MX2009001398A

MX2009001398A - Derivados de polimixina y usos de los mismos.

Info

Publication number: MX2009001398A
Application number: MX2009001398A
Authority: MX
Inventors: Martti Vaara; Timo Vaara
Original assignee: Northern Antibiotics Oy
Priority date: 2006-08-11
Filing date: 2007-08-10
Publication date: 2009-02-17
Also published as: IL220270A0; CA2694289C; EP2057185A1; IL196693B; CN103059106B; WO2008017734A8; RU2009107857A; WO2008017734A1; NO341982B1; CY1117848T1; CN101501063A; AU2007283514A1; EP2057185A4; HRP20160552T1; DK2057185T3; KR101502453B1; ES2575521T3; BRPI0715095B8; CN103059106A; NZ575421A

Abstract

La presente invención se refiere a un derivado de polimixina en donde Rl, R2 y R3 son opcional es y Rl, R2, R3, RS, R8 y R9 son residuos de aminoácido neutrales o catiónicos seleccionados de manera que el número total de cargas positivas a pl-! fisiológico es al menos dos pero no más de tres; y a un producto de combinación comprendiendo al menos dos de tales derivados. La invención se refiere además a un método para tratar, aliviar o mejorar una infección en un sujeto, causada por una bacteria Gram-negativa al administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un derivado de acuerdo a la presente invención a dicho sujeto; a un método para sensibilizar la bacterias Gram-negativas a un agente antibacterial al administrar, simultánea o secuencialmente en cualquier orden una cantidad terapéuticamente efectiva de dicho agente antibacterial y un derivado de acuerdo a la presente invención a dicho sujeto; a métodos para desarrollar nuevos antibióticos; para reducir la nefrotoxicidad, para mejorar las propiedad es farmacocinéticas de polinixinas y octapeptinas naturales; y para sensibilizar a las bacterias clinicamente importantes a un complemento del mecanismo de defensa del huésped presente en suero. Finalmente, la invención se refiere a un proceso para preparar tal es derivados de polimixina.

Description

DERIVADOS DE POLIMIXINA Y USOS DE LOS MISMOS CAMPO TÉCNICO La presente invención se refiere a derivados de polimixina y a usos de los mismos en el tratamiento de infecciones causadas por bacterias Gram-negat ivas . Los derivados de polimixina pueden tener efectos antibacteriales o pueden sensibilizar las bacterias para mejorar los efectos de otros agentes antibacteriales . ANTECEDENTES La sepsis mata a más de 215,000 americanos cada año. Se estima que 750,000 americanos se infectan con sepsis severa y 29% de ellos mueren a causa de ella cada año. Las muertes por sepsis comprenden el 9% de todos los casos de muerte en los E.U. La sepsis mata a tantos americanos como las infecciones miocardiales , aún más que los accidentes de tráfico . Dos a tres millones de americanos adquieren una infección en el hospital cada año y 10% de estas infecciones progresan a sepsis. Más de 90,000 de estos pacientes mueren de sepsis infectados en hospitales. Sepsis severa y choque séptico (sepsis severa combinada con baja presión sanguínea) toman hasta 135,000 vidas cada año en las unidades de cuidado intensivo (ICU) en la Unión Europea de acuerdo al Reporte de Salud OECD del 2000. En Gran Bretaña, 5,000 de 100,000 pacientes quienes adquirieron una infección en el hospital mueren de sepsis cada año en hospitales de cuidado agudo pertenecientes a la organización NHS . El número de víctimas mortales ha aumentando año tras año debido al hecho de que el número de pacientes predispuestos a sepsis, tales como los más viejos, neonatos prematuros, y pacientes con cáncer, ha aumentado, no menos debido a que muchas enfermedades serias son más tratables que antes. También ha aumentado el uso de dispositivos médicos invasivos y procedimientos agresivos. Las bacterias Gram-negat i vas causan más del 40% de todas las infecciones septicémicas y muchas de las bacterias Gram- ne gat i va s son extremadamente mu 11 i re s i s t ant e s . Las bacterias Gram-negat i vas proporcionan un reto más duro en terapia que las Gram-po s i t i va s , ya que poseen una estructura única, la membrana exterior, como su estructura más hacia afuera. Las moléculas de lipopolisacárido ubicadas en la membrana exterior inhiben la difusión de muchos agentes antibacteriales más profundo en la célula, donde se ubican sus últimos objetivos. Más del 95% de los nuevos agentes antibacteriales aislados de la naturaleza o químicamente sintetizados en 1972-1991 carecen de actividad contra Gram-negat i vas (Vaara 1993 ) . Las polimixinas son un grupo de substancias antibióticas cercanamente relacionadas producidas por las cepas de Pa en iba ci 11 u s polymyxa y organismos relacionados. Estos fármacos catiónicos son péptidos relativamente simples con pesos moleculares de aproximadamente 1000. Las polimixinas, tal como polimixina B, son antibióticos de decapéptido, i.e. se hacen de diez (10) residuos de aminoacilo. Son bactericidas y especialmente efectivos contra bacterias Gram- ne gat iva s tales como Escherichia coli y otras especies de En t eroba c teri a cea e , Ps eudomona s , Acinetobacter baumannii , y otras. Sin embargo, las polimixinas tienen efectos adversos severos, incluyendo ne f rot ox i c i dad y neurotoxicidad. Estos fármacos de esta manera tienen uso limitado como agentes terapéuticos debido a la alta toxicidad sistémica. Las polimixinas se han utilizado en la terapia de serias infecciones causadas por aquellas bacterias, pero debido a la toxicidad, su uso se abandonó grandemente en los 70' s cuando se desarrollaron antibióticos más nuevos, mejor tolerados. La emergencia reciente de cepas multiresistentes de bacterias Gram-negativas ha necesitado el uso terapéutico de polimixinas como el último recurso, a pesar de su toxicidad, y como muchos de los antibióticos menos tóxicos ya han perdido su efectividad contra cepas particulares de dichas bacterias, el uso de polimixinas de nuevo ha aumentado. De acuerdo con lo anterior, las polimixinas ahora se han incorporado al arsenal terapéutico, aunque, debido a su toxicidad, en una escala muy limitada. Su uso sistémico (i.e. no tópico) , sin embargo, se limita grandemente a la terapia de infecciones que amenazan la vida causadas por múltiples cepas resistentes de Ps . aeruginosa y A. baumannii asi como por bacterias entéricas resistentes a carbapenem. Las polimixinas consisten de una parte de heptapéptido cíclica y una parte lineal consistiendo de una porción de tripéptido y una cola de ácido graso hidrofóbica enlazada al grupo oí-amino del residuo de aminoácido N-terminal del tripéptido y puede representarse por la fórmula general: (7,R7 — (8)R8 / \ (6) (9)R9 \ / (5)R5 (io)R10 \ / (4)R4 en donde R1-R3 representan la porción de cadena lateral de tripéptido; R4-R10 la porción de anillo de heptapéptido y R(FA) representa la cola de ácido graso hidrofóbica enlazada al grupo a-amino del residuo de aminoácido N-terminal del tripéptido. El grupo polimixina incluye las siguientes polimixinas : Al, A2 , B1-B6, C, DI, D2, El, E2, F, Kl, K2 , M, Pl, P2, S, y T (Storm et al. 1977 ; Srinivasa y Ramachandran 1979) . Todas las polimixinas son policat iónicas y poseen cinco (5) cargas positivas, con la excepción de polimixina D, F, y S que poseen cuatro (4) cargas positivas. Debe observarse que las polimixinas modificadas que carecen de la parte de ácido graso R(FA) pero llevan Rl-R10 tienen una carga positiva adicional cuando se comparan con las polimixinas naturales de las que se derivan, debido al grupo a-amino libre en el N-término del derivado. De acuerdo con lo anterior, por ejemplo, tal un derivado de polimixina B o polimixina E lleva seis (6) cargas positivas en total. La polimixina B clínicamente utilizada y polimixina E difieren entre sí solamente en el residuo R6, que es el residuo de D- fenilalanilo en polimixina B y residuo de D- leucilo en polimixina E. También circulina A y B se clasifican como polimixinas (Storm et al. 1977) . Difieren de otras polimixinas solamente en que llevan el residuo de isoleucilo en la posición R7 mientras otras polimixinas tiene ya sea el residuo de treonilo o leucilo en dicha posición. Para una revisión de las estructuras de algunas polimixinas, ver la Tabla 1. Tabla 1 La estructura de polimixinas seleccionadas y octapeptina asi como derivados seleccionados de las mismas La polimixina B se representa por la siguiente fórmula: (2)Tbr 0)Dab+ MHA/MOA Polimixina B comercíalmente disponible es una mezcla, donde R-FA es predominantemente 6-metiloctanoilo (6-MOA, en polimixina Bl) pero también puede ser un acilo graso relacionado tal como 6 -me t i lhept ano i 1 o (6-MHA, en polimixina B2) , octanoilo (en polimixina B3) , o heptanoilo (polimixina B4) (Sakura et al. 2004) . Todas estas variantes son igualmente potentes contra Gram-negat ivas tal como E. coli (Sakura et al. 2004) . Muy análogamente, en polimixina El (colistina A) y en circulina A R-FA es 6-MOA y en polimixina E2 (colistina B) y en circulina B R-FA es 6-MHA. Numerosos investigadores han unido varias porciones hidrofóbicas incluyendo varios residuos de acilo graso al N-término de derivados de polimixina y análogos y han mostrado que los derivados resultantes tienen actividad antibacterial potente (Chihara et al. 1973, Sakura et al. 2004 y en la publicación de patente de Eü 2006004185. Aún el derivado que lleva el residuo de 9-f luorenilmetoxicarbonilo hidrofóbico voluminoso ya que R-FA es casi tan potente como la polimixina B para inhibir el crecimiento de E. coli y otras bacterias Gram-negativas (Tsubery et al. 2001) . Para actividad biológica la estructura de anillo de heptapéptido es esencial (Storm et al. 1997) . Un derivado con un anillo de octapéptido es significativamente menos activo que un antibiótico. Se han hecho múltiples modificaciones de polimixinas y múltiples moléculas sintéticas como polimixina, y con ciertos limites han conservado su actividad biológica. Las modificaciones comprenden pero no se limitan a aquellos en la cadena lateral, asi como moléculas en las cuales un residuo de aminoácido hidrofóbico inherente (tal como DPhe o Leu) se ha reemplazado con otro residuo de aminoácido hidrofóbico o en el cual Dab catiónico se ha reemplazado con otro residuo de aminoacilo catiónico, tal como residuo Lys, Arg, u ornitina (Storm et al. 1997 , Tsubery et al. 2000a, Tsubery et al. 2002, publicación de patente de E.U. 2004082505, Sakura et al. 2004, publicación de patente de E.U. 2006004185) . Otras modificaciones que resultan en compuestos mi c rob i o 1 ó gi cament e al menos parcialmente activos comprenden pero no se limitan a ésteres de alcanoilo donde los grupos OH de los residuos de treonilo forman ésteres con alcanoilos tales como propionilo y butirilo (Patente de E.U. 3,450,687) . Octapeptinas de otra manera son idénticas a polimixina E (colistina) pero tienen un enlace covalente en lugar de los residuos R1-R2 (Tabla 1) . En esta invención, las posiciones R se enumeran de acuerdo a aquellas en las polimixinas naturales y de esta manera solamente el residuo de aminoacilo en la cadena lateral de octapeptinas se define como R3. De acuerdo con lo anterior, octapeptinas son octapéptidos mientras todas las polimixinas naturales son de capépt i do s , y poseen solamente cuatro (4) cargas positivas. Los residuos R-FA entre varias octapeptinas (Al, A2 , A3, Bl, B2, B3, Cl) incluyen los siguientes: ácido 3-OH-8-metildecanóico , ácido 3 -OH- 8 -me t i lnonanói co , y ácido ß-??- 6-met iloctanóico . Los derivados que poseen un residuo de acilo graso con 6 a 18 átomos de carbono tienen una actividad antibacterial potente contra E . coli (Storm et al . 1977 ) . El primer objetivo de polimixinas en bacterias Gr am-nega t ivas es su membrana exterior ( OM ) que es una barrera de permeabilidad efectiva contra muchos agentes nocivos incluyendo antibióticos grandes (Mw mayor a 700 d) asi como antibióticos hidrofóbicos . Al unir a las moléculas de lipopolisacárido (LPS) expuestas en la superficie exterior de la OM , las polimixinas dañan la estructura y función de la OM y, como un resultado, pe rmebe a 1 i z an (i.e. hacen permeable) OM a polimixina por si misma, asi como a muchos otros agentes nocivos (Nikaido y Vaara 1985, Vaara 1992, Nikaido 2003) . El objetivo final y letal (el objetivo bactericida) de polimixinas se cree que es la membrana citoplásmica (la membrana interior) de bacterias . Se han hecho numerosos esfuerzos por reducir la toxicidad de polimixinas . El tratamiento de polimixina E (colistina) con formaldehido y bisulfito de sodio produce colistina sulfometato, en la cual los grupos amino libres de los cinco residuos de ácido diaminobutirico se han substituido parcialmente por grupos sulfometilo (Tabla 1) . Las preparaciones consisten de mezclas no definidas de los compuestos mono-, di-, tri-, tetra-, y pent a - s ub s t i tu i do s . Las preparaciones s u 1 forne t i 1 ada s , cuando se disuelven recientemente en agua, inicialmente carecen de tanto actividad antibacterial como toxicidad de la molécula de origen, pero cuando los compuestos comienzan a descomponerse en la solución, en la sangre o en los tejidos para producir menos derivados substituidos y colistina libre, tanto la actividad antibacterial como la toxicidad se originan parcialmente. Además, el grado de sulfometilación inicial aparentemente varia entre las preparaciones farmacéuticas come rc i a lment e disponibles. Se han publicado muchas otras maneras de bloquear todos los grupos amino libres. Los ejemplos comprenden pero no se limitan a la formación de bases Shiff inestables con aminoácidos (Storm et al. 1977 ) . Polimixina E nonapéptido (PMEN, colistina nonapéptido, Tabla 1), obtenido al tratar polimixina E e n z imát i cament e y carecer de R-FA y Rl, se muestra en 1973 que es menos tóxico que el compuesto de origen en el ensayo de toxicidad aguda (muerte inmediata presumiblemente debida a bloqueo neuromuscular directo) en ratones (Chihara et al. 1973) . Sin embargo, también carece de la actividad antibacterial, según se mide como su habilidad para inhibir el crecimiento bacterial (Chirara et al . 1973) . Vaara y Vaara, por el otro lado, mostró, que polimixina B nonapéptido (PMBN, Tabla 1) mantiene la habilidad de pe rme ab i 1 i z a r la OM de bacterias Gram-negat i vas (Vaara y Vaara 1983a, b , c ; Patente de E.U. 4,510,132; Vaara 1992) . De acuerdo con lo anterior, aún cuando carece de la actividad antibacterial directa (i.e. la habilidad de inhibir el crecimiento bacterial) , es capaz de sensibilizar (i.e. hacer sensible o, como también se denomina, hacer susceptible) las bacterias a muchos agentes antibacteriales tales como antibióticos hidrofóbicos asi como antibióticos grandes y algunos otros agentes nocivos . PMBN también sensibiliza a las bacterias a la actividad bactericida del sistema complemento humano, presente en suero de humano fresco como un sistema de defensa de primera linea contra invasores (Vaara y Vaara 1983a, Vaara et al. 1984, Vaara 1992) . Además, sensibiliza a las bacterias a la actividad bactericida conjunta del complemento de suero y glóbulos blancos polimo fonucleares humanos (Rose et al . 1999) . PMBN se parece a PMEN en que es menos tóxico en el ensayo de toxicidad aguda en ratones que las polimixinas no modificadas. En ensayos toxicológicos adicionales, varios criterios probaron que PBMN es menos tóxico que su compuesto de origen, pero este derivado de polimixina aún se juzgaba por ser demasiado nefrotóxico para uso clínico. (Vaara 1992) .

