MXPA02007383A - Una solucion concentrada no espumante de compuestos de amonio cuaternario y metodos para su uso. - Google Patents

Una solucion concentrada no espumante de compuestos de amonio cuaternario y metodos para su uso.

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Abstract

Una solucion concentrada de un compuesto de amonio cuaternario (QAC) que comprende un QAC con una concentracion mayor que alrededor de 10% en peso y al menos un agente intensificador de la solubilidad, tal como un alcohol. Se usa una solucion diluida de QAC para ponerla en contacto con productos alimenticios con el fin de evitar el crecimiento de microbios sobre los productos alimenticios en un amplio espectro de contaminacion microbiana de los alimentos. Un metodo para poner en contacto los productos alimenticios con el QAC diluido con un tiempo de aplicacion de al menos 0,1 segundo. Los alimentos que pueden tratarse con este metodo son productos de carniceria, frutos del mar, frutas, productos lacteos, alimentos y bocadillos para mascotas, y cualquier otro alimento que pueda ser tratado y que aun retenga su apariencia y su textura. Uno de los metodos de tratamiento es rociar o nebulizar las soluciones de QAC sobre los productos alimenticios por un tiempo de aplicacion de al menos 0,1 segundo para evitar la contaminacion con microbios de la comida de amplio espectro.

Description

U A SOLUCIÓN CONCENTRADA NO ESPUMANTE DE COMPUESTOS i CUATERNARIO Y MÉTODOS PARA SU USO ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Esta solicitud es una continuación parcial de la solicitud de los Estados Unidos N9 08/840288, presentada el 14 de Abril de 1997, que es una continuación parcial de la solicitud de los Estados Unidos N2 08/631578 presentada el 12 de Abril de 1996, actualmente patente de los Estados Unidos N95855940. 1 Campo de la invención: La presente invención se refiere a una solución que comprende una cantidad concentrada de un compuesto antimicrobiano de amonio cuaternario (QAC). El concentrado QAC de la presente invención usa componentes GRAS (generafly recognized as safe = en general reconocidos como seguros) para obtener una verdadera solución, no una emulsión, de QAC. Esta solución concentrada de QAC se prepara en combinación con al menos un agente intensificador de la solubilidad y es útil para preparar soluciones para diluir hasta una concentración final útil con el fin de usarla en el procesamiento industrial de alimentos o en la preparación casera de alimentos, y en las superficies relacionadas con el procesamiento de alimentos. La presente invención se refiere en general a una solución que comprende una cantidad concentrada de un QAC antimicrobiano y al menos un agente íntensificador de la solubilidad adecuado para usar en métodos de prevención de crecimiento de un amplio rango de microorganismos, sobre los productos alimenticios y en los mismos, así también como en las superficies que entran en contacto con los mismos en el entorno doméstico o industrial. Más específicamente, la presente invención se refiere a una * -jJgÜfrl g^g invención que comprende una cantidad concentrada de y l menos un agente que incrementa la solubilidad, adecuado para usar en un método para prevenir el crecimiento de un amplio espectro de microorganismos en la superficie y dentro de los productos alimenticios, al poner en contacto dichos productos alimenticios» como productos de carnicería, por ejemplo aves, carne vacuna, cerdo, cordero, venado y otros productos de comestibles de carnicería; frutos de mar, por ejemplo pescados y mariscos; frutas; vegetales; productos lácteos; alimentos o bocadillos para mascotas, tales como aquellos preparados a partir de carne de animales, piel y partes que pueden incluir orejas de cerdo, cuero crudo y cecina; y otros productos alimenticios que se pueden tratar usando los métodos de tratamiento acuoso de la presente invención sin detrimento del aspecto, textura, y calidad del alimento. Más específicamente, la presente invención se refiere a una solución que comprende una cantidad concentrada de un QAC antimicrobiano adecuada para usar en un método para inhibir la adherencia, eliminar, y o prevenir el crecimiento de microorganismos en productos alimenticios. Particularmente, el uso de la solución que comprende una cantidad concentrada de un QAC antimicrobiano se relaciona con al efecto de los QAC sobre los microorganismos que pueden originar alimentos portadores de contaminación. Más particularmente, estos microorganismos comprenden microorganismos del género Staphylococcus, Streptococcus, Campylobacter, Arcobacter, Listeria, Aeromonas, Bacillus, Salmonella, Escherichia no productora de toxina, Escherichia patógena productora de toxina, como por ejemplo, la 0157: H7. Más particularmente, la presente invención se refiere a un método de tratamiento mejorado par aplicar QAC diluidos en productos alimenticios, mediante cualquier procedimiento, pero preferiblemente comprende rociar o nebulizar QAC diluidos sobre los productos alimenticios, para prevenir el desarrollo de un amplio espectro de microorganismos sobre los productos, donde el tiempo de aplicación del QAC puede ser tan breve como al menos una décima de segundo. Este tiempo de aplicación breve del ^^^ÉÜ QAC diluido es particularmente útil en un montaje comercial o industrial. 2 Descripotón de las técnicas previas: La prevención de enfermedades originadas por contaminación microbiana de alimentos es de especial interés para la industria de procesado de alimentos, para los entes reguladores y para los consumidores. Un informe reciente del Servicio de Seguridad e Inspección de Alimentos (Food Safety & Inspection Service) (FSIS) del Ministerio de Agricultura de los Estados Unidos (Registro Federal, 3 de Febrero de 1995), estima que en Estados Unidos se producen anualmente más de dos millones de casos de 10 enfermedades causadas por alimentos portadores de contaminación microbiana, con un costo aparejado mayor de un billón de dólares. La contaminación microbiana portada en alimentos ocurre antes de que estos últimos entren en los dispositivos de procesamiento, y por contaminación cruzada en el entorno del procesamiento. El FSIS ha estipulado requerimientos nuevos de Puntos de Análisis de Peligrosidad y Control (Hazard Analysis 15 and Critical Control Point) (HACCP), para reducir la ocurrencia y el número de patógenos portados en alimentos. Los procesadores de alimentos deben cumplir con estas regulaciones. Aunque los medios para alcanzar esta reducción microbiana corre p0c cuenta del criterio del procesador, la FSIS espera que los tratamientos antimicrobjanos sean parte importante de los planes HACCP. Los métodos del tratamiento de la presente 0 invención, que usan formulaciones acuosas preparadas a partir de QAC concentradas, son útiles para cumplir con los requerimientos HACCP. En los esfuerzos realizados para suministrar un producto completamente libre de contaminación microbiana, los procesadores de aves y carnes han encontrado dificultades importantes para eliminar los microorganismos fuertemente adheridos o 5 fijados a los tejidos de aves y carnes a ser utilizados como productos alimenticios. Si los microorganismos contaminantes no se fijan a la superficie del alimento, los mismos ' rísar^-t?- -f~-=. pueden ser lavados fácilmente. Sin embargo, los microorganismos que se har áiapeirWo fuertemente no se pueden eliminar por lavado y son bastante resistentes para eliminar mediante procedimientos químicos o físicos. Se han propuesto varios métodos químicos y físicos para reducir microorganismos en productos de carnicería, como por ejemplo el uso de cloro o dióxido de cloro, ozono, peróxido de hidrógeno, ácido láctico, carbonato de sodio, fosfato trisódico, y estimulación eléctrica. En general, estos métodos han demostrado una efectividad limitada para reducir la contaminación microbiana y pueden afectar el aspecto físico de los productos de carne. La contaminación por Salmonella typhimurium ha sido de especial interés en la industria de procesamiento de aves debido a que el organismo se encuentra a menudo en las aves vivas. Los procesadores de aves han tenido gran dificultad para eliminar microorganismos, como por ejemplo S. typhimurium, que se fijan o adhieren a los tejidos del ave. Para eliminar la contaminación por S typhimurium de las aves y para minimizar la contaminación entre aves, se ha sugerido una cantidad de abordajes químicos y físicos para usar en el procesamiento de aves. En el procesamiento de aves se ha utilizado fosfato trisódico (TSP) para eliminar S Typhimurium; sin embargo los estudios dan resultados conflictivos con relación a la eficacia del TSP contra la Salmonella. Como resultado de su solubilidad en agua, el TSP puede ser eliminado de las aves y en consecuencia no inhibe la adherencia de microorganismos. La Patente de los Estados Unidos N2 5366983 divulga un método para eliminar y prevenir la contaminación por Salmonella de productos de carne mediante tratamiento de una solución acuosa de QAC. Específicamente, los agentes tensioactivos catiónicos de amonio cuaternario, como por ejemplo alquilpiridinio, particularmente, cloruro de cetilpiridinio (CPC) y bromuro de cetil piridinio (CPB) fueron efectivos para eliminar S typhimurium de aves. Esta patente sin embargo, no divulga que tos QAC HtH'f Tf|i? n ^-^ •----* ¿ ^IJJJ»*» ** "?ßil t@r?9an un espectro antimicrobiano más grande, contra cualquier otro género de microorganismos contaminantes no Salmonella. Además, no sugiere que este método de tratamiento sea efectivo en otros productos alimenticios aparte de carnes. Además, no sugiere que se puedan utilizar tiempos de aplicación de QAC muy breves que continúen 5 suministrando un tratamiento antimicrobiano efectivo. Tampoco sugiere soluciones de QAC concentradas, como se divulga en la presente invención, que son particularmente útiles para preparar soluciones de QAC diluidas. Las sustancias alimenticias difieren química y físicamente en virtud de su contenido proteico, porosidad, lipofilicidad, pH, permeabilidad al agua, área de superficie, 0 y la red de carga eléctrica de la superficie. La porosidad del alimento podría ser importante en cuanto al secuestro de bacterias, en tanto que un integumento impermeable de la sustancia alimenticia podría reducir la contaminación bacteriana del alimento. Todas estas diferencias químicas y físicas entre los productos alimenticios hacen que sea difícil predecir que el éxito de un agente antimicrobiano sobre los productos de carne signifique 5 que sea exitoso sobre otros productos alimenticios, como por ejemplo frutas, vegetales, frutos de mar, productos lácteos y alimentos y bocadillos para mascotas. Por ejemplo, se sabe que el QAC y el CPC se unen a proteínas, sin embargo, si la eficacia antimicrobiana del CPC sobre los productos alimenticios se debe en gran parte a su unión a proteínas, no debe esperarse en consecuencia que el método 0 mencionado sea exitoso para tratar frutas y vegetales no proteicos. Cada vez más, las enfermedades ocasionadas por alimentos debido a otras bacterias patógenas y que causan deterioro, además de la Salmonella se han convertido en un problema para los procesadores de alimentos. En la tabla 1 se presenta una lista de estas bacterias y de los productos donde se han identificado las mismas. 5 Entre estos microorganismos contaminantes, enumerados en la tabla, la Escherichia coli 0157: H7 es de especial interés debido a su virulencia, a la gravedad de la enfermedad producida y la mortandad asociada. La Escherichia Coli 0157: H7 produce toxinas "tipo shiga" que ocasionan anomalías en la coagulación sanguínea, insuficiencia renal (síndrome urémico-hemolítico), y muerte. Aunque la recuperación de la enfermedad aguda sea total, 15-30% de las personas infectadas con síndrome urémico-hemolítico presentaran enfermedad renal crónica. Los riesgos asociados por contaminación con E coli 0157: H7 se deben a la resistencia a los antibióticos que presentan. En 1993 entre 8000-16000 de enfermedades ocasionadas por alimento se debían E coli 0157: H7, con un costo estimado comprendido entre 0,2 y 0,5 billones de dólares. Otro contaminante virulento de alimentos, Listeria monocytogenes se ha encontrado en carne, animales, y diversos productos lácteos, pudiendo causar sepsis, meningitis y abscesos diseminados. La Listeria monocytogenes es un microorganismo tolerante al frío, capaz de crecer bajo condiciones de refrigeración. En 1993 se produjeron alrededor de 1700 casos de enfermedades originadas por alimentosa debido a Latería .....^ (^f^t ul,^¡??AM^*M ^á?ií?. monocytogenes, con un costo estimativo comprendido entre 0,1 y 0,2 billones de-dólares* Otro microorganismo de interés en la industria de alimentos es la Aeromonas hydrophila que produce deterioro en la industria de procesamiento de alimentos y carnes, y disminuye el tiempo de vida en la estantería de estos productos. Actualmente, no hay compuestos bactericidas efectivos para prevenir y eliminar la contaminación de un amplio rango de productos alimenticios contra un amplio espectro de microorganismos gram positivos, gram negativos, aeróbicos, anaeróbicos facultativos y microorganismos microaerófilos. Los inventores de la presente invención han probado que los QAC son efectivos contra un amplio espectro de distintos microorganismos que producen enfermedades ocasionadas por alimentos, cuando los mismos se adhieren en un amplio rango de productos alimenticios. Esta sensibilidad de un amplio espectro de microorganismos patógenos no podría haber sido predecida. La sensibilidad de un microorganismo a un agente microbiano en particular, no puede predecir la sensibilidad de otros microorganismos con relación al mismo agente. Se cree que los antisépticos o germicidas tienen un espectro de actividad continuo, pero se deben considerar las susceptibilidades relativas a distintos microorganismos. Por ejemplo, el germicida Hexaclorofeno es básicamente efectivo contra microorganismos Gram positivos, y los antisépticos catiónicos no son efectivos contra microorganismos esporulados. Algunos microorganismos Gram negativos, como por ejemplo la Pseudomonas cepacia, han crecido en soluciones de la droga cloruro de benzalconio. Otras bacterias han sido capaces de crecer en etanol al 70% (Harvey, S C, Antimicrobia Druqs en Reminaton's Pharmaceutical Sciences. 18- Edición, Marck Publishing Co, páginas 1163 -1241 1990). Con relación al tratamiento de productos alimenticios, se ha informado que la Listeria es más resistente a la acción del TSP que la salmonella o la E coli (Somers, E B et al, Int J Food Microbiol. 