MX2011008858A - Compuestos de diarilhidantoina y diariltiohidantoina especificos. - Google Patents
Compuestos de diarilhidantoina y diariltiohidantoina especificos.Info
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Abstract
Se proporcionan composiciones tales como composiciones farmacéuticas, que comprenden compuestos de diarilhidantoína y diariltiohidantoina específicos, o sus sales o solvatos. Formas aisladas y purificadas de los compuestos también se describen, al igual que formas de dosis unitarias, composiciones de compuesto sustancialmente puro y equipos que comprenden los compuestos. Los compuestos y sus composiciones farmacéuticas pueden encontrar uso en la prevención y/o tratamiento de una variedad de condiciones, incluyendo cáncer de próstata, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, y otras.
Description
COMPUESTOS DE DIARILHIDANTOINA Y DIARILTIOHIDANTOINA
ESPECÍFICOS
REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS
Esta solicitud de patente reclama el beneficio de prioridad de la Solicitud de Patente Provisional de los E/U. A. No. de Serie 61/155,119, presentada en febrero 24, 2009 y la Solicitud de Patente · Provisional de los E.U.A. No. de Serie 61/156,398, presentada en febrero 27, 2009. Los contenidos de estas solicitudes aqui se incorporan por referencia en su totalidad.
CAMPO DE LA INVENCIÓN
Aquí se proporcionan tres compuestos específicos de diarilhidantoína y dos específicos de diariltiohidantoína, y composiciones farmacéuticas y otras formas que comprenden estos cinco compuestos específicos. También se proporcionan métodos para evitar y/o tratar condiciones en mamíferos tales como enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, y cáncer de próstata.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
Los compuestos de diarilhidantoína, incluyendo compuestos de diariltiohidantoína, se han descrito en las Publicaciones de patente de los E.U.A. Nos. 2007/0004753, 2007/0254933 y 2009/0111864. Sin embargo, queda una necesidad por nuevas terapias para el tratamiento de diversas enfermedades, incluyendo cáncer de próstata. También se buscan nuevas terapias para el tratamiento de enfermedad de Parkinson y enfermedad de Alzheimer .
(MI)-(MV) como se detalla aquí, son metabolitos del compuesto RD 162' descrito en. la Publicación de patente de los E.U.A. No. 2007/0004753 y pueden encontrar uso en terapia .
BREVE COMPENDIO DE LA INVENCIÓN
Los compuestos (MI)-(MV) se describen. La Fórmula (I) como se proporciona aquí, describe y pretende compuestos de la fórmula (MI)-(MV) . -El compuesto (MI) afecta a través del transportador . norepinefriña . Moduladores del transportador Norepinefriña han sido útiles en terapias para el tratamiento de depresión, enfermedad de Alzheimer, desórdenes de déficit de atención y enfermedad de Parkinson. El compuesto (Mil) afecta mediante el receptor progesterona . Moduladores de receptor de progesterona se han empleado en terapias en donde se implica progesterona. Moduladores de receptor de progesterona tienen potencial para utilizar en control natal, ya sea para evitar embarazo o para abortar embarazo. El compuesto (MIV) afecta en el receptor sigma. Moduladores de receptor sigma han sido útiles en terapias para tratar depresión. Los compuestos (MI)-(MV) son metabolitos del compuesto RD 162'. RD1 62' ha encontrado uso en el tratamiento de cáncer de próstata.
También se describen métodos y composiciones. En una variación, el método comprende administrar un compuesto de la fórmula (MI), (MU), (MUI), (MIV) o (MV) a un individuo, en una cantidad efectiva para modular un receptor, tal como un receptor citado en las Tablas 5 y 9. Métodos para aislar un compuesto de la fórmula (MI), (Mil), (MUI), (MIV) o (MV) se detallan aquí. También se proporcionan métodos para utilizar en terapia un compuesto de la fórmula (MI), (MU), (MUI), (MIV) o (MV) . En un aspecto, la terapia es el tratamiento de la enfermedad de Parkinson, enfermedad Alzheimer o cáncer de próstata. Composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la fórmula (MI), (Mil), (MUI), (MIV) o . (MV) y un portador farmacéutico aceptable también son abarcadas, al igual que formas aisladas y/o purificadas de un compuesto de la fórmula (MI), (Mil), (MUI), (MIV) o (MV) . También se describen formas de dosis unitarias de un compuesto de la fórmula (MI), (Mil), (MUI), (MIV) o (MV) .
De acuerdo con esto, en un aspecto, se proporcionan compuestos que son de la fórmula (I) :
(I)
en donde :
X es S u O, y
cuando X es S, entonces R1 es OH o NH2; y
cuando X es O entonces R1 es OH, NH2 o NHMe, o
su sal o solvato farmacéutica aceptable.
De esta manera, compuestos de las fórmulas (MI),
(MU) , (MUI) , (MIV) y (MV) :
se describen. Se entiende que las sales de los compuestos, tales como sales farmacéuticas aceptables, también se proporcionan .
Compuestos de la fórmula (I) se han identificado como metabolitos del compuesto RD 162', que se ha encontrado útil en el tratamiento de cáncer de próstata y se describe en la publicación de la solicitud de patente de los E.U.A. No. 2007/0004753. Como se describe en los Ejemplos a
Continúación, RD 162' y sus · metabolitos se aislaron por precipitación de proteina inducida por acetonitrilo de 100 µ?? de plasma. Se identificaron metabolitos por mediciones de barrido de tiempo-de-vuelo para iones positivos de 55 a 800 amu. Una molécula particular se identificó como un metabolito RD 162' potencial si su fragmentación diera subespecies que tienen un patrón consistente con el de RD 162' precursor. Cinco metabolitos putativos estuvieron presentes en plasma de ratas, perros, y/o humanos: (MI), (MU), (MUI), (MIV) y (MV) . Las estructuras de los metabolitos se dedujeron por análisis de los espectros de masas y después se sintetizaron los metabolitos putativos. Las estructuras moleculares de los metabolitos se confirmaron a través de un experimento de co-elución LC/MS/MS, en donde las moléculas sintetizadas se compararon directamente a las estructuras aisladas de muestras de plasma de rata, perro y de humano.
Compuestos de la fórmula (I) también pueden encontrar uso en terapia, por ejemplo, en el tratamiento de cáncer de próstata o en el tratamiento de otras indicaciones proporcionales con la actividad de dichos compuestos, tales como la actividad de enlace de receptor aquí detallada.
En una modalidad, con respecto a los compuestos de la fórmula (I) (es decir, compuestos (MI)-(MV)), los compuestos se proporcionan en forma substancialmente pura.
En un aspecto, se proporcionan composiciones que comprenden los compuestos, en donde la composición está libre de sangre u otros fluidos corporales.
En otro aspecto, . se proporcionan composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la fórmula (I), y un portador farmacéutico aceptable. La composición farmacéutica puede comprender uno o más de los compuestos aquí descritos, o sus sales o solvatos.
En otro aspecto, se proporcionan métodos para evitar o tratar una condición de entre aquellas aquí citadas, y particularmente, esta condición puede ser asociada con, por ejemplo, depresión, disfunciones de memoria, tales como enfermedad de Alzheimer y enfermedad de Parkinson, y cáncer de próstata, este método comprende administrar a un individuo que lo requiere, una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula (I), o su sal o solvato, o composición farmacéutica que comprende los anteriores.
La invención también abarca el uso de cualquiera de los compuestos de la invención para la preparación de medicamentos, que pueden administrarse para terapia, tal como para el tratamiento de . las indicaciones aquí descritas, incluyendo cáncer de próstata.
En aspectos adicionales, se proporcionan métodos para sintetizar los compuestos descritos aquí, con protocolos sintéticos representativos y las rutas descritas a Continúación .
Se proporciona una composición farmacéutica que comprende (a) un compuesto de la fórmula (I) :
en donde:
X es S u 0, y
cuando X es S, entonces R1 es OH o NH2; y
cuando X es 0 entonces R1 es OH, NH2 o NHMe;
o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable, y (b) un portador farmacéuticamente aceptable. En un aspecto de la fórmula (I), X es S y R es OH o NH2. En otro aspecto de la fórmula (I), X es 0 y R1 es OH, NH2 o NHMe. En una variación particular de la fórmula (I), el compuesto es de la fórmula (MI) :
o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable. En otra variación de la fórmula (I), el compuesto de la fórmula (MU) :
o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable. En variación aun adicional de la fórmula (i), el compuesto es la fórmula (MUI) :
(MUI)
o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable. Todavía en otra variación de la fórmula (I), el compuesto es de la fórmula (MIV) :
(MIV)
o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable. Todavía en otra variación de la fórmula (I), el compuesto es de la fórmula (MV) :
NC
( V)
o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable.
También se proporciona una composición de compuesto substancialmente puro, en donde el compuesto es de la fórmula I:
(I)
en donde :
X es S u O, y
cuando X es S entoces R1 es OH o NH2; y
cuando X es O entonces R1 es OH, NH2 o NHMe;
o su sal o solvato. En un aspecto de la fórmula (I), X es S y R1 es OH o NH2. En otro aspecto de la fórmula (I), X es 0 y R1 es OH, NH2 o NHMe. En una variación particular de la fórmula (I), el compuesto es de la fórmula (MI) :
OH
Me
Me
MI
su sal o solvato. En otra variación de la fórmula ompuesto de la fórmula (MU) :
Mil
o su sal o solvato. En otra variación de la fórmula compuesto de la fórmula (MUI) :
(MU)
o su sal o solvato. En otra variación de la fórmula compuesto de la fórmula (MIV) :
NC,
(MIV)
o su sal o solvato. En otra variación de la fórmula
compuesto de la fórmula (MV) :
OH
(MV)
o su sal o solvato. Una composición de cualquiera de las modalidades precedentes y variaciones también se proporcionan, en donde la composición contiene menos de aproximadamente 10 por ciento en peso de impureza.
La invención también abarca un método para administrar a un individuo para terapia, un compuesto de la fórmula (I) :
(I)
en donde:
X es S u 0, y
cuando X es S entonces R1 es OH o NH2; y cuando X es 0 entonces R1 es OH, NH2 o NHMe;
o su -sal o solvato farmacéutica aceptable. En un aspecto de la fórmula (I), X es S y R1 es OH o NH2. En otro aspecto de la fórmula (I), X es 0 y R1 es OH, NH2 o NHMe. En una modalidad particular, la terapia es el tratamiento de cáncer de próstata. En otra modalidad, la terapia es el tratamiento de enfermedad de Parkinson o enfermedad de Alzheimer.
También se proporciona un equipo que comprende un compuesto de la fórmula (I):
(I)
en donde:
X es S u 0, y
cuando X es S entonces R1 es OH o NH2; y
cuando X es 0 entonces R1 es OH, NH2 o NHMe;
o una sal o solvato farmacéutica aceptable. En una variación particular, X es S y R1 es OH o NH2. En otra variación, X es O y R1 es OH, NH2 o NHMe. En una modalidad, el equipo además comprende instrucciones para uso, que en una variación son instrucciones para utilizar el compuesto en el tratamiento de cáncer de próstata o instrucciones para utilizar el compuesto en el tratamiento de enfermedad de Parkinson o enfermedad de Alzheimer .
También se proporciona aquí una forma de dosis unitaria que comprende un compuesto de la fórmula (I) :
(I)
en donde:
X es S u 0, y
cuando X es S entonces R1 es OH o NH2; y
cuando X es 0 entonces R1 es OH, NH2 o NHMe;
o su sal o solvato farmacéutica aceptable. En una modalidad,
X es S y R1 es OH o NH2. En otra modalidad, X es 0 y R1 es
OH, NH2 o NHMe.
También se proporciona un compuesto aislado de la fórmula ( I ) :
(I)
en donde:
X es S o 0, y
cuando X es S entonces R1 es OH o NH2;
y cuando X es 0 entonces R1 es OH, NH2 o NHMe;
o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable. En un aspecto, X es S y R1 es OH o NH2. En otro aspecto, X es 0 y
R1 es OH, NH2 o NHMe.
Otros objetos y ventajas serán aparentes para aquellos con destreza en la técnica, a partir de una consideración de la siguiente descripción detallada.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
Definiciones
A menos que se indique claramente de otra forma, los términos "un", "una", y semejantes, se refieren a uno o más .
Con referencia a "aproximadamente" un valor o parámetro aquí, incluye (y describe) modalidades que se dirigen a ese valor o parámetro per se. Por ejemplo, la descripción se refiere a "aproximadamente X" incluye la descripción de "X".
Como se utiliza aquí, por "farmacéuticamente aceptable" se entiende un material que no es biológicamente o de otra forma indeseable, por ejemplo, el material puede incorporarse en una composición farmacéutica administrada a un paciente, sin provocar ningunos efectos biológicos indeseables o interacción en una forma nociva con cualquiera de los otros componentes de la composición en donde está contenida. Portadores o excipientes farmacéuticos aceptables, de preferencia han cumplido las normas requeridas de toxicología y prueba de fabricación y/o se incluyen en la Guía de Ingredientes Inactivos preparada por la Administración de Drogas y Alimentos de los E.U.A. (U.S. Food and Drug administration) .
"Sales farmacéuticas aceptables" son aquellas sales que retienen al menos algo de actividad biológica del compuesto libre (no-sal) y que pueden administrarse como drogas o farmacéuticos a un individuo. Una sal farmacéutica aceptable pretende interacciones iónicas y no un enlace covalente. Estas sales, por ejemplo, incluyen: (1) sales de adición de ácido, formadas con ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, y semejantes; o formadas con ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido oxálico, ácido propiónico, ácido succinico, ácido maleico, ácido tartárico y semejantes; (2) . sales formadas cuando un protón acidico presente en el compuesto precursor ya sea es reemplazado por un ión de metal, por ejemplo, un ión de metal alcalino, un ión alcalino térreo, o un ión de aluminio; o se coordinan con una base orgánica. Bases orgánicas aceptables incluyen etanolamina, dietanolamina, trietanolamina y semejantes. Bases inorgánicas aceptables incluyen hidróxido de aluminio, hidróxido de calcio, hidróxido de potasio, carbonato de sodio, hidróxido de sodio, y semejantes. Ejemplos adicionales de sales farmacéuticas aceptables incluyen aquellas citadas en Berge et al., Pharmaceutical Salts, J Pharm. Sci. 1977 Jan; 66(1): 1-19. Sales farmacéuticas aceptables pueden prepararse in sítu en el proceso de fabricación, o al reaccionar por separado un compuesto purificado de la invención en su forma de ácido o base libre con una base o ácido orgánico o inorgánico conveniente, respectivamente, y aislar la sal asi formada durante purificación subsecuente. Habrá de entenderse que una referencia a una sal farmacéutica aceptable incluye las formas de adición de solvente o sus formas cristalinas, particularmente solvatos o polimorfos. Solvatos contienen ya sea cantidades estequiométricas o no-estequiométricas de un solvente, y a menudo se forman durante el proceso de cristalización. Hidratos se forman cuando el solvente es agua, o se forman alcoholatos cuando el solvente es alcohol. Polimorfos incluyen las estructuras de empaque de cristal diferentes de la misma composición elemental de un compuesto. Polimorfos usualmente tienen diferentes patrones de difracción de rayos X, espectros infrarojos, puntos de fusión, densidad, dureza, forma de cristal, propiedades ópticas y eléctricas, estabilidad y solubilidad. Diversos factores tales como el solvente de recristalización, velocidad de cristalización, y temperatura de almacenamiento, pueden provocar que un solo cristal se forme para dominar.
