ES2316805T3 - Compuestos motilidos. - Google Patents
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Abstract
Un compuesto que tiene la fórmula (I) ** ver fórmula** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que R 1 es alquilo C 1-C 10 sustituido o insustituido, alquenilo C 2-C 10 sustituido o insustituido, alquinilo C 4-C 10 sustituido o insustituido, arilo sustituido o insustituido o heterociclo sustituido o insustituido; R 2 es H, alquilo C1-C5 sustituido o insustituido, alquenilo C2-C5 sustituido o insustituido, alquinilo C2-C5 sustituido o insustituido, arilo sustituido o insustituido o heterociclo sustituido o insustituido; R 3 es H u OH; y R 4 es H u OH, o R 3 y R 4 , tomados en juntos, forman O-(C=O)-O; con la condición de que cuando (a) R 1 es etilo y (b) R 3 es OH o R 3 y R 4 , tomados juntos, forman -C(=O)-O, entonces R 2 no es H o metilo.
Description
Compuestos motílidos.
La presente invención proporciona agentes
procinéticos con propiedades farmacológicas y farmacocinéticas
superiores para el tratamiento de trastornos de motilidad
gastrointestinal. La invención se refiere a los campos de química,
química médica, medicina, biología molecular y farmacología.
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La motilidad gastrointestinal ("GI") regula
el movimiento ordenado del material ingerido a través del intestino
para asegurar la adecuada absorción de nutrientes, electrolitos y
fluidos. El tránsito adecuado a través del esófago, estómago,
intestino delgado y colon depende del control regional de la presión
intraluminal y de varios esfínteres que regulan el movimiento hacia
delante e impiden el flujo retrógrado del contenido GI. El patrón
normal de la motilidad GI puede alterarse por diversas
circunstancias, incluida la enfermedad y la cirugía.
Entre los trastornos de la motilidad
gastrointestinal se incluyen, por ejemplo, la gastroparesia y la
enfermedad por reflujo gastroesofágico ("ERGE"). La
gastroparesia es el retraso del vaciado del contenido del estómago.
Los síntomas de gastroparesia incluyen molestias estomacales, ardor
de estómago, náuseas y vómitos. La gastroparesia aguda puede estar
causada por, por ejemplo, fármacos (p. ej., opiáceos), enteritis
viral e hiperglucemia, y normalmente se trata tratando la
enfermedad subyacente en lugar del trastorno de motilidad. Las
causas más frecuentes de gastroparesia crónica están asociadas con
la diabetes de larga duración o la seudoobstrucción idiopática, a
menudo con la denominada dispepsia "no ulcerosa" o
"funcional".
La ERGE se refiere a las variadas
manifestaciones clínicas del reflujo al esófago de los contenidos
del estómago y del duodeno. Los síntomas más frecuentes son ardor
de estómago y disfasia; también se puede producir pérdida de sangre
por la erosión esofágica. La ERGE puede estar asociada con el tono
bajo y la inadecuada relajación del esfínter esofágico inferior y
se produce con gastroparesia en aproximadamente el 40% de los casos.
En la mayoría de los casos, la ERGE parece ser tratable con agentes
que reducen la liberación del irritante ácido en el estómago (p.
ej., Prilosec) o agentes que incrementan el tono del esfínter
esofágico inferior (p. ej., cisaprida). Otros ejemplos de
trastornos cuyos síntomas incluyen alteración de la motilidad
gastrointestinal son anorexia, estasis de la vesícula biliar, íleo
paralítico posquirúrgico, esclerodermia, seudoobstrucción
intestinal, gastritis, émesis y estreñimiento crónico
(inercia
colónica).
colónica).
Generalmente, estos trastornos GI se tratan con
agentes procinéticos que potencian la motilidad propulsora. Los
motílidos son compuestos macrólidos, tales como eritromicina y sus
derivados, que son agonistas del receptor de la motilina. Entre las
pruebas de la potencial utilidad clínica de los motílidos se incluye
su capacidad para inducir la fase III de los complejos motores
migratorios ("CMM"). CMM se refiere a las cuatro fases
(I-IV) de la actividad eléctrica mostrada por el
estómago y el intestino delgado en estado de ayunas. La contracción
muscular se produce en las fases III y IV, coincidiendo con una onda
peristáltica que propulsiona los contenidos entéricos distalmente
durante el ayuno. Entre otros efectos clínicamente relevantes se
incluyen: Incremento del peristaltismo esofágico y la presión LES
en voluntarios sanos y pacientes con ERGE; aceleración del vaciado
gástrico en pacientes con paresia gástrica; y estimulación de las
contracciones de la vesícula biliar en voluntarios normales,
pacientes después de la eliminación de cálculos biliares y
diabéticos con neuropatía autonómica.
Las eritromicinas son una familia de
antibióticos macrólidos producidos mediante fermentación del
actinomiceto Saccharopolyspora erythraea (antes
Streptomyces erythreus). La eritromicina A, un antibiótico de
uso habitual, es el miembro más abundante e importante de la
familia.
- Eritromicina A R^{a} = OH
- R^{b}= Me
- Eritromicina B R^{a} = H
- R^{b}= Me
- Eritromicina C R^{a} = OH
- R^{b}= H
- Eritromicina D R^{a} = H
- R^{b}= H
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Desde la década de 1950 se sabe que la
eritromicina A (1) es la causa de los efectos secundarios GI, tales
como náuseas, vómitos y molestias abdominales. La eritromicina A
sufre degradación catalizada por ácido en el estómago, formando,
inicialmente,
8,9-anhidro-6,9-hemiacetal
2 (también conocido como eritromicina A enol éter) y, después,
espirocetal 3, como se muestra en el Esquema A. Los efectos
secundarios GI se explican en gran parte mediante la actividad de
agonista de la motilina en la propia eritromicina A y hemiacetal 2.
(El espirocetal 3 es inactivo).
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Esquema
A
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Omura y col., "Gastrointestinal
motor-stimulating activity of macrolide antibiotics
and the structure activity relationship", J. Antibiotics (1985)
38: 1631-2, describen la capacidad relativa de la
eritromicina A, 9-dihidroeritromicina A, y otros
macrólidos para estimular la contracción intestinal en perros
conscientes. En este ensayo, se comunicó que la
9-dihidroeritromicina A era un 65% tan activa como
la eritromicina, a una dosis de 1 mg/kg. Dado que la
9-dihidroeritromicina no puede formar un enol éter,
está claro que la formación del enol éter no es esencial para la
actividad del motílido. Actualmente, la eritromicina se usa para
tratar los trastornos de la motilidad, aunque su actividad
antibacteriana plantea problemas sobre la generación de
microorganismos resistentes. Dado que la
9-dihidroeritromicina también muestra actividad
antibacteriana, existen problemas similares con su uso como
motílido.
motílido.
\newpage
Se ha preparado como motílidos un número de
análogos de la eritromicina enol éter, incluidos
EM-523 (4); EM-574 (5); LY267,108
(6); GM-611 (7); y ABT-229 (8),
cuyas estructuras se muestran a continuación. Véanse las patentes
de EE.UU. números 5.578.579; 5.658.888; 5.922.849; 6.077.943; y
6.084.079.
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Otros motílidos de interés incluyen enol éteres
de lactama y derivados epóxido de lactama. Véanse las patentes de
EE.UU. números 5.712.253; 5.523.401; 5.523.418; 5.538.961; y
5.554.605.
El documento
WO-A-00/63225 describe macrólidos
representados por una fórmula de Markush que parcialmente se
superpone con la presente fórmula (I) y su uso como agentes
antimicrobianos.
El documento
US-B2-6 437 151 describe
eritromicinas con sustituyentes concretos en C-13 y
su uso para, entre otras cosas, la reducción de la motilidad
gástrica.
A pesar de la elevada potencia de los enol
éteres de eritromicina como motílidos, su inestabilidad metabólica
ha dificultado su desarrollo en la clínica. Otros compuestos, tales
como el 7 y el 8, muestran la desensibilización del receptor de la
motilina en ensayos de contractilidad con tiras de músculo y con
base de células. Esta desensibilización puede anunciar una
disminución de la eficacia tras administración de múltiples dosis
del motílido.
Por tanto, existe una necesidad de nuevos
compuestos motílidos con menor actividad antibacteriana, mayor
estabilidad metabólica y menor desensibilización del receptor. La
presente invención proporciona análisis de
9-dihidroeritromicina que cumple esta
necesidad.
\newpage
Un aspecto de la presente invención proporciona
compuestos que tienen la fórmula (I);
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o una sal farmacéuticamente
aceptable de los mismos, en la que R^{1} es alquilo
C_{1}-C_{10} sustituido o insustituido,
alquenilo C_{2}-C_{10} sustituido o
insustituido, alquinilo C_{2}-C_{10} sustituido
o insustituido, arilo sustituido o insustituido, heterociclo
sustituido o insustituido; R^{2} es H, alquilo
C_{1}-C_{5} sustituido o insustituido, alquenilo
C_{2}-C_{5} sustituido o insustituido, alquinilo
C_{2}-C_{5} sustituido o insustituido, arilo
sustituido o insustituido, heterociclo sustituido o insustituido;
R^{3} es H u OH; y R^{4} es H u OH, o R^{3} y R^{4}, tomados
en juntos, forman O-C(=O)-O, con la
condición de que cuando (a) R1 es etilo y (b) R^{3} es OH o
R^{3} y R^{4}, tomados juntos, forman -C(=O)-O,
R^{2} no es H o
metilo.
En un segundo aspecto, se proporciona un
compuesto de esta invención para tratar un trastorno de la motilidad
gástrica en un paciente que lo sufre.
