5% (v/v) , y (c) OPTI PRO SFM suplementado con 4 mM de glutamina y suero al 2% (v/v) . Antes de la infección, el medio de cultivo gastado se elimino y las células se aclararon con DPBS . Los cultivos se infectaron con el virus b/h PIV3/RSV F2 a una MOI de 0.001 y se incubaron a 33 ±1°C, 5 ±1% de C02 después de la infección. Figura 21. Perfil de expresión de la proteína viral del PIV3 HN. Las células se fijaron a varios tiempos después de la infección (36 hpi, 60 hpi, 88 hpi, 112 hpi, 130 hpi , y 155 hpi, respectivamente) y se incubaron con un anticuerpo monoclonal del PIV-3 HN de origen de ratón seguido de un anticuerpo anti-ratón de cabra fluorescente etiquetado. Figura 22. Perfil de expresión de la proteina viral del PIV3 F. Las células se fijaron a varios tiempos después de la infección (36 hpi, 60 hpi, 88 hpi, 112 hpi, 130 hpi, y 155 hpi, respectivamente) y se incubaron con un anticuerpo monoclonal del PIV-3 F de origen de ratón seguido de un anticuerpo anti-ratón de cabra fluorescente etiquetado. Figura 23. Perfil de expresión de la proteína viral del PIV3 F. Las células se fijaron a varios tiempos después de la infección (36 hpi, 60 hpi, 88 hpi, 112 hpi, 130 hpi, y 155 hpi, respectivamente) y se incubaron con un anticuerpo monoclonal del RSV F de origen de humano seguido de un anticuerpo anti-humano de cabra fluorescente etiquetado. Figura 24. Efectos de la adición de sueros antes de la infección en titulaciones de virus infecciosos . Las células Vero se cultivaron en series duplicadas de botellas de rodillo por 3 días antes de la infección en una de las siguientes condiciones: (a) OPTI PRO SFM suplementado con 4mM de glutamina, (b) OPTI PRO SFM suplementado con 4m de glutamina y suero al 5% (v/v) , y (c) OPTI PRO SFM suplementado con 4 mM de glutamina y suero al 2% (v/v) . 5. DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a construcciones de ADNc y ARN de parainfluenza recombinante, que incluye pero no se limita a, construcciones de ADNc y ARN del PIV humano y bovino, que pueden usarse para expresar secuencias heterologas o no nativas . De acuerdo con la presente invención, un virus recombinante es uno derivado de un virus de parainfluenza de bovino o un virus de parainfluenza de humano que se codifica mediante secuencias endógenas o genomicas nativas o secuencias genómicas no nativas. De acuerdo con la invención, una secuencia no nativa es una que es diferente de la secuencia nativa o genómica endógena debido a una o más mutaciones, que incluyen pero no se limitan a, mutaciones de punto, rearreglos o cambios, inserciones, eliminaciones o deleciones, etc., a la secuencia genómica que puede o no puede resultar en un cambio fenotipico . De acuerdo con la presente invención, un virus quimérico de la invención es un bPIV o hPIV recombinante que comprende además una o más secuencias de nucleótidos heterologas . De acuerdo con la invención, un virus quimérico puede codificarse mediante una secuencia de nucleótidos en la que las secuencias de nucleótidos heterologas se han agregado al genoma o en la que las secuencias de nucleótidos se han remplazado con secuencias de nucleótidos heterologas. Estos virus y productos de expresión recombinante y quimérico pueden usarse como vacunas convenientes para la administración a humanos o animales. Por ejemplo, los virus quiméricos de la invención pueden usarse en formulaciones de vacunas para conferir protección contra el neumovirus, virus sincitial respiratorio, virus de parainfluenza o infección del virus de parainfluenza.
En una modalidad, la invención se refiere a construcciones de ADNc y ARN del PIV que se derivan de variantes de PIV humano y bovino y que se diseñan por ingeniería para expresar uno, dos, o tres secuencias heterologas, preferiblemente genes heterólogos que codifican antígenos extraños y otros productos a partir de una variedad de patógenos, genes celulares, antígenos de tumor y virus. En particular, las secuencias heterologas se derivan de morbilivirus o un virus de ARN de hebra negativa, que incluye pero no se limita a, virus de influenza, virus sincitial respiratorio (RSV) , metaneumovirus de mamífero (por ejemplo, variantes Al, A2 , Bl, y B2 de metaneumovirus humano), y subgrupos A, B, C, y D de neumovirus aviar. El MPVs de mamífero puede ser un MPV de mamífero de variante Al, A2 , Bl, y B2. Sin embargo, el MPVs de mamífero de la presente invención puede abarcar variantes de MPV adicionales a identificarse aún, y no se limita a las variantes Al, A2, Bl, y B2. En otra modalidad de la invención, las secuencias heterólogas son secuencias de PIV no nativas, que incluyen secuencias de PIV mutadas. En algunas modalidades, las secuencias heterólogas se derivan del mismo o de diferentes virus . En una modalidad específica, el virus de la invención es un PIV recombinante que comprende secuencias de nucleótidos heterólogas derivadas de metaneumovirus humano o neumovirus aviar. Las secuencias heterólogas a insertarse en el genoma del PIV incluyen, pero no se limitan a, secuencias que codifican los genes F, G, y HN de variantes Al, A2, Bl o B2 de metaneumovirus humano, secuencias que codifican los genes F, G, y HN de neumovirus aviar de tipo A, B, C, o D, y fragmentos inmunogénicos y/o antigénicos de los mismos. En ciertas modalidades, la secuencia de nucleótido heteróloga se agrega al genoma viral. En modalidades alternativas, la secuencia de nucleótido heteróloga se intercambia por una secuencia de nucleótido endógena. La secuencia de nucleótido endógena puede agregarse o insertarse en varias posiciones del genoma del PIV, por ejemplo, en la posición 1, 2, 3, 4, 5, y 6. En una modalidad preferida, la secuencia de nucleótido heteróloga se agrega o inserta en la posición 1. En otra modalidad preferida, la secuencia de nucleótido heteróloga se agrega o inserta en la posición 2. Y en otra modalidad preferida, la secuencia de nucleótido heteróloga se agrega o inserta en la posición 3. Insertar o agregar secuencias de nucleotidos heterólogas en las posiciones de numero inferior generalmente resulta en la expresión más fuerte de la secuencia de nucleotidos heteróloga compara a la inserción en posiciones de números más altos. Estos se debe a un gradiente transcripcional que ocurre a través del genoma del virus. Sin embargo, la eficiencia de la replica del virus debe también considerarse. Por ejemplo, en el virus quimérico b/h PIV3 de la invención, la inserción de un gen heterólogo en la posición 1 retrasa la cinética de replica in Vitro y a menor grado también in vivo (vea la sección 8, ejemplo 3 y figura 5 además de la sección 26, ejemplo 21) . Por lo tanto, insertar secuencias de nucleotidos heterólogas en posiciones de números inferiores es la modalidad preferida de la invención si se desea fuerte expresión de la secuencia de nucleotidos heteróloga. Más preferiblemente, se inserta una secuencia heteróloga en la posición 2 de un genoma b/h PIV3 si se desea expresión fuerte de la secuencia heterologa. (Vea la sección 5.1.2. infra y la sección 8, ejemplo 3) . En algunas otras modalidades, el genoma del PIV recombinante o quimérico se diseña por ingeniería de manera que se altera la región intergénica entre el extremo de la secuencia de codificación del gen heterologo y el inicio de la secuencia de codificación del gen corriente abajo. En otras modalidades más, el virus de la invención comprende un genoma del PIV recombinante o quimérico diseñado por ingeniería de manera que la secuencia de nucleotidos heterólogos se inserta en la posición seleccionada del grupo que consiste de las posiciones 1, 2, 3, 4, 5, y 6 y la región intergénica entre la secuencia de nucleotidos heterologa y el próximo gen corriente abajo se altera. Pueden utilizarse ensayos apropiados para determinar el mejor modo de inserción (por ejemplo., qué posición insertar, y la longitud de la región intergénica) para lograr niveles apropiados de expresión de gen y características de crecimiento viral . Para detalles vea la Sección 5.1.2., infra. En ciertas modalidades, el virus quimérico de la invención contiene dos diferentes secuencias de nucleotidos heterólogas . Las secuencias de nucleotidos heterólogas diferentes pueden insertarse en varias posiciones del genoma del PIV. En una modalidad preferida, una secuencia de nucleotidos heterologa se inserta en la posición 1 y otra secuencia de nucleotidos heterologa se agrega o inserta en la posición 2 o 3. En otras modalidades de la invención, se insertan secuencias de nucleotidos heterólogas en posiciones numeradas más altas del genoma del PIV. De acuerdo con la presente invención, la posición de la secuencia heterologa se refiere al orden en el que se transfieren las secuencias a partir del genoma viral, por ejemplo, una secuencia heterologa en la posición 1 es la primer secuencia de gen a transcribirse a partir del genoma. En ciertas modalidades de la invención, las secuencias de nucleotidos heterólogas a insertarse en el genoma del virus de la invención se deriva de un virus de ARN de hebra negativa, que incluye pero no se limita al, virus de influenza, virus de parainfluenza, virus sincitial respiratorio, metaneumovirus de mamífero, y neumovirus aviar. En una modalidad especifica de la invención, la secuencia de nucleotidos heterologa se deriva de un metaneumovirus aviar. En otra modalidad especifica, la secuencia de nucleotidos heterologa se deriva de un neumovirus aviar. De manera más específica, las secuencia de nucleotidos heterólogos de la invención codifica un gen F, G o SH o una porción del mismo de un metaneumovirus humano o aviar. En modalidades específicas, las secuencias de nucleotidos heterólogos pueden ser cualquiera de SEQ ID N0:1 a través de SEQ ID N0:5, SEQ ID NO: 14, y SEQ ID NO: 15 (Vea tabla 16). En ciertas modalidades específicas, las secuencias de nucleotidos codifica una proteína de cualquiera de SEQ ID NO: 6, a través de SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 16 y SEQ ID NO : 17 (Vea tabla 16) . En ciertas modalidades específicas, las secuencias de nucleotidos codifica una proteína de cualquiera de SEQ ID NO: 314 a través de 389. En modalidades específicas de la invención, una secuencia de nucleotidos heterólogos de la invención se deriva de un neumovirus aviar de tipo A. En otras modalidades específicas de la invención, una secuencia de nucleotidos heterólogos de la invención se deriva de un neumovirus aviar de tipo B. Aún en otras modalidades de la invención, una secuencia de nucleotidos heterólogos de la invención se deriva de un neumovirus aviar de tipo C. Análisis filogenéticos muestran que el tipo A y el tipo B están más cercanamente relacionados uno al otro que ellos con relación al tipo C (Seal, 2000, Animal Health res. Rev. l(l):67-72). El tipo A y el tipo B se encuentran en Europa por lo que el tipo C se aisló primero en E. U. En otra modalidad de la invención, la secuencia de nucleotidos heterólogos codifica un polipéptido quimérico, en donde el ectodominio contiene secuencias antigénicas derivadas de un virus diferente a la cepa del PIV a partir de la cual se deriva la estructura principal del vector, y los dominios de la trasmembrana y luminal se derivan de las secuencias del PIV. El virus quimérico resultante impartiría antigenicidad del virus de ARN de hebra negativa de la opción y tendría un fenotipo atenuado. En una modalidad específica de la invención, la secuencia de nucleótidos heterólogos codifica una proteína F quimérica. Particularmente, el ectodominio de la proteína F quimérica es el ectodominio de un metaneumovirus , de modo que un metaneumovirus humano o neumovirus aviar, y el dominio de la trasmembrana además del dominio del luminal son los dominios de la trasmembrana y el luminal de un virus de parainfluenza, tal como un virus de parainfluenza humano o bovino. Mientras que no se limita por ninguna teoría, la inserción de una proteína F quimérica puede además atenuar el virus en un huésped pretendido pero retiene la antigenicidad de la proteína F atribuida por su ectodominio. Los virus quiméricos de la invención pueden usarse en formulaciones de vacunas para conferir protección contra varias infecciones, que incluyen pero no se limitan a, infección por neumovirus, infección por virus sincitial respiratorio, infección por virus de parainfluenza, infección por virus de influenza, o una combinación de las mismas. La presente invención proporciona preparaciones de vacunas que comprenden PIV quimérico que expresa una o más secuencias antigénicas heterólogas, que incluyen vacunas bivalentes y trivalentes . Las vacunas bivalentes y trivalentes de la invención pueden administrarse en la forma de un vector de PIV que expresa cada uno secuencias antigénicas heterólogas o dos o más vectores de PIV que codifican cada uno diferentes secuencias antigénicas heterólogas. Preferiblemente, las secuencias antigénicas heterólogas se derivan de un virus de ARN de hebra negativa, que incluye pero no se limita a, virus de influenza, virus de parainfluenza, virus sincitial respiratorio (RSV) , metaneumovirus de mamífero (por ejemplo, metaneumovirus aviar) y neumovirus aviar. Así, los viriones quiméricos de la presente invención pueden diseñarse por ingeniería para crear, por ejemplo, vacunas anti-influenza humana, vacunas anti-parainfluenza humana, vacunas anti-RSV humana y vacunas anti-metaneumovirus humana. Preferiblemente, la preparación de la vacuna de la invención comprende virus quiméricos atenuados que son viables e infecciosos . La preparación de la vacuna de la invención puede administrarse sola o en combinación con otras vacunas u otros agentes profilácticos o terapéuticos. La presente invención también se refiere al uso de vectores virales y virus quiméricos para formular vacunas contra un amplio gama de virus y/o antígenos que incluyen antígenos tumorales . Los vectores virales y virus quiméricos de la presente invención pueden utilizarse para modular un sistema inmune del sujeto mediante la estimulación de la tolerancia a un antígeno. Como se utiliza aquí, un sujeto se refiere a un humano, un primate, un caballo, una vaca, una oveja, un cerdo, una cabra, un perro, un gato, un roedor y un miembro de la especie aviar. Cuando se liberan antígenos de tumor, la invención puede usarse para tratar sujetos que tienen enfermedad favorable a la inmuno-respuesta mediada por el rechazo, tal como tumores no sólidos o tumores sólidos de tamaño pequeño. También se contempla que la liberación de antígenos de tumores mediante los vectores virales y virus quiméricos descritos aquí serán útiles para el tratamiento subsecuente a la eliminación de tumores sólidos grandes. La invención también puede usarse para tratar sujetos que se sospecha que tienen cáncer. La invención puede dividirse en las siguientes etapas solamente para el propósito de la descripción y no para a manera de limitación, (a) construcción de plantillas de DNAc y ARN; (b) expresión de productos de gen heterologos que usan plantillas de DNAc y ARN recombinante; y (c) rescate de los genes heterologos en partículas de virus recombinante. 5.1. CONSTRUCCIÓN DEL DNAc Y ARN RECOMBINANTE La presente invención abarca virus recombinantes o quiméricos codificados mediante vectores virales derivados de los genomas del virus de parainfluenza, que incluyen ambos, virus de parainfluenza bovino y virus de parainfluenza de mamífero. De acuerdo con la presente invención, un virus recombinante es uno derivado de un virus de parainfluenza bovino o un virus de parainfluenza de mamífero que se codifica mediante secuencias endógenas o genómicas nativas o secuencias genómicas no nativas. De acuerdo con la invención una secuencia no nativa es una que es diferente de la secuencia genómica nativa o endógena debido a una o más mutaciones, que incluyen pero no se limitan a, mutaciones de punto, cambios, inserciones, deleciones, etc. en la secuencia genómica que puede o no puede resultar en un cambio fenotípico. Los virus recombinantes de la infección, abarcan aquellos virus codificados mediante vectores virales derivados de los genomas del virus de parainfluenza, que incluyen ambos, virus de parainfluenza bovino y mamífero, y pueden o no pueden, incluir ácidos nucleicos que son no nativos al genoma viral . De acuerdo con la presente invención, un vector viral que se deriva del genoma de un virus de parainfluenza es uno que contiene una secuencia de ácido nucleico que codifica por lo menos una parte de un ORF de un virus de parainfluenza .
La presente invención también abarca virus recombinantes que comprenden un vector viral derivado de un genoma del PIV de bovino y/o mamífero que contiene secuencias que resultan en un virus que tiene un fenotipo más conveniente para usarse en formulaciones de vacunas, por ejemplo, fenotipo atenuado o antigenicidad reforzada. Las mutaciones y modificaciones pueden estar en regiones de codificación, en regiones intergenicas y en las secuencias delantera y trasera del virus . De acuerdo con la presente invención, los vectores virales de la invención se derivan del genoma de un virus de parainfluenza de mamífero, en particular un virus de parainfluenza de humano (hPIV) . En modalidades particulares de la invención, el vector viral se deriva del genoma de un virus de parainfluenza humano del tipo 3. De acuerdo con la presente invención, estos vectores virales pueden o no incluir ácidos nucleicos que son no nativos al genoma viral . De acuerdo con la presente invención, los vectores virales de la invención se derivan del genoma de un virus de parainfluenza de bovino (bPIV) . En modalidades particulares de la invención, el vector viral se deriva del genoma del virus de parainfluenza bovino del tipo 3. De acuerdo a la presente invención, estos vectores virales pueden o no incluir ácidos nucleicos que son no nativos al genoma viral.
De acuerdo con la invención, un virus quimérico es un bPIV o hPIV recombinante que comprende además una secuencia de nucleótidos heterologos . De acuerdo con la invención, un virus quimérico puede ser codificado mediante una secuencia de nucleótidos en el que la secuencia de nucleótidos heterologos se ha agregado al genoma o en el que la secuencia de nucleótidos heterologos endógenos o nativos se ha remplazado con secuencias de nucleótidos heterologos. De acuerdo con la invención los virus quiméricos son codificados mediante vectores virales de la invención que comprende además una secuencia de nucleótidos heterologos. De acuerdo con la presente invención, un virus quimérico se codifica mediante un vector viral que puede o no incluir ácidos nucleicos que son no nativos al genoma viral. De acuerdo con la invención, un virus quimérico se codifica mediante un vector viral que al cual se ha agregado, insertado o sustituido secuencias de nucleótidos heterologos para secuencias nativas o no nativas.
Un virus quimérico puede ser de uso particular para la generación de vacunas recombinantes que protegen contra dos o más virus (Tao et al., J. Virol . 72, 2955-2961; Durbin et al., 2000, J. Virol. 74, 6821-6831; Skiadopolulos et al., 1998, J. Virol. 72, 1762-1768 (1998); Teng et al., 2000, J. Virol. 74, 9317-9321) . Por ejemplo, puede considerarse que un vector del virus hPIV o bPIV que expresa una o más proteínas de otro virus de AR de hebra negativa, por ejemplo, MPV o un vector de RSV que expresa una o más proteínas de MPV protegerá individuos vacunados con tal vector contra ambas infecciones del virus. Un intento similar puede considerarse para otros paramixovirus . Virus atenuados y de réplica defectuosa pueden ser de uso para propósitos de vacunación con vacunas en vivo como se ha sugerido para otros virus. (Vea, PCT WO 02/057302, at pp. 6 y 23, incorporada aquí como referencia) . De acuerdo con la presente invención, los heterólogos a incorporarse en los vectores virales que codifican los virus recombinantes o quiméricos de la invención incluyen secuencias obtenidas o derivadas a partir de diferentes cepas de metaneumovirus, cepas de neumovirus aviar y otros virus de ARN de hebra negativa, que incluyen, pero no se limitan, RSV, PIV, virus de influenza y otros virus que incluyen morbilivirus . En ciertas modalidades de la invención, los virus quiméricos o recombinantes de la invención se codifican mediante vectores virales derivados de genomas virales en donde una o más secuencias, regiones intergénicas , secuencias de términos o porciones o ORF total han sido sustituidas con una secuencia heteróloga o no nativa. En ciertas modalidades de la invención, los virus quiméricos de la invención se codifican mediante vectores virales derivados de genomas virales en donde una o más secuencias heterologas se han agregado al vector. Una modalidad específica de la presente invención es un virus quimérico que comprende una estructura principal codificada por secuencias de nucleótidos derivadas de un genoma de virus de parainfluenza . En una modalidad preferida, el genoma del PIV se deriva de PIV bovino, tal como la cepa del bPIV3 de Kansas, o de PIV humano. En una modalidad preferida, el genoma del PIV se deriva de la cepa del bPIV3 de Kansas, en la que las secuencias de nucleótidos del virus de parainfluenza bovino se han sustituido con secuencias heterologas o en las que las secuencias heterologas se han agregado al genoma del bPIV completo. Una modalidad específica más de la presente invención es un virus quimérico que comprende una estructura principal codificada por secuencias de nucleótidos derivadas del genoma de tipo 3 del virus de parainfluenza humano, en la que las secuencias de nucleótidos del virus de parainfluenza humano se han sustituido con secuencias heterologas o en la que las secuencias heterologas se han agregado al genoma del hPIV completo. Una modalidad específica adicional de la presente invención es un virus quimérico que comprende una estructura principal codificada por secuencias de nucleótidos derivadas de genomas de virus de parainfluenza bovino tal como la cepa del bPIV3 de Kansas, en las que (a) el gen F y el gen HN del virus de parainfluenza bovino se han sustituido con el gen F y el gen HN del virus de parainfluenza humano (bPIV/hPIV) , en las que (b) se han agregado secuencias heterologas al genoma del PIV completo. La presente invención también abarca virus quiméricos que comprenden una estructura principal codificada por secuencias de nucleótidos derivadas del bPIV, el hPIV o el genoma bPIV/hPIV que contiene mutaciones o modificaciones, además de secuencias heterologas que resultan en un virus quimérico que tiene un fenotipo más conveniente para usarse en formulaciones de vacunas, por ejemplo, fenotipo atenuado o antigenicidad aumentada. De acuerdo con esta modalidad particular de la invención, una secuencia heteróloga en el contexto de una cadena principal de PIV3 bovino puede ser cualquier secuencia heteróloga para el bPIV3. Otra modalidad específica de la presente invención es un virus quimérico que comprende una estructura principal codificada por secuencias de nucleótidos derivadas de 1, 2, o 3 PIV humanos en los que las secuencias de nucleótidos se han sustituido con secuencias heterologas o en las que las secuencias heterologas se han agregado al genoma del hPIV completo, con la condición de que el virus quimérico resultante no es un hPIV3 quimérico en el que las glicoproteínas hemaglutinin-neuraminidasa y de fusión se han remplazado por aquellas del hPIVl . La presente invención también abarca virus quiméricos que comprenden una estructura principal codificada por secuencias de nucleótidos derivadas de un genoma de hPIV, que contiene mutaciones o modificaciones, además de secuencias heterólogas, que resultan en un virus quimérico que tiene un fenotipo más conveniente para usar en formulaciones de vacunas, por ejemplo, un fenotipo atenuado o de antigenicidad aumentada. Las secuencias de codificación del gen heterólogo flanqueadas por el complemento del sitio/promotor de enlace de la polimerasa viral, por ejemplo, el complemento de los términos o terminales del virus 3^-PIV de la presente invención, o los complementos de ambos los términos del virus 3"- y 5^-PIV pueden construirse usando técnicas conocidas en el arte. Las plantillas de ARN resultante pueden ser de la polaridad negativa y pueden contener secuencias terminales apropiadas que habilitan al aparato que sintetiza el ARN viral a reconocer la plantilla. De manera alternativa, también pueden utilizarse las plantillas de ARN de polaridad positiva, que contienen secuencias terminales apropiadas que habilitan el aparato que sintetiza el ARN viral para reconocer la plantilla. Moléculas de ADN recombinante que contienen estas secuencias híbridas pueden clonarse y transcribirse mediante una polimerasa de ARN dirigida por el ADN, tal como la polimerasa T7, la polimerasa T3, la polimerasa SP6 del bacteriófago o una polimerasa eucariótica tal como la polimerasa I y las similares, para la producción in vitro o in vivo de plantillas de ARM recombinante que poseen las secuencias virales apropiadas y que permiten el reconocimiento y actividad de la polimerasa viral. En una modalidad, el vector PIV de la invención expresa una, dos o tres secuencias heterologos que codifican peptidos y polipéptidos antigénicos. En algunas modalidades, las secuencias heterólogas se derivan del mismo virus o de diferentes virus. En ciertas modalidades, más de una copia de las mismas secuencias de nucleótidos heterólogas se insertan en el genoma del virus de la invención. En algunas modalidades, la secuencia de nucleótidos heterologa se deriva de un metaneumovirus , tal como un metaneumovirus humano o un neumovirus aviar. En modalidades específicas, las secuencias de nucleótidos heterologos derivada de un metaneumovirus es un gen F del metaneumovirus. En otras modalidades específicas, la secuencia de nucleótidos heterologos derivada de un metaneumovirus es un gen G del metaneumovirus . En algunas otras modalidades, la secuencia de nucleótidos heterologos se deriva de un virus sincitial respiratorio. En modalidades específicas, la secuencia de nucleótidos heterólogas derivada del virus sincitial respiratorio es un gen F del virus sincitial respiratorio. En otras modalidades específicas, la secuencia de nucleótidos heterólogos derivada del virus sincitial respiratorio es un gen G del virus sincitial respiratorio . Cuando se insertan una o más secuencias de nucleótidos heterólogas , la posición de la inserción y la longitud de la región intergénica de cada copia insertada pueden determinarse y manipularse mediante diferentes ensayos de acuerdo a la sección 5.1.2. infra. En ciertas modalidades, el rescate del virus quimérico o productos de expresión pueden lograrse mediante genética inversa en sistemas de células hospederas donde las células hospederas se transfectan con construcciones de DNAc o ARN quimérico. Las plantillas de RNA de la presente invención se preparan mediante la " trascripción de secuencias de ADN apropiado con una polimerasa de ARN dirigida al ADN. Las plantillas de ARN de la presente invención pueden prepararse ya sea in vi tro o in vivo mediante la trascripción de secuencias de ADN usando una polimerasa de ARN dirigida al ADN tal como la polimerasa T7, la polimerasa T3 , la polimerasa SP6 del bacteriófago, o una polimerasa eucariótica tal como la polimerasa I. En ciertas modalidades, las plantillas de ARN de la presente invención pueden prepararse ya sea in vitro o in vivo mediante la trascripción de secuencias de ADN apropiado usando un sistema de expresión basado en el plásmido como se describe en Hoffmann et al., 2000, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 97: 6108-6113 o el sistema de trascripción polimerasa I-polimerasa II de ARN unidireccional como se describe en Hoffman and Webster, 2000, J. Gen. Virol . 81:2843-2847. Las plantillas de ARN resultantes de polaridad negativa contendrían secuencias terminales apropiadas que habilitarían el aparato que sintetiza el ARN viral para reconocer la plantilla. Alternativamente, también pueden usarse plantillas de ARN de polaridad positiva que contienen secuencias terminales apropiadas y habilitan el aparato que sintetiza el ARN viral para reconocer la plantilla. La expresión de las plantillas de ARN de polaridad positiva puede lograrse mediante la transfección de plásmidos que tienen promotores que se reconocen por la polimerasa de ARN dependiente del DNA. Por ejemplo, puede usarse el ADN del plásmido, que codifica plantillas de ARN positivo bajo el control de un promotor T7, en combinación con el virus de la vacuna o el sistema T7 de erupción pustulosa en aves . El mARNs bicistronico puede construirse para permitir la iniciación interna de la traducción de secuencias virales y para permitir la expresión de proteína extraña que codifica secuencias a partir del sitio de iniciación terminal regular o viceversa. De manera alternativa, una proteína extraña puede expresarse a partir de una unidad transcripcional externa en la que la unidad trascripcional tiene un sitio de iniciación y un sitio de poliadenilación . En otra modalidad, el gen extraño se inserta en un gen del PIV de modo que la proteína expresada resultante en una proteína de fusión. En ciertas modalidades, la invención se refiere a vacunas trivalentes que comprenden un virus de la invención. En modalidades específicas, el virus usado para una vacuna trivalente es un virus de tipo 3 de parainfluenza humana/ de tipo 3 de parainfluenza bovina quimérico que contiene una primera secuencia de nucleótidos heterólogos, derivada del virus sincitial respiratorio, y una segunda secuencia de nucleótidos heterólogos derivada de un metaneumovi us tal como un metaneumovirus humano o un neumovirus aviar. En una modalidad ejemplar, una vacuna trivalente tal se especificaría para (a) los productos de gen del gen F y el gen HN del virus de parainfluenza humana; (b) la proteína codificada mediante la secuencia de nucleótidos heterólogos derivada de un virus sincitial respiratorio; y (c) la proteína codificada mediante la secuencia de nucleótidos heterólogos derivada de un metaneumovirus. En una modalidad preferida, la primera secuencia de nucleótidos heterólogos es el gen F del virus sincitial respiratorio y esta insertado en la posición 1 y la segunda secuencia de nucleótidos heterólogos es el gen F del metaneumovirus humano y esta insertado en la posición 3.
Muchas combinaciones más están abarcadas por la presente invención y algunas se muestran a manera de ejemplo en la Tabla 1. Pueden usarse para otras combinaciones del gen F o G de un neumovirus aviar. Además, pueden usarse las secuencias de nucleótidos que codifican las proteínas F quiméricas (Vea supra) . En algunas modalidades menos preferidas, la secuencia de nucleótidos heterólogos puede insertarse en posiciones de números más altos del genoma viral . Tabla 1. Arreglos ejemplares de secuencias de nucleótidos heterólogos en los virus usados para vacunas trivalentes .
Combinación Posición 1 Posición 2 Posición 3 Gen-F del 1 hMPV Gen-F del RSV - Gen-F del 2 Gen-F del RSV - hMPV 3 - Gen-F del Gen-F del RSV hMPV 4 - Gen-F del RSV Gen-F del hMPV Gen-F del 5 - hMPV Gen-F del RSV Gen-F del 6 Gen-F del RSV - hMPV Gen-G del 7 hMPV Gen-G del RSV - Gen-G del 8 Gen-G del RSV - hMPV 9 - Gen-G del hMPV Gen-G del RSV Gen-G del 10 - Gen-G del RSV hMPV Gen-G del 11 hMPV - Gen-G del RSV 12 del Gen-G del RSV - Gen-G hMPV Gen-F del 13 hMPV Gen-G del RSV - Gen-F del 14 Gen-G del RSV hMPV - Gen-F del 15 - hMPV Gen-G del RSV Gen-F del 16 - Gen-G del RSV hMPV Gen-F del 17 - Gen-G del RSV hMPV 18 Gen-G del RSV - Gen-F del hMPV Gen-G del 19 Gen-F del RSV - hMPV Gen-G del 20 Gen-F del RSV hMPV - 21 - Gen-G del hMPV Gen-F del RSV 22 - Gen-F del RSV Gen-G del hMPV Gen-G del 23 hMPV - Gen-F del RSV 24 Gen-F del RSV - Gen-G del hMPV En algunas otras modalidades, puede alterarse la región intergenica entre la secuencias heteróloga y el inicio de la secuencia de codificación del gen corriente abajo. Por ejemplo, cada gen listado en la Tabla 1 puede tener una longitud deseable de la región intergénica. En una modalidad ejemplar, la vacuna trivalente comprende un vector b/h PIV3 con un gen F del virus sincitial respiratorio insertado en la posición 1, una región intergénica alterada de 177 nucleotidos (originalmente 75 nucleotidos hasta el codon AUG de inicio del gen N corriente abajo) y un gen F de metaneumovirus humano insertado en la posición 3 con su región intergenica natural.
Muchas más combinaciones están incluidas por la presente invención, como cada inserción de una secuencia de nucleotidos heterólogos puede manipularse de acuerdo a la sección 5.1.2., infra . En una modalidad más amplia, los productos de expresión y los viriones quiméricos de la presente invención pueden diseñarse por ingeniería para crear vacunas contra una amplia gama de patógenos, que incluyen antígenos virales, antigenos de tumores y auto antígenos involucrados en alteraciones auto inmunes. Una manera de lograr este objetivo involucra modificar genes de PIV existentes para contener secuencias extrañas en sus dominios externos respectivos . Donde las secuencias heterólogas son epítopes o antígenos de patógenos, estos virus quiméricos pueden utilizarse para inducir una respuesta inmuno-protectiva contra el agente de la enfermedad a partir de la cual se derivan estos determinantes . Un enfoque para la construcción de estas moléculas híbridas es insertar las ecuencia de nucleotidos heteróloga en un complemento de ADN de un genoma PIV, por ejemplo un hPXV, un bPIV, o un bPIV/hPIV, de manera que la secuencia heteróloga se flanquea por las secuencias virales requeridas para la actividad de la polimerasa viral; es decir, el sitio de enlace/promotor de la polimerasa viral, de aquí en adelante referida como el sitio de enlace de la polimerasa viral, y un 9 sitio de poliadenilación. En una modalidad preferida, la secuencia de codificación heteróloga está flanqueada por las secuencias virales que comprenden los promotores de replicación de las terminales 5' y 3', las ecuencias de inicio del gen y el final del gen, y las señales de empacado que se encuentran en las terminales 5' y/o 3'. En un enfoque alternativo, los oligonucleótidos que codifican el sitio de enlace de la polimerasa viral, por ejemplo, el complemento de la terminal 3 ' o ambas terminales del segmento genómico viral se pueden ligar a la secuencia de codificación heteróloga para construir la molécula híbrida. La colocación de un gen extraño o segmento de un gen extraño dentro de una secuencia objetivo que estaba anteriormente dictada por la presencia de los sitios de la enzima de restricción apropiados dentro de la secuencia objetivo. Sin embargo, los avances recientes en la biología molecular han disminuido este problema de manera importante . Los sitios de la enzima de restricción se pueden colocar fácilmente en cualquier lado dentro de una secuencia objetivo a través del uso de la mutagénesis dirigida al sitio (por ejemplo, ver las técnicas descritas por Kunkel, 1985, Proc. Nati. Acad. Sci U:S:A: 82;488). Las variaciones en la tecnología de la reacción de la cadena de la polimerasa (PCR) , descrita arriba, también permite la inserción específica de secuencias (es decir, los sitios de la enzima de restricción) y también permitiría la construcción fácil de moléculas híbridas. Alternativamente, las reacciones de PCR se podrían usar para preparar las plantillas o patrones recombinantes sin la necesidad de clonación. Por ejemplo, las reacciones de PCR se podrían usar para preparar moléculas de ADN de doble hebra que contienen un promotor de polimerasa de ARN dirigida al ADN (por ejemplo, el bacteriófago T3, T7 o SP6) y la secuencia híbrida que contiene el gen heterologo y el sitio de enlace de la polimerasa PIV. Las plantillas de ARN se podrían transcribir entonces directamente desde este ADN recombinante . En aún otra modalidad, las plantillas de ARN recombinantes se pueden preparar mediante ligación de ARNs que especifica la polaridad negativa del gen heterologo y el sitio de enlace de polimerasa viral usando una ligasa de ARN. Además, se pueden agregar uno o más nucleótidos en el extremo 3 ' del gen HN en la región no traducida para adherirse a la "Reglas de Seis" que puede ser importante en el rescate exitoso del virus. La "Regla de Seis" se aplica a varios paramixovirus y requiere que el número de nucleótidos de un genoma de ARN sea un factor de seis sea funcional. La adición de nucleótidos se puede complementar mediante técnicas conocidas en el arte tal como usando un equipo de mutagénesis convencional como el equipo de mutagénesis QuickChange (Stratagene) . Después de la adición del número apropiado de nucleótidos, el fragmento de ADN correcto, por ejemplo, un fragmento de ADN del gen F y HN de hPIV3 , se puede aislar entonces luego de la digestión con la enzima de restricción apropiada y la purificaión en gel . Los requerimiento de secuencia para la actividad de la polimerasa viral y las construcciones que se pueden usar de acuerdo con la invención se describen en las subsecciones abajo. Sin estar ligado por la teoría, varios parámetros afectan la velocidad o proporción de replicación del virus recombinante y el nivel de expresión de la secuencia heterologa en bPIV, hPIV, b/hPIV y la longitud de la región intergénica que flanquea la secuencia heterologa determina la velocidad de replicación y el nivel de expresión de la secuencia heterologa. En ciertas modalidades, la secuencia líder o la secuencia trasera del virus se modifican con relación al virus tipo nativo. En ciertas modalidades más específicas, las longitudes del líder y/o la secuencia trasera están alteradas. En otras modalidades, la(s) secuencia (s) del líder y/o la secuencia trasera mutan con relación al virus de tipo nativo. La producción de un virus recombinante de la invención yace en la replicación de una copia de longitud parcial o completa del genoma (ARNv) ARN viral de sentido negativo o una copia complementaria del mismo (ARNc) . Este ARNv o ARNc se pueden aislar del virus infeccioso, producido luego de la transcripción in-vitro, o producido en células luego de la transfeccion de ácidos nucleicos. Segundo, la producción del virus de hebra negativa recombinante yace en un complejo de polimerasa f ncional. Típicamente, el complejo de polimerasa de los neumovirus consiste de las proteínas N, P, I y posiblemente M2 , pero no necesariamente limitadas a los mismos . Los complejos o componentes de polimerasa de los mismos se pueden aislar de partículas de virus, aisladas de células que expresan uno o más de los componentes, o producidos luego de la transfeccion de vectores de expresión específicos. Las copias infecciosas de PV se pueden obtener cuando los ARNv o AR c antes mencionados o los vectores que expresan estos ARNs se replican por el complejo 16 de polimerasa arriba mencionado (Schnell et al., 1994, EMBO J 13:4195-4203; Collins et al., 1995, PNAS 92: 11563-11567; Hoffmann et al., 2000, PNAS 97:6108-6113; Bridgen et al., 1996, PNAS 93:15400-15404; Palese et al., 1996, PNAS 93:11354-11358; Peeters et al., 1999, J. Virol. 73:5001-5009; Durbin et al., 1997, Virology 235 :323-332) . La invención proporciona una células hospedera que comprende un ácido nucleico o un vector de acuerdo con la invención. El plásmido o los vectores virales que contienen los componentes de polimerasa de PIV (presumiblemente N, P, L y M2, pero no necesariamente limitadas a los mismos) se generan en células procarioticas para la expresión de los componentes en tipos de células relevantes (bacterias, células de insectos, células eucarióticas) . Los plásmidos o vectores virales que contienen las copias de longitud total o parcial del genoma PIV se generarán en células procarioticas para la expresión de los ácidos nucleicos virales in vitro o in vivo. Los últimos vectores pueden contener otras secuencias virales para la generación de virus quiméricos o proteínas de virus quiméricos, pueden faltar partes del genoma viral para la generación de virus defectuoso de replicación, y pueden contener mutaciones, deleciones o inserciones para la generación de virus atenuados . Las copias infecciosas de PIV (siendo del tipo nativo, atenuados, defectuoso de replicación o quiméricos) se pueden producir luego de la co-expresión de los componentes de polimerasa de acuerdo con las tecnologías del estado del arte descritas arriba. Adem s, se pueden usar las células eucarióticas que expresan de manera transitoria o estable una o más proteínas de PIV de longitud completa o parcial . Tales células se pueden hacer mediante transfección (proteínas o vectores de ácidos nucleicos) , infección (vectores virales) o transducción (vectores virales) y pueden ser útiles para la complementacion del tipo nativo mencionado, atenuado, defectuosa en la replicación o virus quiméricos. 5.1.1. SECUENCIAS DE GEN HETEROLOGAS A INSERTARSE La presente invención incluye virus de parainfluenza bovino o humano recombínate que se diseña por ingeniería para expresar una o más secuencias heterólogas, en donde las secuencias heterólogas codifican fragmentos o productos de gen, de productos de gen que son preferiblemente antigénicos y/o inmunogénicos . Como se utiliza aquí, el término "antigénico" se refiere a la habilidad de una molécula de enlazar anticuerpos o moléculas de MHC. El termino "inmunogénico" se refiere a la habilidad de una molécula de generar respuesta inmune en un huésped u hospedero. En una modalidad preferida, la secuencia de nucleótidos heterólogas a insertarse se derivan de un virus de ARN de hebra negativa, que incluyen pero no se limitan a, virus de influenza, virus de parainfluenza, virus sincitial respiratorio, metaneumovirus de mamífero (por ejemplo, metaneumovirus humano) y neumovirus aviar. En una modalidad preferida, la secuencia heteróloga a insertarse incluye, pero no se limita a, una secuencia que codifica un gen F o H de PIV humano, un gen F de RSV, un gen HA de virus de influenza de tipo A, B, o C, un gen F de MPV humano, un gen F de neumovirus aviar, o un fragmento inmunogénico y/o antigénico del mismos . En algunas modalidades, la secuencia de nucleotidos heterologa a ser insertada se deriva de un metaneumovirus humano y/o neumovirus aviar. En ciertas modalidades, la seucneica de nucleotidos heterologa a ser insertada se deriva de (a) un metaneumovirus humano y un virus sincitial respiratorio; y/o (b) un neumovirus aviar y un virus sincitial respiratorio . En ciertas modalidades preferidas de la invención, la secuencia de nucleotidos heterologa a ser insertada se deriva de un gen F de un metaneumovirus humano y/o un neumovirus aviar. En ciertas modalidades, el gen F se deriva de (a) un metaneumovirus humano y un virus sincitial respiratorio; y/o (b) un neumovirus aviar y un virus sincitial respiratorio. En ciertas modalidades de la invención, la secuencia de nucleotidos heterologa a ser insertada es un gen G derivado de un metaneumovirus humano y/o un neumovirus aviar. En ciertas modalidades, el gen G se deriva de (a) un metaneumovirus humano y un virus sincitial respiratorio; y/o (b) un neumovirus aviar y un virus sincitial respiratorio. En ciertas modalidades, cualquier combinación de diferentes genes F y/o diferentes genes G derivados de metaneumovirus humano, neumovirus aviar, y virus sincitial respiratorio se pueden insertar en el virus de la invención con la condición que en todas las modalidades al menos una secuencia heteróloga derivada de ya sea metaneumovirus humano o neumovirus aviar está presente en el virus de parainfluenza recombinante de la invención. En ciertas modalidades, la secuencia de nucleótidos a ser insertada es una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína F derivada de un metaneumovirus humano . En ciertas otras modalidades, la secuencia de nucleótidos a ser insertada es una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína G derivada de un met neumovirus humano . En aún otras modalidades, la secuencia de nucleótidos a ser insertada es una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína F derivada de un neumovirus aviar. En aún otras modalidades, la secuencia de nucleótidos a ser insertada es una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína G derivada de un neumovirus aviar. Con la condición que en todas las modalidades de la invención al menos una secuencia de nucleótidos heteróloga se deriva de un metaneumovirus, la secuencia de nucleótidos heteróloga a ser insertada codifica una proteína F o una proteína G de un virus sincitial respiratorio . En ciertas modalidades, la secuencia de nucleótidos a ser insertada codifica una proteína quimérica F o una proteína quimérica G. Una proteína quimérica F comprende partes de proteínas F de diferentes virus, tales como un metaneumovirus humano, neumovirus aviar y/o virus sincitial respiratorio. Una proteína G quimérica comprende partes de proteínas G de diferentes virus, tales como un metaneumovirus humano, neumovirus aviar y/o virus sincitial respiratorio. En una modalidad específica, la proteína F comprende un ectodominio de una proteína F de un metaneumovirus, un dominio de transmembrana de una proteína F de un virus de parainfluenza, y el dominio luminal de una proteína F de un virus de parainfluenza . En ciertas modalidades, el ácido nucleico a ser insertado codifica una proteína F, en donde el dominio transmembrana de la proteína F se elimina de manera que se expresa una protexna F soluble. En ciertas modalidades específicas, las secuencias de nucleótidos heterólogas de la invención es una de cualquiera de SEC ID NO: 1 hasta la SEC ID NO: 5, SEC ID NO: 14, y SEC ID NO-.15 (vea tabla 16). En ciertas modalidades específicas, las secuencias de nucleótidos codifica una proteína de cualquiera de SEC ID NO: 6 hasta SEC ID NO -.13, SEC ID NO -.16, y SEC ID NO:17 (vea tabla 16). En ciertas modalidades específicas, la secuencia de nucleótidos codifica una proteína de cualquiera de SEC ID NO: 314 a 389.
Para secuencias de nucleotidos heterólogas derivadas del virus sincitial respiratorio vea, por ejemplo, PCT/US98/20230 , la cual esta incorporada aquí como referencia en su totalidad. En una modalidad preferida, las secuencias de gen heterólogas que pueden expresarse en los virus quiméricos de la invención incluyen pero no se limitan a aquellos que codifican epítopes antigénicos y glicoproteinas de virus, tales como las glicoproteinas de influenza, en particular hemaglutinina H5, H7, epítopes del virus sincitial respiratorio, epítopes del virus de la enfermedad de New Castle, virus de Sendai y virus de Laringotraqueitis infecciosa (ILV) , que resultan en una enfermedad respiratoria. En una modalidad más preferida, las secuencias de nucleotidos heterólogas se derivan de un metaneumovirus , tal como un metaneumovirus humano y/o neumovirus aviar. En otra modalidad más de la invención, las secuencias de gen heterólogas que pueden diseñarse por ingeniería en los virus quiméricos de la invención incluyen, pero no se limitan a, aquellos que codifican epítopes virales y glicoproteinas de virus, tales como el antígeno superficial del virus de la hepatitis B, glicoproteinas superficiales del virus de hepatitis A o C del virus de Epstein Barr, glicoproteinas del virus del papiloma humano, virus 5 de simio, virus de paperas, virus del Nilo Occidental, virus del dengue, glicoproteinas de herpesvirus, VPI de poliovirus, y secuencias derivadas de un virus de inmunodeficiencia humana (VIH) , preferiblemente de tipo 1 o tipo 2. En otra modalidad más, las secuencias de gen heterólogas que pueden diseñarse por ingeniería en virus quiméricos de la invención incluyen, pero no se limitan a, aquellos que codifican epítopes del virus de la enfermedad de Marek (MDV) , epitopes del virus de la enfermedad de Bursal (IBDV) , epitopes del virus de la Anemia del pollo, virus de laringotraqueitis infecciosa (ILV) , virus de influenza aviar (AIV) , rabias, virus de leucemia felina, virus de la enfermedad canina, virus de estomatitis vesicular, y virus de la enfermedad pustulosa del cerdo (Vea Fields et al . , (Ed) , 1991, FUNDAMENTAL VIROLOGY, Segunda edición, imprenta Raven, Nueva York, incorporado aquí como referencia en su totalidad) . Otras secuencias heterólogas de la presente invención incluyen aquellas que codifican antígenos que son característicos de enfermedades autoinmunes . Estos antígenos típicamente se derivarán de la superficie celular, citoplasma, núcleo, mítocondria, y los similares de tejidos de mamíferos, que incluyen antígenos característicos de diabetes mellitas, esclerosis múltiple, eritematosus lupus sistémico, artritis reumatoide, anemia perniciosa, enfermedad de Addison, escleroderma, gastritis autoinmune atrófica, diabetes juvenil, y lupus eritematoso discold.
Antlgenos que son alérgenos generalmente incluyen proteínas o glicoproteínas , que incluyen antígenos derivados de polen, polvo, moldes, esporas, caspa, insectos y comidas. Además, antígenos que son característicos de antígenos tumorales típicamente se derivaran de la superficie celular, citoplasma, núcleo, organelos, y similares de células de tejido tumoral . Ejemplos incluyen antígenos característicos de proteínas tumorales, que incluyen proteínas codificadas mediante oncogenes mutados; proteínas virales asociadas con tumores, y glicoproteínas. Tumores incluyen, pero no se limitan a, aquellos derivados de los tipos de cáncer: labio, nasofaringe, faringe, y cavidad oral, esófago, estómago, colon, recto, hígado, vejiga de la rozadura, laringe, pulmón y bronquios, melanoma de piel, seno, cerviz, uterino, ovario, vejiga, riñon, útero, cerebro y otras partes del sistema nervioso, tiroides, próstata, testículos, enfermedad de Hodgkin, linfoma que no es de Hodgkin, mieloma múltiple y leucemia . En una modalidad específica de la invención, las secuencias heterólogas se derivan del genoma del virus de inmunodeficiencia humana (VIH) , preferiblemente el virus 1 de inmunodeficiencia humana o el virus 2 de inmunodeficiencia humana. En otra modalidad de la invención, las secuencias de codificación heterólogas pueden insertarse dentro de una secuencia de codificación del gen del PIV de modo que se exprese un producto de gen quimérico, que contiene la secuencia del péptido heteróloga dentro de la proteína viral del PIV. En una modalidad tal de la invención, las secuencias heterologas pueden también derivarse del genoma de un virus de inmunodeficiencia humana, preferiblemente del virus 1 de inmunodeficiencia humana o el virus 2 de inmunodeficiencia humana . En casos en los que las secuencias heterologas se derivan del VIH, tales secuencias pueden incluir, pero no limitarse a secuencias derivadas del gen env (por ejemplo, secuencias que codifican todo o parte de gpl60, gp!20, y/o gp41) , el gen pol (por ejemplo, secuencias que codifican todo o parte de la transcriptasa inversa, endonucleasa, proteasa y/o integrasa) , el gen gag (por ejemplo, secuencias que codifican todo o parte de p7, p6, p55, pl7/18, p24/25) tat, rev, nef, vif, vpu, vpr, y/o vpx. En otra modalidad, las secuencias heterologas que pueden diseñarse por ingeniería en los virus quiméricos incluyen aquellos que codifican proteínas con actividades de inmunopotenciación. Ejemplos de proteínas de inmunopotenciación incluyen, pero no se limitan a, citocinas, interferon de tipo 1, inteferon gama, factores de estimulación de colonia, e interleucina -1, -2, -4, -5, -6, -12.
Además, otras secuencias de gen heterólogas que pueden diseñarse por ingeniería en los virus quiméricos incluyen aquellas que codifican antígenos derivados de bacterias tales como glicoproteinas de superficie bacterial, antígenos derivados de hongos, y antígenos derivados de una variedad de otros patógenos y parásitos. Ejemplos de secuencias de gen heterólogas derivadas de patógenos bacteriales incluyen, pero no se limitan a, aquellas que codifican antígenos derivados de especies del siguiente género; Salmonella, Shigella, Chlamydia, Helicobacter, Yersinia, Bordatella, Pseudomonas, Neisseria, Vibrio, Haemophilus, Micoplasma, Streptomyces, Treponema, Coxiella, Ehrlichia, Brucella, Streptobacillus, Fusospirocheta, Spirillum, Ureaplasma, Spirochaeta, Micoplasma, Actínoir cetes, Borrelia, Bacteroides, Trichomoras, Branhamella, Pasteurella, Clostridium, Corynebacterium, histeria, Bacillus, Reysipelothrix, Rhodococcus, Escherichia, Klebsiella, Pseudomanas, Enterobacter, Serratia, Staphylococcus, Streptococcus, Legionella, Mycobacterium, Proteus, Campylobacter, Enterococcus, Acinetobacter, Morganella, Moraxella, Citrobacter, Rickettsia, Rochli eae, además de especies bacteriales tales como; P. aeruginosa; E. colí, P. cepacia. S. epidermis; E. íaecalis, S. pneumonías, S. aureus, N. meningitidis, S. pyogenes, Pasteurella multocida, Treponema pallidum, y P. mirabilis .
Ejemplos de secuencias de gen heterólogas derivadas de hongos patogénicos, incluyen, pero no se limitan a, aquellos que codifican antígenos derivados de hongos tales como Cryptococcus neoformans; Blastomyces dermatitidis; Aiellomyces dermatitidis; Histoplasma Capsulatu ; Coccidioides immitis; especies de Candida, incluyendo C. albicans, C. tropicalis; C. parapsilosis, C. guilliermondii y C. kruseí, especies de Aspergillus, que incluyen A. fu igatus, A. flavus y A. Níger, especies de Rhizopus; especies de Rhizomucor; Especies de Cunninghammella; especies de Apophysomyces, que incluyen A. saksenae, A. mucor y A. absidia; Sporothrix schenckii , Paracoccidioides brasiliensis; Pseudallescheria boydii, Torulopsis glabrata; especies de Trichophyton, especies de Microsporum y especies de Dermatophyres además de cualquier otra levadura u hongo ahora conocido o posteriormente identificado como patógeno. Finalmente, ejemplos de secuencias de gen heterólogas derivadas de parásitos incluyen, pero no se limitan a, aquellas que codifican antígenos derivados de miembros de Apicomplexa phylum tal como, por ejemplo, Babesia, Toxoplasma, Plasmodium, Eimeria, Isospora, Atoxoplasma, Cystoisospora, Ha mondia, Besniotia, Sarcosystis, Frenkelia, Haemoproteus, Leucocytozoon, Theileria, Perkinsus, y Gregarina spp. ; Pneumocystis carinii; miembros de la Microspora phylum tal como, por ejemplo, Nosema, Enterocytozoon, Encephalltozoon, Septata, Mrazekia, Amblyospora, A eson, Glugea, Pleistophora y Microsporidium spp.; y miembros del Ascetospora phylum tal como, por ejemplo, Haplosporídium spp., además de especies que incluyen plasmodium falciparum, P. vivax, P. ovale, P. malaria; Toxoplasma Gondii, Leishmania mexicana, L. trópica, L. major, L aethiopica, L. donovani; Trypanosoma, cruzi, T. brucei, Schistosoma mansoni, S. hae atobium; S. japonium; Trichinella spiralis; Wuchereria bancrofti; Brugia Malayli; Entamoeba histolytica; Enterobius vermiculoarus; Taenia solium, T. saginata, Trichomonas vaginatis, T. hominis, T. tenax; Giardia lamblia; Cryptospo idium parvu ; Pneumocytis carinii, Babesia bovis, B. Divergens, B. Microti, Isospora belli, L hominis; Dientamoeba frágilis; Onchocerca volvulus; Ascaris lumbricoides; Necator americanis; Ancylostoma duodenale; Strongyloides stercoralis; Capillaria philippinensis; Angiostrongylus cantonensis; Hymenolepsis nana; Diphyllobothrium latum; Echinococcus granulosus, E. multilocularis; Paragonimus westermani, P. caliensis; Chlonorchis sinensis; Opisthorchis felineas; G. Viverini, Fasciola hepática, Sarcoptes scabiei, Pediculus humanus; Phthirlus pubis; y Dermatobia hominis, además de cualquier otro parásito ahora conocido o posteriormente identificado como patogénico. 5.1.2. SECUENCIAS METANEUMOVIRALES A INSERTARSE La invención se refiere a secuencias de ácidos nucleicos de un MPV de mamífero, proteínas de un MPV de mamífero y anticuerpos contra proteínas de un MPV de mamífero. La invención se refiere además homólogos de secuencias de ácidos nucleicos de un MPV de mamífero y homólogos de proteínas de un MPV de mamífero. La invención se refiere además a secuencias de ácidos nucleicos que codifican proteínas de fusión, en donde las proteínas de fusión contienen una proteína de un MPV de mamífero o un fragmento de la misma y uno o más péptidos o proteínas que no se derivan de MPV de mamífero. En una modalidad específica, una proteína de fusión de la invención contiene una proteína de un MPV de mamífero o un fragmento de la misma y una etiqueta de péptido, tal como, pero no limitado a, una etiqueta de polihistidina . La invención se refiere además a proteínas de fusión, en donde la proteína de fusión contiene una proteína de un MPV de mamífero o un fragmento de la misma y uno o más péptidos o proteínas que no se derivan del MPV de mamífero. La invención también se refiere a derivados de ácidos nucleicos que codifican una proteína de un MPV de mamífero. La invención también se refiere a derivados de proteínas de un MPV de mamífero. Un derivado puede ser, pero no se limita a, formas mutantes de las proteínas, tal como, pero no limitado a, adiciones, eliminaciones o deleciones, truncamientos, sustituciones e inversiones. Un derivado puede ser además, una forma quimérica de la proteína del MPV de mamífero, en donde por lo menos un dominio de la proteína se deriva de una proteína diferente. Un derivado puede ser también una forma de una proteína de un MPV de mamífero que esta enlazado de manera covalente o no covalente a otra molécula, tal como, por ejemplo, un fármaco. El aislado viral llamado NL/l/00 (también 00-1) es un MPV de mamífero de variante Al y su secuencia genómica se muestra en SEQ ID NO: 95. El aislado viral de término NL/17/00 es un MPV de mamífero de variante A2 y su secuencia genómica se muestra en SEQ ID NO: 96. El aislado viral de término NL/l/99 (también 99-1) es un MPV de mamífero de variante Bl y su secuencia genómica se muestra en SEQ ID NO: 94. El aislado viral de termino NL/l/94 es un MPV de mamífero de variante B2 y su secuencia genómica se muestra en SEQ ID NO: 97. Una lista de secuencias divulgadas en la presente solicitud y los números de SEQ ID se establecen en la Tabla 16. La proteína de un MPV de mamífero puede ser una proteína N, una proteína P, una proteína M, una proteína F, una proteína M2-1, o una proteína M2-2 o un fragmento de la misma. Un fragmento de una proteína de un MPV de mamífero puede ser de por lo menos 25 aminoácidos, por lo menos 50 aminoácidos, por lo menos 75 aminoácidos, por lo menos 100 aminoácidos, por lo menos 125 aminoácidos, por lo menos 150 aminoácidos, por lo menos 175 aminoácidos, por lo menos 200 aminoácidos, por lo menos 225 aminoácidos, por lo menos 250 aminoácidos, por lo menos 275 aminoácidos, por lo menos 300 aminoácidos, por lo menos 325 aminoácidos, por lo menos 350 aminoácidos, por lo menos 375 aminoácidos, por lo menos 400 aminoácidos, por lo menos 425 aminoácidos, por lo menos 450 aminoácidos, por lo menos 475 aminoácidos, por lo menos 500 aminoácidos, por lo menos 750 aminoácidos, por lo menos 1000 aminoácidos, por lo menos 1250 aminoácidos, por lo menos 1500 aminoácidos, por lo menos 1750 aminoácidos, por lo menos 2000 aminoácidos, por lo menos 2250 aminoácidos, de longitud. Un fragmento de una proteína de un MPV de mamífero puede ser de cuando más 25 aminoácidos, a lo más 50 aminoácidos, a lo más 75 aminoácidos, a lo más 100 aminoácidos, a lo más 125 aminoácidos, a lo más 150 aminoácidos, a lo más 175 aminoácidos, a lo más 200 aminoácidos, a lo más 225 aminoácidos, a lo más 250 aminoácidos, a lo más 275 aminoácidos, a lo más 300 aminoácidos, a lo más 325 aminoácidos, a lo más 350 aminoácidos, a lo más 375 aminoácidos, a lo más 400 aminoácidos, a lo más 425 aminoácidos, a lo más 450 aminoácidos, a lo más 475 aminoácidos, a lo más 500 aminoácidos, a lo más 750 aminoácidos, a lo más 1,000 aminoácidos, a lo más 1,250 aminoácidos, a lo más 1,500 aminoácidos, a lo más 1,750 aminoácidos, a lo más 2,000 aminoácidos, por lo menos 2,250 aminoácidos, de longitud. En ciertas modalidades de la invención, la proteína de un MPV de mamífero es una proteína N, en donde la proteína N esta filogenéticamenté más relacionada a la proteína N de un MPV de mamífero, tal como la proteína N codificada por, por ejemplo, el genoma viral del SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, o SEQ ID NO: 97, (vea la Tabla 16 para una descripción los números de SEQ ID) que esta relacionada a la proteína N del APV de tipo C. En ciertas modalidades de la invención, la proteína de un MPV de mamífero es una proteína P, en donde la proteína P esta filogenéticamenté más relacionada a la proteína P de un MPV de mamífero, tal como la proteína P codificada por, por ejemplo, el genoma viral del SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO : 96, o SEQ ID NO: 97, que esta relacionada a la proteína P del APV de tipo C. En ciertas modalidades de la invención, la proteína de un MPV de mamífero es una proteína M, en donde la proteína M esta más relacionada a la proteína M de un MPV de mamífero, tal como la proteína M codificada por, por ejemplo, el genoma viral del SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO : 96, o SEQ ID NO: 97, que esta relacionada a la proteína M del APV de tipo C. En ciertas modalidades de la invención, la proteína de un MPV de mamífero es una proteína F, en donde la proteína F esta filogenéticamente más relacionada a la proteína F de un MPV de mamífero, tal como la proteína F codificada por, por ejemplo, el genoma viral del SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, o SEQ ID NO: 97, que esta relacionada a la proteína F del APV de tipo C. En ciertas modalidades de la invención, la proteína de un MPV de mamífero es una proteína M2-1, en donde la proteína M2-1 esta filogenéticamenté más relacionada a la proteína M2-1 de un MPV de mamífero, tal como la proteína M2-1 codificada por, por ejemplo, el genoma viral del SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO : 96, o SEQ ID NO: 97, que esta relacionada a la proteína M2-1 del APV de tipo C. En ciertas modalidades de la invención, la proteína de un MPV de mamífero es una proteína M2-2, en donde la proteína M2-2 esta filogenéticamente más relacionada a la proteína M2-2 de un MPV de mamífero, tal como la proteína M2-2 codificada por, por ejemplo, el genoma viral del SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, o SEQ ID NO: 97, que esta relacionada a la proteína M2-2 del APV de tipo C. En ciertas modalidades de la invención, la proteína de un MPV de mamífero es una proteína G, en donde la proteína G esta filogenéticamente más relacionada a la proteína G de un MPV de mamífero, tal como la proteína G codificada por, por ejemplo, el genoma viral del SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, o SEQ ID NO: 97, que esta relacionada a cualquier proteína del APV de tipo C.
