LU81795A1

LU81795A1 - Nouvelle penicilline semi-synthetique,son procede de production et composition pharmaceutique la contenant

Info

Publication number: LU81795A1
Application number: LU81795A
Authority: LU
Original assignee: Bristol Myers Co
Priority date: 1978-10-16
Filing date: 1979-10-16
Publication date: 1980-05-07
Also published as: FI68839C; IE791952L; GB2043627A; SE7908528L; YU222682A; FR2439202A1; IT7950565A0; FI793169A; SE8404556D0; YU222782A; US4206116A; YU243779A; CA1132540A; AU5149979A; YU42051B; GR72291B; NL7907577A; DE2941717A1; IE49083B1; DK435279A

Description

! f \ v [ Λ-“J ?"£ g^SRAND-DUCHÊ DE LUXEMBOURG D. 5O. 834 .........!......./.......J 3 du .........16.....octobre.....19-7 S -Monsieur le Ministre de l’Économie Nationale et des Classes Moyennes

Titre delivre : ........................................

» Service de la Propriété Industrielle

nIS/ LUXEMBOURG

Demande de Brevet d’invention I. Requête .La_.société...dite: BEISTQLrJÜYEES COMPANY., 3.45 Park... Avenue.,...........................(i> .NEW... YORK*.....New....York.....1αο22.Λ.....Etats-Unis.....d'Amérique,.....représentée.................

.par....Monsieur....Jacques.....deJ-luyser.agissant.....en...qualité....de...manda-......(2> .taire.............................................................................................................................................................................................................................................

dépose ce..........seize...ac.tobra.-.19oo...soixante-dix-neuf...............................(3) à..............15..........heures, au Ministère de l’Économie Nationale et des Classes Moyennes, à Luxembourg : “ 1. la présente requête pour l’obtention d’un brevet d'invention concernant : .".Nouvelle .....pênicill±ne...semlr.s.y.nthë.tique.r son ...procédé. ...de-----------------------------(4) „ ......pxoduction.....et....composition...pharmaceutiqiie.....la...contenant"..-------------------- .......................................................................................................................................:.......1----------------------------------------------------------------------------------------------------— (5) 2. la délégation de pouvoir, datée de ... NEW....YORK-------------------- le .XQ.....Q.G.fcQbr.6i 19.7_9.._ 3. la description en langue .....française-----------------------------------de l’invention en deux exemplaires ; 4................// planches de dessin, en deux exemplaires ; 5. la quittance des taxes versées au Bureau de l’Enregistrement à Luxembourg, le 1.6 octobre ...19.79.—........................................................................................- ----------------------------------------------------------------------------- revendique pour la susdite demande de brevet la priorité d’une (des) demande(s) de (6)...................Brevet___________________________________________déposée® en (7) -.Etats-Unis. ...d' Amérique---------------------------- le 16......QCt.ob.rs....l.9.18.......(Neu......9.5.1..,..9.0.0).......et.....le.....?.....déc.ejanhr.e....l9.7.8..__________________________________(8) —.(No..·.....9.6.7*33.6.)_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ au nom de .S.....iUYSnte.UrS.-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------¢) élit domicile pour lui (elle) et, si désigné, pour son mandataire, à Luxembourg ........................................

..3.5.*.....fcd.. Royal........................................................................................................................................................................................................................(io) sollicite la délivrance d'un brevet d’invention pour l’objet décrit et représenté dans les annexes susmentionnées, — avec ajournement de cette délivrance à............................................mois.

