MX2008012941A - Un procedimiento novedoso para preparar agentes antibacterianos de oxazolidinona. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a un nuevo procedimiento para preparar el agente antibacteriano de oxazolidinona linezolid, que comprende la reacción de un (S)-1-cloro-3-(bencilidenilamino)propa n-2-ol con un carbamato de morfolinilfluorofenilo, proporcionando un intermedio imina protegido que, tras hidrólisis y acilación, proporciona linezolid con alto rendimiento.

Description

UN PROCEDIMIENTO NOVEDOSO PARA PREPARAR AGENTES ANTIBACTERIANOS DE OXAZOLIDINONA CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere a un procedimiento novedoso para preparar un agente antibacteriano de oxazolidinona. Particularmente, la presente invención se refiere a un nuevo procedimiento para preparar linezolid.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION La resistencia antibacteriana es un problema clínico y de salud pública mundial que ha surgido con rapidez alarmante en los últimos años e indudablemente aumentará en el futuro próximo. La resistencia es un problema en la sociedad así como en las instituciones de atención sanitaria, donde la transmisión de bacterias se amplifica en gran medida. Debido a que la multirresistencia es un problema creciente, los médicos se enfrentan ahora a infecciones para las que no hay una terapia eficaz. Como resultado, los agentes antibacterianos estructuralmente novedosos con un nuevo modo de acción se han vuelto cada vez más importantes en el tratamiento de infecciones bacterianas. Entre los agentes antibacterianos más nuevos, el linezolid es una clase sintética reciente de antimicrobianos activos frente a una serie de microorganismos patogénicos. El linezolid [(S)-A/-[[3-[3-fluoro-4-(4-morfolinil)fenil]-2-oxo-5-oxazolidinil]metil]acetamida] se da a conocer en la patente de EE.UU. n° 5,688,792. Se comercializa en los Estados Unidos por Pfizer Inc. en forma de inyección, comprimidos y suspensiones orales bajo el nombre ZYVOX®. Se describen procedimientos para la preparación de linezolid en la patente de EE.UU. n° 5,688,792, la patente de EE.UU. n° 5,837,870, la publicación PCT WO 99/24393, la publicación PCT WO 2006/004922, J. Med. Chem. 39(3), 673-679, 1996 y Tetrahedron Lett.. 40 (26), 4855, 1999. Se ha descubierto y desarrollado un procedimiento novedoso para preparar linezolid. El procedimiento tiene el potencial de reducir significativamente el coste de la producción comercial de linezolid. Es un procedimiento en tres etapas altamente convergente con un tiempo de ciclo mucho más corto. Es respetuoso con el medio ambiente porque reduce los grandes volúmenes de disolvente utilizados en los procedimientos conocidos actualmente. También se han descubierto intermedios clave cristalizados rápidamente para el procedimiento de la presente invención.

Descripción de la información Los documentos US 4,150,029, 4,250,318, 4,476,136, 4,340,606 y 4,461 ,773 dan a conocer la síntesis de 5-hidroximetiloxazolidinonas a partir de aminas.

J. Med. Chem., 32, 1673 (1989), Tetrahedron 45, 1323, (1989) y la patente de EE.UU. 4,948,801 dan a conocer un procedimiento de producción de oxazolidinonas. Las publicaciones PCT WO 93/09103, WO 93/09103, WO 95/07271 y WO 93/23384; las publicaciones PCT PCT/US95/ 2751 y PCT/US95/10992 dan a conocer la reacción de un carbamato con n-butil-litio, diisopropilamiduro de litio o hexametildisilazida de litio. La publicación internacional WO 95/07271 da a conocer la amoniolisis de oxazolidinonas sustituidas con 5f?-metilsulfoniloximetilo. La patente de EE.UU. 4,476,136 da a conocer un procedimiento de transformación de oxazolidinonas sustituidas con 5-hidroximetilo en las correspondientes oxazolidinonas sustituidas con 5(S)-aminometilo. La patente de EE.UU. 5,332,754 da a conocer oxazolidinonas-CH2-NH-Ac racémicas que pueden sintetizarse en una etapa mediante condensación de un carbamato con glicidilacetamida racémica. La patente de EE.UU. 3,654,298 da a conocer la síntesis de oxazolidinonas sustituidas con 5-alcoximetil-3-arilo mediante la ciclación inducida por etóxido de sodio de clorocarbamatos.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención proporciona un procedimiento para preparar linezolid linezolid que comprende: a) hacer reaccionar un compuesto de estructura (1 ) HO CU . N , X (1 ) en la que X es clorofenilo, bromofenilo o 2,4-diclorofenilo; con un compuesto de estructura (2) (2) a una temperatura en el intervalo de temperatura ambiente a aproximadamente 65°C, en la que R es bencilo o alquilo Ci-8, proporcionando un compuesto de estructura (3): en la que X es clorofenilo, bromofenilo o 2,4-diclorofenilo; b) hidrolizar el compuesto de estructura (3) y adiar posteriormente, proporcionando linezolid. Otros aspectos de la presente invención son los compuestos de estructuras (1 ) y (3) como se muestran anteriormente, sus estructuras cristalinas y sus procedimientos de cristalización.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION A menos que se indique otra cosa, los siguientes términos utilizados en la descripción y reivindicaciones tienen los significados dados a continuación: El contenido de átomos de carbono de diversos restos que contienen hidrocarburo se indica mediante un prefijo que designa el número mínimo y máxima de átomos de carbono en el resto, concretamente, el prefijo C¡.¡ indica un resto del número entero "i" al número entero "j" de átomos de carbono, inclusive. Por tanto, por ejemplo, alquilo C1-8 designa alquilo de uno a ocho átomos de carbono, inclusive. El término alquilo designa tanto grupos lineales como ramificados, pero la referencia a un radical individual tal como "propilo" abarca sólo el radical de cadena lineal, designándose específicamente un isómero de cadena ramificada tal como "isopropilo". Específicamente, alquilo es alquilo C-|. 4. Más específicamente, alquilo es rere-butilo.

El término "temperatura ambiente" designa una temperatura en el intervalo de aproximadamente 20°C a 30°C.

