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4-ARILQUINAZOLINAS Y USO DE LAS MISMAS COMO INHIBIDORES DE NHE-3
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN invención se refiere a compuestos de la fórmula
donde Ar es fenilo o naftilo X-sustituido, que está adicionalmente sustituido por R3 y R4,
X es H, NR6R7 o un anillo saturado de 5-7 miembros que tiene dos átomos de N, R1, R2, R3 y R4 son cada uno, independientemente entre si, H, A, OA, Hal, CF3, OH, N02, NH2, NHA, NA2, NH-CO-A, NH-CO- Ph, SA, SO-A, S02-A, S02-Ph, CN, OCF3, CO-A, C02H, C02A, C0-NH2, CO-NHA, CO-NA2, S02NH2, S02NHA, S02NA2 o fenilo que está insustituido o monosustituido o polisustituido por A, OA, Hal o CF3, A es alquilo que tiene 1, 2, 3, 4, 5 ó 6 átomos de
REF: 155915 2
Hal es F, Cl, Br o I, R5 es H, A, OH, N02, fenilo que está insustituido o monosustituido o polisustituido por A, OA, Hal o CF3, un grupo de protección amino o
R6 y R7 son cada uno, independientemente entre si, H, A, fenilo que está insustituido o monosustituido o polisustituido por A, OA, Hal o CF3, bencilo, un grupo de protección amino o - (CH2) nNR10Rn, R8 y R9 son cada uno, independientemente entre si, H o A, R10 y R11 son cada uno, independientemente entre si, H, A, fenilo que está insustituido o monosustituido o polisustituido por A, OA, Hal o CF3, bencilo o un grupo de protección amino, z es 0 ó 1, y n es 2, 3 ó 4, y sales, solvatos y estereoisómeros de los mismos, incluyendo las mezclas de los mismos en todas las relaciones, y derivados de los mismos de uso farmacéutico, en particular, sales y solvatos de los mismos de tolerancia fisiológica, con la condición de que queden excluidos los compuestos en donde X es H y, simultáneamente, z es 0. La invención se refiere asimismo al uso de los compuestos de la fórmula I y sus sales y solvatos como 3
inhibidores de NHE-3. Recién se describieron otros inhibidores del intercambiador de sodio/protón subtipo 3, por ejemplo, en la EP 0 825 178. Los compuestos exceptuados por la condición ya fueron descriptos en la DE 10043667. Los derivados de quinazolinilguanidina fueron descriptos por V. I. Shvedov et al. en Pharm . Chem. J . (trad. ingl . ) 1980, 14, 532-538 o en Khim. Farm. Zh. 1980, 14, 38-43, y por S.C.Bell et al. en J.Med. Pharm. Chem. 1962, 5, 63-69. La invención tenía por objeto hallar nuevos compuestos con propiedades valiosas, en particular, aquellos que puedan ser usados para preparar medicamentos. Sorprendentemente, se halló que los compuestos de la fórmula I y sus sales se toleran bien e inhiben el intercambiador de sodio/protón subtipo 3 y, al mismo tiempo, tienen una biodisponibilidad mejorada debido a su elevada hidrosolubilidad . Los compuestos de la fórmula I pueden usarse como ingredientes activos medicamentosos en medicina humana y veterinaria . Se sabe que el intercambiador de Na+/H+ representa una familia con al menos seis isoformas diferentes (NHE-1 a NHE-6), de los cuales todos ya han sido clonados. Mientras que el subtipo NHE-1 se distribuye ampliamente en todos los tejidos 4
del cuerpo, los demás subtipos de NHE se expresan selectivamente en órganos específicos como en el riñon o en la pared luminal y la pared contraluminal del intestino delgado. Esta distribución refleja las funciones específicas para las cuales sirven las diversas isoformas, o sea, por un lado, la regulación del pH intracelular y el volumen celular por el subtipo NHE-1 y, por otro lado, la absorción y resorción de Na+ en el intestino y el riñon a través de las isoformas NHE-2 y NHE-3. La isoforma NHE-4 fue hallada principalmente en el estómago. La expresión de NHE-5 está restringida al cerebro y el tejido neuronal . El NHE-6 es la isoforma que forma el intercambiador de sodio/protón en las mitocondrias . La isoforma NHE-3 se expresa, en particular, en la membrana apical de los túbulos renales proximales; por ello, un inhibidor de NHE-3 ejerce, entre otros cosas, una acción de protección de los ríñones. El uso terapéutico de un inhibidor selectivo para la isoforma de NHE-3 es múltiple. Los inhibidores de NHE-3 inhiben o reducen el daño tisular y la necrosis celular luego de eventos hipóxicos e isquémicos fisiopatológicos que dan como resultado una activación de la actividad del NHE, como es el caso durante la isquemia renal o durante la eliminación, el transporte y la reperfusión de un riñon durante un trasplante de riñon.
