MXPA01010524A - Agentes macrolidos anti-infecciosos. - Google Patents

Abstract

Compuestos de formula (1), (2) o (3) en la cual Ra es H; alquilo de (C1-10) sustituido o no sustituido; alquenilo de (C2-10) sustituido o no sustituido; alquinilo de (C2-10) sustituido o no sustituido; arilo de (C4-14) sustituido o no sustituido; o arilalquilo de (C5-20) sustituido o no sustituido; o ORa esta reemplazado por H; Rb es H o halogeno; Rc es H o un grupo protector; Rd es metilo, alquilo de (C3-10) no sustituido, alquilo de (C1-10) sustituido, alquinilo de (C2-10) sustituido o no sustituido; arilo de (C4-14) sustituido o no sustituido; arilalquilo de (C5-20) sustituido o no sustituido; arilalquenilo de (C5-20) sustituido o no sustituido; arilalquinilo de (C5-20) sustituido o no sustituido; amidoarilalquilo de (C5-20) sustituido o no sustituido; amidoarilalquenilo de (C5-20) sustituido o no sustituido; o amidoarilalquinilo de (C5-20) sustituido o no sustituido; Re es H es un grupo protector; L es metileno o carbonilo; T es -O-, -N(R)-, =N(OR)-, -N(NHCOR)-, - N(N=CHR)-, o - N(NHR)- en donde R es H o Ra como se define anteriormente, con la condicion de que cuando L es metileno, T es -O-; uno de Z e Y es H y el otro es OH, OH protegido, o amino, mono o dialquilamino, amino protegido, o un amino heterocicio o Z e Y juntos son =O, =NOH o una oxima derivatizada; incluyendo cualesquier sales aceptables farmaceuticamente de los mismos y cualesquier formas estereoisomericas y mezclas de formas estereoisomericas de los mismos, son agentes antimicrobianos.

Description

AGENTES MACROLIDOS ANTIINFECCtOSOS CAMPO PE LA INVENCIÓN La invención se dirige a compuestos antibacterianos que abarcan en el repertorio de antibióticos semejantes a eritromicina. Más particularmente, la invención concierne a antibióticos macrólidos que contienen un núcleo eritronólido modificado al menos en el substituyente en C-13.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El número de incremento de cepas microbianas que han adquirido resistencia a los compuestos antibióticos conocidos disponibles actualmente se reconoce como una característica peligrosa para la salud publica. Puesto que el uso de dichos compuestos a proliferado, así como también la necesidad para extender las opciones disponibles para tratar una amplia variedad de condiciones basadas en microbios. La necesidad para una larga elección de compuestos antimicrobianos se extiende más allá del tratamiento de la infección humana hacia una necesidad para preservar el alimento y otras comodidades perecederas. Nuevos antibióticos también pueden obtenerse a partir de plantas y animales resistentes así como para proveer resistencia a materiales que de otra manera se someten a corrosión ocasionada por microbios. Por lo tanto, hay una necesidad clara para un armamento extenso de compuestos los cuales pueden proveer una defensa en multifacetas en contra de actividad microbiana no deseada. La publicación PCT No. WO 98/09978 publicada el 12 de marzo de 1998 e incorporada en la presente como referencia describe formas modificadas de eritromicina la cual carece de un residuo cladinosa en la posición 3 y los cuales derivan de varias maneras en la posiciones 9-12 del anillo de macrólido. Similarmente, la patente de E.U.A No. 5,750,510, presenta el 12 de mayor de 1998 e incorporada en la presente como referencia, describe derivados de eritromicina modificados. La eritromicina que ocurren naturalmente tienen la estructura en donde R' puede ser H o OH y R" pueden ser H o CH3. Todos los compuestos descritos en los documentos de patente anteriormente referidos contienen un grupo etilo en la posición 13 del anillo macrólido. Los presentes inventores han encontrado que las alteraciones en el sustituyentes en la posición 13 resulta en un gran número de compuestos con el excelente actividad antibacteriana.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención se dirige a derivados de eritronólido que contienen modificaciones a partir de la estructura nativa. Todos los compuestos de la invención están modificados al menos en la posición 13 y tienen un anillo en la posición 11 ,12. Por lo tanto, en un aspecto, la ¡nvención se dirige a compuestos de la fórmula donde Ra es H; alquilo de (1-1 OC) sustituido o no sustituido; alquenilo de (2-10C) sustituido o no sustituido; alquenilo de (2-1 OC) sustituido o no sustituido; arilo de (4-14C) sustituido o no sustituido; arilalquilo de (5-20C) sustituido o no sustituido; o ORg puede reemplazarse por H; Rb es H o halógeno; Rc es H o un grupo protector; Rd es metilo, alquilo de (3-1 OC) no sustituido; alquilo de (1-1 OC) sustituido; alquenilo de (2-1 OC) sustituido o no sustituido; alquenilo sustituido o no sustituido; arilo de (4-14C) sustituido o no sustituido; arilalquilo de (5-20C) sustituido o no sustituido; arilalquenilo (5-20C) sustituido o no sustituido; arilalquinilo de (5-20C) sustituido o no sustituido; amidoarilalquilo de (5-20C) sustituido o no sustituido; amidoarilalquenilo de (5-20C) sustituido o no sustituido; o amidoarilalquinilo de (5-20C) sustituido o no sustituido; Rc es H o un grupo protector; L es metileno o carbonilo; T es -O-, -N(R)-, -N(OR)-, -N(NHCOR)-, -N(N=CHR)-, o - N(NHR)- en donde R es H o Ra es como se definió anteriormente, con la condición de que cuando L es metileno, T es -O-; uno de Z e Y es H y la otra es OH, OH protegido, p amino, mono-o dialquilamino, amino protegido, o un amino heterociclo o Z e Y juntas son =0, =NOH o un derivado oxima; incluyendo cualquier sal farmacéuticamente aceptable de las mismas y cualesquiera formas estereoisoméricas y mezclas de formas estereoisoméricas de las mismas. En otro aspecto, la invención se dirige a composiciones farmacéuticas o conservadoras que contienen los compuestos de fórmulas (1)-(3) y a métodos para tratar enfermedades infecciosas al administrar estos compuestos o al conservar materiales al proveerlos.

Modo de llevar a cabo la ¡nvención Los compuestos de la invención están convenientemente sintetizados al combinar técnicas sintéticas químicas con procedimientos microbianos implicados en microorganismos genéticamente diseñados. Brevemente, en un modo preferido de llevar a cabo la invención, un hospedero microbiano, preferiblemente un hospedero el cual no produce por sí mismo un antibiótico macrólido, se provee con un sistema de expresión recombinante para la producción de 6-deoxieritronolido B modificado (6-dEB), cuyo sistema de expresión en algunos casos estará alterado mediante una alteración en el dominio catalítico de la porción cetosintasa del primer módulo. Para los sustituyentes en los que R¿ es metilo, las células hospederas se utilizan ias cuales no tienen un dominio alterado de la porción cetosintasa. Esta alteración en la 6-dEB policétidosintasa (PKS) resulta en la incapacidad de esta PKS para utilizar su unidad inicial nativa, y por lo tanto permite la inclusión de una dicétido tioéster sintética para su producto de condensación inicial en la secuencia de reacciones que llevan a 6-dEB modificado sin competencia del dicétido que podría de otra manera, nativamente, ser producido. Por lo tanto, el hospedero recombinante puede proveer una dicétido tioéster sintética para la incorporación dentro del policétido resultante. La incorporación de este dicétido dentro del policétido resultante resulta en un policétido con un sustituyente en la posición 13 que puede seleccionarse como se desee. Los métodos preferidos para preparar policétido tioésteres sintéticos se establecen en la publicación PCT No. WO 00/44717 la cual reclama prioridad de la solicitud de patente copendiente de E.U.A. No. de serie 60/117,384 presentada el 27 de enero de 1999 y 09/492,733 presentada el 27 de enero de 2000, las cuales se incorporan como referencia. Las formas recombinantes de 6-dEB PKS que contienen dominios cetosintasas (KS) inactivadas en el primer módulo (KSI) y organismos apropiados modificados para que contengan un sistema de expresión para este PKS se describen en la publicación PCT WO 97/02358, publicada el 28 de enero de 1997 y WO 99/03986, publicada el 28 de enero de 1999, incorporadas aquí como referencias. El policétido resultante a partir de la expresión del PKS modificado entonces se aisla y se purifica, si se desea, a partir del organismo recombinantemente modificado y se le da Saccharopolyspora erythraea, la cual contienen la funcionalidad para modificaciones post policétido, incluyendo glucosilación. Otras modificaciones incluyen hidroxilación en las posiciones 6 y 12. La eritromicina resultante modificada entonces se aisla y se modifica químicamente para obtener los compuestos de la invención. Los métodos sintéticos para proveer estas modificaciones se describen en la publicación PCT y en la patente de E.U.A. No. WO 98/09978 referida aquí anteriormente. El método general para sintetizar intermediarios para compuestos de la invención se muestra e el esquema A.

ESQUEMA A dicétido proteger 2' hidrolizar, oxidar desproteger 2' El método para sintetizar compuestos a partir de intermediarios ción se muestra en el esquema B. ESQUEMA B El compuesto antiinfeccioso resultante es activo in vitro y in vivo para la actividad en contra de un panel de microorganismos representativos.

Los compuestos de la invención por lo tanto exhiben una diversidad suficiente en la especificidad para abarcar el espectro de actividades antibióticas deseadas. Para su uso en el tratamiento de enfermedades infecciosas, los compuestos de la invención se formulan dentro de composiciones apropiadas las cuales incluirán excipientes típicos, contraiones farmacéuticamente aceptables si el compuesto es una sal, aditivos adicionales como se desee, tal como oxidantes, amortiguadores, y similares, y se administran a animales o humanos. Los tipos de formulaciones que son apropiadas para estos compuestos son similares a aquellas para los antibióticos macrólidos en general. Las formulaciones pueden encontrarse, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., última edición. Los compuestos pueden administrarse mediante cualquier ruta deseada, incluyendo inyección, administración oral, administración transdermal, administración transmucosal, o cualquier combinación. Los compuestos de la invención también pueden administrarse con ingredientes activos adicionales sí se desea. Los compuestos de la ¡nvención son de las fórmulas (1)-(3) como se estableció anteriormente, así como cualesquiera formas estereoisoméricas de estos compuestos como se muestra. Los estereoisómeros particulares descritos son aquellos que resultan a partir del método preferido de síntesis establecido anteriormente y ejemplificado en la presente; sin embargo, al modificar el sistema de expresión de la PKS, o mediante la alteración de la quiralidad del dicétido, o mediante conversión química sintética, otros estereoisómeros también pueden prepararse. Los centros quirales adicionales pueden estar presentes en los sustituyentes tales como Ra y Rd. Los estereoisómeros pueden administrarse como mezclas, o estereoisómeros individuales pueden estar separados y utilizarse como se conoce en la técnica. Las propiedades de los compuestos de fórmula (1)-(3) se definen mediante los sustituyentes Ra-Re, L, T, Y y Z. Las modalidades preferidas a estos sustituyentes se establecen a continuación estos contienen porciones las cuales se definen como sigue: "Halógeno" incluye flúor, cloro, bromo y yodo y más preferiblemente flúor. "Alquilo" se refiere a porciones de hidrocarbilo saturado de cadena recta, cadena ramificada o cíclico que contienen un número específico de carbonos y que puede contener uno o más heteroátomos adecuados; similarmente, alquenilo y alquinilo se refieren a sustituyentes de hidrocarburos de cadena recta o ramificada o cíclicos que contienen uno o más doble enlaces o uno o más triple enlaces, respectivamente y que pueden contener uno o más heteroátomos adecuados.

"Arilos" se refieren a sustituyentes aromáticos que pueden contener uno o más heteroátomos adecuados tales como fenilo, naftilo, quinolilo, o fenantrilo. "Arilalquilo", "arilalquenilo", o "arilalquinilo" se refiere a sustituyentes en donde un grupo arilo está unido a la porción sustituida a través de una unión alquilo, alquenilo o alquinilo, respectivamente. De nuevo, el número de carbonos en los grupos arilalquilo, arilalquenilo o arilalquinilo estará especificado. "Amidoarilalquilo", "amidoarilalquenilo", o "amidoarilalquinilo" se refiere a sustituyentes en donde un grupo arilo está unido a las porciones sustituidas a través de un amido y una unión alquilo, alquenilo ? alquinilo, respectivamente. De nuevo, el número de carbonos en los grupos amido arilalquilo, amidoariloalquenilo o amidoarilalquinilo estará especificado. Por lo tanto, incluido entre los sustituyentes definidos en la presente están "heteroalquilo", "heteroalquenilo", "heteroalquinilo", "heteroarilo", "heteroarilalquilo", y similares. Los heteroátomos adecuados incluyen N, O, y S. Todos los sustituyentes precedentes pueden estar no sustituidos o pueden estar sustituidos adicionalmente. Los sustituyentes típicos incluyen R, -OR, -SR, -NR2, -COR, -COOR, -CONR2, -OOCR, -NRCOR, -OCONR2, -CN, -CF3, -N02) -SOR, -S02R, halógeno en donde cada R es independientemente H o es alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, arilalquilo, o las formas hetero de estos como se define anteriormente. Además, alquilo, alquenilo y alquinilo puede estar sustituidos mediante arilo o heteroarilo, los cuales pueden por sí mismos, estar adicionalmente sustituidos. "Un derivado oxima" es de la fórmula =N-0-R, en donde R es diferente que H y de otra manera se define como sigue. Un "grupo protector" para un hidroxi incluye grupos acilo, grupos sililo, y similares. Los grupos protectores adecuados se describen por Greene, T.W., eí al, in Protecting Groups in Organic Synthesis. 2nd Ed., John Wiley & Sons, Inc. (1991), incorporado en la presente como referencia. La invención incluye modalidades más preferidas de los compuestos preferidos anteriormente. Rd es preferiblemente butilo, pentilo, metoxietoximetilo, ¡sobutilo, metilciclohexilo, fenilo, bencilo, hetilfenilo, 3- (benciloxi)propilo, 2-(pirimidin-2-iltio)etilo, propilo, fluoroetilo, cloroetilo, vinilo, 3-butenilo, o azidoetilo y más preferiblemente propilo, floroetilo, cloroetilo, vinilo, 3-butenilo, o ácido etilo. La publicación PCT No. WO 00/44717 la cual reclama prioridad a la de E.U.A. No. De serie 60/117,284 presentada el 27 de enero de 1999 y E.U.A. No. De serie 09/492,733 presentada el 27 de enero del 2000 ambas incorporadas en la presente como referencia describen varios oligocétido tioésteres, preferiblemente dicétido tioésteres, que pueden incorporarse en la posición C-13. Dichos dicétido tioésteres como se describen en la presente se incorporan dentro de los compuestos de la invención y por lo tanto determinan grupos Rd preferidos en la posición C-13. En otra modalidad preferida, Ra es H o alquilo de C1-C3 inferior, y más preferiblemente metilo. Ra también es preferiblemente arilalquenilo o arilalquinilo tal como 3-arilprop-2-enilo o 3-arilprop-2-inilo. Preferiblemente el grupo arilo en las modalidades preferidas arilalquenilo o arilalquinilo son 3-quinolilo, 4-quinolilo, 5-quinolilo, fenilo, 4-fluorofenio, 4-clorofenilo, 4-metoxifenilo, 6-quinolilo, 6-quinoxalilo, 6-amino-3-quinolilo, o 4-isoquinolilo. Cuando T-L-O forma un anillo carbamato, una combinación de sustituyentes sobre el carbamato de nitrógeno (R), la posición 6-0 (Ra), y la posición 13 (Rd) especialmente se prefieren. En una primera combinación preferida, Ra es preferiblemente arilalquilo, arilalquenilo o arilalquinilo; R es preferiblemente H o alquilo inferior sustituido o no sustituido; y Rd es preferiblemente alquilo sustituido o no sustituido. En estos compuestos Ra es más preferiblemente arilpropilo, arilprop-2-enilo, o arilprop-2-inilo; R es más preferiblemente hidrógeno o metilo; y Rd es más preferiblemente propilo, fluoroetilo, o cloroetilo. En una segunda combinación preferida, Ra es H o alquilo inferior sustituido o no sustituido; R es preferiblemente arilalquilo, arilalquenilo; y Rd es alquilo sustituido o no sustituido. En estos compuestos, Ra es más preferiblemente metilo; R es más preferiblemente arilpropilo, arilprop-2-enilo, o arilprop-2-inil; y Rd es más preferiblemente propilo, fluoroetilo o cloroetilo. En una tercera combinación preferida, cuando Rd es un sustituyente no saturado disponible para derivación adicional tal como alquenilo o alquinilo u otro grupo tal como ácido alquilo, entonces preferiblemente Ra es H o alquilo inferior sustituido o no sustituido, y R es H o alquilo inferior sustituido o no sustituido. Ra es más preferiblemente H o metilo y R es más preferiblemente H. Los sustituyentes no saturados ilustrativos, para Rd son más preferiblemente vinilo, propargilo, o butenilo, y otros sustituyentes derivados que incluyen ácido etilo. Estos compuestos pueden ser fácilmente derivados mediante los métodos de la invención para formar a partir de sustituyentes no saturados los sustituyentes arilalquilo, arilalquenilo, o arilalquenilo, o arilalquenilo y a partir de sustituyentes azido los sustituyentes amidoarilalquilo, amidoarilalquenilo, o amidoarilalquinilo. Los 15-amido cetólidos preferidos, 15-etenilcetólidos preferidos, 15-etenilcetólidos y otros cetólidos aril sustituidos se muestran en los esquemas L y O.

ESQUEMA L ESQUEMA O Adicionalmente, en una modalidad de compuestos (1) T no es N(R). En otra modalidad el compuesto (1) T-L-O no forma un anillo carbamato.

Síntesis de los compuestos de la invención Como se describió anteriormente, las materias primas de antibiótico para cualquier síntesis química adicional se preparan, preferiblemente, al adicionar un dicétido adecuado a un microorganismo modificado para que contenga un sistema de expresión para el 6-dEB PKS que contiene un KS1 knockout, o mediante un célula hospedera que provee un metilo en la posición 13, seguida por la adición del policétido resultante a una cepa recombinante de Saccharopolyspora erythraea que ha sido alterada para eliminar la producción de 6-dEB. Una cepa puede prepararse que sea capaz para hidroxilar tanto las posiciones 6 y 12 o la posición 12 solamente. En el último caso, -ORg se reemplaza por -H. La cepa S. erythraea la cepa K40-67, se obtiene mediante la transformación de una cepa S. erythraea que produce altos de eritromicina A con un plásmido que comprende una secuencia eryA1 mutada que codifica un dominio KS1 inactivado. Mediante recombinación homologa, los transformantes resultantes ahora están incapacitados para producir 6-dEB como un competidor para el substrato policétido y, en lugar de esto hidroxilan la posición 6 y la posición 12 y glicosilan la posición 3 y la posición 5 del policétido modificado que se ha hecho en Streptomyces u otro transformante que produce policétido. Si un macrólido que tiene solamente la posición 12, y no la posición 6 hidroxilada se desea (ORg se reemplaza por H), una cepa S. erythraea se construye mediante la alteración del gen eryF de hidroxilasa en la cepa K40-67. Alternativamente, el gen eryK puede incapacitarse, en donde las modalidades de los compuestos (1 )-(3) pueden producirse fácilmente. La formación de los compuestos de fórmula (1 )-(3) requiere la producción de eritronólido que tiene un hidroxilo en la posición 12. La materia prima puede incluir cualquiera de los compuestos (4)-(6): Las reacciones de glicosilación para la producción de eritromicina resultan en las formas diglicosiladas análogas a los compuestos establecidos en la fórmula (4) en la presente. Si los compuestos de fórmula (4) se preparan a partir del producto inicial, el grupo hidroxilo del anillo cladinosa (unido a la posición 3) puede necesitar protegerse para modificación subsecuente de los sustituyentes macrólidos. Las eritromicinas modificadas de la invención, además de la modificación en C-13, contienen un grupo -OH en la posición 6 a menos que ORa este reemplazado por H como se describió anteriormente. Para la construcción, finalmente, los compuestos de fórmula (1), (2) y (3) en donde la posición 6 es ORg, el compuesto de fórmula (I) (véase esquema A) se provee con grupos protectores a partir de una modalidad de Rc y Re, dicha protección se efectúa utilizando recibos de protección adecuados tales como anhídrido, acético, anhídrido benzoico, formato de benzocloro, hexametildisilazano, o trialquilsililcloruro en un solvente aprótico. Los solventes apróticos incluyen, por ejemplo, diclorometano, cloroformo, tetrahidrofurano, N-metil pirrolidona, dimetiisulfóxido (DMSO), dimetilformamida (DMF) y similares. Las mezclas también utilizarse. La protección de ambos hidroxilos de azúcar en la fórmula (I) también puede hacerse simultáneamente o secuencialmente. Además de la protección de los grupos hidroxilo 2' y 4" de los residuos de glucosa, el grupo ceto en la posición 9 del anillo macrólido también debe protegerse. Típicamente, estos se efectúa al convertir el grupo ceto a un derivado oxima. Las modalidades particularmente preferidas para R en la fórmula =NOR incluyen alquilo (1-12C), sustituido o no sustituido, arilo (6-1 OC), sustituido o no sustituido, alquilo (1-12C), sustituido o no sustituido, (6-1 OC), sustituido o no sustituido, alquilo (1-12C), y heteroalquilo (tal como sustituyentes de la fórmula CR'2OR en donde R', además de estar independientemente mencionada como R como se estableció anteriormente, puede, junto con la otra, formar un anillo cicloalquilo (3-12C)). Una oxima derivada preferida es de la fórmula =NOR en donde R es isopropoxiciclohexilo. Con el grupo 9-ceto y los hidroxilos 2' y 4" protegidos, entonces es posible es alquilar el grupo 6-hidróxi del compuesto de fórmula (I) mediante la reacción con un agente alquilante en la presencia de una base. Los agentes alquilantes incluyen haliduros de alquilo y sulfonatos. Por ejemplo, los agentes alquilantes pueden incluir metiltosilato, bromuro de 2-fluoroetilo, bromuro cinamilo, bromuro de crotonilo, bromuro de alilo, bromuro de propargilo, y similares, la alquilación se lleva a cabo en la presencia de una base, tal como hidróxido de potasio, hidruro de sodio, isopropóxido de potasio, t-butóxido, y un solvente aprótico. La elección del agente alquilante dependerá de la naturaleza de los sustituyentes Ra a ser incluidos. Como se estableció anteriormente Ra puede ser alquilo (1-1 OC), sustituido o no sustituido, alquenilo de (2-1 OC), sustituido o no sustituido o alquinilo de (2-1 OC), sustituido o no sustituido. Particularmente preferidos son alquilo, alquenilo, o alquinilo no sustituidos, o formas sustituidas de estos en donde los sustituyentes incluyen uno o más halógeno, hidroxi, alcoxi (1-6C), oxo, S02R (1-6C), N3, CN, y NR 2 en donde R es H, alquilo sustituido o no sustituido (incluyendo cicloalquenilo) (1-12C), alquinilo (2-12C), (incluyendo cicloalquinilo), arilo (6-1 OC) sustituido o no sustituido, ¡ncluyendo las formas hetero de las anteriores. Especialmente preferidos son metilo, alilo, y etilo. Una vez que la alquilatación del 6-hidroxilo está terminada, el residuo de azúcar y el anillo macrólido puede desprotegerse. La desprotección de las porciones glucósido se lleva a cabo como se describió por Green, T.W., et al., in Protective Groups in Orqanic Svnthesis, infra. Las condiciones similares resultan en la conversión del derivado oxima a =NOH. Si la formación de la oxima no derivada no se lleva a cabo con la desprotección, la conversión de la oxima se lleva a cabo separadamente. La oxima puede por lo tanto removerse y convertirse a un grupo ceto mediante métodos estándar conocidos en la técnica. Los agentes de deoximación incluyen compuestos de oxido de azufre inorgánicos tales como hidrogensulfito de sodio, pirosulfato de sodio, tiosulfato de sodio, y similares. En este caso, los solventes próticos se utilizan, tales como agua, metanol, etanol, isopropanol, trimetilsilanol y mezclas de estos. En general, la reacción de deoximación se lleva a cabo en la presencia de un ácido orgánico. En este punto en el procedimiento, o posteriormente, después de que el compuesto de fórmula (4) se ha convertido a los compuestos de fórmula (5) o (6) o a cualesquiera otros compuestos (1 )-(3)> como se describe adicionalmente a continuación, el grupo introducido en el 6-hidroxilo puede adicionalmente manipularse. Convenientemente, la sustitución inicial puede proveer 6-O-allyl, es decir, 0-CH2CH=CH2, el cual puede adicionalmente derivarse mediante la reducción para dar el compuesto 6-0 propilo, o tratarse con tetraóxido de osmio para proveer el compuesto 2,3-dihidroxipropil, el cual puede adicionalmente esterificarse en cada átomo de oxígeno. El derivado O-alilo también puede oxidarse con ácido m-cloroperoxibenzoico en un solvente aprótico para proveer el compuesto epoxi el cual puede abrirse con aminas o compuestos heteroarilo que contienen N para proveer compuestos con cadenas laterales que contienen N, o puede oxidarse bajo condiciones Wacker para proveer el sustituyente 0-CH2C(0)-CH3, o puede ozonizarse para proveer el aldehido. El aldehido puede entonces convertirse a la oxima o hacerse reaccionar con una amina adecuada y reducirse en la presencia de un agente reductor de borohidruro para proveer una amina. La oxima también puede convertirse a un nitrilo mediante la reacción con una agente de deshidratación en un solvente aprótico. El derivado O-alilo también puede hacerse reaccionar con un haliduro de arilo bajo condiciones Heck (Pd(ll) o Pd(O), fosfina y amina o una base inorgánica) para proveer un derivado 3-aril prop-2-inilo. Este derivado entonces puede reducirse con hidrógeno y paladio sobre carbón para proveer un derivado 3-arilpropilo. Si el sustituyente inicial Ra es un 2-propino, las reacciones similares pueden emplearse para proveer alteraciones en la cadena lateral, incluyendo arilación. Con el objeto de convertir el compuesto de fórmula (4) hacia compuestos de fórmula (6), al primero remover la porción cladinosa, el compuesto de fórmula (4) se trata con ácido acuoso moderado o con un enzima de deglucosilación. Los ácidos adecuados incluyen clorhídrico, sulfúrico, cloroacético, trifluoroacético y similares, en la presencia de alcohol. Los tiempos de reacción son típicamente 0.5-24 horas a una temperatura de -10-35°C. Durante está reacción el grupo 2' de la azúcar remanente se protege como se estableció anteriormente y se desprotege subsecuentemente a la reacción de decladinización. El grupo hidroxilo resultante en la posición 3 del anillo macrólido entonces se oxida a la acetona utilizando un procedimiento de oxidación modificado de Swern. En este procedimiento, un agente de oxidación tal como N-clorosucinimida-dimetilsulfido o un carbodiamida-dimetiisulfóxido se utiliza típicamente un compuesto de fórmula (4) se añade a un complejo preformado N-clorosuccinimida y dimetil sulfóxido en un solvente clorinado tal como cloruro de metileno a -10-25°C. Después de ser agitado por 0.5-4 horas, una amina terciaria tal como trietilamina se añade para producir la cetona correspondiente y el grupo protector 2' entonces se remueve. Con el objeto de halogenar el macrólido en la posición 2 (convirtiendo Rb=H a halógeno), el compuesto de fórmula (6), en donde Rb=H, se trata con una base y un reactivo halogenante electrófilo tal como perbromuro de piridinio o N-fluorobenzensulfonimida. La posición 2 puede halogenarse a cualquier tiempo después de que el compuesto 3 ceto se prepara y preferiblemente después de que anillo 11 ,12 se forma. El sustituyente apropiado tal vinilo, etenilo, butenilo o azido en la posición C-13 puede manipularse adicionalmente. Por ejemplo una sal amido acetato del compuesto de la invención puede derivarse utilizando un cloruro de aril acetilo para producir un grupo aril amino alquilo en la posición C-13 como se ilustra en el esquema J.

