MX2011010478A - Inhibidores del virus de la hepatitis c. - Google Patents

Inhibidores del virus de la hepatitis c.

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MX2011010478A MX2011010478A MX2011010478A MX2011010478A MX 2011010478 A MX2011010478 A MX 2011010478A MX 2011010478 A MX2011010478 A MX 2011010478A MX 2011010478 A MX2011010478 A MX 2011010478A MX 2011010478 A MX2011010478 A MX 2011010478A
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John F Kadow
Makonen Belema
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Abstract

La presente descripción se refiere a compuestos, composiciones y procedimientos para el tratamiento de infección por el virus de la hepatitis C (VHC). También se dan a conocer composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos y procedimientos para usar los compuestos en el tratamiento de infección por VHC.

Description

INHIBIDORES DEL VIRUS DE LA HEPATITIS C Campo de la Invención La presente descripción se refiere de forma general a compuestos antivirales y, más específicamente, a compuestos que pueden inhibir la función de la proteína NS5A codificada por el virus de la hepatitis C (VHC) , a composiciones que comprenden los compuestos, y a procedimientos para inhibir la función de la proteína NS5A.
Antecedentes de la Invención El VHC es un importante patógeno humano que infecta a unos 170 millones de personas en todo el mundo aproximadamente cinco veces el número de infectados por el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1. Una fracción sustancial de estos individuos infectados con el VHC desarrolla enfermedad hepática progresiva grave, incluyendo cirrosis y carcinoma hepatocelular .
El actual tratamiento de referencia para el VHC, que emplea una combinación de interferón pegilado y ribavirina, presenta una tasa de éxito subóptima para conseguir una respuesta vírica mantenida y provoca numerosos efectos secundarios. Por lo tanto, existe una clara y percibida necesidad desde hace mucho tiempo, de desarrollar terapias eficaces para cubrir esta necesidad médica no satisfecha.
El VHC es un virus de AR de polaridad positiva.
REF.: 223775 Basándose en una comparación de la secuencia de aminoácidos deducida y la gran similitud en la región 5' no traducida, el VHC ha sido clasificado como un género diferente de la familia Flaviviridae . Todos los miembros de la familia Flaviviridae presentan viriones encapsulados que contienen un genoma de ARN de polaridad positiva que codifica todas las proteínas específicas del virus conocidas mediante traducción de un marco de lectura abierto, ininterrumpido y único.
Se encuentra una heterogeneidad considerable en la secuencia de nucleótidos y de aminoácidos codificados en todo el genoma del VHC debido a la alta tasa de errores de la ARN polimerasa dependiente de ARN que carece de capacidad correctora. Se han caracterizado al menos seis genotipos principales, y se han descrito más de 50 subtipos distribuidos por todo el mundo. La importancia clínica de la heterogeneidad genética del VHC ha demostrado una propensión a la aparición de mutaciones durante el tratamiento con monoterapia, por lo tanto es deseable el uso de otras opciones de tratamiento. El posible efecto modulador de los genotipos sobre la patogénesis y terapia sigue sin comprenderse .
El genoma de ARN monocatenario de VHC tiene una longitud de aproximadamente 9500 nucleótidos y tiene un único marco de lectura abierto (ORF) que codifica una única poliproteína grande de aproximadamente 3000 aminoácidos. En las células infectadas, esta poliproteína es escindida en múltiples sitios por proteasas celulares y víricas para producir las proteínas estructurales y no estructurales (NS) . En el caso de VHC, la generación de proteínas no estructurales maduras (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, y NS5B) es llevada a cabo por dos proteasas víricas. Se cree que la primera es una metaloproteasa y escinde la unión entre NS2 y NS3 la segunda es una serina proteasa contenida en la región N-terminal de NS3 (también denominada en el presente documento proteasa NS3) y actúa de mediadora de todas las posteriores escisiones aguas abajo de NS3, tanto en cis, en el sitio de escisión de NS3 y NS4A, como en trans, para el resto de los sitios NS4A-NS4B, NS4B-NS5A, NS5A-NS5B. La proteína NS4A parece desempeñar varias funciones, ya sea actuando de cofactor para la proteasa NS3 como ayudando en la localización en la membrana de NS3 y otros componentes de las replicasas víricas. Para la adecuada actividad de proteasa es necesaria la formación de un complejo NS3-NS4A lo que supone una eficacia proteolítica mayor de los eventos de escisión. La proteína NS3 también muestra actividades de nucleósido trifosfatasa y A helicasa. NS5B (también denominada VHC polimerasa) es una ARN polimerasa dependiente de ARN que está implicada en la replicación de VHC con otras proteínas de VHC, entre otras NS5A, en un complejo de replicasa.
Se desean compuestos útiles para tratar pacientes infectados por VHC que inhiban de forma selectiva la replicación viral del VHC. En particular, son deseables compuestos que son eficaces para inhibir la función de la proteína NS5A. La proteína NS5A de VHC se describe, por ejemplo, en las siguientes referencias: S. L. Tan, et al., Virology, 284:1-12 (2001); K.-J. Park, et al., J". Biol. Chem. , 30711-30718 (2003); T. L. Tellinghuisen, et al., Nature, 435, 374 (2005); R. A. Love, et al., J. Virol, 83, 4395 (2009); N. Appel, et al., J. Biol. Chem., 281, 9833 (2006); L. Huang, J. Biol. Che ., 280, 36417 (2005); C. Rice, et al., documento O2006093867.
Breve Descripción de la Invención En un primer aspecto, la presente descripción proporciona un compuesto de Fórmula (I) (I) , o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en la que L se selecciona de un enlace, HC=CH- y R1 y R2 son R1 es en las que ^ denota el punto de unión a la molécula principal ; R3 y R4 se seleccionan independientemente de hidrógeno y halo; cada R5 se selecciona independientemente de hidrógeno y alquilo; cada R6 se selecciona independientemente de hidrógeno y alquilo; R6a es hidrógeno o alquilo, pudiendo formar el alquilo opcionalmente un anillo de tres miembros condensado con un átomo de carbono adyacente; cada R7 se selecciona independientemente de hidrógeno y -C(0)R8; y cada R8 se selecciona independientemente de alcoxi, alquilo, arilalcoxi, arialquilo, cicloalquilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, (NRcRd) alquenilo y (NRcRd) alquilo .
En una primera modalidad del primer aspecto, la presente descripción proporciona un compuesto de Fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en la que L es un enlace. En una segunda modalidad del primer aspecto, R1 es y R2 se selecciona de En una tercera modalidad del primer aspecto, R5 es hidrógeno, R6 es metilo y R6a es alquilo, pudiendo el alquilo formar un anillo de tres miembros condensado con un átomo de carbono adyacente .
En una cuarta modalidad del primer aspecto, la presente descripción proporciona un compuesto de Fórmula (I) , o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en la que L es un enlace, R1 y R2 son cada uno cada R5 es hidrógeno, cada Rs es metilo; y cada R4 es cloro.
En una quinta modalidad del primer aspecto, la presente descripción proporciona un compuesto de Fórmula (I) , o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en la que L es un enlace y R1 y R2 son cada uno En una sexta modalidad del primer aspecto, la presente descripción proporciona un compuesto de Fórmula (I) , o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en la que L es -f^ .
En una séptima modalidad, R1 y R2 son cada uno En una octava modalidad, R5 es hidrógeno y R6 es metilo.
En un segundo aspecto la presente descripción proporciona una composición que comprende un compuesto de Fórmula (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En una primera modalidad del segundo aspecto la composición comprende además uno o dos compuestos adicionales que tienen actividad contra el VHC. En una segunda modalidad del segundo aspecto, al menos uno de los compuestos adicionales es un interferón o una ribavirina. En una tercera modalidad el interferón se selecciona de interferón alfa 2B, interferón alfa pegilado, . -8- interferón de consenso, interferón alfa 2A e interferón linfoblastoide tau.
En una cuarta modalidad del segundo aspecto la presente descripción proporciona una composición que comprende un compuesto de Fórmula (I) , o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, un vehículo farmacéuticamente aceptable y uno o dos compuestos adicionales que tienen actividad contra el VHC, seleccionándose al menos uno de los compuestos adicionales de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, un compuesto que potencia el desarrollo de una reapuesta de linfocitos T auxiliares tipo 1, ARN interférente , ARN antisentido, Imiqimod, ribavirina, un inhibidor de inosina 51 -monofosfato deshidrogenasa, amantadina y rimantadina.
En una quinta modalidad del segundo aspecto la presente descripción proporciona una composición que comprende un compuesto de Fórmula (I) , o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, un vehículo farmacéuticamente aceptable y uno o dos compuestos adicionales que tienen actividad contra el VHC, siendo al menos uno de los compuestos adicionales eficaz para inhibir la función de una diana seleccionada de metaloproteasa de VHC, serina proteasa de VHC, polimerasa de VHC, helicasa de VHC, proteína NS4B de VHC, entrada de VHC, ensamblaje de VHC, salida de VHC, proteína NS5A de VHC y IMPDH para el tratamiento de una infección por VHC.
En un tercer aspecto la presente descripción proporciona un procedimiento de tratamiento de una infección por VHC en un paciente, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. En una primera modalidad del tercer aspecto el procedimiento comprende además administrar uno o dos compuestos adicionales que tienen actividad contra el VHC antes, después o de forma simultánea con el compuesto de Fórmula (I) , o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. En una segunda modalidad del tercer aspecto, al menos uno de los compuestos adicionales es un interferón o una ribavirina. En una tercera modalidad del tercer aspecto, el interferón se selecciona de interferón alfa 2B, interferón alfa pegilado, interferón de consenso, interferón alfa 2A e interferón tau linfoblastoide .
En una cuarta modalidad del tercer aspecto, la presente descripción proporciona un procedimiento de tratamiento de una infección por VHC en un paciente, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables y uno o dos compuestos adicionales que tienen actividad contra el VHC antes, después o de forma simultánea con el compuesto de Fórmula (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, seleccionándose al menos uno de los compuestos adicionales de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, un compuesto que potencia el desarrollo de una respuesta de linfocitos T auxiliares tipo 1, ARN interférente , ARN antisentido, Imiqimod, ribavirina, un inhibidor de inosina 5 ' -monofosfato deshidrogenasa , amantadina y rimantadina.
En una quinta modalidad del tercer aspecto, la presente descripción proporciona un procedimiento de tratamiento de una infección por VHC en un paciente que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables y uno o dos compuestos adicionales que tienen actividad contra el VHC antes, después o de forma simultánea con el compuesto de Fórmula (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, siendo al menos uno de los compuestos adicionales eficaz para inhibir la función de una diana seleccionada de metaloproteasa de VHC, serina proteasa de VHC, polimerasa de VHC, polimerasa de VHC, helicasa de VHC, proteína NS4B de VHC, entrada de VHC, ensamblaje de VHC, salida de VHC, proteína NS5A de VHC y I PDH para el tratamiento de una infección por VHC.
Otras modalidades de la presente descripción pueden comprender combinaciones adecuadas de dos o más de las modalidades y/o aspectos revelados en la presente memoria.
Otras modalidades y aspectos de la descripción serán evidentes de acuerdo con la descripción proporcionada a continuación .
Los compuestos de la presente descripción también existen como tautómeros; por tanto la presente descripción también incluye formas tautoméricas .
La descripción de la presente descripción en el presente documento debería interpretarse de forma congruente con las leyes y principios de los enlaces químicos.
Debe entenderse que los compuestos que incluye la presente descripción son los que son adecuadamente estables para usar como agente farmacéutico.
Se pretende que la definición de cualquier sustituyente o variable (por ejemplo, R5, R6 y R7) en una posición particular en una molécula sea independiente de sus definiciones en cualquier otra parte de la molécula.
Todas las patentes, solicitudes de patente y referencias de la bibliografía citadas en la memoria descriptiva se incorporan al presente documento por referencia en su totalidad. En el caso de incoherencias, prevalecerá la presente descripción, incluidas las definiciones .
Tal como se usa en la presente memoria descriptiva, los siguientes términos tienen los significados indicados: Tal como se usa en el presente documento, las formas en singular "uno", "una", y "la" "el" incluyen las referencias en plural a no ser que el contexto claramente indique lo contrario.
A no ser que se indique de otro modo, todos los grupos arilo, cicloalquilo y heterociclilo de la presente descripción pueden estar sustituidos como se describe en cada una de sus respectivas definiciones. Por ejemplo, la parte arilo de un grupo arilalquilo puede estar sustituida como se describe en la definición del término "arilo" .
El término "alcoxi," tal como se usa en la presente memoria, se refiere a un grupo alquilo unido al resto molecular principal a través de un átomo de oxígeno.
El término "alquilo," tal como se usa en la presente memoria, se refiere a un grupo derivado de un grupo hidrocarbonado saturado de cadena lineal o ramificada que contiene de uno a seis átomos de carbono. En los compuestos de la presente descripción, cuando R6a es alquilo, cada alquilo puede formar opcionalmente un anillo de tres a seis miembros condensado con un átomo de carbono adyacente proporcionando la estructura mostrada a continuación: término "arilo," tal como se usa en la presente memoria, se refiere a un grupo fenilo o un sistema de anillo bicíclico condensado en el que uno o ambos de los anillos es un grupo fenilo. Los sistemas de anillo bicíclico condensado están constituidos por un grupo fenilo condensado con un anillo carbocíclico aromático o no aromático de cuatro a seis miembros. Los grupos arilo de la presente descripción pueden estar unidos al resto molecular principal a través de cualquier átomo de carbono sustituible en el grupo. Ejemplos representativos de grupos arilo incluyen, aunque sin quedar limitados a los mismos, indanilo, indenilo, naftilo, fenilo y tetrahidronaftilo . Los grupos arilo de la presente descripción están opcionalmente sustituidos con uno, dos, tres, cuatro o cinco sustituyentes seleccionados independientemente de alcoxi, alcoxialquilo, alcoxicarbonilo, alquilo, alquilcarbonilo, un segundo grupo arilo, arilalcoxi, arilalquilo, arilcarbonilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, heterociclilcarbonilo, hidroxi, hidroxialquilo, nitro, -NRx y, (NRxRy) alquilo, oxo y -P(0)OR2, donde cada R se selecciona independientemente de hidrógeno y alquilo; y donde la parte alquilo del arilalquilo y el heterociclilalquilo está no sustituida y donde el segundo grupo arilo, la parte arilo del arilalquilo, la parte arilo del arilcarbonilo, el heterociclilo y la parte heterociclilo del heterociclilalquilo y el heterociclilcarbonilo están además opcionalmente sustituidas con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente de alcoxi, alquilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo y nitro.
El término "arilalquilo, " tal como se usa en la presente memoria, se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno, dos o tres grupos arilo. La parte alquilo del arilalquilo está además opcionalmente sustituida con uno o dos grupos adicionales seleccionados independientemente de alcoxi, alquilcarboniloxi , halo, haloalcoxi, haloalquilo, heterociclilo, hidroxi y -NRcRd, estando el heterociclilo además opcionalmente sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente de alcoxi, alquilo, arilo no sustituido, arilalcoxi no sustituido, arilalcoxicarbonilo no sustituido, halo, haloalcoxi, haloalquilo, hidroxi, -NRxRy y oxo.
El término "cicloalquilo," tal como se usa en la presente memoria, se refiere a un sistema de anillo hidrocarbonado saturado monocíclico que tiene de tres a siete átomos y ningún heteroátomo. Ejemplos representativos de grupos cicloalquilo incluyen, pero no están limitados a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo. Los grupos cicloalquilo de la presente descripción están opcionalmente sustituidos con uno, dos, tres, cuatro o cinco sustituyentes seleccionados independientemente de alcoxi, alquilo, arilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo, heterociclilo, hidroxi, hidroxialquilo, nitro y -NRxRy, estando el arilo y el heterociclilo además opcionalmente sustituidos con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente de alcoxi, alquilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo, hidroxi y nitro.
El término "heterociclilo", tal como se usa en la presente memoria, se refiere a un anillo de cuatro, cinco, seis o siete miembros que contiene uno, dos, tres o cuatro heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno y azufre. El anillo de cuatro miembros no tiene ningún doble enlace, el anillo de cinco miembros tiene de ninguno a dos dobles enlaces y los anillos se seis y siete miembros tienen de ninguno a tres dobles enlaces. El término "heterociclilo" también incluye grupos bicíclicos en los que el anillo heterociclilo está condensado con otro grupo heterociclilo monocíclico o un anillo carbocíclico aromático o no aromático de cuatro a seis miembros; así como grupos bicíclicos con puente tales como 7-azabiciclo [2.2.1] hept-7-ilo, 2-azabiciclo [2.2.2] oct-2-ilo y 2 -azabiciclo [2.2.2] oct-3 -ilo. Los grupos heterociclilo de la presente descripción pueden estar unidos al resto molecular principal a través de cualquier átomo de carbono o átomo de nitrógeno en el grupo. Ejemplos de grupos heterociclilo incluyen, aunque sin quedar limitados a los mismos, benzotienilo, furilo, imidazolilo, indolinilo, indolilo, isoquinolinilo, isotiazolilo, isoxazolilo, morfolinilo, oxazolilo, piperazinilo , piperidinilo, pirazolilo, piridinilo, pirrolidinilo, pirrolopiridinilo, pirrolilo, quinolinilo, tiazolilo, tienilo y tiomorfolinilo . Los grupos heterociclilo de la presente descripción están opcionalmente sustituidos con uno, dos, tres, cuatro o cinco sustituyentes seleccionados independientemente de alquenilo, alcoxi, alcoxialquilo, alcoxicarbonilo, alquilo, alquilcarbonilo, arilo, arilalquilo, arilcarbonilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo, un segundo grupo heterociclilo, heterociclilalquilo, heterociclilcarbonilo, hidroxi, hidroxialquilo, nitro, -NRxRy, (NRxRy) alquilo y oxo, donde la parte alquilo del arilalquilo y el heterociclilalquilo está no sustituida y donde el arilo, la parte arilo del arilalquilo, la parte arilo del arilcarbonilo, el segundo grupo heterociclilo, y la parte heterociclilo del heterociclilalquilo y el heterociclilcarbonilo están además opcionalmente sustituidas con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente de alcoxi, alquilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo y nitro.
El término "heterociclilalquilo," tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno, dos, o tres grupos heterociclilo. La parte alquilo del heterociclilalquilo está además opcionalmente sustituida con uno o dos grupos adicionales seleccionados independientemente de alcoxi, alquilcarboniloxi , arilo, halo, haloalcoxi, haloalquilo, hidroxi y -NRcRd, estando el arilo además opcionalmente sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente de alcoxi, alquilo, arilo no sustituido, arilalcoxi no sustituido, arilalcoxicarbonilo no sustituido, halo, haloalcoxi, haloalquilo, hidroxi y -NRxRy.
El término "-NR°Rd," tal como se usa en la presente memoria, se refiere a dos grupos, Rc y Rd, que están unidos al resto molecular principal a través de un átomo de nitrógeno. Rc y Rd se seleccionan independientemente de hidrógeno, alqueniloxicarbonilo, alcoxialquilcarbohilo, alcoxicarbonilo, alquilo, alquilcarbonilo, alquilsulfonilo, arilo, arilalcoxicarbonilo, arilalquilo, arilalquilcarbonilo , arilcarbonilo, ariloxicarbonilo, arilsulfonilo, cicloalquilo, cicloalquiloxicarbonilo, cicloalquilsulfonilo, formilo, haloalcoxicarbonilo, heterociclilo, heterociclilalcoxicarbonilo, heterociclilalquilo, heterociclilalquilcarbonilo, heterociclilcarbonilo, heterocicliloxicarbonilo, hidroxialquilcarbonilo, (NReR£) alquilo, (NReRf) alquilcarbonilo, (NReRf) carbonilo, (NReRf) sulfonilo, -C(NCN)OR' y -C (NCN) NRXRY, donde R' se selecciona de alquilo y fenilo no sustituido y donde la parte alquilo del arilalquilo, el arilalquilcarbonilo, el heterociclilalquilo y el heterociclilalquilcarbonilo están además opcionalmente sustituidos con un grupo -NReRf; y donde el arilo, la parte arilo del arilalcoxicarbonilo, el arilalquilo, el arilalquilcarbonilo, el arilcarbonilo, el ariloxicarbonilo y el arilsulfonilo, el heterociclilo y la parte heterociclilo del heterociclilalcoxicarbonilo, el heterociclilalquilo, el heterociclilalquilcarbonilo, el heterociclilcarbonilo y el heterocicliloxicarbonilo están además opcionalmente sustituidas con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente de alcoxi, alquilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo y nitro.
El término " (NRcRd) alquenilo, tal como se usa en la presente memoria, se refiere a en la que Rc y Rd son como se definen en la presente memoria y cada uno de Rq es independientemente hidrógeno o alquilo Cl-3 - El término " (NRcRd) alquilo, " tal como se usa en la presente memoria, se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno o dos grupos -NRcRd. La parte alquilo del (NRcRd) alquilo está además opcionalmente sustituida con uno o dos grupos adicionales seleccionados de alcoxi, alcoxialquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, alquilsulfañilo, arilalcoxicarbonilo, carboxi , cicloalquilo, heterociclilo, heterociclilcarbonilo, hidroxi y (NReRf) carbonilo; estando el heterociclilo además opcionalmente sustituido con uno, dos, tres, cuatro o cinco sustituyentes seleccionados independientemente de alcoxi, alquilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo y nitro.
El término "-NReRf," tal como se usa en la presente memoria, se refiere a dos grupos, Re y Rf, que están unidos al resto molecular principal a través de un átomo de nitrógeno. Re y Rf se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo, arilo no sustituido, arilalquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, (cicloalquil) alquilo no sustituido, heterociclilo no sustituido, heterociclilalquilo no sustituido, (NRxRy) alquilo y (NRxRy) carbonilo.
El término " -NRxRy, " tal como se usa en la presente memoria, se refiere a dos grupos, Rx y Ry, que están unidos al resto molecular principal a través de un átomo de nitrógeno. Rx y Ry se seleccionan independientemente de hidrógeno, alcoxicarbonilo, alquilo, alquilcarbonilo, arilo no sustituido, arilalcoxicarbonilo no sustituido, arilalquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterociclilo no sustituido y (NRX RY' ) carbonilo, seleccionándose Rx' y Ry' independientemente de hidrógeno y alquilo.
Existen centros asimétricos en los compuestos de la presente descripción. Estos centros se designan con los símbolos " " o "S" , dependiendo de la configuración de los sustituyentes alrededor del átomo de carbono quiral. Debe entenderse que la descripción engloba todas las formas isoméricas estereoquímicas, o sus mezclas, que poseen la capacidad de inhibir NS5A. Pueden prepararse estereoisómeros individuales de los compuestos sintéticamente a partir de materiales iniciales comercialmente disponibles que contienen centros quirales o por preparación de mezclas de productos enantioméricos seguido de separación como por ejemplo conversión a una mezcla de diastereómeros seguido de separación o recristalización, técnicas cromatográficas o separación directa de enantiómeros en columnas cromatográficas quirales. Los compuestos iniciales de estereoquímica particular o bien están comercialmente disponibles o pueden prepararse y resolverse mediante técnicas conocidas en la técnica.
Ciertos compuestos de la presente descripción también pueden existir en formas con conformación estable que puedan separarse. La asimetría de torsión debida a una rotación restringida en torno a un enlace único asimétrico, por ejemplo debido a impedimentos estéricos o a tensión anular, puede permitir la separación de los diferentes confórmeros . La presente descripción incluye cada uno de los isómeros conformacionales de estos compuestos y sus mezclas.
La expresión "compuestos de la presente descripción" y expresiones equivalentes, pretenden incluir compuestos de Fórmula (I) , y sus enantiómeros , diastereoisómeros y sales farmacéuticamente aceptables. De forma similar, las referencias a los intermedios se pretende que engloben sus sales cuando el contexto lo permita.
Se pretende que la presente descripción incluya todos los isótopos de los átomos que aparecen en los presentes compuestos. Los isótopos incluyen los átomos que tienen el mismo número atómico pero diferentes números másicos. Como ejemplo general y sin limitación, los isótopos de hidrógeno incluyen deuterio y tritio. Los isótopos de carbono incluyen 13C y 14C. Los compuestos marcados con isótopos de la invención generalmente se pueden preparar por técnicas convencionales conocidas por los expertos en la técnica o mediante procesos análogos a los descritos en el presente documento, usando un reactivo marcado con isótopo apropiado en lugar del reactivo no marcado que se emplea en otros casos. Los compuestos pueden tener una diversidad de usos potenciales, por ejemplo como patrones y reactivos para determinar la actividad biológica. En el caso de los isótopos estables, los compuestos pueden tener el potencial de modificar favorablemente propiedades biológicas, farmacológicas o farmacocinéticas .
Los compuestos de la presente descripción pueden existir en forma de sales farmacéuticamente aceptables. El término "sal farmacéuticamente aceptable," tal como se usa en el presente documento, representa sales o formas zwiteriónicas de los compuestos de la presente descripción que son solubles o dispersables en agua o aceite, que sean, según el alcance del criterio médico leal, adecuados para usar en contacto con los tejidos de los pacientes sin una excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación correspondiente a una proporción beneficio/riesgo razonable y que sea eficaz para el uso que se pretenda. Las sales pueden prepararse durante el aislamiento y purificación finales de los compuestos o por separado haciendo reaccionar un átomo de nitrógeno adecuado con un ácido adecuado. Sales de adición de ácidos representativas incluyen acetato, adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, bisulfato, butirato, canforato, canfosulfonato ; digluconato, dihidrobromuro, dihidrocloruro, dihidroyoduro, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, formiato, fumarato, hidrocloruro, hidrobromuro, hidroyoduro, 2-hidroxietanosulfonato, lactato, maleato, mesitilenosulfonato, metanosulfonato, naftilenosulfonato, nicotinato, 2 -naftalenosulfonato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, 3 -fenilproprionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tricloroacetato, trifluoroacetato, fosfato, glutamato, bicarbonato, para-toluenosulfonato y undecanoato. Los ejemplos de ácidos que pueden emplearse para formar sales de adición farmacéuticamente aceptables incluyen ácidos inorgánicos como por ejemplo clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico y fosfórico y ácidos orgánicos como por ejemplo oxálico, maleico, succínico y cítrico.
Las sales de adición básicas pueden prepararse durante la etapa de aislamiento y purificación finales de los compuestos haciendo reaccionar un grupo carboxi con una base adecuada como por ejemplo el hidróxido, carbonato o bicarbonato de un catión metálico o con amoniaco o una amina primaria, secundaria o terciaria orgánica. Los cationes de sales farmacéuticamente aceptables incluyen litio, sodio, potasio, calcio, magnesio y aluminio,, así como cationes de amina cuaternario no tóxicos tales como amonio, tetrametilamonio, tetraetilamonio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina , trietilamina , dietilamina, etilamina, tributilamina, piridina, N, -dimetilanilina, N-metilpiperidina, N-metilmorfolina, diciclohexilamina, procaína, dibencilamina, N, N-dibencilfenetilamina y ?,?' -dibenciletilendiamina . Otras aminas orgánicas representativas útiles para la formación de sales de adición de bases incluyen etilendiamina , etanolamina, dietanolamina, piperidina, y piperazina.
Cuando es posible que, para uso en terapia, se puedan administrar cantidades terapéuticamente eficaces de un compuesto de fórmula (I) , así como sus sales farmacéuticamente aceptables, en forma de compuestos químicos en bruto, es posible presentar el ingrediente activo como una composición farmacéutica. Por consiguiente, la descripción proporciona además composiciones farmacéuticas que incluyen cantidades terapéuticamente eficaces de compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables, y uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables. La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz," tal como se usa en la presente memoria, se refiere a la cantidad total de cada ingrediente activo que es suficiente para mostrar un beneficio significativo al paciente, por ejemplo, una reducción de la carga viral. Cuando se aplica a un principio activo individual, administrado solo, el término se refiere a ese ingrediente solo. Cuando se aplica a una combinación, el término se refiere a cantidades combinadas de los principios activos que provoca el efecto terapéutico, ya se administren combinados, en serie o de forma simultanea. Los compuestos de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables, son como se han descrito antes. Los vehículo (s), diluyente(s) o excipiente (s) deben ser aceptables en el sentido de que sean compatibles con los otros ingredientes de la formulación y no sean perjudiciales para el receptor de los mismos. De acuerdo con otro aspecto de la presente descripción se proporciona también un procedimiento para la preparación de una formulación farmacéutica que incluye mezclar un compuesto de fórmula (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, con uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables. El término "farmacéuticamente aceptable" , tal como se usa en la presente memoria, se refiere a los compuestos, materiales, composiciones y/o formas farmacéuticas que son, dentro del alcance del criterio médico habitual, adecuados para usar en contacto con los tejidos de pacientes sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación proporcionado con una relación beneficio/riesgo razonable, y son eficaces para su uso deseado.
Las formulaciones farmacéuticas pueden presentarse en formas monodosis que contienen una cantidad predeterminada de principio activo por monodosis. En una monoterapia para la prevención y tratamiento de enfermedad mediada por VHC son típicos niveles de dosis que varían de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 250 miligramos por kilogramo ("mg/kg") de peso corporal por día, con preferencia de aproximadamente 0.05 a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por día de los compuestos de la presente descripción. Habitualmente , las composiciones farmacéuticas de la presente descripción se administrarán desde aproximadamente 1 a aproximadamente 5 veces al día o de forma alternativa, en forma de infusión continua. La administración puede usarse como terapia crónica o aguda. La cantidad de principio activo que puede combinarse con los materiales de vehículo para producir una única forma farmacéutica variará dependiendo de la afección que se esté tratando, de la gravedad de la afección, del tiempo de administración, la vía de administración, la velocidad de excreción del compuesto empleado, la duración del tratamiento, y la edad, sexo, peso y afección del paciente. Las formulaciones monodosis son las que contienen una dosis o subdosis diaria, tal como se indica anteriormente en el presente documento, o una fracción apropiada de las mismas de un principio activo. El tratamiento se puede iniciar con pequeñas dosis sustancialmente menores que la dosis óptima del compuesto. Después, la dosis se aumenta en pequeños incrementos hasta que se alcanza el efecto óptimo en las circunstancias dadas. En general, el compuesto se administra, de la forma más deseable a un nivel de concentración que generalmente conseguirá resultados antiviralmente eficaces sin provocar efectos secundarios dañinos ni perjudiciales.
Cuando las composiciones de esta descripción comprenden una combinación de un compuesto de la presente descripción y uno o más agentes terapéuticos o profilácticos adicionales, tanto el compuesto como el agente adicional habitualmente están presentes a niveles de dosis de aproximadamente 10 a 150%, y más preferentemente entre aproximadamente 10 y 80% de la dosis que normalmente se administra en una pauta de monoterapia.
Las formulaciones farmacéuticas pueden adaptarse para la administración por cualquier vía apropiada, por ejemplo por vía oral (que incluye bucal o sublingual) , rectal, nasal, tópica (que incluye bucal, sublingual o transdérmica) , vaginal o parenteral (que incluye inyecciones o infusiones subcutánea, intracutánea, . intramuscular, intraarticular, intrasinovial , intrasternal , intratecal, intralesional , intravenosa o intradérmica) . Las formulaciones pueden prepararse mediante cualquier procedimiento conocido en la técnica de la farmacia, por ejemplo asociando el principio activo con los vehículo (s) o excipiente (s) . Son preferentes la administración oral o la administración mediante inyección.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración oral pueden presentarse en forma de unidades separadas tales como cápsulas o comprimidos; polvos o gránulos; soluciones o suspensiones en líquidos acuosos o no acuosos; espumas o batidos comestibles, emulsiones líquidas de aceite en agua o emulsiones de agua en aceite.
Por ejemplo, para la administración oral en forma de un comprimido o cápsula, el componente medicamentoso activo puede combinarse con un vehículo inerte, oral, no tóxico farmacéuticamente aceptable tal como etanol, glicerol, agua y similares. Los polvos se preparan moliendo el compuesto a un tamaño adecuado y mezclando con un vehículo farmacéutico molido de forma similar tal como un carbohidrato comestible, como por ejemplo, almidón o manitol . También puede haber presentes aromas, conservantes, dispersantes y agentes colorantes.
Las cápsulas se elaboran preparando una mezcla en polvo, tal como se describe anteriormente, y cargando vainas de gelatina formadas. Pueden añadirse deslizantes y lubricantes tales como sílice coloidal, talco, estearato de magnesio, estearato de calcio o polietilenglicol sólido a la mezcla en polvo antes de la operación de llenado. También puede añadirse un agente disgregante o solubilizante tal como agar-agar, carbonato cálcico o carbonato sódico para mejorar la disponibilidad del medicamento cuando se ingiere la cápsula.
Además, cuando se desee o sea necesario, también pueden incorporarse aglutinantes, lubricantes, agentes disgregantes y agentes colorantes adecuados a la mezcla. Los aglutinantes adecuados incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales tales como glucosa o beta-lactosa, edulcorantes de maíz, gomas naturales y sintéticas tales como goma arábiga, tragacanto, o alginato sódico, carboximetilcelulosa, polietilenglicol y similares. Los lubricantes que se usan en estas formas farmacéuticas incluyen oleato sódico, cloruro sódico, y similares . sgregantes incluyen, sin limitación, almidón, metilcelulosa, agar, bentonita, goma xantana, y similares. Los comprimidos se formulan, por ejemplo, preparando una mezcla en polvo, granulando o formando pepitas, añadiendo un lubricante y disgregante y dándole forma de comprimidos. Se prepara una mezcla en polvo mezclando el compuesto pulverizado de forma adecuada con un diluyente o base tal como se describe anteriormente, y de forma opcional, con un aglutinante tal como carboximetilcelulosa, un alginato, gelatina, o polivinilpirrolidona , un retardante de la solución tal como parafina, un acelerador de la resorción tal como una sal cuaternaria y/o un agente de absorción tal como bentonita, caolín o fosfato dicálcico. La mezcla en polvo puede granularse humedeciendo con un aglutinante tal como sirope, pasta de almidón, mucílago de acacia o soluciones de materiales celulósicos o poliméricos y haciéndolos pasar por un tamiz. Como alternativa al granulado, la mezcla en polvo puede pasarse por la máquina de comprimidos produciendo pepitas de forma imperfecta que se descomponen en gránulos . Los gránulos pueden lubricarse para evitar que se peguen al comprimido formando moldes mediante la adición de ácido esteárico, una sal de estearato, talco o aceite mineral. La mezcla lubricada se comprime después en forma de comprimidos . Los compuestos de la presente descripción también pueden combinarse con un vehículo inerte fluido y darles forma de comprimidos directamente sin pasar por las etapas de granulado o formación de pellas. Puede proporcionarse un recubrimiento protector transparente u opaco formado por una capa sellante de laca, un recubrimiento de azúcar o material polimérico y un recubrimiento pulido de cera. Pueden añadirse tintes a estos recubrimientos para distinguir entre las diferentes monodosis.
Los líquidos orales como soluciones, jarabes y elixires pueden prepararse en forma monodosis de forma que una cantidad dada contenga una cantidad predeterminada del compuesto. Los jarabes pueden prepararse disolviendo el compuesto en una solución acuosa aromatizada de forma adecuada, mientras que los elixires se preparan mediante el uso de un vehículo no tóxico. También pueden añadirse solubilizantes y emulsionantes tales como alcoholes de isostearilo etoxilados y éteres de polioxietilen sorbitol, conservantes, aditivos aromatizantes tales como aceite de menta o edulcorantes naturales o sacarina u otros edulcorantes artificiales y similares.
Cuando sea apropiado, pueden microencapsularse las composiciones monodosis para la administración oral. La formulación también puede prepararse para prolongar o mantener la liberación como por ejemplo recubriendo o embebiendo el material en forma de partículas en polímeros, cera o similares.
Los compuestos de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables, se pueden administrar también en forma de sistemas de liberación de liposomas, tales como vesículas unilaminares pequeñas, vesículas unilaminares grandes y vesículas multilaminares . Los liposomas pueden formarse a partir de una variedad de fosfolípidos , tales como colesterol, estearilamina, o fosfatidilcolinas .
Los compuestos de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables también se pueden liberar mediante el uso de anticuerpos monoclonales como vehículos individuales a los que se acoplan las moléculas de compuesto. Los compuestos también pueden acoplarse con polímeros solubles como vehículos para fármacos dirigibles. Los polímeros pueden incluir polivinilpirrolidona, copolímero de pirano, polihidroxipropilmetacrilamida-fenol , polihidroxietilaspartamidafenol , o poli (óxido de etileno) polilisina sustituido con restos palmitoilo. Además, los compuestos pueden acoplarse a una clase de polímeros biodegradables de utilidad para lograr la liberación controlada de un fármaco, por ejemplo, ácido poliláctico, polépsilon caprolactona, ácido polihidroxibutírico, poliortoésteres , poliacetales, polidihidropiranos, policianoacrilatos y copolímeros de bloque antipáticos de hidrogeles .
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para administración transdérmica se pueden presentar como parches discretos destinados a permanecer en contacto íntimo con la epidermis del receptor durante un período prolongado de tiempo. Por ejemplo, el ingrediente activo puede liberarse del parche por iontoforesis como se describe de forma general en Phar aceutical Research 1986, 3(6), 318.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración tópica pueden formularse en forma de ungüentos, cremas, suspensiones, lociones, polvos, soluciones, pastas, geles, pulverizadores, aerosoles o aceites.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración rectal pueden presentarse en forma de supositorios o de enemas.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para administración nasal en las que el vehículo es un sólido incluyen un polvo grueso que tiene un tamaño de partículas de por ejemplo en el intervalo de 20 a 500 micrómetros que se administra en la forma en que se toma rape, es decir, por inhalación rápida a través de la vía nasal desde un recipiente de polvo mantenido próximo a la nariz . Formulaciones adecuadas en las que el vehículo es un líquido, para administración como una pulverización nasal o como gotas nasales incluyen soluciones acuosas u oleosas del ingrediente activo.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración por inhalación incluyen polvos o pulverizaciones de partículas finas, que pueden generarse por medio de diversos tipos de aerosoles, nebulizadores o insufladores presurizados dosificados .
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración vaginal pueden presentarse en forma de pesarios, amortiguadores, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones en forma de pulverizador.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración parenteral incluyen soluciones inyectables estériles acuosas y no acuosas que pueden contener antioxidantes, amortiguadores, bacterioestáticos y solutos que hacen que la formulación sea isotónica con la sangre del receptor que se pretenda; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes . Las formulaciones pueden presentarse en envases monodosis o multidosis, por ejemplo ampolletas y viales sellados, y pueden almacenarse en estado liofilizado que requiera únicamente la adición de vehículo líquido estéril, por ejemplo agua inyectable, antes de su uso. Las soluciones y suspensiones inyectables inmediatas pueden prepararse a partir de polvos, gránulos y comprimidos estériles.
Debe entenderse que además de los ingredientes que se mencionan de forma particular anteriormente, las formulaciones pueden incluir otros agentes convencionales en la técnica dependiendo del tipo de formulación en cuestión, por ejemplo, los adecuados para la administración oral pueden incluir agentes aromatizantes .
El término "paciente" incluye seres humanos y otros mamíferos .
El término "tratamiento" se refiere a: (i) prevenir la aparición de una enfermedad, trastorno o estado patológico en un paciente que puede estar predispuesto a la enfermedad, trastorno y/o estado patológico pero al que todavía no se le ha diagnosticado que lo tiene; (ii) inhibir la enfermedad, trastorno o estado patológico, es decir, detener su desarrollo; y (iii) aliviar la enfermedad, trastorno o estado patológico, es decir, causando la regresión de la enfermedad, trastorno y/o estado patológico.
