JPH05308955A - 亜硝酸菌の保存と復元方法 - Google Patents
亜硝酸菌の保存と復元方法Info
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- JPH05308955A JPH05308955A JP3054404A JP5440491A JPH05308955A JP H05308955 A JPH05308955 A JP H05308955A JP 3054404 A JP3054404 A JP 3054404A JP 5440491 A JP5440491 A JP 5440491A JP H05308955 A JPH05308955 A JP H05308955A
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【目的】 硝化細菌のうちの亜硝酸菌の保存と復元方法
に関する。 【構成】 亜硝酸菌を保存する方法において、亜硝酸菌
をピルビン酸もしくはその塩、オキサル酢酸もしくはそ
の塩、α−Ｌ−ラムノース、α−Ｌ−フコース、Ｄ−グ
ルクロン酸もしくはその塩、Ｎ−アセチル−Ｄ−ムラミ
ン酸、α−Ｌ−ラムノース１分子とＤ−グルクロン酸１
分子およびＤ−グルコース２分子を１ユニットとし該ユ
ニットが直鎖状に重合した高分子多糖類のうち少なくと
も１種類以上の有機化合物を含む培地で培養した菌液を
シリカゲルと混合後、凍結保存する亜硝酸菌の保存方法
と上記の凍結保存した亜硝酸菌を復元する方法におい
て、上記の有機化合物、乳酸もしくはその塩、クエン酸
もしくはその塩、コハク酸もしくはその塩、フマル酸も
しくはその塩、リンゴ酸もしくはその塩、グルタミン酸
もしくはその塩、アスパラギン酸もしくはその塩、セリ
ンもしくはその塩のうち少なくとも１種以上の有機化合
物を含む培地で培養する亜硝酸菌の復元方法。
に関する。 【構成】 亜硝酸菌を保存する方法において、亜硝酸菌
をピルビン酸もしくはその塩、オキサル酢酸もしくはそ
の塩、α−Ｌ−ラムノース、α−Ｌ−フコース、Ｄ−グ
ルクロン酸もしくはその塩、Ｎ−アセチル−Ｄ−ムラミ
ン酸、α−Ｌ−ラムノース１分子とＤ−グルクロン酸１
分子およびＤ−グルコース２分子を１ユニットとし該ユ
ニットが直鎖状に重合した高分子多糖類のうち少なくと
も１種類以上の有機化合物を含む培地で培養した菌液を
シリカゲルと混合後、凍結保存する亜硝酸菌の保存方法
と上記の凍結保存した亜硝酸菌を復元する方法におい
て、上記の有機化合物、乳酸もしくはその塩、クエン酸
もしくはその塩、コハク酸もしくはその塩、フマル酸も
しくはその塩、リンゴ酸もしくはその塩、グルタミン酸
もしくはその塩、アスパラギン酸もしくはその塩、セリ
ンもしくはその塩のうち少なくとも１種以上の有機化合
物を含む培地で培養する亜硝酸菌の復元方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は水産動物の畜養・輸送設
備、水族館等の閉鎖系循環水に含まれる硝化細菌のうち
亜硝酸菌の保存と復元方法に関し、廃水、下水およびし
尿処理設備、土壌、海水および河川水など、自然界に広
く分布する亜硝酸菌の保存と復元としても利用できる方
法に関する。
備、水族館等の閉鎖系循環水に含まれる硝化細菌のうち
亜硝酸菌の保存と復元方法に関し、廃水、下水およびし
尿処理設備、土壌、海水および河川水など、自然界に広
く分布する亜硝酸菌の保存と復元としても利用できる方
法に関する。
【０００２】
【従来の技術】硝化菌はアンモニアまたは亜硝酸を亜硝
酸または硝酸に酸化し、二酸化炭素を唯一の炭素源とし
て菌体成分を合成する独立栄養細菌であり、有機物が共
存すると硝化菌の硝化反応は阻害されるといわれてき
た。
酸または硝酸に酸化し、二酸化炭素を唯一の炭素源とし
て菌体成分を合成する独立栄養細菌であり、有機物が共
存すると硝化菌の硝化反応は阻害されるといわれてき
た。
【０００３】硝化細菌にはアンモニアを酸化して亜硝酸
塩にするアンモニア酸化細菌（以下「亜硝酸菌」とい
う）と、亜硝酸塩を酸化して硝酸塩にする亜硝酸酸化菌
（以下「硝酸菌という）の２つの細菌群からなる。それ
ぞれの化学反応式はつぎの通りである。
塩にするアンモニア酸化細菌（以下「亜硝酸菌」とい
う）と、亜硝酸塩を酸化して硝酸塩にする亜硝酸酸化菌
