MX2010012352A - Composicion emoliente. - Google Patents

Abstract

La emulsión se refiere a una composición emoliente para el uso tópico, que comprende una combinación de glicerol vaselina y parafina líquida como un principio activo, en la forma de una emulsión de aceite en agua o de agua en aceite. La invención también se refiere a su uso para preparar una droga para tratar condiciones de piel seca, asociadas con ciertas dermatosis, tal como la dermatitis atópica, condiciones de ictiosis y soriasis; al uso de la misma para preparar una droga para tratar pequeñas quemaduras superficiales, y su uso para preparar una droga para prevenir y/o tratar y/o reducir la frecuencia y la intensidad de ataques de eczema, observados en pacientes que sufren de la dermatitis atópica.

Description

COMPOSICIÓN EMOLIENTE La invención se refiere al campo del tratamiento de patologías y condiciones asociadas con la función de la barrera de la piel afectada.

La epidermis es un epitelio estratificado, de origen ectodérmico, en renovación perpetua.

Protege el cuerpo de la deshidratación , tensiones mecánicas y ciertos ataques patogénicos. Se compone de varios tipos de células, más del 90% de queratinocitos, pero también células de Langerhans, células de Merkel y melanocitos.

Varias capas de diferente naturaleza morfológica y composición celular pueden ser distinguidas del interior al exterior: la capa basal, la cual es el estrato celular cuyos queratinocitos tienen una capacidad de proliferación muy fuerte, lo cual asegura la auto-renovación de la epidermis, luego las capas suprabasales (estrato granuloso, estrato espinoso) y finalmente el estrato córneo (SC) .

Una de las funciones fundamentales de la piel es asegurar una barrera entre el cuerpo y el medio externo por la oposición en una dirección de la penetración en la epidermis de hongos, bacterias y alérgenos desde el ambiente y en otra dirección, la pérdida de agua.

La calidad de la función de barrera es evaluada in vivo en el hombre por la medición de la pérdida de agua insensible y el régimen de hidratación y, en el ratón, por la muerte embriónica por deshidratación, permeabilidad cutánea al teñido o disminución del peso corpóreo.

La integridad del cemento de lipido extracelular, al igual que los elementos celulares del estrato córneo y el equilibrio entre la proliferación de queratinoci-tos y diferenciación son esenciales para el mantenimiento de una función de la barrera epidermal funcional.

El gradiente del pH regula las actividades de varias enzimas y asi contribuye al equilibrio de la barrera.

Por la regulación de la secreción de los cuerpos lamilares en el estrato granuloso, la concentración del Ión de calcio tienen influencia en la composición del cemento extracelular del estrato córneo y asi el equilibrio de la barrera epidermal (Lee et al.). El calcio y el Potasio son reguladores importantes de la homeostasis de barrera en la epidermis del murino, J- Clin. Invest, 89, 530-538, 1992) .

La presencia de un gradiente de agua, el cual varia del 70%, en las capas visibles de la epidermis, hasta el 30% en las capas inferiores de la - epidermis (Warner et al., el análisis de sonda electrónica de la determinación de la piel humana: la determinación del perfil de concentración del agua, J. Invest Determatol, 90 218-224, 1988) sugiere que algo el agua se retiene en la junta entre el estrato granuloso y el estrato córneo.

Una de las funciones del agua en el estrato córneo es la capacidad de las reacciones de hidrólisis enzimáticas, necesarias par la flexibilidad de la piel y la exfoliación normal. Si la cantidad del agua presente en el estrato córneo (SC) cae debajo de un umbral critico, las reacciones enzimáticas se interrumpen, conduciendo a la adhesión de los corneocitos y la acumulación de células sobre la superficie de la piel. Esto crea una apariencia visible de sequedad y prurito de la piel, desprendimiento y descamación.

La hidratación cutánea se apoya en dos fenómenos: el suministro de agua por el flujo trans-dermal desde la sangre circulante y la retención del agua epidermal que entra en juego la función de barrera cutánea . Sin embargo, la barrera con respecto a la pérdida del agua no es absoluta. El movimiento normal del intercambio del agua ente el medio externo y el medio interno a través del estrato córneo se llama TE L (pérdida de agua transepidermal) y constituye parte de la pérdida del agua insensible.