En un tercer aspecto, se proporciona una
composición farmacéutica que comprende un compuesto de esta
invención y un portador farmacéuticamente aceptable.
En un cuarto aspecto, se usan compuestos (I) de
esta invención para la preparación de un medicamento para tratar un
trastorno de la motilidad gástrica en un sujeto.
También se describe una célula huésped
recombinante que produce 11-desoxieritromicinas
(particularmente 11-desoxieritromicina B), junto
con los genes de la policétido sintasa modificados que expresan y
los vectores que se usan para su ingeniería. Las
11-desoxieritromicinas son útiles como productos
intermedios para la síntesis de compuestos de esta invención. La
célula huésped recombinante tiene un gen eryAI sometido a
ingeniería mediante sustitución del dominio de cetoreductasa en el
módulo 2 del mismo con un casete que contiene un dominio de
deshidratasa, un dominio de enoilreductasa y un dominio de
cetoreductasa. También se describe un procedimiento de producir
11-desoxieritromicinas, que comprende cultivar tal
célula huésped recombinante.
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Las definiciones de los términos que se dan más
adelante se aplican a los términos tal como se usan a lo largo de
esta especificación y las reivindicaciones adjuntas, a menos que el
contexto indique claramente otra cosa.
"Alquilo" significa una fracción de
hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que tiene el número
especificado de átomos de carbono en la cadena o, cuando el número
de átomos de carbono no se especifique, hasta 5 átomos de carbono
en la cadena.
"Alquenilo" significa una fracción de
hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que tiene al menos un
doble enlace carbono-carbono y el número
especificado de átomos de carbono en la cadena o, cuando el número
de átomos de carbono no se especifique, hasta 5 átomos de carbono
en la cadena.
"Alquinilo" significa una fracción de
hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que tiene al menos un
triple enlace carbono-carbono y el número
especificado de átomos de carbono en la cadena o, cuando el número
de átomos de carbono no se especifique, hasta 5 átomos de carbono
en la cadena.
\newpage
"Alquilarilo", "arilalquilo",
"heterocicloalquilo", "alquilheteroarilo",
"alquilheterociclo" significan un grupo arilo, heterocíclico o
heteroarilo, según el caso, unido directamente a una fracción de
alquilo, como en bencilo, feneti-
lo.
lo.
"Arilo" significa un sistema de anillos de
hidrocarburo aromático monocíclico o bicíclico que tiene de 6 a 12
átomos de carbono en la porción de anillo, tal como fenilo, naftilo,
y fracciones de bifenilo, cada uno de los cuales está opcionalmente
sustituido en una o más posiciones.
"Cicloalquilo" significa un sistema de
anillos de hidrocarburo cíclico saturado opcionalmente sustituido,
que, preferentemente, contiene de 1 a 3 anillos y de 3 a 7 carbonos
por anillo, que además pueden estar condensados con un anillo
carbocíclico insaturado de C_{3}-C_{7}. Entre
los ejemplos de sistemas de anillo de cicloalquilo se incluyen
ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo,
ciclooctilo, ciclodecilo, ciclododecilo y adamantilo.
"Halógeno" o "halo" significa flúor,
cloro, bromo y yodo.
"Heterociclo", "heterocíclico" o
"heterociclo" significa un sistema de anillos aromáticos o no
aromáticos, completamente saturados o insaturados, por ejemplo, que
es un sistema de anillos monocíclico de 4 a 7 miembros, bicíclico
de 7 a 11 miembros o tricíclico de 10 a 15 miembros, que tiene, al
menos, un heteroátomo en al menos un anillo que contiene un átomo
de carbono. "Heteroarilo" significa un heterociclo en el que el
sistema de anillo es arilo. Cada anillo del grupo heterocíclico que
contiene un heteroátomo puede tener 1, 2 ó 3 heteroátomos
seleccionados de N, O y S, en los que N y S pueden estar
opcionalmente oxidados y el N puede estar opcionalmente
cuaternizado.
Ejemplos de sistemas de anillo heterocíclicos
monocíclicos incluyen pirrolidinilo, pirrolilo, indolilo,
pirazolilo, oxetanilo, pirazolinilo, imidazolilo, imidazolinilo,
imidazolidinilo, oxazolilo, oxazolidinilo, isoxazolinilo,
isoxazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, tiazolidinilo, isotiazolilo,
isotiazolidinilo, furilo, tetrahidrofurilo, tienilo, oxadiazolilo,
piperidinilo, piperazinilo, 2-oxopiperazinilo,
2-oxopiperidinilo,
2-oxopirrolidinilo, 2-oxazepinilo,
azepinilo, 4 piperidonilo, piridinilo,
N-oxo-piridilo, pirazinilo,
pirimidinilo, piridazinilo, tetrahidropiranilo,
tetrahidrotiopiranilo, tetrahidrotiopiranilo sulfona, morfolinilo,
tiomorfolinilo, tiomorfolinilo sulfóxido, tiomorfolinilo sulfona,
1,3-dioxolano y
tetrahidro-1,1-dioxotienilo,
dioxanilo, isotiazolidinilo, tietanilo, tiiranilo, triazinilo y
triazolilo. Entre los grupos heterociclo preferidos se incluyen
piridinilo, pirazinilo, pirimidinilo, pirrolilo, pirazolilo,
imidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiadiazolilo,
oxadiazolilo, tienilo, furanilo, quinolinilo, isoquinolinilo.
"Sal farmacéuticamente aceptable" significa
una sal de un compuesto adecuada para la formulación farmacéutica.
Entre las sales farmacéuticamente aceptables se incluyen las sales
de adición de ácido que pueden formarse mediante, por ejemplo,
mezcla de una solución de un compuesto con una solución de un ácido
farmacéuticamente aceptable, tal como ácido clorhídrico, ácido
bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido
succínico, ácido benzoico, ácido acético, ácido cítrico, ácido
tartárico, ácido fosfórico, ácido carbónico. Cuando un compuesto
lleva una o más fracciones ácidas, se pueden formar sales
farmacéuticamente aceptables mediante el tratamiento de una
solución del compuesto con una solución de una base
farmacéuticamente aceptable, tal como hidróxido de litio, hidróxido
sódico, hidróxido potásico, hidróxido de tetraalquilamonio,
carbonato de litio, carbonato sódico, carbonato potásico, amoniaco,
alquilaminas.
Cuando un grupo se caracteriza por estar
sustituidos (como en "alquilo sustituido", "alquenilo
sustituido", etc.,), tal grupo puede tener uno o más
sustituyentes seleccionados de forma independiente, preferentemente
en un número de uno a cinco, más preferentemente en un número de uno
o dos. Se entiende que un experto en la técnica puede seleccionar
los sustituyentes y los patrones de sustitución para proporcionar
compuestos que sean químicamente estables y que se pueden
sintetizar mediante técnicas conocidas en la técnica, así como los
procedimientos expuestos en la presente memoria descriptiva.
Ejemplos de sustituyentes adecuados incluyen alquilo, alquenilo,
alquinilo, arilo, halo, trifluorometoxi, trifluorometilo, hidroxi,
alcoxi, cicloalquil-oxi, heterociclooxi, alcanoílo,
alcanoiloxi, amino, alquilamino de amonio cuaternario,
aralquilamino, cicloalquilamino, heterocicloamino, dialquilamino,
alcanoilamino, tio, alquiltio, cicloalquiltio, heterociclotio,
ureido, nitro, ciano, carboxi, carboxilalquilo, carbamilo,
alcoxicarbonilo, alquiltiono, ariltiono, alquilsulfonilo,
sulfonamindo, ariloxi, además de los especificados en la presente
memoria descriptiva. El sustituyente puede sustituirse además con,
por ejemplo, halo, hidroxi, alquilo, alcoxi; arilo, arilo
sustituido, alquilo sustituido, aralquilo sustituido.
A menos que se indiquen específicamente
estereoisómeros concretos (p. ej., mediante un enlace en negrita o
en línea discontinua en un estereocentro relevante en una fórmula
estructural), todos los estereoisómeros están incluidos dentro del
alcance de la invención, en forma de compuestos puros así como de
mezclas de los mismos. A menos que se indique otra cosa,
enantiómeros individuales, diastereómeros, isómeros geométricos y
combinaciones y mezclas de los mismos están todos abarcados dentro
de la presente invención. También quedan abarcadas dentro del
alcance de esta invención formas cristalinas polimórficas y
solvatos.
Es posible fabricar profármacos de los
compuestos de esta invención. Tales profármacos son, en general,
derivados funcionales de los compuestos que se pueden convertir
fácilmente in vivo en el compuesto requerido. Procedimientos
convencionales para la selección y preparación de derivados
adecuados del profármaco se describen en, por ejemplo, Design of
Prodrugs, Bundgaard, ed., Elsevier, 1985.
En una forma de realización se proporcionan
compuestos que tienen la fórmula (I), en la que R^{1} es alquilo
C_{1}-C_{10} sustituido o insustituido,
alquenilo C_{2}-C_{10} sustituido o
insustituido, alquinilo C_{2}-C_{10} sustituido
o insustituido, arilo sustituido o insustituido o heterociclo
sustituido o insustituido; R^{2} es H, etilo, propilo, isopropilo
o 2-butilo; R^{3} es H u OH; y R^{4} es H u OH,
o R^{3} y R^{4}, tomados juntos, forman
O-C(=O)-O, con la condición de que
cuando R^{1} es etilo y R^{3} es OH o R^{3} y R^{4},
tomados juntos, forman -C(=O)-O, R^{2} no es H o
metilo
En otra forma de realización de la invención se
proporcionan compuestos que tienen la fórmula (I), en la que
R^{1} es alquilo C_{1}-C5 sustituido o
insustituido; R^{2} es H, alquilo C_{1}-C_{5}
sustituido o insustituido, alquenilo
C_{2}-C_{5} sustituido o insustituido o
alquinilo C_{2}-C_{5} sustituido o
insustituido; R^{3} es H u OH; y R^{4} es H u OH, o R^{3} y
R^{4}, tomados juntos, forman
O-C(=O)-O, con la condición de que
cuando (a) R^{1} es etilo y (b) R^{3} es OH o R^{3} y R^{4},
tomados juntos, forman -C(=O)-O, R^{2} no es H o
metilo.
