MX2007001328A - Secuencias de ahass de monocotiledoneas y metodos de uso. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere a polinucleotidos aislados que codifican polipeptidos de subunidad pequena de sintasa acetohidroxiacida (AHASS), y las secuencias de aminoacidos codificadas por estos polinucleotidos. La presente invencion provee casetes de expresion y vectores de expresion en plantas que comprenden los polinucleotidos que codifican los polipeptidos AHASS o polipeptidos de fusion AHASS, Ademas se proveen plantas, semillas, y celulas hospedadoras transformadas con los polinucleotidos, casetes de presion, o vectores de expresion de la presente invencion. La invencion ademas provee metodos de uso de los polinucleotidos de la presente invencion para mejorar la actividad de la presente invencion para mejorar la actividad de AHAS y mejorar la tolerancia de las plantas herbicidas.

Description

SECUENCIAS DE AHASS DE MONOCOTI EDONEAS Y MÉTODOS DE USO CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a novedosos polinucleótidos que codifican la subunidad pequeña de la enzima sintasa acetohidroxiácida y que pueden ser utilizados para mejorar la actividad de sintasa acetohidroxiácida y la tolerancia a los herbicidas de los cultivos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La sintasa acetohidroxiácida (AHAS; EC 4.1.3.18, también conocida como acetolactato sintasa o ALS) , es la primer enzima que cataliza la síntesis bioquímica de los aminoácidos de cadena ramificada valina, leucina, e isoleucina (Singh, 1999, "Biosynthesis of' valine, leucine and isoleucine, " in Plant Amino Acids, Singh, ed. , Marcel Dekker Inc. New York, New York, pp. 227-247) . AHAS es el sitio de acción de cuatro familias de herbicidas estructuralmente diversas que incluyen las sulfonilureas (LaRossa and Falco, 1984, Trends Biotechnol . 2:158-161), las imidazolinonas (Shaver et al . , 1984, Plant Physiol . 76:545-546), las triazolopiri idinas (Subra anian and Gerwick, 1989, "Inhibition of acetolactate synthase by triazolopyrimidines, " en Biocatalysis in Agricul tural Biotechnology, Whitaker and Sonnet, eds., ACS Symposium Series, American Chemical Society, Washington, Ref.179418 D.C., pp. 277-288), y los pirimidiloxibenzoatos (Subramanian et al . , 1990, Plant Physiol . 94:239-244). Los herbicidas de imidazolinona y sulfonilurea son muy utilizados en la agricultura moderna debido a su efectividad a tasas de aplicación muy bajas y la no-toxicidad relativa en animales. Inhibiendo la actividad de AHAS, estas familias de herbicidas previenen el crecimiento ulterior y desarrollo de plantas susceptibles que incluyen muchas especies de malezas. Varios ejemplos de herbicidas de imidazolinona comercialmente disponibles son PURSUIT® (imazetapir) , SCEPTER® (imazaquin) , y ARSENAL® (imazapir) . Los ejemplos de herbicidas de sulfonilurea son clorsulfuron, metsulfuron metilo, sulfometuron metilo, clorimuron etilo, tifensulfuron metilo, tribenuron metilo, bensulfuron metilo, nicosulfuron, etametsulfuron metilo, rimsulfuron, triflusulfuron metilo, triasulfuron, primisulfuron metilo, cinosulfuron, amidosulfiuon, fluzasulfuron, imazosulfuron, pirazosulfuron etilo, y halosulfuron. Debido a su elevada efectividad y baja toxicidad, los herbicidas de imidazolinona son favorecidos para la aplicación por rocío sobre la parte superior de un área amplia de vegetación. La capacidad de rociar un herbicida sobre la parte superior de un amplio espectro de vegetación disminuye los costos asociados con el establecimiento de la plantación y su mantenimiento, y disminuye la necesidad de preparar el sitio antes de proceder al uso de tales químicos. El rociado sobre la parte superior de una especie tolerante deseada da como resultado la posibilidad de lograr rendimiento máximo potencial de las especies deseadas debido a la ausencia de especies competitivas. Sin embargo, la capacidad de usar estas técnicas de rociado depende de la presencia de especies resistentes a la imidazolinona de la vegetación deseada en el área a rociar. Entre los cultivos más importantes, algunas especies leguminosas como la soya son naturalmente resistentes a los herbicidas de imidazolinona debido a su capacidad para metabolizar rápidamente los compuestos herbicidas (Shaner and Robson, 1985, Weed Sci . 33:469-471). Otros cultivos como el maíz (Newhouse et al . , 1992, Plant Physiol . 100:882886) y el arroz (Barrette et al . , 1989, Crop Safeners for Herbicides, Academic Press, New York, pp. 195-220) son algo susceptibles a los herbicidas de imidazolinona. La sensibilidad diferencial a los herbicidas de imidazolinona depende de la naturaleza química del herbicida particular y del metabolismo diferencial del compuesto de una forma tóxica a no tóxica en cada planta (Shaner et al . , 1984, Plan t Physiol . 76:545-546; Brown et al . , 1987, Pestic. Biochem . Physiol . 27:24-29). Otras diferencias fisiológicas de las plantas como la absorción y translocación también juegan un papel importante en la sensibilidad (Shaner and Robson, 1985, Weed Sci . 33:469-471) . Se han obtenido con éxito cultivares resistentes a las imidazolinonas, sulfonilureas, y triazolopirimidinas usando mutagénesis de semillas, microesferas, polen y callo en Zea mays, Arabidopsis thaliana , Brassica napus, Glycine max, y Nicotiana tabacum (Sebastian et al . , 1989, Crop Sci . 29:1403-1408; Swanson et al . , 1989, Theor. Appl . Genet . 78:525-530; Newhouse et al . , 1991, T eor. Appl . Genet . 83:65-70; Sathasivan et al . , 1991, Plan t Physiol . 97:1044-1050; Mourand et al . , 1993, J. Heredi ty 84:91-96). En todos los casos, un gen nuclear parcialmente dominante, único, confirió resistencia. Además cuatro plantas de trigo resistentes a la imidazolinona fueron previamente aisladas por mutagénesis de semilla de Tri ticum aestivum- L. cv. Fidel (Newhouse et al . , 1992, Plant Physiol . 100:882-886). Los estudios hereditarios confirmaron que un gen parcialmente dominante, único, confirió resistencia. Basándose en estudios alélicos, los autores concluyeron que las mutaciones en las cuatro líneas identificadas fueron ubicadas en el mismo locus. Uno de los genes de resistencia del cultivar Fidel fue designado FS-4 (Newhouse et al . , 1992, Plant Physiol . 100:882-886). La resistencia de las plantas a los herbicidas de imidazolinona también ha sido reportada en un número de patentes. Las Patentes Estadounidenses Nos. 4,761,373, 5,331,107, 5,304,732, 6,211,438, 6,211,439 y 6,222,100 en general describen el uso de un gen AHAS alterado para producir resistencia al herbicida en las plantas, y específicamente revelan ciertas líneas de maíz resistentes a la imidazolinona. La Patente Estadounidense No. 5,013,659 revela plantas que exhiben resistencia al herbicida debido a las mutaciones en por lo menos un aminoácido en una o más regiones conservadas. Las mutaciones descritas codifican la resistencia cruzada a las imidazolinonas y sulfonilureas o resistencia específica a las sulfonilureas, aunque no se describe la resistencia específica a la imidazolinona. Adicionalmente, la Patente Estadounidense No. 5,731,180 y la Patente Estadounidense No. 5,767,361 discute un gen aislado que tiene una única sustitución de aminoácido en una secuencia de aminoácido AHAS en monocotiledónea tipo salvaje que resulta en una resistencia específica a la imidazolinona. Además, las plantas de arroz que son resistentes a los herbicidas que interfieren con sintasa acetohidroxiácida han sido desarrolladas por reproducción por mutación y también por la selección de las plantas resistentes a los herbicidas a partir de un conjunto de plantas de arroz producidas por otro cultivo (Véase, Patentes Estadounidenses Nos. 5,545,822, 5,736,629, 5,773,703, 5,773,704, 5,952,553 y 6,274,796). En las plantas, la enzima AHAS está compuesta por dos subunidades: una subunidad grande (rol catalítico) y una subunidad pequeña (rol regulatorio) (Duggleby and Pang, 2000, J. Biochem . Mol . Biol . 33:1-36). La proteína de la subunidad grande de AHAS (denominada AHASL) puede ser codificada por un gen único como en el caso de Arabidopsis y arroz o por múltiples miembros de una familia de genes como en maíz, cañóla, y algodón. Las sustituciones únicas de nucleótidos, específicas en AHASL confieren sobre la enzima un grado de insensibilidad a una o más clases de herbicidas (Chang and Duggleby, 1998, Biochem J. 333:765-777 ) . Los genes de AHASL resistentes a los herbicidas también han sido racionalmente diseñados. La WO 96/33270 y las Patentes Estadounidenses Nos. 5,853,973 y 5,928,937 revelan métodos de modalidad de modelos basados en la estructura para la preparación de las variantes de AHAS, incluyendo aquellas que exhiban una resistencia selectivamente incrementada a los herbicidas tales como las imidazolinas y los herbicidas que inhiben AHAS. Los modelos basados en computadora de la conformación tridimensional del complejo inhibidor de AHAS predicen varios aminoácidos en el enlace (pocket-binding) del inhibidor propuesto como sitios donde mutaciones inducidas probablemente conferirían resistencia selectiva a las imidazolinonas (Ott et al . , 1996, J. Mol . Biol . 263:359-368). Las plantas de trigo producidas con algunas de estas mutaciones racionalmente diseñadas en los sitios de unión propuestos de la enzima AHAS de hecho han exhibido resistencia específica a una sola clase de herbicidas (Ott et al . , 1996, J. Mol . Biol . 263:359-368). Se conoce mucho acerca de la función de las enzimas AHAS a partir de estudios en sistemas procarióticos. Estos estudios han arrojado luz sobre el papel de la subunidad pequeña AHAS de la proteína (AHASS) . Las enzimas AHAS procarióticas existen como dos subunidades proteicas distintas pero físicamente asociadas. En las procariotas, los dos polipéptidos una "subunidad grande" y una "subunidad pequeña" son expresados a partir de genes separados. Se han identificado en bacterias entéricas tres enzimas AHAS importantes, designadas I, II y III, todas las cuales tienen subunidades grandes y pequeñas. En las procariotas, la enzima AHAS ha demostrado ser una enzima regulatoria en el camino biosintético de los aminoácidos ramificados (Miflin, 1971, Arch . Biochm . Biophys . 146:542-550), en donde sólo la subunidad grande ha demostrado tener actividad catalítica. A partir de los estudios de enzimas AHAS en sistemas microbianos, se han descrito dos roles para la subunidad pequeña. Un rol es la inhibición de la retroalimentación alostérica de la subunidad grande catalítica en presencia de isoleucina, leucina, o valina o combinaciones de las mismas. El otro rol es la mejora de la actividad catalítica de la subunidad grande en ausencia de isoleucina, leucina, o valina. Además se ha demostrado que la subunidad pequeña incrementa la estabilidad de la conformación activa de la subunidad grande (Weinstock et al . , 1992, J. Ba cteriol . 174:5560-5566). La expresión de la subunidad pequeña también puede incrementar la expresión de la subunidad grande según lo visto para AHAS I de E . coli (Weinstock et al . , 1992, J. Bacteriol . 174:5560-5566). Los estudios in vi tro han demostrado que la subunidad grande procariótica exhibe, en ausencia de la subunidad pequeña, un nivel basal de actividad de AHAS y que esta actividad no puede ser inhibida por retroalimentación por los aminoácidos isoleucina, leucina, o valina. Cuando se agrega la subunidad pequeña a la misma mezcla de reacción que contiene la subunidad grande, la actividad específica de la subunidad grande aumenta. Mientras que también se sabe que la subunidad pequeña de AHAS ocurre en las plantas, se conoce menos acerca de su función en vivo . La WO 98/37206 revela la secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de ADNc de AHASS de Nicotiana plumbaginifolia y el uso de esta secuencia en la selección de herbicidas, que inhiben la actividad de la holoenzima AHAS. Además, la WO 98/37206 revela una secuencia de ADNc de longitud parcial para una proteína AHASS de maíz. La Patente Estadounidense No. 6,348,643 revela las secuencias de nucleótidos y aminoácidos de una proteína AHASS de longitud total de Arabidopsis thaliana . Esa patente además revela la activación de las formas tipo salvaje y resistente al herbicida de la proteína AHASL de Arabidopsis mediante la adición de la proteína AHASS de Arabidopsis . La activación fue demostrada revelando la capacidad de una proteína AHASS de Arabidopsis para incrementar la actividad de AHAS específica de las formas tipo salvaje y resistente al herbicida de la proteína AHASL. Más recientemente, la Publicación de Patente Estadounidense No. 2001/0044939 reportó los efectos beneficiosos de la reconstitución de una proteína AHASS de una planta nativa con una proteína AHASL que no es específica de la especie, como se muestra a través de la capacidad de la proteína AHASS de N. plumbagini folia para incrementar la actividad específica de una proteína AHASL de otra planta dicotiledónea, Arabidopsis thaliana .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención provee polinucleótidos aislados que codifican polipéptidos de subunidad pequeña de sintasa acetohidroxiácida (AHASS) de maíz, arroz y trigo que son denominados subunidad pequeña de AHAS de Zea mays subtipo 1 paralogo a (ZmAHASSla) , subunidad pequeña de AHAS de Oryza sativa subtipo 1 (OsAHASSl) , y subunidad pequeña de AHAS de Tri ticum aestivum subtipo 1 (TaAHASSlX) , respectivamente. Los polinucleótidos de la presente invención comprenden una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste de las secuencias de nucleótidos descritas en las SEC ID NOS: 1 y 3, y las secuencias de nucleótidos que codifican las secuencias de aminoácidos establecidas en las SEC ID NOS: 2, 4, y 5, y fragmentos y variantes de las secuencias de nucleótidos que codifican un polipéptido que tiene actividad de AHASS. En una modalidad, los polinucleótidos de la presente invención comprenden los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1 o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3. En otra modalidad, los polinucleótidos de la presente invención tienen al menos un 80% de identidad de secuencia con las secuencias de nucleótidos descritas en la SEC ID NO: 1 o la SEC ID NO: 3, o con los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1 o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3, en donde tales polinucleótidos codifican un polipéptido que tiene actividad de AHASS. Los polinucleótidos aislados de la presente invención además comprenden polinucleótidos que codifican la forma madura de los polipéptidos AHASS de la presente invención. Tales formas maduras de los polipéptidos AHASS carecen del péptido de tránsito al cloroplasto ubicado en el extremo N-terminal. La presente invención además provee secuencias de polinucleótidos que comprenden un promotor de AHASS de arroz. El experto en el arte reconocerá que este polinucleótido comprende una región del genoma del arroz en dirección 5' del sitio de inicio de transcripción del gen de AHASS del arroz que uno puede manipular para generar un promotor de longitud mínima que aún es posible que funcione en plantas. El fragmento genómico del arroz que comprende este promotor es descrito en la SEC ID NO: 10. La presente invención además provee secuencias de polinucleótidos que comprenden un terminador de AHASS de arroz. El experto en el arte reconocerá que este polinucleótido comprende una región del genoma del arroz en dirección 31 del codón de interrupción de traducción del gen de AHASS de arroz, que uno puede manipular para generar un terminador de longitud mínima que es posible que funcione en plantas. El fragmento genómico de arroz que comprende este terminador es descrito en la SEC ID NO: 11. La presente invención además provee casetes de expresión para expresar los polinucleótidos de la presente invención en plantas, células de plantas, y otras células hospedadoras no humanas, que incluyen, entre otras, bacterias, células fúngicas, y células animales. Los casetes de expresión comprenden un promotor con capacidad de expresión en la planta, célula de planta, u otra célula hospedadora de interés, operativamente vinculado a un polinucleótido de la presente invención que codifica un polipéptido AHASS de longitud completa (es decir, incluyendo el péptido de tránsito al cloroplasto) o un polipéptido AHASS maduro (es decir, sin el péptido de tránsito al cloroplasto) . Si se desea la expresión en los plástidos de plantas o células de plantas, el cásete de expresión puede además comprender una secuencia de objetivo al cloroplasto operativamente unida que codifique un péptido de tránsito al cloroplasto. La presente invención además provee vectores de expresión en plantas para expresar tanto un polipéptido AHASL eucariótico como un polipéptido AHASS en una planta o una célula hospedadora de interés. En una modalidad, los vectores de expresión en plantas comprenden un primer constructo de polinucleótido y un segundo constructo de polinucleótido, en donde el primer constructo comprende un primer promotor operativamente unido a una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido AHASL eucariótico, en donde el segundo constructo comprende un segundo promotor operativamente unido a una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido AHASS, y en donde los primer y segundo promotores son capaces de impulsar la expresión genética en una planta o célula hospedadora de interés. En una modalidad, los primer y segundo constructos de polinucleótidos además comprenden una secuencia de objetivo al cloroplasto operativamente unida. En otra modalidad, el polipéptido AHASL eucariótico es un polipéptido AHASL de planta, y en algunos casos es un polipéptido AHASL tolerante al herbicida.

La presente invención provee polipéptidos aislados que comprenden los de polipéptidos AHASS. Los polipéptidos aislados comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de las secuencias de aminoácidos descritas en la SEC ID NO: 2, 4, y 5, las secuencias de aminoácidos codificadas por las secuencias de nucleótidos descrita en la SEC ID NO: 1 y 3, y fragmentos y variantes de las secuencias de aminoácidos que codifican un polipéptido que comprende actividad de AHASS. Tales fragmentos incluyen, pero no se limitan a, formas maduras de los polipéptidos de AHASS de la presente invención, particularmente una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de: los aminoácidos 77-483 de la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID NO: 2, los aminoácidos 74-481 de la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID NO: 4, los aminoácidos 64-471 de la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID NO: 5, la secuencia de aminoácidos codificada por los nucleótidos 275-1495 de la secuencia de nucleótidos descrita en la SEC ID NO: 1, y la secuencia de aminoácidos codificada por los nucleótidos 342-1565 de la secuencia de nucleótidos descrita en la SEC ID NO: 3. La presente invención además provee polipéptidos que tienen por lo menos 81% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID NO: 2, 4, ó 5, o por lo menos 77% de identidad de secuencia con los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5, donde tales polipéptidos comprenden actividad de AHASS. La presente invención además provee plantas transgénicas, semillas, y células de plantas transgénicas que comprenden un polinucleótido AHASS de la presente invención. En una modalidad, el polinucleótido AHASS está operativamente unido a un promotor que impulsa su expresión en una célula de una planta. En otra modalidad, el promotor es un promotor consecutivo o un promotor de tejido preferido. En otra modalidad, el constructo de polinucleótido además comprende una secuencia de objetivo a cloroplasto operativamente unida al polinucleótido AHASS. En una modalidad, la planta transgénica es una planta monocotiledónea seleccionada de un grupo que consiste de maíz, trigo, arroz, cebada, centeno, avenas, tritical, mijo y sorgo. En otra modalidad, la planta transgénica es una planta dicotiledónea seleccionada de un grupo que consiste de soya, algodón, Brassi ca spp. , tabaco, papa, remolacha, alfalfa, girasol, azafrán, y cacahuate. Preferentemente, estas plantas transgénicas, semillas, y células de plantas que comprenden el polinucleótido AHASS de la presente invención tienen actividad de AHAS y/o resistencia a por lo menos un herbicida que se incrementa cuando se compara con una variedad tipo salvaje de la planta.