La función de barrea cutánea es afectada en su mayoría de las patologías de la piel que son las más extendidas en la población y a menudo acompañadas por un componente inflamatorio (soriasis dermatitis atópica,- ictiosis, sequedad de la piel, etc.). Es también afectada en un gran número de condiciones fisiológicas en respuesta al tiempo (enve ecimiento de la piel) o a ataques ambientales (rayos UV, nivel de humedad, polución, quemaduras) .

La interrupción de la función de barrera, cónica o aguda, hace al cuerpo más sensible a ataques externos y deshidratación . Se puede asociar con una perturbación de la exfoliación y la hiperproliferació . (Jackson et al., Patología del estrato córnea, West J. Med, 158,279-285, 1993) .

La solicitud de patente FR 2 847 467 se refiere al uso de al menos un modulador de la actividad de la oxiesterol-7a-hidroxilasa para preparar una composición cosmética con el fin de prevenir y/o tratar trastornos de la piel y/o las membranas mucosales, que afectan el funcionamiento apropiado de la barrera cutánea.

La solicitud de patente FR 2 831 443 se refiere al uso de al menos un extracto de Gingko biloba u Olea europaea, para preparar una composición con el fin de mejorar la función de barrera en la piel.

La solicitud de patente FR 2.905 857 se refiere al uso de una composición que comprende un extracto de pulpa de algarrobo para hidratar y/o proteger de la sequedad de la piel .

Existe una necesidad para- el tratamiento de patologías y condiciones asociada con una función de barrera de la piel afectada.

En una manera sorprendente e inesperada, los inventores notaron que una combinación de glicerol, vaselina y parafina líquida, en la forma de una emulsión de aceite en agua o de agua en aceite, puede tratar las condiciones de piel seca.

Los inventores demostraron que dicha combinación restaura una barrera de la piel para un estado protector y funcional. Ellos evaluaron la actividad de hidratación de esta combinación y la mejora subsiguiente de la función de barrera de la piel, usando un modelo de piel ex vivo de la deshidratación cutánea inducida. Asimismo, ellos observaron que la expresión de los marcadores epidérmicos moleculares, potencialmente implicados en la homeostasis de la función de barrera epidermal por la PCR cuantitativa y la inmunohistoquimica .

Los inventores también siguieron la actividad de la proteasa de serina por la zimografia in situ y la funcionalidad de la barrera de la piel usando sondas fluorescentes. Los resultados mostraron que la combinación de glicerol, vaselina y parafina liquida en la forma de una emulsión de aceite en agua o de agua en aceite, restaura la actividad de la proteasa de serina y la supresión de la inflamación inducida por las tensiones.

Los inventores también demostraron que la selección de una vaselina particular en esta combinación, es particularmente ventajosa para lograr los resultados anteriores. La vaselina, como un agente oclusivo y emoliente es particularmente importante en la composición. En verdad, formando una película protectora sobre la piel, ayuda a compensar la deficiencia de la función de barrera afectad. La calidad de la película formada sobre la piel depende muy fuertemente de las propiedades reológicas de la vaselina usada en la fabricación.

La presente invención tiene asi por objeto una composición para el uso tópico, que comprende una combinación de glicerol, vaselina y parafina liquida como un ingrediente activo, en la forma de una emulsión de aceite en agua o de agua en aceite.

En el contexto de la presente invención, "combinación activa" significa una combinación de glicerol, vaselina y parafina liquida, en la forma de una emulsión de aceite en agua o de agua en aceite.

Ventajosamente, el glicerol, vaselina y parafina liquida poseen los criterios descritos y regulados de acuerdo con la "Farmacopea Europea", 6a Edición.

Ventajosamente, la vaselina de la combinación activa tiene un punto de goteo entre 35°C y 70°C, preferiblemente entre 51 °C y 57 °C- y en una manera particularmente preferida, aproximadamente de 54°C. El punto de goteo es la medida de acuerdo con el proceso 2.2.17 descrito en la "Farmacopea Europea", 6a Edición.

Ventajosamente, la vaselina de la combinación activa tiene una consistencia de 175 1/10 mm y 195 1/19 mm, preferiblemente alrededor de 185 .1/10 mm (cono de penetración a 25°C.

