AGENTE PROFILACTICO O TERAPEUTICO PARA ENFERMEDAD VIRAL Campo de la Invención La presente invención se refiere a un agente profiláctico o terapéutico para una enfermedad viral, caracterizado por la combinación de 22p-metoxiolean-12-eno-3ß, 24 ( 4ß) -diol con un interferón. Antecedentes de la Invención En Japón, unos 1.5-2.0 millones estimados de personas están infectados persistentemente con virus de hepatitis C (HCV) , y se asume que la mayoría de los portadores muestran los síntomas de hepatitis crónica (ver referencia 1 no de patente) . Con respecto a la hepatitis B, hay muchos casos donde la infección no provoca hepatitis crónica, pero desarrolla directamente cáncer hepático. En contraste, de 80 a 90 % de las personas infectadas con HCV desarrollan enfermedad hepática crónica en base a observaciones de tejido hepático, y hay posibilidad que de 50 a 60 % de las personas infectadas con HCV desarrollen cirrosis o carcinoma hepatocelular mediante hepatitis crónica (ver referencia 2 no de patente) . La infección con HCV ha llegado a ser un problema clínico principal a nivel mundial. Los interferones (IFN) son una familia de proteínas altamente homologas y específicas de la especie que regulan la respuesta inmunitaria al inhibir la replicación viral y la proliferación celular, y se conoce que hay cuatro clases de
REF. : 198915
interferones en humanos (referencia 3 no de patente) . Se aplican interferones a varias enfermedades virales en base a los efectos antivirales de los mismos. En particular, para el tratamiento de hepatitis C crónica que se provoca por la infección de HCV, un virus que tiene un genoma de ARN de hebra positiva, se usan ampliamente IFN para eliminar el HCV. Sin embargo, se conoce que los IFN tienen bajos efectos terapéuticos para pacientes infectados con el genotipo Ib de HCV o que tienen una alta carga viral (1 Meq o superior) (ver referencias 4 y 5 no de patente) . Este genotipo y alta carga viral son factores que afectan los efectos terapéuticos de IFN, y estos pacientes dan cuenta de 70 % o más de aquéllos con hepatitis C crónica en Japón. Además, se observan frecuentemente efectos secundarios tal como fiebre, debilidad y trastornos siquiátricos . Como tratamientos convencionales para un paciente infectado con el genotipo Ib y que tiene una alta carga viral, se conoce una terapia de combinación de ribavirina con IFN, y una terapia de combinación de ribavirina con PEG-interferón a-2a (PEG-IFN a-2a) o PEG-interferón a-2b (PEG-IFN a-2b) . Estos efectos terapéuticos (velocidad completa de respuesta) no son suficientes. Aún la terapia de combinación más efectiva de ribavirina con PEG-IFN en la actualidad muestra una velocidad de respuesta completa de, a lo mucho, aproximadamente 50 %. Adicionalmente, en comparación a un tratamiento con IFN solo,
se observan frecuentemente efectos secundarios tal como reducciones de hemoglobina, eritrocitos, y leucocitos en la terapia con IFN/ribavirina . Cuando se usa PEG-IFN a-2a, los síntomas tipo influenza son más moderados que aquéllos provocados por IFN, pero se observan más frecuentemente reacciones cutáneas y reducciones de linfocitos, plaquetas, y eritrocitos. En la terapia de combinación de ribavirina con PEG-IFN a-2b, se presentan frecuentemente trastornos en el sitio de inyección, se desacelera ligeramente la recuperación de los valores de prueba de laboratorio para efectos adversos en hematología, y en pacientes con edad avanzada, tienden a llegar a ser altas las frecuencias de los valores de prueba de laboratorio altamente anormales y la reducción de dosis. Bajo estas circunstancias, se desea el desarrollo de tratamientos efectivos para un caso donde no se obtienen efectos suficientes para el tratamiento con IFN, un caso donde no se espera la efectividad por la administración de IFN debido al genotipo Ib o una alta carga viral, un caso de un paciente con edad avanzada, un caso donde la infección se desarrolla a cirrosis, y similares. El 22p-metoxiolean-12-eno-3p, 24 (4ß) -diol es un compuesto que tiene la siguiente estructura, y se conoce que tiene un efecto inhibidor en el trastorno de hepatocitos (ver
referencias 1 y 2 de patente) .