PMBN lleva cinco (5) cargas positivas. Los estudios subsiguientes revelaron, de manera muy inesperada, que PMEN, también llevando cinco (5) cargas positivas asi como deacilpolimixina B y deacilpolimixina E, ambas llevando seis (6) cargas positivas son agentes potentes para sensibilizar a las bacterias a otros antibióticos (Viljanen et al. 1991, Vaara 1992) . Además, se ha mostrado que un derivado adicional e s t ruct u ra lme nt e reducido de polimixina B octapéptido (PMBO) mantiene una actividad permeabili zante muy efectiva mientras polimixina B heptapéptido (PMBH) es menos activo (Kimura et al. 1992) . PMBN, PMEN y PMBO tienen cinco (5) cargas positivas mientras PMBH tiene solamente cuatro (4) cargas positivas. Esta diferencia puede explicar la actividad más débil de PMBH. El grupo de Ofek, Tsubery y Friedkin recientemente describió péptidos como polimixina que se enlazan a péptidos quimotáct icos , tales como fMLF, que atraen leucocitos polimorfonucleares (publicación de patente de E.U. 2004082505, Tsubery et al. 2005) . Describen péptidos fMLF- PMBN , MLF-PMBN, fMLF-PMEN, fMLF-PMBO y MLF-PMBO, todos llevando cuatro (4) cargas positivas, que sensibilizan a las bacterias Gram-nega t ivas a antibióticos, aún cuando no se publican estudios comparativos con concentraciones crecientes de los compuestos (Tsubery et al. 2005) . Para estudiar las estructuras y propiedades funcionales de polimixinas, unos pocos trabajos han descrito, entre otros compuestos, derivados de polimixina teniendo menos de cuatro (4) cargas positivas. Teuber (1970) ha descrito el tratamiento de polimixina B con anhídrido acético que produce una preparación conteniendo polimixina B así como sus formas mono-, di-, tri-, tetra-, y pent a -N- a ce t i 1 ada s . Teuber también separó cada grupo y reportó de manera no cuantitativa utilizando un ensayo de difusión agar que las formas pent a - a ce t i 1 ada s y tetra-acet iladas carecen de la habilidad para detener el crecimiento de Salmonella typhimurium, mientras las formas di- y monoacet i ladas tuvieron tal habilidad. La forma triacetilada tuvo alguna habilidad. Srinivasa y Ramachandran (1978) aislaron derivados de polimixina B parcialmente formilados y mostraron que un derivado de diformilo asi como un derivado de triformilo inhibieron el crecimiento de Pseudomona s aeruginosa . No describen la habilidad de los compuestos para sensibilizar a las bacterias a antibióticos. Además, en 1980 mostraron que los grupos amino libres de t r i fo rmi lpo 1 imi x i na B en residuos Rl y R3 , asi como los grupos amino libres de di formi lpol imixina B en residuos Rl, R3, y R5 son esenciales mientras los grupos amino libres en R8 y R9 no son esenciales para la inhibición de crecimiento (Srinivasa y Ramachandran , 1980a) . Un octanoil polimixina B heptapéptido derivado de polimixina B acortada se ha descrito por Sakura et al. (2004) . La unión del residuo de octanoilo al N-término del residuo R4 del polimixina B heptapéptido resulta en un compuesto teniendo solamente tres (3) cargas positivas. Sakura et al. encontraron que octanoil polimixina B heptapéptido inhibe el crecimiento de bacterias solamente a una concentración muy alta (128 pg/ml), mientras los otros derivados tales como octanoil polimixina B octapéptido y octanoil polimixina B nonapépt ido , ambos teniendo cuatro cargas (4) fueron agentes muy potentes para inhibir el crecimiento bacterial. La publicación de patente de E.U. 2006004185 recientemente describió ciertos derivados de polimixina y compuestos intermediarios que pueden utilizarse para sintetizar nuevos antibióticos de péptido. Los compuestos antibacteriales descritos poseen cuatro (4) o cinco (5) cargas positivas. Aún existe una necesidad urgente de tratamientos efectivos para infecciones bacteriales, en particular para las infecciones causadas por bacterias Gram-negat i vas mult iresistentes . LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un derivado de polimixina en donde el número total de cargas positivas a pH fisiológico es al menos dos pero no más de tres, con la condición de que R8 y R9 no se formilan cuando R(FA)-R1- R2-R3 constituye la cadena lateral de polimixina B nativa; y R4 no se enlaza directamente a residuo de octanoilo cuando R4- RIO constituye una estructura de anillo de polimixina B nativa. más específicamente, la presente invención se refiere a un derivado, en donde R1-R10 se selecciona del grupo consistiendo de SEQ ID NOs : 9-26, preferentemente SEQ ID NOs: 9-20. La invención también se refiere a un producto de combinación comprendiendo dos o más de los derivados de acuerdo a la presente invención, y a una composición farmacéutica comprendiendo tal (es) derivado (s) o una combinación de los mismos y vehículos y excipientes farmacéuticamente aceptables. Además, la presente invención se refiere a un método para tratar, aliviar o mejorar una infección en un individuo causada por una bacteria Gram-negat i va , comprendiendo administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un derivado o una combinación de acuerdo a la presente invención a dicho individuo, en donde dicha bacteria puede seleccionarse del grupo consistiendo de: Escherichia coli, Klebs iel la pneumoniae , Klebsiella oxytoca, Enterobacter cloacae , Citrobacter freundii, Pseudo onas aeruginosa , y Acinetobacter baumannii. En otra modalidad, la presente invención se refiere a un método para sensibilizar a las bacterias Gram-negat ivas a un agente antibacterial, comprendiendo administrar, simultánea o secuencialmente en cualquier orden, una cantidad terapéuticamente efectiva de dicho agente antibacterial y un derivado de acuerdo a la presente invención, en donde dicho agente antibacterial puede seleccionarse del grupo consistiendo de claritromicina, a z i t romi c i na , eritromicina y otros macrólidos, ketólidos, clindamicina y otras 1 i neo s ami na s , estreptograminas, rifampina, rifabutina, rifalazil y otras rifamicinas, ácido fusidico, mupirocina, oxa z o 1 idi nona s , vancomicina, dalbavancina , telavancina, oritavancina y otros antibióticos de glicopéptido , fluoroquinolonas, bacitracina, derivados de tetraciclina , antibióticos del beta-lactam, novobiocina, p 1 euromut i 1 i na s , inhibidores de síntesis de folato, inhibidores de deformilasa, e inhibidores de bomba de eflujo bacterial. También se proporcionan métodos para desarrollar nuevos antibióticos; para reducir la toxicidad de polimixinas naturales, octapeptinas y sus derivados; para mejorar las propiedades farmacocinéticas de polimixinas naturales, octapeptinas y sus derivados; y para sensibilizar a las bacterias Gram-negat ivas clínicamente importantes a un complemento del mecanismo de defensa del huésped presente en el suero . La presente invención también proporciona usos de un derivado de polimixina de acuerdo a la presente invención en la elaboración de medicamento para tratar infecciones causadas por bacterias Gram-negativas, tales e.g., Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae , Klebs iel la oxytoca , Enterobacter cloacae , Citrobacter freundii, Pseudomona s auruginosa y Acinetobacter baumanni i ; para la elaboración de un medicamento para sensibilizar a las bacterias Gram-negat ivas contra agentes antibacteriales; y para sensibilizar a las bacterias Gram-negativas a un complemento del mecanismo de defensa del huésped presente en el suero. Finalmente, la presente invención se refiere a un proceso para preparar un derivado de polimixina de acuerdo a la presente invención, comprendiendo modificar un compuesto de polimixina u octapeptina natural o sintético o un derivado del mismo teniendo 4 a 6 residuos positivamente cargados al reemplazar 1 a 4 de dichos residuos por residuos neutrales o un enlace covalente, o al convertir 1 a 4 de dichos residuos en residuos neutrales para obtener un derivado de polimixina de la fórmula (I) teniendo 2 o 3 residuos positivamente cargados . Definiciones "Ph fisiológico" como se utiliza en la presente se refiere a un valor de pH de más de 7.0 y por debajo de 7.6, tal como un valor de pH en el rango de 7.1 a 7.5, por ejemplo en el rango de 7.2 a 7.4. "Carga positiva" como se utiliza en la presente denota cargas positivas al pH fisiológico definido arriba. Molécula "catiónica" como se utiliza en la presente se refiere a una molécula que contiene una o más cargas positivas. "Residuo de aminoácido" como se utiliza en la presente se refiere a cualquier residuo de aminoácido natural, no natural o modificado, ya sea en configuración L o D. "Residuos equivalentes" como se utiliza en la presente, se propone incluir modificaciones obvias a e.g., aminoácidos, resultando en aminoácidos no naturales o derivados de los mismos, pero manteniendo la capacidad estructural y/o funcional del residuo re empl a z ado . "Polimixina (s) natural (es) " como se utiliza en la presente, se refiere a polimixinas y circulinas. "Derivado de polimixina" se refiere, para el propósito de esta invención, a derivados sintéticos o semisintéticos de polimixinas u octapeptinas naturales, que tienen una porción de heptapéptido cíclica (o anillo de heptapéptido) R4-R10 y una cadena lateral enlazada al residuo de aminoacilo N- terminal R4. La cadena lateral puede consistir de un R ( FA ) -t riaminacil ( R1-R3 ) , un R ( FA ) - di aminaci 1 ( R2 -R3 ) , un R ( FA ) -monoami no - a c i 1 ( R3 ) , o de R ( FA) solo . "Compuestos" como se utiliza en la presente incluyen todos los isómeros estereoquimicos de dicho compuesto. "Actividad de sensibilización" o "habilidad para sensibilizar" como se utiliza en la presente se propone incluir cualquier habilidad para incrementar la sensibilidad, hacer sensible o hacer susceptible a una bacteria a un agente antibacterial. A reviaciones Ácidos grasos: FA, residuo de acilo graso; 6-MOA y MOA, residuo de 6-me t i lo ct ano i 1 o ; 6-MHA y MHA , residuo de 6-met ilheptanoilo / MO(H)A, la mezcla de 6-me t i lo ct ano i lo , 6 -me t i lhept ano i 1 o y residuos relacionados de acilo graso que ocurre en polimixina B; OHMDA, ácido 3-OH-8-metildecanóico ; OA; residuo de octanoilo; DA, residuo de decanoilo. Aminoácidos: Dab, residuo de a,?-di amino- n-but i r i 1 o ; fDab, residuo de ?-?- formil-diamino-n-butirilo ; acDab, residuo de N-?- a ce t i ldi amino -n-but i r i lo ; Abu, residuo de - ami nobut i r i 1 o ; Thr, residuo de treonilo; Ser, residuo de serinilo; Phe, residuo de fenilalanilo; Leu, residuo leucilo; lie. residuo de isoleucilo; Ala, residuo alanilo; sm-Dab, residuo de ex, ?-diamino-n-buti r i lo ?-s u 1 forne t i 1 ado . Códigos de una letra para residuos de aminoacilo modificados: X, Dab; Z, Abu; B, ?-?-fDab; J, ?-?-acDab. Péptidos: DAPB, deacilpolimixina B; DAC, deacilcolistina; PMBN, polimixina B nonapépt ido ; PMEN, polimixina E nonapépt ido ; PMBO, polimixina B octapépt ido ; PMHP, polimixina B hept apépt i do . Otras: ci, ciclo (para denotar la parte cíclica del péptido, encerrada dentro de corchetes); f, formilo; ac, acetilo; LPS, 1 ipopo 1 i s acá r ido ; OM, membrana exterior; CFU, unidad formadora de colonia. El símbolo * se utiliza en la presente para marcar los residuos entre los cuales la porción de anillo de heptapéptido del compuesto se cierra dejando la parte restante de la molécula como una cadena lateral. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Ahora se ha encontrado que derivados de polimixina conteniendo al menos dos (2) pero no más de tres (3) cargas positivas aún poseen actividad antibacterial contra bacterias Gram- negativas, y/o poseen la habilidad para sensibilizar a las bacterias Gram-negat ivas a agentes antibacteriales, tales como antibióticos, antibióticos semisintét icos , agentes quimi ot e rapéut i co s y factores de defensa del huésped, tal como complemento. Esta reducción de cargas positivas puede mejorar las propiedades farmacológicas de los derivados de acuerdo a la presente invención cuando se comparan con polimixinas naturales y sus derivados conocidos. Más específicamente, puede reducir la toxicidad, incluyendo ne f ro t ox i c i dad , de los compuestos, y/o reducir la liberación de histamina del tejido huésped, ejercida por los compuestos, y/o resultar en propiedades farmacocinét icas más adecuadas tales como vida media en suero más larga o susceptibilidad inferior a la inactivación por tejido polianiónico y constituyentes pus, en comparación con polimixinas clínicamente utilizadas y sus derivados previamente descritos y caracterizados, tal como polimixina B nonapépt ido . La presente invención de esta manera se refiere a un derivado de polimixina que puede representarse por la fórmula general I: (7) R7 — (8)R8 (6) R6 (9)R9 \ / (4) R4 (3)R3 (.)Ri R(FA) (I) en donde Rl, R2 y R3 pueden estar ausentes; y en donde el número total de cargas catiónicas no substituidas, libres en el compuesto es al menos dos (2) y no excede tres (3) ; o una sal farmacéuticamente aceptable del mi smo . En polimixinas y octapeptinas naturales, R(FA) es ácido 6 -me t i 1 o ct anó i co (6-???) , ácido ß-metilheptanóico (6-MHA), ácido octanóico, ácido heptanóico, ácido nonanóico, ácido 3-OH- 6-met iloctanóico , ácido 3-OH-8- me t i lde cañó i co , ácido 3 -OH- 8 -me t i lnonanó i co , ácido 3 -OH- 8 -decano i co , y ácido 3-OH-6-met iloctanóico . Ejemplos de derivados conocidos que tienen actividad antibacterial incluyen aquellos en donde R(FA) es ácido ?-fenilbut irico , ácido isovalérico, ácido 9-f 1 uo ren i 1 -me t ox i ca rbón i co , una serie de ácidos grasos C:9 a C:14 no ramificados asi como ácidos grasos iso C:9 y iso C:10. En un derivado de acuerdo a la presente invención, R ( FA ) puede ser cualquier residuo de ácido graso hidrofóbico, y se selecciona preferentemente del grupo consistiendo de residuos de octanoilo, decanoilo y 6-MHA. Una persona experta en la materia puede reconocer fácilmente equivalentes de estos residuos de R(FA) hidrofóbicos preferidos, que pueden seleccionarse del grupo consistiendo de e.g. un acilo o alquilo opcionalment e substituido, un residuo de isoalquilo opcionalmente substituido, un residuo de cicloalquilo opcionalmente substituido, un residuo de alquenilo opcionalmente substituido, un residuo de cicloalquenilo opcionalmente substituido, un residuo de arilo opcionalmente substituido, un residuo de heteroarilo opcionalmente substituido, un residuo heterociclico opcionalmente substituido, en donde dichos residuos preferentemente tienen más de cinco (5) átomos de carbono y en donde las substituciones también pueden incluir aquellos opcionalmente designados entre el residuo y el N-término del péptido. R(FA) también puede ser un estiramiento de un oligopéptido hidrofóbico. Ejemplos de residuos de R(FA) posibles incluyen (pero no se limitan a) residuos de octanoilo, nonanoilo, isononanoilo , decanoilo, isodecanoilo, undecanoilo, dodecanoilo, te t r adecanoi lo , ciclohexilo, c i c 1 ohept ano i 1 o , ciclooctanoilo , ciclononanoilo, cicloisononanoilo, ciclodecanoilo, cicloisodecanoilo, cicloundecanoilo, ciclododecanoilo, ciclotetradecanoilo, hexilo, heptanoilo, y 9- fluorenilmetoxicarbonilo. En polimixinas y octapeptinas naturales, Rl es Dab o está ausente (i.e. se reemplaza por un enlace covalente) . Ejemplos de derivados conocidos que tienen actividad antibacterial incluyen aquellos en donde Rl es Ala o un enlace covalente. En un derivado de acuerdo a la presente invención Rl, si está presente, puede ser cualquier residuo de aminoácido, siempre que el número total de cargas positivas en dicho derivado no excede tres y que el número total de cargas positivas en la porción de cadena lateral no excede dos, y es preferentemente Abu, si está presente. En polimixinas y octapeptinas naturales, R2 es Thr o está ausente (i.e. se reemplaza por un enlace covalente) . Ejemplos de derivados conocidos que tienen actividad antibacterial incluyen aquellos en donde R2 es O-acet i 1-Thr , 0-propioni 1 -Thr , O-butiril-Thr o un enlace covalente. En un derivado de acuerdo a la presente invención, R2 , si está presente, puede ser cualquier residuo de aminoácido, siempre que el número total de cargas positivas en dicho derivado no exceda tres y que el número total de cargas positivas en la porción de cadena lateral no exceda dos, y se selecciona preferentemente del grupo consistiendo de Thr, DThr, y DAla, si está presente. Una persona experta en la materia también puede reconocer un residuo equivalente de Thr para ser Ser. En polimixinas y octapeptinas naturales, R3 es Dab, DDab o DSer. Ejemplos de numerosos derivados conocidos sintéticos que tienen actividad antibacterial incluyen aquellos en donde R3 es Lys o ácido 2-amino-4-guanidino butírico. En un derivado de acuerdo a la presente invención, R3, si está presente, puede ser cualquier residuo de aminoácido, siempre que el número total de cargas positivas en dicho derivado no exceda tres y que el número total de cargas positivas en la porción de cadena no exceda dos, y se selecciona preferentemente del grupo consistiendo de Thr, DThr, Ser, DSer, DAla, Dab y Abu, si está presente. Una persona experta en la materia puede reconocer fácilmente residuos equivalentes de estos residuos preferidos Rl, R2 y R3, y puede seleccionar tales de un grupo consistiendo de e.g. un enlace covalente, alanina, ácido 2-aminoadípi co , ácido -?-but i r i co , N-(4-aminobutil ) glicina , ácido a- aminobut í r i co , ácido ?-aminobut i rico , ácido a-amino-capróico, aminociclopropanocarboxilato, ácido aminoisobutirico, aminonorbornilcarboxilato, ácido a-amino-n-valérico, arginina, No-metil-arginina, asparagina, a-me t i 1 a spa r t a t o , ácido aspártico, N-benci lg 1 i ciña , N-(2-ca rbami 1 e t i 1) glicina, N-( carbamí letil ) glicina, 1-carboxi-l (2, 2-difeniletilamino) ciclopropano, cisteina, ácido Na-metildiamino-n-butí rico , ácido NY-acet ildiamino-n-but irico , ácido NY-formildiamino-n-butirico , ácido NY-metil-diamino-n-but irico , N - ( N - 2 , 2 -difeniletil) carbamilmetil-glicina, N- (N-3, 3 -difenilpropil) carbamilraeti 1(1) glicina, N - ( 3 , 3 -di feni lpropi 1 ) g 1 i ciña , ácido glutámico, glutamina, glicina, t-butilglicina , ácido 2-amino- 4 -guanidinobut i rico , N-(3-guanidinopropil) glicina, histidina, homofenilalanina , isodesmosina , isoleucina, leucina, norleucina, hi droxi 1 i s i na , Na-metilisina, lisina, ??,-me t i 1 h i drox i 1 i s i na , Na-metilisina, N E - a ce t i 1 h i droxi 1 i s i na , ?e-acetilisina, NE-formilhidoxilisina , ?e- formilisina, ?e -me t i lhidroxi 1 i s ina , ?e-metilisina, metionina, a-me t i 1 -?-aminobut i rat o , -me t i 1 - ami no i s obut i rat o , a- metilciclohexilalanina, a-naf tilalanina, norleucina, norvalina, a-metilornítina, Na-metilornitina, Ns-acetilornitina, Ng-formil-ornitina, Ng-met ilornit ina , ornitina, penicilamina, fenilalanina , hidroxiprol ina , prolina, ácido Na-met ildiamino-n-propiónico , ácido ?ß - a ce t i 1 di amino - n-prop i óni co , ácido Np-fo rmi 1 di ami no -n-p rop i ón i co , ácido ?ß-me t i 1 di ami no - n-p ropi ón i co , fosfoserina, serina, fosfotreonina , treonina, triptofan, tirosina, norvalina, y valina. En polimixinas y octapeptinas naturales, R4 es Da . Ejemplos de derivados sintéticos que tienen actividad antibacterial incluyen aquellos en donde R4 es Lys . En un derivado de acuerdo a la presente invención R4 es un residuo de aminoácido comprendiendo una cadena lateral funcional capaz de ciclizar la molécula, y puede seleccionarse del grupo de residuos equivalentes consistiendo de Lys, hi droxi 1 i s ina , ornitina, Glu, Asp, Dab, ácido diaminopropiónico , Thr, Ser y Cys, preferentemente Dab. En polimixinas y octapeptinas naturales, R5, R8 y R9 son Da . Ejemplos de derivados sintéticos que tienen actividad antibacterial incluyen aquellos en donde R5 , R8, y R9 pueden ser Lys o ácido 2-amino-4-guanidino butírico. En un derivado de acuerdo a la presente invención R5, R8 y R9 pueden ser un residuo de aminoácido neutral o positivamente cargado, preferentemente Dab o Abu, siempre que el número total de cargas positivas en dicho derivado no exceda tres. Una persona experta en la materia, puede reconocer fácilmente residuos equivalentes de estos residuos preferidos, y puede seleccionar tales de un grupo consistiendo de e.g. ácido diaminobut í rico , ácido diaminopropiónico , lisina, hidroxi 1 i s ina , ornitina, ácido 2 - amino- -guanidinobut i r i co , glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina , D- feni 1 al aniña , metionina, treonina, serina, ácido a- amino-n-but i r i co , ácido a-amino-n-valérico , ácido -amino- capróico, ?e- fo rmi 1 - 1 i s ina , ?e - ace t i 1 i s ina , ?e-metilisina, N e - fo rmi lh idro x i 1 i s i na , NE-acetil- hidroxi 1 i s ina , N e -me t i lh i drox i 1 i s i na , L-Na- me t i lhidroxi 1 i s ina , ácido NY-formil-diamino-n-butirico, ácido NY- ace t i 1 di ami no-n-but i r i co , ácido NY-me t i 1 di ami no -n-but i r i co , ácido Np-formildiamino-n-propiónico , ácido D-Np-formildiamino-n-propiónico , ácido Np-a ce t i 1 di ami no - n-propi ón i co , ácido Np-metildiamino-n-propiónico, Ng-fo rmi lo rni t ina , Ng-acet ilorni t ina y Ng-metilornitina . En polimixinas y octapeptinas naturales, R6 es DPhe o DLeu y R7 es Leu, lie, Phe o Thr. Derivados sintéticos que tienen actividad antibacterial incluyen aquellos en donde R6 es DTrp y en donde R7 es Ala. En un derivado de acuerdo a la presente invención, R6 es un residuo de aminoácido hidrofóbico opcionalmente substituido, preferentemente DPhe o DLeu, y R7 es un residuo hidrofóbico opcionalmente substituido, preferentemente Leu, Thr o lie. Una persona experta en la materia puede reconocer fácilmente residuos equivalentes de estos residuos hidrofóbicos preferidos, y puede seleccionar tales de un grupo consistiendo de e.g. fenilalanina , ácido a-amino-n-but irico , triptofano, leucina, metionina, valina, norvalina, norleucina, isoleucina y tirosina. Una persona experta en la materia también puede reconocer el residuo equivalente de treonina para ser serina. En polimixinas y octapeptinas naturales, RIO es Thr y Leu. Ejemplos de derivados conocidos que tienen actividad antibacterial incluyen aquellos en donde RIO es O-acetil-Thr , O-p rop i oni 1 - Th r o O-but i r i 1 - Th r . En un derivado de acuerdo a la presente invención, RIO es Leu o cualquier residuo de aminoácido no hidrofóbico, siempre que el número total de cargas positivas en dicho derivado no exceda tres. Preferentemente RIO es Thr o Leu . Una persona experta en la materia también puede reconocer el residuo equivalente de treonina para ser serina. Más específicamente, los residuos preferidos se eligen en tal manera que R8 y R9 no se formilan cuando R ( FA ) - Rl - R2 - R3 constituye la cadena lateral de polimixina B nativa; y R4 no se enlaza directamente a residuo de octanoilo cuando R4-R10 constituye una estructura de anillo de polimixina B nativa.

