MXPA05000202A - Cuerpos mimeicos ch1-deletados de epo de mimetica de mamifero. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere a por lo menos un novedoso cuerpo mimetico CHI-deletado de EPO humana o una porcion o variante especifica, que incluye acidos nucleicos aislados que codifican por lo menos un cuerpo mimetico CHI-deletado o una porcion o variante especifica, un cuerpo mimetico CHI-deletado o porcion o variantes especificas, vectores, celulas hospederas, animales o plantes transgenicos, y metodos para hacer y utilizar los mismos, que incluyen composiciones, metodos y dispositivos terapeuticos.

Description

MIMETICUERPOS CON PORCION CH1 ELIMINADA IMITATIVOS DE ERITROPOYETINA DE MAMIFERO. SUS COMPOSICIONES. METODOS Y USOS ANTECEDENTES DE LA INVENCION CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere a mimeticuerpos con porción CH1 eliminada imitativos de EPO de mamífero, porciones y variantes especificadas de los mismos, específicos para proteínas biológicamente activas, fragmentos o ligandos, ácidos nucleicos complementarios y que codifican para mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, células hospederas, y métodos para obtener y usar los mismos, incluyendo formulaciones, administración y dispositivos terapéuticos.

TECNICA RELACIONADA Las proteínas recombinantes son una clase emergente de agentes terapéuticos. Dichos agentes terapéuticos recombinantes han producido avances en la modificación química y formulación de proteínas. Dichas modificaciones pueden mejorar potencialmente la utilidad terapéutica de las proteínas terapéuticas, tales como aumentando las vidas medias (por ejemplo, bloqueando su exposición a enzimas proteolíticas), mejorando la actividad biológica o reduciendo efectos secundarios no deseados. Una de dichas modificaciones, es el uso de fragmentos de inmunoglobulina fusionados a proteínas receptoras, tales como enteracept. Se han construido también proteínas terapéuticas usando el dominio Fe para intentar proveer una vida media más larga, o para incorporar funciones tales como unión al receptor Fe, unión a proteína A y fijación al complemento. Una función específica y vital del sistema hematopoyético de los mamíferos, es la producción de eritrocitos, o glóbulos rojos, que transportan oxígeno a los varios tejidos del cuerpo del animal. El proceso de producción de eritrocitos ("eritropoyesis") ocurre continuamente durante la duración de vida de un animal, para compensar la destrucción de eritrocitos. El glóbulo rojo típico tiene una duración de vida relativamente corta, usualmente de 100 a 120 días. La eritropoyesis es un mecanismo fisiológico controlado en forma precisa, por el cual se producen números suficientes de eritrocitos que permiten la oxigenación adecuada de los tejidos, pero no demasiados como para impedir la circulación. Se sabe ahora que la eritropoyesis es controlada principalmente por el polipéptido eritropoyetina (EPO), una glucoproteína acida. La eritropoyetina se produce como resultado de la expresión de un gen de una sola copia localizado en un cromosoma de un mamífero. La secuencia de aminoácidos para la EPO humana recombinante ("rHuEPO"), es sustancialmente idéntica a la secuencia de aminoácidos para la EPO obtenida de fuentes urinarias humanas. Sin embargo, la glucosilación de la rHuEPO difiere de la de la EPO urinaria y la EPO del suero humano. En un mamífero sano, la EPO está presente en el plasma sanguíneo a concentraciones muy bajas, ya que los tejidos están siendo oxigenados suficientemente por el número existente de eritrocitos circulantes. La EPO presente estimula la producción de nuevos eritrocitos para reemplazar a los que se pierden por el proceso de envejecimiento. Además, la producción de EPO es estimulada bajo condiciones de hipoxia, en donde el suministro de oxígeno a los tejidos del cuerpo se reduce abajo de los niveles fisiológicos normales a pesar de la perfusión adecuada del tejido por la sangre. La hipoxia puede ser causada por hemorragia, destrucción de eritrocitos inducida por radiación, varias anemias, altas altitudes o largos períodos de inconsciencia. En contraste, si el número de eritrocitos en la circulación excede el que se requiere para la oxigenación normal de los tejidos, se reduce la producción de EPO. Sin embargo, ciertos estados de enfermedad implican eritropoyesis anormal. Se está usando terapéuticamente EPO humana recombinante (rHuEPO) en muchos países. En los Estados Unidos, la U.S. Food and Drug Administration (FDA, Dirección de Alimentos y Medicinas de los Estados Unidos), ha aprobado el uso de rHuEPO para tratar anemia asociada con enfermedad renal de etapa final. Los pacientes que sufren hemodiálisis para tratar este trastorno sufren típicamente de anemia severa, causada por la ruptura y muerte prematura de eritrocitos como resultado del tratamiento de diálisis. La EPO es también útil en el tratamiento de otros tipos de anemia. Por ejemplo, pueden tratarse con EPO, anemia inducida por quimioterapia, anemia asociada con mielodisplasia, anemia asociada con varios trastornos congénitos, anemia relacionada a SIDA y anemia asociada con premadurez. Además, la EPO puede desempeñar una función en otras áreas, tales como ayudar a restaurar más rápidamente un hematócrito normal en pacientes de trasplante de médula ósea, en la preparación de pacientes para transfusiones sanguíneas autólogas, y en pacientes que sufren de trastornos por sobrecarga de hierro. La eritropoyetina (EPO) es una hormona de glucoproteína formada de 165 aminoácidos y cuatro cadenas de carbohidratos que funcionan como el regulador primario de eritropoyesis por unión a un receptor específico sobre la superficie de células precursoras de eritrocitos. Esta unión señala su proliferación y diferenciación en eritrocitos maduros. El receptor de eritropoyetina es una glucoproteína de 484 aminoácidos con alta afinidad por la eritropoyetina. Para el receptor de eritropoyetina, la homodimerización inducida por el ligando puede ser uno de los eventos clave que determina la activación. La eritropoyetina tiene una vida media relativamente corta. La eritropoyetina administrada intravenosamente se elimina a una velocidad consistente con la cinética de primer orden, con una vida media circulante que varía de aproximadamente 3 a 4 horas en pacientes con CFR. Dentro de la escala de dosis terapéutica, se mantienen niveles detectables de eritropoyetina en plasma durante por lo menos 24 horas. Después de la administración subcutánea de eritropoyetina, se alcanzan niveles máximos en suero dentro de 5 a 24 horas, y disminuyen después lentamente. La Cmáx y t½ después de la administración de eritropoyetina, fueron de 1.80 + 0.7 U/mL y 19.0 ± 5.9 horas, respectivamente. Las dosis de partida de la eritropoyetina varían de 50-150 U/kg tres veces por semana. La dosificación de la eritropoyetina debe individualizarse para mantener el hematócrito dentro de la escala objetivo sugerida. Para pacientes de cirugía, la dosis de eritropoyetina recomendada es de 300 U/kg/día s.c. durante 10 días antes de la cirugía, en el día de cirugía, y por 4 días después de la cirugía, o alternativamente 600 U/kg s.c. una vez en dosis semanales (21 , 14 y 7 días antes de la cirugía), más una cuarta dosis en el día de la cirugía. Varios grupos identificaron pequeños peptidomiméticos de eritropoyetina a través de la selección de colecciones de péptidos para presentación visual de fagos aleatoria para afinidad al receptor de eritropoyetina. Estas secuencias no tienen homología con la eritropoyetina. En pruebas funcionales, varios de estos péptidos mostraron actividad, pero sólo una cienmilésima, la de la eritropoyetina recombinante. Aunque se han hecho varios intentos por aumentar la potencia de estos péptidos preparando dímeros o multímeros covalentes de peptidomiméticos, estos compuestos son aún 1,000-10,000 veces menos activos que la eritropoyetina sobre una base molar.

Se han reclamado también secuencias peptídicas de eritropoyetina como agonistas. Se ha reportado también actividad incrementada de secuencias dimerizadas que comprenden todas las secuencias de eritropoyetina nativas, o cualquiera de las mismas. Estos compuestos tienen poca o ninguna biodisponibilidad oral, y su actividad no los hace económicamente viables por ahora. Por consiguiente, existe la necesidad de proveer versiones mejoradas y/o modificadas de proteínas terapéuticas de EPO, que superen uno o más de estos y otros problemas conocidos en la técnica.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención provee mimeticuerpos con porción CH1 eliminada imitativos de EPO de humano aislados, incluyendo inmunoglobulinas modificadas, productos de desdoblamiento y otras porciones y variantes especificadas de los mismos, así como composiciones de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, ácidos nucleicos codificantes o complementarios, vectores, células hospederas, composiciones, formulaciones, dispositivos, animales transgénicos, plantas transgénicas, y métodos para obtener y usar los mismos, como se describe y/o se permite en la presente, en combinación con lo que se sabe en la técnica. La presente invención provee también por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO aislado, o porción o variante especificada del mismo, como se describe en la presente y/o como es sabido en la técnica. El mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO puede comprender opcionalmente por lo menos una región CH3 enlazada directamente con por lo menos una región CH2 enlazada directamente con por lo menos una región de gozne o fragmento de la misma enlazado directamente con por lo menos una región V parcial, enlazada directamente con una secuencia de enlazador opcional, enlazada directamente a por lo menos un péptido terapéutico, opcionalmente enlazada además directamente con por lo menos una porción de por lo menos una secuencia de anticuerpo variable. En una modalidad preferida, un par de un péptido terapéutico-enlazador-secuencia J parcial-gozne-CH3-CH2 con una secuencia de anticuerpo N-terminal opcional, el par enlazado opcionalmente por asociación o enlace covalente tal como, pero no limitado a, un enlace disulfuro de Cys-Cys. En una modalidad, un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, comprende la fórmula (I): (V1 (n)-Pep(n)-Flex(n)-V2(n)-pHinge(n)-CH2(n)-CH3(n))(m), en donde V1 es por lo menos una porción de un extremo amino de una región variable de inmunoglobulina, Pep es por lo menos un polipéptido imitativo de EPO bioactivo, Flex es un polipéptido que provee flexibilidad estructural, permitiendo que el mimeticuerpo tenga orientaciones y propiedades de unión alternativas, V2 es por lo menos una porción de un extremo carboxilo de una región variable de inmunoglobulina, pHinge es por lo menos una porción de una región de gozne variable de inmunoglobulina, CH2 es por lo menos una porción de una región constante CH2 de inmunoglobulina, CH3 es por lo menos una porción de una región constante CH3 de inmunoglobulina, y n y m pueden ser un entero entre 1 y 10, imitando diferentes tipos de moléculas de inmunoglobulina, por ejemplo, pero no limitados a, lgG1 , lgG2, lgG3, lgG4, lgA1 , lgA2, IgM, IgD, IgE, y similares, o combinaciones de las mismas. De esta manera, un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de la presente invención imita por lo menos una porción de una estructura o función de inmunoglobulina o anticuerpo con sus propiedades y funciones inherentes, mientras provee un péptido terapéutico y sus propiedades o actividades in vitro, in vivo o in situ inherentes o adquiridas. Las varias porciones del anticuerpo y las porciones del péptido terapéutico de por io menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de la presente invención pueden variar como se describe en la presente, en combinación con lo que es sabido en la técnica. La presente invención provee, en un aspecto, moléculas de ácido nucleico aisladas que comprenden, son complementarias, que tienen identidad significativa, o hibridan con, un polinucleótido que codifica para mimeticuerpos específicos o porciones o variantes especificadas de los mismos, que comprenden por lo menos una secuencia, dominio, porción o variante especificado de los mismos. La presente invención provee además vectores recombinantes que comprenden por lo menos una de dichas moléculas de ácido nucleico de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO aisladas, células hospederas que contienen dichos ácidos nucleicos y/o vectores recombinantes, así como métodos para obtener y usar dichos ácidos nucleicos, vectores y/o células hospederas de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO. Por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo de la invención, imita la unión de la porción Pep del mimeticuerpo a por lo menos un ligando, o tiene por lo menos una actividad biológica de, por lo menos una proteína, subunidad, fragmento, porción, o cualquier combinación de los mismos. La presente invención provee también por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO aislado, o porción o variante especificada del mismo, como se describe en la presente y/o como es sabido en la técnica, en donde el mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, tiene por lo menos una actividad tal como, pero no limitada a, actividades biológicas conocidas de por lo menos un péptido o polipéptido bioactivo que corresponde a la porción Pep de fórmula I. Puede seleccionarse de esta manera un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO para una actividad correspondiente de acuerdo a métodos conocidos, tal como por lo menos una actividad neutralizante hacia una proteína o fragmento de la misma. La presente invención provee también por lo menos una composición que comprende (a) por lo menos un ácido nucleico que codifica para mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO aislado, o porción o variante especificada del mismo y/o mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO como se describe en la presente; y (b) un vehículo o diluyente adecuado. El vehículo o diluyente puede ser opcionalmente farmacéuticamente aceptable, de acuerdo a métodos conocidos. La composición puede comprender además opcionalmente por lo menos algún otro compuesto, proteína o composición. La presente invención provee también por lo menos un método para expresar por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, en una célula hospedera, el cual comprende cultivar una célula hospedera como se describe en la presente y/o como es sabido en la técnica, bajo condiciones en donde por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, sea expresado en cantidades detectables y/o recuperables. La presente invención provee además por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, porción o variante especificada del mismo, en un método o composición, cuando se administra en una cantidad terapéuticamente efectiva, para modulación, para tratar o reducir los síntomas de por lo menos uno de un trastorno de huesos y articulaciones, trastorno cardiovascular, un trastorno dental u oral, un trastorno dermatológico, un trastorno de oído, nariz o garganta, un trastorno endocrino o metabólico, un trastorno gastrointestinal, un trastorno ginecológico, un trastorno hepático o biliar, un trastorno obstétrico, un trastorno hematológico, un trastorno inmunológico o alérgico, una enfermedad infecciosa, un trastorno musculoesquelético, un trastorno oncológico, un trastorno neurológico, un trastorno nutricional, un trastorno oftalmológico, un trastorno pediátrico, un trastorno de envenenamiento, un trastorno psiquiátrico, un trastorno renal, un trastorno pulmonar, o cualquier otro trastorno conocido (véase, por ejemplo, The Merck Manual, decimoséptima edición, Merck Research Laboratories, Merck and Co., Whitehouse Station, NJ (1999), cita incorporada enteramente en la presente como referencia), según se requiera en muchas condiciones diferentes tales como, pero no limitadas a, antes de, subsecuente a, o durante, una enfermedad relacionada o condición de tratamiento, como es sabido en la técnica. La presente invención provee además por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, porción o variante especificada del mismo, en un método o composición, cuando se administra en una cantidad terapéuticamente efectiva, para modulación, para tratar o reducir los síntomas de, por lo menos una enfermedad inmune, cardiovascular, infecciosa, maligna y/o neurológica en una célula, tejido, órgano, animal o paciente y/o, según sea necesario, en muchas condiciones diferentes tales como, pero no limitadas a, antes de, subsecuente a, o durante, una enfermedad relacionada o condición de tratamiento, como es sabido en la técnica y/o como se describe en la presente. La presente invención provee también por lo menos una composición, dispositivo y/o método de suministro de una cantidad terapéuticamente o profilácticamente efectiva de por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, de conformidad con la presente invención. La presente invención provee además por lo menos un anticuerpo antiidiotípico para por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de la presente invención. El anticuerpo antiidiotípico incluye cualquier molécula que contenga proteína o péptido que comprenda por lo menos una porción de una molécula de inmunoglobulina tal como, pero no limitada a, por lo menos una región determinante de complementariedad (CDR) de una cadena pesada o ligera o una porción de unión a ligando de la misma, una región variable de cadena ligera o cadena pesada, una región constante de cadena ligera o cadena pesada, una región de estructura, o cualquier porción de las mismas, que una competitivamente una región de unión al receptor de EPO de por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de la presente invención. Dichos anticuerpos antiidiotípicos de la invención pueden incluir, o pueden derivarse de cualquier mamífero tal como, pero no limitado a, un humano, un ratón, un conejo, una rata, un roedor, un primate, y similares. La presente invención provee también por lo menos una molécula de ácido nucleico aislada que comprende, es complementaria a, o híbrida con, un polinucleótido que codifica para por lo menos un anticuerpo antiidiotípico de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, que comprende por lo menos una secuencia, dominio, porción o variante especificado del mismo. La presente invención provee además vectores recombinantes que comprenden dicho anticuerpo antiidiotípico de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO que codifica para moléculas de ácido nucleico, células hospederas que contienen dichos ácidos nucleicos y/o vectores recombinantes, así como métodos para obtener y usar dichos anticuerpos antiidiotípicos, ácidos nucleicos, vectores y/o células hospederas. La presente invención provee también por lo menos un método para expresar por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o anticuerpo antiidiotípico de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, en una célula hospedera, el cual comprende cultivar una célula hospedera como se describe en la presente, bajo condiciones en donde por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO o anticuerpo antiidiotípico sea expresado en cantidades detectables y/o recuperables. La presente invención provee también por lo menos una composición que comprende (a) un ácido nucleico que codifica para mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO aislado y/o mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO como se describe en la presente; y (b) un vehículo o diluyente adecuado. El vehículo o diluyente puede ser opcionalmente farmacéuticamente aceptable, de acuerdo a vehículos o diluyentes conocidos. La composición puede comprender además opcionalmente por lo menos algún otro compuesto, proteína o composición.

La presente invención provee además por lo menos un método o composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, para administrar una cantidad terapéuticamente efectiva para modular o tratar por lo menos una condición relacionada a proteínas en una célula, tejido, órgano, animal o paciente y/o antes de, subsecuente a, o durante, una condición relacionada, como es sabido en la técnica y/o como se describe en la presente. La presente invención provee también por lo menos una composición, dispositivo y/o método de suministro de una cantidad terapéuticamente o profilácticamente efectiva de por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, de conformidad con la presente invención. La presente invención provee además por lo menos un método o composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, para diagnosticar por lo menos una condición relacionada a EPO en una célula, tejido, órgano, animal o paciente, y/o antes de, subsecuente a, o durante, una condición relacionada, como es sabido en la técnica y/o como se describe en la presente. La presente invención provee también por lo menos una composición, dispositivo y/o método de suministro para el diagnóstico de por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, de conformidad con la presente invención. En un aspecto, la presente invención provee por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de mamífero aislado, que comprende por lo menos una región Pep que comprende por lo menos una porción de por lo menos una de SEQ ID NOS: 1-42, por ejemplo, como se presenta en el cuadro 1 más adelante, u opcionalmente con una o más sustituciones, deleciones o inserciones como se describe en la presente o como es sabido en la técnica. En otro aspecto, la presente invención provee por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de mamífero aislado, en donde el mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO une específicamente por lo menos un epítope que comprende por lo menos 1 a 3 de por lo menos un ligando o región de unión, cuyo ligando se une a por lo menos una porción de por lo menos una de SEQ ID NOS: 1-42 como se presenta en el cuadro 1 más adelante, u opcionalmente con una o más sustituciones, deleciones o inserciones como se describe en la presente o como es sabido en la técnica. El mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO (por lo menos uno) puede ser además opcionalmente por lo menos uno de: proteína de unión con una afinidad de por lo menos una seleccionada de por lo menos 10"9 , por lo menos 10"10 M, por lo menos 10"11 M, o por lo menos 10"12 M; neutralizando sustancialmente por lo menos una actividad de por lo " menos una proteína o porción de la misma. Provisto también es un ácido nucleico aislado que codifica para por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de mamífero aislado; un vector de ácido nucleico aislado que comprende el ácido nucleico aislado, y/o una célula hospedera procariótica o eucariótica que comprende el ácido nucleico aislado. La célula hospedera puede ser opcionalmente por lo menos una seleccionada de células COS-1 , COS-7, HEK293, BHK21 , CHO, BSC-1 , Hep G2, 653, SP2/0, 293, HeLa, de mieloma o de linfoma, o cualquier célula derivada, inmortalizada o transformada de las mismas. Provisto también es un método para producir por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, el cual comprende traducir el ácido nucleico que codifica para mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO bajo condiciones in vitro, in vivo o in situ, de modo que el mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO sea expresado en cantidades detectables o recuperables. Provista también es una composición que comprende por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de mamífero aislado, y por lo menos un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. La composición puede comprender además opcionalmente una cantidad efectiva de por lo menos un compuesto o proteína seleccionado de por lo menos uno de un reportero o marca detectable, un fármaco a nti infeccioso, un fármaco para el sistema cardiovascular (CV), un fármaco para el sistema nervioso central (CNS), un fármaco para el sistema nervioso autónomo (ANS), un fármaco para el tracto respiratorio, un fármaco para el tracto gastrointestinal (Gl), un fármaco hormonal, un fármaco para el equilibrio de fluidos o electrólitos, un fármaco hematológico, un fármaco antineoplásico, un fármaco de inmunomodulación, un fármaco oftálmico, ótico o nasal, un fármaco tópico, un fármaco nutricional, un antagonista del FNT, un antirreumático, un relajante muscular, un narcótico, un fármaco antiinflamatorio no esferoidal (AINE), un analgésico, un anestésico, un sedante, un anestésico local, un bloqueador neuromuscular, un antimicrobiano, un antipsoriático, un corticosteroide, un esteroide anabólico, una eritropoyetina, una inmunización, una inmunoglobulina, un inmunosupresor, una hormona de crecimiento, un fármaco para el reemplazo de hormonas, un radiofarmacéutico, un antidepresivo, un antipsicótico, un estimulante, una medicación para el asma, un agonista beta, un esteroide inhalado, una epinefrina o análogo, una citocina, o un antagonista de atocina. La presente invención provee además un fragmento o anticuerpo antiidiotípico que une específicamente por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de la presente invención. Provisto también es un método para diagnosticar o tratar una condición de enfermedad en una célula, tejido, órgano o animal, el cual comprende: poner en contacto o administrar una composición que comprenda una cantidad efectiva de por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de mamífero aislado de la invención con, o a, la célula, tejido, órgano o animal. El método puede comprender además opcionalmente usar una cantidad efectiva de 0.001-50 mg/kilogramo de las células, tejido, órgano o animal. El método puede comprender además opcionalmente usar la puesta en contacto o la administración mediante por lo menos un modo seleccionado de parenteral, subcutáneo, intramuscular, intravenoso, intraarticular, ¡ntrabronquial, intraabdominal, intracapsular, intracartilaginoso, intracavitario, intracelíaco, intracerebelar, intracerebroventricular, intracólico, intracervical, intragástrico, intrahepático, intramiocárdico, intraóseo, intrapélvico, intrapericárdico, intraperitoneal, intrapleural, intraprostático, intrapulmonar, intrarrectal, intrarrenal, intrarretinal, intraespinal, intrasinovial, intratorácico, intrauterino, intravesical, intralesional, de bolo, vaginal, rectal, bucal, sublingual, intranasal o transdérmico. El método puede comprender además opcionalmente administrar, antes de, concurrentemente con, o después de, la (a) puesta en contacto o administración, por lo menos una composición que comprenda una cantidad efectiva de por lo menos un compuesto o proteína seleccionado de por lo menos uno de un reportero o marca detectable, un fármaco antiinfeccioso, un fármaco para el sistema cardiovascular (CV), un fármaco para el sistema nervioso central (CNS), un fármaco para el sistema nervioso autónomo (ANS), un fármaco para el tracto respiratorio, un fármaco para el tracto gastrointestinal (Gl), un fármaco hormonal, un fármaco para el equilibrio de fluidos o electrólitos, un fármaco hematológico, un fármaco antineoplásico, un fármaco de inmunomodulación, un fármaco oftálmico, ótico o nasal, un fármaco tópico, un fármaco nutricional, un antagonista del FNT, un antirreumático, un relajante muscular, un narcótico, un fármaco antiinflamatorio no esteroidal (AINE), un analgésico, un anestésico, un sedante, un anestésico local, un bloqueador neuromuscular, un antimicrobiano, un antipsoriático, un corticosteroide, un esteroide anabólico, fabricación puede comprender opcionalmente tener el contenedor como un componente de sistema o dispositivo de suministro parenteral, subcutáneo, intramuscular, intravenoso, intraarticular, intrabronquial, intraabdominal, intracapsular, ¡ntracartilaginoso, intracavitario, intracelíaco, ¡ntracerebelar, intracerebroventricular, ¡ntracólico, intracervical, ¡ntragástrico, intrahepático, intramiocárdico, intraóseo, intrapélvico, intrapericárdico, intraperitoneal, intrapleural, intraprostático, intrapulmonar, intrarrectal, intrarrenal, intrarretinal, intraespinal, intrasinovial, intratorácico, intrauterino, intravesical, intralesional, de bolo, vaginal, rectal, bucal, sublingual, intranasal o transdérmico. Provisto también es un método para producir por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de mamífero aislado de la presente invención, el cual comprende proveer una célula hospedera o animal transgénico o planta transgénica o célula vegetal capaz de expresar en cantidades recuperables el mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO. Provisto además en la presente invención, es por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO producido mediante el método anterior. La presente invención provee también por lo menos un método para expresar por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o anticuerpo antiidiotípico, en una célula hospedera, el cual comprende cultivar una célula hospedera como se describe en la presente, bajo condiciones en donde por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO sea expresado en cantidades detectables y/o recuperables. La presente invención provee además cualquier invención descrita en la presente.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION La presente invención provee mimeticuerpos aislados, recombinantes y/o sintéticos, o porciones o variantes especificadas de los mismos, así como composiciones y moléculas de ácido nucleico codificantes que comprenden por lo menos un polinucleótido que codifica para por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO. Dichos mimeticuerpos, o porciones o variantes especificadas de los mismos de la presente invención, comprenden secuencias, dominios, fragmentos y variantes especificados específicos de los mismos, y métodos para obtener y usar dichos ácidos nucleicos y mimeticuerpos o porciones o variantes especificadas de los mismos, incluyendo composiciones, métodos y dispositivos terapéuticos. La presente invención provee también por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO aislado, o porción o variante especificada del mismo, como se describe en la presente y/o como es sabido en la técnica. El mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO puede comprender opcionalmente por lo menos una región CH3 enlazada directamente con por lo menos una región CH2 enlazada directamente con por lo menos una región de gozne o fragmento de la misma enlazado directamente con por lo menos una región V parcial, enlazada directamente con una secuencia de enlazador opcional, enlazada directamente a por lo menos un péptido terapéutico, opcionalmente enlazada además directamente con por lo menos una porción de por lo menos una secuencia de anticuerpo variable. En una modalidad preferida, un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO comprende la fórmula (I): (V1 (n)-Pep(n)-Flex(n)-V2(n)-pHinge(n)-CH2(n)-CH3(n))(m), en donde V1 es por lo menos una porción de un extremo amino de una región variable de inmunoglobulina, Pep es por lo menos un péptido bioactivo, Flex es un polipéptido que provee flexibilidad estructural, permitiendo que el mimeticuerpo tenga orientaciones y propiedades de unión alternativas, V2 es por lo menos una porción de un extremo carboxilo de una región variable de inmunoglobulina, pHinge es por lo menos una porción de una región de gozne variable de inmunoglobulina, CH2 es por lo menos una porción de una región constante CH2 de inmunoglobulina, CH3 es por lo menos una porción de una región constante CH3 de inmunoglobulina, y n y m pueden ser un entero entre 1 y 10, imitando diferentes tipos de moléculas de inmunoglobulina, por ejemplo, pero no limitados a, lgG1, lgG2, lgG3, lgG4, lgA1 , lgA2, IgM, IgD, IgE, y similares, o combinaciones de las mismas. El monómero en donde m = 1, puede ser enlazado a otros monómeros mediante asociación o enlace covalente tal como, pero no limitado a, un enlace disulfuro de Cys-Cys. De esta manera, un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de la presente invención imita una estructura de anticuerpo con sus propiedades y funciones inherentes, mientras provee un péptido terapéutico y sus propiedades o actividades in vitro, in vivo o in situ inherentes o adquiridas. Las varias porciones del anticuerpo y las porciones del péptido terapéutico de por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de la presente invención pueden variar como se describe en la presente, en combinación con lo que es sabido en la técnica. Como se usa en la presente, un "mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO", "porción de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO" o "fragmento de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO" y/o "variante de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO", y similares, ¡mita, tiene o simula por lo menos una unión a ligando o por lo menos una actividad biológica de por lo menos una proteína, tal como actividad o unión a ligando in vitro, in situ y/o de preferencia in vivo tal como, pero no limitada a, por lo menos una de SEQ ID NOS: 1-1110. Por ejemplo, un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO adecuado, o porción o variante especificada del mismo de la presente invención, puede unir por lo menos un ligando de proteína, e incluye por lo menos un ligando de proteína, receptor, receptor soluble, y similares. Un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO adecuado, porción o variante especificada del mismo, puede también modular, incrementar, modificar o activar, por lo menos una actividad de señalización del receptor de proteína, u otra actividad mensurable o detectable. Los mimeticuerpos útiles en los métodos y composiciones de la presente invención, se caracterizan por afinidad de unión adecuada a ligandos de proteína o receptores, y opcionalmente y de preferencia tienen baja toxicidad. En particular, un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO en donde los componentes individuales, tales como la porción de región variable, región constante (sin una porción CH1) y estructura, o cualquier porción de las mismas (por ejemplo, una porción de las regiones J, D o V de la cadena ligera o pesada variable; la región de gozne, la cadena ligera o cadena pesada constante, y similares), individualmente y/o en conjunto opcionalmente y de preferencia poseen baja inmunogenicidad, es útil en la presente invención. Los mimeticuerpos que pueden usarse en la invención se caracterizan opcionalmente por su capacidad para tratar a pacientes durante períodos extendidos, con alivio bueno a excelente de síntomas, y baja toxicidad. La baja inmunogenicidad y/o la alta afinidad, así como otras propiedades no definidas, pueden favorecer los resultados terapéuticos logrados. Se define en la presente que la "baja inmunogenicidad" eleva respuestas de HA A, HACA o HAHA significativas en menos de aproximadamente 75%, o de preferencia menos de alrededor de 50, 45, 40, 35, 30, 35, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 y/o 1% de los pacientes tratados, y/o eleva bajos títulos en el paciente tratado (menos de aproximadamente 300, de preferencia menos de alrededor de 100 medidos con un inmunoensayo de enzima de antígeno doble) (véase, por ejemplo, Elllott et al., Lancet 344: 1 125-1127 (1994)).

Utilidad Los ácidos nucleicos aislados de la presente invención pueden usarse para la producción de por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, fragmento o variante especificado del mismo, que puede usarse para efectuar en una célula, tejido, órgano o animal (incluyendo mamíferos y humanos), modular, tratar, aliviar, ayudar a prevenir la incidencia de, o reducir los síntomas de, por lo menos una condición relacionada a proteína, seleccionado de, pero no limitado a, por lo menos uno de una enfermedad o trastorno inmune, una enfermedad o trastorno cardiovascular, una enfermedad o trastorno infeccioso, maligno y/o neurológico, una anemia, una respuesta inmune/autoinmune y/o un cáncer/infección, así como otras condiciones relacionadas a proteína especificadas o conocidas. Dicho método puede comprender administrar una cantidad efectiva de una composición o una composición farmacéutica que comprenda por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, a una célula, tejido, órgano, animal o paciente que necesita de dicha modulación, tratamiento, alivio, prevención o reducción en síntomas, efectos o mecanismos. La cantidad efectiva puede comprender una cantidad de aproximadamente 0.0001 a 500 mg/kg por administración individual o múltiple, o para alcanzar una concentración en suero de 0.0001-5000 µg/ml por administración individual o múltiple, o cualquier escala o valor efectivo en la misma, como se hace y se determina usando métodos conocidos, como se describe en la presente o como se conoce en las técnicas relevantes.

Citas Todas las publicaciones o patentes citadas en la presente se incorporan enteramente en la presente como referencia, ya que muestran el estado de la técnica al momento de la presente invención, y/o proveen descripción y facilitación de la presente invención. Las publicaciones se refieren a toda publicación científica o de patente, o cualquier otra información disponible en cualquier formato de medio, incluyendo todos los formatos registrados, electrónicos o impresos. Las siguientes referencias se incorporan enteramente en la presente como referencia: Ausubel, et al., ed., Current Protocols ¡n Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., NY, NY (1987-2002); Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a. edición, Cold Spring Harbor, NY (1989); Harlow y Lañe, Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY (1989); Colligan et al., eds., Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, Inc., NY (1994-2002); Colligan et al., Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY (1997-2002).

