MX2008010709A

MX2008010709A - Metodos para el uso de anticuerpos contra il-22 humana.

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Publication number: MX2008010709A
Application number: MX2008010709A
Authority: MX
Inventors: Margot O'toole; Lynette A Fouser; Martin Hegen; Deborah P Luxenberg
Original assignee: Wyeth Corp
Priority date: 2006-02-21
Filing date: 2007-02-21
Publication date: 2008-09-03
Also published as: CA2642570C; EP2327423B1; DK1986688T3; CR10231A; RU2008133224A; AR059605A1; HUE047868T2; KR101325943B1; PE20071312A1; US7811567B2; KR20080096596A; EP2327423A3; JP5230452B2; US7846444B2; NO20083697L; SI2327423T1; CN101426528B; DK2327423T3; RU2011144166A; JP2009528288A

Abstract

La presente solicitud proporciona anticuerpos humanos y fragmentos de los mismos aglutinantes con antígeno que específicamente se aglutinan con la interleucina-22 humana (IL-22) y métodos para usarse estos anticuerpos, por ejemplo, en el diagnóstico, tratamiento o prevención de trastornos inflamatorios, enfermedades autoinmunes, alergias, choque séptico, trastornos infecciosos, rechazo del transplante, cáncer y otros trastornos del sistema inmune.

Description

METODOS PARA EL USO DE ANTICUERPOS CONTRA IL-22 HUMANA CAMPO DE LA INVENCION La presente invención trata de anticuerpos, verbigracia, anticuerpos humanos y fragmentos de aglutinación al antigeno de los mismos que aglutinan interleucina-22 (IL-22), en particular, IL-22 humana, y su uso en la regulación de actividades relacionadas con IL-22. Los anticuerpos divulgados aqui son útiles en el diagnóstico, prevención y/o tratamiento de trastornos relacionados con IL-22, verbigracia, trastornos autoinmune, incluyendo artritis. ANTECEDENTES DE LA INVENCION Los antigenos inician respuestas inmunes y activan las dos más grandes poblaciones de linfocitos: células T y células B. Después de estimular el antigeno, las células T se proliferan y diferencian en células efectoras, mientras las células B se proliferan y diferencian en células de plasmas secretoras de anticuerpos. Estas células efectoras secretan y/o responden a citoquinas; que son proteínas pequeñas (< aproximadamente 30 kDa) secretadas por linfocitos y otros tipos de células. La interleucina-22 (IL-22) es una citoquina clase II que muestra homología de secuencia a IL-10. Su expresión es regulada ascendentemente en células T por IL-9 o ConA (Dumoutier L y colaboradores (2000) Proc Nati Acad Sci Estados REF. : 195637 Unidos de América 97 ( 18 ): 10144-9) . Estudios adicionales han demostrado que la expresión de IL-22 mRNA es provocada in vivo en respuesta a la administración de LPS y que IL-22 modula los parámetros indicadores de una respuesta de fase aguda (Dumoutier L. y colaboradores (2000); Pittman D. y colaboradores (2001) Genes and Immunity 2:172). Además, la IL-22 mejora la expresión de péptidos antimicrobianos asociados con la defensa del huésped, incluyendo ß-defensina, S100A7, S100A8 y S100A. olk y colaboradores, Immunity, 21:241-54 (2004) ; Boniface y colaboradores, J. Immunol. 174:3695-3702 (2005) ; Liang y colaboradores, J. Exp. Med. 203 ) ( 10 ) : 2271.79 (2006) . Tomadas juntas, estas observaciones indican que la IL-22 juega un papel en la inflamación (Kotenko S.V. (2002) Cytokine & Growth Factor Review" 13 (3) : 223-40) . Se cree que la IL-22 se aglutina con un complejo receptor que consiste en IL-22R e IL-10R2, dos miembros de la familia del receptor de citoquina tipo II (CRF2) (Xie M.H. y colaboradores (2000) J. Biol Chem 275 (40) : 31335-9; Kotenko S.V. y colaboradores (2001) J Biol Chem 276 ( 4 ) : 2725-32 ) . Ambas cadenas del receptor de IL-22 son expresadas constitutivamente en varios órganos. Las lineas de células epiteliales derivadas de estos órganos responden a IL-22 in vitro (Kotenko S.V. (2002) Cytokine & Growth Reviews 13 (3) : 223-40) . IL-22 induce la activación de las vías JAK/STAT3 y ERK, asi como intermediarios de las demás vías MAPK (Dumoutier L. y colaboradores (2000) supra; Xie .H. y colaboradores (2000) supra: Dumoutier L. y colaboradores (2000) J Immunol 164(4): 1814-9; Kotenko S.V. y colaboradores (2001) J Biol Chem 276(4) :2725-32; Lejeune, D. y colaboradores (2002) J Biol Chem 5 277 (37) : 33676-82) . Los miembros CRF2 son receptores para IFNa/ß, IFNy, factor de coagulación Vlla, IL-10 y las proteínas relacionadas con IL-10 IL-19, IL-20, IL-22, IL-24, IL-26, así como las citoquinas como IFN recién identificadas, IL-28 e IL-29 0 (Kotenko S.V. (2002) Cytokine & Growth Factor Reviews 13 (3) : 223-40; Kotenko, S.V. y colaboradores (2000) Oncogene 19 (21) : 2557-65; Sheppard; P. y colaboradores (2003) Nature Immunology 4(1): 63.8; Kotenko, S.V. y colaboradores (2003) Nature Immunology 4(l):69-77). Además de estos receptores de ^ membrana, la familia CRF2 también incluye una proteína soluble, proteína aglutinante con IL-22 (IL-22BP) , que es específica para IL-22 y bloquea su actividad (Dumoutier, L. y colaboradores (2001) J Immunol 166 ( 12 ): 7090-5 ; Kotenko, S.V. y colaboradores (2001) J Immunol 166 ( 12 ): 7096-103 ; Xu, W y ¦0 colaboradores (2001) Proc Nati Acad Sci Estados Unidos de América 98 ( 17 ): 9511-6; Gruenberg, B.H. y colaboradores (2001) Genes & Immunity 2(6): 329-34; Wei C-C y colaboradores (2003) Genes & Immunity 4:204-211). Mientras el complejo del receptor de IL-22 es único para IL-22, se comparte cada cadena (es decir, IL-22R e IL-10R2) con otros miembros CRF2 para definir los receptores funcionales para otras citoquinas, incluyendo IL-20, IL-24 (IL-22R/IL-20R2) , IL-28, IL-29 ( IFN- R1/IL-10R2 ) e IL-10 (IL-10R1/IL-10R2) (Dumoutier, L. y colaboradores (2001) J. Immunol. 167 ( 7 ) : 3545-9 ; Wang, M. y colaboradores (2002) J Biol Chem 277 ( 9 ) : 7341-7 ; Parrish-Novak, J. y colaboradores (2002) J Biol Chem 277 (49) : 47517-23; Kotenko, S.V. y colaboradores (1997) EMBO J. 16 ( 19 ) : 5894-903 ; Spencer, S.D. y colaboradores (1998) J Exp Med 187 ( 4 ) : 571-8 ) . Ambas cadenas del receptor compuesto son necesarias para la transducción de señal. Una cadena del receptor compuesto ha sido definida históricamente como una cadena de aglutinación al ligando (verbigracia, IFNyRl) en base a su elevada afinidad para la citoquina. La otra cadena (verbigracia, IFNyR2) ha sido caracterizada como una cadena auxiliar o accesoria y muestra mínima afinidad para la citoquina sola (Kotenko, S.V. y colaboradores (2000) Oncogene 19 (21) : 2557-65) . Para IL-22, IL-22R es la subunidad del receptor de elevada afinidad con IL-10R2 que en lo subsiguiente se aglutina con el complejo IL-22/IL-22R (Li, J. y colaboradores (2004) Int. Immunopharmacol . 4 (5) : 673-708; Logsdon, N.J. y colaboradores (2002) J. Interferon Cytokine Res 22 ( 11 ): 1099-1112 ) . SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente solicitud proporciona, por lo menos en parte, agentes de aglutinación de IL-22 tales como anticuerpos y sus fragmentos aglutinantes con antigeno que se aglutinan con la interleucina-22 ("IL-22") , en particular, IL-22 humana, con elevada afinidad y especificidad. Los anticuerpos y sus fragmentos aglutinantes con antigeno de la presente invención también se llaman aquí "anticuerpos anti-IL-22" y "sus fragmentos," respectivamente. En una modalidad, el anticuerpo o su fragmento reduce, inhibe o antagoniza la actividad IL-22. Tales anticuerpos pueden ser utilizados para regular respuestas inmunes o trastornos asociados con IL-22 antagonizando la actividad de IL-22. En otras modalidades, el anticuerpo anti-IL-22 puede ser utilizado en forma diagnóstica o como anticuerpo blanco para descargar un agente terapéutico o citotóxico a una célula de expresión IL-22. De este modo, los anticuerpos anti-IL-22 de la invención son útiles en el diagnóstico, tratamiento y/o prevención de trastornos relacionados con IL-22, verbigracia, trastornos autoinmunes, verbigracia, artritis (incluyendo artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, osteoartritis , artritis psoriática, artritis relacionada con lupus o espondilitis anquilosante) , escleroderma, lupus eritematosus sistémico, HIV, síndrome de Sjogren, vasculitis, esclerosis múltiple, tiroiditis autoinmune, dermatitis (incluyendo dermatitis atópica y dermatitis eczematosa) , miastenia gravis, enfermedad inflamatoria del intestino (IBD), enfermedad de Crohn, colitis, diabetes mellitus (tipo I); condiciones inflamatorias, verbigracia, de la piel (verbigracia, psoriasis) , sistema cardiovascular (verbigracia, aterosclerosis ) , sistema nervioso (verbigracia, enfermedad de Alzheimer) , hígado (verbigracia, hepatitis), riñon (verbigracia, nefritis) y páncreas (verbigracia, pancreatitis) ; trastornos cardiovasculares, verbigracia trastornos metabólicos, lesión radical libre de oxígeno, isquemia; trastornos relacionados con sanación de heridas; trastornos respiratorios, verbigracia, asma y COPD (verbigracia, fibrosis cística) ; condiciones inflamatorias agudas (verbigracia, endotoxemia, sepsos y septicemia, síndrome del choque tóxico y enfermedad infecciosa) ; rechazo de transplante y alergia. En una modalidad, el trastorno asociado con IL-22 es un trastorno artrítico, verbigracia, un trastorno seleccionado de uno o más entre artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, osteoartritis , artritis psoriática o espondilitis anquilosante; un trastorno respiratorio (verbigracia, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD) ; o una condición inflamatoria, verbigracia, de la piel (verbigracia, psoriasis) , sistema cardiovascular (verbigracia, aterosclerosis), sistema nervioso (verbigracia, enfermedad de Alzheimer) , hígado (verbigracia, hepatitis), riñon (verbigracia, nefritis), páncreas (verbigracia, pancreatitis) y órganos gastrointestinales, verbigracia, colitis, enfermedad de Crohn e IBD.

En consecuencia, en un aspecto, la invención presenta un anticuerpo aislado que se aglutina con IL-22, en particular, IL-22 humana. En ciertas modalidades, el anticuerpo anti-IL-22 podrá tener por lo menos una de las siguientes características: (1) es un anticuerpo de especificidad monoclonal o sencilla; (2) es un anticuerpo humano; (3) es un anticuerpo generado in vitro; (4) es un anticuerpo generado in vivo (verbigracia, sistema del ratón transgénico) ; (5) se aglutina con IL-22 con una constante de asociación de por lo menos 1012 M_1; (6) se aglutina con IL-22 con una constante de asociación de por lo menos 1011 M'1; (7); se aglutina con IL-22 con una constante de asociación de por lo menos 1010 M"1; (8) se aglutina con IL-22 con una constante de asociación de por lo menos 109 M"1; (9) se aglutina con IL-22 con una constante de asociación de por lo menos 106 M_1: (10) se aglutina con IL-22 con una constante de disociación de 500 nM o menos; (11) se aglutina con IL-22 con una constante de disociación de 10 nM o menos; (12) se aglutina con IL-22 con una constante de disociación de 250 pM o menos; (13) se aglutina con IL-22 con una constante de "disociación de 60 pM o menos; (14) inhibe la aglutinación de IL-22 con IL-22R o un complejo receptor de IL-22R e IL-10R2 con un IC50 de 10 nM o menos; (15) bloquea la proliferación mediada por IL-22 de células BaF3 realizadas por ingeniería del receptor de IL-22 con un IC5o de 1 nM o menos en una modalidad, con un IC50 de 150 pM o menos en otra modalidad, con un IC50 de 100 pM o menos en otra modalidad y con un IC5o de 10 pM o menos en otra modalidad; y (16) bloquea la secreción GROa mediada por IL-22 proveniente de las células HT29 con un IC50 de 1 nM o menos en una modalidad, con un IC50 de 150 pM o menos en otra modalidad, y con un IC50 de 10 pM o menos en otra modalidad. La proliferación de célula BaF3 mediada por IL-22 y secreción de GROa mediada por IL-22 proveniente de células HT29 puede ser mediada de la forma descrita en los ejemplos. Ejemplos ilustrativos no limitantes de los anticuerpos de la invención se llaman aquí "GIL01", "GIL16", "GIL45", "GIL60," "GIL68," "GIL92," "097D09," "062A09," "062G05," "087B03," "367D04," "368D04," "166B06," "166G05," "375G06," "376B10," "354A08," "355B06," "355E04," y "356A11." Estos anticuerpos pueden ser con lineas de germen o sin linea de germen, En otra modalidad, se selecciona el anticuerpo a partir de 356A11, 354A08, 087B03 y 368D04. Los anticuerpos de la invención podrán aglutinarse específicamente con el mismo epítopo de IL-22 o un epítopo similar (verbigracia, un epítopo solapante) al cual se aglutina GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, ó 356A11. En otras modalidades, los anticuerpos se aglutinan específicamente con un fragmento de una IL-22, verbigracia, un fragmento de por lo menos 10, 20, 50, 75, 100, 150 ó 200 aminoácidos contiguos a la secuencia de aminoácido establecida en la SEQ ID N0:1 o una secuencia que sea por lo menos el 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% . o más idéntica a la misma. En otras modalidades, el anticuerpo inhibe competitivamente la aglutinación de por lo menos un entre GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, ó 356A11 hacia su isótopo blanco. En una modalidad, el anticuerpo de la presente invención incluye un dominio VH, dominio VL o combinación de los mismos, del fragmento Fv de GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, ó 356A11. Por ejemplo, el anticuerpo incluye un dominio VH y/o VL que tiene secuencia de aminoácido conforme se estipula en las Tablas 1 y 7 (SEQ ID NO:5, 23, 41, 59, 77, 95, 113, 131, 149, 167, 185, 203, 221, 239, 257, 275, 293, 311, 329, 347, 365, 383, 401, 419, 437, 455, 473, 491, 509, 527, 545, 563, 581, 599, ó 617 para VH and SEQ ID NO:6, 24, 42, 60, 78, 96, 114, 132, 150, 168, 186, 204, 222, 240, 258, 276, 294, 312, 330, 348, 366, 384, 402, 420, 438, 456, 474, 492, 510, 528, 546, 564, 582, 600, ó 618 para VL) , o una secuencia sustancialmente idéntica a la misma (verbigracia, una secuencia por lo menos aproximadamente el 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más idéntica a la misma, o que difiere en no más de 1, 2, 5, 10 ó 1 15 residuos de aminoácido de la SEQ ID NO:5, 6, 23, 24, 41, 42, 59, 60, 77, 78, 95, 96, 113, 114, 131, 132, 149, 150, 167, 168, 185, 186, 203, 204, 221, 222, 239, 240, 257, 258, 275, 276, 293, 294, 311, 312, 329, 330, 347, 348, 365, 366, 383, 384, 401, 402, 419, 420, 437, 438, 455, 456, 473, 474, 491, 492, 509, 510, 527, 528, 545, 546, 563, 564, 581, 582, 599, 600, 617, ó 618) . En otra modalidad, el anticuerpo de la presente invención incluye un dominio VH, dominio VL o combinación de los mismos, del fragmento Fv de un anticuerpo seleccionado a partir de 356A11, 354A08, 087B03 y 368D04. En esta modalidad, el anticuerpo, o su fragmento aglutinante a antigeno, comprende: Un dominio VH que comprende la secuencia de aminoácido estipulada en la SEQ ID NO: 156 ó 491 y/o dominio VL que comprende la secuencia de aminoácido indicada en la SEQ ID NO: 168 ó 492 (087B03) ; Un dominio VH que comprende la secuencia de aminoácido indicada en la SEQ ID NO: 293 ó 545 y/o un dominio VL que tiene la secuencia de aminoácido indicada en la SEQ ID NO: 294 ó 546 (354A08); Un dominio VL que comprende la secuencia de aminoácido indicada en la SEQ ID NO: 203 ó 617 y/o un dominio VL que comprende la secuencia de aminoácido indicada en la SEQ ID NO:204 ó 618 (368D04) ; o Un dominio VH que comprende la secuencia de aminoácido indicada en la SEQ ID NO: 347 ó 599 y/o un dominio VL que comprende la secuencia de aminoácido indicada en la SEQ ID NO: 348 ó 600 (356A11) . En otra modalidad, el anticuerpo incluye un dominio VH y/o VL codificado por un ácido nucleico que tiene una secuencia de nucleótido indicada en las Tablas 1 y 7 (SEQ ID NO: 14, 32, 50, 68, 86, 104, 122, 140, 158, 176, 194, 212, 230, 248, 266, 284, 302, 320, 338, 356, 374, 392, 410, 428, 446, 464, 482, 500, 518, 536, 554, 572, 590, 608, ó 626 para VH and SEQ ID NO:15, 33, 51, 69, 87, 105, 123, 141, 159, 177, 195, 213, 231, 249, 267, 285, 303, 321, 339, 357, 375, 393, 411, 429, 447, 465, 483, 501, 519, 537, 555, 573, 591, 609, ó 627 para VL) , o una secuencia sustancialmente idéntica a la misma (verbigracia, una secuencia de por lo menos aproximadamente el 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más idéntica a la misma o que difiere en no más de 1, 2, 3, 6, 15, 30 ó 45 nucleótidos a partir de la SEQ NO: 14, 15, 32, 33, 50, 51, 68, 69, 86, 87, 104, 105, 122, 123, 140, 141, 158, 159, 176, 177, 194, 195, 212, 213, 230, 231, 248, 249, 266, 267, 284, 285, 302, 303, 320, 321, 338, 339, 356, 357, 374, 375, 392, 393, 410, 411, 428, 429, 446, 447, 464, 465, 482, 483, 500, 501, 518, 519, 536, 537, 554, 555, 572, 573, 590, 591, 608, 609, 626, ó 627) .

En otras modalidades, el anticuerpo incluye un dominio Fv que tiene una secuencia de aminoácido indicada en las Tablas 1 y 7 (SEQ ID NO: 7, 25, 43, 61, 79, 97, 115, 133, 151, 169, 187, 205, 223, 241, 259, 277, 295, 313, 331, 349, 367, 385, 403, 421, 439, 457, 475, 493, 511, 529, 547, 565, 583, 601, ó 619) , o una secuencia sustancialmente idéntica a la misma (verbigracia, una secuencia por lo menos aproximadamente el 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más idéntica a la misma, o que difiere en no más de 1, 2, 5, 10, 15, 20, 30 ó 35 residuos de aminoácido a partir de la SEQ ID NO:7, 25, 43, 61, 79, 97, 115, 133, 151, 169, 187, 205, 223, 241, 259, 277, 295, 313, 331, 349, 367, 385, 403, 421, 439, 457, 475, 493, 511, 529, 547, 565, 583, 601, ó 619). En otra modalidad, el anticuerpo de la presente invención incluye un dominio Fv de un anticuerpo seleccionado a partir de 356A11 (SEQ ID NO: 349 ó 601), 354A08 (SEQ ID NO:295 ó 547), 087B03 (SEQ ID NO:169 ó 493), y 368D04 (SEQ ID NO:205 ó 619). En otra modalidad, el anticuerpo incluye un dominio Fv codificado por un ácido nucleico que tiene una secuencia de nucleótido indicada en las Tablas 1 y 7 (SEQ ID NO:16, 34, 52, 70, 88, 106, 124, 142, 160, 178, 196, 214, 232, 250, 268, 286, 304, 322, 340, 358, 376, 394, 412, 430, 448, 466, 484, 502, 520, 538, 556, 574, 592, 610, ó 628) o una secuencia sustancialmente idéntica a la misma (verbigracia, una secuencia por lo menos aproximadamente el 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más idéntica a la misma o que difiere en no más de 1, 2, 3, 6, 15, 30, 45, 60, 90 ó 105 nucleótidos a partir de la SEQ ID NO: 16, 34, 52, 70, 88, 106, 124, 142, 160, 178, 196, 214, 232, 250, 268, 286, 304, 322, 340, 358, 376, 394, 412, 430, 448, 466, 484, 502, 520, 538, 556, 574, 592, 610, ó 628). Todavía en otras modalidades, el anticuerpo comprende por lo menos una región determinante de complementariedad (CDR) de estos dominios VH y VL. Por ejemplo, el anticuerpo puede incluir una, dos o tres CDR del dominio VH que tiene una secuencia de aminoácido indicada o incluida dentro de las secuencias de las Tablas 1 y 7 (SEQ ID NO: 5, 7, e , 9, 10, 23, 25, 26, 27, 28, 41 , 43, 44, 45, 46, 59, 61, 62, 63, 64, 77, 79, 80, 81, 82, 95, 97, 98, 99, 100, 113, 115 , 116, 117, 118 r 131, 133, 134, 135, 136, 149, 151, 152, 153 , 154, 167, 169 , 170, 171, 172, 185, 187, 188, 189, 190, 203 , 205, 206, 207 , 208, 221, 223, 224, 225, 226, 239, 241, 242 , 243, 244, 257 , 259, 260, 261, 262, 275, 277, 278, 279, 280 , 293, 295, 296 , 297, 298, 311, 313, 314, 315, 316, 329, 331 , 332, 333, 334 , 347, 349, 350, 351, 352, 365, 367, 368, 369 , 370, 383, 385 , 386, 387, 388, 401, 403, 404, 405, 406, 419 , 421, 422, 423 , 424, 437, 439, 440, 441, 442, 455, 457, 458 , 459, 460, 473 , 475, 476, 477, 478, 491, 493, 494, 495, 496 , 509, 511, 512 , 513, 514, 527, 529, 530, 531, 532, 545, 547 , 548, 549, 550 , 563, 565, 566, 567, 568, 581, 583, 584, 585 , 586, 599, 601, 602, 603, 604, 617, 619, 620, 621, ó 622) o una secuencia sustancialmente homologa a la misma (verbigracia, una secuencia por lo menos aproximadamente el 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más idéntica a la misma) . En otra modalidad, el anticuerpo de la presente invención incluye una, dos o tres CDR del dominio VH de un anticuerpo seleccionado a partir de 356A11, 354A08, 087B03 y 368D04. En esta modalidad, el anticuerpo o su fragmento aglutinante con el antigeno, comprende una región variable de cadena pesada que comprende: a) SEQ ID NO:170 ó 494; b) SEQ ID NO: 171 ó 495; y/o c) SEQ ID NO: 172 ó 496 (087B03); a) SEQ ID NO:296 ó 548; b) SEQ ID NO: 297 ó 549; y/o c) SEQ ID NO: 298 ó 550 (354A08); a) SEQ ID NO: 206 ó 620; b) SEQ ID NO: 207 ó 621; y/o c) SEQ ID NO: 208 ó 622 (368D04); o a) SEQ ID NO:350 ó 602; b) SEQ ID NO: 351 ó 603; y/o c) SEQ ID NO: 352 ó 604 (356A11) . En otra modalidad, el anticuerpo puede incluir uno, dos o tres CDR del dominio VL que tiene una secuencia de aminoácido indicada o incluida dentro de las secuencias en las Tablas 1 y 7 (SEQ ID NO: 6, 7, 11, 12, 13, 24, 25, 29, 30, 31, 42, 43, 47, 48, 49, 60, 61, 65, 66, 67, 78, 79, 83, 84, 85, 96, 97, 101, 102, 103, 114, 115, 119, 120, 121, 132, 133, 137, 138, 139, 150, 151, 155, 156, 157, 168, 169, 173, 174, 175, 186, 187, 191, 192, 193, 204, 205, 209, 210, 211, 222, 223, 227, 228, 229, 240, 241, 245, 246, 247, 258, 259, 263, 264, 265, 276, 277, 281, 282, 283, 294, 295, 299, 300, 301, 312, 313, 317, 318, 319, 330, 331, 335, 336, 337, 348, 349, 353, 354, 355, 366, 367, 371, 372, 373, 384, 385, 389, 390, 391, 402, 403, 407, 408, 409, 420, 421, 425, 426, 427, 438, 439, 443, 444 , 445, 456, 457, 461, 462, 463, 474, 475, 479, 480, 481, 492, 493, 497, 498, 499, 510, 511, 515, 516, 517, 528, 529, 533, 534, 535, 546, 547, 551, 552, 553, 564, 565, 569, 570, 571, 582, 583, 587, 588, 589, 600, 601, 605, 606, 607, 618, 619, 623, 624, ó 625) , o una secuencia sustancialmente idéntica a la misma ( verbig:racia, una secuencia por lo menos aproximadamente del 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más idéntica a la misma) . En otra modalidad, el anticuerpo de la presente invención incluye una, dos o tres CDR del dominio VL de un anticuerpo seleccionado a partir de 356A11, 354A08, 087B03 y 368D04. En esta modalidad, el anticuerpo o su fragmento aglutinante de antigeno, comprende una región variable de cadena liviana que comprende: a) SEQ ID NO: 173 ó 497; b) SEQ ID NO: 174 ó 498; y/o c) SEQ ID NO: 175 ó 499 (087B03);

[0024] a) SEQ ID NO: 299 ó 551); b) SEQ ID NO: 300 ó 552; y/o c) SEQ ID NO: 301 ó 553 (354A08); a) SEQ ID NO: 209 ó 623; b) SEQ ID NO: 210 ó 624; y/o c) SEQ ID NO: 211 ó 625 (368D04) ; o a) SEQ ID NO:353 ó 605; b) SEQ ID NO: 354 ó 606; y/o c) SEQ ID NO: 355 ó 607 (356A11) . Todavía en una modalidad adicional, el anticuerpo comprende un fragmento H3 del dominio VH de GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, ó 356A11, verbigracia, un fragmento H3 que tiene la secuencia de aminoácido indicada en las Tablas 1 y 7 (SEQ ID NO:10, 28, 46, 64, 82, 100, 118, 136, 154, 172, 190, 208, 226, 244, 262, 280, 298, 316, 334, 352, 370, 388, 406, 424, 442, 460, 478, 496, 514, 532, 550, 568, 586, 604, ó 622), o una secuencia sustancialmente idéntica a la misma (verbigracia, una secuencia por lo menos aproximadamente el 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más idéntica a la misma) . El anticuerpo de la invención puede ser de longitud total (verbigracia, incluir por lo menos una cadena pesada completa y obtener por lo menos una cadena liviana completa) o puede incluir solamente un fragmento aglutinante con el antigeno (verbigracia, un Fab, F(ab')2, Fv, un fragmento Fv de cadena sencilla, un fragmento Fd o un fragmento dAb) . El anticuerpo puede incluir una región constante o una porción de la misma, seleccionada a partir de cualquier entre: los genes de la región constante kappa, lambda, alfa, gamma, delta, ypsilon y mu. Por ejemplo, las regiones constantes de cadena pesada de los varios isótopos pueden ser utilizadas incluyendo: IgGi, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgAi, IgA2, IgD, e IgE. La región constante de cadena ligera puede ser seleccionada a partir de kappa o lambda. El anticuerpo puede ser un IgG o podrá también ser IgGik o IgGiY. El anticuerpo anti-IL-22 descrito aquí puede ser derivado o enlazado con otra molécula funcional (tal como otro péptido o proteina (verbigracia, un fragmento Fab) ) . Por ejemplo, un anticuerpo de la invención puede ser enlazado funcionalmente (verbigracia, mediante acoplamiento químico, fusión genética, asociación no-cova-lente o de otra forma) por lo menos a una otra entidad molecular, tal como otro anticuerpo (verbigracia, un anticuerpo biespecífico o multiespecí fico) , toxina, radioisótopo, agente citotóxico o citostático, entre otros. En otro aspecto, la invención presenta una composición farmacéutica que contiene por lo menos un anticuerpo anti-IL-22 y un vehículo de de aceptación farmacéutica. La composición farmacéutica puede incluir además una combinación de por lo menos un anticuerpo anti-IL-22 y por lo menos un agente terapéutico (verbigracia, citoquina e inhibidores del factor de crecimiento, inmunosupresores , agentes antiinflamatorios, inhibidores metabólicos, inhibidores de encima, agentes citotóxicos, agentes citostáticos o sus combinaciones, de la forma descrita con más detalles en este documento) . Las combinaciones del anticuerpo anti-IL-22 y un agente terapéutico también están dentro del alcance de la invención. Las composiciones y combinaciones de la invención pueden ser usadas para regular condiciones inflamatorias asociadas con IL-22, verbigracia, modulando la señalización de IL-22 a través de sus receptores ubicados en las células epiteliales de una variedad de tejidos, incluyendo, pero sin limitación, aquellas del páncreas, piel, pulmón, intestino, hígado, riñon, glándula salivar y endotelia vascular, además de las células inmunes potencialmente activadas y localizadas en el tejido. En otro aspecto, la invención presenta un método para tratar un sujeto con un trastorno asociado con IL-22. El método incluye la administración al sujeto de un anticuerpo anti-IL-22 en una cantidad suficiente para inhibir por lo menos una actividad IL-22 de células inmunes, tratando así el trastorno asociado con IL-22. El anticuerpo anti-IL-22 puede ser administrados al sujeto, solo o en combinación con otros agentes terapéuticos de la forma descrita aquí. El sujeto podrá ser un mamífero, verbigracia, humano. Por ejemplo, el método puede ser utilizado para tratar a un sujeto con un trastorno asociado con IL-22 tal como trastornos autoinmumes, verbigracia, artritis (incluyendo artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, osteoartrit is , artritis psoriática, artritis asociada con lupus o espondilitis anquilosante) , escleroderma, lupus eritematoso sistémico, HIV, síndrome de Sjogren, vasculitis, esclerosis múltiple, tiroiditis autoinmune, dermatitis (incluyendo dermatitis atópica y dermatitis eczematosa) , miastenia gravis, enfermedad inflamatoria del intestino (IBD), enfermedad de Crohn, colitis, diabetes mellitus (tipo I) ; condiciones inflamatorias, verbigracia, de la piel (verbigracia, psoriasis) , sistema cardiovascular (verbigracia, aterosclerosis ) , sistema nervioso (verbigracia, enfermedad de Alzheimer) , hígado (es decir, hepatitis) , riñon (verbigracia, nefritis) y páncreas (verbigracia, pancreatitis); trastornos cardiovasculares, verbigracia, trastornos metabólicos del colesterol, lesión radical libre de oxígeno, isquemia; trastornos asociados con sanación de heridas; trastornos respiratorios, verbigracia, asma y COPD (verbigracia, fibrosis cística) ; condiciones inflamatorias agudas (verbigracia, endotoxemia, sepsis y septicemia, síndrome del choque tóxico y enfermedad infecciosa); rechazo del transplante y alergia. En una modalidad, el trastorno asociado con IL-22 es un trastorno artrítico, verbigracia, un trastorno seleccionado a partir de una o más entre artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, osteoartritis, artritis psoriática o espondilitis anquilosante; un trastorno respiratorio (verbigracia, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD) ; o una condición inflamatoria, verbigracia, de la piel (verbigracia, psoriasis) , sistema cardiovascular (verbigracia, aterosclerosis), sistema nervioso (verbigracia, enfermedad de Alzheimer, hígado (verbigracia, hepatitis), riñon (verbigracia, nefritis) , páncreas (verbigracia, pancreatitis) y órganos gastrointestinales, verbigracia, colitis, enfermedad de Crohn e IBD. En otro aspecto, la invención presenta un método para disminuir, inhibir o reducir una respuesta de fase aguda en un sujeto. El método incluye la administración al sujeto de un agente de aglutinación con IL-22, verbigracia, un antagonista IL-22, (verbigracia, un anticuerpo anti-IL-22 o fragmento del mismo de la forma descrita aquí), en una cantidad suficiente para disminuir, inhibir o reducir la respuesta de fase aguda en el sujeto. En una modalidad, el sujeto es un mamífero, verbigracia, un humano que sufre de un trastorno asociado con IL-22 incluyendo, verbigracia, trastornos respiratorios, trastornos inflamatorios y trastornos autoinmunes. En una modalidad, el agente aglutinante de IL-22 es administrado en forma local, verbigracia, en forma tópica, subcutánea u otras administraciones que no sean en la circulación general. En otro aspecto, puede usarse un agente aglutinante con IL-22 para alterar el tipo de respuesta inmune y/o aumentar la eficacia de una formulación de vacuna para inmunizar a un sujeto. Por ejemplo, un anticuerpo anti-IL-22 de la presente invención puede ser administrado antes, durante y/o después de una inmunización para aumentar la eficacia de la vacuna. En una modalidad, la formulación de vacuna contiene uno o más antagonistas IL-22 y un antigeno, es decir, un inmunógeno, incluyendo, por ejemplo, antigenos virales, bacteriales o de tumor. En otra modalidad, el antagonista IL-22 y el inmunógeno son administrados por separado, verbigracia, dentro de una hora, tres horas, un día o dos días entre sí.