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Los compuestos de la fórmula I tienen una acción citoprotectora que consiste en prevenir la absorción excesiva del sodio y el agua en las células de órganos a los que se suministra poco oxígeno. Los compuestos de la fórmula I tienen una acción hipotensora y son apropiados como ingredientes activos medicamentosos para el tratamiento de hipertonía. Además, son apropiados como diuréticos. Los compuestos de la fórmula I , solos o combinados con inhibidores de NHE de otra especificidad de subtipo, tienen una acción antiisquémica y pueden usarse en caso de trombosis, aterosclerosis, espasmos vasculares, para la protección de órganos, p.ej., riñon e hígado, antes y durante operaciones, y en el caso de insuficiencia renal crónica o aguda. Además pueden usarse para el tratamiento de apoplejías, edema cerebral, isquemia del sistema nervioso, varias formas de shock, por ejemplo, shock alérgico, cardiológico, hipovolémico o bacteriano, y para mejorar el impulso respiratorio, por ejemplo, los siguientes estados: apneas del sueño centrales, muerte súbita, hipoxia postoperatoria y otros trastornos respiratorios . A través de la combinación con un inhibidor de la carboanhidrasa, también se puede mejorar la actividad respiratoria. Los compuestos de la fórmula I tienen un efecto inhibidor 6
sobre la proliferación celular, por ejemplo, la proliferación celular del fibroblasto y la proliferación celular del músculo liso y, en consecuencia, pueden usarse para el tratamiento de enfermedades en las cuales la proliferación celular es una causa primaria o secundaria . Los compuestos de la fórmula I pueden usarse contra las complicaciones tardías de la diabetes, enfermedades de cáncer, enfermedades fibróticas, disfunción endotelial, hipertrofia e hiperplasia de órganos, en particular, en hiperplasia de próstata o hipertrofia de próstata. También son apropiados como agentes de diagnóstico para la determinación y diferenciación de ciertas formas de hipertonía, aterosclerosis, diabetes y enfermedades proliferati as . Como los compuestos de la fórmula I también tienen un efecto ventajoso sobre el nivel de las lipoproteínas en suero, pueden emplearse solos o combinados con otros medicamentos para el tratamiento de un nivel elevado de grasa en sangre. La invención se refiere al uso de los compuestos de la fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 y sus sales y/o solvatos fisiológicamente aceptables para preparar un medicamento para el tratamiento de trombosis, estados isquémicos del corazón, del sistema nervioso periférico y central y de ataques de apoplejía, estados isquémicos de órganos y extremidades periféricos y para el tratamiento de estados de shock.
La invención también se refiere al uso de los compuestos de la fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 y sus sales y/o solvatos fisiológicamente aceptables para preparar un medicamento para usar en operaciones quirúrgicas y trasplantes de órganos y para preservar y almacenar trasplantes para medidas quirúrgicas. La invención también se refiere al uso de los compuestos de la fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 y sus sales y/o solvatos fisiológicamente aceptables para preparar un medicamento para el tratamiento de enfermedades, donde la proliferación celular es una causa primaria o secundaria, para el tratamiento o profilaxis de trastornos de metabolismo graso o impulso respiratorio alterado. La invención se refiere, además, el uso de los compuestos de la fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 y sus sales y/o solvatos fisiológicamente aceptables para preparar un medicamento para el tratamiento de isquemia renal, enfermedades intestinales isquémicas o para la profilaxis de enfermedades renales agudas o crónicas . Los métodos para identificar las sustancias que inhiben el intercambiador de sodio/protón subtipo 3 se describen, por ejemplo, en la US 5.871.919. Los compuestos de la fórmula I son apropiados, además, para el tratamiento de enfermedades bacterianas y parasitarias. Para todos los radicales en los compuestos de la fórmula I 8
que aparecen más de una vez como, por ejemplo, A, sus significados son independientes de los demás. Por hidratos y solvatos de los compuestos de la fórmula I se entiende, por ejemplo, los hemi-, mono- o dihidratós, y por solvatos, por ejemplo, compuestos de adición de alcohol como, por ejemplo, con metanol o etanol . En las fórmulas anteriores, A es alquilo, es lineal o ramificado y tiene 1, 2, 3, 4, 5 ó 6 átomos de carbono. A es, de preferencia, metilo, también etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo o ter-butilo, también pentilo, 1-, 2 ó 3-metilbutilo, 1,1-, 1,2- ó 2 , 2-dimetilpropilo, 1-etilpropilo, hexilo, 1-, 2-, 3- ó 4-metilpentilo, 1,1-, 1,2-, 1,3-, 2,2-, 2,3- ó 3 , 3-dimetilbutilo, 1- ó 2-etilbutilo, 1-etil-l-metilpropilo, l-etil-2-metilpropilo o 1,1,2 ó 1,2,2-trimetilpropilo. OA es, de preferencia, metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi o butoxi . Hal es, de preferencia, F, Cl o Br, pero también I, en particular, F, Cl o Br. Más arriba y más abajo, Ph es un radical fenilo insustituido, salvo que se indique lo contrario. Ar es, de preferencia, fenilo que está monosustituido por X y, por ejemplo, A, flúor, cloro, bromo, yodo, metoxi, etoxi, propoxi, butoxi o CF3. Ar es, de particular preferencia, uno de los siguientes radicales:
donde R3, R4 y X son tal como se definieron con anterioridad.