Mimetícuerpos de la presente invención El mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO puede comprender por lo menos una región CH3 enlazada directamente con por lo menos una región CH2 enlazada directamente con por lo menos una región de gozne o fragmento de la misma enlazado directamente con por lo menos una región V parcial, enlazada directamente con una secuencia de eniazador opcional, enlazada directamente a por lo menos un péptido terapéutico, opcionalmente enlazada además directamente con por lo menos una porción de por lo menos una secuencia de anticuerpo variable. En una modalidad preferida, un par de un péptido terapéutico-enlazador-secuencia J parcial-gozne-CH3-CH2 con una secuencia de anticuerpo N-terminal opcional, el par enlazado opcionalmente por asociación o enlace covalente tal como, pero no limitado a, un enlace disulfuro de Cys-Cys. De esta manera, un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de la presente invención imita una estructura de anticuerpo con sus propiedades y funciones inherentes, mientras provee un péptido terapéutico y sus propiedades o actividades in vitro, in vivo o in situ inherentes o adquiridas. Las varias porciones del anticuerpo y las porciones del péptido terapéutico de por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de la presente invención pueden variar como se describe en la presente, en combinación con lo que es sabido en la técnica. Los mimeticuerpos de la presente invención proveen de esta manera por lo menos una propiedad adecuada en comparación con proteínas conocidas tal como, pero no limitada a, por lo menos una de vida media incrementada, actividad incrementada, actividad más específica, avidez incrementada, inactivación incrementada o disminuida, un subgrupo de actividades seleccionadas o más adecuadas, menos inmunogenicidad, calidad o duración incrementada de por lo menos un efecto terapéutico deseado, menos efectos secundarios, y similares. Pueden producirse fragmentos de mimeticuerpos de conformidad con la fórmula (I) mediante desdoblamiento enzimático o técnicas recombinantes o de síntesis, como es sabido en la técnica y/o como se describe en la presente. Pueden producirse también mimeticuerpos en una variedad de formas truncadas usando genes de anticuerpo en los cuales uno o más codones de detención hayan sido introducidos hacia el extremo 5' del sitio de detención natural. Las varias porciones de los mimeticuerpos pueden unirse químicamente mediante técnicas convencionales, o pueden prepararse como una proteína contigua usando técnicas de ingeniería genética. Por ejemplo, puede expresarse un ácido nucleico que codifique para por lo menos una de las regiones constantes de una cadena de anticuerpo humano, para producir una proteína contigua para su uso en mimeticuerpos de la presente invención. Véase, por ejemplo, Ladner et al., patente de E.U.A. No. 4,946,778, y Bird, R. E. et al., Science, 242: 423-426 (1998), respecto a anticuerpos de cadena sencilla. Como se usa en la presente, el término "mimeticuerpo de humano", se refiere a un anticuerpo en el cual se espera que sustancialmente cualquier parte de la proteína (por ejemplo, péptido imitativo de EPO, estructura, dominios CL, CH (por ejemplo, CH2, CH3), gozne (VL, VH)), sea sustancialmente no inmunógena en humanos, con sólo cambios o variaciones de secuencia menores. Dichos cambios o variaciones retienen o reducen opcionalmente y de preferencia la inmunogenicidad en humanos respecto a anticuerpos de humano no modificados, o mimeticuerpos de la presente invención. De esta manera, un anticuerpo humano y que corresponda al mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de la presente invención, es distinto de un anticuerpo quimérico o humanizado. Se señala que un anticuerpo humano y un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO pueden ser producidos por un animal no humano o célula que sea capaz de expresar genes de inmunoglobulina humana funcionalmente reordenada (por ejemplo, cadena pesada). Pueden diseñarse mimeticuerpos de humano que sean específicos para por lo menos un ligando de proteína o receptor del mismo contra un ligando adecuado, tal como ligando o receptor aislado y/o ligando o receptor de proteína EPO, o una porción de los mismos (incluyendo moléculas sintéticas, tales como péptidos sintéticos). La preparación de dichos mimeticuerpos se lleva a cabo usando técnicas conocidas para identificar y caracterizar regiones de unión a ligando o secuencias de por lo menos una proteína o porción de la misma. En una modalidad preferida, un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO comprende la fórmula (I): (V1 (n)-Pep(n)-Flex(n)-V2(n)-pH¡nge(n)-CH2(n)-CH3(n))(m), en donde V1 es por lo menos una porción de un extremo amino de una región variable de inmunoglobulina, Pep es por lo menos un péptido imitativo de EPO bioactivo, Flex es un polipéptido que provee flexibilidad estructural, permitiendo que el mimeticuerpo tenga orientaciones y propiedades de unión alternativas, V2 es por lo menos una porción de un extremo carboxilo de una región variable de ¡nmunoglobulina, pHinge es por lo menos una porción de una región de gozne variable de ¡nmunoglobulina, CH2 es por lo menos una porción de una región constante CH2 de ¡nmunoglobulina, CH3 es por lo menos una porción de una región constante CH3 de ¡nmunoglobulina, y n y m pueden ser un entero entre 1 y 10, imitando diferentes tipos de moléculas de ¡nmunoglobulina, por ejemplo, pero no limitados a, lgG1 , lgG2, lgG3, lgG4, lgA1 f lgA2, IgM, IgD, IgE, y similares, o cualquier combinación de las mismas. El monómero en donde m = 1 , puede ser enlazado a otros monómeros mediante asociación o enlace covalente tal como, pero no limitado a, un enlace disulfuro de Cys-Cys. En una modalidad preferida, por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo de la presente invención, es producido por cuando menos una línea de células, línea de células mixta, célula inmortalizada o población clonal de células inmortalizadas y/o cultivadas. Pueden producirse células inmortalizadas que producen proteínas, usando métodos adecuados. De preferencia, el mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO (por lo menos uno), o porción o variante especificada del mismo, se genera proveyendo ácido nucleico o vectores que comprendan ADN derivado o que tenga una secuencia sustancialmente similar a por lo menos un locus de inmunoglobulina humana que sea reordenada funcionalmente o que pueda sufrir reordenamiento funcional, y que comprenda además una estructura de mimeticuerpo como se describe en la presente, por ejemplo, pero no limitada a, la fórmula (I), en donde pueden usarse porciones de regiones variables C-terminales y N-terminales para VI y V2, regiones de gozne para pHinge, CH2 para CH2, y CH3 para CH3, como es sabido en la técnica. El término "funcionalmente reordenado", como se usa n la presente, se refiere a un segmento de ácido nucleico de un locus de inmunoglobulina que ha sufrido recombinación de V(D)J, produciendo de esta manera un gen de inmunoglobulina que codifica para una cadena de inmunoglobulina (por ejemplo, cadena pesada), o cualquier porción de la misma. Un gen de inmunoglobulina funcionalmente reordenado puede identificarse directamente o indirectamente usando métodos adecuados tales como, por ejemplo, secuenciación de nucleótidos, hibridación (por ejemplo, Southern blotting, Northern blotting) usando sondas que puedan unirse a uniones codificantes entre segmentos de genes o amplificación enzimática de genes de inmunoglobulina (por ejemplo, reacción en cadena de polimerasa) con iniciadores que puedan unirse a uniones codificantes entre segmentos de genes. Si una célula produce un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante del mismo que comprenda una región variable particular o una región variable que comprenda una secuencia particular (por ejemplo, por lo menos una secuencia Pep), puede determinarse también usando métodos adecuados.

Pueden prepararse también mimeticuerpos, porciones y variantes especificadas de los mismos de la presente invención, usando por lo menos un ácido nucleico que codifique para un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, para proveer animales o mamíferos transgénicos, tales como cabras, vacas, caballos, ovejas, y similares, que produzcan dichos mimeticuerpos o porciones o variantes especificadas de los mismos en su leche. Dichos animales pueden proveerse usando métodos conocidos, como se aplican para secuencias codificantes de anticuerpos. Véase, por ejemplo, pero no limitado a, las patentes de E.U.A. Nos. 5,827,690; 5,849,992; 4,873,316; 5,849,992; 5,994,616; 5,565,362; 5,304,489, y similares, cada una de las cuales se incorpora enteramente en la presente como referencia. Pueden prepararse adicionalmente mimeticuerpos, porciones y variantes especificadas de los mismos de la presente invención, usando por lo menos un ácido nucleico que codifique para mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, para proveer plantas transgénicas y células vegetales cultivadas (por ejemplo, pero no limitadas a, tabaco y maíz) que produzcan dichos mimeticuerpos, porciones o variantes especificadas de los mismos, en las partes de la planta o en células cultivadas de las mismas. Como un ejemplo no limitativo, se han usado con éxito hojas de tabaco transgénico que expresan proteínas recombinantes para proveer grandes cantidades de proteínas recombinantes, por ejemplo, usando un promotor inducible. Véase, por ejemplo, Cramer et al., Curr. Top. Microbio!. Immunol. 240: 95-118 (1999), y referencias citadas en la misma. Asimismo, se ha usado maíz transgénico para expresar proteínas de mamífero a niveles de producción comercial, con actividades biológicas equivalentes a las producidas en otros sistemas recombinantes, o purificadas de fuentes naturales. Véase, por ejemplo, Hood et al., Adv. Exp. Med. Biol. 464: 127-147 (1999), y referencias citadas en la misma. Se han producido también anticuerpos en grandes cantidades a partir de semillas de plantas transgénicas que incluyen fragmentos de anticuerpo, tales como mimeticuerpos de cadena sencilla (scFv), incluyendo semillas de tabaco y tubérculos de papa. Véase, por ejemplo, Conrad et al., Plant Mol. Biol. 38: 101-109 (1998), y referencias citadas en la misma. De esta manera, pueden producirse también mimeticuerpos, porciones y variantes especificadas de los mismos de la presente invención, usando plantas transgénicas, de acuerdo a métodos conocidos. Véase, también, por ejemplo, Fischer et al., Biotechnol. App. Biochem. 30: 99-108 (octubre de 999), Ma et al., Trends Biotechnol. 13: 522-7 (1995); Ma et al., Plant Physiol. 109: 341-6 (1995); Whitelam et al., Biochem. Soc. Trans. 22: 940-944 (1994); y referencias citadas en las mismas. Las referencias anteriores se incorporan enteramente en la presente como referencia. Los mimeticuerpos de la invención pueden unir ligandos de proteína humana con una amplia gama de afinidades (Kp). En una modalidad preferida, por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de humano de la presente invención, puede unir opcionalmente por lo menos un ligando de proteína con alta afinidad. Por ejemplo, por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de la presente invención puede unir por lo menos un ligando de proteína con una KD igual a o menor que alrededor de 10"7 M o, más preferiblemente, con una KQ igual a o menor que aproximadamente 0.1-9.9 M (o cualquier escala o valor en la misma) x 10"7, 10"8, 10"9, 10"10, 10"11, 1CT12 o 10"13 M, o cualquier escala o valor en la misma. La afinidad o avidez de un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO por cuando menos un ligando de proteína, puede determinarse experimentalmente usando cualquier método adecuado, por ejemplo, como se usa para determinar la avidez o afinidad de unión entre anticuerpo-antígeno (véase, por ejemplo, Berzofsky, et al., "Antibody-Antigen Interactions", en Fundamental Immunology, Paul, W. E., ed., Raven Press: New York, NY (1984); Kuby, Janis Immunology, W. H. Freeman and Company: New York, NY (1992); y métodos descritos en las mismas). La afinidad medida de una interacción mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO-ligando particular puede variar, si se mide bajo diferentes condiciones (por ejemplo, concentración de sales, pH). De esta manera, las mediciones de afinidad y otros parámetros de unión al ligando (por ejemplo, KD, Ka, Ka), se hacen de preferencia con soluciones estandarizadas de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO y ligando, y un regulador de pH estandarizado, tal como el regulador de pH descrito en la presente.

Moléculas de ácido nucleico Mediante el uso de la información provista en la presente, tal como las secuencias de nucleótidos que codifican para por lo menos 90-100% de los aminoácidos contiguos de por lo menos una de SEQ ID NOS: 1-42, así como por lo menos una porción de un anticuerpo, en donde las secuencias anteriores se insertan como la secuencia Pep de fórmula (I) para proveer un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de la presente invención, comprendiendo además fragmentos, variantes o secuencias consenso especificados de los mismos, o un vector depositado que comprende por lo menos una de estas secuencias, puede obtenerse una molécula de ácido nucleico de la presente invención que codifique para por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, usando los métodos descritos en la presente o como es sabido en la técnica. Las moléculas de ácido nucleico de la presente invención pueden estar en forma de ARN, tales como ARNm, ARNhn, ARNt o cualquier otra forma, o en forma de ADN incluyendo, pero no limitada a, ADNc y ADN genómico obtenido por clonación o producido en forma sintética, o cualquier combinación de las mismas. El ADN puede ser de triple cadena, de doble cadena o de cadena sencilla, o cualquier combinación de las mismas. Cualquier porción de por lo menos una cadena del ADN o ARN puede ser la cadena codificante, conocida también como la cadena sentido, o puede ser la cadena no codificante, referida también como la cadena antisentido.

Las moléculas de ácido nucleico aisladas de la presente invención, pueden incluir moléculas de ácido nucleico que comprenden un marco de lectura abierto (ORF), opcionalmente con uno o más intrones, moléculas de ácido nucleico que comprenden la secuencia codificante para un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo; y moléculas de ácido nucleico que comprenden una secuencia de nucleótidos sustancialmente diferente de las descritas anteriormente pero que, debido a la degeneración del código genético, codifican aún para por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO como se describe en la presente y/o como es sabido en la técnica. De hecho, el código genético es bien conocido en la técnica. De esta manera, sería habitual para el experto en la técnica generar dichas variantes de ácido nucleico degenerado que codifican para un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO específico, o porción o variante especificada del mismo, de la presente invención. Véase, por ejemplo, Ausubel, et al., citado anteriormente, y dichas variantes de ácido nucleico se incluyen en la presente invención. Como se indica en la presente, las moléculas de ácido nucleico de la presente invención que comprenden un ácido nucleico que codifica para un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO o porción o variante especificada del mismo, pueden incluir, pero no están limitados a, aquellos que codifican para la secuencia de aminoácidos de un fragmento de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, por sí mismo; la secuencia codificante para el mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO entero o una porción del mismo; la secuencia codificante para un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, fragmento porción, así como secuencias adicionales, tales como la secuencia codificante de por lo menos un péptido de fusión o guía de señal, con o sin las secuencias codificantes adicionales mencionadas anteriormente, tales como por lo menos un intrón, junto con secuencias no codificantes adicionales que incluyen, pero no están limitadas a, secuencias 5' y 3' no codificantes, tales como las secuencias transcritas no traducidas que desempeñan una función en transcripción, procesamiento de ARN mensajero, incluyendo señales de poliadenilación y de empalme (por ejemplo, unión a ribosomas y estabilidad del ARN mensajero); y una secuencia codificante adicional que codifica para aminoácidos adicionales, tales como aquellos que proveen funcionalidades adicionales. De esta manera, la secuencia que codifica para un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, puede fusionarse a una secuencia de marcador, tal como una secuencia que codifique para un péptido que facilite la purificación del mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO fusionado, o porción o variante especificada del mismo, que comprenda un fragmento o porción del mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO.

Polinucleótidos que hibridan selectivamente con un polinucleótido como se describe en la presente La presente invención provee ácidos nucleicos aislados que hibridan bajo condiciones de hibridación selectivas con un polinucleótido descrito en la presente, u otros descritos en la presente, incluyendo variantes o porciones especificadas de los mismos. De esta manera, los polinucleótidos de esta modalidad pueden usarse para aislar, detectar y/o cuantificar ácidos nucleicos que comprendan dichos polinucleótidos. Se usan típicamente, pero no exclusivamente, condiciones de hibridación de severidad baja a moderada con secuencias que tienen una identidad de secuencias reducida respecto a secuencias complementarias. Pueden usarse opcionalmente condiciones de severidad moderada a alta para secuencias de mayor identidad. Las condiciones de baja severidad permiten la hibridación selectiva de secuencias que tienen aproximadamente 40-99% de identidad de secuencias, y pueden usarse para identificar secuencias ortólogas o parálogas. Opcionalmente, los polinucleótidos de esta invención codificarán para por lo menos una porción de un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, codificada por los polinucleótidos descritos en la presente. Los polinucleótidos de esta invención abarcan secuencias de ácido nucleico que pueden usarse para hibridación selectiva con un polinucleótido que codifica para un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, de la presente invención. Véase, por ejemplo, Ausubel, citado anteriormente; Colligan, citado anteriormente, cada una siendo incorporada enteramente en la presente como referencia.

Construcción de ácidos nucleicos Los ácidos nucleicos aislados de la presente invención pueden obtenerse usando (a) métodos recombinantes, (b) técnicas de síntesis, (c) técnicas de purificación, o combinaciones de las mismas, como es bien sabido en la técnica. Los ácidos nucleicos pueden comprender convenientemente secuencias además de un polinucleótido de la presente invención. Por ejemplo, puede insertarse un sitio de clonación múltiple que comprenda uno o más sitios de restricción de endonucleasa en el ácido nucleico, para facilitar el aislamiento del polinucleótido. Asimismo, pueden insertarse secuencias traducibles para facilitar el aislamiento del polinucleótido traducido de la presente invención. Por ejemplo, una secuencia de marcador de hexa-histidina provee un medio conveniente para purificar las proteínas de la presente invención. El ácido nucleico de la presente invención - excluyendo la secuencia codificante - es opcionaimente un vector, adaptador o enlazador para clonación y/o expresión de un polinucleótido de la presente invención. Pueden añadirse secuencias adicionales a dichas secuencias de clonación y/o expresión para optimizar su función en clonación y/o expresión, para facilitar el aislamiento de polinucleótido, o para mejorar la introducción del polinucleótido en una célula. El uso de vectores de clonación, vectores de expresión, adaptadores y enlazadores, es bien conocido en la técnica. Véase, por ejemplo, Ausubel, citado anteriormente; o Sambrook, citado anteriormente.

Métodos recombinantes para construir ácidos nucleicos Las composiciones de ácido nucleico aisladas de esta invención, tales como ARN, ADNc, ADN genómico, o cualquier combinación de los mismos, puede obtenerse de fuentes biológicas usando cualquier número de metodologías de clonación conocidas por los expertos en la técnica. En algunas modalidades, sondas de oligonucleótidos que hibridan selectivamente bajo condiciones de severidad adecuadas, con los polinucleótidos de la presente invención, se usan para identificar la secuencia deseada en una colección de ADNc o ADN genómico. El aislamiento de ARN, y la construcción de colecciones de ADN genómico y de ADNc, son bien conocidos por los expertos en la técnica (véase, por ejemplo, Ausubel, citado anteriormente; o Sambrook, citado anteriormente).

Métodos de síntesis para la construcción de ácidos nucleicos Los ácidos nucleicos aislados de la presente invención pueden prepararse también mediante síntesis química directa mediante métodos conocidos (véase, por ejemplo, Ausubel, et al., citado anteriormente). La síntesis química produce en general un oligonucleótido de cadena sencilla, el cual puede convertirse en ADN de doble cadena mediante hibridación con una secuencia complementaria, o mediante polimerización con una ADN polimerasa, usando la cadena sencilla como molde. El experto en la técnica reconocerá que mientras que la síntesis química de ADN puede limitarse a secuencias de aproximadamente 100 o más bases, pueden obtenerse secuencias más largas mediante la ligación de secuencias más cortas.

Cassettes de expresión recombinantes La presente invención provee además cassettes de expresión recombinantes que comprenden un ácido nucleico de la presente invención. Puede usarse una secuencia de ácido nucleico de la presente invención, por ejemplo, una secuencia de ADNc o de ADN genómico que codifique para un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, de la presente invención, para construir un cassette de expresión recombinante que pueda introducirse en por lo menos una célula hospedera deseada. Un cassette de expresión recombinante comprenderá típicamente un polinucleótido de la presente invención enlazado operablemente a secuencias reguladoras de inicio de la transcripción que dirigen la transcripción del polinucleótido en la célula hospedera deseada. Pueden usarse promotores heterólogos y no heterólogos (es decir, endógenos) para dirigir la expresión de los ácidos nucleicos de la presente invención. En algunas modalidades, ácidos nucleicos aislados que sirven como promotor, ¡ntensificador u otros elementos, pueden introducirse en la posición adecuada (hacia el extremo 5', hacia el extremo 3' o en un ¡ntrón) de una forma no heteróloga de un polinucleotido de la presente invención, para sobrerregular o subregular la expresión de un polinucleotido de la presente invención. Por ejemplo, pueden alterarse promotores endógenos in vivo o in vitro mediante mutación, deleción y/o sustitución, como es sabido en la técnica. Un polinucleotido de la presente invención puede expresarse en orientación sentido o antisentido, si se desea. Se apreciará que el control de la expresión génica en orientación sentido o antisentido, puede tener un impacto directo sobre las características observables. Otro método de supresión es la supresión sentido. Se ha mostrado que la introducción de ácido nucleico configurado en la orientación sentido, es un medio efectivo por el cual se bloquea la transcripción de genes objetivo.

Vectores v células hospederas La presente invención se refiere también a vectores que incluyen moléculas de ácido nucleico aisladas de la presente invención, células hospederas que son genéticamente diseñadas con los vectores recombinantes, y la producción de por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, mediante técnicas recombinantes, como es bien sabido en la técnica. Véase, por ejemplo, Sambrook, et al., citado anteriormente; Ausubel, et al., citado anteriormente, cada una siendo incorporada enteramente en la presente como referencia. Los polinucleótidos pueden unirse opcionalmente a un vector que contenga un marcador seleccionable para propagación en un hospedero. En general, se introduce un vector de plásmido en una célula usando métodos conocidos adecuados, tales como electroporación, y similares, y otros métodos conocidos incluyen el uso del vector como un precipitado, tal como precipitado de fosfato de calcio, o en un complejo con un lípido cargado. Si el vector es un virus, puede empacarse ¡n vitro usando una línea de células de empacamiento adecuada, y puede transducirse entonces en células hospederas. La inserción de ADN debe enlazarse operativamente a un promotor adecuado. Las construcciones de expresión contendrán además sitios opcionalmente para por lo menos uno de inicio de la transcripción, terminación y, en la región transcrita, un sitio de unión a ribosoma para traducción. La porción codificante de los transcritos maduros expresada por las construcciones, incluirá de preferencia un codón de inicio de la traducción al inicio, y un codón de terminación (por ejemplo, UAA, UGA o UAG) posicionado adecuadamente en el extremo del ARN mensajero que se va a traducir, siendo preferidos UAA y UAG para expresión en células eucarióticas o de mamífero. Los vectores de expresión incluirán de preferencia, pero opcionalmente, por lo menos un marcador seleccionable. Dichos marcadores incluyen, por ejemplo, pero no están limitados a, genes de resistencia a metotrexato (MTX), dihidrofolato reductasa (DHFR, patente de E.U.A. No. 4,399,216; 4,634,665; 4,656,134, 4,956,288; 5,149,636; 5,179,017), ampicilina, neomicina (G418), ácido micofenólico o glutamina sintetasa (GS, patentes de E.U.A. Nos. 5,122,464; 5,770,359; 5,827,739) para cultivo de células eucarióticas, y genes de resistencia a tetraciclina o ampicilina para cultivo en E. coli y otras bacterias o procariontes (las patentes anteriores se incorporan enteramente en la presente como referencia). Medios y condiciones de cultivo adecuados para las células hospederas descritas anteriormente, se conocen en la técnica. Vectores adecuados serán fácilmente evidentes para los expertos en la técnica. La introducción de una construcción de vector en una célula hospedera, puede efectuarse mediante transfección con fosfato de calcio, transfección mediada por DEAE-dextrán, transfección mediada por lípidos catiónicos, electroporación, transducción, infección, y otros métodos conocidos. Dichos métodos se describen en la técnica, tal como en Sambrook, citado anteriormente, capítulos 1-4 y 16-18; y Ausubel, citado anteriormente, capítulos 1 , 9, 13, 15 y 16. Por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo de la presente invención, puede expresarse en una forma modificada, tal como una proteína de fusión, y puede incluir no sólo señales de secreción, sino también otras regiones funcionales heterólogas. Por ejemplo, puede añadirse una región de aminoácidos adicionales, en particular aminoácidos cargados, al extremo amino de un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, para mejorar la estabilidad y persistencia en la célula hospedera durante la purificación, o durante el manejo y almacenamiento subsecuentes. Asimismo, pueden añadirse porciones de péptidos a un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo de la presente invención, para facilitar la purificación. Dichas regiones pueden removerse antes de la preparación final de un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o por lo menos un fragmento del mismo. Dichos métodos se describen en muchos manuales de laboratorio estándar, tales como Sambrook, citado anteriormente, capítulos 17.29-17.42 y 18.1-18.74; y Ausubel, citado anteriormente, capítulos 16, 17 y 18. Los expertos en la técnica están bien informados de los numerosos sistemas de expresión disponibles para la expresión de un ácido nucleico que codifica para una proteína de la presente invención. Ilustrativas de cultivos de células útiles para la producción de los mimeticuerpos, porciones o variantes especificadas de los mismos, son células de mamífero. Los sistemas de células de mamífero estarán con frecuencia en forma de monocapas de células, aunque pueden usarse también biorreactores o suspensiones de células de mamífero. Muchas líneas de células hospederas adecuadas capaces de expresar proteínas glucosiladas intactas se han desarrollado en la técnica, e incluyen las líneas de células COS-1 (por ejemplo, CRL 650 de la ATCC), COS-7 (por ejemplo, CRL-1651 de la ATCC), HEK293, BHK21 (por ejemplo, CRL-10 de la ATCC), CHO (por ejemplo, CRL 1610, DG-44 de la ATCC) y BSC-1 (por ejemplo, CRL-26 de la ATCC), células hepG2, células P3X63Ag8.653, SP2/0-Ag14 y 293, células HeLa, y similares, las cuales están disponibles fácilmente, por ejemplo, de la American Type Culture Collection, Manassas, Va. Células hospederas preferidas, incluyen células de origen linfoide, tales como células de mieloma y linfoma. Células hospederas particularmente preferidas, son células P3X63Ag8.653 (número de acceso de la ATCC CRL-1580), y células SP2/0-Ag14 (número de acceso de la ATCC CRL-1851). Vectores de expresión para estas células, pueden incluir una o más de las siguientes secuencias de control de la expresión tales como, pero no limitadas a, un origen de replicación; un promotor (por ejemplo, promotores tardío o temprano del SV40, el promotor del CMV (véase, por ejemplo, patentes de E.U.A. Nos. 5,168,062; 5,385,839), un promotor de HSV tk, un promotor de pgk (fosfoglicerato cinasa), un promotor de EF-1 alfa (véase, por ejemplo, patente de E.U.A. No. 5,266,491 ), por lo menos un promotor de inmunoglobulina humana; un intensificador y/o sitios de información de procesamiento, tales como sitios de unión a ribosoma, sitios de empalme de ARN, sitios de poliadenilación (por ejemplo, un sitio de adición de T Ag poli A grande del SV40), y secuencias del terminador de transcripción. Véase, por ejemplo, Ausubel et al., citado anteriormente; y Sambrook, et al., citado anteriormente. Otras células útiles para la producción de ácidos nucleicos o proteínas de la presente invención se conocen y/o están disponibles, por ejemplo, del catálogo de la American Type Culture Collection de hibridomas y líneas de células (www.atcc.org). u otras fuentes conocidas o comerciales. Cuando se usan células hospederas eucarióticas, se incorporan típicamente en el vector secuencias de terminador de la transcripción o de poliadenilación. Un ejemplo de una secuencia de terminador, es la secuencia de poliadenilación del gen de la hormona de crecimiento de bovino. Pueden incluirse también secuencias para el empalme preciso del transcrito. Un ejemplo de una secuencia de empalme, es el intrón VP1 del SV40 (Sprague, et al., J. Viral. 45: 773-781 (1983)). Además, secuencias de genes para el control de la replicación en la célula hospedera, pueden incorporarse en el vector, como es sabido en la técnica.

Purificación de un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO o porción o variante especificada del mismo Un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, puede recuperarse y purificarse de cultivos de células recombinantes mediante métodos bien conocidos que incluyen, pero no están limitados a, purificación de proteína A, precipitación con etanol o sulfato de amonio, extracción con ácido, cromatografía de intercambio aniónico o catiónico, cromatografía de fosfocelulosa, cromatografía de interacción hidrofóbica, cromatografía de afinidad, cromatografía de hidroxiapatita y cromatografía de lectina. Puede usarse también cromatografía de líquidos de alto rendimiento ("CLAR") para la purificación. Véase, por ejemplo, Colligan, Current Protocols in Immunology, o Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY (1997-2002), por ejemplo, capítulos 1 , 4, 6, 8, 9 y 10, cada una de las cuales se incorpora enteramente en la presente como referencia. Los mimeticuerpos o porciones o variantes especificadas de los mismos de la presente invención, incluyen productos purificados naturalmente, productos de procedimientos de síntesis química, y productos obtenidos mediante técnicas recombinantes a partir de un hospedero eucariótico que incluye, por ejemplo, células de levadura, planta superior, insecto y mamífero. Dependiendo del hospedero usado en un procedimiento de producción recombinante, el mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo de la presente invención puede glucosilarse, o puede no glucosilarse, siendo preferida la primera opción. Dichos métodos se describen en muchos manuales de laboratorio estándar, tales como Sambrook, citado anteriormente, secciones 17.37-17.42; Ausubel, citado anteriormente, capítulos 10, 12, 13, 16, 18 y 20; Colligan, Protein Science, citado anteriormente, capítulos 12-14, todas siendo incorporadas enteramente en la presente como referencia.

Mimeticuerpos y fragmentos v/o variantes especificados de los mismos Los mimeticuerpos aislados de la presente invención, comprenden un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, codificado por cualquiera de los polinucleótidos de la presente invención como se describe en forma más detallada en la presente, o cualquier mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO aislado o preparado, o porción o variante especificada del mismo. De preferencia, el mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción de unión a ligando o variante del mismo, une por lo menos un receptor o ligando de proteína EPO, y provee de esta manera por lo menos una actividad biológica de EPO de la proteína correspondiente o un fragmento de la misma. Diferentes proteínas importantes desde el punto de vista terapéutico o de diagnóstico son bien conocidas en la técnica, y pruebas o actividades biológicas adecuadas de dichas proteínas, son también bien conocidas en la técnica. Ejemplos no limitativos de péptidos imitativos de EPO adecuados para esta invención, aparecen en el cuadro 1 más adelante. Estos péptidos pueden prepararse mediante métodos descritos y/o conocidos en la técnica. En la mayoría de los casos, se usan abreviaturas de aminoácido de una sola letra. La X en estas secuencias (y a lo largo de esta especificación, a menos que se especifique de otra manera en un caso particular), significa que puede estar presente cualquiera de los 20 residuos de aminoácido de ocurrencia natural o conocidos, o derivados conocidos de los mismos, o cualquier aminoácido modificado conocido de los mismos. Cualquiera de estos péptidos puede enlazarse en tándem (es decir, secuencialmente), con o sin enlazadores, y unos cuantos ejemplos enlazados en tándem se proveen en el cuadro. Los enlazadores se representan como "?", y pueden ser cualquiera de los enlazadores descritos en la presente. Las repeticiones en tándem y los enlazadores se muestran por separado mediante líneas punteadas para claridad. Cualquier péptido que contenga un residuo de cisteinilo puede entrelazarse opcionalmente con otro péptido que contenga Cys, en donde ambos pueden enlazarse a un vehículo, o sólo uno de ellos. Unos cuantos ejemplos entrelazados se proveen en el cuadro. Cualquier péptido que tenga más de un residuo Cys puede formar también un enlace disulfuro ¡ntrapéptido; véase, por ejemplo, péptidos imitativos de EPO en el cuadro 1. Unos cuantos ejemplos de péptidos enlazados por disulfuro intrapéptido se especifican en el cuadro. Cualquiera de estos péptidos puede derivatizarse como se describe en la presente, y unos cuantos ejemplos derivatizados se proveen en el cuadro. Para derivados en los cuales el extremo carboxilo puede bloquearse con un grupo amino, el grupo amino de bloqueo se muestra como -NH2. Para derivados en los cuales los residuos de aminoácido son sustituidos por porciones diferentes de residuos de aminoácido, las sustituciones se denotan mediante el símbolo d, que significa cualquiera de las porciones conocidas en la técnica, por ejemplo, como se describe en Bhatnagar et al. (1996), J. Med. Chem. 39: 3814-9, y en Cuthbertson et al. (1997), J. Med. Chem. 40: 2876-82, citas que se incorporan enteramente en la presente como referencia. El sustituyente J y los sustituyentes Z (Z5, Z6,...?4o), se definen en las patentes de E.U.A. Nos. 5,608,035, 5,786,331 y 5,880,096, las cuales se incorporan enteramente en la presente como referencia. Para las secuencias miméticas de EPO (cuadro 1), los sustituyentes X2 a Xn y el entero "n" son como se definen en el documento WO 96/40772, el cual se incorpora enteramente en la presente como referencia. Los residuos que aparecen en negritas son D-aminoácidos, pero pueden ser opcionalmente L-aminoácidos. Todos los péptidos se enlazan a través de enlaces peptídicos, a menos que se indique de otra manera. Las abreviaturas se dan al final de esta especificación. En la columna de "SEQ ID NO:", "NR" significa que no se requiere el listado de secuencias para la secuencia determinada.

