MX2013004797A - 1h-pirazol-5-olato sodico sustituido. - Google Patents

Abstract

La presente solicitud se refiere a 1-[6-(mor[olin-4-iI)pirimidin-4 -iI]-4-(1H-1,2,3-triazol-1-il)-1H-pirazol-5-olato sódico, a procedimientos para su preparación, su uso para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades como también su uso para la preparación de medicamentos para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades, especialmente de enfermedades cardiovasculares y hematológicas, de enfermedades renales como también para ayudar a la curación de heridas.

Description

1 H-PIRAZ0L-5-0LAT0 SÓDICO SUSTITUIDO CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente solicitud se refiere a 1-[6-(morfolin-4-il)pirimidin-4-il]-4-(1 H-1 ,2,3-triazol-1-il)-1 H-pirazol-5-olato sódico, a procedimientos para su preparación, a su uso para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades como también su uso para la preparación de medicamentos para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades, especialmente de enfermedades cardiovasculares y hematológicas, de enfermedades renales como también para ayudar a la curación de heridas.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El compuesto de fórmula (I), 1-[6-(morfolin-4-il)pirimidin-4-il]-4-(1 H-1 ,2,3-triazol-1-il)-1 H-pirazol-5-ol (forma enol; fórmula (la)) o bien 2-[6-(morfolin-4-il)p¡rimidin-4-il]-4-(1 H-1 ,2,3-triazol-1 -il)-1 ,2-dihidro-3H-pirazol-3-ona (forma ceto; fórmula (Ib)), se conoce del documento WO 2008/067871. ( la ) ( l ) ( Ib ) El compuesto de fórmula (I) actúa como inhibidor de las HIF-prolil-4-hidroxilasas y debido a este mecanismo de acción específico en vivo después de la administración por vía parenteral u oral produce la inducción de genes blanco HIF, como p. ej. eritropoyetina, y los procedimientos biológicos causados por ello, como p. ej., la eritropoyesis.

El compuesto de fórmula (I) es higroscópico y en condiciones normales del entorno (20-35 °C, presión normal) ya absorbe hasta aproximadamente el 6 % en peso de agua si la humedad ambiente relativa excede 20 % hr. La absorción de 6 % en peso de agua se cumple prácticamente con una humedad ambiental de 30 % hr. Un compuesto de fórmula (I) que contiene agua, cede nuevamente parte del agua contenida cuando la humedad ambiental es menor del 30 % hr. Esta absorción de agua o bien cesión de agua dificulta el manejo del compuesto de fórmula (I), p. ej., los procedimientos de pesaje, y la preparación del compuesto de fórmula (I) en una forma definida, estable y constante para el uso en medicamentos o bien la preparación de medicamentos que contienen el compuesto de fórmula (I). De esa manera aumenta especialmente el dispendio técnico durante la preparación de formas de aplicación que contienen el compuesto de fórmula (I), como p. ej. comprimidos, granulados o soluciones bebibles, dado que para una concentración constante del compuesto de fórmula (I) es necesario tomar medidas para el control y para la regulación de la humedad ambiental.

Ahora se encontró sorprendentemente que del compuesto de fórmula (I) se puede preparar una sal sódica que presenta ventajas decisivas respecto del compuesto de fórmula (I).

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona el compuesto 1-[6-(morfolin-4-il)pirimidin-4-il]-4-(1 H-1 ,2,3-triazol-1-il)-1 H-pirazol-5-olato sódico que corresponde al compuesto de fórmula (II) ( II ) En el marco de la presente invención el 1-[6-(morfolin-4-il)pirimidin-4-il]-4-(1 H-1 ,2,3-triazol-1-il)-1 H-pirazol-5-olato sódico (compuesto de fórmula (II)) preferentemente se presenta en forma cristalina.

Mediante el uso de acuerdo con la invención del compuesto de fórmula (II) se asegura que se logra en comparación con el compuesto de fórmula (I) conocido una estabilidad significativamente más elevada respecto de la absorción o bien la cesión de agua al variar la humedad ambiental. El 1-[6-(morfolin-4-il)pirimidin-4-il]-4-(1H- 1 ,2,3-triazol-l H-pirazol-5-olato sódico (compuesto de fórmula (II)) contiene menos del 0,5 % en peso de agua, no es higroscópico y en condiciones de entorno usuales (20-35 °C, presión normal) incluso con humedad ambiental elevada de hasta el 90 % hr, solo varía mínimamente su contenido de agua, es decir menos del 0,5 % en peso. El compuesto de fórmula (II) técnicamente es de manipulación más sencilla, es decir en los procedimientos de pesaje, y especialmente cuando se trata de garantizar una concentración constante del compuesto de fórmula (II) en una forma de aplicación, como p. ej. un granulado, una solución bebible o un comprimido. Además, el compuesto de fórmula (II) presenta respecto del compuesto de fórmula (I) una solubilidad en agua más elevada.

La invención proporciona además un procedimiento para la preparación del compuesto de acuerdo con la invención de fórmula (II), que está caracterizado porque el compuesto de fórmula (I) ( la ) ( I ) ( |b ) se hace reaccionar en un disolvente con hidróxido de sodio o soda cáustica acuosa o una sal sódica, en su caso con la adición de una base.

Es de preferencia un procedimiento para la preparación del compuesto de acuerdo con la invención de fórmula (II), caracterizado porque el compuesto de fórmula (I) se hace reaccionar en un disolvente con soda cáustica acuosa, en su caso con la adición de una base.

Se prefiere especialmente un procedimiento para la preparación del compuesto de acuerdo con la invención de fórmula (II), caracterizado porque el compuesto de fórmula (I) se hace reaccionar en un disolvente con soda cáustica acuosa, con la adición de trietilamina.

La reacción con hidróxido de sodio o soda cáustica acuosa o una sal sódica por lo general se produce en un disolvente, preferentemente en un rango de temperatura de 20 °C a 120 °C, de preferencia especial en un rango de temperatura de 40 °C a 70 °C, a presión normal. El compuesto de fórmula (II) se aisla de la suspensión obtenida a una temperatura entre -20 °C y 80 °C, preferentemente a una temperatura de 0 °C a 20 °C, a presión normal mediante filtración y después de esto se seca.

En caso que la reacción se produzca con la adición de una base, el compuesto de fórmula (I) por lo general en primer lugar se disuelve con la adición de una base orgánica en un disolvente a una temperatura de 20 °C a 120 °C, preferentemente a una temperatura de 40 °C a 70 °C, a presión normal y después de esto se produce el precipitado del compuesto de fórmula (II) mediante la adición de hidróxido de sodio o soda cáustica acuosa o una sal sódica a una temperatura de 20 °C a 120 °C, preferentemente a una temperatura de 40 °C a 70 °C, a presión normal. El compuesto de fórmula (II) se aisla de la suspensión obtenida a una temperatura entre -20 °C y 80 CC, preferentemente a una temperatura de 0 °C a 20 °C, a presión normal por filtración y después de esto se seca.

