MD4474C1 - Mediu de protecţie pentru liofilizarea şi păstrarea îndelungată a tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02 - Google Patents

Mediu de protecţie pentru liofilizarea şi păstrarea îndelungată a tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02 Download PDF

Info

Publication number
MD4474C1
MD4474C1 MDA20160086A MD20160086A MD4474C1 MD 4474 C1 MD4474 C1 MD 4474C1 MD A20160086 A MDA20160086 A MD A20160086A MD 20160086 A MD20160086 A MD 20160086A MD 4474 C1 MD4474 C1 MD 4474C1
Authority
MD
Moldova
Prior art keywords
cnmn
lyophilization
strain
canosus
streptomyces
Prior art date
Application number
MDA20160086A
Other languages
English (en)
Russian (ru)
Other versions
MD4474B1 (ro
Inventor
Олег КИСЕЛИЦА
Светлана БУРЦЕВА
Максим БЫРСА
Валериу РУДИК
Валентина БУЛЬМАГА
Original Assignee
Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы filed Critical Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы
Priority to MDA20160086A priority Critical patent/MD4474C1/ro
Publication of MD4474B1 publication Critical patent/MD4474B1/ro
Publication of MD4474C1 publication Critical patent/MD4474C1/ro

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Invenţia se referă la biotehnologie, şi anume la un mediu de protecţie pentru liofilizarea şi păstrarea îndelungată a tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02.Mediul, conform invenţiei, conţine 7,5% glucoză, 2,5% gelatină şi 1,0…50,0%vol. extract de polizaharide sulfatate cu o concentraţie de 10 mg/ml, obţinut din biomasa tulpinii de cianobacterie Spirulina platensis CNMN-CB-02.