El término "excipiente" se emplea aquí en forma intercambiable con "portador" y como se emplea aquí, pretende ser una sustancia inerte o inactiva que puede utilizarse en la producción de una droga o producto farmacéutico, tal como una tableta que contiene un compuesto de la invención como un ingrediente activo. Diversas sustancias pueden ser abarcadas por el término excipiente, incluyendo sin limitación cualquier substancia empleada como un aglutinante, desintegrante, revestimiento, auxiliar de compresión/encapsulación, crema o loción, lubricante, soluciones para administración parenteral, materiales para tabletas masticables, endulzante o saborizante, agentes de suspensión/gelificación, o agente de granulación en húmedo. Aglutinantes incluyen, por ejemplo, carbómeros, povidona, goma xantano, etc.; revestimientos incluyen, por ejemplo, acetato ftalato de celulosa, etilcelulosa, goma de gelano, maltodextrina, revestimientos entéricos, etc.; auxiliares de compresión/encapsulación incluyen, por ejemplo, carbonato de calcio, dextrosa, fructosa de (de = "directamente comprimible"), miel de, lactosa (anhidrato o monohidrato; opcionalmente en combinación con aspartame, celulosa, o celulosa microcristalina) , almidón de, sacarosa, etc.; desintegrantes incluyen, por ejemplo, croscarmelosa sodio, goma gelano, almidón glicolato de sodio, etc.; cremas o lociones incluyen, por ejemplo, maltodextrina, carrageninas, etc.; lubricantes incluyen, por ejemplo, estearato de magnesio, ácido esteárico, estearil fumarato de sodio, etc.; materiales para tabletas masticables incluyen, por ejemplo, dextrosa, fructosa de, lactosa (monohidrato, opcionalmente en combinación con aspartame o celulosa), etc.; agentes de suspensión/gelificación incluyen, por ejemplo, carragenina, almidón glicolato de sodio, goma xantano, etc.; endulzantes incluyen, por ejemplo, aspartame, dextrosa, fructosa de, sorbitol, sacarosa de, etc.; y agentes de granulación en húmedo incluyen, por ejemplo, carbonato de calcio, maltodextrina, celulosa microcristalina, etc.
A menos que se indique claramente de otra forma, "un individuo" como se emplea aquí, se pretende que sea un mamífero, incluyendo pero no limitado a un humano, bovino, primate, equino, canino, felino, porcino, y ovino. De esta manera, la invención encuentra uso tanto en medicina humana como en el contexto veterinario, incluyendo uso en animales agrícolas como mascotas domésticas.
El término "cantidad efectiva" o "cantidad terapéutica efectiva" pretende ser aquella cantidad de un compuesto que deberá ser efectiva en una forma terapéutica determinada. Como se entiende en la técnica, una cantidad efectiva puede ser una o más dosis, por ejemplo, una sola dosis o múltiples dosis pueden requerirse para lograr el punto extremo de · tratamiento deseado. Métodos estándar pueden emplearse para medir la magnitud de este efecto, tales como ensayos in vitro con enzima purificada, ensayos basados en células, modelos de animales o pruebas en humanos.
Como se emplea aquí, "tratamiento" o "tratar" es un enfoque para obtener un resultado benéfico o deseado, incluyendo resultados clínicos. Para propósitos de esta invención, resultados clínicos benéficos o deseados incluyen, pero no están limitados a alivio de un síntoma o disminución de la extensión de un síntoma y/o evitar el empeoramiento de un síntoma asociado con una enfermedad o condición.
Como se emplea aquí, un compuesto que es un "modulador" receptor, se pretende y abarca un compuesto que liga o inhibe enlace de un ligando al receptor o reduce o elimina o incrementa o mejora o imita una actividad del receptor. Como tal, un "modulador receptor" abarca tanto un antagonista de. receptor como un agonista receptor.
Como se emplea aquí, "forma de dosis unitaria" se refiere a unidades físicamente discretas, adecuadas como dosis unitarias, cada unidad contiene una cantidad predeterminada de ingrediente activo calculado para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el portador farmacéutico requerido.
Una composición del compuesto "substancialmente puro" se pretende que contenga menos de aproximadamente 35% o menos de aproximadamente 20% o menos de aproximadamente 15% o de preferencia menos de aproximadamente 10% o más preferible menos que aproximadamente 5% o más preferible menos de aproximadamente 3% y más preferible menos de aproximadamente 1% de impureza.
Se entiende que cuando se describen aquí modalidades con la redacción "comprende", de otra forma también se proporcionan modalidades análogas descritas en términos de "consiste de" y/o "consiste esencialmente de".
Compuestos y Composiciones
En ciertos aspectos, aquí se proporcionan compuestos y composiciones que comprenden estos compuestos, por ejemplo, como composiciones farmacéuticas. Los compuestos y composiciones pueden encontrar uso en terapia, por ejemplo, en el tratamiento de cáncer de próstata, enfermedad de Parkinson o enfermedad de Alzheimer.
Composiciones de compuestos substancialmente puros también se proporcionan, al igual que compuestos sintéticos y aislados. Formas de dosis unitarias de los compuestos también se proporcionan .
Aquí se detallan métodos para aislar un compuesto de la fórmula (MI), (MU), (MUI), (MIV) y/o (MV) tal como un método para aislar compuestos de sangre u otro fluido corporal. Composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la fórmula (MI), (MU), (MUI), (MIV) o (MV) y un portador farmacéutico aceptable también se abarcan, al igual' que formas aisladas y/o purificadas de un compuesto de la fórmula (MI), (MU), (MUI), (MIV) o (MV) .
En un aspecto de la invención, se describen compuestos de las fórmulas (MI), (Mil), (MUI) y (MIV) y sus sales. Un compuesto de la fórmula (MV) también se proporciona. Un compuesto de la fórmula (MI), (Mil), (MUI) o (MIV) puede estar en forma aislada, y también se abarcan composiciones que comprenden formas aisladas. También se proporcionan formas aisladas del compuesto (MV) . Un compuesto de la fórmula (MI), (MU), (MUI) o (MIV) puede estar en una forma purificada y composiciones que comprenden un compuesto en formas purificadas, se detallan aquí. También se proporcionan formas purificadas del compuesto (MV) y composiciones que comprenden (MV) en forma purificada.
En un aspecto, se proporciona una composición que comprende un compuesto de la fórmula (I), en donde la composición está libre de sangre u otro fluido corporal. En un aspecto, se proporciona una composición que comprende una forma purificada de un compuesto de la fórmula (I) . Dicha composición puede contener otros componentes, tal como un portador farmacéutico aceptable. En otro aspecto, se proporciona una composición de forma substancialmente pura de un compuesto de la fórmula (I), en donde la composición comprende menos de aproximadamente cualquiera de 15%, 10%, 5%, 3% y 1% de impurezas, estas impurezas pueden por ejemplo ser un compuesto que no es de la fórmula (I) o sangre u otro fluido corporal. En un aspecto, una composición de un compuesto substancialmente puro comprende solo uno de (MI) , (MU) , (MUI) , (MIV) y (MV) .
El Compuesto (MI) es de la fórmula:
(MI)
El Compuesto (Mil) es de la fórmula:
( il)
Compuesto (MUI) es de la fórmula
(MUI)
El Compuesto (MIV) es de la fórmula:
— HN
(MIV)
Compuestos (MI) -(MIV) pueden estar presentes como sales, tales como sales farmacéuticamente aceptables.
El Compuesto (MV) es de la fórmula:
OH
(MV)
y también puede estar presente como una sal, tal como una sal farmacéutica aceptable.
En otro aspecto de la invención, se proporcionan compuestos que son de la fórmula (I):
(I)
en donde:
X es S o O, y
cuando X es S entonces R1 es OH o NH2; y
cuando X es 0 entonces R1 es OH, NH2 o NH e;
o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable.
De esta manera, se proporcionan compuestos de acuerdo con las fórmulas (MI), (MU), (MUI), (MIV) y (MV) :
pueden emplearse en las composiciones y métodos aquí descritos .
En una modalidad, con respecto a los compuestos de la fórmula (I), X es S y R1 es OH o NH2. De esta manera, en una variación, los compuestos de la fórmula (I) son de la fórmula (MI) o (MU) :
En otra modalidad, con respecto a los compuestos de la fórmula ( I ) , X es 0 y R1 es OH, NH2 o NHMe . De esta manera, en una variación, compuestos de la fórmula (I) son de la fórmula (MUI), (MIV) o (MV) :
En una modalidad particular, con respecto a los compuestos de la fórmula (I), X es S y R1 es OH. De esta manera, en una variación, un compuesto de la fórmula (I) es de la fórmula (MI) :
En otra modalidad particular, con respecto a los compuestos de la fórmula (I), X es S y R1 es NH2. De esta manera, en una variación, un compuesto de la fórmula (I) es de la fórmula (Mil) :
Mil
Todavía en otra modalidad particular, con respecto a los compuestos de la fórmula (I), X es O y R1 es NH2. De esta manera, en una variación, un compuesto de la fórmula (I) es de la fórmula (MUI) :
(MUI)
Todavía en otra modalidad particular, con respecto a los compuestos de la fórmula (I), X es 0 y R1 es NHMe . De esta manera, en una variación, un compuesto de la fórmula (I) es de la fórmula (MIV) :
( IV)
Todavía en otra modalidad particular, con respecto a los compuestos de la fórmula ( I ) , X es 0 y R1 es OH . De esta manera, en una variación, un compuesto de la fórmula (I) es de la fórmula (MV) :
En otro aspecto de la invención, aquí se proporciona una sal farmacéutica aceptable de un compuesto de acuerdo con las fórmulas (MI), (Mil), (MUI), (MIV) o (MV) . En una modalidad, la sal farmacéutica aceptable es de un compuesto de acuerdo con las fórmulas (MI) o (Mil). En otra modalidad, la sal farmacéutica aceptable es de un compuesto de acuerdo con las fórmulas (MUI), (MIV), o (MV) .
Se describen compuestos de las fórmulas (MI), (Mil), (MUI), (MIV) y (MV) y sus sales. De esta manera, los compuestos (MI)-(MV) pueden estar presentes como sales, tales como sales farmacéuticas aceptables. Un compuesto de la fórmula (MI), (MU), (MI II), (MIV) o (MV) puede estar en forma aislada y se abarcan composiciones que comprenden formas aisladas. Un compuesto de la fórmula (MI), (Mil), (MUI), (MIV) o (MV) puede estar en una forma purificada y se detallan aquí composiciones que comprenden un compuesto en forma purificada.
Una composición de compuestos substancialmente puro de acuerdo con la fórmula (I), o su sal, se proporciona. En un aspecto, la composición es una composición substancialmente pura del compuesto (MI) o (Mil) . En otro aspecto, una composición de (MUI), (MIV) o (MV) , o su sal substancialmente puro, se describe. Las composiciones substancialmente puras en un aspecto contienen menos de aproximadamente cualquiera de 10 por ciento en peso o 5 por ciento en peso o 1 por ciento en peso de impurezas.
De esta manera, se proporcionan composiciones que comprenden un compuesto de las fórmulas (MI), (Mil), (MUI), (MIV) o (MV) o su sal, tales como composiciones de compuestos substancialmente puros. En alqunas modalidades, una composición que contiene un compuesto de la fórmula (MI), (MU), (MUI), (MIV) o (MV) o su sal está en forma substancialmente pura. En una variación, "substancialmente pura" pretende ser una composición que contiene menos de aproximadamente 35% de impureza, en donde la impureza denota un compuesto diferente al compuesto de la fórmula (MI), (Mil), (MUI), (MIV) o (MV) o su sal. En una variación, se proporciona una composición de compuesto substancialmente puro de la fórmula (MI), (MU), (MI II), (MIV) o (MV) o su sal, en donde la composición contiene menos de aproximadamente 25% de impureza. En otra variación, se proporciona una composición de compuesto substancialmente puro de la fórmula (MI), (MU), (MUI), (MIV) o (MV) o su sal, en donde la composición contiene menos de aproximadamente 20% de impureza. Todavía en otra variación, se proporciona una composición de compuesto substancialmente puro de la fórmula (MI), (MU), (MUI), (MIV) o (MV) o su sal en donde la composición contiene menos de aproximadamente 10% de impureza. En una variación adicional, se proporciona una composición de compuesto substancialmente puro de la fórmula (MI), (MU), (MUI), (MIV) o (MV) o su sal, en donde la composición contiene menos de aproximadamente 5% de impureza. En otra variación, se proporciona una composición del compuesto substancialmente puro de la fórmula (MI), (Mil), (MUI), (MIV) o (MV) o su sal, en donde la composición contiene menos de aproximadamente 3% de impureza. Todavía en otra variación, una composición de compuesto substancialmente puro de la fórmula (MI), (MU), (MUI), (MIV) o (MV) o su sal se proporciona, en donde la composición contiene menos de aproximadamente 1% de impureza. En una variación adicional, se proporciona una composición de compuesto substancialmente puro de la fórmula (MI), (MU), (MUI), (MIV) o (MV) o su sal, en donde la composición contiene menos de aproximadamente 0.5% de impureza. En un aspecto, el % de impurezas pretende ser por ciento de impurezas como se determina mediante por ciento en peso.
Se proporcionan composiciones farmacéuticas en donde la composición comprende un compuesto de la fórmula (MI), (MU), (MUI), (MIV) o (MV) o su sal y un portador farmacéutico aceptable. En otro aspecto de la invención, aquí se proporciona una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéutico aceptable y una cantidad terapéutica efectiva de un compuesto de acuerdo con la fórmula (MI), (MU), (MUI), (MIV) o (MV) , o su sal o solvato farmacéuticos aceptables.
En una modalidad, con respecto a la composición farmacéutica, el portador o excipiente es adecuado para administración parenteral. En una modalidad, con respecto a la composición farmacéutica, el portador es adecuado para administración oral. En una modalidad, con respecto a la composición farmacéutica, el portador es adecuado para administración tópica.
En una modalidad, la composición farmacéutica comprende un compuesto de acuerdo con la fórmula (MI) o (Mil) . En otra modalidad, la composición farmacéutica comprende un compuesto de acuerdo con las fórmulas (MUI), (MIV) , o (MV) . En un aspecto, la composición farmacéutica está libre de un compuesto de acuerdo con la fórmula (MI) o (Mil). En otro aspecto, la composición farmacéutica está libre de un compuesto de acuerdo con las fórmulas (MUI), (MIV) , o (MV) .
En una modalidad, se proporciona una composición farmacéutica de una forma substancialmente pura del compuesto de acuerdo con las fórmulas (MI) o (Mil). En otra modalidad, se proporciona una composición farmacéutica de una forma substancialmente pura del compuesto de acuerdo con las fórmulas (MUI), (MIV), o (MV) .
Un compuesto de la fórmula (I) puede formularse con portadores convenientes para cualquier ruta de suministro disponible, incluyendo suministro oral, mucosal (por ejemplo, nasal, sublingual, vaginal, bucal o rectal) , parenteral (por ejemplo, intramuscular, subcutáneo o intravenoso), tópico o transdérmico . Un compuesto de la fórmula (I) puede formularse con portadores convenientes para proporcionar formas de suministro que incluyen, pero no están limitadas a: tabletas, comprimidos oblongos, cápsulas (tales como cápsulas de gelatina dura, y cápsulas de gelatina suave elástica) , pastillas, comprimidos, pastillas para chupar, gomas, dispersiones, supositorios, ungüentos, cataplasmas
(emplastos), pastas, polvos, vendajes, cremas, soluciones, parches, aerosoles (por ejemplo, roció nasal o inhaladores), geles, suspensiones (por ejemplo, suspensiones liquidas acuosas o no acuosas, emulsiones de aceite-en-agua o emulsiones liquidas de agua-en-aceite ) , soluciones y elixires .
Una formulación farmacéutica puede prepararse al combinar un compuesto de la fórmula (I) con un ingrediente activo con un portador farmacológico aceptable, que se conocen en la técnica. Dependiendo de la forma terapéutica del sistema (por ejemplo, tableta oral) , el portador puede estar en diversas formas. Además, preparaciones farmacéuticas pueden contener conservadores, solubilizantes, estabilizantes, agentes de re-humectación, emulgentes, endulzantes, colorantes, ajustadores, amortiguadores, agentes de revestimiento o antioxidantes. Preparaciones que contienen un compuesto de la fórmula (I) como el ingrediente activo también pueden contener otras sustancias que tienen propiedades terapéuticas valiosas. Formas terapéuticas pueden ser representadas por una dosis estándar usual y pueden prepararse por un método farmacéutico conocido. Formulaciones adecuadas pueden encontrarse, por ejemplo en Remington 's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, PA, 21st ed. (2005), que se incorpora aquí por referencia .