ESQUEMA 1 Como se muestra en el esquema 1 (en el que X y R son como se definen anteriormente), la síntesis empieza con el acoplamiento del resto ¡mina sustituido (1 ) (preferiblemente 1 a 3 eq, lo más preferiblemente 1 .5 a 2 eq) con un carbamato (2), proporcionando la correspondiente (S)-oxazolidinonimina (3). La reacción se lleva a cabo preferiblemente a una temperatura en el intervalo de temperatura ambiente a aproximadamente 65°C en presencia de una base con un pKa mayor de 1 2, preferiblemente una base alcóxido terciario, lo más preferiblemente ferc-butóxido de litio, y un disolvente aprótico no nucleofilo (preferiblemente DMF, DMAc, THF, acetonitrilo, éteres Ci-6 lineales, ramificados y cíclicos y/o disolventes clorados y/o mezclas de estos disolventes, lo más preferiblemente MTBE o cloruro de metileno). Lo más preferiblemente, la temperatura es de aproximadamente 30-60°C y el tiempo de reacción es de 2 a 24 horas. Preferiblemente, se cristaliza la (S)-oxazolidinonimina (2) después de un procesamiento extractivo acuoso y se aisla mediante filtración a partir de un disolvente orgánico débilmente polar tal como un alcohol (incluyendo alcoholes y polioles C1-6 ramificados y lineales) o éter (incluyendo MTBE, THF y otros éteres C1 -6 lineales, ramificados y cíclicos); lo más preferiblemente isopropanol. La hidrólisis del compuesto (3) con una solución ácida acuosa y la posterior acilación proporcionan linezolid bruto. El compuesto (3) se hidroliza mejor con una mezcla de agua y un ácido fuerte tal como ácido clorhídrico, y el subproducto benzaldehído sustituido se retira mediante extracción con un disolvente orgánico inmiscible con agua (preferiblemente tolueno, MTBE, cloruro de metileno y acetato de etilo), lo más preferiblemente acetato de etilo. La solución acuosa resultante de clorhidrato de amina (4) se acila preferiblemente con anhídrido acético, preferiblemente en presencia de agua y un disolvente orgánico inmiscible con agua (lo más preferiblemente cloruro de metileno). La conversión de clorhidrato de amina (4) en linezolid es bien conocida en la bibliografía (B ckner, S.J., et al., Med. Chem. 1996, 39 (3), 673-679, patentes de EE.UU. 5,837,870, 5,688,792).

ESQUEMA II Como se muestra en el esquema II (en el que X es como se define anteriormente), el material de partida clave (1 ) puede prepararse haciendo reaccionar (S)-epiclorhidhna con una mezcla del derivado de benzaldehído sustituido apropiadamente (preferiblemente 0.5 a 2 eq, lo más preferiblemente 1 eq) y amoniaco acuoso (preferiblemente 0.5 a 3 eq, lo más preferiblemente 1 .5 eq). La reacción se realiza mejor en disolventes tanto próticos como apróticos no nucleófilos y no electrófilos tales como alcoholes (incluyendo alcoholes y polioles Ci-6 ramificados y lineales), éteres (incluyendo MTBE, THF y otros éteres Cv6 lineales, ramificados y cíclicos), así como disolventes clorados tales como cloruro de metileno. El MTBE es un disolvente preferido. Se prefieren temperaturas que pueden estar en el intervalo de aproximadamente 15 a aproximadamente 60°C, preferiblemente entre 30 y 50°C lo más preferiblemente. Después de un aislamiento extractivo y concentración, se obtiene el resto ¡mina (1 ). Se cristaliza después a partir de una segunda fase líquida en presencia de disolventes hidrocarburo apróticos no polares tales como, pero sin limitación, alcanos, mezclas de alcanos (hexano, heptano, octano, isooctano y mezclas de alcanos comercialmente disponibles), opcionalmente en presencia de disolvente polares apróticos, preferiblemente disolventes éter tales como MTBE o disolventes aromáticos tales como tolueno o disolventes clorados tales como cloruro de metileno o mezclas de los mismos. Los disolventes preferidos son una mezcla de TBE y heptano o una mezcla de tolueno y heptano. El procedimiento de cristalización puede realizarse a una temperatura en el intervalo de temperatura ambiente (aproximadamente 18-25°C) a aproximadamente 55°C, preferiblemente en un intervalo de 30 a 50°C, más preferiblemente en un intervalo de 38 a 45°C. Esta cristalización proporciona sorprendentemente un alto rendimiento con una pureza enantiomérica significativamente mejorada después de aislamiento mediante filtración.

