MXPA03009058A

MXPA03009058A - Uso de derivados de n-fenil-2-pirimidinamina contra desordenes alergicos tipo enfermedades basadas en mastocitos.

Info

Publication number: MXPA03009058A
Application number: MXPA03009058A
Authority: MX
Inventors: Nakajima Motowo
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 2001-04-05
Filing date: 2002-04-05
Publication date: 2004-11-22
Also published as: GB0108606D0; NO325454B1; HUP0303751A3; CN1529602A; WO2002080925A1; HUP0303751A2; CA2443092A1; KR20090034998A; BR0208663A; IL158061A0; PL363080A1; NO20034414L; SK12312003A3; AU2002307140B2; RU2003130635A; NZ528934A; NO20034414D0; ZA200307563B; RU2304436C2; EP1389113A1

Abstract

El uso de los derivados de N-fenil-2-pirimidinamina de la formula I: (ver formula) en donde los simbolos y sustituyentes tienen el significado dado en la presente, en forma libre o en forma de sal farmaceuticamente aceptable, en la fabricacion de una composicion farmaceutica para el tratamiento de rinitis alergica, dermatitis alergica, alergia a farmacos o alergia a alimentos, angioedema, urticaria, sindrome de muerte repentina de bebes, aspergilosis broncopulmonar, esclerosis multiple, o mastocitosis.

Description

USO DE DERIVADOS DE N-FENIL-2-PIRIMIDINAMINA CONTRA DESÓRDENES ALÉRGICOS TIPO ENFERMEDADES BASADAS EN MASTOCITOS La presente invención se refiere a un nuevo uso de los derivados de N-fenil-2-pirimidinamina de la fórmula I, en donde los símbolos y sustituyentes tienen el significado dado posteriormente en la presente, en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, en la fabricación de una composición farmacéutica para el tratamiento de rinitis alérgica, dermatitis alérgica, alergia a fármacos o alergia a alimentos, angioedema, urticaria, síndrome de muerte repentina de bebés, aspergilosis broncopulmonar , esclerosis múltiple, o mastocitosis; y a un método de tratamiento de animales de sangre caliente, de preferencia seres humanos, en donde se administra una dosis terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula I a un animal de sangre caliente que sufra de una de las enfermedades mencionadas anteriormente. La presente invención se refiere al uso de derivados de N-fenil-2-pirimidinamina de la fórmula I: en donde : Ri es 4-pirazinilo; 1-metil-lH-pirrolilo; fenilo sustituido por amino ó aminoalquilo inferior, en donde el grupo amino en cada caso está libre, alquilado o acilado; 1H-indolilo ó IH-imidazolilo enlazado en un átomo de carbono del anillo de cinco miembros; o piridilo insustituido o sustituido por alquilo inferior enlazado en un átomo de carbono del anillo, e insustituido o sustituido en el átomo de nitrógeno por oxigeno; R2 y R3 son cada uno independientemente del otro, hidrógeno o alquilo inferior; uno o dos de los radicales R4, R5, Rer R7/ y Rs son cada uno nitro, alcoxilo inferior sustituido por flúor, o un radica de la fórmula II: -N ( 9) -C (=X) - (Y) n-Rio UD , en donde : R9 es hidrógeno o alquilo inferior, X es oxo, tio, imino, N-alquilo inferior-imino, hidroxi-imino, u O-alquilo inferior-hidroxi-imino, Y es oxigeno o el grupo NH, n es 0 ó 1, y Rio es un radical alifático que tiene cuando menos 5 átomos de carbono, o un radical aromático, aromático-alifático, cicloalifático, cicloalifático-alifático, heterocxclico, o eterociclico-alifático, y los radicales restantes ¾, R5, Rg, R7/ y Rs son cada uno independientemente de los otros, hidrógeno, alquilo inferior que está insustituido o sustituido por amino libre o alquilado, piperazinilo, piperidinilo, pirrolidinilo, o por morfolinilo, o alcanoílo inferior, trifluorometilo, hidroxilo libre, eterificado o esterificado, amino libre, alquilado o acilado, o carboxilo libre o esterificado, o una sal de este compuesto que tenga cuando menos un grupo formador de sal, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de rinitis alérgica, dermatitis alérgica, alergia a fármacos o alergia a alimentos, angioedema, urticaria, síndrome de muerte repentina de bebé, aspergilosis broncopulmonar, mastocitosis , o esclerosis múltiple. 1-metil-lH-pirrolilo es de preferencia 1-metil-lH-pirrol-2-ilo ó l-metil-lH-pirrol-3-ilo . Ri como fenilo sustituido por amino o por aminoalquilo inferior, en donde el grupo amino en cada caso está libre, alquilado o acilado, es fenilo sustituido en cualquier posición deseada ( orto , meta , o para) , en donde un grupo amino alquilado es de preferencia mono- ó di-alquilo inferior-amino, por ejemplo dimetilamino, y la fracción de alquilo inferior de aminoalquilo inferior es de preferencia alquilo lineal de 1 a 3 átomos de carbono, tal como en especial metilo ó etilo. IH-indolilo enlazado en un átomo de carbono del anillo de 5 miembros es lH-indol-2-ilo ó lH-indol-3-ilo . Piridilo insustituido o sustituido por alquilo inferior enlazado en un átomo de carbono del anillo es 2-, 4-, ó de preferencia 3-piridilo sustituido por alquilo inferior o de preferencia insustituido, por ejemplo 3-piridilo, 2-metil-3-piridilo, ó 4-metil-3-piridilo . Piridilo sustituido en el átomo de nitrógeno por oxigeno es un radical derivado a partir de N-óxido de piridina, es decir, N-óxido-piridilo . Alcoxilo inferior sustituido por flúor es alcoxilo inferior que lleva cuando menos uno, pero de preferencia varios, sustituyentes de flúor, en especial fluorometoxilo ó 1,1,2, 2-tetrafluoroetoxilo . Cuando X es oxo, tio, imino, N-alquilo inferior-imino, hidroxi-imino, u O-alquilo inferior-hidroxi-imino, el grupo C=X es, en el orden anterior, un radical C=0, C=S, C=N-H, C=N-alquilo inferior, C=N-OH, ó C=N-0-alquilo inferior, respectivamente. X es de preferencia oxo. N es de preferencia 0, es decir, el grupo Y no está presente . Y, si está presente, es de preferencia el grupo NH. El término "inferior", dentro del alcance de este texto, denota radicales que tienen hasta e incluyendo 7, de preferencia hasta e incluyendo 4 átomos de carbono.