22:269-276, 1994). Además (Breen et al, J Food Sciencßs» 60:1991-1996, 1995) demostraron que el TSP es mucho menos efecttvß é íiendo ©I crecimiento de Salmonella que desprendiendo este organismo. De manera semejante, el TSP redujo la cantidad de E coli 0157: H7 en carcasas de pollo, pero no es efectivo para inhibir la contaminación cruzada de este microorganismo a otros pollos. La presente invención muestra que los QAC son efectivos contra E coli 0157: H7 en líquidos, reduciendo la cantidad de esta bacteria cuando la misma está adherida a productos alimenticios, así también como inhibiendo la adherencia de esta bacteria a productos alimenticios. Se ha informado que E coli 0157: H7 exhibe resistencia hacia agente antimicrobianos de amplío espectro como por ejemplo la tetraciclina, estreptomicina, sulfisoxazol (Kim et al, J Infect Dis, 170: 1606-1609, 1994) y oxitetraciclina (Ciosek et al. Med Weter 40: 335-338, 1984), en tanto que estos mismos agentes son muy activos contra cepas comunes de E coli no productoras de toxina. Ciertamente, la efectividad de un agente antimicrobiano o biocida contra un microorganismo en particular no se puede predecir basándose en su efectividad respecto de un microorganismo diferente. Hay muchos factores a considerar, como por ejemplo las características microbianas, que juegan un papel en la efectividad de un agente antimicrobiano contra un microorganismo en particular. Estas características pueden incluir, sin limitaciones: (1) el grado de formación de glicocalix por parte de especies determinadas de microorganismos adheridos, (2) la presencia de una envoltura celular que contiene lipopolisacáridos y fosfolipidos en bacterias Gram negativas, (3) la presencia de una lipoproteína, como en la mayoría de las enterobacterias y Pseudomonas, y (4) la presencia de canales de comunicación, por ejemplo en E coli y Salmonella (Fulton et al, Structure in Medical Microbiology. 3a edición, páginas 37-54, 1991). La industria de procesamiento de alimentos, así también como la preparación casera de alimentos, en restaurantes o instituciones, precisa de productos y procesos más efectivos para la prevención del crecimiento de un amplio rango de ? < microorganismos contaminantes de muchos productos alimenticios y de las superficies que entran en contacto con los productos alimenticios y jugos o líquidos de los alimentos. Esto es especialmente válido para microorganismos que se adhieren a las superficies de los alimentos. Como resultado de una cantidad de enfermedades en aumento debido a microorganismos patógenos portados en alimentos, la industria de procesamiento de alimentos requiere, en la actualidad, de procesos más efectivos para la eliminación y prevención de un mayor espectro de microorganismos, particularmente para microorganismos patógenos, como por ejemplo Escherichia coli productora de toxina, es decir E coli 0157: H7, conocidos por provocar graves enfermedades humanas como resultado de la contaminación de alimentos. La presente invención provee una composición que comprende una solución concentrada de QAC y al menos un agente intensificador de la solubilidad, y métodos para prevenir el crecimiento de microorganismos sobre y dentro de los alimentos, así también como en líquidos y en superficies relacionadas con los productos alimenticios y su preparación. Este método de prevención es un objetivo importante para la prevención de contaminación cruzada proveniente de productos alimenticios infectados, para la eliminación de microorganismos adheridos en los productos alimenticios, para la inhibición de la adherencia de microorganismos en los productos alimenticios, y para la prevención del crecimiento de microorganismos que permanecen adheridos en los productos alimenticios. Además, el método de la presente invención se puede adaptar fácilmente para usar en una planta de procesamiento de alimentos. Además la presente invención, suministra composiciones que comprenden una solución que comprende una cantidad concentrada de QAC en combinación con al menos un agente intensificador de la solubilidad o solvente. Esta solución concentrada de QAC de la presente invención provee una solución reserva a partir de la cual se pueden preparar composiciones diluidas de QAC para el tratamiento de productos alimenticios y ir Art .i i.ti.tA.t i- -tarifa. -... -~i[fr ~ ^ tt?±^Jil?utitii?t . de superficies relacionadas con el procesamiento y preparación de alimentos, incluyendo los cuerpos de los animales a partir de los cuales se preparan los productos alimenticios. Por ejemplo, para aumentar la seguridad del procesamiento de la leche y de los productos lácteos, las ubres de las vacas lecheras se pueden tratar antes de su ordeñe con una solución diluida de la solución concentrada de QAC. Además, puede ser útil una solución diluida de QAC con los componentes descriptos en la presente invención, o en combinación con otros componentes reconocidos como efectivos para el lavado de manos y cuerpo de humanos y mascotas. Las soluciones concentradas de QAC son útiles para preparar soluciones de trabajo diluidas para ser usadas en el presente método. Las formulaciones de la presente invención contienen componentes intensificadores de la solubilidad, que permiten que se puedan preparar composiciones más concentradas de QAC La patente de los Estados Unidos N9 5405604 divulga un enjuague bucal concentrado, métodos de uso, y métodos para la fabricación del enjuague bucal. El enjuague bucal está compuesto por una composición concentrada bajo la forma de emulsiones aceite en agua, que consisten esencialmente de un QAC comprendido entre aproximadamente 0,05% y aproximadamente 10%; entre aproximadamente 30% y aproximadamente 85% de un solvente que actúa como transportador de aceite saborizante, donde el solvente es propilenglicol, polietilenglicol y mezclas de los mismos; entre aproximadamente 0,2% y aproximadamente 9,0% de un aceite saborizante; y agua.
La composición de la presente invención difiere de la composición del enjuague bucal al contener mas de 10% de QAC, al ser una verdadera solución homogénea en lugar de una emulsión, y al no contener aceites saborizantes. La patente WO 95/17159 divulga un enjuague bucal concentrado para el suministro de agentes no antimicrobianos catiónicos e insolubles en agua. Las composiciones orales específicas están en la forma de una emulsión de agua en aceite - j - -.-f--*., | ffffj f-iíiiÉffíiiHf- que comprenden de alrededor de 0.05% a alrededor de 10.0% de un cßfl felstó Si amonio cuaternario; de alrededor de 30% a alrededor de 85% de ?n agente antimicrobiano no catiónico insoluble en agua, un solvente que actúa como un portador para dar sabor al aceite y al agua. La patente de los Estados Unidos de América No. 5414124 divulga un método para elaborar una solución de compuesto de amonio cuaternario que comprende de alrededor de 50 a alrededor de 80% de un compuesto de amonio cuaternario y de alrededor de 20% a alrededor de 50% de un solvente, con el solvente siendo de alrededor de 25% a alrededor de 100% de alquilen glicol con el resto siendo agua. La patente WO 98/03066 divulga una composición antimicrobiana, métodos para su preparación y métodos para su uso. La composición está formada por un subcomponente a) un ácido monocarboxílico C?-C4 sustituido o no sustituido, en un 50-99% en peso, y un subcomponente b) un compuesto nitrogenado orgánico catiónico microbiocida o microbiostatico, en un 0,1-50% en peso aproximadamente. La composición de la presente invención difiere de la composición de la patente WO 98/03066, en que contiene un agente intensificador de la solubilidad, en tanto que la patente WO 98/03066 no lo contiene. La presente invención difiere de la patente WO 98/03066, en que no contiene un ácido orgánico, como por ejemplo un ácido monocarboxilico, y en que específicamente no contiene un ácido monocarboxilico C?-C4 que es el componente primario de la patente WO 98/03066. La divulgación de la patente WO 98/03066 refiere que se puede aumentar la eficacia de un ácido monocarboxilico C?-C4 no sustituido que contiene composiciones contra Salmonella, agregando un compuesto nitrogenado orgánico catiónico. Esta invención sostiene la teoría de que un compuesto nitrogenado catiónico microbicida es más apto en cuanto a su efecto, en microbios dañados por ácidos carboxílicos C?-C4. Además, las composiciones de la presente invención pueden contener un ácido orgánico adicional que se mezcle con el compuesto nitrogenado orgánico catiónico para formar un compuesto "ancat" o "catan", no presente en la compasió 'de la presente invención.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La solución concentrada QAC de la presente invención suministra una solución antimicrobiana concentrada que se puede diluir fácilmente para formar una solución que se pone en contacto con productos alimenticios y superficies relacionadas con productos alimenticios, incluyendo partes de animales vivos o muertos, en el caso de productos alimenticios obtenidos de animales. La solución concentrada de OAC de la presente invención comprende un QAC y al menos un agente intensificador de la solubilidad. Preferiblemente el QAC se encuentra en una concentración mayor de aproximadamente 10% en peso. La solución concentrada se diluye para obtener una cantidad diluida de QAC efectiva para inhibir el crecimiento, en una solución acuosa con el agente intensificador de la solubilidad diluido. Los QAC de la presente invención son efectivos para prevenir el crecimiento de un amplio espectro de microorganismos patógenos y causantes de deterioro. Los QAC, particularmente el cloruro de cetilpiridinio (CPC), son especialmente efectivos para prevenir el crecimiento de un amplio espectro de microorganismos que actúan sobre un amplio rango de productos alimenticios. La presente invención provee un método para prevenir el crecimiento de microorganismos en productos alimenticios, que comprende poner en contacto un producto alimenticio con una cantidad de QAC efectiva para prevenir el crecimiento de un amplio espectro de microorganismos en productos alimenticios, siendo el tiempo de aplicación del compuesto sobre el producto alimenticio de por lo menos una fracción de segundo. La prevención del crecimiento de microorganismos en productos alimenticios tiene como fin suministrar un producto alimenticio libre, o con una cantidad mínima de _?f___>_Jf__IL----M-.fc f ptt~ *- ---^«-Mti microorganismos viables que podrían provocar enfermedades en humanos o animales, o deterioro del producto alimenticio antes de su ingestión. La prevención del crecimiento de microorganismos en productos alimenticios incluye, pero no se limita a, los siguientes mecanismos: (1) eliminación de los microorganismos adheridos en los productos alimenticios, (2) inhibición de la adherencia de microorganismos en los productos alimenticios, (3) la muerte o inactivación de los microorganismos en los productos alimenticios; y (4) la muerte o inactivación de los microorganismos no adheridos al producto alimenticio, pero que se encuentran presentes en líquidos relacionados con tos productos alimenticios durante el procesamiento, como en el caso de los tanques de enfriamiento, o que están presentes en superficies relacionadas con la preparación de alimentos, líquidos que quedan en dichas superficies, como por ejemplo contratapas, tablas de corte y piletas, y equipos usados en la preparación de alimentos y en la higienización del alimento. Los microorganismos que se incluyen en el campo de la presente invención son aquellos microorganismos susceptibles a los QAC, más específicamente microorganismos del genero Staphilococcus, Streptococcus, Campylobacter, Arcobacter, Listeria, Aeromonas, Bacillus, Salmonella, Escherichia no productora de toxina, Escherichia patógena productora de toxina, y otros microorganismos capaces de originar alimentos portadores de contaminación bacteriana en alimentos para consumo humano o animal. Otros microorganismos considerados, que también son susceptibles a los QAC, son Aspergillus flavum y Penicillium chrysogenum, y parásitos como por ejemplo Entamoeba histolytica. La presente invención tiene una importante aplicación en la industria de procesamiento de alimentos, así también como en la preparación casera de alimentos, y en instituciones. Los QAC son de fácil obtención y el costo de llevar a cabo el método de la presente invención no es caro en comparación con los crecimientos antimicrobíanos existentes. A diferencia de los tratamientos existentes que usan por ejemplo TSP, el uso de los QAC no altera el aspecto, color, sabor o textura de los productos alimenticios. Para prevenir el crecimiento de un amplio espectro microbiano en productos alimenticios es efectivo un rango de concentraciones de QAC. Los QAC se ensayan para mutagenicidad mediante la prueba de Ames. El QAC preferido de la presente invención CPC, demostró ser no mutagénico mediante la prueba de Ames. Además el CPC ya esta aprobado para uso humano en preparaciones de ingestión oral como por ejemplo Cepacol17 en tabletas, que se ingieren oralmente en una cantidad de hasta 20 mg por día. La presente invención también tiene como objetivo mejorar un método para poner en contacto productos alimenticios con QAC, donde el tiempo de aplicación del QAC sobre los productos alimenticios es de por lo menos una fracción de segundo, y que puede ser de un rango comprendido entre aproximadamente 0,1 segundos y aproximadamente 5 segundos o por un periodo de tiempo que varía de aproximadamente 1 segundo a aproximadamente 5 segundos. También se puede usar un rango de aproximadamente 1 a 2 segundos. Es importante que el tiempo de aplicación del QAC sea suficiente para prevenir significativamente el crecimiento de microorganismos en los productos alimenticios. La presente invención también comprende un método mejorado para poner en contacto QAC con los productos alimenticios mediante rociado o nebulización del compuesto sobre los productos alimenticios. El método de rociado o nebulizado se puede realizar usando una solución QAC diluida en agua o usando la nueva formulación concentrada de QAC con al menos un agente intensificador de la solubilidad, o usando la formulación concentrada de QAC diluida en agua. El rociado o nebulizado directo del concentrado es posible si el porcentaje de QAC del concentrado es apto para uso en productos alimenticios.