En ciertas modalidades de la invención, la proteína de un MPV de mamífero es una proteína SH, en donde la proteína SH esta filogenéticamenté más relacionada a la proteína SH de un MPV de mamífero, tal como la proteína SH codificada por, por ejemplo, el genoma viral del SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, o SEQ ID NO: 97, que esta relacionada a cualquier proteína del APV de tipo C. En ciertas modalidades de la invención, la proteína de un MPV de mamífero es una proteína L, en donde la proteína L esta filogenéticamente m s relacionada a la proteína L de un MPV de mamífero, tal como la proteína SH codificada por, por ejemplo, el genoma viral del SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, o SEQ ID NO: 97, que esta relacionada a cualquier proteína del APV de tipo C. En ciertas modalidades de la invención, la proteína de un MPV de mamífero es una proteína N, en donde la proteína N es idéntica por lo menos 60%, por lo menos 65%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la secuencia de aminoácido de la proteína N codificada por el genoma viral de SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, o SEQ ID NO: 97 (las secuencias de aminoácidos de las proteínas N respectivas se divulgan en SEQ ID NO: 366-369, vea también la Tabla 16) . En ciertas modalidades de la invención, la proteína de un MPV de mamífero es una proteína N, en donde la proteína P es idéntica por lo menos 60%, por lo menos 55%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la secuencia de aminoácido de la proteína P codificada por el genoma viral de SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, o SEQ ID NO: 97 (las secuencias de aminoácidos de las proteínas P respectivas se divulgan en SEQ ID NO: 78-75, vea también la Tabla 16) . En ciertas modalidades de la invención, la proteína de un MPV de mamífero es una proteína M, en donde la proteína M es idéntica por lo menos 60%, por lo menos 65%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la secuencia de aminoácido de la proteína M codificada por el genoma viral de SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, o SEQ ID NO: 97 (las secuencias de aminoácidos de las proteínas M respectivas se divulgan en SEQ ID NO: 358-361, vea también la Tabla 16) . En ciertas modalidades de la invención, la proteína de un MPV de mamífero es una proteína F, en donde la proteína F es idéntica por lo menos 60%, por lo menos 65%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la secuencia de aminoácido de una proteína F codificada por el genoma viral de SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO : 96, o SEQ ID NO: 97 (las secuencias de aminoácidos de las proteínas F respectivas se divulgan en SEQ ID NO: 18-25, vea también la Tabla 16). En ciertas modalidades de la invención, la proteína de un MPV de mamífero es una proteína M2-1, en donde la proteína 2-1 es idéntica por lo menos 60%, por lo menos 65%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la secuencia de aminoácido de la proteína M2-1 codificada por el genoma viral de SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO : 96, o SEQ ID NO: 97 (las secuencias de aminoácidos de las proteínas M2-1 respectivas se divulgan en SEQ ID NO: 42-49, vea también la Tabla 16) . En ciertas modalidades de la invención, la proteína de un MPV de mamífero es una proteína M2-2, en donde la proteína M2-2 es idéntica por lo menos 60%, por lo menos 65%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la secuencia de aminoácido de la proteína M2-2 codificada por el genoma viral de SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, o SEQ ID NO: 97 (las secuencias de aminoácidos de las proteínas M2-2 respectivas se divulgan en SEQ ID NO: 50-57, vea también la Tabla 16) . En ciertas modalidades de la invención, la proteína de un MPV de mamífero es una proteína G, en donde la proteína G es idéntica por lo menos 60%, por lo menos 65%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la secuencia de aminoácido de la proteína G codificada por el genoma viral de SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, o SEQ ID NO: 97 (las secuencias de aminoácidos de las proteínas G respectivas se divulgan en SEQ ID NO: 26-33, vea también la Tabla 16) . En ciertas modalidades de la invención, la proteína de un MPV de mamífero es una proteína SH, en donde la proteína SH es idéntica por lo menos 60%, por lo menos 65%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la secuencia de aminoácido de la proteína SH codificada por el genoma viral de SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, o SEQ ID NO: 97 (las secuencias de aminoácidos de las proteínas SH respectivas se divulgan en SEQ ID NO: 86-93, vea también la Tabla 16) . En ciertas modalidades de la invención, la proteína de un MPV de mamífero es una proteína L, en donde la proteína L es idéntica por lo menos 60%, por lo menos 65%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la secuencia de aminoácido de la proteína L codificada por el genoma viral de SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, o SEQ ID NO: 97 (las secuencias de aminoácidos de las proteínas L respectivas se divulgan en SEQ ID NO: 34-41, vea también la Tabla 16) . Un fragmento de una proteína de PV de mamífero es idéntica por lo menos 60%, por lo menos 65%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la proteína homologa codificada por el virus de SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO : 96, SEQ ID NO: 97, sobre la porción de la proteína que es homologa al fragmento. En una modalidad especifica, ilustrativa, la invención proporciona un fragmento de la proteína F de un MPV de mamífero que contiene el ectodominio de la proteína F y homólogos de la misma. El homólogo del fragmento de la proteína F que contiene el ectodominio es idéntica por lo menos 60%, por lo menos 65%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, al fragmento correspondiente que contiene en ectodominio de la proteína F codificada por un virus de SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, o SEQ ID NO: 97 (las secuencias de aminoácidos de las proteínas F respectivas se divulgan en SEQ ID NO: 18-25; vea también la Tabla 16) . En ciertas modalidades, la invención proporciona una proteína de un MPV de mamífero de subgrupo A y fragmentos de la misma. La invención proporciona una proteína N de un MPV de mamífero de subgrupo A, en donde la proteína N esta filogenétreamente más relacionada a la proteína N codificada por un virus de SEQ ID NO: 95 o SEQ ID NO: 96 que esta relacionada a la proteína N codificada por un virus codificado por SEQ ID NO: 94 o SEQ ID NO: 97. La invención proporciona una proteína G de un MPV de mamífero de subgrupo A, en donde la proteína G esta filogenéticamente más relacionada a la proteína G codificada por un virus de SEQ ID NO: 95 o SEQ ID NO: 96 que esta relacionada a la proteína G codificada por un virus codificado por SEQ ID NO: 94 o SEQ ID NO: 97. La invención proporciona una proteína P de un MPV de mamífero de subgrupo A, en donde la proteína P esta filogenéticamente más relacionada a la proteína P codificada por un virus de SEQ ID NO: 95 o SEQ ID NO: 96 que esta relacionada a la proteína P codificada por un virus codificado por SEQ ID NO: 94 o SEQ ID NO: 97. La invención proporciona una proteína M de un MPV de mamífero de subgrupo A, en donde la proteína M esta filogenéticamente más relacionada a la proteína M codificada por un virus de SEQ ID NO: 95 o SEQ ID NO: 96 que esta relacionada a la proteína M codificada por un virus codificado por SEQ ID NO: 94 o SEQ ID NO: 97. La invención proporciona una proteína N de un MPV de mamífero de subgrupo A, en donde la proteína F esta filogenéticamente más relacionada a la proteína F codificada por un virus de SEQ ID NO: 95 o SEQ ID NO: 96 que esta relacionada a la proteína F codificada por un virus codificado por SEQ ID NO: 94 o SEQ ID NO: 97. La invención proporciona una proteína M2-1 de un MPV de mamífero de subgrupo A, en donde la proteína M2-1 esta filogenéticamente más relacionada a la proteína M2-1 codificada por un virus de SEQ ID NO: 95 o SEQ ID NO: 96 que esta relacionada a la proteína M2-1 codificada por un virus codificado por SEQ ID NO: 94 o SEQ ID NO: 97. La invención proporciona una proteína M2-2 de un MPV de mamífero de subgrupo A, en donde la proteína M2-2 esta filogenéticamente más relacionada a la proteína M2-2 codificada por un virus de SEQ ID NO: 95 o SEQ ID NO: 96 que esta relacionada a la proteína M2-2 codificada por un virus codificado por SEQ ID NO: 94 o SEQ ID NO: 97. La invención proporciona una proteína SH de un MPV de mamífero de subgrupo A, en donde la proteína SH esta filogenéticamente más relacionada a la proteína SH codificada por un virus de SEQ ID NO: 95 o SEQ ID NO: 96 que esta relacionada a la proteína SH codificada por un virus codificado por SEQ ID NO: 94 o SEQ ID NO: 97. La invención proporciona una proteina L de un MPV de mamífero de subgrupo A, en donde la proteína L esta filogenéticamente más relacionada a la proteína L codificada por un virus de SEQ ID NO: 95 o SEQ ID NO: 96 que esta relacionada a la proteína L codificada por un virus codificado por SEQ ID NO: 94 o SEQ ID NO: 97. En otras modalidades, la invención proporciona una proteína de un MPV de mamífero de subgrupo B o fragmentos de la misma. La invención proporciona una proteína N de un MPV de mamífero de subgrupo B, en donde la proteina N esta filogenéticamente más relacionada a la proteína N codificada por un virus de SEQ ID NO: 94 o SEQ ID NO: 97 que esta relacionada a la proteína N codificada por un virus codificado por SEQ ID NO: 95 o SEQ ID NO: 96. La invención proporciona una proteína G de un MPV de mamífero de subgrupo A, en donde la proteína G esta filogenéticamente más relacionada a la proteína G codificada por un virus de SEQ ID NO: 94 o SEQ ID NO: 97 que esta relacionada a la proteina G codificada por un virus codificado por SEQ ID NO: 95 o SEQ ID NO: 96. La invención proporciona una proteína P de un MPV de mamífero de subgrupo A, en donde la proteína P esta filogenéticamente más relacionada a la proteína P codificada por un virus de SEQ ID NO: 94 o SEQ ID NO: 97 que esta relacionada a la proteína P codificada por un virus codificado por SEQ ID NO: 95 o SEQ ID NO: 96. La invención proporciona una proteína M de un MPV de mamífero de subgrupo A, en donde la proteína M esta filogenéticamente más relacionada a la proteína M codificada por un virus de SEQ ID NO: 94 o SEQ ID NO: 97 que esta relacionada a la protexna M codificada por un virus codificado por SEQ ID NO: 95 o SEQ ID NO: 96. La invención proporciona una proteína N de un MPV de mamífero de subgrupo A, en donde la proteína F esta filogenéticamente más relacionada a la proteína F codificada por un virus de SEQ ID NO: 94 o SEQ ID NO: 97 que esta relacionada a la proteína F codificada por un virus codificado por SEQ ID NO: 95 o SEQ ID NO: 96. La invención proporciona una proteína M2-1 de un MPV de mamífero de subgrupo A, en donde la proteína M2-1 esta filogenéticamente más relacionada a la proteína M2-1 codificada por un virus de SEQ ID NO: 94 o SEQ ID NO: 97 que esta relacionada a la proteína M2-1 codificada por un virus codificado por SEQ ID NO: 95 o SEQ ID NO: 96. La invención proporciona una proteína M2-2 de un MPV de mamífero de subgrupo A, en donde la proteína M2-2 esta filogenéticamente más relacionada a la proteína M2-2 codificada por un virus de SEQ ID NO: 94 o SEQ ID NO: 97 que esta relacionada a la proteína M2-2 codificada por un virus codificado por SEQ ID NO: 95 o SEQ ID NO: 96. La invención proporciona una proteína SH de un MPV de mamífero de subgrupo A, en donde la proteína SH esta filogenéticamente más relacionada a la proteína SH codificada por un virus de SEQ ID NO: 94 o SEQ ID NO: 97 que esta relacionada a la proteína SH codificada por un virus codificado por SEQ ID NO: 95 o SEQ ID NO: 96. La invención proporciona una proteína L de un MPV de mamífero de subgrupo A, en donde la proteína L esta filogenéticamente más relacionada a la proteína L codificada por un virus de SEQ ID NO: 94 o SEQ ID NO: 97 que esta relacionada a la proteína L codificada por un virus codificado por SEQ ID NO: 95 o SEQ ID NO: 96. La invención proporciona una proteína G de una variante Bl del MPV de mamífero, en donde la proteína G de una variante Bl del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína G del prototipo de variante Bl, NL/l/99 aislado, que se relaciona a la proteína G del prototipo de la variante Al, NL/l/00 aislado, la proteína G del prototipo de A2 , NL/17/00 aislado, o la proteína G del prototipo de B2 , NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteína G de una variante Bl de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína G es idéntica por lo menos 66%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la proteína G de una variante del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/l/99 (SEQ ID NO: 28) . En una modalidad específica, la proteína G de un MPV de mamífero tiene la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO: 119-153. La invención proporciona una proteína N de una variante Bl del MPV de mamífero, en donde la proteína N de una variante Bl del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína N del prototipo de variante Bl, NL/l/99 aislado, que esta relacionada a la proteína N del prototipo de variante Al, NL/1/00 aislado, la proteína N del prototipo de A2, NL/17/00 aislado, o la proteína N del prototipo de B2 , NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteina N de una variante Bl del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína N es idéntica por lo menos 98.5%, o por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la proteína N de una variante Bl del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/l/99 (SEQ ID NO: 72) . La invención proporciona una proteína P de una variante Bl del MPV de mamífero, en donde la proteína P de una variante Bl del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteina P del prototipo de variante Bl, NL/l/99 aislado, que esta relacionada a la proteína P del prototipo de variante Al, NL/l/00 aislado, la proteína P del prototipo de A2, NL/17/00 aislado, o la proteína P del prototipo de B2 , NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteina P de una variante Bl del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína P es idéntica por lo menos 96%, o por lo menos 98%, o por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la proteína P de una variante Bl del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/l/99 (SEQ ID NO: 80) . La invención proporciona una proteína M de una variante Bl del MPV de mamífero, en donde la proteína M de una variante Bl del MPV de mamífero esta fxlogeneticamente más relacionada a la proteína M del prototipo de variante Bl, NL/l/99 aislado, que esta relacionada a la proteína M del prototipo de variante Al, NL/l/00 aislado, la proteína M del prototipo de A2, NL/17/00 aislado, o la proteína M del prototipo de B2 , NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteína M de una variante Bl del MPV de mamífero, en donde la secuencia de amino ácido de la proteína M es idéntica a la proteína M de una variante Bl del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/l/99 (SEQ ID NO:64). La invención proporciona una proteína F de una variante Bl del MPV de mamífero, en donde la proteína F de una variante Bl del MPV de mamífero esta filogenéticamente relacionada de manera más cercana a la proteína F de variante Bl, NL/l/99 aislado que esta relacionada a la proteína F de variante Al, NL/l/00 aislado, la proteína F de prototipo A2 , NL/17/00 aislado, o la proteína F del prototipo de B2 NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteína F de variante Bl del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína F es idéntica por lo menos 99% a la proteína F de una variante Bl del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/l/99 (SEQ ID NO: 20) . En una modalidad especifica, la proteína F de un MPV de mamífero tiene la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO: 248-327. La invención proporciona una proteína M2-1 de una variante Bl del MPV de mamífero, en donde la proteína M2-1 de una variante Bl del MPV de mamífero esta filogenéticamente relacionada de manera más cercana a la proteína M2-1 del prototipo de variante Bl, NL/l/99 aislado, que esta relacionado a la proteína M2-1 del prototipo de variante Al, NL/l/00 aislado, la proteína M2-1 del prototipo de A2, NL/17/00 aislado, o la proteína M2-1 del prototipo de B2 , NL/1/94 aislado. La invención proporciona una proteína M2-1 de una variante Bl del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína M2-1 es idéntica por lo menos 98% o por lo menos 99% a la proteína M2-1 de una variante Bl del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/l/99 (SEQ ID NO: 44) . La invención proporciona una proteína M2-2 de una variante Bl del MPV de mamífero, en donde la proteína M2-2 de una variante Bl del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína M2-2 del prototipo de variante Bl, NL/l/99 aislado, que esta relacionado a la proteína M2-2 del prototipo de variante Al, NL/l/00 aislado, la proteína M2-2 del prototipo de A2, NL/17/00 aislado, o la proteína M2-2 del prototipo de B2, NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteína M2-2 de una variante Bl del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína M2-2 es idéntica por lo menos 99% o por lo menos 99.5% a la proteína M2-2 de una variante Bl del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/1/99 (SEQ ID NO: 52). La invención proporciona una proteína SH de una variante Bl del MPV de mamífero, en donde la proteína SH de una variante Bl del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína SH del prototipo de variante Bl, NL/1/99 aislado, que esta relacionado a la proteína SH del prototipo de variante Al, NL/l/00 aislado, la proteína SH del prototipo de ?2, NL/17/00 aislado, o la proteína SH del prototipo de B2 , NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteína SH de una variante Bl del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína SH es idéntica por lo menos 83% o por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98%, por lo menos 99 o por lo menos 99.5% a la proteína SH de una variante Bl del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/l/99 (SEQ ID NO: 88) . La invención proporciona una proteína L de una variante Bl del MPV de mamífero, en donde la proteína L de una variante Bl del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína L del prototipo de variante Bl, NL/1/99 aislado, que esta relacionado a la proteína L del prototipo de variante Al, NL/1/00 aislado, la proteína L del prototipo de A2, NL/17/00 aislado, o la proteína L del prototipo de B2, NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteína L de una variante Bl del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína L es idéntica por lo menos 99% o por lo menos 99.5% a la proteína L de una variante Bl del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/1/99 (SEQ ID NO: 36) . La invención proporciona una proteína G de una variante Al del MPV de mamífero, en donde la proteína G de una variante Al del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína G del prototipo de variante Al, NL/l/00 aislado, que esta relacionado a la proteína G del prototipo de variante Bl, NL/1/99 aislado, la proteína G del prototipo de A2, NL/17/00 aislado, o la proteína G del prototipo de B2, NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteína G de una variante Al del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína G es idéntica por lo menos 66%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85% por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98%, por lo menos 99% o por lo menos 99.5% a la proteína G de una variante Al del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/l/00 (SEQ ID NO: 26) . La invención proporciona una proteína N de una variante Al del PV de mamífero, en donde la proteína N de una variante Al del MPV de mamífero esta filogenéticamenté más relacionada a la proteína N del prototipo de variante Al, NL/l/00 aislado, que esta relacionado a la proteína N del prototipo de variante Bl, NL/1/99 aislado, la proteína N del prototipo de A2 , NL/17/00 aislado, o la proteína N del prototipo de B2 , NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteína N de una variante Al del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína N es idéntica por lo menos 99.5% a la proteína N de una variante Al del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/l/00 (SEQ ID NO: 70). La invención proporciona una proteína P de una variante Al del MPV de mamífero, en donde la proteína P de una variante Al del MPV de mamífero esta filogenéticamenté más relacionada a la proteína P del prototipo de variante Al, NL/l/00 aislado, que esta relacionado a la proteína P del prototipo de variante Bl, NL/1/99 aislado, la proteína P del prototipo de A2 , NL/17/00 aislado, o la proteína P del prototipo de B2 , NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteína P de una variante Al del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína P es idéntica por lo menos 96%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la proteína P de una variante Al del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/l/00 (SEQ ID NO:78). La invención proporciona una proteína M de una variante Al del MPV de mamífero, en donde la proteína M de una variante Al del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína M del prototipo de variante Al, NL/l/00 aislado, que esta relacionado a la proteína M del prototipo de variante Bl, NL/1/99 aislado, la proteína M del prototipo de A2, NL/17/00 aislado, o la proteína M del prototipo de B2 , NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteína M de una variante Al del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína M es idéntica por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la proteína M de una variante Al del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/l/00 (SEQ ID NO:62). La invención proporciona una proteína F de una variante Al del MPV de mamífero, en donde la proteína F de una variante Al del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína F del prototipo de variante Al, NL/l/00 aislado, que esta relacionado a la proteína F del prototipo de variante Bl, NL/1/99 aislado, la proteína F del prototipo de A2, NL/17/00 aislado, o la proteína F del prototipo de B2 , NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteína F de una variante Al del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína F es idéntica por lo menos 98%, o por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la proteína F de una variante Al del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/1/00 (SEQ ID NO: 18) . La invención proporciona una proteína M2-1 de una variante Al del MPV de mamífero, en donde la proteína M2-1 de una variante Al del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína M2-1 del prototipo de variante Al, NL/l/00 aislado, que esta relacionado a la proteína M2-1 del prototipo de variante Bl, NL/l/99 aislado, la proteína M2-1 del prototipo de A2 , NL/17/00 aislado, o la proteína M2-1 del prototipo de B2 , NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteína M2-1 de una variante Al del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína M2-1 es idéntica por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la proteína M2-1 de una variante Al del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/l/00 (SEQ ID NO:42) . La invención proporciona una proteína M2-2 de una variante Al del MPV de mamífero, en donde la proteína M2-2 de una variante Al del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína M2-2 del prototipo de variante Al, NL/l/00 aislado, que esta relacionado a la proteína M2-2 del prototipo de variante Bl, NL/l/99 aislado, la proteína M2-2 del prototipo de A2, NL/17/00 aislado, o la proteína M2-2 del prototipo de B2, NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteína M2-2 de una variante Al del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína M2-2 es idéntica por lo menos 96%, o por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la proteína M2-2 de una variante Al del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/1/00 (SEQ ID NO: 50) . La invención proporciona una proteína SH de una variante Al del MPV de mamífero, en donde la proteína SH de una variante Al del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína SH del prototipo de variante Al, NL/l/00 aislado, que esta relacionado a la proteína SH del prototipo de variante Bl, NL/1/99 aislado, la proteína SH del prototipo de A2 , NL/17/00 aislado, o la proteína SH del prototipo de B2, NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteína SH de una variante Al del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína SH es idéntica por lo menos 84%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la proteína SH de una variante Al del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/1/00 (SEQ ID NO: 86). La invención proporciona una proteína L de una variante Al del MPV de mamífero, en donde la proteína L de una variante Al del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína L del prototipo de variante Al, NL/l/00 aislado, que está relacionado a la proteína L del prototipo de variante Bl, NL/l/99 aislado, la proteína L del prototipo de A2 , NL/17/00 aislado, o la proteína L del prototipo de B2 , NL/1/94 aislado.
La invención proporciona una proteína L de una variante Al del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína L es idéntica por lo menos 99% o por lo menos 99.5% a la proteína L de un virus de una variante Al del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/1/00 (SEQ ID NO: 34) . La invención proporciona una proteína G de una variante A2 del MPV de mamífero, en donde la proteína G de una variante A2 del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína G del prototipo de variante A2 , NL/17/00 aislado, que esta relacionado a la proteína G del prototipo de variante Bl, NL/l/99 aislado, la proteína G del prototipo de Al, NL/1/00 aislado, o la proteína G del prototipo de B2, NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteína G de una variante A2 del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína G es idéntica por lo menos 66%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85% por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98%, por lo menos 99% o por lo menos 99.5% a la proteína G de una variante A2 del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/17/00 (SEQ ID NO: 27) . La invención proporciona una proteína N de una variante A2 del MPV de mamífero, en donde la proteína N de una variante A2 del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína N del prototipo de variante A2 , NL/17/00 aislado, que esta relacionado a la proteína N del prototipo de variante Bl, NL/1/99 aislado, la proteína N del prototipo de Al, NL/l/00 aislado, o la proteína N del prototipo de B2, NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteína N de una variante A2 del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína N es idéntica por lo menos 99.5% a la proteína N de una variante ?2 del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/17/00 (SEQ ID NO: 71). La invención proporciona una proteína P de una variante A2 del MPV de mamífero, en donde la proteína P de una variante A2 del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína P del prototipo de variante A2, NL/17/00 aislado, que esta relacionado a la proteína P del prototipo de variante Bl, NL/1/99 aislado, la proteína P del prototipo de Al, NL/l/00 aislado, o la proteína P del prototipo de B2, NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteína P de una variante A2 del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína P es idéntica por lo menos 96%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la proteína P de una variante A2 del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/17/00 (SEQ ID NO:79). La invención proporciona una proteína M de una variante A2 del MPV de mamífero, en donde la proteína M de una variante A2 del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína M del prototipo de variante A2, NL/17/00 aislado, que esta relacionado a la proteína M del prototipo de variante Bl, NL/1/99 aislado, la proteína M del prototipo de Al, NL/l/00 aislado, o la proteína del prototipo de B2, NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteína M de una variante A2 del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína M es idéntica por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la proteína M de una variante A2 del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/17/00 (SEQ ID NO: 63) . La invención proporciona una proteína F de una variante A2 del MPV de mamífero, en donde la proteína F de una variante A2 del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína F del prototipo de variante A2, NL/17/00 aislado, que esta relacionado a la proteína F del prototipo de variante Bl, NL/1/99 aislado, la proteína F del prototipo de Al, NL/l/00 aislado, o la proteína F del prototipo de B2, NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteína F de una variante A2 del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína F es idéntica por lo menos 98%, o por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la proteína F de una variante A2 del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/17/00 (SEQ ID NO: 19) . La invención proporciona una proteína M2-1 de una variante A2 del MPV de mamífero, en donde la proteína M2-1 de una variante A2 del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína M2-1 del prototipo de variante A2, NL/17/00 aislado, que esta relacionado a la proteína M2-1 del prototipo de variante Bl, NL/l/99 aislado, la proteína M2-1 del prototipo de Al, NL/l/00 aislado, o la proteína M2-1 del prototipo de B2 , NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteína M2-1 de una variante A2 del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína M2-1 es idéntica por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la proteína M2-1 de una variante A2 del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/17/00 (SEQ ID NO: 43) . La invención proporciona una proteína M2-2 de una variante A2 del MPV de mamífero, en donde la proteína M2-2 de una variante A2 del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína M2-2 del prototipo de variante A2 , NL/17/00 aislado, que esta relacionado a la proteína M2-2 del prototipo de variante Bl, NL/l/99 aislado, la proteína M2-2 del prototipo de Al, NL/l/00 aislado, o la proteína M2-2 del prototipo de B2 , NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteína M2-2 de una variante A2 del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína M2-2 es idéntica por lo menos 96%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la proteína M2-2 de una variante A2 del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/17/00 (SEQ ID NO: 51). La invención proporciona una proteína SH de una variante A2 del MPV de mamífero, en donde la proteína SH de una variante A2 del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína SH del prototipo de variante A2, NL/17/00 aislado, que esta relacionado a la proteína SH del prototipo de variante Bl, NL/1/99 aislado, la proteína SH del prototipo de Al, NL/1/00 aislado, o la proteína SH del prototipo de B2, NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteína SH de una variante A2 del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína SH es idéntica por lo menos 84%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la proteína SH de una variante A2 del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/17/00 (SEQ ID NO:87) . La invención proporciona una proteína L de una variante A2 del MPV de mamífero, en donde la proteína L de una variante A2 del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína L del prototipo de variante A2, NL/17/00 aislado, que esta relacionado a la proteína L del prototipo de variante Bl, NL/1/99 aislado, la proteína L del prototipo de Al, NL/l/00 aislado, o la proteína L del prototipo de B2, NL/l/94 aislado. La invención proporciona una proteína L de una variante A2 del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína L es idéntica por lo menos 99% o por lo menos 99.5% a la proteína L de una variante A2 del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/17/00 (SEQ ID NO: 35) . La invención proporciona una proteína G de una variante B2 del MPV de mamífero, en donde la proteína G de una variante B2 del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína G del prototipo de variante B2, NL/l/94 aislado, que esta relacionado a la proteína G del prototipo de variante Bl, NL/l/99 aislado, la proteína G del prototipo de Al, NL/1/00 aislado, o la proteína G del prototipo de A2, NL/17/00 aislado. La invención proporciona una proteína G de una variante B2 del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína G es idéntica por lo menos 66%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85% por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98%, por lo menos 99% o por lo menos 99.5% a la proteína G de una variante B2 del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/l/94 (SEQ ID NO: 29) . La invención proporciona una proteína N de una variante B2 del MPV de mamífero, en donde la proteína N de una variante B2 del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína N del prototipo de variante B2, NL/l/94 aislado, que esta relacionado a la proteína N del prototipo de variante Bl, NL/l/99 aislado, la proteína N del prototipo de Al, NL/l/00 aislado, o la proteína N del prototipo de A2, NL/17/00 aislado. La invención proporciona una proteína N de una variante B2 del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína N es idéntica por lo menos 99%, o por lo menos 99.5% a la proteína N de una variante B2 del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/l/94 (SEQ ID NO: 73) . La invención proporciona una proteína P de una variante B2 del MPV de mamífero, en donde la proteína P de una variante B2 del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína P del prototipo de variante B2, NL/l/94 aislado, que esta relacionado a la proteína P del prototipo de variante Bl, NL/l/99 aislado, la proteína P del prototipo de Al, NL/1/00 aislado, o la proteína P del prototipo de A2 , NL/17/00 aislado. La invención proporciona una proteína P de una variante B2 del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína P es idéntica por lo menos 96%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la proteína P de una variante B2 del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/l/94 (SEQ ID NO: 81) . La invención proporciona una proteína M de una variante B2 del MPV de mamífero, en donde la proteína M de una variante B2 del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína M del prototipo de variante B2, NL/l/94 aislado, que esta relacionado a la proteína M del prototipo de variante Bl, NL/l/99 aislado, la proteína M del prototipo de Al, NL/1/00 aislado, o la proteína M del prototipo de A2 , NL/17/00 aislado. La invención proporciona una proteina M de una variante B2 del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de su proteína M es idéntica a la proteína M de una variante B2 del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/l/94 (SSQ ID NO: 65). La invención proporciona una proteína F de una variante B2 del MPV de mamífero, en donde la proteína F de una variante B2 del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína F del prototipo de variante B2 , NL/l/94 aislado, que esta relacionado a la proteína F del prototipo de variante Bl, NL/1/99 aislado, la proteína F del prototipo de Al, NL/l/00 aislado, o la proteína F del prototipo de A2 , NL/17/00 aislado. La invención proporciona una proteína F de una variante B2 del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína F es idéntica por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la proteína F de una variante B2 del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/l/94 (SEQ ID NO: 21) . La invención proporciona una proteína M2-1 de una variante B2 del MPV de mamífero, en donde la proteína M2-1 de una variante B2 del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína M2-1 del prototipo de variante B2, NL/l/94 aislado, que esta relacionado a la proteína M2-1 del prototipo de variante Bl, NL/1/99 aislado, la proteína M2-1 17 del prototipo de Al, NL/1/00 aislado, o la proteína M2-1 del prototipo de A2 , NL/17/00 aislado. La invención proporciona una proteina M2-1 de una variante B2 del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína M2-1 es idéntica por lo menos 98%, o por lo menos 99% o por lo menos 99.5%, a la proteína M2-1 de una variante B2 del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/l/94 (SEQ ID NO: 5). La invención proporciona una proteína M2-2 de una variante B2 del MPV de mamífero, en donde la proteína M2-2 de una variante B2 del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína M2-2 del prototipo de variante B2, NL/l/94 aislado, que esta relacionado a la proteína M2-2 del prototipo de variante Bl, NL/l/99 aislado, la proteína M2-2 del prototipo de Al, NL/1/00 aislado, o la proteína M2-2 del prototipo de A2 , NL/17/00 aislado. La invención proporciona una proteína M2-2 de una variante B2 del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido es idéntica por lo menos 99%, por lo menos 99.5%, a la proteína M2-2 de una variante B2 del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/l/94 (SEQ ID NO: 53) . La invención proporciona una proteína SH de una variante B2 del MPV de mamífero, en donde la proteína SH de una variante B2 del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína SH del prototipo de variante B2, NL/l/94 aislado, que esta relacionado a la proteína SH del prototipo de variante Bl, NL/l/99 aislado, la proteina SH del prototipo de Al, NL/l/00 aislado, o la proteína SH del prototipo de A2 , NL/17/00 aislado. La invención proporciona una proteína SH de una variante B2 del MPV de mamífero, en donde la secuencia de aminoácido de la proteína SH es idéntica por lo menos 84%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, o por lo menos 99.5%, a la proteína SH de una variante B2 del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/1/94 (SEQ ID NO: 89). La invención proporciona una proteína L de una variante B2 del MPV de mamífero, en donde la proteína L de una variante B2 del MPV de mamífero esta filogenéticamente más relacionada a la proteína L del prototipo de variante B2, NL/1/94 aislado, que esta relacionado a la proteína L del prototipo de variante Bl, NL/l/99 aislado, la proteína L del prototipo de Al, NL/l/00 aislado, o la proteína L del prototipo de A2, NL/17/00 aislado. La invención proporciona una proteína L de una variante B2 del MPV de mamífero, en donde y/o si la secuencia de aminoácido de la proteína L es idéntica por lo menos 99% o por lo menos 99.5% a la proteína L de una variante B2 del MPV de mamífero como se representa por el prototipo NL/l/94 (SEQ ID NO:37) . En ciertas modalidades, el porcentaje de identidad de secuencia se basa en un alineamiento de las proteínas de longitud total. En otras modalidades, el porcentaje de identidad de secuencia esta basado en un alineamiento de secuencias de aminoácidos contiguos de las proteínas, en donde las secuencias de aminoácido pueden ser 25 aminoácidos, 50 aminoácidos, 75 aminoácidos, 100 aminoácidos, 125 aminoácidos, 150 aminoácidos, 175 aminoácidos, 200 aminoácidos, 225 aminoácidos , 250 aminoácidos, 275 aminoácidos, 300 aminoácidos , 325 aminoácidos, 350 aminoácidos, 375 aminoácidos , 400 aminoácidos, 425 aminoácidos, 450 aminoácidos , 475 aminoácidos, 500 aminoácidos, 750 aminoácidos, 1000 aminoácidos, 1250 aminoácidos, 1500 aminoácidos, 1750 aminoácidos, 2000 aminoácidos, o 2250 aminoácidos, de longitud. La invención proporciona además secuencias de ácidos nucleicos derivadas de un MPV de mamífero. La invención también proporciona derivados de secuencias de ácidos nucleicos derivadas de un MPV de mamífero. En ciertas modalidades específicas los ácidos nucleicos son modificados.
En ciertas modalidades, un ácido nucleico de la invención codifica una proteína G, una proteína N, una proteína P, una proteína M, una proteína F, una proteína M2-1, una proteína M2-2, una proteína SH, o una proteína L, de un MPV de mamífero como se definió anteriormente. En ciertas modalidades, un ácido nucleico de la invención codifica una proteína G, una proteína , una proteína P, una proteína M, una proteína F, una proteína M2-1, una proteína M2-2, una proteína SH, o una proteína L, de subgrupo A de un MPV de mamífero como se definió anteriormente. En una modalidad específica, el gen G de un MPV de mamífero tiene la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 98-102. En una modalidad específica, el gen F de un PMV de mamífero tiene la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 168-274. En ciertas modalidades, un ácido nucleico de la invención codifica una proteína G, una proteína N, una proteína P, una proteína M, una proteína F, una proteína M2-1, una proteína M2-2, una proteína SH, o una proteína L, de subgrupo B de un MPV de mamífero como se definió anteriormente. En ciertas modalidades, un ácido nucleico de la invención codifica una proteína G, una proteína N, una proteína P, una proteína M, una proteína F, una proteína M2-1, una proteína M2-2, una proteína SH, o una proteína L, de variante Al de un MPV de mamífero como se definió anteriormente. En ciertas modalidades, un ácido nucleico de la invención codifica una proteína G, una proteína N, una proteína P, una proteína M, una proteína F, una proteína M2-1, una proteína M2-2, una proteína SH, o una proteína L, de variante A2 de un MPV de mamífero como se definió anteriormente . En ciertas modalidades, un ácido nucleico de la invención codifica una proteína G, una proteína N, una proteína P, una proteína M, una proteína F, una proteína M2-1, una proteína M2-2, una proteína SH, o una proteína L, de variante Bl de un MPV de mamífero como se definió anteriormente. En ciertas modalidades, un ácido nucleico de la invención codifica una proteína G, una proteína N, una proteína P, una proteína M, una proteína F, una proteína M2-1, una proteína M2-2, una proteína SH, o una proteína L, de variante B2 de un MPV de mamífero como se definió anteriormente. En ciertas modalidades, la invención proporciona una secuencia de nucleotidos que es idéntica por lo menos 50%, por lo menos 55%, por lo menos 60%, por lo menos 65%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 35%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, por lo menos 99.5%, a la secuencia de nucleotidos de SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96 o SEQ ID NO: 97. En ciertas modalidades, la secuencia de ácidos nucleicos de la invención que es idéntica por lo menos 50%, por lo menos 55%, por lo menos 60%, por lo menos 65%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, por lo menos 99.5%, a un fragmento de la secuencia de nucleotidos de SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96 o SEQ ID NO: 97, en donde el fragmento es de por lo menos 25 nucleotidos, por lo menos 50 nucleotidos, por lo menos 75 nucleotidos, por lo menos 100 nucleotidos, por lo menos 150 nucleotidos, por lo menos 200 nucleotidos, por lo menos 250 nucleotidos, por lo menos 300 nucleotidos, por lo menos 400 nucleotidos, v por lo menos 500 nucleotidos, por lo menos 750 nucleotidos, por lo menos 1,000 nucleotidos, por lo menos 1,250 nucleotidos, por lo menos 1,500 nucleótidos, por lo menos 1,750 nucleotidos, por lo menos 2,000 nucleótidos, por lo menos 2,000 nucleotidos, por lo menos 3,000 nucleótidos, por lo menos 4,000 nucleótidos, por lo menos 5,000 nucleótidos, por lo menos 7,500 nucleótidos, por lo menos 10,000 nucleótidos, por lo menos 12,500 nucleótidos, por lo menos 15,000 nucleótidos, de longitud. En una modalidad específica, la secuencia de ácidos nucleicos de la invención es de por lo menos 50%, por lo menos 55%, por lo menos 60%, por lo menos 65%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, por lo menos 99.5%, o 100% idéntico a una de las secuencias de nucleótidos de SEQ ID NO: 98-132; SEQ ID NO : 168-247, SEQ ID NO: 22-25, SEQ ID NO: 30-33; SEQ ID NO: 38-41; SEQ ID NO: 46-49; SEQ ID NO: 54-57; SEQ ID NO: 58-61; SEQ ID NO: 66-69; SEQ ID NO: 74-77; SEQ ID NO: 82-85; o SEQ ID NO: 90-93.
En modalidades especificas de la invención, una secuencia de ácidos nucleicos de la invención es capaz de hibridizar bajo condiciones de rigor bajas, de rigor medias y de rigor altas a una de las secuencias de ácido nucleico de SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 97. En modalidades especificas de la invención, una secuencia de ácidos nucleicos de la invención es capaz de hibridizar bajo condiciones de rigor bajas, de rigor medias y de rigor altas a una de las secuencias de ácido nucleico de SEQ ID NO: 98-132, SEQ ID NO: 168-247; SEQ ID NO: 22-25; SEQ ID NO: 30-33; SEQ ID NO: 38-41; SEQ ID NO: 46-49; SEQ ID NO: 54-57; SEQ ID NO: 58-61; SEQ ID NO: 66-69; SEQ ID NO: 74-77; SEQ ID NO: 82-85; o SEQ ID NO: 90-93. En ciertas modalidades, un ácido nucleico hibridiza en una longitud de por lo menos 25 nucleotidos, por lo menos 50 nucleotidos, por lo menos 75 nucleotidos, por lo menos 100 nucleotidos, por lo menos 150 nucleotidos, por lo menos 200 nucleotidos, por lo menos 250 nucleotidos, por lo menos 300 nucleotidos, por lo menos 400 nucleotidos, por lo menos 500 nucleotidos, por lo menos 750 nucleotidos, por lo menos 1,000 nucleotidos, por lo menos 1,250 nucleotidos, por lo menos 1,500 nucleotidos, por lo menos 1,750 nucleotidos, por lo menos 2,000 nucleotidos, por lo menos 2,00 nucleotidos, por lo menos 3,000 nucleotidos, por lo menos 4,000 nucleotidos, por lo menos 5,000 nucleotidos, por lo menos 7,500 nucleotidos, por lo menos 10,000 nucleotidos, por lo menos 12,500 nucleotidos, por lo menos 15,000 nucleotidos, con 124 la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, o SEQ ID NO: 97. La- invención proporciona además fragmentos de anticuerpos y antígenos de enlace que enlazan de manera específica a una proteína de un MPV de mamífero. Un anticuerpo de la invención enlaza de manera específica a una proteína G, una proteína N, una proteína P, una proteína M, una proteína F, una proteína M2-1, una proteína M2-2, una proteína SH, o una proteína L de un MPV de mamífero. En modalidades específicas, el anticuerpo es un anticuerpo humano o un anticuerpo humanizado. En ciertas modalidades, un anticuerpo de la invención enlaza de manera específica a una proteína G, una proteína N, una proteína P, una proteína M, una proteína F, una proteína M2-1, una proteína M2-2, una proteína SH, o una proteína L de un virus del subgrupo A de un MPV de mamífero. En otras ciertas modalidades, un anticuerpo de la invención enlaza de manera específica a una proteína G, una proteína N, una proteína P, una proteína M, una proteína F, una proteína M2-1, una proteína M2-2, una proteína SH, o una proteína L de un virus del subgrupo B de un MPV de mamífero. En ciertas modalidades, más específicas, un anticuerpo de la invención enlaza de manera específica a una proteína G, una proteína N, una proteína P, una proteína M, una proteína F, una proteína M2-1, una proteína M2-2, una proteína SH, o una proteína L de 5 variante Al de un MPV de mamífero. En otras modalidades, el anticuerpo de la invención enlaza de manera específica a una proteína G, una proteína N, una proteína P, una proteína M, una proteína F, una proteína M2-1, una proteína M2-2, una proteína SH, o una proteína L de un virus del subgrupo A2 de un MPV de mamífero. En ciertas modalidades, un anticuerpo de la invención enlaza de manera específica a una proteína G, una proteína N, una proteína P, una proteína M, una proteína F, una proteína M2-1, una proteína M2-2, una proteína SH, o una proteína L de un virus del subgrupo Bl de un MPV de mamífero. En ciertas modalidades, un anticuerpo de la invención enlaza de manera específica a una proteína G, una proteína N, una proteína P, una proteína M, una proteína F, una proteína M2-1, una proteína M2-2, una proteína SH, o una proteína L de un virus del subgrupo B2 de un MPV de mamífero. 5.1.3. INSERCIÓN DE LA SECUENCIA DEL GEN HETERÓLOGO La inserción de una secuencia de gen extraño en un vector viral de la invención puede complementarse ya sea por un reemplazo completo de una región de codificación viral con una secuencia heteróloga, o por un reemplazo parcial de la misma, o agregando la secuencia de nucleótido heterólogo al genoma viral. El reemplazo completo probablemente se lograría mejor a través del uso de mutagénesis dirigida por PCR. Brevemente, El cebador A de PCR contendría, del extremo 5' al 3': un sitio único de la enzima de restricción, tal como un sitio de la enzima de restricción clase US (es decir, una enzima "desplazadora" ; que reconoce una secuencia específica pero escinde el ADM ya sea corriente arriba o corriente abajo de esa secuencia) ; un estiramiento de los nucleótidos complementarios a una región del gen PIV; y un estiramiento de los nucleótidos complementarios a la porción de codificación del término carboxi de la secuencia heteróloga. El cebador B de PCR contendrían del extremo 5 ' al 3 ' : un sitio único de la enzima de restricción; un estiramiento de los nucleótidos complementarios a un gen PIV; y un estiramiento de los nucleótidos que corresponden a la porción de codificación 5' del gen extraño. Después de una reacción de PCR utilizando estos cebadores con una copia clonada del gen extraño, el producto puede cortarse y clonarse usando los sitios únicos de restricción. La digestión con la enzima clase IIS y la transcripción con la polimerasa del fago purificado generarían una molécula de ARN que contiene los extremos no traducidos exactos del gen del PIV con una inserción del gen extraño. En una modalidad alternada, podrían utilizarse las reacciones cebadas con PCR para preparar ADN de doble hebra que contiene la secuencia promotora del bacteriófago, y la secuencia del gen híbrido para que puedan transcribirse las plantillas de ARN directamente sin clonar.
Una secuencia de nucleotido heterologo puede agregarse o insertarse en varias posiciones del virus de la invención. En una modalidad, la secuencia de nucleotido heterologo se agrega o inserta en la posición 1. En otra modalidad, la secuencia de nucleotido heterologo se agrega o inserta en la posición 2. En otra modalidad, la secuencia del nucleotido heterologo se agrega o inserta en la posición 3. En otra modalidad, la secuencia de nucleotido heterologo se agrega o inserta en la posición 4. En otra modalidad, la secuencia de nucleotido heterologo se agrega o inserta en la posición 5. En todavía otra modalidad, la secuencia de nucleotido heterologo se agrega o inserta en la posición 6. Como se utiliza aquí, el término "posición" se refiere a la posición de la secuencia de nucleotido heterologo en el genoma viral que será transcrita, por ejemplo, la posición 1 significa que es el primer gen será transcrito, y la posición 2 significa que es el segundo gen será transcrito. La inserción de las secuencias del nucleotido heterologo en las posiciones numeradas menores del virus, generalmente produce la expresión más fuerte de la secuencia del nucleotido heterologo comparada a la inserción en las posiciones numeradas superiores debido a un gradiente transcriptional que ocurre a través del genoma del virus . Sin embargo, el gradiente transcriptional también da proporciones específicas de mARJTs viral . La inserción de genes extraños perturbará estas proporciones y producirá la síntesis de cantidades diferentes de proteínas virales que pueden influir en la repetición del virus. Así, deben considerarse el gradiente transcriptional y las cinéticas de repetición al escoger un sitio de inserción. Por ejemplo, la inserción de la secuencia del nucleótido heterólogo en la posición 2 del vector b/h PIV3 produce el mejor índice de repetición y nivel de expresión del gen heterólogo. La inserción de secuencias de nucleótidos heterólogos en las posiciones numeradas menores es la modalidad . preferida de la invención si se desea la expresión fuerte de la secuencia del nucleótido heterólogo. En una modalidad preferida, la secuencia heteróloga se agrega o inserta en la posición 1, 2 o 3. Cuando se inserta una secuencia del nucleótido heterólogo en el virus de la invención, la región intergénica entre el extremo de la secuencia de codificación del gen heterólogo y el inicio de la secuencia de codificación del gen corriente abajo puede alterarse para lograr un efecto deseado. Como se utiliza aquí, el término "región intergénica" se refiere a la secuencia del nucleótido entre la señal de detención de un gen y el codon de inicio (por ejemplo, AUG) de la secuencia de codificación de la próxima estructura de lectura abierta corriente abajo. Una región intergénica puede comprender una región no codificante de un gen, es decir, entre el sitio inicial de transcripción y el inicio de la secuencia de codificación (AUG) del gen. Esta región no codificante se presenta naturalmente en bPIV3 mARNs del y otros genes virales que se ilustran como ejemplos no limitantes en la Tabla 2: Tabla 2 : Longitudes de las Regiones no codificantes para los mARNs de bPIV3 . AUG ... w 45 nucleótidos P 68 nucleótidos M 21 nucleótidos F 201 nucleótidos HN 62 nucleótidos L 12 nucleótidos b/h RSV Fl 10 nucleótidos b/h RSV F2 86 nucleótidos b/h RSV Fl NP-P 83 nucleótidos En varias modalidades, la región intergénica entre la secuencia del nucleótido heterólogo y el gen corriente abajo puede diseñarse, independientemente, para ser por lo menos 10 nt de longitud, por lo menos 20 nt de longitud, por lo menos 30 nt de longitud, por lo menos 50 nt de longitud, por lo menos 75 nt de longitud, por lo menos 100 nt de longitud, por lo menos 125 nt de longitud, por lo menos 150 nt de longitud, por lo menos 175 nt de longitud o por lo menos 200 nt de longitud. En ciertas modalidades, la región intergénica entre la secuencia del nucleótido heterólogo y el gen corriente abajo puede diseñarse, independientemente, para ser a lo más 10 nt de longitud, a lo más 20 nt de longitud, a lo más 30 nt de longitud, a lo más 50 nt de longitud, a lo más 75 nt de longitud, a lo más 100 nt de longitud, a lo más 125 nt de longitud, a lo más 150 nt de longitud, a lo más 175 nt de longitud o a lo más 200 nt de longitud. En las varias modalidades, la región no codificante de un gen deseado en un genoma del virus puede diseñarse también, independientemente de, para ser por lo menos 10 nt de longitud, por lo menos 20 nt de longitud, por lo menos 30 nt de longitud, por lo menos 50 nt de longitud, por lo menos 75 nt de longitud, por lo menos 100 nt de longitud, por lo menos 125 nt de longitud, por lo menos 150 nt de longitud, por lo menos 175 nt de longitud o por lo menos 200 nt de longitud. En ciertas modalidades, la región no codificante de un gen deseado en un genoma del virus puede diseñarse también, independientemente, para ser a lo más 10 nt de longitud, a lo más 20 nt de longitud, a lo más 30 nt de longitud, a lo más 50 nt de longitud, a lo más 75 nt de longitud, a lo más 100 nt de longitud, a lo más 125 nt de longitud, a lo más 150 nt de longitud, a lo más 175 nt de longitud o a lo más 200 nt de longitud.
Cuando se inserta una secuencia del nucleótido heterólogo, el efecto de la posición y la manipulación de la región intergénica pueden utilizarse en combinación para lograr un efecto deseable. Por ejemplo, la secuencia del nucleótido heterólogo puede agregarse o insertarse en una posición seleccionada del grupo que consiste de la posición 1, 2, 3, 4, 5, y 6, y puede alterarse la región intergénica entre la secuencia del nucleótido heterólogo y el gen corriente aba o próximo (vea Tabla 3) . En una modalidad ejemplar, el gen h SV F se inserta en la posición 1 de un vector b/h PIV3 , y la región intergénica entre el gen F y el gen N (es decir, el gen corriente abajo próximo de F) se altera a 177 nucleótidos. Muchas más combinaciones se abarcan por la presente invención y algunas se muestran por vía de ejemplo de en la Tabla 3. Tabla 3. Ejemplos del modo de inserción de las secuencias del nucleótido heterólogo Posición Posición Posición Posición Posición Posición 1 2 3 4 5 6 IGR 10-20 10-20 10-20 10-20 10-20 10-20 IGR 21-40 21-40 21-40 21-40 21-40 21-40 IGR 41-60 41-50 41-60 41-60 41-60 41-60 IGR 61-80 61-80 61-80 61-80 61-80 61-80 IGR 81-100 81-100 81-100 81-100 81-100 81-100 IGR 101-120 101-120 101-120 101-120 101-120 101-120 IGR 121-140 121-140 121-140 121-140 121-140 121-140 IGR 141-160 141-160 141-160 141-160 141-160 141-160 IGR 161-180 161-180 161-180 161-180 161-180 161-180 IGR 181-200 181-200 181-200 181-200 181-200 181-200 IGR 201-220 201-220 201-220 201-220 201-220 201-220 IGR 221-240 221-240 221-240 221-240 221-240 221-240 IGR 241-260 241-260 241-260 241-260 241-260 241-260 IGR 261-280 261-280 261-280 261-280 261-280 261-280 IGR 281-300 281-300 281-300 281-300 281-300 281-300 a Región intergénica, medida en el nucleótido. Dependiendo del propósito (por ejemplo, para tener inmunogenicidad fuerte) de la secuencia del nucleótido heterologo insertada, la posición de la inserción y la longitud de la región intergénica de la secuencia del nucleótido heterologo insertada, puede determinarse por varios índices incluyendo, pero no limitado a, cinéticas de replicacion y niveles de expresión de ARNm o proteína, medidos por los siguientes ejemplos de ensayo no limitantes: ensayo de placa, ensayo de enfoque fluorescente, ensayo de centro infeccioso, ensayo de transformación, ensayo de dilución de punto final, eficiencia de colocación en placas, microscopía de electrones, hemoaglutinación, medición de la actividad de la enzima viral, neutralización viral, inhibición de la hemoaglutinación, fijación del complemento, inmunoteñido, inmunoprecipitación e inmunomanchado, ensayo inmunoabsorbente enlazado a la enzima, detección del ácido nucleico (por ejemplo, análisis de manchado Southern, análisis de manchado Nothern, análisis de manchado Western) , curva de crecimiento, empleo de un gen reportero (por ejemplo, utilizando un gen reportero, tal como la Proteína de Fluorescencia Verde (GFP) o la Proteína de Fluorescencia Verde mejorada (eGFP) , integrado al genoma viral de la misma manera como el gen heterólogo de interés, para observar la expresión de la proteína) , o una combinación de los mismos. Los procedimientos para realizar estos ensayos son bien conocidos en la técnica (vea, por ejemplo, Flint et al., PRINCIPLES OF VIROLOGY, MOLECULAR BIOLOGY, PATHOGENESIS, AND CONTROL, 2000, ASM Press pp 25-56, el texto entero se incorpora aquí por referencia) , y se dan ejemplos no limitantes en la sección de Ejemplos, infra. Por ejemplo, los niveles de expresión pueden determinarse infectando las células en el cultivo con un virus de la invención y subsecuentemente midiendo el nivel de expresión de la proteína mediante, por ejemplo, análisis de manchado Western o ELISA utilizando los anticuerpos específicos al producto del gen de la secuencia heterologa, o midiendo el nivel de expresión de ARN mediante, por ejemplo, análisis de manchado Northern utilizando sondas específicas a la secuencia heterologa. Semejantemente, los niveles de expresión de la secuencia heterologa pueden determinarse infectando a un modelo animal y midiendo el nivel de proteína expresado de la secuencia heterologa del virus recombinante de la invención en el modelo animal . El nivel de la proteína puede medirse obteniendo una muestra de tejido del animal infectado y posteriormente sometiendo la muestra de tejido al análisis de manchado Western o ELISA, utilizando anticuerpos específicos al producto del gen de la secuencia heterologa. Además, si se utiliza un modelo animal, el título de los anticuerpos producidos por el animal contra el producto del gen de la secuencia heterologa puede determinarse por cualquier técnica conocida por el artesano experimentado, incluyendo pero no limitado a, ELISA. Como las secuencias del heterólogo pueden ser homologas a una secuencia del nucleótido en el genoma del virus, se debe tener cuidado de que las sondas y los anticuerpos sean hechos específicos a la secuencia heterologa o a su producto del gen.
En ciertas modalidades específicas, los niveles de expresión de la Proteína F de RSV o hMPV del b/h PIV3 RSV o b/h hMPV PIV3 o b/h PIV3 RSV F y hMPV F quimérico pueden determinarse por cualquier técnica conocida por el artesano experimentado . Los niveles de expresión de la Proteína F puede determinarse infectando las células en un cultivo con el virus quimérico de la invención y midiendo el nivel de expresión de la proteína mediante, por ejemplo, análisis de manchado Western o ELISA utilizando anticuerpos específicos a la Proteína F y/o la Proteína G de hMPV, o midiendo el nivel de expresión de ARN mediante, por ejemplo, análisis de manchado Northern utilizado sondas específicas al Gen F y/o al Gen G de metaneumovirus humano. Semejantemente, los niveles de expresión de la secuencia heterologa pueden determinarse utilizando un modelo animal, infectando un animal y midiendo el nivel de Proteína F y/o Proteína G en el modelo animal. El nivel de la proteína puede medirse obteniendo una muestra de tejido del animal infectado y posteriormente sometiendo la muestra de tejido al análisis de manchado Western o ELISA utilizando anticuerpos específicos a la Proteína F y/o Proteína G de la secuencia heteróloga. Además, si se utiliza un modelo animal, el título de los anticuerpos producidos por el animal contra la Proteína F y/o Proteína G pueden ser determinados por cualquier técnica conocida por el artesano experimentado, incluyendo pero no limitado a, ELISA. La proporción de replicación de un virus recombinante de la invención puede determinarse por cualquier técnica conocida por el artesano experimentado. En ciertas modalidades, para facilitar la identificación de la posición óptima de la secuencia heteróloga en el genoma viral y la longitud óptima de la región intergénica, la secuencia heteróloga codifica un gen reportero. Una vez que los parámetros óptimos son determinados, el gen reportero se reemplaza por una secuencia del nucleótido heterólogo que codifica un antígeno de elección. Puede utilizarse cualquier gen reportero conocido por el artesano experimentado con los métodos de la invención. Para más detalle, vea la sección 5.5. 36 La proporción de replicacion del virus recombinante puede determinarse por cualquier técnica estándar conocida por el artesano experimentado. La proporción de repetición se representa por la tasa de crecimiento del virus y puede determinarse graficando el título viral sobre el tiempo después de la infección. El título viral puede medirse por cualquier técnica conocida por el artesano experimentado. En ciertas modalidades, una suspensión que contiene el virus se incuba con células que son susceptibles a la infección por el virus. Los tipos de células que pueden utilizarse con los métodos de la invención incluyen, pero no se limitan a, células Vero, células LLC-MK-2, células Hep-2, células LF 1043 (HEL) , células MRC-5, células I-38, células 293 T, células QT 6, células QT 35, fibroblasto de embrión de pollo (CEF) , o células tMK. Subsecuente a la incubación del virus con las células, se determina el número de células infectadas. En ciertas modalidades específicas, el virus comprende un gen reportero. Así, el número de células que expresan el gen reportero es representativo del número de células infectadas. En una modalidad específica, el virus comprende una secuencia del nucleótido heterologo que codifica para eGFP, y el número de células que expresan eGFP, es decir, el número de células infectadas con el virus, se determina utilizando FACS .
En ciertas modalidades, la proporción de la repetición del virus recombinante de la invención es a lo más 20% de la proporción de la repetición del virus de tipo salvaje, del que el virus recombinante se deriva bajo las mismas condiciones. Las mismas condiciones se refieren al mismo título inicial del virus, la misma cepa de las células, la misma temperatura de incubación, medio de crecimiento, número de células y otras condiciones de la prueba que pueden afectar la proporción de la replicacion. Por ejemplo, la proporción de la repetición de b/ PIV3 con el gen RSV F en la posición 1 es a lo más 20% de la proporción de la replicacion de bPIV3. En ciertas modalidades, la proporción de la replicacion del virus recombinante de la invención es a lo más 5%, a lo más 10%, a lo más 20%, a lo más 30%, a lo más 40%, a lo más 50%, a lo más 75%, a lo más 80%, a lo más 90% de la proporción de la replicacion del virus de tipo salvaje, del que el virus recombinante se deriva bajo las mismas condiciones, . En ciertas modalidades, la proporción de la replicacion del virus recombinante de la invención es por lo menos 5%, por lo menos 10%, por lo menos 20%, por lo menos 30%, por lo menos 40%, por lo menos 50%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 90% de la proporción de la replicacion del virus de tipo salvaje, del que el virus recombinante se deriva bajo las mismas condiciones. En ciertas modalidades, la proporción de la replicación del virus recombinante de la invención está entre 5% y 20%, entre 10% y 40%, entre 25% y 50%, entre 40% y 75%, entre 50% y 80%, o entre 75% y 90% de la proporción de la replicación del virus de tipo salvaje, del que el virus recombinante se deriva bajo las mismas condiciones. En ciertas modalidades, el nivel de la expresión de la secuencia heteróloga en el virus recombinante de la invención es a lo más 20% del nivel de la expresión de la Proteína F del virus de tipo salvaje, del que el virus recombinante se deriva bajo las mismas condiciones. Las mismas condiciones se refieren al mismo título inicial de virus, la misma cepa de las células, la misma temperatura de incubación, medio de crecimiento, número de células y otras condiciones de la prueba que pueden afectar la proporción de la repetición, . Por ejemplo, el nivel de la expresión de la secuencia heteróloga de la Proteína F de MPV en la posición 1 de bPIV3 es a lo más 20% del nivel de la expresión de la Proteína F de bPIV3 bovina . En ciertas modalidades, el nivel de la expresión de la secuencia heteróloga en el virus recombinante de la invención es a lo más 5%, a lo más 10%, a lo más 20%, a lo más 30%, a lo más 40%, a lo más 50%, a lo más 75%, a lo más 80%, a lo más 90% del nivel de la expresión de la Proteína F del virus de tipo salvaje, del que el virus recombinante se deriva bajo las mismas condiciones, . En ciertas modalidades, el nivel de la expresión de la secuencia heteróloga en el virus recombinante de la invención es por lo menos 5%, por lo menos 10%, por lo menos 20%, por lo menos 30%, por lo menos 40%, por lo menos 50%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 90% del nivel de la expresión de la Proteína F del virus de tipo salvaje, del que el virus recombinante se deriva bajo las mismas condiciones. En ciertas modalidades, el nivel de la expresión de la secuencia heteróloga en el virus recombinante de la invención está entre 5% y 20%, entre 10% y 40%, entre 25% y 50%, entre 40% y 75%, entre 50% y 80%, o entre 75% y 90% del nivel de la expresión de la Proteina F del virus de tipo salvaje, del que el virus recombinante se deriva bajo las mismas condiciones. 5.1.4. INSERCIÓN DE LA SECUENCIA DEL GEN HETERÓLOGO EN EL GEN HN La proteína responsable para la hemaglutinina y las actividades de la neuraminidasa de PIV se codifica por un solo gen, HN. La proteína HN es una glicoproteína de superficie mayor del virus. Para una variedad de virus, tal como la parainfluenza, las proteínas hemaglutinina y neuraminidasa han mostrado contener varios sitios antigénicos. Por consiguiente, esta proteína es un blanco potencial para la respuesta inmuno humoral después de la infección. Por consiguiente, la substitución de sitios antigénicos de HN con una porción de una proteina extraña puede proporcionar una respuesta humoral vigorosa contra este péptido extraño. Si se inserta una secuencia dentro de la molécula HN, y se expresa en la superficie exterior de la HN, será inmunogénica . Por ejemplo, un péptido derivado de gp 160 de VIH podría reemplazar un sitio antigénico de la proteína HN, produciendo una respuesta inmuno humoral a gp 160 y a la proteína HN. En un acercamiento diferente, la secuencia del péptido extraño puede insertarse dentro del sitio antigénico sin anular cualquier secuencia viral . Los productos de la expresión de tales estructuras pueden ser útiles en las vacunas contra el antígeno extraño, y pueden efectivamente eliminar un problema discutido ya antes, de propagación del virus recombinante en el hospedero vacunado. Una molécula HN intacta con una sola substitución en los sitios antigénicos, puede permitir que HN funcione y permitir así la construcción de un virus viable. Por consiguiente, este virus puede crecer sin la necesidad de funciones de ayuda adicionales. El virus también puede atenuarse de otras maneras para evitar cualquier peligro de escape accidental. Pueden hacerse otras construcciones híbridas para expresar las proteínas en la superficie celular o permitirles liberarse de la célula. Como una glicoproteína de superficie, HN tiene un una secuencia de señal de escisión amino-terminal necesaria para el transporte a la superficie celular, y una secuencia amino-terminal necesaria para fijar la membrana. A fin de expresar una proteína extraña intacta en la superficie celular, puede ser necesario utilizar estas señales HN para crear una proteína híbrida. En este caso, la proteína de fusión puede expresarse como una proteína de fusión separada de un promotor interno adicional. Alternativamente, si sólo las señales de transporte están presentes y la membrana que fija el dominio está ausente, la proteína puede secretarse fuera de la célula. 5.1.5. CONSTRUCCIÓN DE ARN BICISTRONICO Podría construirse el ARNm bicistrónico para permitir iniciación interna de la traducción de las secuencias virales y permitir la expresión de la proteína extraña que codifica las secuencias del sitio de iniciación terminal regular. Alternativamente, puede construirse una secuencia de ARNm bicistrónico en donde la secuencia viral se traduce de la estructura de lectura abierta terminal regular, mientras que 'la secuencia extranjera se comienza de un sitio interior. Pueden utilizarse ciertas secuencias (IRES) de sitios de entrada de ribosoma interior. Las secuencias IRES que son escogidas deben ser suficientemente cortas para evitar la interferencia con las limitaciones de empaque de la parainfluenza. Así, es preferible que los IRES escogidos para tal acercamiento bicistrónico sean no más de 500 nucleótidos de longitud, con menos de 250 nucleótidos de longitud ideal. En una modalidad específica, las IRES se derivan de un picornavirus y no incluyen ninguna secuencia picornaviral adicional. Los elementos IRES preferidos incluyen, pero no se limitan a, IRES BiP de mamífero e IRES de virus de hepatitis C. Alternativamente, una proteína extraña puede expresarse de una nueva unidad transcriptional interna en que la unidad transcriptional tiene un sitio de iniciación y un sitio de poliadenilación. En otra modalidad, el gen extraño se inserta en un gen PIV tal que la proteína expresada resultante es una proteína de fusión. 5.2. EXPRESIÓN DE LOS PRODUCTOS DEL GEN HETEROLOGO QUE UTILIZAN PLANTILLAS ADNc Y ARN RECOMBINANTE Las plantillas recombinantes preparadas como se describe anteriormente pueden utilizarse en una variedad de maneras para expresar los productos del gen heterólogo en células hospederas apropiadas o para crear virus quiméricos que expresan los productos del gen heterólogo. En una modalidad, el cADN recombinante pueden utilizarse para transfectar las células hospederas apropiadas y el ARN resultante pueden dirigir la expresión del producto del gen heterólogo en los 1 altos niveles. Los sistemas hospederos celulares que mantienen altos niveles de expresión incluyen líneas celulares continuas que proporcionan funciones virales tales como líneas celulares superinfectadas con PIV, líneas celulares diseñadas para complementar las funciones PIV, etc. En una modalidad alternada de la invención, las plantillas del recombinante pueden utilizarse para transfectar las líneas celulares que expresan una proteína polimerasa viral para lograr la expresión del producto del gen heterólogo. A este extremo, pueden utilizarse líneas celulares transformadas que expresan una proteína polimerasa tal como la proteína L, como células hospederas apropiadas. Pueden diseñarse semejantemente las células hospederas para proporcionar otras funciones virales o funciones adicionales tales como H , NP o N. En otra modalidad, un virus auxiliador puede proporcionar la proteína polimerasa ARN utilizada por las células para lograr la expresión del producto del gen heterólogo. En todavía otra modalidad, las células pueden ser transfectadas con vectores que codifican las proteínas virales tales como N o NP, P, M2-1 y proteínas L. Puede utilizarse una técnica diferente para detectar la expresión de los productos del gen heterólogo (vea, por ejemplo, Flint et al., PRINCIPLES OF VIROLOGY, MOLECULAR BIOLOGY, PATHOGENESIS, AND CONTROL, 2000, ASM Press p 25-56, el texto entero se incorpora aguí por referencia) . En un ensayo ejemplar, las células infectadas con el virus son permeabilizadas con raetanol o acetona e incubadas con un anticuerpo elevado contra los productos del gen heterólogo. Se agrega entonces un segundo anticuerpo que reconoce el primer anticuerpo. Este segundo anticuerpo normalmente se conjuga a un indicador para que la expresión de los productos del gen heterólogo pueda visualizarse o detectarse. 5.3. RESCATE DE PARTÍCULAS DEL VIRUS RECOMBINANTE Para preparar el virus quimérico, pueden utilizarse el cADNs modificado, virus ARNs, o ARN que codifica para el genoma PIV y/o las proteínas extrañas en el mayor o menor sentido para transfectar las células que proporcionan las proteínas virales y las funciones requeridas para la replicación y rescate. Alternativamente, las células pueden ser transfectadas con el virus asistente antes, durante, o después de la transfección por la molécula de ADN o ARN que codifica para el genoma PIV y/o para las proteínas extrañas. Los ADNs y ARNs del PIV del plasmido recombinante, sintético, pueden replicarse y rescatarse en las partículas del virus infeccioso por cualquier número de técnicas conocidas en la técnica, como se describe en la Patente Norteamericana No. 5,166,057 emitida el 24 de noviembre del992; en la Patente Norteamericana No. 5,854,037 emitida el 29 de diciembre del998; en la Solicitud de Patente Europea EP 0702085A1, publicada el 20 de febrero de 1996; en la Solicitud de Patente Norteamericana Numero de Serie No. 09/152, 845; en las Publicaciones de Patentes Internacionales PCT W097/12032 publicada el 3 de abril del997; W096/34625 publicada el 7 de noviembre de 1996; en la Solicitud de Patente Europea EP-A780475; WO 99/02657 publicada el 21 de enero del999; WO 98/53078 publicada el 26 de noviembre de 1998; WO 98/02530 publicada el 22 de enero de 1998; WO 99/15672 publicada el 1 de abril del999; WO 98/13501 publicada el 2 de abril de 1998; WO 97/06270 publicada el 20 de febrero del997; y EPO 780 47SA1 publicada el 25 de junio de 1997, cada una de las cuales se incorporan aquí por referencia en su totalidad. En una modalidad de la presente invención, puede prepararse el ARNs viral recombinante sintético que contiene las regiones no codificantes del ARN del virus de hebra negativa, esencial para el reconocimiento por las polimerasas virales y por el empaque de las señales necesarias para generar un virión maduro. Hay un número de enfoques diferentes que pueden utilizarse para aplicar el enfoque de la genética inversa para rescatar los virus de ARN de hebra negativa. Primero, el ARNs recombinante se sintetiza de una plantilla de ADN recombinante y se reconstituye in vi tro con el complejo de polimerasa viral purificado para formar ribonucleoproteínas recombinantes (RNPs) que pueden utilizarse para transfectar las células. En otra aproximación, se logra una transfección más eficaz si las proteínas polimerasa virales están presentes durante la transcripción del AR s sintético in vitro o in vivo. Con esta aproximación el ARNs sintético puede transcribirse de los plásmidos del cADN que, se co-transcriben in vitro con plásmidos del cADN que codifican las proteínas polimerasa, o se transcriben in vivo en presencia de proteínas polimerasa, es decir, en células que de manera transitoria o constitutivamente expresan las proteínas de polimerasa. En aproximaciones adicionales descritas aquí, la producción del virus quimérico infeccioso puede reproducirse en sistemas celulares hospederos que expresan una proteína polimerasa viral PIV (por ejemplo, en los sistemas de expresión celular virus/hospedero; líneas celulares transformadas diseñadas para expresar una proteína polimerasa, etc . ) , de manera que se rescaten los virus quiméricos infecciosos. En este caso, la necesidad del virus asistente no se utiliza desde que esta función se proporciona por las proteínas polimerasa virales expresadas. De acuerdo con la presente invención, cualquier técnica conocida por aquéllos de habilidad en la técnica, puede utilizarse para lograr la replicacion y rescate de los virus recombinantes y quiméricos . Una aproximación involucra el proporcionar las proteínas virales y las funciones requeridas para la replicación in vitro antes de transfectar las células hospederas. En tal modalidad, pueden proporcionarse las proteínas virales en la forma de virus de tipo salvaje, virus asistente, proteínas virales purificadas o proteínas virales expresadas recombinantemente . Las proteínas virales pueden proporcionarse antes, durante o después de la transcripción del cADNs o ARNs sintético que codifica el virus quimérico. Puede utilizarse la mezcla completa para transfectar las células hospederas. En otra aproximación, pueden proporcionarse las proteínas virales y las funciones requeridas para la replicación antes o durante la transcripción del cADNs o ARNs sintético que codifica el virus quimérico. En tal modalidad, se proporcionan las proteínas virales y las funciones requeridas para la replicación en la forma de virus de tipo salvaje, virus asistente, extractos virales, cADNs o ARNs sintéticos que expresan las proteínas virales, se introducen en la célula hospedera vía infección o transfecció . Esta infección/transfección toma lugar antes o simultáneamente a la introducción del cADNs o ARNs sintético que codifica el virus quimérico. En un enfoque particularmente deseable, las células diseñadas por ingeniería para expresar todos los genes virales del recombinante o virus quimérico de la invención pueden resultar en la producción del virus quimérico infeccioso que contiene el genotipo deseado; eliminando así la necesidad de un sistema de selección. Teóricamente, uno puede reemplazar cualquiera de los seis genes o parte de cualquiera de los seis genes que codifican las proteínas estructurales de PIV con una secuencia extraña. Sin embargo, una parte necesaria de esta ecuación es la habilidad de propagar el virus defectivo (defectivo porque un producto del gen viral normal está ausente o alterado) . Varias posibles aproximaciones están disponibles para rodear este problema. En una aproximación, un virus que tiene una proteína mutante puede crecer en líneas celulares que se construyen para expresar constitutivamente la versión del tipo salvaje de la misma proteína. De este modo, la línea celular complementa la mutación en el virus. Pueden utilizarse técnicas similares para construir líneas celulares transformadas que constitutivamente expresan cualquiera de los genes PIV. Estas líneas celulares que se hacen para expresar la proteína viral pueden utilizarse para complementar el defecto en el virus recombinante y por eso propagarlo . Alternativamente, ciertos sistemas de rango hospedero natural pueden estar disponibles para propagar el virus recombinante.