（以下「硝酸菌という）の２つの細菌群からなる。それ
ぞれの化学反応式はつぎの通りである。
【０００４】（ａ）亜硝酸菌のアンモニア酸化反応 ＮＨ4 + ＋ 3/2Ｏ2 → ＮＯ2 - ＋Ｈ2 Ｏ＋３９．５ｋ
ｃａｌ （ｂ）硝酸菌の亜硝酸酸化反応 ＮＯ2 - ＋ 1/2Ｏ2 → ＮＯ3 - ＋２１．６ｋｃａｌ
ｃａｌ （ｂ）硝酸菌の亜硝酸酸化反応 ＮＯ2 - ＋ 1/2Ｏ2 → ＮＯ3 - ＋２１．６ｋｃａｌ
【０００５】これらの細菌は従属栄養細菌（有機物の酸
化反応によって生ずるエネルギーを利用して増殖する）
に比べて増殖速度が遅く、硝化反応が十分に現れるだけ
の菌量に達するまでに長期間を要する（この期間を「馴
致期間」という）。
化反応によって生ずるエネルギーを利用して増殖する）
に比べて増殖速度が遅く、硝化反応が十分に現れるだけ
の菌量に達するまでに長期間を要する（この期間を「馴
致期間」という）。
【０００６】そこで馴致期間を短縮するためには、別途
準備しておいた多量の硝化菌を種菌として浄化装置など
に加えることが最も効果的である。そのためには適時任
意に用いることができ、復元力が優れた硝化菌の保存方
法が望まれていた。
準備しておいた多量の硝化菌を種菌として浄化装置など
に加えることが最も効果的である。そのためには適時任
意に用いることができ、復元力が優れた硝化菌の保存方
法が望まれていた。
【０００７】従来より細菌の保存方法には継代培養法、
凍結乾燥法およびＬ−乾燥法などがあるが、このうち亜
硝酸菌の有効な保存法は継代培養法しかなかった。
凍結乾燥法およびＬ−乾燥法などがあるが、このうち亜
硝酸菌の有効な保存法は継代培養法しかなかった。
【０００８】なお継代培養法とは、硝化菌を培地に植種
し最適温度で一定期間培養した（硝化菌の場合は通常５
〜７日間）のち、その培養液の一部を別の新鮮培地に直
ちに植種するという操作を繰り返すことによって硝化菌
の保存を図る方法である。
し最適温度で一定期間培養した（硝化菌の場合は通常５
〜７日間）のち、その培養液の一部を別の新鮮培地に直
ちに植種するという操作を繰り返すことによって硝化菌
の保存を図る方法である。
【０００９】
（１）継代培養法は操作が煩雑で多くの労力を要する。
また移植を繰り返すうちに変異を起こしやすく、硝化能
力が低下することがある。
また移植を繰り返すうちに変異を起こしやすく、硝化能
力が低下することがある。
【００１０】（２）細菌を保存処理する際、その細菌濃
度をあらかじめ高めることにより復元効率が大きく向上
する。しかし亜硝酸菌の菌体収率は０．０６〜０．１３
ｇ亜硝酸菌／ｇ除去ＮＨ4 −Ｎと従属栄養細菌に比べて
極めて低く、高い亜硝酸菌濃度を得るためには長時間を
要する。したがって従来は亜硝酸菌培養液を遠心分離機
で集菌し濃縮したのち保存処理していた。この操作は煩
雑で、雑菌にも汚染されやすい。また保存処理していた
亜硝酸菌を復元させるときは従属栄養細菌に比べて依然
として長時間を要する。
度をあらかじめ高めることにより復元効率が大きく向上
する。しかし亜硝酸菌の菌体収率は０．０６〜０．１３
ｇ亜硝酸菌／ｇ除去ＮＨ4 −Ｎと従属栄養細菌に比べて
極めて低く、高い亜硝酸菌濃度を得るためには長時間を
要する。したがって従来は亜硝酸菌培養液を遠心分離機
で集菌し濃縮したのち保存処理していた。この操作は煩
雑で、雑菌にも汚染されやすい。また保存処理していた
亜硝酸菌を復元させるときは従属栄養細菌に比べて依然
として長時間を要する。
【００１１】（３）硝化装置の馴致期間を短縮するため
には、硝化性能を十分に発揮するだけの硝化菌量をあら
かじめ準備しておき、起動時の装置に投入すればよい。
しかし硝化菌は上記のとおり菌体収率が低く増殖が遅い
ため、長時間培養しても低濃度の菌液しか得られないと
いう欠点があった。そのため大量の硝化菌液を運搬する
しかなかった。
には、硝化性能を十分に発揮するだけの硝化菌量をあら
かじめ準備しておき、起動時の装置に投入すればよい。
しかし硝化菌は上記のとおり菌体収率が低く増殖が遅い
ため、長時間培養しても低濃度の菌液しか得られないと
いう欠点があった。そのため大量の硝化菌液を運搬する
しかなかった。
【００１２】（４）硝化装置の馴致が完了した定常運転
に入って後も、系内のなんらかの原因により硝化菌がダ
メージを受け硝化性能が低下することがある。その場合