Las posiciones especificas de a lo mucho las tres (3) cargas positivas referidas en la presente arriba pueden ubicarse en la porción de anillo de heptapéptido y/o en la cadena lateral, si está presente. Cuando tres (3) cargas positivas están presentes en los derivados de acuerdo a la invención, dichas tres (3) cargas positivas pueden ubicarse en la porción de anillo de heptapéptido; o dos (2) cargas positivas pueden ubicarse en la porción de anillo de heptapéptido mientras la carga positiva restante se ubica en la cadena lateral; o una (1) carga positiva puede ubicarse en la porción de anillo de heptapéptido mientras las dos (2) cargas positivas restantes se ubican en la cadena lateral. Preferentemente al menos dos (2) cargas positivas se ubican en la porción de anillo de heptapéptido. En una modalidad, derivados de acuerdo a la presente invención pueden seleccionarse del grupo de derivados en donde R1-R10 se selecciona del grupo consistiendo de Thr-DSer- cy [ Dab-Dab-DPhe-Leu-Dab-Dab-Thr- ] , i.e. . SEQ ID NO. 10; Thr - DTh r - cy [ Dab - Dab - DPhe - Th r - Dab - Dab- Thr-], i.e. SEQ ID NO. 11; Thr-DSer-cy [ Dab-Dab-DPhe-Thr-Dab-Dab-Thr- ] , i.e. SEQ ID NO. 12; Thr-Abu-cy [ Dab - Dab - DPhe - Leu - Dab- Dab- Th r - ] , i.e. SEQ ID NO. 13; Abu- Th r -Abu- cy [ Dab - Dab - DPhe - Leu-Dab-Dab-Thr- ] , i.e. SEQ ID NO. 14; Thr-Dab-cy [ Dab-Dab-DPhe-Leu-Abu-Dab-Thr- ] , i.e. SEQ ID NO. 15; Thr-Abu-cy [ Dab- Dab- DPhe - Leu- Dab - Dab-Leu-], i.e. SEQ ID NO. 16; Thr-DAla-c [ Dab-Dab-DPhe-Thr-Dab-Dab-Thr- ] , i.e. SEQ ID NO. 17; Thr-Dab-cy [ Dab - Dab - DPhe - Leu- Dab-Abu- Th r - ] , i.e. SEQ ID NO. 18; Th r-Abu- cy [ Dab - Dab- DLeu - Leu - Dab-Dab-Thr-], i.e. SEQ ID NO. 19; DAla-DAla-cy [ Dab-Dab-DPhe-Leu-Dab-Dab-Thr- ] , i.e. SEQ ID NO. 20; cy [ Dab-Dab-DPhe-Leu-Dab-Dab-Thr- ] , i.e. SEQ ID NO. 9; Abu-cy [ Dab-Dab-DPhe-Leu-Dab-Dab-Thr-] , i.e. SEQ ID NO. 21; Th r - Dab- cy [ Dab-Abu -DPhe-Leu-Dab-Dab-Thr- ] , i.e. SEQ ID NO. 22; Dab -Thr-Dab-cy [ Dab - Da - DPhe - Leu-Abu -Abu- Th r - ] , i.e. SEQ ID NO. 23; Thr-Abu-cy [ Dab-Lys-DPhe-Leu-Dab-Dab-Thr- ] , i.e. SEQ ID NO. 24; Thr-Abu-cy [ Dab-Abu- DPhe - Leu- Dab- Dab - Th r -] , i.e. SEQ ID NO. 25; y Th r-Abu- cy [ Dab- Dab- DPhe - Leu- Dab-Abu-Thr-], i.e. SEQ ID NO. 26. En otras modalidades, derivados de acuerdo a la presente invención pueden seleccionarse del grupo consistiendo de: 0A-Thr-DSer-cy [Dab-Dab-DPhe-Leu-Dab-Dab-Thr-] , i.e. OA-SEQ ID NO. 10; DA-Thr-DSer-cy [ Dab-Dab-DPhe-Leu-Dab-Dab-Thr- ] , i.e. DA-SEQ ID NO. 10; OA-Thr-DThr-cy [ Dab- Dab- DPhe - Th r- Dab - Dab- Th r - ] , i.e. OA-SEQ ID NO. 11; OA-Thr-DSer-cy [ Dab-Dab-DPhe-Thr-Dab-Dab-Thr- ] , i.e. OA-SEQ ID NO. 12; DA-Thr-Abu-cy [ Dab-Dab-DPhe-Leu-Dab-Dab-Thr- ] , i.e. DA-SEQ ID NO. 13; OA- Th r -Abu- cy [ Dab- Dab-DPhe-Leu-Dab-Dab-Thr- ] , i.e. OA-SEQ ID NO. 13; MHA-Thr-Abu- cy [ Dab-Dab-DPhe-Leu-Dab-Dab-Thr- ] , i.e. MHA-SEQ ID NO. 13; MHA-Abu-Thr-Abu-cy [ Dab-Dab-DPhe-Leu-Dab-Dab-Thr -] , i.e. MHA-SEQ ID NO. 14 ; OA-Thr-Dab-cy [ Dab- Dab - DPhe - Leu -Abu- Dab - Th r-] , i.e. OA-SEQ ID NO. 15; OA-Thr-Abu-cy [ Dab-Dab-DPhe-Leu-Dab-Dab-Leu- ] , i.e. OA-SEQ ID NO. 16; OA-Thr-DAla-cy [Dab-Dab-DPhe-Thr-Dab-Dab- Thr-], i.e. OA-SEQ ID NO. 17; OA-Thr-Dab-cy [ Dab - Dab- DPhe - Leu- Dab-Abu- Th r- ] , i.e. OA-SEQ ID NO. 18; OA-Thr-Abu-cy [ Dab-Dab-DLeu-Leu-Dab-Dab-Thr-], i.e. OA-SEQ ID NO. 19; OA- DA1 a - DA1 a -cy [ Dab-Dab-DPhe-Leu-Dab-Dab-Thr- ] , i.e. OA-SEQ ID NO. 20; DA- cy [ Dab - Dab- DPhe - Leu - Dab- Dab - Th r- ], i.e. DA-SEQ ID NO. 9; OA-Abu- cy [ Dab- Dab -DPhe-Leu-Dab-Dab-Thr-], i.e. OA-SEQ ID NO. 21; OA-Thr-Dab-cy[Dab-Abu-DPhe-Leu-Dab-Dab-Thr-], i.e. OA-SEQ ID NO. 22; MHA- Dab- Th r - Dab- cy [ Dab-Dab-DPhe-Leu-Abu-Abu-Thr- ] , i.e. MHA- S EQ ID NO. 23; OA-Thr-Abu-cy [Dab-Lys-DPhe-Leu-Dab-Dab-Thr-], i.e. OA-SEQ ID NO. 24; OA-Thr-Abu-cy [ Dab-Abu-DPhe-Leu-Dab-Dab-Thr- ] , i.e. OA-SEQ ID NO. 25; y OA-Thr-Abu-cy [ Dab-Dab-DPhe-Leu-Dab-Abu-Thr-], i.e. OA-SEQ ID NO. 26. Preferentemente, derivados de acuerdo a la presente invención se seleccionan del grupo consistiendo de: OA-Thr-DSer-cy [ Dab- Dab- DPhe -Leu-Dab-Dab-Thr- ] , i.e. OA-SEQ ID NO. 10; DA-Thr-DSer-cy [Dab-Dab-DPhe-Leu-Dab-Dab-Thr-] , i.e. DA- SEQ ID NO. 10; OA-Thr-DThr-cy [ Dab-Dab-DPhe-Thr-Dab-Dab-Thr- ] , i.e. OA-SEQ ID NO. 11; OA-Thr-DSer-cy [Dab-Dab-DPhe-Thr-Dab-Dab-Thr-] , i.e. OA-SEQ ID NO. 12; DA-Thr-Abu-cy [ Dab-Dab-DPhe-Leu-Dab-Dab-Thr- ] , i.e. DA- SEQ ID NO. 13; OA-Thr-Abu-cy [Dab-Dab-DPhe-Leu-Dab-Dab-Thr-] , i.e. OA-SEQ ID NO. 13; MHA-Thr-Abu-c [ Dab-Dab-DPhe-Leu-Dab-Dab-Thr- ] , i.e. MHA- SEQ ID NO. 13; MHA-Abu-Thr-Abu-cy [ Dab-Dab-DPhe-Leu-Dab-Dab-Thr-], i.e. MHA-SEQ ID NO. 14; OA-Thr-Dab-cy [ Dab-Dab-DPhe-Leu-Abu-Dab-Thr- ] , i.e. OA-SEQ ID NO. 15; OA- Thr-Abu- cy [ Dab - Dab - D Phe - Leu- Dab- Dab-Leu-], i.e. OA-SEQ ID NO. 16; OA-Thr-DAla-cy [ Dab-Dab-DPhe-Thr-Dab-Dab-Thr- ] , i.e. OA-SEQ ID NO. 17; OA- Th r- Dab - cy [ Dab- Dab- DPhe - Leu - Dab-Abu-Thr-], i.e. OA-SEQ ID NO. 18; OA-Thr-Abu-cy [ Dab-Dab-DLeu-Leu-Dab-Dab-Thr- ] , i.e. OA-SEQ ID NO. 19; OA- DA1 a - DA1 a - cy [ Dab- Dab - DPhe - Leu -Dab-Dab-Thr- ] , i.e. OA-SEQ ID NO. 20; y DA-cy [ Dab-Dab-DPhe-Leu-Dab-Dab-Thr- ] , i.e. DA- S EQ I D NO . 9. Como se muestra en la sección de ejemplos en la presente, los compuestos de acuerdo a la presente invención llevando solamente tres (3) cargas positivas pueden ser agentes muy potentes para inhibir el crecimiento de bacterias Gram-negat ivas o para sensibilizarlas a agentes antibacteriales, y aún derivados llevando solamente dos (2) cargas positivas pueden tener el mismo efecto, aunque a un nivel más moderado. Para actividad antibacterial directa al menos dos (2) y más preferentemente tres (3) cargas positivas se ubican en la porción de anillo de heptapépt ido , y para sensibilizar la actividad al menos una (1) y más preferentemente dos (2) o tres (3) cargas positivas se ubican en la parte de anillo de heptapépt ido . Además, la presencia de dos grupos hidroxilo en la parte de cadena lateral significativamente mejora la actividad antibacterial directa. Los trabajos de Teuber (1970) , Srinivasa y Ramachandran (1980a), y Sakura et al. (2004) describen, entre otros derivados de polimixina, derivados teniendo solamente dos (2) o tres (3) cargas positivas. Sin embargo, la actividad antibacterial de los derivados descritos es muy débil y clínicamente irrelevante (Sakura et al. 1980), atribuida a residuos de aminoácido en contradicción completa a los descubrimientos de la presente invención (Srinivasa y Ramachandran 1980a) o atribuida a residuos de aminoácido no específicos del todo, debido a la purificación incompleta (Teuber 1970) . Además, ninguno de los trabajos citados arriba describen, sugieren o motivan al estudio de la habilidad de tales derivados para sensibilizar a las bacterias Gram-negat ivas a agentes antibacteriales. Como los ejemplos de la presente invención claramente muestran, uno no puede predecir la habilidad de un derivado de polimixina para sensibilizar a las bacterias Gram-negat i vas a agentes antibacteriales en la base de su habilidad para inhibir el crecimiento del mismo. Por ejemplo, mientras una concentración clínicamente irrelevante de octanoil polimixina B heptapéptido de tan alta como 128 µ?/??? se necesita para inhibir el crecimiento de E. coli (Sakura et al. 2004) , una cantidad tan baja como 4 ]ig es suficiente para una sensibilización moderada de la bacteria a rifampina, como se muestra en la sección de ejemplos en la presente. Los derivados de polimixina acetilados descritos por Teuber (1970) son mezclas de derivados diferentemente acetilados. Anhídrido acético puede reaccionar con cualquiera de los cinco grupos amino libres de la molécula de polimixina B para producir una polimixina monoacetilada . Por lo tanto una polimixina mono a ce t i 1 ada de acuerdo a Teuber es una mezcla de cinco derivados de polimixina monoa ce t i 1 ado s , cada uno acetilado a un grupo amino diferente. Una polimixina diacetilada de acuerdo a Teuber es una mezcla de diez derivados diferentemente diacetilados y polimixina triacetilada también es una mezcla de diez derivados diferentemente t r i a ce t i 1 ado s . Teuber no intenta aislar estos derivados de las mezclas. El problema con tales polimixinas modificadas es que la modificación parcial puede resultar en especificidad reducida. Por lo tanto, algunos de los grupos amino que son importantes para la actividad antibacterial se substituyen parcialmente (y por lo tanto se inactivan) mientras algunos de los grupos amino no importantes permanecen parcialmente no substituidos. Además, el grado de substitución puede conducir a variaciones de lote a lote. Los derivados de polimixina de acuerdo a la presente invención, por el otro lado, son compuestos aislados y claramente definidos e identificados de manera estructural. Srinivasa y Ramachandran (1980a) propusieron que los grupos amino de cadena lateral libre de t r i fo rmi 1 -po 1 imi i na B en residuos Rl y R3, asi como los grupos amino libres de diformilpolimixina B en residuos Rl, R3, y R5 son esenciales mientras los grupos amino libres en R8 y R9 no son esenciales para la inhibición de crecimiento de Pseudomonas aeruginosa . Como un contraste a sus conclusiones, los compuestos en la presente invención incluyen aquellos que carecen de los 5 grupos amino libres en Rl y R3 , llevándolos en R5, R8 y R9, y aún son agentes potentes contra Ps . aeruginosa asi como otras bacterias Gram- negat ivas . Un octanoil polimixina B heptapéptido 10 derivado de polimixina B acortada se ha descrito por Sakura et al. (2004) . La unión del residuo de octanoilo al N-término del residuo R4 del polimixina B heptapéptido resulta en un compuesto teniendo solamente tres (3) cargas 15 positivas. Sakura et al. encontraron que ! octanoil polimixina B heptapéptido inhibe el I ¡ crecimiento de bacteria solamente a una concentración muy alta (y clínicamente irrelevante) (128 pg/ml) , mientras los otros 20 derivados tales como octanoil polimixina B octapéptido y octanoil polimixina B nonapéptido, ambos teniendo cuatro cargas (4) son agentes muy potentes para inhibir el i crecimiento bacterial. Sakura et al. no 25 describen o sugieren la habilidad de octanoil polimixina B hept apépt ido para sensibilizar las bacterias a agentes antibacteriales, ni enseñan que una cola de ácido graso más larga incrementa su actividad antibacterial, como se 5 muestra en la sección de ejemplos en la presente . La presente invención en un aspecto proporciona nuevos derivados de polimixina teniendo dos (2) o tres (3) cargas positivas j 10 solamente y aún siendo capaces de inhibir el crecimiento de una o más especies bacteriales Gram-negat ivas y o sensibilizar una o más especies bacteriales Gram- ne gat i va s a un antibiótico o agente antibacterial. 15 La susceptibilidad de las bacterias a un agente antibacterial puede determinarse por ; dos métodos microbiológicos . Un procedimiento rápido pero crudo utiliza discos de papel de filtro comercialmente disponibles que se han 20 impregnado con una cantidad especifica del agente antibacterial. Estos discos se colocan en la superficie de placas de agar que se han inoculado con una suspensión del organismo que se prueba, y las placas se observan para zonas : 25 de inhibición de crecimiento. Una técnica más exacta, la prueba de susceptibilidad de dilución del caldo, incluye preparar tubos de prueba conteniendo diluciones seriales del fármaco en medios de cultivo liquido, inoculando entonces el organismo que se prueba en los tubos. La concentración más baja del fármaco que inhibe el crecimiento de las bacterias después de un periodo de incubación adecuado se reporta como la concentración inhibidora mínima (MIC) . Los derivados de acuerdo a la presente invención pueden inhibir el crecimiento de o sensibilizar a agentes antibacteriales de bacterias Gram-negat ivas clínicamente importantes tales como aquellos pertenecientes al género de las especies Aci n e t oba c t er, Aeromonas, Alcaligenes , Bordetella , Branha el la , Campylobacter, Citrobacter, Enterobacter , Escherichia, Francisella, Fu soba c te ria , Haemoph i lu s , He 1 i coba c ter , Klebsiella , Legionella , Moraxella , Pasteurella , Pies iomonas , Pseudomona s , Salmonella , Serratia, Shigella, y Yersinia. Las bacterias pueden ser, por ejemplo, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca, Enterobacter cloacae , Enterobacter aerogenes , otras especies de Enterobacter , Citrobacter freundi i , Pseudomona s aeruginosa , otras especies de Pseudomonas , Acinetobacter baumannii, asi como muchas otras especies de bacterias Gram-negativas no fermentadas. Las bacterias también incluyen Helicobacter pylori, asi como otras bacterias Gram-negat ivas clínicamente importante s . Las infecciones bacteriales a tratarse incluyen, por ejemplo, bacteremia, septicemia, infección del tejido suave y piel, neumonía, meningitis, infecciones en la región pelveoperitoneal, infección por cuerpo extraño, fiebre en paciente hema t o 1 ógi co , infección asociada con una línea intravenosa u otro catéter, cánula y/o dispositivo, infección en el tracto gastrointestinal, en el ojo, o en el oído, infección superficial de la piel, y colonización del tracto gastrointestinal, membranas mucosas y/o piel por bacterias potencialmente nocivas. Las enfermedades infecciosas bacteriales incluyen (pero no se limitan a) infecciones severas adquiridas en el hospital, infecciones de los pacientes i nmuno comp rome t i do s , infecciones de los pacientes con trasplante de órgano, infecciones en las unidades de cuidado intensivo (ICU), infecciones severas de heridas por quemadura, infecciones severas adquiridas en la comunidad, infecciones de pacientes con fibrosis cistica, asi como infecciones causadas por bacterias Gram-negat i vas multiresistentes. La presente invención también se dirige a combinaciones de dos o más derivados de acuerdo a la presente invención para tratamiento de combinación. Las combinaciones pueden incluir derivados teniendo diferentes espectros de actividad antibacterial o una capacidad para sensibilizar diferentes especies o cepas de bacterias Gram- ne gat iva s a agentes antibacteriales . Otro aspecto de la presente invención se dirige a composiciones farmacéuticas comprendiendo derivados de polimixina de acuerdo a la presente invención, sus formas de sal, combinaciones seleccionadas de los mismos, y opcionalmente un agente antibacterial formulado junto con uno o más vehículos y excipientes farmacéuticamente aceptables.