EJEMPLOS En la discusión anterior y los ejemplos siguientes, las siguientes abreviaturas tienen los siguientes significados. Si no se define una abreviatura, tiene su significado aceptado generalmente. ma = multiplete ancho BOC = terc-butoxicarbonilo da doblete ancho sa = singlete ancho CDI = 1 ,1 -O-carbodiimidazol d doblete dd doblete de dobletes de doblete de cuartetes dt doblete de tripletes DMF = dimetilformamida DMAP = dimetilaminopiridina DMSO = dimetilsulfóxido eq equivalentes 9 gramos h horas HPLC = cromatografía líquida a alta presión HATU = A/-[(dimetilamino)-1 ?- ,2,3-triazolo-[4,5-/b]piridin-1 ¦ ilmetilen]-/V-metilmetanaminio LG grupo saliente m multiplete M molar %M = porcentaje molar max = máximo meq = miliequivalente mg = miligramo mi mililitro mm = milímetro mmoles = milimol MTBE = metil-ferc-butiléter cuartete singlete triplete TBS = tributilsililo TFA = ácido trifluoroacético THF = tetrahidrofurano TLC = cromatografía en capa fina p-TLC = cromatografía preparativa en ca µ? = microlitro N normalidad MeOH = metanol DCM = diclorometano HCI = ácido clorhídrico ACN = acetonitrilo EM = espectrometría de masas TA = temperatura ambiente AcOEt = acetato de etilo EtO = etoxi Ac = acetato NMP = 1 -metil-2-pirrolidinona µ? = microlitro J constante de acoplamiento RMN = resonancia magnética nuclear MHz = megahercio Hz = hercio m/z = relación de masa a carga min = minutos Boc = ferc-butoxicarbonilo CBZ = benciloxicarbonilo DCC = 1 ,3-diciclohexilcarbodiimida PyBOP= hexafluorofosfato de benzotriazol-1 -iloxitrispirrolidino-fosfonio EJEMPLO 1 Preparación de (S)-1 -cloro-3-[(4-cloro-E-benciliden)amino1-propan-2-ol Procedimiento A Se carga un matraz de fondo redondo de tres bocas de 5 I equipado con agitador magnético, termopar, condensador de reflujo y manta calefactora con 4-clorobenzaldehído (351 g, 2.5 moles, 1 .0 eq). Se carga después MTBE (1 ,5 I) en el fondo redondo, proporcionando una disolución homogénea. Se añade amoniaco acuoso (28% en peso, 252.98 mi, 3.75 moles, 1 .5 eq) en una sola porción, dando como resultado un precipitado blanco que se volvió una suspensión clara al cabo de 15 minutos de agitación. Se carga después lentamente (S)-(+)-epiclorhidrina (>99% e.e., 196.0 mi, 2.5 moles, 1 .0 eq) en el recipiente. Después de 40 minutos, se calientan entonces lentamente los contenidos hasta 43°C. Se agita la reacción a 40°C durante 18 horas, en dicho momento permanecía un 8.4% del área de epiclorhidrina por CG. Tras enfriar a TA, se transfiere la mezcla de reacción a un embudo de decantación y se separan las fases. Se desecha la fase acuosa inferior. Se transfiere la fase orgánica a un matraz de fondo redondo de 3 I, se concentra a vacío hasta aproximadamente la mitad del volumen (800-900 mi), en dicho momento se añaden lentamente ¡sooctanos por un tubo de alimentación (-750 mi) hasta que se observa turbidez. Se siembra la mezcla bifásica con ~4 mg del compuesto del título. Se enfría la reacción con un baño de hielo durante 45 minutos con agitación. Se recoge el precipitado y se aclara con isooctano (500 mi). Se seca el sólido durante 18 horas a 50°C a vacio, proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido blanco cristalino. Ensayo de CG: 100%, 99.7% de e.e. mediante SFC quiral. CG (condiciones: columna: HP-1 de 30 m, 0.25 mm de DI, 0.25 pm de película y 103.4 kPa de presión de cabeza, 1 .0 µ? de tamaño de inyección; Tin¡= 70°C, declive de 20°C/min), RT (epiclorhidrina)= 2.4 min, RT (4-clorobenzaldehído)= 4.8 min y RT (compuesto del título)= 9.7 mín; condiciones de HPLC: columna Chiralpak AD-H 250 nm x 4.6 nm, elución con 70% de CO2/30% de MeOH a 3.0 ml/min, detección a 255 nm. RT (compuesto del título)= 3.9 min; RT (enantiómero del compuesto del título)= 2.8 min; H-RMN (400 MHz, CDCI3) d 3.69 (sa, 2H), 3.80 (m, 2H), 4.15 (s, 1 H), 7.41 (d, J= 8 Hz, 2H), 7.69 (d, J= 8 Hz, 2H), 8.33 (s, 1 H); 13C-RMN (CDCI3) d 47.05, 63.09, 70.82, 128.93, 129.39, 134.08, 137.07, 162.30; IR (sedimento de KBr) 1630 cm . Estructura de rayos X: sistema cristalino: monoclinico, grupo espacial: P2(1 ), dimensiones de la celda unitaria a= 8.791 (2) A, b= 4.6556(1 1 ) A, c= 14.372(3) A, a= 90°, ß= 106.819(4)°, ?= 90°, volumen= 563.0(2) A3, Z= 2; F(000)= 240, representación Ortep: Procedimiento B Se carga un matraz de fondo redondo de tres bocas de 5 I equipado con agitador mecánico, termopar, condensador de reflujo y manta calefactora con 4-clorobenzaldehído (375 g, 2.67 moles, 1.0 eq). Se añade metanol o THF y se calienta la mezcla a 10 a 23°C. Se añade amoniaco acuoso (28.4% en peso, 264 mi, 3.95 moles, 1.5 eq) en una sola porción, dando como resultado una solución bifásica que se forma después de agitar durante 15 minutos a 23 a 26°C. Se añade después (S)-(+)-epiclorhidrina (99.3% e.e., 207 mi, 2.64 moles, 1 .0 eq) en una porción. Se agita la mezcla de reacción a 23-24°C durante 18 h, después se calienta a 40 a 45°C y se agita durante 2.5 horas, en dicho momento permanece un 0.26% del área de S-epiclorhidrina por CG (condiciones de CG: 0.050 mi de mezcla de reacción en 1 mi de acetonitrilo, 1 µ? de inyección; columna 15M DB-1 , 0.25 mm de DI, 0.25 m de película y 103.4 kPa de presión de cabeza, 1 .0 µ? de tamaño de inyección; Tln¡= 38°C, declive de 10°C/min), RT (epiclorhidrina)= 1 .1 min, RT (4-clorobenzaldehído)= 6.9 min y RT (compuesto del título)= 16.0 min). Se concentra la mezcla a vacío hasta un volumen total de 1 ,250 mi. Se añade tolueno (250 mi) y se concentra la mezcla a vacío hasta un volumen total de 1 ,250 mi. Se añade tolueno (250 mi) y se concentra la mezcla a vacío hasta un volumen total de 1 ,145 mi. Se añade tolueno (355 mi) y se concentra la mezcla a vacío hasta un volumen total de 900 mi. Se añade tolueno (600 mi) y se concentra la mezcla a vacío hasta un volumen total de 1 ,120 mi. Manteniendo a 45 a 50°C, se añade heptano (1 ,500 mi). Se enfría la disolución bifásica resultante a 45°C y se siembra. Se enfría después la mezcla adicionalmente a 38°C durante 0.5 h con sembrado después de cada grado de enfriamiento. Se permite enfriar después lentamente la mezcla hasta 23°C durante 16 h. Se recogen después los cristales blancos mediante filtración a vacío y se lavan con heptano a temperatura ambiente (180 mi). Se seca el producto en corriente de nitrógeno, proporcionando el compuesto del título. HPLC: 95% del área [columna Kromasil 150 mm x 4.6 mm, 254 nm, caudal: 1 .5 ml/min; A= 1 ,000 mi de agua + 0.52 mi de ácido trifluoroacético + 1 .20 mi de trietilamina; B= acetonithlo; ¡socrático 47:53 A:B durante 5 min, después gradiente a 100% de B durante 5 min; RT [compuesto del título]= 2.1 min; RT (4-clorobenzaldehído)= 2.3 min]; 99.72% e.e. por SFC quiral. Condiciones de HPLC quiral: columna Chiralpak AD-H 250 nm x 4.6 nm, elución con 70% de CO2/30% de MeOH a 3.0 ml/min, detección a 255 nm, RT [compuesto del titulo]= 3.9 m'in; RT (enantiómero del compuesto del título): 2.8 min; 1H-RMN (400 MHz, CDCI3) d 3.69 (sa, 2H), 3.80 (m, 2H), 4.15 (s, 1 H), 7.41 (d, J= 8 Hz, 2H), 7.69 (d, J= 8 Hz, 2H), 8.33 (s, 1 H); 13C-RMN (CDCI3) d 47.05, 63.09, 70.82, 128.93, 129.39, 134.08, 137.07, 162.30.