ESQUEMA J RCOCI EtgN Preferiblemente los derivados C13 de un grupo azido toman un lugar antes de que el cetólido se forme. Los derivados de un grupo alquenilo tal como etenilo que puede tomar lugar ya sea antes o después de que el cetólido se forma y preferiblemente después de que el anillo 11 , 12 se forma, como se muestra en los esquemas N y P.

ESQUEMA N H2, Pd/C ESQUEMA P X = H, F Con el objeto de obtener los compuestos de fórmula (5), los compuestos que resultan a partir de la reacción de deglucosilación de fórmula (4) se tratan con un agente deshidratante tal como carbonil diimidazol y una base. Los intermediarios (7)-(9) pueden entonces prepararse a partir de intermediarios (4)-(6) Será evidente que la presencia del grupo 12-hidroxilo se requiere. Los grupos hidroxilo de las porciones de azúcar se protegen como se describió anteriormente y los grupos protegidos resultantes entonces se hacen reaccionar con hexametildisilazida de sodio y carbonildiimidazol lo cual resulta en la deshidratación para obtener un enlace p en la posición 10-11 y la derivación del 12-hidroxilo para proveer funcionalidad en el anillo macrólido como se muestra en los compuestos (7)-(9). El esquema B ilustra la secuencia de reacción a partir del compuesto (4) al compuesto (9) en el primer paso. La reacción de los compuestos (7)-(9) con amoniaco acuoso provee un compuesto de fórmulas (1 )-(3) en donde L es carbonilo y T es NH como se muestra en el esquema B para compuestos (9) y (3) en el segundo paso. Las reacciones de los compuestos (7)'-(9) con compuestos de las fórmulas H2NR, H2NOR, H2NNHCOR, H2NN=CHR o H2NNHR, en donde R es H o Rg, proveen los compuestos correspondientes de fórmulas (1 )-(3) en donde T es nitrógeno derivado como se describe con los sustituyentes Rf incluyendo -R, OR, -NHCOR, -N=CHR o -NHR. En el esquema B, es Rf H debido a que el amoniaco se utiliza. Estos son compuestos de las fórmulas (10)-(12): en donde Rf representa los sustituyentes en el nitrógeno como se describió anteriormente. El esquema C describe análogamente la reacción del compuesto (7) con H2NRf para formar un compuesto (10). desproteger Rf=H, g, -OR, -NHCOR, -N=CHR, o -NHR, en donde R es H o Ra.

La preparación sigue el procedimiento descrito por Baker et al. J Org Chem (1988) 53:2340, el cual se incorpora en la presente como referencia. En particular, el tratamiento del compuesto (7) con un compuesto amino de la fórmula H2N-Rf resulta en la formación del carbamato cíclico en el que Rf es como se describió anteriormente. El grupo protegido 2'-hidrox¡ puede desprotegerse como se describió anteriormente. Los procedimientos alternativos o adicionales pueden utilizarse para preparar compuestos (10)-(12) en donde Rf no es H. Por ejemplo, los compuestos de fórmulas (10)-(12) en donde Rf es H pueden hacerse reaccionar con agente alquilante el cual es de la fórmula R-halógeno para reemplazar el hidrógeno sobre el nitrógeno del anillo con un grupo alquilo. Además, los compuestos (10)-(12) que no contienen un grupo acilo como un sustituyente sobre el nitrógeno de T pueden formarse mediante el tratamiento de dichos compuestos (10)-(12) con un agente acilante seleccionado a partir del grupo que consiste de R(CO)-halógeno o (RCO)20 para dar compuestos (7)-(9) en donde T es -N- y Rr es -NH-COR. El tratamiento de los compuestos (10)-(12) en donde Rf es -NH2 con un aldehido R-CHO, en donde R es un como se define previamente da compuestos (10)-(12) en donde Rf es -N=CHR. El tratamiento de compuestos (10)-(12), en donde Rf es -NH2 con un agente alquilante que tiene la fórmula R-halógeno, en donde R es como se definió anteriormente, da los compuestos (10)-(12) en donde Rf es R.

Por supuesto, si el substrato para la formación del anillo es un compuesto de fórmula (4), un compuesto de la fórmula (3) resulta; las modificaciones entonces pueden llevarse a cabo para convertir el compuesto de fórmula (3) a compuestos de fórmula (1) y (2), como se describió anteriormente. Bajo estas circunstancias, el grupo ceto puede protegerse mediante una oxima derivada. Dichas modificaciones incluyen la remoción de la porción cladinosa mediante hidrólisis acida; oxidar el grupo 3-hidroxilo; y desproteger el hidroxilo protegido y los grupos ceto. De conformidad con el procedimiento alternativo en el esquema 4a ilustrado (Esquema D1 ) el compuesto intermediario ( ), el cual es el compuesto 9-oxima de eritromicina A, se somete a hidrólisis acida con mineral diluido o ácido orgánico como se describió previamente para remover la porción cladinosa y dar el compuesto intermediario (l2).

ESQUEMA D1 proteger oxima alquilación El compuesto oxima (l2) entonces se convierte al compuesto oxima protegido (l3) en donde V es =N-0-R1 en donde R1 es un grupo protector, mediante la reacción con el reactivo protector de oxima apropiadamente sustituida. Los grupos 3 y 2'-hidroxi de (l3) entonces se protegen, preferiblemente con un grupo protector trimetilsililo, para dar un compuesto (l4). El compuesto (l4) entonces se alquila como se describió previamente para dar el compuesto (l5), y el compuesto (l5) se desoxima primero como se describió anteriormente y luego el producto desoximado se convierte el compuesto ) mediante los procedimientos descritos para la preparación del compuesto (3) a partir del compuesto (4) que se ilustran en el esquema 2. El esquema D2 muestra el compuesto (le) desprotegido entonces y oxidado hacia el derivado 3-cetólido, compuesto (10) de la invención, en donde L es CO y T es -NRf mediante procedimientos descritos previamente. El compuesto intermediario l6 también puede desprotegerse y deshidratarse para formar el compuesto (11) de la invención, también mostrado en el esquema D2.

ESQUEMA D2 desproteger y oxidar Como se mencionó anteriormente, el sustituyente de la posición 6 puede manipularse después de que los compuestos (1)-(3) se forman. Por ejemplo, el compuesto (10) puede prepararse mientras que Ra es -CH2-CH-N-ORh y Rh es H o alquilo de C-I-C3, alquilo de C1-C3 sustituido con arilo, o alquilo de C1-C3 sustituido con heteroarilo. En este método, el compuesto (10), en donde Rg es -CH2-CH=CH2, se trata con ozono para formar el compuesto (10) en donde Ra es -CH2-CH=0. El compuesto (10) en donde Rg es -CH2-CH=0 se trata adicionalmente con un compuesto de hidroxilamina que tiene la fórmula NH2-0-Rh,en donde Rh es como se definió previamente; y se desprotege opcionalmente, y se aisla el compuesto deseado. En una modalidad preferida del procedimiento inmediatamente anterior, Rf es H. En otra modalidad de la ¡nvención es un procedimiento para preparar un compuesto (10) en donde Rg es -CH2-CH2-NH-R¡ en donde R¡, con el átomo al cual está unido, forma un anillo heterocicloalquilo de 3-10 miembros sustituido o no sustituido. El método comprende un compuesto reductivamente aminante (10) en donde Rg es -CH2-CH=0 con un compuesto amina que tiene la fórmula -NH2-R¡, en donde R¡ es como se definió previamente; y opcionalmente desproteger, y aislar el compuesto deseado. Los compuestos de las fórmulas (1)-(3) en donde L es carbonilo y T es -O- o en donde L es metileno y T es -O-, se preparan a partir de compuestos (4)-(6) utilizando el procedimiento descrito por Baker et al., J Org Chem (1988) 53:2340 en cual se incorpora en la presente como referencia. Los compuestos protegidos 2' o 2',4" de fórmulas (4)-(6) se convierten inicialmente al carbonato cíclico mediante la reacción con carbonildiimidazol y hexametildisilazida de sodio. Los compuestos (13)-(15) representan compuestos (1 )-(3) en donde L es metileno y T es -O-: En el esquema E se ilustra la conversión del compuesto que tiene la fórmula (6) al compuesto que tiene la fórmula (1 ). ESQUEMA E desproteger Los esquemas K y M ¡lustran la conversión de eritromicina a cetólidos. ESQUEMA K ESQUEMA M Con el objeto de preparar compuestos de fórmula (4)-(6) o (1 )-(3) en donde uno de Z e Y es H y el otro OH o protegido o es un derivado amino como se describió anteriormente, ya sea el carbonilo u oxima o derivado oxima se reduce utilizando un agente de reducción adecuado. Las aminas substituidas se obtienen mediante alquilación. Los métodos novedosos de síntesis de los compuestos de la invención también se proveen.

Modalidades ejemplares Los compuestos de fórmula (1), (2) y (3) se definen por varios sustituyentes. El cuadro 1 ilustra compuestos dentro del alcance de la presente invención los cuales son: de fórmula (1 ) en donde Rb es H, F, Cl, o Br, Li, CO, y Rc es H; de fórmula (2) en donde Rc es H y L es CO; y de fórmula (3) en donde Rc es H, L es CO, y Rc es H.

EJEMPLOS Los siguientes ejemplos están destinados a ilustrar, pero no a limitar la invención. Se encuentran los números y las designaciones de los compuestos en los esquemas ilustrativos y en la exposición previa. En estos ejemplo, en el primer paso general del método, se prepara un compuesto derivado de 6-desoxieritronólido B (6-dEB) por fermentación de una células hospedera Streptomyces recombinante. La fermentación para producir 15-metil-6-desoxieritronólido B y 14,15-deshidro-6-desoxieritronólido B requiere un intermediario de dicétido sintético para que se le alimente a las células termentadoras. Se describe la preparación de estos dicétidos sintéticos en el ejemplo 1. Estos dicétidos sintéticos son substratos para una 6-desoxieritronólido B sintasa (DEBS) que es incapaz de actuar sobre su substrato natural (propionil-CoA) debido a una mutuación en el dominio de cetosintasa del módulo 1 de DEBS. Esta DEBS recombinante es provista por el plásmido pJRJ2 en Streptomyces coelicolor CH999. Se describe S. coelicolor CH999 en la patente de E.U.A. No. 5,662,491 , incoforada a la presente por referencia. Se describe un derivado de S. coelicolor CH999, S. coelicolor K39-02, que se ha modificado genéticamente para incluir un gen ptpA, en la solicitud de patente de E.U.A. No. de serie 09/181 ,833, incoforada en la presente por referencia, y se puede emplear también para este propósito. El plásmido pJRJ2 codifica los genes eryAl, eryAII, y eryAIII; el gen eryAl contenido en el plásmido contiene la mutación nula KS1. La mutación nula KS1 evita la formación de 6-desoxieritronólido B producido por el gen de tipo silvestre, a no ser que se provea un substrato exógeno. Se describen el plásmido pJRJ2 y un procedimiento para usar el plásmido para preparar novedosas eritromicinas 13-sustituidas, en la publicación de PCT Nos. 99/03986 y WO 97/02358, y en la solicitud de patente de E.U.A. Nos. de serie 08/675,817, presentada el 5 de julio de 1996; 08/896,323, presentada el 17 de julio de 1997, y 09/311 ,756, presentada el 14 de mayo de 1999, cada una de las cuales se incorpora en la presente por referencia. Se pueden preparar los substratos exógenos mediante los métodos e incluyen los compuestos descritos en la publicación de PCT No. WO 00/44717 que reclama prioridad a la solicitud de patente de E.U.A. No. de serie 09/492,733, ambas presentadas el 27 de enero de 2000, por los inventores G. Ashley et al., y ambas que reclaman prioridad a la solicitud de patente de E.U.A. No. de serie 60/117,384, presentada el 27 de enero de 1999, cada una de las cuales se incorpora en la presente por referencia. Se pueden emplear también genes PKS diferentes de los genes ery; los genes adecuados incluyen la mutación nula KS1 que contiene genes PKS de oleandólido y megalomicina descritos en la publicación de PCT No. WO 01/27284 que reclama prioridad a la solicitud de patente de E.U.A. No de serie 60/158,305, presentada el 8 de octubre de 1899, y 09/428,517, presentada el 28 de octubre de 1999, y la publicación de PCT No. WO 00/26349, presentada el 22 de octubre de 1999, cada una de las cuales se incorpora en la presente por referencia. Se describe en el ejemplo 2 la fermentación de Streptomyces coelicolor CH999/pJRJ2 y S. coelicolor CH999/pCK7. Se puede lograr por separación el aislamiento de los productos de 6-desoxieritronólido que resultan de esta fermentación. Se añaden luego los productos aislados al caldo de fermentación de las cepas de Saccharopolyspora erythraea para hacer otros compuestos intermediarios útiles de la invención. Las cepas de S. erythraea catalizan la biosíntesis y la fijación de los residuos de azúcar a las posiciones 3 y 5 de los compuestos derivados de 6-dEB. Estas cepas comprenden también un producto funcional del gen de eryK e hidroxilan así los compuestos derivados de 6-dEB en la posición 12. Las cepas difieren si se produce un producto funcional del gen eryF. Si es así, se hidroxilan también en la posición 6 los compuestos producidos. Si no es así, se produce un derivado de 6-desoxieritronólido A. se describen en el ejemplo 3 estás fermentaciones de S. erythraea, junto con el aislamiento de los compuestos derivados de eritromicina A a partir del caldo de fermentación.

Se usan luego los productos aislados como intermediarios en la síntesis química de otros compuestos intermediarios de la ¡nvención. Para los intermediarios derivados de eritromicina A que comprenden un 6-hidroxilo, los ejemplos 4-6 describen el procedimiento para alquilar los compuestos a fin de hacer los intermediarios 6-O-alquilo de la invención. Se representan esquemáticamente estas reacciones en el esquema G.

ESQUEMA G ca. 85:15 E/Z ca. 85:15 E/Z ca. 85:15 E/Z Fórmula (4) EJEMPLO 1 Preparación de tioésteres de dicétido Se describen en este ejemplo los procedimientos usados para preparar los N-acetilcisteaminotioésteres (NAcS) usados para alimentar las células hospederas de Streptomyces recombinantes para hacer los compuestos intermediarios de 15-metil- y 14,15-deshidro-6-desoxieritronólido B. Los protocolos de síntesis descritos a continuación se describen también en la publicación de PCT No. WO 00/44717 que reclama prioridad a la solicitud de patente provisional de E.U.A. No. de serie WO 00/117,384, presentada 27 de enero de 1999, incorporada a la presente por referencia. Así, se prepara (2R,3R)-2-metil-3-hidroxihexanoato NAcS (preparación E), que se usa para preparar el Intermediario 15-metil-6-desoxieritronólido B, haciendo reaccionar (4S)-N-[(2S,3R)-2-metil-3-hidroxihexanoil]-4-bencll-2-oxazolidinona (preparación D) con N-acetilcisteamina (Preparación B). Se prepara la N-acetilcisteamina, en cambio, a partir de N,S-diacetilcisteamina (preparación A). Se prepara la (4S)-N-[(2R,3R)-2-met¡l-3-hidroxihexanoil]-4-benciI-2-oxazolidinona (preparación D) a partir de (4S)-N-propionil-4-bencil-2-oxazolidinona (propionil-Nox; preparación C). De manera similar, se prepara el (2S,3R)-2-metil-3-hiroxi-4-pentenoato NAcS (preparación G), el cual se usa para preparar el intermediario B 14,15-deshidro-6-desoxieritronólido, haciendo reaccionar (4S)- N-[(2S,3R)-2-metil-3-hidroxi-4-pentenoil]-4-bencil-2-oxazol¡dinona (preparación F) con N-acetilcisteamina (preparación B). Se prepara la (4S)-N-[(2S,3R)-2-metil-3-h¡droxi-4-pentenoil]-4-bencil-2-oxazolidinona (preparación F) a partir de (4S)-N-propionil-4-bencil-2-oxazolidinona (propionil-Nox; preparación C).

A. N.S-diacetilcisteamina Se añadió clorhidrato de cisteamina (50.0 g) a un matraz de fonda redondo, de 3 cuellos, de 1 I, equipado con barra agitadora magnética, dos embudos de adición y un electrodo de pH. Se añadió agua (300 ml) y se enfrió la solución agitada sobre hielo. Se ajustó el pH a 8.0 para adición de KOH a 8 N. Se puso anhídrido acético (125 ml) en un embudo de adición y se puso KOH a 8 N (350 ml) en el otro embudo de adición. Se añadió gota a gota el anhídrido acético a la solución de cisteamina, con KOH a 8 N, añadiéndose de manera que se mantuviera el pH de reacción a 8 +/-1. Después de que hubo estado completa la adición de anhídrido acético, se ajustó el pH a 7.0 usando HCl a 1 N y se dejó agitando la mezcla durante 75 min. sobre hielo. Se añadió NaCI sólido hasta saturar y se extrajo la solución cuatro veces usando 400 ml de porciones de CH2CI2. Se combinaron los extractos orgánicos, se secaron sobre MgS04, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida para producir 68.9 g (97% de rendimiento) de un aceite amarillo pálido, que cristaliza al entrar en reposo a 4°C.

B. N-acetilcisteamina Se puso N,S-diacetilcisteamina (42.64 g) en un matraz de fondo redondo, de 2 I, equipado con agitador magnético y disuelto en 1400 ml de agua. Se purga el matraz con N2 y se enfría la mezcla sobre un baño de hielo. Se añade hidróxido de potasio (49.42 g) y se agita la mezcla durante 2 h sobre hielo bajo atmósfera inerte. Se ajusta el pH a 7 usando HCl a 6 N y se añade NaCI sólido hasta saturar. Se extrae la mezcla 7 veces con 500 ml de porciones de CH2CI2. Se combinan los extractos orgánicos, se secan sobre MgS?4, se filtran y se concentran bajo presión reducida para producir 30.2 g (96% de rendimiento) del producto. Se destila este material inmediatamente antes de su uso, punto de ebullición de 138-140°C/7 mmHg.

C. (4S)-N-propionil-4-bencil-2-oxazolidinona (propionil-Nox) Un matraz de fondo redondo, de tres cuellos, de 1 I, seco, equipado con embudo de adición de 500 ml y barra agitadora, se cargó con 20 g de (4S)-4-bencil-2-oxazolidinona, se bloquea con septa y se lavó con chorro de nitrógeno. Se añadió THF anhidro (300 ml) con cánula y se enfrió la solución resultante con un baño a -78°c de hielo seco/isopropanol. Se cargó el embudo de adición con 78 ml de n-butil-litio (1.6 M en hexano) con cánula, que se añadió en una corriente lenta a la reacción. Se añadió rápidamente con jeringa cloruro de propionilo destilado (punto de ebullición de 77-79°C), 8.0 ml. Se dejó agitando la reacción durante 30 min. en el baño de hielo seco/isopropanol.

Se alejó la reacción del baño frío, se dejó calentar a >0°C y se detuvo con 50 ml de NH4CI acuoso saturado. Se concentró la mezcla a una mezcla aguada sobre un evaporador rodatorio. Se extrajo la mezcla aguada tres veces con 250 ml de porciones de éter etílico. Se combinaron los extractos orgánicos y se lavan con 50 ml, cada uno de NaHC03 acuoso saturado y salmuera, se secaron con MgS04, se filtraron y se concentraron para dar un aceite amarillo. El material se cristalizó al entrar en reposo. Se trituraron los cristales una vez con hexanos fríos (-20°C) para dar 21.0 g (80% de rendimiento) de material cristalino blanco, punto de fusión de 41-43°C. APCI-EM: m/z=234 (MH+), 178,117. 1 H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 7.2-7.4 (5H, m); 4.67 (1 H, m, H4); 4.14-4.22 (2H, m, H5); 3.30 (1 H, dd, J=3.13 Hz, bencílico); 2.89-3.03 (2H, m, H2); 2.77 (1 H, dd, J=9.13, bencílico); 1.20 (3H, t, J=Hz, H2).

D. (4S)-N-r(2S.3R)-2-met¡l-3-hidrox¡hexanoill-4-bencil-2-oxazolidinona Un matraz con fondo redondo, de tres cuellos, de 2 I, seco, equipado con embudo de adición de 500 ml, termómetro de baja temperatura y barra agitadora, se cargó con 19.84 g de N-propioniloxazolidinona, bloqueado con septa y lavado con chorro de nitrógeno. Se añadió diclorometano anhidro (100 ml) con cánula y se enfrió la solución resultante a -65°C en un baño de hielo seco/isopropanol. Se cargó el embudo de adición con cánula con 100 ml de triflato de dibultilboro (1.0 M en diclorometano), que se añadió en una corriente lenta a la reacción. Se añadió gota a gota con jeringa trietilamina (15.6 ml), manteniendo la temperatura de reacción inferior a -10°C. Se transfirió luego la reacción a un baño de hielo y se dejó agitando a 0°C durante 30 min. Después de ese período, se puso la reacción de vuelta en el baño de hielo seco/isopropanol y se dejó enfriar a -65°C. Se añadió butiraldehído (8.6 ml) rápidamente con jeringa y se dejó agitando la reacción durante 30 min. Se transfirió la reacción a un baño de hielo y se cargó el embudo de adición con 100 ml de una solución de fosfato acuoso a 1 M, pH 7.0 (la solución de fosfato está constituida de ¡guales cantidades molares de fosfato de potasio mono- y dibásico). Se añadió la solución de fosfato tan rápidamente como fuera posible, mientras que se mantuvo la temperatura de reacción inferior a 10°C. Se cargó luego el embudo de adición con 300 ml de metanol el cual se añadió tan rápidamente como fuera posible, mientras que se mantenía la temperatura de reacción inferior a 10°C. Finalmente, se cargó el embudo de adición con 300 ml en metanol:peróx¡do de hidrógeno al 30% a 2:1. Se añadió esto gota a gota para asegurar que se mantenía la temperatura inferior a 10°C. Se agitó la reacción durante 1 hora después de completar la adición. Se alejó luego el solvente sobre un evaporador rotatorio hasta que quedó una mezcla aguada. Se extrajo la mezcla aguada 4 veces con 500 ml de porciones de éter etílico. Se lavaron los extractos orgánicos combinados con 250 ml, cada uno de bicarbonato de sodio acuoso saturado y salmuera. Se secó luego el extracto con MgS04, se filtró y se concentró para dar un aceite ligeramente amarillo. Se cromatografió luego el material sobre Si02 usando hexanos:acetato de etilo a 2:1 (producto Rf=0.4) dando por resultado 22.0 g (85% rendimiento) del compuesto del título como un aceite incoloro. APCI-EM: m/z=306 (MH+), 1 H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 7.27-7.4 (5H, m, fenil); 4.71 (1 H, m, H4); 4.17-4.25 (2H, m, H5); 3.96 (1 H, m, H3); 3.77 (1 H, dq, J=2.57, 7Hz, H2); 3.26 (1 H, dd, J=4.13 Hz, bencílico); 2.79 (1 H, dd, J=9.13 Hz, bencílico); 1.5-1.6 (2H, m, H4); 1.3-1.5 (2H, m, H5); 1.27 (3H, d, J=7 Hz, 2'-Me); 0.94 (3H, t, J=7 hz, H6).

E. Tioéster de (2S.3R)-2-metil-3-hidroxihexanoato N-acetilcisteamina Se destiló N-acetilcisteamina a 130°C/7 mm Hg para dar un líquido incoloro a temperatura ambiente. Un matraz de fondo redondo, de tres cuellos, de 1 I, seco, equipado con embudo de adición de 500 ml y barra agitadora, fue bloqueado con septa y lavado con chorro de nitrógeno. Se cargó luego el matraz con 10.7 ml de N-acetilcisteamina con jeringa y con 400 ml de THF anhidro con cánula. Se enfrió la mezcla con un baño de MeOH/hielo. Se añadió gota a gota con jeringa bultil-litio (64 ml de 1.6 M en hexanos), dando por resultado la formación de un precipitado blanco. Después de agitar durante 30 min., se añadió gota a gota con jeringa dtrimetilaluminio (51 ml de 2.0 M en hexanos). La reacción se puso transparente después de la adición de trimetilaluminio y se dejó agitando 30 min. adicionales. Durante este período se puso 20.5 g (0.068 moles) de (4S)- N[(2S,3R)-2-metil-3-hidroxilhexanoil]-4-encil-2-oxazolid¡nona bajo un manto de nitrógeno y se disolvió en 100 ml de THF anhidro; se transfirió luego esta solución en una corriente lenta con cánula a la reacción. La mezcla de reacción resultante se puso de color amarillo-verde y se dejó agitando durante 1 h. Se terminó la reacción cuando ya no se pudo ver el material de partida por análisis cromatográfico de capa delgada (aproximadamente 1 h). Se trató la reacción con ácido oxálico suficientemente saturado para dar una reacción neutra con papel de pH (aproximadamente 90 ml). Se separaron luego los solventes sobre una evaporador rotatorio para dar una mezcla aguada blanca. Se extrajo la mezcla aguada seis veces con 250 ml de porciones de éter etílico. Se combinaron los extractos orgánicos y se lavó con salmuera, se secó con MgS04 se filtró y se concentró para dar un aceite ligeramente amarillo. Se purificó el producto de tioéster por cromatografía instantánea sobre Si02 usando hexanos:EtOAc al 1 :1 hasta eluir la 4-bencil-2-oxazolidinona. En este punto, se cambió el sistema solvente a EtOAc al 100% para dar fracciones puras de tioéster de dicétido. Se combinaron las fracciones de producto y se concentraron para dar 14.9 g (89% de rendimiento) del compuesto del título. Se hace referencia a este compuesto como el tioéster de propildicétido en el ejemplo 2. APCI-EM: m/z 248 (MH+); 1 H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 5.8 (br s, 1 H); 3.94 (dt, 1 H), 3.46 (m, 2H), 3.03 (dt, 2H), 2.71 (dq, 1 H), 1.97 (s, 3H), 1.50 (m, 2H), 1.37 (m, 2H), 1.21 (d, 3H), 0.94 (t, 3H).

F. (4S)-N-F(2S.3R)-2-metil-3-hidroc¡-4-penteno¡l1-4-bencil-2-oxazolidinona Un matraz de fondo redondo, de tres cuellos, de 2 I, seco, equipado con embudo de adición de 500 ml, termómetro de baja temperatura y barra agitadora, se cargó con 20.0 g de propioniloxazolidinona A, bloqueada con septa y lavada con chorro de nitrógeno. Se añadió diclorometano anhidro (100 ml) y se enfrió la solución resultante a -15°C en un baño de metanol/hielo. Se añadió triflato de dibutilboro (100 ml de 1.0 M en diclorometano) en una corriente lenta a través de modo de adición a tal velocidad de manera que se mantuvo la temperatura de reacción inferior a 3°C. Se añadió gota a gota con jeringa diisopropiletilamina (17.9 ml), manteniendo nuevamente la temperatura interna inferior a 3°C. Se enfrió luego la reacción a -65°C usando un baño de hielo seco/isopropanol. Se añadió acroleína durante 5 min. con jeringa. Se dejó agitando esta reacción durante 30 min. después de completar la adición. Se transfirió luego la reacción a un baño de hielo y se cargó el embudo de adición con 120 ml (0.1 mol) de una solución de fosfato acuoso a 1 M, pH 7.0 (la solución de fosfato está constituida de ¡guales cantidades molares de fosfato mono- y dibásico). Se añadió la solución a fosfato tan rápidamente como fuera posible, mientras que se mantenía la temperatura de reacción inferior a 10°C. Se cargó luego el embudo de adición con 400 ml de metanol que se añadió tan rápidamente como fue posible, mientras que se mantenía la temperatura de reacción inferior a 10°C. Finalmente, se cargó en embudo de adición con 400 ml de metano peróxido de hidrógeno a 30% a 2:1 por adición inicial gota a gota para mantener la temperatura inferior a 10°C. Se agitó la reacción durante 1 hora. Se separó el solvente usando un evaporador rotatorio, dejando una mezcla aguada. Se extrajo la mezcla aguada 4 veces con 500 ml de porciones de éter etílico. Se combinaron y se lavaron los extractos orgánicos con 250 ml cada uno de bicarbonato de sodio saturado y salmuera, se secó luego con MgS04, se filtró y se concentró para dar un aceite ligeramente amarillo. La trituración con hexano indujo una cristalización. La recristalización procedente del éter por adición de hexano dio por resultado 13.67 g (55% de rendimiento) de producto. 1 H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 7.2-7.4 (m, 5H); 5.86 (ddd, 1H), 5.35 (dt, 1 H), 5.22 (dt, 1 H), 4.71 (m, 1 H), 4.21 (m, 2H), 3.89 (dq, 1 H), 3.26 (dd, 1H), 2.80 (dd, 1 H), 1.25 (d, 3H).