Facilitan el procesamiento de los compuestos activos en preparaciones que pueden utilizarse farmacéuticamente e incluyen e.g. agentes de dilución, relleno, regulación, espesamiento, humectación, dispersión, s olubi 1 i z a ción , suspensión, emulsión, unión, estabilización, desintegradores, encapsulación , revestimiento, incrustación, lubricación, colorantes, y saborizantes asi como absorbentes, mejoradores de absorción, humectantes, conservadores y lo similar, bien conocidos por una persona experta en la materia . Las composiciones farmacéuticas incluyen composiciones en donde los ingredientes activos se contienen en una cantidad efectiva para lograr el propósito. Más específicamente, una cantidad terapéuticamente efectiva significa una cantidad de compuesto efectiva para tratar, prevenir, aliviar o mejorar los síntomas de la patología o prolongar la supervivencia del sujeto que se trata a una proporción razonable de beneficio a riesgo aplicable a cualquier tratamiento médico. La determinación de una cantidad terapéuticamente efectiva se encuentra bien dentro de la capacidad de aquellos expertos en la materia de medicina. Las composiciones pueden producirse por procesos bien conocidos en la materia, e.g. por medio de procesos convencionales de mezclado, disolución, encapsulación , atrapado, 1 i o f i 1 i z a c i ón , emulsión y granulación. Las formulaciones apropiadas dependientes de la vía de administración elegida, y la composición farmacéutica pueden formularse para liberación inmediata o liberación lenta (e.g. para prolongar el efecto terapéutico y/o mejorar la tolerancia) . Además, las formulaciones pueden presentarse de manera conveniente en forma de dosificación unitaria por métodos conocidos en la materia de farmacia. Las composiciones farmacéuticas de acuerdo a la presente invención incluyen (pero no se limitan a) aquellas propuestas para administración intravenosa, intramuscular, oral, o tópica asi como aquellas administrándose como un supositorio o como un aerosol inhalable. Las composiciones incluyen inyecciones intravenosa, intramuscular, int raperi toneal , subcutánea, int ramedularmente , intratecal, int ravent r icular , intranasal, o intraocular, aerosoles inhalables asi como aquellas propuestas para suministro rectal, oral, int ravaginal , transmucosal o transdérmico . Para administración parenteral (e.g. por inyección de bolo, infusiones de acción rápida, o infusiones lentas), los compuestos de acuerdo a esta invención asi como las combinaciones descritas arriba pueden formularse como sus formas de sal o éster adecuadas en soluciones acuosas estériles, preferentemente fluidos fisiológicamente compatibles tales como salina, 5% dextrosa, solución de Ringer, y solución de Hank. La formulación también puede incluir solventes orgánicos tales como glicol de propileno, glicol de polietileno, glicol de propileno o compuestos relacionados asi como conservadores y agentes tensoact ivos . Las sales de adición ácidas farmacéuticamente aceptables pueden prepararse de ácidos inorgánicos y orgánicos. Las sales derivadas de ácidos inorgánicos incluyen ácido clorhídrico, ácido hidrobrómico , ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, y lo similar. Las sales derivadas de ácidos orgánicos incluyen ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido mélico, ácido malónico, ácido succínico, ácido maléico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido me t ano s u 1 f ón i co , ácido etanosulfónico , ácido p-t o lueno- s ul fóni co , ácido salicílico, y lo s imi lar. Además, las composiciones farmacéuticas para la administración parenteral pueden ser suspensiones o emulsiones en vehículos aceitoso o acuosos, y pueden contener agentes formuladores tales como agentes de suspensión, estabilizadores y/o de dispersión. Los vehículos y solventes lipofílicos adecuados incluyen aceites grasos tales como ésteres de ácidos grasos naturales y/o sintéticos, tales como etil oleato y triglicéridos , o liposomas. Las suspensiones pueden contener substancias, que incrementan la viscosidad de la suspensión, tales como celulosa de carboximetil de sodio, sorbitol o dextran. Las composiciones parenterales pueden presentarse en contenedores sellados de dosis unitaria o múltiples dosis, tales como ampolletas y frascos, y pueden almacenarse en una condición liofilizada requiriendo solamente la adición del excipiente liquido estéril, por ejemplo, agua, para inyecciones, inmediatamente antes del uso . Para administración oral, las preparaciones en forma sólida incluyen e.g. polvos, tabletas, pildoras, grageas, pastillas, cápsulas, comprimidos, y preparaciones microgranulares. Las preparaciones farmacéuticas pueden hacerse utilizando un excipiente sólido, opcionalmente triturando la mezcla resultante, y procesando la mezcla de gránulos, después agregando auxiliares adecuados si se desea, para obtener núcleos de tabletas o grageas. Un vehículo/excipiente sólido puede ser una o más substancias que también pueden actuar como diluyentes, s o lubi 1 i zado re s , lubricantes, agentes de suspensión, aglutinantes, conservadores, agentes sabori zant es , agentes humectantes, agentes desintegradores de tableta, o un material encapsulant e . Los vehículos adecuados incluyen, pero no se limitan a, carbonato de magnesio, estearato de magnesio, talco, dextrosa, lactosa, pectina, almidón, gelatina, tragacanto, metilcelulosa , carboximetilcelulosa de sodio, una cera de baja fundición, manteca de cacao, y lo similar. Las preparaciones líquidas adecuadas para administración oral incluyen e.g. soluciones acuosas, jarabes, elixires, suspensiones acuosas, emulsiones y geles. Las soluciones acuosas pueden prepararse al disolver el componente activo en agua y agregar agentes de estabilización y espesamiento adecuados así como colorantes y sabori zantes . Las suspensiones acuosas pueden prepararse al dispersar el componente activo finalmente dividido en agua con material viscoso, tales como gomas naturales o sintéticas, resinas, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, y otros agentes de suspensión bien conocidos. Las emulsiones pueden prepararse en soluciones en soluciones acuosas de glicol de propileno o pueden contener agentes de emulsión tales como lecitina, monooleato de sorbitan o acacia. Los compuestos de acuerdo a la invención o combinaciones descritas arriba también pueden formularse para administración tópica. Los compuestos activos se mezclan bajo condiciones estériles con vehículos /excipientes farmacéuticamente aceptables, incluyendo cualquier agente regulador y conservador necesario. Las pomadas, cremas y lociones, por ejemplo, pueden formularse con una base acuosa o aceitosa con la adición de agentes adecuados de emulsión, dispersión, suspensión, espesamiento, estabilización, o colorantes. Los excipientes comúnmente utilizados incluyen grasas y aceites animales y vegetales, ceras, parafinas, almidón, derivados de celulosa, tragacanto, y glicol de polietileno. Otras formulaciones tópicas incluyen, pero no se limitan a, gotas para los oídos, gotas para los ojos y parches t rans dé rmi co s . Para administración transdérmica así como t ransmuco s a 1 , los penetrantes generalmente conocidos en la materia pueden utilizarse en la formulación . Para administración por inhalación, los compuestos de acuerdo a esta invención y las combinaciones descritas arriba se suministran en la forma de una presentación de roció en aerosol de un ventilador, paquete presurizado o un nebulizador con el uso de un propulsor adecuado, e.g., diclorodifluormetano, triclorofluormetano, diclorotetrafluoroetano o dióxido de carbono. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosificación puede determinarse al proporcionar una válvula para suministrar una cantidad medida. Las cápsulas y cartuchos de, e.g. gelatina para uso en un inhalador o insuflador puede formularse conteniendo una mezcla en polvo del compuesto y una base de polvo adecuada tal como lactosa o almidón . Los compuestos de acuerdo a esta invención y las combinaciones descritas arriba también pueden formularse en composiciones rectales tales como enemas o supositorios de retención, utilizando bases de supositorio convencionales tales como manteca de cacao, otros glicéridos, glicol de polietileno, o una cera de supositorio. La presente invención también se refiere a un método para utilizar los presentes derivados de polimixina o una combinación de tales derivados como una parte del tratamiento clínico de (o un régimen profiláctico preventivo para) sujetos animales o humanos que sufren de una enfermedad infecciosa, y comprende administrar a dicho sujeto una dosis terapéuticamente efectiva de al menos un derivado de acuerdo a la presente invención, opcionalmente en combinación con un agente antibacterial . La presente invención también se refiere a un método para sensibilizar a las bacterias Gram-nega t i vas a un agente antibacterial, en donde el derivado de acuerdo a la presente invención se administra simultáneamente, o secuencialmente en cualquier orden, con una cantidad terapéuticamente efectiva de dicho agente antibacterial. El derivado de la presente invención y el agente antibacterial pueden administrarse juntos como una formulación o por diferentes vías. Por ejemplo, el derivado de polimixina puede administrarse intravenosamente mientras el agente antibacterial se administra intramuscularmente, intravenosamente, subcutáneamente, oralmente o intraperitonealmente. Alternativamente, el derivado puede administrarse intramuscularmente o intraperitonealmente mientras el agente antibacterial se administra intravenosamente, intramuscularmente o intraperitonealmente, o el derivado puede administrarse en una forma aerosolizada o nebulizada mientras el agente antibacterial se administra, e.g., intravenosamente. El derivado y los agentes antibacteriales pueden administrarse simultánea o secuencialmente , siempre que se den en una manera suficiente para permitir que ambos logren concentraciones efectivas en el sitio de infección . "Efectividad terapéutica" se basa en un resultado clínico exitoso, y no requiere que un derivado de acuerdo a la presente invención, opcionalmente en combinación con un agente antibacterial, mate 100% de las bacterias incluidas en una infección. El tratamiento exitoso depende de lograr un nivel de actividad antibacterial en el sitio de infección, suficiente para inhibir las bacterias en una manera que inclina el balance a favor del huésped. Cuando las defensas del huésped son máximamente efectivas, el efecto antibacterial requerido puede ser modesto. La reducción de la carga de organismo por aún un log (un factor de 10) puede permitir que las propias defensas del huésped controlen la infección. Además, el aumento de un efecto bactericida/bacteriostático temprano puede ser más importante que el efecto bactericida/bacterioestático a largo plazo. Estos eventos tempranos son una parte significativa y critica de éxito terapéutico, debido a que permiten tiempo para que los mecanismos de defensa del huésped se activen. El aumento de la velocidad bacterocida puede ser particularmente importante para infecciones tales como meningitis, infecciones de huesos o articulaciones . La efectividad terapéutica de un agente antibacterial depende de la susceptibilidad de las especies bacteriales a dicho agente antibacterial en la concentración clínicamente relevante del derivado de acuerdo a esta invención. El efecto de compuestos de acuerdo a la presente invención para mejorar la efectividad terapéutica de agentes antibacteriales in vivo puede demostrarse en modelos animales in vivo, tales como ensayos de bacteremia de conejo y peritonitis de ratón, y pueden predecirse en la base de una variedad de pruebas in vi tro, incluyendo (1) determinaciones de la concentración inhibidora mínima (MIC) de un agente antibacterial requerido para inhibir el crecimiento de una bacteria Gram-nega t i va por 24 horas, (2) determinaciones del efecto de un agente antibacterial en la curva de crecimiento cinético de una bacteria Gram-negat i va , y (3) ensayos de verificación de la MIC de diluciones seriales de agente antibacterial solo o en combinación con diluciones seriales de compuesto (s) . Los modelos e j emplif icativos o prueban se conocen en la materia. Utilizando determinaciones in vitro de MIC a 24 horas, puede mostrarse que un derivado de acuerdo a la presente invención reduce la MIC del agente antibacterial. Con este resultado, se espera que la administración concurrente del compuesto in vivo incrementará la susceptibilidad de una bacteria Gram-negativa al agente antibacterial. También pueden mostrarse que un compuesto de acuerdo a la presente invención reduce la MIC de un agente antibacterial del rango en el cual el organismo se considera clínicamente resistente a un rango en el cual el organismo se considera clínicamente susceptible. Con este resultado, se espera que la administración concurrente in vivo del uno o more compuesto (s) de acuerdo a la presente invención con el agente antibacterial invertirá la resistencia y convertirá de manera efectiva el organismo resistente a antibiótico en un organismo susceptible a antibiótico. Al medir el efecto de agentes antibacteriales en las curvas de crecimiento in vitro de bacterias Gram- negat iva s , en la presencia o ausencia de un compuesto de acuerdo a la presente invención, puede mostrarse que el compuesto mejora el efecto antibacterial temprano de agentes antibacteriales dentro de un periodo de preferentemente menos de 24 horas. La mejora de los efectos bacter i cida s / inhibidore s de crecimiento tempranos es importante para determinar el resultado terapéutico. Un derivado de polimixina de acuerdo a la presente invención y ¦ un agente antibacterial también pueden tener efectos sinergisticos o de potenciación más allá de los efectos individuales de cada agente solo o los efectos aditivos de los agentes juntos. En un ensayo de verificación, la combinación de un compuesto de acuerdo a la presente invención con agentes antibacteriales puede resultar en un índice de concentración inhibidor "sinergístico" (FIC) . El método de verificación se basa en la capacidad de adición, que asume que el resultado observado con múltiples fármacos es la suma de los efectos separados de los fármacos que se prueban; de acuerdo a este sistema un FIC de menos de 0.5 se clasifica como sinergia, 1 se clasifica como aditivo, y más de 1 pero menos de 2 se clasifica como indi férente . Los agentes antibacteriales adecuados para utilizarse en combinación con derivados de acuerdo a la presente invención, incluyen e.g. macrólidos, tales claritromicina, azit romicina , y eritromicina, ketólidos, lincosamines , tales como clindamicina, e s t rept og rami na s , rifamicinas, tales como rifampina, rifabutina y rifalazil, ácido fusídico, mupirocina, oxazolidinonas , antibióticos de glicopépt ido , tales como vancomicina, dalbavancina , telavancina y or i t avancina , fluoroquinolonas, derivados de tetraciclina, derivados hidrofóbicos de penicilinas, ce fa 1 o spo r i na s , monobactamos , ca rbapenemo s , penemos y otros antibióticos del beta-lactam, novobiocina, pleuromutilinas, inhibidores de síntesis de folato, inhibidores de deformilasa, e inhibidores de bomba de eflujo bacterial. Una persona experta en la materia para tratar infecciones Gram-negat ivas pueden reconocer fácilmente agentes antibacteriales clínicamente relevantes, adicionales que pueden ser útiles. Preferentemente dichos agentes antibacteriales se seleccionan de un grupo de agentes antibacteriales hidrofóbicos o moderadamente hidrofóbicos contra los cuales la membrana exterior de bacterias Gram-negat i vas actúa como una barrera de permeabilidad efectiva. La invención también incluye el uso de los presentes compuestos o combinaciones de los mismos ' para sensibilizar a las bacterias clínicamente importantes enlistadas en la presente al complemento del mecanismo de defensa del huésped (presente en el suero fresco de animal y humano) al someter dichas bacterias a la acción de tales compuestos durante una infección clínica o una infección sospechada. La defensa del huésped puede ejercerse, e.g., por la acción combinada de complemento y leucocitos polimorfonucleares. Aquellos expertos en la materia de medicina pueden optimizar fácilmente las dosificaciones efectivas y regímenes de administración para los compuestos de acuerdo a la presente invención así como para los antibióticos en administración concurrente, tomando en cuenta factores bien conocidos en la materia incluyendo tipo de sujeto que se dosifica, edad, peso, sexo y condición médica del sujeto, la vía de administración, la función renal y hepática del sujeto, el efecto deseado, el compuesto particular de acuerdo a la presente invención empleado y la tolerancia del sujeto a él. Las dosificaciones de todos los agentes antimicrobiales deben ajustarse en pacientes con deterioro renal o insuficiencia hepática, debido al metabolismo reducido y/o excreción de los fármacos en pacientes con estas condiciones. Las dosis en niños también deben reducirse, generalmente de acuerdo al peso corporal. La dosis diaria total de un derivado de acuerdo a la presente invención administrada a un humano o un animal puede variar, por ejemplo, en cantidades de 0.1 a 100 mg por kg de peso corporal, preferentemente de 0.25 a 25 mg por kg de peso corporal. También se reconocerá por un experto en la materia que el curso óptimo de tratamiento, i.e., el número de dosis dadas por dia para un número definido de días, se determinará por la naturaleza y grado de la condición que se trata, la forma, via y sitio de administración, y el paciente particular que se trata, y que tales optimizaciones pueden determinarse por técnicas convencionales. También se proporciona un método para ensayar un compuesto de acuerdo a la presente invención, dicho compuesto siendo un derivado de una polimixina u octapeptina natural, en donde dicho derivado tiene solamente 2-3 cargas positivas, en contraste con el compuesto que ocurre de manera natural del cual se deriva, para actividad antibacterial contra una bacteria Gram-negat i va dañina y/o para la habilidad para sensibilizarla a agentes antibacteriales y/o el complemento presente en el suero, dicho método comprendiendo la etapa de contactar la bacteria con dicho derivado de una polimixina u octapeptina natural, e identificar derivados que poseen actividad antibacterial y/o sensibilizar la actividad hacia dicha bacteria. También se proporciona un método para seleccionar los derivados de polimixina y octapeptina con unión reducida a tejido renal o sus constituyentes en o de animales prueba o de origen humano midiendo su habilidad reducida para bloquear de manera competitiva la unión de aminoglicosidos a los mismos, o bloquear la unión de otras substancias conocidas para unirlas a los mismos. En un aspecto adicional se proporciona un método para desarrollar nuevos antibióticos comprendiendo las etapas de proporcionar un compuesto de polimixina u octapeptina natural, o un derivado del mismo, teniendo un total de 4 o 5 cargas positivas, o un total de 6 cargas positivas, como en deacilpolimixinas, substituyendo de 1 a 4 residuos llevando una o más cargas positivas con un residuo no teniendo una carga positiva, o con un enlace covalente, generando asi un derivado de polimixina teniendo 2 o 3 cargas positivas, ensayando dicho compuesto derivado para actividad antibacterial contra bacterias Gram-nega t i vas y/o para la habilidad para sensibilizar a las bacterias Gram-negat ivas a un agente antibacterial, y seleccionar compuestos teniendo actividad antibacterial contra bacterias Gram-negat ivas , o la habilidad para sensibilizar a las bacterias Gram-negat ivas a un agente antibacterial. También se proporciona de acuerdo con la presente invención un derivado de polimixina semi sintético que se obtiene al tratar químicamente o enzimáticamente polimixinas u octapeptinas que ocurren de manera natural, respectivamente, o aquellas variantes de las mismas que se fabrican por organismos genéticamente modificados. Los tratamientos químicos incluyen, pero no se limitan a, aquellos con acet anhidruro , ácido fórmico, hidrazina, y ácido oxálico. Los tratamientos enzimáticos incluyen, pero no se limitan a, con enzimas tales como polimixina deacilasa, ficina, papaina, bromelaina, subtilopeptidasas, subtilisina, colistina hidrolasa, y Nagarsa. Los compuestos preferidos de acuerdo a una modalidad son menos catiónicos que polimixinas u octapeptinas naturales, tienen dos (2) o tres (3) cargas positivas solamente, y son: (a) capaces de inhibir el crecimiento de Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae , Klebsiella oxytoca, Enterobacter cloacae , Citrobacter freundii, Pseudomona s aeruginosa o Acinetobacter baumannii y/o sensibilizar cualquiera de ellos a antibióticos, y/o (b) menos tóxicos que polimixinas clínicamente utilizadas, como se evidencia en modelo animal in vivo, y/o (c) menos nefrotóxicos que polimixinas clínicamente utilizadas, como se evidencia en un modelo animal y/o en una prueba in vitro que mide la afinidad de los compuestos a estructuras de riñon, y/o (d) capaces de causar menos liberación de histamina de los tejidos que polimixinas clínicamente utilizadas cuando se administran tópicamente o cuando se inhalan como un aerosol , y/o (e) fa rma co c iné t i carne nt e más favorables, tales como teniendo una vida media en suero más larga y/o al ser menos inactivados por tejido polianiónico y constituyentes pus que polimixinas clínicamente utilizadas. Los métodos para sintetizar los compuestos de acuerdo a la presente invención incluyen pero no se limitan a los siguientes descritos abajo. Para que un compuesto específico se sintetice, un experto en la material es capaz de elegir el método apropiado . 1. Derivados semisintét icos de polimixinas y octapeptinas que llevan una parte de heptapéptido sin cambiar y una cadena lateral de acil-aminacilo modificada que puede hacerse por los procedimientos descritos como sigue : Protección de los grupos amino libres en el material inicial (polimixina u octapeptina, o modificaciones de las mismas) por métodos conocidos por aquellos expertos en la materia, la protección puede lograrse por el uso de residuos tales como t-butoxicarbonilo (tBoc) , fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc), benciloxicarbonilo (CBZ, Z) , aliloxicarbonilo (ALOC), 3-piridil-N-óxido-metoxicarbonilo (como se describe en la publicación de patente GB 1323962), al utilizar bases Schiff tales como benzaldehido por el método descrito en la publicación de Patente Japonesa 7115630/1971 o lo similar que pueden removerse por condiciones convencionales compatibles con la naturaleza del producto . En condiciones donde la deficiente solubilidad en agua ocasionalmente posee un problema en las etapas subsiguientes, la protección puede hacerse al utilizar grupos bloqueadores cargados de manera negativa tales como un derivado de ácido sulfónico de Fmoc o un derivado de ácido carboxilico de Fmoc, el método descri iéndose en la publicación de patente de E.U. 2006004185. La solubilidad en agua también puede mejorarse al enlazar un grupo bloqueador adecuado, removible, negativamente cargado, muy hidrofilico al grupo OH de treonina. Después, el compuesto se somete a un tratamiento enzimático con enzimas tales como polimixina deacilasa, polimixina hidrolasa, papaina, ficina, bromelaina, subtilopeptidasa, Nagarse u otras enzimas que remueven una parte terminal de la cadena lateral o aún la cadena lateral completa de compuestos de polimixina u octapeptina. Este tratamiento opcionalmente puede seguirse por el procedimiento de degradación Edman. El compuesto resultante carece de la cadena lateral completa y consiste de la parte de heptapéptido cíclica solamente, pero tiene un grupo amino alfa N-terminal libre . Alternativamente, polimixinas y octapeptinas que tienen grupos amino protegidos por benciloxicarbonilo pueden tratarse por ácido oxálico o ácido fórmico para producir derivados de deacilo protegidos, el método describiéndose por Kurihara et al. (1974) . El procedimiento se sigue por tratamiento enzimático adicional como arriba y/o por degradación Edman para producir un heptapéptido . Después, un residuo adecuado se enlaza a la posición alfa-amino libre de la porción de anillo de heptapéptido. El residuo puede contener un acilo o residuo relacionado asi como opcionalmente residuos de aminoácido, preferentemente hasta tres residuos. Por ejemplo, un compuesto semisintét ico con un grupo acilo y dos residuos de aminoácido puede prepararse al agregar al heptapéptido descrito arriba un residuo sintético de N-(acil)-t re oni 1 - Dt re on i 1 o . Esto puede lograrse por técnica generales convencionales conocidas por aquellos familiares con el arte de química orgánica, estas técnicas incluyendo el uso de residuos enlazados a -hidrox i - suc c i nimida como se describe en US 2006004185. En esta síntesis particular el procedimiento puede incluir el uso de 2-N- (n-octanoil ) -t reonil-Dt reonil-N-hidroxisuccinimida . 2. Nonapéptidos de polimixina acilados llevando tres (3) grupos amino libres.

