MXPA01010211A

MXPA01010211A - Metodos para inducir la muerte de celulas cancerosas y la regresion de tumores.

Info

Publication number: MXPA01010211A
Application number: MXPA01010211A
Authority: MX
Inventors: Tattanahalli L Nagabhushan
Original assignee: Schering Corp
Priority date: 1999-04-09
Filing date: 2000-04-06
Publication date: 2002-09-18
Also published as: BR0009670A; NO329133B1; DE60032226T2; AR023400A1; WO2000061145A1; PE20010025A1; ZA200108258B; DE60032226D1; HK1038512A1; CA2364675A1; HUP0200773A2; NO20014897L; ES2275505T3; CN1364084A; DK1165078T3; AU783177B2; HK1038512B; US6316462B1; EP1165078B1; AU4204100A

Abstract

Se proveen metodos para tratar cancer, los cuales comprenden la administracion de un inhibidor de una proteina farnesil transferasa junto con un inhibidor de una ruta, de senalizacion Ras adicional para inducir muerte en celulas cancerigenas y regresion en tumores.

Description

MÉTODOS PARA INDUCIR LA MUERTE DE CÉLULAS CANCEROSAS Y LA REGRESIÓN DE TUMORES ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Esta invención describe nuevos métodos para tratar individuos que sufren de cáncer incluyendo tumores y enfermedades metastáticas. En particular esta invención provee métodos para tratar un cáncer, que comprenden el uso combinado de (1) un inhibidor de transferasa de proteína farnesilo ("FPT") y (2) un inhibidor adicional de la vía de señalización Ras para inducir un nivel sinérgico de muerte de células cancerosas (en particular muerte apoptótica de las células) io cual permite regímenes de tratamiento con bajas dosis. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La Figura 1 de la presente memoria muestra una descppción lineal simplificada de una vía de transducción de señales que conduce la proliferación celular. Esta vía se define aquí como la (Vía de señalización Ras), debido a que Ras es un transmisor central en esta vía que recibe señales de los elementos de cadena arriba (por ejemplo los receptores de factor de crecimiento) y ios transmite a los elementos cadena abajo. Las vías de señalización iniciadas por los receptores del factor de crecimiento que conducen a la proliferación celular y en algunos casos a la transformación maligna, están siendo aclarados Muchos receptores del factor de crecimiento tal como los del factor de crecimiento epidérmico (EGF) y los del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) asi como también las moléculas relacionadas con el receptor EGF (por ejemplo, Her-2/Neu/ErbB2), poseen una actividad intrínseca de tirosina quinasa que es activada por la dirnerización del receptor inducido por ligando (Heldin, 1995). Esto da como resultado la autofosforilacióp del receptor en los residuos de tirosina y la adhesión de proteínas que contienen los dominios Src-homología 2 (SH2) . Dos - úe dichas proteínas SH2 son las Grb2 y SHC, que activan indirectamente la pequeña proteína Ras de adhesión de GTP asociada a la membrana del plasma. La activación de Ras ocurre también en respuesta a la adhesión del ligando a siete receptores acoplados a la proteina G del dominio de transmembrana (por ejemplo Gutkind, 1998). La activación de Ras y otras vías de señalización reguladas por el receptor del factor de crecimiento conducen finalmente a cambios en el c?toesqueleto y la expresión génica que son necesarias para la proliferación, diferenciación, y transformación celular (revisado en Campbell et al., 1998). Los tres genes ras (Ha-Ras, N-Ras, y Ki-Ras) codifican cuatro proteínas (debido al empalme alternativo del RANm de Ki-Ras). Bajo circunstancias normales, las proteínas Ras tienen un ciclo entre un estado activo (adherido a GTP) y un estado inactivo (adherido a GDP). La activación Ras ocurre mediante el intercambio del GDP por GTP, el cual es facilitado por una familia de factores de intercambio nucleotídico de guanina. La inactivación Ras ocurre mediante hidrólisis del GTP adherido a GDP. Esta reacción es facilitada por las proteínas activadoras de GTPasa (GAPs) (Trahey and cCormick, 1987). En muchos cánceres humanos, las proteínas Ras se convierten en oncogénicamente activadas debido a mutaciones que destruyen su activación de GTPasa, y que por lo tanto desregulan la señalización Ras (revisado en Campbell et al., 1998). Existen los efectores candidatos múltiples Ras que pueden servir cadena abajo de Ras en la transducción de señales y en la transformación oncogénica, incluyendo miembros de la familia Rho de pequeñas GTPaeas, fosfatidilinositos-3 kinasa (P13K) y la proteína quinasa de serina/treonina c-Raf-1 (revisada en Campbell et al., 1998). La señalización intermediada por Raf es la vía efectora Ras mejor caracterizada. La Ras activada recoge Raf para la membrana en la cuai ocurre la activación Raf. La Raf activada es el componente inicial de una y v- • tascada de quinasa, la cascada Quinasa de Proteípa Activada por Mitógeno (WAPK) (revisado en Lo y and Willumsen, 1993; Campbell et a!., 1998). Raf t sforiia y activa ias proteínas quinasas MEK1 y EK2 (MAPK/ERK quinasa) las cuales a su vez fosforilan y activan las Quinasas Extracelulares reguladas por 5 señales ERK1 y ERK2 (conocidas también como MAPK1 y MAPK2). A diferencia de sus objetivos cadena abajo, ERK1.2, las proteínas MEK1.2 son enzimas muy específicas cuyos únicos substratos conocidos son las proteínas ERK1 ,2. Mediante activación, ERK1 y ERK2 fosforilan (y por lo tanto regulan) una variedad de proteínas objetivo que incluyen los factores de transcripción nuclear que conducen a la respuesta celular final. Esta vía lineal de la señalización Ras .JQ está diagramada en la figura 1. La importancia de estas vías de señalización en el desarrollo anormal de células cancerosas se indica por el descubrimiento de que el receptor del factor de crecimiento y los componentes de la vía Ras a menudo mutan y/o están eobreexpresados en el cáncer. Por ejemplo la Ras está mutacionaimente activada en aproximadamente 30% de los cánceres humanos incluyendo un elevado porcentaje de importantes cánceres epiteliales tales como cánceres de pulmón, 15 colón y pancreáticos. Adicionalmente la sobreexpresión de los receptores del factor de crecimiento ocurre en una variedad de cánceres (por ejemplo la sobreexpresión del receptor de Her-2/Neu ocurre en aproximadamente 30% del cáncer de mama humano). Estas observaciones han conducido a la búsqueda y desarrollo de agentes diseñados para bloquear los componentes individuales de cualquier vía de transducción de señales. Aunque dichos agentes se consideran 20 potenciales y novedosos agentes terapéuticos para cáncer, muchos de los inhibidores de la transducción de señales se considera que actúan en una forma citostática en vez de modo citotóxico, bloqueando el progreso de las células a través de! ciclo celular. Esto ¡os distingue de las drogas quimioterapéuticas para tí¿ cáncer tradicionales porque son menos tóxicas pero también porque poseen menor actividad antitumoral dramática. Por lo tanto sigue existiendo el desafio de hallar métodos nuevos y mejorados para tratar el cáncer. Para tratar las células de cáncer tumorígenas, 5 siria sumamente deseable proveer nuevos métodos que logren una drástica y selectiva inducción de ia muerte de células cancerosas y que al mismo tiempo minimizen los potenciales efectos secundarios tóxicos contra las células normales no transformadas. La presente invención provee dichos métodos de tratamiento. COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente invención provee métodos para tratar cáncer en un paciente (por ejemplo un mamífero tal como un ser humano) que necesite dicho 0 tratamiento, que comprende administrar una cantidad eficaz de (1) un inhibidor de la transferasa de la proteína farnesilo (FPT) y (2) un inhibidor de la vía de señalización Ras adicional. Los métodos de la presente invención logran una inducción inesperadamente dramática en la muerte de las células cancerosas (en particular muerte de células apoptóticas). Los efectos son sinérgicos y muy selectivos contra las células transformadas (particularmente células de cáncer tumorígenas), lo cual permite el uso de pequeñas dosis para minimizar los potenciales efectos tóxicos secundarios contra las células normales no transformadas. Además, los métodos de la presente invención demostraron en forma sorprendente que tienen un efecto sostenido de larga duración en el bloqueo de la señalización de las células, lo cual minimiza nuevamente los potenciales efectos tóxicos secundarios contra células normales no 0 transformadas. Ninguno de estos efectos, dejado solo en su magnitud, podria haber sido pronosticado antes de la presente invención. Además, aprovechando la sorprendente sinergia y los efectos sostenidos de larga duración de esta invención, se proveen métodos especiales con dosis bajas de manera que se puede lograr en forma eficaz la muerte de las células cancerosas y al mismo f. ' tiempo se mantiene bajo riesgo de potenciales efectos tóxicos secundarios para las células normales no transformadas. Los métodos de la presente invención son particularmente útiles para el tratamiento de varios cánceres tumorígenos especialmente cánceres epiteliales (por ejemplo cáncer pancreático, cáncer de ovario, cáncer de próstata, cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer colorectal y cáncer de vesícula), y melanoma. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS El Compuesto Inhibidor FPT definido en las figuras 1 hasta 7 (denominado algunas veces "SCH 66336") es el siguiente: (+) -enantiómero 15 Figura 1 : Trapsducción de Señal Ras: una representación esquemática de los componentes de ia vía de transducción de señales Ras/MAPK. Esta vía iin eal del receptor del factor de crecimiento para la activación ERK fue la primera vi a intermediada por Ras que fue aclarada. También se indican las etapas objetivo de varios inhibidores incluyendo el inhibidor SCH 66336 de FPT y los inhibidores PD098059 y U0126. 20 Figura 2: La respuesta apoptótica dependiente de la dosis para el tratamiento con PD098059 es mejorada mediante la adición de SCH 66336. Se trataron células Rat2 transformadas con H-ras-CVLS con las concentraciones indicadas de PD098059 (A385-023-M005; Alexis Corporation), solas o en combinación con SCH 66336. Las células fueron cosechadas mediante tratamiento con tripsina/EDTA y se fijaron en acetona/metanol (50%:50%) a -20 °C durante 30 minutos, se lavaron concienzudamente con PBS y se rotularon durante treinta minutos a temperatura ambiente con PBS que contenía 75 µg/ml de ioduro de propidio (Pl; Calbiochem; La Jolla, CA) y 500 µg/ml RNasa (Sigma; St. Louis, MO). Se midió la apoptósis mediante tinción con ioduro de propidio de ADN cromosomal con análisis FACS de la población de células (FACS-Calibur, Becton-Dickinson; Mountain View, CA). La concentración de PD098059 varió desde 0,25 a 20 µm en presencia de ) o ausencia de (M) de 100 nM SCH 66336. Figura 3: La respuesta apoptótica dependiente de la dosis para e! tratamiento con SCH 66336 es mejorada mediante la adición de PD098059. Las células Rat2 transformadas con H-Ras-CVLS se trataron durante 36 horas con ¡as concentraciones indicadas de SCH 66336, solas o en combinación con PDO098059. El análisis se llevó a cabo tal como se describió en la descripción para la figura 2. La concentración de SCH 66336 varió desde 0,0125 a 0,75 µM en presencia de (^) o ausencia de (B) de 2,5 µM PD098059. Figura 4: Efecto de SCH 66336 y U0126 sobre Apoptósis medida por FACS: Las células Rat2 transformadas con H-Ras se trataron durante 24 horas con 0 a 10 µM U0126 (#V1121 ; Promega Corporation; Madison, WI) en presencia o en ausencia de 0,5 µM SCH 66336. El análisis se llevó a cabo tal como se describió en la leyenda para la figura 2. 1 = células no tratadas, 2 = SCH 66336; 3 = 1 µM U0126; 4 = 1 µM U0126 + SCH 66336; 5 = 5 µM U0126 + SCH 66336; 7 = 10 µM U0126; 8 = 10 µM U0126 + SCH 66336. Figura 5: Efecto de SCH 66336 y PD098059 sobre Apoptósis medida mediante ia Activación de Caepasa: Las células Rat2 y Rat2 parentales - - transformadas con H-Ras se trataron durante 24 horas con 20 µM PD098059, 0,5 µM SCH 66336, o en combinación de las dos drogas. Las células fueron usadas en un buffer detergente recomendado por Clontech (Ensayo Apo-Alert CPP32/ Caspase-3) y se centrifugaron a 14.000 rpm durante 15 minutos a 4 °C para granular los residuos celulares. La concentración de proteína del sobrenadante resultante se determinó mediante el ensayo de proteína BCA (pierce; Rockford, IL) con 175 µg de cada lisado ensayado para la actividad de Caspasa-3 usando un substrato peptídico fluorogénico (AC-DEVD-AMC; Clontech, Palo Alto, CA) mediante fluormetría (lector de placa CytoFluor; Perseptive Biosystems; Framingham, MA). 1 = células H-Ras no tratadas; 2 = células H-Ras + SCH 66336; 3 = H-Ras + PD 098059; 4 = H-Ras + SCH 66336 + PD 098059; 5 = células Rat2 no tratadas; 6 = células Rat2 + SCH 66336; 7 = células Rat2 + PD09059; 8= células Rat2 + SCH 66336 + PD 098059. Figura 6: Efecto de SCH 66336 y PD 098059 sobre la fosforilación de ERK1 y ERK2: Las células Rat2 transformadas con H-Ras se trataron con 20 µM durante 0 a 36 horas. Las células fueron lisadas en un buffer detergente y se centrifugaron a 14 000 durante 15 minutos a 4 °C para granular los residuos celulares. La concentración de proteína del sobrenadante resultante se determinó mediante el análisis de proteína BCA (Pierce; Rockford, IL). Las proteínas celulares (20 µg) se separaron mediante electrofóresis con Tris-glicina gel de poliacr?lamida 8-16 % (Novex, San Diego, CA). Luego las proteínas fueron transferidas a las membranas PVDF para el análisis de! Borrón Western. Se detectaron los ERk1 y ERK2 fosforilados usando un anticuerpo policlonal de conejo específico para las proteínas p42/44 MAPK fosforiladas (phospho- Thr202 Tyr204 específico; #9101; New England Biolabs, Inc.; Beveriy MA). El total de ERK1 y ERK2 se detectó usando un anticuerpo policlona! de conejo ocnarífií-n nara loe nrntoinac AA M?P (ü ? O - e E .Q¡3nd Biolabs, InC, - levsriy, MA). Ambos anticuerpos fueron reconocidos con anticuerpo HRP-antí- ratón de cabra (peroxídasa de rábano picante; Chemicon; Temecula, CA) y se visualizaron mediante quimioluminiscencia mejorada (SuperSignal West Pico Chemiluminescent Substrate; Pierce; Rockford, IL). § Figura 7: Vías de transducc?ón de señales intraceluíares: La figura 1 diagrama una vía lineal que va desde los receptores del factor de crecimiento a través de Ras hasta la activación de la cascada MAPK. Resulta claro que las vías de señalización son considerablemente más complejas con múltiples ramificaciones e interconecciones. Algunas de estas complejidades se ilustran aquí en la figura 7. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN 0 La presente invención provee nuevos métodos de tratamiento de cáncer combinando (1 ) un inhibidor de transferasa de proteína farnesílo (FPT), y (2) un inhibidor de señalización de la vía Ras adicional. (1) un "inhibidor de transferasa de proteína farpesilo" o "inhibidor FTI", o "FTI" se define aqui como un compuesto que: (i) inhibe potentemente FPT (pero preferiblemente no la transferasa de proteína de geranilgeranilo I, in vitro); (¡i) d bloquea el cambio fenotípico inducido por una forma de H-ras transformante que es un aceptador farnesilo (pero preferiblemente no mediante una forma de H-ras transformante manipulado para ser un aceptador de geranilgeranilo); (iii) bloquea ¡a famesilación intracelular de ras; y (iv) bloquea el desarrollo anormal de las células. (2) Un "inhibidor de la vía de señalización Ras" se define como un agente que bloquea la actividad de cualquier proteína en la vía de transducción de señales que se muestra en la figura 1. Un inhibidor de la vía de señalización ras particularmente preferido e"s un "inhibidor MEK", que se define aquí como un agente que bloquea la actividad de la enzima ¡n vitro de una proteína MEK - '?J¡?S .