^Le^^ii^ata^e.................^ ·· j Π. Procès-verbal de Dépôt

La susdite demande de brevet d’invention a été déposée au Ministère de l’Économie Nationale et des Classes Moyennes, Service de la Propriété Industrielle à Luxembourg, en date du : 16 octobre 1979 * .··..........Pr. le Ministre à 2,5.. heures / \ de l’Économie Nationale et des Classes Moyennes, cofi] K j I rV \ / D. 5o.834

, REVENDICATION DE LA PRIORITE

de la demande de brevet / fi W Aux ETATS-UNIS D’AMERIQUE Du 16 OCTOBRE 1978 DU 7 DECEMBRE 1978_ Mémoire Descriptif déposé à l'appui d'une demande de >4

BREVET D’INVENTION

au

Luxembourg

au nom de : BRISTOL-MYERS COMPANY

pour* "Nouvelle pénicilline semi-synthétique, son procédé de production et composition pharmaceutique la contenant".

\ 1.

-¾ ~ Λ

La présente invention concerne une pénicilline semi-synthétique nouvelles utile comme agent antibactérien pour le traitement d'infections dues à des bactéries 3ram-positives et Gram-négatives.

5 L'acide D-a-amino-a-(3»4~dihydroxyphényl)-acet- amidopénicillanique est un agent antibactérien connus décrit par exemple dans le brevet britannique n° 1 450 764.

Des pénicillines de formule : S “3 0 0 m d? COOH )

II

' /A

·. C-H--N N-C=0 \_/ *Dextro (dans laquelle R est un atome d'hydrogène ou un groupe hy-10 droxy) sont décrites» entre autres» dans le brevet des

Etats-Unis d'Amérique n° 4 087 424 (voir par exemple les exemples 11» 13 et 22-24 et la colonne 45 de ce brevet) ; voir également le brevet des Etats-Unis d'Amérique n° 4 112 090 déposé récemment.

15 La présente invention concerne l'acide de formule :

HO

HO-/' \\—CH-C-HH- Ο O KH y ïoOH ·

Il I! Λ C-H--N N-C=0 - \_/ ayant la configuration D dans la chaîne latérale en position 6» ou un sel acceptable du point de vue pharmaceutique ou un ester aisément hydrolysé de cet acide.

20 Les sels acceptables du point de vue pharma- \ i 2.

* Λ ceutiques auxquels il est fait allusion ci-dessus comprennent des sels métalliques non toxiques tels que les sels de sodiumj potassium} calcium et magnésium} le sel d’ammonium et les sels d’ammonium substitués} par exemple des 5 sels d'amines non toxiques telles que des trialkylamines (par exemple la triéthylamine)} la procaïne, la dibenzyl-amine, la N-benzyl-p-phénéthylamine, la 1-éphénamine, la Ν,Ν'-dibenzyléthylènediamine, la déhydroabiétylamine} la N,N'-bis-(déhydroabiétyl )-ethylènediamine, une N-(alkyle 10 inférieur)-pipéridine (par exemple la N-éthylpipéridine) et d’autres amines qui ont été utilisées pour former des “ sels acceptables du point de vue pharmaceutique de péni cillines et de céphalosporines. Les sels les plus avantageux sont les sels de métaux alcalins} c'est-à-dire les 15 sels de sodium et de potassium.

L'expression "esters physiologiquement hydro-lysés” utilisée dans le présent mémoire désigne des esters acceptables du point de vue pharmaceutique (de pénicillines ou de céphalosporines) connus dans la pratique pour leur 20 aptitude à s'hydrolyser en la forme acide libre in vivo.

Des esters de ce type sont décrits} par exemple} dans les brevets des Etats-Unis d'Amérique n° 3 859 274, n° 3 860 570} n° 3 860 579, n° 3 864 331, n° 3 873 521 et n° 3 919 196, dans les brevets britanniques n° 1 215 812, n° 1 267 936, 25 n° 1 425 571 et n° 1 400 584 et dans les demandes de brevets de la République Fédérale d'Allemagne mises à l'inspection publique sous les numéros 1 951 012 et 2 230 620.