G. Tioéster de (2S.3R)-2-metil-3-hidrox¡-4-pentenoate N-acetilcisteamina Se destiló N-acetilcisteamina a 130°C/7 mm Hg para dar un líquido incoloro a temperatura ambiente. Un matraz de fondo redondo, de tres cuellos, de 1 I, seco, equipado con embudo de adición de 500 ml y barra agitadora, se bloqueó con septa y se lavó con chorro de nitrógeno. Se cargó luego el matraz con 7.5 ml de N-acetilcisteamina con jeringa y con 500 ml de THF anhidro con cánula. Se enfrió luego la reacción con baño de MeOH/hielo. Se añadió gota a gota con jeringa butil-litio (44 ml de 1.6 M en hexano). Se formó un precipitado blanco conforme se añadió n-BuLi. Después de agitar durante 30 min., se añadieron gota a gota con jeringa 35.5 ml (0.071 moles) de tirmetilaluminio (2.0 M en hexano). La reacción se puso clara después de la adición de trimetilaluminio y se dejó agitando 30 min. adicionales se puso (4S)-N-[(2S,3R)-2-metil-3-hidroxi-4-pentenoil]-4-bencil-2-oxazolidinona de la preparación F (13.6 g) bajo un manto de nitrógeno, se disolvió en 50 ml de THF anhidro y se transfirió luego esta solución en una corriente lenta con cánula a la reacción. La mezcla de reacción resultante se puso de color amarillo-verde y se dejó agitando 1 H. Se consideró que la reacción había terminado, cuando ya no se pudo ver el material de partida por cromatografía de capa delgada (aproximadamente 30 min.). Se añadió ácido oxálico suficientemente saturado para dar una reacción neutra con papel de pH (aproximadamente 60 ml). Se separaron luego los solventes con evaporador rotatorio para dar una mezcla aguada blanca. Se extrajo la mezcla aguada 6 veces con 250 ml de porciones de éter etílico. Se combinaron los extractos orgánicos, se lavaron con salmuera, se secaron con MgS04l se filtraron y se concentraron para dar un aceite ligeramente amarillo. Se purificó luego el tioéster por cromatografía instantánea sobre S¡02. Se opero la columna con hexanos: acetato de etilo a 1 :1 hasta la elución de oxazolidinona. En este punto, se cambio el eluyente a acetato de etilo al 100% para dar fracciones puras de producto. Se combinaron las fracciones y se concentraron para dar 7.7 g (71 % de rendimiento) del producto de compuesto del título. Se hace referencia a este producto como tioéster de vinildicétido en el ejemplo 2. 1 H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 5.82 (ddd, 1 H); 5.78 (br, 1 H), 5.21 (dt, 1 H), 4.47 (m, 1 H), 3.45 (m, 2H), 3.04 (m, 2H), 2.81 (dq, 1 H), 1.96 (s, 3H), 1.22 (s, 3H).

EJEMPLO 2 Preparación de eritronolido Se describe Strerptomyces coelicolor CH999/pJRJ2 en la publicación de PCT No. WO 97/02358 que reclama propiedad a la solicitud de patente de E.U.A. nos. de serie 08/896,323, presentada el 17 de julio de 1997, y 08/675,817, presenta el 5 de julio de 1996, cada una de las cuales se incorpora en la presente por referencia. El plásmido pJRJ2 codifica una forma mutada de DEBS en que sea inactivado el dominio de cetosintasa del módulo 1 (KS1) por mutagénesis (KS1 °). Las cepas de S. coelicolor que comprenden este plásmido en las cuales se les alimenta (2S, 3R)-2-metil-3-hidroxihexanoato-N- Acetilcisteamina (Preparación E, propildicétido) del ejemplo 1 produce 15-metil-6-deoxieritronólido B. Se descongela un frasco de 1 ml del banco celular de trabajo CH999/pJRJ2 y se añade el contenido del frasco a 50 ml de medio inoculo 1 en un matraz desviado de 250 ml. Se pone el matraz en un encubador/agitador mantenido a 30±1 °C y 175±25 RPM durante 48±10. Se añade luego el cultivo de 50 ml a un matraz desviado de 2.8 L que contiene 500 ml de medio inoculo 1. Se incuba éste matraz en un encubador/agitador a 30±1°C y 175±25 RPM durante 48±10 horas. Se dividen igualmente 500 ml de cultivo entre diez matraces desviados de 2.8 L, conteniendo cada uno 500 ml de medio inoculo 1. Se incuban luego todos los matraces como se describe previamente. Se prepara un fermentador de 150 L esterilizando 100 L de medio de producción 1 a 121 °C durante 45 minutos. Después de la incubación, se combinan todos los 10 matraces en una botella de inoculación estéril de 5 L y se añaden asépticamente a un fermentador de 150 L. Se controla el fermentador a 30°C, pH 6.5 por adición de H2S04 a 2.5 N y NaOH a 2.5 N, oxigeno disuelto > 80% de saturación de aire por velocidad de agitación, (500-700 RPM), velocidad del flujo de aire (10-50 LPM), y/o control de la retropresión (0.1-0.4 bar). Se controla el material esponjoso por la adición intermitente de una solución al 50% de material antiesponjoso B. A las 24±5 horas, se añade (2S, 3R)-2-metil-3-hidroxihexanol-N-acetilcisteamina (propildicétido, Preparación E en el ejemplo 1) a una concentración final de 1 g/l. Se prepara propildicétido solubilizando el sulfóxido de dimetilo a una relación de 1 :4 (dicétido a DMSO) y se esteriliza luego con filtro (0.2 µm, filtro de nilón). La producción de 15-metil-6-deoxieritronólido B(15-metil-6dEB) cesa en el día 7 y se cosecha el fermentador. Se centrifuga el caos de fermentación a 20,500 g en una centrifuga Alpha Laval™ AS-26. El producto está predominantemente en el centrato; de desecha la masa celular centrifugada.

Se ha completado también este procedimiento en un fermentador de 1000 L (volumen de trabajo de 700 L). El procedimiento de inoculo es idéntico a procedimiento mencionado anteriormente, excepto que se cargan los 150 L de fermentador con medio inoculo 1 y se carga el fermentador de 1000 L con medios de producción 1. Se controla el fermentador a 30°C, pH 6.5 por adición de H2S04 a 2.5-5 N y NaOH a 2.5-5 N, oxigeno disuelto > 70% de la saturación de aire por velocidad de agitación, (140-205 RPM), velocidad del flujo de aire (100-200 LPM), y/o control de contrapresión (0.2-0.5 bar). Se controla el material esponjoso por la adición de una solución al 50% de material antiesponjoso B, según se necesite. A las 24±5 horas, se añade 2-met¡l-3-hidroxihexanol-N-propiocisteamina (300 gramos) racémica al fermentador de 1000 L. Se cosecha el fermentador a 4.6 días por centrifugación como se describe anteriormente. Los medios usados en éste procedimiento incluyen los siguientes: MEDIOS DE INOCULO 1.

Se esteriliza con autoclave durante 60 minutos a 121 °C.

Adiciones post-estériles: 1) 1ml/L de 50mg/ml de triostrepto en DMSO al 100%, filtrado estéril. 2) 1ml/L de emulsión de silicio de material antiesponjoso B al 100% (J.T. Baker), esterilizado con autocalve. 3) 40ml/L de 500 g/L de glucosa, esterilizado con autocalve. (falto) MEDIOS DE PRODUCCIÓN 1.

Esterilizado en el fermentador durante 45 minutos a 121°C.

Adiciones post-estériles para el medio de producción 1 : 1) 1ml/L de 50mg/ml de triostrepto en DMSO al 100%, filtrado estéril. 2) 1 ml/L de emulsión de silicio de material antiesponjoso B al 100% (J.T. Baker), esterilizado con autocalve. Después de la centrifugación, se filtra el centrado. Se hace pasar el filtrado (aproximadamente 700 L) a través de una columna Amicon™ Moduline colun (20 x 350 cm) que contiene 20 L de resina HP20 (Mitsubishi). La velocidad de flujo durante la carga es de 4 L/minuto con una caída de presión inferior a 0.562 kg/cm2 (55,152 Pa). Después de cargar la resina, se lava con 20 L de agua y luego a 40 L de metanol a 30%. Se eluye 15-metil-6dEBusando metanol al 100%. Se recogen cuatro fracciones de 12 L con las fracciones 2, 3 y 4 que contiene todo el 15-metil-6dEB detectable. Se diluye la agrupación de producto 15-metil-6dEB con 36.7 L de agua dando los 75 L de una solución clara. Se carga está solución directamente sobre una columna Amicon™ Vantage de 5 L que contiene resina HP20SS (Mitsubishi). Se lleva a cargo la carga de columna a 1 L/minuto. Se eluye la columna con 20 L de metanol al 65%, 20 L de metanol al 10%, 20 L de metanol al 80% y finalmente 20 L de metanol al 100%. Se recogió un total de 16 x 5 L de fracciones. Se combino el 80% de fracciones junto con lo último 70% de fracciones (25 L)y se evaporo hasta secar. Se disolvió el residuo resultante en 1 L de metanol al 100%, se filtro, evaporo y seco en un 1 de metanol al vacío a 40°C. Este procedimiento dio por resultado 33 g de un producto sólido que contenía 15-metil-6dEB.

B. 14.15-dehidro-6-deoxieritronólido B (compuesto P. Pvj=vinilo) Las cepas de S. coelicolor que comprenden éste plásmido, el cual se alimenta con (2S,3R)-2-metil-3-hidrosi-4-pentenoato NAc tioéster de cisteamina (preparación G) del ejemplo 1 , producen 14,15-dehidro-6-deoxieritronólido B cuando se prepara de acuerdo con el procedimiento descrito en la preparación A anterior para producir 15-metil-6-deox¡eritronólido B.

C. 14-nor-6-deoxieritronólido B (compuesto P. R¿=met¡lo) Similarmente, se produce 14-nor-6-deoxieritronólido B usando hospedero CH999/pCK7 S. coelicolor, cuando se prepara de acuerdo con el procedimiento descrito en el ejemplo 2A.

EJEMPLO 3 Preparación de eritromicina Se convierten los compuestos derivados de 6-dEB producidos en el ejemplo 2, preparaciones A-C, a derivados de eritromicina usando una cepa recombínante de Saccharopolyspora erythraea. Para la producción de erotromicina que tienen tanto grupos 6- como 12-hidroxilo, la cepa usada de S. erythraea fue K40-67 o K39-14V. Se creo esta cepa transformando una cepa de S. erythraea capaz de producir altos niveles de eritromicina A con un plásmido derivado pWHM3 que comprende una secuencia mutada de eryAl que codifica un dominio KS1 inactivado. Por recombinación homologa, se hicieron incapaces los transformantes resultantes, de producir 6-deoxyeritonolido B. Así, el análogo de dEB alimentado no está sujeto a competencia para la hidroxinación en la posición 6. Para producción de derivados de eritromicina que tienen solamente el grupo 12-hidroxilo, la cepa usada de S. erythraea fue K39-07. Se construyó esta cepa a partir de la cepa K40-67 por descomposición del gen de eryF hidroxilasa; este destruye la habilidad de hidroxilar el análogo en la posición 6. Se fermentaron ambas cepas en condiciones sustancialmente similares, como se describe a continuación. 15-metil-eritromicina A Se produce 15-metil-eritromicina A de acuerdo con el siguiente protocolo: se descongela un frasco de ml del banco celular de trabajo K39-14V y se añade el contenido del frasco a 50 ml del medio inoculo 2 en un matraz desviado de 250 ml. Se pone el matraz en un incubador/agitador manteniendo 34±1°C y 175±25 RPM durante 48+10 horas. Se añade luego el cultivo de 50 mL a un matrz desviado de 2.8 L que contiene 500 mL de medio inoculo 2. Se incuba el matraz en un incubador/agitador a 34±1°C y 175+25 RPM durante 48+10 horas. Se divide el cultivo de 500 mL igualmente entre 10 matraces desviados de 2.8 L, conteniendo cada 500 mL de medio inoculo 2. Se incuban luego todos los matraces como se describe previamente. Se prepara un fermentador de 150 L estilizando 100 L en medio de producción 2 a 121 °C durante 45 minutos. Después de la incubación, se combinan todos los 10 matraces en una botella de inoculación estéril de 5L y se añaden asépticamente a un fermentador de 150 L. Se controla el fermentador a 34°C, pH 7.0 por adición de H2S04 a 2.5 N y NaOH, a 2.5 N oxígeno disuelto > 80% de saturación de aire por velocidad de agitación (500-700 RPM) velocidad de flujo de aire (15-50 LPM) y/o control de contra presión (0.1-0.4 bar). Se controla el material esponjoso mediante la adición de una solución al 50% de material antiesponjoso B. A las 24+5 horas, se inicia una alimentación a 58-60 mL/hora de dextrina al 15% (p/w). Se mezcla continuamente la solución de dextrina durante el periodo de alimentación. A las 24±5 horas, se añaden 25 gramos de 15-metil-6dEB (preparación A en el ejemplo 2) a fermentador. Se prepara 15 — metil-6dEB solubilizando 25 gramos de 15-metil-6dEB en 400-600 mL de etanol al 100% y filtrando (0.2 µm, filtro de naylon). La consversión de 15-metil-6dEB a 15-metil-eritromicina A cesa después de 60±10 horas y se cosecha el fermendor. Se centrifuga el cambio de fermentación a 20,500 g en una centrifuga Alfa Laval™ AS-26. El producto esta predominantemente el en centrado; se desecha la masa celular centrifugada.

Los medios usados en este procedimiento incluyen los siguientes: MEDIOS DE INOCULO 2.

Se esteriliza con auto clave durante 60 minutos a 121°C. Adición postesteril Se esteriliza con auto clave 1 ML/L de material autiespumoso al 100% B (J.T. Baker.,).

MEDIOS DE PRODUCCIÓN 2.

Se esteriliza en el fragmentador durante 45 minutos a 121 °C. Se hace pasar el caldo de fragmentación centrifugado (127 L) que contiene 34 g de la molécula de objetivo a través de 18.3 L de sorbete HP20 empacado en una columna de cromatografía Amicon™ P350 Moduline 2. A 4 L/min. de carga, se encuentra que la contrepresión es menor que 0.352 kg/cm2 (34,470 Pa). Enseguida de cargar, se lava la resina con 20 L de agua desinonizada y luego 40 L de metanol a 30%. Se eruye 15-metil eritromicina A usando 54 L de metanol A 100%. Se evapora la agrupación de producto usando un evaporador rotatorio Buchi™ (R-152). Se disolvieron los sólidos en una cantidad mínima de metanol al 100%, se filtró y se evaporó el filtrado hasta secar. Esto dio por resultado 123g de material que contenía 15-metil-eritromicina A al 30% en peso. Se extrajeron dos veces 80 gramos de material al 30% con 1 L de acetona a 40°C. Se filtró el extracto de acetona y se secó el filtrado sobre la superficie interior de un matraz de evporación rotatoria de 20L. Se extrajeron los sólidos comenzando 2: acetona a grandes a 9:1 3 veces a 40°C. Se agruparon los extractos orgánicos y se evaorarón hasta secar tanto 32 g de sólidos enriquecidos (68%) en 15-metil.eritromicina A. Se disolvió la agrupación de producto de la extracción de acetona/hexano en 1 L de metanol al cual se añadió una cantidad igual de agua. Se carga la solución de metanol sobre columna de cromatografía HP20SS (Kontes) previamente lavada y equilibrada con metanol al 50%. Las dimensiones de la columna fueron de 4.8 x 115 cm. La carga de columna con respecto a 15-metil-eritromicina A es de 11 g/L. Se lava la columna con 50% (0.8 L) y 60% (8 L) metanol en agua. Se lleva a cabo la ilusión de la molécula de objetivo usando (70%(8L), 80% (16L) y 85% (8L) de metanol en agua. Se recogieron 1 L de fracciones. Se combinaron las fracciones 11 -29, se evaporaron y se secaron en un número al vacío dando 23 g del producto con 93% de pureza. Este material sirvió de material de partida para los procedimientos de derivatización química descritas en los siguientes ejemplo. Se producen también los siguientes productos por está metodología: (i) 14-noreitromicina A (R =Me); (ii) 14,15-dehidro-eritromicina A (R = alilo), (iii) 14-nor-6-desoxi-eritromicina A; (iv) 14,15-deshidro-6-desoxi-eritromicina A; y (v) 15-met¡l-6-desoxi-eritromicina A. Cuando se usan para hacer derivados de 3-descladinosa-3-oxo, no se separa los derivados de eritromicina A de los derivados de eritromiclna C; en cambio, se usaron mezclas de los compuestos eritromicina A y eritromicina C como materiales de partida para la derivatización química. Se extrajeron estos productos y se purificaron como sigue: En general, se ajustaron los caldos de fermentación a Ph 8.0 por adición de NaOH y se añadió etanol (0.1 l/l de caldo). Se clarificó el caldo por centrifugación y se cargó sobre columna (1 kg de XAD/1 g análogos de eritromicina) de resina XAD-16 (Rohn y Haas) a una velocidad de flujo de 2-4 ml/cm2-min. Se lavó la resina cargada con 2 volúmenes de columna de etanol al 20% (v/v) en agua y se eluyeron los análogos de eritromicina procedentes de la resina con acetona y se recogieron en 1/2 fracciones de volumen de columna. Se identifican las fracciones que contienen análogos de eritromicina por cromatografía de capa delgada (acetato de etilo:hexano a 1 :1) y CLAR/EM. Se agrupan los análogos de fracciones de acetona que contienen eritromicina y se separan los materiales volátiles bajo presión reducida. Se extrae la mezcla acuosa resultante con acetato de etilo. Se lava el extracto de acetato de etilo con NaHC?3 saturado y soluciones de salmuera, se seca sobre sulfato de sodio o magnesio, y se concentra hasta secar bajo presión reducida. Se disuelve el material crudo en diclorometano y se carga sobre una almohadilla de gel de sílice y se lava con diclorometano:metanol (96:4 v/v) hasta que el eluyente ya no está amarillo. El material deseado está con diclorometano:metanol:trietilamina (94:4:2 v/v) y se recoge en fracciones. Se identifican las fracciones que contienen eritromicina por cromatografía de capa delgada, se recoge y se concentra bajo presión reducida. Se recristaliza este material del diclorometano/hexanos. Se ilustra este procedimiento general como sigue: (i) 14-noreritromicina Se añadió un litro de etanol a cada uno de 10 litros de caldo de fermentación. Se centrifugó el caldo y se hizo pasar el sobrenadante a través de 0.6 litros de XAD (dimensiones de la columna 17 cm x 6.5 cm) a una velocidad de flujo de 100 ml/min. Después de cargar, se lavó la columna con 1.5 litros de etanol al 20% (v/v) en agua. Se eluyó luego el material deseado con acetona. Se concentraron las fracciones que contenían este material bajo presión reducida hasta que se separaron los materiales volátiles y se extrajo el resto acuoso con acetato de etilo. Se lavaron las capas de acetato de etilo con solución de bicarbonato de sodio saturado, salmuera, se secó con sulfato de magnesio y se concentró bajo presión reducida para dar el extracto crudo. Se disolvió el material crudo (0.6 g) en diclorometano y se filtró por gravedad a través de una almohadilla de 3 cm de gel de sílice en un embudo filtrado de 6 cm de diámetro. Se eluyó el material con 400 ml de diclorometano seguido por 400 ml de diclorometano:metanol:trietilamina (90:10:2 v/v) y se recogió en 40 ml de fracciones. Se identificaron fracciones que contenía eritromicina por cromatografía de capa delgada (éter:metanol:NH4?H 90:8:2 v/v, Rf~0.35 y diclorometano:metanol 95:5 v/v, Rf~0) y se concentraron bajo presión reducida. Se recristalizó este material procedente de diclorometano/hexanos. (ii) 15-metil-eritromicina A Se añadió 8 litros de etanol a aproximadamente 80 litros de caldo de fermentación. Se centrifugó el caldo y se hizo pasar el sobrenadante a través de 2.5 litros de XAD a una velocidad de flujo de 230 ml/min. Después de cargar, se lavó la columna con 1 litro de agua y 5 litros de etanol al 20% (v/v) en agua. Se eluyó luego el material deseado con acetona. Se concentraron las fracciones que contenían este material bajo presión reducida hasta que se separaron los materiales volátiles y se extrajo el resto acuoso con acetato de etilo. Se lavaron las capas de acetato de etilo con solución de bicarbonato de sodio saturado, salmuera, se secaron con sulfato de magnesio y se concentraron bajo presión reducida para dar el extracto crudo. Se disolvió el material crudo (8.3 g) en diclorometano y se filtró por gravedad a través de una almohadilla de 3 cm de gel de sílice en un embudo fritado de 9 cm de diámetro. Se eluyó el material con 200 ml de diclorometano, seguido por 600 ml de diclorometano:metanol (94:4 v/v), seguido por 900 ml de diclorometano:metanol:trietilamina (89:9:2 v/v) y se recogió en 40 ml de fracciones. Se identificaron las fracciones que contenían eritromicina por cromatografía de capa delgada (éter:metanol:NH4?H 90:8:2 v/v, Rf~0.4 y dlclorometano:metanol 95:5, Rf~0.05) y se concentraron bajo presión reducida. Se volvió a someter este material a procedimiento mencionado anteriormente, antes de que fuera adecuado para su recristalización. (¡ii) 14-nor-6-desoxi-er¡tromicinas Se añadió 1 litro de etanol a cada una de dos fermentaciones de 10 litros. Se centrifugaron los caldos y se combinaron los sobrenadantes para un total de aproximadamente 22 litros. Se hicieron pasar luego los caldos combinados a través de 1 litro de XAD (dimensiones de la columna 23.5 cm x 6.5 cm (d.i.) a una velocidad de flujo de 170 ml/min. Después de cargar, se lavó la columna con 2 litros de etanol al 20% (v/v) en agua. Se eluyó luego el material deseado con acetona. Se concentraron las fracciones que contenían este material bajo presión reducida hasta que se separaron los materiales volátiles y se extrajo el resto acuoso con acetato de etilo. Se lavaron las capas de acetato de etilo con solución saturada de bicarbonato de sodio, salmuera, se secaron con sulfato de magnesio y se concentraron bajo presión reducida para dar el extracto crudo. (iv) 15-metil-6-desox¡-eritromic¡nas Se añadió 1 litro de etanol a cada uno de 3 termentadores que contenían 10 litros de caldo. Se centrifugaron los caldos y se hizo pasar el sobrenadante sobre 1.25 litros de XAD (dimensiones de la columna 40 cm x 6.5 cm) a una velocidad de flujo de 130 ml/min. Se lavó luego la columna con 3 litros de etanol al 20% (v/v) en agua. Se eluyó luego el material deseado con acetona. Se concentraron las fracciones que contenían este material bajo presión reducida hasta que se separaron los materiales volátiles y se extrajo el resto acuoso con acetato de etilo. Se lavaron las capas de acetato de etilo con solución saturada de bicarbonato de sodio, salmuera, se secaron con sulfato de magnesio y se concentraron bajo presión reducida para dar el extracto crudo. Se disolvió el material crudo (2.8 g) en diclorometano y se filtró por gravedad a través de una almohadilla de 3 cm de gel de sílice en un embudo fritado de 5 cm de diámetro. Se eluyó el material con 400 ml de diclorometano:metanol (96:4 v/v) seguido por 400 ml de diclorometano:metanol:triet¡lamina (89:9:2 v/v) y se recogió en 40 ml de fracciones. Se identificaron las fracciones que contenían eritromicina por cromatografía de capa delgada (éter:metanol:NH4?H 90:8:2 v/v y diclorometano:etanol 95:5) y se concentraron bajo presión reducida. Este material requirió purificación adicional por cromatografía de gel de sílice.

EJEMPLO 4 Síntesis de 6-O-metil-14-noreritromicina A. es decir, fórmula (4) en que Ra=Me. Rd=Me, R^H. Rff=H A. 14-Noreritromicina A 9-oxima se Se mantuvo una solución de 14-noreritromicina A (0.621 g, 80% pura), hidroxilamina (0.5 ml de 50% solución acuosa) y ácido acético (0.2 ml) en isopropanol (2 ml), a 50°C durante 22 horas. Se extrajo con cloroformo/etanol (3/2), se lavó con bicarbonato de sodio, salmuera y se secó sobre MgS0 . La filtración y la evaporación in vacuo produjo un producto crudo (0.65 g) como un sólido blanco que se usó directamente para la siguiente transformación.

B. 14-Noreritromicina A-9-|O-(1-¡sopropoxiciclohex¡l?|oxima A una solución de 14-noreritromicina A 9-oxima (0.65 g) y 1 ,1-diisopropoxiciciohexanona (0.95 ml) crudas anteriores entre cloruro de metileno (2 ml) se le añadió p-toluensulfonato de piridinio (PPTS) (0.333 g) en cloruro de metileno (2 ml). Después de agitar durante la noche, se extrajo la mezcla (cloroformo/etanol a 3:2), se lavó (NaHC03-H20, salmuera), y se secó (MgSÜ4). Después de la filtración y la evaporación in vac?o se impulsó repetidamente el producto crudo con tolueno e isopropanol para producir 0.74 g del producto, que se usó directamente para la siguiente reacción.

C. 2',4"-bis-0-trimet¡lsil¡l-14-noreritromicina A-9-[0-(1-isoprop¡-ciclohexiiyioxima A una solución de 14-noritromicina A 9-[0-(1-isopropoxiciclo-hexil)]oxima (0.74 g) en cloruro de metileno (6 ml) se le añadió una solución de trimetilsilil imidazol (0.33 ml) y cloruro de trimetilsililo (0.18 ml) en cloruro de metileno (2 ml) a 0°C. Después de 5 minutos de agitación, se añadió acetato de etilo, ' se lavó (NaHC03-H20, salmuera), y se secó (MgS04). La cromatografía instantánea sobre gel de sílice (hexano:acetona a 10:1 , trietilamina al 1%) dio un producto puro como un sólido blanco (0.50 g). La espectrometría de masas revela [M+H]+ = 1020.

D. 6-Q-Metil-2'-4"-bís-0-trimetilsilil-14-noreritromicina A-9-fO-d -¡sopropoxiciclohesil)joxima Se trató una solución de 2'-4"-b¡s-0-tr¡met¡ls¡l¡l-14-noreritromicina A-9-[0-(1-isopropoxiciclohesil)]oxima (0.3 g, 0.29 mmoles) en 1 :1 metilsulfóxido/tetrahidrofurano (DMSO/THF) (1.4 ml) con 0.3 ml de una solución a 2 M de bromuro de metilo en éter y se enfrío a 10°C. se añadió una mezcla de solución a 1 M de terf-butóxido de potasio en THG (0.6 ml) y DMSO (0.6 ml) durante 6 horas usando una bomba de jeringa. Se diluyó luego la reacción con acetato de etilo, se lavó con NaHC?3, saturado, salmuera, y se secó sobre MgS04. La filtración y la evaporación in vacuo dieron un producto crudo (0.29 g) de un sólido blanco, la espectrometría de masas revela [M+H]+ = 1034.

E. 6-0-Metil-14-norexitromicina A-9-oxima Una mezcla 6-0-metil-2'-4"-bis-0-trimetilsilil-14-noreritromicina A-9-[0-(1-isopropoxiciclohesil)]oxima (0.29 g), ácido acético (3.6 ml), acetronitrilo (6 ml) y agua (3 ml) a temperatura ambiente durante 4.5 horas. Se impulsó la mezcla hasta secar usando tolueno para dar un producto crudo como sólido blanco (0.24 g), que se usó directamente para el siguiente paso sin purificación adicional.

F. 6-0-Metil-14-noreritromicina A Se mantuvo una mezcla 6-0-met¡l-2'-4"-bis-0-trimetilsil¡l-14-noreritromicina A-9-oxima (0.24 g) hidrozulfito de sodio (0.45 g, 85% pura), agua (3 ml), etanol (3 ml) y ácido fórmico (0.07 ml) a 85°C durante 8 horas. Se ajustó la reacción a pH 8 con NaOH a 1 N y se extrajo con acetato de etilo. Se lavó el extracto orgánico con salmuera, se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró para dar un producto crudo como un sólido blanco (0.2 g). La espectrometría de masa revela [M+Hf =7.35.