PK/ERK quinasa) (preferiblemente inhibiendo MEK1 y MEK2), y por lo tanto bloquea la activación de una proteína MAPK según se evidencia por un bloqueo m la fosforilación de la proteína MAPK. Esto puede detectarse mediante análisis - . tí# borrón Western MAPK fosforilado tal como ha sido descripto por ejemplo en 5 Dydley et al., Proc nat! Acad Sci. 92:7686-7689 (1995), y Favata et al., j. Biol Cttem. 273:18623-32 (1998). 1. Inhibidores FPT Como agentes solos o en combinación con quimioterapia (ver por ejemplo Liu et al., 1998), los inhibidores FPT representan una realización líder para bloquear la función de ios oncoproteinas Ras. El FPT cataliza la adición de una porción lipida de isoprenilo sobre un residuo cisteína que está presenta cerca del 10 término carboxi dé la proteína Ras. Esta es la primera etapa de una vía de procesamiento post-translacional que es esencial tanto para la asociación de la membrana Ras como para la transformación opcogénica inducida por Ras. Se ha informado sobre una variedad de inhibidores FPT incluyendo una variedad de inhibidores péptido miméticos así como también otros inhibidores de pequeñas moléculas más notablemente los inhibidores FPT tricíclicos ejemplificados por 15 SCH 66336. Los inhibidores FPT interfieren con el proceso post-transiacional de las proteínas Ras en las células y demuestran actividad antitumoral en una amplia variedad de modelos de cáncer in vitro e in vivo. (Bishop et al., 1995; Liu et al., 1998). La actividad antitumoral de SCH 66336 incluyen la inhibición del desarrollo independiente de la adhesión de una variedad de lineal celulares de tumores humanos in vitro y su desarrollo como xenoinjerto en ratones inmuno- 20 comprometidos (Liu et al., 1998). Las líneas de células tumorales humanas difieren significativamente en su sensibilidad para los efectos de crecimiento de ios inhibidores FPT. La sensibilidad o resistencia no está correlacionada con el estado muíaciona! Ras.

En varios modelos de tumores de ratón transgénico (por ejemplo MMTV-H- Ras, WAP-H-Ras, TGFa y TGFa/neu) han sido inducidas significativas regresiones tumorales mediante el tratamiento con los inhibidores FPT Estas regresiones están asociadas con un aumento de ia apoptósis (Liu et al 1998; g Sarrington et a!., 1998; Norgaard et al., 1999). Los inhibidores FPT pueden inducir también apoptósis de células transformadas en cultivos. Se ha informado que el efecto apoptótico in vitro requiere desarrollo en poco suero o en un medio de crecimiento forzado de suspensión (Hung and Chaung, 1998; Lebowitz et al., 1997; Suzuki et al., 1998). También se ha demostrado que el tratamiento con el inhibidor FPT reduce ia actividad de la vía MAPK en las células Rat1 transformadas con ha-Ras (por 10 ejemplo James et al., 1994). Esta disminución de la actividad MAPK está correlacionada con una disminución del crecimiento celular. Los inhibidores FPT no reducen la actividad M^PK en células Rat1 no transformadas 2. Agentes que tienen como objetivo MEK: La vía MAPK ha sido también examinada, y se ha descripto el desarrollo de terapéutica anti-cáncer y los efectos de los inhibidores específicos de esta vía 15 sobre líneas de células tumorales (Dudiey et al., 1995; Favata et al., 1998). El inhibidor MEK mejor caracterizado es PD098059, una pequeña molécula que inhibe la actividad de MEK1 y MEK2 a través de la adhesión directa de una manera que es no competitiva con respecto a cualquier substrato (proteína ATP o ERK). Esto da como resultado una disminución de la fosforilación de MEK1 y MEK2 y una disminuación de la activación de los substratos MEK, ERK1 y ERK2. 20 El tratamiento con PD098059 bloquea la proliferación intermediada por el factor de crecimiento y un crecimiento independiente de la adhesión de las células transformadas Ras (Alessi et al, 1995, J. Biol Chem. 270:27489-27494).