La presente invención intenta abarcar cualquier método que ponga en contacto la solución de QAC con un producto alimenticio, mediante cualquier método directo, incluyendo rociar, nebulizar, sumergir y embeber. Pero la presente invención también comprende cualquier método para poner en contacto la solución de QAC con los alimentos mediante procedimientos indirectos, como por ejemplo la aplicación de la solución de QAC concentrada o diluida a los equipos para el procesamiento de alimentos, o a las superficies de preparación que están en contacto con los productos alimenticios durante el procesamiento, preparación, almacenado y/o envasado. Además, el método de la presente invención puede incluir opcionalmente un paso para determinar la presencia de microorganismos en los alimentos antes del tratamiento, previamente a poner en contacto el producto alimenticio con los QAC. Como paso de determinación se puede usar cualquier método convencional para determinar fácilmente la presencia de microorganismos, como por ejemplo PCR e inmunoanálisis. Además el método de la presente invención comprende opcionalmente un paso para determinar la presencia de QAC sobre la superficie de los productos alimenticios después de haber estado en contacto con los QAC. Esta determinación se realiza inmediatamente después del paso de la puesta en contacto o después de varios pasos de lavado. Por ejemplo, el QAC se extrae de los tejidos de los alimentos de una manera adecuada para un análisis por cromatografía líquida de alto desempeño (HPLC).
Este método comprende extracción con etanol en los tejidos de los alimentos seguido de extracción en fase sólida usando una columna de intercambio catiónico débil que separa selectivamente los QAC de otros compuestos de la matriz que de lo contrario interferirían en el análisis de HPLC. El ensayo HPLC para la cuantificación de residuos de QAC emplea una columna ciano de fase reversa y usa un QAC análogo como patrón interno.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 es un gráfico de barras que muestra la inhibición de la adherencia de E coli 0157: H7 de un corte de vacío vacuno después de tratamiento con CPC. La Figura 2 es un gráfico de barras que muestra la disminución de microorganismos viables en piel de bagre después de tratamiento con CPC al 5% en glicerina acuosa en medios no selectivos. La Figura 3 es un gráfico de barras que muestra la disminución en medios selectivos de S Typhimurium, de piel de bagre, después de tratamiento con CPC al 5% en glicerina acuosa. La Figura 4 es un gráfico de barras que muestra la disminución de S typhimurium viables en uvas negras después de tratamiento con CPC al 5% en glicerina acuosa. La Figura 5 es un gráfico de barras que muestra la disminución de S Typhimurium en brócoli después de tratamiento con CPC al 5% en glicerina acuosa.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se basa en la determinación de que los QAC son útiles para tratar un amplio rango de productos alimenticios con el fin de disminuir un amplio espectro de contaminación bacteriana portada en alimentos y en superficies relacionadas con el procesamiento y preparación de estos productos alimenticios. La presente invención también se basa en el hallazgo de que los QAC son efectivos para eliminar, matar inactivar e inhibir la adherencia en productos alimenticios de un amplio rango de microorganismos patógenos portados en alimentos. Estos microorganismos , r^ff^-^a^^^t,JJ^^j^^, tfa Staphylococcus, Streptococcus, Campylobacter, Arcobacter, Listeria, Aeromonas Escherichia no productora de toxina y las cepas virulentas de Escherichia productoras de toxina, como por ejemplo la E.coli 0157: H7; hongos, como por ejemplo Aspergillus flavos y Penicillium Chrysogenum; y parásitos como por ejemplo Entamoeba histolytica. Las composiciones de la presente invención comprenden una cantidad efectiva de QAC en una solución acuosa. Particularmente, la concentración saturada de la presente invención provee una solución antimicrobiana ideal para usar en aplicaciones industriales, donde se necesitan grandes cantidades de soluciones de QAC diluidas para el procesamiento de alimentos. La solución saturada de la presente invención contiene una cantidad mínima de componentes, componentes GRAS (generally recognized as safe = en general reconocidos como seguros) y agentes intensificadores de la solubilidad. Las soluciones concentradas QAC de la presente invención otorgan muchas ventajas en la preparación de soluciones diluidas de QAC. Grandes cantidades de QAC en polvo se solubilizan en un solvente acuoso que contiene al menos un agente intensificador de la solubilidad. Es difícil preparar soluciones concentradas de QAC en agua solamente» porque el QAC precipita de la solución. De hecho, es difícil solubilizar más de aproximadamente 5 a aproximadamente 10% de QAC, y bajo algunas condiciones más de 1 % de QAC, dependiendo de la temperatura de la solución, sin la ayuda de los agentes intensificadores de solubilidad. Sin embargo, los inventores de la presente invención han determinado que se pueden preparar soluciones concentradas de QAC si se preparan en combinación con al menos un agente intensificador de la solubilidad o solvente, como por ejemplo un alcohol o un poliglicol. Los QAC son agentes tensioactivos catiónicos conocidos, y como tales las preparaciones de soluciones acuosas de QAC tienen abundante espuma. Sin embargo, cuando la solución concentrada de QAC comprende un QAC con una concentración mayor de 10% o mayor de 15%, y se utiiza al ni r) rrt ??É *"^a-t"aifa¿'*itl^as--A-¿^ menos un agente intensificador de la solubilidad para preparar las soluciones diluidas de QAC, se diminuye en gran medida la abundante espuma que habitualmente se forma cuando se preparan soluciones acuosas de QAC. En la preparación del concentrado se forma un mínimo de espuma, y una vez preparado el concentrado no presenta espuma. Además, el concentrado se diluye con un mínimo de agitación y, por lo tanto, con un mínimo de formación de espuma. Si el QAC concentrado se expone a bajas temperaturas, la solución concentrada de QAC resiste la precipitación. Si se congela, la solución concentrada de QAC con al menos un agente intensificador de la solubilidad, la misma resulta en una solución al ser descongelada. Si después del transporte o almacenado a temperatura ambiente, o del congelamiento, persiste un precipitado de QAC, entonces se eleva la temperatura de la solución hasta que desaparece el precipitado. Si fuera necesario se pueden calentar grandes cantidades de concentrado de QAC en contenedores grandes o tambores sobre un calentador de tambores. Además, comparadas con las soluciones acuosas diluidas de QAC, las soluciones concentradas de QAC, junto con las concentraciones altas de al menos un agente intensificador de la solubilidad como por ejemplo solventes orgánicos miscibles en agua apropiados, presentan un riesgo mínimo de deterioro o de tiempo limitado en estantería. Además, las soluciones concentradas de QAC aumentan la seguridad del usuario al eliminar la inhalación de polvo de QAC, que constituye un problema durante el manipuleo de polvo de QAC, particularmente cuando se manipulea en grandes cantidades, ya que puede producir irritación de pulmones, ojos, garganta, nasal o cutánea. La solución concentrada de QAC disminuye el volumen y masa de la solución a ser transportada y almacenada durante las aplicaciones industriales de soluciones de QAC. Y, de manera muy importante, cuando la solución concentrada de QAC se diluye en agua para prfarar soluciones diluidas de QAC para ser usadas en productos alimenticios, las soluciones concentradas diluidas exhiben una muy buena eficacia antimicrobiana.