EJEMPLO 5 Síntesis de 6-O-metil-14,15-dehidroeritromicina A. es decir, fórmula (4) A. 14-dehidroeritromicina A 9-oxima Se trato una suspensión de 14,15-dehidroeritromicina A (1 ,984 g, 47% de pureza, 1.2 mmoles) en 6 ml de 2-propanol con 1.97 ml de hidroxilamina acuosa al 50% y se agitó hasta disolver. Se añadió ácido acético (0.62 ml) y se agitó la mezcla durante 25 horas a 50°C. Con el enfriamiento a temperatura ambiente, se añadió NaHC03 saturado y se concentró la mezcla in vacuo para separar el isopropanol se extrajo la mezcla acuosa resultante tres veces con 250 ml de CHCI3. Se combinaron los extractos orgánicos, se lavaron con NaHC03 saturado, agua y salmuera, se secaron luego sobre MgS?4, se filtraron y se concentraron para dar 0.92 g del producto.

B. 14.15-deshidroeritromicina A-9-GO- -isopropoxiciclohexil)]oxima Se disolvió la enzima de (A) (0.92 g) en 6.2 ml de CH2CI2 y se trató con 1,1-diisopropoxiciclohexano (1.23 g) y p-toluensulfonato de piridinio (0.464 g) durante 15 horas a temperatura ambiente. Se diluyó la mezcla con 160 ml de CH2CI2) se lavó luego secuencialmente con NaHC?3 saturado, agua, y salmuera. Se secó la fase orgánica con MgS0 se filtro y se evaporó para dar un jarabe de color café. La cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de tolueno a 1 :1 tolueno/acetona + Et3N a 1%) produjo 0I998 g del producto.

C. 2'.4"-bis-0-tr¡metilsilin-14.15-deshidroeritrom¡cina A-9-IO-(1-¡sopropiciclohexil?|oxima Se enfrió una solución de 14,15-deshidroeritromicina A 9-[0-(1-isopropoxic¡clohex¡l)]oxima (998 mg, 9.96) en 11.25 ml de CH2CI2 sobre hielo bajo atmósfera inerte y se trato con una solución de clorotrimetilsilano (0.24 ml) y 1-trimetilsililimimdazol (0.44 ml). Después de 30 minutos, se diluyó la reacción con 250 ml de acetato de etilo y se lavó secuencialmente con NaHC03, agua, y salmuera. Se secó la fase orgánica con MgOS4, se filtró y se evaporó para producir 1.002 g del producto.

D. 2'. 4'-bis(0-trimet¡ls¡lil)-6-Q-met¡l-14. 15-dehidroeritromicina A 9-fO-(1-isopropox¡c¡clohexil)]oxima Se enfrió una solución de 2', 4"-bis-0-trimetilsilil-14, 15-dehidroeritromicina A 9-[0-(1-isopropoxiciclohexil)]oxima (1.00 g, 20.7 mmol) en 9.69 ml de 1 :1 tetrahidrofurano/metilsulfóxido y se taró con 0.97 ml de bromuro de metilo a 2.0 M en éter bajo atmósfera inerte. Se añadió lentamente una mezcla de metil sulfóxido (1.94 ml) y tert-butóxido de potasio a 1.0 M en tetrahidrofurano (1.94 ml). Se verificó la reacción por cromatografía de capa delgada (gel de sílice, tolueno/acetona, a 10:1)y se consideró completa después de la adición de 1.6 equivalentes molares de base. Se diluyó la reacción con 200 ml de acetato de etilo y 70 ml de NaHC03 saturado. Se transfirió la mezcla a un embudo separador, se diluyó con 850 ml de acetato de etilo y 280 ml de NaHC?3 saturado, se lavó luego secuencialmente con agua y salmuera. Se secó la fase orgánica con MgS04, se filtró a través de Celite™, y se evaporó para producir21.2 g de 6-0-met¡l-2\ 4"-bis-0-trimetilsilil-14, 15-dehidroeritromicina A 9-[0-(1-isopropoxiciclohexil)]oxima cruda. Se llevó a cavo esto sin purificación adicional.

E. 6-0-metil-14. 15-dehidroeritromicina A 9-oxima Se trató una solución de 6-0-metil-2', 4"-bis-0-trimetilsililo-14, 15-dehidroeritromicina A 9-[0-(1-isopropoxiciclohéxil)]oxima (1.0 g) en 9.8 ml de acetonitrilo/agua a 2:1 con 5.3 ml de ácido acético, y se agitó durante 8 horas a temperatura ambiente. Se concentró la mezcla en vacuo, se concentro luego repetidamente después de la adición de tolueno para producir 0.797 g de 6-0-metil-14, 15-dehidroeritromicina a 9-oxima.

F. 6-Q-metil-14, 15-dehidroeritromicina A Se puso una solución de d-O-metil-14, 15-dehidroeritromicina A 9-oxima (0.797 g) y hidrosulfito de sodio (85%, 1.02 g) en 7.5 ml de etanol/agua a 1 :1 bajo atmósfera inerte. Se añadió gota a gota ácido fórmico (0.186 ml) y se agitó la mezcla a 180°C durante 3 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, se ajusto la reacción a pH 10 con NaOH a 6 N y se extrajo 3 veces con 100 ml de porciones de acetato de etilo. Se combinaron los extractos orgánicos y se lavaron secuencialmente con NaHC03, agua, y salmuera. Se secó la fase orgánica con MgS04, se filtró y se evaporó para producir 0.68 g de 6-0-met¡l-14,15-deh¡droeritromicina A adecuada para conversión adicional.

EJEMPLO 6 Síntesis de 6-O-metil-15-metileritromicina A. es decir fórmula (4) en que A- 15-Metileritromicina A 9-Oxima Se trató una suspensión de 15-metileritromicina A (20.0 g, 85% de pureza, 22.6 mmol) en 40 ml de 2-propanol con 20.5 ml de hidroxilamina acuosa al 50% y se agitó hasta disolver. Se añadió ácido acético (6.41 ml) y se agitó la mezcla durante 15 horas a 50°C. Con el enfriamiento a temperatura ambiente, se añadió NaHC03 saturado y se concentró la mezcla in vacuo para separar el isopropanol. Se extrajo la mezcla acuosa resultante 3 veces con 250 ml de porciones de CHCI3. Se combinaron los extractos orgánicos, se lavaron con NaHC03 saturado, agua, y salmuera, se secó sobre MgS?4, se filtró y se concentró para producir 20.5 g de producto crudo. El análisis pro LC/EN reveló una mezcla a 94:6 de oximas E y Z, [M+H]+=764.

B. 15-Metileritromicina A 9-[0-(1-isopropoxiciclohexil)joxima Se disolvió la oxima cruda de antes (20.5 g) en 55 ml de CH2CI2 y se trato con 1 ,1-diisopropoxiciclohexano (27.3 ml) y p-toluensulfonato de piridinio (9.8 mg) durante 15 horas a temperatura ambiente. Se diluyó la mezcla con 160 ml de CH2CI2, se lavó luego secuencialmente con NaHC03 saturado, agua y salmuera. Se secó la fase orgánica con MgS04, se filtró y se evaporó para producir un jarabe de color café. La cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de hexanos/acetona de 2:1 a 3:2 + EÍ3N al 1%) produjo 18.0 g del producto.

C. 2'. 4"-bis-0-trimetilsilil-15-metileritromicina A ' 9-í=-(1-isopropoxicicIohexiDloxima Se enfrió una solución de 15-Metileritromicina A 9-[0-(1-isopropoxiciclohexil) Oxima (9.00 g, 9.96 mmol) en 25 ml de CH2 de CH2CI2 sobre hielo bajo atmósfera inerte y se trató con una solución de clorotrimetilsilano (1.89 ml) y 1-trimetilsililimidazol (3.65 ml) en 8 ml de CH2CI2. Después de 30 minutos, se diluyó la reacción con 250 ml de acetato de etilo y se lavó secuencialmente con NaHC03 saturado, agua y salmuera. Se secó la fase orgánica con MgS?4, se filtró y se evaporó. Se purifico el producto crudo por cromatografía de gel de sílice (gradiente de hexanos/acetona a 10:1+Et3N al 1 %), produciendo 7.8 g del producto.

D. 6-0-Metil-2'.4"-bis-0-tr¡metiisil¡l-15-metileritromicina A 9-IO-M-isQpropox¡ciclohexil)]oxima Se enfrió una solución de 2', 4"-bis-0-trimetilsil¡-15-metileritromicina A 9-[0-(1-isopropoxiciclohesil)]oxina (21.7 g, 20.7 mmol) en 41.4 ml de tetrahidrofurano a 10°C y se trató con 41.4 ml de sulfóxido de metilo y 20.7 mi de bromuro de metilo a 2.0 M en éter bajo atmósfera inerte. Se añadió una mezcla de sulfóxido de metilo (41.4 ml) y ter-butóxido de potasio a 1.0 M en tetrahidrofurano (41.4 ml) a una velocidad de aproximadamente 20 ml por hora. Se verificó la reacción por cromatografía de capa delgada (gel de sílice, tolueno/acetona a 10:1) y se consideró completa después de la adición de 1.6 equivalente molares de base. Se diluyó la reacción con 200 ml de acetato de tilo y 70 ml de NaHC03 saturado. Se transfirió la mezcla a un embudo separador, se diluyó con 850 ml de acetato de etilo y 280 ml de NaHC?3 saturado, se lavó luego secuencialmente con agua y salmuera. Se secó la fase orgánica con MgS04) se filtró a través de Celita™1 y se evaporó para producir 21.2 g de ß-O-metil-2', 4"-bis-0-trimetilsilil-15-metileritromicina A 9-[0-(1-isoproposiciclohexil)]oxima cruda. Se llevó a cabo esto sin purificación adicional.

E- 6-0-Metil-15-metileritromicina A 9-oxima Se trató una solución de 6-0-meltil-2', 2"-bis-0-trimetilsilil-15-metileritromicina A 9-[0-(1-isopropoxiciclohexil)]oxima (21.2 g) en 110 ml de acetonitrilo con 50 ml de agua en 67 ml de ácido acético y se agitó durante 8 horas a temperatura ambiente. Se concentró en la mezcla in vacuo, se concentro luego repetidamente después de la adición de tolueno para producir 19.7 g de 6-0-metil-15-metileritromicina A 9-oxima.

F. 6-Q-Met¡l-15-metileritrom¡cina A Una solución de 9-oxima de 6-0-metil-15-metileritromicina A (19.7) e hidrosulfito de sodio (85%, 23.1 g) en 280 ml de 1 :1 etanol/agua se colocó bajo atmósfera inerte. Se añadió por goteo ácido fórmico (3.75 ml), y la mezcla se agitó a 80°C durante 4.5 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la reacción se trató con NaHC03 saturado y se extrajo tres veces con porciones de 400-ml de acetato de etilo. Los extractos orgánicos se combinaron y se lavaron consecutivamente con NaHC?3 saturado, agua y salmuera. La fase orgánica se secó con MgS?4, se filtró y se evaporó para producir 15.1 g de d-O-metil-15-metileritromicina A adecuados para conversión posterior.

EJEMPLO 7 Síntesis de 5-O-(2'-acetildesosaminil)-10.11-anhidro-3-desoxi-3-oxo-6-O- R£=Ac, RbgH) A. 5-0-Desosaminil-6-Q-metil-14-noreritronolida A: Una mezcla de 6-O-metil-14-noreritromicina A (77 mg), 0.073 ml de 12 N HCl y agua (2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla se llevó a pH 8 con 8 N KOH, y se extrajo con acetato de etilo. El extracto orgánico se lavó con salmuera, se secó con MgS04, se filtró y evaporó. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (3:1/hexanos:acetona, trietilamina al 1 %) para dar producto puro como un sólido blanco (42 mg). La espectrometría de masa revela [M+H]+=576.

B. 5-0-(2'-Acet¡ldesosaminil)-6-0-metil-14-noreritronolida A: Una mezcla de 5-0-desosaminil-6-0-metil-14-noreritronolida A (73 mg), carbonato de potasio (20 mg), anhídrido acético (14 µl) y acetona (1 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. Se añadió acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgS?4, se filtró y evaporó. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (3:1/hexanos:acetona, trietilamina al 1 %) para rendir el producto puro (71 mg) como un sólido blanco.

La espectrometría de masa revela [M+H]+=618.

C. 5-Q-(2'-Acetildesosamin¡D-3-desoxi-3-oxo-6-0-metil-14- Una solución de 5-0-(2'-acetildesosaminil)-6-O-metil-14-noreritronolida A (99 mg) y clorhidrato de 1-(3-dimetilaminoprop¡l)-3-etilcarbodiimida (EDC) (206 mg) en diclorometano (2 ml) se trató con DMSO (0.21 ml) y se enfrió en 5°C. Se añadió una solución de trifluoroacetato de piridinio (208 mg) en diclorometano (2 ml) a través de una bomba de jeringa en 4 horas. Luego se añadió acetato de etilo, se lavó con NaHC?3 saturado, agua, salmuera y se secó sobre MgS04, se filtró y evaporó. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (3:1/hexanos:acetona, trietilamina al 1%) para rendir el producto puro (94 mg) como un sólido blanco. La espectrometría de masa revela [M+H]+=616.

D. 5-O-(2'-Acetildesosamini!)-3-desoxi-3-oxo-11 -O-metansulfonil-6-Q-14-noreritronolida A: A una solución de 5-0-(2'-Acetildesosaminil)-3-desoxi-3-oxo-6-0-metil-14-noreritronolida A: (93 mg) en piridina seca (1 ml) se añadió cloruro de metansulfonilo (0.057 ml) a 5°C. Después de 3 horas a 5°C, la reacción se calentó a temperatura ambiente y se mantuvo durante 15 horas más. La mezcla se diluyó con acetato de etilo, se lavó con NaHCOs(2x) saturado, agua (3x), salmuera y se secó sobre MgS04, se filtró y evaporó. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (2:1/hexanos:acetona, trietilamina al 1 %) para rendir el producto puro (72 mg) como un sólido blanco. La espectrometría de masa revela [M+H]+=695.

E. 5-Q-(2'-Acetildesosaminil)-10.11 -anhidro-3-desoxi-3-oxo-6-Q-metil-14-noreritronolida A: Una solución de 5-0-(2'-acetildesosaminil)-3-desoxi-3-oxo-11-0-metansulfonil-6-0-14-noreritronolida A (73 mg) en acetona (1 ml) se trató con diazabicicloundeceno (32 µl) a temperatura ambiente durante 18 horas. La mezcla se diluyó con acetato de etilo, se lavó con NaHC?3 saturado, agua, salmuera y se secó sobre MgS04, se filtró y evaporó. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (2:1/hexanos:acetona, trietilamina al 1%) para rendir el producto puro (50 mg) como un sólido blanco. La espectrometría de masa revela [M+H]+=598. 13C-RMN (CDCI3, 100 MHz): d 207.02, 204.50, 169.63, 168.72, 142.52, 139.40, 101.87, 80.61 , 80.02, 77.14, 72.66, 71.48, 69.09, 63.56, 51.35, 50.56, 47.12, 40.61 , 39.73, 37.36, 30.36, 21.32, 21.06, 20.96, 20.67, 18.45, 14.34, 13.89, 13.55, 13.45.

EJEMPLO 8 Síntesis d 2'-O-benzoil-6-O-metil-3-descladinos?l-3-oxo-10.11-anhidro- 14.15-deshidroeritromicina A (forma anhidro de fórmula (6) Rri=ali!o.

A. 2'-0-Benzoil-6-Q-metil-14.15-deshidroeritromicina A Una solución de 6-0-metil-14,15-deshidroeritromicina A (668 mg), anhídrido benzoico (385 mg), y trietilamina (0.25 ml) en 3.6 ml de CH2CI2 se agitó durante 2 días. Después de adición de NaHC03 saturado, la mezcla se extrajo tres veces con CH2CI2. Los extractos orgánicos se combinaron y evaporaron hasta secar, y el producto se purificó mediante cromatografía de sílice (90:9:1 tolueno/acetona/Et3N) para dar 477 mg del producto; LC-MS muestra [M+H]+=850.6.

B. 2'-0-Benzoil-6-0-metil-4".11-bis(0-metansulfon¡n-14.15-deshidroeritromicina A Una solución de 2'-O-benzoil-6-0-metil-14,15-deshidroeritromicina A (549 mg) y cloruro de metansulfonilo (0.50 ml) en 2.39 ml de piridina se agitó durante 24 horas, luego se diluyó con CH2CI2 y NaHC0 saturado. La mezcla se extrajo tres veces con (90:9:1 tolueno/acetona/Et3N). Los extractos orgánicos se combinaron y evaporaron hasta secar, y el producto se purificó mediante cromatografía de sílice (90:9:1 tolueno/acetona/EtsN) para dar 530 mg de producto; LC-MS muestra [M+H]+=1006.5.

C. 2'-O-Benzo¡l-6-O-metil-4"-O-metansulfonil-10.11-anhidro- 14.15-deshidroeritromicina A Una mezcla de 2'-0-benzoil-6-0-metil-4",11-bis(0-metansulfonil)14,15-deshidroeritromicina A (59 mg) y diazabicicloundeceno (0.18 ml) en 0.195 ml de acetona se agitó durante 24 horas, luego se secó in vacuo. El producto se purificó mediante cromatografía de sílice (90:91 tolueno/acetona/ETaN) para dar 50 mg de producto; LC-MS muestra [M+H]+ = 910.5.

D. 2'-O-Benzoil-6-O-metil-3-desclad¡nos¡l-10,11-anhidro-14.15-deshidroeritromicina A Una mezcla de 2'-0-Benzoil-6-O-metil-4"-0-metanosulfonil- 10,11-anhidro-14,15-deshidroeritromicina A (337 mg), 1.5 mL de acetonitrilo, y 6.9 mL de 3 N HCl se agitó durante 22 horas. El acetonitrilo se removió in vacuo, el pH del residuo acuoso se ajustó a 12 mediante la adición de NaOH, y el producto se extrajo utilizando 4 porciones de CH2CI2. Los extractos combinados se secaron y evaporaron. El producto se purificó mediante cromatografía de sílice (gradiente de 96:4 CH2CI2/MeOH a 95:4:1 CH2CI2/MeOH/Et3N) para dar 197 mg, [M+H]+ = 674.4- E. 2 -O-Benzo¡l-6-O-metil-3-descladinos¡l-3-oxo-10.11-anhidro-14.15-deshidroeritromicina A Una suspensión de 2'-O-Benzoil-6-O-metil-3-descladinosil-10,11-anhidro-14,15-deshidroeritromicina A (226 mg) y el periodinano de Dess-Martin (427 mg) en 14.6 mL de CH2CI2 (14.6 mL) se agitó durante 1 hora. La mezcla se diluyó con CH2CI2 y NaHC03 saturado. El producto se extrajo utilizando 3 porciones de CH2CI2, y los extractos se combinaron, se secaron y evaporaron. La cromatografía de gel de sílice (90:9:1 tolueno/acetona/EtsN) rindió el producto, 168 mg [M+H]+ = 672.4. 13C-RMN (CDCI3, 100 MHz): d 206.78, 203 (br), 168.19, 165.08, 141.36, 139.58, 132.74, 131.51 , 130.46, 129.79, 128.25, 120.18, 102.09, 80.79, 80.40, 78.70, 72.52, 71.91 , 69.19, 63.76, 51.10, 50.54, 47.08, 40.73, 39.87, 37.77, 31.23, 22.13, 20.98, 18.52, 14.28. 14.15, 13.55.

EJEMPLO 9 Síntesis de 5-?-(2 -acetildesosaminií)-10.11-anhidro-3-desoxi-3-oxo-6-O- propilo, Rfa =H. Rc=Ac) A. 6-0-metil-3-descladinosil-15-met¡leritromicina A Una mezcla de 6-0-metil-15-metileritromicina A (15.1 g) y 280 mL de 0.5 N HCl se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. El pH se ajustó a 9 por la adición de 6 N NaOH, y el precipitado resultante se recolectó mediante filtración al vacío, se lavó con agua y se secó. El filtrado se extrajo tres ves con porciones de 400-mL de acetato de etilo. Los extractos orgánicos se combinaron, se lavaron consecutivamente con NaHC03 saturado, agua y salmuera, luego se secaron sobre MgS04, se filtraron y evaporaron para proveer producto adicional. Los productos crudos combinados se sometieron a cromatografías sobre gel de sílice para producir 9.35 g de 6-0-metil-3-descladinosil-15-metileritromicina A pura. ES-LC/MS muestra [M+H]+ = 605.

B. 2'-Q-Acetil-6-Q-metil-3-descladinosil-15-metileritromicina A Se añadió por goteo una solución de anhídrido acético (2.92 mL) en 35 mL de acetato de etilo a una solución de 6-0-metil-3-descladinosll-15-metileritromicina A (9.35 g) en 40 mL de acetato de etilo. La mezcla se agitó durante 30 minutos después del término de la adición, luego se concentró. La cromatografía sobre gel de sílice (2:1 hexanos/acetona) dio 8.35 g de 2 -0-acetil-6-0-met¡l-3-descladinosil-15-metileritromicina A. ES-LC/MS muestra [M+H]+ = 647.

C 2'-0-acetil-6-Q-metil-3-descladinosil-3-oxo-15-metileritromicina A Una solución de 2'-0-acetil-6-0-metll-3-descladinosil-15-metileritromicina A (8.3 g) y clorhidrato de 1-etil-3-(dimetilaminopropil)carbodiimida (16.51 g) in 64 mL de diclorometano y 15.47 mL de sulfóxido de metilo se colocó bajo atmósfera inerte y se enfrió sobre hielo. Se añadió una solución de trifluoroacetato de piridinio (16.63 g) en 64 mL de diclorometano a una velocidad tal que la adición se término en 4 horas, y la reacción se monitoreó a través de cromatografía de capa delgada. Se observó reacción completa después de la adición de 73% de la solución, y de esta forma la reacción se extinguió con la adición de 600 mL de acetato de etilo y 200 mL de NaHC03 saturado. La capa orgánica se recolectó y se lavó consecutivamente con NaHC03 saturado, agua y salmuera, luego se secó sobre MgS?4, se filtró y evaporó para rendir 8.4 g de producto crudo. La cromatografía sobre gel de sílice (3:1 hexanos/acetona) dio 6.75 g de 2'-0-acetil-6-0-metil-3-descladinosil-3-oxo-15-metileritromicina A. ES-LC/MS muestra [M+H]+= 645.

D. 2'-Q-acetil-6-0-metil-3-descladinosil— 3-OXO-11 -O-metanosulfonil-15-metileritromicina A Se añadió por goteo cloruro de metansulfonilo (5.68 mL) a una solución de 2'-0-acetil-6-0-metil-3-descladinosil-3-oxo-15-metileritromicina A (6.73 g) en 35 mL de piridina a 0°C. La mezcla se puso a temperatura ambiente y se extinguió con la adición de 700 mL de acetato de etilo y 200 mL de NaHC03 saturado. La capa orgánica se recolecto y lavó consecutivamente con NaHC03 saturado, agua y salmuera, luego se secó sobre MgS0 , se filtró y evaporó para rendir 8.2 g de producto crudo. La cromatografía sobre gel de sílice (5:2 hexanos/acetona) dio 5.04 g de 2'-0-acetil-6-0-metil-3- descladinosil-3-oxo-11-0-metansulfonil-15-metileritromicina A. ES-LC/MS muestra [M+Hf = 723.

E. 2'-0-acetil-6-0-metil-3-descladinos¡l-3-oxo-10.11-anhh¡dro-15-metileritromicina A Se añadió por goteo 1 ,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno(5.22 mL) a una solución de 2'-0-acetil-6-0-metil-3-descladinosil-3-oxo-11-0-metansulfonil-15-metileritromicina A (5.03 g) en 23 mL de acetona. La solución se concentró después de 4.5 horas, y el residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (5:2 hexanos/acetatona) para dar 3.72 g de 2'-0-acetil-6-0-metil-3-descládinosil-3-oxo-10,11-anhidro-15-metileritromicina A. ES-LC/MS muestra [M+H]+ = 627.

EJEMPLO 10 Síntesis de 5-O-(2'-acetildesosaminil)-10.11-anhidro-3.6-didesoxi-3-oxo- 15-metileritronolida A (fórmula (6). forma anhidro. Rp-propilo, OR, reemplazados por H. R?=H, R =Ac A una solución de 6-desoxi-15-metileritromicina C (220 mg, 0.307 mmoles) en diclorometano (5 mL) se le dio carbonato de potasio (50 mg) y anhídrido acético (100 L, 0.9 mmoles), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La solución se filtró, se añadió hidróxido de sodio (1 N, 25 mL) y salmuera (25 mL) y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo 6 veces. Las capas orgánicas combinadas se secaron con sulfato de sodio, se filtraron y el solvente se removió in vacuo. El producto crudo, la forma acetilada 2' del material de partida se realizó en el siguiente paso. El producto crudo se disolvió en piridina (5 mL) y se añadió cloruro de metilo (70 L, 0.9 mmoles). La reacción se agitó a -20°C durante 2 días, se vertió en hidróxido de sodio (1 N, 25 mL) y salmuera (25 mL) y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo 6 veces. Las capas orgánicas combinadas se secaron con sulfato de sodio, se filtraron y el solvente se removió in vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (tolueno/acetona' = 3:1 , hidróxido de amonio al 1%) para dar forma dimesilada 11.4" (190 mg, 68% sobre dos pasos). La forma dimesilada 11.4" (190 mg, 0.21 mmoles) se disolvió en acetona (7 mL) y se añadió DBU (63 L, 0.42 mmoles), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se vertió en hidróxido de sodio (1 N, 25 mL) y salmuera (25 mL) y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo 6 veces. Las capas orgánicas combinadas se secaron con sulfato de sodio, se filtraron y el solvente se removió in vacuo. El producto crudo, la forma 10,11-deshidro de 6-desoxi-15-metileritromicina se realizó en el siguiente paso. Al producto crudo del paso anterior se añadió ácido clorhídrico (30 mL, 3 N) y etanol (2 mL) y la mezcla se agitó vigorosamente durante 6 horas. Se añadió hidróxido de sodio (5 mL, 10 N) y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo 6 veces. Las capas orgánicas combinadas se secaron con sulfato de sodio, se filtraron y el solvente se removió in vacuo. El producto crudo, la forma anhidra de fórmula (6) (pero con OH en la posición 3) en donde Rd = propilo, ORg es reemplazado por H, Rb = Rc = H, se realizó en el siguiente paso. Al producto crudo del paso anterior en diclorometano (5 mL) se añadió anhídrido acético (50 L, 0.45 mmoles) y carbonato de potasio (100 mg) y la mezcla se agitó vigorosamente durante 9 horas. La reacción se filtró, se añadió hidróxido de sodio (20 mL, 1 N) y salmuera (25 mL) y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo 6 veces. Las capas orgánicas combinadas se secaron con sulfato de sodio, se filtraron y el solvente se removió in vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (tolueno/acetona = 3:1 , hidróxido de amonio al 1 %) para dar la forma acetilada 2' del material de partida (110 mg, 89% sobre tres pasos). El producto del paso anterior (110 mg, 0.184 mmoles) se disolvió en diclorometano (10 mL) y se añadió reactivo de Dess-Martin (220 mg, 0.53 mmoles). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. La reacción se extinguió con hidróxido de sodio (20 mL, 1 N) y salmuera (25 mL) y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo 6 veces. Las capas orgánicas combinadas se secaron con sulfato de sodio, se filtraron y el solvente se removió in vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (tolueno/acetona, gradiente = 6:1-3:1 , hidróxido de amonio al 1%) para dar el compuesto de fórmula (6), forma anhidra, en donde Rd = propilo, ORa es reemplazado por H, Rb = H, Rc = Ac (94 mg, 86%).