Los compuestos de la presente descripción también se pueden administrar con una ciclosporina, por ejemplo, ciclosporina A. Ciclosporina A ha demostrado ser activa contra el YHC en ensayos clínicos (Hepatology 2003, 38, 1282; Biochem. Biophys. Res. Commun. 2004, 313, 42; J. Gastroenterol . 2003, 38, 567) .
La Tabla 1 a continuación enumera algunos ejemplos ilustrativos de compuestos que se pueden administrar con los compuestos de la presente descripción. Los compuestos de la descripción se pueden administrar con otros compuestos activos contra VHC en terapia de combinación, bien de forma conjunta o por separado o combinando los compuestos para formar una composición.
Tabla 1 Tipo de Nombre Clase Compañía inhibidor o comercial fisiológica suministradora diana Inhibidor de NIM811 Novartis ciclofilina Zadaxin Immunomodu1ador Sciclone Suvus Azul de metileno Bioenvision Actilon Agonista de TLR9 Coley (CPG10101) Tularik Inc . , Inhibidor de ß- Batabulin (T67) Anticanceroso South San tubulina Francisco, CÁ ISIS Pharmaceu icals Inc, Carlsbad, ISIS 14803 Antiviral Antisentido CA/Elan Phamaceuticals Inc . , New York, NY Endo Pharmaceuticals Summetrel Antiviral Antiviral Holdings Inc . , Chadds Ford, PA Tipo de Nombre Clase Compañía inhibidor o comercial fisiológica suministradora diana GS-9132 (ACH- Inhibidor del Achillion / Antiviral 806) VHC Gilead Compuestos y sales de pirazolopirimid Arrow ina Inhibidores del Antiviral Therapeutics Del documento VHC Ltd.
WO-2005047288 26 de mayo de 2005 Inhibidor de Ribapharm Inc . , Levovirina Antiviral IMPDH Costa Mesa, CA Vértex Merimepodib Inhibidor de Pharmaceuticals Antiviral (VX-497) IMPDH Inc . , Cambridge, MA XTL XTL-6865 (XTL- Anticuerpo Biopharmaceutic Antiviral 002) monoclonal ais Ltd . , Rehovot, Israel Tipo de Nombre Clase Compañía inhibidor o comercial fisiológica suministradora diana Vértex Pharmaceuticals Inc . , Telaprevir Inhibidor de la Cambridge, MA/ (VX-950, LY- Antiviral serina proteasa Eli Lilly y Co. 570310) NS3 Inc . , Indianapolis , IN Inhibidor de la Wyeth / HCV-796 Antiviral replicasa NS5B Viropharma Inhibidor de la Idenix / N -283 Antiviral replicasa NS5B Novartis Inhibidor de la Gene Labs / GL-59728 Antiviral replicasa NS5B Novartis Inhibidor de la Gene Labs / GL-60667 Antiviral replicasa NS5B Novartis Inhibidor de la 2'C eA Antiviral Gilead replicasa NS5B Inhibidor de la PSI6130 Antiviral Roche replicasa NS5B Tipo de Nombre Clase Compañía inhibidor o comercial fisiológica suministradora diana Inhibidor de la R1626 Antiviral Roche replicasa NS5B 2'C Metil Inhibidor de la Antiviral Merck adenosina replicasa NS5B Japan Tobacco Inhibidor de JTK-003 Antiviral Inc . , Tokio, RdRp Japón ICN Levovirina Antiviral Ribavirina Pharmaceuticals , Costa Mesa, CA Schering- Plough ibavirina Antiviral Ribavirina Corporation, Kenilworth, NJ Profármaco de Ribapharm Inc . , Viramidina Antiviral ribavirina Costa Mesa, CA Ribozyme Pharmaceuticals Heptazyme Antiviral Ribozima Inc . , Boulder , CO Tipo de Nombre Clase Compañía inhibidor o comercial fisiológica suministradora diana Boehringer Ingelheim Inhibidor de la BILN-2061 Antiviral Pharma KG, serina proteasa Ingelheim, Alemania Inhibidor de la SCH 503034 Antiviral Schering Plough serina proteasa SciClone Pharmaceuticals Zadazim Inmunomodulador Inmunomodulador Inc . , San Mateo, CA Maxim Pharmaceuticals Ceplene Inmunomodulador Inmunomodulador Inc . , San Diego, CA F. Hoffmann-La Inmunosupresor CellCept Inmunosupresor Roche LTD, de IgG de VHC Basilea, Suiza Tipo de Nombre Clase Compañía inhibidor o comercial fisiológica suministradora diana Nabi Inmunosupresor Biopharmaceutic Civacir Inmunosupresor de IgG de VHC ais Inc . , Boca Ratón, FL Human Genome IFN de albúmina Albuferon - ce Interferón Sciences Inc . , 0t2b Rockville, MD InterMune IFN Pharmaceuticals Infergen A Interferón alfacón- 1 Inc . , Brisbane , CA Intarcia Omega IFN Interferón IFN-O Therapeutics Transición Therapeutics IFN-ß y EMZ701 Interferón IFN-ß y EMZ701 Inc . , Ontario, Canadá Serono , Rebif Interferón IF -ßla Ginebra, Suiza Tipo de Nombre Clase Compañía inhibidor o comercial fisiológica suministradora diana F. Hoffmann-La Roferon A Interferón IFN-ot2a Roche LTD, Basilea, Suiza Schering-Plough Intrón A Interferón IFN-a2b Corporation, Kenilworth, NJ RegeneRx Biopharma.
Inc . , Bethesda, Intrón A y IFN-a2b/ocl- MD / Interferón Zadaxin tirnosina SciClone Pharmaceuticals Inc, San Mateo, CA Schering-Plough IFN- Rebetron Interferón Corporation, a2b/ribavirina Kenilworth, NJ InterMune Inc . , Actimmune Interferón INF-? Brisbane, CA Interferón-ß Interferón Interferón-ß- la Serono Tipo de Nombre Clase Compañía inhibidor o comercial fisiológica suministradora diana IFN de acción viragen/ Multiferon Interferón prolongada Valentis GlaxoSmithKline IFN-anl Wellferon Interferón pie, Uxbridge, linfoblastoide Reino Unido Viragen Inc . , Omniferon Interferón IFN-oc natural Plantation, FL F. Hoffmann^La Pegasys Interferón IFN-a2a pegilado Roche LiTD, Basilea, Suiza Maxim Pegasys y IFN-oc2a pegilado Pharmaceuticals Interferón Ceplene Inmunomodulador Inc . , San Diego, CA IFN-c2a F. Hoffmann-La Pegasys y Interferón pegilado/ ibavir Roche LTD, Ribavirina ina Basilea, Suiza Schering-Plough PEG-Intrón Interferón IFN-cc2b PEGilado Corporation, Kenilworth, NJ Tipo de Nombre Clase Compañía inhibidor o comercial fisiológica suministradora diana IFN-0C2b Schering-Plough PEG-Intrón / Interferón PEGilado/ribavir Corporation, ribavirina ina Kenilworth, NJ Indevus Protección Pharmaceutica1s IP-501 Antifibrótico hepática Inc . , Lexington, A Idun Protección Inhibidor de Pharmaceuticals IDN-6556 hepática caspasa Inc . , San Diego, CA InterMune ITMN-191 (R- Inhibidor de la Pharmaceuticals Antiviral 7227) serina proteasa Inc . , Brisbane, CA Inhibidor de la GL-59728 Antiviral Genelabs replicasa NS5B Agonista de TLR- ANA-971 Antiviral Anadys 7 Inhibidor de la Boceprevir Antiviral Schering Plough serina proteasa Tipo de Nombre Clase Compañía inhibidor o comercial fisiológica suministradora diana Tibotec BVBA, Inhibidor de la TMS-435 Antiviral Mechelen, serina proteasa Bélgica Boehringer Ingelheim Inhibidor de la BI-201335 Antiviral Pharma KG, serina proteasa Ingelheim, Alemania Inhibidor de la MK-7009 Antiviral Merck serina proteasa inhibidor de PF-00868554 Antiviral Pfizer replicasa Anadys Inhibidor de Pharmaceuticals , ANA598 Antiviral NS5B Polimerasa Inc . , San no nucleósido Diego, CA, USA Idenix Inhibidor de Pharmaceuticals , IDX375 Antiviral replicasa no Cambridge, MA, nucleótido USA Tipo de Nomb e Clase Compañía inhibidor o comercial fisiológica suministradora diana Boehringer Ingelheim Inhibidor de BILB 1941 Antiviral Canadá Ltd R&D, NS5B Polimerasa Laval, QC, Canadá Inhibidor de Pharmasset , PSI-7851 Antiviral polimerasa Princeton, NJ, nucleósido USA Antiviral Inhibidor de VCH-759 ViroChem Pharma NS5B Polimerasa Antiviral Inhibidor de VCH-916 ViroChem Pharma NS5B Polimerasa Antiviral Inhibidor de GS-9190 Gilead NS5B Polimerasa Antiviral ZymoGenetics / Peg-interferón Interferón Bristol-Myers lamda Squibb Los compuestos de la presente descripción también se pueden emplear como reactivos de laboratorio. Los compuestos pueden ser una contribución decisiva para proporcionar herramientas de investigación para diseñar ensayos de replicación del virus, validación de sistemas de ensayo en animales y estudios de biología estructural para potenciar más el conocimiento de los mecanismos de la enfermedad de VHC. Además, los compuestos de la présente descripción son útiles para establecer o determinar el sitio de unión de otros compuestos antivirales, por ejemplo, por inhibición competitiva.
Los compuestos de esta descripción también pueden ser útiles para tratar o prevenir contaminación viral de materiales y por tanto reducir el riesgo de infección viral de laboratorio o personal médico o pacientes que entren en contacto con tales materiales, por ejemplo, sangre, tejidos, instrumental y prendas quirúrgicas, instrumental y prendas de laboratorio, y aparatos y materiales para la extracción o transfusión de sangre.
Descripción Detallada de la Invención Esta descripción pretende incluir compuestos que tienen la fórmula (I) cuando se preparan por procedimientos de síntesis o por procedimientos metabólicos que incluyen los que se producen en el cuerpo humano o animal (en vivo) o procedimientos que se producen en vitro.
Las abreviaturas usadas en la presente solicitud, incluyendo en particular en los esquemas ilustrativos y ejemplos siguientes, son bien conocidas por los expertos en la técnica. Algunas de las abreviaturas usadas son las siguientes: min para minutos; TFA para ácido trifluoracético; DMAP para ?,?-dimetilaminopiridina; Boc o BOC para tert-butoxicarbonilo; EtOAc para acetato de etilo; DMF para N, N-dimetilformamida ; DIEA para diisopropiletilaraina; MeOH para metanol; HATU para hexafluorfosfato de O- (7-azabenzotriazol-l-il) -?,?,?' ,?' -tetrametetiluronio; Ph para fenilo; h para horas; THF para tetrahidrofurano ; SEM para 2 -trimetilsililetoxmetoxi ; Cbz para carbonilbenciloxi; dppf para difenilfosfinoferrocina ; EtOH para etanol ; TA para temperatura ambiente; y TR para tiempo de retención.
Los compuestos y procedimientos de la presente descripción se comprenderán mejor en relación con los siguientes esquemas de reacción que ilustran los procedimientos por medio de los cuales se pueden preparar los compuestos de la presente descripción. Los materiales de partida se pueden obtener de suministradores comerciales o prepararse por procedimientos de la bibliografía bien conocidos por los expertos en la técnica. Será fácilmente evidente para un experto en la técnica que los compuestos definidos antes se pueden sintetizar por sustitución de los reactivos y agentes apropiados en las síntesis mostradas a continuación. También será evidente para un experto en la técnica que las etapas de protección y desprotección selectiva, además del orden de las propias etapas, se pueden llevar a cabo en un orden variable, dependiendo de la naturaleza de las variables para completar con éxito las síntesis siguientes. Las variables son como se han definido antes a no ser que de indique de otro modo más adelante.
Esquema de reacción 1: Derivados de fenilglicina sustituidos Los derivados de fenilglicina sustituidos se pueden preparar por una serie de procedimientos mostrados a continuación. Se puede alquilar de forma reductora (ruta A) éster t-butílico de fenilglicina con un aldehido apropiado y un reductor tal como cianoborohidruro sódico en medio ácido. La hidrólisis del éster t-butílico se puede llevar a cabo con un ácido fuerte tal como HC1 o ácido trifluoroacético . De forma alternativa, se puede alquilar fenilglicina con un haluro de alquilo tal como yoduro de etilo y una base como bicarbonato sódico o carbonato potásico (ruta B) . La ruta C ilustra la alquilación reductora de fenilglicina como en la ruta A seguida por una segunda alquilación reductora con un aldehido alternativo como formaldehído en presencia de un agente reductor y ácido. La ruta D ilustra la síntesis de fenilglicinas sustituidas a través de los análogos de ácido mandélico correspondientes. La conversión del alcohol secundario a un grupo saliente competente se puede llevar a cabo con cloruro de p-toluenosulfonilo . El desplazamiento del grupo tosilato con una amina apropiada seguida por retirada reductora del éster bencílico puede proporcionar derivados de fenilglicina sustituidos. En la ruta E se resuelve un derivado de fenilglicina sustituido racémico por esterificación con un compuesto auxiliar quiral enantioméricamente puro tal como, aunque sin quedar limitados a los mismos, (+) -1-feniletanol , ( - ) -1-feniletanol , una oxazolidinona de Evan, o pantolactona enantioméricamente pura. La separación de diastereoisómeros se lleva a cabo por cromatografía (gel de sílice, HPLC, cristalización y similares) seguida por la retirada del compuesto auxiliar quiral proporcionando derivados de fenilglicina enantioméricamente puros. La ruta H ilustra una secuencia de síntesis que intersecciona con la ruta E en la que se instala el compuesto auxiliar quiral citado antes de la adición de la amina. De forma alternativa, se puede bromar un éster de un ácido arilacético con una fuente de ion bromonio tal como bromo, N-bromosuccinimida o CBr4. El bromuro de bencilo resultante se puede desplazar con una diversidad de aminas mono o disustituidas en presencia de una base de amina terciaria tal como trietilamina o base de Hunig. La hidrólisis del éster metílico por tratamiento con hidróxido de litio a baja temperatura o HC1 6N a temperatura elevada proporciona los derivados de fenilglicina sustituidos. Otro procedimiento se muestra en la ruta G. Los análogos de glicina se pueden obtener con una diversidad de haluros de arilo en presencia de una fuente de paladio(O) tal como bis (tributilfosfina) paladio y base como fosfato potásico.
El éster resultante se puede hidrolizar entonces por tratamiento con base o ácido. Se sobreentiende que en la técnica existen otros procedimientos bien conocidos para preparar derivados de fenilglicina y se pueden modificar para proporcionar los compuestos deseados en la presente descripción. Se sobreentiende que los derivados de fenilglicina finales se pueden purificar hasta una pureza enant iomérica mayor que 98% de ee por HPLC preparativa.
Esquema de reacción 2: Derivados de aminoácido adiados En otra modalidad de la presente descripción, se pueden preparar derivados de fenilglicina acilados como se ilustra a continuación. Los derivados de fenilglicina en los que se protege el ácido carboxílico como un éster que se retira fácilmente se pueden acilar con un cloruro de ácido en presencia de una base tal como trietilamina para proporcionar las amidas correspondientes (ruta A) . La ruta B ilustra la acilación del derivado de fenilglicina de partida con un cloroformiato apropiado mientras que la ruta C muestra la reacción con un isocianato o cloruro de carbamoilo apropiado. Cada uno de los intermedios mostrados en las rutas A - C se pueden desproteger por procedimientos conocidos por los expertos en la técnica (es decir; tratamiento del éster t-butílico con base fuerte tal como HCl o ácido trif luoroacét ico) .
Esquema de reacción 3 Los ácidos fenilacéticos sustituidos con amino se pueden preparar por tratamiento de un ácido clorometilfenilacético con un exceso de una amina.
Síntesis de precursores de ácido comunes La valoración de la pureza y el análisis de masas de baja resolución se llevaron a cabo en un sistema de CL Shimadzu CL acoplado con un sistema de EM Waters Micromass ZQ . Se apreciará que los tiempos de retención pueden variar ligeramente entre máquinas. Condiciones de CL aplicables a la presente sección, a no ser que se indique de otro modo.
Condiciones de EM-W1 Columna = XTERRA 3.0 X 50 mm S7 % Inicial de B = 0 % Final de B = 100 Tiempo de gradiente = 2 min Tiempo de parada = 3 min Caudal = 5 mi/min Longitud de onda = 220 nm Disolvente A = TFA al 0.1% en metanol al 10%/H20 al 90% Disolvente B = TFA al 0.1% en metanol al 90%/H2O al 10% Condiciones de EM-W2 Columna = XTERRA 3.0 X 50 mm S7 % Inicial de B = 0 % Final de B = 100 Tiempo de gradiente = 3 min Tiempo de parada = 4 min Caudal = 4 ml/min Longitud de onda = 220 nm Disolvente A = TFA al 0.1% en metanol al 10%/H2O al 90% Disolvente B = TFA al 0.1% en metanol al 90%/H2O al 10% Condiciones de EM-W5 Columna = XTERRA 3.0 X 50 mm S7 % Inicial de B = 0 % Final de B = 30 Tiempo de gradiente = 2 min Tiempo de parada = 3 min Caudal = 5 ml/min Longitud de onda = 220 nm Disolvente A = TFA al 0.1% en metanol al 10%/H20 al 90% Disolvente B = TFA al 0.1% en metanol al 90%/H20 al 10% Condiciones-Dl Columna XTERRA C18 3.0 X 50 rara S7 % Inicial de B = 0 % Final de B = 100 Tiempo de gradiente = 3 min Tiempo de parada = 4 min Caudal 4 ml/min Longitud de onda = 220 nm Disolvente A = TFA al 0.1% en metanol al 10%/H2O al 90% Disolvente B = TFA al 0.1% en metanol al 90%/H2O al 10% Condiciones-D2 Columna = Phenomenex-Luna 4.6 X 50 mm S10 % Inicial de B = 0 % Final de B = 100 Tiempo de gradiente = 3 min Tiempo de parada = 4 min Caudal = 4 ml/min Longitud de onda = 220 nm Disolvente A = TFA al 0.1% en metanol al 10%/H2O al 90% Disolvente B = TFA al 0.1% en metanol al 90%/H2O al 10% Condiciones-M3 Columna = XTERRA C18 3.0 X 50 mm S7 % Inicial de B = 0 % Final de B = 40 Tiempo de gradiente = 2 min Tiempo de parada = 3 min Caudal = 5 ml/min Longitud de onda = 220 nm Disolvente A = TFA al 0.1% en metanol al 10%/H2O al 90% Disolvente B = TFA al 0.1% en metanol al 90%/H2O al 10% Condición I Columna = Phenomenex-Luna 3.0X 50 mm S10 % Inicial de B = 0 % Final de B = 100 Tiempo de gradiente = 2 min Tiempo de parada = 3 min Caudal = 4 ml/min Longitud de onda = 220 nm Disolvente A = TFA al 0.1% en metanol al 10%/H20 al 90% Disolvente B = TFA al 0.1% en metanol al 90%/H2O al 10% Condición II Columna = Phenomenex-Luna 4.6X50 mm S10 % Inicial de B = 0 % Final de B = 100 Tiempo de gradiente = 2 min Tiempo de parada = 3 min Caudal = 5 ml/min Longitud de onda = 220 nm Disolvente A = TFA al 0.1% en metanol al 10%/H2O al 90% Disolvente B = TFA al 0.1% en metanol al 90%/H2O al 10% Condición III Columna = HPLC XTERRA C18 3.0 x 50mm S7 % Inicial de B = 0 % Final de B = 100 Tiempo de gradiente = 3 min Tiempo de parada = 4 min Caudal = 4 ml/min Longitud de onda = 220 nm Disolvente A = TFA al 0.1% en metanol al 10%/H20 al 90% Disolvente B = TFA al 0.1% en metanol al 90%/H20 al 10% Cap-1 Se añadió una suspensión de Pd al 10%/C (2.0 g) en metanol (10 mi) a una mezcla de (R) -2-fenilglicina (10 g, 66.2 mmol) , formaldehído (33 mi de 37% en peso en agua), HCl 1N (30 mi) y metanol (30 mi) y se expuso a H2 (413.57 kPa) durante 3 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas (Celite ) y el filtrado se concentro al vacío. El material bruto resultante se recristalizó en isopropanol proporcionando la sal HCl de Cap-1 como agujas blancas (4.0 g) . Rotación óptica: -117.1° [c = 9.95 mg/ml en ?20; ? = 589 nm] . RM de ¾ (DMSO-d6< d = 2.5 pm, 500 MHz) : d 7.43-7.34 (m, 5H) , 4.14 (s, 1H) , 2.43 (s, 6H) ; CL (Cond. I): TR = 0.25; CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + Ci0Hi4 O2 180.10; encontrado 180.17; E AR : Anal. 'Calculado para [M+H] + C10Hi4NO2 180.1025; encontrado 180.1017.
Cap-2 Se añadió NaBH3CN (6.22 g, 94 mmol) en porciones durante unos pocos minutos a una mezcla enfriada (hielo/agua) de (R) -2-fenilglicina (6.02 g, 39.8 mmol) y MeOH (100 mi), y se agitó durante 5 min. Se añadió acetaldehído (10 mi) gota a gota durante 10 minutos y se continuó agitando a la misma temperatura fría durante 45 minutos y a temperatura ambiente durante -6.5 horas. La mezcla de reacción se volvió a enfriar con baño de hielo-agua, se trató con agua (3 mi) y luego se inactivo con una adición gota a gota de HCl concentrado durante ~ 45 min hasta que el pH de la mezcla fue ~ 1.5 -2.0. El baño de enfriamiento se retiró y se continuó agitando mientras se añadía HCl concentrado con el fin de mantener el pH de la mezcla aproximadamente a 1.5-2.0. La mezcla de reacción se agitó durante una noche, se filtró para separar la suspensión blanca y el filtrado se concentró al vacío. El material bruto se recristalizó en etanol proporcionando la sal HCl de Cap-2 como un sólido blanco brillante en dos tandas (tanda-1: 4.16 g; tanda-2: 2.19 g) . RMN de ¾ (DMSO-dg, S = 2.5 ppm, 400 MHz) : 10.44 (1.00, s ancho, 1H) , 7.66 (m, 2H) , 7.51 (m, 3H) , 5.30 (s, 1H) , 3.15 (m ancho, 2H) , 2.98 (m ancho, 2H) , 1.20 (s ancho aparente, 6H) . Tanda-1: [a]25 -102.21° (c = 0.357, ¾0) ; canda-2: [a]25 -99.7° (c = 0.357, H20) . CL (Cond. I): TR = 0.43 min; CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + 208.13; encontrado 208.26 Cap- 3 Se añadió secuencialmente acetaldehído (5.0 mi, 89.1 mmol) y una suspensión de Pd al 10%/C (720 mg) en metanol/H20 (4 ml/l mi) a una mezcla enfriada (~ 15 °C) de (R) -2-fenilglicina (3.096g, 20.48 mmol), HC1 1N (30 mi) y metanol (40 mi) . Se retiró el baño de enfriamiento y la mezcla de reacción se agitó bajo un globo de H2 durante 17 horas. Se añadió más acetaldehído (10 mi, 178.2 mmol) y se continuó agitando en atmósfera de H2 durante 24 horas [Nota: el suministro de H2 se reponía cuando era necesario a través de la reacción] . La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas (Celite ) y el filtrado se concentró al vacío. El material bruto resultante se recristalizó en isopropanol proporcionando la sal HCl de ácido (R) -2- (etilamino) -2-fenilacético como un sólido blanco brillante (2.846 g) . RMN de ? (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : d 14.15 (s ancho, 1H) , 9.55 (s ancho, 2H) , 7.55-7.48 (m, 5H) , 2.88 (m ancho, 1H) , 2.73 (m ancho, 1H) , 1.20 (t aparente, J = 7.2, 3H) . CL (Cond. I) : TR = 0.39 min; índice de homogeneidad >95%; CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] * C10H14NO2 : 180.10; encontrado 180.18.
Se añadió una suspensión de Pd al 10%/C (536 mg) en metanol/H20 (3 ral/1 mi) a una mezcla de ácido (R) -2-(etilamino) -2-f eni lacét ico/HCl (1.492 g, 6.918 mmol) , formaldehído (20 mi de 37% en peso en agua) , HC1 1N (20 mi) y metanol (23 mi) . La mezcla de reacción se agitó bajo un globo de H2 durante -72 horas, en el que se el suministro de H2 se reanudaba según se necesitaba. La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas (Celite ) y el filtrado se concentró al vacio. El material bruto resultante se recristalizó en isopropanol (50 mi) proporcionando la sal HC1 de Cap-3 como un sólido blanco (985 mg) . RMN de 1H (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : d 10.48 (s ancho, 1H) , 7.59-7.51 (m, 5H) , 5.26 (s, 1H) , 3.08 (s ancho aparente, 2H) , 2.65 (s ancho, 3H) , 1.24 (m ancho, 3H) . CL (Cond. I) : TR = 0.39 min; índice de homogeneidad >95%; CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + CnH16N02 : 194.12; encontrado 194.18; EMAR : Anal. Calculado para [M+H] + CnHi6N02: 194.1180; encontrado 194.1181.
Cap-4 Se añadió ClC02Me (3.2 mi, 41.4 mmol) gota a gota a una semisolución en THF enfriada (hielo/agua) (410 mi) de 2-amino-2-fenilacetato de (R) - tert-butilo/HCl (9.877 g, 40.52 mmol) y diisopropiletilamina (14.2 mi, 81.52 mmol) durante 6 min, y se agitó a una temperatura similar durante 5.5 horas. El componente volátil se eliminó al vacío, y el residuo se repartió entre agua (100 mi) y acetato de etilo (200 mi) . La fase orgánica se lavó con HC1 1N (25 mi) y solución saturada de NaHC03 (30 mi) , se secó ( gS04) , se filtró y se concentró al vacío. El aceite resultante incoloro se trituró en hexanos, se filtró y se lavó con hexanos (100 mi) proporcionando 2- (metoxicarbonilamino) -2-fenilacetato de (R) -tert-butilo como un sólido blanco (7.7 g) . RMN de ?? (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : 7.98 (d, J = 8.0, 1H) , 7.37-7.29 (m, 5H) , 5.09 (d, J = 8, 1H) , 3.56 (s, 3H) , 1.33 (s, 9H) . CL (Cond. I) : TR = 1.53 min; índice de homogeneidad -90 %; CL/EM: Anal. Calculado para [M+Na] + Ci4H19NNa04 : 288.12; encontrado 288.15.
Se añadió TFA (16 mi) gota a gota a una solución enfriada (hielo/agua) en CH2C12 (160 mi) del producto anterior durante 7 minutos y se retiró el baño de enfriamiento y la mezcla de reacción se agitó durante 20 horas. Puesto que la desprotección todavía no fue completa, se añadió más TFA (1.0 mi) y se continuó agitando durante otras 2 horas más. El componente volátil se eliminó al vacío, y el residuo oleoso resultante se trató con éter dietílico (15 mi) y hexanos (12 mi) proporcionando un precipitado. El precipitado se filtró y se lavó con éter dietílico/hexanos (relación -1:3; 30 mi) y se secó al vacío proporcionando Cap-4 como un sólido blanco apelusado (5.57 g) . Rotación óptica: -176.9° [c = 3.7 mg/ml en H20; ? = 589 nm] . RM de ?? (D SO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : d 12.84 (s ancho, 1H) , 7.96 (d, J = 8.3 , 1H) , 7.41-7.29 (m, 5H) , 5.14 (d, J = 8.3, 1H) , 3.55 (s, 3H) . CL (Cond. I) : TR = 1.01 min; índice de homogeneidad >95%; CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C10H12NO4 210.08; encontrado 210.17; EMAR: Anal. Calculado para [M+H] + C10H12N04 210.0766; encontrado 210.0756.
Cap-5 Se calentó a 100°C durante 21 horas una mezcla de (R) - 2 - fenilglicina (1.0 g, 6.62 mmol), 1,4-dibromobutano (1.57 g, 7.27 mmol) y Na2C03 (2.10 g, 19.8 mmol) en etanol (40 mi) . La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se filtró, y el filtrado se concentró al vacío. El residuo se disolvió en etanol y se acidificó con HCl 1N hasta pH 3-4, y el componente volátil se eliminó al vacío. El material bruto resultante se purificó por una HPLC de fase inversa (agua/metanol/TFA) proporcionando la sal TFA de Cap-5 como una espuma blanca semiviscosa (1.0 g) . RMN de XH (DMSO-d6, d = 2.5, 500 MHz) d 10.68 (s ancho, 1H) , 7.51 (m, 5H) , 5.23 (s, 1H) , 3.34 (s ancho aparente, 2H) , 3.05 (s ancho aparente, 2H) , 1.95 (s ancho aparente, 4H) ; TR = 0.30 min (Cond. I) ; índice de homogeneidad >98%; CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + Ci2Hi6N02 : 206.12; encontrado 206.25.
La sal TFA de Cap-6 se sintetizó a partir de (R) - 2 - feni lgl ic ina y l-bromo-2- (2-bromoetoxi) etano usando el procedimiento de preparación de Cap-5. RMN de 1H (DMSO-dg, d = 2.5, 500 MHz) d 12.20 (s ancho, 1H) , 7.50 (m, 5H) , 4.92 (s, 1H) , 3.78 (s ancho aparente, 4H) , 3.08 (s ancho aparente, 2H) , 2.81 (s ancho aparente, 2H) ; TR = 0.32 min (Cond. I); >98%; CL/EM: Anal. Calculado para [M+H]+ C12H16N03 : 222.11; encontrado 222.20; EMAR : Anal. Calculado para [M+H] + Ci2Hi6N03 : 222.1130 ; encontrado 222.1121.
Cap-7 Cap-7a: enantiómero-1 Cap-7b: enant¡ómero-2 Se anadió gota a gota una solución en CH2C12 (200 mi) de cloruro de p- toluenosulfonilo (8.65 g, 45.4 mmol) a una solución (-5 °C) en CH2C12 (200 mi) de 2-hidroxi-2-fenilacetato de (S) -bencilo (10.0 g, 41.3 mmol) , trietilamina (5.75 mi, 41.3 mmol) y 4 -dimetilaminopiridina (0.504 g, 4.13 mmol), mientras se mantenía la temperatura de -5 °C a 0 °C. La reacción se agitó a 0 °C durante 9 horas, y luego se almacenó en un congelador (-25 °C) durante 14 horas. Se dejó descongelar hasta temperatura ambiente y se lavó con agua (200 mi) , HC1 1N (100 mi) y salmuera (100 mi) , se secó (MgS04) , se filtró y se concentró al vacío proporcionando 2-fenil-2- (tosiloxi) acetato de bencilo como un aceite viscoso que solidificó en reposo (16.5 g) . La integridad quiral del producto no se verificó y el producto se usó en la etapa siguiente sin purificación adicional. RMN de (DMSO-d6, d = 2.5, 500 MHz) d 7.78 (d, J = 8.6, 2H) , 7.43-7.29 (m, 10H) , 7.20 (m, 2H) , 6.12 (s, 1H) , 5.16 (d, J = 12.5, 1H) , 5.10 (d, J = 12.5, 1H) , 2.39 (s, 3H) . TR = 3.00 (Cond. III) ; índice de homogeneidad >90%; CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C22H2o a05S: 419.09; encontrado 419.04.
Se calentó a 65 °C durante 7 horas una solución en THF (75 mi) de 2-fenil-2- (tosiloxi) acetato de bencilo (6.0 g, 15.1 tnmol) , 1-metilpiperazina (3.36 mi, 30.3 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (13.2 mi, 75.8 mmol). Se dejó enfriar la reacción hasta temperatura ambiente y el componente volátil se eliminó al vacío. El residuo se repartió entre acetato de etilo y agua, y la fase orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó (MgS04) , se filtró y se concentró al vacío. El material bruto resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, etilo acetato) proporcionando 2- (4-metilpiperazin-l-il) -2 -fenilacetato de bencilo como un aceite viscoso anaranjado-pardo (4.56 g) . El análisis HPLC quiral (Chiralcel OD-H) indicó que la muestra es una mezcla de enantiómeros en una relación 38.2 a 58.7. La separación de los enantiómeros se realizó como sigue: se disolvió el producto en 120 mi de etanol/heptano (1:1) y se inyectó (5 ml/inyección) en una columna HPLC quiral (Chiracel OJ, 5 cm ID x 50 cm L, 20 µp?) eluyendo con 85:15 Heptano/etanol a 75 ml/min, y se controló a 220 nm. El enantiómero- 1 ( 1.474 g ) y el enantiómero-2 (2.2149 g) se recuperaron como aceite viscoso. RMN de H (CDC13, d = 7.26, 500 MHz) 7.44-7.40 (m, 2H) , 7.33-7.24 (m, 6H) , 7.21-7.16 (m, 2H) , 5.13 (d, J = 12.5, 1H) , 5.08 (d, J = 12.5, 1H) , 4.02 (s, 1H) , 2.65-2.38 (s ancho aparente, 8H) , 2.25 (s, 3H) . TR = 2.10 (Cond. III); índice de homogeneidad >98%; CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C20H25 2O2: 325.19; encontrado 325.20.
Se añadió una solución en metanol (10 mi) de cualquiera de los enantiómeros de 2- (4-metilpiperazin-l-il) -2-fenilacetato de bencilo (1.0 g, 3.1 mmol) a una suspensión de Pd al 10%/C (120 mg) en metanol (5.0 mi). La mezcla de reacción se expuso a un globo de hidrógeno con un control cuidadoso durante <50 min. Inmediatamente después de completarse la reacción, se filtró el catalizador a través de tierra de diatomeas (Celite®) y el filtrado se concentró al vacío proporcionando Cap-? , contaminado con ácido fenilacético como una espuma color castaño (867.6 mg; la masa es superior al rendimiento teórico) . El producto se usó en la etapa siguiente sin purificación adicional. RMN de 1H (DMSO-d6( d = 2.5, 500 MHz) d 7.44-7.37 (m, 2H) , 7.37-7.24 (m, 3H) , 3.92 (s, 1H) , 2.63-2.48 (s ancho a . , 2H) , 2.48-2.32 (m, 6H) , 2.19 (s, 3H) ; TR = 0.31 (Cond. II); índice de homogeneidad >90%; CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C13H19N202 : 235.14; encontrado 235.15; EMAR: Anal. Calculado para [M+H] + C13H19 2O2 : 235.1447; encontrado 235.1440.
La síntesis de Cap-8 y Cap-9 se llevó a cabo de acuerdo con la síntesis de Cap-7 usando aminas apropiadas para la etapa de desplazamiento de SN2 (es decir, 4-hidroxipiperidina para Cap-8 y (S) - 3 - fluoropirrolidina para Cap-9) y condiciones modificadas para la separación de los intermedios estereoisoméricos respectivos, como se describe más adelante.
Cap- 8 8a: enant¡ómero-1 8b: enantiómero-2 La separación enantiomérica del intermedio 2- (4-hidroxipiperidin-l-il) -2-fenil acetato de bencilo se efectuó empleando las siguientes condiciones: se disolvió el compuesto (500 mg) en etanol/heptano (5 ml/45 mi) . La solución resultante se inyectó (5 ml/inyección) en una columna HPLC quiral (Chiracel OJ, 2 cm ID x 25 cm de longitud, 10 µp?) eluyendo con 80:20 de heptano/etanol a 10 ml/min, controlada a 220 nm, proporcionando 186.3 mg de enantiómero- 1 y 209.1 mg de enantiómero-2 como aceites viscosos amarillo claro. Estos ésteres bencílicos se sometieron a hidrogenación de acuerdo con la preparación de Cap-1 proporcionando Cap-8 : RMN de ? (DMS0-d6, d = 2.5, 500 MHz) 7.40 (d, J = 7, 2H) , 7.28-7.20 (m, 3H) , 3.78 (s 1H) , 3.46 (m, 1H) , 2.93 (m, 1H) , 2.62 (m, 1H) , 2.20 (m, 2H) , 1.70 (m, 2H) , 1.42 (m, 2H) . TR = 0.28 (Cond. II) índice de homogeneidad >98%; CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + Ci3Hi8N03: 236.13 ; encontrado 236.07; EMAR : Calculado para [M+H]+ Ci3H18N03: 236.1287; encontrado 236.1283.
Cap-9 9a: diastereómero-1 9b: diastereómero-2 La separación diastereomérica del intermedio 2-((S)-3-fluoropirrolidin-l-il) -2-fenilacetato de bencilo se efectuó empleando las siguientes condiciones: se separó el éster (220 mg) en una columna HPLC quiral (Chiracel OJ-H, 0.46 cm ID x 25 cm L, 5 Jim) eluyendo con 95% de C02 / 5% de metanol con 0.1% de TFA, a una presión de lOxlO5 Pa, 70 ml/min de Caudal, y una temperatura de 35 °C. Se concentró el eluato de HPLC para los estereoisómeros respectivos y el residuo se disolvió en CH2C12 (20 mi) y se lavó con un medio acuoso (10 mi agua + 1 mi de solución saturada de NaHC03) . La fase orgánica se secó (MgS04) , se filtró y se concentró al vacío proporcionando 92.5 mg de fracción-1 y 59.6 mg de fracción-2. Estos ésteres bencílicos se sometieron a hidrogenacion de acuerdo con la preparación de Cap-7 para preparar Caps 9a y 9b. Cap-9a (diastereómero-1 ; la muestra es una sal TFA como resultado de la purificación en una HPLC de fase inversa usando H20/metanol/TFA como disolvente) : RMN de 1H (DMS0-d6, d = 2.5, 400 MHz) 7.55-7.48 (m, 5H) , 5.38 (d de m, J = 53.7, 1H) , 5.09 (s ancho, 1H) , 3.84-2.82 (m ancho, 4H) , 2.31-2.09 (m, 2H) . TR = 0.42 (Cond. I); índice de homogeneidad >95%; CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + Ci2H15F 02 : 224.11; encontrado 224.14; CapSb (diastereómero-2) : RMN de ¾ (DMSO-de, d = 2.5, 400 ???) 7.43-7.21 (m, 5H) , 5.19 (d de m, J = 55.9, 1H) , 3.97 (s, 1H) , 2.95-2.43 (m, 4H) , 2.19-1.78 (m, 2H) . TR = 0.44 (Cond. I); CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + Ci2Hi5FN02 : 224.11; encontrado 224.14.
Cap-10 A una solución de D-prolina (2.0 g, 17 mmol) y formaldehído (2.0 mi de 37% en peso en H20) en metanol (15 mi) se añadió una suspensión de Pd al 10%/C (500 mg) en metanol (5 mi) . La mezcla se agitó bajo un globo de hidrógeno durante 23 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas (Celite®) y se concentró al vacío proporcionando Cap-10 como un sólido blanquecino (2.15 g) . RMN de ??. (DMS0-d6, d = 2.5, 500 MHz) 3.42 (m, 1H) , 3.37 (dd, J- = 9.4, 6.1, 1H) , 2.85-2.78 (m, 1H) , 2.66 (s, 3H) , 2.21-2.13 (m, 1H) , 1.93-1.84 (m, 2H) , 1.75-1.66 (m, 1H) . TR = 0.28 (Cond. II); índice de homogeneidad >98%; CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C6Hi2N02 : 130.09; encontrado 129.96.
