MX2012010288A - Inhibidores de arilfuorofosfato de co-transporte de sodio/fosfato de membrana apical intestinal. - Google Patents

Abstract

La presente invención está dirigía a fluorofosfatos, y sus composiciones farmacéuticas, los cuales son inhibidores de co-transporte de sodio/fosfato apical intestinal y son útiles en el tratamiento de hiperfosfatemia, para reducir niveles de fosfato en sangre, y tratar hipertensión.

Description

INHIBIDORES DE ARILFLUOROFOSFATO DE CO-TRANSPORTE DE SODIO/FOSFATO DE MEMBRANA APICAL INTESTINAL REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reclama el beneficio de la fecha de presentación de la Solicitud Provisional de E.U.A. No. 61/310,902, que se presentó el 5 de marzo, 2010.

CAMPO DE LA INVENCION Esta invención se refiere a arilfluorofosfato hidrófilos que actúan para inhibir el co-transporte de fosfato mediado por Na de membrana apical intestinal, tratamientos efectivos para reducir el fosfato en la sangre, métodos para tratar hiperfosfatemia, y métodos para hacer inhibidores.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION El hiperparatiroidismo secundario es una complicación común y severa de insuficiencia renal crónica (CRF) que resulta en osteodistrofia renal, hipertensión, acidosis metabólica, y contribuye a enfermedad cardiaca. La hiperfosfatemia debido a una excreción disminuida de fosfato renal se piensa que contribuye a hiperparatiroidismo secundario en pacientes con insuficiencia renal crónica. Recientemente, se ha establecido que disminuir la carga de fosfato puede reducir hiperparatiroidismo secundario y posiblemente conservar la función renal.

En mamíferos, la absorción de fosfato intestinal ocurre en la membrana de microvellosidades en el intestino próximo (duodenal y yeyuno). La absorción de fosfato tiene un componente activo y un componente pasivo. La captación activa de fosfato se acopla a la captación de Na* b ajo su gradiente de potencial electroquímico por el co-transportador de NaVfosfato. El componente activo de la absorción de fosfato se regula por fósforo dietético y suero 1,25 dihidroxivitamina D3. Se ha reportado que los cambios en el fósforo dietético alteran la expresión de NaPi II b en el intestino. La captación de fosfato independiente de Na+ ocurre por un mecanismo desconocido bajo su gradiente de potencial electroquímico. El mecanismo de transporte de fosfato a través de la membrana basolateral intestinal no ha sido definido.

Las chalconas son una clase de acetonas aromáticas con actividad biológica importante y su efecto sobre transporte de membrana es bien conocido. La floridzina, es un miembro de las chalconas, es un potente inhibidor de co-transportadores de Na+/glucosa de membrana de microvellosidades intestinal. La aglucona de floridzina, floretina, inhibe una variedad de transportadores de membrana que incluyen Banda 3 (AE-I, 9, 10) y el portador de glucosa de fusión facilitada (GLUT-4, 9, 14). Se ha mostrado que un derivado de floretina fosforilada, 2'-PP, un potente inhibidor del co-transportador de Na+/fosfato intestinal pero no el co-transportador de Na+/fosfato de túbulo próximo renal primario. La mayor limitación de 2'-PP para el tratamiento de hiperfosfatemia es que es un éster de fosfato, y por lo tanto, se degrada por fosfatasas, incluyendo las fosfatasas de membrana apical intestinal, fosfatasa alcalina.

De esa forma, se necesitan continuamente agentes nuevos o mejorados que inhiban el co-transporte de fosfato mediado por Na* de membrana apical intestinal para desarrollar fármacos nuevos y más efectivos que están dirigidos al tratamiento de hiperparatiroidismo secundario causado por CRF y que resulta en osteodistrofia renal, hipertensión, acidosis metabólica, y que contribuye a enfermedad cardiaca. 2'-FPP que es 30 veces más potente que 2'-PP y también es el más estable para estearasas y representa un mayor avance y mejora en 2'-PP bien conocido por ser eficaz en el tratamiento de CRF. Los compuestos, composiciones y métodos aquí descritos están dirigidos a estas necesidades y a otros fines.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención proporciona, entre otros, compuestos que conforman la Fórmula I: 1 o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde los miembros constituyentes se definen aquí. Los compuestos pueden inhibir el co-transporte de fosfato mediado por sodio de membrana apical intestinal.

La presente invención además proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos un portador farmacéuticamente aceptable. El compuesto puede estar presente en una cantidad que confiere un resultado clínicamente benéfico en un paciente al cual se le ha administrado del compuesto. De esa forma, las composiciones pueden incluir cantidades terapéuticamente efectivas de los compuestos aquí descritos.

La presente invención además proporciona métodos para inhibir el co-transporte de sodio/fosfato apical intestinal, que comprende contactar el epitelio intestinal con un compuesto de la Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

La presente invención además proporciona métodos para tratar una enfermedad o un trastorno asociado con niveles anormales de fosfato en sangre en un paciente al administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

La presente invención además proporciona métodos para tratar enfermedades tales con insuficiencia renal crónica, osteodistrofia renal, hipertensión, acidosis metabólica, y enfermedad cardiaca en un paciente al administrar al paciente un compuesto de la Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. La insuficiencia renal puede ser insuficiencia renal de etapa terminal.

La presente invención además proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usarse en la preparación de un medicamento o para la producción de un medicamento para usarse en terapia, que incluye terapia para una condición aquí descrita.

La presente invención proporciona procedimientos para tratar un compuesto de la Fórmula I: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R es alquilo de C2.A W se selecciona de NRA, O, y S; Z se selecciona de un enlace individual, -C(O)-, NRA, O, y S; X1 y X2 cada uno se selecciona independientemente de -OH, -NHRA, y -C(0)OH; RA es H o alquilo de C1 3; m es 1, 2, 3, ó 4; y n es 1, 2, 3, ó 4.

La presente invención proporciona procedimientos para preparar un compuesto de la Fórmula 1-1: 1-1.

La presente invención proporciona procedimientos para preparar un compuesto de la Fórmula 1-2: La presente invención proporciona procedimientos para brotar un compuesto de la Fórmula 1-3: La presente invención proporciona procedimientos para preparar un compuesto de la Fórmula I-4: 1-4.

DESCRIPCION DETALLADA La presente invención proporciona, entre otros, compuestos que inhiben el co-transporte de Na/fosfato apical y son útiles, por ejemplo, para reducir los niveles de fosfato en sangre, y en el tratamiento de hiperfosfatemia. Los compuestos de la invención incluyen aquellos que tienen la Fórmula I: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R es alquilo de C2^¡ W se selecciona de NRA, O, y S, Z se selecciona de un enlace individual, -C(O)-, NRA, O, y S; cada uno de X1 y X2 se selecciona independientemente de -OH, NHRA, y -C(0)OH; RA es H o alquilo de C1.3, m es 1, 2, 3, ó 4; y n es 1 , 2, 3, ó 4.

En otras modalidades, cada uno de X1 y X2 se selecciona independientemente de OR1 y OR2, en donde R1 y R2 son independientemente H o un grupo protector. En otras modalidades, X1 y X2 se seleccionan independientemente de COOR1 y COOR2, en donde R1 y R2 son independientemente H o un grupo protector.