Se usaron el hidróxido de sodio y la soda cáustica acuosa y la sal sódica en una proporción molar de 0,8 a 2 equivalentes molares respecto del compuesto de fórmula (I). Preferentemente se usan el hidróxido de sodio y la soda cáustica acuosa y la sal sódica en una proporción molar de 1 ,0 a 1 ,4 equivalentes molares respecto del compuesto de fórmula (I).

Como sal sódica son adecuadas por ejemplo las sales de ácidos orgánicos como carboxilatos de sodio, como por ejemplo acetato de sodio o citrato de sodio, o sales de ácidos inorgánicos como por ejemplo carbonato de sodio, hidrocarbonato de sodio, fosfato de sodio, hidrofosfato de sodio o cloruro de sodio.

Como disolventes son adecuados los alcoholes de bajo peso molecular como por ejemplo metanol, etanol, n-propanol, iso-propanol, n-butanol, sec-butanol, iso-butanol, 1-pentanol, o tetrahidrofurano, o acetonitrilo, o tolueno, o 1 ,4-dioxano o mezclas de los disolventes mencionados, o mezclas de los disolventes indicados con agua. Preferentemente son metanol, etanol, 2-propanol, tetrahidrofurano o mezclas de los disolventes mencionados con agua. De preferencia especial son las mezclas de metanol con agua o etanol con agua en una relación entre 1 : 1 y 50 : 1 (v/v), de preferencia muy especial so las mezclas de metanol con agua en una relación entre 7 : 3 y 30 : 1 (v/v).

Como bases orgánicas son adecuadas las aminas terciarias como por ejemplo trietilamina o diisopropiletilamina. Preferentemente es la trietilamina. La base orgánica se usa en una proporción de 0 a 4 equivalentes molares respecto del compuesto de fórmula (I). Preferentemente se usa la base orgánica en una proporción de 0,7 a 1 ,5 equivalentes molares respecto del compuesto de fórmula (I).

La preparación del compuesto de acuerdo con la invención de fórmula (II) puede explicarse mediante el siguiente esquema de reacción: Esquema BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Figura 1 : Muestra los espectros IR del compuesto de fórmula (II) y del compuesto de fórmula (I).

Figura 2: Muestra los espectros Raman del compuesto de fórmula (II) y del compuesto de fórmula (I) Figura 3: Muestra los espectros UV/VIS del compuesto de fórmula (II) y del compuesto de fórmula (I) Figura 4: Muestra el espectro 1H RMN del compuesto de fórmula (II) Figura 5: Muestra el espectro 1H RMN del compuesto de fórmula (I) Figura 6: Muestra el espectro 13C RMN del compuesto de fórmula (II) Figura 7: Muestra el espectro 13C RMN del compuesto de fórmula (I) Figura 8: Muestra el espectro de masa del compuesto de fórmula (II) Figura 9: Muestra el espectro de masa del compuesto de fórmula (I) Figura 10: Muestra el difractograma de rayos X del compuesto de fórmula (II) Figura 11 : Difractograma de rayos X del compuesto de fórmula (I) DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN El compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención muestra un espectro de acción farmacológico valioso, no previsible. Por lo tanto, es adecuado para el uso como medicamento para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades en humanos y en animales.

El compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención se distingue como inhibidor específico de las HIF-prolil-4-hidroxilasas.

El compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención debido a sus propiedades farmacológicas puede usarse para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades cardiovasculares, especialmente de insuficiencia cardíaca, enfermedad cardíaca coronaria, angina de pecho, infarto de miocardio, apoplejía, arterioesclerosis, hipertonía esencial, pulmonar y maligna así como también enfermedad oclusiva arterial periférica.

El compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención por lo demás es adecuado para el tratamiento y/o la profilaxis de trastornos de la hematopoyesis, como p. ej. anemias idiopáticas, anemia renal y anemias concomitantes de una enfermedad tumoral (especialmente una anemia inducida por quimioterapia), de una infección (especialmente infección por VIH) u otra enfermedad inflamatoria, como p. ej. artritis reumatoidea. El compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención por lo demás es adecuado para el tratamiento de apoyo de anemias a causa de pérdida de sangre, anemia por carencia de hierro, anemia por carencia de vitaminas (p.ej. a causa de carencia de vitamina B12 o a causa de carencia de ácido fólico), anemia hipoplásica y aplásica, anemia hemolítica o para el tratamiento de apoyo de anemias a causa de trastornos del metabolismo de hierro (anemia sideroacréstica) o anemias a causa de otros trastornos endocrinos (p. ej., hipotireosis).

El compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención además es adecuado para incrementar el hematocrito con el objeto de obtener sangre para la autodonacíón antes de intervenciones quirúrgicas.

El compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención además puede usarse para el tratamiento y/o la profilaxis de condiciones isquémicas causados por intervenciones quirúrgicas y sus secuelas después de intervenciones quirúrgicas, especialmente operaciones cardíacas usando una máquina cardiopulmonar (p. ej., intervenciones de bypass, implantes de válvulas cardíacas), intervenciones en las carótidas, intervenciones en la arteria aorta e intervenciones con apertura mediante instrumental o penetración de la calota craneal. El compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención es adecuado además para el tratamiento general y/o la profilaxis en intervenciones quirúrgicas con la finalidad de acelerar la sanación de heridas y abreviar el tiempo de convalecencia.

El compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención además es adecuado para el tratamiento y la profilaxis de secuelas de estados isquémicos agudos y prolongados del cerebro (p. ej., apoplejía, asfixia de parto).

El compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención además puede usarse para el tratamiento y/o la profilaxis de cáncer y para el tratamiento y/o la profilaxis de una afección del estado de salud que se manifiesta durante el tratamiento del cáncer especialmente después de la terapia con citoestáticos, antibióticos y radiación.

El compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención es apropiado además para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades de tipo reumático y de otras formas de enfermedad que pertenecen a las enfermedades autoinmunes, y especialmente para el tratamiento y/o la profilaxis de una afección del estado de salud que se manifiesta durante el tratamiento de tales enfermedades.

Por lo demás, el compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención puede usarse para el tratamiento y/o la profilaxis de afecciones oculares (p. ej., glaucoma), del cerebro (p. ej., Parkinson, Alzheimer, demencia, sensación dolorosa crónica), de enfermedades renales crónicas, de insuficiencia renal y de falla renal aguda, como también para ayudar a la curación de heridas.

El compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención además es adecuado para el tratamiento y/o la profilaxis de una debilidad física general que incluso puede llegar a la caquexia, que se manifiesta con mayor frecuencia a edad más avanzada.

Adicionalmente, el compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención es adecuado para el tratamiento y/o la profilaxis de disfunción sexual.