性能回復に要する時間は有機物廃水浄化装置などに比べ
て長時間を要する。これも硝化菌の菌体収率が低く、増
殖が遅いことによる。性能回復の時間を短縮するために
は、硝化性能を十分に回復するだけの高濃度の硝化菌を
系内に再度供給すればよいが、従来低濃度の硝化菌液し
か得られず実現は難しかった。
に入って後も、系内のなんらかの原因により硝化菌がダ
メージを受け硝化性能が低下することがある。その場合
性能回復に要する時間は有機物廃水浄化装置などに比べ
て長時間を要する。これも硝化菌の菌体収率が低く、増
殖が遅いことによる。性能回復の時間を短縮するために
は、硝化性能を十分に回復するだけの高濃度の硝化菌を
系内に再度供給すればよいが、従来低濃度の硝化菌液し
か得られず実現は難しかった。
【００１３】上記の問題点のうち、亜硝酸菌を保存処理
する前にあらかじめ高濃度の菌液を短時間で得る方法は
既に提案した（特願平２−３３０６３６号）。本発明は
さらにこれ以外の問題点を解決するために、亜硝酸菌の
有効な保存と復元方法を提供しようとするものである。
する前にあらかじめ高濃度の菌液を短時間で得る方法は
既に提案した（特願平２−３３０６３６号）。本発明は
さらにこれ以外の問題点を解決するために、亜硝酸菌の
有効な保存と復元方法を提供しようとするものである。
【００１４】
【課題を解決するための手段】本発明者は、 （１）亜硝酸菌を保存する方法において、亜硝酸菌をピ
ルビン酸もしくはその塩、オキサル酢酸もしくはその
塩、α−Ｌ−ラムノース、α−Ｌ−フルコース、Ｄ−グ
ルクロン酸もしくはその塩、Ｎ−アセチル−Ｄ−ムラミ
ン酸、α−Ｌ−ラムノース１分子とＤ−グルクロン酸１
分子およびＤ−グルコース２分子を１ユニットとし該ユ
ニットが直鎖状に重合した高分子多糖類のうち少なくと
も１種類以上の有機化合物を含む培地で培養した菌液を
シリカゲルと混合後、凍結保存することを特徴とする亜
酸菌の保存方法、
ルビン酸もしくはその塩、オキサル酢酸もしくはその
塩、α−Ｌ−ラムノース、α−Ｌ−フルコース、Ｄ−グ
ルクロン酸もしくはその塩、Ｎ−アセチル−Ｄ−ムラミ
ン酸、α−Ｌ−ラムノース１分子とＤ−グルクロン酸１
分子およびＤ−グルコース２分子を１ユニットとし該ユ
ニットが直鎖状に重合した高分子多糖類のうち少なくと
も１種類以上の有機化合物を含む培地で培養した菌液を
シリカゲルと混合後、凍結保存することを特徴とする亜
酸菌の保存方法、
【００１５】（２）上記１の凍結保存した亜硝酸菌を復
元する方法において、上記１の有機化合物、乳酸もしく
はその塩、クエン酸もしくはその塩、コハク酸もしくは
その塩、フマル酸もしくはその塩、リンゴ酸もしくはそ
の塩、グルタミン酸もしくはその塩、アスパラギン酸も
しくはその塩、セリンもしくはその塩を含む培地で培養
することを特徴とする亜酸菌の還元方法である。
元する方法において、上記１の有機化合物、乳酸もしく
はその塩、クエン酸もしくはその塩、コハク酸もしくは
その塩、フマル酸もしくはその塩、リンゴ酸もしくはそ
の塩、グルタミン酸もしくはその塩、アスパラギン酸も
しくはその塩、セリンもしくはその塩を含む培地で培養
することを特徴とする亜酸菌の還元方法である。
【００１６】
（１）亜硝酸菌にダメージを与えることなく保存するこ
とができる。 （２）保存していた亜硝酸菌を復元するとき、特定有機
化合物によって亜硝酸菌の増殖または硝化作用が促進さ
れ、従来の方法では得られなかった高濃度の亜硝酸菌液
または硝化能力の復元が比較的短時間で得られる。
とができる。 （２）保存していた亜硝酸菌を復元するとき、特定有機
化合物によって亜硝酸菌の増殖または硝化作用が促進さ
れ、従来の方法では得られなかった高濃度の亜硝酸菌液
または硝化能力の復元が比較的短時間で得られる。
【００１７】なお特定の有機化合物による亜硝酸菌増殖
または硝化作用の促進のメカニズムはまだ不明である。
おそらくこれらの特定有機化合物は従属栄養細菌では他
の有機化合物から容易に生合成されるが、亜硝酸菌では
代謝経路の違いからその生合成に相当の時間を要するの
ではないかと考えられる。
または硝化作用の促進のメカニズムはまだ不明である。
おそらくこれらの特定有機化合物は従属栄養細菌では他
の有機化合物から容易に生合成されるが、亜硝酸菌では
代謝経路の違いからその生合成に相当の時間を要するの
