MD4499C1 - Mediu de protecţie pentru conservarea tulpinii Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06 - Google Patents

Mediu de protecţie pentru conservarea tulpinii Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06 Download PDF

Info

Publication number
MD4499C1
MD4499C1 MDA20160084A MD20160084A MD4499C1 MD 4499 C1 MD4499 C1 MD 4499C1 MD A20160084 A MDA20160084 A MD A20160084A MD 20160084 A MD20160084 A MD 20160084A MD 4499 C1 MD4499 C1 MD 4499C1
Authority
MD
Moldova
Prior art keywords
cnmn
strain
medium
preservation
extract
Prior art date
Application number
MDA20160084A
Other languages
English (en)
Russian (ru)
Other versions
MD4499B1 (ro
Inventor
Олег КИСЕЛИЦА
Максим БЫРСА
Светлана БУРЦЕВА
Анастасия ВАСИЛЬЧУК
Валериу РУДИК
Валентина БУЛЬМАГА
Original Assignee
Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы filed Critical Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы
Priority to MDA20160084A priority Critical patent/MD4499C1/ro
Publication of MD4499B1 publication Critical patent/MD4499B1/ro
Publication of MD4499C1 publication Critical patent/MD4499C1/ro

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Invenţia se referă la biotehnologie, şi anume la un mediu de protecţie pentru conservarea tulpinii de actinomicete Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06.Mediul, conform invenţiei, conţine 7,5% glucoză, 2,5% gelatină, 10…50% vol. extract de polizaharide sulfatate cu o concentraţie de 10 mg/ml, obţinut din biomasa tulpinii de cianobacterie Spirulina platensis CNMN-CB-02 şi apă distilată restul.