Además el compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención es adecuado para el tratamiento y/o la profilaxis de Diabetes mellitus y sus afecciones secundarias, como p. ej. Macro- y microangiopatía diabética, nefropatía diabética y neuropatía.

Por lo demás, el compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención es adecuado para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades fibrósicas p. ej. del corazón, del pulmón y del hígado.

El compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención también es especialmente adecuado para la profilaxis y el tratamiento de la retinopatía de los prematuros (Retinopathia praematurorum).

La presente invención proporciona además el uso del compuesto de acuerdo con la invención de fórmula (II) para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades, especialmente de las enfermedades antes indicadas.

La presente invención proporciona además el uso del compuesto de acuerdo con la invención de fórmula (II) para la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades, especialmente de las enfermedades antes indicadas.

La presente invención proporciona además un procedimiento para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades, especialmente de las enfermedades antes indicadas usando una cantidad efectiva del compuesto de acuerdo con la invención de fórmula (II).

El compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención puede usarse solo o en caso necesario en combinación con otros principios activos. La presente invención proporciona además medicamentos, que contienen el compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención y uno o varios otros principios activos, especialmente para el tratamiento y/o la prevención de las enfermedades antes indicadas. Como principios activos adecuados para la combinación se indican preferentemente a modo de ejemplo: inhibidores de ACE, antagonistas del receptor de angiotensina II, bloqueadores de beta receptores, antagonistas de calcio, inhibidores de PDE, antagonistas del receptor de corticoides minerales, diuréticos, aspirina, suplementos de hierro, suplementos de vitamina B12 y ácido fólico, estatinas, derivados de Digitalis (Digoxina), quimioterapéuticos tumorales como también antibióticos.

En una realización preferente de la invención, se administra el compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención en combinación con inhibidor de ACE, como preferentemente y a modo de ejemplo enalapril, captopril, lisinopril, ramipril, delapril, fosinopril, quinopril, perindopril o trandopril.

En una realización preferente de la invención se administra el compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención en combinación con un antagonista All de angiotensina, como preferentemente y a modo de ejemplo losartán, candesartán, valsartán, telmisartán o embusartán.

En una realización preferente de la invención se administra el compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención en combinación con un bloqueador de beta receptores, como preferentemente y a modo de ejemplo propranolol, atenolol, timolol, pindolol, alprenolol, oxprenolol, penbutolol, bupranolol, metipranolol, nadolol, mepindolol, carazalol, sotalol, metoprolol, betaxolol, celiprolol, bisoprolol, carteolol, esmolol, labetalol, carvedilol, adaprolol, landiolol, nebivolol, epanolol o bucindolol.

En una realización preferente de la invención se administra el compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención en combinación con un antagonista de calcio, como preferentemente y a modo de ejemplo nifedipina, amlodipina, verapamilo o diltiazem.

En una realización preferente de la invención se administra el compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención en combinación con un inhibidor de la fosfod ¡este rasa (PDE), como preferentemente y a modo de ejemplo milrinona, amrinona, pimobendan, cilostazol, sildenafilo, vardenafilo o tadalafilo.

En una realización preferente de la invención se administra el compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención en combinación con un antagonista del receptor de corticoides minerales, como preferentemente y a modo de ejemplo espironolactona, eplerenona, canrenona o canrenoato de potasio.

En una realización preferente de la invención se administra el compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención en combinación con un diurético, como preferentemente y a modo de ejemplo furosemida, bumetanida, torsemida, bendroflumetiazida, clorotiazida, hidroclototiazida, hidroflumetiazida, meticlotiazida, politiazida, triclorometiazida, clorotalidona, indapamida, metolazona, quinetazona, acetazolamida, diclorofenamida, metazolamida, glicerina, isosorbida, manitol, amilorida o triamtereno.

En una realización preferente de la invención se administra el compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención en combinación con un inhibidor de HMG-CoA reductasa de la clase de las estatinas, como preferentemente y a modo de ejemplo lovastatina, simvastatina, pravastatina, fluvastatina, atorvastatina, rosuvastatina, cerivastatina o pitavastatina.

En una realización preferente de la invención se administra el compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención en combinación con un agente quimioterapéutico tumoral, como preferentemente y a modo de ejemplo del grupo de los complejos de platino, como p. ej. cisplatino y carboplatino, de los alquilantes, como p. ej. ciclofosfoamida y clorambucilo, de los antimetabolitos, como p. ej. 5-fluoruracilo y metotrexato, de los inhibidores de topoisomerasa, como p. ej. etoposida y camptotecina, de los antibióticos, como p. ej. doxorubicina y daunorubicina, o de los inhibidores de quinasa, como p. ej., sorafenib y sunitinib.

En una realización preferente de la invención se administra el compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención en combinación con un antibiótico, como preferentemente y a modo de ejemplo del grupo de las penicilinas, cefalosporinas o quinolonas, como p. ej. ciprofloxacina y moxifloxacina.

La presente invención proporciona además medicamentos que contienen el compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención, en general junto con uno o varios adyuvantes inertes, no tóxicos, adecuados para uso farmacéutico, como también su uso para los fines antes enunciados.

El compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención puede presentar una acción sistémica y/o local. A este fin se lo puede aplicar de manera adecuada, como p. ej. por vía oral, parenteral, pulmonar, nasal, sublingual, lingual, bucal, rectal, dérmica, transdérmica, conjuntiva, ótica o como implante o bien como prótesis endovascular.

Para estas vías de aplicación, el compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención puede administrarse en formas de aplicación adecuadas.

Para la administración oral son adecuadas formas de aplicación eficientes de acuerdo con el estado de la técnica que liberan el compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención de modo rápido y/o modificado, como p. ej. comprimidos (comprimidos recubiertos o no recubiertos, por ejemplo recubrimientos resistentes a jugos gástricos o de disolución lenta o con recubrimiento insolubles, que controlan la liberación del compuesto de acuerdo con la invención), comprimidos, obleas/láminas, liofilizados/láminas, cápsulas que se desintegran rápidamente en la cavidad bucal (por ejemplo, cápsulas de gelatina dura o blanda), grageas, granulados, pellets, polvos, emulsiones, suspensiones, aerosoles o soluciones.

La administración por vía parenteral se puede realizar evitando el paso de absorción (p. ej., por vía intravenosa, intrarterial, intracardial, intraespinal o intralumbar) o usando la absorción (p. ej., por vía intramuscular, subcutánea, intracutánea, percutánea o intraperitoneal). Para la administración por vía parenteral son adecuadas entre otras las formas de aplicación con preparados inyectables o para infusión en forma de soluciones, suspensiones, emulsiones, liofilizados o polvos estériles.