CUADRO 1 Secuencias de péptidos imitativos de EPO Secuencia/estructura; SEQ ID NO: YXCXXGPXTWXCXP YXCXXGPXTWXCXP-YXCXXGPXTWXCXP 2 YXCXXGPXTWXCXP-A-YXCXXGPXTWXCXP 3 YXCXXGPXTWXCXP-A-e-amina) 4 K / YXCXXGPXTWXCXP-A-(a-amina) 4 GGTYSCHFGPLTWVCKPQGG 5 5 CUADRO 1 (CONTINUACION) GGDYHCRMGPLTWVCKPLGG 6 GGVYACRMGPITWVCSPLGG 7 VGNY CHFGPITWVCRPGGG 8 GGLYLCRFGPVTWDCGYKGG 9 GGTYSCHFGPLT VCKPQGG- 10 GGTYSCHFGPLTWVCKPQGG-A-GGTYSCHFGPLTWVCKPQGG 11 GGTYSCHFGPLTWVCKPQGGSSK 12 GGTYSCHFGPLTWVCKPQGGSSK 13 GGTYSCHFGPLTWVCKPQGGSSK 14 GGTYSCHFGPLTWVCKPQGGSSK-A-GGTYSCHFGPLTWVCKPQGGSSK GGTYSCHFGPLTWVCKPQGGSS-A-s-amina) \ K / GGTYSCHFGPLTWVCKPQGGSS-A-(a-amina) 15 GGTYSCHFGPLTWVCKPQGGSSK(A-biotina) 16 GGTYSCHGP LTW VCKPQ G G 18 VGNYMAHMGPITWVCRPGG 19 GGPHHVYACRMGPLTWIC 20 GGTYSCHFGPLTWVCKPQ 21 CUADRO 1 (CONTINUACION) GGLYACHMGPMTWVCQPLRG 22 TIAQYICYMGPETWECRPSPKA 23 YSCHFGPLTWVCK 24 YCHFGPLTWVC 25 YX2X3X4X5GPX6TWX7X8 27 X1YX2X3X4X5GPX6X7 8X9X10 11 28 X1YX2CX4X5GPX6TWX7CX9X1oXii 29 GGLYLCRFGPVTWDCGYKGG 30 GGTYSCHFGPLTWVCKPQGG 31 GGDYHCRMGPLTWVCKPLGG 32 VGNYMCHFGPITWVCRPGGG 33 GGVYACRMGPITWVCSPLGG 34 VGNYMAHMGPITWVCRPGG 35 GGTYSCHFGPLTWVCKPQ 36 GGLYACHMGPMT%AIVCQPLRG 37 TIAQYICYMGPETWECRPSPKA 38 YSCHFGPLTWVCK 39 YCHFGPLTWVC 40 SCHFGPLTWVCK 41 (AX2)nX3X4X5GPX6TWX7X8 42 Las actividades biológicas de EPO son bien conocidas en la técnica. Véase, por ejemplo, Anagnostou A et al Erythropoietin has a mitogenic and positive chemotactic effect on endothelial cells. Proceedings of the National Academy of Science (USA) 87: 5978-82 (1990); Fandrey J y Jelkman WE Interleukin 1 and tumor necrosis factor-alpha inhibit erythropoietin production in vitro. Annals of the New York Academy of Science 628: 250-5 (1991 ); Geissler K et al Recombinant human erythropoietin: A multipotential hemopoietic growth factor in vivo and in vitro. Contrib. Nephrol. 87: 1-10 (1990); Gregory CJ Erythropoietin sensitivity as a differentiation marker in the hemopoietic system. Studies of three erythropoietic colony responses in culture. Journal of Cellular Physiology 89: 289-301 (1976); Jelkman W et al onokines inhibiting erythropoietin production in human hepatoma cultures and in isolated perfused rat kidneys. 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British Journal of Haematology 80: 285-92 (1992); Pauly JU et al Highly specific and highly sensitive enzyme immunoassays for antibodies to human interleukin 3 (IL3) and human erythropoietin (EPO) in serum. Behring Instituí Mitteilungen 90: 112-25 (1991); Sakata S y Enoki Y Improved microbioassay for plasma erythropoietin based on CFU-E colony formation. Ann. Hematology 64: 224-30 (1992); Sanengen T et al Immunoreactive erythropoietin and erythropoiesis stimulating factor(s) in plasma from hypertransfused neonatal and adult mice. Studies with a radioimmunoassay and a cell culture assay for erythropoletln. Acta Physiol. Scand. 135: 11-6 (1989); y Widness JA et al A sensitive and specific erythropoietin immunoprecipitation assay: application to pharmacokinetic studies. Journal of Lab. Clin. Med. 119: 285-94 (1992). Para más información, véase también las líneas de células individuales usadas en bioensayos individuales. Cada una de las referencias anteriores, se incorpora enteramente en la presente como referencia. La EPO puede ponerse a prueba usando líneas de células tales como HCD57, NFS-60, TF-1 y UT-7, que responden al factor. La actividad de EPO puede ponerse a prueba también en una prueba de formación de colonias, determinando el número de CFU-E de células de médula ósea. Un método de detección alternativo y enteramente diferente, es la cuantificación de citocinas mediante RT-PCR. Un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción de variante especificada del mismo, que parcialmente o de preferencia provee sustancialmente por lo menos una actividad biológica de por lo menos una proteína o fragmento, puede unir el ligando de proteína o fragmento, y proveer de esta manera por lo menos una actividad que es de otra manera mediada a través de la unión de la proteína a por lo menos un receptor o ligando de proteína o a través de otros mecanismos mediados o dependientes de proteína. Como se usa en la presente, el término "actividad de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO", se refiere a un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO que puede modular o causar por lo menos una actividad dependiente de proteína por alrededor de 7 20-10,000%, de preferencia por cuando menos aproximadamente 60, 70, 80, 90, 91 , 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000%, o más, dependiendo de la prueba. La capacidad de un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, para proveer por lo menos una actividad dependiente de proteína, se evalúa de preferencia mediante cuando menos una prueba biológica de proteínas adecuada, como se describe en la presente y/o como es sabido en la técnica. Un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de humano, o porción o variante especificada del mismo de la invención, puede ser similar a cualquier clase (IgG, IgA, IgM, etc.) o isotipo, y puede comprender por lo menos una porción de una cadena ligera kappa o lambda. En una modalidad, el mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de humano, o porción o variante especificada del mismo, comprende un fragmento variable de cadena pesada de IgG, región de gozne, CH2 y CH3, por ejemplo, por lo menos uno de los isotipos lgG1 , lgG2, lgG3 o lgG4. Por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo de la invención, une por lo menos un ligando especificado específico a por lo menos una proteína, subunidad, fragmento, porción, o cualquier combinación de los mismos. El péptido imitativo de EPO (por lo menos uno) de por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, porción o variante especificada del mismo de la presente invención, puede unir opcionalmente por lo menos un epítope de ligando especificado del ligando. El epítope de unión puede comprender cualquier combinación de por lo menos una secuencia de aminoácidos de por lo menos uno a tres aminoácidos a la porción especificada entera de aminoácidos contiguos de las secuencias seleccionadas del grupo que consiste de un ligando de proteína, tal como un receptor de EPO, o porción del mismo. Dichos mimeticuerpos pueden prepararse uniendo las varias porciones de fórmula (I) del mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO usando técnicas conocidas, preparando y expresando por lo menos una (es decir, una o más) moléculas de ácido nucleico que codifiquen para el mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, usando técnicas conocidas de tecnología de ADN recombinante, o usando cualquier otro método adecuado, tal como síntesis química. Mimeticuerpos que se unen a receptores o ligandos de proteína humana y que comprenden una región variable de cadena ligera o cadena pesada definida, pueden prepararse usando métodos adecuados, tales como presentación visual de fagos (Katsube, Y., et al., Int. J Mol. Med, 1 (5): 863-868 (1998)), o métodos que usan animales transgénicos, como es sabido en la técnica y/o como se describe en la presente. El mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, puede expresarse usando el ácido nucleico codificante o porción del mismo en una célula hospedera adecuada. De preferencia, dichos mimeticuerpos o fragmentos de unión a ligando de los mismos pueden unir receptores o ligandos de EPO de humano con alta afinidad (por ejemplo, KD menor que o igual a aproximadamente 10"7 M). Secuencias de aminoácidos que son sustancialmente iguales a las secuencias descritas en la presente, incluyen secuencias que comprenden sustituciones conservativas de aminoácidos, así como deleciones y/o inserciones de aminoácidos. Una sustitución conservativa de aminoácidos se refiere ai reemplazo de un primer aminoácido por un segundo aminoácido que tiene propiedades químicas y/o físicas (por ejemplo, carga, estructura, polaridad, carácter hidrofóbico/carácter hidrofílico) que son similares a las del primer aminoácido. Las sustituciones conservativas incluyen el reemplazo de un aminoácido por otro aminoácido dentro de los siguientes grupos: lisina (K), arginina (R) e histidina (H); aspartato (D) y glutamato (E); asparagina (N), glutamina (Q), serina (S), treonina (T), tirosina (Y), K, R, H, D y E; alanina (A), valina (V), leucina (L), isoleucina (I), prolina (P), fenilalanina (F), triptófano (W), metionina (M), cisteína (C) y glicina (G); F, W e Y; C, S y T.

Códigos de aminoácidos Los aminoácidos que constituyen los mimeticuerpos o porciones o variantes especificadas de los mismos de la presente invención, se abrevian con frecuencia. Las designaciones de aminoácidos pueden indicarse designando el aminoácido por su código de una sola letra, su código de tres letras, nombre, o codones de tres nucleotidos, como es bien conocido en la técnica (véase, Alberts, B., et al., Molecular Biology of The Cell, tercera edición, Garland Publishing, Inc., New York, 1994): Un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo de la presente invención, puede incluir una o más sustituciones, deleciones o adiciones de aminoácidos, ya sea de mutaciones naturales o manipulación humana, como se especifica en la presente. De hecho, el número de sustituciones de aminoácidos que el experto en la técnica haría, depende de muchos factores que incluyen los que se describieron anteriormente. Hablando en términos generales, el número de sustituciones, inserciones o deleciones de aminoácidos por cuando menos uno de un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, no será mayor de 40, 30, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11 , 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 aminoácidos, tal como de 1 a 30 o cualquier escala o valor en la misma, como se especifica en la presente. Los aminoácidos en un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo de la presente invención, que son esenciales para una función, pueden identificarse mediante métodos conocidos en la técnica, tales como mutagénesis dirigida a sitio o mutagénesis de exploración de alanina (véase, por ejemplo, Ausubel, capítulos 8 y 15; Cunningham y Wells, Science 244: 1081-1085 (1989)). El último procedimiento introduce mutaciones de alanina individuales en cualquier residuo en la molécula. Las moléculas mutantes resultantes se ponen a prueba entonces para actividad biológica tal como, pero no limitada a, por lo menos una actividad relacionada a proteína, como se especifica en la presente o como es sabido en la técnica. Pueden identificarse también sitios que sean críticos para la unión del mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, mediante análisis estructural, tal como cristalización, resonancia magnética nuclear o marcación por fotoafinidad (véase Smith et al., J. Mol. Biol. 224: 899-904 (1992), y de Vos, et al., Science 255: 306-312 (1992)). Los mimeticuerpos o porciones o variantes especificadas de los mismos de la presente invención pueden comprender como la porción Pep de fórmula (I), sin estar limitados a, por lo menos una porción, secuencia o combinación seleccionada de 3 para todas las SEQ ID NOS: 1-42, o por lo menos una de las mismas. Variantes no limitativas que pueden mejorar o mantener por lo menos una de las actividades señaladas anteriormente incluyen, pero no están limitadas a, cualquiera de los polipéptidos anteriores, comprendiendo además por lo menos una mutación que corresponda a por lo menos una sustitución, inserción o deleción que no afecte en forma significativa las actividades o funciones biológicas adecuadas de dicho mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO. Un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, puede comprender además opcionalmente por lo menos una porción funcional de por lo menos un poüpéptido como porción Pep de fórmula (I), por lo menos una de 90-100% de SEQ ID NOS: 1-42. Un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO puede comprender además opcionalmente una secuencia de aminoácidos para la porción Pep de fórmula (I), seleccionada de una o más de SEQ ID NOS: 1-42. En una modalidad, la secuencia de aminoácidos de Pep, o porción de la misma, tiene aproximadamente 90-100% de identidad (es decir, 90, 91 , 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, o cualquier escala o valor en la misma) con la secuencia de aminoácidos correspondiente de la porción correspondiente de por lo menos una de SEQ ID NOS: 1-42. De preferencia, se determina 90-100% de identidad de aminoácidos (es decir, 90, 91 , 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, o cualquier escala o valor en la misma) usando un algoritmo de cómputo adecuado, como es sabido en la técnica. Los mimeticuerpos o porciones o variantes especificadas de los mismos de la presente invención, pueden comprender cualquier número de residuos de aminoácido contiguos de un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo de la presente invención, en donde ese número se selecciona del grupo de enteros que consisten de 10-100% del número de residuos contiguos en un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO. Opcionalmente, esta subsecuencia de aminoácidos contiguos tiene por lo menos aproximadamente 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250 o más aminoácidos de longitud, o cualquier escala o valor en la misma. Además, el número de dichas subsecuencias puede ser cualquier entero seleccionado del grupo que consiste de 1 a 20, tal como por lo menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, o más. Como los expertos en la técnica apreciarán, la presente invención incluye por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO biológicamente activo, o porción o variante especificada del mismo de la presente invención. Mimeticuerpos biológicamente activos, o porciones o variantes especificadas de los mismos, tienen una actividad específica de por lo menos 20%, 30% o 40%, y de preferencia por lo menos 50%, 60% o 70%, y más preferiblemente por lo menos 80%, 90% o 95%-100%, de la de la proteína insertada o fusionada nativa (no sintética), endógena o relacionada y conocida, o porción o variante especificada. Métodos para poner a prueba y cuantificar medidas de actividad enzimática y carácter específico por el substrato, son bien conocidos por los expertos en la técnica. En otro aspecto, la invención se refiere a mimeticuerpos de humano y fragmentos de unión a ligando, como se describe en la presente, los cuales son modificados por la unión covalente de una porción orgánica. Dicha modificación puede producir un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO o fragmento de unión a ligando con propiedades farmacocinéticas mejoradas (por ejemplo, vida media en suero in vivo incrementada). La porción orgánica puede ser un grupo polimérico hidrofílico lineal o ramificado, grupo ácido graso o grupo éster de ácido graso. En modalidades particulares, el grupo polimérico hidrofílico puede tener un peso molecular de alrededor de 800 a aproximadamente 120,000 Daltons, y puede ser un polialcanglicol (por ejemplo, polietilenglicol (PEG), polipropilenglicol (PPG)), polímero de carbohidratos, polímero de aminoácidos o polivinilpirrolidona, y el ácido graso o grupo éster de ácido graso puede comprender de alrededor de 8 a aproximadamente 40 átomos de carbono. Los mimeticuerpos modificados y fragmentos de unión a ligando de la invención pueden comprender una o más porciones orgánicas que se unen covalentemente, directamente o indirectamente, al mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo. Cada porción orgánica que se une a un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o fragmento de unión a ligando de la invención, puede ser independientemente un grupo polimérico hidrofílico, un grupo ácido graso o un grupo éster de ácido graso. Como se usa en la presente, el término "ácido graso" abarca ácidos monocarboxílicos y ácidos dicarboxílicos. Un "grupo polimérico hidrofílico", como el término se usa en la presente, se refiere a un polímero orgánico que es más soluble en agua que en octano. Por ejemplo, la polilisina es más soluble en agua que en octano. De esta manera, un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO modificado por la unión covalente de polilisina, es abarcado por la invención. Polímeros hidrofílicos adecuados para modificar mimeticuerpos de la invención, pueden ser lineales o ramificados e incluyen, por ejemplo, polialcanglicoles (por ejemplo, PEG, monometoxi-polietilenglicol (mPEG), PPG, y similares), carbohidratos (por ejemplo, dextrán, celulosa, oligosacáridos, polisacáridos, y similares), polímeros de aminoácidos hidrofílicos (por ejemplo, polilisina, poliarginina, poliaspartato, y similares), óxidos de polialcano (por ejemplo, óxido de polietileno, óxido de polipropileno, y similares) y polivinilpirrolidona. De preferencia, el polímero hidrofílico que modifica el mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de la invención tiene un peso molecular de alrededor de 800 a aproximadamente 50,000 Daltons como una entidad molecular separada. Por ejemplo, puede usarse PEG2500, PEG5000, PEG7500, PEG9000. PEG10000, PEG12500 y P G2C000, en donde el subíndice es el peso molecular promedio del polímero en Daltons. El grupo polimérico hidrofílico puede ser sustituido con uno a aproximadamente 6 grupos alquilo, ácido graso o éster de ácido graso. Polímeros hidrofílicos que son sustituidos con un grupo ácido graso o grupo éster de ácido graso, pueden prepararse usando métodos adecuados. Por ejemplo, un polímero que comprende un grupo amina puede ser acoplado a un carboxilato del ácido graso o éster de ácido graso, y un carboxilato activado (por ejemplo, activado con ?,?-carbonil diimidazol) en un ácido graso o éster de ácido graso, puede ser acoplado a un grupo hidroxilo en un polímero. Los ácidos grasos y ésteres de ácidos grasos adecuados para modificar mimeticuerpos de la invención pueden ser saturados, o pueden contener una o más unidades de insaturación. Los ácidos grasos que son adecuados para modificar mimeticuerpos de la invención incluyen, por ejemplo, n-dodecanoato (C 2, laurato), n-tetradecanoato (Ci4, miristato), n-octadecanoato (Ci8, estearato), n-eicosanoato (C20, araquidato), n-docosanoato (C-22, behenato), n-triacontanoato (C30), n-tetracontanoato (C40), c/s-A9-octadecanoato (C18, oleato), todo c/s-A5,8,11 ,14-e¡cosatetraenoato (C2o, araqu ¡donato), ácido octanodioico, ácido tetradecanodioico, ácido octadecanodioico, ácido docosanodioico, y similares. Esteres de ácido graso adecuados incluyen monoésteres de ácidos dicarboxílicos que comprenden un grupo alquilo inferior lineal o ramificado. El grupo alquilo inferior puede comprender de uno a aproximadamente doce, de preferencia de uno a alrededor de seis, átomos de carbono. Los mimeticuerpos y fragmentos de unión a ligando de humano modificados pueden prepararse usando métodos adecuados, tales como mediante reacción con uno o más agentes de modificación. Un "agente de modificación", como el término se usa en la presente, se refiere a un grupo orgánico adecuado (por ejemplo, polímero hidrofíiico, un ácido graso, un éster de ácido graso) que comprende un grupo de activación. Un "grupo de activación" es una porción química o grupo funcional que puede, bajo condiciones adecuadas, reaccionar con un segundo grupo químico, formando de esta manera un enlace covalente entre el agente de modificación y el segundo grupo químico. Por ejemplo, grupos de activación reactivos a amina incluyen grupos electrofílicos tales como tosilato, mesilato, halo (cloro, bromo, flúor, yodo), ésteres de N-hidroxisuccinimidilo (NHS), y similares. Grupos de activación que pueden reaccionar con tioles incluyen, por ejemplo, maleimida, yodoacetilo, acrilolilo, piridil disulfuros, ácido 5-tiol-2-nitrobenzoico tiol (TNB-tiol), y similares. Puede acoplarse un grupo funcional aldehido a moléculas que contengan amina o hidrazida, y un grupo azida puede reaccionar con un grupo fósforo trivalente para formar enlaces de fosforamidato o fosforimida.

Métodos adecuados para introducir grupos de activación en moléculas se conocen en la técnica (véase, por ejemplo, Hermanson, G. T., Bioconjugate Techniques, Academic Press; San Diego, CA (1996)). Puede unirse directamente un grupo de activación al grupo orgánico (por ejemplo, polímero hidrofílico, ácido graso, éster de ácido graso) o a través de una porción de enlazador, por ejemplo, un grupo de C1-C12 divalente, en donde uno o más átomos de carbono pueden ser reemplazados por un heteroátomo tal como oxígeno, nitrógeno o azufre. Porciones de enlazador adecuadas incluyen, por ejemplo, tetraetilenglicol, -(CH2)3-, -NH-(CH2)6-NH-, -(CH2)2-NH- y -CH2-0-CH2-CH2-0-CH2-CH2-0-CH-NH-. Pueden producirse agentes de modificación que comprendan una porción de enlazador, por ejemplo, haciendo reaccionar una mono-Boc-alquildiamina (por ejemplo, mono-Boc-etilendiamina, mono-Boc-diaminohexano) con un ácido graso en presencia de 1-etil-3-(3-dimetilamínopropil)carbod¡imida (EDC), para formar un enlace de amida entre la amina libre y el carboxilato de ácido graso. El grupo protector Boc puede removerse del producto mediante tratamiento con ácido trifluoroacético (TFA) para exponer una amina primaria que puede acoplarse a otro carboxilato como se describió, o puede hacerse reaccionar con anhídrido maleico, y el producto resultante puede ser ciclizado para producir un derivado de maleimido activado del ácido graso (véase, por ejemplo, Thompson et al., documento WO 92/16221 , cuyas enseñanzas completas se incorporan en la presente como referencia). Los mimeticuerpos modificados de la invención pueden producirse haciendo reaccionar un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de humano o fragmento de unión a ligando, con un agente de modificación. Por ejemplo, las porciones orgánicas pueden unirse al mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO en una forma no específica del sitio, usando un agente de modificación reactivo a amina, por ejemplo, un éster de NHS de PEG. Fragmentos de unión a ligando o mimeticuerpos de humano modificados pueden prepararse también, reduciendo enlaces disulfuro (por ejemplo, enlaces disulfuro intracadena) de un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO o fragmento de unión a ligando. El fragmento de unión a ligando o mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO reducido, puede hacerse reaccionar entonces con un agente de modificación reactivo a tiol para producir el mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO modificado de la invención. Mimeticuerpos de humano modificados y fragmentos de unión a ligando que comprenden una porción orgánica que se une a sitios específicos de un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo de la presente invención, pueden prepararse usando métodos adecuados, tales como proteólisis invertida (Fisch et al., Bioconjugate Chem., 3: 147-153 (1992); Werlen et al., Bioconjugate Chem., 5: 411-417 (1994); Kumaran et al., Protein Sci. 6(10): 2233-2241 (1997); Itoh et al., Bioorg. Chem., 24(1 ): 59-68 (1996); Capellas et al., Biotechnol. Bioeng., 56(4): 456-463 (1997)), y los métodos descritos en Hermanson, G. T., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996).

Composiciones de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO La presente invención provee también por lo menos una composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, que comprende por lo menos uno, por lo menos dos, por lo menos tres, por lo menos cuatro, por lo menos cinco, por lo menos seis, o más mimeticuerpos o porciones o variantes especificadas del mismo, como se describe en la presente y/o como es sabido en la técnica, que se proveen en una composición, mezcla o forma de ocurrencia no natural. Dichos porcentajes de composición son en peso, volumen, concentración, molaridad o molalidad como soluciones, mezclas, suspensión, emulsiones o coloides líquidos o secos, como es sabido en la técnica o como se describe en la presente. Dichas composiciones pueden comprender 0.00001-99.9999 por ciento en peso, volumen, concentración, molaridad o molalidad como líquido, gas o soluciones secas, mezclas, suspensión, emulsiones o coloides, como es sabido en la técnica o como se describe en la presente, o cualquier escala o valor en la misma tal como, pero no limitada a, 0.00001 , 0.00003, 0.00005, 0.00009, 0.0001 , 0.0003, 0.0005, 0.0009, 0.001 , 0.003, 0.005, 0.009, 0.01 , 0.02, 0.03, 0.05, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1 , 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1 , 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.3, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 71 , 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81 , 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91 , 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99.1 , 99.2, 99.3, 99.4, 99.5, 99.6, 99.7, 99.8 o 99.9%. Dichas composiciones de la presente invención incluyen de esta manera, pero no están limitadas a, 0.00001-100 mg/ml y/o 0.00001-100 mg/g. La composición puede comprender además opcionalmente una cantidad efectiva de por lo menos una proteína o compuesto seleccionado de por lo menos uno de un fármaco antiinfeccioso, un fármaco para el sistema cardiovascular (CV), un fármaco para el sistema nervioso central (CNS), un fármaco para el sistema nervioso autónomo (ANS), un fármaco para el tracto respiratorio, un fármaco para el tracto gastrointestinal (Gl), un fármaco hormonal, un fármaco para el equilibrio de fluidos o electrólitos, un fármaco hematológico, un antineoplásico, un fármaco de inmunomodulación, un fármaco oftálmico, ótico o nasal, un fármaco tópico, un fármaco nutricional, o similares. Dichos fármacos son bien conocidos en la técnica, e incluyen formulaciones, indicaciones, dosificación y administración para cada una de las presentadas en la presente (véase, por ejemplo, Nursing 2001 Handbook of Drugs, vigésima primera edición, Springhouse Corp., Springhouse, PA, 2001 ; Health Professional's Drug Guide 2001 , ed., Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, Inc, Upper Saddle River, NJ; Pharmacotherapy Handbook, Wells et al., ed., Appleton & Lange, Stamford, CT, cada una incorporada enteramente en la presente como referencia). El fármaco antiinfeccioso puede ser por lo menos uno seleccionado de amebicidas o por lo menos un antiprotozoarios, antihelmínticos, antimicóticos, antipalúdicos, antituberculosos, o por lo menos un antileproso, aminoglucósidos, penicilinas, cefalosporinas, tetraciclinas, sulfonamidas, fluoroquinolonas, antivirales, macrólidos antiinfecciosos y antiinfecciosos diversos. El fármaco CV puede ser por lo menos uno seleccionado de inotrópicos, antiarrítmicos, antianginosos, antihipertensivos, antilipidémicos y fármacos cardiovasculares diversos. El fármaco para el CNS puede ser por lo menos uno seleccionado de analgésicos no narcóticos, o por lo menos uno seleccionado de antipiréticos, fármacos antiinflamatorios no esteroidales, analgésicos narcóticos o por lo menos un analgésico opioide, sedantes-hipnóticos, anticonvulsivantes, antidepresivos, fármacos tranquilizantes, antipsicóticos, estimulantes del sistema nervioso central, antiparkinsonianos y fármacos diversos para el sistema nervioso central. El fármaco para el ANS puede ser por lo menos uno seleccionado de colinérgicos (parasimpaticomiméticos), anticolinérgicos, adrenérgicos (simpaticomiméticos), bloqueadores adrenérgicos (simpatolíticos), relajantes del músculo esquelético y bloqueadores neuromusculares. Ei fármaco para el tracto respiratorio puede ser por lo menos uno seleccionado de antihistamínicos, broncodilatadores, expectorantes o por lo menos uno de antitusivos y fármacos respiratorios diversos. El fármaco para el tracto Gl puede ser por lo menos uno seleccionado de antiácidos o por lo menos uno de adsorbentes o por lo menos uno de antiflatulentos, enzimas digestivas, o por lo menos uno de solubilizadores de cálculos biliares, antidiarreicos, laxantes, antieméticos y antiulcerosos. El fármaco hormonal puede ser por lo menos uno seleccionado de corticosteroides, andrógenos, o por lo menos uno de esteroides anabólicos, estrógenos o por lo menos uno de progestinas, gonadotropinas, fármacos antidiabéticos, o por lo menos uno de glucagon, hormonas tiroideas, antagonistas de hormonas tiroideas, hormonas de pituitaria y fármacos tipo paratiroides. El fármaco para el equilibrio de fluidos y electrólitos puede ser por lo menos uno seleccionado de diuréticos, electrólitos, o por lo menos uno de soluciones de reemplazo, acidificadores, o por lo menos uno de alcalinizadores. El fármaco hematológico puede ser por lo menos uno seleccionado de hematínicos, anticoagulantes, derivados de sangre y enzimas trombolíticas. Los antineoplásicos pueden ser por lo menos uno seleccionado de fármacos alquilantes, antimetabolitos, antineoplásicos antibióticos, antineoplásicos que alteran el equilibrio hormonal y antineoplásicos diversos. El fármaco de inmunomodulación puede ser por lo menos uno seleccionado de ¡nmunosupresores, vacunas, o por lo menos uno de toxoides, antitoxinas, o por lo menos uno de antivenenos, sueros inmunes y modificadores de respuesta biológica. Los fármacos oftálmicos, óticos y nasales pueden ser por lo menos uno seleccionado de oftálmicos antünfecciosos, oftálmicos antiinflamatorios, mióticos, midriáticos, oftálmicos vasoconstrictores y fármacos oftálmicos, óticos y nasales diversos. El fármaco tópico puede ser por lo menos uno seleccionado de antiinfecciosos locales, escabicidas, o por lo menos uno de pediculicidas y corticosteroides tópicos. El fármaco nutricional puede ser por lo menos uno seleccionado de vitaminas, minerales o calóricos. Véase, por ejemplo, el contenido de Nursing 2001 Drug Handbook^ citado anteriormente. El amebicida o antiprotozoarios (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de atovacuona, clorhidrato de cloroquina, fosfato de cloroquina, metronidazol, clorhidrato de metronidazol e isetionato de pentamidina. El antihelmíntico (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de mebendazol, pamoato de pirantel y tiabendazol. El antimicótico (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de anfotericina B, complejo de anfotericina B-sulfato de colesterilo, complejo de anfotericina B-lípido, anfotericina B liposomal, fluconazol, flucitosina, griseofulvina de tamaño en mieras, griseofulvina de tamaño en ultramicras, itraconazol, ketoconazol, nistatina y clorhidrato de terbinafina. El antipalúdico (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de clorhidrato de cloroquina, fosfato de cloroquina, doxiciclina, sulfato de hidroxicloroquina, clorhidrato de mefloquina, fosfato de primaquina, pirimetamina y pirimetamina con sulfadoxina. El antituberculoso o antileproso (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de clofazimina, cicloserina, dapsona, clorhidrato de etambutol, isoniazid, pirazinamida, rifabutina, rifampina, rifapentina y sulfato de estreptomicina. El aminoglucósido (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de sulfato de amikacina, sulfato de gentamicina, sulfato de neomicina, sulfato de estreptomicina y sulfato de tobramicina. La penicilina (por lo menos una) puede ser por lo menos una seleccionada de amoxicilina/clavulanato de potasio, amoxicilina trihidratada, ampicilina, ampicilina sódica, ampicilina trihidratada, ampicilina sódica/sulbactam sódico, cloxacilina sódica, dicloxacilina sódica, mezlocilina sódica, nafcilina sódica, oxacilina sódica, penicilina G benzatina, penicilina G potásica, penicilina G procaínica, penicilina G sódica, penicilina V potásica, piperacilina sódica, piperacilina sódica/tazobactam sódico, ticarcilina disódica y ticarcilina disódica/clavulanato de potasio. La cefalosporina (por lo menos una) puede ser por lo menos una seleccionada de por lo menos uno de cefaclor, cefadroxilo, cefazolina sódica, cefdinir, clorhidrato de cefepima, cefixima, cefmetazol sódico, cefonicida sódica, cefoperazona sódica, cefotaxima sódica, cefotetán disódico, cefoxitina sódica, cefpodoxima proxetil, cefprozil, ceftazidima, ceftibuten, ceftizoxima sódica, ceftriaxona sódica, cefuroxima axetil, cefuroxima sódica, clorhidrato de cefalexina, cefalexina monohidratada, cefradina y loracarbef. La tetraciclina (por lo menos una) puede ser por lo menos una seleccionada de clorhidrato de demeclociclina, doxiciclina cálcica, hiclato de doxiciclina, clorhidrato de doxiciclina, doxiciclina monohidratada, clorhidrato de minociclina y clorhidrato de tetraciclina. La sulfonamida (por lo menos una) puede ser por lo menos una seleccionada de co-trimoxazol, sulfadiazina, sulfametoxazol, sulfisoxazol y sulfisoxazol acetilo. La fluoroquinolona (por lo menos una) puede ser por lo menos una seleccionada de mesilato de alatrofloxacina, ciprofloxacina, enoxacina, levofloxacina, clorhidrato de lomefloxacina, ácido nalidíxico, norfloxacina, ofloxacina, esparfloxacina y mesilato de trovafloxacina. El antiviral (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de sulfato de abacavir, aciclovir sódico, clorhidrato de amantadina, amprenavir, cidofovir, mesilato de delavirdina, didanosina, efavirenz, famciclovir, fomivirsén sódico, foscarnet sódico, ganciciovir, sulfato de ¡ndinavir, lamivudina, lamivudina/zidovudina, mesilato de nelfinavir, nevirapina, fosfato de oseltamivir, ribavirina, clorhidrato de rimantadina, ritonavir, saquinavir, mesilato de saquinavir, estavudina, clorhidrato de valaciclovir, zalcitabina, zanamivir y zidovudina. El macrólido antiinfeccioso (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de azitromicina, claritromicina, diritromicina, eritromicina base, estolato de eritromicina, etilsuccinato de eritromicina, lactobionato de eritromicina y estearato de eritromicina. El antiinfeccioso diverso (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de aztreonam, bacitracina, succinato sódico de cloranfenicol, clorhidrato de clindamicina, palmitato de clindamicina, fosfato de clindamicina, ¡mipenem y cilastatina sódica, meropenem, macrocristales de nitrofurantoína, microcristales de nitrofurantoína, quinupristina/daifopristina, clorhidrato de espectinomicina, trimetroprima y clorhidrato de vancomicina (véase, por ejemplo, las pp. 24-214 de Nursing 2001 Drug Handbook). El inotrópico (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de lactato de amrinona, digoxina y lactato de milrinona. El antiarrítmico (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de adenosina, clorhidrato de amiodarona, sulfato de atropina, tosilato de bretilio, clorhidrato de diltiazem, disopiramida, fosfato de disopiramida, clorhidrato de esmolol, acetato de flecainida, fumarato de ibutilida, clorhidrato de lidocaína, clorhidrato de mexiletina, clorhidrato de moricizina, fenitoína, fenitoína sódica, clorhidrato de procainamida, clorhidrato de propafenona, clorhidrato de propanolol, bisulfato de quinidina, gluconato de quinidina, poligalacturonato de quinidina, sulfato de quinidina, sotalol, clorhidrato de tocainida y clorhidrato de verapamilo. El antianginoso (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de besilato de amlodipidina, nitrito de amilo, clorhidrato de bepridilo, clorhidrato de diltiazem, dinitrato de isosorbide, mononitrato de isosorbide, nadolol, clorhidrato de nicardipina, nifedipina, nitroglicerina, clorhidrato de propranolol, verapamilo y clorhidrato de verapamilo. El antihipertensivo (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de clorhidrato de acebutolol, besilato de amlodipina, atenolol, clorhidrato de benazepril, clorhidrato de betaxolol, fumarato de bisoprolol, candesartán, cilexetil, captopril, clorhidrato de carteolol, carvedilol, clonidina, clorhidrato de clonidina, diazóxido, clorhidrato de diltiazem, mesilato de doxazosina, enalaprilat, maleato de enalapril, mesilato de eprosartán, felodipina, mesilato de fenoldopam, fosinopril sódico, acetato de guanabenz, sulfato de guanadrel, clorhidrato de guanfacina, clorhidrato de hidralazina, irbesartán, isradipina, clorhidrato de labetalol, lisinopril, losartán potásico, metildopa, clorhidrato de metildopa, succinato de metoprolol, tartrato de metoprolol, minoxidil, clorhidrato de moexipril, nadolol, clorhidrato de nicardipina, nifedipina, nisoldipina, nitroprusiato sódico, sulfato de penbutolol, perindopril erbumina, mesilato de fentolamina, pindolol, clorhidrato de prazosina, clorhidrato de propranolol, clorhidrato de quinalaprilo, ramipril, telmisartán, clorhidrato de terazosina, maleato de timolol, trandolapril, valsartán y clorhidrato de verapamilo. El antilipidémico (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de atorvastatina cálcica, cerivastatina sódica, colestiramina, clorhidrato de colestipol, fenofibrato (micronizado), fluvastatina sódica, gemfibrozilo, lovastatina, niacina, pravastatina sódica y simvastatina. El fármaco CV diverso (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de abciximab, alprostadil, clorhidrato de arbutamina, cilostazol, bisulfato de clopidogrel, dipiridamol, eptifibatida, clorhidrato de midodrina, pentoxifilina, clorhidrato de ticlopidina y clorhidrato de tirofibán (véase, por ejemplo, las pp. 215-336 de Nursing 2001 Drug Handbook). El antipirético o analgésico no narcótico (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de acetaminofén, aspirina, trisalicilato magnésico de colina, diflunisal y salicilato de magnesio. El fármaco antiinflamatorio no esteroidal (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de celecoxib, diclofenaco potásico, diclofenaco sódico, etodolaco, fenoprofeno cálcico, flurbiprofeno, ibuprofeno, indometacina, indometacina sódica trihidratada, ketoprofeno, ketorolaco trometamina, nabumetona, naproxeno, naproxeno sódico, oxaprozina, piroxicam, rofecoxib y sulindac. El analgésico opioide o narcótico (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de clorhidrato de alfentanil, clorhidrato de brupenorfina, tartrato de butorfanol, fosfato de codeína, sulfato de codeína, citrato de fentanilo, sistema transdérmico de fentanilo, fentanilo transmucoso, clorhidrato de hidromorfona, clorhidrato de meperidina, clorhidrato de metadona, clorhidrato de morfina, sulfato de morfina, tartrato de morfina, clorhidrato de nalbufina, clorhidrato de oxicodona, pectinato de oxicodona, clorhidrato de oximorfona, clorhidrato de pentazocina, clorhidrato de naxolona, lactato de pentazocina, clorhidrato de propoxifeno, napsilato de propoxifeno, clorhidrato de remifentanilo, citrato de sufentanilo y clorhidrato de tramadol. El hipnótico-sedante (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de hidrato de doral, estazolam, clorhidrato de flurazepam, pentobarbital, pentobarbital sódico, fenobarbital sódico, secobarbital sódico, tamazepam, triazolam, zaleplon y tartrato de zolpidem. El anticonvulsivante (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de acetazolamida sódica, carbamazepina, clonazepam, cloracepato dipotásico, diazepam, divalproex sódico, etoxusimida, fosfenitoína sódica, gabapentina, sulfato de magnesio de lamotrigina, fenobarbital, fenobarbital sódico, fenitoína, fenitoína sódica, fenitoína sódica (diluida), primidona, clorhidrato de tiagabina, topiramato, valproato sódico y ácido valproico. El antidepresivo (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de clorhidrato de amitriptilina, pamoato de amitriptilina, amoxapina, clorhidrato de bupropión, bromhidrato de citalopram, clorhidrato de clomipramina, clorhidrato de desipramina, clorhidrato de doxepina, clorhidrato de fluoxetina, clorhidrato de imipramina, pamoato de imipramina, mirtazapina, clorhidrato de nefazodona, clorhidrato de nortriptilina, clorhidrato de paroxetina, sulfato de fenelzina, clorhidrato de sertralina, sulfato de tranilcipromina, maleato de trimipramina y clorhidrato de venlafaxína. El fármaco tranquilizante (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de alprazolam, clorhidrato de buspirona, clorodiazepóxido, clorhidrato de clorodiazepóxido, cloracepato dipotásico, diazepam, clorhidrato de doxepina, embonato de hidroxizina, clorhidrato de hidroxizina, pamoato de hidroxizina, lorazepam, mefrobamato, clorhidrato de midazolam y oxazepam. El fármaco antipsicótico (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de clorhidrato de cloropromazina, clozapina, decanoato de flufenazina, enantato de flufenazina, clorhidrato de flufenazina, haloperidol, decanoato de haloperidol, lactato de haloperidol, clorhidrato de loxapina, succinato de loxapina, besilato de mesoridazina, clorhidrato de molindona, olanzapina, perfenazina, pimozida, procloroperazina, fumarato de quetiapina, risperidona, clorhidrato de tioridazina, tiotixeno, clorhidrato de tiotixeno y clorhidrato de trifluoperazina. El estimulante del sistema nervioso central (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de sulfato de anfetamina, cafeína, sulfato de dextroanfetamina, clorhidrato de doxapram, clorhidrato de metanfetamina, clorhidrato de metilfenidato, modafinil, pemolina y clorhidrato de fentermina. El antiparkinsoniano (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de clorhidrato de amantadina, mesilato de benztropina, clorhidrato de biperidén, lactato de biperidén, mesilato de bromocriptina, carbidopa-levodopa, entacapona, levodopa, mesilato de pergolida, diclorhidrato de pramipexol, clorhidrato de ropinirol, clorhidrato de selegilina, tolcapona y clorhidrato de trihexilfenidilo. El fármaco diverso para el sistema nervioso central (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de clorhidrato de bupropión, clorhidrato de donepezil, droperidol, maleato de fluvoxamina, carbonato de litio, citrato de litio, clorhidrato de naratriptano, nicotina polacrilex, sistema transdérmico de nicotina, propofol, benzoato de rizatriptan, clorhidrato de sibutramina monohidratada, succinato de sumatriptan, clorhidrato de tacrina y zolmitriptan (véase, por ejemplo, las pp. 337-530 de Nursing 2001 Drug Handbook). El colinérgico (por ejemplo, parasimpaticomimético) (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de cloruro de betanecol, cloruro de edrofonio, bromuro de neostigmina, metilsulfato de neostigmina, salicilato de fisostigmina y bromuro de piridostigmina. Los anticolinérgicos (por lo menos uno) pueden ser por lo menos uno seleccionado de sulfato de atropina, clorhidrato de diciclomina, glicopirrolato, hiosciamina, sulfato de hiosciamina, bromuro de propantelina, escopolamina, butilbromuro de escopolamina y bromhidrato de escopolamina. Los adrenérgicos (simpaticomiméticos) (por lo menos uno) pueden ser por lo menos uno seleccionado de clorhidrato de dobutamina, clorhidrato de dopamina, bitartrato de metaraminol, bitartrato de norepinefrina, clorhidrato de fenilefrina, clorhidrato de pseudoefedrina y sulfato de pseudoefedrina. El bloqueador adrenérgico (simpatolítico) (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de mesilato de dihidroergotamina, tartrato de ergotamina, maleato de metisergida y clorhidrato de propranolol. El relajante de músculo esquelético (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de baclofen, carisoprodol, clorzoxazona, clorhidrato de ciclobenzaprina, dantrolene sódico, metocarbamol y clorhidrato de tizanidina.