Ventajosamente, la vaselina de la combinación activa tiene una viscosidad entre 4 cSt y 5 cSt a 100°C, preferiblemente de alrededor de 4.8 cSt a 100°C.

Ventajosamente, la vaselina de la combinación activa tiene un espectro de espectrometría de RMN a 500 MHz del carbono-13 (13C) que comprende un pico a 24.55 ppm, cuya área relativa a un control de 1% de trimetilsilano (TMS)está entre 4 y 8.

En la composición inventiva, la combinación activa está presente en una proporción entre el 10% y el 50% y preferiblemente entre el 20% y el 30% en peso, comparado con el peso total de la composición; la concentración del glicerol está entre el 5% y 30%, preferiblemente entre el 10% y el 20% y, en una manera particularmente preferida, aproximadamente el 25% en peso, en comparación con el peso total de la composición; la concentración de la vaselina está entre el 3% y el 20%, preferiblemente entre el 5% y 10% y en forma particularmente preferida aproximadamente el 8% en peso comparado con el peso total de la composición la concentración de parafina líquida está entre el 0.5% y el 5%, preferiblemente, entre el 1% y el 3% y en una manera particularmente preferida aproximadamente el 2% en peso, comparado con el peso total de la composición.

En la fase acuosa, el agua está entre el 30% y el 80% en peso, comparado con el peso total de la composición.

Ventajosamente, la composición inventiva consiste de aproximadamente 15% de glicerol, aproximadamente 8% de vaselina y aproximadamente 2% de parafina líquida en peso, comparado con el peso total de la composición.

La composición dermatológica, de acuerdo con la invención, además comprende excipientes típicos compartibles dermatológicamente .

La composición dermatológica, de acuerdo con la presente invención, se puede preparar en la forma de una emulsión de agua en aceite ( /0) o una emulsión de aceite en agua (0/W) , una emulsión múltiple, tal como, por ejemplo, una emulsión de aceite en agua en aceite (0/W/O) o en la forma de una hidrodispersión o una lipodispersión, un gel o un aerosol.

El excipiente compartible dermatológicamente puede ser cualquier excipiente entre los conocidos por una persona experta en la materia, con el fin de obtener una composición para la : aplicación tópica en la forma de una crema, loción, gel, pomada, emulsión, microemulsión, rocío, etc.

La composición inventiva puede contener, en particular, aditivos y auxiliares de formulación, tal como emulsionantes, espesantes, agentes de gelificación, agentes que fijan el agua, agentes de difusión, estabilizadores, tintes, perfumes y preservativos.

Emulsionadores adecuados incluyen el ácido esteárico, trolamina y estearato de PEG-40.

Preferiblemente, la composición inventiva tiene aproximadamente el 5% del emulsionador en peso, comparado con el peso total de la composición.

Venta osamente, la composición de la invención tiene entre el 1% y el 5% de ácido esteárico, preferiblemente alrededor del 3% en peso, comparado con el peso total de la composición.

Ventajosamente, la composición inventiva tiene entre el 0% y el 2% de trolamina, preferiblemente alrededor del 0.5% en peso, comparado con el peso total de la composición. : Ventajosamente, la composición inventiva tiene entre el 0% y el 2% del estearato de PEG-40, preferiblemente alrededor del 0.5% en peso, comparado con el peso total de la composición.

Espesadores adecuados incluyen el monoestearato de glicerol y el PEG 600.

Preferiblemente, la composición inventiva tiene aproximadamente el 5% de espesadores en peso, comparado con el peso total de la composición.

: Ventajosamente, la composición inventiva tiene entre el 2% y el 10% del monoestearato de glicerol, preferiblemente alrededor del 5% en peso, comparado con el peso total de la composición.

Ventajosamente, la composición inventiva tiene entre el 2% y el 10% del PEG 600, preferiblemente alrededor del 5% en peso, comparado con el peso total de la composición .

Preservativos adecuados incluyen el parahidoxibenzoato de propilo y el clorocresol.

Preferiblemente, la composición inventiva tiene aproximadamente el 0.1% de preservativos en peso, comparado con el peso total de la composición.