En otro aspecto, la invención proporciona un método para detectar la presencia de IL-22 en una muestra in vitro. Las muestras podrán incluir muestras biológicas tales como suero, plasma, tejido y biopsia. El presente método puede ser utilizado para diagnosticar un trastorno, tal como un trastorno asociado con IL-22 de la forma descrita aquí. El método incluye: (1) el contactar una muestra o una muestra de control con un anticuerpo anti-IL-22 y (2) detectar la formación de un complejo entre el anticuerpo anti-IL-22 y la muestra o la muestra de control, donde un cambio estadísticamente significativo en la formación del complejo en la muestra con relación a una muestra de control, es indicador de la presencia de la IL-22 en la muestra. En otro aspecto, la invención proporciona un método para detectar la presencia de IL-22 in vivo (verbigracia, formación de imágenes in vivo en un sujeto) . El método puede ser utilizado para diagnosticar un trastorno, verbigracia, un trastorno asociado con IL-22 de la forma descrita aquí. El método incluye: (1) la administración de un anticuerpo anti-IL-22 a un sujeto o a un sujeto de control bajo condiciones que permiten la aglutinación del anticuerpo con IL-22 y (2) la detección de la formación de un complejo entre el anticuerpo e IL-22, donde un cambio estadísticamente significativo en la forma del complejo en el sujeto con relación al control, verbigracia, un sujeto de control, es indicador de la presencia de IL-22. El anticuerpo podrá ser etiquetado directa o indirectamente con una sustancia detectable para facilitar la detección del anticuerpo aglutinando o sin aglutinar. Las sustancias detectables adecuadas incluyen varias enzimas, grupos prostéticos, materiales fluorescentes, materiales luminescentes y materiales radiactivas. En otro aspecto, la invención proporciona un método para descargar o tener a un agente como blanco, verbigracia, un agente terapéutico o citotóxico, a una célula de expresión de IL-22 in vivo. El método incluye la administración de un anticuerpo anti-IL-22 a un sujeto bajo condiciones que permitan la aglutinación del anticuerpo con la IL-22. El anticuerpo podrá ser acoplado con una segunda mitad terapéutica, tal como una toxina. La divulgación proporciona secuencias de ácido nucleico provenientes de los dominios VH y VL de GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, y 356A11. Igualmente se proporcionan secuencias de ácido nucleico que comprenden por lo menos una CDR a partir de GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, y 356A11. La divulgación también proporciona vectores y células huéspedes que comprenden tales ácidos nucleicos. La divulgación proporciona además métodos para producir dominios VH y VL y anticuerpos funcionales que comprenden la totalidad o una porción de tales dominios derivados de los dominios VH o VL de GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, ó 356A11. Los aspectos adicionales de la divulgación serán estipulados parcialmente en la descripción y parcialmente resultarán obvios de la descripción o podrán ser aprendidos mediante la puesta en práctica de la invención. La .invención se estipula y es particularmente señalada en las reivindicaciones y la divulgación no debe ser interpretada como limitante del alcance de las reivindicaciones. La siguiente descripción detallada incluye representaciones ilustrativas de varias modalidades de la invención, que no son restrictivas de la invención reivindicada. Las figuras que acompañan constituyen parte de esta memoria descriptiva y, juntas con la descripción, sirven solamente para ilustrar las modalidades y no limitar la invención. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Figura 1. Potencia de los clones scFv anti-Il matriz en el ensayo del complejo receptor de IL-22: ensayo de competición DELFIA del complejo receptor de IL-22 que se aglutina con bio. IL-22.

Figuras 2A-2G. Formación de perfil los clones scFv guias en el ensayo del complejo receptor de IL-22: ensayo de competición DELFIA del complejo receptor de IL-22 que se aglutina con bio. IL-22. (Fig. 2A) GIL derivado. (Fig. 2B) GIL 16 derivado. (Fig. 2C) GIL 16, GIL 60 y GIL 68 derivado. (Fig. 2D) GIL 60 derivado. (Fig. 2E) GIL 68 derivado. (Fig. 2F) GIL 68 derivado. (Fig. 2G) GIL 92 derivado. Figuras 3A-3B. Potencia IgG en ensayos basados en célula GROa. GIL-IgGs optimizados en ensayo huIL-22 GROa . (Fig. 3A) IgG con linea de germen. (Fig. 3B) IgG sin linea de germen. Figuras 4A-4B. Reactividad de especies cruzadas de anticuerpos IL-22 mediante ELISA. GIL-IgG optimizados se aglutinan específicamente con IL-22. (Fig. 4A) IgG con línea de germen. (Fig. 4B) IgG sin línea de germen. Figura 5. Secuencias de aminoácido y nucleótidos de la IL-22 humana. La secuencia de nucleótido de la IL-22 humana es SEQ ID NO: 2 e incluye una poli (A) cola. La secuencia de nucleótido divulgada incluye un marco de lectura abierto y la secuencia de aminoácido de la proteína IL-22 de longitud total correspondiente a la secuencia de nucleótido que antecede es reportada en la SEQ ID NO:l. La secuencia de aminoácido de la IL-22 madura corresponde aproximadamente a los aminoácidos 34-179 de la SEQ ID NO: 1. Figura 6. Las secuencias de aminoácido y nucleótido de IL-22 del ratón.

Figura 7. Secuencias de aminoácido y nucleótido de GILOl, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, y 356A11 sin linea de germen, incluyendo dominios VH y VL Y LAS CDR (Hl, H2, H3, Ll, L2 y L3) .

Figura 8. Secuencias de aminoácido y nucleótido de GILOl, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 062A09, 087B03, 166B06, 166G05, 354A08, 355B06, 355EA, 356A11 y 368D04 con linea de germen, incluyendo los dominios VH y VL y las CDR (Hl, H2, H3, Ll, L2 y L3) . Figura 9. Secuencias de aminoácido y nucleótido de scFv para GILOl, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 35 A08, 355B06, 355E04 y 356A11 sin linea de germen, con CDR subrayadas (Hl, H2, H3, Ll, L2 y L3) . Figura 10. Secuencias de aminoácido y nucleótido de scFv para GILOl, GIL165, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 062A09, 087B03, 166B06, 166G05, 354A08, 355B06, 355E04, 356A11 y 368D04 con linea de germen con CDR subrayadas (Hl, H2, H3, Ll, L2 y L3) . Figuras 11A-11B. Media vida in vivo de (Fig. 11A) 356A11 y (Fig. 11B) 368D04. Figuras 12A-12B. Puntuaciones de gravedad de la enfermedad media (Fig. 12A) o puntuaciones de la gravedad de la enfermedad (Fig. 12B) con varias dosis de 356A11 administradas en días alternos en el modelo CIA murino. Figuras 13A-13D. Puntuaciones de la gravedad de la enfermedad media de 8 mg kg"1 de 356A11 administrada en días alternis en modelo CIA murino en estudios múltiples. Figuras 14A-14B. Puntuaciones de gravedad de la enfermedad media de 8 mg kg"1 de 356A11 administrada una vez o dos veces por semana en el modelo CIA murino. Figuras 15A-15B. Puntuaciones de la gravedad de la enfermedad provenientes de dos estudios separados de 8 mg kg-1 de 356A11 administrado en días alternos, dos veces por semana o una vez por semana en modelo CIA murino. Figuras 16A-16F. Evaluación histológica (pata) del avance de la enfermedad en estudios múltiples utilizando ratones tratados con (Fig. 16A) 8 mg kg _1 de 356A11 en días alternos o (Fig. 16B) 16 mg kg"1 de 356A11 en días alternos, (Fig. 16C) 8 mg kg"1 de 356A11 en días alternos, una vez por semana o dos veces por semana, (Fig. 16D) 8 mg kg"1 de 356A11 una vez por semana, (Fig. 16E) 8 mg kg"1 dos veces por semana, o (Fig. 16F) 8 mg kg"1 de 356A11 en días alternos en modelo CIA murino. Figura 17. Detección y estabilización de la IL-22 in vivo (ng/mL) en ratones artríticos tratados 356A11. Figura 18. Detección de IL-22 in vivo (ng/mL) en ratones artríticos administrados en anticuerpo de control isotipo. Figura 19. La regulación ascendente de proteína IL-22 e IL-22R en lesiones psoriáticas humanas. Figuras 20A-20B. Evaluación de la enfermedad de los ratones tratados con 16 mg/kg de 356A11, 368D04 o anticuerpo de control en modelo murino de psoriasis. (Fig. 20A) avance de la enfermedad clínica en 10 semanas. (Fig. 20B) Puntuación clínica a las 10 semanas. Figura 21. Detección de niveles séricos in vivo de IL-22 (pg/mL) en ratones psoriáticos tratados con 16 mg/kg de 356A11, 368D04 o un anticuerpo de control. Figuras 22A-22D. Detección de niveles séricos in vivo de (Fig. 22A) IL-17A, (Fig. 22B) IL-17F, (Fig. 22C) IL-17A/F; y (Fig. 22D) IL-6 en ratones psoriáticos tratados con 16 mg/kg de 356A11, 368D04 o un anticuerpo de control. Figura 23. Análisis citométrico de flujo de células del nodulo linfático CD4 + mezcladas tratado con PMA e ionomicina siguiente el aislamiento de los ratones psoriáticos tratados con 16 mg/kg de 356A11, 368D04 o un anticuerpo de control y manchado para IL-22 e IL-17A; IL-22 e IL-17F; IL-17A e IL-17F; IL-22 y TNF-a; IL-22 e IFNy; o TNFa e IFNy. Figuras 24A-24E. Expresión del gen de citoquina en las orejas de ratones psoriáticos tratados con 16 mg/kg de 356A11, 368D04 o un anticuerpo de control. (Fig. 24A) IL-22. (Fig. 24B) IL-17. (Fig. 24C) IFNy. (Fig. 24D) IL-17F. (Fig. 24E) IL- Figuras 25A-25F. Detección de citoquina en los supernatantes de células de nodulo linfático mezcladas aisladas de ratones psoriáticos tratados con 16 mg/kg de 356A11, 368D04, o un anticuerpo de control y estimuladas ex vivo con y sin anticuerpo anti-CD3 aglutinado en placa. (Fig. 25A) IL-22. (Fig. 25B)IL-6. (Fig. 25C) IFNy. (Fig. 25D) IL-17F. (Fig. 25E) IL-17A/F. (Fig. 25F) IL-17A. Figuras 26A-26E. Expresión del gen de citoquina en células del nodulo linfático mezcladas aisladas de ratones psoriáticos tratados con 16 mg/kg de 356A11, 368D04 o un anticuerpo de control y estimuladas ex vivo con anticuerpo anti-CD3 aglutinado en placa. (Fig. 26A) IL-22. (Fig. 26B) IL-6. (Fig. 26C) IFNy (Fig. 26D) IL-17F. (Fig. 26E) IL-17A. Figuras 27A-27B. Evaluación de la enfermedad en ratones tratados con 16 mg/kg de 356A11 o anticuerpo de control en modelo de psoriasis murino. Ratones tratados con IL-12 y LPS el día 1 siguiente a la transferencia adoptiva de células T. (Fig. 27A) Avance de la enfermedad clínica en 10 semanas. (Fig. 27B) Puntuación clínica a las 10 semanas. Figura 28. Detección de niveles séricos invivo de IL-22 (ng/mL) en ratones psoriáticos tratados con 16 mg/kg de 356A11 o un anticuerpo de control. Ratones tratados con IL-12 y LPS el día 1 siguiente a la transferencia adoptiva de células T. Figuras 29A-29D. Detección de los niveles séricos in vivo de (Fig. 29A) IL-17A, (Fig. 29B) IL-17, (Fig. 29C) IL-17A/F; y (Fig. 29D) IL-6 en ratones psoriáticos tratados con 16 mg/kg de 356A11 o un anticuerpo de control. Los ratones tratados con IL-12 y LPS el día 1 siguiente a la transferencia adoptiva de células T. Figuras 30A-30E. Expresión del gen de citoquina en las orejas de ratones psoriáticos tratados con 16 mg/kg de 356A11 o un anticuerpo de control. (Fig. 30A) IL-17. (Fig. 30B) IL-22. (Fig. 30C) IL-17F. (Fig. 30D) IFNy. (Fig. 30E) IL-6. Ratones tratados con IL-12 y LPS el día 1 siguiente a la transferencia adoptiva de células T. Figura 31. Análisis citométrico de flujo de células del nodulo linfático CD+4 mezcladas tratadas con PMA e ionomicina siguiente al aislamiento de ratones psoriáticos tratados con 16 mg/kg de 356A11 o un anticuerpo de control y manchadas para IL-22 e IL-17A; IL-22 e IL-17F; IL-17A e IL-17F; IL-22 y TNFa; IL-22 e IFNy; o TNFa e IFNy. Ratones tratados con IL-12 y LPS el día 1 siguiente a la transferencia adoptiva de células T. Figuras 32A-32E. Detección de citoquina en los supernatantes de células del nodulo linfático mezcladas aisladas de los ratones psoriáticos tratados con 16 mg/kg de 356A11 o un anticuerpo de control y estimuladas ex vivo con o sin anticuerpo anti-CD3 aglutinado en placa. (Fig. 32A) IL-22. (Fig. 32B) IL-6. (Fig. 32C) IFNy (Fig. 32D) IL-17A. (Fig. 32E) IL-17F. Ratones tratados con IL-12 y LPS el día 1 siguiente a la transferencia adoptiva de células T. Figuras 33A-33E. Expresión del gen de citoquina en células del nodulo linfático mezcladas aisladas de ratones psoriáticos tratados con 16 mg/kg de 356A11 o un anticuerpo de control y estimuladas ex vivo con anticuerpo anti-CD3 aglutinado en placa. (Fig. 33A) IL-22. (Fig. 33B) IL-6. (Fig. 33C) IFNy (Fig. 33D) IL-17A. (Fig. 33E) IL-17F. Ratones tratados con IL-12 y LPS el día 1 siguiente a la transferencia adoptiva de células T. Figuras 34A-34B. Evaluación de la enfermedad de ratones tratados con 16 mg/kg de 356A11 o anticuerpo de control en modelo murino de psoriasis. (Fig. 34A) Avance de la enfermedad clínica en 10 semanas. (Fig. 34B) Puntuación clínica a las 10 semanas . Figura 35. Detección de niveles séricos in vivo de IL-22 (ng/mL) en ratones psoriáticos tratados con 16 mg/kg de 356A11 o un anticuerpo de control. Figuras 36A-36H. Expresión del gen de citoquina en las orejas de ratones psoriáticos tratados con 16 mg/kg de 356A11 o un anticuerpo de control. (Fig. 36A) IL-22, (Fig. 36B) IL-17, (Fig. 36C) IL-17F, (Fig. 36D) IL-IF6 (IL-1 miembro de la familia 6), (Fig. 36E) IL-6, (Fig. 36F) IFNy, (Fig. 36G) IL-22 BO (proteína de aglutinación con IL-22) o (Fig. 36H) IL-22R1 (subunidad del receptor de IL-22) . Figuras 37A-37B. Evaluación de la enfermedad en ratones tratados con 16 mg/kg de 356A11 o anticuerpo de control en modelo de psoriasis murina. (Fig. 37A) Avance de la enfermedad clínica en 10 semanas. (Fig. 37B) Puntuación clínica a las 10 semanas. Ratones tratados con IL-12 y LPS el día 1 siguiente a la transferencia adoptiva de células T. Figura 38. Detección de niveles séricos in vivo de IL-22 (ng/mL) en ratones psoriáticos tratados con 16 mg/kg de 356A11 o un anticuerpo de control. Ratones tratados con IL-12 y LPS el día 1 siguiente a la transferencia adoptiva de células T. Figura 39A-39D. Detección de niveles séricos in vivo de (Fig. 39A) IL-17A y (Fig. 39B) IL-6 en ratones psoriáticos tratados con 16 mg/kg de 356A11 o un anticuerpo de control (sin coadministración de IL-12 y LPS) y (Fig. 39C) IL-17A y (Fig. 39D) IL-6 en ratones psoriáticas tratados con 16 mg/kg de 356A11 o un anticuerpo de control (IL-12 y LPS administrado el día 1 siguiente a la transferencia adoptiva de células T) .

Figuras 40A. Puntuación de la gravedad de la enfermedad media o (Fig. 40B) puntuación de la gravedad de la enfermedad el día 30 de 16 mg kg-1 de 356A11 administrado en días alternos en modelo CIA murino. Figura 41. Puntuación de la gravedad de la enfermedad media de 8 mg kg _1 de 356A11 administrado en días alternos, una vez por semana o dos veces por semana en modelo CIA murino . Figuras 42A-42C. Evaluación histológica (pata) del avance de la enfermedad en ratones tratados con (Fig. 42A) 8 mg kg"1 de 356A11 una vez por semana, (Fig. 42B) 8 mg kg _1 de 356A11 dos veces por semana, o (Fig. 42C) 8 mg kg _1 de 356A11 en días alternos. Figura 43. Evaluación histológica (puntuación media de la gravedad de la pata) del avance de la enfermedad en ratones tratados con 8 mg kg"1 de 356A11 una vez por semana, dos veces por semana o en días alternos. Figuras 44A-44B. Puntuaciones medias de la gravedad de la enfermedad provenientes de dos estudios separados de 8 mg kg"1 de 356A11 administrado una vez por semana en modelo CIA murino . Figuras 45A-45B. Evaluación histológica (pata) del avance de la enfermedad proveniente de dos estudios separados en ratones tratados con 8 mg kg"1 de 356A11 una vez por semana en modelo CIA murino. Figuras 46A-46C. Puntuaciones medias de la gravedad de la enfermedad provenientes de tres estudios separados de 8 mg kg" 1 de 368D04 administrado una vez por semana en modelo CIA murino . Figuras 47A-47C. Evaluación histológica (para) del avance de la enfermedad proveniente de tres estudios separados en ratones tratados con 8 mg kg"1 de 368D04 una vez por semana en modelo CIA murino. Figuras 48A-48B. Niveles séricos de (Fig. 48A) IL-6 (pg/ml) y (Fig. 48B) CXCL1 (ng/ml) provenientes de ratones tratados con 356A11 (8 mpk una vez por semana) en modelo CIA murino. DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION I. Definiciones Con el fin de que la presente invención pueda ser entendida con mayor facilidad, primero se definen ciertos términos. Las definiciones adicionales aparecen por toda la descripción detallada. El término "anticuerpo" se refiere a una inmunoglobulina o fragmento de la misma y comprende cualquier polipéptido que comprenda un fragmento aglutinante con antigeno o un dominio aglutinante con antigeno. El término incluye, pero sin limitación, anticuerpos policlonal, monoclonal, monoespecifico, poliespecifico, inespecifico, humanizado, humano, de cadena sencilla, quimérico, sintético, recombinante, híbrido, mutado, injertado y anticuerpos generados ín vitro. A menos que sea precedido de la palabra "intacto", el término "anticuerpo" incluye fragmentos de anticuerpo tales como Fab, F(ab' )2r Fv, scFv, Fd, dAb, y otros fragmentos de anticuerpo que retienen la función aglutinante con antígeno. Típicamente, tales fragmentos comprenderían un dominio aglutinante con antígeno.

Los términos "dominio aglutinante con antigeno" y "fragmento aglutinante con antigeno" se refieren a una parte de una molécula del anticuerpo que comprende aminoácidos responsables de la aglutinación especifica entre anticuerpo y antigeno. La parte del antigeno que es específicamente reconocida y aglutinada por el anticuerpo se denomina "epítopo." Un dominio aglutinante con antígeno podrá comprender una región variable de cadena liviana del anticuerpo (VL) y una región variable de cadena pesada del anticuerpo (VH) ; sin embargo, no tiene que comprender ambas. Los fragmentos Fd, por ejemplo, tienen dos regiones VH y a menudo retienen alguna función aglutinante con antígeno del dominio intacto aglutinante con antígeno. Ejemplos de fragmentos aglutinantes con antígeno de un anticuerpo incluyen (1) un fragmento Fab, un fragmento monovalente que tiene los dominios VL, VH, CL y CH1; (2) un fragmento F(ab')2, un fragmento bivalente que tiene dos fragmentos Fab enlazados por un puente de disulfuro en la región de bisagra; (3) un fragmento Fd que tiene los dominios VH y CH1; (4) un fragmento Fv que tiene los dominios VL y VH de un solo brazo de un anticuerpo, (5) un fragmento dAb ( ard y colaboradores (1989) Nature 341:544-546), el cual tiene un dominio VH; (6) una región determinante de la complementariedad aislada (CDR) y (7) una cadena sencilla Fv (scFv) . Aunque los dos dominios del fragmento Fv, VL y VH, son codificados por genes separados, pueden ser unidos, utilizando métodos recombinantes , mediante un enlazador sintético que les permite hacerse como una cadena de proteina única donde las regiones VL y VH forman pares con el fin de formar moléculas monovalentes (conocidas como Fv de cadena sencilla (scFv) ; véanse, verbigracia, Bird y colaboradores (1988) Science 242:423-426; y Huston y colaboradores (1988) Proc Nati. Acad. Sci. Estados Unidos de América 85:5879-5883): Estos fragmentos de anticuerpo son obtenidos utilizando técnicas convencionales conocidas por aquellos versados en el arte, y los fragmentos son evaluados por su función en la misma manera que los anticuerpos intactos . El término "cantidad efectiva" se refiere a una dosificación o cantidad que sea suficiente para regular la actividad IL-22 para mejorar los síntomas clínicos o lograr un resultado biológico deseado, verbigracia, actividad de célula T y/o célula B disminuida, supresión de autoinmunidad, supresión de rechazo del transplante, etc. El término "anticuerpo humano" incluye anticuerpo que tiene regiones constantes y variables correspondientes sustancialmente a las secuencias de inmunoglobulina de la línea de germen humana conocidas en el arte, incluyendo, por ejemplo, aquellos descritos por Kabat y colaboradores. (Véanse Kabat y colaboradores (1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242) . Los anticuerpos humanos de la invención podrán incluir residuos de aminoácido no codificados por las secuencias de inmunoglobulina de la linea de germen humana (verbigracia, mutaciones introducidas al azar o mutagénesis especificas del sitio in vitro o mediante mutación somática in vivo) , por ejemplo en las CDR, y en particular, CDR3. El anticuerpo humano puede tener por lo menos una, dos, tres, cuatro, cinco o más posiciones reemplazadas por un residuo de aminoácido que no sea codificado por la secuencia de inmunoglobulina de la linea de germen humana. La frase "inhibir" o "antagonizar" la actividad IL-22 y sus cognados se refiere a una reducción, inhibición o de otra forma disminución de por lo menos una actividad de IL-22 debido a la aglutinación con un anticuerpo anti-IL-22, donde la reducción es relativa a la actividad de IL-22 en la ausencia del mismo anticuerpo. La actividad puede ser medida utilizando cualquier técnica conocida en el arte, incluyendo, por ejemplo, de la forma descrita en los Ejemplos 7 y 9. La inhibición o antagonismo no necesariamente indica una eliminación total de la actividad biológica del polipéptido IL-22. Una reducción en la actividad podrá ser de aproximadamente del 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% o más. El término "interleucina-22" o "IL-22" se refiere a una citoquina de la clase II (que podrá ser mamífero) capaz de aglutinarse con IL-22R y/o un complejo receptor de IL-22R e IL-10R2 y tiene por lo menos una de las siguientes características: (1) una secuencia de aminoácido de un polipéptido IL-22 de mamífero de ocurrencia natural (longitud completa o forma madura) o un fragmento del mismo, verbigracia, una secuencia de aminoácido mostrada como SEQ ID N0:1 (humana) o SEQ ID NO: 3 (murina) o un fragmento de la misma; (2) una secuencia de aminoácido sustancialmente idéntica, verbigracia, a por lo menos el 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% idéntica a una secuencia de aminoácido mostrada como SEQ ID NO:l o sus aminoácidos 34-179 (humanos) o SEQ ID NO: 3 (murina) o un fragmento de la misma; (3) una secuencia -de aminoácido que es codificada por una secuencia de nucleótido IL-22 de mamífero de ocurrencia natural o un fragmento de la misma (verbigracia, SEQ ID NO: 2 o nucleótidos 71 a 610 (humana) o SEQ ID NO: 4 (murina) o un fragmento de la misma); (4) una secuencia de aminoácido codificada por una secuencia de nucleótido que es sustancialmente idéntica a una secuencia de nucleótido mostrada como SEQ ID NO: 2 o nucleótidos 71 a 610 de la misma (humana) o SEQ ID NO: 4 (murina) o un fragmento de la misma; (5) una secuencia de aminoácido codificada por una secuencia de nucleótido para degenerarse en una secuencia de nucleótido IL-22 de ocurrencia natural o un fragmento de la misma, verbigracia, SEQ ID NO: 2 (humana) o SEQ ID NO: (murina) o un fragmento de la misma; o (6) una secuencia de nucleótido que se hibridiza con una de las secuencias de nucleótido que anteceden bajo condiciones rigurosas, verbigracia, condiciones altamente rigurosas. La IL-22 podrá aglutinarse con IL-22R y/o un complejo receptor de IL-22R e IL-10R2 de origen mamífero, verbigracia, humano o ratón. La secuencia de nucleótido y la secuencia de aminoácido prevista de IL-22 humana se muestra en la SEQ ID NO: 2 y SEQ ID N0:1, respectivamente. La secuencia de aminoácido de IL-22 humana madura corresponde a aminoácidos 34-179 de la SEQ ID NO:l. El análisis de IL-22 humana recombinante revela muchos dominios estructurales. (Nagem y colaboradores (2002) Structure, 10:1051-62; Solicitud de Patente americana No. US 2002/0187512 Al) . El término "actividad de IL-22" se refiere a por lo menos un proceso celular iniciado o interrumpido como resultado de la aglutinación de IL-22 con un complejo receptor que consiste en IL-22R e IL-10R2 en la célula. Las actividades de IL-22 incluyen por lo menos uno, pero sin limitación a: (1) aglutinación de IL-22R o un complejo receptor de IL-22R e IL-10R2 (verbigracia, IL-22R humano o sin IL-10R2 humano); (2) asociación con las moléculas de transducción de señales (verbigracia, JAK-l) ; (3) estímulo de la fosforilación de proteínas STAT (verbigracia, STAT5, STAT3, o sus combinaciones); (4) activación de las proteínas STAT; y (5) modulación de (verbigracia, aumento o disminución) la proliferación, diferenciación, función celular efectora, actividad citolitica, secreción de citoquina, supervivencia o sus combinaciones, de células epiteliales, o células inmunes. Las células epiteliales incluyen, pero sin limitación, células de la piel, intestino, hígado y riñon, así como células endoteliales . Los fibroblastos incluyen, pero sin limitación, fibroblastos sinoviales. Las células inmunes podrán incluir células T CD8+ y CD4+, células NK, células B, macrófagos y megacariocitos . La actividad de IL-22 puede ser determinada in vitro, por ejemplo, utilizando el ensayo de inhibición del receptor de IL-22 de la forma descrita en los Ejemplos 2 y 6, el ensayo de secreción GROa en el Ejemplo 9 o el ensayo de proliferación VAF3 del Ejemplo 7. La actividad de IL-22 también puede ser determinado in vivo, por ejemplo, puntuando la progresión de una respuesta inmune o trastorno de la forma descrita en el Ejemplo 13. Conforme se utiliza aquí, "anticuerpo generado in vitro" se refiere a un anticuerpo donde la totalidad o parte de la región variable (verbigracia, por lo menos una CDR) es generada en una selección de célula no-inmune (verbigracia, una presentación de fago in vitro, un segmento de proteína o cualquier otro método en el cual las secuencias candidatas pueden ser ensayadas para determinar su capacidad de aglutinarse con un antígeno) . Este término excluye secuencias generadas por rearreglo genómico en una célula inmune. El término "aislado" se refiere a una molécula que es sustancialmente libre de su ambiente natural. Por ejemplo, una proteina aislada es sustancialmente libre de material celular u otras proteínas provenientes de la célula o fuente de tejido de la cual deriva. El término también se refiere a preparaciones donde la proteína aislada es suficientemente pura para las composiciones farmacéuticas; o por lo menos el 70-80% (p/p) puras; o por lo menos 80-90% (p/p) puras; o por lo menos 90-95% puras; o por lo menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100% (p/p) puras. La frase "porcentaje idéntico" o "porcentaje de identidad" se refiere a la similitud entre por lo menos dos secuencias diferentes. Este porcentaje de identidad puede ser determinado mediante algoritmos de alineación estándares, por ejemplo, la Herramienta de Alineación Local Básica (BLAST) descrita por Altstuhl y colaboradores ((1990) J. Mol. Biol., 215: 403-410); el algoritmo de Needleman y colaboradores ((1970) J. Mol. Biol., 48: 444-453); o el algoritmo de Meyers y colaboradores ((1988) Comput . Appl . Biosci., 4: 11-17). Un juego de parámetros podrá ser la matriz de puntuación Blosum 62 con una penalidad de brecha de 12, una penalidad de extensión de brecha de 4 y una penalidad de brecha del desplazamiento del marco de 5. El porcentaje de identidad entre dos secuencias de aminoácido o nucleótido también puede ser determinado utilizando el algoritmo de E. Meyers y W. Miller ((1989) CABIOS, 4:11-17) el cual ha sido incorporado en el programa ALIGN (versión 2.0) utilizando una tabla de residuo de peso PAM120, una penalidad de longitud de brecha de 12 y una penalidad de brecha de 4. El porcentaje de identidad también se calcula comparando secuencias de longitud similar.