Des exemples appréciés d'esters physiologiquement hydro-lysés comprennent les esters d'acétoxyméthyle, de piva-30 loyloxyméthyle, d'α-acétoxyéthyle, d'a-acétoxybenzyle» d'a-pivaloyloxyéthyle, de phtalidyle (3-phtalidyle), d'in-danyle (5-indanyle), de méthoxyméthyle, de benzoyloxymé-thyle, d'a-éthylbutyryloxyméthyle, de propionyloxyméthyle, de valéryloxyméthyle et d'isobutyryloxyméthyle. Les esters 35 préférés sont les esters d'acétoxyméthyle, de pivaloyloxy-méthyle, de méthoxyméthyle, de phtalidyle et de 5-indanyle, notamment les esters d'acétoxyméthyle, de méthoxyméthyle et de pivaloyloxyméthyle.

<V

5 3.

! %

La pénicilline de formule : HO-// \\-CH-C-NH-r-Γ >CH3 i /—"

0 o »H / COOH

A

C H -ΤΛ N-C=0 r c2ft5 *\^_J x ' est préparée} selon une forme de réalisation} par réaction d'un composé de formule : H\_ HO-Ù —GH-C-NH-

\=/ I —I

NH2 σ cooe ii *Dextro 5 ou d'un sel ou d'un ester aisément clivable de ce composé} avec un agent acylant de formule :

H

C-H--H N-COOH 111 \__/ ou avec un dérivé acylant réactif de cet agent et} si le produit de réaction renferme un groupe aisément clivable protégeant la fonction ester} par élimination éventuelle 10 du groupe protecteur par une opération connue et? le cas échéant} transformation par un procédé connu (a) du produit sous la forme d'un acide libre en un sel acceptable du point de vue pharmaceutique ou en un ester physiologiquement hydrolyse de ce produit} ou (b) du produit sous 15 la forme d'un sel en l'acide libre ou en un sel acceptable du point de vue pharmaceutique ou en un ester physiologiquement hydrolysé de ce produit. La réaction d'acyla-

V

4.

\

V

♦ ή tion indiquée ci-dessus peut être conduite selon des procédés qui sont eux-mêmes connus dans la pratiques par exemple dans la synthèse des peptides s des pénicillines et des céphalosporines.

5 Les pénicillines de départ de formule (II) sont des composés connus. La préparation de la matière acylante (III) de départ à fonction acide est décrite ci-après .

Dans l'acylation du groupe α-amino de la péni-10 cilline (II)j l'acide carboxylique de formule (III) peut être utilisé sous sa forme propre» auquel cas il est pré-’ férable d'utiliser un enzyme ou un agent de condensation.

Des exemples appréciés d’agents de condensation comprennent le chlorure de N»N'-diméthylchloroformiminiurn, un N,N'-15 carbonyldiimidazole ou un N»N'-carbonyl.ditriazole» un réactif carbodiimidique (notamment le N»N'-dicyclohexylcarbo-diimide» le N,N'-diisopropylcarbodiimide ou le N-cyclohe-xyl-N’-(2-morpholinoéthyl)-carbodiimide» un réactif alkyl-ylaminé, un réactif du type d'un sel d'isoxasolium» un 20 réactif du type cétène-imine» 1'hexachlorocyclotriphos- phatriazine ou 1'hexabromocyclotriphosphatriazine» l'azide diphénylphosphorylique (DPPA·) » le cyanure de diathylphcs-phoryle (DEPC)» le phosphite de diphényle ou la N-éthoxv-carbonyl-2-éthoxy-l» 2-dihydroquinoléine (EEDQ).

25 Au lieu d'utiliser l'acide carboxylique (III)» dans le procédé ci-dessus» on peut aussi utiliser en variante des dérivés acylants réactifs de l'acide (III)» c'est-à-dire des équivalents fonctionnels de l'acide en tant qu*agents acylants pour un groupe amino primaire. Des 30 exemples de dérivés acylants réactifs de l'acide carboxylique comprennent l'halogénure d'acide (par exemple le chlorure d’acide ou le bromure d’acide)» des anhydrides d'acides» y compris des anhydrides mixtes (par exemple des anhydrides alkoxyformiques)» des azides d’acides» des es-35 ters actifs (par exemple des esters de p-nitrophényle) et des thioesters actifs. Un autre dérivé réactif de l'acide est un azolide correspondant» c'est-à-dire un amide de • l'acide dont l'atome d'azote d'amide appartient à un noyau i \

V

<*·

R

-J · pentagonal quasi aromatique renfermant au moins 2 atomes d'azote? c'est-à-dire l'imidazolej le pyrazole? les tri-azolesj le benzimidazole? le benzotriazole et leurs dérivés substitués. Le procédé général de préparation d'azolides 5 est décrit} par exemple} dans le brevet des Etats- Unis d'Amérique n° 3 910 900.

