EP2323639A1 - Composition emolliente - Google Patents

Composition emolliente

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Publication number
EP2323639A1
EP2323639A1 EP09745849A EP09745849A EP2323639A1 EP 2323639 A1 EP2323639 A1 EP 2323639A1 EP 09745849 A EP09745849 A EP 09745849A EP 09745849 A EP09745849 A EP 09745849A EP 2323639 A1 EP2323639 A1 EP 2323639A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
composition
composition according
water
petrolatum
glycerol
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP09745849A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Pierre Fabre
Christophe Przybylski
Jean-François CORDOLIANI
Marion Kopec
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Pierre Fabre Dermo Cosmetique SA
Original Assignee
Pierre Fabre Dermo Cosmetique SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pierre Fabre Dermo Cosmetique SA filed Critical Pierre Fabre Dermo Cosmetique SA
Publication of EP2323639A1 publication Critical patent/EP2323639A1/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

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    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/007—Preparations for dry skin

Definitions

  • the invention relates to the field of treatment of pathologies and conditions associated with an impaired skin barrier function.
  • the epidermis is a pluristratified epithelium, of ectodermal origin, in perpetual renewal.
  • keratinocytes are composed of several cell types: more than 90% keratinocytes but also Langerhans cells, Merkel cells and melanocytes.
  • the basal layer There are several layers of different morphological and cellular composition, from the inside to the outside: the basal layer, a cell layer whose keratinocytes have a very strong proliferation capacity which makes it possible to ensure the self-renewal of the cell. epidermis, then the suprabasal layers (granular, thorny layers) and finally the stratum corneum (Stratum Corneum, SC).
  • One of the fundamental functions of the skin is to ensure a barrier between the body and the external environment, opposing in one way the penetration into the epidermis of fungi, bacteria and allergens of the environment and in the other direction to loss of water.
  • the quality of the barrier function is evaluated in vivo in humans by measuring the insensible loss of water and the rate of hydration and in the mouse by death by dehydration of embryos, dermal permeability to a dye or decrease body weight.
  • the integrity of the extracellular lipid cement as well as all the cellular elements of the stratum corneum and the balance between keratinocyte proliferation and differentiation are essential for maintaining a functional epidermal barrier function.
  • the pH gradient regulates the activities of the different enzymes and thus contributes to the balance of the barrier.
  • the concentration of calcium ions influences the composition of the extracellular cement of the stratum corneum and thus the equilibrium of the epidermal barrier (Lee et al., Calcium and potassium are important regulators of barrier homeostasis in murine epidermis,
  • One of the functions of water in the stratum corneum is to allow the enzymatic hydrolysis reactions necessary for the flexibility of the skin and for normal desquamation. If the amount of water present in the SC falls below a critical threshold, enzymatic reactions are disrupted, leading to the adhesion of corneocytes and the accumulation of cells on the surface of the skin.
  • Cutaneous hydration is based on two phenomena: the supply of water through the trans-epidermal flow brought from the bloodstream and the retention of epidermal water which involves the cutaneous barrier function.
  • the barrier to water losses is not absolute.
  • the normal movement of water between the outer and inner environment through the stratum corneum is called TEWL (transepidermal water loss) and is a part of the water insensitive loss.
  • the cutaneous barrier function is impaired in most of the skin diseases most common in the population and often accompanied by an inflammatory component (psoriasis, atopic dermatitis, ichthyosis, dry skin ). It is also so in a large number of physiological states in response to weather (skin aging) or environmental aggressions
  • the disruption of the barrier function makes the body more sensitive to external aggression and dehydration. It may be associated with dysregulation of desquamation and hyperproliferation (Jackson et al., Pathobiology of stratum corneum, West J. Med, 158, 279-285, 1993).
  • the application FR2847467 relates to the use of at least one agent that modulates the activity of the oxysterol 7 ⁇ -hydroxylase for the preparation of a cosmetic composition intended for preventing and / or treating cutaneous disorders and / or membranes of the type mucous membranes affecting the proper functioning of the skin barrier.
  • Application FR2831443 relates to the use of at least one extract of
  • Gingko biloba or Olea europaea for the preparation of a composition intended to improve the barrier function of the skin.
  • the application FR2905857 relates to the use of a composition comprising a carob pulp extract to moisturize and / or protect from dry skin.
  • the inventors have demonstrated that this combination restores a protective and functional skin barrier. They evaluated the moisturizing activity of this combination and subsequent enhancement of skin barrier function using an in vivo skin model of induced skin dehydration. In addition, they observed the expression of molecular epidermal markers potentially involved in the homeostasis of the epidermal barrier function by quantitative PCR and immunohistochemistry. The inventors also monitored serine protease activity by in situ zymography and skin barrier functionality using fluorescent probes. The results show that the combination of glycerol, petrolatum and liquid paraffin in the form of an oil-in-water or water-in-oil emulsion makes it possible to restore the serine protease activity and to suppress the inflammation induced by the stress.
  • Vaseline as an occlusive and emollient agent is particularly important in the composition. Indeed, by forming a protective film on the skin, it helps to compensate for the impairment of the impaired barrier function. The quality of the film formed on the skin depends very strongly on the rheological properties of the petroleum jelly used in the manufacture.
  • composition for topical use comprising, as active ingredient, a combination of glycerol, petrolatum and liquid paraffin, in the form of an oil-in-water or water-in-oil emulsion.
  • active combination means the combination of glycerol, petrolatum and liquid paraffin, in the form of an oil-in-water or water-in-oil emulsion.
  • glycerol, petrolatum and liquid paraffin have the criteria described and controlled according to "European Pharmacopeia", 6th Edition.
  • the vaseline of the active combination has a dropping point of between 35 and 70 ° C., preferably of between 51 and 57 ° C., particularly preferably of about 54 ° C.
  • the drop point is measured according to the method 2.2.17 described in "European Pharmacopeia", 6th Edition.
  • the vaseline of the active combination has a consistency of between 175 and 195 1/10 mm, preferably about 185 1/10 mm (cone penetration at 25 ° C).
  • the vaseline of the active combination has a viscosity of between 4 and 5 cSt at 100 ° C., preferably about 4.8 cSt at 100 ° C.
  • the vaseline of the active combination has a spectrum in 500 MHz NMR spectroscopy of C13 carbon comprising a peak at 24.55 ppm, the area relative to a control of Tetra methyl sylan (TMS) at 1% is between 4 and 8.