La cantidad de un compuesto de la fórmula (I) en una composición farmacéutica u otra, incluyendo una forma de dosis unitaria, puede ser una cantidad efectiva. En una variación, una composición, tal como una composición farmacéutica, comprende un compuesto de la fórmula (I) en una forma de dosis, en una cantidad desde aproximadamente 10 ng a aproximadamente 1,500 mg o más.
Se proporcionan artículos de manufactura que comprenden un compuesto de la invención, o su sal o solvato, en un recipiente conveniente. El recipiente puede una ampolleta, tarro, frasquito y semejantes.
Los métodos y equipos que aquí se proporcionan, pueden · comprender un compuesto como se detalla aquí, o su sal o solvato, igual como si cada modalidad se citara en forma específica e individual. Igualmente, el método y equipos que aquí se proporcionan, pueden comprender una composición como aquí se detalla, tal como una composición farmacéutica, igual como si cada si toda y cada una de las modalidad se citaran en forma específica e individual.
Métodos
Compuestos de la fórmula (I) (es decir, compuestos (MI)-(MV)) son activos en uno o más objetivos o blancos moleculares y de esta manera pueden encontrar uso en terapia. Los compuestos (MI)-( V), o su sal o solvato pueden emplearse para modular un receptor de las Tablas 5 y 9, y aquí se abarcan métodos para modular dichos receptores.
Se proporcionan a un individuo métodos de terapia que comprenden administrar un compuesto de la fórmula (I), o su sal o solvato, o una composición farmacéutica que comprende cualquiera de los anteriores. En una variación, el método comprende administrar un compuesto de la fórmula (MI), (Mil), (MI II), (MIV) o (MV) a un individuo en una cantidad efectiva para modular un receptor, tal como un receptor citado en las Tablas 5· y 9. En un aspecto, se proporciona un método para modular el transportador de norepinefriña en un individuo, . en donde el método comprende administrar al individuo un compuesto de la fórmula (MI) , o su sal o solvato. En otro aspecto, se proporciona un método para modular el receptor de progesterona en un individuo, en donde el método comprende administrar al individuo un compuesto de la fórmula (Mil) , o su sal o solvato. En otro aspecto, se proporciona un método para modular el receptor sigma en un individuo, en donde el método comprende administrar al individuo- un compuesto de la fórmula (MIV), o su sal o solvato .
En algunas modalidades, un compuesto como se describe aquí que modula un receptor (un modulador receptor) inhibe el enlace de un ligando en al menos aproximadamente o aproximadamente cualquiera de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% o 100%- como se determina en los ensayos descritos aquí. En algunas modalidades, el modulador receptor reduce una actividad de un receptor en al menos aproximadamente o aproximadamente cualquiera de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% o 100% en comparación a la actividad correspondiente en el mismo sujeto antes de tratamiento con el modulador receptor o comparado con la actividad correspondiente en otros sujetos que no reciben el modulador receptor. En algunas modalidades, el modulador receptor mejora una actividad de un receptor en al menos aproximadamente o aproximadamente cualquiera de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% o 100 o 200% o 300% o 400% o 500% o más, en comparación con la actividad correspondiente en el mismo sujeto antes de tratamiento con el modulador receptor en comparación con la actividad correspondiente en otros sujetos que no reciben el modulador receptor. En algunas modalidades, el modulador receptor es capaz de ligar al sitio activo de un receptor (por ejemplo, un sitio de enlace para un ligando) . En algunas modalidades, el modulador receptor es capaz de ligar a un sitio aloestérico de un receptor.
En otro aspecto de la invención, aquí se proporciona un método para evitar o tratar una enfermedad o condición aquí descrita, en un individuo que comprende administrar al individuo una cantidad efectiva de un compuesto de acuerdo con las fórmulas (MI), (Mil), (MUI), (MIV) o (MV) , o su sal, o una composición farmacéutica que comprende cualquiera de los anteriores.
En otro aspecto de la invención, aquí se proporciona un método para tratar cáncer de próstata que comprende administrar a un individuo que lo requiere, una cantidad terapéutica efectiva de un compuesto de acuerdo con las fórmulas (MI), (MU), (MUI), (MIV) o (MV) , o su sal, o una composición farmacéutica que comprende cualquiera de los anteriores. En una modalidad particular con respecto al método para tratar cáncer de próstata en un individuo, el compuesto es de acuerdo con las fórmulas (MI) o (Mil), o su sal o solvato. En una modalidad particular respecto al método para tratar cáncer de próstata en un individuo, el compuesto es de acuerdo con las fórmulas (MUI), (MIV) o (MV) , o su sal o solvato. En una modalidad particular con respecto al método para tratar cáncer de próstata en un individuo, el compuesto es de acuerdo con las fórmulas (Mil), (MUI), o (MIV), o su sal o solvato.
En una modalidad, con respecto al método del tratamiento, la enfermedad o condición se elige de enfermedad de Parkinson, y enfermedad de Alzheimer. Esto es, en una modalidad, se proporciona un método para tratar enfermedad de Parkinson, en donde el método comprende administrar a un individuo, una cantidad terapéutica efectiva de un compuesto de la fórmula (I), o su sal o solvato. En otra modalidad, se proporciona un método para tratar enfermedad de Alzheimer, en donde el método comprende administrar a un individuo, una cantidad terapéutica efectiva de un compuesto de la fórmula (I), o su sal o solvato.
En una modalidad particular, se proporciona un método para tratar enfermedad de Parkinson, en donde el método comprende administrar a un individuo que lo requiere, un compuesto de la fórmula (MI), o su sal o solvato, o composición farmacéutica que comprende cualquiera de los anteriores. En otra modalidad, se proporciona un método para tratar enfermedad de Alzheimer, en donde el método comprende administrar a un individuo que lo requiere, un compuesto de la fórmula (MI), o su sal o solvato, o una composición farmacéutica que comprende cualquiera de los anteriores.
También se proporcionan métodos para tratar cáncer de próstata, alopecia, carcinoma hepatocelular o acné vulgaris, en donde el método comprende administrar a un individuo una cantidad terapéutica efectiva de un compuesto de la fórmula (I), o su sal o solvato. En un aspecto, el método comprende administrar un compuesto de la fórmula (MI), (Mil), (MUI) o (MIV) . En una modalidad, el método es un método para tratar cáncer de próstata. En otra modalidad, el método es un método para tratar alopecia. Todavía en otra modalidad, el método es un método para tratar carcinoma hepatocelular. Todavía en otra modalidad, el método es un método para tratar acné vulgaris.
En una variación particular, se proporciona un método para tratar cáncer de próstata, alopecia, carcinoma hepatocelular o acné vulgaris, en donde el método comprende administrar a un individuo un compuesto de la fórmula (MI), o su sal o solvato. En otra variación, se proporciona un método para tratar cáncer de próstata, alopecia, carcinoma hepatocelular o acné vulgaris, en donde el método comprende administrar a un individuo, un compuesto de la fórmula (Mil), o su sal o solvato. En una modalidad adicional, se proporciona un método para tratar cáncer de próstata, alopecia, carcinoma hepatocelular o acné vulgaris, en donde el método comprende administrar a un individuo un compuesto de la fórmula (MUI) , o su sal o solvato. En otra modalidad, se proporciona un método para tratar cáncer de próstata, alopecia, carcinoma hepatocelular o acné vulgaris, en donde el método comprende administrar a un individuo, un compuesto de la fórmula (MIV) , o su sal o solvato.
En otra variación, se proporciona un método de control natal para un individuo femenino, en donde el método comprende administrar un compuesto de la fórmula (Mil) al individuo. En una variación, el compuesto se administra al individuo en una cantidad para evitar embarazo. En otra variación, el compuesto se administra al individuo en una cantidad para abortar el embarazo. En una variación, el compuesto (Mil) se suministra a un individuo femenino que está embarazado. En otra variación, el compuesto (Mil) se proporciona a un individuo femenino que no está embarazado.
En una variación adicional, se proporciona un método para tratar depresión, en donde el método comprende administrar a un individuo una cantidad terapéutica efectiva de un compuesto de la fórmula (MIV) , o su sal o solvato, o una composición farmacéutica que comprende cualquiera de los anteriores .
En una variación adicional, se proporciona un método para tratar un desorden de déficit de atención, en donde' el método comprende administrar a un individuo una cantidad terapéutica efectiva de un compuesto de la fórmula (MI), o su sal o solvato, o una composición farmacéutica que comprende cualquiera de los anteriores.
En cualquiera de los métodos proporcionados, en un aspecto, el individuo es un humano.
En una modalidad, el tratamiento de una enfermedad o condición con un compuesto de la invención o su sal farmacéutica aceptable, se acompaña por ninguno o menos efectos secundarios que los asociados con las terapias actualmente disponibles para la enfermedad o condición y/o mejoran la calidad de vida del individuo.
Un régimen de tratamiento que involucra un compuesto de la fórmula (I) puede involucrar administrar el compuesto a un individuo, tal como a humano, en dosis de entre aproximadamente 0.01 y aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal, al menos una vez al día y durante el periodo de tiempo requerido para lograr el efecto terapéutico. En otras variaciones, la dosis diaria (u otra frecuencia de dosis) de un compuesto de la fórmula (I) está entre aproximadamente 0.01 y aproximadamente 8 mg/kg; o entre aproximadamente 0.01 a aproximadamente 6 mg/kg; o entre aproximadamente 0.01 y aproximadamente 4 mg/kg; o entre aproximadamente 0.01 y aproximadamente 2 mg/kg; o entre aproximadamente 0.01 y aproximadamente 1 mg/kg; o entre aproximadamente 0.03 y aproximadamente 10 mg/kg; o entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10 mg/kg; o entre aproximadamente 2 y aproximadamente 10 mg/kg; o entre aproximadamente 4 a aproximadamente 10 mg/kg; o entre aproximadamente 6 a aproximadamente 10 mg/kg; o entre aproximadamente 8 a aproximadamente 10 mg/kg; o entre aproximadamente 0.1 y aproximadamente 5 mg/kg; o entre aproximadamente 0.1 y aproximadamente 4 mg/kg; o entre aproximadamente 0.5 y aproximadamente 5 mg/kg; o entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5 mg/kg; o entre aproximadamente 1 y aproximadamente 4 mg/kg; o entre aproximadamente 2 y aproximadamente 4 mg/kg; o entre aproximadamente 1 y aproximadamente 3 mg/kg; o entre aproximadamente 1.5 y aproximadamente 3 mg/kg; o entre aproximadamente 2 y aproximadamente 3 mg/kg; o entre aproximadamente 0.03 y 4 mg/kg; o entre aproximadamente 0.03 mg/kg y 2 mg/kg; o entre aproximadamente 0.05 y 10 mg/kg; o entre aproximadamente 0.05 y 8 mg/kg; o entre aproximadamente 0.05 y 4 mg/kg; o entre aproximadamente 0.05 y aproximadamente 3 mg/kg; o entre aproximadamente 10 kg a aproximadamente 50 kg; o entre aproximadamente 10 a aproximadamente 100 mg/kg o entre aproximadamente 10 a aproximadamente 250 mg/kg; o entre aproximadamente 50 a aproximadamente 100 mg/kg o entre aproximadamente 50 y 200 mg/kg; o entre aproximadamente 100 y aproximadamente 200 mg/kg o entre aproximadamente 200 y aproximadamente 500 mg/kg; o una dosis sobre aproximadamente 100 mg/kg; o una dosis sobre aproximadamente 500 mg/kg.
Un compuesto de la fórmula (I) puede administrarse a un individuo de acuerdo con un régimen de dosis efectivo por un periodo de tiempo o duración deseada, tal como al menos aproximadamente una semana, al menos aproximadamente 2 semanas, al menos aproximadamente tres semanas, al menos aproximadamente un mes, al menos aproximadamente 2 meses, al menos aproximadamente 3 meses, al menos aproximadamente 6 meses, o al menos aproximadamente 12 meses o más. En una variación, se administra un compuesto de la fórmula (I) a un individuo en un programa diario o intermitente por la duración de la vida del individuo.
La frecuencia de dosis de un compuesto de la fórmula (I) puede ser aproximadamente una dosis semanal. La frecuencia de dosis de un compuesto de la fórmula (I) puede ser de aproximadamente una dosis una vez diaria, dosis dos ¦veces diaria o una dosis de tres veces diarias. La frecuencia de dosis de un compuesto de la fórmula (I) puede ser aproximadamente una dosificación de tres veces a la semana o una dosis de cuatro veces a la semana o puede ser una dosis de dos veces a la semana. La frecuencia de dosis de un compuesto de la fórmula (I) puede ser más que aproximadamente una dosis a la semana pero menos que aproximadamente dosis diarias. La frecuencia de dosis de un compuesto de la fórmula
(I) puede ser aproximadamente una dosis de una vez al mes. La frecuencia de dosis de un compuesto de la fórmula (I) puede ser aproximadamente una dosis de dos veces a la semana. La frecuencia de dosis de un compuesto de la fórmula (I) puede ser más de aproximadamente dosis una vez al mes pero menos que aproximadamente dosis de una vez a la semana. La frecuencia de dosis de un compuesto de la fórmula (I) puede ser intermitente (por ejemplo, dosis una vez diaria por 7 días seguido por sin dosis por 7 días, repetido por cualquier periodo de tiempo de 14 dias, tal como aproximadamente 2 meses, aproximadamente 4 meses, aproximadamente 6 meses o más) . La frecuencia de dosis de un compuesto de la fórmula
(I) puede ser Continúa (por ejemplo, dosis una vez a la semana por semanas Continúas) . Cualquiera de las frecuencias de dosis puede emplear cualquiera de los compuestos aquí descritos, o su sal o solvato, junto con cualquiera de las dosis aquí descritas.
Equipos
La invención además proporciona equipos que comprende un compuesto de la fórmula (I) . Los equipos pueden incluir opcionalmente un conjunto de instrucciones, generalmente instrucciones escritas, aunque también es aceptable un medio de almacenamiento electrónico (por ejemplo, disquete magnético o disco óptico) que contiene instrucciones. Las instrucciones incluidas con el equipo generalmente incluye la información en cuanto a componentes y su administración a un individuo, tal como información respecto a dosis, programa de dosis, y ruta de administración. En algunas modalidades, el equipo incluye (a) un compuesto de la fórmula (I) o su farmacéuticamente aceptable su sal; y (b) instrucciones para uso en una condición o desorden aquí descritos, tal como cáncer de próstata, enfermedad de Alzheimer y enfermedad de Parkinson. Los equipos pueden emplearse para cualquiera uno o más de estos usos aquí descritos, y de acuerdo con esto pueden contener instrucciones para cualquiera uno o más de los usos establecidos (por ejemplo, tratar y/o evitar y/o retrasar el inicio y/o el desarrollo de cualquier indicación aquí descrita) .
En algunas modalidades, la cantidad del compuesto de la fórmula (I) en un equipo es una cantidad suficiente para producir un resultado terapéutico deseado (por ejemplo, reducir la severidad o duración de, estabilizar la severidad de, o eliminar uno . o más síntomas de una indicación a tratar) .
Equipos en general comprenden empaque conveniente. Los equipos pueden comprender uno o más recipientes que comprenden cualesquiera compuesto o compuestos aquí descritos. Empaque conveniente incluye pero no está limitado a, ampolletas, botellas, tarros, empaque flexible (por ejemplo, bolsas de plástico) y semejantes. Cada componente, (cuando hay más de un componente) puede empacarse en recipientes separados o algunos componentes pueden combinarse en un recipiente cuando lo permiten la reactividad cruzada y la vida en almacenamiento. Los equipos pueden proporcionar opcionalmente componentes adicionales tales como excipientes.