X es, de preferencia, NR6R7, un anillo de 5 a 7 miembros que tiene dos átomos de N o el siguiente radical:
donde R12 es H, A, Ph, bencilo o un grupo de protección amino como, por ejemplo, BOC o CBO y en particular, H, A o fenilo. En particular, X es H, NA2 o un radical del siguiente grupo:
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R5 es, de preferencia, H, A, OH, N02 o un grupo de protección amino, en particular, H, A, OH o N02. R6 y R7 son, de preferencia simultáneamente, H, de modo independiente entre si, H, A, bencilo o -(CH2)nNA2.
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R6 y Rs son, de preferencia, H o metilo, en particular,
H. R10 y R11 son, de preferencia, H, A, bencilo o fenilo, en particular, H, metilo o bencilo. z es, de preferencia, 0. n es, de preferencia, 2. El término "grupo de protección amino" se conoce en general y se refiere a los grupos que son apropiados para proteger (bloquear) un grupo amino de reacciones químicas, pero pueden eliminarse fácilmente luego de haber llevado a cabo la reacción química deseada en otras partes de la molécula. Son típicos de estos grupos, en particular, grupos acilo, arilo, aralcoximetilo y aralquilo insustituidos o sustituidos. Como los grupos de protección amino se eliminan luego de la reacción deseada (o secuencia de reacción) , su naturaleza y tamaño no son cruciales; sin embargo, se da preferencia a aquellos que tienen 1-20, en particular, 1-8 átomos de carbono. El término "grupo acilo" cubre a los grupos acilo derivados de ácidos carboxílieos o sulfónicos alifáticos, aralifáticos, aromáticos o heterocíclicos y, en particular, grupos alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo , y en especial, grupos aralcoxicarbonilo . Los ejemplos de grupos de protección amino de este tipo son alcanoilo, como acetilo, propionilo y butirilo; aralcanoilo, como fenilacetilo; aroilo, como benzoilo o toluilo; ariloxialcanoilo, como POA; alcoxicarbonilo, como metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, 2,2,2- 12
tricloroetoxicarbonilo, BOC (ter-butoxicarbonilo) y 2-yodoeto-xicarbonilo ; alqueniloxicarbonilo, como aliloxicarbonilo (Aloe) , aralquiloxicarbonilo, como CBZ ( "carbobenzoxi" , sinónimo de Z) , 4-metoxibenciloxicarbonilo (MOZ) , 4-nitrobenci-loxicarbonilo o 9-fluorenilmetoxicarbonilo (FMOC) ; 2-(fenil-sulfonil) etoxicarbonilo; trimetilsililetoxicarbonilo (Teoc) o arilsulfonilo, como 4-metoxi-2 , 3 , 6- trimetilfenilsulfonilo (Mtr) . El grupo de protección amino es, de preferencia, formilo, acetilo, propionilo, butirilo, fenilacetilo, benzoilo, toluilo, POA, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, 2 , 2 , 2-tricloroetoxicarbonilo, BOC, 2 yodoetoxicarbonilo, CBZ ( "carbobenzoxi" ) , 4-metoxibenciloxicarbonilo, FMOC, Mtr o bencilo. La invención se refiere, en particular, a los compuestos de la fórmula I donde al menos uno de dichos radicales tiene uno de los significados preferidos indicados con anterioridad y al uso de los mismos. Se da preferencia, además, a los compuestos de la fórmula I y sales y solvatos de los mismos donde al menos uno de los radicales R1, R2, R3 y R4 tiene uno de los siguientes significados: Hal, A, OH, N02, NH2, NHA, NA2, NH-CO-A, NH-CO-Ph, SA, SO-A, S02-A, S02-Ph, CN,. OCF3, CO-A, C02H, C02A, CO-NH2 , CO-NHA, CO-NA2, S02NH2, S02NHA, S02NA2 o fenilo que está insustituido o monosustituido o polisustituido por A, OA, Hal o CF3.
