MX2007007264A - Compuestos de piridazinona. - Google Patents

Abstract

La invencion esta dirigida a compuestos de piridazinona y a composiciones farmaceuticas que contiene estos compuestos que son utiles en el tratamiento del virus de hepatitis C.

Description

COMPUESTOS DE PIRIDAZINONA Campo de la invención La invención se dirige a compuestos de piridazinona y a composiciones farmacéuticas que contienen estos compuestos que son útiles en el tratamiento de infecciones mediadas por virus de hepatitis C.

Antecedentes de la invención La hepatitis C es un gran problema de salud a nivel mundial. La Organización Mundial de la Salud estima que 170 millones de personas son portadores crónicos del virus de hepatitis C (HCV) , con sólo 4 millones de portadores en Estados Unidos. En los Estados Unidos, la infección por HCV abarca el 40% de enfermedades hepáticas crónicas y la enfermedad por HCV es la causa más común para transplante de hígado. La infección por HCV lleva a una infección crónica y aproximadamente 70% de personas infectadas desarrollaran cambios histológicos crónicos en el hígado (hepatitis crónica) con riesgo de 10-40% de cirrosis y un riesgo de vida de 4% estimado de carcinoma hepatocelular. El CDC estima que cada año en los Estados Unidos existen 35,000 nuevos casos de infección por HCV y aproximadamente diez mil muertes atribuidas a la enfermedad por HCV. La norma actual de cuidado es una combinación de REF. : 182899 interferón pegilado/ribavirina a un costo de aproximadamente $31,000 usd/anuales. Estos fármacos tienen problemas de dosificación difícil y efectos secundarios que descartan su uso en casi la mitad de los pacientes diagnosticados. El tratamiento con interferón pegilado se asocia con amenaza de síntomas tipo resfriado, irritabilidad, incapacidad para concentrarse, ideas suicidas y leucocitopenia . La ribavirina está asociada con anemia hemolítica y defectos de nacimiento. La respuesta global a esta terapia estándar es baja; aproximadamente un tercio de los pacientes no responden. De aquellos que responden, una gran fracción recaen dentro de 6 meses de finalización de 6 a 12 meses de terapia. Como consecuencia, la velocidad de respuesta a largo plazo para todos los pacientes entran en tratamiento es sólo de aproximadamente 50%. La velocidad de respuesta relativamente baja y los efectos secundarios significativos de los tratamientos de fármacos anti-HCV de terapia actual, unido con los efectos negativos a largo plazo de infección por HCV crónica, da como resultado una necesidad médica continua de terapia mejorada. Los farmacéuticos antivirales para tratar enfermedades virales ARN tipo HCV son pocos, y como se describió arriba, están regularmente asociados con múltiples efectos adversos. Mientras que existe, en algunos casos, medicinas disponibles para reducir los síntomas de la enfermedad, existen pocos fármacos para inhibir efectivamente la replicación del virus subyacente. La importancia y preponderancia de enfermedades de virus ARN, incluyendo pero no limitados a infección crónica por el virus de hepatitis C, y junto con la disponibilidad limitada y efectividad de los farmacéuticos antivirales actuales, han creado una necesidad persuasiva y continua por nuevos farmacéuticos para tratar estas enfermedades.

Breve descripción de la invención La presente invención describe compuestos de piridazinona nuevos, profármacos farmacéuticamente aceptables, metabolitos farmacéuticamente activos, sales farmacéuticamente aceptables y solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, los cuales son útiles en el tratamiento o prevención de infección de virus de hepatitis C en un paciente en necesidad del mismo que comprende administrar al paciente una cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva de un compuesto de piridazinona. En un aspecto general, la invención se refiere a compuestos de la fórmula I en donde R1 y R2 son independientemente H, alquilo, cicloalquilo, arilo, o heterociclilo, y Anillo A es arilo o heterociclilo de 5 ó 6 miembros, en donde las porciones alquilo, arilo, cicloalquilo, o heterociclilo anteriores son sustituidas opcionalmente por 1-3 sustituyentes seleccionados de alcanoilo, alquilamina, amino, arilo, cicloalquilo, heterociclilo, alquilo de C?-C6, haloalquilo de Ci-Ce, hidroxialquilo de Ci-Ce, alcoxi de Ci-Ce, alquilamina de Ci-Cß, dialquilamina de C?-C6, alquenilo de C2-C6 o alquinilo de C2- s, en donde cada uno de los cuales puede ser interrumpido por uno o más heteroátomos, carboxilo, ciano, halo, hidroxi, nitro, -N=N-NH2, -C(0)2- (alquilo de C?-C6) , -C (0) 2- (arilo) , -C(0)2- (cicloalquilo) , -C (0) 2- (heterociclilo) , -0- (haloalquilo de Ci-C6) , -0- (alquilo de C?-C6) arilo, -0- (alquilo de Ci- C6) cicloalquilo, -0- (alquilo de d-C6) heterociclilo, -0-(alquilo de Ci-Cß) amino, -0- (alquilo de Ci-Ce) alquilamino, -0-(alquilo de Ci-Ce) dialquilamino, -0- (alquilo de C?-Cg)-C(O)-amino, -0- (alquilo de C?~C6) -C (0) -alquilamino, -0- (alquilo de C?-C6) -S (0) 2-amino, -0- (alquilo de d-C6) - S (0) 2-alquilamino, -0- (alquilo de C?-C6) - S (0) 2-dialquilamino, -0- (alquilo de C?~ C6) -C (0) -dialquilamino, -O-arilo, -O-heterociclilo, -NHC(O)-(C?-C6 alquilo), -NHC (0) - (C?-C6 alquenilo), -NHC (0) - (arilo) , -NHC (0) - (cicloalquilo) , -NHC (0) - (heterociclilo) , -NHC (OJ(alquilo de C?~C6) arilo, -NHC (0) - (alquilo de Ci-Cß) cicloalquilo, -NHC (0) - (alquilo de C?-C6) heterociclilo, NHC (0) - (alquilo de C?-C6) amino, -NHC (0) - (alquilo de C?~ C?) alquilamina, -NHC (0) - (alquilo de C?-C6) dialquilamina, NHC (0) - (alquilo de C?-C6 )C(0) amino, -NHC (0) - (alquilo de Ci-C6)C(0) alquilamina, -NHC (0) - (alquilo de Cx-C6)C(0) dialquilamina, -NHC (0) - (alquilo de C?-C6) (H) - (alquilo de C?-C6)C(0)2- (alquilo de d-Ce), -NH- (alquilo de C?-C6)-C(0)-amino, -NH- (alquilo de C?-C6) -C (0) -alquilamino, -NH- (alquilo de C?-C6) -C (0) -dialquilamino, -NHC (0) - (alquilo de Cx-C6) S (0) 2 (alquilo de C?-C6) , -NHC (0) - (alquilo de C?-C6)-S-(heterociclilo) , -NHS (0) 2- (alquilo de d-C6) , -NHS(0)2-(arilo), -NH- (alquilo de C?-C6) - S(0)2-amino, -NH- (alquilo de C?-C6)- S (0) 2-alquilamino, -NH- (alquilo de d-C6) - S(0)2-dialquilamino, -NHS (0) 2- (cicloalquilo) , -NHS(0)2-(heterociclilo), -NHS (0) (alquilo de C?-C6) , -NHS (0) (arilo) , - NHS (O) (cicloalquilo) , -NHS (O) (heterociclilo) , -NHS (alquilo de C?-C6) , -NHS (arilo), -NHS (cicloalquilo) , y -NH-S-(heterociclilo) , en donde cada uno de los sustituyentes anteriores pueden ser sustituidos opcionalmente más por 1 a 5 sustituyentes seleccionados de amino, ciano, halo, nitro, alquilamina de Ci-Cß, dialquilamina de Ci-d y alquilo de Ci-Cß, alcoxi de Ci-Ce , alquenilo de C?~ C6, hidroxilo de Ci-d e hidroxialquilo de Ci-Ce, cada uno sustituido opcionalmente por halo, o una sal, hidrato, tautómero o estereoisómero farmacéuticamente aceptable de los mismos. En un aspecto, el compuesto de la invención se refiere a compuestos de la fórmula I en donde R1 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de Ci-Ce, arilo y heterociclilo que tienen 1 a 3 átomos de N, O o S. En otra modalidad, la invención se refiere a compuestos de la fórmula I, en donde R1 se selecciona del grupo que consiste en: En otra modalidad, la invención se refiere a compuestos de la fórmula I, en donde R2 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de Ci-Cß sustituido opcionalmente con arilo de C6-C?0 o cicloalquilo de C3-C8 y heterociclilo de C3-Cg que tiene 1 a 3 átomos de N, O o S y arilo de C6-C?0. El arilo, cicloalquilo y heterociclilo son además sustituidos opcionalmente alquilo de Ci-Cg o halo. En una modalidad particular, R2 se selecciona del grupo que En un aspecto de la invención el Anillo A de la fórmula I es un arilo o heterociclilo de 5 ó 6 miembros, sustituido opcionalmente con alquilo, -halo, -OH, -O-alquilo, -0CHR3C (O) O-alquilo, -OCHR3C (O) NR4R5, -NHR4, -NRC (O) -arilo, o -N02, en donde R3, R4, y R5 son independientemente -H o alquilo de Ci-Cß, o R4 y R5 se combinan con el átomo N al cual están unidos para formar un anillo heterociclilo de 5 ó 6 miembros sustituido opcionalmente con -NH2. En una modalidad particular, anillo A, junto con el anillo al cual se fusiona, se selecciona del grupo que consiste en: En otra modalidad, la invención se refiere a compuestos de la fórmula I seleccionados del grupo que consiste en en donde R1 y R2 son los mismos como se definieron inmediatamente arriba, y R6 se selecciona del grupo que consiste en: H OMe OH U° H2, v?NH- °t°^. * *.

- NO, i-NH2 En una modalidad preferida, la invención se refiere a compuestos de la fórmula I, en donde R1 se selecciona del grupo que consiste en: En otra modalidad preferida, la invención se refiere a compuestos de la fórmula I, en donde R2 se selecciona del grupo que consiste en: En otra modalidad preferida, la invención se refiere a compuestos de la fórmula I seleccionados del grupo que consiste en: en donde R1 y R2 son los mismos como se definieron inmediatamente arriba, y R7 se selecciona del grupo que consiste en: En una modalidad particular, el compuesto de la invención se selecciona del grupo que consiste en: En una modalidad más preferida, la invención se refiere a compuestos de la fórmula I, en donde R2 se selecciona del grupo que consiste en: En otra modalidad más preferida, la invención se refiere a compuestos de la fórmula II: en donde R1 y R2 son los mismos como se definieron inmediatamente arriba, y R7 se selecciona del grupo que consiste en: La invención también está dirigida a profármacos farmacéuticamente aceptables, metabolitos farmacéuticamente activos, a sales farmacéuticamente aceptables y a solvatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos, profármacos o metabolitos de la fórmula I. También se describen métodos adecuados para hacer los compuestos de la invención.

En un aspecto, la invención comprende un método para tratar o prevenir infección por virus de hepatitis C en un mamífero en necesidad del mismo, de preferencia en un humano en necesidad del mismo, que comprende administrar al paciente cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva de un compuesto de la fórmula I. En una modalidad, la invención comprende un método para tratar o prevenir infección por virus de hepatitis C al administrar a un paciente en necesidad del mismo cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva de un compuesto de la fórmula I que es un inhibidor de polimerasa NS5B HCV. En otro aspecto, la invención comprende un método para tratar o prevenir infección por virus de hepatitis C en un paciente en necesidad del mismo, que comprende administrar al paciente cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva de un compuesto de la fórmula I y un vehículo, portador o excipiente farmacéuticamente aceptable. En otro aspecto, la invención comprende un método para tratar o prevenir infección por virus de hepatitis C en un paciente en necesidad del mismo, que comprende administrar al paciente cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva de un compuesto de la fórmula I y un agente terapéutico adicional, de preferencia un agente antiviral adicional o un agente inmunomodulador.

Descripción detallada de la invención Cuando se usan los siguientes términos en esta descripción, lo es como se define a continuación: Los términos "que comprende", "que tiene" y "que incluye" se usan en la presente en su sentido abierto y no limitativo . El término "alquilo", según se usa en la presente, a menos que se indique lo contrario, incluye radicales de hidrocarburo monovalentes saturados que tienen porciones rectas, ramificadas o cíclicas (incluyendo porciones fusionadas y bicíclicas puenteadas así como espirocíclicas) , o una combinación de las porciones anteriores. Para que un grupo alquilo tenga porciones cíclicas, el grupo debe tener al menos 3 átomos de carbono. El término "alquenilo" según se usa en la presente a menos que se indique lo contrario, incluye porciones alquilo que tienen al menos un doble enlace carbono-carbono en donde alquilo es como se definió arriba e incluyendo isómeros E y Z de la porción alquenilo. El término "alquinilo", según se usa en la presente, a menos que se indique lo contrario, incluye porciones alquilo que tienen al menos un triple enlace carbono-carbono en donde el alquilo es como se definió arriba . El término "alcoxi", según se usa en la presente y a menos que se indique lo contrario, incluye grupos O-alquilo en donde alquilo es como se definió arriba. El término "Me" significa metilo, "Et" significa etilo, "Ac" significa acetilo. El término "cicloalquilo", según se usa en la presente y a menos que se indique lo contrario se refiere a un hidrocarburo bicíclico o tricíclico no aromático, saturado o parcialmente saturado, monocíclico o fusionado, espiro o no fusionado mencionado en la presente y que contiene un total de 3 a 10 átomos de carbono, de preferencia 5-8 átomos de carbono de anillo. Los cicloalquilos ejemplares incluyen anillos monocíclicos que tienen de 3-7, de preferencia 3-6, átomos de carbono, tales como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciciohexilo, cicioheptilo y similares. Ejemplos ilustrativos de cicloalquilos se derivan de, pero no están limitados a, los siguientes: El término "arilo", según se usa en la presente y a menos que se indique lo contrario, incluye un radical orgánico derivado de un hidrocarburo aromático mediante la remoción de un hidrógeno, tal como fenilo o naftilo. El término "heterociclilo" o "heterocíclico", según se usa en la presente y a menos que se indique lo contrario, incluye grupos heterocíclicos aromáticos (por ejemplo, heteroarilos) y no aromáticos que contienen uno a cuatro heteroátomos seleccionados cada uno de O, S y N, en donde cada grupo heterocíclico tiene de 4-10 átomos en su sistema de anillo, y con la condición de que el anillo del grupo no contenga dos átomos de 0 adyacentes. Los grupos heterocíclicos no aromáticos incluyen grupos que tienen sólo 3 átomos en su sistema de anillo, pero los grupos heterocíclicos aromáticos deben tener al menos 5 átomos en su sistema de anillos. Los grupos heterocíclicos incluyen sistemas de anillos benzo-fusionados . Un ejemplo de un grupo heterocíclico de cuatro miembros es azetidinilo (derivado de azetidina) . Un ejemplo de un grupo heterocíclico de 5 miembros es tiazolilo y un ejemplo de un grupo heterocíclico de 10 miembros es quinolinilo. Ejemplos de grupos heterocíclicos no aromáticos son pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, dihidrofuranilo, tetrahidrotienilo, tetrahidropiranilo, dihidropiranilo, tetrahidrotioiranilo, piperidino, morfolino, tiomorfolino, tioxanilo, pierazinilo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, homopiperidinilo, oxepanilo, tiepanilo, oxazepinilo, diazepinilo, tiazepinilo, 1, 2, 3, 6-tetrahidropiridinilo, 2-pirrolinilo, 3-pirrolinilo, indolinilo, 2H-piranilo, 4H-piranilo, dioxanilo, 1,3-dioxolanilo, pirazolinilo, ditianilo, ditiolanilo, dihidropiranilo, dihidrotienilo, dihidrofuranilo, pirazolidinilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, 3-azabiciclo [3.1.0] hexanilo, 3-azabiciclo [4.1.0] heptanilo, 3H-indolilo y quinolizinilo. Ejemplos de grupos heterocíclicos aromáticos son: piridinilo, imidazolilo, pirimidinilo, pirazolilo, triazolilo, pirazinilo, tetrazolilo, furilo, tienilo, isoxazolilo, tiazolilo, oxazolilo, isotiazolilo, pirrolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, indolilo, bencimidazolilo, benzofuranilo, cinolinilo, indazolilo, indolizinilo, ftalazinilo, piridazinilo, triazinilo, isoindolilo, pteridinilo, purinilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, furazanilo, benzofurazanilo, benzotiofenilo, benzotiaozolilo, benzoxazolilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, naftiridinilo y furopiridinilo . Los grupos anteriores, derivados de los grupos listados arriba, pueden ser unidos a C o a N cuando esto sea posible. Por ejemplo, un grupo derivado de pirrol puede ser pirrol-1-ilo (unido a N) o pirrol-3-ilo (unido a C) . Además, un grupo derivado de imidazol puede ser imidazol-1-ilo (unido a N) o imidazol-3-ilo (unido a C) . El heterocíclico de 4-10 miembros puede ser sustituido opcionalmente en cualquier carbono de anillo, átomo de azufre o nitrógeno por 1 ó 2 oxo, por anillo. Un ejemplo de un grupo heterocíclico en el que dos átomos de carbono de anillo son sustituidos con porciones oxo es 1,1-dioxo-tiomorfolinilo . Otros ejemplos ilustrativos de heterocíclico de 4-10 miembros se derivan de, pero no están limitados a, los siguientes: El término "inmunomodulador se refiere a productos naturales o sintéticos capaces de modificar el sistema inmunológico normal o aberrantes a través de la estimulación o supresión. El término "prevenir" se refiere a la capacidad de un compuesto o composición de la invención para prevenir una enfermedad identificada en la presente en pacientes diagnosticados como teniendo la enfermedad o quienes estén en riesgo de desarrollar esta enfermedad. El término abarca también prevenir la progresión adicional de la enfermedad en pacientes quienes ya sufran de o tengan síntomas de tal enfermedad. El término "paciente" o "sujeto" significa un animal (por ejemplo, vaca, caballo, borrego, cerdo, pollo, pavo, codorniz, gato, perro, ratón, rata, conejo, cobayo, etc.) o un mamífero, incluyendo animales quiméricos y transgénicos y mamíferos. En el tratamiento o prevención de infección por HCV, el término "paciente" o "sujeto" significa de preferencia un mono o un humano, muy preferiblemente un humano. En una modalidad específica el paciente o sujeto es infectado por o expuesto al virus de la hepatitis C. En ciertas modalidades, el paciente es un infante humano (edad 0-2), niño (edad 2-17), adolescente (edad 12-17), adulto (edad 18 y más) o geriátrico (edad 70 y más) . Además, el paciente incluye pacientes inmunocomprometidos tales como pacientes VIH positivos, pacientes de cáncer, pacientes que sufren inmunoterapia o quimioterapia. En una modalidad particular el paciente es un individuo saludable, es decir, que no presenta síntomas de otras infecciones virales. El término una "cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a una cantidad del compuesto de la invención suficiente para proporcionar un beneficio en el tratamiento o prevención de una enfermedad viral, para retrasar o minimizar síntomas asociados con infección viral o enfermedad inducida viralmente o para curar o reducir la enfermedad o infección o causa de la misma. En particular, una cantidad terapéuticamente efectiva significa una cantidad suficiente para proporcionar un beneficio terapéutico en vivo . Usado en relación con una cantidad de un compuesto de la invención, el término abarca de preferencia una cantidad no tóxica que mejora la terapia general, reduce o evita síntomas o causa de enfermedad, o incrementa la eficacia terapéutica de o sinergia con otro agente terapéutico. El término una "cantidad profilácticamente efectiva" se refiere a una cantidad de un compuesto de la invención u otro ingrediente activo suficiente para dar como resultado la prevención de infección, recurrencia o dispersión de infecciones virales. Una cantidad profilácticamente efectiva puede referirse a una cantidad adecuada para prevenir infección inicial o la recurrencia o expansión de la infección o una enfermedad asociada con la infección. Usado en relación con una cantidad asociada de un compuesto de la invención, el término abarca de preferencia una cantidad no tóxica que mejora la profilaxis general o incrementa la eficacia profiláctica de o se sinergia con otro agente profiláctico o terapéutico. El término "en combinación" se refiere al uso de más de un agente profiláctico y/o terapéutico simultánea o secuencialmente y de una manera que sus efectos respectivos sean aditivos o sinérgicos. El término "tratar" se refiere a: (i) prevenir que una enfermedad, trastorno o condición ocurra en un animal que pueda estar predispuesto a la enfermedad, trastorno y/o condición, pero que no haya sido diagnosticado aún como teniéndola; (ii) inhibir la enfermedad, trastorno o condición, es decir, detener su desarrollo y (iii) aliviar la enfermedad, trastorno o condición, es decir, causar la regresión de la enfermedad, trastorno y/o condición. Los términos "a" y "ß" indican la configuración estereoquímica específica de un sustituyente en un átomo de carbono asimétrico en una estructura química dibujada. Los compuestos de la invención pueden exhibir el fenómeno de tautomerismo. Mientras que la fórmula I no puede ilustrar expresamente todas las formas tautoméricas posibles, se debe entender que la fórmula I está destinada a representar cualquier forma tautomérica del compuesto ilustrado y no a ser limitada simplemente a un compuesto específico ilustrado por los dibujos de fórmula. Para ilustración, y en ninguna forma limitando el alcance de los tautómeros, los compuestos de la fórmula I pueden existir como lo siguiente: Algunos de los compuestos de la invención pueden existir como esteroisómeros individuales (es decir, esencialmente libres de otros esteroisómeros), racematos y/o mezclas de enantiómeros y/o diastereómeros. Todos estos estereoisómeros, racematos individuales y mezclas de los mismos están destinados a estar dentro del alcance de la presente invención. De preferencia, los compuestos de la invención que son ópticamente activos se usan en forma ópticamente pura. Como se entiende generalmente por aquellos expertos en la técnica, un compuesto ópticamente puro que tiene un centro quiral (es decir, átomo de carbono asimétrico) es uno que consiste esencialmente en uno de los dos enantiómeros posibles (es decir, es enantioméricamente puro) , y un compuesto ópticamente puro que tiene más de un centro quiral es uno que es tanto diastereoméricamente puro como enantioméricamente puro. De preferencia, los compuestos de la presente invención se usan en una forma que es al menos 90% ópticamente pura, es decir, una forma que contiene al menos 90% de un solo isómero (80% de exceso enantiomérico ("e.e.") o exceso diastereomérico ("d.e.")), muy preferiblemente al menos 95% (90%, e.e. o d.e.), todavía más preferiblemente por lo menos 97.5% (95% e.e. o d.e.) y más preferiblemente al menos de 99% (98% e.e. o d.e.). Además, la fórmula I está diseñada para cubrir las formas solvatadas así como no solvatadas de las estructuras identificadas. Por ejemplo, la fórmula I incluye compuestos de la estructura indicada tanto en formas hidratada como no hidratada. Otros ejemplos de solvatos incluyen las estructuras en combinación con isopropanol, etanol, metanol, DMSO, acetato de etilo, ácido acético o etanolamina. Además de los compuestos de la fórmula I, la invención incluye profármacos farmacéuticamente aceptables, metabolitos farmacéuticamente activos y sales farmacéuticamente aceptables de estos compuestos y metabolitos . Un "profármaco farmacéuticamente aceptable" es un compuesto que puede convertirse bajo condiciones fisiológicas o mediante solvólisis en el compuesto especificado o en una sal farmacéuticamente aceptable de este compuesto antes de exhibir sus efectos farmacológicos. Típicamente, el profármaco se formula con los objetivos de estabilidad química mejorada, aceptación y cooperación de pacientes mejorada, biodisponibilidad mejorada, duración de acción prolongada, selectividad de órganos mejorada, formulación mejorada (por ejemplo, hidrosolubilidad incrementada) y/o efectos secundarios reducidos (por ejemplo, toxicidad). El profármaco puede prepararse fácilmente usando de los compuestos de la fórmula I usando métodos conocidos en la técnica, tales como aquellos descritos por Burger ' s Medicinal Chemistry and Drug Chemistry, 1, 172-178, 949-982 (1995) . Véase también Bertolini et al., J. Med. Chem . 40, 2011 -201 6 (1997); Shan, et al., J. Pharm . Sci . , 86 (7), 765-767; Bagshave, Drug Dev. 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Estas conversiones metabólicas, las cuales normalmente afectan la polaridad de los compuestos de la invención, alteran la manera en la cual los fármacos son distribuidos en y son excretados del cuerpo. Sin embargo, en algunos casos, el metabolismo de un fármaco se requiere para efecto terapéutico. Por ejemplo, los fármacos anticáncer de la clase antimetabolitos deben ser convertidos en sus formas activas después de que hayan sido transportados dentro de una célula cancerosa. Ya que la mayoría de los fármacos sufren transformación metabólica de cierto tipo, las reacciones bioquímicas que juegan un papel en el metabolismo de fármacos pueden ser numerosas y diversas. El principal sitio de metabolismo de fármacos es el hígado, aunque también pueden participar otros tejidos. Una característica típica de muchas de estas transformaciones es que los productos metabólicos o "metabolitos" son más polares que los fármacos de origen, aunque un fármaco polar algunas veces produce un producto menos polar. Las sustancias con altos coeficientes de división lípidos/agua, las cuales pasan fácilmente a través de membranas, también se difunden de regreso fácilmente de la orina tubular a través de las células tubulares renales dentro del plasma. Así, estas sustancias tienden a tener una baja eliminación renal y una larga persistencia en el cuerpo. Si un fármaco es metabolizado a un compuesto más polar, uno con un coeficiente de división más bajo, su reabsorción tubular general será ampliamente reducida. Más aún, los mecanismos secretores específicos de aniones y cationes en los túbulos renales proximales y en las células hepáticas parenquimáticas operan en sustancias altamente polares. Como un ejemplo específico, fenacetil (acetofenetidina) y acetaniluro son ambos agentes analgésicos y antipiréticos leves, pero se transforman dentro del cuerpo en un metabolito más polar y más efectivo, p-hidroxiacetanilida (acetaminofen) , el cual se usa ampliamente actualmente. Cuando una dosis de acetaniluro se da a una persona, los metabolitos sucesivos forman un pico y caen en el plasma secuencialmente. Durante la primera hora, el acetaniluro es el principal componente en el plasma. En la segunda hora, al caer el nivel de acetaniluro, la concentración del metabolito acetaminofen alcanza un pico. Finalmente, después de pocas horas, el componente en plasma principal es un metabolito adicional que es inerte y puede ser rescatado del cuerpo. Así, las concentraciones en plasma de uno o más metabolitos, así como el propio fármaco, pueden ser farmacológicamente importantes. Una "sal farmacéuticamente aceptable" está destinada a significar una sal gue conserva la efectividad biológica de los ácidos y bases libres del compuesto especificado y que no es biológicamente o de otra manera indeseable.. Un compuesto de la invención puede poseer un grupo suficientemente ácido, suficientemente básico o ambos grupos funcionales, y en consecuencia reaccionar con cualquiera de un número de bases inorgánicas u orgánicas, y ácidos inorgánicos y orgánicos, para formar una sal farmacéuticamente aceptable. Las sales farmacéuticamente aceptables ejemplares incluyen aquellas sales preparadas mediante la reacción de los compuestos de la presente invención con un ácido mineral y orgánico o una sal inorgánica tales como sales incluyendo sulfatos, pirosulfatos, bisulfatos, sulfitos, bisulfitos, fosfatos, monohidrogenfosfatos, dihidrogenfosfatos, metafosfatos, pirofosfatos, cloruros, bromuros, yoduros, acetatos, propionatos, decanoatos, caprilatos, acrilatos, formiatos, isobutiratos, caproatos, heptanoatos, propiolatos, oxalatos, malonatos, succinatos, suberatos, sebacatos, fumaratos, maleatos, butin-1, 4-dioatos, hexin-1, 6-dioatos, benzoatos, clorobenzoatos, metilbenzoatos, dinitrobenzoatos, hidroxibenzoatos, metoxibenzoatos, ftalatos, sulfonatos, silensulfonatos, fenilacetatos, fenilpropionatos, fenilbutiratos, citratos, lactatos, ?-hidroxibutiratos, glicolatos, tartratos, metansulfonatos, propansulfonatos, naftalen-1-sulfonatos, naftalen-2-sulfonatos y mandelatos. Si el compuesto de la invención es una base, la sal farmacéuticamente aceptable deseada puede prepararse mediante cualquier método adecuado disponible en la técnica, por ejemplo, tratamiento de la base libre, un ácido inorgánico, tal como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares, o como un ácido orgánico, tal como ácido acético, ácido maleico, ácido succínico, ácido mandélico, ácido fumárico, ácido malónico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido glicólico, ácido salicílico, un ácido piranosidílico tal como ácido glucurónico o ácido galacturónico, un a-hidroxiácido, tal como ácido cítrico o ácido tartático, un aminoácido, tal como ácido aspártico o ácido glutámico, un ácido aromático tal como ácido benzoico o ácido cinámico, un ácido sulfónico tal como ácido p-toluensulfónico o ácido etansulfónico o similares . Si el compuesto de la invención es un ácido, la sal farmacéuticamente aceptable deseada puede prepararse mediante cualquier método adecuado, por ejemplo, tratamiento del ácido libre como una base inorgánica u orgánica, tal como una amina (primaria, secundaria o terciaria) , un hidróxido de metal alcalino o hidróxido de metal alcalinotérreo o similares. Ejemplos ilustrativos de sales adecuadas incluyen sales orgánicas derivadas de aminoácidos, tales como glicina y arginina, amoniaco, aminas primarias, secundarias y terciarias y aminas cíclicas, tales como piperidina, morfolina y piperazina, y sales inorgánicas derivadas de sodio, calcio, potasio, magnesio, manganeso, hierro, cobre, zinc, aluminio y litio.