ではないかと考えられる。
【００１８】
（実施例１）以下に亜硝酸菌の代表菌株（Nitrosomonas
europaea ATCC 25978) を例にとって、本発明の一実施
例を説明する。
europaea ATCC 25978) を例にとって、本発明の一実施
例を説明する。
【００１９】なお実施例での亜硝酸菌の培養は表１に示
す高圧滅菌した培地（Lewis, R.F.and D.Pramer, 1958,
"Isolation of Nitrosomonas in pure culture", J.Ba
cteriol., 76, 524-528) （以下「Ｐ培地」という）を
用いて、すべて無菌的に操作した。
す高圧滅菌した培地（Lewis, R.F.and D.Pramer, 1958,
"Isolation of Nitrosomonas in pure culture", J.Ba
cteriol., 76, 524-528) （以下「Ｐ培地」という）を
用いて、すべて無菌的に操作した。
【表１】
【００２０】ピルビン酸が５ｍＭ、オキサル酢酸が５ｍ
Ｍ、α−Ｌ−ラムノースが１０ｍＭ、α−Ｌ−フコース
が５ｍＭ、Ｄ−グルクロン酸が１０ｍＭ、Ｎ−アセチル
−Ｄ−ムラミン酸が５ｍｇ／リットル、α−Ｌ−ラムノ
ース１分子とＤ−グルクロン酸１分子およびＤ−グルコ
ース２分子を１ユニットとし、該ユニットが直鎖状に重
合した高分子多糖類（以下これを「ゲランガム」とい
う）が０．５％となるようにそれぞれ別個の培地（表
１）３０ｍｌに加え、培地（表１）であらかじめ５日間
前培養しておいた亜硝酸菌液３ｍｌを植種した。この液
を３０℃、１２０ｒｐｍで５日間回転培養した。
Ｍ、α−Ｌ−ラムノースが１０ｍＭ、α−Ｌ−フコース
が５ｍＭ、Ｄ−グルクロン酸が１０ｍＭ、Ｎ−アセチル
−Ｄ−ムラミン酸が５ｍｇ／リットル、α−Ｌ−ラムノ
ース１分子とＤ−グルクロン酸１分子およびＤ−グルコ
ース２分子を１ユニットとし、該ユニットが直鎖状に重
合した高分子多糖類（以下これを「ゲランガム」とい
う）が０．５％となるようにそれぞれ別個の培地（表
１）３０ｍｌに加え、培地（表１）であらかじめ５日間
前培養しておいた亜硝酸菌液３ｍｌを植種した。この液
を３０℃、１２０ｒｐｍで５日間回転培養した。
【００２１】またこれと並行して添加物質を含まない培
地（コントロール）について同様に５日間回転培養し、
これらの培養液の菌数を直接計数した。その結果表２に
示す。
地（コントロール）について同様に５日間回転培養し、
これらの培養液の菌数を直接計数した。その結果表２に
示す。
【００２２】いずれの添加培地でも最終菌濃度が１．０
×１０9 cells/ml以上となったが、無添加培地（コント
ロール）の最終菌濃度は４．０×１０8 cells/mlにとど
まった。
×１０9 cells/ml以上となったが、無添加培地（コント
ロール）の最終菌濃度は４．０×１０8 cells/mlにとど
まった。
【表２】
【００２３】表２のうち最終菌濃度が最高のラムノース
添加培地で増菌した菌液（１．８×１０9 cells/ml）、
最終菌濃度が最低のフコース添加培地で増菌した菌液
（１．０×１０9 cells/ml）および無添加培地（コント
ロール）の菌液を以下の保存試験に供した。
添加培地で増菌した菌液（１．８×１０9 cells/ml）、
最終菌濃度が最低のフコース添加培地で増菌した菌液
（１．０×１０9 cells/ml）および無添加培地（コント
ロール）の菌液を以下の保存試験に供した。
【００２４】なお無添加培地（コントロール）の菌液は
遠心分離（９０００×０．５分間）により集菌したのち
５倍濃縮となるように培地（表１）で再懸濁した液（こ
のときの菌濃度は２．０×１０9 cells/ml）を使った。
遠心分離（９０００×０．５分間）により集菌したのち
５倍濃縮となるように培地（表１）で再懸濁した液（こ
のときの菌濃度は２．０×１０9 cells/ml）を使った。
【００２５】まず無色シリカゲルを水洗後乾燥し、その
０．４ｇを試験管にいれて１８０℃、２時間乾熱滅菌し
た。それを氷冷しながら上記３種類の菌液１ｍｌを滴下
し、ディープフリーザー（−８０℃）で凍結保存した。
またコントロールも同様にして保存した。
０．４ｇを試験管にいれて１８０℃、２時間乾熱滅菌し
た。それを氷冷しながら上記３種類の菌液１ｍｌを滴下