Cap-11 Una mezcla de ácido (2S, 4R) -4-fluoropirrolidin-2- carboxílico (0.50 g, 3.8 mmol) , formaldehído (0.5 mi de 37% en peso en H20) , HCl 12 N (0.25 mi) y Pd al 10%/C (50 mg) en metanol (20 mi) se agitó bajo un globo de hidrógeno durante 19 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas (Celite®) y el filtrado se concentró al vacío. El residuo se recristalizó en isopropanol proporcionando la sal HCl de Cap-11 como un sólido blanco (337.7 mg) . RMN de 1H (DMSO-d6, d = 2.5, 500 MHz) 5.39 (d m, J = 53.7, 1H) , 4.30 (m, 1H) , 3.90 (ddd, J = 31.5, 13.5, 4.5, 1H) , 3.33 (dd, J = 25.6, 13.4, 1H) , 2.85 (s, 3H) , 2.60-2.51 (m, 1H) , 2.39-2.26 (m, 1H) . TR = 0.28 (Cond. II); índice de homogeneidad >98%; CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C6H FN02 : 148.08; encontrado 148.06.
Cap-12 (igual que Cap 52) Se disolvió L-alanina (2.0 g, 22.5 mmol) en solución acuosa al 10% de carbonato sódico (50 mi) , y se añadió a la misma una solución en THF (50 mi) de cloroformiato de metilo (4.0 mi) . La mezcla de reacción se agitó en condiciones ambientales durante 4.5 horas y se concentró al vacío. El sólido blanco resultante se disolvió en agua y se acidificó con HCl 1N hasta un pH ~ 2-3. Las soluciones resultantes se extrajeron con acetato de etilo (3 x 100 mi) , y la fase orgánica reunida se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró al vacío proporcionando un aceite incoloro (2.58 g) . Se purificaron 500 mg de este material por una HPLC de fase inversa (H20/metanol/TFA) proporcionando 150 mg de Cap-12 como un aceite incoloro. RMN de XH (DMS0-d6, d = 2.5, 500 MHz) 7.44 (d, J = 7.3, 0.8H) , 7.10 (s ancho, 0.2H), 3.97 (m, 1H) , 3.53 (s, 3H) , 1.25 (d, .7 = 7.3, 3H) .
Cap-13 I 0 Se agitó una mezcla de L-alanina (2.5 g, 28 mmol) , formaldehído (8.4 g, 37% en peso), HCl 1N (30 mi) y Pd al 10%/C (500 mg) en metanol (30 mi) en una atmósfera de hidrógeno (344.64 o kPa) durante 5 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas (Celite ) y el filtrado se concentró al vacio proporcionando la sal HCl de Cap-13 como un aceite que solidificó en reposo al vacío (4.4 g; la masa es superior al rendimiento teórico) . El producto se usó sin purificación adicional . RMN de XH (DMSO-dg, d = 2.5, 500 MHz) d 12.1 (s ancho, 1H) , 4.06 (q, J = 7.4, 1H) , 2.76 (s, 6H) , 1.46 (d, J = 7.3 , 3H) .
Cap-14 Cap-14 Etapa 1: Una mezcla éster tert-butílico de (R)-(-)- D-fenilglicina (3.00 g, 12.3 mmol) , NaBH3CN (0.773 g, 12.3 mmol) , KOH (0.690 g, 12.3 mmol) y ácido acético (0.352 mi, 6.15 mmol) se agitó en metanol a 0 °C. A esta mezcla se añadió dialdehído glutárico (2.23 mi, 12.3 mmol) gota a gota durante 5 minutos. La mezcla de reacción se agitó calentando hasta temperatura ambiente y se continuó agitando a la misma temperatura durante 16 horas. El disolvente se eliminó seguidamente y el residuo se repartió con NaOH acuoso al 10% y acetato de etilo. La fase orgánica se separó, se secó (MgS04) , se filtró y se concentró hasta sequedad proporcionando un aceite transparente. Este material se purificó por HPLC preparativa de fase inversa (Primesphere C-18, 30 x lOOmm; CH3CN-H20-TFA al 0.1%) dando el éster intermedio (2.70 g, 56%) como un aceite transparente. RM de XH (400 MHz, CDCl3) d 7.53-7.44 (m, 3H) , 7.40-7.37 (m, 2H) , 3.87 (d, J" = 10.9 Hz, 1H) , 3.59 (d, J = 10.9 Hz , 1H) , 2.99 (t, J = 11.2 Hz, 1H) , 2.59 (t, J" = 11.4 Hz , 1H) , 2.07-2.02 (m, 2H) , 1.82 (d, J = 1.82 Hz, 3H) , 1.40 (s, 9H) . CL/EM: Anal. Calculado para C17H25 O2 : 275; encontrado: 276 (M+H) + .
Etapa 2: A una solución agitada del éster intermedio (1.12 g, 2.88 mmol) en diclorometano (10 mi) se añadió TFA (3 mi) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas y luego se concentró hasta sequedad dando un aceite amarillo claro. El aceite se purificó usando HPLC preparativa de fase inversa (Primesphere C-18, 30 x 100mm; CH3CN-H20-TFA al 0.1%). Las fracciones apropiadas se reunieron y se concentraron hasta sequedad al vacío. El residuo se disolvió entonces en una cantidad mínima de metanol y se aplicó en cartuchos de extracción MCX LP (2 x 6 g) . Los cartuchos se aclararon con metanol (40 mi) y luego eluyó el compuesto deseado usando amoníaco 2M en metanol (50 mi) . Las fracciones que contenían producto se reunieron y concentraron y el residuo se suspendió en agua. La 1 iof i 1 i zac ión de esta solución proporcionó el compuesto del epígrafe (0.492 g, 78%) como un sólido amarillo claro. RMN de 1H (DMSO-d6) d 7.50 (s, 5H) , 5.13 (s, 1H) , 3.09 (s ancho, 2H), 2.92-2.89 (m, 2H) , 1.74 (m, 4H), 1.48 (s ancho, 2H) . CL/EM: Anal. Calculado para C13H17 O2 : 219; encontrado: 220 (M+H) + .
Cap-15 W-Cap-15 Etapa 1: 2-Bromo-2-fenilacetato de (S)-l-feniletilo: A una mezcla de ácido a-bromofenilacético (10.75 g, 0.050 mol), (S) - ( - ) -1-feniletanol (7.94 g, 0.065 mol) y DMAP (0.61 g, 5.0 mmol) en diclorometano seco (100 mi) se añadió EDCI sólido (12.46 g, 0.065 mol) todo de una vez. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente en Ar durante 18 horas y luego se diluyó con acetato de etilo, se lavó (H20 x 2, salmuera) , se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró dando un aceite amarillo pálido. La cromatografía ultrarrápida (Si02/ hexano-etilo acetato, 4:1) de este aceite proporcionó el compuesto del epígrafe (11.64 g, 73%) como un sólido blanco. RMN de ¾ (400 MHz, CDC13) d 7.53-7.17 (m, 10H) , 5.95 (q, J = 6.6 Hz, 0.5H), 5.94 (q, J = 6.6 Hz, 0.5H) , 5.41 (s, 0.5H) , 5.39 (s, 0.5H), 1.58 (d, J = 6.6 Hz, 1.5H) , 1.51 (d, J = 6.6 Hz, 1.5H) .
Etapa 2: (R) -2- (4-hidroxi-4-metilpiperidin-l-il) -2-fenilacetato de (S) -1-feniletilo : A una solución de 2-bromo-2-fenilacetato de (S) -1-feniletilo (0.464 g, 1.45 mmol) en THF (8 mi) se añadió trietilamina (0.61 mi, 4.35 mmol) , seguido por yoduro de tetrabutilamonio (0.215 g, 0.58 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos y luego se añadió una solución de 4-metil-4-hidroxipiperidina (0.251 g, 2.18 mmol) en THF (2 mi) . La mezcla se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente y luego se calentó a 55-60 °C (temperatura de baño de aceite) durante 4 horas. La mezcla de reacción enfriada se diluyó entonces con acetato de etilo (30 mi) , se lavó (H20 x2 , salmuera) , se secó (MgS04) , se filtró y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-60% de etilo acetato-hexano) proporcionando primero el isómero (S,R) del compuesto del epígrafe (0.306 g, 60%) como un sólido blanco y luego el correspondiente isómero (S,S) (0.120 g, 23%) , también como un sólido blanco. Isómero (S,R) : RMN de 1H (CD3OD) d 7.51-7.45 (m, 2H) , 7.41-7.25 (m, 8H) , 5.85 (q, J = 6.6 Hz, 1H) , 4.05 (s, 1H) , 2.56-2.45 (m, 2H) , 2.41-2.29 (m, 2H) , 1.71-1.49 (m, 4H) , 1.38 (d, J = 6.6 Hz, 3H) , 1.18 (s, 3H) . CLEM: Anal. Calculado para C22H27NO3 : 353 ; encontrado: 354 (M+H) + . Isómero (S,S) : RMN de XH (CD3OD) d 7.41-7.30 (m, 5H) , 7.20-7.14 (m, 3H) , 7.06-7.00 (m, 2H) , 5.85 (q, J" = 6.6 Hz, 1H) , 4.06 (s, 1H) , 2.70-2.60 (m, 1H) , 2.51 (dt, J = 6.6, 3.3 Hz, 1H) , 2.44-2.31 (m, 2H) , 1.75-1.65 (m, 1H) , 1.65-1.54 (m, 3H) , 1.50 (d, J" = 6.8 Hz, 3H) , 1.20 (s, 3H) . CLEM: Anal. Calculado para C22H2 NO3 : 353; encontrado: 354 (M+H) + .
Etapa 3: ácido (R) -2- (4-hidroxi-4-metilpiperidin-l-il) -2-fenilacético : A una solución de (R) -2- (4-hidroxi-4-metilpiperidin-l-il) -2-fenilacetato de (S) - 1 - feniletilo (0.185 g, 0.52 mmol) en diclorometano (3 mi) se añadió ácido trif luoracét ico (1 mi) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Los volátiles se eliminaron seguidamente al vacío y el residuo se purificó por HPLC preparativa de fase inversa (Primesphere C-18, 20 x 100mm; CH3 CN- H2O-TFA al 0.1%) dando el compuesto del epígrafe (como sal TFA) como un sólido azulado pálido (0.128 g, 98%) . CLEM: Anal. Calculado para Ci4H19N03 : 249; encontrado: 250 (M+H) + .
Cap-16 (fl Cap-16 Etapa 1: 2- (2-fluorofenil) acetato de (S) -1-feniletilo: Una mezcla de ácido 2 - fluorofenilacético (5.45 g, 35.4 mmol) , (S) -1-feniletanol (5.62 g, 46.0 mmol) , EDCI (8.82 g, 46.0 mmol) y D AP (0.561 g, 4.60 mmol) en CH2C12 (100 mi) se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. El disolvente se concentró a continuación y el residuo se repartió con H20-acetato de etilo. Se separaron las fases y la fase acuosa se volvió a extraer con acetato de etilo (2x) . Las fases orgánicas reunidas se lavaron (H20, salmuera) , se secaron (Na2S04) , se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage/ 0-20% de acetato de etilo-hexano) proporcionando el compuesto del epígrafe como un aceite incoloro (8.38 g, 92%) . RMN de XH (400 MHz , CD3OD) d 7.32 - 7.23 (m, 7H) , 7.10-7.04 (m, 2), 5.85 (q, J = 6.5 Hz, 1H) , 3.71 (s, 2H) , 1.48 (d, J = 6.5 Hz, 3H) .
Etapa 2: 2 - (2 -Fluorofenil ) -2 - (piperidin- 1-il) acetato de (R) - ( (S) -1-feniletilo) : A una solución de 2- (2-fluorofenil) acetato de (S) -1-feniletilo (5.00 g, 19.4 mmol) en THF (1200 mi) a 0°C se añadió DBU (6.19 g, 40.7 mmol) y la solución se dejó calentar hasta temperatura ambiente mientras se agitaba durante 30 minutos. La solución se enfrió entonces hasta -78 °C y se añadió una solución de CBr4 (13.5 g, 40.7 mmol) en THF (100 mi) y la mezcla se dejó calentar hasta -10 °C y se agitó a esta temperatura durante 2 horas. La mezcla de reacción se inactivo con NHC1 acuoso saturado y se separaron las fases. La fase acuosa se volvió a extraer con acetato de etilo (2x) y las fases orgánicas reunidas se lavaron (H20, salmuera) , se secaron (Na2S04) , se filtraron y se concentraron al vacío. Al residuo se añadió piperidina (5.73 mi, 58.1 mmol) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. Los volátiles se concentraron entonces al vacío y el residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage/ 0-30% de éter dietílico-hexano) proporcionando una mezcla pura de diastereoisómeros (relación 2:1 por MN de 1H) como un aceite amarillo (2.07 g, 31%), junto con material de partida sin reaccionar (2.53 g, 51%) . Otra cromatografía de la mezcla diastereomérica (Biotage/ 0-10% éter dietílico-tolueno) proporcionó el compuesto del epígrafe como un aceite incoloro (0.737 g, 11%). RMN de 1H (400 MHz, CD30D) d 7.52 (ddd, J = 9.4, 7.6, 1.8 Hz, 1H) , 7.33 -7.40 (m, 1), 7.23 - 7.23 (m, 4H) , 7.02 - 7.23 (m, 4H) , 5.86 (q, J" = 6.6 Hz, 1H) , 4.45 (s, 1H) , 2.39 - 2.45 (m, 4H) , 1.52 - 1.58 (m, 4H) , 1.40 - 1.42 (m, 1H) , 1.38 (d, J = 6.6 Hz, 3H) . CLEM: Anal. Calculado para C21H24F O2 : 341; encontrado: 342 (M+H) + .
Etapa 3: ácido (R) -2- (2-fluorofenil) -2- (piperidin-1-il)acético: Una mezcla de 2- (2-fluorofenil) -2- (piperidin-l-il) acetato de (R) - ( (S) -1-feniletilo) (0.737 g, 2.16 mmol) y Pd(0H)2 al 20%/C (0.070 g) en etanol (30 mi) se sometió a hidrogenación a temperatura ambiente y presión atmosférica (globo de H2) durante 2 horas. La solución se purgó entonces con Ar, se filtró a través de tierra de diatomeas (Celite ) y se concentró al vacío. Esto proporcionó el compuesto del epígrafe como un sólido incoloro (0.503 g, 98%) . RMN de ¾ (400 MHz, CD3OD) d 7.65 (ddd, J = 9.1, 7.6, 1.5 Hz, 1H) , 7.47-7.53 (m, 1H) , 7.21-7.30 (m, 2H) , 3.07-3.13 (m, 4H) , 1.84 (s ancho, 4H) , 1.62 (s ancho, 2H) . CLEM: Anal. Calculado para Ci3H16FN02: 237; encontrado : 238 (M+H) + .
Cap-11 (fl>Cap-17 Etapa 1: (R) -2- (4-hidroxi-4-fenilpiperidin-l-il) -2-fenilacetato de (S) -1-feniletilo: A una solución de 2-bromo-2-fenilacetato de (S) -1-feniletilo (1.50 g, 4.70 mmol) en THF (25 mi) se añadió trietilamina (1.31 mi, 9.42 mmol), seguido por yoduro de tetrabutilamonio (0.347 g, 0.94 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos y luego se añadió una solución de 4-fenil-4-hidroxipiperidina (1.00 g, 5.64 mmol) en THF (5 mi) . La mezcla se agitó durante 16 horas y luego se diluyó con acetato de etilo (100 mi), se lavó (H20 x2, salmuera), se secó (MgSQj) , se filtró y se concentró. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (acetato de etilo 0-60%-hexano) proporcionando una mezcla aproximadamente 2:1 de diastereoisomeros, como se juzgó por RM de La separación de esos isómeros se llevó a cabo usando cromatografía de fluido supercrítico (Chiralcel OJ-H, 30 x 250mm; 20% etanol en C02 a 35 °C) , dando primero el isómero (R) del compuesto del epígrafe (0.534 g, 27%) como un aceite amarillo y luego el isómero (S) correspondiente (0.271 g, 14%), también como un aceite amarillo. Isómero (S,R) : RMN de H (400 MHz, CD3OD) d 7.55-7.47 (m, 4H) , 7.44-7.25 (m, 10H) , 7.25-7.17 (m, 1H) , 5.88 (q, J = 6.6 Hz, 1H) , 4.12 (s, 1H) , 2.82-2.72 (m, 1H) , 2.64 (dt, J = 11.1, 2.5 Hz, 1H) , 2.58-2.52 (m, 1H) , 2.40 (dt, J = 11.1, 2.5 Hz, 1H) , 2.20 (dt, J = 12.1, 4.6 Hz, 1H) , 2.10 (dt, J = 12.1, 4.6 Hz, 1H) , 1.72-1.57 (m, 2H) , 1.53 (d, J = 6.5 Hz, 3H) . CLEM: Anal. Calculado para C27H29 O3 : 415; encontrado: 416 (M+H) +; Isómero (S,S) : RMN de XH (400 MHz, CD3OD) 5 7.55-7.48 (m, 2H) , 7.45-7.39 (m, 2H) , 7.38-7.30 (m, 5H) , 7.25-7.13 (m, 4H) , 7.08-7.00 (m, 2H) , 5.88 (q, J = 6.6 Hz, 1H) , 4.12 (s, 1H) , 2.95-2.85 (m, 1H) , 2.68 (dt, J = 11.1, 2.5 Hz, 1H) , 2.57-2.52 (m, 1H), 2.42 (dt, J = 11.1, 2.5 Hz, 1H) , 2.25 (dt, J = 12.1, 4.6 Hz, 1H) , 2.12 (dt, J = 12.1, 4.6 Hz, 1H) , 1.73 (dd, J = 13.6, 3.0 Hz, 1H) , 1.64 (dd, J= 13.6, 3.0 Hz, 1H) , 1.40 (d, J= 6.6 Hz, 3H) . CLEM: Anal. Calculado para C27H29 O3 : 415; encontrado: 416 (M+H) +.
Los ésteres siguientes se prepararon de una forma similar.
Diastereómero 1: RMN de *H (500 MHz, DMSO- d6) d ppm 1.36 (d, J=6.41 Hz, 3H) 2.23 - 2.51 (m, 4H) 3.35 (s, 4H) 4.25 (s, 1H) 5.05 (s, 2H) 5.82 (d, J=6.71 Hz, 1H) 7.15 - 7.52 (m, 15H) .
CLEM: Análisis calculado para: Encontrado: 459.44 (M+H) +.
Diastereómero 2 : RMN de lH (500 MHz, DMSO- d6) d ppm 1.45 (d, J=6.71 Hz, 3H) 2.27 - 2.44 (m, 4H) 3.39 (s, 4H) 4.23 (s, 1H) 5.06 (s, 2H) 5.83 (d, J=6.71 Hz, 1H) 7.12 (dd, J=6.41, 3.05 Hz, 2H) 7.19 - 7.27 (m, 3H) 7.27 - 7.44 (m, 10H) .
CLEM: Análisis calculado para: C28H3ON2C 458.22; Encontrado: 459.44 (M+H) +. 25 Condiciones de SFC quiral para determinar el tiempo de retención Condición I Columna: Columna Chiralpak AD-H, 4.62X250 mm , 5µ?? Disolventes: 90% de C02 - metanol al 10% con DEA al 0.1% Temp : 35 °C Presión: 15 MPa Caudal: 2.0 ral/rain.
UV controlado a 220 nm Inyección: 1.0 mg/3 mi de metanol Condición II Columna: Columna Chiralcel OD-H, 4.62X250 mm , 5µp? Disolventes: 90% de C02 - metanol al 10% con DEA al 0.1% Temp : 35 °C Presión: 15 MPa Caudal: 2.0 ml/min.
UV controlado a 220 nm Inyección: 1.0 mg/ml de metanol Cap-17, Etapa 2: ácido ( R ) - 2 - ( 4 - hidroxi - 4 -f eni lpiper idin - 1 - i 1 ) - 2 - f eni 1 acét i co : A una solución de ( R ) - 2 - ( 4 - hidro i -4-fenilpiperidin-l-il) - 2 -fenilacetato de ( S ) - 1 - f eni 1 e t i lo (0.350 g, 0.84 mmol) en diclorometano (5 mi) se añadió ácido trif luoracético (1 mi) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Los volátiles se eliminaron seguidamente al vacío y el residuo se purificó por HPLC preparativa de fase inversa (Primesphere C-18, 20 x 100mm; CH3CN-H20-TFA al 0.1%) dando el compuesto del epígrafe (como sal TFA) como un sólido blanco (0.230 g, 88%) . CLEM : Anal. Calculado para Ci9H2i 03 : 311.15; encontrado: 312 (M+H) + .
Los siguientes ácidos carboxílicos se prepararon en forma ópticamente pura de una forma similar: Condiciones de CLEM para determinar el tiempo de retención Condición I Columna: Phenomenex- Luna 4.6 X 50 mm S10 % Inicial de B = 0 % Final de B = 100 Tiempo de gradiente = 4 min Caudal = 4 ml/min Longitud de onda = 220 Disolvente A = metanol al.10% - H20 al 90% - TFA al 0.1% Disolvente B = metanol al 90% - H20 al 10% - TFA al 0.1% Condición II Columna: Waters - Sunf iré 4.6 X 50 mm S5 % Inicial de B = 0 % Final de B = 100 Tiempo de gradiente = 2 min Caudal = 4 ml/min Longitud de onda = 220 Disolvente A = metanol al 10% - H20 al 90% - TFA al 0.1% Disolvente B = metanol al 90% - H20 al 10% - TFA al 0.1% Condición III Columna: Phenomenex 10µ 3.0 X 50 mm % Inicial de B =¦ 0 % Final de B = 100 Tiempo de gradiente = 2 min Caudal = 4 ml/min Longitud de onda = 220 Disolvente A = metanol al 10% - H20 al 90% - TFA al 0.1% Disolvente B = metanol al 90% - H20 al 10% - TFA al 0.1% Cap-18 Etapa 1: 2 - ( - i r i di 1 ) - 2 - bromoac e tat o de (R,S) -etilo: A una solución de 4 -piridilacetato de etilo (1.00 g, 6.05 mmol) en THF seco (150 mi) a 0 °C en argón se añadió DBU (0.99 mi, 6.66 mmol) . La mezcla de reacción se dejó calentar hasta temperatura ambiente durante 30 minutos y luego se enfrió hasta -78 °C. A esta mezcla se añadió CBr4 (2.21 g, 6.66 mmol) y se continuó agitando a -78 °C durante 2 horas. Seguidamente la mezcla de reacción se inactivo con NH4C1 acuoso saturado y se separaron las fases. La fase orgánica se lavó (salmuera) , se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró al vacío. El aceite amarillo resultante se purificó inmediatamente por cromatografía ultrarrápida (Si02/ hexano-acetato de etilo, 1:1) proporcionando el compuesto del epígrafe (1.40 g, 95%) como un aceite amarillo algo estable. RMN de 1K (400 MHz , CDC13) d 8.62 ( dd , J = 4.6, 1.8 Hz, 2H) , 7.45 (dd, J = 4.6, 1.8 Hz , 2H) , 5.24 (s, 1H) , 4.21-4,29 (m, 2H) , 1.28 (t, J" = 7.1 Hz , 3H) . CLEM: Anal. Calculado para C9Hi0BrNO2 : 242, 244; encontrado: 243, 245 (M+H)+.
Etapa 2: 2 - ( 4 - p i r i di 1 ) - 2 - ( N , N -dimet ilamino) acetato de (R,S) -etilo: A una solución de 2- (4-piridil) - 2 -bromoacet ato de (R,S) -etilo (1.40 g, 8.48 mmol) en DMF (10 mi) a temperatura ambiente se añadió dimetilamina (2M en THF, 8.5 mi, 17.0 mmol) . Después de completarse la reacción (que se juzgó por cromatografía en capa fina) los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se purificó por cromatograf í a ultrarrápida (columna Biotage, 40+M Si02; 50%-100% de acetato de et i lo - hexano ) proporcionando el compuesto del epígrafe (0.539 g, 31%) como un aceite amarillo claro. RMN de 1H (400 MHz , CDC13) d 8.58 (d, J = 6.0 Hz, 2H) , 7.36 (d, J = 6.0 Hz, 2H) , 4.17 (m, 2H) , 3.92 (s, 1H) , 2.27 (s, 6H) , 1.22 (t, J" = 7.0 Hz) . CLEM : Anal. Calculado para CnH16N202: 208; encontrado: 209 (M+H)+.
Etapa 3: ácido (R, S) -2- (4-piridil) -2 - ( N , N -dime t i lamino ) acét i co : A una solución de 2- (4- i r idi 1 ) - 2 - ( , N- dime t i 1 amino ) ace tat o de (R,S) -etilo (0.200 g, 0.960 mmol) en una mezcla de THF - me t anol - H20 (1:1:1, 6 mi) se añadió LiOH en polvo (0.120 g, 4.99 mmol) a temperatura ambiente. La solución se agitó durante 3 horas y luego se acidificó hasta pH 6 usando HCl 1 . La fase acuosa se lavó con acetato de etilo y luego se liofilizó dando el diclorhidrato del compuesto del epígrafe como un sólido amarillo (que contenía LiCl) . El producto se usó como tal en las posteriores etapas. RMN de 1H (400 MHz, DMS0-d6) d 8.49 (d, J = 5.7 Hz, 2H) , 7.34 (d, J = 5.7 Hz , 2H) , 3.56 (S, 1H) , 2.21 (s, 6H) .
Los siguientes ejemplos se prepararon de una forma similar usando el procedimiento descrito antes; NMe2 CLEM: Anal. Calculado Cap-34 para CiiHi2 203: 220; encontrado: 221 ( +H)+.
CLEM: Anal. Calculado Cap-35 para C12Hi3N02S: 235; encontrado: 236 (M+H)+.
NMe2 CLEM: Anal. Calculado Cap-36 para Ci2Hi4N202S : 250; encontrado: 251 (M+H)+.
Cap-37 Etapa 1: 2 - (quinolin- 3 - il) - 2 - (N, -dimetilamino) -acetato de (R,S) -etilo: Una mezcla de N, N-dimetilaminoacetato de etilo (0.462 g, 3.54 mmol) , K3P04 (1.90 g, 8.95 mmol) , Pd(t-Bu3P) 2 (0.090 g, 0.176 mmol) y tolueno (10 mi) se desgasificó con una corriente de burbujas de Ar durante 15 minutos. La mezcla de reacción se calentó entonces a 100 °C durante 12 horas, después de lo cual se enfrió hasta temperatura ambiente y se vertió en H20. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (2x) y las fases orgánicas reunidas se lavaron (H20, salmuera) , se secaron (Na2S04) , se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó primero por HPLC preparativa de fase inversa (Primesphere C-18, 30 x 100mm; CH3C -H20-5 itiM H4OAC) y luego por cromatografía ultrarrápida (Si02/ hexano-acetato de etilo, 1:1) proporcionando el compuesto del epígrafe (0.128 g, 17%) como un aceite naranja. RMN de XH (400 MHz , CDCI3) d 8.90 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 8.32 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 8.03-8.01 (m, 2H) , 7.77 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1.5 Hz, 1H) , 7.62 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1.5 Hz, 1H) , 4.35 (s, 1H) , 4.13 (m, 2H) , 2.22 (s, 6H) , 1.15 (t, J = 7.0 Hz, 3H) . CLEM: Anal. Calculado para C15Hi8 202: 258; encontrado: 259 (M+H) + .
Etapa 2: Ácido (R,S) 2- (quinolin-3-il) -2- (N,N-dimetilamino) acético: Se calentó una mezcla de 2- (guiñolin-3-il) -2- (?,?-dimetilamino) acetato de (R,S) -etilo (0.122 g, 0.472 mmol) y HC1 6M (3 mi) a 100 °C durante 12 horas. El disolvente se eliminó al vacío proporcionando el diclorhidrato del compuesto del epígrafe (0.169 g, >100%) como una espuma amarillo claro. El material sin purificar se usó en las etapas siguientes sin purificación adicional. CLEM: Anal. Calculado para CuH^C^: 230; encontrado: 231 (M+H) +.
Cap-38 Cap-38 Etapa 1: 2- (dimetilamino) -2- (2-fluorofenil) acetato de (R) - ( (S) -1-feniletilo) y 2- (dimetilamino) -2- (2-fluorofenil) acetato de (S) - ( (S) -1-feniletil) : A una mezcla de ácido (RS) -2- (dimetilamino) -2- (2-fluorofenil) acético (2.60 g, 13.19 mmol) , DMAP (0.209 g, 1.71 mmol) y (S) -1-feniletanol (2.09 g, 17.15 mmol) en CH2C12 (40 mi) se añadió EDCI (3.29 g, 17.15 mmol) y la mezcla se dejó agitando a temperatura ambiente durante 12 horas. El disolvente se eliminó entonces al vacío y el residuo se repartió con acetato de etilo-H20. Se separaron las fases, la fase acuosa se volvió a extraer con acetato de etilo (2x) y las fases orgánicas reunidas se lavaron (H20, salmuera) , se secaron (Na2S0 ) , se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage/ 0-50% de éter dietílico-hexano) . La mezcla diastereomérica pura resultante se separó entonces por HPLC preparativa de fase inversa (Primesphere C-18, 30 x 100mm; CH3CN-H20-TFA al 0.1%) dando primero (R) - 2 - (dimetilamino) - 2 -( 2 - fluorofenil ) acetato de (S) -1-fenetilo (0.501 g, 13%) y luego (S) -2- (dimetilamino) -2- (2-fluorofenil) -acetato de (S) -1-fenetilo (0.727 g. 18%) , ambas como sus sales TFA. isómero (S,R) : RMN de XH (400 MHz, CD30D) d 7.65 - 7.70 (m, 1H) , 7.55-7.60 (ddd, J = 9.4, 8.1, 1.5 Hz, 1H) , 7.36-7.41 (m, 2H) , 7.28-7.34 (m, 5H) , 6.04 (q, J" = 6.5 Hz, 1H) , 5.60 (s, 1H) , 2.84 (s, 6H) , 1.43 (d, J = 6.5 Hz, 3H) . CLEM: Anal. Calculado para CiaH2oFN02 : 301; encontrado: 302 (M+H)+; isómero (S,S) : RMN de ?? (400 MHz, CD30D) 5 7.58- 7.63 (m, 1H) , 7.18-7.31 (m, 6H) , 7.00 (dd, J = 8.5, 1.5 Hz , 2H) , 6.02 (q, J = 6.5 Hz, 1H) , 5.60 (s, 1H) , 2.88 (s, 6H) , 1.54 (d, J = 6.5 Hz, 3H) . CLEM : Anal. Calculado para C18H2oFN02: 301; encontrado: 302 ( +?) + .
Etapa 2: ácido (R) -2- (dimetilamino) -2- (2-fluorofenil ) acético : Una mezcla de 2- (dimetilamino) -2- (2-fluorofenil) acetato de (R) - ( (S) -1-feniletilo) , sal TFA (1.25 g, 3.01 mmol) y 20% de Pd(0H)2/C (0.125 g) en etanol (30 mi) se sometió a hidrogenación a temperatura ambiente y presión atmosférica (globo de H2) durante 4 horas. La solución se purgó entonces con Ar, se filtró a través de tierra de diatomeas (Celite ) y se concentró al vacío. Esto dio el compuesto del epígrafe como un sólido incoloro (0.503 g, 98%). RMN de ?? (400 MHz, CD3OD) d 7.53-7.63 (m, 2H) , 7.33-7.38 (m, 2H) , 5.36 (s, 1H) , 2.86 (s, 6H) . CLEM : Anal.
Calculado para Ci0H12FNO2: 197; encontrado: 198 (M+H) + .
El isómero S se podía obtener a partir de 2- (dimetilamino) -2- (2-fluorofenil) acetato de (S)-((S)-1-feniletilo) , sal TFA de una forma similar.
Cap-39 Una mezcla de (R) - (2 -clorofenil ) glicina (0.300 g, 1.62 mmol), formaldehído' (solución acuosa al 35%, 0.80 mi, 3.23 mmol) y 20% de Pd(OH)2/C (0.050 g) se sometió a hidrogenación a temperatura ambiente y presión atmosférica (globo de H2) durante 4 horas. La solución se purgó entonces con Ar, se filtró a través de tierra de diatomeas (Celite ) y se concentró al vacío. El residuo se purificó por HPLC preparativa de fase inversa (Primesphere C-18, 30 x lOOmm; CH3CN-H20-TFA al 0.1%) dando la sal TFA del compuesto del epígrafe ácido (R) -2- (dimetilamino) -2- (2-clorofenil) acético como un aceite incoloro (0.290 g, 55%). RMN de ?? (400 MHz , CD3OD) d 7.59-7.65 (m, 2H) , 7.45-7.53 (m, 2H) , 5.40 (s, 1H) , 2.87 (s, 6H) . CLEM: Anal. Calculado para C10H12ClNO2 : 213; encontrado: 214 (M+H)+.
Cap-40 cap-40 A una solución enfriada en hielo de (R)-(2-clorofenil) glicina (1.00 g, 5.38 mmol) y NaOH (0.862 g, 21.6 mmol) en H20 (5.5 mi) se añadió cloroformiato de metilo (1.00 mi, 13.5 mmol) gota a gota. La mezcla se dejó agitando a 0 °C durante 1 hora y luego se acidificó mediante la adición de HC1 concentrado (2.5 mi) . La mezcla se extrajo con acetato de etilo (2x) y la fase orgánica reunida se lavó (H20, salmuera) , se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró al vacío dando el compuesto del epígrafe ácido (R)-2-(metoxicarbonilamino) -2- (2-clorofenil) acético como una espuma amarillo-naranja (1.31 g, 96%). RMN de ¾ (400 MHz, CD3OD) d 7.39 - 7.43 (m, 2H) , 7.29 - 7.31 (m, 2H) , 5.69 (s, 1H) , 3.65 (s, 3H) . CLEM: Anal. Calculado para Ci0H10ClNO4 : 243 ; encontrado: 244 (M+H)+.
Cap-41 cap- 41 A una suspensión de ácido 2- (2- (clorometil) fenil) acético (2.00 g, 10.8 mmol) en THF (20 mi) se añadió morfolina (1.89 g, 21.7 mmol) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas . La mezcla de reacción se diluyó entonces con acetato de etilo y se extrajo con H20 (2x) . La fase acuosa se liofilizó y el residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage/ 0-10% de metanol-CH2Cl2) dando el compuesto del epígrafe ácido 2 -( 2 - (morfolinometil ) fenil ) acético como un sólido incoloro (2.22 g, 87%). RMN de H (400 MHz , CD30D) d 7.37-7.44 (m, 3H) , 7.29-7.33 (m, 1H) , 4.24 (s, 2H) , 3.83 (s ancho, 4H) , 3.68 (s, 2H) , 3.14 (s ancho, 4H) . CLEM: Anal. Calculado para Ci3Hi7 03 : 235; encontrado: 236 (M+H)+.
Los siguientes ejemplos se prepararon de igual modo usando el procedimiento descrito para Cap-41 Cap-45a Cap-45a Se anadió HMDS (1.85 mi, 8.77 mmol) a una suspensión de p- toluenosulfonato del ácido (R) -2-amino-2- fenilacético (2.83 g, 8.77 mmol) en CH2C12 (10 mi) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadió isocianato de metilo (0.5 g, 8.77 mmol) en una porción continuando la agitación durante 30 minutos. La reacción se inactivo mediante adición de H20 (5 mi) y se filtró el precipitado resultante, se lavó con H20 y n-hexanos, y se secó al vacío. Se recuperó ácido (R) -2- ( 3 -metilureido) -2-fenilacético (1.5 g; 82 %) como un sólido blanco y se usó sin purificación adicional. RMN de H (500 MHz , DMS0-d6) 5 ppm 2.54 (d, J=4.88 Hz, 3H) 5.17 (d, J=l .93 Hz , 1H) 5.95 (q, J"=4.48 Hz, 1H) 6.66 (d, J=7.93 Hz, 1H) 7.26 - 7.38 (m, 5H) 12.67 (s, 1H) . CLEM: An l. Calculado para C10H12N2O3 208.08 encontrado 209.121 (M+H) + ; HPLC Phenomenex C-18 3.0 X 46 mm, 0 a 100% de B durante 2 minutos, tiempo de mantenimiento 1 minuto, A = 90% de agua, 10% de metanol, 0.1% de TFA, B = 10% de agua, 90% de metanol, 0.1% de TFA, TR = 1.38 min, índice de homogeneidad 90 %.
Cap- S cap-46 El producto deseado se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito para Cap-45a. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-dg) d ppm 0.96 (t, .7=7.17 Hz, 3H) 2.94 - 3.05 (m, 2H) 5.17 (d, J=7.93 Hz, 1H) 6.05 (t, J=5.19 Hz, 1H) 6.60 (d, J=7.63 Hz, 1H) 7.26 - 7.38 (m, 5H) 12.68 (s, 1H) . CLEM : Anal. Calculado para 0????4 2?3 222.10 encontrado 223.15 (?+?) + .
HPLC XTE RA C-18 3.0 X 506 mm, 0 a 100% de B durante 2 minutos, tiempo de mantenimiento 1 minuto, A = 90% de agua, 10% de metanol, 0.2% H3P04, B = 10% de agua, 90% de métanol, 0.2% H3P04í TR = 0.87 min, índice de homogeneidad 90 %.
Cap-47 Etapa 1: 2 - ( 3 , 3 -dimetilureido) -2 - fenilacetato de (R) - tert-butilo : A una solución agitada de (R) -terc-butil-2 - amino-2-fenilacetato (1.0 g, 4.10 mmol) y base de Hunig (1.79 mi, 10.25 mmol) en DMF (40 mi) se añadió cloruro de dimetilcarbamoílo (0.38 mi, 4.18 mmol) gota a gota durante 10 minutos . Después de agitar a temperatura ambiente durante 3 horas, la reacción se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con H20, HCl ac. 1N y salmuera, se secó (MgS04) , se filtró y se concentró a presión reducida , Se obtuvo 2 - ( 3 , 3 -dimetilureido) -2 -fenilacetato de (R) -tert- butilo como un sólido blanco ( 0.86 g; 75%) y se usó sin purificación posterior. RMN de 1H (500 MHz , DMSO-d6) d ppm 1.33 (s, 9H) 2.82 (s, 6H) 5.17 (d, J=7.63 Hz , 1H) 6.55 (d, J=l .32 Hz, 1H) 7.24 - 7.41 (m, 5H) . CLEM: Anal. Calculado para Ci5H22N203 278.16 encontrado 279.23 (M+H)+; HPLC Phenomenex LUNA C-18 4.6 x 50 mm, 0 a 100% de B durante 4 minutos, tiempo de mantenimiento 1 minuto, A = 90% de agua, 10% de metanol, 0.1% de TFA, B = 10% de agua, 90% de metanol , 0.1% de TFA, TR = 2.26 min, índice de homogeneidad 97%.