Polimixina D posee solamente cuatro (4) cargas positivas. Los grupos amino libres de polimixina D pueden protegerse por los medios descritos arriba. Esto se sigue por un tratamiento enzimático y una etapa de degradación Edman opcional, para producir un nonapéptido, que puede entonces acilarse por acilisotiocianato (por el método bien conocido por una persona experta en la materia y descrito en US 2006004185, por cloruro de acilo (por el método bien conocido por una persona experta en la materia y descrito en Chihara et al. 1974), o al utilizar residuos enlazados a N-hidroxi succinimida (por el método bien conocido por una persona experta en la materia y descrito en US 2006004185, Finalmente, se remueven los grupos protectores. En una manera análoga, nonapéptido de polimixina S acilado y nonapéptido de polimixina F acilado pueden hacerse. Ambos llevan solamente tres (3) grupos amino libres. 3. Heptapépt idos de polimixina y octapeptina acilados. Los heptapépt idos pueden hacerse por tratamiento Nagarse de los compuestos naturales, como se describe por Kimura et al. 1992. Alternativamente, pueden hacerse por tratamientos con otras enzimas tales como polimixina acilasa, polimixina hidrolasa, ficina, papaina, bromelaina, y subtilopeptidasa, seguido por etapas de degradación Edman opcionales. También pueden hacerse al deacilar los compuestos naturales por hidrazina o por ácidos tales como ácido fórmico y ácido oxálico, seguido por etapas de degradación Edman. El heptapéptido puede entonces acilarse por ejemplo, al utilizar la técnica de cloruro de acilo bien conocida por una persona experta en la materia y descrita en Chihara et al. (1974) . El heptapéptido de polimixina acilado lleva solamente tres (3) grupos amino libres. 4. Derivados de polimixina y octapeptina totalmente sintéticos pueden hacerse por los métodos muy convencionales conocidos por aquellos expertos en la materia. Tales métodos incluyen los procedimientos de síntesis de fase líquida así como los procedimientos de síntesis de fase sólida descritos, por ejemplo, por Sakura et al. (2004), Tsubery et al. (2000a, 2000b, 2002, 2005), y Ofek et al. (2004) . Los métodos incluyen e.g. el uso de agentes protectores tales como Fmoc, tBoc, y CBZ en posiciones estratégicas, asi como la etapa de ciclización donde DPPA (difenil fo s fo ra z i dato ) o una mezcla de benzotrizol-l-il-oxi-tris-pirrolidino-fosfonio hexafluorofosfato (PyBop), N-hidroxibenzotriazol (HoBt), y N-met ilmor folina (NMM) se utiliza. Los derivados de Fmoc de muchos no triviales asi como D-aminoácidos están comercialmente disponibles. 5. Reacciones e j empl i f i ca t i va s relacionadas con la conversión de los grupos amino libres para generar los compuestos de acuerdo a la presente invención teniendo 2 o 3 cargas positivas pueden incluir (pero no se limitan a) las siguientes reacciones: A) reacción de grupo amina libre del compuesto con una porción de conjugación comprendiendo un grupo epóxido reactivo, generando asi un enlace ß-hidroxi-amina ; B) reacción de grupo amina libre del compuesto con una porción de conjugación comprendiendo un haluro de sulfonilo reactivo, generando asi un enlace de sulfonamida; C) reacción de grupo amina libre del compuesto con una porción de conjugación comprendiendo un ácido carboxilo reactivo, generando así un enlace amina; D) reacción de grupo amina libre del compuesto con una porción de conjugación comprendiendo un grupo aldehido reactivo (bajo condiciones de reducción), generando así un enlace amina; E) reacción de grupo amina libre del compuesto con una porción de conjugación comprendiendo un grupo cetona reactivo (bajo condiciones de reducción), generando así un enlace amina; F) reacción de grupo amina libre del compuesto con una porción de conjugación comprendiendo un grupo isocianato reactivo, generando así un enlace de urea. LISTA DE REFERENCIAS Todas las referencias citadas en la presente solicitud se incorporan en la presente para referencia en su totalidad. Chihara S, Tobita T, Yahata M, Ito A, Koyama Y. 1973. Enzymatic degradation of colistin. Isolation and identification of -N- Acil a, ?-diaminobutyric acid and colistin nonapeptide. Agr Biol Chem 37:2455-2 63. Chihara S, Ito A , Yahata M, Tobita T, Koyama Y. 1974. Chemical synthesis, isolation and characterization of a-?-fattyacil colistin nonapeptide with special reference to the correlation bet een antimicrobial activity and carbón number of fattyacil moiety. Agrie Biol Chem 38:521-529. Kimura Y, Matsunaga H, Vaara M. 1992.