Description

Invenţia se referă la biotehnologie, şi anume la un mediu de protecţie pentru liofilizarea şi păstrarea îndelungată a tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02 şi poate fi aplicată pentru conservarea, păstrarea, studierea şi utilizarea eficientă a genofondului microbian autohton de interes ştiinţific şi biotehnologic.
Sunt cunoscute medii de protecţie pentru liofilizarea tulpinilor de actinomicete ce conţin gelatină, zaharoză, glucoză, lapte degresat în diferite concentraţii şi combinări [1,2]. Însă, neajunsul acestor medii de protecţie constă în viabilitatea scăzută a tulpinilor după liofilizare şi păstrare indelungată.
În calitate de cea mai apropiată soluţie a invenţiei revendicate poate servi mediul care conţine (%): gelatină 2,5 şi glucoză 7,5 [3].
La conservarea tulpinii pe acest mediu de protecţie în condiţii proxime viabilitatea ei după liofilizare constituie 90,3±2,0%, iar după păstrarea timp de 1 an 79,1±1,4% din numărul iniţial.
Dezavantajul acestui mediu constă în faptul că compoziţia chimică a mediului nu asigură o protecţie adecvată (deplină) tulpinii de actinomicete în timpul liofilizării şi păstrării îndelungate, astfel după liofilizare obţinându-se o viabilitate joasă, care scade semnificativ pe durata păstrării timp de 1 an.
Problema pe care o rezolvă prezenta invenţie constă în elaborarea unui mediu de protecţie care asigură viabilitate înaltă tulpinii după liofilizare şi păstrarea ei eficientă la nivel înalt timp de 1 an.
Invenţia soluţionează problema prin aceea că se propune un mediu de protecţie pentru liofilizarea şi păstrarea îndelungată a tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02, care conţine 7,5% glucoză, 2,5% gelatină şi 1,0…50,0%vol. extract de polizaharide sulfatate cu o concentraţie de 10 mg/ml, obţinut din biomasa tulpinii de cianobacterie Spirulina platensis CNMN-CB-02.
Polizaharidele sulfatate au fost extrase din biomasă de spirulină cu apă distilată în raport de 1:45 (m/V) la temperatura de 90°C, timp de 2 ore. După centrifugare timp de 10 min, la 4800 rot./min, la supernatant s-a adaugat soluţie de 1% de bromură de cetiltrimetilamoniu pentru precipitarea polizaharidelor cu centrifugare repetată la aceiaşi parametri. Precipitatul obţinut a fost spălat cu soluţie saturată de acetat de sodiu în alcool de 95%, apoi repetat cu alcool de 96% (Ratana Chikahan, Nattayaporn Chriasuwan, Panya Triratana, Veara Loha, Suvit Tia, Boosya Bunnag. Polysaccharide extraction from Spirulina sp. And antioxidant capacity. International Journal of Biological Macromolecules. 2013, v.58, p.73-78).
Extractul de polizaharide obţinut este constituit din 87,7% hidraţi de carbon şi 12,3% peptide.
Suplinirea mediului de protecţie cu extract de aminoacizi şi oligopeptide de origine cianobacteriană, care manifestă acţiune antioxidantă, de stabilizare a membranelor celulare şi de stimulare a regenerării ţesuturilor, anihilează efectul negativ al temperaturilor joase, presiunii înalte, deshidratării şi formelor reactive de oxigen, la care sunt supuse microorganismele în timpul liofilizării şi păstrării îndelungate, oferind tulpinii o protecţie suplimentară, contribuind astfel la majorarea viabilităţii după liofilizare şi menţinerea ei la un nivel înalt pe durata păstrării îndelungate.
Rezultatul tehnic al invenţiei constă în sporirea cu 12,6…38,0% a viabilităţii tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02 după liofilizare şi cu 20,5…39,8% după 1 an de păstrare, faţă de cea mai apropiată soluţie (vezi tabelul).
Exemple de realizare a invenţiei
Exemplul 1
În tuburi înclinate cu mediu agarizat Czapek, în condiţii sterile, se cultivă tulpina Streptomyces canosus CNMN-Ac-02 timp de 14 zile, tuburile fiind plasate în termostat la temperatura de +27°C. Materialul semincer obţinut se transferă în mediul de protecţie lichid cu următoarea componenţă: 2,5% gelatină; 7,5% glucoză şi 1,0…10,0% vol. extract de polizaharide sulfatate (10 mg/ml), până la obţinerea titrului de 1010-...1011 UFC ml-1. Suspensia obţinută se divizează câte 1 ml în flacoane pentru liofilizare. Probele se congelează brusc la temperatura de minus 50°C. Peste 12 ore se efectuează liofilizarea la temperatura condensorului de minus 88...94°C, vid 6…7 Pa, timp de 12 ore. Probele liofilizate se sigilează în vid şi se păstrează la temperatura de +4...5°C.
În varianta martor viabilitatea tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02 este de 90,3,2±2,0 după liofilizare şi de 79,1±1,4% peste 1 an de păstrare, iar în variantele conform invenţiei de 109,6...110,4% şi, respectiv, 105,5...107,2%, ceea ce este cu 19,3...20,1 şi, respectiv, 26,4...28,1% mai mult.
Exemplul 2
În tuburi înclinate cu mediu agarizat Czapek, în condiţii sterile, se cultivă tulpina Streptomyces canosus CNMN-Ac-02 timp de 14 zile, tuburile fiind plasate în termostat la temperatura de +27°C. Materialul semincer obţinut se transferă în mediul de protecţie lichid cu următoarea componenţă: 2,5% gelatină; 7,5% glucoză şi 20,0…50,0% vol. extract de polizaharide sulfatate (10 mg/ml), până la obţinerea titrului de 1010-...1011 UFC ml-1. Suspensia obţinută se divizează câte 1 ml în flacoane pentru liofilizare. Probele se congelează brusc la temperatura de minus 50°C. Peste 12 ore se efectuează liofilizarea la temperatura condensorului de minus 88...94°C, vid 6…7 Pa, timp de 12 ore. Probele liofilizate se sigilează în vid şi se păstrează la temperatura de +4...5°C.
În varianta martor viabilitatea tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02 este de 90,3±2,0 după liofilizare şi de 79,1±1,4% peste 1 an de păstrare, iar în variantele conform invenţiei de 102,9...128,3 şi, respectiv, 99,6...118,9%, ceea ce este cu 12,6...38,0 şi, respectiv, 20,5...39,8% mai mult.
Viabilitatea tulpinii, după liofilizare şi păstrare timp de 1 an, se exprimă în procente faţă de numărul iniţial de UFC (unităţi formatoare de colonii) şi este calculată conform formulei BSR = (logAL/logBL) × 100 (Muñoz-Rojas, J., Bernal, P., Duque, E., Godoy, P., Segura, A., Ramos, J. Involvement of Cyclopropane Fatty Acids in the Response of Pseudomonas putida KT2440 to Freeze-Drying. In: Applied Environmental Microbiology. 2006, vol. 72, № 1, p. 472-477).
Tabelul 1
Viabilitatea tulpinii S. canosus CNMN-Ac-02 până, după liofilizare şi la 1 an de păstrare pe mediu proxim şi pe mediu de protecţie cu extract de polizaharide sulfatate
Mediul proxim Mediul cu adaos de extract de polizaharide sulfatate (10mg/ml), (% vol.) Gelatină 2,5%+ glucoză 7,5% 1,0 5,0 10,0 Viabilitatea, % până după 1 an până după 1 an până după 1 an până după 1 an 100 90,3±2,0 79,1±1,4 100 109,6± 1,0 105,5± 2,6 100 109,9± 1,5 106,2± 3,0 100 110,4± 1,5 107,2± 3,0 Mediul proxim Mediul cu adaos de extract de polizaharide sulfatate (10mg/ml), (% vol.) Gelatină 2,5%+ glucoză 7,5% 20,0 30,0 50,0 Viabilitatea, % până după 1 an până după 1 an până după 1 an până după 1 an 100 90,3± 2,0 79,1±1,4 100 102,9± 0,1 99,6± 1,6 100 128,3± 6,3 118,9± 5,7 100 105,8± 1,5 103± 0,4
1. Куплетская М. Б., Аркадьева З.А. Методы длительного хранения коллекции микроорганизмов кафедры микробиологии МГУ. Микробиология, 1997, т. 66, № 2, р. 283-288
2. Yocheva L., Najdenova M., Doncheva D., Antonova-Niconova S. Influence of the long-term preservation on some biological features of three streptomycetes strains, producers of antibiotic substances. Journal of culture collection, 2002, v. 3, p. 25-32
3. Chiseliţa Oleg, Burţeva Svetlana, Bîrsa Maxim, Bulimaga Valentina, Vasiliciuc Anastasia. Viability and antimicrobial activity of streptomyces strains from NCNM after lyophilization. Studia Universitatis Moldaviae, Seria Stiinţe reale şi ale naturii, 2016, nr.1(91), p. 61-71