Etapa 2: ácido (R) -2 - ( 3 , 3 -dimetilureido) -2 -fenilacético : A una solución agitada de 2- (3,3-dimetilureido) -2-fenilacetato de ( (R) -tert-butilo (0.86 g, 3.10 mmol) en CH2C12 (250 mi) se añadió TFA (15 mi) gota a gota y la solución resultante se agitó a ta durante 3 horas. El compuesto deseado precipitó entonces en solución con una mezcla de EtOAC : Hexanos (5:20), se separó por filtración y se secó a presión reducida. Se aisló ácido (R)-2-(3,3-dimetilureido) -2-fenilacético como un sólido blanco (0.59g, 86%) y se usó sin purificación posterior. RMN de 1H (500 MHz, DMS0-d6) d ppm 2.82 (s, 6H) 5.22 (d, J=7.32 Hz , 1H) 6.58 (d, J=7.32 Hz, 1H) 7.28 (t, .7=7.17 Hz, 1H) 7.33 (t, J=7.32 Hz , 2H) 7.38 - 7.43 (m, 2H) 12.65 (s, 1H) . CLEM: Anal. Calculado para CnHi4 203 : 222.24 ; encontrado: 223.21 (M+H) + . HPLC XTERRA C-18 3.0 x 50 mm, 0 a 100% de B durante 2 minutos, tiempo de mantenimiento 1 minuto, A = 90% de agua, 10% de metanol, 0.2% H3PO4, B = 10% de agua, 90% de metanol, 0.2% H3P04, TR = 0.75 min, índice de homogeneidad 93%.
Etapa 1: 2- (3 -ciclopentilureido) -2-fenilacetato de (R) -tert-butilo : A una solución agitada de clorhidrato del ácido (R) -2-amino-2-fenilacético (1.0 g, 4.10 mmol) y base de Hunig (1.0 mi, 6.15 mmol) en DMF (15 mi) se añadió isocianato de ciclopentilo (0.46 mi, 4.10 mmol) gota a gota y durante 10 minutos . Después de agitar a temperatura ambiente durante 3 horas, la reacción se concentró a presión reducida y el residuo resultante se suspendió en acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con H20 y salmuera, se secó (MgS04) , se filtró y se concentró a presión reducida. Se obtuvo 2- (3-ciclopentilureido) -2-fenilacetato de (R) -tert-butilo como un aceite opaco (1.32 g; 100 %) y se usó sin purificación posterior. RMN de ¾ (500 MHz, CD3C1-D) d ppm 1.50 - 1.57 (m, 2H) 1.58 - 1.66 (m, 2H) 1.87 - 1.97 (m, 2H) 3.89 - 3.98 (m, 1H) 5.37 (s, 1H) 7.26 - 7.38 (m, 5H) . CLEM : Anal. Calculado para C18H26 203 318.19 encontrado 319.21 (M+H)+; HPLC XTERRA C- 18 3.0 X 50 rara, 0 a 100% de B durante 4 minutos, tiempo de mantenimiento 1 minuto, A = 90% de agua, 10% de metanol, 0.1% de TFA, B = 10% de agua, 90% de metanol, 0.1% de TFA, TR = 2.82 min, índice de homogeneidad 96%.
Etapa 2: Ácido (R) -2- (3-ciclopentilureido) -2-fenilacético : A una solución agitada de 2- (3-ciclopentilureido) -2-fenilacetato de (R) -tert-butilo (1.31 g, 4.10 mmol) en CH2C12 (25 mi) se añadió TFA (4 mi) y trietilsilano (1.64 mi; 10.3 mmol) gota a gota, y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas . Los componentes volátiles se eliminaron a presión reducida y el producto bruto se recristalizó en acetato de etilo/pentanos proporcionando ácido (R) -2- (3-ciclopentilureido) -2-fenilacético como un sólido blanco (0.69 g, 64%) . RMN de ¾ (500 MHz, DMS0-d6) d ppm 1.17 - 1.35 (m, 2H) 1.42 - 1.52 (m, 2H) 1.53 - 1.64 (m, 2H) 1.67 - 1.80 (m, 2H) 3.75 - 3.89 (m, 1H) 5.17 (d, J=l .93 Hz, 1H) 6.12 (d, J=7.32 Hz, 1H) 6.48 (d, J=7.93 Hz , 1H) 7.24 - 7.40 (m, 5H) 12.73 (s, 1H) . CLEM: Anal. Calculado para Ci4H18 203 : 262.31; encontrado: 263.15 (M+H) + . HPLC XTERRA C-18 3.0 X 50 muí, 0 a 100% de B durante 2 minutos, tiempo de mantenimiento 1 minuto, A = 90% de agua, 10% de metanol, 0.2% H3P04, B = 10% de agua, 90% de metanol, 0.2% H3P04, TR = 1.24 min, índice de homogeneidad 100%.
Cap-49 cap-49 una solución agitada de ácido (bencilamino) acético (2.0 g, 12.1 mmol) en ácido fórmico (91 mi) se añadió formaldehído (6.94 mi, 93.2 mmol) . Después de cinco horas a 70 °C, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida hasta 20 mi y precipitó un sólido blanco. Después de filtrar, las aguas madres se recogieron y se concentró además a presión reducida proporcionando el producto bruto. La purificación por HPLC preparativa de fase inversa (Xterra 30 X 100 mm, detección a 220 nm, Caudal 35 ml/min, 0 a 35% de B durante 8 min; A = 90% de agua, 10 % de metanol, 0.1% de TFA, B = 10% de agua, 90 % de metanol, 0.1% de TFA) proporcionó el compuesto del epígrafe ácido 2- (bencil (metil) -amino) acético como su sal TFA (723 mg, 33%) como una cera incolora. EMN de XH (300 MHz, DMSO-ds) d ppm 2.75 (s, 3H) 4.04 (s, 2H) 4.34 (s, 2H) 7.29 - 7.68 (m, 5H) . CLEM: Análisis calculado para: C10H13 O2 179.09; Encontrado: 180.20 (M+H) + .
Cap-50 Cap-50 A una solución agitada de ácido 3-metil-2- (metilamino) butanoico ( 0.50 g, 3.81 mmol) en agua ( 30 mi) se añadió K2C03 (2.63 g, 19.1 mmol) y cloruro de bencilo (1.32 g, 11.4 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La mezcla de reacción se extrajo con acetato de etilo (30 mi x 2 ) y la fase acuosa se concentró a presión reducida proporcionando el producto bruto que se purificó por HPLC preparativa de fase inversa (Xterra 30 x lOOmm, detección a 220 nm, Caudal 40 ml/min, 20 a 80% de B durante 6 min; A = 90% de agua, 10 % de metanol, 0.1% de TFA, B = 10% de agua, 90 % de metanol, 0.1% de TFA) proporcionando ácido 2-(bencil (metil) amino) - 3 -met ilbutanoico , sal TFA (126 mg, 19%) como una cera incolora. R N de XH (500 MHz , DMSO-d6) d ppm 0.98 (d, 3H) 1.07 (d, 3H) 2.33 - 2.48 (m, 1H) 2.54 - 2.78 (m, 3H) 3.69 (s, 1H) 4.24 (s, 2H) 7.29 - 7.65 (m, 5H) . CLEM : Análisis calculado para: Ci3Hi9 02 221.14; Encontrado: 222.28 (M+H)+.
Se añadió Na2C03 (1.83g, 17.2 mmol) a una solución de NaOH (33 mi de 1M/H20, 33 mmol) de L-valina (3.9 g, 33.29 mmol) y la solución resultante se enfrió con baño de hielo-agua. Se añadió gota a gota durante 15 minutos cloroformiato de metilo (2.8 mi, 36.1 mmol) , se retiró el baño de enfriamiento y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3.25 horas. La mezcla de reacción se lavó con éter (50 mi, 3x) , y la fase acuosa se enfrió con un baño de hielo-agua y se acidificó con HCl concentrado hasta un pH de 1-2, y se extrajo con CH2C12 (50 mi, 3x) . La fase orgánica se secó (MgS04) y se evaporó al vacío proporcionando Cap-51 como un sólido blanco (6 g) . RMN de 1H para el rotámero dominante (DMS0-d6, d = 2.5 ppm, 500 MHz) : 12.54 (s, 1H) , 7.33 (d, J = 8.6, 1H) , 3.84 (dd, J" = 8.4, 6.0, 1H) , 3.54 (s, 3H) , 2.03 (m, 1H) , 0.87 (m, 6H) . EMAR : Anal. Calculado para [M+H] + C7Hi4N04 : 176.0923 ; encontrado 176.0922.
Se añadió DIEA (137.5 mi, 0.766 mol) a una suspensión de clorhidrato de 2 -amino-3 -metilbutanoato de (S) -tert-butilo (75.0 g, 0.357 mol) en THF (900 mi) , y la mezcla se enfrió hasta 0 °C (baño de hielo/agua) . Se añadió gota a gota durante 45 minutos cloroformiato de metilo (29.0 mi, 0.375 mol) , se retiró el baño de enfriamiento y la mezcla heterogénea se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se repartió entre EtOAc y agua (1 litro de cada uno) . La fase orgánica se lavó con H20 (1 1) y salmuera (1 1) , se secó (MgS04) , se filtró y se concentró a presión reducida. El material bruto se hizo pasar a través de un lecho corto de gel de sílice (1 kg) , eluyendo con hexanos (4 1) y EtOAc : hexanos 15:85 (4 1) proporcionando 2 - (metoxi carboni lamino ) - 3 -metilbutanoato de ( S ) - tert -but i lo como un aceite transparente (82.0 g, 99% de rendimiento) . RMN de 1H (500 MHz, DMSO-d6, d = 2.5 ppm) 7.34 (d, J = 8.6, 1 H) , 3.77 (dd, J = 8.6, 6.1, 1 H) , 3.53 (s, 3 H), 1.94 - 2.05 (m, 1 H) , 1.39 (s, 9 H), 0.83 - 0.92 (m, 6 H) . RMN de 13C (126 MHz, DMSO-d6, d = 39.2 ppm) 170.92, 156.84, 80.38, 60.00, 51.34, 29.76, 27.62, 18.92, 17.95. CL/EM: [M+Na]+ 254.17.
Se añadieron ácido t ri f luoroacét ico (343 mi, 4.62 mol) y Et3SiH (142 mi, 0.887 mol) secuencialment e a una solución de 2 - (metoxicarbonilamino) - 3 -metilbutanoato de ( S ) - 1 ert -but i lo (82.0 g, 0.355 mol) en CH2C12 ( 675 mi) , y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. El componente volátil se eliminó a presión reducida y el aceite resultante se trituró con éter de petróleo (600 mi) proporcionando un sólido blanco, que se filtró y se lavó con hexanos (500 mi) y éter de petróleo (500 mi) . La recristalización en EtOAc/éter de petróleo proporcionó Cap-51 como cristales a modo de escamas blancos (54.8 g, 88 % de rendimiento) . PF = 108.5- 109.5 °C. RMN de XH (500 MHz , DMSO-d6, d = 2.5 ppm) 12.52 (s, 1 H) , 7.31 (d, J" = 8.6, 1 H ) , 3.83 ( dd , J = 8.6, 6.1, 1 H) , 3.53 (s, 3 H) , 1.94 - 2.07 (m, 1 H) , 0.86 (dd, J = 8.9, 7.0, 6 H) . RMN de 13C (126 MHz, DMSO-d6, d = 39.2 ppm) 173.30, 156.94, 59.48, 51.37, 29.52, 19.15, 17.98. CL/EM: [M+H] + = 176.11. Análisis calculado para C7H13N04 : C, 47.99 ; H , 7.48; N, 7.99. Encontrado: C, 48.17; H, 7.55; N, 7.99. Rotación óptica: [a] D = -4.16 (12.02 rag/ml ; MeOH) . Pureza óptica: >99.5 % ee . Nota: la valoración de la pureza óptica se realizó en el derivado éster metílico de Cap-51, que se preparó según un protocolo de esterif icación normalizado en TMSCHN2 (benceno/MeOH) . Condiciones del análisis de HPLC : columna, ChiralPak AD-H (4.6 x 250mm, 5µt?) ; disolvente, heptano al 95% / IPA al 5% ( isocrático) ; caudal, 1 ml/min; temperatura, 35 ° C ; UV controlado a 205 nm .
[Nota: Cap 51 también se podía adquirir de Flamm] .
Cap-52 (Igual que Cap-12) Cap-52 se sintetizó a partir de L-alanina de acuerdo con el procedimiento descrito para la síntesis de Cap-51. Con fines carácter izadores , se purificó una porción del material bruto por una HPLC de fase inversa ( H20/me tanol / TFA ) proporcionando Cap -52 como un aceite incoloro viscoso. RMN de 1H (DMSO-d6( d = 2.5 ppm, 500 Hz ) : 12.49 (s ancho, 1H) , 7.43 (d, J = 7.3, 0.88H) , 7.09 (s ancho aparente, 0.12H) , 3.97 (m, 1H) , 3.53 (s, 3H) , 1.25 (d, J = 7.3, 3H) .
Cap-53 a -64 se prepararon a partir de materiales partida apropiados de acuerdo con el procedimiento descrito para la síntesis de Cap-51, con las modificaciones indicadas si las hubiera.
Cap Estructura Datos Cap-53a : RMN de :H (DMS0-d6, d = 2.5 (R) ppm, 500 MHz) : d 12.51 (s Cap-53b: ancho, 1H) , 7.4 (d, J = 7. , (S) 0.9H), 7.06 (s ap., 0.1H), 3.86-3.82 (m, 1H) , 3.53 (s, 3H), 1.75-1.67 (m, 1H) , H 1.62-1.54 (m, 1H) , 0.88 (d,.
J = 7.3, 3H) . TR = 0.77 minutos (Cond. II); CL/EM: Anal. Calculado para [M+Na]+ C6HuNNa04 : 184.06; encontrado 184.07. EMAR Calculado para [M+Na]+ C6HnNNa04: 184.0586; encontrado 184.0592.
Cap-61 RMN de H (DMS0-d6/ d = 2.5 ppm, 400 MHz) : d 12.27 (s ancho, 1H) , 7.40 (s ancho, 1H) , 3.50 (s, 3H) , 1.32 (s, 6H) . EMAR: Anal. Calculado para [M+H]+ C6H12N04: 162.0766; encontrado 162.0765.
Cap- 62 RMN de LH (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 Hz) : d 12.74 (s ancho, 1H) , 4.21 (d, J = 10.3, 0.6H), 4.05 (d, J = 10.0, 0.4H), 3.62/3.60 (dos o singletes, 3H) , 3.0 (s, 3H) , o 2.14-2.05 (m, 1H) , 0.95 (d, J = 6.3, 3H), 0.81 (d, J = 6.6, 3H) . CL/EM: Anal .
Calculado para [M-H]" CsHmNC : 188.09; encontrado 188.05.
Cap-63 [Nota: se dejó proceder la reacción durante más tiempo que el indicado para el procedimiento general.] RMN de 1H (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, o 400 MHz) : 12.21 (s ancho, 1H), 7.42 (s ancho, 1H) , 3.50 (s, 3H), 2.02-1.85 (m, 4H) , 1.66-1.58 (m, 4H) . CL/EM: Anal. Calculado para [M+H]+ C8H14N04: 188.09; encontrado 188.19.
Cap-64 [Nota: se dejó proceder la reacción durante más tiempo que el indicado para el procedimiento general.] RMN de XH (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, Q 400 MHz): 12.35 (s ancho, 1H), 7.77 (s, 0.82H), 7.56/7.52 (s ancho solapante, 0.18H), 3.50 (s, 3H), 2.47-2.40 (m, 2H) , 2.14-2.07 (m, 2H) , 1.93-1.82 (m, 2H) .
Cap-65 Se añadió cloroformiato de metilo (0.65 mi, 8.39 mmol) gota a gota durante 5 minutos a una mezcla enfriada (hielo-agua) de Na2C03 (0.449 g, 4.23 mmol) , NaOH (8.2 mi de 1M/H20, 8.2 mmol) y ácido (S) -2-amino-3-hidroxi-3-metilbutanoico (1.04 g, 7.81 mmol) . La mezcla de reacción se agitó durante 45 min, y luego se retiró el baño de enfriamiento y se continuó agitando durante otras 3.75 horas. La mezcla de reacción se lavó con CH2C12, y la fase acuosa se enfrió con baño de hielo-agua y se acidificó con HCl concentrado hasta una región de pH de 1-2. El componente volátil se eliminó al vacío y el residuo se suspendió en una mezcla 2:1 de MeOH/CH2Cl2 (15 mi) y se filtró, y el filtrado se sometió a evaporación rotativa proporcionando Cap-65 como una espuma semiviscosa blanca (1.236 g) . RMN de 1H (D S0-d6, d = 2.5 ppm, 400 Hz) : d 6.94 (d, J = 8.5, 0.9 H) , 6.53 (s ancho, 0.1H), 3.89 (d, J = 8.8, 1H) , 2.94 (s, 3H) , 1.15 (s, 3H) , 1.13 (s, 3H) .
Cap-66 y -67 se prepararon a partir de materiales de partida disponibles comercialmente empleando el procedimiento descrito para la síntesis de Cap-65.
Cap-66 RMN de XH (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz): d 12.58 (s ancho, 1H) , 7.07 (d, J = 8.3, 0.13H), 6.81 (d, J = 8.8, 0.67H), 4.10-4.02 (m, 1.15H), 3.91 (dd, J = 9.1, 3.5, 0.85H), 3.56 (s, 3H) , 1.09 (d, J = 6.2, 3H) . [Nota: solo se indican las señales dominantes de NH] Cap-67 R N de XH (DMS0-d6, d = 2.5 pm, 400 MHz) : 12.51 (s ancho, 1H) , 7.25 (d, J" = 8.4, 0.75H), 7.12 (d ancho, J = 0.4, 0.05H), 6.86 (s ancho, 0.08H), 3.95-3.85 (m, 2H) , 3.54 (s, 3H) , 1.08 (d, J = 6.3, 3H) . [Nota: solo se indican las señales dominantes de NH] Cap- 68 Se añadió cloroformiato de metilo (0.38 mi, 4.9 mmol) gota a gota a una mezcla de NaOH 1N (ac) (9.0 mi, 9.0 mmol) , NaHC03 1M (ac) (9.0 mi, 9.0 mol), éster ß-bencílico del ácido L-aspártico (1.0 g, 4.5 mmol) y dioxano (9 mi) . La mezcla de reacción se agitó en condiciones ambientales durante 3 horas, y luego se lavó con acetato de etilo (50 mi, 3x) . La fase acuosa se acidificó con HCl 12N hasta un pH ~ 1-2, y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 mi) . Las fases orgánicas reunidas se lavaron con salmuera, se secaron (Na2S04) , se filtraron y se concentraron al vacío proporcionando Cap - 68 como un aceite amarillo claro (1.37g; la masa es superior al rendimiento teórico, y el producto se usó sin purificación adicional) . RM de ""? (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 500 MHz) : d 12.88 (s ancho, 1H) , 7.55 (d, J = 8.5, 1H) , 7.40-7.32 (m, 5H) , 5.13 (d, J = 12.8, 1H) , 5.10 (d, J = 12.9, 1H) , 4.42-4.38 (m, 1H) , 3.55 (s, 3H) , 2.87 (dd, J = 16.2, 5.5, 1H) , 2.71 (dd, J =16.2, 8.3, 1H) . CL (Cond. II) : TR = 1.90 min; CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C13Hi6N06 : 282.10; encontrado 282.12.
Cap - 69a y - 69b Cap-69a: enantiomero (R) Cap-69b: enantiomero (S) añadió NaCNBH3 (2.416 g, 36.5 mmol) en lotes una solución acuosa enfriada (~15°C) (17 ml)/MeOH (10 mi) de alanina (1.338 g, 15.0 mmol) . Unos pocos minutos después se añadió gota a gota durante 4 minutos acetaldehído (4.0 mi, 71.3 mmol), se retiró entonces el baño de enfriamiento y la mezcla de reacción se agitó en condiciones ambientales durante 6 horas. Se añadió más acetaldehído (4.0 mi) y la reacción se agitó durante 2 horas. Se añadió HCl concentrado lentamente a la mezcla de reacción hasta que el pH alcanzó ~ 1.5, y la mezcla resultante se calentó durante 1 hora a 40°C. La mayoría del componente volátil se eliminó al vacío y el residuo se purificó con una resina de intercambio iónico Do ex ® 50WX8-100 (la columna se lavó con agua y el compuesto se eluyó con NH4OH diluido, preparado mezclando 18 mi de NH4OH y 282 mi de agua) proporcionando Cap-69 (2.0 g) como un sólido higroscópico blando blanquecino. RMN de 1H (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : d 3.44 (q, J = 7.1, 1H) , 2.99-2.90 (m, 2H) , 2.89-2.80 (m, 2H) , 1.23 (d, J = 7.1, 3H) , 1.13 (t , J = 7.3 , 6H) .
Cap-70 a -74x se prepararon de acuerdo con el procedimiento descrito para la síntesis de Cap-69 empleando materiales de partida apropiados.
Cap-70a : RMN de *H (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, (R) 400 MHz) : 5 3.42 (q, J = 7.1, Cap-70b: 1H), 2.68-2.60 (m, 4H) , 1.53- (S) 1.44 (m, 4H) , 1.19 (d, J = 7.3, 3H) , 0.85 (t, J = 7.5, 6H) .
CL/EM: Anal. Calculado para [M+H]+ C9H20 O2: 174.15; encontrado 174.13.
Cap-71a: RMN de lH (DMS0-d6 d = 2.5 ppm, ( R ) 500 MHz) : d 3.18-3.14 (m, 1H) , Cap-71b: 2.84-2.77 m, 2H), 2.76 (S) ^\ 0 (m, 2H) , 1.69-1.54 (m, 2H) , 1.05 (t, J = 7.2, 6H) , 0..91 (t, J = 7.3, 3H) . CL/EM: Anal. Calculado para [M+H]+ C8H18N02 : 160.13; encontrado 160.06.
Cap-12 RMN de lH (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : d 2.77-2.66 (m, 3H) , 2.39-2.31 (m, 2H) , 1.94-1.85 (m, 1H) , 0.98 (t, J = 7.1, 6H) , 0.91 (d, J = 6.5, 3H) , 0.85 (d, J = 6.5, 3H) . CL/EM: Anal. Calculado para [M+H]+ C9H20 O2: 174.15; encontrado 174.15.
Cap-73 RMN de 1H (DMSO-d6, 6 = 2.5 ppm, 500 MHz) : d 9.5 (s ancho, 1H) , ^ 0 OH 3.77 (dd, J = 10.8, 4.1.1H), 3.69-3.61 ( m, 2H) , 3.26 (s, 3H) , 2.99-2.88 (m, 4H) , 1.13 (t, J = 7.2, 6H) .
Cap-74 RMN de 1H (DMS0-d6, 5 = 2.5 ppm, 500 MHz) : d 7.54 (s, 1H) , 6.89 (s, 1H), 3.81 (t, J = 6.6, k,lH), 2.82-2.71 (m, 4H) , 2.63 N (dd, J = 15.6, 7.0, 1H), 2.36 (dd, J = 15.4, 6.3, 1H) , 1.09 (t, J = 7.2, 6H) . TR = 0.125 minutos (Cond. II); CL/EM: Anal. Calculado para [M+H]+ C8H17N2O3 : 189.12; encontrado 189.13.
Cap-74x CL/EM: Anal. Calculado [M+H]+ C10H22 O2 : 188 encontrado 188.21 Cap-75 Cap- 75, etapa a enfriada (baño de hielo/agua) en agua (25 mi ) /metanol (15 mi) de H-D-Ser-OBzl HC1 (2.0 g, 8.6 mmol) . Se añadió acetaldehído (1.5 mi, 12.5 mmol) gota a gota durante 5 min, se retiró el baño de enfriamiento, y la mezcla de reacción se agitó en condiciones ambientales durante 2 horas. La reacción se inactivo cuidadosamente con HC1 12N y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en agua y se purificó con una HPLC de fase inversa (MeOH/H20/TFA) proporcionando la sal TFA de 2-(dietilamino) -3-hidroxipropanoato de (R) -bencilo como un aceite incoloro viscoso (1.9 g) . RMN de 1H (DMSO-d6, 5 = 2.5 ppm, 500 MHz) : d 9.73 (s ancho, 1H) , 7.52-7.36 (m, 5H) , 5.32 (d, J = 12.2, 1H) , 5.27 (d, J = 12.5, 1H) , 4.54-4.32 (m, 1H) , 4.05-3.97 (m, 2H) , 3.43-3.21 (m, 4H) , 1.23 (t, J = 7.2, 6H) . CL/EM (Cond. II): TR = 1.38 min; CL/EM: Anal. Calculado para [M+H]+ C14H22 O3: 252.16; encontrado 252.19.
Cap- 75 Se añadió NaH (0.0727 g, 1.82 mmol, 60%) a una solución enfriada (hielo-agua) en THF (3.0 mi) de la sal TFA de 2 - (dietilamino) -3 -hidroxipropanoato de (R) -bencilo (0.3019 g, 0.8264 mmol) preparada antes, y la mezcla se agitó durante 15 min. Se añadió yoduro de metilo (56 µ?, 0.90 mmol) y se continuó agitando durante 18 horas dejando que el baño se descongelara hasta condiciones ambiente. La reacción se inactivo con agua y se cargó en un cartucho CX preacondicionado con MeOH (6 g) y se lavó con metanol seguido por elución del compuesto con NH3 2N/Metanol . La eliminación del componente volátil al vacío proporcionó Cap-75, contaminado con ácido (R) -2 - (dietilamino) -3 -hidroxipropanoico, como un semisólido amarillo (100 mg) . El producto se usó como tal sin purificación adicional.
Se añadió NaCNBH3 (1.60 g, 24.2 mmol) en cargas a una solución enfriada (-15 °C) en agua/MeOH (12 mi cada uno) de ácido (S) -4-amino-2- (tert-butoxicarbonilamino) butanoico (2.17 g, 9.94 mmol). Unos pocos minutos después se añadió acetaldehído (2.7 mi, 48.1 mmol) gota a gota durante 2 min, se retiró el baño de enfriamiento y la mezcla de reacción se agitó en condiciones ambientales durante 3.5 horas. Se añadió más acetaldehído (2.7 mi, 48.1 mmol) y la reacción se agitó durante 20.5 horas. Se eliminó al vacío la mayoría del componente MeOH, y la mezcla restante se trató con HCl concentrado hasta que su pH llegó a ~ 1.0 y luego se calentó durante 2 horas a 40 °C. El componente volátil se eliminó al vacío, y el residuo se trató con HCl 4 M/dioxano (20 mi) y se agitó en condiciones ambientales durante 7.5 horas. El componente volátil se eliminó al vacío y el residuo se purificó con resina de intercambio iónico Dowex ® 50WX8-100 (la columna se lavó con agua y el compuesto se eluyó con NH40H diluido, preparado a partir de 18 mi de NH4OH y 282 mi de agua) proporcionando el intermedio ácido (S) -2-amino-4- (dietilamino) butanoico como un sólido blanquecino (1.73 g) .
Se añadió cloroformiato de metilo (0.36 mi, 4.65 mmol) gota a gota durante 11 min a una mezcla enfriada (hielo-agua) de Na2C03 (0.243 g, 2.29 mmol), NaOH (4.6 mi de 1M/H20, 4.6 mmol) y el producto anterior (802.4 mg) . La mezcla de reacción se agitó durante 55 min, y luego se retiró el baño de enfriamiento y se continuó agitando durante otras 5.25 horas. La mezcla de reacción se diluyó con un volumen igual de agua y se lavó con CH2C12 (30 mi, 2x) , y la fase acuosa se enfrió con baño de hielo-agua y se acidificó con HCl concentrado hasta un pH en torno a 2. El componente volátil se eliminó al vacío y el material bruto se desbasificó con resina MCX (6.0g; la columna se lavó con agua, y la muestra se eluyó con NH3 2.0 M/MeOH) proporcionando Cap-?ß impuro como un sólido blanquecino (704 mg) . RM de 1H (MeOH-d4, d = 3.29 ppm, 400 MHz) : d 3.99 (dd, J = 7.5, 4.7, 1H) , 3.62 (s, 3H) , 3.25-3.06 (m, 6H) , 2.18-2.09 (m, 1H) , 2.04-1.96 (m, 1H) , 1.28 (t, J = 7.3, 6H) . CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C10H21N2O4: 233.15; encontrado 233.24.
Cap- 77a y - 77b Cap-77a: enantiomero 1 Cap-77b: enantiomero 2 La síntesis de Cap-?? se llevó a cabo de acuerdo con el procedimiento descrito para Cap-l usando 7- azabiciclo [2.2.1] heptano para la etapa de desplazamiento SN2, y efectuando la separación enantiomérica del intermedio 2- (7- azabiciclo [2.2.1] heptan-7-il) -2-fenilacetato de bencilo usando las siguientes condiciones: el intermedio (303.7 mg) se disolvió en etanol, y la solución resultante se inyectó en una columna HPLC quiral (columna Chiracel AD-H, 30 x 250 mm, 5 um) eluyendo con 90% de CO2-10% de EtOH a 70 ml/min, y una temperatura de 35 °C proporcionando 124.5 mg de enantiomero- 1 y 133.8 mg de enantiómero-2. Estos ésteres bencílicos se sometieron a hidrogenación de acuerdo con la preparación de Cap- l proporcionando Cap-11 : RMN de 1H (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz): d 7.55 (m, 2H) , 7.38-7.30 (m, 3H) , 4.16 (s, 1H) , 3.54 (s ancho aparente, 2H) , 2.08-1.88 (m, 4 H) , 1.57-1.46 (m, 4H) . CL (Cond. I) : TR = 0.67 min; CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C14H18N02 : 232.13; encontrado 232.18. EMAR: Anal. Calculado para [M+H] + C14H18N02 : 232.1338; encontrado 232.1340.
Cap- 78 Se añadió NaCNBH3 (0.5828 g, 9.27 mmol) a una mezcla de la sal HCl de ácido {R) -2- (etilamino) -2-fenilacético (un intermedio en la síntesis de Cap-3; 0.9923 mg, 4.60 mmol) y (1-etoxiciclopropoxi) trimetilsilano (1.640 g, 9.40 mmol) en MeOH (10 mi), y se calentó la mezcla semiheterogénea a 50 °C con un baño de aceite durante 20 horas. Se añadieron más (1-etoxiciclopropoxi) trimetilsilano (150 mg, 0.86 mmol) y NaCNBH3 (52 mg, 0.827 mmol) y la mezcla de reacción se calentó otras 3.5 horas. Se dejó enfriar hasta temperatura ambiente y se acidificó ~ pH entorno a 2 con HCl concentrado, y la mezcla se filtró y el filtrado se evaporó en un evaporador rotatorio. El material bruto resultante se suspendió en i-PrOH (6 mi) y se calentó para efectuar la disolución y la parte no disuelta se separó por filtración y el filtrado se concentró al vacío. Se purificó aproximadamente 1/3 del material bruto resultante con una HPLC de fase inversa (H20/MeOH/TFA) proporcionando la sal TFA de Cap-18 como un aceite incoloro viscoso (353 mg) . RM de ""? (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz ,- después de intercambio de D20) : d 7.56-7.49 (m, 5H) , 5.35 (S, 1H) , 3.35 (m, 1H) , 3.06 (s ancho aparente, 1H) , 2.66 (m, 1H) , 1.26 (t, J = 7.3, 3H) , 0.92 (m, 1H) , 0.83-0.44 (m, 3H) . CL (Cond. I): TR = 0.64 min; CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + Ci3H18N02 : 220.13; encontrado 220.21. EMAR: Anal. Calculado para [M+H] + C13Hx8N02 : 220.1338; encontrado 220.1343.
Cap- 79 Se burbu eó ozono a través de una solución enfriada (-78 °C) en CH2.C12 (5.0 mi) de Cap-55 (369 mg, 2.13 mmol) durante aproximadamente 50 min hasta que la mezcla de reacción alcanzó un tinte de color azul. Se añadió Me2S (10 gotas de pipeta) y la mezcla de reacción se agitó durante 35 min. Se reemplazó el baño de -78 °C con un baño a -10 °C y se continuó agitando durante otros 30 min, y luego sé eliminó el componente volátil al vacío proporcionando un aceite viscoso incoloro .
Se añadió NaBH3CN (149 mg, 2.25 mmol) a una solución en MeOH (5.0 mi) del material bruto anterior y morfolina (500 µ? , 5.72 mmol) y la mezcla se agitó en condiciones ambientales durante 4 horas. Se enfrió hasta temperatura de hielo-agua y se trató con HCl concentrado para llevar el pH a ~2.0, y luego se agitó durante 2.5 horas. El componente volátil se eliminó al vacío, y el residuo se purificó con una combinación de resina CX (lavado con MeOH; elución con NH3 2.0 N/MeOH) y una HPLC de fase inversa (H20/MeOH/TFA) proporcionando Cap-79 que contenía una cantidad desconocida de morfolina.
Con el fin de consumir la morfolina contaminante se disolvió el material anterior en CH2C12 (1.5 mi) y se trató con Et3N (0.27 mi, 1.94 mmol) seguido por anhídrido acético (0.10 mi, 1.06 mmol) y se agitó en condiciones ambientales durante 18 horas. Se añadieron THF (1.0 mi) y H20 (0.5 mi) y se continuó agitando durante 1.5 horas. El componente volátil se eliminó al vacío, y el residuo resultante se hizo pasar a través de resina MCX (lavado con MeOH; elución con NH3 2.0 N/MeOH) proporcionando Cap-19 impuro como un aceite viscoso marrón, que se usó para la etapa siguiente sin purificación adicional .
Cap-80a y -80b durante 15 min a una mezcla enfriada (hielo-agua) de ácido (S) -3-amino-4- (benciloxi) -4 -oxobutanoico (10.04g, 44.98 mmol) y MeOH (300 ml) , se retiró el baño de enfriamiento y la mezcla de reacción se agitó en condiciones ambientales durante 29 horas. Se eliminó la mayor parte del componente volátil al vacío y el residuo se repartió cuidadosamente entre EtOAc (150 ml) y solución saturada de NaHC03. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (150 ml, 2x) , y la fase orgánica reunida se secó (MgS04) , se filtró y se concentró al vacío proporcionando 4 -metil -2 -aminosuccinato de (S) -1-bencilo como un aceite incoloro (9.706g) . RMN de ?? (DMS0-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : d 7.40-7.32 (m, 5H) , 5.11 (s, 2H) , 3.72 (t aparente, J = 6.6, 1H) , 3.55 (s, 3H) , 2.68 (dd, J" = 15.9, 6.3, 1H) , 2.58 (dd, J" = 15.9, 6.8, 1H) , 1.96 (s, 2H) . CL (Cond. I) : TR = 0.90 rain; CL/EM: Anal. Calculado para [ +H] + Ci2H16N04: 238.11; encontrado 238.22.
Se añadió Pb(N03)2 (6.06 g, 18.3 mmol) durante 1 minuto a una solución en CH2C12 (80 ml) de 4-metil-2-aminosuccinato de (S) -1-bencilo (4.50 g, 19.0 mmol) , 9-bromo-9-fenil-9H-fluoreno (6.44 g, 20.0 mmol) y Et3N (3.0 ml , 21.5 mmol) y la mezcla heterogénea se agitó en condiciones ambientales durante 48 horas. La mezcla se filtró y el filtrado se trató con MgS04 y se filtró de nuevo y el filtrado final se concentró. El material bruto resultante se sometió a una purificación en Biotage (350 g gel de sílice, elución con CH2C12) proporcionando 4-metil 2- ( 9-fenil-9H- fluoren-9-ilamino) succinato de (S) -1-bencilo como aceite incoloro muy viscoso (7.93 g) . RMN de 1H (DMSO-d6, 6 = 2.5 ppm, 400 MHz) : d 7.82 (m, 2H) , 7.39-7.13 (m, 16H) , 4.71 (d, J = 12.4, 1H) , 4.51 (d, J = 12.6, 1H) , 3.78 (d, J = 9.1, NH) , 3.50 (s, 3H) , 2.99 (m, 1H) , 2.50-2.41 (m, 2H, parcialmente solapado con disolvente). CL (Cond. I): TR = 2.16 min; CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C31H28 04 : 478.20; encontrado 478.19.
Se añadió LiHMDS (9.2 mi de 1.0 M/THF, 9.2 mmol) gota a gota durante 10 min a una solución enfriada (-78 °C) THF (50 mi) de 4-metil 2- (9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) succinato de (S) -1-bencilo (3.907 g, 8.18 mmol) y se agitó durante ~1 horas. Se añadió Mel (0.57 mi, 9.2 mmol) gota a gota durante 8 min a la mezcla y se continuó agitando durante 16.5 horas dejando que el baño de enfriamiento se descongelara hasta temperatura ambiente. Después de inactivar con solución saturada de NH4C1 (5 mi) , se eliminó al vacío la mayor parte del componente orgánico y el residuo se repartió entre CH2C12 (100 mi) y agua (40 mi) . La fase orgánica se secó (MgS0 ) , se filtró y se concentró al vacío, y el material bruto resultante se purificó con un Biotage (350 g gel de sílice; 25% de EtOAc/hexanos) proporcionando 3.65 g de una mezcla de diastereoisómeros 2S/3S y 2S/3R de 4-metil 3-metil-2- (9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) succinato de 1-bencilo en una relación -1.0:0.65 (RMN de 1H) . La estereoquímica del isómero dominante no se determinó en este paso y la mezcla se sometió a la etapa siguiente sin separación. Datos parciales de RM de ?? (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : Diastereómero mayoritario, d 4.39 (d, J = 12.3, 1H de CH2) , 3.33 (s, 3H, solapado con señal de H20) , 3.50 (d, J = 10.9, NH) , 1.13 (d, J" = 7.1, 3H) ; Diastereómero minoritario, d 4.27 (d, J =12.3, 1H de CH2) , 3.76 (d, J = 10.9, NH) , 3.64 (s, 3H) , 0.77 (d, J = 7.0, 3H) . CL (Cond. I): TR = 2.19 min; CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C32H30 O4 : 492.22; encontrado 492.15.
Se añadió hidruro de diisobutilaluminio (20.57 mi de 1.0 M en hexanos, 20.57 mmol) gota a gota durante 10 min a una solución enfriada (-78 °C) en THF (120 mi) de 4-metil-3-metil-2- (9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) succinato de (2S) -1-bencilo (3.37 g, 6.86 mmol) preparado antes y se agitó a -78 °C durante 20 horas. La mezcla de reacción se separó del baño de enfriamiento y se vertió rápidamente en H3P0 ~1M/H20 (250 mi) con agitación y la mezcla se extrajo con éter (100 mi, 2x) . La fase orgánica reunida se lavó con salmuera, se secó (MgS04) , se filtró y se concentró al vacío. Se preparó una malla de gel de sílice del material bruto y se sometió a cromatografía (25% de EtOAc/hexanos ; elución por gravedad) proporcionando 1.1 g de 4-hidroxi-3-metil-2- (9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) butanoato de (2S, 3S) -bencilo, contaminado con alcohol bencílico, como un aceite incoloro viscoso y 4-hidroxi-3-metil-2- (9-fenil-9fí-fluoren- 9 -ilamino) butanoato de (2S, 3R) -bencilo que contenía el estereoisómero (2S,3R) como una impureza. La muestra anterior se volvió a someter a las mismas condiciones de purificación de cromatografía en columna proporcionando 750 mg de material purificado como una espuma blanca. [Nota: el isómero (2S, 3S) eluye antes qüe el isómero (2S,3R) en las condiciones anteriores] . Isómero (2S, 3S) : RMN de XH (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : 7.81 (m, 2H) , 7.39-7.08 (m, 16H) , 4.67 (d, J = 12.3, 1H) , 4.43 (d, J = 12.4, 1H) , 4.21 (t aparente, J = 5.2, OH), 3.22 (d, J = 10.1, NH) , 3.17 (m, 1H) , 3.08 (m, 1H) , -2.5 (m, 1H, solapado con la señal del disolvente), 1.58 (m, 1H) , 0.88 (d, J = 6.8, 3H) . CL (Cond. I): TR = 2.00 min; CL/EM: Anal. Calculado para [M+H]+ C31H3o 03: 464.45; encontrado 464.22. Isómero (2S, 3R) : RMN de XH (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz): 7.81 (d, J = 7.5, 2H) , 7.39-7.10 (m, 16H) , 4.63 (d, J= 12.1, 1H) , 4.50 (t aparente, J = 4.9, 1H) , 4.32 (d, J = 12.1, 1H) , 3.59-3.53 (m, 2H) , 3.23 (m, 1H) , 2.44 (dd, J = 9.0, 8.3, 1H) , 1.70 (m, 1H) , 0.57 (d, J = 6.8, 3H) . CL (Cond. I): TR = 1.92 min; CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C31H30 O3 : 464.45; encontrado 464.52.