En el caso de agentes que sean sólidos, se entiende por los expertos en la técnica que los compuestos de la invención y sales pueden existir en diferentes formas de cristal o polimórficas, todas las cuales están destinadas a estar dentro del alcance de la presente invención y fórmulas especificadas .

Métodos de tratamiento y prevención de infecciones por virus de la hepatitis C La presente invención proporciona métodos para tratar o prevenir una infección por virus de la hepatitis C en un paciente que lo requiera. La presente invención también proporciona además métodos para introducir una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula I o combinación de estos compuestos en el torrente sanguíneo de un paciente en el tratamiento y/o prevención de infecciones por virus de la hepatitis C. La magnitud de una dosis profiláctica o terapéutica de un compuesto de la fórmula I de la invención o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo en el tratamiento agudo o crónico o prevención de una infección variará, sin embargo, con la naturaleza y severidad de la infección, y la ruta por la cual el ingrediente activo es administrado. La dosis, y en algunos casos la frecuencia de la dosis, también variarán de acuerdo con la infección que se tratará, la edad, peso corporal y respuesta del paciente individual. Los regímenes de dosificación adecuados pueden seleccionarse fácilmente por los expertos en la técnica con la consideración debida de estos factores. Los métodos de la presente invención están particularmente bien adaptados para pacientes humanos. En particular, los métodos y dosis de la presente invención pueden ser útiles para pacientes inmunocomprometidos incluyendo, pero no limitados a pacientes con cáncer, pacientes infectados por VIH y pacientes con una enfermedad inmunodegenerativa . Más aún, los métodos pueden ser útiles para pacientes inmunocomprometidos actualmente en un estado de revisión. Los métodos y dosis de la presente invención también son útiles para pacientes que sufran otros tratamientos antivirales. Los métodos de prevención de la presente invención son particularmente útiles para pacientes en riesgo de infecciones virales. Estos pacientes incluyen, pero no están limitados a, trabajadores del cuidado de la salud, por ejemplo, doctores, enfermeras, cuidadores de hospicios; personal militar, maestras, trabajadores del cuidado de niños; pacientes que viajen a, o que vivan en, lugares foráneos, en particular lugares del tercer mundo incluyendo trabajadores de ayuda social, misioneros y diplomáticos extranjeros. Finalmente, los métodos y composiciones incluyen el tratamiento de pacientes refractarios o pacientes resistentes a tratamiento tales como resistencia a inhibidores de transfectasa inversa, inhibidores de proteasa, etc.

Dosis La toxicidad y eficacia de los compuestos de la invención pueden determinarse mediante procedimientos farmacéuticos estándares en cultivos de células o animales experimentales, por ejemplo, para determinar la LD50 (la dosis letal para 50% de la población) y la ED5o (la dosis terapéuticamente efectiva en 50% de la población) . La relación de dosis entre los efectos terapéuticos es el índice terapéutico y puede expresarse como la relación LD50/ED50. Los datos obtenidos de los ensayos de cultivos de células y estudios con animales pueden usarse para formular una gama de dosificación de los compuestos para usarse en humanos. La dosis de estos compuestos se encuentra de preferencia dentro de una escala de concentración circulantes que incluyen la ED50 con toda o ninguna toxicidad. La dosis puede variar dentro de esta escala dependiendo de la forma de dosis empleada y de la ruta de administración utilizada. Para cualquier compuesto usado en el método de la invención, la dosis terapéuticamente efectiva puede calcularse inicialmente a partir de ensayos de cultivos de células. Una dosis puede la formularse en modelos de animales para lograr una escala de concentración en plasma circulante que incluya la IC50 (es decir, la composición del compuesto de prueba que logra una inhibición máxima media de los síntomas) determinada en cultivo de células; como alternativa, la dosis de los compuestos puede la formularse en modelos animales para lograr una escala de concentración en plasma circulante del compuesto que corresponda a la concentración requerida para lograr una magnitud de respuesta fija. Esta información se puede usar para determinar de manera más precisa las dosis útiles en humanos. Los niveles en plasma pueden medirse por ejemplo, mediante cromatografía de líquidos de alto rendimiento . Los protocolos y composiciones de la invención se prueban de preferencia en vi tro, y luego en vivo, para la actividad terapéutica y profiláctica deseada, antes de usarse en humanos. Por ejemplo, los ensayos en vi tro que pueden usarse para determinar si la administración de un protocolo terapéutico específico es indicada, incluyen ensayos de cultivo de células en vi tro en los cuales las células que responden a los efectos de los profármacos de la fórmula I, compuestos de la fórmula II y otros compuestos de la invención son expuestos al ligando y la magnitud de respuesta se mide por una técnica adecuada. La evaluación de los compuestos es después hecha con respecto a la potencia del compuesto, y al grado de conversión entre el compuesto de la fórmula I y el compuesto de origen de la fórmula II. Los compuestos para usarse en los métodos de la invención pueden probarse en sistemas de modelos animales adecuados antes de probarse en humanos, incluyendo pero no limitados a ratas, ratones, pollos, vacas, monos, conejos, hámsteres, etc. Los compuestos se pueden usar después en las pruebas clínicas adecuadas . La magnitud de una dosis profiláctica o terapéutica de un profármaco en la fórmula I, compuesto de la fórmula II u otro compuesto de la invención o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo en el tratamiento o prevención agudo o crónico de una condición, variará con la naturaleza y severidad de la infección, la ruta mediante la cual el ingrediente activo sea administrado. La dosis, y tal vez la frecuencia de dosis, también variarán de acuerdo con la infección que se tratará, la edad, peso corporal y respuesta del paciente individual. Los regímenes de dosificación adecuados pueden seleccionarse fácilmente por los expertos en la técnica con consideración adecuada de estos factores. En una modalidad, la dosis administrada depende del compuesto específico que será usado, el peso y condición del paciente. También, la dosis puede diferir para varios compuestos particulares de la invención; las dosis adecuadas pueden predecirse con base en las mediciones en vi tro mencionadas arriba y con base en estudios con animales, de tal forma que dosis más pequeñas sean adecuadas para aquellos compuestos que muestren efectividad a concentraciones más bajas que otros compuestos cuando se midan en los sistemas descritos o referenciados en la presente. En general, la dosis al día está en la escala de aproximadamente 0.001 a 100 mg/kg, de preferencia alrededor de 1 a 25 mg/kg, muy preferiblemente alrededor de 5 a 15 mg/kg. Para el tratamiento de humanos infectados por virus de la hepatitis C, aproximadamente 0.1 mg a alrededor de 15 g por día se administra en alrededor de una a cuatro divisiones al día, de preferencia 100 mg a 12 g al día, muy preferiblemente de 100 mg a 8000 mg al día. Además, la dosis diaria recomendada puede administrarse en ciclos como agentes individuales o en combinación con otros agentes terapéuticos. En una modalidad, la dosis diaria se administra en una sola dosis o en dosis igualmente divididas. En una modalidad relacionada, la dosis diaria recomendada puede administrarse una vez por semana, dos veces a la semana, tres veces a la semana, cuatro veces a la semana o cinco veces a la semana. En una modalidad preferida, los compuestos de la invención se administran para proporcionar distribución sistémica del compuesto en el paciente. En una modalidad relacionada, los compuestos de la invención se administran para producir un efecto sistémico en el cuerpo. En otra modalidad los compuestos de la invención se administran vía administración oral, mucosa (incluyendo sublingual, bucal, rectal, nasal o vaginal), parenteral (incluyendo, subcutánea, intramuscular, inyección de bolo, intraarterial o intravenosa), transdérmica o tópica. En una modalidad específica los compuestos de la invención se administran vía administración mucosa (incluyendo sublingual, bucal, rectal, nasal o vaginal), parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, inyección de bolo, intraarterial, intravenosa), transdérmica o tópica. En una modalidad específica más, los compuestos se administran mediante administración oral. En una modalidad específica más, los compuestos de la invención no se administran mediante administración oral. Las cantidades terapéuticamente efectivas diferentes pueden ser aplicables para diferentes infecciones, como se conocerá fácilmente por los expertos en la técnica. De manera similar, las cantidades suficientes para tratar o prevenir estas infecciones, pero insuficientes para causar, o suficientes para reducir, efectos adversos asociados con terapias convencionales también son abarcadas por las cantidades de dosis descritas arriba y los programas de frecuencia de dosis.

Terapia de combinación Los métodos específicos de la invención comprenden además la administración de un agente terapéutico adicional (es decir, un agente terapéutico que no es un compuesto de la invención) . En ciertas modalidades de la presente invención, los compuestos de la invención pueden usarse en combinación con al menos algún otro agente terapéutico. Los agentes terapéuticos incluyen, pero no están limitados a antibióticos, agentes antieméticos, antidepresivos y agentes antifúngicos, agentes anti-inflamatorios, agentes antivirales, agentes anticáncer, agentes inmunomoduladores, a-interferones, ß-interferones, ribavirina, agentes alquilantes, hormonas, citocinas o moduladores tipo receptor Toll. En una modalidad preferida la invención abarca la administración de un agente terapéutico adicional que sea específico para HCV o que demuestre actividad anti-HCV. Los compuestos de la fórmula I de la invención pueden administrarse o formularse en combinación con antibióticos. Por ejemplo, se pueden formular con un macrólido (por ejemplo, tobramicina (Tobi®) , una cefalosporina (por ejemplo, cefalexin (Keflex®) , cefradina (Velosef®, cefuroxima (Ceftin®) , cefprozil (Cefzil®, cefaclor (Ceclor®, cefixime (Suprax® o cefadroxilo (Duricef®) , una claritromicina (por ejemplo, claritromicina (Biaxin®), una eritromicina (por ejemplo, eritromicina (Emycin®) , una penicilina (por ejemplo, penicilina V (V-Cillin K o Pen Vee K®) ) o una quinolona (por ejemplo, ofloxacino (Floxin®, ciprofloxacino (Cipro® o norfloxacino (Noroxin®) , antibióticos de aminoglicósidos (por ejemplo, apramicina, arbekacina, bambermicinas, butirosina, dibecacina, neomicina, neomicina, undecilenato, netilmicina, paromomicina, ribostamicina, sisomicina y espectinomicina) , antibióticos de anfenicol (por ejemplo, azidanfenicol, cloranfenicol, florfenicol y tianfenicol) , antibióticos de ansamicina (por ejemplo, rifamida y rifanpin) , carbacefemas (por ejemplo, loracarbef) , carbapenemas (por ejemplo, biapenem e imipenem), cefalosporinas (por ejemplo, cefaclor, cefadroxilo, cefamandol, cefatrizina, cefazedona, cefozopran, cefpimizol, cefpiramida y cefpiroma) , cefamicinas (por ejemplo, cefbuperazona, cefmetazol y cefminox) , monobactamas (por ejemplo, aztreonam, carumonam y tigemonam) , oxacefemas (por ejemplo, flomoxef y moxalactama) , penicilinas (por ejemplo, amdinocilina, amdinocilina pivoxilo, amoxicilina, bacampicilina, ácido bencilpenicilinico, bencilpenicilina sódica, epicilina, fenbenicilina, floxacilina, penamocilina, yodhidrato de penetamato, o-benetamina de penicilina, penicilina 0, penicilina V, penicilina V benzatina, penicilina V hidrabamina, penimepiciclina y pencihicilina potásica) , lincosamidas (por ejemplo, clindamicina y lincomicina) , anfomicina, bacitracina, capreomicina, colistina, enduracidina, enviomicina, tetraciclinas (por ejemplo, apiciclina, clortetraciclina, clomociclina y demeclociclina) , 2, 4-diaminopirimidinas (por ejemplo, brodimoprim) , nitrofuranos (por ejemplo, furaltadona y cloruro de furazolio) , quinolonas y análogos de las mismas (por ejemplo, cinoxacino, clinafloxacino, flumequina y grepagloxacino) , sulfonamidas (por ejemplo, acetilsulfametoxipirazina, bencilsulfamida, noprilsulfamida, ftalilsulfacetamida, sulfacrisoidina y sulfacitina) , sulfonas (por ejemplo, diatimosulfona, glucosulfona sodio y solasulfona) , cicloserina, mupirocina y tuberina. Los compuestos de la fórmula I de la invención también se pueden administrar o formular en combinación con un agente antiemético. Los agentes antieméticos incluyen, pero no están limitados a, metoclopromida, domperidona, proclorperazina, prometazina, clorpromazina, trimetobenzamida, ondasetron, granisetrón, hidroxizina, acetilleucina monoetanolamina, alizaprida, azasetrón, benzquinamida, bietanautina, bromoprida, buclizina, cleboprida, ciclizina, dimenhidrinato, difenidol, dolasetron, meclizina, metalatal, metopimazina, nabilon, oxipermdilo, pipamazina, escopolamina, sulpirida, tetrahidrocanabinoles, tietilperazina, tioproperazina, tropisetron y mezclas de los mismos . Los compuestos de la fórmula I de la invención se pueden administrar o formular en combinación con un antidepresivo. Los antidepresivos adecuados incluyen pero no están limitados a, dinedalina, caroxazona, citalopram, dimetazan, fencamina, indalpina, clorhidrato de indeloxazina, nefopam, nomifensina, oxitriptan, oxipertina, paroxetina, sertralina, tiazesim, trazodona, benmoxina, iproclozida, iproniazid, isocarboxazid, nialamida, octamoxin, fenelzina, cotinina, roliciprina, rolipram, maprotilina, metralindol, mianserina, mirtazepina, adinazolam, amitriptilina, amitriptilinóxido, amoxapina, butriptilina, clompramina, demexiptilina, desipramina, dibenzepina, dimetacrina, diotiepina, doxepina, fluacizina, impramina, N-óxido de impramina, iprindol, lofepramina, melitracen, metapramina, nortriptilina, noxiptilina, opipramol, pizotilina, propizepina, protriptilina, quinupramina, tianeptina, trimipramina, adrafinil, benactizina, bupropion, butacetina, dioxadrol, duloxetina, etoperidona, febarbamato, femoxetina, fenpentadiol, fluoxetina, fluvoxamina, hematoporfirina, hipericina, levofacetoperano, medifoxamina, milnacipran, minprina, monoclebemida, nefazodona, oxaflozano, pilberlaina, prolintano, pirisuccideanol, ritanserina, roxidnol, cloruro de rubidio, sulpirida, tandospirona, tiozalinona, tofenacina, toloxatona, tranilcipromina, L-triptofan, venlafaxina, viloxazina y zimeldina. Los compuestos de la fórmula I de la invención se pueden administrar o formular en combinación con un agente antifúngico. Los agentes antifúngicos adecuados incluyen pero no están limitados a anfotericina B, itraconazol, quetoconazol, fluconazol, intratecal, flucitosina, miconazol, butoconazol, clotrimazol, nistatina, terconazol, tioconazol, ciclopirox, econazol, haloprogrin, naftifina, terbinafina, undecilenato y griseofulvina. Los compuestos de la fórmula I de la invención se pueden administrar o formular en combinación con un agente anti-inflamatorio. Los agentes anti-inflamatorios útiles incluyen pero no están limitados a, fármacos antiinflamatorios no esteroides tales como ácido salicilico, ácido acetilsalicílico, metilsalicilato, diflunisal, salsalato, olsalazina, sulfasalazina, acetaminofen, indometacina, sulindac, etodolac, ácido mefenámico, meclofenamato sodio, tolmetina, ketorolaco, dielofenaco, ibuprofeno, naproxeno, naproxeno sódico, fenoprofeno, quetoprofeno, flurbinprofeno, oxaprozina, piroxicam, meloxicam, ampiroxicam, droxicam, pivoxicam, tenoxicam, nabumetoma, fenilbutazona, oxifenbutazona, antipirina, aminopirina, apazona y nimesulida; antagonistas de leucotrienos incluyendo, pero no limitados a, zileuton, aurotioglucosa, tiomalato de sodio de oro y auranofin; esteroides incluyendo pero no limitados a, dipropionato de alclometasona, ameinonida, dipropionato de beclometasona, betametasona, benzoato de betametasona, dipropionato de betametasona, fosfato sódico de betametasona, valerato de betametasona, propionato de clobetasol, pivalato de clocortolona, hidrocortisona, derivados de hidrocortisona, desonida, desoximatasona, dexametasona, flunisolida, flucoxinolida, flurandrenoida, halcinocida, medrisona, metilprednisolona, acetato de metilprednisolona, succinato sódico de metilprednisolona, furoato de mometasona, acetato de parametasona, prednisolona, acetato de prednisolona, fosfato sódico de prednisolona, tebuatato de prednisolona, prednisona, triamcinolona, acetónico de triamcinolona, diacetato de triamcinolona y hexacetónido de triamcinolona y otros agentes antiinflamatorios incluyendo, pero no limitados a, metatrexato, colchicina, alopurinol, probenecid, sulfinpirazona y benzbromarona . Los compuestos de la fórmula I de la invención se pueden usar o formular en combinación con otro agente antiviral. Los agentes antivirales útiles incluyen, pero no están limitados a, inhibidores de proteasa, inhibidores de transcriptasa inversa a nucleósido, inhibidores de transcriptasa inversa no nucleósidos y análogos de nucleósidos. Los agentes antivirales incluyen pero no están limitados a zidovudina, aciclovir, ganciclovir, vidarabina, indoxuridina, trifluridina, levovirina, viramidina y ribavirina, asi como foscarnet, amantadina, rimantadina, saquinavir, indinavir, amprenavir, lopinavir, ritonavir, los a-interferones; ß-interferones; adeofivir, clevadina, entecavir, pleconaril. Los compuestos de la fórmula I de la invención se pueden administrar o formular en combinación con un agente inmunomodulador. Los agentes inmunomoduladores incluyen, pero no están limitados a, metotrexato, leflunomida, ciclofosfamida, ciclosporina A, micofenolato mofetil, rapamicina (sirolimus), mizoribina, desoxispergualina, brequinar, malononitriloamindas (por ejemplo, leflunamida), moduladores de receptores de células T y moduladores de receptores de citocinas, péptidomiméticos y anticuerpos (por ejemplo, anticuerpos humanos, humanizados, quiméricos, monoclonales, policlonales, Fvs, ScFvs, Fab o fragmentos F(ab)2 o fragmentos de unión a epitopes), moléculas de ácido nucleico (por ejemplo moléculas de ácido nucleico antisentido y hélices triples) , moléculas pequeñas, compuestos orgánicos y compuestos inorgánicos. Ejemplos de moduladores de receptor en células T incluyen, pero no están limitados a, anticuerpos receptores anticélulas T (por ejemplo, anticuerpos anti-CD4 (por ejemplo, CM-T412 (Boeringer) , IDEC- CE9.1® (IDEC y SKB) , mAB 4162 94, Ortoclona y OKTcdr4a ( Janssen-Cilag) ) , anticuerpos anti-CD3 (por ejemplo, Nuvion (Product Design Labs), OKT3 (Johnson y Johnson), o Rituxan (IDEC)), anticuerpos anti-CD5 (por ejemplo, un inmunoconjugado enlazado a ricina anti-CD5) , anticuerpos anti-CD7 (por ejemplo, CHH-380 (Novartis) ) , anticuerpos anti-CD8, anticuerpos monoclonales de ligando anti-CD40 (por ejemplo, IDEC-131 (IDEC)), anticuerpos anti-CD52 (por ejemplo, CAMPATH ÍH (Ilex)), anticuerpos anti-CD2, anticuerpos anti-CDlla (por ejemplo, Xanelim (Genentech)) y anticuerpos anti-B7 (por ejemplo, IDEC-114 (IDEC)) e inmunoglobulina CTLA4. Ejemplos de moduladores de receptor de citocinas incluyen, pero no están limitados a, receptores de citocinas solubles (por ejemplo, dominio extracelular de un receptor de TNF-a o un fragmento del mismo, el dominio extracelular de un receptor de IL-lß o un fragmento del mismo y el dominio extracelular de un receptor de IL-6 o un fragmento del mismo) , citocinas o fragmentos de los mismos (por ejemplo, interleucina (IL)-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15, TNF-a, interferón (IFN)-a, IFN-ß, IFN-? y GM-CSF), anticuerpos antirreceptor y citosina (por ejemplo, anticuerpos antireceptores IFN, anticuerpos anti-receptor de IL-2 (por ejemplo, Zenapax (Protein Design Labs)), anticuerpos antireceptor de IL-4, anticuerpos anti-receptor de IL-6, anticuerpos anti-receptor de IL-10, anticuerpos anti-receptor de IL-12), anticuerpos anti-citocinas (por ejemplo, anticuerpos anti-IFN, anticuerpos anti-TNF-a, anticuerpos anti-IL-lß, anticuerpos anti-IL-6, anticuerpos anti-IL-8 (por ejemplo, ABX-IL-8 (Abgenix) ) y anticuerpos anti-IL-12). Los compuestos de la fórmula I de la invención se pueden administrar o formular en combinación con un agente que inhibe enzimas virales, incluyendo pero no limitadas a inhibidores de HCV proteasa, tales como BILN 2061 e inhibidores de NS5b polimerasa tales como NM107 y su profármaco NM283 (Idenix Pharmaceuticals, Inc., Cambridge, MA) . Los compuestos de la fórmula I de la invención se pueden administrar o formular en combinación con un agente que inhiba HCV polimerasa tal como aquellos descritos en Wu, Curr Targets , Infecí Disord. 2003; 3 (3) : 207-19 o en combinación con el compuestos que inhiban la función helicasa del virus tales como aquellos descritos en Bretner M, et al . Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids . 2003; 22 (5-8 ): 1531, o con inhibidores de otros objetivos específicos de HCV tales como aquellos descritos en Zhang X. Idrugs . 2002 ; 5 (2 ) : 154-8. Los compuestos de la fórmula I de la invención se pueden administrar o formular en combinación con un agente que inhiba la replicación viral. Los compuestos de la fórmula I de la invención se pueden administrar o formular en combinación con citocinas. Ejemplos de citocinas incluyen, pero no están limitados a, interleucina-2 (IL-2), interleucina-3 (IL-3), interleucina-4 (IL-4), interleucina-5 (IL-5), interleucina-6 (IL-6), interleucina-7 (IL-7), interleucina-9 (IL-9), interleucina-10 (IL-10), interleucina-12 (IL-12), interleucina 15 (IL-15), interleucina 18 (IL-18), factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), eritropoyetina (Epo), factor de crecimiento epidérmico (EGF) , factor de crecimiento de fibroblastos (FGF), factor estimulador de granulocitos y macrófagos (GMCSF) , factor estimulador de colonia de granulocitos (G-CSF) , factor estimulador de colonia de macrófagos (M-CSF) , prolactina e interferón (IFN), por ejemplo, IFN-a e IFN-?) . Los compuestos de la fórmula I de la invención se pueden administrar y formular en combinación con hormonas. Ejemplos de hormonas incluyen, pero no están limitadas a, hormona liberadora de hormona leutinizante (LHRH) , hormona de crecimiento (GH) , hormona liberadora de hormona de crecimiento, ACTH, somatostatina, somatotropian, somatomedina, hormona paratiroides, factores de liberación hipotalámica, insulina, glucagón, encefalinas, vasopresina, calcitonina, heparina, heparina de bajo peso molecular, heparinoides, opioides sintéticos y naturales, hormonas estimuladores de tiroides de insulina y endorfinas. Los compuestos de la fórmula I de la invención se pueden administrar o formular en combinación con ß-interferones que incluyen, pero no están limitados a, interferón ß-la, interferón ß-lb. Los compuestos de la fórmula I de la invención se pueden administrar y formular en combinación con a-interferones que incluyen, pero no están limitados a, interferón a-1, interferón a-2a (roferon) , interferón a-2b, intrón, Peg-Intron, Pegasys, interferón de consenso (infergen) y albuferón. Los compuestos de la fórmula I de la invención se pueden administrar o formular en combinación con un incrementador de absorción, particularmente aquellos que se dirigen al sistema linfático, incluyendo, pero no limitados a glicocolato de sodio; caprato de sodio; N-lauril-ß-D-maltopiranósido; EDTA; micelas mixtas y aquellos reportados en Muranishi Cri t . Rev. Ther . Drug Carrier Syst . , 7-1-33, el cual se incorpora en la presente a manera de referencia en su totalidad. También se pueden usar otros incrementadores de absorción conocidos. Así, la invención también abarca una composición farmacéutica que comprende uno o más compuestos de la fórmula I de la invención y otros compuestos de la invención y uno o más incrementadores de la invención. Los compuestos de la fórmula I de la invención se pueden administrar o formular en combinación con un agente alquilante. Ejemplos de agentes alquilantes incluyen, pero no están limitados a mostazas nitrogenadas, etileniminas, metilmelaminas, alquilsulfonatos, nitrosoureas, triazenos, mecloretamina, ciclofosfamida, ifosfamida, melfalan, clorambucilo, hexametilmelaina, tiotepa, busulfan, carmustina, estreptozocina, dacarbazina y temozolomida. Los compuestos de la fórmula I de la invención y los demás agentes terapéuticos puede actuar de manera aditiva o, muy preferiblemente, en forma sinérgica. En una modalidad preferida, una composición que comprende un compuesto de la invención se administra junto con la administración de otro agente terapéutico, el cual puede ser parte de la misma composición o estar en una composición diferente a la que comprende los compuestos de la invención. En otra modalidad, un compuesto de la invención se administra antes de o después de la administración de otro agente terapéutico. En una modalidad separada, un compuesto de la invención se administra a un paciente que no ha sufrido previamente o que no está sufriendo actualmente tratamiento con otro agente terapéutico, particularmente un agente antiviral. En una modalidad, los métodos de la invención comprenden la administración de uno o más compuestos de la fórmula I de la invención sin un agente terapéutico adicional .