En otra forma de realización de la invención se
proporcionan compuestos que tienen la fórmula (I), en la que
R^{1} es etilo; R^{2} es alquilo C_{2}-C_{5}
sustituido o insustituido, alquenilo C_{2}-C_{5}
sustituido o insustituido o alquinilo
C_{2}-C_{5} sustituido o insustituido; R^{3}
es H u OH; y R^{4} es H u OH, o R^{3} y R^{4}, tomados
juntos, forman O-C(=O)-O.
En otra forma de realización de la invención se
proporcionan compuestos que tienen la fórmula (I), en la que
R^{1} es etilo; R^{2} es etilo, propilo, isopropilo o
2-butilo; R^{3} es H u OH; y R^{4} es H u OH, o
R^{3} y R^{4}, tomados juntos, forman
O-C(=O)-O.
En otra forma de realización de la invención se
proporcionan compuestos que tienen la fórmula (I), en la que
R^{1} es etilo sustituido; R^{2} es H, alquilo
C_{1}-C_{5} sustituido o insustituido, alquenilo
C_{2}-C_{5} sustituido o insustituido o
alquinilo C_{2}-C_{5} sustituido o insustituido;
R^{3} es H u OH; y R^{4} es H u OH, o R^{3} y R^{4},
tomados juntos, forman
O-C(=O)-O.
En otra forma de realización de la invención se
proporcionan compuestos que tienen la fórmula (I), en la que
R^{1} es fluoroetilo o azidoetilo; R^{2} es H, alquilo
C_{1}-C_{5} sustituido o insustituido, alquenilo
C2-C_{5} sustituido o insustituido o alquinilo
C_{2}-C_{5} sustituido o insustituido; R^{3}
es H u OH; y R^{4} es H u OH, o R^{3} y R^{4}, tomados
juntos, forman O-C(=O)-O.
En otra forma de realización de la invención se
proporcionan compuestos que tienen la fórmula (I), en la que
R^{1} es etilo sustituido; R^{2} es H, etilo, propilo,
isopropilo o 2-butilo; R^{3} es H u OH; y R^{4}
es H u OH, o R^{3} y R^{4}, tomados juntos, forman
O-C(=O)-O.
En otra forma de realización de la invención se
proporcionan compuestos que tienen la fórmula (I), en la que
R^{1} es fluoroetilo o azidoetilo; R^{2} es H, etilo, propilo,
isopropilo o 2-butilo; R^{3} es H u OH; y R^{4}
es H u OH, o R^{3} y R^{4}, tomados juntos, forman
O-C(=O)-O.
En otra forma de realización de la invención se
proporcionan compuestos que tienen la fórmula (I), en la que
R^{1} es propilo; R^{2} es H, alquilo
C_{1}-C_{5} sustituido o insustituido, alquenilo
C_{2}-C_{5} sustituido o insustituido o
alquinilo C_{2}-C_{5} sustituido o insustituido;
R^{3} es H u OH; y R^{4} es H u OH, o R^{3} y R^{4},
tomados juntos, forman
O-C(=O)-O.
En otra forma de realización de la invención se
proporcionan compuestos que tienen la fórmula (I), en la que
R^{1} es propilo; R^{2} es H, etilo, propilo, isopropilo o
2-butilo; R^{3} es H u OH; y R^{4} es H u OH, o
R^{3} y R^{4}, tomados juntos, forman
O-C(=O)-O.
En otra forma de realización de la invención se
proporcionan compuestos que tienen la fórmula (I), en la que
R^{1} es vinilo, butilo, bencilo,
but-3-en-1-ilo,
fenilo o 4-hidroxifenilo; R^{2} es H, alquilo
C_{1}-C_{5} sustituido o insustituido,
alquenilo C_{2}-C_{5} sustituido o insustituido
o alquinilo C_{2}-C_{5} sustituido o
insustituido; R^{3} es H u OH; y R^{4} es H u OH, o R^{3} y
R^{4}, tomados juntos, forman
O-C(=O)-O.
En otra forma de realización de la invención se
proporcionan compuestos que tienen la fórmula (I), en la que
R^{1} es vinilo, butilo, bencilo,
but-3-en-1-ilo,
fenilo o 4-hidroxifenilo; R^{2} es H, etilo,
propilo, isopropilo o 2-butilo; R^{3} es H u OH;
y R^{4} es H u OH, o R^{3} y R^{4}, tomados juntos, forman
O-C(=O)-O.
En otra forma de realización de la invención, se
proporcionan compuestos que tienen la fórmula (I), en la que
R^{3} y R^{4} son, de forma independiente, H u OH; R^{1} se
selecciona del grupo compuesto por etilo,
2-fluoroetilo y 1-propilo; y R^{2}
se selecciona del grupo compuesto por metilo, etilo, isopropilo y
2-butilo; con la condición de que R^{1} es etilo
y R^{3} es OH; en consecuencia R_{2} no es metilo.
En otra forma de realización, R^{1} es alquilo
C_{1}-C_{5} sustituido o insustituido
(preferentemente etilo); R^{2} es H, metilo, etilo, propilo,
isopropilo o 2-butilo; R^{3} es H; y R^{4} es H
u OH.
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En otra forma de realización de la invención se
proporcionan compuestos que tienen las estructuras:
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También se describen procedimientos para la
preparación de los compuestos de fórmula (I). En una forma de
realización, los compuestos de fórmula (I) se preparan a partir de
las correspondientes eritromicinas (II) como se ilustra en el
Esquema 1.
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Esquema
1
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En esta forma de realización, la eritromicina
(II) se trata con borohidruro sódico en metanol para proporcionar
la
(9S)-9-dihidroeritromicina,
(III). El compuesto (III) se desmetila usando, por ejemplo, yodo y
luz en metanol tamponado o usando N-yodosuccinimida
en acetonitrilo, para proporcionar el compuesto (IV). La alquilación
del compuesto (IV) usando R^{2}X, en el que R^{2} es como se ha
definido antes y X es un haluro, preferentemente bromo o yodo,, o
sulfonato, preferentemente triflato o tosilato, en presencia de una
base tal como N,N-diisopropiletilamina proporciona
los compuestos de fórmula (I).
Como alternativa, la secuencia de las etapas de
desmetilación/y la etapa de reducción con borohidruro se puede
invertir, como se muestra en el Esquema 1A:
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Esquema
1A
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En otra forma de realización de la invención,
las eritromicinas (II) en las que R^{3} y R^{4} tomados juntos
forman O-C (=O)-O se preparan tal
como se ilustra en el Esquema 2.
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Esquema
2
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La reacción de la eritromicina (II), en la que
R^{3} y R^{4} son ambos OH, con un reactivo carbonilante, por
ejemplo carbonato de etileno o
1,1-carbonildiimidazol, en presencia de una base,
por ejemplo carbonato potásico o 4-(dimetilamino)piridina,
proporciona el 11,12-carbonato cíclico. A
continuación, los carbonatos cíclicos se convierten en los
productos finales de acuerdo con el procedimiento ilustrado en el
Esquema 1.
Las eritromicinas de fórmula (II) se preparan
como se ilustra en el Esquema 3 y se describen en las patentes de
EE.UU. 6.066.721; 6.261.816; y 6.395.710.
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Esquema
3
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En resumen, a una policétido sintasa se
suministra un dicétido tioéster de fórmula (V) para producir un
policétido de estructura (VI). La preparación de dicétido
tioésteres se describe en el documento WO 00/44717. En la presente
invención, la policétido sintasa es una
6-desoxieritronolida B sintasa o una
8,8a-desoxioleandolida sintasa. Ejemplos adecuados
de 6-desoxieritronolida B sintasas se encuentran en,
por ejemplo, Saccharopolyspora erythraea, como se describe
en la patente de EE.UU. 5.824.513, y en Micromonospora
megalomicea, como se describe en el documento WO 01/27284. Un
ejemplo de una 8,8a-desoxioleandolida sintasa se
encuentra en Streptomyces antibioticus, como se describe en
la patente de EE.UU. 6.251.636. Estas policétido sintasas se
modifican de modo que se impida la incorporación de sus unidades
iniciadoras nativas. Procedimientos para mutar las policétido
sintasas de modo que se impida la incorporación de unidades
iniciadoras nativas mediante, por ejemplo, inactivación de la
cetosintasa del módulo 1, se describen en la patente de EE.UU.
6.066.721.
Aunque el dicétido tioéster (V) se puede
suministrar a una forma sin células de la policétido sintasa, como
se describe en la patente de EE.UU. 6.080.555, es más cómodo
introducirlo (V) en un cultivo de un organismo que exprese la
policétido sintasa mutada. El organismo puede ser un actinomiceto,
tal como Streptomyces o Saccharopolyspora,
preferentemente Streptomyces coelicolor, como se
describe en la patente de EE.UU. 6.066.721 Y en la publicación DE
PCT WO 01/83803, o un organismo que no sea un actinomiceto, tal como
Escherichia coli o Saccharomyces cerevesiae como se
describe en el documento WO 01/31035. El policétido resultante (VI)
se aísla opcionalmente del medio de cultivo. En el Ejemplo 1 que se
expone más adelante se detalla un procedimiento para este proceso.