Adicionalmente, se reportó que 22p-metoxiolean-12-e??-3ß, 24 ( 4ß) -diol tiene un efecto anti-HCV (ver referencia 6 no de patente) , y este compuesto se espera que se desarrolle como un agente terapéutico para enfermedades hepáticas virales. Sin embargo, no se han estudiado los efectos obtenidos al combinar ese compuesto con otros fármacos. Referencia 1 de patente.- Publicación Internacional WO 97/03088. Referencia 2 de patente.- Patente Japonesa número
3279574. Referencia 1 no de patente.- The Japan Society of Hepatology, ed., "Mansei kanen no chiryo gaido (Guidelines of treatment for chronic hepatitis)", BUNKODO Co., Ltd., 2006, p. 21. Referencia 2 no de patente.- Shiro UNO, "The guideline of treatment for hepatitis C", Nippon Rinsho, 2004,
vol. 62, suppl. 7, p. 342-346. Referencia 3 no de patente.- Annual Review of Biochemistry, EUA, 1987, vol. 56, p. 727-777. Referencia 4 no de patente.- Shiro UNO, "Akiraka ni natta interferon no kouka to genkai (Revealed effects and limit of interferon)", Naika, 1999, vol. 84, no. 2, p. 285-291. Referencia 5 no de patente.- Lancet, Reino Unido, 1998, vol. 352, no. 9138 p. 1426-1432. Referencia 6 no de patente.- Hepatology EUA, 2005, vol. 42, p. 248A Breve Descripción de la Invención Para solucionar los problemas anteriores, los presentes inventores han llevado a cabo estudios intensivos de agentes efectivos para prevenir o tratar enfermedades virales, particularmente enfermedades infecciosas debidas a un virus que tiehe un genoma de ARN de hebra positiva, y como resultado, encontraron que una combinación de 22p-metoxiolean-12-???-3ß, 24 ( ß) -diol con interferon mejoró un efecto inhibidor en la replicación de HCV, y puede ser un fármaco útil para prevenir o tratar las enfermedades virales, y para presentar la presente invención. La presente invención se refiere a (1) un agente profiláctico o terapéutico para una enfermedad viral, caracterizado por combinar 22p-metoxiolean-
12-ß??-3ß, 24 (4ß) -diol con un interferón como ingredientes activos ; ' (2) el agente profiláctico o terapéutico de (1), en donde la enfermedad viral se provoca por un virus de ARN; (3) el agente profiláctico o terapéutico de (2), en donde el virus de ARN tiene un genoma de ARN de hebra positiva ; (4) el agente profiláctico o terapéutico de (3), en donde el virus de ARN es virus de hepatitis C; (5) el agente profiláctico o terapéutico de (1), en donde la enfermedad viral es hepatitis C, o cirrosis o carcinoma hepatocelular provocado por hepatitis C. (6) un método para prevenir o tratar una enfermedad viral, que comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo 22p-metoxiolean-12-eno-3P, 24 ( 4ß ) -diol e interferón en una cantidad efectiva para lo mismo; (7) el método de (6), en donde la enfermedad viral se provoca por un virus de ARN; (8) el método de (7), en donde el, virus de ARN tiene un genoma de ARN de hebra positiva; (9) el método de (8), en donde el virus de ARN es virus de hepatitis C; (10) el método de (6), en donde la enfermedad viral es hepatitis C, o cirrosis o carcinoma hepatocelular provocado por hepatitis C;
(11) un uso de 22p-metoxiolean-12-eno-3p, 24 ( ß) -diol e interferón en la elaboración de un agente profiláctico o terapéutico para una enfermedad viral; (12) el uso de (11) , en donde la enfermedad viral se provoca por un virus de ARN; (13) el uso de (12) , en donde el virus de ARN tiene un genoma de ARN de hebra positiva; (14) el uso de (13) , en donde el virus de ARN es virus de hepatitis C; y (15) el uso de (11) , en donde la enfermedad viral es hepatitis C, o cirrosis o carcinoma hepatocelular provocado por hepatitis C. El agente profiláctico o terapéutico de la presente invención exhibe altos efectos profilácticos o terapéuticos en enfermedades virales, preferentemente enfermedades virales provocadas por un virus de ARN, de manera más preferente enfermedades virales provocadas por un virus que tiene un genoma de ARN de hebra positiva, de manera más preferente hepatitis C provocada por el virus de hepatitis C, o cirrosis o carcinoma hepatocelular provocado por hepatitis C, al administrar 22p-metoxiolean-12-eno-3p, 24 ( 4ß) -diol e interferón en combinación de los mismos. Breve Descripción de las Figuras La Figura 1 es una gráfica que muestra efectos inhibidores de 22p-metoxiolean-12-eno-3p, 24 ( 4ß) -diol solo, IFN