Description

Invenţia se referă la biotehnologie, şi anume la un mediu de protecţie pentru conservarea tulpinii de actinomicete Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06.
Invenţia poate fi aplicată pentru conservarea, păstrarea, studierea şi utilizarea eficientă a genofondului microbian autohton de interes ştiinţific şi biotehnologic.
Sunt cunoscute medii de protecţie pentru liofilizarea tulpinilor de actinomicete ce conţin gelatină, zaharoză, glucoză, lapte degresat în diferite concentraţii şi combinări: lapte degresat (LD), lapte degresat cu glucoză de 7,0% (LD+G7%), gelatină 1,0% cu zaharoză 10,0% (Gel1%+Z10%), gelatină 2,5% cu zaharoză 7,5% (Gel 2,5%+Z 7,5%) [1].
Este cunoscut mediul de protecţie pentru liofilizarea tulpinilor de actinomicete ce conţine: zahăr (10%), lapte degresat (5,5%) şi gelatină (1,5%) [2].
Însă, neajunsul acestor medii de protecţie constă în viabilitatea scăzută a tulpinilor după liofilizare.
Cea mai apropiată soluţie a mediului de protecţie revendicat pentru liofilizarea tulpinii Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06 este mediul care conţine, (%): gelatină - 2,5 şi glucoză -7,5 [3].
La conservarea tulpinii pe acest mediu de protecţie în condiţii proxime viabilitatea ei după liofilizare constituie 75,7±1,4% din numărul iniţial.
Dezavantajul acestui mediu constă în faptul că compoziţia chimică a mediului nu asigură o protecţie deplină tulpinii de actinomicete în timpul liofilizării, astfel obţinându-se o viabilitate scăzută.
Problema pe care o rezolvă prezenta invenţie constă în elaborarea unui mediu de protecţie care asigură sporirea viabilităţii tulpinii după liofilizare.
Mediul de protecţie pentru conservarea tulpinii de actinomicete Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06, conform invenţiei, conţine 7,5% glucoză, 2,5% gelatină, 10…50% vol. extract de polizaharide sulfatate cu o concentraţie de 10 mg/ml, obţinut din biomasa tulpinii de cianobacterie Spirulina platensis CNMN-CB-02 şi apă distilată restul.
Extractul de polizaharide sulfatate este obţinut din biomasa tulpinii de cianobacterie Spirulina platensis CNMN-CB-02 prin extragere cu apă distilată la temperatura de 90°C, centrifugare, sedimentare cu soluţie de 1% de bromură de cetil-trimetil-amoniu, spălare cu soluţie saturată de acetat de sodiu şi alcool etilic de 96% vol.
Polizaharidele sulfatate au fost extrase din biomasa de spirulină cu apă distilată în raport de 1:45 (m/V) la temperatura de 90°C, timp de 2 ore. După centrifugare timp de 10 min la 4800 rot/min la supernatant se adaugă soluţie de 1% de bromură de cetil-trimetil-amoniu pentru precipitarea polizaharidelor şi se repetă centrifugarea la aceiaşi parametri. Precipitatul obţinut se spală cu soluţie saturată de acetat de sodiu în alcool de 95%, apoi repetat cu alcool de 96% [Ratana Chaiklahan, Nattayaporn Chirasuwan, Panya Triratana, Veara Loha, Suvit Tia, Boosya Bunnag. Polysaccharide extraction from Spirulina sp. and its antioxidant capacity. International Journal af Biological Macromolecules., 2013, v. 58, p.73-78].
Extractul de polizaharide obţinut este constituit din 87,7% hidraţi de carbon şi 12,3% peptide. Efectul pozitiv se datorează suplinirii mediului de protecţie cunoscut cu extract de polizaharide sulfatate de origine cianobacteriană, care posedă acţiune antioxidantă şi antiradicalică şi oferă tulpinii o protecţie suplimentară, contribuind astfel la majorarea viabilităţii ei după liofilizare.
Rezultatul tehnic al invenţiei constă în sporirea cu 30,0...36,9% a viabilităţii tulpinii de actinomicete Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06 faţă de cea mai apropiată soluţie (tab.), datorită includerii în mediul de protecţie a extractului de polizaharide sulfatate de origine cianobacteriană, care posedă acţiune antioxidantă şi antiradicalică şi anihilează efectul negativ al temperaturilor joase, presiunii înalte, deshidratării şi formelor reactive de oxigen la care sunt supuse microorganismele în timpul liofilizării.
Exemplu de realizare a invenţiei
Exemplul 1
În tuburi înclinate cu mediu agarizat Czapek, în condiţii sterile, se cultivă tulpina Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06 timp de 14 zile, în termostat la temperatura de +27°C. Materialul semincer obţinut se transferă în mediul de protecţie lichid cu următoarea componenţă, (%): gelatină - 2,5; glucoză - 7,5 şi extract de polizaharide sulfatate de origine cianobacteriană (concentraţia de 10 mg/ml) - 10% vol., până la obţinerea titrului de 108…1010 UFC ml-1. Suspensia obţinută se plasează câte 1 ml în flacoane pentru liofilizare. Probele se congelează brusc la temperatura de minus 50°C. Peste 12 ore se efectuează liofilizarea la temperatura condensorului de minus 88...94°C, vid 6…7 Pa, timp de 12 ore. Probele liofilizate se sigilează în vid şi se păstrează la temperatura de +4…+5°C.
În varianta martor viabilitatea tulpinii Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06 este de 75,7±1,4%, iar în varianta optimizată de 105,7±1,5%, ceea ce este cu 30,0% mai mult.
Exemplul 2
În tuburi înclinate cu mediu agarizat Czapek, în condiţii sterile, se cultivă tulpina Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06 timp de 14 zile, în termostat la temperatura de +27°C. Materialul semincer obţinut se transferă în mediul de protecţie lichid cu următoarea componenţă, (%): gelatină - 2,5; glucoză - 7,5 şi extract de polizaharide sulfatate de origine cianobacteriană (concentraţia de 10 mg/ml) - 30% vol., până la obţinerea titrului de 108…1010 UFC ml-1. Suspensia obţinută se plasează câte 1 ml în flacoane pentru liofilizare. Probele se congelează brusc la temperatura de minus 50°C. Peste 12 ore se efectuează liofilizarea la temperatura condensorului de minus 88…94°C, vid 6…7 Pa, timp de 12 ore. Probele liofilizate se sigilează în vid şi se păstrează la temperatura de +4…+5°C.
În varianta martor viabilitatea tulpinii Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06 este de 75,7±1,4%, iar în varianta optimizată de 106,2±2,5%, ceea ce este cu 30,5% mai mult.
Exemplul 3
În tuburi înclinate cu mediu agarizat Czapek, în condiţii sterile, se cultivă tulpina Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06 timp de14 zile, în termostat la temperatura de +27°C. Materialul semincer obţinut se transferă în mediul de protecţie lichid cu următoarea componenţă, (%): gelatină - 2,5; glucoză - 7,5 şi extract de polizaharide sulfatate de origine cianobacteriană (concentraţia de 10 mg/ml) - 50% vol., până la obţinerea titrului de 108…1010 UFC ml-1. Suspensia obţinută se plasează câte 1 ml în flacoane pentru liofilizare. Probele se congelează brusc la temperatura de minus 50°C. Peste 12 ore se efectuează liofilizarea la temperatura condensorului de minus 88...94°C, vid 6…7 Pa, timp de 12 ore. Probele liofilizate se sigilează în vid şi se păstrează la temperatura de +4...+5°C.
În varianta martor viabilitatea tulpinii Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06 este de 75,7±1,4%, iar în varianta optimizată de 112,6±2,4%, ceea ce este cu 36,9% mai mult.
Viabilitatea tulpinii liofilizate se exprimă în procente faţă de numărul iniţial de UFC (unităţi formatoare de colonii) şi este calculată conform formulei BSR = (logAL/logBL) × 100 ( Muñoz-Rojas, J., Bernal, P., Duque, E., Godoy, P., Segura, A., Ramos, J. Involvement of Cyclopropane Fatty Acids in the Response of Pseudomonas putida KT2440 to Freeze-Drying. In: Applied Environmental Microbiology. 2006, vol. 72, № 1, p. 472-477).
Tabel
Viabilitatea tulpinii S. massasporeus CNMN-Ac-06 până şi după liofilizare pe mediu de protecţie cu extract de polizaharide sulfatate de origine cianobacteriană (10 mg/ml) în diferite concentraţii
Mediul prototip Mediul cu adaos de extract de polizaharide sulfatate de origine cianobacteriană (10 mg/ml), (%/vol.) gelatină 2,5%+ glucoză 7,5% 10% 30 % 50% până după până după până după până după 100% 75,7±1,4 100% 105,7±1,5 100% 106,2±2,5 100% 112,6±2,4
1. Куплетская М. Б., Аркадьева З.А. Методы длительного хранения коллекции микроорганизмов кафедры микробиологии МГУ. Микробиология. 1997, т. 66, № 2, р. 283-288
2. Yocheva L., Najdenova M., Doncheva D., Antonova-Niconova S. Influence of the long-term preservation on some biological features of three streptomycetes strains, producers of antibiotic substances. Jornal of culture collection, 2002, v. 3, p. 25-32
3. Chiselita Oleg, Burteva Svetlana, Birsa Maxim, Bulimaga Valentina, Vasiliciuc Anastasia. Viability and antimicrobial activity of streptomyces strains from NCNM after lyophilization. Studia Universitatis Moldaviae, Seria Stiinte reale si ale naturii. 2016, nr.1(91), p. 61-71