Los recipientes pueden ser formas de dosis unitarias paquetes a granel, (por ejemplo, paquetes de múltiples dosis), o dosis sub-unitarias . Por ejemplo, pueden proporcionarse equipos que contengan dosis suficiente de un compuesto de la fórmula (I), para proporcionar tratamiento efectivo de un individuo que tiene una indicación para tratar por un periodo prolongado, tal como cualquiera de una semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 6 semanas, 8 semanas, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 7 meses, 8 meses, 9 meses o más. Los equipos también pueden incluir dosis de múltiples unidades de los compuestos e instrucciones para uso y ser empacados en cantidades suficientes para almacenamiento y uso en farmacias (por ejemplo, farmacias de hospitales y farmacias de formulación) .
Métodos para Preparar y Aislar Compuestos de la Invención
Métodos sintéticos para generar compuestos de diarilhidantoina, se describen en las Publicaciones de las Patentes de los E.U.A. Números 2007/0004753, 2007/0254933 y 2009/0111864, que se incorporan aquí por referencia en su totalidad y específicamente respecto a métodos sintéticos. Los compuestos (MI)-(MV) también pueden elaborarse de acuerdo con los métodos detallados en los presentes Ejemplos.
Los siguientes Ejemplos se proporcionan para ilustrar pero no limitar la invención.
Ejemplo 1. Aislamiento e Identificación de
Compuestos de Plasma de Rata.
Metabolitos de RD162' se aislaron e identificaron en muestras de plasma de estado estables a partir del grupo de alta dosis de un estudio de toxicologia oral de 26 semanas en ratas Sprague Dawley machos y hembras.
Muestras de plasma de rata se almacenaron a aproximadamente -20 grados C o más frío. Las muestras se obtuvieron de sujetos que reciben RD1621. Las muestras de estudio se prepararon para inyección HPLC por precipitación de cada muestra (100 µ?>) con un volumen 3-x (300 µ?>) de acetonitrilo . Las muestras se centrifugaron a 16,000 g por 5 min. Después de centrifugación, 380 µ L de cada sobrenadante se transfieren a un nuevo tubo y evaporan a sequedad en un Speed-Vac. Las muestras evaporadas se reconstituyeron en 50 µ L de ácido fórmico al 0.2% en agua.
Se analizaron muestras utilizando las siguientes condiciones LC/MS/MS: HPLC: Sistema Shimadzu VP; Fase Móvil: ácido fórmico al 0.2% en agua (A) y ácido fórmico 0.15% en metanol (B) ; Columna: .1 x 50 mm columna TITAN C18 (Peeke Scientific) ; Volumen de Inyección: 20 µ?,; Gradiente: 5-75% B en 30 min; Gasto de Flujo: 100 / L/min; Espectrómetro de Masas: Applied Biosystems/MDS SCIEX Q-STAR; Interfase: división IonSpray a -1/10; barrido de iones precursores: TOF Positivo de 100-900 amu; barrido de iones producto: Ion Producto TOF de 60-900. amu del ión más intenso en el Barrido de Ion Precursor; Calibración TOF: Calibrado externamente utilizando Substrato Renina.
Las muestras se prepararon para inyección y analizaron el mismo día. La Tabla 1 resume los resultados de este análisis.
Tabla 1. Resumen de Metabolitos Identificados por RD162' LC/MS/MS en Plasma de Rata
Muestras
Área Pico MS Animal Número (Tiempo de Muestra TK )
Nombre RT Compuesto 1591 1590 1709
(min) o (2h) (8h) (8h)
Metabolito
(m/z)
RD 162' 26.0 465 5.9e5 4.0e5 l.le6
(MI) 27.8 452 1.3e4 l.Oe4 1.8e4
(MU) 25.1 451 7.5e3 4.2e3 1.2e4
(MI I I) 23.3 435 ND ND ND
(MIV) 24.1 449 6. le4 3.2e4 3.0e4
Ejemplo 2. Aislamiento e Identificación de Compuestos en Plasma de Perro.
Metabolitos de RD1621 se aislaron e identificaron en muestras de plasma de estado estable a partir del grupo de alta dosis de un estudio de toxicologia oral de 13 semanas en perros sabuesos machos.
Muestras de plasma de perro se almacenaron a aproximadamente -20 grados C o más frió. Muestras se obtuvieron de los sujetos que reciben RD162' . Las muestras de estudio se prepararon para inyección HPLC al precipitar cada muestra (100 / L) con un volumen 3-x (300 L) de acetonitrilo . Las muestras se centrifugaron a 16,000 g por 5 min. Después de centrifugación, 380 µ\> de cada sobrenadante se transfieren a un nuevo tubo y evaporan a sequedad en un Speed-Vac. Las muestras evaporadas se reconstituyeron en 50 //L de ácido fórmico al 0.2% en agua.
Muestras se analizaron utilizando las siguientes condiciones LC/MS/MS: HPLC: Sistema Shimadzu VP; Fase Móvil: ácido fórmico al 0.2% en agua (A) y ácido fórmico al 0.15% en metanol (B) ; Columna: 1 x ( 50 mm columna TITAN C18 (Peeke Scientific) ; Volumen de Inyección: 20 µ1>; Gradiente: 5-75% B en 30 min; Gasto de flujo: 100 /L/min; Espectrómetro de masas: Applied Biosystems/MDS SCIEX Q-STAR; Interfase: Separación IonSpray a -1/10; Barrido de Iones Precursores: TOF Positivo de 100-900 amu; Barrido de Iones Producto: Ión de Producto TOF de 60-900 amu de ión más intenso en Barrido de Ión Precursor; Calibración TOF: calibrado Externamente utilizando Substrato de Renina.
Las muestras se prepararon para inyección y analizaron el mismo día. La Tabla 2 resume los resultados de este análisis.
Tabla 2. Resumen de Metabolitos RD1621 Identificados por
LC/MS/MS en muestras de Plasma de Perro
Área Pico MS Animal
Número (Tiempo de
Muestra TK )
Nombre RT Compuesto 119 1591 1590 1709
(min) o (2h) (2h) (8h) (8h)
Metabolito
(m/z)
RD 26.0 465 6.3e5 3. le5 3.8e5 4.2e5 162'
(MI) 27.8 452 5.6e4 5.6e4 2.5e4 2.4e4
(MU) 25.1 451 7.5e3 2.7e3 5.8e3 5. le3
(MUI) 23.3 435 ND ND ND ND
(MIV) 24.1 449 3.7e3 7.9e2 2. le3 2.3e3
Ejemplo 3. Aislamiento e Identificación de Compuestos en
Plasma Humano.
Metabolitos de' RD162' se aislaron e identificaron en muestras de plasma de estado estable de pacientes de cáncer de próstata que toman RD162' . Las muestras humanas de estado estable consistieron en cinco muestras Cmax que se obtuvieron en aproximadamente el dia 84 de tratamiento a 240 mg/dia .
Muestras de plasma humano se almacenaron a aproximadamente -20 grados C o más frió. Se obtuvieron muestras de sujetos que reciben RD162'. Las muestras de estudio se prepararon para inyección de HPLC al precipitar cada muestra (100 µ?·) con un volumen 3-x (300 µ?,) de acetonitrilo . Las muestras se centrifugaron a 16,000 g por 5 min. Después de centrifugación, 380 µ L de cada sobrenadante se transfirieron a un nuevo tubo y evaporan a sequedad en un Speed-Vac. Las muestras evaporadas se reconstituyeron en 50 /L de ácido fórmico al 0.2% en agua.
Muestras se analizaron utilizando las siguientes condiciones LC/MS/MS: HPLC: Sistema Shimadzu VP; fase Móvil: ácido fórmico al 0.2% en agua (A) y ácido fórmico al 0.15% en metanol (B) ; Columna: 1 x 50 mm columna TITAN C18 (Peeke Scientific) ; Volumen de Inyección: 20 / L; Gradiente 5-75% B en 30 min; Gasto de flujo: 100 / L/min; Espectrómetro de masas: Applied Biosystems/MDS SCIEX Q-STAR; Interfase: separación IonSpray a -1/10; Barrido de Iones Precursores: TOF Positivo de 100-900 amu; Barridos de Iones Producto: Ión Producto de TOF de 60-900 amu de ión más intenso en Barrido de Ión Precursor; Calibración TOF: Calibrado externamente utilizando Substrato Renina.
Las muestras se prepararon para inyección y analizaron el mismo día. La Tabla 3 resume los resultados de este análisis.
Tabla 3. Resumen de Metabolitos RD162 ' Identificados por
LC/MS/MS en Muestras de Plasma Humano
Área Pico MS ID de Sujeto
(Muestra de Tiempo PK)
Nombre RT Compues3478 1473 3475 1472 3454
(min) to o (lh) (lh) (lh) (lh) (2h)
Metabo- lito
(m/z)
RD162 ' 26.0 465 6.4e5 6.3e5 5.0e5 5.4e5 5.7e5
(MI) 27.8 452 3.8e4 4.5e4 2.5e4 5.4e4 6.2e4
(MU) 25.1 451 1.7e5 1.6e5 1.5e5 1.5e5 1.6e5
(MUI) 23.3 435 2.2e4 1.3e4 1.9e4 1.6e4 1.6e4
Ejemplo 4: Cuantificación de Compuestos en Plasma Humano.
Para estimar las concentraciones de los metabolitos en plasma humano, ensayos LC/MS/MS para (MI), (Mil), y (MUI) se cuantificaron y utilizaron para analizar plasma de 18 pacientes de cáncer de próstata que recibieron RD162' a 150 a 480 mg por día por aproximadamente tres meses. Los resultados de este análisis (Tabla 4) mostraron que (MI) y (Mil) estuvieron presentes a altas concentraciones en el plasma, y (MUI) estuvo presente a bajas concentraciones.
Tabla 4. Concentraciones de Metabolitos RD162' en Plasma de Pacientes Tratados con RD162' por al menos Tres Meses Resumen de Concentraciones en Plasma de Estadísticas Pacientes Expresadas como Porcentaje para Resultado de la Concentración de RD162'
de (MI) (MU) (MUI)
18 Pacientes
Mínimo 16% 49% 1%
Máximo 259% 204% 14%
Promedio 60% 112% 4%
El método empleado para derivar los datos anteriores como sigue. Ensayo de Electro rocío LC/MS/MS de Metabolitos RD162' ((MI), (MU), (MUI)):
Procedimientos de Extracción de Plasma para Determinaciones de Concentración: una muestra de plasma humano (50 µ?,) se agrega a un tubo de vidrio de 10-mL. Un volumen de 10-// L de solución de material IS se agrega al tubo, seguido por adición de amortiguador fosfato 1 M a pH 3.0 (400 µ?·) . La mezcla se sometió a torbellino y se agrego tetrabutilmetil éter (5 mL) . El tubo se sometió a torbellino por 30 seg. y centrifugó a 4540 g por 10 min. El solvente se transfirió a un tubo de vidrio y secó bajo flujo de aire a 35-40 grados C. La muestra se reconstituyeron con 100 µ L de metanol: ácido fórmico al 0.1% en agua (7:3) sometió a torbellino por 30 seg, y sónico por 5 min. La muestra se transfiere a una ampolleta de HPLC y centrifugaron a 4540 g por 5 min. Un volumen de 20- µ L después se inyecta en un sistema LC/MS/MS para ensayo.
Parámetros LC/MS/MS para Metabolitos RD162' ((MU) y (MUI)) : Parámetros de Instrumento de Modo de Ión Positivo - Función 1; Polaridad: ES+ ; tipo de Datos: datos MRM; tipo de Función: MRM de 8 canales.
Canal Reacción ResiVolts Energía Compuesdencia de de Col. to (seg) cono
1 435.35> 0.05 55.0 35.0 (MUI)
152.30
2 435.35> 0.05 55.0 35.0 (MUI)
164.30
3 435.35> 0.05 55.0 35.0 (MUI)
178.30
4 435.35> 0.05 55.0 25.0 (MUI)
418.30
5 451.25> 0.05 55.0 35.0 (MU)
178.30
6 451.25> 0.05 55.0 27.0 (MU)
195.40
7 469.30> 0.05 50.0 27.0 D4-RD
213.40 162' norma interna
8 469.30> 0.05 50.0 27.0 D4-RD
384.40 162 ' norma interna
Condiciones iniciales de HP1100 LC: Columna HPLC:
ACE C18, 5 juñ, 150 x 2.1 mm id. Solventes: A% 40.0; B% 60.0; C% 0.0; D% 0.0; Válvula A ajustada al canal 1; Válvula B ajustada al canal 1. Flujo: 0.300 mL/min; tiempo de parada: 9.0 min; Presión Mínima: 0 bar; Presión Máxima: 300 bar; Temperatura de Horno Izquierdo: 30.0 grados C; Temperatura de Horno Derecho: 30.0 grados C.
Programa de Gradiente de Bomba HPl 100 LC:
Tiempo A% B% C% D% Flujo Presión
(mL/min)
0.00 40.0 60.0 0.0 0.0 0.300 300
1.50 40.0 60.0 0.0 0.0 0.300 300
1.60 10.0 90.0 0.0 0.0 0.300 300
3.50 10.0 90.0 0.0 0.0 0.300 300
3.60 40.0 60.0 0.0 0.0 0.300 300 Parámetros LC/MS/MS para Metabolito RD162' (MI)
Parámetros de Instrumento - Función 1
ES-; tipo de Datos: datos MRM; tipo de Función
canales .
Canal Reacción ResiVolts Energía Compuesto dencia de de Col.
(seg) cono
1 373.30> 0.05 50.0 35.0 Fenilcumarina 315.20 IS
2 373.30> 0.05 50.0 25.0 Fenilcumarina 343.30 IS
3 373.30> 0.05 50.0 25.0 Fenilcumarina 358.30 IS
4 450.20> 0.05 30.0 30.0 (MI)
158.00
5 450.20> 0.05 30.0 15.0 (MI)
406.30
Columna HPLC: ACE C18, 5 µ?, 150 x 2.1 mm id; modo de Bomba HP1 100 LC : Isocrática; condiciones de solvente de Isocratico: A% 25.0; B% 75.0; ' C% 0.0; D% 0.0; Válvula A ajustada al canal 1; Válvula B ajustada al canal 1; Flujo: 0.300 mL/min; Tiempo de Parada: 4.5 min; Presión Mínima: 0 bar; Presión Máxima: 300 bar: Temperatura de Horno Izquierdo: 30.0 grados C; Temperatura de Horno Derecho: 30.0 grados C.
Síntesis de los Compuestos de la Invención
Ejemplo 5. Preparación de ácido 4- ( 3- ( 4-ciano-3-(trifluorometil) fenil) -5, 5-dimetil-4-oxo-2-tioxoimidazolidin-1-il ) -2-fluorobenzoico (Compuesto (MD) :
4- (3- (4-Ciano-3- (trifluorometil ) fenil) -5, 5-dimetil-4-oxo-2-tioxoimidazolidin-l-il) -2-fluoro-N-metilbenzamida se suspenden en HCl concentrado y calientan a 120 grados C en un recipiente a presión por 48 h. La reacción se supervisa por cromatografía capa delgada (TLC = Thin Layer Chromatography ) . La mezcla de reacción se enfría a temperatura ambiente. El residuo se filtra y purifica por cromatografía de gel sílice (100-200 malla, eluyente: 0-5% metanol-diclorometano) . MS (m/z) : 452 (M+l) . HPLC: Columna, YMC ODS AQ, 4.6x250 mm, 5 jum, Fase Móvil A: 10 mM acetato de Amonio, Fase Móvil B: Acetonitrilo, Gradiente, Isocratico: 55% A: 45% B, tiempo de Retención, 3.804 min, HPLC Pureza, 95.82%, Gasto de flujo, 1 mL/min. XH RMN (CDC13, base libre) : d (ppm) 8.22 (t, 1H) , 8.0 (d, 1H) , 7.98 (s, 1H), 7.82 (d, 1H) , 7.2 (m, 2H) 1.6 (s, 6H) .
Ejemplo 6. Preparación de 4- (3- (4-Ciano-3-( trifluorometil ) fenil) -5, 5-dimetil-4-oxo-2-tioxoimidazolidin-1-il ) -2-fluorobenzamida (Compuesto (Mil)).