solo, y una combinación de 22p-metoxiolean-12-eno- 3p , 24 ( 4ß) -diol con IFN, en la replicación de HCV en el día 1 después de la infección de Ad-T7pol. La Figura 2 es una gráfica que muestra los efectos inhibidores de 22p-metoxiolean-12-eno- 3p , 24 ( ß) -diol solo, IFN solo, y una combinación de 22p-metoxiolean-12-eno- 3p , 24 ( 4ß) -diol con IFN, en la replicación de HCV en el día 2 después de la infección de Ad-T7pol. La Figura 3 es una gráfica que muestra efectos inhibidores de
24 ( 4ß) -diol solo, IFN solo, y una combinación de 22ß-p???????1?3?-12-???-3ß , 24 (4ß) -diol con IFN, en la replicación de HCV en el día 3 después de la infección de Ad-T7pol. Descripción detallada de la invención El término "enfermedades virales" significa enfermedades provocadas por un virus. Los virus que provocan las enfermedades incluyen virus de ADN y virus de ARN . Los virus de ADN se pueden ejemplificar por virus de hepatitis B, virus de viruela, virus de herpes, adenovirus, y parvovirus. Los virus de ARN se pueden ejemplificar por reovirus, togavirus, coronavirus, rabdovirus, paramixovirus , ortomixovirus , buniavirus, arenavirus, retrovirus, picornavirus , y calicivirus. Como los virus en el agente profiláctico o terapéutico de la presente invención, son preferibles los
virus de ARN, los virus de ARN que tienen un genoma de ARN de hebra positiva son más preferibles, y es más preferible el virus de hepatitis C. Los virus de ARN que tienen un genoma de ARN de hebra positiva se pueden ejemplificar por poliovirus, coxsackievirus , ecovirus, enterovirus, rinovirus, virus de hepatitis A, virus de hepatitis E, virus de rubéola, virus de encefalitis equina del Este, virus de encefalitis equina del Oeste, virus de fiebre amarilla, virus de fiebre de dengue, virus de encefalitis de San Luis, virus de Hepatitis C, virus de hepatitis G, coronavirus, virus del Oeste del Nilo, y virus de estomatitis vesicular. Los virus de ARN que tienen un genoma de ARN de hebra positiva se replican de una manera común. Es decir, las células se infectan con un virus, y el ARN viral entra a las células. El ARN viral completo se traduce directamente a proteínas virales, tal como ARN-polimerasa dependiente de ARN necesaria para replicar el ARN viral. Estas proteínas traducidas replican el ARN viral al usar el ARN viral completo como una plantilla. El ARN viral replicado se incorpora en proteínas auto-productoras, y los virus resultantes se liberan al exterior de las células (ver JP 2005-35913 A) . Un mecanismo de acción anti-viral de interferón se propone en, por ejemplo, JP 2005-35913 A, como sigue: el interferón se une a un receptor en la superficie de una célula, y entonces, se induce en la célula una proteína que
tiene efectos antivirales. Por ejemplo, se genera oligo-2'-5'-adenilato por la acción de 2 ' -5 ' -adenilato-sintetasa inducida por interferón. Se considera que oligo-2'-5'-adenilato activa la ARNasa dependiente de ARN, la ARNasa dependiente de ARN activada degrada el ARN viral, y como resultado, el interferón exhibe efectos anti-virales . De acuerdo al mecanismo anterior de acción, se considera que el agente profiláctico o terapéutico de la presente invención es efectivo para virus de ARN que tienen un genoma de ARN de hebra positiva. En las enfermedades virales, los ejemplos de enfermedades provocadas por virus de hepatitis (tal como virus de hepatitis B (HBV) y virus de hepatitis C (HCV) ) incluye trastornos hepáticos y similares de hepatitis viral aguda o crónica (tal como hepatitis B y hepatitis C) , preferentemente hepatitis C, o cirrosis o carcinoma hepatocelular provocado por hepatitis C. La hepatitis B se define como hepatitis provocada por infección de HBV, y la Hepatitis C se define como hepatitis provocada por infección de HCV. La hepatitis crónica se define como una condición clínica donde persiste la inflamación en el hígado, o parece que persiste, durante 6 meses o más. Los trastornos hepáticos se definen como enfermedades inflamatorias en el hígado, y se pueden usar como un concepto que incluye hígado graso, cirrosis, y carcinoma hepatocelular de acuerdo al progreso de los síntomas.