  • the active combination is present in a proportion of between 10 and 50% and preferably between 20 and 30% by weight relative to the total weight of the composition; the concentration of glycerol is between 5 and 30%, preferably between 10 and 20% and particularly preferably is about 15% by weight relative to the total weight of the composition, the petrolatum concentration is between 3 and 20%. %, preferably between 5 and 10% and particularly preferably is about 8% by weight relative to the total weight of the composition and the liquid paraffin concentration is between 0.5 and 5%, preferably between 1 and 3 % and particularly preferably is about 2% by weight relative to the total weight of the composition.
  • the water is between 30 and 80% by weight relative to the total weight of the composition.
  • the composition according to the invention comprises approximately 15% of glycerol, approximately 8% of petrolatum and approximately 2% of liquid paraffin by weight relative to the total weight of the composition.
  • the dermatological composition according to the invention further comprises conventional dermatologically compatible excipients.
  • the dermatological composition according to the present invention may be prepared in the form of a water-in-oil (W / O) or oil-in-water (O / W) emulsion, a multiple emulsion such as, for example, a water-in-oil emulsion.
  • W / O / W water-in-oil
  • O / W oil-in-water
  • W / O / H oil-in-water emulsion
  • a hydrodispersion or a lipodispersion a gel or an aerosol.
  • the dermatologically compatible excipients may be any excipient among those known to those skilled in the art to obtain a composition for topical application in the form of a cream, a lotion, a gel or an ointment. , an emulsion, a microemulsion, a spray, etc.
  • the composition according to the invention can in particular contain additives and formulation aids, such as emulsifiers, thickeners, gelling agents, water binders, spreading agents, stabilizers, dyes, perfumes and the like. conservatives.
  • Suitable emulsifiers include stearic acid, trolamine, PEG-40-stearate.
  • the composition according to the invention has about 5% emulsifiers by weight relative to the total weight of the composition.
  • the composition according to the invention has between 1 and 5% of stearic acid, preferably about 3% by weight relative to the total weight of the composition.
  • the composition according to the invention has between 0 and 2% of trolamine, preferably about 0.5% by weight relative to the total weight of the composition.
  • the composition according to the invention has between 0 and 2% of PEG-40-stearate, preferably about 0.5% by weight relative to the total weight of the composition.
  • Suitable thickeners include glycerol monostearate, PEG 600.
  • the composition according to the invention has about 5% thickeners by weight relative to the total weight of the composition.
  • the composition according to the invention has between 2 and 10% of glycerol monostearate, preferably about 5% by weight relative to the total weight of the composition.
  • the composition according to the invention has between 2 and 10% of PEG 600, preferably about 5% by weight relative to the total weight of the composition.
  • Suitable preservatives include propyl parahydroxybenzoate, chlorocresol.
  • the composition according to the invention has about 0.1% preservatives by weight relative to the total weight of the composition.
  • the composition according to the invention has between 0.05 and 1% of propyl parahydroxybenzoate, preferably about 0.1% by weight relative to the total weight of the composition.
  • Suitable leveling agents include dimethicone, polydimethylcyclosiloxane.
  • the composition according to the invention has about 2% spreading agents by weight relative to the total weight of the composition.
  • the composition according to the invention has between 0.2 and 2% dimethicone, preferably about 0.5% by weight relative to the total weight of the composition.
  • the composition according to the invention has between 1 and 3% of polydimethylcyclosiloxane, preferably about 2.5% by weight relative to the total weight of the composition.
  • Suitable water fixatives include polyethylene glycol, preferably polyethylene glycol 600.
  • the composition according to the invention has about 8% water fixers by weight relative to the total weight of the composition.
  • the composition according to the invention has between 2 and 10% of polyethylene glycol, preferably about 5% by weight relative to the total weight of the composition.
  • the water used for the aqueous phase of the emulsion may be distilled water or thermal water having dermato-cosmetic properties.
  • the composition according to the invention comprises: approximately 15% of glycerol, approximately 8% of petrolatum, approximately 2% of liquid paraffin, and as excipients: approximately 1 to 5% of stearic acid,
  • the present invention also relates to the use of a composition according to the invention for the preparation of a medicament for treating dry skin conditions, in particular certain dermatoses such as atopic dermatitis, ichthyotic conditions, psoriasis.
  • the present invention also relates to the use of a composition according to the invention for the preparation of a medicament for treating superficial burns of small areas.
  • the present invention also relates to the use of a composition according to the invention for the preparation of a medicament for preventing and / or treating / reducing the frequency and intensity of eczematous flares observed in patients with dermatitis atopic.
  • Figure 1 NMR spectrum at 500 MHz C13 carbon of 5 g sample Syntadex A Vaseline (Syntheal) and Composition A.
  • composition A Composition A
  • composition A '
  • PEG-40-stearate 0.5 g of PEG-40-stearate, and as excipients stearic acid, glycerol monostearate, polydimethylcyclosiloxane, dimethicone, polyethylene glycol 600, chlorocresol,
  • composition A we evaluate the moisturizing activity of composition A and the subsequent improvement of skin barrier function using a skin model ex vzvo of induced skin dehydration.
  • the laboratory retrieves skin samples from plastic surgery surgical waste (breast reduction).
  • the use of these samples comes within the framework of "the declaration of activity of conservation and preparation of elements of the human body for the research program needs of the Pierre Fabre group" made to the Ministry of Higher Education and the research.
  • RNA expression After treatment, 2 biopsies of 6 mm diameter were taken for analysis of RNA expression and a 4 mm diameter biopsy included in a Tissue Tek® (Sakura Finetek) resin block for histology.
  • Tissue Tek® Sekura Finetek
  • protein analysis the skin is exposed to heat shock in a water bath at 60 ° C. for 5 minutes and then at 4 ° C. for 2 minutes in order to separate the epidermis from the dermis.
  • Biopsies and epidemics are frozen in liquid nitrogen and stored at -80 ° C. before being analyzed.
  • RNA 6000 Nano LabChip® chips The skin biopsies are ground in a mortar previously cooled with liquid nitrogen and the RNAs are extracted using an RNeasy® kit (QIAGEN) according to the supplier's recommendations. The RNA is then assayed using a Bio analysesr 2100® (Agilent Technologies) on RNA 6000 Nano LabChip® chips. The cDNA is obtained from 1 ⁇ g of RNA by retro-transcription enzymatic reaction carried out with an Access RT-PCR Core Reagents® kit (Promega), using oligo dT primers. The levels of gene expression are analyzed by quantitative PCR on a thermocycler.