Composiciones farmacéuticas y formas de dosis Las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación unitaria individuales que comprenden compuestos de la fórmula I de la invención, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable de los mismos, también son abarcados por la invención. Las formas de dosificación individual de la invención también son abarcadas por la administración oral, en mucosas (incluyendo sublingual, rectal, nasal o vaginal), parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, inyección de bolo, intraarterial o intravenosa), transdérmica o tópica. Las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación de la invención típicamente comprenden también uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. Las formas de dosificación estériles también se contemplan. En una modalidad alternativa, una composición farmacéutica abarcada por esta modalidad incluye un compuesto de la fórmula I de la invención, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, y por lo menos un agente terapéutico adicional. Ejemplos de agentes terapéuticos adicionales incluyen, pero no están limitados a, aquellos listados arriba. La composición, forma y tipos de formas de dosificación típicamente variarán dependiendo de su uso. Por ejemplo, una forma de dosis usada en el tratamiento agudo de una enfermedad o una enfermedad relacionada puede contener cantidades más grandes de uno o más de los ingredientes activos que comprende que una forma de dosis usada en el tratamiento crónico de la misma enfermedad. Similarmente, una forma de dosis parenteral puede contener cantidades más pequeñas de uno o más de los ingredientes activos que comprende que una forma de dosis oral usada para tratar la misma enfermedad o trastorno. Estas y otras formas en las cuales las formas de dosis especificas abarcadas por esta invención variarán de una a otra serán fácilmente aparentes para aquellos expertos en la técnica. Véase, por ejemplo, Remington ' s Pharma ceutical Sciences , 18a. Ed., Mack Publishing, Easton PA (1990) . Ejemplos de formas de dosificación incluyen, pero no están limitadas a: tabletas; capletas; cápsulas, tales como cápsulas de gelatina suave elástica; sellos; trociscos, pastillas; dispersiones; supositorios; ungüentos; cataplasmas (emplastos); pastas; polvos; preparaciones; cremas; emplastos; soluciones; parches; aerosoles (por ejemplo aspersores o inhaladores nasales); geles; formas de dosis líquidas adecuadas para administración oral o en mucosas a un paciente, incluyendo suspensiones (por ejemplo suspensiones líquidas acuosas o no acuosas, emulsiones de aceite en agua o emulsiones liquidas de agua en aceite) , soluciones y elixires, formas de dosis líquidas adecuadas para administración oral a un paciente y sólidos estériles (por ejemplo, sólidos cristalinos o amorfos) que pueden ser reconstituidas para proporcionar formas de dosis liquidas adecuadas para administración parenteral a un paciente. Las composiciones farmacéuticas y formas de dosis tipicas comprenden uno o más vehículos, excipientes o diluyentes. Los excipientes adecuados se conocen bien por los expertos en la técnica de farmacia, y ejemplos no limitativos de excipientes adecuados se proporcionan en la presente. Si un excipiente particular es adecuado para su incorporación en una composición farmacéutica o forma de dosis depende de una variedad de factores bien conocidos en la técnica incluyendo, pero no limitados a, la forma en la cual la forma de dosis será administrada a un paciente. Por ejemplo, las formas de dosis orales tales como tabletas pueden contener excipientes no adecuados para usarse en formas de dosis parenterales. El carácter adecuado de un excipiente particular también puede depender de los ingredientes activos específicos en la forma de dosis. Esta invención abarca además composiciones farmacéuticas anhidras y formas de dosis que comprenden ingredientes activos, ya que el agua puede facilitar la degradación de algunos compuestos. Por ejemplo, la adición de agua (por ejemplo 5%) es ampliamente aceptada en las técnicas farmacéuticas como un medio para simular el almacenamiento a largo plazo para determinar así las características tales como vida útil o la estabilidad de las formulaciones con el tiempo. Véase, por ejemplo, Carstensen, Drug Stabili ty: Principies y Practice, 2a. Ed. Marcel Dekker, NY, NY, 1995, p. 379-80. En efecto, agua y calor aceleran la descomposición de algunos compuestos. Asi, el efecto del agua en una formulación puede ser de gran significado toda vez que la humedad y/o humedecimiento se encuentra comúnmente durante la fabricación, manejo, empaque, almacenamiento, transportación y uso de las formulaciones. Las composiciones farmacéuticas anhidras y formas de dosis de la invención pueden prepararse usando ingredientes anhidros o que contengan baja humedad y condiciones de baja humedad o baja humectación. Una composición farmacéutica anhidra debe prepararse y almacenarse de tal forma gue su naturaleza anhidra se mantenga. En consecuencia, las composiciones anhidras se empacan de preferencia usando materiales que se conoce prevengan la exposición a agua de tal forma que puedan incluirse en kits de la formulación adecuados. Ejemplos de empaques adecuados incluyen, pero no están limitados a, hojas selladas herméticamente, plásticos, recipientes de dosis única (por ejemplo frascos), empaques de burbuja y empaques de tira. La invención abarca además composiciones farmacéuticas y formas de dosis que comprenden uno o más compuestos que reducen la velocidad a la cual un ingrediente activo se descompondrá. Estos compuestos, los cuales son mencionados en la presente como "estabilizadores", incluyen pero no están limitados a antioxidantes tales como ácido ascórbico, reguladores de pH o reguladores de sal. Al igual que las cantidades y tipos de excipientes, las cantidades y tipos específicos de ingredientes activos en una forma de dosis pueden diferir dependiendo de factores tales como, pero no limitados a, la ruta por la cual vaya a ser administrado a los pacientes. Sin embargo, las formas de dosis típicas de la invención comprenden compuestos de la invención, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable de los mismos que comprenden 0.1 mg a 1,500 mg por unidad para proporcionar dosis de aproximadamente 0.01 a 200 mg/kg al día.

Formas de dosis oral Las composiciones farmacéuticas de la invención que son adecuadas para administración oral pueden presentarse como formas de dosis individuales, tales, pero no limitadas a, tabletas (por ejemplo, tabletas masticables), capletas, cápsulas y líquidos (por ejemplo, jarabes saborizados). Estas formas de dosis contienen cantidades predeterminadas de ingredientes activos, y pueden prepararse mediante métodos de farmacia bien conocidos por aquellos expertos en la técnica. Véase generalmente Remington ' s Pharmaceutical Sciences, 18a ed. Mack Publishing Easton PA (1990) . Las formas de dosis oral típicas de la invención se preparan al combinar los ingredientes activos en una mezcla íntima de al menos un excipiente de acuerdo con técnicas de mezclado farmacéutico convencionales. Excipientes pueden tener una amplia variedad de formas dependiendo de la forma de preparación deseada para administración. Por ejemplo, los excipientes adecuados para usarse en formas de dosis liquidas o en aerosol orales incluyen, pero no están limitadas a, agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes saborizantes, conservadores y agentes colorantes. Ejemplos de excipientes adecuados para usarse en forma de dosis oral sólidas, por ejemplo, polvos, tabletas, cápsulas y comprimidos) incluyen, pero no están limitados a, almidones, azúcares, celulosa microcristalina, diluyentes, agentes granuladores, lubricantes, aglutinantes y agentes desintegradores. Debido a su facilidad de administración, las tabletas y cápsulas representan las formas únicas de dosis oral más adecuadas, en cuyo caso los excipientes sólidos se emplean. Si se desea, las tabletas pueden ser recubiertas mediante técnicas acuosas o no acuosas estándares. Estas formas de dosis pueden prepararse mediante cualquiera de los métodos de farmacia. En general, las composiciones farmacéuticas y formas de dosis se preparan al mezclar uniforme e intimamente los ingredientes activos con vehículos líquidos, vehículos sólidos finamente divididos o ambos, y luego configurando el producto en la presentación deseada si es necesario.

Por ejemplo, una tableta puede prepararse mediante compresión o moldeo. Las tabletas comprimidas pueden prepararse al comprimir en una máquina adecuada los ingredientes activos en una forma de flujo libre tal como polvo o granulos, mezclados opcionalmente con un excipiente. Las tabletas moldeadas pueden hacerse al moldear en una máquina adecuada una mezcla del compuesto en polvo humedecida con un diluyente líquido inerte. Ejemplos de excipientes que pueden usarse en las formas de dosis orales de la invención incluyen, pero no están limitados a, aglutinantes, rellenos, desintegrantes y lubricantes. Los aglutinantes adecuados para usarse en las composiciones farmacéuticas y formas de dosis incluyen, pero no están limitados a, almidón de maíz, almidón de papa u otros almidones, gelatina, gomas naturales y sintéticas tales como acacia, alginato de sodio, ácido alginico, otros alginatos, tragacanto en polvo, goma guar, celulosas o derivados (por ejemplo, etilcelulosa, acetato de celulosa, carboximetilcelulosa de calcio, carboximetilcelulosa de sodio) , polivinilpirrolidona, metilcelulosa, almidón pregelatinizado, hidroxipropilmetilcelulosa (por ejemplo, Nos. 2208, 296, 2910), celulosa microcristalina y mezclas de las mismas. Ejemplos de rellenos adecuados para usarse en las composiciones farmacéuticas y formas de dosis descritas en la presente incluyen, pero no están limitadas a, talco, carbonato de calcio (por ejemplo, granulos o en polvo) , celulosa microcristalina, celulosa en polvo, dextratos, caolin, manitol, ácido silícico, sorbitol, almidón, almidón pregelatinizado y mezclas de los mismos. El aglutinante, relleno o composiciones farmacéuticas de la invención está presente típicamente en una cantidad de alrededor de 50 a 99% en peso de la composición farmacéutica o forma de dosis. Las formas adecuadas de celulosa microcristalina incluyen, pero no están limitadas a, los materiales vendidos como AVICEL-PH-101, AVICEL-PH-103, AVICEL RC-581, AVICEL-PH-105 (disponible de FMC Corporation, American Viseóse División, Avicel Sales, Marcus Hook, PA) , y mezclas de los mismos. Un aglutinantes específico es una mezcla de celulosa microcristalina y carboximetilcelulosa de sodio vendida como AVICEL RC-581. Los excipientes o aditivos anhidros o de baja humedad adecuados incluyen AVICEL-PH-103™ y Almidón 1500 LM. Los desintegradores se usan en las composiciones de la invención para proporcionar tabletas que se desintegren cuando sean expuestas a un ambiente acuoso. Las tabletas que contienen demasiado desintegrador pueden desintegrarse en almacenamiento, mientras que aquellas que contengan muy poco podrían no desintegrarse a una velocidad deseada o bajo las condiciones deseadas. Asi, una cantidad suficiente de desintegrador que ni sea demasiada ni muy poca como para alterar dañinamente la liberación de los ingredientes activos se debe usar para formar formas de dosis orales sólidas de la invención. La cantidad de desintegrador usado varía con base en el tipo de la formulación, y es fácilmente discernible por aquellos expertos en la técnica. Las composiciones farmacéuticas comprenden típicamente de aproximadamente 0.5 a alrededor de 15 por ciento en peso del desintegrador, específicamente de aproximadamente 1 a aproximadamente 15 por ciento en peso de desintegrador. Los desintegradores que pueden usarse en las composiciones farmacéuticas y formas de dosis de la invención incluyen, pero no están limitados a, agar-agar, ácido alginico, carbonato de calcio, celulosa microcristalina, croscarmelosa de sodio, crospovidona, polacrilina potasio, glicolato de almidón de sodio, almidón de papa o tapioca, almidón pre-gelatinizado, otros almidones, arcillas, otras alginas, otras celulosas, gomas y mezclas de las mismas. Los lubricantes que pueden usarse en las composiciones farmacéuticas y formas de dosis de la invención incluyen, pero no están limitados a, estearato de calcio, estearato de magnesio, aceite mineral, aceite mineral ligero, glicerina, sorbitol, manitol, polietilenglicol, otros glicoles, ácido esteárico, laurisulfato de sodio, talco, aceite vegetal hidrogenado (por ejemplo, aceite de cacahuate, aceite de semilla de algodón, aceite de girasol, aceite de ajonjolí, aceite de olivo, aceite de maíz y aceite de soya) , estearato de zinc, oleato de etilo, laureato de etilo, agar y mezclas de los mismos. Los lubricantes adicionales incluyen, por ejemplo, un gel de sílice siloide (AEROSIL 200, fabricado por W.R. Grace Co. de Baltimore, MD) , un aerosol coagulado de sílice sintética (comercializado por Degussa Co . de Plano, TX) , CAB-O-SIL (un producto de dióxido de silicio pirógeno vendido por Cabot Co. de Boston, MA) y mezclas de los mismos. Si se usan en absoluto, los lubricantes se usan típicamente en una cantidad de al menos aproximadamente 1% en peso de las composiciones farmacéuticas o formas de dosis en las cuales se incorporan.

Formas de dosis de liberación retrasada Los ingredientes activos de la invención pueden administrarse mediante medios de liberación controlada o por dispositivos de suministro que se conocen bien por aquellos expertos en la técnica. Ejemplos incluyen, pero no están limitados a, aquellos descritos en las patentes de E.U.A. Nos.: 3,845,770; 3,916,899; 3,536,809; 3,598,123; y 4,008,719, 5,674,533, 5,059,595, 5,591,767, 5,120,548, 5,073,543, 5,639,476, 5,354,556 y 5,733,566, cada una de las cuales se incorpora en la presente a manera de referencia.

Estas formas de dosis pueden usarse para proporcionar una liberación lenta o controlada de uno o más ingredientes activos usando, por ejemplo, hidropropilmetilcelulosa, otras matrices poliméricas, geles, membranas permeables, sistemas osmóticos, recubrimientos de capas múltiples, micropartículas, liposomas, microesferas o una combinación de los mismos para proporciona el perfil de liberación deseado en proporciones variables. Las formulaciones de liberación controlada adecuadas conocidas por aquellos expertos en la técnica incluyendo aquellas descritas en la presente, se pueden seleccionar fácilmente para usarse con los ingredientes activos de la invención. La invención abarca entonces formas de dosis única individuales adecuadas para administración oral tales, pero no limitadas a, tabletas, cápsulas, gelcaps y capletas que están adaptados para liberación controlada. Todos los productos farmacéuticos de liberación controlada tienen una meta común de mejorar la terapia con fármacos sobre aquella lograda por sus contrapartes no controladas. Idealmente, el uso de una preparación de liberación controlada diseñada óptimamente en el tratamiento médico se caracteriza por un minimo de sustancia de fármaco que se emplea para curar o controlar la condición en una cantidad de tiempo minima. Las ventajas de la formulaciones de liberación controlada incluyen una actividad extendida del fármaco, frecuencia de dosis reducida y una recuperación del paciente incrementada. Además, las formulaciones de liberación controlada pueden usarse para afectar el tiempo de inicio de acción otras características tales como niveles en sangre del fármaco, y puede entonces afectar la ocurrencia de efectos secundarios (por ejemplo, adversos) . La mayoría de las formulaciones de liberación controlada están diseñadas para liberar inicialmente una cantidad de fármaco (ingrediente activo) que rápidamente produzca el efecto terapéutico deseado y continuamente libere otras cantidades de fármaco para mantener este nivel de efecto terapéutico profiláctico durante un periodo de tiempo extendido. Para mantener este nivel constante de fármaco en el cuerpo, el fármaco debe ser liberado de una forma de dosis a una velocidad que reemplace la cantidad de fármaco que esté siendo metabolizada y excretada del cuerpo. La liberación controlada de un ingrediente activo puede estimularse mediante condiciones incluyendo, pero no limitadas a, pH, temperatura, enzimas, agua u otras condiciones o compuestos fisiológicos .

Formas de dosis parenteral Las formas de dosis parenteral pueden administrarse en pacientes mediante rutas incluyendo pero no limitadas a, administración subcutánea, intravenosa, (incluyendo inyección de bolo), intramuscular e intraarterial. Debido a que su administración típicamente deriva las defensas naturales del paciente contra contaminantes, las formas de dosis parenteral son de preferencia estériles o capaces de ser esterilizadas antes de su administración a un paciente. Ejemplos de formas de dosis parenteral incluyen, pero no están limitadas a, soluciones listas para inyección, productos secos y/o liofilizados listos para ser disueltos o suspendidos en un vehículo farmacéuticamente aceptable para inyección (polvos reconstituibles) , suspensiones listas para inyección y emulsiones . Los vehículos adecuados que pueden usarse para proporcionar formas de dosis de la invención se conocen bien por los expertos en la técnica. Ejemplos incluyen, pero no están limitados a: agua para inyección USP; vehículos acuosos tales como, pero no limitados a, inyección de cloruro de sodio, inyección de Ringer, inyección de dextrosa, inyección de cloruro de sodio y dextrosa e inyección de Ringer lactada; vehículos miscibles en agua tales como, pero no limitados a, alcohol etílico, polietilenglicol y polipropilenglicol; vehículos no acuosos tales como, pero no limitados a, aceite de maiz, aceite de semilla de algodón, aceite de cacahuate, aceite de ajonjolí, oleato de etilo, miristato de isopropilo y benzoato de bencilo. Los compuestos que incrementan la solubilidad de uno o más de los ingredientes activos de la presente también se pueden incorporar en las formas de dosis parenteral de la invención.

Formas de dosis transdérmica Las formas de dosis transdérmica incluyen parches "tipo depósito" o "tipo matriz", los cuales pueden aplicarse en la piel y usarse durante un periodo de tiempo especifico para permitir la penetración de una cantidad deseada de ingredientes activos. Los excipientes adecuados (por ejemplo, vehículos y diluyentes) y otros materiales que pueden usarse para proporcionar formas de dosis transdérmica y tópica abarcadas por esta invención se conocen bien por los expertos en las técnicas farmacéuticas, y dependen del tejido particular al cual una composición farmacéutica dada o forma de dosis será aplicada. Con ese hecho en mente, los excipientes típicos incluyen, pero no están limitados a, agua, acetona, etanol, etilenglicol, propilenglicol, butano-1, 3-diol, miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, aceite mineral y mezclas de los mismos. Dependiendo del tejido especifico que se tratará, los componentes adicionales pueden usarse antes de, en conjunto con o después de tratamiento con ingredientes activos de la invención. Por ejemplo, incrementadores de penetración pueden usarse para ayudar a suministrar los ingredientes activos al tejido. Los incrementadores de penetración adecuados incluyen, pero no están limitados a: acetona; varios alcoholes tales como etanol, alcohol oleílico y tetrahidrofurilo; sulfóxidos de alquilo tales como sulfóxido de dimetilo; dimetilacetamida; dimetilformamida; polietilenglicol; pirrolidonas tales como polivinilpirrolidona; grados Kollidon (Povidona, Polividona); urea y varios esteres de azúcar solubles o insolubles en agua tales como Tween 80 (polisorbato 80) y Span 60 (monoestearato de sorbitan) . El pH de una composición farmacéutica o forma de dosis, o del tejido al cual se aplique la composición farmacéutica o forma de dosis, también se puede ajustar para mejorar el suministro de uno o más ingredientes activos. De manera similar, la polaridad de un vehículo solvente, su potencia iónica o tonicidad pueden ajustarse para mejorar el suministro. Compuestos tales como estearatos también se pueden agregar a las composiciones farmacéuticas o formas de dosis para alterar adecuadamente la hidrofilicidad o lipofilicidad de uno o más ingredientes activos para mejorar asi el suministro. A este respecto, los estearatos pueden servir como un vehículo lípido para la formulación, como un agente emulsionante o agente tensioactivo, y como un agente mejorador del suministro o mejorador de la penetración. Diferentes sales, hidratos o solvatos de los ingredientes activos pueden usarse para ajustar más las propiedades de la composición resultante.

Formas de dosis tópica Las formas de dosis tópicas de la invención incluyen, pero no están limitadas a, cremas, lociones, ungüentos, geles, emulsiones, suspensiones u otras formas conocidas por los expertos en la técnica. Véase, por ejemplo, Remington ' s Pharma ceuti cal Sciences, 18a. Ed. Mack Publishing, Easton PA (1990); e Introduction to Pharma ceutical Dosage Forms, 4a. Ed. Lea y Febiger, Filadelfia (1985) . Los excipientes adecuados (por ejemplo vehículos y diluyentes) y otros materiales que pueden usarse para proporcionar formas de dosis transdérmicas y tópicas abarcadas por esta invención se conocen b por aquellos expertos en las técnicas farmacéuticas, y dependen del tejido particular al cual será aplicada una composición o forma de dosis dada. Con ese hecho en mente, los excipientes típicos incluyen, pero no están limitados a, agua, acetona, etanol, etilenglicol, propilenglicol, butano-1, 3-diol, miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, aceite mineral y mezclas de los mismos. Dependiendo del tejido específico que será tratado, componentes adicionales pueden usarse antes de, en conjunto con o después del tratamiento con los ingredientes activos de la invención. Por ejemplo, pueden usarse mejoradores de penetración para ayudar a suministrar los ingredientes activos al tejido. Mejoradores de penetración adecuados incluyen, pero no están limitados a: acetona, varios alcoholes tales como etanol, oleilo y tetrahidrofosforilo; sulfóxidos de alquilo tales como sulfóxido de dimetilo, dimetilacetamida, dimetilformamida; polietilenglicol; pirrolidonas tales como polivinilpirrolidona; grados Kollidon (Povidona, Polividona); urea y varios esteres de azúcar hidrosolubles o insolubles en agua tales como Tween 80 (polisorbato 80) y Span 60 (monoesteratato de sorbitán).

Formas de dosis en mucosas Las formas de dosis en mucosas de la invención incluyen, pero no están limitadas a, soluciones oftálmicas, atomizaciones y aerosoles, u otras formas conocidas por alguien de capacidad en la técnica. Véase, por ejemplo, Remington ' s Pharma ceutical Sciences, 18a ed. Mack Publishing, Easton PA (1990); e In troduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 4a ed. Lea y Febiger, Filadelfia (1985). Las formas de dosis adecuadas para tratar tejidos de mucosas dentro de la cavidad oral pueden formularse como enjuagues bucales o como geles orales. En una modalidad, el aerosol comprende un vehículo. En otra modalidad, el aerosol está libre de vehículo.