Procedimiento C Se carga un matraz de fondo redondo de tres bocas de 5 I equipado con agitador mecánico, termopar, condensador de reflujo y manta calefactora con 4-clorobenzaldehído (375 g, 2.67 mmoles, 1 .0 eq). Se añade después MTBE (1 .50 I), proporcionando una disolución homogénea después de calentar a 9 a 24°C. Se añade amoniaco acuoso (28.4% en peso, 265 mi, 3.97 moles, 1.5 eq) en una sola porción, dando como resultado una disolución bifásica formada después de agitar durante 15 minutos a 23 a 26°C. Se añade después (S)-(+)-epiclorhidrina (99.3% e.e., 209 mi, 2.67 mmoles, 1 .0 eq) en una porción. Se agita la mezcla de reacción a 23-24°C durante 3 días. Se separan las fases y se concentra la fase superior a presión atmosférica a 2,000 a 1 ,000 mi de volumen total (punto de ebullición 58 a 67°C). Manteniendo a 45 a 50°C, se añade heptano (1 ,700 mi). Se enfría la disolución bifásica resultante a 45°C y se siembra. Se enfría después adicionalmente la mezcla a 38°C durante 0.5 h sembrando después de cada grado de enfriamiento. Se permite después enfriar lentamente la mezcla adicionalmente hasta 23°C durante 1 h. Se recogen después los cristales blancos mediante filtración a vacío y se lavan con heptano a temperatura ambiente (180 mi). Se seca el producto en corriente de nitrógeno, proporcionando el compuesto del título. HPLC 94% del área [columna Kromasil 150 nm x 4.6 nm, 254 nm, caudal 1 .5 ml/min; A= 1 ,000 mi de agua + 0.52 mi de ácido trifluoroacético + 1 .20 mi de trietilamina; B= acetonitrilo, ¡socrático 47:53 A:B durante 5 min, después gradiente a 100% de B durante 5 min; RT [compuesto del título]= 2.1 min; RT (4-clorobenzaldehído)= 2.3 min]; 99.92% e.e. por SFC quiral. Condiciones de HPLC quiral: columna Chiralpak AD-H 250 nm x 4.6 nm, elución con 70% de CO2/30% de MeOH a 3.0 ml/min, detección a 255 nm. RT [compuesto del título]= 3.9 min; R (enantiómero del compuesto del título)= 2.8 min; H-RMN (400 Hz, CDCI3) d 3.69 (sa, 2H), 3.80 (m, 2H), 4.15 (s, 1 H), 7.41 (d, J= 8 Hz, 2H), 7.69 (d, J= 8 Hz, 2H), 8.33 (s, 1 H); 3C-RMN (CDCI3) d 47.05, 63.09, 70.82, 128.93, 129.39, 134.08, 1 37.07, 162.30.

EJEMPLO 2 Preparación de (S)-5-{f(4-clorobenciliden)amino]metil}-3-(3-fluoro-4- morfolin-4-ilfenil)oxazolidin-2-ona Procedimiento A Se añade terc-butóxido de litio (12.1 1 g, 151 .4 mmoles, 2.5 eq) a éster bencílico del ácido (3-fluoro-4-morfolin-4-ilfenil)carbámico (20 g, 60.05 mmoles, 1 eq), seguido de cloruro de metileno (80 mi), y se agita la mezcla a temperatura ambiente. Se añade a la suspensión resultante (S)-1-cloro-3-[(4-clorobenciliden)amíno]propan-2-ol (21 .07 g, 90.81 mmoles, 1.5 eq) en cloruro de metileno (40 mi) en una porción. Se calienta la suspensión clara resultante a reflujo (41 °C) durante 5 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, se lava la fase orgánica con agua (1 x 100 mi, 1 x 50 mi) y se desechan después estos lavados acuosos. Se concentra la fase orgánica a vacío hasta aproximadamente la mitad del volumen, en dicho momento se añade alcohol isopropílico (200 mi) y se continúa la concentración hasta un volumen de menos de 200 mi. Se enfría la suspensión resultante a -10°C a -20°C, se aislan los sólidos medíante filtración y se lavan con alcohol isopropílico frío (menos de 100 mi), después se secan a 55°C a vacío, proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido cristalino. El ensayo de SFC aquiral indica una pureza de un 99.4% del área y el ensayo de SFC quiral identificó un 0. 1 % del enantiómero (R). Condiciones de HPLC: columna YMC 5 µ ODS-AM 150 nm x 4.6 nm, elución con CH3CN/agua + 0.1 % de TFA desde 20% de CH3CN hasta 80% de CH3CN en 8 min a 0.5 ml/min, detección a 254 nm. RT [éster bencílico del ácido (3-fluoro-4-morfolin-4-ilfenil)carbámico]= 8.5 min; RT (compuesto del titulo)= 7.9 min; condiciones de HPLC: columna Chiralcel OJ-H 250 nm x 4.6 nm, elución con 75% de CO2/25% de MeOH a 3.0 ml/min, detección a 255 nm. RT [compuesto del título]= 3.8 min; RT (enantiómero del compuesto del título)= 4.4 min; 1H-RMN (400 MHz, CDCI3) d 3.05 (d, J= 4 Hz, 4H), 3.87 (d, J= 4 Hz, 4H), 3.90 (m, 2H), 4.12 (m, 2H), 4.95 (m, 1 H), 6.92 (t, J= 8 Hz, 1 H), 7.12 (d, J= 2 Hz, 1 H), 7.36 (d, J= 8 Hz, 2H), 7.44 (dd, J= 16.4 Hz, 1 H), 7.63 (d, J= 8 Hz, 2H), 8.34 (s, H); 13C-RMN (CDCI3) d 48.23, 51 .00, 63.19, 66.94, 71 .69, 107.42 (d, J= 27 Hz), 1 13.88, 1 18.74, 128.93, 129.50, 133.36 (d, J= 1 1 Hz), 133.94, 136.30, 137.22, 154.46, 155.48 (d, J= 244 Hz), 163.46.