La presente invención provee métodos para mejorar la actividad de AHAS en una planta que comprenden transformar una planta con un polinucleótido AHASS de la presente invención. En una modalidad, el polinucleótido AHASS está en un cásete de expresión que comprende un promotor, operativamente unido a la secuencia de nucleótidos de AHASS, que es capaz de impulsar la expresión genética en una célula de planta. En otra modalidad, el promotor es un promotor constitutivo o un promotor de tejido preferido. En todavía otra modalidad, la planta comprende un polipéptido de subunidad grande de sintasa acetohidroxiácida tolerante a herbicidas (AHASL) . Los métodos de la presente invención pueden ser utilizados para mejorar o incrementar la resistencia de una planta a por lo menos un herbicida que interfiere con la actividad catalítica de la enzima AHAS. También se provee una planta transgénica producida a través de estos métodos, en donde la actividad de AHAS en esta planta transgénica se incrementa cuando se compara con una variedad tipo salvaje de la planta. La presente invención además provee métodos para mejorar la tolerancia a los herbicidas en una planta tolerante a los herbicidas que comprende transformar la planta con un polinucleótido AHASS de la presente invención. En una modalidad, el polinucleótido de AHASS está en un cásete de expresión que comprende un promotor, operativamente unido a la secuencia de nucleótidos de AHASS, capaz de impulsar la expresión genética en una célula de planta. En otra modalidad, el promotor es un promotor constitutivo o un promotor de tejido preferido. En una modalidad, el constructo de polinucleótido AHASS además comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido AHASL tolerante a los herbicidas. En otra modalidad, la planta tolerante a los herbicidas comprende un polipéptido AHASL. En todavía otra modalidad, la planta tolerante a los herbicidas está o no está genéticamente diseñada para expresar el polipéptido AHASL tolerante a los herbicidas. En otra modalidad, la planta tolerante a los herbicidas es una planta tolerante a imidazolinona. También se provee una planta transgénica producida a través de estos métodos, en donde la actividad de AHAS en tal planta transgénica se incrementa cuando se compara con una variedad tipo salvaje de la planta. La invención además provee métodos para controlar las malezas cercanas a una planta, que comprende aplicar un herbicida de imidazolinona a las malezas y a la planta, en donde la planta tiene tolerancia incrementada al herbicida de imidazolinona cuando se compara con una variedad tipo salvaje de la platnta y en donde la planta comprende un constructo de polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos de AHASS de la presente invención. En una modalidad, la secuencia de nucleótidos de AHASS está definida en la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3; los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3. En otra modalidad, el nucleótido AHASS comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido definido en la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4, o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5. La presente invención además provee polipéptidos de fusión aislados que comprenden un dominio de AHASL operativamente unido a un dominio de AHASS, en donde el polipéptido de fusión tiene actividad de AHAS. EL dominio de AHASL comprende una secuencia de aminoácidos de un polipéptido AHASL eucariótico maduro. El dominio de AHASS comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID NO: 2, 4, y 5; las secuencias de aminoácidos codificadas por las secuencias de nucleótidos descritas en la SEC ID NO: 1 y 3; y fragmentos y variantes de las secuencias de aminoácidos que codifican un polipéptido que tiene actividad de AHASS. Tales fragmentos incluyen, pero no se limitan a, formas maduras de los polipéptidos de AHASS de la presente invención, particularmente una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de: los aminoácidos 77-483 de la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID NO: 2, los aminoácidos 74-481 de la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID NO: 4, los aminoácidos 64-471 de la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID NO: 5, la secuencia de aminoácidos codificada por los nucleótidos 275-1495 de la secuencia de nucleótidos descrita en la SEC ID NO: 1, y los nucleótidos 342-1565 de la secuencia de nucleótidos descrita en la SEC ID NO: 3. En una modalidad, el polipéptido AHASL eucariótico es un polipéptido AHASL de planta. En otra modalidad, el polipéptido AHASL eucariótico es un polipéptido AHASL de una planta tolerante a los herbicidas. En todavía otra modalidad, el polipéptido de fusión además comprende una región enlazante operativamente unida entre el dominio AHASL y el dominio AHASS. Preferentemente, el polipéptido AHASL y el polipéptido AHASS son de distintas especies. La presente invención además provee vectores de expresión para expresar un polipéptido de fusión AHASL-AHASS en una planta o célula hospedadora de interés. El vector de expresión comprende un promotor operativamente unido a un polinucleótido que codifica un polipéptido de fusión AHASL-AHASS. El polinucleótido comprende una primera secuencia de nucleótidos operativamente unida a una segunda secuencia de nucleótidos, en donde la primera secuencia de nucleótidos codifica una secuencia de aminoácidos que comprende un polipéptido AHASL maduro eucariótico y la segunda secuencia de nucleótidos codifica una secuencia de aminoácidos que comprende un polipéptido AHASS maduro de la presente invención. El polinucleótido puede además comprender una tercera secuencia de nucleótidos operativamente unida que codifica una región enlazante, la cual se encuentra entre los dominios AHASL y AHASS del polipéptido de fusión. En una modalidad, el polinucleótido que codifica un polipéptido de fusión AHASL-AHASS además comprende una secuencia de objetivo al cloroplasto operativamente unida. En otra modalidad, el dominio de AHASL eucariótico del polipéptido de fusión es un polipéptido AHASL de una planta. En todavía otra modalidad, el polipéptido AHASL eucariótico es un polipéptido AHASL de una planta tolerante a los herbicidas. La presente invención además provee plantas transgénicas, semillas, y células de plantas que comprenden un polinucleótido que codifica un polipéptido de fusión AHASL-AHASS. También se proveen métodos de producción de una planta tolerante a los herbicidas, que comprenden transformar una célula de una planta con un vector de expresión que comprende un promotor operativamente unido a un polinucleótido que codifica un polipéptido de fusión AHASL-AHASS, y generar una planta transgénica a partir de la célula de planta transgénica, en donde la planta transgénica que comprende el polipéptido de fusión AHASL-AHASS tiene tolerancia incrementada a por lo menos un herbicida cuando se compara coh una variedad tipo salvaje de la planta.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 es una alineación de la secuencia de aminoácidos de los polipéptidos de AHASS maduros de la presente invención: ZmAHASSla (residuos 77-483 de la SEC ID NO: 2), OsAHASSl (residuos 74-481 de la SEC ID NO: 4), y TaAHASSlX (residuos 64-471 de la SEC ID NO: 5) . Las secuencias de aminoácidos deducidas (menos el péptido de tránsito al cloroplasto variable esperado) anteriormente fueron alineadas usando el Clustal X versión 1.81, Modo de Alineación Múltiple. La alineación completa fue llevada a cabo alternativamente (al menos tres veces) usando los parámetros por omisión. "*" indica que el aminoácido es idéntico en todas las secuencias. ":" y "." son sustituciones conservadoras descendentes . Las regiones conservadas del Dominio 1 y Dominios 2 son indicadas en negritas. El dominio 1 está en el término N, y el dominio 2 está en el término-C. Existe una región de enlace variable interpuesta que se sitúa entre los Dominios 1 y 2. La Figura 2 provee identidades de secuencias de aminoácidos porcentuales a partir de comparaciones por pares de polipéptidos de AHASS maduros. Las comparaciones incluyen todas las secuencias de AHASS en plantas publicamente conocidas y las secuencias de aminoácidos de la presente invención para ZmAHASSla (SEC ID NO : 2), OsAHASSl (SEC ID NO: 4), y TaAHASSIX (SEC ID NO: 5). La secuencia de aminoácidos deducida de las secuencias de codificación de todos los genes y otras secuencias de longitud completa putativas fueron alineadas usando el algoritmo ClustalW. Las diferencias por pares fueron calculadas basándose en esta alineación. Los datos son presentados en formato porcentual de identidad de secuencia entre dos secuencias. Nomenclatura: "GmAHASSl" se refiere a la subunidad pequeña de AHAS de Glycine max subtipo 1 (SEC ID NO: 18 de la Publicación de Patente Estadounidense No. 2001/00044039A1) ; "NpAHASSl" se refiere a la subunidad pequeña de AHAS de Nicotiana plumbagini folia subtipo 1 (NO. de acceso AJ234901.1); "ZmAHASS2" se refiere a la subunidad pequeña de AHAS de Zea mays subtipo 2 (SEC ID NO: 10 de la Publicación de Patente Estadounidense No. 2001/00044039A1)'; "OsAHASS2" se refiere a la subunidad pequeña de AHAS de Oryza sa tiva subtipo 2 (SEC ID NO: 16 de la Publicación de Patente Estadounidense No. 2001/00044039A1) ,- "AtAHASSl" se refiere a la subunidad pequeña de AHAS de Arabidopsis thaliana AHAS subtipo 1 (NM_179843.1) ; y "AtAHASS2" se refiere a la subunidad pequeña de AHAS de A . thaliana subtipo 2 (NM_121634.2) . La Figura 3 provee identidades de secuencias de aminoácidos porcentuales a partir de comparaciones por pares del Dominio 1 de polipéptidos de AHASS. Las comparaciones incluyen el Dominio 1 de todas las secuencias de AHASS en plantas publicamente conocidas y de la secuencia de aminoácidos de la presente invención para ZmAHASSla (SEC ID NO: 2), OsAHASSl (SEC ID NO: 4), y TaAHASSIX (SEC ID NO: 5). La nomenclatura para la secuencia de aminoácidos y las identidades porcentuales de secuencias de aminoácidos son como se describió anteriormente para la Figura 2 excepto que se utilizó solamente la secuencia de aminoácidos correspondiente al Dominio 1 para determinar el porcentaje de identidad de secuencia. La Figura 4 provee identidades de secuencias de aminoácidos porcentuales a partir de comparaciones por pares del Dominio 2 de polipéptidos de AHASS. Las comparaciones incluyen el Dominio 2 de todas las secuencias de AHASS en plantas publicamente conocidas y de la secuencia de aminoácidos de la presente invención para ZmAHASSla (SEC ID NO: 2), OsAHASSl (SEC ID NO: 4), y TaAHASSIX (SEC ID NO: 5). La nomenclatura para la secuencia de aminoácidos y las identidades porcentuales de secuencias de aminoácidos son como se describió anteriormente para la Figura 2 excepto que se utilizó solamente la secuencia de aminoácidos correspondiente al Dominio 2 para determinar el porcentaje de identidad de secuencia. Los dominios 1 y 2 fueron empíricamente determinados a partir de la secuencia de aminoácidos de polipéptidos de AHASS conocidos. Cada dominio contiene un dominio ACT. Los polipéptidos de AHASS en planta conocidos tienen dos repeticiones de un polipéptido AHASS de una duplicación antigua, las "repeticiones" son ahora completamente distintas entre si y son denominadas en la presente como Dominios 1 y 2. La Figura 5 provee una alineación de la secuencia de aminoácidos de OsAHASSl (SEC ID NO: 4) y una traducción de anotaciones del ADN genómico de OsAHASSl que están disponibles del Institute for Genomic Research (TIGR) (SEC ID NO: 12). Los aminoácidos que son idénticos en las posiciones correspondientes en las dos secuencias de aminoácidos están sombreados. También se provee una secuencia de consenso. La Figura 6 ilustra la alineación y regiones de superposición de dos ESTs y un contig propietario usado para construir la secuencia de nucleótidos de OsAHASSl de longitud completa (SEC ID NO: 3) .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a moléculas de polinucleótidos aisladas que comprenden secuencias de nucleótidos que codifican polipéptidos de la subunidad pequeña de sintasa acetohidroxiácida (AHASS) . Específicamente, la presente invención se refiere moléculas de polinucleótidos aisladas que codifican polipéptidos de AHASS de monocotiledóneas de maíz ( Zea mays) , arroz ( Oryza sa tiva ) , y trigo ( Tri ticum aestivum) , los cuales son referidos en la presente como ZmAHASSla, OsAHASSl, y TaAHASSIX, respectivamente. Más específicamente, la presente invención se refiere a moléculas de polinucleótidos aisladas que comprenden una secuencia de polinucleótidos seleccionada del grupo que consiste de: una secuencia de nucleótidos definida en la SEC ID NO: 1 o la SEC ID NO: 3, una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido AHASS como se define en la SEC ID NO: 2, 4, y 5, y fragmentos y variantes de tales secuencias de nucleótidos que codifican polipéptidos de AHASS funcionales. Además, la presente invención provee polinucleótidos ' aislados que codifican un polipéptido ZmAHASSla, OsAHASSl, o TaAHASSIX maduro. Los polipéptidos de AHASS maduros de la presente invención carecen del péptido de tránsito a cloroplasto que se encuentra en el extremo N-terminal de cada uno de los polipéptidos ZmAHASSla, OsAHASSl, y TaAHASSIX, pero retienen la actividad de AHASS. En particular, los polinucleótidos de la presente invención comprenden una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste de: nucleótidos 275-1495 de la secuencia de nucleótidos descrita en la SEC ID NO: 1, nucleótidos 342-1565 de la secuencia de nucleótidos descrita en la SEC ID NO: 3, una secuencia de nucleótidos que codifica los aminoácidos 77-483 de la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID NO: 2, una secuencia de nucleótidos que codifica los aminoácidos 64- 471 de la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID NO: 4, una secuencia de nucleótidos que codifica los aminoácidos 74-481 de la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID NO: 5, y fragmentos y variantes de estas secuencias de nucleótidos que codifican un polipéptido AHASS maduro que tiene actividad de AHASS. Como se usa en la presente, a menor que se indique lo contrario, "actividad de AHASS" se refiere a una actividad biológica de un polipéptido AHASS, por lo cual el polipéptido AHASS incrementa la actividad de AHAS de por lo menos un polipéptido AHASL cuando tales polipéptidos de AHASS y AHASL se encuentran, con relación a la actividad de AHAS del polipéptido AHASL en ausencia del polipéptido AHASS. Las moléculas de polinucleótidos de AHASS aisladas de la presente invención pueden ser empleadas para transformar plantas de cultivo para mejorar la tolerancia de las plantas de cultivo a los herbicidas, particularmente herbicidas conocidos por inhibir la actividad de AHAS, y en particular herbicidas de imidazolinona y sulfonilurea. Tales moléculas de polinucleótidos de AHASS pueden ser utilizadas en casetes de expresión, vectores de expresión, vectores de transformación, plásmidos, y similares. Las plantas transgénicas obtenidas siguiendo la transformación con tales constructos de polinucleótidos muestran una mayor tolerancia a los herbicidas que inhiben AHAS tales como, por ejemplo, herbicidas de imidazolinona y sulfonilurea. Conforme a la presente, los términos "tolerancia" y "resistencia" son utilizados indistintamente y se refieren a la capacidad de una planta para soportar el efecto de un herbicida a un nivel que normalmente mataría, o inhibiría el crecimiento de una variedad tipo salvaje de la planta. Conforme a la presente, "variedad tipo salvaje" de la planta hace referencia a un grupo de plantas que son analizadas con fines comparativos como una planta de control, en donde la variedad tipo salvaje de la planta es idéntica a la planta de prueba (planta transformada con el polinucleótido AHASS o planta en la cual la expresión del polipéptido AHASS ha sido modificada) con la excepción que la variedad tipo salvaje de la planta no ha sido transformada con el polinucleótido AHASS y/o la expresión del polinucleótido AHASS en la planta de variedad tipo salvaje no ha sido modificada. El uso de la expresión planta de "variedad tipo salvaje", por lo tanto, no significa que la planta carece de ADN recombinante en su genoma. Las composiciones de la presente invención incluyen una secuencia de nucleótidos que codifican los polipéptidos de AHASS. En particular, la presente invención provee moléculas de polinucleótidos aisladas (también denominadas en la presente "moléculas de ácido nucleico") que comprenden la secuencia de nucleótidos que codifica las secuencias de aminoácidos mostradas en la SEC ID NO: 2, 4, y 5. Además se proveen polipéptidos con una secuencia de aminoácidos codificada por una molécula de polinucleótidos descrita en la presente, por ejemplo, aquella descrita en la SEC ID NO: 1 y 3, y fragmentos y variantes de la misma. La presente invención abarca composiciones de polipéptido o ácido nucleico aislado o sustancialmente purificado. Un polipéptido o molécula de polinucleótido "aislada" o "purificada", o una porción biológicamente activa de la misma está sustancial o esencialmente libre de componentes que normalmente acompañan o interactúan con la molécula de polinucleótidos o polipéptido como se encuentra en su ambiente que se presenta naturalmente. Así, un polipéptido o molécula de polinucleótidos aislada o purificada está sustancialmente libre de otro material celular, o medio de cultivo cuando se produce a través de técnicas recombinantes, o sustancialmente libre de precursores químicos u otros químicos cuando se sintetiza químicamente. Preferentemente, un ácido nucleico "aislado" está libre de secuencias (preferentemente secuencias de codificación de polipéptidos) que naturalmente flanquean al ácido nucleico (es decir, las secuencias dispuestas en los extremos 5' y 3' del ácido nucleico) en el ADN genómico del organismo del cual el ácido nucleico se deriva. Por ejemplo, en varias modalidades, la molécula de polinucleótidos aislada puede contener menos de aproximadamente 5 kb, 4 kb, 3 kb, 2 kb, 1 kb, 0.5 kb, o 0.1 kb de secuencias de nucleótidos que naturalmente flanquean la molécula de polinucleótido en el ADN genómico de la célula del cual el ácido nucleico se deriva. Un polipéptido que está sustancialmente libre de material celular incluye preparaciones de polipéptidos que tienen menos de aproximadamente 30%, 20%, 10%, 5%, o 1% (en peso seco) de polipéptido contaminante. Cuando el polipéptido de la presente invención o su porción biológicamente activa es producida por vía recombinante, el medio de cultivo preferentemente representa menos de aproximadamente 30%, 20%, 10%, 5%, o 1% (en peso seco) de precursores químicos o químicos que no son polipéptidos de interés. La presente invención provee polipéptidos aislados que comprenden los polipéptidos de AHASS: ZmAHASSla, OsAHASSl, y TaAHASSIX. Conforme a la presente, los términos "proteína" y "polipéptido" son utilizados indistintamente haciendo referencia a una cadena de por lo menos cuatro aminoácidos unidos por enlaces de péptidos. LA cadena puede ser lineal, ramificada, circular o combinaciones de las mismas. Los polipéptidos aislados pueden comprender una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID NO: 2, 4, y 5; la secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia de nucleótidos descrita en la SEC ID NO: 1 y 3; y fragmentos funcionales y variantes de la secuencia de aminoácidos que codifican un polipéptido AHASS que tiene actividad de AHASS.