Claims (2)

1. Mediu de protecţie pentru conservarea tulpinii de actinomicete Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06, care conţine 7,5% glucoză, 2,5% gelatină, 10…50% vol. extract de polizaharide sulfatate cu o concentraţie de 10 mg/ml, obţinut din biomasa tulpinii de cianobacterie Spirulina platensis CNMN-CB-02 şi apă distilată restul.
2. Mediu, conform revendicării 1, în care extractul de polizaharide sulfatate este obţinut din biomasa tulpinii de cianobacterie Spirulina platensis CNMN-CB-02 prin extragere cu apă distilată la temperatura de 90°C, centrifugare, sedimentare cu soluţie de 1% de bromură de cetiltrimetilamoniu, spălare cu soluţie saturată de acetat de sodiu şi alcool etilic de 96% vol.
MDA20160084A 2016-07-15 2016-07-15 Mediu de protecţie pentru conservarea tulpinii Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06 MD4499C1 (ro)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
MDA20160084A MD4499C1 (ro) 2016-07-15 2016-07-15 Mediu de protecţie pentru conservarea tulpinii Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
MDA20160084A MD4499C1 (ro) 2016-07-15 2016-07-15 Mediu de protecţie pentru conservarea tulpinii Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06

Publications (2)

Publication Number Publication Date
MD4499B1 MD4499B1 (ro) 2017-07-31
MD4499C1 true MD4499C1 (ro) 2018-02-28

Family

ID=59383907

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MDA20160084A MD4499C1 (ro) 2016-07-15 2016-07-15 Mediu de protecţie pentru conservarea tulpinii Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06

Country Status (1)

Country Link
MD (1) MD4499C1 (ro)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1652336A1 (ru) * 1989-06-07 1991-05-30 Всесоюзный научно-исследовательский институт антибиотиков Защитна среда дл лиофильного высушивани облигатно анаэробных и микроаэрофильных микроорганизмов
JPH05308955A (ja) * 1991-03-19 1993-11-22 Mitsubishi Heavy Ind Ltd 亜硝酸菌の保存と復元方法
MD617B1 (ro) * 1995-08-28 1996-11-29 Univ Nicolae Testemitanu Mediu pentru cultivarea campilobacteriilor
MD1353F1 (ro) * 1998-12-03 1999-11-30 Inst De Microbiologie Al Acade Mediu nutritiv pentru cultivarea streptomicetelor
UA27038U (en) * 2007-06-19 2007-10-10 Inst Problems Of Cryobiology & Cryomedicine A method for conservation of spore culture of streptomyces aureofaciens