Procedimiento B Se añade terc-butóxido de litio (225 g, 2.81 moles, 2,5 eq) a éster bencílico del ácido (3-fluoro-4-morfolin-4-ilfenil)carbámico (372 g, 1 .13 moles, 1 eq), seguido de cloruro de metileno (2.2 I), y se agita la mezcla a temperatura ambiente. Se añade a la suspensión resultante (S)-1 -cloro-3-[(4-clorobenciliden)amino]propan-2-ol (400 g, 1 .72 moles, 1 .5 eq) en una porción.

Se calienta la suspensión clara resultante a reflujo (41°C) durante 10 h. Se añade la suspensión densa resultante a una disolución de ácido acético (85.2 g, 1 .2 eq) en metanol (800 mi) manteniendo el reflujo y se aclara con metanol (40 mi). Se concentra la suspensión densa resultante mediante destilación atmosférica hasta un volumen total de 3,200 mi. Se añade metanol (2,500 mi), concentrando mediante destilación atmosférica para mantener un volumen total de 3,200-3,800 mi. Se enfría la suspensión densa resultante a 3°C y se recoge el precipitado mediante filtración a vacio, se lava con metanol y se seca en corriente de nitrógeno, proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido cristalino. (Condiciones HPLC: columna Kromasil C 8, 3.5 pm, 250 mm x 4.6 mm, fase móvil A= 0.52 mi de TFA, 1.20 mi de trietilamina, 1000 mi de agua; fase móvil B= acetonitrilo, ¡socrático 53:47 A:B durante 5 min, después gradiente hasta 100% de B durante 5 min a 1 .5 ml/min, detección a 254 nm; RT [compuesto del título]= 6.66 min.

EJEMPLO 3 Preparación de (S)-A/-f3-(3-fluoro-4-morfolin-4-ilfen¡l)-2-oxooxazolidin-5- ilmetillacetamida (linezolid) Procedimiento A Se añaden acetato de etilo (935 mi) y agua (935 mi) a (S)-5-{[(4-clorobenciliden)amino]metil}-3-(3-fluoro-4-morfolin-4-ilfenil)oxazolidin-2-ona (129.5 g, 31 mmoles, 1 .0 eq). Se añade a la mezcla heterogénea HCI ac 12 M (51 .58 mi, 620 mmoles, 20 eq). Al cabo de unos minutos, el sólido se disolvió y la mezcla de reacción es bifásica. Después de agitar la emulsión a temperatura ambiente durante 2 horas, el ensayo de HPLC mostró que la reacción de hidrólisis era completa (condiciones de HPLC: columna YMC 5 µ ODS-AM 150 nm x 4.6 nm, elución con CH3CN/agua + 0.1 % de TFA desde 20% de CH3CN hasta 80% de CH3CN en 8 min a 0.5 ml/min, detección a 254 nm. El tiempo de retención de la (S)-A/-[3-(3-fluoro-4-morfolin-4-ilfenil)-2-oxooxazolidin-5-ilmetil]amina es de 3.2 min). Se separan las fases, se desecha la fase orgánica y se lava la fase acuosa con acetato de etilo (500 mi). Se añade CH2CI2 (900 mi) y se ajusta el pH a 6.7 con -25 mi de NaOH ac. al 50%. Con agitación constante, se añade Ac2O (58.49 mi, 620 mml, 2.0 eq) en una porción y el pH cae a 2. Se reajusta después el pH a 6 utilizando NaOH ac. al 50%. Se ajusta el pH a aproximadamente 7.1 con NaOH ac. al 50% y se separan las fases. Se extrae la fase acuosa con CH2CI2 (800 mi), se combinan los extractos orgánicos y se concentran hasta ~1 I de volumen. Se añade acetato de etilo (1 I) y se reduce el volumen a 1 .5 I a vacío. Se añade otro litro de acetato de etilo y se reduce el volumen de nuevo a 1 I a vacío. Se enfría la suspensión densa resultante a 0°C y se recoge el precipitado mediante filtración a vacio. Se lava el sólido resultante con acetato de etilo (250 mi). Se seca el producto bruto a vacío a 50°C durante 2 horas, proporcionando el compuesto del título en la forma cristalina I de linezolid.

Procedimiento B Siguiendo el procedimiento general del procedimiento A y haciendo variaciones no críticas, sino sustituyendo por (S)-5-{[(2,4-diclorobenciliden)amino]-metil}-3-(3-fluoro-4-morfolin-4-ilfen¡l)oxazolidin-2-ona (ejemplo 1 1 ) la (S)-5-{[(4-clorobenciliden)amino]metil}-3-(3-fluoro-4-morfolin-4-ilfenil)oxazolidin-2-ona, se obtiene el compuesto del título.

Procedimiento C Siguiendo el procedimiento general del procedimiento B y haciendo variaciones no críticas, sino sustituyendo por (S)-5-{[(4-bromobenciliden)-amino]metil}-3-(3-fluoro-4-morfolin-4-ilfeníl)oxazolidin-2-ona (ejemplo 9) la (S)-5-{[(4-clorobenciliden)amino]metil}-3-(3-fluoro-4-morfolin-4-ilfenil)oxazolidin-2-ona, se obtiene el compuesto del título.