Usando las policétido sintasas nativas se producen policétidos con
R^{3}= OH.
En un procedimiento, la policétido sintasa
nativa ha mutado de modo que produzca un policétido que tenga
R^{3}= H. Procedimientos para producir policétido sintasas
mutadas en, por ejemplo, las patentes de EE.UU. 6.391.594 y
6.403.775.
El policétido (VI) se convierte en una
eritromicina (II) a través de una serie de etapas de ajuste que
incluyen hidroxilación en C-6, adición de
desoxamina al 5-OH, hidroxilación en
C-12 y mutilación en
micarosa-3''-OH. Otras formas de la
eritromicina se pueden preparar usando la subpoblación adecuada de
enzimas de ajuste. Por ejemplo, la eritromicina B (R^{4}= H) se
prepara omitiendo la hidroxilación en C-12.
Este ajuste se realiza de un modo más
conveniente suministrando policétido (VI) a un cultivo de un
organismo que exprese todas las enzimas necesarias para las
transformaciones, por ejemplo un mutante de Saccharopolyspora
erythraea que comprende una policétido sintasa inactiva tal y
como se describe en la patente de EE.UU. 6.395.710. Un
procedimiento para este proceso se detalla en el Ejemplo 2 que
figura más adelante.
\newpage
Los compuestos de fórmula (I) son agonistas del
receptor de la motilina. La tabla 1 muestra los valores de
CE_{50} para la activación del receptor de la motilina, medidos
mediante un ensayo de influjo de calcio tal y como se describe en
Carreras y col., Anal. Biochem. 300,146-151
(2002).
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La actividad antibacteriana (Tabla 2) se
determinó mediante pruebas de susceptibilidad in vitro frente
a Streptococcus pneumoniae ATCC 6301, una cepa sensible a
macrólidos, usando procedimientos conocidos en la técnica de
microbiología.
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Se analizaron los compuestos para detectar
desensibilización del receptor de motilina usando el ensayo basado
en células que se describe en Carreras y col., US 2002/0192709 A1
(2002), "Methods for Evaluating Therapeutic Efficacy". Como se
muestra en la Tabla 3 a continuación, los compuestos mostraron poca
o ninguna desensibilización tras la exposición a cantidades 1 ó 10
mM del compuesto analizado.
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Otro aspecto de la presente invención
proporciona el uso de compuestos que tienen fórmula (I) para la
preparación de un medicamento para el tratamiento de la motilidad
gástrica alterada. En general, usando los compuestos de la presente
invención comprende administrar a un sujeto que lo necesite una
cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente
invención. Ejemplos ilustrativos de trastornos que se pueden tratar
con los compuestos de la invención se incluyen gastroparesia,
enfermedad de reflujo gastroesofágico, anorexia, estasis de la
vesícula biliar, íleo paralítico posquirúrgico, esclerodermia,
seudoobstrucción intestinal, gastritis, émesis y estreñimiento
crónico (inercia colónica).
La cantidad terapéuticamente eficaz se puede
expresar en forma de una dosis diaria total del compuesto o
compuestos de esta invención y se puede administrar a un sujeto en
una dosis única o dividida. La dosis diaria total puede ser en
cantidades de, por ejemplo, aproximadamente 0,01 a aproximadamente
10 mg/kg de peso corporal, o, más habitualmente, de aproximadamente
0,1 a aproximadamente 2 mg/kg de peso corporal. Las composiciones
para dosis única puede contener tales cantidades o submúltiplos de
las mismas hasta obtener la dosis diaria. En general, los regímenes
de tratamiento de acuerdo con la presente invención comprenden la
administración a un sujeto que lo necesite aproximadamente 10 mg a
aproximadamente 1000 mg del compuesto(s) de la presente
invención al día en dosis única o múltiples.
Normalmente, el compuesto de la invención será
parte de una composición o preparación farmacéutica que puede estar
en cualquier forma adecuada tal como forma sólida, semisólida o
líquida. En general, la preparación farmacéutica contendrá uno o
más de los compuestos de la invención como un ingrediente activo y
un portador farmacéuticamente aceptable. Normalmente, el
ingrediente activo está en mezcla con un portador o excipiente
orgánico o inorgánico adecuado para aplicación externa, enteral o
parenteral. El ingrediente activo puede mezclarse con, por ejemplo,
los portadores habituales farmacéuticamente no tóxicos para
comprimidos, píldoras, cápsulas, supositorios, pesarios,
soluciones, emulsiones, suspensiones y cualquier otra forma adecuada
para usar. Las formas de dosificación oral se pueden preparar
esencialmente tal y como describen Hondo y col., 1987,
Transplantation Proceedings XIX, Supp. 6: 17-22.
Los portadores que se pueden usar incluyen agua,
glucosa, lactosa, goma arábiga, gelatina, manitol, pasta de
almidón, trisilicato de magnesio, talco, almidón de maíz, queratina,
sílice coloidal, almidón de patata, urea y otros portadores
adecuados para usar en la fabricación de preparaciones en forma
sólida, semisólida o licuada. Además, se pueden usar agentes
auxiliares estabilizantes, espesantes y colorantes y perfumes. Por
ejemplo, los compuestos de la invención se pueden utilizar con
hidroxipropilmetilcelulosa esencialmente como se describe en la
patente de EE.UU. 4.916.138 o con un tensioactivo esencialmente como
se describe en la publicación de patente EPO nº
428.169.
428.169.
En resumen, la presente invención proporciona
compuestos motílidos y su uso, que además se ilustran mediante los
ejemplos siguientes.
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Ejemplo
1
Este ejemplo describe la fabricación de
15-metil-6-desoxieritronolida
B (también denominada 13
propil-6-dEB o
15-metil-6-dEB), un
producto intermedio usado en la síntesis de ciertos compuestos de
esta invención. (Otras eritronolidas se nombran de forma análoga;
por ejemplo, la eritronolida con un grupo flúor en lugar de un
grupo metilo en la posición 15 se denomina
15-flúor-6-dEB).
Un vial de 1 ml del banco de células de trabajo
CH999/pJRJ2 (Streptomyces coelicolor que contiene un PKS en
el que el dominio de la cetosintasa del módulo 1 se ha inactivado
mediante mutación) se descongela y el contenido del vial se añade a
50 ml de Medio 1 en un matraz con placas deflectoras de 250 ml.
El Medio 1 comprende 45 g/l de almidón de maíz;
10 g/l de licor de maíz fermentado; 10 g/l de lavadura de cerveza
inactivada seca; y 1 g/l de CaCO_{3}. Esta solución se esteriliza
en autoclave durante 90 minutos a 121ºC. Tras la esterilización,
antes de usar se añaden 1 ml/l de tioestrepton de 50 mg/ml filtrado
estéril en DMSO 100% y 1 ml/l de emulsión de silicio B antiespuma
al 100% (J.T. Baker).
El matraz que contiene las células descongeladas
y el Medio 1 se coloca en un incubador/agitador mantenido a 30
\pm 1ºC y a 175 \pm 23 RPM durante 48 \pm 1º horas A
continuación, a un matraz con placas deflectoras de 2,8 ml que
contiene 500 ml de Medio 1 se añaden los 50 ml del cultivo. Este
matraz se incuba en un incubador/agitador a 30 \pm 1ºC y a 175
\pm 25 RPM durante 40 \pm 10 horas. Después, el cultivo de 500
ml se usa para inocular un fermentador de 10 l que contiene 5 l de
Medio 1. El fermentador se controla a 30ºC, pH 6,5 mediante la
adición de H_{2}SO_{4} 2,5N y NaOH 2,5N, a una tasa de agitación
de 600 RPM y a un caudal de aire de 1-2 LPM. La
espuma se controla mediante la adición de una solución al 50% de
Antiespuma B según sea necesario. El cultivo del fermentador se
deja crecer en estas condiciones durante 24 \pm 5 horas.
Un fermentador de 150 l se prepara mediante
esterilización de 100 l de Medio 1 a 121ºC durante 45 minutos. Tras
el periodo de crecimiento, el contenido del fermentador de 10 l se
añade asépticamente a un fermentador de 150 l. El fermentador se
controla a 30ºC, pH 6,5 mediante la adición de H_{2}SO_{4} 2,5N
y NaOH 2,5N, saturación de aire \geq 80% oxígeno disuelto
mediante tasa de agitación (500-700 RPM), caudal de
aire de (10-50 LPM) y un control de presión
retrógrado (10-40 kPa). La espuma se controla
mediante la adición de una solución al 50% de Antiespuma B según
sea necesario.
A las 35\pm5 horas, una vez que el oxígeno
disuelto ha alcanzado un mínimo y el contenido de CO2 en el
fermentador de gas ha alcanzado un máximo se añade (\pm)
(6)-(2R*,3S*)-2-metil-3-hidroxihexanoil-N-propionilcisteamina
(propil dicétido) hasta una concentración final de 4 g/l. El propil
dicétido se prepara mediante la disolución en metilsulfóxido a una
proporción de 2:3 (entre el dicétido y el DMSO) y, después, se
esteriliza mediante filtración (0,2 \mul, filtro de nylon). La
producción de
15-metil-6-desoxieritronolida
B (13-propil-6-dEB)
cesa el día 8 y se procede a recoger el fermentador. El caldo de
fermentación se centrifuga a 20.500 g en una centrífuga Alpha Laval
AS-26. El producto se encuentra, predominantemente,
en el sobrenadante; la masa celular centrifugada se desecha.