La expresión "fragmentos funcionales y variantes" hace referencia a fragmentos y variantes de los polipéptidos ejemplificados que tienen actividad de AHASS. Adicionalmente se proveen polipéptidos aislados que comprenden las formas maduras de los polipéptidos AHASS de la presente invención. Tales polipéptidos aislados comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de: los aminoácidos 77-483 de la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID NO: 2, los aminoácidos 74-481 de la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID NO: 4, los aminoácidos 64-471 de la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID NO: 5, la secuencia de aminoácidos codificada por los nucleótidos 275-1495 de la secuencia de nucleótidos descrita en la SEC ID NO: 1, la secuencia de aminoácidos codificada por los nucleótidos 342-1565 de la secuencia de nucleótidos descrita en la SEC ID NO: 3, y fragmentos y variantes de la secuencia de aminoácidos que codifica un polipéptido AHASS maduro que tiene actividad de AHASS. En ciertas modalidades de la presente invención, los métodos involucran el uso de plantas tolerantes a herbicidas o resistentes a herbicidas. Una planta "tolerante a herbicidas" o "resistente a herbicida" es una planta tolerante o resistente a por lo menos un herbicida a un nivel que normalmente mataría, o inhibiría el crecimiento de una variedad normal o tipo salvaje de la planta. Preferentemente la planta tolerante a los herbicidas de la presente invención comprende una proteína AHASL tolerante o resistente a los herbicidas. La expresión "proteína AHASL tolerante a los herbicidas" o "proteína AHASL resistente a los herbicidas" hace referencia a una proteína AHASL que exhibe una mayor actividad de AHAS, con respecto a la actividad de AHAS de una proteína AHASL tipo salvaje, en presencia de un herbicida que se sabe interfiere con la actividad de AHAS y a una concentración o nivel que se conoce inhibe la actividad de AHAS de la proteína AHASL del tipo salvaje. Además, se reconoce que una proteína AHASL tolerante o resistente a los herbicidas puede ser introducida en una planta transformando una planta o ancestro de la misma con una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína AHASL tolerante o resistente a los herbicidas. Tales proteínas AHASL tolerantes o resistentes a los herbicidas son codificadas por los polinucleótidos de AHASL tolerantes o resistentes a los herbicidas. Alternativamente, proteína AHASL tolerante o resistente a los herbicidas puede presentarse en una planta como resultado de una mutación natural o inducida en un gen AHASL gene endógeno en el genoma de una planta o un ancestro de la misma. La presente invención provee plantas transformadas, tejidos de planta transformados, células de planta transformadas y células hospedadoras transformadas con mayor resistencia o tolerancia a por lo menos un herbicida. La cantidad preferida o concentración de herbicida es una "cantidad de herbicida" o "concentración efectiva". La expresión "cantidad efectiva" o "concentración efectiva" se refiere a una cantidad o concentración suficiente para matar o inhibir el crecimiento de una planta, tejido de planta, célula de planta, o célula hospedadora similar no transformada, pero que la cantidad no mata o inhibe severamente el crecimiento de las plantas transformadas, células de planta transformadas, o células hospedadoras transformadas. La expresión "planta, célula de planta, o célula hospedadora similar no transformada" hace referencia a una planta, tejido de planta, célula de planta, o célula hospedadora, respectivamente, que carece del polinucleótido específico de la presente invención que fue empleado en la creación de la planta, célula de planta, o célula hospedadora transformada de la presente invención. El uso del término "no transformada", en consecuencia, no implica que una planta, tejido de planta, célula de planta, u otra célula hospedadora carece de ADN recombinante en su genoma. La presente invención provee métodos para mejorar la tolerancia o resistencia de una planta, tejido de planta, célula de planta, u otra célula hospedadora a por lo menos un herbicida que interfiere con la actividad de la enzima AHAS.

Preferentemente, tal herbicida es un herbicida de imidazolinona o sulfonilurea. Para la presente invención, los herbicidas de imidazolinona incluyen, pero no se limitan a, PURSUIT® (imazetapir) , CADRE® (imazapic) , RAPTOR® (imazamox), SCEPTER® (imazaquin), ASSERT® (imazetabenz) , ARSENAL® (imazapir) , un derivado de cualquiera de los herbicidas anteriores, o una mezcla de dos o más de los herbicidas anteriores, por ejemplo, imazapir/imazamox (ODYSSEY®) . Más específicamente, el herbicida de imidazolinona puede ser seleccionado de, por ejemplo, pero no se limita a, ácido 2- (4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidiazolin-2-il) -nicotínico, ácido [2- (4-isopropil) -4-] [metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il) -3-quinolincarboxílico] , ácido [5-etil-2- (4-isopropil-] 4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il) -nicotínico, ácido 2- (4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il) -5- (metoximetil) -nicotínico, ácido [2- (4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-] imidazolin-2-il) -5-metilnicotínico, y una mezcla de [ 6- (4-isopropil-4-]metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il) -m-toluato de metilo y [2- (4-isopropil-4-metil-5-] oxo-2-imidazolin-2-il) -p-toluato de metilo. Se prefiere el uso de ácido 5-etil-2- (4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il) -nicotínico y ácido [2- (4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-] il) -5- (metoximetil) -nicotínico. Particularmente se prefiere el uso de ácido [2- (4-isopropil-4-]metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il) -5- (metoximetil) -nicotínico. Para la presente invención, los herbicidas de sulfonilurea incluyen, pero no se limtian a, clorsulfuron, metsulfuron metilo, sulfometuron metilo, chlorimuron etilo, tifensulfuron metilo, tribenuron metilo, bensulfuron metilo, nicosulfuron, etametsulfuron metilo, rimsulfuron, triflusulfuron metilo, triasulfuron, primisulfuron metilo, cinosulfuron, amidosulfiuon, fluzasulfuron, imazosulfuron, pyrazosulfuron etílilco, y halosulfuron. La presente invención provee métodos para mejorar la actividad de AHAS en una planta que comprende transformar una planta con un constructo de polinucleótido AHASS. Conforme a la presente, la expresión "constructo de polinucleótido AHASS" se refiere a un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos de AHASS . Los métodos comprenden introducir un constructo de polinucleótido de la presente invención en por lo menos una célula de planta y generar una planta transformada a partir de ella. En una modalidad, el constructo de polinucleótido AHASS comprende un promotor operativamente unido a la secuencia de nucleótidos AHASS, siendo el promotor capaz de impulsar la expresión genética en una célula de planta. Preferentemente, el promotor es un promotor constitutivo o un promotor de tejido preferido. Los métodos pueden ser empleados para mejorar o incrementar la tolerancia de una planta a por lo menos un herbicida que interfiere con la actividad catalítica de la enzima AHAS. La presente invención además provee métodos para mejorar la tolerancia los herbicidas en una planta tolerante a los herbicidas, que comprende transformar la planta con un constructo de polinucleótido AHASS. Estos métodos comprenden introducir un constructo de polinucleótido AHASS de la presente invención en por lo menos una célula de planta y regenerar una planta transformada de la misma. En una modalidad, la planta tolerante a los herbicidas comprende una proteína AHASL tolerante a los herbicidas que confiere a la planta tolerancia a por lo menos un herbicida conocido por interferir con la actividad de la enzima AHAS. En otra modalidad, el constructo de polinucleótido AHASS comprende un promotor operativamente unido a la secuencia de nucleótidos AHASS, siendo el promotor capaz de impulsar la expresión genética en una célula de planta. Los métodos pueden ser empleados para incrementar la tolerancia de una planta tolerante a los herbicidas a por lo menos un herbicida que interfiere con la actividad de la enzima AHAS. De este modo, los métodos permiten la aplicación de mayores niveles de un herbicida a una planta tolerante a los herbicidas sin matar o dañar significativamente la planta tolerante a los herbicidas . La presente invención provee casetes de expresión para expresar los polinucleótidos AHASS de la presente invención en plantas, tejidos de plantas, células de plantas y otras células hospedadoras. Los casetes de expresión comprenden un promotor capaz de expresarse en la planta, tejido de planta, célula de planta u otra célula hospedadora de interés operativamente unida a un polinucleótido de la presente invención que codifica un polipéptido AHASS de longitud completa (es decir, que incluye el péptido de transito al cloroplasto) o un polipéptido AHASS maduro (es decir, sin el péptido de tránsito al cloroplasto) . Si se desea la expresión en los plástidos de plantas o células de plantas, el cásete de expresión puede comprender una secuencia de objetivo al cloroplasto operativamente unida que codifique un péptido de tránsito al cloroplasto. Los casetes de expresión de la presente invención pueden ser empleados en métodos para mejorar la tolerancia a los herbicidas de una planta o una célula hospedadora. Los métodos comprenden transformar la planta o célula hospedadora con un cásete de expresión de la presente invención, en donde el cásete de expresión comprende un promotor capaz de expresarse en la planta o célula hospedadora de interés y en donde el promotor está operativamente unido a un polinucleótido AHASS de la presente invención. La presente invención además provee vectores de expresión para expresar en una planta o una célula hospedadora de interés un polipéptido AHASL eucariótico y un polipéptido AHASS de la presente invención. En una modalidad, los vectores de expresión en plantas comprenden un primer constructo de polinucleótido y un segundo constructo de polinucleótido, en donde el primer constructo de polinucleótido comprende un primer promotor operativamente unido a una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína AHASL eucariótica, en donde el segundo constructo de polinucleótido comprende un segundo promotor operativamente unido a una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína AHASS, y en donde los primer y segundo promotores son capaces de impulsar la expresión genética en una planta o célula hospedadora de interés. En una modalidad, los primer y segundo constructos de polinucleótido además comprenden una secuencia de objetivo al cloroplasto operativamente unida. En otra modalidad, la proteína AHASL eucariótica es una proteína AHASL de planta, y en algunos casos es una proteína AHASL tolerante a los herbicidas. Para la expresión en plantas y células de plantas, el vector de expresión es denominado vector de expresión en plantas. Los primer y segundo promotores de un vector de expresión en plantas son capaces de impulsar la expresión genética en una célula de planta. El uso de la expresión "constructo de polinucleótido" en la presente no pretende limitar la invención a los constructos de polinucleótido que comprenden ADN. Los expertos en el arte reconocerán que los constructos de polinucleótidos, particularmente polinucleótidos y oligonucleótidos, comprendidos de ribonucleótidos y combinaciones de ribonucleótidos y desoxirribonucleótidos también pueden emplearse en los métodos revelados. Por ello, los constructos de polinucleótidos de la presente invención abarcan todos aquellos constructos de polinucleótido que pueden ser empleados en los métodos de la presente invención para transformar plantas que incluyen, pero no se limitan a, aquellas comprendidas de desoxirribonucleótidos, ribonucleótidos, y combinaciones de los mismos. Tales desoxirribonucleótidos y ribonucleótidos incluyen tanto moléculas que se presentan naturalmente como análogos sintéticos. Los constructos de polinucleótidos de la presente invención además abarcan todas las formas de constructos de polinucleótido que incluyen, pero no se limitan a, formas de cadena simple, formas de cadena doble, horquillas, estructuras tipo "vastago y bucle", y similares. Además, los expertos en el arte entenderán que cada secuencia de nucleótidos revelada en la presente también abarca el complemento de esa secuencia de nucleótidos ejemplificada. Además, se reconoce que los métodos de la presente invención pueden emplear un constructo de polinucleótido capaz de dirigir, en una planta transformada, la expresión de por lo menos una proteína, la expresión de al menos una proteína, o por lo menos un ARN, tal como por ejemplo, un ARN antisentido que es complementario a por lo menos una porción de un ARNm. Típicamente, tal constructo de polinucleótido está comprendido de una secuencia de codificación para una proteína o un ARN operativamente unido a las regiones regulatorias transcripcionales 5' y 3' . Alternativamente, asimismo se reconoce que los métodos de la presente invención pueden emplear un constructo de polinucleótido que no sea capaz de dirigir, en una planta transformada, la expresión de de una proteína o un ARN. La presente invención provee proteínas de fusión que comprenden un dominio AHASL eucariótico operativamente unido a un dominio AHASS, donde el dominio AHASL comprende una secuencia de aminoácidos de una proteína AHASL eucariótica madura, y en donde el dominio AHASS comprende una secuencia de aminoácidos de una proteína AHASS de la presente invención. El dominio AHASL puede comprender una secuencia de aminoácidos de una proteína AHASL eucariótica madura que es de la misma o una diferente especie eucariótica que la secuencia de aminoácidos de la proteína AHASS del dominio AHASS. Por ello, el dominio AHASL comprende cualquier secuencia de aminoácidos conocida de una proteína AHASL eucariótica madura de cualquier organismo eucariótico que incluye, pero no se limita a, una planta monocotiledónea, una planta dicotiledónea, un alga, un animal, o un hongo. La presente invención además provee una secuencia de nucleótidos que codifica tales proteínas de fusión. La presente invención provee vectores de expresión para expresar un polipéptido de fusión AHASL-AHASS en una planta o una célula hospedadora de interés. El vector de expresión comprende un promotor, capaz de impulsar la expresión genética en la planta o célula hospedadora de interés, operativamente unido a un polinucleótido que codifica el polipéptido de fusión AHASL-AHASS. El polinucleótido comprende una primera secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que comprende un polipéptido AHASL maduro eucariótico y está operativamente unida a una segunda secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que comprende un polipéptido AHASS maduro de la presente invención. En modalidades particulares, el polinucleótido además comprende una tercera secuencia de nucleótidos operativamente unida que codifica una región enlazante situada entre la primera y la segunda secuencia de nucleótidos . Cuando se expresan en una planta o célula hospedadora, los polipéptidos de fusión AHASL-AHASS de la presente invención tienen actividad de AHAS. Preferentemente, un polipéptido de fusión AHASL-AHASS comprende un nivel de actividad de AHAS superior a la actividad del polipéptido AHASL correspondiente en ausencia del correspondiente polipéptido AHASS. La presente invención provee métodos de producción de una planta tolerante a los herbicidas, que comprende transformar la célula de planta con un vector de expresión en plantas que comprende un promotor operativamente unido a un polinucleótido que codifica un polipéptido de fusión AHASL-AHASS y generar una planta transgénica a partir de la célula de planta transgénica. Los métodos pueden ser utilizados para producir plantas de cultivo con una mayor tolerancia a por lo menos un herbicida que interfiera con la enzima AHAS. La presente invención abarca células hospedadoras transformadas con los polinucleótidos aquí descritos que incluyen, pero no se limitan a, la secuencia de nucleótidos AHASS, la secuencia de nucleótidos que codifica los polipéptidos de fusión AHASL-AHASS, constructos de polinucleótidos, casetes de expresión, y vectores de expresión. Las células hospedadoras de la presente invención abarcan tanto células procarióticas como eucarióticas, que incluyen, pero no se limitan a, células de plantas, células animales, células bacteriales, células de levadura, y otras células fúngicas. Preferentemente, las células hospedadoras de la presente invención son células hospedadoras no humanas. Más preferentemente, las células hospedadoras son células de plantas, células bacterianas, y células de levadura. Muy preferentemente, las células hospedadoras son células de plantas . Además, se reconoce que, para la expresión de un polinucleótido de la presente invención en una célula hospedadora de interés, el polinucleótido puede estar operativamente unido a un promotor capaz de impulsar la expresión genética en la célula hospedadora de interés. Los métodos de la presente invención para expresar los polinucleótidos en células hospedadoras no dependen de un promotor en especial. Los métodos abarcan el uso de cualquier promotor conocido en el arte y capaz de impulsar la expresión genética en la célula hospedadora de interés. La presente invención abarca moléculas de polinucleótidos AHASS y fragmentos y variantes de las mismas. Las moléculas de polinucleótidos que son fragmentos de estas secuencias de nucleótidos también caen dentro del alcance de la presente invención. El término "fragmento" hace referencia a una porción de la secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido AHASS de la presente invención. Un fragmento de una secuencia de nucleótidos AHASS de la presente invención puede codificar una porción biológicamente activa de un polipéptido AHASS, o puede ser un fragmento el cual es posible utilizar como una sonda de hibridación o un cebador de PCR aplicando los métodos que se revela a continuación. Una porción biológicamente activa de un polipéptido AHASS puede ser preparada aislando una porción de una de las secuencia de nucleótidos AHASS de la presente invención, expresando la porción codificada del polipéptido AHASS (por ejemplo, por expresión recombinante en vi tro) , y evaluando la actividad de la porción codificada del polipéptido AHASS. Las moléculas de polinucleótidos que son fragmentos de una secuencia de nucleótidos AHASS comprenden por lo menos aproximadamente 15, 20, 50, 75, 100, 200, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, 1100, 1150, 1200, 1250, 1300, 1350, 1400, 1500, 1600, 1700, ó 1800 nucleótidos, o hasta el número de nucleótidos presente en una secuencia de nucleótidos de longitud completa revelada en la presente (por ejemplo, 1726 y 1861 nucleótidos para la SEC ID NO: 1 y 3, respectivamente) de acuerdo al uso pretendido. Se entiende que los fragmentos aislados incluyen cualquier secuencia contigua no revelada antes de la presente invención así como las secuencias que son sustancialmente iguales y que no se revelan. En consecuencia, si un fragmento aislado ha sido revelado antes de la presente invención, ese fragmento no se propone para ser incluido por la presente invención. Cuando una secuencia no ha sido revelada antes' de la presente invención, un fragmento de ácido nucleico aislado tiene por lo menos aproximadamente 12, 15, 20, 25, ó .30 nucleótidos contiguos. Otras regiones de la secuencia de nucleótidos pueden comprender fragmentos de varios tamaños, dependiendo de la homología potencial con las secuencias previamente reveladas. Un fragmento de una secuencia de nucleótidos AHASS que codifica una porción biológicamente activa de un polipéptido AHASS de la presente invención codificará por lo menos aproximadamente 15, 25, 30, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300, 350, 400, ó 450 aminoácidos contiguos, o hasta el número de aminoácidos total presente en un polipéptido AHASS de longitud completa de la presente invención (por ejemplo, 483, 481, y 471 aminoácidos para la SEC ID NO: 2, 4, y 5, respectivamente) . Los fragmentos de una secuencia de nucleótidos AHASS que son de utilidad como sondas de hibridación para cebadores de PCR en general no necesitan codificar una porción biológicamente activa de un polipéptido AHASS. Las moléculas de polinucleótidos que son variantes de la secuencia de nucleótidos revelada en la presente también se incluyen por la presente invención. Las "Variantes" de las secuencias de nucleótidos AHASS de la presente invención incluyen aquellas secuencias que codifican polipéptidos AHASS revelados en la presente pero que difieren conservadamente debido a la degeneración del código genético. Estas variantes alélicas que se presentan naturalmente pueden ser identificadas mediante el uso de técnicas de biología molecular muy conocidas, tal como la reacción en cadena de polimerasa (PCR) y las técnicas de hibridación como se resume en adelante. Las variantes de secuencias de nucleótidos también incluyen las secuencias de nucleótidos sintéticamente derivadas que han sido generadas, por ejemplo, usando mutagénesis en sitio dirigido pero que aún codifican el polipéptido AHASS revelado en la presente invención como se discute posteriormente. En general, las variantes de secuencias de nucleótidos de la presente invención tendrán por lo menos aproximadamente 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ó 99% de identidad con una secuencia de nucleótidos particular revelada en la presente. Una variante de secuencia de nucleótidos AHASS codificará un polipéptido AHASS, respectivamente, que tiene una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos aproximadamente 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ó 99% de identidad con la secuencia de aminoácidos de un polipéptido AHASS revelado en la presente. Además, el artesano experto en el arte además apreciará que se pueden introducir cambios por mutación en las secuencias de nucleótidos de la presente invención conduciendo a cambios en la secuencia de aminoácidos de los polipéptidos AHASS codificados sin alterar la actividad biológica de los polipéptidos AHASS. De este modo, una molécula de polinucleótidos aislada que codifique un polipéptido AHASS que tiene una secuencia que difiere de aquella de la SEC ID NO: 2, 4, ó 5, respectivamente, puede ser creada introduciendo una o más sustituciones de nucleótidos, adiciones o supresiones en la correspondiente secuencia de nucleótidos revelada en la presente, de modo que una o más sustituciones, adiciones o supresiones de aminoácidos se introduzcan al polipéptido codificado. Las mutaciones pueden ser introducidas por técnicas estándar, como mutagénesis dirigida al sitio y mutagénesis mediada por PCR. Estas variantes de secuencias de nucleótidos también se incluyen por la presente invención. Por ejemplo, preferentemente, se pueden hacer sustituciones de aminoácidos conservadoras en uno o más residuos de aminoácidos, preferentemente no esenciales, seleccionados. Un residuo de aminoácido "no esencial" es un residuo que puede ser alterado de la secuencia tipo salvaje de un polipéptido AHASS (por ejemplo, la secuencia de la SEC ID NO: 2, 4, ó 5, respectivamente) sin alterar la actividad biológica, en donde un residuo de aminoácido "esencial" es requerido para la actividad biológica. Una "sustitución de aminoácido conservadora" es aquella en la cual el residuo de aminoácido es reemplazado por un residuo de aminoácido que tiene una cadena lateral similar. Se han revelado en el arte familias de residuos de aminoácidos que tienen cadenas laterales similares. Estas familias incluyen aminoácidos con cadenas laterales básicas (por ejemplo, lisina, arginina, histidina) , cadenas laterales acidas (por ejemplo, ácido aspártico, ácido glutámico) , cadenas laterales polares sin carga (por ejemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteina) , cadenas laterales no polares (por ej emplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptofan) , cadenas laterales beta-ramificadas (por ej emplo, treonina, valina, isoleucina) , y cadenas laterales aromáticas (por ej emplo, tirosina, fenilalanina, triptofan, histidina) . Tales sustituciones no se realizarían para residuos de aminoácidos conservados, o para residuos de aminoácidos dentro de una porción conservada . Las proteínas de la presente invención pueden ser alteradas de varias maneras incluyendo sustituciones de aminoácidos, supresiones, truncaciones, e inserciones. Los métodos para tales manipulaciones son en general conocidos en el arte. Por ejemplo, las variantes de secuencias de aminoácidos de los polipéptidos AHASS pueden ser preparadas realizando mutaciones en el ADN. Los métodos de mutagénesis y alteraciones de la secuencia de nucleótidos son muy conocidos en el arte. Véase, por ejemplo, Kunkel, 1985, Proc . Na ti . Acad. Sci . USA 82:488-492; Kunkel et al . , 1987, Methods in Enzymol . 154:367-382; Patente Estadounidense No. 4,873,192; Waiker and Gaastra, eds., 1983, Techniques in Molecular Biology, MacMillan Publishing Company, New York, y las referencias aquí citadas. Es posible encontrar orientación acerca de las sustituciones de aminoácidos adecuadas que no afecten la actividad biológica de la proteína de interés en el modelo de Dayhoff et al . , 1978, Atlas of Protein Sequence and Structure, Nati. Biomed. Res. Found., Washington, D.C., que se incorpora a la presente como referencia. Pueden resultar preferibles las sustituciones conservadoras como intercambiar un aminoácido por otro con propiedades similares . Alternativamente, se puede hacer una variante de secuencia de nucleótidos AHASS introduciendo mutaciones aleatoriamente a lo largo de toda o parte de una secuencia de codificación AHASS, como por mutagénesis por saturación, y lo mutantes resultantes pueden ser clasificados en cuanto a su actividad biológica AHASS para identificar mutantes que retengan actividad. Luego de la mutagénesis, el polipéptido codificado puede ser expresado de manera recombinante, y la actividad del polipéptido se puede determinar usando técnicas de ensayo estándar. Así, la secuencia de nucleótidos de la presente invención incluye las secuencias aquí reveladas así como fragmentos y variantes de las mismas. La secuencia de nucleótidos AHASS de la presente invención, y fragmentos y variantes de la misma, pueden ser empleados como sondas y/o cebadores para identificar y/o clonar homólogos de AHASS en otras plantas. Tales sondas pueden ser empleadas para detectar transcriptos o secuencias genómicas que codifiquen los mismos o idénticos polipéptidos.