Ej emplo 6a. Preparación de 4-bromo-2-fluorobenzamida :
Br
una solución agitada de ácido 4-bromo fluorobenzoico (1.5 g, 6.84 mmoles) en DC (15 mL) se agrega por gotas cloruro de oxalilo (3.45 g, 27.39 mmoles) a O grados C. Después de completarse la adición, 2 a 3 gotas de DMF se agregan a 0 grados C y la mezcla de reacción se. agita por 2 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentra bajo presión reducida y el residuo se disuelve en THF seco (20 mL) . A esta solución se agrega amoniaco ac. (50 mL) a 0 grados C. La mezcla de reacción se calienta a y agita a temperatura ambiente por 30 min. El solvente se retira bajo presión reducida y el residuo se formó en azeótropo con tolueno para obtener 1.3 g de producto. 1H RMNM (CDC13, base libre): d (ppm) 8.0 (t, 1H) , 7.40 (d, 1H) , 7.30 (d, 1H) , 6.60 (bs, 1H) , 5.9 (bs, 1H) .
Ejemplo 6b. Preparación de ácido 2- ( 4-carbamoil-3-fluoro enilamino) -2-metilpropanoico :
F
4-Bromo-2-fluorobenzamida (0.5 g, 2.29 mmoles) , ácido 2 aminoisobutirico (0.354 g, 3.54 mmoles), Cul (87 mg, 0.458 mmol), y K2C03 (0.790 g, 5.72 mmoles) se mezclaron en DMF (5 mL) . H20 (0.5 mL) y TEA (11 mg, 0.1 mmol) se agregaron seguido por 2-acetil ciclohexanona (60 mg, 0.428 mmol). La mezcla de reacción se calienta a 95-100 grados C por 48 h. La mezcla de reacción se diluye con H20 (20 mL) y la capa acuosa se lava con etil acetato (20 mL) . La acuosa capa se acidifica con ácido cítrico 1M a pH 4 y el producto se extrae con etil acetato (20 mL x 3) . La capa orgánica combinada se secó sobre Na2S04 anhidro y concentró bajo presión reducida para obtener el producto. 1H R N (DMSO, base libre) : d (ppm) 7.55-7.45 (t, 1H), 7.20 (bs, 1H) , 7.05 (bs, 1H) , 6.80 (bs, 1H), 6.35-6.30 (d, 1H) , 6.18-6.10 (d, 1H) , 1.42 (s, 6H) .
Ejemplo 6c. Preparación de metil 2- ( -carbamoil-3-fluorofenilamino) -2-metilpropanoato :
F
°, CH3
CHg
Una solución de ácido 2- ( -carbamoil-3-fluorofenilamino) -2-metilpropanoico y K2C03 (1.5 equivalentes) en DMF (10 veces) se agita a RT por 10 min. Mel (1.5 equivalentes) se agrega y la mezcla de reacción se calienta a 55-60 grados C por 2h. El solvente se retira bajo presión reducida y la mezcla de reacción se vacia en agua, extrae con etil acetato (100 mL x 2), seca sobre Na2S04, concentra y purifica por cromatografía en columna. 1H RMN (CDCI3, base libre) : 5 (ppm) 7.9 (t, 1H) , 6.5 (bs, 1H) , 6.4 (d, 1H) , 6.2 (d, 1H), 5.6 (bs, 1H) , 4.6 (bs, 1H) , 3.75 (s, 3H) , 1.6 (s, 6H) .
Ejemplo 6d. Preparación de 4-isotocianato-2-( trifluorometil ) benzonitrilo :
Tiofosgeno (10 g, 87.71 mmoles) se disuelve en agua y agita a temperatura ambiente por 10 min. 4-Amino-2-trifluorometil-benzonitrilo se agrega en porciones a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente por 2 h. El producto se extrae con diclorometano, y la capa orgánica se lava con agua, salmuera, seca sobre sulfato de sodio y evapora para obtener 12 g de producto. 1ti RMN (CDC13) : d (ppm) 7.84 (d, 1H) , 7.58 (s, 1H) , 7.48 (d, 1H) .
Ejemplo 6e. Preparación de 4- (3- (4-ciano-3-(trifluorometil ) fenil) -5, 5-dimetil-4-oxo-2-tioxoimidazolidin-1-il) -2-fluorobenzamida (Compuesto (MID) :
Una solución de metil 2- ( -carbamoil-3-fluorofenilamino) -2-metilpropanoato y 2- (trifluorometil) -4-isotiocianatobenzonitrilo (1.5 equivalentes) en DMSO seco (5 mL por mmol) se calentó a 80-82 grados C por 12 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua y extrajo con etil acetato. La capa orgánica combinada se concentró bajo presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice eluyendo con Acetona-Hexanos al 40%. MS (m/z) : 451 (M+l) . HPLC: Columna, YMC ODS A, 4.6x150 mm, 5 ym, Fase Móvil A: Acetato de amonio 10 inM, Fase Móvil B: Acetonitrilo, Gradiente, 10% B hasta 2 min, 10% a 90% B en 3 min, se retiene por 3 min, 90% a 10% B en 5 min, Tiempo de retención, 2.782 min, HPLC Pureza, 99.4%, Gasto de Flujo, 1 mL/min. XH RMN ( CDC13 , Base libre) : d (ppm) 8.3 (t, 1H) , 8.0 (d, 1H) 7.98 (s, 1H), 7.8 (d, 1H) , 7.27 (d, 1H) , 7.2 (d, 1H) , 6.65 (d, 1H), 6.0 (s, 1H) , 1.62 (s , 6H) .
E emplo 7_. Preparación de 4- (3- (4-ciano-3- (trifluorometil ) fenil) -5, 5-dimetil-2, 4-dioxoimidazolidin-l-il) -2-fluorobenzamida (Compuesto (MUI))
A una solución de 4- ( 3- (4-ciano-3- (trifluorometil) fenil) -5, 5-dimetil-4-oxo-2-tioxoimidazolidin-1-il) -2-fluorobenzamida (Compuesto (Mil ) ) (1.48 g, 3.4 mmoles) en etanol (60 mL) se agrega H202 acuoso al 30% (30 mL) a temperatura ambiente. La solución se calentó a reflujo por 1 h. Después de retirar etanol, salmuera (100 mL) se agrega y la capa acuosa se extrae con etil acetato. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio y concentró bajo presión reducida para obtener el producto crudo que se purificó por cromatografía en gel de sílice. MS (m/z) : 435 (M+l) . HPLC: Columna, YMC ODS A, 4.6x150 mm, 5 µ?t?, Fase Móvil A: Acetato de amonio 10 mM, Fase Móvil B: Acetonitrilo, Gradiente, 10% B hasta 2 min, 10% a 90% B en 6 min, se retiene por 10 min, 90% a 10% B en 4 min, Tiempo de retención, 9.548 min, Pureza HPLC, 98.08%, Gasto de Flujo, 1 mL/min. 1H RMN (CDC13, Base libre): d (ppm) 8.3 (t, 1H) , 8.18 (s, 1H) , 8.2 (d, 1H), 7.96 (d, 1H) , 7.25 (m, 2H) , 6.65 (bd, 1H) , 5.9 (bs, 1H) 1.65 (s, 6H) .
Ejemplo 8^ Preparación de 4- (3- (4-ciano-3- (trifluorometil) fenil) -5, 5-dimetil-2, 4-dioxoimidazolidin-l-il ) -2-fluoro-N-metilbenzamida (Compuesto (MIV) )
A una solución de 4- ( 3- ( -ciano-3- (trifluorometil) fenil) -5, 5-dimetil-4-oxo-2-tioxoimidazolidin-1-il) -2-fluoro-N-metilbenzamida (1.52 g, 3.4 mmoles) en etanol (60 mL) se agrega ?202 acuoso al 30% (30 mL) a temperatura ambiente. La solución se calienta al reflujo por 1 h. Después de retirar etanol, salmuera (100 mL) se agrega y la capa acuosa se extrae con etil acetato. La capa orgánica se seca sobre sulfato de sodio y concentra bajo presión reducida para obtener el producto crudo que se purificó por cromatografía en gel de sílice. MS (m/z) , 449 (M+ 1) . HPLC: Columna, YMC ODS A, 4.6x150 mm, 5 µ??, Fase Móvil A: Acetato de amonio 10 mM, Fase Móvil B: Acetonitrilo, Gradiente, 10% B hasta 2 .min, 10% a 90% B en 3 min, retiene por 3 min, 90% a 10% B en 5 min, Tiempo de retención, 8.976 min, Pureza HPLC, 98.46%, Gasto de Flujo, 1 mL/min. XH RMN (CDC13, Base libre) : d (ppm) 8.22 (t, 1H) , 8.18 (s, 1H) , 8.04 (d, 1H), 7.95 (d, 1H) , 7.28 (d, 1H) , 7.22 (d, 1H) , 6.70 (m, 1H) , 3.05 (d, 3H) , 1.65 (s, 6H) .
Ejemplo 9. Preparación de ácido 4- (3- (4-ciano-3-(trifluorometil) fenil) -5, 5-dimetil-2, 4-dioxoimidazolidin-l-il ) -2-fluorobenzoico (Compuesto ( V) ) :
Una solución de ácido 4- ( 3- ( 4-ciano-3-(trifluorometil) fenil) -5, 5-dimetil-4-oxo-2-tioxoimidazolidin-1-il ) -2-fluorobenzoico (50 mg, 0.11 mmol) en cloruro de tionilo (0.5 mL, 67.7 mmoles) se agita a 90 grados C por 15 h. La mezcla de . reacción se concentra bajo presión reducida a sequedad. Agua-hielo (20 mL) se agrega al residuo y el producto se extrae con etil acetato (60 mL) . La capa orgánica se seca sobre sulfato de sodio anhidro y evapora bajo presión reducida para dar por resultado producto crudo, que se purifica por HPLC de fase inversa para dar por resultado ácido 4- (3- (4-ciano-3- (trifluorometil) fenil) -5, 5-dimetil-2, -dioxoimidazolidin-l-il ) -2-fluorobenzoico . 1H RMN OMS0-d6 (BASE LIBRE) : d (ppm) 8.39 (d, 1H) , 8.25 (s, 1H) , 8.1 (d, 1H), 8.0 (t, 1H), 7.45 (d, 1H) , 7.4 (d, 1H) , 1.58 (s, 6H) .
Actividad Biológica de los Compuestos de Prueba
Los siguientes ejemplos ilustran la actividad biológica de los Compuestos (MI)- (MIV) . Ensayos de enzimas y enlace estándar tales como aquellos descritos a Continúación, pueden realizarse por los practicantes tales como por ejemplo, Cerep, Inc. (Redmond, A, USA) ; MDS Pharma Services (King of Prussia, PA, USA) ; NovaScreen Biosciences/Caliper Life Sciences (Mountain View, CA, USA) ; y EuroScreen FAST (Gosselies, Bélgica) .
De iniciones :
Se emplean las siguientes abreviaturas de receptor en los siguientes ejemplos:
Adenosina para Ai, A2a y A3; Adrenérgico para a2 y a2; Angiotensina para ??? y AT2; Benzodiazepina para BZD; Bradiquinina para Bi y B2; Cannabinoide para CBi y CB2; Colecistoquinina para CCKi y CCK2; Factor de Liberación de Corticotropina para CRFi; Dopamina para Di, D2s, D3, D4.4; Endotelina para ETA y ETB; ácido Gamma-aminobutirico para GABA; Ácido gamma-aminobutirico ionotrópico para GABAA; Alfa-amino-3-hidroxil-5-metil-4-isoxazolepropionato para AMPA; Ácido N-Metil-D-aspártico para NMDA; Histamina para ??, H2 y H3; Leucotrieno para LTB4 y LTD ; Hormona de Liberación de Gonadotropina para GnRH; Melanocortina para MC4; Muscarinico para M; Neuroquinina para NKi, NK2 y NK3; Neuropéptido para Y; Opioide Nociceptina para NOP; fenciclidina para PCP; Purinérgico para P2X y P2Y; Serotonina para 5-HT; Somatostatina para ssts; Glucocorticoide para GR; Estrógeno para ER; Progesterona para PR; Hormona tiroide para TR; Hormona para Liberación de Tirotropina para TRHi; Vasopresina para Via y V2; ATP-Sensible a K+ para KATP; K+ disparado por voltaje, para Kv; y Ca2+-de pequeña conductancia-dependiente para SKca- . Las siguientes abreviaturas de enzima se emplean en los siguientes ejemplos: Fosfodiesterasa para PDE1B, PDE2A, PDE3A, PDE4D, PDE5; Proteina Quinasa C alfa para PKCa; Catecol-O-metil transferasa para CO T; Monoamina oxidasa para MAO-A y MAO-B; y Feniletanolamina-N-metil transferasa para PNMT.
Ejemplo Bl . Farmacología In-Vitro: Actividad de Enlace de Compuestos (MI ) - (MIV) .
Los compuestos (MI) -(MIV) se evaluaron por criba a
10 µ? contra los objetivos mostrados en la Tabla 5. Métodos de ensayo de enlace de radioligando utilizados para medir la actividad de compuestos de la invención, serán familiares para aquellos con detreza en la técnica. Por cada ensayo de enlace, los procedimientos generales y condiciones experimentales se resumen en las Tablas 5 y 6, respectivamente. En cada caso de ensayo, los componentes de ensayo tales como, por ejemplo el tipo de célula, ligando, compuesto de referencia y semejantes, serán familiares a los practicantes de dicho ensayo.