Los compuestos de la fórmula I de la invención pueden administrarse también directamente al pulmón mediante inhalación. Para administración por inhalación, un compuesto de la invención puede suministrarse convenientemente al pulmón mediante un número de dispositivos diferentes. Por ejemplo, un inhalador de dosis medida ("MDI") que utiliza recipientes que contienen un propelente de baja ebullición adecuado, por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorotrifluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado se puede usar para suministrar un compuesto directamente a los pulmones. Los dispositivos MDI están disponibles de un número de proveedores tales como 3M Corporation, Aventis, boehringer Ingleheim, Forest Laboratories, Glaxo-Wellcome, Schering Plough y Vectura. Como alternativa, un dispositivo Inhalador de Polvo Seco (DPI) se puede usar para administrar un compuesto de la invención a los pulmones (véase, por ejemplo, Raleigh et al . , Proc . Amer . Assoc . Cáncer Research Annual Meeting, 1999, 40, 397, el cual se incorpora en la presente a manera de referencia) . Los dispositivos DPI usan típicamente un mecanismo tal como un chorro de gas para crear una nube de polvo seco dentro de un recipiente, el cual puede ser después inhalado por el paciente. Los dispositivos DPI también se conocen bien en la técnica y pueden comprarse de un número de vendedores que incluyen, por ejemplo, Fisons, Glaxo-Wellcome, Inhale Therapeutic Systems, ML Laboratories, Qdose y Vectura. Una variación popular es el sistema DPI de dosis múltiples ("MDDPI") , el cual permite más de una dosis terapéutica. Los dispositivos MDDPI están disponibles de compañías tales como AstraZeneca, GlaxoWellcome, IVAX, Schering Plough, SkyePharma y Vectura. Por ejemplo, pueden formularse cápsulas y cartuchos de gelatina para usarse en un inhalador o insuflador que contengan una mezcla en polvo del compuesto y una base para polvo adecuada tal como lactosa o almidón para estos sistemas. Otro tipo de dispositivo que se puede usar para suministrar un compuesto de la invención a los pulmones es un dispositivo de roció líquido suministrado, por ejemplo, por Aradigm Corporation. Los sistemas de rocío líquido usan orificios de boquilla extremadamente pequeños para aerosolizar formulaciones de fármaco liquidas que luego pueden ser inhaladas directamente al interior de los pulmones . En una modalidad preferida, se usa un dispositivo nebulizador para suministrar un compuesto de la fórmula I de la invención a los pulmones. Los nebulizadores crean aerosoles a partir de la formulaciones de fármaco liquidas usando, por ejemplo, energia ultrasónica para formar partículas finas que puedan ser fácilmente inhaladas (véase, por ejemplo, Verschoile et al . , Bri tish J. Cáncer, 1990, 80, Suppl 2, 96, la cual se incorpora en la presente a manera de referencia) . Ejemplos de nebulizadores incluyen dispositivos suministrados por Sheffield/Systemic Pulmonary Delivery Ltd. (véase, Armer et al . , patente de E.U.A. NO. 5,954,047; van der Linden et al . , patente de E.U.A. No. 5,950,619; van der Linden et al . , patente de E.U.A. No. 5,970,974, la cual se incorpora en la presente a manera de referencia) , Aventis y Batelle Pulmonary Therapeutics. En una modalidad particular preferida, se usa un dispositivo en aerosol electrohidrodinámico ("EHD") para suministrar compuestos de la invención a los pulmones. Los dispositivos de aerosol EHD usan energia eléctrica para aerosolizar soluciones o suspensiones de fármaco líquidas (véase, por ejemplo, Noakes et al . , patente de E.U.A. No. 4,765,539; Coffee, patente de E.U.A. No. 4,962,885; Coffee, solicitud de PCT WO 94/12285; Coffee, solicitud de PCT WO 94/14543; Coffee, solicitud de PCT WO 95/26234, Coffee, solicitud de PCT WO 95/26235, Coffee, solicitud de PCT WO 95/32807, las cuales se incorporan en la presente a manera de referencia) . Las propiedades electroquímicas de la formulación pueden ser parámetros importantes para optimizar cuando se suministre ese fármaco al pulmón con un dispositivo de aerosol EHD y esta optimización se lleva a cabo de rutina por alguien de capacidad en la técnica. Los dispositivos de aerosol EHD pueden suministrar de manera más eficiente fármacos en los pulmones que las tecnologías de suministro pulmonar existentes. Otros métodos de suministro intrapulmonar de los compuestos de la invención serán conocidos por el experto en la técnica y están dentro del alcance de la invención. Las formulaciones de fármaco liquidas adecuadas para usarse con nebulizadores y dispositivos de aspersión de líquidos y dispositivos de aerosol EHD típicamente incluirán un compuesto de la fórmula I de la invención con un vehículo farmacéuticamente aceptable. De preferencia, el vehículo farmacéuticamente aceptable es un líquido tal como alcohol, agua, polietilenglicol o un perfluorocarburo . Opcionalmente, otro material puede añadirse para alterar las propiedades de aerosol de la solución o suspensión del compuesto. De preferencia, este material liquido tal como un alcohol, glicol, poliglicol o un ácido graso. Otros métodos para formular soluciones o suspensiones de fármaco liquidas adecuadas para usarse en dispositivos de aerosol se conocen por los expertos en la técnica (véase, por ejemplo, Biesalski, patente de E.U.A. No. 5,112,598; Biesalski, 5,556,611, los cuales se incorporan en la presente a manera de referencia) . Un compuesto también se puede formular en composiciones rectales o vaginales tales como supositorios o edemas de retención, por ejemplo, que contengan bases para supositorio convencionales tales como manteca de cacao u otros glicéridos. Además de las formulaciones descritas previamente, un compuesto de la fórmula I de la invención también se puede formular como una preparación de depósito. Estas formulaciones de larga acción pueden administrarse mediante implantación (por ejemplo subcutáneamente o intramuscularmente) o mediante inyección intramuscular. Así, por ejemplo, los compuestos pueden formularse con materiales poliméricos o hidrofóbicos adecuados (por ejemplo, como una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio iónico, o como derivados ligeramente solubles, por ejemplo, una sal ligeramente soluble. Como alternativa, otros sistemas de suministro farmacéutico pueden emplearse. Liposomas y emulsiones son ejemplos bien conocidos de vehículos de suministro que se pueden usar para suministrar los compuestos de la fórmula I de la invención. Ciertos solventes orgánicos tales como sulfóxido de dimetilo también se pueden emplear, aungue normalmente al costo de una mayor toxicidad. Los compuestos de la invención también se pueden suministrar en un sistema de liberación controlada. En una modalidad, se puede usar una bomba (Sefton, CRC Cri t . Ref Biomed Eng. , 1987, 14, 201; Buchwald et al, Surgery, 1980, 88, 507; Saudek et al., N. Engl . J. Med. , 1989, 321, 574). En otra modalidad, se pueden usar materiales poliméricos (véase Medi cal Applica tions de Controlled Reléase, Langer and Wise (eds.), CRC Pres. Boca Ratón, Fia. (1974); Con trolled drug Bioavailabili ty, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, Nueva York (1984); Ranger y Peppas, J. Macromol . Sci . Rev. Macromol . Chem . 1983, 23, 61; véase también Levy et al. Science, 1985, 228, 190; Durging et al., Ann Neurol . , 1989, 25, 351; Howard et al., J. Neurosurg., 11 , 105, (1989). En otra modalidad más, un sistema de liberación controlada puede ser puesto en proximidad del objetivo de los compuestos de la invención, por ejemplo, el pulmón, requiriendo así de sólo una fracción de la dosis sistémica (véase, por ejemplo, Goodson en Medi cal Appli ca tions de Con trolled Reléase, citado anteriormente, vol. 2, p. 115 (1984)). Puede usarse otro sistema de liberación controlada (véase por ejemplo, Langer, Science 1990, 249, 1527). Excipientes adecuados (por ejemplo, vehículos y diluyentes) y otros materiales que pueden usarse para proporcionar formas de dosis en mucosas abarcadas por esta invención se conocen bien por los expertos en las técnicas farmacéuticas y dependen del sitio o método particular que una composición o forma de dosis dada será administrada. Con ese hecho en mente, excipientes típicos incluyen, pero no están limitados a, agua, etanol, etilenglicol, propilenglicol, butano-1, 3-diol, miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, aceite mineral y mezclas de los mismos, los cuales no son tóxicos y son farmacéuticamente aceptables. Ejemplos de estos ingredientes adicionales se conocen bien en la técnica. Véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a ed., Mack Publishing, Easton PA (1990) . El pH de una composición farmacéutica o forma de dosis, o del tejido al cual se aplique la composición farmacéutica o forma de dosis, también se puede ajustar para mejorar el suministro de uno o más ingredientes activos. En forma similar, la polaridad de un vehículo solvente, su fuerza iónica o tonicidad puede ajustarse para mejorar el suministro. Compuestos tales como estearatos también se pueden añadir a composiciones farmacéuticas o formas de dosis para alterar adecuadamente la hidrofilicidad o lipofilicidad de uno o más ingredientes activos para mejorar asi el suministro. A este respecto, estearatos pueden servir como un vehículo líquido para la formulación, como un agente emulsionante o tensioactivo, y como un agente mejorador de suministro o mejorador de penetración. Diferentes sales, hidratos o solvatos de los ingredientes activos pueden usarse para ajustar más las propiedades de la composición resultante .

Kits La invención proporciona un empaque o kit farmacéutico que comprende uno o más recipientes que comprenden un compuesto de la fórmula I, compuesto de la fórmula II u otro compuesto de la invención útil para el tratamiento o prevención de una infección por virus de la hepatitis C. En otras modalidades, la invención proporciona un empaque o kit farmacéutico que comprende uno o más recipientes que comprenden un compuesto de la invención útil para el tratamiento de una infección por virus de la hepatitis C y uno o más recipientes que comprenden un agente terapéutico adicional, incluyendo pero no limitados a aquellos listados arriba, en particular un agente antiviral, un interferón, un agente que inhibe enzimas virales o un agente que inhibe la replicación viral, de preferencia el agente terapéutico adicional es especifico para HCV o demuestra actividad anti-HCV. La invención proporciona también un empaque o kit farmacéutico que comprende uno o más recipientes que comprenden uno o más de los ingredientes de las composiciones farmacéuticas de la invención. Opcionalmente asociados con estos recipientes puede estar una notificación en forma prescrita por una agencia gubernamental que regule la fabricación, uso o venta de productos farmacéuticos o biológicos, notificación que refleje la aprobación por la agencia de fabricación, uso o venta para administración a humanos .

Los agentes de la invención pueden prepararse usando las rutas de reacción y esquemas de sintesis como los descritos a continuación, empleando las técnicas generales conocidas en la técnica usando materiales de partida que estén fácilmente disponibles. La síntesis de compuestos no ejemplificados de acuerdo con la invención se puede llevar a cabo exitosamente por modificaciones aparentes para aquellos expertos en la técnica, por ejemplo, al proteger adecuadamente grupos que interfieran, al cambiar a otros agentes adecuados conocidos en la técnica o al hacer modificaciones de rutina a las condiciones de reacción. como alternativa, otras reacciones descritas en la presente o generalmente conocidas en la técnica serán reconocidas como teniendo aplicabilidad para preparar otros compuestos de la invención.

Preparación de los compuestos En los esquemas de reacción descritos a continuación, a menos que se indique lo contrario todas las temperaturas se muestran en grados Celsius y todas las partes y porcentajes son en peso. Los reactivos se compraron de proveedores comerciales tales como Aldrich Chemical Company y se usaron sin purificación adicional a menos que se indique lo contrario. Tetrahidrofurano (THF) y N, N-dimetilformamida (DMF) se compraron de Aldrich en botellas Sure Seal y se usaron como se recibieron. Las reacciones mostradas abajo se hicieron generalmente bajo una presión positiva de argón a una temperatura ambiente (a menos que se indique lo contrario) en solventes anhidros. Los productos de vidrio se secaron en horno y/o se secaron con calor. Las reacciones se ensayaron mediante TLC y/o analizaron por LC-EM y concluyeron como lo juzga el consumo del material de partida. La cromatografía de capa delgada analítica (TLC) se llevó a cabo en placas de vidrio precubiertas con gel de silice 60 F254 placas de 0.25 mm (EM Science) y se visualizó con luz UV (254 nm) y/o se calentó con ácido fosfomolíbdico etanólico comercial. La cromatografía de capa delgada (TLC) preparativa se llevó a cabo en placas de vidrio precubiertas con gel de sílice 60 F254 0.5 mm placas (20 x 20 cm, de Thomson Instrument Company) y se visualizaron con luz UV (254 nm) . Los tratamientos se hicieron típicamente al duplicar el volumen de reacción con el solvente de reacción o solvente de extracción y luego lavando con las soluciones acuosas indicadas usando 25% en volumen del volumen de extracción a menos que se indique lo contrario. Las soluciones de productos se secaron sobre Na2S04 y/o Mg2S04 anhidro antes de la filtración y evaporación de los solventes bajo presión reducida en un evaporador giratorio y se indicaron como solventes removidos al vacio. La cromatografía en columna se completó bajo presión positiva usando gel de sílice de 230-400 mallas. Los espectros de 1H-RMN se registraron en un instrumento Varian Mercury-VX400 que operaba a 400 MHz. Los espectros de RMN se obtuvieron como soluciones de CDC13 (reportados en ppm) , usando cloroformo como la norma de referencia (7.27 ppm y 77.00 ppm para carbono), CD30D (3.4 y 4.8 pm para los protones y 49.3 ppm para carbono), DMS0-d6 (2.49 ppm para protón), o internamente tetrametilsilano (0.00 ppm) cuando fuera adecuado. Otros solventes de RMN se usaron como se requiriera. Cuando se reportan multiplicidades pico, las siguientes abreviaturas se usan: s (singulete), d (doblete) , t (triplete) , q (cuarteto) , m (multiplete) , br (ampliado), dd (doblete de dobletes), dt (doblete de tripletes). Las constantes de acoplamiento, cuando se dan, se reportan en Hertz (Hz) . Los espectros de masa reportados son ( + )-ES LC/MS conducidos por el departamento de química analítica de Anadys Pharmaceuticals, Inc. Las vias sintéticas descritas y los procedimientos experimentales utilizan muchas abreviaturas químicas comunes, THF (tetrahidrofurano), DMF (N, N-dimetilformamida) , EtOAc (acetato de etilo) , DMSO (sulfóxido de dimetilo) , ACN (acetonitrilo), EtOH (etanol), EDC (clorhidrato de l-(3-dimetilaminopropil) -3-etilcabodiimida) , HATU (hexafluorofosfato de 0- (7-azabenzotriazol-l-il) -1, 1, 3, 3-tetrametiluronio) , TFA (anhidrido trifluoroacético) , DIEA (diisopropiletilamina), BOC (ter-butoxicarbonilo), LDA (litio diisopropilamina), KOBu (ter-butóxido de potasio), NaOAc (acetato de sodio) , NaOEt (etóxido de sodio) , Py (piridina) , DBU (1, 8-diazaciclo [5.4.0] undec-7-eno) , HBTU (hexafluorofosfato de O-benzotriazol-1-il-N, N,N' , N' -tetrametiluronio) , TEA (trietilamina) , MeOH (metanol) , DCM (diclorometano), DMA (dimetilacetamida), DCC (N,N-diciclohexilcarbodiimida) , HPLC (cromatografia de líquidos de alta presión) , TLC (cromatografia de capa delgada) y similares . Los Métodos 1-6 proporcionan procedimientos generales que se pueden usar para preparar compuestos listados en la tabla 1. Método 1: Esquema de reacción 1 proporciona un procedimiento general que fue usado para preparar compuestos de la fórmula I .

Esquema de reacción 1 En una ruta sintética típica, éster alfa-ceto 1 se puede tratar con hidrazina 2 para formar hidrazona 3. Véase, por ejemplo, J. Heterocyclic Chem . , 26(3), 619-24 (1989); Solicitud de patente europea, 331061 (Sept 1989) ; J. Chem . Soc . Perkin Trans . 1 : Organi c y Bio-Organic Chem . (1972-1999) , (10) , 2721-8 (1988) . El mezclado de los intermediarios clave de 3 y 4 seguido por fusión a una temperatura en el intervalo de 140-200 °C sin solvente puede dar la molécula objetivo deseada 5.

Ejemplo 1-1 Esquema de reacción la describe la sintesis del compuesto 5a Esquema de reacción la En este ejemplo especifico, éster alfa-ceto la (2.02 g, 12.3 mmoles) se mezcló con oxalato de n-butilhidrazina (2a) (3.3 g, 18.5 mmoles), CH3C02Na (1.5 g, 18.5 mmoles) y 40 mL de MeOH. La mezcla se calentó a reflujo durante 1.5 horas. El análisis LC-EM de la mezcla de reacción confirmó la finalización de la reacción. El sólido inorgánico se filtró y se lavó con MeOH (20 mL x 2) . El material filtrado se concentró bajo vacío reducido. La extracción de líquido-líquido se llevó a cabo entonces usando EtOAc (30 mL x 3) y H20 (20 mL) . La capa orgánica se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía de vaporización instantánea sobre gel de sílice para dar el producto puro deseado (3a) (1.91 g, 66% de rendimiento aislado) como un aceite amarillo como una mezcla de isómeros Z- y E-. LC-EM (ESI+) : m/e = 235.1 [M+l]+ (em exacto: 234.14). XH RMN (400 MHz, CDC13) : d 7.22-7.51 (m, 5H) , 3.81 (s, 3H, 65 %), 3.79 (s, 3H, 35 %), 3.55 (t, 2H, 65%, J= 7.2 Hz), 3.43 (t, 2H, 35 %, J= 7.4 Hz), 1.62-1.70 (en, 2H, 65 %), 1.49-1.57 (m, 2H, 35 %), 1.38-1.47 (m, 2H, 65 %), 1.24-1.35 (m, 2H, 35 %), 0.97 (t, 3H, 65 %, J= 7.4 Hz), 0.91 (t, 3H, 35 %, J= 7.4 Hz) . La condición de reacción para esta etapa se describió en la patente de E.U.A. No. 6,355,796, en donde una cetona se hizo reaccionar con hidroxilamina. El compuesto 4a (894.2 mg, 3 mmoles) se mezcló con el compuesto de arriba 3a (702.9 mg, 3 mmoles) . La mezcla sólida se calentó a 160 °C bajo N2 con agitación durante 6 horas. LC-EM indicó reacción incompleta. Extender el calentamiento a la misma temperatura durante 3 horas adicionales no mejoró la conversión. El material crudo se purificó mediante purificación de HPLC usando un gradiente de ACN y agua para dar el producto puro deseado (5a) (73.8 mg) . Algo del material de inicio de 4a (213.4 mg) se recuperó durante la purificación de HPLC. LC-EM (ESI+) : m/e = 455.3 [M+l]+ (em exacto: 454.13); XH RMN (400 MHz, CDC13) : d 7.77-7.79 (m, 2H) , 7.45-7.47 (m, 3H) , 7.38 (d, ÍH, J= 2.4 Hz), 7.23 (d, ÍH, J= 8.8 Hz), 7.19 (dd, ÍH, 9. 2 Hz, J2 = 2.4 Hz), 4.27 (t, 2H, J= 7.4 Hz), 3.88 (s, 3H) , 1.82-1.89 (m, 2H) , 1.38-1.47 (m, 2H) , 0.99 (t, 3H, J= 7.4 Hz).

Método 2: El esquema de reacción 2 proporciona un procedimiento general que fue usado para preparar compuestos de la fórmula I.

Esquema de reacción 2 En una ruta sintética típica, un éster alfa-ceto 1 se trata con carbazato de ter-butilo (6) en presencia de ácido acético bajo reflujo en EtOH para dar hidrazona 7. Hidrazona 7 se alquiló adicionalmente para formar el intermediario clave 9 mediante tratamiento con bromuro 8 en presencia de base. Véase Lawton et al . , J. Chem . Soc . Perkin Trans . 1 , 885-897 (1987) . Al mezclar los intermediarios de 9 y 4 seguido por fusión a una temperatura en el intervalo de 140-200 °C puede dar el producto ciclizado 5.

Ejemplo 2-1 Esquema de reacción 2a describe la sintesis del compuesto 5b Esquema de reacción 2a En este ejemplo específico, éster alfa-ceto (lb) |1.0 g, 5.61 mmoles) se mezcló con carbazato de ter-butilo [6) (742 mg, 5.61 mmoles), 150 µL de ácido acético y 15 mL de EtOH. La mezcla se calentó a 60 °C durante 3 horas. El resultado de LC-EM confirmó la finalización de la reacción y el producto (7a) contiene tanto la forma de isómero E- como Z-. Al dejar reposar a temperatura ambiente, se precipitaron cristales blancos de la solución. La solución estándar se decantó y los cristales restantes se secaron bajo presión reducida para dar el producto puro deseado (7a) el cual se usó directamente en la siguiente etapa. LC-EM (ESI+) : m/e = 293.2 [M+l]+ (em exacto: 292.14). Hidrazona 7a (949.8 mg, 3.24 mmoles) se mezcló con bromuro de isoamilo (8a) (390 µL, 3.24 mmoles), K2C03 (2.2 g, 16.2 mmoles), DMF (3 mL) y THF (3 mL) . La mezcla se agitó a 80 °C durante 17 horas. El sólido inorgánico se filtró y se lavó con THF. El material filtrado se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografia de vaporización instantánea sobre gel de silice para dar 440 mg del producto deseado 9a en 37.5% de rendimiento aislado. LC-EM (ESI): m/e = 363.2 [M+l]+ (em exacto: 362.22). El compuesto 9a (285.1 mg, 0.787 mmoles) se mezcló con el compuesto 4a (235 mg, 0.787 mmoles) . La mezcla sólida se calentó a 160 °C bajo N2 durante 7 horas. El material crudo se purificó mediante cromatografía de vaporización instantánea usando un gradiente de EtOAc y hexano para dar el producto puro deseado 5b (17.1 mg) como un aceite amarillo. LC-EM (APCI+) : m/e = 469.2 [M+l]+ (em exacto: 468.13). XH RMN (400 MHz, CDC13) : 7.80-7.82 (m, 2H) , 7.47-7.50 (m, 3H) , 7.41 (d, ÍH, J= 2.8 Hz), 7.27 (d, ÍH, J= 8.8 Hz), 7.22 (ÍH, dd, J1 = 9.0 Hz, J2 = 2.6 Hz), 4.32 (t, 2H, J= 7.2 Hz), 3.91 (s, 3H) , 1.76-1.81 (m, 2H) , 1.66-1.76 (m, ÍH) , 1.03 (d, 6H, J= 6.8 Hz) .

Ejemplo 2-2: Esquema de reacción 2b describe la sintesis del compuesto 5c ^^ Esquema de reacción 2b 2- (2-Ciclopropil-etil) -5-hidroxi-4- (7-metoxi-l, 1-dioxo-1, 2-dihidro-l?6-benzo [l,2,4]tiadiazin-3-il)-6-tiofen-2-il-2H-piridazin-3-ona (5c) En este ejemplo especifico, el compuesto 9b se hizo de la misma forma que la del compuesto 9a. El compuesto 9b (654.2 mg) se mezcló con el compuesto 4a (533.8 mg) y se calentó a 160 °C sin solvente bajo atmósfera de N2 durante 1 hora seguido por calentamiento a 185 °C durante 3 h. El producto crudo se purificó mediante cromatografia de vaporización instantánea sobre gel de silice usando un gradiente de acetato de etilo y hexano (0-100 % EtOAc en hexano) para dar el producto deseado 5c (86.5 mg) en 10.2% de rendimiento aislado. XH RMN (400 MHz, CDC13) : d 7.98 (d, ÍH, J= 3.2 Hz), 7.44 (d, ÍH, J= 4.8 Hz), 7.41 (d, 1 H J= 2.4 Hz), 7.19-7.26 (m, 2H) , 7.13 (t, ÍH, J= 4.4 Hz), 4.36 (t, 2H, J= 7.0 Hz), 3.90 (s, 3H) , 1.78 (q, 2H, J= 7.0 Hz), 0.72-0.80 (m, ÍH), 0.47-0.51 (m, 2H) , 0.065-0.102 (m, 2H) ; LCMS (ESI+) : m/e = 473.1 [M+l]+ (EM exacto: 472.09). 2- (2-Ciclopropil-etil) -5-hidroxi-4- (7-hidroxi-l , 1-dioxo-1, 2-dihidro-l?6-benzo [l,2,4]tiadiazin-3-il)-6-tiofen-2-il-2H-piridazin-3-ona (5d) El compuesto 9b (203 mg) se mezcló con el compuesto 4b (131.2 mg) y se calentó a 160 °C sin solvente bajo atmósfera de N2 durante 4 h. El producto crudo se purificó mediante cromatografia de vaporización instantánea sobre gel de sílice usando un gradiente de acetato de etilo y hexano (0-100 % EtOAc en hexano) para dar el producto deseado 5d (9.11 mg) en 4.3% de rendimiento aislado y se recuperó el material de inicio de 9b (115.8 mg) . ?H RMN (400 MHz, DMSO- d6) : d 10.40 (s, br, ÍH) , 7.91 (d, ÍH, J= 3.6 Hz), 7.68 (d, ÍH, J= 4.8 Hz), 7.52 (d, 1 H J= 9.2 Hz), 7.14-7.17 (m, 3H) , 4.23 (t, 2H; J= 7.0 Hz), 1.69 (q, 2H, J= 7.0 Hz), 0.70-0.80 (m, ÍH) , 0.38-0.44 (m, 2H) , 0.02-0.06 (m, 2H) ; LC-EM (ESI+) : m/e = 459.25 [M+l]+ (EM exacto: 458.07).