La presente invención esta particularmente destinada a una solución concentrada de QAC que comprende un amonio cuaternario en una concentración mayor de aproximadamente 10% en peso, y al menos un agente intensificador de la solubilidad. El agente intensificador de la solubilidad es cualquier solvente orgánico miscible en agua que intensifique la solubilidad del polvo de QAC en una solución acuosa, de manera tal que forme una solución para concentraciones mayores de 10% en peso. Una solución al 10% en peso se prepara pesando 10 gramos de QAC y disolviéndolo en 90 gramos de un líquido que comprende al menos un agente intensificador de la solubilidad y agua, si la misma fuera necesaria, para llevar el peso a 90 gramos de líquido. La solución concentrada de QAC de la presente invención comprende QAC en solución a concentraciones mayores de aproximadamente 10% en peso y preferiblemente a concentraciones de aproximadamente 15% en peso. La solución concentrada de QAC comprende QAC en solución a concentraciones comprendidas entre más de aproximadamente 10% o más de aproximadamente 15% en peso, y aproximadamente 60% en peso. Aunque se puede usar una concentración de QAC de más de aproximadamente 60% en peso en la solución concentrada de QAC, el límite superior útil está determinado por la interacción entre el % (o peso) de QAC y los agentes intensificadores de la solubilidad usados para preparar la solución concentrada. Los agentes intensificadores de la solubilidad específicos o combinaciones de los mismos pueden dar como resultado formulaciones concentradas de QAC mayores de 60%. Es importante disolver y solubilizar todo el polvo del QAC antes de preparar la formulación diluida para tratar los productos alimenticios. Preferiblemente, el QAC se encuentra en una concentración comprendida entre más de aproximadamente 10%, o más de aproximadamente 15%, y, aproximadamente 15% en peso, y aproximadamente 50% en peso, y más preferiblemente en una concentración comprendida entre aproximadamente 10% o aproximadamente 15% en peso, y, aproximadamente 40% en peso. Pero también f t 4ttt ^ ^-*^^"^"*^"-^ «*-?**.***~^~*S~\ fif - 1 iiiii ii É iiii^ JÉÍM es útil para la presente solución concentrada, la concentración de QAC comprendida entre aproximadamente 10% y aproximadamente 30% en peso o entre aproximadamente 15% y aproximadamente 25% en peso, y dentro de este rango la concentración de aproximadamente 20% en peso. Las concentraciones de QAC de la presente invención se describen, ya sea en concentraciones expresadas en partes por millón (ppm) o como % en peso, donde 100000 ppm es igual a 10% en peso. Los ejemplos utilizan CPC y usan tanto ppm como % para consignar la concentración. Para alcanzar el peso faltante de la solución y llegar al 100% en peso, se agrega el agente intensificador de la solubilidad o una combinación de estos agentes, y, si fuera necesario, agua. En la presente invención se considera agente intensificador de la solubilidad a cualquier agente intensificador de la solubilidad que solubilice los QAC a concentraciones mayores de aproximadamente 10% en peso; pero los alcoholes son los agentes intensificadores de la solubilidad preferidos. Además, son agentes intensificadores de la solubilidad útiles los poli glicoles, como por ejemplo polietilenglicol. La presente invención contempla usar uno o más de estos agentes intensíficadores de la solubilidad. Más preferiblemente, el alcohol se elige del grupo que comprende, alcohol monohídrico, alcohol dihídrico, alcohol trihídrico, un polietilen glicol y una combinación de los mismos. Cualquiera de estos tipos de alcoholes se pueden utilizar solos o en combinación con uno o más de los otros tipos de alcoholes, para obtener el % en peso deseado del agente intensificador de la solubilidad. Si se utiliza un alcohol monohídrico, entonces se prefiere que este tipo de alcohol sea preferiblemente un alcohol alifático, más preferiblemente alcohol etílico. Si se utiliza un alcohol dihídrico, entonces se prefiere un glicol o un derivado del mismo. De los glicoles, el más preferido es el propílenglicol, que se puede obtener fácilmente a través de una cantidad de distribuidores. El propilenglicol otorga ventajas sobre otros alcoholes como agente intensificador de la solubilidad " concentraciones altas de QAC, como por ejemplo CPC. Los alcoholes trihídricos, como por ejemplo glicerol o derivados del mismo también son útiles como agentes intensificadores de la solubilidad en las presentes soluciones concentradas de CPC. La elección del alcohol depende del producto alimenticio final con el cual se ponga en contacto, y se elige para que sea compatible con los pasos del tratamiento, previos o posteriores al contacto del QAC con el producto alimenticio. Si se usa un poliglicol como agente intensificador de la solubilidad, se prefiere el polietilenglicol, y particularmente las especies con menor peso molecular, con un peso molecular promedio menor o igual a 600, que son bien conocidas y tiene propiedades similares al propilenglicol. Si se usa alcohol etílico como agente intensificador de la solubilidad, el mismo se encuentra en concentraciones de hasta aproximadamente 40% en peso. En la presente invención, los rangos de alcohol etílico están entre aproximadamente 0,5% en peso y aproximadamente 40% en peso, entre aproximadamente 10% en peso y aproximadamente 40% en peso, entre aproximadamente 15% en peso y aproximadamente 30% en peso, y dentro de este rango es útil en la presente invención, la concentración de aproximadamente 20% en peso. Las soluciones concentradas de QAC contienen al menos un agente intensificador de la solubilidad, como por ejemplo un alcohol de hasta una concentración de aproximadamente 70% en peso. Más preferiblemente, el alcohol se encuentra en una concentración de hasta aproximadamente 60% en peso y puede estar en el rango comprendido entre aproximadamente 10% en peso y aproximadamente 60% en peso. La concentración del agente intensificador de la solubilidad varía dependiendo del% en peso del QAC que se debe disolver en solución, así también como del uso en particular destinado para la solución concentrada de QAC y de las diluciones del mismo. Preferiblemente la solución concentrada de QAC comprende una concentración de QAC de aproximadamente 40% en peso y al menos un alcohol en una concentración comprendida entre aproximadamente 50% en peso y aproximadamente 60% en peso, con agua para alcanzar el % en peso restante. El alcohol preferido para esta solución es propilenglicol. Más preferiblemente la solución concentrada de QAC comprende un QAC en concentraciones de aproximadamente 40% en peso, y al menos un alcohol a una concentración comprendida entre aproximadamente 55% en peso y aproximadamente 60% en peso, y agua presente en aproximadamente 5% en peso. La solución de QAC concentrada más preferida comprende QAC en una concentración de aproximadamente 40% en peso, un alcohol en una concentración de aproximadamente 57% en peso y agua en aproximadamente 3% en peso. Otra vez, el alcohol preferido en esta solución es propilenglicol. Sin embargo, también es útil una solución concentrada de QAC que comprenda QAC a una concentración de aproximadamente 40% en peso y al menos un alcohol a una concentración de hasta aproximadamente 50% en peso, y preferiblemente aproximadamente 50% en peso. En esta solución acuosa concentrada, el agente intensificador de la solubilidad puede ser una combinación de alcoholes, como por ejemplo, alcohol etílico y propilenglicol. Pero el glicerol también es útil como agente intensificador de la solubilidad, solo o en combinación con otros alcoholes o poliglicoles. Para este propósito, el glicerol es útil a una concentración de hasta, e incluyendo, aproximadamente 20% en peso, y también es útil en concentraciones comprendidas entre aproximadamente 0,5% y aproximadamente 10% en peso y dentro de este rango, a una concentración de aproximadamente 1 %. El glicerol es útil en métodos donde el propilenglicol no es el alcohol de elección para solubilizar el QAC. Otra solución concentrada de QAC útil, comprende un QAC a una concentración de aproximadamente 20% en peso y al menos un alcohol a una concentración de aproximadamente 50% en peso, como por ejemplo una combinación de alcohol etílico y propilenglícol, y preferiblemente una combinación donde cada alcohol se encuentre en aproximadamente 25% en peso. El QAC útil de la presente solución concentrada de QAC se elige' delli íj ufcpb que comprende alquilpiridinio, tetra-alquilamonio, y sales alquil-alicíclicas de amonio. El alquilpiridinio se representa mediante formula estructural (I): donde n es 9-21 ; y X es un halógeno. El tetra-alquínamonium se representa mediante la formula estructural (II): donde n es 9-21 ; R se elige del grupo que comprende CH3 y C2H5 ; y X es un halógeno. Las sales de amonio alquil-alicíclicas se representan mediante la formula estructural (lll): donde n es 9-21 ; Z es 4-5; R se elige del grupo que comprende CH3 y C2H5 , y X es un halógeno. En relación con su efectividad para eliminar microorganismos adheridos en diferentes alimentos, así también como para inhibir la adherencia de los microorganismos, se evalúan una cantidad de QAC, todos ellos agentes tensioactivos catiónicos, es decir surfactantes. De los QAC estudiados el más efectivo es el clomro de cetilpiridinio qve se utiliza en los ejemplos estipulados a continuación, pero sin que esto restrinja el uso de los QAC al CPC, dentro de los alcances de la presente invención, ya que otros miepibr s de QAC también tienen propiedades semejantes contra microorganismos patógenos portados en alimentos. Los QAC que tienen entre 12 y 16 átomos de carbono en el sector de la cadena larga, tienen máxima actividad antimicrobiana. El QAC preferido, que es el CPC, tiene 16 átomos de carbono en el sector de la cadena larga. La presente invención comprende además; la dilución de la solución concentrada de QAC, ¡ncluyendo al menos un agente intensificador de la solubilidad, y agua si se requiere para obtener el% en peso de CPC; y la puesta en contacto de esta solución diluida de QAC con un producto alimenticio para prevenir el crecimiento microbiano o la adherencia microbiana en los productos alimenticios. La solución diluida de QAC comprende QAC en una concentración de hasta, e incluyendo, aproximadamente 1% de QAC en peso. El Ministerio de Agricultura de los Estados Unidos considera % en peso como la expresión de concentración de QAC para tratar productos alimenticios, aceptable en uso. La cantidad de QAC que permanece en un producto alimenticio en particular, varía de acuerdo a los diferentes tipos de alimentos tratados y al método de aplicación. La solución concentrada de QAC descripta en la presente invención se diluye con agua para obtener una solución diluida de QAC comprendida entre aproximadamente 0,1% hasta e incluyendo, aproximadamente 1%, pero se puede aumentar o disminuir dependiendo del producto alimenticio tratado y del método usado. La solución concentrada de QAC, que se preparó basándose en una relación peso en peso, según se describió anteriormente, se diluye para obtener la concentración de QAC de tratamiento deseada mediante una dilución volumen en volumen. Por ejemplo, una solución concentrada de QAC al 40% se diluye a una QAC al 1%, diluyendo 2,5 ml del QAC concentrado con 97,5 ml de agua. En una planta de procesamiento de alimentos, se prefiere la dilución volumen en volumen debido a su facilidad de preparación. Sin embargo también se puede usar una dilución peso en peso para preparar soluciones diluidas de QAC, donde 2,5 gramos de una solución de QAC al 40% en peso se mezclan con 97,5 gramos de agua, para obtener una solución de QAC al 1%. La dilución de QAC de la solución concentrada también resulta en la dilución del agente intensificador de la solubilidad que se encuentra en la solución concentrada. La dilución de la solución concentrada de QAC es útil para contactar el producto alimenticio mediante rociado, nebulización, inmersión, o mediante cualquier otro método de contacto que sea adecuado para poner en contacto la dilución de la solución de QAC con el producto alimenticio, incluyendo contacto indirecto, como por ejemplo la puesta en contacto del equipo o las superficies de procesamiento o preparación de productos alimenticios que están en contacto con el alimento durante el procesamiento, preparación, almacenado y/o envasado. Cuanto más breve sea el tiempo de aplicación de la solución de QAC, tanto mejor, particularmente para los propósitos de procesamiento de alimentos industriales y comerciales. La presente invención se basa además en la determinación de que el tiempo de aplicación de los QAC en los productos alimenticios mediante procesos de rociado o nebulizado se puede reducir a un valor tan bajo como por lo menos aproximadamente 0,1 segundo, a la vez que continua siendo efectivo para inhibir significativamente la adherencia de microorganismos en alimentos portadores de microorganismos, lo que es una mejora significativa y una ventaja comercial en cuanto al uso comercial de este proceso. Los procesos de aplicación por nebulización o rociado permiten que el tiempo de aplicación de la solución diluida de QAC sobre el producto alimenticio sea de un tiempo tan breve como de hasta 20 segundos, pero más preferente de aproximadamente 10 segundos o menos y más preferiblemente de aproximadamente 5 segundos o menos. El tiempo de aplicación más preferido de QAC sobre el producto a^-.---*---,-»^ ¡Hi - |l<a?| alimenticio está comprendido entré "aproximadamente 0,1 y aproximadamente 5 segundos y dentro de este rango también es útil entre aproximadamente 0,1 y aproximadamente 2 segundos, con un rango preferido entre aproximadamente 0,5 segundos y aproximadamente 2 segundos. Debe entenderse que la presente invención contempla tiempos de aplicación de la solución de QAC diluida tan breves como sea posible físicamente, en tanto tengan como resultado la inhibición de microorganismos en los productos alimenticios o en los líquidos y superficies con los cuales entra en contacto el producto alimenticio. Además, en la presente invención se contemplan distintos intervalos de tiempo menores de 20 segundos. En el presente método es útil cualquier tipo de método de contacto del QAC con el producto alimenticio, en tanto permita tiempos de aplicación breves. En la presente invención es útil un método que utiliza una cabina para el rociado o nebulizado del producto alimenticio. La maquinaria usada en dichas cabinas en las etapas de procesamiento de una planta procesadora de alimentos, se puede adaptar para reducir el tiempo de aplicación a un mínimo, a la vez que se consigue un efecto antimicrobians eficaz sobre los alimentos. Todos estos tiempos de aplicación breve, es decir menores de 20 segundos y tan bajos como 0,1 segundo, disminuyen significativamente los microorganismos viables que son portados en alimentos, en estos productos alimenticios. Además, es necesaria una cantidad muy pequeña de solución diluida de QAC para el tratamiento de rociado o nebulizado; por ejemplo, para un tratamiento eficaz, es útil una cantidad tan baja como aproximadamente 1 onza (equivalente a 28.34 gramos) de solución de QAC diluida, por libra de producto alimenticio. En una planta procesadora de aves, el presente método de tiempo de aplicación breve de QAC, es útil para tratar pollos posteriormente a su enfriamiento después de haber sido sumergidos en un baño de enfriamiento de agua fría. Los pollos se retiran del baño de enfriamiento y se tratan con la solución diluida de QAC de la presente e.?. -MÍjL. .a** * . invención durante un tiempo de aplicación menor de aproximadamente 20 segundo®, preferiblemente menor de aproximadamente 10 segundos, más preferiblemente menor de aproximadamente 5 segundos, l$ preferiblemente menor de aproximadamente 2 segundo, más preferiblemente aún menor de aproximadamente 0,1 segundo. A continuación los pollos tratados, son envasados sin posterior lavado ni enjuague. Sin embargo, el método opcional puede incluir, si se considera necesario, al menos un paso de lavado de los pollos antes de su envasado. El paso opcional de lavado puede incluir rociar o nebulizar el producto alimenticio con agua o sumergir el producto alimenticio en un recipiente o tanque de agua. Los aspectos descriptos en la presente invención se describen en detalle en los ejemplos a continuación con referencia a las figuras 1-5. Los ejemplos que se muestran a continuación en sus realizaciones preferidas, sirven para ilustrar aún más la presente invención, sin que esto implique límites a la presente invención. Los ejemplos utilizan como productos alimenticios tratados por este método, aves de corral, carne vacuna, bagre, brócoli y uvas pero también se pueden tratar, dentro de los alcances de la presente invención, otros productos alimenticios que no sean afectados de manera adversa mediante el proceso de tratamiento.