Las asignaciones estereoquímicas relativas de los productos de reducción con DIBAL se hicieron basándose en estudios NOE llevados a cabo en derivados lactona preparados a partir de cada isómero empleando el siguiente protocolo: Se añadió LiHMDS (50 µ? de 1.0 M/THF, 0.05 mmol) a una solución enfriada (hielo-agua) en THF (2.0 mi) de 4-hidroxi-3-metil-2-( 9-fenil- 9H- fluoren- 9- ilamino) butanoato de (2S , 3S) -bencilo (62.7 mg, 0.135 mmol) , y la mezcla de reacción se agitó a temperatura similar durante ~2 horas. El componente volátil se eliminó al vacío y el residuo se repartió entre CH2C12 (30 mi) , agua (20 mi) y solución acuosa saturada de NH4C1 (1 mi) . La fase orgánica se secó (MgS04) , se filtró y se concentró al vacío, y el material bruto resultante se sometió a una purificación Biotage (40 g gel de sílice; 10-15% de EtOAc/hexanos) proporcionando (3S , 4S) -4 -metil-3- ( 9- fenil -9H-fluoren-9-ilamino) dihidrofuran-2 (3íí) -ona como una película incolora de sólido (28.1 mg) . Se elaboró 4-hidroxi-3-metil-2- (9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) butanoato de ( 2S , 3R) -bencilo de forma similar a (3S, 4R) -4-metil-3- (9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) dihidrofuran-2 (3H) -ona . Isómero (3S, 4S) -lactona: RM de ?? (DMS0-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) , 7.83 (d, J = 7.5, 2H) , 7.46-7.17 (m, 11H) , 4.14 (t aparente, J" = 8.3, 1H) , 3.60 (d, J" = 5.8, NH) , 3.45 (t aparente, J = 9.2 , 1H) , -2.47 (m, 1H, parcialmente solapado con la señal del disolvente), 2.16 (m, 1H) , 0.27 (d, J- = 6.6, 3H) . CL (Cond. I) : TR = 1.98 min; CL/EM: Anal. Calculado para [M+Na] + C2 H2i a02 : 378.15; encontrado 378.42. Isómero (3S , 4R) -lactona : RMN de XH (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz), 7.89 (d, J = 7.6, 1H) , 7.85 (d, J = 7.3, 1H) , 7.46-7.20 (m, 11H) , 3.95 (dd, J = 9.1, 4.8, 1H) , 3.76 (d, J = 8.8, 1H) , 2.96 (d, J = 3.0, NH) , 2.92 (dd, J = 6.8, 3, NCH) , 1.55 (m, 1H) , 0.97 (d, J = 7.0, 3H) . CL (Cond. I) : TR = 2.03 min; CL/EM: Anal. Calculado para [M+Na] + C24H2i a02: 378.15; encontrado 378.49.
Se añadieron TBDEM-C1 (48 mg, 0.312 mmol) seguido por imidazol (28.8 mg, 0.423 ramol) a una solución en CH2C12 (3 mi) de 4-hidroxi-3-metil-2- (9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) butanoato de (2S, 3S) -bencilo (119.5 mg, 0.258 mmol), y la mezcla se agitó en condiciones ambientales durante 14.25 horas. La mezcla de reacción se diluyó entonces con CH2C12 (30 mi) y se lavó con agua (15 mi) , y la fase orgánica se secó (MgS0 ) , se filtró y se concentró al vacío. El material bruto resultante se purificó con una Biotage (40 g gel de sílice; 5% de EtOAc/hexanos) proporcionando 4-(tert-butildimetilsililoxi) -3-metil-2- (9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) butanoato de (2S , 3S) -bencilo, contaminado con impurezas con base de TBDMS, como un aceite incoloro viscoso (124.4 mg) . Se elaboró 4-hidroxi-3-metil-2- (9-fenil-9H-fluoren- 9 -ilamino) butanóato de (2S, 3R) -bencilo de forma similar a 4 - (tert-butildimetilsililoxi ) - 3 -metil -2 - ( 9 - fenil -9H-fluoren-9-ilamino) butanoato de ( 2S , 3R) -bencilo . Isómero (2S, 3S) -silil éter: RMN de K (D SO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) , 7.82 (d, J = 4.1, 1H) , 7.80 (d, J = 4.0, 1H) , 7.38-7.07 (m, 16 H) , 4.70 (d, J = 12.4, 1H) , 4.42 (d, J = 12.3, 1H) , 3.28-3.19 (m, 3H) , 2.56 (dd, J = 10.1, 5.5, 1H) , 1.61 (m, 1H) , 0.90 (d, J = 6.8, 3H) , 0.70 (s, 9H) , -0.13 (s, 3H) , -0.16 (s, 3H) . CL (Cond. 1, donde el tiempo de ejecución de prolongó hasta 4 min) : TR = 3.26 min; CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C37H44NO3S 1 : 578.31; encontrado 578.40. Isómero (2S,3R)-silil éter: RMN de H (DMSO-dG, d = 2.5 ppm, 400 MHz) , 7.82 (d, J = 3.0, 1H) , 7.80 (d, J = 3.1, 1H) , 7.39-7.10 (m, 16H) , 4.66 (d, J = 12.4, 1H) , 4.39 (d, J = 12.4, 1H) , 3.61 (dd, J = 9.9, 5.6, 1H) , 3.45 (d, J = 9.5, 1H) , 3.41 (dd, J = 10, 6.2, 1H) , 2.55 (dd, J = 9.5, 7.3, 1H) , 1.74 (m, 1H) , 0.77 (s, 9H) , 0.61 (d, J = 7.1, 3H) , -0.06 (s, 3H) , -0.08 (s, 3H) .
Se unió un globo de hidrógeno a una mezcla de 4-(tert-butildimetilsililoxi) -3-metil-2- (9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) butanoato de (2S, 3S) -bencilo (836 mg, 1.447 mmol) y Pd al 10%/C (213 mg) en EtOAc (16 mi) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante - 21 horas, recargándose el globo con H2 cuando fue necesario. La mezcla de reacción se diluyó con CH2C12 y se filtró a través de un lecho de tierra de diatomeas (Celite-545®) , y se lavó el lecho con EtOAc (200 mi), EtOAc/MeOH (mezcla 1:1, 200 mi) y MeOH (750 mi). La fase orgánica combinada se concentró y se preparó una malla de gel de sílice a partir del material bruto resultante y se sometió a una cromatografía ultrarrápida (mezcla 8:2:1 de EtOAc/i-PrOH/H20) proporcionando ácido (2S, 3S) -2-amino-4- (tert-butildimetilsililoxi ) -3-metilbutanoico como un sólido apelusado blanco (325 mg) . Se elaboró 4- (tert-butildimetilsililoxi) -3-metil-2- (9-fenil-9H-fluoren-9- ilamino) butanoato de (2S , 3R) -bencilo de forma similar a ácido (2S, 3R) -2-amino-4- ( tert-butildimetilsililoxi ) -3-metilbutanoico . (Isómero 2S,3S)-amino ácido: RM de 1H (Metanol-d4, d = 3.29 ppm, 400 MHz) , 3.76 (dd, J = 10.5, 5.2, 1H) , 3.73 (d, J = 3.0, 1H) , 3.67 (dd, J = 10.5, 7.0, 1H) , 2.37 (m, 1H) , 0.97 (d, J = 7.0, 3H) , 0.92 (s, 9H) , 0.10 (s, 6H) . CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + CiiH26N03Si : 248.17; encontrado 248.44. Isómero (2S, 3R) -amino ácido: RMN de ?~? (Metanol-d4, d = 3.29 ppm, 400 MHz), 3.76-3.75 (m, 2H) , 3.60 (d, J = 4.1, 1H) , 2.16 (m, 1H) , 1.06 (d, J = 7.3, 3H) , 0.91 (s, 9H) , 0.09 (s/ 6H) . Anal. Calculado para [M+H] + CiiH26 03Si: 248.17; encontrado 248.44.
Se añadieron agua (1 mi) y NaOH (0.18 mi de 1.0 M/H20, 0.18 mmol) a una mezcla de ácido (2S, 3S) -2-amino-4- (tert-butildimetilsililoxi) -3-metilbutanoico (41.9 mg, 0.169 mmol) y Na2C03 (11.9 mg, 0.112 mmol) , y se sometió a ultrasonidos durante aproximadamente 1 minuto para efectuar la disolución de los reactivos. La mezcla se enfrió entonces con un baño de hielo-agua, se añadió cloroformiato de metilo (0.02 mi, 0.259 mmol) se durante 30 s y se continuó con agitación vigorosa a temperatura similar durante 40 minutos y luego a temperatura ambiente durante 2.7 horas . La mezcla de reacción se diluyó con agua (5 mi) , se enfrió con baño de hielo-agua y se trató gota a gota con solución acuosa de HC1 1.0 N HCl (-0.23 mi) . La mezcla se diluyó adicionalmente con agua (10 mi) y se extrajo con CH2C12 (15 mi, 2x) . La fase orgánica reunida se secó (MgS04) , se filtró y se concentró al vacío proporcionando Cap-80a como un sólido blanquecino. Se elaboró ácido (2S , 3R) -2 -amino-4 - (tert-butildimetilsililoxi ) -3-metilbutanoico de forma similar a Cap-80b. Cap-80a: RM de XK (DMS0-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) , 12.57 (s ancho, 1H) , 7.64 (d, J = 8.3, 0.3H), 7.19 (d, J = 8.8, 0.7H) , 4.44 (dd, J = 8.1, 4.6, 0.3H), 4.23 (dd, J = 8.7, 4.4, 0.7H), 3.56/3.53 (dos singletes, 3H) , 3.48-3.40 (m, 2H) , 2.22-2.10 (m, 1H) , 0.85 (s, 9H) , -0.84 (d, 0.9H, solapado con la señal de t-Bu) , 0.79 (d, J = 7, 2.1H), 0.02/0.01/0.00 (tres singletes solapados, 6H) . CL/EM: Anal. Calculado para [M+Na] + Ci3H27 a05Si : 328.16; encontrado 328.46. Cap-80b: RMN de XH (CDC13, d = 7.24 ppm, 400 MHz), 6.00 (d ancho, J = 6.8, 1H) , 4.36 (dd, J- = 7.1, 3.1, 1H) , 3.87 (dd, J = 10.5, 3.0, 1H) , 3.67 (s, 3H) , 3.58 (dd, J = 10.6, 4.8, 1H) , 2.35 (m, 1H) , 1.03 (d, J = 7.1, 3H) , 0.90 (s, 9H) , 0.08 (s, 6H) . CL/EM: Anal. Calculado para [M+Na]+ Ci3H27NNa05Si : 328.16; encontrado 328.53. Los productos brutos se utilizaron sin purificación adicional.
Cap-81 preparó de acuerdo con el protocolo descrito por Falb et al. Synthetic Communications 1993, 23, 2839.
Cap-82 a Cap- 85 Se sintetizaron Cap-82 a Cap-85 a partir de los materiales de partida apropiados de acuerdo con el procedimiento descrito para Cap-51 o Cap-13. Las muestras presentaron perfiles espectrales similares a los de sus enantiómeros (es decir, Cap-4, Cap-13, Cap-51 y Cap-52, respectivamente) .
Cap-82 Cap-83 Cap-84 Cap-85 Cap-86 Me0 A una mezcla de O-metil-L-treonina (3.0 g, 22.55 mmol) , NaOH (0.902 g, 22.55 mmol) en H20 (15 mi) se añadió ClC02Me (1.74 mi, 22.55 mmol) gota a gota a 0°C. La mezcla se dejó agitando durante 12 h y se acidificó hasta pH 1 usando HC1 1N. La fase acuosa se extrajo con EtOAc y (2x250 mi) y MeOH al 10% en CH2C12 (250 mi) y las fases orgánicas reunidas se concentraron al vacío proporcionando un aceite incoloro (4.18 g, 97%) que era de pureza suficiente para usar en las etapas siguientes. RMN de ¾ (400 MHz, CDC13) d 4.19 (s, 1H) , 3.92-3.97 (m, 1H) , 3.66 (s, 3H) , 1.17 (d, J = 7.7 Hz, 3H) . CLEM: Anal. Calculado para C7Hi3N05 : 191; encontrado: 190 (M-H) " .
Cap-87 A una mezcla de L-homoserina (2.0 g, 9.79 mmol), Na2C03 (2.08 g, 19.59 mmol) en H20 (15 mi) se añadió ClC02 e (0.76 mi, 9.79 mmol) gota a gota a 0°C. La mezcla se dejó agitando durante 48 h y se acidificó hasta H 1 usando HCl 1 . La fase acuosa se extrajo con EtOAc y (2X250 mi) y las fases orgánicas reunidas se concentraron al vacío proporcionando un sólido incoloro (0.719 g, 28%) que era de pureza suficiente para usar en las etapas siguientes. RMN de XH (400 MHz , CDC13) d 4.23 (dd, J = 4.5, 9.1 Hz, 1H) , 3.66 (s, 3H) , 3.43-3.49 (m, 2H) , 2.08 -2.14 (m, 1H) , 1.82 - 1.89 (m, 1H) . CLEM: Anal. Calculado para C7H13N05 : 191; encontrado: 192 (M+H) + .
Cap- 88 Se calentó una mezcla de L-valina (1.0 g, 8.54 mmol), 3 -bromopiridina (1.8 mi, 18.7 mmol), K2C03 (2.45 g, 17.7 mmol) y Cul (169 mg, 0.887 mmol) en DMSO (10 mi) a 100°C durante 12h. La mezcla de reacción se enfrió hasta ta, se vertió en H20 (aproximadamente 150 mi) y se lavó con EtOAc (x2) . Las fases orgánicas se extrajeron con una pequeña cantidad de H20 y las fases acuosas reunidas se acidificaron hasta aproximadamente pH 2 con HCl 6N. El volumen se redujo hasta aproximadamente la tercera parte y se añadieron 20 g de resina de intercambio iónico (Strata) . La suspensión se dejó reposar durante 20 min y se cargó en un lecho de resina de intercambio catiónico (Strata) (aproximadamente 25 g) . Se lavó el lecho con H20 (200 mi) , MeOH (200 mi) y luego NH3 (3M en MeOH, 2X200 mi) . Se concentraron las fracciones apropiadas al vacío y el residuo (aproximadamente 1.1 g) se disolvió en H20, se congeló y liofilizó. El compuesto del epígrafe se obtuvo como una espuma (1.02 g, 62%) . MN de 1H (400 MHz , DMSO-d6) d 8.00 (s ancho, 1H) , 7.68 - 7.71 (m, 1H) , 7.01 (s ancho, 1H) , 6.88 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 5.75 (s ancho, 1H) , 3.54 (s, 1H) , 2.04 - 2.06 (m, 1H) , 0.95 (d, J = 6.0 Hz, 3H) , 0.91 (d, J = 6.6 Hz, 3H) . CLEM: Anal. Calculado para Ci0H14N202: 194 ; encontrado: 195 (M+H) + .
Cap- 89 Se calentó a 100°C durante 12 horas una mezcla de L-valina (1.0 g, 8.54 mmol) , 5 -bromopirimidina (4.03 g, 17.0 mmol) , K2C03 (2.40 g, 17.4 mmol) y Cul (179 rag, 0.94 mmol) en DMSO (10 mi) . La mezcla de reacción se enfrió hasta TA, se vertió en H20 (aproximadamente 150 mi) y se lavó con EtOAc (x2) . Las fases orgánicas se extrajeron con una pequeña cantidad de H20 y las fases acuosas reunidas se acidificaron hasta aproximadamente pH 2 con HC1 6N. El volumen se redujo hasta aproximadamente la tercera parte y se añadieron 20 g de resina de intercambio catiónico (Strata) . La suspensión se dejó reposar durante 20 minutos y se cargó en un lecho de resina de intercambio catiónico (Strata) (aproximadamente 25g) . El lecho se lavó con H20 (200 mi) , MeOH (200 mi) y luego NH3 (3M en MeOH, 2x200 mi) . Se concentraron las fracciones apropiadas al vacío y se disolvió el residuo (aproximadamente 1.1 g) en H20, se congeló y liofilizó. El compuesto del epígrafe se obtuvo como una espuma (1.02 g, 62%). La RMN de XH (400 MHz, CD3OD) mostró que la mezcla contenía valina y no se pudo estimar la pureza. El material se usó como tal en las posteriores reacciones. CLEM: Anal. Calculado para C9H13 302 : 195; encontrado: 196 (M+H)+.
Cap-90 Se preparó Cap-90 de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación de Cap-1. El material bruto se usó como tal en las etapas posteriores. CLEM: Anal. Calculado para CnHi5 02 : 193; encontrado: 192 (M-H) " .
Los siguientes Caps se prepararon de acuerdo con el procedimiento del usado para la preparación del Cap 51, a menos que se indique de otro modo: Cap-117 a Cap-123 Para la preparación de Cap-117 a Cap-123 los Boc aminoácidos se obtuvieron de suministradores comerciales y se desprotegieron por tratamiento con TFA al 25% en CH2C12. Después de completarse la reacción que se juzgó por CLEM se eliminaron los disolventes al vacío y se carbamoiló la sal TFA correspondiente del aminoácido con cloroformiato de metilo de acuerdo con el procedimiento descrito para el Cap-51.
Cap-124 Se llevó a cabo la carbamoilación de la sal clorhidrato de éster tert-butílico de L-treonina de acuerdo con el procedimiento para Cap-51. La mezcla de reacción bruta se acidificó con HCl 1N hasta pH~l y la mezcla se extrajo con EtOAc (2X50 mi) . Las fases orgánicas reunidas se concentraron al vacío dando un aceite incoloro que solidificó en reposo. La capa acuosa se concentró al vacío y la mezcla resultante de producto y sales inorgánicas del producto y sales inorgánicas se trituró con EtOAc-CH2Cl2-MeOH (1:1:0.1) y luego se concentró la fase orgánica al vacío dando un aceite incoloro que por CLEM se mostró que era el producto deseado. Ambas tandas se reunieron dando 0.52 g de un sólido. RM de ?? (400 MHz, CD30D) d 4.60 (m, 1H) , 4.04 (d, J" = 5.0 Hz , 1H) , 1.49 (d, J = 6.3 Hz, 3H) . CLEM: Anal. Calculado para C5H7N04 : 145; encontrado: 146 (M+H)+.
Cap-125 A una suspensión de Pd(0H)2 (20%, 100 mg) , formaldehído acuoso (37% en peso, 4 mi) , ácido acético (0, 5 mi) en metanol (15 mi) se añadió ácido (S) -4-amino-2- (tert- butoxicarbonilamino) butanoico (1 g, 4.48 mmol) . La reacción se purgó varias veces con hidrógeno y se agitó durante la noche bajo un globo de hidrógeno a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de tierra de diatomeas (Celite®) y se eliminó el compuesto volátil al vacío. El material resultante bruto se usó como tal para la etapa siguiente. CLEM: Anal. Calculado para CnH22N204 : 246; encontrado: 247 ( +H)+.
Cap-126 cj-25 cap- 126 Este procedimiento es una modificación del que se usó para preparar Cap-51. A una suspensión de 3-metil-L-histidina (0.80 g, 4.70 mmol) en THF (lOmL) y H20 (10 mi) a 0°C se añadió NaHC03 (0.88 g, 10.5 mmol) . La mezcla resultante se trató con ClC02Me (0.40 mi, 5.20 mmol) y se dejó agitar la mezcla a 0°C. Después de agitar durante aproximadamente. 2h la CLEM no mostró material de partida. La reacción se acidificó hasta pH 2 con HCl 6 N.
Los disolventes se eliminaron al vacío y el residuo se suspendió en 20 mi de MeOH al 20% en CH2C12. La mezcla se filtró y se concentró dando una espuma amarillo claro (1.21 g, ) . La CLEM y M de 1H mostraron que el material era una mezcla 9:1 del éster metílico y el producto deseado. Este material se suspendió en THF (10 mi) y H20 (10 mi) , se enfrió hasta 0°C y se añadió LiOH (249.1 mg, 10.4 mmol) . Después de agitar aproximadamente lh la CLEM mostró que no quedaba éster. Seguidamente la mezcla se acidificó con HC1 6N y los disolventes se eliminaron al vacío. La CLEM y RM de 1H confirmaron la ausencia del éster. El compuesto del epígrafe se obtuvo como su sal HCl contaminada con sales inorgánicas (1.91 g, >100%) . El compuesto se usó como tal en posteriores etapas sin purificación adicional. RMN de 1H (400 MHz , CD3OD) d 8.84, (s, 1H) , 7.35 (s, 1H) , 4.52 (dd, J = 5.0, 9.1 Hz, 1H) , 3.89 (s, 3H) , 3.62 (s, 3H) , 3.35 (dd, J = 4.5, 15.6 Hz, 1H, parcialmente oscurecido por disolvente), 3.12 (dd, J = 9.0, 15.6 Hz, 1H) . CLEM: Análisis calculado para C9H13N304 : 227.09; encontrado: 228.09 (M+H)+.
Cap-127 cj-26 cap-127 preparó Cap-127 de acuerdo con el procedimiento para Cap-126 anterior partiendo de ácido (S) -2-amino-3- (1-metil-lH-imidazol-4-il)propanoico (1.11 g, 6.56 mmol), NaHC03 (1.21 g, 14.4 mmol) y ClC02Me (0.56 mi, 7.28 mmol) . El compuesto del epígrafe se obtuvo como su sal HCl (1.79 g, >100%) contaminado con sales inorgánicas. La CLEM y RMN de ""? mostraron la presencia de aproximadamente 5% del éster metílico. La mezcla bruta se usó como tal sin purificación adicional. RMN de ?? (400 MHz , CD3OD) d 8.90 (s, 1H) , 7.35 (s, 1H) , 4.48 (dd, J = 5.0, 8.6 Hz , 1H) , 3.89 (s, 3H) , 3.62 (s, 3H) , 3.35 (m, 1H) , 3.08 (m, 1H) .
CLEM: Anal. Calculado para C9H13 304 : 227.09; encontrado: 228 (M+H) + .
Preparación de Cap-128 cj-29 cap-128 Etapa 1. Preparación de 2- (tert oxicarbonilamino) ent-4-inoato de (S) -bencilo (cj-27b) . cj-27b A una solución de cj - 27a (1.01 g, 4.74 mmol) , DMAP (58 mg, 0.475 mmol) y iPr2NEt (1.7 mi, 9.8 mmol) en CH2C12 (100 mi) a 0°C se añadió Cbz-Cl (0.68 mi, 4.83 mmol) . La solución se dejó agitando durante 4 h a 0°C, se lavó (KHS04 1N, salmuera) , se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida (TLC 6:1 hex:EtOAc) dando el compuesto del epígrafe (1.30 g, 91%) como un aceite incoloro. RMN de ""? (400 MHz , CDC13) d 7.35 (s, 5H) , 5.35 (d ancho, J = 8.1 Hz, 1H) , 5.23 (d, J = 12.2 Hz, 1H) , 5.17 (d, J = 12.2 Hz, 1H) , 4.48 - 4.53 (m, 1H) , 2.68 - 2.81 (m, 2H) , 2.00 (t, J = 2.5 Hz, 1H) , 1.44 (s, 9H) . CLEM: Anal. Calculado para C17H2iN04 : 303; encontrado: 304 (M+H)+.
Etapa 2. Preparación de 3 - ( 1-bencil- 1H- 1 , 2 , 3 -triazol-4 - il) -2 - (tert-butoxicarbonilamino) propanoato de (S) -bencilo (cj -28) . cj-28 A una mezcla de 2- (tert-butoxicarbonilamino) pent-4-inoato de (S) -bencilo (0.50 g, 1.65 mmol) , ascorbato sódico (0.036 g, 0.18 mmol), CuS04-5H20 (0.022 g, 0.09 mmol) y NaN3 (0.13 g, 2.1 mmol) en DMF-H20 (5 mi, 4:1) a ta se añadió BnBr (0.24 mi, 2.02 mmol) y la mezcla se calentó hasta 65°C. Después de 5 horas, la CLEM indicó baja conversión. Se añadió una porción adicional de NaN3 (100 mg) y se continuó calentando durante 12 horas. La reacción se vertió en EtOAc y H20 y se agitó. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo tres veces con EtOAc y las fases orgánicas reunidas se lavaron (H20 x3 , salmuera) , se secaron (Na2S04) , se filtraron y concentraron. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (Biotage, 40+M 0-5% de MeOH en CH2C12; TLC 3% de MeOH en CH2C12) proporcionando un aceite amarillo claro que solidificó en reposo (748.3 mg, 104%) . La RMN fue consistente con el producto deseado pero sugirió la presencia de DMF. El material se usó como tal sin purificación adicional. RMN de ? (400 MHz, DMSO-d6) d 7.84 (s, 1H) , 7.27 - 7.32 (m, 10H) , 5.54 (s, 2H) , 5.07 (s, 2H) , 4.25 (m, 1H) , 3.16 (dd, J = 1.0, 5.3 Hz, 1H) , 3.06 (dd, J = 5.3, 14.7 Hz) , 2.96 (dd, J = 9.1, 14.7 Hz, 1H) , 1.31 (s, 9H) . CLEM: Anal. Calculado para C2 H28N404 : 436; encontrado: 437 (M+H) + .
Etapa 3. Preparación de 3 - ( 1-bencil-lH- 1 , 2 , 3 -triazol-4 -il ) -2 - (metoxicarbonilamino) propanoato de (S) -bencilo (cj -29) . cj-29 Se añadió TFA (4 mi) a una solución de 3-(l-bencil-lH-l,2,3-triazol-4-il) -2- ( tert-butoxicarboni lamino) propanoato de (S) -bencilo (0.52 g, 1.15 mmol) en CH2C12. La mezcla se dejó agitando a temperatura ambiente durante 2h. La mezcla se concentró al vacío dando un aceite incoloro que solidificó en reposo. Este material se disolvió en THF-H20 y se enfrió hasta 0°C. Se añadió NaHC03 sólido (0.25 g, 3.00 mmol) seguido por ClC02Me (0.25 mi, 3.25 mmol) . Después de agitar durante 1.5h la mezcla se acidificó hasta pH~2 con HCl 6N y luego se vertió en H20-EtOAc. Las capas orgánicas se separaron y se extrajo la capa acuosa 2x con EtOAc . Las capas orgánicas reunidas se lavaron (H20, salmuera) , se secaron (Na2S04) , se filtraron y se concentraron al vacío dando un aceite incoloro (505.8 mg, 111%, la RMN sugirió la presencia de una impureza no identificada) que solidificó en reposo en la bomba. El material se usó como tal sin purificación posterior. RMN de 1H (400 MHz, DMS0-d6) 5 7.87 (s, 1H) , 7.70 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 7.27 - 7.32 (m, 10H) , 5.54 (s, 2H) , 5.10 (d, J = 12.7 Hz, 1H) , 5.06 (d, J = 12.7 Hz, 1H) , 4.32 - 4.37 (m, 1H) , 3.49 (s, 3H) , 3.09 (dd, J = 5.6, 14.7 Hz, 1H) , 2.98 (dd, J = 9.6, 14.7 Hz , 1H) . CLEM : Anal. Calculado para C2iH22N404 : 394 ; encontrado: 395 (M+H) + .
Etapa 4. Preparación de ácido (S)-2- (metoxicarboni lamino) -3- (1H-1 , 2 , 3-triazol-4-il) propanoico (Cap-128) .
Cap- 128 Se sometió 3- (1-bencil-lH-l, 2 , 3 - triazol -4 - il ) -2- (metoxicarbonilamino) propanoato de (S) -bencilo (502 mg, 1.11 mmol) a hidrogenación en presencia de Pd-C (82 mg) en MeOH (5 mi) a presión atmosférica durante 12h. La mezcla se filtró a través de tierra de diatomeas (Celite®) y se concentró al vacío. Se obtuvo ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) -3- (1H-1, 2 , 3-triazol-4-il) propanoico como una goma incolora (266 mg, 111%) que estaba contaminada con aproximadamente 10% del éster metílico. El material se usó sin purificación adicional. ° RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6) d 12.78 (s ancho, 1H) , 7.59 9s, 1H) , 7.50 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 4.19 - 4.24 (m, 1H) , 3.49 (s, 3H) , 3.12 (dd, J" = 4.8 Hz, 14.9 Hz, 1H) , 2.96 (dd, J = 9.9, 15.0 Hz, 1H) . CLEM: Anal. Calculado para C7H10N4O4 : 214; encontrado: 215 (M+H)+.
Preparación de Cap-129 Etapa 1. Preparación de ácido (S)-2- (benciloxicarbonilamino) -3- (lH-pirazol-l-il) propanoico (c -31) . cj-31 Se calentó una suspensión de 2 -oxooxetan- 3 -ilcarbamato de (S) -bencilo (0.67 g, 3.03 mmol) y pirazol (0.22 g, 3.29 mmol) en CH3CN (12 mi) a 50°C durante 24h. La mezcla se enfrió hasta TA durante la noche y el sólido se filtró proporcionando ácido (S) -2- (benciloxicarbonilamino) -3 -( lH-pirazol - 1 - il ) ropanoico (330.1 mg) . El filtrado se concentró al vacío y luego se trituró con una pequeña cantidad de CH3CN (aproximadamente 4 mi) proporcionando una segunda tanda (43.5 mg) . Rendimiento total 370.4 mg (44%) . P.f. 165.5 - 168°C. p.f. lit 168.5 - 169.5 [Vederas et al. J. Am. Chem. Soc . 1985, 107, 7105] . RMN de XH (400 MHz, CD3OD) d 7.51 (d, J = 2.0, 1H) , 7.48 (s, J = 1.5 Hz, 1H) , 7.24 - 7.34 (m, 5H) , 6.23 m, 1H) , 5.05 (d, 12.7 H, 1H) , 5.03 (d, J = 12.7 Hz, 1H) , 4.59 - 4.66 (m, 2H) , 4.42 - 4.49 (m, 1H) . CLEM : Anal. Calculado para C1 H15N3O4 : 289; encontrado: 290 (M+H) + .
Etapa 2. Preparación de ácido (S)-2- (metoxicarbonilamino) -3- (lH-pirazol-l-il)propanoico ( ap-129) . cap-129 Se sometió ácido (S) -2- (benciloxicarbonilamino) -3- (lH-pirazol-l-il) propanoico (0.20 g, 0.70 mmol) a hidrogenación en presencia de Pd-C (45 mg) en MeOH (5 mi) a presión atmosférica durante 2h. El producto parecía ser insoluble en MeOH, por tanto se diluyó la mezcla de reacción con 5 mi de H20 y unas pocas gotas de HC1 6N. La solución homogénea se filtró a través de tierra de diatomeas (Celite®) , y el MeOH se eliminó al vacío. La solución restante se congeló y se liofilizó dando una espuma amarilla (188.9 mg) . Este material se suspendió en THF-H20 (1:1, 10 mi) y luego se enfrió hasta 0°C. A la mezcla fría se añadió NaHC03 (146.0 mg, 1.74 mmol) cuidadosamente (generación de C02) · Después de cesar la generación de gas (aproximadamente 15 min) se añadió ClC02Me (0.06 mi, 0.78 mmol) gota a gota. La mezcla se dejó agitando durante 2 horas y se acidificó hasta pH~2 con HCl 6N y se vertió en EtOAc . Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAC (x5) . Las fases orgánicas reunidas se lavaron (salmuera) , se secaron (Na2S04) , se filtraron y concentraron dando el compuesto del epígrafe como un sólido incoloro (117.8 mg, 79%) . RMM de ""? (400 MHz , DMSO-d6) d 13.04 (s, 1H) , 7.63 (d, J = 2.6 Hz , 1H) , 7.48 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 7.44 (d, J = 1.5 Hz, 1H) , 6.19 (t aparente, J" = 2.0 Hz, 1H) , 4.47 (dd, J" = 3.0 , 12.9 Hz, 1H) , 4.29 - 4.41 (m, 2H) , 3.48 (s, 3H) . CLEM : Anal. Calculado para 08??? 304: 213 ; encontrado: 214 (M+H) + .
Cap-130 Se preparó Cap-130 por acilación de (R) -fenilglicina disponible comercialmente de forma análoga al procedimiento dado en: Calmes, M.; Daunis, J. ; Jacquier, R. ; Verducci, J. Tetrahedron, 1987, 43(10), 2285.
Cap-131 Etapa a: Se añadió cloruro de dimetilcarbamoílo (0.92 mi, 10 mmol) lentamente a una solución de clorhidrato de 2 -amino-3 -metilbutanoato de (S) -bencilo (2.44 g; 10 mmol) y base de Hunig (3.67 mi, 21 mmol) en THF (50 mi). La suspensión blanca resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche (16 horas) y se concentró a presión reducida. El residuo se repartió entre acetato de etilo y agua. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó (MgS04) , se filtró y se concentró a presión reducida. El aceite amarillo resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida, eluyendo con acetato de etilo : hexanos (1:1)¦ Las fracciones recogidas se concentraron al vacío proporcionando 2.35 g (85%) de aceite transparente. RM de. H (300 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 0.84 (d, J"=6.95 Hz, 3H) , 0.89 (d, J=6.59 Hz, 3H) , 1.98-2.15 (m, 1H) , 2.80 (s, 6H) , 5.01-5.09 (m, J=12.44 Hz, 1H) , 5.13 (d, J=12.44 Hz , 1H) , 6.22 (d, .7=8.05 Hz, 1H) , 7.26-7.42 (m, 5H) . CL (Cond. 1): TR = 1.76 min; E : Análisis calculado para [M+H] + C16H22N203 : 279.17; encontrado 279.03.
Etapa b: A una solución en MeOH (50 mi) del intermedio preparado antes (2.35 g; 8.45 mmol) se añadió Pd/C (10%; 200 mg) y la suspensión negra resultante se llenó con N2 (3x) y se colocó en 10.13 kPa de H2. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche y se filtró a través de un filtro de microfibra para separar el catalizador. La solución transparente resultante se concentró entonces a presión reducida obteniendo 1.43 g (89%) de Cap-131 como espuma blanca, que se usó sin purificación posterior. RMN de ?? (500 MHz , DMS0-d6) d ppm 0.87 (d, J=4.27 Hz, 3H) , 0.88 (d, J=3.97 Hz, 3H) , 1.93-2.11 (m, 1H) , 2.80 (s, 6H) , 3.90 (dd, ,7=8.39, 6.87 Hz, 1H) , 5.93 (d, J"=8.54 Hz, 1H) , 12.36 (s, 1H) . CL (Cond. 1) : TR = 0.33 min; EM : Análisis calculado para [M+H]+ C8H17 203: 189.12; encontrado 189.04.
Cap-132 Cap-132 se preparó a partir de clorhidrato de 2 - aminopropanoato de (S)-bencilo de acuerdo con el procedimiento descrito para Cap-131. RMN de H (500 MHz, DMS0-d6) d ppm 1.27 (d, J=7.32 Hz , 3H), 2.80 (s, 6H) , 4.06 (ct, 1H) , 6.36 (d, J=7.32 Hz, 1H) , 12.27 (s, 1H) . CL (Cond. 1) : TR = 0.15 min; EM : Análisis calculado para [M+H] + C6H13 203 : 161.09 ; encontrado 161.00.
Cap-133 Cap-133 se preparó a partir de clorhidrato de 2-amino-3 -metilbutanoato de (S) -tert-butilo y cloroformiato de 2 - fluoroetilo de acuerdo con el procedimiento descrito para Cap-47. RMN de *H (500 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.87 (t, J = 6.71 Hz, 6H) , 1.97-2.10 (m, 1H) , 3.83 (dd, J=8.39, 5.95 Hz, 1H) , 4.14-4.18 (m, 1H) , 4.20-4,25 (m, 1H) , 4.50-4.54 (m, 1H) , 4.59-4.65 (m, 1H) , 7.51 (d, J" = 8.54 Hz, 1H) , 12.54 (s, 1H) .
Cap-134 Cap-134 se preparó a partir de (S) -dietil alanina y cloroformiato de metilo de acuerdo con el procedimiento descrito para Cap-51. RMN de XH (500 MHz, DMS0-d6) d ppm 0.72-0.89 (m, 6H) , 1.15-1.38 (m, 4H) , 1.54-1.66 (m, 1H) , 3.46-3.63 (m, 3H) , 4.09 (dd, J = 8.85, 5.19 Hz , 1H) , 7.24 (d, J = 8.85 Hz, 1H) , 12.55 (s, 1H) . CL (Cond. 2): TR = 0.66 min; CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C9H18N04 : 204.12; encontrado 204.02.
Cap-135 Una solución de ácido D-2 -amino- (4 -fluorofenil ) acético (338 mg, 2.00 mmol) , HCl 1N en éter dietílico (2.0 mi, 2.0 mmol) y formalina (37%, 1 mi) en metanol (5 mi) se sometió a hidrogenación bajo un globo en paladio al 10% sobre carbón (60 mg) durante 16 h a 25°C. La mezcla se filtró a través de Celite proporcionando la sal HCl de Cap-135 como una espuma blanca (316 mg, 80%) . RMN de XH (300 MHz, MeOH-d4) d 7.59 (dd, J = 8.80, 5.10 Hz , 2H) , 7.29 (t, J = 8.6 Hz, 2H) , 5.17 (s, 1H) , 3.05 (s muy ancho, 3H) , 2.63 (s muy ancho, 3H) ; TR = 0.19 min (Condiciones de EM- 5) ; índice de homogeneidad del 95%; EMBR: Análisis calculado para [M+H]+ C10Hi3FNO2: 198.09; encontrado: 198.10.
Cap-136 A una suspensión enfriada (-50 °C) de 1-bencil-lH-imidazol (1.58 g, 10.0 mmol) en éter dietílico anhidro (50 mi) en nitrógeno se añadió n-butil litio (2.5 M en hexanos, 4.0 mi , 10.0 mmol) gota a gota. Después de agitar durante 20 minutos a -50 °C, se hizo burbujear dióxido de carbono (pasado a través de Drierite) en la mezcla de reacción durante 10 minutos antes de dejar calentar hasta 25°C. El precipitado pesado que se formó al añadir dióxido de carbono a la mezcla de reacción se filtró proporcionando un sólido blanco higroscópico que se recogió en agua (7 mi) , se acidificó hasta pH = 3 , se enfrió y se indujo a cristalizar con raspado. La filtración de este precipitado dio un sólido blanco que se suspendió en metanol, se trató con HCl lN/éter dietílico (4 mi) y se concentró al vacío. La liofilización del residuo en agua (5 mi) proporcionó la sal HCl de Cap-136, como un sólido blanco (817 mg, 40%) . RMN de ? (300 MHz, DMS0-d6) d 7.94 (d, J = 1.5 Hz , 1H) , 7.71 (d, J = 1.5 Hz , 1H) , 7.50-7.31 (m, 5H) , 5.77 (s, 2H) ; TR = 0.51 min (Condiciones de EM-W5) ; índice de homogeneidad del 95%; EMBR: Análisis calculado para [M+H] + C1iH12N202 : 203.08; encontrado: 203.11.