De este modo, métodos como PCR, hibridación, y similares pueden ser usados para identificar tales secuencias que tienen una identidad sustancial a las secuencias de la presente invención. Véase, por ejemplo, Sambrook et al . , 1989, Molecular Cloning: Labora tory Manual , 2d ed. , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, NY, and Innis, et al . , 1990, PCR Protocols : A Guide to Methods and Applica tions, Academic Press, NY. Las secuencias de nucleótidos AHASS aislada basadas en su identidad de secuencia con la secuencia de nucleótidos AHASS de la presente, o con los fragmentos y variantes de la misma, se incluyen por la presente invención. En un método de hibridación, la totalidad o parte de una secuencia de nucleótidos AHASS conocida puede utilizarse para seleccionar bibliotecas genómicas o ADNc. Los métodos de construcción del ADNc y las bibliotecas genómicas son en general conocidos en el arte y revelados en Sambrook et al . , 1989, Molecular Cloning: A Labora tory Manual , 2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, NY . Las llamadas sondas de hibridación pueden ser fragmentos de ADN genómicos, fragmentos de ADNc, fragmentos de ARN, u otros oligonucleótidos, y pueden ser marcados con un grupo detectable como 32P, o cualquier otro marcador detectable, como otros radioisótopos, un compuesto fluorescente, una enzima, o un co-factor de enzima. Las sondas de hibridación pueden ser preparadas marcando oligonucleótidos sintéticos basándose en la secuencia de nucleótidos AHASS conocida que se revela en la presente. Además es posible utilizar cebadores degenerados diseñados sobre la base de nucleótidos conservados o residuos de aminoácidos en una secuencia de nucleótidos AHASS conocida o una secuencia de aminoácidos codificada. La sonda típicamente comprende una región de secuencia de nucleótidos que se hibrida a condiciones severas a por lo menos aproximadamente 12, preferentemente aproximadamente 25, más aún aproximadamente 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300, 350, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1200, 1400, 1600, ó 1800 nucleótidos consecutivos de una secuencia de nucleótidos AHASS de la presente invención o un fragmento o variante de la misma. Los métodos de preparación de sondas para hibridación son en general conocidos en el arte y revelados en Sambrook et al . , 1989, Molecular Cloning: A Labora tory Manual , 2d ed. , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, NY, que se incorpora a la presente como referencia. Por ejemplo, toda la secuencia AHASS completa revelada en la presente, o una o más porciones de la misma, puede ser empleada como una sonda capaz de hibridarse específicamente a las correspondientes secuencias AHASS y ARNs mensajeros. Las técnicas de hibridación incluyen selección de bibliotecas de ADN plateado (ya sea placas o colonias; véase, por ejemplo, Sambrook et al . , 1989, Molecular Cloning: A Labora tory Manual, 2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, NY) . La hibridación de tales secuencias puede ser llevada a cabo bajo condiciones severas. La expresión "condiciones severas" o "condiciones de hibridación severas" hace referencia a condiciones bajo las cuales una sonda se hibridará a su secuencia objetivo a un grado mayor detectable que otras secuencias (por ejemplo, por lo menos dos veces sobre el medio) . Las condiciones severas son dependientes de la y serán distintas en distintas circunstancias. Típicamente, las condiciones severas serán aquellas en las cuales la concentración de sal es inferior a aproximadamente 1.5 M de ion Na, típicamente aproximadamente 0.01 entre 1.0 M de ion Na (u otras sales) a un pH de 7.0 a 8.3 y la temperatura es de por lo menos aproximadamente 30 °C para sondas cortas (por ejemplo, 10 a 50 nucleótidos) y por lo menos aproximadamente 60 °C para sondas largas (por ejemplo, superior a 50 nucleótidos) . Las condiciones severas también pueden lograrse con la adición de agentes de desestabilización como formamida. Las condiciones ejemplares de baja astringencia incluyen hibridación con una solución amortiguadora de 30 a 35% de formamida, 1 M NaCl, 1% SDS (dodecil sulfato de sodio) a 37 °C, y un lavado de IX a 2X SSC (20X SSC = 3.0 M NaCl/0.3 M citrato trisódico) de 50 a 55°C.

Las condiciones de astringencia moderadas ejemplares incluyen hibridación de 40 a 45% formamida, 1.0 M NaCl, 1% SDS a 37 °C, y un lavado en 0.5X a IX SSC de 55 a 60°C. Las condiciones de astringencia elevada ejemplares incluyen hibridación en 50% formamida, 1 M NaCl, 1% SDS a 37 °C, y un lavado en 0. IX SSC de 60 a 65°C. Opcionalmente, los amortiguadores de lavado pueden comprender aproximadamente entre 0.1% y 1% SDS. La duración de la hibridación es en general inferior a aproximadamente 24 horas, usualmente aproximadamente entre 4 y 12 horas. La especificidad es típicamente la función de los lavados post-hibridación, siendo los factores críticos la resistencia iónica y la temperatura de la solución de lavado final. Para los híbridos de ADN-ADN, la Tm puede ser aproximada a partir de la ecuación de Meinkoth y Wahl (1984) Anal . Biochem . 138:267-284: Tm = 81.5°C + 16.6 (log M) + 0.41 (%GC) - 0.61 (% de form) - 500/L; donde M es la molaridad de los cationes monovalentes, %GC es el porcentaje de nucleótidos guanosina y citosina en el ADN, % de form es el porcentaje de formamida en la solución de hibridación, y L es la longitud del híbrido en pares base. La Tm es la temperatura (bajo una resistencia iónica y pH definidos) a la cual el 50% de una secuencia objetivo complementaria se hibrida con una sonda perfectamente igualada. La Tm se reduce en aproximadamente 1°C por cada 1% de desigualación, así, Tm, hibridación, y/o las condiciones de lavado pueden ser ajustadas para hibridar las secuencias de la identidad deseada. Por ejemplo, si se buscan secuencias con >90% de identidad, la Tm puede ser disminuida 10 °C. En general, las condiciones severas son seleccionadas de modo que sean aproximadamente 5°C inferiores al punto de fusión térmica (Tm) para la secuencia específica y. su complemento a una resistencia iónica y pH definidos. Sin embargo, las condiciones severamente severas pueden utilizar una hibridación y/o lavado 1, 2, 3, ó 4°C menos que el punto de fusión térmica (Tm) ; las condiciones moderadamente severas pueden utilizar una hibridación y/o lavado a 6, 7, 8, 9, ó 10 °C menos que el punto de fusión térmica (Tm) ; las condiciones de baja astringencia pueden utilizar una hibridación y/o lavado a 11, 12, 13, 14, 15, ó 20°C menos que el punto de fusión térmica (Tm) . Usando la ecuación, las composiciones de hibridación y lavado, y el Tm deseados, los expertos en el arte entenderá que las variantes en la astringencia de las soluciones de hibridación y/o lavado están inherentemente descritas. Si el grado deseado de desigualación resulta en una Tm inferior a 45°C, (solución acuosa) o 32°C (solución de formamida), es preferible incrementar la concentración de SSC de modo que pueda usarse una temperatura más elevada. Una guía extensiva a la hibridación de ácidos nucleicos se encuentra en Tijssen, 1993, Labora tory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology— Hybridiza tion wi th Nucleic Acid Probes , Part I, Chapter 2, Elsevier, NY; y Ausubel et al . , eds., 1995, Current Protocols in Molecular Biology, Chapter 2, Greene Publishing and Wiley-Interscience, NY. También véase Sambrook et al . , 1989, Molecular Cloning: A Labora tory Manual , 2d ed. , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, NY. Se reconoce que las moléculas de polinucleótidos y polipéptidos de la presente invención abarcan moléculas de polinucleótidos y polipéptidos que comprenden un nucleótido o una secuencia de aminoácidos suficientemente idéntica a una secuencia de nucleótidos de la SEC ID NO: 1 o la SEC ID NO: 3 o una secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 2, 4, ó 5. La expresión "suficientemente idéntica" es utilizada en la presente para hacer referencia a una primera secuencia de aminoácido o nucleótidos que contiene un número suficiente o mínimo de residuos de aminoácidos o nucleótidos idénticos o equivalentes (por ejemplo, con una cadena lateral similar) con una segunda secuencia de aminoácido o nucleótidos de manera que las primera y segunda secuencias de aminoácido o nucleótidos tengan un dominio estructural común y/o actividad funcional común. Por ejemplo, las secuencias de aminoácido o nucleótidos que contienen un dominio estructural común que tienen por lo menos aproximadamente 45%, 55%, ó 65% de identidad, preferentemente 75% de identidad, más preferentemente 77%, 80%, 81%, 85%, 95%, ó 98% de identidad se definen en la presente como suficientemente idénticas. Para determinar el porcentaje de identidad de dos secuencias de aminoácidos o dos ácidos nucleicos, las secuencias son alineadas para propósitos de comparación óptimos. El porcentaje de identidad entre las dos secuencias es una función del número del número de posiciones idénticas compartidas por las secuencias (es decir, porcentaje de identidad = número de posiciones idénticas / número de posiciones totales (por ejemplo, posiciones superpuestas) x 100) . En una modalidad, las dos secuencias son de la misma longitud. El porcentaje de identidad entre dos secuencias puede ser determinado usando técnicas similares a las descritas a continuación, con o sin permitir huecos. Al calcular el porcentaje de identidad, típicamente se cuentan las concordancias exactas. Para la presente invención, los valores de identidad de secuencia/similitud son preferentemente de la alineación sin huecos de una secuencia de nucleótido de longitud total o aminoácidos de longitud total de la presente invención a una segunda secuencia de nucleótido o aminoácidos. La determinación del porcentaje de identidad entre dos secuencias puede lograrse usando un algoritmo matemático. Un ejemplo preferido, no limitativo, de un algoritmo matemático utilizado para la comparación de dos secuencias es el algoritmo de Karlin y Altschul, 1990, Proc . Na ti . Acad. Sci . USA 87:2264, modificado como en Karlin y Altschul, 1993, Proc . Na ti . Acad. Sci . USA 90:5873-5877. Este algoritmo está incorporado a los programas NBLAST y XBLAST de Altschul et al . , 1990, J. Mol . Biol . 215:403. Las búsquedas de nucleótidos BLAST pueden ser ejecutadas con el programa NBLAST, resultado = 100, longitud de palabra = 12, para obtener secuencias de nucleótidos homologas a las moléculas de polinucleótidos de la presente invención. Las búsquedas de proteínas BLAST pueden ser ejecutadas con el programa XBLAST, resultado = 50, longitud de palabra = 3, para obtener secuencias de aminoácidos homologas a las moléculas de proteínas de la presente invención. Para obtener alineaciones con huecos con propósitos comparativos, se puede utilizar Gapped BLAST conforme se describe en Altschul et al . , 1997, Nucleic Acids Res . 25:3389. Alternativamente, se puede usar PSI-Blast para ejecutar una búsqueda iterada que detecte las relaciones distantes entre las moléculas. Véase Altschul et al . , 1997, supra . Cuando se empleen los programas BLAST, Gapped BLAST, y PSI-Blast, es posible usar los parámetros por omisión de los respectivos programas (por ejemplo, XBLAST y NBLAST). Véase http://www.ncbi.nlm.nih.gov. Otro ejemplo preferido no limitativo de un algoritmo matemático empleado para la comparación de secuencias es el algoritmo de Myers y Miller, 1988, CABIOS 4:11-17. Este algoritmo se incorpora al programa ALIGN (versión 2.0), que es parte del paquete de software de alineación de secuencias GCG. Cuando se emplea el programa ALIGN para comparar una secuencia de aminoácidos, es posible usar una tabla de residuos por peso PAM120, una penalización de longitud de espacio de 12, y una penalización de espacio de 4. La alineación también puede ser ejecutada manualmente por inspección. A menos que se establezca de otra forma en la presente, las identidades de secuencia porcentuales por pares son generadas a partir de la alineación de dos nucleótidos o dos secuencias de aminoácidos con Clustalx versión 1.81 y MEGA (Molecular Evolutionary Genetics Analysis) versión 2.1 usando el modelo de distancia p simple. La expresión "programa equivalente" se refiere a cualquier programa de comparación de secuencias que, para dos secuencias en cuestión, genera una alineación que tiene concordancias de nucleótidos o residuos de aminoácidos idénticos y un porcentaje idéntico de identidad de secuencia por comparación con la alineación correspondiente generada por Clustalx versión 1.81 y el porcentaje de identidad calculado por MEGA (Molecular Evolutionary Genetics Analysis) versión 2.1 usando el modelo de distancia p simple. Las secuencias de nucleótidos AHASS de la presente invención incluyen tanto secuencias que se presentan naturalmente como formas mutantes. Del mismo modo, los polipéptidos de la presente invención abarcan tanto polipéptidos que se presentan naturalmente como variantes y formas modificadas de los mismos. Tales variantes continúan teniendo la actividad de AHASS deseada. Obviamente, las mutaciones que se realizarán en el ADN que codifica la variante no deben colocar a la secuencia fuera del marco de lectura y preferentemente no crearán regiones complementarias que podrían producir una estructura de ARNm secundaria. ( Véase, por ejemplo, Publicación de Patente Europea No. 75,444). No se espera que las supresiones, inserciones, y sustituciones de las secuencias de proteínas incluidas en la presente produzcan cambios radicales en las características de la proteína. Sin embargo, cuando es difícil predecir el efecto exacto de la sustitución, supresión, o inserción antes de hacerlo, el experto en el arte apreciará que el efecto será evaluado por ensayos de selección de rutina. Es decir, la actividad puede ser evaluada por ensayos de actividad de AHAS. Véase, por ejemplo, Singh et al . , 1988, Anal . Biochem . 171:173-179, que se incorpora a la presente como referencia. Las variantes de secuencias de nucleótidos y proteínas también abarcan secuencias y proteínas derivadas de un procedimiento mutagénico y recombinogénico tal como mezclado de ADN. Con tal procedimiento, una o más secuencias de codificación AHASS distintas pueden ser manipuladas para producir una nueva proteína AHASS que tiene las propiedades deseadas. De este modo, se generan bibliotecas de polinucleótidos recombinantes a partir de una población de polinucleótidos de secuencia relacionados que comprenden regiones de secuencia que tienen identidad de secuencia sustancial y pueden ser recombinados homólogamente en vi tro o en vivo . Por ejemplo, usando este procedimiento, es posible mezclar porciones de secuencia que codifican un dominio de interés entre el gen AHASS de la presente invención y otros genes AHASS conocidos para obtener una nueva codificación genética para una proteína con una propiedad de interés mejorada, como por ejemplo un mayor Km en el caso de una enzima. En el arte se conocen estrategias para tal mezcla de ADN. Véase, por ejemplo, Stemmer, 1994, Proc . Na ti . Acad. Sci . USA 91:10747-10751; Stemmer, 1994, Na ture 370:389-391; Crameri et al . , 1997, Na ture Biotech . 15:436-438; Moore et al . , 1997, J. Mol . Biol . 272:336-347; Zhang et al . , 1997, Proc . Na ti . Acad. Sci . USA 94:4504-4509; Crameri et al . , 1998, Na ture 391:288-291; y Patentes Estadounidenses Nos. 5,605,793 y 5,837,458. La secuencia de nucleótidos de la presente invención puede ser usada para aislar las secuencias correspondientes de otros organismos, particularmente otras plantas, más específicamente otras monocotiledóneas. De este modo, métodos como PCR, hibridación, y similares pueden ser empleados para identificar tales secuencias basándose en su homología con las secuencias descritas en la presente. Las secuencias aisladas basadas en su identidad de secuencia con las secuencias de AHASS completas descritas en la presente o fragmentos de la misma se incluyen por la presente invención. Así, las secuencias aisladas que codifican una proteína AHASS y que se hibridizan bajo condiciones severas con la secuencia revelada en la presente, o fragmentos de la misma, se incluyen por la presente invención. En un procedimiento de PCR, es posible diseñar cebadores de oligonucleótidos para usar en las reacciones PCR para amplificar las correspondientes secuencias de ADN a partir de ADNc o ADN genómico extraído de cualquier planta de interés. En general se conocen en el arte métodos para diseñar cebadores de PCR y clonar PCR y se revelan en Sambrook et al . , 1989, Molecular Cloning: A Labora tory Manual, 2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, NY . Véase también Innis et al . , eds., 1990, PCR Protocols : A Guide to Methods and Applica tions, Academic Press, NY; Innis and Gelfand, eds., 1995, PCR Stra tegies, Academic Press, NY; e Innis and Gelfand, eds., 1999, PCR Methods Manual , Academic Press, NY. Los métodos conocidos de PCR incluyen, entre otros, métodos que emplean cebadores en pares, cebadores anidados, cebadores simples específicos, cebadores degenerados, cebadores de gen específicos, cebadores de vector específicos, cebadores parcialmente discordantes, y similares . Las secuencias AHASS de la presente invención también se proveen en casetes de expresión para la expresión en una planta de interés. El cásete incluirá secuencias regulatorias 5' y 3' operativamente unidas a una secuencia de nucleótidos AHASS de la presente invención. La expresión "operativamente unida" de acuerdo a la presente hace referencia a un enlace funcional entre un promotor y una segunda secuencia, la secuencia del promotor inicia y media la transcripción de la secuencia de ADN que corresponde a la segunda secuencia. En general, operativamente unido significa que el ácido nucleico o secuencia de aminoácidos están unidos de modo que ambas secuencias cumplan la función o actividad atribuida a la secuencia usada. En una modalidad, operativamente unido significa que las secuencias de ácido nucleico unidas son contiguas y, donde es necesario unir dos regiones de codificación de proteínas, contiguas y en el mismo marco de lectura. El cásete puede además contener al menos un gen adicional a ser contransformado en el organismo. Alternativamente, el/los genes adicionales pueden ser provistos en múltiples casetes de expresión. Tal cásete de expresión está provisto de una pluralidad de sitios de restricción para la inserción de la secuencia AHASS para estar bajo la regulación transcripcional de las regiones regulatorias. El cásete de expresión puede además contener genes marcadores seleccionables. El cásete de expresión puede incluir en la dirección de transcripción 5' -3', una región de iniciación transcripcional y translacional (es decir, un promotor) , una secuencia AHASS de la presente invención, y una región de terminación transcripcional y translacional (es decir, región de terminación) funcional en plantas. El promotor puede ser nativo o análogo, o extraño o heterólogo, a la planta hospedadora y/o a la secuencia AHASS de la presente invención. Adicionalmente, el promotor puede ser la secuencia natural o alternativamente una secuencia sintética. Cuando el promotor es "extraño" o "heterólogo" a la planta hospedadora, hace referencia al promotor que no se encuentra en la planta nativa en la cual el promotor se introduce. Cuando el promotor es "extraño" o "heterólogo" a la secuencia AHASS de la presente invención, hace referencia a que el promotor no es nativo o se presenta naturalmente para la secuencia AHASS operativamente unida de la presente invención. Conforme a la presente, un gen quimérico comprende una secuencia de codificación operativamente unida a una región de iniciación de transcripción que es heteróloga a la secuencia de codificación . Mientras que puede ser preferible expresar las secuencias usando promotores heterólogos, las secuencias de promotores nativos de AHASS o AHASL también pueden ser empleadas. Tales constructos modificarían los niveles de expresión de la proteína AHASS en la planta o célula de planta. Así, se altera el fenotipo de la planta o célula de planta. La región de terminación puede ser nativa con la región de iniciación transcripcional, puede ser nativa con la secuencia de interés AHASS operativamente unida, puede ser nativa con la planta hospedadora, o puede ser derivada de otra fuente (es decir, extraña o heteróloga al promotor, la secuencia de interés AHASS, la planta hospedadora, o cualquier combinación de las mismas) . Las regiones de terminación convenientes están disponibles del Ti-plásmido de A . tumefaciens, como las regiones de terminación de octopina sintasa y nopalina sintasa ( Véase además Guerineau et al . , 1991, Mol . Gen . Genet . 262:141-144; Proudfoot, 1991, Cell 64:671-674; Sanfacon et al . , 1991, Genes Dev. 5:141-149; Mogen et al . , 1990, Plan t Cell 2:1261-1272; Munroe et al . , 1990, Gene 91:151-158; Bailas et al . , 1989, Nucleic Acids Res . 17:7891-7903; y Joshi et al . , 1987, Nucleic Acid Res . 15:9627-9639) . Donde sea apropiado, el/los genes pueden ser optimizados para una mayor expresión en la planta transformada. Es decir, los genes pueden ser sintetizados usando codones preferidos por planta para una mejor expresión ( Véase, por ejemplo, Campbell and Gowri, 1990, Plan t Physiol . '92:1-11 donde se expone el uso de codones preferidos por hospedadora) . En el arte se dispone de métodos disponible para sintetizar genes preferidos por planta ( Véase, por ejemplo, Patente Estadounidense No. 5,380,831, y 5,436,391, y Murray et al . , 1989, Nucleic Acids Res . 17 : 477-498 , que se incorporan a la presente como referencia) . Las modificaciones de secuencia adicionales son conocidas por mejorar la expresión genética en un hospedador celular. Estas incluyen la eliminación de secuencias que codifican señales de poliadenilación espurias, señales de sitios de separación exón-intrón, repeticiones tipo transposon, y otras secuencias bien caracterizadas que pueden ser perjudiciales para la expresión genética. El contenido G-C de la secuencia puede ser ajustado a niveles promedio para un hospedador celular dado, como se calcula por referencia a genes conocidos expresados en la célula hospedadora. Cuando es posible, la secuencia es modificada para evitar estructuras de ARNm secundarias de horquillas predichas. Las secuencias de nucleótidos para mejorar la expresión genérica también pueden ser empleadas en los vectores de expresión en plantas. Se incluyen intrones de maíz Adhl, gen intrónl (Callis et al . , 1987, Genes and Developmen t 1:1183-1200) , y secuencias conductoras (secuencia W) del virus Mosaico del Tacaco (TMV) , Virus Moteado Clorótico del Maíz, y el Virus Mosaico de la Alfalfa (Gallie et al . , 1987, Nucleic Acid Res . 15:8693-8711 y Skuzeski et al . , 1990, Plan t Molec . Biol . 15:65-79). El primer intrón del locus shrunkent-1 del maíz, ha demostrado incrementar la expresión de genes en constructos de genes quiméricos. Las Patentes Estadounidenses Nos. 5,424,412 y 5,593,874 revelan el uso de intrones específicos en constructos de expresión genéticos, y Gallie et al . , 1994, Plant Physiol . 106:929-939 también han demostrado que los intrones son útiles en la expresión de genes de regulación sobre una base específica de tejido. Para mejorar adicionalmente u optimizar la expresión genética de la subunidad pequeña de AHASS, los vectores de expresión en plantas de la presente invención pueden también contener secuencias de ADN que contienen regiones de fijación de matriz (MARs). Las células de plantas transformadas con tales sistemas de expresión modificados, entonces, pueden exhibir una sobreexpresión o expresión constitutiva de una secuencia de nucleótidos de la presente invención. Los casetes de expresión pueden adicionalmente contener secuencias conductoras 5' en la construcción de los casetes de expresión. Tales secuencias conductoras pueden actuar para mejorar la translación. Los conductores de translación son conocidos en el arte e incluyen: conductores de picornavirus, por ejemplo, conductor EMCV (región np codificante 5' de encefalomiocarditis) (Elroy-Stein et al . , 1989, Proc . Na ti .