EJEMPLO 4 Trituración (conversión de la forma cristalina I de linezolid en la forma cristalina II de linezolid) Se transfiere el producto del ejemplo (89.18 g) a un matraz de fondo redondo de 3 I equipado con agitador mecánico, termopar y manta calefactora. Se añade acetato de etilo (2.23 I, 15 ml/g) y se siembra con cristales de linezolid de forma II, y se calienta la suspensión densa a aproximadamente 50°C. Se observa una ligera exotermia de 3°C. Después de 30 minutos de calentamiento, se observa un cambio de forma a medida que el sólido cambia a agujas largas. Se continúa la agitación durante 2 horas a 50°C, en dicho momento se enfrían los contenidos a temperatura ambiente y se agitan durante 30 minutos adicionales. Se enfrían después los contenidos hasta 3°C durante 1 .5 horas, se filtra y se lava con acetato de etilo frío (300 mi totales). Se secan los sólidos resultantes a vacío a 50°C durante 18 horas, proporcionando linezolid (78.12 g) en forma II por XRD, 99.8% en peso, 99.9% e.e.. Condiciones de HPLC: columna YMC 5 µ ODS-AM, 150 nm x 4.6 nm, elución con CH3CN/agua + 0.1 % de TFA desde 20% de CH3CN hasta 80% de CH3CN en 8 min a 0.5 ml/min, detección a 254 nm. RT (linezolid)= 4.4 min; condiciones de HPLC: columna Chiralcel OJ-H 250 nm x 4.6 nm, elución con 90% de CO2/10% de MeOH a 3.0 ml/min, detección a 255 nm. RT [compuesto del título]= 3.6 min; RT (enantiómero del compuesto del título)= 4.1 min.

EJEMPLO 5 Preparación de (S)-1-cloro-3-f(4-bromobenciliden)-amino1propan-2-ol Se añade amoniaco (28% en peso, 10.9 mi, 167 mmoles, 1 .54 eq) a una disolución de 4-bromobenzaldehído (20.8 g, 1 12 mmoles) en MTBE (48 g) a temperatura ambiente. Se agita la mezcla bifásica durante 15 minutos y se añade (S)-(+)-epiclorhidrina (>97% e.e., 8.5 mi, 108 mmoles, 1 .0 eq). Se agita la mezcla durante 3 días a temperatura ambiente y se separan las fases. Se seca la fase orgánica sobre MgS04 (2 g), se clarifica con aclarado de MTBE (10 mi) y se añade Isopar C (100 mi) al filtrado. Se concentra la disolución a vacio hasta 75 mi de volumen total, se recoge el precipitado resultante mediante filtración a vacío a temperatura ambiente, y se lava con isooctanos. El secado en corriente de nitrógeno proporcionó el compuesto del titulo en forma de un sólido cristalino. 1H-RMN (400 MHz, CDCI3) d 3.69 (m, 2H), 3.77 (dd, J= 6, 13 Hz, 1 H), 3.84 (dd, J= 13, 5 Hz, 1 H), 4.1 5 (m, 1 H), 7.57 (d, J= 8 Hz, 2H), 7.62 (d, J= 8 Hz, 2H), 8.31 (s, 1 H); 13C-RMN (CDCI3) d 47.05, 63.1 1 , 70.80, 129.60, 131 .89, 134.49, 137.36, 162.41 .

EJEMPLO 6 Preparación de (S)-1-cloro-3-[(4-nitrobencil¡den)amino1-propan-2-ol Se añade (S)-(+)-epiclorh¡drina (>99% e.e., 1.39 mi, 17.8 mmoles, 1 .0 eq) a una mezcla de 4-nitrobenzaldehído (2.69 g, 17.8 mmoles), THF (10 mi) y amoniaco acuoso (28%, 1 .80 mi, 26.7 mmoles, 1 .5 eq) a 18°C. Se agita la mezcla a 40°C durante 18 h, después se concentra a vacío, proporcionando el compuesto del título en forma de un aceite. CG (columna: HP-1 de 30 m, 0.25 mm DI y 0.25 pm de película y 103.4 kPa de presión de cabeza, 1 .0 pl de tamaño de inyección; T¡ni= 70°C, declive de 20°C/min), TR (compuesto del título)= 1 1 .16 min, 64% de área.

EJEMPLO 7 Preparación de (S)-1-cloro-3-[(2,4-dimetoxibencil¡den)-amino1propan-2-ol Se añade amoniaco (28% en peso, 10.9 mi, 167 mmoles, 1 .54 eq) a una disolución de 2,4-dimetoxibenzaldehído (18.0 g, 1 12 mmoles) en MTBE (48 g) a temperatura ambiente. Se agita la mezcla bifásica durante 15 minutos y se añade (S)-(+)-epiclorhidrina (>97% e.e., 8.5 mi, 108 mmoles, 1 .0 eq). Se agita la mezcla durante 3 días a temperatura ambiente y se separan las fases. Se seca la fase orgánica sobre MgS04 (2 g), se clarifica con un aclarado de MTBE (10 mi) y se añade Isopar C (100 mi) al filtrado. Se concentra la disolución a vacio hasta 75 mi de volumen total. Se permite reposar la mezcla bifásica resultante a temperatura ambiente durante 24 horas. Se recoge el sólido ceroso resultante mediante filtración a vacío a temperatura ambiente, y se lava con isooctanos. Se seca en corriente de nitrógeno, proporcionando el compuesto del título. H-RMN (400 MHz, CDCI3) d 3.74 (m, 4H), 3.85 (s, 6H), 4.1 1 (m, 1 H), 6.44 (s, 1 H), 6.53 (c, J= 12 Hz, 1 H), 7.89 (d, J= 8 Hz, 1 H), 8.68 (s, 1 H); 13C-RMN (CDCI3) d 47.1 1 , 55.44, 55.46, 63.39; 3C-RMN (CDCI3) d 71 .07, 97.94, 105.32, 1 17.40, 128.45, 159.13, 160.20, 163.35.