Los siguientes compuestos de la fórmula I se hicieron también en una forma análoga al procedimiento descrito en Método 2, excepto con los materiales de inicio adecuados . 2-{3- [5-Hidroxi-2- (3-metil-butil) -3-oxo-6-tiofen-2-il-2, 3-dihidro-piridazin-4-il] -1, 1-dioxo-1, 2-dihidro-l?6-benzo [1, 2, 4 ] tiadiazin-7-iloxi } -acetamida : XH RMN (400 MHz, CD3OD) : d 7.96 (m, ÍH) , 7.30-7.44 (m, 4H) , 7.06-7.08 (m, 1 H) , 4.58 (s, br, 2H) , 4.10-4.26 (m, 2H) , 1.62-1.78 (m, 3H) , 1.01 (d, 6H, J= 6.0 Hz); LC-EM (ESI+) : m/e = 518.3[M+1]+ (EM exacto: 517.11). 2- (2-Ciclopropil-etil) -5-hidroxi-4- (7-metoxi-l, 1-dioxo-1, 2-dihidro-l?6-benzol [l,2,4]tiadiazin-3-il)-6-tiofen-2-il-2H-piridazin-3-ona: XH RMN (400 MHz, CDC13) : d 7.98 (d, ÍH, J= 3.2 Hz) , 7.44 (d, ÍH, J= 4.8 Hz), 7.41 (d, 1 H J= 2.4 Hz) , 7.19-7.26 (m, 2H) , 7.13 (t, ÍH, J= 4.4 Hz), 4.36 (t, 2H, J= 7.0 Hz), 3.90 (s, 3H) , 1.78 (q, 2H, J= 7.0 Hz), 0.72-0.80 (m, ÍH) , 0.47-0.51 (m, 2H) , 0.065-0.102 (m, 2H) ; LC-EM (ESI+) : m/e = 473.1 [M+l]+ (EM exacto: 472.09). 2- (2-Ciclopropil-etil) -5-hidroxi-4- (7-hidroxi-l , 1-dioxo-1, 2-dihidro-l?6-benzol [1,2,4] tiadiazin-3-il) -6-tiofen- 2-il-2H-piridazin-3-ona: XH RMN (400 MHz, DMSO-d6) : d 10.40 (s, br, IH) , 7.91 (d, ÍH, J= 3.6 Hz), 7.68 (d, ÍH, J= 4.8 Hz), 7.52 (d, 1 H J= 9.2 Hz) , 7.14-7.17 (m, 3H) , 4.23 (t, 2H, J= 7.0 Hz) , 1.69 (q, 2H, J= 7.0 Hz) , 0.70-0.80 (m, ÍH) , 0.38-0.44 (m, 2H) , 0.02-0.06 (m, 2H) ; LC-EM (ESI + ) : m/e = 459.25 [M+l]+ (EM exacto: 458.07) . 2-Bencil-5-hidroxi-4- (7-metoxi-l, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzol [l,2,4]tiadiazin-3-il)-6-fenil-2H-piridazin-3-ona: XH RMN (400 MHz, CDC13) : d 7.99-8.02 (m, ÍH) , 7.40- 7.45 (m, 2H) , 7.267.38 (m, 4H) , 7.16-7.24 (m, 3H) , 7.13-7.15 (m, ÍH) , 5.42 (s, 2H) , 3.91 (s, 3H) ; LCMS (ESI): m/e = 495.1 [M+l]+ (EM exacto: 494.07). 2-Bencil-5-hidroxi-4- (7-hidroxi-l, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzol [1,2,4] tiadiazin-3-il) -6-tiofen-2-il-2H-piridazin-3-ona: XH RMN (400 MHz, DMSO-d6) : d 7.90 (dd, ÍH, J2= 4 . 0 Hz, J2 =1.2 Hz), 7.66 (m, ÍH) , 7.45 (d, ÍH, J= 9.2 Hz), 7.24-7.38 (m, 5H) , 7.10-7.16 (m, 3H) , 5.32 (s, 2H) ; LC-EM (ESI+) : m/e = 481.0 [M+1]+(EM exacto: 480.06). 2- [3- (2-Bencil-5-hidroxi-3-oxo-6-tiofen-2-il-2, 3-dihidro-piridazin-4-il) -1, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzol [l,2,4]tiadiazin-7-iloxi) -acetamida : XH RMN (400 MHz, DMSO-d6) : d 7.90 (dd, ÍH, J2= 3.6 Hz, J2 = 0.8 Hz), 7.67 (d, ÍH, J= 5.2 Hz) , 7.61 (s, br, ÍH) , 7.57 (d, ÍH, J= 8.8 Hz), 7.25-7.41 (m, 6H) , 7.15 (dd, ÍH, J:= 4 . 4 Hz, J2 = 3.6 Hz), 5.33 (s, 2H) , 4.56 (s, 2H) ; LC-EM (ESI): m/e = 538. 1 [M+1]+(EM exacto: 537.08). 2- (2-Cloro-6-fluoro-bencil) -5-hidroxi-4- (7-metoxi-1, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzol [1,2,4] tiadiazin-3-il) -6-tiofen-2-il-2H-piridazin-3-ona XH RMN (400 MHz, CDC13) : d 7.85-7.90 (m, ÍH) , 7.18-7.44 (m, 5H) , 7.037.12 (m, 3H) , 5.58 (s, 2H) , 3.91 (s, 3H) ; LC-EM (ESI+) : m/e = 547.2 [M+l ]+(EM exacto: 546.02). 2- (2-Cloro-6-fluoro-bencil) -5-hidroxi-4- (7-hidroxi-1, 1-dioxo-1, 2-dihidro-l?6-benzol [1,2,4] tiadiazin-3-il) -6-tiofen-2-il-2H-piridazin-3-ona XH RMN (400 MHz, DMSO-d6) : d 10.2 (s, br, ÍH) , 7.70 (d, ÍH, J= 3.2 Hz), 7.53 (d, ÍH, J= 4.4 Hz) , 7.41-7.46 (m, ÍH) , 7.37 (d, 2H, J= 8 Hz), 7.27 (t, ÍH, J= 8 Hz), 7.04-7.10 (m, 3H) , 5.38 (s, 2H) ; LC-EM (ES1+) : m/e = 533.04 [M+1] + (EM exacto: 532.01) . 5-Hidroxi-4- (7-metoxi-l, 1-dioxo-l, 2-dihidro—l?6-benzol [1,2, 4] tiadiazin-3-il) -2- (3-metil-butil) -6- ( 1-metil-lH-pirrol-2-il) -2H-piridazin-3-ona LC-EM (ESI+) : m/e = 472.30 [M+l]+ (em exacto: 471.16); XH RMN (400MHz, CDC13) : d 7.42 (d, ÍH, J= 2.8 Hz) , 7.27 (m, ÍH) , 7.21 (m, ÍH) , 6.92 (dd, ÍH, J= 3.6, 2.0 Hz), 6.81 (t, ÍH, J = 2.0 Hz), 6.26 (m, ÍH) , 4.28 (m, 2H) , 3.92 (s, 3H) , 3.84 (s, 3H) , 1.75 (m, 3H) , 1.01 (d, 6H, J= 6.4 Hz).

Método 3: El esquema de reacción 3 proporciona un procedimiento general que fue usado para preparar compuestos de la fórmula I .

Esquema de reacción 3 En la ruta sintética mostrada en el esquema de reacción 3, hidrazona 3 se puede tratar con ácido carboxilico 10 o con 10 activado ín si tu al añadir reactivos de activación tales como HBTU, HATU, DCC o mediante intermediario de cloruro de ácido u otros métodos de acoplamiento de amida conocidos en la técnica para formar el intermediario clave 11. Véase, por ejemplo, Lawton et al . , J. Chem . Soc . Perkin Trans . 1 , 885-897 (1987). El compuesto 11 se puede transformar en el compuesto del titulo 5 mediante ciclización intra-molecular usando bases tales como, pero no limitadas a, NaOEt, KO^u, KOH, NaH, o LDA.

Ejemplo 3-1 Esquema de reacción 3a describe la sintesis de los compuestos de 5e, 5f y 5g.

Esquema de reacción 3a Éster etílico de ácido 2- (butil-hidrazono) -3-metil-butírico (3b) : A una solución de éster etílico de ácido 3-metil-2-oxo-butirico (lc) (1.88 g, 13.04 mmoles) en 45 mL de CHC13, se le añadió sal oxalato de butil-hidrazina (2.11 g, 11.85 mmoles) seguido por NaOAc (1.94 g, 23.4 mmoles) y MgS04 (1.43 g, 11.88 mmoles) . La mezcla se calentó a reflujo durante 3.5 horas bajo atmósfera de N2 con agitación. Después de enfriarse, el sólido se filtró y el material filtrado se concentró bajo vacio reducido. El residuo se limpió primero por medio de una extracción entre EtOAc (50 mL x 3) y H20 (20 mL) . La capa orgánica se concentró bajo presión reducida y se secó bajo alto vacio durante la noche para dar 2.17 g del producto crudo (3b) en 85.4% de rendimiento como una mezcla de los isómeros E- y Z-. Este producto crudo se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LC-EM (ESI+) : m/e = 215.4 [M+l]+, 237.1 [M+Na]+ (em exacto: 214.17). Éster etílico de ácido 2- {butil- [2- (7-metoxi-l, 1-dioxo-1, 4-dihidro-116-benzo [l,2,4]tiadiazin-3-il)-acetil]-hidrazono} -3-metil-butirico (lia) : A una solución de éster etílico de ácido 2- (butil-hidrazono) -3-metil-butirico (3b) (79 mg, 0.37 mmoles) y ácido (1, 1-dioxo-1, 4-dihidro-116-benzo[l,2, 4] tiadiazin-3-il) -acético (10a) (100 mg) en 0.4 mL de DMF anhidro y 2 mL de cloruro de metileno anhidro, se le añadió una solución de 1, 3-diciclohexil-carbodiimida (DCC) (76.3 mg) en 0.4 mL de cloruro de metileno y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El sólido se filtró y el material filtrado se concentró bajo presión reducida, se le añadió H20 (10 mL) , se extrajo con EtOAc (20 mL x 3). El producto crudo se purificó entonces mediante cromatografía de vaporización instantánea sobre gel de sílice para dar el producto deseado (lia) (102.8 mg) y el producto ciclizado adicionalmente (5e) (9.5 mg) en rendimiento total de 65.7%. LC-EM (ESI+) : m/e = 467.0 [M+l]+ (em exacto: 466.19). 2-Butil-5-hidroxi-6-isopropil-4- (7-metoxi-l, 1-dioxo-1, 2-dihidro-l?6-benzo [1, 2, 4] tiadiazin-3-il) -2H-piridazin-3-ona (5e) : A una solución de éster etílico de ácido 2-{butil-[2- ( 7-metoxi-1, 1-dioxo-1, 4-dihidro-116-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -acetil] -hidrazono} -3-metil-butírico (11 a) (68.9 mg, 148 µmol) en 1.1 mL de ter-butanol, 1.0 M de KO' u en ter-butanol (370 µL, 370 pmol) y la mezcla resultante se batió a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se enfrió rápidamente con HCl l.OM en H20 (370 µL) , se le añadió 3 mL de salmuera, se extrajo con cloruro de metileno (5 mL x 2) y EtOAc (5 mL x 3), se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró al vacío y se purificó adicionalmente mediante cromatografía de vaporización instantánea sobre gel de sílice para dar el producto deseado (5e) (37.1 mg) en 59.6% de rendimiento. Este producto se hizo en múltiples lotes y the rendimiento aislado varío de 59 % a 81 %. LC-EM (ESI+) : m/e = 421.1 [M+l]+ (em exacto: 420.15). 1H RMN (400 MHz, CDC13) : 87.39-7.40 (m, ÍH) , 7.17-7.26 (m, 2 H) , 4.19 (t, 2H, J= 7.2 Hz), 3.90 (s, 3H) , 3.32 (m, J= 6.8 Hz, ÍH) , 1.80 (m, 2H, J= 7.6 Hz), 1.40 (m, 2H, J= 7.6 Hz), 1.27 (d, 6H, J= 6.8 Hz), 0.99 (t, 3H, J= 7.4 Hz) . 2-Butil-5-hidroxi-4- (7-hidroxi-l, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -6-isopropi1-2H-piridazin-3-ona (5f) : 2-Butil-5-hidroxi-6-isopropil-4- (7-metoxi-l, 1-dioxo-l,2-dihidro-l?6-benzo[l,2,4] tiadiazin-3-il) -2H-piridazin-3-ona (5e) (56 mg) se disolvió en 3 mL de cloruro de metileno. Se le añadió BBr3 (466 µL, 1.0 M en cloruro de metileno) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1.5 horas. El resultado LC-EM mostró que la reacción no estaba completa. Se le añadió BBr3 (0.5 mL, 1.0 M) y la mezcla de reacción se continuó batiendo a temperatura ambiente durante la noche. LC-EM confirmó que la reacción estaba cerca de completarse. La mezcla de reacción se vertió en hielo (10 mL) , se extrajo con CHC13 (20 mL x 3) . La capa orgánica se secó sobre MgS0 , se filtró, se concentró bajo presión reducida y se purificó adicionalmente mediante cromatografia de vaporización instantánea sobre gel de silice para dar el producto deseado (5f) (42.2 mg) en 78.0% de rendimiento. XH RMN (400 MHz, CDC13) : d 7.46 (d, ÍH, J= 2.8 Hz), 7.16-7.26 (m, 2 H) , 4.20 (t, 2H, J= 7.2 Hz) , 3.34 (m, J= 6.8 Hz, ÍH), 1.81 (m, 2H) , 1.41 (m, 2H) , 1.29 (d, 6H, J= 6.8 Hz), 1.00 (t, 3H, J= 7.4 Hz); LC-EM (ESI+) : m/e - 407.1 [M+l] + (EM exacto: 406.13) . 2- [3- (2-Butil-5-hidroxi-6-isopropil-3-oxo-2 , 3-dihidro-piridazin-4-il) -1, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzol [1,2,4] tiadiazin-7-iloxi] -acetamida (5g) : A una solución de 2-butil-5-hidroxi-4- (7-hidroxi-1, 1-dioxo-1, 2-dihidro-l?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -6-isopropil-2H-piridazin-3-ona (5f) (38.7 mg, 95.2 µmol) en DMF anhidro (4 mL) , se le añadió 2-bromo-acetamida (14.5 mg, 104.7 µ.mot) seguido por K2C03 (39.5 mg, 285.6 µmol). La mezcla resultante se calentó a 80 °C durante la noche con agitación. La mezcla de reacción se concentró bajo vacio reducido y el residuo se purificó mediante cromatografia de vaporización instantánea sobre gel de silice para dar el producto deseado (5g) (21.7 mg) en 49.2 % de rendimiento. 1H RMN (400 MHz, DMS0-d6) : d 7.63-7.66 (m, ÍH) , 7.62 (br, 1 H) , 7.40 (br, ÍH) , 7.34-7.39 (m, 2 H) , 4.58 (s, 2H) , 4.10 (m, 2H) , 3.23 (m, ÍH, J= 6.8 Hz) , 1.72 (m, 2H, J= 7.2 Hz), 1.32 (m, 2H, J= 7.2 Hz), 1.21 (d, 6H, J= 6.4 Hz), 0.91 (t, 3H, J= 7.2 Hz); LC-EM (ES1+): m/e = 464.1 [M+l]+ (EM exacto: 463.15).

Ejemplo 3-2 Esquema de reacción 3b describe la sintesis de los compuestos de 5j y 5k.

Esquema de reacción 3b Éster etílico de ácido 3-metil-2-l (3-metil-butil) -hidrazono] -butírico (3c) : 11 A una solución de 2b (2.00 g, 10.4 mmoles) disuelto en EtOH (55 mL) se le añadió 2-oxobutirato de etil-3-metilo (lc) (1.7 mL, 1.1 mmoles) . La solución se calentó 4 horas a 80 °C, se enfrió a temperatura ambiente, y se concentró al vacio. La mezcla cruda se disolvió en H20 (100 mL) y se extrajo con EtOAc (100 mL) . La capa orgánica se secó sobre MgS04 y se concentró al vacio. La mezcla cruda se purificó mediante cromatografia de vaporización instantánea sobre gel de silice (0-6% EtOAc/hexanos) para dar 3c (1.0 g, 43 %) como un aceite transparente. LC-EM (ESI) m/e 229 [M+H]+ (EM exacto: 228.18) . 4- (1, 1-Dioxo-l, 4-dihidro--l?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -5-hidroxi-6-isopropi1-2- (3-metilbutil) -1, 6-dihidro-2H-piridazin-3-ona (5h) : N,N'-Diciclohexilcarbodiimida (0.447 g, 2.17 mmoles), el compuesto 10b (0.520 g, 2.17 mmoles), y 3c (0.494 g, 2.17 mmoles) se disolvieron en CH2C12 (12 mL) y DMF (2 mL) . Después de la agitación a temperatura ambiente durante la noche, se le añadió trietilamina (0.95 mL, 6.83 mmoles) a la solución. Después de agitar 90 min a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtró, y se concentró al vacio. La mezcla de reacción se purificó mediante cromatografia de vaporización instantánea sobre gel de silice (0-5% McOH/CH2Cl2) para dar 5h (0.413 g, 47 %) como un sólido blanco. XH RMN (400MHz, D6-DMSO) d 9.91 (br s, 1 H) , 7.90 (d, J= 10 Hz, 1 H), 7.75 (t, J= 8 Hz, 1 H) , 7.63 (d, J=10 Hz, 1 H) , 7.54 (t, J= 10 Hz, 1 H) , 4.14 (m, 2 H) , 3.32 (t, J= 8 Hz, 2 H) , 1.65-1.55 (m, 2 H) , 1.15 (d, J= 8 Hz, 6 H) , 0.87 (d, J= 6.4 Hz, 6 H) . MS (ESI+) m/e 405 [M+H]+. 5-Hidroxi-6-isopropil-2- (3-metil-butil) -4- (7-nitro-1, 1-dioxo-1, 4 -dihidro-l?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -2H-piridazin-3-ona (5i) : A una solución de 5h (0.097 g, 0.025 mmoles) en H2S04 conc. (0.65 mL) enfriado en baño con hielo se le añadió HN03 conc (0.10 mL) . Después de agitar 30 min a 0°C, la mezcla de reacción se vertió en hielo triturado (1.5 g) . El precipitado resultante se recolectó mediante filtración para dar 5i (0.091 g, 85 %) como un sólido amarillo. XH RMN (400MHz, Dg-DMSO) d 13.90 (s, 1 H) , 8.57 (d, J= 2.8 Hz, 1 H) , 8.49 (dd, J= 9.2, 2.8 Hz, 1 H) , 7.82 (d, J= 8.8 Hz, 1 H) , 4.11 (t, J= 6.8 Hz, 2 H) , 3.23 (m, 2 H) , 1.61 (m, 2 H) , 1.21 (d, J= 8 Hz, 6 H) , 0.93 (d, J= 8 Hz, 6 H) . MS (ESI) m/e 450 [M+H]+. 4- ( 7-Amino-1, 1-dioxo-l, 4-dihidro-l?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -5-hidroxi-6-isopropi1-2- (3-metil-butil) -2H-piridazin-3-ona (5j) : A una solución de 5i (0.100 g, 0.22 mmoles) en MeOH (5 mL) y THF (5 mL) se le añadió níquel de Raney (0.6 mL, 50% de suspensión en H20) seguido por NH2NH2 anhidro (0.3 mL, 9.56 mmoles) . La mezcla de reacción se agitó 15 min a temperatura ambiente, se filtró usando un filtro de jeringa con membrana PTFE de 0.2 µm, y se concentró al vacio. La mezcla cruda se purificó mediante cromatografía en columna de vaporización instantánea usando gel de sílice se eluyó con 0-3% MeOH / CH2C12 para dar 5j (0.072 g, 77 %) como un sólido rojo. 1H RMN (400MHz, D6-DMSO) d 7.0 (br s, 1 H) , 6.93 (s, 1 H) , 6.79 (d, J = 2.8 Hz, 1 H) , 6.76 (d, J = 2.4 Hz), 5.33 (br s, 2 H) , 3.86 (t, J= 6.8 Hz, 2 H) , 3.22 (m, 1 H) , 1.52 (m, 3 H) , 1.08 (d, J= 7.2 Hz, 6 H) , 0.90 (d, J= 6.4 Hz, 6 H) . MS(ESI+) m/e 420 [M+H]+.

N- { 3- [5-Hidroxi-6-isopropil-2- (3-metil-butil) -3-oxo-2, 3-dihidro-piridazin-4-il] -1, 1-dioxo-l, 4-dihidro-l?6-benzo[l,2,4]tiadiazin-7-il} -benzamida (5k) : A una solución de 5j (0.048 g, 0.11 mmoles) y 4-dimetilaminopiridina (0.0014 g, 0.011 mmoles) en DMF se le añadió trietilamina (18 µL, 0.125 mmoles) seguido por cloruro de benzoilo (16 µL, 0.137 mmoles) . La mezcla de reacción se agitó 4 horas a 80 °C y se enfrió a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se trató con NaHC03 sat. (1 mL) y se extrajo dos veces con EtOAc (3 mL) . La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (1 mL) , se secó sobre MgS04, y se concentró al vacío. La mezcla cruda se purificó mediante cromatografía en columna de vaporización instantánea usando gel de sílice (0-40 % EtOAc/hexanos) para dar 5k (0.030 g, 50 %) como un sólido amarillo. XH RMN (400MHz, D5-DMSO) d 10.63 (br s), 8.45 (d, J= 2.4 Hz, ÍH) , 8.09 (dd, J= 8.8, 2 Hz, 1 H) , 8.97 (d, J= 7.2 Hz, 2 H) , 7.67 (d, J= 9.2 Hz, 1 H) , 7.60 (d, J= 7.2 Hz, 1 H) , 7.54 (t, J= 7.2 Hz, 2 H) , 4.13 (d, J= 6.8 Hz, 2 H) , 3.25 (m, 1 H) , 1.63 (m, 3 H) , 1.22 (d, J= 6.8 Hz, 6 H) , 0.93 (d, J= 6.4 Hz, 6 H) . LC-EM(ESI+) m/e 524 [M+H]+.

La anilina (5j) se puede derivar fácilmente para formar sulfonamida al hacer reaccionar el compuesto 5j con cloruro de sulfonilo. Se puede alquilar también al hacer reaccionar con cloruro o bromuro de alquilo activado. Además, la anilina 5j se puede hacer reaccionar con aldehidos mediante aminación reductiva para formar anilinas secundarias usando los métodos conocidos en la técnica.