  • ICycler iQ® fluorescence (Biorad) with iQ TM SYBR® Green Super Mix PCR kits (Biorad) following a 40-cycle protocol comprising denaturation at 95 ° C (15 sec) and elongation at 60 ° C (1 mm).
  • the accumulation of the PCR product proportional to the fluorescence emission (intercalating SYBR®Green) is visualized cycle by cycle thanks to the iCycler software.
  • ICycler version 3.1 analysis software delivers raw CT values
  • the induction factor (FI) is then calculated for each treatment with respect to the corresponding control condition.
  • FI 2 " ⁇ Cr
  • control without stress corresponds to the control not desiccated
  • stressed corresponds to a skin biopsy that was dried for 2 hours and then spent 2 additional hours in a control condition (ie without topical treatment)
  • condition "treated” is the skin which has undergone 2 hours of drying followed by 2 hours of topical treatment with an emollient.
  • the treated epidemics are ground in a mortar cooled with liquid nitrogen and the proteins are extracted in a lysis buffer RIPA (Tris HCl pH8 50mM, NaCl 15OmM, Triton X 100 IX, Na + Desoxycholate 1%, SDS 0.1% 5mM EDTA, 10mM DTT, protease inhibitor cocktail (reference P8340, SIGMA).
  • RIPA Tris HCl pH8 50mM, NaCl 15OmM, Triton X 100 IX, Na + Desoxycholate 1%, SDS 0.1% 5mM EDTA, 10mM DTT, protease inhibitor cocktail (reference P8340, SIGMA).
  • the proteins are then assayed by the DC-DC Protein Assay method.
  • the protein mixture is separated by electrophoresis using the Mini system
  • Protein II Biorad
  • proteins are transferred to a PVDF membrane (Hybond-P, Amersham).
  • the protein of interest is revealed by a specific antibody and an ECL + kit (Amersham).
  • the amount of protein and the proportion of degraded form are calculated using Image Master TotalLab version 1.11 software (Amersham) after normalization with respect to ⁇ - actin (reference protein).
  • Cryocuts are fixed for 10 minutes with acetone at 20 ° C. and then rehydrated with PBS before being analyzed by immunochemical staining. After fixation and rehydration, the skin sections are saturated with a 3% BSA solution and incubated for 1 hour with the primary antibody directed against the protein of interest. In a second time, they are incubated for 1 hour with the secondary antibody coupled to a fluorochrome Alexa-488 or Alexa-555 and finally mounted in Mowiol containing DAPI to mark the nuclei.
  • the sections are rinsed in a washing solution (Tween 20 1% in water) and incubated for 2 hours at 37 ° C. with a solution containing the specific substrate.
  • enzymes of interest coupled to a fluorophore (annex).
  • annex a solution containing the specific substrate.
  • enzymes of interest coupled to a fluorophore (annex).
  • the fluorophore is cleaved, releasing a fluorescent signal observable under a microscope.
  • the labeled slides are then observed using an epifluorescence microscope (Nikon Eclipse 5Oi) or a Zeiss Axiovert 100 inverted confocal microscope.
  • the skin explants are incubated for an additional hour in an oven at 37 ° C with a fluorescent probe
  • Lucifer Yellow Carboxyhydrazide dilithium is known (Invitrogen) at 1M in HBSS buffer. The skin is then rinsed in an HBSS bath for 1 minute and then 4mm diameter biopsies are taken and included in the resin Tissue TekR® (Sakura Finetek) (Matsuki et al 1998). The skin is then cut, the nuclei are labeled with DAPI and the slides are observed under a fluorescence microscope at a wavelength of 450 nm as described above.
  • the first analysis consisted in studying a fundamental functional parameter in the cutaneous barrier function: the permeability of the upper layers of the epidermis. Incubation of the skin with a fluorescent probe (Lucifer Yellow) after the drying experiment allowed to characterize the modulation of cutaneous permeability. In the control condition, the marking is very weak and superficial, the probe penetrates little through the stratum corneum and is eliminated during rinsing. After two hours of drying, the marking is observable in the deeper strata of the stratum corneum. Drying makes the skin more permeable, its barrier function is deteriorated. The topical treatment with the composition After drying for two hours restores the impermeability of the SC with respect to the probe, the marking is again weak and superficial, as in the control condition. We can then conclude that the moisturizing treatment has a repairing effect on the parched skin and the cutaneous barrier function observable on the tissue model.
  • the expression of different genes potentially involved in the homeostasis of the epidermal barrier function was measured by quantitative PCR under the various stress conditions or treatment of the drying model. Immunohistochemistry analysis has shown the reorganization of the expression of certain proteins in terms of localization, for example tight junctions. Degradation of corneodesmosomal proteins was analyzed by Western-Blot. The targets studied using these different approaches have been grouped according to their physiological role (see Table 1). The objective of this study is to observe a visualizable stress response and a correction of the effect of stress by the topical application of the composition A.
  • Table 1 Summary of Targets and Pharmacological Response Considered in the Desiccation Model.
  • the activity of the serine proteases was evaluated by in situ zymography on the dehydration model and observed under a confocal microscope in the control condition after two hours of drying and after two hours of drying followed by a two-hour incubation with the composition A
  • the marking is the most intense in the control condition, it corresponds to the normal strong activity. This marking decreases and becomes irregular along the stratum corneum after two hours of drying while its intensity is increased and the location of the activity reorganized after the two hours of incubation with the composition A.
  • the drying has the effect of reducing and disrupt enzymatic activity.
  • composition A is capable of restoring the enzymatic activity of the dehydrated skin, which confirms the effect of this composition for a return of the homeostasis of the desquamation.
  • composition A makes it possible to restore the level of expression of the molecular targets whose expression is increased by the stress of cutaneous dehydration induced.
  • Composition A also makes it possible to restore serine protease activity.
  • topical application of the composition A makes it possible to eliminate the inflammation induced by the stress.
  • composition A in topical application makes it possible to restore the barrier function of the skin, to limit
  • Syntadex A (Syntheal) petroleum jelly has a characteristic spectrum in C13 carbon NMR spectroscopy at 500 MHz, including a peak at 24.55 ppm, the area of which is related to a 1% Tetra methyl sylan (TMS) control. between 4 and 8.