Claims (2)

1. Mediu de protecţie pentru liofilizarea şi păstrarea îndelungată a tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02, care conţine 7,5% glucoză, 2,5% gelatină şi 1,0…50,0%vol. extract de polizaharide sulfatate cu o concentraţie de 10 mg/ml, obţinut din biomasa tulpinii de cianobacterie Spirulina platensis CNMN-CB-02.
2. Mediu, conform revendicării 1, în care extractul de polizaharide sulfatate este obţinut din biomasa tulpinii de cianobacterie Spirulina platensis CNMN-CB-02 prin extragere cu apă la temperatura de 90°C, centrifugare, sedimentare cu soluţie de 1% de bromură de cetiltrimetilamoniu, spălare cu soluţie saturată de acetat de sodiu şi alcool etilic de 96%vol.
MDA20160086A 2016-07-15 2016-07-15 Mediu de protecţie pentru liofilizarea şi păstrarea îndelungată a tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02 MD4474C1 (ro)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
MDA20160086A MD4474C1 (ro) 2016-07-15 2016-07-15 Mediu de protecţie pentru liofilizarea şi păstrarea îndelungată a tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
MDA20160086A MD4474C1 (ro) 2016-07-15 2016-07-15 Mediu de protecţie pentru liofilizarea şi păstrarea îndelungată a tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02

Publications (2)

Publication Number Publication Date
MD4474B1 MD4474B1 (ro) 2017-03-31
MD4474C1 true MD4474C1 (ro) 2017-10-31

Family

ID=58412684

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MDA20160086A MD4474C1 (ro) 2016-07-15 2016-07-15 Mediu de protecţie pentru liofilizarea şi păstrarea îndelungată a tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02

Country Status (1)

Country Link
MD (1) MD4474C1 (ro)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MD1226Z (ro) * 2017-06-29 2018-08-31 Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы Mediu de protecţie pentru conservarea şi păstrarea îndelungată a tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02
MD1235Z (ro) * 2017-06-29 2018-09-30 Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы Mediu de protecţie pentru conservarea şi păstrarea îndelungată a tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH05308956A (ja) * 1991-03-19 1993-11-22 Mitsubishi Heavy Ind Ltd 硝酸菌の保存と復元方法
JPH05308955A (ja) * 1991-03-19 1993-11-22 Mitsubishi Heavy Ind Ltd 亜硝酸菌の保存と復元方法
MD617B1 (ro) * 1995-08-28 1996-11-29 Univ Nicolae Testemitanu Mediu pentru cultivarea campilobacteriilor
MD1353F1 (ro) * 1998-12-03 1999-11-30 Inst De Microbiologie Al Acade Mediu nutritiv pentru cultivarea streptomicetelor
MD20010233A (ro) * 2001-07-24 2003-02-28 Inst De Microbiologie Al Acade Mediu nutritiv pentru cultivarea pseudomonadelor fluorescente
UA27038U (en) * 2007-06-19 2007-10-10 Inst Problems Of Cryobiology & Cryomedicine A method for conservation of spore culture of streptomyces aureofaciens
RU2006138233A (ru) * 2004-03-31 2008-05-10 Даниско А/С (Dk) Способ