Acad. Sci . USA 86:6126-6130); conductores de potivirus, por ejemplo, conductor TEV (Tobacco Etch Virus) (Gallie et al . , 1995, Gene 165 (2) : 233-238) , conductor MDMV (Virus Mosaico Enano del Maíz) ( Virology 154:9-20), y proteína de enlace de cadena pesada de inmunoglobulina humana (BiP) (Macejak et al . , 1991, Na ture 353:90-94); conductor no traducido de la proteína de recubrimiento del ARNm del virus mosaico de la alfalfa (AMV RNA 4)(Jobling et al . , 1987, Na ture 325:622-625); conductor del virus mosaico del tabaco (TMV) (Gallie et al . , 1989, en Molecular Biology of RNA, ed. Cech, Liss, New York, pp. 237-256); y conductor del virus moteado clorótico del maíz (MCMV) (Lommel et al . , 1991, Virology 81:382-385). Véase además, Della-Cioppa et al . , 1987, Plant Physiol . 84:965-968. También pueden utilizarse otros métodos conocidos para mejorar la traducción, por ejemplo, intrones, y similares. En la preparación del cásete de expresión, varios fragmentos de ADN pueden ser manipulados, para proveer secuencias de ADN en la orientación adecuada, y, cuando sea apropiado, en el marco de lectura apropiado. A tal efecto, es posible emplear adaptadores o enlazantes para unir los fragmentos de ADN u otras manipulaciones pueden implicarse para proporcionar sitios de restricción convenientes, la eliminación de ADN superfluo, la eliminación de sitios de restricción, o similares. Para este propósito, se pueden involucrar mutagénesis en vi tro, reparación de cebadores, restricción, desnaturalización térmica, y sustituciones, por ejemplo, transiciones y transversiones. Se puede usar un número de promotores en la práctica de la presente invención. Los promotores pueden ser seleccionados basados en el resultado deseado. Los ácidos nucleicos pueden ser combinados con promotores constitutivos, con preferencia por tejidos, u otros para la expresión en plantas . Tales promotores constitutivos incluyen, por ejemplo, el promotor de núcleo del promotor Rsyn7 y otros promotores constitutivos revelados en WO 99/43838 y la Patente Estadounidense No. 6,072,050; el promotor CaMV 35S de núcleo (Odell et al . , 1985, Na ture 313:810-812); actina de arroz (McElroy et al . , 1990, P-Zant Cell 2:163-171); ubiquitina (Christensen et al . , 1989, Plan t Mol . Biol . 12:619-632 y Christensen et al . , 1992, Plant Mol . Biol . 18:675-689); pEMU (Last et al . , 1991, Theor . Appl . Genet . 81:581-588); MAS (Velten et al . , 1984, EMBO J. 3:2723-2730) ; promotor ALS (Patente Estadounidense No. 5,659,026), y similares. Otros promotores constitutivos incluyen, por ejemplo, Patentes Estadounidenses Nos. 5,608,149; 5,608,144; 5,604,121; 5,569,597; 5,466,785; 5,399,680; 5,268,463; 5,608,142; y 6,177,611. Los promotores con preferencia por tejidos pueden ser utilizados para dirigir una expresión de AHASS mejorada dentro de un tejido de planta particular. Estos promotores con preferencia por tejidos incluyen, pero no se limitan a, promotores con preferencia por las hojas, promotores con preferencia por la raíz, promotores con preferencia por la semilla y promotores con preferencia por el tallo. Los promotores con preferencia por tejidos incluyen Yamamoto et al., 1997, Plant J. 12 (2) : 255-265; Kawamata et al., 1997, Plant Cell Physiol. 38 (7) : 792-803; Hansen et al., 1997, Mol. Gen Genet. 254 (3) : 337-343; Russell et al., 1997, Transgenic Res. 6(2) :157-168; Rinehart et al., 1996, Plant Physiol. 112(3) :1331-1341; Van Camp et al., 1996, Plant Physiol. 112 (2) : 525-535; Canevascini et al., 1996, Plant Physiol. 112 (2) : 513-524; Yamamoto et al., 1994, Plant Cell Physiol. 35(5) :113-118; Lam, 1994, Results Probl. Cell Differ. 20:181-196; Orozco et al., 1993, Plant Mol Biol. 23 (6) : 1129-1138; Matsuoka et al., 1993, Proc Nati. Acad. Sci. USA 90(20): 9586-9590; y Guevara-García et al., 1993, Plant J. 4 (3) : 495-505. Tales promotores pueden ser modificados, si es necesario, para expresión débil. En una modalidad, los ácidos nucleicos de interés están dirigidos al cloroplasto para la expresión. De este modo, donde el ácido nucleico de interés no está directamente insertado en el cloroplasto, el cásete de expresión adicionalmente contendrá una secuencia de objetivo al cloroplasto que comprenda una secuencia de nucleótidos que codifique un péptido de tránsito al cloroplasto para dirigir el producto genético de interés a los cloroplastos. Estos péptidos de tránsito son conocidos en el arte. Véase, por ejemplo, Von Heijne et al., 1991, Plant Mol. Biol.. Rep. 9:104-126; Clark et al., 1989, J. Biol. Chem. 264:17544-17550; Della-Cioppa et al., 1987, Plant Physiol. 84:965-968; Romer et al., 1993, Biochem. Biophys. Res. Commun. 196:1414-1421; y Shah et al., 1986, Science 233:478-481. Mientras que los polipéptidos AHASS de la presente invención incluyen un péptido de tránsito al cloroplasto nativo, cualquier péptido de tránsito al cloroplasto conocido en el arte puede fusionarse con la secuencia de aminoácidos de un péptido maduro AHASS de la presente invención uniendo operativamente una secuencia de objetivo al cloroplasto al extremo 5' de una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido AHASS maduro de la presente invención. Las secuencias de objetivo al cloroplasto son conocidas en el arte e incluyen la subunidad pequeña de cloroplasto de ribulosa-1, 5-bisfosfato carboxilasa (Rubisco) (de Castro Silva Filho et al., 1996, Plant Mol. Biol. 30:769-780; Schnell et al., 1991, J. Biol. Chem. 266 (5) : 3335-3342) ; 5- (enolpiruvil) shikimato-3-fosfato sintasa (EPSPS) (Archer et al., 1990, J. Bioenerg. Biomemb. 22 ( 6) : 789-810) ; triptofan sintasa (Zhao et al., 1995, J. Biol. Chem. 270 (11) : 6081- 6087); plastocianina (Lawrence et al., 1997, J. Biol. Chem. 272 (33) :20357-20363) ; corismato sintasa (Schmidt et al., 1993, J. Biol. Chem. 268 (36) : 27447-27457 ) ; y proteína de unión clorofila a/b para la captación de luz (LHBP) (Lamppa et al., 1988, J. Biol. Chem. 263:14996-14999). Véase además Von Heijne et al., 1991, Plant Mol. Biol. Rep. 9:104-126; Clark et al., 1989, J. Biol. Chem. 264:17544-17550; Della-Cioppa et al., 1987, P-Zant Physiol. 84:965-968; Romer et al., 1993, Biochem. Biophys. Res. Commun. 196:1414-1421; y Shah et al., 1986, Science 233:478-481. En el arte se conocen métodos de transformación de cloroplastos (Véase, por ejemplo, Svab et al., 1990, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 87:8526-8530; Svab and Maliga, 1993, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90:913-917; Svab and Maliga, 1993, EMBO J. 12:601-606). El método se basa en una pistola de partículas de ADN que contiene un marcador seleccionable y dirige el ADN al genoma del plástido a través de recombinación homologa. Adicionalmente, la transformación del plástido puede lograrse mediante una transactivación de un transgen apoyado sobre plástido silencioso por expresión en tejido preferido de una polimerasa de ARN con codificación nuclear y dirigida al plástido. Este sistema ha sido reportado en McBride et al., 1994, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 91:7301-7305. Los ácidos nucleicos de interés que se dirigen al cloroplasto pueden ser optimizados para la expresión en el cloroplasto para contemplar las diferencias en el uso de codones entre el núcleo, de la planta y este organelo. De este modo, los ácidos nucleicos de interés pueden ser sintetizados usando codones de cloroplasto preferidos ( Véase, por ejemplo, Patente Estadounidense Nos. 5,380,831, la cual se incorpora en la presente como referencia) . Como se describe en la presente, las secuencias de nucleótidos AHASS de la presente invención pueden ser utilizadas para mejorar la tolerancia a los herbicidas de plantas que comprenden un gen que codifica un polipéptido AHASL tolerante a los herbicidas. Este gen AHASL puede ser incorporado al genoma de la planta y puede ser un gen endógeno o transgen. Adicionalmente, en ciertas modalidades, las secuencias de ácidos nucleicos de la presente invención pueden ser apiladas con cualquier combinación de secuencias de nucleótidos de interés para producir plantas con un fenotipo deseado. Por ejemplo, los polinucleótidos de la presente invención pueden ser apilados con cualquier otro polinucleótido que codifique polipéptidos con actividad pesticida y/o insecticida, como, por ejemplo, las proteínas tóxicas de Ba cillus thuringiensis (como se describe en las Patentes Estadounidenses Nos. 5,366,892; 5,747,450; 5,737,514; 5,723,756; 5,593,881; y Geiser et al . , 1986, Gene 48:109). Las combinaciones generadas también pueden incluir múltiples copias de cualquiera de los polinucleótidos de interés . Se reconoce que con estas secuencias de nucleótidos, pueden construirse construcciones antisentido, complementarios a por lo menos una porción del ARN mensajero (ARNm) para las secuencias AHASS . Los nucleótidos antisentido son construidos para hibridarse con el correspondiente ARNm. Las modificaciones de las secuencias antisentido pueden realizarse siempre y cuando las secuencias se hibriden e interfieran con la expresión del correspondiente ARNm. De este modo, es posible emplear construcciones antisentido que tienen un 70%, preferentemente 80%, más preferentemente 85% de identidad de secuencia con las correspondientes secuencias antisentido. Además, se pueden usar porciones de los nucleótidos antisentido para interrumpir la expresión del gen objetivo. En general, se pueden usar secuencias de por lo menos 50 nucleótidos, 100 nucleótidos, 200 nucleótidos, o mayores . Las secuencias de nucleótidos de la presente invención también pueden ser utilizadas en la orientación de sentido para suprimir la expresión de genes endógenos en plantas. Los métodos para suprimir la expresión de genes en plantas usando secuencias de nucleótidos en la orientación' de sentido son conocidos en el arte. Los métodos en general involucran transformar las plantas con un constructo de ADN que comprende un promotor el cual impulsa la expresión en una planta operativamente unida a por lo menos una porción de una secuencia de nucleótidos que corresponde a la transcripción del gen endógeno. Típicamente, esta secuencia de nucleótidos tiene una identidad de secuencia sustancial con la secuencia de la transcripción del gen endógeno, preferentemente superior a aproximadamente 65% de identidad de secuencia, más preferiblemente superior a aproximadamente 85% de identidad de secuencia, muy preferiblemente superior a aproximadamente 95% de identidad de secuencia ( Véase las Patentes Estadounidenses Nos. 5,283,184 y 5,034,323; que se incorporan en la presente como referencia) . En general, el cásete de expresión comprenderá un gen marcador seleccionable para la selección de las células transformadas. Los genes marcadores seleccionables son utilizados para la selección de las células o tejidos transformados. Los genes marcadores incluyen genes que codifican polipéptidos que confieren resistencia antibiótica, como aquellos genes que codifican neomicina fosfotransferasa II (NEO) e higromicina fosfotransferasa (HPT) , así como genes que codifican polipéptidos que confieren resistencia a los compuestos herbicidas, como glufosinato amonio, bromoxinil, imidazolinonas, y 2, 4-diclorofenoxiacetate (2,4-D). Véase en general, Yarranton, 1992, Curr. Opin . Biotech . 3:506-511; Christopherson et al . , 1992, Proc . Na ti . Acad. Sci . USA 89:6314-6318; Yao et al., 1992, Cell 71:63-72; Reznikoff, 1992, Mol. Microbiol. 6:2419-2422; Barkley et al., 1980, en The Operon, pp. 177-220; Hu et al., 1987, Cell 48:555-566; Brown et al., 1987, Cell 49:603-612; Figge et al., 1988, Cell 52:713-722; Deuschle et al., 1989, Proc. Nati. Acad. Aci. USA 86:5400-5404; Fuerst et al., 1989, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 86:2549-2553; Deuschle et al., 1990, Science 248:480-483; Gossen, 1993, Ph.D. Thesis, University of Heidelberg; Reines et al., 1993, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90:1917-1921; Labow et al., 1990, Mol. Cell. Biol. 10:3343-3356; Zambretti et al., 1992, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89:3952-3956; Baim et al., 1991, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 88:5072-5076; Wyborski et al., 1991, Nucleic Acids Res. 19:4647-4653; Hillenand-Wissman, 1989, Topics Mol. Struc. Biol. 10:143-162; Degenkolb et al., 1991, Antimicrob. Agents Chemother. 35:1591-1595; Kleinschnidt et al., 1988, Biochemistry 27:1094-1104; Bonin, 1993, Ph.D. Thesis, University of Heidelberg; Gossen et al., 1992, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89:5547-5551; Oliva et al., 1992, Antimicrob. Agents Chemother. 36:913-919; Hlavka et al., 1985, Handbook of Experimental Pharmacology, Vol. 78, Springer-Verlag, Berlin; Gilí et al., 1988, Nature 334:721-724. Tales descripciones se incorporan en la presente como referencia. La lista precedente de genes marcadores seleccionables no pretende ser limitativa. Cualquier gen marcador seleccionable puede ser usado en la presente invención.