En algunas modalidades, R es -CH2-CH2-CH2-CH2-.

Algunas modalidades, W se selecciona de NRA y O.

En algunas modalidades, W es O.

En algunas modalidades, Z se selecciona de un enlace individual y -C(O)-.

En algunas modalidades, Z es -C(O)-.

En algunas modalidades, X1 y X2 se seleccionan independientemente de OH y NH2.

En algunas modalidades, X1 y X2 ambos son OH.

En algunas modalidades, n es 1 ó 2.

En algunas modalidades, m es 1 ó 2.

En algunas modalidades, m es 2 y n es 1.

En algunas modalidades, R es -CH2-CH2 y Z es -C(O)-.

En algunas modalidades, W es O, y X1 y X2 ambos son OH.

Como se utiliza aquí, el término "alquilo" pretende hacer referencia a un grupo hidrocarburo saturado que es de cadena recta o ramificada. Los grupos de alquilo ilustrativos incluyen etilo (Me), etilo (Et), propilo (por ejemplo, N-propilo e isopropilo), butilo (por ejemplo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, t-butilo), pentilo (por ejemplo, n-pentilo, isopentilo, sec-pentilo, neopentilo), y similares. Cualquier grupo alquilo puede contener de 1 a aproximadamente 20, de 2 a aproximadamente 20, de 1 a aproximadamente 10, de 1 a aproximadamente 8, de 1 a aproximadamente 6, de 1 a aproximadamente 4, o de uno a aproximadamente 3 átomos de carbono.

Como se utiliza aquí, "arilo" se refiere a hidrocarburos aromáticos monocíclicos o policíclicos (por ejemplo, que tienen 2, 3 ó 4 anillos fusionados) tales como, por ejemplo, fenilo, naftilo, antracenilo, fenantrenilo, indanilo, ¡ndenilo, y similares. En algunas modalidades, los grupos de arilo tienen de 6 a aproximadamente 20 átomos de carbono.

Como se utiliza aquí, "heteroarilo" se refiere a un heterociclo aromático que tiene al menos un miembro de anillo de átomo heterogéneo tal como azufre, oxígeno, o nitrógeno. Los grupos de heteroarilo incluyen sistemas monocíclicos y policíclicos (por ejemplo, que tienen 2, 3 ó 4 anillos fusionados). Ejemplos de grupos de heteroarilo incluyen sin limitación, piridilo, piridivinilo, pirazinilo, piridazinilo, triazinilo, furilo, quinolilo isoquilonilo, tienilo, imidazolilo, tiazolilo, indolilo, pirrilo, oxalolilo, benzofurilo, benzotienilo, benztiazolilo, isoxazolilo, pirazolilo, triazolilo, tetrazolilo, indazolilo, 1 , 2 ,4-t iad iazo I i lo , isotiazolilo, benzotienilo, purinilo, carbazolilo, bencimidazolilo, indolinilo, y similares. Ejemplos de grupos de heteroarilo bicíclicos incluyen sin limitación, purinilo, indolilo, y similares. En algunas modalidades, cualquier N que'forma un anillo en una porción de heteroarilo puede sustituirse por oxo. En algunas modalidades, los grupos de heteroarilo tienen la forma de 1 a aproximadamente 20 átomos de carbono, y en modalidades adicionales de aproximadamente 3 a aproximadamente 20 átomos de carbono. En algunas modalidades, el grupo de heteroarilo contiene 3 a aproximadamente 14, 4 a aproximadamente 14, 9 a aproximadamente 10, ó 5 a 6 átomos que forman un anillo. En algunas modalidades, el grupo de heteroarilo tiene 1 a aproximadamente 4, 1 a aproximadamente 3, ó 1 a 2 átomos heterogéneos.

Sé debe apreciar que ciertas características de la invención, que son, para claridad, descritas en el contexto de modalidades separadas, también pueden p roporcionarse en combinación con una modalidad individual. De forma inversa, varias características de la invención que, por brevedad, se describen en el contexto de una modalidad individual, también pueden proporcionarse separadamente o en cualquier subcombinación adecuada.

Los compuestos aquí descritos pueden ser asimétricos (por ejemplo, que tienen uno o más estereocentros) . Todos los esteroisómeros, tales como enantiómeros y diaestereómeros, se pretenden a menos que se indique de otra forma. Los compuestos de la presente invención que contienen átomos de carbono asimétricamente sustituidos pueden aislarse en formas ópticamente activas o racémicas. Los métodos sobre cómo preparar formas ópticamente activas de materiales de partida ópticamente inactivos se conocen en la técnica, tales como por resolución de mezclas racémicas o por síntesis estéroselectiva. Muchos isómeros geométricos de olefinas, enlaces dobles C = N, y similares también pueden estar presentes en los compuestos aquí descritos, y todos esos isómeros estables se contemplan en la presente invención. Los isómeros geométricos cis y trans de los compuestos de la presente invención se describen y pueden aislarse como una mezcla de isómeros o como formas isoméricas separadas.

La resolución de mezclas racémicas de compuestos puede llevarse a cabo a través de cualquiera de los numerosos métodos conocidos en la técnica. Un método ilustrativo incluye recristalización fraccional utilizando un ácido de resolución quiral que tiene un ácido orgánico que forma sal, ópticamente activo. Los agentes de resolución adecuados para métodos de recristalización fraccional son, por ejemplo, ácidos ópticamente activos, tales como las formas D y L de ácido tartárico, ácido diacetiltartárico, ácido dibenzoiltartárico, ácido mandélico, ácido málico, ácido láctico o los varios ácidos alcanforsulfonicos ópticamente activos tal como ácido ß-alcanforsulfónico. Otros agentes de resolución adecuados para métodos de cristalización fraccional incluyen formas esteroisoméricamente puras de a-metilbencilamina (por ejemplo, formas S y R, o formas diaesteroméricamente puras), 2-fenilglicinol, norefedrina, efedrina, N-metilefedrina, ciclohexiletilamina, 1,2-diaminocicloxano, y similares.

La resolución de mezclas racémicas puede llevarse a cabo por disolución en una columna empacada con un agente de resolución ópticamente activo (por ejemplo, dinitrobenzoilfenilglicina). La composición de solvente de elución puede determinarse por un experto en la técnica.

Los compuestos de la invención también incluyen formas tautométricas. Las formas tautométrica resultan del barrido de un enlace individual con un doble enlace adyacente junto con la migración concomitante de un protón. Las formas tautométricas incluyen tautómeros prototópicos que son estados de protonación isomérica que tienen la misma forma empírica y carga total.

Tautómeros prototrópicos ilustrativos incluyen pares de cetona-enol, pares de amida-ácido imídico, pares de lactama-lactima, pares de amida-ácido imídico, pares de enamina-imina, y formas anulares en donde un protón puede ocupar dos o más posiciones de un sistema heterocíclico, por ejemplo, 1H- y 3H-imidazol, 1H-, 2H- y 4H- 1,2,4-triazol, 1H- y 2H-isoindol, y 1H- y 2H-pirazol. Las formas tautométricas pueden estar en equilibrio o bloquearse estéricamente dentro de una forma por sustitución apropiada.