Ri, R2 R3, y R9 como alquilo inferior son de preferencia metilo ó etilo. Un radical alifático Rio que tiene cuando menos 5 átomos de carbono, de preferencia no tiene más de 22 átomos de carbono, en general no más de 10 átomos de carbono, y es un radical de hidrocarburo alifático sustituido, o de preferencia insustituido, es decir, un radical de alquinilo, alquenilo, o de preferencia alquilo, sustituido o de preferencia insustituido, tal como alquilo de 5 a 7 átomos de carbono, por ejemplo pentilo normal, ün radical aromático R10 tiene hasta 20 átomos de carbono, y está insustituido o sustituido, por ejemplo en cada caso naftilo insustituido o sustituido, tal como en especial 2-naftilo, o de preferencia fenilo, seleccionándose de preferencia los sustituyentes a partir de ciano, alquilo inferior insustituido o sustituido por hidroxilo, amino, ó 4-metil-piperazinilo, tal como en especial metilo, trifluorometilo, hidroxilo libre, eterificado, o esterificado, amino libre, alquilado o acilado, y carboxilo libre o esterificado . En un radical aromático-alifático Rio, la fracción aromático es como se define anteriormente, y la fracción alifática es de preferencia alquilo inferior, tal como en especial alquilo de 1 a 2 átomos de carbono, que está sustituido o de preferencia insustituido, por ejemplo bencilo. Un radical cicloalifático Rio tiene en especial hasta 30, más especialmente hasta 20, y de una manera muy especial hasta 10 átomos de carbono, es mono- ó poli-ciclico, y está sustituido o de preferencia insustituido , por ejemplo tal como un radical de cicloalquilo, en especial tal como un radical de cicloalquilo de 5 ó 6 miembros, tal como de preferencia ciclohexilo. En un radical cicloalifático-alifático R10, la fracción cicloalifática es como se define anteriormente, y la fracción alifática es de preferencia alquilo inferior, tal como en especial alquilo de 1 a 2 átomos de carbono, que está sustituido o de preferencia insustituido. ün radical heterociclico Rio contiene en especial hasta 20 átomos de carbono, y es de preferencia un radical monociclico saturado o insaturado que tiene 5 ó 6 miembros del anillo, y de 1 a 3 heteroátomos que de preferencia se seleccionan a partir de nitrógeno, oxigeno y azufre, en especial, por ejemplo, tienilo ó 2-, 3-, ó 4-piridilo, o un radical bi- ó tri-ciclico en donde, por ejemplo, uno o dos radicales de benceno están templados (fusionados) al radical monociclico mencionado. En un radical heterociclico-alifático Rio, la fracción heterociclica es como se define anteriormente, y la fracción alifática es de preferencia alquilo inferior, tal como en especial alquilo de 1 a 2 átomos de carbono, que está sustituido o de preferencia insustituido. Hidroxilo eterificado es de preferencia alcoxilo inferior. Hidroxilo esterificado es de preferencia hidroxilo esterificado por un ácido carboxilico orgánico, tal como un ácido alcanoico inferior, o un ácido mineral, tal como un ácido halohidrico, por ejemplo alcanoiloxilo inferior, o en especial halógeno, tal como yodo, bromo, o especial flúor o cloro . Amino alquilado es, por ejemplo, alquilo inferior-amino, tal como metilamino, ó dialquilo inferior-amino, tal como dimetilamino . Amino acilado es, por ejemplo, alcanoilo inferior-amino, o benzoilamino . Carboxilo esterificado es, por ejemplo, alcoxilo inferior-carbonilo, tal como metoxicarbonilo . Un radical de fenilo sustituido puede llevar hasta 5 sustituyentes , tales como flúor, pero en especial en el caso de los sustituyentes relativamente grandes, está en general sustituido por solamente de 1 a 3 sustituyentes. Los ejemplos de fenilo sustituido que pueden recibir una mención especial son 4-cloro-fenilo, pentafluoro-fenilo, 2-carboxí-fenilo, 2-metoxi-fenilo, 4-fluoro-fenilo, 4-ciano-fenilo, y 4-metil-fenilo . Los grupos formadores de sal en un compuesto de la fórmula I, son grupos o radicales que tienen propiedades básicas o ácidas . Los compuestos que tienen cuando menos un grupo básico o cuando menos un radical básico, por ejemplo un grupo amino libre, un radical de pirazinilo, o un radical de piridilo, pueden formar sales de adición de ácido, por ejemplo con ácidos inorgánicos, tales como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, o un ácido fosfórico, o con ácidos carboxílicos o sulfónicos orgánicos adecuados, por ejemplo ácidos mono- ó di-carboxílicos alifáticos, tales como ácido trifluoroacético, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido succínico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido hidroximaleico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, o ácido oxálico, o aminoácidos, tales como arginina o lisina, ácidos carboxílicos aromáticos, tales como ácido benzoico, ácido 2-fenoxi-benzoico, ácido 2-acetoxi-benzoico, ácido salicílico, ácido 4-aminosalicílico, ácidos carboxílicos aromáticos-alifáticos , tales como ácido mandélico o ácido cinámico, ácidos carboxílicos heteroaromáticos, tales como ácido nicotínico, ó ácido isonicotínico, ácidos sulfónicos alifáticos, tales como ácido metan-, etan-, ó 2-hidroxietan-sulfónico, o ácidos sulfónicos aromáticos, por ejemplo ácido bencen-, p-toluen-, ó naftalen-2-sulfónico. Cuando están presentes varios grupos básicos, se pueden formar sales de adición de mono- ó poli-ácido. Los compuestos de la fórmula I que tienen grupos ácidos, por ejemplo un grupo carboxilo libre en el radical Rao, pueden formar sales de metales o de amonio, tales como sales de metales alcalinos o de metales alcalinotérreos, por ejemplo sales de sodio, potasio, magnesio, o calcio, o sales de amonio con amoniaco o con aminas orgánicas adecuadas, tales como monoaminas terciarias, por ejemplo trietilamina ó tri- (2-hidroxietil) -amina, o bases heterociclicas, por ejemplo N-etil-piperidina ó N, N' -dimetil-piperazina . Los compuestos de la fórmula I que tengan tanto grupos ácidos como básicos, pueden formar sales internas. Para los propósitos de aislamiento o purificación, asi como en el caso de los compuestos que se utilizan adicionalmente como intermediarios, también es posible utilizar sales farmacéuticamente inaceptables. Sin embargo, para propósitos terapéuticos, solamente se utilizan sales no tóxicas farmacéuticamente aceptables, y por consiguiente, estas sales son las preferidas. Los compuestos de la fórmula I se pueden utilizar para el tratamiento o para la fabricación de medicamentos para el tratamiento de animales de sangre caliente, de preferencia seres humanos. El término "rinitis alérgica", como se utiliza en la presente, significa cualquier reacción alérgica de la mucosa nasal. Esta reacción alérgica puede ocurrir, por ejemplo, de una forma perenne, por ejemplo conjuntivitis bernal, o por temporada, por ejemplo fiebre de heno. El término "dermatitis alérgica", como se utiliza en la presente, significa en especial dermatitis atópica, dermatitis por contacto alérgica, y dermatitis excematosa, pero comprende, por ejemplo, también dermatitis seborreica, Lichen planus, urticaria, y acné. Dermatitis atópica, como se define en la presente, es un desorden inflamatorio crónico de la piel que se ve en individuos con una predisposición hereditaria a un umbral cutáneo reducido al prurito. Se caracteriza principalmente por comezón extrema, que conduce a raspaduras y frotaduras que a su vez dan como resultado las lesiones típicas del eczema. La dermatitis por contacto alérgica, como se define en la presente, es una forma de dermatitis que se debe a la sensibilización alérgica a diferentes sustancias que producen reacciones inflamatorias en la piel de aquéllos que hayan adquirido hipersensibilidad al alérgeno como un resultado de una exposición previa al mismo . El término "alergia a fármacos o alergia a alimentos", como se utiliza en la presente, pertenece a una reacción alérgica producida por un fármaco o por antígenos ingeridos, tales como, por ejemplo, fresas, leche, o huevos. El término "aspergilosis broncopulmonar" , se refiere a una infección de los pulmones con Aspergillus . El término "mastocitosis", como se utiliza en la presente, se refiere a mastocitosis sistémica, por ejemplo mastocitoma, y en particular a neoplasmas de mastocitos caninos . Los compuestos de la fórmula I se están refiriendo posteriormente en la presente de una manera colectiva como COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN. Los mastocitos tienen un papel importante como las células efectoras primarias en los desórdenes alérgicos mencionados en la presente. La desgranulación mediada por IgE especifica del antigeno de los mastocitos conduce a la liberación subsecuente de mediadores químicos y múltiples citocinas, y a la síntesis de leucotrienos . Además, los mastocitos están involucradas en la patogénesis de esclerosis múltiple . Los neoplasmas de mastocitos se presentan tanto en seres humanos como en animales. En los perros, los neoplasmas de mastocitos se denominan mastocitomas , y la enfermedad es común, representando del 7 por ciento al 21 por ciento de los tumores caninos. Se debe hacer un distinción entre la mastocitosis humana, que normalmente es transitoria o indolora, y la neoplasia de mastocitos canina, que se comporta de una manera impredecible , y con frecuencia es agresiva y metastásica. Por ejemplo, los mastocitomas solitarios humanos esencialmente nunca forman metástasis; en contraste, el 50 por ciento de los mastocitomas caninos se comportan de una forma maligna, como fue estimado por Hottendorf y Nielsen (1999) , después de revisar 46 reportes publicados de tumores en 938 perros. El cáncer en la población de las mascotas es una enfermedad espontánea. Los propietarios de mascotas, motivados por la prolongación de la calidad de vida de sus animales, con frecuencia buscan el cuidado y tratamiento especializado de los oncólogos veterinarios en los hospitales veterinarios privados y en los hospitales de enseñanza veterinaria a través de todo el pais. Las modalidades terapéuticas de los pacientes de cáncer veterinarios son similares a las de los seres humanos, incluyendo cirugía, quimioterapia, terapia por radiación, y bioterapia. Se ha estimado que existen 42 millones de perros y aproximadamente 20 millones de gatos en los Estados Unidos. Empleando estimaciones crudas de la incidencia de cáncer, existen aproximadamente 4 millones de nuevos diagnósticos de cáncer hechos en perros, y un número similar en gatos cada año. Los tumores de mastocitos cutáneos en perros son un problema común. La mayoría de los tumores de mastocitos son benignos y se cura con simple recepción; sin embargo, si son recurrentes o metastásicos hacia sitios distantes, las opciones terapéuticas son limitadas. Las opciones de tratamiento para las lesiones recurrentes pueden incluir terapia por radiación con haz externo. Para las metástasis distantes o la enfermedades diseminada, el uso de los protocolos de quimioterapia que contienen Lomustine® y vinblastina, ha demostrado algún beneficio. Los sitios para las metástasis de los tumores de mastocitos incluyen piel, nodos linfáticos regionales, bazo, hígado, y médula ósea.