EJEMPLO 8 Preparación de (S)-1-cloro-3-[(2,6-diclorobenciliden)-amino1propan-2-ol Se añade amoniaco (28% en peso, 10.9 mi, 167 mmoles, 1 .54 eq) a una disolución de 2,6-diclorobenzaldehído (18.9 g, 1 12 mmoles) en MTBE (48 g) a temperatura ambiente. Se agita la mezcla bifásica durante 15 minutos y se añade (S)-(+)-epiclorhidrina (>97% e.e., 8.5 mi, 108 mmoles, 1 .0 eq). Se agita la mezcla durante 3 días a temperatura ambiente y se separan las fases. Se seca la fase orgánica sobre MgS02 (2 g), se clarifica con un aclarado de MTBE (10 mi) y se añade Isopar C (100 mi) al filtrado. Se concentra la disolución a vacío, proporcionando el compuesto del título en forma de un aceite. 1H-RMN (400 MHz, CDCI3) d 3.74 (m, 4H), 3.85 (s, 6H), 4.1 1 (m, 1 H), 6.44 (s, 1 H), 6.53 (c, J= 12 Hz, 1 H), 7.89 (d, J= 8 Hz, 1 H), 8.68 (s, 1 H)¡ 3C-RMN (CDCI3) d 47.1 1 , 55.44, 55.46, 63.39; 13C-RMN (CDCI3) d 71.07, 97.94, 105.32, 1 17.40, 128.45, 159.13, 160.20, 163.35.

EJEMPLO 9 Preparación de (S)-5-([(4-bromobenciliden)amino1metil>-3-(3-fluoro-4- morfolin-4-¡lfenil)oxazolidin-2-ona Se añade terc-butóxido de litio (4.64 g, 57.9 mmoles, 2.55 eq) a éster bencílico del ácido (3-fluoro-4-morfolin-4-ilfenil)carbámico (7.51 g, 22.7 mmoles, 1 eq), seguido de cloruro de metileno (45 mi), y se agita la mezcla a temperatura ambiente. Se añade a la suspensión resultante (S)-1 -cloro-3-[(4-bromobenciliden)amino]propan-2-ol (8.55 g, 30.9 mmoles, 1 .36 eq) en una porción. Se calienta la suspensión clara resultante a reflujo (41 °C) durante 21 h. Se añade la suspensión densa resultante a una disolución de ácido acético (1 .76 g, 29.3 mmoles, 1 .29 eq) en metanol (46 g), y se aclara con metanol (24 g). Se concentra la suspensión densa resultante mediante destilación atmosférica hasta un volumen total de 100 mi. Se enfría la suspensión densa resultante a 3°C y se recoge el precipitado medíante filtración a vacío, se lava con metanol y se seca en corriente de nitrógeno, proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido cristalino. 1 H-RMN (CDCI3) d 3.05 (t, J= 5 Hz, 4H), 3.87 (t, J= 5 Hz, 4H), 3.90 (dd, J= 5, 14 Hz, 1 H), 3.96 (dd, J= 5, 13 Hz, 1 H), 4.04 (dd, J= 6.9 Hz, 1 H), 4.12 (t, J= 9 Hz, 1 H), 4.95 (p, J= 5, Hz, 1 H), 6.92 (t, J= 9 Hz, 1 H), 7.13 (dd, J= 10, 2 Hz, H), 7.43 (dd, = 14, 3 Hz, 1 H), 7.52 (d, J= 9 Hz, 2H), 7.56 (d, J= 9 Hz, 2H), 8.33 (s, 1 H); 13C-RMN (CDCI3) d 48.05, 50.84 (JC-F= 4 Hz), 63.03, 66.77, 71 .49, 107.25 (JC-F= 26 Hz), 1 13.70 (JC-F= 4 Hz), 1 18.60, 125.56, 129.54, 131 .72, 133.18 (JC-F= 10 Hz), 134.20, 136.09 (JC-F= 6 Hz), 154.30, 155.32 (JC- F= 245 Hz), 163.41 .

EJEMPLO 10 Preparación de (S)-1-cloro-3-r(2,4-diclorobenciliden)-amino1propan-2-ol Se añade amoniaco (28% en peso, 63.0 mi, 943 mmoles, 1 .48 eq) a una disolución de 2,4-diclorobenzaldehído (1 12 g, 639 mmoles) en MTBE (267 g) a temperatura ambiente. Se agita la mezcla bifásica durante 15 minutos y se añade (S)-(+)-epiclorhidrina (>97% e.e., 50.0 mi, 639 mmoles, 1 .0 eq). Se agita la mezcla durante 3 días a temperatura ambiente y se separan las fases. Se seca la fase orgánica sobre MgS04 (2 g), se clarifica con un aclarado de MTBE (50 mi) y se concentra la disolución hasta 200 mi. Se añade heptano (300 mi), se recoge el precipitado resultante mediante filtración a vacío a temperatura ambiente y se lava con heptano. Se seca en corriente de nitrógeno, proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido cristalino. 1H-RMN (CDCI3) d 3.66 (dd, J= 6, 1 1 Hz, 1 H), 3.70 (dd, J= 5, 1 1 Hz, 1 H), 3.80 (ddd, J= 1 .6, 13 Hz, 1 H), 3.86 (ddd, J= 2.5, 13 Hz, 1 H), 4.14 (p, J= 6 Hz, 1 H), 7.28 (dd, J= 2.8 Hz, 1 H), 7.40 (d, J= 2 Hz, 1 H), 7.96 (d, J= 8 Hz, 1 H), 8.71 (s, 1 H); 3C-RMN (CDCI3) d 46.98, 63.21 , 70.66, 127.37, 128.95, 129.49, 131 .06, 135.64, 137.22, 159.13.