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La estrategia en la protección fue utilizar tres niveles de protección ortogonal, la protección Fmoc temporal para las funciones alfa amino, grupos que se remueven durante la etapa de segmentación de ácido, y protección s emi -pe rmanent e para cubrir las funciones de cadena lateral reactiva mientras la reacción de ciclización tiene lugar. Después de la salida del péptido de la resina, el Ácido carboxilico C-terminal se reacciona con una función amino en la cadena lateral de uno de los aminoácidos para formar un peptide cíclico. Después de la etapa de ciclización, los grupos de protección s emi -pe rmanent e s se remueven para producir peptide NAB . De acuerdo con lo anterior, la función alfa amino del aminoácido se protege por f luorenil-metoxicarbonilo (Fmoc) y Fmoc se remueve por 20% piperidina en DMF en cada ciclo. El aminoácido que se incluye con ciclización, e.g. ácido diaminobutirico, se protege por t-butoxicarbonilo (tBoc) , un grupo lábil ácido que se remueve en la etapa de segmentación. Todos los otros aminoácidos que tienen grupos funcionales de cadena lateral se protegen por un grupo que es estable en la etapa de segmentación de acido, i.e. benciloxicarbonilo (Z) . Fenilalanina y leucina de aminoácidos naturalmente no necesitan protección de cadena lateral. El término amino no se protege; esto permite la reacción directa en el procedimiento de acilación. Las etapas de síntesis se realizan en un sintetizador automático comercial que empleó O- (ß-clorobenzotriazol-l-il) -?,?,?' ,?' -tetrametiluronio hexafluorofosfato (HCTü) como activador . Ácido 6-metilheptanóico (6-MHA) fue de Ultra Scientific Inc, North Kingstown, RI, USA (número de producto, FLBA 002) . Otros ácidos grasos fueron de un proveedor estándar. La acilación se realiza al utilizar un exceso molar de cuatro pliegues de cada aminoácido o el ácido graso, exceso molar de cuatro pliegues del activador HCTU (ver arriba) , y un exceso molar de ocho pliegues de N-metil morfolina. El tiempo de reacción fue 30 mi n . Los aminoácidos se compran ya protegidos de un proveedor estándar. El péptido se remueve de la resina por reacción con una solución de 95% ácido trif luoroacético y 5% agua por 2 horas a temperatura ambiente, para producir el producto parcialmente protegido. El péptido resultante se precipita con dietil éter . La mezcla de ciclización utilizada fue benzotriazol-l-il-oxi-tris-pirrolidino-fosfonio hexafluorofosfato (PyBop), N-hidroxibenzotriazol (HoBt) , y N-metil morfolina (N ) en el exceso molar de 2, 2, y 4, respectivamente. El péptido se disuelve en dimet i 1 formamida , la mezcla de ciclización se agrega y deja reaccionar por 2 horas. El peptide protegido, ciclizado se precipita por la adición de dietil éter frió. Cualquier PyBop residual se remueve al enjuagar el péptido con agua . Los grupos de protección de cadena lateral restantes (Z) se remueven por dehidrogenación catalítica. El péptido se disuelve en ácido acético-metanol-agua (5:4:1), bajo una atmósfera de hidrógeno y en la presencia de un catalizador de carbón de pa 1 adi o . El péptido se purifica por cromatografía de fase inversa utilizando gradientes convencionales de a ce t on i t r i 1 o : agua : á c i do t rifluoroacético . El producto se seca por 1 i o f i 1 i z a c i ón . La producción fue 20-40 mg representando aprox. 20%-40% de lo teórico, calculado de la cantidad molar (aprox. 100 micromoles) del primer residuo de aminoacilo unido a la resina. La pureza, como se estima por HPLC de fase inversa fue más del 95%. Para péptidos acilados, el producto de degradación Edman no reveló ningún residuo de aminoácido, indicando que el grupo a-amino del residuo de aminoácido N-terminal se bloquea, como se espera, debido a la N-acilación exitosa. Dentro del error experimental, las masas obtenidas son aquellas esperadas de los valores teóricos. E emplo 2 Actividad antibacterial directa de los compuestos contra Escherlchia. coli Los péptidos sintetizados en el Ejemplo 1, todos llevando al menos dos (2) pero no más de tres (3) cargas positivas, se estudian por su habilidad para inhibir el crecimiento de E. coli. Esto se prueba empleando placas agar LB (LB Agar Lennox, Difco, BD, Sparks, MD , U.S. A) . El organismo indicador E . coli IH3080 (K1.018) fue una cepa encapsulada originalmente aislada de un neonato que sufre de meningitis (Vaara et al. 1984) y obtenida del Instituto Nacional de Salud Pública, Helsinki, Finlandia. De un cultivo desarrollado durante la noche de IH3080 en agar LB, una suspensión de aprox. 108 células/ml se prepara en 0.9% NaCl . Las alícuotas de esta suspensión se colocan entonces en las placas agar y las placas se agitan gentilmente para esparcir la suspensión de manera uniforme en la superficie entera de la placa. Después, la parte no absorbida de la suspensión se remueve al utilizar una pipeta Pasteur. Después de que la superficie se ha secado, las cavidades pequeñas (diámetro, 2 mm) se colocan en las placas (cinco cavidades por placa) al utilizar un tubo de metal estrecho de borde puntiagudo estéril, punta de pipeta de uso único, y succión al vacío. Un método alternativo utilizó un hisopo para esparcir el inocolum. Las muestras (4 µ? y 10 µ?) de la solución de péptido en 0.9% NaCl (en concentraciones de 1 g/ml y 0.1 pg/ml) se colocan entonces en las cavidades y los fluidos de muestra se dejan absorber. Los controles incluyeron 0.9% de solución de NaCl sin el compuesto a probarse. Las placas se incuban entonces por 18 h a 37°C después de lo cual los diámetros de zonas de inhibición de crecimiento alrededor de cada cavidad se miden; el diámetro de la cavidad por si misma no se reduce. Finalmente, los diámetros se convierten a áreas de superficie de la inhibición de crecimiento La Tabla 2 muestra la actividad antibacterial de los derivados contra E. coli IH3080 en comparación con aquella de una cantidad igual de polimixina B asi como de algunos derivados de polimixina no relacionados con la presente invención. NAB734, NAB737, NAB739 y NAB740 fueron compuestos más antibacteriales y fueron aún más antibacteriales que polimixina B contra E. coli IH3080. Una cavidad conteniendo 4 µ? de NAB739 produjo un área de inhibición de crecimiento tan amplia como 133 mm cuadrados. En estos cuatro compuestos NAB, la cadena lateral consiste de dos residuos de aminoacilo que llevan grupos hidroxilo. Diferente a NAB739, NAB7061 no fue antibacterial a 4 . Sin embargo, despliega actividad antibacterial notable a 10 µg. NAB7061 difiere de NAB739 solamente al llevar Abu (en lugar de DSer) en R3. La prolongación de la longitud de la parte de acilo graso de C8 en NAB7061 a CIO en NAB7062 resultó en actividad antibacterial notablemente mejorada manifestándose a 4 µg . Además, tres otros péptidos (NAB738, NAB716 y NAB719) desplegaron actividad antibacterial notable aunque claramente más débil que NAB739 y los otros compuestos más antibacteriales. Una propiedad común de los compuestos directamente antibacteriales a E. coli fue la presencia de tres cargas positivas fuera de las cuales cualquiera de todas las tres o al menos dos se ubican en posiciones adecuadas en la parte cíclica. En el último caso las posiciones relativas de dichas cargas afectan significativamente la potencia de la actividad antibacterial contra E.coli.

Además, como se muestra en la Tabla 2, también la estructura y longitud de la cadena lateral tuvo influencia significativa en la potencia de la actividad antibacterial. La presencia de una cadena lateral consistiendo de al menos dos residuos de aminoacilo parece ser importante para los compuestos antibacteriales contra E. coli, ya que los compuestos que carecen ya sea de R2 (NAB713) o ambos R2 y R3 (octanoilo PBHP) también carecieron de la actividad antibacterial directa en las condiciones utilizadas en el ensayo. Sin embargo, puede anticiparse, que la falta de aquellos residuos puede compensarse al utilizar en lugar de residuo de octanoilo, un residuo más extendido como R ( FA ) . los compuestos y su actividad contra Escherichia coli IH3080 Estructura** Actividad parte Cargas antibacterial FAt Secuencia de péptidos*** positivas en a cadena SEQ ID parte lateral parte cíclica No. cíclica total 4 ug 10 ug Compuestos de referencia Polimixina B MO (H) A TX c [XXFLXXT] 1 3 5 79 133 Colistina (polimixina E) MO(H) A XTX cy [XXLLXXT] 2 3 5 ND ND Deacilpolimixina B - +XTX cy [XXFLXXT] 3 3 6 57 113 Deacilcolistina +XTX Cy [XXLLXXT] 4 3 6 79 95 Polimixina B nonapéptido - +TX Cy [XXFLXXT] 5 3 5 0 0 Polimixina B heptapéptido +cy [XXFLXXT] 6 4 4 0 0 NAB704 - +TZ cy [XXFLXXT) 7 3 4 0 0 NAB705 - +ZTZ cy [XXFLXXT] 8 3 4 0 0 Octanoilo PMBH OA - cy [XXFLXXT] 9 3 3 0 0 Compuestos de la presente invención NAB 739 OA TS cy [XXFLXXT] 10 3 3 133 177 NAB 740 DA TS cy [XXFLXXT] 10 3 3 95 133 NAB 737 OA TT cy [X FTXXT] 11 3 3 133 201 NAB 734 OA TS cy [XXFTXXT] 12 3 3 113 177 NAB 7062 DA Z cy [XXFLXXT] 13 3 3 50 99 NAB 7061 OA TZ cy [XXFLXXT] 13 3 3 0 50 NAB 706 MHA TZ cy [XXFLXXT] 13 3 3 5 7 NAB 707 MHA ZTZ cy [XXFLXXT] 14 3 3 5 7 NAB 716 OA TX cy [XXFLZXT] 15 2 3 13 64 NAB 719 OA TZ cy [XXFLXXL] 16 3 3 7 50 NAB 738 OA TA cy [XXFTXXT] 17 3 3 0 64 NAB 717 OA TX cy [XXFLXZT] 18 2 3 0 0 NAB 718 OA TZ cy [XXLLXXT] 19 3 3 0 0 NAB 733 OA AA cy [XXFLXXT] 20 3 3 0 0 NAB 736 DA - cy [XXFLXXT] 9 3 3 0 0 NAB 713 OA z cy [XXFLXXT] 21 3 3 0 0 NAB 715 OA TX cy [XZFLXXT] 22 2 3 0 0 NAB 721 MHA XTX cy [XXFLZZT] 23 1 3 0 0 NAB 731 OA TZ cy [XKFLXXT] 24 3 3 0 0 NAB 710 OA TZ cy [XZFLXXT] 25 2 2 0 7 NAB 709 OA TZ cy [XXFLXZT] 26 2 2 0 0 NAB 708 OA TZ cy [XXFLZXT] 27 2 2 0 0 NAB 725 OA XTX cy [XZFLXZT] 28 1 3 0 0 NAB 726 OA XTX cy [XZFLZXT] 29 1 3 0 0 NAB 722 HA XTX cy [XZFLZZT] 30 0 2 0 0 NAB 735 OA XXX cy [XZFLZZT] 31 0 3 0 0 NAB 701 - +TX cy [XXFLZZT] 32 1 3 0 0 NAB 702 - +TX cy [XXFLBBT] 33 1 3 0 0 NAB 703 - +TX cy [XXFLJJT] 34 1 3 0 0 * Acividad antibacterial medida como la inhibición de crecimiento (en milímetros cuadrados) alrededor de una cavidad conteniendo 4 o 10 microgramos de un compuesto en placas LB. ** Códigos de una letra para residuos de aminoacilo: A, Ala; F, Phe; K, Lys; L, Leu; S, Ser; T, Thr; X Dab; Z, Abu; B, ?-?-formil-Dab; J, ?-?-acetil-Dab . Las letras subrayadas indican residuos que están en configuración D. Las letras en negritas indican residuos que llevan una carga positiva. + en negritas indica la carga positiva del grupo a-amino en el término N libre del péptido. Abreviación: cy, ciclo. ***En el listado de secuencias, X, Z, B, J y aminoácidos en configuración D se denotan Xaa, y se definen como residuos modificados (MOD_RES) .

Ejemplo 3 Actividad antibacterial directa de compuestos NAB seleccionados contra Acinetobacter ba.uma.nnli y Pseudomonas aeruginosa La actividad antibacterial directa de doce compuestos NAB contra Acinetobacter baumannii ATCC 19606 y Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 se prueba al utilizar el método de determinación de susce tibilidad descrito en el Ejemplo 2. Los resultados se muestran en la Tabla 3. Cinco compuestos (NAB7062, NAB734, NAB737, NAB739, y NAB740) tuvieron actividad notable contra A. baumannii. En el Ejemplo 2, los mismos compuestos se muestran por ser muy potentes contra E . coli. La actividad antibacterial de NAB739 y NAB740 fue tan fuerte como o aún más fuerte que aquella de polimixina B .

Contra P. aeruginosa , los compuestos NAB más activos fueron NAB739, NAB740 así como NAB736, que es muy inactivo contra E. coli y Acinetobacter baumannii. NAB740 fue el compuesto más activo y su actividad fue tan fuerte como aquella de polimixina B. Todos los tres compuestos NAB carecen de cargas positivas en la cadena lateral y aún fueron inactivas contra P. aeruginosa . Este descubrimiento es contra la conclusión de Srinivasa y Ramachandran (1980a) que los grupos amino libres en Rl y R3 son esenciales para la inhibición de crecimiento de P. aeruginosa . Sorprendentemente, NAB736 es preferentemente efectiva contra P. aeruginosa mientras octanoilo PMBH es mucho menos efectiva. De acuerdo con lo anterior, el alargamiento de la parte R(FA) de C8 a CIO tiene un efecto marcado en la actividad.

Tabla 3 Actividad Antibacterial , * de doce (12) nuevos compuestos contra Acinetobacter bauma nn i i y Pseudomona s aeruginosa * Acividad antibacterial medida como la inhibición de crecimiento (en milímetros cuadrados) alrededor de una cavidad conteniendo 4 o 10 µ? del compuesto en placas LB.

Ejemplo 4 Actividad antibacterial directa de NAB734 contra bacterias Gram-negati as seleccionadas La susceptibilidad de once cepas de bacterias Gram-negat ivas (nueve especies diferentes) a NAB734 y polimixina B se compara al utilizar el método de determinación de susceptibilidad descrito en el Ejemplo 2. Las cepas incluyeron aquellas que pertenecen a las especies de Serratia marcescens y Proteus mirabilis, ambas especies generalmente conocidas por ser resistentes a polimixina. Además, la determinación de susceptibilidad también se realiza al utilizar las bacterias Gram-posit ivas , Staphylococcus aureus, también generalmente conocidas por ser resistentes a polimixina. Diez de las cepas originadas de ATCC (Colección de Cultivo Tipo Americano, Manassas, VA, U.S.A.), y una de" CCUG (Colección de Cultivo de la Universidad de Gothenburg, Suecia) . La fuente de E. coli IH3080 se ha descrito en el Ejemplo 2. Polimixina B sulfato fue de Sigma-Aldrich (St. Louis, O, USA) . Los resultados en la Tabla 4 muestran que NAB734 generalmente puede considerarse ser aproximadamente tan potente como polimixina B contra E . coli, Klebs iella pneumoniae , Klebsiella oxitoca , Enterobacter cloacae, y Citrobacter freundii. De alguna manera parece ser menos potente que polimixina B contra Acine toba c ter baumannii y claramente menos potente que polimixina B contra Pseudomonas aeruginosa . Representantes de especies de bacterias resistentes a polimixina conocidas fueron resistentes a NAB734 también. Esto sugiere que NAB734 tiene una acción antibacterial muy especifica y que su modo de acción es muy similar a aquel de polimixina B. Tabla 4 Actividad antibacterial * de NAB 734 contra bacterias Gram-negat i vas seleccionadas y Staphylococcus aureus Cepa NAB 734 Polimixina B sulfato 4 µ? 10 4 10 pg E. , coli ATCC25922 133 177 95 133 E. . coli IH3080 113 154 95 133 K. . pneumoniae ATCC13883 64 113 79 113 K . pneumoniae CCUG45421 64 104 95 133 K . oxytoca ATCC13182 95 143 79 104 E . cloacae ATCC23355 133 177 95 143 C . freundii ATCC8090 133 177 95 154 A . baumannii ATCC19606 57 79 113 154 P . aeruginosa ATCC27853 13 50 95 133 S . marcescens ATCC8100 0 0 0 0 P . mirabilis ATCC29906 0 0 0 0 S . aureus ATCC 25923 0 0 0 0 * Acividad antibacterial medida como la inhibición de crecimiento (en milímetros cuadra alrededor de una cavidad conteniendo 4 o 10 µ? del compuesto en placas LB. E emplo 5 La habilidad de los compuestos NAB para sensibilizar E. coli IH3080 a un antibiótico modelo de rifampina Nuevos péptidos NAB de acuerdo a la presente invención y todos llevando al menos dos (2) pero no más de tres (3) cargas positivas, también se estudian por su habilidad para sensibilizar E . coli IH3080 a rifampina. Esto se prueba en paralelo con las determinaciones de susceptibilidad descritas en el Ejemplo 2 y al emplear placas LB que contienen concentraciones crecientes (0.1 pg/ml, 0.3 pg/ml, 1 pg/ml) de rifampina (Sigma-Aldrich, St . Louis, O, U.S. A) . La Tabla 5 muestra la actividad de los compuestos NAB (4 pg) contra E. coli IH3080 en la presencia de rifampina (0.1 y 1 pg /mi) en comparación con la actividad de una cantidad igual de substancias previamente descritas conocidas por sensibilizar a las bacterias Gram-negat ivas a agentes antibacteriales, i.e. polimixina B heptapépt ido , deacilpolimixina B, deacilcolistina , polimixina B nonapéptido, asi como con polimixina B. Los compuestos también incluyeron octanoilo PMBH, un agente que no se ha reportado previamente por ser capaz de sensibilizar las bacterias a antibióticos. Varios compuestos NAB sensibilizaron E. coli IH3080 al efecto antibacterial de una concentración de rifampina tan baja como 0.1 pg/ml. En la ausencia de los compuestos probados, una concentración de cien pliegues (10 µ?/t??) de rifampina fue necesaria para efecto inhibidor. Varios compuestos que carecen de una actividad antibacterial directa notable a 4 µg fueron capaces de sensibilizar la bacteria objetivo a rifampina. Tales compuestos incluyeron NAB7061, NAB717, NAB718, y NAB733. Además, la mayoría de los compuestos NAB que tuvieron actividad antibacterial directa, i.e. actividad antibacterial en la ausencia de rifampina (ver el Ejemplo 2) , inhibieron la bacteria objetivo aún de manera más efectiva en la presencia de rifampina. La habilidad de los compuestos más activos NAB734, NAB737, NAB738, y NAB739 fue claramente aún mayor que aquella de PMBN, el permeabilizador bien conocido de OM . Los compuestos NAB más activos llevan tres (3) cargas positivas y tienen al menos dos (2) cargas positivas colocadas de manera adecuada en la parte cíclica, el posicionamiento relativo de las cuales afectan la potencia de la actividad de sensibilización. Sin embargo debe observarse, que NAB716, que lleva solamente dos cargas positivas en la parte cíclica y tiene la tercer carga positiva en la forma de un residuo Dab en R3, es notablemente capaz de sensibilizar E. coli a r i fampina . Entre las series de los compuestos teniendo todos residuos de octanoilo como R(FA), octanoilo PMHP, que carece tanto de R2 como R3, posee la actividad de sensibilidad más débil, NAB713, que carece de R2 , posee una actividad de alguna manera mejor, y NAB7061, que posee tanto R2 como R3 tuvo una actividad remarcable. Esto indica que la presencia de R2 y R3 es ventajosa. Sin embargo, su ausencia puede al menos compensarse parcialmente al alargar la parte R(FA) como en NAB736. Lleva residuo de decanoilo como la parte R(FA), carece tanto de R2 como R3, y es muy active como un sensibilizador. Los compuestos NAB que llevan ambas de sus dos (2) cargas positivas en la parte cíclica fueron menos activos que los compuestos NAB estructuralmente de otra manera análogos que llevan todos sus tres (3) cargas positivas en la parte cíclica, o, para un compuesto (NAB708) , inactivo en las condiciones de estudio empleadas. Los compuestos NAB que llevan dos (2) cargas positivas en la cadena lateral y una (1) carga positiva en la parte acíclica tienen actividad muy modesta, si la hay, en las condiciones de estudio empleadas. NAB735, que lleva todas de sus tres (3) cargas positivas en la cadena lateral es inactiva en las condiciones de estudio empleadas. De nuevo, las posiciones relativas de dichas cargas en la parte cíclica afectó la potencia de la actividad de sensibilización. Tabla 5 Actividad antibacterial de los compuestos (4 pg) contra E. col IH3080 en la presencia de rifampina* Actividad antibacterial en la presencia de concn de rifampina ^g/ml) de 0 0.1 1.0 Referencia y otros compuestos Polimixina B 79 95 104 Colistina (polimixina E) ND ND ND Deacilpolimixina B 57 79 127 Deacilcolistina 79 87 127 Polimixina B nonapéptido (P BN) 0 20 113 Polimixina B heptapéptido (PBHP) 0 0 38 NAB 704 0 0 24 NAB 705 0 0 5 Octanoilo PMBH 0 0 38 Nuevos compuestos de la presente invención NAB 739 133 177 201 NAB 740 95 95 95 NAB 737 133 177 201 NAB 734 113 154 201 NAB 7062 50 104 104 NAB 7061 0 113 155 NAB 706 5 79 133 NAB 707 5 87 113 NAB 716 13 133 165 NAB 719 7 79 95 NAB 738 0 133 177 NAB 717 0 71 95 NAB 718 0 13 133 NAB 733 0 95 113 NAB 736 0 113 133 NAB 713 0 20 38 NAB 715 0 0 33 NAB 721 0 13 28 NAB 731 0 0 5 (22**) NAB 710 0 7 13 NAB 709 0 0 13 NAB 708 ¦ 0 0 0 NAB 725 0 0 0 NAB 726 0 0 0 NAB 722 0 0 0 NAB 735 0 0 0 NAB 701 0 0 0 NAB 702 0 0 0 NAB 703 0 0 0 * Actividad antibacterial medida como la inhibición de crecimiento (en milimetros cuadrados) alrededor de una cavidad conteniendo 4 µg de un compuesto en placas sin rifampina o rifampina (0.1 o 1.0 µg/ l) ** El valor en paréntesis se obtiene utilizando una cavidad conteniendo 10 µg del compuesto .