Venta osamente, la composición inventiva tiene entre el 0.05 y el 1% de parahidroxbenzoato de propilo preferiblemente alrededor del 0.1% en peso, comparado con el peso total de la composición.

Agentes de dispersión adecuados incluyen la dimeticóna y el polidimetilciclosiloxano .

Preferiblemente, la composición inventiva tiene aproximadamente el 2% de agentes de dispersión en peso, comparado con el peso total de la composición.

Ventajosamente, la composición inventiva tiene entre el 0.2 y el 2% de dimeticóna, preferiblemente alrededor del 0.5% en peso, comparado con el peso total de la composición.

Ventajosamente, la composición inventiva tiene entre él 1% y el 3% del polidimetilciclosiloxano, preferiblemente alrededor del 2.5% en peso, comparado con el peso total de la composición.

Agentes adecuados que fijan agua incluyen el polietilen-glicol, preferiblemente el polietilen-glicol 600.

Preferiblemente, la composición inventiva tiene aproximadamente el 8% de agentes que fijan el agua, en peso, comparado con el peso total de la composición.

Ventajosamente, la composición de la invención tiene entre el 2% y el 10% de polietilen-glicol , preferiblemente alrededor del 5% en peso, comparado con el peso total de la composición.

El agua usada en la fase acuosa de la emulsión puede ser agua destilada o agua térmica, que posean propiedades dermato-cosméticas .

Ventajosamente, la composición inventiva consiste de: aproximadamente 15% de glicerol, aproximadamente 8% de vaselina, aproximadamente 2% de parafina liquida, y, como excipientes aproximadamente del 1 al 5% de ácido esteárico, aproximádamente del 2% al 10% de monoestearato de glicerol apro imadamente del 2% al 3% de polidimetilciclosiloxano, aproximádamente del 0. 2% al 10% de polietilen-glicol 600, aproximádamente del 0% al 2% de trolamina, aproximadamente del 0 .05 al 1% de para idrozxi-benzoato propilo, hasta el 100% con agua.

La presente invención también tiene como un objeto el uso de una composición de acuerdo con la invención, para preparar una droga para tratar condiciones de la piel secas, asociadas con ciertas dermatosis, tal como la dermatitis atópica, condiciones de ictiosis y soriasis.

La presente invención también tiene como un objeto el uso de una composición de acuerdo con la invención, para preparar una droga para el tratamiento de quemaduras superficiales pequeñas.

La presente invención también tiene como un objeto el uso de una composición, de acuerdo con la presente invención para preparar una droga para prevenir y/o tratar y/o reducir la frecuencia e intensidad de ataques de eczema observados entre pacientes que sufren de dermatitis atópica.

La presente invención se ilustra por los siguientes ejemplos.

FIGURAS Figura 1: Espectro de Resonancia Magnético-Nuclear (RMN) a 500 MHz del carbono-13 para una muestra de 5 g de Vaselina Syntaex A (Syntheal) y de la composición A.

EJEMPLOS Ejemplo 1 - Formulaciones Composición A 15 g de glicerol 8 g de vaselina 2 g de parafina liquida 0.5 g dé trolamina, y, como excipientes, ácido esteárico, monoestearato de glicerol, polidimetilciclosiloxan . dimeticona, polietilen- glicol (PEG) 600, para hidroxibenzoato de propilo, agua, hasta 100 g.

Composición A' 15 g de glicerol, 8 g de vaselina, 2 g de parafina liquida, 1.5 g de ácido esteárico, 5 g de monoestearato de glicerol, 1.5 g de polidimetilciclosiloxano, 0.5 g de dimeticona, 5 g de polietilen-glicol 600, 0.15 g de trolamina, 0.1 g de parahidroxibenzoato de propilo, agua hasta 100 g Composición B 15 g de -glicerol 8 g de vaselina 2 g de parafina liquida 0.5 g de estearato de PEG-40 y, como excipientes: ácido esteárico, monoestearato de glicerol polidimetilciclosiloxano, dimeticona, polietilen- glicol 600, clorocresol, agua hasta 100 g.