Tras la centrifugación, se realiza la extracción
en fase sólida usando una resina HP20 (Mitsubishi). El tamaño de la
columna se selecciona en base al volumen y el título del
sobrenadante, de modo que no se supera la capacidad de carga de 15
g de 15-metil-6-dEB
por litro de resina HP20. El caldo centrifugado se pasa a través del
lecho de la resina a un caudal lineal de 300 \pm 20 cm/h. La
presión en la columna no deberá superar los 103,42 kPa. A
continuación, la resina se lava con 2 volúmenes de columna (VC) de
agua y después con 2 VC de metanol al 30%, cada uno a una velocidad
de 300 \pm 20 cm/h. se eluye
13-propil-6-dEB
usando 7-10 VC de metanol al 100% a una velocidad
de 300 \pm 20 cm/h. Durante la elución se recogen fracciones de 1
VC. Después se analizan las fracciones y las que contengan el
producto se combinan para dar un producto acumulado que contiene
> 95% de la
15-metil-6-dEB
original en el caldo centrifugado. El producto acumulado se reduce a
sólidos usando evaporación rotatoria. La pureza del producto en
esta etapa es de 5-35%. El material insoluble en
metanol se elimina del producto acumulado mediante suspensión de
los sólidos en 3 l de metanol al 100% por 100 l del volumen de
caldo original, mezclado durante 20 minutos y filtración.
La etapa de purificación final es la
cromatografía usando resina HP20SS (Mitsubishi). El tamaño de la
columna se selecciona en base a una cantidad de producto, de modo
que no se supera la capacidad de carga de 15 g de
15-metil-6-dEB por
litro de resina HP20SS. La solución de metanol filtrada se diluye
mediante la adición de un volumen igual de agua, La solución de
metanol al 50% se pasa a través de lecho de la resina a un caudal
lineal de 300 \pm 20 cm/h. a continuación, la columna se lava con
2 VC de metanol al 50% a una velocidad de 300 \pm 20 cm/h. El
producto se eluye usando 12 VC de metanol al 70% a una velocidad de
300 \pm 20 cm/h. Durante la elución se recogen fracciones de 1
VC. Después se analizan las fracciones y las que contengan >50
mg/l de
15-metil-6-dEB y que
tengan una pureza cromatográfica > 20% se combinan. El producto
acumulado se reduce a sólidos usando evaporación rotatoria. La
pureza del producto en esta etapa es > 65% y es adecuada para la
bioconversión en la eritromicina adecuada.
Otros análogos modificados de
6-dEB se preparan de acuerdo con el mismo
procedimiento, sustituyendo el dicétido tioéster adecuado en lugar
del propil dicétido. Por tanto, el
15-flúor-6-dEB se
prepara usando (\pm)
(2R*,3S*)-5-fluoro-2-metil-3-hidroxipentanoil-N-propionilcisteamina.
Asimismo, la síntesis de
15-metil-6-dEB y
15-fluoro-6-dEB se
enseña en Ashley y col., documento WO 00/44717 A2 (2000), cuya
descripción se incorpora en la presente memoria descriptiva por
referencia.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
2
Este ejemplo describe la conversión de
15-metil-6-desoxieritronolida
B en 15-metileritromicina A (fórmula II, R^{1}=
CH_{2}CH_{2}CH_{3}; R^{3} = R^{4} = OH). Las técnicas de
conversión también se enseñan en Carreras y col., J. Biotechnology,
92, 217-228 (2002).
Un vial de 1 ml del banco de células de trabajo
K39-14V (un mutante eryA de S.
erythraea incapaz de producir 6-dEB)
se descongela y el contenido del vial se añade a 50 ml de Medio 2 en
un matraz con placas deflectoras de 250 ml.
El medio 2 comprende 16 g/l de almidón de maíz;
10 g/l de dextrina de maíz; 15 g/l de harina de soja; 4 g/l de
CaCO_{3}; 5 g/l de licor fermentado de maíz; 6 g/l de aceite de
soja; 2,5 g/l de NaCl y 1 g/l de ((NH_{4})_{2}SO_{4}.
Esta solución se esteriliza mediante autoclave durante 60 minutos a
121ºC y antes de usar se añaden 1 ml/l de emulsión de silicio B
antiespuma (J.T. Baker) al 100%.
El matraz que contiene las células descongeladas
y el Medio 2 se coloca en un incubador/agitador mantenido a 34
\pm 1ºC y a 175 \pm 25 RPM durante 48 \pm 10 horas. A
continuación, a un matraz con placas deflectoras de 2,8 ml que
contiene 500 ml de Medio 2 se añaden los 50 ml del cultivo. El
matraz se incuba en un incubador/agitador a 34 \pm 1ºC y 175
\pm 25 RPM durante 48 \pm 10 horas. Después, el cultivo de 500
ml se usa para inocular un fermentador de 10 l que contiene 5 l de
Medio 2. El fermentador se controla a 34ºC, pH 7,0 mediante la
adición de H_{2}SO_{4} 2,5N y NaOH 2,5N, a una tasa de agitación
de 600 RPM y a un caudal de aire de 1-2 LPM. La
espuma se controla mediante la adición de una solución al 50% de
Antiespuma B según sea necesario. El cultivo del fermentador se
deja crecer en estas condiciones durante 24 \pm 5 horas.
Un fermentador de 150 l se prepara mediante
esterilización de 100 l de Medio 3 a 121ºC durante 45 minutos. El
medio 3 comprende 17,5 g/l de almidón de maíz; 16 g/l de dextrina de
maíz; 16,5 g/l de harina de soja; 4 g/l de CaCO_{3}; 5 g/l de
licor fermentado de maíz; 3 g/l de aceite de soja; 3,5 g/l de NaCl y
1 g/l de ((NH_{4})_{2}SO_{4}. Tras el periodo de
crecimiento, el contenido del fermentador de 10 l se transfiere
asépticamente al fermentador de 150 l. El fermentador se controla a
34ºC, pH 7,0 mediante la adición de H_{2}SO_{4} 2,5N y NaOH
2,5N, saturación de aire \geq 80% oxígeno disuelto mediante tasa
de agitación (500-700 RPM), caudal de aire de
(15-50 LPM) y un control de presión retrógrado
(10-40 kPa). La espuma se controla mediante la
adición de una solución al 50% de Antiespuma B.
A 24 \pm 5 horas se inicia la alimentación a
58-60 ml/hora de 15% de dextrina (p/v). La solución
de dextrina se mezcla continuamente durante el periodo de
alimentación. A las 24 \pm 5 horas se añaden 25 gramos de
13-propil-6-dEB al
fermentador. La
13-propil-6-dEB se
prepara mediante solubilización de 25 gramos de
13-propil-6-dEB en
400-600 ml de etanol al 100% y filtración (0,2 mm,
filtro de nylon). La conversión de
13-propil-6-dEB en
13-propil-eritromicina A cesa tras
60 \pm 10 horas y el fermentado se recoge. El caldo de
fermentación se centrifuga a 20.500 g en una centrífuga Alpha Laval
AS-26. El producto se encuentra, predominantemente,
en el sobrenadante; la masa celular centrifugada se desecha.
Tras la centrifugación, se realiza la extracción
en fase sólida usando una resina HP20 (Mitsubishi). El tamaño de la
columna se selecciona en base al volumen y el título del
sobrenadante, de modo que no se supera la capacidad de carga de 15
g de 15-metileritromicina A por litro de resina
HP20. El caldo centrifugado se ajusta a un pH 9, después se pasa a
través del lecho de la resina a un caudal lineal de 275 \pm 25
cm/h. La presión en la columna no deberá superar los 103,42 kPa. A
continuación, la resina se lava con 1 volumen de columna (VC) de
agua a un caudal de 275 \pm 25 cm/h. Se eluye
15-metileritromicina usando 5 VC de metanol al 100%
a una velocidad de 275 \pm 25 cm/h. Durante la elución se recogen
fracciones de 1 VC. A continuación se analizan las fracciones y se
combinan las que contienen producto para dar un producto acumulado.
El producto acumulado se reduce a sólidos usando evaporación
rotatoria.
El material insoluble en metanol se elimina del
producto acumulado mediante suspensión de los sólidos en 1 l de
metanol al 100% por 100 l del volumen de caldo original, ajusta
hasta un pH de 9 y filtración. El producto acumulado (filtrado) se
reduce a sólidos usando evaporación rotatoria.
La 15-metileritromicina A se
extrae del producto acumulado (sólidos) mediante adición de 2 l de
hexano:acetona a 4:1 por 100 l de volumen del caldo original,
mezcla durante 20 minutos y filtración. Los sólidos restantes se
extraen del mismo modo dos veces más y los filtrados se combinan. El
producto acumulado se reduce a sólidos usando evaporación
rotatoria.
La etapa de purificación final es la
cromatografía usando resina HP20SS (Mitsubishi). El tamaño de la
columna se selecciona en base a una cantidad de producto, de modo
que no se supera la capacidad de carga de 15 g de
15-metileritromicina A por litro de resina HP20SS.
Los sólidos de las etapas anteriores se disuelven en 1 l de metanol
por 100 l de volumen de caldo original y se añade un volumen igual
de agua. La solución de metanol al 50% se pasa a través de lecho de
la resina a un caudal lineal de 275 \pm 25 cm/h. A continuación,
la columna se lava con 1 VC de metanol al 50%, después 3 CV de
metanol al 60%, cada uno a una velocidad de 3275 \pm 25 cm/h. El
producto se eluye usando 3 VC de metanol al 70% a una velocidad de
275 \pm 25 cm/h. Durante la elución se recogen fracciones de 1
VC. Después se analizan las fracciones y se combinan las que
contienen 15-metileritromicina A. El producto
acumulado se reduce a sólidos usando evaporación rotatoria.