Los bloqueadores neuromusculares (por lo menos uno) pueden ser por lo menos uno seleccionado de besllato de atracurio, besilato de cisatracurio, cloruro de doxacurio, cloruro de mivacurio, bromuro de pancuronio, bromuro de pipecuronio, bromuro de rapacuronio, bromuro de rocuronio, cloruro de succinilcollna, cloruro de tubocurarina y bromuro de veruconio (véase, por ejemplo, las pp. 531-84 de Nursing 2001 Drug Handbook). El antihistamínico (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de maleato de bromfeniramina, clorhidrato de cetirizina, maleato de clorfeniramina, fumarato de clemastina, clorhidrato de ciproheptadina, clorhidrato de difenhidramina, clorhidrato de fexofenadina, loratadina, clorhidrato de prometazina, teoclato de prometazina y clorhidrato de triprolidina. Los broncodilatadores (por lo menos uno) pueden ser por lo menos uno seleccionado de albuterol, sulfato de albuterol, aminofilina, sulfato de atropina, sulfato de efedrina, epinefrina, bitartrato de epinefrina, clorhidrato de epinefrina, bromuro de ipratropio, isoproterenol, clorhidrato de isoproterenol, sulfato de isoproterenol, clorhidrato de levalbuterol, sulfato de levalbuterol, sulfato de metaproterenol, oxtrifilina, acetato de pirbuterol, xinafoato de salmeterol, sulfato de terbutalina y teofilina. Los expectorantes o antitusivos (por lo menos uno) pueden ser por lo menos uno seleccionado de benzonatato, fosfato de codeína, sulfato de codeína, bromhidrato de dextrometorfán, clorhidrato de difenhidramina, guaifenesina y clorhidrato de hidromorfona. El fármaco respiratorio diverso (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de acetilcisteína, dipropionato de beclometasona, beractant, budesonida, calfactant, cromolín sódico, dornasa alfa, epoprostenol sódico, flunisolida, propionato de fluticasona, montelukast sódico, nedocromilo sódico, palivizumab, acetónido de triamcinolona, zafirlukast y zileuton (véase, por ejemplo, las pp. 585-642 de Nursing 2001 Drug Handbook). El antiácido, adsorbente o antiflatulento (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de carbonato de aluminio, hidróxido de aluminio, carbonato de calcio, magaldrato, hidróxido de magnesio, óxido de magnesio, simeticona y bicarbonato de sodio. Las enzimas digestivas o solubilizadores de cálculos biliares (por lo menos uno) pueden ser por lo menos uno seleccionado de pancreatina, lipasa pancreática y ursodiol. El antidiarreico (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de atapulguita, subsalicilato de bismuto, policarbófilo cálcico, clorhidrato de difenoxiiato o sulfato de atropina, loperamida, acetato de octreotida, tintura de opio y tintura de opio (alcanforada). El laxante (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de bisacodilo, policarbófilo cálcico, cáscara sagrada, extracto fluido aromático de cáscara sagrada, extracto fluido de cáscara sagrada, aceite de ricino, docusato de sodio, docusato de calcio, glicerina, lactulosa, citrato de magnesio, hidróxido de magnesio, sulfato de magnesio, metilcelulosa, aceite mineral, polietilenglicol o solución de electrólitos, Psyllium, sen y fosfatos de sodio. El antiemético (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de clorhidrato de clorpromazina, dimenhidrinato, mesílato de dolasetron, dronabinol, clorhidrato de granisetron, clorhidrato de meclizina, clorhidrato de metoclopramida, clorhidrato de ondansetron, perfenazina, proclorperazina, edisilato de proclorperazina, maleato de proclorperazina, clorhidrato de prometazina, escopolamina, maleato de trietilperazina y clorhidrato de trimetobenzamida. El fármaco antiulceroso (por lo menos uno) puede - ser por lo menos uno seleccionado de cimetidina, clorhidrato de cimetidina, famotidina, lansoprazol, misoprostol, nizatidina, omeprazol, rabeprozol sódico, citrato de bismuto, ranitidina, clorhidrato de ranitidina y sucralfato (véase, por ejemplo, las pp. 643-95 de Nursing 2001 Drug Handbook). Los corticosteroides (por lo menos uno) pueden ser por lo menos uno seleccionado de betametasona, acetato de betametasona o fosfato sódico de betametasona, fosfato sódico de betametasona, acetato de cortisona, dexametasona, acetato de dexametasona, fosfato sódico de dexametasona, acetato de fludrocortisona, hidrocortisona, acetato de hidrocortisona, cipionato de hidrocortisona, fosfato sódico de hidrocortisona, succinato sódico de hidrocortisona, metilprednisolona, acetato de metilprednisolona, succinato sódico de metilprednisolona, prednisolona, acetato de prednisolona, fosfato sódico de prednisolona, tebutato de prednisolona, prednisona, triamcinolona, acetónido de triamcinolona y diacetato de triamcinolona. El andrógeno o esferoide anabólico (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de danazol, fluoximesterona, metiltestosterona, decanoato de nandrolona, fenpropionato de nandrolona, testosterona, cipionato de testosterona, enantato de testosterona, propionato de testosterona y sistema transdérmico de testosterona. El estrógeno o progestina (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de estrógenos esterificados, estradiol, cipionato de estradiol, sistema transdérmico de acetato de noretindrona/estradiol, valerato de estradiol, estrógenos (conjugados), estropipato, etinil estradiol, etinil estradiol y desogestrel, etinil estradiol y diacetato de etinodiol, etinil estradiol y desogestrel, etinil estradiol y diacetato de etinodiol, etinil estradiol y levonorgestrel, etinil estradiol y noretindrona, etinil estradiol y acetato de noretindrona, etinil estradiol y norgestimato, etinil estradiol y norgestrel, etinil estradiol y acetato de noretindrona y fumarato ferroso, levonorgestrel, acetato de medroxiprogesterona, mestranoi y noretindrona, noretindrona, acetato de noretindrona, norgestrel y progesterona. La gonadotropina (por lo menos una) puede ser por lo menos una seleccionada de acetato de ganirelix, acetato de gonadorelina, acetato de histrelina y menotropinas. El antidiabético o glucagon (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de acarbosa, cloropropamida, glimepirida, glipizida, glucagon, gliburida, insulinas, clorhidrato de metformina, miglitol, clorhidrato de pioglitazona, repaglinida, maleato de rosiglitazona y troglitazona. La hormona tiroidea (por lo menos una) puede ser por lo menos una seleccionada de levotiroxina sódica, liotironina sódica, liotrix y tiroides. El antagonista de hormona tiroidea (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de metimazol, yoduro de potasio, yoduro de potasio (solución saturada), propiltiouracilo, yodo radiactivo (yoduro de sodio, 13 1) y solución fuerte de yodo. La hormona hipofisaria (por lo menos una) puede ser por lo menos una seleccionada de corticotropina, cosintropina, acetato de desmofresina, acetato de leuprolida, corticotropina de depósito, somatrem, somatropina y vasopresina. El fármaco tipo paratiroides (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de calcifediol, calcitonina (humana), calcitonina (de salmón), calcitriol, dihidrotaquisterol y etidronato disódico (véase, por ejemplo, las pp. 696-796 de Nursing 2001 Drug Handbook). El diurético (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de acetazolamida, acetazolamida sódica, clorhidrato de amilorida, bumetanida, clortalidona, etacrinato sódico, ácido etacrínico, furosemida, hidroclorotiazida, indapamida, manitol, metolazona, espironolactona, torsemida, triamtereno y urea. El electrólito o solución de reemplazo (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de acetato de calcio, carbonato de calcio, cloruro de calcio, citrato de calcio, glubionato de calcio, gluceptato de calcio, gluconato de calcio, lactato de calcio, fosfato de calcio (dibásico), fosfato de calcio (tribásico), dextrán (de alto peso molecular), dextrán (de bajo peso molecular), almidón, cloruro de magnesio, sulfato de magnesio, acetato de potasio, bicarbonato de potasio, cloruro de potasio, gluconato de potasio, inyección de Ringer, inyección de Ringer (lactada) y cloruro de sodio. El acidificador o alcalinizador (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de bicarbonato de sodio, lactato de sodio y trometamina (véase, por ejemplo, las pp. 797-833 de Nursing 2001 Drug Handbook). El hematínico (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de fumarato ferroso, gluconato ferroso, sulfato ferroso, sulfato ferroso (deshidratado), dextrán de hierro, sorbitoi de hierro, complejo de hierro y polisacárido y complejo de gluconato férrico de sodio. El anticoagulante (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de ardeparina sódica, dalteparina sódica, danaparoid sódico, enoxaparina sódica, heparina cálcica, heparina sódica y warfarina sódica. El derivado de sangre (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de albúmina a 5%, albúmina a 25%, factor antihemofílico, complejo inhibidor anticoagulante, antitrombina III (humana), factor IX (humano), complejo de factor IX y fracciones de proteínas plasmáticas. La enzima trombolítica (por lo menos una) puede ser por lo menos una seleccionada de alteplasa, anistreplasa, reteplasa (recombinante), estreptocinasa y urocinasa (véase, por ejemplo, las pp. 834-66 de Nursing 2001 Drug Handbook). El fármaco alquilante (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de busulfán, carboplatina, carmustina, clorambucilo, cisplatina, ciclofosfamida, ¡fosfamida, lomustina, clorhidrato de mecloretamina, melfalán, clorhidrato de melfalán, estreptozocina, temozolomida y tiotepa. El antimetabolito (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de capecitabina, cladribina, citarabina, floxuridina, fosfato de fludarabina, fluorouracilo, hidroxiurea, mercaptopurina, metotrexato, metotrexato sódico y tioguanina. El antibiótico antineoplásico (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de sulfato de bleomicina, dactinomicina, citrato de daunorrubicina liposomal, clorhidrato de daunorrubicina, clorhidrato de doxorrubicina, clorhidrato de doxorrubicina liposomal, clorhidrato de epirrubicina, clorhidrato de idarrubicina, mitomicina, pentostatina, plicamicina y vairrubicina. Los antineoplásicos (por lo menos uno) que alteran el balance hormonal, pueden ser por lo menos uno seleccionado de anastrozol, bicalutamida, fosfato sódico de estramustina, exemestane, flutamida, acetato de goserelina, letrozol, acetato de leuprolida, acetato de megestrol, nilutamida, citrato de tamoxifeno, testolactona y citrato de toremifeno. El antineoplásico diverso (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de asparaginasa, bacilo de Calmette-Guerin (BCG) intravesical vivo), dacarbazina, docetaxel, etopósido, fosfato de etopósido, clorhidrato de gemcitabina, clorhidrato de irinotecan, mitotano, clorhidrato de mitoxantrona, paclitaxel, pegaspargasa, porfimer sódico, clorhidrato de procarbazina, rituximab, tenipósido, clorhidrato de topotecan, trastuzumab, tretinoína, sulfato de vinblastina, sulfato de vincristina y tartrato de vinorrelbina (véase, por ejemplo, las pp. 867-963 de Nursing 2001 Drug Handbook). El inmunosupresor (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de azatioprina, basiliximab, ciclosporina, daclizumab, inmunoglobulina linfocítica, muromonab-CD3, micofenolato mofetil, clorhidrato de micofenolato mofetil, sirolimus y tacrolimus. La vacuna o toxoide (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de vacuna BCG, vacuna anticólera, toxoides diftérico y tetánico (adsorbidos), toxoides diftérico y tetánico y vacuna antipertussis acelular adsorbida, toxoides diftérico y tetánico y vacuna antipertussis de células enteras, vacunas contra el conjugado b de Haemophilus, vacuna contra la hepatitis A (inactivada), vacuna contra la hepatitis B (recombinante), vacuna antigripal 1999-2000 tipos A y B trivalentes (antígeno de superficie purificado), vacuna antigripal 1999-2000 tipos A y B trivalentes (subvirión o subvirión purificado), vacuna antigripal 1999-2000 tipos A y B trivalentes (virión completo), vacuna contra el virus de la encefalitis japonesa (inactivada), vacuna contra la enfermedad de Lyme (OspA recombinante), vacuna contra el sarampión, parotiditis y rubéola (viva), vacuna contra el sarampión, parotiditis y rubéola (viva atenuada), vacuna antisarampionosa (viva atenuada), vacuna de polisacáridos antimeningocócica, vacuna antiparotídica (viva), vacuna antipeste, vacuna antineumocócica (polivalente), vacuna de poliovims o antipoliomielítica (inactivada), vacuna de poliovims o antipoliomielítica (viva, oral, trivalente), vacuna antirrábica (adsorbida), vacuna antirrábica (células diploides humanas), vacuna antirrubeólica y antiparotídica (viva), vacuna antirrubeólica (viva, atenuada), toxoide tetánico (adsorbido), toxoide tetánico (fluido), vacuna antitifoidea (oral), vacuna antitifoidea (parenteral), vacuna de polisacáridos de tipo Vi, vacuna contra el virus de la varicela y vacuna anti-fiebre amarilla. La antitoxina o el antiveneno (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de antiveneno contra la viuda negra, antiveneno contra los crótalos (polivalente), antitoxina diftérica (equina) y antiveneno contra Micrurus fulvius. El suero inmune (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de inmunoglobulina de citomegalovirus (intravenosa), ¡nmunoglobulina de hepatitis B (humana), inmunoglobulina intramuscular, inmunoglobulina intravenosa, inmunoglobulina de rabia (humana), ¡nmunoglobulina intravenosa de virus sincicial respiratorio (humana), inmunoglobulina Rh0(D) (humana), inmunoglobulina intravenosa Rh0(D) (humana), inmunoglobulina del tétanos (humana) e inmunoglobulina de varicela-zoster. Los modificadores de respuesta biológica (por lo menos uno) pueden ser por lo menos uno seleccionado de aldesleucina, epoetina alfa, filgrastim, acetato de glatiramer para inyección, interferón alfacon-1 , interferón alfa-2a (recombinante), interferón alfa-2b (recombinante), interferón beta-1a, interferón beta-1 b (recombinante), interferón gamma-1 b, clorhidrato de levamisol, oprelvekin y sargramostim (véase, por ejemplo, las pp. 964-1040 de Nursing 2001 Drug Handbook). Los antiinfecciosos oftálmicos (por lo menos uno) pueden seleccionarse de bacitracina, cloranfenicol, clorhidrato de ciprofloxacina, eritromicina, sulfato de gentamicina, ofloxacina a 0.3%, sulfato de polimixina B, sulfacetamida sódica a 10%, sulfacetamida sódica a 15%, sulfacetamida sódica a 30%, tobramicina y vidarabina. Los antiinflamatorios oftálmicos (por lo menos uno) pueden ser por lo menos uno seleccionado de dexametasona, fosfato sódico de dexametasona, diclofenaco sódico a 0.1 %, fluorometolona, flurbiprofeno sódico, ketorolaco trometamina, acetato de prednisolona (suspensión) y fosfato sódico de prednisolona (solución). El miótico (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de cloruro de acetilcolina, carbacol (infraocular), carbacol (tópico), yoduro de ecotiofato, pilocarpina, clorhidrato de pilocarpina y nitrato de pilocarpina. El midriático (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de sulfato de atropina, clorhidrato de ciclopentolato, clorhidrato de epinefrina, borato de epinefrilo, bromhidrato de homatropina, clorhidrato de fenilefrina, bromhidrato de escopolamina y tropicamida. Los vasoconstrictores oftálmicos (por lo menos uno) pueden ser por lo menos uno seleccionado de clorhidrato de nafazolina, clorhidrato de oximetazolina y clorhidrato de tetrahidrozolina. Los oftálmicos diversos (por lo menos uno) pueden ser por lo menos uno seleccionado de clorhidrato de apraclonidina, clorhidrato de betaxolol, tartrato de brimonidina, clorhidrato de carteolol, clorhidrato de dipivefrina, clorhidrato de dorzolamida, difumarato de emedastina, fluoresceína sódica, fumarato de ketotifeno, latanoprost, clorhidrato de levobunolol, clorhidrato de metipranolol, cloruro de sodio (hipertónico) y maleato de timolol. El ótico (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de ácido bórico, peróxido de carbamida, cloranfenicol y condensado de trietanolamina-oleato de polipéptidos. El fármaco nasal (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de dipropionato de beclometasona, budesonida, sulfato de efedrina, clorhidrato de epinefrina, flunisolida, propionato de fluticasona, clorhidrato de nafazolina, clorhidrato de oximetazolina, clorhidrato de fenilefrina, clorhidrato de tetrahidrozolina, acetónido de triamcinolona y clorhidrato de xilometazolina (véase, por ejemplo, las pp. 1041-97 de Nursing 2001 Drug Handbook). Los antinfecciosos locales (por lo menos uno) pueden ser por lo menos uno seleccionado de aciclovir, anfotericina B, crema de ácido azelaico, bacitracina, nitrato de butoconazol, fosfato de clindamicina, clotrimazol, nitrato de econazol, eritromicina, sulfato de gentamicina, ketoconazol, acetato de mafenida, metronidazol (tópico), nitrato de miconazol, mupirocin, clorhidrato de naftifina, sulfato de neomicina, nitrofurazona, nistatina, sulfadiazina de plata, clorhidrato de terbinafina, terconazol, clorhidrato de tetraciclina, tioconazol y tolnaftato. El escabicida o pediculicida (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de crotamitón, lindano, permetrina y piretrinas. El corticosteroide tópico (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de dipropionato de betametasona, valerato de betametasona, propionato de clobetasol, desonida, desoximetasona, dexametasona, fosfato sódico de dexametasona, diacetato de diflorasona, acetónido de fluocinolona, fluocinonida, flurandrenolida, propionato de fluticasona, halcionida, hidrocortisona, acetato de hidrocortisona, butirato de hidrocortisona, valerato de hidrocortisona, furoato de nometasona y acetónido de triamcinolona (véase, por ejemplo, las pp. 1098-1136 de Nursing 2001 Drug Handbook). La vitamina o mineral (por lo menos uno) puede ser por lo menos uno seleccionado de vitamina A, complejo de vitamina B, cianocobalamina, ácido fólico, hidroxocobalamina, leucovorina calcica, niacina, niacinamida, clorhidrato de pirodoxina, riboflavina, clorhidrato de tiamina, vitamina C, vitamina D, colecalciferol, ergocalciferol, análogo de vitamina D, doxercalciferol, paricalcitol, vitamina E, análogo de vitamina K, fitonadiona, fluoruro de sodio, fluoruro de sodio (tópico), elementos traza, bromo, cobre, yodo, manganeso, selenio y zinc. Los calóricos (por lo menos uno) pueden ser por lo menos uno seleccionado de infusiones de aminoácidos (cristalinas), infusiones de aminoácidos en dextrosa, infusiones de aminoácidos con electrólitos, infusiones de aminoácidos con electrólitos en dextrosa, infusiones de aminoácidos para disfunción hepática, infusiones de aminoácidos para alta tensión metabólica, infusiones de aminoácidos para disfunción renal, dextrosa, emulsiones de grasa y triglicéridos de cadena media (véase, por ejemplo, las pp. 1137-63 de Nursing 2001 Drug Handbook). Las composiciones de polipéptido o anticuerpo de mimeticuerpo con CH1 eliminada de la presente invención, pueden comprender además por lo menos una de cualquier cantidad adecuada y/o efectiva de una composición o composición farmacéutica que comprenda por lo menos un anticuerpo o proteína de mimeticuerpo con CH1 eliminada a una célula, tejido, órgano, animal o paciente que necesite de dicha modulación, tratamiento o terapia, opcionalmente comprendiendo además por lo menos uno seleccionado de por lo menos un antagonista de FNT (por ejemplo, pero no limitado a, un antagonista de proteína o químico de FNT, un fragmento o anticuerpo policlonal o monoclonal de FNT, un fragmento o receptor de FNT soluble (por ejemplo, p55, p70 o p85), polipéptidos de fusión de los mismos, o un antagonista de FNT de molécula pequeña, por ejemplo, proteína de unión a FNT I o II (TBP-1 o TBP-II), nerelimonmab, ¡nfliximab, enteracept, CDP-571 , CDP-870, afelimomab, lenercept, y similares), un antirreumático (por ejemplo, metotrexato, auranofina, aurotioglucosa, azatioprina, etanercept, tiomalato sódico de oro, sulfato de hidroxicloroquina, leflunomida, sulfasalzina), un relajante muscular, un narcótico, un fármaco antiinflamatorio no esteroidal (AINE), un analgésico, un anestésico, un sedante, un anestésico local, un bloqueador neuromuscular, un antimicrobiano (por ejemplo, aminoglucósido), un antimicótico, un antiparasitario, un antiviral, un carbapenem, una cefalosporina, una flurorquinolona, un macrólido, una penicilina, una sulfonamida, una tetraciclina, otro antimicrobiano), un antipsoriático, un corticosteroide, un esferoide anabólico, un agente relacionado con diabetes, un mineral, un nutricional, un agente de tiroides, una vitamina, una hormona relacionada con calcio, un antidiarreico, un antitusivo, un antiemético, un antiulceroso, un laxante, un anticoagulante, una eritropoyetina (por ejemplo, epoetina alfa), un filgrastim (por ejemplo, G-CSF, Neupogen), un sargramostim (GM-CSF, Leukine), una Inmunización, una inmunoglobulina, un inmunosupresor (por ejemplo, basiliximab, ciclosporina, daclizumab), una hormona de crecimiento, un fármaco para el reemplazo de hormonas, un modulador del receptor de estrógeno, un midriático, un cicloplégico, un agente alquilante, un antimetabolito, un inhibidor mitótico, un radiofarmacéutico, un antidepresivo, un agente antimaníaco, un antipsicótico, un ansiolítico, un hipnótico, un simpaticomimético, un estimulante, donepezil, tacrina, una medicación contra el asma, un agonista beta, un esteroide inhalado, un inhibidor de leucotrieno, una metilxantina, una cromolina, una epinefrina o análogo, domase alfa (Pulmozyme), una atocina, o un antagonista de citocina. Ejemplos no limitativos de dichas citocinas incluyen, pero no están limitados, cualquiera de IL-1 a IL-23. Dosificaciones adecuadas son bien conocidas en la técnica. Véase, por ejemplo, Wells et al., eds., Pharmacotherapy Handbook, 2a. edición, Appleton and Lange, Stamford, CT (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascón Pocket Pharmacopoeia 2000, edición de lujo, Tarascón Publishing, Loma Linda, CA (2000), cada una de las cuales se incorpora enteramente en la presente como referencia. Dichas composiciones pueden incluir también moléculas de toxina que se asocian, unen, coformulan o coadministran con por lo menos un anticuerpo o polipéptido de la presente invención. La toxina puede actuar opcionalmente para destruir selectivamente la célula o tejido patológico. La célula patológica puede ser una célula cancerosa u otra célula. Dichas toxinas pueden ser, pero no están limitadas a, toxina purificada o recombinante o fragmento de toxina que comprenda por lo menos un dominio citotóxico funcional de toxina, por ejemplo, seleccionado de por lo menos uno de ricina, toxina diftérica, toxina de veneno o una toxina bacteriana. El término toxina incluye también endotoxinas y exotoxinas producidas por cualquier bacteria de ocurrencia natural, muíante o recombinante, o virus que pueda causar cualquier condición patológica en humanos y otros mamíferos, incluyendo choque por toxina, que puede ocasionar la muerte. Dichas toxinas pueden incluir, pero no están limitadas a, enterotoxina termolábil (LT) de E. coli enterotoxigénica, enterotoxina termoestable (ST), citotoxina de Shigella, enterotoxinas de Aeromonas, toxina 1 del síndrome de choque tóxico (TSST-1 ), enterotoxina de estafilococos A (SEA), B (SEB) o C (SEC), enterotoxinas de estreptococos, y similares. Dichas bacterias incluyen, pero no están limitadas a, cepas de una especie de E. coli enterotoxigénica (ETEC), E. coli enterohemorrágica (por ejemplo, cepas del serotipo 0157:H7), especies de Staphylococcus (por ejemplo, Staphylococcus aureus, Staphylococcus pyogenes), especies de Shigella (por ejemplo, Shigella dysenteriae, Shigella flexnerí, Shigella boydii y Shigella sonnei), especies de Salmonella (por ejemplo, Salmonella typhi, Salmonella cholera-suis, Salmonella enteritidis), especies de Clostridium (por ejemplo, Clostridium períríngens, Clostrídium dificile, Clostridium botulinum), especies de Camphlobacter (por ejemplo, Camphlobacter jejuni, Camphlobacter fetus), especies de Heliobacter (por ejemplo, Heliobacter pylorí), especies de Aeromonas (por ejemplo, Aeromonas sobria, Aeromonas hydrophila, Aeromonas caviae), Pleisomonas shigelloides, Yersina enterocolitica, especies de Vibrio (por ejemplo, Vibrio cholerae, Vibrio parahemolyticus), especies de Klebsiella, Pseudomonas aeruginosa, y estreptococos. Véase, por ejemplo, Stein, ed., INTERNAL MEDICINE, 3a. ed., pp. 1-13, Little, Brown and Co., Boston, (1990); Evans et al., eds., Bacterial Infections of Humans: Epidemiology and Control, 2a. ed., pp. 239-254, Plenum Medical Book Co., New York (1991 ); Mandell et al, Principies and Practice of Infectious Diseases, 3a. ed., Churchill Livingstone, New York (1990); Berkow et al, eds., The Merck Manual, decimosexta edición, Merck and Co., Rahway, N.J. 1992; Wood et al, FEMS Microbiology Immunology 76: 121-134 (1991 ); y Marrack et al, Science, 248: 705-711 (1990), cuyo contenido se incorpora enteramente en la presente como referencia.

Las composiciones de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo de la presente invención, pueden comprender además por lo menos uno de cualquier auxiliar adecuado tal como, pero no limitado a, diluyente, aglutinante, estabilizador, reguladores de pH, sales, solventes lipofílicos, conservador, adyuvante, o similares. Se prefieren auxiliares farmacéuticamente aceptables. Ejemplos no limitativos de dichas soluciones estériles, y métodos de preparación de las mismas, son bien conocidos en la técnica tales como, pero no limitados a, Gennaro, ed., Remington's Pharmaceutical Sciences, decimoctava edición, Mack Publishing Co. (Easton, PA) 1990. Pueden seleccionarse habitualmente vehículos farmacéuticamente aceptables que sean adecuados para el modo de administración, solubilidad y/o estabilidad de la composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, como es bien sabido en la técnica o como se describe en la presente. Excipientes y aditivos farmacéuticos útiles en la presente composición incluyen, pero no están limitados a, proteínas, péptidos, aminoácidos, lípidos y carbohidratos (por ejemplo, azúcares, incluyendo monosacáridos, disacáridos, trisacáridos, tetrasacáridos y oligosacáridos; azúcares derivatizados, tales como alditoles, ácidos aldónicos, azúcares esterificados, y similares; y polisacáridos o polímeros de azúcar), que pueden estar presentes individualmente o en combinación, comprendiendo solos o en combinación 1-99.99% en peso o en volumen. Ejemplos de excipientes de proteína incluyen albúmina de suero, tales como albúmina de suero humano (HSA), albúmina humana recombinante (rHA), gelatina, caseína, y similares. Componentes de aminoácidos/mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo representativos, que pueden funcionar también en una capacidad reguladora de pH, incluyen alanina, glicina, arginina, betaína, histidina, ácido glutámico, ácido aspártico, cisteína, lisina, leucina, isoleucina, valina, metionina, fenilalanina, aspartame, y similares. Un aminoácido preferido es la glicina. Excipientes de carbohidratos adecuados para su uso en la presente invención incluyen, por ejemplo, monosacáridos tales como fructosa, maltosa, galactosa, glucosa, D-manosa, sorbosa, y similares; disacáridos tales como lactosa, sacarosa, trehalosa, celobiosa, y similares; polisacáridos tales como rafinosa, melezitosa, maltodextrinas, dextranos, almidones, y similares; y alditoles tales como manitol, xilitol, maltitol, lactitol, xilitol sorbitol (glucitol), mioinositol, y similares. Excipientes de carbohidratos preferidos para su uso en la presente invención, son manitol, trehalosa y rafinosa. Las composiciones de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO pueden incluir también un regulador de pH o un agente para el ajuste del pH; típicamente, el regulador de pH es una sal preparada a partir de una base o ácido orgánico. Reguladores de pH representativos incluyen sales de ácidos orgánicos tales como sales de ácido cítrico, ácido ascórbico, ácido glucónico, ácido carbónico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido acético o ácido itálico; Tris, clorhidrato de trometamina o reguladores de pH de fosfato. Reguladores de pH preferidos para su uso en las presentes composiciones, son sales de ácidos orgánicos tales como citrato. Además, las composiciones de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo de la invención, pueden incluir aditivos/excipientes poliméricos tales como polivinilpirrolidonas, ficoles (un azúcar polimérico), dextratos (por ejemplo, ciclodextrinas tales como 2-hidroxipropil-p-ciclodextrina), polietilenglicoles, agentes saborizantes, agentes antimicrobianos, edulcorantes, antioxidantes, agentes antiestáticos, agentes tensioactivos (por ejemplo, polisorbatos tales como "TWEEN 20" y "TWEEN 80"), lípidos (por ejemplo, fosfolípidos, ácidos grasos), esteroides (por ejemplo, colesterol) y agentes quelantes (por ejemplo, EDTA). Estos y otros excipientes y/o aditivos farmacéuticos conocidos adecuados para su uso en las composiciones de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de conformidad con la invención se conocen en la técnica, por ejemplo, como se enlistan en "Remington: The Science & Practice of Pharmacy", decimonovena edición, Williams & Williams, (1995), y en "Physician's Desk Reference", quincuagésima segunda edición, Medical Economics, Montvale, NJ (1998), cuya descripción se incorpora enteramente en la presente como referencia. Materiales de excipiente o vehículo preferidos son carbohidratos (por ejemplo, sacáridos y alditoles) y reguladores de pH (por ejemplo, citrato) o agentes poliméricos.