Los compuestos de la invención también incluyen todos los isótopos o átomos que ocurren en los intermediarios o compuestos finales. Los isótopos i ncluyen aquellos átomos que tienen el mismo número atómico pero diferentes números de masa. Por ejemplo, los isótopos de hidrógeno incluyen tritio y deuterio.

El término, "compuesto", como se utiliza aquí pretende incluir todos los esteroisómeros, isómeros geométricos, tautómeros, e isótopos de las estructuras ilustradas, que incluyen estructuras que se adaptan a una fórmula genérica aquí descrita.

Todos los compuestos, sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, pueden encontrarse junto con otras sustancias tales como agua y solventes ( por ejemplo, hidratos y solvatos) o pueden ser aislados.

En algunas modalidades, los compuestos de la invención, o sales de los mismos, están substancialmente aislados. Por "substancialmente aislado" significa que el compuesto esté al menos parcial o substancialmente separado del ambiente en el cual se formó o detectó. La separación parcial puede incluir, por ejemplo, una composición enriquecida en los compuestos de la invención. La separación sustancial puede i ncluir composiciones que contienen al menos aproximadamente 50%, al menos aproximadamente 60%, al menos aproximadamente 70%, al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 90%, al menos aproximadamente 95%, al menos aproximadamente 97%, o al menos aproximadamente 99% en peso de los compuestos de la invención, o sal de los mismos. Los métodos para aislar compuestos y sus sales son comunes en la técnica.

La frase "farmacéuticamente aceptable" se emplea aquí para hacer referencia a aquellos compuestos, materiales, composiciones, y/o formas de dosificación que están, dentro del alcance de juicio médico, adecuado para usarse en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin toxicidad, irritación, respuesta alérgica excesivos, u otro problema o complicación, de acuerdo con una relación de beneficio/riesgo razonable.

Las expresiones, "temperatura ambiente" y "temperatura ambiental", como se utilizan aquí, se entienden en la técnica, y se refieren generalmente a una temperatura, por ejemplo, una temperatura de reacción, que está aproximadamente a la temperatura del cuarto e n el cual se lleva a cabo la reacción, por ejemplo, una temperatura de aproximadamente 20°C a aproximadamente 30°C.

La presente invención también incluye sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos aquí descritos. Como se utiliza aquí, "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a derivados de los compuestos descritos en donde el compuesto parental se modifica al convertir un ácido o una porción de ácido o base existente a su forma de sal. Ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no están limitados a, sales de ácido mineral u orgánico de residuos básicos tales como aminas; sales alcalinas u orgánicas de residuos ácidos tales como ácidos carboxílicos; y similares. Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente • invención incluyen las sales no tóxicas convencionales del compuesto parental formado, por ejemplo, de ácidos inorgánicos u orgánicos no tóxicos. Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención pueden sintetizarse del compuesto parental que contiene una porción básica o acida mediante métodos químicos convencionales. Generalmente, tales sales pueden prepararse al hacer reaccionar las formas de ácido o base libre de estos compuestos con una cantidad estoiquiométrica de la base o el ácido apropiado en agua con un solvente orgánico, o en una mezcla de los dos; generalmente, medio no acuso como éter, acetato de etilo, alcoholes (por ejemplo, metanol, etanol, ¡sopropanol, o butanol) o acetonitrilo (ACN) se prefieren. Las listas de sales adecuadas se encuentran en Remington Pharmaceutical Sciences, 17° ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418 y Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977), cada uno de los cuales se incorpora aquí para referencia en su totalidad.

Síntesis: los procedimientos e intermediarios de la presente invención son útiles en la preparación de inhibidores de co-transporte de sodio/fosfato apical intestinal, efectivos para reducir niveles de fosfato en sangre e hiperfosfatemia. Los compuestos de la invención, que incluyen sales de los mismos, pueden prepararse utilizando técnicas de síntesis orgánica conocida y pueden sintetizarse de acuerdo con cualquiera de numerosas rutas sintéticas posibles.

Las reacciones para preparar compuestos de la invención pueden llevarse a cabo en solventes adecuados que pueden seleccionarse fácilmente por un experto en la técnica de síntesis orgánica. Solventes adecuados pueden ser substancialmente no reactivos con los materiales de partida (reactivos), los intermediarios, o productos a temperatura a las cuales se llevaron a cabo las reacciones, por ejemplo, temperaturas que pueden variar de la temperatura de congelación del solvente a la temperatura de ebullición del solvente. Puede llevarse a cabo una reacción dada en un solvente o una mezcla de más de un solvente. Dependiendo del paso de reacción particular, los solventes adecuados para un paso de reacción particular pueden seleccionarse por el experto en la técnica.

La preparación de compuestos de la invención puede involucrar la protección y desprotección de varios grupos químicos. La necesidad de protección y desprotección, y la selección de grupos de protección apropiados, pueden determinarse fácilmente por un experto en la técnica. La química de los grupos de protección puede encontrarse, por ejemplo, en T.W. Greene y P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed., Wiley & Sons, Inc., Nueva York (1999), que se incorpora aquí para referencia en su totalidad.

Las reacciones pueden verificarse de acuerdo con cualquier método adecuado conocido en la técnica. Por ejemplo, la formación de producto puede verificarse mediante medios espectroscópicos, tales como espectroscopia de resonancia magnética nuclear (por ejemplo, H o 13C), espectroscopia infrarroja, espectrofotometría (por ejemplo, UV-visible), espectrometría de masa, o mediante métodos, cromatográficos tales como cromatografía de líquido de alto desempeño (HPLC) o cromatografía de capa delgada (TLC).

Métodos sintéticos ilustrativos para preparar compuestos de la invención se proporcionan en los esquemas a continuación. Por ejemplo, los compuestos de la invención pueden prepararse mediante el esquema retrosintético general mostrado en el Esquema 1. Los compuestos de la Fórmula 1 pueden prepararse al someter un compuesto a la fórmula 2 con un agente de fluorización. Los compuestos de la fórmula 2 pueden sintetizarse al remover Pr2 de un compuesto de la fórmula 3. Los compuestos de la fórmula 3 pueden prepararse fácilmente de la fosforilación de compuestos de la fórmula 4. Finalmente, los compuestos de la fórmula 5 pueden sintetizarse a través de la desprotección selectiva que revela el punto de fijación (W) para fosforilación.

Esquema 1 Por consiguiente, la presente invención proporciona procedimiento para preparar un compuesto de la Fórmula I: I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R es alquilo de C2-4; W se selecciona de NRA, O, y S; Z se selecciona de un enlace individual, -C(O)-, NRA, O y S; X1 y X2 cada uno se selecciona independientemente de -OH, -NHRA, y -C(0)OH; RA es H o alquilo de Ci.3; m es 1, 2, 3, ó 4; y n es 1, 2, 3, ó 4; el procedimiento comprende: a) remover Pr1 e n la presencia de Pr2 d e un compuesto de la Fórmula 1-1 : I-I en donde Pr1 y Pr2 son grupos protectores; para preparar un compuesto de la fórmula I-2; 1-2 b) hacer reaccionar un compuesto de la Fórmula 1-2 con un agente de fosforilación para preparar un compuesto de la Fórmula 1-3 c) remover Pr2 de un compuesto de la Fórmula 1-3 con un agente de reducción para preparar un compuesto de la Fórmula 1-4: 1-4 d) detectar u n compuesto de la Fórmula I-4 con un agente de fluorización para preparar dicho compuesto de la Fórmula I.