, J¡ A Recientemente, se informó sobre un nuevo inhibidor MEK, el U0126, el Ctial se adhiere a MEK con superior afinidad que el PD098059. Para una información más detallada sobre los inhibidores MEK, y los métodos para preparar los inhibidores MEK puede hacerse referencia por ejemplo a las 5 publicaciones de patentes internacionales WO 99/01421 (Enero 14 de 1999) y WO 99/01426 (Enero 14, 1999). 3, Agentes que tienen como objetivo los receptores del factor de crecimiento: Se tomaron dos realizaciones primarias para bloquear las vías de señalización de! receptor del factor de crecimiento: (i) anticuerpo monoclonales *,Q dirigidos contra el receptor; (ii) inhibidores de la actividad del receptor de tirosina quinasa; y (iii) ácidos nucleicos antisentido para bloquear la expresión de proteínas. Los anticuerpos monoclonales Anti-receptores incluyen aquellos que tienen como objetivo el receptor erbB2 (por ejemplo HERCEPTIN®/ trastuzumab de Geneptech) y aquellos que tienen como objetivo el receptor EGF. El anticuerpo receptor anti-EGF mejor caracterizado es el anticuerpo quimérico C225 (Goldstein et al. (1995), Clin Cáncer res. 1 :1311-1318). Tanto 5 HERCEPTIN® como C225 han demostrado se eficaces en modelos de tumores pre-clínicos en los cuales estaban expresados sus receptores relacionados. También se ha informado sobre los inhibidores de pequeñas moléculas de actividad de tirosina-quinasa con por lo menos dos de estos compuestos ya en pruebas clínicas humanas: Inhibidor de! receptor PDGF de Sugen que es el SU101 que está en la fase II! de ¡as pruebas clínicas para giioma y en las 0 pruebas de etapas previas para otras indicaciones para cáncer, y el inhibidor de receptor EGF de Pfizer, que es el CP-358,774, que está en pruebas clínicas de fase previa (Moyer et al. (1997), Cáncer res. 57:4838-4848). 4. Otros antagonistas de señalización «f^ ' Además de las realizaciones descpptas más arriba, otros elementos de la vía de señalización Ras y otras vías de traneduccíón de señales, han sido objetivos del descubrimiento de drogas contra el cáncer. Las proteínas SH2 (SCH y Grb2), que unen los receptores del factor de crecimiento con la activación Ras, e han sido el objetivo de agentes péptido miméticos que bloquean la adhesión de I os dominios SH2 para las secuencias de proteínas que contienen fosfotirosina. La proteína quinasa Raf, que liga Ras a la activación de MEK1.2 ha sido también el objetivo de inhibidores de quinasa de pequeñas moléculas y de realizaciones antisentido. Esta última realización (ISIS-5132) está en la fase II de pruebas clínicas (Monia et al., 1996). Otros objetivos relevantes de señalización intracelular incluyen la fosfo- 10 lípidoquinasa P13K (fosofatid?linositol-3 quinasa) y la proteína quinasa C. En realizaciones preferidas, los métodos de la presente invención pueden usarse para tratar células tumorígenas de cáncer, que tienen un efecto significativo sobre la muerte de las células (por ejemplo por apoptósis) en el caso de células cancerosas (es decir que tienen un efecto significativo sobre la muerte de las células más allá de la simple interrupción del desarrollo), mientras que al 15 mismo tiempo, pueden administrarse los agentes activos en dosis relativamente bajas (y/o en forma menos frecuente) para minimizar ios potenciales efectos tóxicos secundarios contra las células normales no transformadas. Además la presente invención provee nuevos métodos t para tratar cáncer mediante ia provisión de un efecto más prolongado y más sostenido sobre la señalización de las células bloqueadoras mientras que al mismo tiempo se minimiza el riesgo de ?W los potenciales efectos secundarios contra las células normales. Por lo tanto la presente invención provee métodos para inducir un nivel sinérgico de muerte de células cancerosas (por ejemplo apoptósis) en un paciente con cáncer que comprende administrar concurrentemente o en - - • ? ?*g«g* secuencias cantidades eficaces de (1) un inhibidor FPT y (2) un inhibidor de vía d señalización adicional Ras (es decir en cantidades que son suficientes para inducir un nivel sinérgico de muerte de células cancerosas medido por ejemplo mediante el ensayo de fluorescencia con ioduro de propidio descripto en Dengler § et al., (1995) Anticancer Durgs. 6:522-32. De manera similar, se aquí proveen métodos para matar células cancerosas en un paciente con cáncer (medido mediante el ensayo de Dengler et al 1995) que comprende administrar cantidades eficaces de (1 ) un inhibidor FPT y (2) un inhibidor de vía de señalización Ras adicional. Además en realizaciones preferidas, los métodos de la presente invención incluyen métodos para tratar tumores y para producir una regresión en el 10 volumen tumoral (por ejemplo medido por scaneo CAT) en un paciente que necesita dicho tratamiento (por ejemplo un mamífero tal como un ser humano), mediante la administración, en forma concurrente o secuencial, (1 ) de un inhibidor FPT y (2) un inhibidor de vía de señalización Ras adicional en cantidades suficientes para lograrlo. Ejemplos de tumores que pueden tratarse incluyen pero no están limitados a cánceres epiteliales, por ejemplo cáncer de 15 próstata, cáncer de pulmón (por ejemplo adenocarcinoma de pulmón), cánceres pancreáticos (carcinoma nancreático ta! como por ejemplo carcinoma pancreático exócrino), cánceres de mama, cáncer de colon (por ejemplo carcinoma colorectales tales como por ejemplo adenocarcinoma de colon y adenoma de colon), cáncer de ovario, carcinoma de vesícula y cánceres de hígado. Otros cánceres que pueden tratarse incluyen melanomas, leucemias mieloides (por 2 ejemplo leucemia mielogena aguda), sarcomas, cáncer folicular de tiroides, y síndroma mielodisplático. Las composiciones farmacéuticas que comprenden un inhibidor FPT y un inhibidor de la vía de señalización Ras adicional para el tratamiento de cáncer {incluyendo la inducción de muerte de células cancerosas y regresión del tumor), y la preparación de dichas composiciones, se proveen también mediante la presente invención. Tal como se usan aquí los términos siguientes tienen los siguientes § significados a menos que se indique lo contrario: "Inhibidor receptor del factor de crecimiento": un agente que bloquea las propiedades de transducción de señales de un receptor de factor de crecimiento. Estos pueden actuar como inhibidores directos de la actividad de tirosina quinasa del receptor o mediante la inhibición de la activación estimulada por ligando de ia actividad de quinasa receptor ta! como ha sido descripto en Levitski and Gazit, Q 1995 (Science. 267:1782-1788). "Inhibidor de tirosina quinasa": un agente que bloquea la actividad de fosforilación de tirosina mediante competición con ATP o a través de una interacción aloesterica con la enzima tal como ha sido descripto en Levitski and Gazit, 1995. "Inhibidor de proteína quínasa": un agente que bloquea la actividad de fosforilación sobre serina, treonina o residuos tirosina tal como ha sido descripto en Levitzki and Gazít, 1995. "Inhibidor del receptor p185 erbB2/HER2/neu" o "inhibidor de! receptor erbB2": un agente que bloquea las propiedades de transducción de señales del receptor erbB2 inhibiendo la actividad de tírosina quinasa dei receptor o bloqueando la estimulación del ligando de la actividad de quinasa del receptor tal como ha sido descripto en Levitzki and Gazit, 1995. "Inhibidor de tiroeina quinasa del receptor PDGF": un agente que bloquea las propiedades de transducción de señales del receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) ya sea inhibiendo la actividad de tirosina quinasa dei receptor o bien bloqueando la estimulación de PDGF de la actividad de quinasa del receptor tal como ha sido descripto en Kovalenko, M., et al. (1994). Cáncer res. 54:6106-6114. "Inhibidor de tirosina quinasa de! receptor EGF": un agente que bloquea las propiedades de transducción de señales del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGF) inhibiendo la actividad de tirosina quinasa dei receptor o bloqueando la estimulación de EGF de la actividad de quinasa del receptor tal como ha sido descripto en Fry et al., (1994), Science 9:1093-1095. "Un anticuerpo dirigido contra el dominio extracelular de un receptor del factor de crecimiento": dicho anticuerpo bloquea la actividad biológica del receptor del factor de crecimiento inhibiendo la adhesión de! ligando y/o evitando la activación estimulada por ligando de la tirosina quinasa receptora tai como ha sido descripto en Mendelsohn, J. (1992) J. Nat'l Cáncer Inst Monogr 13:125-131. "Un anticuerpo monoclonal cuyo objetivo es el receptor p185 erbB2/HER2/neu" o "un anticuerpo monocionai cuyo objetivo es el receptor erbB2". dicho anticuerpo bloquea la actividad biológica dei receptor HER2 tal como se muestra mediante la inhibición de ¡a adhesión del ligando y/o evitando la activación estimulada por el ligando de la quinasa receptora del factor de crecimiento tal como ha sido descripto en Pegram et al., 1998; Ver también Cárter et al. (1992), Proc. Nat Acad. Sci. 89:4285-4289. "Un anticuerpo monoclonal cuyo objetivo es el receptor EGF": mostrado por un anticuerpo monoclonal que inhibe ia adhesión de EGF, y la actividad de quipasa estimulada por EGF tal como ha sido descripto por Mendelsohn, J. (1992) J. Nat'l Cáncer inst Monogr 13:125-131. "Una molécula antisentido dirigida contra un receptor de factor de crecimiento u otro componente en la via de señal Ras: un oligonucleotido modificado que interfiere con la traducción de RNA mensajero (y por lo tanto con la expresión de proíeína) de cualquier componente de proteínas en la vía tal como ha sido descripto en Wang et al , 1998 o Resnicoff, 1998. Para una discusión general de la tecnología antisentido ver por ejemplo Antisense DNA y ARN, (Cold Spring Harbor Laboratory, D. Melton, ed., 1998) "Concurrentemente" (1 ) simultáneamente a lo largo de! tiempo o (2) en diferentes momentos durante el curso de un programa de tratamiento común; y "Secuencialmente" (1) administración de un componente del método ((a) del inhibidor FPT o (b) un inhibidor de la vía Ras adicional) seguido de la administración del componente; después de la administración de un componente el segundo componente puede administrarse substancialmente en forma inmediata después de! primer componente, o el segundo componente puede administrarse después de un período de tiempo eficaz a continuación del primer componente; el período de tiempo eficaz es ¡a cantidad de tiempo para la realización del beneficio. máximo desde la administración del primer componente. "Cadena abajo" se define aquí como una actividad de proteína (dentro de la via de señalización Ras) que es regulada por Ras ya sea directamente a través de la adhesión de proteína. proteína o indirectamente por una proteína efectora regulada por Ras. Por lo tanto en referencia a la Figura 1 , un "elemento cadena abajo de Ras" puede ser por ejemplo Mek 1 ,2 o Erk1 ,2. "Cadena arriba" se define aquí como una actividad de proteína (dentro de la vía de señalización Ras) que regula la actividad de Ras, ya sea directamente a través de la adhesión de prote?na:proteína o bien indirectamente regulando otra proteína que se adhiere directamente y que regula la actividad Ras. Por lo tanto, un "elemento cadena arriba de Ras" puede ser por ejemplo un receptor erbB2, PDGF, el receptor IGF o un receptor EGF. "Muerte de las células", tal como se describe aquí, es la muerte inducida ya sea bajo condiciones fisiológicas o mediante una lesión aguda que da como resultado el desordenamiento de las organeias celulares y las proteínas y la <fe©l(ción de los procesos metabólicos revisado por Raff, M. (1998). Nature. 386:119-122. La muerte celular puede medirse como por ejemplo, mediante el ensayo con citametría de flujo de ioduro de propidio descripto en Dengler et al., (1S95) Anticancer Drugs. 6:522-32. =» "Apoptosís" tal como se describe aquí es una forma de muerte celular (muerte de células programada) que exhibe cambios morfológicos estereotípicos revisado por Raff, M. (1998) Nature. 396:119-122. La apoptosis puede medirse por ejemplo mediante el ensayo de citometria de flujo con ioduro de propidio descripto en Dengler et al., (1995) Anticancer Drugs. 6:522-32, o mediante ia desoxinucieotidil transferasa terminal in situ y el ensayo de traducción por muesca (análisis TÚNEL) descripto en Gorczyca, (1993) Cáncer ras 53:1945-51. 10 "Sinérgico" o "nivel sinérgico" se define aquí como un efecto logrado por la combinación de dos componentes que es superior a la suma de los efectos de cualquiera de los dos componentes por separado del componente constante). Por lo tanto, por ejemplo, la frase "cantidades eficaces para inducir un nivel sinérgico de muerte tíe células cancerosas" se refiere a las cantidades de dos componentes que logran un nivel de muerte de células cancerosas (por ejemplo 15 muerte de células por apoptosis medido por el ensayo de citometría de flujo con ioduro de propidio descripto en Dengler et al., (1995) Anticancer Drugs. 6:522-32, o mediante desoxinucleotidil transferasa terminal in situ y ensayo de traducción de muesca (Análisis TÚNEL) descripto en Gorczyca, (1993) Cáncer Res 53.1945- 51), que es superior a la suma de los efectos de cualquiera de los dos componentes solos. 20 "Efecto sostenido" se define aquí como una respuesta apoptótica/mejorada para un tratamiento de combinación con un FPT1 y un inhibidor MEK1 ,2 en comparación con el tratamiento de uno solo por separado. Las consecuencias de un "efecto sostenido" pueden ser monitoreadas midiendo la actividad MAPK o bien la muerte de las células o apoptósis tal como se describió previamente. El curso de tiempo eficaz para la inhibición de ia vía MAPK con las drogas individuales depende de la dosis. Sin embargo los presentes experimentos 5 muestran que los inhibidores MEK1.2 inhiben óptimamente la vía MAPK en o antes en un tratamiento de 6 horas, mientras que SCH 66336 demuestra una inhibición óptima de la via MAPK 12-18 horas después del tratamiento. El efecto inhibidor MAPK de SCH 66336 ha demostrado que dura tanto como 72 horas después del tratamiento. Por io tanto la combinación de las dos drogas puede dar como resultado una inhibición "sostenida" de la vía MAPK por un largo período •JQ de tiempo preferiblemente por un período a partir o justo antes de seis horas antes del tratamiento y prosiguiendo preferiblemente a través de hasta 36 horas, más preferiblemente 72 horas antes del tratamiento (ver por ejemplo figura 6). La frase "muerte de células cancerosas" se refiere a la inducción de la muerte de células cancerosas en células tumorales de cáncer transformadas. ILUSTRACIONES MAS DETALLADAS DE LOS INHIBIDORES FPT Entre las clases de compuestos que pueden usarse como inhibidores FPT 5 se incluyen: benzocicloheptap?ridinas triciclicas de anillo fusionado, oligopéptidos, compuestos péptido-mimético, compuestos péptído miméticos farnesilados, compuestos carbonilpiperazinilo, compuestos carbonilpiperidinilo, derivados farnesiio, y productos naturales y derivados. Ejemplos de compuestos que son inhibidores de FPT y documentos dirigidos a tales compuestos se dan a continuación. 0 Benzocicloheptapiridinas triciclicas de anillo fusionado: WO 95/105 4; WO 95/10515; WO 95/10516; WO 95/30363; WO 96/30018; WO 96/30017; WO 96/30362; WO 96/31111 ; WO 96/31478; WO 96/31478; WO 96/31477; WO 95/31505; WO 97/23478; Solicitud de Patente Internacional N° PCT/US97/17314 * » (WO 98/15556), Solicitud de Patente Internacional N° PCT/US97/15899 (WO 98/11092), Solicitud de Patente Internacional N° PCT/US97/15900 (WO 38/11096), Solicitud de Patente Internacional N° PCT/US97/15801 (WO 98/1 1 106), Solicitud de Patente Internacional N° PCT/US97/15902 (WO 5 98/11097), Solicitud de Patente Internacional N° PCT/US97/15903 (WO 98/11098), Solicitud de Patente Internacional N° PCT/US97/15904; Solicitud de Patente Internacional N° PCT/US97/15905 (WO 98/11099), Solicitud de Patente Internacional N° PCT/US97/15906 (WO 98/11 100), Solicitud de Patente internacional N° PCT/US97/15907 (WO 98/11093), Solicitud de Patente Internacional N° PCT/US97/19976 (WO 98/11091), Solicitud de Patente Norteamericana N° 08/877049; Solicitud de Patente Norteamericana N° 10 08/877336; Solicitud de Patente Norteamericana N° 08/877269; Solicitud de Patente Norteamericana N° 08/877050; Solicitud de Patente Norteamericana N° 08/877052; Solicitud de Patente Norteamericana N° 08/877051 ; Solicitud de Patente Norteamericana N° 08/877498; Solicitud de Patente Norteamericana N° 08/877057, Solicitud de Patente Norteamericana N° 08/877739, Solicitud de Patente Norteamericana N° 08/877677; Solicitud de Patente Norteamericana N° 15 08/877741 ; Solicitud de Patente Norteamericana N° 08/877743; Solicitud de Patente Norteamericana N° 08/877457, Solicitud de Patente Norteamericana N° 08/877673; Solicitud de Patente Norteamericana N° 08/876507; Solicitud de Patente Norteamericana N° 09/216.398. Algunos inhibidores FPT son oligopéptidos, especialmente tetrapéptidos o derivados de los mismos, basados en la fórmula Cys-Xaa1-Xaa2-Xaa3, donde 20 Xaa3 representa un residuo serina, metionina o glutamina, y Xaa1 y Xaa2 puede representar una amplia variedad de residuos aminoácido pero especialmente aquellos que tienen una cadena secundaria aiifática. Sus derivados pueden tener o no tres enlaces peptídicos; por lo tanto se ha hallado que la reducción de un - enlace peptídico -CO-NH- a una agrupación amina secundaria o incluso el reemplazo de los átomos de nitrógeno en la cadena peptídica con átomos de carbono (con la condición de que algunos factores tales como la configuración general de la molécula y la separación de los extremos estén ampliamente conservados) proveen compuestos que frecuentemente son más estables que los aiigopéptidos y que si son activos tienen actividad más prolongada. Dichos # compuestos se denominan aquí compuestos péptido-miméticos. Los oligopéptidos (en su mayor parte tetrapéptidos pero también pentapéptidos incluyen la fórmula Cys-Xaa1-Xaa2-Xaa3, EPA 461.489, EPA 520.823; EPA 528.486; y WO 95/1 1917. Los compuestos péptido-mimético- especialmente Cys-Xaa-Xaa-Xaa- miméticos: EPA 535.730, EPA 535.731 ; EPA 618.221 ; WO 94/09766; WO 94/10138; WO 94/07966; US 5.326.773; US 5.340.828; US 5.420.245; WO 95/20396; US 5.439.918; y WO 95/20396. Compuestos péptido-mimético farnesilados- específicamente cys-Xaa-xaa- Xaa-mimético farnesilado: GB-A 2.276.618. Otros compuestos péptido-miméticos: US 5.352.705, WO 94/00419; WO 95/00497; WO 95/09000; WO 95/09001 ; WO 95/12612; WO 95/25086; EPA 675.112; y FR-A 2.718.149. Los derivados farnesilo: EPA 534.546; WO 94/19357; WO 95/08546; EPA 537.007; y WO 95/13059. Productos naturales y derivados: WO 94/18157; US 5.430.055; GB-A 2.261.373; GB-A 2.261.374; GB-A 2.261.375; US 5.420...334; US 5.436.263. Otros compuestos: WO 94/26723; WO 95/08542; US 5.420.157; WO 95/21815; WO 96/31501 ; WO 97/16443; WO 97/21701 ; U.S. 5.578.629; U.S. 5.627.202; WO 96/39137; WO 97/18813; WO 97/27752; WO 97/27852; WO 97/27853; WO 97/27854; WO 97/36587; WO 97/36901 ; WO 97/36900; WO " * §?/36898; WO 97/36897 WO 97/36896; WO 97/36892; WO 97/36891 ; WO §7/36890; WO 97/36889 WO 97/36888; WO 97/36886; WO 97/36881 ; WO §7/36879; WO 97/36877 WO 97/36876; WO 97/36875; WO 97/36605; WO •97/36593; WO 97/36592; WO 97/36591 ; WO 97/36585, WO 97/36584; y WO S7/36583. Un plásmido que codifica una unidad a- y una unidad ß de un FPT, y que describe un ensayo para el mismo: WO 94/10184. También se hace referencia a la Solicitud de Patente Norteamericana acta N° 09/217.335 y a la Solicitud de Patente Internacional n° PCT/US98/26224, que describe una variedad de métodos para combinar los inhibidores FPT con agentes quimioterapéuticos y/o con terapia de radiación para el tratamiento de 10 enfermedades proliferativas tales como cáncer. Todos los documentos precedentes dirigidos a compuestos que son inhibidores de FPT se incorporan aqui como referencia a los mismos. Una revisión de muchos de dichos compuestos ha sido dada por Graham ¡n Exp. Opin. Ther. Patents (1995) 5(12) 1269-1285. Se comprenderá que la amplitud de una fórmula química en una memoria 15 de Patente puede no permitir la clasificación de todos los compuestos de la misma bajo uno de los precedentes encabezamientos. Por ejemplo la cadena monoierpenilo en los derivados farnesilo puede extenderse en una cantidad de grupos metileno o incluso otro residuo isopreno. Los tetrapéptidos de la fórmula Cys-Xaa1-Xaa2-Xaa3 tienen un residuo cisteína amino-terminal. Un tetrapéptido de este tipo forma el carboxilo-terminal 20 de ras. Dichos tetrapéptidos son capaces de adherirse con FPT y competir con Ras. Los compuestos de estructura similar pero que tienen por lo menos uno de los grupos carbonilo de! tetrapéptido reemplazados con un grupo hidrocarbílo tal como un grupo metileno y que están clasificados precedentemente como compuestos péptido-mimético son también capaces de adherirse con FPT y de competir con ras, pero generalmente son más resistentes a la degradación enzimática in vivo. INHIBIDORES FPT-COMPUESTOS EJEMPLIFICADOS 5 Los siguientes documentos describen inhibidores FPT preferidos para ser usados en la presente invención. Los documentos describen también métodos para inhibir desarrollo anormal de células (por ejemplo tumores) usando los compuestos descriptos en el documento. Las designaciones de radicales y fórmulas definidos aquí para un documento particular se aplican únicamente a los compuestos descriptos en este documento. La WO 95/10516 publicada el 20 de Abril de 1995 y la WO 97/30363 10 publicada el 3 de Octubre de 1996, describen compuestos de fórmula 1.0: o una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato de la misma donde: uno de a, b, c y d representa N o NR9 donde R9 es O-, -CH3 o -(CH2)nC02H donde n es 1 a 3, y los grupos a, b, c y d remanentes representan CR1 o CR2; o cada uno de a, b, c y d están independientemente seleccionados de CR1 y 20 CR2; cada R1 y cada R2 está independientemente seleccionado de H, halo, -CF; OR10, -COR10, -SR10, -S(O),R11 (donde t es O, 1 o 2), SCN, -N(R10)2, -N02, -OC(O)Rl0, -C02R10, -OC02Rn, -CN, -NHC(O)Rl0, -NHS02R10, -CONHRl°, -CONHCH2CH2OH, - NRIOCOOR1 !, -SRUC JOR1!, -SR11N(R75)2 donde cada R75 está independientemente seleccionado entre H y - C(0)OR11, benzotriazol-1-iIoxi, tetrazoi-5-ilt?o, tetrazol-5-iltio substituido, alquinilo, aiquenilo, estando dichos grupo alquilo o alquenilo opcionalmente substituido con halo, -OR10 o -CO2R10; R3 y R4 son iguales o diferentes y cada uno representa independientemente H o cualquiera de los substituyentes R1 y R2, o R3 y R4 tomados conjuntamente representan un anillo Cs-C7 saturado o insaturado fusionado al anillo benceno; cada uno de R5, Re, R7 y R8 representa independientemente H, -CF3, - COR10, alquilo o arilo, estando dicho alquilo o arilo opcionalmente substituido con -OR10, -SR10, -S(0)tR11, -NR10COOR11, -N(R10)2, -N02, -COR10, -OC02R11, - C02R10, o OP03R1°, o uno de R5, R6, R7 y R8 pueden ser tomados conjuntamente en combinación con R40 tal como se define más abajo para representar -(CH2)r- donde r es 1 a 4 que puede estar substituido con alquilo inferior, alcoxi inferior, - CF3 o ariio, o R5 está combinado con R6 para representar =0 o =S y/o R se combina con R8 para representar =0 o =S; R10 representa H, alquilo, arilo o aralquiio; R ,11 representa alquilo o arilo, X representa N, CH o C, donde C puede contener un doble enlace opcional representado por la linea de puntos, con el átomo de carbono 1 1 ; la línea de puntos entre los átomos de carbono 5 y 6 representa un doble enlace opGional de modo que cuando esta presente un doble enlace, A y B independientemente representan -R10, halo, -OR11, -OC02R11 o -OC(0)R1°, y cuando no está presente ningún doble enlace entre los átomos de carbono 5 y 6, cada uno de A y B, independientemente representa H2, - (OR11)2, (H y halo), dihalo, (alquilo y H), (alquilo) (H y - OC(0)R1°), (H y -ORA0), =0, (arilo y H), =NOR10, o -0-(CH2)p- O- donde p es 2, 3 o 4, R representa R40, R42. R44, o R54, tal como se define más adelante, R40 representa H, aplo, alquilo, cicloalquiio, alquenilo, alquinilo o -D donde -D representa donde R3 y R4 son tal como se han definido anteriormente y W es O, S o NR 40 donde R10 es tal como se han definido mas arriba, estando dichos grupos R' cicloalquílo, alquenilo y alquinilo opcionalmentes substituidos con desde 1-3 grupos seleccionados de halo, -CON (R10)2, arilo, -C02R10, -OR12, -SR12, -N(R10)2, -N(R10)2, -N(R10)C02R11, -COR12, -N02 o D, donde -D, R10 y R11 son tal como se han definido más arriba y R12 representa R10, -(CH2)mOR10 o -(CH2)qC02R10 donde R10 es tal como se definió previamente, m es 1 a 4 y Q es 0 a 4; dichos grupos - >'?i H v alquenilo y alquinilo R40 no contienen -OH, -SH o -N(R10)2 en un carbono que contiene un doble o triple enlace; o R40 representa fenilo substituido con un grupo seleccionado de -S02NH2, - NHSO2CH3, -S02NHCH3, -S02CH3, -SOCH3, -SCH3, y -NHS02CF3, cuyo grupo c está preferentemente situado en posición para del anillo fenilo; o R40 representa un grupo seleccionado de R representa 20 R 20 —C- R46 R 21 - - donde R20, R21 y R46 están cada uno independientemente seleccionados del grupo que consiste en- (1 ) H; (2) -(CH2)qSC(0)CH3 donde q es 1 a 3; (3) -(CH2)q0S2CH3 donde q es 1 a 3; (4) -OH; (5) -CS-(CH2)W- (fenilo substituido) donde w es 1 a 3 y los substituyentes en dicho grupo fenilo substituido son los mismos substituyentes descriptos bajo (12) siguiente para fenilo substituido; (6) -NH2; (7) -NHCBZ; 10 (8) -NHC(0)OR'22 donde R22 es un grupo alquilo que tiene de 1 a 5 átomos de carbono o R22 representa fenilo substituido con 1 a 3 grupos alquilo; (9) alquilo; (10) -(CH2)k-feni!o donde k es 1 a 6; (1 1) fenilo; (12) fenilo substituido donde los substituyentes están seleccionados del 15 grupo que consiste en: halo, N02, -OH, -OCH3, -NH2, -NHRa -N(R22)2, alquilo, - 0(CH2)rfenilo (donde t es de 1 a 3) y -0(CH2)pfenilo substituido (donde t es de 1 a 3); (13) naftilo; (14) naftilo substituido, donde los substituyentes son ta! como se han definido para fenüo substituido bajo (12) precedente; 20 (15) hidrocarburo policiclicos puenteados que tienen de 5 a 10 átomos de carbono; (16) cicloalquilo que tiene de 5 a 7 átomos de carbono; (M\ hotornarilrv j ?*. í*?^tl,?*,é,*.. &?*&tb. *. *.t?á¡b Ut ?* .. _ . _j .».*__ -^ *, ,**.! , .... . J i&.«faiJ-ftS. «*... - - - (18) hidroxialquilo; (19) piridilo substituido o N-óxído de piridilo substituido donde los substituyentes están seleccionados entre metilpiridilo, morfolinilo, imidazolilo, 1- piperidinilo, 1-(4-metiipiperaz?nilo), -S(0)tR11, y cualquiera de los substituyentes que se dan bajo (12) precedente para fenilo substituido y dichos substituyentes están unidos a un carbono del anillo por reemplazo del hidrógeno unido a dicho carbono; (20) (21) (22) (23) -NHC(O)-(CH2) -fen?lo o -NH(0)-(CH2)k-(fenilo substituido), donde dicho k es tal como se ha definido bajo (10) precedentemente; (24) anillo V piperidina: donde R50 representa H, alquilo, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, haloalquilo o - C(0)NH(R10) donde R10 es H o alquilo; (25) -NHC(0)CH2C6H5 o -NHC(0)CH (C6H5 substituido); (26) -NHC(0)OC6H5; - (27) (28) (29) (30) -OC(O)-heteroar?lo (por ejemplo p?pd?na-4-carbon?lox?) (31 ) -0-alqu?lo (por ejemplo OCH3), (32) -CF3, (34) un grupo heterocicloalquilo de formula (35) un grupo pipepdinilo que tiene la formula donde RBb es H, alquilo o alquilo substituido con -OH o -SCH3, o 46 Rzo o R21 tomados conjuntamente forman un grupo =0 y R D remanente es ta! como se definió más arriba, o dos de R20, R21 y R46 tomados conjuntamente forman el anillo pipepdipa V - - donde R50 es tal como se definió bajo (24) precedentemente; con la condición de que R46, R20 y R21 están seleccionados de manera que el átomo de carbono al cual están unidos no está unido a más de un heteroátomo; R4 representa -NR R donde R representa heteroarilo, N- metilpiperidinilo y arilo y R48 representa H o alquilo; R54 representa un grupo heterociclico N-óxido que tiene la fórmula (i), (ii), (¡ii) o (iv): donde R ,586, R58, y R60 son diferentes y cada uno está independientemente seleccionado de H, halo, -CF3, -OR10, -C(O)Rn0, -SR10, -S(0)eR11 (donde e es 1 o 2), -N(R??)2, -N02, -C02R1U, -OC02R , -OCOR10, alquilo, arilo, alquenilo y , 10 , 10\ alquinilo, donde el alquilo puede estar substituido con -OR10, -SR1U o -N(R ,?)2 y cuyo alquenilo puede estar substituido con OR11 o SR11; o R54 representa un grupo heterocíclico de N-óxido que tiene la fórmula (ia), (iia), (iiia) o (iva): donde y representa N+ -O- y E representa N; o R64 representa un grupo alquilo substituido con uno de dichos grupos N- óxido heterocíclicos (i), (ii), (¡ii), (iv), (ia), (iia), (iüa), (iva); y Z representa O o S de modo que R puede ser tomado en combinación en con R5, R6, R7 o R8 tal como se ha definido más arriba o R representa R40, R42, R •? o R 54 WO 97/23478 publicada el 3 de Julio de 1997, y que se incorpora aquí expresamente como referencia describe los compuestos: -3 - enantiomero (-) (-) - enantiomero (+) - epanliomero - (+) - ' enaptiomero (-)- enaptiomero (-) - epaptiomero (-)- enantiomero (+)-' enaptiomero - (-) - ' epantiomero (+) - enaptiomero (-) - enantiomero (+)- enaptiomero (+) - enantiomero (-) enaptiomero (-) - enantiómero (+) - enaptiomero (+)-< enantiómero - - y ¡as sales farmacéuticamente aceptables del mismo. Un compuesto preferido que se usa como inhibidor FPT en el método de la presente invención tiene la fórmula: 10 15 es decir., " el compuesto 4-[2-[4-[(8-cloro-3,10-dibromo-6,1 1-dihidro-5H- benzo[5,6]c¡clohepta[1 ,2-b]p¡r?dina-1 1-i!]-1-piperid¡nil]-2-oxoet¡l]-1- pipendinacarboxamida, preferiblemente el (+)-isomero de! mismo que tiene la estructura - Ver también las Patentes Norteamericanas N° 5.719.148 (concedida el 17 de Febrero de 1998) y 5 874.442 (concedida el 23 de Febrero de 1999), que se incorporan expresamente aquí como referencia. La Solicitud de Patente Norteamericana USSN 09/216.398, que se incorpora aquí como referencia describe compuestos que son útiles para la inhibición de FPT representados por la fórmula: o una sal farmacéuticamente aceptable o solvato del mismo donde: ' uno de a, b, c y d representan n o N+ O- y los grupos a, b, c, ó remanentes representan CR1 o CR2; o cada uno de a, b, c y d están independientemente seleccionados de CR1 o CR2: X representa N o CH cuando el enlace opcional (representado por la linea de puntos) está ausente y representa C cuando el enlace opcional está presente; ia línea de puntos entre los átomos de carbono 5 y 6 representa un enlace opcional de modo que cuando está presente un doble enlace, A y B independientemente representan -R15, halo, -OR16, -OCO2R16 o -OC(0)R15, y cuando no está presente ningún doble enlace entre los átomos de carbono 5 y 6 A y B representan cada uno independientemente H2, -(OR6)2, H y halo, dihalo, alquilo y H, (alquilo)2, -H y -OC(0)R15, H y -OR15, =0, arilo y H, =NOR15 o -O-(CH2)p-0-donde p es 2, 3 o 4; cada R1 y cada R2 están independientemente seleccionados de H, halo, -CF3, -OR15 (por ejemplo., -OCH3), -COR15, -SR15 (por ejemplo -SCH3 y -SCH2C6H5), -S(0),R16 (donde t es O, 1 o 2, por ejemplo -SCH2C02CH3), -SR16N(R17)2 donde cada R17 está independientemente seleccionado entre H y -C(0)OR16 con ia condición de que R15 no sea -CH2- (por ejemplo -S(CH2)2NHC(0)0-t-but¡lo y -S(CH2)2NH2), benzotriazol-1-iloxi, tetrazol-5-iltio, o tetrazol-5-iltio substituido (por ejemplo, tetrazol-5-iltio alquilo substituido tal como 1-metil-tetrazol-5-ilt¡o), alquinilo, alquenilo, o alquilo, dicho grupo alquilo o alquenilo estando dicho grupo alquilo o alquenilo opcionalmente substituido con halo, -OR15 o -C02R15; R3 y R4 son ¡guales o diferentes y cada uno representa independientemente H, cualquiera de los substituyentes de R y R2 o R3 y R4 tomados conjuntamente representan un anillo Cs-C saturado o insaturado fusionado con el anillo benceno (anillo lll); R5, R6 y R7 representan cada uno independientemente H, -CF3, -COR10, alquilo o arilo, estando dicho alquilo o arilo opcionalmente substituido con -OR15, -SR15, -S(0)tR16, -NR15COOR16, -N(R15)2, -NO2, -COR15, -OCOR15, -OC02R15, -C02R1' , OP03R15, o R5 está combinado con R6 para representar =0 o =S; R8 está seleccionado de: H, alquilo C3 a C4 (preferiblemente una cadena alquilo ramificada y más preferiblemente una cadena alquilo C4-C7 ramificada), arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, alquilo substituido, arilo substituido, arilalquilo substituido, heteroarilo substituido, heteroarilalquilo substituido, cicloalquilo substituido, cicloalquilalquilo substituido; los substituyentes para los grupos R8 substituidos están seleccionados entre: alquilo, arilo, arilaiquilo, cicloalquilo, -N(R18)2, -OR18, ciclcalquilalquilo, halo, 8"*-t j-*"- *•'"«• '?"S2?^a^ití¡ÉiAímM?^tíÍ CN, -C(0)N(R18)2 o -C02R18; con la condición de que los substituyentes -OR1 y -N(R18)2 no están unidos al carbono que está unido ai N de la porción -C(0)NR ; cada R18 está independientemente seleccionado de: H, alquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo o cicloaiquilo; R19 y R10 están independientemente seleccionados de H, alquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquüo, cicloalquilo o -CON(R18)2 (donde R es tal como se ha definido anteriormente), y los grupos R9 y R10 substituibles están opcionalmente substituidos con uno o más (por ejemplo 1-3) substituyentes seleccionados de. alquilo (por ejemplo, metilo, etilo, isopropilo y similares), cicloalquilo, arilalquilo o heteroarilalquüo (es decir los grupos R9 y/o R10 pueden estar no substituidos o pueden estar substituidos con 1-3 de los substituyentes descpptos más arriba excepto cuando R9 y/o R10 es H); o R9 y R10 conjuntamente con el átomo de carbono al cual están unidos forman un anillo cicloalquilo C3-C6; R11 y R12 están independientemente seleccionados de: H, alquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, cicloalquilo, -CON(R18)2 -OR18 o -N(R 8)2; donde R18 es tal como se ha definido más arriba; con la condición de que los grupos -OR18 y -N(R18)2 no están unidos a un átomo de carbono que es adyacente a un átomo de nitrógeno; y donde dichos grupos R 1 y R12 están opcionalmente substituidos con uno o más (por ejemplo 1-3) substituyentes seleccionados de alquilo (por ejemplo metilo, etilo, isopropilo y similares) cicloalquilo, arilalquilo, o heteroarilalquüo; o R11 y R12 conjuntamente con el átomo de carbono al cual están unidos forman un anillo cicloalquilo C3 a C6; R13 es un anillo imidazolilo seleccionado de: ~ ......... . .. . . . . .. *, ^^.^ .^faAi JJM donde R19 está seleccionado de: (1 ) H, (2) alquilo, (3) alquilo, (4) arilo, (5) arilalquilo, (6) arilalquüo substituido donde los substituyentes están seleccionados entre halo (por ejemplo F y Cl) o CN, (7) -C (arilo)3 (por ejemplo -C (fenilo)3, es decir tritiio u (8) cicioalquilo; dicho anillo imidazolilo 2 0 o 2.1 está opcionalmente substituido con uno o n dos substituyentes y dicho anillo ¡midazol 4.0 está opcionalmente substituido con 1-3 substituyentes y dicho anillo imidazol 4.1 'está opcionalmente substituido con un substituyentes donde dichos substituyentes opcionales para ¡os anillos 2.0, 2.1 , 4.0 y 4.1 están unidos a los átomos de carbono de dichos anillo imidazol y están independientemente seleccionados entre -NHC(0)R18, -C(R )2OR , -OR1 , -SR18, F, C!, Br, alquilo ariio, arilalquilo, cicloalquilo, o -N(R18)2, R18 es tal como se ha definido anteriormente; cada R34 está independientemente seleccionado de H o alquilo (preferiblemente -CH3), preferiblemente H; R35 está seleccionado de H, - C(0)OR20, o -C(0)NHR20, y R20 es tal como se define a continuación (preferiblemente R20 es alquilo o cicloaiquilo, más preferiblemente ciclopentilo o ciciohexilo); Q representa un anillo arilo (por ejemplo fenilo), un anillo cicioalquilo (por ejemplo ciclopent o o ciciohexilo) o un anillo heteroarilo (por ejemplo furanilo, pirrolilo, tienilo, oxaiilo o tiazoiilo); (ejemplo del grupo -C(R3 )2OR incluyen -CH2OH, -CH2OC(0)OR2° y -CH2OC(0)NHR20); R , 14 está seleccionado de: " .