Los siguientes compuestos de la fórmula I se hicieron también usando el Método 3. 2-Butil-5-hidroxi-6- (2-hidroxi-l, 1 -dimetil-etil) -4- (7-metoxi-l, 1-dioxo-1, 2-dihidro-l?6-benzo [l,2,4]tiadiazin-3-il) -2H-piridazin-3-ona XH RMN (400 MHz, CDC13) : d 7.38-7.41 (m, ÍH) , 7.18- 7.25 (m, 2H) , 4.18 (t, 2H, J= 6.8 Hz), 3.90 (s, 3H) , 3.84 (s, 2H), 1.76-1.85 (m, 2H) , 1.41 (s, 6H) , 1.33-1.44 (m, 2H) , 1.00 (t, 3H, J= 7.2 Hz); LC-EM (ESI): m/e = 451.0 [M+1]+(EM exacto: 450.16) . 2- { 3-15-Hidroxi-2- (3-metil-butil) -3-oxo-6-tiofen-2-Í1-2, 3-dihidro-piridazin-4ill-l, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-iloxi } -N-metil-acetamida ?H RMN (400 MHz, CDC13): d 7.99 (d, ÍH, J= 4 Hz), 7.43-7.50 (m, 2H) , 7.32 (d, ÍH, J= 9.2 Hz), 7.22-7.28 (m, ÍH) , 7.14 (t, ÍH, J= 4.6 Hz), 6.53 (s, br, ÍH) , 4.58 (s, 2H) , 4.30 (t, 2H, J= 7.2 Hz), 2.96 (d, 3H, J= 4.8 Hz), 1.68-1.80 (m, 3H) , 1.03 (d, 6H, J= 6 Hz) ; LC-EM (ESI'): m/e = 532.18 [M+1]+(EM exacto: 531.12). 4-{ 7- [2- (3-Amino-pirrolidin-1-il) -2-oxo-etoxi] -1,1-dioxo-1, 2-dihidro-l?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il } -5-hidroxi-2- (3-metil-butil) -6-tiofen-2-il-2H-piridazin-3-ona XH RMN (400 MHz, CD3OD) : d 7.93 (d, ÍH, J= 3.6 Hz) , 7.50 (d, ÍH, J= 5.2 Hz) , 7.42-7.46 (m, ÍH) , 7.36-7.41 (m, 2H) , 7.09 (dd, ÍH, J:= 5.0 Hz, J2 = 4 Hz) , 4.89 (s, 2H, 61 %) ,4.86 (s, 2H, 39 %) ,4.26 (t, 2H, J= 7.2 Hz), 3.94-4.01 (m, ÍH) , 3.743.86 (m, 2H) , 3.64-3.73 (m, 2H) , 2.51 (m, ÍH, 61 %, J= 6.2 Hz) , 2.38 (m, ÍH, 39 %, J= 6.4 Hz) , 2.19-2.27 (m, ÍH, 61 %) ,2.06-2.14 (m, ÍH, 39 %) , 1.64-1.79 (m, 3H) , 1.02 (d, 6H, J= 6.4 Hz) ; LC-EM (ESI) : m/e = 587.3 [M+1]+(EM exacto: 586.17) . [4-Hidroxi-5- ( 7-metoxi-1, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -1- (3-metil-butil) -6-oxo-l, 6-dihidro-piridazin-3-il] -fenil-acetonitrilo *H RMN (400 MHz, DMS0-d6) : d 12.20 (s, ÍH) , 10.28 (s, ÍH) , 7.23-7.36 (m, 8H) , 4.04 (t, 2H, J= 7.6 Hz), 3.84 (s, 3H) , 3.60 (s, ÍH) , 1.57-1.71 (m,3H), 0.89 (d, 6H, J= 6.4 Hz) ; LC-EM (ESP-): m/e = 508.4 [M+1]+(EM exacto: 507.16). Éster etílico de ácido 2-{ 3- [5-hidroxi-2- (3-metil-butil) -3-oxo-6-tiofen-2-il-2, 3-dihidro-piridazin-4-il] -1, 1-dioxo-1, 2-dihidro-l?6-benzo [ 1, 2, 4 ] tiadiazin-7-iloxi } -propiónico XH RMN (400 MHz, CDC13) : d 7.98 (d, ÍH, J= 3.6 Hz) , 7.45 (d, ÍH, J= 4.8 Hz), 7.34 (s, br, ÍH) , 7.24-7.27 (m, 2H) , 7.13 (t, ÍH, J= 4.40 Hz), 4.83 (q, ÍH, J= S . l Hz) , 4.21-4.30 (m, 4H) , 1.77 (q, 2H, J= 7.2 Hz), 1.67 (d, 3H, J= 6.8 Hz), 1.64-1.72 (m, 3H) , 1.30 (t, 3H, J= 7.2 Hz), 1.02 (d, 6H, J= 6.4 Hz); LC-EM (ESI+) : m/e = 561.33 [M+1] + (EM exacto: 560.14). 2-{3- [5-Hidroxi-2- ( 3-metil-butil) -3-oxo-6-tiofen-2-il-2, 3-dihidro-piridazin-4il] -1, 1-dioxo-1, 2-dihidro-l?6-benzo[ l,2,4]tiadiazin-7-iloxi) -propionamida XH RMN (400 MHz, DMSO-d6) : d 7.90 (d, ÍH, J= 3.6 Hz), 7.61-7.69 (m, 3H) , 7.28-7.34 (m, 3H) , 7.16 (dd, ÍH, J = 5.0 Hz, J2 = 3.8 Hz), 4.78 (q, ÍH, J= 6.4 Hz), 4.17 (t, 2H, J= 7.0 Hz), 1.60-1.70 (m, 3H) , 1.47 (d, 3H, J= 6.4 Hz), 0.95 (d, 6H, J= 6.4 Hz); LC-EM (ESI+) : m/e = 532.14 [M+1] + (EM exacto: 531.12) . Ácido 2- { 3- [5-hidroxi-2- (3-metil-butil) -3-oxo-6-tiofen-2-il-2, 3-dihidro-piridazin-4-il] -1, 1-dioxo-1, 2-dihidro-l?6-benzo [l,2,4]tiadiazin-7-iloxi}-propiónico XH RMN (400 MHz, DMSO-d6) : d 7.90 (dd, ÍH, J2= 3.6 Hz,,/? = 1.2 Hz), 7.67 (dd, ÍH, J2= 5.2 Hz, J2 = 1.0 Hz), 7.59 (d, ÍH, J= 9.2 Hz) , 7.31 (dd, ÍH, J2= 9.2 Hz, J, = 3.0 Hz), 7.22 (d, ÍH, J= 2.8 Hz) , 7.16 (dd, ÍH, i= 5.0 Hz, J2 = 3.8 Hz), 5.05 (q, ÍH, J= 6.8 Hz) , 4.16 (t, 2H, J= 7.0 Hz) , 1.58-1.70 (m, 3H) , 1.53 (d, 3H, J= 6.8 Hz) , 0.95 (d, 6H, J= 6.4 Hz) ; LC-EM (ESI+) : m/e = 533.3 [M+1]+(EM exacto: 532.11) . 4- (1, 1-Dioxo-1, 2-dihidro-l?6-benzo[l, 2,4] tiadiazin-3-il) -5-hidroxi-6-isopropil-2- (3-metil-butil) -2H-piridazin-3-ona XH RMN (400 MHz, CDC13): d 7.98 (d, ÍH, J= 8.0 Hz) , 7.63 (t, ÍH, J = 7.2 Hz), 7.47 (t, ÍH, J = 7.8 Hz), 7.30 (d, ÍH, J = 8.0 Hz), 4.22 (t, 2H, J= 7.4 Hz), 3.33 (m, ÍH, J = 6.8 Hz), 1.60-1.74 (m, 3H) , 1.28 (d, 6H, J= 6.4 Hz), 1.01 (d, 6H, J= 6.0 Hz); LC-EM (ESI): m/e = 405.4 [M+1] + (EM exacto: 404.15) . 5-Hidroxi-6-isopropi1-4- (7-metoxi-l, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo[l,2,4]tiadiazin-3-il)-2- (3-metil-butil) -2H-piridazin-3-ona XH RMN (400 MHz, CDC13) : d 7.43 (d, ÍH, J= 2.4 Hz) , 7.21-7.29 (m, 2H) , 4.24 (t, 2H, J= 7.2 Hz) , 3.93 (s, 3H) , 3.35 (m, ÍH, J= 6.9 Hz) , 1.62-1.76 (m, 3H) , 1.31 (d, 6H, J= 6.8 Hz) , 1.03 (d, 6H, J= 6.4 Hz) ; LC-EM (ESI + ) : m/e = 435.3 [M+1]+(EM exacto: 434.16) . 5-Hidroxi-4- (7-hidroxi-l, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6- v benzo [l,2,4]tiadiazin-3-il)-6-isopropil-2- (3-metil-butil) -2H-piridazin-3-ona XH RMN (400 MHz, CDC13) : d 7.47 (d, ÍH, J= 2.4 Hz), 7.16-7.23 (m, 2H) , 6.81 (s, br, ÍH) , 4.22 (t, 2H, J= 7.0 Hz), 3.33 (m, ÍH, J= 6.8 Hz), 1.60-1.74 ( , 3H) , 1.29 (d, 6H, J= 6.8 Hz), 1.00 (d, 6H, J= 6.4 Hz) ; LC-EM (ESI): m/e = 421.3 [M+1]+(EM exacto: 420.15). 2- { 3- [5-Hidroxi-6-isopropil-2- (3-metil-butil) -3-oxo-2, 3-dihidro-piridazin-4-il] -1, 1-dioxo-1, 2-dihidro-l?6-benzo [1 , 2, 4]tiadiazin-7-iloxi} -acetamida XU RMN (400 MHz, CDC13) : d 7.46 (d, ÍH, J= 2.4 Hz) , 7.30 (d, ÍH, J= 8.8 Hz), 7.23-7.25 (m, ÍH) , 6.45 (s, br, ÍH) , 5.70 (s, br, ÍH), 4.57 (s, 2H) , 4.21 (t, 2H, J= 7.2 Hz), 3.32 (m, ÍH, J= 6.8 Hz), 1.63-1.73 (m, 3H) , 1.27 (d, 6H, J= 6.8 Hz), 1.00 (d, 6H, J= 6.4 Hz); LC-EM (EST): m/e = 478.1 [M+1]+(EM exacto: 477.17). 5-Hidroxi-4- (7-metoxi-l, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo [1,2, 4] tiadiazin-3-il) -2 (3-metil-butil) -6- ( 1-metil-lH-indol-3-il) -2H-piridazin-3-ona ? RMN (400 MHz, DMSO-d6) : d 8.27 (d, ÍH, J= 7.6 Hz), 8.21 (s, br, ÍH) , 7.49 (d, ÍH, J= 9.2 Hz), 7.38 (d, ÍH, J= 8.4 Hz), 7.19-7.29 (m, 3H) , 7.14 (t, ÍH, J= 7.4 Hz), 4.30 (t, 2H, J= 7.0 Hz), 3.85 (s, br, 6H) , 1.66-1.80 (m, 3H) , 0.97 (d, 6H, J= 6.4 Hz); LC-EM (EST+) : m/e = 522.37 [M+1] + (EM exacto : 521.17). 2-Bencil-4- (1, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo[l,2,4]tiadiazin-3-il) -5-hidroxi-6-isopropi1-2H-piridazin-3-ona XU RMN (400 MHz, CDC13): d 7.96-7.98 (m, ÍH), 7.61-7.65 (m, ÍH) , 7.47 (dt, ÍH, Jx= 7.6. Hz, J2 =1.2 Hz), 7.28-7.41 (m, 6H), 5.36 (s, 2H) , 3.34 (m, ÍH, J= 6.8 Hz), 1.30 (d, 6H, J= 7.2 Hz); LC-EM (ESP): m/e = 425.7 [M+1]+(EM exacto: 424.12) . 2- {3- [5-Hidroxi-2- (3-metil-butil) -3-oxo-6-tiofen-2-il-2, 3-dihidro-piridazin-4-il] -1, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo[l,2,4]tiadiazin-7-iloxi) -butiramida XH RMN (400 MHz, CDC13) : d 7.94-7.96 (m, ÍH) , 7.47 (d, ÍH, J= 2.8 Hz), 7.42 (dd, ÍH, J?= 5.0 Hz, J2 = 1.0 Hz), 7.27 (d, ÍH, J= 9.2 Hz), 7.20-7.23 (m, ÍH) , 7.11 (dd, ÍH, J2= 5.0 Hz, J2 = 3.8 Hz), 6.25 (s, br, ÍH) , 5.58 (s, br, ÍH) , 4.58 (t, ÍH, J = 5.6 Hz), 4.26 (t, 2H, J= 7.6 Hz), 1.98-2.06 (m, 2H) , 1.62-1.77 (m, 3H) , 1.05 (t, 3H, J= 7.2 Hz), 1.00 (d, 6H, J= 6.4 Hz); LC-EM (EST) : m/e = 546.9 [M+1] + (EM exacto: 545.14) .

N-Hidroxi-2-{3- [5-hidroxi-2- (3-metil-butil) -3-oxo-6-tiofen-2-il-2, 3-dihidro-piridazin-4-il] -1, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo [l,2,4]tiadiazin-7-iloxi} -acetamida XH RMN (400 MHz, CD3OD) : d 7.96 (d, ÍH, J= 2.8 Hz), 7.39 (d, ÍH, J= 5.2 Hz), 7.28-7.33 (m, 3H) , 7.05 (t, ÍH, J= 4.2 Hz), 4.62 (s, br, 2H) , 4.13 (t, 2H, J= 6.8 Hz), 1.64-1.73 (m, 3H) , 1.00 (d, 6H, J= 6.4 Hz); LC-EM (ESI): m/e = 533.8 [M+1]+(EM exacto: 533.10). 2- [3- (2-Ciclobutilmetil-5-hidroxi-3-oxo-6-tiofen-2-il-2, 3-dihidro-piridazin-4-il) -1, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-iloxil-acetamida XH RMN (400 MHz, CDC13): d 7.99 (dd, ÍH, J?= 3.6 Hz, J2 =1.2 Hz) , 7.49 (d, ÍH, J= 2.4 Hz) , 7.46 (dd, ÍH, J2= 5.0 Hz, J2 = 1.0 Hz) , 7.28-7.33 (m, 2H) , 7.15 (dd, ÍH, 5.0 Hz, J2 = 3.8 Hz) , 6.45 (s, br, ÍH) , 5.65 (s, br, ÍH) , 4.59 (s, 2H) , 4.30 (d, 2H, J= 7.2 Hz) , 2.92 (m, ÍH, J= 7.2 Hz) , 2.10-2.18 (m, 2H), 1.90-2.02 (m, 4H) ; LC-EM (ES] ) : m/e = 516.27 [M+1]+(EM exacto: 515.09) . 2- {3- [2- (2-Cicl opropil) -5 -hidroxi -3 -oxo- 6- tiof en- 2-il-2, 3-dihidro-piridazin-4-il] -1, 1-dioxo-l, 2 -di hidro- l?6-benzo [1, 2 , 4 ] tiadiazin-7- i loxi -acetamida LC-EM (ESI) : m/e = 516.0 [M+l]+ (EM exacto: 515.09) ; XH RMN (400 MHz, DMSO-d6) : d 7.90 (d, ÍH, J= 3.6 Hz) , 7.67 (d, ÍH, J= 5.2 Hz) , 7.62 (s, br, ÍH) , 7.58-7.61 (m, ÍH) , 7.40 (s, br, ÍH) , 7.32-7.38 (m, 2H) , 7.16 (dd, ÍH, J2= 4.8 Hz, J2 = 3.6 Hz) , 4.57 (s, 2H) , 4.22 (t, 2H) , 1.69 (q, 2H, J= 7.2 Hz) , 0.70-0.80 (m, ÍH) , 0.380.43 (m, 2H) , 0.04 (q, 2H, J= 5.2 Hz) . 2-Ciclobutilmeti1-4- (1, 1-dioxo-1, 2-dihidro-l?6-benzo [l,2,4]tiadiazin-3-il) -5-hidroxi-6-isopropil-2H-piridazin-3-ona LC-EM (ESI+) : m/e = 403.39 [M+l]+ (EM exacto: 402.14); XH RMN (400 MHz, CDC13) : d 7.98 (dd, ÍH, i= 1.2 Hz, J2 = 0.8 Hz), 7.62-7.66 (m, ÍH) , 7.46-7.50 (m, ÍH) , 7.28 (d, I H, J = 8.4 Hz), 4.22 (d, 2H, J = 7.6 Hz), 3.33 (m, ÍH, J = 6.8 Hz), 2.86 (m, ÍH, J= 7.6 Hz), 2.05-2.11 (m, 2H) , 1.86-2.00 (m, 4H) , 1.28 (d, 6H, J= 6.8 Hz) 6-Butil-5-hidroxi-4- (7-metoxi-l, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzol [1,2, 41tiadiazin-3-il) -2- (3-metil-butil) -2H-piridazin-3-ona LC-EM (ESI+) : m/e = 449.20 [M+l]+ (em exacto: 448.18); U RMN (400MHz, CDC13) : d 7.40 (d, ÍH, J= 2.8 Hz), 7.23 (d, ÍH, J= 8.4 Hz), 7.19 (dd, ÍH, J= 8.4, 2.8 Hz), 4.20 (t, 2H, J= 7.2 Hz), 3.90 (s, 3H) , 2.74 (t, 2H, J= 7.6 Hz), 1.68 (m, 5H) , 1.41 (m, 2H) , 1.00 (d, 6H, 6.0 Hz) , 0.98 (t, 3H, J= 7.2 Hz) . 6-Butil-5-hidroxi-4- (7-hidroxi-1, 1-dioxo-1 , 2-dihidro-l?6-benzo[l,2, 4] tiadiazin-3-il) -2- (3-metil-butil) -2H-piridazin-3-ona LC-EM (ESI+) : m/e = 435.2 [M+l]+ (em exacto: 434.16); ?U RMN (400MHz, CDC13) : d 7.46 (d, ÍH, J= 2.8 Hz), 7.21 (d, IH, J= 8.8 Hz) , 7.16 (dd, ÍH, J= 8.8, 2.8 Hz) , 6.83 (s amplio, ÍH) , 4.20 (t, 2H, J = 6.8 Hz), 2.75 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 1.69 (m, 5H) , 1.42 (m, 2H) , 1.00 (d, 6H, 6.0 Hz), 0.98 (t, 3H, J= 7.2 Hz) . 2-{3- [6-Butil-5-hidroxi-2- (3-metil-butil) -3-oxo-2, 3-dihidro-piridazin-4-ill-l, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo[l,2,4]tiadiazin-7-iloxi} -acetamida LC-EM (ESI): m/e = 492.24 [M+l]+ (em exacto: 491.18); XH RMN (400MHz, CDC13) : d 7.43 (d, ÍH, J= 2.4 Hz), 7.29 (d, ÍH, J= 8.8 Hz), 7.24 (dd, ÍH, J= 8.8, 2.4 Hz), 4.54 (s, 2H), 4.16 (t, 2H, J= 7.6 Hz), 2.71 (t , 2H, J= 1. 2 Hz) , 1.64 (m, 5H) , 1.38 (m, 2H) , 0.96 (d, 6H, 7.2 Hz) , 0.94 (t, 3H, J= 7.6 Hz) . 2-Butil-5-hidroxi-4- (7-metoxi-l, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo [1, 2, 4 ] tiadiazin-3-il) -6- (3-metil-butil) -2H-piridazin-3-ona LC-EM (ESI'): m/e = 449.23 [M+l]+ (em exacto: 448.18); XH RMN (400MHz, CDC13): d 7.40 (d, ÍH, J= 2.4 Hz), 7.23 (d, ÍH, J= 8.8 Hz), 7.19 (dd, ÍH, J= 8.8, 2.4 Hz), 4.18 (t, 2H, J= 7.6 Hz), 3.90 (s, 3H) , 2.74 (m, 2H) , 1.80 (m, 2H) , 1.62 (m, ÍH) , 1.58 (m, 2H) , 1.40 (m, 2H) , 1.00 (t, 3H, J= 7.2 Hz) , 0.98 (d, 6H, J= 6.4 Hz) . 2-Butil-5-hidroxi-4- (7-hidroxi-l, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo[l,2,4]tiadiazin-3-il) -6- (3-metil-butil) -2H-piridazin-3-ona LC-EM (ESI+) : m/e = 435.24 [M+l]+ (em exacto: 434.16); XH RMN (400MHz, CDC13): d 7.46 (d, ÍH, J= 2.8 Hz), 7.20 (d, ÍH, J= 8.8 Hz), 7.16 (dd, ÍH, J= 8.8, 2.8 Hz), 6.80 (s amplio, ÍH) , 4.18 (t, 2H, J= 7.6 Hz), 2.76 (m, 2H) , 1.80 (m, 2H) , 1.64 (m, ÍH) , 1.58 (m, 2H) , 1.40 (m, 2H) , 1.00 (t, 3H, J= 7.2 Hz), 0.98 (d, 6H, J= 6.4 Hz). 2-{3-{2-Butil-5-hidroxi-6- (3-metil-butil) -3-oxo-2, 3-dihidro-piridazin-4-ill-l, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo[l,2,4]tiadiazin-7-iloxi} -acetamida LC-EM (ESI): m/e = 492.25 [M+l]+ (em exacto: 491.18); ?U RMN (400MHz, CDC13) : d 7.47 (d, ÍH, J= 2.8 Hz), 7.29 (d, ÍH, J= 9.2 Hz), 7.24 (dd, ÍH, J= 9.2, 2.8 Hz) , 6.46 (s amplio, ÍH) , 5.67 (s amplio, ÍH) , 4.58 (s, 2H) , 4.18 (t, 2H, J= 7.2 Hz), 2.75 (m, 2H) , 1.80 (m, 2H) , 1.62 (m, ÍH) , 1.58 (m, 2H) , 1.40 (m, 2H) , 1.01 (t, 3H, J= 7.2 Hz), 0.98 (d, 6H, J= 6.4 Hz) . 2, 6-Dibutil-5-hidroxi-4- (7-metoxi-l, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo [ l,2,41tiadiazin-3-il) -2H-piridazin-3-ona LC-EM (ESI): m/e = 435.31 [M+l]+ (em exacto: 434.16); ?U RMN (400MHz, CDC13) : d 7.40 (d, ÍH, J= 2.4 Hz), 7.22 (d, ÍH, J= 8.8 Hz), 7.19 (dd, ÍH, J= 8.8, 2.4 Hz) , 4.18 (t, 2H, J= 7.6 Hz), 3.90 (s, 3H) , 2.74 (t, 2H, J= 8.0 Hz), 1.80 (m, 2H) , 1.68 (m, 2H) , 1.41 (m, 4H) , 0.99 (t, 3H, J= 7.2 Hz) , 0.98 (t, 3H, J= 7.2 Hz) . 2, 6-Dibutil-5-hidroxi-4- (7-hidroxi-1, 1-dioxo-1, 2-dihidro-l?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -2H-piridazin-3-ona LC-EM (ESI+) : m/e = 421.04 [M+l]+ (em exacto: 420.15); ?U RMN (400MHz, CDC13) : d 7.46 (d, ÍH, J= 2.4 Hz), 7.20 (d, ÍH, J= 8.8 Hz), 7.16 (dd, ÍH, J= 8.8, 2.4 Hz), 6.90 (s amplio, 1H) , 4.18 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 2.75 (t, 2H, J = 8.0 Hz), 1.80 (m, 2H) , 1.68 (m, 2H) , 1.41 (m, 4H) , 0.99 (t, 3H, J= 7.2 Hz), 0.98 (t, 3H, J= 7.2 Hz). 2- [3- (2, 6-Dibutil-5-hidroxi-3-oxo-2, 3-dihidro-piridazin-4-il) -1, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo[l,2,4]tiadiazin-7-iloxi] -acetamida LC-EM (ESI+) : m/e = 478.17 [M+l]+ (em exacto: 477.17); ÍH RMN (400MHz, CDC13) : d 7.47 (d, ÍH, J= 2.4 Hz), 7.29 (d, ÍH, J= 8.8 Hz) , 7.25 (dd, ÍH, J= 8.8, 2.4 Hz), 6.47 (s amplio, ÍH) , 5.77 (s amplio, ÍH) , 4.58 (s, 2H) , 4.18 (t, 2H, J= 7.2 Hz), 2.75 (t, 2H, J= 7.6 Hz) , 1.80 (m, 2H) , 1.68 (m, 2H) , 1.41 (m, 4H) , 0.99 (t, 3H, J= 7.2 Hz), 0.98 (t, 3H, J= 7.2 Hz) . 5-Hidroxi-4- (7-metoxi-l, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -2 (3-metil-butil) -6-propil-2H-piridazin-3-ona LC-EM (ESI+) : m/e = 435.31 [M+l]+ (em exacto: 434.16); XH RMN (400MHz, CDC13): d 7.40 (d, ÍH, J= 2.4 Hz), 7.23 (d, ÍH, J= 8.8 Hz), 7.19 (dd, ÍH, J= 8.8, 2.4 Hz), 4.20 (t, 2H, J= 7.6 Hz), 3.90 (s, 3H) , 2.72 (t, 2H, J= 7.6 Hz) , 1.72 (m, 5H), 1.01 (t, 3H, J= 7.2 Hz), 0.99 (d, 6H, J= 6.0 Hz) . 5-Hidroxi-4- (7-hidroxi-l, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -2- (3-metil-butil) -6-propil-2H-piridazin-3-ona LC-EM (ESI+) : m/e = 421.04 [M+l]+ (em exacto: 420.15); 1H RMN (400MHz, CDC13) : d 7.47 (d, ÍH, J= 2.4 Hz), 7.22 (d, ÍH, J= 8.8 Hz) , 7.17 (dd, ÍH, J= 8.8, 2.4 Hz), 4.20 (t, 2H, J = 7.6 Hz), 2.73 (t, 2H, J = 7.6 Hz), 1.72 (m, 5H) , 1.02 (t, 3H, J = 7.2 Hz), 0.99 (d, 6H, J= 6.4 Hz). 2-{3-15-Hidroxi-2- (3-metil-butil) -3-oxo-6-propil- 2, 3-dihidro-piridazin-4-il] -1, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo[l,2,4]tiadiazin-7-iloxi} -acetamida LC-EM (ESI+) : m/e = 478.19 [M+l]+ (em exacto: 477.17); XH RMN (400MHz, DMSO): 6 7.66 (d, ÍH, J= 8.8 Hz), 7.62 (s amplio, ÍH) , 7.40 (s amplio, ÍH) , 7.38 (d, ÍH, J = 3.2 Hz), 7.35 (m, 1 H) , 4.58 (s, 2H) , 4.12 (t, 2H, J = 6.8 Hz), 2.64 (t, 2H, J = 7.6 Hz) , 1.65 (m, 4H) , 1.61 (m, ÍH) , 0.94 (t, 3H, J= 7.2 Hz), 0.92 (d, 6H, J= 6.4 Hz). 5-Hidroxi-4- (7-metoxi-l, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo[l,2,4]tiadiazin-3-il)-2,6-bis- (3-metil-butil) -2H-piridazin-3-ona LC-EM (ESI+) : m/e = 463.23 [M+l]+ (em exacto: 462.19); lU RMN (400MHz, CDC13) : d 7.40 (d, ÍH, J= 2.8 Hz), 7.24 (d, ÍH, J= 8.4 Hz), 7.19 (dd, ÍH, J= 8.4, 2.8 Hz), 4.19 (t, 2H, J= 7.6 Hz), 3.90 (s, 3H) , 2.75 ( , 2H) , 1.74-1.55 (m, 6H), 1.00 (d, 6H, J=6.4 Hz), 0.98 (d, 6H, J= 6.4 Hz). 5-Hidroxi-4- (7-hidroxi-l, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo [1, 2, 4 ] tiadiazin-3-il) -2 , 6-bis- ( 3-metil-butil) -2H-piridazin-3-ona LC-EM (ESI + ) : m/e = 449.18 [M+l]+ (em exacto: 448.18) ; XH RMN (400MHz, CDC13) : d 7.47 (d, ÍH, J= 2.4 Hz) , 7.21 (d, ÍH, J= 8.8 Hz) , 7.17 (dd, ÍH, J= 8.8, 2.4 Hz) , 6.90 (s, ÍH), 4.20 (t, 2H, J= 7.6 Hz) , 2.75 (m, 2H) , 1.74-1.54 (m, 6H) , 1.00 (d, 6H, J=6.4 Hz) , 0.98 (d, 6H, J= 6.4 Hz) . 2-{3- [5-Hidroxi-2, 6-bis- (3-metil-butil) -3-oxo-2, 3-dihidro-piridazin-4-il] -1, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo [1,2, 4]tiadiazin-7-iloxi} -acetamida LC-EM (ESI) : m/e = 506.24 [M+l] + (em exacto: 505.20) ; ?U RMN (400MHz, CDC13) : d 7.46 (d, ÍH, J= 2.4 Hz) , 7.30 (d, ÍH, J= 9.2 Hz) , 7.17 (dd, ÍH, J= 8.8, 2.4 Hz) , 6.47 (s, ÍH) , 5.75 (s, ÍH), 4.58 (s, 2H) , 4.20 (t, 2H, J = 7.6 Hz), 2.75 (m, 2H) , 1.74-1.54 (m, 6H) , 1.00 (d, 6H, J=6.4 Hz) , 0.98 (d, 6H, J= 6.4 Hz) . 6-Furan-2-il-5-hidroxi-4- (7-metoxi-l, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -2- (3-metil-butil) -2H-piridazin-3-ona LC-EM (EST): m/e = 459.3 [M+l]+ (em exacto: 458.13); XH RMN (400MHz, CDC13) : d 7.62 (dd, ÍH, J= 2.0, 0.8 Hz), 7.41 (d, ÍH, J= 2.4 Hz), 7.33 (dd, ÍH, J= 3.6, 0.8 Hz), 7.27 (d, ÍH, J= 8.8 Hz), 7.22 (dd, ÍH, J= 8.8, 3.2 Hz), 6.58 (dd, ÍH, J= 3.6, 2.0 Hz), 4.33 (t, 2H, = 7.6 Hz), 3.91 (s, 3H) , 1.78 (m, 2H) , 1.71 (m, ÍH) , 1.02 (d, 6H, J= 6.4 Hz) . 2- (3, 3-Dimetil-butil)-4-(l, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo[l,2,4]tiadiazin-3-il) -5-hidroxi-6-isopropi1-2H-piridazin-3-ona LC-EM (ESI): m/e = 419.20 [M+l]+ (em exacto: 418.17); XH RMN (400MHz, CDC13): d 7.97 (m, ÍH) , 7.63 (m, 1H) , 7.48 (m, ÍH) , 7.31 (d, ÍH, J= 8.0 Hz) , 4.21 (m, 2H) , 3.33 (m, ÍH) , 1.71 (m, 2H), 1.28 (d, 6H, J= 6.8 Hz), 1.03 (s, 9H) . 2- (2-Ciclopropiletil) -4- (1, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo{ 1,2,4] tiadiazin-3-il) -5-hidroxi-6-isopropi1-2H-piridazin-3-ona LC-EM (ESI ): 403.38 [M+H] + . ^-R N (400 MHz, CDC13, ppm): 7.95 (dd, ÍH, J= 8.0, 1.4 Hz); 7.63 (t, ÍH, J= 7.8 Hz); 7.47 (t, ÍH, J= 7.6 Hz); 7.29 (d, ÍH, J= 8.2 Hz); 4.29 (t, 2H, J= 7.0 Hz); 3.33 (septet, ÍH, J= 6.8 Hz) ; 1.73 (q, 2H, J = 7.0 Hz); 1.27 (d, 6H, J= 6.6 Hz); 0.73 (m, ÍH) ; 0.46 (m, 2H) 0.05 (q, 2H, J= 5.3 Hz). 6-ter-Butil-2- (3, 3-dimetil-butil) -5-hidroxi-4- (7-metoxi-1, 1-dioxo-1, 2-dihidro-l?6-benzo [l,2,4}tiadiazin-3-il-2H-piridazin-3-ona LC-EM (EST+) : m/e = 463.90 [M+l]+ (em exacto: 462.19); XH RMN (400MHz, CDC13): d 7.40 (d, ÍH, J= 2.87 Hz), 7.25 (m, ÍH) , 7.19 (dd, ÍH, J= 8.8, 2.8 Hz), 4.20 (m, 2H) , 3.90 (s, 3H) , 1.72 (m, 2H) , 1.41 (s, 9H) , 1.02 (s, 9H) . 3- [1- (3, 3-Dimetil-butil) -4-hidroxi-5- (7-metoxi-l, 1-dioxo-1, 2-dihidro-l?6-benzo [ 1, 2 , 4 ] tiadiazin-3-il) -6-oxo-l, 6-dihidro-piridazin-3-il] -propionitrilo. LC-EM (ESI+) : m/e = 460.17 [M+l]+ (em exacto: 459.16); XH RMN (400MHz, DMS0-d6) : d 7.24 (d, ÍH, J= 8.8 Hz), 7.15 (dd, ÍH, J= 8.8, 2.8 Hz), 7.12 (d, ÍH, J= 2.8 Hz), 3.91 (m, 2H) , 3.81 (s, 3H) , 2.77 (m, 4H) , 1.55 (m, 2H) , 0.93 (s, 9H : 2- (3, 3-Dimetil-butil) -5-hidroxi-4- (7-metoxi-l, 1-dioxo-1, 2-dihidro-l?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -6-tiofen-2-il-2H-piridazin-3-ona LC-EM (ESI+) : m/e = 489.10 [M+l]+ (em exacto: 488.12); XH RMN (400MHz, CDC13) : d 7.99 (dd, ÍH, J= 4.0, 0.8 Hz), 7.45 (dd, ÍH, J= 5.2, 0.8 Hz), 7.41 (d, ÍH, J = 2.4 Hz), 7.28 (ÍH, d, J= 9.2 Hz), 7.21 (dd, ÍH, J= 9.2, 2.8 Hz), 7.14 (dd, ÍH, J= 5.6, 4.0 Hz), 4.29 (m, 2H) , 3.91 (s, 3H) , 1.77 (m, 2H) , 1.05 (s, 9H) . 2y {3- [2- (3, 3-Dimetil-butil) -5-hidroxi-3-oxo-6-tiofen-2-il-2, 3-dihidro-piridazin-4-il] -1, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-iloxi } -acetamida LC-EM (ESI+) : m/e = 532.16 [M+l]+ (em exacto: 531.12); XH RMN (400MHz, DMS0-d6) : d 7.90 (d, ÍH, J= 3.2 Hz), 7.64 (d, ÍH, J= 4.8 Hz), 7.61 (s amplio, ÍH) , 7.57 (d, ÍH, J= 9.2 Hz), 7.40 (s amplio, ÍH) , 7.33 (m, 2H) , 7.15 (dd, ÍH, J= 4.8, 3.6 Hz), 4.56 (s, 2H) , 4.14 (en, 2H) , 1.67 (m, 2H) , 0.97 (s, 9H) . 2-{3-12- (3, 3-Dimetil-butil) -5-hidroxi-6- (5-metil-tiofen-2-il) -3-oxo-2, 3dihidro-piridazin-4-il}-l, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-iloxi } -acetamida LC-EM (ESI): m/e = 546.25 [M+l]+ (em exacto: 545.14); ?U RMN (400MHz, DMS0-d6) : d 7.70 (d, ÍH, J = 2.8 Hz), 7.61 (s, ÍH) , 7.54 (d, ÍH, J = 9.2 Hz) , 7.32 (dd, 1 H, J = 8.8, 2.4 Hz), 7.3 0 (s, 1 H) , 6.82 (d, 1 H, J = 2.4 Hz), 4.5 5 (s, 2H) , 4.10 (m, 2H) , 2.47 (s, 3H) , 1.65 (m, 2H) , 0.97 (s, 9H) . 2-Bencil-4- (1, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo[l,2,4]tiadiazin-3-il) -5-hidroxi-6- (5-metil-tiofen-2-il) -2H-piridazin-3-ona ÍH RMN (400 MHz, CDC13): 14.06 (s, ÍH) , 7.99 (d, ÍH, J= 7.6 Hz), 7.81 (d, ÍH, J= 4 Hz), 7.64 (t, ÍH, J= 7.8 Hz), 7.50 (m, 3H) , 7.38 (m, 4H) , 6.80 (d, ÍH, J= 3.6 Hz), 5.41 (s, 2H), 2.57 (s, 3H) ; LC-EM (ESI+) : m/e = 479.1 [M+l] + . 2-{ 3- [2- (2-Ciclopropil-etil) -5-hidroxi-6- (5-metil-tiofen-2-il) -3-oxo-2 ,3-dihidro-piridazin-4-il]-l, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-iloxi } acetamida LC-EM (ESIF) : m/e 530.9 [M+l]+; xñ RMN (DMS0-d6): 7.72 (d, ÍH, J= 3.2 Hz), 7.62 (s, br, ÍH) , 7.61 (d, ÍH, J= 9.2 Hz), 7.40 (s, br, ÍH) , 7,33-7.37 (m, 2H) , 6.84 (dd, ÍH, J2= 3.6 Hz , J2 = 0.8 Hz), 4.57 (s, 2H) , 4.20 (t, 2H, J= 7.0 Hz), 2.47 (s, 3H) , 1.67 (q, 2H, J= 6.9 Hz), 0.68-0.79 (m, 1H), 0.38-0.43 (m, 2H) , 0.03 (q, 2H, J= 4.8 Hz). 2-{3- [2-Ciclobutilmetil-5-hidroxi-6- (5-metil-tiofen-2-il) -3-oxo-2, 3-dihidro-piridazin-4-il] -1, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-iloxi } -acetamida LC-EM (ESI+) : m/e 530.8 [M+l]+; XH RMN (DMSO-d6, ppm): 7.71 (d, ÍH, J = 3.6 Hz), 7.62 (s, br, ÍH) , 7.60 (d, ÍH, J= 8.8 Hz), 7.40 (s, br, ÍH) , 7.32-7.38 (m, 2H) , 6.83-6.85 (m, ÍH) , 4.57 (s, 2H) , 4.15 (d, 2H, J= 7.6 Hz), 2.71-2.84 (m, ÍH) , 2.47 (s, 3H) , 1.98-2.06 (m, 2H) , 1.81-1.92 (m, 4H) . 6-ter-Butil-2- (3, 3-dimetil-butil) -5-hidroxi-4- (7-hidroxi-1, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -2H-piridazin-3-ona LC-EM (ES1+) : m/e = 449.20 [M+l]+ (em exacto: 448.18); XH RMN (400MHz, CDC13): d 7.46 (d, ÍH, J= 2.8 Hz), 7.24 (d, ÍH, J= 8.8 Hz), 7.17 (dd, ÍH, J= 8.8, 2.8 Hz), 6.44 (br, s, ÍH) , 4.21 (m, 2H) , 3.90 (s, 3H) , 1.72 (m, 2H) , 1.42 (s, 9H) , 1.02 (s, 9H) . 2-{3- [6-ter-Butil-2- (3, 3-dimetil-butil) -5-hidroxi-3-OXO-2, 3-dihidro-piridazin-4-il] -1, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-iloxi } -acetamida LC-EM (ESI+) : m/e = 506.9 [M+l]+ (em exacto: 505.20); ?U RMN (400MHz, DMS0-d6) : d 7.67 (d, ÍH, J= 8.8 Hz), 7.62 (br, s, ÍH) , 7.40 (br, s, ÍH) , 7.37 (dd, ÍH, J= 8.8, 2.8 Hz), 7.35 (m, ÍH) , 4.58 (s, 2H) , 4.13 (m, 2H) , 1.65 (m, 2H) , 1.37 (s, 9H) , 0.95 (s, 9H) .