EJEMPLOS Los microorganismos utilizados en los ejemplos siguientes son como siguen: Staphylococcus aureus ATCC 29213, Campylobacter jejuni ATCC 29428, Escherichia coli (cepa productora no tóxica) ATCC 25922; Escherichia coli O157:H7 (cepa productora no tóxica) ATCC 43895, Arcobacter butzleri ATCC 49616, Listeria monocytogenes ATCC 49594, Aeromonas hydrophila ATCC 49140, Bacillus cereus ATCC 49063, Salmonella typhimurium ATCC 14028 y NCTC 12023, y cultivos comercialmente de Aspergillus flavus y Penicillium chrysogenum.
Ejemplo 1 Actividad bactericida de compuestos de amonio cuaternario sobre cultivos en suspensión (no unidos a productos de carnicería) Concentración mínima inhibitoria (MIC) de compuestos de amonio cuaternario Se determinaron las concentraciones mínimas inhibitorias (MIC) para QAC en un cultivo Mueller Hinton (BBL Microbiology System) usando el método de macrodilución establecido por el Comité Nacional de Lineamientos para Laboratorios Clínicos de 1987. Los experimentos se realizaron mediante una incubación de 16 horas a 37SC para Staphylococcus aureus, Escherichia coli 0157: H7, Listeria monocytogenes y Salmonella typhimurium. Para Aeromonas hydrophila y Bacillus cereus, las incubaciones se llevaron a cabo a 30°C. Se determinaron las MIC a través de la menor dilución sin turbidez visible. La Tabla 2 muestra los datos del experimento anterior: TABLA 2 CONCENTRACIÓN MÍNIMA INHIBITORIA (MIC) ¿J?.- Concentración mínima bactericida (MBC) de compuestos de amonio cuaternario Se determinaron las concentraciones mínimas bactericidas (MBC) para QAC respecto de Campylobacter jejuni y Arcobacter butzieri en un cultivo de Mueller Hinton (BBL Microbiology System) usando el método de macrodilución establecido por el Comité Nacional de Lineamientos para Laboratorios Clínicos de 1987. Los experimentos se realizaron mediante una incubación microaerofílica a 37SC por 48 horas. Se plaqueó una alícuota de cada dilución en agar y se la incubó en condiciones microaerofílicas a 372C por 48 horas. Se determinaron las MBC a través de la menor dilución sin crecimiento. La Tabla 3 muestra los datos del experimento anterior: TABLA 3 CONCENTRACIÓN MÍNIMA BACTERICIDA (MBC) (-) Sin crecimiento (+) Crecimiento Las MBC se obtuvieron por medio del método de macrodilución de cultivo (Comité Nacional de Lineamientos para Laboratorios Clínicos).
Los datos de MIC y de MBC muestran que el CPC es efectivo contra un amplio rango de microorganismos.
Actividad de compuestos de amonio cuaternario en células planctónicas Se centrifugó un cultivo de 16 horas de E coli 0157: H7 sobre un cultivo de tripticasa de soja (15000 rpm, 10 minutos, 4°C). Después de la remoción del ísLu****^..... .- ?+tt ? ±¿*. * sobrenadante, se lavó el precipitado con 10 ml de buffer de fosfato de potasio 0,04 M (PPB, pH 7,0) y se lo suspendió en PPB hasta una suspensión final de 1 a 2 x 109 células/ml. Se centrifugaron alícuotas (1 ,0 ml) (14000 rpm, 3 minutos) y se retiraron los sobrenadantes. Cada precipitado se suspendió nuevamente en 1 ml de una solución acuosa de varias concentraciones (100 a 1000 µg/ml) de la composición de prueba (CPC) o en 1 ,0 ml de PPB, se lo agitó (30 segundos), se lo incubó por 1 minuto a 259C, y se lo centrifugó (14000 rpm, 3 minutos). Después de retirar el sobrenadante, cada precipitado se suspendió en 0,5 ml de PPB. Se contaron las células de cada muestra usando alícuotas duplicadas de 0,05 ml y técnicas comunes de dilución seriada en agar de tripticasa de soja, registrándose los datos como media de unidades formadoras de colonias (CFU)/ml. Los resultados del experimento anterior muestran que se logró una reducción completa de las E coli 0157: H7 viables en suspensión a todas las concentraciones evaluadas de CPC (100, 250, 500 y 1000µg/ml). Los resultados de este experimento son particularmente significativos para la prevención de la contaminación con E coli 0157: H7 en el procesamiento industrial de la came. Como se describió con anterioridad, la cepa de E coli que produce toxinas muestra resistencia a muchos agentes antimicrobianos de amplio espectro. Estos resultados proveen evidencia de que el tratamiento de productos de carnicería con QAC evitará que un trozo de carne contaminada contamine otros trozos no contaminados debido a que el QAC matará al organismo en el líquido que sea el agente de transferencia responsable de esta contaminación.
Ejemplo 2 Efectos de compuestos de amonio cuaternario sobre la reducción de las bacterias viables fijadas sobre piel de pollo Se separaron pieles de pollo (2,5 x 2,5 cm) del área de la pata, se las esterilizó mediante una dosis de 45 KGy de irradiación desde una fuente de electrones y se las colocó con la epidermis hacia arriba en cada cavidad de una placa de cultivo de tejidos de seis cavidades. Cada trozo de piel se inoculó con 5 ml de solución salina tamponada con fosfato 0,008 M (PBS, pH 7,2) que contenían 6 a 8 x 103 CFU/ml de bacterias, con la excepción del grupo control de base, que se trató solamente con 5 ml de PBS. Las placas se incubaron (30 minutos, 35eC) y se lavó cada trozo de piel (2X, 5ml de PBS) para retirar los microorganismos unidos débilmente (no fijados). Se trató cada piel inoculada con 5 ml de PBS que contenían CPC. Se usaron tres trozos de piel para cada concentración de CPC, incluyendo una en la cual las pieles se trataron solamente con 5 ml de PBS (concentración 0). Las placas se incubaron con agitación (100 rpm) por 30 minutos a 25eC. Después de la incubación, se lavó cada trozo de piel (5 ml de PBS), se lo colocó en una bolsa estéril de plástico que contenía 80 ml de solución salina o 1% de peptona, y se lo homogeneizó por 2 minutos usando una batidora de laboratorio (Stomacher» 400, Seward Medical, Londres, Inglaterra). Se plaquearon tres alícuotas del homogenato (1 ml) y se las incubó (372C, 18 a 24 horas). Se contaron las colonias de bacterias, se corrigió por dilución y se informó el resultado como CFU/piel. Estos estudios muestran la reducción en bacterias viables (Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus, Campylobacter jejuni, Escherichia coli (cepa no productora de toxinas) y Escherichia coli 0157: H7) después de un tratamiento con concentraciones de 50 a 1000 ppm de CPC. Se evaluaron concentraciones mayores, de hasta 8000 ppm de CPC, contra Escherichia coli 0157: H7 y se halló que reducían la cantidad de bacterias fijadas hasta menos del 0,1%. Estos estudios muestran una inhibición significativa del crecimiento de estas cinco bacterias sobre pieles de pollo.
Ejemplo 3 Efectos de los compuestos de amonio cuaternario sobre la inhibición de la unión de bacterias a pieles de pollo Se separaron pieles de pollo (2,5 x 2,5 cm) del área de la pata, se las esterilizó mediante una dosis de 45 KGy de irradiación desde una fuente de electrones y se las colocó con la epidermis hacia arriba en cada cavidad de una placa de cultivo de tejidos de seis cavidades. Cada trozo de piel se inoculó con 5 ml de solución salina tamponada con fosfato 0,008 M (PBS, pH 7,2) que contenían CPC. Se usaron tres trozos de piel para cada concentración de compuesto de prueba, incluyendo una en la cual las pieles se trataron solamente con 5 ml de PBS (concentración 0). Las placas se incubaron con agitación (100 rpm) por varios tiempos (1 minuto o 10 minutos). Se retiró la solución de incubación por aspiración y se lavaron las pieles (5 ml de PBS) para luego incubarlas 30 minutos a 25SC con 5 ml de PBS que contenían 6 a 8 x 103CFU/ml de bacterias. Después de la incubación, cada trozo de piel se lavó (2X, 5 ml de PBS) para retirar los microorganismos unidos débilmente (no fijados), se lo colocó en una bolsa estéril de plástico que contenía 80 ml de solución salina o 1 % de peptona, y se lo homogeneizó por 2 minutos usando una batidora de laboratorio (Stomacher» 400, Seward Medical, Londres, Inglaterra). Se plaquearon tres alícuotas del homogenato (1 ml) y se las incubó (372C, 18 a 24 horas). Se contaron las colonias de bacterias, se corrigió por dilución y se informó el resultado como CFU/piel. Estos estudios muestran la inhibición de la unión de bacterias (Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus, Campylobacter jejuni, Escherichia coli (cepa no productora de toxinas) y Escherichia coli 0157: H7) a pieles de pollo después de un tratamiento con concentraciones de 50 a 1000 ppm de CPC. Los datos en estos estudios iJ^ H, § y muestran que el tratamiento previo de las pieles de pollo con CPC inhibe significativamente la unión de estos microorganismos a las pieles de pollo. El tratamiento de una piel de pollo con CPC por solamente 1 minuto resulta en una inhibición significativa de la unión de S typhimurium a concentraciones de 500 ppm y 1000 ppm. Este menor tiempo de contacto del QAC con los productos de carnicería apoya el uso de menores tiempos de contacto que los que se habían informado previamente como efectivos. Generalmente, las inmersiones en tanques helados pueden prolongarse por hasta 60 minutos, pero los datos presentados en la presente documentación apoyan el hecho de que pueda usarse un menor tiempo de inmersión y aún obtener una reducción significativa en la cantidad de microorganismos viables. El paso de puesta en contacto con CPC de la presente invención puede llevarse a cabo por aproximadamente 20 segundos a alrededor de 60 minutos. La presente invención también describe tiempos de contacto útiles dentro de este rango de menos de 10 minutos, y en rangos de alrededor de 20 segundos a alrededor de 9 minutos, de alrededor de 20 segundos a alrededor de 5 minutos y de alrededor de 20 segundos a alrededor de 90 segundos.
Ejemplo 4 Efectos de compuestos de amonio cuaternario sobre la reducción de bacterias viables fijadas sobre tejido de carne vacuna Se prepararon cuadrados de tejido de came vacuna (2,5 x 2,5 cm) de aproximadamente 0,5 cm de grosor, se los esterilizó mediante una dosis de 45 KGy de irradiación desde una fuente de electrones y se los colocó en cada cavidad de una placa de cultivo de tejidos de seis cavidades. Cada trozo de tejido se inoculó con 5 ml de solución salina tamponada con fosfato 0,008 M (PBS, pH 7,2) que contenían 6 a 8 x 103 ^-M-..,^A-t^»i.*r ^ CFU/ml de bacterias, con la excepción del grupo control de base, que se trató solamente con 5 mi de PBS. Las placas se incubaron (30 minutos, 359C) y se lavó cada cuadrado (2X, 5ml de PBS) para retirar los microorganismos unidos débilmente. Se trataron los cuadros inoculados con 5 ml de PBS que contenían el CPC. Se usaron tres trozos de tejido para cada concentración de compuesto de prueba, incluyendo una en la cual los cuadrados se trataron solamente con 5 ml de PBS (concentración 0). Las placas se incubaron con agitación (100 rpm) por 30 minutos a 252C. Después de la incubación, se lavó cada trozo de piel (5 ml de PBS), se lo colocó en una bolsa estéril de plástico que contenía 50 ml de solución salina o 1% de peptona, y se lo homogeneizó por 2 minutos usando una batidora de laboratorio (Stomacher» 400, Seward Medical, Londres, Inglaterra). Se plaquearon tres alícuotas del homogenato (1 ml) y se las incubó (372C, 18 a 24 horas). Se contaron las colonias de bacterias, se corrigió por dilución y se informó el resultado como CFU/cuadrado Los resultados de este estudio muestran una reducción en las Escherichia coli 0157: H7 viables después de un tratamiento con concentraciones de 50 a 1000 ppm de CPC sobre tejido de carne vacuna, con una reducción de 62 a 64% en las bacterias fijadas a 500 y 1000 ppm de CPC.