し、ディープフリーザー（−８０℃）で凍結保存した。
またコントロールも同様にして保存した。
【００２６】これらの保存菌を２４時間後に培地（表
１）１０ｍｌに懸濁し、３０℃、１２０ｒｐｍで培養
し、その硝化能力の復元を試みた。硝化能力は発現は培
養中の亜硝酸濃度を定量することにより観察した。その
結果を表３に示す。
１）１０ｍｌに懸濁し、３０℃、１２０ｒｐｍで培養
し、その硝化能力の復元を試みた。硝化能力は発現は培
養中の亜硝酸濃度を定量することにより観察した。その
結果を表３に示す。
【表３】
【００２７】これよりいずれの添加または無添加培地で
もシリカゲル凍結保存によれば５日間に亜硝酸菌の硝化
反応が発現した。
もシリカゲル凍結保存によれば５日間に亜硝酸菌の硝化
反応が発現した。
【００２８】なおピルビン酸、オキサル酢酸、グルクロ
ン酸、ムラハン酸およびゲランガム添加培地について
も、表３と同じ結果が得られた。
ン酸、ムラハン酸およびゲランガム添加培地について
も、表３と同じ結果が得られた。
【００２９】（比較例１）実施例１の３種類の保存用亜
硝酸菌液各１ｍｌをアンプルに入れ、真空乾燥機によっ
て室温下で減圧しながら水分を除去（この方法はＬ−乾
燥と呼ばれている）した。
硝酸菌液各１ｍｌをアンプルに入れ、真空乾燥機によっ
て室温下で減圧しながら水分を除去（この方法はＬ−乾
燥と呼ばれている）した。
【００３０】またこれは並行して３種類の保存用亜硝酸
菌液各ｍｌをアンプルに入れ、ドライアイス−アセトン
で予備凍結後、真空乾燥機によって減圧下で水分を除去
した。
菌液各ｍｌをアンプルに入れ、ドライアイス−アセトン
で予備凍結後、真空乾燥機によって減圧下で水分を除去
した。
【００３１】これらの保存菌を２４時間後に培地（表
１）１０ｍｌに懸濁し、３０℃、１２０ｒｐｍで培養
し、実施例１と同様にそ硝化能力の復元を試みた。硝化
能力の発現は培養液中の亜硝酸濃度を定量することによ
り観察した。その結果を表４に示す。
１）１０ｍｌに懸濁し、３０℃、１２０ｒｐｍで培養
し、実施例１と同様にそ硝化能力の復元を試みた。硝化
能力の発現は培養液中の亜硝酸濃度を定量することによ
り観察した。その結果を表４に示す。
【表４】
【００３２】これよりいずれの添加培地または無添加培
地でもＬ−乾燥によれば８日間後にやや亜硝酸菌の硝化
反応が発現してくるが、凍結乾燥ではまったく復元しな
かった。
地でもＬ−乾燥によれば８日間後にやや亜硝酸菌の硝化
反応が発現してくるが、凍結乾燥ではまったく復元しな
かった。
【００３３】なおＬ−乾燥において３％のＬ−グルタミ
ン酸ソーダ溶液に懸濁した場合も表４と同様の結果が得
られた。
ン酸ソーダ溶液に懸濁した場合も表４と同様の結果が得
られた。
【００３４】この比較例１と実施例１を比較すれば、亜
硝酸菌の保存はシリカゲル凍結保存が優れていることが
分かる。
硝酸菌の保存はシリカゲル凍結保存が優れていることが
分かる。
【００３５】（実施例２）実施例１と同様に、ラムノー
スおよびフコース添加培地で増菌した亜硝酸菌液を１０
カ月間シリカゲル凍結保存した。この保存菌液１ｍｌず
つを、ピルビン酸が５ｍＭ、オキサル酢酸が５ｍＭ、α
−Ｌ−ラムノースが１０ｍＭ、α−Ｌ−フコースが５ｍ
Ｍ、Ｄ−グルクロン酸が１０ｍＭ、Ｎ−アセチル−Ｄ−
ムラミン酸が５０ｍｇ／リットル、ゲランガムが０．５
％、乳酸が５ｍＭ、クエン酸が１０ｍＭ、コハク酸が５
ｍＭ、フマル酸が５ｍＭ、リンゴ酸が１ｍＭ、グルタミ
ン酸が１０ｍｇ／ｌ、アスパラギン酸が５ｍｇ／ｌ、セ
リンが１０ｍｇ／ｌとなるようにそれぞれ添加した培地
（表１）１０ｍｌに懸濁し、３０℃、１２０ｒｐｍで培
養し、その硝化能力の復元を試みた。硝化能力の発現は
実施例１と同様に培養液中の亜硝酸濃度を定量すること
により観察した。その結果を表５に示す。
スおよびフコース添加培地で増菌した亜硝酸菌液を１０
カ月間シリカゲル凍結保存した。この保存菌液１ｍｌず
つを、ピルビン酸が５ｍＭ、オキサル酢酸が５ｍＭ、α
−Ｌ−ラムノースが１０ｍＭ、α−Ｌ−フコースが５ｍ
Ｍ、Ｄ−グルクロン酸が１０ｍＭ、Ｎ−アセチル−Ｄ−
ムラミン酸が５０ｍｇ／リットル、ゲランガムが０．５
％、乳酸が５ｍＭ、クエン酸が１０ｍＭ、コハク酸が５
ｍＭ、フマル酸が５ｍＭ、リンゴ酸が１ｍＭ、グルタミ