Otras eritromicinas modificadas se preparan
usando el mismo procedimiento y sustituyendo el análogo de
6-dEB adecuado en lugar de
15-metil-6-dEB. Por
tanto, la 15-fluoroeritromicina A se prepara usando
15-flúor-6-dEB.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
3
Este ejemplo describe un procedimiento general
para la preparación de
(9S)-9-dihidroeritromicinas (fórmula
II), con referencia al Esquema 1.
Una solución de la eritromicina (0,36 mmol) en
etanol/éter 1:3 (20 ml) se enfría hasta -15ºC y se trata con
borohidruro sódico (0,9 mmol). La reacción se deja calentar
lentamente hasta la temperatura ambiente durante 4 horas. El exceso
de borohidruro se destruye mediante la adición de tampón fosfato, pH
6, y se añaden 10 ml de trietanolamina. Después de 1 hora, la
mezcla se extrae con acetato de etilo, se seca sobre MgSO_{4}, se
filtra y se concentra hasta sequedad a presión reducida. El
producto se purifica mediante cromatografía en gel de sílice usando
acetona:hexanos a 1:1 con 1% de trietilamina. Los compuestos
siguientes se prepararon usando este procedimiento:
(9S)-9-dihidroeritromicina
A;
(9S)-9-dihidro-15-metileritromicina
A; y
(9S)-9-dihidro-15-fluoroeritromicina
A.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
4
Este ejemplo describe un procedimiento general
para la preparación de
(N-desmetil-(9S)-9
dihidroeritromicinas (fórmula III), con referencia al Esquema
1.
A una solución de la
(9S)-9-dihidroeritromicina
(150 mg) en 10 ml de metanol/agua a 8:2 se añade secuencialmente
trihidrato acetato sódico (139 mg) y yodo (62 mg). Una solución 0,2M
de LiOH (1 ml) se añade en 4 porciones en 1 hora. La reacción
completa se determina mediante análisis cromatográfico en capa fina.
El exceso de reactivos se inactiva mediante la adición de
tiosulfato sódico saturado y los volátiles se eliminan a presión
reducida y la mezcla se extrae con acetato de etilo. La fase
orgánica se lava con NaHCO_{3} saturado, se seca sobre
Na_{2}SO_{4}, se filtra y se concentra para dar el producto
bruto. La cromatografía en gel de sílice (acetona/hexanos + 2% de
Et 3N) da el producto puro. Los compuestos siguientes se prepararon
usando este procedimiento:
N-desmetil
(9S)-9-dihidroeritromicina
A;
N-desmetil
(9S)-9-dihidro-15-metileritromicina
A; y
N-desmetil
(9S)-9-dihidro-15-fluoroeritromicina
A.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
5
Este ejemplo describe la preparación de
N-desmetil-N-R2-(9S)-9-dihidroeritromicinas,
con particular referencia al Esquema 1, compuestos que tienen la
fórmula II (R^{3} = R^{4} = OH).
Una mezcla del análogo
N-desmetil
(9S)-9-dihidro-eritromicina
A (0,035 mmol), diisopropiletilamina (62,5 \mul), R^{2}I (1,3
mmol) y acetonitrilo (1 ml) se sella y agita a 70ºC durante la
noche. La mezcla se enfría, diluye con NaHCO_{3} acuoso y se
extrae con acetato de etilo. El extracto se seca sobre MgSO_{4},
se filtra y se evapora hasta sequedad. El producto se purifica
mediante cromatografía en gel de sílice usando hexanos/acetona + 1%
de Et_{3}N. Los compuestos siguientes se prepararon de acuerdo con
este procedimiento:
(a)
N-desmetil-N-etil
(9S)-9-dihidro-15-fluoroeritromicina
A, usando N-desmetil (9S)-9
dihidro-15-fluoroeritromicina A y
yoduro de etilo;
\newpage
(b)
N-desmetil-N-isopropil
(9S)-9-dihidro-15-fluoroeritromicina
A, usando N-demetil (9S)-9
dihidro-15-fluoroeritromicina A y
yoduro de isopropilo;
(c)
N-desmetil-N-isopropil
(9S)-9-dihidro-15-metileritromicina
A, usando N-demetil (9S)-9
dihidro-15-metileritromicina A y
yoduro de isopropilo;
(d)
N-desmetil-N-(2-butil)
(9S)-9-dihidro-15-metileritromicina
A, usando N-demetil (9S)-9
dihidro-15-metileritromicina A y
2-yodobutano.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
6
Este ejemplo ilustra la etapa de desmetilación
del Esquema 1A, con referencia específica a N
desmetil-15-metileritromicina A
(compuesto III; R^{1} = 1-propilo; R^{3} =
R^{4} = OH), aunque debe entenderse que el procedimiento
generalmente es aplicable a otros compuestos análogos.
Una mezcla de
15-metileritromicina A (compuesto III, R^{1} =
1-propilo; R^{3} = R^{4} = OH; 5,00 g, 6,15
mmol) y trihidrato acetato sódico (4,18 g, 30,75 mmol) en
metanol-agua (8:2 V/V, 100 ml) se agitó a 50ºC. A
continuación se añadió yodo (1,56 g, 6,15 mmol). Durante la reacción
se añadió hidróxido sódico 1N (6,15 ml) en porciones pequeñas. La
reacción completa se determinó mediante análisis cromatográfico en
capa fina. Tras la eliminación del disolvente, la mezcla se extrajo
tres veces con acetato de etilo, se secó sobre sulfato sódico. El
producto bruto (4,97 g) se obtuvo en forma de un sólido amarillo,
que se usó para la siguiente etapa sin más purificación.
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Ejemplo
7
Este ejemplo ilustra la etapa de alquilación del
Esquema 1A, con referencia específica a N desmetil
N-isopropil-15-metileritromicina
A (compuesto IV', R^{1} = 1-propilo; R^{2} =
isopropilo; R^{3} = R^{4} = OH), aunque debe entenderse que el
procedimiento generalmente es aplicable a otros compuestos
análogos.
Una mezcla de la
N-desmetil-15-metileritromicina
A del ejemplo anterior (2,50 g, 3,41 mmol), diisopropiletilamina
(6,1 ml, 10 equiv.), 2-yodopropano (10,2 ml, 30
equiv.) en acetonitrilo (50 ml) se calentó en un baño de 70ºC. Se
añadieron agua y bicarbonato sódico saturado. La solución se extrajo
tres veces con acetato de etilo y se secó sobre sulfato magnésico.
El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna de
gel de sílice (3:1 hexano:acetona, 1% de trietilamina) para dar N
desmetil-N-isopropil-15-metileritromicina
A (1,80 g, rendimiento del 75% para dos etapas). m/z: 777,0 (MH);
RMN ^{13}C (CDCl_{3}): 221,86, 175,62, 103,11, 96,15, 83,30,
79,85, 78,01, 75,10, 74,90, 74,59, 72,58, 70,35, 68,91, 68,75,
65,48, 62,79, 52,49, 49,47, 45,12, 44,76, 39,32, 38,43, 37,85,
34,96, 33,06, 30,76, 30,19, 26,93, 21,48, 21,41, 20,99, 20,46,
19,47, 18,62, 18,27, 16,15, 15,84, 14,00,12,04, 9,01.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
8
Este ejemplo ilustra la etapa de reducción de
carbonilo del Esquema 1A, con particular referencia a N
desmetil-N-isopropil-15-metIl-(9S)-9-dihidroeritromicina
A (compuesto I; R^{1} = 1-propilo; R^{2} =
isopropilo; R^{3} = R^{4} = OH), aunque debe entenderse que el
procedimiento generalmente es aplicable a otros compuestos
análogos.
El compuesto
N-desmetil-N-isopropil-15-metileritromicina
A (1,74 g, 2,24 mmol) se disolvió en metanol-éter (1:3 V/V, 50 ml),
después se enfrió hasta -20ºC. Se añadió borohidruro sódico (189 mg,
5,0 mmol). A continuación, la mezcla se calentó lentamente hasta la
temperatura ambiente durante un periodo de 3 horas. El exceso de
borohidruro sódico se destruyó mediante la adición de tampón fosfato
a pH 6,0, seguido por trietanolamina (10 ml). Después de 30
minutos, la mezcla se extrajo con acetato de etilo y se secó sobre
sulfato magnésico. El producto bruto se purificó mediante
cromatografía en gel de sílice, (3:1 hexano-acetona
con 1% de trietilamina). Se obtuvo
N-desmetil-N-isopropil-15-metil-(9S)-9-dihidroeritromicina
A pura (1,63 g, rendimiento de 93%). m/z: 779,0 (MH);
RMN-^{13}C (CDCl_{3}): 177,28, 102,59, 95,81,
83,45, 82,76, 78,81, 77,86, 75,68, 75,03, 74,67, 72,68, 70,38,
70,24, 69,26, 65,97, 62,28, 52,52, 49,34, 44,83, 42,00, 36,78,
34,80, 34,37, 33,01, 31,96, 31,02, 30,76, 25,46, 21,58, 21,28,
21,10, 20,41, 19,93, 19,74, 18,27, 16,37, 14,86, 14,30, 14,02,
9,17.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
9
Este ejemplo describe la construcción de una
cepa de Saccharopolyspora erythraea
(K24-1/159 44) capaz de biosintetizar
11-desoxieritromicinas, con particular referencia a
11-desoxieritromicina B, que son útiles como
productos intermedios para la síntesis de ciertos compuestos de esta
invención.