EJEMPLO 11 I. Compuesto de fórmula (4): Rr¡ = propilo. Rc = alilo Paso 1. Alilación de antibiótico intermedio en 6-OH: Una solución de 9-[0-(1-isopropoxiciclohexil)ox¡ma de 2',4"-bis-O-trimetilsilil-15-metileritromicina A (fórmula (I) (Ra es OH, R es propilo, protegido en 2' y 4" con trimetilsililo y en C9 = O por la isopropoxíciclohexiloxima) (7.8 g, 7.44 mmóles) en 30 mL de tetrahidrofurano se enfrió sobre hielo y se trató con 30 mL de sulfóxido de metilo y 2.58 mL de bromuro de alilo recién destilado bajo atmósfera Inerte. Se añadió una mezcla de sulfóxido de metilo (29.8 mL) y 1.0 M de terbutóxido de potasio en tetrahidrofurano (29.8 mL) a una velocidad de 1.33 equivalentes molares de base por hora. La reacción se monitoreó mediante cromatografía de capa delgada (gel de sílice, 10:1 tolueno/acetona), y se consideró terminada después de la adición de 3.6 equivalentes molares de base. La reacción se diluyó con 700 mL de acetato de etilo y se lavó consecutivamente con NaHC03, agua y salmuera. La fase orgánica se secó con MgS04, se filtró, y evaporó para dar 8.08 g de 9-[0-(1-¡sopropoxiciclohexil)]ox¡ma de 6-0-alil-2'-4"-b¡s-0-tr¡metilsilil-15-metileritromicina A. Esto se realizó sin purificación adicional.

Paso 2: Una solución de 9-[0-(1-¡sopropoxiciclohexil)]oxima de 6-0-alil-2 "-b¡s-0-trimetilsilil-15-met¡leritromic¡na A (8.08 g) en 42 mL de acetonitrilo se trató con 21 mL de agua y 24 mL de ácido acético, y se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente. La mezcla se concentró después de adición de 2-propanol, luego repetidamente después de adición de tolueno para dar 7.7 g de producto crudo. La cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de 2:1 a 1 :1 hexanos/acetona + 1 % Et3N) dio 3.75 g de 9-oxima de 6-O-alil-l 5-metileritromicina A. Paso 3: Una solución de 9-oxima de ß-O-alil-15-metileritromicina A (3.75 g) e hidrosulfito de sodio (85%, 5.37 g) en 66 mL de 1 :1 etanol/agua se colocó bajo atmósfera inerte. Se añadió por goteo ácido fórmico (0.845 mL), y la mezcla se agitó a 80°C durante 3.5 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la reacción se ajustó a pH 10 con 6 N NaOH y se extrajo tres veces con porciones de 150-mL de acetato de etilo. Los extractos orgánicos se combinaron y lavaron consecutivamente con NaHC?3 saturado, agua y salmuera. La fase orgánica se secó con MgS04, se filtró y evaporó para dar 3.42 g de 6-0-al¡l-15-metileritromicina A adecuados para conversión adicional.

II. Compuesto de fórmula (4): Rj = Me, Rg = alilo Paso 1 : Alilación de antibiótico intermedio en 6-OH: Una solución de 9-[0-(1-¡sopropoxiciclohexil)]oxima de 2'~4"-bis-0-trimetilsilil-14-metileritromicina A, Fórmula (I), (Ra es OH, Rd es metilo, protegido en 2' y 4" con trimetilsililo y en C9=0 por la isoproxiciclohexil oxima) (202 mg) en tetrahidrofurano (0.4 ml), DMSO (0.4 ml), y éter (0.04 ml) se enfrió a 10°C y se trató con 0.035 ml de bromuro de alilo recién destilado bajo atmósfera inerte. Se añadió una mezcla de sulfóxido de metilo (0.4 ml) y 1.0 M de tert-butóxido de potasio en tetrahidrofurano (0.4 ml) a una velocidad de 0.22 ml/hora. La reacción se monitoreó mediante cromatografía de capa delgada (gel de sílice, 5:1 tolueno/acetona). La reacción se diluyó con acetato de etilo y se lavó consecutivamente con NaHC03 saturado, agua y salmuera. La fase orgánica se secó con MgS04, se filtró y evaporó para dar 222 mg de 9-[0-(1-isopropoxiciclohexil)]oxima 6-0-alil-2',4"-bis-0-trimetilsilil-14-noreritromicina A cruda. Esto se realizó sin purificación adicional. Paso 2: Una solución de 9-[0-(1-¡sopropox¡ciclohexil)]oxima de 6-0-alil-2',4"-b¡s-0-trimetils¡lil-14-noreritromic¡na A (222 mg) en 4 ml de acetonitrilo se trató con 2 ml de agua y 204 ml de ácido acético, y se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente. La mezcla se concentró después de adición de 2-propanol, luego repetidamente después de adición de tolueno para dar 220 mg de 9-oxima de 6-0-alil-14-noreritromicina A cruda. Paso 3: Una solución de 9-oxima de 6 -O-alil-14-noreritromicina A.(220 mg) e hidrosulfito de sodio (85%, 322 mg) en 4 ml de 1 :1 etanol/agua se colocó bajo atmósfera inerte. Se añadió por goteo ácido fórmico (0.050 ml), y la mezcla se agitó a 80°C durante 15 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la reacción se ajustó a pH 10 con 6N NaOH y se extrajo tres veces con porciones de 150 ml de acetato de etilo. Los extractos orgánicos se combinaron y se lavaron consecutivamente con NaHC?3 saturado, agua y salmuera. La fase orgánica se secó con MgS?4, se filtró y evaporó para dar 156 mg de 6-O-alil-l 4-noreritromicina A adecuada para conversión adicional.

Otras modalidades De manera similar, se preparan compuestos de fórmula (4) en donde Y y Z son juntas, =0, Ra es alilo, a partir de un intermediario en donde Rd es butilo, bencilo, vinilo o 3-hidroxibutilo.

EJEMPLO 12 Conversión de fórmula (4) a fórmula (6) Paso 1 : una mezcla del compuesto preparado en el ejemplo 11 , II (77 mg, crudo), 0.073 ml de 12 N HCl y agua (2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla se colocó a pH 8 con 8 NKOH, y se extrajo con acetato de etilo. El extracto orgánico se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04, se filtró y evaporó. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (3:1/hexanos:acetona, trietilamina al 1 %) para dar producto puro como un sólido blanco (42 mg). Paso 2: para proteger el 2' OH una mezcla del compuesto anterior (73 mg), carbonato de potasio (20 mg), anhídrido acético (14µl) y acetona (1 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. Se añadió acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgS0 , se filtró y evaporó. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (3:1/hexanos:acetona, trietilamina al 1 %) para dar el producto puro (71 mg) como un sólido blanco. Paso 3: una solución del compuesto resultante del paso 2 (99 mg) y clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiim¡da (EDC) en diclorometano (206 mg) se trató con DMSO (0.21 ml) y se enfrió a 5°C. Se añadió una solución de trifluoroacetato de piridinio (208 mg) en diclorometano (2 ml) a través de una bomba de jeringa en 4 horas. Luego se añadió acetato de etilo, se lavó con NaHC?3 saturado, agua, salmuera y se secó sobre MgS04, se filtró y evaporó. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (3:1/hexanos:acetona, trietilamina al 1 %) para dar el compuesto puro de fórmula (6) (94 mg, Ra es alilo, Rc es acetato y Rd es CH3). Paso 4: para desproteger 2'OH, se agitó una solución del compuesto resultante de paso 3 (94 mg) en 5 ml metanol a temperatura ambiente durante 24 horas. El solvente se removió in vacuo para dar el compuesto deseado de fórmula (6) Ra es alilo, Rc es H, y Rd es CH3).

Otras modalidades De manera similar, se preparan compuestos de fórmula (4) en donde Ra es alilo, Rc es H, y Rd es propilo, butilo, bencilo, vinilo o 3-hidroxibutilo.

EJEMPLO 13 Preparación de compuestos de fórmula (5) El compuesto de fórmula (4), preparado como el derivado de 6-alilo en el ejemplo 11 , se protege en la posición 2', se trata con ácido y se deshidrata, luego se desprotege para obtener el compuesto en fórmula (5), como se muestra en el esquema A, en donde Rc es H, y Ra es alilo. Asimismo, los compuestos de fórmula (6) en donde Rd es propilo, butilo, bencilo, vinilo o 3-hidroxibutilo, se preparan como se describió anteriormente utilizando como material de partida los compuestos de fórmula (I) en donde Rd es como se mencionó anteriormente.

EJEMPLO 14 Conversión de =O en posición 9 a ==NOH De acuerdo con el procedimiento del ejemplo 6A, el carbonilo en posición 9 de eritromicina se convierte a las oximas correspondientes.

EJEMPLO 15 Conversiones en -ORa A. Alilo?Propilo Una solución de cualquiera de los compuestos anteriormente preparados (0.2 mmoles) en etanol se inunda con nitrógeno y se añade 10% de paladio sobre carbono (20 mg). La mezcla es entonces inundada con hidrógeno y la mezcla de reacción se agita durante la noche bajo presión de hidrógeno positiva. La mezcla de reacción se filtra y concentra in vacuo para dar un vidrio. La cromatografía sobre gel de sílice (95:5:0.5 diclorometano-metanol-amonia) da los compuestos propilo como sólidos blancos.

B. Alilo-» -CH?CHO Se pasa ozono a través de una solución a -78°C en diclorometano (100 ml) de cualquiera de los compuestos antes resultantes (4.0 mmoles) durante 45 minutos. La mezcla de reacción es entonces inundada con nitrógeno durante 10 minutos. Se añade sulfuro de dimetilo (1.46 ml, 20 mmoles) a -78°C y la mezcla de reacción se agita durante 30 minutos a 0°C. La mezcla de reacción se concentra in vacuo para dar una espuma blanca que se utiliza sin purificación adicional al calentar una solución del compuesto en THF (40 ml, 4.0 mmoles) y trifenilsfosfina (2.62 g, 10.0 mmoles) a 55°C durante 2.5 horas. La mezcla de reacción se concentra in vacuo para dar una espuma blanca. La cromatografía sobre gel de sílice (1 :1 acetona:hexano, luego 75:25:0.5 acetona-hexano-trietilamina) da el compuesto deseado como un sólido blanco.

C. Alilo ? CHL-CH=NOH A una solución en metanol (5 ml) del compuesto preparado en B, en donde Ra es -CH2CHO, (0.80 mmoles) se añade trietilamina (31 µl, 0.225 mmoles) y clorhidrato de hidroxilamina (7.7 mg, 0.112 mmoles) y la mezcla de reacción se agita durante 6 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se recoge en acetato de etilo y se lava con bicarbonato de sodio acuoso al 5% y salmuera, se seca sobre sulfato de sodio, y se concentra in vacuo para dar un vidrio claro. La cromatografía sobre gel de sílice (95:5:0.5 diclorometano-metanol-amonia) da el compuesto como un sólido blanco.

D. C_H2CH=NOH? -CH2CN A una solución bajo nitrógeno del compuesto preparado en C (0.267 mmoles) en THF (5 ml) se añade diisopropilcarbodiimida (83 µl, 0.534 mmoles) y CuCI (2.7 mg, 0.027 mmoles) y la mezcla de reacción se agita durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se recoge en acetato de etilo y se lava con bicarbonato de sodio acuoso al 5% y salmuera, se seca sobre sulfato de sodio, y se concentra in vacuo para dar un vidrio claro. La cromatografía sobre gel de sílice (95:5:0.5 diclorometano-metanol-amonia) da el compuesto deseado como un sólido blanco.

E. -CH2CHO? -CH CH NH2 A una solución en metanol (10 ml) del compuesto preparado en B (0.276 mmoles) se añade acetato de amonio (212 mg, 2.76 mmoles) y la mezcla se enfría a 0°C. Se añade cianoborohidruro de sodio (34 mg, 0.553 mmoles) y la mezcla de reacción se agita durante 30 horas a 0°C. La mezcla de reacción se recoge en acetato de etilo y se lava con carbonato de sodio acuoso al 5%, tr¡s(hidroximetil)aminometano acuoso al 2%, y salmuera, se seca sobre sulfato de sodio, se filtra y concentra in vacuo. La cromatografía sobre gel de sílice (90:10:0.5 diclorometano-metanol-amonia) da el compuesto deseado como un sólido blanco.

F. -CH,CHO? -CH CH2NHCH2-fenilo A una solución a 0°C en metanol (10 ml) del compuesto preparado en B (0.200 mmoles) se añade ácido acético (114 µl, 2.00 mmoles) y bencilamina (218 µl, 2.00 mmoles) y la mezcla se agita durante 10 minutos. Se añade cianoborohidruro de sodio (24.8 mg, 0.400 mmoles) y la mezcla de reacción se agita durante 16 horas. Luego se añade cianoborohidruro de sodio adicional (24.8 mg, 0.400 mmoles) y la agitación continúa durante 5 horas. La mezcla de reacción se recoge en acetato de etilo y se lava con carbonato de sodio acuoso al 5%, tris(hidroximetil)aminometano acuoso al 2%, y salmuera, se seca sobre sulfato de sodio, se filtra y concentra in vacuo. La cromatografía sobre gel de sílice (95:5:0.5 diclorometano-metanol-amonia) seguida de una segunda cromatografía (50:50:0.5 acetona-hexano-trietilamina) da el compuesto deseado como una espuma blanca.

G. -CH CHO? -CH2CH2NHCH2CHrfenilo A una solución a 0°C en metanol (10 ml) del compuesto preparado en B (0.200 mmoles) se añade ácido acético (114 µl, 2.00 mmoles) y fenetilamina (218 µl, 2.00 mmoles) y la mezcla se agita durante 10 minutos. Se añade cianoborohidruro de sodio (24.8 mg, 0.400 mmoles) y la mezcla de reacción se agita durante 16 horas. La mezcla de reacción se recoge en acetato de etilo y se lava con carbonato de sodio acuoso al 5%, tris(hidroximetil)aminometano acuoso al 2% y salmuera, se seca sobre sulfato de sodio, se filtra y concentra in vacuo. La cromatografía sobre gel de sílice (90:10:0.5 diclorometano-metanol-amonia) da el compuesto deseado.

H. -CH2CHO? -CH2CH2NHCH(CO?CH3)CH fen¡lo A una solución a 0°C en metanol (10 ml) del compuesto preparado en B (0.200 mmoles) se añade clorhidrato de éster L-f nilalaninmetílico (129 mg, 0.600 mmoles) y la mezcla se agita durante 10 minutos. Se añade cianoborohidruro de sodio (924.8 rng, 0.400 mmoles) y la mezcla de reacción se agita durante 22 horas. La mezcla de reacción se recoge en acetato de etilo y se lava con carbonato de sodio acuoso al 5%, tris(hidroximetil)amlnometano acuoso al 2% y salmuera, se seca sobre sulfato de sodio, se filtra y concentra in vacuo. La cromatografía sobre gel de sílice (95:5:0.5 diclorometano-metanol-amonia) da el compuesto deseado.

I. -CH2CHO? -CH2CH2NHCH (4-piridilo) El compuesto deseado se prepara de acuerdo con el método en G, excepto por la sustitución de 4-aminometilpiridina por fenetilamina.

J. -CH CH2NH2-> -CH2CH2NHCH2-(4-auinolilo) A una solución del compuesto preparado en E (0.15 mmoles) en metanol (2 ml) se añade 4-quinolinecarboxaldehído (23 mg, 0.15 mmoles), ácido acético (8.6 µl, 0.15 mmoles) y cianoborohidruro de sodio (9.4 mg, 0.15 mmoles) y la mezcla de reacción se agita durante 15 horas. La mezcla de reacción se recoge en acetato de etilo y se lava con carbonato de sodio acuoso al 5%, tris(hidroximetil)aminometano acuoso al 2% y salmuera, se seca sobre sulfato de sodio, se filtra y concentra in vacuo. La cromatografía sobre gel de sílice (95:10:0.5 diclorometano-metanol-amonia) da el compuesto deseado.

K. Alilo ? -CH2CH=CH-fenilo A una solución bajo nitrógeno del compuesto 2' protegido preparado en el ejemplo 10 (1.00 mmoles), acetato de paladio (II) (22 mg, 0.100 mmoles) y trifenilfosfina (52 mg, 0.200 mmoles) en acetonitrilo (5 ml) se añade yodobenceno (220 µl, 2.00 mmoles) y trietilamina (280 µl, 2.00 mmoles) y la mezcla se enfría a -78°C, se desgasifica y se sella. La mezcla de reacción es entonces calentada a 60°C durante 0.5 horas y se agita a 80%C durante 12 horas, se recoge en acetato de etilo y se lava dos veces con bicarbonato de sodio acuoso al 5%, una vez con tris(hidroximetil)aminometano acuoso al 2% y una vez con salmuera, se seca sobre sulfato de sodio, se filtra y concentra in vacuo. La cromatografía sobre gel de sílice (95:5:0.5 diclorometano-metanol-amonia) da el compuesto deseado. La desprotección de realiza mediante calentamiento en metanol. Otras modalidades de las fórmulas (4)-(6) donde Rb es H, Rc es H, y Rd es propilo, butilo, bencilo, vinilo o 3-hidroxibutilo son aquellas en donde R4 es: Cualquiera de los compuestos anteriores se puede convertir a los derivados correspondientes en donde Y y Z son juntas =NOH en la manera descrita en el ejemplo anterior 14.

EJEMPLO 16 Paso 1. Protección en 2'-OH para formar compuesto intermediario del compuesto (6) que tiene qrupo hidroxilo en C-3. Rg es alilo v Rg es benzoilo A una solución del producto del ejemplo 12 u otra modalidad del mismo en donde Rd es propilo, butilo, bencilo, vinilo o 3-hidroxibutilo (2.49 g, 4.05 mmoles) en diclorometano (20 ml) se añade anhídrido benzoico (98%, 1.46 g, 6.48 mmoles) y trietilamina (0.90 ml, 6.48 mmoles) y la suspensión blanca se agita durante 26 horas a temperatura ambiente. Se añade carbonato de sodio acuoso al 5% y la mezcla se agita durante 20 minutos. La mezcla se extrae con diclorometano. La fase orgánica se lava con bicarbonato de sodio acuoso al 5% y salmuera, se seca sobre sulfato de sodio y se concentra in vacuo para dar una espuma blanca. La cromatografía sobre gel de sílice (30% acetona-hexanos) da el compuesto protegido.

Paso 2. Oxidación para formar compuesto (6). Rg es alilo. R, es benzoilo A una solución a -10°C bajo N2 de N-clorosuccinamida (0.68 g, 5.07 mmoles) en diclorometano (20 ml) se añade sulfuro de dimetilo (0.43 ml, 5.92 mmoles) durante 5 minutos. La suspensión blanca resultante se agita durante 20 minutos a -10°C y luego se añade una solución del compuesto resultante del paso 1 (2.43 g, 3.38 mmoles) en diclorometano (20 ml) y la mezcla de reacción se agita durante 30 minutos de -10 a -5°C. Se añade por goteo trietilamina (0.47 ml, 3.38 mmoles) durante 5 minutos y la mezcla de reacción se agita durante 30 minutos a 0°C. La mezcla de reacción se extrae con diclorometano. La fase orgánica se lava dos veces con bicarbonato de sodio acuoso al 5% y una vez con salmuera, se seca sobre sulfato de sodio y se concentra in vacuo para dar una espuma blanca. La cromatografía sobre gel de sílice (30% acetona-hexanos) da el compuesto oxidado.

Paso 3: Formar carbonato cíclico de compuesto de fórmula (\) a partir del esquema ilustrativo E: Rg es -CH2CH=CH2. Rr, es benzoilo A una solución a -35°C bajo nitrógeno en THF (60 ml) del compuesto preparado en el paso 2 (3.58 g, 5.00 mmoles) se añade hexametildisilazida de sodio (1.0 M en THF, 5.5 ml, 5.5 mmoles) y la suspensión blanca resultante se agita durante 30 minutos. Se añade por goteo una solución de carbonildiimidazol (4.05 g, 25 mmoles) en THF (40 ml) durante 20 minutos a -35°C y luego se remueve el baño frío y la mezcla de reacción se agita durante 30 minutos. La mezcla de reacción se recoge en acetato de etilo y se lava con bicarbonato de sodio acuoso al 5% y salmuera, se seca sobre sulfato de sodio, se filtra y concentra in vacuo. La cromatografía sobre gel de sílice (30% acetono-hexano) da el compuesto deshidratado (2.6 g) como una espuma blanca (M+H)+ es 744.

Paso 4: Desprotección para formar compuesto de fórmula (1): L Una solución del compuesto resultante del paso 3 (719 mg, 1.0 mmoles) en metanol (20 ml) se agita a reflujo durante 6 horas. La mezcla de reacción se concentra in vacuo y el residuo es purificado mediante cromatografía sobre gel de sílice (95:5:0.5 diclorometano-metanol-amonia) para dar el compuesto deseado.

EJEMPLO 17 Compuesto de fórmula (1): L es CO. T es O. Rg es -CH2CH=CH-fenilo A. Formar carbonato cíclico del compuesto de fórmula (1 ) a partir del esquema E ilustrativo: Rg es -VH2CH=CH-fenilo. RQ es benzoilo Una solución del compuesto preparado en el ejemplo 15, paso K u otras modalidades en donde Rd es propilo, butilo, bencilo, vinilo o 3-hidroxibutilo (150 mg, 0.20 mmoles) en THF (5 ml) se enfría a -35°c y se inunda con nitrógeno. Se añade hexametildisilazida de litio (1.0 M en THF, 0.22 ml, 0.22 mmoles) durante 2 minutos a -35°C. La mezcla de reacción se agita durante 10 minutos a -35°C y luego se añade por goteo una solución de carbonildiimidazol (162 mg, 1.00 mmoles) en THF (3 ml) durante 2 minutos. Se remueve el baño frío y la mezcla de reacción se agita durante 30 minutos. La mezcla de reacción se enfría a 0°C se añade 0.5 M KH2PO4 acuoso. La mezcla se extrae con acetato de etilo y la fase orgánica se lava con salmuera, se seca sobre sulfato de sodio y se concentra in vacuo. La cromatografía sobre gel de sílice (30% acetona-hexano) da el compuesto deshidratado.

B. Desprotección para formar compuesto de fórmula (1 ): L es La desprotección del compuesto preparado en el paso A se realiza mediante calentamiento en metanol de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 16, paso 4. Al utilizar los procedimientos descritos en los ejemplos y esquemas anteriores y métodos conocidos en la técnica de química orgánica se pueden preparar los compuestos' de fórmula (1) en donde L es CO y T es O. Estos compuestos incluyen uno de los sustituyentes de Ra abajo mencionados: EJEMPLO 18 Preparación de compuesto de fórmula (1): L es CO. T es NH. Rg ES - Paso 1 : Preparación para formar la forma 10. 11 anhidro de compuesto intermedio (6): Rg es -CH?CH=CH2. Rc es benzoilo A. 6-0-alil-3-descladinosil-15-metil-eritromicina A Una mezcla de 6-0-alil-15-metileritromicina A (6.58 g) y 125 mL de 0.5 N HCl se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. El pH se ajustó a 10 con la adición 6 N NaOH, y la mezcla se extrajo tres veces con porciones de 225-ml de acetato de etilo. Los extractos orgánicos se combinaron, se lavaron consecutivamente con NaHC03 saturado, agua y salmuera, luego se secaron sobre MgS04, se filtraron y evaporaron. El producto crudo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (3:2 tolueno/acetona + 1 % Et^N) para dar 3.04 g de 6-0-alil-3-descladinosil-15-metileritromicina A pura. ES-LC/MS muestra [M+H]+=617.

B. 2'-Q-Benzoil-6-0-alil-3-desclad¡nosil-15-metil-eritromicina A 6-0-Alil-3-descladinosil-15-metileritromicina A (2.43 g, 3.86 mmoles, 1.00 eq) y anhídrido benzoico 1.78 g, 7.72 mmoles, 2.00 eq) se colocaron en un matraz de base redonda y se inundó con N2. Se añadió acetato de etilo (17.5 ml). La solución se agitó durante 3.5 horas y luego se diluyó con 400 ml de EtOAc y se lavó dos veces con 150 ml de NaHC03 acuoso saturado, y una vez con 150 ml de agua y salmuera. La fase orgánica se secó sobre MgS04, se filtró y concentró. La purificación mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (3:1 hexanos:acetona + 1% Et3N) dio 1.94 g (68.1%) del producto deseado como un sólido blanco. ES-LC/MS muestra [M+H]+=721. 13C RMN (100.6 MHz, CDCI3) d 219.4, 174.3, 165.4, 135.3, 132.6, 130.8, 129.7, 128.2, 117.2, 99.7, 80.7, 79.0, 77.9, 77.7, 75.1 , 74.3, 72.3, 69.0, 64.7, 63.3, 45.6, 43.9, 40.7, 37.9, 37.7, 35.7, 32.1, 30.8, 21.1 , 20.2, 19.3, 18.1 , 16.3, 15.1 , 14.0, 12.4, 7.7.

C. 2'-0-Benzoil-6-Q-alil-3-desclád¡nosil-3-oxo-15-metil-eritromicina A N-Clorosuccinimida (0.510 g, 3.82 mmoles, 1.50 eq) se disolvió en 13 ml de CH2CI2 anhidro y se enfrió a -10°C bajo C N2. Se añadió sulfuro de metilo (0.328 mL, 4.46 mmoles, 1.75 eq), y la reacción se agitó durante 15 minutos. Se añadió por goteo una solución de 2'-0-benzoil-6-0-alil-3-descladinosil-15-metileritromicina A (1.87 g, 2.55 mmoles, 1.00 eq) en 13 ml de en CH2CI2 anhidro. Después de 30 minutos, se añadió Et3N (0.355 mL, 2.55 mmoles, 1.00 eq) recién destilado; y la reacción se llevó hasta 0°C durante 30 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con 400 ml de EtOAc y se lavó posteriormente con 100 ml de NaHC03 acuoso saturado, agua y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgS?4, se filtró, concentró y purificó mediante cromatografía instantánea (9:1 hexanos:acetona + 1 % EtsN) para dar 0.931 g (49.9%) del producto deseado como un sólido blanco. ES-LC/MS muestra [M+Hf=719. 13C RMN (100.6 MHz, CDCI3) d 219.1 , 206.1 , 169.5, 165.3, 132.7, 129.0, 129.7, 128.3, 117.4, 100.7, 78.5, 76.6, 75.3, 74.2, 72.1 , 69.2, 69.0, 64.5, 63.7, 50.6, 45.3, 44.8, 40.7, 38.3, 37.8, 31.7, 31.0, 21.1 , 20.2, 19.5, 18.1 , 16.5, 14.5, 14.0, 12.6, 12.2.

D. 2'-Q-Benzoilo-6-0-alil-3-descladinosil-3-oxo-11 -O-metanosulfonil-15-metil-eritromicina A 2'-0-Benzoil-6-0-Alil-3-descladinosil-3-oxo-15-metileritromicina A (904 mg, 1.24 mmoles, 1.00 eq) se disolvió en piridina recién destilada (4 ml) y se enfrió a 0°C. Se añadió por goteo cloruro de metansulfonilo (0.478 mL, 6.17 mmoles, 5.00 eq). La reacción se dejó alcanzar temperatura ambiente y se agitó durante la noche. La mezcla se diluyó con 350 ml de EtOAc y se extinguió con 100 ml de NaHC03 acuoso saturado. Las capas se separaron, y la fase orgánica se lavó posteriormente con 100 ml de agua y salmuera. La fase orgánica se secó sobre MgS0 , se filtró y concentró. La cromatografía instantánea sobre gel de sílice (4:1 hexanos:acetona + 1 % EtsN) dio 741 mg (74.1%) del compuesto deseado como un sólido blanco. 13C RMN (100.6 MHz, CDCI3) d 203.0, 168.9, 165.0, 137.6, 133.1 , 130.3, 129.8, 128.5, 114.4, 108.8, 102.2, 91.1 , 84.4, 81.6, 78.8, 72.2, 69.2, 64.3, 63.9, 52.1 , 46.6, 45.8, 40.7, 38.8, 38.2, 35.9, 31.8, 30.9, 29.7, 24.8, 21.0, 19.6, 18.2, 15.5, 15.4, 13.8, 13.5.