Tabla 5 : Procedimientos Generales
Ensayo Origen Compuesto de
Referencia
Ai (h) (aa) hr1 (células CHO) DPCPX
A2A (h) (ag) hr1 (células HEK-293) ECA
A3 (H) (ag) hr1 (células HEK-293) IB-MECA ai (ns)2 (aa) Corteza cerebral de rata prazosina a2 (ns)2 (aa) Corteza cerebral de rata yohimbina ß? (h) (ag) hr1 (células HEK-293) atenolol ß2 (h) (ag) hr1 (células CHO) ICI 118551
ATi (h) (aa) hr1 (células HEK-293) saralasina
AT2 (h) (ag) hr1 (células CHO) saralasina
BZD Corteza cerebral de rata diazepam
(central) (ag)
Bi (h) (ag) hr1 (células CHO) desArg10-KD
B2 (?) (ag) hr1 (células CHO) NPC 567
CBi (h) (ag) hr1 (células CHO) CP 55940
CB2 (h) (ag) hr1 (células CHO) WIN 55212-2
CCKi (CCKA) (h) hr1 (células CHO) CCK-8s (ag)
CCK2 (CCKB) (h) hr1 (células CHO) CCK-8 s (ag)
CRFi (h) (ag) hr1 (células CHO) Sauvagina
Di ( ) (aa) hr1 (células CHO) SCH 23390 D2S (h) (aa) hr1 (células HEK-293) (+) butaclamol
D3 (h) (aa) hr1 (células CHO) ( + ) butaclamol
D44 (h) (aa) hr1 (células CHO) Clozapina
ETA (h) (ag) hr1 (células CHO) endotelina-1
ETB (h) (ag) hr1 (células CHO) endotelina-3
GABA (ns)2 Corteza cerebral de GABA
(ag) rata
AMPA (ag) Corteza cerebral de L-glutamato rata
Kainate (ag) Corteza cerebral de Ácido kainico rata
NMDA (aa) Corteza cerebral de CGS 19755 rata
Hi (h) (aa) hr1 (células . HEK-293) pirilamina
H2 (h) (aa) Hr1 (células CHO) cimetidina
Continúa Tabla 5
Ensayo Origen Compuesto de
Referencia
H3 (h) (ag) hr1 (células (R) a-Me-histamina
CHO)
12 (aa) Corteza idazoxan
cerebral de
rata
BLTi (LBT4) ( h ) hr1 (células CHO) LTB4
(ag)
CysLTi (LTD4) (h) hr1 (células CHO) LTD4
(ag)
GnRH (LH-RH) (ag) glándula [D-Trp6] -LH-RH pituitaria de rata
MC4 ( ) (ag) hr1 (células CHO) NDP-a-MSH
M (ns)2 (aa) Corteza cerebral Atropina
de rata
NKi ( h ) (ag) Células U-373MG [Sar9,
(endógenas ) Met (02) n] -SP
NK2 ( h ) (ag) hr1 (células CHO) [Nleu10] - MKA (4-10)
NK3 (h) (aa) hr1 (células CHO) SB 222200
Y (ns)2 (ag) Corteza cerebral NPY
de rata
N neuronal a-BGTX- Corteza cerebral nicotina insensible (a4ß2) de rata
(ag)
Opioide (ns)2 (aa) Corteza cerebral naloxona
de rata
NOP (ORL1) ( h ) (ag) hr1 (células HEK- nociceptina
293)
PCP (aa) Corteza cerebral K 801
de rata
P2X (ag) Vejiga urinaria de A, ß- eATP
rata
P2Y (ag) Corteza cerebral dATPaS
de rata
5-HT (ns)2 (ag) Corteza cerebral serotonina
de rata
s (ns)2 (ag) Corteza cerebral haloperidol de rata
sst5 (h) (ag) hr1 (células CHO) somatostatina- 14
GR (h) (ag) Células IM-9 dexametasona
(citosol )
ER (ns)2 (h) (ag) Células MCF-7 17- -estradiol
(citosol)
PR (h) (ag) Células T47D promegestona
(citosol )
TR (TH) (ag) Hígado de rata T3
RHi (h) (ag) hr1 (células CHO) TRH
Via (h) (ag) hr1 (células CHO) [d (CH2 ) 51 , Tyr (
e)2] -AVP
V2 (h) (ag) hr1 (células CHO) AVP
Canal Ca2+ (L, Corteza cerebral nitrendipina sitio de rata
dihidropiridina )
(aa)
Canal2+ (LK, sitio Corteza cerebral diltiazem diltiazem de rata
(benzotiazepinas)
(aa)
Canal Ca2+ (L, Corteza cerebral D 600
sitio verapamil) de rata
( fenilalquilamina)
(aa)
Canal KATP (aa) Corteza cerebral glibenclamida de rata
hERG (preparación hr1 (células HEK- astemizol de membrana) (aa) 293)
Canal Kv (aa) Corteza cerebral a-dendrotoxina de rata
Canal SKCa (aa) Corteza cerebral Apamina
de rata
Canal Na+ (sitio 2) Corteza cerebral veratridina
(aa) de rata
Canal Cl" (GABA- Corteza cerebral picrotoxinina gated) (aa) de rata
Transportador de hr1 (células CHO) protriptilina norepinefriña ( )
(aa)
Transportador hr1 (células CHO) BTCP
dopamina ( ) (aa)
Transportador GABA Corteza cerebral Ácido
(aa) de rata nipecotinico
Transportador de hr1 (células CHO) hemicolinio-3 colina (CHT1) ( h )
(aa)
Transportador 5-HT hr1 (células CHO) imipramina (h) (aa)
(ag) = radioligando agonista; (aa) = radioligando antagonista;
1. hr - recombinante humano; 2. ns - no-selectivo
Tabla 6 : Condiciones Experimentales
nsayo Ligando Conc . No Incubación
Especifico
i ( h ) [3H] DPCPX 1 nM DPCX (1 µ?) 60 min/22
(aa) grados C
A2A ( h ) [3H]CGS 21680 6 nM ECA (µ?) 120 min/22 (ag) grados C
A3 [125I] AB- ECA 0.15 IB-MECA (1 120 min/22
( h ) (ag) nM µ?) grados C i (ns) (a [3H] prazosina 0.25 prazosina 60 min/22 a) nM (0.5 µ?) grados C CGK2 [ 125I ] CCK-8 s 0.08 CCK-8 s (1 60 min/22
(CCKB) nM µ?) grados C
(h) (ag)
Continúa Tabla 6
Ensayo Ligando Conc . No Incubación
Especifico
CRFi (h) [125I] sauva- 0.075 sauvagina 120 min/22
(ag) gina nM (0.5 µ?) grados C
Di (h) [3H] SCH 0.3 nM SCH 23390 60 min/22
(aa) 23390 (1 µ?) grados C
D2S (h) [3H] espipe- 0.3 nM (+) utacla- 60 min/22
(aa) rona mol (10 µp?) grados C
D3 (h) [3H] espipe- 0.3 nM (+) butacla- 60 min/22
(aa) rona mol (10 µp\) grados C
D4(4 (h) [3H] espipe- 0.3 nM (+) butacla- 60 min/22
(aa) rona mol (10 µp?) grados C
ET¾ (h) [125I]endo- 0.03 nM endotelina- 120 min/37
(ag) telina-1 1 (0.1 µ?) grados C
ETB (h) [125I]endo- 0.03 nM endotelina- 120 min/37
(ag) telina-1 1 (0.1 µ?) grados C
GABA [3H] GABA 10 nM GABA (100 60 min/22
(ns) (ag) µ?) grados C
AMPA [3H JAMPA 8 nM L-glutamato 60 min/4
(ag) (1 nM) grados C Kainato [3H] ácido 5 nM L-glutamato 60 min/4 (ag) kainico (1 nM) grados C
NMDA (aa) . [3H]CGP 5 nM L-glutamato 60 min/4
39653 (100 µ?) grados C
Hi [3H]pirila- 3 nM Pirilamina 60 min/22
( h ) (aa) mina (1 µ?) grados C
H2 ( h ) [ 125I ] APT 0.075 Tiotidina 120 min/22 (aa) nM (100 µ?) grados C
H3 [3H] Na-Me- 1 nM (R) -Me- 60 min/22
( h ) (ag) histmina histamina grados C
(1 µ?)
I2 (aa) [ H] idazoxan 2 nM cirazolina 30 min/22
(+ 1 µ? (10 µ?) grados C yohimbina )
BLTi [ H]LTB4 0.2 nM LTB„ (0.2 60 min/22
(LTB4) (h) µ?) grados C (ag)
CysLTi [3H] LTD4 0.3 nM LTD4 (1 µ?) 60 min/22 (LTD4) (h) grados C (ag)
GnRH (LH- [125I] [D- 0.05 nM [D-Trp6] - 90 min/4 RH) (ag) Trp6] -LH-RH LH-RH ( 1 µ?) grados C
MC4 ( h ) [12 I]NDP-a- 0.05 nM NDP-OÍ-MSH 120 min/37 (ag) MSH (1 µ?) grados C M [3H] QNB 0.05 nM atropina (1 120 min/22
(ns) (aa) µ?) grados C
NKi (h) [125I]BH-SP 0.15 nM [Sar9,Met 60 min/22
(ag) (02)n]-SP grados C
(1 µ?)
NK2' ( h ) [125I]NKA 0.1 nM [Nleu10] - 60 min/22 (ag) NKA (4-10) grados C
(10 µp?)
NK3 [ H] SR 0.4 nM SB 222200 120 min/22
( h ) (aa) 142801 (10 µ?) grados C
Continúa tabla 6
Ensayo Ligando Conc . No Incubación
Especifico
Y (ns) (ag) [125i] 0.05 nM NPY (1 µ?) 120 min/22 péptido grados C YY
N neuronal [3H] 1.5 nM Nicotina 75 min/4
OÍ-BGTX- citi- (10 µ?) grados C insensible sina
( 4ß2) (ag)
Opioide (ns) [3H] 1 nM Naloxona (1 40 min/22
(aa) nalo- µ?) grados C xona
OP (ORL1) [3H] noci 0.2 nM nociceptina 60 min/22
( h ) (ag) cep- (1 µ?) grados C tina
PCP (aa) [3H] TCP 10 nM MK 801 (10 120 min/37 µ?) grados C
P2X (ag) [3?]a,ß- 3 nM a, ß-MeATP 120 min/4
MeATP (10 µ?) grados C
P2Y (ag) [35S]dAT 10 nM dATPaS (10 60 min/22
PaS µ?) grados C
5-HT (ns) [3H] 2 nM serotonina 60 min/37
(ag) seroto- (10 µ?) grados C nina
s (ns) (ag) [3H] DTG 8 nM haloperidol 120 min/22
(10 µ?) grados C sst5 ( h ) [125I]Ty 0.1 nM somatosta- 120 min/22
(ag) r11- tina-14 (1 grados C soma- µ?)
tos- tatina- 14
GR ( h ) (ag) [3H] 1.5 nM triamcino- 6 h /4 dexa- lona (10 grados C meta- µ?)
sona
ER . (ns) ( ) [3H] estr 1 nM 17- -estra- 20 h /4
(ag) a-diol diol (6 µ?) grados C
PR (h) (ag) [3H] 0.5 nM Promegeston 20 h /4 proges- a (1 µ?) grados C terona
TR (TH) (ag) [125I]T3 0.1 nM T3 (1 µ?) 18 h /4
grados C
TRHi (h) [3H]Me- 2 nM TRH (10 µ?) 120 min/4
(ag) TRH grados C
V (?) (ag) [3H] AVP 0.3 nM AVP (1 µ?) 60 min/22 grados C
V2 (h) (ag) [3H] AVP 0.3 nM AVP (1 µ?) 120 min/22 grados C
Canal Ca2+ [3H] 0.2 nM nifedipina 120 min/22 (L, sitio nitren- (1 µ?) grados C dihidro- dipina
piridina )
(aa)
Canal Ca2+ [3H] 5 nM diltiazem 120 min/22 (L, sitio diltia(10 µp?) grados C diltiazem) - zem
(benzotia-zepinas )
(aa)
Canal Ca2+ [3H] (-)D 3 nM D 600 (10 120 min/22 (L, sitio 888 µ?) grados C verapamil )
( fenilalquil
-amina) (aa)
Canal KATp [3H] 0.1 nM Glibenclami 60 min/22 (aa) gliben- da (1 µ?) grados C clamida
hERG (prepa[3H] 2 nM Astemizol 75 min/22 ración de aste- (10 µ?) grados C membrana) (aa mizol
)
Canal Kv [125I]a- 0.01 nM a- 60 min/22 (aa) dendro- dendrotoxi- grados C toxina na (50 nM)
Continúa Tabla 6
Ensayo Ligando Conc . No Incubación especifico
Canal SKca [125I]apa- 0 . 007 apamina 60 min/ 4
(aa) mina nM ( 100 nM) grados C
Canal Na+ [3H]batra- 10 nM Veratridina 60 min/22
(sitio 2) cotoxina ( 300 µ?) grados C
(aa)
Canal Cl" os] TBPS 3 nM picrotoxi- 120 min/22 (activado nina (20 grados por µ?)
GABA) (aa)
Transpor[3H] nisoxe- 1 nM Desipramina 120 min/4 tador tina (1 µ?) grados C norepine-frina ( h )
(aa)
Transpor[3H] BTCP 4 nM BTCP (10 120 min/4 tador µ?) grados C dopamina
( h ) (aa)
Transpor[3H] GABA 10 nM GABA (1 mM) 30 min/22 tador GABA (+10 µ? grados C (aa) isoguva- cina) ( +10
µ?
baclofen)
Transporta[3H] hemico- 3 nM hemicoli- 60 min/22 dor colina linio m-3 nio-3 (10 grados C (CHT1) ( h ) µ?)
(aa)
Transporta3H] imipra- nM imipramina 60 min/22 dor 5-HT [mina 2 grados
( h ) (aa)
(ag) = radioligando agonista; (aa) = radioligando antagonista; (ns) - no-selectivo
Análisis y Expresión de Resultados: Compuestos de la invención se probaron en los ensayos bioquímicos y se determinó por ciento de inhibición de enlace específico. El enlace de ligando específico a los receptores se define como la diferencia entre el enlace total y el enlace no específico determinado en la presencia de un exceso de ligando no etiquetado. Los resultados se expresan como por ciento de inhibición de enlace específico de control ( 100- ( (enlace específico medido/enlace específico de control) x 100) ) obtenido en la presencia de los compuestos de prueba. Los resultados de los ensayos se resumen en la Tabla 7.
Tabla 7. Resultados de Ensayos de Enlace
% Inhibición de Enlace Específico de Control @ 10 µ
(MI) (MU) (MUI) (MIV)
Ai ( ) (aa) 10 9 2 6
A2A [ h ) (ag) 10 -5 2 3
A3 ( h ) (ag) 69 17 11 50 ai (ns) (aa) -4 -7 -5 -3
a2 (ns) (aa) -7 -9 -7 -7 ß? (h) (ag) -2 -7 2 3 ß2 (h) (ag) 6 -3 -6 -10
ATi (h) (aa) 11 0 6 0
CONTINÚA TABLA
AT2 ( ) (aa) -1 -6 -2 1
BZD (central) (ag) -35 -37 -20 -29
Bi lh) (ag) 0 6 5 4
B2 (h) (ag) 2 -12 -3 0
CBi (h) (ag) -20 11 6 4
CB2 (h) (ag) -2 1 -3 1
CC i (CCKA) ( ) 47 0 -14 25 (ag)
CCK2 (CCKB) (h) -10 -18 -18 -12 (ag)
CRF! (h) (ag) -4 1 -9 -23
Di (ii) (aa) -18 -14 -17 -17
D2S (h) (aa) -16 -8 -22 -17
D3 (h) (aa) 7 11 0 7
D44 ( ) (aa) 1 9 13 -15
ETA (h) (ag) -21 -16 -12 -27
ETB (?) (ag) -7 -4 0 -3
GABA (ns) (ag) -12 0 -10 5
A PA (ag) 1 -10 -2 -4 Kainato (ag) -4 -21 -10 -8
NMDA (aa) 2 5 0 -41
Hi (h) (aa) -8 2 -2 -11
H2 (h) (aa) -41 -27 -19 -20
H3 (h) (ag) -3 -2 -13 -4
I2 (aa) 28 22 20 8
BLTi (LTB4) (h) -15 -8 -4 -6
(ag)
CysLTi (LTD4) (ag) 3 18 11 11
GnRH (LH-RH) (ag) -21 -51 5 0
MC4 (h) (ag) -23 -25 -1 -15
M (ns) (aa) 18 1 20 25
NKi (h) (ag) -7 9 -9 -7
NK2 (h) (ag) -6 -3 0 2
NK3 (h) (aa) -11 3 -2 -7
Y (ns) (ag) -6 -6 -2 -2
N neuronal oc-BGTX- 0 -3 -11 -3 insensible (a4ß2)
(ag)
opioide (ns) (aa) -6 -14 -15 -10
NOP (ORL1). ( ) -10 -4 0 -2
(ag)
PCP (aa) 0 5 2 4
P2X (ag) 4 4 2 2 P2Y (ag) -19 -2 -1 0
5-HT (ns) (ag) 21 14 -12 6 s (ns) (ag) 20 39 34 50
Sst5 (h) (ag) -25 16 2 -7
GR (h) (ag) 5 30 0 4
ER (ns) (h) (ag) -8 3 -2 -11
PR (h) (ag) 23 74 8 11
CONTINÚA TABLA 7
TR (TH) (ag) -7 0 -9 -2
TRHi (h) (ag) 18 -4 -5 0
Via (h) (ag) 2 15 -1 -8
V2 ( ) (ag) 5 3 4 -1
Canal Ca2+ (L, sitio 16 18 -2 16 dihidropiridina) (aa)
Canal Ca2+ (L, sitio 2 22 -2 1 diltiazem) (benzotia- zepinas) (aa)
Canal Ca2+ (L, sitio -2 -13 -1 -5 verapamil) (fenil- alquilamina) (aa)
Canal KATP (aa) 17 24 7 7 hERG (preparación de -39 7 8 10 membrana) (aa)
Canal Kv (aa) -2 -3 -2 -4
Canal S Ca (aa) -6 4 1 -10
Canal Na+ (sitio 2) -5 13 1 5 (aa)
Canal Cl" (activado 47 81 38 36 por GABA) (aa)
Transportador nore- 56 -13 9 20 pinefrina (h) (aa)
Transportador 32 23 13 7 dopamina {h) (aa)
Transportador GABA -16 7 -35 -24 (aa)
Transportador colina -16 -22 -13 10 (CHT1) (h) (aa)
Transportador 5-HT 1 16 13 18 (h) (aa)
(ag) = radioligando agonista; (aa) = radioligando antagonista; (ns) - no-selectivo
Resultados de Farmacología In Vitro: Resultados que muestran una inhibición (o estímulo para ensayos que se corren en condiciones básales) mayor a 50%, en general se considera que representan efectos significantes de los compuestos de prueba. Resultados que muestran una inhibición (o estímulo) entre 20% y 50%, en general son indicativos de efectos más débiles a moderados. Resultados que muestran una inhibición (o estimulo) menor a 20%, en general se consideran menos significantes.