En algunas modalidades, Pr1 es: En algunas modalidades, Pr2 es bencilo.

En algunas modalidades, el agente de fosforilación es un éster de fosfito. En una modalidad adicional, el éster de fosfito es dibencil fosfito. En otra modalidad, el agente de fosforilación es un ácido fosfónico. En una modalidad adicional, el ácido fosfónico es ácido fluorofosfónico.

En algunas modalidades, el agente de reducción está compuesto de gas hidrógeno y un metal de transición.

En algunas modalidades, el agente de fluorización es dinitrofluorobenceno. En una modalidad adicional, el agente de fluorización es ácido fluorhídrico.

Como se muestra en el Esquema 2, el compuesto floridzina es bencilado para proporcionar el compuesto completamente protegido por bencilo 6. El tratamiento de compuesto 6 bajo condiciones ácidas proporcionó fenol 7 que se convirtió en el compuesto de fosfato protegido por bencilo 8. La hidrogenación catalítica de 8 proporcionó 2'-fosfofluoretina (9) que se fluorizó con un agente de fluorización tal como dinitrofluorobenceno (DNFB) o ácido fluorhídrico (HF) para proporcionar 2'-fluorofosfoflorentina (10).

Esquema 2 Alternativamente, 2'-fosfofloret¡na (9) puede fluorizarse utilizando ácido fluorhídrico anhidro para generar 2'- fluorofosfofloretina (10) (Esquema 3).

Una ruta alternativa para preparar 2'-fluorofosfofloretina se muestra en el Esquema 4 partiendo del compuesto conocido de floridzina. La bencilación de floridzina proporcionó 6 que se desprotegió selectivamente para proporcionar el fenol 7. El tratamiento con diclorocromato (DCC) y ácido fluorofosfónico ofreció el ácido fluorofosfónico 8a. La remoción de los grupos bencilo de 8a se realizó utilizando amonio y Dowex para proporcionar 2-fluorofosfofloretina.

Esquema 4 2'-fluorofosfofloret¡na Métodos de uso: Los compuestos de la invención pueden inhibir el co-transporte de sodio/fosfato apical intestinal. Los compuestos de la invención también pueden ser un tratamiento efectivo para reducir los niveles de fosfato en sangre y la hiperfosfatemia.

La presente invención además proporciona métodos para tratar una enfermedad causada por o asociada con niveles elevados de fosfato en sangre en un sujeto mamífero, incluyendo identificar un sujeto en el cual es deseable la reducción de niveles de fosfato en sangre, y administrar al sujeto que necesita tal tratamiento en una cantidad terapéuticamente efectiva o dosis de un compuesto de la presente invención o una composición farmacéutica del mismo. En algunas modalidades, el sujeto es un mamífero. En algunas modalidades, el sujeto es u n ser humano. En algunas modalidades, el compuesto se administra oralmente. En algunas modalidades, la enfermedad es insuficiencia renal crónica. En algunas modalidades, la insuficiencia renal crónica está asociada, con y/o acompañada por hiperfosfatemia, hiperparatiroidismo secundario, osteodistrofia renal, hipertensión, acidosis metabólica, o enfermedad cardíaca. La insuficiencia renal crónica puede ser insuficiencia renal de etapa terminal, y pacientes que sufren de insuficiencia renal de etapa terminal son propensos a tratamiento como se describe aquí.

Como se utiliza aquí, el término "poner en contacto" se refiere a la unión de porciones indicadas en un sistema in vitro o un sistema in vivo. Por ejemplo, "poner en contacto" un compuesto de la invención con el co-transporte de sodio/fosfato apical intestinal incluye la administración de un compuesto de la presente invención a un individuo o un paciente tal como un ser humano, así como, por ejemplo, introducir un compuesto de la invención en una muestra que contiene una preparación celular o purificada del co-transporte de sodio/fosfato apical intestinal.

Como se utiliza aquí, el término "individuo" o "paciente" utilizado intercambiablemente, se refiere a cualquier animal, incluyendo mamíferos, preferiblemente ratones, ratas, otros roedores, conejos, perros, gatos, puercos, ganado, ovejas, caballos, o primates, y muy preferiblemente seres humanos.

Como se utiliza aquí, la frase "cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a la cantidad de compuesto activo o agente farmacéutico que produce la respuesta biológica o médica que se busca en un tejido, sistema, animal, individuo o ser humano por un investigador, veterinario, doctor u otro personal clínico.

Como se utiliza aquí, el término "tratar" o "tratamiento" se refiere a uno o más de (1) prevenir la enfermedad; por ejemplo, prevenir una enfermedad, condición o trastorno en un individuo que puede estar predispuesto a la enfermedad, condición o trastorno pero que aún no experimenta o presenta la patología o sintomatolog ía de la enfermedad, (2) inhibir la enfermedad, por ejemplo, inhibir una enfermedad, condición o trastorno en un individuo que está experimentando o presentando la patología o la sintomatología de la enfermedad, condición o trastorno; y (3) mejorar la enfermedad; por ejemplo, mejorar una enfermedad, condición o trastorno en un individuo que está experimentando o presentando la patología o sintomatología de la enfermedad, condición o trastorno (es decir, revertir la patología y/o sintomatología) tal como disminuir la severidad de la enfermedad.

Formulaciones farmacéuticas y forma de dosificación: cuando se emplean como fármacos, los compuestos de la invención pueden administrarse en la forma de composiciones farmacéuticas. Estas composiciones pueden prepararse en una forma bien conocida en la técnica farmacéutica, y pueden administrarse mediante una variedad de rutas, dependiendo de si se desea tratamiento local o sistémico y del área que se va a tratar. La administración puede ser oral.

Esta invención también incluye composiciones farmacéuticas que contienen, como el ingrediente activo, el compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con uno o más portadores farmacéuticamente aceptables (excipientes). En algunas modalidades, la composición es adecuada para administración oral. Al hacer las composiciones de la invención, el ingrediente activo se mezcla típicamente con un excipiente, diluido por un excipiente o encerrado dentro de un portador en la forma de, por ejemplo, una cápsula, bolsa, papel, u otro contenedor. Cuando el excipiente sirve como un diluyente, puede ser un material sólido, semi-sólido, o líquido, que actúa como un vehículo, portador o medio que actúa para el ingrediente activo. De esta forma, las composiciones pueden estar en la forma de tabletas, pildoras, polvos, grajeas, bolsas, sellos, elixires, suspensiones, emulsiones, soluciones, jarabes, cápsulas de gelatina suave y dura, y polvos empacados estériles.

Al preparar una formulación, el compuesto activo puede triturarse para proporcionar el tamaño de partícula apropiado antes de combinarse con otros ingredientes. Si el compuesto activo es substancialmente insoluble, puede triturarse un tamaño de partícula menor que 200 mallas. Si el compuesto activo es substancialmente soluble en agua, el tamaño de partícula pueda ajustarse al triturar para proporcionar distribución substancialmente uniforme en la formulación, por ejemplo, aproximadamente 40 mallas.