En otra modalidad, las proteínas virales y las funciones requeridas para la replicación pueden proporcionarse como material genético en la forma de cADNs o ARNs sintético para que se co-transcriban con el cADNs o ARNs sintético que codifica el virus quimérico. En un aproximación particularmente deseable, los plásmidos que expresa el virus quimérico y la polimerasa viral y/o otras funciones virales son' co-transfectadas en las células hospederas. Por ejemplo, los plásmidos que codifican el PIV ARN genómico o antigenómico, de tipo salvaje o modificado, pueden ser co-transfectados en las células hospederas con plásmidos que codifican las proteínas polimerasa virales PIV, NP o N, P, M2-1 o L. Alternativamente, el rescate del virus b/h PIV3 quimérico puede lograrse por el uso de Virus de Vaccinia Modificado Ankara (MVA) que codifica la polimerasa T7 ARN, o una combinación de MVA y plásmidos que codifican las proteínas polimerasa (N, P, y L) . Por ejemplo, MVA-T7 o enfermedad pustulosa de aves Fowl Pox-T7 puede infectarse en las células Vero, células LLC-MK-2, células Hep-2, células LF 1043 (HEL) , células tMK, LLC-MK2, HUT 292, FRHL-2 (rhesus) , FCL-1 (mono verde) , I-38 (humano) , células MRC-5 (humano) , células 293 T, células QT 6, células QT 35 y células CEF. Después de la infección con MVA-T7 o Fow Pox-T7, un b/h PIV3 cADN antigenómico de longitud llena puede ser transfectado en las células HeLa o Vero junto con los plásmidos NP, P, M2-1 y L que codifican la expresión. Alternativamente, la polimerasa puede proporcionarse por transfección del plásmido. Las células y el sobrenadante de la célula subsecuentemente pueden cosecharse y someterse a un ciclo sencillo de congelación-descongelación. El lisado celular resultante puede utilizarse entonces para infectar una monocapa de la célula HeLa o Vero en presencia de 1-beta-D-arabinofuranosilcitosina (ara C) , un inhibidor de la replicación del virus vaccinia, para generar una cepa de virus . El sobrenadante y las células de estas placas pueden entonces cosecharse, congelársedescongelarse una vez, y puede detectarse la presencia de partículas de virus bPIV3 mediante inmunoteñido de placas del virus utilizando el antisuero PI 3 -específico . Otra propuesta para propagar el virus recombinante involucra la co-cultivación con virus de tipo nativo. Esto podría hacerse simplemente tomando el virus recombinante y coinfectando las células con este y otros virus de tipo nativo (preferentemente una cepa de la vacuna) . El virus de tipo nativo debe complementar para el producto del gen de virus defectivo y debe permitir el crecimiento de ambos el de tipo nativo y el virus recombinante. Alternativamente, puede utilizarse un virus asistente para soportar la propagación del virus recombinante . En otra propuesta, pueden replicarse plantillas sintéticas en células co-infectadas con el virus recombinante que expresan la proteína polimerasa de virus PIV. De hecho, este método puede utilizarse para rescatar el virus infeccioso recombinante de acuerdo con la invención. A este extremo, la proteína de polimerasa PIV puede expresarse en cualquier sistema celular de expresión vector/hospedero, incluyendo pero no limitado a los vectores de expresión viral (por ejemplo, virus vaccinia, adenovirus, baculovirus, etc.) o líneas celulares que expresan una proteína polimerasa (por ejemplo, vea Krystal et al., 1986, Proc . Nati. Acad. Sci. USA 83:2709-2713) . Además, la infección de las células hospederas que expresan todas las seis proteínas PIV puede resultar en la producción de partículas de virus quimérico infecciosas . Debe notarse que puede ser posible construir un virus recombinante sin alterar la viabilidad del virus. Estos virus alterados serían entonces de crecimiento competente y no necesitarían que el auxiliador funcione para replicar. En ciertas modalidades, las condiciones para la propagación del virus se optimizan para producir un cultivo celular altamente productivo y robusto (qué sería benéfico, por ejemplo, para la fabricación de los candidatos de vacuna del virus de la invención) . Pueden identificarse los parámetros críticos, y el proceso de producción puede perfeccionarse primero en experimentos en pequeña escala para determinar la escalabilidad, robustez, y reproducibilidad (un ejemplo de esta optimización del proceso se proporciona en la Sección 36) y subsecuentemente adaptarlo a la producción en gran escala del virus. En ciertas modalidades, el virus que se propaga utilizando los métodos de la invención es PIV. En ciertas modalidades, el virus que se propaga utilizando los métodos de la invención es un recombinante o un PIV quimérico. En ciertas modalidades, el virus que se propaga utilizando los métodos de la invención es un virus de una de las siguientes familias virales Adenoviridae, Arenaviridae , Astroviridae, Baculoviridae , Bunyaviridae, Caliciviridae, Caulimovirus, Coronaviridae, . Cystoviridae, Filoviridae, Flaviviridae, Hepadnaviridae , Herpesviridae, Hypoviridae, Idaeovirus, Inoviridae, Iridoviridae, Leviviridae, Lipothrixviridae, Luteovirus, Machlomovirus , Marafivirus , Microviridae, Myoviridae, Necrovirus, Nodaviridae, Orthomyxoviridae, Papovaviridae, Paramyxoviridae , Partitiviridae , Parvoviridae, PhycoADNviridae, Picornaviridae, Plasmaviridae, Podoviridae, PolyADNviridae, Potyviridae, Poxviridae, Reoviridae, Retroviridae , R abdoviridae , Sequiviridae , Siphoviridae , Sobemovirus, Tectiviridae, Tenuivirus, Tetraviridae , Tobamovirus, Tobravirus, Togaviridae, Tombusviridae, Totiviridae, Trichovirus, Mononegavirales . En ciertas modalidades, el virus que se propaga con los métodos de la invención es un virus ARN. En ciertas modalidades, el virus no es un virus de la familia Herpesviridae . En ciertas modalidades, el virus no es HSV. En ciertas modalidades, un cultivo celular infectado con un virus o una estructura viral de interés, se incuba a una temperatura de incubación post-infección menor, comparada a la temperatura de incubación estándar para las células en el cultivo. En una modalidad específica, un cultivo celular infectado con una estructura viral de interés, se incuba a 33°C o aproximadamente 33°C (por ejemplo, 33 ± 1°C) . En ciertas modalidades, la temperatura de incubación post-infección es aproximadamente 25°C, 26°C, 27°C, 28°C, 29°C, 30°C, 31°C, 32°C, 33°C, 34°C, 35°C, 36 °C o 37 °C. En ciertas modalidades, el virus se propaga incubando un célula antes de la infección con el virus a una temperatura optimizada para el crecimiento de las células y subsecuente a la infección de las células con el virus, es decir, postinfección, la temperatura se cambia a una temperatura menor. En ciertas modalidades el cambio es por lo menos 1°C, 2°C, 3°C, 4°C, 5°C, 6°C, 7°C, 8°C, 9°C, 10°C, 11°C, o por lo menos 12 °C. En ciertas modalidades el cambio o desplazamiento es a lo más 1°C, 2°C, 3°C, 4°C, 5°C, 6°C, 7°C, 8°C, 9°C, 10°C, 11°C, o a lo más 12°C. En una modalidad específica, el cambio o desplazamiento es 4°C.
En ciertas modalidades, las células se cultivan en un medio que contiene suero antes de la infección con un virus o una estructura viral de interés, y las células se cultivan en un medio sin suero después de la infección con el virus o la estructura viral . Para una descripción más detallada del crecimiento de las células infectadas sin suero, vea la sección titulada "Plasmid-Only Recovery of Virus in Serum Free Media" . En una modalidad específica, el suero es el suero bovino fetal y está presente en una concentración de 5% del volumen del cultivo, 2% del volumen del cultivo, o 0.5% del volumen del cultivo. En ciertas modalidades, el virus se propaga incubando células que se infectan con el virus en ausencia de suero. En ciertas modalidades, el virus se propaga incubando células que se infectan con el virus en un medio de cultivo que contiene menos de 5% de suero, menos de 2.5% de suero, menos de 1% de suero, menos de 0.1% de suero, menos de 0.01% de suero, o menos de 0.001 % de suero. En ciertas modalidades, las células se incuban antes de la infección con el virus en el medio que contiene suero. En ciertas modalidades, subsecuente a la infección de las células con el virus, las células se incuban en ausencia de suero. En otras modalidades, las células se incuban primero en el medio que contiene suero; las células se transfieren entonces en el medio sin suero; y subsecuentemente, las células se infectan con el virus y además se incuban en ausencia del virus. En ciertas modalidades, las células se transfieren del medio que contiene suero al medio en ausencia de suero, removiendo el medio que contiene suero de las células y agregando el medio sin suero. En otras modalidades, las células se centrifugan y el medio que contiene suero se remueve y se agrega el medio sin suero. En ciertas modalidades, las células se lavan con el medio sin suero para asegurar que las células una vez infectadas con el virus se incuben en ausencia de suero. En ciertas, más específicas modalidades, las células se lavan con el medio sin suero por lo menos una vez, dos veces, tres veces, cuatro veces, cinco veces, o por lo menos diez veces. En otras modalidades aún, las células se cultivan en un medio que contiene suero y a una temperatura que es óptima para el crecimiento de las células antes de la infección con un virus o una estructura viral, y el cultivo celular se incuba a una baja temperatura (relativa a la temperatura de incubación estándar para el correspondiente virus o vector viral) después de la infección con la estructura viral de interés. En una modalidad especifica, las células se cultivan en un medio que contiene suero antes de la infección con una estructura viral de interés a 37°C, y el cultivo celular se incuba a 33 °C o aproximadamente 33 °C (por ejemplo, 33 + 1°C) después de la infección con la estructura viral de interés . En otras modalidades aún, las células se cultivan en un medio que contiene suero y a una temperatura que es óptima para el crecimiento de las células antes de la infección con un virus o una estructura viral, y el cultivo celular se incuba sin suero a una baja temperatura (relativa a la temperatura de incubación estándar para el correspondiente virus o vector viral) después de la infección con la estructura viral de interés. En una modalidad específica las células se cultivan en un medio que contiene suero antes de la infección con una estructura viral de interés a 37°C, y el cultivo celular se incuba sin suero a 33 °C o aproximadamente 33 °C (por ejemplo, 33 + 1°C) después de la infección con la estructura viral de interés . Pueden utilizarse las construcciones virales y los métodos de la presente invención para la producción comercial de virus, por ejemplo, para la producción de la vacuna. Para la producción comercial de una vacuna, se prefiere que la vacuna contenga sólo virus inactivados o proteínas virales que estén completamente libres de virus infecciosos o que contaminen el ácido nucleico viral, o alternativamente, que contengan vacunas vivas atenuadas que no revierten a la virulencia. También debe evitarse la contaminación de las vacunas con agentes adventicios introducidos durante la producción. Pueden utilizarse métodos conocidos en la técnica para la producción en gran escala de virus o proteínas virales, para la producción comercial de una vacuna de la invención. En una modalidad, para la producción comercial de una vacuna de la invención, las células se cultivan en un bioreactor o termentador. Los bioreactores están disponibles en volúmenes de bajo 1 litro a más de 100 litros, por ejemplo, Bioreactor Cyto3 (Osmonics, Minnetonka, MN) ; bioreactores NBS (New Brunswick Scientific, Edison, N. J.); y bioreactores a escala comercial y de laboratorio a partir de B. Braun Biotech International (B. Braun Biotech, Melsungen, Alemania) . En otra modalidad, los estudios de la optimización del proceso en pequeña escala (por ejemplo, vea Ejemplo 31 (Sección 36)) se realiza antes de la producción comercial del virus, y las condiciones optimizadas son seleccionadas y utilizadas para la producción comercial del virus . En ciertas modalidades de la invención, el virus puede recuperarse sin el virus auxiliar o asistente. Más específicamente, el virus puede recuperarse introduciendo en una célula, un plásmido que codifica el genoma viral y plásmidos que codifican las proteínas virales, requeridos para la replicación y rescate. En ciertas modalidades, la célula es crecida y mantenida en el medio libre de suero. En ciertas modalidades, los plasmidos se introducen en la célula por electroporación. En una modalidad específica, un plásmido que codifica el cADN antigenómico del virus bajo el control del promotor T7, un plásmido que codifica la polimerasa T7 ARN, y plásmidos que codifican la proteína N, proteína P, y proteína L, respectivamente, bajo el control del promotor T7, se introducen en las células SF Vero por electroporación. Se obtuvieron las células Vero a partir de ATCC y se adaptaron para crecer en el medio libre de suero de acuerdo a los siguientes pasos (desarrollados por el laboratorio Mike Berry' s) . 1. Se descongela ATCC CCL-81 Vial en DMEM + 5% v/v de FBS en el matraz T-25, P121; 2. Se extienden 5 conductos en DMEM + 5% v/v de FBS P126; 3. Se transfieren directamente las células FBS crecidas al OptiPRO (Invitrogen Corporation) en los matraces T-225; 4. Se extienden 7 conductos en OptiPRO; 5. Se congela el Material del Banco Celular Pre-Master en los Conductos 133-7; 6. Se extienden 4 conductos en OptiPRO; 7. Se congela el Material del Banco Celular Master en el Conducto 137; 8. Se extienden 4 conductos en OptiPRO; 9. Se el Material del Banco Celular de Trabajo (Working) en el Conducto 141; y 10. Se descongela y se extienden para electroporación y amplificación del virus. Los métodos para el rescate de partículas virales están descritos anteriormente en esta Sección. En ciertas modalidades, las células utilizadas para el rescate viral son células que pueden crecer y/o mantenerse sin la adición de componentes derivados de animales o humanos. En ciertas modalidades, las células utilizadas para el rescate viral son células que se adaptan al crecimiento sin suero. En una modalidad específica, las células SF Vero se utilizan para el rescate del virus. En ciertas modalidades, las células son crecidas y/o mantenidas en OptiP O SFM (Invitrogen Corporation) complementadas con 4mM L-glutamina. En ciertas modalidades, las células son crecidas en el medio que se complementa con suero, pero para el rescate de partículas virales las células se transfieren en el medio libre de suero. En una modalidad específica, las células se lavan en el medio libre de suero para asegurar que el rescate viral tome lugar en un ambiente libre de suero. Los plásmidos se introducen en las células por cualquier método conocido por el artesano experimentado que puede utilizarse con las células, por ejemplo, por la transfección del fosfato de calcio, transíección de DEAE-Dextran, electroporación o transfección mediada del liposoma (vea Capítulo 9 de Short Protocols in Molecular Biology, Ausubel et al. (editors) , John Wiley & Sons, Inc., 1999). En modalidades específicas, la electroporación se utiliza para introducir el ADN del plásmido en las células . Las células SF Vero son resistentes a la lipofeccion. Para seleccionar las células que han sido transfectadas con los plásmidos requeridos, los plásmidos también pueden portar ciertos marcadores . Tales marcadores incluyen, pero no se limitan a, resistencia a ciertos antibióticos (por ejemplo, kanamicina, blasticidina, ampicilina, Higromicina B, Puromicina y Zeocina™) , marcadores ¦ que confieren ciertas propiedades autotróficas en una célula que carece de esta propiedad sin el marcador, o un marcador también puede ser un gen que se requiere para el crecimiento de una célula pero que es mutada en las células en que el plásmido se introduce. La transcripción del genoma viral y/o los genes virales está bajo el control transcriptional de un promotor. Así, las secuencias que codifican el genoma viral o las proteínas virales se enlazan operativamente a la secuencia del promotor. Cualquier sistema de polimerasa promotor/ARN conocido por el artesano experimentado, puede utilizarse con los métodos de la presente invención. En ciertas modalidades, el promotor puede ser un promotor que permita la transcripción por un endógeno de polimerasa de AR a la célula, por ejemplo, una secuencia del promotor que están reconocida por una polimerasa celular de ARN dependiente de ADN, tal como la polimerasa de ARN I (Pol I) o la polimerasa de ARN II (Pol II) . En ciertas modalidades, el promotor puede ser un promotor inducible. En ciertas modalidades, el promotor puede ser un promotor que permita la transcripción por una polimerasa de ARN que no es endógena a la célula. En ciertas, más específicas modalidades, el promotor es un promotor T3 , promotor T7, promotor SPS, o promotor CMV. Dependiendo del tipo de promotor utilizado, también se introduce un plásmido que codifica la polimerasa de ARN que reconoce al promotor en la célula, para proporcionar la polimerasa de ARN apropiada. En modalidades especificas, la polimerasa de ARN es la polimerasa T3 ARN, polimerasa T7 ARN, polimerasa SP6 ARN, o polimerasa CMV ARN. En una modalidad específica, se transcriben los genes virales y el genoma viral bajo el control de un promotor T7, y se introduce un plásmido que codifica la polimerasa T7 ARN para proporcionar la polimerasa T7 ARN. La transcripción de la polimerasa puede estar bajo el control de cualquier sistema promotor que funcionaría en el tipo de célula utilizada. En una modalidad específica, se utiliza el promotor CMV.
El genoma viral puede estar en orientación más o menos . Así, el genoma viral puede transcribirse del material genético para generar una copia de sentido positivo del genoma viral (copia antigenoma) o una copia de sentido negativo del genoma viral (copia genómica) . En ciertas modalidades, el genoma viral es un virus recombinante, quimérico y/o atenuado de la invención. En ciertas modalidades, puede reforzarse la eficiencia de replicación viral y rescate si el genoma viral es de longitud de hexámero. A fin de asegurar que el genoma viral es de la longitud apropiada, los extremos 5' o 3' pueden definirse utilizando las secuencias de ribozoma, incluyendo, la secuencia del ribozoma Virus Delta de Hepatitis (HDV) , secuencias de ribozoma con cabeza de martillo, o fragmentos de los mismos, los cuales retiene la actividad catalítica del ribozoma. En ciertas modalidades, las proteínas virales requeridas para la replicación y rescate incluyen el gen N, P, y L. En ciertas, más específicas, modalidades, las proteínas virales requeridas para la replicación y rescate incluyen el gen N, P, M2-1 y L. 5.4. ATENUACIÓN DE LOS VIRUS RECOMBINANTES Los virus recombinantes de la invención pueden diseñarse además genéticamente para exhibir un fenotipo atenuado. En particular, los virus recombinantes de la invención exhiben un fenotipo atenuado en un sujeto al que se administra el virus como una vacuna. La atenuación puede lograrse por cualquier método conocido por un artesano experimentado. Sin estar limitado por la teoría, el fenotipo atenuado del virus recombinante puede causarse, por ejemplo, utilizando un virus que naturalmente no replica bien en un hospedero intencional (por ejemplo, utilizando un vector PIV3 bovino en el humano) , por replicacion reducida del genoma viral, por la habilidad reducida del virus para infectar una célula hospedera, o por la habilidad reducida de las proteínas virales para ensamblarse a una partícula viral infecciosa relativa a la cepa del virus de tipo nativo. La viabilidad de ciertas secuencias del virus, tal como la secuencia delantera y trasera puede probarse utilizando un ensayo minigenoma (vea sección 5.5.1) . Los fenotipos atenuados de un virus recombinante de la invención pueden ser probados por cualquier método conocido por el artesano (vea, por ejemplo, sección 5.5). Un virus candidato, por ejemplo, puede probarse para su habilidad de infectar a un hospedero o para la proporción de replicacion en un sistema de cultivo celular. En ciertas modalidades, se utiliza un sistema mini-genoma para probar el virus atenuado cuando el gen que es alterado es N, P, L, M2 o una combinación de los mismos. En ciertas modalidades, se utilizan curvas de crecimiento a diferentes temperaturas para probar el fenotipo atenuado del virus. Por ejemplo, un virus atenuado puede crecer a 35°C, pero no a 39°C o 40°C. En ciertas modalidades, pueden utilizarse líneas celulares diferentes para evaluar el fenotipo atenuado del virus. Por ejemplo, un virus atenuado sólo puede crecer en las líneas celulares del mono, pero no en las líneas celulares humanas, o los títulos del virus que pueden lograrse en las líneas celulares son diferentes son diferentes para el virus atenuado. En ciertas modalidades, la replicación viral en el tracto respiratorio de un modelo animal pequeño, incluyendo pero no limitado a, marmotas, ratas del algodón, ratones y conejillos de indias, se utilizan para evaluar los fenotipos atenuados del virus . En otras modalidades, la respuesta inmune inducida por el virus, incluyendo pero no limitado a, los títulos del anticuerpo (por ejemplo, ensayado por el ensayo de neutralización de la reducción de la placa o ELISA) se utiliza para evaluar los fenotipos atenuados del virus. En una modalidad específica, el ensayo de neutralización de la reducción de la placa o ELISA se lleva a cabo a una dosis baja. En ciertas modalidades, puede probarse la habilidad del virus recombinante para provocar los síntomas patológicos en un modelo animal . Una habilidad reducida del virus para provocar los síntomas patológicos en un sistema modelo animal es indicativa de su fenotipo atenuado. En una modalidad especifica, los virus candidatos se prueban en un modelo de mono por infección nasal, indicada por la producción de mucosa. Los virus de la invención pueden atenuarse tal que una o más de las características funcionales del virus se dañan. En ciertas modalidades, la atenuación se mide en comparación con la cepa de tipo salvaje del virus del que se deriva el virus atenuado. En otras modalidades, la atenuación se determina comparando el crecimiento de un virus atenuado en sistemas hospederos diferentes. Así, por un ejemplo no limitante, se dice que un PIV3 bovino se atenúa, cuando ha crecido en un hospedero humano si el crecimiento del PIV3 bovino en el hospedero humano está reducido comparado al crecimiento del PIV3 bovino en un hospedero bovino. En ciertas modalidades, el virus atenuado de la invención es capaz de infectar a un hospedero, es capaz de replicar en un hospedero tal que se producen partículas virales infecciosas. En comparación con la cepa de tipo salvaje, sin embargo, la cepa atenuada crece a títulos menores o crece más despacio. Cualquier técnica conocida por el artesano experimentado puede utilizarse para determinar la curva de crecimiento del virus atenuado y compararla a la curva de crecimiento del virus de tipo salvaje. Para métodos ejemplares vea la sección de los Ejemplos, infra. En una modalidad específica, el virus atenuado crece a un título de menos de 105 pfu/ml, de menos de 104 pfu/ml, de menos de 103 pfu/ml, o de menos de 102 pfu/ml en células Vero bajo las condiciones como se describe . En ciertas modalidades, el virus atenuado de la invención (por ejemplo, un PIV3 quimérico) no puede replicarse en las células humanas así como lo hace el virus de tipo salvaje (por ejemplo, PIV3 de tipo salvaje) . Sin embargo, el virus atenuado puede replicar bien en una línea celular que carece de las funciones del interferón, tal como las células Vero. En otras modalidades, el virus atenuado de la invención es capaz de infectar a un hospedero, de replicar en el hospedero, y de provocar que las proteínas del virus de la invención se inserten en la membrana citoplásmica, pero el virus atenuado no provoca que el hospedero produzca nuevas partículas virales infecciosas. En ciertas modalidades, el virus atenuado infecta al hospedero, replica en el hospedero, y provoca que las proteínas virales se inserten en la membrana citoplásmica del hospedero con la misma eficiencia como el virus mamífero de tipo salvaje. En otras modalidades, la habilidad del virus atenuado de provocar que las proteínas virales se inserten en la membrana citoplásmica en la célula hospedera está reducida comparada al virus de tipo salvaje. En ciertas modalidades, la habilidad del virus mamífero atenuado de replicar en el hospedero está reducida comparada al virus de tipo salvaje. Cualquier técnica conocida por el artesano experimentado puede utilizarse para determinar si un virus es capaz de infectar una célula mamífera, o de replicar dentro del hospedero, y de provocar que las proteínas virales se inserten en la membrana citoplásmica del hospedero. Para los métodos ilustrativos vea la sección 5.5. En ciertas modalidades, el virus atenuado de la invención es capaz de infectar a un hospedero. En contraste al PIV de tipo salvaje, sin embargo, el PIV atenuado no puede replicarse en el hospedero. En una modalidad específica, el virus atenuado puede infectar a un hospedero y puede provocar al hospedero para insertar las proteínas virales en sus membranas citoplásmicas, pero el virus atenuado es incapaz de ser replicado en el hospedero. Cualquier método conocido por el artesano experimentado puede utilizarse para probar si el virus atenuado ha infectado al hospedero y ha provocado que el hospedero inserte las proteínas virales en sus membranas citoplásmicas . En ciertas modalidades, la habilidad del virus mamífero atenuado de infectar a un hospedero está reducida comparada a la habilidad del virus de tipo salvaje de infectar al mismo hospedero. Cualquier técnica conocida por el artesano experimentado puede utilizarse para determinar si un virus es capaz de infectar a un hospedero. Para los métodos ilustrativos vea sección 5.5. En ciertas modalidades, las mutaciones (por ejemplo, las mutaciones en sentido equivocado) se introducen en el genoma del virus para generar un virus con un fenotipo atenuado. Las mutaciones (por ejemplo, las mutaciones en sentido equivocado) pueden introducirse en el gen N, el gen P, el gen F, el gen M2, el gen 2-1, el gen M2-2, el gen SH, el gen G o el gen L del virus recombinante . Las mutaciones pueden ser adiciones, substituciones, supresiones, o combinaciones de las mismas. En modalidades especificas, se introduce una sola mutación de supresión del aminoácido para las proteínas N, P, L o M2 , que puede seleccionarse para la funcionalidad en el sistema de ensayo mini-genoma y evaluarse para la funcionalidad predicha en el virus. En modalidades más específicas, la mutación en sentido equivocado es una mutación sensible al frío. En otras modalidades, la mutación en sentido equivocado es una mutación sensible al calor. En una modalidad, se remueven los principales sitios de fosforilación de la proteína P del virus. En otra modalidad, se introducen una mutación o mutaciones en el gen L del virus para generar una cepa sensible a la temperatura. En todavía otra modalidad, el sitio de escisión del gen F es imitado de tal manera que la escisión no ocurre u ocurre a muy baja eficiencia.
En otras modalidades, se introducen deleciones en el genoma del virus recombinante. En modalidades más específicas, puede introducirse una supresión en el gen N, el gen P, el gen F, el gen M2 , el gen M2-1, el gen M2-2, el gen SH, el gen G o el gen L del virus recombinante. En modalidades específicas, la supresión está en el gen M2 del virus recombinante de la presente invención. En otras modalidades específicas, la supresión está en gen SH del virus recombinante de la presente invención. En todavía otra modalidad específica, el gen M2 y gen SH se suprimen. En ciertas modalidades, se altera la región intergénica del virus recombinante. En una modalidad, se altera la longitud de la región intergénica. Vea la Sección 5.1.2". para los ejemplos ilustrativos. En otra modalidad, las regiones intergénicas se redistribuyen del extremo 5 ' al 3 ' del genoma viral . En otras modalidades, se cambia la posición del genoma de un gen o genes del virus recombinante . En una modalidad, el gen el F o G se mueve al extremo 3' del genoma. En otra modalidad, se mueve el gen N al extremo 5' del genoma. En ciertas modalidades, la atenuación del virus se logra reemplazando un gen del virus de tipo salvaje con un gen de un virus de una especie diferente. En las modalidades ilustrativas, el gen N, el gen P, el gen F, el gen M2, el gen M2-1, el gen M2-2, el gen SH, el gen HN o el gen L de bPIV3 se reemplaza con el gen N, el gen P, el gen F, el gen M2 , el gen M2-1, el gen M2-2, el gen SH, el gen HN o el gen L, respectivamente, de hPIV3. En otras modalidades ilustrativas, el gen N, el gen P, el gen F, el gen ¥12, el gen M2-1, el gen M2-2, el gen SH, el gen HN o el gen L de hPIV3 se remplazan con el gen N, el gen P, el gen F, el gen M2 , el gen M2-1, el gen M2-2, el gen SH, el gen HN o el gen L, respectivamente, de bPIV3. En una modalidad preferida, la atenuación del virus se logra reemplazando uno o más genes asociados a la polimerasa (por ejemplo, N, P, L o M2) con genes de un virus de una especie diferente. En ciertas modalidades, la atenuación del virus se logra reemplazando o suprimiendo uno o más dominios específicos de una proteína del virus de tipo salvaje con dominios derivados de la proteína correspondiente de un virus de una especie diferente. En una modalidad ilustrativa, el ectodominio de una proteína F de bPIV3 se reemplaza con un ectodominio de una proteína F de un metaneumovirus . En una modalidad preferida, uno o más dominios específicos de la proteína L, N, o P se reemplazan con dominios derivados de las proteínas correspondientes de un virus de una especie diferente. En otra modalidad ilustrativa, el dominio de la transmembrana de la proteína F se suprime para que una proteína F soluble se exprese . En ciertas modalidades de la invención, la secuencia delantera y/o trasera del virus recombinante de la invención puede modificarse para lograr un fenotipo atenuado. En ciertas, más específicas modalidades, la secuencia delantera y/o trasera está reducida en longitud, relativa al virus de tipo salvaje en por lo menos 1 nucleótido, por lo menos 2 nucleótidos, por lo menos 3 nucleótidos, por lo menos 4 nucleótidos, por lo menos 5 nucleótidos o por lo menos 6 nucleótidos. En ciertas otras, más específicas modalidades, la secuencia de la delantera y/o trasera del virus recombinante es mutada. En una modalidad específica, la secuencia delantera y trasera es 100% complementaria entre sí. En otras modalidades, 1 nucleótido, 2 nucleótidos, 3 nucleótidos, 4 nucleótidos, 5 nucleótidos, 6 nucleótidos, 7 nucleótidos, 8 nucleótidos, 9 nucleótidos, o 10 nucleótidos no son complementarios entre sí, donde los nucleótidos restantes de la secuencia delantera y trasera son complementarios entre sí. En ciertas modalidades, los nucleótidos no complementarios son idénticos entre sí. En ciertas otras modalidades, los nucleótidos no complementarios son diferentes entre sí . En otras modalidades, si el nucleótido no complementario en la trasera es purina, el nucleótido correspondiente en la secuencia delantera también es una purina. En otras modalidades, si el nucleótido no complementario en la trasera es el pirimidina, el nucleótido correspondiente en la secuencia delantera también es una purina. Cuando una vacuna viva atenuada se utiliza, también debe considerarse su seguridad. La vacuna no debe causar padecimientos . Cualquier técnica conocida en la técnica que pueda hacer una vacuna segura puede utilizarse en la presente invención. En adición a las técnicas de atenuación, pueden utilizarse otras técnicas. Un ejemplo no limitante es utilizar un gen heterólogo soluble que no pueda incorporarse en la membrana del virión. Por ejemplo, pueden utilizarse una sola copia del gen F de RSV soluble, una versión del gen RSV que carece de la transmembrana y los dominios citosólicos. Debido a que no puede incorporarse en la membrana del virión, no se espera que cambie el tropismo del virus . Pueden utilizarse varios ensayos para probar la seguridad de una vacuna. Vea sección 5.5., infra. Particularmente, pueden utilizarse gradientes de sacarosa y ensayos de neutralización. Un ensayo del gradiente de sacarosa puede utilizarse para determinar si una proteína heteróloga se inserta en un virión. Si la proteína heteróloga se inserta en el virión, el virión debe probarse para su habilidad de provocar síntomas aun cuando la cepa parental no causa síntomas. Sin limitarse por la teoría, si la proteína heteróloga está incorporada en el virión, el virus puede haber adquirido nuevas, posiblemente, propiedades patológicas. 5.5. MEDICIÓN DE TÍTULO VIRAL, EXPRESIÓN DE LAS SECUENCIAS ANTIGÉNICAS, INMÜNOGENICIDAD Y OTRAS CARACTERÍSTICAS DEL VIRUS QUIMÉRICO Pueden emplearse varios ensayos de acuerdo con la presente invención para determinar la tasa de crecimiento de un virus quimérico o recombinante en un sistema de cultivo celular, un sistema modelo animal o en un sujeto. También pueden emplearse varios ensayos de acuerdo con la presente invención para determinar los requerimientos de los virus quiméricos y recombinantes para lograr la infección, replicación y empaquetamiento de los viriones. Pueden utilizarse los ensayos descritos aquí para ensayar el título viral con el tiempo para determinar las características del crecimiento del virus. En una modalidad específica, el título viral se determina obteniendo una muestra de las células infectadas o del su eto infectado, preparando una dilución en serie de la muestra e infectando una monocapa de células que son susceptibles a la infección con el virus en una dilución del virus que permite la emergencia de placas sencillas. Las placas pueden contarse entonces, y el título viral expresarse como la placa que forma las unidades por el mililitro de la muestra. En una modalidad específica de la invención, la tasa de crecimiento dé un virus de la invención en un sujeto se estima por el título de los anticuerpos contra el virus en el sujeto. Sin estar limitado por la teoría, el título del anticuerpo en el sujeto refleja no sólo el título viral en el sujeto sino también la antigenicidad . Si la antigenicidad del virus es constante, puede utilizarse el aumento del título del anticuerpo en el sujeto para determinar la curva de crecimiento del virus en el sujeto. En una modalidad preferida, la tasa de crecimiento del virus en los animales o en los humanos se prueba mejor muestreando fluidos biológicos de un hospedero en múltiples puntos de tiempo post-infecci n, y midiendo el título viral. La expresión de la secuencia del gen heterólogo en un sistema de cultivo celular o en un sujeto puede determinarse por cualquier técnica conocida por el artesano experimentado. En ciertas modalidades, la expresión del gen heterólogo se mide cuantificando el nivel de la transcripción. El nivel de la transcripción puede medirse por el análisis de manchado Northern o por RT-PCR utilizando sondas o cebadores, respectivamente, que son específicos para la transcripción. La transcripción puede distinguirse del genoma del virus porque el virus está en la orientación antisentido considerando que la transcripción está en la orientación del sentido. En ciertas modalidades, la expresión del gen heterologo se mide cuantificando el nivel del producto de la proteína del gen heterologo. El nivel de la proteína puede medirse por análisis de manchado Western que utilizan anticuerpos que son específicos a la proteína. En una modalidad específica, el gen heterologo se etiqueta con una etiqueta de péptido. La etiqueta de péptido puede detectarse utilizando los anticuerpos contra la etiqueta de péptido. El nivel de la etiqueta de péptido detectado es representativo para el nivel de proteína expresado del gen heterologo. Alternativamente, la proteína expresada del gen heterologo puede aislarse en virtud de la etiqueta de péptido. La cantidad de la proteína purificada se correlaciona con el nivel de expresión del gen heterologo. Tales etiquetas de péptido y métodos para el aislamiento de proteínas fusionadas a tal etiqueta de péptido, son bien conocidos en la técnica. Una variedad de etiquetas de péptido conocida en la técnica puede utilizarse en la modificación del gen heterologo, tales como, pero no limitado a, las regiones constantes de inmunoglobulina, secuencia de polihistidina (Petty, 1996, Metal-chelate affinity chromatography, in Current Protocols in Molecular Biology, volumen 1-3 (1994-1998) . Ed. Ausubel, F. M. , Brent, R., Kunston, R. E., Moore, D. D . , Seidman, J. G., Smith, J. A. and Struhl, K. Publicado por John Wiley and sons, Inc., USA, Greene Publish. Assoc. & Wiley Interscience) , transferasa S glutationa (GST; Smith, 1993, Methods Mol. Cell Bio. 4: 220- 229), la proteína de enlace a la maltosa de E. coli (Guan et al., 1987, Gene 67: 21-30), varios dominios que unen la celulosa (patentes norteamericanas 5,496,934; 5,202,247; 5,137,819; Tomme et al., 1994, Protein Eng. 7:117-123) , y el epítope FLAG (Short Protocols in Molecular Biology, 1999, Ed. Ausubel et al., John Wiley & Sons, Inc., Unit 10.11) etc. Otras etiquetas de péptido son reconocidas por compañeros de enlace específicos y facilitan así el aislamiento mediante enlace por afinidad al compañero de enlace, el cual está preferentemente inmovilizado y/o sobre un soporte sólido. Como se apreciará por aquellos expertos en la técnica, pueden utilizarse muchos métodos para obtener la región de codificación de las etiquetas péptido anteriormente mencionadas, incluyendo pero no limitado a, clonación de ADN, amplificación de ADN, y métodos sintéticos. Algunas de las etiquetas de péptido y reagentes están comercialmente disponibles para su detección y aislamiento. Las muestras de un sujeto pueden obtenerse por cualquier método conocido por el artesano experimentado. En ciertas modalidades, la muestra consiste de aspirado nasal, torunda de la garganta, esputo o lavado bronco-alveolar . 5.5.1. CONST UCTOS DE MINIGENOMA Los constructos o construcciones de minireplicón pueden generarse para contener un gen reportero antisentido. Cualquier gen reportero conocido por el artesano experimentado puede utilizarse con la invención. En una modalidad específica, el gen reportero es CAT. En ciertas modalidades, el gen reportero puede flanquearse por el bPlV de sentido negativo o por el hPIV lider unido al ribozoma delta de hepatitis (Hep-d Ribo) y señales (T-T7) de terminación de polimerasa T7, y la secuencia trasera bPIV o hPIV precedida por el promotor de polimerasa T7 ARN. En ciertas modalidades, el plásmido que codifica el minireplicón se transfecta en una célula hospedera. La célula hospedera expresa la polimerasa T7 ARN, el gen N, el gen P, el gen L, y el gen M2.1. En ciertas modalidades, la célula hospedera se transfecta con plásmidos que codifican la polimerasa T7 ARN, el gen N, el gen P, el gen L, y el gen M2.1. En otras modalidades, el plásmido que codifica el minireplicón se transfecta en una célula hospedera y la célula hospedera se infecta con un virus asistente . El nivel de la expresión del gen reportero y/o su actividad pueden ensayarse por cualquier método conocido por el artesano experimentado, tal como, pero no limitado a, los métodos descritos en la sección 5.5.6.
En ciertas modalidades más específicas, el minireplicón comprende los siguientes elementos, en el orden listado: Polimerasa T7 ARN o polimerasa ARN I, secuencia delantera, inicio del gen, GFP, secuencia trasera, secuencia de ribozoma delta de Hepatitis o secuencia de terminación de polimerasa ARN I. Si se utiliza T7 como la polimerasa ARN, la secuencia de ribozoma delta de Hepatitis debe utilizarse como la secuencia de terminación. Si se utiliza la polimerasa ARN I, puede utilizarse la secuencia de terminación de polimerasa ARN I como una señal de terminación. Dependiendo del sistema de rescate, la secuencia del minireplicón puede estar en orientación en el sentido o antisentido. En ciertas modalidades, la secuencia delantera puede modificarse relativo a la secuencia delantera de tipo salvaje del virus de la invención. La secuencia delantera puede estar opcionalmente precedida por un AC . La secuencia del promotor T7 puede estar con o sin un doblete o triplete G, dónde el doblete o triplete G mantiene la transcripción incrementada. En una modalidad específica, una célula se infecta con un virus de la invención a T0. 24 horas después, en T24, la célula se transfecta con un constructo de minireplicón. 48 horas después de T0 y 72 horas después de T0 , las células se prueban para la expresión del gen reportero. Si se utiliza un producto del gen reportero fluorescente (por ejemplo, GFP), la expresión del gen reportero puede probarse utilizando FACS. En otra modalidad, una célula se transfecta con seis plásmidos a T=0 horas. Las células son entonces cosechadas a T=40 horas y T=60 horas y se analizan para la expresión CAT o GFP. En otra modalidad específica, una célula se infecta con MVA-T7 a TO . 1 hora después, a TI, la célula se transfecta con una constructo de minireplicón. 24 horas después de TO, la célula se infecta con un virus de la invención. 72 horas después de TO, las células se prueban para la expresión del gen reportero. Si se utiliza un producto del gen reportero fluorescente (por ejemplo, GFP), la expresión del gen reportero puede probarse utilizando FACS. 5.5.2. MEDICIÓN DE LA INCIDENCIA DEL INDICE DE INFECCIÓN La incidencia de la infección puede determinarse por cualquier método bien conocido en la técnica, incluyendo pero no limitado a, la examinación de muestras clínicas (por ejemplo, torundas nasales) para la presencia de una infección, por ejemplo, pueden detectarse los componentes hMPV, RSV, hPIV, o bPIV/hPIV por el ensayo de la inmunofluorescencia (IFA) utilizando un anticuerpo anti-hMPV-antígeno, un anticuerpo anti-RSV-antígeno, un anticuerpo anti-hPIV-antígeno, y/o un anticuerpo que sea específico al producto del gen de la secuencia de nucleótidos heterólogos, respectivamente . En ciertas modalidades, pueden procesarse directamente las muestras que contienen células intactas, mientras que aislados sin células intactas deben primero cultivarse en una línea celular permisiva (por ejemplo, las células HEp-2) . En una modalidad ilustrativa, las suspensiones celulares cultivadas se aclaran por centrifugación a, por ejemplo, 300xg durante 5 minutos a temperatura ambiente, seguido por un PBS, pH 7.4 (libre de Ca++ y Mg++) se lavan bajo las mismas condiciones. Los pellets o pelotillas celulares son resuspendidos en un volumen pequeño de PBS para el análisis. Los aislados clínicos primarios que contienen las células intactas se mezclan con PBS y se centrifugan a 300xg durante 5 minutos a temperatura ambiente . Se remueve la mucosa de la interfaz con la punta de una pipeta estéril y se lavan los pellets celulares una vez más con PBS bajo las mismas condiciones. Los pellets se resuspenden entonces en un volumen pequeño de PBS para el análisis. Cinco a diez microlitros de cada suspensión celular se motean por pozo de 5 mm en portaobjetos de vidrio supercurado de HTC de 12 pozos lavados con acetona y se dejan secar al aire. Los portaobjetos se colocan en acetona fría (-20°C) durante 10 minutos. Las reacciones se bloquean agregando PBS- BSA al 1% a cada pozo seguido por una incubación de 10 minutos a temperatura ambiente. Se lavan los portaobjetos tres veces en PBS- Tween-20 al 0.1% y se secan al aire. Diez microlitros de cada reagente del anticuerpo primario diluido a 250 ng/ml en amortiguador de bloqueo, se motean por pozo y las reacciones se incuban en un ambiente humedecido a 37°C durante 30 minutos. Se lavan entonces extensivamente los portaobjetos en tres cambios de PBS- Tween-20 al 0.1% y se secan al aire. Diez microlitros del reagente del anticuerpo conjugado secundario apropiado diluidos a 250 ng/ml en amortiguador de bloqueo se motean por pozo respectivo y las reacciones se incuban en un ambiente humedecido a 37°C durante unos 3.0 minutos adicionales. Se lavan los portaobjetos entonces en tres cambios de PBS-Tween-20 al 0.1%. Cinco microlitros de PBS -glicerol al 50% - 10 mM de Tris pH 8.0 - 1 mM de EDTA se motean por pozo de reacción y los portaobjetos se cubren con cubreobjetos. Cada pozo de reacción se analiza subsecuentemente mediante microscopía por fluorescencia a 200X de potencia usando un filtro B-2A (EX 450-490 nm) . Se anotan las reacciones positivas contra un antecedente autofluorescente obtenido a partir de las células no teñidas o de las células teñidas solo con el reactivo secundario. Las reacciones positivas SV se caracterizan por fluorescencia luminosa puntuada con pequeñas inclusiones en el citoplasma de las células infectadas . 5.5.3. MEDICIÓN DE TÍTULO DE SUERO La titulación del suero del anticuerpo puede determinarse por cualquier método bien conocido en la técnica, por ejemplo, pero no limitado a, la cantidad del anticuerpo o fragmentos del anticuerpo en las muestras de suero puede cuantificarse por un examen ELISA intercalado. De manera breve, los ELISA consiste de placas de microtitulación revestidas a 4°C con un anticuerpo que reconoce el anticuerpo o el fragmento del anticuerpo en el suero. Los placas se bloquean entonces durante aproximadamente 30 minutos a temperatura ambiente con PBS-Tween-BSA al 0.5%. Se construyen las curvas estándar utilizando el anticuerpo purificado o el fragmento del anticuerpo diluido en PBS-BSA-BSA, y se diluyen las muestras en PBS-BSA. Se agregan las muestras y los estándares para duplicar los pozos de la placa de ensayo y se incuban durante aproximadamente 1 hora a temperatura ambiente. Después, el anticuerpo no unido se lava con PBS-TWEEN y el anticuerpo de unión se trata con un anticuerpo secundario etiquetado (por ejemplo, IgG anti-humana de cabra conjugada con peroxidasa de rábano) durante aproximadamente 1 hora a temperatura ambiente. La unión del anticuerpo etiquetado se detecta agregando un substrato cromogénico específico para la etiqueta y midiendo la proporción de producción del substrato, por ejemplo, por un espectrofotómetro . La concentración de los niveles del anticuerpo o del fragmento del anticuerpo en el suero se determina por la comparación de la proporción de producción del substrato para las muestras a la proporción de producción del substrato para la curva estándar. 5.5.4. ESTUDIOS DE ESTIMULACIÓN Este ensayo se utiliza para determinar la habilidad del virus recombinante de la invención y de las vacunas de la invención, para prevenir la infección viral de la zona respiratoria inferior en un sistema modelo animal, incluyendo pero no limitado a, ratas de algodón, hamsters Syrian Golden, y ratones Balb/c. El virus recombinante y/o la vacuna pueden administrarse por vía intravenosa (IV) , por vía intramuscular (IM) o por vía intranasal (EN) . El virus recombinante y/o la vacuna pueden administrarse por cualquier técnica bien conocida por el artesano experimentado . Este ensayo también utiliza para correlacionar la concentración de suero de los anticuerpos con una reducción en el título pulmonar del virus al que el anticuerpo se une. En el día 0, grupos de animales, incluyendo pero no limitado a, ratas de algodón (Sigmodon hispídis, peso promedio 100 g) , macacos cynomolgous (peso promedio 2.0 kg) y hámsteres (por ejemplo, hamsters Syrian Golden) se inoculan con el virus recombinante o la vacuna de interés o BSA por inyección intramuscular, por inyección intravenosa, o por vía intranasal . Antes de, de manera concurrente con, o subsecuente a la administración del virus recombinante o de la vacuna de la invención, los animales se infectan con el virus de tipo nativo en donde el virus de tipo nativo es el virus contra el cual la vacuna fue generada. En ciertas modalidades, los animales se infectan con el virus de tipo nativo por lo menos 1 día, por lo menos 2 días, por lo menos 3 días, por lo menos 4 días, por lo menos 5 días, por lo menos 6 días, por lo menos 1 semana, por lo menos 2 semanas, por lo menos 3 semanas o por lo menos 4 semanas subsecuentes a la administración del virus recombinante y/o la vacuna de la invención. En una modalidad preferida, los animales se infectan con el virus de tipo nativo 21 días subsecuentes a la administración del virus recombinante y/o la vacuna de la invención. En otra modalidad preferida los animales se infectan con el virus de tipo nativo 28 días subsecuentes a la administración del virus recombinante y/o la vacuna de la invención. Después de la infección, los animales son sacrificados, y su tejido de turbinato nasal y/o tejido del pulmón se cosecha y los títulos del virus se determinan por los ensayos apropiados, por ejemplo, ensayo de placa y ensayo TCID50. Pueden utilizarse 10 mg/kg de albúmina del suero bovino (BSA) como un control negativo. Las concentraciones del anticuerpo en el suero en el momento de la estimulación pueden determinarse utilizando el examen ELISA intercalado. 5.5.5. PRUEBAS CLÍNICAS Las vacunas de la invención o fragmentos de la misma se han probado en ensayos in vi tro y los modelos animales pueden evaluarse además para seguridad, tolerancia, inmunogenicidad, infectividad y farmacocinéticos en grupos de voluntarios humanos saludables normales, incluyendo todos los grupos de edades. En una modalidad preferida, los voluntarios humanos saludables son infantes en aproximadamente 6 semanas de edad o mayores, niños y adultos. Los voluntarios se administran de manera intranasal, de manera intramuscular, de manera intravenosa o por un sistema de entrega pulmonar en una sola dosis de un virus recombinante de la invención y/o una vacuna de la invención. Pueden requerirse dosis múltiples del virus y/o vacuna de la invención en los niños seronegativos de 6 a 60 meses de edad. También pueden requerirse dosis múltiples de virus y/o vacuna de la invención en los primeros seis meses de vida para estimular la inmunidad local y sistémica y para superar la neutralización por el anticuerpo maternal. En una modalidad preferida, se utiliza un régimen de dosificación primario en 2 , 4, y 6 meses de edad y una dosis reforzadora al principio del segundo año de vida. Un virus recombinante de la invención y/o una vacuna de la invención puede administrarse solo o concurrentemente con vacunas pediátricas recomendadas en las edades correspondientes . En una modalidad preferida, se utilizan los ensayos clínicos placebo-controlados con aleatoriedad de doble ciego. En una modalidad específica, se utiliza un horario aleatorio generado por una computadora. Por ejemplo, cada sujeto en el estudio se matriculará como una sola unidad y se le asignará un único número de caso. Varios sujetos dentro de una sola familia se tratarán como individuos con el propósito de la matriculación. Padres/guardián, sujetos, e investigadores permanecerán ciegos respecto a qué sujetos del grupo de tratamiento se han asignado para la duración del estudio. Los estudios serológicos y virológicos serán realizados por personal del laboratorio ciegos a la asignación del grupo de tratamiento. Sin embargo, se espera que el aislamiento del virus de la vacuna del fluido del lavado nasal obtenido después de la vacunación, identifique probablemente vacunas al grupo de laboratorio de virología. El grupo serológico y virológico están separados y el grupo de serología se prevendrá de adquirir cualquier conocimiento de los resultados del cultivo. Cada voluntario se monitorea preferentemente por lo menos 12 horas antes de recibir el virus recombinante de la invención y/o una vacuna de la invención, y cada voluntario se monitoreará durante por al menos quince minutos después de recibir la dosis a un sitio clínico. Posteriormente los voluntarios son monitoreados como pacientes no hospitalizados en los días 1-14, 21, 28, 35, 42, 49, y 56 después de la dosis. En una modalidad preferida, los voluntarios se monitorean durante el primer mes después de cada vacunación como pacientes no hospitalizados. Todos los eventos adversos serios relacionados a la vacuna se informarán durante la duración completa del ensayo. Un evento adverso serio se define como un evento que 1) resulta en la muerte, 2) amenaza inmediatamente la vida, 3) resulta en invalidez permanente o sustancial, 4) resulta en o prolonga una hospitalización del enfermo internado existente, 5) resulta en una anomalía congénita, 6) es un cáncer, o 7) es el resultado de una sobredosis de la vacuna de estudio. Se reportarán los eventos adversos serios que no están relacionados a la vacuna comenzando en el día de la primera vacunación (Día 0) y continuarán durante los 30 días que siguen a la última vacunación. Los eventos adversos serios no relacionados a la vacuna no se reportarán durante 5 a 8 meses después del período de reporte de 30 días que sigue a la última vacunación. Una dosis de vacuna/placebo no se dará si un niño tiene un evento adverso serio relacionado con la vacuna después de la dosis previa. Cualquier evento adverso que no se considera relacionado con la vacuna, pero que es de preocupación, se discutirá por el monitoreo o seguimiento del estudio clínico y el monitoreo médico se hace antes de la decisión para dar otra dosis. Las muestras de sangre se colectan vía un catéter de fijación o venipunción directa (por ejemplo, utilizando tubos Vacutainer con porción superior roja de 10 mi) a los siguientes intervalos: (1) antes de administrar la dosis del virus recombinante de la invención y/o una vacuna de la invención; (2) durante la administración de la dosis del virus recombinante de la invención y/o una vacuna de la invención; (3) 5 minutos, 10 minutos, 15 minutos, 20 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 24 horas, y 48 horas después de administrar la dosis del virus recombinante de la invención y/o una vacuna de la invención; y (4) 3 días, 7 días, 14 días, 21 días, 28 días, 35 días, 42 días, 49 días, y 56 días después de administrar la dosis del virus recombinante de la invención y/o una vacuna de la invención. En una modalidad específica, se obtienen un total de 5 drenados de sangre (3-5 mi cada una) , cada uno justo antes de la primer, tercer y dosis reforzadora y aproximadamente un mes que sigue a la administración de la tercera dosis y a la dosis reforzadora de la vacuna o placebo. Las muestras se dejan coagular a temperatura ambiente y el suero se colecta después de la centrifugación. Los sueros se prueban para los niveles de anticuerpos (HAI) de inhibición de la hemoaglutinación del suero cepa-especifico contra el virus de la invención. También se prueban otros indicadores de inmunogenicidad tales como IgG, IgA, o anticuerpos de neutralización. Pueden medirse las respuestas del anticuerpo del suero a una o más de las otras vacunas dadas concurrentemente. La cantidad de anticuerpos generada contra el virus recombinante de la invención y/o una vacuna de la invención en las muestras de los pacientes puede cuantificarse por ELISA. También puede monitorearse la inmunidad de las células T (respuestas citotóxicas y asistenteso auxiliadoras) en PBMC y pulmón y lavados nasales. La concentración de los niveles del anticuerpo en el suero de los voluntarios se corrige substrayendo el nivel de suero de la predosis (nivel de fondo) de los niveles de suero a cada intervalo de colección después de la administración de la dosis de virus recombinante de la invención y/o una vacuna de la invención. Para cada voluntario los parámetros farmacocinéticos se computan de acuerdo a la aproximación independiente del modelo (Gibaldi et al., eds . , 1982, Pharmacokinetics, 2a edición, Marcel Dekker, Nueva York) de las concentraciones del fragmento de anticuerpo o del anticuerpo de suero corregido. Los lavados nasales obtenidos aproximadamente 2, 3, 4, 5, 6, 7 o 8 días después cada dosis de vacuna/placebo se cultivan para detectar el derramamiento del virus de la vacuna de la invención. En una modalidad preferida, se cultivan los lavados nasales obtenidos 7 días después de cada dosis de vacuna/placebo. También utiliza una torunda nasofaríngea, una torunda de la garganta, o un lavado nasal para determinar la presencia de otros virus en los voluntarios con la enfermedad febril médicamente asistida (temperatura rectal mayor o igual a 102° F) y/o difeteria, bronquiolitis, o neumonía a cualquier tiempo durante el estudio. Las muestras se embarcan sobre hielo seco al sitio designado para el estudio. Se utilizan los ensayos para el aislamiento y cuantificación del virus de la vacuna de la invención y los ensayos de inmunoteñido utilizan MAb para identificar el virus de la vacuna de la invención (se dan ejemplos de tales ensayos en las sección de los Ejemplos, infra) . Pueden probarse los especímenes del lavado nasal para otros virus y respuestas inmunes incluyendo IgG, IgA, y anticuerpo de neutralización. 5.5.6. GENES REPORTEROS En ciertas modalidades, los ensayos para la medición de la expresión del gen reportero en el cultivo del tejido o en modelos animales pueden utilizarse con los métodos de la invención. La secuencia de nucleótidos del gen reportero se clona en el virus, tal como bPIV, hPIV, o b/hPIV3 , en donde (i) la posición del gen reportero se cambia y (ii) la longitud de las regiones intergenicas que flanquean el gen reportero es variada. Se prueban diferentes combinaciones para determinar la proporción óptima de expresión del gen reportero y la proporción de la replicación óptima del virus que comprende el gen reportero . En ciertas modalidades, se generan los constructos de minigenoma para incluir un gen reportero. La construcción de constructos del minigenoma se describe en la sección 5.5.1. La abundancia del producto del gen reportero puede determinarse por cualquier técnica conocida por el artesano experimentado. Tales técnicas incluyen, pero no se limitan a, análisis de manchado Northern o análisis de manchado Western utilizando sondas o anticuerpos, respectivamente, que son específicos al gen reportero. En ciertas modalidades, el gen reportero emite una señal fluorescente que puede detectarse en un FACS. FACS puede utilizarse para detectar las células en que el gen reportero se expresa. Las técnicas para practicar el aspecto específico de esta invención emplearán, a menos que otra cosa se indique, técnicas convencionales de biología molecular, microbiología, y manipulación de ADN recombinante y producción, que son rutinariamente practicadas por uno de habilidad en la técnica. Vea, por ejemplo, Sambrook, 1989, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Segunda Edición; DNA Cloning, Volúmenes I y II (Glover, Ed. 1985) ; y Transcription and Translation (Hames & Higgins, Eds . 1984) . La actividad bioquímica del producto del gen reportero representa el nivel de la expresión del gen reportero. El nivel total de actividad de gen reportero también depende de la proporción de la replicación del virus recombinante de la invención. Así, para determinar el verdadero nivel de la expresión del gen reportero del virus recombinante, el nivel de la expresión total debe ser dividido por el título del virus recombinante en el cultivo celular o el modelo animal. Los genes reporteros que pueden utilizarse con los métodos de invención incluyen, pero no se limitan a, los genes listados en la Tabla 4 debajo: Tabla : Genes reporteros y propiedades bioquímicas de los productos de los genes reporteros respectivos Gene reportero Actividad de la proteína y Medición CAT (cloramfenicol Transferencia de grupos acetiltransferasa) acetilo radiactivos a cloramfenicol o detección mediante cromatografía de capa delgada y autoradiografía GAL (b-galactosidasa) Hidroliza galactosidas incoloras para producir productos coloreados GUS (b-glucuronidasa) Hidroliza glucoronidas incoloras para producir productos coloreados LUC (luciferasa) Oxida Luciferina que emite fotones GFP (proteina fluorescente Proteina fluorescente sin verde) sustrato SEAP (fosfatasa alcalina Reacción de luminiscencia con secretada) sustratos convenientes o con sustratos que generan cromóforos HRP (peroxidasa de rábano) En la presencia de óxido de hidrógeno, oxidación del 3 , 3 " , 5 , 5"-tetrametilbencidina para formar un complejo con color AP (fosfatasa alcalina) Reacción de luminiscencia con sustratos convenientes o con sustratos que generan cromóforos La abundancia del gen reportero puede medirse por, ínter alia, análisis de manchado Western o análisis de manchado Northern o cualquier otra técnica utilizadas para la cuantificación de la transcripción de una secuencia de nucleótidos, la abundancia de su ARNm su proteína (vea Short Protocols in Molecular Biology, Ausubel et al. (editors) , Jolm Wiley & Sons, Inc., 4 edición, 1999). En ciertas modalidades, la actividad del producto del gen reportero se mide como una lectura de la expresión de gen reportero del virus recombinante . Para la cuantificación de la actividad del producto del gen reportero, pueden investigarse características bioquímicas del producto del gen reportero (vea Tabla 1) . Los métodos para medir la actividad bioquímica de los productos del gen reportero son bien conocidos por el artesano experimentado. Una descripción más detallada de los genes reporteros ilustrativos que pueden utilizarse con los métodos de la invención se establece debajo. LUCIFERASA Las luciferasas son enzimas de que emiten luz en la presencia de oxígeno y un substrato (luciferina) y qué se han usado para proyectar baja-luz de la expresión del gen, en tiempo real en los cultivos celulares, células individuales, organismos enteros, y organismos transgénicos (revisado por Greer & Szalay, 2002, Luminescence 17 (1) : 43-74) . Como se utiliza aquí, el término "luciferasa" como se utiliza en relación a la invención se piensa que abarca todas las luciferasas , o las enzimas recombinantes derivadas de las luciferasas que tiene actividad de luciferasa. Se han caracterizado bien los genes de luciferasa de las luciérnagas, por ejemplo, a partir de especies Photinus y Lucióla (vea, por ejemplo, la Solicitud de Patente Internacional No. O 95/25798 para Photillus pyralis, Solicitud de Patente Europea No. EP 0 524 448 para Lucióla cruciata y Lucióla lateralis, y Devine et al., 1993, Biochim. Biophys . Acta 1173 (2): 121 - 132 para Lucióla mingrelica. Otros genes de luciferasa eucarióticos incluyen, pero no se limitan a, sea panzy (Renilla. reniformis, vea, por ejemplo, Lorenz et al., 1991, Proc Nati Acad Sci USA. 88 (10) : 4438-4442) , y luciérnaga (Lampyris noctiluca, vea por ejemplo, Sula-Newby et al., 1996, Biochem J. 313:761-767). Los sistemas luciferina-luciferasa bacterianos incluyen, pero no se limitan a, los genes de lux bacterianos de Photorhabdus luminescens terrestres (vea, por ejemplo, Manukhov et al., 2000, Genetika 36 (3) : 322-30) y las bacterias marinas Vibrio fischeri y Vibrio harveyi (vea, por ejemplo, Miyamoto et al., 1988, J Biol Chem. 263 (26): 13393-9, y Cohn et al., 1983, Proc Nati Acad Sci USA. , 80 (1): 120-3, respectivamente). Las luciferasas englobadas por la presente invención también incluyen las luciferasas mutantes descritas en la Patente Norteamericana No. 6,265,177 a Squirrell et al., que está incorporada en su totalidad por referencia. PROTEINA FLUORESCENTE VERDE La proteína fluorescente verde ("GFP") es una proteína 238 de aminoácido con aminoácidos 65 a 67 involucrados en la formación del cromóforo que no requiere substratos adicionales o cofactores para despedir luz fluorescente (vea, por ejemplo, Prasher et al., 1992, Gene 111: 229-233; Yang et al., 1996, Nature Biotechnol . 14:1252-1256; y Cody et al., 1993, Biochemistry 32:1212-1218).
Como se utiliza aquí, el término "proteína fluorescente verde" o "GFP" como se utiliza en relación a la invención pretende abarcar todas las GFPs (incluyendo varias formas de GFPs que exhibe colores diferentes del verde) , o enzimas recombinantes derivadas de las GFPs que tienen actividad de GFP. El gen nativo para GFP se clonó a partir de Aequorea victoria medusa bioluminiscente (vea, por ejemplo, Morin al et., 1972, J. Cell Physiol . 77: 313-318). El tipo nativo GFP tiene una cresta de mayor excitación a 395 nm y una cresta o pico de menor excitación a 470 nm. La cresta de absorción a 470 nm permite el monitoreo de los niveles de GFP utilizando juegos de filtros (FITC) de isotiocianato de fluoresceína estándar. Se han encontrado mutantes del gen GFP útiles para reforzar la expresión y para modificar la excitación y fluorescencia. Por ejemplo, los GFPs mutantes con alanina, glicina, isoleucina, o treonina sustituidos por serina en la posición 65 resultan en GFPs mutantes con cambios en los máximos de excitación y fluorescencia mayor que la protexna de tipo nativo cuando se excita a 488 nm (vea, por ejemplo, Heim et al., 1995, Nature 373: 663-664); Patente Norteamericana No. 5,625,048; Delagrave et al., 1995, Biotechnology 13: 151-154; Cormack et al., 1996, Gen 173: 33-38; y Cramer et al., 1996, Nature Biotechnol . 14: 315-319). La capacidad de excitar GFP a 488 nm permite el uso de GFP con células estándar fluorescentes activadas que clasifican (FACS) equipo. En otra modalidad, los GFPs aislados a partir de organismos diferentes de la medusa, tal como, pero no limitado a, (sea panzy) , Renilla reriformis. El EGFP es una variante de GFP (3-5) de tipo nativo desplazado al rojo que se ha optimizado para una fluorescencia más alta y una expresión más alta en células de mamíferos. (Máxima excitación=488 nm; máxima emisión=507 nm) . El EGFP codifica la variante GFPmutl que contiene la sustitución de doble aminoácido de Phe-64 a Leu y Ser-65 a Thr. La secuencia de codificación del gen EGFP contiene más de 190 cambios silenciosos de la base que corresponden a preferencias de uso de codon humano . BETA GALACTOSIDASA La beta galactosidasa (""ß-gal") es una enzima que cataliza la hidrólisis de b-galactosidas , incluyendo lactosa, y los análogos de galactosidasa o-nitrofenil- -D-galactopiranosida ("ONPG") y clorofenol rojo-b-D-galactopiranosida ("CPRG") (vea, por ejemplo, Nielsen et al., 1983 Proc Nati Acad Sci USA 80(17) :5198 5202; Eustice et al., 1991, Biotechniques 11:739-742; y Henderson et al., 1986, Clin. Chem. 32:1637-1641). El gen ß-gal funciona también como un gen reportero debido a que el producto de la proteina es extremadamente estable, resistente a la degradación proteolitica en Usados celulares, y pueden ensayarse con facilidad. Cuando el ONPG se usa como el sustrato, la actividad del puede cuantificarse con un espectrofotómetro o un lector de microplacas . Como se utiliza aquí, el término "beta galactosidasa" o "ß-gal" como se utiliza con relación a la invención pretende incluir todos los b-gals, incluyendo productos del gen lacZ, o encimas recombinantes derivadas de b-gals que tienen activiadad b-gal . El gen b-gal funciona también como un gen reportero debido a que el producto de la proteína es extremadamente estable, resistente a la degradación proteolitica en lisados celulares, y puede fácilmente ensayarse. En una modalidad en donde ONPG esta en el sustrato, la actividad b-gal puede cuantificarse con un espectrofotómetro o lector de microplacas para determinar la cantidad de ONPG convertido a 420 nm. En una modalidad cuando CPRG esta en el sustrato. La actividad b-gal puede cuantificarse con un espectrofotómetro o lector de microplacas para determinar la cantidad de CPRG convertido a 570 a 595 nm. CLORA FENICOL ACETILTRANSFERASA La cloramfenicol acetil transferasa ("CAT") es comúnmente usada como un gen reportero en sistemas de células de mamíferos ya que las células de mamíferos no tienen niveles detectables de actividad de CAT. El ensayo para CAT involucra incubar extractos celulares con cloramfenicol radioetiquetado y co-factores apropiados, que separan los materiales de inicio a partir del producto mediante, por ejemplo, cromatografía de capa delgada ("TLC"), seguida por conteo por centelleo (vea, por ejemplo, Patente Norteamericana No. 5,726,041, la cual esta incorporada aquí como referencia en su totalidad) . Como se utiliza aquí, el término "cloramfenicol acetiltransferasa" o "CAT" como se utiliza en relación a la invención pretende incluir todos los CATs, o enzimas recombinantes derivadas de CAT que tienen actividad de CAT. Mientras que es preferible que un sistema reportero que no requiere procesamiento celular, radioisótopos, y separaciones cromatograficas sería más tratable para una selección de alto rendimiento, el CAT como un gen reportero puede estar preferiblemente en situaciones cuando la estabilidad del gen reportero es importante. Por ejemplo, la proteína del CAT reportero tiene una vida media in vivo de aproximadamente 50 horas, lo cual es ventajoso cuando se desea un tipo de resultado de cambio dinámico contra un acumulativo. FOSFA ASA ALCALINA SECRETADA La enzima de la fosfatasa alcalina secretada (SEAP) es una forma truncada de fosfatasa alcalina, en la que la escisión del dominio de la trasmembrana de la proteína permite ser segregada a partir de las células en el medio circundante.