  • TMS Tetra methyl sylan

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Description

COMPOSITION EMOLLIENTE
L'invention concerne le domaine du traitement des pathologies et états associés à une fonction barrière de la peau altérée.
L'épiderme est un épithélium pluristratifié, d'origine ectodermique, en perpétuel renouvellement.
Il protège l'organisme de la déshydratation, des stress mécaniques et de certaines agressions pathogènes.
Il est composé de plusieurs types cellulaires : des kératinocytes à plus de 90% mais aussi des cellules de Langerhans, de Merkel et des mélanocytes.
On distingue plusieurs couches de nature morphologique et de composition cellulaire différentes, de l'intérieur vers l'extérieur : la couche basale, assise cellulaire dont les kératinocytes ont une capacité de prolifération très forte qui permet d'assurer l' auto-renouvellement de l'épiderme, puis les couches suprabasales (couches granuleuse, épineuse) et enfin la couche cornée (Stratum Corneum, SC).
Une des fonctions fondamentales de la peau est d'assurer une barrière entre l'organisme et le milieu extérieur s'opposant dans un sens à la pénétration dans l'épiderme de champignons, bactéries et allergènes de l'environnement et dans l'autre sens à la perte en eau.
La qualité de la fonction barrière est évaluée in vivo chez l'homme par la mesure de la perte insensible en eau et le taux d'hydratation et chez la souris par la mort par déshydratation des embryons, la perméabilité cutanée à un colorant ou la diminution de poids corporel.
L'intégrité du ciment lipidique extracellulaire ainsi que de tous les éléments cellulaires de la couche cornée et l'équilibre entre prolifération et différenciation kératinocytaires sont capitaux pour le maintien d'une fonction barrière épidermique fonctionnelle. Le gradient de pH régule les activités des différentes enzymes et contribue ainsi à l'équilibre de la barrière.
En régulant la sécrétion des corps lamellaires dans la couche granuleuse, la concentration en ions calcium influence la composition du ciment extracellulaire de la couche cornée et ainsi l'équilibre de la barrière épidermique (Lee et al., Calcium and potassium are important regulators of barrier homeostasis in murine epidermis,
J. Clin Invest,89, 530-538, 1992).
La présence d'un gradient d'eau qui passe de 70% dans les couches visibles de l'épiderme à 30% dans les couches inférieures du SC et à 15% au niveau des couches de cellules les plus externes de l'épiderme (Warner et al, Electron probe analysis of human skin : détermination of the water concentration profile, J. Invest Dermatol, 90, 218-224, 1988) suggère qu'une partie de l'eau est retenue dès la jonction entre couche granuleuse et couche cornée.
Une des fonctions de l'eau dans la couche cornée est de permettre les réactions d'hydrolyse enzymatique nécessaires à la flexibilité de la peau et à une desquamation normale. Si la quantité d'eau présente dans le SC descend en dessous d'un seuil critique, les réactions enzymatiques sont perturbées, conduisant à l'adhésion des cornéocytes et à l'accumulation des cellules à la surface de la peau.
Cela crée une apparence visible de sécheresse, des démangeaisons, la peau pèle et s'écaille.
L'hydratation cutanée repose sur deux phénomènes : l'apport d'eau par le flux trans-épidermique apporté depuis la circulation sanguine et la rétention d'eau épidermique qui met en jeu la fonction barrière cutanée. Cependant la barrière vis- à-vis des pertes hydriques n'est pas absolue. Le mouvement normal d'échange d'eau entre le milieu externe et interne à travers la couche cornée est appelé TEWL (transepidermal water loss) et constitue une part de la perte insensible en eau.
La fonction barrière cutanée est altérée dans la majorité des pathologies de la peau les plus répandues dans la population et souvent accompagnées d'une composante inflammatoire (psoriasis, dermatite atopique, ichtyoses, sécheresse cutanée...). Elle l'est également dans un grand nombre d'états physiologiques en réponse au temps (vieillissement cutané) ou aux agressions de l'environnement
(UVs, taux d'humidité, pollution, brûlures).
La perturbation de la fonction barrière, chronique ou aiguë, rend l'organisme plus sensible aux agressions extérieures et à la déshydratation. Elle peut être associée à un dérèglement de la desquamation et à une hyperprolifération (Jackson et al. Pathobiology of the stratum corneum, West J. Med, 158, 279-285, 1993).
La demande FR2847467 concerne l'utilisation d'au moins un agent modulateur de l'activité de l'oxystérol 7α-hydroxylase pour la préparation d'une composition cosmétique destinée à prévenir et ou/traiter les désordres cutanés et/ou de membranes de type muqueuses affectant le bon fonctionnement de la barrière cutanée.
La demande FR2831443 concerne l'utilisation d'au moins un extrait de
Gingko biloba ou d'Olea europaea, pour la préparation d'une composition destinée à améliorer la fonction barrière de la peau. La demande FR2905857 concerne l'utilisation d'une composition comprenant un extrait de pulpe de caroube pour hydrater et/ou protéger de la sécheresse cutanée.
Il existe un besoin en un traitement des pathologies et états associés à une fonction barrière de la peau altérée. On a maintenant constaté de manière tout à fait surprenante et inattendue qu'une association de type glycérol, vaseline et paraffine liquide sous forme d'une émulsion huile dans eau ou eau dans huile permettait de traiter les états de sécheresse cutanée.
Les inventeurs ont mis en évidence que cette association restaure une barrière de la peau protectrice et fonctionnelle. Ils ont évalué l'activité hydratante de cette association et l'amélioration subséquente de la fonction barrière de la peau en utilisant un modèle de peau in vivo de déshydratation cutanée induite. En outre, ils ont observé l'expression des marqueurs épidermiques moléculaires potentiellement impliqués dans l'homéostasie de la fonction barrière épidermique par PCR quantitative et immuno-histochimie. Les inventeurs ont également suivi l'activité serine protéase par zymographie in situ et la fonctionnalité de la barrière de la peau en utilisant des sondes fluorescentes. Les résultats montrent que l'association de type glycérol, vaseline et paraffine liquide sous forme d'une émulsion huile dans eau ou eau dans huile permet de restaurer l'activité serine protéase et de supprimer l'inflammation induite par le stress.