Los compuestos de la invención pueden triturarse utilizando procedimientos de trituración tal como trituración de humedad para obtener un tamaño de partícula apropiado para la formación de tableta y para otro tipo de formulación. Las preparaciones finamente divididas (nanopartículas) de los compuestos de la invención pueden prepararse mediante procedimientos conocidos en la técnica, por ejemplo, ver Solicitud internacional No. WO 2002/000196.

Algunos ejemplos de excipientes adecuados incluyen lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidones, goma acacia, fosfato de calcio, alginatos, tragacantos, gelatina, silicato de calcio, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, celulosa, agua, jarabe, y metilcelulosa. Las formaciones pueden incluir adicionalmente: agentes lubricantes tales como talco, estearato de magnesio, y aceite mineral; agentes humectantes; agentes emulsificantes y de suspensión; agentes conservadores tales como metil- y propilhidroxi-benzoatos; agentes endulzantes; y agentes saborizantes. Las composiciones de la invención pueden formularse para proporcionar liberación rápida, sostenida o retrasada del ingrediente activo después de la administración al paciente al emplear procedimientos conocidos en la técnica.

La composiciones pueden formularse en una forma de dosificación de unidad, cada dosificación que contiene desde aproximadamente 5 hasta aproximadamente 1000 mg (1 g), más usualmente de aproximadamente 100 a aproximadamente 500 mg, del ingrediente activo. El término "formas de dosificación de unidad" se refiere a unidades físicamente distintas adecuadas como dosificaciones sanitarias para sujetos humanos y otros mamíferos, cada unidad contiene una cantidad predeterminada de material activo calculado para producir el efecto terapéutico deseado, en asociación con un excipiente terapéutico adecuado.

En algunas modalidades, los compuestos o composiciones de la invención contienen de aproximadamente 5 a aproximadamente 50 mg del ingrediente activo. Un experto en la técnica apreciará que esto representa compuesto o composiciones que contienen aproximadamente 5 a aproximadamente 10, aproximadamente a 10 aproximadamente 15, aproximadamente 15 a aproximadamente 20, aproximadamente 20 a aproximadamente 25, aproximadamente 25 a aproximadamente 30, aproximadamente 30 a aproximadamente 35, aproximadamente 35 a aproximadamente 40, aproximadamente 40 a aproximadamente 45, aproximadamente 45 a aproximadamente 50 mg del ingrediente activo.

En algunas modalidades, los compuestos son composiciones de la invención que contienen de aproximadamente 50 a aproximadamente 500 mg del ingrediente activo. Un experto en la técnica apreciará que esto representa compuestos o composiciones que contienen de aproximadamente 50 a aproximadamente 100, aproximadamente 100 a aproximadamente 150, aproximadamente 150 a aproximadamente 200, aproximadamente 200 a aproximadamente 250, aproximadamente 250 a aproximadamente 300, aproximadamente 350 a aproximadamente 400, o de aproximadamente 450 a aproximadamente 500 mg del ingrediente activo.

En algunas modalidades, los compuestos o composiciones de la invención contienen de aproximadamente 500 a aproximadamente 1000 mg del ingrediente activo. Un experto en la técnica apreciará que esto representa compuestos o composiciones que contienen d e aproximadamente 500 a aproximadamente 550, aproximadamente 550 a aproximadamente 600, aproximadamente 600 a aproximadamente 650, aproximadamente 650 a aproximadamente 700, aproximadamente 700 a aproximadamente 750, aproximadamente 750 a aproximadamente 800, aproximadamente 800 a aproximadamente 850, aproximadamente 850 a aproximadamente 900, aproximadamente 900 a aproximadamente 950, o aproximadamente 950 a aproximadamente 1000 mg del ingrediente activo.

El compuesto activo puede ser efectivo en un amplio rango de dosificación y generalmente se administra en una cantidad terapéuticamente efectiva. Sin embargo, se entenderá que la cantidad del compuesto realmente administrado usualmente se determinará por un médico, de acuerdo con las circunstancias relevantes, incluyendo la condición que se va a tratar, la ruta elegida de administración, el compuesto real administrado, la edad, peso, y respuesta del paciente individual, la severidad de los síntomas del paciente, y similares.

Para preparar composiciones sólidas tales como tabletas, el ingrediente activo principal se mezcla con un excipiente farmacéutico para formar una composición de preformulación sólida que contiene una mezcla homogénea de un compuesto de la presente invención. Cuando se hace referencia a estas composiciones de preformulación como homogéneas, el ingrediente activo se dispersa típicamente de forma uniforme a través de la composición para que la composición pueda subdividirse fácilmente en formas de dosificación de unidad igualmente efectivas tales como tabletas, pildoras y cápsulas. Esta formulación sólida entonces se subdivide en formas de dosificación de unidad del tipo descrito anteriormente que contiene de, por ejemplo, aproximadamente 0.1 a aproximadamente 1000 mg del ingrediente activo de la presente invención.

Las tabletas o pildoras de la presente invención pueden revestirse o de otra forma estar compuestas para proporcionar una forma de dosificación que ofrece la ventaja de acción prolongada. Por ejemplo, la tableta o pildora puede comprender una dosificación interior y un componente de dosificación exterior, el último estando en la forma de una cubierta sobre la primera. Los dos componentes pueden estar separados por una capa entérica que sirve para resistir la desintegración en el estómago y permitir que el componente interior pase intacto dentro del duodeno o que se retrasa en liberación. Puede utilizarse una variedad de materiales para tales capas entéricas o revestimientos, tales como materiales que incluyen un número de ácidos poliméricos y mezclas de ácidos poliméricos con tales materiales como goma laca, alcohol etílico, y acetato de celulosa.

Las formas líquidas en las cuales pueden incorporarse los compuestos y composiciones de la presente invención para administración oralmente o por inyección incluyen soluciones acuosas, jarabes adecuadamente saborizados, suspensiones acuosas o aceitosas, y emulsiones saborizadas con aceites comestibles tales como aceite de semilla de algodón, aceite de ajonjolí, aceite de coco, o aceite de cacahuate, así como elixires y vehículos farmacéuticos similares.

En algunas modalidades, las composiciones se administran por la ruta oral para efecto local. Pueden administrarse composiciones de solución, suspensión, o en polvo oralmente a partir de dispositivos que suministran la formulación en una forma apropiada.

La cantidad de compuesto o composición administrada a un paciente variará dependiendo de lo que se está administrando, el propósito de la administración, tal como profilaxis o terapia, el estado del paciente, la forma de administración, y similares. En aplicaciones terapéuticas, las composiciones pueden administrarse a un paciente que ya sufre de una enfermedad en una cantidad suficiente para curar o al menos detener parcialmente los síntomas de la enfermedad y sus complicaciones. Las dosis efectivas dependerán de la condición de la enfermedad que se trata así como del juicio del personal médico que atiende dependiendo de factores tales como la severidad de la enfermedad, la edad, peso y condición general del paciente, y similares.