Cap-137 Cap-137, etapa a Una suspensión de l-cloro-3-cianoisoquinolina (188 mg, 1.00 mmol; preparada de acuerdo con el procedimiento del documento WO 2003/ 099274) (188 mg, 1.00 mmol), fluoruro de cesio (303.8 mg, 2.00 mmol), dicloruro de bis ( tri-tert-butilfosfina) aladio (10 mg, 0.02 mmol) y 2- (tributilestannil) furano (378 µ? , 1.20 mmol) en dioxano anhidro (10 mi) en nitrógeno se calentó a 80 °C durante 16 horas de enfriar hasta 25°C y se trató con solución acuosa saturada de fluoruro potásico con agitación vigorosa durante 1 h. La mezcla se repartió entre acetato de etilo y la fase orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró. La purificación del residuo sobre gel de sílice (elución con acetato de etilo de 0% a 30%/hexanos) proporcionó Cap-137, etapa a (230 mg, 105%) como un sólido blanco que se usó directamente a continuación. TR = 1.95 min (Condiciones de EM- 2); índice de homogeneidad del 90%; EMBR: Análisis calculado para [M+H] + Ci4H8N20 : 221.07; encontrado: 221.12.
Cap-137 A una suspensión de Cap 137, etapa a, (110 mg, 0.50 mmol) y peryodato sódico (438 mg, 2.05 mmol) en tetracloruro de carbono (1 mi), acetonitrilo (1 mi) y agua (1.5 mi) se añadió tricloruro de rutenio hidratado (2 mg, 0.011 mmol) . La mezcla se agitó a 25 °C durante 2 h y luego se repartió entre diclorometano y agua. La fase acuosa se separó, se extrajo dos veces más con diclorometano y se secaron los extractos reunidos sobre Na2S04i se filtraron y concentraron. La trituración del residuo con hexanos proporcionó Cap-137 (55 mg, 55%) como un sólido de color grisáceo. TR = 1.10 min (Condiciones de EM-W2) ; índice de homogeneidad del 90%; CLEM: Análisis calculado para [M+H] + CnHaN202 : 200.08; encontrado: 200.08.
Caps 138 a 158 Estrategia de síntesis. Procedimiento A.
Cap-138, etapa a A una suspensión agitada de 5-hidroxiisoquinolina (preparada de acuerdo con el procedimiento del documento WO 2003/ 099274) (2.0 g, 13.8 mmol) y trifenilfosfina (4.3 g, 16.5 mmol) en tetrahidrofurano seco (20 mi) se añadió metanol seco (0.8 mi) y azodicarboxilato de dietilo (3.0 mi, 16.5 mmol) en varias porciones. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 h antes de diluir con acetato de etilo y se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró. El residuo se preabsorbió sobre gel de sílice y se sometió a cromatografía (elución con acetato de etilo al 40%/hexanos) proporcionando Cap-138, etapa a (1.00 g, 45%) como un sólido amarillo claro. RMN de 1H (CDC13, 500 MHz) d 9.19 (s, 1H) , 8.51 (d, J = 6.0 Hz , 1H) , 7.99 (d, J = 6.0 Hz , 1H) , 7.52-7.50 (m, 2H) , 7.00-6.99 (m, 1H) , 4.01 (s, 3H) ; TR = 0.66 min (Cond. D2); índice de homogeneidad del 95%; CLEM: Análisis calculado para [M+H] + Ci0Hi0NO : 160.08; encontrado 160.1.
Cap-138, etapa b A una solución agitada de Cap 138, etapa a (2.34 g, 14.7 mmol) en dielorómetaño anhidro (50 mi) a temperatura ambiente se añadió ácido meta-cloroperbenzoico (77%, 3.42 g, 19.8 mmol) en una porción. Después de agitar durante 20 horas, se añadió carbonato potásico en polvo (2.0 g) y la mezcla se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente antes de que se filtrara y concentrara al vacío proporcionando Cap-138, etapa b (2.15 g, 83%) como un sólido amarillo pálido que era suficientemente puro para ' usarse posteriormente directamente. RMN de ?? (CDC13, 400 MHz) d 8.73 (d, J = 1.5 Hz, 1H) , 8.11 (dd, J = 7.3, 1.7 Hz, 1H) , 8.04 (d, J=7.1 Hz, 1H), 7.52 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 7.8 Hz, 1H) , 4.00 (s, 3H) ; TR = 0.92 min, (Condiciones-DI ) ; índice de homogeneidad del 90%; CLEM: Análisis calculado para [M+H] + Ci0Hi0 02 : 176.07; encontrado: 176.0.
Cap-138, etapa c A una solución agitada de Cap 138, etapa b (0.70 g, 4.00 mmol) y trietilamina (1.1 mi, 8.00 mmol) en acetonitrilo seco (20 mi) a temperatura ambiente en nitrógeno se añadió cianuro de trimetilsililo (1.60 mi, 12.00 mmol). La mezcla se calentó a 75 °C durante 20 h antes de enfriar hasta temperatura ambiente, se diluyó con acetato de etilo y se lavó con solución saturada de bicarbonato sódico y salmuera antes de secar sobre Na2S0 y concentrar el disolvente. El residuo se sometió a cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (elución con gradiente de acetato de etilo al 5%/en hexanos) hasta acetato de etilo al 25%/en hexanos) proporcionando Cap-138, etapa c (498.7 mg, 68%) como un sólido blanco cristalino junto con 223 mg (30%) de más Cap-138, etapa c recuperado del filtrado. RMN de XH (CDC13, 500 MHz) d 8.63 (d, J = 5.5 Hz, 1H) , 8.26 (d, J = 5.5 Hz, 1H) , 7.88 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 7.69 (t, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.08 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 4.04 (s, 3H) ; TR = 1.75 min, (Condiciones-DI) ; índice de homogeneidad del 90%; CLEM: Análisis calculado para [M+H] + CnH9N20 : 185.07; encontrado: 185.10.
Cap-138 Se trató Cap-138, etapa c (0.45 g, 2.44 mmol) con solución de hidróxido sódico SN (10 mi) y la suspensión resultante se calentó a 85°C durante 4 h, se enfrió hasta 25 °C, se diluyó con diclorometano y se acidificó con ácido clorhídrico 1N. La fase orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04/ se concentró hasta ½ del volumen y se filtró proporcionando Cap-138 (0.44 g, 88.9%) como un sólido amarillo. RMN de ¾ (DMSO-ds, 400 MHz) d 13.6 (s ancho, 1H) , 8.56 (d, J = 6.0 Hz, 1H) , 8.16 (d, J = 6.0 Hz, 1H) , 8.06 (d, J = 8.8 Hz, 1H) , 7.71-7.67 (m, 1H) , 7.30 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 4.02 (s, 3H) ; TR = 0.70 min (Condiciones-Dl) ; índice de homogeneidad del 95%; CLEM: Análisis calculado para [M+H]+ CnHioN03: 204.07; encontrado: 204.05.
Estrategia de síntesis. Procedimiento B (derivado Tetrahedron Letters, 2001, 42, 6707) .
Cap-139 Cap-139, etapa a un vial a rosca de pared gruesa que contenía una suspensión desgasificada en argón de l-cloro-6-metoxiisoquinolina (1.2 g, 6.2 mmol ; preparado de acuerdo con el procedimiento del documento O 2003/ 099274) , cianuro potásico (0.40 g, 6.2 mmol), 1 , 5 -bis (difenilfosfino) pentano (0.27 g, 0.62 mmol) y acetato de paladio (II) (70 mg, 0.31 mmol) en tolueno anhidro (6 mi) se añadió ?,?,?',?'-tetrametiletilendiamina (0.29 mi, 2.48 mmol). El vial se selló, se calentó hasta 150 °C durante 22 h y luego se dejó enfriar hasta 25 °C. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró. El residuo se purificó sobre gel de sílice (elución con gradiente de acetato de etilo al 5%/hexanos hasta acetato de etilo al 25%/hexanos proporcionando Cap-139, etapa a (669.7 mg, 59%) como un sólido blanco. RMN de XH (CDC13, 500 MHz) d 8.54 (d, J = 6.0 Hz, 1H) , 8.22 (d, J = 9.0 Hz , 1H) , 7.76 (d, J = 5.5 Hz, 1H) , 7.41-7.39 (m, 1H) , 7.13 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 3.98 (s, 3H) ; TR = 1.66 min (Condiciones-Dl) ; índice de homogeneidad del 90%; CLEM: Análisis calculado para [M+H] + CuH9N20 : 185.07; encontrado: 185.2.
Cap-139 Cap-139 se preparó a partir de la hidrólisis básica de Cap-139, etapa a con NaOH SN de acuerdo con el procedimiento descrito para Cap 138. RMN de 1H (400 MHz, DMS0-d6) d 13.63 s muy ancho, 1H) , 8.60 (d, J = 9.3 Hz, 1H) , 8.45 (d, J = 5.6 Hz, 1H) , 7.95 (d, J ¦¦ 5.9 Hz, 1H) , 7.49 (d, J = 2.2 Hz, 1H) , 7.44 (dd, J = 9.3, 2.5 Hz, 1H) , 3.95 (s, 3H) ; TR = 0.64 min (Condiciones-Dl) ; índice de homogeneidad del 90%; CLEM : Análisis calculado para [M+H] + CnHi0 O3 : 204.07; encontrado: 204.05.
Cap-140 A una mezcla agitada vigorosamente de 1,3-dicloro- 5 -etoxiisoquinolina (482 mg, 2.00 mmol ; preparada de acuerdo con el procedimiento del documento WO 2005/ 051410) , acetato de paladio (II) (9 mg, 0.04 mmol), carbonato sódico (223 mg, 2.10 mmol) y 1 , 5 -bis (difenilfosfino) entano (35 mg, 0.08 mmol) en dimetilacetamida seca (2 mi) a 25 °C en nitrógeno se añadió N, , ' , ' -tetrametiletilendiamina (60 mi, 0.40 mmol). Después de 10 min, la mezcla se calentó hasta 150 °C, y luego se añadió una solución patrón de acetona cianohidrina (preparada a partir de 457 µ? de acetona cianohidrina en 4.34 mi de DMA) en porciones de 1 mi durante 18 h usando una bomba de jeringa. La mezcla se repartió entonces entre acetato de etilo y agua y se separó la fase orgánica, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró. El residuo se purificó sobre gel de sílice (elución con gradiente de acetato de etilo al 10% en hexanos hasta acetato de etilo al 40% en hexanos) proporcionando Cap-140, etapa a (160 mg, 34%) como un sólido amarillo. TR = 2.46 min (Condiciones de EM-W2) ; índice de homogeneidad del 90%; CLEM: Análisis calculado para [ +H] + Ci2H9ClN20: 233.05; encontrado: 233.08.
Cap-140 Cap-140 se preparó por la hidrólisis ácida de Cap- 140, etapa a con HC1 12N como se describe en el procedimiento para la preparación de Cap 141, descrito más adelante. TR = 2.24 min (Condiciones de EM-W2); índice de homogeneidad del 90%; CLEM: Análisis calculado para [M+H] + CisHuClNOs : 252-04; encontrado: 252.02.
Cap-141 Cap- 141 , etapa a se preparó a partir de 1- bromo- 3 - f luoroisoquinol ina (preparada a partir de 3- amino - 1 - bromo i soquinol ina usando el procedimiento esbozado en J. Med. Chem. 1970, 13, 613) como se describe en el procedimiento para la preparación de Cap-140, etapa a (vide supra) . RMN de H (500 MHz , CDCl 3 ) d 8.35 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 7.93 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 7.83 (t, J = 7.63 Hz, 1H), 7.77-7.73 (m, 1H) , 7.55 (s, 1H) ; TR = 1.60 min ( Condi c ione s - D 1 ) ; índice de homogeneidad del 90%; CLEM : Análisis calculado para [M+H] + C10H6FN2 : 173.05; encontrado: 172.99.
Cap-141 Se trató Cap-141, etapa a (83 mg , 0.48 mmol) con HCl 12N (3 mi) y la suspensión resultante se calentó a 80 °C durante 16 h antes de enfriar hasta temperatura ambiente y se diluyó con agua (3 mi) . La mezcla se agitó durante 10 min y luego se filtró proporcionando Cap-141 (44.1 mg , 48%) como un sólido blanquecino. El filtrado se diluyó con di c lorometano y se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04 y se concentró proporcionando más Cap-141 (29.30 mg , 32%) que era suficientemente puro para usarlo posteriormente. RMN de 1R (DMSO-d6, 500 MHz) d 14.0 (s ancho, 1H) , 8.59- 8.57 (m, 1H) , 8.10 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 7.88-7.85 (m, 2H), 7.74-7.71 (m, 1H) ; TR = 1.33 min ( Condiciones -DI ) ; índice de homogeneidad del 90%; CLEM: Análisis calculado para [M+H] + C10H7FNO2 : 192.05; encontrado: 191.97.
Cap-142 Cap-142, etapa a Cap-142, etapa a se preparó a partir de N-óxido de -bromoisoquinolina como se describe en el procedimiento en dos etapas para la preparación de Cap-138, etapas b y c. TR = 1.45 min (Condiciones de EM-W1) ; índice de homogeneidad del 90%; CLEM: Análisis calculado para [M+H] + Ci0H6BrN2 : 232.97; encontrado: 233.00.
Cap-142, etapa b una suspensión desgasificada en argón de Cap-142, etapa a (116 mg, 0.50 mmol) , fosfato potásico tribásico (170 mg, 0.80 mmol), acetato de paladio (II) (3.4 mg, 0.015 mmol) y 2 - (diciclohexilfosfino) bifenilo (11 mg, 0.03 mmol) en tolueno anhidro (1 mi) se añadió morfolina (61 µ? , 0.70 mmol) . La mezcla se calentó a 100 °C durante 16 h, se enfrió hasta 25 °C, se filtró a través de tierra de diatomeas (Celite®) y se concentró. La purificación del residuo sobre gel de sílice, (elución con gradiente de acetato de etilo del 10% a 70% en hexanos proporcionó Cap-142, etapa b (38 mg, 32%) como un sólido amarillo, que se llevó a etapas posteriores directamente. TR = 1.26 min (Condiciones de EM-Wl) ; índice de homogeneidad del 90%; CLEM : Análisis calculado para [M+H] + Ci4H14N30 : 240.11; encontrado: 240.13.
Cap-142 Cap-142 se preparó a partir de Cap-142, etapa b con hidróxido sódico 5N como se describe en el procedimiento para Cap 138. R = 0.72 min (Condiciones de EM-W1) ; índice de homogeneidad del 90%; CLEM: Análisis calculado para [M+H] + Ci Hi5 203 : 259.11; encontrado: 259.08.
Cap-143 Cap-143, etapa a A una solución agitada de 3-amino-l-bromoisoquinol ina (444 mg , 2.00 mmol) en dimet ilformamida anhidra (10 mi) se añadió hidruro sódico (60%, sin lavar, 96 mg , 2.4 mmol) en una porción. Esta mezcla se agitó a 25 °C durante 5 min antes de añadir éter 2 -bromoetí lico (90%, 250 µ? , 2.00 mmol) . La mezcla se agitó otra vez a 25 °C durante 5 h y a 75 °C durante 72 h antes de enfriar hasta 25 °C, se inactivo con solución saturada de cloruro amónico y se diluyó con acetato de etilo. La fase orgánica se separó, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2S0 , se filtró y se concentró. La purificación del residuo sobre gel de sílice (elución con gradiente de acetato de etilo al 0% a 70% en hexanos proporcionó Cap- 143 , etapa (180 mg , 31%) a como un sólido amarillo. TR = 1.75 min (Condiciones de EM-W1) ; índice de homogeneidad del 90%; CLEM : Análisis calculado para [M+H] + C13Hi4BrN20 : 293.03; encontrado: 293.04.
Cap- 143 A una solución fría (-60 °C) de Cap-143, etapa a (154 mg , 0.527 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 mi) se añadió una solución de n-butil litio en hexanos (2.5 M, 0.25 mi, 0.633 mmol) . Después de 10 min, se burbujeó dióxido, de carbono en la mezcla de reacción durante 10 minutos antes que se inactivara con HC1 1N y se dejó calentar hasta 25°C. La mezcla se extrajo entonces con diclorometano (3 x 30 mi) y los extractos orgánicos reunidos se concentraron al vacío. La purificación del residuo por una HPLC de fase inversa (MeOH/agua/TFA) proporcionó Cap-143 (16 mg, 12%). TR = 1.10 min (Condiciones de EM- 1) ; índice de homogeneidad del 90%; CLEM: Análisis calculado para [M+H]+ C14H.5N2O3 : 259.11; encontrado: 259.08.
Cap-144 Ca a a Se añadió 1, 3-dicloroisoquinolina (2.75 g, 13.89 mmol) en pequeñas porciones a una solución fría (0 °C) de ácido nítrico fumante (10 mi) y ácido sulfúrico concentrado (10 mi) . La mezcla se agitó a 0°C durante 0.5 horas antes de que se calentara gradualmente hasta 25°C a la que se agitó durante 16 horas. La mezcla se vertió entonces en un vaso de precipitados que contenía hielo triturado y agua y la suspensión resultante se "agitó durante 1 hora a 0°C antes de que se filtrara proporcionando Cap-144, etapa a (2.73 g, 81%) como un sólido amarillo que se usó directamente. TR = 2.01 min. (Condiciones-DI) ; índice de homogeneidad del 95%; CLEM: Análisis calculado para [M+H] + CgHsClasOj: 242.97; encontrado: 242.92.
Cap-144, etapa b Se suspendió Cap-144, etapa a (0.30 g, 1.23 mmol) en metanol (60 mi) y se trató con óxido de platino (30 mg) y la suspensión se sometió a hidrogenación de Parr a 48.26 kPa de H2 durante 1.5 h. Antes se añadieron formalina (5 mi) y más óxido de platino (30 mg) . La suspensión se volvió a someter a hidrogenación de Parr a 310.26 kPa de H2 durante 13 h antes de someter a filtración por succión a través de tierra de diatomeas (Celite®) y se concentró hasta ¼ de su volumen. La filtración por succión del precipitado proporcionó el compuesto del epígrafe como un sólido amarillo que se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (elución con gradiente de acetato de etilo al 5% en hexanos hasta acetato de etilo al 25% en hexanos) proporcionando Cap-144, etapa b (231 mg, 78%) como un sólido amarillo pálido. TR = 2.36 min (Condiciones-DI) ; índice de homogeneidad del 95%; RMN de ¾ (400 MHz, CDC13) d 8.02 (s, 1H) , 7.95 (d, J = 8.6 Hz, 1H) , 7.57-7.53 (m, 1H) , 7.30 (d, J = 7.3 Hz, 1H) , 2.88 (s, 6H) ; CLEM: Análisis calculado para [M+H]+ CnHiiCl2N2: 241.03; encontrado: 241.02. EMAR: Análisis calculado para [M+H]+ C HnCl2N2: 241.0299; encontrado: 241.0296.
Cap-144, etapa c Cap-144, etapa c se preparó a partir de Cap-144, etapa b de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación de Cap-139, etapa a. TR = 2.19 min (Condiciones-DI) ; índice de homogeneidad del 95%; CLEM: Análisis calculado para [M+H]+ C12HHCIN3: 232.06; encontrado: 232.03. EMAR: Análisis calculado para [M+H]+ C^HUCINB: 232.0642; encontrado: 232.0631.
Cap-144 Cap-144 se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito para Cap-141. TR = 2.36 min (Condiciones-Dl) ; 90%; CLEM: Análisis calculado para [M+H] + C12H12CI 2O2 : 238.01; encontrado: 238.09.
Caps-145 a 162 Se prepararon Caps-145 a 162 a partir de las 1-cloroisoquinolinas apropiadas de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación de Cap-138 (Procedimiento A) o Cap-139 (Procedimiento B) a no ser que se describa de otro modo más adelante.
Tr (Condición Procede CL) ; Cap diHidró¬ Cap miento índice de n° lisis homogeneidad, %; datos EM 1.14 min (Condiciones de EM-W1) ; 90%; C02H CLEM: Cap- Preparado a partir 12N Análisis 145 de 1,3- B HC1 calculado dicloroisoquinolin para [M+H]+ a disponible Ci0H7ClNO2: comercialmente 208.02; encontrado : 208.00. 0.70 min (Condiciones- Di); 95%; C02H CLEM: Cap- Preparado a partir Análisis NaOH 148 de 7- A calculado 5N hidroxiisoquinolin para [M+H]+ a disponible CuHioN03: comercialmente 204.07; encontrado : 204.05. 0.70 min (Condiciones- Di) ; 95%; CLEM: C02H Cap- Análisis Preparado a partir NaOH 149 A calculado de 5- 5N para [M+H]+ hidroxiisoquinolin CnH10NO3: a disponible 204.07; comercialmente encontrado : 20 .05. 0.30 min (Condiciones C02H de EM-W1) ; Preparado a partir 90%; de 6-fluoro-l- CLE : Cap- cloroisoquinolina , NaOH Análisis 160 que se puede B 5N calculado sintetizar para [M+H]+ siguiendo el C10H7FNO2: procedimiento del 192.05; documento WO 2003/ encontrado: 099274 192.03. 0.70 min (Cond. DI); 95%; CLEM: Cap- Preparado a partir Análisis 161 de ácido 4- calculado bromoquinolin-2- para [M+H]+ carboxilico y C12H13N2O2: dimetilamina 217.10; (DMSO, 100 °C) encontrado : 217.06. 0.65 min (Condiciones- Preparado a partir M3); 95%; de m-anisidina CLEM: Cap- siguiendo el Análisis 162 procedimiento — -- calculado descrito en J. para [M+H]+ Hetero. Chem. CnH10NO3: 1993,. 17 y 204.07; Heterocycíes, encontrado : 2003, 60, 953. 203.9 .
Cap-163 A una solución de ácido 2 -cetobutírico (1.0 g, 9.8 mmol) en éter dietílico (25 mi) se añadió gota a gota bromuro de fenilmagnesio (22 mi, 1M en THF) . La reacción se agitó a -25 °C en nitrógeno durante 17.5h. La reacción se acidificó con HCl 1N y el producto se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 mi) . La fase orgánica reunida se lavó con agua seguido por salmuera y se secó sobre MgS04. Después de concentrar al vacío se obtuvo un sólido blanco. El sólido se recristalizó en hexanos/acetato de etilo proporcionando Cap-163 como agujas blancas (883.5 mg) . RMN de 1H (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 500 MHz) : 12.71 (s ancho, 1 H) , 7.54-7.52 (m, 2H) , 7.34-7.31 (m, 2H) , 7.26-7.23 (m, 1H) , 5.52-5.39 (s ancho, 1H) , 2.11 (m, 1H) , 1.88 (m, 1H) , 0.79 (t ap, J = 7.4 Hz, 3H) .
Cap-164 Se expuso a H2 a 344.74 kPa en un frasco de Parr durante 42 horas una mezcla de ácido 2-amino-2-fenilbutírico (1.5 g, 8.4 mmol), formaldehído (14 mi, 37% en agua), HCl 1N (10 mi) y Pd al 10%/C (0.5 mg) en MeOH (40 mi). La reacción se filtró sobre Celite y se concentró al vacío, el residuo se suspendió en MeOH (36 mi) y el producto se purificó con una HPLC de fase inversa ( eOH/H20/TFA) proporcionando la sal TFA de Cap-164 como un sólido blanco (1.7 g) . RMN de XH (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 500 MHz) 7.54-7.47 (m, 5H) , 2.63 (m, 1H) , 2.55 (s, 6H) , 2.31 (m, 1H) , 0.95 (t ap, J = 7.3 Hz, 3H) .
Cap-165 A una mezcla de ácido 2-amino-2-indanocarboxílico (258.6 mg, 1.46 mmol) y ácido fórmico (0.6 mi, 15.9 mmol) en 1 , 2-dicloroetano (7 mi) se añadió formaldehído (0.6 mi, 37% en agua) . La mezcla se agitó a -25 °C durante 15 min luego se calentó a 70 °C durante 8h. El componente volátil se eliminó al vacío y el residuo se disolvió en DMF (14 mi) y se purificó por una HPLC de fase inversa (MeOH/H20/TFA) proporcionando la sal TFA de Cap-165 como un aceite viscoso (120.2 mg) . M de H (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 500 MHz) : 7.29- 7.21 (m, 4 H) , 3.61 (d, J = 17.4 Hz , 2H) , 3.50 (d, J = 17.4 Hz, 2H) , 2.75 (s, 6H) . CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + Ci2H16N02: 206.12; encontrado: 206.07.
Cap-166a y -166b Cap-166a: Diastereómero-1 Cap-166b: Diastereómero-2 Caps-166a y -166b se prepararon a partir de (1S, 4S) - (+) -2-metil-2 , 5 -diazabiciclo [2.2.1] heptano (2HBr) de acuerdo con el procedimiento descrito para la síntesis de Cap-la y Cap-lb, con la salvedad de que se separó el éster bencílico intermedio usando una columna semipreparativa Chiralcel OJ, 20 x 250 mm, 10 µp? eluyendo con una mezcla 85:15 de heptano/etanol a 10 ml/min de caudal de elución durante 25 min. Cap-166b: RMN de XH (DMS0-d6, 5 = 2.5 ppm, 500 MHz): 7.45 (d, J = 7.3 Hz , 2H) , 7.27-7.19 (m, 3H) , 4.09 (s, 1H) , 3.34 (s ancho ap, 1H) , 3.16 (s ancho ap, 1H) , 2.83 (d, J"=10.1 Hz, 1H) , 2.71 (m, 2H) , 2.46 (m, 1H) , 2.27 (s, 3H) , 1.77 (d, J = 9.8 Hz, 1H) , 1.63 (d, J = 9.8 Hz , 1H) . CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C14H19 2O2 : 247.14; encontrado: 247.11.
Cap-167 Se agitó una solución de ácido Boc-1, 3 -dihidro-2H-isoindol carboxílico racémico (l.Og, 3.8 mmol) en TFA al 20%/CH2Cl2 a -25 °C durante 4h. Se eliminó todo el componente volátil al vacío. Se expuso una mezcla del material bruto resultante, formaldehído (15 mi, 37% en agua), HC1 1N (10 mi) y Pd al 10%/C (10 mg) en MeOH a H2 (275.71 kPa) en un frasco de Parr durante 23 h. La mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se concentró al vacío proporcionando Cap-167 como una espuma amarilla (873.5 mg) . MN de XH (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 500 MHz) 7.59-7.38 (m, 4H) , 5.59 (s, 1H) , 4.84 (d, J = 14 Hz, 1H) , 4.50 (d, J = 14.1 Hz, 1H) , 3.07 (s, 3H) . CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + Ci0H12NO2 : 178.09; encontrado: 178.65.
Cap-168 Se preparó Cap-168 racémico a partir de ácido Boc-aminoindano-l-carboxílico racémico de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación de Cap-167. El producto bruto se empleó como tal .
Cap-169 Se colocó una mezcla de clorhidrato de ácido 2-amino-2-feniIpropanoico (5.0 g, 2.5 mmol) , formaldehído (15 mi, 37% en agua), HC1 1N (15 mi) y Pd al 10%/C (1.32 g) en MeOH (60 mi) en un frasco de Parr y se agitó en hidrógeno (379.11 kPa) durante 4 días. La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas (Celite®) y se concentró al vacío. El residuo se suspendió en MeOH y se purificó por HPLC preparativa de fase inversa (MeOH/agua/TFA) proporcionando la sal TFA de Cap-169 como un semisólido viscoso (2.1 g) . RM de XH (CDC13, d = 7.26 ppm, 500 MHz) : 7.58-7.52 (m, 2 H) , 7.39-7.33 (m, 3H) , 2.86 (s ancho, 3H) , 2.47 (s ancho, 3H) , 1.93 (s, 3H) . CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + CnHi6 02 : 194.12; encontrado: 194.12.
Cap-170 A ácido (S) -2-amino-2- (tetrahidro-2H-piran-4-il) acético (505 mg; 3.18 mmol; obtenido de Astatech) en agua (15ml) se añadió carbonato sódico (673 mg; 6.35 mmol) y la mezcla resultante se enfrió hasta 0°C momento en el que se añadió cloroformiato de metilo (0.26ml; 3.33mmol) gota a gota durante 5 minutos. Se dejó agitando la reacción durante 18 horas llegando lentamente a temperatura ambiente a medida que se fundía el baño de hielo. La mezcla de reacción se repartió entonces entre HC1 1N y acetato de etilo. La fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo de nuevo con dos porciones más de acetato de etilo. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron al vacío proporcionando Cap-170 un residuo incoloro. RM de ? (500 MHz , DMS0-d6) d ppm 12.65 (1 H, s ancho), 7.44 (1 H, d, J=8.24 Hz) , 3.77 - 3.95 (3 H, m) , 3.54 (3 H, s) , 3.11 - 3.26 (2 H, m) , 1.82 - 1.95 (1 H, m) , 1.41 - 1.55 (2 H, m) , 1.21 - 1.39 (2 H, m) ; CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C9Hi6N05 : 218.1; encontrado 218.1.
Cap-171 Una solución de 2 - (benciloxicarbonilamino) -2 - (oxetan-3-iliden) acetato de metilo (200 mg, 0.721 mmol; II Fármaco (2001), 56, 609-613) en acetato de etilo (7 mi) y CH2C12 (4.00 mi) se desgasificó burbujeando nitrógeno durante lOmin. Se añadieron entonces dicarbonato de dimetilo (0.116 ml, 1.082 mmol) y Pd/C (20 mg, 0.019 mmol) , la mezcla de reacción se ajustó bajo un globo de hidrógeno y se dejó agitando a temperatura ambiente durante la noche momento en el que la TLC (95:5 CH2C12 / MeOH: visualizada con tinción realizada en lg de Ce(NH4)2S04, 6g de molibdato amónico, 6 mi de ácido sulfúrico y 100 mi de agua) indicó la conversión completa. La reacción se filtró a través de Celite y se concentró. El residuo se purificó por Biotage (cada con diclorometano en 25 de muestra; elución en columna 25S con diclorometano para 3CV luego 0 a 5% de MeOH / diclorometano sobre 250ml luego mantenido a 5% de MeOH / diclorometano para 250ml; fracciones de 9 mi) . Las fracciones obtenidas que contenían material deseado y se concentraron hasta 120 mg (81%) de 2- (metoxicarbonilamino) -2- (oxetan-3-il) acetato de metilo como un aceite incoloro. RMN de 1H (500 MHz, CL0R0F0RM0-D) d ppm 3.29 - 3.40 (m, J=6.71 Hz, 1 H) 3.70 (s, 3 H) 3.74 (s, 3 H) 4.55 (t, J=6.41 Hz, 1 H) 4.58 - 4.68 (m, 2 H) 4.67 - 4.78 (m, 2 H) 5.31 (s ancho, 1 H) . CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C8H14N05 : 204.2; encontrado 204.0.
Se añadió a 2- (metoxicarbonilamino) -2- (oxetan-3-il) acetato de metilo (50 mg, 0.246 mmol) en THF (2 mi) y agua (0.5 mi) hidróxido de litio monohidratado (10.33 mg, 0.246 mmol) . La solución resultante se dejó agitando durante la noche a temperatura ambiente. La TLC (1:1 EA / Hex; tinción de Hanessian [lg de Ce(NH4)2S04, 6 g de molibdato amónico, 6 ml de ácido sulfúrico y 100 mi de agua] ) indicó que quedaba -10% de material de partida. Se añadieron otros 3 mg de LiOH y se dejó agitando durante la noche momento en el que la TLC mostró que no quedaba material de partida. Se concentró al vacío y se colocó en alto vacío durante la noche proporcionando 55 mg de 2- (metoxicarbonilamino) -2- (oxetan-3-il) acetato de litio como un sólido incoloro. RMN de 1H (500 MHz, MeOD) d ppm 3.39 - 3.47 (m, 1 H) 3.67 (s, 3 H) 4.28 (d, J=7.93 Hz, 1 H) 4.64 (t, J=6.26 Hz , 1 H) 4.68 (t, J=l .02 Hz , 1 H) 4.73 (d, J=7.63 Hz, 2 H) .
Cap-172 Cap-172, etapa a La siguiente etapa de diazotación se adaptó de Barton, A. ; Breukelman, S. P . ; Kaye , P. T . ; Meakins, G. D.; Morgan, D. J. J. C. S. Perkin Trans I 1982, 159-164: Se añadió una solución de NaN02 (166 mg, 2.4 mmol) en agua (0.6 mi) a una solución agitada, fría (0 °C) de 2-amino- 5 - et i 1 - 1 , 3 - 1 iazol - 4 -carboxilato de metilo (186 mg, 1.0 mmol) , CuS04»5H20 (330 mg, 1.32 mmol) , NaCl (260 mg , 4.45 mmol) y H2S04 (5.5 mi) en agua (7.5 mi) . La mezcla se agitó a 0 °C durante 45 min y se dejó calentar hasta temperatura ambiente donde se agitó durante otra 1 h antes de añadir CuCl (118 mg) . Esta mezcla se agitó de nuevo a temperatura ambiente durante 16 h antes de diluirse con salmuera y extraerse con éter dos veces. Las fases orgánicas se reunieron, se secaron sobre MgS04 y se concentraron dando 2 - cloro- 5 -etiltiazol -4 -carboxilato de metilo (es decir, Cap- 172 , etapa a) (175 mg, 85%) como un aceite naranja (80% de pureza) que se usó directamente en la siguiente reacción. TR = 1.99 min (Condición-MDl) ; CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C7H9C1N02S : 206.01; encontrado: 206.05.
Cap-172 A una solución de 2 - cloro- 5 -eti 11iazol - 4 -carboxilato de metilo (175 mg) en THF/H2O/Me0H (20 mi/ 3 mi/ 12 mi) se añadió LiOH (305 mg, 12.76 mmol) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche antes de concentrar y neutralizar con HCl 1N en éter (25 mi) . El residuo se extrajo dos veces con acetato de etilo y las fases orgánicas se reunieron, se secaron sobre MgS04 y se evaporaron proporcionando Cap-172 (60 mg, 74%) como un sólido rojo que se usó sin purificación posterior. RMN de ? (300 MHz, DMS0-d6) d ppm 13.03-13.42 (1 H, m) , 3.16 (2 H, q, J = 7.4 Hz) , 1.23 (3 H , t , J = 7.5 Hz). TR = 1.78 min (Condición-MDl) ; CL/EM: Análisis calculado para [M+H]+ C6H7C1N02S: 191.99; encontrado: 191.99.
Cap-173 La siguiente etapa de diazotación se adaptó de Barton, A.; Breukelman, S. P . ; Kaye, P. T . ; Meakins, G. D . ; Morgan, D. J. J". C. S. Perkin Trans I 1982, 159-164: Se añadió una solución de NaN02 (150 mg, 2.17 mmol) en agua (1.0 mi) gota a gota a una solución agitada, fría (0 °C) de 2- amino-5-etil-l, 3-tiazol-4-carboxilato de metilo (186 mg, 1.0 mmol) en H3P02 al 50% (3.2 mi) . La mezcla se agitó a 0 °C durante 1 h y se dejó calentar hasta temperatura ambiente donde se agitó durante otras 2h. Después de volver a enfriar hasta 0 °C, la mezcla se trató lentamente con una solución de NaOH (85 mg) en agua (10 mi) . La mezcla se diluyó entonces con solución saturada de NaHC03 y se extrajo dos veces con éter. Las fases orgánicas se reunieron, se secaron sobre MgS0 y se concentraron dando 5-etiltiazol-4-carboxilato de metilo (es decir, Cap-173, etapa a) (134 mg, 78%) como un aceite naranja (85% de pureza) que se usó directamente en la siguiente reacción. TR = 1.58 min (Condición-MDl) ; CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C7H10NO2S : 172.05; encontrado: 172.05.
Cap-173 A una solución de 5-etiltiazol-4-carboxilato de metilo (134 mg) en THF/H20/MeOH (18 mi/ 2.7 mi/ 11 mi) se añadió LiOH (281 mg, 11.74 mmol) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche antes de concentrar y neutralizar con HCl 1N en éter (25 mi) . El residuo se extrajo dos veces con acetato de etilo y las fases orgánicas se reunieron, se secaron sobre MgS04 y se evaporaron proporcionando Cap-173 (90 mg, 73%) como un sólido naranja que se usó sin purificación posterior. RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) d ppm 12.74-13.04 (1 H, m) , 3.20 (2 H, q, J = 7.3 Hz) , 1.25 (3 H, t, J = 7.5 Hz) . TR = 1.27 min (Condición- MD1) ; CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C6H8N02S : 158.03; encontrado: 158.04.
Cap-174 Se añadió anhídrido tríflico (5.0 g, 18.0 mmol) a a gota a una solución fría (0 °C) de 3 -hidroxipicolinato metilo (2.5 g, 16.3 mmol) y TEA (2.5 mi, 18.0 mmol) en CH2C12 (80 mi) . La mezcla se agitó a 0 °C durante lh antes de dejar calentar hasta temperatura ambiente, momento en el que se agitó durante una hora más. La mezcla se inactivo entonces con solución saturada de NaHC03 (40 mi) y la fase orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04 y se concentró dando 3- (trifluorometilsulfoniloxi) picolinató de metilo (es decir, Cap-174, etapa a) (3.38 g, 73%) como un aceite marrón oscuro (>95% de pureza) que se usó directamente sin purificación posterior. RMN de XH (300 MHz , CDC13) d ppm 8.72-8.79 (1 H, m) , 7.71 (1 H, d, J = 1.5 Hz) , 7.58-7.65 (1 H, m) , 4.04 (3 H, s) . TR = 1.93 min (Condición-MDl) ; CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C8H7F3 05S : 286.00; encontrado: 286.08.
Cap-174 A una solución de 3- (trifluorometilsulfoniloxi) -picolinató de metilo (570 mg, 2.0 mmol) en DMF (20 mi) se añadió LiCl (254 mg, 6.0 mmol), tributil (vinil ) estannano (761 mg, 2.4 mmol) y dicloruro de bis (trifenilfosfina) paladio (42 mg, 0.06 mmol) . La mezcla se calentó a 100 °C durante la noche antes d añadir una solución saturada de KF (20 mi) a la mezcla de reacción a temperatura ambiente. Esta mezcla se agitó durante 4 h antes de filtrar a través de tierra de diatomeas (Celite®) y el lecho se lavó con acetato de etilo. La fase acuosa del filtrado se separó entonces y se concentró al vacío. El residuo se trató con HC1 4N en dioxanos (5 mi) y la mezcla resultante se extrajo con metanol, se filtró y se evaporó proporcionando Cap-174 (260 mg) como un sólido verde que estaba ligeramente contaminado con sales inorgánicas pero que se usó sin purificación posterior. RMN de 1H (300 MHz , DMS0-d6) d ppm 8.21 (1 H, d, J = 3.7 Hz) , 7.81-7.90 (1 H, m) , 7.09 (1 H, dd, J = 7.7, 4.8 Hz) , 6.98 (1 H, dd, J = 17.9, 11.3 Hz) , 5.74 (1 H, dd, J = 17.9, 1.5 Hz) , 5.20 (1 H, d, J" = 11.0 Hz) . TR = 0.39 min (Condición-MDl) ; CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C8H8N02 : 150.06; encontrado: 150.07.