Como se utiliza aquí, el término "fosfatasa alcalina secretada" o "SEAP" como se utiliza en relación a la invención pretende incluir todas las SEAP o encimas recombinantes derivadas del SEAP que tienen actividad de fosfatasa alcalina. La actividad de la SEAP puede detectarse mediante una variedad de métodos, que incluyen, pero no se limitan a, medición de catálisis de un sustrato fluorescente, inmunoprecipitación, HPLC, y detección radiométrica . Se prefiere el método luminiscente debido a su sensitividad incrementada a través de métodos de detección calorimétricos. La ventaja de utilizar SEAP es que no se requiere la etapa de lisis celular dado que la proteína de la SEAP es secretada fuera de la célula, lo que facilita la automatización de procedimientos de muestras y ensayos . Un ensayo a base de células que usa SEAP para usarse en gravamen a base de células de la proteasa del virus de la Hepatitis C esta descrito en la Patente Norteamericana No. 6,280,940 a Potts et al., la cual esta incorporada aquí como referencia en su totalidad. 5.5.7. SISTEMAS DE CULTIVO CELULAR, HUEVOS CON EMBRIÓN Y MODELOS ANIMALES Sistemas de cultivo celular conocidos en el arte pueden utilizarse para propagar o probar actividades de los virus de la presente invención. (Vea por ejemplo., Flint et al., PRINCIPLES OF VIROLOGY, MOLECULAR BIOLOGY, PATHOGENESIS, AND CONTROL, 2000, ASM Press 25-29, el texto total esta incorporado aquí como referencia) . Ejemplos de tales sistemas de cultivo de células incluyen, pero no se limitan a, cultivos de células primarias que se preparan a partir de tejidos de células de animales (por ejemplo, cultivos de células derivadas de riñon de mono, amnios embriónicos humanos, riñon, prepucio, y embriones de pollo o ratón) ; cepas de células diploides que consisten de una población homogénea de un solo tipo y puede dividirse más de 100 veces antes de morir (por ejemplo., cultivo celular derivado de embriones humanos, tales como la cepa WI-38 derivada de pulmón embrionico humano) ; y lineas de células continuas que consisten de un- solo tipo de célula que puede propagarse de manera indefinida en cultivo (por ejemplo, células HEp-2, células Hela, células Vero, células L y 3T3 y células BHK-21) . Los virus de la invención pueden también propagarse en huevos de pollo embrionado . En 5 a 14 días después de la fertilización, se taladra un hueco en el cascarón y se inyecta el virus en el sitio apropiado para su replica. Pueden utilizarse cualquier modelo de animales en la presente invención para completar varios propósitos, tales como para determinar la eficacia y seguridad de las vacunas de la invención. Ejemplos de tales modelos de animales incluyen, pero no se limitan a, ratas de algodón (Sigmodon hispidis) , hámsteres, ratones, monos, y chimpancés. En una modalidad preferida, se usan hámsters Syrian Golden. 5.5.8. ENSAYO DE NEUTRALIZACIÓN Los ensayos de neutralización pueden llevarse a cabo para tratar la aplicación de seguridad importante de si las glicoproteinas superficiales heterologas se incorporan en el virion que puede resultar en un fenotipo de tropismo del virus. Como se utiliza aquí "tropismo" se refiere a la afinidad de un virus para un tipo particular de célula. El tropismo usualmente se determina mediante la presencia de receptores de células en células especificas que permiten a un virus entrar a estas y únicamente a este tipo de células particulares. Un ensayo de neutralización se realiza mediante el uso ya sea de el MAbs de la glicoproteina superficial heterologa (un ejemplo no limitante es la proteína F de un virus de ARN de hebra negativa) o antisuero policlonal que comprende anticuerpos contra la glicoproteina de superficie heterologa . Se prueba una dilución diferente de anticuerpos para observar si el virus quimérico de la invención puede neutralizarse. La glicoproteina superficial heterologa no debe estar presente en la superficie del virión en una cantidad suficiente para resultar en el enlace y la neutralización del anticuerpo . 5.5.9. ENSAYO DE GRADIENTE DE SUCROSA La cuestión de si las proteínas heterologas se incorporan en el virión puede además investigarse mediante el uso de un ensayo bioquímico. Los Usados de células infectadas pueden fraccionarse en gradientes de sucrosa del 20-60%, varias fracciones se colectan y analizan para la presencia y distribución de proteínas heterologas y las proteínas de vector mediante manchado western. Las fracciones y las proteínas del virus pueden también ensayarse mediante titulaciones del virus máximas mediante ensayos con placas . Ejemplos de ensayos de gradientes de sucrosa se dan en la sección 23, infla. Cuando las proteínas heterologas se asocian con el virión, ellas co-emigraran con el virión. 5.6. FORMULACIONES DE VACUNAS UTILIZANDO LOS VIRUS QUIMÉRICOS La invención comprende formulaciones de vacunas que comprenden el virus de AR de hebra negativa diseñado por ingeniería de la presente invención. Los virus de PIV recombinante de la presente invención pueden utilizarse como un vehículo para expresar epitopes extraños que inducen una respuesta protectiva a cualquiera de una variedad de patógenos. En una modalidad especifica, la invención comprende el uso de virus de bPIV recombinante o hPIV atenuado que ha sido modificado en formulaciones de vacunas para conferir protección contra la infección por hPIV. Las preparaciones de vacunas de la invención comprenden vacunas multivalentes, que incluyen preparaciones de vacunas bivalentes y trivalentes. Las vacunas bivalentes y trivalentes de la invención pueden administrarse en la forma de un vector que expresa cada una de la secuencia antigénica heteróloga. Por ejemplo, un primer PIV quimérico que expresa una o más secuencias antigénicas heterólogas puede administrarse en combinación con segundo PIV quimérico que expresa una o más secuencias antigénicas heterólogas, en donde las secuencias antigénicas heterólogas en el segundo PIV quimérico son diferentes de las secuencias antigénicas heterólogas en el primer PIV quimérico. Las secuencias antigénicas heterólogas en el primer y segundo PIV quimérico pueden derivarse del mismo virus pero codificar diferentes proteínas, o pueden derivarse de diferentes virus. En una modalidad preferida, las secuencias antigénicas heterólogas en el primer PIV quimérico se derivan del virus sincitial respiratorio, y las secuencias antigénicas heterólogas en el segundo PIV quimérico se derivan del met neumovirus humano. En otra modalidad preferida, las secuencias antigénicas heterólogas en el primer PIV quimérico se derivan del virus sincitial respiratorio, y las secuencias antigenicas heterologas en el segundo PIV quimérico se derivan del neumovirus aviar. En ciertas modalidades preferidas, la formulación de la vacuna de la invención se usa para proteger contra infecciones causadas por un virus de ARN de hebra negativa, que incluye pero no se limita a, virus de influenza, virus de parainfluenza, virus sincitial respiratorio, y metaneumovirus de mamífero (por ejemplo, metaneumovirus humano). De manera más especifica, la formulación de la vacuna se usa para proteger contra infecciones por un metaneumovirus humano y/o un neumovirus aviar. En ciertas modalidades, la formulación de la vacuna de la invención se usa para proteger contra infecciones por (a) un metaneumovirus humano y un virus sincitial respiratorio; y/o (b) un neumovirus aviar y un virus sincitial respiratorio. En una modalidad preferida, la invención proporciona una molécula proteica o una proteína viral de un metaneumovirus especifico o fragmento funcional de la misma codificada por un ácido nucleico de acuerdo a la invención. Moléculas proteicas útiles son por ejemplo derivadas de cualquiera de los genes o fragmentos genomicos que se pueden derivar de un virus de acuerdo a la invención. Particularmente útiles son las proteínas F, SH, y/o G o fragmentos antigénicos de las mismas para la inclusión como antígeno o subunidad de inmunogen, pero también puede utilizarse el virus totalmente inactivo. También son particularmente útiles aquellas sustancias proteicas que se codifican por fragmentos de ácidos nucleicos que se identifican por análisis filogenéticos, por supuesto son preferidas aquellas que están dentro de los límites y metes preferidos de ORFs útiles en análisis filogenéticos , en particular para sacar el anticuerpo de MPV especifico o respuestas de células T sea in vivo (por ejemplo, para propósitos protectivos o para proporcionar anticuerpos de diagnostico) o in vitro (por ejemplo, mediante tecnología de despliegue de fase u otra técnica útil para generar anticuerpos sintéticos) . Una composición farmacéutica que comprende un virus, un ácido nucleico, una molécula proteica o fragmento de la misma, un antígeno y/o un anticuerpo de acuerdo a la invención pueden por ejemplo utilizarse en un método o tratamiento para la prevención de una infección de MPV y/o una enfermedad respiratoria que comprende proporcionar a un individuo con una composición farmacéutica de acuerdo a la invención. Esta es más útil cuando dicho individuo es un humano, específicamente cuando dicho humano es menor de 5 años de edad, dado que tales infantes y niños jóvenes son probablemente los más propensos a ser infectados por un MPV humano como se proporciona aq í. De manera general, en los pacientes en fase aguda sufrirán de síntomas respiratorio superiores predispuestos por otras respiratorias y enfermedades respiratorias, también pueden ocurrir enfermedades respiratorias inferiores predispuestas por más y otras condiciones serias . Las composiciones de la invención pueden usarse para el tratamiento de individuos inmuno comprometidos incluyendo pacientes con cáncer, recipientes de trasplantes y los ancianos . La invención también proporciona métodos para obtener un agente antiviral útil en el tratamiento de la enfermedad de la zona respiratoria que comprende establecer un cultivo de células o animal experimental que comprende un virus de acuerdo a la invención, tratar dicho cultivo o animal con un agente antiviral candidato, y determinar el efecto de dicho agente en dicho virus o su infección de dicho cultivo o animal . La invención también proporciona el usa de un agente antiviral de acuerdo a la invención para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de la enfermedad de la zona respiratoria, específicamente cuando es provocada por una infección de MPV o enfermedad relacionada, y proporciona una composición farmacéutica que comprende un agente antiviral de acuerdo a la invención, útil en un método para el tratamiento o prevención de una infección de MPV o enfermedad respiratoria, dicho método comprende proporcionar un individuo con una composición farmacéutica tal .
En ciertas modalidades de la invención, la vacuna de la invención comprende metaneumovirus de mamífero. En ciertas modalidades más especificas, el metaneumovirus de mamífero es un metaneumovirus humano. En una modalidad preferida, el metaneumovirus de mamífero a utilizarse en una formulación de vacuna tiene un fenotipo atenuado. Para métodos que logren un fenotipo atenuado, vea la sección 5.4. La invención proporciona formulaciones de vacunas para la prevención y el tratamiento de infecciones con PIV, RSV, APV, y/o hMPV. En ciertas modalidades, la vacuna de la invención comprende virus recombinantes y quiméricos de la invención. En ciertas modalidades el virus es atenuado. En una modalidad especifica, la vacuna comprende APV y la vacuna se utiliza para la prevención y el tratamiento para infecciones de hMPV en humanos. Sin que se limite por la teoría, debido al alto grado de homología de la proteína F del APV con la proteína F del hMPV, la infección con APV resultará en la producción de anticuerpos en el huésped que reaccionará de manera cruzada con el hMPV y protegerá al huésped de la infección con hMPV y enfermedades relacionadas. En otra modalidad especifica, la vacuna comprende hMPV y la vacuna se usa para la prevención y el tratamiento para la infección de APV en aves, tales como, pero no limitadas a, pavos. Sin que se limite por la teoría, debido al alto grado de homología de la proteína F del APV con la proteína F del hMPV, la infección con hMPV resultará en la producción de anticuerpos en el huésped u hospedero que reaccionara de manera transversal con el APV y protegerá el huésped de la infección con APV y enfermedades relacionadas . En ciertas modalidades, la formulación de la vacuna de la invención se usa para proteger contra infecciones por (a) un metaneumovirus humano y un virus de parainfluenza humana; y/o (b) un neumovirus aviar y un virus de parainfluenza humana y enfermedades relacionadas . En ciertas modalidades, la formulación de la vacuna de la invención se usa para proteger contra infecciones por (a) un metaneumovirus humano, un virus sincitial respiratorio y/o un neumovirus aviar y un virus de parainfluenza humana y enfermedades relacionadas. En ciertas modalidades, la formulación de la vacuna de la invención se usa para proteger contra infecciones por (a) un metaneumovirus humano, un virus sincitial respiratorio y un virus de parainfluenza humana; y/o (b) un neumovirus aviar, un virus sincitial respiratorio y un virus de parainfluenza humana y enfermedades relacionadas. En ciertas modalidades, la formulación de la vacuna de la invención se usa para proteger contra infecciones por un metaneumovirus humano, un virus sincitial respiratorio, y un virus de parainfluenza humana. En otras ciertas modalidades, la formulación de la vacuna de la invención se usa para proteger contra infecciones por un neumovirus aviar, un virus sincitial respiratorio y un virus de parainfluenza humana y enfermedades relacionadas . Debido al alto grado de homología entre las proteínas F de diferentes especies virales, para comparaciones de secuencias de aminoácidos ejemplares vea la figura 1, las formulaciones de la vacuna de la invención pueden usarse para la protección de virus diferentes a partir de uno desde el cual se derivo la secuencia de nucleótidos heteróloga que codifica la proteína F. En una modalidad especifica ejemplar, una formulación de la vacuna, contiene un virus que comprende una secuencia de nucleótidos heterólogas derivada de un neumovirus aviar de tipo A, y la formulación de la vacuna se usa para proteger desde una infección por neumovirus aviar de tipo A y neumovirus aviar de tipo B. En otra modalidad ejemplar especifica, una formulación de la vacuna contiene un virus que comprende una secuencia de nucleótidos heteróloga derivada de un subgrupo C de neumovirus aviar, y la formulación de la vacuna se usa para proteger desde infección por neumovirus aviar de subgrupo C y neumovirus aviar de subgrupo D.
La invención incluye formulaciones de vacunas para administrarse a humanos y animales que son útiles para proteger contra PIV, hMPV, APV (incluyendo APV C y APV D) , influenza, RSV, virus Sendai, paperas, virus de laringotraqueitis , simianvirus 5, papilomavirus humano, además de otros virus, patógenos y enfermedades relacionadas. La invención incluye además, formulaciones de vacunas para administrarse a animales y humanos que son útiles para proteger contra infecciones por metaneumovirus humano, infecciones por neumovirus aviar, y enfermedades relacionadas.
En una modalidad la invención incluye formulaciones de vacunas que son útiles contra enfermedades de animales domésticos que causan agentes que incluyen virus de la rabia, virus de leucemia felina (FLV) y virus de enfermedad canina. En otra modalidad más, la invención incluye formulaciones de vacunas que son útiles para proteger el ganado contra el virus de estomatitis vesicular, virus de la rabia, virus de la fiebre biliosa hematúrica o morriña, virus de erupción pustulosa en cerdos, y además para proteger animales salvajes contra el virus de la rabia. Los virus atenuados generados mediante la genética intentos de genética inversa pueden utilizarse en la vacuna y las formulaciones farmacéuticas descritas aquí. Las técnicas de genética inversa pueden también utilizarse para otras mutaciones adicionales diseñadas por ingeniería para otros genes virales importantes para la producción de vacunas . Por ejemplo, las mutaciones en la región no codificante 5' pueden afectar la traslación de mARN, las mutaciones en las proteínas cápside se piensa que influencian el montaje viral y los mutantes sensitivos a la temperatura y adaptados al frío son frecuentemente menos patogénicos que el virus parental . (Vea por ejemplo, Flint et al., PRINCIPLES OF VIROLOGY, MOLECULAR BIOLOGY, PATHOGENESIS, AND CONTROL, 2000, ASM Press pp 670-683, el texto total esta incorporado aquí como referencia). Los epitopes de variantes de cepas de vacunas útiles pueden diseñarse por ingeniería en el virus atenuado. De manera alternativa, los epitopes totalmente extraños, incluyen antígenos derivados de otros virales y no virales pueden diseñarse por ingeniería en la cepa atenuada. Por ejemplo, los antígenos de virus no relacionados tales como VIH (gpl60, gpl20, gp41) , antígenos parásitos (por ejemplo, malaria), antígenos de bacterias u hongos, o antígenos de tumores pueden diseñarse por ingeniería en la cepa atenuada. De manera alternativa, los epitopes que alteran el tropismo del virus in vivo pueden diseñarse por ingeniería en los virus quiméricos atenuados de la invención. Virtualmente cualquier secuencia del gen heterologo puede construirse en los virus quiméricos de la invención para usarse en vacunas. Preferiblemente, los moieties y péptidos que actúan como modificadores de respuesta biológica se construyen en los virus quiméricos de la invención para usarse en vacunas. Preferiblemente, los epitopes que inducen una respuesta inmune protectiva a cualquiera de una variedad de patógenos, o antígenos que enlazan anticuerpos de neutralización pueden expresarse mediante o como parte de los virus quiméricos. Por ejemplo, las secuencias de genes heterologos que pueden construirse en los virus quiméricos de la invención incluyen, pero no se limitan a hemaglutinin neuramidasa de influenza y parainfluenza y glicoproteínas de fusión tales como los genes HN y F del PIV3 humano. En otra modalidad más, las secuencias de genes heterologos que pueden diseñarse por ingeniería en los virus quiméricos incluyen aquellas que codifican proteínas con actividades de inmunomodulación. Ejemplos de proteínas de inmunomodulación incluyen, pero no se limitan a, citocinas, interferon de tipo 1, interferon gama, factores de estimulación de colonias, interleucina -1, -2, -3, -4, -5, -6, -12, y antagonistas de estos agentes . Además, las secuencias de genes heterologos que pueden construirse en los virus quiméricos de la invención para usarse en vacunas incluyen pero no se limitan a secuencias derivadas de un virus de inmuodeficiencia humana (VIH) , preferiblemente de tipo 1 o tipo 2. En una modalidad preferida, un péptido inmunogenico derivado del VIH que puede ser la fuente de un antígeno puede construirse en un PIV quimérico que puede entonces utilizarse para sacar una respuesta inmune de vertebrada. Tales péptidos derivados del VIH pueden incluir, pero no limitarse a, secuencias derivadas del gen env (por ejemplo, secuencias que codifican todo o parte de gpl60, gpl20, gpl20 y/o gp41) , el gen pol (por ejemplo, secuencias que codifican todo o parte de la trascriptasa inversa, endonucleasa, proteasa, y/o integrasa) , el gen gag (por ejemplo, secuencias que codifican todo o parte de p7, p6, p55, pl7/l8, p24/25) , tat, rev, nef, vif, vpu, vpr, y/o vpx. Otras secuencias heterologas pueden derivarse del antígeno superficial del virus de la hepatitis B (HBsAg) ; antígenos superficiales del virus de la hepatitis A o C, las glicoproteínas del virus Epstein Barr; las glicoproteínas del papilomavirus humano; las glicoproteínas del virus sincitial respiratorio, el virus de parainfluenza, el virus Sendai, el simianvirus 5 o el virus de paperas; las glicoproteínas del virus de influenza, las glicoproteínas del herpesvirus; el VPI de poliovirus; determinantes antigénicos de patógenos no virales tales como bacterias y parásitos por mencionar algunos. En otra modalidad, pueden expresarse todas o porciones de genes de inmunoglobulina . Por ejemplo, regiones variables de inmunoglobulinas anti-idiotipicas que imitan tales epitopes pueden construirse en los virus quiméricos de la invención. Otras secuencias heterologas pueden derivarse de antígenos tumorales, y los virus quiméricos resultantes pueden usarse para generar una respuesta inmune contra las células tumorales que conducen a la regresión del tumor en vivo. Las vacunas pueden utilizarse en combinación con otros regimenes terapéuticos, que incluyen pero no se limitan a, quimioterapia, terapia con radiación, cirugía, trasplante de médula ósea, etc, para el tratamiento de tumores. De acuerdo con la presente invención, los virus recombinantes pueden diseñarse por ingeniería para expresar antígenos asociados a los tumores (TAAs) , que incluyen pero no se limitan a, antígenos de tumores humanos reconocidos por células T (Robbins and Kawakami, 1996, Curr, Opin. Immunol . 8:628-536, incorporada aquí como referencia en su totalidad) . Proteínas de linaje de melanocitos, incluyen gplOO, MART-l/ elanA, TRP-1 (gp75) , tirosinasa; antígenos de tumor especifico ampliamente distribuidos, MAGE-1, MAGE-3, BAGE, GAGE-1, GAGE-1, N-acetilglucosaminiltransferasa-V, pl5; antígenos de tumor específicos mutados, ß-catenina, MUM-1, CDK4; antígenos de nonmelanoma para carcinoma de pecho, ovario, cervical, y pancreático, HER-2/neu, papilomavirus -E6, -E7, MUC-1 humano. Aún en otras modalidades, las secuencias de nucleotidos heterologas se deriva de un metaneumovirus , tal como un metaneumovirus humano y/o neumovirus aviar. En otras modalidades, el virus de la invención contiene dos diferentes secuencias de nucleotidos heterólogas en donde una se deriva de un metaneumovirus tal como un metaneumovirus aviar y/o neumovirus aviar y la otras se deriva de un virus sincitial respiratorio . Las secuencias de nucleotidos heterólogas codifican una proteina F o una proteina G del virus respectivo. En una modalidad especifica, las secuencias de nucleotidos heterólogas codifican una proteína F quimérica, en donde la proteína F quimérica contiene el ectodominio de una proteína F de un metaneumovirus y el dominio de la trasmembrana además del dominio luminar de una proteína F de un virus de parainfluenza. Pueden formularse ya sea una vacuna viral recombinante viva o una vacuna viral recombinante inactiva. Puede preferirse una vacuna viva debido a que la multiplicación en el huésped origina un estimulo prolongado de clase y magnitud similar a aquellas que ocurren en las infecciones naturales, y por lo tanto, confiere inmunidad sustancial de largo periodo. La producción de tales formulaciones de vacunas del virus recombinante vivo pueden complementarse usando métodos convencionales que involucran la propagación del virus en cultivos celulares o en la alantoides del embrión de pollo seguido de la purificación. De manera adicional, como se ha demostrado el bPIV no es patogénico en humanos, este virus es altamente satisfactorio para usarse como una vacuna en vivo. A este respecto, el uso de PIV (vectores) genéticamente diseñado por ingeniería para propósitos de vacunas puede desear la presencia de características de atenuación en estas cepas. La introducción de mutaciones apropiadas (por ejemplo, deleciones) en las plantillas usadas en la trasfección pueden proporcionar los virus nuevos con características de atenuación. Por ejemplo, las mutaciones que están asociadas con sensitividad a la temperatura o adaptación al frío pueden hacerse en mutaciones con deleciones . Estas mutaciones deben ser más estables que las mutaciones de punto asociadas mutantes sensitivos al frío o la temperatura y las frecuencias de la reversión deben ser extremadamente bajas. De manera alternativa, pueden construirse virus quiméricos con características de "suicidio" . Tales virus sufrirían solamente una o unas pocas rondas de replica dentro del huésped. Cuando se usa como una vacuna, el virus recombinante sufriría ciclos de replicación limitada e induciría un nivel suficiente de respuesta inmune pero no sufriría en el huésped humano y provocaría enfermedad. Los virus recombinantes que carecen de uno o más de los genes del PIV o que poseen genes del PIV mutados no serían capaces de experimentar rondas de replica sucesivas. Los virus defectivos pueden producirse en lineas de células que expresan de manera permanente un gen tal . Los virus que carecen de un gen esencial se replicarían en estas líneas de células, sin embargo, cuando se administran a un huésped humano, no serían capaces de completar una ronda de replica. Tales preparaciones pueden transcribir y trasladar -en este ciclo abortivo-- un número suficiente de genes para inducir una respuesta inmune . De manera alternativa, pueden administrarse cantidades más grandes de las cepas, de modo que estas preparaciones sirvan como vacunas de virus inactivos (muertos) . Para vacunas inactivas es preferible que el producto del gen heterologo se exprese como un componente viral de modo que el producto del gen este asociado con el virión. La ventaja de tales preparaciones es que ellas contienen proteínas nativas y no experimentan inactivación por tratamiento con formalina u otros agentes usados en la fabricación de vacunas de virus muertos. De manera alternativa, el PIV mutado hecho de cADN puede ser altamente atenuado de manera se que duplica por únicamente unas pocas rondas .
En ciertas modalidades, la vacuna de la invención comprende un virus atenuado. Sin que se limite por la teoría, el virus atenuado puede ser efectivo como una vacuna aún si el virus atenuado es incapaz de provocar que una célula genere nuevas partículas virales infecciosas debido a que las proteínas virales se insertan en la membrana citoplásmica del huésped simulando así una respuesta inmune . En otra modalidad de este aspecto de la invención, las formulaciones de vacunas inactivas pueden prepararse usando técnicas convencionales para "matar" los virus quiméricos . Las vacunas inactivas están "muertas" en el sentido de que su contagiosidad se ha destruido. De manera ideal, la contagiosidad del virus se destruye sin que afecte su inmunogenicidad. Para preparar vacunas inactivas, los virus quiméricos pueden crecer en cultivos de células o en la alantoides del embrión de pollo, purificado por ultracentrifugación zonal, inactivada por formaldehído o ß-propiolactona, y conjuntada. La vacuna resultante es usualmente inoculada de manera intramuscular. Los virus inactivados pueden formularse con un adyuvante conveniente para aumentar la respuesta inmunológica . Tales adyuvantes pueden incluir pero no limitarse a geles minerales, por ejemplo, hidróxido de aluminio; sustancias activas superficiales tales como el lisolecitin, polioles pluronicos, polianiones; péptidos; emulsiones aceitosas; y adyuvantes humanos potencialmente útiles tales como el BCG, Corynebacterium parvum, ISCOMS, y virosomas . Pueden utilizarse muchos métodos para introducir las formulaciones de vacunas descritas anteriormente, estas incluyen pero no se limitan a vías oral, intradermal, intramuscular, intraperitoneal , intravenosa, subcutánea, percutánea, e intranasal e inhalación. Puede ser preferible introducir la formulación de la vacuna del virus quimérico vía la ruta natural de la infección del patógeno para la cual se diseño la vacuna. En ciertas modalidades, la invención se refiere a composiciones inmunogenicas . Las composiciones inmunogenicas comprenden un PIV quimérico. En ciertas modalidades, la composición inmunogenica comprende un PIV quimérico atenuado. En ciertas modalidades, la composición inmunogenica comprende además un portador aceptable farmacéuticamente . Pueden utilizarse varias técnicas para evaluar la efectividad y seguridad de una vacuna de acuerdo a la presente invención. Una vacuna efectiva es una vacuna que protege individuos vacunados de enfermedades debidas a patógenos, mediante invocar propiedades naturales, celulares, respuestas humorales con efectos laterales mínimos. La vacuna no debe causar enfermedad. Puede utilizarse cualquier técnica que sea capaz de medir la réplica del virus y la respuesta inmune del sujeto vacunado para evaluar la vacuna. Por ejemplo, pueden utilizarse estudios de estimulación y pruebas clínicas. Vea la sección 5.5.4. y la Sección 5.5.5.. También se dan ejemplos no limitantes en las secciones de ejemplos, infra. 5.6.1. REGIMENES DE DOSIFICACIÓN Y DMINISTRACIÓN DE LAS VACUNAS O PREPARACIONES INMÜNOGENICAS DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona vacunas y preparaciones inmunogénicas que comprenden PIV quimérico que expresan una o más secuencias antigénicas heterólogas o no nativas. Las vacunas o preparaciones inmunogénicas de la invención incluyen vacunas individuales o multivalentes, que incluyen vacunas bivalentes o trivalentes. Las vacunas o formulaciones inmunogénicas son útiles para proporcionar protecciones contra varias infecciones virales. Particularmente, las vacunas o formulaciones inmunogénicas de la invención proporcionan protección contra infecciones de la zona respiratoria en un huésped. Un virus recombinante y/o una vacuna o formulación inmunogenica de la invención puede administrarse sola o en combinación con otras vacunas. Preferiblemente, una vacuna o formulación inmunogénica de la invención se administra en combinación con otras vacunas o formulaciones inmunogénicas que proporcionan protección contra enfermedades de la zona respiratoria, tales como pero no limitadas a, vacunas del virus sincitial respiratorio, vacunas de influenza, vacunas de sarampión, vacunas de paperas, vacunas de rubéola, vacunas de neumococo, vacunas de rickettsia, vacunas de estafilococo, vacunas de la tos ferina, o vacunas contra canceres de la zona respiratoria. En una modalidad preferida, el virus y/o vacuna de la infección se administra de manera concurrente con vacunas pediátricas recomendadas en las edades correspondientes. Por ejemplo, a dos meses, cuatro o seis meses de edad, el virus y/o vacuna de la invención puede administrarse de manera concurrente con DtaP (IM) , Polio (IPV o OPV) y Hepatitis B (IM) . A los once o quince meses de edad, el virus y/o vacuna de la invención puede administrarse de manera concurrente con Hib (IM) , Polio (IPV o OPV) , MMRII® (SubQ) ; Varivax® (SubQ) , y hepatitis B (IM) . Las vacunas que pueden utilizarse con los métodos de la invención se repasan en varias publicaciones, por ejemplo, The Jordán Report 2000, División of Microbiology and Infectious Diseases, National Institute of Allergy and Infectious Diseases, Nacional Institute of Health, Estados Unidos, contenido el cual esta incorporado aquí como referencia en su totalidad. Una vacuna o formulación inmunogenica de la invención puede administrarse a un sujeto per se o en la forma de una composición farmacéutica o terapéutica. Las composiciones farmacéuticas que comprenden un adyuvante y un antígeno inmunogenico de la invención (por ejemplo, un virus, un virus quimérico, un virus mutado) pueden fabricarse por medio de procesos de mezclado, disolución, granulación, preparación de grageas, flotación, emulsificación, encapsulación, entrampado o liofilización convencionales. Las composiciones farmacéuticas pueden formularse en modos convencionales usando uno o más portadores aceptables fisiológicamente, diluyentes, excipientes o auxiliares que facilitan el procesamiento del antígeno inmunogenico de la invención en preparaciones que pueden utilizarse de manera farmacéutica. Formulaciones apropiadas es, o entre otros, depende de la ruta de administración elegida. Cuando una vacuna o composición inmunogenica de la invención comprende coadyuvantes o se administra junto con uno o más coadyuvantes, los coadyuvantes que pueden utilizarse incluyen, pero no se limitan a, coadyuvantes de sales minerales, o coadyuvantes de geles de sales minerales, coadyuvantes de partículas, coadyuvantes de micropartículas, coadyuvantes de la mucosa, y adyuvantes inmunoestimuladores . Ejemplos de coadyuvantes incluyen, pero no se limitan a, hidróxido de aluminio, gel de fosfato de aluminio, adyuvante completo de Freud, adyuvante incompleto de Freud, formulaciones de escualeno o escualeno con adyuvante de aceite en agua, poliesteres biodegradables y biocompatibles, loposomas polimerizadas, glicosidas triterpenoides o saponinas (por ejemplo, QuilA y QS-21, también vendido bajo la marca registrada STIMULON, ISCOPREP) , N-acetil-muramil-L-treonil-D-isoglutamina () reonil- DP, vendido bajo la marca registrada TERMURTIDE) , LPS, lípido A de monofosforil ( ) 3D-MLA vendido bajo la marca registrada MPL) . El sujeto al que se le administra la vacuna o una composición inmunogénica es preferiblemente un mamífero, más preferiblemente un humano, pero puede también ser un animal, incluyendo, primates, vacas, caballos, ovejas, cerdos, aves (por ejemplo, pollos, pavos) , cabras, gatos, perros, hámsteres, ratones y roedores. Pueden utilizarse muchos métodos para introducir la vacuna o la composición inmunólogica de la invención, que incluyen pero no se limitan a, ruta oral, intradermal, intramuscular, intraperitoneal , intravenosa, subcutánea, percutanea, intranasal y de inhalación, y vía escarificación (rayadura a través de las capas superiores de la piel, por ejemplo, usando una aguja bifurcada) . Para administración tópica, la vacuna o preparaciones inmunogenicas de la invención pueden formularse como soluciones, geles, ungüentos, cremas, suspensiones, etc, como se conocen bien en el arte.
Para la administración de manera intranasal o por inhalación, la preparación a usarse de acuerdo a la presente invención puede ser convenientemente liberada en la forma de una presentación de atomizador de aerosol de paquetes presurizados o un nebulizador, con el uso de un propulsor conveniente, por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas conveniente . En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosificación puede determinarse mediante proporcionar una válvula para liberar una cantidad medida. Las cápsulas o cartuchos de, por ejemplo, gelatina para usarse en un inhalador o insuflador pueden formularse conteniendo una mezcla de polvo del compuesto y una base de polvo conveniente tal como la lactosa o almidón. Por inyección, la vacuna o preparaciones inmunogénicas pueden formularse en soluciones acuosas, preferiblemente en amortiguadores compatibles fisiológicamente tales como la solución de Hank, la solución de Ringer, o amortiguador salino fisiológico. La solución puede agentes formulatorios tales como agentes de suspensión, estabilización y/o dispersión. De manera alternativa, las proteínas pueden estar en forma de polvo para la constitución con un vehículo estable, por ejemplo, agua libre de pirogeno estéril, antes de usarse.
La determinación de una cantidad efectiva de la vacuna o formulación inmunogenica para la administración esta también dentro de las capacidades de aquellos expertos en el arte, especialmente en virtud de la divulgación detallada proporcionada aquí . Una dosis efectiva puede estimarse inicialmente a partir de ensayos in vitro. Por ejemplo, una dosis puede formularse modelos animales para lograr una inducción de una respuesta inmune utilizando técnicas que son bien conocidas en el arte. Alguien que tiene habilidad ordinaria en el arte puede fácilmente optimizar la administración para todas las especies animales en base a resultados descritos aquí . La cantidad e intervalo de dosificación pueden ajustarse de manera individual. Por ejemplo, cuando se utiliza como una composición inmunogenica, una dosis conveniente es una cantidad de la composición que cuando se administra como se describió anteriormente, es capaz de sacar una respuesta de anticuerpo. Cuando se utiliza como una vacuna, la vacuna o formulaciones inmunogénicas de la invención pueden administrarse en aproximadamente 1 a 3 dosis por un periodo de 1 a 36 semanas. Preferiblemente, se administran 1-2 dosis, en intervalos de aproximadamente 2 semanas por aproximadamente 4 meses y vacunaciones de refuerzo pueden darse de manera periódica de aquí en adelante . Protocolos alternos pueden ser apropiados para animales individuales. Una dosis conveniente es una cantidad de la formulación de la vacuna que, cuando se administra como se describió anteriormente, es capaz de originar una respuesta inmune en un animal inmunizado suficiente para proteger al animal de una infección por por lo menos de 4 a 12 meses. En general, la cantidad del antígeno presente en una dosis varía de aproximadamente 1 pg a aproximadamente 100 mg por kg del huésped, de manera típica de aproximadamente lOpg a aproximadamente 1 mg, y preferiblemente de aproximadamente lOOpg a aproximadamente 1 pg. Rangos de dosificación convenientes variaran con la ruta de inyección y el tamaño del paciente, pero típicamente variaran de aproximadamente 0.1 mL a aproximadamente 5 mL . En una modalidad especifica, los virus y/o vacunas de la invención se administran a una dosis individual de inicio de por lo menos 103 TCID50, por lo menos 104 TCID50/ por lo menos 105 TCIDso, por lo menos 106 TCID50. En otra modalidad especifica, el virus y/o vacunas de la invención se administran en dosis múltiples. En una modalidad preferida, se usa un régimen de dosificación primaria a los 2, 4, y 6 meses de edad y una dosificación reforzadora al inicio del segundo año de vida. Más preferiblemente, cada dosis de por lo menos 105 TCID50, por lo menos 10e TCID50 se da en un régimen de dosificación múltiple. La proporción de replica de un virus puede usarse como un índice para ajustar la dosis de una vacuna en una prueba clínica. Por ejemplo, ensayos para probar la proporción de replica de un virus (por ejemplo, una curva de crecimiento, vea Sección 5.5, para ensayos disponibles) pueden utilizarse para comparar la proporción de replica de los virus y/o vacunas de la invención para aquellas del bPIV3 , que se demostró en estudios previos (vea Clements et al., J. Clin. Microbiol. 29: 1175-82 (1991); arron et al., J. Infect . Dis. 171:1107-14 (1995); Karron et al., Ped. Inf. Dis. J. 5: 650-654 (1996) . Estos estudios mostraron que una vacuna de PIV3 bovino es generalmente segura y tolerada por voluntarios humanos saludables, incluyendo adultos, niños de 6-60 meses de edad, e infantes de 2-6 meses de edad. En estos estudios, los sujetos recibieron por lo menos una sola dosis de vacuna de PIV3 de 103 TCID50 a 10e TCID50. Doce niños recibieron dos dosis de PIV3 en lugar de una dosis sin efectos adversos) . Una proporción de replica comparable en cuanto al bPIV3 sugiere que una dosificación comparable puede usarse en una prueba clínica. Una proporción de replica inferior comparada a aquella del PIV3 sugiere que puede usarse una dosificación más alta . 5.6.2. POBLACIONES OBJETIVO En ciertas modalidades de la invención, la población objetivo para los métodos terapéuticos y de diagnostico de la invención se definen por la edad. En ciertas modalidades, la población objetivo para los métodos terapéuticos y/o de diagnostico se caracterizan por una enfermedad o trastorno adicional a una infección de la zona respiratoria. En una modalidad específica, la población objetivo incluye niños jóvenes, menores de edad. En una modalidad más especifica, el niño menor de dos años no sufre de enfermedad diferente a la infección de la zona respiratoria. En otras modalidades, la población objetivo incluye pacientes mayores de 5 años de edad. En una modalidad más especifica, los pacientes de por arriba de la edad de años sufren de una enfermedad adicional o trastorno que incluye fibrosis cística, leucemia, y linfoma que no es de Hodking, o recientemente recibieron una trasplante de medula ósea o riñon. En una modalidad especifica de la invención, la población objetivo incluye sujetos en los que la infección de hMPV esta asociada con inmunosupresión de los anfitriones . En una modalidad especifica, el sujeto es un individuo inmunocomprometido . En ciertas modalidades, la población objetivo para los métodos de la invención incluye adultos mayores.
En una modalidad especifica, el sujeto a tratarse con los métodos de la invención se infecto con hMPV en los meses del invierno . Los siguientes ejemplos son ilustrativos, pero no limitantes, de la presente invención. Las células y virus empleados en los ejemplos se mantienen como sigue: la cepa ?2 del RSV, los virus de parainfluenza bovino de tipo 3/ parainfluenza humana de tipo 3 (los virus b/h PIV3/RSV) , el metaneumovirus humano de cepa NL/1/00 (hMPV) , los virus de RSV transportados con el vector de parainfluenza bovino de tipo 3/ parainfluenza humana de tipo 3 (los virus b/h PIV3/RSV), y el metaneumovirus humano transportado con el vector de parainfluenza bovino de tipo 3/ parainfluenza humana de tipo 3 (b/h PIV3/RSV) crecieron en células Vero en Opti- EM (Gibco/BRL) en la presencia de gentamicina. El virus de la vacuna modificada Ankara (MVA-T7) o enfermedad pustulosa de las aves (fowl-pox) -T7 (FP-T7) que expresan la fase de la polimerasa de AR T7 crecieron en células de riñon de pollo embrionico (SPAFAS) . Las células Vero, HeLa y Hep-2 se mantuvieron en MEM (JRH Biociencias) suplido con suero bovino fetal al 10% (FBS) 2 nM de L-glutamina, aminoácidos no esenciales y antibióticos. 6. EJEMPLO 1: CONSTRUCCIÓN Y CLONACIÓN DEL ADNc QUIMÉRICO DE LA PARAINFLUENZA BOVINA 3/PARAINFLUENZA HUMANA 3 Con el fin de sustituir los genes F y HN del bPIV3 con aquéllos de hPIV3 , se introdujeron enzimas de restricción adicionales en el ADNc del bPIV3 infeccioso. Utilizando mutagénesis dirigida, se introdujo un sitio Nhe I único en la posición 5041 del nucleótido y se introdujo un sitio Sal I en el nt 8529 del ADNc del bP!V3. El ADNc del bPIV3 de longitud completa, modificado, se trató con enzimas de restricción Nhe I y Sal I y un fragmento de ADN de 14 kb que abarca todas las secuencias virales del bPIV3 excepto los genes F y HN, se aisló mediante purificación con gel . Para obtener las secuencias del gen F y HN de hPIV3, se infectó un plato de 10 cm de células Vero confluentes con una cepa de hPIV3 (hPIV3/Tex/l2084/l983) . Después de 3 días de incubación a 37 °C, las células se cosecharon y se aisló el ARN total utilizando ARN STAT-LS 50 (Tel-Test Inc.). Se generó ADNc viral mediante trascripción inversa utilizando un oligo específico hPIV3 que se hibridiza en la posición 4828 del genoma del hPIV3. Los genes F y HN de hPIV3 se amplificaron mediante PCR (reacción en cadena de polimerasa) utilizando polimerasa Taq. El producto PCR se clonó en el vector de clonación pT/A TOPO (Invitrogen) y a partir de dos clones (#11 y #14) se secuenciaron los genes hPIV3 F y HN. El análisis de secuencia reveló que para el clon #11, se corrigió el gen F, aunque el gen HN contenía secuencias anómalas; para el clon #14, se corrigió el gen HN, aunque el gen F contenía codones de terminación anómalos. Por consiguiente un plásmido, que contiene los genes h.PIV3 F y HN funcionales, se construyó combinando el gen F correcto de #11 con el gen HN correcto de #14 de la siguiente manera. Ambos plásmidos hPIV3 (#11 y #14) se digirieron con Nhel y EcoRl . Un fragmento de 1.6 kb que alberga el gen F correcto, se aisló del clon #11 y un fragmento de 8.5 kb que contiene el gen HN correcto y las secuencias de plásmidos, se aisló del clon #14. Los dos fragmentos se ligaron para producir el plásmido que contiene los genes intactos F y HN de hPIV3. La secuencia correcta se confirmó mediante análisis de secuencia de ADN. Finalmente, se agregó un nucleótido individual al extremo 3' del gen HN en la región no traducida para satisfacer la "Regla de Seis" . La adición del nucleótido individual se logró utilizando el equipo de mutagénesis QuikChange (Stratagene) y se confirmó mediante la secuenciación de ADN. El fragmento de ADN correcto del gen F y HN de hPIV3 se aisló entonces mediante digestión con Nhe 1 y Sal 1 y un fragmento de ADN de 3.5 kb se purificó con gel . El ADNc quimérico de longitud completa b/h PIV3 se construyó ligando el fragmento de ADN de 14.5 kd que alberga las secuencias bPIV3 descritas anteriormente y el fragmento de ADN de 3.5 kb que contiene los genes hPIV3 F y HN (ver la Figura 3) . El ADN del plásmido quimérico de longitud completa se confirmó mediante un mapeo extenso de las enzimas de restricción. Además, los empalmes del gen M/F y HN/L del constructo quimérico se confirmaron mediante la secuenciación de ADN que contienen las secuencias bPIV3 y hPIV3 así como un sitio de la enzima de restricción Nhe 1 y Sal 1, respectivamente . 7 - EJEMPLO 2 : CONSTRUCCIÓN Y CLONACIÓN DE LOS ADNcs DE LOS GENES F Y G DEL VIRUS SINCITIAL RESPIRATORIO VECTORIZADO DE LA PARAINFLUENZA BOVINA 3/PARAINFLUENZA HUMANA 3 Con el fin de determinar los efectos de las inserciones del antígeno de RSV en la posición 1 ó 2 del genoma de PIV3 b/h en la réplica del virus, se clonaron los genes F y G del virus respiratorio sincitial (RSV) en diferentes posiciones del vector quimérico de la parainfluenza bovina 3/parainfluenza humana 3 (vector b/h PIV3) . Ver la Figura 4. Con el fin de insertar genes extraños en el ADNc de la PIV3 (b/h) bovina/humana, se introdujeron sitios de la enzima de restricción Avrll en el plásmido del ADNc de la b/h PIV3 (Haller et al., 2000; 2001, es decir el mismo constructo que en el Ejemplo 6 ) mediante mutagénesis dirigida utilizando el equipo QuickChange (Stratagene) . Se introdujo un sitio Avrll en el nucleótido (nt) 104 en el genoma de la b/h PIV3 alterando cuatro nucleotidos utilizando el siguiente oligo 51 -GAA ATC CTA AGA CCC TAG GCA TGT TGA GTC-3 ' y su complemento. Este sitio de la enzima de restricción se utilizó para insertar los genes de RSV en la primera posición (la mayor parte 3') del genoma viral. Se introdujo otro sitio Avrll en la región intergenética N-P en el nt 1774 cambiando dos nucleotidos utilizando el siguiente oligo 51 -CCACAACTCAATCAACCTAGGATTCATGGAAGACAATG-3 ' y su complemento. Este sitio de restricción se utilizó para insertar los genes de RSV en la segunda posición entre los genes N y P de la PIV3 b/h (Figura 4) . Se probó la funcionalidad de los ADNcs de la PIV3 b/h de longitud completa que albergan los sitios Avrll en los nts 104 y 1774, recuperando los virus mediante genética inversa. Construcción del cásete G de RSV (gen N-P de terminación/inicio) : Se generó un fragmento de ADN que contenía la región intergenética N-P de la bPIV3 así como las secuencias terminales 3' del gen RSV G, utilizando el ADNc de la b/h de PIV3 como una plantilla de PCR. Este fragmento se generó mediante PCR utilizando los siguientes oligos: 5'-CCCAACACACCACGCCAGTAGTCACAAAGAGATGACCACTATCAC-3 ' y 5 ' - CCCAAGCTTCCTAGGTGAATCTTTGGTTGATTGAGTTGTGG-3 ' . Este fragmento se utilizó entonces para llevar a cabo la PCR de solapamiento para agregar la región intergenética N-P del b/h PIV3 al gen RSV G. Para la segunda reacción PCR, se utilizó un plásmido que contiene el gen G y F de RSV como una plantilla de ADN, el oligo 51 -CAGCGGATCCTAGGGGAGAAAAGTGTCGAAGAAAAATGTCC-3 ' y un oligo generado a partir del fragmento de PCR corto anterior, se utilizaron como cebadores. El fragmento de PCR resultante que contiene el gen G de RSV se enlazó a la región intergenética N-P de la b/h PIV3 y los sitios de la enzima de restricción Avrll flanqueante, se clonó en pGEM3. El gen G de RSV se secuenció para confirmar la presencia de un marco de lectura abierto, intacto, y las secuencias de aminoácidos previstas. Los fragmentos de ADN que albergan el gen G de RSV se insertaron en la primera y segunda posición utilizando los sitios de la enzima de restricción Avrll en un subclon que alberga solamente los primeros 5200 nucleótidos del geno a de la bPIV3 (bPIV3 1-5) que se linealizó con Avrll. Cuando se utiliza en la presente y otros Ejemplos, bPIV3 1-5 se refiere al nucleótido 1 a 5196 (ó 5200) del genoma de la PIV3 bovina. Existe un sitio BstBl en esta localización. Construcción del cásete F de RSV (Gen N-P de inicio/terminación) : El fragmento del gen F de RSV se aisló mediante PCR a partir de un plásmido del ADNc de la bPIV3 de longitud completa/RSV F+G utilizando oligos que agregan sitios Avrll en el extremo 5' y 3' del gen F de RSV, y se introdujo en el plásmido bPIV3 1-5 que contiene los primeros 5200 nucleótidos del genoma de la bPIV3 y el sitio Avrll en el nt 1774, el cual se linealizó con el Avrll. La región intergenética N-P de bPIV3 se aisló mediante PCR utilizando como bPIV3 1-5/RSV G2 una plantilla. El oligo 5'-GACGCGTCGACCACAAAGAGATGACCACTATCACC-3 ' y un oligo que se hibridiza en el marco de lectura abierto del F de bPIV3 se utilizaron para generar un fragmento PCR que contiene la región intergenética N-P de bPIV3 , sitio Avrll, y secuencias bPIV3 hasta el nt 5200. El fragmento PCR se digirió con Salí y Nhel, y se agregó al plásmido bPIV3 1-5 que alberga el gen F de RSV en la posición 2, el cual se digirió con Salí y Nhel. Para introducir el gen F de RSV que contiene la región intergenética N-P en la posición 1, el cásete de F de RSV de 1.8 kb se cortó utilizando el Avrll, y se ligó en la bPIV3 1-5 que contiene el sitio Avrll en el nt 104, el cual se linealizó con Avrll . Construcción del cásete de F de RSV con una región intergenética corta (N de terminación/N de inicio) : La generación del gen F de RSV con la región intergenética N-N corta se logró realizando una reacción PCR utilizando bPIV3 1-5/RSV F2 como una plantilla, el oligo 5'-GCGCGTCGACCAAGTAAGAAAAACTTAGGATTAAAGAACCCTAGGACTGTA-31 , y un oligo que se hibridiza corriente arriba del extremo 5' del gen F de RSV que abarca el sitio de la enzima de restricción Avrll. El producto PCR que contiene el gen F de RSV y la región intergenética N-N corta, se digirió con Avrll y se introdujo en el nt 104 de la bPIV3 1-5 la cual se linealizó con Avrll . Los casetes del gen G de RSV y F de RSV se secuenciaron para confirmar la presencia de un marco de lectura abierto, intacto, las secuencias de aminoácidos previstas, y para verificar la regla de seis. Las unidades de trascripción de G de RSV y F de RSV se insertaron en la primera o segunda posición utilizando los sitios de la enzima de restricción Avrll en un subclon bPIV3 1-5 que se linealizó con el Avrll. Después de confirmar la orientación apropiada mediante el mapeo de la enzima de restricción, se digirieron los plásmidos que albergan los genes RSV en la primera posición con Sphl y BssHII y se aislaron los fragmentos de ADN de 4 kb (bPIV3 1-5/RSV Gl) ó de 4.8 kb (bPIV3 1-5/RSV Fl) . En un segundo paso de clonación, el remanente del genoma de la PIV3 b/h se agregó como un fragmento de ADN de 15.1 kb de Splzl -BssHII, que genera ADNcs de longitud completa. Los subclones bPIV3 , que albergan los genes RSV en la segunda posición, se cortaron con Sphl y Nhel, y se aislaron fragmentos de ADN de 5.8 kb (bPIV3/RSV G2) y de 6.5 kb (bPIV3/RSV F2) . En un segundo paso de clonación, el resto del genoma de la b/h PIV3 se ligó como un fragmento de ADN de Nhel-Sphl de tamaño 1.4 kb. Los plásmidos de b/h PIV3/RSV quiméricos de longitud completa se propagaron en células STBL-2 (Gibco/BRL) que proporcionan altos rendimientos de plásmidos del ADNc de longitud completa del virus . 8. EJEMPLO 3: GEN F 0 G DEL VIRUS SINCITIAL RESPIRATORIO VECTORIZADO DE LA PARAINFLUENZA BOVINA 3/PARAINFLUENZA HUMANA 3 QUE DESPLIEGA UN EFECTO POSICIONAL CON RESPECTO A LA PRODUCCIÓN DE ARNm Y LA EXPRESIÓN DE PROTEÍNAS ASÍ COMO CON LA RÉPLICACIÓN DEL VIRUS N VITRO Se realizaron tres experimentos para confirmar la expresión efectiva del gen F ó G de RSV en los constructos del Ejemplo 2, y para determinar los efectos posicionales de las inserciones del gen en el genoma de la PIV3. Primero, con el fin de demostrar la expresión de la proteína RSV mediante los virus quiméricos, se llevó a cabo una transferencia Western de Usados de células infectadas con el virus quimérico y se sondearon con antisuero de RSV específico. Ver la Figura 5A. Las transferencias Western se realizaron como sigue: Se utilizaron virus quiméricos para infectar células Vero sub-confluentes (70-80%) en un OI de 0.1 ó 1.0. Cuarenta y ocho horas después de la infección se removió la cubierta del medio y se lavaron las monocapas infectadas una vez con 1 mi de PBS. Las células se Usaron subsecuentemente en 400 µ? de amortiguador Laemmli (Bio-Rad) que contiene ß-Mercaptoetanol al 0.05% (Sigma) . Se separaron 15 µ? de cada muestra en Tris-HCl al 12% Ready Gel (Bio-Rad) y se transfirieron a membranas de nailon utilizando una célula de transferencia semi-seca (Bio-Rad) . Las membranas de nailon se enjuagaron en PBS [pH 7.6] que contiene Tween-20 al 0.5% (v/v) (Sigma) (PBST) y se bloquearon con PBST que contiene leche seca al 5% (p/v) (PBST-M) durante 20-30 minutos a temperatura ambiente . Las membranas se incubaron ya sea con una mezcla de anticuerpos monoclonales de RSV F (WHO 1269, 1200, 1153, 1112, 1243, 1107, ver Beeler y Coelingh, J. Virol . (1989) 63 (7) : 2941-50, la cual se incorpora en la presente como referencia) a una dilución 1:1000 en PBST-M ó con anticuerpo policlonal PBST-M ó RSV G 10181 (Orbigen) a una dilución de 1:2000 en PBST-M durante 1 hora a temperatura ambiente. Después de cuatro lavados con PBST, las membranas se incubaron con un anticuerpo anti-ratón secundario de cabra conjugado con peroxidasa de rábano (Dako) a una dilución 1:2000 en PBST-M durante 1 hora a temperatura ambiente. Las membranas se lavaron 4 veces con PBST y se revelaron utilizando un substrato de quimioluminiscencia (Amersham Pharmacia) y se expusieron a Biomax Light Film (Kodak) para la visualización de bandas de proteínas.
Consecuente con la eficiencia de réplica reducida del b/h/RSV P1*N-N en las células Vero (Figura 5c, ver posteriormente) , la cantidad de RSV Fl detectada 48 horas post-infección, fue aproximadamente 10 veces menor que la presente en las células infectadas con b/h PIV3/RSV F2 ó RSV A2 de tipo natural (comparar carriles 2, 3, y 4, Figura 5A) . Se detectó una banda de 50 kDa que representa el fragmento de RSV Fl en las células infectadas con b/h PIV3/RSV Fl y b/h PIV3/RSV F2 así como con el RSV de tipo natural. La b/h PIV3/RSV Fl expresó niveles de la proteína RSV Fl en 48 horas post-infección (hpi) similares a aquéllos observados para la b/h PIV3/RSV F2. Solamente se detectaron niveles bajos del FO en las células infectadas con b/h PIV3/RSV Fl y b/h PIV3/RSV F2 que indican que los precursores FO se procesaron eficientemente durante las infecciones como se observó también en las infecciones con RSV de tipo natural. Como se esperaba, el b/h PIV3 y los lisatos de células infectadas falsas no dieron una señal de proteína RSV F. Se observó una banda más pequeña de 26 kDa en los lisatos de b/h PIV3/RSV Fl y F2 que no estaba presente en los lisatos de RSV de tipo natural. Esta banda representa un fragmento proteolítico de la proteína RSV F no producida en las células infectadas con RSV de tipo natural . La ausencia del fragmento proteolítico en las células infectadas con RSV se puede deber a la presencia del conjunto completo de proteínas del RSV. Cuando se repitieron las infecciones con b/h PIV3/RSV Fl *N-N a un MOI superior de 1.0 (Figura 5A, carril 1) , el fragmento Fl en las células infectadas con b/h PIV3/RSV Fl acumuló niveles del RSV de tipo natural en 48 horas post-infección. La cantidad relativa de los fragmentos Fl de 50 kDa y 26 kDa en las células infectadas con b/h PIV3/RSV Fl ó b/h PIV3/RSV F2, fue de aproximadamente 1:5. La expresión relativa del gen G en RSV en las células infectadas con b/h PIV3/RSV Gl, b/h PIV3/RSV G2 y el RSV de tipo natural a un MOI de 0.1 en 48 horas post-infección, se muestra en la figura 5A. Se detectaron las formas tanto inmaduras como glicosiladas del gel G en RSV que migraron a aproximadamente 50 kDa y 90 kDa, respectivamente. Las células infectadas con b/h PIV3/RSV Gl mostraron niveles de expresión del gen G de RSV similares a aquéllos observados en las células infectadas con RSV de tipo natural (líneas 1 y 3, Figura 5A) . Sin embargo, en las células infectadas con b/h PIV3/RSV G2, la acumulación del gen G de RSV fue aproximadamente 2-3 veces más que la presente en las células infectadas con el RSV de tipo natural (líneas 2 y 3, Figura 5A) . Los niveles superiores de la expresión RSV G se pueden deber a la posición 3' más próxima del gen RSV G en el genoma de la PIV3 comparado con su posición en el genoma RSV. No se observaron niveles superiores de expresión para el gen G de RSV en la posición 1, lo cual se puede deber a un fenotipo de réplica atenuado del virus . No se observaron bandas especificas del gen G de RSV en los lisatos de células derivados de las células infectadas f lsamente o con b/h PIV3. Colectivamente, estos datos mostraron que el b/h PIV3/RSV quimérico expresó eficientemente las proteínas RSV ya sea en la posición 1 ó 2. Se observaron niveles de expresión equivalentes de las proteínas RSV por la b/h PIV3 independientemente de sí se utilizó la posición 1 ó 2, aunque la posición 2 pareció expresar niveles ligeramente superiores de la proteína RSV G. Los niveles de expresión del antígeno en la posición 1 ó posición 2 del genoma de la PIV3 , fueron similares de tal modo que se puede utilizar cualquier posición para la inserción de genes . A continuación, el análisis de transferencia Northern mostró que la trascripción del ARNm correlacionada con el resultado de la expresión de proteínas se demostró por la transferencia Western, ver la Figura 5B. La transferencia Northern se realizó como sigue: se preparar ARN celular total a partir de células infectadas con virus utilizando Trizol LS (Life Technologies) . El ARN se purificó además mediante una extracción con fenol-cloroformo y se precipitó con etanol. Las pelotillas de ARN se resuspendieron en agua tratada con pirocarbonato dietílico y se almacenaron a -80 °C. Se separaron cantidades iguales del ARN total en geles de agarosa al 1% que contienen formaldehído al 1% y se transfirieron a membranas de nailon (Amersham Pharmacia Biotech) utilizando un aparato Turboblotter (Schleicher & Schuell) . Las transferencias se hibridizaron con ribosondas etiquetadas con digoxigenina (DIG) -UTP sintetizadas mediante trascripción in vitro utilizando un equipo de etiquetado DIG RNA (Roche Molecular Biochemicals) . La hibridación se llevó a cabo a S8°C durante 12 horas en solución Express Hyb (Clontech) . Las transferencias se lavaron a 68 °C dos veces con SSC 2X (SSC IX que contiene NaCl 0.015 M con citrato de sodio 0.015 M) -dodecil-sulfato de sodio (SDS) al 0.1% seguido por un lavado con SSC 5X-SDS al 1% y un lavado final con SSC 0.1X-SDS al 0.1%. Se detectaron señales de las sondas hibridizadas utilizando un equipo de detección DIG-Luminescent (Roche Molecular Biochemicals) y se visualizaron mediante su exposición con una película BioMax ML (Kodak) . El análisis Northern de la b/h PIV3/RSV Fl *N-N, b/h PIV3/RSV F2, b/h PIV3/RSV Gl y b/h PIV3/RSV G2, mostró que los niveles del ARNm viral para el RSV F ó RSV G se correlacionó bien con los niveles observados de la proteína RSV (Figura 5B) . Los niveles más bajos de los ARNms del RSV F se observaron para la b/h PIV3/RSV Fl *N-N los cuales también exhibieron la menor cantidad producida de la proteina RSV F. La b/h PIV3/RSV Gl produce menos AR ms del RSV G lo que da como resultado niveles inferiores de la proteína RSV G que los observados para la b/h PIV3/RSV G2. Finalmente, el crecimiento de diferentes virus (con el gen RSV F ó G ya sea en la posición 1 ó posición 2) se correlaciona con los resultados de la expresión de la proteina y la trascripción del ARN. La curva de crecimiento mostrada en la Figura 5C se obtuvo como sigue: Se cultivaron células Vero a una confluencia del 90% y se infectaron en un MOI de 0.01 ó 0.1 con b/h PIV3 , b/h PIV3/RSV Fl, b/h PIV3/RSV Gl, b/h PIV3/RSV F2, y b/h PIV3/RSV G2. Las capas mono-moleculares infectadas se incubaron a 37°C. Las células y el medio se cosecharon conjuntamente 24, 48, 72, 96 y 120 horas postinfección, y se almacenaron a -70°C. Las titulaciones del virus para cada punto de tiempo de la cosecha, se determinaron mediante TCID50 o ensayos de placa en células Vero. Los ensayos TCID50 se inspeccionaron visualmente para su CPE después de la incubación a 37 °C durante 6 dias, mientras que los ensayos de placa se inmunotiñeron con antisuero policlonal del RSV para su cuantificación después de 5 días de incubación.
A un MOI de 0.01 en células Vero, los virus quiméricos que albergan los genes RSV G ó F en la primera posición (b/h PIV3/RSV Gl y b/h PIV3/RSV Fl *N-N) se replicaron a una velocidad más lenta, que da titulaciones pico inferiores, y exhibieron una fase de retraso mayor que los virus que contenían los genes RSV en la segunda posición. Las titulaciones pico del b/h PIV3/RSV Fl *N-N y b/h PIV3/RSV Gl a 96 horas post-infección, fueron de 1067 y 10 TCID50/ml, respectivamente (Figura 5C) . En contraste, las titulaciones pico del b/h PIV3/RSV F2 y b/h PIV3/RSV G2 fueron de 108° y 1074 a 72 y 96 horas post-infección, respectivamente (Figura 5C) . El virus de control de la b/h PIV3 exhibió titulaciones pico de 108° TCID50/ml, respectivamente (Figura 5C) . La b/h PIV3/RSV F2 dio 1.3 titulaciones superiores lógicas que la b/h PIV3/RSV Fl *N-N. La b/h PIV3/RSV G2 replicada a 1.9 titulaciones superiores lógicas que la b/h PIV3/RSV Gl . Colectivamente, los datos mostraron que la b/h PIV3 que expresa proteínas RSV en las posiciones 1 ó 2 del genoma se replicó a titulaciones pico de 10s -108 PFU/ml en las células Vero. Los virus que albergan la inserción de antigenos en la posición 2 se replican más eficientemente en el cultivo de tejido que aquéllos que contienen genes extraños en la posición 1.
Para determinar sí se pudieran lograr del todo titulaciones superiores de la b/h PIV3/RSV Fl *N-N y la b/h PIV3/RSV Gl, se repitieron las curvas de crecimiento en un MOI superior de 0.1. En un MOI de 0.1, se incrementaron las titulaciones pico de la b/h PIV3/RSV Fl *N-N y b/h PIV3/RSV Gl por 0.5 a 1.3 lógico (datos no mostrados) . Las fases de retraso de estos virus se redujeron y las titulaciones pico se lograron antes durante el ciclo de crecimiento. 9. EJEMPLO 4: EFECTO POSICIONAL DE LAS INSERCIONES eGFP EN EL GENOMA DE LA PARAINFLUENZA BOVINA 3/PARAINFLUENZA HUMANA 3 EN LA REPLICACIÓN DEL VIRUS El efecto de las inserciones genéticas en la estructura del vector PIV3 bo ina/humana, se evaluó sistemáticamente introduciendo el gen eGFP secuencialmente entre todos los genes del PIV3 y observando el efecto en la réplica del virus y la expresión del eGFP (Figura 6) . Este tipo de ensayo investiga la importancia del gradiente de trascripción observado para los paramixovirus que dan relaciones específicas de los ARNms virales. La inserción de genes extraños perturbará estas relaciones y dará como resultado la síntesis de diferentes cantidades de las proteínas virales las cuales pueden influenciar la réplica del virus. Se elige el gen eGFP para este ensayo puesto que el mismo no se incorporará en la membrana del virión, y por lo tanto no deberá interferir con los procesos virales tal como el empaque, germinación, admisión, etc. El gen eGFP se insertó en cuatro posiciones del genoma de la b/h PIV3 , tres de las cuales se caracterizaron por la expresión del eGFP y la réplica del virus. El cásete del gen eGFP se enlazó a la región intergenética de la bPIV3 N-P. La b/h GFP1 alberga el cásete del gen eGFP en la posición 3 ' más próxima del genoma de la b/h PIV3. La b/h PIV3/GFP2 contenía el case del gen eGFP entre los genes N y P del genoma de la b/h PIV3. La b/h PIV3/GFP3 se localizó entre P y M, y la b/h PIV3/GFP4 tuvo el gen eGFP entre M y F de la b/h PIV3 (Figura 6) . Construcción del cásete del gen eGFP: la plantilla del gen eGFP está disponible comercialmente, por ejemplo, la misma se puede comprar de BD Biosciences (pIRES2-EGFP) ó Clontech (pEGFP-Nl) . Ver Hoffmann et al., Virology 267: 310-317 (2000). El gen eGFP se aisló mediante PCR y la región intergenética bPIV3 N-P se agregó empleando el método PCR de solapamiento, utilizando los siguientes oligos: 51 -ATTCCTAGGATGGTGAGCAAGGGCG3 ' , 5 ' -GGACGAGCTGTACAAGTAAAAAAATAGCACCTAATCATG-31 , y 51 - CTACCTAGGTGAATCTTTGGTTG-3 ' . El cásete gen eGFP se insertó en la pCR2. 1, se secuenció, y se confirmó la adherencia a la regla de seis. Luego el cásete del eGFP se digirió con Avrll, purificado con gel, y se insertó en las posiciones 1, 2, 3, y 4 de la b/h PIV3 como se describió anteriormente. Generación de ADNcs de longitud completa que albergan el gen eGFP en las posiciones 1 y 2 : el case del gen eGFP se insertó en los plásmidos de la bPIV3 1-5 los cuales contenían secuencias bPIV3 de los nts 1-5200 y un sitio de la enzima de restricción Avrll ya sea en el nt 104 (posición 1) ó nt 1774 (posición 2) . Después de confirmar la orientación apropiada mediante el mapeo de la enzima de restricción, el plásmido que alberga el gen eGFP en la primera posición se digirió con Sphl y BssHII y se aislaron los fragmentos de ADN y 4 kb (eGFPl 1-5) . A continuación, el resto del genoma de la b/h PIV3 se agregó a un fragmento de ADN de 15.1 kb de Sphl-BssHII , que da ADNcs de longitud completa. Para la generación de ADNc de longitud completa que comprende el eGFP en la posición 2, los subclones de la bPIV3 que albergan los genes eGFP en la segunda posición se cortan con Sphl y Nhel, y se aislaron los fragmentos de ADN de 5.8 kb (eGFP2 1-5). A continuación, se agregó el resto del genoma de la b/h PIV3 como un fragmento de ADN de Nhel-Sphl de tamaño 14 kb . Los plásmidos quiméricos de longitud completa de la b/h PIV3/eGFP se propagaron en células STBL-2 (Gibco/BRL) que proporcionan altos rendimientos de plásmidos de de ADNc de longitud completa del virus.
Generación de ADNcs de longitud completa que albergan el gen eGFP en las posiciones 3 y : con el fin de insertar el case del eGFP en la posición 3 del genoma de la b/h PIV3, se introdujo un sitio de la enzima de restricción Avrll en el nt 3730 en la región intergenética P-M de un subclon que contiene los nts 1-5200 de la bPIV3 , alterando dos nucleótidos. El siguiente oligo y su complemento se utilizaron en una reacción de PCR QuickChange para introducir el sitio Avrll: 5'-GGACTAATCAATCCTAGGAAACAATGAGCATCACC-3 ' . El cásete del eGFP se digirió con Avrll y se ligó al subclon bPIV3 1-5 linearizado con Avrll que alberga el sitio Avrll en el nt 3730. Se aisló un fragmento de ADN de 5.5 kb de Sphl a Nhel del GFP que contiene el subclon y se introdujo en el ADNC de la PIV3 b/h digerida con Sphl y Nhel para producir un plasmido de longitud completa. Con el fin de agregar el cásete del gen eGFP en la posición 4 del genoma de la b/h PIV3, se generó un subclon que contiene secuencias de b/h PIV3 a partir de los nts 1-8500. Este subclon se lineaLizó con Nhel (nt 5042) , y se insertó el cásete del eGFP que contiene los extremos Avrll del compatibles . Luego el subclon que alberga el cásete del eGFP se digirió con Sphl y Xhol y se aisló un fragmento de ADN de 7.1 kb. El plásmido de la b/h PIV3 se trató con Sphl y Xhol y se produjo un fragmento de 11 kb. Estos dos fragmentos de ADN se ligaron para generar la b/h PIV3/GFP4.