El término "repertorio" se refiere a por lo menos una secuencia de nucleótido derivada total o parcialmente de por lo menos una secuencia que codifica por lo menos una inmunoglobulina . La(s) secuencia (s) podrá (n) ser generada (s) mediante redisposición in vivo de los segmentos V, D y J de cadenas pesadas y los segmentos V y J de cadenas livianas. Alternativamente, la(s) secuencia (s) puede (n) ser generada (s) a partir de una célula en respuesta a cuál redisposición ocurre, verbigracia, estimulo in vitro. Alternativamente, parte o la totalidad de la(s) secuencia (s) podrá (n) ser obtenida mediante empalme del DNA, síntesis de nucleótido, mutagénesis y otros métodos, véase, verbigracia, la Patente americana No. 5.565.332. Un repertorio podrá incluir solamente una secuencia o podrá incluir una pluralidad de secuencias, incluyendo unas en una colección genéticamente diversa. Los términos "aglutinación especifica" o "se aglutina específicamente" se refiere a dos moléculas que forman un complejo que es relativamente estable bajo condiciones fisiológicas. La aglutinación específica es caracterizada por una elevada afinidad y una capacidad baja a moderada de la forma distinguida de la aglutinación inespecifica que usualmente tiene una baja afinidad con una capacidad moderada a elevada. Típicamente, la aglutinación se considera específica cuando la constante de asociación K¾ es superior a 106M_1. Si fuere necesario, la aglutinación inespecifica puede ser reducida sin afectar sustancialmente la aglutinación específica variando las condiciones de aglutinación. Las condiciones de aglutinación apropiadas, tales como la concentración de anticuerpos, resistencia iónica de la solución, temperatura, tiempo permitido para la aglutinación, concentración de un agente de bloqueo (verbigracia, albúmina sérica, caseína láctea), etc. podrán ser optimizadas por el artesano versado utilizando técnicas de rutina. Las condiciones ilustrativas se estipulan en el Ejemplo 3, pero otras condiciones conocidas por la persona de conocimientos ordinarios en el arte caen dentro del alcance de la presente invención . Conforme se utiliza aquí, el término "riguroso" describe condiciones para la hibridización y lavado. Aquellos versados en el arte conocen condiciones rigurosas y ellas pueden encontrarse en Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6. Se describen métodos acuosos y no acuosos en esa referencia y cualquiera de ellos puede ser utilizado. Un ejemplo de condiciones de hibridización rigurosas es la hibridización en 6X cloruro de sodio/citrato de sodio (SSC) aproximadamente a 45°C, seguida de por lo menos un lavado en 0,2 SSC, 0,1% SDS a 50°C. Un segundo ejemplo de condiciones de hibridización rigurosas es la hibridización en 6X SSC aproximadamente a 45°C, seguida de por lo menos un lavado en 0,2X SSC, 0,1% SDS a 55°C. Otro ejemplo de condiciones de hibridización rigurosas es la hibridización en 6X SSC aproximadamente a 45°C, seguida de por lo menos un lavado en 0,2X SSC, 0,1% SDS a 60°C. Un ejemplo adicional de condiciones de hibridización rigurosas es la hibridización en 6X SSC aproximadamente a 45°C, seguida de por lo menos un lavado en 0,2X SSC, 0,1% SDS a 65°C. Las condiciones rigurosas elevadas incluyen hibridización en 0,5 fosfato de sodio, 7% SDS a 65°C, seguida de por lo menos un lavado a 0,2X SSC, 1% SDS a 65°C. La frase "sustancialmente conforme se indica", "sustancialmente idéntica" o "sustancialmente homologa" significa que la secuencia de aminoácido o nucleótido relevante (verbigracia, CDR, dominio VH o VL será idéntica o tendrá diferencias insustanciales (a través de sustituciones de aminoácido conservadas) en comparación con las secuencias que se indican. Las diferencias insustanciales incluyen cambios de aminoácido menor, tales como 1 ó 2 sustituciones en una secuencia de 5 aminoácidos de una región especificada. En el caso de anticuerpos, el segundo anticuerpo tiene la misma especificidad y tiene por lo menos el 50% de la afinidad del primer anticuerpo. Las secuencias sustancialmente idénticas o homologas (verbigracia, por lo menos aproximadamente el 85% de identidad de secuencia) a las secuencias divulgadas aquí también forman parte de esta solicitud. En alguna modalidad, la identidad de secuencia puede ser aproximadamente el 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más. Alternativamente, la existe identidad u homología sustancial cuando los segmentos de ácido nucleico se hibridizarán bajo condiciones de hibridización selectivas (verbigracia, condiciones de hibridización altamente rigurosas), en el complemento de la trenza. Los ácidos nucleicos podrán estar presentes en células enteras, en un lisato de célula o en forma parcialmente purificada o sustancialmente pura. El término "agente terapéutico" es una sustancia que trata o ayuda en el tratamiento de un trastorno médico. Los agentes terapéuticos podrán incluir, pero sin limitación, sustancias que modulan las células inmunes o respuestas inmunes de forma que complemente la actividad de IL-22 de los anticuerpos anti-IL-22. Aquí se describen ejemplos no limitantes y usos de agentes terapéuticos. [00108] Conforme se utiliza aquí, una "cantidad de eficacia terapéutica" de un anticuerpo IL-22 se refiere a una cantidad de un anticuerpo que es efectiva, basada en una administración de dosis sencilla o múltiple a un sujeto (tal como paciente humano) para tratar, evitar, curar, retardar, reducir la gravedad y/o mejorar por lo menos un síntoma de un trastorno o trastorno recurrente o prolongar la supervivencia del sujeto más allá de la esperada en la ausencia de ese tratamiento . El término "tratamiento" se refiere a una medida terapéutica o preventiva. El tratamiento podrá ser administrado a un sujeto que tenga un trastorno médico o quien, a la larga, podrá adquirir el trastorno, con el fin de evitar, curar, retardar, reducir la gravedad y/o mejorar uno o más síntomas de un trastorno o trastorno recurrente o con el fin de prolongar la supervivencia de un sujeto más allá de la esperada en la ausencia de ese tratamiento. II. Anticuerpos anti-IL-22 La divulgación proporciona anticuerpos anti-IL-22 novedosos que comprenden fragmentos novedosos que se aglutinan con antígeno. Numerosos métodos conocidos por aquellos versados en la técnica están disponibles para obtener anticuerpos o sus fragmentos aglutinantes con antígeno. Por ejemplo, pueden producirse anticuerpos utilizando métodos DNA recombinantes (Patente americana No. 4.816.567) . Los anticuerpos monoclonales también podrán ser producidos mediante generación de hibridomas (véase, verbigracia, Kohler y Milstein (1975) Nature, 256: 495-499) de conformidad con los métodos conocidos. Los hibridomas formados de esta manera son luego tamizados utilizando métodos estándares, tales como ensayo inmunoabsorbente enlazado con enzima (ELISA) y el análisis de resonancia plasmón superficial (BIACORE™) , para identificar uno o más hibridomas que producen un anticuerpo que se aglutina específicamente con un antígeno especificado. Podrá utilizarse cualquier forma del antígeno especificado como el inmunógeno, verbigracia, antígeno recombinante , formas de ocurrencia natural, cualesquiera variantes o fragmentos de los mismos, así como su péptido antigénico. Un método ilustrativo para hacer anticuerpos incluye la selección de las bibliotecas de la expresión de proteína, verbigracia, bibliotecas de presentación de fago o ribosoma. Se describe la presentación de fago, por ejemplo, en Ladner y colaboradores, Patente americana No. 5.223.409; Smith (1985) Science 228:1315-1317; Clackson y colaboradores (1991) Nature, 352: 624-628; Marks y colaboradores (1991) J. Mol. Biol . , 222: 581-597 O 92/18619; WO 91/17271; O 92/20791; O 92/15679; WO 93/01288; WO 92/01047; WO 92/09690; y WO 90/02809. Además del uso de las bibliotecas de presentación, el antígeno especificado puede ser utilizado para inmunizar un animal no-humano, verbigracia, un roedor, verbigracia, un ratón, hámster o rata. En una modalidad, el animal no-humano incluye por lo menos parte de un gen de inmunoglobulina humana. Por ejemplo, es posible realizar por ingeniería cepas de ratón deficientes en la producción de anticuerpos del ratón con grandes fragmentos del Ig loci humano. Utilizando la tecnología de hibridoma, los anticuerpos monoclonales específicos al antígeno derivados de los genes con la especificidad deseada podrán ser producidos y seleccionados. Véase, verbigracia, XENOMOUSE™, Green y colaboradores )1994) Nature Genetics 7:13-21, US 2003-0070185, O 96/34096, publicada el 31 de octubre de 1996, y Solicitud PCT No. PCT/US96/05928, presentada el 29 de abril de 1996. En otra modalidad, se obtiene un anticuerpo monoclonal a partir del animal no-humano y luego quimérico modificado, verbigracia, humanizado, desinmunizado podrá ser producido utilizando técnicas de DNA recombinante conocidas en el arte. Se ha descrito una variedad de enfoques para hacer anticuerpos quiméricos. Véase orrison y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci U.S. A. 81:6851, 1985; Takeda y colaboradores, Nature 314:452, 1985, Cabilly y colaboradores, Patente americana No. 4.816.567; Boss y colaboradores, Patente americana No. 4.816.397; Tanaguchi y colaboradores, Publicación de Patente europea EP171496; Publicación de Patente europea 0173494, Patente del Reino Unido GB 2177096B. Los anticuerpos humanizados también podrán ser producidos, por ejemplo, utilizando ratones transgénicos que expresan genes humanos de cadena pesada y liviana, pero son incapaces de expresar los genes de cadena pesada y liviana de la inmunoglobulina de ratón endógena. Winter describe un método de injerto de CDR ilustrativo que podrá utilizarse para preparar los anticuerpos humanizados descritos aquí (Patente americana No. 5.225.539) . Todas las CDR de un anticuerpo humano particular podrán ser reemplazadas con por lo menos una parte de una CDR no-humana o apenas parte de las CDR podrá ser reemplazada por CDR no-humana. Solamente es necesario reemplazar el número de CDR requeridas para la aglutinación del anticuerpo humanizado con el antigeno predeterminado. Los anticuerpos humanizados o sus fragmentos pueden ser generados reemplazando secuencias del dominio variable Fv que no se envuelven directamente en la aglutinación con el antigeno con secuencias equivalentes provenientes de dominios variables Fv humanos. Métodos ilustrativos para generar anticuerpos humanizados o sus fragmentos son proporcionados por Morrison (1985) Science 229:1202-1207; por Oi y colaboradores (1986) Bio Techniques 4:214; y por US 5.585.089; US 5.693.761; US 5.693.762; US 5.859.205; y US 6.407.213. Aquellos métodos incluyen aislamiento, manipulación y expresión de las secuencias de ácido nucleico que codifican la totalidad o parte de los dominios variables Fv de inmunoglobulina proveniente de por lo menos una de entre una cadena pesada o liviana. Esos ácidos nucleicos podrán ser obtenidos a partir de un hibridoma que produce un anticuerpo contra un blanco predeterminado, de la forma descrita anteriormente, asi como de otras fuentes. El DNA recombinante que codifica la molécula del anticuerpo humanizado puede ser luego clonada en un vector de expresión apropiado. En ciertas modalidades, se optimiza un anticuerpo humanizado mediante la introducción de sustituciones conservadoras, sustituciones de secuencia por consenso, sustituciones de linea de germen y/o retromutaciones . Tales moléculas de inmunoglobulina alteradas pueden ser hechas mediante cualquiera de varias técnicas conocidas en el arte (verbigracia, Teng y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci. U.S. A. 80: 7308-7312, 1983; Kozbor y colaboradores, Immunology Today, 4: 7279, 1983; Olsson y colaboradores, Meth, Enzymol., 92: 3-16, 1982), y podrán hacerse de conformidad con las enseñanzas de la Publicación PCT WO92/06193 o EP 0239400) . Un anticuerpo o fragmento del mismo también podrá ser modificado mediante deleción especifica de epitopos de célula T o "desinmunización" mediante los métodos divulgados en el documento WO 98/52976 y WO 00/34317. En resumen, los dominios variables de cadena pesada y liviana de un anticuerpo pueden ser analizados con respecto a las propiedades que se aglutinan con la Clase II HC; estos péptidos representan epitopos de célula T potenciales (definidos en WO 98/52976 y WO 00/34317) . Para la detección de epitopos de células T potenciales, puede aplicarse un enfoque de modulación por computador llamado "hilado con péptido" y además pueden realizarse búsquedas en una base de datos de los péptidos de aglutinación de la Clase II MHC humanos para identificar los motivos presentes en las secuencias VH y VL, de la forma descrita en el documento WO 98/52976 y WO 00/34317. Estos motivos se aglutinan con cualquiera de los 18 alotipos DR de la Clase II MHC importantes y asi constituyen epitopos de célula T potenciales. Los epitopos de célula T potenciales detectados pueden ser eliminados sustituyendo números pequeños de residuos de aminoácido en los dominios variables, o preferiblemente, mediante sustituciones de aminoácidos sencillas. Típicamente, se hacen sustituciones conservadoras. A menudo, pero no exclusivamente, podrá utilizarse un aminoácido común a una posición en las secuencias de anticuerpo de la línea de germen humana. Las secuencias de líneas de germen humanas, verbigracia, se divulgan en Tomlinson, y colaboradores )1992) J Mol Biol . 227:776-798; Cook, G.P. y colaboradores (1995) Immunol. Today Vol . 16(5): 237-242; Chothia, D. y colaboradores (1992) J. Mol. Biol. 227:799-817; y Tomlinson y colaboradores (1995) EMBO J 14:4628-4638. El directorio de la V BASE proporciona un directorio amplio de secuencias de región variable de inmunoglobulina humana (recopiladas por Tomlinsen, I.A. y colaboradores MRC Centre for Protein Engineering, Cambridge, UK) . Estas secuencias pueden ser utilizadas como una fuente de secuencia humana, verbigracia, para las regiones marco y CDR. También pueden usarse regiones marco humanas por consenso, verbigracia, de la forma descrita en la Patente americana No. 6.300.064. En ciertas modalidades, un anticuerpo puede contener una constante de inmunoglobulina alterada o región Fe. Por ejemplo, un anticuerpo producido de conformidad con las enseñanzas aquí contenidas podrá aglutinarse más fuertemente o con más especificidad con las moléculas efectoras tales como receptores de complemento y/o Fe, que pueden controlar varias funciones inmunes del anticuerpo tales como actividad de célula efectora, lisis, actividad mediada por complemento, aclaración del anticuerpo y media vida del anticuerpo. Los receptores Fe típicos que se aglutinan con una región Fe de un anticuerpo (verbigracia, un anticuerpo IgG) incluyen, pero sin limitación, receptores de las subclases FcyRI, FcyRII y FcyRI II y FcRn, incluyendo variantes alélicas y alternativamente formas empalmadas de estos receptores. Los receptores Fe son revisados en Ravetch y Kinet, Annu . Rev. Immunol. 9:457-92, 1991; Capel y colaboradores, Immunomethods 4:2534, 1994; y de Haas y colaboradores, J. Lab. Clin. Med. 126:330-41, 1995). Para las técnicas de producción adicionales, véase Antibodies: A Laboratory Manual, eds . Harlow y colaboradores, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988. La presente invención no está limitada necesariamente a cualquier fuente particular, método de producción u otras características especiales de un anticuerpo . Los anticuerpos, también conocidos como inmunoglobulinas , son típicamente proteínas glicosiladas tetraméricas compuestas de dos cadenas livianas (L) de aproximadamente 25 kDa cada una y dos cadenas pesadas (H) de aproximadamente 50 kDa cada una. Podrán encontrarse en los anticuerpos, dos tipos de cadena liviana, llamadas lambda y kappa. Dependiendo de la secuencia de aminoácido del dominio constante de las cadenas pesadas, pueden asignarse las inmunoglobulinas a cinco clases de magnitud: A, D, E G y M y varias de éstas podrán ser divididas adicionalmente en subclases (isotipos) , verbigracia, IgGi, IgG2, IgG3, IgG4, IgAi, y IgA2. Cada cadena liviana incluye un dominio (VL) variable (V) del terminal N y un dominio (CL) constante (C) . Cada cadena pesada incluye un dominio (VH) V del terminal N, tres o cuatro dominios C (CHS) y una región de bisagra. El dominio CH más próximo a VH es designado CH1. Los dominios VH y VL consisten en cuatro regiones de secuencias relativamente conservadas llamadas regiones marco (FR1, FR2, FR3 y FR4 ) que forman un andamio para tres regiones de secuencias hipervariables (regiones que determinan la complementariedad, CDR) . Las CDR contienen la mayoría de los residuos responsables de las interacciones específicas del anticuerpo con el antígeno. Las CDR se denominan CDR1, CDR2 y CDR3. En consecuencia, los constituyentes de CDR en la cadena pesada son denominan Hl, H2 y H3, mientras los constituyentes CDR en la'cadena liviana se denominan Ll, L2 y L3. La CDR3 es típicamente la mayor fuente de diversidad molecular dentro del sitio de aglutinación del anticuerpo. H3, por ejemplo, puede ser tan corto como dos residuos de aminoácido o superior a 26 aminoácidos. Las estructuras de la subunidad y las configuraciones tridimensionales de diferentes clases de inmunoglobulinas son bien conocidas en el arte. Para una revisión de la estructura del anticuerpo, véase Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, eds . Harlow y colaboradores, 1988. Una persona versada en la técnica reconocerá que cada estructura de subunidad, verbigracia, una estructura de CH, VH, CL, VL, CDR, FR, comprende fragmentos activos, verbigracia, la porción de la subunidad VH, VL o CDR que se aglutina con el antígeno, es decir, el fragmento que se aglutina con el antígeno o verbigracia, la porción de la subunidad CH que se aglutina y/o activa un receptor Fe y/o complemento. Las CDR típicamente se refieren a las CDR de Kabat, de la forma descrita en Sequences of Proteins of Immunological Interest , US Department of Health and Human Services (1991), eds. Kabat y colaboradores. Otro estándar para caracterizar el sitio de aglutinación del antígeno es referirse a los circuitos hipervariables descritos por Chothia. Véase, verbigracia, Chothia, D. y colaboradores (1992) J. Mol. Biol . 227:799-817; y Tomlinson y colaboradores (1995) EMBO J. 14:4628-4638: Todavía otro estándar es la definición AbM utilizada por el software de modelación de anticuerpos AbM de Oxford Molecular. Véase, generalmente, verbigracia, Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains. En Antibody Engineering Lab Manual (Ed. : Duebel, S. y Kontermann, R. , Springer-Verlag, Heidelberg) . Las modalidades descritas con respecto a las CDR de Kabat pueden ser alternativamente implementadas utilizando relaciones descritas similares con respecto a los circuitos hipervariables de Chothia o los circuitos definidos por AbM. El fragmento Fab (Fragmento de aglutinación al antígeno) consiste en dominios VH-CH1 y VL-CL enlazados covalentemente mediante un enlace de disulfuro entre las regiones constantes. El fragmento Fv es más pequeño y consiste en dominios VH y VL enlazados de manera no-covalente . Para superar la tendencia de dominios enlazados de manera no-covalente para disociar, puede construirse un fragmento de Fv de cadena sencilla (scFv) . El scFv contiene un polipéptido flexible que enlaza (1) el término C de VH con el término N de VL o (2) el término C de VL con el término N de VH. Podrá utilizarse un péptido 15-mer (Gly4Ser) como un enlazador, pero se conocen otros enlazadores en el arte. La secuencia de genes del anticuerpo después del ensamblaje y la mutación somática es altamente variada y se estiman que estos genes variados codifican 1010 moléculas de anticuerpo diferentes ( Immunoglobulin Genes, 2nd ed. , eds, Jonio y colaboradores, Academic Press, San Diego, CA, 1995) . Un "anticuerpo bifuncional" o "biespecifico" es un anticuerpo híbrido artificial que tiene dos pares de cadena pesada/liviana diferentes y dos sitios de aglutinación diferentes. Los anticuerpos biespecificos pueden ser producidos mediante una variedad de métodos incluyendo la fusión de hibridomas o el enlace de fragmentos Fab' . Véanse, verbigracia, Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990); Kostelny y colaboradores, J. Immunol. 148, 1547-1553 (1992) . En una modalidad, el anticuerpo biespecífico comprende un primer polipéptido de dominio aglutinante, tal como un fragmento Fab' , enlazado por medio de una región constante de inmunoglobulina con un segundo polipéptido de dominio aglutinante. InmunoFarraacéuticos Modulares Pequeños (SMIP™) proporcionan un ejemplo de una molécula variante que comprende un polipéptido de dominio aglutinante. Los SMIP y sus usos y aplicaciones se divulgan, verbigracia, en la Solicitud de Patente publicada americana Nos. 2003/0118592, 2003/0133939, 2004/0058445, 2005/0136049, 2005/0175614, 2005/0180970, 2005/0186216, 2005/0202012, 2005/0202023, 2005/0202028, 2005/0202534 y 2005/0238646 y sus miembros de la familia de patentes conexas, todo lo cual queda incorporado aquí por referencia en su totalidad. 5 Un SMIP se refiere típicamente a una proteína de fusión de inmunoglobulina con dominio aglutinante que incluye un polipéptido de dominio aglutinante que se fusiona o de otra forma se conecta con una bisagra de inmunoglobulina o polipéptido de la región que actúa como bisagra, el cual a su vez se fusiona o de otro modo se conecta con una región que comprende una o más regiones constantes nativas o hechas por ingeniería provenientes de una cadena pesada de inmunoglobulina, distinta a CH1, por ejemplo, las regiones CH2 y CH3 de IgG e IgA o las regiones CH3 y CH4 de IgE (véase, verbigracia, U.S. 2005/0136049 de Ledbetter, J. y colaboradores, la cual queda incorporada aquí por referencia, para obtener una descripción más completa) . La proteína de fusión de inmunoglobulina del dominio aglutinante puede incluir además una región que incluye un polipéptido de la región constante CH2 de cadena pesada de inmunoglobulina hecha por ingeniería (o CH3 en el caso de una construcción derivada en su totalidad o en parte de IgE) que se fusiona o de otra forma se conecta con el polipéptido de la región de bisagra y un polipéptido de la región constante CH3 de cadena pesada de inmunoglobulina (o CH4 en el caso de una construcción derivada en su totalidad o en parte de IgE) que se fusiona o de otra forma se conecta con el polipéptido de la región constante CH2 (o CH3 en el caso de una construcción derivada en su totalidad o en parte de IgE) . Típicamente, tales proteínas de fusión de inmunoglobulina del dominio aglutinante son capaces de por lo menos una actividad inmunológica seleccionada a partir del grupo que consiste en citotoxicidad mediada por célula dependiente de anticuerpo, fijación de complemento y/o aglutinación con un blanco, por ejemplo, un antigeno blanco; tal como IL-22 humana. Las proteínas terapéuticas, es decir, una proteína o péptido que tiene un efecto biológico sobre una región en el cuerpo en el cual actúa o en una región del cuerpo en el cual actúa remotamente por medio de intermedios, también son útiles para la puesta en práctica de la invención. Una proteína terapéutica puede incluir miméticas. Las miméticas son moléculas contentivas de péptido que simulan elementos de estructura secundaria de la proteína. Véase, por ejemplo, Johnson y colaboradores, "Peptide Turn Mimetics" in BIOTECHNOLOGY AND PHARMACY, Pezzuto y colaboradores, Eds . , Chapman y Hall, Nueva York (1993), la cual queda incorporada aquí por referencia. El razonamiento subyacente por detrás del uso de mimética de péptido es que la espina dorsal de péptido de las proteínas existen principalmente para orientar las cadenas secundarias de aminoácido de tal forma que facilite las interacciones moleculares, tales como aquellas del anticuerpo y antígeno. Se espera que una mimética de péptido permita interacciones moleculares similares a la molécula natural. Estos principios podrán ser utilizados para realizar por ingeniería moléculas de segunda generación que tengan muchas de las propiedades naturales de los péptidos blanco discutidos aquí, pero con características alteradas y hasta mejoradas . Otras modalidades de las proteínas terapéuticas incluyen proteínas de fusión. Estas moléculas generalmente tienen la totalidad o una porción sustancial de un péptido blanco, por ejemplo, IL-22, enlazado en el término N o C, con la totalidad o una porción de un segundo polipéptido o proteína. Por ejemplo, las funciones podrán emplear secuencias líderes provenientes de otras especies para permitir la expresión recombinante de una proteína en un huésped heterólogo. Otra fusión útil incluye la adición de un dominio inmunológicamente activo, tal como epítopo de anticuerpo, para facilitar la purificación de la proteína de fusión. La inclusión de un sitio de partición en o cerca del empalme de- fusión facilitará la remoción del polipéptido extraño después de la purificación. Otras fusiones útiles incluyen el enlace de dominio funcionales, tales como sitios activos provenientes de las enzimas, dominios de glicosilación, señales de blanco celular o regiones transmembranas. Ejemplos de proteínas o péptidos que podrán ser incorporados en una proteína de fusión incluyen proteínas citostáticas , proteínas citocidas, agentes proaptosis, agentes antiangiogénicos, hormonas, citoquinas, factores del crecimiento, fármacos de péptidos, anticuerpos, fragmentos Fab de anticuerpos, antígenos, proteínas receptoras, enzimas, lectinas, proteínas MHC, proteínas para adhesión de células y proteínas aglutinantes. Aquellos versados en el arte conocen bien los métodos para la generación de proteínas de fusión. Tales proteínas pueden ser producidas, por ejemplo, mediante sujeción química utilizan reactivos de enlace cruzado bifuncionales , por .medio de la síntesis de novo de la proteína de fusión completa o mediante sujeción de una secuencia de DNA que codifica el péptido blanco a una secuencia de DNA codificando el segundo péptido o proteína, seguida de la expresión de la proteína de fusión intacta . En una modalidad, el péptido blanco, por ejemplo, IL-22, se fusiona con una región constante de cadena pesada de inmunoglobulina , tal como un fragmento Fe, el cual contiene dos dominios de región constante y una región de bisagra pero carece de la región variable (Véase, Patentes americanas Nos. 6.018.026 y 5.750.375, la cual queda incorporada aquí por referencia) . La región Fe podrá ser una región Fe de ocurrencia natural o podrá ser alterada para mejorar ciertas calidades, tales como calidades terapéuticas, tiempo de circulación, agregación reducida, etc. Los péptidos y proteínas fusionadas con una región Fe típicamente presentan una mayor media vida in vivo que su similar sin fusión. Igualmente, una fusión con una región Fe permite la dimerización/multimerización del polipéptido de fusión. Las moléculas VHH (o nanocuerpos) , como son conocidas por el artesano versado, son dominios variables de cadena pesada derivados de inmunoglobulinas naturalmente desprovistas de cadenas livianas, tales como aquellas derivadas de Camelidae descritas en el documento WO9404678, el cual queda incorporado aquí por referencia. Tal molécula VHH puede ser derivada de anticuerpos desarrollados en especies de Camelidae, por ejemplo, en el camello, llama, dromedario, alpaca y guanaco y a veces se llama dominio variable camélido o camelizado. Véase, verbigracia, Muyldermans, J. Biotechnology (2001) 74 (4 ): 277-302, cuyo documento queda incorporado aquí por referencia. Otras especies además de las Camelidae podrán producir anticuerpos de cadena pesada naturalmente desprovisto de cadena liviana. Las moléculas VHH son aproximadamente 10 veces más pequeñas que las moléculas IgG. Son polipéptidos sencillos y muy estables, que resisten condiciones extremas de pH y temperatura. Además, son resistentes a la acción de proteasas que no es el caso para los anticuerpos convencionales. Además, la expresión in vitro de VHH produce elevado rendimiento, VHH funcionales dobladas adecuadamente. Además, los anticuerpos generados en Camélidas reconocerán epitopos distintos a aquellos reconocidos por anticuerpos generados in vitro a través del uso de bibliotecas de anticuerpos o por medio de la inmunización de mamíferos distintos a las Camélidas (véase el documento WO 8749805, el cual queda incorporado aquí por referencia) . Un aspecto de la presente invención comprende anticuerpos y fragmentos de aglutinación con antigeno que se aglutinan con IL-22. La divulgación proporciona CDR novedosas derivadas de las bibliotecas de gen de inmunoglobulina humana. La estructura para llevar una CDR es generalmente una porción o cadena pesada o liviana de la misma, donde se ubica la CDR en una región de CDR de ocurrencia natural. Las estructuras y ubicaciones de dominios variables podrán ser determinadas de la forma descrita en Kabat y colaboradores, Sequences of Proteins of Immunological Interest, No. 91-3242, National Institutes of Health Publications, Bethesda, MD (1991) . En las Figuras 7-10 se contemplan las secuencias de DNA y aminoácido (AA) de las modalidades ilustrativas de los anticuerpos anti-IL-22 de la presente invención, incluyendo sus fragmentos scFv, dominios VH y VL y CDR y los mismos son enumerados en las Tablas 1 y 7. Veinte modalidades especificas de los anticuerpos sin linea de germen son identificados como GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, y 356A11. Las posiciones CDR en los dominios VH y VL de los anticuerpos sin linea de germen se enumeran en la Tabla 2. Quince modalidades especificas de los anticuerpos con linea de germen se identifican como GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 062A09, 087B03, 166B06, 166G05, 354A08, 355B06, 355E04, 356A11, y 368D04.