Cap-175 Cap-175, etapa a A una solución de 3 - (trifluorometilsulfoniloxi) -picolinato de metilo (es decir, Cap 173, etapa a) (570 mg, 2.0 mmol) , un intermedio en la preparación de Cap-174, en D F (20 mi) se añadió LiCl (254 mg, 6.0 mmol), tributil (vinil ) estannano (761 mg, 2.4 mmol) y dicloruro de bis (trifenilfosfina) aladio (42 mg, 0.06 mmol) . La mezcla se calentó a 100 °C durante 4 h antes de eliminar el disolvente al vacío. El residuo se suspendió en acetonitrilo (50 mi) y hexanos (50 mi) y la mezcla resultante se lavó dos veces con hexanos . Se separó entonces la fase de acetonitrilo, se filtró a través de Celite y se evaporó. La purificación del residuo por cromatografía ultrarrápida en un aparato Horizon (elución con gradiente de acetato de etilo al 25% en hexanos hasta acetato de etilo al 65% en hexanos) proporcionó 3-vinilpicolinato de metilo (es decir, Cap-175, etapa a) (130 mg, 40%) como un aceite amarillo. RMN de 1H (300 MHz, CDC13) d ppm 8.60 (1 H, dd, J = 4.6, 1.7 Hz), 7.94 (1 H, d, J = 7.7 Hz) , 7.33-7.51 (2 H, m) , 5.72 (1 H, d, J = 17.2 Hz) , 5.47 (1 H, d, J = 11.0 Hz) , 3.99 (3 H, s) . TR = 1.29 min (Condición-MD1) ; CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C9H10NO2 : 164.07; encontrado: 164.06.
Cap-175, etapa b Se añadió paladio sobre carbón (10%, 25 mg) a una solución de 3 -vinilpicolinato de metilo (120 mg, 0.74 mmol) en etanol (10 mi) . La suspensión se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de hidrógeno durante 1 h antes de filtrar a través de Celite y se lavó el lecho de tierra de diatomeas (Celite®) con metanol . El filtrado se concentró hasta sequedad proporcionando 3 -etilpicolinato de metilo (es decir, Cap-175, etapa b) que se llevó directamente a la siguiente reacción. TR = 1.15 min (Condición-MDl) ; CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C9Hi2N02: 166.09; encontrado: 166.09.
Cap- 175 una solución de 3 -etilpicolinato de metilo en THF/H20/MeOH (5 mi/ 0.75 mi/ 3 mi) se añadió LiOH (35 mg, 1.47 mmol) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 días antes de añadir más LiOH (80 mg) . Después de otras 24 horas más a temperatura ambiente, la mezcla se filtró y el disolvente se eliminó al vacío. El residuo se trató entonces con HCl 4N en dioxanos (5 mi) y la suspensión resultante se concentró hasta sequedad proporcionando Cap-175 como un sólido amarillo que se usó sin purificación posterior. RMN de H (300 MHz, DMSO-ds) d ppm 8.47 (1 H, dd, J = 4.8, 1.5 Hz) , 7.82-7.89 (1 H, m) , 7.53 (1 H, dd, J = 7.7, 4.8 Hz) , 2.82 (2 H, q, J = 7.3 Hz) , 1.17 (3 H, t, J = 7.5 Hz) . TR = 0.36 min (Condición-MDl); CL/EM: Análisis calculado para [M+H]+ CeHioNC : 152.07; encontrado: 152.10.
Cap-176 Cap-176, etapa a Se añadió una solución de 1 , 4-dioxaspiro [4.5] decan- 8-ona (15 g, 96 mmol) en EtOAc (150 mi) a una solución de 2-(benciloxicarbonilamino) -2- (dimetoxifosforil ) acetato de metilo (21.21 g, 64.0 mmol) en 1 , 1 , 3 , 3 -tetrametilguanidina (10.45 mi, 83 mmol) y EtOAc (150 mi). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 72 h y luego se diluyó con EtOAc (25 mi) . La fase orgánica se lavó con HC1 1N (75 mi) , H20 (100 mi) y salmuera (100 mi) , se secó (MgS04) , se filtró y se concentró. El residuo se purificó por Biotage (EtOAc al 5% hasta 25 %/Hexanos; 300g columna) . Las fracciones reunidas que contenían el producto se concentraron entonces al vacío y el residuo se volvió a cristalizar en hexanos/EtOAc dando cristales blancos que corresponden a 2- (benciloxicarbonilamino) -2- (1, 4-dioxaspiro [4.5] decan-8-iliden) acetato de metilo (6.2 g) RMN de *H (400 MHz , CDCl3-d) d ppm 7.30 - 7.44 (5 H, m) , 6.02 (1 H, s ancho), 5.15 (2 H, s) , 3.97 (4 H, s) , 3.76 (3 H, s ancho), 2.84 - 2.92 (2 H, m) , 2.47 (2 H, t, J=6.40 Hz) , 1.74 - 1.83 (4 H, m) . CL (Cond. OLI): TR = 2.89 min. CL/EM: Análisis calculado para [M+Na] + C19H23 Na06 : 745.21; encontrado: 745.47.
Cap 176, etapa b Se preparó el éster Cap 176, etapa b a partir del alqueno Cap 176, etapa a de acuerdo con el procedimiento de Burk, M. J. ; Gross, M. F. and Martínez J. P. (J". Am. Chem. Soc . , 1995, 117, 9375-9376 y referencias en el mismo) : Se cargó una botella a alta presión de 500 mi con el alqueno Cap 176, etapa a (3.5 g, 9.68 mmol) en MeOH desgasificado (200 mi) en una capa de N2. La solución se cargó entonces con tetraf luoroborato de ( - ) - 1 , 2 -bis ( (2S , 5S) -2 , 5 -dimet ilf osf olano) etano (ciclooctadieno) rodio (I) (0.108 g, 0.194 mmol) y la mezcla resultante se cubrió con N2 (3x) y se cargó con H2 (3x) . La solución se agitó vigorosamente a 482 kPa de H2 a temperatura ambiente durante 72 h. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo que quedó se suspendió en EtOAc. La solución pardusca se filtró entonces a través de un lecho de gel de sílice y se eluyó con EtOAc. El disolvente se concentró al vacio proporcionando un aceite transparente que correspondía al éster Cap 176, etapa b (3.4 g) , RMN de XH (500 MHz, CDClj-d) d ppm 7.28 - 7.43 (5 H, m) , 5.32 (1 H, d, J=9.16 Hz) , 5.06 -5.16 (2 H, m) , 4.37 (1 H, dd, J=9.00, 5.04 Hz), 3.92 (4 H, t, J=3.05 Hz) , 3.75 (3 H, s) , 1.64 - 1.92 (4 H, m) , 1.37 "- 1.60 (5 H, m) . CL (Cond. OLI) : TR = 1.95 min. CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + Ci9H26N06 : 364.18; encontrado: 364.27.
Cap 176, etapa c Se disolvió el éster Cap 176, etapa b (4.78 g, 13.15 mmol) en THF (15 mi) seguido por la adición secuencial de agua (10 mi), ácido acético glacial (26.4 mi, 460 mmol) y ácido dicloroacético (5.44 mi, 65.8 mmol) . La mezcla resultante se agitó durante 72 h a temperatura ambiente, y la reacción se inactivo mediante la adición lente de Na2C03 sólido con agitación vigorosa hasta que no fue visible la generación de gas. El producto bruto se extrajo en acetato de etilo al 10%-diclorometano y las fases orgánicas se reunieron, se secaron (MgS04) , se filtraron y concentraron. El residuo resultante se purificó por Biotage (EtOAc al 0 hasta 30%/Hex; 25 g de columna) proporcionando la cetona Cap 176, etapa c (3.86g) como un aceite transparente. RM de ""? (400 MHz, CDCl3-d) d ppm 7.28 - 7.41 (5 H, m) , 5.55 (1 H, d, J-=8.28 Hz) , 5.09 (2 H, s) , 4.46 (1 H, dd, J=8.16, 5.14 Hz) , 3.74 (3 H, s) , 2.18 - 2.46 (5 H, m) , 1.96 - 2.06 (1 H, m) , 1.90 (1 H, ddd, J=12.99, 5.96, 2.89 Hz) , 1.44 - 1.68 (2 H, m, J=12.36, 12.36, 12.36, 12.36, 4.77 Hz) . CL (Cond. OLI) : TR = 1.66 min. CL/EM: Análisis calculado para [M+Na] + Ci7H2i Na05: 342.13; encontrado: 342.10.
Cap 176, etapa d Se añadió Deoxo-Fluor® (3.13 mi, 16.97 mmol) a una solución de la cetona Cap 176, etapa c (2.71 g, 8.49 mmol) en CH2C12 (50 mi) seguido por la adición de una cantidad catalítica de EtOH (0.149 mi, 2.55 mmol) . La solución amarillenta resultante se agitó a ta durante la noche. La reacción se inactivo mediante la adición de NaHC03 acuoso saturado (25 mi) y la mezcla se extrajo con EtOAc (3X75 mi) ) . Las fases orgánicas reunidas se secaron (MgS04) , se filtraron y se secaron dando un aceite amarillento. El residuo se purificó por cromatografía en Biotage (EtOAc al 2% hasta 15%/Hex; 90g de columna) y se recuperó un sólido blanco correspondiente al difluoruro de difluoro aminoácido Cap 176, etapa d (1.5 g) . RMN de XH (400 MHz, CDCl3-d) d ppm 7.29 - 7.46 (5 H, m) , 5.34 (1 H, d, J=8.28 Hz) , 5.12 (2 H, s) , 4.41 (1 H, dd, J=8.66, 4.89 Hz), 3.77 (3 H, s) , 2.06 - 2.20 (2 H, m) , 1.83 - 1.98 (1 H, m) , 1.60 - 1.81 (4 H, m) , 1.38 - 1.55 (2 H, m) . RMN de 19F (376 MHz, CDCl3-d) d ppm -92.15 (1 F, d, J=237.55 Hz), -102.44 (1 F, d, .7=235.82 Hz). CL (Cond. OLI) : TR = 1.66 min. CL/EM: Análisis calculado para [2M+Na]+ C3 H42F4 2Na08 : 705.28; encontrado: 705.18.
Cap 176, etapa e Se disolvió el difluoruro Cap 176, etapa d (4 g( 11.72 mmol) en MeOH (120 mi) y se cargó con Pd/C (1.247 g, 1.172 mmol) . Se inyectó en la suspensión N2 (3x) y la mezcla de reacción se colocó bajo una presión de 101 kPa de H2 (globo) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 48 h. La suspensión se filtró entonces a través de un lecho de Celite y se concentró al vacío dando un aceite que corresponde al aminoácido Cap 176, etapa e (2.04 g) y que se usó sin purificación posterior. RMN de 1H (400 MHz , DMSO-d6) d ppm 3.62 (3 H, s) , 3.20 (1 H, d, J=5.77 Hz) , 1.91 - 2.09 (2 H, m) , 1.50 - 1.88 (7 H, m) , 1.20 - 1.45 (2 H, m) . RMN de 19F (376 MHz, DMSO-d6) d ppm -89.39 (1 F, d, J=232.35 Hz) , -100.07 (1 F , d, J=232.35 Hz) . RMN de 13C (101 MHz , DMSO-d6) d ppm 175.51 (1 C, s) , 124.10 (1 C, t, .7=241.21, 238.90 Hz), 57.74 (1 C, s) , 51.39 (1 C, s) , 39.23 (1 C, s ancho) , 32.02 - 33.83 (2 C, m) , 25.36 (1 C, d, J=10.02 Hz) , 23.74 (1 C, d, J"=9.25 Hz) . CL (Cond. OL2) : TR = 0.95 min . CL/EM: Análisis calculado para [2M+H]+ C18H3iF4 202 : 415.22; encontrado: 415.40.
Cap 176, etapa f Se añadió cloroformiato de metilo (1.495 mi, 19.30 mmol) a una solución de aminoácido Cap 176, etapa e (2 g, 9.65 mmol) y DIEA (6.74 mi, 38.6 mmol) en CH2C12 (100 mi) . La solución resultante se agitó a ta durante 3 h y se eliminaron los volátiles a presión reducida. El residuo se purificó por Biotage (EtOAc al 0% hasta 20%/Hex; 90 g de columna) . Se recuperó un aceite transparente que solidificó en reposo al vacío y que correspondía al carbamato Cap-176, etapa f (2.22 g) . RMN de 1H (500 MHz , CDCl3-d) d ppm 5.27 (1 H, d, J=8.55 Hz), 4.39 (1 H, dd, J=8.85, 4.88 Hz), 3.77 (3 H , s) , 3.70 (3 H, s) , 2.07 - 2.20 (2 H, m) , 1.84 - 1.96 (1 H, m) , 1.64 - 1.82 (4 H, m) , 1.39 - 1.51 (2 H, m) . RMN de 19F (471 MHz, CDCl3-d) d ppm -92.55 (1 F, d, J=237.13 Hz), -102.93 (1 F, d, J=237.12 Hz). RMN de 13C (126 MHz, CDCl3-d) d ppm 171.97 (1 C, s), 156.69 (1 C, s) , 119.77 - 125.59 (1 C, m) , 57.24 (1 C, s ancho), 52.48 (1 C, s ancho), 52.43 (1 C, s), 39.15 (1 C, s), 32.50 - 33.48 (2 C, m) , 25.30 (1 C, d, J=9.60 Hz), 24.03 (1 C, d, J"=9.60 Hz) . CL (Cond. OLI) : TR = 1.49 rain. CL/EM: Análisis calculado para [M+Na] + CnH17F2NNa04 : 288.10; encontrado: 288.03.
Cap-176 Se añadió una solución de LiOH (0.379 g, 15.83 mmol) en agua (25 mi) a una solución de carbamato Cap-176, etapa f (2.1 g, 7.92 mmol) en THF (75 mi) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. Se eliminó el THF al vacío y la fase acuosa restante se acidificó con solución de HC1 1N (2 mi) y luego se extrajo con EtOAc (2 X 50 mi) . Las fases orgánicas reunidas se secaron (MgS04) , se filtraron y se concentraron dando una espuma que correspondía al Cap- 176 (1.92 g) . RMN de XK (400 MHz , DMS0-d6) d ppm 12.73 (1 H, s), 7.50 (1 H, d, J"=8.78 Hz), 3.97 (1 H, dd, J=8.53, 6.02 Hz), 3.54 (3 H, s) , 1.92 - 2.08 (2 H, m) , 1.57 - 1.90 (5 H, m) , 1.34 - 1.48 (1 H, m) , 1.27 (1 H, qd, J=12.72, 3.26 Hz) . RMN de 19F (376 MHz, DMSO-d6) d ppm -89.62 (1 F, d, J=232.35 Hz) , -99.93 (1 F, d, J=232.35 Hz) . CL (Cond. OL2) : TR = 0.76 min. CL/EM: Análisis calculado para [M-H] + C10Hi F2NO4: 250.09 ; encontrado: 250.10.
EJEMPLOS La presente descripción se detallará ahora en relación con ciertas modalidades, las cuales no pretenden limitar su alcance. Al contrario, la presente descripción abarca todas las alternativas, modificaciones y equivalentes que puedan ser incluidos dentro del alcance de las reivindicaciones. Así, los siguientes ejemplos, que incluyen modalidades específicas, ilustrarán una práctica de la presente descripción, entendiéndose que los ejemplos se dan con fines ilustrativos de ciertas modalidades y se presentan para proporcionar lo que se cree que es la descripción más útil y fácilmente comprensible de sus procedimientos y aspectos conceptuales.
A no ser que se indique de otro modo, los porcentajes de las soluciones expresan una relación peso a volumen y las relaciones de las soluciones expresan una relación volumen a volumen. Los espectros de Resonancia Magnética Nuclear (RMN) se registraron en un espectrómetro Bruker a 300, 400 ó 500 MHz ; los desplazamientos químicos (d) se expresan en partes por millón .
El análisis de masas de baja resolución y la determinación de la pureza se llevaron a cabo en un sistema de CL Shimadzu acoplado con un sistema de EM Waters Micromass ZQ (Condición 1 y la) o de HPLC Waters Acquity con detección UV-Vis Water PDA y EM Waters ZQ (Condición 2). El tiempo de retención (TR) se obtuvo empleando las siguientes condiciones y se apreciará que los tiempos de retención pueden variar ligeramente entre aparatos : Condición 1 Columna = Phenomenex-Luna 3.0X 50 mm S10 % Inicial de B = 0 % Final de B = 100 Tiempo de gradiente = 3 min Tiempo de parada = 4 min Caudal = 4 ml/min Longitud de onda = 220 nm Disolvente A = TFA al 0.1% en metanol al 10%/H2O al 90% Disolvente B = TFA al 0.1% en metanol al 90%/H2O al 10% Condición la Columna = Phenomenex-Luna 4.6X 30 mm S10 % Inicial de B = 0 % Final de B = 100 Tiempo de gradiente = 3 min Tiempo de parada = 4 min Caudal = 4 ml/min Longitud de onda = 220 nm Disolvente A = TFA al 0.1% en metanol al 10%/H2O al 90% Disolvente B = TFA al 0.1% en metanol al 90%/H2O al 10% Condición 2 Columna = Waters Acquity BEH C18; 1.7 µ?? ; 150 X 2.1 mm ID; (a 35C) B al 10% mantenido 0-lmin B al 10-50% 0-25 min B al 50-98% 25-33 min B al 98% mantenido 32-35 min B al 98-10% 35.0-35.5 min B al 10% mantenido 35.5-40 min Caudal = 0.35 ml/min Longitud de onda = 254 nm Disolvente A = TFA al 0.05% en agua Disolvente B = TFA al 0.05% en CH3CN Las medidas del índice de homogeneidad se realizaron en un sistema de CL Shimadzu acoplado en las siguientes condiciones: Condición 3 Columna = Waters Sunfire C18, 4.6X150 mm, 3.5 µt? % Inicial de B = 10 % Final de B = 50 Tiempo de gradiente = 20 min Tiempo de parada = 25 min Caudal = 1 ml/min Longitud de onda = 220 & 254 nm Disolvente A = TFA al 0.1% en CH3CN al 5%/H20 al 95% Disolvente B = TFA al 0.1% en CH3CN al 95%/H20 al 5% Condición 3a Igual que Condición 3 con la excepción de que el Tiempo de parada = 50 min.
Condición 4 Columna = Waters Xbridge phenyl, 4.6X150 mm, 3 % Inicial de B = 10 % Final de B = 50 Tiempo de gradiente = 20 min Tiempo de parada = 25 min Caudal = 1 ml/min Longitud de onda = 220 & 254 nm Disolvente A = TFA al 0.1% en CH3CN al 5%/H20 al 95% Disolvente B = TFA al 0.1% en CH3CN al 95%/H20 al 5% Condición 4a Igual que Condición 4 con la excepción de que el Tiempo de parada = 40 min.
Ejemplo 1 Ejemplo 1, Etapa a Se añadió DMAP (2.833 g, 23.19 mmol) a solución en CH2C12 (40 mi) de 4, 5-dihidro-lH-pirazol-5-carboxilato de (S) -metilo (preparado de acuerdo con J. Am. Chem. Soc. 1997, 119, 8379-8380; 2.95 g, 23.02 mmol) y Boc20 (11.89 mi, 51.2 mmol) y se agitó en condiciones ambientales durante 22.5 horas. Se añadió más Boc20 (1.83 g) y se continuó agitando durante 15 horas. Se añadió gel de sílice a la mezcla de reacción y el disolvente se eliminó al vacío, y se sometió la malla resultante a una purificación en Biotage (300 g de gel de sílice; la columna se eluyó con EtOAc al 30-50%/hexanos) proporcionando el carbamato la como un aceite amarillo (3.956 g) . También se obtuvo una muestra de la pirazolina de partida, contaminada con el producto (695 mg) . R N de 1H (CDC13, d = 7.24 ppm, 400 MHz) : 6.80 (s, 1H) , 4.67 (dd, J = 12.6, 6.1 Hz, 1H) , 3.75 (s, 3H) , 3.22 (ddd, J = 18.5, 12.6, 1.4 Hz, 1H) , 2.94 (ddd, J = 18.5, 6.1, 1.7 Hz , 1H) , 1.5 (s, 9H) . CL/EM: Análisis calculado para [M+Na] + CioH16N2Na04 : 251.10; encontrado 251.26.
Ejemplo 1, Etapa b Se añadió cianoborohidruro sódico (0.769 g, 12.23 mmol) en porciones durante 1 minuto a una solución en ácido acético (7.0 mi) del carbamato la (1.0523 g, 4.61 mmol) y se agitó en condiciones ambientales durante 20 h. Se añadió formaldehído (1 mi de 37% en agua) gota a gota durante 4 min, y se continuó agitando durante 4.5 h. El componente volátil se eliminó al vacío y el residuo se trató con NaHC03 saturado (10 mi) y CH2C12 (30 mi), y la mezcla se agitó y se separaron las fases. La fase orgánica se lavó con otra solución saturada de NaHC03 (10 mi) , se secó (MgS0 ) y se concentró al vacío. El material bruto resultante se purificó con una Biotage (240 g de gel de sílice; la muestra se cargó con CH2C12; eluyó con EtOAc al 60-100%/hexanos) proporcionando el carbamato Ib como un aceite incoloro (861 mg) . MN de XH (CDC13, d = 7.24 ppm, 400 MHz) : 4.39 (t ancho aparente, J = 7.7, 1H) , 3.74 (s, 3H) , 3.15-3.02 (m, 2H) , 2.64 (s, 3H) , 2.48-2.40 (m, 1H) , 2.30-2.21 (m, 1H) , 1.45 (s, 9H) . CL/EM: Análisis calculado para [M+Na] + CnH20N2NaO4 : 267.13; encontrado 267.28. añadió una solución acuosa (5 mi) de LiOH (0.1459 g, 6.09 mmol) a una solución en metanol (5 mi) del éster Ib (0.76 g, 3.11 mmol) y se agitó en condiciones ambientales durante ~7 h. La mezcla de reacción se enfrió con un baño de hielo-agua, y se añadió, gota a gota, HC1/H20 (3 mi de 1.00 N; 3.0 mmol) y se agitó durante unos pocos minutos. A continuación, el componente volátil se eliminó al vacío y el aceite viscoso resultante se expuso a alto vacío proporcionando carboxilato de le como una espuma blanca, que se empleó como tal para la próxima etapa. RMN de 1H (DMSO-d6, d = 2.50 ppm, 400 MHz) para la muestra bruta: 3.98 (dd, J = 8.5, 6.3, 1H) , 2.86-2.74 (m, 2H) , 2.45 (s, 3H) , 2.25-2.17 (m, 1H) , 2.10-2.02 (m, 1H) , 1.35 (s, 9H) . CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C10H19N2O4 : 231.13; encontrado 231.21.
Ejemplo 1, Etapa d Se añadió 1, 1' - (bifenil-4, 4 ' -diil)bis (2-bromoetanona) (0.601 g, 1.517 mmol) en un lote a una solución en DMF (10 mi) de carboxilato de le (3.1 mmol) y DIEA (0.55 mi, 3.15 mmol), y la mezcla heterogénea resultante se agitó en condiciones ambientales durante -20.6 h, después de lo cual se obtuvo una apariencia homogénea. componente volátil se eliminó vacío, y el residuo se repartió entre CH2C12 (100 mi) , agua (20 mi) y solución saturada de NaHC03 (1 mi) . Se obtuvo una fase orgánica de aspecto inusualmente lechoso que requirió más cantidad de la habitual de MgS0 para secar. La fase orgánica se concentró al vacío, y el residuo resultante se sometió a una purificación en Biotage (110 g de gel de sílice; se usó CH2C12 para cargar la muestra; EtOAc al 50-100%/hexanos para eliminar las impurezas de mayor TR, seguido por MeOH al 10%/EtOAc) proporcionando el diéster Id como una espuma amarilla (808 mg) . El análisis de RM de XK indicó que la muestra contenía disolventes residuales en una relación molar 1.0:0.2:0.1 de producto/DMF/EtOAc, y que estaban presentes impurezas sin identificar de acuerdo con el análisis CL/EM. RMN de ¾ (DMSO-d6, d = 2.50 ppm, 400 MHz) : 8.11 (d, J = 8.3, 4H) , 7.97 (d, J = 8.6, 4H) , 5.68 (d, J = 17.1, 2H) , 5.57 (d, J = 16.9, 2H) , 4.51 (dd, J = 8.9, 6.4, 2H) , 3.05-2.95 (m, 4H) , 2.64-2.55 (m, 2H) , 2.48 (s, 6H) , 2.45-2.37 (m, 2H) , 1.39 (s, 18H) . CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C36H47 Oio: 695.33; encontrado 695.35.
Ejemplo 1, Etapa e añadió acetato amónico (1.75 g, 22.7 mmol) a una solución en xileno (11 mi) del cetoéster Id (802 mg) , y el matraz de reacción se tapó y se calentó con un microondas a 140 °C durante 90 min proporcionando una mezcla heterogénea rojiza con un alquitrán rojo oscuro sedimentado en el fondo del matraz de reacción. La mezcla de reacción se trató con CH2C12 (90 mi), MeOH (3 mi), agua (60 mi), NaHC03 saturado (6 mi) , y se agitó intensamente para efectuar la total disolución y luego se separaron las fases. La fase acuosa se lavó con CH2C12 (45 mi) , y la fase orgánica reunida se secó (MgS04) y se concentró al vacío. El material residual se disolvió en MeOH y se purificó con una HPLC de fase inversa (H20/MeOH/TFA) , y el eluato de la HPLC se trató con NH3 2N en exceso/MeOH para inactivar el TFA. El componente volátil se eliminó al vacío, y el material resultante se purificó entre MeOH al 10%/CH2C12 (60 mi) , agua (20 mi) y NaHC03 saturado (2 mi) . La fase acuosa se lavó entonces con MeOH al 20%/CHCl3 (25 mi) para ayudar a solubillzar la suspensión de sólido. La fase orgánica reunida se secó (MgS04) y se evaporó al vacío proporcionando el imidazol le como un sólido blanquecino (287 mg; El análisis de RMN de E indicó que la muestra contenía ~1 mol. equiv. de MeOH) . RMN de ?? (DMSO-d6, d = 2.50 ppm, 400 MHz) : 12.34 (s ancho, 0.36H), 11.88 (s ancho, 1.64H), 7.85-7.64 (m, 8H) , 7.54-7.52 (m, 1.62H), 7.37-7.35 (m, 0.38H), 4.94-4.89 (m, 2H) , 3.14-3.08 (m, 2H) , 3.05-2.98 (m, 2H) , 2.62 (s ancho, 6H) , -2.47 (m, 4H; parcialmente solapado con la señal del disolvente), 1.30/1.26 (2 s parcialmente solapados, 18H) . CL/EM: Análisis calculado para [M+H]+ C36H47N804: 655.37; encontrado 655.28.
Ejemplo 1, Etapa f Se añadieron HC1 4.0 N/dioxano (5 mi, 20 mmol) y MeOH (1 mi) secuencialmente al carbamato le (276 mg) , y la mezcla se agitó en condiciones ambientales durante 4.5 h. El componente volátil se eliminó al vacío proporcionando la sal HC1 de la pirazolidina lf como sólido blanquecino (270 mg) , que se sometió a la etapa siguiente sin purificación. El análisis por RM de 1H indicó que la muestra contenía impurezas no identificadas minoritarias. RMN de 1H (DMS0-d6< d = 2.50 ppm, 400 MHz) : 8.20 (s, 2H) , 8.07 (d, J = 8.3, 4H) , 7.94 (d, J = 8.6, 4H) , 7.55 (s ancho, ~1.6H) , 5.17 (s ancho, 2H) , 3.06 (s, 6H) , 2.93-2.64 (m ancho, 4H) (Nota: no se pudieron elucidar las señales de CH2N en parte debido al ensanchamiento de la señal y solapamiento con la del agua) . CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C26H3iN8 : 455.27; encontrado 455.17.
Ejemplo 1 Se añadió DIEA (0.14 mi, 0.802 mmol) a una mezcla de pirazolidina lf (81 mg, 0.12 mmol), ácido (S)-2- (metoxicarbonilamino) -3-metilbutanoico (0.049 mg, 0.281 mmol) y HATU (97.7 mg, 0.257 mmol) en DMF (2 ml) , y la mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 36 min. La mayoría del componente volátil se eliminó al vacío, y el residuo se purificó con dos condiciones diferentes de HPLC de fase inversa (MeOH/agua/TFA seguido por CH3CN/agua/TFA) proporcionando la sal TFA del Ejemplo 1 como una espuma blanquecina (30.3 mg) . RM de 1H (DMS0-d6 con inyección de D20, d = 2.50 ppm, 400 MHz) : 8.13-7.96 (m ancho, 2H) , 7.91 (s aparente, 8H) , 5.29 (m, 2H) , 4.71/4.52 (dos s ancho solapando, 2H) , 3.52 (s, 6H) , 3.25-2.90 (m ancho, 4.66H), 2.82-2.59 ( solapamiento de m y s, s está en 2.66, 8.34H), 2.35-2.23 (m, 1H) , 2.13-2.04 (m, 2H) , 0.92-0.67 (m ancho solapado, 12H) . CL (Condición 3 y 4) : índice de homogeneidad >95%. CL/EM (Condición 1) : TR = 1.80 min. CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C40H53 10O6 : 769.41; encontrado 769.34.
Ejemplo 2-6 Los Ejemplo 2-4 se prepararon como sales TFA a partir del intermedio lf y los ácidos apropiados de acuerdo con el procedimiento descrito para la síntesis del Ejemplo 1. El Ejemplo 5 se aisló durante la preparación del Ejemplo 4, presumiblemente originándose de una epimerización del centro bencílico durante la etapa de acoplamiento. El Ejemplo 6 (sal TFA) se preparó de forma similar a partir del intermedio lf empleando una mezcla equimolar de ácido ( S) -2 - (metoxicarbonilamino) - 3 -metilbutanoico y ácido ( S) -2 - (metoxicarbonilamino) - 2 -( tetrahidro-2H-piran- - il ) acético para la etapa de acoplamiento y separando la mezcla estadística resultante de productos por la técnica de HPLC que se describe para el Ejemplo-1. : : : 25 Ejemplo 7 El Ejemplo 3 (sal TFA; 45.6 mg; 0.047 mmol) se desbasificó (1 g MCX; lavado con MeOH; elución con NH3 2.0 M/MeOH) , y el eluato se concentró y se expuso a alto vacío durante ~ 2 horas. Se añadieron NCS (0.0153 g, 0.112 mmol) y DMF (1.5 mi) al material anterior, y la mezcla de reacción se calentó a 50 °C durante -21 horas. Después de esto, se enfrió hasta temperatura ambiente, se diluyó con MeOH y se purificó con una HPLC de fase inversa (MeOH/agua/TFA) proporcionando la sal TFA del Ejemplo 7 como una espuma amarillo claro (32.7 mg) . RMN de 1H (DMSO-d6, d = 2.50 ppm, 400 MHz) : 7.88-7.82 (m, 8H) , 7.27-6.89 (dos m ancho, 2H) , 5.12-4.98 (m ancho, 2H) , 4.70 (m ancho, 1.52H), 4.46 (m ancho, 0.48H) , 3.56-2.50 (dos ? s' solapados con 'm' , 19.5H) , 2.03 (m ancho, 0.5H) , 1.74-1.38 (m, 4?) , 0.90 (m, 6?) . CL (Condición 3a y 4a) : índice de homogeneidad >95%. CL/EM (Condición la) : Rt = 2.87 min. CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C38H47Cl2 io06 : 809.31; encontrado 809.29.
Ejemplo 7.1 El Ejemplo 7.1 (sal TFA) se preparó a partir del Ejemplo 1 de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo 7. CL (Condición 3a y 4a) : índice de homogeneidad >95%. CL/EM (Condición la): TR = 2.99 min. CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C4oH51Cl2 io06 : 837.34; encontrado 837.34.
Ejemplo 8 Ejemplo 8, etapa a Se añadió una solución en agua (1.5 mi) de LiOH (0.030 g, 1.25 mmol) a una solución en MeOH (1.5 mi) del éster Ib (0.157 g, 0.643 mmol), y se agitó a temperatura ambiente durante 3.5 h. Se eliminó la mayoría del componente volátil al vacío y el residuo se diluyó con agua (10 mi) , se añadieron gota a gota 1.3 mi de HC1 1N, y luego se extrajo con EtOAc (25 mi, 4x) . La fase orgánica reunida se secó (MgS04) y se evaporó al vacío proporcionando el ácido 8a como un aceite incoloro, que solidificó parcialmente tras una exposición prolongada a alto vacío (115.8 mg) . RMN de ""? (DMS0-d6 d = 2.50 ppm, 400 MHz) : 4.19 (dd, J = 8.8, 6.8, 1H) , 2.96-2.86 (m, 2H) , 2.47-2.39 [solapado (m, 1H) y (s, 3H) ] , 2.16-2.07 (m, 1H) , 1.36 (s, 9H) . [Apréciese que el perfil de RMN de 1H es diferente del de su análogo carboxilato de litio le] Ejemplo 8, etapa b Se añadió gota a gota DIEA (0.45 mi, 2.58 mmol) durante 30 segundos a una mezcla de clorhidrato de 2-amino-l- (4 -bromofenil ) etanona (0.218 g, 0.871 mmol), el ácido 8a (0.20 g, 0.87 mmol) y HATU (0.331 g, 0.871 mmol) en DMF (3 mi) , y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 130 min. Se eliminó al vacío la mayoría del DFM y el residuo se repartió entre CH2C12 (50 mi) y agua (20 mi) . La fase orgánica se secó (MgS04) y se concentró al vacío. El material bruto se purificó con una Biotage (90 g de gel de sílice; la muestra se cargó con la ayuda de CH2C12; elución con EtOAc) proporcionando la cetoamida 8b como un sólido blanquecino (317 mg) . RMN de ^ (DMSO-d6, d = 2.50 ppm, 400 MHz) : 8.25 (t ancho aparente, J = 5.6, 1H) , 7.93 (d, J = 8.6, 2H) , 7.76 (d, J = 8.5, 2H) , 4.67 (dd, J = 18.4, 5.8, 1H) , 4.56 (dd, J = 18.4, 5.5, 1H) , 4.34 (dd, J = 8.5, 6.8, 1H) , 2.90 (m, 2H) , 2.47 (s, 3H) , 2.40-2.32 (m, 1H) , 2.16-2.08 (m, 1H) , 1.37 (s, 9H) . CL/EM: Análisis calculado para [M+Na] + Ci8H2581Br 3 a04 : 450.08; encontrado 450.07.
Ejemplo 8, Etapa c Se añadió acetato amónico (0.388 g, 5.03 mmol) a un tubo a presión de 15 mi que contenía una mezcla de la cetoamida 8b (0.313 g, 0.734 mmol) y xilenos (7.0 mi), y se tapó el tubo a presión y se calentó con un baño de aceite equilibrado entre 133-135 °C durante 130 min. La mayoría del componente volátil se eliminó al vacío, y el residuo se repartió entre CH2C12 (50 mi) , agua (20 mi) y solución saturada de NaHC03 (2 mi) . La fase orgánica se secó (MgS04) , se concentró al vacío y se purificó con una Biotage (40 g de gel de sílice; la muestra se cargó en la columna con CH2CI2; elución con EtOAc) proporcionando el imidazol 8c como un sólido amarillo oscuro (202 mg) . RMN de ^ (DMS0-d6, d = 2.50 ppm, 400 MHz): 12.36 (s ancho, 0.11H), 11.93 (s ancho, 0.89H), 7.71-7.49 (m, 5H) , 4.89 (t aparente, J = 7.6, 1H) , 3.11-2.97 (m, 2H) , 2.60 (s, 3H) , -2.46 (m ancho, parcialment solapado con la señal del disolvente, 2H) , 1.29/1.25 (dos solapados, 9H) . CL/EM: Análisis calculado para [M+H] Ci8H2481Br 404 : 409.11; encontrado 409.11.
Ejemplo 8, Etapa d Se añadió Pd(Ph3P)4 (0.025 g, 0.022 mmol) a una solución en DMF (3 mi) del bromuro 8c (0.19 g, 0.466 mmol) y 1 , 2 -bis (trimetilestannil) etino (0.081 g, 0.230 mmol) en un vial. Se burbujeó nitrógeno a través de la mezcla de reacción durante 1.5 minutos y se tapó el vial y se calentó a 90 °C bajo un blindaje contra explosiones durante 16.5 horas. La mayoría del componente volátil se eliminó al vacío y el residuo se purificó con una Biotage (30 g de gel de sílice; MeOH al 0-30%/EtOAc) proporcionando el alquino 8d, que contenía disolvente residual e impurezas sin identificar, como una espuma amarilla/sólido (108 mg) . RMN de 1H (DMSO-d6, d = 2.50 ppm, 400 MHz) : 12.41 (s, 0.26H), 11.97 (s, 1.74H), 7.81-7.40 (m, 10H) , 4.90 (t aparente, J = 7.7, 2H) , 3.13-2.98 (m, 4H) , 2.61 (s, 6H) , ~2.47 (m, parcialmente solapado con la señal del disolvente, 4H) , 1.30/1.26 (dos s solapados, 18H) . CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C38H47N804 : 697.37; encontrado 697.44.
Ejemplo 8 El Ejemplo 8 (sal TFA) se preparó a partir del carbamato 8d de acuerdo con el procedimiento descrito para la síntesis del Ejemplo 1 (sal TFA) a partir del carbamato le y empleando el ácido apropiado. CL (Condición 3 y 4) : índice de homogeneidad >95%. CL/EM {Condición la) : TR = 2.01 min. CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C42H53Nio06 : 793.41; encontrado 793.39.
Ejemplo 9 Ejemplo 9, Etapa a El bromuro 9a se preparó partiendo de 2 -bromo- 1- (4 - bromofenil ) etanona y ácido ( IR, 3S , 5R) - 2 -metil - 2 - azabiciclo [3.1.0] hexano-3 -carboxílico (véase la solicitud de patente US20090068140 para esta preparación)- de acuerdo con el procedimiento descrito para la síntesis del intermedio le. RMN de ¾ (DMSO-d6, d = 2.50 ppm, 400 MHz) : 12.21/11.93 (dos s ancho, 1H) , 7.70-7.47 (m, 4.87H), 7.29 (d, J = 1.6, 0.13H) , 4.59 (m ancho, 1H) , 3.41 (m ancho, 1H) , 2.37-2.17 (m ancho, 2H) , 1.62 (m ancho, 1H) , 1.22 (s muy ancho, 9H) , 0.75 (m, 1H) , 0.54 (m, 1H) . CL/EM (Condición 1) : TR = 1.87 min. CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C19H2381BrN302 : 406.10; encontrado 406.07.
Ejemplo 9, Etapa b Se disolvió el carbamato 9a (4.13 g, 10.22 mmol) en dioxano (100 mi) , y se añadió HC1 4N en dioxano (40 mi, 160 mmol) lentamente y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. Todo el componente volátil se eliminó al vacío proporcionando la pirrolidina 9b/2HCl como un sólido amarillo (3.8 g) . RMN de 1H (DMSO-d6, 5 = 2.50 ppm, 400 MHz) : 10.38/9.94 (dos s ancho solapando, ~2H) , 7.92 (s, 1H) , 7.78 (d, J = 8.5, 2H) , 7.63 (d, J = 8.6, 2H) , 4.68 (m, 1H) , 3.39 (m, 1H) , -2.5 ( vm' parcialmente solapado con la señal del disolvente, 2H) , 1.91 (m, 1H) , 1.11 (m, 1H) , 0.83 (m, 1H) . CL/EM {Condición 1) : TR = 1.39 min. CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C14H1579BrN3 : 304.04; encontrado 304.10.