O O O .A' 'C.H../ O .A' . R 36 .so. / R .:20 (5.0) (6.0) (7.0) (7.1 ) or (8. o; R15 está seleccionado de H, alquilo, arilo o arilalquilo; R16 está seleccionado de: alquilo o arilo, R20 está seleccionado de: H, alquilo, alcoxi, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo o heterocicioalquilo con la condición de que R2 no es H cuando R14 es el grupo 5.0 u 8.0; cuando R20 es distinto de H, entonces dicho grupo R20 está opcionalmente 10 substituido con uno o más (por ejemplo 1-3) subsituyentes seleccionados de : halo, alquilo, arilo, -OR1d o -N(R18)2, donde cada grupo R18 es igual o diferente y donde R18 es tal como se ha definido más arriba, con la condición de que dicho substituyentes opcional no esté unido a un átomo de carbono que es adyacente a un átomo de oxigeno o nitrógeno; R21 está seleccionado de H, alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, 15 heteroarilo, heteroarilalquilo o heterocicioalquilo; cuando R21 es distinto de H, entonces dicho grupo R21 está opcionalrnente substituido con uno o más (por ejemplo 1-3) substituyentes seleccionados de' halo, alquilo, arilo, -OR18 o -N(R18)2, donde cada grupo R18 es igual o diferente y donde R18 es tal como se ha definido más arriba, con la condición de que dicho substituyentes opcional no está unido a un átomo de carbono que es adyacente a 20 un átomo de oxígeno o nitrógeno; n es C-5, cada R32 y cada R33 para cada n (es decir., para cada grupo -C(R32)(R33)- está independientemente seleccionado de: H, alquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, cicloaiquilo, -CON(R18)2, -OR18 o -N(R18)2; donde R18 es tal como se ha definido más arriba; y donde dichos grupos R y R" substituibles están opcionaimente substituidos con uno o más (por ejemplo 1-3) substituyentes seleccionados de alquilo (por ejemplo metilo, etilo, isopropilo, y similares), cicloalquilo, arilalquilo o heteroarilalquilo; o R32 y R33 conjuntamente con el átomo de carbono al cual están unidos forman un anillo cicloalquiio C3 a C6; y R3S está seleccionado de cicloalquilo, heterocicloalquilo o arilo (por ejemplo fenilo); y con la condición de que: (1 ) cuando R14 está seleccionado de e! grupo 6.0, 7.0, 7.1 , o 9.0 y X es N, entonces R8 está seleccionado de: alquilo C3-C10, alquilo C3 a C10 substituido, arilalquilo, arilalquilo substituido, heteroarilalquilo, heteroarilalquilo substituido, cicloalquilalquilo, o cícloalquilalquilo substituido; (2) cuando R14 está seleccionado de: grupo 6.0, 7.0, 7.1 u 8.0 y X es N y Re es H entonces ia cadena alquilo entre R13 (es decir el anillo imidazol 2.0, 4.0, o 4.1 ) y la porción amida (es decir el grupo -C(O)NR18) está substituido, es decir., (a) por ¡o menos uno de R9, R10, R11, R12, R32, R33 es distinto de H, y/o (b) R9 y R10, y/o R11 y R12, se toman conjuntamente para formar un anillo cicloalquilo; (3) cuando R14 es un grupo 5.0 y X es N y R6 es H, entonces la cadena alquilo entre R1" (es decir, el anillo ¡mia'azoi 2.0, 4.0 o 4.1 ) y la porción amida (es decir el grupo -C(0)NR18) está substituido, es decir., (a) por lo menos uno de Rs, 10, R1 , R12, R32, R33 es distinto de H, y/o (b) R9 y R10, y/o R11 y R12, se toman conjuntamente para formar un anillo cicloalquilo; Los inhibidores FPT preferidos incluyen péptidos y compuestos péptidos- miméticos y compuestos tríciicos de anillos fusionado de los documentos precedentes (que han sido ya incorporados aquí como referencia a los mismos).