Tabla 1A: Secuencias de Aminoácido y Nucleótido de Dominios VH y VL, Fv y CDR de Anticuerpos sin línea de germen Tabla IB: Secuencias de Aminoácido y Nucleótido de Dominios VH y VL, Fv y CDR de Anticuerpos sin línea de germen Tabla 2: Posiciones de CDR dentro de las Secuencias de Aminoácido del Anticuerpo sin línea de germen de los Dominios VH y VL 10 15 Los anticuerpos anti-IL-22 de la presente invención podrán comprender opcionalmente regiones constantes de anticuerpos o partes de las mismas. Por ejemplo, podrá sujetarse un dominio VL en su extremo terminal C a un dominio constante de cadena liviana como CK o CX. Igualmente, un dominio VH o parte del mismo podrá ser sujetado a la totalidad o parte de una cadena pesada como IgA, IgD, IgG e IgM y cualquier subclase de isotipo. Las regiones constantes son conocidas en el arte (véase, por ejemplo, Kabat y colaboradores, Sequences of Proteins of Immunological Interest, No. 91-3242, National Institutes of Health Publications, Bethesda, MD (1991)). Por consiguiente, los anticuerpos dentro del alcance de la presente invención incluyen dominios VH y VL o una porción de los mismos, combinados con regiones constantes conocidas en el arte. Ciertas modalidades comprenden un dominio VH, un dominio VL o una combinación de los mismos, del fragmento Fv proveniente de GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, ó 356A11. Otra modalidad comprende un dominio VH, un dominio VL o una combinación de los mismos, del fragmento Fv a partir de un anticuerpo seleccionado a partir de 354A08, 098B03 y 368D04. Las modalidades adicionales comprenden una, dos, tres, cuatro, cinco o seis regiones determinantes de complementariedad (CDR) a partir de los dominio VH y VL. Los anticuerpos cuyas secuencias de CDR se incluyen en la SEQ ID NO: 5-13, 23-31, 41-49, 59-67, 77-85, 95-103, 113-121, 131-139, 149-157, 167-175, 185-193, 203-211, 221-229, 239-247, 257-265, 275-283, 293-301, 311-319, 329-337, 347-355, 365-373, 383-391, 401-409, 419-427, 437-445, 455-463, 473-481, 491-499, 509-517, 527-535, 545-553, 563-571, 581-589, 599-607, ó 617-625 quedan comprendidos dentro del alcance de la presente invención. Por ejemplo, en una modalidad, un anticuerpo comprende un fragmento de H3 del dominio VH de GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, ó 356A11 con lineas de germen o sin linea de germen i a partir de un anticuerpo seleccionado a partir de 356A11, 354A08, 087B03, y 368D04. En ciertas modalidades, los dominios VH y/o VL tienen lineas de germen, es decir, las regiones marco (FR) de estos dominios son mutadas utilizando técnicas de biología molecular convencional para coincidir con aquellas producidas mediante células con línea de germen. En otras modalidades, las secuencias FR permanecen divergidas de las secuencias de líneas de germen por consenso. En una modalidad de la presente invención, en la Tabla 7 se muestran los anticuerpos con línea de germen. En una modalidad, la invención proporciona secuencias de aminoácido y ácido nucleico para los GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, ó 356A11 con linea de germen. Las secuencias de aminoácido y nucleótido para el dominio VH de los GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 062A09, 087B03, 166B06, 166G05, 354A08, 355B06, 355E04, 356A11, y 368D04 con linea de germen se muestran en la Tabla 7 y en la Figura 8. Las secuencias de aminoácido y nucleótido para el dominio VL de los GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 062A09, 087B03, 166B06, 166G05, 354A08, 355B06, 355E04, 356A11, y 368D04 con linea de germen también se muestran en la Tabla 7 y en la Figura 8. En una modalidad, se utiliza la mutagénesis para hacer un anticuerpo más similar a una o más secuencias de linea de germen. Esto podrá ser deseable cuando se introducen mutaciones en la región marco de un anticuerpo a través de mutagénesis somática o a través de una PCR tendiente a errores. Las secuencias de linea de germen para los dominios VH y VL pueden ser identificadas realizando alineaciones de secuencia de aminoácido y ácido nucleico contra la base de datos VBASE (MRC Center for Protein Engineering, UK) . VBASE es un directorio amplio de todas las secuencias de regiones variables de linea de germen humana recopiladas desde más de mil secuencias publicadas, incluyendo aquellas en las presentes ediciones de las bibliotecas de datos del Genbank y EMBL. En algunas modalidades, las regiones FR de los scGvs son mutadas de conformidad con las pares más cercanos en la base de datos VBASE y las porciones CDR se mantienen intactas. En algunas modalidades, los anticuerpos de la presente invención reaccionan específicamente con un epítopo que es el mismo que el epítopo reconocido por GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, ó 356A11, de tal modo que inhiban en forma competitiva la aglutinación de GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, ó 356A11 con la IL-22 humana. Algunos anticuerpos pueden ser determinados en ensayos de aglutinación competitivos. En una modalidad, el anticuerpo o su fragmento aglutinante con antígeno, se aglutina con un epítopo IL-22 que es reconocido por 368B04,- de tal modo que el anticuerpo inhibe competitivamente la aglutinación de 368B04 con la IL-22 humana. En otra modalidad, el anticuerpo o su fragmento aglutinante con antígeno, se aglutina con el epítopo IL-22 que es reconocido por 356A11, de tal modo que el anticuerpo inhiba competitivamente la aglutinación de 356A11 con la IL-22. En otra modalidad, el anticuerpo o su fragmento aglutinante con antígeno, se aglutina con un epítopo que es reconocido por 354A08, de tal modo que el anticuerpo inhiba competitivamente la aglutinación de 354A08 con la IL-22 humana. En otra modalidad, el anticuerpo, o su fragmento aglutinante con antigeno, se aglutina con un epitopo IL-22 que es reconocido por 087B03, de tal modo que el anticuerpo inhiba competitivamente la aglutinación de 087B03 con la IL-22 humana. En una modalidad, la constante de asociación (KA) de estos anticuerpos para la IL-22 humana es por lo menos 106 NT1. En otra modalidad, la constante de asociación de estos anticuerpos para la IL-22 humana es por lo menos 109 M_1. En otras modalidades, la constante de asociación de estos anticuerpos para la IL-22 humana es por lo menos 1010 M"1, por lo menos 1011 M_1 o por lo menos 1012 M"1. La afinidad de aglutinación podrá ser determinada utilizando técnicas conocidas en el arte, tal como ELISA, tecnología de biosensor, tal como análisis de interacción bioespecí fico u otras técnicas incluyendo aquellas descritas en esta solicitud. Se contempla que los anticuerpos de la presente invención podrán aglutinarse con otras proteínas, tales como, por ejemplo, proteínas recombinantes que comprenden la totalidad o una porción de IL-22. La persona de conocimientos ordinarios en la técnica reconocerá que los anticuerpos divulgados podrán ser utilizados para detectar, medir y/o inhibir proteínas que difieren algo de la IL-22. Por ejemplo, estas proteínas podrán 7 ser homólogos de IL-22. Se espera que los anticuerpos anti-IL-22 se aglutinen con proteínas que comprendan una secuencia que sea por lo menos aproximadamente del 60%. 70%, 80%, 90%, 955 o más idéntica a cualquier secuencia de por lo menos 100, 80, 60, 40 ó 20 aminoácidos contiguos en la secuencia contemplada en SEQ ID N0:1. Además de los análisis de homología de secuencia, el mapeo de epítopo véase, verbigracia, Epitope Mapping Protocols, ed. Morris, Humana Press, 1996) y los análisis de estructura secundaria y terciaria pueden ser llevados a cabo para identificar estructuras 3D específicas asumidas por los anticuerpos actualmente divulgados y sus complejos con antígenos. Tales métodos incluyen, pero sin limitación, cristalografía por rayos X (Engstrom (1974) Biochem. Exp . Biol., 11:7-13) y modelación por computador de representaciones virtuales de los presentes anticuerpos (Fletterick y colaboradores (1986) Computer Graphics and Molecular Modeling, in Current Communications in Molecular Biology, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY) . La divulgación proporciona un método para obtener anticuerpos anti-IL-22 que comprende la creación de anticuerpos con secuencia (a) alterada (s) de VH y/o VL en la Tabla 1. Tales anticuerpos podrán ser derivados por un persona versada utilizando técnicas conocidas en el arte. Por ejemplo, las sustituciones, deleciones o adiciones de aminoácido pueden ser introducidas en las regiones FR y/o CDR. Los cambios de FR usualmente son diseñados para mejorar la estabilidad e inmunogenicidad del anticuerpo, mientras que los cambios de CDR son típicamente diseñados para aumentar la afinidad del anticuerpo por su antígeno. Los cambios que incrementan la afinidad podrán ser ensayados alterando la secuencia de CDR y midiendo la afinidad del anticuerpo por su blanco (véase Antibody Engineering, 2nd ed., Oxford University Press, ed. Borrebaeck, 1995) . Los anticuerpos cuyas secuencias de CDR difieren insustancialmente de aquellas incluidas o no en las secuencias en SEQ ID NO: 5-13, 23-31, 41-49, 59-67, 77-85, 95-103, 113-121, 131-139, 149-157, 167-175, 185-193, 203-211, 221-229, 239-247, 257-265, 275-283, 293-301, 311-319, 329-337, 347-355, 365-373, 383-391, 401-409, 419-427, 437-445, 455-463, 473-481, 491-499, 509-517, 527-535, 545-553, 563-571, 581-589, 599-607, ó 617-625, quedan comprendidos en el alcance de la presente invención. Típicamente, esto involucra la sustitución de un aminoácido con un aminoácido que tiene características similares de carga, hidrofóbicas o estereoquímicas. También podrán hacerse sustituciones más drásticas en regiones FR, en contraste con regiones CDR, siempre y cuando no afecten adversamente (verbigracia, reduzcan la afinidad en más del 50% en comparación con el anticuerpo sin sustituir) las propiedades de aglutinación del anticuerpo. También podrán hacerse sustituciones para colocar linea de germen en el anticuerpo o estabilizar el sitio de aglutinación con el antigeno . Las modificaciones conservadoras producirán moléculas que tienen características funcionales y químicas similares a aquellas de la molécula a partir de la cual se hacen esas modificaciones. En contraste, las modificaciones sustanciales en las características funcionales y/o químicas de las moléculas podrán lograrse seleccionando sustituciones en la secuencia de aminoácido que difieren significativamente en cuanto a su efecto sobre el mantenimiento (1) de la estructura de la espina dorsal molecular en el área de sustitución, por ejemplo, como una conformación de hoja o helicoidal, (2) la carga o hidrofobicidad de la molécula en el sitio del blanco o (3) el tamaño de la molécula. Por ejemplo, una "sustitución de aminoácido conservadora" podrá comprender una sustitución de un residuo de aminoácido nativo por un residuo no-nativo de tal modo que haya poco o ningún efecto sobre la polaridad o carga del residuo de aminoácido en esa posición. (Véase, por ejemplo, MacLennan y colaboradores, 1998, Acta Physiol. Scand. Suppl. 643:55-67; Sasaki y colaboradores, 1998, Adv. Biophys. 35:1-24) . Las sustituciones de aminoácido deseadas (ya sean conservadoras o no-conservadoras) pueden ser determinadas por aquellos versados en el arte en el momento en que se deseen esas sustituciones. Por ejemplo, las sustituciones de aminoácido pueden ser utilizadas para identificar residuos importantes de la secuencia de molécula o para aumentar o disminuir la afinidad de las moléculas descritas aquí. Las sustituciones de aminoácido ilustrativas incluyen, pero sin limitación, aquellas indicadas en la Tabla 3. Tabla 3: Sustituciones de Aminoácido En ciertas modalidades, las sustituciones de aminoácido conservadoras también comprenden residuos de aminoácido de ocurrencia no-natural que son incorporados típicamente mediante síntesis de péptido químicas en vez de mediante síntesis en los sistemas biológicos.

En una modalidad, el método para hacer un dominio VH variante comprende la adición, deleción o sustitución de por lo menos un aminoácido en los dominios VH divulgados o la combinación de los dominios VH divulgados con por lo menos un dominio VL, y el ensayo del dominio VH variante para la aglutinación de IL-22 o la modulación de la actividad de IL-22. Un método análogo para hacer un dominio VL variante comprende la adición, deleción o sustitución de por lo menos un aminoácido en los dominios VL divulgados o la combinación de los dominios VL divulgados con por lo menos un dominio VH y el ensayo del dominio VL variante para la aglutinación de IL-22 o modulación de la actividad de IL-22. Un aspecto adicional de la divulgación proporciona un método para preparar anticuerpos o fragmentos aglutinantes con antígeno que se aglutinan específicamente con IL-22. El método comprende : (a) el proporcionar un repertorio iniciador de ácidos nucleicos que codifica un dominio VH que carece de por lo menos una CDR o contiene por lo menos una CDR a ser reemplazada; (b) la inserción en la región de CDR o reemplazado de la misma del repertorio iniciador por lo menos por un ácido nucleico donante que codifica una secuencia de aminoácido de la manera sustancialmente indicada aquí para una CDR VH, dando un repertorio de producto; (c) la expresión de los ácidos nucleicos del repertorio de producto; (d) la selección de un fragmento aglutinante con antigeno especifico que se aglutina con IL-22; y (e) la recuperación del fragmento aglutinante con antigeno especifico o ácido nucleico que lo codifica. En un método análogo se combina por lo menos una CDR VL con un repertorio de ácidos nucleicos que codifican un dominio de VL que carece por lo menos una CDR o contiene por lo menos una CDR a ser reemplazada. La por lo menos CDR VH o VL podrá ser una CDR1, CDR2, un CDR3 o combinación de las mismas, incluyendo combinaciones de CDR VH y VL, tales como aquellas indicadas en las Tablas 1 ó 7, incluyendo aquellas indicadas en la SEQ ID NO :8, 9, 10, 11, 12, 13, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 404, 405, 406, 407, 408, 409, 422, 423, 424, 425, 426, 427, 440, 441, 442, 443, 444 , 445, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 476, 477, 478, 479, 480, 481, 494, 495, 496, 497, 498, 499, 512, 513, 514, 515, 516, 517, 530, 531, 532, 533, 534, 535, 548, 549, 550, 551, 552, 553, 566, 567, 568, 569, 570, 571, 584, 585, 586, 587, 588, 589, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 620, 621, 622, 623, 624, ó 625. En una modalidad, el dominio variable incluye una CDR3 a ser reemplazada o carece una región codificadora de CDR3 y por lo menos el ácido nucleico donante codifica un aminoácido sustancialmente de la forma indicada en la SEQ ID NO: 10, 13, 28, 31, 46, 49, 64, 67, 82, 85, 100, 103, 118, 121, 136, 139, 154, 157, 172, 175, 190, 193, 208, 211, 226, 229, 244, 247, 262, 265, 280, 283, 298, 301, 316, 319, 334, 337, 352, 355, 370, 373, 388, 391, 406, 409, 424, 427, 442, 445, 460, 463, 478, 481, 496, 499, 514, 517, 532, 535, 550, 553, 568, 571, 586, 589, 604, 607, 622, ó 625. En otra modalidad, el dominio variable incluye una CDRl a ser reemplazada o carece una región codificadora de CDRl y por lo menos el ácido nucleico donante codifica una secuencia de aminoácido sustancialmente de la forma indicada en la SEQ ID NO:8, 11, 26, 29, 44, 47, 62, 65, 80, 83, 98, 101, 116, 119, 134, 137, 152, 155, 170, 173, 188, 191, 206, 209, 224, 227, 242, 245, 260, 263, 278, 281, 296, 299, 314, 317, 332, 335, 350, 353, 368, 371, 386, 389, 404, 407, 422, 425, 440, 443, 458, 461, 476, 479, 494, 497, 512, 515, 530, 533, 548, 551, 566, 569, 584, 587, 602, 605, 620, ó 623. En otra modalidad, el dominio variable incluye una CDR2 a ser reemplazada o carece de una región codificadora CDR2 y por lo menos el ácido nucleico donante codifica una secuencia de aminoácido sustancialmente de la forma indicada en la SEQ ID NO:9, 12, 27, 30, 45, 48, 63, 66, 81, 84, 99, 102, 117, 120, 135, 138, 153, 156, 171, 174, 189, 192, 207, 210, 225, 228, 243, 246, 261, 264, 279, 282, 297, 300, 315, 318, 333, 336, 351, 354, 369, 372, 387, 390, 405, 408, 423, 426, 441, 444, 459, 462, 477, 480, 495, 498, 513, 516, 531, 534, 549, 552, 567, 570, 585, 588, 603, 606, 621, ó 624. En otra modalidad, el dominio variable incluye una CDR3 a ser reemplazada o carece una región codificadora de CDR3 y además comprende una CDR1 a ser reemplazada o carece una región codificadora de CDR1, donde el por lo menos ácido nucleico donante codifica una secuencia de aminoácido sustancialmente de la forina indicada en las Tablas 1 ó 7. En otra modalidad, el dominio variable incluye una CDR3 a ser reemplazada o carece una región codificadora de CDR3 y además comprende una CDR2 a ser reemplazada o carece una región codificadora de CDR2, donde por lo menos el ácido nucleico donante codifica una secuencia de aminoácido sustancialmente de la forma indicada en las Tablas 1 ó 7. En otra modalidad, el dominio variable incluye una CDR3 a ser reemplazada o carece una región codificadora de CDR3 y comprende además una CDR1 y una CDR2 a ser reemplazada o carece una CDR1 y una región codificadora de CDR2, donde por lo menos el ácido nucleico donante codifica una secuencia de aminoácido sustancialmente de la forma indicada en las Tablas 1 ó 7. La utilización de la metodología de DNA recombinante, podrá introducirse una secuencia CDR divulgada en un repertorio de los dominios VH o VL que carecen la respectiva CDR (Marks y colaboradores (Bio Technology (1992) 10: 779-783) . Por ejemplo, pueden utilizarse un iniciador adyacente al extremo 5' del dominio variable y un iniciador a la tercera FR para generar un repertorio de secuencias de dominio variable que carecen de CDR3. Este repertorio puede ' ser combinado con una CDR3 de un anticuerpo divulgado. Utilizando técnicas análogas, podrán barajarse porciones de la secuencia CDR divulgada con porciones de las secuencias CDR provenientes de otros anticuerpos para proporcionar un repertorio de fragmentos aglutinantes con antígeno que se aglutinan con IL-22. Cualquiera de los repertorios puede ser expresado en un sistema huésped tal como presentación de fago (descrito en el documento WO 92/01047 y su correspondiente Patente americana No. 5.969.108) de tal modo que puedan seleccionarse fragmentos aglutinantes con antígeno adecuados que se aglutinen con la IL-22.

Una alternativa adicional utiliza mutagénesis al azar de las secuencias VH o VL para generar dominios VH o VL variantes todavía capaces de aglutinarse con IL-22. Una técnica que utiliza PCR propenso a errores es descrita por Gram y colaboradores (Proc. Nat. Acad. Sci. U.S. A. (1992) 89:3576-3580) . Todavía otro método utiliza mutagénesis directa de las secuencias divulgadas. Tales técnicas son divulgadas por Barbas y colaboradores (Proc. Nat. Acad. Sci. U.S. A. (1994) 91: 3809-3813) y Schier y colaraboradores (J. Mol. Biol . (1996) 263: 551-567) . Una porción del dominio variable comprenderá por lo menos una región CDR sustancialmente de la forma indicada aquí y, opcionalmente , regiones marco intervinientes provenientes de los dominios VH o VL conforme se contemplan aquí. La porción podrá incluir la mitad del terminal C de la FR1 y/o la mitad del terminal N de la FR4. Los residuos adicionales en el extremo del terminal N o terminal C del dominio variable podrán no ser los mismos residuos encontrados en anticuerpos de ocurrencia natural. Por ejemplo, la construcción de anticuerpos mediante técnicas DNA recombinantes a menudo introduce los residuos del terminal N o C provenientes de su uso de enlazadores. Algunos enlazadores podrán ser utilizados para unir dominios variables con otros dominios variables (verbigracia, diacuerpos) , dominios constantes o etiquetas proteináceas . Aunque las modalidades ilustradas en los Ejemplos comprenden un par "coincidente" de dominios VH y VL, un artesano versado reconocerá que las modalidades alternativas podrán comprender fragmentos aglutinantes con antigeno que contienen solamente una CDR sencilla proveniente del dominio o bien VL o VH. Uno cualquiera de los dominios aglutinantes con antigeno específicos de la cadena sencilla puede ser utilizado para seleccionar dominios complementarios capaces de formar un fragmento aglutinante con antígeno específico de dos dominios capaz, por ejemplo, de aglutinarse con la IL-22. La selección podrá ser lograda mediante métodos de selección para la presentación de fago utilizando el llamado enfoque combinatorial doble jerárquico divulgado en WO 92/01047. En este enfoque, se utiliza una colonia individual contentiva de un clon de cadena H o L para infectar una biblioteca completa de clones codificando la otra cadena (L o H) y se selecciona el dominio aglutinante con antígeno específico de dos cadenas resultante de conformidad con las técnicas descritas de presentación de fago. En algunas modalidades alternativas, los anticuerpos anti-IL-22 pueden ser enlazados con una proteína (verbigracia, albúmina) mediante enlace cruzado químico o métodos recombinantes . Los anticuerpos divulgados también podrán ser enlazados con una variedad de polímeros no-proteináceos (verbigracia, polietilenglicol , polipropilenglicol o polioxialquilenos ) en las formas indicadas en las Patentes americanas Nos. 4.640.835; 4.496.689; 4.301.144; 4.670.417; 4.791.192; ó 4.179.337. Los anticuerpos pueden ser modificados químicamente mediante conjugación covalente con un polímero, por ejemplo, para aumentar su media vida en la circulación sanguínea. En las Patentes americanas Nos. 4.766.106; 4.179.337; 4.495.285; y 4.609.546 se muestran polímeros y métodos de sujeción ilustrativos. Los anticuerpos divulgados pueden ser modificados para alterar su glicosilación; es decir, por lo menos una mitad de carbohidrato puede ser deletada o añadida al anticuerpo. La deleción o adición de los sitios de glicosilación puede ser lograda cambiando la secuencia de aminoácido para deletar o crear sitios de consenso de glicosilación, que son bien conocidos en el arte. Otro medio de añadir mitades de carbohidrato es el acoplamiento químico o enzimático de glucósidos con los residuos de aminoácido del anticuerpo (ver el documento O 87/05330 y Aplin y colaboradores (1981) CRC Crit. Rev. Bíochem. , 22: 259-306). También puede lograrse la remoción de las mitades de carbohidrato química o enzimáticamente (ver Hakimuddin y colaboradores (1987) Arch. Bíochem. Biophys . 259: 52; Edge y colaboradores (1981) Anal. Bíochem. , 118:131; Thotakura y colaboradores (1987) Meth. Enzymol. , 138 : 350) .

Se conocen en el arte, métodos para alterar una región constante de anticuerpo. Los anticuerpos con función alterada (verbigracia, afinidad alterada para un ligando efector tal como FcR en una célula o el componente Cl del complemento) pueden ser producidos reemplazando por lo menos un residuo de aminoácido en la porción constante del anticuerpo con un residuo diferente (véase, verbigracia, el documento EP 388.141 Al, US 5.264.821 y US 5.648.260). Podrían describirse tipos similares de alteraciones que, si se aplicasen a anticuerpo murino o de otra especie, reducirían o eliminarían funciones similares . Por ejemplo, es posible alterar la afinidad de una región Fe de un anticuerpo (verbigracia, un IgG, tal como un humano IgG) para FcR (verbigracia, Fe gamma Rl) o Clq. La afinidad podrá ser alterada reemplazando por lo menos un residuo especificado con por lo menos un residuo que tiene una funcionalidad apropiada en su cadena lateral o introduciendo un grupo funcional cargado, tal como glutamato o aspartato, o quizás un residuo no-polar aromático tal como fenilalanina, tirosina, triptofano o alanina (véase, verbigracia, US 5.624.821) . Por ejemplo, el reemplazo del residuo 297 (asparagina) por alanina en la región constante IgG inhibe significativamente el reclutamiento de células efectoras, mientras reduce solo significativamente (cerca de tres veces más débil) la afinidad por Clq (véase, verbigracia, la Patente americana 5.624.821) . La numeración de los residuos en la cadena pesada es la del índice EU (véase Kabat y colaboradores, 1991 supra) . Esta alteración destruye el sitio de glicosilación y se cree que se requiere la presencia de carbohidrato para la aglutinación del receptor Fe. Cualquier otra sustitución en este sitio que destruya el sitio de glicosilación se cree que cause una disminución similar en la actividad lítica. Se sabe que otras sustituciones de aminoácido, verbigracia, cambiando cualquiera de los residuos 318 (Glu), 320 (Lys) y 322 (Lys), a Ala, suprimen la aglutinación de Clq con la región Fe de los anticuerpos IgG (véase, verbigracia, la Patente americana 5.624.821) . Se pueden producir anticuerpos modificados que tienen una interacción reducida con un receptor Fe. Por ejemplo, se ha mostrado que en el IgG3 humano, que se aglutina con el receptor Rl gamma Fe humano, cambiando Leu 235 en Glu destruye su interacción con el receptor. Las mutaciones en los sitios adyacentes o cercanos en la región de enlace de la bisagra de un anticuerpo (verbigracia, reemplazando los residuos 234, 236 ó 237 por Ala) también puede usarse para afectar la afinidad del anticuerpo por el receptor Rl gamma Fe. La numeración de los residuos en la cadena pesada se basa en el índice EU (véase Kabat y colaboradores, 1991, supra) . Los métodos adicionales para alterar la actividad lítica de un anticuerpo, por ejemplo, alterando por lo menos un aminoácido en la región terminal N del dominio CH2, se describen en el documento WO 94/29351 por Morgan y colaboradores y en la Patente americana 5.624.821. Los anticuerpos de la presente invención podrán ser marcados con una etiqueta detectable o funcional. Estas etiquetas incluyen radioetiquetas (verbigracia, 131I ó 99Tc) , etiquetas enzimáticas (verbigracia, peroxidasa de rábano rusticano o fosfatasa alcalina) y otras mitades químicas (verbigracia, biotina) . La invención también podrá presentar un anticuerpo aislado que se aglutina con la IL-22, en particular, la IL-22 humana. En ciertas modalidades, el anticuerpo anti-IL-22 podrá tener por lo menos una de las siguientes características: (1) es un anticuerpo monoclonal o de especificidad sencilla; (2) es un anticuerpo humano; (3) es un anticuerpo generado in vitro; (4) es un anticuerpo generado in vivo (verbigracia, sistema de ratón transgénico) ; (5) se aglutina a IL-22 con una constante de asociación de por lo menos 1012 M"1; (6) se aglutina a IL-22 con una constante de asociación de por lo menos 1011 M_1; (7) se aglutina a IL-22 con una constante de asociación de por lo menos 1010 -NT1; (8) se aglutina a IL-22 con una constante de asociación de por lo menos 109 M-1; (9) se aglutina a IL-22 con una constante de asociación de por lo menos 106 M-1; (10) se aglutina a IL-22 con una constante de disociación de 500 nM o menos; (11) se aglutina a IL-22 con una constante de asociación de 10 nM o menos; (12) se aglutina a IL-22 con una constante de disociación de 150 pM o menos; (13) se aglutina a IL-22 con una constante de disociación de 60 pM o menos; (14) inhibe la aglutinación de IL-22 con IL-22R o un complejo receptor de IL-22R e IL-10R2 con un IC50 de 10 nM o menos; (15) bloquea la proliferación mediada de IL-22 de las células BaF3 hechas por ingeniería del receptor de IL-22 con un IC50 de 1 nM o menos en una modalidad, con un IC50 de 150 pM o menos en otra modalidad, con un IC50 de 100 pM o menos en otra modalidad, y con un IC50 de 10 pM o menos en otra modalidad; y (16) bloquea la secreción GROa mediada por IL-22 proveniente de HT29 con un IC50 de 1 nM o menos en una modalidad, con un IC50 de 150 pM o menos en otra modalidad y con un IC50 de 10 pM o menos en otra modalidad. Una persona versada en el arte apreciará que las modificaciones descritas anteriormente no son todas exhaustivas y que muchas otras modificaciones son obvias para el artesano versado a la luz de las enseñanzas de la presente divulgación. III. Ácidos Nucleicos, Sistemas de Clonación y Expresión La divulgación proporciona ácidos nucleicos aislados que codifican los anticuerpos divulgados. Los ácidos nucleicos podrán comprender DNA o RNA y podrán ser sintéticos (total o parcialmente) o recombinantes (total o parcialmente) . La referencia a una secuencia de nucleótido conforme se indica a continuación comprende una molécula de DNA con la secuencia especificada y comprende una molécula de RNA con la secuencia especificada en la cual U es sustituida por T. Igualmente se proporcionan ácidos nucleicos que comprenden una secuencia de codificación para una, dos o tres CDR, un dominio VH, un dominio VL o sus combinaciones, conforme se divulgan aquí, o una secuencia sustancialmente idéntica a la misma (verbigracia, una secuencia por lo menos el 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más idéntica a la misma o que sea capaz de hibridizarse bajo condiciones rigurosas en las secuencias divulgadas) . En una modalidad, los ácidos nucleicos asilados tienen secuencias de nucleótido que codifican regiones variables de cadena pesada y cadena liviana de un anticuerpo anti-IL-22 que tiene por lo menos una CDR seleccionada de las secuencias de aminoácido de la SEQ ID NO: 8-13, 26-31, 44-49, 62-67, 80-85, 98-103, 116-121, 134-139, 152-157, 170-175, 188-193, 206-211, 224-229, 242-247, 260-265, 278-283, 296-301, 314-319, 332-337, 350-355, 368-373, 386-391, 404-409, 422-427, 440-445, 458-463, 476-481, 494-499, 512-517, 530-535, 548-553, 566-571, 584-589, 602-607, ó 620-625; o secuencia que codifica una CDR que difiere en uno o dos aminoácidos de las secuencias descritas aquí . El ácido nucleico puede codificar solamente la región variable de cadena liviana o cadena pesada o también puede codificar una región constante de cadena liviana o pesada, enlazada operativamente con la correspondiente región variable. En una modalidad, se enlaza la región variable de cadena liviana con una región constante seleccionada a partir de una región constante kappa o lambda. La región constante de cadena liviana podrá también ser un tipo humano kappa o lambda. En otra modalidad, se enlaza la región variable de cadena pesada con una región constante de cadena pesada de un isotipo de anticuerpo seleccionado a partir de IgG (verbigracia, IgGx, IgG2, IgG3, IgG4) , IgM, IgAi, IgA2, IgD, e IgE. La región constante de cadena pesada podrá ser un isotipo IgG (verbigracia, un IgGx) . Las composiciones de ácido nucleico de la presente invención, mientras que a menudo están en la secuencia nativa (de cDNA o DNA genómico o sus mezclas) salvo los sitios de restricción modificados y similares, podrán ser mutadas de conformidad con técnicas estándares para proporcionar secuencias de gen. Para las secuencias de codificación, estas mutaciones podrán afectar la secuencia de aminoácido de la forma deseada. En particular, las secuencias de nucleótido sustancialmente idénticas o derivadas de la constante V, D, J nativa, cambia y las demás secuencias descritas aquí son contempladas (donde "derivado" indica que una secuencia es idéntica o modificada de otra secuencia) .

En una modalidad, el ácido nucleico difiere (verbigracia mediante sustitución, inserción o deleción) de aquél de las secuencias proporcionadas (verbigracia, de la manera siguiente; por lo menos en uno pero menos de 10, 20, 30 ó 40 nucleótidos ; por lo menos uno pero menos del 1%, 5%, 10% ó 20% de los nucleótidos en el presente ácido nucleico) . Si fuere necesario para este análisis, las secuencias deben ser alineadas para lograr máxima homología. Las secuencias "sacadas del circuito" de las deleciones o inserciones, o pares erróneos, son consideradas diferentes. La diferencia podrá ser en un nucleótido o nucleótidos que codifica un residuo o residuos esenciales o la diferencia podrá ser una sustitución o sustituciones conservadoras. La divulgación también proporciona construcciones de ácido nucleico en la forma de plásmidos, vectores, cassettes de transcripción o expresión, que comprenden por lo menos un ácido nucleico de la forma descrita aquí. La divulgación proporciona además una célula huésped que comprende por lo menos una construcción de ácido nucleico descrita aquí. Igualmente se proporcionan los métodos para hacer proteína (s) codificada ( s ) a partir de ácido (s) nucleico (s) que comprenden la secuencia descrita aquí. El método comprende el cultivo de células huésped bajo condiciones apropiadas de modo que expresen la proteína proveniente del ácido nucleico.