Se sugiere la involucración del receptor KIT en la patogénesis de la mastocitosis , por la observación de que se han detectado varias mutaciones que dan como resultado la activación constitutiva de KIT en un número de lineas de mastocitos. Por ejemplo, se presenta una mutación puntual en el c-KIT humano, que causa la sustitución de Asp816 por Val en el dominio de fosfotransferasa y en la auto-activación del receptor, en una linea de leucemia de mastocitos humana a largo plazo (HMC-1) , y en el codón correspondiente en dos lineas de mastocitos de roedor. Más aún, en algunos casos la mastocitosis humana, se ha identificado ín situ esta mutación activadora. Se han encontrado otras dos mutaciones activadoras en la región de yuxtamembrana intracelular de KIT, es decir, la sustitución con Val560Gly en la linea de mastocitos humana HMC-1, y una supresión de 7 aminoácidos (Thr573-His579) , en una linea de mastocitos de roedor denominada FMA3. Se puede demostrar, mediante los modelos de prueba establecidos, y en especial los modelos de prueba descritos en la presente, que los COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN, o en cada caso una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, dan como resultado una prevención efectiva, o de preferencia el tratamiento de cuando menos una de las enfermedades mencionadas en la presente. La persona experta en la técnica pertinente está absolutamente capacitada para seleccionar un modelo de prueba pertinente para probar las indicaciones terapéuticas y los efectos benéficos indicados anteriormente en la presente y más adelante en la presente. Por ejemplo, la actividad farmacológica se puede demostrar en un estudio clínico o en el procedimiento de prueba como se describe esencialmente más adelante en la presente.

Parte A Ejemplo 1 Este ejemplo demuestra los efectos in vitro de los COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN sobre el desarrollo dependiente de SCF del crecimiento de mastocitos humanos cultivados generados a partir de células sanguíneas de médula CD34+ utilizando el sistema de cultivo descrito por Kinoshita T. Sawai . , y colaboradores en Blood 1999, 94, 496-508. Más del 90 por ciento de las células aisladas para CD34 de acuerdo con el análisis citométrico de flujo. Reactivos y Anticuerpos Los COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN se solubilizan en suero regulado con fosfato en una concentración de 10_2M, y se almacenan a -80°C. Todo el ácido retinoico trans (Sigma) se disuelve en etanol en una concentración de 10-2 M, y se almacena en frascos protegidos de la luz a -80°C. El MAB purificado para triptasa (MAB1222) se puede adquirir en Chemicon International, Inc., CA. Para el análisis citométrico de flujo, los mAbs para CD34 (8gl2, FITC) , y CDllb (Leul5, PE) se adquieren en Becton Dickinson Immunocytometry Systems (Mountain View, CA) , y el mAb para CD41 (SZ22, FITC) en Immunotech S.A. (Marsella, Francia). El mAb para glicoforina A (GPA, JC159, FITC) se puede obtener en Dako (Glostrup, Dinamarca) . Para la mancha Western y la inmunoprecipitación, los mAbs para c-kit (Nü-c-kit) y para fosfotirosina (4G10) se pueden adquirir en Nichirel and Upstate Biotechnology, Inc. (Lake Placid, NY) , respectivamente. Cultivos en Suspensión Se llevan a cabo cultivos líquidos privados de suero en placas de cultivo de 24 pozos (#3047; Becton Dickinson). Se cultivan 20,000 células CD34+ en cada pozo conteniendo 2 mililitros de un medio-a complementado con albúmina de suero bovino al 1 por ciento, 300 microgramos/mililitro de transferrina humana completamente saturada de hierro (aproximadamente 98 por ciento pura, Sigma) , 16 microgramos/mililitro de lecitina de semilla de soya (Sigma), 9.6 microgramos/mililitro de colesterol (Nakalai Chemicals Ltd., Japón), y 20 nanogramos/mililitro de SCF, 10 nanogramos/mililitro de GM-CSF, 2 Unidades /mililitro de EPO, 10 nanogramos/mililitro de TPO, diferentes concentraciones de un COMPUESTO DE LA INVENCIÓN, solo o en combinación. Con el objeto de examinar los efectos de un COMPUESTO DE LA INVENCIÓN sobre el desarrollo dependiente de SCF de los mastocitos, se utilizan células cultivadas durante 10 semanas con 20 nanogramos/mililitro de SCF a partir de células sanguíneas de médula CD34+ como células objetivas. Durante 2 semanas, se incuban 5 a 10 x 104 células cultivadas en 10 semanas, en placas de cultivo de 24 pozos conteniendo 20 nanogramos/mililitro de SCF con o sin diferentes concentraciones de un COMPUESTO DE LA INVENCIÓN. Las placas se incuban a 37 °C en una atmósfera humidificada inundada con una mezcla de CO2 al 5 por ciento, O2 al 5 por ciento, y O2 al 90 por ciento. Cuando el cultivo se continúa hasta 4 semanas, se reemplaza la mitad del medio de cultivo cada 2 semanas con un medio fresco conteniendo los factores. El número de células viables se determina mediante una prueba de exclusión de azul de tripano utilizando un hemocitómetro. Cultivos Celulares Clónales El ensayo de colonias de mastocitos se lleva a cabo en platos de cultivo en suspensión Lux de 35 milímetros (#171099; Nunc, IL) . El cultivo consistió en células cultivadas durante 10 semanas (4,000 células/mililitro) con 10 nanogramos/mililitro de SCF, medio-a, metilcelulosa al 0.9 por ciento (Shinetsu Chemical, Japón) , albúmina de suero bovino al 1 por ciento, 300 microgramos/mililitro de transferrina humana completamente saturada de hierro, 16 microgramos/mililitro de lecitina de semilla de soya, 9.6 microgramos/mililitro de colesterol, y 100 nanogxamos/mililitro de SCF con o sin 10"6 M de un COMPUESTO DE LA INVENCIÓN. Los platos se incuban a 37 °C en una atmósfera humidificada inundada con una mezcla de CO2 al 5 por ciento, 02 al 5 por ciento, y 2 al 90 por ciento. Después de 4 semanas, los agregados consistentes en 30 o más células se califican como colonias de mastocitos, y aquéllos consistentes en 10 a 29 células se califican como racimos de mastocitos. Se levantan 30 colonias individuales y racimos, y se tiñen con el mAb anti-triptasa y con IgGl de ratón, utilizando la técnica de fosfatasa alcalina-anti-fosfatasa alcalina (?????) . Casi todas las células constituyentes son positivas para triptasa. Teñidos Citoquimicos e Inmunológicos Las células cultivadas se extienden sobre portaobjetos utilizando un Cytospin II. La reacción citoquimica con peroxidasa (POX) se lleva a cabo mediante el método convencional. La reacción con mAb contra triptasa se detecta utilizando el método de APAAP (Dako APAAP Kit System, Dako Corp., CA) , como es descrito por F. Ma, K. Koike y colaboradores en B . J. Haematol. 1998, 100, 427-35. Inmunoprecipitación y Mancha Western La inmunoprecipitación y la mancha Western se realizan como es descrito por T. Kamijo, K. Koike y colaboradores en Leuk. Res. 1997, 21, 1097-106.