Las composiciones administradas a un paciente pueden estar en la forma de composiciones farmacéuticas descritas anteriormente. Estas composiciones pueden esterilizarse mediante técnicas de esterilización convencionales, o pueden filtrarse estériles. Las soluciones acuosas pueden empacarse para usarse como están, o liofilizarse, la preparación liofilizada que se combina con un portador acuoso estéril antes de la administración. El pH de las preparaciones de compuesto típicamente estará entre 3 y 11, más preferiblemente de 5 a 9 y muy preferiblemente de 7 a 8. Se entenderá que el uso de ciertos excipientes, portadores, o estabilizadores anteriores resultará en la formación de sales farmacéuticas.

La dosificación terapéutica de un compuesto de la presente invención puede variar de acuerdo con, por ejemplo, el uso particular para el cual se hizo el tratamiento, la forma de administración del compuesto, la salud y condición del paciente, y el juicio del médico que prescribe. La proporción o concentración de un compuesto de la invención en una composición farmacéutica puede variar dependiendo de un número de factores incluyendo dosificación, características químicas (por ejemplo, hidrofobicidad), y la ruta de administración. Por ejemplo, los compuestos de la invención pueden proporcionarse en una solución reguladora de pH fisiológica acuosa que contiene de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 10% p/v del compuesto para administración parenteral. Algunos rangos de dosis típicos son de aproximadamente 1 pg/kilogramo a aproximadamente 1 g/kg de peso corporal por día.

En estudios con 2'-fosfoiretina, se administró a animales 0.1 g y s e observaron efectos secundarios en una prueba de 3 meses en ratas normales o de refrectomía 5/6. En otros estudios, con 2'-fosfofluoretina, se administró a los animales 0.02 g/día. No se observaron efectos secundarios en una prueba de 2 meses en ratas normales; en una prueba de 1 mes en ratas de nefrectomía 5/6; y en una prueba de un mes en ratas sensibles a sal DAH1. Los compuestos se compararon favorablemente con sales de calcio (tales como TUMS®), LaC03 (FOSRENOL®), y una resina de unión de fósforo (RENAGEL®).

En algunas modalidades, el rango de dosis es de aproximadamente 0.01 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por día. La dosificación similarmente depende de variables tales como el tipo y grado de progreso de la enfermedad o trastorno, el estado de salud general del paciente particular, la eficacia biológica relativa del compuesto seleccionado, formulación del excipiente, y su ruta de administración. Las dosis efectivas pueden extrapolarse de curvas de dosis-respuesta derivadas de sistemas de prueba de modelo in Vitro o animal.

EJEMPLOS Ejemplo 1. Síntesis de 2'-fluorofosfofloretina (2'-FPP) utilizando dinitrof luorobenceno (DNFB) Se sintetizó 2'-fluorofosfofloretina (2'-FPP) de acuerdo con el método de Peerce y otros J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 283: G848-G855, 2002.

Paso 1. 4,6,4-tri-O-bencilf loretina Se disolvió floridzina (2 g) en dimetilformamida re-destilada (35 mi) y carbonato de potasio (3.1 g). Se agregó bromuro de bencilo (2.7 mi) a esta solución y se dejó que la mezcla de reacción se agitará durante 3 días a 23°C. La solución se destiló bajo vacío, y el residuo se enfrió a temperatura ambiente. El residuo se extrajo con agua/etil acetato (2:1) 3 veces. Las capas orgánicas se combinaron y concentraron in vacuo. El residuo se disolvió en 1,4 dioxano (200 mi) y se agregó HCI gota a gota a una concentración final de 0.4 N. La mezcla se mantuvo en reflujo durante 3 horas. La mezcla de reacción se enfrió, se diluyó con 1 M de bicarbonato de sodio, y se extrajo con acetato de etilo. La extracción de acetato de etilo se repitió tres veces. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, seguido por los lavados con NaCI (0.9%). Se agregó Na2S04 anhídrido a la capa orgánica y se mezcló. La filtración al vacío removió el Na2C04. Se agregó Na2C04 fresco a la solución, que entonces se agitó durante 12 horas a 23°C. La filtración al vacío removió el Na2C04, y el filtrado se concentró para generar 4,6,4-tri-O-bencilfloretina (2.1 g, rendimiento 92%): 1 H-NMR (CDCI3) 813.6 (s, 1H); 7.46-7.29 (m, 15H); 6.86 (d, J = 8.8 Hz, 2H); 6.8 (d, J = 8.8 Hz, 2H); 6.35 (d, J = 2.3 Hz, 1H); 6.21 (d, J = 2.3 Hz, 1H); 5.17 (s, 2H); 5.14 (s, 2H); 5.07 (s, 2H); 3.2 (t, J = 7.1 Hz, 2H) ppm.

Paso 2. Dibencilfosfotribencil floretina Se disolvió 4,6,4-Tri-O-bencilfloretina en N, N-dimetilacetamida (DMAc) y se colocó sobre hielo. Se agregó hidruro de sodio (60%), y la mezcla se agitó a 23°C durante 1 hora. La solución se enfrió, y el hidruro de sodio se inactivo con tetracloruro de carbono. Se agregó dibencilfosfito (1.31 mi) en N, -dimetilacetamida, y la solución se agitó durante 30 minutos. La solución se acidificó y se dividió entre agua y hexano/acetato de etilo (1:1). La capa de agua se extrajo tres veces con hexano/acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con 0.9% NaCI y se secaron en sulfato de sodio anhidro. El sulfato de sodio se removió por filtración. El filtrado se concentró al vacío y se purificó por cromatografía en gel de sílice utilizando acetato de etilo/diclorometano/hexanos (5:25:70) como el eluyente. Se recuperó dibencilfosfotribencil floretina (750 mg; rendimiento 43%): 1 H-NMR (CDCI3) d 7.42-7.29 (m, 25 H)¡ 6.93 (d, J = 8.8 Hz, 2H); 6.78 (d, J = 8.8 Hz, 2H); 6.63 [banda doble (dd), 7 = 1.2, 2 Hz, 1HJ; 6.4 (dd, J = 0.6, 2.1 Hz, 1H); 5.06 (s, 5.04, 2H); 5.04 (s, 2H); 4.97 (d, J = 4.8 Hz, 4H); 4.87 (s, 2H); 3.03 (t, J = 8.4 Hz, 2H); 2.83 (t, J = 8.2 Hz, 2H) ppm.

Paso 3. 2'-fluorofosfofloretina (2'-FPP) Se disolvió Dibencilfosfotribencil floretina en acetato de etilo. Se agregó paladio sobre carbono (200 mg de 10%), y la solución se agitó bajo gas H2 durante 2 horas. La solución se filtró a través de Celite (Sigma-Aldrich). La pasta de Celite se lavó 2 veces con acetato de etilo, y los lavados combinados se concentraron bajo presión reducida para generar 2'-PP (400 mg, rendimiento 29%) después de secado: punto de fusión (mp), 171-172 °C, 1H-NMR (d6-DMSO) d 13.0 (s, 1H); 10.7 (bs, 1H); 9.2 (bs, 1H); 7.03 (d, J = 8.6 Hz, 2H); 6.64 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 6.63 (dd, J = 1.2. 2.1 Hz, 1H); 2.77 (d, J = 7.6 Hz, 2H) ppm. 31P-NMR en D20 generó un pico individual a 4 ppm compuesto de 98% de la señal de fósforo. 31P-NMR en DMSO generó un pico individual en 4.3 pulsos/minuto. Los experimentos de 3C-NMR desacoplado de H proporcionaron 12 especies de carbono únicas que podrían asignarse al inhibidor.