Siguiendo la expresión y producción, el dominio VH o VL o el miembro de aglutinación especifico podrá aislarse y/o purificarse utilizando cualquier técnica adecuada, luego se utiliza de la forma apropiada. El método también puede incluir los pasos de fusionar un ácido nucleico que codifica un scFv con ácidos nucleico que codifican una porción Fe de un anticuerpo y que expresa el ácido nucleico fusionado en una célula. El método también puede incluir un paso de colocar linea de germen. Los fragmentos aglutinantes con antigeno, dominios VH y/o VL, y las moléculas y vectores de ácido nucleico codificadores podrán ser aislados y/o purificados a partir de su ambiente natural, en forma sustancialmente pura u homogénea, o, en el caso de ácido nucleico, libre o sustancialmente libre de ácido nucleico o genes de origen distinto a la secuencia codificadora de un péptido con la función requerida. Se conocen en el arte los sistemas para clonar y expresar polipéptidos en una variedad de células huésped. Las células adecuadas para producir anticuerpos son descritas, por ejemplo, en Fernandez y colaboradores (1999) Gene Expression Systems, Academic Press, eds . En resumen, las células huésped adecuadas incluyen células de mamíferos, células de insectos, células vegetales, células de levadura o células procarióticas , verbigracia, E. coli. Las células de mamífero disponibles en el arte para la expresión de polipéptido 1 heterólogo incluyen líneas de célula linfocitica (verbigracia, NSO) , células HEK294, células del ovario de hámster chino (CHO) , células COS, células HeLa, células renales de bebés de hámster, células oocitas y células provenientes de un animal transgénico, verbigracia, célula epitelial de mamífero. En una modalidad, los anticuerpos GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, y 356A11 son expresados en HEK293 o células CHO. En otra modalidad, una selección de anticuerpos seleccionados a partir de 365A11, 354A08, 087B03 y 368D04 se expresan en HEK293 o células CHO. En otras modalidades, los ácidos nucleicos que codifican los anticuerpos de la invención son colocados bajo el control de un promotor específico de tejido (verbigracia, un promotor específico mamífero) y se producen los anticuerpos en animales transgénicos . Por ejemplo, los anticuerpos son secretados en la leche del animal transgénico, tal como una vaca, cochino, caballo, oveja, cabra o roedor transgénico. Los vectores adecuados podrán ser seleccionados o construidos para contener secuencias reguladoras apropiadas, incluyendo secuencias promotoras, secuencias terminadoras , secuencias de poliadenilación, secuencias mejoradoras, genes marcadores y otras secuencias. Los vectores también podrán contener un plásmido o espina dorsal viral. Para apreciar los detalles, véase Sambrook y colaboradores, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989) . Muchas técnicas establecidas utilizadas con vectores, incluyendo la manipulación, preparación, mutagénesis, formación de secuencia, y transfección de DNA, son descritas en Current Protocols in Molecular Biology, Second Edition, Ausubel y colaboradores, eds . , John Wiley & Sons (1992) . Un aspecto adicional de la divulgación proporciona un método para introducir el ácido nucleico en una célula huésped. Para las células eucarióticas , las técnicas de transfección adecuadas podrán incluir fosfato de calcio, DEAE-Dextran, electroporación, transfección mediada por liposoma y transducción utilizando retrovirus u otros virus, verbigracia, vaccinia o baculovirus. Para las células bacteriales, las técnicas adecuadas podrán incluir transformación de cloruro de calcio, electroporación y transfección utilizando bacteriófago. La introducción de DNA podrá ser seguida de un método de selección (verbigracia, resistencia al fármaco) para seleccionar células que contienen el ácido nucleico. IV. Usos de Anticuerpos Anti-IL-22 Los anticuerpos anti-IL-22 que actúan como antagonistas a IL-22 pueden ser utilizados para regular por lo menos una respuesta inmune mediada por IL-22, tal como actuando sobre células epiteliales en tejido sólido modulando indirectamente las respuestas inmunes aguas abajo, tal como bloqueando la expansión de los subconjuntos de célula T, incluyendo, por ejemplo, células TH17 T. En una modalidad, los anticuerpos de la invención se utilizan en un método para regular una respuesta inmune, el método comprendiendo el contactar IL-22 con un anticuerpo de la invención regulando asi la respuesta inmune. En una modalidad, la respuesta inmune comprende proliferación de células, actividad citolitica, secreción de citoquina o secreción de quimioquina. De acuerdo con lo expuesto, los anticuerpos de la invención se pueden utilizar a fin de inhibir directa o indirectamente la actividad (es decir, proliferación, diferenciación y/o supervivencia) de una célula hematopoyét ica o inmune (por ejemplo, una célula de linaje mieloide, linfoide o eritroide o las células precursoras de los mismos) y, por lo tanto, se pueden utilizar para el tratamiento de una variedad de trastornos inmunológicos y trastornos hiperproliferativos . Ejemplos no limitativos de los trastornos inmunológicos que se pueden tratar incluyen, aunque sin limitarse a ellos, trastornos autoinmunes, por ejemplo, la artritis (inclusive artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, osteoartritis, artritis psoriática, artritis asociada con lupus o espondilitis anquilosante) , esclerodermia, lupus eritematoso sistémico, VIH, síndrome de Sjogren, vasculitis, esclerosis múltiple, tiroiditis autoinmune, dermatitis (lo que incluye la dermatitis atópica y la dermatitis eczematosa) , miastenia grave, enfermedad de intestino inflamatorio (IBD,. por sus iniciales en inglés), enfermedad de Crohn, colitis, diabetes mellitus (tipo I) ; condiciones inflamatorias tales como de la piel (por ejemplo, psoriasis), del sistema cardiovascular (por ejemplo, ateroesclerosis), del sistema nervioso (por ejemplo, enfermedad de Alzheimer) , hígado (por ejemplo, hepatitis), riñon (por ejemplo, nefritis) y páncreas (por ejemplo, pancreatitis); los trastornos cardiovasculares, tales como los trastornos metabólicos del colesterol, las lesiones por oxigenación de los radicales libres y la isquemia; los trastornos asociados con la curación de heridas; los trastornos respiratorios, por ejemplo asma y COPD (tales como la fibrosis quística) ; las condiciones inflamatorias agudas, entre ellas la endotoxemia, sepsis y septicemia, síndrome de shock tóxico y enfermedades infecciosas; rechazo de trasplantes y alergia. En una forma de ejecución, el trastorno asociado con la IL-22 es un trastorno artrítico, por ejemplo un trastorno que puede ser uno o más de artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, osteoartritis , artritis psoriática o espondilitis anquilosante; un trastorno respiratorio, como por ejemplo el asma, la enfermedad pulmonar obstructiva (COPD, por sus iniciales en inglés) ; o una condición inflamatoria, por ejemplo de la piel (verbigracia, soriasis) , del sistema cardiovascular (por ejemplo, ateroesclerosis) , del sistema nervioso (por ejemplo, la enfermedad de Alzheimer) , del hígado (por ejemplo, hepatitis), del riñon (por ejemplo, nefritis), del páncreas (por ejemplo, pancreatitis) y de los órganos gastrointestinales, por ejemplo enfermedad de Crohn e IBD; condiciones inflamatorias agudas, entre ellas la endotoxemia, sepsis y septicemia, síndrome de shock tóxico y enfermedades infecciosas; insuficiencia orgánica generalizada; enfermedad respiratoria (ARD) ; amiloidosis; neuropatías tales como glomeruloesclerosis , neuropatía membranosa, arteriosclerosis renal, glomerulonefritis , enfermedades fibroproliferativas del riñon así como otras disfunciones del riñon y tumores renales. Debido a los efectos de la IL-22 sobre el epitelio, los anticuerpos anti-IL-22 se pueden utilizar para tratar diferentes clases de cáncer epitelial, por ejemplo, carcinoma, melanoma y otros. A los fines de la descripción de una exposición detallada sobre la inhibición de IL-22 en las enfermedades mencionadas y otras véase WO 03/083062 (páginas 58-75) . La esclerosis múltiple es una enfermedad del sistema nervioso central que se caracteriza por la inflamación y pérdida de las vainas de mielina; éste último es el material graso que aisla los nervios y resulta necesario para un funcionamiento adecuado de los nervios. La inflamación resultante de una respuesta inmunológica dependiente de la IL-22 se puede tratar con los anticuerpos y las composiciones de esta invención. En el modelo de encefalitis autoinmune experimental (EAE, por sus iniciales en inglés) para esclerosis múltiple en ratones (Tuohy y colaboradores, J. Immunol. (1988) 141:1126.1130; Sobel y colaboradores, J. Immunol. (1984) 132:2393-2401; y Traugott, Cell Immunol. (1989) 119:114-129), el tratamiento de los ratones con inyecciones de GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04 o 356A11 previo, y de manera continua, a la inducción de la EAE pudo retrasar bastante el ataque de la enfermedad. Ello puede resultar útil como un modelo con el propósito de confirmar la utilización del anticuerpo de la invención. De manera similar, los anticuerpos de esta invención se pueden emplear para el tratamiento de la esclerosis múltiple en los seres humanos . La artritis es una enfermedad caracterizada por la inflamación de las articulaciones. La artritis reumatoide (RA, por sus iniciales en inglés) es la forma de artritis más frecuente e implica la inflamación del tejido conjuntivo y la membrana sinovial; esta última es la membrana que recubre la articulación. Con frecuencia, la membrana sinovial inflamada penetra la articulación y daña el cartílago y el hueso. La proteína IL-22 e IL-22R y/o su transcrito está asociada con ambas enfermedades humanas. En las biopsias sinoviales en los casos de RA, la proteina IL-22 es detectada en los fibroblastos sinoviales vimentina+ y algunos macrófagos CD68+ mientras la IL-22R es detectada en los fibroblastos sinoviales. El tratamiento de los fibroblastos sinoviales con IL-22 induce la producción de la proteina quimioatrayente de monocitos 1, MCP-1, asi como la actividad metabólica general (Ikeuchi, H. y colaboradores (2005) Artritis Rheum . 52:1037-46). Los inhibidores de IL-22 mejoran los síntomas de la artritis reumatoide (WO 2005/000897 A2 ; Patente EE. üü . No. 6.939.545). Por medio de los anticuerpos de esta invención se puede tratar la secreción incrementada de quimioquinas y citoquinas inflamatorias y, lo que es más importante, la enfermedad recrudecida resultante por las respuestas inmunológicas dependientes de IL-22. De manera similar, los anticuerpos y las composiciones de esta invención se pueden emplear en el tratamiento de la RA u otras enfermedades artríticas en seres humanos. El rechazo de trasplantes es el fenómeno inmunológico por el cual los tejidos provenientes de un donante son "atacados" específicamente por las células inmunes del huésped. Las células "atacantes" más importantes son las células T; los receptores de las células T reconocen las moléculas MHC del donante como "extrañas". Este reconocimiento activa las células T, las cuales proliferan y secretan una variedad de proteínas citolíticas y citoquinas que definitivamente destruyen el trasplante. MLR y los modelos de trasplante han sido descritos por Current Protocole In Immunology, Segunda Edición, Coligan y colaboradores, eds . John Wiley & Sons, 1994; Kasaian y colaboradores, Immunity (2002) 16:559-569; Fulmer y colaboradores, Am. J. Anat. (1963) 113:273:285; y, Lenschow y colaboradores, Science (1992) 257:789-792). Los anticuerpos y las composiciones de esta invención se pueden utilizar con el objeto de reducir MLR y tratar el rechazo de trasplantes y enfermedades relacionadas, por ejemplo la enfermedad injerto versus huésped, que son dependientes de la IL-22 en seres humanos. Los anticuerpos de esta invención también son útiles en el tratamiento de los trastornos hiperproliferativos asociados con la actividad aberrante de las células responsivas a IL-22 y las células responsivas a IL-22R/IL-10R2 mediante la administración, a un sujeto, de los anticuerpos en una cantidad suficiente para inhibir o reducir la hiperproliferación de células responsivas a IL-22 y/o IL-22R y/o IL-10R2 y permitir que los anticuerpos traten o prevengan el trastorno. La expresión IL-22 e IL-22R es constitutiva de las células epiteliales de una cantidad de tejidos inclusive, aunque sin limitarse a los mencionados a continuación, del páncreas, pulmón, piel, intestino, hígado, riñon (Kotenko, S.V. y colaboradores (2001) J. Biol. Chem. 276:2725-32; Sie, M.H. y colaboradores (2000) J. Biol. Chem. 275:31335-9; olk, K. y colaboradores (2004) Immunity 21:241-54). Además, el complejo receptor de IL-22 también se expresa en la superficie de los fibroblastos de la articulación enferma y del intestino normal (Ikeuchi, H. y colaboradores (2005) Artritis Rheum. 52:1037-46; Andoh, A. y colaboradores (2005) Gastroenterology 129:969-84). Los derivados neoplásicos de estos tipos de células pueden ser hiper-responsivos a IL-22, modulando la capacidad de supervivencia de estas células en el organismo. De esta manera, los anticuerpos a la IL-22 se pueden utilizar con el propósito de inhibir el avance de los neoplasmas, por ejemplo, los carcinomas de célula escamosa, carcinomas de célula basal, carcinomas y papilomas de célula de transición, adenomas, adenocarcinoma , linitis plástica, insulinoma, glucagonoma, gastrinoma, vipoma, colangiocarcinoma , carcinoma hepatocelular , carcinoma quistico adenoide, tumor carcinoide de apéndice, prolactinoma, oncocitoma, adenoma de célula Hurthle, carcinoma de célula renal, tumor de Grawitz, adenomas endocrinos múltiples, adenoma endometrioide, neoplasmas de la piel y partes anexas, neoplasmas mucoepidermoides, neoplasmas quistico, mucino y seroso, quisteadenoma, seudo mixoma de peritoneo, neoplasmas ductal, lobular y medular, neoplasmas de célula acinar, neoplasmas epiteliales complejos, tumor de Warthin, timoma, neoplasmas de gónada, tumor de cordón-estroma, tecoma, tumor de célula granulosa, arrenoblastoma, tumor de célula Sertoli-Leydig, paraganglioma, feocromocitoma, tumor de glomus, nevo melanocítico, melanoma maligno, melanoma, melanoma nodular, nevo displásico, lentigo maligno, melanoma de dispersión superficial o melanoma lentiginoso acral. Si bien el receptor de IL-22 no es detectado en las células inmunes activadas o al natural ex vivo, la desregulación del receptor podría hacer que dichas células neoplásicas derivadas sean responsivas a IL-22 y, de esta manera, inhibirlas mediante un anticuerpo a la IL-22. En otro aspecto, la presente invención caracteriza un método de disminuir, inhibir o reducir una respuesta de fase aguda en un sujeto. El método comprende administrar al sujeto un anticuerpo anti-IL-22 o fragmento del mismo, de la manera que se describe en este documento, en una cantidad suficiente para disminuir, inhibir o reducir la respuesta de fase aguda en el sujeto. En una forma de ejecución, el sujeto es un mamífero, por ejemplo un ser humano, que padece un trastorno asociado con la IL-22 conforme aquí descrito inclusive trastornos del tracto respiratorio, trastornos inflamatorios y trastornos autoinmunes. En una forma de ejecución, el agente aglutinante a IL-22 es administrado localmente, es decir, por vía tópica, subcutánea u otras vías de administración que no sean en la circulación general. Se piensa que IL-22 ejerce sus efectos inflamatorios de manera local, es decir, actuando, puede ser por acción directa, como un modulador o regulador de la inflamación de los tejidos en oposición a los efectos sistémicos directos. De acuerdo con ello, la inhibición de la actividad de IL-22 mediante el empleo de un anticuerpo anti-IL-22 de la presente invención puede proporcionar un agente antiinflamatorio más efectivo, menos tóxico y especifico para el tejido en comparación con las modalidades antiinflamatorias sistémicas. Además, la inhibición de IL-22 local utilizando, por ejemplo, un anticuerpo anti-IL-22 o fragmento del mismo conforme aquí descrito, puede proporcionar un candidato útil para combinarse con las modalidades antiinflamatorias sistémicas. V. Terapia de combinación Según una forma de ejecución, se administra una composición farmacéutica que comprende por lo menos un anticuerpo anti-IL22 y por lo menos un agente terapéutico en una terapia de combinación. Esta terapia resulta útil en el tratamiento de condiciones patológicas o trastornos tales como los inflamatorios e inmunológicos . El término "de combinación" en este contexto significa que la composición del anticuerpo y el agente terapéutico se suministran esencialmente al mismo tiempo, sea de manera simultánea o en secuencia. En una forma de ejecución según la cual los compuestos se suministran en secuencia, cuando se comienza la administración del segundo compuesto, el primero de los dos compuestos todavía será detectable en concentraciones efectivas en el sitio de tratamiento. Según otra forma de ejecución en la que los compuestos se administran en secuencia, al .comenzarse la administración del segundo compuesto, el primero de los dos compuestos en el sitio de tratamiento ya no será detectable en concentraciones efectivas. Por ejemplo, la terapia de combinación puede incluir por lo menos un anticuerpo anti-IL-22 coformulado y/o coadministrado al menos con un agente terapéutico adicional. Los agentes adicionales pueden incluir por lo menos un inhibidor de citoquina, un inhibidor del factor de crecimiento, un inmunosupresor , un agente antiinflamatorio, un inhibidor metabólico, un inhibidor de enzima, un agente citotóxico y un agente citostático, conforme se describirá de manera más detalla en lo que sigue. Dichas terapias de combinación pueden utilizar venta osamente dosis menores de los agentes terapéuticos administrados evitando, de esta manera, las eventuales toxicidades o complicaciones asociadas con las diferentes monoterapias . Todavía más, los agentes terapéuticos adicionales aquí revelados actúan en los pasajes en adición a IL-22/IL-22R/IL-10R2 , o en otro pasaje diferente y, por lo tanto, se espera que mejoren y/o promuevan los efectos de los anticuerpos anti-IL-22. Los agentes terapéuticos utilizados en combinación con los anticuerpos anti-IL-22 pueden ser aquellos que interfieren, en diferentes etapas, en la respuesta inflamatoria autoinmune y subsiguiente. Según una forma de ejecución, por lo menos un anticuerpo anti-IL-22 aquí descrito puede ser coformulado y/o coadministrado por lo menos con un antagonista del factor de crecimiento y/o citoquina. El antagonista puede incluir receptores solubles, inhibidores péptidos, moléculas menores, fusiones de ligandos, anticuerpos y fragmentos aglutinantes de los mismos (que aglutinan las citoquinas, los factores de crecimiento o sus receptores u otras moléculas de la superficie celular) y "citoquinas antiinflamatorias" y los agonistas de los antes mencionados. Ejemplos no limitativos de los agentes que se pueden utilizar en combinación con los anticuerpos anti-IL-22 aquí descritos incluyen, mas sin limitarse a ellos, antagonistas de por lo menos una interleucina (por ejemplo, IL-1, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-12 o una de sus subunidades p35 o p40), IL-13, IL-15, IL-16, IL-17A-F (inclusive los heterodimeros del mismo, por ejemplo, IL-17A/IL-17F) , IL-18, IL-20, IL-21 e IL-23 o una de sus subunidades pl9 o p40; citoquina, por ejemplo, TNFa, LT, EMPA-II y GM-SCF; y, el factor de crecimiento, por ejemplo, FGF y PDGF. Los agentes también pueden incluir, mas sin constituir una limitación, los antagonistas de por lo menos un receptor para una interleucina, citoquina y factor de crecimiento. Los anticuerpos anti-IL-22 también se pueden combinar con inhibidores, tales como los anticuerpos o fragmentos de aglutinación de los mismos, de las moléculas de la superficie celular tales como CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD80 (B7.1), CD86 (B7.2), CD90 o sus ligandos, por ejemplo, CD154 (gp39, CD40L) o LFA-l/ICAM-1 y VLA-4/VCAM-1 (Yusuf-Makagiansar y colaboradores (2002) Med. Res. Rev. 22 ( 2 ) : 146-67 ) . En algunas formas de ejecución, los antagonistas que se pueden utilizar en combinación con los anticuerpos anti-IL-22 aquí descritos pueden incluir antagonistas de IL-1, IL-12 o una de sus subunidades p35 o p40, TNFa, IL-15, IL-17A-F inclusive los heterodímeros del mismo, por ejemplo, el heterodimero IL-17A/IL-17F, IL-18, IL-20, IL-21 e IL-23 o una de sus subunidades pl9 o p40, y sus receptores . Los ejemplos de esos agentes comprenden a los antagonistas de IL-12, tales como los anticuerpos que aglutinan IL-12 (véase por ejemplo WO 00/56772) o una de sus subunidades p35 o p40; los inhibidores del receptor de IL-12, tales como los anticuerpos al receptor de IL-12; y el receptor de IL-12 soluble y los fragmentos del mismo. Ejemplos de los antagonistas IL-15 incluyen anticuerpos contra IL-15 o su receptor, fragmentos solubles del receptor de IL-15 y proteínas que aglutinan IL-15. Los ejemplos de antagonistas IL-18 incluyen anticuerpos a la IL-18, fragmentos solubles del receptor de IL-18 y proteínas que aglutinan IL-18, tales como IL-18BP, allet y colaboradores (2001) Circ. Res. 28. Ejemplos de los antagonistas IL-1 comprenden inhibidores de la Enzima de Conversión de Interleucina-1 (ICE), tales como Vx740; antagonistas IL-1, por ejemplo, IL-1RA (ANIKINRA, AMGEN) , sIL-1RII (Immunex) y anticuerpos del receptor anti-IL-1. En una forma de ejecución, la terapia de combinación incluye por lo menos un anticuerpo anti-IL-22 coformulado y/o coadministrado con un antagonista, tal como un anticuerpo o fragmento de aglutinación de antigeno del mismo o un receptor soluble de por lo menos uno de los heterodimeros de IL-17A, IL-17F, IL-17A/IL-17F, o IL-23 o una de sus subunidades pl9 o p40. Los ejemplos de antagonistas TNF incluyen anticuerpos al TNF, por ejemplo TNFcc humano, tal como D2E7 (anticuerpo anti-TNFa humano, véase la Patente EE. UU. No. 6.258.562, Humira™, BASF) ; CDP-571/CDP-870/BAY-10-3356 (anticuerpos anti-TNFa humanizados, Celltech /Pharmacia) ; cA2 (anticuerpo anti-TNFa quimérico, Remicade™, Centocor) ; y, fragmentos de anticuerpo anti-TNF (por ejemplo, CPD870) . Otros ejemplos incluyen el receptor TNF soluble, es decir p55 o p75 humano, los fragmentos y derivados tales como p55 kdTNFR-IgG (proteina de fusión del receptor-IgG de TNF de 55 kD, Lenercept™) y 75 kdTNFR-IgG (proteina de fusión del receptor-IgG de TNF de 75 kD, Enbrel™, Immunex, véase, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1994) Vol. 37, S295; J. Invest. Med. (1986) Vol . 44, 235A) . Otros ejemplos incluyen los antagonistas de enzima, por ejemplo los inhibidores de la enzima conversora del TNFa (TACE) tales como el derivado del ácido alfa-sulfonil hidroxámico (WO 01/55112) o el inhibidor N-hidroxiformamida (GW 3333, -005 o -022) y TNF-bp/s-TNFR (proteina de aglutinación de TNF soluble, véase Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S284 y Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. (1995) Vol. 268, pp. 37-42). Los antagonistas del TNF pueden ser fragmentos del receptor TNF soluble (es decir, p55 o p75 humanos) y sus derivados, tales como 75 kdTNFR-IgG e inhibidores de la enzima de conversión del TNFa (TACE) . En otras modalidades, los anticuerpos anti-IL-22 descritos en el presente documento se pueden administrar en combinación con uno de los siguientes: antagonistas IL-13, tales como el receptor de IL-13 soluble y/o anticuerpos anti-IL-13; antagonistas IL-2, tales como las proteínas de fusión IL-2 (por ejemplo, DAB 486-IL-2 y/o DAB 389-IL-2, Seragen, véase Arthritis & Rheumatism (1993) Vol. 36, 1223) y anticuerpos anti-IL-2R, por ejemplo, anti-Tac (anticuerpo humanizado, Protein Design Labs, véase Cáncer Res. 1990 Mar 1 ; 50 ( 5 ) : 1495-502 ) . Otra combinación incluye los anticuerpos anti-IL-22 en combinación con inhibidores anti-CD4 no-agotados tales como IDEC-CE9.1/SB 210396 (anticuerpo anti-CD4, IDEC / Smith Kline) . Incluso otras combinaciones comprenden anticuerpos anti-IL-22 con antagonistas del pasaje coestimulante CD80 (B7.1) y CD86 (B7.2), tales como anticuerpos, receptores solubles o ligandos antagonistas; ligando glicoproteina P-selectina (PSLG); y citoquinas antiinflamatorias y sus agonistas (es decir, anticuerpos) . Las citoquinas antiinflamatorias pueden incluir IL-4 (DNAX, Schering) ; IL-10 (SCH 52000, IL-10 recombinante, DNAX, Schering) ; IL-13; y, TGF. En otras modalidades, por lo menos un anticuerpo anti-IL-22 puede ser coformulado y/o coadministrado con, al menos, una droga antiinflamatoria, un inmunosupresor , un inhibidor metabólico y un inhibidor enzimático. Los ejemplos de drogas o inhibidores que se pueden emplear en combinación con los antagonistas IL-22 aquí descritos incluyen, sin restricción a los mencionados a continuación, por lo menos uno seleccionado a partir del grupo que consiste de: droga antiinflamatoria no esteroide (NSAID, por sus siglas en inglés), tales como ibuprofeno, Tenidap (véase, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S280), Naproxen (véase Neuro Report (1996), Vol. 7, pp. 1209-1213), Meloxicam, Piroxicam, Diclofenac e Indomethacin; Sulfasalazine (véase Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S281) ; corticosteroides tales como prednisolona ; drogas antiinflamatorias supresoras de la citoquina (CSAID, por sus iniciales en inglés); y un inhibidor de la biosintesis de nucleótido, tal como un inhibidor de la biosintesis de purina (por ejemplo, un antagonista de folato tal como metotrexato) y un inhibidor de la biosintesis de pirimidina (por ejemplo, un inhibidor de deshidrogenasa dihidroorotato (DHODH) tal como leflunomide (véase Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S131; Inflammation Research (1996) Vol. 45, pp. 103-107). Los agentes terapéuticos para utilizarse en combinación con antagonistas IL-22/IL-22R o IL-22/IL-10R2 pueden incluir NSAIDs, CSAIDs, inhibidores DHODH (tales como leflunomide) y antagonistas folato (tales como metotrexato) . Los ejemplos de inhibidores adicionales incluyen por lo menos uno de los mencionados a continuación: un corticosteroide , sea oral, inhalado o inyección local; un inmunosupresor , tal como la ciclosporina y tacrolimus (FK-506); un inhibidor mTOR, tal como sirolimus (rapamicina) o un derivado de rapamicina, por ejemplo un derivado de éster de rapamicina tal como CCI-779 (Elit L. (2002) Current Opinión Investig. Drugs 3 ( 8 ) : 1249-53 ; Huang, S. y colaboradores Current Opinión Investig. Drugs 3 ( 2 ) : 295-304 ; un agente que interfiere con la señalización de las citoquinas proinflamatorias, tales como TNFa e IL-1 (por ejemplo, IRAK, NIK, IKK, p38 o un inhibidor cinasa MAP) ; un inhibidor COX2, por ejemplo, celecoxib y las variantes del mismo (MK-966) , véase Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento) , S81; un inhibidor fosfodiesterasa, tal como R973401, véase Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S282; un inhibidor fosfolipasa, por ejemplo un inhibidor de fosfolipasa citosólica 2 (cPLA2) tal como los análogos trifluormetil cetona (Patente EE. UU . No. 6.350.892); un inhibidor del factor de crecimiento de la célula endotelial vascular (VEGF) ; un inhibidor del receptor VEGF; y un inhibidor de angiogénesis . Los agentes terapéuticos para utilizarse en combinación con el anticuerpo anti-IL-22 pueden incluir inmunosupresores , tales como ciclosporina y tacrolimus (FK-506) e inhibidores mTOR, tales como sirolimus (rapamicina) o derivados de rapamicina, por ejemplo los derivados de éster de rapamicina como CCI-779; inhibidores COX2, tales como celecoxib y variantes del mismo; e inhibidores fosfolipasa, tales como inhibidores de fosfolipasa citosólica 2 (cPLA2) tal como los análogos trifluormetil cetona . Los ejemplos de agentes terapéuticos que pueden ser coadministrados y/o coformulados al menos con un anticuerpo anti-IL-22 incluyen, mas sin limitarse a los aquí nombrados, al menos uno de los siguientes: antagonistas TNF, tales como anticuerpos anti-TNF; fragmentos solubles de los receptores de TNF, por ejemplo p55 y p75 humano y los derivados de los mismos, tales como p55 kdTNFR-IgG (proteina de fusión del receptor-IgG de TNF de 55 kD, Lenercept™) y 75 kdTNFR-IgG (proteina de fusión del receptor-IgG de TNF de 75 kD, Enbrel™, ) ; antagonistas de la enzima de TNF, tales como los inhibidores TACE; antagonistas de IL-12 (o una de sus subunidades p35 o p40) , IL-15, IL-17A-F (inclusive los heterodimeros de los mismos, por ejemplo, el heterodimero IL-17A/ IL-17F), IL-18, IL-20, IL-21, IL-22 e IL-23 (o una de sus subunidades pl9 o p40) ; los agentes de depleción de las células B y las células T, tales como los anticuerpos anti-CD4 o anti-CD22; inhibidores de moléculas menores, tales como el metotrexato y leflunomide ; sirolimus (rapamicina) y los análogos del mismo, tales como CCI-779; inhibidores Cox-2 y CPLA2; inhibidores p38, TPL-2, Mk-2 y NFkB; RAGE y RAGE soluble; inhibidores PSGL-1 y P-selectina, tales como anticuerpos e inhibidores de moléculas menores; y agonistas del receptor de estrógeno beta (ERB) y antagonistas de ERB-NFkb. Aquellos agentes terapéuticos que tienen la capacidad de ser coadministrados y/o coformulados al menos con un anticuerpo anti-IL-22 comprenden por lo menos uno de los nombrados a continuación: un fragmento soluble de un receptor TNF, por ejemplo p55 o p75 humano, tal como 75 kdTNFR-IgG (proteina de fusión del receptor-IgG de TNF de 75 kD, Enbrel™) ; metotrexato; leflunomide; y sirolimus (rapamicina) y los análogos del mismo, tales como CCI-779. Los anticuerpos anti-IL-22 revelados en este documento se pueden emplear en combinación con otros agentes terapéuticos en el tratamiento de trastornos inmunológicos específicos, tal como se argumentará de manera detallada en lo que sigue. Los ejemplos no restrictivos de agentes para el tratamiento de trastornos artríticos, tales como la artritis reumatoide, artritis inflamatoria, artritis reumatoide juvenil, osteoartritis y artritis psoriática, con los cuales se puede combinar un anticuerpo anti-IL-22, comprenden al menos uno de los mencionados a continuación: antagonistas TNF, tales como los anticuerpos anti-TNF; fragmentos solubles de receptores TNF, por ejemplo, p55 y p75 humano y los derivados de los mismos tales como p55 kdTNFR-IgG (proteína de fusión del receptor-IgG de TNF de 55 kD, Lenercept™) y 75 kdTNFR-IgG (proteína de fusión del receptor-IgG de TNF de 75 kD, Enbrel™) ; antagonistas de la enzima de TNF, tales como los inhibidores TACE; antagonistas de IL-12 (o una de sus subunidades p35 o p30), IL-15, IL-17A-F (inclusive los heterodímeros de los mismos, por ejemplo, el heterodímero IL-17A/ IL-17F), IL-18, IL-21, IL-22, IL-23 (o una de sus subunidades pl9 o p40); los agentes de depleción de las células B y las células T, tales como los anticuerpos anti-CD4 o anti-CD22; inhibidores de moléculas menores, tales como el metotrexato y leflunomide; sirolimus (rapamicina) y los análogos del mismo, tales como CCI-779; inhibidores Cox-2 y CPLA2; NSAIDs; inhibidores p38, TPL-2, Mk-2 y NFkB; RAGE o RAGE soluble; inhibidores PSGL-1 y P-selectina, tales como anticuerpos e inhibidores de moléculas menores; agonistas del receptor de estrógeno beta (ERB) y antagonistas de ERB-NFkb. Los agentes terapéuticos que pueden ser coadministrados y/o coformulados al menos con un antagonista IL-22 /IL-22R/IL-10R2 comprenden por lo menos uno de los referidos a continuación: un fragmento soluble de un receptor TNF, por ejemplo p55 o p75 humano, tal como 75 kdTNFR-IgG (proteina de fusión del receptor-IgG de TNF de 75 kD, Enbrel™) ; metotrexato; leflunomide; y sirolimus (rapamicina) o un análogo del mismo, (verbigracia, CCI-779) . Ejemplos no limitativos de agentes para tratar la esclerosis múltiple con los cuales puede combinarse el anticuerpo anti-IL-22 incluyen, por ejemplo, interferón-ß, por ejemplo IFNp-la e IFNp-lb, copaxone, corticosteroides , inhibidores de IL-1, inhibidores TNF, anticuerpos al ligando CD40, anticuerpos a CD80 y antagonistas IL-12, inclusive los anticuerpos que aglutinan IL-12 o una de sus subunidades p35 o p40. Los ejemplos no limitativos de los agentes convenientes para el tratamiento de la enfermedad de intestino inflamatorio o enfermedad de Crohn con los cuales se puede combinar un anticuerpo anti-IL-22 incluyen budenosida; factor de crecimiento epidérmico; corticosteroides; ciclosporina ; sulfasalazine ; aminosalicilatos ; 6-mercaptopurine ; azathioprine ; metronidazole ; inhibidores de lipoxigenasa ; mesalamine; olsalazine; balsalazide; antioxidantes; inhibidores tromboxano; antagonistas del receptor de IL-1; anticuerpos monoclonales anti-IL-1; anticuerpos monoclonales anti-IL-6; factores de crecimiento; inhibidores de elastasa; compuestos piridinil-imidazol ; antagonistas TNF conforme se describen en este documento; IL-4, IL-10, IL-13 y/o TGFP o los agonistas de los mismos, es decir, anticuerpos del agonista; IL-11; prodrogas glucuronida- o dextrano-conj ugadas de prednisolona , dexametasona o budenosida; oligodesoxinucleótidos de fósforotioato antisentido ICAM-1 (ISIS 2302; Isis Pharmaceuticals , Inc.); receptor 1 de complemento soluble (TP10; T Cell Sciences, Inc.); mesalazine de liberación prolongada; metotrexato; antagonistas del Factor Activador de Plaquetas (PAF); ciprofloxacina y lignocaina. En otras modalidades, se puede usar un anticuerpo anti-IL-22 en combinación por lo menos con un anticuerpo dirigido a otros objetivos implicados en la regulación de las respuestas inmunológicas , por ejemplo, el rechazo de trasplantes o la enfermedad injerto versus huésped. Los ejemplos de agentes para el tratamiento de las respuestas inmunológicas con los cuales se puede combinar el antagonista IL-22/IL-22R/IL10R2 de la presente invención comprenden, mas sin restringirse a ellos, los siguientes: los anticuerpos contra las moléculas de la superficie celular, CD25 (receptor a de IL-2), CDlla (LFA-1), CD54 (ICAM-1), CD4 , CD45, CD28/CTLA4, CD80 (B7-1), CD86 (B7-2), entre otros, o las combinaciones de los mismos. En 1 otra forma de ejecución, se utiliza un anticuerpo anti-IL-22 en combinación con por lo menos un agente inmunosupresor general, tal como ciclosporina A o FK506. Otro aspecto de la presente invención se refiere al kit adecuado para poder efectuar la administración combinada de los anticuerpos anti-IL-22 con otros agentes terapéuticos. De acuerdo con una incorporación del presente, el kit comprende por lo menos un anticuerpo anti-IL-22 formulado en un vehículo farmacéutico, y por lo menos un agente terapéutico formulado de la manera conveniente en una preparación farmacéutica o en más de una preparaciones farmacéuticas separadas. VI. Usos diagnósticos Los anticuerpos también se pueden utilizar con el fin de detectar la presencia de IL-22 en las muestras biológicas. Cuando se correlaciona la presencia o nivel de estas proteínas con una condición médica, la persona versada en el arte está en capacidad de diagnosticar la condición médica asociada. Por ejemplo, la IL-22 induce los cambios asociados con aquellos causados por las citoquinas inflamatorias (tales como IL-1 y TNFa) y los inhibidores de IL-22 mejoran los síntomas de la artritis reumatoide (WO 2005/000897 A2 ) . Las condiciones médicas ilustrativas que pueden ser diagnosticadas por los anticuerpos de esta invención incluyen la esclerosis múltiple, artritis reumatoide, pancreatitis, psoriasis, enfermedad de intestino inflamatorio, pancreatitis y rechazo de trasplante.