Método 4: El esquema de reacción 4 proporciona un procedimiento general que fue usado para preparar compuestos de la fórmula I .

Esquema de reacción 4 En el procedimiento general, los esteres a-ceto se hicieron reaccionar con hidrazinas para formar hidrazonas que se trataron entonces con cloruro de etilmalonilo seguido por tratamiento base para generar el intermediario de piridazinona ciclizada (13) . Este intermediario se mezcló después con la o-aminosulfonamida (14) sin o con solvente en una condición caliente para dar los compuestos deseados (5) de la fórmula I.

Ejemplo 4-1 Esquema de reacción 4a describe la sintesis de 4- (1 , 1-Dioxo- 1 , 2-dihidro-l?6-pirido [4 , 3-e] [1,2 , 4] tiadiazin-3-il) -5- hidroxi-2- (3-metil-butil) -6-tiofen-2-il-2H-piridazin-3-ona (51) Esquema de reacción 4a Ester etílico de ácido 1 (3-Metil-butil) -hidrazonol-tiofen-2-il-acético (3d) A una solución de éster etílico de ácido oxo- tiofen-2-il-acético (ld) (3.97 g, 21.6 mmoles) en etanol absoluto (100 mL) , se le añadió (3-metil-butil) -hidrazina (2b) (2.0 g, 19.6 mmoles). La mezcla se agitó a 80 °C bajo atmósfera de N2 durante 2-25 horas. La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografia de vaporización instantánea sobre gel de silice para dar el producto deseado (3d) (2.48 g) que se usó directamente en la siguiente etapa. LC-EM (ESI): m/e 269.2 [M+l]+, 537.4 [2M+1]+, 559.0 [2M+Na]+ (em exacto: 268.12) . Éster etílico de ácido [ (2-etoxicarbonil-acetil) - (3-metil-butil) -hidrazonol-tiofen-2-il-acético (12a) A una solución de éster etílico de ácido [(3-metil-butil) -hidrazono] -tiofen-2-il-acético (3d) (400 mg, 1.49 mmoles) en DMF anhidro (8 mL) a 0°C bajo atmósfera de N2, se le añadió NaH (Aldrich) (60% en aceite mineral, 78 mg, 1.94 mmoles), y la suspensión resultante se agitó durante 20 min. Se le añadió cloruro de etilmalonilo (Alfa Aesar) (317 µL, 2.24 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 1 hora, y se enfrió rápidamente mediante adición de H20, se extrajo con EtOAc (50 mL x 2 ) . La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04, se concentró bajo presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía de vaporización instantánea sobre gel de sílice para dar el producto deseado (12a) (380 mg, 67 %) como una mezcla de los isómeros E/Z. LC-EM (ESI'): m/e 383.4 [M+l]+ (em exacto: 382.16); XH RMN (400MHz, CDC13) : d 7.40 (dd, ÍH, J= 4.8, 0.8 Hz), 7.16 (m, ÍH) , 7.04 (dd, ÍH, J= 5.6, 4.0 Hz), 4.45 (q, 2H, J= 7.2 Hz) , 4.20 (m, 2H) , 3.86 (m, 2H) , 3.71 (s, 2H), 1.57 (m, ÍH) , 1.50 (m, 2H) , 1.43 (t, 3H, J= 7.2 Hz), 1.26 (t, 3H, J= 7.2 Hz), 0.92 (d, 6H, J= 6.4 Hz). Éster etílico de ácido 5-Hidroxi-2- (3-metil-butil) -3-oxo-6-tiofen-2-il-2, 3-dihidro-piridazin-4-carboxilico (13a) . A una solución de éster etílico de ácido [ (2-etoxicarbonil-acetil) - (3-metil-butil) -hidrazono] -tiofen-2-il-acético (12a) (380 mg, 1.0 mmoles) en EtOH (6 mL) a temperatura ambiente, se le añadió etóxido de sodio (Aldrich) (21 wt % en etanol, 0.4 mL, 1.1 mmoles), y la mezcla resultante se agitó durante 30 min. Se le añadió lentamente HCl acuoso (5%, 0.75 mL) , y después seguido por extracción líquido-liquido con H20/EtOAc. La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04, se concentró bajo presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografia de vaporización instantánea sobre gel de sílice para dar el producto deseado (13a) (280 mg, 83%) como un sólido amarillo. LC-EM (ESI'): m/e = 337.30 [M+l]+ (em exacto: 336.11); XH RMN (400MHz, CDC13) : d 7.89 (dd, ÍH, J= 3.6, 1.2 Hz), 7.39 (dd, ÍH, J= 5.2, 1.2 Hz), 7.10 (dd, 1 H, J = 5.2, 3.6 Hz), 4.53 (q, 2H, J = 7.2 Hz) , 4.22 (en, 2H) , 1.73 (m, 2H) , 1.68 (m, ÍH) , 1.50 (t, 3H, J= 7.2 Hz), 0.99 (d, 6H, J= 6.4 Hz) . 4- (1, l-Dioxo-l,2-dihidro-l?6-pirido[4,3-e] [1,2,4] tiadiazin-3-il) -5-hidroxi-2- (3metil-butil) -6-tiofen-2-il-2H-piridazin-3-ona (51) Éster etílico e ácido 5-hidroxi-2- (3-metil-butil) -3-oxo-6-tiofen-2-il-2 , 3-dihidro-piridazin-4-carboxílico (13a) (153 mg, 0.46 mmoles) y 4-amino-3-piridinsulfonamida (14a) (80 mg, 0.46 mmoles) se disolvieron en N-metilpirrolidinona (NMP) (2 mL) bajo atmósfera de N2, y luego se agitaron a 180°C durante 30 min. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se llevó a cabo entonces la extracción liguido-liguido usando EtOAc y H20. La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04, se concentró bajo presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografia de vaporización instantánea sobre gel de silice seguido de purificación mediante HPLC para dar el compuesto del titulo (51) (5 mg, 5 %) as yellow solid. LC-EM (ESI+) : m/e = 446.08 [M+l]+ (em exacto: 445.09); ?U RMN (400MHz, DMS0-d6) : d 9.00 (s, ÍH) , 8.64 (d, ÍH, J = 6.0 Hz), 7.89 (dd, ÍH, J = 3.6, 1.2 Hz) , 7.56 (dd, ÍH, J = 5.2, 1.2 Hz), 7.49 (d, ÍH, J= 6.0 Hz), 7.10 (dd, ÍH, J= 5.2, 3.6 Hz), 4.06 (t, 2H, J= 6.8 Hz), 1.62(m, 3H) , 0.93 (d, 6H, J= 6.4 Hz) .

Los compuestos de la fórmula 1 que contienen otros heterociclos aromáticos de 6 miembros para reemplazar el anillo piridina del compuesto anterior (51) se puede preparar en forma similar usando este método. Los siguientes compuestos de la fórmula I se hicieron en forma análoga al procedimiento descrito en el Método 4, excepto con los materiales de inicio adecuados. 5-Hidroxi-4- (7-metoxi-l, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo[l,2,4]tiadiazin-3-il)-2- (3-metil-butil) -6- ( 3-meti1-tiofen-2-il) -2H-piridazin-3-ona ?U RMN: (DMSO-de, 400 MHz) d 7.39 (d, ÍH, J= 5.1 Hz), 7.24 (d, ÍH, J= 9.0 Hz), 7.15 (dd, ÍH, J = 9.0, 2.7 Hz) , 7.11 (d, ÍH, J = 2.7 Hz), 6.89 (d, I H, J = 5.1 Hz), 4.02-3.97 (m, 2H) , 3.81 (s, 3H) , 2.40 (s, 3H) , 1.62-1.59 (m, 4H) , 0.93 (d, 6H, J= 6.2 Hz); LC-EM (ESI+) : m/e 489.13 [M+H] + . 2- [3-{5-Hidroxi-2- (3-metil-butil) -6- (3-metil-tiofen-2-il) -3-oxo-2, 3-dihidro-piridazin-4-il] -1, l-dioxo-1,2-dihidro-l?6-benzo [l,2,4]tiadiazin-7-iloxi} -acetamida XH RMN: (DMS0-d6, 400 MHz) d 7.60 (s, ÍH) , 7.49 (d, ÍH, J= 5.1 Hz), 7.42 (d, ÍH, J= 9.0 Hz), 7.38 (s, ÍH) , 7.28- 7.22 (m, 2H), 6.95 (d, ÍH, J= 5.1 Hz), 4.52 (s, 2H) , 4.07-4.06 (m, 2H) , 2.37 (s, 3H) , 1.65-1.60 (m, 4H) , 0.84 (d, 6H, J= 6.6 Hz); LC-EM (ESI+) : m/e 532.15 [M+H]+. 5-Hidroxi-4- (7-metoxi-l, 1-dioxo-l, 2-dihidro-l?6-benzo (1, 2, 41tiadiazin-3-il) -2- ( 3-metil-butil) -6-tiazol-2-il-2H-piridazin-3-ona LC-EM (ESI): m/e = 476 [M+H]+ (EM exacto: 475.10); ?U RMN (400 MHz, CDC13) d 8.06-8.10 (m, ÍH) , 7.57-7.61 (m, ÍH) , 7.40-7.43 (m, ÍH) , 7.21-7.29 (m, 2H) , 4.40 (t, 2H, J= 7.6 Hz), 3.92 (s, 3H) , 1.70-1.84 (m, 3H) , 1.03 (d, 6H, J= 6.8 Hz) .

Método 5: Esquema de reacción 5 describe la sintesis de compuestos de la fórmula I.

Esquema de reacción 5 En el procedimiento general, el compuesto 13 se mezcló con el compuesto 14 y se calentó a una temperatura entre 160°C y 170°C sin solvente para dar la amida 15. El compuesto 15 se trató entonces con 1,8-diazabiciclo [5, 4, 0] undec-7-eno (DBU) en presencia de piridina bajo condición de calentamiento en un tubo sellado a una temperatura entre 140°C a 160 °C para dar el producto deseado (5) .

Ejemplo 5-1 Esquema de reacción 5a describe la sintesis del compuesto 5m. ( 5-Cloro-2-sulfamoil-tiofen-3-il ) -amida de ácido 5-hidroxi-2- (3-metil-butil) -3-oxo-6-tiofen-2-il-2, 3-dihidro-piridazin-4-carboxílico (15a) El éster (13a) hecho mediante el Método 4 (86 mg, 0.26 mmoles) y amida de ácido 3-amino-5-cloro-tiofen-2-sulfónico (14b) (54 mg, 0.26 mmoles) se mezclaron en un recipiente de reacción y se agitaron en un baño de aceite precalentado a 160 °C durante 10 mins para dar la (5-cloro-2-sulfamoil-tiofen-3-il) -amida de ácido 5-hidroxi-2- (3-metilbutil) -3-oxo-6-tiofen-2-il-2 , 3-dihidro-piridazin-4-carboxilico correspondiente (15a) como un sólido amarillo oscuro que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LC-EM (ESI+) : m/e = 503.09 [M+l]+ (em exacto: 502.02) . 4- (2-Cloro-7, 7-dioxo-4, 7-dihidro-l?6-ditia-4, 6-diaza-inden-5-il) -5-hidroxi-2- (3-metil-butil) -6-tiofen-2-il-2H-piridazin-3-ona (5m) . A una solución del intermediario de amida (15a) (54 mg, 0.11 mmoles) en piridina anhidra (1.5 mL) en un tubo sellado, se le añadió 1, 8-Diazabiciclo [5, 4, 0] undec-7-eno (DBU) (20 µL) y después se agitó a 140 °C (temperatura de baño de aceite) durante 24 hrs. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y el solvente se removió al vacío, y después el residuo se secó adicionalmente al alto vacio durante 2 hrs. El material crudo material se purificó mediante cromatografia de vaporización instantánea sobre gel de sílice usando hexano y EtOAc para dar el producto deseado (5m) (8.0 mg, 15 %) como un sólido amarillo. LC-EM (ESI+) : m/e = 485.21 [M+l]+ (em exacto: 484.01); ? RMN (400 MHz, DMSO-d6) : d 7.86 (dd, ÍH, J= 3.2, 1.2 Hz), 7.52 (dd, ÍH, J= 5.2, 0.8 Hz), 7.46 (s, ÍH) , 7.07 (dd, ÍH, J= 5.2, 3.2 Hz) , 4.03 (m, 2H) , 1.60 (m, 3H) , 0.93 (d, 6H, J= 6.4 Hz).

Los compuestos de la fórmula I que contienen los heterociclos aromáticos de 5 miembros como el anillo A en lugar del tiofeno de los ejemplos anteriores como se mostró arriba en el ejemplo 5-1 puede ser sintetizado en una forma similar a la del método 5. Los esquemas de reacción 6-11 describen las rutas sintéticas para los intermediarios indicados. El esquema de reacción 6 describe la sintesis del intermediario 2.

Esquema de reacción 6 En una ruta sintética tipica como se mostró en el Esquema de reacción 6, el bromuro 8 puede hacerse reaccionar con carbazato de ter-butilo 6 en presencia de K2C03 bajo calentamiento para formar hidrazina Boc-protegida 1 usando los procedimientos de la literatura descritos en Huck et al . , Synlet t , 2001 (9), 1467-1469 (2001) y Tetrahedron Let ters , 40(18), 3543-3546 (1999). El grupo Boc puede removerse ya sea mediante tratamiento con TFA o HCl para dar la hidrazina 2 como sal TFA o HCl.

Ejemplo 6-1 Esquema de reacción 6a describe la sintesis de sal de ácido ciclobutilmetil-hidrazina trifluoroacético Esquema de reacción 6a En este ejemplo específico, el bromuro 8b (2.39 g, 18.1 mmoles) se hizo reaccionar con carbazato de ter-butilo 6 (3.24 g, 21.74 mmoles) en presencia de Cs2C03 (12 g, 36.24 mmoles) en 40 mL de DMF a 80 °C durante la noche. El espectro EM confirmó la formación del producto deseado la con muy poco material de inicio dejado. Después de enfriarse la mezcla de reacción, se filtró el sólido. El material filtrado se concentró bajo vacio y el residuo crudo se purificó adicionalmente mediante cromatografia de vaporización instantánea sobre gel de silice usando un gradiente de acetato de etilo en hexano (0-50 %) . Se obtuvo el producto puro deseado (la) (669.1 mg) en 22.5 % de rendimiento aislado. LC-EM: (ESI): m/e = 201 [M+l]+, 223.2 [M+Na]+, 400.7 [2M+1]+, 423.5 [2M+Na]+ (EM exacto: 200.15).

El compuesto la (306 mg) se trató con 10 mL de 20% de TFA en cloruro de metileno y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4.5 horas. El resultado de LC-EM confirmó el producto deseado. La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida y se secó sobre alto vacío durante la noche para dar aceite amarillo como el producto deseado 2c como sal TFA que se usó directamente en la siguiente etapa. LC-EM: (ESI+) : m/e = 201.4 [2M+1]+ (EM exacto: 100.15) .

El esquema de reacción 7 describe la síntesis del intermediario 2.

Esquema de reacción 7 H2N-NH2 NH2 R2_Br ^ R2_N,H EtOH , reflujo 8 2 El bromuro 8 se puede tratar con gran exceso de monohidrato de hidrazina en etanol bajo condición de reflujo para dar la hidrazina 2 deseada.

Ejemplo 7-1 Esquema de reacción 7a describe la sintesis de 3-metil-butil- hidrazina (2) Esquema de reacción 7a 3-Metil-butil) -hidrazina (2b) : A una solución de monohidrato de hidrazina (Aldrich) (40 mL) en EtOH (250 mL) bajo atmósfera de N2, se le añadió rápidamente l-bromo-3-metil-butano (8a) (Aldrich) (15.1 g, 100 mmoles), y la mezcla resultante se sometió a reflujo durante 24 hrs. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida. El residuo se tomó en H20 (40 mL) /DCM (200 mL) , se le añadió K2C03 sólido a la capa acuosa saturada. Se separaron dos capas y la capa acuosa se extrajo con DCM (2 x 100 mL) . Las capas orgánicas combinadas se secaron over K2C03, y después se concentraron bajo presión reducida para dar el producto deseado (2b) (7.0g, 70%) como un aceite incoloro. XH RMN (400MHz, CDC13) : d 2.80 (m, 2H) , 1.65 (en, ÍH) , 1.41 (m, 2H) , 0.93 (d, 6H, J= 6.4 Hz) .

Ejemplo 7-2 Sintesis de ciclobutilmetil-hidrazina (2c) Ciclobutilmetil-hidrazina (2c) : Usando una ruta sintética similar empezando con bromuro de ciclobutilmetilo, se preparó también el ciclobutilmetil-hidrazina (2c). LC-EM: (ESe) : m/e = 201.4 [2M+1]+ (EM exacto: 100.10); XH RMN (400MHz, CDC13) : d 3.06 (s, br, 3H) , 2.81 (d, 2H, J= 7.6 Hz), 2.47-2.54 (m, ÍH) , 2.05-2.13 (m, 2H) , 1.83-1.97 (m, 2H) , 1.66-1.75 (m, 2H) .

El esquema de reacción 8 describe la síntesis de la sal oxalato de hidrazina 6.

Esquema de reacción 8 En un procedimiento general, aldehido 2 puede sufrir la aminación reductiva con el compuesto 3 para dar el compuesto 4 que puede reducirse al compuesto 5. El compuesto 5 se puede tratar con NaOH seguido por la acidificación usando ácido oxálico para dar la sal de oxalato de hidrazina deseada (6) .