ン酸が１０ｍｇ／ｌ、アスパラギン酸が５ｍｇ／ｌ、セ
リンが１０ｍｇ／ｌとなるようにそれぞれ添加した培地
（表１）１０ｍｌに懸濁し、３０℃、１２０ｒｐｍで培
養し、その硝化能力の復元を試みた。硝化能力の発現は
実施例１と同様に培養液中の亜硝酸濃度を定量すること
により観察した。その結果を表５に示す。
【表５】
【００３６】これより添加培地の場合は、無添加培地に
比べて亜硝酸菌の硝化性能の発現が速く、復元が速くな
ることがわかる。
比べて亜硝酸菌の硝化性能の発現が速く、復元が速くな
ることがわかる。
【００３７】
（１）本発明では亜硝酸菌を比較的短時間の培養で高濃
度化できる。そのため保存処理するに際し遠心分離機で
濃縮することなく培養が終了した菌液をそのまま容易に
保存処理できる。
度化できる。そのため保存処理するに際し遠心分離機で
濃縮することなく培養が終了した菌液をそのまま容易に
保存処理できる。
【００３８】（２）シリカゲル凍結保存により保存期間
を大幅に長くできるため、継代培養法のように多くの労
力を要せず、しかも移植に伴う変異の発生を最小限に防
ぐことができる。
を大幅に長くできるため、継代培養法のように多くの労
力を要せず、しかも移植に伴う変異の発生を最小限に防
ぐことができる。
【００３９】（３）シリカゲル凍結保存していた亜硝酸
菌を復元させるとき、従来の無機化合物（アンモニア）
による培養に比べて硝化能力の復元が著しく速められ
る。
菌を復元させるとき、従来の無機化合物（アンモニア）
による培養に比べて硝化能力の復元が著しく速められ
る。
【００４０】（４）以上の効果に加えて、硝化装置の馴
致またはトラブル対策用の植種菌として、従来に比べて
少容量の硝化菌液量で、短時間のうちに硝化性能が発揮
または回復することが可能となる。
致またはトラブル対策用の植種菌として、従来に比べて
少容量の硝化菌液量で、短時間のうちに硝化性能が発揮
または回復することが可能となる。
【手続補正書】
【提出日】平成３年４月３０日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２１】 またこれと並行して添加物を含まない培
地（コントロール）について同様に５日間回転培養し，
これらの培養液の菌数を直接計数した。その結果を表２
に示す。
地（コントロール）について同様に５日間回転培養し，
これらの培養液の菌数を直接計数した。その結果を表２
に示す。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２４】 なお無添加培地（コントロール）の菌液
は遠心分離（９，０００×Ｇ，５分間）により集菌した
のち５倍濃縮となるように培地（表１）で再懸濁した液
（このときの菌濃度は２．０×１０９ｃｅｌｌｓ／ｍ
ｌ）を使った。
は遠心分離（９，０００×Ｇ，５分間）により集菌した
のち５倍濃縮となるように培地（表１）で再懸濁した液
（このときの菌濃度は２．０×１０９ｃｅｌｌｓ／ｍ
ｌ）を使った。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２６】 これらの保存菌を２４時間後に培地（表
１）１０ｍｌに懸濁し、３０℃、１２０ｒｐｍで培養
し、その消化能力の復元を試みた。消化能力の発現は培
養中の亜硝酸濃度を定量することにより観察した。その
結果を表３に示す。
１）１０ｍｌに懸濁し、３０℃、１２０ｒｐｍで培養
し、その消化能力の復元を試みた。消化能力の発現は培
養中の亜硝酸濃度を定量することにより観察した。その
結果を表３に示す。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２７】 これよりいずれの添加または無添加培で
もシリカゲル凍結保存によれば５日後に亜硝酸菌の硝化
反応が発現した。
もシリカゲル凍結保存によれば５日後に亜硝酸菌の硝化
反応が発現した。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正内容】
【００３０】 またこれは並行して３種類の保存用亜硝
酸菌液各１ｍｌをアンプルに入れ、ドライアイス−アセ
トンで予備凍結後、真空乾燥機によって減圧下で水分を
除去した。
酸菌液各１ｍｌをアンプルに入れ、ドライアイス−アセ
トンで予備凍結後、真空乾燥機によって減圧下で水分を