Composición B' 15 g de glicerol, 8 g de vaselina, 2 g de parafina liquida, g de ácido esteárico, g de monoestearato de glicerol g sw poliimetilciclosiloxano, 0.5 g de dimetiona, 0.1 g de trolamina, 3 g de polietilen-glicol 500 0.5 g de estearato de PEG-40 0.075 g de clorocresol, agua hasta 100 g.

Ejemplo 2 : Análisis de la regulación de la deshidratación cutánea inducida Aquí, evaluamos la actividad de hidratación de la composición A y la mejora subsiguiente de la función de barrera de la piel, usando un modelo ex vivo de la deshidratación cutánea inducida.

Observamos la expresión de los marcadores epidermales moleculares diferenciales por la PCT cuantitativa y la inmunohistoquimica .

También guiamos la actividad de las enzimas de proteasa de serina por la zimografia in situ y la degradación de las proteínas corneodesmosomales por la mancha Western.

La funcionalidad de la barrera de la piel se analizó por el uso de sondas fluorescentes.

Materiales y métodos Modelos de tejidos 1. Preparación de explantes cutáneos El laboratorio recuperó muestras de piel del desecho de operaciones de la cirugía de plástico reducciones mamarias). El uso de estas muestras se encuentra dentro del ámbito de la declaración de actividad y preservación y preparación de elementos del cuerpo humano para las necesidades del programa de investigación del grupo Pierre Fabre hechas por el Ministerio Francés para la Educación Superior e Investigación Estas muestras se lavaron en 10 baños de PBS y luego discos de 2 cm de diámetro se recortaron con un punzón. Los explantes cutáneos se extendieron sobre una rejilla en el disco Petri y un anillo de diámetro de 1 cm se incrustó en la piel para delimitar el área de tratamiento. 2. Cinética de los modelos Para el modelo de deshidratación inducida, la piel se desecó durante 2 horas bajo el sombrerete del cultivo celular en un disco sin cubrir y luego se colocó en una incubadora para un tratamiento tópico con o sin la combinación activa durante 2 horas. El control negativo el esfuerzo de deshidratación se sometió a la misma cinética en un disco Petri cerrado. 3. Muestras y Análisis Después del tratamiento, 2 biopsias de 6 mm de diámetro se tomaron para el análisis de la expresión del ARN y una biopsia de diámetro de 4 mm se encerró en un bloque de la resina de Tissue Tek® (Sakura Finetek) para la histología. Para el análisis de las proteínas, la piel se expuso a un choque térmico en un baño de agua a 60 °C durante 5 minutos, luego a un baño de 4°C durante 2 minutos, con el fin de separar la epidermis de la dermis.

Las biopsias y las epidermis se congelaron en nitrógeno líquido y se almacenaron a -80°C, antes de ser analizadas .

II. Análisis del Trascriptomo por la PCR cuantitativa Las biopsias de la piel se trituraron en un mortero pre-enfriado con nitrógeno líquido y los ARN se extrajeron usando un estuche RNeasy® (QIAGEN) , de acuerdo con la recomendaciones del fabricante. El ARN luego se ensayó usando un Bioanalyser 2100® (Agilent Technologies) en chips de ARN 6000 Nano LabChip®. Se obtuvo el cADN de 1 µ? de ARN por la reacción enzimática de transcripción reversa, ejecutado con un estuche Access RT-PCR Core Reagents® (Promega), usando aprestos oligo-dT. Los niveles de expresión de genes se analizaron por la PCR cuantitativa en un iCycler iQ® (Biorad) ciclador térmico fluorescente con PCR iQ™ (SYBR® estuches Super Green Mix (Biorad) , de acuerdo con un protocolo de 40 ciclos que comprenden la desnaturalización a 95°C (15 segundos) y la extensión a 60°C (1 minuto). La acumulación del producto de PCR proporcional a la emisión de fluorescencia (intercalando SYBR® Green) se visualizó el ciclo después del ciclo usando el software iCycler .