Formulaciones Como se indicó anteriormente, la invención provee formulaciones estables, las cuales pueden incluir de preferencia un regulador de pH adecuado con solución salina o una sal elegida, así como soluciones y formulaciones conservadas opcionales que contienen un conservador, así como formulaciones conservadas de uso múltiple adecuadas para uso farmacéutico o veterinario, que comprenden por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, en una formulación farmacéuticamente aceptable. Las formulaciones conservadas contienen por lo menos un conservador conocido o seleccionado opcionalmente del grupo que consiste de por lo menos un fenol, m-cresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol, alcohol bencílico, nitrito fenilmercúrico, fenoxietanol, formaldehído, clorobutanol, cloruro de magnesio (por ejemplo, hexahidratado), alquilparabeno (metilparabeno, etilparabeno, propilparabeno, butilparabeno, y similares), cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio, dehidroacetato de sodio y timerosal, o mezclas de los mismos, en un diluyente acuoso. Cualquier concentración o mezcla adecuada puede usarse como es sabido en la técnica, tal como 0.001-5%, o cualquier escala o valor en la misma tal como, pero no limitada a, 0.001 , 0.003, 0.005, 0.009, 0.01 , 0.02, 0.03, 0.05, 0.09, 0.1 , 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1 , 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1 , 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.3, 4.5, 4.7, 4.8, 4.9, o cualquier escala o valor en la misma. Ejemplos no limitativos incluyen, sin conservador, m-cresol a 0.1-2% (por ejemplo, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.9, 1.0%), alcohol bencílico a 0.1-3% (por ejemplo, 0.5, 0.9, 1.1 , 1.5, 1.9, 2.0, 2.5%), timerosal a 0.001-0.5% (por ejemplo, 0.005, 0.01), fenol a 0.001-2.0% (por ejemplo, 0.05, 0.25, 0.28, 0.5, 0.9, 1.0%), alquilparabenos a 0.0005-1.0% (por ejemplo, 0.00075, 0.0009, 0.001 , 0.002, 0.005, 0.0075, 0.009, 0.01 , 0.02, 0.05, 0.075, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.5, 0.75, 0.9, 10%), y similares. Como se indicó anteriormente, la invención provee un artículo de fabricación, que comprende material de empacamiento y por lo menos un frasco que comprende una solución de por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, con los reguladores de pH y/o conservadores prescritos, opcionalmente en un diluyente acuoso, en donde dicho material de empacamiento comprende una marca que indica que dicha solución puede conservarse durante un período de 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 9, 12, 18, 20, 24, 30, 36, 40, 48, 54, 60, 66, 72 horas, o más. La invención comprende además un artículo de fabricación, que comprende material de empacamiento, un primer frasco que comprende liofilizado y por lo menos un mimeticuerpo con porción CH eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, y un segundo frasco que comprende un diluyente acuoso de regulador de pH o conservador prescrito, en donde dicho material de empacamiento comprende una marca que le da instrucciones a un paciente para que reconstituya el mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO (por lo menos uno), o porción o variante especificada del mismo en el diluyente acuoso, para formar una solución que pueda conservarse durante un período de veinticuatro horas o más. El mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO (por lo menos uno), o porción o variante especificada del mismo usada de conformidad con la presente invención, puede producirse mediante medios recombinantes que incluyen preparaciones transgénicas o de células de mamífero, o puede purificarse a partir de otras fuentes biológicas, como se describe en la presente o como es sabido en la técnica. La gama de cantidades de por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo en el producto de la presente invención, incluye cantidades que dan después de reconstitución, si es un sistema en húmedo/seco, concentraciones de alrededor de 1.0 µg ml a aproximadamente 1000 mg/ml, aunque concentraciones menores y mayores son operables y dependen del vehículo de suministro deseado, por ejemplo, las formulaciones en solución diferirán de los métodos de parche transdérmico, pulmonar, transmucoso u osmótico o de microbomba. De preferencia, el diluyente acuoso comprende además opcionalmente un conservador farmacéuticamente aceptable. Conservadores preferidos incluyen los seleccionados del grupo que consiste de fenol, m-cresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol, alcohol bencílico, alquilparabeno (metilparabeno, etilparabeno, propilparabeno, butilparabeno, y similares), cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio, dehidroacetato de sodio y timerosal, o mezclas de los mismos. La concentración del conservador usado en la formulación, es una concentración suficiente para dar un efecto antimicrobiano. Dichas concentraciones dependen del conservador seleccionado, y son fácilmente determinadas por el experto en la técnica. Otros excipientes, por ejemplo, agentes de isotonicidad, reguladores de pH, antioxidantes, conservadores e intensificadores, pueden añadirse opcionalmente y de preferencia, al diluyente. Un agente de isotonicidad, tal como glicerina, se usa comúnmente a concentraciones conocidas. Un regulador de pH fisiológicamente tolerado se añade de preferencia para proveer control mejorado del pH. Las formulaciones pueden abarcar una amplia gama de valores de pH, tales como de alrededor de pH 4 a aproximadamente pH 10, y escalas preferidas de alrededor de pH 5 a aproximadamente pH 9, y una escala más preferida de alrededor de 6.0 a aproximadamente 8.0. De preferencia, las formulaciones de la presente invención tienen un pH entre alrededor de 6.8 y aproximadamente 7.8. Reguladores de pH preferidos incluyen reguladores de pH de fosfato, más preferiblemente fosfato de sodio, en particular solución salina regulada en su pH con fosfato (PBS). Otros aditivos, tales como solubilizadores farmacéuticamente aceptables tales como Tween 20 (monolaurato de polioxietileno (20) sorbitán), Tween 40 (monopalmitato de polioxietileno (20) sorbitán), Tween 80 (monooleato de polioxietileno (20) sorbitán), Pluronic F68 (copolímeros de bloque de polioxietileno-polioxipropileno) y PEG (polietilenglicol), o agentes tensioactivos no iónicos tales como polisorbitán 20 u 80 poloxámero 184 ó 188, polioles Pluronic®, otros copolímeros de bloque, y quelantes tales como EDTA y EGTA, pueden añadirse opcionalmente a las formulaciones o composiciones para reducir la agregación. Estos aditivos son particularmente útiles, si se usa un contenedor de plástico o bomba para administrar la formulación. La presencia de un agente tensioactivo farmacéuticamente aceptable, mitiga la propensión de la proteína a agregarse. Las formulaciones de la presente invención pueden prepararse mediante un procedimiento que comprende mezclar por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, y un conservador seleccionado del grupo que consiste de fenol, m-cresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol, alcohol bencílico, alquiparabeno (metilparabeno, etilparabeno, propilparabeno, butilparabeno, y similares), cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio, dehidroacetato de sodio y timerosal, o mezclas de los mismos, en un diluyente acuoso. La mezcla del mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO (por lo menos uno), o porción o variante especificada del mismo y conservador en un diluyente acuoso, se lleva a cabo usando procedimientos de mezcla y disolución convencionales. Para preparar una formulación adecuada, por ejemplo, una cantidad medida de por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo en solución regulada en su pH, se combina con el conservador deseado en una solución regulada en su pH en cantidades suficientes para proveer la proteína y el conservador a las concentraciones deseadas. Variaciones de este procedimiento serían reconocidas por los expertos en la técnica. Por ejemplo, el orden en que los componentes se añaden, si se usan aditivos adicionales, y la temperatura y el pH a los cuales la formulación se prepara, son factores que pueden optimizarse para la concentración y los medios de administración usados. Las formulaciones reclamadas pueden proveerse a los pacientes como soluciones claras o como frascos dobles que comprenden un frasco de liofilizado y por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo que es reconstituido con un segundo frasco que contiene agua, un conservador y/o excipientes, de preferencia un regulador de pH de fosfato y/o solución salina y una sal elegida, en un diluyente acuoso. Ya sea un frasco de solución individual o frasco doble que requiera reconstitución, puede reutilizarse múltiples veces, y puede bastar para ciclos individuales o ciclos múltiples de tratamiento de los pacientes, y puede proveer de esta manera un régimen de tratamiento más conveniente que el disponible actualmente. Los presentes artículos de fabricación reclamados son útiles para administración durante un período de inmediatamente a 24 horas o más. Por consiguiente, los artículos de fabricación actualmente reclamados ofrecen ventajas significativas al paciente. Las formulaciones de la invención pueden almacenarse con seguridad opcionalmente a temperaturas de alrededor de 2 a aproximadamente 40°C, y retienen la actividad biológica de la proteína durante períodos extendidos, permitiendo de esta manera una etiqueta del empaque que indica que la solución puede mantenerse y/o usarse durante un período de 6, 12, 18, 24, 36, 48, 72 ó 96 horas, o más. Si se usa diluyente conservado, dicha etiqueta puede incluir un uso de hasta por lo menos 1 a 12 meses, medio año, uno y medio años y dos años. Las soluciones de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO (por lo menos uno), o porción o variante especificada del mismo en la invención, pueden prepararse mediante un procedimiento que comprende mezclar por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, en un diluyente acuoso. La mezcla se lleva a cabo usando procedimientos de mezcla y disolución convencionales. Para preparar un diluyente adecuado, por ejemplo, una cantidad medida de por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo en agua o regulador de pH, se combina en cantidades suficientes para proveer la proteína y opcionalmente un conservador o regulador de pH a las concentraciones deseadas. Variaciones de este procedimiento serían reconocidas por los expertos en la técnica. Por ejemplo, el orden en que los componentes se añaden, si se usan aditivos adicionales, y la temperatura y el pH a los cuales la formulación se prepara, son factores que pueden optimizarse para la concentración y los medios de administración usados. Los productos reclamados pueden proveerse a los pacientes como soluciones claras o como frascos dobles que comprenden un frasco de liofilizado y por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, que es reconstituido con un segundo frasco que contiene al diluyente acuoso. Ya sea un frasco de solución individual o frasco doble que requiera reconstitución, puede reutilizarse múltiples veces, y puede bastar para ciclos individuales o ciclos múltiples de tratamiento de los pacientes, y puede proveer de esta manera un régimen de tratamiento más conveniente que el disponible actualmente. Los productos reclamados pueden proveerse indirectamente a los pacientes, proveyendo a farmacias, clínicas u otras de dichas instituciones e instalaciones, soluciones claras o frascos dobles que comprendan un frasco de liofilizado y por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, que sea reconstituido con un segundo frasco que contiene al diluyente acuoso. La solución clara en este caso puede ser de hasta a un litro o incluso de un tamaño más grande, proveyendo un gran depósito del cual porciones más pequeñas de la solución de mimeticuerpo con porción CH eliminada imitativo de EPO (por lo menos uno), o porción o variante especificada del mismo, pueden recuperarse una o múltiples veces para transferencia en frascos más pequeños, y provistos por la farmacia o clínica a sus clientes y/o pacientes. Dispositivos reconocidos que comprenden estos sistemas de frasco individual, incluyen los dispositivos de inyector de pluma para suministro de una solución, tales como Humaject®, NovoPen®, B-D®Pen, AutoPen® y OptiPen®. Dispositivos reconocidos que comprenden un sistema de frasco doble, incluyen los sistemas de inyector de pluma para reconstituir un fármaco liofilizado en un cartucho para suministro de la solución reconstituida, tal como la HumatroPen®. Los productos reclamados actualmente, incluyen material de empacamiento. El material de empacamiento provee, además de la información requerida por las agencias reguladoras, las condiciones bajo las cuales el producto puede usarse. El material de empacamiento de la presente invención le da instrucciones al paciente de cómo reconstituir el mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO (por lo menos uno), o porción o variante especificada del mismo en el diluyente acuoso, para formar una solución y para usar la solución durante un período 2 a 24 horas o más, para el producto húmedo/seco de dos frascos. Para el producto en solución de frasco individual, la etiqueta indica que dicha solución puede usarse durante un período de 2 a 24 horas, o más. Los productos actualmente reclamados, son útiles para uso del producto farmacéutico en humanos. Las formulaciones de la presente invención pueden prepararse mediante un procedimiento que comprende mezclar por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo y un regulador de pH seleccionado, de preferencia un regulador de pH de fosfato que contenga solución salina o una sal elegida. La mezcla del mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO (por lo menos uno), o porción o variante especificada del mismo y regulador de pH en un diluyente acuoso, se lleva a cabo usando procedimientos de mezcla y disolución convencionales. Para preparar una formulación adecuada, por ejemplo, una cantidad medida de por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo en agua o regulador de pH, se combina con el agente regulador de pH deseado en agua en cantidades suficientes para proveer la proteína y el regulador de pH a las concentraciones deseadas. Variaciones de este procedimiento serían reconocidas por los expertos en la técnica. Por ejemplo, el orden en que los componentes se añaden, si se usan aditivos adicionales, y la temperatura y el pH a los cuales la formulación se prepara, son factores que pueden optimizarse para la concentración y los medios de administración usados. Las formulaciones estables o conservadas reclamadas pueden proveerse a los pacientes como soluciones claras o como frascos dobles que comprenden un frasco de liofilizado y por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, que es reconstituido con un segundo frasco que contiene un conservador o regulador de pH y excipientes, en un diluyente acuoso. Ya sea un frasco de solución individual o frasco doble que requiera reconstitución, puede reutilizarse múltiples veces, y puede bastar para ciclos individuales o ciclos múltiples de tratamiento de los pacientes, y puede proveer de esta manera un régimen de tratamiento más conveniente que el disponible actualmente. Por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo en las formulaciones o soluciones estables o conservadas descritas en la presente, puede administrarse a un paciente de conformidad con la presente invención, mediante una variedad de métodos de suministro que incluyen inyección subcutánea o intramuscular; transdérmica, pulmonar, transmucosa, por implante, bomba osmótica, cartucho, microbomba, u otros medios apreciados por los expertos en la técnica, como es bien sabido en la técnica.

Aplicaciones terapéuticas La presente invención para mimeticuerpos, provee también un método para modular o tratar anemia en una célula, tejido, órgano, animal o paciente, la cual incluye, pero no está limitada a, por lo menos una de cualquier anemia, anemia relacionada a tratamiento de cáncer, anemia relacionada a radioterapia o quimioterapia, anemia relacionada a tratamiento de infección viral o bacteriana, anemia renal, anemia de premadurez, anemia asociada a cáncer de individuos pediátricos y/o adultos, anemia asociada con linfoma, mieloma o mieloma múltiple, anemia asociada a SIDA, tratamiento concomitante para pacientes con o sin donación de sangre autóloga que esperan cirugía electiva, preoperatoria y post-operatoria, donación o transfusión de sangre autóloga, manejo perioperatorio, neutropenia cíclica o síndrome de Kostmann (agranulocitosis congénita), enfermedad renal de etapa terminal, anemia asociada con diálisis, insuficiencia renal crónica, enfermedades hematopoyéticas primarias, tales como anemia hipoplásica congénita, talasemia mayor o enfermedad de células falciformes, y complicaciones vaso-oclusivas de enfermedad de células falciformes. Véase Furman et al., Pediatrics 1992; 90: 716-728, Goldberg Science. 1988; 242: 1412-1415; Paul et al., Exp Hematol. 1984; 12: 825-830; Erslev et al., Arch Intern Med. 1968; 122: 230-235; Ersley et al., Ann Clin Lab Sci. 1980; 10: 250-257; Jacobs et al., Nature. 1985; 313: 806-810; Lin et al., Proc. Nati Acad Sci USA. 1985; 82: 7580-7584; Law et al., Proc Nati Acad Sci USA, 1986; 83: 6920-6924; Goldwasser et al., J Biol Chem. 1974; 249: 4202-4206; Eaves et al., Blood. 1978; 52: 1196-1210; Sawyer et al., Blood. 1989; 74: 103-109; Winearls et al., Lancet. 1986; 2: 1175-1178; Eschbach et al., N Engl J Med. 1987; 3 6: 73-78; Eschbach et al., Ann Intern Med. 1989; 111 : 992-1000, cada referencia siendo incorporada enteramente en la presente como referencia. Los mimeticuerpos de la presente invención pueden usarse también para formas no renales de anemia inducida, por ejemplo, por infecciones crónicas, procesos inflamatorios, radioterapia y tratamiento con fármacos citostáticos, y se han reportado resultados alentadores en pacientes con anemia no renal. Véase, por ejemplo, Abéis Rl y Rudnick SA Erythropoietin: evolving clinical applications. Experimental Hematology 19: 842-50 (1991 ); Graber SE y Krantz SB Erythropoietin: biology and clinical use. Hematology/Oncol. Clin. North Amer. 3: 369-400 (1989); Jelkman W y Gross AJ (eds.) Erythropoietin. Springer, Berlín 1989; Koury MJ y Bondurant MC The molecular mechanism of erythropoietin action. European Journal of Biochemistry 210: 649-63 (1992); Krantz SB Erythropoietin. Blood 77: 419-34 (1991); Tabbara IA Erythropoietin. Biological and clinical applications. Archives of Internal Medicine 153: 298-304 (1993), cada una incorporada enteramente en la presente como referencia. La presente invención provee también un método para modular o tratar una anemia o condición relacionada a células sanguíneas, en una célula, tejido, órgano, animal o paciente, en donde dicha anemia o condición relacionada a células sanguíneas, está asociada con por lo menos una que incluye, pero no está limitada a, por lo menos una de enfermedad relacionada al sistema inmune, enfermedad cardiovascular o enfermedad infecciosa, maligna y/o neurológica. Dicho método puede comprender opcionalmente administrar una cantidad efectiva de por lo menos una composición o composición farmacéutica que comprende por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, a una célula, tejido, órgano, animal o paciente que necesita de dicha modulación, tratamiento o terapia. La presente invención provee también un método para modular o tratar cáncer/enfermedad infecciosa en una célula, tejido, órgano, animal o paciente que incluye, pero no está limitada a, (i) por lo menos una de infección bacteriana aguda o crónica, procesos infecciosos o parasitarios agudos y crónicos que incluyen infecciones bacterianas, virales y micóticas, infección por VIH/neuropatía por VIH, meningitis, hepatitis, artritis séptica, peritonitis, neumonía, epiglotitis, E. coli 0157: h7, síndrome urémico hemolítico/púrpura trombocitopénica trombolítica, malaria, dengue, fiebre hemorrágica, leishmaniasis, lepra, síndrome de choque tóxico, miositis estreptocócica, gangrena gaseosa, Mycobacterium tuberculosis, Mycobacteríum avium intracelular, neumonía por Pneumocystis carínii, enfermedad inflamatoria pélvica, orquitis/epididimitis, Legionella, enfermedad de Lyme, influenza a, virus de Epstein-Barr, síndrome hemofagocítíco asociado a encefalitis vital, meningitis aséptica/encefalitis vital, y similares; (¡i) leucemia, leucemia aguda, leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia míeloide aguda (AML) de células B, células T o FAB ALL, leucemia mielocítica crónica (CML), leucemia linfocítica crónica (CLL), leucemia de células pilosas, síndrome mielodisplásico (MDS), un linfoma, enfermedad de Hodgkin, un linfoma maligno, linfoma no de Hodgkin, linfoma de Burkitt, mieloma múltiple, sarcoma de Kaposi, carcinoma colorrectal, carcinoma pancreático, carcinoma nasofaríngeo, histiocitosis maligna, síndrome paraneoplásico/hipercalcemia maligna, tumores sólidos, adenocarcinomas, sarcomas, melanoma maligno, y similares; o (iü) enfermedades neurodegenerativas, esclerosis múltiple, dolor de cabeza por migraña, complejo de demencia y SIDA, enfermedades de desmielinización, tales como esclerosis múltiple y mielitis transversal aguda; trastornos cerebelares y extrapiramidales, tales como lesiones del sistema corticoespinal; trastornos de los ganglios básales o trastornos cerebelares; trastornos de movimiento hipercinético, tales como corea de Huntington y corea senil; trastornos del movimiento inducidos por fármacos, tales como los inducidos por fármacos que bloquean a los receptores de dopamina del SNC; trastornos de movimiento hipocinético, tales como enfermedad de Parkinson; parálisis supranuclear progresiva; lesiones estructurales del cerebelo; degeneraciones espinocerebelares, tales como ataxia espinal, ataxia de Friedreich, degeneraciones corticales cerebelares, degeneraciones de sistemas múltiples (de Mencel, Dejerine-Thomas, Shi-Drager y Machado-Joseph); trastornos sistémicos (enfermedad de Refsum, abetalipoprotemia, ataxia, telangiectasia, y trastorno de sistemas múltiples mitocond ríales); trastornos del núcleo de desmielinización, tales como esclerosis múltiple, mielitis transversal aguda; y trastornos de la unidad motora, tales como atrofias musculares neurogénicas (degeneración de células del asta anterior, tales como esclerosis lateral amiotrófica, atrofia muscular espinal del infante y atrofia muscular espinal juvenil); enfermedad de Alzheimer; síndrome de Down en edad intermedia; enfermedad difusa del cuerpo de Lewy; demencia senil o del tipo de cuerpo de Lewy; síndrome de Wernicke-Korsakoff; alcoholismo crónico; enfermedad de Creutzfeldt-Jakob; panencefalitis esclerosante subaguda, enfermedad de Hallerrorden-Spatz; y demencia pugilística, y similares. Dicho método puede comprender opcionalmente administrar una cantidad efectiva de una composición o composición farmacéutica que comprenda por lo menos un anticuerpo para FNT o porción o variante especificada del mismo, a una célula, tejido, órgano, animal o paciente que necesita de dicha modulación, tratamiento o terapia. Véase, por ejemplo, The Merck Manual, decimasexta edición, Merck & Company, Rahway, NJ (1992). Dicho método puede comprender opcionalmente administrar una cantidad efectiva de por lo menos una composición o composición farmacéutica que comprenda por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, a una célula, tejido, órgano, animal o paciente que necesite de dicha modulación, tratamiento o terapia. La presente invención provee también un método para modular o tratar por lo menos una enfermedad cardiovascular en una célula, tejido, órgano, animal o paciente que incluyen, pero no está limitada a, por lo menos uno de síndrome de choque cardíaco, infarto al miocardio, insuficiencia cardiaca congestiva, apoplejía, apoplejía isquémica, hemorragia, arteriosclerosis, aterosclerosis, enfermedad arteriosclerótica diabética, hipertensión, hipertensión arterial, hipertensión renovascular, sincope, choque, sífilis del sistema cardiovascular, insuficiencia cardiaca, cor pulmonar, hipertensión pulmonar primaria, arritmias cardiacas, latidos ectópicos auriculares, aleteo auricular, fibrilación auricular (sostenida o paroxismal), taquicardia auricular caótica o multifocal, taquicardia de QRS estrecha regular, arritmias específicas, fibrilación ventricular, arritmias del haz de His, bloqueo auriculoventricular, bloqueo de la rama fascicular, trastornos isquémicos miocárdicos, enfermedad de arteria coronaria, angina de pecho, infarto al miocardio, cardiomiopatía, cardiomiopatía congestiva dilatada, cardiomiopatía restrictiva, enfermedades cardiacas valvulares, endocarditis, enfermedad pericárdica, tumores cardiacos, aneurismas aórticos y periféricos, disección aórtica, inflamación de la aorta, oclusión de la aorta abdominal y sus ramas, 6 trastornos vasculares periféricos, trastornos arteriales oclusivos, enfermedad aterosclerótica periférica, tromboangitis obliterante, trastornos arteriales periféricos funcionales, fenómeno y enfermedad de Raynaud, acrocianosis, eritromelalgia, enfermedades venosas, trombosis venosa, venas varicosas, fístula arteriovenosa, linfederma, lipedema, angina inestable, lesión por reperfusión, síndrome post-bomba, lesión por reperfusión-isquemia, y similares. Dicho método puede comprender opcionalmente administrar una cantidad efectiva de una composición o composición farmacéutica que comprenda por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, a una célula, tejido, órgano, animal o paciente que necesita de dicha modulación, tratamiento o terapia. Cualquier método de la presente invención puede comprender administrar una cantidad efectiva de una composición o composición farmacéutica que comprenda por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, a una célula, tejido, órgano, animal o paciente que necesite de dicha modulación, tratamiento o terapia. Dicho método puede comprender además opcionalmente coadministración o terapia de combinación para tratar dichas enfermedades inmunes, en donde la administración de dicho mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO a (por lo menos uno), porción o variante especificada del mismo, comprende además administrar antes de, concurrentemente con, y/o después de, por lo menos uno seleccionado de por lo menos un antagonista de FNT (por ejemplo, pero no limitado a, un fragmento o anticuerpo de FNT, un fragmento o receptor de FNT soluble, proteínas de fusión de los mismos, o un antagonista de FNT de molécula pequeña), un antirreumático, un relajante muscular, un narcótico, un fármaco antiinflamatorio no esferoidal (AI E), un analgésico, un anestésico, un sedante, un anestésico local, un bloqueador neuromuscular, un antimicrobiano (por ejemplo, aminoglucósido), un antimicótico, un antiparasitario, un antiviral, un carbapenem, una cefalosporina, una flurorquinolona, un macrólido, una penicilina, una sulfonamida, una tetraciclina, otro antimicrobiano), un antipsoriático, un corticosteroide, un esferoide anabólico, un agente relacionado con diabetes, un mineral, un nutricional, un agente de tiroides, una vitamina, una hormona relacionada con calcio, un antidiarreico, un antitusivo, un antiemético, un antiulceroso, un laxante, un anticoagulante, una eritropoyetina (por ejemplo, epoetina alfa), un filgrastim (por ejemplo, G-CSF, Neupogen), un sargramostim (GM-CSF, Leukine), una inmunización, una inmunoglobulina, un inmunosupresor (por ejemplo, basiliximab, ciclosporina, daclizumab), una hormona de crecimiento, un fármaco para el reemplazo de hormonas, un modulador del receptor de estrógeno, un midriático, un cicloplégico, un agente alquilante, un antimetabolito, un inhibidor mitótico, un radiofarmacéutico, un antidepresivo, un agente antimaníaco, un antipsicótico, un ansiolítico, un hipnótico, un simpaticomimético, un estimulante, donepezil, tacrina, una medicación contra el asma, un agonista beta, un esferoide inhalado, un inhibidor de leucotrieno, una metilxantina, una cromolina, una 8 epinefrina o análogo, domase alfa (Pulmozyme), una citocina, o un antagonista de citocina. Dosificaciones adecuadas son bien conocidas en la técnica. Véase, por ejemplo, Wells et al., eds., Pharmacotherapy Handbook, 2a. edición, Appleton and Lange, Stamford, CT (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascón Pocket Pharmacopoeia 2000, edición de lujo, Tarascón Publishing, Loma Linda, CA (2000), cada una de las cuales se incorpora enteramente en la presente como referencia. Los mimeticuerpos pueden usarse también ex vivo, tal como en el cultivo autólogo de médula ósea. En una palabra, se remueve médula ósea de un paciente antes de quimioterapia, y se trata con TPO y/o EPO, opcionalmente en combinación con mimeticuerpos, opcionalmente en combinación con una o más citocinas adicionales. La médula tratada se regresa entonces al paciente después de quimioterapia, para acelerar la recuperación de la médula. Además, puede usarse también TPO, sola o en combinación con mimeticuerpos de EPO y/o EPO, para la expansión ex vivo de células de médula ósea o células progenitoras de sangre periférica (PBPC). Antes del tratamiento con quimioterapia, la médula puede estimularse con factor de células madre (SCF) o G-CSF para liberar células progenitoras precoces en la circulación periférica. Estos progenitores se recogen opcionalmente y se concentran de la sangre periférica, y se tratan entonces en cultivo con TPO y mimeticuerpos, opcionalmente en combinación con una o más de otras citocinas que incluyen, pero no están limitadas a, SCF, G-CSF, IL-3, GM-CSF, IL-6 o IL-11 , para que se diferencien y proliferen en cultivos de megacariocitos a alta densidad, los cuales se regresan entonces opcionaimente al paciente después de quimioterapia a altas dosis. Las dosis de TPO para tratamiento ex vivo de médula ósea, estará en la escala de 100 pg/ml a 10 ng/ml, de preferencia de 500 pg/ml a 3 ng/ml. Las dosis de mimeticuerpos serán equivalentes en actividad a EPO, que puede usarse de 0.1 unidades/ml a 20 unidades/ml, de preferencia de 0.5 unidades/ml a 2 unidades/ml, o cualquier escala o valor en la misma. Los antagonistas de FNT adecuados para composiciones, terapia de combinación, coadministración, dispositivos y/o métodos de la presente invención (comprendiendo además por lo menos un anticuerpo, porción o variante especificada del mismo, de la presente invención) incluyen, pero no están limitados a, anticuerpos anti-FNT, fragmentos de unión a ligando de los mismos, y moléculas receptoras que se unen específicamente al FNT; compuestos que previenen y/o inhiben la síntesis de FNT, liberación de FNT o su acción sobre células objetivo, tales como talidomida, tenidap, inhibidores de fosfodiesterasa (por ejemplo, pentoxifilina y rolipram), agonistas del receptor de adenosina A2b e intensificadores del receptor de adenosina A2b; compuestos que previenen y/o inhiben la señalización del receptor de FNT, tales como inhibidores de cinasa de proteína activada por mitógenos (MAP); compuestos que bloquean y/o inhiben el desdoblamiento del FNT en la membrana, tales como inhibidores de metaloproteinasa; compuestos que bloquean y/o inhiben la actividad del FNT, tales como inhibidores de enzima de conversión de angiotensina (ACE) (por ejemplo, captopril); y compuestos que bloquean y/o inhiben la producción y/o síntesis de FNT, tales como inhibidores de MAP cinasa. Como se usa en la presente, un "anticuerpo del factor de necrosis tumoral", "anticuerpo de FNT", "anticuerpo de FNTa", o fragmentos y similares, disminuyen, bloquean, inhiben, suprimen o interfieren con la actividad del FNTa in vitro, in situ, y/o de preferencia, in vivo. Por ejemplo, un anticuerpo humano de FNT adecuado de la presente invención puede unir el FNTa, e incluye anticuerpos anti-FNT, fragmentos de unión a antígeno de los mismos, y mutantes o dominios especificados de los mismos que se unen específicamente al FNTa. Un anticuerpo o fragmento de FNT adecuado, puede también disminuir, bloquear, suprimir, interferir, prevenir y/o inhibir la síntesis de ARN, ADN o proteína del FNT, liberación del FNT, señalización del receptor de FNT, desdoblamiento del FNT de membrana, actividad del FNT, y producción y/o síntesis del FNT. El anticuerpo quimérico cA2 consiste de la región variable de unión a antígeno del anticuerpo lgG1 de FNTa anti-humano de ratón neutralizante de alta afinidad designado como A2, y las regiones constantes de una lgG1 humana, la inmunoglobulina kappa. La región Fe de la lgG1 humana mejora la función efectora del anticuerpo alogénico, aumenta la vida media en suero circulante, y disminuye la inmunogenicidad del anticuerpo. La avidez y el carácter específico por el epítope del anticuerpo quimérico cA2, se derivan de la región variable del anticuerpo de murino A2. En una modalidad particular, una fuente preferida para ácidos nucleicos que codifican para la región variable del anticuerpo de murino A2, es la línea de células de hibridoma A2. El anticuerpo quimérico A2 (cA2) neutraliza el efecto citotóxico del FNTa humano natural y recombinante, en una forma dependiente de la dosis. A partir de pruebas de unión del anticuerpo quimérico cA2 y FNTa humano recombinante, se calculó que la constante de afinidad del anticuerpo quimérico cA2 es de 1.04x1010M"1. Métodos preferidos para determinar el carácter específico por el anticuerpo monoclonal y la afinidad mediante inhibición competitiva, pueden encontrarse en Harlow, et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1988; Colligan et al., eds., Current Protocols In Immunology, Greene Publishing Assoc. y Wiley Interscience, New York (1992-2002); Kozbor et al., Immunol. Today, 4: 72-79 (1983); Ausubel et al., eds. Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience, New York (1987-2002); y Muller, Meth Enzymol. 92: 589-601 (1983), cuyas referencias se incorporan enteramente en la presente como referencia. En una modalidad particular, el anticuerpo A2 monoclonal de murino es producido por una línea de células designada como c134A. El anticuerpo quimérico cA2 es producido por una línea de células designada como c168A. Otros ejemplos de anticuerpos anti-FNT monoclonales que pueden usarse en la presente invención, se describen en la técnica (véase, por ejemplo, la patente de E.U.A. No. 5,231 ,024; Móller, A. et al., Cytokine 2(3): 162-169 (1990); solicitud de E.U.A. No. 07/943,852 (presentada en septiembre 11 de 1992); Rathjen et al., publicación internacional No. WO 91/02078 (publicada en febrero 21 de 1991 ); Rubín et al., publicación de patente EPO No. 0 218 868 (publicada en abril 22 de 1987); Yone et al., publicación de patente EPO No. 0288 088 (octubre 26 de 1988); Liang, et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 137: 847-854 (1986); Meager, et al., Hybrídoma 6: 305-311 (1987); Fendly et al., Hybridoma 6: 359-369 (1987); Bringman, et al., Hybrídoma 6: 489-507 (1987); y Hirai, et al., J. ¡mmunol. Meth. 96: 57-62 (1987), cuyas referencias se incorporan enteramente en la presente como referencia).