Ejemplo 5 Efectos de compuestos de amonio cuaternario sobre la inhibición de la unión de bacterias a tejido de carne vacuna Se prepararon cuadrados de tejido de came vacuna (2,5 x 2,5 cm) de aproximadamente 0,5 cm de grosor, se los esterilizó mediante una dosis de 45 KGy de irradiación desde una fuente de electrones y se los colocó en cada cavidad de una placa de cultivo de tejidos de seis cavidades. Cada trozo de tejido se inoculó con 5 ml de >ifc.-.^.f.^ ^ ^»^ solución salina tamponada con fosfato 0,008 M (PBS, pH 7,2) que contenían OPC. Se usaron tres trozos de piel para cada concentración de compuesto de prueba, incluyendo una en la cual las pieles se trataron solamente con 5 ml de PBS (concentración 0). Las placas de cultivo se incubaron con agitación (100 rpm) por 10 minutos a 259C. Se retiró la solución de incubación por aspiración y se lavaron los cuadrados (5 ml de PBS) para luego incubarlos (30 minutos, 359C) con 5 ml de PBS que contenían 6 a 8 x 103CFU/ml de bacterias. Después de la incubación, cada trozo de tejido se lavó (2X, 5 ml de PBS) para retirar los microorganismos unidos débilmente (no fijados), se lo colocó en una bolsa estéril de plástico que contenía 80 ml de solución salina o 1% de peptona, y Se lo homogeneizó por 2 minutos usando una batidora de laboratorio (Stomacher» 400, Seward Medical, Londres, Inglaterra). Se plaquearon tres alícuotas del homogenato (1 ml) y se las incubó (372C, 18 a 24 horas). Se contaron las colonias de bacterias, se corrigíó por dilución y se informó el resultado como CFU/cuadrado. Los resultados de este estudio muestran la inhibición de la unión de Escherichia coli 0157: H7 después de un tratamiento con 50 a 1000 ppm de CPC, con una reducción del 76% en la cantidad de bacterias fijadas a la came a concentraciones de 1000 ppm de CPC. La Figura 1 muestra los resultados de ?na prueba separada que usa mayores concentraciones de CPC y el mismo procedimiento experimental. A 20000 ppm de CPC, se inhibieron por completo la unión de las bacterias a la carne.
Ejemplo 6 Rocío de carne de aves de corral pre - enfriada con 0,1% de cloruro de cetilpiridinio Se diseñó y se construyó una cámara de prueba de rocío para usarla en una planta piloto de procesamiento de aves de corral. El sistema de prueba de rocío consistía en una cámara de prueba, un tanque de almacenamiento de agua para rocío, .*..*, , ., _ -TSK una bomba de presión, un filtro, reguladores de presión, una cámara plástica de rocío con ocho toberas localizadas en los «Jatro lados y un colector para el agua usada. Había tres toberas en cada uno de los tubos ptSüStun rocío desde el frente y desde atrás. Se usó una tobera para rociar desde arriba y una para rociar desde abajo. Las dimensiones de la cámara son preferiblemente de 3 x 3 x 3 pies. Con una bomba de alta presión, podía ajustarse la presión entre 0 y 140 psi (equivalente de 0 a 8.8 kgf/cm2). La distancia entre las toberas de rocío y la came de pollo fue de 12 a 15 pulgadas. Se usó la tobera superior para rociar dentro de la carne de pollo. Se usaron toberas de rocío con una forma cónica achatada (1/8TK-SS1 , Spraying Systems Co). La solución de rocío en el tanque de almacenamiento se bombeó en el regulador de presión y luego se la roció a través de las toberas en la cámara. En la cámara de rocío, se instalaron varias capas de rocío que consistían toberas y tubos de acero inoxidable, y se cubrió la cámara con láminas de plástico para evitar la deriva química. Se usó un grillete para colgar un trozo de carne de pollo en la cámara. Se obtuvieron trozos de carne de pollo pre - enfriados en una planta local de procesamiento de aves de corral. Se los retiró del extremo de una línea de procesamiento de evisceración, se los transportó al laboratorio de investigación y se los usó de inmediato para las pruebas. El tiempo transcurrido entre la planta de procesamiento y el laboratorio de investigación fue de menos de media hora. La temperatura de la carne de pollo estaba en el rango de 32 a 379C. Se inoculó la came de pollo rociando 1 ml de S typhimurium a 1 x 106 CFU/ml y luego se la incubó a temperatura ambiente por 30 minutos. Se lavó la carne de pollo inoculada rociándole agua corriente a 30 psi (equivalente a 2.1 kgf/cm2) y 22SC por 5 segundos para retirar las células de Salmonella unidas débilmente. Luego, cada trozo de carne se colgó en la cámara de rocío y se lo roció con uno de los compuestos de prueba. Después del rocío, se lavó cada trozo de came con agua corriente por 20 segundos. Se lavó luego la carne de pollo con agua tamponada con peptona en una bolsa de plástico en un agitador automático con el fin de obtener muestras para el análisis microbiano. Se examinó visualmente el color de la piel del pollo comparando las aves tratadas con los compuestos de prueba, tales como los QAC, con aves sin tratar. Se usó CPC a una concentración de 1000 ppm a distintas presiones y duraciones de rocío. Se fijó la temperatura del agua de rocío a temperatura ambiente, es decir, 222C. Las presiones se fijaron a 30, 50 y 120 psi (equivalente 2.1 , 3.5 y 9.8 kgf/cm2, respectivamente), y las duraciones, a 30 y 90 segundos. Se realizaron tres réplicas para cada prueba. Se comparó la reducción para S typhimurium en cada trozo de carne de pollo entre los grupos rociados con compuestos de prueba, los rociados con agua y los grupos sin rociar. Después de los tratamientos de rocío, se agitó mecánicamente cara trozo de carne con 100 ml del agua tamponada con peptona (BPW) por 1 minuto y se colectó el agua de lavado. Las muestras se diluyeron, se las enriqueció, se las plaqueó en agar XLT agar o Petrifilm (3M, Inc; St Paul, MN para placas de conteo aeróbico total) y se las incubó por 18 a 24 horas a 372C. Luego, se contaron las unidades formadoras de colonias. Se calculó la cantidad de bacterias fijadas usando una técnica de cantidad más probable. Los conteos de cantidades más probables de Salmonella y los conteos aeróbicos totales en las placas se realizaron en cada trozo de carne usando las muestras de agua de lavado. Se usó un análisis de varianza para evaluar los datos experimentales con el objeto de determinar cualquier diferencia significativa entre los grupos de tratamiento y los controles (Guía del Usuario SAS/STAT, SAS Institute, Inc, Cary, NC 1993). Los resultados de este experimento muestran que el rocío de 30 y 90 segundos de una solución de 1000 ppm de CPC a presiones de 30, 50 y 120 psi (equivalente a 2.1 , 3.5 y 9.8 kgf/cm2, respectivamente) causa una reducción significativa en la cantidad de Salmonella sobre la carne de pollo. Estos datos muestran que el método de rocío es un método altemativo viable frente el método común de inmersión o lavado de pollos cuando se los rocía por 30 segundos a 90 segundos con una presión en el rango de 30 a 120 psi (equivalente de 2.1 a 9.8 kgf/cm2) a una concentración de 0,1% de CPC. Puede ser posible usar menores concentraciones de CPC con presiones variables de rocío dentro del rango descripto de 30 a 120 psi (equivalente de 2.1 a 9.8 kgf/cm2), o más» y variar los tiempos de rocío para obtener el proceso más eficiente que resulte en una reducción significativa en los microorganismos del alimento. El método de rocío' será ventajoso para su uso en un proceso industrial, ya que podrían rociarse muchos trozos de carne de pollo en forma automática por períodos breves de tiempo y aún obtener una reducción significativa en las bacterias patogénicas.
Ejemplo 7 Estudio de concentración y tiempo efectivo de los efectos de los compuestos de amonio cuaternario sobre 5 typhimurium en piel de pollo Se estudiaron los efectos del CPC sobre la inhibición y la reducción de los S typhimurium viables en piel de pollo. Las soluciones de prueba comprendieron varias concentraciones de CPC (Sigma Chemical Co, St Louis, MO) en 5% (v/v) de glicerina en solución salina tamponada con fosfato 0,008 M, pH 7,2 (PBS). Las soluciones se prepararon disolviendo cantidades apropiadas de CPC en la mezcla de glicerina - PBS.
Se esterilizaron cuadrados de piel (2,5 x 2,5 cm) a partir de patas de pollos frescos sin procesar por medio de una dosis de irradiación de 45 kGy (rayo de electrones de un acelerador lineal enfocado, lowa State University). La fuente de S typhimurium fue la cepa ATCC # 14028 o la cepa NCTC # 12023. Todos los conteos de colonias se realizaron en placas con agar de soja triplica (TSA; DIFCO, Detroit, Ml). La solución madre de Salmonella estaba en TSA. La preparación de inóculos se hizo como sigue. Se inoculó un » j 1 t 5Í frasco que contenía 50 ml de cultivo de soja triplica con S typhimurium de una única cotonía y luego se lo incubó (372C) con agitación (150 rpm) por una noche. Se lavó una alícuota de un ml de cultivo con 9 ml de PBS (4800 rpm, 10 minutos) dos veces. Se suspendió nuevamente el precipitado en PBS para obtener una concentración final de células (espectrofotométricamente, 420 nm) de 1 a 2 x 106 unidades formadoras de colonia (CFU) por ml. Se separó la piel de pollo del área de la pata y se la colocó con la epidermis hacia arriba en cada cavidad de una placa de cultivo de tejidos de seis cavidades. Los trozos de piel se inocularon con 5 ml de PBS que contenían 1 a 2 x 106 CFU de S typhimurium por ml, con la excepción del grupo control de base, que se trató solamente con 5 ml de PBS. Las placas de cultivo con los trozos piel se incubaron (30 minutos, 359C) y se retiró la solución de incubación por aspiración. Las pieles inoculadas se trataron con 5 ml de la solución de prueba. Se usaron conjuntos de tres trozos de piel para cada concentración de solución de prueba, ¡ncluyendo un conjunto en el que las pieles se trataron solamente con 5 ml de 5% (v/v) de glicerina en PBS (concentración 0). Las placas se incubaron a 259C con agitación (100 rpm) por 1 , 3 ó 10 minutos. Después de la incubación, cada trozo de piel se lavó con aspiración (5 ml de PBS), se lo colocó en una bolsa de plástico estéril que contenía 50 ml de peptona al 0,1 % (p/v) y se lo homogeneizó por 2 minutos usando una batidora de laboratorio Stomacher» 400 (Seward Medical Co, Londres, Inglaterra). Se cortó asépticamente un borde de la bolsa y se transfirieron todos sus contenidos a un tubo estéril de centrífuga que luego se centrifugó por 10 minutos (12000 rpm, 20eC). Se suspendió nuevamente el precipitado en 5 ml de peptona al 0,1 % (p/v)/agua. Se colocó un ml de la dilución apropiada en agar TSA por triplicado y luego se lo incubó a 379C por 24 horas, después de lo cual se contaron las colonias, se corrigió por dilución, y se informó el resultado como CFU/piel. Los resultados muestran que la reducción de Salmonella dependió de la concentración de CPC y del tiempo de exposición. Se logró una descontaminación cercana a 5 log?> at tratar cßn soluciones de CPC de 4000 y IÉ00 ppm por tiempos de contacto tan bajos como 3 minutos. Los cuadrados de piel se colocaron con la epidermis hacia arriba en cada cavidad de una placa de cultivo de tejidos de seis cavidades. Los trozos de piel se trataron con 5 ml de la solución de prueba. Se usaron conjuntos de tres trozos de piel para cada concentración de solución de prueba, ¡ncluyendo un conjunto en el que las pieles se trataron solamente con 5 ml de 5% (v/v) de glicerina en PBS (concentración 0). Las placas de cultivo con los trozos de piel se incubaron a 259C eon agitación (100 fm) por 1 , 3 ó 10 minutos. Se retiró la solución de incubación por aspiración y se lavaron las pieles (5 ml de PBS) para luego incubarlas (30 minutos, 359C) con 5 ml de PBS que contenían 1 a 2 x 106 CFU de S typhimurium por ml. Después de la ¡ncubación, cada trozo de piel se lavó con aspiración (5 ml de PBS), se lo colocó en una bolsa de plástico estéril que contenía 50 ml de peptona al 0,1% (p/v) y se lo homogeneizó por 2 minutos usando una batidora de laboratorio Stomacher» 400 (Seward Medical Co, Londres, Inglaterra). Se plaquearon tres alícuotas de los homogenatos (1 ml) en agar TSA y se las incubó a 37^0 por 24 horas para luego contar las colonias, corregir por dilución e informar el resultado como logio CFU/piel. Los resultados indican que la prevención de la contaminación con Salmonella mediante un tratamiento previo con CPC también mostró una dependencia de la concentración y del tiempo. Se observaron los efectos más marcados para un tratamiento previo de 10 minutos, donde se verificó una inhibición de 4,9 logio de la unión de Salmonella a una concentración de 8000 ppm. Este resultado es importante ya que la prevención de la contaminación es de gran importancia en el procesamiento de tos alimentos. Los valores de log™ CFU/piel para los controles estuvieron dentro del rango de 4,61 a 5,03. Las diferencias entre las muestras tratadas y los controles se analizare© "5^*-*^ usando ANOVA seguidos por análisis de rango múltiple de Newman - Keuls, y resultaron estadísticamente significativas ( « d,01). En otro experimento de rocío, se obtuvo una reducción de 3,3 logio para Salmonella después de un rocío de 90 segundos de carne de pollo con una solución de 5000 ppm de CPC.