El software de análisis versión 3.1 del iCycler entregó valores sin tratar de CT (umbral del ciclo) el ciclo desde el cual comienza la amplificación de cADN. La expresión de varios genes de referencia se analizó en paralelo, usando el programa Genorm versión 3.4, que hace posible ' escoger el gene de referencia más estable de una muestra a la siguiente. El gene es luego usado como la referencia para normalizar los resultados por el cálculo ACT = (gene CT de interés) - (CT gene de referencia) , El factor de inducción (IF) es luego calculado para cada tratamiento comparado con la condición de control correspondiente. IF = 2AAcT, donde ???t = (ACT tratado) - (control ACT) . La expresión mARN se evaluó en duplicado para los cinco experimentos que surgen de 5 diferentes individuos, Cuando el facto der inducción, comparado con el control es mayor de 2, la expresión de gene se considera será inducida y cuando es menor de 0.5, la expresión se considera será expresada. El efecto del principio activo en la respuesta a la tensión causada en el modelo se evaluó por el porcentaje de inhibición calculada con la siguientes fórmula: (% de inhibición a la respuesta de esfuerzo) = 100* (((IF de esfuerzo) - (IF de esfuerzo sin control)) - (( IF tratado) - control de IF sin esfuerzo))/ ((IF con esfuerzo) - control de IF sin esfuerzo) ) .

Comparado con el modelo del estudio, la condición de control sin esfuerzo corresponde al control no desecado, la condición "con esfuerzo" corresponde a la biopsia de la piel que se desecó durante 2 horas y. luego se gastaron 2 horas adicionales en la condición de control (es decir, sin tratamiénto tópico), finalmente, la condición "tratada" es' la piel¦ que se ha sometido a 2 horas de secado, seguido por 2 horas -de tratamiento tópico por emoliente.

III. Análisis de expresión de proteína por mancha Western Las epidermis tratadas se trituraron en un mortero enfriado con nitrógeno líquido y las proteínas se extrajeron en un amortiguador de lisis RIPA (40 mM Tris-HCl pH 8, 150 mM de NaCl, 1% de Tritón X-100; 1% de Na+ deoxicolato, 1% SDS; 5 mM EDTA: 100 mM DTT; coctel inhibidor de proteasa (P8340, SIGMA.

Las proteínas son luego ensayadas por el Ensayo de Proteína DC-DC (Biorad método y analizado por la mancha Western. Para cada condición, 25 pg a 40 µ? de proteínas totales se despositaron en 7.5% de geles de poliacrilamida TrisGlicina. La mezcla de proteínas se separó por electrólisis usando el sistema de Mini Protean II (Biorad) y las proteínas se transfirieron a una membrana PVDF (Hybond-P, Amersham) . La proteína de interés se reveló por un anticuerpo específico y un estuche ECL+ (Amersham) . La cantidad de proteínas y la proporción de la forma degradada se calcularon usando el software versión 1.11 (Amersham) Image Master Total-Lab, después de la normalización, comparado con la ß-actina (proteína de referencia) .

IV Técnicas Histológicas Las biopsias de la piel se seccionaron con el criotomo (Leica CM 3050s) en secciones de 5 \im de espesor y se depositaron en portaobjetos de observación (Starfrost®) . 1 -Inmunohistoquímica Las secciones crío se fijaron durante 10 minutos en acetona a 20°C y luego se rehidrataron en PBS antes de ser analizadas por la rotulación inmunoquímica . Después de fijar y de la rehidratación, las secciones de piel se saturaron con una solución de BSA al 3% y se incubaron durante 1 hora con el anticuerpo primario dirigido contra la proteína de interés. ??· seguida se incubaron durante 1 hora con el anticuerpo secundario acoplado a un Alexa-488 o Alexa-555 fluorocromo y finalmente se montaron en Mowiol que contiene DAOi para teñir los núcleos.

Ziraografía in situ Después de fijar durante 10 minutos en acetona a -2°C, las secciones se enjuagaron en una solución de lavado (1% de T een 20 en agua) y se incubaron durante 2 horas a 37 °C con una solución que contiene un substrato especifico de las enzimas de interés, acopladas a un fluoróforo (secundario) . Cuando la enzima es activa, el fluoróforo se desdobla, liberando una señal fluorescente que se puede observar bajo el microscopio. Los portaobjetos rotulados luego sé observaron bajo el microscopio de epifluorescencia (Nikon Eclipse 50i) o bajo el microscopio confocal invertido Zeiss Axiovent 100 .