La espectrometría de masa de electroaspersión proporcionó una masa/carga de ion de 355 (masa + protón) consistente con la masa molecular calculada de 2'-PP de 354. 2'-PP se paso a través de una columna de intercambio de ion equilibrada con 100 mM de bicarbonato de tetrametilamonio, se concentró bajo vacío y se agregó a 10 mM de DNFB. La reacción se agitó a 23°C durante 4 horas, y los reactivos se lavaron a través de una columna de gel de sílice eluyendo con cloroformo:metanol (70%:30%). Las fracciones se secaron y se precipitaron con 0.1 M NaOH. El precipitado se recolectó, se intercambió el regulador de pH a través de una columna Sephadex G-10 y se concentró bajo vacío.

Ejemplo 2. Síntesis de 2'-fluorofosfof loretina (2'-FPP) utilizando ácido hialurónico Se realizó una síntesis alternativa de 2'FPP sustituyendo ácido fluorhídrico para DNFB.

Iniciando con 20 mg de 2'-PP disuelto en 1 mi de DMF, 0.1 mi de 0.1 M HF se agregó y la solución se dejo asentar a 23°C durante 2 horas. La mezcla de reacción se enfrió, y se neutralizó a pH 8 con 12 N NaOH. Los productos precipitados se pasaron a través de una columna de Sephadex G-10 equilibrada con 100 mM TMAHC03 y se liofilizó.

Se examinó la pureza de 2'-FPP a través d e cromatografía de capa delgada sobre gel de sílice utilizando cloroformo: metanol (7:3), o cloroformo:3-propanol (8:2). Se realizó análisis de 2'-FPP siguiendo TLC para comparación de floretina y 2'-PP. Se examinaron placas de TLC para fosfato mediante la reacción de Fiske-SubbaRow y para fluoruro con HCI del lago de circonio-alisarin. Una reacción positiva con lago de alisarin requirió calentar la tira del TLC durante 1 hora a 60°C. H-NM R (d6-DMSO) d 10.7 (s, 1H); 9.3, (s, 1H); 7.17 (t, 2H J = 8.6 Hz), 6.8 (t, 2H); 6.6 (d, 2H, J = 8.4 Hz), 3.2 (t, 2H, J = 2 Hz); 2.9 (t, 2H, J = 2.1 Hz); 1.9 (banda individual débil) ppm.

Ejemplo A: Efectos de 2'-FPP en captación de fosfato dependiente de Na f32P1 El efecto de [32P] sobre captación de fosfato dependiente de Na) dentro de vesículas de membrana de microvellosidades intestinales (apical) se examinó utilizando experimentos de filtración rápida y conteo de cintilacion de líquido contando cuentas retenidas en filtros en presencia de gradientes dirigidos de 100 mM Na ó 100 mM K cis (hacia adentro). 2'-PP y 2'-FPP ambos inhibieron la captación de fosfato dependiente de Na dentro de vesículas de membrana de microvellosidades intestinales. 2'-FPP fue 12X más potente que 2'-PP al inhibir captación de fosfato dependiente de Na. La IC50 evidente para 2'-PP fue 46 nM ± 8 nM (n = 4) similar a resultados previos (Peerce y otros, Biochem, Biophys, Res. Comm. 301:8-12, 2003; Peerce y Clarke, AM.J. Physiol. 283: G848-G855, 2002). La IC50 para 2'-FPP fue 3.6 nM + 0.6 nM (n=4).

Ejemplo B: El efecto de fosf of loretinas en la hidrólisis de p-nitrofosfato por fosfatasa alcalina de rata v fosfatases BBMV intestinales Los resultados mostrados en el Ejemplo A utilizaron una exposición de 3 segundos de vesículas y sustratos y una exposición de 5 minutos de vesículas a 2'-FPP. Antes de la exposición y degradación de 2'-PP en contraste a 2'-FPP pueden contribuir a la potencia aumentada de 2'-FPP cuando se compara con 2'-PP. Para examinar esta posibilidad, se examinó el efecto de fosfofloretinas sobre hidrólisis de p-nitrofosfato por fosfatasa alcalina de rata y fosfatasa BBMV intestinales. 2'-PP es un mejor inhibidor de actividad de fosfatasa alcalina y actividad de fosfatasa BBMV intestinal que 2'-FPP. 2mM 2'-PP dieron como resultado a proximadamente 50% de inhibición de actividad de fosfatasa BBMV intestinal cuando se comparó con menos de 10% de inhibición por 2'-FPP. Consistente con la interpretación de que la potencia de 2'-PP como un inhibidor de captación de fosfato dependiente de Na se limitó por hidrólisis mediada por fosfatasa de 2'-PP, la adición de inhibidores de fosfatasa alcalina (ácido ascórbico, más cisteína) disminuyó la IC50 para inhibición de 2'-PP de captación de fosfato dependiente de Na 34% (de 38 nM a 26 nM). Estos resultados indican que comparados con 2'-PP, dos factores son responsables de la potencia aumentada de 2'-FPP como un inhibidor de captación de fosfato dependiente de Na dentro de vesículas de membrana de microvellosidades intestinales: 1) resistencia aumentada de 2'-FPP a degradación catalizada de fosfatasa de éster de fosfato, y 2) afinidad aumentada de fluorofosfatos para el sitio de fosfato de co-transportador de fosfato de Na intestinal comparado con fosfato.

Ejemplo C: Duración del efecto de una exposición individual de intestino de rata a 2 -FPP y 2'-PP Para examinar la duración del efecto de una sola dosis de 2'-FPP en captación de fosfato, se cortaron tiras intestinales (cuadros de aproximadamente 5 cm) y se incubaron en placas de cultivo de células de 12 cavidades en la presencia de 2'FPP o 2'-PP durante 1 hora, seguido por exposición a DMEM (medio d e Eagles m odificado por de Debecco) fresco, [32P] fosfato y concentraciones variables de 2'-PP o 2'-FPP.

Una exposición individual de 2" -PP resultó en más de 60% de inhibición de captación de fosfato y que la inhibición fue estable durante 6 horas después de exposición al fármaco. En contraste, la exposición a 2'-PP resultó en un 40% de inhibición de captación de fosfato que disminuyó a menos de 35% de inhibición 6 horas después de la exposición al fármaco. La captación de glucosa no se afectó por la exposición a cualquiera de 2'-PP o 2'-FPP consistente con reportes previos que las fosfof loretinas son específicas para co-transporte de fosfato de Na, y que las tiras intestinales fueron viables durante el curso del experimento.

Estos experimentos se expandieron para examinar el efecto de concentración de 2'-FPP sobre captación de fosfato.

Se incubaron tiras intestinales de 1 cm2 de duodeno/yeyuno de rata en DMEM a 37°C y 5% de C02 durante 1 hora. Después del período de incubación, el DMEM se reemplazó conteniendo 2'-FPP y las tiras se incubaron durante 1 hora más. Después de la exposición de 1 hora a 2'-FPP, el DMEM se reemplazó con medio fresco + 5\iC de [32P] fosfato. Las tiras se expusieron a fosfato de rastreador durante 1 hora, se precipitaron con 10% TCA y se centrifugaron a 5000 mg durante 30 minutos. Se tomó una alícuota del sobrenadante para conteo de cintilación.