Ejemplo 8 Efectos de compuestos de amonio cuaternario sobre la reducción de Listeria monocytogenes viable unidos a piel de pollo Se siguieron los pasos del Ejemplo 2, excepto que se usó L monocytogenes para inocular piel de pollo y los medios en la bolsa plástica usada en el Stomacher 400 contenían peptona al 0,1 %. A concentraciones de CPC de 2000 ppm o mayores, se observó una reducción mayor que 4 logio en L monocytogenes.
Ejemplo 9 Efectos de Compuestos de amonio cuaternario sobre la inhibición de la unión de Listeria monocytogenes viables unidos a piel de pollo Se siguieron los pasos del Ejemplo 3, excepto que se usó L monocytogenes para inocular piel de pollo y los medios en la bolsa plástica usada en el Stomacher 400 contenían peptona al 0,1 %. Los resultados de este estudio muestran una reducción del 82% en las bacterias fijadas a 50 ppm, una reducción del 92% a 100 ppm y una reducción del 100% a 500 y a 1000 ppm.
Ejemplo 10 Efectos de compuestos de amonio cuaternario sobre la reducción de SatmoneHa typhimurium viables unidos a b||r , wa negra y brócoli Se estudiaron los efectos del CPC sobre la reducción de S typhimurium viables sobre bagre, uva negra y brócoli. Las soluciones de prueba comprendían varias concentraciones de CPC (Sigma Chemical Co, St Louis, MO) en glicerina al 5% (v/v) en solución salina tamponada con fosfato 0,008 M, pH 7,2 (PBS). Las soluciones se prepararon disolviendo cantidades apropiadas de CPC en la mezcla de glicerina - PBS. Las muestras de alimento fueron uvas negras pequeñas intactas, ramilletes de brócoli y cuadrados de piel de bagre (2,5 x 2,5 cm) separados de bagres recién descongelados sin procesar. Las frutas y las verduras se adquirieron en una verdulería local, mientras que el pescado se envió congelado desde un proveedor local de bagres. La fuente de S typhimurium fue la cela ATCC # 14028 o la cepa NCTC # 12023. Todos los conteos de colonias se desarrollaron usando placas de agar XLD selectivo para Salmonella (DIFCO, Detroit, Ml). Adicionalmente, en los experimentos con bagre, se realizaron conteos de colonias aeróbicas totales usando un medio no selectivo, agar de soja tríptica (TSA: DIFCO, Detroit, Ml). El almacenamiento de Salmonella fue en TSA. La preparación de los inóculos de S typhimurium se realizó como se describe en el Ejemplo 7 anterior. Se colocaron muestras de alimento en cada cavidad de placas de cultivo de tejido de seis cavidades. Las muestras se inocularon luego con 5 ml de PBS que contenían 1 a 2 x 106 CFU de S typhimurium por ml, con la excepción de un grupo control de base que se trató solamente con 5 ml de PBS. Las placas de cultivo con las muestras de alimento se incubaron (30 minutos, 359C) y luego se retiró la solución de incubación por aspiración. Las muestras inoculadas se trataron con 5 ml de la solución de XAALLtib ?*..***» ... . ,-^M^.-?a -^-^ prueba. Se usaron conjuntos de tres muestras de alimento para cada concentración de solución de prueba, incluyendo un conjunto en el cual las muestras de alimento se trataron solamente con 5 ml de glicerina al 5% (v/v) en PBS (concentración 0). Las placas se incubaron a 25°C con agitación (100 rpm) por 3 minutos. Después de la incubación, se preparó cada muestra de alimento y se la colocó en una bolsa plástica para usarla con la batidora de laboratorio Stomacher» 400, tal como se describió en el Ejemplo 7 anterior. Se cortó asépticamente un borde de la bolsa y se transfirieron los contenidos completos a un tubo estéril de centrífuga que luego se centrifugó por 10 minutos (12000 rpm, 209C). Se suspendió nuevamente el precipitado en 5 ml de peptona al 0,1 % (p/v)/agua. Se colocó un ml de la dilución apropiada en agar XLD para los experimentos con uva y con brócoli, y en agar XLD y TSA para el bagre, por triplicado. Después de la incubación a 372C por 24 horas, se contaron las colonias, se corrigió por dilución, y se informó el resultado como CFU/piel para el bagre y como CFU/gramo para las otras muestras de alimento. Los resultados de estos experimentos se muestran en las Figuras 2 a 5. Como los bagres no habían sido irradiados, la Figura 2 muestra el conteo total de bacterias aeróbicas en medios no selectivos, mientras que la Figura 3 muestra solamente los conteos de Salmonella.
Ejemplo 11 Efecto del rocío de compuestos de amonio cuaternario sobre la reducción de bacterias viables en pollos enteros Estos experimentos evaluaron el efecto que tendría el rocío de QAC sobre pollos completos usando un rociador comercial sobre la reducción de bacterias viables. Las soluciones de inoculación de bacterias se hicieron como sigue: se cultivó E coli (ATTC # 25922) en una solución de infusión de corazón y cerebro (BHl) por 20 a 24 y^^ * g ljl i^^?á^g^ horas, y luego se la diluyó hasta una concentración de 1 en 1000 agregarte© ß ?it de cuRtvf de E coli a 500 ml de solución salina fisiológica (PSS). B -ll por 20 a 24 horas y luego se la diluyó hasta una concentración de 1 en 5000 agregando 0,1 ml de cultivo de S typhimurium a 500 ml de solución salina fisiológica (PSS). La solución de tratamiento con CPC se preparó a una concentración de 5000 ppm.
Se obtuvieron pollos Prechill en una planta local de procesamiento de aves de corral para cada prueba. Los pollos se colocaron en una línea de grilletes y se roció 1 ml de la solución de inoculación en el vientre de cada pollo, y 1 ml en el dorso. Se dejó que las bacterias se fijaran por 30 minutos a temperatura ambiente. Después de la unión, se lavaron los pollos en la línea de grilletes con agua corriente por 20 segundos. Los pollos se dividieron en grupos de diez. Para cada caso, hubo un grupo de diez pollos que se roció con 5000 ppm de CPC y hubo un grupo de diez pollos que se roció solamente con agua corriente. En las pruebas con S typhimurium también hubo un grupo que no fue rociado después de la inoculación para evaluar el efecto del rocío. Para todas las bacterias, se trató un grupo de pollos con lavado Johnson™ por 20 segundos a 60 psi (equivalente 4.2 kgf/cm2)con 35 tazas de agua corriente. Después del lavado, se dejó reposar los pollos por 90 segundos y luego se los lavó con 20 tazas de agua corriente por 20 segundos a 80 psi (equivalente a 5.6 kgf/cm2). Este ciclo de lavado se repitió cada dos o tres veces. El intervalo de cada lavado fue tambiét) de 90 segundos. Se trató otro grupo de pollos con 5000 ppm de CPC por 20 segundos a 60 psi (equivalente a 4.2 kgf/cm2)en el lavado Johnson™, luego se lo dejó reposar por 90 segundos, y luego se lo lavó con 20 tazas de agua corriente por 20 segundos a 80 psi. Este ciclo de lavado se repitió cada dos o tres veces. Después del tratamiento, los pollos se colocaron en bolsas plásticas y se agregaron 100 ml de agua tamponada con peptona al 0,1% (BPW) a cada bolsa. Se agitaron las bolsas en forma mecánica y se colectó el lavado mediante la técnica dte cantidad más probable (MPN). Se empleó también Petrifi.m™ para la evaluación de los conteos aeróbicos totales por placa (TPC). Se enumeraron los C jejuni preexistentes (no inoculados) mediante la técnica de MPN y los E coli, por Petrifilm™. Los resultados que se presentan a continuación muestran que el tratamiento con CPC es efectivo para reducir la cantidad de C jejuni, E coli y S typhimurium. Se evaluó el agua de lavado de las pruebas con S typhimurium y se halló que el CPC en el agua de lavado redujo las Salmonella en 1 log. Así, los datos de muerte que se presentan a continuación para Salmonella pueden reducirse en 1 log.
Ejemplo 12 Efecto de compuestos de amonio cuaternario sobre hongos de la comida Este estudio evaluó el efecto del CPC sobre hongos de la comida. Se colocaron cultivos inclinados de Aspergillus flavus y Penicillium chrysogenum en placas de agar de dextrosa de papa (PDA). Treinta minutos después de la inoculación o 24 horas después de la inoculación (y de la incubación a temperatura ambiente), se colocaron dos filtros redondos (7 mm de diámetro) en la superficie de cada placa. Se agregaron soluciones de CPC de 200 ppm, 1000 ppm, 5000 ppm y 25000 ppm, o de agua destilada y deionizada (DD) a los filtros, 10 µl por filtro. Todas las placas se incubaron con el lado de la tapa hacia arriba a temperatura ambiente por 48 horas. Se midieron los diámetros de los anillos de inhibición. Los resultados que se presentan a continuación muestran que el CPC es efectivo contra los hongos de la comida. -*É*&^^Jk. ^*.*? *~?a* a?f\ . i El CPC es efectivo contra los hongos de la comida evaluados.
Ejemplo 13 Efecto de Compuestos de amonio cuaternario sobre pollos usando tiempos breves de aplicación En dos ensayos conducidos en una facilidad de procesamiento de pollos parrilleros, se usó la formulación de Cecured (0,2 a 0,5% de CPC), que está diluida a partir de un concentrado de CPC que contiene CPC (40%), propilenglicol (57%) y agua (3%), todos los componentes sobre una base de peso en peso, para tratar pollos post -enfriamiento. En estos estudios, se modificó la cabina final de lavado o cabina de "falla fecal", que se localiza antes de las secciones de acomodación y empaquetado, pero antes de la de enfriado por inmersión, para la aplicación de la formulación de CPC. Las modificaciones en la cabina incluyeron el cambio de las toberas para permitir solamente pequeños volúmenes (de 1 a 6 onzas) de la formulación por pollo, y la modificación del . ^^liMÉ ^.^ „„ ., JÍA ¿, ?^^^iu^?táitátu^taíltil patrón de rocío sobre los pollos para permitir la cobertura total de un área superficial máxima. Además, se extendió la Iqngitud total de la cabina y se instalaron mecanismos de evacuación de la cabina. La formulación concentrada de CecureF se diluyó hasta la concentración correcta de usa en el punto de aplicación directa sobre el pollo o se ta diluyó y se la mantuvo en grandes recipientes antes de aplicarla. Se aplicó la solución diluida de Cecured a cada pollo por alrededor de 1,5 segundos. La temperatura de la solución fue de temperatura ambiente o ligeramente sobre o debajo de la anterior, dependiendo de las condiciones de almacenamiento. Después del tratamiento de los pollos con la solución diluida de CecureF, se dejó que los pollos se escurrieran por aproximadamente 3 minutos antes del análisis de microbios. Los pollos se analizaron usando una técnica de lavado de pollos completos en 400 ml de agua tamponada con peptona. Las muestras se evaluaron por la presencia de Campylobacter, Salmonella, E coli no productora de toxinas, y se realizaron conteos de placas aeróbicas que estimaron los organismos totales. Se evaluaron también los pollos control por estos mismos organismos, pero estos pollos se colectaron justo antes de la cabina modificada de falla fecal. En ambas pruebas, los conteos de Campylobacter, E coli, y de placa aeróbica (bacterias aeróbicas totales) se vieron significativamente reducidos en más del 99%. En ambas pruebas, la incidencia de Salmonella se redujo significativamente hasta menos de un 10% de positivos, mientras que las tasas de incidencia en los pollos control con Salmonella fueron mayores, en algunos casos, del 60%. La descripción precedente de las realizaciones preferidas de la presente invención se presentó con propósitos ilustrativos y no pretende limitar la invención a las composiciones específicas que se usan en los ejemplos, ya que son posibles varias modificaciones a la invención descripta a la luz de las enseñanzas anteriores. La presente llAil-ky^JiáM^^-^i^^ invención se basa en el descubrimiento de que los QAC evitan y reducen significativamente la contaminación bacteriana en un amplio espectro. La formulación concentrada de QAC provee muchas ventajas para usarla a gran escala en una planta de procesamiento de alimentos.