Para otras vías de administración son adecuadas, p. ej. formas farmacéuticas para inhalación (entre otros, inhaladores en polvo, nebulizadores), gotas, soluciones o aerosoles nasales, comprimidos para uso lingual, sublingual o bucal, obleas/láminas o cápsulas, supositorios, preparados óticos u oculares, cápsulas vaginales, suspensiones acuosas (lociones, mezclas agitables), suspensiones lipófilas, ungüentos, cremas, sistemas terapéuticos transdérmicos (p. ej., parches), leches, pastas, espumas, talco para espolvorear, implantes o prótesis endovasculares.

Preferentemente es la administración por vía oral o parenteral, especialmente la administración por vía oral y por vía intravenosa.

El compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención puede ser transformado a las formas de aplicación indicadas. Ello puede suceder de un modo en sí conocido al mezclarlo con adyuvantes inertes, no tóxicos, adecuados para uso farmacéutico. Forman parte de estos adyuvantes entre otros sustancias portadoras (por ejemplo celulosa microcristalina, lactosa, manitol), disolventes (p. ej., polietilenglicoles líquidos), emulsionantes y agentes de dispersión o reticulación (por ejemplo dodecilsulfato de sodio, polioxisorbitanoleato), aglutinantes (por ejemplo polivinilpirrolidona), polímeros sintéticos y naturales (por ejemplo albúmina), estabilizadores (p. ej., antioxidantes como por ejemplo ácido ascórbico), colorantes (p. ej., pigmentos inorgánicos, como por ejemplo óxidos de hierro) y sustancias mejoradoras del gusto y/o del olor.

En general resultó ventajoso administrar por vía parenteral cantidades de aproximadamente 0,001 a 1 mg/kg, de preferencia aproximadamente 0,01 a 0,5 mg/kg de peso corporal para lograr resultados efectivos. Para la aplicación por vía oral, la dosificación es aproximadamente 0,01 a 100 mg/kg, de preferencia aproximadamente 0,01 a 20 mg/kg y de preferencia muy especial de 0,1 a 10 mg/kg de peso corporal.

A pesar de ello, en su caso puede ser necesario apartarse de las cantidades indicadas y concretamente en relación con el peso corporal, la vía de aplicación, la reacción individual frente al principio activo, la forma y el momento de la preparación o bien el intervalo, en el que se realiza la aplicación. De esa manera, puede ser suficiente en algunos casos, administrar menos que la cantidad mínima antes indicada, mientras que en otros casos es necesario exceder el límite superior mencionado. En caso de aplicar cantidades más elevadas puede ser recomendable, distribuir estar en varias dosis individuales a lo largo del día.

Los ejemplos de realización indicados a continuación explican la invención. La invención no se limita a los ejemplos.

Los datos en porcentaje en los siguientes ensayos y ejemplos son, salvo indicación en contrario, porcentajes en peso; las partes son partes en peso. Las proporciones de disolventes, de dilución y los datos de la concentración de las soluciones líquido/líquido en cada caso se refieren al volumen.

A. Ejemplos Abreviaturas: ACN Acetonitrilo bS singulete ancho (en espectros RMN) D doblete (en espectros RMN) DSC calorimetría diferencial dinámica (Differential Scanning Calorimetry) % en peso porcentaje en peso M multiplete (en espectros RMN) n.d. no detectado RMN resonancia magnética nuclear (nuclear magnetic resonance) hr humedad relativa S singulete (en espectros RMN) seg. Segundos T triplete (en espectros RMN) v/v volumen/volumen d oscilaciones de deformación V oscilaciones de elongación Compuestos de partida: Ejemplo 1A Éster metílico del ácido 2-(1 H-1,2,3-triazol-1-il)acrílico Se disolvieron 450 g de éster etílico del ácido 2-(1H-1 ,2,3-tr¡azol-1-il)acético en 3,5 I de metanol, se diluyó con 30 g de trietilamina y se agitó durante 16 h a 22 °C. A continuación se eliminaron por destilación al vacío todos los disolventes. Se obtuvieron 410 g del compuesto del título en forma de aceite.

Ejemplo 2A Éster metílico del ácido 3-(Dimetilamíno)-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)acrílico Se diluyeron 400 g de éster metílico del ácido 2-(1 H-1 ,2,3-triazol-1-il)acrílico con 522 g de dimetilformamida-dimetilacetal y se calentaron hasta la ebullición. Se eliminaron por destilación las sustancias de bajo punto de ebullición que se formaban. Al cabo de 4 h se enfrió a 55 °C y se agregaron 1050 mi de ter-butiléter de metilo/ 2-propanol (3 : 1 v/v). La suspensión resultante se enfrió a 22 °C y se filtró. La torta de filtro se lavó varias veces con ter-butiléter de metilo y se secó al vacio a 40 °C. Se obtuvieron 493 g del compuesto del título como sólido.

Ejemplo 3A 1-[6-(morfolin-4-il)pir¡m¡din-4-il]-4-( H-1,2,3-triazol-1-il)-1 H-pirazol-5-ol (forma enol; fórmula (la)) o bien 2-[6-(morfolin-4-il)pir¡m¡dinH4-il]^4-(1H-1,2,3-triazol-1-¡l)-1,2-dihidro-3H-pirazol-3-ona (forma ceto; fórmula (Ib)) Se mezclaron 20 g de 4-(6-hidrazinopirimidin-4-il)morfolino y 24,6 g de éster metílico del ácido (2E/Z)-3-(dimetilam¡no)-2-(1 H-1 ,2>3-triazol-1-il)acrílico en 210 mi de acetato de etilo con 5,84 g de ácido trifluoroacético y se agitó 24 h bajo reflujo. La suspensión resultante se enfrió a 0 °C y se filtró. La torta de filtro se lavó con acetato de etilo, se aspiró intensamente y después de esto en 160 mi de agua. La suspensión se ajustó mediante la adición de 4,5 mi de ácido acético a un valor aproximado de pH 5, se agitó otros 15 minutos y se filtró. La torta de filtro se lavó dos veces con 50 mi de agua y después de esto se secó al vacío a 40 °C. Rendimiento: 26,0 g (79,4 % del teórico) del compuesto del título.

La preparación de los compuestos 4-(6-hidraz¡nop¡rim¡din-4-il)morfolin (Ejemplo N° 16A), éster etílico del ácido 2-(1W-1 ,2,3-tr¡azol-1-il)acético (Ejemplo N° 39A) y éster etílico del ácido 3-(dimet¡lamino)-2-(1/-/-1 ,2,3-triazol-1-il)acrílico (Ejemplo N° 3A) ya se describió en el documento WO 2008/067871.

La preparación del compuesto 2-(6-morfolin-4-ilpirimidin-4-il)-4-(1/-/-1 ,2,3-triazol-1-il)-1 ,2-dihidro-3/- -pirazol-3-ona a partir de 4-(6-hidrazinopirimidin-4-il)morfolina y éster etílico del ácido 3-(dimetilamino)-2-(1/-/-1 ,2,3-triazol-1-il)acrílico también se describió en el documento WO 2008/067871 (Ejemplo N° 71).