Moléculas receptoras de FNT Moléculas receptoras de FNT preferidas útiles en la presente invención, son las que unen el FNTa con alta afinidad (véase, por ejemplo, Feldmann et al., publicación internacional No. WO 92/07076 (publicada en abril 30 de 1992); Schall et al., Cell 61 : 361-370 (1990); y Loetscher et al., Cell 61 : 351-359 (1990), cuyas referencias se incorporan enteramente en la presente como referencia), y poseen opcionalmente baja inmunogenicidad. En particular, los receptores de superficie celular del FNT de 55 kDa (FNT-R p55) y de 75 kDa (FNT-R p75), son útiles en la presente invención. Formas truncadas de estos receptores, que comprenden los dominios extracelu lares (ECD) de los receptores, o porciones funcionales de los mismos (véase, por ejemplo, Corcoran et al., Eur. J. Biochem. 223: 831-840 (1994)), son también útiles en la presente invención. Se han detectado formas truncadas de los receptores de FNT, que comprenden los ECD, en orina y suero, como proteínas de unión inhibidoras del FNTa de 30 kDa y 40 kDa (Engelmann, H. et al., J. Biol. Chem. 265: 1531-1536 (1990)). Moléculas multiméricas del receptor de FNT y moléculas de fusión del ¡nmunorreceptor de FNT, y derivados y fragmentos o porciones de los mismos, son otros ejemplos de moléculas receptoras de FNT que son útiles en los métodos y las composiciones de la presente invención. Las moléculas receptoras de FNT que pueden usarse en la invención, se caracterizan por su capacidad para tratar a pacientes durante períodos extendidos con alivio bueno a excelente de síntomas, y baja toxicidad. La baja inmunogenicidad y/o la alta afinidad, así como otras propiedades no definidas, pueden favorecer los resultados terapéuticos logrados. Las moléculas multiméricas receptoras de FNT útiles en la presente invención comprenden el ECD completo, o una porción funcional del mismo, de dos o más receptores de FNT enlazados mediante uno o más enlazadores de polipéptidos u otros enlazadores no peptídicos, tales como polietilenglicol (PEG). Las moléculas multiméricas pueden comprender además un péptido de señal de una proteína secretada que dirige la expresión de la molécula multimérica. Estas moléculas multiméricas y métodos para su producción, se han descrito en la solicitud de E.U.A. No. 08/437,533 (presentada en mayo 9 de 995), cuyo contenido se incorpora enteramente en la presente como referencia.

Las moléculas de fusión del inmunorreceptor de FNT útiles en los métodos y las composiciones de la presente invención, comprenden por lo menos una porción de una o más moléculas de inmunoglobulina y uno o más receptores de FNT completos, o una porción funcional de los mismos. Estas moléculas de fusión del inmunorreceptor pueden ensamblarse como monómeros, o heteromultímeros u homomultímeros. Las moléculas de fusión del inmunorreceptor pueden ser también monovalentes o multivalentes. Un ejemplo de dicha molécula de fusión del inmunorreceptor de FNT, es la proteína de fusión de IgG/receptor de FNT. Moléculas de fusión del inmunorreceptor de FNT, y métodos para su producción, se han descrito en la técnica (Lessiauer et al., Eur. J. Immunol. 21 : 2883-2886 (1991); Ashkenazi et al., Proc. Nati. Acad. Sci USA 88: 10535-10539 (1991); Peppel et al., J. Exp. Med. 174: 1483-1489 (1991 ); Kolls et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 91 : 215-219 (1994); Butler et al., Cytokine 6(6): 616-623 (1994); Baker et al., Eur. J. Immunol. 24: 2040-2048 (1994); Beutler et al., patente de E.U.A. No. 5,447,851 ; y solicitud de E.U.A. No. 08/442,133 (presentada en mayo 16 de 1995), cada una de las cuales se incorpora enteramente en la presente como referencia). Métodos para producir moléculas de fusión del inmunorreceptor, pueden encontrarse también en Capón et al., patente de E.U.A. No. 5,116,964; Capón et al., patente de E.U.A. No. 5,225,538; y Capón et al., Nature 337: 525-531 (1989), cuyas referencias se incorporan enteramente en la presente como referencia. Un equivalente funcional, derivado, fragmento o región de 5 moléculas receptoras de FNT, se refiere a la porción de la molécula receptora de FNT, o a la porción de la secuencia de la molécula receptora de FNT que codifica para la molécula receptora de FNT, que es de tamaño y secuencias suficientes que se asemejan funcionalmente a las moléculas receptoras de FNT que pueden usarse en la presente invención (por ejemplo, que se unen al FNT con alta afinidad y poseen baja inmunogenicidad). Un equivalente funcional de moléculas receptoras de FNT, incluye también moléculas receptoras de FNT modificadas que se asemejan funcionalmente a las moléculas receptoras de FNT que pueden usarse en la presente invención (por ejemplo, que se unen al FNT alfa con alta afinidad y poseen baja inmunogenicidad). Por ejemplo, un equivalente funcional de una molécula receptora de FNT puede contener un codón "silencioso", o una o más sustituciones, deleciones o adiciones de aminoácidos (por ejemplo, sustitución de un aminoácido ácido por otro aminoácido ácido; o sustitución de un codón que codifica para el mismo aminoácido hidrofóbico o un aminoácido hidrofóbico diferente por otro codón que codifica para un aminoácido hidrofóbico). Véase Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Assoc. y Wiley-lnterscience, New York ( 987-2002). Las citocinas incluyen, pero no están limitadas a, todas las citocinas conocidas. Véase, por ejemplo, CopewithCytokines.com. Antagonistas de citocinas incluyen, pero no están limitados a, cualquier anticuerpo, fragmento o mimético, cualquier receptor soluble, fragmento o mimético, cualquier antagonista de molécula pequeña, o cualquier combinación de los mismos. Cualquier método de la presente invención puede comprender un método para tratar un trastorno mediado por proteína, el cual comprende administrar una cantidad efectiva de una composición o composición farmacéutica que comprenda por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, a una célula, tejido, órgano, animal o paciente que necesite de dicha modulación, tratamiento o terapia. Dicho método puede comprender además opcionalmente coadministración o terapia de combinación para tratar dichas enfermedades inmunes, en donde la administración de dicho mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO (por lo menos uno), o porción o variante especificada del mismo, comprende además administrar antes, concurrentemente, y/o después, por lo menos una citocina seleccionada de por lo menos alguna otra citocina tal como IL-3, -6 y -11 ; factor de células madre; G-CSF y GM-CSF. Típicamente, el tratamiento de condiciones patológicas se efectúa administrando una cantidad o dosificación efectiva de por lo menos una composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO que sume en total, en promedio, una escala de por lo menos alrededor de 0.01 a 500 mg de por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, por kg del paciente por dosis, y de preferencia de por lo menos aproximadamente 0.1 a 100 mg de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, por kg del paciente por administración individual o múltiple, dependiendo de la actividad específica de la contenida en la composición. En forma alternativa, la concentración en suero efectiva puede comprender una concentración en suero de 0.1-5000 µ9/?t?? por administración individual o múltiple. Dosificaciones adecuadas son conocidas por los médicos generales y dependerán, de hecho, del estado de enfermedad particular, la actividad específica de la composición que se está administrando, y el paciente particular que está sufriendo el tratamiento. En algunos casos, para lograr la cantidad terapéutica deseada, puede ser necesario proveer una administración repetida, es decir, administraciones individuales repetidas de una dosis medida o monitoreada particular, en donde las administraciones individuales se repiten hasta que se logre la dosis o el efecto diario deseado. Dosis preferidas pueden incluir opcionalmente 0.01 , 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1 , 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 y/o 30 mg/kg/administración, o cualquier escala, valor o fracción de las mismas, o para lograr una concentración en suero de 0.1 , 0.5, 0.9, 1.0, 1.1 , 1.2, 1.5, 1.9, 2.0, 2.5, 2.9, 3.0, 3.5, 3.9, 4.0, 4.5, 4.9, 5.0, 5.5, 5.9, 6.0, 6.5, 6.9, 7.0, 7.5, 7.9, 8.0, 8.5, 8.9, 9.0, 9.5, 9.9, 10, 10.5, 10.9, 11, 11.5, 11.9, 20, 12.5, 12.9, 13.0, 13.5, 13.9, 14.0, 14.5, 4.9, 5.0, 5.5, 5.9, 6.0, 6.5, 6.9, 7.0, 7.5, 7.9, 8.0, 8.5, 8.9, 9.0, 9.5, 9.9, 10, 10.5, 10.9, 11, 11.5, 11.9, 12, 12.5, 12.9, 13.0, 13.5, 13.9, 14, 14.5, 15, 15.5, 15.9, 16, 16.5, 16.9, 17, 17.5, 17.9, 18, 18.5, 18.9, 19, 19.5, 19.9, 20, 20.5, 20.9, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 96, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500 y/o 5000 µg/m\ por administración individual o múltiple, o cualquier escala, valor o fracción de las mismas. En forma alternativa, la dosificación administrada puede variar, dependiendo de factores conocidos, tales como las características farmacodinámicas del agente particular, y su modo y vía de administración; edad, salud y peso del receptor; naturaleza y grado de los síntomas, tipo de tratamiento concurrente, frecuencia de tratamiento, y del efecto deseado. Usualmente, una dosificación de ingrediente activo puede ser de aproximadamente 0.1 a 100 mg por kg de peso corporal. Ordinariamente de 0.1 a 50, y de preferencia de 0.1 a 10 mg por kg por administración, o en forma de liberación sostenida, son efectivos para obtener los resultados deseados. Como un ejemplo no limitativo, el tratamiento de humanos o animales puede proveerse como una dosificación de una sola vez o periódica de por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo de la presente invención, de 0.01 a 100 mg/kg, tal como 0.5, 0.9, 1.0, 1.1 , 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 1 1 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 ó 100 mg/kg por día, en por lo menos uno del día 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 1 1 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 , 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 ó 40, o en forma alternativa, por lo menos uno de la semana 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ó 20, o cualquier combinación de las mismas, usando dosis individuales, de infusión o repetidas. Las formas de dosificación (composición) adecuadas para administración interna, contienen en general de alrededor de 0.0001 mg a aproximadamente 500 mg de ingrediente activo por unidad o contenedor. En estas composiciones farmacéuticas, el ingrediente activo estará presente ordinariamente en una cantidad de alrededor de 0.5-95% en peso, con base en el peso total de la composición. Para administración parenteral, el mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, puede formularse como una solución, suspensión, emulsión o polvo liofilizado en asociación, o provisto por separado, con un vehículo parenteral farmacéuticamente aceptable. Ejemplos de dichos vehículos son agua, solución salina, solución de Ringer, solución de dextrosa y albúmina de suero humano a 5%. Pueden usarse también liposomas y vehículos no acuosos tales como aceites fijados. El vehículo o polvo liofilizado puede contener aditivos que mantengan isotonicidad (por ejemplo, cloruro de sodio, manitol) y estabilidad química (por ejemplo, reguladores de pH y conservadores). La formulación se esteriliza mediante técnicas conocidas o adecuadas. Vehículos farmacéuticos adecuados se describen en la edición más reciente de Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol, un texto de referencia estándar en este campo.

Administración terapéutica Muchos modos de administración conocidos y desarrollados pueden usarse de conformidad con la presente invención, para administrar cantidades terapéuticamente efectivas de por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, de conformidad con la presente invención. Aunque la administración pulmonar se usa en la siguiente descripción, pueden usarse otros modos de administración de conformidad con la presente invención, con resultados adecuados. Un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de la presente invención puede suministrarse en un vehículo, como una solución, emulsión, coloide o suspensión, o como un polvo, usando cualquiera de una variedad de dispositivos y métodos adecuados para administración por inhalación u otros modos descritos en la presente o conocidos en la técnica.

Formulaciones para administración parenteral Las formulaciones para administración parenteral pueden contener como excipientes comunes solución salina o agua estéril, polialquilenglicoles tales como polietilenglicol, aceites de origen vegetal, naftalenos hidrogenados, y similares. Pueden prepararse suspensiones acuosas u oleosas para inyección usando un emulsionante adecuado o humidificador y un agente de suspensión, de acuerdo a métodos conocidos. Agentes para inyección pueden ser un agente de dilución no tóxico no administrable oralmente, tal como una solución acuosa o una solución inyectable estéril o suspensión en un solvente. Como el vehículo o solvente adecuado, puede usarse agua, solución de Ringer, solución salina isotónica, etc.; como un solvente ordinario, o solvente de suspensión, puede usarse aceite no volátil estéril. Para estos propósitos, puede usarse cualquier tipo de ácido graso y aceite no volátil, incluyendo ácidos grasos o aceites grasos sintéticos o semisintéticos o naturales; y monoglicéridos o diglicéridos o triglicéridos naturales o sintéticos o semisintéticos. La administración parenteral se conoce en la técnica e incluye, pero no está limitada a, medios de inyección convencionales, un dispositivo de inyección sin aguja presurizado con gas, como se describe en la patente de E.U.A. No. 5,851 , 98, y un dispositivo perforador de láser como se describe en la patente de E.U.A. No. 5,839,446, cada una de las cuales se incorpora enteramente en la presente como referencia.

Suministro alternativo La invención se refiere además a la administración de por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, mediante medios parenteral, subcutáneo, intramuscular, intravenoso, de bolo, vaginal, rectal, bucal, sublingual, intranasal o transdérmico. Pueden prepararse composiciones de proteína, mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, para su uso para administración parenteral (subcutánea, intramuscular o intravenosa), en particular en forma de soluciones o suspensiones líquidas; para uso en administración vaginal o rectal, en particular en formas semisólidas tales como cremas y supositorios; para administración bucal o sublingual, en particular en forma de tabletas o cápsulas; o administración intranasal, en particular en forma de polvos, gotas nasales o aerosoles o ciertos agentes; o administración transdérmica, en particular en forma de un gel, ungüento, loción, suspensión o sistema de suministro por parche, con intensificadores químicos tales como sulfóxido de dimetilo, para modificar la estructura de la piel o para aumentar la concentración del fármaco en el parche transdérmico (Junginger, et al. en "Drug Permeation Enhancement"; Hsieh, D. S. eds., pp. 59-90 ( arcel Dekker, Inc. New York 1994, citas incorporadas enteramente en la presente como referencia), o con agentes oxidantes que permitan la aplicación de formulaciones que contienen proteínas y péptidos sobre la piel (véase documento WO 98/53847), o aplicaciones de campos eléctricos para crear vías de transporte transitorio tales como electroporación, o para aumentar la movilidad de fármacos cargados a través de la piel, tal como iontoforesis, o aplicación de ultrasonido tal como sonoforesis (véase patentes de E.U.A. Nos. 4,309,989 y 4,767,402) (las publicaciones y patentes anteriores siendo incorporadas enteramente en la presente como referencia).

Administración pulmonar/nasal Para administración pulmonar, de preferencia por lo menos una composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, se suministra en un tamaño de partícula efectivo para alcanzar las vías aéreas inferiores de los pulmones o senos. De conformidad con la invención, por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, puede suministrarse mediante cualquiera de una variedad de dispositivos de inhalación o nasales conocidos en la técnica para la administración de un agente terapéutico por inhalación. Estos dispositivos capaces de depositar formulaciones dispersadas en un gas en la cavidad del seno o los alvéolos de un paciente, incluyen inhaladores de dosis medida, nebulizadores, generadores de polvo seco, atomizadores, y similares. Otros dispositivos adecuados para dirigir la administración pulmonar o nasal de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, se conocen también en la técnica. Dichos dispositivos pueden usar formulaciones adecuadas para dispensar el mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, en un aerosol. Dichos aerosoles pueden comprender soluciones (tanto acuosas como no acuosas) o partículas sólidas. Inhaladores de dosis medida tales como el inhalador de dosis medida Ventolin®i usan típicamente un gas propelente, y requieren accionamiento durante la inspiración (véase, por ejemplo, los documentos WO 94/16970 y WO 98/35888). Inhaladores de polvo seco tales como Turbuhaler (Astra), Rotahaler® (Glaxo), Dlskus® (Glaxo), inhalador Spiros™ (Dura), dispositivos comercializados por Inhale Therapeutics, y el inhalador de polvo Spinhaler® (Fisons), usan accionamiento de un polvo mixto con la respiración (véase los documentos US 4668218 de Astra, EP 237507 de Astra, WO 97/25086 de Glaxo, WO 94/08552 de Dura, US 5458135 de Inhale, y WO 94/06498 de Fisons, incorporados enteramente en la presente como referencia). Nebulizadores tales como AERx™ de Aradigm, el nebulizador Ultravent® (Mallinckrodt), y el nebulizador Acorn II® (Marquest Medical Products) (véase los documentos US 5404871 de Aradigm, y WO 97/22376) (las referencias anteriores siendo incorporadas enteramente en la presente como referencia), producen aerosoles a partir de soluciones, mientras que los inhaladores de dosis medida, inhaladores de polvo seco, etc., generan aerosoles de partículas pequeñas. Se pretende que estos ejemplos específicos de dispositivos de inhalación disponibles comercialmente, sean representativos de dispositivos específicos adecuados para la práctica de esta invención, y no se pretende que sean limitativos del alcance de la misma. De preferencia, una composición que comprenda por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, se suministra mediante un atomizador o inhalador de polvo seco. Existen varias características deseables de un dispositivo de inhalación para administrar por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, de la presente invención. Por ejemplo, el suministro mediante el dispositivo de inhalación es en forma ventajosa confiable, reproducible y preciso. El dispositivo de inhalación puede suministrar opcionalmente pequeñas partículas secas, por ejemplo, menores de alrededor de 10 µ?t?, de preferencia de aproximadamente 1-5 µpp, para buena respirabilidad.

Administración de composiciones de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, como un aerosol Un aerosol que incluya una formulación de proteína de la composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, puede producirse forzando una suspensión o solución de por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, a través de una boquilla bajo presión. Pueden elegirse el tamaño y la configuración de la boquilla, la presión aplicada, y la velocidad de alimentación del líquido, para lograr la salida y el tamaño de partícula deseados. Puede producirse una electroaspersión, por ejemplo, mediante un campo eléctrico en conexión con una alimentación por boquilla o capilar. En forma ventajosa, las partículas de por lo menos una formulación de proteína de la composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, suministrada mediante un atomizador, tienen un tamaño de partícula menor de aproximadamente 0 µ??, de preferencia en la escala de alrededor de 1 µ?? a aproximadamente 5 µ?t?, y más preferiblemente de alrededor de 2 µ?t? a aproximadamente 3 µp?. Las formulaciones de por lo menos una formulación de proteína de la composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, adecuadas para su uso con un atomizador, incluyen típicamente una formulación de proteína de la composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, en una solución acuosa a una concentración de alrededor de 1 mg a aproximadamente 20 mg, de por lo menos una formulación de proteína de la composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, por mi de solución. La formulación puede incluir agentes tales como un excipiente, un regulador de pH, un agente de isotonicidad, un conservador, un agente tensioactivo y, de preferencia, zinc. La formulación puede incluir también un excipiente o agente para estabilización de la formulación de proteína de la composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, tal como un regulador de pH, un agente reductor, una proteína global, o un carbohidrato. Proteínas globales útiles para formular proteínas de la composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, incluyen albúmina, protamina, o similares. Carbohidratos típicos útiles para formular proteínas de la composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, incluyen sacarosa, manitol, lactosa, trehalosa, glucosa, o similares. La formulación de proteína de la composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, puede incluir también un agente tensioactivo, el cual puede reducir o prevenir la agregación, inducida por la superficie, de la formulación de proteína de la composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, causada por la atomización de la solución en la formación de un aerosol. Pueden usarse varios agentes tensioactivos convencionales, tales como ésteres de ácidos grasos de polioxietileno y alcoholes, y ésteres de ácidos grasos de polioxietileno sorbitol. Las cantidades variarán en general entre 0.001 y 14% en peso de la formulación. Agentes tensioactivos especialmente preferidos para los propósitos de esta invención, son monooleato de polioxietileno sorbitán, polisorbato 80, polisorbato 20, o similares. Pueden incluirse también en la formulación otros agentes conocidos en la técnica para la formulación de una proteína, tales como mimeticuerpos, o porciones o variantes especificadas de los mismos.

Administración de composiciones de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, mediante un nebulízador La formulación de proteína de la composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, puede administrarse mediante un nebulizador, tal como nebulizador a chorro o un nebulizador ultrasónico. Típicamente, en un nebulizador a chorro, se usa una fuente de aire comprimido para crear un chorro de aire de alta velocidad a través de un orificio. Conforme el gas se expande más allá de la boquilla, se crea una región de baja presión, la cual extrae una solución de la formulación de proteína de la composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, a través de un tubo capilar conectado a un depósito de líquido. La corriente de líquido del tubo capilar es separada por esfuerzo cortante en fragmentos y gotas inestables conforme sale del tubo, creando un aerosol. Puede usarse una gama de configuraciones, velocidades de flujo y tipos de deflector, para lograr las características de desempeño deseadas de un nebulizador a chorro determinado. En un nebulizador ultrasónico, se usa energía eléctrica de alta frecuencia para crear energía vibratoria mecánica, usando típicamente un transductor piezoeléctrico. Esta energía es transmitida a la formulación de proteína de la composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, ya sea directamente o a través de un fluido de acoplamiento, creando un aerosol que incluye la formulación de proteína de la composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo. En forma ventajosa, las partículas de la formulación de proteína de la composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo suministrada mediante un nebulizador, tienen un tamaño de partícula menor de aproximadamente 10 µ??, de preferencia en la escala de alrededor de 1 µ? a aproximadamente 5 µp?, y más preferiblemente de alrededor de 2 µ?? a aproximadamente 3 µ?t?. Las formulaciones de por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, adecuadas para su uso con un nebulizador, ya sea a chorro o ultrasónico, incluyen típicamente una formulación de proteína de la composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, en una solución acuosa a una concentración de alrededor de 1 mg a aproximadamente 20 mg, de por lo menos una formulación de proteína de la composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, por mi de solución. La formulación puede incluir agentes tales como un excipiente, un regulador de pH, un agente de isotonicidad, un conservador, un agente tensioactivo y, de preferencia, zinc. La formulación puede incluir también un excipiente o agente para estabilización de la formulación de proteína de la composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO (por lo menos una), o porción o variante especificada del mismo, tal como un regulador de pH, un agente reductor, una proteína global, o un carbohidrato. Proteínas globales útiles para formular proteínas de la composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO (por lo menos una), o porción o vanante especificada del mismo, incluyen albúmina, protamina, o similares. Carbohidratos típicos útiles para formular por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, incluyen sacarosa, manitol, lactosa, trehalosa, glucosa, o similares. La formulación de proteína de la composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO (por lo menos una), o porción o variante especificada del mismo, puede incluir también un agente tensioactivo, el cual puede reducir o prevenir la agregación, inducida por la superficie, del mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO (por lo menos uno), o porción o variante especificada del mismo, causada por la atomización de la solución en la formación de un aerosol. Pueden usarse varios agentes tensioactivos convencionales, tales como ésteres de ácidos grasos de polioxietileno y alcoholes, y ésteres de ácidos grasos de polioxietileno sorbitol. Las cantidades variarán en general entre 0.001 y 4% en peso de la formulación. Agentes tensioactivos especialmente preferidos para los propósitos de esta invención, son monooleato de polioxietileno sorbitán, polisorbato 80, polisorbato 20, o similares. Pueden incluirse también en la formulación otros agentes conocidos en la técnica para la formulación de una proteína, tal como por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo.

Administración de composiciones de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, mediante un inhalador de dosis medida En un inhalador de dosis medida (MDI), un propelente, por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, y cualquier excipiente u otro aditivo, son contenidos en un bote como una mezcla que incluye un gas comprimido licuado. El accionamiento de la válvula dosificadora libera la mezcla como un aerosol, que contiene de preferencia partículas en la escala de tamaño de menos de aproximadamente 10 µp?, de preferencia de alrededor de 1 µ?t? a aproximadamente 5 µ??, y más preferiblemente de alrededor de 2 µ?? a aproximadamente 3 µ?t?. El tamaño de partícula en aerosol deseado puede obtenerse usando una formulación de proteína de la composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, producida mediante varios métodos conocidos por los expertos en la técnica, incluyendo molienda a chorro, secado por aspersión, condensación de punto crítico, o similares. Inhaladores de dosis medida preferidos, incluyen los fabricados por 3M o Glaxo, y que usan un propelente de hidrofluorocarbono. Las formulaciones de por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, para su uso con un dispositivo inhalador de dosis medida, incluirán en general un polvo finamente dividido que contiene por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, como una suspensión en un medio no acuoso, por ejemplo, suspendido en un propelente con ayuda de un agente tensioactivo. El propelente puede ser cualquier material convencional usado para este propósito, tal como clorofluorocarbono, un hidroclorofluorocarbono, un hidrofluorocarbono o un hidrocarburo, incluyendo triclorofluorometano, diclorodifluorometano, diclorotetrafluoroetanol y 1 ,1,1 ,2-tetrafluoroetano, HFA-134a (hidrofluoroalcano- 34a), HFA-227 (hidrofluoroalcano-227), o similares. De preferencia, el propelente es un hidrofluorocarbono. El agente tensioactivo puede seleccionarse para estabilizar por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, como una suspensión en el propelente, para proteger al agente activo contra la degradación química, y similares. Agentes tensioactivos adecuados incluyen trioleato de sorbitán, lecitina de soya, ácido oleico, o similares. En algunos casos, se prefieren aerosoles en solución que usan solventes tales como etanol. Agentes adicionales conocidos en la técnica para la formulación de una proteína tal como una proteína, pueden incluirse también en la formulación. El experto en la técnica reconocerá que los métodos de la presente invención pueden lograrse mediante la administración pulmonar de por lo menos una composición de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, mediante dispositivos no descritos en la presente. 43 Formulaciones para administración en mucosas Para absorción a través de superficies mucosas, las composiciones y los métodos para administrar por lo menos un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, incluyen una emulsión que comprenda una pluralidad de partículas en submicras, una macromolécula mucpadhesiva, un péptido bioactivo, y una fase acuosa continua, que promueva la absorción a través de superficies mucosas, logrando mucoadhesión de las partículas en emulsión (véase patente de E.U.A. No. 5,514,670). Superficies mucosas adecuadas para la aplicación de las emulsiones de la presente invención, pueden incluir vías de administración corneal, conjuntival, bucal, sublingual, nasal, vaginal, pulmonar, estomacal, intestinal y rectal. Las formulaciones para administración vaginal o rectal, por ejemplo, supositorios, pueden contener como excipientes, por ejemplo, polialquilenglicoles, vaselina, manteca de cacao, y similares. Las formulaciones para administración intranasal pueden ser sólidas y contienen como excipientes, por ejemplo, lactosa, o pueden ser soluciones acuosas u oleosas de gotas nasales. Para administración bucal, los excipientes incluyen azúcares, estearato de calcio, estearato de magnesio, almidón pregelatinizado, y similares (véase patente de E.U.A. No. 5,849,695).

Formulaciones para administración oral Las formulaciones para administración oral dependen de la coadministración de adyuvantes (por ejemplo, resorcinoles y agentes tensioactivos no iónicos tales como éter oleílico de polioxietileno y éter de n-hexadecilpolietileno), para aumentar artificialmente la permeabilidad de las paredes intestinales, así como la coadministración de inhibidores enzimáticos (por ejemplo, inhibidores de tripsina pancreática, düsopropilfluorofosfato (DFF) y trasilol)), para inhibir la degradación enzimática. El compuesto constituyente activo de la forma de dosificación de tipo sólido para administración oral, puede mezclarse con por lo menos un aditivo, incluyendo sacarosa, lactosa, celulosa, manitol, trehalosa, rafinosa, maltitol, dextrán, almidones, agar, alginatos, quitinas, quitosanes, pectinas, goma de tragacanto, goma arábiga, gelatina, colágena, caseína, albúmina, polímero sintético o semisintético y glicérido. Estas formas de dosificación pueden contener también otros tipos de aditivos, por ejemplo, agentes de dilución inactivos, lubricantes tales como estearato de magnesio, parabeno, agente conservador tal como ácido sórbico, ácido ascórbico, alfa-tocoferol, antioxidante tal como cisteína, desintegrador, aglutinante, espesante, agente regulador de pH, agente edulcorante, agente saborizante, agente de perfume, etc. Las tabletas y pildoras pueden procesarse además en preparaciones con recubrimiento entérico. Las preparaciones líquidas para administración oral incluyen preparaciones en emulsión, jarabe, elixir, suspensión y solución permisibles para uso médico. Estas preparaciones pueden contener agentes de dilución inactivos usados habitualmente en dicho campo, por ejemplo, agua. Se ha descrito también a los liposomas como sistemas de suministro de fármacos para insulina y heparina (véase patente de E.U.A. No. 4,239,754). Más recientemente, se han usado microesferas de polímeros artificiales de aminoácidos mixtos (proteinoides) para suministrar agentes farmacéuticos (véase patente de E.U.A. No. 4,925,673). Además, se usan compuestos de vehículo descritos en la patente de E.U.A. No. 5,879,681 y la patente de E.U.A. No. 5,871 ,753 para suministrar agentes biológicamente activos oralmente, como es sabido en la técnica.

Formulaciones para administración transdérmica Para administración transdérmica, el mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO (por lo menos uno), o porción o variante especificada del mismo, es encapsulado en un dispositivo de suministro tal como un liposoma o nanopartículas, micropartículas, microcápsulas o microesferas poliméricas (referidas en conjunto como micropartículas, a menos que se indique de otra manera). Se conocen muchos dispositivos adecuados, que incluyen micropartículas hechas de polímeros sintéticos tales como polihidroxiácidos tales como ácido poliláctico, ácido poliglicólico y copolímeros de los mismos, poliortoésteres, polianhídridos y polifosfazenos, y polímeros naturales. tales como colágena, poliaminoácidos, albúmina y otras proteínas, alginato y otros polisacáridos, y combinaciones de los mismos (véase patente de E.U.A. No. 5,814,599).

Formulaciones para administración prolongada A veces puede ser deseable suministrar los compuestos de la presente invención al sujeto durante períodos prolongados, por ejemplo, durante períodos de una semana a un año a partir de una administración individual. Pueden usarse varias formas de dosificación de liberación lenta, de depósito o por implante. Por ejemplo, una forma de dosificación puede contener una sal no tóxica farmacéuticamente aceptable de los compuestos que tenga un bajo grado de solubilidad en fluidos corporales, por ejemplo, (a) una sal ácida de adición con un ácido polibásico tal como ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido tánico, ácido pamoico, ácido algínico, ácido poliglutámico, ácidos monosulfónicos o disulfónicos de naftaleno, ácido poligalacturónico, y similares; (b) una sal con un catión de metal polivalente tal como zinc, calcio, bismuto, bario, magnesio, aluminio, cobre, cobalto, níquel, cadmio, y similares, o con un catión orgánico formado de, por ejemplo, ?,?'-dibencil-etilendiamina o etilendiamina; o (c) combinaciones de (a) y (b), por ejemplo, una sal de tanato de zinc. Además, los compuestos de la presente invención, o de preferencia, una sal relativamente insoluble tal como la descrita anteriormente, puede formularse en un gel, por ejemplo, un gel de monoestearato de aluminio con, por ejemplo, aceite de ajonjolí, adecuado para inyección. Sales particularmente preferidas, son sales de zinc, sales de tanato de zinc, sales de pamoato, y similares. Otro tipo de formulación de depósito de liberación lenta para inyección contendría al compuesto o la sal dispersada encapsulada en un polímero no antigénico no tóxico de degradación lenta, tal como un polímero de ácido poliglicólico/ácido poliláctico, por ejemplo, como se describe en la patente de E.U.A. No. 3,773,919. Los compuestos o, de preferencia, sales relativamente insolubles tales como las que se describieron anteriormente, pueden formularse también en pellas silásticas de matriz de colesterol, en particular para su uso en animales. Formulaciones de liberación lenta, de depósito o por implante adicionales, por ejemplo, liposomas de gas o líquido, se conocen en la literatura (véase patente de E.U.A. No. 5,770,222 y "Sustained and Controlled Reléase Drug Delivery Systems", J. R. Robinson ed., Marcel Dekker, Inc., N. Y. 1978). Habiendo descrito en general la invención, la misma se entenderá más fácilmente haciendo referencia a los siguientes ejemplos, los cuales se proveen a manera de ilustración, y no se pretende que sean limitativos.

EJEMPLO 1 Clonación y expresión de un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO en células de mamífero Un vector de expresión en mamíferos típico, contiene por lo menos un elemento promotor, que media el inicio de la transcripción de ARN mensajero, la secuencia codificante del mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo, y señales requeridas para la terminación de la transcripción y la poliadenilación del transcrito. Elementos adicionales incluyen intensificadores, secuencias de Kozak y secuencias intermedias flanqueadas por sitios de donador y aceptor para empalme de ARN. Puede lograrse una transcripción altamente eficiente con los promotores temprano y tardío del SV40, las repeticiones terminales largas (LTRS) de retrovirus, por ejemplo, RSV, HTLVI, HIVI, y el promotor temprano del citomegalovirus (CMV). Sin embargo, pueden usarse también elementos celulares (por ejemplo, el promotor de actina de humano). Vectores de expresión adecuados para su uso en la práctica de la presente invención incluyen, por ejemplo, vectores tales como pIRESI neo, pRetro-Off, pRetro-On, PLXSN o pLNCX (Clontech Labs, Palo Alto, CA), pcDNA3.1 (+/-), pcDNA/Zeo (+/-) o pCDNA3.1/Hygro (+/-) (Invitrogen), PSVL y PMSG (Pharmacia, Uppsala, Suecia), pRSVcat (ATCC 37152), pSV2dhfr (ATCC 37146) y pBC12MI (ATCC 67109). Células hospederas de mamífero que podrían usarse, incluyen células humanas Hela 293, H9 y de Jurkat, células NIH3T3 y C127 de ratón, células Cos 1 , Cos 7 y CV 1 , células OC1-3 de codorniz, células L de ratón y células de ovario de hámster chino (CHO). En forma alternativa, el gen puede expresarse en líneas de células estables que contengan el gen integrado en un cromosoma. La cotransfección con un marcador seleccionare tal como dhfr, gpt, neomicina o higromicina, permite la identificación y el aislamiento de las células transfectadas. El gen transfectado puede amplificarse también para que exprese grandes cantidades del mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO codificado, o porción o variante especificada del mismo. El marcador de DHFR (dihidrofolato reductasa), es útil para desarrollar líneas de células que posean varios cientos o incluso varios miles de copias del gen de interés. Otro marcador de selección útil, es la enzima glutamina sintasa (GS) (Murphy, et al., Biochem. J. 227: 277-279 (1991); Bebbington, et al., Bio/Technology 10: 169-175 (1992)). Mediante el uso de estos marcadores, las células de mamífero se desarrollan en medio selectivo, y se seleccionan las células con la resistencia más alta. Estas líneas de células contienen los genes amplificados integrados en un cromosoma. Se usan con frecuencia células de ovario de hámster chino (CHO) y NSO para la producción del mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porciones o variantes especificadas del mismo. Los vectores de expresión pC1 y pC4 contienen al promotor fuerte (LTR) del virus del sarcoma de Rous (Cullen, et al., Molec. Cell. Biol. 5: 438-447 (1985)), más un fragmento del intensificador del CMV (Boshart, et al., Cell 41 : 521-530 (1985)). Sitios de clonación múltiples, por ejemplo, con los sitios de desdoblamiento BamHI, Xbal y Asp718 de la enzima de restricción, facilitan la clonación del gen de interés. Los vectores contienen además del intrón 3', la señal de poliadenilación y terminación del gen de preproinsulina de rata.