La cantidad del eGFP producido mediante b/h PIV3/GFP1, 2, y 3 se evaluó de dos maneras. Primero, la cantidad de células verdes producidas en la infección de las células Vero con b/h PIV3/GFP1 , 2, y 3 a MOIs de 0.1 y 0.01 durante 20 horas, se determinó utilizando un microscopio fluorescente (Figura 7A) . La b/h PIV3/GFP3 sorprendentemente produjo menos células verdes que la b/h PIV3/GFP1 ó 2. En segundo lugar, se realizó un análisis western en las células infectadas y se sondearon las transferencias con GFP MAb así como un PIV3 PAb. Se confirmó la observación inicial de que b/h PIV3/GFP3 dramáticamente produce menos proteína eGFP (Figura 7B) . La b/h PIV3/GFP1 y GFP2 producen cantidades similares de la proteina eGFP. Los métodos de las transferencias western se controlaron por la misma carga de volumen mediante el sondeo con un anticuerpo PIV3 (Figura 7B) . De manera interesante, todos los tres virus mostraron cantidades similares de proteínas PIV3 producidas (la proteína HN es la banda más prominente) . Estos resultados sugieren que el b/h PIV3/GFP transcribe menos ARNms del GFP en la posición 3 cuando se compara con las posiciones 1 y 2. Estos datos confirmaron la presencia de un gradiente de trascripción de los ARNms virales en los paramixovirus . El nivel de producción de la proteína PIV3 HN no fue afectado por las inserciones del gen eGFP (Figura 7B) .
Con el fin de determinar sí las inserciones del gen GFP tuvieron un efecto en la cinética de la réplica del virus de la b/h PIV3/GFP1, 2, y 3, se llevaron a cabo curvas de crecimiento de ciclos múltiples en células Vero (Figura 7C) . Las curvas de crecimiento mostraron que la b/h PIV3/GFP1 tuvo un comienzo retardado de réplica del virus en 24 y 48 horas post-infección que la b/h PIV3/GFP2 ó GFP3. Sin embargo, las titulaciones pico finales obtenidas fueron similares para todos los tres virus. La cinética de la réplica para la b/h PIV3/GFP2 y GFP3 fueron cercanamente idénticas (Figura 7C) . De manera interesante, las relaciones alteradas de los ARNms virales no parecen efectuar la réplica del virus significativamente. 10. EJEMPLO 5: CONSTRUCCIÓN Y CLONACIÓN DEL VIRUS RESPIRATORIO SINTICIAL F QUIMÉRICO, VECTORIZADO DE LA PARAINFLUENZA BOVINA 3/PARAINFLUENZA HUMANA 3 CON DIFERENTES REGIONES INTERGENICAS Se utilizaron tres diferentes constructos para determinar el efecto de la región intergenética (nucleótidos entre cada ARNm, por ejemplo, entre el gen F y el gen N) en la expresión de la proteína y la réplica viral . Ver la Figura 8. El primer constructo el RSV Fl* N-N vectorizado de la PIV3 b/h en la posición 1, el cual tuvo una secuencia gen de terminación N/gen de inicio N de la bPIV (RSV Fl* N-N en la Figura 4) ; el segundo constructo fue el RSV F vectorizado de la b/h PIV3 en la posición 1 (RSV Fl* N-N en la Figura 4) ; y el último fue el RSV vectorizado de la b/h PIV3 en la posición 1 (RSV Fl en la figura 4) . Todos los tres constructos se generaron de conformidad con las estrategias de clonación descritas en la sección 7, Ejemplo 2. La diferencia más dramática entre los dos casetes es la distancia entre la secuencia del gen de inicio N y el codón de inicio de traducción N en la b/h PIV3/RSV Fl *N-N la cual fue solamente de 10 nts de longitud. En cambio, esta distancia es de 86 nts de longitud en la b/h PIV3/RSV F2. La otra diferencia es el uso de la secuencia del gen de inicio N en la b/h PIV3/RSV Fl *M-W en lugar de la secuencia del gen de inicio P como se hizo en la b/h PIV3/RSV F2. Con el fin de determinar sí la distancia entre el gen de inicio de trascripción y la traducción de inicio de una unidad de trascripción viral, tiene un efecto en la réplica del virus, se generó el constructo de la b/h PIV3/RSV Fl que contenía el cásete del gen RSV F como se utilizó para la b/h PIV3/RSV F2. 11. EJEMPLO 6: LA LONGITUD Y/O NATURALEZA DE LA REGION INTERGENÉTICA CORRIENTE ABAJO DEL GEN DEL VIRUS RESPIRATORIO SINTICIAL TIENE UN EFECTO EN LA REPLICACIÓN DEL VIRUS Los tres constructos en el Ejemplo 5 se utilizaron en los siguientes experimentos para determinar los efectos de la región intergenética en la expresión de proteínas virales y la réplica viral . Ver la Figura 9. En primer lugar, la expresión de la proteína RSV F para la b/h PIV3/RSV Fl , b/h PIV3/RSV Fl *N-N, y b/h PIV3/RSV F2 , se comparó a 24 y 48 horas post-infección a un MOI de 0.1 en células Vero utilizando transferencias Western. Las transferencias Western se realizaron como sigue: Se utilizaron virus quiméricos para infectar células Vero sub-confluentes (70-80%) en un MOI de 1.0. Veinticuatro horas después de la infección se removió la cubierta del medio y se lavaron las monocapas infectadas una vez con 1 mi de PBS. Las células se lisaron subsecuentemente en 400 1 de amortiguador Laemmli (Bio-Rad) que contiene b-Mercaptoetanol al 0.05% (Sigma) . Se separaron 15 mi de cada muestra en Tris-HCl al 12% Ready Gel (Bio-Rad) y se transfirieron a membranas de nailon utilizando una célula de transferencia semi-seca (Bio-Rad) . Las membranas de nailon se enjuagaron en PBS (pH 7.6) que contiene Tween-20 al 0.5% (v/v) (Sigma) (PBST) y se bloquearon con PBST que contiene leche seca al 5% (p/v) (PBST-M) durante 20-30 minutos a temperatura ambiente. Las membranas se incubaron ya sea con una mezcla de anticuerpos monoclonales de RSV F (WHO 1269, 1200, 1153, 1112, 1243, 1107) a una dilución 1:1000 en PBST-M en PBST-M durante 1 hora a temperatura ambiente . Después de cuatro lavados con PBST, las membranas se incubaron con un anticuerpo anti-ratón secundario de cabra conjugado con peroxidasa de rábano (Dako) a una dilución 1:2000 en PBST- durante 1 hora a temperatura ambiente. Las membranas se lavaron 4 veces con PBST y se revelaron utilizando un substrato de quimioluminiscencia (Amersham Pharmacia) y se expusieron a Biomax Light Film (Kodak) para la visualización de bandas de proteínas. La b/h PIV3/RSV Fl expresó niveles de la proteína de RSV Fa a 24 y 48 horas post-infección cerca de los niveles observados para la b/h PIV3/RSV F2 aunque muy superiores a aquéllos de la b/h PIV3/RSV Fl *N-N. Por lo tanto, el espaciado entre el elemento del gen de inicio y el codón de inicio de traducción, puede ser crítico para la réplica del virus. Las secuencias de inicio del gen se cambiaron a las secuencias de inicio del gen P, sin embargo este cambio solamente incurrió en la alteración de un solo nucleótido. Cualquiera de estos factores puede ser responsable de rescatar el fenotipo de la expresión de la proteína RSV F. A continuación, se llevaron a cabo curvas de crecimiento en ciclos múltiples para comparar la cinética de la réplica del virus de la b/h PIV3/RSV Fl, b/h PIV3/RSV Fl *N-N, y b/h PIV3/RSV F2 en las células Vero a un MOI de 0.1 (ver la Figura 9B) , la cual se realizó como sigue: Se cultivaron células Vero a una confluencia del 90% y se infectaron en un MOI de 0.1 con b/h PIV3, b/h PIV3/RSV Pl *N-N, b/h PIV3/RSV Fl, y b/h PIV3/RSV F2. Las capas mono-moleculares infectadas se incubaron a 37 °C. Las células y el medio se cosecharon conjuntamente 0, 24, 48, 72 y 96 horas post-infección, y se almacenaron a -70 °C. Las titulaciones del virus para cada punto de tiempo de la cosecha, se determinaron mediante ensayos de placa en células Vero. Los ensayos de placa se inmunotiñeron con antisuero policlonal de RSV para su cuantificacion después de 5 días de incubación. Como se muestra en la Figura 9B, el comienzo de la réplica del b/h PIV3/RSV Fl *N-N, se retrasó y las titulaciones pico fueron inferiores a aquéllas de la b/h PIV3/RSV F2. En cambio, la b/h PIV3/RSV Fl exhibió una curva de crecimiento que fue cercanamente idéntica a aquélla observa para la b/h PIV3/RSV F2. 12. EJEMPLO 7: CLONACIÓN DE LOS CONSTRUCTOS VECTORIZADOS TRIVALENTES DE LA PARAINFLUENZA BOVINA 3/PARAINFLUENZA HUMANA 3 Los siguientes ejemplos se refieren a la generación de vacunas trivalentes que albergan las glicoproteínas de superficie (F y HN) de hPIV3 , RSV F, y hMPV F para proteger a los niños de enfermedades causadas por el RSV, hMPV, y hPIV3 utilizando una única vacuna para virus atenuados vivos. Estos virus trivalentes se recuperaron mediante genética inversa.
La construcción de dos genomas del virus, comprendiendo cada una estructura quimérica del b/h PIV3 con dos inserciones adicionales de la secuencia heterologa, en donde una secuencia de nucleótidos heterologa se deriva de un gen del metaneumovirus F y otra secuencia de nucleótidos heterologa se deriva de un gen del virus respiratorio sincitial F, se hicieron como sigue (ver la Figura 10) : plásmidos b/h PIV3 RSV F2 ó b/h PIV3/hMPV F2 se digirieron con Sphl y Nhel, y se aisló un fragmento de 6.5 kb. El ADNc de longitud completa para el b/h PIV3/RSV Fl ó b/h PIV3/hMPV Fl se digirió con Sphl y Nhel, y se aisló un fragmento de 14.8 kb y se ligó con el fragmento de ADN de 6.5 kb derivado del plásmido b/h PIV3/RSV F2 ó b/h PIV3/h PV F2 para generar ADNcs virales de longitud completa. Los virus generados de los constructos descritos anteriormente (es decir, con FRSV en la posición 1 y FhMpv en la posición 3 y con FhMpv en la posición 1 y FRSV en la posición 3) se han replicado y empacado en células Vero. Los virus rescatados, preferiblemente el virus que comprende el primer constructo como se describe en la presente, se puede utilizar como una vacuna trivalente contra la infección del virus de la parainfluenza, infección del metaneumovirus, e infección del virus respiratorio sincitial. 13. EJEMPLO 8: CLONACIÓN DE DOS VIRUS RESPIRATORIOS SINCITIALES F AL VECTOR DE LA PARAINFLUENZA BOVINA 3/PARAINFLUENZA HUMANA 3 Se diseñaron virus quiméricos que realizan dos copias del gen F de RSV con el fin de determinar sí más proteínas RSV producidas mediante el virus quimérico, dará como resultado una inmunogenicidad mejorada. Este virus se rescató mediante genética inversa, biológicamente clonado y amplificado en células Vero para dar una reserva de material del virus con una titulación de 1 x 106 pf /ml . Este virus, b/h PIV3/RSV F1F2, se puede utilizar para evaluar la cinética del crecimiento del virus, para la producción de la proteína RSV F, y para la replicación e inmunogenicidad de hámsteres. Los constructos se generaron de la siguiente manera (ver la Figura 11) : el plásmido RSV F2 1-5 se digirió con Sphl y Nhel, y se aisló un fragmento de 6.5 kb. El ADNc de longitud completa para la b/h PIV3/RSV Fl se digirió con Sphl y Nhel y se aisló un fragmento de ADN de 1 .8 kb y se ligó con el fragmento de ADN de 6.5 kb derivado de la b/h PIV3/RSV F2 para generar ADNcs virales de longitud completa. 14. EJEMPLO 9: CONSTRUCCIÓN Y CLONACIÓN DEL ADNc DEL GEN F DEL METANEUMOVIRUS HUMANO VECTORIZADO CON PARAINFLUENZA BOVINA 3/PARAINFLUENZA HUMANA 3 El gen F del metaneumovirus humano (hMPV) se insertó en las posiciones 1 y 2 del genoma de la b/h PIV3 (Figura 12) . El cásete del gen F de hMPV albergó la región intergenética de la bPIV3 N-P. Se utilizó un plásmido (pRF515) que lleva el gen F de hMPV (NL/l/100) , y se corrigió una sola mutación de nucleótido individual en el gen F de hMPV (es decir, el nucleótido 3352 se corrigió a partir de C a T (tipo natural) , que genera el pRF515-M4. La región intergenética bPIV3 N-P se agregó al extremo 3' del gen F de hMPV que utiliza PCR de solapamiento . Para el F de hMPV, el oligo de la PCR de solapamiento fue 51 -GGCTTCATACCACATAATTAGAAAAATAGCACCTAATCATG-TTCTTACAATGGTCGACC-31. Durante este paso de clonación, los oligos se utilizaron en el extremo 5' (5 ' -GCAGCCTAGGCCGCAA-TAACAATGTCTTGGAAAGTGGTGATC-3 ') y en el extremo 3' del cásete del gen F de hMPV (5 ' -CTACCTAGGTGAATCTTTGGTTG-3 ¦ ) en la reacción PCR que contenía los sitios de la enzima de restricción Avrll. El cásete del gen F de hMPV se ajustó para cumplir con la regla de seis utilizando un equipo de mutagénesis QuickChange y los siguientes oligos (5 ' -CCTAGGCCGCAATAGACAATGTCTTGG-3 ' , 5 ' -CCAAGACATTGTCTATTGCG- GCCTAGG-3 ' ) . Se generaron plásmidos de ADNc de longitud completa de la b/h PIV3/RSV Fl (posición 1) y F2 (posición 2) de la misma manera como se describe en la sección 9, Ejemplo 4, supra, para la b/h PIV3/GFP1 y eGFP2.
El cásete del gen F de hMPV se secuenció para confirmar la presencia de un marco de lectura abierto, intacto, la secuencia de aminoácidos prevista, y para verificar la regla seis. La unidad de transcripción del gen F de hMPV se insertó en la primera o segunda posición utilizando los sitios de la enzima de restricción Avrll en un subclon bPIV3 1-5 que se linearizó con Avrll. Después de confirmar la orientación apropiada por el mapeo de la enzima de restricción, el plásmido que alberga el gen hMPV en la primera posición se digirió con SpZlI y BssHII se aisló un fragmento de ADN de 4.8 kb (hMPV Fl 1-5) . El resto del genoma de la b/h PIV3 se ligó a un fragmento de ADN de 15.1 kb de Sphl-BssHII, que da ADNcs de longitud completa. El subclon bPIV3 que alberga el gen hMPV en la segunda posición se cortó con Sphl y Nhel , y se aisló un fragmento de ADN de 6.5 kb (b/h PIV3/hMPV F2) . El resto del genoma de la b/h PIV3 se ligó a un fragmento de ADN de Nliel-Sphl de tamaño 14 kb para generar plásmidos de ADNc de longitud completa. 15. EJEMPLO 10: ENSAYOS DE INMUNOPRECIPITACIÓN Y REPLICACIÓN DEL GEN F DE METANEUMOVIRUS VECTORIZADO DE LA PARAINFLUENZA BOVINA 3/PARAINFLUENZA HUMANA 3 Para confirmar que la proteína F se expresó en el metaneumovirus F humano vectorizado de la b/h PIV3 en la posición 2 (hMPV F2) , se utilizaron conejillos de indias o antisuero humano para inmunoprecipitar la proteína hMPV F (ver la Figura 13?) . Para la inmunoprecipitación de la proteína hMPV F expresada por la b/h PIV3/hMPV, se infectaron células Vero con b/h PIV3 ó b/h PIV3/hMPV Fl ó F2 en una MOI de 0.1 ó 0.05. Veinticuatro horas post-infección, las células se lavaron una vez con DME sin cisterna y menos metionina (ICN) y se incubaron en el mismo medio durante 3 Ó min. El medio se extrajo y se agregaron 0.5 mi del DME que carece de cisterna y metionina que contiene 100 \iCi de [35S] -Pro-Mix (Amersham) a las células. Las células infectadas se incubaron en la presencia de isótopos 35S durante 5 horas a 37 °C. Se extrajo el medio y las células infectadas se lisaron en amortiguador RIPA 0.3 M que contiene inhibidores de proteasa. El lisato de células se incubó con conejillos de india o antisuero policlonal humano contra hMPV y se unió a IgG-agarosa (Sigma) . Después de lavar tres veces con amortiguador RIPA 0.5 M, las muestras se fraccionaron en un gel de proteínas al 10%. El gel se secó y se expuso a una película de rayos X. La expresión de la proteína hMPV F mediante b/h PIV3/hMPV Fl y F2 se mostró mediante inmunoprecipitación utilizando antisuero hMPV de conejillo de indias (Figura 13A) . De manera interesante, se observó una migración de bandas específicas a aproximadamente 80 kDa en los lisados de b/h PIV3/hMPV Fl y F2. Este tamaño correspondió a la proteína precursora F, FO . También se observaron bandas no-específicas de diferentes tamaños en las líneas del b/h PIV3 y los carriles de control falsos (Figura 13) . Estos datos sugirieron que la b/h PIV3/hMPV Fl y F2 expresa la proteína hMPV F. No se observó el producto de escisión Fl del precursor FO . El análisis del sitio de escisión de la proteína F reveló que el sitio de escisión de la proteína hMPV F consistió de residuos de aminoácidos no cargados (RQSRFVL) mientras que los virus relacionados como el RSV ó APV A tienen aminoácidos cargados en el sitio de procesamiento de la proteína F, RKRRFLG y RRRRFVL, respectivamente. Es conocido de los virus de la influenza que las proteínas F con aminoácidos cargados en el sitio de escisión pueden procesar la proteína F eficientemente y exhibe un fenotipo virulento (Hatta et al., Science (2001) 293 (5536) : 1840-22001) . El sitio de escisión "débil" de la proteína hMPV F puede ser responsable de detectar solamente la proteína FO puesto que los fragmentos Fl y F2 podrían estar presentes solamente a niveles bajos que pueden no ser detectables con los métodos aplicados. La escisión ineficiente de la proteína F puede ser un proceso que dirige el crecimiento lento de la replicación del hMPV en el cultivo de tejido y que explica el requerimiento de tripsina de algunas cepas hMPV (van den Hoogen, 2001) , Sin embargo, los reactivos del anticuerpo hMPV disponibles están limitados y estos antisueros interactúan solamente con el precursor de la proteina hMPV F. También podría ser posible que la Fl escindida sea inestable y por consiguiente que no se visualice fácilmente utilizado este método. Las curvas de crecimiento se realizaron para determinar la cinética de la replicación del virus del b/h PIV3/hMPV F2 y para compararlas con aquéllas observadas para el b/h PIV3 y b/h PIV3/RSV F2 las en células Vero en una MOI de 0.1 (Figura 13B) . Los datos mostraron que la b/h PIV3/hMPV F2 exhibió un comienzo retardado de la replicación a 24 horas post-infección comparada con la b/h PIV3/RSV F2. Sin embargo, ya no se observó una diferencia en la replicación 48 horas después de la infección y más allá. También se realizaron curvas de crecimiento para determinar la cinética de la replicación viral del b/h PIV3/hMPV Fl y se compararon con aquéllas observadas para la b/h PIV3/hMPV F2 y b/h PIV3 en las células Vero en una MOI de 0.01 (Figura 13C) . La curva de crecimiento se obtuvo utilizando el mismo procedimiento como se describe en la Sección 8 para los virus quiméricos de la b/h PIV3/RSV. Los datos mostraron que la b/h PIV3/hMPV Fl tuvo un comienzo retardado de la replicación y dan titulaciones pico inferiores para el b/h PIV3/hMPV F2 ó b/h PIV3. El tamaño de placa de la b/h hMPV Fl también es más pequeño comparado con la b/h hMPV F2. El virus quimérico que alberga el gen F de hMPV en la posición 2 del genoma b/h PIV3 se replicó a los niveles observados para la b/h PIV3. Las titulaciones pico observadas para la b/h PIV3/hMPV F2 96 horas después de la infección, fueron de 8.1 loglO PFU/ml. En cambio, la proteína hMPV F que expresa la PIV3 de la posición 1 exhibió un comienzo retardado de la replicación del virus, y las titulaciones pico se disminuyeron a 1.8 loglO comparada con la b/h PIV3/hMPV F2 96 horas después de la infección. Se obtuvieron solamente titulaciones de 6.3 loglO PFU/ml de las células Vero infectadas con la b/h PIV3/hMPV Fl. El defecto de la replicación del virus exhibido por la b/h PIV3/hMPV Fl, fue más severo que aquél de la b/h PIV3/RSV Gl ó b/h PIV3/RSV Fl sugiriendo que la naturaleza del inserto puede tener un efecto en la replicación del virus. Colectivamente, los datos mostraron que la b/h PIV3 que expresa una proteína hMPV en las posiciones 1 ó 2 del genoma, se replicó a titulaciones pico de 10s -108 PFU/ml en las células Vero. Los virus que albergan la inserción de antígenos en la posición 2, se replicaron más eficientemente en el cultivo de tejido que aquéllos que contienen genes extraños en la posición 1.
Los virus quiméricos b/h PIV3/hMPV Fl y F2 también se evaluaron por su capacidad de infectar y replicarse en hámsteres Syrian Golden (Tabla 5) . Por lo tanto, se utilizaron los virus quiméricos, b/h PIV3/hMPV Fl y F2 , para infectar intranasalmente los hámsteres Syrian Golden y se analizó su capacidad para replicarse en el trato respiratorio (Tabla 15) . Se infectaron intranasalmente hámsteres Syrian Golden de cinco semanas (seis animales por grupo) con 1 x 106 pfu ó 1 x 104 PFU de b/h PIV3, b/h PIV3/h PV Fl ó F2 , ó hMPV/NL/l/00 en un volumen de 100 µ?. Se mantuvieron por separado los diferentes grupos en jaulas micro-aisladoras. Cuatro días después de la infección, los cornetes nasales y los pulmones de los animales se cosecharon, homogeneizaron y almacenaron a -70 °C. Las titulaciones del virus presente en los tejidos se determinaron mediante ensayos TCID50 en células Vero. Para los estudios de estimulación, los animales se inocularon en el día 28 intranasalmente con 1 x 106 pfu/ml de hPIV3 ó hMPV/NL/l/00. Cuatro días después de la estimulación, se aislaron los cornetes nasales y los pulmones de los animales y se evaluaron para la replicación del virus provocador mediante ensayos de placa en células Vero que se inmunotiñeron para su cuantificación.
Tabla 5 Replicación del b/h PIV3 que Expresa la Proteina hMPV F en las Posiciones 1 ó 2 en Hámsteres a Se inocularon intranasalmente grupos de seis hámsteres con 1 x 106 pfu del virus indicado. b Error estándar Nota: Se leyeron ensayos TCID50 para CPE en el Día 10. Los resultados mostraron que la b/h PIV3/hMPV Fl y F2 replicada en los cornetes nasales de los hámsteres a altos niveles de 5.3 y 5.7 lógico TCID50/g de tejido, respectivamente. Estas titulaciones fueron similares a aquéllas observadas para la b/h PIV3 (4.8 loglO TCID50/g de tejido). En comparación, el hMPV de tipo natural exhibió titulaciones de 5.3 logio TClD50/g de tejido en los tractos respiratorios superiores de los hámsteres (Tabla 5) . La b/h PIV3/hMPV Fl y F2 se replicaron a titulaciones de 5.7 a 4.6 logio TCID50/g de tejido en los pulmones de los hámsteres (Tabla 5) . Estas titulaciones fueron similares a aquéllas observadas para b/h PIV3 (5.6 logio TCID50/g de te ido). El hMPV de tipo natural exhibió titulaciones reducidas de 3.6 logio TCID50/g de tejido en el tracto respiratorio inferior de los hámsteres (Tabla 5) . Estos datos demostraron que la b/h PIV3/hMPV Fl y F2 podría infectar eficientemente y replicarse en el tracto respiratorio superior e inferior de los hámsteres Syrian Golden. Estos resultados sugirieron que los hámsteres son un modelo adecuado de animal pequeño para estudiar la inmunogenicidad del hMPV así como los candidatos a la vacuna del hMPV. 16. EJEMPLO 11: CLONACIÓN DEL CONSTRUCTO DEL GEN F DEL VIRUS RESPIRATORIO SINCITIAL SOLUBLE También se generó un constructo (es decir, b/h PIV3/sol RSV F2) que contiene una sola copia del gen RSV F soluble, una versión del gen RSV F que carece de la membrana y de dominios citosólicos, (Figura 14) . Este constructo se puede utilizar para probar la inmunogenicidad (todavía se espera que el RSV F soluble obtenga una respuesta inmune específica del RSV) . Podría ser ventajoso que la incapacidad del RSV F soluble se incorpore en la membrana del virión. Por lo tanto este virus se puede ver como un virus quimérico más seguro puesto que no se espera cambie que su tropismo del virus . El plásmido del ADNc para el b/h PIV3/RSV Fl sol se puede rescatar mediante genética inversa. El b/h PIV3/RSV F2 sol se construyó como sigue . El ADNc de la (b/h) PIV3/sol RSV Fl bovina/humana albergó la fusión (F) y los genes de hemaglutinina-neuraminidasa (H ) se derivaron de la PIV3 humana mientras que el resto del genoma viral se originó de la bPIV3. Se utilizó el plásmido bPIV3 1-5/RSV F2 descrito previamente como una plantilla de ADN para PCR. Este plásmido contenia secuencias de bPIV3 de los nucleótidos (nt) 1-5200 y el gen RSV F se insertó en el nt 177 . Un oligo el cual se hibridiza en el nt 5946 (en el gen F) del genoma RSV A2 y el oligo 5'-CGTGGTCGACCATTGTAAGAAGATGATTAGGTGCTATTTTTATTTAATTTGTGGTGGATTT-ACCGGC-3 ' , se emplearon para remover los dominios de transmembrana y citoplásmicos del RSV F, eliminando 150 nucleótidos. El fragmento de PCR resultante se digirió con Hpal y Salí y se introdujo en la bPIV3 1-5/RSV F2 tratada con Hpal y Salí para dar el plásmido bPIV3 1-5/sol RSV F2. El subclon bPIV3 que alberga el gen sol RSV F en la segunda posición, se cortó con Sphl y Nhel y se aisló un fragmento de ADN de 6.3 kb. El resto del genoma de la PIV3 bovina/humana se ligó como un fragmento de ADN de Nhel-Sphl de tamaño de 14 kb para generar el plásmido de longitud completa b/h PIV3/sol RSV F2. El virus recombinante se recuperó mediante genética inversa . Se generaron reservas de material de virus de titulaciones altas y se cuantificaron mediante ensayos de placa en células Vero que se tiñeron con inmunoperoxidasa utilizando antisuero policlonal de cabra con RSV. Los reservas de virus se almacenaron a -70°C. 17. EJEMPLO 12: EXPRESIÓN DEL METANEUMOVIRUS F HUMANO EN CÉLULAS INFECTADAS CON EL METANEUMOVIRUS F HUMANO VECTORIZADO DE LA PARAINFLUENZA BOVINA 3/PARAINFLUENZA HUMANA 3 Las reservas del virus b/h 104 nMPV F se diluyeron en serie 10 veces y se utilizaron para infectar células Vero sub-confluentes. Se traslaparon células infectadas con el medio optiMEM que contiene gentamicina y se incubaron a 35 °C durante 5 días. Las células se fijaron con metanol al 100% y se inmunotiñeron con una dilución 1:1000 con suero anti-hMPV001 de conejillo de indias seguido por una dilución 1:1000 de anticuerpos conjugados HRP anti-conej illo de indias. La expresión del nMPV F se visualizó mediante revelado de color específico en la presencia de la corriente del substrato AEC (DAKO corporation) . Ver la Figura 15A. Las reservas del virus b/h MP-P hMPV se diluyeron en serie 10 veces y se utilizaron para infectar las células Vero sub-confluentes . Las células infectadas se traslaparon con metilcelulosa al 1% en un medio EMEM/L-15 (JRH Biosciences; Lenexa, KS) suplementado con un medio L15 Ix/MEM que contiene penicilina/estreptomicina, L-glutamina y suero de bovino fetal. Las células infectadas se incubaron a 35 °C durante 5 días, se fijaron con metanol al 100% y se inmunotiñeron con una dilución 1:1000 de suero de conejillo de indias anti-hMPVOOl seguido por anticuerpos conjugados HRP anti-conej illo de indias (Ver la Figura 15B) . El suero de conejillo de indias anti-hMPV001 es específico para las proteínas h PVOOl y no para enlazarse a las proteínas b/h PIV3. 18. EJEMPLO 13: RESCATE DEL VIRUS QUIMÉRICO DE LA PARAINFLUENZA BOVINA TIPO 3/PARAINFLUENZA HUMANA TIPO 3 EN CÉLULAS HELA Y CÉLULAS VERO El rescate del virus quimérico b/h PIV3 se hizo utilizando un procedimiento similar que para el rescate de bPIV3. El rescate del virus quimérico b/h PIV3 mediante genética inversa se llevó a cabo en células HeLa utilizando LipofecTACE (Gibco/BRL) . Las células HeLa confluentes al 80%, células Hep-2, ó células Vero, se infectaron con MVA a una MOI de 4. Una hora después de la infección, el ADNc del b/h PIV3 anti-genómico de longitud completa (4 g) se tranfectó en las células HeLa ó Vero conjuntamente con los plásmidos de expresión NP (0.4 /¿g) , P (0.4 µ ) , y L/pCITE (0.2 g) . Cuarenta horas después de la infección, las células el sobrenadante celular se cosecharon (PO) y sometieron a un solo ciclo de congelamiento-descongelación. Se utilizó entonces el lisato celular resultante para infectar una capa mono-molecular de células Vero frescas en la presencia de 1-beta-D-arabinofuranosilcitosina (ara C) , una inhibición de replicación del virus vaccinia, para generar una reserva del virus PI . El sobrenadante y las células de estas placas se cosecharon, se congelaron-descongelaron una vez y en la presencia de partículas del virus bPIV3 se evaluaron por su inmuno-teñido de placas de virus utilizando antisuero específico de PIV3. Los lisatos celulares de la cosecha PI dio como resultado un CPE completo de las capas mono-moleculares de células Vero y el inmuno-teñido indicó la presencia de un infección extensa del virus . 19. EJEMPLO 14: RESCATE DE LOS VIRUS DEL METANEUMOVIRUS F HUMANO, VECTORIZADO, DE LA PARAINFLUENZA BOVINA TIPO 3/PARAINFLUENZA HUMANA TIPO 3 Los virus b/h PIV3 que expresan el hMPV F en la posición uno (b/h 104 hMPV F) o posición dos (b/h NP-P hMPV F) , se obtuvieron como sigue. Se infectaron células HEp-2 ó Vero a una confluencia del 80-90% en platos de 6 pozos con Viruela aviar T7 a una multiplicidad de infección (m.o.i.) de 0.1 a 0.03. Después de la infección con Viruela aviar T7, las células se lavaron una vez con PBS y se transfectaron con las siguientes cantidades del plásmido ADN: ADNc de longitud completa b/h 104 hMPV F ó b/h MP-P hMPV F 2.0 /ig, pCite N 0.4 µg/ pite P 0.4, /zg, pCite L de 0.2 g. (Los plásmidos pCite tienen un promotor T7 seguido por el elemento IRE derivado del virus de encéfalomiocarditis (EMCV) ) . La transfección se realizó en la presencia de Lipofectamine 2000 (Invitrogen) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. La reacción de transfección se incubó a 33 °C durante 5 a 12 horas después de lo cual el medio que contiene la Lipofectamina 2000 se reemplazó con 2 mi del OptiMe fresco que contiene gentamicina. Las células transfectadas se incubaron además a 33 °C durante dos dias . Las células se estabilizaron con SPG y se lisaron mediante un ciclo de congelación-descongelación a -80 °C. El lisado celular crudo se utilizó para infectar una nueva capa mono-molecular Vero con el fin de amplificar los virus rescatados. Los virus quiméricos se purificaron limitando las diluciones en las células Vero y se generaron reservas de virus de titulaciones altas de 106-108 PFU/ml. La expresión de la proteina hMPV F se confirmó mediante inmunoteñido con antisuero hMPV policlonal de conejillo de indias . 20. EJEMPLO 15: RESCATE DE LOS GENES DEL VIRUS RESPIRATORIO SINCITIAL VECTORIZADO DE LA PARAINFLUENZA BOVINA TIPO 3/PARAINFLUENZA HUMANA TIPO 3 MEDIANTE GENÉTICA INVERSA Se recuperó el virus infeccioso mediante genética inversa en células HeLa ó HEp-2 utilizando los métodos de-transfección descritos previamente (ver el Ejemplo 13) . Brevemente, se infectaron células HEp-2 ó Vero a una confluencia del 80-90% en platos de cultivo de tejido de 6 pozos con FP-T7 ó MVA-T7 a una multiplicidad de infección (m.o.i.) de 0.1-0.3 ó 1-5, respectivamente. Después de la infección con FP-T7 ó MVA-F7, se lavaron las células una vez con PBS y se transfectaron con las siguientes cantidades del ADN del plásmido (2.0 µg del ADWc de longitud completa del F ó G del b/h PIV3/RSV, 0.4 /xg de pCITE/N, 0.4 g de pCITE/P, 0.2 \L< de pCITE/L) . Las transfecciones se realizaron en la presencia de Lipofectamine 2000 (Invitrogen) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Las reacciones de transfección se incubaron a 33 °C durante 5 a 12 horas después de lo cual el medio que contiene Lipofectamine 2000, se reemplazó con 2 mi de OptiMem fresco que contiene gentamicina. Las células transfectadas se incubaron además a 33 °C durante dos días. Las células se estabilizaron con SPG y se lisaron con un ciclo de congelación-descongelación a -80 DC. El lisado celular crudo se utilizó para infectar una nueva capa mono-molecular de células Vero con el fin de amplificar los virus rescatados . Los virus quiméricos se purificaron limitando las diluciones en las células Vero y se generaron reservas de virus de titulación elevadas de 106-108 PFU/ml. Los genes RSV de los virus quiméricos se aislaron mediante RT-PCR y las secuencias se confirmaron. La expresión de las proteínas RSV se confirmó mediante el inmunoteñido de las capas mono-moleculares de las células Vero infectadas con antisuero policlonal RSV de cabra (Biogénesis) . 21. EJEMPLO 16: CONFIRMACIÓN DEL RESCATE DEL VIRUS QUIMÉRICO DE LA PARAINFLUENZA BOVINA TIPO 3/PARAINFLUENZA HUMANA TIPO 3 MEDIANTE RT-PCR Para constatar que el virus rescatado es de naturaleza quimérica, es decir, el virus contiene las secuencias del gen F y HN de hPIV3 en una estructura bPIV3 , el genoma del ARN viral se analizó además mediante RT-PCR. Las células Vero, infectadas con la reserva del virus Pl de tres aislado derivados independientemente del b/h PIV3, se cosecharon y se aisló el ARN total. El ARN viral se amplificó utilizando un oligo que se hibridiza en la posición 4757 de bPIV3. Una región viral del nt 5255 a 6255 se amplificó mediante PCR. El fragmento de PCR de 1 kb deberá contener secuencias hPIV3. Esto se confirmó mediante digestión con enzimas (Sacl y Bgl II) específica para el hPIV3 y que no se corta en la región complementaria del bPIV3 (ver la Figura 2) . Como se esperaba, Sacl y Bgl II cortan el fragmento PCR en fragmentos más pequeños que confirman que las secuencias aisladas se derivan del hPIV3 (ver líneas 3, 5, 7) . Además, una región en el gen de polimerasa L del nt 9075 a nt 10469, se amplificó mediante PCR. Esta región deberá contener secuencias bPIV3. De nuevo el fragmento PCR resultante de 1.4 kb se digirió utilizando una enzima específica para el bPIV3 (Pvull y BamHl) que no se corta en la región equivalente del hMPV (Figura 3) . El fragmento de 1.4 kb de hecho se digirió mediante Pvull y BamHl confirmando que el gen de polimerasa es de origen bPIV3 (ver líneas 3, 4, 6, 7, 9 y 10 de la Figura 3) . En resumen, el análisis RT-PCR muestra que el virus b/h PIV3 rescatado es de naturaleza quimérica. El mismo contiene genes F y HN de hPIV3 en una estructura genética bPIV3. 22. EJEMPLO 17: ESTABILIDAD GENÉTICA DE LOS GENES DEL VIRUS RESPIRATORIO SINCITIAL, VECTORIZADO, Y METANEUMOVI US HUMANO DE LA PARAINFLUENZA BOVINA TIPO 3/PARAINFLUENZA HUMANA TIPO 3 Con el fin de demostrar que la b/h PIV3/RSV y los virus quiméricos b/h PIV3/hMPV son genéticamente estables y mantienen los casetes introducidos del gen RSV ó hMPV, los lisatos celulares infectados se hicieron pasar en un proceso ciego en serie diez veces en células Vero. Las células Vero sub-confluentes en matraces T25 se infectaron con b/h PIV3/RSV ó b/h PIV3/hMPV a una MOI de 0.1 y se incubaron durante 4 días a 33 °C o hasta que el CPE fuera visible. Al final del periodo de incubación las células infectadas y el medio se cosecharon, congelaron y descongelaron dos veces, y el lisado resultante se utilizó para infectar un nuevo matraz T25 de células Vero.
Este ciclo se repitió diez veces. Todos los lisados celulares de P 1 a PIO se analizaron mediante ensayo de placa e inmunoteñido para la expresión de la expresión de las proteínas RSV ó hMPV y titulaciones de virus. En el paso 10, los casetes del gen F de RSV, G de RSV, o F de hMPV se aislaron mediante RT-PCR a partir de los lisados PIO, y se verificaron mediante análisis de secuencia (para identificar posibles alteraciones de nucleótidos) . Todos los aislados mantuvieron los casetes del gen RSV o hMPV y la expresión de la proteina RSV o hMPV para los 10 pasos analizados. No se observó una estabilidad del inserto incrementado de PIV3 que expresa los genes RSV o hMPV dependiendo de la localización de la inserción del gen en el genoma de la PIV3 , posición 1 ó 2. 23. EJEMPLO 18: FRACCIONAMIENTO DEL VIRIÓN DE LOS GENES DEL VIRUS RESPIRATORIO SINCITIAL VECTORADO DE LA PARAINFLUENZA BOVINA TIPO 3/PARAINFLUENZA HUMANA TIPO 3 EN GRADIENTES DE SACAROSA La cuestión de sí las proteínas RSV se incorporaron en el virión b/h PIV3 , se investigó además por el uso de un ensayo bioquímico. Las células Vero se inocularon con cada uno de los- virus quiméricos b/h PIV3 a una MOI de 0.1 Cuando el CPE máximo fue visible, las capas mono-moleculares infectadas se congelaron, descongelaron y se hicieron girar por 10 minutos a 2000 rpm. Los sobrenadantes clarificados se hicieron girar a través de una almohadilla de sacarosa al 20% a 10,000 x g durante 90 minutos. La pelotilla se resuspendió entonces en PBS y se colocaron por capas con delicadeza sobre la parte superior del gradiente de sacarosa al 20-66%. Los gradientes se hicieron girar a 10,000 x g durante 20 horas para lograr el equilibrio. Se cosecharon dieciocho fracciones de 2 mi empezando desde la parte superior del gradiente. Se extrajeron 0.4 mi de cada fracción para la determinación de la titulación del virus . Cada f acción se resuspendió en 2 volúmenes de PBS al 20% y se concentró haciéndola girar a 10, 000 x g durante 1 hora. La pelotilla se resuspendió entonces en 0.05 mi del amortiguador Laemmli (Biorad) y se analizaron las proteínas RSV y PIV3 mediante transferencia Western, utilizando un antisuero policlonal de RSV F MAb (NuMax L1FR-S28R) , RSV (Biogénesis) y bPIV3 (VMRD) . La proteína RSV F truncada C-terminal expresada en el baculovirus que se purificó hasta homogeneidad, también se analizó en un gradiente de sacarosa.
Las fracciones también se analizaron para las titulaciones pico mediante ensayo de placa. Se llevaron a cabo inicialmente gradientes de RSV F libre (generado en baculovirus y truncado C-terminal) , RSV A2, y b/h PIV3. La mayoría del RSV F libre estuvo presente en las fracciones 3, 4, 5, y 6 en la porción superior del gradiente (Figura 16B) . Las fracciones RSV se sondearon con antisuero de RSV policlonal así como con RSV F MAb. Las fracciones que contenían las grandes cantidades de los viriones de RSV también mostraron la señal más fuerte para el RSV F, sugiriendo que la protexna RSV F co-emigra y se asocia con los viriones del RSV (Figura 16B) . Estas fracciones también exhibieron las titulaciones de virus más altas (Figura 16B) . Los viriones de b/h PIV3 pueden ser más pleiomorficos y por consiguiente la distribución de las fracciones del pico que contienen los viriones de b/h PIV3 fue más amplia. Los viriones de b/h PIV3 estuvieron presentes en las fracciones 9, 10, 11, 12, y 13 (Figura 16C) . De nuevo las fracciones que albergan la mayoría de las cifras de viriones, también exhibieron las titulaciones de virus más alta mediante ensayo de placa (Figura 16C) . Las fracciones de gradiente de sacarosa de la b/h PIV3/RSV F2 se analizaron tanto con un antisuero policlonal PIV3 y un RSV F MAb (Figura 16D) . Las fracciones que contienen la mayoría de los viriones fueron las fracciones 11, 12, 13 y 14 como se muestra mediante Western utilizando el antisuero PIV3. Según el caso, estas también fueron las fracciones que exhibieron las cantidades más altas de la proteína RSV F. Sin embargo, también estuvo presente algún RSV F libre en las fracciones 5 y 6. Las fracciones 11, 12, 13 y 14 exhibieron las titulaciones pico del virus (Figura 16D) . De modo semejante, las fracciones que contiene la mayoría de viriones de b/h PIV3/RSV G2 (fracciones 9, 10, 11 y 12) también exhibieron la señal más fuerte para la proteína RSV G (Figura 16E) . De nuevo estas fueron las fracciones con las titulaciones más altas de virus (Figura 16E) . Colectivamente estos datos sugirieron que la mayoría de las proteínas RSV F y G co-emigraron y se asociaron con los viriones de b/h PIV3. Sin embargo, algunas proteínas RSV libres también estuvieron presentes en las fracciones superiores de los gradientes . 24. EJEMPLO 19: EL VIRUS RESPIRATORIO SINCITIAL (RSV) QUIMÉRICO, VECTORIZADO, DE LA PARAINFLUENZA BOVINA TIPO 3/PARAINFLUENZA HUMANA TIPO 3, NO SE PODRIA NEUTRALIZAR CON ANTISUERO RSV Con el fin de dirigir la importante cuestión de seguridad de sí las glicoproteínas de superficie incorporadas en el virión de b/h PIV3 dan como resultado un fenotipo del tropismo del virus alterado, se llevaron a cabo ensayos de neutralización (Tablas 6 y 7) . Se realizaron ensayos de neutralización para los virus quiméricos b/h PIV3 , b/h PIV3/RSV o RSV utilizando células Vero. Las diluciones dobles, en serie, del antisuero policlonal RSV (Biogénesis; Poole, Inglaterra) , un RSV F MAb (1200 MAb) obtenido de Dr. Judy Beeler y el banco de reactivos WHO (Beeler y Coelingh, J. Virol. (1989) 63 (7): 2941-50), y hPIV3 F (C191/9) y HN (68/2) MAbs (van Wyke Coelingh y Tierny, J Virol. 1989 63 (9): 3755-60; van yke Coelingh et al., 1985), se incubaron con aproximadamente 100 PFU ya sea de los virus quiméricos b/h PIV3, b/h PIV3/RSV ó RSV en 0.5 mi de OptiMEM a TA durante 60 min. después de la incubación, las mezclas de virus-suero o RSV se transfirieron a capas mono-moleculares de células Vero, incubadas a 35°C durante 1 hora, cubiertas con metilcelulosa al 1% en medio EMEM/L-15 (JRH Biosciences ; Lenexa, KS) y se incubaron a 35°C. Seis días después de la inoculación, se inmunotiñeron las capas mono-moleculares de las células infectadas. Se expresaron titulaciones de neutralización como el recíproco de la dilución de suero más alta que inhibió el 50% de las placas virales. Los RSV F MAbs (WHO 1200 MAb) neutralizó el 50% del RSV A2 de tipo natural a una dilución 1:2000 (Tabla 6). En contraste, aún una dilución de 1:25 no neutralizó ninguno de los b/h PIV3/RSV quiméricos. De modo semejante, una dilución de 1:400 del antisuero RSV policlonal (Biogénesis) neutralizó el 50% del RSV A2, aunque aún una dilución de 1:15.6 no neutraliza el b/h PIV3/RSV (Tabla 6).
Tabla 6 Los Virus Quiméricos b/h PIV3/RSV no se Neutralizaron mediante Anticuerpos RSV El hPIV3 F MAb C191/9 neutralizó el 50% del b/h PIV3 así como el PIV3 b/h/RSV a una dilución de 1:500 (Tabla 7) . ün hPIV3 HN MAb 68/2 neutralizó el PIV3 b/h a una dilución de 1:16,000 y el b/h PIV3/RSV a una dilución de 1:32,000 (Tabla 7) . Tabla 7 Los Virus Quiméricos PIV3 b/h/RSV se Neutralizaron mediante Mabs hPIV3 no determinado.
Estos ensayos también se realizaron utilizando las mismas condiciones aunque en la presencia de complemento de conejillos de indias y todavía no se observa neutralización del b/ PIV3/RSV. Los resultados obtenidos utilizando RSV policlonal así como anticuerpos monoclonales RSV F, sugirieron que la proteína RSV F expresada por la b/h PIV3 no se incorporó en la envoltura del virión. A pesar de que los ensayos utilizados no han sido lo suficientemente sensibles para detectar pequeñas cantidades de la proteína RSV F en la superficie del virión. Sin embargo, si estuvieran presentes niveles bajos de RSV F en la superficie del virión de b/h PIV3/RSV F2, la proteína RSV F no fue capaz de sustituir funcionalmente la proteína PIV3 F. Para estudiar adicionalmente este tema, se generó un b/h PIV3 que expresó una forma soluble de la proteína RSV F que carece de la transmembrana y los dominios cistosólicos , que dan la proteína RSV F incapaz de ser insertada en la membrana del virión (Fig. 14) . La remoción de la transmembrana y los dominios cistosólicos se logró eliminando 50 aminoácidos en el C terminal de la proteína RSV F. Las secuencias del gen de inicio y del gen de terminación de la bPIV3 del cásete del gen sol RSV F permaneció idéntica a aquélla del cásete del gen RSV F de longitud completa (Fig. 14) . Ambas b/h PIV3 quiméricas expresaron las proteínas RSV F naturales y solubles eficientemente y se replicaron a titulaciones altas de 10-10 PFU/ml en cultivo de tejido. Estos datos mostraron además que las proteínas RSV no fueron funcionales, es decir, la proteína RSV F podría no sustituir funcionalmente la proteína h.PIV3 F que se bloqueó mediante el anticuerpo hPIV3 F. Por lo tanto, es poco probable un cambio en el tropismo del virus de la b/h PIV3 que expresa antígenos extraños derivados del RSV y hMPV. 25. EJEMPLO 20: EL PIV BOVINO QUIMÉRICO DEMOSTRÓ FENOTIPOS ATENUADOS, Y OBTUVO RESPUESTAS PROTECTORAS FUERTES CUANDO SE ADMINISTRÓ IN VIVO Se infectaron hámsteres Syrian Golden de cinco semanas con 5 x 105 pfu de bPIV3 de tipo natural, bPIV3 recombinante, hPIV3 , PIV3 humano/bovino, y placebo. Los cinco diferentes grupos de animales se mantuvieron separados en jaulas micro-aisladoras. Cuatro días después de la infección, los animales se sacrificaron. Los cornetes nasales y pulmones de los animales se homogeneizaron y almacenaron a -80 °C. El virus presente en los tejidos se determinó mediante ensayos TCID50 en células MDBK a 37 °C. La infección con el virus se confirmó mediante hemabsorción con glóbulos rojos de conejillo de indias. La Tabla 8 muestra las titulaciones de replicacion de las diferentes cepas PIV3 en hámsteres en los pulmones y cornetes nasales . Observar que la PIV3 recombinante y los 283 virus quiméricos PIV3 b/h se atenúan en los pulmones de los hámsteres : Tabla 8 Replicación de los Virus PIV3 en Hámsteres Syrian Golden en los Cornetes Nasales y Pulmones. a Se inocularon grupos de cuatro hámsteres intranasalmente con 5 x 105 PFU del virus indicado. b Error estándar.
Además, se recolectaron muestras de suero de los hámsteres antes de la infección y se analizaron en el día 21 después de la infección en un ensayo de inhibición con hemaglutinación. Las muestras de suero se trataron con una enzima destructora del receptor (RDE, DENKA. Seiken Co.) y se removieron las aglutininas específicas mediante incubación con glóbulos rojos de conejillo de indias durante 1 hora en hielo. Se agregaron bPIV3 de tipo natural y hMPV a muestras de suero de hámster, diluido dos veces, en serie. Finalmente, se agregaron glóbulos rojos de conejillo de indias (0.5%), y se permitió la hemaglutinacion a temperatura ambiente. La Tabla 9 muestra la respuesta del anticuerpo generada en los hámsteres que se infectaron con las diferentes cepas de PIV3. Observar que el virus quimérico b/h PIV3 genera una respuesta del anticuerpo contra el hPIV3 tan fuerte como el hPIV3 de tipo natural, excediendo con mucho la respuesta generada por el bPIV3 recombinante o de tipo natural: Tabla 9 Ensayo de Inhibición con Hemaglutinacion Utilizando Suero de los Hámsteres Infectados con Diferentes Virus PIV3.
Estos resultados demuestran las propiedades de los virus quiméricos de PIV3 b/h de la presente invención los cuales hacen que estos recombinantes sean adecuados para su uso en las formulaciones de vacuna. No solamente los virus quiméricos de PIV3 b/h demostraron un fenotipo atenuado cuando se administraron in vivo, sino que los mismos también generar una respuesta al anticuerpo tan fuerte como la del hPIV3 de tipo natural. Por consiguiente, debido a que los virus quiméricos de la presente invención tienen una combinación única que tiene un fenotipo atenuado y que producen una respuesta inmune tan fuerte como un hPIV de tipo natural, estos virus quiméricos tienen las características necesarias para su uso exitoso en humanos para inhibir y/o proteger contra la infección del PIV. 26. EJEMPLO 21: REPLICAC ÓN DEL LA PROTEÍNA G Ó F DEL VIRUS RESPIRATORIO SINCITIAL, VECTORIZADO, DE LA PARAINFLUENZA BOVINA TIPO 3/PARAINFLUENZA HUMANA TIPO 3 EN EL TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR E INFERIOR DE LOS HÁMSTERES Se infectaron hámsteres Syrian Golden de cinco semanas de edad (seis animales por grupo) intranasalmente con un medio de 1 x 106 PFU ó 1 x 104 PFU de b/h PIV3 , b/h PIV3/RSV, RSV A2, ó placebo en un volumen de 100 µ? . Los diferentes grupos se mantuvieron por separado en jaulas micro-aisladoras. Cuatro dias después de la infección, los cornetes nasales y los pulmones de los hámsteres se cosecharon, homogeneizaron y almacenaron a -70 °C. Las titulaciones del virus presente en los tejidos, se determinaron mediante ensayos TCID50 en células Vero. Para los ensayos de estimulación, los animales se inocularon en el día 28 intranasalmente con 1 x 105 pfu/ml de hPIV3 ó RSV A2. Cuatro días después de la estimulación, se 28 aislaron los cornetes nasales y pulmones de los animales y se evaluaron para la replicación del virus provocador mediante ensayos de placa en células Vero que se inmunotiñeron para su cuantificación. La Tabla 10 muestra las titulaciones de replicación de las diferentes cepas en hámsteres en los pulmones y cornetes nasales . Tabla 10 Replicación del PIV3 bovino/humano que Expresa las proteínas RSV G ó F en el Tracto Respiratorio Superior e Inferior de los Hámsteres . a Se inocularon grupos de cuatro hámsteres intranasalmente con 5 x 106 PFU del virus indicado. b Error estándar.
Los hámsteres Syrian Golden representan un modelo adecuado de animal pequeño para evaluar la replicación e inmunogenicidad de los virus bPIV3 y hPIV3 diseñados genéticamente. Se esperaba que la introducción de los 287 antígenos RSV no pudiera alterar la capacidad del b/h PIV3 quimérico para infectarse y replicarse en hámsteres puesto que los antígenos extraños no se incorporaron en el virión (Tabla 6 y Tabla 7) . Cuando los animales se inmunizaron intranasalmente, los resultados mostraron que todos los PIV3 b/h/RSV quiméricos se replicaron de 4.2 a 4.6 loglO TCID50/g de tejido en los cornetes nasales de los hámsteres (Tabla 10). Estos niveles de replicación fueron similares a aquéllos observados para b/h PIV3 el cual exhibe 4.8 loglO TCID50/g de tejido (Tabla 10). Los hámsteres Syrian Golden son solamente semi-permisivos para la infección con RSV. Los títulos del RSV observadas en el tracto respiratorio superior de los hámsteres, se disminuyeron mediante 1.4 loglO TCID50/g de tejido, comparadas con aquéllas del b/h PIV3 (Tabla 10) . El b/h PIV3/RSV que alberga el gen RSV en la posición 1, exhibió 0.9-1.5 loglO de títulos reducidos en los pulmones de los hámsteres, comparadas con b/h PIV3 (Tabla 10) . En cambio, el b/h PIV3/RSV que contenía una inserción de genes en la posición 2, se replicó dentro de 0.1 loglO de las titulaciones observadas para el PIV3 b/h en el tracto respiratorio inferior de los hámsteres (Tabla 10) . El PIV3 quimérico que alberga genes extraños en la posición 1 ó 2 retienen la capacidad de replicarse eficiente en el tracto respiratorio inferior y superior de los hámsteres a niveles similares a los del PIV3 288 b/h. La introducción de un gen adicional del genoma del PIV3 b/h en posiciones 1 ó 2 no atenúa el virus significativamente para la replicación in vivo del virus. 27. EJEMPLO 22: LOS HÁMSTERES INMUNIZADOS CON EL VIRUS RESPIRATORIO SINCITIAL VECTORADO DE LA PARAINFLUENZA BOVINA 3/PARA NFLUENZA HUMANA 3 SE PROTEGIERON EN LA ESTIMULACIÓN CON EL VIRUS DE PARAINFLUENZA HUMANA 3 Y EL VIRUS A2 RESPIRATORIO SINCITIAL Con el fin de evaluar sí los niveles de replicación observados para el b/h PIV3/RSV fueron suficientes para obtener una respuesta inmune protectora en hámsteres, los animales se estimularon intranasalmente con 106 PFU RSV ó hPIV3 por animal en el Día 28 después de la vacuna. Los animales inmunizados con b/h PIV3/RSV se protegieron completamente del hPIV3 y RSV (Tabla 11) . El virus provocador de RSV se detectó a niveles muy bajos y el virus provocador del hPIV3 no se observó en absoluto en el tracto respiratorio superior e inferior de los hámsteres . Solamente los animales que habían recibido el medio de placebo, exhibieron 4.4 y 4.1 loglO TCID50/g de tejido de hPIV3, y 3.6 y 3.1 loglO pfu/g de tejido de RSV en los tractos respiratorios superiores e inferiores (Tabla 11) . Este estudio también mostró que los animales inmunizados con RSV no se protegieron de la estimulación con hPIV3. Asimismo, los animales vacunados con 289 hPIV3 exhibieron altas titulaciones del virus provocador de RSV (Tabla 11) .
Tabla 11 Los Hámsteres Inmunizados con PIV3 b/h/RSV se Protegieron en la Estimulación con hPIV3 y RSV A2 Virus bPIV3 RSVA2 Provocador: Titulación Media del Virus en Titulación Media del Virus en el Día 4 después de la el Día 4 después de la estimulación (logi0TCID50/g de estimulación (logio pfu/g de tejido ±S.E.)b,c tejido ± S.E.)b Virus inmunizante3 Cornetes nasales Pulmones Cornetes nasales Pulmones PIV3 b/h < 1.2 ±0.0 <1.0±0.1 ND ND RSV Gl b/h < 1.2 ±0.1 < 1.1 ±0.1 < 1.0 ±0.3 < 0.7 ±0.1 RSV Fl b/h < 1.2 ±0.2 < 1.0 ±0.0 < 1.1 ±0.5 < 0.6 ±0.0 RSVFI P-Pb/h < 1.0 ±0.0 <1.0±0.0 < 0.8 ±0.1 < 0.5 ± 0.0 RSV G2 b/h < 1.2 ±0.2 < 1.1 ±0.2 < 0.8 ±0.1 < 0.8 ±0.3 RSVF2 b/h < 1.2 ±0.1 < 1.0± 0.1 < 1.3 ±0.6 <1.6±1.0 RSV A2 4.5 ±0.6 4.8 ±0.6 < 0.6 ± 0.2 < 0.6 ±0.1 Placebo 4.4 ±0.1 4.1 ±0.1 3.6 ±0.8 3.1 ±0.7 a Virus utilizado para inmunizar grupos de seis hámsteres en el * día 0. b En el día 28, los hámsteres se estimularon con 106 pfu de hPIV3 ó RSV A2. Cuatro días después de la estimulación, se cosecharon los pulmones y cornetes nasales . c Error estándar. 28. EJEMPLO 23. LA VACUNACIÓN DE LOS HÁMSTERES CON VIRUS RESPIRATORIO SINCITIAL DE LA PARAINFLUENZA BOVINA 3/PARAINFLUENZA HUMANA 3, INDUCE LOS ANTICUERPOS DEL SUERO HAI Y NEUTRALIZANTES. Antes de administrar la dosis de estimulación, se obtuvieron muestras de suero en el Día 28 de los animales inmunizados con B/H PIV3/RSV. Se analizó el suero del hámster para la presencia o anticuerpos neutralizantes de RSV utilizando un ensayo de reducción de placa al 50%, y para los anticuerpos del suero HAI PIV3 llevando a cabo ensayos de inhibición con hemaglutinacion (HAI) (Tabla 12) . El ensayo de reducción de placa al 50% (ensayo de neutralización) se llevó a cabo como sigue: el suero del hámster se diluyó dos veces enserie, y se incubó con 100 PFU de RSV A2 durante una hora. Luego las mezclas de virus-suero se transfirieron a capas mono-moleculares de células Vero y se cubrieron con metilcelulosa. Después de 5 días de incubación a 35 °C, las capas mono-moleculares se inmunotiñeron utilizando antisuero policlonal RSV para su cuantificación. Se realizaron ensayos de inhibición con hemaglutinacion (HAI) incubando diluciones dobles en serie del suero del hámster del Día 28 a 25 °C durante 30 min. con hPIV3 en placas de fondo en forma de V de 96 pozos. Subsecuentemente, se agregaron- eritrocitos de conejillos de indias a cada pozo, la incubación se continuó durante unos 90 min. adicionales, y se registró la presencia o ausencia de la hemaglutinación en cada pozo. Las titulaciones se expresaron como el recíproco medio log2 de la dilución más alta de suero que la hemaglutinación inhibida. Tabla 12 La Vacunación de los Hámsteres con PIV3 b/h/RSV Induce los Anticuerpos del Suero HAI y Neutralizantes Virus utilizados para hámsteres inmunizados. Las titulaciones del anticuerpo neutralizante determinaron mediante un ensayo de reducción de placa al 50%. Las titulaciones del anticuerpo neutralizante del pre-suero de hámster fueron < 1.0 y las titulaciones del anticuerpo HAI fueron < 4.0. Los resultados mostraron que los virus que expresan la proteína RSV F en las posiciones 1 ó 2 del genoma, exhibieron titulaciones del anticuerpo neutralizante RSV de 5.5 y 6.9 log2 , respectivamente. Estos títulos fueron ligeramente inferiores a los títulos del anticuerpo observadas para el suero obtenido de los animales vacunados con el RSV de tipo natural (Tabla 12) . En cambio, los virus que expresan la proteína RSV G, mostraron titulaciones del anticuerpo neutralizante de RSV que se redujeron por ~ 50% (Tabla 12) . Todos los sueros del hámster con b/h PIV3/RSV quimérico, mostraron niveles de anticuerpos en el suero HAI que se redujeron a 0.5-2.0 log2 comparados con los niveles observados para el PIV3 b/h (Tabla 12) . Los resultados mostraron que el PIV3 b/h/RSV quimérico se podría infectar y replicar en hámsteres y provocar una respuesta inmune protectora al hPIV3 y RSV. 29. EJEMPLO 24: LA VACUNACIÓN DE LOS HAMSTERES CON DOSIS BAJA DEL VIRUS RESPIRATORIO SINCITIAL VECTORIZADO DE LA PARAINFLUENZA BOVINA 3/PARAINFLUENZA HUMANA 3, PROTEGE A LOS HAMSTERES DE LA ESTIMULACION CON EL VIRUS SINCITIAL RESPIRATORIO A2 , E INDUCE ANTICUERPOS DEL SUERO HAI Y NEUTRALIZANTES Con el fin de identificar el mejor candidato a la vacuna, se utilizaron dosis bajas del virus con diferentes constructos (ver el Ejemplo 2) para inmunizar los hámsteres.
Los resultados de los experimentos de estimulación, se resumen en la Tabla 13. Tabla 13 Los Hámsteres Inmunizados con Dosis Baja de PIV3 b/h/RSV se Protegen de la Estimulación con RSV A2 Replicación Estimulación conRS V A2 Titulación Media del Virus Titulación Media del Virus en el en el Día 4 Después de la Día 4 Después de la Estimulación Vacunación (log^TCID/g (fogio pft/g de tejido ± S.E.)b de tejido ± S.E.)b]C Virus inmunizante3 Cornetes nasales Pulmones Cornetes nasales Pulmones PIV3 b/h 4.9 ± 0.5 4.8 ± 1.0 ND ND RSV Gl b/h 3.0 ± 0.8 3.1 ± 0.5 < 0.9 ± 0.5 < 0.7 ± 0.4 RSV Fl* b/hN-N 3.4 ± 0.1 3.5 ± 0.1 < 1.4 ± 0.7 < 0.5 ± 0.0 RSV G2 b/h 4.1 ± 0.6 3.8 ± 0.4 < 0.8 ± 0.0 < 0.5 ± 0.1 RSV F2 b/h 5.2 ± 0.6 3.9 ± 0.4 < 0.7 ± 0.1 < 0.5 ± 0.1 RSV A2 2.8 ± 0.3 2.7 ± 0.6 < 0.8 ± 0.1 < 0.5 ± 0.0 Placebo NDd ND 3.0 ± 0.8 3.2 ± 0.9 a Virus utilizado para inmunizar grupos de seis hámsteres en el día 0 con una dosis baja de 104 PFU/ml. b En el día 28, los hámsteres se estimularon con 106 pfu de RSV A2. Cuatro días después de la estimulación, se cosecharon los pulmones y cornetes nasales de los animales . 0 Error estándar.