La captación de fosfato dependiente de Na en el intestino está compuesta tanto de componentes dependientes de Na como independientes de Na. La captación dependiente de Na en el duodeno y yeyuno es aproximadamente captación de fosfato 70% dependiente d e Na y 30% independiente d e Na. Los resultados son consistentes con 2'-FPP inhibiendo el componente dependiente de Na que se impulsa por el co-transportador de Na/fosfato de membrana de microvellosidades intestinales, NaPi 2b. La inhibición máxima fue de 67% + 5% (n = 4) de absorción de fosfato total. La IC50 evidente para 2'-FPP fue 160 nM ± 20 nM (n=4). Ésto se compara con una inhibición máxima bajo condiciones idénticas de 43 ± 6% (n = 3) para 2'-PP, y una IC50 de 15µ? ±3 µ? (n = 3).

Ejemplo D: Se examinó el efecto de 2'-FPP en fosfato de sodio y calcio en suero en ratas adultas de 4-5 meses con función renal normal. Se alimentaron a las ratas diariamente con 3 mi de 0.5µ? de 2'-FPP en solución salina regulada en pH con fosfato pH 7. Aproximadamente 30 minutos después las ratas se expusieron a alimento durante 3 horas. Después del periodo de alimentación, se retiró el alimento.

Las ratas tuvieron exposición ad libitum al agua. En el tercer día del experimento, se extrajo sangre de la vena de la cola, antes de la alimentación. Los animales luego se alimentaron como anteriormente, y se expusieron al alimento. Este procedimiento se repitió en los días 5, 8, 11, y 14. En el día 14 los animales fueron sacrificados y terminó el experimento. Se determinó fósforo, calcio, y BUN en suero utilizando equipos clínicos.

El fósforo en suero disminuyó 52% ± 6% (n = 8) en ratas adultas con función renal normal dentro de la primera semana de tratamiento con 2'-FPP y permaneció estable a 3 mg/dL por el resto del experimento de 2 semanas. El Ca2+ en suero no se afectó por 2'-FPP que disminuyó a menos de 2.5% durante la exposición de 2 semanas a 2'-FPP. BUN fue 10 mg/dL al inicio del experimento y no cambió en el curso del experimento. Experimentos previos bajo condiciones idénticas realizadas con 25 µ? de 2'-PP resultaron en una disminución de 30% ± 4% fósforo en suero sin cambio en Ca2+ en suero.

Claims (35)

1. REIVINDICACIONES compuesto de la Formula I I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R es alquilo de C2-4¡ W se selecciona de NRA, O, y S; Z se selecciona de un enlace individual, -C(O)-, NRA, O, y S; X1 y X2 cada uno se selecciona independientemente de -OH, -NHRA, y .C(0)OH; RA es H o alquilo de C1.3; m es 1, 2, 3, ó 4; y n es 1, 2, 3, ó 4.
2. 2 - El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R es -CH2-CH2- o -CH2-CH2-CH2-.
3. 3. - El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde W se selecciona de W se selecciona de NRA y O.
4. 4. - El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde W es O.
5. 5.- El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Z se selecciona de un enlace individual y -C(O)-.
6. 6.- El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Z es -C(O)-.
7. 7. - El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde X1 y X2 se seleccionan independientemente de OH y NH2.
8. 8. - El compuesto de acuerdo con la cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, o una sal al farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde X1 y X2 son ambos OH.
9. 9.- El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde n es 1 ó 2.
10. 10. - El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde m es 1 ó 2.
11. 11. - El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde m es 2 y n es 1.
12. 12. - El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 1 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R es -CH2-CH2 y Z es -C(O)-.
13. 13. - El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 1 2, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde W es O y X1 y X2 ambos son OH.
14. 14. - Un compuesto de acuerdo c on la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto es:
15. 15.- Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto es:
16. 16. - Una composición que comprende un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos un portador farmacéuticamente aceptable.
17. 17. - Un método para tratar una enfermedad causada por o asociada con niveles elevados de fosfato en sangre en un sujeto mamífero, el método comprende identificar un sujeto en el cual es deseable la reducción de niveles de fosfato en sangre; y administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la Fórmula I: 1.
18. 18. - El método de acuerdo con la reivindicación 17, en donde el sujeto es un mamífero.
19. 19. - El método de acuerdo con la reivindicación 17, en donde el sujeto es un ser humano.
20. 20. - El método de acuerdo con la reivindicación 17, en donde el compuesto se administra oralmente.
21. 21. - El método de acuerdo con la reivindicación 17, en donde el compuesto administrado es: I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
22. 22.- Un método para tratar una enfermedad causada por o asociada con niveles elevados de fosfato en sangre en un paciente que lo necesita, el método comprende administrar a dicho paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto o composición de acuerdo con la reivindicación 1.
23. 23. - El método de acuerdo con la reivindicación 22, en donde dicha enfermedades es insuficiencia renal crónica.
24. 24. - El método de acuerdo con la reivindicación 23, en donde la insuficiencia renal crónica está asociada con y/o acompañada por hiperfosfatemia, hiperparatiroidismo secundario, osteodistrofia renal, hipertensión, acidosis metabólica, o enfermedad cardíaca.
25. 25. - El método de acuerdo con la reivindicación 22, en donde el compuesto es: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
26. 26.- Un procedimiento para preparar un compuesto Fórmula I: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R es alquilo de C2- ; W se selecciona de NRA, O, y S; Z se selecciona de un enlace individual, -C(O)-, NRA, O, y S; X1 y X2 cada uno se selecciona independientemente de -OH, -NHRA, y C(0)OH; RA es H o alquilo de Ci-3; m es 1, 2, 3, ó 4; y n es 1, 2, 3, ó 4; el procedimiento comprende: a) remover Pr en la presencia de Pr2 de un compuesto de la Fórmula 1-1 : 1-1 en donde Pr1 y Pr2 son grupos protectores; para preparar un compuesto de la Fórmula I-2; b) hacer reaccionar un compuesto de la Fórmula I-2 con un agente de fosforilatación para preparar un compuesto de la Fórmula 1-3 c) remover Pr2 de un compuesto de la Fórmula 1-3 con un agente de reducción para preparar un compuesto de la Formula 1-4: 1-4 d) hacer reaccionar un compuesto de la Fórmula 1-4 con un agente de fluorización para preparar dicho compuesto de la Fórmula I.
27. 27.- El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 26, en donde Pr es:
28. 28. - El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 26, en donde Pr2 es bencilo.
29. 29. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 26, en donde el agente de fosforilación es un éster de fosfito.
30. 30. - El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 29, en donde el éster de fosfito es fosfito de dibencilo.
31. 31. - El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 26, en donde el agente de fosforilación es ácido fosfónico.
32. 32. - El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 31, en donde el ácido fosfónico es ácido fluorofosfónico.
33. 33. - El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 26, en donde el agente de reducción está compuesto de gas hidrógeno y un metal de transición.
34. 34. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 26, en donde el agente de fluorización es dinitrof luorobenceno.
35. 35. - El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 26, en donde el agente de fluorización es ácido fluorhídrico.