Les inventeurs ont également mis en évidence que le choix d'une vaseline particulière dans cette association est particulièrement avantageuse pour atteindre les résultats ci-dessus. La vaseline en tant qu'agent occlusif et émollient est particulièrement importante dans la composition. EN effet, en formant un film protecteur sur la peau, elle permet d'aider à compenser la déficience de la fonction barrière altérée. La qualité du film formé sur la peau dépend très fortement des propriétés rhéo logiques de la vaseline utilisée dans la fabrication.
La présente invention a ainsi pour objet une composition à usage topique comprenant, en tant que principe actif, une association de glycérol, vaseline et paraffine liquide, sous forme d'une émulsion huile dans eau ou eau dans huile.
Au sens de la présente invention, on appellera « association active » l'association glycérol, vaseline et paraffine liquide, sous forme d'une émulsion huile dans eau ou eau dans huile.
Avantageusement, le glycérol, la vaseline et la paraffine liquide présentent les critères décrits et contrôlés selon « European Pharmacopeia », 6ème Edition.
Avantageusement, la vaseline de l'association active présente un point de goutte compris entre 35 et 700C, de préférence compris entre 51 et 57°C, de manière particulièrement préférée d'environ 54°C. Le point de goutte est mesuré selon le procédé 2.2.17 décrit dans « European Pharmacopeia », 6ème Edition.
Avantageusement, la vaseline de l'association active présente une consistance comprise entre 175 et 195 1/10 mm, de préférence d'environ 185 1/10 mm (pénétration au cône à 25°C). Avantageusement, la vaseline de l'association active présente une viscosité comprise entre 4 et 5 cSt à 1000C, de préférence d'environ 4,8 cSt à 1000C. Avantageusement, la vaseline de l'association active présente un spectre en spectroscopie RMN à 500 MHz du carbone C13 comprenant un pic à 24,55 ppm dont l'aire relative à un témoin de Tetra méthyl sylane (TMS) à 1% est comprise entre 4 et 8. Dans la composition selon l'invention, l'association active est présente selon une proportion comprise entre 10 et 50 % et préférentiellement entre 20 et 30 % en poids par rapport au poids total de la composition ; la concentration en glycérol est comprise entre 5 et 30 %, préférentiellement entre 10 et 20 % et de manière particulièrement préférée est d'environ 15% en poids par rapport au poids total de la composition, la concentration en vaseline est comprise entre 3 et 20 %, préférentiellement entre 5 et 10 % et de manière particulièrement préférée est d'environ 8% en poids par rapport au poids total de la composition et la concentration en paraffine liquide est comprise entre 0,5 et 5 %, préférentiellement entre 1 et 3 % et de manière particulièrement préférée est d'environ 2% en poids par rapport au poids total de la composition.
Dans la phase aqueuse, l'eau est comprise entre 30 et 80 % en poids par rapport au poids total de la composition.
Avantageusement, la composition selon l'invention comprend environ 15% de glycérol, environ 8% de vaseline et environ 2% de paraffine liquide en poids par rapport au poids total de la composition.
La composition dermatologique selon l'invention comprend, en outre, des excipients usuels dermatologiquement compatibles.
La composition dermatologique selon la présente invention peut être préparée sous la forme d'une émulsion eau dans huile (E/H) ou huile dans eau (H/E), d'une émulsion multiple comme par exemple, une émulsion eau dans huile dans eau (E/H/E) ou une émulsion huile dans eau dans huile (H/E/H), ou encore sous la forme d'une hydrodispersion ou une lipodispersion, un gel ou un aérosol.
Les excipients dermatologiquement compatibles peuvent être tout excipient parmi ceux connus de l'homme de l'art en vue d'obtenir une composition pour l'application topique sous forme de crème, d'une lotion, d'un gel, d'une pommade, d'une émulsion, d'une microémulsion, d'un spray, etc. La composition selon l'invention peut en particulier contenir des additifs et aides à la formulation, tels que des émulsionnants, des épaississants, des gélifiants, des fixateurs d'eau, des agents d'étalement, des stabilisants, des colorants, des parfums et des conservateurs. Des émulsionnants appropriés comprennent l'acide stéarique, la trolamine, le PEG-40-stéarate.
De préférence, la composition selon l'invention présente environ 5% d'émulsionnants en poids par rapport au poids total de la composition.
Avantageusement, la composition selon l'invention présente entre 1 et 5% d'acide stéarique, de préférence environ 3% en poids par rapport au poids total de la composition.
Avantageusement, la composition selon l'invention présente entre 0 et 2% de trolamine, de préférence environ 0,5% en poids par rapport au poids total de la composition. Avantageusement, la composition selon l'invention présente entre 0 et 2% de PEG-40-stéarate, de préférence environ 0,5% en poids par rapport au poids total de la composition.
Des épaississants appropriés comprennent le monostéarate de glycérol, le PEG 600. De préférence, la composition selon l'invention présente environ 5% d'épaississants en poids par rapport au poids total de la composition.
Avantageusement, la composition selon l'invention présente entre 2 et 10% de monostéarate de glycérol, de préférence environ 5% en poids par rapport au poids total de la composition. Avantageusement, la composition selon l'invention présente entre 2 et 10% de PEG 600, de préférence environ 5% en poids par rapport au poids total de la composition.
Des conservateurs appropriés comprennent le parahydroxybenzoate de propyle, le chlorocrésol. De préférence, la composition selon l'invention présente environ 0,1% de conservateurs en poids par rapport au poids total de la composition. Avantageusement, la composition selon l'invention présente entre 0,05 et 1% de parahydroxybenzoate de propyle, de préférence environ 0,1% en poids par rapport au poids total de la composition.
Des agents d'étalement appropriés comprennent la diméthicone, le polydiméthylcyclosiloxane.
De préférence, la composition selon l'invention présente environ 2% d'agents d'étalement en poids par rapport au poids total de la composition.
Avantageusement, la composition selon l'invention présente entre 0,2 et 2% de diméthicone, de préférence environ 0,5% en poids par rapport au poids total de la composition.
Avantageusement, la composition selon l'invention présente entre 1 et 3% de polydiméthylcyclosiloxane, de préférence environ 2,5% en poids par rapport au poids total de la composition.
Des fixateurs d'eau appropriés comprennent le polyéthylène glycol, de préférence le polyéthylène glycol 600.
De préférence, la composition selon l'invention présente environ 8% de fixateurs d'eau en poids par rapport au poids total de la composition.
Avantageusement, la composition selon l'invention présente entre 2 et 10% de polyéthylène glycol, de préférence environ 5% en poids par rapport au poids total de la composition.