Ejemplo 8-1 Esquema de reacción 8a describe la sintesis de 2- ciclopropiletil-hidrazina oxalate salt (6a) . 5 85% (2 etapas) fí ¡ 1. 40% NaOH, reflujo.12 h H fí H V 2. ácido oxálico, 50% H2N V HO T 5a 6a Éster etílico de ácido N ' - (2- Ciclopropiletilidene) hidrazincarboxílico (4a) : Cloruro de oxalilo (4.7 mL, 54.3 mmoles) se disolvió en 120 mL de CH2C12 y la solución resultante se enfrió a -78 °C. Se añadió mediante goteo sulfóxido de dimetilo (7.7 mL, 0.109 mol) y la mezcla de reacción se agitó durante 10 min a -78 °C. 2-Ciclopropiletanol (7) (4.25g, 49.3 mmoles) se disolvió en 10 mL de CH2C12 y se le añadió todo junto a la reacción. Después de agitar durante 1 h, se le añadió trietilamina (34.7 mL, 0.25 moles) y la reacción se calentó a temperatura ambiente. La mezcla heterogénea se dividió entonces entre CH2C12 y agua y se extrajo dos veces con CH2C12. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgS04, y se filtraron. La solución resultante de 2-ciclopropiletanal se concentró al vacio a un volumen de aproximadamente 50 mL usando un baño en evaporador giratorio rellenado con hielo triturado. Debido a la volatilidad de este aldehido, se usó como una mezcla cruda y no se purificó más. La solución de 2-ciclopropiletanal se diluyó con 50 mL EtOH. Se le añadió carbazato de etilo (5.14 g, 49.3 mmoles) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 12 h, bajo la cual se concentró al vacío y el material crudo se purificó mediante cromatografia en columna de vaporización instantánea (0-5 % MeOH en CH2C12) para dar 7.1 g (85 %) de la hidrazona (4a) como un sólido cristalino incoloro. 1H-RMN (400 MHz, CDC13) : 8.21 (br s, ÍH) ; 7.21 (s, ÍH) ; 4.23 (m, 2H) ; 2.17 (t, 3H, J= 5.9 Hz) 1.06 (m, 2H) ; 0.80 (m, ÍH) ; 0.1 (d, 2H) ; 0.48 (m, 2H) ; 0.13 (m, 2H) ppm. Éster etílico de ácido N ' - (2-ciclopropiletil) hidrazincarboxílico (5a) Éster etílico de ácido N'-(2-ciclopropiletiliden) hidrazincarboxilico (4a) (1.5 g, 8.9 mmoles) se disolvió en 35 mL EtOH y a esta solución se le añadió PVC al 5% (0.2 g, 0.9 mol). Se evacuó la atmósfera en el matraz y se reemplazo tres veces con H2. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 h bajo una presión ligeramente positiva de H2l bajo la cual se filtró a través de alúmina neutral y se concentró para producir 1.4 g (93%) del producto deseado (4a) como un liquido incoloro transparente. ^-RMN (400 MHz, CDC13) : 4.18 (q, 2H, J= 7.0 Hz); 3.00 (t, 2H, J= 7.0 Hz) 1.42 (q, 2H, J= 7.0 Hz) ; 1.29 (t, 3H, J= 7.2 Hz); 0.73 (m, ÍH) ; 0.1 (d, 2H) ; 0.47 (m, 2H) ; 0.08 (m, 2H) ppm.

Sal oxalato de 2-ciclopropiletil-hidrazina (6a) : Éster etílico de ácido N'-(2-ciclopropiletil) hidrazincarboxílico (5a) (2.2 g, 12.6 mmoles) se suspendió en 7 mL de una solución de NaOH acuosa al 40%. La mezcla bifásica se calentó durante 12 horas a 120 °C, bajo la cual se enfrió a temperatura ambiente y se dividió entre salmuera y CH2CI2. La capa orgánica se removió, se secó sobre MgS04, y se filtró. Se le añadió ácido oxálico (1.1 g, 12.6 mmoles) al material filtrado, el cual después de 12 h se filtró y se secó al vacio para para producir 1.7 g (50 %) de la sal de oxalato (6a) como un polvo blanco. 1H-RMN (400 MHz, D20) : 3.13 (t, 2H, J= 7.2 Hz); 1.46 (q, 2H, J= 7.2 Hz) ; 0.61 (m, ÍH) ; 0.1 (d, 2H) ; 0.39 (m, 2H) ; 0.01 (m, 2H) ppm.

Ejemplo 8-2 Sintesis de sal oxalato de 3-metilbutil hidrazina 6b Usando una ruta sintética similar empezando con isovaleraldehido y cabazato de etilo, se preparó también la sal oxalato de 3-metilbutil hidrazina (6b) . XH-NMR (400 MHz, D20) : 3.09 (t, 2H, J= 8.0 Hz); 1.58 (m, ÍH) ; 1.47 (m, 2H) ; 0.84 (d, 6H, J= 6.3 Hz) ppm.

Ejemplo 8-3 Sintesis de sal oxalato de (3, 3-dimetil-butil) -hidrazina (k) Usando la misma ruta sintética, se preparó también la sal oxalato de ( 3, 3-dimetil-butil) -hidrazina (6c). XH RMN (400MHz, D20) : d 3.08 (m, 2H) , 1.47 (m, 2H) , 0.85 (s, 9H) ppm.

El esquema de reacción 9 describe la síntesis de los intermediarios de 9, 4a, 10a, 10b y 4b.

Esquema de reacción 9 4a 10a BBr3, CH2Cl2 t.a. _ V - EtOH, H2S04 H° Y Va O 80 °C H H 4b 10c 7-Metoxi-l, 1-dioxo-l, 4-dihidro-2H-l?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-ona (8) Una solución de isocianato de clorosulfonilo (17 mL, 195 mmoL) se disolvió en 150 mL de nitroetano y se enfrió a - 40 °C. Una solución de 4-metoxianilina (7) (20 g, 162 mmoles) en 100 mL de nitroetano se añadió entonces mediante goteo de un embudo de goteo con agitación. Después que se completó la adición, la reacción se agitó durante 5 minutos adicionales y se le añadió cloruro de alumino (25 g, 195 mmoles) . La mezcla se calentó rápidamente a 110 °C con agitación durante 20 minutos. El material crudo material se vertió entonces en hielo y el precipitado se recolectó mediante filtración por succión, se lavó con agua fría, y se secó al vacío para producir 35 g del producto deseado (8) como un polvo púrpura en 95 % de rendimiento. 1H RMN (400 MHz, DMS0-d6) : d 11.05 (s, ÍH) , 7.2 (m, 3H) , 3.78 (s, 3H) , 3.6 (br, ÍH) . 2-Amino-5-metoxi-bencensulfonamida (9) Una solución de 8 (15 g, 65. 1 mmoles) se disolvió en 140 mL de ácido sulfúrico acuoso al 50 %. La solución se calentó entonces a 130 °C durante 6 horas. La solución se vertió después sobre hielo y se neutralizó a 0°C con la adición de hidróxido de sodio acuoso saturado. La mezcla se extrajo entonces con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con salmuera, y se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se secó al vacio para producir 8.1 g del producto deseado (9) como un sólido café en 60% de rendimiento. Véase procedimiento descrito en Girard, Y, et al . , J. Chem . Soc . Perkin Trans 1 , 1043-1047 (1979). XU RMN (400 MHz, DMS0-d6) : d 7.19 (s, 2H) , 7.07 (d, ÍH, J= 2.8 Hz), 6.90 (dd, ÍH, J:= 8.8 Hz, JJ = 2.8 Hz), 6.73 (d, ÍH, J= 8.8 Hz) , 5.40 (s, 2H) , 3.65 (s, 3H) . Éster etílico de ácido N- ( 4-metoxi-2-sulfamoil-fenil) -malonamico (10) Una suspensión neta de 9 (8.0 g, 40 mmoles) en dietilmalonato (14.1 g, 82 mmoles) se calentó a 160 °C durante 60 minutos después se enfrió a temperatura ambiente.

La mezcla se trituró en hexano y se decantó dos veces. La mezcla se trituró entonces en éter dietílico y se decantó dos veces. El sólido restante se secó entonces al vacío para producir 8.8 g del producto deseado (10) como un sólido café en 70% de rendimiento. ?U RMN (400 MHz, DMS0-d6) : d 9.39 (s, ÍH) , 7.72 (d, ÍH, J= 8.8 Hz), 7.46 (s, 2H) , 7.34 (m, ÍH) , 7.16 (m, ÍH) , 4.10 (m, 2H) , 3.78 (s, 3H) , 3.54 (s, 2H) , 1.95 (m, 3H) . Éster etílico de ácido (7-metoxi-l, 1-dioxo-l, 4-dihidro-l?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -acético (4a) Una mezcla de 10 (8.0 g, 28 mmoles) en oxicloruro de fósforo (150 mL, 1.64 mol) se calentó a reflujo durante 2.5 horas, después se enfrió a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El residuo se disolvió entonces en acetato de etilo y se neutralizó con bicarbonato de sodio acuoso saturado. La fase orgánica se lavó con ácido clorhídrico 2 N y después salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró al vacío. El producto sólido se trituró entonces con éter dietilico para producir 6.6 g del producto deseado (4a) como un sólido café en 79 % de rendimiento. Véase procedimiento descrito en solicitud de patente internacional No. PCT/US03/16374. XH RMN (400 MHz, DMS0-d6) : d 12.20 (s, ÍH) , 7.27 (m, 2 H) , 7.20 (s, ÍH) , 4.14 (q, 2H, J= 7.2 Hz), 3.73 (s, 3H) , 3.66 (s, 2H) , 1.21 (t, 3H, J= 7.6 Hz); LC-EM (ESI+) : m/e = 299.1 [M+l]+. Ácido (7-metoxi-l, 1-dioxo-l, 4-dihidro-l] 6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -acético (10a) A una suspensión de éster etílico de ácido (7-metoxi-1, 1-dioxo-1, 4-dihidro-l?6-benzo [l,2,4]tiadiazin3-il)~ acético (4a) (1.0 g, 3.35 mmoles) en 5 mL de THF y 1 mL de DMF, se le añadió 10 mL de 6.0 M de HCl en H20 y la mezcla de reacción se batió a temperatura ambiente durante 2 dias o una semana. La mezcla de reacción se diluyó con salmuera, se filtró, se lavó y se recolectó el sólido que se secó adicionalmente bajo alto vacio durante la noche para dar el producto deseado de 705.4 mg como primer lote del producto (10a). El material filtrado se extrajo tres veces con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre MgS0 , se filtró, se concentró bajo presión reducida y se secó adicionalmente bajo alto vacío durante la noche para dar el segundo lote del producto deseado (10a) (185.2 mg) . En total se obtuvieron 890.6 mg del compuesto 10a con 98.4 % de rendimiento. Este producto se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. Esta reacción se repitió múltiples veces en una escala mayor y el rendimiento varió de 85 a 98 %. Ácido (7-hidroxi-l, 1-dioxo-l, 4-dihidro-l?6-benzo [1,2, 4 ]tiadiazin-3-il) -acético (10c) : A una solución del compuesto 4a (1 g, 3.7 mmoles) en diclorometano (23 mL) , se le añadió mediante goteo una solución de 1.0 M de BBr3 en diclorometano a 0 °C durante 5 minutos. La mezcla de reacción se agitó a 0 °C a temperatura ambiente durante la noche. El resultado LC-EM confirmó la finalización de la reacción. La mezcla de reacción se vertió en 50 mL de hielo la cual se extrajo con EtOAc (150 mL x 3) . La capa orgánica combinada se secó sobre MgS04, se filtró, se concentró bajo presión reducida y además se secó bajo alto vacío para dar 826.8 mg del producto deseado (10c) como una espuma café en 87.2 % de rendimiento. Este producto crudo se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LC-EM: (EST) m/e =257.10 [M+l]+ (em exacto: 256.02) . En un experimento separado, se repitió la reacción de arriba en una escala más grande en donde 1.5 g (5.03 mmoles) material de inicio de 4a se usó dando como resulta el producto crudo de 10c que se transfirió directamente al compuesto 4b. Éster etílico de ácido (7-hidroxi-l, 1-dioxo-l, 4-dihidro-l?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -acético (4b) : EtOH (15 mL) y 150 µL de H2S0 (conc.) se le añadieron al compuesto 10c (5.03 mmoles) y la mezcla se calentó a 80 °C durante 45 minutos con agitación. El solvente se evaporó parcialmente a la mitad del volumen original bajo presión reducida. EtOAc (30 mL) se le añadió y la mezcla resultante se lavó con H2O (15 mL x 3) mediante extracción. La capa acuosa se retroextrajo con EtOAc una vez (60 mL) y la capa orgánica combinada se secó sobre MgS0 anihidro, se filtró, se concentró para dar el producto deseado (4b) (1.11 g) como un sólido gris. Este material crudo se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LC-EM: (ESI) m/e = 285.10 [M+l ]+ A. (em exacto: 284.05) .

El esquema de reacción 10 describe la sintesis del intermediario 10b.

Esquema de reacción 10 10b Ester etílico de ácido N- ' (2-sulfamoil-fenil) -malonamico (12) : Una suspensión de 2-aminobencensulfonamida 11 (10.0 g, 58.1 mmoles) en dietilmalonte (18.1 mL) se calentó a 160°C. La mezcla de reacción se volvió homogénea al calentarse y se agitó continuamente durante 6 horas a 160 °C. Al enfriar a temperatura ambiente se le añadió éter dietilico (150 mL) a la mezcla de reacción para inducir la precipitación. El precipitado se recolectó mediante filtración al vacío para dar 12 como un sólido púrpura (5.0 g, 30%). ^ RMN (400 MHz, D6-DMS0) d 9.57 (s, 1 H) , 7.99 (d, J= 8 Hz, 1 H) , 7.84 (dd, J= 8, 1 Hz, 1 H) , 7.58 (td, J= 8, 1 Hz, 1 H) , 7.53 (s, 2 H) , 7.31 (td, J= 8, 1 Hz, 1 H) , 4.14 (dt, J= 7.2, 7.2 Hz, 2 H) , 3.60 (s, 2 H) , 1.22 (t, J = 7.2 H, 3 H) . MS(ESI+) m/e 537 [M+H]+. Éster etílico de ácido ( 1, 1-dioxo-l, 4-dihidro-l?6-benzo [1, 2, 4 ] tiadiazin-3-il) -acético (4c) : Una mezcla de 12 (2.50 g, 8.73 mmoles) en oxicloruro de fósforo (50 mL) se calentó bajo reflujo durante 6 h, se enfrió a temperatura ambiente, y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en acetato de etilo (200 mL) y se extrajo con Na2C03 saturado (100 mL) . La capa orgánica se lavó con HCl 1 N (50 mL) , se secó sobre MgS04, y se concentró al vacío para dar 4c (1.99 g, 85 %) como un sólido amarillo. XH RMN (400MHz, D6-DMS0) d 12.22 (s, ÍH) , 7.79 (d, J=12 Hz, 1 H) , 7.67 (t, J= 10 Hz, 1 H) , 7.45 (t, J= 8 Hz, 1 H) , 7.30 (d, J= 8 Hz, 1 H), 4.15 (dt, J= 7.2, 7.2 Hz, 2 H) , 3.69 (s, 2 H) , 1.21 (t, J= 7.2 Hz, 3 H). Ácido (1, l-dioxo-l,4-dihidro-l?6-benzo[l,2,4] tiadiazin-3-il) -acético (10b) : Una solución de 4c (1.98 g, 7.36 mmoles) en THF (10 mL) y HCl 6 N (20 mL) se agitó durante 2 días a temperatura ambiente. Se le añadió a la solución cloroformo (20 mL) para inducir la precipitación bajo agitación vigorosa 15 min. El precipitado se recolectó mediante filtración al vacio para dar 10b (1.50 g, 85 %) como un sólido amarillo. ?U RMN (400MHz, De-DMSO) d 12.25 (s, 1 H) , 7.78 (d, J= 8 Hz, 1 H) , 7.66 (td, J= 8, 1 Hz, 1 H) , 7.44 (td, J= 8, 1 Hz, 1 H) , 7.32 (d, J= 8 Hz, 1 H) , 3.70 (br s, 1 H) , 3.58 (s, 2 H) .

El esquema de reacción 11 describe la síntesis del intermediario 14b.

Esquema de reacción 11 15 16 14b El intermediario 14b se preparó en una forma similar al procedimiento descrito en Hansen, J. B. et al . J. Med . Chem . 2002, 45 , A l l í - 4187.

Amida de ácido 3-amino-5-cloro-tiofen-2-sulfónico (14b) : lU RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 7.32 (br s, 2H) , 6.58 (s, ÍH) , 5.93 (br s, 2H) . LC-EM (ESI+): m/e = 213.20 [M+H]+.

La sal HCl correspondiente (clorhidrato de 3-amino-5-clorotiofen-2-sulfonamida) de 14b como sal HCl se hizo también de acuerdo con el mismo método de la literatura.

Pruebas biológicas La capacidad de los compuestos de la fórmula I para inhibir la recplicación de HCV se puede demostrar en los siguientes ensayos in vi tro .

Ensayo de inhibición de polimerasa NS5B Los compuestos se probaron durante la inhibición de polimerasa de HCV. Se llevaron a cabo los ensayos en placas flash de 96 pocilios recubiertas con estreptavidina usando 50 nM de enzima, 0.5 µCi de [a-33P]GTP, 0.63 µM de GTP, y 250 nM de oligo (rGi3) /poly rC 5 ' biotinilado en 20 mM de Tris-HCl, pH 7.5, 5 mM de MgCl2, 20 mM de NaCl, 5 mM de ditiotreitol, y 0.1 g/L de BSA. La reacción se detuvo mediante aspiración después de 75 min a 28°C y la placa se lavó varias veces. Después de lavar, se contó la radioactividad incorporada usando un contador de centelleo Microbeta. Los resultados de la prueba (valores IC50) para compuestos de la fórmula I se resumen en la Tabla 1, en donde ++ significa inhibición de polimerasa NS5B con valores IC50 menos de 10 µM, + significa valores IC50 entre 10 µM y 50 µM y no determinado significa valores IC50 que no fueron medidos. La masa medida para cada compuesto en la Tabla 1 correspnde a la masa predicha.

Ensayo de replicón de HCV (EC50 replicón (µM) ) Línea de célula Se obtuvieron células Huh7 de hapatocito humano que contenían replicón dicistrónico de Ralf Bartenschlager en la University de Mainz, Alemania.

Estas células se mantienen bajo selección G418- Geneticina y se pasan cuando son 80-90% confluentes. Esta línea de células Huh7 contiene un elemento ARN de replica autónomo (replicón) que incorpora los elementos HCV no estructurales necesario durante la replicación, y bajo los cuales depende la supervivencia del replicón en la célula. La inhibición de cualquier de las funciones HCV críticas por un compuesto lleva a pérdida del número de copias del replicón. El ensayo se lleva a cabo mediante la preparación de placas de 96 pocilios suficientes que contienen células Huh7, en donde las células se siembran a 4500 células /poci lio , en 200 µl de volumen de medio final. Las células se incuban entonces durante 24 horas a 37°C, 5% de CO2, y 95% de humedad antes se añade el compuesto. Los ensayos de respuesta de concentración de medio-log de ocho puntos se llevan acabo para determinar la potencia/EC50 de los compuestos de la fórmula I para inhibir la replicación del replicón de HCV. El porcentaje final de DMSO aceptable en este sistema de ensayo es de 0.5%. Los compuestos se diluyen en medio en un formato adecuado y 50 µl de cada dilución de fármaco se añade a cada pocilio. Las células son entonces incubadas con los compuestos durante 3 días a 37°C, 5% de C02, y 95% de humedad. Se lleva a cabo la cuantificación de ARN mediante tecnología de ADNb (ADN ramificado) de Genospectra usando NS3 como un marcador viral de ARN y GAPDH como un marcador de ARN celular. La citotoxicidad celular se mide por nivel GAPDH. Después de 72 horas de exposición el medio se descarte de la placa de ensayo y las monocapas celulares se lisan mediante adición de 150 µL de mezcla de lisis (Genospectra) con incubación a 53 ° C durante 45 minutos. Después de la incubación, cada lisado se mezcló a fondo y se transfirieron 5 µL de (sonda NS3) o 10 µL de (sonda GAPDH) de cada lisado a la placa de captura y se analizaron mediante ensayo de ADNb.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (16)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:

1. Un compuesto caracterizado porque tiene la fórmula I en donde R1 y R2 son independientemente H, alquilo, cicloalquilo, arilo, o heterociclilo, y el anillo A es arilo o heterociclilo de 5 ó 6 miembros, en donde las porciones alquilo, arilo, cicloalquilo, o heterociclilo anteriores son sustituidas opcionalmente por 1-3 sustituyentes seleccionados de alcanoilo, alquilamina, amino, arilo, cicloalquilo, heterociclilo, alquilo de C?-C6, haloalquilo de C?-C6, hidroxialquilo de Ci-Ce, alcoxi de Ci-C?, alquilamina de Ci-Cß, dialquilamina de C?-C6, alquenilo de C2-C6 o alquinilo de C2-Cß, en donde cada uno de los cuales puede ser interrumpido por uno o más heteroátomos, carboxilo, ciano, halo, hidroxi, nitro, -N=N-NH2, -C(0)2- (alquilo de Ci-Ce) , -C (O) 2- (arilo) , -C(0)2- (cicloalquilo) , -C (O) 2- (heterociclilo) , -O- (haloalquilo de C?~ e) r -O- (alquilo de Ci-Ce) arilo, -O- (alquilo de C?~ C6) cicloalquilo, -O- (alquilo de Ci-Cß) heterociclilo, -0- (alquilo de Ci-Cß) amino, -0- (alquilo de Ci-Ce) alquilamino, -0- (alquilo de C?-C6) dialquilamino, -0- (alquilo de C?-C6)-C(0)-amino, -0- (alquilo de C?-C6) -C (0) -alquilamino, -0- (alquilo de

Ci-Ce) -S (0) 2-amino, -0- (alquilo de C?-C6)- S (0) 2-alquilamino, -0- (alquilo de Ci-Cß) - S (0) 2-dialquilamino, -0- (alquilo de Ci- C6) -C (0) -dialquilamino, -O-arilo, -O-heterociclilo, -NHC (0) - (C?-C6 alquilo), -NHC (0) - (C?-C6 alquenilo), -NHC (0) - (arilo) , - NHC (0) - (cicloalquilo) , -NHC (0) - (heterociclilo) , -NHC(O)- (alquilo de C?-C6) arilo, -NHC (0) - (alquilo de C?~ C6) cicloalquilo, -NHC (0) - (alquilo de C?-C6) heterociclilo,

NHC (O) - (alquilo de C?-C6) amino, -NHC (O) - (alquilo de Cx-Cß) alquilamina, -NHC (O) - (alquilo de Ci-Ce) dialquilamina, NHC (O) -(alquilo de C?-C6 )C (O) amino, -NHC (O) - (alquilo de Ci-C6)C (O) alquilamina, -NHC (O) - (alquilo de Ci-C6)C (O) dialquilamina, -NHC (O) - (alquilo de C?-C6) N (H) - (alquilo de C?-C6)C(0)2- (alquilo de C?-C6) , -NH- (alquilo de C?-C5) -C (O) -amino, -NH- (alquilo de C?-C6) -C (O) -alquilamino, -NH- (alquilo de C?-C6) -C (O) -dialquilamino, -NHC (0) - (alquilo de Cx-C6) S (0)2 (alquilo de C?-C6) , -NHC (0) - (alquilo de C?-C6) -S- (heterociclilo), -NHS (0) 2- (alquilo de C?-C6) , -NHS(0)2- (arilo) , -NH- (alquilo de C?-C6) - S(0)2-amino, -NH- (alquilo de C?-C6)- S (0)2-alquilamino, -NH- (alquilo de C?-C6) - S(0)2-dialquilamino, -NHS (O) 2- (cicloalquilo) , -NHS(0)2- (heterociclilo) , -NHS (O) (alquilo de C?-C6) , -NHS (O) (arilo) , -NHS (O) (cicloalquilo) , -NHS (O) (heterociclilo) , -NHS (alquilo de C?-C6) , -NHS (arilo), -NHS (cicloalquilo) , y -NH-S- (heterociclilo) , en donde cada uno de los sustituyentes anteriores pueden ser sustituidos opcionalmente más por 1 a 5 sustituyentes seleccionados de amino, alquilamina de C?-C6, dialquilamina de Ci-Cß y alquilo de C?-C6, alcoxi de C?-C6 , alquenilo de Cj.-C6, hidroxilo de C?-C6 e hidroxialquilo de C?-C6, cada uno sustituido opcionalmente por halo, ciano y nitro o una sal, hidrato, tautómero o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo. 2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R1 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de Ci-Cß, arilo y heterociclilo que tienen 1 a 3 átomos de N, 0 o S. 3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R1 se selecciona del grupo que consiste en: ^ y

4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R2 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de Ci-Cß sustituido opcionalmente con arilo de C6-C?0 o cicloalquilo de C3-C8 y heterociclilo de C3-C9 que tiene 1 a 3 átomos de N, O o S y arilo.

5. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R2 se selecciona del grupo que consiste en :

6. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el Anillo A es un arilo o heterociclilo de 5 ó 6 miembros, sustituido opcionalmente con alquilo, -halo, -OH, -O-alquilo, OCHR5C(0) O-alquilo, -OCHR4C (0) NR5R6, -NHR5, -NR5C (0) -arilo, NHS02R7 o -N02, en donde R4, R5 y R6 son independientemente -H o alquilo, o R5 y R6 se combinan con el átomo N al cual están unidos para formar un anillo heterociclilo de 5 ó 6 miembros sustituido opcionalmente con -NH2 y en donde alquilo es alquilo de C?-C6

7. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el anillo A, junto con el anillo al cual se fusiona, se selecciona del grupo que consiste en:

8. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque se selecciona del grupo que consiste en

9. Una composición farmacéuticamente aceptable caracterizada porque comprende un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 y un vehículo farmacéuticamente aceptable .

10. Un método para inhibir la replicación del virus de hepatitis C caracterizado porque comprende exponer el virus de hepatitis C a una concentración terapéuticamente efectiva de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1.

11. Un método de tratamiento de una célula que tiene al menos algunos elementos del virus de hepatitis C caracterizado porque comprende incubar la célula con un compuesto de conformidad con la reivindicación 1.

12. Un método para tratar o prevenir la infección por virus de la hepatitis C en un mamífero en necesidad del mismo, caracterizado porque comprende administrar al mamífero una cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1.

13. El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque el mamífero es un humano.

14. El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque comprende además administrar un agente terapéutico adicional al mamífero.

15. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el agente terapéutico adicional se selecciona del grupo que consiste en un antibiótico, un agente antiemético, un antidepresivo, un agente antifúngico, un agente anti-inflamatorio, un agente antiviral, un agente anticáncer, un agente inmunomodulador, un a-interferón, un ß-interferón, una ribavirina, un agente alquilante, una hormona, una citocina y un modulador tipo receptor Toll.

16. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el agente terapéutico adicional es un modulador tipo receptor Toll.