El compuesto
11-desoxieritromicina B se puede prepara en una
fermentación sencilla en una célula huésped sometida a ingeniería
genética que expresa una versión modificada del conjunto de genes
DEBS (eryAI, eryAII y enyAIII). El gen enyAI
se somete a ingeniería mediante sustitución del dominio de la
cetoreductasa en el módulo 2 con un casete que contiene un dominio
de deshidratasa, un dominio de enoilreductasa y un dominio de
cetoreductasa tomados de, por ejemplo, el módulo 1 de la rapamicina
PKS. Los procedimientos para la sustitución de dominios se
proporcionan en, por ejemplo, McDaniel, documento US 6.403.775
(2002), que se incorpora en la presente memoria descriptiva por
referencia. El gen eryAI sometido a ingeniería se incorpora
junto con los genes eryAII y eryAIII en una célula
huésped competente en la producción de eritromicinas una vez que se
han añadido los genes de la PKS sometidos a ingeniería. En formas de
realización preferidas, estas células huésped son "huéspedes
limpios", en las que se han eliminado sus genes nativos de PKS.
Entre los ejemplos de huéspedes adecuados se incluyen el huésped
limpio Saccharopolyspora erythraea K24-1 y
las cepas de Saccharopolyspora erythraea que poseen genes
mutados de la PKS, tales como los descritos en Santi y col.,
documento US 2002/0004229 A1 (2002). En la cepa
K24-1 se ha sustituido los genes nativos eryAI,
eryAII y eryAIII con el sitio de inserción del fago
attB del actinofago \PhiC31, que se describe en la patente
de EE.UU. 5.190.871, que se incorpora en la presente memoria
descriptiva por referencia, y seguido por el promotor ermE*.
Esto permite que los vectores plasmídicos que comprenden el sitio de
inserción complementario del fago attP junto con los genes
se puedan integrar en el cromosoma en el sitio attB en
presencia de una integrasa del fago. Entre los ejemplos de los
vectores del fago de integración adecuado se incluyen pSET152 y
sus
derivados.
derivados.
La preparación de la cepa huésped de partida
Saccharopolyspora erythraea K24-1 se describe
en Santi y col., documento US 2002/0004229 A1 (2002), ya la cepa se
depositó en la Colección Americana de Cultivos Tipo (American Type
Culture Collection), P.O. Box 1549, Manassas, Virginia 20108, EEUU,
de acuerdo con los términos del Tratado de Budapest del 12 de marzo
de 2003 con número de registro PTA-5054.
pKOS159-8 y
pKOS159-10 son derivados de pSET152 que contienen
los genes eryA bajo el control del promotor rmEp* y
del par promotor-activador
actIp/actII-ORF4, respectivamente. Un fragmento de
NsiI de 35 kb de pKAO127 que lleva los genes eryA y
la región actIp/actII-ORF4 se clonó en
pKOS97-64c (derivado de a pSET152 que contiene el
promotor ermEp* y un sitio cos de \lambda) para hacer
pKOS159 10. El terminador de la transcripción fd del
fragmento pKAO127 impide la expresión de cualquier gen del promotor
ermEp* en este plásmido. El fragmento que contiene el
terminador fd y el segmento actIp/actII-ORF4
en pKOS159-10 se eliminó mediante digestión con
PacI y auto-ligadura para generar
pKOS159-8. Para la expresión de los genes
eryA bajo el control de su promotor natural, se construyó
pKOS159-31 clonando el fragmento
NdeI-XbaI portador de los genes eryA (y el
sitio cos de \lambda) de pKOS159-10 y fragmento
del lado izquierdo de eryAI amplificado por PCR digerido con
XbaI-NdeI anterior en pSET152 digerido con
XbaI. El pKOS159 33, que contiene los genes eryA de S.
erythraea K41-135 se construyó de un modo
análogo usando el fragmento eryA de
pKOS108-04. Asimismo, todos los plásmidos de
expresión de DEBS sometidos a ingeniería se fabricaron usando pKOS
159-31 como estructura y las enzimas de restricción
adecuadas para mover el fragmento de eryA genéticamente
modificado de los plásmidos existentes.
pKOS159-44 es un plásmido
derivado de pSET152 (Bierman y col., Gene 116, 43-49
(1992), "Plasmid cloning vectors for the conjugal transfer of DNA
from Escherichia coli to Streptomyces spp.") que
tiene genes eryA genéticamente modificados (KR2
\rightarrow rapDH/ER/KR1) bajo el control del promotor
eryAI (Rodriguez y col., J. Ind. Microbio. Biotechnol.,
"Rapid Engineering of Polyketide Overproduction by Gene Transfer
to Industrially Optimized Strains", publicado en la web como el
documento Nº
10.1007/s10295-003-0045-1
(http://link.springer-ny.com) (16 de abril de
2003)). Un fragmento de NdeI-NsiI de 30 kb (que portan
genes eryA genéticamente modificados) de
PKOS11-66 (Xue y col., Proc. Natl. Acad. Sci.
U.S.A., 96,11740-11745 (1999), "A multiplasmid
approach to preparing large libraries of polyketides") se aisló y
ligó en un fragmento NdeI NsiI de 8 kb de
pKOS159-33 (Rodriguez et al., citado
ant.), que contiene el vector pSET152, el promotor
eryAp y el sitio cos de \lambda). La mezcla de unión se
empaquetó usando extracto de de empaquetado Gigapack III Gold
(Stratagene) y se usó para infectar E. coli
XL-1 Blue. Los recombinantes se seleccionaron en
placas de agar LB que contienen 60 \mug/ml de apramicina. El ADN
del plásmido pKOS159-44 se aisló y comprobó
mediante digestión de restricción.
La cepa K24-1 de S.
erythraea que contiene una deleción cromosómica de los tres
genes eryA y la inserción de los loci attB para el
fago \varphiC31 de Streptomyces procedente de
Streptomyces lividans, seguido por el promotor ermE*
en su lugar, se preparó recogiendo esporas de las cepas cultivadas
en placas 1-2M1 (por litro, 5 g de glucosa, 5 g de
tristona, 0,5 g de clorhidrato de betaína, 5 g de almidón de maíz,
1 g de licor fermentado (50%), 200 mg de MgSO_{4}\cdot7H_{2}O,
2 mg de ZnSO_{4}\cdot7H_{2}O, 0,8 mg de
CuSO_{4}\cdot5H_{2}O, 0,2 mg de CoCl_{2}\cdot6H_{2}O, 4
mg de FeSO_{4}\cdot7H_{2}O, 80 mg de
CaCl_{2}\cdot6H_{2}O, 150 mg de KH_{2}PO_{4}, 10 g de
NaCl, 20 g de agar) filtrando las esporas a través de algodón
estéril y resuspendiéndolas en 1 ml de glicerol al 20%. Las
suspensiones de esporas se almacenaron a -20ºC. A 5 ml de 2xYT se
añadió una alícuota de 20 \mul de la suspensión de esporas y se
incubó a 30ºC con agitación. Tras 1 hora, las esporas se recogieron
mediante centrifugación células receptoras). Las células donantes
se prepararon mediante transformación de E. coli
ET12567/pUZ8002 con pKOS159-44 y seleccionando sólo
según la resistencia a apramicina. De la placa de transformación
primaria se escogieron varias colonias y se usaron para inocular 5
ml de LB con cloranfenicol (10 \mug/ml), canamicina (100
\mug/ml) y apramicina (60 \mug/ml). Las células se cultivaron a
37ºC durante 3-4 horas (DO600 de
0,4-0,6), se recogieron mediante centrifugación, se
lavaron en 5 ml de LB, se centrifugaron y se resuspendieron en 100
\mul de LB. La transferencia conjugada entre las células donantes
y receptoras se llevó a cabo mediante la resuspensión de las células
receptoras en la suspensión de donantes de 100 \mul t las células
se diseminaron en placas R5 (Hopwood y col., Genetic Manipulation
of Streptomyces: A Laboratory Manual (The John Innes Foundation,
Norwich, UK, 1985), que contiene 50 \mug/ml de ácido malidíxico y
se incubaron a 34ºC durante 16 horas. Después, las placas se
superpusieron con 3 ml de agar nutritivo blando que contiene 1 mg de
ácido malidíxico y 2 mg de apramicina. Los exconjugantes K24
1/159-44 se observaron tras 48 horas de
incubación
adicional.
adicional.
La cepa
K24-1/159-44 se depositó en la
Colección Americana de cultivos Tipo (American Type Culture
Collection), P.O. Box 1549, Manassas, Virginia 20108, EE.UU., de
acuerdo con los términos del Tratado de Budapest el 12 de marzo de
2003, con número de registro PTA-5054.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
10
Este ejemplo describe la biosíntesis de
11-desoxieritromicina B, un producto intermedio para
la síntesis de ciertos compuestos de esta invención, usando la cepa
descrita en el ejemplo anterior.
Se siguieron las técnicas de fermentación
descritas en Frykman y col., Biotechnol Bioeng.,
76,303-310 (2001)
"Precursor-Directed Production of Erythromycin
Analogs by Saccharopolyspora erythraea" y Rodriguez y
col., citado ant.
Se usaron los medios siguientes: (a) El medio de
siembra V1 que contenía 16 g/l de almidón de maíz, 10 g/l de
dextrina (D-2256, Sigma-Aldrich), 15
g/l de harina de soja (S-9633,
Sigma-Aldrich), 2,5 g/l de cloruro sódico, 5 g/l de
licor de maíz fermentado, 1 g/l de sulfato amónico
(A-2939, Sigma-Aldrich), 6 g/l de
aceite de soja (S-7381,
Sigma-Aldrich), y 4 g/l de carbonato cálcico
(C-4830, Sigma Aldrich). (b) El medio de
fermentación F2 contenía 28 g/l de almidón de maíz, 24 g/l de
harina de soja, 5,5 g/l de cloruro sódico, 8 g/l de licor de maíz
fermentado y 1,5 g/l de sulfato amónico, 4,5 g/l de aceite de soja y
6 g/l de carbonato cálcico. Todos los medios se esterilizaron
mediante autoclave a 121ºC durante 90 minutos.