Sonda fluorescente Después del tratamiento de deshidratación, los explantes cutáneos se incubaron durante un hora más en el incubador a 37 °C con 1 mM de sal de litio de carbohidrazida e color' amarillo Lucifer en el amortiguador HBSS. La piel luego se enjuagó con un baño de HBSS durante 1 minuto y luego se tomaron biopsias de 4 mm de diámetro y se encerraron en resina Tissue Tek ® (Sakura Finetek) (Matsuki et al., 1998). La piel luego se seccionó, los núcleos se tiñeron con DAPI y los portaobjetos se observaron bajo el microscopio de fluorescencia en una longitud de onda de 450 nm, como se describió antes.

Resultados I. Modelo de ruptura de la función de barrera por secado inducido 1. Medición de la permeabilidad cutánea por la sonda fluorescente El primer análisis consistió en estudiar un parámetro funcional fundamental en la función de barrera cutánea: la permeabilidad de las capas superiores de la epidermis. La incubación de la piel con la sonda fluorescente (amarillo Lucifer) después del experimento de secado hecho es posible por caracterizar la modulación de la permeabilidad cutánea. En la condición de control, la rotulación es muy débil y superficial; la sonda penetra poco a través del estrato córneo y se elimina durante el enjuague. Después de dos horas de secado, la rotulación se puede observar en las capas más profundas del estrato córneo. El secado hace a la piel más permeable; su función de barrera es deteriorada. El tratamiento tópico por la composición A que sigue a la dos horas de secado, restaura la impermeabilidad del SC con respecto a la sonda; la rotulación es de nuevo débil y superficial, como bajo la condición de control. Puede luego ser concluido que el tratamiento de hidratación tiene un efecto de reparación con la piel desecada y en la función de barrera cutánea, que se puede observar en el modelo de tejido. 2. Efectos de la regulación del transcriptomo y el proteomo La expresión de varios genes implicados potencialmente en la homeostasis de la función de barrera epidermal se midió por la PCR cuantitativa bajo los varios esfuerzos o condiciones de tratamiento del modelo de secado. El análisis por la inmunohistloquimica mostró la reorganizació de la expresión de ciertas proteínas en términos la localización, por ejemplo, las juntas firmes. La degradación de las proteínas corneodesmosomales se analizaron por la mancha Western.

Los objetivos estudiados que usaron estos varios acercamientos se agruparon de acuerdo con su papel fisiológico (véase la Tabla 1) . El objetivo de este estudio es observar una respuesta para visualizar la tensión y una corrección del efecto de la tensión por la aplicación tópica de la composición A.

El trabajo realizado también demostró los varios niveles de la regulación de ciertos objetivos. Así se nota que las enzimas de exfoliación no fueron reguladas al nivel de transcripción sino más particularmente, en el nivel de su actividad (véase los Resultados 3) .

Tabla 1: Resumen de objetivos y la respuesta farmacológica estudiada en el modelo de secado Y = objetivo reacciona en el modelo; N = objetivo no reacciona en el modelo B-GC N N DES 2 N N Fiiaggrin Y Y Involucrin N N TG1 N N TG3 N N Caspase 14 N N Elox 3 Y N 12R-LOX " N N HAS2 Y N CD44 N N AQP3 Y Y NHE1 Y Y IL-la Y Y Occludin Y Y Claudin Y Y Claudin '4 Y Y ZO.1 N N DE-cadrinb N N ß-catenin N N 3. Medición de la actividad enzimática relacionada a la exfoliación La actividad de la proteasa de Serina se evaluó por la zimografia in situ sobre un modelo de deshidratación y se observó bajo el microscopio confocal en la condición de control, después de dos horas de secado y después de dos horas de secado, seguido por os horas de incubación, con la composición A. La rotulación es más intensa bajo la condición de control; corresponde a la actividad fuerte normal. Esta rotulación disminuye y llega a ser irregular a lo largo del estrato córneo después de dos horas de secado, en tanto su intensidad aumenta y la localización de a actividad reorganizada después de dos hora de incubación con la composición A. El efecto del secado de disminuir e interrumpir la actividad enzimática. Estos resultados son consistentes con la disminución en la degradación de las proteínas corneosomales , la cual se observó con el secado y confirma el efecto del secado en la disminución en la exfoliación observada en el modelo desarrollado. La composición A es capaz de restaurar la actividad enzimática de la piel deshidratada, lo cual confirma el efecto de esta composición en el retorno a la homeostasis de la exfoliación .