22p-metoxiolean- 12-eno- 3p , 24 ( 4 ß ) -diol, que se puede usar como uno de los ingredientes activos para el agente profiláctico o terapéutico de la presente invención, es un compuesto conocido, y se puede obtener por ejemplo para el método descrito en el Ejemplo 22 (Compuesto 27 ) de la WO 97 / 0308 8 . En general, 22 p-metoxiolean- 12-eno-3P, 24 ( p ) -diol se puede administrar de manera oral como una formulación farmacéutica convencional, tal como cápsulas, microcápsulas, tabletas, gránulos, gránulos finos, polvos, y similares. Adicionalmente, se puede administrar de manera parenteral (por ejemplo, inyección intravenosa, inyección intramuscular, administración subcutánea, administración intraperitoneal, administración rectal, administración percutánea) como una formulación farmacéutica convencional, tal como inyecciones (intravenosas, intramusculares, y similares) y similares. Estas formulaciones se pueden preparar por un método convencional usando un excipiente, un agente de relleno, un aglutinante, un agente humectante, un agente desintegrante, un agente tensoactivo, un lubricante, un agente dispersante, un amortiguador, un conservador, un solubilizador , un antiséptico, un sabor, un agente de ablandamiento, un estabilizador, y similares. Los ejemplos de los aditivos anteriores que son no tóxicos y adecuados para las preparaciones incluyen lactosa, fructosa, glucosa, almidón,
gelatina, carbonato de magnesio, silicato de magnesio sintético, talco, estearato de magnesio, metilcelulosa, carboximetilcelulosa o una sal de la misma, goma arábica, polietilenglicol , jarabe, vaselina, glicerina, etanol, propilenglicol , ácido cítrico, cloruro de sodio, sulfito de sodio, fosfato de sodio, y similares. En el agente profiláctico o terapéutico de la presente invención, la forma, la ruta de administración, la dosis, el periodo de administración, y similares de 22ß-metoxiolean-12-eno-3P, 2 (4ß) -diol se puede seleccionar de manera, apropiada de acuerdo con, por ejemplo, el peso, la edad, los síntomas, y similares de un paciente. Adicionalmente , éstos no se limitan de manera particular, en tanto que se mejore el efecto antiviral de 22p-metoxiolean-12-???-3ß, 24 ( ß) -diol cuando se combina con interferón. Por ejemplo, una dosis diaria de 1 a 1000 mg se administra de manera oral o parenteral como una dosis individual o dosis plurales divididas. De manera preferente, una dosis diaria de 25 a 800 mg se divide en dos dosis, que se administran de manera oral o parenteral. No se limita un interferón (IFN), que se puede usar como el otro ingrediente activo para el agente profiláctico o terapéutico de la presente invención. Los IFN comercialmente disponibles o . IFN bajo desarrollo clínico incluyen, por ejemplo, IFÑa naturales (Sumiferon: Dainippon Sumitomo Pharma
Co., Ltd.), IFNa-2a, IFNa-2b (Intron A: Schering-Ploug) , polietilenglicol (PEG)-IFNa natural, PEG-IFNa-2a (Pegasys: Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.), PEG-IFNa-2b (PEG-Intron A) , IFNp natural (IFNp Mochida: Mochida Pharmaceutical Co., Ltd., y Feron: Toray Industries, Inc.), PEG-IFNp natural, IFNy natural, IFN de consenso (Advaferon: Astellas Pharma Inc.), PEG-IFN de consenso, combinaciones de los mismos, y similares. En el agente profiláctico o terapéutico de la presente invención, la dosis, duración, programa, ruta, y similar para la administración de IFN no se limitan de manera particular, en tanto que sea efectivo en la prevención o tratamiento de las enfermedades virales. Por ejemplo, con respecto a hepatitis C, una dosis diaria de 100,000 a 10,000,000 I.U., se administra de manera subcutánea, de manera intramuscular o de manera intravenosa como una dosis individual o dosis plurales divididas de forma continua o intermitente (tal como tres veces por semana) durante 2 a 48 semanas, en general, pero esta administración se puede modificar de manera apropiada de acuerdo con el tipo o cantidad de un virus, el peso o edad de un paciente, y similares. De manera preferente, una dosis diaria de