L'eau utilisée pour la phase aqueuse de l'émulsion peut être une eau distillée ou une eau thermale ayant des propriétés dermato-cosmétique. Avantageusement, la composition selon l'invention comprend : environ 15 % de glycérol, - environ 8% de vaseline, environ 2% de paraffine liquide, et à titre d'excipients : environ 1 à 5% d'acide stéarique,
- environ 2 à 10% de monostéarate de glycérol,
- environ 1 à 3% de polydiméthylcyclosiloxane, - environ 0,2 à 2% de diméthicone,
- environ 2 à 10% de polyéthylène glycol 600, environ 0 à 2% de trolamine, environ 0,05 à 1% de parahydroxybenzoate de propyle
- jusqu'à 100% en eau.
La présente invention a également pour objet l'utilisation d'une composition selon l'invention pour la préparation d'un médicament destiné à traiter les états de sécheresse cutanée, en particulier de certaines dermatoses telles que dermatite atopique, états ichtyosiques, psoriasis.
La présente invention a également pour objet l'utilisation d'une composition selon l'invention pour la préparation d'un médicament destiné à traiter les brûlures superficielles de faibles étendues.
La présente invention a également pour objet l'utilisation d'une composition selon l'invention pour la préparation d'un médicament destiné à prévenir et/ou traiter/réduire la fréquence et l'intensité des poussées eczémateuses observées chez les patients atteints de dermatite atopique.
La présente invention est illustrée par les exemples suivants. FIGURES
Figure 1 : Spectre RMN à 500 MHz du carbone C13 de 5 g d'échantillon de la vaseline Syntadex A (Synthéal) et de la Composition A.
EXEMPLES
Exemple 1 : Formulations
Composition A
15 g de glycérol, 8 g de vaseline,
2 g de paraffine liquide,
- 0,5 g de trolamine, et à titre d'excipients acide stéarique, monostéarate de glycérol, polydiméthylcyclosiloxane, diméthicone, polyéthylène glycol (PEG) 600, parahydroxybenzoate de propyle
- eau jusqu'à 100 g. Composition A'
15 g de glycérol, 8 g de vaseline,
- 2 g de paraffine liquide, - 1,5 g d'acide stéarique,
5 g de monostéarate de glycérol, 1 ,5 g de polydiméthylcyclosiloxane, 0,5 g de diméthicone,
- 5 g de polyéthylène glycol 600, - 0,15 g de trolamine,
0,1 g de parahydroxybenzoate de propyle
- eau jusqu'à 100 g.
Composition B - 15 g de glycérol,
8 g de vaseline,
- 2 g de paraffine liquide,
- 0,5 g de PEG-40-stéarate, et à titre d'excipients acide stéarique, monostéarate de glycérol, polydiméthylcyclosiloxane, diméthicone, polyéthylène glycol 600, chlorocrésol,
- eau jusqu'à 100 g.
Composition B' - 15 g de glycérol,
8 g de vaseline,
- 2 g de paraffine liquide, 3 g d'acide stéarique,
5 g de monostéarate de glycérol, 2 g de polydiméthylcyclosiloxane,
- 0,5 g de diméthicone, 0,1 g de tro lamine,
3 g de polyéthylène glycol 600,
- 0,5 g de PEG-40-stéarate,
- 0,075 g de chlorocrésol, - eau jusqu'à 100 g.
Exemple 2 : analyse de la régulation de la déshydratation cutanée induite
Nous évaluons ici l'activité hydratante de la composition A et l'amélioration subséquente de la fonction barrière de la peau en utilisant un modèle de peau ex vzvo de déshydratation cutanée induite.
Nous observons l'expression des marqueurs épidermiques moléculaires différentiels par PCR quantitative et immuno-histochimie.
Nous suivons également l'activité des enzymes à serine protéase par zymographie in situ et la dégradation de protéines cornéodesmosomales par western blotting. La fonctionnalité de la barrière de la peau est analysée en utilisant des sondes fluorescentes.
Matériel et méthodes
1. Modèles tissulaires 1. Préparation des explants cutanés
Le laboratoire récupère des prélèvements de peau provenant de déchets opératoires de chirurgie plastique (diminutions mammaires). L'utilisation de ces prélèvements rentre dans le cadre de « la déclaration d'activité de conservation et de préparation d'éléments du corps humain pour les besoins de programme de recherche du groupe Pierre Fabre » faite au Ministère de l'Enseignement Supérieur et de la Recherche.
Ces prélèvements sont lavés dans 10 bains de PBS puis découpés à l' emporte-pièce en disques de 2 cm de diamètre. Les explants cutanés sont étalés sur une grille dans une boîte de Pétri et un anneau de 1 cm de diamètre est scellé sur la peau pour délimiter la zone de traitement.
2. Cinétique des modèles Pour le modèle de déshydratation induite, la peau est desséchée pendant 2 heures sous la hotte de culture cellulaire dans une boîte sans couvercle puis est mise à l'étuve pour un traitement topique avec ou sans association active pendant 2 heures. Le témoin négatif du stress de déshydratation subit la même cinétique dans une boîte de Pétri fermée.
3. Prélèvements pour l'analyse
Après le traitement, 2 biopsies de 6 mm de diamètre sont prélevées pour l'analyse de l'expression des ARN et une biopsie de 4 mm de diamètre incluse dans un bloc de résine Tissue Tek® (Sakura Finetek) pour l'histologie. Pour l'analyse des protéines, la peau est exposée à un choc thermique dans un bain d'eau à 600C pendant 5 minutes puis à 4°C pendant 2 minutes afin de séparer l'épidémie du derme.
Les biopsies et les épidémies sont congelés dans l'azote liquide et stockés à -800C avant d'être analysés.