La biología de objetivos selectos se resume como sigue. Receptor de Adenosina A3 : receptor acoplado de proteína G con un papel deficientemente definido en función celular cardiaca, inflamatoria y neuronal (Fishman, et al. "Pharmacology and therapeutic applications of A3 receptor subtype". Curr. Top. Med. Chem. (2003), 3(4):463-9); receptor Cannabinoide CB2: receptor acoplado a proteína G involucrado en nocicepción, y función celular inmune (Jhaveri, et al. "Cannabinoid CB2 receptor-mediated anti-nociception in models of acute and chronic pain". Mol Neurobiol. (2007), 36 ( 1 ) : 26-35 ; Marriott, et al. "Recent advances in the development of selective ligands for the cannabinoid CB(2) receptor". Curr. Top. Med. Chem. (2008), 8(3): 187- 204); Cl" channel (rat): GABA-gated chloride channel regulates neuronal cell activity (Treiman, D. "GABAergic Mechanisms in Epilepsy". Epilepsia (2001), 42(3): 8-12); Adrenergic al (non-selective, rat): receptor acoplado proteína G para catecolaminas . Estos receptores regulan la contracción de músculo liso y liberación de neurotransmisor (Michelotti, et al. "Alpha 1-Adrenergic receptor regulation: basic science and clinical implications" . Pharmacol . Ther. (2000), 88 ( 3 ) : 281-309 ) ;
Sigma (non-selective) : Membrane bound CNS receptor modulating behavior related to depression (Stahl, S. "Antidepressant Treatment of Psychotic Major Depression: Potential Role of the Sigma Receptor." CNS Spectr. (2005), 10 (4) : 319-323) ; transportador de Norepinefriña : Transporta noradrenalina y en una menor proporción dopamina desde la sinapsis de regreso a las vesículas intraneuronales para almacenamiento hasta uso posterior (Mándela, et al. "The Norepinephrine Transporter and Its Regulation" . J. Neurochemistry (2006), 97(2):310-333); PR Progesterona : Expresado en todos los sistemas fisiológicos mayores, con picos en útero/ovario, cerebelo, médula espinal e hipotálamo (Edwards, et al. "Progesterone receptor transcrition and non-transcription signaling mechanisms". Steroids (2003), 68 (10-13) : 761-770) .
Ejemplo B2 : Farmacología In-Vitro: Enlace Receptor de Andrógeno Humano (AR) .
Preparación de Tejido: El receptor de andrógeno humano se expresó en células LNCAP que se cultivaron y cosecharon por tripsinización a partir de matraces T- 175. El precipitado congelado se descongeló y resuspendió por sonicación, después diluyó a la concentración apropiada. El homogenizado se centrifugó @ 48, 000 g por 10 min a 4 grados C. Se empleó el sobrenadante. La proteína se determinó. El tejido se diluye a 0.325 mg/mL con amortiguador de ensayo de manera tal que cada tubo recibió 65 µ g de proteína, o la concentración de ensayo final fue 0.260 mg/mL.
Materiales- y Reactivos: [3H] -Metiltrienolona se diluyó a una concentración de 5 nM en HEPES 25 mM pH 7.4 (que contiene EDTA 1.0 mM, molibdato de sodio 10 mM, glicerol al 10%, PMSF 0.5 mM) , de manera tal que la concentración de radio ligando final en el ensayo fue 0.5 nM. Enlace no especifico se define como el restante en la presencia de M Metiltrienolona- 2xl0"7 (R1881) . El compuesto de referencia fue Metiltrienolona (R1881), que se corre a las siguientes concentraciones finales de: 2xl0-11, 5?10-11, lxlO"10, 2xl0~10, 5xl0"10, lxlO-9, 2xl0"9, 5xl0~9, lxlO'8, 2xl0~8, 5xl0~8 y lxlO"7 M.
Amortiguadores: HEPES 25 mM pH 7.4; EDTA 1.0' mM; molibdato sodio 10 mM; Glicerol al 10%; PFSM 0.5 mM (PMSF disuelto en EtOH primero, antes de agregar al amortiguador restante) .
Reacción de enlace: (Liao, et al. "The Use of a Hydroxylapatite-Filter Steroid Receptor Assay Method in the Study of the Modulation of Androgen Receptor Interaction . " J. Steroid Biochem. (1984), 20:11-17 (con modificaciones)). Cada ampolleta recibió los siguientes componentes: compuesto de prueba/referencia o vehículo (25 /L); [3H] -Metiltrienolona (25 j L) ; suspensión de tejido (200 /L) . La reacción de enlace se inicia con la adición de tejido, y se incubó a 0-4 grados C (en refrigeración) por 18-22 h (durante la noche). La reacción de enlace se terminó por rápida filtración de los contenidos del tubo en filtros GF/B tratados con PEI al 0.1%. Los tubos de ensayo se enjuagaron una vez con HEPES 25 nM enfriado por hielo, después rápidamente enjuagaron con 6x1 mL/tubo del mismo amortiguador de lavado. Radioactividad atrapada en los filtros se estima utilizando espectrometría de centelleo en líquido, después de impregnar los filtros por al menos 1 h en cóctel de centelleo. Enlace no específico se define como la cantidad de radioactividad restante en la presencia de etiltrienolona sin etiquetar 2 x 10~7M (Rl 881). Enlace específico se calcula. a partir de la diferencia entre el enlace total y no específico. Valores IC50 se determinan al trazar enlace específico como una función de concentración de compuesto de prueba. Valores Ki se obtuvieron directamente de los valores IC50 utilizando la ecuación Cheng-Prusoff (Ki = IC50/ ( 1+ (L/KD) ) , en donde L = concentración de radio ligando en el ensayo, y KD = afinidad del radio ligando para el receptor determinado independientemente. Ejemplos de resultados de ensayo se muestran en la Tabla 8.
Tabla 8. Actividad de Enlace AR de Compuestos (MI) - (MIV)
Ki ( ?)
Compuesto de Mibolerona Mibolerona Metiltrienolona referencia
Compuesto de 0.0051 0.0051 0.000063 referencia Ki
Compuesto de
prueba
(MI) NR NR NR (>10)
(MU) 0.074 0.51 0.059
(MUI) 0.83 1.5 0.314
(MIV) 0.69 0.97 0.361
Los datos en la Tabla 8 muestran que los compuestos MII-MIV tienen actividad hacia receptor de andrógeno .
Ejemplo B3 : Farmacología In-Vitro: Ensayos de Enzima
Los ensayos de enzima que se proporcionan a Continuación serán familiares por aquellos con destreza en la técnica. Por cada ensayo de enzima, se resumen los procedimientos generales y condiciones experimentales en las Tablas 9 y 10, respectivamente.
Tabla 9: Procedimientos Generales
Ensayo Origen Compuesto de referencia
PDE1B ( ) humano Calmidazolio recombinante
(células Sf9)
PDE2A {h) humano EHNA
recombinante
(células Sf9)
PDE3A ( ) humano Milrinona recombinante
(células Sf9)
PDE4D ( h ) humano Rolipram recombinante
(células Sf9)
PDE5 ( h ) (ns) Plaquetas Zaprinast humanas
adenilil ciclasa Cerebro de rata Forscolina
(basal)
guanilil ciclasa Pulmón bovino nitroprusiurio
(basal) de sodio
PKCa (h) recombinante Bis 10 humano (células
de insecto)
acetilcolinesterasa recombinante Neost igmina
(?) humano (células
HEK-293)
COMT Hígado porcino Ro 41-0960
GABA transaminasa Cerebro de rata AoAA
MAO-A ( h ) placenta humana Clorgilina
MAO-B (h) plaquetas deprenil humanas
PN T Medula adrenal LY 78335 bovina
tiroxina Cuerpo estriado 3-yodo L- hidroxilasa de rata tirosina
ATPase (Na+/K+) Corteza cerbral Ouabaina porcina
(ns) - no-selectivo
Tabla 10: Condiciones Experimentales
Ensayo Substrato / IncubaProducto Método
Estimulo / ción de de Trazador Reacción Detección
PDE1B (h) cGMP (240 30 min cGMP HTRF nM) / 22°C residual
PDE2A (h) cAMP (40 nM) 30 min cAMP HTRF
/ 22°C residual
PDE3A (h) cAMP (40 nM) 30 min cAMP HTRF
/ 22°C residual
PDE4D (h) cAMP (40 nM) 30 min cAMP HTRF
/ 22°C residual
PDE5 (h) (ns) cGMP (240 30 min cGMP HTRF nM) / 22°C residual adenilil ATP (0.5 mM) 60 min cAMP HTRF ciclasa (basal) ( forscolina / 30°C
300 µ M para
control )
guanilil GTP (0.1 itiM) 90 min cGMP HTRF ciclasa (basal) (nitropru- / 30°C
surio de
sodio 1 mM
para
control )
Ensayo Substrato / Incuba Producto Método
Estimulo / ción de de
Trazador Reacción Detección
PKCa (h) ATP + 15 min / Fosfobio HTRF biotinil- 22°C -tinil- neurogranina neuro- 28-43 péptido granina
(60 nM) 28-43
péptido
acetil AMTCh (50 30 min / tio- Fotomecolin µ?) 37°C conju- tría esterasa ( ) gado
COMT Esculetina (1 30 min / Scopolet Fluori- 37°C ina metría GABA GABA (9 niM) + 60 min / Semi Fluori- transami a - 37°C aldehiido metria -nasa cetoglutarato succinico
(9 mM)
MAO-A quinuramina 30 min / 4- Fotometri (h) (0.15 mM) 30°C OHquinolina a
MAO-B Benzilamina 45 min / Benzal- Fotometri (h) (0.5 mM) 37°C dehido a
PNMT [14C]SAM (4 20 min / [14C] Conteo de µ M) + 37°C metanfrina centelleo normetanfrina
(28 mM)
Tiro- [ 3H] tirosina 40 min / [3H] H20 Conteo de sina (10 M)¦ ¦ 37°C centelleo hidro- xilasa
ATPasa ATP (2 mM) 60 min / Pi Fotometri (Na+/K+) 37°C a
(ns) - no-selectivo
Análisis y Expresión de Resultados: Los resultados se expresan como un por ciento de actividad especifica de control ( (actividad especifica medida/actividad especifica de control) x 100) que se obtiene en la presencia del compuesto de prueba. Los resultados se presentan en la Tabla 11.
Tabla 11 : Resultados de Ensayos de enzima
Ensayo % Inhibición de Valores de
Control @ 10 ?
(MI) (MU) (MUI) ( IV)
PDE1B ( ) 0 -11 -8 -2
PDE2A ( ) 12 2 2 0
PDE3A (h) 3 0 4 2
PDE4D (h) 1 -9 -11 -41
PDE5 (h) (ns) 4 -1 8 2
PKCa ( ) 4 6 3 5 acetil 51 9 -1 23 colín
esterase (h)
COMT 1 -1 -1 0
GABA transaminasa -7 -5 -2 -1
MAO-A ( ) -5 0 14 11 AO-B (h) 8 -4 -5 11
PNMT -6 -4 -2 14
Tirosina hidroxilasa -4 2 -2 -2
ATPasa (Na+/K+) 4 -10 3 -13
% de Estimulo Respecto a Control
@ 10 µ M
adenilil ciclasa 0 3 4 11 (basal)
guanilil ciclasa 0 0 -1 2
(basal)
(ns) - no-selectivo
Ejemplo B : .Ensayo de Translocación Nuclear de Receptor de Andrógeno .
Manejo Celular: Lineas celulares PathHunter NHRPro se expandieron a partir de materiales de congelador en matraces T25 de acuerdo con procedimientos estándar y se mantienen en medio de crecimiento selectivo antes de ensayo. Una vez que se establece que las células sean sanas y crecen normalmente, las células se transfirieron de matraces utilizando amortiguador de disociación de células libres de tripsina y sembraron en microplacas 384 pozos de fondo claro con pared blanca para perfilado compuesto. Para perfilado, las células se sembraron a una densidad de 10,000 células por pozo en un volumen total de 50 µ~?? y se dejó que se adhirieran y recuperan durante la noche antes de adición de compuesto. El medio contiene suero filtrado con carbono-dextrano para reducir el nivel de hormonas presentes.
Modo de Criba: Los compuestos se probaron en modos agonista y antagonista en las siguientes respuestas de dosis: 60, 20, 6.67, 2.22, 0.74, 0.25, 0.08, 0.03, 0.009 y 0.003 µ?, en duplicado con diluciones en serie triples y obteniendo salida de EC50 y IC50.
Formato Agonista: Dilución intermedia de materiales de compuestos se generaron, de manera tal que el compuesto 5.5 µ L de 10X puedo agregarse a casa pozo con una concentración DMSO final de 1% de volumen total. Para perfilado compuesto en modo agonista, las células se incubaron en la presencia de compuesto a 37 grados C por 5 h.
Formato Antagonista: Curvas de dosis agonista se realizaron para determinar el valor ECeo para la siguiente prueba antagonista con compuestos. 5.5 µ L de agonista 10X se agregan a cada pozo con una concentración igual de vehículos presente. Concentración de agonista EC8o se determina directamente a partir de curvas de dosis agonista. Para determinación de antagonista, se preincubaron células con antagonistas seguido por prueba de agonista a la concentración ECeo: 5.5 L de compuesto 10X agregado a las células e incubaron por 37 grados C por 1 h; 5.5 µ?, de agonista EC8o ?? se agregaron a las células a e incubaron por 37 grados C por 5 h.
Detección de Señal: Después de incubación de compuesto apropiado, la señal de ensayo se generó a través de una sola adición de 30 µ L (50% v/e) de cóctel reactivo PathHunter para ensayos agonista y antagonista respectivamente, seguido por 1 h incubación a temperatura ambiente. Las microplacas se leyeron siguiendo generación de señal con un instrumento PerkinElmer ViewLuxMR para detección de señal quimioluminescente .
Análisis de Datos: Curvas de dosis en la presencia y ausencia de compuestos se trazaron utilizando el Prisma GraphPad. Un resumen de los resultados de ensayo se proporciona en la Tabla 12.
Tabla 12. Resultados de Ensayo de Translocación Nuclear de Receptor de Andrógeno para los Compuestos (MI) - (MIV)
Ensayo de Traslocacion Nuclear de AR
Modo Agonista Modo Agonista
EC50 µ? EC50 /M
Norgesterol (ag) 0.0029
Geldanamicina (aa) 0.018
(MI) NR >60
(MU) NR 3.2
(MUI) NR 16.2
(MIV) NR
11.6
(ag) = agonista; (aa) = antagonista
Ejemplo B5: Ensayo Funcional GABAA.
El objetivo de este estudio era evaluar los efectos funcionales de MI-MIV en los receptores GABAA ionotrópicos humanos. Los receptores GABAA a1ß3 y al/? 3/ 2 humanos se expresaron en oocitos de Xenopus . Efectos de la expresión aguda se emplearon par estimar los efectos agonísticos posibles de compuestos mientras que pre- y co-exposición con GABA se emplearon para evaluar los efectos inhibitorios posibles de los compuestos.