6,000,000 a 10,000,000 I.U., se administra de manera continua durante 2 a 8 semanas seguido por administración intermitente durante 22 a 46 semanas, pero este programa se puede modificar de manera apropiada de acuerdo con el tipo o forma de IFN que
se va a usar. La relación de combinación (relación de uso o relación de composición) de 22p-metoxiolean-12-eno-3P, 24 ( 4p) -diol e interferón no se limita de manera particular, en tanto que sea efectiva en la prevención o tratamiento de las enfermedades virales. Por ejemplo, con respecto a hepatitis C, la relación de combinación se puede seleccionar de manera apropiada de 1 mg: 100, 000 I.U., a 1000 mg: 10, 000,000 I.U., de manera preferente 25 mg: 1,000,000 I.U., a 800 mg: 10,000,000 I.U., como una dosis diaria. En el agente profiláctico o terapéutico de la presente invención, 22p-metoxiolean-12-eno-3p, 24 (4ß) -diol e interferón se administran en combinación. El término
"administración en combinación" incluye una modalidad en la cual se administran de manera simultánea o con un intervalo una preparación individual de 22p-metoxiolean-12-eno-3p, 24 ( 4P) -diol y otra preparación individual de interferón. En esta modalidad, el número de administraciones de una preparación puede ser el mismo como, o diferente de aquél de otra preparación. Las dosis e intervalos apropiados de 22p-metoxiolean-12-eno-3P, 24 ( 4P) -diol e interferón se pueden seleccionar de acuerdo con un ensayo clínico controlado. El agente profiláctico o terapéutico de la presente invención puede ser una forma de dosis que comprende los dos
ingredientes activos en una composición, o dos formas de dosis que comprenden de manera separada los dos ingredientes activos en diferentes composiciones. Ej emplos La presente invención ahora se ilustrará adicionalmente por el siguiente Ejemplo, pero no se limita a éste . Ejemplo 1 : Con irmación de efecto inhibidor de la combinación de 223-metoxiolean-12-eno-33 , 24 (4ß) -diol e interferón en la replicación de HCV En este ejemplo, se usó un modelo de replicación de HCV de genoma completa como se describe en la referencia 6 no de patente para evaluar el agente profiláctico o terapéutico de la presente invención. Se obtuvo un ADNc de un clon de longitud completa de virus de hepatitis C infeccioso (HCV) H77 [GenBank AF011751; Yanagi, M. , Purcell, R.H., Emerson, S.U., Bukh, J. Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 94(16), 8738-8743 (1997)] del genotipo la que fue refractario al tratamiento con interferón, y se adaptó para preparar un plásmido (pT7-f1HCV-Rz ) que contiene el ADNc con un promotor T7 y un gen de ribozima de virus de hepatitis delta en los términos 5' y 3' del mismo, respectivamente. Células HepG2 (número de recurso: JCRB1054) inoculadas en placas de 6 concavidades se transíectaron con el plásmido pT7-flHCV-Rz (3 µg/concavidad) . Después de 24 horas de la