Las moléculas aisladas de polinucleótidos que codifican los polipéptidos AHASS pueden ser usadas en vectores para transformar plantas de modo que las plantas obtenidas posean una mayor tolerancia a los herbicidas, particularmente herbicidas de imidazolinona. Las moléculas aisladas de polinucleótidos que codifican los polipéptidos AHASS pueden ser usadas en vectores solas o en combinación con una secuencia de nucleótidos que codifica la subunidad grande de la enzima AHAS para conferir resistencia a los herbicidas en plantas ( Véase, Patente Estadounidense No. 6,348,643; la cual se incorpora en la presente en su totalidad como referencia) .

Una secuencia de nucleótidos AHASS de la presente invención también puede ser usada en combinación con una secuencia AHASL de nucleótidos como un marcador para seleccionar células de plantas, tejidos de plantas y plantas transformados. Cualquier gen de interés puede ser incorporado en vectores que comprenden secuencias de nucleótidos que codifican los polipéptidos AHASS y AHASL. Los vectores pueden ser introducidos en células o tejidos de plantas que son susceptibles a los herbicidas con inhibición de AHAS. Las plantas, tejidos de plantas y células de plantas transformados que contienen estos vectores pueden ser seleccionados en la presencia de herbicidas usando técnicas estándar conocidas en el arte. La presente invención además provee un vector de expresión en plantas que comprende un promotor que impulsa la expresión en una planta operativamente unido a una molécula de polinucleótido AHASS aislada de la presente invención. La molécula de polinucleótido aislada comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido AHASS de monocotiledónea, particularmente un polipéptido AHASS que comprende una secuencia que se describe en la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, o SEC ID NO: 5, o un fragmento funcional o variante de las mismas. El vector de expresión en plantas de la presente invención no depende de un promotor particular, tal promotor es capaz de impulsar la expresión genética en una célula de planta. Los promotores preferidos incluyen, pero no se limitan a, promotores constitutivos y promotores con preferencia por tejidos. En otra modalidad, el vector de expresión en planta comprende: un promotor de un gen AHASL eucariótico operativamente unido a una secuencia de nucleótidos que codifica el polipéptido AHASL, y un promotor que es capaz de impulsar la expresión en una célula de planta operativamente unido a una secuencia de nucleótidos AHASS de la presente invención, donde la secuencia de nucleótidos AHASS es seleccionada del grupo que consiste de las secuencias de nucleótidos descritas en la SEC ID NO: 1 e SEC ID NO: 3, las secuencias de nucleótidos que codifican la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, e SEC ID NO: 5, y fragmentos y variantes de las mismas que codifican un polipéptido AHASS maduro que comprende actividad de AHASS. Tales polipéptidos AHASS maduros son capaces de incrementar la actividad de AHASS de por lo menos un polipéptido AHASL cuando tales polipéptidos AHASS y AHASL están juntos, cuando se compara con la actividad de AHAS del polipéptido AHASL en la ausencia del polipéptido AHASS. En todavía otra modalidad, el vector de expresión en plantas para expresar un gen AHAS heterólogo en una planta comprende un promotor de planta operativamente unido a una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido de fusión que comprende la secuencia de aminoácidos del polipéptido AHASL maduro fusionado a la secuencia de aminoácidos de un polipéptido AHASS. Tal constructo de polinucleótido comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido AHASL maduro operativamente unido a una secuencia de nucleótidos AHASS de la presente invención.

Como se usa en la presente, la expresión "operativamente unido" en el contexto de tal polinucleótido que codifica a un polipéptido de fusión se refiere a una primera secuencia de nucleótidos que codifica una primera secuencia de aminoácidos ligada o fusionada a una segunda secuencia de nucleótidos que codifica una segunda secuencia de aminoácidos de modo tal que la secuencia fusionada de aminoácidos que es codificada por la secuencia fusionada de nucleótidos comprende las primera y segunda secuencias de aminoácidos. Se reconoce que un constructo de polinucleótido que codifica un polipéptido de fusión de la presente invención puede además comprender secuencias de nucleótidos adicionales y que tales secuencias de nucleótidos adicionales pueden ser ubicadas 5' de la primera secuencia de codificación, 3' de la segunda secuencia de codificación, o entre las primera y segunda secuencias de codificación. Además se reconoce que en ciertas modalidades de la presente invención, puede ser deseable incluir en tal secuencia de nucleótidos fusionada que codifica un polipéptido de fusión una secuencia de nucleótidos adicional que codifica una secuencia de aminoácidos enlazante. En el polipéptido de fusión resultante, la secuencia de aminoácidos enlazante estará localizada entre las primera y segunda secuencias de aminoácidos. Se reconoce que puede ser deseable tener tal secuencia de aminoácidos enlazante para permitir la interacción óptima entre las porciones del polipéptido de fusión que corresponden a las primera y segunda secuencias de aminoácidos. Tal secuencia de aminoácidos enlazante puede comprender 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 75, 100, o más aminoácidos. Cuando se usa "operativamente unido" en referencia a la combinación de las dos secuencias de aminoácidos para formar una proteína de fusión, se pretende que las dos secuencias de aminoácidos estén fusionadas o unidas para formar una secuencia continua de aminoácidos única de modo que ambas secuencias cumplan la función o actividad atribuida a la secuencia usada. En una modalidad, tal proteína de fusión es el producto de traducción de una secuencia de nucleótidos continua única que comprende una primera secuencia de nucleótidos operativamente unida a una segunda secuencia de nucleótidos. La primera secuencia de nucleótidos codifica la primera secuencia de aminoácidos, y la segunda secuencia de nucleótidos codifica la segunda secuencia de aminoácidos. Luego se produce el polipéptido de fusión como el producto de traducción de la secuencia de nucleótidos continua única. En otra modalidad, el vector de expresión en plantas comprende un promotor que es capaz de impulsar la expresión genética en una célula de planta operativamente unida a un polinucleótido que codifica un polipéptido de fusión que comprende la secuencia de aminoácidos de un polipéptido AHASL maduro y la secuencia de aminoácidos de un polipéptido AHASS maduro de la presente invención. Así, el polipéptido de fusión está comprendido de dos dominios, un dominio AHASL y un dominio AHASS. Este polipéptido de fusión puede comprender a partir del extremo terminal N, el dominio AHASL seguido del dominio AHASS, o alternativamente, el dominio AHASS seguido del dominio AHASL. Además, el polipéptido de fusión puede además comprender una secuencia de aminoácidos de una región enlazante. En tal polipéptido de fusión, la región enlazante está situada entre los dominios AHASL y AHASS. Si se desea, para la expresión de cloroplastos, el polinucleótido que codifica el polipéptido de fusión además comprende una secuencia de objetivo al cloroplasto que codifica un péptido de tránsito al cloroplasto. Este péptido de tránsito al cloroplasto puede ser seleccionado del grupo que consiste de péptidos de tránsito al cloroplasto de los polipéptidos nativos AHASS o AHASL del polipéptido de fusión o cualquier otro péptido de tránsito al cloroplasto conocido en el arte. Se reconoce que este péptido de tránsito al cloroplasto típicamente se encuentra en el extremo N-terminal de una proteína . Las secuencias de nucleótidos AHASS de la presente invención pueden ser usadas para producir enzimas AHAS ancladas, que comprendan los polipéptidos de fusión AHASL-AHASS de la presente invención. Por ejemplo, en una modalidad de la presente invención, una primera molécula de polinucleótidos que codifica un polipéptido AHASS de la presente invención se acopla de manera translacional a una segunda molécula de polinucleótidos que codifica la secuencia de aminoácidos de una proteína AHASL eucariótica a través de una secuencia de nucleótidos enlazante que codifica una región enlazante (o polipéptido enlazante) , como poliglicina (polyGly) . Es decir, la secuencia de nucleótidos enlazante está operativamente unida al extremo 3' de la primera secuencia de nucleótidos y el extremo 5' de la segunda secuencia de nucleótidos, para codificar un polipéptido que comprende en serie la secuencia de aminoácidos del polipéptido AHASS, la secuencia de aminoácidos de la región enlazante, y la secuencia de aminoácidos del polipéptido AHASL. Un posicionamiento alternativo involcura intercambiar las secuencias de codificación maduras de las subunidades grandes y pequeñas alrededor de la transcripción de la región enlazante con la secuencia de tránsito de la subunidad pequeña. La presente invención no depende de que las regiones enlazantes tengan un número particular de aminoácidos, solamente de que el polipéptido de fusión tenga actividad de AHAS, preferentemente un nivel mayor de actividad de AHAS que el polipéptido AHASL correspondiente en la ausencia del polipéptido AHASS correspondiente. Se reconoce que las enzimas AHAS ancladas pueden ser utilizadas para mejorar la tolerancia a los herbicidas manteniendo cercanos entre si los dominios de las subunidades de AHAS grandes y pequeñas. Se ha demostrado con la enzima AHAS de E . coli que la asociación entre las subunidades grandes y pequeñas es vaga. Se estimó en E. coli que a una concentración de 10"7 M para cada subunidad, las subunidades grandes sólo se asocian por la mitad como la holoenzima activa 2ß2 (Sella et al . , 1993, J. Bacteriology 175:5339- 5343) . Se reconoce que la mayor actividad se logra cuando existe un exceso molar de la proteína AHASS con relación a la concentración molar de la proteína AHASL. Puesto que se ha determinado que la enzima AHAS es más estable y activa cuando ambas subunidades están asociadas (Weinstock et al . , 1992, J. Bacteriology, 174:5560-5566, Sella et al . , 1993, J. Bacteriology 175:5339-5343), se puede crear una enzima altamente activa y estable fusionando las dos subunidades en un polipéptido único. Se ha demostrado que los polipéptidos anclados funcionan adecuadamente. Gilbert et al . Expresaron dos enzimas sintéticas de oligosacáridos ancladas en E. coli para producir una enzima que fue funcional, estable en vi tro, y soluble (Gilbert et al . , 1998, Na ture Biotechnology 16: 769-772) . La expresión de las subunidades grandes y pequeñas de AHAS como un polipéptido único a partir de un constructo de nucleótido único también tiene ventajas para la producción de cultivos transgénicos tolerantes a los herbicidas. El uso de un gen único para transformar y criar plantas en líneas de cultivo seleccionadas es más fácil y más ventajoso que cuando se usan dos o más genes. Se puede construir un vector de expresión en plantas que contiene dos constructos de polinucleótidos - uno codifica un polipéptido AHASL y el otro un polipéptido AHASS. De esta manera, los dos genes se segregan como un solo locus, facilitando la producción de cultivos tolerantes a los herbicidas. Alternativamente, la subunidad grande y pequeña puede fusionarse en un solo gen expresado a partir de un solo promotor. El polipéptido de fusión tendría elevados niveles de actividad de AHAS y tolerancia a los herbicidas. La subunidad grande de AHAS puede ser de una secuencia de tipo salvaje (si la resistencia es conferida en presencia de una subunidad pequeña independiente o fusionada) , o puede ser una subunidad grande mutante que por si misma tenga algún nivel de resistencia a los herbicidas. La presencia de la subunidad pequeña puede mejorar la actividad de la subunidad grande, mejorar la tolerancia a los herbicidas de la subunidad grande, incrementar la estabilidad de la enzima cuando se expresa en vivo, y/o incrementar la resistencia de la subunidad grande a la degradación. La subunidad pequeña de este modo elevaría la tolerancia de la planta/cultivo a una imidazolinona u otro herbicida. La tolerancia elevada permitiría la aplicación y/o incremento de seguridad de las tasas de control de malezas de herbicida sin fitotoxicidad para la planta transformada. Idealmente, la tolerancia conferida elevaría la tolerancia a los herbicidas conocidos por interferir con AHAS como, por ejemplo, herbicidas de imidazolinona y sulfonilurea. La asociación de las subunidades grandes y pequeñas parece ser altamente específica en las procariotas. E. coli, por ejemplo, tiene tres isoenzimas AHASL y tres isoenzimas AHASS. Cada isoenzima AHASL específicamente se asocia con solo una de las isoenzimas AHASS, aún cuando todas las subunidades se expresen en el mismo organismo (Weinstock et al . , 1992, J. Bacteriology, 174:5560-5566). Sin embargo, poco se conoce acerca de la especificidad de las interacciones entre las proteínas eucarióticas AHASL y AHASS de la misma o distinta especies o de distintos pares de isoenzimas de la misma especie. Los polipéptidos AHASS de la presente invención pueden ser purificados de, por ejemplo, plantas de maíz, arroz, y trigo y pueden ser empleados en composiciones. Asimismo, es posible usar una molécula de polinucleótidos aislada que codifica una proteína AHASS de la presente invención para expresar un polipéptido AHASS de la presente invención en un microbio como E . coli . El polipéptido AHASS expresado puede ser purificado a partir de extractos de E. coli a través de cualquier método conocido por aquellos de experiencia ordinaria en el arte. La presente invención también se refiere a un método de producción de una planta transgénica, la cual es resistente a un herbicida. Este método comprende transformar una planta con un vector de expresión en plantas ' que comprende un promotor que impulsa la expresión en una planta 4 operativamente unido a una molécula de polinucleótidos aislada de la presente invención. La molécula de polinucleótido aislada comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido AHASS de monocotiledónea, particularmente un polipéptido AHASS que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de: una secuencia de aminoácidos que se describe en la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, o SEC ID NO: 5; los aminoácidos 77-483 de la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID NO: 2, los aminoácidos 64-471 de la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID NO: 4, y los aminoácidos 74-481 de la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID NO: 5; o un fragmento funcional o variante de las mismas. La presente invención además se refiere a un método para conferir tolerancia a los herbicidas a una célula de planta. El método comprende co-transformar la célula de planta con un primer vector de expresión en plantas que comprende un primer promotor con capacidad de expresión en planta operativamente unido a una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido AHASL y un segundo vector de expresión en plantas que comprende un segundo promotor con capacidad de expresión en planta operativamente unido a una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido AHASS de la presente invención. Preferentemente, la secuencia de nucleótidos que codifica el polipéptido AHASL codifica un polipéptido AHASL eucariótico.

En una modalidad, la secuencia de nucleótidos que codifica el polipéptido AHASL codifica un polipéptido AHASL de planta. En otra modalidad, la secuencia de nucleótidos que codifica la proteína AHASL codifica un polipéptido AHASL de monocotiledónea. En todavía otra modalidad, la secuencia de nucleótidos que codifica el polipéptido AHASL codifica un polipéptido AHASL del cual se sabe que la actividad de AHAS es mejorada por el polipéptido AHASS de la presente invención. La presente invención además se refiere a un método para mejorar la tolerancia a los herbicidas de una planta transgénica que expresa un gen que codifica un polipéptido AHASL o un mutante o variante del mismo. Este método comprende transformar la planta transgénica con una molécula de polinucleótidos AHASS de la presente invención. Preferentemente, la molécula de polinucleótidos está operativamente unida a un promotor que es capaz de impulsar la expresión genética en una planta o en por lo menos una célula de la misma. La presente invención además provee métodos para mejorar la resistencia a los herbicidas en las plantas progenie de una planta resistente a los herbicidas. El método comprende cruzar somática o sexualmente la planta cuyo complemento genérico comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una polipéptido AHASL eucariótico resistente a los herbicidas con una planta transformada con una molécula de polinucleótidos que codifica un polipéptido AHASS de la presente invención y seleccionar aquellas plantas progenie que exhiben tolerancia a los herbicidas mejorada. En una modalidad, la progenie seleccionada comprende la molécula de polinucleótidos que codifica el polipéptido AHASS de la presente invención establemente incorporado en sus genomas. Esta planta progenie comprende una resistencia mejorada a por lo menos un herbicida, comparada con la resistencia a los herbicidas de una variedad tipo salvaje de la planta. La presente invención además provee plantas transgénicas y plantas progenie producidas a través de los métodos de la presente invención, las plantas exhiben una resistencia mejorada a un herbicida que interfiere con la enzima AHAS. Las composiciones y métodos de la presente invención pueden ser usados para mejorar la resistencia de una planta o célula hospedadora a cualquier clase de inhibidor de AHASS, incluyendo, pero no limitado a, imidazolinonas y sulfonilureas: triazaolopirimidas (cloransulam-metilo, florasulam, diclosulam, metosulam, flumetsulam) ; pirimidinil (tio) benzoatos (piriminobac-metilo, piritiobac-Na, piriftalid, piribezoxim, bispiribac-Na) ; y sulfonilamino-carbonil-triazolinonas (flucarbenzona-Na, prooxicarbazona-Na) . Preferentemente, los herbicidas de la presente invención son aquellos utilizados en agricultura como, por ejemplo, imidazolinonas, sulfonilureas, cloransulam-metilo, y florasulam. En una modalidad de la presente invención, los herbicidas son productos herbicidas comercialmente disponibles que comprenden un herbicida de imidazolinona que incluye, pero no limitado a, Backdraft™, Beyond™ Herbicide, Cadre®, Extreme®, Lightning® Herbicide, Pursuit®, Raptor®, y Sceptor®. Algunas modalidades de la presente invención implican el uso de secuencias de nucleótidos que codifican polipéptidos AHASL. Tales secuencias de nucleótidos son conocidas en el arte. La presente invención no depende de una secuencia de nucleótidos particular que codifica un polipéptido AHASL particular, solamente de que la actividad de tal polipéptido AHASL sea capaz de ser mejorada o aumentada por un polipéptido AHASS de la presente invención. Preferentemente, la secuencia de nucleótidos codifica un polipéptido AHASL eucariótico. Más preferentemente, la secuencia de nucleótidos codifica un polipéptido AHASL de una planta. Las secuencias de nucleótidos que codifican polipéptidos AHASL incluyen aquellas descritas en los Números de Acceso AAR06607.1 ( Camelina microcarpa ) , AAK68759.1 (Arabidopsis thaliana ) , AAK50821.1 (Amaran thus powellii ) CAA87083.1 ( Gossypium hirsutum) , CAA87084.1 ( Gossypi um hirsutum) , CAA18088.1 ( Papaver rhoeas) , BAB20812.1 ( Oryza sa tiva ) , AAG40279.1 ( Solanum ptycanthum) , AAG53548.1 ( Tri ticum aestivum) , AAG53550.1 ( Tri ticum aestivum) , AAM03119.1 ( Bromus tectorum) , y AAC14572.1 ( Hordeum vulgare) . Los polinucleótidos AHASS de la presente invención pueden ser utilizados en métodos para mejorar la tolerancia de las plantas tolerantes a los herbicidas. En particular, tales plantas tolerantes a los herbicidas comprenden un polipéptido AHASL tolerante a los herbicidas o resistente a los herbicidas. Tales plantas tolerantes a los herbicidas incluyen tanto plantas transformadas con una secuencia de nucleótidos AHASL tolerante a los herbicidas como plantas que comprenden en sus genomas un gen endógeno que codifica un polipéptido AHASL tolerante a los herbicidas. Se conocen en el arte secuencias de nucleótidos que codifican polipéptidos AHASL tolerantes a los herbicidas y plantas tolerantes a los herbicidas que comprenden en un gen endógeno que codifica un polipéptido AHASL tolerante a los herbicidas. Véase, por ejemplo, las Patentes Estadounidenses Nos. 5,013,659, 5,731,180, 5,767,361, 5,545,822, 5,736,629, 5,773,703, 5,773,704, 5,952,553, y 6,274,796; todas las cuales se incorporan en la presente en su totalidad como referencia. Se dispone de numerosos vectores de transformación en plantas y métodos de transformación de plantas. Véase, por ejemplo, An et a l . , 1986, Plant Pysiol . , 81:301-305; Fry et al . , 1987, Plant Cell Rep. 6:321-325; Block, 1988, Theor. AppL Genet .76:767-774; Hinchee et al . , 1990, Stadler. Genet .