Preparación de Oocitos: Todos los experimentos se llevaron a cabo en GABAA humano expresados de oocitos de Xenopus utilizando el método de expresión cADN . Oocitos de Xenopus se prepararon e inyectaron utilizando procedimientos estándar. Brevemente, ovarios se cosecharon a partir de hembras de Xenopus Laevis que se han anestesiado profundamente y picado siguiendo las reglas de derechos de animales del cantón de Ginebra. Un pequeño trozo de ovario se aisló para preparación inmediata mientras que la parte restante se coloco 4 grados C en una solución base estéril que contiene NaCl (88 mM) , KC1 (1 mM) , NaHC03 (2.4 m ) , HEPES (10 mM) , MgS04JH20 (0.82 mM) , Ca (N03) 2.4H20 (0.33 mM) , CaCl2.6H20 (0.41 mM) , a pH 7.4, y suplementado con 20 µq/mL de canamicina, 100 unidades/mL de penicilina y 100 µg/mL de estreptomicina. Todas las grabaciones se realizaron a 18 grados C y las células súper fusionadas con medio OR2 que contiene NaCl (82.5 mM) , KC1 (2.5 mM) , HEPES (5 mM) , CaCl2.2H20 (1.8 mM) , MgCl2.6H20 (1 mM) , pH 7.4.
Grabaciones electrofisiológicas : Corrientes evocadas por GABA se registraron utilizando un proceso automatizado equipado con configuración de abrazadera de voltaje de dos electrodos estándar (TVEC = two-electrode voltage-clamp configuration) . A menos que se indique, se mantuvieron las células a -80 mV. Datos se capturaron y analizaron utilizando un programa de análisis y adquisición de datos de propiedad HiQScreen bajo Matlab (Mathworks Inc.).
Preparación de Agonistas: GABA se preparó con una solución de material concentrado (??'^?) en agua y después diluyó en el medio de grabación para obtener la concentración de prueba deseada. Se prepararon compuestos como solución madre (10~2 M) en DMSO y después diluyeron en el medio de grabación para obtener la concentración de prueba deseada. DMSO residual no excede la concentración de 1% una concentración que se ha mostrado que no tiene efectos en la función de oocitos de Xenopus.
Análisis y Estadísticas de Datos: Para análisis estadístico, se calcularon valores ya sea con Excel (Microsoft) o Matlab (Mathworks Inc.). Para obtener significancia estadística, todos los experimentos se llevaron a cabo utilizando al menos tres células. Valores se presentan como promedio + SEM.
Procedimientos Experimentales: Inyecciones de cADNs que codifica para subunidades GABAA humanas, se realizaron en al menos cien oocitos utilizando un dispositivo de inyección automatizada de propiedad (Hogg et al., J. Neurosci. Métodos, 2008) y expresión de receptor se examinó al menos dos días después. Se picaron oocitos con dos electrodos y su potencial de membrana se mantuvo a .un valor fijo (-80 mV) a través del experimento .
La Medición de Actividad Agonista de MI-MIV: Los efectos de MI-MIV en función de receptor GABAA se evaluaron con un protocolo de exposición sencilla (30 seg.). En este protocolo la célula primero se prueba con un pulso de prueba de referencia de GABA (10 µ?, 5 seg.), y su respuesta se emplea como control. GABA. se retira y la célula después se expone por 30 seg al compuesto de prueba, durante cuyo tiempo se mide grabaciones de canal. Finalmente, el compuesto de prueba se retira y GABA se vuelve a aplicar (3 µ?, 5 seg.) al final de la incubación. Las grabaciones tomadas durante el periodo de 30 seg cuando MI-MIV estuvo presente no mostró corrientes hacia dentro detectables indicando que estos compuestos no activan el receptor 1ß3 GABAA. M4 igualmente se prueba para actividad agonista al receptor a1ß3?2 GABAA. Similar a los resultados que se obtienen para el receptor a1ß3 GABAA, M4 no evoca ningunas corrientes hacia adentro detectables en el receptor 1ß ?2 GABAA, indicando que estos compuestos no activan cualquier forma del receptor GABAA.
Medición de Actividad Antagonista de MI-MIV: Para evaluar los posibles efectos inhibitorios de concentración de MI-MIV, se diseñaron protocolos de inhibición. En este protocolo oocitos que expresan respuestas robustas GABA se exponen por 45 seg a una concentración determinada del compuesto bajo escrutinio y la respuesta a una concentración GABA fija aplicada en la presencia del compuesto, se registra. Después de un breve lavado para retirar GABA las células se regresan por otros 45 seg en la misma concentración y el proceso después se repite con una superior concentración del compuesto. Ya que los oocitos se exponen Continuamente al compuesto de prueba, se observa un efecto acumulativo para las más altas concentraciones. El control positivo en este ensayo, el antagonista ter-butilbiciclofosforo tionato (TBPS) , demuestra un efecto inhibitorio dependiente de concentración en el receptor a1ß3. La IC50 derivada para TBPS fue 0.6 + 0.06 µ?. Este valor IC50 es consistente con lo que se ha reportado en la literatura [Hamann et al, Mol. Pharmacol. (1990), 37 (4) : 578-582] .
Resultados: MI demuestra una .inhibición dependiente de concentración del receptor a1ß3 y el receptor 1ß3?2 con valores IC50 derivados de 20.7 + 6 µ? y 68.3 ± 6.0 µ?. A la más alta concentración, se logró casi una completa inhibición (75 ± 18.4%) . M2 demostró una inhibición dependiente de concentración del receptor a1ß3 con un valor IC50 derivado de 2.3 ± 0.3 µ?. A la más alta concentración, se logró casi inhibición completa (80 ± 10%) . M3 demostró una inhibición dependiente de concentración del receptor a!ß3 con un valor IC50 derivado de 4.0 ± 3.15 µ?. A la más alta concentración, se logró inhibición parcial (57 ± 7%). M4 demostró una inhibición dependiente de concentración del receptor a1ß3 con un valor IC50 derivado de 1.55 ± 0.19 µ?. A la más alta concentración, se logró casi inhibición completa (78 ± 3%) .
Resumen: Efectos Agonistas: Breve exposición a MI-MIV no provocó corrientes hacia adentro detectables en cualquiera de al ? 3 o el receptor a1/?3?2 GABA¾ indicando que estos compuestos no activan cualquiera de estas dos formas del receptor GABAA. Efectos Antagonistas: MI-MIV antagonizó al receptor a1ß3 GABAA con valores IC50 y valores de % de Inhibición como se resume en la Tabla 13. Como se observó inhibición en el intervalo µ?, estos datos indican que MI-MIV son antagonistas funcionales del receptor GABA¾.
Tabla 13: Resul'tados de Ensayo Funcional GABAA para MI-MIV
Compuesto a!ß3 GABAA
IC50 ( ?) % de inhibición @
100 ?
MI 2.7 ± 6.03 90
M2 2.3 ± 1.5 88
75 ± 2.1
M3 4.0 ± 3.15 57
M4 1.55 ± 0.19 78
44.98 ± 4.62
Ejemplo B6. Identificación de (MI)-(MV) en Plasma de Rata.
Metabolitos de RD162' se aislaron e identificaron en muestras de plasma de estado estable de tres ratas Sprague Dawley macho que se dosificaron oralmente con una mezcla de RD1621 no radio etiquetado y RD162' radio etiquetado ( [14C] RD162 ' ) a 100 mg/kg/dia (total RD162') y 250 Ci/kg/day ([14C] radioactividad). Las ratas fueron dosificadas una vez al dia por siete días consecutivos; cuatro · horas después de dosificar el séptimo dia, se recolectó plasma de todas las tres ratas. Las muestras de plasma se almacenaron a aproximadamente -70 grados C o más frío .
[14C] RD162' tiene actividad especifica de 57.6 mCi/mmol y, por análisis HPLC fue >98% puro. La posición del átomo [14C] se muestra a Continúación, en donde * significa la posición de la radio etiqueta:
F
Las muestras de plasma de los tres animales se combinaron en una mezcla de 1:1:1 (referida como "Plasma de Ratas Recolectado") y analizó por concentración de RD162' y sus metabolitos. La identificación de los metabolitos [14CJRD162' y [14CJRD162' en Plasma de Ratas Recolectado se baso en la co-elución de HPLC con las normas de referencia y en análisis espectral de masa. Se emplearon electro rocío de iones positivos LC/ S y LC/MS/MS para analizar los metabolitos .
Para preparar el Plasma de Ratas Recolectado para análisis HPLC, aproximadamente 1 g de la muestra de plasma se combinó con acetonitrilo (ACN, muestra:ACN, 1:3, v:v), mezcló con torbellino, sónico en agua fría, centrifugó y los sobrenadantes se retiraron. La extracción se repitió dos veces y los sobrenadantes respectivos se combinaron. Alícuotas duplicadas se analizaron por conteo de centelleo de líquido (LSC = Liquid Scintillation Counting) para determinar la recuperación de extracción, que fue 100%. Los sobrenadantes combinados se evaporaron a sequedad y reconstituyeron en 1 mL de ácido fórmico al 0.1% en osmosis inversa (RO = reverse osmosis) agua: ACN: metanol (MeOH, 50:45:5, v:v:v). La muestra se mezcló con torbellino, sonicó, micro centrifugó, y alícuotas duplicadas se analizaron por LSC, para determinar la recuperación de reconstitución, que fue 98.1%. La muestra reconstituida se analizó por HPLC para determinar el perfil de metabolito con fracciones recolectadas a intervalos de 10 segundos y analizó por conteo de centelleo sólido.
Las muestras preparadas se analizan utilizando las siguientes condiciones LC/MS/MS: HPLC: Hewlett Packard 1100 series; Fase Móvil: ácido fórmico al 0.1% en agua de osmosis inversa (A) y acetonitrilo (B) ; Columna: Agilent Eclipse XDB-Cl 8, 4.6 x 150 mm, 5 µt?; columna de protección: Cartucho Phenomenex Security Guard C18, 3 x 4 mm; temperatura de columna: 20 grados C; Gradiente: 20-80% B en 40 min; Gasto de flujo: 1.5 mL/min.
Para los experimentos de co-elución, los tiempos de elución se determinaron para RD1621 y sus metabolitos. RD162' y metabolitos (MI), (MU), (MUI), (MIV) y (MV) se inyectaron en HPLC y el tiempo de elución de la columna se midió por detección de luz ultravioleta a 254 nm. Los tiempos de retención resultantes, que se resumen en la Tabla 14, se ampliaron para determinar en forma cualitativa las entidades. Tabla 14. Por ciento Cromatográfico HPLC de Radioactividad de muestra como [14C]RD162' o Metabolitos se [14C]RD162' en Muestras de Plasma Recolectadas de Estado Estable con Administración Oral de [14C]RD162' en Ratas Macho
Nombre Inicio Fin Retención Altura
(min) (min) (min) Pico
(mV)
(MUI) 14.67 15.33 14.97 77
(MV) 15.60 16.30 15.93 49
(MIV) 17.37 18.10 17.70 63
(Mil) 18.57 19.17 18.90 43
RD162' 22.27 23.13 22.63 164 (MI) 24.03 24.93 24.50 86
(Continuación de Tabla 14.)
Nombre Área % de % de
Pico Radioactividad Radioactividad
(mV) recuperada (%) inyectada (%)
(MUI) 426 12.50 7.96
(MV) 308 9.05 5.76
(MIV) 452 13.27 8.45
(MU) 288 8.45 5.38
RD162 ' 1159 34.03 21.66
(MI) 589 17.31 11.02
Las estructuras de (MI), (MU), (MUI), (MIV) y
(MV) se confirmaron por análisis espectral de masas.
B7. Determinación de valores IC5Q y/o EC50.
Compuestos de la invención pueden ser además estimados al determinar valores IC50 y/o EC50 de curvas de concentración-respuesta. Métodos para determinar los valores IC50 y/o EC50 pueden llevarse a cabo de acuerdo con los métodos conocidos.
Aunque la invención anterior se ha descrito con cierto detalle a manera de ilustración y ejemplo para propósitos de claridad de comprensión, es aparente para aquellos con destreza en la técnica que ciertos cambios menores y modificaciones se practicarán. Por lo tanto, la descripción y ejemplos no deberán de considerarse como limitantes del alcance de la invención.
Todas las referencias de principio a fin, tales como publicaciones, patentes, solicitudes de patentes y solicitudes de patentes publicadas, se incorporan aquí por referencia en sus totalidades.
Claims (34)
1. Una composición farmacéutica que comprende (a) un compuesto de la fórmula I: 0 Me (I) en donde: X es S o 0, y cuando X es S entonces R1 es OH o NH2; y cuando X es 0 entonces R1 es OH, NH2 o NHMe; o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable, y (b) un portador farmacéuticamente aceptable.
2. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque X es S y R1 es OH o NH2.
3. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque X es O'y R1 es OH, NH2 o NHMe.
4. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el compuesto es de la fórmula (MI ) : MI o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable.
5. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el compuesto es de la fórmula (Mil ) : MU o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable.
6. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el compuesto es de la fórmula (Mil) : (MUI) o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable.
7. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el compuesto es de la fórmula (MIV) : (MIV) o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable.
8. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el compuesto es de la fórmula (MV) : (MV) o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable.
9. Una composición de un compuesto substancialmente puro, en donde el compuesto es de la fórmula I: (I) en donde: X s S o O, y cuando X es S entonces R1 es OH o NH2; y cuando X es O entonces R1 es OH, NH2 o NHMe; o su sal o solvato.
10. La composición de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque X es S y R1 es OH o NH2.
11. La composición de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque X es O y R1 es OH, NH2 o NHMe.
12. La composición de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque el compuesto es de la fórmula (MI) : o su sal o solvato.
13. La composición de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque el compuesto es de la fórmula (MU) : Mil o su sal o solvato.
14. La composición de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque el compuesto es de la fórmula (MUI) : (MUI) o su sal o solvato.
15. La composición de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque el compuesto es de la fórmula (MIV) : (MIV) o su sal o solvato.
16. La composición de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque el compuesto es de la fórmula (MV) : (MV) o su sal o solvato.
17. La composición cualquiera de las reivindicaciones 9-16, caracterizada porque en donde la composición contiene menos de aproximadamente 10 por ciento en peso de impureza.
18. Un método para administrar a un individuo para terapia, un compuesto de la fórmula I: (I) en donde: X es S o O, y cuando X es S entonces R1 es OH o NH2; y cuando X es O entonces R1 es OH, NH2 o NHMe; o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable.
19. El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque X es S y R1 es OH o NH2.
20. El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque X es O y R1 es OH, NH2 o NHMe .
21. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 18-20, caracterizado porque la terapia es el tratamiento de cáncer de próstata.
22. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 18-20, caracterizado porque la terapia es el tratamiento de enfermedad de Parkinson o enfermedad de Alzheimer .
23. Un equipo que comprende un compuesto de la fórmula I: en donde: X es S o O, y cuando X es S entonces R1 es OH o NH2; y cuando X es O, entonces R1 es OH, NH2 o NHMe; o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable.
24. El equipo de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque X es S y R1 es OH o NH2.
25. El equipo de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque X es 0 y R1 es OH, NH2 o NHMe .
26. El equipo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 23-25, caracterizado porque el equipo además comprende instrucciones para uso.
27. El equipo de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque las instrucciones son para uso del compuesto en el tratamiento de cáncer de próstata.
28. El equipo de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque las instrucciones son para uso del compuesto en el tratamiento de enfermedad de Parkinson o enfermedad de Alzheimer.
29. Una forma de dosis unitaria que comprende un compuesto de la fórmula I: (I) en donde: X es S o 0, y cuando X es S entonces R1 es OH o NH2; y cuando X es 0 entonces R1 es OH, NH2 o NHMe; o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable.
30. La forma de dosis unitaria de conformidad con la reivindicación 29, caracterizada porque X es S y R1 es OH o NH2.
31. La forma de dosis unitaria de conformidad con la reivindicación 29, caracterizada porque X es 0 y R es OH, NH2 o NHMe.
32. Un compuesto aislado de la fórmula I: (I) en donde: X es S o 0, y cuando X es S entonces R1 es OH o NH2; y cuando X es O entonces R1 es OH, NH2 o NHMe; o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable.
33. El compuesto aislado de conformidad con reivindicación 32, caracterizado porque X es S y R es OH o NH2.
34. El compuesto aislado de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque X es 0 y R es OH, NH2 o NHMe.
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