E. 2'-O-Benzoil-6-O-al¡l-3-descladinosil-3-oxo-10.11-anhidro-15-metil-eritromjcina A 2'-0-Benzoil-6-0-alil-3-descladinosil-3-oxo-11 -metanesulfonil-15-metil-eritromicina A (705 mg, 0.870 mmoles, 1.00 eq) se disolvió en acetona (3 ml) y se añadió por goteo 1 ,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (0.651 mL, 4.35 mmoles, 5.00 eq). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas y luego se concentró. La cromatografía instantánea sobre gel de sílice (4:1 hexanos:acetona + 1 %EtsN) dio 486 mg (78.0%) del compuesto deseado como un sólido blanco. 13C RMN (100.6 MHz, CDCI3) d 210.1 , 208.4, 170.2, 165.2, 141.0, 140.2, 136.3, 132.7, 130.4, 129.8, 128.2, 115.5, 100.6, 81.0, 78.7, 77.2, 73.8, 72.0, 69.1 , 64.6, 63.3, 51.0, 47.4, 40.8, 39.4, 36.2, 31.9, 31.3, 23.6, 21.2, 21.1 , 21.0, 19.4, 14.1 , 13.9, 13.7, 13.1.

Paso 2: Formación de intermediario de imidazoluro (7) a partir del esquema C v ciclización para formar carbamato cíclico de compuesto (1 ) (10): Rg es -CH2CH=CH?Rf- es benzoilo 2'-O-Benzoil-6-O-alil-10)11-anhidro-3-descladinosil-3-oxo-15-metil-eritromicina A (227 mg, 0.317 mmoles, 1.00 eq) se disolvió en 1.3 ml de THF recién destilado y se enfrió a -15°C bajo N2. Se añadió hidruro de sodio (25 mg de una dispersión al 60% en aceite mineral, 0.634 mmoles, 2.00 eq), y la reacción se agitó durante 15 minutos. Se añadió por goteo una solución de 1 ,1 -carbonildiimidazol (140 mg, 0.866 mmoles, 3.00 eq) en 1.3 ml de THF recién destilado. Después de agitación durante 30 minutos, la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante 1.5 horas. La mezcla se diluyó con 100 ml de EtOAc y se lavó posteriormente con 30 ml de NaHC03 acuoso saturado, agua y salmuera. La fase orgánica se secó sobre MgS?4, se filtró y concentró para dar 275 mg de producto crudo (100%) el cual se disolvió en 2 ml de ACN y 0.2 ml de THF anhidro. Se añadió hidróxido de amonio acuoso saturado (2 ml). La reacción se selló y agitó durante 2 días. Los volátiles se removieron bajo presión reducida y el residuo se volvió a disolver en 100 ml de EtOAc. La solución se lavó posteriormente con 30 ml de NaHC?3 acuoso saturado, agua y salmuera. La fase orgánica se secó sobre MgS?4, se filtró y concentró. La cromatografía instantánea del producto crudo (4:1 hexanos:acetona + 1 % Et3N) dio 184 mg (76.5%) del producto deseado.

EJEMPLO 19 Preparación de compuesto de fórmula (3): L es CO. T es NH. Rg es -CH - (2-naftilo) Paso 1 : Alquilación de 6-OH para formar compuesto (4) a partir del esquema B: Rg es -CH2-(2-naftilo). Rg v Rg son H. Siguiendo los procedimientos del ejemplo 11 , pasos 1-3, excepto por la sustitución de bromuro de (2-naftilo)metilo por el bromuro de alilo del paso 1 , se prepara el compuesto.

Paso 2: Protección de 2'.4" hidroxilo para formar compuesto intermediario (4) a partir del esquema B: Rg es -CH2-(2-naftilo), Rg v Rg son acetilo El compuesto del paso 1 (2.0 g) es tratado de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 16, paso 1 , excepto por la sustitución de anhídrido acético por el anhídrido benzoico de ese ejemplo.

Paso 3: Formación de compuesto intermediario (9) a partir del esquema B v formación de carbamato cíclico del compuesto (3) a partir del esquema B: El compuesto del paso 2 (500 mg) se trata con NaH y carbonildiimidazol y es tratado con amonia en acetonitrilo de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 18, paso 2 para dar el compuesto.

EJEMPLO 20 Preparación de compuesto de fórmula (1): Rg es acetilo. L es CO. T es NH. R* es -CH2CH=CH2 Paso 1 : Preparación de compuesto intermediario (4) a partir del esquema B: Rg es -CH2CH=CH2. Rc v Rg son acetilo A una muestra del compuesto del ejemplo 11 , paso 3 o una modalidad del mismo en donde Rd es propilo, butilo, bencilo, vinilo o 3-hidroxibutilo (405.2 g, 528 mmoles) en diclorometano (20 ml), se añade dimetilaminopiridina (0.488 g, 4 mmoles) y anhídrido acético (3.39 ml, 36 mmoles), y la mezcla se agita a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla se diluye con cloruro de metileno, luego se lava con bicarbonato de sodio acuoso al 5% y salmuera y se seca sobre Na2S?4. El residuo se seca y recristaliza a partir de acetonitrilo para dar el compuesto.

Paso 2: Deshidratación en C-10. 11 y derivación de C-12 para formar compuesto intermediario (9) a partir del esquema B: Rg es -CH2CH=CH . R. v Rg son acetilo. A una muestra del compuesto del paso 1 (85.8 g, 100 mmoles) en THF seco (500 ml), enfriada a -40°C e inundada con nitrógeno se añade bis(trimetilsililo)amida de sodio (125 ml, 125 mmoles) durante 20 minutos, y la mezcla se agita a -40°C durante 40 minutos. A esta mezcla se añade una solución de carbonildiimidazol (3.65 g, 22.56 mmoles) en 5:3 THF/DMF (800 ml) bajo nitrógeno a -40°C durante 30 minutos, y la mezcla se agita a -20°C durante 30 minutos. La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 27 horas, luego se diluye con acetato de etilo. La mezcla se lava con bicarbonato de sodio al 5% y salmuera, se seca sobre Na2S?4, y se concentra para dar el compuesto (9), el cual es directamente llevado al siguiente paso.

Paso 3: Formación de carbamato cíclico del compuesto (3) a partir del esquema B: Rg es -CH2CH=CH . Rg v Rg son acetilo El compuesto del paso 2 (124 g) se disuelve en 9:1 acetonitrilo/THF (1100 ml), se añade hidróxido de amonio (28%, 200 ml) y la mezcla se agita a temperatura ambiente bajo nitrógeno durante 8 días. Se remueve el solvente, y el residuo se disuelve en acetato de etilo. Esta solución se lava con bicarbonato de sodio al 5% y salmuera, se seca sobre Na2S0 y se concentra para dar el compuesto (3).

Paso 4: Preparación de forma 3-OH del compuesto (1 ): Rg es -CH?CH=CH2. Rg v R» son acetilo A una muestra del compuesto del paso 3 (69.0 g, 78.2 mmoles) suspendida en etanol (200 ml) y diluido con agua (400 ml) se añade por goteo HCl (0.972 N, 400 ml) durante 20 minutos. La mezcla se agita durante 4 horas, se añade HCl adicional (4 N, 100 ml) durante 20 minutos. La mezcla se agita durante 18 horas, se enfría a 0°C, luego se añade NaOH (4 N, 200 ml) durante 30 minutos hasta aproximadamente pH 9. El compuesto intermediario es aislado mediante filtración.

Paso 5: Preparación de compuesto (1 ): Rg es -CH2CH=CH . F y Ra son acetilo. L es CO. T es NH. A una solución a -10°C bajo nitrógeno de N-clorosuccinimida (2.37 g, 17.8 mmoles) en diclorometano (80 ml) se añade sulfuro de dimetilo (1.52 ml, 20.8 mmoles) durante 5 minutos. La suspensión blanca resultante se agita durante 10 minutos a -10°C, se añade una solución del compuesto del paso 4 (8.10 g, 11.9 mmoles) en diclorometano (60 ml) y la mezcla de reacción se agita durante 30 minutos a -10 a -5°C. Se añade por goteo trietilamina (1.99 ml, 14.3 mmoles) durante 10 minutos y la mezcla de reacción se agita durante 1 hora a 0°C. La mezcla de reacción se extrae con diclorometano. La fase orgánica se lava con bicarbonato de sodio acuoso al 5% y salmuera, se seca sobre sulfato de sodio, y se concentra in vacuo para dar una espuma blanca. La cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con 50:50:0.5 acetona/hexanos/hidróxido de amonio) da el compuesto.

EJEMPLO 21 Preparación alternativa del compuesto de fórmula (1): L es CO. T es NH.

Paso 1 : Preparación del compuesto de fórmula (1): R^ es H. R¿ es propilo. L es CO. T es NH. Rg es -CH2CH=CH-(3-auinolilo).

Preparación A: Fórmula (1): R =H. R« es -CH?-CH=CH-(3-quinolilo) Carbamato 11 ,12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-desclad¡nosil-11-desoxi-3-oxo-15-metileritromicina A (40 mg, 0.0528 mmoles), 1.0 eq), aducto de tris(dibencilidenacetona) dipaladio (O)-cloroformo (14 mg, 0.014 mmoles, 0.5 eq), tri-o-tolilfosfina (17 mg, 0.055 mmoles, 1.0 eq), y 3-bromoquinolina (72 µl, 0.53 mmoles, 10 eq) se colocaron en un matraz de fondo redondo que se inundó con hl2. Se agregaron el acetonitrilo desgasificado (1 ml) y Et3N recientemente destilado (0.015 ml, 0.11 mmoles, 2.0 eq). La reacción se puso bajo reflujo durante 63 horas. La mezcla se regresó a temperatura ambiente y se diluyó con 40 ml de EtOAc. La solución se lavó sucesivamente con 10 ml cada uno de NaHC03 acuoso saturado, agua, y salmuera. La fase orgánica se secó sobre MgS?4, se filtró y concentró. La cromatografía instantánea del producto crudo (gradiente de 5:1 a 2:1 hexanos: acetona + 1% de Et3N) produjo 34 mg del producto deseado.

Paso 2: El producto anterior (34 mg) se disolvió en 1 ml de metanol, se selló y se puso bajo reflujo a 80°C durante 16 horas. Los materiales volátiles se removieron bajo presión reducida. La cromatografía instantánea (1 :1 hexanos:acetona + 1 % de Et3N) dio el producto deseado como un sólido color amarillo claro (25 mg, 61% en de los dos pasos). ES-LC/MS: [M+H]+ = 780.5 13C-RMN (CDCI3, 100 MHz): d 217.44, 205.37, 169.48, 157.69, 149.71 , 147.61 , 132.51 , 129.96, 129.56, 129.15, 129.05, 128.49, 128.05, 126.70, 102.90, 83.42, 78.71 , 76.42, 75.91, 70.22, 69.53, 65.83, 64.31 , 58.12, 50.81 , 46.29, 46.12, 45.05, 40.18 (2 C), 39.05, 37.31 , 31.64, 28.19, 21.15, 20.18, 19.43, 18.05, 14.38, 14.11 , 13.76, 13.63 (2C).

Preparación B: Fórmula (1): Rh = H. Rg es -CH2-CH=CH-(3-(6-fluoroquinolilo) Se preparó de acuerdo con el método de preparación A utilizando 3-bromo-6-fluoroquinolina en lugar de 3-bromoquinolina. ES-LC/MS: [M+Hf = 798.5 13C-RMN (CDCI3, 100 MHz): d 217.49, 205.36, 169.54, 160.6, (JCF=248 Hz), 157.68, 149.05, 144.69, 131.84, 131.64 (JCF=9 Hz), 130.28, 129.63, 129.31 , 128.7 (JCF= 10 Hz), 119.20, (JCF=27 Hz), 110.87 (JCF=22 Hz), 102.94, 83.42, 78.77, 76.44, 75.91 , 70.22, 69.55, 65.84, 64.24, 58.09, 50.83, 46.36, 46.06, 45.05, 40.18 (2 C) 39.04, 37.32, 31.63, 28.19, 21.16, 20.19, 19.46, 18.04, 14.37, 14.18, 13.76, 13.62 (2 C).

Preparación C: Fórmula (1 ): Rh = H. Rg es -CH2-CH=CH-(3-(6-cloroquinolilo) Se preparó de acuerdo con el método de preparación A utilizando 3-bromo-6-cloroquinolina en lugar de 3-bromoquinolina. ES-LC/MS: [M+H]+ = 814.5. 13C-RMN (CDCI3, 100 MHz): d 217.48, 205.35, 169.55, 157.67, 149.90, 145.92, 132.42, 131.49, 130.80, 130.44 129.92, 129.49, 129.46, 128.71 , 126.57, 102.94, 83.41 , 78.78, 76.45, 75.91 , 70.22, 69.54, 65.83, 64.23, 58.07, 50.83, 46.39, 45.99, 45.04, 40.17 (2 C), 39.03, 37.32, 31.62, 31.53, 28.18, 21.16, 20.17, 19.49, 18.04, 14.36, 14.21 , 13.76, 13.61 , (2 C).

Preparación D: Fórmula (1): Rb = H. Rg es -CH -CH=CH-(4-isoquinolilo) Se preparó de acuerdo con el método de preparación A utilizando 4-bromoisoquinolina en lugar de 3-bromoquinolina. ES-LC/MS: [M+H]+ = 781. 13C-RMN (CDCls, 100 MHz): d 217.49, 205.43, 169.75, 157.39, 152.07, 140.74, 133.61 , 130.65, 130.44, 128.07, 127.72, 127.05, 126.89, 122.77, 102.85, 83.28, 78.74, 75.72, 70.22, 69.51 , 65.88, 64.45, 58.10, 50.91 , 46.07, 45.09, 40.18 (2 C) 38.99, 37.34, 31.48, 29.66, 28.28, 21.18, 20.39, 19.33, 14.53, 14.01 , 13.86, 13.66, 13.62.

Preparación E: Fórmula (1 ): R = H. Rg es -CH2-CH=CH-(3-piridilo) Se preparó de acuerdo con el método de la preparación A utilizando 3-bromopiridina en lugar de 3-bromoquinolina. LC/MS: [M+H]+ = 731. 13C-RMN (CDCls, 100 MHz): d 217.39, 205.27, 169.50, 157.61 , 148.81, 148.68, 132.63, 132.16, 129.65, 128.18, 123.46, 102.91 , 83.36, 78.63, 76.35, 75.79, 70.20, 69.52, 65.83, 64.17, 58.06, 50.78, 46.28, 45.03, 40.16 (2 C), 38.96, 37.29, 31.64, 31.52, 28.19, 22.58, 21.14, 20.21 , 19.42, 18.04, 1.35, 14.12, 14.05, 13.79, 13.61 , (2 C).

Preparación F: Fórmula (1 ): Rh = H. Rg es -CH -CH=CH-(3-(6-metjlquinolilo) Se preparó de acuerdo con el método de preparación A utilizando 3-bromo-6-metilquinolina en lugar de 3-bromoquinolina. ES-LC/MS: [M+H]+ = 795. 13C-RMN (CDCI3, 100 MHz): d 217.37, 205.35, 169.47, 157.65, 148.82, 146.23, 136.45, 131.87, 131.37, 130.09, 129.51 , 128.78, 128.22, 128.06, 126.86, 102.87, 83.40, 78.68, 75.91 , 70.20, 69.47, 65.83, 64.33, 58.11 , 50.81 , 46.28, 45.04, 40.15 (2 C), 39.05, 37.31 , 31.64, 28.24, 21.52, 21.14, 20.18, 19.45, 18.05, 14.38, 14.11 , 13.77, 13.63 (2 C).

Preparación G: Fórmula (1 ): Rh = H. Rg es -CH -CH=CH-(3-(6-aminoguinolilo) Se preparó de acuerdo con el método de preparación A, utilizando 3-bromo-6-aminoquinolina en lugar de 3-bromoquinolina. ES-LC/MS: [M+H]+ = 796.

Preparación H: Fórmula (1 ): Rh = H. Rg es -CH2-CH=CH-(3-(5-isoxazol-3-il)t¡en¡lo) Se preparó de acuerdo con el método de preparación A, utilizando 5-(isoxazol-3-il)-2-bromotiofeno en lugar de 3-bromoquinolina.

Preparación I: Fórmula (1 ): Rh = H. Rg es -CH?-CH=CH-(6-quinolilo) Se preparó de acuerdo con el método de preparación A, utilizando 6-bromoquinolina en lugar de 3-bromoquinolina.

Preparación J: Fórmula (1 ): Rh = H. Rg es -CH -CH=CH-(3-auinoxal-6-ilo) Se preparó de acuerdo con el método de preparación A, utilizando 6-bromoquinoxalina en lugar de 3-bromoquinolina.

' Preparación K: Fórmula (1): Rh=H. Rg es -CH -CH=CH-(5-(N-(2-piridip-2-furamidilo) Se preparó de acuerdo con el método de preparación A, utilizando N-(piridil)5-bromo-2-furamida en lugar de 3-bromoquinolina. quinolilo) Se preparó de acuerdo con el método de preparación A utilizando carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-desclad¡nosil-11-desoxi-3-oxo-2-fluoro-15-metileritromicina A en lugar de carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-desoxi-3-oxo-15-metlleritromicin A. LCM/MS: [M+H]+=798.6. 19F-RMN (CDCls, 376 MHz): d-163.93. 13C-RMN (CDCls, 100 MHz): d 217.97, 204.28 (JCF=27 Hz), 165.62 (JCF=23 HZ), 157.18, 149.71 , 147.70, 132.65, 130.25, 129.53, 129.22, 129.12, 129.06, 128.15, 128.08, 126.78, 104.10, 98.02 (JCF=206 Hz), 83.40, 79.59, 79.37, 77.57, 70.41 , 69.74, 65.85, 64.36, 58.11 , 44.23, 40.83 (JCF=1.5 Hz), 40.25 (2 C), 39.04, 37.45, 31.37, 28.16, 25.30 (JCF=22 HZ), 21.19, 20.86, 19.54, 17.67, 15.46 (JCF=1 .7 HZ), 13.82, 13.80, 13.29.

Preparación BB: Fórmula (1): Rh=F. Rg es -CH2-CH=CH-(3-(6-fluoroquinolilo) Se preparó de acuerdo con el método de preparación B utilizando carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoiI-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-desoxi-3-oxo-2-fluoro-15-metileritromicina A en lugar de carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-desoxi-3-oxo-15-metileritromicina A.

Preparación CC: Fórmula (1 ): Rb=F. Rg es -CH -CH=CH-(3-(6-cloroquinolilo) Se preparó de acuerdo con el método de preparación C utilizando carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinos¡l-11-desoxi-3-oxo-2-fluoro-15-metileritromicina A en lugar de carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-desoxi-3-oxo-15-metileritromicin A.

Preparación DD: Fórmula (1 ): R¿=F. Rg es -CH2-CH=CH-(4-isoquinolilo) Se preparó de acuerdo con el método de preparación D utilizando carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-desoxi-3-oxo-2-fluoro-15-metileritromicina A en lugar de carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-desoxi-3oxo-15-metileritromicina A.

Preparación EE: Fórmula (1 ): Rh=F. Rg es -CH2-CH=CH-(3-piridilo) Se preparó de acuerdo con el método de preparación E utilizando carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-O-benzoil-6-O-alil-11-amino-3-descladinos¡l-11-desoxi-3-oxo-2-fluoro-15-metileritromicina A en lugar de carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-desoxi-3-oxo-15-metileritromicina A.

Preparación FF: Fórmula (1 ): Rb=F. Rg es -CH2-CH=CH-(3-(6-metilquinolilo) Se preparó de acuerdo con el método de preparación E utilizando carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-desoxi-3-oxo-2-fluoro-15-metileritromicina A en lugar de carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-desoxi-3-oxo-15-metileritromicina A.

Preparación GG: Fórmula (1 ):R =F. Ra es -CH?-CH=CH-(3-(6-aminoquinolilo) Se preparó de acuerdo con el método de preparación G utilizando carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinos¡l-11-desoxi-3-oxo-2-fIuoro-15-metileritromicina A en lugar de carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-desoxi-3-oxo-15-metileritromicina A.

Preparación HH. Fórmula (1 ): Rh=F. Rg es -CH2-CH=CH-(3-(5-isoxazol-3-il)tienilo Se preparó de acuerdo con el método de preparación H utilizando carbamato 1 1 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-1 1-amino-3-descladinosil-11-desoxi-3-oxo-2-fluoro-15-metileritromicina A en lugar de carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-desoxi-3-oxo-15-metileritromicina A.

Preparación II: Fórmula (1 ) Rh=F. Rg es -CH -CH=CH-(6-quinolilo) Se preparó de acuerdo con el método de preparación I utilizando carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11- desoxi-3-oxo-2-fluoro-15-metileritromicina A en lugar de carbamato 1 1 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11 -amino-3-descladinosil-11 -desoxi-3-oxo-15-metilerltromicina A.

Preparación JJ: Fórmula (1 ): Rh=F. Rg es -CH2-CH=CH-(3-quínoxal-6-ilo) Se preparó de acuerdo con el método de preparación J utilizando carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-desoxi-3-oxo-2-fluoro-15-metileritromicina A en lugar de carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11 -amino-3-descladinosil-11 -desoxi-3-oxo-15-metíleritromicina A.

Preparación KK: Fórmula (1 ): Rb=F. Rg es -CH2-CH=CH-(5-(N-(2-piridil)-2-furamidilo) Se preparó de acuerdo con el método de preparación K utilizando carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinos¡l-11-desox¡-3-oxo-2-fluoro-15-metileritromicina A en lugar de carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-O-benzoil-6-O-alil-11-amino-3-descladionosil-11-desoxi-3-oxo-15-met¡leritromic¡na A. Utilizando los procedimientos descritos en los ejemplos anteriores y esquemas y métodos conocidos en la técnica de la química orgánica sintética, los compuestos de carbamato cíclico de fórmula (1 ) en donde L es CO y T es NH pueden prepararse. Estos compuestos tienen el sustituyente Ra como se describe a continuación: EJEMPLO 22 Preparación del compuesto de fórmula (1): L es CO. T es N(CH3). Rg es - Paso 1 : Preparación del compuesto (10) del esquema 3: Rf es metilo. Rg es -CH2CH=CH2 R^es benzoilo Al reemplazar el hidróxido de amonio del ejemplo 18 con metilamina, se forma el compuesto anterior. Otras modalidades: Utilizando los procedimientos anteriores, los compuestos de fórmulas (1)-(3) pueden formarse en donde L es (2-fluorenilo); -CH2CH=CH-(3-(2-furanilo)-6-quinolilo); -CH2CH=CH-(9-fluorenon-2-ilo); -CH2CH=CH-(6-benzoil-2-naftilo): -CH2CH=CH-(7-metoxi-2-naftilo); CH2CH=CH-(-3-fenil-6-quinolilo); -CH2CH=CH-(3-(2-piridil)-6-quinolilo); CH2CH=CH-(3-(2-tiofenil)-6-quinolilo); -CH2CH=CH-(4-metilnaftilo); CH2CH=CH-(6-ß-D-galactopirasonil-2-naftilo); -CH2CH=CH-(7-quinolilo); -CH2CH=CH-(4-fluoronaftílo); -CH2CH=CH-(3-bifenilo); -CH2CH=CH-(5-nitronaftilo); -CH2CH=CH-(4-pirrolilfenilo); -CH2CH=CH-(6-metoxi-2-naftilo); -CH2CH=CH-(3,5-diclorofenilo); -CH2-(3-yodofenilo); -CH2-(3-(2-furanil)fenilo); -CH2CH=CH-(6-hidroxi-2-naftilo); -CH2CH=CH-(6-(2-bromoetoxi)-2-naftilo); -CH2CH=CH-(6-(2-(tetrazolil)etoxi-2-naftilo); -CH2CH=CH-naftilo; -CH2CH=CH-(5-(3-isoxazolil)-2-tiofenilo); -CH2CH=CH-(1 ,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinilo; y -CH2CH=CH-(5-(2-piridil)aminocarbon¡l-2-furanilo). Además, después de los procedimientos del ejemplo 21 , salvo sustituir el reactivo que se presenta a continuación con 3-bromoquinolina del ejemplo 21 , se preparan los compuestos adicionales. Estos son compuestos de fórmula (I) en donde L es CO y T es O que tiene el sustituyentes Ra como se describió a continuación; EJEMPLO 23 Conversión a -ORg A. Alilo ? -CH2QHO El compuesto del ejemplo 18 (14.0 g) se disuelve en -CH2CI2 (200 ml) y la solución se enfría a -78°C bajo una atmósfera de nitrógeno. Posteriormente se hace burbujear ozono a través de la solución hasta que se mantiene un color azul. La reacción entonces se purga con N2 hasta que se vuelve incolora y se agrega dimetilsulfuro (14 ml) y la mezcla de reacción se calienta a 0°C. Después de agitar durante 90 minutos, la mezcla de reacción se concentra bajo presión reducida para dar una espuma amarilla clara. Este material se disuelve en THF (300 ml) y se trata con trifenilfosfina (8 g) a reflujo durante 6 horas, posteriormente la mezcla de reacción se concentra bajo presión reducida. La cromatografía (1 :1 acetona/hexanos a 3:1 acetona/hexanos con 0.5% de TEA) dio el producto.

B. -CH?CHO ? -CH CH?NHCH2fenilo El compuesto del ejemplo 23A (120 mg, 0.187 mmoles) y bencilamina (40 µl, 0.366 mmoles, 2 equivalentes) se disolvieron en 3 ml de diclorometano seco. Los tamices moleculares (4A) se agregaron y la reacción se agitó durante la noche. La reacción entonces se filtró y se concentró bajo presión reducida. La imina resultante se disolvió en MeOH (5 ml), una cantidad catalítica de 10% de Pd en carbono se agregó, y la reacción se agitó rápidamente bajo 1 atmósfera de presión H2 durante 20 horas. La mezcla entonces se filtró a través una almohadilla de Celite™, y la solución se concentró bajo presión reducida. La cromatografía (Si02, 5% de MeOH/diclorometano con 0.2% de NH4OH) da el material deseado (84 mg) como un sólido blanco.

C. -CH2CHO ? -CH CH NHCH2CH2fenilo Este compuesto se preparó a partir del compuesto del ejemplo 23A (108 mg, 0.169 mmoles) y fenetilamina (42 µl, 0.334 mmoles), 2 equivalentes) utilizando el procedimiento descrito en el ejemplo 23B. la cromatografía (S¡02, 5% de MeOH/diclorometano con 0.5% de NH4OH) da el material deseado.

D. -CH CHQ ? -CH2CH2NHCH2CH2CH2fenilo Este compuesto se preparó a partir del compuesto del ejemplo 23A (100 mg, 0.156 mmoles) y 3-fenil-1 -propilamina (40 µl, 0.282 mmoles, 1.8 equivalentes) utilizando el procedimiento descrito en el ejemplo 23B. La cromatografía (Si02, 5% de MeOH/diclorometano con 0.5% de NH4OH) da el material deseado.

E. -CH CHO ? -CH2CH NHCH2CH2CH2CH2fenilo Este compuesto se preparó a partir del compuesto del ejemplo 23A (170 mg, 01.266 mmoles) y 4-fenil-1-butilamina (68 µl, 0.431 mmoles, 1.6 equivalentes) utilizando el procedimiento que se describe en el ejemplo 23B. La cromatografía (S¡02, 5% de MeOH/diclorometano con 0.2% de NH4OH) da el material deseado.

F. -CH?CHO -» -CH2CH2NHCH2CH2CH2-(3-quinolilo) El compuesto del ejemplo 23A (135 mg, 0.211 mmoles) y 3-(3-quinolil)-1 -propilamina (70 mg, 0.376 mmoles, 1.8 equivalentes) se disolvieron en 4 ml de diclorometano seco. Los tamices moleculares (4Á) se agregan y la reacción se agita durante la noche. La reacción entonces se filtra y se concentra bajo presión reducida. La imina resultante se disuelve en MeOH (5 mL) y se trata con NaCNBH3 (aproximadamente 100 mg) y suficiente AcOH para cambiar el indicador verde de bromocresol de azul a amarillo. Después de agitar durante 4 horas. La mezcla de reacción se vierte en solución de NaHCOs saturada y se extrae en diclorometano. La porción orgánica se lava con NaHCOs saturado, H20 y salmuera, se seca (Na2S04) y se concentra bajo presión reducida. La cromatografía (Si02, 5% de MeOH/diclorometano con 0.5% de NH4OH a 10% de MeOH/diclorometano con 1 % de NH4OH) da el material deseado.