Ejemplos de realización: Ejemplo 1 1 -[6-(morfolin-4-il)pirimidin-4-il]-4-(1 H-1 ,2,3-triazo -il)-1 H-pirazol-5-olato sódico (compuesto de fórmula (II)) Ejemplo 1.1 Se suspendieron 10 g del compuesto del ejemplo 3A en 50 mi de metanol/agua (9 : 1 v/v). A la suspensión se añadió bajo agitación 3,4 g de soda cáustica al 45 % y se añadió además 50 mi de metanol/agua (9 : 1 v/v). La suspensión se calentó a 50 °C y se agitó durante 2 h a 50 °C. Después de esto se enfrió a 0 °C, se continuó agitando 5 durante 1 h a 0 °C y se filtró. La torta de filtro obtenida se lavó con metanol/agua (9 : 1 v/v) y se secó. Rendimiento: 10,1 g del compuesto de fórmula (II); 6,8 % en peso de Na Ejemplo 1.2 Se suspendieron 5 g del compuesto del ejemplo 3A en 60 mi de etanol/agua (1 : 1 í o v/v) y se diluyeron a 22 °C con 1 ,41 g de soda caústica al 45 %. La suspensión se agitó durante 3 días a 50 °C y durante 2 h a 20 °C. El sólido se separó por filtración, se lavó con 10 mi de agua y se secó. Rendimiento: 4 g del compuesto de fórmula (II). Ejemplo 1.3 Se suspendieron 30,25 g del compuesto del ejemplo 3A en 150 mi metanol/agua (9 : 1 15 v/v) a 22 °C. Se añadieron 13,3 mi de trietilamina y la mezcla se calentó a 60 °C. Al cabo de 15 min se filtró la solución obtenida prácticamente clara, se lavó el filtro con 10 mi de metanol/agua (9 : 1 v/v) y se mezcló el producto filtrado recolectado a 60 °C lentamente con 10,3 g de soda cáustica al 45 %. La suspensión resultante se mezcló con poca cantidad de cristales del compuesto de fórmula (II), se continuó agitando 20 durante 1 h a 60 °C, después de esto se enfrió lentamente a 0 °C y se filtró. La torta de filtro se lavó con 15 mi de metanol/agua (9 : 1 v/v) y se secó al vacío a 40 °C. Rendimiento: 25,1 g del compuesto de fórmula (II).

Ejemplo 1.4 Se suspendieron 25 g del compuesto del ejemplo 3A en 150 mi de metanol/agua (1 : 25 1 v/v) y se mezcló con 1 1 mi de trietilamina. La solución obtenida se calentó a 60 °C y se mezcló con 8,5 g de soda cáustica al 45 %. La suspensión resultante se enfrió lentamente a 22 °C, se agitó durante 2 h a 22 °C y después de esto 1 h a 0-5 °C. Después de la filtración se lavó la torta de filtro con 15 mi de metanol/agua (1 : 1 v/v) y se secó al vacío a 40 °C. Rendimiento: 26 g del compuesto de fórmula (II). 30 Calorimetría diferencial dinámica (DSC): Los termogramas se obtuvieron usando un calorímetro de barrido diferencial DSC 7 o bien Pyris-1 y un dispositivo para el análisis termogravimétrico TGA 7 de la empresa Perkin-Elmer.

Calorímetro de barrido diferencial DSC 7 o bien Pyris-1; fabricante: Perkin-Elmer; velocidad de calentamiento: 2 y 20 K/min: gas de barrido: nitrógeno; crisol: crisoles de aluminio no herméticos al gas; preparación de muestras: ninguna.

Dispositivo para el análisis termogravimétrico TGA 7; fabricante: Perkin-Elmer; velocidad de calentamiento: 10 Kmin"1; gas de barrido: nitrógeno, 20-30 ml/min; crisol: crisol de platino abierto; preparación de muestras: ninguna.

El 1-[6-(morfolin-4-il)pirimidin-4-il]-4-(1 H-1 ,2,3-triazol-1-il)-1 H-pirazol-5-olato sódico (compuesto de fórmula (II)) se disgrega a una temperatura superior a los 300 °C sin fundirse.

Adsorción y desorción de vapor de agua: La isotérmica de absorción de humedad se registró con un dispositivo analizador de vapor Dynamic Vapour Sorption Analyzer IGA Sorp de la empresa Hiden Analytical. La temperatura de medición fue de 25 °C. No hubo ninguna preparación de muestras.

Tabla 1 : adsorción y desorción de vapor de agua de 1-[6-(morfolin-4-il)pirimidin-4-il]-4-(1 H-1 ,2,3-triazol-1-il)-1 H-pirazol-5-olato sódico (compuesto de fórmula (II)) Datos de solubilidad: Procedimiento: Se prepararon soluciones saturadas de la sustancia de ensayo mediante la agitación durante 16 horas de una suspensión en agua a 25 °C. Las suspensiones obtenidas después se filtraron y se determinó el contenido en el filtrado mediante medición por HPLC.