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De los compuestos de la fórmula I, se da particular preferencia a aquellos cuyo radical R1 es Cl, en particular, en la posición 6, y a aquellos cuyo radical R3 es metilo, en particular, en la posición 4' . Los compuestos de la fórmula I cuyo radical R3 es metilo, en particular, en la posición 4', tienen una selectividad particularmente pronunciada de enlace con el receptor NHE-3. Se da preferencia, además, a los compuestos de las fórmulas IA, IB y IC:
donde R1, R2, Ar e Y son tal como se definieron con anterioridad. En particular, R1 en las fórmulas IA, IB e IC es H, mientras que R2 es Hal o, en particular, Cl . Y adopta preferentemente uno de los siguientes significados: 14
Y tiene, de preferencia particular, uno de los siguientes significados:
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También se da particular preferencia a los siguientes compuestos II a 110 y sales y solvatos de los mismos:
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Los clorhidratos y los p-toluensulfonatos de los compuestos de las fórmulas II a 110 se prefieren de manera muy particular. Los compuestos de la fórmula I y también los materiales de partida para su preparación se obtienen, además, por métodos conocidos per se, tal como se describe en la bibliografía (por ejemplo en los manuales estándar, como Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie [Métodos de Química Orgánica], Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart) , para ser precisos, en condiciones de reacción que son conocidas y apropiadas para dichas reacciones. También se pueden usar 17
variantes que son conocidas en sí, pero no se mencionan en la presente con mayor detalle. Los materiales de partida también puede formarse in situ, si se desea, de modo que no se aislan de la mezcla de reacción, sino que se convierten inmediatamente en los compuestos de la fórmula I. Los compuestos de la fórmula I se preparan, de preferencia, por reacción de los compuestos de la fórmula II
donde R1, R2 y Ar son tal como se definieron con anterioridad, con 1-cianoguanidina o una 1-cianoguanidina correspondientemente N-alquilada o N-arilada de la fórmula NC-Y, donde Y es tal como se definió con anterioridad, y z es 0. La reacción puede llevarse a cabo en un solvente, preferentemente, un solvente inerte. Los ejemplos de los solventes apropiados son hidrocarburos, como hexano, éter de petróleo, benceno, tolueno o xileno; hidrocarburos clorados, como tricloroetileno, 1 , 2-dicloroetano, tetraclorometano, cloroformo o diclorometano; alcoholes, como metanol, etanol, isopropanol, n-propanol, n-butanol o ter-butanol ; éteres, como éter dietílico, éter diisopropílico, tetrahidrofurano 18
(THF) o dioxano; glicoléteres , como éter monometílico o monoetílico de etilenglicol , éter dimetílico de etilenglicol (diglime) ; cetonas, como acetona o butanona; amidas, como acetamida, dimetilacetamida, N-metilpirrolidona (NMP) o dimetilformamida (DMF) ; nitrilos, como acetonitrilo; sulfóxidos, como dimetilsulfóxido (D SO) ; disulfuro de carbono; ácidos carboxílieos , como ácido fórmico o ácido acético; nitroderivados , como nitrometano o nitrobenceno; ésteres, como acetato de etilo, o mezclas de dichos solventes. Se usan de preferencia DMF, agua o un alcohol. La reacción se lleva a cabo, de preferencia muy particular, sin un solvente, es decir, a punto de fusión, a temperaturas de entre 100 y 200° C. Es ventajosa la presencia de un catalizador ácido, como
A1C13, TiCl4, ácido p-toluensulfónico, BF3, ácido acético, ácido sulfúrico, ácido oxálico, POCl3 o pentóxido de fósforo.
Una variante preferida comprende el empleo de al menos uno de los reactivos siendo ya una sal, por ejemplo, el clorhidrato. Otro método valioso para preparar los compuestos de la fórmula I comprende la reacción, en lugar del compuesto de la fórmula NC-Y, de un compuesto de la fórmula III HN=CX-Y III donde 19
X es -S-alquilo, -S-arilo, -O-alquilo u -O-arilo, Y es tal como se definió con anterioridad, donde z es 0, alquilo es, de preferencia, tal como se definió con anterioridad para A, y arilo es tal como se definió con anterioridad para Ar, con un compuesto de la fórmula II. Finalmente, los compuestos de la fórmula I pueden prepararse por reacción de los compuestos de la fórmula IV
donde Ar, Hal, R1 y R2 son tal como se definieron con anterioridad y Hal es, en particular, Cl, con un compuesto de la fórmula HY, donde Y es tal como se definió con anterioridad. HY es, de preferencia particular, guanidina o un compuesto de la siguiente fórmula:
donde R5 es tal como se definió con anterioridad. Esta reacción se lleva a cabo, de preferencia, en presencia de una base fuerte, como alcóxido de metal alcalino o aminas básicas fuertes. Las bases usadas son, de preferencia particular, metóxido de sodio, etóxido de sodio,' metóxido de potasio, etóxido de potasio, ter-butóxido de 20
potasio, DBN, DBU o DABCO. Los solventes usados para la reacción de los compuestos de la fórmula IV con compuestos de la fórmula HY son, de preferencia, DMSO, NMP o D F. Los compuestos de la fórmula IV pueden obtenerse por métodos de preparación que son conocidos per se. Los compuestos de la fórmula IV se preparan, de preferencia particular, por reacción de los compuestos de la fórmula V
donde R1, R2 y Hal son tal como se definieron con anterioridad, a) con ácidos borónicos de la fórmula Ar-B(OH)2 en presencia de un compuesto de paladio, como, por ejemplo, cloruro de bis (trifenilfosfin) paladio (II) en forma de un acoplamiento de Suzuki. Ya se han revelado muchas variantes de esta reacción en la bibliografía (por ejemplo S. L. Buchwald y J. M. Fox, The Strem Chemiker, 200, 18,
1), Okabe et al., Tetrahedron, 1995, 51, 1861 a 1866; Curd et al. J. Chem. Soc. 1948, 1759 a 1766), o b) con compuestos de tributilestaño de la fórmula Ar-Sn(n- C2H5)3 en forma de un acoplamiento de Stille (por ejemplo, J. K. Stille Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1986, 25, 508).