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1652336A1 (ru) * 1989-06-07 1991-05-30 Всесоюзный научно-исследовательский институт антибиотиков Защитна среда дл лиофильного высушивани облигатно анаэробных и микроаэрофильных микроорганизмов
JPH05308955A (ja) * 1991-03-19 1993-11-22 Mitsubishi Heavy Ind Ltd 亜硝酸菌の保存と復元方法
MD617B1 (ro) * 1995-08-28 1996-11-29 Univ Nicolae Testemitanu Mediu pentru cultivarea campilobacteriilor
MD1353F1 (ro) * 1998-12-03 1999-11-30 Inst De Microbiologie Al Acade Mediu nutritiv pentru cultivarea streptomicetelor
UA27038U (en) * 2007-06-19 2007-10-10 Inst Problems Of Cryobiology & Cryomedicine A method for conservation of spore culture of streptomyces aureofaciens

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Chiselita Oleg, Burteva Svetlana, Birsa Maxim, Bulimaga Valentina, Vasiliciuc Anastasia. Viability and antimicrobial activity of streptomyces strains from NCNM after lyophilization. Studia Universitatis Moldaviae, Seria Stiinte reale si ale naturii. 2016, nr.1(91), p. 61-71 *
Yocheva L., Najdenova M., Doncheva D., Antonova-Niconova S. Influence of the long-term preservation on some biological features of three streptomycetes strains, producers of antibiotic substances. Jornal of culture collection, 2002, v. 3, p. 25-32 *
Куплетская М. Б., Аркадьева З.А. Методы длительного хранения коллекции микроорганизмов кафедры микробиологии МГУ. Микробиология. 1997, т. 66, № 2, р. 283-288 *

Also Published As

Publication number Publication date
MD4499B1 (ro) 2017-07-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Bellali et al. A new protectant medium preserving bacterial viability after freeze drying
Band-Schmidt et al. Morphology, biochemistry, and growth of raphidophyte strains from the Gulf of California
CN105483007A (zh) 植物乳杆菌固定化制剂
Ramón-Sierra et al. Antimicrobial and antioxidant activity of proteins isolated from Melipona beecheii honey
Tashyreva et al. Effect of nitrogen starvation on desiccation tolerance of Arctic Microcoleus strains (cyanobacteria)
Medwed et al. Ecophysiological, morphological, and biochemical traits of free-living Diplosphaera chodatii (Trebouxiophyceae) reveal adaptation to harsh environmental conditions: C. Medwed et al.
Krishnakumar et al. Evaluation of bioactive metabolites from halophilic microalgae Dunaliella salina by GC-MS analysis
Demirel et al. Influence of media and temperature on the growth and the biological activities of Desmodesmus protuberans (FE Fritsch & MF Rich) E. Hegewald
Yang et al. Effects of different pre-freezing temperatures on the freeze-drying survival rate and stability during room temperature storage of Lactiplantibacillus plantarum LIP-1
MD4473C1 (ro) Mediu de protecţie pentru liofilizarea şi păstrarea îndelungată a tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02
Mashhadinejad et al. Effect of growth conditions and extraction solvents on enhancement of antimicrobial activity of the microalgae Chlorella vulgaris
CN112251388B (zh) 一种植物乳杆菌及其乳酸菌发酵剂的应用
MD4474C1 (ro) Mediu de protecţie pentru liofilizarea şi păstrarea îndelungată a tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02
CN104293678A (zh) 一种产连翘脂苷a、b和连翘苷的连翘内生真菌及其应用
Su et al. Optimization of medium and cultivation conditions for enhanced exopolysaccharide yield by marine Cyanothece sp. 113
CN104630111A (zh) 一株解淀粉芽胞杆菌及其活性代谢产物的分离方法与应用
MD4498C1 (ro) Mediu de protecţie pentru conservarea tulpinii Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06
Vamanu et al. Antioxidant and antibacterial properties of the extracts from Pleurotus ostreatus EVFB1 and EVFB4
Lv et al. Medium optimization of three marine probiotics and their application in the culture of Sebastes schlegelii
Kaushik et al. Cyanobacteria: antibacterial activity
CN105483008A (zh) 植物乳杆菌固定化制剂制备方法
MD1226Y (ro) Mediu de protecţie pentru conservarea şi păstrarea îndelungată a tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02
MD1235Y (ro) Mediu de protecţie pentru conservarea şi păstrarea îndelungată a tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02
RU2737321C1 (ru) Способ сохранения бактерий в фекальной микробиоте и бактериальных культур, выращенных на плотных агаризованных питательных или дифференциальных средах в условиях низких температур с использованием составной среды для заморозки
BELYAGOUBI et al. Phycochemistry study and antimicrobial activity of Spirogyra freshwater green microalgae from Algeria

Legal Events

Date Code Title Description
FG4A Patent for invention issued
KA4A Patent for invention lapsed due to non-payment of fees (with right of restoration)
MM4A Patent for invention definitely lapsed due to non-payment of fees