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH05308956A (ja) * 1991-03-19 1993-11-22 Mitsubishi Heavy Ind Ltd 硝酸菌の保存と復元方法
JPH05308955A (ja) * 1991-03-19 1993-11-22 Mitsubishi Heavy Ind Ltd 亜硝酸菌の保存と復元方法
MD617B1 (ro) * 1995-08-28 1996-11-29 Univ Nicolae Testemitanu Mediu pentru cultivarea campilobacteriilor
MD1353F1 (ro) * 1998-12-03 1999-11-30 Inst De Microbiologie Al Acade Mediu nutritiv pentru cultivarea streptomicetelor
MD20010233A (ro) * 2001-07-24 2003-02-28 Inst De Microbiologie Al Acade Mediu nutritiv pentru cultivarea pseudomonadelor fluorescente
RU2006138233A (ru) * 2004-03-31 2008-05-10 Даниско А/С (Dk) Способ
UA27038U (en) * 2007-06-19 2007-10-10 Inst Problems Of Cryobiology & Cryomedicine A method for conservation of spore culture of streptomyces aureofaciens

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Chiseliţa Oleg, Burţeva Svetlana, Bîrsa Maxim, Bulimaga Valentina, Vasiliciuc Anastasia. Viability and antimicrobial activity of streptomyces strains from NCNM after lyophilization. Studia Universitatis Moldaviae, Seria Stiinţe reale şi ale naturii, 2016, nr.1(91), p. 61-71 *
Yocheva L., Najdenova M., Doncheva D., Antonova-Niconova S. Influence of the long-term preservation on some biological features of three streptomycetes strains, producers of antibiotic substances. Journal of culture collection, 2002, v. 3, p. 25-32 *
Куплетская М. Б., Аркадьева З.А. Методы длительного хранения коллекции микроорганизмов кафедры микробиологии МГУ. Микробиология, 1997, т. 66, № 2, р. 283-288 *
Нечисляев В. А., Орлова В. Е., Бахтин И. А. Универсальная защитня среда для лиофилизации пробиотических преператов. Казанский медицинский журнал. 2010, том 91, №1. Găsit internet: <URL:http://cyberleninka.ru/article/n/universalnaya-zaschitnaya-sreda-dlya-liofilizatsii-probioticheskih-preparatov> *

Also Published As

Publication number Publication date
MD4474B1 (ro) 2017-03-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Bellali et al. A new protectant medium preserving bacterial viability after freeze drying
Zhang et al. Antifungal activity and mechanism of cinnamon essential oil loaded into mesoporous silica nanoparticles
Billi et al. Effects of nitrogen limitation and starvation on Chroococcidiopsis sp.(Chroococcales)
Day et al. Cryo-injury in algae and the implications this has to the conservation of micro-algae
CN105483007A (zh) 植物乳杆菌固定化制剂
Taylor et al. Nitrogen-fixation associated with the marine blue-green alga, Trichodesmium, as measured by the acetylene-reduction technique
Tashyreva et al. Effect of nitrogen starvation on desiccation tolerance of Arctic Microcoleus strains (cyanobacteria)
MD4473C1 (ro) Mediu de protecţie pentru liofilizarea şi păstrarea îndelungată a tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02
MD4474C1 (ro) Mediu de protecţie pentru liofilizarea şi păstrarea îndelungată a tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02
Jia et al. Algicidal bacteria in phycosphere regulate free-living Symbiodinium fate via triggering oxidative stress and photosynthetic system damage
Yang et al. Effects of different pre-freezing temperatures on the freeze-drying survival rate and stability during room temperature storage of Lactiplantibacillus plantarum LIP-1
CN112251388B (zh) 一种植物乳杆菌及其乳酸菌发酵剂的应用
CN108586570B (zh) 一种辣椒抗菌肽的提取纯化方法
Corona et al. Screening study for antibacterial activity from marine and freshwater microalgae
CN106937674B (zh) 用于肉品保鲜的抗菌剂
CN103952359A (zh) 一株短波单胞菌及其应用
CN104630111B (zh) 一株解淀粉芽孢杆菌及其活性代谢产物的分离方法与应用
US20230413857A1 (en) Compositions of microorganisms and methods of using same
Shu et al. Effects of carbohydrates, prebiotics and salts on survival of Saccharomyces boulardii during freeze-drying
MD4499C1 (ro) Mediu de protecţie pentru conservarea tulpinii Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06
MD4498C1 (ro) Mediu de protecţie pentru conservarea tulpinii Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06
Vamanu et al. Antioxidant and antibacterial properties of the extracts from Pleurotus ostreatus EVFB1 and EVFB4
RU2737321C1 (ru) Способ сохранения бактерий в фекальной микробиоте и бактериальных культур, выращенных на плотных агаризованных питательных или дифференциальных средах в условиях низких температур с использованием составной среды для заморозки
CN117158474A (zh) 普罗旺斯类芽孢杆菌pp-2在海鲈鱼保鲜中的应用
MD1226Y (ro) Mediu de protecţie pentru conservarea şi păstrarea îndelungată a tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02

Legal Events

Date Code Title Description
FG4A Patent for invention issued
KA4A Patent for invention lapsed due to non-payment of fees (with right of restoration)
MM4A Patent for invention definitely lapsed due to non-payment of fees