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La presente solicitud se refiere, del mismo modo, al proceso para preparar los compuestos de la fórmula V. En algunos casos, puede ser apropiado sólo para formar los radicales R1, R2, R3 y R4 y otros grupos funcionales luego de la reacción de los compuestos de la fórmula II con los compuestos de la fórmula NC-Y o los compuestos de la fórmula III, por ejemplo por eliminación de un grupo de protección, clivaje del éter o hidrogenación de grupos nitro para formar grupos amino. De modo correspondiente, también puede ser apropiado formar solamente los radicales R1, R2, R3 y R4 y otros grupos funcionales luego de la reacción de los compuestos de la fórmula IV con los compuestos de la fórmula HY por medio de las medidas arriba mencionadas. Los compuestos de la fórmula I, donde X es NR6R7 o un anillo saturado de 5-7 miembros que tiene dos átomos de N, se sintetizan preferentemente de los compuestos de halógeno de la fórmula VI
por amidación catalizada con paladio usando las correspondientes bases de nitrógeno, preferentemente, HNR6R7 o la siguiente base de nitrógeno: 22
donde R6, R7 y R12 son tal como se definieron con anterioridad. Las reacciones de este tipo fueron descriptas, por ejemplo, por Buchwald y Hartwig (R. Stürmer, Ang. Chem. 1999, 111, 3509 a 3510; L. Buchwald et al. J. Am. Chem. Soc. 1998, 120, 9722 a 9723) . Además de un catalizador de paladio apropiado, como, por ejemplo, Pd(OAc)2 o Pd2(dba)3, la elección del ligando, en particular, tiene una importancia crucial para el éxito de la reacción. Los ejemplos de ligandos adecuados son 2- (di-ter-butilfosfinil) -bifenilo, 2-dimetilamino-2' - (di-ter-butilfosfinil) bifenilo, FcPtPtBu2 o 2,2' -bis (diciclohexilfosfino) -1,1' -binaftilo . Antes de la reacción, deberán protegerse los grupos amino presentes, por ejemplo por medio de grupos de protección amino. La presente solicitud también se refiere a los nuevos compuestos de las fórmulas II, IV y VI . Una base de la fórmula I puede convertirse en la sal de adición ácida asociada usando un ácido, por ejemplo, por reacción de cantidades equivalentes de la base y del ácido en un solvente inerte, como etanol, seguido por evaporación. Los ácidos apropiados para esta reacción son, en particular aquellos que proporcionan ácidos de aceptación fisiológica.
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De esta manera, es posible usar ácidos inorgánicos, por ejemplo, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácidos hidrohálicos , como ácido clorhídrico o ácido bromhídrico , ácidos fosfóricos, como ácido ortofosfórico o ácido sulfámico, también ácidos orgánicos, en particular, ácidos carboxílicos, sulfónicos o sulfúricos alifáticos, alicíclicos, aralif ticos, aromáticos o heterocíclicos monobásicos o polibásicos, por ejemplo, ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido piválico, ácido dietilacético, ácido malónico, ácido succínico, ácido pimélico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido láctico, ácido tartárico, ácido málico, ácido cítrico, ácido glucónico, ácido ascórbico, ácido nicotínico, ácido isonicotínico, ácido metan- o etansulfónico, ácido etandisulfónico, ácido 2-hidroxietansulfónico, ácido bencensulfónico, ácido p-toluensulfónico, ácidos naftalenmono- y -disulfónico y ácido laurilsulfúrico . Las sales con ácidos fisiológicamente inaceptables, por ejemplo picratos, pueden usarse para la aislación y/o la purificación de los compuestos de la fórmula I . La invención también se refiere al uso de los compuestos de la fórmula I como inhibidores del NHE-3 y/o sus sales fisiológicamente aceptables para obtener preparaciones farmacéuticas, en particular, por métodos no químicos. En este caso, pueden convertirse en una forma de dosificación 24
apropiada junto con al menos un excipiente o adyuvante sólido, líquido y/o semilíquido y, si se desea, combinados con uno o más ingredientes activos. La invención se refiere también a preparaciones farmacéuticas que comprenden al menos un inhibidor de NHE-3 de la fórmula I y/o una de sus sales y solvatos fisiológicamente aceptables. Estas preparaciones pueden usarse como medicamentos en la medicina humana o veterinaria. Los excipientes apropiados son sustancias orgánicas o inorgánicas que son adecuadas para la administración enteral (por ejemplo, oral) , parenteral o tópica y que no reaccionan con los nuevos compuestos, por ejemplo, agua, aceites vegetales, alcoholes bencílicos, alquilenglicoles , polietilenglicoles , triacetato de glicerol, gelatina, carbohidratos, como lactosa o almidón, estearatos de magnesio, talco o vaselina. Para la administración oral son apropiados, en particular, los comprimidos, las pildoras, los comprimidos recubiertos, las cápsulas, los polvos, los gránulos, los jarabes, los jugos o las gotas, para la administración rectal son apropiados los supositorios, para la administración parenteral son apropiadas las soluciones, preferentemente las soluciones a base de aceite o acuosas, también las suspensiones, las emulsiones o los implantes, y apropiados para la aplicación tópica son los ungüentos, las cremas o los polvos, o transdérmicamente en parches.