除去した。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正内容】
【００３１】 これらの保存菌を２４時間後に培地（表
１）１０ｍｌに懸濁し、３０℃、１２０ｒｐｍで培養
し、実施例１と同様にその硝化能力の復元を試みた。硝
化能力の発現は培養中の亜硝酸濃度を定量することによ
り観察した。その結果を表４に示す。
１）１０ｍｌに懸濁し、３０℃、１２０ｒｐｍで培養
し、実施例１と同様にその硝化能力の復元を試みた。硝
化能力の発現は培養中の亜硝酸濃度を定量することによ
り観察した。その結果を表４に示す。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正内容】
【００３２】 これよりいずれの添加培地または無添加
培地でもＬ−乾燥によれば８日後にやや亜硝酸菌の硝化
反応が発現してくるが、凍結乾燥ではまったく復元しな
かった。
培地でもＬ−乾燥によれば８日後にやや亜硝酸菌の硝化
反応が発現してくるが、凍結乾燥ではまったく復元しな
かった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｎ 1/04 Ｃ１２Ｒ 1:01）
Claims (2)
- 【請求項１】 亜硝酸菌を保存する方法において、亜硝
酸菌をピルビン酸もしくはその塩、オキサル酢酸もしく
はその塩、α−Ｌ−ラムノース、α−Ｌ−フコース、Ｄ
−グルクロン酸もしくはその塩、Ｎ−アセチル−Ｄ−ム
ラミン酸、α−Ｌ−ラムノース１分子とＤ−グルクロン
酸１分子およびＤ−グルコース２分子を１ユニットとし
該ユニットが直鎖状に重合した高分子多糖類のうち少な
くとも１種類以上の有機化合物を含む培地で培養した菌
液をシリカゲルと混合後、凍結保存することを特徴とす
る亜硝酸菌の保存方法。 - 【請求項２】 上記請求項１の凍結保存した亜硝酸菌を
復元する方法において、上記請求項１の有機化合物、乳
酸もしくはその塩、クエン酸もしくはその塩、コハク酸
もしくはその塩、フマル酸もしくはその塩、リンゴ酸も
しくはその塩、グルタミン酸もしくはその塩、アスパラ
ギン酸もしくはその塩、セリンもしくはその塩のうち少
なくとも１種以上の有機化合物を含む培地で培養するこ
とを特徴とする亜硝酸菌の復元方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3054404A JP3040506B2 (ja) | 1991-03-19 | 1991-03-19 | 亜硝酸菌の保存と復元方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3054404A JP3040506B2 (ja) | 1991-03-19 | 1991-03-19 | 亜硝酸菌の保存と復元方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05308955A true JPH05308955A (ja) | 1993-11-22 |
| JP3040506B2 JP3040506B2 (ja) | 2000-05-15 |
Family
ID=12969761
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3054404A Expired - Lifetime JP3040506B2 (ja) | 1991-03-19 | 1991-03-19 | 亜硝酸菌の保存と復元方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3040506B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MD4474C1 (ro) * | 2016-07-15 | 2017-10-31 | Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы | Mediu de protecţie pentru liofilizarea şi păstrarea îndelungată a tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02 |