Ejemplo 6 La habilidad de los compuestos NAB para sensibilizar Aclnetobacter ba.uma.nn11 y Pseudomon s aeruglnosa a un antibiótico modelo de rifampina Los péptidos NAB relacionados con la presente invención también se estudian por su habilidad para sensibilizar A. baumanni i y P. aeruginosa a rifampina (Tabla 6) . Esto se prueba en paralelo con las determinaciones de susceptibilidad descritas en el Ejemplo 3 y al emplear placas LB que contienen concentraciones crecientes (0.1 µ?/p??, 0.3 µ?/p??, 1 µ?/p??) de r i fampina . Varios compuestos NAB poseen una habilidad muy marcada para sensibilizar A. baumannii a rifampina. La habilidad de los compuestos más activos NAB734, NAB737, y NAB739 fue claramente aún mejor que aquella de PMBN, el permeabilizador efectivo bien conocido de OM . NAB739 inhibió el crecimiento de P. aeruginosa de alguna manera mejor en la presencia de rifampina que en su ausencia. Tabla 6 Actividad antibacterial * de doce (12) nuevos compuestos (4 \iq) contra Acinetobacter baumannii y Pseudomonas aeruginosa en la presencia de rifampina (0.1 o 0.3 vq/ml) A. baumannii ATCC 19606 Ps. aeruginosa ATCC 27853 0 0.1 0.3 0 0.1 0.3 NAB 7061 0 28 50 0 0 0 NAB 7062 13 50 95 0 0 7 NAB 716 0 0 64 0 0 0 NAB 717 0 0 50 0 0 0 NAB 718 0 0 38 0 0 0 NAB 719 0 154 133 0 0 7 NAB 736 0 95 154 38 38 38 NAB 734 38 201 283 13 20 20 NAB 737 38 201 283 0 20 20 NAB 738 0 95 154 0 13 13 NAB 739 113 177 314 38 64 64 NAB 740 133 154 154 64 64 64 PMBN 0 133 154 113 113 154 Octanoilo PMBH nd nd nd 0 13 13 * Actividad antibacterial medida como la inhibición de crecimiento (en milímetros cuadrados) alrededor de una cavidad conteniendo 4 µg de un compuesto en placas sin rifampina (control) o con rifampina (0.1 o 0.3 µg ml) E emplo 7 NAB7061 sensibiliza E. coli , Klebsiella pneumoniae , y Enterobacter cloacae a un amplio rango de agentes antibacteriales Las concentraciones inhibidoras mínimas (MIC) de un conjunto representativo de agentes ant imicrobiales clínicamente utilizados se determinan para dos cepas de E . coli (ATCC25922 y IH3080), K . pneumoniae ATCC13883, y E. cloacae ATCC23355 al utilizar medio agar Mueller-Hinton (no. de producto Lab039; LabM Ltd., Bury, Lañes, U.K.) en la presencia de NAB7061 (4 µg/ml) así como en su ausencia. MICs se determinan al utilizar cintas E (Biodisk Ltd., Solna, Suecia) de acuerdo a las instrucciones del fabricante. La concentración de NAB7061 utilizada no inhibe por si misma el crecimiento de la bacteria objetivo. MIC de NAB7061 para E . coli IH3080 y K. pneumoniae ATCC13883 fue > 16 pg/ml, para E . coli ATCC25922 16 g/ml, y para E. cloacae ATCC23355 8 pg/ml . Los resultados se muestran en la Tabla 7. NAB7061 a una conce tración de 4 g/ml fue capaz de sensibilizar las cepas probadas a rifampina por un factor variando de 170 a 1500. El factor de sensibilización se define como la proporción de MIC de un antibiótico en la ausencia de NAB7061 a aquella en la presencia de 4 ug/ml de NAB7061. Los factores de sensibilización extremadamente altos se observan también para clarit romicina (63-380), mupirocina (24-512) , azitromicina (31-94) , eritromixina (21-48), y para algunas de las cepas para, ácido fusidico, quinupris tinada 1 fopr i s t ina , c 1 indami ciña , linezolid, y vancomicina. Todos estos agentes antibacteriales son notablemente hidrofóbicos o grandes (vancomicina) y se conocen por excluirse por OM intacto de bacterias Gram- negativas pero penetran OM dañado. La sensibilización no significati a (factor de sensibilización <2, probado al utilizar E . coli ATCC25922 ) s e encuentra para piperacilina, ce ft a z idima , cefotaxima, levo f 1 oxacina , c i p ro f 1 oxa c i na , meropenem, y tobramicina , todos los agentes que son hidrofilicos o relativamente hidrofilicos y contra los cuales OM intacto no es una barrera de permeabilidad efectiva . Tabla 7 Factores de sensibilización* para agentes antibacteriales seleccionados a concentración de NAB 7061 de 4 pg/ml E. coli E. COli pneum. cloacae ATCC IH 3080 ATCC ATCC 25922 13883 23355 Rifampina** 250 - 750 170 - 350 250 - 500 750 - 1500 Claritromicina*** 170 - 380 190 - 260 63 85 - 380 Mupirocina*** 64 - 170 64 - 85 24 - 32 250 - 512 Azitromicina*** 24 - 64 31 - 94 31 - 43 32 Eritromicina*** 32 - 48 32 - 42 24 - 48 21 - 43 Ácido fusidico > 43 > 43 > 4 > 8 Quinupristin- dalfopr . > 21 > 21 1 > 5 Clindamicina 6 12 43 32 Linezolid > 11 > 8 > 4 > 8 Vancomicina 5 2.5 1 32 Polimixina B 5 2 1 4 Trimetoprim 4 3 2 3 Moxifloxacina 2.5 4 1.4 4 *Factor de sensibilización es la proporción de MIC del antibiótico en la ausencia de NAB 7061 con aquella en la presencia de 4 \g/ml de NAB 7061 **Resultados de cinco determinaciones independientes ***Resultados de dos determinaciones independientes E emplo 8. Susceptibilidad de 33 cepas diferentes de bacterias Gram-negativas a rifampina y ciaritromicina en la presencia de NAB7061 (4 pg/ml) Las concentraciones inhibidoras mínimas (MIC) de rifampina y claritromicina para un conjunto representativo de diferentes cepas de bacterias Gram-nega t i vas clínicamente relevantes se determinan por el método de prueba E como en el Ejemplo 7 y al utilizar Mueller-Hinton agar con o sin NAB7061 (4 pg/ml ) . Esta concentración de NAB7061 no inhibió por sí misma el crecimiento de la bacteria objetivo. Las cepas originadas de ATCC (11 cepas), CCUG (11 cepas), y NCTC (La Colección Nacional de Cultivos de Tipo, Colindale, U.K.; 2 cepas) . Ocho cepas (las F-cepas) se compran de Mobidiag Ltd., Helsinki, Finlandia. La fuente de E . coli IH3080 se ha dado en el Ejemplo 2. El factor de sensibilización se define como en el Ejemplo 7. Los resultados se muestran en la Tabla 8. Para todas las cepas (17) pertenecientes al grupo consistiendo de E . coli, K. oxitoca , E. cloacae , y C. freundii, MIC de rifampina fue tan baja como <_ 0.125 g/ml en la presencia de NAB7061 (4 pg/ml) y el factor de sensibilización varió de 85 a 2000. Se obtienen resultados muy similares con el a r i t romi c i na . Para quince de diecisiete cepas pertenecientes al grupo consistiendo de E . coli, K. oxitoca , E. cloacae , y C. freundii, la MIC of clarit romicina fue tan baja como <_ 0.25 pg/ml en la presencia de NAB7061 (4 pg/ml) y para todas las 17 cepas el factor de sensibilización varió de 90 a 1000. Las cepas de K. pneumoniae permanecieron de alguna manera más resistentes a ambos antibióticos, y los factores de sensibilización variaron entre 10 y 500. Para las tres cepas de A. baumannii , los factores de sensibilización variaron entre 24 y 125, y los valores resultantes de MIC fueron muy bajos (para rifampina <_ 0.125 g/ml y para ciar it romicina <^ 0.5 g/ml) . Tabla 8 La habilidad de NAB 7061 para sensibilizar a las bacterias Gram-negat ivas a modelos de antibióticos (rifampina y c 1 a r i t romi c i na ) MIC (pg/ml) de MIC (pg/ml) de rifampina en la Factor de claritromicina en Factor de Cepa bacterial presencia de 4 sensibilización** la presencia de 4 sensibilización*** pg/ml de NAB 7061 a rifampina pg/ml de NAB 7061 a claritromicina E. coli ATCC25922**** 0.016 - 0.047 250-750 0.094 - 0.125 170-400 E. coli IH3080**** 0.023 - 0.047 170-350 0.047 - 0.064 190-260 E. coli CCUG41421 0.032 - 0.064 125 0.125 400 E. coli CCUG41422 0.094 - 0.125 170 - 256 0.25 100 E. coli CCUG41424 0.064 - 0.094 85 - 94 0.125 130 E. coli CCUG41425 0.016 - 0.023 200 - 260 0.047 340 E. coli CCUG41427 0.032 - 0.064 100 - 250 0.064 250 E. coli CCUG41429 0.032 125 - 250 0.064 250 E. coli CCUG41432 0.032 180 - 250 0.064 90 E. coli NCTC13351 0.032 - 0.047 340 - 500 0.032 750 E. coli NCTC13353 0.064 125 - 250 1 260 . pneuraoniae ATCC13883**** 0.064 - 0.125 250 - 500 0.19 60 K. pneumoniae CCUG45421 2 - 3 10 - 20 24 10 K. pneumoniae F145 0.19 - 0.25 170 0.25 170 K. pneumoniae F144 0.19 >170 0.75 64 K. pneumoniae F136 0.75 >43 2 24 . oxytoca ATCC131B2 0.032 - 0.047 680 - 750 0.25 260 . oxytoca CCUG51683 0.012 - 0.023 700 - 2000 0.19 250 E. cloacae ATCC23355**** 0.008 - 0.016 750-1500 0.25 - 0.75 90-400 E. cloacae CCUG52947 0.032 - 0.047 500 - 1000 0.38 350 E. cloacae F230 0.016 - 0.032 1500 0.047 1000 E. cloacae F232 0.023 1400 0.094 500 C. freundii ATCC8090 0.023 - 0.032 500 - 1000 0.125 250 Ac. baumannii ATCC19606 0.094 - 0.125 24 - 32 0.5 50 Ac. baumannii F263***** 0.032 - 0.19 21 - 125 0.38 40 Ac. baumannii F264 0.125 32 0.25 100 S. maltophilia ATCC17444 2 4 - 8 64 4 S. marcescens ATCC8100 16 <2 96 <2 P. mirabilis ATCC29906 1 - 6 <2 24 <2 P. vulgaris ATCC13315 1 - 1.5 <2 24 <2 P. aeruginosa ATCC27853 12 - 16 2 32 <2 P. aeruginosa CCUGS1971 >32 <2 64 <2 P. aeruginosa F58 >32 <2 256 <2 * Resultados de dos determinaciones inde endientes ** Factor de sensibilización es la proporción de MIC de rifampina en la ausencia de NAB 7061 con aquella en la presencia de 4 µ?/ml de NAB 7061 *** Factor de sensibilización es la proporción de MIC de claritromicina en la ausencia de NAB 7061 con aquella en la presencia de 4 µg/ml de NAB 7061 **** Resultados de determinaciones independientes cinco (rifampina) dos (claritromicina) ***** Resultados de tres determinaciones independientes (rifampina) .

E emplo 9. NAB7061 sensibiliza cepas resistentes a carbapenem de Acinetobacter a carbapenems Las concentraciones inhibidoras mínimas (MIC) de dos carbapenems, imipenem y meropenem, para tres cepas de A. baumannii se determinan por el método de prueba E como en el Ejemplo 7 y al utilizar agar Mué 11 e r- H i nt on con o sin NAB7061 (4 g/ml) . Esta concentración de NAB7061 no inhibe por sí misma el crecimiento de la bacteria objetivo. El factor de sensibilización se define como en el Ejemplo 7. Los resultados se muestran en la Tabla 9. NAB7061 sensibilizó ambas cepas resistentes a carbapenem (F263, F264) a ambos carbapenems por un factor >_4. Tabla 9 Actividad antibacterial de imipenem y meropenem contra cepas de Acinetobacter baumannii en la ausencia de NAB 7061 y en la presencia de NAB 7061 (4 µ?/p??) Cepa MIC (ug/ml) de imipenem MIC (pg/ml) de meropenem en en la concentración indicada la concentración indicada ( g/ml) de NAB 7061 (ug/ml) de NAB 7061 0 4 0 4 A. baumannii ATCC19606 0.38 0.38 1.5 0.75 A. baumannii F263 >32 8 >32 6 A. baumannii F264 24 6 32 4 Ejemplo 10. NAB7061 sensibiliza E. col! al complemen o en suero normal fresco La habilidad de NAB7061 para sensibilizar la cepa lisa, encapsulada de E. coli a la acción bactericida de suero de conejillo de Indias normal (GPS) se estudia por el método descrito por Vaara et al. (1984) . E . coli IH3080 (018, Kl) se desarrolla en caldo LB (LB broth Lennox, Difco, BD, Sparks, MD , U.S. A) a 37°C en un agitador giratorio hacia la fase de crecimiento logarítmica temprana, enjuaga con PBS (salina regulada de fosfato, 8.0 g de NaCl, 0.2 g de KC1, 1.44 g de Na2HP0 x 2H20 y 0.2 g de KH2P0 por litro) y se vuelve a suspender en PBS, a aprox . 109 células/ral) . GPS se utiliza como fuente complemento. Se almacena a -70°C antes de uso. Para inactivar el complemento, el suero se incuba a 56°C por 30 min .

El procedimiento experimental fue como sigue. 10% GPS en PBS se inocula con aprox. 500 CFU (unidades formadoras de colonia) de bacteria por mi y colocan en 0.2 mi de alícuotas en cavidades de placas de mi c ro conce nt ra c i ón . Las cavidades ya contienen cantidades crecientes de NAB7061 en 0.020 mi de 0.9% NaCl. La placa se incuba a 37°C por 2 h después de lo cual la cavidad se vacía sobre placas LB . Las placas se incuban durante la noche a 37 °C y se cuentan las colonias desarrolladas . Los resultados se muestran en la Tabla 10. NAB7061 por sí misma no reduce significativamente el conteo de CFU en la ausencia de GPS o en la presencia de 10% GPS inactivado por calor. Sin embargo, una concentración de NAB7061 tan baja como 2 µg/ml fue suficiente para reducir el conteo de CFU por un factor de aprox. 100 en la presencia de 10% GPS fresco. De acuerdo con lo anterior, NAB7061 actúa de manera sinergística con la maquinaria complemento bactericida en suero fresco, como lo hace PMBN, el agente bien conocido por tener esta propiedad.