Análisis Citortiétrico de Flujo Para el análisis de los marcadores superficiales sobre las células cultivadas, se recolectan 1-2/105 células en tubos de plástico, y se incuban con FITC- ó PE-mAb apropiadamente diluido, como es descrito por Kinoshita T, Sawai N. y colaboradores en Blood 1999, 94, 496-508. Las células se lavan dos veces, después de lo cual se analizan sus marcadores superficiales con el citómetro de flujo FACScan. Las células viables se marcan de acuerdo con sus características de dispersión de luz hacia adelante y sus características de dispersión lateral. La proporción de células positivas se determina mediante una comparación con las células teñidas con Ig acoplada con isotipo de ratón conjugada con FITC ó PE. Detección de Apoptosis Celular El análisis de la apoptosis celular se lleva a cabo mediante un análisis citométrico de flujo utilizando yoduro de propidio (PI, Sigma) de acuerdo con el procedimiento descrito por N. Sawai, K. Koike y colaboradores en Stem Cells, 1999, 17, 45-53. Con el objeto de reducir las células que sufren apoptosis, necrosis, o que ya están muertas, se puede utilizar una centrifugación de gradiente Percoll. Se ponen en capas células cultivadas durante 10 semanas sobre Percoll al 27 por ciento (Sigma) en un medio-a y Percoll al 54 por ciento en suero regulado con fosfato. Después de la centrifugación, las células se recolectan desde la interfase de las dos diferentes concentraciones de solución de Percoll, se lava con suero regulado con fosfato, y se tratan con 1 mililitro de Ortho PermeaFixMR durante 40 minutos a temperatura ambiente. Luego las células se incuban con ARNsa exento de ADNsa (Sigma) durante 15 minutos a 37°C, y se tiñen con PI durante 15 minutos. El contenido de ADN de 2 x 104 células se monitorea con un citómetro de flujo. Las células cultivadas durante 10 semanas (2 x 106) expuestas a SCF, o a SCF y un COMPUESTO DE LA INVENCIÓN, se lisan durante 10 minutos sobre hielo en 100 microlitros de regulador de lisis y hipotónico [Tris 10 mM (pH de 7.5), EDTA 10 mM, pH de 8.0, Tritón X-100 al 0.5 por ciento]. Después de la centrifugación durante 10 minutos a 14,000 g, el sobrenadante se transfiere a un nuevo tubo, y se trata con 0.2 miligramos/mililitro de ARNsa A (Sigma) y 0.2 miligramos/mililitro de Proteinasa K (Sigma) . El ADN se precipita con 120 microlitros de isopropanol y 20 microlitros de NaCl 5M durante la noche a -20°C. Después de la centrifugación a 14,000g, los gránulos se secan, se disuelven en 20 microlitros de Tris-EDTA, y luego se analizan las muestras mediante electroforesis en gel, en agarosa al 2 por ciento, y se tiñen con bromuro de etidio. Ensayo de los Niveles de Histamina, Triptasa, y Citocina Se miden las concentraciones de histamina en los listados celulares obtenidos mediante el tratamiento de las células cultivadas con Nonidet P-40 al 0.5 por ciento y en sobrenadante, mediante el Estuche de Radioinmunoensayo de Histamina (RIA) (Immunotech) , como se describe en Kinoshita T. Sawai N. y colaboradores en Blood 1999, 94, 496-508. Análisis Estadístico Todos los experimentos se deben llevar a cabo cuando menos tres veces. Para determinar el significado de la diferencia entre dos grupos independientes, se puede utilizar la prueba-T no emparejada, o la prueba de Mann-Whitney-U cuando los datos no estén normalmente distribuidos. Resultados Obtenidos para Monomesilato de N-{5- [4- (4-metil-piperazino-metil ) -benzoilamido] -2-metil-fenil } -4- (3-piridil) -2-pirimidinamina (STI571B) La adición de STI571B en 10-6 M o más al cultivo con SCF casi inhibe completamente la generación de la progenie. En SCF más STI571B, el número de células viables queda sin cambios en el día 2, y luego declina de una forma dependiente del tiempo. En el día 14, el número total de células alcanza un nivel negligible. De una manera consistente con los resultados obtenidos por los mastocitos cultivados en 10 semanas, el STI571B en 10~6 deprime notoriamente la producción de células por parte de las células CD34+ bajo estímulo con SCF. Adicionalmente, el STI571B induce una muerte programada de los mastocitos cultivados bajo el estímulo con SCF. El porcentaje de núcleos sub-diploides aumenta con el periodo de cultivo. Esta observación se puede confirmar poniendo en escala el ADN en las células expuestas a SCF más STI571B en electroforesis en gel . El STI571B ejerce sus efectos inhibidores en la primera fase de desarrollo de los mastoc.itos , asi como en el crecimiento de los mastocitos que aparecen al final. Los resultados obtenidos demuestran la inhibición del crecimiento de los mastocitos humanos dependiente de SCF por parte de los COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN, por ejemplo STI571B. Por consiguiente, se demuestra que los COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN se pueden utilizar para el tratamiento de las enfermedades mencionadas en la presente. Par-be B: Mastocitosis Ejemplo 2 : Métodos Reactivos: Novartis Pharma; Basilea, Suiza proporcionó la SAL I para utilizarse en estos experimentos . Se hicieron soluciones de suministro 10 mM frescas del inhibidor antes de cada experimento, disolviendo el compuesto en 1 mililitro de Suero Regulado con Fosfato (PBS; Gibco-BRL) . Anticuerpos: Se utilizó un anticuerpo anti-KIT de conejo policlonal (c-kit Ab-1) en una dilución de 1:500 (c-kit Ab-1; Oncogene, Cambridge, MA) . Se utilizó un anticuerpo anti-fosfotirosina (PY20) en una dilución de 1:1000 (PY20 Transduction Laboratories; Lexington, KY) . Se utilizó un anticuerpo de cabra anti-ratón conjugado con peroxidasa en una dilución de 1:5,000, y un anticuerpo de cabra anti-conejo en una dilución de 1:10,000 (Pierce; Rockford, IL) . Lineas celulares: Las lineas de células de mastocitoma canino BR y C2 se obtuvieron del Dr. George Caughey (Universidad de California en San Francisco, San Francisco, CA) . Ambas lineas celulares se mantuvieron en DMEM complementado con suero bovino fetal al 2 por ciento, L-glutamina 1 mM, HEPES 12.5 mM (pH de 7.5), 0.25 miligramos/mililitro de histidina, penicilina-estreptomicina al 1 por ciento, y fungizona al 1 por ciento. Las células BR y C2 se derivaron a partir de tumores de mastocitos caninos, y se establecieron originalmente en un cultivo a largo plazo después del paso inicial en ratones inmunodeficientes (DeVinney R. y colaboradores, Am. J. Respir. Cell Mol. Biol . 1990; 3(5): 413-420; Lazarus SC . y colaboradores, Am. J. Physiol. 1986; 251(6 Pt 1) :C935-C944) . La linea celular BR tiene una mutación puntual (T1752C) que da como resultado una sustitución de leucina a prolina en el aminoácido 575 (dominio de yuxtamembrana) . La linea celular C2 tiene una duplicación en fila interna (ITD) de la región de yuxtamembrana de KI . La traducción de este ITD da como resultado la reduplicación de los residuos de aminoácidos en el extremo 3' del exón 11 (London CA y colaboradores, Exp . Hermatol 1999; 27 ( 4 ) : 689-697 ; Ma Yet y colaboradores, J.