Symp. 203-212; Cousins et al., 1991, Aust. J. Plant Physiol. 18:481-494; Chee and Slightom, 1992, Gene.118 : 255-260; Christou et al., 1992, Trends. Biotechnol. 10:239-246; D'Halluin et al., 1992, Bio/Technol. 10:309-314; Dhir et al., 1992, Plant Physiol. 99:81-88; Casas et al., 1993, Proc. Nat.

Acad Sci. USA 90:11212-11216; Christou, 1993, In Vitro Cell.

Dev. Biol. -Plant; 29P: 119-124; Davies et al., 1993, Plant Cell Rep. 12:180-183; Dong and Mchughen, 1993, Plant Sci. 91:139-148; Franklin and Trieu, 1993, Plant. Physiol. 102:167; Golovkin et al., 1993, Plant Sci. 90:41-52; Guo Chin Sci. Bull. 38:2072-2078; Asano et al., 1994, Plant Cell Rep. 13; Ayeres and Park, 1994, Crit. Rev. Plant. Sci. 13:219-239; Barcelo et al., 1994, Plant. J. 5:583-592; Becker et al., 1994, Plant. J. 5:299-307; Borkowska et al., 1994, Acta. Physiol Plant. 16:225-230; Christou, 1994, Agro. Food. Ind.

Hi Tech. 5: 17-27; Eapen et al. (1994) Plant Cell Rep. 13:582-586; Hartman, et al. (1994) Bio-Technology 12: 919923; Ritala et al., 1994, Plant. Mol. Biol. 24:317-325; y Wan and Lemaux, 1994, Plant Physiol. 104:3748. Ciertos métodos de la presente invención involucran introducir un constructo de polinucleótido en una planta.

Como se usa en la presente, el término "introducir" se refiere a presentar a la planta el constructo de polinucleótido de modo que el constructo tenga acceso al interior de una célula de una planta. Los métodos de la presente invención no dependen de un método particular para introducir un constructo de polinucleótido a una planta, solamente que el constructo de polinucleótido tenga acceso al interior de por lo menos una célula de la planta. Se conocen en el arte métodos de introducción de constructos de polinucleótidos que incluyen, pero no se limitan a, métodos de transformación estable, métodos de transformación transitoria, y métodos mediados por virus. Como se usa en la presente, la expresión "transformación estable" hace referencia a un método de transformación en el cual el constructo de polinucleótido introducido a una planta se integra en el genoma de la planta y es capaz de ser heredado por la progenie de la misma. Como se usa en la presente, la expresión "transformación transitoria" hace referencia a un método de transformación en el cual un constructo de polinucleótido introducido a una planta no se integra en el genoma de la planta. Para la transformación de plantas y células de plantas, las secuencias de nucleótidos de la presente invención se insertan usando técnicas estándar en cualquier vector conocido en el arte que es adecuado para la expresión de las secuencias de nucleótidos en una planta o célula de la misma. La selección del vector depende de la técnica de transformación específica y la especie de planta objetivo a ser transformada. En una modalidad preferida, una secuencia de nucleótidos AHASS es operativamente unida a un promotor de planta conocido por un alto nivel de expresión en una célula de planta, y este constructo luego es introducido en una planta que comprende en su genoma un alelo AHASL resistente a los herbicidas. Este alelo AHASL resistente a los herbicidas puede ser nativo o endógeno al genoma de la planta o puede ser introducido en el genoma de la planta a través de cualquier método de transformación de plantas conocido en el arte. De este modo, la efectividad del gen de resistencia a los herbicidas (AHASL) puede ser mejorada por estabilización o activación de la proteína de subunidad grande. Este método puede ser aplicado a cualquier especie de planta; sin embargo, es más beneficioso cuando se aplica a plantas de cultivo, particularmente plantas de cultivo que típicamente están creciendo en la presencia de un herbicida. Las metodologías para construir casetes de expresión de plantas y para introducir ácidos nucleicos extraños a las plantas son en general conocidas en el arte y se han descrito previamente. Por ejemplo, el ADN extraño puede ser introducido en las plantas usando vectores de plásmidos inductores de tumores (Ti) . Otros métodos utilizados para el suministro de ADN extraño involucran el uso de transformación de protoplastos mediada por PEG, electroporación, monocristales filamentosos de microinyección, y biolística o bombardeo de microproyectiles para la absorción directa del ADN (Véase, por ejemplo, Patente Estadounidense No. 5,405,765 concedida a Vasil et al.; Bilang et al., 1991, Gene 100: 247-250; Scheid et al., 1991, Mol. Gen. Genet., 228: 104-112; Guerche et al., 1987, Plant Science 52: 111-116; Neuhause et al., 1987, Theor. AppL Genet. 75: 30-36; Klein et al., 1987, Nature 327: 70-73; Howell et al., 1980, Science 208:1265; Horsch et al., 1985, Science 221: 1229-1231; DeBlock et al., 1989, Plant Physiology 91: 694-701; Weissbach and Weissbach, eds., 1988, Methods for Plant Molecular Biology, Academic Press, Inc. y Schuler and Zielinski, eds., 1989, Methods in Plant Molecular Biology, Academic Press, Inc.). El método de transformación depende de. la célula de planta a ser transformada, la estabilidad de los vectores empleados, el nivel de expresión de los productos genéticos y otros parámetros. Otros métodos adecuados de introducción de una secuencia de nucleótidos en una célula de planta y posteriormente la inserción en el genoma de la planta incluyen la microinyección como se describe por Crossway et al. (1986, Biotechniques 4:320-334), electroporación como se describe por Riggs et al. (1986, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 83:5602-5606,); transformación mediada por Agrobacterium como se describe por Townsend et al. (Patente Estadounidense No. 5,563,055) y Zhao et al. (Patente Estadounidense No. 5,981,840); transferencia genética directa como se describe por Paszkowski et al. (1984, EMBO J. 3:2717-2722) ; aceleración de partículas balísticas como se describe en, por ejemplo, Sanford et al. (Patente Estadounidense No. 4,945,050), Tomes et al. (Patente Estadounidense No. 5,879,918), Tomes et al. (Patente Estadounidense No. 5,886,244), Bidney et al. (Patente Estadounidense No. 5,932,782), Tomes et al. (1995, "Direct DNA Transfer into Intact Plant Cells via Microprojectile Bombardment, " en Plant Cell, Tissue, and Organ Culture: Fundamental Methods, ed. Gamborg and Phillips, Springer-Verlag, Berlin; McCabe et al., 1988, Biotechnology 6:923-926); y transformación de Lecl (WO 00/28058). También véase, Weissinger et al., 1988, Ann. Rev. Genet. 22:421-477; Sanford et al., 1987, Particulate Science and Technology 5:27-37 (cebolla); Christou et al., 1988, Plant Physiol. 87:671-674 (soja); McCabe et al., 1988, Bio/Technology 6:923-926 (soja); Finer and McMullen, 1991, In Vitro Cell Dev. Biol. 27P: 175-182 (soja); Singh et al., 1998, Theor. Appl. Genet. 96:319-324 (soja); Datta et al., 1990, Biotechnology 8:736-740 (arroz); Klein et al., 1988, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 85:4305-4309 (maíz); Klein et al., 1988, Biotechnology 6:559-563 (maíz); Tomes, Patente Estadounidense No. 5,240,855; Buising et al., Patente Estadounidense No. 5,322,783 y 5,324,646; Tomes et al., 1995, "Direct DNA Transfer into Intact Plant Cells via Microprojectile Bombardment," en Plant Cell, Tissue, and Organ Culture: Fundamental Methods, ed. Gamborg, Springer-Verlag, Berlin, (maíz); Klein et al., 1988, Plant Physiol. 91:440-444 (maíz); Fromm et al., 1990, Biotechnology 8:833-839 (maíz); Hooykaas-Van Slogteren et al., 1984, Nature (London) 311:763-764; Bowen et al., Patente Estadounidense No. 5,736,369 (cereales); Bytebier et al., 1987, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 84:5345-5349 (Liliaceae); De Wet et al., 1985, en The Experimental Manipulation of Ovule Tissues , ed. Chapman et al., Longman, NY, pp . 197-209 (polen); Kaeppler et al., 1990, Plant Cell Reports 9:415-418 y Kaeppler et al., 1992, Theor. Appl. Genet. 84:560-566 (transformación mediada por monocristales filamentosos); D'Halluin et al., 1992, Plant Cell 4:1495-1505 (electroporación); Li et al., 1993, Plant Cell Reports 12:250-255 y Christou and Ford, 1995, Annals of Botany 75:407-413 (arroz); Osjoda et al., 1996, Nature Biotechnology 14:745-750 (maíz vía Agrobacterium tumefaciens) ; todos los cuales se incorporan en la presente como referencia. Los polinucleótidos de la presente invención también pueden ser introducidos en una planta poniendo en contacto la planta con un virus o ácidos nucleicos virales. En general, tales métodos involucran incorporar un constructo de polinucleótido de la presente invención dentro de una molécula de ADN o ARN viral. Se reconoce que un polipéptido AHASS de la presente invención puede inicialmente ser sintetizado como parte de una poliproteína, que posteriormente puede ser procesada por proteolisis en vivo o en vi tro para producir el polipéptido AHASS recombinante deseado. Además, se reconoce que los promotores de la presente invención además abarcan los promotores empleados para la transcripción por polimerasas de ARN virales. Los métodos de introducción de constructos de polinucleótidos en plantas y de expresión de una proteína codificada en estas, que involucran moléculas de ARN o ADN virales, son conocidos en el arte. ( Véase, por ejemplo, Patentes Estadounidenses Nos. 5,889,191, 5,889,190, 5,866,785, 5,589,367 y 5,316,931; incorporadas en la presente como referencia) . Las células de la presente invención en las cuales se han introducido los polinucleótidos AHASS pueden crecer en las plantas de acuerdo con las formas convencionales ( Véase, por ejemplo, McCormick et al . , 1986, Plant Cell Reports 5:81-84). Estas plantas luego pueden crecer, y se polinizan con la misma cepa transformada o distintas cepas, y el híbrido resultante que tiene la expresión constitutiva de la característica fenotípica deseada puede ser identificado. Se pueden hacer crecer dos o más generaciones para asegurar que la expresión de la característica fenotípica deseada se mantenga establemente y se herede, y luego las semillas pueden ser cosechadas para asegurar que la expresión de la característica fenotípica deseada ha sido lograda. De este modo, la presente invención provee una semilla transformada (también denominada "semilla transgénica) que tiene un constructo de polinucleótido AHASS de la presente invención.

En una modalidad, el polinucleótido AHASS de la presente invención se incorpora establemente en un genoma de planta. La presente invención puede ser usada para la transformación de cualquier especie de planta, incluyendo, pero no limitado a, monocotiledóneas y dicotiledóneas. Los ejemplos de especies de plantas de interés incluyen, pero no se limitan a, maíz (Zea mays), Brassica sp. (por ejemplo, B. napus, B. rapa, B. júncea) , particularmente aquellas especies Brassica útiles como fuentes de aceite de semilla, alfalfa (Medicago sativa), arroz (Oryza sativa), centeno (Sécale cereale) , sorgo (Sorghum bicolor, Sorghum vulgare) , mijo (por ejemplo, mijo perla (Pennisetum glaucum) , mijo proso (Panicum míliaceum) , mijo cola de zorro (Setaria itálica), mijo dedo (Eleusine coracana) ) , girasol (Helianthus annuus) , cártamo (Carthamus tinctorius) , trigo (Triticum aestivum, T. Turgidum ssp. durum) , soya (Glycine max) , tabaco (Nicotiana tabacum) , papa (Solanum tuberosum) , cacahuate (Arachis hypogaea) , algodón (Gossypium barbadense, Gossypium hirsutum) , batata (Ipomoea batatus) , mandioca (Manihot esculenta) , café (Co-ffea spp.), coco (Cocos nucifera) , pina (Ananas como sus) , árboles de cítricos (Citrus spp.), cacao (Theobroma cacao), té (Camellia sinensis) , banana (Musa spp.), aguacate (Persea americana) , higo ( Ficus casica ) , guayaba ( Psidium guajava ) , mango (Mangifera indica ) , oliva ( Olea europaea ) , papaya ( Carica papaya) , anacardo (Anacardium occidentale) , macadamia (Macadamia integrifolia) , almendra ( Prunus amygdalus) , remolacha (Beta vulgaris) , caña de azúcar ( Saccharum spp.), avenas, cebada, vegetales, ornamentales, y coniferas. En una modalidad, las plantas de la presente invención son plantas de cultivo (por ejemplo, maíz, arroz, trigo, remolacha, alfalfa, girasol, Brassica, soya, algodón, cártamo, cacahuate, sorgo, mijo, tabaco, etc.), preferentemente plantas de granos (por ejemplo, maíz, arroz, trigo, cebada, sorgo, centeno, tritical, etc.), más preferentemente plantas de maíz, arroz, y trigo. También se deberá entender que lo anterior se refiere a las modalidades preferidas de la presente invención y que numerosos cambios pueden ser implementados sin apartarse del alcance de la invención. La invención es ilustrada adicionalmente por los siguientes ejemplos, los cuales no se construyen en cualquier forma para imponer limitaciones en el alcance de la misma. Por el contrario, será claramente entendido que puede recurrirse a varias otras modalidades, modificaciones y equivalentes de las mismas, las cuales, después de la lectura de la descripción, pueden inspirar por si mismas a aquellos expertos en el arte sin apartarse del espíritu de la presente invención y/o el alcance de las reivindicaciones anexas.

EJEMPLOS Ejemplo 1 Identificación de la Secuencia de Nucleótidos AHASS de Longi tud Completa de Maíz, Arroz , y Trigo Se extrajo el ARN total del tejido de hoja de maíz (cultivo 3394) usando la solución de extracción de ARN de planta Concert™ (Invitrogen Corp., Carlsbad, CA, USA). Este grupo de ARN total sirvió como la fuente de ARN para la producción de una primera cadena de biblioteca de ADNc con el kit Invitrogen' s Gene Racer (RLM-RACE) . Se diseñaron los cebadores usados para la rápida amplificación de los extremos de ADNc (RACE) , buscando la región 5' de una secuencia de ADNc de dominio público de menor longitud total (ZmAHASSla: Número de acceso AY105043) . Esta secuencia parcial tiene un error de secuenciado que destruye el ORF del ADNc. La comparación de secuencia entre los ADNc AHASSl traducidos con la secuencia de ADNc ZmAHASSla parcial indicó la base que fue probablemente la que originó el cambio de marco. Sin embargo, hasta que se obtuvo el ADNc de longitud total experimentalmente derivado, la identidad de la base de cambio de marco no fue cierta. Los cebadores empleados para la resolución 5' RACE de ZmAHASSla son como sigue: TTCACAAGGATGGAGAGAAGTATGCGAGCGA gjb 17 (SEC ID NO: 6) ACATCACCCCCAGCATTGGATGGTTGA gjb 18 (SEC ID NO: 7) AAGCAGCAGAAAATCGCCAGAAACGGG gjb 42 (SEC ID NO: 8) AACGCCTCTATCAGGTCTGGGTAAG gjb 43 (SEC ID NO: 9) .

Los productos 5' RACE fueron TA clonados usando el kit de clonación Promega' s pGem T-easy. Se secuenciaron cuatro clones de plásmidos separados, y la secuencia de nucleótidos que se determinó resolvió el codón de inicio experimental de ADNc ZmAHASSla. Usando el codón de inicio derivado experimentalmente acoplado con la secuencia parcial pública que designó al codón de oparo, los cebadores para la amplificación del ADNC de longitud total fueron diseñados. El PCR se realizó amplificando el ADNc ZmAHASSla de una biblioteca de ADNc de primera cadena derivada del tejido de planta antes mencionado. Se secuenciaron y analizaron veintitrés clones independientes de un grupo de cuatro reacciones de ADNc independientes, confirmando la secuencia de ADNc experimental de ZmAHASla y confirmando la identidad del error de secuencia de cambio de marco en la secuencia de ADNc parcial publicada AY105043. Las marcas de secuencia expresadas (ETSs) correspondientes a las secuencias de nucleótidos AHAS de maíz y trigo de las SEC ID NOS : 1 y 3, respectivamente, fueron identificadas en una base de datos de EST propietaria basada en la homología con las secuencias de nucleótidos AHASS conocidas. Luego se obtuvo un clon de ADNc de maíz de longitud total usando el método de amplificación rápida de extremos de ADNc (RACE), particularmente el método 5 ' -RACE (Frohman et al . , 1988, Proc . Na ti . Acad. Sci . USA 85:8998-9002) . El ADNc resultante fue secuenciado para obtener la secuencia de nucleótidos descrita en la SEC ID NO: 1. La secuencia de aminoácidos de trigo (SEC ID NO: 5) se derivó de las secuencias de aminoácidos predichas de las secuencias de nucleótidos de varias ESTs degeneradas superpuestas (secuencias de nucleótidos no mostradas). Se ensambló el contig C5532171 a partir de seis ESTs de trigo propietarias y dos presentaciones de GenBank de secuencias parciales (gi2139744 y gi21319X) . Se utilizó Contig Express (Informax, Inc., North Bethesda, MD, USA) para repetir el ensamble precedente a partir del EST propietaria original. El ensamble obtenido abarcó todo el gen pero contuvo numerosos polimorfismos. Probablemente representen variantes entre los tres genes homólogos en el trigo. Por ello, no hubo un 100% de identidad en las superposiciones. La secuencia de aminoácidos esperada (que representa un consenso) luego fue alineada con aquellas de ZmAHASSla y OsAHASSl, y otras secuencias públicas y cada aminoácido "inesperado" fue verificado examinando las secuencias de nucleótidos originales usadas para la secuencia de consenso. El ADNc AHASS de arroz de longitud total fue ensamblado a partir de dos ESTs públicas (Números de acceso: AU064546 y AU166867) y un contig propietario. La secuencia de nucleótidos de arroz AHASS es descrita en la SEC ID NO: 3. La secuencia de aminoácidos deducida es descrita en la SEC ID NO: 4. Las secuencias de aminoácidos y nucleótido de arroz AHASS de la presente invención fueron comparadas contra las anotaciones del ADN genómico OsAHASSl disponible en TIGR (The Institute for Genomic Research, 9712 Medical Center Drive, Rockville, MD 20850; en línea en www.tigr.org). Los números de referencia TIGR para las anotaciones del ADN genómico OsAHASSl son TIGR gen temp id: 8351.t03738 y 8351.t03738. Sin embargo, estas anotaciones no fueron idénticas a las secuencias de aminoácido (SEC ID NO: 4) y nucleótido AHASS de arroz de longitud completa (SEC ID NO: 3) de la presente invención. A nivel de nucleótido, hay dos diferencias de exón entre la anotación y la SEC ID NO: 3. Las diferencias al nivel de aminoácido son representadas en la alineación presentada en la Figura 5.