II. Analyse du transcriptome par PCR quantitative
Les biopsies de peau sont broyées dans un mortier préalablement refroidi à l'azote liquide et les ARNs sont extraits grâce à un kit RNeasy® (QIAGEN) selon les recommandations du fournisseur. L'ARN est ensuite dosé à l'aide d'un Bioanalyser 2100® (Agilent Technologies) sur puces RNA 6000 Nano LabChip®. L'ADNc est obtenu à partir d'1 μg d'ARN par réaction enzymatique de rétro- transcription réalisée avec un kit Accès RT-PCR Core Reagents® (Promega), à l'aide d'amorces oligo dT. Les niveaux d'expression génique sont analysés par PCR quantitative sur un thermocycleur à. fluorescence ICycler iQ® (Biorad) avec des kits PCR iQ™SYBR® Green Super Mix (Biorad) suivant un protocole de 40 cycles comprenant une dénaturation à 95°C (15 sec) et une élongation à 600C (1 mm). L'accumulation du produit de PCR proportionnelle à l'émission de fluorescence (intercalant SYBR®Green) est visualisée cycle après cycle grâce au logiciel iCycler. Le logiciel d'analyse iCycler version 3.1 délivre des valeurs brutes de CT
(Cycle Threshold): cycle à partir duquel l'amplification d'ADNc débute. L'expression de plusieurs gènes de référence est analysée en parallèle à l'aide du programme Genorm version 3.4 qui permet de choisir le gène de référence le plus stable d'un échantillon à l'autre. Ce gène sert ensuite de référence pour la normalisation des résultats par le calcul du ΔCT = CT gène d'intérêt — CT gène de référence.
Le facteur d'induction (FI) est ensuite calculé pour chaque traitement par rapport à la condition contrôle correspondante. FI = 2 "ΔΔCr où ΔΔCT = ΔCT traité - ΔCT contrôle L'expression des ARNm est évaluée en duplicat pour cinq expériences provenant de 5 individus différents. Lorsque le facteur d'induction par rapport au contrôle est supérieur à 2, on considère que l'expression du gène est induite et lorsqu'il est inférieur à 0,5, on considère que l'expression est réprimée. L'effet du principe actif sur la réponse au stress causée dans le modèle est évalué par le pourcentage d'inhibition calculé avec la fonaule suivante: % d'inhibition = 100 * (FI stressé — FI témoin sans stress) — (FI traité — FI témoin sans stress) de réponse au stress (FI stressé — FI ténsoin sans stress)
Par rapport au modèle d'étude, la condition « témoin sans stress» correspond au contrôle non desséché; la condition «stressé» correspond à une biopsie de peau qui a été desséchée 2 heures puis qui a passé 2 heures supplémentaire en condition contrôle (c'est-à-dire sans traitement topique); enfin la condition «traité » est la peau qui a subi 2 heures de dessèchement suivies de 2 heures de traitement topique par un émollient.
III. Analyse de l'expression protéique par Western Blot
Les épidémies traités sont broyés dans un mortier refroidi à l'azote liquide et les protéines sont extraites dans un tampon de lyse RIPA (Tris HCI pH8 5OmM; NaCL 15OmM; Triton X 100 IX; Na+Desoxycholate 1%; SDS 0,1%; EDTA 5mM ; DTT 10OmM; cocktail d'inhibiteur de protéases (référence P8340, SIGMA).
Les protéines sont ensuite dosées par la méthode DC-DC Protein Assay
(Biorad) et analysées par Western Blot. Pour chaque condition, 25 à 40μg de protéines totales sont déposées sur des gels Tris-Glycine à 7,5% de polyacrylamide.
Le mélange protéique est séparé par électrophorèse à l'aide du système Mini
Protean II (Biorad) et les protéines sont transférées sur une membrane de PVDF (Hybond-P, Amersham). La protéine d'intérêt est révélée par un anticorps spécifique et un kit ECL+ (Amersham). La quantité de protéines et la proportion de forme dégradée sont calculées grâce au logiciel Image Master TotalLab version 1.11 (Amersham) après normalisation par rapport à la β — actine (protéine de référence).
IV. Techniques histologiques
Les biopsies de peau sont sectionnées au cryotome (Leica CM 3050s) en coupes de 5μm d'épaisseur et déposées sur des lames d'observation (Starfrost®). 1. Immunohistochimie
Les cryocoupes sont fixées 10 minutes à l'acétone à 200C puis réhydratées au PBS avant d'être analysées par marquage immunochimique. Après fixation et réhydratation, les coupes de peau sont saturées avec une solution de BSA 3% et incubées 1 heure avec l'anticorps primaire dirigé contre la protéine d'intérêt. Dans un deuxième temps, elles sont incubées pendant 1 heure avec l'anticorps secondaire couplé à un fluorochrome Alexa-488 ou Alexa-555 et enfin montées dans du Mowiol contenant du DAPI pour marquer les noyaux.
2 Zymographie in situ
Après une fixation de 10 minutes dans l'acétone à -200C, les coupes sont rincées dans une solution de lavage (Tween 20 1% dans l'eau) et incubées 2 heures à 37°C avec une solution contenant le substrat spécifique des enzymes d'intérêt couplé à un fluorophore (annexe). Lorsque l'enzyme est active, le fluorophore est clivé, libérant un signal fluorescent observable au microscope. Les lames marquées sont ensuite observées au microscope à épifluorescence (Nikon Eclipse 5Oi) ou au microscope confocal inversé Zeiss Axiovert 100.
3 Sonde fluorescente
Après le traitement de déshydratation, les explants cutanés sont incubés pendant une heure supplémentaire à l'étuve à 37°C avec une sonde fluorescente
Lucifer Yellow Carboxyhydrazide dilithium sait (Invitrogen) à ImM dans du tampon HBSS. La peau est ensuite rincée dans un bain d'HBSS pendant 1 minute puis des biopsies de 4mm de diamètre sont prélevées et incluses dans de la résine Tissue TekR® (Sakura Finetek) (Matsuki et al 1998). La peau est ensuite coupée, les noyaux sont marqués au DAPI et les lames sont observées au microscope à fluorescence à une longueur d'onde de 450 nm comme décrit ci-dessus.
Résultats
I. Modèle de rupture de la fonction barrière par dessèchement induit
1. Mesure de la perméabilité cutanée par une sonde fluorescente
La première analyse a consisté à étudier un paramètre fonctionnel fondamental dans la fonction barrière cutanée : la perméabilité des couches supérieures de l'épiderme. L'incubation de la peau avec une sonde fluorescente (Lucifer Yellow) après l'expérience de dessèchement a permis de caractériser la modulation de la perméabilité cutanée. En condition contrôle, le marquage est très faible et superficiel, la sonde pénètre peu à travers la couche cornée et est éliminée lors du rinçage. Après deux heures de dessèchement, le marquage est observable dans les strates plus profondes de la couche cornée. Le dessèchement rend la peau plus perméable, sa fonction barrière est détériorée. Le traitement topique par la composition A suite aux deux heures de dessèchement restaure l'imperméabilité du SC vis à vis de la sonde, le marquage est à nouveau faible et superficiel, comme dans la condition contrôle. On peut alors conclure que le traitement hydratant a un effet réparateur sur la peau desséchée et sur la fonction barrière cutanée observable sur le modèle tissulaire.