transíección, las células HepG2 se infectaron con un adenovirus recombinante que expresa T7-polimerasa (Ad-T7pol) (10 PFU/célula) para expresar el gen de HCV en las células hospedadoras . En este modelo de replicación, el ARN completamente homólogo al gen de HCV (hebra positiva) se transcribe en las células. Esta hebra positiva de HCV se traduce a una proteina de NS5B que tiene una actividad de ARN-polimerasa dependiente de ARN. Como resultado, se transcribe una hebra negativa de HCV, y se observa la replicación intracelular de HCV. Después de 3 horas de la infección con Ad-T7pol, se adicionaron 22p-metoxiolean-12-eno-3p, 24 ( 4ß) -diol y/o IFN-a 2b (Intron A: Schering-Plough) a las células, solos o en combinación, para examinar los efectos inhibidores de los mismos en la replicación de HCV. Se adicionaron 22ß-metoxiolean-12-eno-3p, 24 ( ß) -diol e IFN-a 2b a cada medio de cultivo (2 mL) a concentraciones finales de 0.1 µ????/? y 100 IU/mL, respectivamente. Los medios de cultivo se intercambiaron después de 1 dia desde la infección con Ad-T7pol, para nuevos líquidos de cultivo que contienen los compuestos de prueba anteriores a las mismas concentraciones. Como un control, se adicionó sulfóxido de dimetilo (DMSO) , que se . usó como un solvente para 22p-metoxiolean-12-eno-3P, 24 ( 4ß) -diol, solo al medio de cultivo a una concentración final de 0.1 %. Este experimento se llevó a cabo bajo condiciones
donde no se observó la citotoxicidad de cada compuesto de prueba . Se recolectaron células en el día 1, día 2, y día 3 después de la infección con Ad-T7pol, y los ARN se extrajeron de las células. La expresión del ARN de HCV se cuantificó al realizar trascripción inversa usando ADN-polimerasa de rTth seguido por PCR de tiempo real (Ciclador Ligero: Roche Diagnostics) . La expresión del ARNm de gliceraldehído-3-fosfato-deshidrogenasa (GAPDH) , que fue un gen de dirección de la célula hospedadora, se cuantificó al realizar la trascripción inversa usando transcriptasa inversa de MuLV seguido por PCR de tiempo real. Como cebadores para la PCR de tiempo real, Cebador homosentido: 5'-GCA GAA AGC GTC TAG CCA TGG CGT-3' (SEQ ID NO: 1, 68-91 nt de 5'UTR), y Cebador antisentido: 5'-CTC GCA AGC ACC CTA TCA GGC AGT-3 ' (SEQ ID NO: 2, 311-288 nt de 5'UTR) se usaron para ARN de HCV, y un kit comercialmente disponible (conjunto de cebadores GAPDH Humanos: Search LC) se usó para GAPDH. Los resultados se muestran en las Figuras 1 a 3. En las Figuras 1 a 3, la senda 1 es el resultado del control, la senda 2 es el resultado de 22p-metoxiolean-12-eno-3p, 24 (4ß) -diol (0.1 µp???/L) solo, la senda 3 es el resultado de IFN (100 IU/mL) solo, y la senda 4 es el
resultado de 22p-metoxiolean-12-eno-3P, 24 (4ß) -diol e IF en combinación. Como resultado, se confirmó que el efecto inhibidor en la replicación de HCV se mejoró de manera sinérgica cuando se combinó 22ß-metoxiolean-12-eno-3P, 24 ( 4ß) -diol con IFN, significativamente en comparación a la administración individual de cada compuesto. iAplicabiliriari Industrial De acuerdo a la presente invención, se puede proporcionar un agente profiláctico o terapéutico para una enfermedad viral (de manera preferente un agente efectivo para infección con un virus que tiene un genoma de ARN de hebra positiva, de manera más preferente un agente efectivo para hepatitis C provocada por virus de hepatitis C, o cirrosis o carcinoma hepatocelular provocado por hepatitis C) , caracterizado por combinar 22p-metoxiolean-12-eno-3p, 24 (4ß) -diol con un interferón. Aunque la presente invención se ha descrito con referencia a modalidades especificas, son posibles varios cambios y modificaciones obvias para aquellos expertos en la técnica sin apartarse del alcance de las reivindicaciones anexas. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.