En el arte son bien conocidos los métodos de detección con base en un anticuerpo; entre ellos se encuentran ELISA, los radioinmunoensayos, immunoblots, Western blots, citometria de flujo, inmunofluorescencia, inmunoprecipitación y otras técnicas relacionadas. Los anticuerpos se pueden proveer en un kit diagnóstico que incluya por lo menos uno de estos procedimientos de detección de IL-22. El kit puede contener otros componentes, envases, instrucciones u otro material que ayude en la detección de la proteina y en la utilización del mismo. Se pueden modificar los anticuerpos con marcadores detectables, inclusive con grupos ligando (por ejemplo, biotina) , fluoróforos y cromóforos, radioisótopos, reactivos de electrón-denso o enzimas. Las enzimas se detectan por su actividad. Por ejemplo, la peroxidasa de rábano se detecta por su capacidad de convertir tetrametilbencidina (TMB) en un pigmento azul, cuantificable por medio de un espectrofotómetro . Otros socios de aglutinación convenientes incluyen biotina y avidina, IgG y proteina A asi como otros pares receptor-ligando ya conocidos en el arte. [00214] Los anticuerpos pueden estar funcionalmente unidos, ya sea por copulación química, fusión genética, asociación no-covalente y otros similares, por lo menos a otra entidad molecular tal como otro anticuerpo (por ejemplo, un anticuerpo biespecífico o multiespecí fico) , toxinas, radioisótopos, agentes citotóxicos o citostáticos , entre otros. Otras posibilidades y permutaciones, que resultarán obvias para la persona versada en la materia objeto del presente, serán consideradas equivalentes dentro del alcance de esta invención. VII. Composiciones farmacéuticas y métodos de administración Algunas formas de ejecución de la presente invención incluyen composiciones que comprenden los anticuerpos aquí revelados. Las composiciones pueden ser útiles para uso farmacéutico y su administración a los pacientes. Las composiciones comprenden un anticuerpo de la presente invención y un excipiente farmacéutico. De acuerdo con el presente contexto, en el término "excipiente farmacéutico" se incluye disolventes, medios de dispersión, revestimientos, agentes antibacterianos y antifungales , agentes de retardo de absorción e isotónicos, etc., compatibles con la administración de un producto farmacéutico. En el arte es bien conocida la utilización de estos agentes para las sustancias farmacéuticamente activas. Las composiciones también pueden contener otros compuestos activos que proporcionen funciones terapéuticas complementarias, adicionales o mejoradas. Las composiciones farmacéuticas también se pueden incluir en un recipiente, empaque o dispensador junto con las instrucciones para su administración. Se formula una composición farmacéutica de la presente invención a fin de que sea compatible con la vía de administración que se pretende utilizar. Los métodos empleados con el objeto de lograr esta administración son conocidos por aquellos conocedores de la materia. Las composiciones farmacéuticas se pueden administrar por vía tópica u oral o pueden tener la capacidad de transmitirse a través de las membranas mucosas. Los ejemplos de administración de una composición farmacéutica incluyen la ingestión oral o la inhalación. La administración también puede ser intravenosa, intraperitoneal , intramuscular, intracavidad, subcutánea, cutánea o transdérmica . Comúnmente, las soluciones o suspensiones utilizadas para la aplicación intradérmica o subcutánea comprenden por lo menos uno de los componentes a continuación mencionados: un diluyente estéril tal como agua, solución salina, aceites fijos, polietilenglicol , glicerina, propilenglicol u otro disolvente sintético; agentes antibacterianos tales como alcohol bencílico o metil parabenos; antioxidantes tales como ácido ascórbico o bisulfito de sodio; agentes quelantes tales como ácido etilendiamina tetraacético (EDTA) ; agentes tampón tales como acetato, citrato o fosfato; y agentes de tonicidad tales como cloruro de sodio o dextrosa. El pH se puede ajustar por medio de ácidos o bases. Dichas preparaciones pueden estar contenidas ya sea en ampolletas, en jeringas desechables o en frascos de dosis múltiple.

Las soluciones o suspensiones utilizadas para la administración intravenosa comprenden un vehículo tal como un suero fisiológico salino, agua bacteriostática , Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, NJ) , etanol o poliol. En todos los casos, la composición debe ser estéril y fluida para facilitar su colocación en una jeringa. Con frecuencia se puede obtener la fluidez adecuada mediante el uso de lecitina o agentes tensoactivos . La composición debe ser estable bajo las condiciones de manufactura y almacenamiento. Se puede lograr la eliminación de microorganismos mediante el empleo de agentes antibacterianos y antifungales , por ejemplo, parabenos, clorobutanol , fenol, ácido ascórbico, timerosal, etc. En muchos casos, es posible incluir agentes isotónicos (azúcar) , polialcoholes (manitol y sorbitol) o cloruro de sodio en la composición. La absorción prolongada de la composición se puede lograr mediante la adición de un agente que retrasa la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina. Las composiciones orales incluyen un diluyente inerte o un vehículo comestible. La composición puede estar incluida en una gelatina o comprimida en tabletas. A los efectos de la administración oral, los anticuerpos se pueden incorporar con excipiente y colocarse en tabletas, pastillas o cápsulas. En la composición se pueden incluir materiales adyuvantes o agentes aglutinantes compatibles. Las tabletas, pastillas y cápsulas pueden contener (1) un aglutinante tal como celulosa microcristalina, goma tragacanto o gelatina; (2) un excipiente tal como almidón o lactosa; (3) un agente de desintegración tal como ácido algínico, Primogel o almidón de maíz; (4) un lubricante tal como estearato de magnesio; (5) un agente de deslizamiento tal como dióxido de silicio coloidal; o, (6) un agente edulcorante o agente de sabor. La composición también se puede administrar mediante una vía transmucosa o transdérmica . Por ejemplo, los anticuerpos que comprenden una porción Fe pueden tener la capacidad de cruzar las membranas de las mucosas del intestino, boca o pulmón, por medio de los receptores Fe. La administración transmucosa se puede lograr por medio del empleo de tabletas, atomizadores nasales, inhaladores o supositorios. La administración transdérmica también se puede lograr por medio del empleo de una composición contentiva de ungüentos, bálsamos, geles o cremas según se conocen en el arte. A los fines de la administración transmucosa o transdérmica se utilizan agentes penetrantes adecuados para la barrera que debe ser penetrada. En cuanto a la administración por inhalación, los anticuerpos se entregan en un aerosol desde un dispensador o recipiente presurizado que contiene un agente propulsor, por ejemplo un liquido o un gas, o un nebulizador.

En algunas modalidades, los anticuerpos de la presente invención se preparan con ciertos vehículos a los fines de 1 proteger los anticuerpos contra la rápida eliminación del cuerpo. Los polímeros biodegradables , por ejemplo, acetato de etileno vinilo, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres , ácido poliláctico, se emplean con bastante frecuencia. Los métodos de preparación de dichas formulaciones ya son conocidos para aquellos versados en el arte. Se pueden utilizar también las suspensiones liposomales como vehículos farmacéuticamente aceptables. Los liposomas se pueden preparar de acuerdo con los métodos establecidos conocidos en el arte (Patente EE. UU . No. 4.522.811). Los anticuerpos o composiciones del anticuerpo de la invención se administran en las cantidades terapéuticamente efectivas que aquí se describen. Las cantidades terapéuticamente efectivas pueden variar de acuerdo con la edad, la condición y el sexo del sujeto así como la severidad de su condición clínica. La dosis conveniente puede ser determinada por el médico con base en las indicaciones clínicas. Los anticuerpos o las composiciones se pueden suministrar como una dosis de bolo con el objeto de maximizar los niveles de anticuerpos que circulan durante el período de tiempo mayor. La infusión continua también se puede emplear después de la dosis de bolo. Según se usa en el presente documento, el término "sujeto" pretende incluir seres humanos y animales no-humanos. Los sujetos comprenden un paciente humano que presenta un trastorno caracterizado por las células que expresan la IL-22, por ejemplo una célula cancerosa o una célula inmunológica . El término "animales no-humanos" en esta invención incluye todos los vertebrados, tales como primates no-humanos, ovejas, perros, vacas, pollos, anfibios, reptiles, etc. Los ejemplos de los rangos de dosis que se pueden administrar a un sujeto se pueden seleccionar a partir de: 1 µg/kg hasta 20 mg/kg, 1 µg/kg hasta 10 mg/kg, 1 µg/kg hasta 1 mg/kg, 10 µg/kg hasta 1 mg/kg, 10 µg/kg hasta 100 mg/kg, 100 µg/kg hasta 1 mg/kg, 250 µg/kg hasta 2 mg/kg, 250 µg/kg hasta 1 mg/kg, 500 µg/kg hasta 2 mg/kg, 500 µg/kg hasta 1 mg/kg, 1 mg/kg hasta 2 mg/kg, 1 mg/kg hasta 5 mg/kg, 5 mg/kg hasta 10 mg/kg, 10 mg/kg hasta 20 mg/kg, 15 mg/kg hasta 20 mg/kg, 10 mg/kg hasta 25 mg/kg, 15 mg/kg hasta 25 mg/kg, 20 mg/kg hasta 25 mg/kg y 20 mg/kg hasta 30 mg/kg, o superiores. Estas dosis se pueden administrar de manera diaria, semanal, quincenal, mensual o con menor frecuencia, por ejemplo, semestralmente , dependiendo de la dosis, el método de administración, el trastorno o el (los) síntomas (s) que habrá (n) de tratarse así como las características individuales del sujeto. Las dosis también se pueden administrar por medio de infusión continua, tal como por medio de una bomba. La dosis administrada también puede depender de la vía de administración. Por ejemplo, la administración subcutánea puede requerir de una dosis superior que la administración intravenosa. En determinadas circunstancias puede resultar ventajoso formular composiciones en forma de dosis unitaria para facilitar la administración y hacer la dosis más uniforme. La forma de unidad de dosis, según se describe en el presente, se refiere unidades físicamente separadas ajustadas al paciente. Cada unidad de dosis contiene una cantidad predeterminada de anticuerpo calculada para producir un efecto terapéutico en asociación con el vehículo. La unidad de dosis depende de las características de los anticuerpos así como del efecto terapéutico particular que se pretende lograr. Por medio de los procedimientos farmacéuticos estándar, en cultivos celulares o animales experimentales se puede determinar la toxicidad y la eficacia terapéutica ' de la composición, por ejemplo mediante la determinación de la LD50 (la dosis letal para 50% de la población) y la ED50 (la dosis terapéuticamente efectiva en 50% de la población) . La relación de dosis entre los efectos tóxico y terapéutico es el índice terapéutico y se puede expresar como la relación LD5o/ED50. Los anticuerpos que muestran mayores índices terapéuticos pueden ser menos tóxicos y/o más efectivos terapéuticamente. Los datos obtenidos a partir de ensayos de cultivos celulares y estudios animales se pueden utilizar para formular un rango de dosis en seres humanos. La dosis de estos compuestos puede encontrarse dentro del rango de concentraciones de anticuerpo circulando en la sangre, que incluye una ED50 con poca o ninguna toxicidad. La dosis puede variar dentro de este rango dependiendo de la forma de dosis de la composición empleada y de la vía de administración. Para cualquier anticuerpo utilizado en la presente invención, la dosis terapéuticamente efectiva se puede estimar, inicialmente, mediante el empleo de ensayos en cultivos de células. Se puede formular una dosis en modelos animales para lograr un rango de concentración en plasma en circulación que incluye IC5o, es decir, la concentración de anticuerpos que logra una inhibición media-máxima de los síntomas. Los efectos de cualquier dosis en particular se pueden monitorear por medio de un bioensayo adecuado. Ejemplos de bioensayos adecuados incluyen ensayos de replicación de ADN, ensayos con base-transcripción, ensayos de aglutinación IL-22 /IL-22R, ensayos de aglutinación IL-22 /IL-10R2 , IL-22/IL-22R/IL-10R2 y otros ensayos inmunológicos . EJEMPLOS Ejemplo 1: Selección de scFv de anti-IL-22. Selección de GIL01 y GIL68 madres Se aisló GIL01 y GIL68 de las bibliotecas de scFv mediante selección soluble en IL-22. Las selecciones solubles se llevaron a cabo utilizando IL-22 biotinilada con una proteína FLAG marcada / N-terminal His (bio. IL-22 H/F). Inicialmente, se utilizó Bio. IL-22 H/F en una concentración de 100 nM. Una biblioteca de fagómido scFv, que es una versión expandida de la biblioteca 1.38xl010 descrita (Vaughan y colaboradores, 1996) se utilizó a fin de seleccionar los anticuerpos específicos para IL-22. Los fagos scFv purificados (1012 unidades de transducción (tu)) fueron bloqueados durante 30 minutos en 100 µ? de MPBS al 3% (leche en polvo al 3% en PBS) , luego se agregó bio. IL-22 H/F y se les incubó a temperatura ambiente durante 1 hora. El fago/antígeno se agregó a 50 µ? de bolitas magnéticas de Estreptavidina M280 Dynal, que habían sido bloqueadas durante 1 hora a 37° C en 1 mi de MPBS al 3%, luego se incubó durante otros 15 minutos a temperatura ambiente. Las bolitas se atraparon mediante el empleo de una rejilla magnética y se lavaron 4x en 1 mi de MPBS al 3% / Tween 20 al 0,1% (v/v) seguido por tres lavados con PBS. Después del último lavado, las bolitas se resuspendieron en 100 µ? PBS y se utilizaron para infectar 5 mi de células TG-1 de E. coli de crecimiento exponencial. Las células y los fagos en las bolitas se incubaron durante 1 hora a 37° C (30 minutos en reposo y 30 minutos agitándose a 250 rpm) , posteriormente se esparcieron sobre placas 2TYAG. Las placas se incubaron a 30° C durante la noche y, al día siguiente, se vieron las colonias. Las colonias fueron desprendidas de las placas y colocadas en 10 mi de un caldo 2TY y se agregó glicerol al 15% para almacenamiento a -70°C.

Los cultivos del material en glicerol desde la primera selección por paneo fueron superinfectados con el fago helper y rescatados para dar las partículas de fago de expresión-anticuerpo scFv para la segunda ronda de selección. Se llevó a cabo una segunda y una tercera rondas de selección soluble de la manera anteriormente descrita, cayendo la concentración de bio. IL-22 H/F a 50 n . Aislamiento de las madres GIL16, GIL45, GIL60 y GIL92 Se aislaron GIL16, GIL45, GIL60 y GIL92 de las bibliotecas de scFv mediante una combinación de paneo sobre una proteína de fusión IL-22 y la selección soluble en bio. IL-22 H/F. Las cavidades de la placa de microtítulo se revistieron con 10 µq/ l de la proteína de fusión IL-22 humana (PBS de Dulbecco, pH 7.4 ) y se incubaron durante la noche a 4o C. Las cavidades se lavaron con PBS y bloquearon durante 2 horas a 37° C en MPBS al 3%. Los fagos purificados (1012 tu) en 100 µ? de MPBS al 3% se agregaron a las cavidades bloqueadas y se incubaron a temperatura ambiente durante 1 hora. Las cavidades se lavaron 10 veces con PBST (PBS contentivo de Tween 20 al 0,1% v/v) , luego 10 veces con PBS. Las partículas de fagos aglutinadas se levigaron con 100 µ? de solución tripsina (0,5 µg/ml de tripsina en 50 mM Tris pH 8 , 1 mM CaCl2) durante 30 minutos a 37° C. Se utilizaron los fagos levigados para infectar 10 mi de TG1 de E. coli de crecimiento exponencial. Las células infectadas se cultivaron en caldo 2TY durante 1 hora a 37° C, de igual manera a la anteriormente descrita, luego se marcaron sobre las placas 2TYAG e incubaron toda la noche a 30° C. Las colonias resultantes fueron desprendidas de las placas por raspado y rescatadas de la manera anteriormente descrita. Se llevó a cabo una segunda ronda de selección soluble, conforme lo antes descrito, utilizando 100 nM bio. IL-22 H/F. Ejemplo 2 : ScFv bloquea la aglutinación de IL-22 a IL-22R Se realizaron los ensayos de inhibición en los anticuerpos madre GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68 y GIL92 con el objeto de identificar los anticuerpos que bloquean o alteran la aglutinación de IL-22 a IL-22R y/o el complejo receptor IL-22. Se verificó scFv crudo contentivo de extractos periplásmicos en cuanto a su capacidad de inhibir la aglutinación de bio. IL-22 H/F a la proteina del receptor de IL-22 humano (hIL-22R) . Se recogieron las colonias resultantes de las selecciones en placas de 96 cavidades contentivas de 100 µ? de 2TYAG. La producción de scFv se indujo mediante la adición de 1 mM de IPTG a los cultivos de crecimiento exponencial y la incubación durante toda la noche a 30° C. Se prepararon los extractos periplásmicos (Griffiths y colaboradores, 1993) en 50 mM de MOPS pH 7 , 4 / 0 , 5 mM de EDTA / 0, 5M de Sorbitol.

Las placas de microtitulo se revistieron con 1,25 µg/ml de un anticuerpo a la proteina del receptor de IL-22 (en PBS) durante 1,5 horas a temperatura ambiente. Posteriormente, las placas se lavaron tres veces en PBS y bloquearon durante 1 hora a temperatura ambiente con PBS contentivo de leche en polvo al 2% (2% MPBS) . Después de otros 3 lavados, se agregó a cada cavidad 50 µ? del medio acondicionado celular al 25% contentivo de una proteina del receptor de IL-22 y se incubó toda la noche a 4°C. Al día siguiente, se agregó 25 µ? de muestra y 25 µ? de bio. IL-22 H/F (54 ng/ml en PBS / BSA al 0,05%/ Tween al 0,05%) a las placas lavadas y se incubó durante 1,5 horas a temperatura ambiente. Después de 3 lavados en PBST, se detectó la aglutinación de bio. IL-22 H/F con Europium-Streptavidin y se detectó TRF con un kit reactivo DELFIA® y Lector de Placa Víctor 2™ (Perkin Elmer) . Los clones que mostraron inhibición de la aglutinación de la IL-22 se ensayaron nuevamente como scFv purificado. Se utilizó tanto el ensayo de aglutinación de IL-22/IL-22R, anteriormente descrito, como el ensayo del complejo receptor IL-22 / IL-22, que se describirá en lo sucesivo. Las concentraciones de scFv se titularon con el objeto de establecer las potencias del clon medidas mediante los valores de IC50 del ensayo. Estas se determinaron utilizando el software GraphPad Prism y el ajuste de la curva de la ecuación logística de cuatro parámetros. Los resultados del ensayo del complejo del receptor de IL-22 se muestran en la Figura 1. Ejemplo 3: Verificación de la aglutinación de IL-22 mediante ELISA del fago A los fines de establecer la especificidad de los scFv's para la IL-22 se realizó un ELISA del fago utilizando la proteína de fusión de IL-22, IL-22 H/F y una proteína sin relación. Se inocularon las colonias de E. coli individuales a placas de 96 cavidades contentivas de 100 µ? de medio 2TYAG por cavidad. El fago auxiliar M13K07 se agregó en una multiplicidad de la infección (moi, por sus iniciales en inglés) de 10 al cultivo de crecimiento exponencial y las placas se incubaron 1 hora más a 37° C. Las placas se centrifugaron en una centrífuga de banco a 2000 rpm durante 10 minutos. El flotante se separó y las pelas celulares se resuspendieron en 100 µ? de 2TYAK e incubaron a 30° C agitándolas durante toda la noche. Al día siguiente, las placas fueron sometidas a centrifugación a 2000 rpm durante 10 minutos y 100 µ? del flotante contentivo del fago proveniente de cada cavidad se transfirió a la placa de 96 cavidades fresca. Las muestras de fago fueron bloqueadas en una concentración final de 3% MPBS durante 1 hora a temperatura ambiente . Las placas de microtítulo se revistieron con 1 µg/ml de la proteína de fusión IL-22, IL-22 H/F o una proteina sin relación y se incubaron toda la noche a 4o C. Después del revestimiento, las soluciones se separaron de las cavidades y las placas se bloquearon durante 1 hora a temperatura ambiente en MPBS al 3%. Las placas se enjuagaron con PBS, luego se agregó 50 µ? del fago prebloqueado a cada cavidad. Las placas se incubaron a temperatura ambiente durante 1 hora, luego se lavaron con 3 cambios de PBST seguido por 3 cambios de PBS. A cada cavidad se le agregó 50 µ? de una dilución de 1:5000 de conjugado anti-Ml3-HRP (Pharmacia) y las placas se incubaron a temperatura ambiente durante 1 hora. Las placas se lavaron 3 veces con PBST, luego 3 veces con PBS. Se agregó 50 µ? del substrato TMB a cada cavidad y se incubó hasta la revelación del color. La reacción se detuvo mediante la adición de 25 µ? de 0,5 M de H2S04 y se midió la absorbancia a 450 nm. Estos experimentos confirmaron la aglutinación específica de los clones scFv a la IL-22. Ejemplo 4: Conversión de scFv en IgG [00236] Las regiones V de cadena pesada y liviana de los clones de scFv se amplificaron con los iniciadores específicos del clon. Los productos PCR fueron digeridos con las enzimas de restricción adecuadas y subclonados en vectores contentivos del dominio constante de cadena pesada de IgG4 humano (para los dominios VH) o vectores contentivos de los dominios constantes de cadena liviana lambda o kappa humanos (dominios VL) . Se determinaron las lineas germinales de los segmentos VH y VL más cercanas y esta información se utilizó a fin de indicar si se utilizaban los dominios constantes de cadena liviana kappa o lambda (Tabla 4) . La inserción correcta de los dominios de región V en los plásmidos fue verificada mediante la ordenación en secuencia del ADN del plásmido de las colonias de E. coli individuales. Los plásmidos se prepararon a partir de cultivos de E. coli mediante técnicas estándar y de construcciones de cadenas pesada y liviana co-transfectados con las células HEK 293 EBNA utilizando técnicas estándar. La IgG secretada se purificó mediante la utilización de proteina A Sepharose (Pharmacia) y agente tampón modificado con PBS . Tabla 4: Lineas de germen VH y VL de los clones de neutralización de IL-22 potencia de IgG purificada fue verificada por medio del ensayo de inhibición del complejo del receptor de IL-22 conforme se describirá más adelante. Las concentraciones IgG se titularon con el propósito de obtener los valores de potencia. Los datos de la potencia de la muestra se enseñan en la Tabla 5. Tabla 5: Potencia de IL-22 scFv y de IgG en el ensayo de inhibición del complejo receptor de IL-22 Ejemplo 5: Optimización del anticuerpo de IL-22 Se crearon grandes bibliotecas de visualización de ribosomas y se seleccionaron los scFv que específicamente reconocían la IL-22 humana recombinante , sustancialmente de la manera descrita por Hanes y colaboradores (2000). Inicialmente, los cinco clones madres (GIL01, GIL16, GIL60, GIL68 y GIL92) se convirtieron en un formato de visualización de ribosoma y esta plantilla se utilizó de manera subsiguiente a fin de la creación de la biblioteca. A nivel del ADN se agregó un promotor T7 en el extremo 5' para transcripción eficiente al ARNm. A nivel del ARNm, la construcción contenia un sitio de aglutinación-ribosoma procariótico (secuencia de Shine-Dalgarno) y 5' & 3' circuitos de troncos para estabilidad del ARNm. En el extremo 3' de la cadena simple, el codon stop se separó y se agregó una porción de gilí para actuar como separador, permitiendo el pliegue de scFv a partir del túnel ribosoma1 (Hanes y colaboradores, 2000) . Se crearon las bibliotecas de visualización de ribosomas derivadas de los clones de guia mediante mutagénesis de las regiones que determinan la complementariedad de la cadena simple (CDRs) utilizando PCR con polimerasa Taq ADN sin corrección de pruebas. Se llevó a cabo la selección con base en la afinidad después que el material de la biblioteca se incubó con bio . IL-22H/F, seguido por bolitas paramagnét icas revestidas con estreptavidina (Dynal M280) . Los complejos terciarios (ARNm-ribosoma-scFv) se recuperaron mediante separación magnética mientras los complejos no aglutinados se separaron por lavado. Posteriormente, los ARNms que codifican la aglutinación scFcs fueron recuperados por RT-PCR, según se describiera (Hanes y colaboradores, 2000) y el proceso de selección se repitió con concentraciones decrecientes (100 n - 10 pM durante 5 rondas) de bio . IL-22H/F. Se introdujo PCR propenso a error con el fin de incrementar el tamaño de la biblioteca. La tasa de error empleada creó un promedio de 7,2 mutaciones por 1.000 bp después de una reacción de PCR estándar basada en el método de Cadwell y Joyce (1992). Las reacciones iniciales de PCR propenso a error se llevaron a cabo entre las rondas de selección primera y segunda. Se prepararon las bibliotecas de recombinación VH/VL para cada clon madre a partir de los productos de visualización de ribosoma CDR VH y VL después de la segunda o la cuarta rondas de selección. La porción VH del producto de selección CDR VH para un linaje particular fue específicamente amplificada por PCR utilizando los iniciadores específicos del clon. La porción VL del producto de selección CDR VL para el mismo linaje fue amplificada por separado. Estos dos productos PCR fueron recombinados mediante una reacción de solapamiento de PCR. Así se creó una biblioteca completa de productos scFv contentiva de todos los componentes requeridos para las posteriores rondas de selección por visualización de ribosomas . A los efectos de algunos clones se utilizaron las bibliotecas de visualización de fagos. Las bibliotecas de fagos se crearon por mutagénesis de las CDRs de cadena simple utilizando reacciones PCR con iniciadores adecuados, seleccionados de la manera anteriormente descrita. Los productos obtenidos también se combinaron con los productos de la selección de la visualización de ribosomas para crear bibliotecas de recombinación VH/VL. Los productos de la selección VH de la cuarta ronda de visualización de ribosoma, junto con los productos de la tercera ronda de visualización de fagos, se recombinaron con los productos VL del mismo linaje. Esto se logró utilizando iniciadores específicos del clon y solapamiento de PCR para producir bibliotecas de recombinación VH/VL. Las selecciones con bio.IL-22 H/F soluble continuaron en el formato de visualización de ribosoma anteriormente descrito. Las regiones csFv de los productos de selección se clonaron direccionalmente en pCANTAB6 para una producción de scFv de selección bioquímica de alto rendimiento . Ejemplo 6: Identificación de los clones optimizados Se utilizaron dos ensayos para seleccionar con alto rendimiento los productos de selección. Los productos derivados de los clones GIL01, GIL16 y GIL68 fueron seleccionados mediante un ensayo de fluorescencia homogéneo resuelto en tiempo (HTRF®, Cis Biointernational ) , mientras los productos GIL60 y GIL62 fueron seleccionados por medio de ensayo DELFIA® (Perkin Elmer) . Ensayo de competencia de epitopo HTRF® Se preparó scFv crudo contentivo de los flotantes del cultivo de los clones de GIL01, GIL16 y GIL68 de la manera antes descrita y se seleccionó en cuanto a la inhibición de la aglutinación de bio.IL-22H/F a GIL68 en un ensayo HTRF. IgG GIL68 marcada con criptato (kit de marcado de Cis Biointernational ) se diluyó 400 veces en un agente tampón de ensayo (PBS/ 0,4M KF / BSA 0,05%/Tween 0,05%), seguido por la adición de 7,5 nM de Estreptavidina XL665 (Xlent, Cis Biointernational). Esta solución se mezcló con la muestra cruda de scFv (diluida 125x) y bio.IL-22H/F en una placa Optiplate de 384 cavidades Packard (Perkin Elmer) . Las placas se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente y luego se leyeron utilizando un Lector de Placas Víctor 2™ (Perkin Elmer) . La relación de emisión de 665 nM / 620 nM se utilizó para calcular el porcentaje de aglutinación específico de cada cavidad . Ensayo de fluorescencia resuelto en tiempo DELFIA® Los clones resultantes de GIL60 y GIL92 se seleccionaron en cuanto a la inhibición de la aglutinación de bio.IL-22H/F a un complejo receptor de IL-22. Las placas de microtítulo se revistieron con un anticuerpo del complejo receptor de IL-22 (1 µg/ml en PBS) y se incubaron durante 1,5 horas a temperatura ambiente. Las placas se lavaron tres veces en PBST y bloquearon durante 1 hora, a temperatura ambiente, con MPBS al 2%. Después de otros 3 lavados, el medio acondicionado con la célula diluida contentivo del complejo receptor de IL-22 se agregó e incubó toda la noche a 4o C. Los flotantes de scFv crudo se prepararon de la manera antes descrita. Al día siguiente, se agregó 25 µ? de la muestra de scFv diluida y 25 µ? de bio.IL-22 H/F (6 ng/ml) a las placas lavadas y se incubó durante 1,5 horas a temperatura ambiente. Las placas se lavaron 3 veces en PBST, luego se detectó la aglutinación de bio.IL-22H/F al complejo receptor de IL-22 por medio de Europium-Estreptavidina y el kit reactivo DELFIA® (Perkin Elmer) . La Fluorescencia de Resolución en Tiempo se midió utilizando un Lector de Placa Víctor 2™ (Perkin Elmer). Se llevaron a cabo las pruebas del scFv purificado a partir de clones positivos identificados en la selección, mediante el ensayo de competencia del complejo receptor de IL-22 DELFIA® de la manera anteriormente descrita. Se utilizó una titulación de las concentraciones de scFv a fin de establecer la potencia del clon medida por valores de IC50 en el ensayo. Los resultados de las muestras se presentan en las Figuras 2A-2G. Se diseñaron catorce clones optimizados 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04 y 356A11. Ejemplo 7 : Clasificación de los clones optimizados en el ensayo de proliferación BAF-3-IL-22 Los ensayos de proliferación se realizaron a fin de evaluar la capacidad del anticuerpo de bloquear la proliferación celular BaF3 mediada por IL-22. Las células BaF3 que expresan hIL22R/hIL10R2 se generaron por medio de co- transfección de las células BaF3 con hIL22R-GFP y hIL10R2-YFP. Las células BaF3 que expresan tanto hIL22R como hIL10R2 (células receptoras BaF3-IL-22) fueron separadas y recogidas por FACS. Las células receptoras BaF3-IL-22 se mantuvieron de manera rutinaria en RPMI1640 con FBS al 10% y 1 ng/mL de IL-3 murino. Inmediatamente antes del ensayo, las células se lavaron 4 veces en el medio de ensayo (RPMI1640 con FBS al 10%, 100U/ml de Penicilina y 100 µg/ml de Estreptomicina), se resuspendieron en el medio de ensayo y se incubaron a 37° C en CO2 al 5% durante 6-8 horas. A fin de preparar las placas de ensayo se agregaron 100 µ? de células (lxloVml en el medio de ensayo) a las 60 cavidades centrales de una placa de cultivo de tejidos, de fondo plano, con 96 cavidades (Costar) . Las muestras de ensayo de scFv o IgG se prepararon diluyendo la muestra de material en un medio de ensayo seguido por filtración a través de un filtro de 0,22 µ?. Se prepararon diluciones en serie de 5 veces de las muestras en una placa de dilución separada. Las cavidades contentivas de las células se trataron con 50 µ? de muestra seguido por 50 µ? de IL-22 humano (40 ng/ml en medio de ensayo) y luego se incubaron durante 40 horas a 37°C en CO2 al 5%. Las cavidades de control incluyeron ya sea el medio solo o las células solas o en presencia de 10 ng/ml de IL-22 humano.