A continuación los titulaciones de anticuerpos neutralizantes se determinaron mediante un ensayo de reducción de placa al 50% (ensayo de neutralización) . Los ensayos de neutralización se realizaron para b/h PIV3, virus quiméricos de b/h PIV3/RSV o RSV utilizando células Vero. Las diluciones dobles, en serie, del antisuero policlonal RSV (Biogénesis; Poole, Inglaterra) , un RSV P MAb (WHO 1200 MAb) obtenido de Medlmmune ó hPIV3 F (C191/9) y MAbs HN (68/2) , se incubaron con aproximadamente 100 PFU ya sea de b/h PIV3, virus quiméricos b/h PIV3/RSV o RSV en 0.5 mi de OptiME a TA durante 60 min. Después de la incubación, se transfirieron las mezclas de virus -suero a las monocapas de células Vero, se incubaron a 35 °C durante 1 hora; se recubrieron con metilcelulosa al 1% en un medio E EM/L-15 (JRH Biosciences ; Lenexa, S) y se incubaron a 35 °C. Seis dias después de la inoculación, se inmunotiñeron las capas mono-moleculares de células infectadas. Las titulaciones de neutralización se expresaron como el recíproco de la dilución más alta del suero que inhibió el 50% de las placas virales. También se llevaron a cabo para obtener ensayos de neutralización para el suero obtenido en el Día 28 después de la infección de los hámsteres inmunizados con b/h PIV3, virus quiméricos b/h PIV3/RSV, o RSV A2. Los sueros del hámster se diluyeron dos veces en serie, y se incubaron con 100 PFU de RSV ?2 durante una hora. Luego las mezclas del virus -suero se transfirieron a las monocapas de células Vero y se recubrieron con metilcelulosa. Después de 5 días de incubación a 35 °C las capas se inmunotiñeron utilizando el antisuero policlonal para su cuantificacion . Las titulaciones del anticuerpo neutralizante de pre-suero de hámster, fueron < 1.0 y las titulaciones del anticuerpo HAI fueron < 4.0. Los ensayos de inhibición con hemaglutinacion (HAI) se realizaron incubando diluciones dobles en serie en el Día 28 del suero del hámster a 25 °C durante 30 min. con hPIV3 en placas de fondo con forma de V, de 96 placas. Subsecuentemente, se agregaron eritrocitos de conejillos de indias a cada pozo, la incubación se continuó durante unos 90 min. adicionales, y se registró la presencia o ausencia de hemaglutinacion en cada pozo . La Tabla 14 resumen los resultados : Tabla 14 La Vacunación de Hámsteres con Dosis más Bajas de PIV3 b/h/RSV Induce los Anticuerpos del Suero HAI y Neutralizantes Virus utilizado para inmunizar hámsteres a una dosis baja de 104 pfu/ml. b Las titulaciones del anticuerpo neutralizante se determinaron mediante un ensayo de reducción de placa al 50%. c Las titulaciones del anticuerpo neutralizante del pre-suero de hámster, fueron < 1.0 y las titulaciones del anticuerpo HAI, fueron < 4.0. El fenotipo de replicación restringido de los virus quiméricos que poseen los genes RSV en la primera posición se exacerbó cuando la dosis de inoculación se redujo a 1 x 104 PFU por animal. El b/h PIV3/RSV Fl y Gl se replicaron en los tractos respiratorios superiores de los hámsteres a titulaciones que se redujeron a 1.0-2.0 logio, comparadas con aquéllas de b/h PIV3 (Tabla 13) . En cambio, el b/h PIV3/RSV con los genes RSV en la posición 2, se replicó en el tracto respiratorio superior a niveles observados para b/h PIV3. La replicación en los pulmones de hámsteres se restringió todavía más para el b/h PIV3/RSV que alberga genes RSV en la primera posición (Tabla 13) . En cambio, el b/h PIV3/RSV F2 todavía se replicó a altas titulaciones de 105'2 y 103'9 en los cornetes nasales y pulmones, respectivamente (Tabla 13) . Los hámsteres vacunados se estimularon en el Día 28 con 1 x 106 pfu de RSV A2 (Tabla 13) . A pesar de que los bajos niveles de replicación observados en los tractos respiratorios de hámsteres, los animales se protegieron en el tracto respiratorio tanto inferior como superior de la estimulación con RSV (Tabla 13) . El grado de protección fue tan bueno como el observado para los animales vacunados con wt RSV. Solamente los animales que recibieron el medio de de placebo mostraron altas titulaciones del virus en los cornetes nasales y pulmones (Tabla 13) . El suero se recolectó de los hámsteres inmunizados en el Día 28, y se analizaron para la presencia de los anticuerpos de suero HAI PIV3 y neutralizantes RSV (Tabla 14) . Se observó una caída de aproximadamente el 50% en las titulaciones del anticuerpo neutralizante RSV, en los sueros obtenidos de hámsteres inmunizados con b/h PIV3/RSV cuando se compararon con las titulaciones observadas para los sueros de wt RSV (Tabla 14) . Aunque los sueros obtenidos de animales que habían recibido el b/h PIV3 que alberga los genes RSV en la posición 2, todavía exhibieron titulaciones más altas del anticuerpo de neutralización RSV que las observadas para los sueros del b/h PIV3/RSV con los genes RSV en la posición 1. Las titulaciones del anticuerpo del suero ??? también se redujeron ligeramente en comparación con los sueros del b/h PIV3 (Tabla 14) . 30. EJEMPLO 25: LOS HÁMSTERES INMUNIZADOS CON EL METANEUMOVIRUS F HUMANO VECTORIZADO DE LA PARAINFLUENZA BOVINA 3/PARAINFLUENZA HUMANA 3, SE PROTEGIERON EN LA ESTIMULACIÓN CON EL VIRUS 3 DE LA PARAINFLUENZA HUMANA O EL METANEUMOVIRUS NL/001 HUMANO Se inmunizaron cinco grupos de Hámsteres Syrian Golden (cada grupo tenía seis hámsteres) con b/h PIV3, b/h hMPV Fl, b/h hMPV F2 , hMPV ó placebo, respectivamente. Los cinco diferentes grupos de animales se mantuvieron separados en jaulas micro-aisladoras. En el Día 28 después de la inmunización, los hámsteres se estimularon con 1 x 106 PFU ya sea de hPIV3 ó hMPV (cepa NL/001) para evaluar la inmunogenicidad inducida por el b/h PIV3/hMPV F. Cuatro días después de la estimulación, los animales se sacrificaron. Los cornetes nasales y pulmones de los animales se homogeneizaron y almacenaron a -80°C. El virus presente en los tejidos se determinó mediante ensayos TCID50 en células MDBK a 37°C. Se confirmó la infección del virus mediante hemabsorción con células de glóbulos rojos de conejillo de indias. La Tabla 15 muestra las titulaciones de la cepa PIV3 y la cepa MPV en los hámsteres en los pulmones y cornetes nasales. Tabla 15 Los Hámsteres Inmunizados con PIV3 b/h/RSV F se Protegieron en la Estimulación con hPIV3 ó hMPV/ L/001 Virus provocador: hPIV3 hMPV Titulación media del virus en el Titulación media del virus en el día 4 después de la estimulación día 4 después de la estimulación (bao TCID50/g del tejido ± (log10 PFU/g del tejido ± S.E)b S.E)b Virus inmunizante3 Cornetes nasales Pulmones Cornetes nasales Pulmones PIV3 b/h < 1.3 ± 0.2 < 1.1 ± 0.1 ND hMPV Fl b/h < 1.3 ± 0.1 < 1.1 ± 0.1 3.5 ± 0.8 < 0.5 ± 0.2 hMPV F2 b/h < 1.2 ± 0.1 < 1.2 ± 0.1 < 0.9 ± 0.4 < 0.5 ± 0.1 hMPV ND < 0.8 ± 0.3 < 0.4 ± 0.0 Placebo 4.3 ± 0.3 4.5 ± 0.5 6.0 ± 0.3 4.5 ± 1.3 a Virus utilizado para inmunizar grupos de seis hámsteres en el día 0. b En el día 28, los hámsteres se estimularon con 106 pfu de hPIV3 ó hMPV. Cuatro dias después de la estimulación, se cosecharon los pulmones y cornetes nasales de los animales.
ND = no determinado . Los resultados mostraron que los animales que recibieron el b/h PIV3/RSV F2 (F en la posición dos) se protegieron completamente del hMPV así como el hPIV3 (Tabla 15) . Sin embargo, el b/h PIV3/RSV Fl (F en la posición uno) solamente redujo las titulaciones de hMPV infectado en el tracto respiratorio superior (por ejemplo, cornetes nasales) a 2.5 logs, mientras que el mismo proporcionó una protección completa en el tracto respiratorio inferior (por ejemplo, los pulmones) de la infección tanto del hMPV como del hPIV3 (Tabla 15) . Los animales a los que se les administró el medio de placebo, exhibieron títulos altos del virus estimulador en los tractos respiratorios inferiores y superiores (Tabla 15) . 31. EJEMPLO 26: LOS HÁMSTERES VACUNADOS CON EL METANEUMOVIRUS HUMANO VECTORIZADO DE LA PARAINFLUENZA BOVINA 3/PARAINFLUENZA HUMANA 3, PRODUJERON ANICUERPOS EN SUERO HMPV NEUTRALIZANTES Y PIV3 HAI. Se obtivieron muestras de suero de los hámteres en el Día 28 antes de la administración del virus de estimulación, y se analizó para la presencia de anticuerpos neutralizantes hMPV y antucierpos del suero HAI (Tabla 16) . Se observaron altos niveles de anticuerpos neutralizantes hMPV, 7.36 log2 , para los sueros derivados de los animales infectados con hMPV. Los sueros obtenidos a partir de hámsteres vacunados con b/h PIV3/hMPV Fl ó F2 mostraron títulos de anticuerpos neutrralizantes de 7.77 y 7.38 log2 , respectivamente, que fueron equivalentes a aquellos observados para los sueros de hMPV tipo nativo o salvaje 8Tabla 16) . Los niveles de anticuperos HAI también fueron similares a aquellos observados para b/h. PIV3 , el vector del virus. El b/h PIV3/hMPV Fl y F2 quiméricos mostraron títulos de HAI de 5.78 y 6.33 log2 , respectivamente, los cuales se redujeron por 1.2 y 0.7 lo2 comparados a los títulos HAI obtenidos a partir de los sueros de ámteres infectados con b/h PIV3 (Tabla 16) . Tabla 16 Vacunacionde hámateres con b/hPIV/hMPV induce los anticuerpos neutralizantes HAI y hMPV del suero PIV3 Virus usados para inmunizar a los hámteres bLos títulos de los anticuerpos neutralizantes se determinaron por un ensayo de reducción de placa al 50%. cLos títulos de los anticuerpos neutralizantes del pre-suero de los hámteres fueron < 1.0 y los títulos del anticuerpo HAI fueron < 2. En resumen, los resultados mostraron que el b/h PIV3 que expresa la proteína hMPV F en las posiciones 1 ó 2 del genoma de b/h PIV3 , puede infectar eficientemente y replicarse en hámsteres Syrian Golden e inducir una respuesta inmune protectora y proteger de la estimulación con hPIV3 y hMPV. La inmunización de los hámsteres con éstos virus quiméricos también generaron la producción de los anticuerpos neutralizantes hMPV y los anticuerpos del suero HAI a niveles similares a aquellos observados para wt hMPV o b/h PIV3 , respectivamente . 32. EJEMPLO 27: LAS CONSTRUCCIONES VECTORIZADAS DE LA PARAINFLUENZA BOVINA 3/PARAINFLUENZ HUMANA 3 TRIVALENTE, SE REPLICA EN HÁMSTERES Y PROTEGE A LOS HÁMSTERES DE hMPV/NLl/00, hPIV3 Y RSV A2. Se infectaron hámsteres Syrian Golden de cinco semanas de edad (seis animales por grupo) de manera intranasal con 1.0 x 106 PFU del virus b/h PIV3 y 1.0 x 105 PFU del virus b/h PIV3/ SV Fl/hMPV F3 trivalente en un volumen 0.1 mi, respectivamente. Los grupos diferentes se mantuvieron separadamente en cajas del micro-aislante. Cuatro días post-infección, se cosecharon los cornetes nasales y los pulmones de los animales, se homogeneizaron y almacenaron a -70°C. Los títulos del virus presente en los tejidos se determinaron mediante ensayo TCID50 en células Vero. La Tabla 17 muestra los títulos de replicación de las diferentes cepas en hámsteres en los pulmones y los cornetes nasales. Tabla 17 Replicación del virus trivalente en Hámsteres aLos animales RSV/hMPV se incoularon de manera intranasal con 1.0 x 106 PFU de virus en un volumen de 0.1 mi, los animales b/h PIV3 recibieron 1 x 106 PFU virus. bError estándar. Para evaluar si los niveles de replicación obserrvados para b/h PUIV3/RSV Fl/hMPV F3 fueron suficientes para generar una respuesta inmune protectora en hámeteres, los animales se estimularon (incoulados) en el día 28 de manera intranasal con 1 x 10s PFU de hPIV3 , 1 x 106 PFU de RSV, y 1.0 x 105 PFU de hMPV/NL/l/00. Cuatro días después de la estimulación, los cornetes nasales y los pulmones de los animales se aislaron y ensayaron para la estimulación de la replicación del virus mediante ensayos de placa en la células Vero que fueron inmuno-teñidas para cuantificación. El estuio mostró que en el día 28 después de la vacunación, los animales inmunizados con b/h PIV3/RSV Fl/ hMPV F3 se protegieron de todos los tres virus, es decir, se protegieron de los virus hPIV3 , RSV y hMPV (hMPV/NL/1/00) (Tabla 18) . Tabla 18 El virus trivalente protege a los hámsteres de hMPV/NL/1/00, hPIV3 y RSV A2 a Todos los animales se inocularon intranasalmente con 1 x 106 PFU de virus en un volumen de 0.1 mi excepto que los animales hPMV que recibieron 1.0 x 105 PFU de virus. b Error estándar. 33. EJEMPLO 28: EL b/h PIV3 QUE EXPRESA LA PROTEÍNA DE FUSIÓN NATIVA O SOLUBLE DEL RSV, CONFIERE PROTECCIÓN COMPLETA DE LAS INFECCIONES RSV EN LOS MONOS VERDES AFRICANOS. Dos candidatos de vacuna RSV potenciales, b/h PIV3/RSV F2 305 (ver Ejemplo 2) y b/h PIV3/sol RSV F2 (ver Ejemplo 11), se evaluaron en este estudio para eficiencia e inmunogenicidad en un modelo de primate no humano. S empleó un vector b/h PIV3 para expresar las formas nativa y soluble de la proteína RSV F a partir de la posición 2 del genoma PIV3 , yuxtapuesto entre N y P. El análisis previo de b/h PIV3/RSV F2 había mostrado que los hámsteres vacunados con esta vacuna estuvieron protegiso tanto de la estimulación por RSV como por hPIV3. Se comparó la eficiencia de dos vacuna b/h PIV3 que expresaban ya sea la proteína nativa RSV F capaz de ser insertada en la envoltura del virión o la proteína RSV F soluble que no se podría incorporar en el virión. La proteína RSV F soluble no se puede anclar en la envoltura del virión debido a la ausencia del dominio de transmembrana. Los anticuerpos producidos en respuesta a la expresión de la proteína RSV F mediante b/h PIV3 se espera que resulten en la neurralización cruzada y la protección cruzada contra la infección por todas las cepas de RSV, debido a que los genes RSV F se conservan altamente entre los subgrupos A y B de RSV. Ambos b/h PIV3/RSV F2 y b/h PIV3/sol RSV F2 expresaron las proteínas RSV F eficientemente de la posición 2 del genoma PIV3. Estas vacunas de RSV se analizaron para niveles de replicación en el tracto respiratorio de los monos verdes africanos (AGMs) , y la capacidad de producir una respuesta inmune protectora a partir de la estimulación del RSV de tipo salvaje o nativo. Los estudios descritos en este Ejemplo han mostrado que ambos candidatos de vacunas de RSV, b/h PIV3/RSV F2 y b/h PIV3/sol RSV F2 , fueron eficaces y protegieron a los primates no humanos completamente de la estimulación del RSV. Ambas quimeras RSV vectorizadas con PIV3 representan vacunas atractivas para ser evaluadas posteriormente en los ensayos clínicos con humanos. Hasta la fecha, basado en las respuestas inmunes protectoras producidas y los txtulos de anticuerpos de RSV y hPIV3 generados, b/h PIV3/RSV F2 y b/h PIV3/sol RSV F2 mostró respuestas equivalentes . Las evaluaciones de seguridad adicional para los padecimientos de RSV mejorados en un modelo de rata del algodón así como en los estudios de tropismo del tejido en hámteres se puede realizar para establecer un perfil de seguridad más detallado para amboas candidatos de vacuna PIV3/RSV. La vacuna de PIV3/RSV que despliega o muestra el mejor perfil de seguridad se evaluará adicionalmente en adultos y niños en pruebas clínicas para producir una vacuna de RSV aún más eficiente. 1. Materiales y Métodos Células y Virus Células Vero se mantuvieron en Medio Eagle Modificado (MEM) (JHR Biosciences) suplementado con L-glutamina 2 M, aminoácidos no esenciales (NEAA) , antibióticos y 10% de FBS . b/h PIV3/RSV F2, b/h PIV3/sol RSV F2 , RSV A2 , RSV B 9320, hMPV/NL/l/00 se propagaron en células Vero. Las células se infectaron con los virus a una multiplicidad de infección (OI) de 0.1 PFU/célula. Tres a cinco días después de la infección las células y el sobrenadante se recolectaron y se estabilizaron agregando lOx SPG (lOx SPG es Sacarosa 2.18 M, H2P04 0.038M, K2HP04 0.072 M, L-Glutamato 0.054 M) a una concentración final de Ix. Las reservas de virus se almacenaron a -70 °C. Los títulos de virus se determinaron por análisis de placas en células Vero. Las placas se cuantificaron después de tinción con inmunoperoxidasa usando antisuero policlonal de cabra de PIV3 (VMRD) o RSV (Biogénesis) . Estudios en Primates Monos Verdes Africanos (Cercopithecus aethiops) RSV- y PIV3-seronegativos (3.5 a 6.5 años de edad, 2.6 a 5.8 kg) se identificaron usando RSV F IgG ELISA (Immuno-Biological Laboratoires) y un ensayo de inhibición de hemoaglutinación (HAI) (descrito abajo) para el presuero de primate recolectado en el día 14 antes de la fecha de inicio del estudio. Los primates se alojaron en jaulas micro-aislantes individuales. Los monos se anestesiaron con una mezcla de cetamina-valium y se infectaron por vía intranasal e intratraqueal con b/h PIV3/RSV F2, b/h PIV3/sol RSV F2 , RSV A2 y hMPV/NL/1/00. El Volumen de dosificación nasal fue de 0.5 mL por fosa nasal, y el volumen de dosificación intratraqueal fue de 1 mL. En el día 1, cada animal recibió una dosis de 2 mi conteniendo 2-3 x 105 PFU del virus. El grupo de animales de placebo recibió el mismo volumen de dosificación de Opti-MEM. En el día 28, todos los animales se desafiaron por vía traqueal y por vía nasal con 7 x 105 PFU de RSV A2 (1 mi en cada sitio) . Se recolectaron muestras o torundas Nasofaríngeas (NP) diariamente por 11 días y se recolectaron especímenes de lavados traqueales en los Días 1, 3, 5, 7 y 9 después de la inmunización y antes del desafío. Las muestras de sangre obtenidas de la vena femoral se recolectaron en los Días 0, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49, y 56 para análisis serológico. Los animales se monitorearon en cuanto a los cambios en la temperatura corporal indicando una fiebre, signos de una nariz que moquea, fría, estornudos, pérdida de apetito y de peso corporal . Los virus presentes en los especímenes de primates NP y TL se cuantificaron por ensayos en placas usando células Vero que se inmunizaron con antisuero policlonal de cabra de RSV. Los títulos promedios máximos representan el promedio de los títulos de virus máximos medidos para cada animal en cualquiera de los 11 días enseguida de la inmunización o el desafío .
Ensayo de Neutralización por Reducción de Placas (PRNA) : Los PRNAs se llevaron a cabo para el suero obtenido en los días 1, 28, y 26 después de la dosis de los primates infectados con b/h PIV3/RSV F2 y b/h PIV3/sol RSV F2, respectivamente . El suero de primate se diluyó serialmente dos veces, y se incubó con 100 PFU de RSV A2 en presencia de complemento de cerdo de guinea por una hora a 4°C. las mezclas de virus-suero se transfirieron a monocapas de células Vero y se revistieron con metil celulosa al 1% en medio EMEM/L-15 (JRH Biosciences; Lenexa, KS) conteniendo 2% de FBS y 1% de antibióticos. Después de 6 días a 35°C, las monocapas se inmunotiñeron usando antisuero policlonal de cabra RSV para su cuantificació . Los títulos de neutralización se expresaron como el log2 reciproco de la dilución de suero más alta que inhibió el 50% de placas virales. RSV F IgG Elisa: El suero de primate de los días 1, 28 y 56 de los animales vacunados se analizó en cuanto a la presencia de RSV F IgG usando un equipo de ELISA (Immuno-Biological Laboratoires , Hamburgo, Alemania) de acuerdo a las instrucciones del fabricante. El antisuero secundario de mono (Rockland Inc.) se usó a una dilución de 1:1000. los títulos de anticuerpo RSV F IgG se expresaron como log2 IgG U/ml. Ensayos de Microneutralización de hPIV3 : Los ensayos de raicroneutralización se llevaron a cabo en células Vero. Diluciones seriales dobles de suero de primate, iniciando a 1:4, se incubaron a 37°C por 60 min con 100 TCID50 de hIPV3. Después, las mezclas de virus-suero se transfirieron a monocapas de células en placas de 96 pozos y se incubaron a 37°C por seis días, después de lo cual todos los pozos se observaron por CPE. Los títulos de neutralización se expresaron como el reciproco de la dilución de suero más alta que inhibe el CPE. A los títulos de anticuerpo de neutralización de=4 (la dilución de suero mas baja evaluada) se les asignó un titulo log2 reciproco de 2. Ensayo de Inhibición de Hemoaglutinación de PIV3 (HAI) ; Los ensayos HAI se llenaron a cabo incubando diluciones seriales dobles de suero de primate a 25 °C por 20 min con 8 unidades de HA/0.05 mi de bPIV3 o bien de hPIV3. subsecuentemente, se agregaron células sanguíneas rojas de cerdo de guinea a cada pozo, la incubación se continuó por 90 min, y cada pozo se observó por la hemoaglutinación. Los títulos de HAI se expresaron como el reciproco de la dilución más alta de antisuero que inhibió la aglutinación de eritrocitos mediada por el virus . 2. Resultados b/h PIV3/RSV F2 y b/h PIV3/sol RSV F2 se Replican Eficientemente en el Tracto Respiratorio de AGMs Se ha mostrado que los AG s soportan niveles altos de replicación de RSV A y RSV B en el tracto respiratorio inferior y superior. Para estudiar la eficiencia de replicación de las vacunas b/h PIV3/RSV F2 y b/h PIV3/sol RSV F2 , se diseño el experimento como sigue (véase la Figura 17). Brevemente, en el Día 1, AGMs RSV y PIV3 -seronegativos , cuatro animales por grupo, se inmunizaron por vía nasal y por vía traqueal con b/h PIV3/RSV F2 o b/h PIV3/sol RSV F2 con una dosis de 2-3 x 105 PFU. Un grupo de control positivo se infectó con RSV A2 del tipo salvaje y al grupo de control negativo se administro medio de placebo. En el Día 28, todos los animales se desafiaron por vía nasal y por vía traqueal con 7 x 105 PFU de RSV A2 del tipo salvaje. Los animales se alojaron en jaulas micro-aislantes por la duración de este estudio. Muestras nasofaríngeas se recolectaron diariamente por 11 días después de la inmunización y después del desafío, y muestras de lavados traqueales se obtuvieron en los días 2, 4, 6, 8 y 10 después de la inmunización y después del desafío. Muestras de suero para análisis de anticuerpos se recolectaron cada siete días a través de la duración del estudio (véase la Figura 17) . Como se muestra en la Tabla 19, enseguida de la vacunación con b/h PIV3/RSV F2, los monos resguardados por siete días en la nasofaringe muestran un título máximo promedio de 5.6 logio PFU/ml, y por nueve dias en la traquea con títulos máximos promedio de 7.0 logio PFU/ml. La inmunización de los AGMs con el virus de vacuna que expresa la forma soluble de la proteína RSV F, b/h PIV3/sol RSV F2, resultó en el desprendimiento del virus por ocho días en la nasofaringe mostrando títulos promedio máximos de 5.6 logm PFU/ml, un por siete días en la traquea con títulos máximos de 6.8 logio PFU/ml, Tabla 19. En contraste, la infección de los primates con wt RSV A2 resultó en seis días de desprendimiento del virus en la nasofaringe alcanzando títulos máximos promedio de 3.3 logi0 PFU/ml y ocho días de desprendimiento del virus en la traquea mostrando títulos máximos promedio de 5.0 log10 PFU/ml. Los animales a los cuales se les administró el medio de placebo no albergaban el virus (Tabla 19) . Por lo tanto, la inmunización de primates no humanos con b/h PIV3/RSV F2 o b/h PIV3/sol RSV F2, resultó en niveles altos de replicación similares y duración de desprendimiento del virus para ambas vacunas candidatas evaluadas. Ciertamente, la replicación del virus para las vacunas candidatas b/h PIV3/RSV fue 200 veces más alta en URT y 63-100 veces más alta en LRT en comparación con el RSV A2 del tipo salvaje.
Tabla 19. Los Monos Verdes Africanos Inmunizados con b/h PIV3/RSV F2 o b/h PIV3/sol RSV F2 fueron protegidos Completamente de la Estimulación con RSV A2 del Tipo Salvaje *Los animales se inocularon con 2-3 x 105 PFU del virus indicado en cada sitio por vía nasal y por vía traqueal en un volumen de un mi . #el título máximo promedio del virus se expresa como logi0PFU/ml± el error estándar y es el promedio del título más alto del virus de cada animal en el grupo específico durante el curso del estudio. $Los animales fueron desafiados en el Día 28 con 7 x 105 PFU de RSV A2. ND=no determinado. Los animales se observaron por 11 días después de la vacunación por los signos de la enfermedad RSV tales como flujo nasal, nariz que moquea, resfriado, o fiebre. No se notaron signos de la enfermedad durante este periodo de replicación aguda del virus. En este estudio, ambas vacunas candidatas, b/h PIV3/RSV F2 y b/h PIV3/sol RSV F2, se replicaron a títulos altos de 5.6 y 7.0 loglO PFU/mi en el URT y LRT de los AGMs, 314 respectivamente. Los títulos de replicación observados para los candidatos de vacunas RSV en el tacto respiratorio de los AGM fueron más altos que aquellos para el RSV A2 del tipo salvaje. Los niveles de replicación observados para las vacunas candidatas de RSV potenciales dieron protección completa contra el desafío del wt RSV 28 días después de la dosis. Los títulos de replicación altos del virus del desafío RSV A2 se observaron sólo para los animales administrados con medio de placebo o los animales que habían sido vacunados con hMPV, un paramixovirus relacionado, lo cual no resultó el la protección inmunológica cruzada. Los AGMs inmunizados con b/h PIV3/RSV F2 o b/h PIV3/sol RSV F2 fueron protegidos completamente contra la estimulación del RSV A2 del Tipo Silvestre Para evaluar la protección inmune contra la infección de RSV, los primates vacunados fueron desafiados con una dosis alta de RSV A2 del tipo silvestre cuatro semanas después de la inmunización. Se midió la eficacia como una reducción en el título del virus con estimulación de RSV albergado, en el URT y LRT de los animales infectados. Los primates inmunizados con b/h PIV3/RSV F2 o b/h PIV3/sol RSV F2 fueron protegidos eficientemente contra el desafío de RSV A2 (Tabla 19) . Sólo un animal vacunado con b/h PIV3/RSV F2 albergó niveles bajos de virus del desafío (1.8 Logio .PFU/ml) por un día en la 315 nasofaringe y un día en la traguea (1.6 Logio PFU/ml) . los títulos máximos promedio para este grupo de tratamiento fueron 1.2 Log10 PFU/ml en el URT y 1.2 Logi0 PFU/ml en el LRT . Los animales a los cuales se administró b/h PIV3/sol RSV F2 también fueron protegidos completamente contra el desafío de t RSV (Tabla 19) . Un animal mostró niveles bajos de inclusión del virus del desafío (1.3 Logio PFU/ml) por tres días en la nasofaringe, pero este animal no albergó RSV en la traquea. Los títulos máximos promedio para los primates inmunizados con b/h PIV3/sol RSV F2 fueron 1.1 Log10 PFU/ml en la nasofaringe y 1.0 Log10 PFU/ml en la traquea. Niveles similares de protección inmune se observaron para los AG s infectados con wt RSV A2 (Tabla 19) . Este grupo mostró niveles de 1.2 Logxo PFU/ml y 1.0 Logio PFU/ml de virus de estimulación de RSV albergado en la nasofaringe y la traquea, respectivamente. Un animal que fue infectado con RSV en el Día 1 albergó niveles bajos de virus del desafío RSV (1.3 log10 PFU/ml) en la nasofaringe por un día. En contraste, los grupos de tratamiento que habían recibido medio de placebo mostraron niveles altos de replicación del virus de la estimulación RSV, 4.3 Log10 PFU/ml en la nasofaringe y 5.7 Log10 PFU/ml en la traquea y los primates albergaron el virus de la estimulación por ocho días tanto en URT y LRT. Los AGMs a los que se administró hMPV, un paramixovirus relacionado, en el día 1, no fueron protegidos 316 contra el desafío de RSV y albergaron el virus de la estimulación RSV por ocho días en el URT y LRT. Se observaron títulos máximos promedio de 4.0 Logi0 PFU/ml y 5.0 logio PFU/ml en la URT y LRT de los AGMs (Tabla 19) . Estos resultados muestran que la vacunación con cualquier el candidato de vacuna de RSV podría proteger eficientemente a primates no humanos contra la subsecuente infección de RSV del tipo silvestre . Los AGMs inmunizados con b/h PIV3/RSV F2 o b/h PIV3/sol RSV F2 Produjeron Anticuerpos de Suero Protectores contra RSV La eficacia de los candidatos de vacuna RSV guiados por b/h PIV3 se evaluaron adicionalmente por los niveles de los títulos de anticuerpos de neutralización de RSV y del suero RSV F IgG producidos cuatro semanas después de la inmunización. Los títulos de anticuerpos de neutralización de RSV se determinaron usando un ensayo de neutralización de placas al 50% (PR A) (Tabla 20) . 317 Tabla 20. La Vacunación de Monos Verdes Africanos con b/h PIV3/RSV F2 y b/h PIV3/sol RSV F2 produjo títulos de Anticuerpos Neutralizantes de RSV y de Suero IgG RSV F Es ecíficos *Todos los animales mostraron títulos de anticuerpos neutralizantes de RSV de <2.4 log2 y títulos de RSV F IgG de <3.6 log2 U/Ml en el Día 1), el suero se recolectó en el Día 1 (antes de la inmunización), el día 28 (antes del desafío de RSV), y el día 56 (4 semanas después del desafío de RSV). RSV A2 y RSV B 9320 se usaron como antígenos en el ensayo de neutralización.
Los AGMs infectados con RSV A2 del tipo silvestre mostraron titulos del anticuerpo neutralizante de RSV de 9 log2 cuatro semanas después de la infección cuando se usó un subgrupo A de RSV como antigeno en el PRNA. Se observó una reducción de cinco log2 en los titulos del anticuerpo neutralizante de RSV cuando se empleó el subgrupo B de RSV en el PRNA. Los candidatos de vacunas, b/h PIV3/RSV F2 y b/h PIV3/sol RSV F2, mostraron titulos de anticuerpo neutralizante de RSV de ~4 log2 en el Día 28 después de la dosis cuando se usaron el subgrupo a o el subgrupo B de RSV como antigeno. En contraste, el suero derivado de los animales a los que se les 1 administró el medio de placebo, no mostraron títulos del anticuerpo neutralizante de RSV ya sea para el subgrupo A o B. El suero obtenido en el Día 56, cuatro semanas después del desafío de RSV, también fue evaluado por la presencia de anticuerpos neutralizantes de RSV (Tabla 20) . El Día 56 el suero derivado de los AGMs infectados con RSV A2 del tipo silvestre mostró un incremento de 1.7 log2 en el título de anticuerpo neutralizante de RSV cuando se evaluó el subgrupo A, pero el título de anticuerpo neutralizante no se incrementó para el subgrupo B. No se observó una elevación significativa en el título de anticuerpo neutralizante para el suero del Día 56 que se origina de los primates inmunizados con b/h PIV3/RSV F2 o b/h PIV3/sol RSV F2 ya sea para los antígenos del subgrupo A o B . Las muestras de suero de los animales de placebo mostró un incremento de 7 log2 en el título de anticuerpo neutralizante de RSV en el Día 56 para el subgrupo A RSV, pero sólo un nivel bajo de anticuerpos neutralizantes para el subgrupo B. Para medir adicionalmente la respuesta inmune producida como respuesta por las vacunas guiadas por PIV3/RSV, se analizaron los niveles de IgG específicos de la proteína F de RSV antes de la dosis (Día 1) , cuatro semanas después de la dosis (Día 28) y cuatro semanas después de la dosis (Día 56) (Tabla 20) . El suero de los primates antes de la dosis para todos los tratamientos mostró valores menores de 3.6 log2 IgG U/ml indicando la ausencia de IgG específico de RSV F. En contraste, cuatro semanas después de la vacunación, los niveles de IgG específicos de RSV F para el suero derivado de b/h PIV3/RSV F2 o b/h PIV3/sol RSV F2 mostraron títulos de 8.2 y 8.0 log2, respectivamente. Niveles similares de títulos de 8.6 log2 RSV F IgG se observaron en el suero del Día 28 que se origina de los animales infectados con RSV A2. Sólo el suero del día 28 de los animales de placebo no contenía RSV F IgG. Los títulos de RSV F IgG para el suero del Día 56 de los animales inmunizados con RSV A2 , b/h PIV3/RSV F2 , y b/h PIV3/sol RSV F2 se elevaron en 0.5 a 1.4 log2 en el título desde los niveles observados para el suero del Día 28. en contraste, el suero del Día 56 obtenido de los animales de placebo desafiados con wt RSV A2 mostró una elevación de aproximadamente 7 log2 en el título de IgG específico de RSV F. Los primates no humanos vacunados con las vacunas de PIV3/RSV F claramente producen títulos de anticuerpos neutralizantes y de IgG específicos de RSV suficientes para proteger a los animales completamente contra el desafío de RSV. Las vacunas de b/h PIV3/RSV F quiméricas produjeron anticuerpos neutralizantes de RSV específicos tanto para el subgrupo A y B de RSV. El alto grado de conservación de las secuencias de aminoácidos entre las proteínas RSV F del subgrupo A y B resulta en epitopes neutralizantes compartidos. Los niveles de títulos de anticuerpos neutralizantes de RSV fueron 5 log2 más bajos para b/h PIV3/RSV F que para aquellos observados para el suero de primate obtenido de los AGMs infectados con RSV A2 del tipo silvestre. En las vacunas de b/h PIV3/RSV, los anticuerpos neutralizantes de RSV se produjeron solamente en respuesta a la proteína RSV F en lugar de a la partículas completa del virus RSV. Los niveles de anticuerpo de neutralización cruzada de RSV B para el suero obtenido de los AGMs infectados con RSV ?2 del tipo silvestre se redujeron en 5 log2 en comparación con los niveles de anticuerpos observados cuando se evaluó el antígeno RSV A2 homólogo. En contraste, no se observó una reducción en los títulos de anticuerpo neutralizante específico de RSV B producidos por b/h PIV3/RSV F2 y b/h PIV3/sol RSV F2. Estos resultados sugieren que los niveles de anticuerpo neutralizante del suero inducidos por la proteína RSV F fueron suficientes para proteger a los primates completamente contra el desafío del RSV. Aunque los títulos de anticuerpo neutralizante de RSV fueron más bajos para el suero de primate b/h PIV3/RSV F, la actividad de neutralización para las cepas de RSV de los subgrupos A y B fue idéntica. El suero de primate derivado de la infección de RSV del tipo silvestre mostró títulos neutralizantes de RSV altos para el antígeno de RSV A homólogo, y niveles más bajos para el antígeno RSV B los cuales fueron similares en título a aquellos observados para las vacunas dirigidas por PIV3/RSV F. Una elevación significativa (<6 log2) en los títulos del anticuerpo RSV F IgG se observó para los primates con RSV A2 o inmunizados con las vacunas de b/h PIV3/RSV F. No se observó un incremento adicional en los títulos del anticuerpo neutralizante de IgG o bien IgG para los animales vacunados con b/h PIV3/RSV f o b/h PIV3/sol RSV F en respuesta al desafío del RSV. Puesto que los títulos del anticuerpo neutralizante de RSV medidos para las vacunas de PIV3/RSV fueron más bajos que aquellos observados para el suero obtenido de los primates infectados con el wt RSV, las respuestas celulares inmunes pueden haber jugado un papel en la generación de tal protección efectiva contra el desafío de RSV. Se pueden hacer otros estudios para abordar la contribución del sistema inmune celular a la eficacia de las vacunas de PIV3/RSV atenuadas, en vida. Se espera que el vector b/h PIV3 sea atenuado en los humanos debido a que la mayoría del genoma viral se deriva de bPIV3 el que se demostró es seguro en los niños (véase Karron et al., Pedriatr. Infect. Dis. J. 15:650-654 (1996)). Skiadopoulos et al . , mostró claramente usando el modelo de atenuación del mono rhesus que el fenotipo de atenuación de bPIV3 era de naturaleza poligénica (véase Skiadopoulos et al., J. Virol. 77:1141-1148 (2003); Van Wyke Coelingh et al., J. Infect. Dis. 157:655-662(1988). En tanto que los genes bPIV3 F y HN pueden contener alguna atenuación especifica de determinantes genéticos, la contribución más grande al fenotipo de atenuación se atribuyó a las proteínas bPIV3 N y P. Sc midt et al. Evaluaron un número de antígenos que expresan b/h PIV3 de diferentes posiciones del genoma de PIV3 , por su replicación en el tracto respiratorio de los monos rhesus (véase Schmidt et al., J. Virol. 76:1089-199 (2002); Van Wyke Coelingh et al., J. Infect. Dis. 157:655-662 (1988)). Todas los b/h PIV3 quiméricos que expresan las proteínas de RSV se replicaron menos eficientemente que el b/h PIV3 en el URT, sólo se observaron títulos ligeramente mayores (-0.5 logio TICM50/ml) en LRT de los monos rhesus, en comparación con el vector b/h PIV3. Estos datos validan adicionalmente la expectación de que el b/h PIV3/RSV será atenuado en los humanos . Los infantes no poseen un sistema inmunológico bien desarrollado y por lo tanto pueden ser necesarias varias administraciones de la vacuna para desarrollar inmunidad duradera y protectora contra el RSV. Los programas de vacunación supuestos de 2,4 y 6 meses de edad pueden ser concebibles, idealmente para ser programados concurrentemente 323 con otras vacunaciones rutinarias en la infancia. El PIV3 es altamente inmunogénico y la primera vacunación de PIV/RSV induce altos niveles de anticuerpos de PIV3. Esto puede resultar en inmunidad vectorial de modo tal que las inmunizaciones subsecuentes con el PIV/RSV pueden no producir una elevación adicional en el título del anticuerpo. Un estudio reciente de Karron et al . , presenta datos mostrando que las dosis múltiples de PIV3 no resultarán en inmunidad vectorial siempre que los intervalos entre las administraciones se separen los suficiente (véase Karron et al., Pediatr. Infect . Dis. J. 22:394-405 (2003)). La administración de una sola dosis de la vacuna cp-45 PIV3, un virus que pueda pasar por el frío y sea sensible a la temperatura, restringe la magnitud de la replicación de la vacuna después de la segunda dosis. Sin embargo, la frecuencia de la infección con una segunda dosis de la vacuna estaba claramente influenciada por el intervalo de dosificación. Sólo el 24% de los infantes albergaron el virus cuando se administró una segunda dosis de la vacuna 1 mes después. En contraste, el 62% de los infantes albergaron el virus cuando se administró la segunda dosis 3 meses después de la primera dosis. Estos resultados sugieren que para minimizar los efectos inmunitarios del vector PIV3 , el intervalo entre las vacunaciones debería ser más de un mes pero menos de tres meses . La inmunización con P1V3/RSV de los AGMs resultó en la producción de suero de anticuerpos neutralizantes de hPIV3 y HAI. Para evaluar si las vacunas de PIV3/RSV podrían proteger contra la infección del RSV y hPIV3, el suero de primates se analizó en cuanto a la presencia de anticuerpos de suero de neutralización de hPIV3 y HAI (Tabla 21) .
Tabla 21. Los AGMs Inmunizados con b/h PIV3/RSV F2 o b/h PW3/sol RSV F2 *los títulos de anticuerpo neutralizante de hPIV3 < 2.0 log2 y títulos de PIV3 HAI z 4.0 estaban presentes en el Día 1 antes del suero. se usaron hPIV3/Wash/47885/57 y bPIV3/Kansas/l 5626/84 como los antígenos en el ensayo HAI.
El suero de los Dias 28 y 56 de los animales inmunizados con b/h PIV3/RSV F2 y b/h PIV3/sol RSV F2 mostraron títulos del anticuerpo de neutralización de hPIV3 de ~6 log2. Los títulos de anticuerpo HAI específico de PIV3 humano se 128 y 64 se observaron para b/h PIV3/RSV F2 y b/h PIV3/sol RSV F2, en el suero del Día 28 y el Día 56, respectivamente. Títulos menores de anticuerpo ??? de 11.3 y 16.0 se mostraron cuando se evaluó el antígeno bPIV3 usando el suero del Día 28. El suero del Día 56 mostró títulos de bPIV3 HAI aun más bajos. Puesto que las glicoproteínas superficiales, F y H , de los virus b/h PIV3/RSV se derivan del PIV humano, se observó un título de anticuerpo del suero HAI mayor para el antígeno homólogo (hPIV3) que para el antígeno heterologo bPIV3. Los anticuerpos de suero neutralizantes de hPIV3 o PIV3 ??? no se detectaron en el suero derivado de los receptores del placebo. Estos resultados sugieren que las vacunas de b/h PIV3/RSV también pueden ser eficaces para las infecciones de hPIV3. Este estudio determina si los títulos de anticuerpo neutralizante de hPIV3 y HAI se produjeron en respuesta a la vacunación. Los niveles de hPIV3 HAI y anticuerpos neutralizantes observados para el suero de primate obtenido de los animales inmunizados con ambos tipos de vacunas b/h PIV3/RSV F eran similares a los títulos mostrados por los monos rhesus vacunados con b/h PIV3. Los monos rhesus inmunizados con b/h PIV3 fueron protegidos completamente contra el desafío con el hPIV3 del tipo silvestre. Estos resultados sugieren que las vacunas RSV dirigidas por b/h PIV3 pueden ser efectivas como vacunas bivalentes para proteger a infantes tanto de las infecciones y enfermedades de RSV y hPIV3. 34. EJEMPLO 29: EVALUACIÓN DE LA EFICIENCIA E INMUNOGENICIDAD DEL b/h PIV3 QUE EXPRESA UNA PROTEÍNA ANTIGÉNICA DEL MPV EN LOS MONOS VERDES AFRICANOS Los candidatos potenciales de vacuna MPV, por ejemplo b/h PIV3 que expresa una proteína antigénica de MPV tal como MPV F, se evalúan para la eficiencia y la inmunogenicidad en un modelo de primate no humano, tales como los monos verdes africanos . Se mantuvieron las células Vero en Medio de Eagle Modificado (MEM) (JRH Biosciences) suplementado con L-glutamibna 2 mM, aminoácidos no esenciales (NEAA) , antibióticos, y FBS al 10%, b/h PIV3 que expresa una proteína antigénica de MPV, por ejempo, b/h PIV3/MPV F2, y un MPV tipo salvaje, por ejemplo hMPV/NL/l/OO, se propagan en las células Vero. Las células se infectaron con los virus a una multiplicidad de infección (MOI) de 0.1 PFU/célula. Tres a cinco días post-infección, las células y el sobrenadante se recolectaron y estabilizaron agregando lOx SPG (lOx SPG es 2.18 M de Sucrosa, 0.038 M de K¾P04, 0.072 M de K2HP04, 0.054 M de L-Glutamato) a una concentración final de Ix. Los materiales virales se almacenaron a -70°C, Los títulos de virus se determinaron mediante ensayos de placa en células Vero. Las placas se cantificaron después de teñido con inmunoperoxidasa usando PIV3 (VMRD) o antisuerio policlonal de cabra MPV (Biogénesis) . Los monos Verdes Africanos MPV- y PIV3-seronegativos (Cercopithecus aethiops) (3.5 a 6.5 años de edad, 2.6 a 5.8 kg) se identificaron usando un MPV F IgG ELISA (Immuno-Biological Laboratories) y un ensayo de inhibición de hemaglutinina (HAI) para pre-sueros de primates recolectados en el día 14 antes de la fecha de inicio del estudio. La MPV F IgG ELISA se realizó como sigue: se analizaron los sueros de primates de los días 1, 28 y 56 de los animales vacunados para la presencia de MPV F IgG utilizando un equipo ELISA (Immuno-Biological Laboratories, Hamburgo, Alemania) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. El antisuero secundario de mono (Rockland Inc.) se utilizó a una dilución de 1:1000. Las titulaciones del anticuerpo MPV F IgG se expresaron como log2 IgG U/ml. Los ensayos HAI se realizaron incubando diluciones dobles en serie del suero de primate a 25 °C durante 30 min. con 8 HA unidades/0.05 mi de cada bPIV3 ó hPIV3. Subsecuentemente, se agregaron células de glóbulos rojos de conejillos de indias a cada pozo, la incubación se continuó durante 90 min. , y cada pozo se observó para la hemaglutinación. Los títulos de HAI se expresaron como el recíproco de la dilución más alta del antisuero que inhibió la aglutinación de eritrocitos mediada por al virus. 328 Los primates se alojaron en jaulas micro-aisladoras individuales. Los monos se anestesiaron con una mezcla de ketamina-valium y se infectaron intranasal e intratraquealmente con un vector b/h PIV3 que expresa una proteina antigénica de MPV, por ejemplo, b/h PIV3/RSV F2, un PV de tipo natural, por ejemplo, hMPV/NL/l/00. El volumen de dosis nasal es de 0.5 mi por orificio nasal, y el volumen de dosis intratraqueal es de 1 mi. En el día 1, cada animal recibió una dosis de 2 mi que contenía 2-3 x 105 PFU de virus. El grupo de animales placebo recibe el mismo volumen de dosis de Opti-MEM. En el Día 28, todos los animales se estimularon intratraqueal e intranasalmente con 7 x 105 PFU de hMPV/NL/100 (1 mi en cada sitio) . Se recolectaron diariamente los empapadores nasofaríngeos (NP) durante 11 días y las muestras del lavado traqueal (TL) se recolectaron los Días 1, 3, 5, 7 y 9 después de la inmunización y después de la estimulación. Las muestras de sangre obtenidas de la vena femoral se recolectaron los Días 0, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49 y 56 para el análisis serológico. Los animales se monitorean para los cambios de temperatura corporal que indican una fiebre, signos de un resfriado, flujo nasal, estornudo, pérdida del apetito, y peso corporal. Se cuantificó el virus presente en los especímenes NP y TL del primate mediante ensayos de placa utilizando células V que se inmunotiñen con antisuero policlonal de cabra PV. Las titulaciones pico, medias, del virus representan la media de la titulación pico del virus, determinada para cada animal en cualquiera de los 11 días siguientes á la inmunización o estimulación. Se llevaron a cabo ensayos de neutralización por reducción de placas (PR As) para los sueros obtenidos en los días 1, 28, y 56 después de la dosis de los primates infectados con un vector b/h PIV3 que expresa una proteína antigénica de MPV, por ejemplo, b/h PIV3/ SV F2. Los sueros de primate se diluyen dos veces en serie, y se incuban con 100 PFU de hMPV/NL/lOO en la presencia de complemento de conejillo de indias durante una hora a 4°C. Las mezclas de virus-suero se transfieren a capas mono-moleculares de células Vero y se recubren con metilcelulosa al 1% en un medio EMEM/L-15 (JRH Biosciences; Lenexa, KS) que contiene 2% de FBS y 1% de antibióticos. Después de 6 días de incubación a 35 °C, las capas mono-moleculares se inmunotiñen utilizando antisuero policlonal de cabra MPV para la cuantificación. Las titulaciones de neutralización se expresan como el log2 recíproco de la dilución más alta de suero que inhibe el 50% de las placas virales. Se realizaron ensayos de micro-neutralización hPIV3 en células Vero. Las diluciones dobles en serie del suero de primate, que empezaban a 1:4, se incubaron a 37°C durante 60 min. con 100 TCID50 de hPIV3. Las mezclas del virus-suero se transfirieron a las capas mono-moleculares en placas de 96 pozos y se incubaron a 37°C durante seis días, después de lo cual todos los pozos se observaron para CPE. Las titulaciones de neutralización se expresaron como el reciproco de la dilución más alta de suero que inhibió el CPE. A las titulaciones del anticuerpo de neutralización de = 1:4 (la dilución más baja de suero probada) se asigna un título log2 recíproco de 2. Para estudiar la eficiencia de replicación de los candidatos a la vacuna MPV, el experimento se diseña como sigue. En el Día 1, monos verdes africanos, sero-negativos con MPV y PIV3 , cuatro animales por grupo, se inmunizaron intranasal e intratraquealmente con un candidato a la vacuna MPV, por ejemplo b/h PIV3 /RSV F2 , con una dosis de 2-3 x 105 PFU. Un grupo de control positivo se infectó con MPV de tipo natural, por ejemplo, hMPV/NL/100, y al grupo de control negativo se le administró un medio de placebo. En el Día 28, todos los animales se estimularon intranasal e intratraquealmente con 7 x 105 PFU de MPV de tipo natural, por ejemplo, hMPV/NL/100. Los animales se alojaron en jaulas micro-aisladoras durante la duración de este estudio. Se recolectaron diariamente los empapadores nasofaríngeos durante 11 días después de la inmunización y después de la estimulación, y las muestras del lavado traqueal se obtienen los días 2, 4, 6, 8, y 10 post-inmunización y postestimulación. Las muestras desuero para los análisis de anticuerpos se recolectaron cada siete días en toda la duración del estudio . Con el fin de evaluar la protección inmune de la infección MPV, los primates se estimularon con una dosis alta de MPV de tipo natural, por ejemplo, hMPV/NL/100, cuatro semanas post-inmunización. La eficacia se mide como una reducción en el título del virus de estimulación MPV de albergado en la URT y LRT de los animales infectados . La eficacia de los candidatos a la vacuna del MPV vectorado al b/h PIV3 , se evalúa además por los niveles de las titulaciones del anticuerpo de suero MPV F IgG y de neutralización MPV, producidas cuatro semanas postinmunización. Las titulaciones del anticuerpo neutralizante MPV se determinan utilizando un ensayo de neutralización con reducción de placas al 50% (PRNA) . Las respuestas inmunes producidas por los candidatos a la vacuna MPV también se analizan midiendo los niveles específicos de IgG de la proteína MPV F en la pre-dosis (Día 1) , cuatro semanas postdosis (Día 28) , y cuatro semanas post-estimulación (Día 56) . Con el fin de evaluar sí las vacunas MPV vectoradas a b/h PIV3 , pueden proteger de la infección con MPV y hPIV3, los sueros de primates también se analizan para la presencia de anticuerpos del suero HAI y de neutralización hPIV3. 35. EJEMPLO 30: ENSAYO DE MICRO-NEUTRALIZACIÓN UTILIZANDO CONSTRUCTOS DE b/h PIV3 QUE CONTIENEN EL GEN GFP ó eGFP Cuando los virus se inoculan en un animal, se produce un arreglo de anticuerpos contra el virus. Algunos de estos anticuerpos pueden enlazar partículas del virus y neutralizar la infectividad de los virus. Se utiliza un ensayo de micro-neutralización para analizar la infectividad restante de los virus después de que los virus se incubaron con diluciones de anticuerpos que contienen suero. Los ensayos de micro-neutralización se realizan como sigue: los sueros se diluyen con Medio Opti-MEM (lx) . El suero y el medio se mezclan suavemente mediante inversión, y luego colocándolos en hielo. Cada dilución de los sueros, se incubo con un virus de interés, en donde el genoma del virus se ha manipulado para que contenga uno o más de los genes GFP ó eGFP (Ver la Sección 9, Ejemplo 4) . Las células se lavaron con solución salina amortiguada con fosfato ("PBS"). La mezcla de virus/sueros se agrega a células y se incuba durante una hora a 35 °C. La totalidad del medio, la cual contiene el virus, se remueve, y las células se lavan con PBS . Se agrega medio Opti-MEM a las células y los cultivos celulares se incuban durante tres días. La infectividad remanente de los virus se mide cuantificando los focos verdes de GFP o eGFP en las imágenes capturadas con el microscopio de fluorescencia. También se puede realizar un ensayo de reducción de placas utilizando un virus correspondiente sin GFP ó eGFP, por ejemplo, RSV de tipo natural, para comparar la sensibilidad del ensayo de micro-neutralización. 36. EJEMPLO 31: DESARROLLO DE UN CULTIVO CELULAR ROBUSTO Y DE ALTO RENDIMIENTO PARA LA ELABORACIÓN DE LOS CANDIDATOS A LA VACUNA DEL VIRUS Este ejemplo describe un proceso de cultivo celular robusto y de alto rendimiento. Este proceso se puede utilizar, por ejemplo, para la fabricación de las vacunas de virus descritas en la solicitud. Primero se identificaron los parámetros críticos del proceso, y el proceso de producción se optimizó en experimentos de pequeña escala. A continuación, se realizaron numerosos estudios utilizando las condiciones optimizadas de operación para determinarla escalabilidad, robustez, y reproducibilidad del sistema de producción. El proceso descrito en el Ejemplo incrementó los rendimientos del virus infeccioso por sobre 1 logio TCIDS0/mL. MATERIALES Y MÉTODOS: El virus, un virus de PIV3 bovina/humana que contiene un constructo de inserto del gen RSV F como se muestra en la Figura 4, mencionado en la presente como "b/h PIV3/RSV F2") , se propagó utilizando células Vero (ATCC) que se han adaptado para crecer en un medio libre de suero (SFM) compuesto de OPTI PRO SFM (Gibco) suplementado con L-glutamina 4mM. Las células Vero dependientes del anclaje se mantuvieron rutinariamente sembrando 5 x 104 células/ml en el SMF, realimentado los cultivos 3 días post-siembra, y pasando los matraces 5 días post-siembra . Las titulaciones del virus se determinaron utilizando un ensayo de la dosis infecciosa del cultivo de tejido (TCID50) al 50% y se cuantificaron en 10gioTCID50/mL. RESULTADOS Optimización del Proceso Se realizaron estudios de optimización del proceso a pequeña escala en matraces T-75 sembrados con células Vero en SFM a 1.75 x 106 células/matraz. Todos los cultivos pre-infección se incubaron a 37 + 1°C, 5 + C02 al 1% y se infectaron ya sea 3 ó 5 días post-siembra. Para los cultivos infectados 5 días post-siembra, se realizó un intercambio SFM en el tercer día post-siembra. En el momento de la infección, el medio gastado se reemplazó por SFM que contenía el virus b/h PIV3/RSV F2. Se toman muestras de los cultivos al menos una vez al día, y se evalúa el virus infeccioso por TCID50. Las barras de error en las Figuras representan la desviación estándar obtenida de los cultivos duplicados. Efectos de Multiplicidad de Infección (MOI) Se infectaron células Vero con el virus b/h PIV3/RSV F2 a una MOI de 0.1, 0.01, 0.001, 0.0001, y 0.00001 en el quinto día post-siembra. Los resultados muestran que las titulaciones más bajas del virus se mantuvieron de MOI 0.0001 y 0.00001, mientras que se observaron titulaciones comparables del virus de MOI 0.1, 0.01, y 0.001 (Figura 18). El experimento se repitió y se observaron las mismas tendencias. Efectos del Punto de Infección (POI) y Temperatura Post- Infección Se infectaron células Vero a 2 diferentes densidades celulares ya sea 33 ± 1°C ó 37 ± 1°C post-infección. Aunque las titulaciones del virus infeccioso no se mejoraron infectando a densidades celulares superiores, las mismas se elevaron por sobre 1 loglO TCID50/mL utilizando la temperatura más baja de incubación post-infección (Figura 19) . El experimento se repitió y se observaron las mismas tendencias. Efectos del Suplemento del Medio de Pre-Infección Suplementando el medio de pre-infección con suero, las titulaciones del virus infeccioso se incrementaron además por sobre 1 logio TCID5o/mL (Figura 20) . Perfil de Expresión de Proteínas Virales de PIV3 H , PIV3 F , y RSV F La expresión de las tres proteínas virales de RSV F2 -PIV3 HN, PIV3 F, y RSV F - se monitoreó en el transcurso de la infección en los cultivos celulares mediante inmunofluorescencia . Se sembraron células a 8 x 103 células/pozo en SMF en múltiples placas de 96 pozos. Cuatro días post-siembra, las placas se enjuagaron una vez con DPBS, se infectaron con el virus b/h PIV3/RSV F2 a MOI 0.001 y se incubaron a 33 ± 1°C, 5 ± C02 al 1%. En múltiples intervalos de tiempo post-infección, se fijó una placa de 96 pozos con paraformaldehído (4%) antes del inmunoteñido . Las Figuras 21, 22, y 23 indican que todas las tres proteínas virales se expresaron por los cultivos de células Vero en SF . Las imágenes en estas figuras se capturaron a una amplificación 5X. Escalamiento del Proceso El experimento de suplemento del medio se repitió sembrando las células Vero en Frascos Rotativos de 1700 cm2 (Corning) a 1.75 x 107 células/f asco. Las titulaciones del virus infecciosos fueron notablemente superiores en los cultivos suplementados con suero pre-infección (Figura 24) . El experimento se repitió y se observaron las mismas tendencias . SUMARIO Identificando los parámetros críticos del proceso y optimizando el proceso de infección en experimentos a pequeña escala, se incrementaron las titulaciones del virus infeccioso RSV F2 por sobre 1 logio TCID50/mL. El proceso de producción 337 del virus b/h PIV3/RSV F2 se perfeccionó exitosamente en experimentos con frascos rotativos con resultados consistentes y reproducibles . 37. EJEMPLO 32: RECUPERACIÓN UNICAMENTE CON PLÁSMIDOS DE PIV3 EN CÉLULAS VERO LIBRES DE SUERO MEDIANTE ELECTROPORACIÓN El proceso demostrado en este ejemplo permite la recuperación de la PIV3 recombinante utilizando únicamente plásmidos, en la ausencia de virus auxiliares. La recuperación de PIV3 se llevó a cabo utilizando células Vero SF, las cuales se propagan en la ausencia de productos derivados de animales y humanos. Este proceso permite la recuperación de PIV3 recombinante con una eficiencia similar a los métodos previos utilizando virus auxiliares (vacuna recombinante o virus de viruela aviar que expresan la polimerasa T7) . Debido a que no son necesarios virus auxiliares en el proceso de recuperación, los virus de vacuna están libres de agentes de contaminación, simplificando la producción de vacunas corriente abajo (en dirección 3'). Las células utilizadas para la recuperación del virus de vacuna se hicieron crecer en un medio que no contiene productos derivados de animales o humanos. Esto elimina las preocupaciones acerca de las encefalopatías espongiformes transmisibles (por ejemplo BSE) , para productos y usuarios. Este método hace posible la generación de una simiente de vacuna recombinante que está completamente libre de 38 componentes derivados de animales o humanos. Esta simiente también esta libre de virus auxiliares. Se describen sistemas de expresión a base de plásmidos para el rescate de virus de ADNc, por ejemplo, en RA Lerch. et al., Wyeth Vaccines, Pearl River NY, USA (Resumen 206 de la XII Conferencia Internacional en Virus de Hebra Negativa, 14-19 de Junio de 2003, Pisa Italia) y G. Neumann et al., J. Virol., 76, pp. 406-410. Métodos y Resultados Se introdujeron plásmidos de bPIV3 N (4 µg; marcador: resistencia a la kanamicina) , plásmidos bPIV3 P (4 /ng; marcador resistencia a la kanamicina) , plásmidos bPIV3 L (2 g; marcador resistencia a la kanamicina) , ADNc que codifica el ADNc antigenómico PIV3 (5 /¿g; marcador resistencia a la kanamicina) y polimerasa T7 RNA que codifica pADT7 (N) DpT7 (5 xg; marcador: blasticidina) en células Vero SF utilizando electroporación en medio libre de suero. bPIV3 N, bPIV3 P y bPIV3 están en los vectores pCITE bajo el control del promotor T7. El pADT7(N)ApT7 está en un pcDNA6/V5-His C modificado en el cual se eliminó el promotor T7 que conduce solamente al promotor CMV. La polimerasa T7 se expresa a partir del promotor CMV. El bPIV3 antigenómico es un pUC19 y la trascripción del antigenoma está bajo el promotor T7. 339 El pulso para la electroporación fue de 220V y 950 microfaradios . Se utilizaron 5.5 X 10e SF células Vero por electroporación. Se permitió recuperar las células electroporadas a 33 °C en la presencia de OptiC (una formulación diseñada de GIBCO Invitrogen Corporation) durante toda la noche . Las células recuperadas se lavaron dos veces con 1 mL de PBS que contenía calcio y magnesio y se recubren con 2 mL de OptiC. Las células electroporadas se incuban además a 33 °C durante 5-7 días. Al final del periodo de incubación, las células se raspan en el medio y el lisato celular total se analizó para la presencia de PIV3. Se confirmó la recuperación de virus mediante el inmunoteñido de ensayos de placas utilizando anticuerpos policlonales específicos de RSV ó hMPV. Las titulaciones recuperadas de células electroporadas se muestran en la Tabla 22 y Tabla 23. La Tabla 22 muestra las titulaciones de diferentes virus recuperados mediante electroporación en células Vero SF. Los virus son diferentes PIV3 bovinos, quiméricos . Los plásmidos con los ADNcs que codifican los diferentes PIV3 bovinos, quiméricos, y PIV3 con el gen F del RSV humano en la posición 2 (MEDI 534) , el marcador en el plásmido es kanamicina (la posición 2 es la posición entre el primer y segundo marco de lectura abierto del genoma viral natural, o alternativamente, la posición del segundo gen del genoma viral a ser trascrito) ; PIV3 bovino con una forma soluble del gen F que carece de transmembrana y dominios luminares del RSV humano en la posición 2 (MEDI 535) , el marcador en el plásmido es kanamicina; PIV3 bovino con el gen F del metaneumovirus humano en la posición 2 (MEDI 536) , el marcador en el plásmido es kanamicina; PIV3 bovino con el gen F de RSV humano en la posición 2 (MED 534) , el marcador en el plásmido es ampicilina; el PIV3 con el gen F del metaneumovirus humano en la posición 2 (MED 536) , el marcador en el plásmido es ampicilina. La recuperación del virus mediante electroporación bajo diferentes condiciones se muestra en 23 para el virus quimérico MEDI 534. Las células Vero se hacen crecer en la presencia de suero para titulación. Los MEDI 534 se trataron con electroporación utilizando (i) Opti, (ii) Opti C que contiene gentamicina IX, (iii) Opti MEM (opti C que contiene transferencia humana) para probar la eficiencia de la recuperación del virus utilizando diferentes medios. Las electroporaciones se hicieron bajo condiciones idénticas utilizando las mismas células Vero SF. Los resultados mostraron que la gentamicina IX es completamente inhibidora de la recuperación del virus y la transferrina humana no juega un papel en la eficiencia de la recuperación del virus. La presencia del ARN bacterial también es inhibidora de la 341 recuperación del virus. En las electroporaciones hechas con plásmidos preparados sin tratamiento con RNasa A, no se recuperó el virus . PO y Pl en la Tabla 22 y Tabla 23 se refiere a los virus. PO indica los virus obtenidos de las células electroporadas . Pl indica los virus que se amplificaron una vez en las células vero se hicieron crecer en la presencia de suero de bovino fetal . Las titulaciones similares se obtienen si los virus PO se amplificaban en las células vero SF. Tabla 22. Virus (Medi 543-537) recuperados mediante electroporación en células Vero libres de suero (P17) y se pasan en células Vero que contienen suero. Las células Vero SF utilizadas en el PO y Pl son pasos de virus después de la electroporación y después de una amplificación en las células Vero, respectivamente.
Virus Vectorados* PO Pl loglO(pfu/ml) bh RSVF2 kan (MEDI 534) 3.53 8.40 bh RSVF2 sol kan (MEDI 535) 3.20 8.20 bh hMPVF2 kan (MEDI 536) >4.00 8.18 bh RSVF2 amp (MEDI 534) <1.00 8.60 bh hMP 2 amp (MEDI 536) 4.28 8.34 342 Tabla 23. Recuperación de virus mediante electroporación bajo diferentes condiciones 1 Virus recuperados en células Vero libres de suero (P8) y titulados células Vero cultivadas en la presencia de suero 2 Paso del virus obtenido de las células electroporadas. 3 La electroporación se realizó con plásmidos preparados sin tratamiento con RNasa ?. La presente invención no será limitada en su alcance por las modalidades específicas descritas que se proponen como simples ilustraciones de aspectos individuales de la invención, y cualquier constructo, virus o enzima que sea funcionalmente equivalente están dentro del alcance de esta invención. De hecho, varias modificaciones de la invención además de aquéllas mostradas y descritas en la presente, serán evidentes para aquellos expertos en la técnica a partir de la descripción anterior y dibujos acompañantes . Se pretende que tales modificaciones caigan dentro del alcance de las reivindicaciones anexadas. Se citan diversas publicaciones en la presente, las descripciones de las cuales se incorporan como referencia en su totalidad.