Invest. Dermatol. 1999; 112 (2) :165-170) . Ensayos de Proliferación: Se agregaron células a placas de 96 pozos en una densidad de 40,000 células/pozo en un medio de cultivo normal, y con concentraciones variables de la SAL I. La proliferación se midió a las 48-72 horas utilizando un ensayo basado en XTT (Roche Molecular Biochemicals ; Indianapolis , IN) . (Heinrich MC y colaboradores, Blood 2000; 96 ( 3 ): 925-932 ) . Lisados de Proteina : Las células BR y C2 se lavaron dos veces en suero regulado con fosfato, y luego se tranquilizaron en Optimem (Gibco-BRL) a 37 °C durante aproximadamente 18 horas. Luego las células se incubaron durante 90 minutos en la presencia de diferentes concentraciones de la SAL I. En seguida de esta incubación, las células se granularon y se lisaron utilizando de 100 a 250 microlitros de regulador de lisis de proteina (Tris 50 mM, NaCl 150 mM, NP-40 al 1 por ciento, desoxicolato al 0.25 por ciento, con la adición de los inhibidores aprotinina, leupeptina, pepstatina, PMSF, y ortovanadato de sodio [Sigma] ) . El análisis de inmunomancha Western se realizó como se describió anteriormente (Hoatlin ME y colaboradores, Blood 1998; 91 (4) : 1418-1425; Heinrich MC y colaboradores, Blood 2000; 96(3) : 925-932) .

Ejemplo 3: El COMPUESTO I inhibe la cinasa de KIT constitutivamente activada asociada con los tumores de mastocitos caninos. Para probar la eficacia del COMPUESTO I para inhibir la actividad de la cinasa de las formas mutantes del KIT canino, utilizamos dos lineas celulares (BR y C2 ) que expresan dos isoformas de KIT diferentes constitutivamente activadas . Las mutaciones de KIT en estas lineas celulares se localizan ambas en el dominio de yuxtamembrana, y son homologas a las mutaciones que se ven en los tumores estromales gastrointestinales humanos (GISTs) (Lux ML y colaboradores, Am. J. Pathol. 2000; 156 (3) : 791-795; Rubin BP y colaboradores, Cáncer Res. 2001; 61 (22 ): 8118-8121) . Los Usados preparados a partir de células BR ó C2 se sondearon con un anticuerpo anti-P-Tyr, y la activación del receptor de KIT se evaluó midiendo la autofosforilación . Como se reportó anteriormente, se observó autofosforilación de KIT en estas células en ausencia de SLF (Ma Yet y colaboradores, J. Invest. Dermatol. 1999; 112 (2) : 165-170; Ma Y. y colaboradores, Journal of Investigative Dermatology 2000; 114 (2) : 392-394) . La inhibición de la autofosforilación de KIT mediante el COMPUESTO I dependió de la dosis, observándose una inhibición completa utilizando dosis de 10 y 1.0 µ?. Se vio una inhibición casi completa utilizando una dosis de 0.1 µ?. Se vio una autofosforilación limitada de c-kit utilizando dosis de 0.001-0.01 µ? del COMPUESTO I. Por consiguiente, el COMPUESTO I no solamente inhibe la autofosforilación del receptor c-kit mutado en estas células, sino que también es un inhibidor más potente de este receptor mutado de lo que es el del receptor c-kit de tipo silvestre (IC50 100-200 nM) (Heinrich MC y colaboradores, Blood 2000; 96 ( 3 ): 25-932 ) . Para determinar si el COMPUESTO I modulaba la expresión de la proteina KIT, la membrana se separó y se volvió a sondear con un anticuerpo anti-c-kit. No hubo cambio alguno en la expresión de la proteina c-kit en las células tratadas con el COMPUESTO I. Por consiguiente, el COMPUESTO I disminuye la autofosforilación del polipéptido KIT canino imitante, mediante la inhibición de la actividad de la cinasa de KIT, en lugar de reducir la expresión de la proteina KIT.

E emplo 4 : El COMPUESTO I inhibe la proliferación de las lineas celulares de tumores de mastocitos caninos . Para probar el efecto biológico de inhibir la actividad de cinasa de un receptor c-kit imitante, cultivamos células BR ó C2 durante 48-72 horas en la presencia de diferentes concentraciones del COMPUESTO I. En las concentraciones inhibidoras de 0.1-10 µ?, la proliferación se redujo por el 90 al 95 por ciento, comparándose con las células tratadas solamente con el medio. Se vio una inhibición parcial de la proliferación en dosis de 0.001-0.01 µ? del COMPUESTO I. La reducción en la proliferación que se ve con las dosis de 0.01-10 µ? de inhibidor, fue estadísticamente significativa (p<0.001). Por consiguiente, el COMPUESTO I inhibe la proliferación de las células BR y C2 con el mismo intervalo de respuesta a la dosis que se ve para la inhibición de la autofosforilación del receptor. Las observaciones morfológicas de las células tratadas con inhibidor revelaron cambios consistentes con la apoptosis (no se muestran los datos) . Tabla 1: Células BR Promedios % SD % SD Células 0.929 100% 0.030447 3% 5 µ? 0.083 9% 0.001732 0% 1 µ? 0.105 11% 0.002 0% 0.1 µ?? 0.105 11% 0.002082 0% 0.01 µ? 0.479 52% 0.043016 5% 0.001 µ? 0.781 84% 0.033081 4% Tabla 2: Células C2 Tablas 1 y 2 : Las células BR ó C2 se aplicaron a placas de 96 pozos en una concentración de 40,000 células/pozo, y se cultivaron en un medio de cultivo normal, y variando la concentración del COMPUESTO I. La proliferación celular se midió a las 72 horas utilizando un sistema de ensayo basado en XTT. Cada concentración del COMPUESTO I se ensayó por triplicado. Los resultados se expresan como un porcentaje de la máxima proliferación (células solamente, sin el COMPUESTO I), desviación estándar + 1. Se muestran los resultados representativos de uno de seis experimentos independientes. Composiciones para Mascotas y Seres Humanos Ejemplo 5: Cápsulas con metansulfonato de 4- [ ( 4-metil-l-piperazin-1-ilmetil) -N- [4-metil-3- [ [4- (3-piridinil) -2-pirimidinil] amino] fenil] benzamida, forma del cristal ß. Se preparan cápsulas conteniendo 11.95 miligramos del compuesto mencionado en el titulo (= SAL I) correspondientes a 10.0 miligramos del COMPUESTO I (base libre) como sustancia activa, en la siguiente composición: Composición SAL I 11.95 mg Celulosa MK GR 9.2 mg Crospovidona XL 1.5 mg Aerosil 200 0.2 mg Estearato de magnesio 0.15 mg 23.0 mg Las cápsulas se preparan mezclando los componentes y llenando la mezcla en cápsulas de gelatina dura, tamaño 1.

E emplo 6 : Cápsulas con metansulfonato de 4- [ ( 4-metil-l-piperazin-l-ilmetil) -N- [4-metil-3- [ [4- (3-piridinil) -2-pirimidinil] amino] fenil] benzamida, forma del cristal ß. Se preparan cápsulas conteniendo 10.0 miligramos del compuesto mencionado en el titulo (= SAL I) como sustancia activa, en la siguiente composición: Composición Sustancia activa 10.0 mg Avicel 20.0 mg PVPPXL 1.5 mg Aerosil 0.2 mg Estearato de magnesio 0.15 mg 31.85 mg Las cápsulas se preparan mezclando los componentes y llenando la mezcla en cápsulas de gelatina dura, tamaño 1.