Los más preferidos son los compuestos triciclicos de anillo fusionado y más preferidos aún son los compuestos de WO 97/23478. La inhibición de FPT y la actividad antitumoral de los compuestos usados como inhibidores de FPT en esta invención pueden determinarse mediante métodos conocidos en el arte- ver por ejemplo, los Ensayos de Enzimas In Vitro, Ensayos a base de células, Ensayos Mat de Células, y los Estudios Antitumorales In Vivo de la WO 95/10516 publicada el 20 de Abril de 1995 y el Ensayo en Agar Blando en la WO 97/23478 publicado el 3 de julio de 1997. USO DE QUIMIOTERAPIA Y/O TERAPIA DE RADIACIÓN COMO AGENTES ADICIONALES EN LOS TRATAMIENTOS DE LA PRESENTE INVENCIÓN Los agentes quimioterapéuticos y/o de radiación pueden agregarse opcionalmente a ios regímenes de tratamiento de la presente invención (además de la combinación de (1 ) un inhibidor de transferasa de proteína farnesilo FPT, y (2) un inhibidor de señalización de la vía Ras adicional). Para ser usado en quimioterapia y/o terapia de radiación en combinación con un únicamente un inhibidor FPT puede hacerse referencia a Liu, M., et al. Cáncer res. 58:4947- 4956 (1998) y la solicitud de Patente Norteamericana USSN 98/217.335, que se incorporan aquí como referencia. Las clases de compuestos que pueden usarse como agente quimioterapéutico incluyen agentes alquilantes, antimetabolitos, productos naturales y sus derivados, hormonas y esteroidos (incluyendo análogos de síntesis y sintéticos). Ejemplos de compuestos dentro de estas clases son los que se dan a continuación. Agentes alquilantes (incluyendo mostazas de nitrógeno, derivados de etilenimina, sulfonatos de alquilo, nitrosoureas y triazenos); mostaza de uracilo, Clormetina, Ciclofofamida (Cytoxan®), Ifosíamida, Melfalan, Clorambucil, y; * 4** >«? *?«, Pipobroman, Trietilen-melamina, Trietilenotiofosforamina, Busulfan, Carmustina, Lomustina, Streptozocina, Dacarbazina, y Temozolomida. Antimetaboiitos (incluyendo antagonistas de ácido fólico, análogos de pirimid'ma, análogos de purina e inhibidores de adenosina desaminasa); 5 Metotrexato, 5-Fluoruracüo, Floxuridina, Citarabina, 6-Mercaptopurina, 6- Tioguanina, fosfato de Fludarabina, Pentostatina, y Gemcitabina. Productos naturales y sus derivados (incluyendo alcaloides vinca, antibióticos antitumorales, enzimas, linfoquinas y epipodofilotoxinas): Vinblastina, Vincristina, Vindesina, Bleomicina, Dactinomicina, Daunorubicina, Doxorubicina, Epirubicina, Idarubicina, paclitaxel (paclitaxel es comercialmente obtenible como Taxol ®), Mitramicina, Deoxico-formicina, Mitomicina-C, L-Asparginasa, Interferones (especialmente IFN-a), Etoposida, y Teniposida. Hormonas y Esteroides (incluyendo análogos sintéticos); 17a- Etiniiestradiol, Dietilestilbestrol, Testosterona, Prednisona, Fluoximesterona, Propionato de Dromoestanolona, Acetato de Megestrol, Tamoxifen, Metilprednisolona, Metiltestosterona, Prednisolona, Triamsinolona, Clorotrianiseno, Hidroxiprogesterona, Aminoglutetimida, Estramustina, Acetato de 15 Medroxiprogesterona, Leoprolida, Flutamída, Toremifeno, Zoladex. Sintéticos (incluyendo complejos inorgánicos tales como complejos de coordinación de platino). Cisplatina, Carboplatina, Hidroxiurea, Amsacrina, Procarbazina, Mitotano, Mitoxantrona, Levamisol, y Hexametilmelamina. Métodos para una administración segura y eficaz de la mayor parte de estos agentes quimioterapéuticos son conocidos por los expertos en la materia. 20 Además su administración ha sido descripta en ¡a literatura convencional. Por ejemplo la administración de muchos de los agentes quimioterapéuticos ha sido descripta en "Physicians' Desk Reference" (PDR), por ejemplo 1996 edición (Medica! Economics Company, Mcn.tvale, NJ 07545-1742, USA); cuya descripción incorpora aqui como referencia. EJEMPLOS Los ejemplos provistos a continuación describen el efecto de la combinación de un inhibidor FPT (SCH 66336) con un inhibidor MEK (cualquiera de PDO98059 u U0126) para la muerte programada de las células (apoptosis) en las células Rat2 transformadas con H-Ras. De manera similar a las líneas de células tumorales, estas células exhiben un fenotipo totalmente transformado que incluye la capacidad de desarrollarse independientemente de fijación en agar blando y como xenoinjertos en ratones. El compuesto inhibidor FPT usado en los ejemplos siguientes (SCH 66336, Schering-Plough Research Institute) tiene la siguiente fórmula: "PD 098059", es un ¡nhibidor MEK particular que tiene la siguiente estructura química.

PD 098059 se describe en forma más detallada en Dudley et al., 1995. La referencia de Dudley et al., menciona que el sólido iiofüizado debe reconstituirse en DMSO para las concentraciones de reactivo usadas en los experimentos que se describen aquí. Otro ejemplo de un inhibidor MEK" tiene ia siguiente estructura química UO 126"- * * & . 52 - U0126 se describe en forma más detallada en Favata et al., 1998. ia referencia de Favata et al., menciona también que el sólido liofil?zado debe reconstituirse en DMSO para las concentraciones usadas en los experimentos que se describen aqui. Materiales y Métodos Lineas de células y tratamiento En todos los casos las secuencias Ras contenían una mutación activadora de Gly12 a Val. H-ras (G12V; CVLL) representa una mutación Ser189 a la Leu que genera una forma geranil geranilada de la proteípa H-ras. Loas ADNc que 10 representan estas proteinas H-ras fueron subclonadas en el plásmido pMV7 para la generación de líneas de células Rat2 que expresan ras estables mediante retroversión retroviral y selección con el gen de neomicina (kirschmeier et al., 1988). Las líneas de células estables presentadas aquí representan clones individuales de células seleccionadas de neomicina que expresan ras. Las H-ras (G12V)/Rat2, H-ras (G12V;CVLL)/Rat2, y las células parentales Rat2 fueron 15 propagadas en DMEM que contenían 10% de suero de ternero fetal, penicilina, estreptomicina, aminoácidos no esenciales, L-glutamina y para los transformantes Ras, 200 µg/ml Geneticin (Gibco/BRL; Gaíthersburg, MD). Todas las céluías ras transformadas demostraron un fenotipo totalmente transformado que incluye el desarrollo independiente de la fijación y capacidades tomorígenas. PD098059 (A385-023-M005; Alexis Corporation; San Diego, CA) y UO 26 20 (#V1121 ; Promega Corporation; Madison, Wl) y fueron usados de acuerdo con Dudley et al., (1995) y Favata et a!., (1998). Análisis FACS El análisis FACS se llevó a cabo usando protocolos convencionales, las células fueron cosechadas mediante tratamiento con tripsina EDTA, la tripsina se neutralizó con DMEM pue contenía 10% de FCS y las células fueron granuladas a razón de 500 x g durante 5 minutos. Las células se lavaron con PBS, se granularon, se resuspendieron en 0,5 ml de PBS, y se fijaron con 10 ml de acetona:metanol enfriado con hielo (1.1) durante 30 minutos a -20 °C. Para rotular el ADN cromosomal con ioduro de propidio (Pl), se lavaron dos veces las células fijadas con PBS, antes de resuspenderias a razón de 1 x 106 células/ml en PBS, 75 µg/ml de Pl (Calbiochem; La Jolla, CA), 500 µg/ml RNasa (Sigma; St. Louis, MO), para una incubación de 30 minutos a temperatura ambiente. Las células fueror filtradas a través de una tapa filtradora de 35 µm (Becton Díckinson; Franklin Lakes, NJ) y se almacenaron a 4 °C antes del análisis FACS en un FACS Calibur (Becton Dichkinson; Mountain View, CA). La quantificaci?n se ¡levó a cabo usando CelIQuest (Becton Dickinson, Mountain View, CA) Ensayo de actividad de Caspasa Las células Rat2 transformadas y Rat2 parentaies de H-ras se trataron con 20 µM PD098059, 0,5 µM SCH 66336 o una combinación de las dos drogas durante 36 horas a 37 °C. Las células se cosecharon con tripsma/EDTA, se granularon a 500 x g durante 5 minutos, se lavaron con PBS, y fueron nuevamente granuladas. Las células fueron resuspendidas/lisadas en un buffer de lisis (ApoAlert CPP32/Caspase-3 Assay Kit; Clontech Laboratories; Palo Alto CA) que contenía inhibidores de proteasa "Complete" (Boehringer Mannheim; Germany), incubados durante 10 minutos en hielo y se centrifugaron durante 3 minutos a 12000 rpm a 4 °C tal como se recomienda en el Protocolo Clontech. La concentración de proteína de ¡os usados de células se determinó usando el ensayo de proteína BCA (pierce; Rockford, ¡L) y aproximadamente 30 µg de cada lisado fue ensayado para la actividad de Caspasa-3 por fluormetría (lector de placa (CytoFluor; Perspective Biosystems; Framingham, MA) usando un substrato peptídico fluorgenico (Ac-DEVD-AFC; Clontech; Palo Alto, CA). Análisis de Borrón Western de! estatus de fosforilación de ERK .2 Se usaron las células en un buffer detergente (provisto de ApoAlert CPP32/Caspase-3 Assay Kit; Clontech; Palo Alto CA) y se centrifugaron a 14000 rpm durante 15 minutos a 4 °C para granular ios residuos celulares. La concentración de proteina del sobrenadante resultante se determinó mediante el ensayo de proteína BCA (Pierce; Rockford, IL). Se separaron las proteínas celulares (20 µg) en 8-16% de geles de Tris-Glycina poüacrüamida (Novex; San Diego, CA) y se transfirieron a membranas de PVDE para el análisis del Borrón Western. Las proteínas fosforiladas ERK1 y ERK2 fueron detectadas usando un anticuerpo policlonal de conejo específico para la forma fosforilada de las proteínas p42/44 MAPK (phosfho-Thr202 Tyr204 específicas; New England Biolabs, Inc., Beverly MA). Las proteínas totales ERK1 y ERK2 se detectaron usando un anticuerpo policlonal de conejo especifico para ¡as proteinas p42/44 MAPk (New England Biolabs, Inc; Beverly, MA). Un anticuerpo secundario de anticonejo-HRP de cabra (Chemicon; Temecula, CA) permitió la visualización mediante quimiolumipiscencia mejorada (SuperSignal West Pico Chemiluminescent Substrate; Pierce, Rockford, IL). Resultados 1. Efectos sobre la apoptosis: clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS): Las respuestas apoptóticas celulares pueden monitorearse en una variedad de formas que incluyen análisis de la fragmentación de ADN cromosoma!, clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS) de células teñidas por ioduro de propidio, y medición de la activación de caspasa. Para evaluar la respuesta apoptótica al tratamiento con cualquiera de las drogas se coloreo el ADN cromosomal de ¡as células tratadas con ¡oduro de propidio y se analizaron las células individuales mediante FACS. Las poblaciones típicas de cultivo de células exhiben, un gran pico de célula en la fase G1-G0 de! ciclo dlular con un pico menor que representa ¡as células de fase G2/M. Entre estos •dos picos están células en la fase S de! ciclo celular. Las células que exhiben rotulación de ADN que están antes del pico G1/GO que representan células con AON fragmentado comprenden menos de la cantidad diploide del ADN cromosomal y por lo tanto están sometidas a muerte celular (Dengler, et al., 1995). Esta medición provee una relativa cuantificación de la apoptosis que es comparable con otros ensayos de apoptosis que incluyen dUTP intermediada por TdT, rotulación de extremo con muesca (Análisis TÚNEL); Gorczyca et al., (1993) Cáncer Res. 53- 1945-51 . En los experimentos siguientes, se determinó el porcentaje de población total de células en el pico subGO/G1 como medición del porcentaje de apoptosis. El tratamiento de las células Rat2 transformadas con H-Ras con PDO098059 solo durante 36 horas dio como resultado un aumento de porcentaje de células apoptóticas que dependen de la dosis (Figura 2). En una concentración de 20 µM PDO098059, el 50% de las células fueron apoptóticas. Cuando se repitió ¡a respuesta a la dosis de PDO98059 en presencia de 100 nM de SCH 66336 se observó un resultado muy diferente En presencia de 100 nM de SCH 66336 s Jo, 30% de las células fueron apoptóticas. Cuando se trató con la combinación, más del 60% de las células fueron arrastradas hasta la apoptósis usando tampoco como 2,5 µm PDO098059. La concentración de PDO098059 requerida para lograr una apoptosis dei 50% fue de 20 µ cuando este compuesto se usó solo, pero fue de < 1 µM cuando se usó en combinación con un inhibidor FPT. Esto indica que SCH 66336 sensibiliza las células en forma significativa par los efectos pro-apoptoticos de PD098059. También se llevó a cabo un experimento inverso. Ei tratamiento con SCH 66336 solo durante 36 horas indujo una respuesta apoptotica dependiente de la dosis (Fig. 3). Usando 0,75 µM SCH 66336, 70% ¡as células fueron apopíóticas.