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Los nuevos compuestos también pueden liofilizarse y los liofilizados resultantes se usan, p.ej., para obtener preparaciones inyectables. Las preparaciones indicadas pueden esterilizarse y/o comprender adyuvantes, como lubricantes, conservantes, estabilizantes y/o humectantes, emulsionantes, sales para modificar la presión osmótica, sustancias de amortiguación, colorantes y saborizantes y/o una pluralidad de otros ingredientes activos, p.ej. una o varias vitaminas. Las preparaciones farmacéuticas apropiadas para administración en forma de aerosoles o atomizadores son, por ejemplo, soluciones, suspensiones o emulsiones del ingrediente activo · de la fórmula I en un solvente farmacéuticamente aceptable. Los compuestos de la fórmula I y sus sales y solvatos fisiológicamente aceptables pueden usarse para el tratamiento y/o la profilaxis de las enfermedades o los cuadros clínicos descriptos con anterioridad. En general, las sustancias conformes a la invención se administran, de preferencia, en dosis de entre aproximadamente 0,1 y 500 mg, en particular, de entre 1 y 10 mg, por unidad de dosis. La dosis diaria oscila, de preferencia, entre aproximadamente 0,001 y 10 mg/kg de peso corporal. Sin embargo, la dosis específica para cada paciente depende de una amplia variedad de factores, por ejemplo, de la eficacia del compuesto específico empleado, de la edad, 26
del peso corporal, del estado general de salud, del sexo, de la dieta, del período y el método de administración, de la velocidad de excreción, de la combinación de medicamentos y de la gravedad de la enfermedad particular a la que se aplica la terapia. Se prefiere la administración oral. Ej emplos : Más arriba y más abajo, todas las temperaturas se indican en °C. En los ejemplos que figuran a continuación, "elaboración convencional" significa que se adiciona agua de ser necesario, la mezcla se ajusta -de ser necesario- a un pH de entre 2 y 10, dependiendo de la constitución del producto final, la mezcla se extrae con acetato de etilo o diclorometano, las fases se separan, la fase orgánica se seca sobre sulfato de sodio y se evapora, y el producto se purifica por cromatografía en gel de sílice y/o por cristalización, p. f. es el punto de fusión. Ejemplo 1:
Una mezcla de 1,00 g del compuesto 1, 0,60 g de dicarbonato de di-ter-butilo (2), 20,0 mi de dimetilformamída y 1,20 g de carbonato de potasio se calienta a 60° C durante 27
toda la noche. Se agrega agua a la mezcla de reacción, la mezcla se filtra y el residuo se somete a la elaboración convencional, dando como resultado el compuesto 3. Ejemplo 2:
Una mezcla de 100 mg del compuesto 3_, 600 mg de dicarbonato de di-ter-butilo (2) y 5 mi de diclorometano se agita a 50° C durante 4 horas. Se elimina el solvente y el residuo se somete a la elaboración convencional, dando como resultado el compuesto 4. Ejemplo 3 :
Se agregan 0,242 g del compuesto 4, 0,16 g de 1-piperazilcarboxilato de ter-butilo y 0,170 g de ter-butóxido de sodio en una atmósfera de nitrógeno a una solución de 60 28
mg de acetato de paladio (II) y 100 mg de tri-ter-butilfosfina en 5 mi de xileno. La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 24 horas, se adiciona agua y la mezcla se somete a la elaboración convencional, dando como resultado el compuesto 6. Ejemplo 4 :
Se agregan 20 mg de ácido trifluoroacético a 1,50 g del compuesto enfriando con hielo, y la mezcla se agita a temperatura ambiente durante una hora. Se eliminan todos los componentes volátiles, el residuo se disuelve en 50 mi de agua, y se agrega por goteo una solución de hidróxido de sodio 1 N hasta que la mezcla se torna alcalina. El precipitado resultante se filtra por succión, se disuelve en 20 mi de metanol y se precipita con la adición de una solución metanólica de ácido clorhídrico. La filtración y la elaboración convencional dan como resultado el compuesto 7 (p.f .245° C) .