E emplo 7 : Cápsulas con metansulfonato de 4- [ ( 4-metil-l-piperazin-l-ilmetil) -N- [4-metil-3- [ [4-metil-3- [ [4- (3-piridinil) -2-pirimidinil] amino] fenil] benzamida, forma del cristal ß. Se preparan cápsulas conteniendo 119.5 miligramos del compuesto mencionado en el titulo (= mesilato del COMPUESTO I) correspondientes a 100 miligramos del COMPUESTO I (base libre) como sustancia activa, en la siguiente composición : Composición Mesilato del COMPUESTO I 119.5 mg Celulosa MK GR 92 mg Crospovidona XL 15 mg Aerosil 200 2 mg Estearato de magne 1.5 mg 230 mg Las cápsulas se preparan mezclando los componentes y llenando la mezcla en cápsulas de gelatina dura, tamaño 1.

Ejemplo 8 : Ejemplo de una serie de casos prospectivos de perros mascota con tumores de mastocitos cutáneos mensurables . Los pacientes del estudio son perros mascota con tumores de mastocitos mensurables e histológicamente confirmados. Los casos están limitados a aquéllos con lesiones mensurables susceptibles a biopsia. Los criterios de elegibilidad son: tumores de mastocitos cutáneos mensurables histológicamente confirmados . - los casos requerirán biopsia en serie con perforación de Keyes de 2 milímetros antes y durante la terapia . grado histológico (II-intermedio ó III-pobremente diferenciado) . - estado de desempeño 0 ó 1 (Karnofsky Modificado - Tabla 3) . consentimiento informado del poseedor. (a) Los criterios de exclusión son: quimioterapia citotoxica concurrente. no se pueden iniciar prednisona ni fármacos anti-inflamatorios no esteroidales dentro de 30 días del estudio; si se han administrado prednisona o fármacos antiinflamatorios no esteroidales por más de 30 días, se pueden continuar . - prueba de ácido biliar en suero anormal (función del hígado) . Tabla 3 : Estado de desempeño (Karnofsky Modificado) Grado Descripción 0 actividad normal . 1 actividad restringida; actividad reducida desde el estado previo a la enfermedad. 2 comprometido; ambulatorio solamente para las actividades vitales ; defeca y orina consistentemente en áreas aceptables. 3 Discapacitado; se debe alimentar forzadamente; incapaz de confinar la orina y defecación a áreas aceptables. 4 Muerte .

La evaluación previa al tratamiento de todos los casos incluye examen físico, conteo sanguíneo completo, recubrimiento esponjoso, bioquímica en suero, urianálisis, ácidos biliares en suero (en ayuno y post-prandial) , documentación del tamaño del nodo linfático regional, radiografías abdominales, y ultrasonido abdominal. El régimen de tratamiento es de 25 miligramos/kilogramo oralmente cada día por 60 días de la SAL I. El tratamiento se continúa en todos los casos durante 60 días, a menos que se observe un progreso de la enfermedad. En los casos que experimenten una respuesta parcial o una respuesta completa, se puede considerar continuar la terapia durante 60 días adicionales. Los casos que terminen con éxito la terapia son elegibles para repetir la entrada al estudio. Tabla 4 : Plan de Tratamiento y Evaluación Clínica.

Acción Día O Día 7 Día 14 Día 28 Cada 14 días Etapa clínica1 X X X Examen físico X X X X X Medición de carga de tumor X X X X X Inicio de SAL I, 25 mg/kg al día X Farmacocinética3 X Biopsia de incisión4 X X Etapa de repetición X ¦""La etapa inicial consiste en el examen físico, CBS, recubrimiento esponjoso, bioquímica en suero, pruebas de función del hígado (ácido biliar en suero), urianálisis, radiografías abdominales, y ultrasonido abdominal. La re-evaluación puede consistir en examen físico y medición de la carga del tumor solo, o repetición de la etapa clínica. 2La carga de tumor se mide en el día 0, 7, 14, 29, y luego cada 14 días. La respuesta al tratamiento se definirá contra las lesiones cutáneas mensurables y otras lesiones identificadas en la etapa (CR, PR, SD, PD - definidos más adelante) . 3La recolección de plasma de los primeros cinco casos se emprende a las 0, 0.5 1, 2, 5, 8, 12, 16, 24 horas en seguida de la primera dosis de la SAL I . 4La biopsia de incisión de las lesiones mensurables definidas se recolectará en el día 0 y en el 28 de todos los casos. Se recopilan biopsias adicionales en el momento de una respuesta parcial (PR) , y después de la respuesta objetiva completa (CR) . La eficacia del COMPUESTO I se evalúa contra tumores de mastocitos cutáneos mensurables, utilizando los puntos finales clínicos . Los puntos finales biológicos se pueden tomar de biopsias en serie recolectadas a partir de tumores cutáneos y a partir de muestras de sangre disponibles a través del curso del tratamiento.