•** Cuando se usó solo, la concentración de SCH 66336 requerido para inducir el 50% de la apoptosis fue de entre 0,25 - 0,5 µM. La curva de respuesta a la dosis para SCH 66336 exhibió un desplazamiento para la izquierda en presencia de 2,5 µ PDO98059 lo cual significó una respuesta apoptotica mejorada. Cuando 5 estaba presente PD098059 la concentración de SCH 66336 requerida para inducir el 50% de la apoptosis fue de 50 nM. Un conjunto similar de experimentos se llevó a cabo con un ¡nhibidor MEK estructuralmente distinto U0126 (Fig. 4). De manera similar a PD098059, U0126 es un inhibidor muy selectivo de las proteínas MEK1.2 es un inhibidor muy selectivo de ¡as proteínas MEK1.2 que exhibe una potente inhibición de su -jQ actividad de quinasa (Farata, et aL, 1990). El tratamiento con U0126 solo dio como resultado una inducción dependiente de la dosis de la apoptosis en células Rat2 transformadas con H-Ras con 17% de células apoptóticas observadas usando una concentración de 10 µM. Cuando se repitió este experimento en presencia de 0,5 µM de SCH 66336 (una concentración que indujo 14% de apoptósis por si misma), se observó una respuesta más que aditiva con la combinación. La combinación de 10 µM U0126 y 0,5 µlvl de SCH 66336 dio como 15 . resultado más de 50% de las células convertidas en apoptóticas. Estos datos demuestran un aumento significativo de la potencia pro- apoptótica en las células Rat2 transformadas con H-Ras de los inhibidores MEK y los inhibidores SCH 66336 cuando se probó en combinación. En contraste con estos resultados, ¡as células Rat2 parentales no transformadas o las células Rat2 transformadas con Ki-Ras activados fueron insensibles a la apoptósis inducida 20 por cualquiera de ¡as drogas solas o mediante la combinación de SCH 66336 y PD098059 (los datos no se muestran). La falta de efecto en las células Rat2 transformadas con Ki-Ras puede explicarse en parte por recientes observaciones sin oi confirió rio pno alni mac ¡cnfnrma- Ra= ÍKÍ-R2S V N-R3S^ S?n alternativamente preniladas mediante la gerani! geranil transferasa 1 tanto in vitro como en células tratadas con inhibidores FPT (Zhang et al., 1997; Whyte et al., 1997). 2. Efectos sobre la apoptosis: Activación de Caspasa Las caspasas son una familia evolucionadamente conservada de enzimas que degradan y desarman proteollticamente la célula en respuesta a las señales proapoptóticas (revisadas en Thomberry and Lazebnik, 1998). Para evaluar la apoptósis usando este punto final bioquímico distinto, se midió ¡a actividad de caspasa en usados de células preparados a partir de células Rat2 transformadas con H-Ras usando un ensayo fluormétrico para la actividad de caspasa 3 (Apo- Alert CPP32/Caspasa-3 Ensayo, Clontech). El tratamiento de células H-Ras transformadas durante 24 horas con 0,5 µM de SCH 66336 o 20 µM de PD098059 solo aumentó ¡a actividad de caspasa por arriba del nivel de base de las células no tratadas (Figura 5). Estos resultados coinciden con los efectos proapoptóticos de cualquiera de las drogas observados durante el análisis FACS (Figura 2 a las 36 horas). Cuando las células Rat2 transformadas con H-Ras fueron tratadas con ¡a combinación de ambas drogas, se observó una respuesta mas que aditiva de la caspasa 3 lo cual confirmó nuevamente los resultados del FACS. Se observó muy poca o ninguna activación de caspasa en las células Rat2 parentales cuando se trataron con un agente único o con una combinación de ambas drogas (Fig. 5). 3, Efectos sobre ia fosforilación MAPK Se investigó la capacidad del ¡nhibidor FPT SCH 66336 y del inhibidor MEK PD098059 para bloquear la activación MEK en células Rat2 transformadas con H-Ras midiendo el estado de fosforilación de sus substratos ERK1 y ERK2 (44 y 42 Kd, respectivamente). E! tratamiento de células con 20 µM de PD098059 minuyó la fosforilación de ambas proteinas (Fig. 6). La inhibición máxima se observó en el primer punto de tiempo examinado (6 horas) y la fosforilación permaneció suprimida a través de las 36 horas. El tratamiento de las células con 0,5 µM de SCH 66336 disminuyó la fosforilación de ambas proteínas en una sola c vez (Fig. 6) y de manera que dependía de la dosis (no se muestran los datos), o con 0,5 µM de SCH 66336 que exhibió una inhibición máxima entre las 24-36 horas de tratamiento. En ambos casos la inhibición de la fosforilación fue más profunda para la proteina ERK1 de 44 kDa. Aunque su estado de fosforüación disminuyó, la cantidad total de es^as proteinas no fue afectada por el tratamiento con la droga (Fig. 6, paneles inferiores). Discusión Los inhibidores de FPT tales como los inhibidores SCH 66336 y MEK tales como PD098059 o U0126 toman como objetivo distintas etapas en una vía común de transducción de señales. Sorprendentemente cuando ambos agentes se combinan, tienen más que un efecto aditivo sobre la apoptósis en las células Rat2 transformadas con H-Ras medido mediante análisis FACS o por población subG0/G1 o por activación de caspasa. Sin deseos de remitirnos a una teoría en particular, existen dos potenciales explicaciones para esta observación, ia primera, es posible si esta combinación dio co o resultado una inhbidón más completa o de duración más prolongada (sostenida de la via lineal señalada en ia figura 1 ). Alternativamente, la eficacia de la combinación puede atribuirse al hecho de que las vías de señalización intraceiular son considerablemente más complejas y están más interconectadas que la vía descripta en la figura 1. En un esquema de conexiones más completa se muestra en la figura 7. Tal como se mencionó previamente, es ciaro que estas vías se ramifican en varias etapas a lo largo de la vía. Los receptores del factor de crecimiento activan varias vías de señalización a través de interacciones que son intermediadas por SH2. De ' " X manera similar los efectores Ras múltiples han sido identificados utilizando híbridos de dos levaduras y otras realizaciones bioquímicas. La eficacia combinada de un ¡nhibidor FPT y un ¡nhibidor MEK puede ser la razón de sus efectos sobre distintas ramificaciones de estas vías. Por ejemplo, además de c bloquear la activación intermediada por H-Ras de MEk, los inhibidores FPT bloquean otras vías efectoras Ras (por ejemplo ¡as vías PI3K y Rho). De manera similar existe evidencia de la activación independiente ras de la via MEK/MAPK (Duckworth and Cantley, 1997; Morrison and Cutler, 1997). Aunque los componentes moleculares de esta via inaependiente Ras siguen sin estar totalmente delineados, esto sugiere que un inhibidor FPT solo no puede bloquear todas las vías que conducen a la activación MEK/MAPK. Por lo tanto, ¡as 10 combinación de estas dos clases de inhibidores puede dar como resultado un bloqueo más completo. Independientemente del mecanismo, los datos ex vivo con la combinación de SCH 66336 y PD098059 demuestran una sorprendente potenciación de ía actividad inductora de apoptosis. Además, este tipo de eficacia mejorada en forma combinada es extensibie incluyendo otros agentes cuyo objetivo son las 15 vías de transducción de señales, por ejemplo agentes que bloquean los receptores del factor de crecimiento. Tal como se manifestó anteriormente dichos efectos pueden ser ei resultado de (i) una inhibición más completa de! factor de crecimiento -la vía de señalización Ras que la que se logra con el tratamiento con un solo agente; o (¡i) la inhibición simultánea de múltiples vías de señalización. Por ejemplo muchos tumores pueden ser impulsados por la acción de factores 2 múltiples de crecimiento, actuando cada uno de ellos de modo autocrino o paracrino para dirigir la proliferación a través de sus receptores relacionados, el bloqueo de una de estas vías receptoras usando anticuerpos o inhibidores de íirosina ppinasa puede ejercer un efecto antitumcra! bloqueando ¡a vía de - señaüzación pero sin embargo otras vías impulsadas por el receptor no pueden ser afectadas. La adición de un inhibidor FPT puede cerrar la señalización de estas otras vías, lo cua! dará como resultado una inhibición más completa de ¡a transducción de señales y por lo tanto exhibirá un efecto antitumorai sinérgico. 5 Debido a que ¡os receptores del factor de crecimiento se sabe que inician cascadas de señalización múltiple (por ejemplo Ras/MEK, fosforilasa C? y PI3K), puede suceder que la ¡nhibición de la via Ras con un inhibidor FPT o un inhibidor MEK no tenga ningún efecto sobre la capacidad de señalización de estas otras vías. Por lo tanto, la adición de un anticuerpo receptor del factor de crecimiento o un ¡nhibidor de tirosina quinasa a una célula tumora! tratada con un inhibidor FPT -JQ puede dar como resultado una ¡nhibición más completa de la señalización y tener un efecto antitumoral sinérgico mediante la interrupción de aquellas vías que no son afectadas por el ¡nhibidor FPT. También puede observarse tipos similares de sinergia combinando los inhibidores FPT con agentes cuyos objetivos son otras etapas en estas vías de señalización (por ejemplo los inhibidores Raf, los inhibidores SH2, los inhibidores PI3K). 5 COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS Los portadores farmacéuticamente aceptables inertes usados para preparar composiciones farmacéuticas sobre ¡os inhibidores FPT y los inhibidores de las vía de señalización Ras descriptos aquí pueden ser sólidos o líquidos. Las preparaciones sólidas incluyen polvos, tabletas, granulos dispersables, cápsulas, sellos y supositorios. 0 Los polvos y tabletas pueden comprender desde aproximadamente 5 hasta aproximadamente 70% de ingrediente activo. Los portadores sólidos apropiados son conocidos en el arte, por ejemplo carbonato de magnesio, estearato de -i i tiij¿£ i i ¡i É tiS á ^^m magnesio, talco, azúcar, y/o lactosa. Pueden usarse tabletas, polvos, sellos y cápsulas como formas de dosificación sólida apropiadas para administración oral. Pata preparar supositorios, se funde primero una cera de bajo punto de fusión tal como un mezcla de glicéridos de ácidos grasos o manteca de cacao y 5 s© dispersa homogéneamente el ingrediente activo en ia misma mediante agitación. La mezcla homogénea fundida se vierte luego en moldes de un tamaño apropiado y se deja enfriar y por consiguiente solidificar. Las preparaciones liquidas incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones. Pueden mencionarse como ejemplo, agua o soluciones de agua y propilenglicol para inyección parenteral. Las preparaciones liquidas pueden incluir también soluciones para administración intranasal. 10 Las preparaciones en aerosol que son apropiadas para inhalación pueden incluir soluciones y sólidos en forma pulverulenta que pueden estar en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable ta! como un gas comprimido inerte. Así mismo se incluyen las preparaciones sólidas que están destinadas a la conversión poco tiempo antes de su uso a preparaciones líquidas par 15 administración ora! o parenteral. Dichas formas líquidas incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones Los inhibidores FPT y los inhibidores de ¡a vía Ras adicionales descpptos aqui pueden ser liberados aquí también por vía transdermica. Las composiciones transdermicas pueden tener las formas de cremas, lociones, aerosoles y/o emulsiones y pueden incluirse en un parche trasndérmico del tipo de matriz o 20 **" deposito tal como los que se usan convencionalmente en el arte para tales propósitos. Preferiblemente los compuestos se administran por vía oral.