Tabla 10 La actividad bactericida sinergistica de NAB7061 y 10% suero de conejillo de Indias (GPS) contra E. coli IH3080 (018:K1)* Concentración de NAB7061 ( g/ml) 0 1 2 4 ninguna (PBS) 100 97 97 79 10% GPS 270 230 2 0 10% GPS, activado por calor 500 500 500 250 *medida como % de super ivencia después del tratamiento por 2 horas a 37°C E emplo 11 Afinidad reducida de NAB7061 a la membrana del borde en cepillo (BBM) de la corteza renal La unión de los compuestos de acuerdo a esta invención a membrana del borde en cepillo (BBM) de la corteza renal puede medirse indirectamente al medir su habilidad para inhibir la unión de gentamicina radiomarcada a BBM. De acuerdo con lo anterior, los compuestos de acuerdo a esta invención que tienen menos afinidad a BBM que por ejemplo polimixina B inhiben la unión de gentamicina radiomarcada a menor grado que lo hace polimixina B. BBM se aisla de la corteza renal de ratas albinas macho al utilizar la técnica de precipitación Mg2 + /EGTA como se describe por Nagai et al. (2006) . La unión de gentamicina se mide, de acuerdo al método descrito por Nagai et al. (2006) al incubar las vesículas BBM (20µ1) en 10 mM HEPES (pH 7.5) con 100 m manitol en la presencia de 20 µ? [3H] gentamicina (American Radiolabeled Chemicals, Inc., St. Louis, O. U.S. A) con o sin el compuesto a probarse o un control positivo. Después de una incubación de 60 min a 4°C, se agregan 1 mi de regulador frío descrito arriba, y la mezcla se filtra a través de un filtro Millipore (0.45 µ??; HAWP) . El filtro se enjuaga con el regulador y la radioactividad restante en el filtro se mide al utilizar un contador de centelleo líquido. Los valores IC5o se determinan como en Nagai et al. (2006) utilizando la ecuación Hill. Los valores IC50 (µ?) para el compuesto NAB estudiado y los controles fueron los siguientes: 187.3 + 24.3 para NAB7061 (promedio de dos experimentos independientes, cada uno con tres determinaciones paralelas), 39.3 + 5.5 para polimixina B (promedio de dos experimentos independientes, cada uno con tres determinaciones paralelas) , y 90.2 + 9.7 para gentamicina sin marcar (tres determinaciones paralelas) . De acuerdo con lo anterior, la afinidad de NAB7061 a BBM es solamente aproximadamente la mitad de la afinidad de gentamicina a BBM y aproximadamente un quinto de la afinidad de polimixina B a BBM. E emplo 12 La actividad de NAB7061 en modelo de peritonitis E. coli experimental en ratones Una suspensión de E . coli IH3080 (Kl:018) en salina (0.9% NaCl) se prepara de un cultivo durante la noche en una placa agar sanguínea (Statens Serum Institut, Copenhagen, Dinamarca) . Todos los ratones (NMR1 hembra de Harían Scandinavia, Aller0d, Dinamarca; peso, 25-30 g) se inoculan intraperitonealmente con 0.5 mi de la suspensión conteniendo 0.96 x 106 CFU por mi en el cuadrante inferior lateral del abdomen. En lhr, el conteo de CFU se determina de los tres ratones y los ratones restantes (cuatro ratones por grupo) se tratan con una inyección subcutánea de 0.2 mi de solución de eritromicina en salina (correspondiente a 5 mg/kg peso corporal) o solución NAB7061 en salina (correspondiente a 5 mg/kg peso corporal), o tanto eritromicina como NAB7061 (correspondiente a 5 mg/kg peso corporal de ambos fármacos; dados en dos sitios separados) . El grupo de control recibió dos inyecciones de 0.2 mi de salina. 4.5 h después de la infección, todos los ratones se anestesiaron con C02 y se sacrificaron. Salina estéril (2 mi) se inyectó intraperitonealmente y el abdomen se masajeó gentilmente antes de que se abra en placas agar sanguíneas, las placas se incuban durante la noche, y las colonias se cuentan . 1 h después de la infección, el conteo CFU fue 0.74 (+ 0.7) x 106 por mi. 4.5 h después de la infección (correspondiente a 3.5 h después del tratamiento), los conteos de CFU (por mi) fueron 11.1 (+_ 6.2) x 106 (grupo control), 8.9 (+_ 6.4) x 106 (grupo eritromicina), 1.1 (+ 0.6) x 106 (grupo ??? 7061), y 2.1 (+ 1.2) x 106 (grupo NAB más eritromicina) . De acuerdo con lo anterior, en la ausencia de NAB 7061, el conteo bacterial aumentó por un factor de 15 (grupo salina) o por un factor de 12 (grupo eritromicina) , mientras en la presencia de NAB 7061, los factores correspondientes variaron de 1.5 a 3. Ejemplo 13 Estudios de toxicidad en NAB7061 La toxicidad en ratas jóvenes (pesando aprox. 150 g al inicio del estudio) se determina al administrar dosis (1, 2, 4, 8, 16, y 32 mg/kg por día) de NAB7061 asi como el compuesto de polimixina B control intravenosamente dos veces (2) al dia por dos semanas. Un grupo de diez (10) ratas se estudia para cada régimen de dosis. Las observaciones clínicas se hacen diariamente, el peso corporal se midió dos veces a la semana, y el consumo de alimentos dos veces a la semana. Al final de la semana 2, todos los animales se sacrifican. El compuesto de control, polimixina B influenció de manera negativa la ganancia de peso corporal tan bajo como una dosis de 1 mg/kg por día mientras la dosis más baja de NAB7061 que tuvo este efecto fue 8 mg/kg. Polimixina B causó mortalidad a 32 mg/kg por día (100% mortalidad), mientras todas las ratas que recibieron NAB7061 permanecieron vivas durante el estudio. Al final del estudio, el nitrógeno de urea sanguíneo (BUN) fue 15% más alto en el grupo que recibe polimixina 16 mg/kg por día que en el grupo polimixina de baja dosis o control (1 mg/kg por día) . En el grupo que recibió NAB7061 en la dosis de 16 mg/kg por día, no se encontró tal aumento, y en el grupo que recibió NAB7061 en la dosis de 32 mg/kg por día, el aumento fue 7%. La hi s topatologí a de los ríñones se realiza para cada animal y la histopatología de todos los tejidos se realiza en tres grupos de alta dosis recibiendo NAB7061. Ningún descubrimiento patológico relacionado con NAB7061 se encontró en la patología general e histopatología de cualquier órgano o en la histopatología de ríñones en cualquier animal que recibió NAB7061.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Derivado de polimixina de la fórmula general (I), (7)R7 — (8) 8 / \ (6)R6 (9)R9 \ / (5)R5 (10)R10 \ / (3) 3 (2)R2 (I) en donde R1 , R2 y R3 son opcionales; caracterizado en que Rl, R2 , R3, R5, R8 y R9 son residuos de aminoácido neutrales o catiónicos seleccionados de manera que el número total de cargas positivas a pH fisiológico es al menos dos pero no más de tres; con la condición de que R8 y R9 no se formilan cuando R ( FA ) -Rl -R2 -R3 constituye la cadena lateral de polimixina B nativa; y R4 no se enlaza directamente a residuo de octanoilo cuando R4-R10 constituye una estructura de anillo de polimixina B nativa; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 2. Derivado de acuerdo a la reivindicación 1, en donde dichas cargas positivas se seleccionan del grupo consistiendo de grupos amino no substituidos, libres y otros grupos catiónicos. 3. Derivado de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde R1-R10 se selecciona del grupo consistiendo de SEQ ID NO: 9-26. 4. Derivado de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde R(FA) se selecciona del grupo consistiendo de OA, DA y MHA. 5. Derivado de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde el número de dichas cargas positivas es tres. 6. Derivado de acuerdo a la reivindicación 5, en donde R1-R10 se selecciona del grupo consistiendo de SEQ ID NO: 9-20. 7. Derivado de acuerdo a la rei indicación 6, seleccionado del grupo consistiendo de OA-SEQ ID NO. 10, DA- SEQ ID NO. 10, OA-SEQ ID NO. 11, OA-SEQ ID NO. 12, DA- S EQ ID NO. 13, OA-SEQ ID NO. 13, MHA-SEQ ID NO. 13, MHA-SEQ ID NO. 14, OA-SEQ ID NO. 15, OA-SEQ ID NO. 16, OA-SEQ ID NO. 17, OA-SEQ ID NO. 18, OA-SEQ ID NO. 19, OA-SEQ ID NO. 20, y DA- S EQ ID NO . 9. 8. Producto de combinación comprendiendo dos o más de los derivados de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7. 9. Composición farmacéutica comprendiendo al menos un derivado de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, y al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable y/o excipiente. 10. Composición farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 9, comprendiendo además un agente antibacterial. 11. Método para tratar, aliviar o mejorar una infección en un sujeto causada por una bacteria Gram-negat i va , comprendiendo administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un derivado de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 o una combinación de acuerdo a la reivindicación 8. 12. Método de acuerdo a la reivindicación 11, en donde dicha bacteria se selecciona del grupo consistiendo de: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae , Klebsiella oxitoca , Enterobacter cloacae , Citrobacter freundii, Pseudomonas aeruginosa y Acinetobacter baumannii. 13. Método para sensibilizar a las bacterias Gram-negat i vas a un agente antibacterial, comprendiendo administrar, simultánea o secuencialmente en cualquier orden, una cantidad terapéuticamente efectiva de dicho agente antibacterial y un derivado de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 o una combinación de acuerdo a la reivindicación 8. 14. Método de acuerdo a la reivindicación 13, en donde dicho agente antibacterial .se selecciona del grupo consistiendo de clari t romicina , azitromicina , eritromicina y otros macrólidos, ketólidos, clindamicina y otras lincosaminas , es t reptograminas , rifampina, rifabutina, rifalazil y otras rifamicinas, ácido fusidico, mupirocina, oxazolidinonas , vancomicina, dalbavancina , telavancina, oritavancina y otros antibióticos de glicopéptido , fluoroquinolonas, bacitracina, derivados de tet raciclina , antibióticos del beta-lactam, novobiocina, pleuromut ilinas , inhibidor es de síntesis de folato, inhibidor es de deformilasa, e inhibidor es de bomba de eflujo bacterial. 15. Método de acuerdo a la reivindicación 14, en donde dicho agente anti-bacterial se selecciona del grupo consistiendo de: c 1 a r i t romi c i na , azit romicina , erit romicina , el indami ciña , la combinación de est reptogramina qu i nup r i s t i na - da 1 fop r i s t i na , rifampina, ácido fusídico, mupirocina, la linezolida de o xa z o 1 i di nona , vancomicina, la moxi f loxacina de f luoroquinolona , y el trimetoprim inhibidor de síntesis de folato. 16. Método de acuerdo a la reivindicación 13, en donde dicha bacteria se selecciona del grupo consistiendo de: Esche ichia coli, Klebsiella pneumoniae , Klebsiella oxitoca , Enterobacter cloacae , Citrobacter freundii, Ps eudomona s aeruginosa , y Acinetobacter baumannii. 17. Método para desarrollar nuevos antibióticos comprendiendo las etapas de a) proporcionar un compuesto de polimixina u octapeptina natural, o un derivado del mismo, teniendo un total de 4 a 6 cargas positivas; b) substituir de 1 a 4 residuos llevando una o más cargas positivas con un residuo no teniendo una carga positiva, o con un enlace covalente, generando asi un derivado de un compuesto de polimixina teniendo 2 o 3 cargas positivas; c) ensayar dicho compuesto derivado para actividad antibacterial contra bacterias Gram-negat ivas ; o la habilidad para sensibilizar a las bacterias Gram-negat i vas a un antibiótico; y d) seleccionar compuestos teniendo actividad antibacterial contra bacterias Gram- ne ga t iva s , o la habilidad para sensibilizar a las bacterias Gram- ne gat iva s a un agente antibacterial . 18. Método para reducir la toxicidad de polimixinas naturales, octapeptinas y sus derivados durante la aplicación de las mismas en el tratamiento de infecciones en un individuo, dicho método comprendiendo las etapas de: a) proporcionar un compuesto de polimixina u octapeptina natural, o un derivado del mismo, teniendo un total de 4 a 6 cargas positivas; b) substituir de 1 a 4 residuos llevando una o más cargas positivas con un residuo no teniendo una carga positiva, o con un enlace covalente, generando asi un derivado teniendo 2 o 3 cargas positivas; y c) administrar dicho derivado a dicho individuo. 19. Método de acuerdo a la reivindicación 18, en donde dicha toxicidad es nef rotoxicidad . 20. Método para mejorar las propiedades fa rma co c i né t i ca s , de polimixinas naturales, octapeptinas y sus derivados, dicho método comprendiendo las etapas de: a) proporcionar un compuesto de polimixina u octapeptina natural, o un derivado del mismo, teniendo un total de 4 a 6 cargas positivas; b) substituir de 1 a 4 residuos llevando una o más cargas positivas con un residuo no teniendo una carga positiva, o con un enlace covalente, generando asi un derivado teniendo 2 o 3 cargas positivas; en donde dichas propiedades farmacocinét icas mejoradas consisten de vida media en suero prolongada; o susceptibilidad inferior a la inactivación por tejido polianiónico y constituyentes pus, en comparación con el compuesto inicial. 21. Método para sensibilizar a las bacterias Gram-negat i vas clínicamente importantes a un complemento del mecanismo de defensa del huésped presente en el suero, en donde dichas bacterias se someten a la acción de un derivado de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 durante una infección clínica. 22. Método de acuerdo a la reivindicación 21, en donde dichas bacterias se seleccionan del grupo consistiendo de: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae , Klebsiella oxitoca , Enterobacter cloacae , Citrobacter freundii, Pseudomonas aeruginosa , y Acinetobacter baumannii. 23. Uso de un derivado de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en la elaboración de un medicamento para tratar infecciones causadas por bacterias Gram- negativas . 24. Uso de acuerdo a la reivindicación 23, en donde dichas bacterias se seleccionan del grupo consistiendo de: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae , Klebsiella ox i toca , Enterobacter cloacae , Citrobacter freundii, Pseudomona s aeruginosa , y Acinetobacter ba umanni i . 25. Uso de un derivado de acuerdo a cualquiera de las rei indicaciones 1 a 7 para la elaboración de un medicamento para sensibilizar a las bacterias Gram-nega t i vas contra agentes antibacteriales. 26. Uso de acuerdo a la reivindicación 25, en donde dichas bacterias se seleccionan del grupo consistiendo de: Escheríchia coli, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxitoca , Enterobacter cloacae, Citrobacter freundii, Pseudomona s aeruginosa , y Acinetobacter ba umanni i . 27. Uso de acuerdo a la reivindicación 25, en donde dicho agente antibacte ial se selecciona del grupo consistiendo de c 1 a r i t romi c i na , a z i t romi c i na , eritromicina y otros macrólidos, ketólidos, clindamicina y otras 1 inco s ami na s , est reptograminas , rifampina, rifabutina, rifalazil y otras rifamicinas, ácido fusidico, mupirocina, o xa z o 1 i di nona s , vancomicina, dalbavancina , telavancina, oritavancina y otros antibióticos de gl i copépt ido , fluoroquinolonas, bacitracina, derivados de tet raciclina , antibióticos del beta-lactam, novobiocina, pleuromutilinas , inhibidor es de síntesis de folato, inhibidor es de de fo rmi 1 a s a , e inhibidor es de bomba de eflujo bacterial. 28. Uso de acuerdo a la reivindicación 27, en donde dicho agente antibacterial se selecciona del grupo consistiendo de: claritromicina, azitromicina, eritromicina, clindamicina, la combinación de es t reptogramina quinupr i s t ina-da 1 fopr i s t ina , rifampina, ácido fusídico, mupirocina, la linezolida de oxazolidinona, vancomicina, la moxi f loxacina de f luoroquinolona , y el trimetoprim inhibidor de síntesis de folato. 29. Uso de un derivado de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para la elaboración de un medicamento para sensibilizar a las bacterias Gram-negat ivas a un complemento del mecanismo de defensa del huésped presente en el suero. 30. Uso de acuerdo a la reivindicación 29, en donde dichas bacterias se seleccionan del grupo consistiendo de: Escherichia coli, Klebs iel la pneumoniae , Klebsiella oxitoca , Enterobacter cloacae , Citrobacter freundii, Pseudomona s aeruginosa , y Acinetobacter ba umann i i . 31. Un proceso para preparar un derivado de polimixina de la fórmula (I) como se define en la reivindicación 1 comprendiendo modificar un compuesto de polimixina u octapeptina natural o sintético o un derivado del mismo teniendo 4 a 6 residuos positivamente cargados al reemplazar 1 a 4 de dichos residuos por residuos neutrales, o por un enlace covalente, o convertir 1 a 4 de dichos residuos en residuos neutral es para obtener un derivado de polimixina de la fórmula (I) de acuerdo a la reivindicación 1, teniendo 2 o 3 residuos positivamente cargados. 32. Proceso de acuerdo a la reivindicación 31 comprendiendo llevar a cabo el proceso como un proceso sintético total. 33. Proceso de acuerdo a la reivindicación 31 comprendiendo llevar a cabo el proceso como un proceso semisintético . 34. Proceso de acuerdo a la rei indicación 33 comprendiendo las etapas de: a) someter un compuesto de polimixina u octapeptina natural o sintético o un derivado del mismo a segmentación para remover la cadena lateral de dicho compuesto de polimixina, y recuperar la parte cíclica de dicho compuesto, y b) acoplar a la parte cíclica obtenida en la etapa a) una cadena lateral sintéticamente preparada para obtener un derivado de polimixina de la fórmula (I) de acuerdo a la reivindicación 1. 35. Proceso de acuerdo a la reivindicación 34 comprendiendo llevar a cabo la segmentación en la etapa a) enz imát i cament e . 36. Proceso de acuerdo a la reivindicación 34 comprendiendo llevar a cabo la segmentación en la etapa a) químicamente. 37. Proceso de acuerdo a la reivindicación 34 comprendiendo llevar a cabo la segmentación en la etapa a) utilizando una combinación de ambos tratamientos, químico o enz imát ico. RESUMEN La presente invención se refiere a un derivado de polimixina en donde Rl, R2 y R3 son opcional es y Rl, R2 , R3, R5 , R8 y R9 son residuos de aminoácido neutrales o catiónicos seleccionados de manera que el número total de cargas positivas a pH fisiológico es al menos dos pero no más de tres; y a un producto de combinación comprendiendo al menos dos de tales derivados. La invención se refiere además a un método para tratar, aliviar o mejorar una infección en un sujeto, causada por una bacteria Gram-negat i va al administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un derivado de acuerdo a la presente invención a dicho sujeto; a un método para sensibilizar la bacterias Gram-negat i vas a un agente antibacterial al administrar, simultánea o secuencialmente en cualquier orden una cantidad terapéuticamente efectiva de dicho agente antib cterial y un derivado de acuerdo a la presente invención a dicho sujeto; a métodos para desarrollar nuevos antibióticos; para reducir la ne f ro t ox i c i dad , para mejorar las propiedad es farmacocinét icas de polimixinas y octapeptinas naturales; y para sensibilizar a las bacterias clínicamente importantes a un complemento del mecanismo de defensa del huésped presente en suero. Finalmente, la invención se refiere a un proceso para preparar tal es derivados de polimixina.