Los puntos finales clínicos incluyen el índice de respuesta de los tumores mensurables, la respuesta objetiva contra el tumor mensurable, y el tiempo hasta el progreso del tumor mensurable. Se registrarán todos los efectos secundarios adversos. "Respuestas de Tumores Objetivas", como se definen más adelante, se observan bajo el tratamiento con el COMPUESTO I, e indican la eficacia del régimen de tratamiento . En particular, se pueden observar Respuestas Completas y Respuestas Parciales al tratamiento con el COMPUESTO I. Adicionalmente, se puede observar que más animales que obtengan el tratamiento muestran la Enfermedad Estable, mientras que menos animales tratados muestran la Enfermedad Progresiva. También, se puede observar que menos animales que obtengan el tratamiento muestran una Recurrencia de la enfermedad, comparándose con los animales no tratados. El Tiempo hasta el Progreso, Duración de Remisión, y Sobrevivencia pueden aumentar en los animales bajo tratamiento con el COMPUESTO I. "Respuesta Completa (CR)" se define como la desaparición de toda la evidencia clínica de cáncer y de cualesquiera signos relacionados con el cáncer. "Respuesta Parcial (PR)" se define como una reducción del 50 por ciento o más en la suma de los productos de las mediciones para las lesiones representativas, sin un incremento en el tamaño de cualesquiera lesiones o aparición de nuevas lesiones. "Enfermedad Estable (SD) " se define como ninguna respuesta o una respuesta menor que la definida para la respuesta parcial o la enfermedad progresiva sin aparición de nuevas lesiones o empeoramiento de los signos clínicos. "Enfermedad Progresiva (PD)" se define como un aumento inequívoco de cuando menos el 50 por ciento en el tamaño de cualquier lesión mensurable o aparición de nuevas lesiones . "Recurrencia (R)" se define como la aparición de nuevas lesiones o la reaparición de lesiones viejas en perros que habían tenido una respuesta completa; en los perros que solamente habían tenido una respuesta parcial, la recurrencia se definió como un aumento de cuando menos un 50 por ciento en la suma de los productos de las mediciones de las lesiones representativas, comparándose con las mediciones obtenidas en el momento de la máxima respuesta. "Tiempo hasta el Progreso (TTP)" se reporta desde el día 0 del protocolo. El TTP se definirá como el número de días desde el inicio de la terapia (desde el día 0) hasta la recurrencia (R) . "Duración de Remisión" se define como el número de días desde la respuesta ob etiva (PR ó CR) hasta la recurrencia . "Sobrevivencia" se define como el número de dias desde el principio del tratamiento con el COMPUESTO I hasta el fallecimiento. La causa del fallecimiento se anotará, pero puede incluir progreso de la enfermedad, toxicidad, y otros. Los resultados obtenidos demuestran la inhibición de los neoplasmas de mastocitos por parte de los COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN, por ejemplo STI571B. Se da preferencia a los COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN en donde : uno o dos de los radicales R4, R5, R6, R7 y Rs son cada uno nitro o un radical de la fórmula II, en donde R9 es hidrógeno o alquilo inferior, X es oxo, tio, imino, N-alquilo inferior-imino, hidroxi-imino, u O-alquilo inf rior-hidroxi-imino, Y es oxígeno o el grupo NH, n es 0 ó 1, y Ri0 es un radical alifático que tiene cuando menos 5 átomos de carbono, o un radical aromático, aromático-alifático, cicloalifático, cicloalifático-alifático, heterocíclico, o heterocíclico-alifático, y los radicales restantes R4, R5, R r 7 y Rs son cada uno independientemente de los otros, hidrógeno, alquilo inferior que está insustituido o sustituido por amino libre o alquilado, piperazinilo, piperidinilo, pirrolidinilo, o por morfolinilo, o alcanoilo inferior, trifluorometilo, hidroxilo libre, eterificado o esterificado, amino libre, alquilado o acilado, o carboxilo libre o esterificado, y los sustituyentes restantes son como se definen anteriormente . Se da preferencia en especial a los COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN en donde: Ri es piridilo ó N-óxido-piridilo, cada uno de los cuales está enlazado en un átomo de carbono, R2 y R3 son cada uno hidrógeno, R4 es hidrógeno o alquilo inferior, R5 es hidrógeno, alquilo inferior, o trifluorornetilo, R6 es hidrógeno, R7 es nitro, alcoxilo inferior sustituido por flúor, o un radical de la fórmula II en donde R9 es hidrógeno, X es oxo, n es 0, y Rio es piridilo enlazado en un átomo de carbono, fenilo que está insustituido o sustituido por halógeno, ciano, alcoxilo inferior, carboxilo, alquilo inferior, o por 4-metil-piperazinil-metilo, ó alquilo de 5 a 7 átomos de carbono, tienilo, 2-naftilo, ó ciclohexilo, y RB es hidrógeno. Se da una preferencia especial a los COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN en donde cuando menos uno de los radicales R4 y R8 es alquilo inferior, y los sustituyentes restantes son como se definen anteriormente. Se da preferencia sobre todo a los COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN en donde: Ri es piridilo enlazado en un átomo de carbono, R2, R3, R5, R6 y Re son cada uno hidrógeno, R4 es alquilo inferior, R7 es un radical de la fórmula II, en donde Rg es hidrógeno, X es oxo, n es 0, y Rio es 4-metil-piperazinil-metilo . Se da preferencia sobre todo especialmente al COMPUESTO DE LA INVENCIÓN de la fórmula I, el cual es CGP 57148B {monomesilato de N- { 5- [ 4- ( 4-metil-piperazino-metil ) -benzoilamido] -2-metilfenil } -4- (3-piridil) -2~pirimidinamina} . De una manera muy preferible, se utiliza un COMPUESTO DE LA INVENCIÓN en la forma de su sal de monomesilato . En una modalidad preferida de la invención, la enfermedad que se va a tratar se selecciona a partir de rinitis alérgica, dermatitis alérgica, alergia a fármacos y alergia a alimentos . En otra modalidad preferida de la invención, la enfermedad que se va a tratar es esclerosis múltiple. En una modalidad adicional de la invención, la enfermedad que se va a tratar se selecciona a partir de angioedema, urticaria, síndrome de muerte repentina de bebé, y aspergilosis broncopulmonar . Además, los COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN se pueden utilizar para el tratamiento de mastocitosis sistémica, en especial mastocitoma. Esta última enfermedad es una enfermedad maligna con metástasis extensa, en particular en perros. Por consiguiente, los COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN son particularmente útiles para la preparación de un medicamento para el tratamiento de neoplasmas de mastocitos caninos . Los COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN se dan a conocer de una manera genérica y especifica en las Solicitudes de Patente Números EP 0,564,409 Al y WO 99/003854, en particular en las reivindicaciones del compuesto y en los productos finales de los ejemplos de trabajo, incorporándose el asunto objeto de los productos finales, las preparaciones farmacéuticas, y las reivindicaciones a la presente solicitud como referencia a estas publicaciones. De la misma manera, están comprendidos los estereoisómeros correspondientes, asi como los polimorfos correspondientes, por ejemplo, modificaciones de cristal, que se dan a conocer en las mismas . En la Patente Europea Número EP 0,564,409 Al, los COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN se describen como útiles para la terapia de cáncer, trombosis, psoriasis, fibrosis, dermatoesclerosis, y ateroesclerosis . De conformidad con la presente invención, ahora se ha encontrado que los COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN de una manera sorprendente tienen un efecto benéfico sobre rinitis alérgica, dermatitis alérgica, alergia a fármacos o alergia a alimentos, angioedema , urticaria, síndrome de muerte repentina de bebés, aspergilosis broncopulmonar, esclerosis múltiple, y más aún, mastocitosis , en especial neoplasmas de mastocitos caninos. De acuerdo con los descubrimientos particulares de la invención, la presente invención también proporciona un método de tratamiento de animales de sangre caliente, incluyendo seres humanos, en donde se administra una dosis terapéuticamente efectiva de un COMPUESTO DE LA INVENCIÓN a este animal de sangre caliente, de preferencia un ser humano o un perro, muy preferiblemente un ser humano, que sufra de una de las enfermedades mencionadas en la presente. La invención también se refiere a un método para administrar a un perro sujeto que tenga neoplasmas de mastocitos caninos, un COMPUESTO DE LA INVENCIÓN o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, el cual comprende administrar una cantidad farmacéuticamente efectiva de un COMPUESTO DE LA INVENCIÓN o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo al perro una vez al dia durante de preferencia un periodo que exceda a un mes, dos meses, o inclusive tres meses. La invención se refiere en especial a este método en donde se administra una dosis diaria de aproximadamente 20 a 200 miligramos, de preferencia de 80 a 160 miligramos, en especial 125 miligramos de la SAL I. De preferencia, la invención se refiere al uso o método en donde se administra una dosis diaria de una sal de monometansulfonato de 4- (4-metilpiperazin-l-ilmetil) -N- [4-metil-3- (4-piridin3-il) irimidin-2-ilamino) fenil] -benzamida de la fórmula I a un perro, y esta dosis diaria comprende una cantidad de la sal de monometalsulfonato suficiente para mantener niveles en plasma de cuando menos 0.2 µ?. El término "método de tratamiento", como se utiliza en la presente, se refiere en especial también a un método de prevención de las enfermedades mencionadas en la presente, es decir, la administración profiláctica de una composición farmacéutica que comprenda un COMPUESTO DE LA INVENCIÓN a pacientes sanos, para prevenir el brote de las enfermedades mencionadas en la presente. La presente invención también se refiere a una composición farmacéutica para el tratamiento de cuando menos una de las enfermedades mencionadas en la presente, la cual comprende un COMPUESTO DE LA INVENCIÓN. Las composiciones farmacéuticas para el tratamiento de cuando menos una de las enfermedades mencionadas en la presente comprenden una cantidad efectiva de los COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN, junto con vehículos farmacéuticamente aceptables que sean adecuados para administración tópica, enteral, por ejemplo oral o rectal, o parenteral, y pueden ser inorgánicos u orgánicos, sólidos o líquidos. Para administración oral, se utilizan en especial tabletas o cápsulas de gelatina que comprendan a los COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN junto con diluyentes y/o lubricantes, por ejemplo ácido silícico, talco, ácido esteárico o sales del mismo, y/o polietilenglicol, pero también lociones, geles, o cremas. Las tabletas pueden comprender aglutinantes, almidones, gelatina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, y/o polivinilpirrolidona, desintegradores, y/o mezclas efervescentes, o adsorbentes, colorantes, saborizantes , y edulcorantes. Los COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN también se pueden utilizar en la forma de composiciones parenteralmente administrables , o en la forma de soluciones para infusión. La administración tópica es, por ejemplo, a la piel. Una forma adicional de administración tópica es al ojo, por ejemplo para el tratamiento de conjuntivitis bernal . Las composiciones farmacéuticas se pueden esterilizar y/o pueden comprender excipientes, por ejemplo conservadores, estabilizantes, agentes humectantes y/o emulsionantes, solubilizantes , sales para regular la presión osmótica y/o reguladores del pH. Las presentes composiciones farmacéuticas se preparan de una manera conocida por si misma, por ejemplo por medio de procesos convencionales de mezcla, granulación, confitería, disolución, o liofilización, y comprenden de aproximadamente el 1 por ciento al 100 por ciento, en especial de aproximadamente el 1 por ciento a aproximadamente el 20 por ciento de ingredientes activos . Los COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN, por ejemplo, se pueden formular como se da a conocer en los Ejemplos 4 y 6 de la Publicación Internacional Número WO 99/03854. El intervalo de dosificación de los COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN que se va a emplear, depende de factores conocidos por la persona experta en este campo, incluyendo la especie de animal de sangre caliente, el peso corporal y la edad, el modo de administración, la sustancia particular que se vaya a emplear, y la enfermedad que se vaya a tratar. A menos que se informe de otra manera en la presente, los COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN de preferencia se administran de una a cuatro veces al día, o inmediatamente cuando se observa una reacción alérgica. Además, los COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN, en especial la N-{5- [4- (4-metil-piperazino-metil) -benzoilamino] -2-metil-fenil } -4- (3-piridil ) -3-pirimidinamina (STI571B) , de preferencia se administran a un animal de sangre caliente, en especial un ser humano, en una dosificación en el intervalo de aproximadamente 10 a 750 miligramos/dia, de preferencia de 300 a 600 miligramos/dia, y más preferiblemente de 30 a 300 miligramos/dia. En los perros, dependiendo de la especie, de la edad, de la condición individual, del modo de administración, y del cuadro clínico en cuestión, se administran dosis efectivas, por ejemplo dosis diarias de aproximadamente 20 a 200 miligramos, de preferencia de 80 a 160 miligramos, en especial 125 miligramos a animales de sangre caliente de un peso corporal de aproximadamente 5 kilogramos . Para los perros adultos de aproximadamente 5 kilogramos con neoplasmas de mastocitos caninos malignos no reseccionables , y/o metastásicos , se puede recomendar una dosis inicial de 125 miligramos al día. Para perros con una respuesta inadecuada después de una evaluación de la respuesta a la terapia con 125 miligramos al dia, se puede considerar escalar la dosis, y los perros se pueden tratar siempre que se beneficien del tratamiento y en ausencia de toxicidades limitantes . Las dosificaciones se pueden titular de tal manera que se alcancen niveles en plasma de cuando menos 0.2 µ? (micromolar) , de preferencia de cuando menos 0.5 µ?, más preferiblemente de cuando menos 1 µ?. Se prefiere en particular alcanzar y/o mantener un nivel en plasma de aproximadamente 1 µ?.