| MD4473C1 (ro) * | 2016-07-15 | 2017-10-31 | Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы | Mediu de protecţie pentru liofilizarea şi păstrarea îndelungată a tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02 |
| MD4498C1 (ro) * | 2016-07-15 | 2018-02-28 | Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы | Mediu de protecţie pentru conservarea tulpinii Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06 |
| MD4499C1 (ro) * | 2016-07-15 | 2018-02-28 | Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы | Mediu de protecţie pentru conservarea tulpinii Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61140238U (ja) * | 1985-02-20 | 1986-08-30 | ||
| JPS61286637A (ja) * | 1985-06-14 | 1986-12-17 | Honda Motor Co Ltd | 伝動ベルト |
-
1991
- 1991-03-19 JP JP3054404A patent/JP3040506B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61140238U (ja) * | 1985-02-20 | 1986-08-30 | ||
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| MD4474C1 (ro) * | 2016-07-15 | 2017-10-31 | Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы | Mediu de protecţie pentru liofilizarea şi păstrarea îndelungată a tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02 |
| MD4473C1 (ro) * | 2016-07-15 | 2017-10-31 | Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы | Mediu de protecţie pentru liofilizarea şi păstrarea îndelungată a tulpinii Streptomyces canosus CNMN-Ac-02 |
| MD4498C1 (ro) * | 2016-07-15 | 2018-02-28 | Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы | Mediu de protecţie pentru conservarea tulpinii Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06 |
| MD4499C1 (ro) * | 2016-07-15 | 2018-02-28 | Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы | Mediu de protecţie pentru conservarea tulpinii Streptomyces massasporeus CNMN-Ac-06 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3040506B2 (ja) | 2000-05-15 |
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