Tabla 2: Solubilidad en agua Espectroscopia IR y Raman: Para la medición de las espectroscopias IR y Raman del compuesto de fórmula (II) se usaron espectrómetros FT/IR IFS 66v de Bruker y espectrómetros FT/Raman Multi AM de Bruker con los siguientes parámetros: Tabla 3: Asignación de bandas de oscilación características en los espectros IR o bien Raman del compuesto de fórmula (II) Para la medición de espectros IR y Raman del compuesto de fórmula (I) se usaron espectrómetros FT/IR Vértex 80v de Bruker y espectrómetros FT/Raman MultiRAM de Bruker con los siguientes parámetros: Tabla 4: Asignación de bandas de oscilación características en los espectros IR o bien los espectros Raman del compuesto de fórmula (I) Espectroscopia UV7VIS: Los espectros UV/VIS se midieron en un espectrómetro Perkin Elmer (Lambda 40P) con las siguientes condiciones o bien parámetros: Cubeta: longitud de pasaje 1 cm; vidrio de cuarzo Rango de cantidad de ondas: 200 - 800 nm Ranura de apertura: 1 nm Preparación de muestras: aprox. 1 mg/100 mi de acetonitrilo/agua 1 :1 Bandas: 285; 249 nm de compuesto de fórmula (II) y 289,3; 248,2 nm de compuesto de fórmula (I) Tabla 5: Cálculo de la absorción específica y del coeficiente de absorción molar Espectroscopia RMN: Los espectros de RMN se registraron en un espectrómetro RMN (Advance) de Bruker en las siguientes condiciones o bien parámetros: Fórmulas estructurales del compuesto de fórmula (II) y del compuesto de fórmula (I) con asignación de las respectivas señales RMN (II) (l) Tabla 6: Espectro 1H RMN del compuesto de fórmula (II) - desplazamiento químico, multiplicidad de señal, número relativo de protones (la numeración de los átomos H se refiere a la fórmula estructural para la asignación de las respectivas señales RMN) Tabla 7: Espectro 1H RMN del compuesto de fórmula (I) - desplazamiento químico, multiplicidad de señal, número relativo de protones (la numeración de los átomos H se refiere a la fórmula estructural para la asignación de las respectivas señales RMN) Tabla 8: Espectro 13C RMN del compuesto de fórmula (II) - desplazamiento químico, multiplicidad de señal, número relativo de núcleos C en el compuesto de fórmula (II) (la numeración de los átomos C se refiere a la fórmula estructural para la asignación de las respectivas señales RMN) Tabla 9: Espectro 3C RMN del compuesto de fórmula (I) - desplazamiento químico, multiplicidad de señal, número relativos de núcleos C en el compuesto de fórmula (I) (la numeración de los átomos C se refiere a la fórmula estructural para la asignación de las respectivas señales RMN) Espectroscopia de masa: El espectro de masa se registró en un espectrómetro de masa de Waters (ZQ) en las condiciones o bien parámetros indicados a continuación: Tabla 10: Interpretación del espectro de masa del compuesto de fórmula (II) Análisis elemental: Tabla 12: Resultados del análisis elemental del compuesto de fórmula (II) Tabla 13: Resultados del análisis elemental del compuesto de fórmula (I) Difractometría de rayos X: Difractómetro de transmisión PANalytical X'Pert PRO con contador PIXcel (Multichannel): Radiación: cobre, K alfa Monocromador primario: espejo de rayos X para focalización Longitud de onda (K1 ): 1 ,5406 A Longitud de onda (K2): 1 ,5444 Á Parámetros del generador: 40 kV, 40 mA Rango de medición: 2-38° Condiciones ambientales: 25 °C, 40 - 60 % hr o bien sistema de difracción de polvo STOE: Difractómetro: transmisión Monocromador: germanio curvado (111) Generador : 45 kV, 35 mA Longitud de onda: 1.540598 Cu Detector: PSD lineal Modo de escaneo: transmisión/ PSD móvil / omega fijo Tipo de escaneo: 2Theta:Omega Condiciones ambientales: 25 °C, 40 - 60 % hr Tabla 14: Difractometria de polvo por rayos X del compuesto de fórmula (II) Tabla 15: Difractometria de polvo por rayos X del compuesto de fórmula (I) B. Evaluación de la efectividad farmacológica Las propiedades farmacológicas de los compuestos de acuerdo con la invención se pueden mostrar en los siguientes ensayos: Abreviaturas: DMEM medio de Eagle modificado por Dulbecco FCS suero fetal de ternero TMB 3,3',5,5 -tetrametilbencidina Tris tris(hidroximetil)-aminometano 1. Ensayos in vitro para la determinación de la actividad y la selectividad de los inhibidores de HIF-prolil-4-hidroxilasa 1.a) Inhibición de la actividad de la HIF-prolilhidroxilasa: La HIF hidroxilada se enlaza específicamente con el complejo-C de Hippel-Lindau proteína-elongina B-elongina (complejo VBC). Esta interacción sólo se produce cuando la HIF está hidroxilada en un radical prolilo conservado. Constituye la base para la determinación bioquímica de la actividad de la HIF-prolilhidroxilasa. El ensayo se describe en la forma descrita [Oehme F., Jonghaus W., Narouz-Ott L., Huetter J., Flamme I., Anal. Biochem. 330 (1), 74-80 (2004)]: Se incubó una placa de microtitulación clara de 96 cavidades recubierta con NeutrAvidin HBC (empresa Pierce) durante 30 minutos con caseína bloqueante.

Después de esto se lavó la placa tres veces con cada vez 200 µ? de tampón de lavado (Tris 50 mM, pH 7,5, NaC1 100 mM, caseína bloqueante 10 % (v/v), 0,05 % (v/v) Tween 20) por cavidad: El péptido biotina-DLDLEMLAPYIPMDDDFQL (empresa Eurogentec, 4102 Seraing, Bélgica) se agrega en una concentración de 400 nM en 100 µ? de tampón de lavado. Este péptido se usa como sustrato para la hidroxilación de prolilo y se une a la placa de microtitulación. Después de 60 minutos de incubación se lava la placa tres veces con tampón de lavado, se incuba durante 30 minutos con biotina 1 mM en caseína bloqueante y a continuación se lava tres veces con tampón de lavado.

Para realizar las reacciones de la prolilhidroxilasa, se incuba al sustrato de péptido ligado a la placa durante 1 a 60 minutos con un lisato celular que contiene prolilhidroxilasa. Las reacciones se producen en 100 µ? de tampón de reacción (Tris 20 mM, pH 7,5, KCI 5 mM, MgCI2 1 ,5 mM, 2-oxogl uta rato 1 µ?-1 mM, FeS04 10 µ?, ascorbato 2 mM) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción además contiene el inhibidor de la prolilhidroxilasa en diferentes concentraciones. La sustancia de ensayo se usa preferentemente, pero no exclusivamente en concentraciones entre 1 nM y 100 µ?. Mediante el lavado triple de la placa con el tampón de lavado se detienen las reacciones.

Para la determinación cuantitativa de la hidroxilación de prolilo se adiciona una proteína de fusión, que contiene tanto la tioredoxina a partir de E. coli como también el complejo VBC, en 80 µ? de tampón de enlace (Tris 50 mM, pH 7,5, NaCI 120 mM). Al cabo de 15 minutos se añaden 10 µ? de una solución de anticuerpo anti-tioredoxina policlonal de conejo en tampón de enlace. Después de otros 30 minutos se adiciona 10 µ? de una solución de inmunoglobulina anti-conejo acoplada con peroxidasa de rábano picante en tampón de enlace. Después de 30 minutos de incubación a temperatura ambiente se lava tres veces con tampón de lavado para eliminar el complejo VBC sin ligar y anticuerpos. Para determinar la cantidad de complejo VBC ligado, se incuba durante 15 minutos con TMB. La reacción cromática se finaliza con la adición de 100 µ? de ácido sulfúrico 1 M. Al medir la densidad óptica a 450 nm se determina la cantidad de complejo VBC enlazado. Es proporcional a la cantidad de prolina hidroxilada en el sustrato péptido.

Para la detección de la hidroxilación de prolilo se puede usar alternativamente un complejo VBC acoplado con europio (empresa Perkin Elmer). En ese caso se determina la cantidad de complejo VBC ligado mediante fluorescencia resuelta en el tiempo. Además es posible usar complejo VBC marcado con [35S]-metionina. Para ello el complejo VBC con marcación radioactiva puede prepararse mediante la transcripción traslación in vitro en lisato de reticulocitos.

El compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención inhibe la actividad de la HIF-prolilhidroxilasa en este ensayo con un valor IC50 de 0,47 µ? (valor medio para EGLN2/PHD1 ) o bien 0,14 µ? (valor medio para EGLN1/PHD2). 1.b) Ensayo in vitro celular, funcional: La cuantificación de la efectividad del compuesto de acuerdo con la invención se realiza mediante una línea celular recombinante. La célula se deriva originariamente de una línea celular de carcinoma pulmonar humano (A549, ATCC: American Type Culture Collection, Manassas, VA 20108, EE.UU.). La línea celular de ensayo se transforma de manera estable con un vector que contiene el gen reportero de la Photinus piralis-luciferasa (denominado en adelante luciferasa) bajo el control de un promotor mínimo artificial. El promotor mínimo se compone de dos elementos responsables de la hipoxia corriente arriba de la caja TATA [Oehme F., Ellinghaus P., Kolkhof P., Smith T.J., Ramakrishnan S., Hütter J., Schramm M., Flamme I., Biochem. Biophys. Res. Commun. 296 (2), 343-9 (2002)]. Bajo la acción de la hipoxia (p. ej., cultivo en presencia del 1 % de oxígeno durante 24, horas) o bajo la acción de inhibidores de dioxigenasa no selectivos (p. ej., desferroxamina en una concentración de 100 µ?, cloruro de cobalto en una concentración de 100 µ? o éster dietílico de /V-oxalilglicina en una concentración de 1 mM) la línea celular de ensayo produce luciferasa, que puede ser detectada y cuantificada con ayuda de reactivos de bioluminiscencia adecuados (p. ej., Steady-Glo® Luciferase Assay System, Promega Corporation, Madison, Wl 53711 , EE.UU.) y de un luminómetro adecuado.

Desarrollo del ensayo: Las células se colocan el día previo al ensayo en una cantidad exacta de medio de cultivo (DMEM, 10 % FCS, glutamina 2 mM) en una placa de microtitulación de 384 o 1536 cavidades y se mantienen en un incubador de células (96 % humedad ambiental, 5 % v/v CÜ2, 37 °C). El día del ensayo se adicionan al medio de cultivo las sustancias de ensayo en concentraciones escalonadas. En preparados que se usan como control negativo no se agrega ninguna sustancia de ensayo a las células. Como control positivo para determinar la sensibilidad de la célula a los inhibidores se adiciona p. ej. desferroxamina en concentraciones finales de 100 µ?. De 6 a 24 horas después de pasar las sustancias de ensayo a las cavidades de la placa de microtitulación se mide la señal lumínica resultante en el luminómetro. Mediante los valores de medición se elabora una relación dosis-efecto que se usa como base para la determinación de las concentraciones efectivas de la mitad del máximo (denominado valor EC5o).

El compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la invención presenta en el ensayo aquí descrito un valor EC50 de 7 µ?. 1.c) Ensayo in vitro celular, funcional para modificar la expresión génica: Para estudiar la modificación de la expresión de ARNm específicos en líneas celulares humanas después del tratamiento con sustancias de ensayo, se cultivan las siguientes líneas celulares en placas de 6 o 24-cavidades: células de hepatoma humano (HUH, JCRB Cell Bank, Japón), fibroblastos renales embrionales humanos (HEK/293, ATCC, Manassas, VA 20108, EE.UU.), células de carcinoma cervical humano (HeLa, ATCC, Manassas, VA 20108, EE.UU.), células endoteliales de venas de cordón umbilical (HUVEC, Cambrex, East Rutherford, New Jersey 07073, EE.UU.). Al cabo de 24 horas después de la adición de las sustancias de ensayo se lavan las células con solución salina con tampón de fosfato y de ellas se obtiene el ARN total usando un procedimiento adecuado (p. ej., reactivo Trizol®, Invitrogen GmbH, 76131 Karlsruhe, Alemania).

Para un experimento de análisis típico se produce la digestión con DNasa I de 1 pg por vez del ARN total obtenido de ese modo y se traduce usando una reacción de transcriptasa inversa adecuada (ImProm-ll Reverse Transcription System, Promega Corporation, Madison, Wl 53711 , EE.UU.) en un ADN complementario (DNAc). Se usa en cada caso 2,5 % del preparado de ADNc así obtenido para la reacción en cadena de polimerasa. El nivel de expresión del ARNm de los genes a estudiar se analiza mediante la real time quantitative polymerase chain reaction TaqMan-PCR; Heid C.A., Stevens J., Livak K.J., Williams P.M., Genome Res. 6 (10), 986-94 (1996)] usando un instrumento de detección de secuencia ABI Prism 7700 (empresa Applied Biosystems, Inc.). Las combinaciones de sondas primer usadas para ello se generan mediante el software Primer Express 1.5 (empresa Applied Biosystems, Inc.). En detalle se analizan los ARNm de eritropoyetina, carboanhidrasa IX, lactato deshidrogenasa A y el factor de crecimiento de endotelío vascular. 2. Ensayos in vivo para la comprobación del efecto en el sistema cardiovascular 2.a) Ensayo in vivo para modificar la expresión génica: Se administra a ratones o a ratas los compuestos de ensayo disueltos con 5 disolventes adecuados, ya sea por vía oral mediante administración por sonda esofágica, o por vía intraperitoneal o intravenosa. Las dosificaciones típicas son 0,1 , 0,5, 1 , 5, 10, 20, 50, 100 y 300 mg de sustancia por peso corporal y administración. A los animales de control solo se les administró disolvente. A las 4, 8 o 24 horas después de la administración de la sustancia de ensayo se sacrificó a los animales con una í o sobredosis de isoflurano y a continuación con rotura de cuello y se retiraron los órganos a analizar. Algunas partes de los órganos se congelaron súbitamente en nitrógeno líquido. De las partes de órganos se obtiene ARN total tal como se describió en B.1.a) y se traduce ese en un ADNc. El nivel de expresión del ARNm de los genes a analizar se estudia mediante la real time quantitative polymerase chain reaction [TaqMan-PCR; 15 Heid C.A., Stevens J., Livak K.J., Williams P.M., Genome Res. 6 (10), 986-94 (1996)] empleando un instrumento de detección de secuencia ABI Prism 7700 (empresa Applied Biosystems, Inc.).