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Ejemplo 5:
CIH CIH
Una mezcla de 0,10 g del compuesto 8 y 0,152 g del compuesto 9 en 1,0 mi de l-metil-2-pirrolidona se agita a temperatura ambiente durante 2 horas. Subsiguientemente se filtra la mezcla de reacción, el residuo se disuelve en una mezcla de metanol y diclorometano, y se agrega una solución metanólica de ácido clorhídrico. El enfriamiento, la refiltración y la elaboración convencional dan como resultado el compuesto 10. Ejemplo 6:
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Una mezcla de 0,75 g del compuesto 8, 0,40 g de nitroguanidina (11) y 0,40 mi de DABCO en 5 mi de l-metil-2-pirrolidona se agita a 80° C durante 6 horas. La elaboración 30
convencional de la mezcla de reacción da como resultado compuesto 12 Ejemplo 7:
11 14 15 Una mezcla de 5,00 g del compuesto 13, 2,91 g de ácido tolilborónico (14), 0,30 g de cloruro de bis (trifenilfos-fin)paladio (II) y 1,2 g de hidróxido de sodio en polvo en 60 mi de diglime se agita a 130°C durante seis horas. Subsiguientemente se agrega agua a la mezcla de reacción que se somete a la elaboración convencional, dando como resultado el compuesto 15. Ejemplo 8:
8 6
Una mezcla de 1,45 g del compuesto 8 y 0,58 g de DABCO en 15 mi de dimetilsulfóxido se agita a temperatura ambiente durante 2 horas, y se agregan subsiguientemente 2,66 g de hidroxiguanidinsulfato-l-hidrato . Luego de haber adicionado 31
1,39 mi de trietilamina por goteo, la mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante dos días. La elaboración convencional de la mezcla da como resultado el compuesto 16 (p. f . 193 - 195° C) . Los siguientes inhibidores de NHE-3 preferidos se obtuvieron como sales de adición ácida o bases libres análogamente a los procesos indicados anteriormente, usando los correspondientes precursores: pTsOH -que figura a continuación- significa ácido p- toluensulfónico . Ejemplos 9 - 44:
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33 34
35 Ejemplos 81 - 116: 36
37 Ejemplos 117 - 152:
38
39
Ejemplos 153 - 188: 40
41
Ejemplos 189 - 224:
42
Ejemplos 225 - 260: 43
44
Ejemplos 261 - 296:
45
46
Ejemplos 297 - 332 47
48
Ejemplos 333 - 368
49
50
51
52 Ejemplos 405 - 440: 53
54 Ejemplos 441 - 476: 55
56
Ejemplos 477 - 512: 57
58
59
Ejemplos 549 - 584
nHA
(549) H Cl H PTsOH
(550) Cl CH3 HC1 60
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Ensayos farmacológicos A continuación se describe el método usado para la caracterización de los compuestos de la fórmula I como inhibidores de NHE-3. Los compuestos de la fórmula I se caracterizan con respecto a su selectividad por las isoformas de HE-1 a NHE- 3. Las tres isoformas se expresan de modo estable en líneas celulares de fibroblasto de ratón. La acción de inhibición de los compuestos se evalúa por determinación de la captación sensible a EIPA de 22Na+ en las células luego de la acidosis intracelular.
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Material y métodos Líneas celulares LAP1 que expresan las diferentes isoformas de NHE Las líneas celulares LAP1 que expresan las isoformas de NHE-1, -2 y -3 (una línea celular de fibroblasto de ratón) se obtuvieron del Prof. J. Pouysségur (Niza, Francia). La transfección se lleva a cabo por medio del método de Franchi et al. (1986) . Las células se cultivan en un medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) con 10% de suero de ternero fetal desactivado (FCS) . Para la selección de células con expresión de NHE, se usa el llamado "método de muerte por ácido" de Sardet et al. (1989). Las células se incuban primero durante 30 minutos en un buffer sin sodio ni bicarbonato con contenido de NH4C1. El NH4C1 extracelular se elimina luego mediante lavado con un buffer sin bicarbonato, sin NH4C1 y sin sodio. Las células se incuban luego en un buffer sin bicarbonato con contenido de NaCl . Solamente estas células que expresan funcionalmente el NHE son capaces de sobrevivir en la acidificación intracelular a la que están sometidas. Caracterización de los inhibidores de NHE con respecto a su selectividad de isoformas Con las líneas celulares de fibroblasto de ratón antes mencionadas que expresan las isoformas de NHE-1, NHE-2 y NHE-3, se ensayan compuestos en cuanto a la selectividad frente a las 63