Estos resultados muestran que la composición A restauran el nivel de expresión de los objetivos moleculares, cuya expresión se aumenta por la tensión de la deshidratación cutánea inducida. La composición A también restaura la actividad de la proteasa de la serina. Además, la aplicación tópica de la composición A elimina la inflamación inducida por el esfuerzo.

El total de estos resultados sugiere que a aplicación tópica de la composición A restaura los limites de la función de la barrera a la piel.

Ejemplo 3 : Caracterización por la RMN de la vaselina Syntadex A 5 g de la muestra se solubilizaron en cloroformo deuterado para la medición por 500 MHz de la RMN del carbono-13.

La vaselina Syntadex A (Syntheal) exhibe un espectro de espectroscopia de la RMN a 500 MHz característico del carbono-13, que comprende notablemente un pico de 24.55 ppm, cuya área relativa al control del 1% del tetrametilsilano (TMS) está ente 4 y 8.

El mismo pico se encontró en la composición A.

Claims (14)

REIVINDICACIONES

1. Una composición para el uso tópico que comprende una combinación de glicerol, vaselina y parafina liquida, como ingrediente activo, en la forma de una emulsión de aceite en agua o de agua en aceite.

2. La composición de la reivindicación 1, donde la vaselina tiene un espectro de la espectroscopia de Resonancia-Magnético-Nuclear (RMN) a 500 MHz, del carbono 13, que : comprende un pico a 24.55 ppm, cuya área relativa a un control del 1% de tetrametilsilano (TMS) está entre 4 y 8.

3. La composición de las reivindicaciones 1 ó 2, donde la vaselina tiene un punto de goteo entre 51°C y 57°C, en particular de 54°C.

4. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la cual la vaselina tiene una consistencia entre 175 1/10 mm y 195 1/10 mra (penetración de cono a 25°C.

5. La composición de la reivindicación 4, en donde la vaselina tiene una consistencia entre 185 1/10 mm y 195 1/10 mm (penetración de cono a 25°C) .

6. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la cual la vaselina tiene una viscosidad entre 4 cSt y 5 cSt, a 100°C.

7. La composición de la reivindicación 6, en donde la vaselina tiene una viscosidad de aproximadamente 4.8 cSt a 100°C. r

8. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende aproximadamente el 15% de glicerol, aproximadamente el 8% de vaselina y aproximadamente el 2% de parafina liquida.

9. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende uno o más excipientes, seleccionados del grupo que incluye el ácido esteárico, monoestearato de glicerol, polidimetilciclosiloxano, dimeticona, polietilen-glicol 600, trolamiria, parahidroxbenzoato de propilo, clorocresol, PEG- 40-estearato, y agua destilada.

10. Uso de la composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes para preparar una droga para el tratamiento de condiciones de sequedad cutánea de ciertas dermatosis, tal como la dermatitis atópica, condiciones de ictiosis, y soriasis.

11. Uso de la composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, para preparar una droga para el tratamiento de pequeñas quemadas superficiales.

12. Uso de la composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, precedentes para preparar una droga para prevenir y/o tratar y/o reducir la frecuencia y la intensidad de los ataques de eczema observados en pacientes que sufren de dermatosis atópica.

13. Uso de una vaselina, con un punto de goteo entre 51°C y 57°C, para preparar la composición de uso tópico que comprende una combinación de glicerol, vaselina y parafina liquida como un ingrediente activo, en la forma de una emulsión de aceite en agua o de agua en aceite.

14. Uso de una vaselina con un espectro de espectroscopia RMN a 500 MHz del carbono 13, que comprende un pico a 24.55 ppm, cuya área relativa al control del 1% de tetrametilsilano está entre 4 y -8, para preparar la composición para uso tópico que comprende una combinación de glicerol, vaselina y parafina liquida como un ingrediente activo, en la forma de una emulsión de aceite en agua o de agua en aceite.