Se crearon dos matraces de siembra tomando un
vial de 1 ml de Saccharopolyspora erythraea K24
1/pKOS159-44 de un banco de células congeladas,
descongelando y añadiendo el contenido del vial a 50 ml de medio V1
e incubando a 34ºC durante 40-48 h. A continuación
se crearon dos siembras secundarias mediante la transferencia de
alícuotas de 50 ml desde el matraz de siembra a 500 ml de medio V1
y la incubación a 34ºC durante 40-48 horas.
Ambos cultivos de siembra secundarios de 500 ml
se transfirieron a un fermentador B. Braun B10 que contenía 9 l de
medio V1. El fermentador se puso en funcionamiento a 34ºC y se
mantuvo a un pH 7,0 mediante la adición de ácido sulfúrico 2,5N e
hidróxido sódico 2,5N. Se proporcionaron aireación a 3 LPM y
agitación a 600-800 rpm, manteniendo la tensión de
oxígeno disuelto a más de un 40%. La recolección tuvo lugar después
de aproximadamente 24 horas.
A continuación, 10 l del cultivo de siembra en
fermentador se transfirieron a un fermentador B. Braun Biostat
UD500 que contenía 300 l de medio F2. El fermentador Biostat UD500
se puso en funcionamiento a 34ºC y se mantuvo a un pH 7,0 mediante
la adición de ácido sulfúrico 2,5N e hidróxido sódico 2,5N. Se
proporcionaron agitación a 200-300 rpm y aireación
a 40-250 LPM manteniendo la tensión de oxígeno
disuelto a más de un 40%. Se introdujo dextrina (150 g/l) a una
velocidad de 675 ml/h de 24 a 98 h. se introdujo aceite de soja a
una velocidad de 64 ml/h de 24 a 140 h. se introdujo propanol a una
velocidad de 26 ml/h de 24 a 140 horas. La recolección tuvo lugar
tras 180 horas.
La espuma se controló mediante la adición de una
solución al 50% de Antiespuma B (JT Baker) según fue necesario.
El caldo de fermentación se aclaró mediante
centrifugación y se sometió a extracción en fase sólida usando una
resina HP20 (Mitsubishi). El producto absorbido se eluyó con metanol
y se secó. Después, el producto bruto se sometió a extracción en
líquido:líquido con acetato:agua. Los extractos de acetato de etilo
combinados se secaron. El producto se purificó mediante
cromatografía usando una resina HP20SS, eluyendo con un gradiente
escalonado desde 50% hasta 80% de metanol. Las fracciones que
contenían el producto se combinaron y secaron para proporcionar
11-desoxieritromicina B. mz: 702,64 (MH);
RMN-^{13}C (CDCl_{3}): 219,13, 175,56, 102,48,
95,92, 82,73, 79,40, 78,92, 77,79, 74,88, 72,52, 70,79, 68,80,
65,52, 65,13, 49,25, 45,98, 44,31, 43,40, 40,15 (2x), 38,11, 37,20,
36,54, 34,79, 33,19, 28,52, 26,37, 24,55, 21,37, 21,19, 18,54,
18,31, 15,69, 14,68, 11,96, 10,36, 9,16 ppm.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
11
Este ejemplo describe la conversión de
11-desoxieritromicina B en
N-demetil-N-isopropil
11
desoxi-(9S)-9-dihidroeritromicina
B (compuesto I, R_{1} = etilo, R^{2} = isopropilo y R^{3} =
R^{4} = H; compuesto J, Tabla 1), usando el enfoque del Esquema
1.
El compuesto
11-desoxieritromicina B (200 mg, 0,285 mmol) se
redujo generalmente siguiendo el procedimiento del ejemplo 8 para
dar (9S)-9-dihidroeritromicina B (94
mg, rendimiento de 47%). m/z 705,0 (MH);
RMN-^{13}C (CDCl_{3}): 176,82, 0,102, 0,38,
95,82, 83,04, 80,95, 80,23, 79,01, 77,82, 74,89, 72,71, 70,89,
69,14, 66,04, 65,12, 49,28, 44,67, 42,23, 40,28 (2x), 37,36, 0,34,
0,81, 33,50, 32,58, 29,39, 28,90, 25,29, 25,17, 21,53, 21,16,
20,04, 18,13, 17,98, 13,82, 10,59, 10,22, 9,24.
Generalmente siguiendo los procedimientos de los
ejemplos 6 y 7, la
11-desoxi-(9S)-9-dihidroeritromicina
B (94 mg, 0,134 mmol) se convirtió después en
N-desmetil-N-isopropil-11-desoxi-(9S)-9-dihidroeritromicina
B (57 mg, rendimiento del 58%). m/z: 733,0 (MH);
RMN-^{13}C (CDCl_{3}): 176,98, 102,05, 95,55,
82,33, 81,11, 80,22, 78,90, 77,89, 74,93, 72,69, 70,29, 69,11,
65,98, 65,16, 52,53, 49,28, 44,52, 42,38, 37,27, 34,91, 34,73,
33,38, 32,96, 32,60, 30,99, 29,38, 25,18 (2x), 21,54, 21,22, 21,05,
20,34, 19,91, 18,12, 17,85, 13,68, 10,45, 10,21, 9,10.
Claims (15)
1. Un compuesto que tiene la fórmula (I)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
o una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo, en la
que
R^{1} es alquilo
C_{1}-C_{10} sustituido o insustituido,
alquenilo C_{2}-C_{10} sustituido o
insustituido, alquinilo C_{4}-C_{10} sustituido
o insustituido, arilo sustituido o insustituido o heterociclo
sustituido o insustituido;
R^{2} es H, alquilo
C_{1}-C_{5} sustituido o insustituido, alquenilo
C_{2}-C_{5} sustituido o insustituido,
alquinilo C_{2}-C_{5} sustituido o insustituido,
arilo sustituido o insustituido o heterociclo sustituido o
insustituido;
R^{3} es H u OH; y
R^{4} es H u OH, o R^{3} y R^{4}, tomados
en juntos, forman O-(C=O)-O;
con la condición de que cuando (a)
R^{1} es etilo y (b) R^{3} es OH o R^{3} y R^{4}, tomados
juntos, forman -C(=O)-O, entonces R^{2} no es H o
metilo.
2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, en el que
R^{1} es alquilo
C_{1}-C_{10} sustituido o insustituido,
alquenilo C_{2}-C_{10} sustituido o
insustituido, alquinilo C_{2}-C_{10} sustituido
o insustituido, arilo sustituido o insustituido o heterociclo
sustituido o insustituido;
R^{2} es H, etilo, propilo, isopropilo o
2-butilo; y
R^{3} y R^{4} son OH,
con la condición de que cuando
R^{1} es etilo, entonces R^{2} no es H o
metilo.
3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, en el que:
R^{1} es alquilo
C_{1}-C_{5} sustituido o insustituido;
R^{2} es H, alquilo
C_{1}-C_{5} sustituido o insustituido, alquenilo
C_{2}-C_{5} sustituido o insustituido,
alquinilo C_{2}-C_{5} sustituido o insustituido;
y
R^{3} y R^{4} son OH,
con la condición de que cuando
R^{1} es etilo, entonces R^{2} no es H o
metilo.
4. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, en el que:
R^{1} es etilo sustituido;
R^{2} es etilo, propilo, isopropilo o
2-butilo; y
R^{3} y R^{4} son OH.
5. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, en el que:
R^{1} es etilo sustituido;
R^{2} es H, alquilo
C_{1}-C_{5} sustituido o insustituido, alquenilo
C_{2}-C_{5} sustituido o insustituido,
alquinilo C_{2}-C_{5} sustituido o insustituido;
y
R^{3} y R^{4} son OH.
6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, en el que:
R^{1} es etilo sustituido;
R^{2} es H, etilo, propilo, isopropilo o
2-butilo; y
R^{3} y R^{4} son OH.
7. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, en el que:
R^{1} es propilo;
R^{2} es H, alquilo
C_{1}-C_{5} sustituido o insustituido, alquenilo
C_{2}-C_{5} sustituido o insustituido,
alquinilo C_{2}-C_{5} sustituido o insustituido;
y
R^{3} y R^{4} son OH.
8. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, en el que
R^{3} y R^{4} son, de forma independiente, H
u OH;
R^{1} se selecciona del grupo constituido por
etilo, 2-fluoroetilo y 1-propilo;
y
R^{2} se selecciona del grupo constituido por
metilo, etilo, isopropilo y 2-butilo; con la
condición de que cuando R^{1} es etilo y R^{3} es OH, R^{2}
no es metilo.
9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, en el que R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} son de acuerdo con
las combinaciones expuestas en la tabla siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
10. Un compuesto según la reivindicación 1
seleccionado del grupo compuesto por:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
11. Un compuesto según la reivindicación 1, que
tiene una estructura de la fórmula:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
12. Un compuesto según la reivindicación 1, que
tiene una estructura de la fórmula:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
13. Una composición farmacéutica que comprende
un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones
1 a 12, junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.
14. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 12, para usar en el tratamiento de un
trastorno de la motilidad gástrica.
15. El uso de un compuesto de acuerdo con una
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, para la preparación de
un medicamento para tratar un trastorno gástrico en un paciente.
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