Tabla 24 LEYENDAS PARA EL LISTADO DE SECUENCIAS SEQ ID NO: 1 Proteína (M) de matriz del aislado 00-1 del metaneumovirus humano y los genes de la proteína (F) de fusión. SEQ ID NO: 2 Gen de la proteína de fusión del neumovirus aviar, cds parcial SEQ ID NO: 3 ARNm de la proteína de fusión del aislado Ib de neumovirus aviar, cds completo. SEQ ID NO: 4 Gen del virus de rinotraqueitis del pavo para la proteína de fusión (subunidades Fl y F2) , cds completo. SEQ ID NO: 5 El gen de la proteína (M) de matriz del neumovirus aviar, cds parcial y el gen de la glicoproteina (F) de fusión del neumovirus aviar, cds completo SEQ ID NO: 6 La proteína F del paramixovirus hRSV B SEQ ID NO: 7 La proteína F del paramixovirus hRSV A2 SEQ ID NO: 8 Metaneumovirus humano 01-71 (Secuencia parcial) SEQ ID NO: 9 La proteína (M) de la matriz del aislado 00-1 de metaneumovirus humano y los genes de la proteína (F) de fusión 4 El gen de la protelna de fusión del neumovirus aviar, cds parcial ARNm de la proteína de fusión del aislado Ib de neumovirus aviar, cds completo El gen del virus de rinotraqueitis de pavo pera la proteína de fusión (subunidades Fl y F2) , cds completo El gen de la glicoproteina (F) de fusión del neumovirus aviar, cds completo ARNm de la proteína (G) de unión del virus de rinotraqueitis del pavo (cepa CVL14/1) , cds completo La proteína (G) de unión del virus de rinotraqueitis del pavo (cepa 6574) , cds completo ARNm de la proteína (G) de unión del virus de rinotraqueitis del pavo (cepa CVL14/1) , cds completo La proteína (G) de unión del virus de rinotraqueitis del pavo (cepa 6574) , cds completo Secuencia de la proteína F para NL/l/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 19 Secuencia de la proteína F para NL/17/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 20 Secuencia de la proteína F para L/l/99 aislado de HMPV SEQ ID NO: 21 Secuencia de la proteína F para NL/l/94 aislado de HMPV SEQ ID NO: 22 Secuencia del gen F para NL/l/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 23 Secuencia del gen F para NL/17/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 24 Secuencia del gen F para NL/l/99 aislado de HMPV SEQ ID NO: 25 Secuencia del gen F para NL/l/94 aislado de HMPV SEQ ID NO: 26 Secuencia de la proteína G para NL/l/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 27 Secuencia de la proteína G para NL/17/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 28 Secuencia de la proteína G para NL/l/99 aislado de HMPV SEQ ID NO: 29 Secuencia de la proteína G para NL/l/94 aislado de HMPV SEQ ID NO: 30 Secuencia del gen G para NL/l/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 31 Secuencia del gen G para NL/17/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 32 Secuencia del gen G para NL/l/99 aislado de HMPV SEQ ID NO: 33 Secuencia del gen G para NL/l/94 aislado de HMPV SEQ ID NO: 34 Secuencia de la proteína L para NL/l/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 35 Secuencia de la proteína L para NL/17/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 36 Secuencia de la proteína L para NL/l/99 aislado de HMPV SEQ ID NO: 37 Secuencia de la proteína L para NL/l/94 aislado de HMPV SEQ ID NO: 38 Secuencia del gen L para NL/l/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 39 Secuencia del gen L para NL/17/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 40 Secuencia del gen L para NL/l/99 aislado de HMPV SEQ ID NO: 41 Secuencia del gen L para NL/l/94 aislado de HMPV SEQ ID NO: 42 Secuencia de la proteína M2-1 para NL/l/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 43 Secuencia de la proteina M2-1 para NL/17/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 44 Secuencia de la proteína M2-1 para NL/l/99 aislado de HMPV SEQ ID NO: 45 Secuencia de la proteína M2-1 para NL/l/94 aislado de HMPV SEQ ID NO: 46 Secuencia del gen M2-1 para NL/l/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 47 Secuencia del gen M2-1 para NL/17/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 48 Secuencia del gen M2-1 para NL/l/99 aislado de HMPV SEQ ID NO: 49 Secuencia del gen M2-1 para NL/l/94 aislado de HMPV SEQ ID NO: 50 Secuencia de la proteína M2-2 para NL/l/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 51 Secuencia de la proteína M2-2 para NL/17/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 52 Secuencia de la proteína M2-2 para NL/l/99 aislado de HMPV SEQ ID NO: 53 Secuencia de la proteína M2-2 para NL/l/94 aislado de HMPV SEQ ID NO: 54 Secuencia del gen M2-2 para NL/l/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 55 Secuencia del gen M2-2 para NL/17/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 56 Secuencia del gen M2-2 para NL/l/99 aislado de HMPV SEQ ID NO: 57 Secuencia del gen M2-2 para NL/1/94 aislado de HMPV SEQ ID NO: 58 Secuencia del gen M2 para NL/1/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 59 Secuencia del gen M2 para NL/17/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 60 Secuencia del gen M2 para NL/l/99 aislado de HMPV SEQ ID NO: 61 Secuencia del gen M2 para NL/1/94 aislado de HMPV SEQ ID NO: 62 Secuencia de la proteína M para NL/1/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 63 Secuencia de la proteina M para NL/17/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 64 Secuencia de la proteína M para NL/l/99 aislado de HMPV SEQ ID NO: 65 Secuencia de la proteína M para NL/l/94 aislado de HMPV SEQ ID NO: 66 Secuencia del gen M para NL/l/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 67 Secuencia del gen para NL/17/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 68 Secuencia del gen M para NL/l/99 aislado de HMPV SEQ ID NO: 69 Secuencia del gen M para NL/l/94 aislado de HMPV SEQ ID NO: 70 Secuencia de la proteina N para NL/l/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 71 Secuencia de la proteína N para NL/17/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 72 Secuencia de la proteína N para NL/l/99 aislado de HMPV SEQ ID NO: 73 Secuencia de la proteína N para NL/l/94 aislado de HMPV SEQ ID NO: 74 Secuencia del gen N para NL/l/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 75 Secuencia del gen N para NL/17/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 76 Secuencia del gen N para NL/l/99 aislado de HMPV SEQ ID NO: 77 Secuencia del gen N para NL/l/94 aislado de HMPV SEQ ID NO: 78 Secuencia de la proteína P para NL/l/00 aislado de HMPV SEQ ID NO; 79 Secuencia de la proteína P para NL/17/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 80 Secuencia de la proteína P para NL/l/99 aislado de HMPV SEQ ID NO: 81 Secuencia de la proteína P para NL/l/94 aislado de HMPV SEQ ID NO: 82 Secuencia del gen P para NL/1/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 83 Secuencia del gen P para NL/17/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 84 Secuencia del gen P para NL/l/99 aislado de HMPV SEQ ID NO: 85 Secuencia del gen P para NL/l/94 aislado de HMPV SEQ ID NO: 86 Secuencia de la proteína SH para NL/1/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 87 Secuencia de la proteína SH para NL/17/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 88 Secuencia de la proteína SH para NL/l/99 aislado de HMPV SEQ ID NO: 89 Secuencia de la proteína SH para NL/l/94 aislado de HMPV SEQ ID NO: 90 Secuencia del gen SH para NL/1/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 91 Secuencia del gen SH para NL/17/00 aislado de HMPV SEQ ID NO: 92 Secuencia del gen SH para NL/l/99 aislado de HMPV SEQ ID NO: 93 Secuencia del gen SH para NL/l/94 aislado de HMPV SEQ ID NO: 94 Secuencia de ADNc para NL/l/99 (99-1) aislado del HMPV (Metaneumovirus Humano) SEQ ID NO: 95 Secuencia de ADNc para NL/l/00 (00-1) aislado del HMPV SEQ ID NO: 96 Secuencia de ADNc para NL/17/00 aislado del HMPV SEQ ID NO: 97 Secuencia de ADNc para NL/l/94 aislado del HMPV SEQ ID NO: 98 Secuencia de codificación del gen G para NL/1/00 (Al) aislado SEQ ID NO: 99 Secuencia de codificación del gen G para BR/2/01 (Al) aislado SEQ ID NO: 100 Secuencia de codificación del gen G para FL/4/01 (Al) aislado SEQ ID NO: 101 Secuencia de codificación del gen G para FL/3/01 (Al) aislado SEQ ID NO: 102 Secuencia de codificación del gen G para PL/8/01 (Al) aislado SEQ ID NO: 103 Secuencia de codificación del gen G para FL/10/01 (Al) aislado SEQ ID NO: 104 Secuencia de codificación del gen G para NL/10/01 (Al) aislado SEQ ID NO: 105 Secuencia de codificación del gen G para NL/2/02 (Al) aislado SEQ ID NO: 106 Secuencia de codificación del gen G para NL/17/00 (A2) aislado SEQ ID NO: 107 Secuencia de codificación del gen G para NL/1/81 (A2) aislado SEQ ID NO: 108 Secuencia de codificación del gen G para NL/1/93 (A2) aislado SEQ ID NO: 109 Secuencia de codificación del gen G para NL/2/93 (A2) aislado SEQ ID NO: 110 Secuencia de codificación del gen G para NL/3/93 (A2) aislado SEQ ID NO: 111 Secuencia de codificación del gen G para NL/1/95 (A2) aislado SEQ ID NO: 112 Secuencia de codificación del gen G para NL/2/96 (A2) aislado SEQ ID NO: 113 Secuencia de codificación del gen G para NL/3/96 (A2) aislado SEQ ID NO: 114 Secuencia de codificación del gen G para NL/22/01 (A2) aislado SEQ ID NO: 115 Secuencia de codificación del gen G para NL/24/01 (A2) aislado SEQ ID NO: 116 Secuencia de codificación del gen G para NL/23/01 (?2) aislado SEQ ID NO: 117 Secuencia de codificación del gen G para NL/29/01 (A2) aislado SEQ ID NO: 118 Secuencia de codificación del gen G para NL/3/02 (A2) aislado SEQ ID NO: 119 Secuencia de codificación del gen G para L/1/99 (Bl) aislado SEQ ID NO: 120 Secuencia de codificación del gen G para NL/11/00 (Bl) aislado SEQ ID NO: 121 Secuencia de codificación del gen G para NL/12/00 (Bl) aislado SEQ ID NO: 122 Secuencia de codificación del gen G para NL/5/01 (Bl) aislado SEQ ID NO: 123 Secuencia de codificación del gen G para NL/9/01 (Bl) aislado SEQ ID NO: 124 Secuencia de codificación del gen G para NL/21/01 (Bl) aislado SEQ ID NO: 125 Secuencia de codificación del gen G para NL/1/94 (B2) aislado 354 SEQ ID NO: 126 Secuencia de codificación del gen G para NL/1/82 (B2) aislado SEQ ID NO: 127 Secuencia de codificación del gen G para L/1/96 (B2) aislado SEQ ID NO: 128 Secuencia de codificación del gen G para NL/6/97 (B2) aislado SEQ ID NO: 129 Secuencia de codificación del gen G para NL/9/00 (B2) aislado SEQ ID NO: 130 Secuencia de codificación del gen G para NL/3/01 (B2) aislado SEQ ID NO: 131 Secuencia de codificación del gen G para NL/4/01 (B2) aislado SEQ ID NO: 132 Secuencia de codificación del gen G para Ü /5/01 (B2) aislado SEQ ID NO: 133 Secuencia de la proteína G para NL/1/00 (Al) aislado SEQ ID NO: 134 Secuencia de la proteína G para BR/2/01 (Al) aislado SEQ ID NO: 135 Secuencia de la proteína G para PL/4/01 (Al) aislado SEQ ID NO: 136 Secuencia de la proteína G para FL/3/01 (Al) aislado SEQ ID NO: 137 Secuencia de la proteína G para FL/8/01 (Al) aislado 355 SEQ ID NO: 138 Secuencia de la proteína G para FL/lO/01 (Al) aislado SEQ ID NO: 139 Secuencia de la proteína G para NL/10/01 (Al) aislado SEQ ID NO: 140 Secuencia de la proteína G para NL/2/02 (Al) aislado SEQ ID NO: 141 Secuencia de la proteína G para NL/17/00 (A2) aislado SEQ ID NO: 142 Secuencia de la proteína G para NL/l/81 (A2) aislado SEQ ID NO: 143 Secuencia de la proteína G para NL/l/93 (A2) aislado SEQ ID NO: 144 Secuencia de la proteína G para NL/2/93 (A2) aislado SEQ ID NO: 145 Secuencia de la proteína G para NL/3/93 (A2) aislado SEQ ID NO: 146 Secuencia de la proteína G para NL/l/95 (A2) aislado SEQ ID NO: 147 Secuencia de la proteína G para NL/2/96 (A2) aislado SEQ ID NO: 148 Secuencia de la proteína G para NL/3/96 (A2) aislado SEQ ID NO: 149 Secuencia de la proteína G para NL/22 (A2) aislado 35 SEQ ID NO: 150 Secuencia de la proteína G para NL/24/01 (A2) aislado SEQ ID NO: 151 Secuencia de la proteína G para NL/23/01 (A2) aislado SEQ ID NO: 152 Secuencia de la proteína G para NL/29/01 (A2) aislado SEQ ID NO: 153 Secuencia de la proteína G para NL/3/02 (A2) aislado SEQ ID NO: 154 Secuencia de la proteína G para NL/l/99 (Bl) aislado SEQ ID NO: 155 Secuencia de la proteína G para NL/ll/00 (Bl) aislado SEQ ID NO: 156 Secuencia de la proteína G para NL/12 (Bl) aislado SEQ ID NO: 157 Secuencia de la proteína para NL/5/01 (Bl) aislado SEQ ID NO: 158 Secuencia de la proteína para NL/9/01 (Bl) aislado SEQ ID NO: 159 Secuencia de la proteína G para NL/21/01 (Bl) aislado SEQ ID NO: 160 Secuencia de la proteína G para NL/l/94 (B2) aislado SEQ ID NO: 161 Secuencia de la proteína G para NL/l/82 (B2) aislado SEQ ID NO: 162 Secuencia de la proteina G para NL/l/96 (B2) aislado SEQ ID NO: 163 Secuencia de la proteina G para NL/6/97 (B2) aislado SEQ ID NO: 164 Secuencia de la proteína G para NL/9/00 (B2) aislado SEQ ID NO: 165 Secuencia de la proteína G para NL/3/01 (B2) aislado SEQ ID NO: 166 Secuencia de la proteína G para NL/4/01 (B2) aislado SEQ ID NO: 167 Secuencia de la proteína G para NL/5/01 (B2) aislado SEQ ID NO: 168 Secuencia de codificación del gen F para NL/1/00 aislado SEQ ID NO: 169 Secuencia de codificación del gen F para UK/1/00 aislado SEQ ID NO: 170 Secuencia de codificación del gen F para NL/2/00 aislado SEQ ID NO: 171 Secuencia de codificación del gen F para NL/13/00 aislado SEQ ID NO: 172 Secuencia de codificación del gen F para NL/14/00 aislado SEQ ID NO: 173 Secuencia de codificación del gen F para FL/3/01 aislado SEQ ID MO: 174 Secuencia de codificación del gen F para FL/4/01 aislado SEQ ID NO: 175 Secuencia de codificación del gen F para FL/8/01 aislado SEQ ID NO: 176 Secuencia de codificación del gen F para UK/1/01 aislado SEQ ID NO: 177 Secuencia de codificación del gen F para UK/7/01 aislado SEQ ID NO: 178 Secuencia de codificación del gen F para FL/10/01 aislado SEQ ID NO: 179 Secuencia de codificación del gen F para NL/6/01 aislado SEQ ID NO: 180 Secuencia de codificación del gen F para NL/8/01 aislado SEQ ID NO: 181 Secuencia de codificación del gen F para NL/10/01 aislado SEQ ID NO: 182 Secuencia de codificación del gen F para NL/14/01 aislado SEQ ID .NO: 183 Secuencia de codificación del gen F para NL/20/01 aislado SEQ ID NO: 184 Secuencia de codificación del gen F para NL/25/01 aislado SEQ ID NO: 185 Secuencia de codificación del gen F para NL/26/01 aislado SEQ ID NO: 186 Secuencia de codificación del gen F para NL/28/01 aislado SEQ ID NO: 187 Secuencia de codificación del gen F para NL/30/01 aislado SEQ ID NO Secuencia de codificación del gen F para BR/2/01 aislado SEQ ID NO: 189 Secuencia de codificación del gen F para BR/3/01 aislado SEQ ID NO: 190 Secuencia de codificación del gen F para NL/2/02 aislado SEQ ID NO: 191 Secuencia de codificación del gen F para NL/4/02 aislado SEQ ID NO: 192 Secuencia de codificación del gen F para NL/5/02 aislado SEQ ID NO: 193 Secuencia de codificación del gen F para NL/6/02 aislado SEQ ID NO: 194 Secuencia de codificación del gen F para NL/7/02 aislado SEQ ID NO: 195 Secuencia de codificación del gen F para NL/9/02 aislado SEQ ID NO: 196 Secuencia de codificación del gen F para FL/1/02 aislado SEQ ID NO: 197 Secuencia de codificación del gen F para NL/1/81 aislado SEQ ID NO: 198 Secuencia de codificación del gen F para NL/1/93 aislado SEQ ID NO: 199 Secuencia de codificación del gen F para NL/2/93 aislado SEQ ID NO: 200 Secuencia de codificación del gen F para NL/4/93 aislado SEQ ID NO: 201 Secuencia de codificación del gen F para NL/1/95 aislado SEQ ID NO: 202 Secuencia de codificación del gen F para NL/2/96 aislado SEQ ID NO: 203 Secuencia de codificación del gen F para NL/3/96 aislado SEQ ID NO: 204 Secuencia de codificación del gen F para NL/1/98 aislado SEQ ID NO: 205 Secuencia de codificación del gen F para NL/17/00 aislado SEQ ID NO: 206 Secuencia de codificación del gen F para NL/22/01 aislado SEQ ID NO: 207 Secuencia de codificación del gen F para NL/29/01 aislado SEQ ID NO: 208 Secuencia de codificación del gen F para NL/23/01 aislado SEQ ID NO: 209 Secuencia de codificación del gen F para NL/17/01 aislado SEQ ID NO: 210 Secuencia de codificación del gen F para NL/24/01 aislado SEQ ID NO: 211 Secuencia de codificación del gen F para NL/3/02 aislado SEQ ID NO: 212 Secuencia de codificación del gen F para NL/3/98 aislado SEQ ID NO: 213 Secuencia de codificación del gen F para NL/1/99 aislado SEQ ID NO: 214 Secuencia de codificación del gen F para NL/2/99 aislado SEQ ID NO: 215 Secuencia de codificación del gen F para NL/3/99 aislado SEQ ID NO: 216 Secuencia de codificación del gen F para NL/11/00 aislado SEQ ID NO: 217 Secuencia de codificación del gen F para NL/12/00 aislado SEQ ID NO: 218 Secuencia de codificación del gen F para NL/1/01 aislado SEQ ID NO: 219 Secuencia de codificación del gen F para NL/5/01 aislado SEQ ID NO: 220 Secuencia de codificación del gen F para NL/9/01 aislado SEQ ID NO: 221 Secuencia de codificación del gen F para NL/19/01 aislado SEQ ID NO: 222 Secuencia de codificación del gen F para NL/21/01 aislado SEQ ID NO: 223 Secuencia de codificación del gen F para UK/11/01 aislado SEQ ID NO: 224 Secuencia de codificación del gen F para FL/1/01 aislado SEQ ID NO: 225 Secuencia de codificación del gen F para FL/2/01 aislado SEQ ID NO: 226 Secuencia de codificación del gen F para FL/5/01 aislado SEQ ID NO: 227 Secuencia de codificación del gen F para FL/7/01 aislado SEQ ID NO: 228 Secuencia de codificación del gen F para FL/9/01 aislado SEQ ID NO: 229 Secuencia de codificación del gen F para UK/10/01 aislado SEQ ID NO: 230 Secuencia de codificación del gen F para NL/1/02 aislado SEQ ID NO: 231 Secuencia de codificación del gen F para NL/1/94 aislado SEQ ID NO: 232 Secuencia de codificación del gen F para NL/1/96 aislado SEQ ID NO: 233 Secuencia de codificación del gen F para NL/6/97 aislado SEQ ID NO: 234 Secuencia de codificación del gen F para NL/7/00 aislado SEQ ID NO: 235 Secuencia de codificación del gen F para NL/9/00 aislado SEQ ID NO: 236 Secuencia de codificación del gen F para NL/19/00 aislado SEQ ID NO: 237 Secuencia de codificación del gen F para NL/28/00 aislado SEQ ID NO: 238 Secuencia de codificación del gen F para NL/3/01 aislado SEQ ID NO: 239 Secuencia de codificación del gen F para NL/4/01 aislado SEQ ID NO: 240 Secuencia de codificación del gen F para NL/11/01 aislado SEQ ID NO: 241 Secuencia de codificación del gen F para NL/15/01 aislado SEQ ID NO: 242 Secuencia de codificación del gen F para NL/18/01 aislado SEQ ID NO: 243 Secuencia de codificación del gen F para FL/6/01 aislado SEQ ID NO: 244 Secuencia de codificación del gen F para U /5/01 aislado SEQ ID NO: 245 Secuencia de codificación del gen F para UK/8/01 aislado SEQ ID NO: 246 Secuencia de codificación del gen F para NL/12/02 aislado SEQ ID NO: 247 Secuencia de codificación del gen F para H /1/02 aislado SEQ ID NO: 248 Secuencia de la proteina F para NL/1/00 aislado SEQ ID NO: 249 Secuencia de la proteína F para UK/1/00 aislado SEQ ID NO: 250 Secuencia de la proteína F para NL/2/00 aislado SEQ ID NO: 251 Secuencia de la proteína F para NL/13/00 aislado SEQ ID NO: 252 Secuencia de la proteína F para NL/14/00 aislado SEQ ID NO: 253 Secuencia de la proteína F para FL/3/01 aisl do SEQ ID NO: 254 Secuencia de la proteína F para FL/4/01 aislado SEQ ID NO: 255 Secuencia de la proteína F para FL/8/01 aislado SEQ ID NO: 256 Secuencia de la proteína F para UK/l/01 aislado SEQ ID NO: 257 Secuencia de la proteína F para UK/7/01 aislado SEQ ID NO: 258 Secuencia de la proteína F para FL/10/01 aislado SEQ ID NO: 259 Secuencia de la proteina F para NL/6/01 aislado SEQ ID NO: 260 Secuencia de la proteina F para NL/8/01 aislado SEQ ID NO: 261 Secuencia de la proteína F para NL/lO/01 aislado SEQ ID NO: 262 Secuencia de la proteína F para NL/14/01 aislado SEQ ID NO: 263 Secuencia de la proteína F para NL/20/01 aislado SEQ ID NO: 264 Secuencia de la proteína F para NL/25/01 aislado SEQ ID NO: 265 Secuencia de la proteína F para NL/26/01 aislado SEQ ID NO: 266 Secuencia de la proteína F para NL/28/01 aislado SEQ ID NO: 267 Secuencia de la proteína F para NL/30/01 aislado SEQ ID NO: 268 Secuencia de la proteína F para BR/2/01 aislado SEQ ID NO: 269 Secuencia de la proteína F para BR/3/01 aislado SEQ ID NO: 270 Secuencia de la proteína F para NL/2/02 aislado SEQ ID NO: 271 Secuencia de la proteína F para NL/4/02 aislado SEQ ID NO: 272 Secuencia de la proteína F para NL/5/02 aislado SEQ ID NO: 273 Secuencia de la proteína F para NL/6/02 aislado SEQ ID NO: 274 Secuencia de la proteína F para NL/7/02 aislado SEQ ID NO: 275 Secuencia de la proteína F para NL/9/02 aislado SEQ ID NO: 276 Secuencia de la proteína F para FL/l/02 aislado SEQ ID NO: 277 Secuencia de la proteína F para NL/l/81 aislado SEQ ID NO: 278 Secuencia de la proteína F para NL/l/93 aislado SEQ ID NO: 279 Secuencia de la proteína F para NL/2/93 aislado SEQ ID NO: 280 Secuencia de la proteína F para NL/4/93 aislado SEQ ID NO: 281 Secuencia de la proteína F para NL/l/95 aislado SEQ ID NO: 282 Secuencia de la proteína F para NL/2/96 aislado SEQ ID NO: 283 Secuencia de la proteína F para NL/3/96 aislado SEQ ID NO: 284 Secuencia de la proteína F para NL/l/98 aislado SEQ ID NO: 285 Secuencia de la proteína F para NL/17/00 aislado SEQ ID NO: 286 Secuencia de la proteína F para NL/22/01 aislado SEQ ID NO: 287 Secuencia de la proteína F para NL/29/01 aislado SEQ ID NO: 288 Secuencia de la proteína F para NL/23/01 aislado SEQ ID NO: 289 Secuencia de la proteína F para NL/17/01 aislado SEQ ID NO: 290 Secuencia de la proteína F para NL/24/01 aislado SEQ ID NO: 291 Secuencia de la proteína F para NL/3/02 aislado SEQ ID NO: 292 Secuencia de la proteina F para NL/3/98 aislado SEQ ID NO: 293 Secuencia de la proteína F para NL/l/99 aislado SEQ ID NO: 294 Secuencia de la proteína F para NL/2/99 aislado SEQ ID NO: 295 Secuencia de la protexna F para NL/3/99 aislado SEQ ID NO: 296 Secuencia de la proteína F para NL/ll/00 aislado SEQ ID NO: 297 Secuencia de la proteína F para NL/12/00 aislado SEQ ID NO: 298 Secuencia de la proteína F para NL/1/01 aislado SEQ ID NO: 299 Secuencia de la proteína F para NL/5/01 aislado SEQ ID NO: 300 Secuencia de la proteína F para NL/9/01 aislado SEQ ID NO: 301 Secuencia de la proteína F para NL/19/01 aislado SEQ ID NO: 302 Secuencia de la proteína F para NL/21/01 aislado SEQ ID NO: 303 Secuencia de la proteína F para UK/ll/01 aislado SEQ ID NO: 304 Secuencia de la proteína F para FL/l/01 aislado SEQ ID NO: 305 Secuencia de la proteína F para FL/2/01 aislado SEQ ID NO: 306 Secuencia de la proteína F para FL/5/01 aislado SEQ ID NO: 307 Secuencia de la proteína F para FL/7/01 aislado SEQ ID NO: 308 Secuencia de la proteína F para FL/9/01 aislado SEQ ID NO: 309 Secuencia de la proteína F para UK/10/01 aislado SEQ ID NO: 310 Secuencia de la proteína F para NL/l/02 aislado SEQ ID NO: 311 Secuencia de la proteína F para NL/l/94 aislado SEQ ID NO: 312 Secuencia de la proteína F para NL/l/96 aislado SEQ ID NO: 313 Secuencia de la proteína F para NL/6/97 aislado SEQ ID NO: 314 Secuencia de la proteína F para NL/7/00 aislado SEQ ID NO: 315 Secuencia de la proteína F para NL/9/00 aislado SEQ ID NO: 316 Secuencia de la proteína F para NL/19/00 aislado SEQ ID NO: 317 Secuencia de la proteína F para NL/28/00 aislado SEQ ID NO: 318 Secuencia de la proteína F para NL/3/01 aislado SEQ ID NO: 319 Secuencia de la proteína F para NL/4/01 aislado SEQ ID NO: 320 Secuencia de la proteína F para NL/ll/01 aislado SEQ ID NO: 321 Secuencia de la proteína F para NL/15/01 aislado SEQ ID NO: 322 Secuencia de la proteína F para NL/18/01 aislado SEQ ID NO: 323 Secuencia de la proteína F para FL/6/01 aislado SEQ ID NO: 324 Secuencia de la proteína F para UK/5/01 aislado SEQ ID NO: 325 Secuencia de la proteína F para UK/8/01 aislado SEQ ID NO: 326 Secuencia de la proteína F para NL/12/02 aislado SEQ ID NO: 327 Secuencia de la proteína F para HK/l/02 aislado.
LISTADO DE SECUENCIAS <110> Medlmmune Vaccine, Inc. ViroNovative BV <120> SISTEMAS DE EXPRESIÓN DE VIRUS DE PARAINFLUENZA RECOMB?????? Y VACUNAS QUE COMPRENDEN ANTÍGENOS HETERÓLOGOS DERIVADOS DEL ETANEUMOVIRUS <130> 7682-111-228 <140> <141> <150> 60/466,181 <151> 2003-04-25 <150> 60/499,274 <151> 2003-08-28 <150> 60/550,931 <151> 2004-03-05 <160> 327 <170> FastSEQ para Windows Versió 4.0 <210> 1 <211> 2507 <212> ADN <213> metaneumovirus <220> <221> CDS <222> (1) ... (2507) <223> Proteína de matriz 00-1 aislada de metaneumovirus humano (M) y genes de la proteína de fusión (F) <400> 1 atggagtcct acctagtaga cacctatcaa ggcattcctt acacagcagc tgttcaagtt 60 gatctaatag aaaaggacct gttacctgca agcctaacaa tatggttccc tttgtttcag 120 gccaacacac caccagcagt gctgctcgat cagctaaaaa ccctgacaat aaccactctg 180 tatgctgcat cacaaaatgg tccaatactc aaagtgaatg catcagccca aggtgcagca 240 atgtctgtac ttcccaaaaa atttgaagtc aatgcgactg tagcactcga tgaatatagc 300 aaactggaat ttgacaaact cacagtctgt gaagtaaaaa cagtttactt aacaaccatg 360 aaaccatacg ggatggtatc aaaatttgtg agctcagcca aatcagttgg caaaaaaaca 420 catgatctaa tcgcactatg tgattttatg gatctagaaa agaacacacc tgttacaata 480 ccagcattca tcaaatcagt ttcaatcaaa gagagtgagt cagctactgt tgaagctgct 540 ataagcagtg aagcagacca agctctaaca caggccaaaa ttgcacctta tgcgggatta 600 attatgatca tgactatgaa caatcccaaa ggcatattca aaaagcttgg agctgggact 660 caagtcatag tagaactagg agcatatgtc caggctgaaa gcataagcaa aatatgcaag 720 acttggagcc atcaagggac aagatatgtc ttgaagtcca gataacaacc aagcaccttg 780 gccaagagct actaacccta tctcatagat cataaagtca ccattctagt tatataaaaa 840 tcaagttaga acaagaatta aatcaatcaa gaacgggaca aataaaaatg tcttggaaag 900 tggtgatcat tttttcattg ttaataacac ctcaacacgg tcttaaagag agctacttag 960 aagagtcatg tagcactata actgaaggat atctcagtgt tctgaggaca ggttggtaca 1020 ccaatgtttt tacactggag gtaggcgatg tagagaacct tacatgtgcc gatggaccca 1080 gcttaataaa aacagaatta gacctgacca aaagtgcact aagagagctc agaacagttt 1140 ctgctgatca actggcaaga gaggagcaaa ttgaaaatcc cagacaatct agattcgttc 1200 taggagcaat agcactcggt gttgcaactg cagctgcagt tacagcaggt gttgcaattg 1260 ccaaaaccat ccggcttgaa agtgaagtaa cagcaattaa gaatgccctc aaaaagacca 1320 atgaagcagt atctacattg gggaatggag ttcgtgtgtt ggcaactgca gtgagagagc 1380 tgaaagattt tgtgagcaag aatctaacac gtgcaatcaa caaaaacaag tgcgacattg 1440 ctgacctgaa aatggccgtt agcttcagtc aattcaacag aaggttccta aatgttgtgc 1500 ggcaattttc agacaacgct ggaataacac cagcaatatc tttggactta atgacagatg 1560 ctgaactagc cagagctgtt tccaacatgc caacatctgc aggacaaata áaactgatgt 1620 tggagaaccg tgcaatggta agaagaaaag ggttcggatt cctgatagga gtttacggaa 1680 gctccgtaat ttacatggtg caactgccaa tctttggggt tatagacacg ccttgctgga 1740 tagtaaaagc agccccttct tgttcaggaa aaaagggaaa ctatgcttgc ctcttaagag 1800 aagaccaagg atggtattgt caaaatgcag ggtcaactgt ttactaccca aatgaaaaag 1860 actgtgaaac aagaggagac catgtctttt gcgacacagc agcaggaatc aatgttgctg 1920 agcagtcaaa ggagtgcaac ataaacatat ctactactaa ttacccatgc aaagttagca 1980 caggaagaca tcctatcagt atggttgcac tatctcctct tggggctttg gttgcttgct 2040 acaagggagt gagctgttcc attggcagca acagagtagg gatcatcaag caactgaaca 2100 aaggctgctc ttatataacc aaccaagacg cagacacagt gacaatagac aacactgtat 2160 accagctaag caaagttgaa ggcgaacagc atgttataaa aggaaggcca gtgtcaagca 2220 gctttgaccc agtcaagttt cctgaagatc aattcaatgt tgcacttgac caagttttcg 2280 agagcattga gaacagtcag gccttggtgg atcaatcaaa cagaatccta agcagtgcag 2340 agaaaggaaa cactggcttc atcattgtaa taattctaat tgctgtcctt ggctctacca 2400 tgatcctagt gagtgttttt atcataataa agaaaacaaa gagacccaca ggagcacctc 2460 cagagctgag tggtgtcaca aacaatggct tcataccaca taattag 2507 <210> 2 <211> 1596 <212> ADN <213> neumvirus <220> <221> CDS <222> (1) ... (1596) <223> Gen de la proteína de fusión de neumovirus de aves, cds parcial <400> 2 atgtcttgga aagtggtact gctattggta ttgctagcta ccccaacggg ggggctagaa 60 gaaagttatc tagaggagtc atgcagtact gttactagag gatacctgag tgttttgagg 120 acaggatggt atacaaatgt gttcacactt ggggttggag atgtgaaaaa tctcacatgt 180 accgacgggc ccagcttaat aagaacagaa cttgaactga caaaaaatgc acttgaggaa 240 ctcaagacag tatcagcaga tcaattggca aaggaagcta ggataatgtc accaagaaaa 300 gcccggtttg ttctgggtgc catagcatta ggtgtggcaa ctgctgctgc tgtgacggct 360 ggtgtagcga tagccaagac aattaggcta gaaggagaag tggctgcaat caaaggtgcg 420 ctcaggaaaa caaatgaggc tgtatctaca ttaggaaatg gcgtgagggt acttgcaaca 480 gctgtgaatg atctcaagga ctttataagt aaaaaattga cacctgcaat aaacaggaac 540 aagtgtgaca tctcagacct taagatggca gtgagctttg gacaatacaa tcggaggttc 600 ctcaatgtgg taagacagtt ttctgacaat gcaggtatta cgcctgcaat atctctagat 660 ttaatgactg acgctgagct tgtaagagct gtaagcaaca tgcccacatc ttcaggacag 720 atcaatctga tgcttgagaa tcgggcaatg gtcagaagga aaggatttgg gattttgatt 780 ggagtttatg gtagctctgt ggtctatata gtgcagcttc ctattttcgg tgtgatagat 840 acaccgtgtt ggagggtgaa ggctgctcca ttatgttcag ggaaagacgg gaattatgca 900 tgtctcttgc gagaggacca aggttggtat tgtcaaaatg ctggatccac agtttattat 960 ccaaatgagg aggactgtga agtaagaagt gatcatgtgt tttgtgacac agcagctggg 1020 ataaatgtag caaaggagtc agaagagtgc aacaggaata tctcaacaac aaagtaccct 1080 tgcaaggtaa gtacagggcg tcacccaata agcatggtgg ccttatcacc actgggtgct 1140 ttggtagcct gttatgacgg tatgagttgt tccattggaa gcaacaaggt tggaataatc 1200 agacctttgg ggaaagggtg ttcatacatc agcaatcaag atgctgacac tgttacaatt 1260 gacaacacag tgtaccaatt gagcaaagtt gaaggagaac aacacacaat taaagggaag 1320 ccagtatcta gcaattttga ccctatagag ttccctgaag atcagttcaa cgtagccctg 1380 gatcaggtgt ttgaaagtgt tgagaagagt cagaatctga tagaccagtc aaacaagata 1440 ttggatagca ttgaaaaggg gaatgcagga tttgtcatag tgatagtcct cattgtcctg 1500 ctcatgctgg cagcagttgg tgtgggtgtc ttctttgtgg ttaagaagag aaaagctgct 1560 cccaaattcc caatggaaat gaatggtgtg aacaac 1596 <210> 3 <211> 1666 <212> ADM <213> neumovir s <220> <221> CDS <222> (14) ... (1627) <223> RNAm de la proteína de fusión Ib aislada del neumovirus de aves, cds completa <400> 3 gggacaagtg aaaatgtctt ggaaagtggt actgctattg gtattgctag ctaccccaac 60 gggggggcta gaagaaagtt atctagagga gtcatgcagt actgttacta gaggatacct 120 gagtgttttg aggacaggat ggtatacaaa tgtgttcaca cttgaggttg gagatgtgga 180 aaatctcaca tgtaccgacg ggcccagctt aataagaaca gaacttgaac tgacaaaaaa 240 tgcacttgag gaactcaaga cagtatcagc agatcaattg gcaaaggaag ctaggataat 300 gtcaccaaga aaagcccggt ttgttctggg tgccatagca ttaggtgtgg caactgctgc 360 tgctgtgacg gctggtgtag cgatagccaa gacaattagg ctagaaggag aagtggctgc 420 aatcaagggt gcgctcagga aaacaaatga ggctgtatct acattaggaa atggcgtgag 480 ggtacttgca acagctgtga atgatctcaa ggactttata agtaaaaaat tgacacctgc 540 aataaacagg aacaagtgtg acatctcaga ccttaagatg gcagtgagct ttggacaata 600 caatcggagg ttcctcaatg tggtaagaca gttttctgac aatgcaggta ttacgcctgc 660 aatatctcta gatttaatga ctgacgctga gcttgtaaga gctgtaagca acatgcccac 720 atcttcagga cagatcaatc tgatgcttga gaatcgggca atggtcagaa ggaaaggatt 780 tgggattttg attggagttt atggtagctc tgtggtctat atagtgcagc ttcctatttt 840 cggtgtgata gatacaccgt gttggaaggt gaaggctgct ccattatgtt cagggaaaga 900 cgggaattat gcatgtctct tgcgagagga ccaaggttgg tattgtcaaa atgctggatc 960 cacagtttat tatccaaatg aggaggactg tgaagtaaga agtgatcatg tgttttgtga 1020 cacagcagct gggataaatg tagcaaagga gtcagaagag tgcaacagga atatctcaac 1080 aacaaagtac ccttgcaagg taagtacagg gcgtcaccca ataagcatgg tggccttatc 1140 accactgggt gctttggtag cctgttatga cggtatgagt tgttccattg gaagcaacaa 1200 ggttggaata atcagacctt tggggaaagg gtgttcatac atcagcaatc aagatgctga 1260 cactgttaca attgacaaca cagtgtacca attgagcaaa gttgaaggag aacaacacac 1320 aattaaaggg aagccagtat ctagcaattt tgaccctata gagttccctg aagatcagtt 1380 caacgtagcc ctggatcagg tgtttgaaag tgttgagaag agtcagaatc tgatagacca 1440 gtcaaacaag atattggata gcattgaaaa ggggaatgca ggatttgtca tagtgatagt 1500 cctcattgtc ctgctcatgc tggcagcagt tggtgtgggt gtcttctttg tggttaagaa 1560 gagaaaagct gctcccaaat tcccaatgga aatgaatggt gtgaacaaca aaggatttafc 1620 cccttaattt tagttattaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaa 1666 <210> 4 <211> 1636 <212> ADN <213> virus rhinotracheitis <220> <221> CDS <222> (13) ... (1629) <223> Gen del virus rhinotracheitis de pavo para la proteina de fusión (subunidades Fl y F2) , cds completa <400> 4 gggacaagta ggatggatgt aagaatctgt ctcctattgt tccttatatc taatcctagt 60 agctgcatac aagaaacata caatgaagaa tcctgcagta ctgtaactag aggttataag 120 agtgtgttaa ggacagggtg gtatacgaat gtatttaacc tcgaaatagg gaatgttgag 180 aacatcactt gcaatgatgg acccagccta attgacactg agttagtact cacaaagaat 240 gctttgaggg agctcaaaac agtgtcagct gatcaagtgg ctaaggaaag cagactatcc 300 tcacccagga gacgtagatt tgtactgggt gcaatagcac ttggtgttgc gacagctgct 360 gccgtaacag ctggtgtagc acttgcaaag acaattagat tagagggaga ggtgaaggca 420 attaagaatg ccctccggaa cacaaatgag gcagtatcca cattagggaa tggtgtgagg 480 gtactagcaa ctgcagtcaa tgacctcaaa gaatttataa gtaaaaaatt gactcctgct 540 attaaccaga acaaatgcaa tatagcagat ataaagatgg caattagttt tggccaaaat 600 aacagaaggt tcctgaatgt ggtgaggcaa ttctctgata gtgcaggtat cacatcagct 660 gtgtctcttg atttaatgac agatgatgaa cttgttagag caattaacag aatgccaact 720 tcatcaggac agattagttt gatgttgaac aatcgtgcca tggttagaag gaaggggttt 780 ggtatattga ttggtgttta tgatggaacg gtcgtttata tggtacaact gcccatattc 840 ggcgtgattg agacaccttg ttggagggtg gtggcagcac cactctgtag gaaagagaaa 900 ggcaattatg cttgtatact gagagaagat caagggtggt actgtacaaa tgctggctct 960 acagcttatt atcctaataa agatgattgt gaggtaaggg atgattatgt attttgtgac 1020 acagcagctg gcattaatgt ggccctagaa gttgaacagt gcaactataa catatcgact 1080 tctaaatacc catgcaaagt cagcacaggt agacaccctg tcagtatggt agccttaacc 1140 cccctagggg gtctagtgtc ttgttatgag agtgtaagtt gctccatagg tagcaataaa 1200 gtagggataa taaaacagct aggcaaaggg tgcacccaca ttcccaacaa cgaagctgac 1260 acgataacca ttgataacac tgtgtaccaa ttgagcaagg ttgtaggcga acagaggacc 1320 ataaaaggag ctccagttgt gaacaatttt aacccaatat tattccctga ggatcagttc 1380 aatgttgcac ttgaccaagt atttgagagt atagatagat ctcaggactt aatagataag 1440 tctaacgact tgctaggtgc agatgccaag agcaaggctg gaattgctat agcaatagta 1500 gtgctagtca ttctaggaat cttcttttta cttgcagtga tatattactg ttccagagtc 1560 cggaagacca aaccaaagca tgattacccg gccacgacag gtcatagcag catggcttat 1620 gtcagttaag ttattt 1636 <210> 5 <211> 1860 <212> ADN <213> neumovirus <220> <221> CDS <222> (1) ... (110) <223> Gen de la protelna de matriz de neumovirus de aves (M) , cds parcial <220> <221> CDS <222> (216) ... (1829) <223> Gen de la glicoproteína de fusión de neumovirus de aves (F) , cds completa <4Q0> 5 gagttcaggt aatagtggag ttaggggcat acgttcaagc agaaagcata agcagaatct 60 gcaggaactg gagccaccag ggtacgagat atgtcctgaa gtcaagataa acacagagag 120 tacacttacc aaatcacagt aacaatttcg tttttaaccc tctcatagtt attacctagc 180 ttgatattat ttagaaaaaa ttgggacaag tgaaaatgtc ttggaaagtg gtactgctat 240 tggtattgct agctacccca acgggggggc tagaagaaag ttatctagag gagtcatgca 300 gtactgttac tagaggatac ctgagtgttt tgaggacagg atggtataca aatgtgttca 360 cacttgaggt tggagatgtg gaaaatctca catgtaccga cgggcccagc ttaataagaa 420 cagaacttga actgacaaaa aatgcacttg aggaactcaa gacagtatca gcagatcaat 480 tggcaaagga agctaggata atgtcaccaa gaaaagcccg gtttgttctg ggtgccatag 540 cattaggtgt ggcaactgct gctgctgtga cggctggtgt agcgatagcc aagacaatta 600 ggctagaagg agaagtggct gcaatcaagg gtgcgctcag gaaaacaaat gaggctgtat 660 ctacattagg aaatggcgtg agggtacttg caacagctgt gaatgatctc aaggactt a 720 taagtaaaaa attgacacct gcaataaaca ggaacaagtg tgacatctca gaccttaaga 780 tggcagtgag ctttggacaa tacaatcgga ggttcctcaa tgtggtaaga cagttttctg 840 acaatgcagg tattacgcct gcaatatctc tagatttaat gactgacgct gagcttgtaa 900 gagctgtaag caacatgccc acatcttcag gacagatcaa tctgatgctt gagaatcggg 960 caatggtcag aaggaaagga tttgggattt tgattggagt ttatggtagc tctgtggtct 1020 atatagtgca gcttcctatt ttcggtgtga tagatacacc gtgttggaag gtgaaggctg 1080 ctccattatg ttcagggaaa gacgggaatt atgcatgtct cttgcgagag gaccaaggtt 1140 ggtattgtca aaatgctgga tccacagttt attatccaaa tgaggaggac tgtgaagtaa 1200 gaagtgatca tgtgttttgt gacacagcag ctgggataaa tgtagcaaag gagtcagaag 1260 agtgcaacag gaatatctca acaacaaagt acccttgcaa ggtaagtaca gggcgtcacc 1320 caataagcat ggtggcctta tcaccactgg gtgctttggt agcctgttat gacggtatga 1380 gttgttccat tggaagcaac aaggttggaa taatcagacc tttggggaaa gggtgttcat 1440 acatcagcaa tcaagatgct gacactgtta caattgacaa cacagtgtac caattgagca 1500 aagttgaagg agaacaacac acaattaaag ggaagccagt atctagcaat tttgacccta 1560 tagagttccc tgaagatcag ttcaacatag ccctggatca ggtgtttgaa agtgttgaga 1620 agagtcagaa tctgatagac cagtcaaaca agatattgga tagcattgaa aaggggaatg 1680 caggatttgt catagtgata gtcctcattg tcctgctcat gctggcagca gttggtgtgg 1740 gtgtcttctt tgtggttaag aagagaaaag ctgctcccaa attcccaatg gaaatgaatg 1800 gtgtgaacaa caaaggattt atcccttaat tttagttact aaaaaattgg gacaagtgaa 1860 <210> 6 <211> 574 <212> PRT <213> paramyxovirus <400> 6 Met Glu Leu Leu lie His Arg Leu Ser Ala lie Phe Leu Thr Leu Ala 1 5 10 15 lie Asn Ala Leu Tyr Leu Thr Ser Ser Gln Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30 Tyr Gln Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Arg Gly Tyr Phe Ser Ala Leu 35 40 45 Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60 Lys Glu Thr Lys Cys Asn Gly Thr Asp Thr Lys Val Lys Leu lie Lys 65 70 75 80 Gln Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gln Leu Leu 85 90 95 Met Gln Asn Thr Pro Ala Ala Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Ala Pro 100 105 110 Gln Tyr Met Asn Tyr Thr lie Asn Thr Thr Lys Asn Leu Asn Val Ser 115 120 125 lie Ser Lys Lys Arg Lys Arg Arg Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val 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<213> neumovirus de aves <400> 13 Met Ser Trp Lys Val Val Leu Leu Leu Val Leu Leu Ala Thr Pro Thr 1 5 10 15 Gly Gly Leu Glu Glu Ser Tyr Leu Glu Glu Ser Cys Ser Thr Val Thr 20 25 30 Arg Gly Tyr Leu Ser Val Leu Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Asn Val Phe 35 40 45 Thr Leu Glu Val Gly Asp Val Glu Asn Leu Thr Cys Thr Asp Gly Pro 50 55 60 Ser Leu lie Arg Thr Glu Leu Glu Leu Thr Lys Asn Ala Leu Glu Glu 65 70 75 80 Leu Lys Thr Val Ser Ala Asp Gln Leu Ala Lys Glu Ala Arg lie Met 85 90 95 Ser Pro Arg Lys Ala Arg Phe Val Leu Gly Ala lie Ala Leu Gly Val 100 105 110 Ala Thr Ala Ala Ala Val Thr Ala Gly Val Ala lie Ala Lys Thr lie 115 120 125 Arg Leu Glu Gly Glu Val Ala Ala lie Lys Gly Ala Leu Arg Lys Thr 130 135 140 Asn Glu Ala Val Ser Thr Leu Gly Asn Gly Val Arg Val Leu Ala Thr 145 150 155 160 Ala Val Asn Asp Leu Lys Asp Phe lie Ser Lys Lys Leu Thr Pro Ala 165 170 175 lie Asn Arg Asn Lys Cys Asp lie Ser Asp Leu Lys Met Ala Val Ser 180 185 190 Phe Gly Gln Tyr Asn Arg Arg Phe Leu Asn Val Val Arg Gln Phe Ser 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(1191) <223> RNAm de la proteína de unión (G) del virus rhinotracheitis de pavo (cepa CVL14/1), cds completa <400> 14 gggacaagta tctctatggg gtccaaacta tatatggctc agggcaccag tgcatatcaa 60 actgcagtgg ggttctggct ggacatcggg aggaggtaca tattggctat agtcctatca 120 gctttcgggc tgacctgcac agtcactatt gcactcactg ttagcgtcat agttgaacag 180 tcagtgttag aggagtgcag aaactacaat ggaggagata gagattggtg gtcaaccacc 240 caggagcagc caactactgc accaagtgcg actccagcag gaaattatgg aggattacaa 300 acggctcgaa caagaaagtc tgaaagctgt ttgcatgtgc aaatttctta tggtgatatg 360 tatagccgca gtgatactgt actgggtggt tttgattgta tgggcttatt ggttctttgc 420 aaatcaggac caatttgtca gcgagataat caagttgacc caacagccct ctgccattgc 480 agggtagatc tttcaagtgt ggactgctgc aaggtgaaca agattagcac taacagcagc 540 accacctctg agccccagaa gaccaacccg gcatggccta gccaagacaa cacagactcc 600 gatccaaatc cccaaggcat aaccaccagc acagccactc tgctctcaac aagtctgggc 660 ctcatgctca catcgaagac tgggacacac aaatcagggc ccccccaagc cttgccgggg 720 agcaacacca acggaaaaac aaccacagac cgagaaccag ggcccacaaa ccaaccaaat 780 tcaaccacca atgggcaaca caataaacac acccaacgaa tgacaccccc gccaagtcac 840 gacaacacaa gaaccatcct ccagcacaca acaccctggg aaaagacatt cagtacatac 900 aagcccacac actctccgac caacgaatca gatcaatccc tccccacaac tcaaaacagc 960 atcaactgtg aacattttga cccccaaggc aaggaaaaaa tctgctacag agtaggttct 1020 tacaactcca atattacaaa gcaatgcaga attgatgtgc ctttgtgttc cacttatagc 1080 acagtgtgca tgaaaacata ctataccgaa ccattcaact gttggaggcg tatctggcgt 1140 tgcttgtgtg atgacggagt tggtctggtt gagtggtgtt gcactagtta act 1193 <210> 15 <211> 1260 <212> ADN <213> Virus rhinotracheitis <220> <221> CDS <222> (16) ... (1260) <223> Protelna de unión (G) del virus rhinotracheitis de pavo (cepa 6574) , cds completa <400> 15 gggacaagta tccagatggg gtcagagctc tacatcatag agggggtgag ctcatctgaa 60 atagtcctca agcaagtcct cagaaggagc caaaaaatac tgttaggact ggtgttatca 120 gccttaggct tgacgctcac tagcactatt gttatatcta tttgtattag tgtagaacag 180 gtcaaattac gacagtgtgt ggacacttat tgggcggaaa atggatcctt acatccagga 240 cagtcaacag aaaatacttc aacaagaggt aagactacaa caaaagaccc tagaagatta 300 caggcgactg gagcaggaaa gtttgagagc tgtgggtatg tgcaagttgt tgatggtgat 360 atgcatgatc gcagttatgc tgtactgggt ggtgttgatt gtttgggctt attggctctt 420 tgtgaatcag gaccaatttg tcagggagat acttggtctg aagacggaaa cttctgccga 480 tgcacttttt cttcccatgg ggtgagttgc tgcaaaaaac ccaaaagcaa ggcaaccact 540 gcccagagga actccaaacc agctaacagc aaatcaactc ctccggtaca ttcagacagg 600 gccagcaaag aacataatcc ctcccaaggg gagcaacccc gcagggggcc aaccagcagc 660 aagacaacta ttgctagcac cccttcaaca gaggacactg ctaaaccaac gattagcaaa 720 cctaaactca ccatcaggcc ctcgcaaaga ggtccatccg gcagcacaaa agcagcctcc 780 agcaccccca gccacaagac caacaccaga ggcaccagca agacgaccga ccagagaccc 840 cgcaccggac ccactcccga aaggcccaga caaacccaca gcacagcaac tccgcccccc 900 acaaccccaa tccacaaggg ccgggcccca acccccaaac caacaacaga cctcaaggtc 9S0 aacccaaggg aaggcagcac aagcccaact gcaatacaga aaaacccaac cacacaaagt 1020 aatcttgttg actgcacact gtctgatcca gatgagccac aaaggatttg ttaccaggta 1080 ggaacttaca atcctagtca atcgggaacc tgcaacatag aggttccaaa atgttccact 1140 tatgggcatg cttgtatggc tacattatat gacaccccat tcaactgctg gcgcaggacc 1200 aggagatgca tctgtgattc cggaggggag ctgattgagt ggtgctgtac tagtcaataa 1260 <210> 16 <211> 391 <212> PRT <213> Virus rhinotracheitis de pavo <400> 16 et Gly Ser Lys Leu Tyr Met Ala Gln Gly Thr Ser Ala Tyr Gln Thr 1 5 10 15 Ala Val Gly Phe Trp Leu Asp lie Gly Arg Arg Tyr lie Leu Ala lie 20 25 30 Val Leu Ser Ala Phe Gly Leu Thr Cys Thr Val Thr lie Ala Leu Thr 35 40 45 Val Ser Val lie Val Glu Gln Ser Val Leu Glu Glu Cys Arg Asn Tyr 50 55 60 Asn Gly Gly Asp Arg Asp Trp Trp Ser Thr Thr Gln Glu 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Ser Thr Met lie Leu Val Ser Val Phe lie 500 505 510 lie lie Lys Lys Thr Lys Lys Pro Thr Gly Ala Pro Pro Glu Leu Ser 515 520 525 Gly Val Thr Asn Asn Gly Phe lie Pro His Asn 530 535 <210> 19 <211> 539 <212> PRT <213> Metaneumovirus humano <400> 19 Met Ser Trp Lys Val Val lie lie Phe Ser Leu Leu lie Thr Pro Gln 1 5 10 15 His Gly Leu Lys Glu Ser Tyr Leu Glu Glu Ser Cys Ser Thr lie Thr 20 25 30 Glu Gly Tyr Leu Ser Val Leu Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Asn Val Phe 35 40 45 Thr Leu Glu Val Gly Asp Val Glu Asn Leu Thr Cys Ser Asp Gly Pro 50 55 60 Ser Leu lie Lys Thr Glu Leu Asp Leu Thr Lys Ser Ala Leu Arg Glu 65 70 75 80 Leu Lys Thr Val Ser Ala Asp Gln Leu Ala Arg Glu Glu Gln lie Glu 85 90 95 Asn Pro Arg Gln Ser Arg Phe Val Leu Gly Ala lie Ala Leu Gly Val 100 105 110 Ala Thr Ala Ala Ala Val Thr Ala Gly Val Ala lie Ala Lys Thr lie 115 120 125 Arg Leu Glu Ser Glu Val Thr Ala lie Lys Asn Ala Leu Lys Thr Thr 130 135 140 Asn Glu Ala Val Ser Thr Leu Gly Asn Gly Val Arg Val Leu Ala Thr 145 150 155 160 Ala 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tgttggagaa ccgtgcaatg gtaagaagaa aagggttcgg aatcctgata 780 ggagtttacg gaagctccgt aatttacatg gtgcaactgc caatctttgg ggttatagac 840 acgccttgct ggatagtaaa agcagcccct tcttgttcag gaaaaaaggg aaactatgct 900 tgcctcttaa gagaagacca aggatggtat tgtcaaaatg cagggtcaac tgtttactac 960 ccaaatgaaa aagactgtga aacaagagga gaccatgtct tttgcgacac agcagcagga 1020 atcaatgttg ctgagcagtc aaaggagtgc aacataaaca tatctactac taattaccca 1080 tgcaaagtta gcacaggaag acatcctatc agtatggttg cactatctcc tcttggggct 1140 ttggttgctt gctacaaggg agtgagctgt tccattggca gcaacagagt agggatcatc 1200 aagcaactga acaaaggctg ctcttatata accaaccaag acgcagacac agtgacaata 1260 gacaacactg tataccagct aagcaaagtt gaaggcgaac agcatgttat aaaaggaagg 1320 ccagtgtcaa gcagctttga cccagtcaag tttcctgaag atcaattcaa tgttgcactt 1380 gaccaagttt tcgagagcat tgagaacagt caggccttgg tggatcaatc aaacagaatc 1440 ctaagcagtg cagagaaagg aaacactggc ttcatcattg taataattct aattgctgtc 1500 cttggctcta ccatgatcct agtgagtgtt tttatcataa taaagaaaac aaagaaaccc 1560 acaggagcac ctccagagct gagtggtgtc acaaacaatg gcttcatacc acataattag 1620 210> 23 <211> 1620 <212> ADN <213> Metai humano <400> 23 atgtcttgga aagtggtgat cattttttca ttgctaataa cacctcaaca cggtcttaaa SO gagagctacc tagaagaatc atgtagcact ataactgagg gatatcttag tgttctgagg 120 acaggttggt ataccaacgt ttttacatta gaggtgggtg atgtagaaaa ccttacatgt 180 tctgatggac ctagcctaat aaaaacagaa ttagatctga ccaaaagtgc actaagagag 240 ctcaaaacag tctctgctga ccaattggca agagaggaac aaattgagaa tcccagacaa 300 tctaggtttg ttctaggagc aatagcactc ggtgttgcaa cagcagctgc agtcacagca 360 ggtgttgcaa ttgccaaaac catccggctt gagagtgaag tcacagcaat taagaatgcc 420 ctcaaaacga ccaatgaagc agtatctaca ttggggaatg gagttcgagt gttggcaact 480 gcagtgagag agctaaaaga ctttgtgagc aagaatttaa ctcgtgcaat caacaaaaac 540 aagtgcgaca ttgatgacct aaaaatggct gttagcttca gtcaattcaa cagaaggttt 600 ctaaatgttg tgcggcaatt ttcagacaat gctggaataa caccagcaat atctttggac 660 ttaatgacag atgctgaact agccagggcc gtttctaaca tgccgacatc tgcaggacaa 720 ataaaattga tgttggagaa ccgtgcgatg gtgcgaagaa aggggttcgg 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<212> ADN <213> Metaneumo irus humano <400> 25 atgtcttgga aagtgatgat tatcatttcg ttactcataa cacctcagca cggactaaaa 60 gaaagttatt tagaagaatc atgtagtact ataactgaag gatatctcag tgttttaaga 120 acaggttggt acaccaatgt ctttacatta gaagttggtg atgttgaaaa tcttacatgt 180 actgatggac ctagcttaat caaaacagaa cttgacctaa ccaaaagtgc tctgagagaa 240 ctcaaaacag tttctgctga tcagttagcg agagaagaac aaattgaaaa tcccagacaa 300 tcaaggtttg tcctaggtgc aatagctctt ggagttgcca cagcagcagc agtcacagca 360 ggcattgcaa tagccaaaac cataagactt gagagtgaag tgaatgcaat caaaggtgct 420 ctcaaaacaa ccaacgaggc agtatccaca ctaggaaatg gagtgcgagt cctagccact 480 gcagtaagag agctgaaaga atttgtgagc aaaaacctga ctagtgcgat caacaagaac 540 aaatgtgaca ttgctgatct gaagatggct gtcagcttca gtcaattcaa cagaagattc 600 ctaaatgttg tgcggcagtt ttcagacaat gcagggataa caccagcaat atcattggac 660 ctaatgactg atgctgagct ggccagagct gtatcataca tgccaacatc tgcaggacag 720 ataaaactaa tgttagagaa ccgtgcaatg gtgaggagaa aaggatttgg aatcttgata 780 ggggtctacg gaagctctgt gatttacatg gtccagctgc 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humano <400> 26 Met Glu Val Lys Val Glu Asn lie Arg Thr lie Asp Met Leu Lys Ala 1 5 10 15 Arg Val Lys Asn Arg Val Ala Arg Ser Lys Cys Phe Lys Asn Ala Ser 20 25 30 Leu Val Leu lie Gly lie Thr Thr Leu Ser lie Ala Leu Asn lie Tyr 35 40 45 Leu lie lie Asn Tyr Lys Met Gln Lys Asn Thr Ser Glu Ser Glu His 50 55 60 His Thr Ser Ser Ser Pro Met Glu Ser Ser Arg Glu Thr Pro Thr Val 65 70 75 80 ¦ Pro Thr Asp Asn Ser Asp Thr Asn Ser Ser Pro Gln His Pro Thr Gln 85 90 35 Gln Ser Thr Glu Gly Ser Thr Leu Tyr Phe Ala Ala Ser Ala Ser Ser 100 105 110 Pro Glu Thr Glu Pro Thr Ser Thr Pro Asp Thr Thr Asn Arg Pro Pro 115 120 125 Phe Val Asp Thr His Thr Thr Pro Pro Ser Ala Ser Arg Thr Lys Thr 130 135 140 Ser Pro Ala Val His Thr Lys Asn Asn Pro Arg Thr Ser Ser Arg Thr 145 150 155 160 His Ser Pro Pro Arg Ala Thr Thr Arg Thr Ala Arg Arg Thr Thr Thr 165 170 175 Leu Arg Thr Ser Ser Thr Arg Lys Arg Pro Ser Thr Ala Ser Val Gln 180 185 190 Pro Asp lie Ser Ala Thr Thr His Lys Asn Glu Glu Ala Ser Pro Ala 195 200 205 Ser 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cagaaccaac atcaacacca 360 gatacaacaa accgcccgcc cttcgtcgac acacacacaa caccaccaag cgcaagcaga 420 acaaagacaa gtccggcagt ccacacaaaa aacaacccaa ggacaagctc tagaacacat 480 tctccaccac gggcaacgac aaggacggca cgcagaacca ccactctccg cacaagcagc 540 acaagaaaga gaccgtccac agcatcagtc caacctgaca tcagcgcaac aacccacaaa 600 aacgaagaag caagtccagc gagcccacaa acatctgcaa gcacaacaag aatacaaagg 660 aaaagcgtgg aggccaacac atcaacaaca tacaaccaaa ctagttaa 708 <210> 31 <211> 660 <212> ADN <213> Metaneumovirus humano <400> 31 atggaggtga aagtagagaa cattcgagca atagacatgc tcaaagcaag agtgaaaaat 60 cgtgtggcac gtagcaaatg ctttaaaaat gcttctttaa tcctcatagg aataactaca 120 ctgagtatag ctctcaatat ctatctgatc ataaactaca caatacaaaa aaccacatcc 180 gaatcagaac accacaccag ctcaccaccc acagaaccca acaaggaagc ttcaacaatc 240 tccacagaca acccagacat caatccaagc tcacagcatc caactcaaca gtccacagaa 300 aaccccacac tcaaccccgc agcatcagcg agcccatcag aaacagaacc agcatcaaca 360 ccagacacaa caaaccgcct gtcctccgta gacaggtcca cagcacaacc aagtgaaagc 420 agaacaaaga caaaaccgac agtccacaca atcaacaacc caaacacagc ttccagtaca 480 caatccccac cacggacaac aacgaaggca atccgcagag ccaccacttt ccgcatgagc 540 agcacaggaa aaagaccaac cácaacatta gtccagtccg acagcagcac cacaacccaa 600 aatcatgaag aaacaggttc agcgaaccca caggcgtctg caagcacaat gcaaaactag 660 <210> 32 <211> 675 <212> ADN <213> Metaneumovirus humano <400> 32 atggaagtaa gagtggagaa cattcgagcg atagacatgt tcaaagcaaa gataaaaaac 60 cgtataagaa gcagcaggtg ctatagaaat gctacactga tccttattgg actaacagcg 120 ttaagcatgg cacttaatat tttcctgatc atcgatcatg caacattaag aaacatgatc 180 aaaacagaaa actgtgctaa catgccgtcg gcagaaccaa gcaaaaagac cccaatgacc 240 tccacagcag gcccaaacac caaacccaat ccacagcaag caacacagtg gaccacagag 300 aactcaacat ccccagtagc aaccccagag ggccatccat acacagggac aactcaaaca 360 tcagacacaa cagctcccca gcaaaccaca gacaaacaca cagcaccgct aaaatcaacc 420 aatgaacaga tcacccagac aaccacagag aaaaagacaa tcagagcaac aacccaaaaa 480 agggaaaaag gaaaagaaaa cacaaaccaa accacaagca cagctgcaac ccaaacaacc 540 aacaccacca accaaatcag aaatgcaagt gagacaatca caacatccga cagacccaga 600 actgacacca caacccaaag cagcgaacag acaacccggg caacagaccc aagctcccca 660 ccacaccatg catag 675 <210> 33 <211> 711 < 12> ADN <213> Metaneuraovirus humano <400> 33 atggaagtaa gagtggagaa cattcgggca atagacatgt tcaaagcaaa aatgaaaaac 60 cgtataagaa gtagcaagtg ctatagaaat gctacactga tccttattgg attaacagca 120 ttaagtatgg cacttaatat ttttttaatc attgattatg caatgttaaa aaacatgacc 180 aaagtggaac actgtgttaa tatgccgccg gtagaaccaa gcaagaagac cccaatgacc 240 tctgcagtag acttaaacac caaacccaat ccacagcagg caacacagtt ggccgcagag 300 gattcaacat ctctagcagc aacctcagag gaccatctac acacagggac aactccaaca 360 ccagatgcaa cagtctctca gcaaaccaca gacgagtaca caacattgct gagatcaacc 420 aacagacaga ccacccaaac aaccacagag aaaaagccaa ccggagcaac aaccaaaaaa 480 gaaaccacaa ctcgaactac aagcacagct gcaacccaaa cactcaacac taccaaccaa 540 actagctatg tgagagaggc aaccacaaca tccgccagat ccagaaacag tgccacaact 600 caaagcagcg accaaacaac ccaggcagca gacccaagct cccaaccaca ccatacacag 660 aaaagcacaa caacaacata caacacagac 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Met Phe Ser Lys Val Met Phe 1490 1495 1500 Glu Ser Lys Val Lys Lys Arg lie Met Leu Tyr Asp Val Lys Phe Leu 1505 1510 1515 1520 Ser Leu Val Gly Tyr lie Gly Phe Lys Asn Trp Phe lie Glu Gln Leu 1525 1530 1535 Arg Val Val Glu Leu His Glu Val Pro Trp lie Val Asn Ala Glu Gly 1540 1545 1550 Glu Leu Val Glu lie Lys Pro lie Lys lie Tyr Leu Gln Leu lie Glu 1555 1560 1565 Gln Ser Leu Ser Leu Arg lie Thr Val Leu Asn Tyr Thr Asp Met Ala 1570 1575 1580 His Ala Leu Thr Arg Leu lie Arg Lys Lys Leu Met Cys Asp Asn Ala 1585 1590 1595 1600 Leu Phe Asn Pro Ser Ser Ser Pro Met Phe Ser Leu Thr Gln Val lie 1605 1610 1615 Asp Pro Thr Thr Gln Leu Asp Tyr Phe Pro Lys Val lie Phe Glu Arg 1620 1625 1630 Leu Lys Ser Tyr Asp Thr Ser Ser Asp Tyr Asn Lys Gly Lys Leu Thr 1635 1640 1645 Arg Asn Tyr Met Thr Leu Leu Pro Trp Gln His Val Asn Arg Tyr Asn 1650 1655 1660 Phe Val Phe Ser Ser Thr Gly Cys Lys lie Ser Leu Lys Thr Cys lie 1665 1670 1675 1680 Gly Lys Leu lie Lys Asp Leu Asn Pro Lys Val Leu Tyr Phe lie Gly 1685 1690 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aaattaaata tgatatgtga ttggctgcag 360 ttaaagtcta catcagatga tacctcaatc ctaagtttta tagatgtaga atttatacct 420 agctgggtaa gcaattggtt tagtaattgg tacaatctca acaagttgat tctggaattc 480 aggaaagaag aagtaataag aactggttca atcttgtgta ggtcattggg taaattagtt 540 tttgttgtat catcatatgg atgtatagtc aagagcaaca aaagcaaaag agtgagcttc 600 ttcacataca atcaactgtt aacatggaaa gatgtgatgt taagtagatt caatgcaaat 660 ttttgtatat gggtaagcaa cagtctgaat gaaaatcaag aagggctagg gttgagaagt 720 aatctgcaag gcatattaac taataagcta tatgaaactg