Claims

REIVINDICACIONES

1. El uso de un derivado de N-fenil-2-pirimidinamina de la fórmula I : en donde : Ri es 4-pirazinilo; 1-metil-lH-pirrolilo; fenilo sustituido por amino ó aminoalquilo inferior, en donde el grupo amino en cada caso está libre, alquilado o acilado; 1H-indolilo ó lH-imidazolilo enlazado en un átomo de carbono del anillo de cinco miembros; o piridilo insustituido o sustituido por alquilo inferior enlazado en un átomo de carbono del anillo, e insustituido o sustituido en el átomo de nitrógeno por oxigeno; R2 y R3 son cada uno independientemente del otro, hidrógeno o alquilo inferior; uno o dos de los radicales R , R5, R6, R7, y Re son cada uno nitro, alcoxilo inferior sustituido por flúor, o un radica de la fórmula II :

-N (R9) -C <=X) - (Y) n-R10 (II) , en donde : Rg es hidrógeno o alquilo inferior, X es oxo, tio, imino, N-alquilo inferior-imino, hidroxi-imino, u O-alquilo inferior-hidroxi-imino , Y es oxigeno o el grupo NH, n es 0 ó 1, y Rio es un radical alifático que tiene cuando menos 5 átomos de carbono, o un radical aromático, aromático-alifático, cicloalifático, cicloalifático-alifático, heterociclico, o eterociclico-alif tico, y los radicales restantes R , R5, R6, R7, y Rs son cada uno independientemente de los otros, hidrógeno, alquilo inferior que está insustituido o sustituido por amino libre o alquilado, piperazinilo, piperidinilo, pirrolidinilo, o por morfolinilo, o alcanoilo inferior, trifluorometilo, hidroxilo libre, eterificado o esterificado, amino libre, alquilado o acilado, o carboxilo libre o esterificado, o una sal de este compuesto que tenga cuando menos un grupo formador de sal, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de rinitis alérgica, dermatitis alérgica, alergia a fármacos o alergia a alimentos, angioedema, urticaria, síndrome de muerte repentina de bebé, aspergilosis broncopulmonar, mastocitosis, o esclerosis múltiple. 2. El uso de un compuesto de la fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, en donde: uno o dos de los radicales R4, R5, R6, R y Re son cada uno nitro o un radical de la fórmula II, en donde R9 es hidrógeno o alquilo inferior, X es oxo, tio, imino, N-alquilo inferior-imino, hidroxi-imino, u O-alquilo inferior-hidroxi-imino, Y es oxígeno o el grupo NH, n es 0 ó 1, y R10 es un radical alifático que tiene cuando menos 5 átomos de carbono, o un radical aromático, aromático-alifático, cicloalifático, cicloalifático-alifático, heterociclico, o heterociclico-alifático, y los radicales restantes R4, R5, R6, R7 y Re son cada uno independientemente de los otros, hidrógeno, alquilo inferior que está insustituido o sustituido por amino libre o alquilado, piperazinilo, piperidinilo, pirrolidinilo, o por morfolinilo, o alcanoilo inferior, trifluorometilo, hidroxilo libre, eterificado o esterificado, amino libre, alquilado o acilado, o carboxilo libre o esterificado, y los sustituyentes restantes son como se definen en la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de este compuesto, que tenga cuando menos un grupo formador de sal. 3. El uso de un compuesto de la fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, en donde:

Ri es piridilo enlazado en un átomo de carbono, R2, R3, R5, R6 y Rs son cada uno hidrógeno, R es alquilo inferior, R7 es un radical de la fórmula II, en donde Rg es hidrógeno, X es oxo, n es 0, y Rio es 4-metil-piperazinil-metilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

4. El uso de un compuesto de la fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, cuyo compuesto es N-{5-[4- ( -metil-piperazino-metil) -benzoilamido] -2-metilfenil } -4- (3-piridil] -2-pirimidinamina, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

5. El uso de un compuesto de la fórmula I de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el compuesto se utiliza en la forma de su sal de monomesilato .

6. El uso de un compuesto de la fórmula I de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de neoplasmas de mastocitos caninos.

7. Un método de tratamiento de un animal de sangre caliente que tenga rinitis alérgica, dermatitis alérgica, alergia a fármacos o alergia a alimentos, angioedema, urticaria, síndrome de muerte repentina de bebés, aspergilosis broncopulmonar, mastocitosis, o esclerosis múltiple, el cual comprende administrar al animal un compuesto de la fórmula I como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en una cantidad que sea terapéuticamente efectiva contra cuando menos una de las enfermedades mencionadas anteriormente, en donde el compuesto de la fórmula I también puede estar presente en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable.

8. Un método para de tratamiento de perros que sufran de neoplasmas de mastocitos caninos, el cual comprende administrar a este perro que necesite dicho tratamiento, una dosis efectiva contra neoplasmas de mastocitos caninos, de un compuesto de la fórmula I como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

9. El uso o método de acuerdo con las reivindicaciones 8 ó 6, en donde se administra una dosis diaria de 20 a 200 miligramos de 4- ( 4-metilpiperazin-l-ilmetil) -N- [4-metil-3- (4-piridin-3-il) irimidin-2-ilamino) fenil] -benzamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, a un perro adulto.

10. El uso o método de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 7, en donde se administra una dosis diaria de 30 a 400 miligramos de 4- ( 4-metilpiperazin-l-