Clonación y expresión en células CHO El vector pC4 se usa para la expresión del mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, o porción o variante especificada del mismo. El plásmido pC4 es un derivado del plásmido pSV2-dhfr (número de acceso de la ATCC 37146). El plásmido contiene al gen de DHFR de ratón bajo el control del promotor temprano del SV40. Pueden seleccionarse células de ovario de hámster chino y otras células que carezcan de actividad de dihidrofolato que son transfectadas con estos plásmidos, desarrollando las células en un medio selectivo (por ejemplo, EM alfa menos, Life Technologies, Gaithersburg, MD) complementado con el agente quimioterapéutico metotrexato. La amplificación de los genes de DHFR en células resistentes a metotrexato (MTX), ha sido bien documentada (véase, por ejemplo, F. W. Alt, et al., J. Biol. Chem. 253: 1357-1370 (1978); J. L. Hamlin y C. Ma, Biochem. et Biophys. Acta 1097: 107-143 (1990); y M. J. Page y M. A. Sydenham, Biotechnology 9: 64-68 (1991)). Células desarrolladas en concentraciones crecientes de MTX desarrollan resistencia al fármaco, sobreproduciendo la enzima objetivo, DHFR, como resultado de amplificación del gen de DHFR. Si un segundo gen es enlazado al gen de DHFR, es usualmente coamplificado y sobreexpresado. Se sabe en la técnica que este procedimiento puede usarse para desarrollar líneas de células que poseen más de 1000 copias de los genes amplificados. Después, cuando se retira el metotrexato, se obtienen líneas de células que contienen al gen amplificado integrado en uno o más cromosomas de la célula hospedera. El plásmido pC4 contiene para expresar el gen de interés, el promotor fuerte de la repetición terminal larga (LTR) del virus del sarcoma de Rous (Cullen, et al., Molec. Cell. Biol. 5: 438-447 (1985)) más un fragmento aislado del intensificador del gen temprano inmediato del citomegaiovirus (CMV) humano (Boshart, et al., Cell 41 : 521-530 (1985)). Hacia el extremo 3' del promotor, están sitios de desdoblamiento de enzimas de restricción BamHI, Xbal y Asp718 que permiten la integración de los genes. Detrás de estos sitios de clonación, el plásmido contiene al intrón 3' y al sitio de poliadenilación del gen de preproinsulina de rata. Otros promotores de alta eficiencia pueden usarse también para la expresión, por ejemplo, el promotor de b-actina humana, los promotores temprano o tardío del SV40, o las repeticiones terminales largas de otros retrovirus, por ejemplo, VIH y HTLV1. Pueden usarse sistemas de expresión génica Tet-Off y Tet-On de Clontech y sistemas similares, para expresar la EPO en una forma regulada en células de mamífero (M. Gossen y H. Bujard, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89: 5547-5551 (1992)). Para la poliadenilación del ARN mensajero, pueden usarse también otras señales, por ejemplo, de los genes de globina u hormona de crecimiento humano. Pueden seleccionarse también líneas de células estables que posean un gen de interés integrado en los cromosomas, después de cotransfección con un marcador seleccionable tal como gpt, G418 o higromicina. Es ventajoso usar más de un marcador seleccionable al inicio, por ejemplo, G418 más metotrexato. El plásmido pC4 es digerido con enzimas de restricción, y desfosforilado entonces usando fosfatasa intestinal de ternera mediante procedimientos conocidos en la técnica. El vector se aisla entonces de un gel de agarosa a 1 %.

Se usa la secuencia de ADN que codifica para el mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO completo, o porción o variante especificada del mismo, por ejemplo, como se presenta en SEQ ID NOS: 13, 14, 15, 16, 17, 18, que corresponde a las regiones variables de HC (cadena pesada) y LC (cadena ligera) de un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de la presente invención, de acuerdo a pasos de método conocidos. Se usa también en esta construcción ácido nucleico aislado que codifique para una región constante humana adecuada (es decir, regiones de HC y LC) (por ejemplo, como se provee en el vector p1351 ). El ADN que codifica para la región variable y constante aislada y el vector desfosforilado, se ligan entonces con ADN ligasa de T4. Se transforman entonces células HB101 de E. coli o células XL-1 Blue, y se identifican bacterias que contengan el fragmento insertado en el plásmido pC4 usando, por ejemplo, análisis de enzimas de restricción. Se usan células de ovario de hámster chino (CHO) que carecen de un gen de DHFR activo para transfección. Se cotransfectan 0.5 µg del plásmido de expresión pC4 con 0.5 µg del plásmido pSV2-neo usando lipofectina. El plásmido pSV2neo contiene un marcador seleccionare dominante, el gen neo de Tn5 que codifica para una enzima que confiere resistencia a un grupo de antibióticos que incluyen a G418. Las células se siembran en MEM alfa menos complementado con 1 µg/ml de G418. Después de 2 días, las células son tripsinizadas y se siembran en placas de clonación de hibridomas (Greiner, Alemania) en MEM alfa menos complementado con 10, 25 ó 50 ng/ml de metotrexato más 1 µ?/?t?? de G418. Después de aproximadamente 10 a 14 días, los clones individuales son tripsinizados, y se siembran entonces en cajas de Petri de 6 cavidades o matraces de 10 mi, usando concentraciones diferentes de metotrexato (50 nM, 100 nM, 200 nM, 400 nM, 800 nM). Los clones que crecen a las concentraciones más altas de metotrexato, se transfieren entonces a nuevas placas de seis cavidades que contienen concentraciones incluso mayores de metotrexato (1 mM, 2 mM, 5 mM, 10 mM, 20 mM). Se repite el mismo procedimiento, hasta que se obtengan clones que crezcan a una concentración de 100-200 mM. La expresión del producto génico deseado se analiza, por ejemplo, mediante SDS-PAGE y Western blot, o mediante análisis de CLAR de fase invertida.

EJEMPLO 2 Ejemplo no limitativo de un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada de la invención Antecedentes EMP-1 (péptido mimético 1 de EPO), es un péptido de 20 aminoácidos sin homología de secuencias con la eritropoyetina humana (HuEPO), pero con la capacidad (como un dímero) de activar al receptor de EPO (Wrighton et al, 1996, Science, vol. 273, 458-463). Sin embargo, su actividad relativamente baja (10,000 a 100,000 veces menos que la de la HuEPO) y su vida media corta (vida media ex vivo de 8 horas en suero a 50%, vida media in vivo desconocida), comprometen su utilidad como terapéutico. Por lo tanto, fue necesaria una vía que confiriera al péptido una vida media más larga, sin perturbar, y posiblemente mejorando, su potencia. Para este fin, se han hecho varios intentos para incrementar la actividad de EMP-1 estabilizando la dimerización del péptido, o incorporando el péptido en estructuras más grandes para aumentar su vida media. Wrighten et al. (1997, Nature B ¡oteen nology, vol. 15, 1261-65), combinaron EMP-1 marcado con biotina con estreptavidina para estabilizar la dimerización. Vieron un incremento de 100 veces en actividad en una prueba de proliferación celular in vitro. Usaron también anticuerpos anti-biotina para estabilizar el dímero peptídico; sin embargo, sólo se observó un incremento de 10 veces en actividad. Los mismos autores prepararon una forma dimérica químicamente definida de EMP-1. En este caso, se observó un incremento de 100 veces en actividad in vivo. Otro grupo buscó mejorar la actividad de EMP-1 a través de enlace covalente con polietilenglicol (PEG) (Johnson et al., 1997, Chem. & Bio., Vol. 4 (12), 939-50). Reportaron un incremento en potencia de hasta 1000 veces; sin embargo, se encontró que la construcción es ¡nmunógena en ratones (los anticuerpos fueron dirigidos hacia el péptido) (Dana Johnson, comunicaciones personales). Kuai et al. (2000, J. Peptide Res., Vol. 56, 59-62), insertaron el péptido EMP-1 en la secuencia del inhibidor 1 de activador de plasminógeno (PAI-1 ). Se pensó que la inserción de EMP-1 en este andamio estabilizaría la dimerización y aumentaría la vida media. En una prueba in vivo, se observó que la potencia de esta construcción es 2500 veces mayor que la del EMP-1 solo. Debe notarse que se usaron diferentes pruebas in vltro y modelos in vivo en estos estudios, y que las potencias reportadas pueden no ser comparables entre sí, o a resultados presentados en la presente.

Mimeticuerpo con porción CH1 eliminada de EMP-1 de la presente invención Un ejemplo no limitativo específico de esta invención, es la construcción EMP-NfusCG1 , en donde V son los tres primeros aminoácidos de un anticuerpo de ocurrencia natural, Pep es una copia individual del péptido EMP-1 bioactivo, y Flex es una repetición en tándem del enlazador flexible de Gly-Gly-Gly-Ser. V2 es la región J de una IgG de ocurrencia natural, pHinge es la región de gozne de lgG1 completa, y CH2 y CH3 son de la subclase de isotipo de lgG1. Se piensa que esta estructura restringirá el péptido EMP-1 , pero permitirá flexibilidad suficiente, de modo que se estabilice la dimerización de los péptidos como parte del homodímero ensamblado. En apoyo de esto, la actividad de EMP-NfusCG1 en una prueba de proliferación celular in vltro, es aproximadamente 550 veces mayor que la del péptido EMP-1 , y sólo 4 a 6 veces menor que la de la HuEPO recombinante (rHuEPO). Además, se espera que la vida media de esta construcción sea muchas veces la de la rHuEPO, o el péptido EMP-1 solo y similar a la de una IgG. Consistentemente, ratones normales tratados con EMP-NfusCG1 logran un hematócrito máximo significativamente mayor en comparación con ratones tratados con rHuEPO, cuando se dan iguales unidades de actividad, y se mantienen niveles elevados durante un período más largo. Esta construcción es secretada eficientemente de las células, y parece estar plegada adecuadamente, superando los problemas asociados con los mimeticuerpos de primera generación. Además de la estructura básica descrita anteriormente, se describen variantes con características biológicas potencialmente favorables. Estas incluyen construcciones que pueden tener una tendencia disminuida a autoasociarse, funciones efectoras inmunes reducidas o ¡nmunogenicidad disminuida. Se prevén otras modificaciones que confieran características deseadas tales como conformación mejorada del péptido biológicamente activo, y transferencia a través de la barrera hemoencefálica. Las variantes y modificaciones propuestas pueden combinarse de cualquier forma, para dar construcciones con actividades deseadas. Mediante el uso de métodos de ADN recombinante, el péptido EMP-1 fue insertado en un vector intermedio entre un péptido de señal de inmunoglobulina y una secuencia J de humano. Esto se hizo usando oligonucleótidos sintéticos complementarios con extremos compatibles con los sitios de restricción Bst11071 y Kpnl presentes en el vector (5'-TACAGGCCCAGATCCAGGGCGGTACCTACAGCTGCCACTTCGGGCCCTC ACGTGGGTGTGCAAGCCCCAGGGCGGCGGAAGCGGGGGAGGCTCCGG TAC-3' (SEQ ID NO: 43) y 3'-CGGAGCCTCCC CCGCTTCCGCCGCCCTGGGGCTTGCACACCCACGTGAGGGGCCCGAAG TGGCAGCTGTAGGTACCGCCCTGGATCTGGGCCTGTA-5') (SEO. ID NO: 44). Estos oligonucleótidos contenían una secuencia codificante para el sitio consenso de peptidasa de señal, el péptido EMP-1, y un enlazador flexible formado de dos repeticiones Gly-Gly-Gly-Ser. Un fragmento de restricción Xbal que contenía los elementos funcionales mencionados anteriormente, fue transferido entonces en un vector de expresión. Este vector contenía el intensificador y promotor de inmunoglobulina anti-CD4, y la secuencia codificante para el gozne de lgG1 de humano, región constante de HC 2 (CH2) y región constante 3 de HC (CH3), así como los elementos necesarios para la replicación del plásmido y selección en bacterias, y la selección para elementos de expresión estables en células de mamífero. Este plásmido fue linealizado e introducido en la línea de células de mieloma de ratón NSO mediante electroporación. Se seleccionaron células resistentes y se identificaron elementos de alta expresión de EMP-NfusCG1 mediante prueba de ELISA de sobrenadantes de cultivo. La purificación de la construcción a partir de sobrenadantes del cultivo de células, se logró mediante cromatografía de afinidad de proteína A estándar. El paso del producto purificado a través de geles de poliacrilamida que contenían SDS bajo condiciones desnaturalizantes y reductoras, confirmó el tamaño esperado del producto purificado. La identidad de la proteína purificada se confirmó además mediante espectrometría de masa y secuenciación N-terminal. Se muestra a continuación la secuencia de aminoácidos de EMP-NfusCGl Los dominios funcionales se anotan arriba de la secuencia codificante de péptidos. La secuencia consenso del péptido de señal de tres aminoácidos corresponde a los tres primeros aminoácidos de una inmunoglobulina de ocurrencia natural. Se piensa que estos aminoácidos favorecen la remoción eficiente del péptido de señal por la peptidasa de señal en el retículo endoplásmico. Esta secuencia va seguida inmediatamente de la secuencia codificante de EMP-1. Los dos aminoácidos C-terminales de la secuencia de EMP-1 combinada con los siguientes seis aminoácidos, forman un enlazador flexible caracterizado por la repetición Gly-Gly-Gly-Ser. Sigue una secuencia de región de unión (J) de humano. Se piensa que la secuencia J provee incluso más flexibilidad que permite que el dímero de EMP-1 asuma la conformación adecuada, y permite que el dímero sobresalga de la estructura globular de la inmunoglobulina y penetre en la hendidura entre los dos receptores de EPO. La región de gozne de HC se incluye también en la construcción inmediatamente después de la región J. Existen tres cisteínas en la región de gozne de lgG1 (resaltada). La primera se aparearía normalmente con la cadena ligera (LC) de inmunoglobulina, y las otras dos participarían en enlaces intercadena entre dos HCs. El resto de la secuencia se forma de las regiones CH2 y CH3, que constituyen el volumen de la proteína. Una de las razones de que se piense que las inmunoglobulinas tienen una vida media en suero larga, es su capacidad para unir el FcRn que extiende la vida media en suero, regresando la inmunoglobulina que sufrió pinocitosis de nuevo hacia el espacio extracelular. El sitio de unión de FcRn traslapa la unión de las regiones CH2 y CH3 (Sheilds et al, 2001 , J. Biol. Chem., Vol. 276 (9), 6591- 6604). La secuencia peptídica de EMP-NfusCG1 muestra dominios funcionales importantes.

Secuencia consenso de peptidasa de señal Reglón J Enlazador Péptido E P-1 Gozne de huGI 1QIQGGTYSCHFGPLTWVC PQGGGSGGGSGTLVTVSSEPKSCD THTCPPCPAPELLGGP IgGI CH2 61SVFLFPP P DTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNA TKPREEQYNS IgGI CH2 lgG1 CH3 121 TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL IgGI CH3 181 T NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ IgGI CH3 241 QGNVFSCSV HEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 50 Es bien sabido que dos cadenas pesadas de IgG se ensamblan durante el procesamiento celular mediante enlaces disulfuro entre cisteínas localizadas en la región de gozne para formar un homodímero. Se espera que esto ocurra también entre los péptidos modificados que forman la construcción EMP-NfusCG1 ensamblada. Además, se espera que se forme también el enlace disulfuro intracadena entre las dos cisteínas en el péptido EMP-1. La estructura esperada de EMP-NfusCG1 contiene dos péptidos EMP-1. La disposición espacial de los péptidos en el extremo amino, junto con la flexibilidad de las secuencias adjuntas, debe permitir que los péptidos formen el dímero bioactivo. La actividad de EMP-NfusCG1 se puso a prueba primero en una prueba de bioactividad in vitro. Para esta prueba, se usó la línea de células UT-7/EPO dependiente de EPO, derivada de un paciente con leucemia megacarioblástica aguda (Kotmatsu et al., 1993, Blood, Vol. 82 (2), 456-464). Estas células sufren muerte celular programada 48 a 72 horas después de retirarlas de los medios complementados con rHuEPO. Las células que se han incubado en ausencia de rHuEPO durante 24 horas, pueden salvarse si se tratan con rHuEPO o un agonista de EPO. Se añadió EMP-NfusCG1 a células agotadas sin rHuEPO, y se determinó la viabilidad celular 48 horas después del tratamiento usando el compuesto de tetrazolio MTS (CelITiter 96 Aqueous One Solution, Promega), que es metabolizado por células vivas para dar un producto con una absorbancia que puede medirse. Los resultados de una prueba típica mostraron que la potencia de EMP-NfusCG1 sobre una base molar, es 500 veces mayor que la del péptido EMP-1 , y 5 veces menor que la de la rHuEPO. Además, estas mismas células fueron estimuladas con EMP-NfusCG1 , y se visualizaron los patrones de fosforilación de tirosina haciendo correr el lisado de células a través de un gel de poliacrilamida. El patrón exhibido por EMP-NfusCG1 fue similar al de la rHuEPO, indicando que el mecanismo por el cual EMP-NfusCG1 actúa sobre estas células, es similar al de la rHuEPO.

Se llevaron a cabo estudios in vivo en ratones normales para comparar la vida media de EMP-NfusCG1 con la de la rHuEPO, y para comparar sus efectos sobre la eritropoyesis. Estudios preliminares indicaban que la respuesta a la rHuEPO era más pronunciada que cuando los ratones fueron dosificados en dos días consecutivos, más que una sola dosis. Visto también en estudios preliminares, cuando la rHuEPO fue dosificada a 2000 U/kg, el hematócrito de los ratones se elevó al máximo en el día 4, y disminuyó de nuevo a casi los niveles de la línea de referencia alrededor del día 7. Para comparar el efecto de EMP-NfusCG1 con rHuEPO, la dosis de EMP-NfusCG1 fue normalizada con base en la actividad en la prueba de bioactividad in vitro; se administraron casi 5 veces más EMP-NfusCG1 , puesto que era 5x menos activo en la prueba. También se tomó en cuenta la diferencia en pesos moleculares (rHuEPO = 30,400 daltons, EMP-NfusCG1 = 62,200 daltons). Cuando se dosificó igualmente a los ratones, con base en estas consideraciones, EMP-NfusCG1 dio una respuesta máxima mayor, y la respuesta se prolongó en comparación con la rHuEPO. Se midieron las concentraciones de rHuEPO y E P-NfusCG1 en suero mediante ELISA. En una prueba sensible a concentraciones de rHuEPO tan bajas como 2.5 mU/ml, no se observaron señales positivas a partir de muestras del día 4 a una dilución de 1 :8. Esto es consistente con la vida media esperada de 2 a 8 horas de la rHuEPO en roedores (reporte de expertos de PRI, parte IC2: documentación toxicofarmacológica). En contraste, se detectaron niveles de EMP-NfusCG1 tan altos como 1.5 ug/mL en el día 4, y continuaron siendo altos hasta el final del estudio. La linealidad del perfil de depuración de la figura 6, es inusual. Puede ser que, puesto que el primer punto de tiempo fue 3 días después de la última inyección, se alcanzó la concentración máxima (CmáX) antes de que se tomara la primera muestra, y por lo tanto no se observó el valor máximo de la curva exponencial. Otra explicación es que los perfiles de absorción y eliminación de esta construcción novedosa, son tales que el perfil de depuración parece ser lineal. Con base en estos datos, puede calcularse una vida media aproximada de 10.8 días, varias veces la de la rHuEPO. Además de EMP-NfusCG1 , se obtuvieron tres construcciones similares que diferían en el isotipo de las regiones CH2 y CH3 del gozne o en el número de elementos incluidos que permiten flexibilidad del péptido EMP-1. Una de las construcciones, denominada EMP-NfusCG4, es idéntica a EMP-NfusCGI , salvo que el gozne y las regiones constantes son del subtipo G4. Específicamente, el fragmento de restricción Xbal usado para construir el plásmido de expresión EMP-NfusCG1 , fue transferido en un vector que proveyó el intensificador y promotor de inmunoglobulina anti-CD4, y la secuencia codificante para el gozne de lgG4 de humano, CH2 y CH3, así como los elementos necesarios para la replicación del plásmido y selección en bacterias, y selección para elementos de expresión estables en células de mamífero. Este plásmido fue expresado y purificado en una forma similar a la de EMP-NfusCG1. Se muestra a continuación la secuencia codificante de EMP-NfusCG4.

Secuencia idéntica a EMP-NfusCG1 Gozne de huG4 QIQGGTYSCHFGPLTWVCKPQGGGSGGGSGTLVTVSSESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVF lgG4 CH2 LFPPKPKDTL ISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYR lgG4 CH3 lgG4 CH2 WSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKN lgG4 CH3 QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGN lgG4 CH3 241 VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK SEQ ID NO: 51 Se muestra a continuación una comparación de un par de ejemplos de un mimeticuerpo con porción CH1 eliminada: QIQGGTYSCHFGPLTWVCKPQGGGSGGGSGTLVTVSSEP SCDKTH-TCPPCPAPELL MG1 --- CG4. S.YGPP . S„. „ F .

M G4 — S.YGPP . S . F m uCG2a RGPTIKPCPPCK. .N ..

Una diferencia importante entre los subtipos de lgG1 y lgG4, está en el número de cisteínas en la región de gozne. Al igual que el subtipo G1 , existen dos cisteínas en el gozne de lgG4 que participan en el enlace disulfuro entre cadenas pesadas. La cisteína que interviene normalmente en la formación del enlace disulfuro para la LC, falta en el gozne de G4; se localiza en la región CH1 de G4 que falta en esta construcción. La región de gozne de lgG4 es menos flexible que el gozne de lgG1 , y esto puede tener impacto sobre las conformaciones potenciales del dímero de EMP-NfusCG1 (Dangl et al. 1997, EMBO Journal, vol. 7(7), 1989-94). Además, los dos isotipos difieren en su capacidad para mediar la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) y la citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo (ADCC). El subtipo G1 es un inductor fuerte de la cascada de complementos, mientras que el subtipo G4 tiene poca actividad (Dangl et al. 1997, EMBO Journal, vol. 7(7), 1989-94). Además, el subtipo G1 se une con alta afinidad al receptor Fe, y favorece la citotoxicidad mediada por células, mientras que el subtipo G4 se une débilmente (Alian & Seed, 1989, Science, vol. 423, 378-80). La incapacidad relativa del subtipo G4 para activar las funciones efectoras es deseable, puesto que se desea proliferación de las células objetivo. El sitio de unión para el receptor del depurador de FcRn está presente en la lgG4, y puesto que no parece haber diferencia alguna en la unión de la subclase de IgG, se espera que la farmacocinética sea similar al subtipo G1 (West et al, 2000, Biochem., Vol. 39, 9698-9708). Como con la construcción de G1 , se espera que EMP-NfusCG4 forme un homodímero mediante las dos cisteínas localizadas en la región de gozne. Como se mencionó anteriormente, la ausencia de una tercera cisteína en el gozne de G4 niega la posibilidad de un tercer enlace disulfuro entre las dos cadenas. La conformación del dímero de EMP-1 puede ser también diferente, debido a las diferencias en tamaño y flexibilidad de las regiones de gozne. Notando estas diferencias, se espera que la estructura general de EMP-NfusCG4 sea similar a EMP-NfusCG4. Se puso a prueba EMP-NfusCG4 en una prueba de bioactividad in vitro como se describió anteriormente. La prueba se llevó a cabo dos veces con resultados similares. La potencia de EMP-NfusCG4 es trece veces menor, que la de EMP-NfusCG1 en esta prueba; sin embargo, en promedio, la diferencia es de casi 10 veces. Puesto que EMP-NfusCG1 es 5 veces menos potente que la rHuEPO, se esperaría que la diferencia entre E P-NfusCG4 y la rHuEPO sea de aproximadamente 50 veces. En esta prueba, la diferencia real es de 60 veces. La diferencia entre EMP-NfusCG4 y EMP-1 en esta prueba es de 40 veces; sin embargo, el valor de EC50 para EMP-1 es 2 veces menor que el promedio histórico, de modo que la diferencia real entre EMP-NfusCG4 y EMP-1 puede ser mayor. La actividad menor observada con EMP-NfusCG4 se atribuye a las diferencias en el gozne que puede no permitir que el dímero de EMP-1 se forme en una conformación óptima. Hasta la fecha, no se ha puesto a prueba a EMP-NfusCG4 in vivo. Se diseñaron dos construcciones adicionales para investigar qué dominios funcionales se requieren para actividad. Para esto, se omitió la región J de humano, y una de las repeticiones Gly-Gly-Gly-Ser entre la secuencia de EMP-1 y la región de gozne. Las diferencias entre las versiones "completas" descritas anteriormente y estas versiones "mínimas", difieren en la subclase del isotipo (G1 contra G4) del gozne, las regiones CH2 y CH3.

Secuencia consenso de peptidasa de señal Región J Eniazador Péptido EMP-1 Completas QIQGGTYSCHFGPLTWVC PQGGGSGGGSGTLVTVSS.. Gozne SEQ ID NO: 52 Mínimas QIQGGTYSCHFGPLTWVCKPQGGGS... Gozne SEQ ID NO:53 La construcción de los plásmidos de expresión para las versiones mínimas, designadas como EMP-NfusMG1 y EMP-NfusMG4, se logró insertando oligonucleotidos sintéticos en un vector intermedio, como se hizo para construir los plásmidos de expresión para EMP-NfusCG1 y EMP-NfusCG4 (5- TACAGGCCCAGGGCGGTACCTACAGCTGCCACTTCGGGCCCCTCACGTG GGTGTGCAAGCCCCAGGGCGGCGGATCAGGTAAGTT-3' (SEQ ID NO: 45) y 3'-CTAGAACTTACCTGATCCGCCGCCCTGGGGCTTGCACACCCACGTGAGG GGCCCGAAGTGGCAGCTGTAGGTACCGCCCTGGGCCTGTA-5') (SEQ ID NO: 46). Estos oligonucleotidos sintéticos contenían la secuencia codificante para el sitio consenso de peptidasa de señal, el péptido EMP-1 y una repetición Gly-Gly-Gly-Ser individual. Sin embargo, en este caso, el extremo 3' de los oligonucleotidos fue compatible con el sitio de restricción Xbal, a diferencia de los oligonucleotidos usados para construir las versiones completas. Mediante clonación en el sitio Xbal, que se localiza hacia el extremo 3' de la región J en el vector intermedio, se omitió la secuencia codificante para la región J. La construcción de los plásmidos de expresión finales se logró como se describió para EMP-NfusCG1 y EMP-NfusCG4. Debido a problemas técnicos, hasta la fecha, sólo EMP-NfusMG4 ha sido expresado y purificado. La estructura esperada de EMP-Nfus G4 tiene una saliente del péptido EMP-1 de la estructura globular de la proteína, y se espera que sea menos pronunciada que con EMP-NfusCG4, y por esta razón el dímero del péptido EMP-1 no fue capaz de penetrar en la hendidura entre los receptores de EPO. Además, puede reducirse la flexibilidad de los péptidos EMP-1 que forman la conformación óptima del dímero. Esto es especialmente importante a la luz de observaciones hechas por Livnah et al. (1998, Nat. Strust. Biol., Vol. 5, 993-1004). Descubrieron un péptido (EMP-33) que podría dimerizar dos receptores de EPO, pero no activar el receptor. Al comparar la estructura cristalina del complejo del receptor EMP-33/EPO con la del complejo del receptor EMP-1/EPO, encontraron que una ligera diferencia en la orientación de los receptores dimerizados, era la diferencia entre la capacidad de los péptidos para activar los receptores. Por lo tanto, si el dímero de EMP-1 no puede formar la conformación óptima, puede ser incapaz de dimerizar al receptor de EPO, o puede no llevar a los receptores en una conformación de activación. Se puso a prueba la construcción EMP-NfusMG4 para actividad en la prueba de bioactividad de UT7 in vitro. Los resultados de esta prueba se presentan en la figura 12. Puesto que esta prueba se hizo sólo una vez, debido a la variabilidad de la prueba de bioactividad, estos resultados deben considerarse como preliminares. La potencia de EMP-Nfus G4 es 227 veces menor que la de la rHuEPO, y 44 veces mayor que la del péptido EMP-1 en esta prueba. Sin embargo, la EC5o de la rHuEPO en esta prueba es tres veces menor que el promedio histórico, de modo que la diferencia entre EMP-NfusMG4 y la rHuEPO puede ser significativamente menor. No se hizo una comparación directa entre EMP-NfusCG4 y EMP-NfusMG4. Con base en una comparación de la EC50 promedio de EMP-NfusCG4, 3.5 x 10~10 con la EC50 de EMP-Nfus G4 observada en esa prueba, la diferencia es de dos veces. Aunque estos resultados son preliminares, esto indica que la falta de la secuencia J de humano y una repetición Gly-Gly-Gly-Ser no reduce sustancialmente la potencia de la construcción EMP-NfusMG4. No se sabe si esta observación se extendería a la construcción EMP-NfusMG1. Actualmente están siendo expresadas construcciones adicionales con cambios de aminoácidos individuales o múltiples, para evitar actividades no deseables. Estos cambios pueden expresarse individualmente, o pueden combinarse cambios múltiples en una sola construcción. La cisteína que interviene normalmente en un puente disulfuro entre HC y LC, mutará a una alanina. Puesto que esta cisteína puede intervenir en la estabilización de la construcción formando un tercer puente disulfuro, es posible que pueda formar aberrantemente un enlace disulfuro con otras cisteínas dentro de la construcción, o que pudiera formar un enlace disulfuro entre dos construcciones. Mediante la remoción de la cisteína, podría mejorarse el plegamiento y el ensamble adecuados, y se disminuiría la posibilidad de autoasociación. Se ha mostrado que la mutación de dos residuos de lisina (L), L234 y L235, en la región de gozne inferior de lgG1 a alanina (A), suprimiría la capacidad de la inmunoglobulina para mediar la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) y la citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo (ADCC) (Hezereh et al., 2001, J. Viral., Vol. 75 (24), 12161-68). Estudios preliminares han mostrado que EMP-NfusCG1 no media la lisis de células del complemento que expresan el receptor de EPO. Esto puede deberse al bajo número de receptores que se encuentran en células progenitoras de eritroides. Además, la expansión in vivo de progenitores de eritroides, según se evidencia mediante incrementos significativos en hematócrito, apoya la irrelevancia funcional posible de funciones efectoras inmunes. Sin embargo, aunque no se han observado efectos asociados a la función efectora, persiste el interés por introducir estas mutaciones como un paso precautorio. Otra modificación que resultaría en una disminución en la mediación de las funciones efectoras inmunes, es la remoción del sitio de unión a glucosilación. Esto puede lograrse mediante la mutación de la asparagina en la posición 297 (N297) a glutamina (Q). Otros cambios pueden incluir opcionalmente reemplazar la treonina (T) con un aminoácido alternativo para reducir o modificar la O-glucosilación; por ejemplo, se sabe que T34 o T47 con versiones aglucosiladas de la subclase de lgG1 , son mediadores deficientes de la función efectora inmune (Jefferis et al. 1998, Immunol. Rev., Vol. 163, 50-76). ? c c EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPS EEQYNSTYRVV A AA Q Mutaciones propuestas en las secuencias del gozne de EMP-NfusCGI v las secuencias codificantes de CH2 (SEQ ID NO: 47) Una modificación adicional que se está buscando actualmente, es el reemplazo de las regiones CH2 y CH3 de lgG1 de EMP-NfusCG1 , con las mismas regiones del subtipo de lgG4, mientras se retiene la región de gozne de G1. Como se describió anteriormente, la capacidad de la subclase lgG4 para mediar las funciones efectoras inmunes, es mucho menor que la de la subclase G1. También como se describió anteriormente, se piensa que diferencias entre la flexibilidad de la región de gozne en las dos subclases de IgG, pueden determinar las diferencias en actividad entre EMP-NfusCG1 y EMP-NfusCG4. Por lo tanto, esta construcción podría retener la actividad de EMP-NfusCG1 sin los problemas de las funciones efectoras inmunes potenciales. Otras modificaciones concebidas, son las que disminuirían la inmunogenicidad potencial de las construcciones. Un determinante importante de la inmunogenicidad, es la capacidad de los péptidos derivados de una proteína para ser eficientemente unidos y presentados por moléculas del MHC a células T, y para inducir una respuesta inmune basada en células o asistencia de células T para una respuesta de anticuerpo. Mediante el uso de algoritmos basados en la red disponibles públicamente para unión al MHC (SYFPETHI, Ramensee et al., 1999, Immunogenetics, vol. 50, 213-19 y BIMAS), se analizaron epítopes de unión al MHC potenciales dentro de la región N-terminal que contiene a EMP-1 de EMP-NfusCG1. Pueden evaluarse mutaciones que disminuirían la ¡nmunogenicidad predicha de uno o más péptidos para efecto in vivo sobre la ¡nmunogenicidad. (SEQ ID NO: 48): Péptidos que se predice se unen a moléculas de clase I del MHC: QIQGGTYSCHFGPLTWVCKPQGGGSGGGSGTLVTVSSEPKSCD THTC PPC IQGGTYSCHF GTYSCHFGPL TYSCHFGPL YSCHFGPLTW CHFGPLTWV GSGGGSGTL SGGGSGTLV GGGSGTLVTV GGSGTLVTV TLVTVSSEP LVTVSSEPK SSEPKSCDKT SSEPKSCDK Péptidos que se predice se unen a moléculas de clase II del (SEQ ID NO: 49) QIQGGTYSCHFGPLTWVC PQGGGSGGGSGTLVTVSSEPKSCDKTHTC PPC FGPLTWVCKPQGGGS LTWVCKPQGGGSGGG SGTLVTVSSEPKSCD SCHFGPLTWVCKPQG GGGSGTLVTVSSEPK GTLVTVSSEPKSCDK VTVSSEPKS Ejemplos no limitativos de secuencias adicionales, incluyen los siguientes: Sin QIQ: (SEQ ID NO: 62) GGTYSCHFGPLTWVCKPQGGGSGGGSGTLVTVSSEPKSCD THTCPPCPAPELL Mutación de dos Cys en EMPi: (SEQ ID NO: 63) (QVQ)GGTYSSHFGPLTWVSKPQGGGSGGGSGTLVTVSSEPKSADKTHTCPPCPAPEAA Mutación de Leu56 y Leu57; (SEQ ID NO: 64) (QIQ)GGTYSCHFGPLTWVCKPQGGGSGGGSGTL VTVSSEPKS ADKTHTCPPCPAPEAA (SEQ ID NO: 65) (QVQ)GGTYSCHFGPLTWVCKPQGGGSGGGSGTLVTVSSEPKSADKTHTCPPCPAPEAA (SEQ ID NO: 66) (QVQ)GGTYSCHFGPLTWVCKPQGGGSGGGSGTLVTVSSEPKSADKTHTCPPCPAPELA (SEQ ID NO: 67) (QVQ)GGTYSCHFGPLTWVCKPQGGGSGGGSGTLVTVSSEPKSADKTHTCPPCPAPEAL (SEQ ID NO: 68) (QVQ)GGTYSCHFGPLTWVCKPQGGGSGGGSGTLVTVSSEPKSADKTHTCPPCP APELE lgG4 con gozne de IgGI: (SEQ ID NO: 69) (QIQ)GGTYSCHFGPLTWVCKPQGGGSGGGSGTLVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEFL GI-G4lgG4 con longitud diferente del enlazador: (SEQ ID NO: 70) (QIQ GTYSCHFGPLTWVCKPQGGGSGTLVTVSSESKYGPPCPSCPAPEFL (SEQiDNO: 71 ) (QIQ)GGTYSCHFGPLTWVCKPQGGGSGGGSG"n.VTVSSESKYGPPCPSCPAPEFL (SEQ ID NO: 72) (QIQ)GGTYSCHFGPLTWVCKPQGGGSGGGSGGGTLVTVSSESKYGPPCPSCPAPEFL (SEQ ID NO: 73) (QIQ)GGTYSCHFGPLTVWCKPQGGGSGGGSGGGSG vTVSSESKrGPPCPSCPAPEFL IgGI con gozne truncado: (SEQ ID NO: 74) (QVQ)GGTYSCHFGPLTWVCKFOGGGSGGGSGTLVTVSSCPPCPAPELL (SEQ ID NO: 75) (QVQ)GGTYSCHFGPLTWVCKPQGGGSGGGSGTLVWSSTHTCPPCPAPELL (SEQIDNO: 76) (QVQJGGP SCHFGPLTWVCKT^MGGSGGGSGTLV SSAKD CPPCPAPELL IgGI con expresión bloqueada de sitios de O-glucosilación: (SEQ ID NO: 77) (QIQJGGPr'SCHFGPLTWVCKPQGGGSGGGSGTLVTVSSEPKSADKTHACPPCPAPELL (SEQ ID NO: 78) (QIQJGGTYSCHFGPLTWVCKPQGGGSGGGSGTLVAVSSEPKSADKTHTCPPCPAPELL (SEQ ID NO: 79) (QIQ)GGTYSCHFGPLTWVCKPO3GGSGGGSGTLV SSEPKSADKAHTCPPCPAPELL (SEQ ID NO: 80) (QIQ)GGTYSCHFGPLTWVCKPQGGGSGGGSGTLVAVSSEPKSADKTHACPPCPAPELL Ventajas: La construcción novedosa, EMP-NfusCG1 descrita anteriormente, ofrece una forma alternativa de presentar visualmente el péptido bioactivo EMP-1. La actividad de esta construcción está en la escala de la rHuEPO, y la vida media in vivo es similar a la de una IgG. Además, se espera que las modificaciones propuestas, en combinación y además de los rasgos novedosos de EMP-NfusCG1 , mejoren la utilidad de la construcción EMP-NfusCG1. Será claro que la invención puede ponerse en práctica de otra manera a como se describe particularmente en los ejemplos y la descripción anteriores.