tagattatat gcttagttta 780 tgttgcaatg aaggtttctc acttgtgaaa gagttcgaag gctttattat gagtgaaatt 840 cttaggatta ctgaacatgc tcaattcagt actagattta gaaatacttt attaaatgga 900 ttaactgatc aattaacaaa attaaaaaat aaaaacagac tcagagttca tggtaccgtg 960 ttagaaaata atgattatcc aatgtacgaa gttgtactta agttattagg agatactttg 1020 agatgtatta aattattaat caataaaaac ttagagaatg ctgctgaatt atactatata 1080 tttagaatat tcggtcaccc aatggtagat gaaagagatg caatggatgc tgtcaaatta 1140 aacaatgaaa tcacaaaaat ccttaggtgg gagagcttga cagaactaag aggggcattc 1200 atattaagga ttatcaaagg atttgtagac aacaacaaaa gatggcccaa aattaaaaac 1260 ttaaaagtgc ttagtaagag atggactatg tacttcaaag caaaaagtta ccccagtcaa 1320 cttgaattaa gcgaacaaga ttttttagag cttgctgcaa tacagtttga acaagagttt 1380 tctgtccctg aaaaaaccaa ccttgagatg gtattaaatg ataaagctat atcacctcct 1440 aaaagattaa tatggtctgt gtatccaaaa aattacttac ctgagaaaat aaaaaatcga 1500 tatctagaag agactttcaa tgcaagtgat agtctcaaaa caagaagagt actagagtac 1560 tatttgaaag ataataaatt cgaccaaaaa gaacttaaaa gttatgttgt taaacaagaa 1620 tatttaaatg ataaggatca tattgtctcg ctaactggaa aagaaagaga attaagtgta 1680 ggtagaatgt ttgctatgca accaggaaaa cagcgacaaa tacaaatatt ggctgaaaaa 1740 ttgttagctg ataatattgt accttttttc ccagaaacct taacaaagta tggtgatcta 1800 gatcttcaga gaataatgga aatcaaatcg gaactttctt ctattaaaac tagaagaaat 1860 gatagttata ataattacat tgcaagagca tccatagtaa cagatttaag taagttcaac 1920 caagccttta ggtatgaaac tacagcgatc tgtgcggatg tagcagatga actacatgga 1980 acacaaagcc tattctgttg gttacatctt atcgtcccta tgacaacaat gatatgtgcc 2040 tatagacatg caccaccaga aacaaaaggt gaatatgata tagataagat agaagagcaa 2100 agtggtttat atagatatca tatgggtggt attgaaggat ggtgtcaaaa actctggaca 2160 atggaagcta tatctctatt agatgttgta tctgtaaaaa cacgatgtca aatgacatct 2220 ttattaaacg gtgacaacca atcaatagat gtaagtaaac cagttaagtt atctgagggt 2280 ttagatgaag tgaaagcaga ttatagcttg gctgtaaaaa tgttaaaaga aataagagat 2340 gcatacagaa atataggcca taaacttaaa gaaggggaaa catatatatc aagagatctt 2400 cagtttataa gtaaggtgat tcaatctgaa ggagtaatgc atcctacccc tataaaaaag 2460 atcttaagag tgggaccatg gataaacaca atattagatg acattaaaac cagtgcagag 2520 tcaataggga gtctatgtca ggaattagaa tttagggggg aaagcataat agttagtctg 2580 atattaagga atttttggct gtataattta tacatgcatg aatcaaagca acacccccta 2640 gcagggaagc agttattcaa acaactaaat aaaacattaa catcagtgca gagatttttt 2700 gaaataaaaa aggaaaatga agtagtagat ctatggatga acataccaat gcagtttgga 2760 ggaggagatc cagtagtctt ctatagatct ttctatagaa ggacccctga ttttttaact 2820 gaagcaatca gtcatgtgga tattctgtta agaatatcag ccaacataag aaatgaagcg 2880 aaaataagtt tcttcaaagc cttactgtca atagaaaaaa atgaacgtgc tacactgaca 2940 acactaatga gagatcctca agctgttggc tcagagcgac aagcaaaagt aacaagtgat 3000 atcaatagaa cagcagttac cagcatctta agtctttctc caaatcaact tttcagcgat 3060 agtgctatac actacagtag aaatgaagaa gaggtcggaa tcattgctga caacataaca 3120 cctgtttatc ctcatggact gagagttttg tatgaatcat taccttttca taaagctgaa 3180 aaagttgtga atatgatatc aggaacgaaa tccataacca acttattaca gagaacatct 3240 gctattaatg gtgaagatat tgacagagct gtatccatga tgctggagaa cctaggatta 3300 ttatctagaa tattgtcagt agttgttgat agtatagaaa ttccaaccaa atctaatggt 3360 aggctgatat gttgtcagat atctagaacc ctaagggaga catcatggaa taatatggaa 3420 atagttggag taacatcccc tagcatcact acatgcatgg atgtcatata tgcaactagc 3480 tctcatttga aagggataat cattgaaaag ttcagcactg acagaactac aagaggtcaa 3540 agaggtccaa agagcccttg ggtagggtcg agcactcaag agaaaaaatt agttcctgtt 3600 tataacagac aaattctttc aaaacaacaa agagaacagc tagaagcaat tggaaaaatg 3660 agatgggtat ataaagggac accaggttta agacgattac 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tatatgatgt aaaatttcta 4560 tcattagtag gttatatagg gtttaagaat tggtttatag aacagttgag atcagctgag 4620 ttgcatgagg taccttggat tgtcaatgcc gaaggtgatc tggttgagat caagtcaatt 4680 aaaatctatt tgcaactgat agagcaaagt ttatttttaa gaataactgt tttgaactat 4740 acagatatgg cacatgctct cacaagatta atcagaaaga agttgatgtg tgataatgca 4800 ctattaactc cgattccatc cccaatggtt aatttaactc aagttattga tcctacagaa 4860 caattagctt atttccctaa gataacattt gaaaggctaa aaaattatga cactagttca 4920 aattatgcta aaggaaagct aacaaggaat tacatgatac tgttgccatg gcaacatgtt 4980 aatagatata actttgtctt tagttctact ggatgtaaag ttagtctaaa aacatgcatt 5040 ggaaaactta tgaaagatct aaaccctaaa gttctgtact ttattggaga aggggcagga 5100 aattggatgg ccagaacagc atgtgaatat cctgacatca aatttgtata cagaagttta 5160 aaagatgacc ttgatcatca ttatcctttg gaataccaga gagttatagg agaattaagc 5220 aggataatag atagcggtga agggctttca atggaaacaa cagatgcaac tcaaaaaact 5280 cattgggatt tgatacacag agtaagcaaa gatgctttat taataacttt atgtgatgca 5340 gaatttaagg acagagatga tttttttaag atggtaattc tatggaggaa acatgtatta 5400 tcatgcagaa tttgcactac ttatgggaca gacctctatt tattcgcaaa gtatcatgct 5460 aaagactgca atgtaaaatt accttttttt gtgagatcag tagccacctt tattatgcaa 5520 ggtagtaaac tgtcaggctc agaatgctac atactcttaa cactaggcca ccacaacaat 5580 ttaccctgcc atggagaaat acaaaattct aagatgaaaa tagcagtgtg taatgatttt 5640 tatgctgcaa aaaaacttga caataaatct attgaagcca actgtaaatc acttttatca 5700 gggctaagaa taccgataaa taagaaagaa ttaaatagac agagaaggtt attaacacta 5760 caaagcaacc attcttctgt agcaacagtt ggaggtagca aggtcataga gtctaaatgg 5820 ttaacaaaca aggcaaacac aataattgat tggttagaac atattttaaa ttctccaaaa 5880 ggtgaattaa attatgattt ttttgaagca ttagaaaata cttaccctaa tatgattaaa 5940 ctaatagata atctagggaa tgcagagata aaaaaactga tcaaagtaac tggatatatg 6000 cttgtaagta aaaaatga 6018 <210> 39 <211> 6018 <212> ADN <213> Metaneumovirus humano <400> 39 atggatcctc ttaatgaatc cactgttaat gtctatctcc ctgattcgta ccttaaagga 60 gtaatttctt ttagtgaaac taatgcaatt ggttcatgtc tcttaaaaag accttactta 120 aaaaatgaca acactgcaaa agttgccata gagaatcctg ttattgagca tgtgagactc 180 aaaaatgcag tcaattctaa aatgaaaata tcagattaca aggtagtaga gccagtaaac 240 atgcaacatg aaataatgaa gaatgtacac agttgtgagc tcacactatt gaaacagttt 300 ttaacaagga gtaaaaacat tagcactctc aaattaaata tgatatgtga ttggctgcaa 360 ttaaagtcta catcagatga tacctcaatc ctaagtttca tagatgtaga atttatacct 420 agttgggtaa gcaactggtt tagtaattgg tacaatctca ataagttaat tttggaattc 480 agaagagagg aagtaataag aaccggttca atcttatgca ggtcattggg taaattagtt 540 tttattgtat catcatacgg atgtatcgtc aagagcaaca aaagcaaaag agtgagcttc 600 ttcacataca atcaactgtt aacatggaaa gatgtgatgt taagtagatt taatgcgaat 660 ttttgtatat gggtaagcaa tagtctgaat gaaaatcagg aagggctagg gttaagaagt 720 aatctacaag gtatgttaac taataaacta tatgaaactg tagattatat gctaagttta 780 tgttgcaatg aaggtttctc acttgtaaaa gagttcgaag gttttattat gagtgaaatc 840 cttaggatta ctgaacatgc tcaattcagt actagattta gaaatacttfc atta afcgga 900 ttaacagatc aattaacaaa attaaaaaat aaaaacagac tcagagttca tggtaccgta 960 ttagaaaata atgattatcc aatgtatgaa gttgtactta 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ctatcaaaac cagaagaaat 1860 gacagttata ataattacat tgcaagagca tccatagtaa cagatttgag caagttcaac 1920 caagccttta gatatgaaac tacagcgatc tgtgcggatg tagcagacga attacatgga 1980 acacaaagct tattctgttg gttacatctt atcgttccta tgactacaat gatatgtgcc 2040 tatagacatg caccaccaga aacaaaaggt gaatatgata tagataagat agaagagcaa 2100 agtggtctat atagatatca catgggcggt attgaaggat ggtgtcaaaa actctggaca 2160 atggaagcta tatctttatt ggatgttgta tctgtaaaga cacggtgtca aatgacatct 2220 ttattaaacg gtgataacca atcaatagat gtaagtaaac cagtcaagtt atctgaaggt 2280 ttagatgaag tgaaggcaga ttatcgctta gcaataaaaa tgctaaaaga aataagagat 2340 gcatacagaa atataggcca taaacttaaa gaaggggaaa catatatatc aagggatctt 2400 caatttataa gcaaggtgat tcaatctgaa ggagtgatgc atcctacccc tataaaaaag 2460 gtcttgagag taggaccatg gataaacaca atattagatg acattaaaac tagtgctgag 2520 tcaataggga gtctatgtca agaattagaa t taggggag aaagcataat agttagtctg 2580 atattaagaa acttctggct gtataactta tacatgcatg aatcaaagca acatcctttg 2640 gcagggaaac agttattcaa acaactaaat aaaacattaa 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Asp Asn Lys Leu Ser Asp Ser Lys His Val Ala Leu His Asn 115 120 125 Leu Val Leu Ser Tyr Met Glu Met Ser Lys Thr Pro Ala Ser Leu lie 130 135 140 Asn Asn Leu Lys Arg Leu Pro Arg Glu Lys Leu Lys Lys Leu Ala Lys 145 150 155 160 Leu lie lie Asp Leu Ser Ala Gly Ala Glu Asn Asp Ser Ser Tyr Ala 165 170 175 Leu Gln Asp Ser Glu Ser Thr Asn Gln Val Gln 180 185 <210> 43 <211> 187 <212> PRT <213> Metaneumovirus humano <400> 43 Met Ser Arg Lys Ala Pro Cys Lys Tyr Glu Val Arg Gly Lys Cys Asn 1 5 10 15 Arg Gly Ser Glu Cys Lys Phe Asn His Asn Tyr Trp Ser Trp Pro Asp 20 25 30 Arg Tyr Leu Leu lie Arg Ser Asn Tyr Leu Leu Asn Gln Leu Leu Arg 35 40 45 Asn Thr Asp Arg Ala Asp Gly Leu Ser lie lie Ser Gly Ala Gly Arg 50 55 60 Glu Asp Arg Thr Gln Asp Phe Val Leu Gly Ser Thr Asn Val Val Gln 65 70 75 80 Gly Tyr lie Asp Asp Asn Gln Ser lie Thr Lys Ala Ala Ala Cys Tyr 85 90 95 Ser Leu His Asn lie lie Lys Gln Leu Gln Glu Val Glu Val Arg Gln 100 105 110 Ala Arg Asp Ser Lys Leu Ser Asp Ser Lys His Val Ala Leu His Asn 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caaatatgaa gtgcggggca aatgcaacag aggaagtgag 60 tgtaagttta accacaatta ctggagttgg ccagatagat acttattaat aagatcaaac 120 tatctattaa atcagctttt aaggaacact gatagagctg atggcctatc aataatatca 180 ggcgcaggca gagaagacag aacgcaagat tttgttctag gttccaccaa tgtggttcaa 240 ggttatattg atgataacca aagcataaca aaagctgcag cctgctacag tctacacaac 300 ataatcaagc aactacaaga agttgaagtt aggcaggcta gagatagcaa actatctgac 360 agcaagcatg tggcactcca taacttaatc ttatcttaca tggagatgag caaaactccc 420 gcatctttaa tcaacaatct taaaagactg ccgagagaaa aactgaaaaa attagcaaag 480 ctgataattg acttatcagc aggcgctgac aatgactctt catatgccct gcaagacagt 540 gaaagcacta atcaagtgca gtga 564 <210> 48 <211> 564 <212> ADN <213> Metaneumovirus humano <400> 48 . atgtctcgta aggctccatg caaatatgaa gtgcggggca aatgcaacag agggagtgat 60 tgcaaattca atcacaatta ctggagttgg cctgatagat atttattgtt aagatcaaat 120 tatctcttaa atcagctttt aagaaacaca gataaggctg atggtttgtc aataatatca 180 ggagcaggta gagaagatag aactcaagac tttgttcttg gttctactaa tgtggttcaa 240 gggtacattg 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480 ctcataattg acttatcagc aggtgctgaa aatgactctt catatgcctt gcaagacagt 540 gaaagcacta atcaagtgca gtgagcatgg tccagttttc attactatag aggttgatga 600 catgatatgg actcacaagg acttaaaaga agctttatct gatgggatag tgaagtctca 660 tactaacatt tacaattgtt atttagaaaa catagaaatt atatatgtca aggcttactt 720 aagttag 727 <210> 59 <211> 727 <212> ADN <213> Metaneumovirus humano <400> 59 atgtctcgca aggctccatg caaatatgaa gtgcggggca aatgcaacag aggaagtgag 60 tgtaagttta accacaatta ctggagttgg ccagatagat acttattaat aagatcaaac 120 tatctattaa atcagctttt aaggaacact gatagagctg atggcctatc aataatatca 180 ggcgcaggca gagaagacag aacgcaagat tttgttctag gttccaccaa tgtggttcaa 240 ggttatattg atgataacca aagcataaca aaagctgcag cctgctacag tctacacaac 300 ataatcaagc aactacaaga agttgaagtt aggcaggcta gagatagcaa actatctgac 360 agcaagcatg tggcactcca taacttaatc ttatcttaca tggagatgag caaaactccc 420 gcatctttaa tcaacaatct taaaagactg ccgagagaaa aactgaaaaa attagcaaag 480 ctgataattg acttatcagc aggcgctgac aatgactctt catatgccct gcaagacagt 540 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actcacaaag aattaaaaga aacactgtct gatgggatag taaaatcaca 660 caccaatatt tatagttgtt acttagaaaa tatagaaata atatatgtta aaacttactt 720 aagttag 727 <210> 61 <211> 727 <212> ADN <213> Metaneumovirus humano <400> 61 atgtctcgca aagctccatg caaatatgaa gtacggggca agtgcaacag gggaagtgag 60 tgcaaattca accacaatta ctggagctgg cctgataggt atttattgtt aagatcaaat 120 tatctcttga atcagctttt aagaaacact gataaggctg atggtttgtc aataatatca 180 ggagcaggta gagaagatag gactcaagac tttgttcttg gttctactaa tgtggttcaa 240 gggtacattg ataacaatca aggaataaca aaggctgcag cttgctatag tctacataac 300 ataataaaac agctacaaga aatagaagta agacaggcta gagataataa gctttctgac 360 agcaaacatg tggcacttca caacttgata ttatcctata tggagatgag caaaactcct 420 gcatccctga ttaataacct aaagaaacta ccaagagaaa aactgaagaa attagcgaaa 480 ttaataattg atttatcagc aggaactgat aatgactctt catatgcctt gcaagacagt 540 gaaagcacta atcaagtgca gtaagcatgg tcccaaattc attaccatag aggcagatga 600 tatgatatgg acacacaaag aattaaagga gacactgtct gatgggatag taaaatcaca 660 caccaatatt tacagttgtt 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atcaaggaac aagatatgtg ctgaagtcca gttaa 765 <210> 68 <211> 765 <212> ADN <213> Metaneumovirus humano <400> 68 atggagtcct atctagtaga cacttatcaa ggcattccat atacagctgc tgttcaagtt 60 gacctggtag aaaaagattt actgccagca agtttgacaa tatggtttcc tttatttcag 120 gccaacacac caccagcagt tctgcttgat cagctaaaaa ccttgacaat aacaactctg 180 tatgctgcat cacagaatgg tccaatactc aaggtaaatg catctgccca aggtgctgcc 240 atgtctgtac ttcccaaaaa attcgaggta aatgcaactg tagcacttga tgaatacagt 300 aaacttgatt ttgacaagct gacggtctgc gatgttaaaa cagtttattt gacaactatg 360 aaaccgtacg ggatggtgtc aaaatttgtg agttcagcca aatcagttgg caaaaagaca 420 catgatctaa ttgcactatg tgacttcatg gacctagaga aaaatatacc tgtgacaata 480 ccagcattca taaagtcagt ttcaatcaaa gagagtgaat cagccactgt tgaagctgca 540 ataagcagcg aagccgacca agccttgaca caagccaaga ttgcgcccta tgcaggacta 600 attatgatca tgaccatgaa caatccaaaa ggtatattca agaaactagg ggctggaaca 660 caagtgatag tagagctggg ggcatatgtt caggctgaga gcatcagtag gatctgcaag 720 agctggagtc accaaggaac aagatacgta ctaaaatcca gataa 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Metaneumovirus humano <400> 70 Met Ser Leu Gln Gly lie His Leu Ser Asp Leu Ser Tyr Lys His Ala 1 5 10 15 lie Leu Lys Glu Ser Gln Tyr Thr lie Lys Arg Asp Val Gly Thr Thr 20 25 30 Thr Ala Val Thr Pro Ser Ser Leu Gln Gln Glu lie Thr Leu Leu Cys 35 40 45 Gly Glu lie Leu Tyr Ala Lys His Ala Asp Tyr Lys Tyr Ala Ala Glu 50 55 60 lie Gly lie Gln Tyr lie Ser Thr Ala Leu Gly Ser Glu Arg Val Gln 65 70 75 80 Gln lie Leu Arg Asn Ser Gly Ser Glu Val Gln Val Val Leu Thr Arg 85 90 95 Thr Tyr Ser Leu Gly Lys lie Lys Asn Asn Lys Gly Glu Asp Leu Gln 100 105 110 Met Leu Asp lie His Gly Val Glu Lys Ser Trp Val Glu Glu lie Asp 115 120 125 Lys Glu Ala Arg Lys Thr Met Ala Thr Leu Leu Lys Glu Ser Ser Gly 130 135 140 Asn lie Pro Gln Asn Gln Arg Pro Ser Ala Pro Asp Thr Pro lie lie 145 150 155 160 Leu Leu Cys Val Gly Ala Leu lie Phe Thr Lys Leu Ala Ser Thr lie 165 170 175 Glu Val Gly Leu Glu Thr Thr Val Arg Arg Ala Asn Arg Val Leu Ser 180 185 190 Asp Ala Leu Lys Arg Tyr Pro Arg Met Asp lie Pro Lys lie Ala Arg 195 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caggtggttc taaccaaaac atactcctta 300 gggaaaggca aaaacagtaa aggggaagag ctgcagatgt tagatataca tggagtggaa 360 aagagttgga tagaagaaat agacaaagag gcaagaaaga caatggtaac tttgcttaag 420 gaatcatcag gtaacatccc acaaaaccag agaccttcag caccagacac accaataatt 480 ttattatgtg taggtgccct aatattcact aaactagcat caacaataga agttggatta 540 gagactacag ttagaagagc taatagagtg ctaagtgatg cactcaaaag atacccaagg 600 atagatatac caaagattgc tagatctttt tatgaactat ttgaacaaaa agtgtactac 660 agaagtttat tcattgagta cggaaaagct ttaggctcat cttcaacagg aagcaaagca 720 gaaagtttgt ttgtaaatat atttatgcaa gcttatggag ctggccaaac actgctaagg 780 tggggtgtca ttgccagatc atccaacaac ataatgctag ggcatgtatc tgtgcaatct 840 gaattgaagc aagttacaga ggtttatgac ttggtgagag aaatgggtcc tgaatctggg 900 cttttacatc taagacaaag tccaaaggca gggctgttat cattggccaa ttgccccaat 960 tttgctagtg ttgttcttgg caatgcttca ggtctaggca taatcggaat gtacagaggg 1020 agagtaccaa acacagagct attttctgca gcagaaagtt atgccagaag cttaaaagaa 1080 agcaataaaa tcaacttctc ttcgttaggg cttacagatg aagaaaaaga agctgcagaa 1140 cacttcttaa acatgagtgg tgacaatcaa aatgattatg agtaa 1185 <211> 1185 <212> ADN <213> Metaneumovirus humano <400> 77 atgtctcttc aagggattca cctaagtgat ctgtcatata aacatgctat attaaaagag 60 tctcaataca caataaaaag agatgtaggc accacaactg cagtgacacc ttcatcattg 120 cagcaagaga taacactttt gtgtggagag attctttaca ctaaacatac tgattacaaa 180 tatgctgcag agatagggat acaatatatt tgcacagctc taggatcaga aagagtacaa 240 cagattttaa gaaattcagg tagtgaggtt caggtggttc taaccaagac atactcttta 300 gggaaaggta aaaatagtaa aggggaagag ttgcaaatgt tagatataca tggagtggaa 360 aagagttggg tagaagaaat agacaaagag gcaagaaaaa caatggtgac tttgctaaag 420 gaatcatcag gcaacatccc acaaaaccag aggccttcag caccagacac accaataatt 480 ttattgtgtg taggtgcttt aatattcact aaactagcat caacaataga agttggacta 540 gagactacag ttagaagggc taacagagtg ttaagtgatg cgctcaaaag ataccctagg 600 gtagatatac caaagattgc tagatctttt tatgaactat ttgagcagaa agtgtattac 660 aggagtctat tcattgagta tgggaaagct ttaggctcat cttcaacagg aagcaaagca 720 gaaagtttgt ttgtaaatat atttatgcaa gcttatggag ccggtcagac aatgctaagg 780 tggggtgtca ttgccagatc atctaacaac ataatgctag ggcatgtatc tgtgcaagct 840 gaattgaaac aagttacaga ggtttatgat ttggtaagag aaatgggtcc tgaatctggg 900 cttttacatc taagacaaag tccaaaggca ggactgttat cgttggctaa ttgccccaat 960 tttgctagtg ttgttcttgg taatgcttca ggtctaggta taatcggaat gtacagggga 1020 agagtgccaa acacagagct attttctgca gcagaaagtt atgccagaag cttaaaagaa 1080 agcaacaaaa tcaacttctc ctcattaggg ctcacagacg aagaaaaaga agctgcagaa 1140 cacttcttaa acatgagtga tgacaatcaa gatgattatg agtaa 1185 <210> 78 <211> 294 <212> PRT <213> Metaneumovirus humano <400> 78 et Ser Phe Pro Glu Gly Lys Asp lie Leu Phe Met Gly Asn Glu Ala 1 5 10 15 Ala Lys Leu Ala Glu Ala Phe Gln Lys Ser Leu Arg Lys Pro Gly His 20 25 30 Lys Arg Ser Gln Ser lie lie Gly Glu Lys Val Asn Thr Val Ser Glu 35 40 45 Thr Leu Glu Leu Pro Thr lie Ser Arg Pro Ala Lys Pro Thr lie Pro 50 55 60 Ser Glu Pro Lys Leu Ala Trp Thr Asp Lys Gly Gly Ala Thr Lys Thr 65 70 75 80 Glu lie Lys Gln Ala lie Lys Val Met Asp 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ttcatcatta agcattgagg ccagattgga atcaatagag 540 gagaaattaa gcatgatatt agggctatta agaacactca acattgctac agcaggaccc 600 acagcagcaa gagatgggat cagagatgca atgattggcg taagagagga attaatagca 660 gacataataa aggaagctaa agggaaagca gcagaaatga tggaagagga aatgagtcaa 720 cgatcaaaaa taggaaatgg tagtgtaaaa ttaacagaaa aagcaaaaga gctcaacaaa 780 attgttgaag atgaaagcac aagtggagaa tccgaagaag aagaagaacc aaaagacaca 840 caagacaata gtcaagaaga tgacatttac cagttaatta tgtag 885 <210> 83 <211> 885 <212> ADN <213> Metaneumovirus humano <400> 83 atgtcattcc ctgaaggaaa agatattctt ttcatgggta atgaagcagc aaaattggca 60 gaagcttttc aaaaatcatt aagaaaacct aatcataaaa gatctcaatc tattatagga 120 gaaaaagtga acactgtatc tgaaacattg gaattaccta ctatcagtag acctaccaaa 180 ccgaccatat tgtcagagcc gaagttagca tggacagaca aaggtggggc aatcaaaact 240 gaagcaaagc aaacaatcaa agttatggat cctattgaag aagaagagtt tactgagaaa 300 agggtgctgc cctccagtga tgggaaaact cctgcagaaa agaagttgaa accatcaacc 360 aacactaaaa agaaggtctc atttacacca aatgaaccag gaaaatacac 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gaaaagaaaa cacaaaccaa 6720 accacaagca cagctgcaac ccaaacaacc aacaccacca accaaatcag aaatgcaagt 6780 gagacaatca caacatccga cagacccaga actgacacca caacccaaag cagcgaacag 6840 acaacccggg caacagaccc aagctcccca ccacaccatg catagagagg tgcaaaactc 6900 aaatgagcac aacacacaaa catcccatcc aagtagttaa caaaaaacca caaaataacc 6960 ttgaaaacca aaaaaccaaa acataaaccc agacccagaa aaacatagac accatatgga 7020 aggttctagc atatgcacca atgagatggc atctgttcat gtatcaatag caccaccatc 7080 attcaaggaa taagaagagg cgaaaattta agggataaat gacaatggat cccttttgtg 7140 aatctactgt taatgtttat ctccctgatt catatctcaa aggagtaata tcttttagtg 7200 aaaccaatgc aattggatca tgtcttttga aaagacccta tctaaaaaat gacaacactg 7260 ccaaagttgc tgtagaaaac cctgttgttg aacatgtgag gcttagaaat gcagtcatga 7320 ccaaaatgaa gatatcagat tataaagtgg ttgaaccagt taatatgcag catgaaataa 7380 tgaaaaatat acatagttgt gagcttacat tattaaaaca attcttaacg agaagcaaaa 7440 acattagctc tctaaaatta aatatgatat gtgattggtt acagttaaaa tccacttcag 7500 ataacacatc aattctcaat tttatagatg tggagttcat 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Metaneumovirus humano <400> 102 atggaggtga aagtggagaa cattcgaaca atagatatgc tcaaagcaag agtaaaaaat 60 cgtgtggcac gcagcaaatg ctttaaaaat gcctctttgg tcctcatagg aataactaca 120 ttgagtattg ccctcaatat ctatctgatc ataaactata aaatgcaaaa aaacacatct 180 gaatcagaac atcacaccag ctcatcaccc atggaatcca gcagagaaac tccaacggtc 240 cccacagata attcagacac caactcaagc ccacaacatc caactcaaca gtccacagaa 300 ggctccacac tctactttgc agcctcagca agctcaccag agacagaacc aacatcaaca 360 ccagacacaa cagaccgccc gcccttcgtc gacacacaca caacaccacc aagcgcaagc 420 agaacaaaga caagtccggc agtccacaca aaaaacaacc caaggataag ctccagaaca 480 cattctccac catgggcaac gacaaggacg gcacgcagaa ccaccactct ccgcacaagc 540 agcacaagaa agagaccgtc cacagcatca gtccaacccg acatcagcgc aacaacccac 600 aaaaacgaag aagcaagtcc agcgagccca caaacatctg caagcacaac aagaacacaa 660 aggaaaagcg tggaggccaa cacatcaaca acatacaacc aaactagtta acaaaaaata 720 caaaataact ctaagataaa ccatgcagac accaacaatg gagaagtcaa aagacaattc 780 acaatctccc caaaaaggca acaacaccat attagctctg cccaaatctc 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cgtataagaa gtagcaagtg ctatagaaat gctacactga tccttattgg attaacagca 120 ctaagtatgg cacttaatat ttttttaatc attgattatg caacattaaa aaacatgacc 180 aaagtggaac actgtgttaa tatgccgccg gtagaaccaa gcaagaagac cccaatgacc 240 tctgcagtag actcaaacac caaacccaat ccacagcagg .caacacagtt gaccacagag 300 gattctacat ctttagcagc aaccctagag gaccatccac acacagggac aactccaaca 360 ccagatgcaa cagtctctca gcaaaccaca gacgagcaca caacactgct gagatcaacc 420 aacagacaga ccacccaaac aactgcagag aaaaagccaa ccagggcaac aaccaaaaaa 480 gaaaccacaa ctcgaaccac aagcacagct gcaacccaaa cactcaacac caccaaccaa 540 actagcaatg gaagagaggc aaccacaaca tctgccagat ccagaaacaa tgccacaact 600 caaagcagcg atcaaacaac ccaggcagca gaaccaagct cccaatcaca acatacacag 660 aaaagcacaa caacaacata caacacagac acatcttctc taagtagtta acaaaaaaac 720 tataaaataa ccatgaaaac caaaaaacta gaaaagttaa tttgaactca gaaaagaaca 780 caaacactat atgaattatt tgagcgtata tactaatgaa atagcatctg tttgtgcatc 840 aataatacca tcattattta agaaataaga agaagctaaa attcaa 886 <210> 130 <211> 887 <212> ADN <213> Metaneumovirus humano <400> 130 atggaagtaa gagtggagaa cattcgggca atagacatgt tcaaagcaaa gatgaaaaac 60 cgtataagaa gtagcaagtg ctatagaaat gctacactga tccttattgg attatcagca 120 ctaagtatgg cacttaatat ttttttaatc attgattatg caaaatcaaa aaacatgacc 180 agagtggaac actgtgtcaa tatgccgccg gtagaaccaa gcaagaagac cccaatgacc 240 tctgcagtag acttaaacac caaacccaat ccacagcggg caacacagtt gaccacagag 300 gattcaacat ctctagcagc aaccctagag ggccatctac acacagggac aactccaaca 350 ccagatgtaa cagtctctca gcaaaccaca gacgagcaca caacactgct gagatcaacc 420 aacagacaga ccacccaaac agccgcagag aaaaagccaa ccagagtaac aactaacaaa 480 gaaaccataa ctcgaaccac aagcacágcc gcaacccaaa cactcaacac caccaaccaa 540 accaacaatg gaagagaggc aaccacaaca tctgccagat ccagaaacaa tgccacaact SOO caaagcagcg accaaacaac ccaggcagca gacccaagct cccaatcaca acatacacag 660 aaaagcataa caacaacata caacacagac acatcttctc caagtagtta acaaaaaaac 720 tataaaataa ccatgaaaac caaaaaaact agaaaagtta atttgaactc agaaaagaac 780 acaaacacta tatgaattgt ttgagcgtat atactaatga 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<212> PRT <213> etapneumovirus humano <400> 142 Met Glu Val Lys Val Glu Asn lie Arg Ala lie Asp Met Leu Lys Ala 1 5 10 15 Arg Val Lys Asn Arg Val Ala Arg Ser Lys Cys Phe Lys Asn Ala Ser 20 25 30 Leu lie Leu lie Gly lie Thr Thr Leu Ser lie Ala Leu Asn lie Tyr 35 40 45 Leu lie lie Asn Tyr Thr lie Gln Lys Thr Thr Ser Glu Ser Glu His 50 55 60 His Thr Ser Ser Pro Pro Thr Glu Ser Asn Lys Glu Thr Ser Thr lie 65 70 75 80 Pro lie Asp Asn Pro Asp lie Asn Pro Asn Seir Gln His Pro Thr Gln 85 90 95 Gln Ser Thr Glu Ser Pro Thr Leu Asn Pro Ala Ala Ser Val Ser Pro 100 105 110 Ser Glu Thr Glu Pro Ala Ser Thr Pro Asp Thr Thr Asn Arg Leu Ser 115 120 125 Ser Val Asp Arg Ser Thr Thr Gln Pro Ser Glu Ser Arg Thr Lys Thr 130 135 140 Lys Pro Thr Val His Thr Lys Asn Asn Pro Ser Thr Val Ser Arg Thr 145 150 ' 155 150 Gln Ser Pro Leu Arg Ala Thr Thr Lys Ala Val Leu Arg Ala Thr Ala 165 170 175 Phe Arg Thr Ser Ser Thr Arg Lys Arg Pro Thr Thr Thr Ser Val Gln 180 185 190 Ser Asp Ser Ser Thr Thr Thr Gln Asn His Glu Glu 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<223> Xaa = aminoácido desconocido u otro <400> 147 Met Glu Val Lys Val Glu Asn lie Arg Ala lie Asp Met Leu Lys Ala 1 5 10 15 Arg Val Lys Asn Arg Val Ala Arg Ser Lys Cys Phe Lys Asn Ala Ser 20 25 30 Leu lie Leu lie Gly lie Thr Thr Leu Ser lie Ala Leu Asn lie Tyr 35 40 45 Leu lie lie Asn Tyr Thr lie Gln Lys Thr Thr Ser Glu Ser Glu His 50 55 60 His Thr Ser Ser Pro Pro Thr Glu Ser Asn Lys Glu Ala Ser Thr lie 65 70 75 80 Ser Thr Asp Asn Pro Asp lie Asn Pro Asn Ser Gln His Pro Thr Gln 85 90 95 Gln Ser Thr Glu Asn Pro Thr Leu Asn Pro Ala Ala Ser Val Ser Ser 100 105 110 Ser Glu Thr Glu Pro Ala Ser Thr Pro Asp Thr Thr Asn Arg Leu Ser 115 120 125 Ser Val Asp Arg Ser Thr Ala Gln Pro Ser Glu Ser Arg Thr Lys Thr 130 135 140 Lys Pro Thr Val His Thr Arg Asn Asn Pro Ser Thr Ala Ser Ser Thr 145 150 155 160 Gln Ser Pro Pro Arg Val Thr Thr Lys Ala lie Leu Arg Ala Thr Val 165 170 175 Phe Arg Met Ser Ser Thr Gly Lys Arg Pro Ala Thr Thr Leu Val Gln 180 " 185 190 Ser Asp Ser Ser Thr Thr Thr Gln Asn Hls Glu 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<213> Metaneumovirus humano <40O> 227 ataggggtct acggaagctc cgtgatttac atggttcaat tgccgatctt tggtgtcata 60 gatacacctt gttggataat caaggcagct ccctcttgct cagaaaaaaa cgggaattat 120 gcttgcctcc taagagagga tcaagggtgg tattgtaaaa atgcaggatc cactgtttac 180 tacccaaatg aaaaagactg cgaaacaaga ggtgatcatg ttttttgtga cacagcagca 240 gggatcaatg ttgctgagca atcaagagaa tgcaacatca acatatctac taccaactac 300 ccatgcaaag tcagcacagg aagacaccct ataagcatgg ttgcactatc acctctcggt 360 gctttggtgg cttgctataa aggggtaagc tgctcgattg gcagcaatcg ggttggaatc 420 atcaaacaat tacctaaagg ctgctcata 449 <210> 228 <211> 449 <212> ADN <213> Metaneumovirus humano <400> 228 ataggggtct acggaagctc tgtgatttac atggttcaat tgccgatctt tggtgtcata 60 gatacacctt gttggataat caaggcagct ccctcttgct cagagaaaaa cgggaattat 120 gcttgcctcc taagagagga tcaagggtgg tattgtaaaa atgcaggatc cactgtttac 180 tacccaaatg aaaaagactg cgaaacaaga ggtgatcatg tgttttgtga cacagcagca 240 gggatcaatg ttgctgagca atcaagagaa tgcaacatca acatatctac taccaactac 300 ccatgcaaag 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irus humano <400> 298 lie Gly Val Tyr Gly Ser Ser Val lie Tyr Met Val Gln Leu Pro lie 1 5 10 15 Phe Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp lie lie Lys Ala Ala Pro Ser 20 25 30 Cys Ser Glu Lys Asn Gly Asn Tyr Ala Cys Leu .Leu Arg Glu Asp Gln 35 40 45 Gly Trp Tyr Cys Lys Asn Ala Gly Ser Thr Val Tyr Tyr Pro Asn Glu 50 55 60 Lys Asp Cys Glu Thr Arg Gly Asp His Val Phe Cys Asp Thr Ala Ala 65 70 75 80 Gly lie Asn Val Ala Glu Gln Ser Arg Glu Cys Asn lie Asn lie Ser 85 90 95 Thr Thr Asn Tyr Pro Cys Lys Val Ser Thr Gly Arg His Pro .lie Ser 100 105 110 Met Val Ala Leu Ser Pro Leu Gly Ala Leu Val Ala Cys Tyr Lys Gly 115 120 125 Val Ser Cys Ser lie Gly Ser Asn Arg Val Gly lie lie Lys Gln Leu 130 135 140 Pro Lys Gly Cys Ser 145 <210> 299 <211> 149 <212> PRT <213> Metaneumovirus humano <400> 299 lie Gly Val Tyr Gly Ser Ser Val lie Tyr Met Val Gln Leu Pro lie 1 5 10 15 Phe Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp lie lie Lys Ala Ala Pro Ser 20 25 30 Cys Ser Glu Lys Asn Gly Asn Tyr Ala Cys Leu Leu Arg Glu Asp Gln 35 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Ser 145 <210> 302 <211> 149 <212> PRT <213> Metaneumovirus humano <400> 302 lie Gly Val Tyr Gly Ser Ser Val lie Tyr Met Val Gln Leu Pro lie 1 5 10 15 Phe Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp lie lie Lys Ala Ala Pro Ser 20 25 30 Cys Ser Glu Lys Asn Gly Asn Tyr Ala Cys Leu Leu Arg Glu Asp Gln 35 40 45 Gly Trp Tyr Cys Lys Asn Ala Gly Ser Thr Val Tyr Tyr Pro Asn Glu 50 55 60 Lys Asp Cys Glu Thr Arg Gly Asp His Val Phe Cys Asp Thr Ala Ala 65 70 75 80 Gly lie Asn Val Ala Glu Gln Ser Arg Glu Cys Asn lie Asn lie Ser 85 90 95 Thr Thr Asn Tyr Pro Cys Lys Val Ser Thr Gly Arg His Pro lie Ser 100 105 110 Met Val Ala Leu Ser Pro Leu Gly Ala Leu Val Ala Cys Tyr Lys Gly 115 120 125 Val Ser Cys Ser lie Gly Ser Asn Arg Val Gly lie lie Lys Gln Leu 130 135 140 Pro Lys Gly Cys Ser 145 <210> 303 <211> 149 <212> PRT <213> etaneumovirus humano <400> 303 lie Gly Val Tyr Gly Ser Ser Val lie Tyr Met Val Gln Leu Pro lie 1 5 10 15 Phe Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp lie lie Lys Ala Ala Pro Ser 20 25 30 .- Cys Ser Glu 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Gln Leu Pro lie 1 5 10 15 Phe Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp lie lie Lys Ala Ala Pro Ser 20 25 30 Cys Ser Glu Lys Asp Gly Asn Tyr Ala Cys Leu Leu Arg Glu Asp Gln 35 40 45 Gly Trp Tyr Cys Lys Asn Ala Gly Ser Thr Val Tyr Tyr Pro Asn Glu 50 55 · 60 Lys Asp Cys Glu Thr Arg Gly Asp His Val Phe Cys Asp Thr Ala Ala 65 70 75 80 Gly lie Asn Val Ala Glu Gln Ser Arg Glu Cys Asn lie Asn lie Ser 85 90 95 Thr Thr Asn Tyr Pro Cys Lys Val Ser Thr Gly Arg His Pro lie Ser 100 105 110 Met Val Ala Leu Ser Pro Leu Gly Ala Leu Val Ala Cys Tyr Lys Gly 115 120 125 Val Ser Cys Ser lie Gly Ser Asn Arg Val Gly lie lie Lys Gln Leu 130 135 140 Pro Lys Gly Cys Ser 145 <210> 312 <211> 149 <212> PRT <213> Metaneumovirus humano <400> 312 lie Gly Val Tyr Gly Ser Ser Val lie Tyr Met Val Gln Leu Pro lie 1 5 10 15 Phe Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp lie lie Lys Ala Ala Pro Ser 20 25 30 Cys Ser Glu Lys Asp Gly Asn Tyr Ala Cys Leu Leu Arg Glu Asp Gln 35 40 45 Gly Trp Tyr Cys Lys Asn Ala Gly Ser Thr Val Tyr Tyr Pro Asn Glu 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Met Val Ala Leu Ser Pro Leu Gly Ala Leu Val Ala Cys Tyr Lys Gly 115 120 125 Val Ser Cys Ser lie Gly Ser Asn Arg Val Gly lie lie Lys Gln Leu 130 135 140 Pro Lys Gly Cys Ser 145 <210> 314 <211> 149 <212> PRT <213> Metaneumovirus humano <400> 314 lie Gly Val Tyr Gly Ser Ser Val lie Tyr Met Val Gln Leu Pro lie 1 5 10 ,15 Phe Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp lie lie Lys Ala Ala Pro Ser 20 25 30 Cys Ser Glu Lys Asp Gly Asn Tyr Ala Cys Leu Leu Arg Glu Asp Gln 35 40 45 Gly Trp Tyr Cys Lys Asn Ala Gly Ser Thr Val Tyr Tyr Pro Asn Glu 50 55 60 Lys Asp Cys Glu Thr Arg Gly Asp His Val Phe Cys Asp Thr Ala Ala 65 70 75 80 Gly lie Asn Val Ala Glu Gln Ser Arg Glu Cys Asn lie Asn lie Ser 85 90 95 Thr Thr Asn Tyr Pro Cys Lys Val Ser Thr Gly Arg His Pro lie Ser 100 105 110 Met Val Ala Leu Ser Pro Leu Gly Ala Leu Val Ala Cys Tyr Lys Gly 115 120 125 Val Ser Cys Ser lie Gly Ser Asn Arg Val Gly lie lie Lys Gln Leu 130 135 ' 140 Pro Lys Gly Cys Ser 145 <210> 315 <211> 149 <212> PRT <213> Metaneumovirus humano <400> 315 lie Gly Val Tyr Gly Ser Ser Val lie Tyr Met Val Gln Leu Pro lie 1 5 10 15 Phe Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp lie lie Lys Ala Ala Pro Ser 20 25 30 Cys Ser Glu Lys Asp Gly Asn Tyr Ala Cys Leu Leu Arg Glu Asp Gln 35 40 45 Gly Trp Tyr Cys Lys Asn Ala Gly Ser Thr Val Tyr Tyr Pro Asn Glu 50 55 .60 Lys Asp Cys Glu Thr Arg Gly Asp His Val Phe Cys Asp Thr Ala Ala 65 70 75 80 Gly lie Asn Val Ala Glu Gln Ser Arg Glu Cys Asn lie Asn lie Ser 85 90 95 Thr Thr Asn Tyr Pro Cys Lys Val Ser Thr Gly Arg His Pro lie Ser 100 105 110 Met Val Ala Leu Ser Pro Leu Gly Ala Leu Val Ala Cys Tyr Lys Gly 115 120 125 Val Ser Cys Ser lie Gly Ser Asn Arg Val Gly lie lie Lys Gln Leu 130 135 140 Pro Lys Gly Cys Ser 145 <210> 316 <211> 149 <212> PRT <213> Metaneumovirus humano <400> 316 lie Gly Val Tyr Gly Ser Ser Val lie Tyr Met Val Gln Leu Pro lie 1 5 10 15 Phe Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp lie lie Lys Ala Ala Pro Ser 20 25 30 Cys Ser Glu Lys Asp Gly Asn Tyr Ala Cys Leu Leu Arg Glu Asp Gln 35 40 45 Gly Trp 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<211> 149 <212> PRT <213> Metaneumovirus humano <400> 319 lie Gly Val Tyr Gly Ser Ser Val lie Tyr Met Val Gln Leu Pro lie 1 5 10 15 Phe Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp lie lie Lys Ala Ala Pro Ser 20 25 30 Cys Ser Glu Lys Asp Gly Asn Tyr Ala Cys Leu Leu Arg Glu Asp Gln 35 40 45 Gly Trp Tyr Cys Lys Asn Ala Gly Ser T r Val Tyr Tyr Pro Asn Glu 50 55 60 Lys Asp Cys Glu Thr Arg Gly Asp His Val Phe Cys Asp Thr Ala Ala 65 70 ' 75 80 Gly lie Asn Val Ala Glu Gln Ser Arg Glu Cys Asn lie Asn lie Ser 85 90 95 Thr Thr Asn Tyr Pro Cys Lys Val Ser Thr Gly Arg His Pro lie Ser 100 105 110 Met Val Ala Leu Ser Pro Leu Gly Ala Leu Val Ala Cys Tyr Lys Gly . 115 120 125 Val Ser Cys Ser lie Gly Ser Asn Arg Val Gly lie lie Lys Gln Leu 130 135 140 Pro Lys Gly Cys Ser 145 <210> 320 <211> 149 <212> PRT <213> etaneumovirus humano <400> 320 lie Gly Val Tyr Gly Ser Ser Val lie Tyr Met Val Gln Leu Pro lie 1 5 10 15 Phe Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp lie lie Lys Ala Ala Pro Ser 20 25 30 Cys Ser Glu Lys Asp Gly Asn 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Gln Leu 130 135 140 Pro Lys Gly Cys Ser 145 <210> 323 <211> 149 <212> PRT <213> Metaneumovirus humano <400> 323 lie Gly Val Tyr Gly Ser Ser Val lie Tyr Met Val Gln Leu Pro lie 1 5 10 15 Phe Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp lie lie .Lys Ala Ala Pro Ser 20 25 30 Cys Ser Glu Lys Asp Gly Asn Tyr Ala Cys Leu Leu Arg Glu Asp Gln 35 40 45 Gly Trp Tyr Cys Lys Asn Ala Gly Ser Thr Val Tyr Tyr Pro Asn Glu 50 55 60 Lys Asp Cys Glu Thr Arg Gly Asp His Val Phe Cys Asp Thr Ala Ala 65 70 75 80 Gly lie Asn Val Ala Glu Gln Ser Arg Glu Cys Asn lie Asn lie Ser 85 90 95 Thr Thr Asn Tyr Pro Cys Lys Val Ser Thr Gly Arg His Pro lie Ser 100 105 110 Met Val Ala Leu Ser Pro Leu Gly Ala Leu Val Ala Cys Tyr Lys Gly 115 120 125 Val Ser Cys Ser lie Gly Ser Asn Arg Val Gly lie lie Lys Gln Leu 130 135 140 Pro Lys Gly Cys Ser 145 <210> 324 <211> 149 <212> PRT <213> Metaneumovirus humano <400> 324 lie Gly Val Tyr Gly Ser Ser Val lie Tyr Met Val Gln Leu Pro lie 1 5 ' 10 15 Phe Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp lie lie Lys Ala Ala Pro Ser 20 25 30 Cys Ser Glu Lys Asp Gly Asn Tyr Ala Cys Leu Leu Arg Glu Asp Gln 35 40 45 Gly Trp Tyr Cys Lys Asn Ala Gly Ser Thr Val Tyr Tyr Pro Asn Glu 50 55 60 Lys Asp Cys Glu Thr Arg Gly Asp His Val Phe Cys Asp Thr Ala Ala 65 70 75 80 Gly lie Asn Val Ala Glu Gln Ser Arg Glu Cys Asn lie Asn lie Ser 85 90 95 Thr Thr Asn Tyr Pro Cys Lys Val Ser Thr Gly Arg His Pro lie Ser 100 105 110 Met Val Ala Leu Ser Pro Leu Gly Ala Leu Val Ala Cys Tyr Lys Gly 115 120 125 Val Ser Cys Ser lie Gly Ser Asn Arg Val Gly .lie lie Lys Gln Leu 130 135 140 Pro Lys Gly Cys Ser 145 <210> 325 <211> 149 <212> PRT <213> Metaneumovirus humano <400> 325 / lie Gly Val Tyr Gly Ser Ser Val lie Tyr Met Val Gln Leu Pro lie 1 5 10 15 Phe Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp lie lie Lys Ala Ala Pro Ser 20 25 30 Cys Ser Glu Lys Asp Gly Asn Tyr Ala Cys Leu Leu Arg Glu Asp Gln 35 40 45 Gly Trp Tyr Cys Lys Asn Ala Gly Ser Thr Val Tyr Tyr Pro Asn Glu 50 55 60 Lys Asp Cys Glu Thr Arg Gly Asp His Val Phe Cys Asp Thr Ala Ala 65 70 75 80 Gly lie Asn Val Ala Glu Gln Ser Arg Glu Cys Asn lie Asn lie Ser 85 90 95 Thr Thr Asn Tyr Pro Cys Lys Val Ser Thr Gly Arg His Pro lie Ser 100 105 110 Met Val Ala Leu Ser Pro Leu Gly Ala Leu Val Ala Cys Tyr Lys Gly 115 120 125 Val Ser Cys Ser lie Gly Ser Asn Arg Val Gly lie lie Lys Gln Leu 130 135 140 Pro Lys Gly Cys Ser \ 145 <210> 326 <211> 149 <212> PRT <213> Metaneumovirus humano <400> 326 lie Gly Val Tyr Gly Ser Ser Val lie Tyr Met Val Gln Leu Pro lie 1 5 10 15 Phe Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp lie lie Lys Ala Ala Pro Ser 20 25 30 Cys Ser Glu Lys Asp Gly Asn Tyr Ala Cys Leu Leu Arg Glu Asp Gln 35 40 45 Gly Trp Tyr Cys Lys Asn Ala Gly Ser Thr Val Tyr Tyr Pro Asn Glu 50 55 60 Lys Asp Cys Glu Thr Arg Gly Asp His Val Phe Cys Asp Thr Ala Ala 65 70 75 80 Gly lie Asn Val Ala Glu Gln Ser Arg Glu Cys Asn lie Asn lie Ser 85 90 95 Thr Thr Asn Tyr Pro Cys Lys Val Ser Thr Gly Arg His Pro lie Ser 100 105 110 Met Val Ala Leu Ser Pro Leu Gly Ala Leu Val Ala Cys Tyr Lys Gly 115 120 125 Val Ser Cys Ser lie Gly Ser Asn Arg Val Gly lie lie Lys Gln Leu 130 135 140 Pro Lys Gly Cys Ser 145 <210> 327 <211> 149 <212> PRT <213> Metaneumovirus humano <400> 327 lie Gly Val Tyr Gly Ser Ser Val lie Tyr Met Val Gln Leu Pro lie 1 5 10 15 Phe Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp lie lie Lys Ala Ala Pro Ser 20 25 30 Cys Ser Glu Lys Asp Gly Asn Tyr Ala Cys Leu Leu Arg Glu Asp Gln 35 40 45 Gly Trp Tyr Cys Lys Asn Ala Gly Ser Thr Val Tyr Tyr Pro Asn Glu 50 55 60 Lys Asp Cys Glu Thr Arg Gly Asp His Val Phe Cys Asp Thr Ala Ala 65 70 75 80 Gly lie Asn Val Ala Glu Gln Ser Arg Glu Cys Asn lie Asn lie Ser 85 90 95 Thr Thr Asn Tyr Pro Cys Lys Val Ser Thr Gly Arg His Pro lie Ser 100 105 110 Met Val Ala Leu Ser Pro Leu Gly Ala Leu Val Ala Cys Tyr Lys Gly 115 120 125 Val Ser Cys Ser lie Gly Ser Asn Arg Val Gly lie lie Lys Gln Leu 130 135 140 Pro Lys Gly Cys Ser 145

Claims (19)

  1. 634
  2. REIVINDICACIONES 1. Un virus de parainfluenza recorabinante de tipo 3 , que comprende una secuencia de nucleótidos "de metaneumovirus de mamífero, caracterizado porque el metaneumovirus de mamífero es un virus de ARN de hebra individual de sentido negativo que pertenece a la subfamilia Pneumovirinae de la familia Paramixoviridae y en donde el metaneumovirus de mamífero está filogenéticamente mas relacionado a un aislado de virus depositado como 1-2614 con CNC , Paris que está relacionado al virus de rinotraqueitis del pavo (TRTV) . 2. El virus de parainfluenza recombinante de la reivindicación 1, caracterizado porque la secuencia de nucleótidos del metaneumovirus de mamífero está sustituida por una secuencia de nucleótidos de parainfluenza o se inserta en el genoma del virus de parainfluenza . 3. El virus de parainfluenza recombinante de la reivindicación 1, caracterizado porque la secuencia de nucleótidos de metaneumovirus de mamíferos se inserta en la posición 1, 2 , 3, 4, 5, o 6 del genoma del virus de parainfluenza . 4. El virus de parainfluenza recombinante de la reivindicación 1, caracterizado porque comprende además una secuencia de nucleótidos del RSV. 5. El virus de parainfluenza recombinante de la reivindicación 1, caracterizado porque el virus de 635 parainfluenza es un virus de parainfluenza bovino . 6. El virus de parainfluenza recombinante de la reivindicación 5, caracterizado porque comprende además una o más secuencias de nucleótidos del virus de parainfluenza humana . 7. El virus de parainfluenza recombinante de la reivindicación 1, caracterizado porque la secuencia de nucleótidos codifica un polipéptido de metaneumovirus de mamífero . 8. El virus de parainfluenza recombinante de la reivindicación 7, caracterizado porque el polipéptido es la proteína F o G del metaneumovirus de mamífero, o un fragmento de la misma. 9. El virus de parainfluenza recombinante de la reivindicación 7, caracterizado porque el polipéptido es por lo menos 90% idéntico a la SEQ ID NO: 70 o un fragmento de la misma; es por lo menos 70% idéntico a la SEQ ID NO: 78 o un fragmento de la misma; es por lo menos 90% idéntico a SEQ ID NO: 62 o un fragmento de la misma; es por lo menos 82% idéntico a la SEQ ID NO: 18 o un fragmento de la misma; es por lo menos 85% idéntico a la SEQ ID NO: 42 o un fragmento de la misma; es por lo menos 60% idéntico a la SEQ ID NO: 50 o un fragmento de la misma; es por lo menos 85% idéntico a la SEQ ID NO: 34 o un fragmento de la misma; es por lo menos 20% idéntico a la SEQ ID NO: 26 o un fragmento de la misma; es 636 por lo menos 30% idéntico a SEQ ID NO: 86 o un fragmento de la misma. 10.' El virus de parainfluenza recombinante de la reivindicación 7, caracterizado porque el polipéptido es SEQ
  3. ID NO: 78, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 42, SEQ
  4. ID NO: 50, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 86, SEQ
  5. ID NO: 70, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 80, SEQ
  6. ID NO: 64, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 52, SEQ
  7. ID NO: 88, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 73, SEQ
  8. ID NO: 81, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 45, SEQ
  9. ID NO: 53, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 27, SEQ
  10. ID NO: 71, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 43, SEQ
  11. ID NO: 51, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 35, o un f agmento de las mismas . 11. El virus de parainfluenza recombinante de la reivindicación 1, caracterizado porque la secuencia de nucleótidos se selecciona del grupo que consiste de SEQ ID NO: 22-25; SEQ ID NO: 30-33; SEQ ID NO: 38-41;, SEQ ID NO: 46-49, SEQ ID NO: 54-61; SEQ ID NO: 66-69; SEQ ID NO: 74-77; SEQ ID NO: 82-85; SEQ ID NO: 90-93, SEQ ID NO: 98-132; SEQ ID NO: 168-247; o un fragmento de la mismas
  12. 12. El virus de parainfluenza recombinante de las reivindicaciones 9 o 10, caracterizado porque el fragmento es de por lo menos 10, de por lo menos 15, de por lo menos 20, de por lo menos 25, de por lo menos 50, de por lo menos 75, 637 de por lo menos 100, de por lo menos 150, de por lo menos 250, de por lo menos 500, de por lo menos 750, o de por lo menos 1000 aminoácidos de longitud.
  13. 13. El virus de parainfluenza recombinante de las reivindicación 11, caracterizado porque el fragmento es de por lo menos 10, de por lo menos 15, de por lo menos 20, de por lo menos 25, de por lo menos 50, de por lo menos 75, de por lo menos 100, de por lo menos 150, de por lo menos 250, de por lo menos 500, de por lo menos 750, o de por lo menos 1000 nucleótidos de longitud.
  14. 14. El virus de la reivindicación 1, caracterizado porque la secuencias de nucleótidos heterólogas se deriva de un metaneumovirus humano.
  15. 15. El virus de la reivindicación 7, caracterizado porque la secuencia de metaneumovirus de mamífero codifica una proteína F, una proteína G, una proteína SH, una proteína N, una proteína P, una proteína M2, una proteína M2-1, una proteína M2-2, una proteína L, o un fragmento de las mismas.
  16. 16. Una molécula de ADN o ARN recombinante que codifica el genoma del virus de cualquiera de las reivindicaciones 1-14.
  17. 17. Una molécula de ADN o ARN recombinante que codifica el genoma del virus de la reivindicación 15. 18. Una formulación de vacuna, caractérizada porque comprende el virus recombinante de cualquiera de las 638 reivindicaciones 1-14 y un excipiente aceptable farmacéuticamente. 19. Una formulación de vacuna, caracterizado porque comprende el virus recombinante de la reivindicación 15 y un excipiente aceptable farmacéuticamente. 20. Un método para tratar una infección del tracto respiratorio en un mamífero, dicho método caracterizado porque comprende administrar la vacuna de la reivindicación
  18. 18. 21. Un método para tratar una infección del tracto respiratorio en un mamífero, dicho método caracterizado porque comprende administrar la vacuna de la reivindicación
  19. 19. 22. El método de la reivindicación 20, caracterizado porque el mamífero es un humano. 23. El método de la reivindicación 21, caracterizado porque el mamífero es un humano. 24. Un método para propagar el virus recombínate de cualquiera de las reivindicaciones 1-15, caracterizado porque el método comprende cultivar células que están infectadas con el virus a una temperatura en donde la temperatura es inferior a la temperatura que es óptima para el crecimiento de las células. 25. Un método para propagar el virus recombínate de cualquiera de las reivindicaciones 1-15, caracterizado porque 639 el método comprende (i) cultivar células a una primer temperatura antes de la infección con el virus; (ii) infectar las células con el virus; y (iii) cultivar las células a una segunda temperatura después de la infección de las células con el virus, en donde la segunda temperatura es inferior que la primera temperatura. 26. Un método para propagar el virus recombínate de cualquiera de las reivindicaciones 1-15, caracterizado porque el método comprende cultivar células que están infectadas con el virus en la ausencia de suero. 27. Un método para propagar el virus recombínate de cualquiera de las reivindicaciones 1-15, caracterizado porque el método comprende (i) cultivar células en la presencia de suero antes de la infección con el virus; (ii) infectar las células con el virus? y (iii) cultivar las células en la ausencia de suero después de la infección de las células con el virus . 28. Un método para propagar el virus recombínate de cualquiera de las reivindicaciones 1-15, caracterizado porque el método comprende cultivar células que están infectadas con el virus sin suero a una temperatura inferior a la temperatura que es óptima para el crecimiento de células.
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Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8715922B2 (en) * 2001-01-19 2014-05-06 ViroNovative Virus causing respiratory tract illness in susceptible mammals
US20030232061A1 (en) * 2001-10-18 2003-12-18 Fouchier Ronaldus Adrianus Maria Recombinant parainfluenza virus expression systems and vaccines comprising heterologous antigens derived from metapneumovirus
KR100964413B1 (ko) 2001-01-19 2010-06-15 비로노바티브 비.브이. 감응성 포유류에서 호흡계 질환을 유발하는 바이러스
TWI359868B (en) 2002-02-21 2012-03-11 Medimmune Vaccines Inc Recombinant parainflulenza virus expression system
WO2004010935A2 (en) * 2002-07-25 2004-02-05 Medimmune, Inc. Methods of treating and preventing rsv, hmpv, and piv using anti-rsv, anti-hmpv, and anti-piv antibodies
EP2494987A1 (en) * 2003-04-25 2012-09-05 MedImmune Vaccines, Inc. Metapneumovirus strains and their use in vaccine formulations and as vectors for expression of antigenic sequences and methods for propagating virus
EP1869225A4 (en) * 2005-03-10 2010-02-24 Medimmune Vaccines Inc METAPNEUMOVIRENSTÄMME AND THEIR USE IN VACCINATE FORMULATIONS AND AS VECTORS FOR THE EXPRESSION OF ANTIGENOUS SEQUENCES AND METHOD FOR SPREADING THE VIRUS
EP1907537A4 (en) * 2005-07-14 2010-11-10 Mayo Foundation PREPARATIONS BASED ON PARAMYXOVIRIDAE VIRUS
US20090017517A1 (en) * 2007-07-13 2009-01-15 Medimmune, Llc Preparation of Negative-Stranded RNA Viruses by Electroporation
US20090186050A1 (en) * 2007-11-16 2009-07-23 Fouchier Ron A M Live attenuated metapneumovirus strains and their use in vaccine formulations and chimeric metapneumovirus strains
PT2370099T (pt) 2008-12-09 2016-07-14 Novavax Inc Proteínas f vsr modificadas e processos para a sua utilização
US11446374B2 (en) 2008-12-09 2022-09-20 Novavax, Inc. Modified RSV F proteins and methods of their use
CN102548578A (zh) * 2009-06-24 2012-07-04 魁北克益得生物医学公司 疫苗
KR101073991B1 (ko) * 2009-10-27 2011-10-21 대한민국 국내사육 닭에서 유행하는 신규한 ｂ형 조류메타뉴모바이러스 ｓｃ1509주 및 이의 용도
KR20140077169A (ko) * 2011-09-30 2014-06-23 노바백스, 인코포레이티드 호흡기 세포 융합 바이러스에 대한 재조합 나노입자 ｒｓｖ ｆ 백신
JP6132420B2 (ja) * 2011-10-25 2017-05-24 国立大学法人岐阜大学 変異狂犬病ウイルス合成・増殖方法、並びに狂犬病ワクチン製剤
GB201119032D0 (en) * 2011-11-03 2011-12-14 Isis Innovation Multisomes: encapsulated droplet networks
WO2014103310A1 (ja) * 2012-12-26 2014-07-03 バイオコモ株式会社 ヒトパラインフルエンザ２型ウイルスベクターを利用したワクチン
JP6703475B2 (ja) 2013-03-13 2020-06-03 アメリカ合衆国 融合前ｒｓｖｆタンパク質およびそれらの使用
US10034929B2 (en) 2013-03-15 2018-07-31 The Regents Of The University Of California RNA interference functions as an antiviral immunity in mammals
CL2013002829A1 (es) * 2013-10-01 2014-04-04 Univ Pontificia Catolica Chile Formulacion inmunogenica que contiene bcg vivas recombinantes que expresan antigenos de metapneumovirus (hmpv) en una suspension que se prepara a partir de un liofilizado sin la necesidad de adjuvante; su uso farmaceutico; vacuna contra hmpv.
JP6589159B2 (ja) * 2014-04-01 2019-10-16 共立製薬株式会社 新規ネコモルビリウイルス株、不活化ワクチン製剤、並びにネコモルビリウイルス感染症予防方法
JP7020917B2 (ja) 2015-01-20 2022-02-16 ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ， アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー， デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ キメラｒｓｖ／ｂｐｉｖ３ ｆタンパクを発現する組換えヒト／ウシパラインフルエンザウイルス３（ｂ／ｈｐｉｖ３）およびその使用
EP3344291A4 (en) 2015-09-03 2019-04-10 Novavax, Inc. VACCINE COMPOSITIONS WITH IMPROVED STABILITY AND IMMUNOGENICITY
MD3718565T2 (ro) 2015-10-22 2022-09-30 Modernatx Inc Vaccinuri împotriva virusului respirator
EP3436064A1 (en) 2016-03-29 2019-02-06 The U.S.A. As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Substitutions-modified prefusion rsv f proteins and their use
EP3551193A4 (en) 2016-12-08 2020-08-19 Modernatx, Inc. NUCLEIC ACID VACCINES AGAINST RESPIRATORY VIRUSES
WO2018109220A2 (en) 2016-12-16 2018-06-21 Institute For Research In Biomedicine Novel recombinant prefusion rsv f proteins and uses thereof
WO2018222573A1 (en) 2017-05-29 2018-12-06 The United State Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Recombinant chimeric bovine/human parainfluenza virus 3 expressing rsv g and its use
AU2019238171A1 (en) 2018-03-19 2020-09-24 Novavax, Inc. Multivalent influenza nanoparticle vaccines
US11351242B1 (en) 2019-02-12 2022-06-07 Modernatx, Inc. HMPV/hPIV3 mRNA vaccine composition
TWI708877B (zh) 2019-10-18 2020-11-01 福懋興業股份有限公司 導電布及其製備方法與應用
CN111961652A (zh) * 2020-07-09 2020-11-20 温氏食品集团股份有限公司 一种禽偏肺病毒的无血清全悬浮培养方法及其在疫苗中的应用
CN117729935A (zh) 2021-04-27 2024-03-19 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) 表达sars-cov-2刺突蛋白的重组嵌合牛/人副流感病毒3及其用途
CN113593639B (zh) * 2021-08-05 2023-08-25 湖南大学 一种用于病毒基因组变异分析、监测方法和系统
WO2023102388A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Sanofi Pasteur Inc. Human metapneumovirus viral vector-based vaccines
WO2023215727A2 (en) * 2022-05-02 2023-11-09 The Regents Of The University Of California Multicomponent systems for site-specific genome modifications

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5854037A (en) * 1989-08-28 1998-12-29 The Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York Recombinant negative strand RNA virus expression systems and vaccines
US5166057A (en) * 1989-08-28 1992-11-24 The Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York Recombinant negative strand rna virus expression-systems
US5824307A (en) * 1991-12-23 1998-10-20 Medimmune, Inc. Human-murine chimeric antibodies against respiratory syncytial virus
US5869036A (en) * 1995-12-08 1999-02-09 St. Louis University Live attenuated vaccines based on CP45 HPIV-3 strain and method to ensure attenuation in such vaccine
US6180398B1 (en) * 1996-07-12 2001-01-30 Virogeneitics Corporation Two-step immunization procedure against the pyramyxoviridae family of viruses using recombinant virus and subunit protein preparation
US7192593B2 (en) * 1997-05-23 2007-03-20 The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Use of recombinant parainfluenza viruses (PIVs) as vectors to protect against infection and disease caused by PIV and other human pathogens
US6656719B1 (en) 1997-10-27 2003-12-02 Merck & Co., Inc. Serum-free, low-protein media for rotavirus vaccine production
US6146642A (en) * 1998-09-14 2000-11-14 Mount Sinai School Of Medicine, Of The City University Of New York Recombinant new castle disease virus RNA expression systems and vaccines
KR20070058607A (ko) * 1999-05-18 2007-06-08 가부시키가이샤 디나벡크 겐큐쇼 엔벨로프 유전자 결손 파라믹소과 바이러스 벡터
KR100940776B1 (ko) * 1999-07-09 2010-02-11 더 가버먼트 오브 더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카 애즈 리프리젠티드 바이 더 디파트먼트 오브 헬스 앤 휴먼 서비씨즈 약독화된 사람-소 키메라 파라인플루엔자바이러스(ｐｉｖ) 백신
EP1103610A1 (en) * 1999-11-26 2001-05-30 Introgene B.V. Production of vaccines from immortalised mammalian cell lines
US8715922B2 (en) * 2001-01-19 2014-05-06 ViroNovative Virus causing respiratory tract illness in susceptible mammals
KR100964413B1 (ko) * 2001-01-19 2010-06-15 비로노바티브 비.브이. 감응성 포유류에서 호흡계 질환을 유발하는 바이러스
US20030232061A1 (en) * 2001-10-18 2003-12-18 Fouchier Ronaldus Adrianus Maria Recombinant parainfluenza virus expression systems and vaccines comprising heterologous antigens derived from metapneumovirus
ATE509097T1 (de) * 2001-11-21 2011-05-15 Us Health Gewinnung von rekombinantem menschlichem parainfluenzavirus typ 1 (hpivi) aus cdna
TWI359868B (en) * 2002-02-21 2012-03-11 Medimmune Vaccines Inc Recombinant parainflulenza virus expression system
US7704491B2 (en) * 2003-02-28 2010-04-27 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Recombinant human metapneumovirus and its use
EP2494987A1 (en) * 2003-04-25 2012-09-05 MedImmune Vaccines, Inc. Metapneumovirus strains and their use in vaccine formulations and as vectors for expression of antigenic sequences and methods for propagating virus
WO2005007078A2 (en) * 2003-04-30 2005-01-27 The Boards Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Method of inhibiting human metapneumovirus and human coronavirus in the prevention and treatment of severe acute respiratory syndrome (sars)

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