isoformas por medio del procedimiento descripto por Counillon et al. (1993) y Scholz et al. (1995). Las células se acidifican intracelularmente mediante el método con prepulsos de NH4C1 y posteriormente por incubación en un buffer libre de bicarbonato con contenido de 22Na+. Debido a la acidificación intracelular, se activa el NHE, el sodio es captado por las células. El efecto del compuesto de ensayo se expresa como inhibición de la captación de 22Na+ sensible a EIPA (etilisopropilamiloridaj . Las células que expresaban NHE-1 , NHE-2 y HE-3 se sembraron en una densidad de 5-7,5 x 104 células/cavidad en placas de microtitulación de 24 cavidades y se cultivaron hasta confluencia durante 24 a 48 horas. El medio se elimina por succión y las células se incuban durante 60 minutos a 37° C en buffer de H4C1 (50 mM de H4C1 , 70 mM de cloruro de colina, 15 mM de MOPS, pH 7,0) . El buffer se elimina posteriormente, y las células se cubren rápidamente dos veces con buffer de lavado de cloruro de colina (120 mM de cloruro de colina, 15 mM de PIPES/tris, 0,1 mM de ouabaína, 1 mM de MgCl2, 2 mM de CaCl2/ pH 7,4) y se filtraron por succión. Las células se cubren luego con el buffer de carga de cloruro de colina (120 mM de cloruro de colina, 15 mM de PIPES/tris, 0,1 mM de PIPES/tris, 0,1 mM de ouabaína, 1 mM de MgCl2, 2 mM de CaCl2, pH 7,4, 22Na* (0,925 kBg/100 mi de buffer de carga) ) y luego se incubaron en este buffer durante 6 minutos. Tras expirar el tiempo de incubación, se elimina el buffer de incubación por succión. A fin de 64
eliminar la radioactividad extracelular, las células se lavan rápidamente cuatro veces con solución salina helada amortiguada con fosfato (PBS) . Las células se solubilizan luego por adición de 0,3 mi de NaOH 0,1 N por cavidad. Las soluciones que contenían fragmentos celulares se transfieren a tubos para centelleo. Cada cavidad se lava después dos veces con 0,3 mi de NaOH 0,1 N, y las soluciones de lavado también se introducen en los correspondientes tubos para centelleo. El cóctel de centelleo se agrega a los tubos que contenían el lisado celular, y la radioactividad es captada por las células se comprueba por determinación de la radiación ß. Bibliografía : Counillon et al. (1993) Mol. Pharmacol . 44: 1041-1045 Franchi et al. (1986) Proc .Nati .Acad. Sci. USA 83: 9388-9392 Sardet et al. (1989) Cell 56: 271-280 Scholz et al. (1995) Cardiovasc . Res. 29: 260-268 Los siguientes ejemplos se refieren a las preparaciones farmacéuticas : Ejemplo A: Frascos para inyectables Una solución de 100 g de un inhibidor de NHE-3 de la fórmula I y 5 g de fosfato disódico ácido en 3 1 de agua bidestilada se ajusta a un valor de pH 6,5 usando ácido clorhídrico 2 N, se filtra en forma estéril, se transfiere a frascos para inyectables, se liofiliza en condiciones estériles y se sella en forma estéril. Cada frasco para 65
inyectables contiene 5 mg de ingrediente activo. Ejemplo B: Supositorios Se funde una mezcla de 20 g de un inhibidor de NHE-3 de la fórmula I con 100 g de lecitina de soja y 1400 g de manteca de cacao, se vierte en moldes y se deja enfriar. Cada supositorio contiene 20 mg de ingrediente activo. Ejemplo C: Solución Se prepara una solución de 1 g de un inhibidor de NHE-3 de la fórmula I, 9,38 g de NaH2P04 . 2 H20, 28,48 g de Na2HP04 . 12 H20 y 0,1 g de cloruro de benzalconio en 940 mi de agua bidestilada. Se ajusta a un valor de pH 6,8, se lleva hasta 1 litro y se esteriliza por radiación. Esta solución puede utilizarse en forma de gotas oftálmicas. Ejemplo D: Ungüento Se mezclan 500 mg de un inhibidor de NHE-3 de la fórmula
I con 99,5 g de vaselina en condiciones asépticas. Ejemplo E: Comprimidos Se comprime una mezcla de 1 kg de un inhibidor de NHE-3 de la fórmula I, 4 kg de lactosa, 1,2 kg de almidón de papa, 0,2 kg de talco y 0,1 kg de estearato de magnesio de manera usual para formar comprimidos, de modo tal que cada comprimido contenga 10 mg de ingrediente activo. Ejemplo F: Comprimidos recubiertos Análogamente al ejemplo E, los comprimidos se prensan y luego se recubren de manera usual con una cobertura de 66
sucrosa, almidón de papa, talco, goma tragacanto y colorante. Ejemplo G: Cápsulas 2 kg de un inhibidor de NHE-3 de la fórmula I se introducen de manera usual en cápsulas de gelatina dura, de modo que cada cápsula contenga 20 mg de ingrediente activo. Ejemplo H: Ampollas Una solución de 1 kg de un inhibidor de NHE-3 de la fórmula I se filtra en forma estéril en 60 1 de agua bidestilada, se transfiere a ampollas, se liofiliza en condiciones estériles y se sella bajo esterilidad. Cada ampolla contiene 10 mg del ingrediente activo. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.