Preferiblemente, la preparación farmacéutica está en un forma de dosificación unitaria. En dicha forma la preparación se subdivide en dosis unitarias que contienen las cantidades apropiadas del componente activo, por ejemplo una cantidad eficaz para lograr el propósito deseado. La cantidad de 5 compuesto activo en una dosis de preparación unitaria puede variar o puede ajustarse a desde aproximadamente 0,5 mg a 1000 mg, preferiblemente desde aproximadamente 1 mg a 300 mg, y más preferiblemente 5 mg a 200 mg, de acuerdo con la aplicación particular. La dosis real empleada puede variar dependiendo de los requisitos del paciente y de la gravedad de ¡a enfermedad que se está tratando. La -JQ determinación de la dosis adecuada para una situación particular está dentro de ía experiencia del perito en la materia. En general el tratamiento se inicia con dosis más pequeñas inferiores a la dosis óptima del compuesto. A continuación se incrementa la dosis en pequeñas cantidades hasta alcanzar el efecto óptimo bajo las circunstancias determinadas. Por razones de conveniencia ¡a dosis diaria total puede dividirse y puede administrarse en porciones durante el día si se desea. 5 La cantidad y frecuencia de administración de los inhibidores FPT y de los inhibidores de la vía Ras adicional estarán reguladas de acuerdo con la opinión del clínico de cabecera (médico) considerando factores taies como la edad, el estado y el peso del paciente así como también la gravedad de la enfermedad que se está tratando. En general, la dosis para un inhibidor FPT (cuando se usa como único agente), puede tener concebiblemente un rango superior de 2000 0 mg/día, preferiblemente un rango de desde 50 a 400 mg/dia en casos en los que el inhibidor FPT es una benzocicloheptapiridina trícicüca de anillo fusionado, sin embargo, en la terapia de combinación de la presente invención, un régimen de haia rlncifir-orvAn nroforirlí. río Inc inhir-iirlriroc f- pT PS OOT SlSITlClO Í3 j - y* Sr. administración oral de una cantidad en el rango de desde 1 ,4 a 400 mg/día más preferiblemente 1 ,4 a 350 mg/día, aún más preferiblemente 3,5 a 70 mg/día preferiblemente con un programa de dosificación B.l.D. Un rango de dosis particularmente baja puede ser de 1 ,4 a 70 mg/día. Los inhibidores de la vía Ras adicionales pueden administrarse de acuerdo con los protocolos terapéuticos que son bien conocidos en el arte. Ver, por ejemplo., Pegram, M.D. et al., (1998). J. Clin Oncol. 16:2659-2671. Resultará aparente para ¡os expertos en la materia que la administración del inhibidor de la vía Ras adicional puede variar dependiendo de la enfermedad que se está tratando y de los efectos conocidos del inhibidor de la vía ras adicional sobre 10 esta enfermedad. Así mismo de acuerdo con el conocimiento del médico clínico, los protocolos terapéuticos (por ejemplo las cantidades, de dosificación y los tiempos de administración), pueden variarse en vista de los efectos observados de ¡os agentes terapéuticos administrados (es decir., el ¡nhibidor de la vía ras adicional) en el paciente, y en vista de las respuestas observadas de la enfermedad para los agentes terapéuticcs administrados. En general, las dosis para un inhibidor de las vías de señalización ras adicional (cuando se usa como 15 agente único) puede estar, por ejempio en el rango de 5 a 2000 mg/día. Sin embargo en la terapia de combinación de la presente invención, un régimen de bajas dosis preferido de un inhibidor de una via de señalización ras adicional (por ejemplo un ¡nhibidor MEK), es ¡a administración de un cantidad en el rango de desde 1 a 350 mg/día más preferiblemente 3,5 a 70 mg/día preferiblemente con un programa de dosificación B.i.D. Un rango de dosis particularmente bajo puede 20 ser de 1 a 70 mg/día. Por lo tanto, en un ejemplo preferido de terapia de combinación para el tratamiento de cáncer (por ejemplo., cáncer pancreático, de pulmón o de vesícula^ ei inhibidor FPT puede ser SCH 66335 ta! como se identificó previamente, administrado oralmente en una cantidad de 70 mg/día en dos dosis divididas, en un régimen de dosificación continua; y el inhibidor de la vía de señalización Ras adicional puede ser PD098059 (o un análogo del mismo) administrado en una cantidad de 350 mg/dia en dos dosis dividas en un régimen de dosificación continua. En otro ejemplo preferido de terapia de combinación para el tratamiento de cáncer (por ejemplo., cáncer pancreático, de pulmón o de vesícula) el inhibidor FPT es SCH 66336, tal como se identificó previamente, administrado por vía oral en une. cantidad de 70 mg/dia en dos dosis divididas en un régimen de dosificación continua; y e¡ inhibidor de la via de señalización Ras adicional es U0126 (o un análogo del mismo) administrado en una cantidad de 350 mg/día en dos dosis divididas en un régimen de dosificación continua. En los métodos de esta invención, un inhibidor FPT se administra concurrentemente o secuenciaimente con un ¡nhibidor de la vía Ras adicional. Por lo tanto no es necesario que por ejemplo ei inhibidor de la via Ras adicional y e! inhibidor FPT se administren en forma simultánea o en forma esencialmente simultánea. La ventaja de una administración simultánea o esencialmente simultánea está dentro de la determinación del médico clínico. Así mismo, en general, el ¡nhibidor FPT y el ¡nhibidor de !a vía Ras adicional no deben ser administrados en la misma composición farmacéutica, y deben administrarse, debido a diferentes características físicas y químicas por vías diferentes. Por ejemplo el inhibidor FPT puede administrarse por vía ora! para generar y mantener buenos niveles del mismo en la sangre, mientras que el inhibidor de la vía Ras adicional puede administrarse por via intravenosa. La determinación de! modo de administración y de la conveniencia de administración cuando es posible en la misma composición farmacéutica está dentro de los conocimientos de! médico clínico. La administración inicia! podrá efectuarse de ^cuerdo con protocolos bien establecidos conocidos en el arte y luego en base a tos efectos observados, pueden ser modificados en el médico de cabecera en las dosis, el modo de administración y los tiempos de administración. La elección particular de un inhibidor de FPT y del ¡nhibidor de la via Ras adicional dependerá del diagnostico del médico y de sus opiniones sobre el estado del paciente y el protocolo de tratamiento apropiado. El inhibidor FPT y e! inhibidor de la vía Ras adicional pueden ser administrados concurrentemente (por ejemplo simultáneamente, esencialmente simultáneamente o dentro del protocolo de tratamiento), o secuencialmente dependiendo de la naturaleza de la enfermedad proliferativa del estado del paciente y de la elección real del inhibidor de la via Ras adicional que deb administrarse conjuntamente (es decir dentro de un protocolo de tratamiento único) con el inhibidor FPT. Si el ¡nhibidor FPT y el inhibidor de la vía Ras no se administran simultáneamente o esencialmente simultáneamente, entonces el orden inicial de administración del inhibidor FPT y del ¡nhibidor de la via Ras adicional pueden no ser importantes. Por lo tanto el inhibidor FPT puede administrarse primero seguido de administración del ¡nhibidor de la via Ras adicional; o el ¡nhibidor de ta vía Ras adicional puede administrarse primero seguido de la administración dei inhibidor FPT. Esta administración alternativa puede repetirse durante un protocoio de tratamiento único. La determinación del orden de administración y de la cantidad de repeticiones de cada agente terapéutico durante un protocolo de tratamiento está dentro de la experiencia del experto en la materia después de evaluar la enfermedad que se está tratando y el estado del paciente. Por ejemplo el inhibidor de la vía Ras adicional puede administrarse primero y luego puede continuarse el tratamiento con la administración del inhibidor FPT seguido, I ' cuando se considera ventajoso, de la administración del ¡nhibidor de la vía Ras adicional, etc, hasta que se completa el protocolo de tratamiento. Por ¡o tanto, de acuerdo con la experiencia y los conocimientos, el médico clínico puede modificar cada protocolo para la administración de un componente (agente terapéutico - es decir-, ¡nhibidor de FPT, inhibidor de la vía Ras adicional) del tratamiento de acuerdo con las necesidades individuales del paciente a medida que avanza el tratamiento. El médico clínico, a juzgar si el tratamiento es eficaz en ¡as dosis administradas considerará el bienestar general del paciente así como también los signos más definidos, tales como el alivio de ¡os síntomas relacionados con la 10 enfermedad, la ¡nhibición del crecimiento del tumor, el encogimiento real del tumor o la inhibición de ¡a metástasis. El tamaño del tumor puede medirse a través de métodos convencionales tales como estudios radiológicos, por ejemplo scaneo CAT o MRI, y pueden usarse mediciones sucesivas para juzgar si el crecimiento del tumor se ha retardado o no o incluso si se ha revertido. El alivio de los síntomas relacionados con ia enfermedad tales como dolor, y la mejora de la condición general, pueden usarse también para juzgar la eficacia del 15 tratamiento. (Naturalmente, tai como se indicó previamente, un tratamiento eficaz empleando ¡os métodos de la presente de la presente ¡nvención dará preferiblemente como resultado un nivel sinérgico de muerte de las células cancerosas y/o una reducción del tumor). Los siguientes son ejemplos (Ejemplos 1 -4) de formulaciones de cápsulas de FPT: 20 (+) -enantiomero EJEMPLOS 1 y 2 Formulación de la Capsula Composición Eiemplo 1 Eiemplo 2 % Composición ma/cáosula ma/cáosula Solución sólida 100 400,0 84,2 Dióxido de silicio NF(1) 0,625 2,5 0,5 Estearato 0,125 0,5 0, 1 de magnesio NF (2) Croscarmelosa de Sodio NF 1 1.000 44,0 9,3 Pluronic F68 NF 6,250 25,0 5,3 Dióxido de silicio NF t3> 0,625 2,5 0,5 Estearato de magnesio NF ( ) 0,125 0,5 0,1 TOTAL 1 18.750 475,00 Tamaño de la cápsula N° 4 N° 0 MÉTODO (Ejemplos 1 y 2) Preparación de Solución Sólida Composición q/tanda % de Composición Compuesto inhibidor FPT 80 33,3 Povidona NK K29/32 160 66,6 Cloruro de metiieno 5000 mL se evapora El compuesto inhibidor FPT cristalino y ta povidona se disolvieron en cloruro de metileno. La solución se secó usando un secador de pulverización de solvente apropiado. Luego se redujo el residuo hasta finas partículas hasta trituración. El polvo luego se hizo pasar a través de un tamiz de malla 30. Se halló que el polvo era amorfo por análisis de rayos X. La solución sólida, el sólido de silicio01 y estearato de magnesio (2) se mezclaron en un mezclador apropiado durante 10 minutos. La mezcla se compactó usando un compactador de rodillo apropiado y se trituró usando un molino apropiado provisto de un tamiz de malla 30. La croscarmelosa de sodio, el Pluronic F68 y el dióxido de silicio í3) se agregaron a la mezcla triturada y se mezclaron adicionalmente durante 10 minutos. Se preparó una pre-mezcla con estearato de magensio (4> y con porciones iguales de la mezcla. La premezcla se agregó al resto de la mezcla y se siguió mezclando durante 5 minutos. La mezcla fue luego encapsuiada en cápsuias de gelatina de cascara dura.

EJEMPLOS 3 v 4 Formulación de la Cápsula Composición Ejemplo 3 Eiempto 4 % Composición mq/capsula mq/cápsula Solución sólida 400 200,0 80,0 Dióxido de silicio NF(1) 3,75 1 ,875 0,75 Estearato 0,125 0,625 0,25 de magnesio NF (2) Croscarmelosa de Sodio NF 40,00 20,0 8,0 Pluronic F68 NF 50,00 25,0 10 10 Dióxido de silicio NF (o) 3,75 1 ,875 0,75 Estearato de magnesio NF (4) 1 ,25 0,625 0,25 TOTAL 500,0 250,00 Tamaño de la capsula N° 0 N° 2 15 MÉTODO (Eiemplos 3 y 4) Preparación de Solución Sólida Composición q/tanaa % de Composición Compuesto inhibidor FPT 15 50 Pov?dona NK K29/32 15 50 Cloruro de metileno 140 mL se evapora 20 Metanol 60 mL se evapora El compuesto inhibidor FPT cristalino y la povidona se disolvieron en una mezcla de cloruro de metileno y metanol. La solución se secó usando un secador de pulverización de solvente apropiado. Luego se redujo ei residuo hasta finas partículas hasta trituración. El polvo luego se hizo pasar a través de un tamiz de malla 30. Se halló que el polvo era amorfo por análisis de rayos X. La solución sólida, el sólido de sil?cio(1) y estearato de magnesio (2) se mezclaron en un mezclador apropiado durante 10 minutos. La mezcla se 5 compactó usando un compactador de rodillo apropiado y se trituró usando un molino apropiado provisto de un tamiz de malla 30. La croscarmelosa de sodio, el Piuronic F68 y el dióx,do de silicio (3) se agregaron a la mezcla triturada y se mezclaron adicionaimepte durante 10 minutos. Se preparó una pre-mezcla con estearato de magnesio {A) y con porciones iguales de la mezcla. La premezcla se agregó al resto de la mezcla y se siguió mezclando durante 5 minutos. La mezcla -|Q fue luego encapsulada en cápsulas de gelatina de cascar? dura. Para información sobre las formulaciones puede hacerse también referencia a las solicitudes de Patente Norteamericanas Actas N° 08/997168 y 60/068387 (presentadas el 22 de Diciembre de 1997), que se incorporan aquí expresamente como referencia. El alcance de esta invención en su aspecto de composición farmacéutica no está limitado por los ejemplos provistos. 5 Todos los documentos (por ejemplo publicaciones y solicitudes de Patente) citados aquí se incorporan como referencia en e! mismo grado que si cada documento individual tuviera especifica e individualmente indicado para ser incorporado como referencia. Aunque la presente invención ha sido descripto conjuntamente con las realizaciones específicas establecidas más arriba, muchas alternativas, 0 modificaciones y variaciones de la misma resultarán aparentes para los expertos en la materia. Todas dichas alternativas, modificaciones y variaciones están dentro del espíritu y alcance de la presente invención. > . Referencias Alessi, D. R., et.al. (1995). J Biol Chem. 270:27489-27494. Barrington, R. E„ et.a!. (1998). Mol Cell Biol.75:85-92. Bishop.W. R., et.ai. (1995). J Biol Chem. 270:3061 1-30618. Campbell, S. , et.al. (1998). Oncogene. 77:1395-1413. Dengler, W.A., et.a!. (1995). Anticancer Drugs. 6:522-32. Duckworth, B. C, and Cantley, L. C. (1997). J Biol Chem. 272:27665- 27670. Dudley, D. T., et.al. (1995). Proc Nati Acad Sci USA. 927686-7689. Favata, M. F., et.al. (1998). J Bioi Chem. 273:18623-32. Fry, D.W., et.al. (1994). Science. 9:1093-1095. Goldstein, N. !., et.al. (1995). Clin Cáncer Res. 7:131 1-1318. Gorczyca et al., (1993) Cáncer Res. 53: 1945-51. Graham, N. (1995). Exp Opin Ther Patents. 5:1269-1285. Gutkind, J. S. (1998). J Biol Chem. 273:1839-1842. Heldin, C.H. (1995). Cell. 50:213-23. Hung.'W. C, and Chaung, L Y. (1998). Int J Oncol. 72137-140. James, G. , et.al. (1994). J Biol Chem. 259:27705-27714. Koh!, N., eí.al. (1995). Nature Medicine. 7:792. Kovalenko, M., et.a!. (1994). Cáncer Res. 54:6106-61 14. Lebowitz, P. F., et.al. (1997). J Bio! Chem. 272.15591-15594. Levitzki, A., and A. Gazit. (1995). Science. 267:1782-1788. Liu, M., et.al. (1998). Cáncer Res. 58:4947-4956. Lowy, D. R., and Willumsen, B. (1993) Annu Rev Biochem. 62:851-8091. Mendelsohn, J. (1992). J Nat'l Cáncer Inst Monogr 73:125-131 . Moasser, M.M., et.al. (1998). Proc Nati Acad Sci. 95:1369-1374.