Numerosas modificaciones y variaciones de la presente invención son posibles a la luz de las enseñanzas anteriores y, por lo tanto, están dentro del alcance de la presente invención.

LISTADO DE SECUENCIAS <110> Heaver, George A.; Knight, David M. ; Ghrayeb, John; Scallon, Bernard J. ; Nesspor, Thomas C; Kutloski, Karen A.; Centocor, Inc. <120> Mimeticuerpos con Porción CHl Eliminada Imitativos de Eritropoyetina de Mamífero, sus Composiciones, Métodos y Usos <140> 10/609, 783 <141> 2003/06/30 <150> 60/412,144 <151> 2002/09/12 <130=> CEN0311 PCT <160> 80 <170> Patentln versión 3.3 <210> i <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Tyr Xaa Cys Xaa Xaa Gly Pro Xaa Thr Trp Xaa Cys Xaa Pro 1 5 10 <210> 2 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Tyr Xaa Cys Xaa Xaa Gly Pro Xaa Thr Trp Xaa Cys Xaa Pro Tyr Xaa 1 5 10 15 Cys Xaa Xaa Gly Pro Xaa Thr Trp Xaa Cys Xaa Pro 20 25 <210> 3 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Tyr Xaa Cys Xaa Xaa Gly Pro Xaa Thr Trp Xaa Cys Xaa Pro Tyr Xaa 1 5 10 15 Cys Xaa Xaa Gly Pro Xaa Thr Trp Xaa Cys Xaa Pro 20 25 <210> 4 <211> 28 <212> P T <213> Homo sapiens <400> 4 Tyr Xaa Cys Xaa Xaa Gly Pro Xaa Thr Trp Xaa Cys Xaa Pro Tyr Xaa 1 5 10 15 Cys Xaa Xaa Gly Pro Xaa Thr Trp Xaa Cys Xaa Pro 20 25 <210> 5 <211> 20 < 12> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys 1 5 10 15 Pro Gln Gly Gly 20 <210> 6 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Gly Gly Asp Tyr His Cys Arg Met Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys 1 5 10 15 Pro Leu Gly Gly 20 <210> 7 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Gly Gly Val Tyr Ala Cys Arg Met Gly Pro lie Thr Trp Val Cys Ser 1 5 10 15 Pro Leu Gly Gly 20 <210> 8 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Val Gly Asn Tyr Met Cys His Phe Gly Pro lie Thr Trp Val Cys Arg 1 5 10 15 Pro Gly Gly Gly 20 <210> 9 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Gly Gly Leu Tyr Leu Cys Arg Phe Gly Pro Val Thr Trp Asp Cys Gly 1 5 10 15 Tyr Lys Gly Gly 20 <210> 10 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys 1 5 10 15 Pro Gln Gly Gly 20 <210> 11 <211> 40 <212> PRT < 13> Homo sapiens <400> 11 Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys 1 5 10 15 Pro Gln Gly Gly Gly Qly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr 20 25 30 Trp Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly 35 40 <210> 12 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys 1 5 10 15 Pro Gln Gly Gly Ser Ser Lys 20 <210> 13 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys 1 5 10 15 Pro Gln Gly Gly Ser Ser Lys 20 <210> 14 <211> 23 <212> P T <213> Homo sapiens <400> 14 Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys 1 5 10 15 Pro Gln Gly Gly Ser Ser Lys 20 <210> 15 <211> 46 <212> PRT <213> Homo sapiens <400>- 15 Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys 1 5 10 15 Pro Gln Gly Gly Ser Ser Lys Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly 20 25 30 Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Ser Ser Lys 35 40 45 <210> 16 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400 16 Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys 1 5 10 15 Pro Gln Gly Gly Ser Ser Lys 20 <210> 17 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Cys Xaa Xaa Gly Pro Xaa Thr Trp Xaa Cys 1 5 10 <210> 18 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys Pro 1 5 10 15 Gln Gly Gly <210> 19 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Val Gly Asn Tyr Met Ala His Met Gly Pro lie Thr Trp Val Cys Arg 1 5 10 15 Pro Gly Gly <210> 20 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Gly Gly Pro His His Val Tyr Ala Cys Arg Met Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 lie Cys <210> 21 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys 1 5 10 15 Pro G n <210> 22 <211> 20 < 12> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Gly Gly Leu Tyr Ala Cys His Met Gly Pro Met Thr Trp Val Cys Gln 1 5 10 15 Pro Leu Arg Gly 20 <210> 23 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23 Thr lie Ala Gln Tyr lie Cys Tyr Met Gly Pro Glu Thr Trp Glu Cys 1 5 10 15 Arg Pro Ser Pro Lys 20 <210> 24 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24 Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys 1 5 10 <210> 25 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Tyr Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys 1 5 10 <210> 26 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Xaa Xaa Xaa Gly Pro Xaa Thr Trp Xaa Xaa 1 5 10 <210> 27 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Pro Xaa Thr Trp Xaa Xaa 1 5 10 <210> 28 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28 Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 29 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29 Xaa Tyr Xaa Cys Xaa Xaa Gly Pro Xaa Thr Trp Xaa Cys Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 <210> 30 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30 Gly Gly Leu Tyr Leu Cys Arg Phe Gly Pro Val Thr Trp Asp Cys Gly 1 5 10 15 Tyr Lys Gly Gly 20 <210> 31 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 31 Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys 1 5 10 15 Pro Gln Gly Gly 20 <210> 32 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32 Gly Gly Asp Tyr His Cys Arg Met Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys 1 5 10 15 Pro Leu Gly Gly 20 <210> 33 <211=> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33 Val Gly Asn Tyr Met Cys His Phe Gly Pro lie Thr Trp Val Cys Arg 1 5 10 15 Pro Gly Gly Gly 20 <210> 34 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 34 Gly Gly Val Tyr Ala Cys Arg Met Gly Pro lie Thr Trp Val Cys Ser 1 5 10 15 Pro Leu Gly Gly 20 <210> 35 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35 Val Gly Asn Tyr Met Ala His Met Gly Pro lie Thr Trp Val Cys Arg 1 5 10 15 Pro Gly Gly <210> 36 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36 Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys 1 5 10 15 Pro Gln <210> 37 <211> 21 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 37 Gly Gly Leu Tyr Ala Cys His Met Gly Pro Met Thr Ala lie Val Cys 1 5 10 15 Gln Pro Leu Arg Gly 20 <210> 38 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38 Thr lie Ala Gln Tyr lie Cys Tyr Met Gly Pro Glu Thr Trp Glu Cys 1 5 10 15 Arg Pro Ser Pro Lys Ala 20 <210> 39 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 39 Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys 1 5 10 <210> 40 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 40 Tyr Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys 1 5 10 <210> 41 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 41 Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys 1 5 10 <210> 42 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 42 Ala Xaa Asn Xaa Xaa Xaa Gly Pro Xaa Thr Trp Xaa Xaa 1 5 10 <210> 43 <211> 100 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 43 tacaggccca gatccagggc ggtacctaca gctgccactt cgggcccctc acgtgggtgt gcaagcccca gggcggcgga agcgggggag gctccggtac <210> 44 <211> 96 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 44 cggagcctcc cccgcttccg ccgccctggg gcttgcacac ccacgtgagg ggcc ggcagctgta ggtaccgccc tggatctggg cctgta <210> 45 <211> 85 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 45 tacaggccca gggcggtacc tacagctgcc acttcgggcc cctcacgtgg gtgtgcaagc cccagggcgg cggatcaggt aagtt <210> 46 <211> 89 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 46 ctagaactta cctgatccgc cgccctgggg cttgcacacc cacgtgaggg gcccgaagtg gcagctgtag gtaccgccct gggcctgta <210> 47 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 47 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 20 25 30 Arg Val Val 35 <210> 48 <211> 51 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 48 Gln lie Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu 20 25 30 Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 35 40 45 Pro Pro Cys 50 <210> 49 <211> 51 <212 PRT <213> Homo sapiens <400> 49 Gln lie Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu 20 25 30 Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 35 40 45 Pro Pro Cys 50 <210> 50 <211> 269 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50 Gln lie Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu 20 25 30 Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 35 40 45 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 50 55 60 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu 65 70 75 80 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 85 90 95 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 100 105 110 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 115 120 125 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 130 135 140 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys 145 150 155 160 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 165 170 175 Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 180 185 190 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 195 200 205 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 210 215 220 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 225 230 235 240 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 245 250 255 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 260 265 <210> 51 <211> 266 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 51 Gln lie Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu 20 25 30 Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys 35 40 45 Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 50 55 60 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 65 70 75 80 Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp 85 90 95 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 100 105 110 Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 115 120 125 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 130 135 140 Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly 145 150 155 160 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu 165 170 175 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 180 185 190 Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 195 200 205 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 210 215 220 Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn 225 230 235 240 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 245 250 255 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 260 265 <210> 52 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 52 Gln lie Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu 20 25 30 Val Thr Val Ser Ser 35 <210> 53 <211> 25 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 53 Gln lie Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser 20 25 <210> 54 <211> 102 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 54 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser 1 5 10 15 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 20 25 30 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 35 40 45 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 50 55 60 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 65 70 75 80 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys 85 90 95 Thr lie Ser Lys Ala Lys loo <210> 55 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 55 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp 1 5 10 15 Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 20 25 30 Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 35 40 45 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 50 55 60 Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 65 70 75 80 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 85 90 95 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 100 105 <210> 56 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 56 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe 1 5 10 15 Leu Gly Gly Pro 20 <210> 57 <211> 102 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 57 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu et lie Ser 1 5 10 15 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp 20 25 30 Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 35 40 45 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val 50 55 60 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 65 70 75 80 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys 85 90 95 Thr lie Ser Lys Ala Lys 100 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 5 10 15 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 20 25 30 Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 35 40 45 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 50 55 60 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 65 70 75 80 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 85 90 95 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 100 105 <210> 59 <211> 102 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 59 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met II 1 5 10 15 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp 20 25 30 Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 35 40 45 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val 50 55 60 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 65 70 75 80 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys 85 90 95 Thr lie Ser Lys Ala Lys 100 <210> SO <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 60 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 1 5 10 15 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 20 25 30 Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 35 40 45 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 50 55 60 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 65 70 75 80 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 85 90 95 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 100 105 <210> 61 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapi <400> 61 Gly Gly Gly Ser 1 <210> 62 <211> 54 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 62 Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys 1 5 10 15 Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu Val Thr Val 20 25 30 Ser Ser Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 35 40 45 Pro Ala Pro Glu Leu Leu 50 <210> 63 <211> 57 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 63 Gln Val Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Ser His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Ser Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu 20 25 30 Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ala Asp Lys Thr His Thr Cys 35 40 45 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala 50 55 <210> 64 <211> 57 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64 Gln lie Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu 20 25 30 Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ala Asp Lys Thr His Thr Cys 35 40 45 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala 50 55 <210> 65 <211> 57 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 65 Gln Val Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu 20 25 30 Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ala Asp Lys Thr His Thr Cys 35 40 45 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala 50 55 <210> 65 <211> 57 <212> PRT 213> Homo sapiens <400> 66 Gln Val Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu 20 25 30 Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ala Asp Lys Thr His Thr Cys 35 40 45 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Ala 50 55 <210> 67 <211> 57 <212> P T <213> Homo sapiens <400> 67 Gln Val Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu 20 25 30 Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ala Asp Lys Thr His Thr Cys 35 40 45 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Leu 50 55 <210> 68 <211> 57 <212> PRT <213> Homo sapiens <40.0> 68 Gln Val Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu 20 25 30 Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ala Asp Lys Thr His Thr Cys 35 40 45 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Glu 50 55 <210> 69 <211> 57 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 69 Gln lie Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu 20 25 30 Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys 35 40 45 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu 50 55 <210> 70 <211> 50 <212> P T <213> Homo sapiens <400> 70 Gln lie Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 20 25 30 Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu 35 40 45 Phe Leu 50 <210> 71 <211> 54 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 71 Gln lie Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu 20 25 30 Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys 35 40 45 Pro Ala Pro Glu Phe Leu 50 <210> 72 <211> 56 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 72 Gln lie Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 20 25 30 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro 35 40 45 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu 50 55 <210> 73 <211> 58 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 73 Gln lie Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 20 25 30 Ser Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro 35 40 45 Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu 50 55 <210> 74 <211> 47 <212> PRT < 13> Homo sapiens <400> 74 Gln Val Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu 20 25 30 Val Thr Val Ser Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 35 40 45 <210> 75 <211> 50 <212> PRT <213> Homo <400> 75 Gln Val Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu 20 25 30 Val Thr Val Ser Ser Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 35 40 45 Leu Leu 50 <210> 76 <211> 53 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 76 Gln Val Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu 20 25 30 Val Thr Val Ser Ser Ala Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 35 40 45 Ala Pro Glu Leu Leu 50 <210> 77 <211> 57 <212> P T <213> Homo sapiens <400> 77 Gln lie Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu 20 25 30 Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ala Asp Lys Thr His Ala Cys 35 40 45 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 50 55 <210> 78 <211> 57 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 78 Gln lie Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu 20 25 30 Val Ala Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ala Asp Lys Thr His Thr Cys 35 40 45 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 50 55 <210> 79 <211> 57 < 12> PRT <213> Homo sapiens <400> 79 Gln lie Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu 20 25 30 Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ala Asp Lys Ala His Thr Cys 35 40 45 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 50 55 <210> 80 <211> 57 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 80 Gln lie Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu 20 25 30 Val Ala Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ala Asp Lys Thr His Ala Cys 35 40 45 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 50 55

Claims (1)

1. NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES 1.- Por lo menos un ácido nucleico de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, que comprende por lo menos un polinucleótido que codifica para por lo menos una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NOS: 50-51, o un polinucleótido complementario a la misma. 2. - Por lo menos un ácido nucleico de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, que comprende por lo menos un polinucleótido que codifica para por lo menos una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NOS: 62-80, o un polinucleótido complementario a la misma. 3. - Por lo menos un ácido nucleico de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO que comprende por lo menos un polinucleótido que codifica para un polipéptido de conformidad con la fórmula (I): (V1 (n)-Pep(n)-Flex(n)-V2(n)-pH¡nge(n)-CH2(n)-CH3(n))(m), en donde V1 es por lo menos una porción de un extremo amino de una región variable de inmunoglobulina, Pep es por lo menos un péptido imitativo de EPO bioactivo, Flex es un polipéptido que provee flexibilidad estructural, permitiendo que el mimeticuerpo tenga orientaciones y propiedades de unión alternativas, V2 es por lo menos una porción de un extremo carboxilo de una región variable de inmunoglobulina, pHinge es por lo menos una porción de una región de gozne variable de inmunoglobulina, CH2 es por lo menos una porción de una región constante CH2 de inmunoglobulina, CH3 es por lo menos una porción de una región constante CH3 de inmunoglobulina, y n y m pueden ser un entero entre 1 y 10. 4 - Por lo menos un polipéptido de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, que comprende todos los aminoácidos contiguos de SEQ ID NO: 50-51. 5.- Por lo menos un polipéptido de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, que comprende todos los aminoácidos contiguos de SEQ ID NO: 62-80. 6.- Por lo menos un polipéptido de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, que comprende un polipéptido de conformidad con la fórmula (I): (V1 (n)-Pep(n)-Flex(n)-V2(n)-pHinge(n)-CH2(n)-CH3(n))(m), en donde V1 es QIQ, Pep es por lo menos un péptido bioactivo seleccionado de SEQ ID NOS: 1-42, Flex comprende GGGS (SEQ ID NO: 61 ), V2 es GTLVTVSS (SEQ ID NO: 52), pHinge es EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP (SEQ ID NO: 53), CH2 es SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK (SEQ ID NO: 54), CH3 es GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLS LSPGK (SEQ ID NO: 55), y n y m son un entero entre 1 y 10. 7.- Por lo menos un polipéptido de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, que comprende un polipéptido de conformidad con la fórmula (I): (V1 (n)-Pep(n)-Flex(n)-V2(n)-pHinge(n)-CH2(n)-CH3(n))(m), en donde V1 es QIQ, Pep es por lo menos un péptido bioactivo seleccionado de SEQ ID NOS: 1-42, Flex comprende GGGS, V2 es GTLVTVSS (SEQ ID NO: 52), pHinge es ESKYGPPCPSCPAPEFLGGP (SEQ ID NO: 56), CH2 es SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAK (SEQ ID NO: 57), CH3 es GQPREPQVYTLPPSQEE TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLS LSLGK (SEQ ID NO: 58), y n y m son un entero entre 1 y 10. 8.- Por lo menos un polipéptido de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, que comprende un polipéptido de conformidad con la fórmula (I): (V1 (n)-Pep(n)-Flex(n)-V2(n)-pHinge(n)-CH2(n)-CH3(n))(m), en donde V1 es una porción N-terminal de una región variable de humano, Pep es por lo menos un péptido bioactivo seleccionado de SEQ ID NOS: 1-42, Flex es un polipéptido que provee flexibilidad estructural, permitiendo que el mimeticuerpo tenga orientaciones y propiedades de unión alternativas, V2 es por lo menos una porción de un extremo carboxilo de una región variable de inmunoglobulina, pHinge es por lo menos una porción de una región de gozne variable de inmunoglobulina, CH2 SVFLFPPKPKDTL ISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWWDGVEVHNAKTK PREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK (SEQ ID NO: 54), CH3 es GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLS LSPGK (SEQ ID NO: 55), y n y m son un entero entre 1 y 10. 9.- Por lo menos un pollpéptido de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, que comprende un polipéptido de conformidad con la fórmula (I): (V1 (n)-Pep(n)-Flex(n)-V2(n)-pHinge(n)-CH2(n)-CH3(n))(m), en donde V1 es una porción N-terminal de una región variable de humano, Pep es por lo menos un péptido bioactivo seleccionado de SEQ ID NOS: 1-42, Flex es un polipéptido que provee flexibilidad estructural, permitiendo que el mimeticuerpo tenga orientaciones y propiedades de unión alternativas, V2 es por lo menos una porción de un extremo carboxilo de una región variable de inmunoglobulina, pHinge es por lo menos una porción de una región de gozne variable de inmunoglobulina, CH2 es SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAK (SEQ ID NO: 59), CH3 es GQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVLSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL SLSLGK (SEQ ID NO: 60), y n y m son un entero entre 1 y 10. 10. - Por lo menos un polipéptido de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, que comprende un polipéptido de conformidad con la fórmula (I): (V1 (n)-Pep(n)-Flex(n)-V2(n)-pHinge(n)-CH2(n)-CH3(n))(m), en donde V1 es QIQ, Pep es por lo menos un péptido bioactivo seleccionado de SEQ ID NOS: 1-42, Flex es un polipéptido que provee flexibilidad estructural, permitiendo que el mimeticuerpo tenga orientaciones y propiedades de unión alternativas, V2 es por lo menos una porción de un extremo carboxilo de una región variable de inmunoglobulina, pHinge es por lo menos una porción de una región de gozne variable de inmunoglobulina, CH2 es por lo menos una porción de una región constante CH2 de inmunoglobulina, CH3 es por lo menos una porción de una región constante CH3 de inmunoglobulina, y n y m pueden ser un entero entre 1 y 10. 11. - Por lo menos un polipéptido de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, que comprende un polipéptido de conformidad con la fórmula (l): (V1 (n)-Pep(n)-Flex(n)-V2(n)-pHinge(n)-CH2(n)-CH3(n))(m), en donde V1 es por lo menos una porción de un extremo amino de una región variable de inmunoglobulina, Pep es por lo menos un péptido imitativo de EPO bioactivo, Flex comprende GGGS (SEQ ID NO: 61), V2 es por lo menos una porción de un extremo carboxilo de una región variable de inmunoglobulina, pHinge es por lo menos una porción de una región de gozne variable de inmunoglobulina, CH2 es por lo menos una porción de una región constante CH2 de inmunoglobulina, CH3 es por lo menos una porción de una región constante CH3 de inmunoglobuiina, y n y m pueden ser un entero entre 1 y 10. 12. - Por lo menos un polipéptido de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, que comprende un polipéptido de conformidad con la fórmula (I): (V1 (n)-Pep(n)-Flex(n)-V2(n)-pHinge(n)-CH2(n)-CH3(n))(m), en donde V1 es por lo menos una porción de un extremo amino de una región variable de inmunoglobuiina, Pep es por lo menos un péptido imitativo de EPO bioactivo, Flex es un polipéptido que provee flexibilidad estructural, permitiendo que el mimeticuerpo tenga orientaciones y propiedades de unión alternativas, V2 es GTLVTVSS (SEQ ID NO: 52), pHinge es por lo menos una porción de una región de gozne variable de inmunoglobuiina, CH2 es por lo menos una porción de una región constante CH2 de inmunoglobuiina, CH3 es por lo menos una porción de una región constante CH3 de inmunoglobuiina, y n y m pueden ser un entero entre 1 y 10. 13. - Por lo menos un polipéptido de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, que comprende un polipéptido de conformidad con la fórmula (I): (V1 (n)-Pep(n)-Flex(n)-V2(n)-pHinge(n)-CH2(n)-CH3(n))(m), en donde V1 es por lo menos una porción de un extremo amino de una región variable de inmunoglobuiina, Pep es por lo menos un péptido imitativo de EPO bioactivo, Flex es un polipéptido que provee flexibilidad estructural, permitiendo que el mimeticuerpo tenga orientaciones y propiedades de unión alternativas, V2 es por lo menos una porción de un extremo carboxilo de una región variable de ¡nmunoglobulina, pHinge es EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP (SEQ ID NO: 53), CH2 es por lo menos una porción de una región constante CH2 de ¡nmunoglobulina, CH3 es por lo menos una porción de una región constante CH3 de ¡nmunoglobulina, y n y m pueden ser un entero entre 1 y 10. 14.- Por lo menos un polipéptido de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, que comprende un polipéptido de conformidad con la fórmula (I): (V1 (n)-Pep(n)-Flex(n)-V2(n)-pHinge(n)-CH2(n)-CH3(n))(m), en donde V1 es por lo menos una porción de un extremo amino de una región variable de ¡nmunoglobulina, Pep es por lo menos un péptido bioactivo seleccionado de SEQ ID NOS: 1-20, Flex es un polipéptido que provee flexibilidad estructural, permitiendo que el mimeticuerpo tenga orientaciones y propiedades de unión alternativas, V2 es por lo menos una porción de un extremo carboxilo de una región variable de ¡nmunoglobulina, pHinge es por lo menos una porción de una región de gozne variable de ¡nmunoglobulina, CH2 es por lo menos una porción de una región constante CH2 de ¡nmunoglobulina, CH3 es por lo menos una porción de una región constante CH3 de ¡nmunoglobulina, y n y m pueden ser un entero entre 1 y 10. 15.- Por lo menos un polipéptido de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, que comprende un polipéptido de conformidad con la fórmula (I): (V1 (n)-Pep(n)-Flex(n)-V2(n)-pHinge(n)-CH2(n)-CH3(n))(m), en donde V1 es por lo menos una porción de un extremo amino de una región variable de inmunoglobulina, Pep es por lo menos un péptido bioactivo seleccionado de SEQ ID NOS: 21-42, Flex es un polipéptido que provee flexibilidad estructural, permitiendo que el mimeticuerpo tenga orientaciones y propiedades de unión alternativas, V2 es por lo menos una porción de un extremo carboxilo de una región variable de inmunoglobulina, pHinge es por lo menos una porción de una región de gozne variable de inmunoglobulina, CH2 es por lo menos una porción de una región constante CH2 de inmunoglobulina, CH3 es por lo menos una porción de una región constante CH3 de inmunoglobulina, y n y m pueden ser un entero entre 1 y 10. 16. - Un ácido nucleico de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO o polipéptido de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en donde dicho polipéptido tiene por lo menos una actividad de por lo menos un polipéptido Pep. 17. - Un anticuerpo monoclonal o policlonal antiidiotípico, proteína de fusión, o fragmento de los mismos, que une específicamente por lo menos un polipéptido de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15. 18.- Un ácido nucleico de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO que codifica para por lo menos un polipéptido de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO o anticuerpo de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17. 19.- Un vector de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO que comprende por lo menos un ácido nucleico aislado de conformidad con la reivindicación 18. 20.- Una célula hospedera de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO que comprende un ácido nucleico aislado de conformidad con la reivindicación 18. 21.- La célula hospedera de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de conformidad con la reivindicación 20, caracterizada además porque dicha célula hospedera es por lo menos una seleccionada de células COS-1 , COS-7, HEK293, BHK21 , CHO, BSC-1 , Hep G2, 653, SP2/0, 293, NSO, DG44 CHO, CHO K1 , HeLa, de mieloma o de Iinfoma, o cualquier célula derivada, inmortalizada o transformada de las mismas. 22.- Un método para producir por lo menos un polipéptido de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO o anticuerpo de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, que comprende traducir un ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 18, bajo condiciones in vitro, in vivo o in situ, de modo que el mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO o anticuerpo sea expresado en cantidades detectables o recuperables. 23.- Una composición que comprende por lo menos un ácido nucleico de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, polipéptido de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO o anticuerpo de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17. 24. - La composición de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada además porque dicha composición comprende además por lo menos un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. 25. - La composición de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada además porque comprende por lo menos una composición que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de por lo menos un compuesto, composición o polipéptido seleccionado de por lo menos uno de un reportero o marca detectable, un antagonista de FNT, un fármaco antiinfeccioso, un fármaco para el sistema cardiovascular (CV), un fármaco para el sistema nervioso central (CNS), un fármaco para el sistema nervioso autónomo (ANS), un fármaco para el tracto respiratorio, un fármaco para el tracto gastrointestinal (Gl), un fármaco hormonal, un fármaco para el equilibrio de fluidos o electrólitos, un fármaco hematológico, un antineoplásico, un fármaco de inmunomodulación, un fármaco oftálmico, ótico o nasal, un fármaco tópico, un fármaco nutricional, una citocina, o un antagonista de citocina. 26.- La composición de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada además porque está en una forma de por lo menos una seleccionada de un líquido, gas o solución, mezcla, suspensión, emulsión o coloide seco, una preparación liofilizada, o un polvo. 27. - Un método para diagnosticar o tratar una condición relacionada al ligando de EPO en una célula, tejido, órgano o animal, que comprende (a) poner en contacto o administrar una composición que comprende una cantidad efectiva de por lo menos un ácido nucleico, polipéptido o anticuerpo de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 con, o a, dicha célula, tejido, órgano o animal. 28. - El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado además porque dicha cantidad efectiva es 0.001-50 mg de anticuerpo de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO; 0.000001-500 mg de dicho mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO; o 0.0001-100 µg de dicho ácido nucleico de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO por kilogramo de dichas células, tejido, órgano o animal. 29.- El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado además porque dicha puesta en contacto o dicha administración es mediante por lo menos un modo seleccionado de parenteral, subcutáneo, intramuscular, intravenoso, intraarticular, intrabronquial, intraabdominal, intracapsular, intracartilaginoso, intracavitario, intracelíaco, intracerebelar, intracerebroventricular, intracólico, intracervical, intragástrico, intrahepático, intramiocárdico, intraóseo, intrapélvico, intrapericárdico, intraperitoneal, intrapleural, intraprostático, intrapulmonar, intrarrectal, intrarrenal, intrarretinal, intraespinal, intrasinovial, intratorácico, intrauterino, intravesicai, intralesional, de bolo, vaginal, rectal, bucal, sublingual, intranasal o transdérmico. 30. - El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado además porque comprende administrar antes de, concurrentemente con, o después de, dicha (a) puesta en contacto o administración, por lo menos una composición que comprende una cantidad efectiva de por lo menos un compuesto o polipéptido seleccionado de por lo menos uno de un reportero o marca detectable, un antagonista de FNT, un fármaco antiinfeccioso, un fármaco para el sistema cardiovascular (CV), un fármaco para el sistema nervioso central (CNS), un fármaco para el sistema nervioso autónomo (ANS), un fármaco para el tracto respiratorio, un fármaco para el tracto gastrointestinal (Gl), un fármaco hormonal, un fármaco para el equilibrio de fluidos o electrólitos, un fármaco hematológico, un antineoplásico, un fármaco de inmunomodulación, un fármaco oftálmico, ótico o nasal, un fármaco tópico, un fármaco nutricional, una citocina, o un antagonista de citocina. 31. - Un dispositivo, que comprende por lo menos un polipéptido, anticuerpo o ácido nucleico de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO aislado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, en donde dicho dispositivo es adecuado para poner en contacto o administrar dicho polipéptido, anticuerpo o ácido nucleico (por lo menos uno) de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, mediante por lo menos un modo seleccionado de parenteral, subcutáneo, intramuscular, intravenoso, intraarticular, intrabronquial, intraabdominal, intracapsular, intracartilaginoso, intracavitario, intracelíaco, intracerebelar, intracerebroventricular, intracólico, intracervical, intragástrico, intrahepático, intramiocárdico, ¡ntraóseo, intrapélvico, ¡ntrapericárdico, intraperitoneal, intrapleural, intraprostático, intrapulmonar, intrarrectal, intrarrenal, intrarretinal, intraespinal, intrasinovial, intratorácico, intrauterino, intravesical, intralesional, de bolo, vaginal, rectal, bucal, sublingual, intranasal o transdérmico. 32. - Un artículo de fabricación para uso farmacéutico o de diagnóstico en humanos, que comprende material de empacamiento y un contenedor que comprende por lo menos un polipéptido, anticuerpo o ácido nucleico de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO aislado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17. 33. - El artículo de fabricación de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado además porque dicho contenedor es un componente de un sistema o dispositivo de suministro parenteral, subcutáneo, intramuscular, intravenoso, intraarticular, intrabronquial, intraabdominal, ¡ntracapsular, intracartilaginoso, intracavitario, intracelíaco, intracerebelar, intracerebroventricular, intracólico, intracervical, intragástrico, intrahepático, intramiocárdico, intraóseo, intrapélvico, ¡ntrapericárdico, intraperitoneal, intrapleural, intraprostático, intrapulmonar, intrarrectal, intrarrenal, intrarretinal, intraespinal, intrasinovial, intratorácico, intrauterino, intravesical, intralesional, de bolo, vaginal, rectal, bucal, sublingual, intranasal o transdérmico. 34. - Un método para producir por lo menos un polipéptido, anticuerpo o ácido nucleico de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO aislado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, que comprende proveer por lo menos una célula hospedera, animal transgénico, planta transgénica, o célula vegetal capaz de expresar en cantidades detectables o recuperables dicho polipéptido, anticuerpo o ácido nucleico. 35.- Por lo menos un polipéptido, anticuerpo o ácido nucleico de mimeticuerpo con porción CH1 eliminada imitativo de EPO, producido mediante un método de conformidad con la reivindicación 34.