G. -CH CHO ? -CH CH2NHCH2(3-quinolilo) El compuesto del título se prepara a partir del compuesto del ejemplo 23A (150 mg, 0.234 mmoles) y 3-(aminometil)quinolina (100 mg, 0.633 mmoles, 2.7 equivalentes) utilizando el procedimiento descrito en el ejemplo 23F. La cromatografía (S¡02, 5% de MeOH/diclorometano con 0.5% de NH4OH) da el material deseado. El reactivo de 3-(aminometil)quinolina se prepara mediante métodos conocidos en la técnica.

Otras modalidades de las fórmulas (1)-(3) en donde Rb es H, Rc es H, L es -CO-, T es -NH-, y Rd es propilo, butüo, bencilo, vinilo, o 3-hidroxibutilo son aquellas en donde Ra se convierte de -CH2CHO a: -CH2CH2NHCH2(6-quinolilo); -CH2CH=NO(fenilo); -CH2CH=NOCH2(fenilo); -CH2CH=NOCH2(4-N02-fenilo); -CH2CH=NOCH2(4-quinolilo); CH2CH=NOCH2(2-quinolilo); -CH2CH=NOCH2(3-quinolilo); -CH2CH=NOCH2(6-quinolilo); -CH2CH=NOCH2(1 -naftilo); -CH2CH=NOCH2(2-naftilo); CH2CH=NHOCH2(fenilo); -CH2CH2NHOCH2(4-N02-fenilo); -CH2C(0)fenilo; -CH2C(0)-(4-F-fenilo); .CH2CH=NNHC(0)fenilo; o -CH2CH(OH)-fenilo.

H. -CH2CH=CH-(3-quinolilo) ? CH2CH2CH2(3-auinol¡lo) Una mezcla del compuesto del ejemplo 18 en donde Ra es -CH2CH=CH-(3-quinolilo) (230 mg) y 10% de Pd/C (50 mg) en 30 ml de metanol y 15 ml de acetato de etilo se inundan con nitrógeno y se agitan bajo un átomo de hidrógeno a temperatura ambiente durante 22 horas. La mezcla se filtra, y el filtrado se concentra bajo presión reducida. La cromatografía en gel de sílice (5% de MeOH/diclorometano con 5% de NH4OH) da el material deseado.

I. -CH2CH=CH-(3-quinolilo) ? -CH9(2-(3-auinolil)c¡clopropilo) A una solución de diazometano (0.64 M, 312 ml, 2.00 mmoles) en éter se añade una solución del compuesto del ejemplo 18 en donde Ra es -CH2CH=CH-(3-quinolilo) (153 mg, 0.200 mmoles) en diclorometano (5.0 ml) a 0C° bajo nitrógeno. Una pequeña cantidad (2 mg) de acetato de paladio se añade, y la mezcla se agita durante 20 minutos. Otra porción de diazometano (3 ml) se añade, y la mezcla se agita durante 1 hora. Los solventes se evaporan, y el residuo se purifica mediante cromatografía en gel de sílice (5% de MeOH/diclorometano con 0.5% de NH4OH) para dar el compuesto del título como un sólido blanco.

EJEMPLO 24 Conversiones en Rg A. -H -> propanoilo (Rg es -CH2CH=CH-(3-quinolilo) A una solución del compuesto del ejemplo 18 convertida a Ra, en donde Rg es -CH2CH=CH(3-quinolilo), (152 mg) en diclorometano se añaden anhídrido propiónico (52 µL) y trietilamina (56 µL), y la mezcla se agita durante 24 horas a temperatura ambiente. La mezcla se diluye con acetato de etilo, y esta se lava con 5% de solución de NaHCOs y salmuera, se seca (Na2S?4) y se concentra bajo presión reducida. El residuo se cromatografía en gel de sílice (1 :1 acetato/hexanos) para dar el compuesto del título como una espuma blanca. B. -H - etilsuccinoilo (Rg es -CH2CH=CH-(3-quinolilo)) A una solución del compuesto del ejemplo 18 convertido a Ra, en donde Ra es -CH2CH=CH-(3-quinolilo) (153 mg, 0.200 moles) en diclorometano (10 mL) a 0°C se añade cloruro de etilsuccinilo (29 µL) y trietilamína (56 µL), y la mezcla se agita durante 24 horas a temperatura ambiente. La mezcla se diluye con acetato de etilo, y esta se lava con 5% de solución de NaHC03 y salmuera, se seca (Na2S?4) y se concentra bajo presión reducida. El residuo se cromatografía en gel de sílice (1 :1 acetato/hexanos) para dar el compuesto del título como una espuma blanca.

EJEMPLO 25 Preparación del compuesto de fórmula (1): L es CO. T es NH. R3 es - CH2C=C-H. Rc v Rfl son H Paso 1 : Preparación del intermediario del compuesto (4): la posición 9 es N-0-(1-¡sopropoxiciclohex¡lo). Rg es -CH2C=C-H. Rg y Re son trimetilsililo A una solución bajo nitrógeno de 2',4"-bis-0-trimetilsilileritromicina A 9-[0-(1-isopropoxiclohexil)]oxima (100 g, 96.9 mmoles, preparado de acuerdo con el método de la patente de E.U.A. No. 4,990,602) en THF (200 ml) se añade DMSO anhidro (200 ml) y la mezcla se enfría a 0°C. A esta solución agitada bajo una atmósfera de N2 se agrega bromuro de propargilo (25 ml, 240 mmoles, 80% en peso en tolueno), seguido por una solución de KOH en seco (13.6 g, 240 mmoles) en DMSO anhidro (300 ml) durante 25 minutos, y la mezcla se agita vigorosamente durante 1 hora a 0°C. KOH adicional (10.9 g, 190 mmoles) y bromuro de propargilo (21 ml, 190 mmoles) se agregan, y la mezcla se agita a 0°C bajo N2 durante 1.5 horas. Esta adición de KOH y bromuro de propargilo se repite 3 veces más en intervalos de 1.5 horas. La mezcla posteriormente se extrae con acetato de etilo, y las fases orgánicas se lavan con agua y salmuera y se seca (MgS04). La remoción del solvente al vacío da el producto crudo, que se toma directamente para el siguiente paso.

Paso 2: Conversión de -N-O-d-isopropoxicicIohexilo) en la posición 9 a -NQH en un intermediario del compuesto (4): Rg es. -CH2C=C-H Al compuesto del paso 1 (108 g) en CH3CN (300 ml) se añade agua (150 ml) y ácido acético (glacial, 200 ml), y la mezcla se agita a temperatura ambiente durante 20 horas. El solvente entonces se remueve al vacío a 40°C, y el residuo se recoge en EtOAc y se lava sucesivamente con 5% Na2C03 y salmuera. La fase orgánica se seca entonces sobre MgS04, se filtra y se concentra para dar el compuesto como una espuma color café, que se toma directamente para el siguiente paso.

Paso 3: Conversión de -NOH en la posición 9 a =Q para formar un compuesto intermediario (4): Rg es -CH2C=C-H El compuesto del paso 2 (74 g) se disuelve en etanol (550 ml) y se diluye con agua (550 ml). A esta solución se añade nitrito de sodio (33 g, 0.48 moles), y la mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 15 minutos. A continuación se añaden HCl 4M (125 ml, 0.48 moles) a temperatura ambiente durante 15 minutos, la mezcla se calienta a 70°C durante 2 horas, y entonces en enfría a temperatura ambiente. La mezcla se extrae con acetato de etilo, y la fase orgánica se lava con 5% de Na2C?3 y salmuera, y entonces se seca sobre MgS04, se filtra y se concentra. El producto crudo se purifica mediante cromatografía en gel de sílice, eluyendo con 1% de metanol/diclometano que contiene 0.5% de hidróxido de amonio. El compuesto se cristaliza a partir de acetonitrilo para dar el compuesto.

Paso 4: Protección de grupos 2' y 4" hidroxilo para formar el compuesto intermediario (4) del esquema 2: Rc v Rg son acetilo. Rg es -CH2OC-H A una solución de 19 g (246 mmoles) el compuesto del paso 3 en diclorometano anhidro (100 ml) se añade 4-dimetilaminopiridina (105 mg) y trietilamina (7.16 ml, 52 mmoles). La mezcla se enfría a alrededor de 15°C en un baño de agua fría, y se añade anhídrido acético (5.5 ml, 59 mmoles) durante 5 minutos. Después de agitar a 15°C durante 5 minutos, el baño de agua fría se remueve, y la reacción se agita a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla se diluye con acetato de etilo y se lava sucesivamente con 5% de carbonato de sodio acuoso (dos veces), agua (dos veces) y salmuera. Los extractos orgánicos se secan sobre sulfato de magnesio, se filtran y concentran in vacuo. El secado a un peso constante con un alto vacío provee el compuesto.

Paso 5: Deshidratación en posición 10. 11 y derivación en la posición 12 para formar el compuesto intermediario (9) del esquema 2: Rg y Rg son acetilo. R es -CH?C=C-H A una solución a 0°C del compuesto del paso 4 (21 g, 24.5 mmoles) en THF (128 ml) y sulfóxido de dimetilo (48 ml) se añade 1 , l '-carbonildiimidazol (14.3 g, 88.3 mmoles). Después de agitar durante 5 minutos, se añade hidruro de sodio (60% dispersión en aceite mineral, 1.3 g, 32.5 mmoles) en porciones durante 1 hora bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de una adición completa, el baño frío se remueve, y la mezcla se agita a temperatura ambiente durante 3.5 horas. La reacción se vuelve a enfriar a 0°C, se diluye con acetato de etilo (-400 ml), y se extingue con 5% de bicarbonato de sodio acuoso (50 ml). Las capas orgánicas se lavan sucesivamente con agua y salmuera, posteriormente se secan sobre sulfato de magnesio. La solución se filtra y el filtrado se concentra in vacuo y se seca a un peso constante para producir el compuesto que se toma directamente para el siguiente paso.

Paso 6: Formar el carbamato cíclico del compuesto (3) del esquema 2: FL y R£ son acetilo. R^es -CH2C=C-H Un recipiente de presión que contiene el compuesto del paso 5 (23 g, 24 mmoles) en acetonitrilo (250 ml) se enfría a -78°C. Un volumen igual de amoniaco líquido (250 ml) se condensa en el recipiente de reacción que posteriormente se sella y se permite calentar a temperatura ambiente mientras se agita. Después de 20 horas la reacción se vuelve a enfriar a -78°C, el recipiente de presión se abre y la reacción se permite calentar a temperatura ambiente mientras se agita. Cuando todo el amoniaco líquido se ha evaporado, el acetonitrilo se remueve in vacuo, y el residuo se seca a un peso constante para proveer el compuesto.

Paso 7: Remover la porción de Cladinose de la posición 3 para formar el compuesto (1 ) que tiene un grupo hidroxilo en la posición 3: Rg es acetilo. Rg es -CH2C=C-H. A una suspensión a 0°C del compuesto del paso 6 (21 g) en 1 :1 etanol/agua (200 ml) ' se añade ácido clorhídrico 4M (125 ml) durante 10 minutos. Después de remover el baño frío, la solución de reacción se agita a temperatura ambiente durante 26 horas. La mezcla se diluye con agua, se enfría a 0°C y se hace básica a un pH de 10 con hidróxido de sodio 2 N. Posteriormente la mezcla se extrae con acetato de etilo (400 ml), y las capas orgánicas se lavan con salmuera. Los extractos orgánicos se secan sobre sulfato de magnesio, se filtran, y se concentran in vacuo. El secado a un peso constante provee 18 g del producto crudo que se cristaliza a partir de acetato de etilo/hexanos para dar el compuesto puro.

Paso 8: Oxidación del hidroxilo de posición 3 a carbonilo del compuesto (1 ): Rg es acetilo. Rg es -CH2C=C-H A una solución a -10°C de N-clorosuccinimida (2.3 g, 0.017 moles) en diclorometano (100 ml) se añade sulfuro de metilo (1.47 ml, 0.021 moles) durante 5 minutos. La reacción se agita a -10°C durante 10 minutos. Una solución del compuesto del paso 7 (8.3 g, 0.012 ml) en diclorometano (100 ml) se añade entonces durante 30 minutos, y la mezcla se agita durante 25 minutos a -10°C. Trietilamina (1.6 ml, 0.021 moles) se añade durante 5 minutos, y la reacción se agita a -10°C durante 50 minutos. La reacción entonces se extingue con 5% de bicarbonato de sodio acuoso (50 ml), y se extrae con diclorometano (300 ml). Las capas orgánicas se lavan con 5% de bicarbonato de sodio acuoso seguido por salmuera, se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y concentra in vacuo. El producto crudo se purifica en gel de sílice con cromatografía de columna eluyendo secuencialmente con 30% de acetona/hexanos seguido por 50% de acetona/hexanos para proveer el compuesto.

Paso 9: Desprotección para formar el compuesto de fórmula (1 ): L es CQ. T es NH. Rg es -CH2C=C-H. Rg es H Una muestra (72 mg) del compuesto del paso 8 se disuelve en metanol (8 ml) y se agita a temperatura ambiente durante 18 horas. Después de concentrar al vacío y secar a un peso constante bajo vacío elevado se obtienen 65 mg el compuesto del título puro.

Paso opcional: conversión de Rg de -CH2C=C-(6-metoxi-2-naftilo bromonaftaleno) a -CH2C=C-Br para formar el compuesto (1): FL es -CH2C=C-Br. Rg es cetilo A una solución bajo nitrógeno del compuesto del ejemplo 25, paso 8 (100 mg) en acetona (ml) se añade ácido acético (8.4 µL) a temperatura ambiente. Una segunda solución que contiene N-bromosuccinimida (39 mg) y nitrato de plata (2.5 ml) en 1 ml de acetona se prepara y después se agita a temperatura ambiente bajo nitrógeno durante 10 minutos y se enfría a 0°C. La primera solución entonces se añade a la segunda solución en una porción, el baño frío se remueve, y la mezcla de reacción resultante se agita a temperatura ambiente bajo nitrógeno durante 2 horas. La reacción entonces se diluye con acetato de etilo, se añade bicarbonato de sodio acuso saturado, y la mezcla se agita a temperatura ambiente durante la noche. La fase orgánica se separa, se lava con salmuera y se seca (MgS?4). El solvente se remueve, y el residuo se purifica mediante cromatografía en gel de sílice, eluyendo con 40% de acetona/hexanos para dar el compuesto. El grupo Rc puede desprotegerse con metanol.

EJEMPLO 26 Preparación del compuesto de fórmula (I): L es CO. T es NH. Rg es como se especifica a continuación. Rg es H. Rb. es H. R¿ es propilo I. Material de partida: Preparación del compuesto de fórmula (I): RE=H: Rg es -O-proparailo.

Paso 1 : Una solución de 9-[0-(1-isopropoxiciclohexil)] oxima de 2', 4"-bis-O-trimetilsilil-15-metileritromicina A (100 mg) en 0.1 ml de tetrahidrofurano, 0.1 ml de éter, y 0.1 ml de DMSO se enfrió a 10°C y se trató con 0.028 ml de 3-bromo-1-(trimetilsil¡l)-1 -propino bajo atmósfera inerte. Una mezcla de metilsulfóxido (0.19 ml) y 1.0 M de ferf-butóxido de potasio en tetraidrofurano (0.38 ml) se añade a una velocidad de 2.0 equivalentes molares de base por hora. Equivalentes adicionales (0.014 ml) del bromuro TMS-propargilo se añadió después de 0.5 y 1 hora. La reacción se monitoreó mediante una cromatografía de capa delgada (gel de sílice, 10:1 tolueno/acetona), y se juzgó completa después de la adición de 2.3 equivalentes molares de base. La reacción se diluyó con 100 ml de acetato de etilo y 30 ml de NaHC03 saturado, y se lavó consecuencialmente con NaHCOs saturado, agua y salmuera. La fase orgánica se secó con MgS?4, se filtró, y se evaporó. El producto crudo se cromatografió en gel de sílice (40:1 hexanos/acetona+1% de EtsN) para producir 9-[0-1-(1-isopropoxiciclohexil)]oxima de 6-0-(3-trimetilsili)propargil-2', 4"-bis-0-trimetilsilil-15-metileritromiclna A.

Paso 2: Una solución de 9-[0-(1-isopropoxiciclohexil)]oxima de 6-0-(3-trimetilsili)propargil-2', 4"-bis-0-trimetilsilil-15-met¡leritromicina A impura de la anterior (0.88 g) en 4.4 ml de acetonitrilo se trató con 2.2 ml de agua y 2.5 ml de ácido acético, y se agitó durante 24 horas a temperatura ambiente. La mezcla se concentró después de la adición de 2-propanol, posteriormente en repetidas veces después de la adición de tolueno. Este material se agitó con carbonato de potasio y metanol (6 ml) durante 2.5 horas. La mezcla se diluyó con acetato de etilo (200 ml), y se lavó secuencialmente con NaHC03 saturado, agua, y salmuera. La fase orgánica se secó con MgS04, se filtró, y se evaporó para producir el producto.

Paso 3: Una solución del producto de (iii) e hidrosulfito de sodio (0.59 g) en 7 ml de 1.1 etanol/agua se colocaron bajo atmósfera inerte. El ácido fórmico (0.096 ml) se añadió gota a gota, y la mezcla se agitó a 80°C durante 5 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la reacción se ajustó a un pH de 10 con NaOH 6N y se extrajo 3 veces con 150 ml de porciones de acetato de etilo. Los extractos orgánicos se combinaron y lavaron secuencialmente con NaHC03 saturado, agua y salmuera. La fase orgánica se secó con MgS0 se filtró y se evaporó para producir 6-0-propargil-15-metileritromicina A adecuada para una conversión adicional. El material puro puede prepararse mediante cromatografía en gel de sílice.

Paso 4: Una mezcla de 6-0-proparg¡l-15-metileritromlcina A (0.40 g) y 6 ml de HCl 0.6 N se agitó a temperatura ambiente durante 17 horas. El pH se ajustó a 9 mediante la adición de NaOH 6N y se añadieron 150 ml de acetato de etilo. Los extractos orgánicos se lavan secuencialmente con NaHC03 saturado, agua, y salmuera, posteriormente se secan sobre MgS04, se filtran y se evaporan para proveer un producto adicional. El producto crudo se cromatografía en gel de sílice para dar 6-0-propargil-3-descladinosil-15-metileritromícína A pura.

Paso 5: Una solución de 6-0-propargil-3-descladinosil-15-metileritromicina A (0.16 g) y anhídrido benzoico (0.12 g) en 1.3 ml de acetato de etilo se agitó durante 17 horas, después se lavó secuencialmente con NaHCOs saturado, agua, y salmuera. La solución se secó sobre MgS?4, se filtró y se evaporó. El producto crudo se cromatografió sobre gel de sílice para producir 2'-0-benzoil-6-0-propargil-3-descladinos¡l-15-metileritromicina A.

Paso 6: N-Clorosuccinimida (0.510 g, 3.82 mmoles, 1.50 equivalentes) se disolvió en 13 ml de CH2CI2 anhidro y se enfrió a -10°C bajo N2. Sulfuro de metilo (0.328 ml, 4.46 mmoles, 1.75 equivalentes) se añadieron, y la reacción se agitó durante 15 minutos. Una solución de 2'-0-benzoil-6-0-propargil-3-descladinosil-15-metileritromicina A (1.87 g, 2.55 mmoles, 1.0 equivalentes) en 13 ml de CH2CI2 anhidro se agregó gota a gota. Después de 30 minutos, EÍ3N recientemente destilado (0.355 ml, 2.55 mmoles, 1.0 equivalente) se añadió, y la reacción se llevó a 0°C durante 30 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con 400 ml de EtOAc y se lavó sucesivamente con 100 ml cada uno de NaHCOs acuoso saturado, agua y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgS?4, se filtró, se concentró y se purificó por cromatografía.

Paso 7: 2'-0-benzo¡l-6-0-propargil-3-desclad¡nosil-3-oxo-15-metileritromicina A (904 mg) se disolvió en piridina recientemente destilada (4 ml) y se enfrió a 0°C. Se añadió cloruro de metansulfonilo (0.478 ml, 6.17 mmoles, 5.00 equivalente) gota a gota. Se permitió que la reacción se encontrara a temperatura ambiente y se agitara durante la noche. La mezcla se diluyó con 350 ml de EtOAc y se extinguió con 100 mL de NaHC03 acuoso saturado. Las capas se separaron, y la fase orgánica se lavó sucesivamente con 100 ml cada una de agua y salmuera. La fase orgánica se secó sobre MgS?4, se filtró y se concentró. La cromatografía instantánea sobre gel de sílice produjo el producto.

Paso 8: 2,-0-Benzoil-6-0-propargil-3-descladinosil-3-oxo-11-metansulfonilo-15-metil-eritromicina A (705 mg) se disuelve en acetona (3 ml), y 1 ,8-diazabiciclo[5.4.0]-undec-7-eno (0.651 ml, 4.35 mmoles, 5.00 equivalentes) se añade gota a gota. La reacción se agita a temperatura ambiente durante 6 horas y posteriormente se concentra. La cromatografía instantánea sobre gel de sílice produce el producto.

Paso 9: 2,-O-Benzo¡l-6-O-propargil-10,11-anhidro-3-descladinosil-3-oxo-15-metileritromicina A (227 mg) se disuelve en 1.3 ml de THF recientemente destilado y se enfría -15°C bajo N2. Hidruro de sodio (25 mg de una dispersión al 60% en aceite mineral, 0.634 mmoles, 2.00 equivalentes) se añade, y la reacción se agita durante 15 minutos. Una solución de 1 ,1 -carbonildiimidazol (140 mg) en 1.3 ml de THF recientemente destilado se añade gota. Después de agitar durante 30 minutos, se permite que la reacción se caliente a temperatura ambiente durante 1.5 horas. La mezcla se diluye con 100 ml de EtOAc y se lava sucesivamente con 30 ml de NaHC03 acuoso saturado, agua, y salmuera. La fase orgánica se seca sobre MgS04, se filtra, y se concentra, posteriormente el residuo se disuelve en 2 ml de ACN y 0.2 ml de THF anhidro. El hidróxido de amonio acuoso saturado (2 ml) se añade. La reacción se sella y se agita durante dos días. Los productos volátiles se remueven bajo presión reducida, y el residuo se vuelve a disolver en 100 ml de EtOAc. La solución se lava sucesivamente con 30 ml cada uno de NaHCOs acuoso saturado, agua y salmuera. La fase orgánica se seca sobre MgS04, se filtra, y concentra. La cromatografía instantánea produce el producto de carbamato cíclico.

II. Preparación de compuestos utilizando compuestos de I Paso 1 : Carbamato 11 , 12 cíclico de 2'-0-Benzoil-6-0-propargil-11-amino-3-descladinos¡l-11-desoxi-3-oxo-15-metileritromicina A (40 mg), aducto de tris(dibenzilideneacetona)d¡paladio(0)-cloroformo (14 mg), tri-o-tolilfosfina (17 mg), yoduro de cobre, y 3-bromoquinolina (72 µl, 0.53 mmoles, 10 equivalente) se colocaron en un matraz de fondo redondo que se inundó con N2. El acetonitrilo desgasificado (1 ml) y Et3N recientemente destilado (0.015 ml, 011 mmoles, 2.0. equivalentes) se agregan. La reacción se puso bajo reflujo durante 63 horas. La mezcla se regresó a temperatura ambiente y se diluyó con 40 ml de EtOAc. La solución se lava sucesivamente con 10 ml cada una de NaHCOs acuoso saturado, agua y salmuera. La fase orgánica se seca sobre MgS04, se filtra y concentra. La cromatografía instantánea produce el producto deseado.

Paso 2: El producto anterior se disuelve en 1 ml de metanol, se sella, y somete a reflujo a 80°C durante 16 horas. Los productos volátiles se remueven bajo presión reducida. La cromatografía instantánea produce el producto deseado.

Preparación B: Fórmula (1 ): R^= H. Rg es -CH2-CC-(3-(6-fluoroquinolilo) Se prepara de acuerdo con el método de preparación A, utilizando 3-bromo-6-fluoroquinolina en lugar de 3-bromoquinolina.

Preparación C: Fórmula (1 ): R _= H. Rg es -CH -CC-(3-(6-cloroquinolilo) Se prepara de acuerdo con el método de preparación A, utilizando 3-bromo-6-cloroquinolina en lugar de 3-bromoquinolina.

Preparación D: Fórmula (1 ): R^= H. Rg es -CH2-CC-(4-isoquinolilo) Se prepara de acuerdo con el método de preparación A, utilizando 4-bromoisoquinolina en lugar de 3-bromoquinolina.

Preparación E: Fórmula (1 ): R^ H. Rg es -CH2-CC-(3-piridilo) Se prepara de acuerdo con el método de preparación A, utilizando 3-piridina en lugar de 3-bromoquinolina.

Preparación F: Fórmula (1 ): R^= H. Rg es -CH2-CC-(3-(6-metilquinolilo) Se prepara de acuerdo con el método de preparación A, utilizando 3-bromo-6-metilquinolina en lugar de 3-bromoquinolina. Preparación G: Fórmula (1 ): iy= H. Rg es -CH?-CC-(3-(6-aminoquinolilo) Se prepara de acuerdo con el método de preparación A, utilizando 3-bromo-6-aminoquinolina en lugar de 3-bromoquinolina.

Preparación H: Fórmula (1 ): R^= H. Rg es -CH2-CC-(3-(5-isoxazol-3-il)tienilo) Se prepara de acuerdo con el método de preparación A, utilizando 5-(isoxazol-3-il)-2-bromotlofeno en lugar de 3-bromoquinolina.

Preparación I: Fórmula (1): Rh = H. Rg es -CH2-CC-(6-quinolilo) Se prepara de acuerdo con el método de preparación A, utilizando 6-bromoquinolina en lugar de 3-bromoquinolina.

Preparación J: Fórmula (1 ): R^= H. Rg es -CH2-CC-(3-quinoxal-6- ÜO) Se prepara de acuerdo con el método de preparación A, utilizando 6-bromoquinoxalina en lugar de 3-bromoquinolina.

Preparación K: Fórmula (1 ): R^= H. Rg es -CH2-CC-(5-(N-(2-pirid¡l)-2-furamidilo Se prepara de acuerdo con el método de preparación A, utilizando N-(2-piridil)5-bromo-2-furamida en lugar de 3-bromoquinolina.

Preparación AA: Fórmula (1 ): Rfr=F. Rg es -CH2-CC-(3-auinolilo) Se preparara de acuerdo con el método de preparación A utilizando carbamato 11 ,12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-1 1-amino-3-descladinosil-11-desoxi-3-oxo-2-fluoro-15-metileritromicina A en de lugar de carbamato 11,12 cíclico de 2,-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-desoxi-3-oxo-15-metileritromicina A.

Preparación BB: Fórmula (1 ): Rí _= F. Rg es CH2-CC-(3-(6-fluoroquinolilo) Se preparara de acuerdo con el método de preparación B utilizando carbamato 11 ,12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinos¡l-11-desox¡-3-oxo-2-fluoro-15-metileritromicina A en lugar de carbamato 11 ,12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-1 1-desoxi-3-oxo-15-metileritromicina A.

Preparación CC: Fórmula (1 ): Rh_= F. Ra es CH2-CC-(3-(6-cloroquinolilo) Se preparara de acuerdo con el método de preparación C utilizando carbamato 11 ,12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-desoxi-3-oxo-2-fluoro-15-metileritromicina A de en lugar de carbamato 1 1 ,12-cíclico de 2,-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-desoxi-3-oxo-15-metileritromicina A.

Preparación DD: Fórmula (1 ): Rb=F. Rg es -CH -CC-(4-isoquinolilo) Se prepara de acuerdo con el método de preparación D utilizando carbamato de 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-desoxy-3-oxo-2-fluoro-15-metileritromicina A en lugar de carbamato 1 1 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-desoxi-3-oxo-15-metileritromicina A.

Preparación EE: Fórmula (1 ): Rb=F. Rg es -CH2-CC-(3-piridilo) Se prepara de acuerdo con el método de preparación E utilizando carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-1 1-amino-3-descladinosil-11-desoxy-3-oxo-2-fluoro-15-metileritromicina A en lugar de carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-desoxi-3-oxo-15-metileritromicina A.

Preparación FF: Fórmula (1 ): R =F. Rg es -CH -CC-(3-(6-metilauinolilo) Se prepara de acuerdo con el método de preparación F utilizando carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-1 1-amino-3-descladinosil-1 1-desoxy-3-oxo-2-fluoro-15-met¡leritrom¡c¡na A en lugar de carbamato 11 , 12-cícllco de 2'-0-benzoíl-6-0-alil-1 1-am¡no-3-descladinosil-11-desoxi-3-oxo-15-metileritromicina A.