Se detectó la proliferación celular por medio de la adición a las cavidades de 20 µ? de Alamar Blue (Serotec) , seguido por la incubación durante 5 horas + 30 minutos a 37°C en C02 al 5%. Las placas se mezclaron mediante golpeo suave para asegurar una señal pareja a través de las cavidades antes de proceder a la medición de la fluorescencia (excitación=560 nM, emisión=590 nM) . Los valores EC50 e IC50 se estimaron por medio de la utilización de la prueba de curva logística de cuatro parámetros (Software Graphpad Prism 2) y se emplearon para clasificar los anticuerpos. Los datos de potencia de la muestra para scFv e IgG optimizados se muestran en la Tabla 6. Tabla 6: Valores IC50 de clones de scFv e IgG en el ensayo de proliferación de BaF3-IL-22 * Los clones GIL92-derivados se sometieron a ensayo como IgG formados de lineas de germen.

Ejemplo 8 : Linea de germen Los datos de secuencia para los seis clones madres se utilizaron a fin de identificar la secuencia de linea de germen más cercana para las cadenas pesada y liviana de cada clon. Se efectuaron las mutaciones adecuadas utilizando las técnicas estándar de mutagénesis dirigidas al sitio con los iniciadores mutagénicos adecuados. La mutación de secuencias se confirmó por medio del análisis de secuencia. Las secuencias para los clones de lineas germinales y sus dominios scFv y VH y VL se muestran en la Tabla 7. Se realizaron las pruebas de scFv purificado proveniente de clones madres de las lineas germinales mediante el ensayo de competencia de IL-22 biotinilado que aglutina el complejo receptor de IL-22, conforme anteriormente descrito, a fin de establecer las potencias del clon medidas por medio de los valores de IC50 del ensayo. Los resultados se resumen en la Tabla 8.

Tabla 7A: Secuencias de Aminoácido y Nucleótido de Dominios VH y VL, Fv y CDR de Anticuerpos con líneas de Germen (GILOl , GILI 6, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 062A09 y 087B03) Tabla 7B: Secuencias de Aminoácido y Nucleótido de Dominios VH y VL, Fv y CDR de Anticuerpos con líneas de Germen (168B06, 166G05, 354AS08, 35B06, 35E04, 356A11 y 368D04) Tabla 8: Potencias de scFv de clones madres de linea de germen y de no-linea de germen en el ensayo de competencia del receptor de IL-22 Nueve de los anticuerpos optimizados se formaron de linea de germen conforme antes descrito. Ocho IgG de linea de germen se sometieron a prueba en el ensayo de proliferación de BaF3-IL-22 según se describiera anteriormente. Los valores IC50 del anticuerpo a partir de un experimento representativo se muestran en la Tabla 9. Posteriormente, las secuencias de anticuerpo se enviaron a GENEART North America (28 Kirk Bradeen Rd. East, Toronto, ON, Canadá M8Y2E6) , donde fueron sintetizadas por expresión optimizada en las células CHO utilizando el algoritmo de optimización propiedad de GENEART.

Tabla 9: Potencias IgG de clones optimizados formados de linea de germen en el ensayo de proliferación de BaF3-IL-22R muestra contenia el precipitado ND= no determinado E emplo 9 : El anticuexpo inhibe la secreción de GROa inducida por IL-22 de las células HT29 Se llevaron a cabo los ensayos GROa a fin de evaluar la capacidad del anticuerpo de bloquear la secreción de GROa inducida por IL-22 a partir de las células HT29. Las células HT29 fueron cultivadas en placas de cultivo de tejidos, de fondo plano, de 96 cavidades (Corning Inc. Cat . #3595) en medio DME (DMEM + FBS al 10% + 100 unidad/ml de penicilina y estreptomicina + 2 mM de Glutamina) a 5 x 10 /cavidad. Se mezcló 10 ng/ml de IL-22 con el anticuerpo diluido en serie en medio DMEM y se incubó durante 30 minutos a 37°C. Después de 24 horas de cultivo, el medio se separó de las células HT29 y se agregó una mezcla previa de IL-22 y anticuerpo a las células de la placa de 96 cavidades. Después de 48 horas de incubación a 37°C con C02 al 5%, el medio se recogió y GROa secretado fue sometido a ensayo utilizando el kit de inmunoensayo Human GROa Immunoassay de R&D Systems, Cat. DGR00, de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Los resultados se presentan en las Figuras 3A-3B. Ejemplo 10 : El anticuerpo se aglutina e inhibe la IL-22 de las diferentes especies . La reactividad reciproca entre especies de los anticuerpos optimizados de linea de germen y de no-linea de germen se determinó de la manera especificada a continuación. Las placas de ELISA (Costar, Cat. #3590) permanecieron durante toda la noche cubiertas con 1 µ?/p?? de IL-22 de rata, ratón o humano o IL-26 humano en tampón PBS. Las placas se lavaron tres veces con tampón PBST (Tween 20 al 0,05% en PBS) , luego se bloquearon con BSA al 1% (Sigma A8918) / PBST durante 1 hora a temperatura ambiente. Se agregaron los anticuerpos a 1 se incubaron durante 1 hora a 25° C. Las placas se lavaron, más tarde se agregó anticuerpo IgG anti-humano de cabra HRP-con ugado (Southern Biotech Association, Cat . #2040-05) . Las placas se incubaron durante 1 hora a 25°C, luego se lavaron con PBST y desarrollaron con TMB (KPL, Cat. #50-76-04) . La reacción se detuvo con 0,18 M de H2S04. Las placas se leyeron a OD 450 nm. Los resultados se presentan en las Figuras 4A-4B. Estos anticuerpos también fueron sometidos a evaluación tanto en el ensayo de célula GROa como en el ensayo de proliferación de BaF3-IL-22. Tal como se demuestra en las Tablas 10(a) y 10(b) , los anticuerpos bloquearon la actividad de señalización de la IL-22 humana, de mono, de rata y de ratón por medio del receptor de IL-22 humano. 356A11 y 368D04 también demostraron reactividad reciproca entre las especies contra IL-22 murino, de rata y mono cuando se llevó a cabo el análisis de interacción bioespecifico (BIA) de tiempo real, conforme se argumentará en mayor detalle en el Ejemplo 11.

Tabla 10 (a) . Los anticuerpos IL-22 son altamente potentes para el bloqueo de IL-22 en otras especies según se demuestra en el sistema de ensayo con base en célula GROa . Los valores mostrados representan los valores de IC50 en pM.

Tabla 10 (b) . Los anticuerpos IL-22 son altamente potentes para el bloqueo de IL-22 en otras especies según se demuestra en el sistema de ensayo con base en célula BaF3. Los valores mostrados representan los valores de IC50 en pM.

Ejemplo 11 : Comparación de la cinética de aglutinación entre los anticuerpos monoclonales anti-IL-22 de la rata y los anticuerpo monoclonales anti-IL-22 del ser humano. La cinética de aglutinación de los anticuerpos monoclonales anti-IL-22 del ser humano (356A11 y 368D04) y los anticuerpos monoclonales anti-IL-22 de la rata (P3/3 (Ab-02) y P3/2 (Ab-04) de O 2005/000897 y O 02/068476) a la IL-22 humana se evaluaron mediante el análisis de interacción bioespecifico (BIA) de tiempo real utilizando la tecnología de resonancia de plasmón superficial. A fin de preparar la superficie del biosensor para los anticuerpos monoclonales de la rata, se inmovilizó la Proteína A/G (Pierce #21186, Rockford, IL) sobre un chip de carboximetil dextrano (CM5) grado investigación utilizando copulación amina. La superficie se activó con EDC/NHS. La proteína A/G se inyectó a una concentración de 50 µ?/??? en tampón de acetato de sodio (pH 4,0) . La inmovilización se efectuó mediante la utilización de las herramientas Wizard con un intento de 3000 (RUs) para la proteína A/G. Los restantes grupos activados fueron bloqueados con 1,0 M de etanolamina (pH 8,0) . El primer flujo celular se utilizó como una superficie de referencia para corregir el índice refractivo del volumen, los efectos de matriz y la aglutinación no específica. Los flujos celulares segundo, tercero y cuarto se revistieron con la molécula de captura. Los anticuerpos 14 monoclonales Ab-02 y Ab-04 de la rata, que se aglutinan a la proteina A/G, fueron atrapados sobre la superficie de la proteina A/G mediante la inyección de 30 µ? de una solución 1 µ?/p??. La diferencia neta entre la linea base y el punto aproximadamente 90 segundos después de completarse la inyección de Ab-02 y Ab-04 se utilizó para representar la cantidad de aglutinación del ligando. A fin de preparar la superficie del biosensor para los anticuerpos monoclonales humanos se inmovilizó ya sea un anticuerpo monoclonal humano (356A11 ó 368D04) o un anticuerpo de control PD-1 (#17) sobre un chip carboximetil dextrano grado investigación (CM5) utilizando copulación amina. La superficie se activó con EDC/NHS. Los anticuerpos de captura se inyectaron a una concentración de 1 µg/ml en tampón de acetato de sodio (pH 5,5). Los grupos activados restantes fueron bloqueados con 1,0M de etanolamina (pH 8,0). Se utilizó el primer flujo celular como superficie de referencia para corregir el índice de refracción del volumen, los efectos de matriz y la aglutinación no específica. Los flujos celulares segundo, tercero y cuarto se revistieron con la molécula de captura . Para Ab-02 y Ab-04, se inyectaron las soluciones de IL-22 humana a concentraciones de 300, 100, 50, 25, 12,5, 6,4, 3,2, 1,6 y 0 nM en triplicados a una tasa de flujo de 30 µ? por minuto durante 3 minutos y la cantidad de material aglutinado como una función de tiempo se registró como sensorgramas . La fase de disociación fue monitoreada en tampón HBS/EP durante 10 minutos a la misma tasa de flujo seguido por una inyección de 5 µ? de TFA al 0,1% y una inyección de 5 µ? de glicina de pH 1,5 para regenerar una superficie de captura completamente activa . Para 356A11 y 368D04, se inyectaron las soluciones de IL-22 humana a concentraciones de 400, 200, 100, 50, 25, 12,5, 6,25 y 0 nM en triplicados a una tasa de flujo de 100 µ? por minuto (el flujo fue alto a fin de evitar la aglutinación no especifica) durante 3 minutos y la cantidad de material aglutinado, como una función de tiempo, se registró como sensorgrams. La fase de disociación fue monitoreada en tampón HBS/EP durante 60 minutos a la misma tasa de flujo seguido por dos inyecciones de glicina de pH 1,5 a los fines de regenerar una superficie de captura completamente activa. Todos los experimentos cinéticos se realizaron a 22,5°C en tampón HBS/EP. Los efectos del tampón y material bruto se sustrajeron en cada sensorgrama utilizando doble referencia. En los experimentos de control, la primera inyección contenia tampón. Los datos cinéticos se analizaron utilizando el software 3.0.2 de BIAevaluation aplicado a un modelo 1:1. Las constantes de la tasa de asociación (Ka) y disociación (Kd) aparentes se calcularon a partir de las regiones adecuadas de los sensorgrams utilizando un análisis global. Las constantes de afinidad de la interacción entre el anticuerpo y el analito se calcularon a partir de las constantes de la tasa de cinética por medio de las siguientes fórmulas: KD = Kd / Ka, donde KD es la constante de disociación, y KA = Ka / Kd, donde KA es la constante de asociación. Los datos sobre aglutinación para Ab-02 y AB-04 se resumen en las Tablas 11A y 11B. Los datos de aglutinación para 356A11 y 368D04 se resumen en la Tabla 12. Tabla 11A. Parámetros cinéticos para la interacción entre IL- 22 humana y anticuerpos anti-IL-22 Ab-02 y Ab-04 Tabla 11B. Datos cinéticos sobre los anticuerpos monoclonales de la rata para IL-22 humana.

Tabla 12. Datos cinéticos sobre los anticuerpos monoclonales humanos para IL-22 humana.

Estos resultados demuestran que los anticuerpos monoclonales anti-IL-22 humanos de la presente invención tienen una afinidad significativamente superior para la IL-22 humana que los anticuerpos monoclonales anti-IL-22 de la rata Ab-02 y Ab-04 los cuales, según se describiera en O 2005/000897 y WO 02/068476, tienen la capacidad de neutralizar IL-22 humana. Específicamente, la constante de disociación de 356A11 (KD = 5,40 x 10"11 M o 0, 054 nM) para IL-22 humana es aproximadamente 1000 veces y más de 40 veces mayor que las constantes de disociación de Ab-02 (KD = 5,22 x 10"8 M o 52 nM) y Ab-04 (KD = 2,38 x 10"9 M o 2,38 nM) , respectivamente. De manera similar, 368D04 (KD = 1,32 x 10~10 M o 0,132 nM) tiene una afinidad para la IL-22 humana que es aproximadamente 400 veces y 18 veces más fuerte que Ab-02 y Ab-04, respectivamente. Los perfiles de aglutinación de 356A11 y 36804 para la IL-22 de mono, murino y rata fueron similares a aquellos de IL-22 humana (estos datos no se muestran en el presente) . Las especificidades de aglutinación de 356A11 y 368D04 también se evaluaron utilizando BIA. Ningún anticuerpo demostró reactividad reciproca con IL-10 humana, IL-19 humana, IL-20 humana, IL-24 humana, IL-28A humana, IL-29 humana, IFN-a2c humana o IFN-? humana (estos datos no se muestran) . Ejemplo 12: Media vida in vivo de Anticuerpos Anti-IL-22 Humana. Los anticuerpos anti-IL-22 humana de la invención tienen largas medias vidas in vivo. Por ejemplo, la media vida in vivo tanto de 356A11 como 368D04 en ratones DBA/1 fue de ocho días. Específicamente, se administró una sola dosis o bien de 356A11 ó 368D04 (16 mg/kg) por vía intraperitoneal a ratones DBA/1. Los anticuerpos 356A11 y 368D04 fueron detectados en el suero de ratones utilizando un IgGl humano ELISA. Los cursos del tiempo de las concentraciones séricas 356A11 y 368D04 se muestran en las Figuras 11A y B. Los parámetros PK de 356A11 y 368D04 se resumen en la Tabla 13 sigue. Tabla 13. Parámetros PK de 3536A11 y 368D04.

Ejemplo 13: Tratamiento de la Artrutis La artritis es una enfermedad caracterizada por inflamación de las articulares. La artritis reumatoide (RA) es la forma más frecuente de artritis, abarcando la inflamación del tejido conectivo y la membrana sinovial, una membrana que forra las articulares. La membrana sinovial inflamada a menudo infiltra la articulación y daño el cartílago y hueso de la articulación. Tanto la proteína IL-22 como IL-22R y/o transcrito se asocian con la enfermedad humana. En las biopsias sinoviales RA, la proteína IL-22 es detectada in fibroblastos sinoviales vimentina"1" y algunos macrófagos CD68+ mientras se detecta IL-22R en fibroblastos sinoviales. El tratamiento de fibroblastos sinoviales con IL-22 induce la producción de proteína-1 quimioatractiva monocítico, MCP-1, así como actividad metabólica general (Ikeuchi, H. y colaboradores (2005) Arthritis Rheum. 52:1037-46) . Se utiliza IL-22 para estudiar su efecto sobre células provenientes de la membrana sinovial, la membrana que forra las articulaciones. Los sinoviocitos similares a fibroblasto humano (HFLS) (Cell Applications (San Diego, CA) ) son aislados de los tejidos sinoviales de los pacientes con artritis reumatoide que se someten a cirugía de las articulaciones. Se cultivan los HFLS con IL-22 humana durante 48 horas y se remueven los supernatantes y ensayan para las quimioquinas y citoquinas mediante ELISA. La IL-22 aumentará la secreción HFLS de quimioquinas MCP-1, Eotaxin e IP-10 y citoquinas TNFa, IL-6 e IL-8. En el arte se sabe que estas quimioquinas y citoquinas promueven la inflamación a través de varias actividades y concentraciones aumentadas en las articulaciones causadas por IL-22 exacerba la inflamación y RA. La actividad del anticuerpo anti-IL-22 humana para mejorar los síntomas en artritis, inducida por colágeno (CIA) fue examinada utilizando los anticuerpos 356A11 y 368D04. CIA es el modelo estándar de ratones y ratas para estudiar artritis reumatoide, véase, verbigracia, Holmdahl y colaboradores, (2002) Ageing Res. Rev. , 1:135. El día 0, se inyectaron ratones machos DBA/1 (Jackson Laboratory, Bar Harbor, Maine) por vía subcutánea en la base de la cola con 100 g de Colágeno bovino Tipo II (Chondrex, Redmond, WA) en adyuvante de Freund completo y el día 21, los ratones fueron empujados con 100 \iq de Colágeno bovino Tipo II en adyuvante de Freund completo. Se monitorearon los ratones por lo menos dos veces por semana para determinar el avance de la enfermedad. Se anotó la puntuación de la gravedad de la enfermedad utilizando evaluación bruta de la pata de la manera siguiente; 0 = ausencia de hinchazón, 1 = 1 a 2 dígitos hinchados o tobillo hinchado, 2 = más de 2 dígitos hinchados o hinchazón suave de la pata, 3 = amplia hinchazón de la pata y 4 = alquilosis de la pata. Los ratones inyectados con un anticuerpo de controlo isotipo después de las inyecciones de colágeno desarrollaron la enfermedad progresivamente. El tratamiento o bien con 356A11 ó 368D04 redujo significativamente el avance de la enfermedad. Estos fueron estudios ciegos de tal modo que los investigadores no sabían cuál grupo de animal recibía cual anticuerpo hasta el final del estudio. Se evaluaron varias dosis de 356A11 y 368D04. Los tratamientos de 356A11 ó 368D04 (o un anticuerpo de control de isotipo IgGly humano) fueron iniciados cuando el 10% de los ratones en el grupo de tratamiento presentó una puntuación de la gravedad de la enfermedad de por lo menos 1. El anticuerpo fue administrados a varias frecuencias: en días alternos, una vez por semana o dos veces por semana, y los ratones fueron monitoreados para determinar el avance de la enfermedad. La administración o bien de 8 ó 16 mg kg"1 de 356A11 en días alternos bloqueó significativamente el avance de CIA en estudios múltiples conforme se muestra en las Figuras 12A-12B, 13 y 40-41. Cuatro estudios CIA separados (Figuras 13A-13D) , ensayando con 8 mg kg"1 de 356A11 en días alternos, muestran que el anticuerpo 356A11 bloqueó consistentemente el avance de la enfermedad en el modelo CIA murino. Sorprendentemente, la dosificación dos veces por semana y hasta semanalmente con 8 mg kg"1 de 356A11 también fue suficiente en estudios múltiples para bloquear significativamente el avance de la enfermedad conforme se muestra en las Figuras 14A-15B, 41 y 44A-44B.

En el primer estudio CIA con 368D04 (administrado en días alternos a 16 mg kg-1) , se observó poca o ninguna eficacia. Sin embargo, la administración de 8 mg kg-1 de 368D04 una vez por semana en estudios múltiples bloqueó significativamente el avance de la enfermedad de la forma mostrada en las Figuras 46A-46C. La capacidad del anticuerpo anti-IL-22 humana de bloquear significativamente el avance de la enfermedad cuando se administra una vez por semana en el modelo CIA indica que el anticuerpo podría ser administrados con una frecuencia de dosificación similar o una frecuencia de dosificación todavía más extendida, tal como una vez cada dos semanas, cuando se administran en humano. Los efectos del tratamiento del anticuerpo anti-IL-22 también fueron evaluados mediante análisis histopatológico de las patas. Al final del estudio, los animales fueron eutanizados, las patas fueron cosechadas y fijadas con formalina al 10% para su histología, descalcificadas y empotradas en parafina para seccionar y manchado H&E estándar. Se dieron puntuaciones a las patas en un método de puntuación de 5 puntos (0-4) para caracteruzar la intensidad y extensión de la artritis. Se utilizaron infiltrados inflamatorios para dar la puntuación además de otros cambios relacionados con la inflamación, tales como formación de pannus, fibrosa de la membrana sinovial, erosión del cartílago auricular y/o destrucción del hueso subcondral. Las puntuaciones de histología fueron determinadas utilizando lecturas de patas individuales: NAD=0 o no se descubrió nada animal; l=ligero a moderado; 2=suave a moderado; 3=marcado; 4=massivo. El efecto histológico de la administración terapéuica de los anticuerpos anti-IL-22 se muestran en las Figuras 16A-16F, 42A-42C, 43, y 45A-45B, administrando 356A111 en estudios múltiples mejoró los síntomas de artritis inducida por colágeno en ratones. Igualmente, la administración de 368D04 en días alternos de 8 mg kg"1 en estudios múltiples mejoró los síntomas de artritis inducida por colágeno en ratones. Figuras 47A-47C. Además de las evaluaciones histopatológicas , también se examinó la destrucción del hueso en ratones tratados. Al final del estudio, se fijaron las patas en una posición lateral y se tomaron fotos con rayos X con una máquina Faxitron. La Faxitron proporciona radiografías por rayos X de elevada resolución y la elevada capacidad de aumento proporciona rendimiento mejorado en la formación de imágenes. Las radiografías Faxitron se correlacionaron con puntuaciones brutas y visuales de la evaluación de la pata y mostraron que el tratamiento con anticuerpo anti-LI-22 evitó la destrucción del hueso en comparación con el tratamiento con el anticuerpo de control de isotipo (datos no mostrados) . 1 Ejemplo 14 : Detección de IL-22 sérica mediante ELISA y aumentada detección de IL-22 sérica in vivo con tratamiento con 356A11 Hasta la fecha, la detección de la expresión del gen IL-22 solamente ha sido reportada en el nivel de RNA. Con la ELISA descrita a continuación, IL-22 no es detectada en ratones normales. Hemos descubierto, sin embargo, que la ELISA muestra la detección de IL-22 en la circulación de ratones artríticos. Además, la administración del anticuerpo 356A11 permite la detección de IL-22 a niveles diez veces más elevado. El anticuerpo 356A11 en la dosis dadas secuestra la citoquina, neutralizando así su actividad de la forma mostrada en los ejemplos anteriores. Con la circulación de este anticuerpo dentro del torrente sanguíneo, la IL-22 secuestrada por anticuerpo ahora es detectada a mayores niveles con esta ELISA. Esto se debe a los epítopos únicos y distintos de la captura y anticuerpos detectores que constituyen esta ELISA mIL-22. Esta ELISA detecta IL-22/356A11 , IL-22BP/IL-22 , IL-22BP/356A11/IL-22 e IL-22 desnuda, equivalentemente. En el contexto de los estudios CIA discutidos anteriormente (Ejemplo 13), se trataron ratones artríticos en días alternos con 16 mg kg_1 de anticuerpo 356A11. A los 30 días después del empuje con colágeno, se recolectó suero de los ratones después del sacrificio. Los niveles de IL-22 en las muestras séricas fueron luego medidos mediante ELISA.

Para este formato de ELISA, lmGIL 19P3/1, se revistió un anticuerpo IL-22 anti-murino monoclonal IgGlk en una placa ELISA microtituladora con 96 cavidades a ser usada como el anticuerpo de captura. Las muestras séricas obtenidas de los ratones artríticos fueron diluidas en serie y luego añadidas a las placas microtituladoras revestidas. Después de permitir que las muestras se incubasen con lmGIL 19P3/1 en las placas microtituladoras, las placas fueron lavadas y se añadió 2hmG0L 19P3/5-bio, un anticuerpo anti-IL-22 monoclonal IgG2ak conjugado con biotina, a las placas como un anticuerpo de detección. Después de otro paso de incubación y lavado, la estreptavidina conjugada con peroxidasa de arándano rusticano (HRP) , lo que convierte tetramet ilbencidina (TMB) en un pigmento azul y es cuantificable con un espectrofotómetro fue añadida, incubada y la placa lavada. Después de la incubación final con TBM seguida de la adición de H2S04 diluida para parar la reacción enzimática, se midió la absorbencia a 450 nm utilizando un espectrómetro. Alternativamente, y debido a que el isotipo del anticuerpo detector, rat IgG2ak, es distinto del isotipo del anticuerpo de revestimiento, también puede usarse un anticuerpo secundario conjugado con HRP que se aglutina con el anticuerpo IgG2a de rata. Utilizando este sandwich de ELISA, demostramos que la adición de cantidades crecientes o bien de mIL-22BP y/o 356A11 no afecta la capacidad para detectar una concentración fija de IL-22 murina. Se ha utilizado esta ELISA para detectar IL-22 en el suero de ratones después de una inyección de LPS, i.p. Cuando se administró a ratones CIA el anticuerpo 356A11, de la forma indicada anteriormente, se detectó IL-22 en el suero a niveles que oscilan aproximadamente de 1 ng/mL aproximadamente a 9 ng/mL. Véase la Figura 17. A la inversa, los ratones artríticos del grupo de tratamiento de control, que reciben anticuerpo de control UgGly humano, registraron niveles in vivo significativamente más bajos (menos 1 ng/mL). Véanse las Figuras 17 y 18. De este modo, el anticuerpo 356A11 captura IL-22 in vivo para producir un complejo de anticuerpo/citoquina estabilizado que circula. Esto a su vez permite la detección de IL-22 in vivo con aumentada sensibilidad de la forma mostrada en las Figuras 16A-16F. En contraste con las grandes cantidades de anticuerpo utilizadas en el estudio que antecede, se propone que el 356A11 a niveles considerablemente más bajos también podrá ser administrado y tener el mismo efecto. Ejemeplo 15: Tratamiento de la psoriasis Se midieron los niveles de IL-22 e IL-22R RNA en muestras de tejido en pares (lesión vs . no-lesión) tomadas de pacientes psoriáticos humanos utilizando PCR cuantitativa. Este estudio demostró que los niveles de IL-22 e IL-22R fueron regulados ascendentement en lesiones psoriáticas. Figura 19. Otra evidencia implica IL-22 en el desarrollo de psoriasis. Por ejemplo, ratones transgénicos que expresan, en forma constitutiva, IL-22 presente con la piel espesa, filtrados celulaes inmunes mononucleares, caracteristicxa de lesiones psoriáticas y mueren luego del nacimiento. WO 03/083062. Igualmente, la administración de IL-22 a ratones induce el espesamiento de la piel e infiltrados celulares inmunes mononucleares. WO 03/083062. IL-22 también induce hiperplasia quetarinociica humana, sugiriendo un papel importante en los procesos inflamatorios de la piel. Boniface y colaboradores, J. Immunol., 2005 174:3695-3702. El transplante xenogénico en ratones SCID es un modelo reconocido para estudiar la psoriasis, verbigracia, Boehncke y colaboradores, Br. K. Dermatol . 2005, 153 ( ) : 758-66. Bajo anestesia local, se corta la piel escindida lesional (espesor aproximadamente 0,5 mm) de un paciente con psoriasis crónica en etapa de placas. Los injertos escindidos humanos son trasplantados a las espaldas de ratones SCID de 6-8 semanas de edad. Se dan a los ratones 3 semanas para aceptar el injerto y sanar. A los 22 días siguientes al trasplante, se inyectan a los ratones por vía intraperitoneal 8 mg kg'1 de anticuerpos anti-IL-22, tal como 087B03, 368D04, 354A08 ó 356A11 con linea de germen, en días alternos. Como control negaivo, los ratones reciben aplicaciones intragásticas diarias de 200 L PBS. Como control positivo, los ratones reciben aplicación intragástica diaria de 2 mg kg"1 dexametasona en 200 pL PBS. Los controles negativos desarrollan contrastes de psoriasis, incluyendo acantosis, papilomatosis, paraquetosis y un infiltro mononuclear denso. Los ratones son sacrificados al dia 50 siguiente al trasplante y se cortan los injertos con la piel circundante. Se fija una mitad del injerto en formalina y se congela la otra mitad en nitrógeno liquido. Se realizan manchados de rutina con hematoxilina y eosina y se analizan los cambios patológicos de los injertos tanto cualitativa (diferenciación epidérmica) como cuantitativamente (espesor epidérmico, infiltrado inflamatorio) . El espesor epidérmico medio podrá ser medido de la punta de los lomos de la retía hasta el borde de la epidermis viable utilizando un micrómetro ocular. La densidad del infiltrado inflamatorio podrá ser determinada contando el número de células en tres campos de potencia adyacentes. El avance de la enfermedad podrá ser evaluado utilizando análisis histológico para medir los contrastes de la psoriasis, tal como acantosis, papilomatosis, paraquetosis, infiltrados inflamatorios y la apariencia de las capas córneas y granulares. Los ratones del control negativo inyectados con 200 µL PBS o un anticuerpo de control hecho par con isotipo siguiente al trasplante del injerto progresivamente desarrollan psoriasis. Debido a que las lesiones psoriáticas expresan mayores niveles de IL-22, se espera que el tratamiento con anticuerpos anti-IL-22, por ejemplo, con 087B03, 368D04, 354A08 o 356A11 con linea de germen, suprima o retarde la psoriasis, conforme a lo confirmado en el estudio de transferencia adoptiva reportado a continuación. La transferencia adoptiva de células T CD4+CD45rbelevada en ratones scid/scid es otro modelo reconocido para estudiar la psoriasis en ratones. Hong y colaboradores, J. Immunol., 162 ( 1 ): 7480-91 (1999). En este modelo, la coadministración de LPS e IL-12 ó enterotoxina B de estafilococo en ratones scid/scid a 1 día después de la transferencia adoptiva de células T CD4+CD45rbelevado induce lesiones cutáneas que presentan los contrastes observados en la psoriasis humana. Utilizando una ligera modificación de este modelo, se transfirieron células T CD4+CD45rbelevadoCD25 a ratones scid/scid con o sin la coadministración de LPS e IL-12 al día siguiente a la transferencia adoptiva. Las células T CD4+CD45rbelevad0CD25 fueron capaces de inducir lesiones psoriáticas cuando se transfieren a ratones scid/scid inclusive cuando fueron administradas sin LPS e IL-12. De este modo, la administración de IL-12 y LPS después de la transferencia adoptiva no pareció alterar la eficacia de anticuerpos anti-L-22 en este modelo. Las célilas para la transferencia adoptiva fueron preparadas de la forma descrita anteriormente con ligera modificación. Se recolectaron bazos de ratones donantes BALB/cBy de 6 a 8 semanas (Jackson Laboratory, Bar Harbor, Maine) y se aislaron esplenocitos mediante homogeneización mecánica de bazos enteros. Se seleccionaron células T CD4* utilizando kit de enriquecimiento CD4 murino (R&D) de conformidad con instrucciones del fabricante. Se etiquetaron células T, enriquecidas con CD4, con anti-CD4-PE ( Pharmingen ) , anti-CD45RB FITC y anti-CD25-APC (Pharmingen) . Las células fueron clasificadas utilizando un clasificador de células Moflo (Becton Dickson, San José, CA) . Se recolectaron células CD4+CD45rbelevad0CD25 y fueron >95% puras. Las células fueron resuspendidas en salina a 2 x 106 células/ml y se infectaron células x 105 i.p. en ratones C . B . -17 /Prkdc scid/scod (Jackson Laboratory, Bar Harbor, Maine) . En algunos casos, se administraron lOng IL-12 y 20 ug LPS i.p. a loa ratones recipientes que recibieron células CD4+CD45RBelevad0 el dia 1 y una dosis adicional de IL-12 fue administrada el dia 3. Los ratones fueron dosificados con 16 mg/kg o bien de un anticuerpo de control isotipo o anticuerpos anti-IL-22 (356A11 ó 368D04) el dia de la transferencia adoptiva y una vez por semana en lo sucesivo durante 10 semanas. Los ratones fueron monitoreados para determinar los síntomas clínicos de lesiones cutáneas dos veces por semana. A la terminación dele studio, se cosecharon para más estudios ex vivo las orejas de los ratones, piel, nodulos linfáticos y bazo. Evaluación Clínica Los ratones fueron evaluados por investigadores ciegos dos veces por semana iniciando a los 10 días después de la transferencia adoptiva. Para registrar el avance de la enfermedad, se dieron puntuaciones clínicas semicuantitativas de 0 a 6 basadas en la apariencia física: 0 = ningún síntoma en la piel u oreja; 0,5 = ligero eritema en la oreja o párpado, 1 = eritema suave, modelo en las orejas o párpados con suave espesamiento de la oreja (<2% de la superficie corporal); 2 = eritema moderado a severo en 2-10% de la superficie corporal, formación de escama suave; 3 = eritema y formación de escamas graves en el 10%-20% de la superficie corporal; 4 = eritema y formación de escamas muy graves, amplios en 20-40% de la superficie corporal; 5 = eritema muy grave, amplio y formación de escamas en 40%-60% de la superficie corporal; 6 = eritema muy grave, amplio y formación de escamas en más del 60% de la superficie corporal. Se anotaron las observaciones específicas basadas en la condición de la piel, manifestaciones de las orejas, apariencia de los párpados y presencia de inflamación en las extremidades y en la cola. En el estudio sin la coadministración de LPS e IL-12, los anticuerpos 356A11 y 368D04 suprimieron la inflamación de la piel, al compararse con los ratones tratados con anticuerpo de control, iniciando tanto pronto como el día 21 para 356A11 y el día 35 para 368D04 (Figuras 20A-20B) . Se observaron resultados similares en el estudio con la coadministración de LPS e IL-12 el día uno siguiente a la transferencia adoptiva, con el 356A11 y 368D04 suprimiento significativamente las lesiones cutáneas, al compararse con el anticuerpo de control, iniciando tan pronto como el día 28 después de la transferencia adoptiva. (Figuras 27A y 27B) . En un estudio separado, 356A11, sin (Figuras 34A-34B) o con (Figuras 37A-37B) la coadministración de LPS e IL-12 el día uno siguiente a la transferencia adoptiva, suprimió signficativamente la inflamación de la piel, al compararse con los ratones tratados con anticuerpo de control, iniciando tan pronto como el dia 21. Detección de citoquina El suero de ratono supernatantes provenientes de cultivo de células fueron cuantificados para IL-6, IFNy, y TNFa utilizando un kit ELISA (sistema R&D) . ELISA para heterodimero de IL-22, IL-17A, IL-17F e IL-A/F comprendió el revestimiento de una placa de fondo plano de 96 cavidades (Costar) durante la noche a 4°C con 100 µ? de una solución al 2 g/ml de anticuerpo anti-IL-22 (Ab-01), anti-IL-17A (R&D) o anti-IL-17F (RK015-01) en PBS . Las placas fueron luego lavadas con PBS/Tween (0,05% Tween-20 en PBS) y bloqueadas con 200 µ? PBS más el 1% BSA durante 1 h a TA. Los anticuerpos a IL-22 murina (Ab-01, Ab-02, y Ab-03) e IL-17F murina (RK015-01) fueron generados mediante métodos descritos en Li y colaboradores, Int.