2. Effets sur la régulation du transcriptome et du protéome
L'expression de différents gènes potentiellement impliqués dans l'homéostasie de la fonction barrière épidermique a été mesurée par PCR quantitative dans les différentes conditions de stress ou de traitement du modèle de dessèchement. L'analyse par immunohistochimie a permis de montrer la réorganisation de l'expression de certaines protéines en terme de localisation, par exemple les jonctions serrées. La dégradation des protéines cornéodesmosomales a été analysée par Western-Blot. Les cibles étudiées à l'aide de ces différentes approches ont été regroupées selon leur rôle physiologique (voir tableau 1). L'objectif de cette étude est d'observer une réponse au stress visualisable et une correction de l'effet du stress par l'application topique de la composition A.
Le travail réalisé a également permis de mettre en évidence les différents niveaux de régulation de certaines cibles. Nous avons ainsi pu constater que les enzymes de la desquamation n'étaient pas régulées au niveau transcriptionnel mais plus spécialement au niveau de leur activité (cf. Résultats 3).
Tableau 1 : Récapitulatif des cibles et de la réponse pharmacologique étudiées dans le modèle de dessèchement.
O=La cible réagit dans le modèle ; O=Oui X=La cible ne réagit pas dans le modèle N=Non
3. Mesure de l'activité enzymatique liée à la desquamation
L'activité des protéases à serine a été évaluée par zymographie in Situ sur le modèle de déshydratation et observée au microscope confocal dans la condition contrôle après deux heures de dessèchement et après deux heures de dessèchement suivies par une incubation de deux heures avec la composition A. Le marquage est le plus intense dans la condition contrôle, il correspond à l'activité forte normale. Ce marquage diminue et devient irrégulier le long de la couche cornée après deux heures de dessèchement alors que son intensité est augmentée et la localisation de l'activité réorganisée après les deux heures d'incubation avec la composition A. Le dessèchement a pour effet de diminuer et perturber l'activité enzymatique. Ces résultats sont cohérents avec la diminution de la dégradation des protéines cornéodesmosomales que nous observons avec le dessèchement et confirme l'effet du dessèchement sur la diminution de la desquamation observée sur le modèle mis au point. La composition A est capable de restaurer l'activité enzymatique de la peau déshydratée ce qui confirme l'effet de cette composition pour un retour de l'homéostasie de la desquamation.
Ces résultats montrent que la composition A permet de restaurer le niveau d'expression des cibles moléculaires dont l'expression est accrue par le stress de déshydratation cutané induit. La composition A permet également de restaurer l'activité serine protéase. En outre, l'application topique de la composition A permet de supprimer l'inflammation induite par le stress.
L'ensemble de ces résultats suggère que la composition A en application topique permet de restaurer la fonction barrière de la peau, de limiter
Exemple 3 : Caractérisation par RMN de la vaseline Syntadex A
5 g d'échantillon sont solubilisés dans du chloroforme deutéré pour mesure par
RMN à 500 MHz du carbone C13.
La vaseline Syntadex A (Synthéal) présente un spectre caractéristique en spectroscopie RMN à 500 MHz du carbone C13, comprenant notamment un pic à 24,55 ppm dont l'aire relative à un témoin de Tetra méthyl sylane (TMS) à 1% est comprise entre 4 et 8.
Ce même pic se retrouve dans la Composition A.

Claims

Revendications
1. Composition à usage topique comprenant, en tant que principe actif, une association de glycérol, vaseline et paraffine liquide sous forme d'une émulsion huile dans eau ou eau dans huile.
2. Composition selon la revendication 1 dans laquelle la vaseline présente un spectre en spectroscopie RMN à 500 MHz du carbone C13 comprenant un pic à 24,55 ppm dont l'aire relative à un témoin de Tetra méthyl sylane (TMS) à 1% est comprise entre 4 et 8.
3. Composition selon la revendication 1 ou 2 dans laquelle la vaseline présente un point de goutte compris entre 51 et 57°C, notamment 54°C
4. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes dans laquelle la vaseline présente une consistance comprise entre 175 et 195 1/10 mm (pénétration au cône à 25°C).
5. Composition selon la revendication 4 dans laquelle la vaseline présente une consistance d'environ 185 1/10 mm (pénétration au cône à 25°C).
6. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes dans laquelle la vaseline présente une viscosité comprise entre 4 et 5 cSt à 1000C.
7. Composition selon la revendication 6 dans laquelle la vaseline présente une viscosité d'environ 4,8 cSt à 1000C.
8. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes comprenant environ 15% de glycérol, environ 8% de vaseline et environ
2% de paraffine liquide.
9. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes comprenant un ou plusieurs excipients choisis dans le groupe constitué de acide stéarique, monostéarate de glycérol, polydiméthylcyclosiloxane, diméthicone, polyéthylène glycol 600, trolamine, parahydroxybenzoate de propyle, chlorocrésol, PEG-40-stéarate, eau distillée.
10. Utilisation d'une composition selon l'une quelconque des revendications précédentes pour la préparation d'un médicament destiné à traiter les états de sécheresse cutanée de certaines dermatoses telles que dermatite atopique, états ichtyosiques, psoriasis.
11. Utilisation d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 pour la préparation d'un médicament destiné à traiter les brûlures superficielles de faibles étendues.
12. Utilisation d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 pour la préparation d'un médicament destiné à prévenir et/ou traiter/réduire la fréquence et l'intensité des poussées eczémateuses observées chez les patients atteints de dermatite atopique.
13. Utilisation d'une vaseline présentant un point de goutte compris entre 51 et 57°C pour préparer une composition à usage topique comprenant, en tant que principe actif, une association de glycérol, vaseline et paraffine liquide sous forme d'une émulsion huile dans eau ou eau dans huile.
14. Utilisation d'une vaseline présentant un spectre en spectroscopie RMN à 500 MHz du carbone C13 comprenant un pic à 24,55 ppm dont l'aire relative à un témoin de Tetra méthyl sylane (TMS) à 1% est comprise entre 4 et 8 pour préparer une composition à usage topique comprenant, en tant que principe actif, une association de glycérol, vaseline et paraffine liquide sous forme d'une émulsion huile dans eau ou eau dans huile.
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