Preparación GG: Fórmula (1 ): R =F. Rg es -CH?-CC-(3-(6-aminoquinolilo) Se prepara de acuerdo con el método de preparación G utilizando carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinos¡l-11-desoxy-3-oxo-2-fluoro-15-metileritromicina A en lugar de carbamato 1 1 , 12-cíclíco de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-deoxi-3 — oxo-15-metileritromicin A.

Preparación HH: Fórmula (1 ): Rh=F. g es -CH?-CC-(3-(5-iSQxazol-3-iOtienilo) Se prepara de acuerdo con el método de preparación H utilizando carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3- descladinos¡l-11-desoxy-3-oxo-2-fluoro-15-metileritromicina A en lugar de carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-desoxi-3-oxo-15-metileritromicin A.

Preparación II: Fórmula (1 ): Rh=F. Rg es -CH?-CC-(6-auinolilo) Se prepara de acuerdo con el método de preparación I utilizando carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-desoxy-3-oxo-2-fluoro-15-met¡leritrom¡c¡na A en lugar de carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11 -amino-3-descladinosil-11 -desoxi-3-oxo-15-metileritromicina A.

Preparación JJ: Fórmula (1 ): Rfr=F, Rg es -CH2-CC-(3-quinoxal-6-m Se prepara de acuerdo con el método de preparación J utilizando carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-desoxy-3-oxo-2-fluoro-15-metileritromicina A en lugar de carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-desoxi-3-oxo-15-metileritromicina A.

Preparación KK: Fórmula (1 ): Rb=F. Rg es -CH2-CC-(5-(N-(2-p¡ridil)-2-furam¡d¡lo) Se prepara de acuerdo con el método de preparación K utilizando carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3- descladinosil-11-desoxy-3-oxo-2-fluoro-15-metileritromicina A en lugar de carbamato 11 , 12-cíclico de 2'-0-benzoil-6-0-alil-11-amino-3-descladinosil-11-desoxi-3-oxo-15-metileritromicina A.

EJEMPLO 27 Compuesto de fórmula (1): L es CO. T es NH. R,. es -CH -(2.2-dimetil-1.3- dioxolan-4-ilo). RE es H Paso 1 : Conversión de la forma 3-OH del compuesto (1 ) de Rg es -CH2CH=CH2 a R^es -CH CH(OH)CH2OH. Rn es acetilo A una muestra del compuesto del ejemplo 20, paso 4 (5.0 g, 7.32 mmoles, forma 3-OH del compuesto (1 ), Ra es CH2CH=CH2, Rc es acetilo) y N-óxido de N-metilmorfolina N (1.7 g, 14.5 mmoles) en THF (25 ml) a temperatura ambiente se añade Os0 (4% en H20, 0.090 ml, 0.0147 mmoles), y la mezcla se agita durante 24 horas. La reacción se extingue con bisulfito de sodio (1.5 g) y agua (10 ml), y los solventes se remueven al vacío. El residuo se disuelve en acetato de etilo, que se lava con salmuera, bicarbonato de sodio acuoso, agua y salmuera, y se secó (Na2S0 ). El solvente se elimina para dar el compuesto.

Paso 2: Conversión de la forma 3-OH del compuesto (1) de Rg es -CH CH(OH)CHoOH a Rg es CH2-(2.2-dimetil-1.3-dioxolan-4-il). R. es acetil A una muestra del compuesto del paso 1 (500 mg, 0.70 mmoles) y 2,2-dimetoxipropano (0.26 mL, 2.1 mmoles) en tolueno (7 mL) se añade ácido p-toluensulfónico (160 mg, 0.84 mmoles), y la mezcla se agita a 55°C durante 3 días. La mezcla de diluye con acetato de etilo, y esta solución se lava con una solución de carbonato de sodio al 10%, agua y salmuera. La fase orgánica se seca (Na2S?4), y el solvente se remueve para dar el producto crudo, el cual se purifica mediante cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con 2:97:1 metanol/cloroformo/hidróxido de amonio para dar el compuesto.

Paso 3: Oxidación de 3-OH a carbonilo para formar el compuesto (1): Rg es -CH?-(2,2-dimetil-1.3-dioxolan-4-¡n. Rg es acetilo Una muestra del compuesto del paso 2 (356 mg, 0.47 mmoles) se oxida con N-clorosuccinimida y sulfuro de dimetilo de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 16, paso 2, para proporcionar el compuesto.

Paso 4: Desprotección para formar el compuesto de fórmula (1): L es CO. T es NH. Rg es -CH (2.2-dimetil-1.3-dioxolan-4-¡p. R.. es H Una muestra del compuesto del paso 3 (100 mg, 0.13 mmoles) se agita en metanol (4 mL) durante la noche a temperatura ambiente. El solvente se remueve, y el residuo se purifica mediante cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con 0.9:98.1 metanol/cloroformo/hidróxido de sodio para dar el compuesto.

Paso opcional: conversión de Ra es -CH2-(2.2-dimetil-1.3-dioxolan-4-il) en el compuesto (1 ) a -CH2CH(OH)CH2OH Una muestra del compuesto del paso 4 (100 mg, 0.13 mmoles) se agita a reflujo con ácido p-toluensulfónico (35 mg, 0.18 mmoles) en 4:1 THF/agua (2.5 mL) durante 3 horas. La mezcla se diluye con acetato de etilo, y esta solución se lava con solución de carbonato de sodio al 10%, agua y salmuera. La fase orgánica se seca (Na2S?4), y el solvente se remueve para dar el producto crudo, el cual se purifica mediante cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con 2:97:1 metanol/cloroformo/hidróxido de amonio para dar el compuesto.

EJEMPLO 28 Fluorinación de la posición C2 antes del anillo cíclico 11.12 formado Síntesis d 2'-O-benzoil-6-O-proparqil-3-descladinosil-3-oxo-10.11- anhidro-2-fluoro-15-metileritromicina A Una solución de 2'-0-benzo¡l-6-0-propargil-3-desclad¡nosil-3-oxo-10,11-anhidro-15-met¡leritromicina A en tetrahidrofurano bajo atmósfera inerte se enfría a -78°C y se trata con 1.0M tert-butóxido de potasio en tetrahidrofurano. La mezcla se agita durante 5 minutos, y una solución de N-fluorobenzensulfonimida en tetrahidrofurano se añade en 3 porciones durante 2 horas. Después de la adición, la reacción se deja calentar a temperatura ambiente y se mantiene durante 5 horas adicionales. Se añade K2C03 acuoso, y la mezcla se extrae con CH2CI2. Los extractos orgánicos se combinan, se secan sobre MgS?4, se filtran y se evaporan. La cromatografía sobre gel de sílice da el producto.

EJEMPLO 29 Fluorinación de la posición C2 después del carbamato cíclico formado Síntesis de carbamato de 2'-O-alil-3-desclad¡nosH-3-oxo-11-deoxi-11- amino-2-fluoro-15-metiler¡tromicina A 11.12 cíclico A una solución de THF (0.5 ml) de carbamato de 2'-0-bencilo-6-0-alil-3-descladinosil-3-oxo-11 -deoxi-11 -amino-15-metileritromicina A 11 ,12-cílico (100 mg, 0.132 mmoles, 1.0 eq) se añade una solución THF de tert-butóxido de potasio (0.3 ml, 1 M, 2.3 eq.) a -78°C. La mezcla de reacción se mantiene entonces a -60°C a -40°C durante 20 minutos, seguido por la introducción de N-fluorobenzensulfonimida (46 mg, 0.146 mmoles, 1.1 eq.) en THF (0.2 ml) a -78°C. La mezcla de reacción se mantiene a -70°C a -40°C durante 1 hora antes de que se deje calentar a 0°C desde -70°C en 1.5 horas. Se diluye entonces con EtOAc, se lava con NaHC03 acuoso saturado, agua y salmuera. La fase orgánica se seca sobre MgS?4, se filtra, y se concentra. La cromatografía instantánea del producto crudo (4:1 hexanos:acetona + 1% Et3N) produjo 76 mg (74%) del producto deseado. 13C-RMN (100.6 MHz, CDCI3) d 217.5, 203 (d, J = 27.6 Hz), 165.5 (d, J = 23.8 Hz), 165.2; 157.5. 135.4, 132.9, 130.4, 129.8, 128.3, 118.0, 101.7, 98 (d, J = 207 Hz), 83.5, 79.1 , 78.6, 72.1 , 69.4, 64.6, 63.5, 57.5, 44.2, 40.7, 40.4, 38.5, 37.3, 31.4, 31.3, 24.9 (d, J = 24.3 Hz), 21.0, 20.7, 19.4, 17.7, 15.0, 13.9, 13.7, 13.3.

EJEMPLO 30 Derivatización de la posición C-13 Material de partida: sal de diacetato de 15-ami?noeritromicina A Una solución de 15-azidoeritromicina A (7.75 g, 10 mmoles) en 50 mL de metanol se trata con ácido acético (2.0 mL) y paladio sobre carbono al 10% (0.1 g) y se agita bajo una atmósfera de gas de hidrógeno hasta que el análisis de cromatografía de capa delgada revela la completa reducción del material de partida. La suspensión se filtra a través de Celite™ para remover el catalizador, entonces se evapora a sequedad para rendir el producto, el cual se utiliza como un material de partida para las siguientes derivatizaciones.

A. Síntesis de 15-(qu¡nol-4-ilacetamido)eritromicina A Una solución de sal de diacetato de 15-arninoeritromicina A (1.0 g) en 10 mL en diclorometano se trata de manera secuencial con cloruro de quinol-4-ilacetil (350 mg) y trietilamina (0.5 mL) a 0°C. Después de 3 horas, la reacción se diluye con diclorometano y se lava 3 veces con NaHCOß acuso saturado. La fase orgánica se seca sobre MgS04, se filtra, y se evapora para producir el producto crudo. La purificación mediante cromatografía de gel de sílice rinde el producto puro.

B. Síntesis de 15-(3(quinol-4-¡l)propinamido)eritromicina A Una solución de sal de diacetato de 15-aminoeritromicin A (1.0 g) en 10 mL de diclorometano se trata de manera secuencial con cloruro de 3-(quinol-4-il)propionilo (400 mg) y trietilamina (0.5 mL) a 0°C. Después de 3 horas, la reacción se diluye con diclorometano y se lava 3 veces con NaHC?3 acuso saturado. La fase orgánica se seca sobre MgS04, se filtra, y se evapora para producir el producto crudo. La purificación mediante cromatografía de gel de sílice rinde el producto puro.

C. Síntesis de 15(isoqu¡nol-4-¡lacetam¡do)eritromicina A Una solución de sal de diacetato de 15-aminoeritromicina A (1.0 g) en 10 mL de diclorometano se trata secuencialmente con cloruro de isoquinol-4-ilacetilo (350 mg) y trietilamina (0.5 mL) a 0°C. Después de 3 horas, la reacción se diluye con diclorometano y se lava 3 veces con NaHC03 acuso saturado. La fase orgánica se seca sobre MgS04, se filtra, y se evapora para producir el producto crudo. La purificación mediante cromatografía de gel de sílice rinde el producto puro.

D. Síntesis de 15-(3-(isoquinol-4-il)propionamido)er¡tromicina A Una solución de sal de diacetato de 15-aminoeritromicin A (1.0 g) en 10 mL de diclorometano se trata de manera secuencial con cloruro de 3-(isoquinol-4-il)propionilo (400 mg) y trietilamlna (0.5 mL) a 0°C. Después de 3 horas, la reacción se diluye con diclorometano y se lava 3 veces con NaHC03 acuso saturado. La fase orgánica se seca sobre MgS04, se filtra, y se evapora para producir el producto crudo. La purificación mediante cromatografía de gel de sílice rinde el producto puro.

E. Síntesis de 15 ((qu¡nol-5-¡lamino)acetamido)eritromicina A Una solución de sal de diacetato de 15 aminoeritromicina A (10 g) en mL de diclorometano se trata de manea secuencial con ácido (quínol-5-ilamino)acético (0.30 g), diciclohexilacarbodiimida (0.4 g), 1-hidroxibenzotriazol (0.25 g), y trietilamina (0.5 mL) a 0°C. Después de 3 horas, la reacción se diluye con diclorometano y se lava 3 veces con NaHCOs acuso saturado. La fase orgánica se seca sobre MgS04, se filtra, y se evapora para producir el producto crudo. La purificación mediante cromatografía de gel de sílice rinde el producto puro.

F- Síntesis de 15-((quino-6-ilamino)acetamido)eritromicina A Una solución de sal de diacetato de 15-aminoeritromicina A (1.0 g) en 10 mL de diclorometano se trata de manera secuencial con ácido (quinol-6-ilamino)acético (0.30 g), diciclohexilcarbodiimido (0.4 g), 1-hidroxibenzotriazol (0.25 g), y trietilamina (0.5 mL) a 0°C. Después de 3 horas, la reacción se diluye con diclorometano y se lava 3 veces con NaHCOs acuso saturado. La fase orgánica se seca sobre MgS04, se filtra, y se evapora para producir el producto crudo. La purificación mediante cromatografía de gel de sílice rinde el producto puro.

G. Síntesis de 15-((quinol-4-ilmetil)carbamo¡lamino)eritromicina A Una solución de sal de diacetato de 15-aminoeritromicina A (1.0 g) en 10 mL de diclorometano se trata de manera secuencial con cloruro de quinolina-4-metoxicarbonilo (400 mg) y trietilamina (0.5 mL) a 0°C. Después de 3 horas, la reacción se diluye con diclorometano y se lava 3 veces con NaHCOs acuso saturado. La fase orgánica se seca sobre MgS04, se filtra, y se evapora para producir el producto crudo. La purificación mediante cromatografía de gel de sílice rinde el producto puro.

EJEMPLO 31 Carbamato de 6-O-Metil-3-descladinosil-3-oxo-11-deoxi-11-amino-15-(3- (quinol-4-il)propionamido)eritromicina A 11. 12-ciclico Este se prepara de acuerdo con los procedimientos descritos en l ejemplo 30, empezando con 15-(3-(quinol-4-il)propionamido)eritromicina A.

EJEMPLO 32 Carbamato de 6-O-metil-3-descladinosil-3-oxo-11-deoxi-11-amino- 2-fluoro-15-(3-(quinol-4-il)propionamido)er¡tromicina A 11,12- ciclico Paso 1 : A una solución de carbamato de 2'-0-benzoil-6-0-metil-3-descladinosil-3-oxo-11-deoxi-11-amino-15-(3-(quinol-4-il)propionamido)eritromicina A 11 ,12 cíclico en THF se añade una solución de THF de íe/ -butoxido de potasio (2.3 eq.) a-78°C. La mezcla de reacción se mantiene entonces a -60°C a 40°C durante 20 minutos, seguido por introducción de N-fluorobencensulfonimida (1.1 eq) en THF (0.2 ml) a-78°C. La mezcla de reacción se mantiene a -70°C a -40°C durante una hora antes de que se deje calentar a 0°C de -70°C en 1.5 h. Se diluye entonces con EtOAc, se lava con NaHC?3, agua, y salmuera. La fase orgánica se seca sobre MgSO, se filtra y se concentra. La cromatografía instantánea produce el producto deseado como el 2'-0-benzoato. Paso 2: el producto del paso 1 se disuelve en 1 mL de metanol, se sella, y se somete a reflujo a 80°C durante 16 horas. Los volátiles se remueven bajo presión reducida. La cromatografía instantánea rinde el producto deseado.

EJEMPLO 33 Carbamato de 2'-O-benzoil-6-O-met¡l-3-descladinosil-3-oxo-11-deoxi-11- amino-15-etenileritromicina A 11. 12-ciclico Esta se prepara de acuerdo con los procedimientos descritos anteriormente, partiendo con 15-etenileritromicina A.

EJEMPLO 34 Carbamato de 6-O-metil-3-descladinosil-3-oxo-11-deoxi-11-amino- 15-etenileritromicina A 11.12-ciclico Carbamato de 2'-0-Benzoil-6-0-metil-3-descladinosil-3-oxo-11-deoxi-11-am¡no-15-eteniler¡tromicina A 11 ,12-ciclico del ejemplo 33 se disuelve en 1 mL de metanol, se sella, y se somete a reflujo a 80°C durante 16 horas. Los volátiles se remueven bajo presión reducida. La cromatografía instantánea rinde el producto deseado.

EJEMPLO 35 Carbamato de 6-O-meti¡-3-descladinosil-3-oxo-11-deoxi-11-amino- 2-fluoro- 5-etenileritromicina A 11.12-ciclico Paso 1 : A una solución de carbamato de 2'-0-benzoil-6-0-metil-3-descladinosil-3-oxo-11 -deoxi-11 -amino-15-etenileritromicina A 11 ,12-ciclico en THF se añade una solución de THF de ferf-butóxido de potasio (2.3 eq.) a -78°C. La mezcla de reacción se mantiene entonces a -60°C a -40°C durante 20 minutos, seguido por la introducción de N-fluorobencensulfonimida (1.1 eq.) en THF (0.2 ml) a -78°C. La mezcla de reacción se mantiene a -70°C a -40°C durante 1 hora antes de que se deje entibiar a 0°C de -70°C en 1.5 h. Se diluye entonces con EtOAc, se lava con NaHCOs acuoso saturado, agua, y salmuera. La fase orgánica se seca sobre MgS?4, se filtra, y se concentra. La cromatografía instantánea rinde el producto deseado como el 2'-0-benzoato. Paso 2: El producto del paso 1 se disuelve en 1 mL de metanol, se sella y se somete a reflujo a 80°C durante 16 horas. Los volátiles se remueven bajo presión reducida. La cromatografía instantánea rinde el producto deseado.

EJEMPLO 36 Carbamato de 6-O-Metil-3-descladinosil-3-oxo-11-deoxi-11-amino-15-(2- (3-quinolil)etenil)eritromicina A 11.12-cíclico Paso 1 : Carbamato de 2'-0-Benzoil-6-0-metil-11-amino-3-descladinosil-11-deoxi-3-oxo-15-etenileriltromicina A 11 ,12 cíclico (40 mg), aducto de tris(dibenzilideneacetona)dipalad¡o(0)-cloroformo (14 mg), tri-o-tolifosfina (17 mg), y 3-bromoquinolina (72 µl) se colocan en un matraz de fondo redondo que se enjuaga con N2. Se añaden acetonitrilo desgasificado (1 ml) y Et3N recién destilado. La reacción se somete a reflujo durante 63 horas. La mezcla se regresa a temperatura ambiente y se diluye con 40 ml de EtOAc. La solución se lava sucesivamente con 10 ml cada uno de NaHC03 acuoso saturado, agua y salmuera. La fase orgánica se seca sobre MgS0 , se filtra, y concentra. La cromatografía instantánea del producto crudo rinde el producto deseado. Paso 2: El producto del paso 1 se disuelve en 1 ml de metanol, se sella, y se somete a reflujo a 80°C durante 16 horas. Los volátiles se remueven bajo presión reducida. La cromatografía instantánea rinde el producto deseado.

EJEMPLO 37 Carbamato de 6-O-Metil-3-descladinosil-3-oxo-11-deoxi-11-amino-2- fluoro-15-(2-(3-quinolil)etenil)eritromicina A 11.12-cíclico Paso 1 : Carbamato de 2'-0-Benzoil-6-0-metil-11-amino-3-descladinosil-11-deoxi-3-oxo-2-fluoro-15-etenileritromicina A 11 ,12-ciclico (40 mg), aducto de tris(dibenzilideneacetona) dipaladio(0)-cloroformo (14 mg), tri-o-tolifosfina (17 mg), y 3-bromoquinolina (72 µl) se colocan en un matraz de fondo redondo el cual se enjuaga con N2. Se añaden acetonitrilo desgasificado (1 ml) y Et3N (0.015 ml) recién destilado. La reacción se somete a reflujo durante 63 horas. La mezcla se regresa a temperatura ambiente y se diluye con 40 ml de EtOAc. La solución se lava sucesivamente con 10 ml cada uno de NaHC03 acuoso saturado, agua y salmuera. La fase orgánica se seca sobre MgS?4, se filtra, y se concentra. La cromatografía instantánea del producto crudo rinde el producto deseado. Paso 2: El producto del paso 1 se disuelve en 1 ml de metanol, se sella, y se somete a reflujo durante 16 horas a 80°C. Los volátiles se remueven bajo presión reducida. La cromatografía instantánea rinde el producto deseado.

EJEMPLO 38 Carbamato de 6-O-Met?l-3-descladinosil-3-oxo-11-deoxi-11-amino-2- fluoro-15-(2-(3-quinolilmetil)etenil)eritromicina A 11.12-cíclico Paso 1 : Una mezcla de carbamato de 2'-0-benzoil-6-0-metil-11-amino-3-descladinosil-11-deoxi-3-oxo-2-fluoro-15-etenileriltrom¡cina A 11 ,12-ciclico, 3-alilquinolina, y cloruro de bis(trifenilfosfina)benzilidenerhodio se calienta en benceno a reflujo durante 8 horas. La mezcla se regresa a temperatura ambiente y se diluye con 40 ml de EtOAc. La solución se lava sucesivamente con 10 ml cada uno de NaHC03 acuoso saturado, agua y salmuera. La fase orgánica se seca sobre MgS?4, se filtra, y se concentra. La cromatografía instantánea del producto crudo rinde el producto deseado. Paso 2: El producto del paso 1 se disuelve en 1 ml de metanol, se sella, y somete a reflujo durante 16 horas a 80°C. Los volátiles se remueven bajo presión reducida. La cromatografía instantánea rinde el producto deseado.

Claims (33)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un compuesto de la fórmula: en la cual Ra es H; alquilo de (C1-10) sustituido o no sustituido; alquenilo de (C2-10) sustituido o no sustituido; alquinilo de (C2-10) sustituido o no sustituido; arilo de (C4-14) sustituido o no sustituido; arilalquilo de (C5-20) sustituido o no sustituido; o OFla está reemplazado por H; Rb es H o halógeno; Rc es H o un grupo protector; Rd es metilo, alquilo de (C3-10) no sustituido; alquilo de (C1-10) sustituido; alquenilo de (C2-10) sustituido o no sustituido; arilo de (C4-14) sustituido o no sustituido; arilalquilo de (C5-20) sustituido o no sustituido; arilalquenilo de (C5-20) sustituido o no sustituido; arilalquinilo de (C5-20) sustituido o no sustituido; amidoarilalquilo de (C5-20) sustituido o no sustituido; amidoarilalquenilo de (C5-20) sustituido o no sustituido; o amidoarilalquinilo de (C5-20) sustituido o no sustituido; Rc es H o un grupo protector; L es metileno o carbonilo; T es -O-, -N(OR)-, -N(NHCOR)-, -N(N=CHR)-, o -N(NHR)- en las cuales R es H o Ra como se define anteriormente, con la condición de que cuando L es metileno, T es -O-; uno de Z e Y es H y el otro es OH, OH protegido, o amino, mono o dialquilamino, amino protegido, o un amino heterociclo o Z e Y juntos son =0, =NOH o una oxima derivada; incluyendo cualesquier sales aceptables farmacéuticamente de los mismos y cualesquier formas estereoisoméricas y mezclas de formas estereoisoméricas de los mismos.

2.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque Rd es metilo, propilo o vinilo.

3.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque Ra es arilalquenilo o arilalquinilo.

4.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado además porque Ra es 3-arilprop-2-enil ó 3-arilprop-2-inil.

5.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado además porque dicho arilo es 3-quinolil, 4-quinolil ó 5-quinolil, fenilo, 4-fluorofenilo, 4-clorofenilo, 4-metoxifenilo, 6-quinolil, 6-quinoxalil, 6-amino-3-quinolil, ó 4-isoquinolil.

6.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque Rg es H o alquilo de CrC3.

7.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado además porque Ra es metilo.

8.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque Rb es flúor.

9.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R^ es un sustituyente disponible para derivatización.

10.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado además porque F d es alquenllo, alquinilo o sustituyente que contiene azido.

11.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque Rd es vinilo, butenilo, propargilo o azidoalquilo.

12.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque F*d es un sustituyente derivatizado.

13.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado además porque Ra es un derivado de un alquenilo, un alquinilo o sustituyente que contiene azido.

14.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado además porque R es un derivado de vinilo, butenilo, propargilo o azidolaquilo.

15.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado además porque Fld es amidoarilalquilo, amidoarilalquenilo, amidoarilaquinilo o arilalquilo sustituido o no sustituido.

16.- Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de conformidad con la reivindicación 12, en mezcla con un excipiente aceptable farmacéuticamente.

17.- El uso del compuesto de conformidad con la reivindicación 1, ó una composición farmacéutica del mismo, para preparar un medicamento para controlar infección en un sujeto.

18.- Un método para conservar material de descomposición microbiana cuyo método comprende proveer dicho material con una cantidad efectiva del compuesto de conformidad con la reivindicación 1.

19.- Un compuesto de la fórmula (I) en donde Ra es H; alquilo de (C1-10) sustituido o no sustituido; alquenilo de (C2-10) sustituido o no sustituido; alquinilo de (C2-10) sustituido o no sustituido; arilo de (C4-14) sustituido o no sustituido; arilalquilo de (C5-20) sustituido o no sustituido; o ORa está reemplazado por H; Rb es hidrógeno o flúor; Rc y Rß son cada uno de manera independiente hidrógeno o un grupo protector; F d es butilo, pentilo, metoxietoximetilo, isobutilo, metilciclohexilo, fenilo, bencilo, etilfenilo, 3-(3-benciloxi)propilo, 2-(pirim¡d¡n-2-¡ltio)etilo, propllo, fluoroetilo, cloroetilo, vinilo, 3-butenilo, o azidoetilo; y Rf es hidrógeno,

20.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 19, en donde F g es alilo; Rb y Rf son cada uno hidrógeno; Rc y Re son cada uno de manera independiente hidrógeno o un grupo protector; y Rd es propilo.

21.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 19, en donde I g es alilo; Rb y Rf son cada uno hidrógeno; Rc y Re son cada uno de manera independiente hidrógeno o un grupo protector; Rd es fluoroetilo.

22.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 19, en donde es alilo; Rb es flúor; Rc y Re son cada uno de manera independiente hidrógeno o un grupo protector; Rd es propilo; y Rf es hidrógeno.

23.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 19, en donde F*a es alilo; Rb es flúor; ^ y Re son cada uno de manera independiente hidrógeno o un grupo protector; y7 Rd es fluoroetilo.

24.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 19, en donde F g es 3-aril prop-2-enil; Rb es hidrógeno o flúor; Rc y Re son cada uno de manera independiente hidrógeno o un grupo protector; R es propilo o fluoroetilo; y Rfßs hidrógeno.

25.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado además porque el arilo es 3-quinolilo, 4-quinolilo, 5-quinolilo, fenilo, 4-fluorofenilo, 4-clorofenilo, 4-metoxifenilo, 6-quinolilo, 6-quinoxalilo, 6-amino-3-quinolilo, o 4-isoquinolilo.

26.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 19, en donde Ra es quinolilo; Rb, Rc, Re y Rf son cada uno hidrógeno; y Rd es propilo.

27.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 19, en donde Ra es 6-quinoxalilo; Rb, Rc, Re y Rf son cada uno hidrógeno; y Rd es fluoroetilo.

28.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 19, en donde Ra es 3-quinolilo; Rb, Rc, e y Rf son cada uno hidrógeno; y Rd es fluoroetilo.

29.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 19, en donde Ra es 6-quinoxalilo; Rb, Rc, Re y Rf son cada uno hidrógeno; y Rd es fluoroetilo.

30.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 19, en donde Rg es 6-quinolilo; Rb es flúor, Rc, Re y Rf son cada uno hidrógeno; y Rd es propilo.

31.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 19, en donde Ra es 6-quinoxalilo; Rb es flúor; Rc, Re y Rf son cada uno hidrógeno; y Rd es fluoroetilo.

32.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 19, en donde Ra es 3 quinolilo; Rb es flúor; Rc, Rey Rf son cada uno hidrógeno; y Rd es fluoroetilo.

33.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 19, en donde Fia es 6-quinoxalilo; R es flúor; Rc, Re y Rf son cada uno hidrógeno; y Rd es fluoroetilo.