La sustancia de acuerdo con la presente invención en comparación con el control con placebo después de la administración oral o parenteral, produce un 20 aumento significativo, dependiente de la dosis, del ARNm de la eritropoyetína en el riñon. 2.b) Determinación del nivel de eritropoyetína en suero: A los ratones o a las ratas se les administra la sustancia de ensayo en un disolvente adecuado ya sea por vía intraperitoneal u oral una o dos veces por día. Las 25 dosificaciones típicas son 0,1 , 0,5, 1 , 5, 10, 20, 50, 100 y 300 mg de sustancia por peso corporal y administración. A los animales de control solo se les administró disolvente. Antes de la aplicación y cuatro horas después de la última administración de la sustancia se realiza a los animales bajo una anestesia breve una extracción de sangre del plexo venoso retro orbital o de la vena de la cola. Mediante la adición de heparína 30 de litio se evita la coagulación de la sangre. Se obtiene plasma sanguíneo mediante centrifugación. En el plasma sanguíneo se determina el contenido de eritropoyetína usando un ensayo ELISA para eritropoyetina (Quantikine® mouse Epo Immunoassay, R&D Systems, Inc., Minneapolis, EE.UU.) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Los valores de medición se convierten en pg/ml usando una medición de referencia realizada para eritropoyetina de ratón.

La sustancia de acuerdo con la presente invención después de la administración oral o parenteral, produce un aumento significativo, dependiente de la dosis, de la eritropoyetina plasmática respecto del valor inicial y del control con placebo. 2.c) Determinación de la composición celular de la sangre periférica: A los ratones o a las ratas se les administra la sustancia de ensayo en un disolvente adecuado ya sea por vía intraperitoneal u oral una o dos veces por día durante varios días. Las dosificaciones típicas son 0,1 , 0,5, 1 , 5, 10, 20, 50, 100 y 300 mg de sustancia por peso corporal y administración. A los animales de control solo se les administró disolvente. Al final del ensayo se realiza a los animales bajo una anestesia breve una extracción de sangre del plexo venoso retro orbital o de la vena de la cola y se evita la coagulación mediante la adición de citrato de sodio. En un equipo de medición electrónico adecuado se determina en las muestras de sangre las concentraciones de eritrocitos, leucocitos y trombocitos. Las concentraciones de los reticulocitos se determinan al realizar frotis de sangre que se colorean con una solución colorante adecuada para ello (empresa KABE Labortechnik, Nümbrecht), mediante análisis microscópico de 1000 eritrocitos por vez. Para la determinación del hematocrito se extrae sangre del plexo venoso retro orbital usando un capilar para hematocrito y se lee en forma manual el valor del hematocrito después de centrifugar los capilares en una centrífuga adecuada para ello.

La sustancia de acuerdo con la presente invención después de la administración oral o parenteral, produce un aumento significativo, dependiente de la dosis, del hematocrito, del número de eritrocitos y de los reticulocitos respecto del valor inicial y del control con placebo.

C. Ejemplos de realización para composiciones farmacéuticas Los compuestos de acuerdo con la invención pueden ser transformadas de la siguiente manera en preparaciones farmacéuticas: Comprimido: Composición: 100 mg del compuesto de acuerdo con la invención, 50 mg de lactosa (monohidrato), 50 mg de almidón de maíz (nativo), 10 mg de polivinilpirrolidona (PVP 25) (empresa BASF, Ludwigshafen, Alemania) y 2 mg de estearato de magnesio. Peso del comprimido 212 mg. Diámetro 8 mm, radio de curvatura 12 mm.

Preparación: La mezcla del compuesto de acuerdo con la invención, lactosa y almidón es granulada con una solución al 5 % (m/m) de la PVP en agua. El granulado se mezcla después del secado con el estearato de magnesio durante 5 minutos. Esta mezcla se comprime con una prensa usual para comprimidos (para el tamaño del comprimido, ver arriba). Como valor de referencia para la compresión se usa una fuerza de prensado de 15 kN.

Suspensión de aplicación oral: Composición: 1000 mg del compuesto de acuerdo con la invención, 1000 mg de etanol (96 %), 400 mg de Rhodigel® (goma de xantano de la empresa FMC, Pennsilvania, EE.UU.) y 99 g de agua.

Una dosis individual de 100 mg del compuesto de acuerdo con la invención equivale a 10 mi de suspensión oral.

Preparación: Se suspende el Rhodigel en etanol, se agrega el compuesto de acuerdo con la invención a la suspensión. Se agrega agua bajo agitación. Hasta finalizar el hinchamiento del Rhodigel se continúa agitando durante aproximadamente 6 h.

Solución de aplicación oral: Composición: 500 mg del compuesto de acuerdo con la invención, 2,5 g de polisorbato y 97 g de polietilenglicol 400. Una dosis individual de 100 mg del compuesto de acuerdo con la invención equivalen a 20 g de solución oral.

Preparación: Se suspende el compuesto de acuerdo con la invención en la mezcla de polietilenglicol y polisorbato bajo agitación. El procedimiento de agitación se continúa hasta la completa disolución del compuesto de acuerdo con la invención.

Solución i.v.: Se disuelve el compuesto de acuerdo con la invención en una concentración inferior a la solubilidad de saturación en un disolvente fisiológicamente compatible (p. ej., solución salina isotónica, solución de glucosa al 5 % y/o solución de PEG 400 al 30 %). La solución se filtra de forma estéril y se envasa en viales para inyección estériles y libres de pirógenos.

Claims (11)

REIVINDICACIONES

1. 1 -[6-(morfolin-4-il)pirimidin-4-il]-4-(1 H-1 ,2,3-triazol-1 -il)-1 H-pirazol-5-olato sódico de acuerdo con el compuesto de fórmula (II)

2. El compuesto de fórmula (II) de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque el compuesto de fórmula (II) se presenta en forma cristalina.

3. El procedimiento para la preparación del compuesto de fórmula (II) de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el compuesto de fórmula (I) ( la ) ( I ) ( Ib ) se hace reaccionar en un disolvente con hidróxido de sodio o soda cáustica acuosa o una sal sódica, en su caso con la adición de una base.

4. El procedimiento para la preparación del compuesto de fórmula (II) de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el compuesto de fórmula (I) se hace reaccionar en un disolvente con soda cáustica acuosa, en su caso con la adición de una base.

5. El procedimiento para la preparación del compuesto de fórmula (II) de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el compuesto de fórmula (I) se hace reaccionar en un disolvente con soda cáustica acuosa, con la adición de trietilamina.

6. El compuesto de conformidad con una de las reivindicaciones 1 ó 2, para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades.

7. Uso del compuesto como el que se reclama en una de las reivindicaciones 1 ó 2, para la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades.

8. Uso del compuesto como el que se recima en una de las reivindicaciones 1 ó 2, para la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades cardio-circulatorias, insuficiencia cardíaca, anemia, enfermedades renales crónicas e insuficiencia renal.

9. Un medicamento que contiene el compuesto como el que se reclama en una de las reivindicaciones 1 ó 2 en combinación con un adyuvante inerte, no tóxico, adecuado para uso farmacéutico.

10. Un medicamento, caracterizado porque comprede el compuesto como el que se reclama en una de las reivindicaciones 1 ó 2 en combinación con otro principio activo.

11. El medicamento de conformidad con la reivindicación 9 ó 10, para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades cardio-circulatorias, insuficiencia cardíaca, anemia, enfermedades renales crónicas e insuficiencia renal.