Immunopharmacol . 4:693-708 (2004) . Entre todos los siguientes pasos, se lavaron las placas con PBS/Tween. Luego se añadieron estándares IL-22 (R&D) , IL-17A (R&D) , IL-17F e IL-17A/F, muestras de supernatantes y muestras séricas (diluidas con PBS 1:5) . Luego se añadieron anticuerpos secundarios biotinilados paara IL-22 (Ab-03), anti-IL-17A (R&D) y anti-IL-17F (RK015-01) a las respectivas placas a 0,5 µ?/p?? en solución BSA/PBS al 1% e incubaron durante 1 hora a 37°C. Se añadió estreptavidina (Pierce) etiquetada poli HRP de conformidad con las instrucciones del fabricante durante 15 minutos. La placa fue desarrollada añadiendo sustrato TMB durante 15-30 minutos. Luego se leyó el ensayo en un lector de Placa Molecular Devices (Sunnyvale, CA) y se analizaron los datos utilizando software SOFTmax. En el estudio sin la coadministración de LPS e IL-12, se detectaron mayores niveles de IL-22 sérica en ratones tratados con 356A11 que en ratones tratados con anticuerpo de control, indicando que 356A11 captura y estabiliza IL-22 in vivo (Figura 21), de la forma discutida en el Ejemplo 14. También se observaron resultados similares en ratones tratados con 356A11 con la coadministración de LPS e IL-12 al día uno siguiente a la transferencia adoptiva. (Figura 28) . Estos resultados fueron replicados en un estudio separado con 356A11 sin (Figura 35) y con (Figura 38) la coadministración de LPS e IL-12 el dia uno siguiente a la transferencia adoptiva. No se detectó IL-22 sérica en ratones tratados con 368D04 (Figura 21) . En el estudio sin la coadministración de LPS e IL-12, se detectaron niveles séricos significativamente inferiores de 5 IL-17F, IL-17A, IL-17A/F en ratones tratados con 356A11 y 368D04 (Figuras 22A-22C) . Igualmente se observó una tendencia de disminuir los niveles séricos de IL-6 en ratones tratados con 356A11 y 368D04 (Figura 22D) . IFNy y TNFa estuvieron por debajo del limite de detección en suero proveniente de ratones 0 tratados con los anticuerpos de control, 356A11 o 368D04. También se observaron resultados similares en ratones tratados con 356A11 con la coadministración de LPS e IL-12 el día uno siguiente a la transferencia adoptiva. (Figuras 29A-29D) . En un estudio separado, también se observaron niveles séricos 5 significativamente más bajos de IL-17A e IL-6 en ratones tratados con 356A11 sin (Figuras 39A-39B) y con (Figuras 39C- 39D) la coadministración de LPS e IL-12 el día uno siguiente a la transferencia adoptiva. Aislamiento y estimulo de nodulo linfático ? Las lesiones psoriáticas en este modelo usualmente avanzan de la oreja, ojo, cara y cuello hasta el resto del cuerpo. Los ratones tratados con terapéutica usualmente desarrollan lesiones cutáneas suaves alrededor solamente del ojo y de la oreja. Por consiguiente, los nodulos linfáticos ¦5 cervicales que drenan la cara fueron aislados de cada ratón para obtener el mayor número de células activadas. Las células del nodulo linfático (LN) fueron recuperadas mediante homogeneización mecánica. Lax células LN fueron mezcladas aproximadamente de 9 a 10 ratones por grupo y resuspendidas a lxl06/ml en medio RPMI 1640 completo suplementado con FBS al 10% (HyClone) , 5 x 10"5 M 2-ME (Sigma), 2 mM glutamina (Life Technologies, Gaithersburg, MD) , 10 U/ml penicilina, 100 g estreptomicina (Life Technologies), y 15 mM HEPES. Luego se colocó un total de 200 pg/cavidade de esta suspensión en una placa de 96 cavidades y estimuló con anti-CD3 más anti-CD28 (?µ?/p?? cada) durante 48 horas. Manchado de citoquina intracelular Para examinar los efectos de la neutralización de IL-22 sobre la población de célula T efectora, se realizó manchado de cicotina intracelular en las células del nodulo linfático cervical. Las células fueron estimuladas con 50 ng/ml (PMA (Sigma) , 1 ug/ml ionomicina (Sigma) y GolgiPlug (Pharmingen) durante 12 horas. Las células fueron primero manchadas para el antigeno superficial (CD4) y luego tratadas con Cytofix/Cytoperm (Pharmingen) de conformidad con las instrucciones del fabricante. Se realizó el manchado con citoquina intracelular utilizando anticuerpos a IFNy, IL-22, IL-17A, IL-17F, TNFa y controles de isotipo IgG relevantes. Se etiquetó anti-IL-22 (Ab-02) con Alexa 647 (Molecular Probes) u anti-IL-17F (RK015-01) con FITC (Pierce Biotechnologies ) de conformidad con las instrucciones del fabricante. Se analizaron las células en una población CD4+. Los resultados del análisis FACS muestran que en ratones tratados con 356A11 y 368D04 (sin la coadministración de LPS e IL-12), hubo porcentajes más bajos de células T CD4+ que producen IL-22, IL-17A y tanto IL-22 como IL-17F, pero mayores porcentajes de célilas T CD4+ que producen IFNy cuando se comparan con los ratones tratados con control isotipo (Figura 23). Resultados similares también fueron observados en ratones tratados con 356A11 con la coadministración de LPS e IL-12 el día uno siguiente a la transferencia adoptiva. (Figura 31). Cuantificación de transcritos de citoquina Se aisló RNA de las orejas de los ratones o célilas LN (después del estimulo) utilizando el kit Qiagen Rneasy (Qiagen) . Se realizó PCR cuantitativa para los transcritos de citoquina utilizando iniciadores y sondas precualificadas (Applied Biosystems) . Se utilizó el método ???? para normalizar el transcrito a GAPDH y para calcular la inducción de pliegue relativa a los ratones de control. Los resultados de PCR cuantitativa utilizando RNA proveniente de las orejas de ratones muestran que los ratones tratados con 356A11 y 368D04 presentaron menor expresión de gen IL-22, IL-17F, IL-17A e IL-6 pero expresión de IFNy intensificada al compararse con ratones tratados con el anticuerpo de control (Figuras 24A-24E) . También ser observaron resultados similares en ratones tratados con 356A11 con la coadministración de LPS e IL-12 el día uno siguiente a la transferencia adoptiva. (Figuras 30A-30E) . Estos resultados fueron replicados en un estudio separado con 356A11 (sin la coadministración de LPS e IL-12), donde también se observó que los ratones tratados con 356A11 presentaron expresión del gen de la proteina 6 de la familia IL-1 más baja (IL-1F6) y proteina de aglutinación IL-22 sin cambio y expresión del gen de la subunidad (IL-22R1) del receptor de IL-22, en comparación con ratones tratados con el anticuerpo de control. (Figuras 36A-36H) . Los resultados de PCR cuantitativa utilizando RNA provenientes de células del nodulo linfático, estimuladas con anti-CD3 y anti-CD28 durante 48 horas, de la forma descrita anteriormente, muestran que 356A11 y 368D04 suprimieron la expresión del gen de IL-22, IL-6, IL-17A e IL-17F ex vivo pero no efectuaron cambios significativos en la expresión del gen IFNy. (Figuras 26A-26E) . Se observaron resultados similares en ratones tratados con 356A11 con la coadministración de LPS e IL-12 el día uno siguiente a la transferencia adoptiva. (Figuras 33A-33E) . Supernatantes provenientes de células del nodulo linfátoco estimuladas con anti-CD3 y anti-CD28, de la forma descrita anteriormente, fueron recolectadas para análisis de citoquina utilizando kits ELISA (sistema R&D) de la forma discutida anteriormente. Los resultados ELISA de citoquina reflejaron los datos de expresión del gen LN, mostrando que 356A11 y 368D04 suprimieron la secreción ex vivo de IL-22, IL-ß, IL-17A, e IL-17F pero no produjeron cambios significativos en la secreción de IFNy proveniente de células estimuladas. (Figuras 25A-25F) . Se observaron resultados similares en ratones tratados con 356A11 con la coadministración de LPS e IL-12 el día uno siguiente a la transferencia adoptiva. (Figuras 32A-32E) . Análisis histopatológico Se realizaron necropsias en tejido de ratones al ocurrir la terminación del estudio in vivo. Las muestras de tejido provenientes de la oreja, piel del tronco fueron recolectadas y fijadas en solución de formalina al 10% para la preparación de sección y análisis. Para registrar la gravedad de la enfermedad, se asignaron puntuaciones histológicas s emi cuant i t a t i va s de 0 a 5 basadas en la gravedad de la inflamación. Se realizó la evaluación histológica forma ciega por parte de un patólogo certificado por el colegio. 0 = dentro del limite normal; 1 = mínimo; 2 = suave, 3 = moderado, 4 = marcado y 5 = severo. Análisis de inmunohistoquímica Se recolectaron muestras de tejido y empotraron en compuesto Tissue Tek OCT (Miles, Elkhurt, IN) y congelaron con hielo seco para secciones cortadas con criostato. Se fijaron secciones del tejido (5 µ??) en acetona al 100% y mancharon con anticuerpo anti-CD4, anti-CDllb y ant i-neutrófilo ( PharMingen) . Los tejidos fueron evaluados como negativo = 0, suave = 1, moderado = 2, y severo = 3 basado en detección con microscopía fluorescente visual. Los hallazgos de histología sugieren que los ratones tratados con 356A11 y 368D04 experimentaron menor proliferación de que r a t i noc i t o , peg de retía e infiltrados de células inflamatorias en la piel cuando se compara con el tratamiento de control isotipo. Adicionalmente , los resultados de inmunohistoquímica mostraron que 356A11 disminuyó el número de CD4+, CDllb+ (macrófagos) y neutrófilos en las capa epidérmica, dérmica y subcutis. Los resultados histológicos reflejaron aquél de los hallazgos y soporte clínicos utilizando antagonista IL-22, tal como los anticuerpos de esta invención, como agentes terapéuticos para el tratamiento de psoriasis y otras enfermedades de la piel parecidas a psoriasis. Los resultados globales demuestran que los anticuerpos de la presente invención, tales como 087B03, 368D04, 354A08 ó 356A11, son eficaces en este modelo murino de psoriasis e ndica que el tratamiento con anticuerpos anti-IL-22, incluyendo 087B03, 368D04, 354A08 ó 356A11, proporciona una estrategia eficaz para intervención terapéutica en la psoriasis humana. Ejemplo 16: Tratamiento de los pacientes Aquellos pacientes que padecen un trastorno autoinmune, un trastorno respiratorio, una condición inflamatoria de la piel, del sistema cardiovascular, del sistema nervioso, los ríñones, el hígado y el páncreas o los pacientes de trasplante se encuentran entre las clases de paciente que pueden ser tratados con los anticuerpos de la invención. Los regímenes de tratamiento de ejemplo así como los resultados esperados de los anticuerpos elaborados de acuerdo con esta invención, inclusive 087B03, 368D04, 354A08 y 356A11, se especifican a continuación. También se pueden utilizar dosis y frecuencias de administración diferentes a aquellas puntualizadas en la Tabla 13. La persona versada en la materia objeto del presente podrá ajustar el régimen de tratamiento según sea necesario basado en la vía de administración u otras variables conocidas, tales como la edad, peso, condición, sexo, severidad de la condición médica, etc. del paciente que será tratado.

Tabla 14: Regímenes de tratamiento La memoria descriptiva se entenderá a cabalidad al tener en cuenta las enseñanzas de las referencias mencionadas en la misma. Las formas de ejecución de la especificación simplemente proporcionan una ilustración de la invención mas no deberán interpretarse como una limitación de su alcance. La persona versada en el arte reconocerá que se pueden ejecutar muchas otras incorporaciones, todas comprendidas dentro de esta invención. Todas las Patentes y publicaciones mencionadas en esta revelación constituyen simples referencias; en caso que el material mencionado como referencia contradiga o sea incoherente con esta especificación, esta última reemplazará a dicho material. La mención de referencias en este documento no implica la admisión de que las mismas constituyen el arte precedente a la presente invención. Salvo que se indique de otro modo, es de entender que todos los números que expresan cantidades de ingredientes, condiciones de reacción y demás utilizados en la especificación, inclusive las reivindicaciones, son modificables por el término "aproximadamente" en todos los casos. De acuerdo con ello, y salvo que se indique lo contrario, los parámetros numéricos son aproximaciones y pueden variar dependiendo de las propiedades que se desee obtener. Por último, aunque no sea un intento de limitar la aplicación de la doctrina de las equivalencias al alcance de las reivindicaciones, cada parámetro numérico habrá de interpretarse teniendo en cuenta el número de dígitos significativos y de los redondeos a las aproximaciones comunes . Salvo que se indique de otro modo, el término "al menos", cuando precede a una serie de elementos, pretende referirse a cada elemento de la serie. Las personas conocedoras de la materia objeto de este documento reconocerán y tendrán la capacidad de determinar muchos equivalentes para las formas de ejecución especificas de la invención aquí descrita mediante el simple empleo de la experimentación usual. Es la intención que dichos equivalentes estén comprendidos en las reivindicaciones que aparecen a continuación. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Un método para tratar o prevenir un trastorno asociado con IL-22, en un sujeto, caracterizado porque comprende la administración, al sujeto, de un anticuerpo, o fragmento del mismo aglutinante con antigeno, que se aglutina específicamente con IL-22 humana, en una cantidad suficiente para inhibir o reducir la actividad celular humana en el sujeto, tratando o evitando así el trastorno, donde el anticuerpo, o su fragmento aglutinante con antígeno, comprende un dominio VH que comprende por lo menos una región variable de cadena pesada y un dominio VL que comprende por lo menos una región variable de cadena liviana de una cualquiera de la SEQ ID NO :11, 12, 13, 29, 30, 31, 47, 48, 49, 65, 66, 67, 83, 84, 85, 101, 102, 103, 119 , 120, 121, 137, 138, 139, 155, 156, 157, 173, 174, 175, 191, 192, 193, 209, 210, 211, 227, 228, 229, 245, 246, 247, 263, 264, 265, 281, 282, 283, 299, 300, 301, 317, 318, 319, 335, 336, 337, 371, 372, 373, 389, 390, 391, 407, 408, 409, 425, 426, 427, 443, 444, 445, 461, 462, 463, 479, 480, 481, 497, 498, 499, 515, 516, 517, 533, 534, 535, 551, 552, 553, 569, 570, 571, 587, 588, 589, 605, 606, 607, 623, 624, ó 625. 2. ün método para tratar o prevenir un trastorno 17 relacionado con IL-22, en un sujeto, caracterizado porque comprende la administración, al sujeto, de un anticuerpo, o fragmento del mismo aglutinante con antigeno, que se aglutina específicamente con IL-22 humana, en una cantidad suficiente para inhibir o reducir la actividad celular humana en el sujeto, trayando o previniendo así el trastorno, donde el anticuerpo o su fragmento aglutinante con antígeno, comprende un dominio VL que comprende por lo menos una región variable de cadena liviana y un dominio VH que comprende por lo menos una región variable de cadena pesada de una cualquiera de la SEQ ID NO :8, 9, 10, 26, 27, 28, 44, 45, 46, 62, 63, 64, 80, 81, 82, 98, 99, 100, 116, 117, 118, 134, 135, 136, 152, 153, 154, 170, 171, 172, 188, 189, 190, 206, 207, 208, 224, 225, 226, 242, 243, 244, 260, 261, 262, 278, 279, 280, 296, 297, 298, 314, 315, 316, 332, 333, 334, 350, 351, 352, 368, 369, 370, 386, 387, 388, 404, 405, 406, 422, 423, 424, 440, 441, 442, 458, 459, 460, 476, 477, 478, 494 , 495, 496, 512, 513, 514, 530, 531, 532, 548, 549, 550, 566, 567, 568, 584, 585, 586, 602, 603, 604, 620, 621, ó 622. 3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque por lo menos una región variable de cadena pesada comprende una cualquiera de SEQ ID NO: 8, 9, 10, 26, 27, 28, 44, 45, 46, 62, 63, 64, 80, 81, 82, 98, 99, 100, 116, 117, 118, 134, 135, 136, 152, 153, 154, 170, 171, 172, 188, 189, 190, 206, 207, 208, 224, 225, 226, 242, 243, 244, 260, 261, 262, 278, 279, 280, 296, 297, 298, 314, 315, 316, 332, 333, 334, 350, 351, 352, 368, 369, 370, 386, 387, 388, 404, 405, 406, 422, 423, 424, 440, 441, 442, 458, 459, 460, 476, 477, 478, 494, 495, 496, 512, 513, 514, 530, 531, 532, 548, 549, 550, 566, 567, 568, 584, 585, 586, 602, 603, 604, 620, 621, ó 622. 4. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque dominio VL comprende la secuencia de aminoácido de una cualquiera de SEQ ID NO:6, 24, 42, 60, 78, 96, 114, 132, 150, 168, 186, 204, 222, 240, 258, 276, 294, 312, 330, 348, 366, 384, 402, 420, 438, 456, 474, 492, 510, 528, 546, 564, 582, 600, ó 618. 5. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizado porque anticuerpo, o su fragmento aglutinante con antigeno, comprende un dominio VH que tiene la secuencia de aminoácido de una cualquiera de SEQ ID N0:5, 23, 41, 59, 77, 95, 113, 131, 149, 167, 85, 203, 221, 239, 257, 275, 293, 331, 329, 347, 365, 383, 401, 419, 437, 455, 473, 491, 509, 527, 545, 563, 581, 599, ó 617. 6. El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el dominio VH comprende la secuencia de aminoácido de una cualquiera de SEQ ID NO: 5, 23, 41, 59, 77, 95, 113, 131, 149, 185, 221, 239, 257, 275, 331, 329, 365, 383, 401, 419, 437, 455, 473, 509, 527, 563, ó 581 y el dominio VL comprende la secuencia de aminoácido de una cualquiera SEQ ID N0:6, 24, 42, 60, 78, 96, 114, 132, 150, 186, 222, 240, 258, 276, 312, 330, 366, 384, 402, 420, 438, 456, 474, 510, 528, 564, ó 582. 7. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque dominio VH comprende la secuencia de aminoácido de la SEQ ID NO: 167 ó 491 y el dominio VL comprende la secuencia de SEQ ID NO: 168 ó 492. 8. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque el dominio VH comprende la secuencia de aminoácido de la SEQ ID NO: 293 ó 545 y el dominio VL comprende la secuencia de SEQ ID NO:294 ó 546. 9. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque el dominio VH comprende la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO: 203 ó 617 y eldominio VL comprende la secuencia de SEQ ID NO:204 ó 618. 10. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque el dominio VH comprende la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO: 347 ó 599 y el dominio VL comprende la secuencia de SEQ ID NO:348 ó 600. 11. Un método para tratar o prevenir un trastorno asociada con IL-22, en un sujeto, caracterizado porque comprende la administración, al sujeto, de un anticuerpo o fragmento del mismo aglutinante con el antigeno que se aglutina específicamente con IL-22 humana, en una cantidad suficiente para inhibir o reducir la actividad inmune en el sujeto, tratando o previniendo asi el trastorno, donde el anticuerpo o su fragmento aglutinante con antigeno se aglutina específicamente con IL-22 humana y tiene una constante de asociación para IL-22 humana de por lo menos 12. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque la constante de asociación para IL-22 humana es por lo menos 1011 ?G1. 13. Un método para tratar o prevenir un trastorno asociado con IL-22 en un sujeto, caracterizado porque comprende la administración, al sujeto, de un anticuerpo o fragmento del mismo aglutinante con el antígeno, que se aglutina específicamente con la IL-22 humana, en una cantidad suficiente para inhibir o reducir la actividad celular inmune en el sujeto, tratando o previniendo así el trastorno, donde el anticuerpo o su fragmento aglutinante con el antígeno, bloquea la proliferación de célula BaF3 mediada por IL-22 con IC50 de 150 p o menos, donde las células BAF3 comprenden un receptor de IL-22 humana. 14. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el anticuerpo o su fragmento aglutinante con antígeno, bloquea la proliferación de célula BAF3 mediada por IL-22 con IC50 de 100 pM o menos. 15. Un método para tratar o prevenir un trastorno asociado IL-22 en un sujeto, caracterizado porque comprende la administración, al sujeto, de un anticuerpo o fragmento del mismo aglutinante con antigeno, que se aglutina específicamente con IL-22 humana, en una cantidad suficiente para inhibir o reducir actividad celular inmune en el sujeto, tratando o previniendo así el trastorno, donde el anticuerpo o fragmento del mismo aglutinante con antígeno, bloquea secreción GROa mediada por IL-22 proveniente de células HT29 con IC50 de 1 nM o menos. 16. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento del mismo aglutinante con antígeno, bloquea secreción GROa mediada por IL-22 proveniente de células HT29 con IC50 de 150 pM o menos. 17. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-16, caracterizado porque se selecciona el trastorno asociado con IL-22 a partir de enfermedad inflamatoria del intestino, pancreatitis, esclerosis múltiple, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, HIV, síndrome de Sjogren, artritis reumatoide juvenil, osteoartritis , artritis psoriática, espondilitis anquilosante, psoriasis, rechazo de trasplante y enfermedad de Crohn. 18. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-17, caracterizado porque comprende además la administración al sujeto de otro agente terapéutico seleccionado de un inhibidor de citoquina, un inhibidor del factor de crecimiento, un inmunosupresor , un agente antiinflamatorio, un inhibidor metabólico, un inhibidor de enzima, un agente citotóxico y un agente citostático. 19. El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque se selecciona el agente terapéutico de un antagonista de TNF, un antagonista de IL-12, un antagonista de IL-15, un antagonista de IL-17, un antagonista de IL-18, un antagonista de IL-19, un antagonista de IL-20, un antagonista de IL-21, un antagonista de IL-23, un agente agotador de célula T, un agente agotador de célula B, metotrexato, leflunomida, sirolimus (rapamicina) o un análogo de los mismos, un inhibidor de Cox-2, un inhibidor de cPLA2, un NSAID y un inhibidor p38. 20. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-19, caracterizado porque el sujeto es un mamífero . 21. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-19, caracterizado porque sujeto es un humano . 22. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-19, caracterizado porque el anticuerpo es administrado en una gama seleccionada a partir de 1 µg/kg a 20 mg/kg, 1 g/kg a 10 mg/kg, 1 ug/kg a 1 mg/kg, 10 g/kg a 1 mg/kg, 10 ug/kg a 100 µq/kgl 100 µg a 1 mg/kg, 250 g/kg a 2 mg/kg, 250 ug/kg a 1 mg/kg, 500 g/kg a 2 mg/kg, 1 mg/kg a 5 mg/kg, 5 mg/kg a 10 mg/kg, 10 mg/kg a 20 mg/kg, 10 mg/kg a 25 mg/kg, y 20 mg/kg a 30 mg/kg. 23. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-22, caracterizado porque el trastorno asociado con IL-22 es artritis, enfermedad inflamatoria del intestino o psoriasis. 24. El método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque el trastorno asociado con IL-22 es artritis reumatoide. 25. El método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque el trastorno asociado con IL-22 es psoriasis. 26. Un método para tratar o prevenir un trastorno hiperproliferante en un sujeto, caracterizado porque comprende la administración, al sujeto, de un anticuerpo, o fragmento del mismo aglutinante con antigeno, que se aglutina específicamente con IL-22 humana, en una cantidad suficiente para inhibir o reducir la hiperproliferación de células que responden a IL-22 y/o IL-22R y/o IR-10R2 en el sujeto y que permite que el anticuerpo trate o evite el trastorno, donde el anticuerpo o fragmento del mismo aglutinante con antígeno, comprende por lo menos una región variable de cadena pesada de una cualquiera de SEQ ID NO:8, 9, 10, 26, 27, 28, 44, 45, 46, 62, 63, 64, 80, 81, 82, 98, 99, 100, 116, 117, 118, 134, 135, 136, 152, 153, 154, 170, 171, 172, 188, 189, 190, 206, 207, 208, 224, 225, 226, 242, 243, 244, 260, 261, 262, 278, 279, 280, 296, 297, 298, 314, 315, 316, 332, 333, 334, 350, 351, 352, 368, 369, 370, 386, 387, 388, 404, 405, 406, 422, 423, 424, 440, 441, 442, 458, 459, 460, 476, 477, 478, 494, 495, 496, 512, 513, 514, 530, 531, 532, 548, 549, 550, 566, 567, 568, 584, 585, 586, 602, 603, 604, 620, 621, ó 622. 27. Un método para tratar o preventir un trastorno asociada con IL-22 en un sujeto, caracterizado porque comprende la administración, al sujeto, de un anticuerpo o fragmento del mismo aglutinante con antigeno que se aglutina específicamente con un epítopo que es reconocido por GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, ó 356A11, de tal modo que el anticuerpo inhiba competitivamente la aglutinación de GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, ó 356A1 con IL-humana, en una cantidad suficiente para inhibir o reducir actividad celular inmune en el sujeto, tratando o previniendo así el trastorno. 28. El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque el anticuerpo se aglutina específicamente con un epítopo IL-22 que es reconocido por 087B03, de tal modo que el anticuerpo inhiba competitivamente la aglutinación de 087B03 con IL-22 humana. 29. El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque el anticuerpo se aglutina específicamente con un epítopo que es reconocido por 354A08, de tal modo que el anticuerpo inhiba competitivamente la aglutinación de 354A08 con la IL-22 humana. 30. El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque el anticuerpo se aglutina específicamente con un epítopo IL-22 que es reconocido por 368D04, de tal modo que el anticuerpo inhiba competitivamente la aglutinación de 368D04 con la IL-22 humana. 31. El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque el anticuerpo se aglutina específicamente con un epítopo de IL-22 que es reconocido por 356A11, de tal modo que el anticuerpo inhiba competitivamente la aglutinación de 356A11 con la IL-22 humana.