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES , . ¡. 1. Una solución concertada de un compuesto de amonio raíéfl que comprende: un compuesto de amonio cuaternario con una concentración mayor de alrededor de 15% en peso a aproximadamente 40% en peso; y al menos un agente intensificador de la solubilidad, en donde por lo menos uno de dichos agentes intensificadores de la solubilidad es propilen glicol. 2. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con la reivindicación 1 , en donde dicho compuesto de amonio cuaternario es una sal de alquilpiridinio, una sal de tetra - alquilamonio, o una sal de amonio alquilalicíclica. 3. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con la reivindicación 2, en donde dicha sal de alquilpipdinio se representa mediante formula estructural (I): donde n es 9-21 ; y X es un halógeno, en donde dicha sal de tetra-alquilamonio se representa mediante la formula estructural (II): ík--.. -&-,-*_- donde n es 9-21 ; R se elige del grupo que comprende CH3 y C2H5 ; y X es un halógeno; y en donde la sal de amonio alquil-alicíclicas se representan mediante la formula estructural (lll): donde n es 9-21 ; Z es 4-5; R se elige del grupo que comprende CH3 y C2H5 ; y X es un halógeno. 4. Una solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario que comprende: un compuesto de amonio cuaternario con una concentración mayor de alrededor de 10% en peso; y al menos un agente intensificador de la solubilidad, en donde por lo menos uno de dichos agentes intensificadores de la solubilidad es propilen glicol, en donde el compuesto de amonio cuaternario es una sal de alquilpiridinio o una sal de amonio alquilalicíclica. 5. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con la reivindicación 4, en donde dicha sal de alquilpipdinio se representa mediante formula estructural (I): donde n es 9-21 ; y X es un halógeno, y en donde la sal de amonio alquil-alicíc cas se representan mediante la . — ^--^"^ th formula estructural (lll): donde n es 9-21 ; Z es 4-5; R se elige del grupo que comprende CH3 y C2H5 ; y X es un halógeno. 6. Una solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario que comprende: un compuesto de amonio cuaternario con una concentración mayor de alrededor de 10% en peso; y al menos un agente intensificador de la solubilidad, en donde por lo menos uno de dichos agentes intensificadores de la solubilidad es propilen glicol, en donde el compuesto de amonio cuaternario es una sal de alquilpiridinio representada por la fórmula estructural (I): donde n es 9-21 ; y X es un halógeno, una sal de tetra-alquilamonio representada mediante la formula estructural X " donde n es 9-21 ; R se elige del grupo que comprende CH3 y C2H5 ; y X es un halógeno; y* una sal de amonio alquil-alicíclicas representada mediante la formula estructural (lll): donde n es 9-21 ; Z es 4-5; R se elige del grupo que comprende CH3 y C2H5 ; y X es un halógeno. 7. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con la reivindicación 6, en donde dicho compuesto de amonio cuaternario es mayor de aproximadamente 15% en peso. 8. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la solución no comprende uno o más aceites saborizantes. 9. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde el agente intensificador de la solubilidad comprende además un alcohol o un poliglicol. 10. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con la reivindicación 9, en donde dicho agente intensificador de la solubilidad se selecciona del grupo que consiste en un alcohol monohídrico, un alcohol dihídrico, un alcohol trihídrico, un polietilenglicol y una combinación de los mismos. 1 1. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con la reivindicación 10, en donde dicho alcohol monohídrico es un alcohol alifático, dicho alcohol dihídrico es un glicol o un derivado del mismo, y dicho alcohol trihídrico es glicerol o un derivado del mismo. g -^ 12. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de onformidad con cualquiera de las reivindicaciones 4, 5 ó 6, en donde dicho compuesto de amonio cuaternario varía entre más de alrededor de 10% en peso y alrededor de 60% en peso. 13. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 4, 5 ó 6, en donde dicho compuesto de amonio cuaternario varía entre más de alrededor de 10% en peso y alrededor de 50% en peso. 14. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 4, 5 ó 6, en donde dicho compuesto de amonio cuaternario varía entre más de alrededor de 10% en peso y alrededor de 40% en peso. 15. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 4, 5 ó 6, en donde dicho compuesto de amonio cuaternario varía entre más de alrededor de 10% en peso y alrededor de 30% en peso. 16. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con la reivindicación 7 u 8, en donde dicho compuesto de amonio cuaternario varía entre alrededor de 15% en peso y alrededor de 50% en peso. 17. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con la reivindicación 7 u 8, en donde dicho compuesto de amonio cuaternario varía entre alrededor de 15% en peso y alrededor de 40% en peso. 18. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, 7 ú 8, en donde dicho compuesto de amonio cuaternario varía entre alrededor de 15% en peso y alrededor de 25% en peso. 19. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, en donde dicho agente intensificador de la solubilidad está presente a una concentración de hasta alrededor de 70% en peso. 20. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, en donde dicho agente intensificador de la solubilidad está presente a una concentración que varía de alrededor de 10% en peso a alrededor de 60% en peso. 21. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde dicho compuesto de amonio cuaternario está presenta a una concentración de aproximadamente 40% en peso y dicho agente intensificador de la solubilidad está presente a una concentración que varía de alrededor de 50% en peso a aproximadamente 60% en peso. 22. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con la reivindicación 21 , en donde dicho compuesto de amonio cuaternario está presente a una concentración de alrededor de 40% en peso y dicho agente ¡ntensificador de la solubilidad está presente a una concentración que va de alrededor de 55% en peso y alrededor de 60% en peso, y donde dicha solución comprende además agua hasta alrededor de 5% en peso. 23. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con la reivindicación 22, en donde dicho compuesto de amonio cuaternario está presente a una concentración de alrededor de 40% en peso, dicho agente intensificador de la solubilidad está presente a una concentración de alrededor de 57% en peso y dicha agua está presente a alrededor de 3% en peso. 24. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde dicho compuesto de amonio cuaternario está presenta a una concentración de aproximadamente 40% en peso y dicho agente intensificador de la solubilidad está presente a una concentración Cíe alrededor de 50% en peso. 25. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde dicho compuesto de amonio cuaternario está presenta a una concentración de aproximadamente 20% en peso y dicho agente intensificador de la solubilidad está presente a una concentración de alrededor de 50% en peso. 26. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 25, en donde dicho agente intensificador de la solubilidad es una combinación de alcohol etílico y propilen glicol. 27. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 9 a 26, en donde dicho compuesto de amonio cuaternario está presenta a una concentración de aproximadamente 40% en peso y dicho alcohol es glicerol y está presente a una concentración de alrededor de 20% en peso. 28. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27, en donde dicha sal de amonio cuaternario es una sal de alquilpiridinio. 29. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con la reivindicación 28, en donde dicha sal de alquilpiridinio es cloruro de cetilpiridinio. 30. Una solución de un compuesto de amonio cuaternario solución que consiste esencialmente en: un compuesto de amonio cuaternario con una concentración de hasta alrededor de 1% en peso; al menos un agente intensificador de la solubilidad, en donde por lo menos uno de dichos agentes intensificadores de la solubilidad es propilen glicol; y agua, en donde la solución no comprende uno o más aceites saborizantes. 31. Una solución de un compuesto de amonio cuaternario solución que comprende únicamente: un compuesto de amonio cuaternario con una concentración de hasta alrededor de 1% en peso; al menos un agente intensificador de la solubilidad, en donde por lo menos uno de dichos agentes intensificadores de la solubilidad es propilen glicol; y agua. 32. La solución de un compuesto de amonio cuaternario solución de conformidad con la reivindicación 30 o 31 , en donde dicho compuesto de amonio cuaternario tiene una concentración de alrededor de 0,01% a alrededor de 1%. 33. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 30 a 32, en donde dicho agente intensificador de la solubilidad comprende además un alcohol o un poliglicol. 34. La solución de un compuesto de amonio cuaternario solución de conformidad con la reivindicación 33, en donde dicho agente intensificador de la solubilidad se selecciona del grupo que consiste en un alcohol monohídrico, un alcohol dihídrico, un alcohol trihídrico, un polietilenglicol y una combinación de los mismos. 35. La solución de un compuesto de amonio cuaternario solución de conformidad con la reivindicación 34, en donde dicho alcohol monohídrico es un etanol alifático, dicho alcohol dihídrico es un glicol o un derivado del mismo, y dicho alcohol trihídrico es glicerol o un derivado del mismo. 36. La solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 30 a 35, en donde dicha solución toma la forma de un rocío o de un nebulizado. r* -^tf4^^HH J 8**"'-M-M,fc- — -^-^^^^^-MaA^.-^>-^KAa,fc>J^^a^.<,- -Tiii i-pM^-^-Ma^MiMáhMiiftaarf M it 37. Un método para evitar el crecimiento de microorganismos sobre un producto alimenticio que comprende: poner en contacto dicho producto alimenticio con una cantidad efectiva para inhibir el crecimiento microbiano de una solución de un compuesto de amonfe cuaternario que comprende un compuesto de amonio cuaternario y por lo menos un agente intensificador de la solubilidad, en donde por lo menos uno de dichos agentes intensificadores de la solubilidad es propilen glicol. 38. El método para evitar el crecimiento de microorganismos sobre un producto alimenticio de conformidad con la reivindicación 37, en donde el tiempo de aplicación de dicha solución es de al menos una fracción de un segundo, para evitar el crecimiento de microorganismos sobre dicho producto alimenticio. 39. El método para evitar el crecimiento de microorganismos sobre un producto alimenticio de conformidad con la reivindicación 38, en donde dicho tiempo de aplicación es de alrededor de 0,1 segundos a alrededor de 5 segundos. 40. El método para evitar el crecimiento de microorganismos sobre un producto alimenticio de conformidad con la reivindicación 39, en donde dicho tiempo de aplicación es de alrededor de 1 segundo a alrededor de 5 segundos. 41. El método para evitar el crecimiento de microorganismos sobre un* producto alimenticio de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 37 a 40, en donde dicho contacto es por rociado o nebulizado. 42. El método para evitar el crecimiento de microorganismos sobre un producto alimenticio de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 37 a 41 , en donde dicha solución de un compuesto de amonio cuaternario se diluye a partir de una solución concentrada de un compuesto de amonio cuaternario de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 29. 43. El método para evitar el crecimiento de microorganismos sobre un producto alimenticio de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 37 a 41 , en donde el compuesto de amonio cuaternario es la solución de un compuesto dß amonio cuaternario de cualquiera de las reivindicaciones 30 a 36. 44. Un método que comprende: a) proporcionar una solución concentrada que comprende: un compuesto de amonio cuaternario con una concentración mayor de aproximadamente 10% en peso; y al menos un agente intensificador de la solubilidad, en donde al menos uno de dichos agentes intensificadores de la solubilidad es propilen glicol; b) diluir la solución concentrada para formar una solución de trabajo diluida; y c) aplicar la solución de trabajo diluida a un producto alimenticio. 45. El método de conformidad con la reivindicación 44, en donde el paso (b) comprende diluir la solución concentrada con agua para formar una solución de trabajo diluida, dicho compuesto de amonio cuaternario estando presente en la solución de trabajo diluida en una cantidad efectiva para evitar el crecimiento de microorganismos sobre el producto alimenticio. 46. El método de conformidad con la reivindicación 44, en donde el paso (b) comprende diluir la solución concentrada con agua para formar una solución de trabajo diluida, dicho compuesto de amonio cuaternario estando presente en la solución de trabajo diluida en una concentración sustancialmente dentro del rango de alrededor de 0.1% a alrededor de 1 % en peso. 47. El método de conformidad con la reivindicación 44, en donde el paso (c) comprende aplicar la solución de trabajo diluida al producto alimenticio durante al menos una fracción de un segundo. hHt^t A-Afai' " Ttr- r j- fi1r j^glg . «? x~*?*i* *- • - f*ft~-JbSpi&A ?. 48. El método de conformidad con la reivindicación 44, en donde el paso (c) comprende aplicar la solución de trabajo diluida al producto alimenticio durante un tiempo de aplicación, en donde dicho tiempo de aplicación es de alrededor de 0.1 segundos a alrededor de 5 segundos.
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