- Monia, B.P., et.al. (1996). Nucleosides and Nucleotides Their Biological Applications- 1. Supp 34. Morrison, D.K., and Cutler, R.E. (1997). Curr Opin Cell Biol. £174-179.

Moyer, J. D., et.al. (1997). Cáncer Res. 57: 4838-4848. Norgaard, P., et.al. (1999). Clin Cáncer Res. 5:35-42. Pegram, M.D., et.a!. (1998). J Clin Oncol. 76:2659-2671. Raff, M. (1998). Nature. 396:1 19-122. Resnicoff, M. (1998). Int J Mol Med. 7:883-888. Suzuki, N., et.al. (1998). Proc Nati Acad Sci USA. 95:15356-15361.

Thornberry, N.A. and Lazebnik, Y. (1998). Science. 287:1312-1316.

Trahey, M., and McCorrnick, F. (1987). Science. 238:542-5. Wang, H.M., et.a!. (1998). Anticancer Res. 78: 2297-2300. Whyte.D.B., et.al. (1997). J Biol Chem. 272:14459-14464. Zhang, F. , (1997). J Biol Chem. 272:10232-10239.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES 1. Uso para tratar cáncer en un paciente que necesita dicho tratamiento, que comprende cantidades que son eficaces para inducir un nivel sinérgico de muerte de las células cancerosas de (1 ) un ¡nhibidor de FPT y (2) un ¡nhibidor de vía de señalización Ras adicional. 2. El uso de la reivindicación 1 , donde dicho inhibidor FPT es una benzocicloheptapiridína triciclica de anillo fusionado. 3. El uso de la reivindicación 1 , donde el inhibidor de ¡a vía de señalización Ras adicional es un ¡nhibidor de quinasa. 4. El uso de la reivindicación 1 , donde el inhibidor de la vía de señalización Ras adicional iphibibe un elemento en sentido descendente de Ras en la vía de señalización Ras. 5. El uso de la reivindicación 1 , donde el inhibidor de la vía de señalización Ras adicional es un inhbidor MEK. 6. El uso de la reivindicación 1 , donde el inhibidor de la vía de señalización Ras adicional es un inhbidor del receptor del factor de crecimiento. 7. El uso de la reivindicación 6, donde el inhibidor del receptor del factor de crecimiento es un inhibidor de tirosina quinasa. 8. El uso de la reivindicación 7, donde el ¡nhibidor de tirosina quinasa es un pequeña molécula seleccionada de! grupo que consiste en (1 ) un ¡nhibidor receptor erbB2, (2) un receptor ¡nhibidor PDGF, (3) un ¡nhibidor receptor IGF, y (4) un ¡nhibidor de tirosipa quipasa del receptor EGF. ****.' *"TAm t,>t?t? ' i 9. El uso de la reivindicación 6, donde el inhibidor del receptor del factor de crecimiento es un anticuerpo dirigido contra el dominio extracelular de un receptor del factor de crecimiento. 10. El uso de la reivindicación 9, donde el anticuerpo es un anticuerpo monoclonai cuyo objetivo es el erbB2 o un anticuerpo monoclonal cuyo objetivo es el receptor EGF. 1 1. El uso de la reivindicación 9, donde el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal cuyo objetivo es el receptor erbB2. 12. El uso de la reivindicación 1 , donde el inhibidor FPT se administra en una cantidad de desde 1 ,4 a 400 mg/día. 13. El uso de la reivindicación 12, donde el inhibidor FPT se administra en 10 una cantidad de desde 3,5 a 70 mg/día. 14. El uso de la reivindicación 1 , donde el inhibidor de la vía Ras adicional se administra en una cantidad de desde 1 a 350 mg/día. 15. El uso de la reivindicación 14, donde el inhibidor de la vía Ras adicional se administra en una cantidad de desde 3,5 a 70 mg/día. 16. El uso de la reivindicación 1 , donde el ¡nhibidor FPT y dicho inhibidor 15 de vía Ras adicional se administran simultáneamente. 17. El uso de la reivindicación 1 , donde el inhibidor FPT y dicho ¡nhibidor de la vía Ras adicional se administran en secuencia. 18. El uso de la reivindicación 17, donde dicho inhibidor de la vía Ras adicional se administra primero. 19. El uso de la reivindicación 17, donde dicho ¡nhibidor FPT se administra 20 primero. 20. El uso de ia reivindicación 1 , donde el cáncer es: cáncer de pulmón, cáncer pancreático, cáncer de colon, cáncer de ovario, cánceres de hígado, leucemia mieloide, melanoma, cáncer folicular de la tiroides, carcinoma de ! i vesícula, glioma, síndrome mielodisplástico, cáncer de mama o cáncer de próstata. 21. El uso de la reivindicación 1 , que comprende además administrar un agente quimioterapéutico. 22. El uso de la reivindicación 21 , donde dicho agente quimioterapéutico está seleccionado de: mostaza de uracilo, Clormetina, Ciclofofamida (Cytoxan®), Ifosfamida, Melfalan, Clorambucil, Pipobroman, Trietilen-melamina, Trietilenotiofosforamipa, Busulfan, Carmustina, Lomustina, Síreptozocina, Dacarbazina, y Temozolomida, Antimetabolitos (incluyendo antagonistas de ácido fólico, análogos de pirimidina, análogos de purina e inhibidores de adenosina desaminasa); Metotrexato, 5-Fluoruracilo, Floxuridina, Citarabina, 6-Mercaptopurina, 6-Tioguanina, fosfato de Fiudarabina, Pentostatina, y Gemcitabina. Productos naturales y sus derivados (incluyendo alcaloides vinca, antibióticos antitumorales, enzimas, ünfoquinas y epipodofilotoxinas): Vinblastina, Vipcristina, Vindesina, Bleomicina, Dactinomicipa, Daunorubicina, Doxorubicina, Epirubicina, Idarubicina, paclitaxel (paclitaxel es comercialmente obtenible como Taxol ®), Mitramicina, Deoxico-formicipa, Mitomícina-C, L-Asparginasa, Interferones (especialmente IFN-a), Etoposida, y Teniposída, Hormonas y Esteroides (incluyendo análogos sintéticos); 17a-Etinilestradiol, Díetilestilbestrol, Testosterona, Prednisona, Fluoximesterona, Propionato de Dromoestanolona, Acetato de Megestrol, Tamoxifen, Metiiprednisolona, Metiltestosterona, Prednisolona, Triamsinolopa, Clorotrianiseno, HIdroxiprogesterona, Aminoglutetimida, Estramustina, Acetato de Medroxiprogesterona, Leoproüda, Flutamida, Toremifeno, Zoiadex, Sintéticos (incluyendo complejos inorgánicos tales como complejos de coordinación de platino): Cisplatína, Carboplatina, Hidroxiurea, Amsacrina, Procarbazina, Mitotano, Mitoxantrona, Levamisol, y Hexametíimelamina. 23. El uso de la reivindicación 21 donde dicho agente aptineoplático es temo?olamida. 24. El uso de la reivindicación 1 que comprende además administrar radiación. 25. Un uso para tratar cáncer en un paciente que necesita dicho tratamiento, donde dicho tratamiento comprende administrar, en forma concurrente o secuencial, una cantidad eficaz de (1 ) un inhibidor FPT (+) -enantiomero y (2) un inhibidor de vía de señalización Ras adicional. 26. El uso de la reivindicación 25 donde el ¡nhibidor de ia vía de señalización Ras adicional es un inhibidor de quinasa. 27. El uso de la reivindicación 25, donde el inhibidor de la vía de señalización Ras adiciona! inhibe un elemento en sentido descendente de Ras y en ia vía de señalización Ras. 28. El uso de la reivindicación 25, donde el inhibidor de la vía de señalización Ras adicional es un inhibidor MEK. 29. El uso de la reivindicación 25, donde el inhibidor de la vía de señalización Ras adicional es un inhibidor del receptor del factor de crecimiento. 30. El uso de la reivindicación 29, donde el ¡nhibidor del receptor del factor de crecimiento es un ¡nhibidor de tirosina quinasa. 31. El uso de la reivindicación 30, donde el inhibidor de tirosina quinasa es una pequeña molécula seleccionada del grupo que consiste en (1 ) un inhibidor receptor erbB2, (2) un receptor inhibidor PDGF, (3) un ¡nhibidor receptor IGF, y (4) un inhibidor de tirosipa quinasa del receptor EGF. 32. El uso de la reivindicación 29, donde el ¡nhibidor del receptor del factor de crecimiento es un anticuerpo dirigido contra el dominio extracelular de un receptor del factor de crecimiento. 33. El uso de ia reivindicación 32, donde el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal cuyo objetivo es el erbB2 o un anticuerpo monoclonal cuyo objetivo es el receptor EGF. 34. El uso de la reivindicación 32, donde el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal cuyo objetivo es el receptor erbB2. 35. El uso de la reivindicación 25, donde el inhibidor FPT se administra en una cantidad de desde 1 ,4 a 400 mg/día. 36. El uso de la reivindicación 35, donde el inhibidor FPT se administra en una cantidad de desde 3,5 a 70 mg/día. 37. El uso de la reivindicación 25, donde el inhibidor de la vía Ras adicional se administra en una cantidad de desde 1 a 350 mg/día. 38. El uso de la reivindicación 37, donde el inhibidor de la vía Ras adicional se administra en una cantidad de desde 3,5 a 70 mg/día. 39. Uso de (1 ) un inhibidor de transferasa de proteína famesilo (FPT) y (2) un ¡nhibidor de vía de señalización Ras adicional para la manufactura de un medicamento útil para inducir un nivel sinérgico de muerte de células cancerosas en un paciente con cáncer que comprende cantidades eficaces de (1) un ¡nhibidor FPT y (2) un ¡nhibidor de la vía de señalización Ras adicional. 40. El uso de la reivindicación 39 donde el ¡nhibidor FPT es una foenzocicloheptapiridina tricíclica de anillo fusionado. 41. El uso de la reivindicación 39 donde el ¡nhibidor de la vía de señalización Ras adicional es un inhibidor de quipasa. 5 42. El uso de la reivindicación 39, donde el inhibidor de la vía de señalización Ras adicional inhibe un elemento en sentido descendente de Ras en la vía de señalización Ras. 43. El uso de ¡a reivindicación 39, donde ei inhibidor de la vía de señalización Ras adicional es un inhibidor MEK. 44. El uso de la reivindicación 39, donde ei inhibidor de la vía de -jQ señalización Ras adicional es un inhibidor de! receptor del factor de crecimiento. 45. El uso de la reivindicación 44, -donde el ¡nhibidor del receptor de! factor de crecimiento es un inhibidor de tirosina quinasa. 46. El uso de ia reivindicación 45, donde el inhibidor de tirosina quinasa es un pequeña molécula seleccionada del grupo que consiste en (1 ) un inhibidor receptor erbB2, (2) un receptor inhibidor PDGF, (3) un inhibidor del receptor IGF, y (4) un ¡nhibidor de tirosina quinasa del receptor EGF. 15 47. El uso de la reivindicación 44, donde el ¡nhibidor del receptor del factor de crecimiento es un anticuerpo dirigido contra ei dominio extracelular de un receptor del factor de crecimiento. 48. El uso de la reivindicación 47, donde el anticuerpo es un anticuerpo monoclopal cuyo objetivo es el erbB2 o un anticuerpo monoclonal cuyo objetivo es el receptor EGF. 0 49. El uso de la reivindicación 47, donde el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal cuyo objetivo es el receptor erbB2. 50. El uso de la reivindicación 39, donde el inhibidor FPT se administra en una cantidad de desde 1 ,4 a 400 mg/día. 51. El método de la reivindicación 50, donde el inhibidor FPT se administra en una cantidad de desde 3,5 a 70 mg/día. 52. El método de la reivindicación 39, donde el inhibidor de la vía Ras adicional se administra en una cantidad de desde 1 a 350 mg/día. 53. El método de la reivindicación 52, donde el inhibidor de la vía Ras adicional se administra en una cantidad de desde 3,5 a 70 mg/día. 54. Un método para tratar cáncer en un paciente que necesita dicho tratamiento, comprendiendo dicho tratamiento administrar (1 ) un inhibidor FPT y (2) un inhibidor de la vía de señalización Ras adicional donde el ¡nhibidor FPT se administra en una cantidad de desde 1 ,4 a 400 mg/día. 55 Uso de (1 ) un ¡nhibidor de transferasa de proteípa famesílo (FPT) y (2) un inhibidor de vía de señalización Ras adicional para la manufactura de un medicamento útil para tratar cáncer en un paciente que necesita dicho tratamiento, que comprende (1 ) un inhibidor FPT y (2) un inhibidor de la vía de señalización Ras adicional, donde el ¡nhibidor de la vía Ras adicional se encuentra en una cantidad de desde 1 a 350 mg/día. 56. Uso de (1 ) un inhibidor de transferasa de proteína farnesilo (FPT) y (2) un ¡nhibidor de vía de señalización Ras adicional para la manufactura de un medicamento útil para la regresión de! volumen de un tumor en un paciente con cáncer, que comprende cantidades eficaces de (1 ) un inhibidor FPT y (2) un inhibidor de la vía de señalización Ras adicional. 57. Uso de acuerdo con la reivindicación 1 , donde la muerte de las células cancerosas ocurre a través de apopíósis. p: SCHERING CORPORATION fti-f¡?i??t t?f? i¡|?y