Ejemplo 9, Etapa c Se añadió gota a gota cloroformiato de bencilo (0.5 ml, 3.33 mmol) durante ~ lmin a una mezcla enfriada (hielo/agua) de la pirrolidina 9b / (2HC1) (1.05 g, 2.78 mmol), carbonato sódico (0.301 g, 2.84 mmol) en dioxano (10 mi) y agua (10.00 mi) y se agitó la mezcla semiheterogénea a la misma temperatura durante 15 horas. Puesto que el análisis por CL/EM indicó la presencia del subproducto bis-Cbz además del producto deseado, se añadió NH3/MeOH (2 N, 12 mi) y se continuó agitando durante 5 horas. La mezcla de reacción se concentró hasta 1/3 de su volumen, se repartió entre CH2C12 (50 mi) y agua (20 mi) , y la fase orgánica se secó (MgS04) y se evaporó al vacío. El material bruto resultante se purificó con una Biotage (80 g de gel de sílice; la muestra se cargó con CH2C12; EtOAc al 60-70%/hexanos) proporcionando el bromuro 9c como una espuma blanquecina (0.992 g) . MN de ?? (DMSO-d6í d = 2.50 ppm, 400 MHz) : 12.24/12.02 (dos s ancho, 1H) , 7.71(d, J = 8.3, 1.8H) , 7.61-6.97 (m ancho, 8.2H) , 5.15-4.89 (m, 2H) , 4.80-4.72 (m, 1H) , 3.48 (m, 1H) , 2.44-2.26 (m, 2H) , 1.68 (m, 1H) , 0.85-0.80 (m, 1H) , 0.62-0.59 (m, 1H) . CL/EM (Condición 1) : TR = 2.06 min. CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C22H2i81BrN302 : 440.08; encontrado 440.09.
Ejemplo 9, Etapa d añadió Pd(Ph3P)4 (0.105 g, 0.091 mmol) a una mezcla del bromuro 9c (0.988 g, 2.254 mmol) , 4,4,4' ,4' ,5, 5,5', 5' -octametil-2 , 21 -bi (1,3, 2 -dioxaborolano) (1.167 g, 4.60 mmol), acetato potásico (0.582 g, 5.93 mmól) y dioxano (19 mi) en un tubo a presión de 75 mi. Se burbujeó nitrógeno a través de la mezcla durante 1 minuto, se tapó el recipiente y se calentó con un baño de aceite a 80 °C durante 15.3 horas. La mezcla heterogénea amarilla se retiró del baño de calentamiento, el componente volátil se eliminó al vacío, y se preparó una malla de gel de sílice a partir del residuo y se purificó con una Biotage (EtOAc al 60-70%/hexanos) . El material resultante se disolvió en CH2CI2 (60 mi), se lavó con agua (20 mi, 2x) , se secó (MgS04) y se evaporó al vacío proporcionando el boronato 9d como una espuma blanquecina (898.4 mg) . RMN de ?? (DMS0-d6, d = 2.50 ppm, 400 MHz) : 12.29 (s ancho, 0.14H) , 12.03 (s ancho, 0.86H) , 7.77 (d, J = 8.1, 1.71H) , 7.67-7.63 (m, 2.38H) , 7.57 (s, 1H) , 7.25 (s ancho, 5H) , 5.11-4.91 (m, 2H) , 4.81-4.73 (m, 1H) , 3.48 (m, 1H) , 2.37 (m, 2H) , 1.69 (m, 1H) , 1.30 (s, 12H) , 0.86-0.81 (m, 1H) , 0.62 -0.58 (m, 1H) . CL/EM (Condición 1) : TR = 2.29 min . CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C28H3311B 304 : 486.26 ; encontrado 486.24. [Nota: también se observó una variante hidrolizada con pinacol en la CL/EM a TR = 1.63 min] .
Eje plo 9, Etapa e Se añadió Pd(Ph3P)4 (0.023 g, 0.020 mmol) a una mezcla de bromuro 8c (0.1483g, 0.364 mmol), boronato 9d (0.205 g, 0.422 mmol) y NaHC03 (0.105 g, 1.250 mmol) en 1,2-dimetoxietano (2.4 mi) y agua (0.8 mi), se inyectó nitrógeno y se calentó a 80 °C durante 8 horas. La mayoría del componente volátil se eliminó al vacío y el residuo se repartió entre CH2C12 (50 mi) y agua (20 mi) . La fase orgánica se secó (MgS0 ) , se concentró al vacío y se purificó con una Biotage (40 g de gel de sílice; la muestra se cargó con CH2C12; eluyó con eOH al 0-10%/EtOAc) proporcionando el bifenilo 9e como una película amarillo claro que contenía EtOAc residual en una relación 2.5/1.0 producto a disolvente. Considerando el disolvente residual, la muestra tenía una masa efectiva de 126 mg. RMN de ?? (DMSO-d6, d = 2.50 ppm, 400 MHz) : 12.34 (s, 0.18H) , 12.24 (s, 0.17H), 11.99/11.89 (dos s ancho solapando, 1.65H), 7.90-7.53 (m, 10H) , 7.25 (m ancho, 5H) , 5.13-4.75 (m, 4H) , 3.52-3.48 (m, 1H) , 3.16-2.98 (m, 2H) , 2.62 (s, 3H) , 2.47-2.31 (m, 4H; parcialmente solapado con la señal del disolvente), 1.70 (m, 1H) , 1.30/1.27 (dos s solapando, 9H) , 0.87-0.81 (m, 1H) , 0.62 (m, 1H) . CL/EM (Condición 1) : TR = 1.99 min. CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C40H 4 7O4 : 686.35; encontrado 686.
Ejemplo 9, Etapa f Se añadió una suspensión de Pd/C (32.6 mg) en EtOH (1.0 mi) a una mezcla del carbamato 9e (0.127 g, 0.185 mmol) y K2C03 (0.0287 g, 0.208 mmol) en EtOH (2 mi) , y se agitó bajo un globo de hidrógeno durante ~5 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de un lecho corto de tierra de diatomeas (Celite ) , se lavo con MeOH y se concentro al vacio proporcionando la pirrolidina 9f como una película de sólido amarillo. La muestra pesaba 117.2 mg (que está por encima del valor teórico esperado, y posiblemente es un indicio de la presencia de KHC03 o K2C03) . El material se sometió a la etapa siguiente como tal. CL/EM (Condición 1) : TR = 1.67 min. CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C32H38 7O2 : 552.31; encontrado 552.30.
Ej e plo 9 El Ejemplo 9 (sal TFA) se preparó a partir de la pirrolidina 9f de acuerdo con la siguiente secuencia de tres etapas: (i) Se acopló la pirrolidina 9f con ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) -2- (tetrahidro-2H-piran-4-il) acético empleando el procedimiento descrito para el Ejemplo 1 con la excepción de que la purificación del material bruto se llevó a cabo de acuerdo con el procedimiento descrito para el intermedio le, incluyendo la etapa de desbasificación; (ii) la desprotección del grupo Boc se llevó a cabo de acuerdo con la preparación del intermedio lf; y, (iii) el producto resultante se acopló con ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) -3-metilbutanoico de acuerdo con el procedimiento descrito para el Ejemplo 1. R N de 1H (DMSO-d6 con inyección de D20, d = 2.50 ppm, 400 Hz) : 8.13-7.85 (m, 10H) , 5.29 (m, 1H) , 4.99 (m, 1H) , 4.79-4.36 ( t?' y 'd' solapados, J = 6.8 para vd' , 2H) , 3.85-3.81 (m, 3H) , 3.55 (s, 3H) , 3.52 (s, 3H) , 3.33-2.59 ( vm ancho' y s solapados, (s' está en 2.67, 9H) , 2.56-2.25 (m, 2H) , 2.12-2.04 (m, 2H) , 1.97-1.89 (m, 1H) , 1.48-1.32 (m, 4H) , 0.98-0.68 (m, 8H) . CL/EM (Condición la) : TR = 1.80 min. CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C43H54N9O7 : 808.41; encontrado 808.46. CL {Condición 3 y 4) : índice de homogeneidad >95%.
Ejemplo 10 Ejemplo 10, Etapa a Se añadió gota a gota durante 12 minutos una solución en DMF (24 mi) de hidrazina-1 , 2 -dicarboxilato de 2- bencilo 2-tert-butilo (4.871 g, 18.29 mmol) a una suspensión en DMF enfriada en hielo-agua (45 mi) de NaH (1.63 g, 40.8 mmol) . La mezcla heterogénea resultante se agitó durante 15 min, y se retiró el baño de enfriamiento y se continuó agitando durante 3.5 h. A continuación, se añadió gota a gota 1 , 3 -dibromopropano (2.5 mi, 24.48 mmol) durante 5 minutos a la mezcla heterogénea anterior, momento en el cual se observó una rigurosa generación de gas acompañada por la homogeneización gradual de la mezcla de reacción. La mezcla se agitó durante -18.5 h, se añadió MeOH en exceso, y el componente volátil se eliminó al vacío. El residuo se repartió entre CH2C12 (100 mi) y agua (20 mi) . La fase orgánica se lavó con agua (20 mi) , se secó (MgS0 ) , se concentró al vacío y el aceite resultante se sometió a una purificación en Biotage (300 g de gel de sílice; EtOAc al 20-50%/hexanos) proporcionando la pirazolidina 10a como un aceite incoloro (4.963 g) . RMN de 1H (DMS0-d6, d = 2.50 ppm, 400 MHz) : 7.37-7.30 (m, 5H) , 5.17 (d ancho, J = 12.4, 1H) , 5.07 (d ancho, J = 12.1, 1H) , 3.77 (m, 2H) , 3.23-3.09 (m, 2H) , 2.02-1.93 (m, 2H) , 1.35 (s, 9H) . CL/EM: Análisis calculado para [M+Na] + Ci6H22 2Na04 : 329.15; encontrado 329.23.
Ejemplo 10, Etapa b enfrió una solución en dioxano (41 mi) del carbamato 10a (4.96 g, 16.19 mmol) con hielo/agua durante ~ 3 min y se añadió HCl/dioxano (21 mi de 4.0 N, 84 mmol) durante ~2 min. El baño de enfriamiento se retiró inmediatamente después de finalizar la adición y se continuó agitando durante 16 horas. La eliminación del componente volátil al vacío proporcionó la sal HCl de la pirazolidina 10b como sólido blanco (3.848 g) . RM de XH (DMSO-d6( d = 2.50 ppm, 400 MHz) : 7.45-7.33 (m, 5H) , 5.21 (s, 2H) , 3.62 (t, J = 7.1, 2H) , 3.37 (t, J = 7.0, 2H) , 2.21-2.14 (m, 2H) . CL/EM: Análisis calculado para [M+Na] + CnH^^ aC : 229.10; encontrado 229.12.
Ejemplo 10, Etapa c Se añadió trietilamina (4.80 mi, 34.4 mmol) a una mezcla de DMF (26 mi) y pirazolidina 10b/HCl (2.353 g, 9.70 mmol) y se agitó intensamente durante 10 min, seguido por tratamiento con ultrasonidos durante ~1 min. La mezcla heterogénea resultante se enfrió con baño de hielo/agua y se trató con 2.2.10.10 - tetrametil -6 - 1 ioxo-3 , 9-dioxa-5 , 7 -diazaundecano-4 , 8-diona (2.815 g, 10.19 mmol) , se agitó durante 5 min y luego se añadió en porciones durante 30 segundos HgCl2 (2.95 g, 10.87 mmol) . Se continuó agitando durante 5 horas mientras se dejaba descongelar el baño hasta 10 °C, y luego se retiró el baño y se continuó agitando durante 4 h. La mezcla de reacción se filtró a través de un lecho corto de tierra de diatomeas (Celite ) y el filtrado se concentró al vacío. El residuo se disolvió en CH2C12 (100 mi) y se lavó con agua (40 mi, 2x) , se secó (MgS04) y se concentró al vacío. El residuo se sometió a una purificación en Biotage (300 g de gel de sílice; EtOAc al 20-50%/hexanos) proporcionando la guanidina 10c como una espuma blanca (3.924 g) . Apréciese que no se determinó la estereoquímica E/Z del producto. RMN de XH (DMS0-d6, d = 2.50 ppm, 400 MHz) : 9.61 (s ancho, 1H) , 7.36-7.29 (m, 5H) , 5.13 (s, 2H) , 3.77 (señal muy ancha, 2H) , 3.26 (señal muy ancha, 2H) , 2.03-1.96 (m, 2H) , 1.39/1.37 (dos s solapando, 18H) . CL/EM: Análisis calculado para [M+Na]+ CzzI^^ aOg : 471.22; encontrado 471.11.
Ejemplo 10, Etapa d Se añadió una solución en THF (10 mi) de la guanidina 10c (1.452 g, 3.24 mmol) gota a gota durante 10 minutos a una suspensión en THF (20 mi) de NaH (0.14 g de dispersión al 60% en aceite, 3.50 mmol) y la mezcla se agitó durante 10 min. Se añadió una mezcla de 2-bromo-l- (4-bromo enil) etanona (1.883 g, 6.77 mmol) y KI (0.051 g, 0.307 mmol) a la mezcla anterior y se continuó agitando la mezcla semiheterogénea a temperatura ambiente durante 4 h. El componente volátil se eliminó al vacío y el residuo se repartió entre CH2C12 (100 mi) , agua (20 mi) y NH4C1 saturado (2 mi) . La fase orgánica se secó (MgS04) , se concentró al vacío y el aceite resultante se sometió a una purificación en Biotage (300 g de gel de sílice; la muestra se cargó con EtOAcl al 20%/hexanos ; elución en columna con EtOAc al 20-50%/hexanos) proporcionando la cetona lOd (espuma blanca, 0.910 g) y material de partida sin consumir 10c (0.606 g) . No se determinó la estereoquímica E/Z del producto. RMN de 1H (D SO-d6, d = 2.50 ppm, 400 MHz) : 7.85/7.76 ( solapamiento de s ancho y d, J = 8.3, 4H) , 7.42-7.30 (m, 5H) , 5.20-4.38 (m muy ancho, 4H) , 4.17-3.70 (m muy ancho, 2H) , 3.30 (s ancho aparente, 2H) , 2.13 (s ancho aparente, 2H) , 1.33/1.28 (s solapando, 18H) . CL/EM-. Análisis calculado para [M+H] + C3oH3881BrN407 : 647.19; encontrado 647.25.
Ejemplo 10, Etapa e Se añadió TFA al 25%/CH2Cl2 (28 mi) a la cetona lOd (1.846g, 2.86 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante -21 h. La mayoría del diclorometano se eliminó al vacío y el residuo se trató con MeOH (200 mi) y se agitó durante 28 h. La mayoría del componente volátil se eliminó al vacío y el residuo se trató con CH2C12 (80 mi) , agua (20 mi) y solución saturada de NaHC03 (10 mi) , se agitó intensamente durante unos pocos minutos y se repartieron las fases. La fase orgánica se secó (MgS04) y se concentró al vacío y el material bruto se purificó con una Biotage (240 g de gel de sílice; la muestra se cargó con EtOAc al 50%/hexanos ; la columna eluyó con EtOAc al 50-80% /hexanos) proporcionando el imidazol lOe como una espuma blanca (1.138 g) . RMN de ?? (DMSO-d6, d = 2.50 ppm, 400 MHz) : 11.60/11.53 (s ancho solapando, 1H) , 7.64-7.58 (m, 2H) , 7.53-7.46 (m, 2H) , 7.39-7.29 (m, 6H) , 5.15 (s, 2H) , 3.64/3.57 (m solapando, 4H) , 2.04-1.97 (m, 2H) . CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C2oH2o79Br 402 : 427.08; encontrado 427.10.
Ejemplo 10, Etapa f añadió NaH (0.092 g de dispersión en aceite 60%, 2.30 mmol) en un lote a una solución en THF (12.5 mi) enfriada (hielo/agua) del imidazol lOe (0.918 g, 2.148 mmol) y se agitó durante 10 min. Luego se añadió gota a gota durante 1 minuto SEMCl (0.46 mi, 2.48 mmol) y se agitó a temperatura similar durante 25 minutos. Se retiró el baño de enfriamiento y se continuó agitando la mezcla de reacción durante 65 min, y luego se añadió MeOH (2 mi) y unos pocos minutos después se eliminó el componente volátil al vacío. Se preparó una malla de gel de sílice directamente del material bruto y se sometió a una purificación en Biotage (240 g de gel de sílice; EtOAc al 10-20%/hexanos) proporcionando el bromuro 10 f como un aceite viscoso incoloro (744 mg) . Apréciese que no se determinó la regioquímica del grupo SEM en el anillo imidazol y no tuvo importancia para el propósito en curso. RMN de XH (DMSO-d6, d = 2.50 ppm, 400 MHz) : 7.67-7.65 (m, 3H) , 7.53 (d, J = 8.3, 2H) , 7.34-7.27 (m, 5H) , 5.32 (s, 2H) , 5.09 (s, 2H) , 3.68 (t aparente, J = 7.5, 2H) , 3.51 (t aparente, J = 8.1, 2H) , 3.37 (t aparente, J = 6.7, 2H) , 2.32-2.25 (m, 2H) , 0.82 (t aparente, J = 8.1, 2H) , -0.05 (s, 9H) . CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C26H3481BrN403Si : 559.16; encontrado 559.04.
Ejemplo 10, Etapa g Se añadió una mezcla de PdCl2 (dppf ) . CH2C12 (0.0473 g, 0.058 mmol) y dppf (0.0321g, 0.058 mmol) a la mezcla de bromuro 10 f (0.899 g, 1.61 mmol), 4.4,4· ,4' ,5.5,5' ,5'-octametil -2 , 2 ' -bi ( 1,3,2-dioxaborolano) (0.218 g, 0.857 mmol) y K2C03 (0.2391 g, 1.730 mmol) en DMSO (18 mi) . Se burbujeó nitrógeno a través de la mezcla durante 10 minutos y luego se calentó con un baño de aceite (-80 °C) durante 23 h. A continuación, se dejó enfriar la mezcla de reacción hasta temperatura ambiente, ésta se diluyó con CH2C12 (60 mi) y se lavó con agua (20 mi, 3x) . La fase orgánica se secó (MgS04) y se concentró al vacío. Se preparó una malla de gel de sílice a partir del residuo bruto resultante y se sometió a una purificación en Biotage (90 g de gel de sílice; EtOAc al 10-40%/hexanos) proporcionando el producto lOg acoplado como una espuma amarillo' claro (359 mg) . Apréciese que no se determinó la regioquímica del grupo SEM en el anillo imidazol. RM de XH (CDC13, d = 7.24 ppm, 400 MHz) : 7.77 (d# J = 8.3, 4H) , 7.60 (d, J = 8.6, 4H) , 7.35-7.28 (m, 10H) , 7.14 (s, 2H) , 5.37 (s ancho, 4H) , 5.14 (s, 4H) , 3.81 (t aparente, J = 3.5, 4H) , 3.51 (t aparente, J = 8.2, 4H) , 3.45 (t aparente, J = 7.0, 4H) , 2.47 (m, 4H) , 0.88 (t aparente, J = 8.2, 4H) , -0.03 (s, 18H) . HRMS : Análisis calculado para [M +H]+ C52H67N806Si2 : 955.4717; encontrado 955.4725.
Ejemplo 10 Se añadió una mezcla A 2:1 (v/v) de TFA/CH2Cl2 (3 mi) al intermedio lOg (52.2 mg, 0.055 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 19 h. El componente volátil se eliminó al vacío, y el residuo se repartió entre CH2C12 (30 mi) , agua (10 mi) y solución saturada de NaHC03 (1 mi) . La fase orgánica se secó (MgS04) , se concentró al vacío y el residuo se disolvió en DMF y se purificó con una HPLC de fase inversa (MeOH/H20/TFA) proporcionando la sal TFA del Ejemplo 10 como una espuma blanca (16.2 mg) . RMN de ? (DMSO-ds, d = 7.24 ppm, 400 MHz) : 7.88 (d, J = 9.1, 4H) , 7.85 (d, J = 8.8, 4H) , 7.77 (s, 2?) , 7.40-7.30 (m, 10H), 5.19 (s, 4H) , 3.79 (t aparente, J = 6.8, 4H) , 3.71 (m, 4H), 2.19 (m, 4H) . CL {Condición 2 y 3) : índice de homogeneidad >95%. CL/EM {Condición 1) : TR = 2.09 min. CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C4oH39 804 : 695.31; encontrado 695.35.
Se podía obtener la forma desbasificada del Ejemplo 10 empleando en cambio el siguiente protocolo de purificación: después del tratamiento acuoso, se preparó una malla de gel de sílice y se sometió a una purificación en Biotage (gel de sílice; CH2C12 al 30%/EtOAc) proporcionando el Ejemplo 10 como un sólido amarillo claro.
Ejemplo 11 Se añadió una solución de HCl en EtOH (0.1 mi de -2.5 M, 0.250 mmol) gota a gota durante 20 segundos a una semi suspens ión en CH2C12 (2.5 mi) de la forma desbasificada del Ejemplo 10 (59.2 mg , 0.085 mmol) y se agitó durante 10 min. Se añadió una suspensión de Pd al 10%/C (0.012 g) en CH2C12 (0.5 mi), seguido por MeOH (1.0 mi) y la mezcla se agitó bajo un globo de hidrógeno durante 1.5 horas. Se añadió más HCl/EtOH (0.1 mi de 2.5 M , 0.250 mmol) y se continuó agitando durante 1.5 h. La mezcla se filtró a través de un lecho corto de Celite® con la ayuda de metanol en exceso, se concentró el filtrado y el material resultante se expuso a alto vacío durante 1.5 h y se sometió a la etapa siguiente sin caracterizaciones.
Se añadieron secuencialmente ácido (S)-2- (metoxicarbonilamino) - 3 -met ilbutanoico (0.0361 g, 0.206 mmol), DMF (2.5 mi) y DIEA (0.09 mi, 0.515 mmol) al producto bruto anterior y la mezcla resultante se trató con HATU (0.067 g, 0.176 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 4.3 h. El componente volátil se eliminó al vacío, y el residuo se hizo pasar a través de una columna MCX (lg; lavado con MeOH; elución con NH3 2.0 M/MeOH) y el eluato se concentró al vacío. El material resultante se disolvió en MeOH y se purificó con una HPLC de fase inversa (MeOH/H20/TFA) proporcionando la sal TFA del Ejemplo 11 (40.5 mg) como una espuma blanquecina. RMN de 1H (DMS0-d6, d = 7.24 ppm, 400 MHz) : 7.85 (s aparente, 8H) , 7.74 (s ancho, 2H) , 7.60 (m muy ancho, 2H; intercambiable con D20) , 4.25 (s ancho aparente, 2H) , 4.13/3.98 (dos s ancho solapando, 4H) , 3.52 (s, 6H) , 3.34 (s ancho aparente, 4H) , 2.12 (s ancho aparente, 4H) , 1.95 (s ancho aparente, 2H) , 0.89-0.85 (m, 12H) . CL {Condición 3 y 4) : índice de homogeneidad >95%. CL/EM (Condición 1) : TR = 1.79 min. CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C38H49Nio06: 741.38 ; encontrado 741.48.
Ejemplo 12 El Ejemplo 12 (sal TFA) se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito para el Ejemplo 11 con la excepción de que se empleó ácido (R) -2- (me toxicarbonilamino ) - 2 - f enilacét ico en lugar de ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) - 3 -met i lbutanoico . CL {Condición 3 y 4) : índice de homogeneidad 95%. CL/EM (Condición 2) : TR = 14.4 min. CL/EM: Análisis calculado para [M+H] + C44H4s 10O6: 809.35; encontrado 809.60.
ACTIVIDAD BIOLÓGICA Se utilizó un ensayo VHC Replicón en la presente descripción, y se preparó, realizó y validó como se describe en la patente de propiedad conjunta PCT/US2006/022197 y en O'Boyle et . Antimicrob Agents Chemother. 2005 Abr i 1 ; 49 ( 4 ) : 1346 - 53. También se han usado procedimientos de ensayo que incorporan informadores de luciferasa como se describe (Apath.com).
Se usaron células con el replicón VHC-neo y células con replicón que contenían mutaciones en la región NS5A para ensayar la familia de compuestos descritos en este documento. Se determinó que los compuestos tenían una actividad de inhibición 10 veces menor en las células que contenían mutaciones que en las células de tipo silvestre. Por lo tanto, los compuestos de la presente descripción pueden ser eficaces para inhibir la función de la proteína NS5A de VHC y se entiende que son tan eficaces en combinaciones como se ha descrito anteriormente en la solicitud de patente PCT/US2006/022197 y en la patente de propiedad conjunta WO/O4014852. Adem s, los compuestos de la presente descripción pueden ser eficaces contra el genotipo VHC Ib. Debe entenderse además que los compuestos de la presente descripción pueden inhibir múltiples genotipos de VHC. La Tabla 2 muestra los valores de CE50 (Concentración eficaz inhibidora al 50%) de compuestos representativos de la presente descripción contra el genotipo Ib de VHC. En una modalidad, los compuestos de la presente descripción son inhibidores de los genotipos la, lb( 2a, 2b, 3a, 4a y 5a. Los valores de CE50 contra Ib de VHC son como sigue: A = >100 nM; B = 1-99 nM; C = 101-999 pM; y D = 0.7-100 pM .
Tabla 2 CE50 contra CEso Ib contra Ib Ejemplo Nombre en en µ? intervalo ( (lS)-l-( ((5S)-5-(5-(4'-(2- ( (3S)-2-( (2S)-2- ( (metoxicarbonil) amino) -3- metilbutanoil) -l-metil-3- pirazolidinil) -lH-imidazol- 1 0.000003 D 5-il) -4-bifenilil) -1H- imidazol-2-il) -2-metil-l- pirazolidinil) carbonil) -2- metilpropil ) carbamato de metilo (4,4' -bifenildiilbis (1H- imidazol-4, 2-diil ( (5S) -2- metil-5, 1- pirazolidindiil) ( (lS)-2- 2 D oxo-1- ( tetrahidro-2H-piran- 4-il) -2, 1- etanodiil ))) biscarbamato de dimetilo (4,4' -bifenildiilbis (1H- imidazol-5, 2-diil ( (5S) -2- metil-5, 1- 3 D pirazolidindiil ) ( (2S)-1- oxo-1, 2- butanodiil) ) ) biscarbamato de dimetilo ( (lR)-2-( (5S)-5-(5-(4'-(2- ( (3S)-2-( (2S)-2- ( (metoxicarbonil) amino) -2- fenilacetil) -l-metil-3- pirazolidinil) -lH-imidazol- 4 D 5-il) -4-bifenilil) -1H- imidazol-2-il) -2-metil-l- pirazolidinil ) -2-oxo-l- feniletil ) carbamato de metilo (4, ' -bifenildiilbis (1H- 10 imidazol-5, 2-diil ( (5S) -2- metil-5 , 1- 5 D pirazolidindiil) ((lR)-2- oxo-l-fenil-2 , 1- etanodiil ))) biscarbamato de dimetilo ( (lS)-l-( ( (5S) -5- (4- (4 (2- 15 ( (3S)-2-( (2S)-2- ( (metoxicarbonil ) amino) -2- (tetrahidro-2H-piran-4- il) acetil ) -l-metil-3- pirazolidinil ) -lH-imidazol- 6 D 4-il) -4-bifenilil) -IH- imidazol-2-il ) -2-metil-l- 20 pirazolidinil ) carbonil) -2- metilpropil ) carbamato de metilo 25 (4,4' -bifenildiilbis ( (4- cloro-lH-imidazol-5, 2- diil) ( (5S) -2-metil-5, 1- pirazolidindiil ) ((2S)-1- 7 D oxo-1, 2- butanodiil) ) ) biscarbamato 5 de dimetilo ( (1S) -1- ( ( (5S) -5- (4-cloro- 5-(4'-(4-cloro-2-( (3S)-2- ( (2S)-2- ( (metoxicarbonil ) amino) -3- metilbutanoil ) -l-metil-3- 7.1 0.0000008 D pirazolidinil ) -lH-imidazol- 5-il) -4-bifenilil) -1H- imidazol-2-il ) -2-metil-l- pirazolidinil ) carbonil) -2- metilpropil ) carbamato de metilo 15 ( (lS)-l-( ( (5S)-5-(5-(4-( (4- (2- ( (3S) -2- ( (2S) -2- ( (metoxicarbonil) amino) -3- metilbutanoil ) -l-metil-3- pirazolidinil ) -lH-imidazol- 8 0.00020 C 5-il)fenil)etinil) fenil) - lH-imidazol-2-il) -2-metil- 20 1-pirazolidinil ) carbonil) - 2-metilpropil) carbamato de metilo 25 ( (lS)-l-( ((5S)-5-(5-(4'-(2- ( (IR, 3S, 5R) -2- ( (2S) -2- ( (metoxicarbonil ) amino) -2- (tetrahidro-2H-piran-4- il) acetil) -2- azabiciclo[3,l,0]hex-3-il)- D lH-imidazol-5-il) -4- bifenilil) -lH-imidazol-2- il ) -2-metil-l- pirazolidinil ) carbonil) -2- metilpropil ) carbaraato de metilo 2, 2 ' - (4, 4 ' - bifenildiilbis ( lH-imidazol- 4,2-diil) )di (1- ? pirazolidincarboxilato) de dibencilo ( (lS)-l-( (2-(4-{4'-(2-{2- ( (2S)-2- ( (metoxicarbonil) amino) -3- metilbutanoil ) -1- pirazolidinil) -lH-imidazol- <0.0137 < ? 4-il) -4-bifenilil) -1H- imidazol-2-il) -1- pirazolidinil) carbonil) -2- metilpropil ) carbamato de metilo (4, 4 '-bifenildiilbis (1H- imidazol-4, 2-diil-2, 1- pirazolidindiil ( (1R) -2-oxo- 12 C l-fenil-2,1- etanodiil ))) biscarbamato de dimetilo Será evidente para un experto en la técnica que la presente descripción no se limita a los anteriores ejemplos ilustrativos, y que puede realizarse en otras formas específicas sin separarse de sus atributos esenciales. Por lo tanto se desea que los ejemplos sean considerados en todos los respectos ilustrativos y no restrictivos, haciendo referencia a las reivindicaciones anexas, en lugar de a los ejemplos anteriores, y por lo tanto se pretende que todos los cambios que entren dentro del significado y del alcance de equivalencia de las reivindicaciones estén incluidos en ellas .
Los compuestos de la presente descripción pueden inhibir VHC mediante mecanismos además de, o distintos a, la inhibición de NS5A. En una modalidad, los compuestos de la presente descripción inhiben el replicón de VHC y en otra modalidad los compuestos de la presente descripción inhiben NS5A. Los compuestos de la presente divulgación pueden inhibir varios genotipos del VHC .
Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (21)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :
1. Un compuesto caracterizado porque tiene la fórmula (I) (I) , una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en donde , -HC=CH- y R1 y R2 son R1 es y R2 se selecciona de en donde denota el punto de unión a la molécula principal ; R y R se seleccionan independientemente de hidrógeno y halo; cada R5 se selecciona independientemente de hidrógeno y alquilo; cada R6 se selecciona independientemente de hidrógeno y alquilo; R6a es hidrógeno o alquilo, en donde el alquilo puede opcionalmente formar un anillo de tres miembros condensado y con un átomo de carbono adyacente; cada R7 se selecciona independientemente de hidrógeno y -C(0)R8; y cada R8 se selecciona independientemente de alcoxi, alquilo, arilalcoxi, arilalqiulo, cicloalquilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, (NRcRd) alquenilo y (NRcRd) alquilo.
2. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, caracterizados porque L es un enlace.
3. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 2, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, caracterizados porque R1 es Y R2 se selecciona de
4. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 3, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, caracterizados porque R5 es hidrógeno, R6 es metilo y R6a es alquilo, formando el alquilo un anillo de tres miembros condensado y con un carbono adyacente.
5. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 2, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, caracterizados porque R1 y R2 son cada uno
6. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, caracterizados porque L es .
7. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 6, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, caracterizados porque R1 y R2 son cada uno
8. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 7, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, caracterizados porque R5 es hidrógeno y R6 es metilo .
9. Un compuesto caracterizado porque se selecciona de : ( (1S) -1- ( ( (5S) -5- (5- (4 ' - (2 - ( (3S) -2 - ( (2S) -2-( (metoxicarbonil ) amino) -3-metilbutanoil) -l-metil-3-pirazolidinil) -lH-imidazol-5-il) -4 -bifenilil ) -lH-imidazol-2-il) -2-metil-l-pirazolidinil) carbonil) -2-metilpropil) carbamato de metilo; (4,4' -bifenildiilbis ( lH-imidazol-4 , 2-diil ( (5S) -2-metil-5 , 1-pirazolidindiil) ( (1S) -2-oxo-l- (tetrahidro-2H-piran-4-il) -2 , 1-etanodiil) )) biscarbamato de dimetilo; (4,4' -bifenildiilbis ( 1H- imidazol-5 , 2-diil ( (5S) -2-metil-5 ( 1-pirazolidindiil) ( (2S) -1-oxo-l, 2-butanodiil) )) biscarbamato de dimetilo; ((lR)-2-((5S)-5-(5-(4'-(2-((3S)-2-((2S)-2- ( (metoxicarbonil) amino) -2-fenilacetil) -l-metil-3-pirazolidinil) -lH-imidazol-5-il) -4 -bifenilil ) -lH-imidazol-2-il) -2-metil-l-pirazolidinil) -2-oxo-l-feniletil) carbamato de metilo; (4,4' -bifenildiilbis (1H- imidazol -5 , 2-diil ( (5S) -2-metil-5 , 1-pirazolidindiil) ( (IR) -2-oxo-l-fenil-2 , 1-etanodiil ))) biscarbamato de dimetilo; ((lS)-l-(((5S)-5-(4-(4'-(2-((3S)-2-((2S)-2- ( (metoxicarbonil) amino) -2- (tetrahidro-2H-piran-4-il) acetil) -l-metil-3-pirazolidinil) -lH-imidazol-4-il) -4-bifenilil) -1H-imidazol-2-il) -2-metil-l-pirazolidinil) carbonil) -2-metilpropil) carbamato de metilo; (4,4' -bifenildiilbis ( (4 -cloro- 1H- imidazol-5 , 2 -diil) ( (5S) -2-metil-5, 1-pirazolidindiil) ( (2S) -1-oxo-l, 2-butanodiil) )) biscarbamato de dimetilo; ( (1S) -1- ( ( (5S) -5- (5- (4-( (4- (2- ( (3S) -2- ( (2S) -2- ( (metoxicarbonil) amino) -3-metilbutanoil) -l-metil-3-pirazolidinil) -lH-imidazol-5-il) fenil) etinil) fenil) -1H-imidazol-2-il) -2-metil-l-pirazolidinil) carbonil) -2-metilpropil ) carbamato de metilo,- ( (1S) -1- ( ( (5S) -5- (5- (4'- (2- ( (1R,3S,5R) -2- ( (2S) -2- ( (metoxicarbonil ) amino) -2 - (tetrahidro-2H-piran-4 - il ) acetil ) -2-azabiciclo [3.1.0] hex-3-il) -lH-imidazol-5-il) -4-bifenilil) -lH-imidazol-2-il) -2-metil-l-pirazolidinil) carbonil) -2-metilpropil ) carbamato de metilo 2,2' - (4,4' -bifenildiilbis (lH-imidazol-4 , 2-diil ) ) di ( 1-pirazolidincarboxilato) de dibencilo; ((lS)-l-((2-(4-(4'-(2-(2-((2S)-2- ( (metoxicarbonil) amino) -3-metilbutanoil) -1-pirazolidinil) -1H-imidazol-4-il) -4 -bifenilil ) - 1H- imidazol -2 - il ) -1-pirazolidinil) carbonil) -2-metilpropil) carbamato de metilo; (4,4' -bifenildiilbis ( 1H- imidazol -4 ,2-diil-2,l-pirazolidindiil ( (IR) -2-oxo-l-fenil-2 , 1- etanodiil) )) biscarbaraato de dimetilo; y ( (1S) -1- ( ( (5S) -5- (4-cloro-5- (4 ' - (4 -cloro-2- ( (3S) -2-( (2S) -2- ( (metoxicarbonil) amino) -3-metilbutanoil) -l-metil-3-pirazolidinil) -lH-imidazol-5-il) -4 -bifenilil ) -lH-imidazol-2-il) -2-metil-l-pirazolidinil) carbonil) -2-metilpropil) carbamato de metilo.
10. Una composición caracterizada porque comprende un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
11. La composición de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada porque comprende además uno o dos compuestos adicionales que tienen actividad contra el VHC.
12. La composición de conformidad con la reivindicación 11, caracterizada porque al menos uno de los compuestos adicionales es un interferón o una ribavirina.
13. La composición de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada porque el interferón se selecciona de interferón alfa 2B, interferón alfa pegilado, interferón de consenso, interferón alfa 2A e interferón tau linfoblastoide .
14. La composición de conformidad con la reivindicación 11, caracterizada porque al menos uno de los compuestos adicionales se selecciona de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, un compuesto que potencia el desarrollo de una respuesta de linfocitos T auxiliares de tipo 1, ARN de interferencia, ARN antisentido, imiqimod, ribavirina, un inhibidor de inosina 51 -monofosfato deshidrogenasa, amadantina y rimantadina .
15. La composición de conformidad con la reivindicación 11, caracterizada porque al menos uno de los compuestos adicionales es eficaz para inhibir la función de una diana seleccionada de metaloproteasa del VHC, serina proteasa del VHC, polimerasa del VHC, helicasa del VHC, proteína NS4B del VHC, entrada del VHC, ensamblaje del VHC, salida del VHC, proteína NS5A del VHC e IMPDH para el tratamiento de una infección por el VHC.
16. Uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables para la manufactura de un medicamento para tratar una infección por VHC en un paciente.
17. Uso de conformidad con la reivindicación 16, el cual comprende además administrar uno o dos compuestos adicionales que tienen actividad contra el VHC antes de, después de, o simultáneamente con, el compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
18. Uso de conformidad con la reivindicación 17, en donde al menos uno de los compuestos adicionales es un interferón o una ribavirina.
19. Uso de conformidad con la reivindicación 18, en donde el interferón se selecciona de interferón alfa 2B, interferón alfa pegilado, interferón de consenso, interferón alfa 2A e interferón tau linfoblastoide .
20. Uso de conformidad con la reivindicación 17, en donde al menos uno de los compuestos adicionales se selecciona de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, un compuesto que potencia el desarrollo de una respuesta de linfocitos T auxiliares de tipo 1, ARN de interferencia, ARN antisentido, Imiqimod, ribavirina, un inhibidor de inosina 5 ' -monofosfato deshidrogenasa, amadantina y rimantadina .
21. Uso de conformidad con la reivindicación 17, en donde al menos uno de los compuestos adicionales es eficaz para inhibir la función de una diana seleccionada de metaloproteasa del VHC, serina proteasa del VHC, polimerasa del VHC, helicasa del VHC, proteína NS4B del VHC, entrada del VHC, ensamblaje del VHC, salida del VHC, proteína NS5A del VHC e I PDH para el tratamiento de una infección por el VHC .
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