EJEMPLO 11 Preparación de (S)-5-{f(2,4-diclorobenciliden)amino1metil)-3-(3-fluoro-4- morfolin-4-ilfenil)oxazolidin-2-ona Se añade terc-butóxido de litio (4.69 g, 58.5 mmoles, 2.55 eq) a éster bencílico del ácido (3-fluoro-4-morfolin-4-ilfenil)carbámico (7.59 g, 23.0 mmoles, 1 eq), seguido de cloruro de metileno (45 mi), y se agita la mezcla a temperatura ambiente. Se añade a la suspensión resultante (S)-1 -cloro-3- [(2,4-diclorobenciliden)amino]propan-2-ol (8.24 g, 30.9 mmoles, 1 .35 eq) en una porción. Se calienta la suspensión clara resultante a reflujo (41 °C) durante 21 h. Se añade la suspensión densa resultante a una disolución de ácido acético (1 .76 g, 29.3 mmoles, 1 .27 eq) en metanol (46 g), y se aclara con metanol (24 g). Se concentra la mezcla resultante mediante destilación atmosférica hasta 51 g de peso neto. Se enfría la suspensión densa resultante a 0°C y se recoge el precipitado mediante filtración a vacío, se lava con metanol y se seca en corriente de nitrógeno, proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido. 1H-RMN (CDCI3) d 3.05 (t, J= 4 Hz, 4H), 3.87 (t, J= 4 Hz, 4H), 3.98 (t, J= 4 Hz, 1 H), 4.04 (dd, J = 6, 9 Hz, 1 H), 4.13 (t, J= 9 Hz, 1 H), 4.97 (p, J= 5 Hz, 1 H), 6.92 (t, J= 9 Hz, 1 H), 7.14 (dd, J= 2, 9 Hz, 1 H), 7.22 (dd, J= 2.9 Hz, 1H), 7.39 (d, J= 2 Hz, 1H), 7.44 (dd, J= 3, 14 Hz, 1H), 7.87 (d, J= 2 Hz, 1H), 8.75 (s, 1H); 13C-RMN (CDCI3) d 48.03, 50.83, 63.16, 66.78, 71.44, 107.20 (JC-F= 26 Hz), 113.62, 118.59, 127.37, 129.05, 129.46, 130.93, 133.16 (JC-F= 1 Hz), 135.71, 136.09 (JC-F= 9 Hz), 137.38, 154.26, 155.32 (JC.F= 245 Hz), 160.24.

Claims (26)

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES

1 .- Un procedimiento para preparar linezolid linezolid que comprende: a) hacer reaccionar un compuesto de estructura (1 ) (1 ) en la que X es clorofenilo, bromofenilo o 2,4-diclorofenilo; con un compuesto de estructura (2) (2) a una temperatura en el intervalo de temperatura ambiente a aproximadamente 65°C, en la que R es bencilo o alquilo C-|.8, proporcionando un compuesto de estructura (3): (3) en la que X es clorofenilo, bromofenilo o 2,4-diclorofenilo; b) hidrolizar el compuesto de estructura (3) y acilar posteriormente, proporcionando linezolid.

2.- Un compuesto de estructura (1 ) de conformidad con la reivindicación 1 , que es (S)-1 -cloro-3-[(4-cloro-E-benciliden)amino]propan-2-ol.

3.- El compuesto de estructura (1 ) de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque es (S)-1 -cloro-3-[(4-bromo-E- benciliden)amino]propan-2-ol.

4. - El compuesto de estructura (1 ) de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque es (S)-1 -cloro-3-[(2,4-dicloro-E- benciliden)amino]propan-2-ol.

5. - El compuesto de estructura (3) de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque es (S)-5-{[(4- clorobenciliden)amino]metil}-3-(3-fluoro-4-morfolin-4-ilfenil)oxazolidin-2-ona.

6. - Un compuesto de estructura (3) (S)-5-{[(4- bromobenciliden)amino]metil}-3-(3-fluoro-4-morfolin-4-ilfen¡l)oxazolidin-2-ona.

7. - El compuesto de estructura (3) de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque es (S)-5-{[(2,4- diclorobenciliden)amino]metil}-3-(3-fluoro-4-morfolin-4-ilfenil)oxazolidin-2-ona.

8. - La temperatura de conformidad con la reivindicación 1 , que está en un intervalo de aproximadamente 30-65°C.

9. - Un compuesto de estructura (2) de conformidad con la reivindicación 1 , en donde R es bencilo.

10. - El compuesto de estructura (2) de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R es tere-butilo.

1 1 .- Un procedimiento para preparar un compuesto de estructura (3) en donde X es clorofenilo, bromofenilo o 2,4-diclorofenilo; que comprende: a) hacer reaccionar un compuesto de estructura (I) <*> en donde X es clorofenilo, bromofenilo o 2,4-diclorofenilo; con un compuesto de estructura (2) O (2) a una temperatura en el intervalo de temperatura ambiente a aproximadamente 65°C, en la que R es bencilo o alquilo d-8.

12.- La temperatura de conformidad con la reivindicación 8, que está en el intervalo de aproximadamente 30-65°C.

13.- Un compuesto de estructura (1 ) ( 1 ) en donde X es clorofenilo, bromofenilo o 2,4-diclorofenilo.

14.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado además porque es (S)-1 -cloro-3-[(4-cloro-E-benciliden)amino]propan-2-ol.

15. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado además porque es (S)-1 -cloro-3-[(4-bromo-E-benciliden)amino]propan-2-ol.

16. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado además porque es (S)-1 -cloro-3-[(2,4-diclorobenciliden)amino]propan-2-ol.

17. - (S)-5-{[(4-Clorobenciliden)amino]metil}-3-(3-fluoro-4-morfolin-4-ilfenil)oxazolidin-2-ona.

18. Un procedimiento de cristalización de un compuesto de estructura (1 ) (1) que comprende a) licuar un compuesto de estructura (1 ) en presencia de un disolvente hidrocarburo aprótico no polar a una temperatura en el intervalo de temperatura ambiente a aproximadamente 55°C, opcionalmente en presencia de un disolvente aprótico polar; y b) enfriar lentamente la temperatura a temperatura ambiente o inferior.

19.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque el disolvente hidrocarburo es un alcano o mezclas de alcanos.

20.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque el disolvente hidrocarburo es hexano, heptano, octano, isooctano o mezclas de los mismos.

21 . - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque el disolvente aprótico polar es un disolvente éter, un disolvente clorado, un disolvente aromático o mezclas de los mismos.

22. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque el disolvente aprótico polar es MTBE.

23. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque el disolvente aprótico polar es tolueno.

24.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque el disolvente aprótico polar es cloruro de metileno.

25. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque la temperatura está en el intervalo de aproximadamente 30 a 50°C.

26. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque la temperatura está en el intervalo de 38 a 45°C.