Ejemplo 2 Proteínas AHASS de Maíz , Arroz, y Trigo Las secuencias de aminoácidos de las proteínas AHASS del maíz, arroz, y trigo de la presente invención son descritas en las SEC ID NOS: 2, 4, y 5, respectivamente. A partir de las comparaciones con las secuencias de aminoácidos de la presente invención con otras secuencias de aminoácidos AHASS de plantas conocidas, la ubicación del péptido de tránsito al cloroplasto fue determinada para cada una de las secuencias de aminoácidos de la presente invención. Para la proteína AHASS del maíz, el péptido de tránsito al cloroplasto corresponde a los aminoácidos 1-76, y la proteína madura corresponde a los aminoácidos 77-483 de la SEC ID NO: 2. Para la proteína AHASS del arroz, el péptido de tránsito al cloroplasto corresponde a los aminoácidos 1-73, y la proteína madura corresponde a los aminoácidos 74-481 de la SEC ID NO: 4. Para la proteína AHASS del trigo, el péptido de tránsito al cloroplasto corresponde a los aminoácidos 1-63, y la proteína madura corresponde a los aminoácidos 64-471 de la SEC ID NO: 5. Una alineación de las secuencias de aminoácidos de las proteínas AHASS maduras de la presente invención se proporciona en la figura 1. Las tres proteínas AHAS de la presente invención contienen cada una dos dominios conservados, designados como Dominio 1 y Dominio 2, los cuales están separados por una región enlazante variable. Las secuencias de aminoácidos de la presente invención fueron comparadas con otras secuencias de aminoácidos AHASS de plantas conocidas. La Figura 2 provee identidades de secuencias de aminoácidos a partir de comparaciones por pares de las proteínas AHASS maduras de la presente invención y proteínas AHASS maduras conocidas de plantas. Las Figuras 3 y 4 proveen los resultados de comparaciones similares para los Dominios 1 y 2, respectivamente. Todas las publicaciones y solicitudes de patente mencionadas en la especificación son indicativas del nivel de aquellos expertos en el arte al cual la invención pertenece. Todas las publicaciones y solicitudes de patente se incorporan en la presente como referencia al mismo grado como si cada publicación o solicitud de patente individual fue específica e individualmente indicada para ser incorporada como referencia. Aunque la invención precedente ha sido descrita con cierto detalle por vía de ilustración y ejemplo para propósitos de claridad de entendimiento, será obvio que ciertos cambios y modificaciones pueden ser practicados dentro del alcance de las reivindicaciones anexas. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (57)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Un polinucleótido aislado, caracterizado porque comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste de: (a) un polinucleótido de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3; los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la

SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3; (b) un polinucleótido que tiene al menos un 80% de identidad de secuencia con la secuencia de nucleótidos definida en la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3; los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1 , o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3; en donde el polinucleótido codifica un polipéptido que tiene actividad de subunidad pequeña de sintasa acetohidroxiácida (AHASS) ; (c) un polinucleótido que se hibrida bajo condiciones severas a la secuencia de nucleótidos definida en la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3; los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3, en donde el polinucleótido codifica un polipéptido que tiene actividad de AHASS; (d) un polinucleótido que codifica un polipéptido de conformidad con la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4, o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5; (e) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene al menos 81% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos definida en la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4, o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5; en donde el polinucleótido codifica un polipéptido que tiene actividad de AHASS; (f) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene al menos 77% de identidad de secuencia con los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5; en dondeo el polinucleótido codifica un polipéptido que tiene actividad de AHASS; (g) un polinucleótido de conformidad con la SEC ID NO: 10; y (h) un polinucleótido de conformidad con la SEC ID NO: 11. 2. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende una secuencia de nucleótidos de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3, los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3.

3. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende una secuencia de nucleótidos que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con la secuencia de nucleótidos de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3, los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3, en donde el polinucleótido codifica un polipéptido que tiene actividad de AHASS.

4. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido de conformidad con la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4, o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5.

5. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de conformidad con la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4; o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5, en donde el polinucleótido codifica un polipéptido que tiene actividad de AHASS.

6. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende un polinucleótido de conformidad con la SEC ID NO: 10 o la SEC ID NO: 11.

7. El polinucleótido aislado de conformidad con cualquiera de (a) a (f) de la reivindicación 1, caracterizado porque es un cásete de expresión que comprende un promotor operativamente unido al polinucleótido.

8. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque es un vector de expresión en plantas.

9. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el cásete de expresión además comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un péptido de tránsito al cloroplasto operativamente unido al polinucleótido.

10. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el promotor es capaz de impulsar la expresión del polinucleótido en una célula hospedadora seleccionada del grupo que consiste de una bacteria, una célula fúngica, una célula animal, y una célula de planta.

11. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el cásete de expresión está presente en una célula hospedadora seleccionada del grupo que consiste de una bacteria, una célula fúngica, una célula animal, y una célula de planta.

12. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el cásete de expresión está en una planta.

13. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el vector de expresión en plantas además comprende un segundo constructo de polinucleótido que comprende un segundo promotor operativamente unido a una segunda secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido AHASL eucariótico, en donde ambos promotores son capaces de impulsar la expresión genética en una célula de planta.

14. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque es seleccionado del grupo que consiste de: una secuencia de nucleótidos de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3, los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3; y una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido de conformidad con la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4, o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5.

15. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el polipéptido AHASL eucariótico es un polipéptido AHASL de planta.

16. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el polipéptido AHASL eucariótico es un polipéptido AHASL tolerante a los herbicidas.

17. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el vector de expresión está en una célula de planta.

18. El vector de expresión en plantas de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque está en una planta.

19. Un polipéptido aislado, caracterizado porque comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de: (a) un polipéptido de conformidad con la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4, o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5; (b) un polipéptido que tiene al menos 81% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de conformidad con la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4, o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5, en donde el polipéptido tiene actividad de subunidad pequeña de sintasa acetohidroxiácida (AHASS) ; (c) un polipéptido que tiene al menos 77% de identidad de secuencia con los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5, en donde el polipéptido tiene actividad de AHASS; (d) un polipéptido codificado por un polinucleótido que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con una secuencia de nucleótidos de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3, los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3, en donde el polipéptido tiene actividad de AHASS; y (e) un polipéptido codificado por un polinucleótido que se hibrida bajo condiciones severas a una secuencia de nucleótidos de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3, los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3, en donde el polipéptido tiene actividad de AHASS.

20. El polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque está definido en la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4; o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5.

21. Una célula de planta transgénica, caracterizada porque comprende un constructo de polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste de: (a) un polinucleótido de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3, los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3; (b) un polinucleótido que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con la secuencia de nucleótidos de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3, los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3, en donde el polinucleótido codifica un polipéptido que tiene actividad de subunidad pequeña de sintasa acetohidroxiácida (AHASS); (c) un polinucleótido que se hibrida bajo condiciones severas a la secuencia de nucleótidos de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3, los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3, en donde el polinucleótido codifica un polipéptido que tiene actividad de AHASS; (d) un polinucleótido que codifica un polipéptido de conformidad con la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4, o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5; (e) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene al menos 81% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de conformidad con la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4, o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5, en donde el po inucleótido codifica un polipéptido que tiene actividad de AHASS; y (f) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene al menos 77% de identidad de secuencia con los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5, en donde el polinucleótido codifica un polipéptido que tiene actividad de AHASS.

22. La célula de planta transgénica de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque el constructo de polinucleótido está operativamente unido a un promotor seleccionado del grupo que consiste de un promotor consecutivo y un promotor con preferencia por tejidos.

23. La célula de planta transgénica de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque el constructo de polinucleótido además comprende una segunda secuencia de nucleótidos que codifica un péptido de tránsito al cloroplasto operativamente unido a la primera secuencia de nucleótidos.

24. La célula de planta transgénica de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque la actividad de AHAS de la célula de planta transgénica se incrementa cuando se compara con una variedad tipo salvaje de la célula de planta.

25. La célula de planta transgénica de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque la tolerancia de la célula de planta transgénica a al menos un herbicida se incrementa cuando se compara con una variedad tipo salvaje de la célula de planta.

26. La célula de planta transgénica de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque es una célula de planta monocotiledónea seleccionada del grupo que consiste de maíz, trigo, arroz, cebada, centeno, avenas, tritical, mijo, y sorgo.

27. La célula de planta transgénica de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque es de una célula de planta dicotiledónea seleccionada del grupo que consiste de soya, algodón, Brassica spp . , tabaco, papa, remolacha, alfalfa, girasol, cártamo, y cacahuate.

28. La célula de planta transgénica de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque está en una planta.

29. La célula de planta transgénica de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque está en una semilla .

30. Un método para mejorar la actividad de AHAS en una planta, caracterizado porque comprende introducir un constructo de polinucleótido en una célula de planta y generar de la célula de planta una planta transgénica que tiene actividad de AHAS incrementada cuando se compara con una variedad tipo salvaje de la planta, en donde el constructo de polinucleótido comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste de: (a) un polinucleótido de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3; los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3; (b) un polinucleótido que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con la secuencia de nucleótidos de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3, los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3, en donde el polinucleótido codifica un polipéptido que tiene actividad de subunidad pequeña de sintasa acetohidroxiácida (AHASS) ; (c) un polinucleótido que se hibrida bajo condiciones severas a la secuencia de nucleótidos de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3, los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3, en donde el polinucleótido codifica un polipéptido que tiene actividad de AHASS; (d) un polinucleótido que codifica un polipéptido de conformidad con la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4, o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5; (e) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene al menos 81% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de conformidad con la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4, o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5, en donde el polinucleótido codifica un polipéptido que tiene actividad de AHASS; y (f) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene al menos 77% de identidad de secuencia con los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5, en donde el polinucleótido codifica un polipéptido que tiene actividad de AHASS.

31. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque la planta transgénica tiene tolerancia incrementada a un herbicida cuando se compara con una variedad tipo salvaje de la planta.

32. El método de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque la planta transgénica tiene tolerancia incrementada a un herbicida de imidazolinona cuando se compara con una variedad tipo salvaje de la planta.

33. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque la planta es una planta tolerante a los herbicidas .

34. El método de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque la planta es una planta tolerante a imidazolinona .

35. El método de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque la planta comprende un polipéptido de subunidad grande de sintasa acetohidroxiácida (AHASL) tolerante a los herbicidas .

36. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el constructo de polinucleótido además comprende un promotor operativamente unido a la secuencia de nucleótidos, en donde el promotor es seleccionado del grupo que consiste de un promotor constitutivo y un promotor con preferencia por tejidos.

37. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el constructo de polinucleótido además comprende una secuencia de polinucleótidos que codifica un polipéptido de subunidad grande de sintasa acetohidroxiácida (AHASL) tolerante a los herbicidas.

38. Una planta transgénica, caracterizada porque tiene actividad de AHAS incrementada cuando se compara con una variedad tipo salvaje de la planta producida por un método que comprende, introducir un constructo de polinucleótido en una célula de planta y generar de la célula de planta la planta transgénica, en donde el constructo de polinucleótido comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste de: (a) un polinucleótido de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3; los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3; (b) un polinucleótido que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con la secuencia de nucleótidos de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3, los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3, en donde el polinucleótido codifica un polipéptido que tiene actividad de la subunidad pequeña de sintasa acetohidroxiácida (AHASS) ; (c) un polinucleótido que se hibrida bajo condiciones severas a la secuencia de nucleótidos de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3, los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3, en donde el polinucleótido codifica un polipéptido que tiene actividad de AHASS; (d) una secuencia de polinucleótidos que codifica un polipéptido de conformidad con la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4, o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5; (e) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene al menos 81% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de conformidad con la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4, o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5, en donde el polinucleótido codifica un polipéptido que tiene actividad de AHASS; y (f) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene al menos 77% de identidad de secuencia con los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5, en donde el polinucleótido codifica un polipéptido que tiene actividad de AHASS.

39. La planta transgénica de conformidad con la reivindicación 38, caracterizada porque el constructo de polinucleótido comprende una secuencia de nucleótidos de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3, los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3.

40. La planta transgénica de conformidad con la reivindicación 38, caracterizada porque el constructo de polinucleótido comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido de conformidad con la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4; o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5.

41. Un método para controlar las malezas cercanas a una planta, caracterizado porque comprende aplicar un herbicida de imidazolinona a las malezas y a la planta, en donde la planta tiene tolerancia incrementada al herbicida de imidazolinona cuando se compara con una variedad tipo salvaje de la planta y en donde la planta comprende un constructo de polinucleótido que tiene una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste de: (a) un polinucleótido de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3; los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3; (b) un polinucleótido que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con la secuencia de nucleótidos de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3, los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3, en donde el polinucleótido codifica un polipéptido con actividad de la subunidad pequeña de sintasa acetohidroxiácida (AHASS) ; (c) un polinucleótido que se hibrida bajo condiciones severas a la secuencia de nucleótidos de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3, los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3, en donde el polinucleótido codifica un polipéptido que tiene actividad de AHASS; (d) una secuencia de polinucleótidos que codifica un polipéptido de conformidad con la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4, o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5; (e) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene al menos 81% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de conformidad con la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4, o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5, en donde el polinucleótido codifica un polipéptido que tiene actividad de AHASS; y (f) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene al menos 77% de identidad de secuencia con los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5, en donde el polinucleótido codifica un polipéptido que tiene actividad de AHASS.

42. Un polipéptido de fusión, caracterizado porque comprende un dominio de subunidad grande de sintasa acetohidroxiácida (AHASL) operativamente unido a dominio de subunidad pequeña de sintasa acetohidroxiácida (AHASS) ; en donde el péptido de fusión comprende actividad de AHAS, en donde el dominio AHASL comprende una secuencia de aminoácidos de un polipéptido AHASL eucariótico maduro, y en donde el dominio AHASS comprende una secuencia de aminoácidos de un polipéptido AHASS seleccionado del grupo que consiste de: (a) un polipéptido de conformidad con la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4, o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5; (b) un polipéptido que tiene al menos 81% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de conformidad con la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4, o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5, en donde el polipéptido tiene actividad de subunidad pequeña de sintasa acetohidroxiácida (AHASS) ; (c) un polipéptido que tiene al menos 77% de identidad de secuencia con los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5, en donde el polipéptido tiene actividad de AHASS; (d) un polipéptido codificado por un polinucleótido que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con una secuencia de nucleótidos de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3, los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3, en donde el polipéptido tiene actividad de AHASS; y (e) un polipéptido codificado por un polinucleótido que se hibrida bajo condiciones severas a una secuencia de nucleótidos de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3, los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3, en donde el polipéptido tiene actividad de AHASS.

43. El polipéptido de fusión de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque el polipéptido AHASL eucariótico es un polipéptido AHASL de planta.

44. El polipéptido de fusión de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque comprende además una región enlazante operativamente unida entre el dominio AHASL y el dominio AHASS.

45. El polipéptido de fusión de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque el polipéptido AHASL y el polipéptido AHASS son de especies diferentes.

46. Un polinucleótido aislado, caracterizado porque codifica un polipéptido de fusión de subunidad grande de sintasa acetohidroxiácida (AHASL) - de subunidad pequeña de sintasa acetohidroxiácida (AHASS) , en donde AHASL es un polipéptido AHASL eucariótico, y en donde AHASS comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de: (a) un polipéptido de conformidad con la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4, o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5; (b) un polipéptido que tiene al menos 81% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de conformidad con la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4, o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5, en donde el polipéptido tiene actividad de subunidad pequeña de sintasa acetohidroxiácida (AHASS) ; (c) un polipéptido que tiene al menos 77% de identidad de secuencia con los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5, en donde el polipéptido tiene actividad de AHASS; (d) un polipéptido codificado por un polinucleótido que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con una secuencia de nucleótidos de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3, los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3, en donde- el polipéptido tiene actividad de AHASS; y (e) un polipéptido codificado por un polinucleótido que se hibrida bajo condiciones severas a una secuencia de nucleótidos definida en la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3, los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3, en donde el polipéptido tiene actividad de AHASS.

47. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque la AHASS comprende una secuencia de aminoácidos de conformidad con la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4, o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5.

48. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque comprende además una tercera secuencia de nucleótidos operativamente unida que codifica una región enlazante.

49. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque comprende además una secuencia de objetivo al cloroplasto operativamente unida al polinucleótido .

50. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque el polipéptido AHASL eucariótico es un polipéptido AHASL de planta.

51. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque el polipéptido AHASL eucariótico es un polipéptido AHASL tolerante a los herbicidas .

52. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque está en un vector de expresión en plantas.

53. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque está en una célula de planta .

54. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque está en una semilla.

55. Un método para producir una planta transgénica que tiene actividad de AHAS incrementada, caracterizado porque comprende introducir un constructo de polinucleótido en una célula de planta y generar a partir de la célula de planta transgénica una planta transgénica que tiene actividad de AHAS incrementada cuando se compara con una variedad de tipo salvaje de la planta, en donde el constructo de polinucleótido codifica un polipéptido de fusión de subunidad grande de sintasa acetohidroxiácida (AHASL) -subunidad pequeña de sintasa acetohidroxiácida (AHASS) , donde la AHASL es un polipéptido AHASL eucariótico, y AHASS comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de: (a) un polipéptido de conformidad con la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4, o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5; (b) un polipéptido que tiene al menos 81% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de conformidad con la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4, o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5, en donde el polipéptido tiene actividad de subunidad pequeña de sintasa acetohidroxiácida (AHASS) ; (c) un polipéptido que tiene al menos 77% de identidad de secuencia con los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5, en donde el polipéptido tiene actividad de AHASS; (d) un polipéptido codificado por un polinucleótido que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con una secuencia de nucleótidos de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3, los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3, en donde el polipéptido tiene actividad de AHASS; y (e) un polipéptido codificado por un polinucleótido que se hibrida bajo condiciones severas a una secuencia de nucleótidos de conformidad con la SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3, los nucleótidos consecutivos 275-1495 de la SEC ID NO: 1, o los nucleótidos consecutivos 342-1565 de la SEC ID NO: 3, en donde el polipéptido tiene actividad de AHASS.

56. El método de conformidad con la reivindicación 55, caracterizado porque el polipéptido AHASS está definido en la SEC ID NO: 2, SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 5, los aminoácidos consecutivos 77-483 de la SEC ID NO: 2, los aminoácidos consecutivos 74-481 de la SEC ID NO: 4, o los aminoácidos consecutivos 64-471 de la SEC ID NO: 5.

57. El método de conformidad con la reivindicación 55, caracterizado porque la planta transgénica tiene tolerancia incrementada a un herbicida de imidazolinona cuando se compara con una variedad del tipo salvaje de la planta.