On a mentionné ci-dessus l'utilisation d'enzymes pour combiner l'acide libre avec le composé (II).

Ces procédés renferment dans leur cadre l'utilisation d'un 10 ester,tel que l'ester méthylique} de cet acide libre} avec des enzymes élaborés par divers micro-organismesj par exem-„ pie ceux qui sont décrits dans "J. Am. Chem. Soc."} _94 (11) ? 4035-4037 (1972)j dans "J. Antibiotics (Japon)"? 24 (5)? 321-323 (1971) et dans le brevet des Etats-Unis d'Améri-15 que n° 3 682 777.

L'acylation de l'acide carboxylique (III) ou de son dérivé acylant réactif peut être conduite sur l'acide pénicillanique de formule (II) ou sur un sel (par exemple un sel de métal alcalin ou un sel d'amine) ou un ester 2o aisément clivable de cet acide.

L'expression "ester aisément clivable" désigne un dérivé de l'acide pénicillanique dont le groupe 3-car-boxyle a été protégé par l'un quelconque des groupes connus aptes à protéger un ester} capables d'être éliminés 25 après la réaction d'acylation par des opérations telles qu'une hydrolyse chimique ou enzymatique? un traitement avec des agents réducteurs chimiques dans des conditions douces? une irradiation par la lumière ultraviolette ou une hydrogénation catalytique? qui n'entraînent pas de 30 destruction appréciable de la portion restante de la molécule. Des exemples d'esters "aisément clivables" comprennent les esters de trialkylsilyle (par exemple de trimé-thylsilyle) et d'autres esters dérivés de 1'alcool sily-lique ou de l'alcool stannylique qui peuvent être éliminés 35 par solvolyse avec un solvant renfermant des groupes hydro-xyle ? tertiobutoxycarbonyle? benzhydryle? benzyle? p-nitrobenzyle? p-méthoxybenzyle? 2,2?2-trichloréthyle) phé-nacyle? acétonyle? p-bromophénacyle? alkyle inférieurs tels

V

K

v 6.

que méthyle} éthyle ou tertiobutyle? et des esters physiologiquement hydrolyses mentionnés ci-dessus. Les procédés généraux pour la préparation de ces esters et pour leur élimination sont décrits dans la littérature et sont bien 5 connus de l’homme de l'art.

Le procédé d'acylation est mis en oeuvre dans un solvant inerte à l'égard de la réaction} qui peut être aqueux ou non aqueux. Des solvants convenablesj inertes à l'égard de la réaction} comprennent par exemple l'eau5 10 1'acétone} le tétrahydrofuranne5 le dioxanne} l'acétoni- trile5 le diméthylformamide5 le diméthylsulfoxyde} le chlorure de méthylène} le chloroforme} le benzène} le toluène} la méthylisobutylcétone et des mélanges des solvants organiques mentionnés ci-dessus avec de l'eau. Le choix 15 du solvant} c'est-à-dire en particulier le fait de savoir si l'on utilise un solvant aqueux ou un solvant non aqueux} dépend des composants particuliers que l'on utilise au départ. Ainsi} par exemple} si la pénicilline de départ de formule (II) est utilisée sous la forme dans laquelle le 20 groupe carboxyle en position 3 est protégé par un groupe ester clivé par des solvants hydroxyliques5 par exemple un ester de silyle ou de stannyle} on utilise le plus avantageusement un solvant organique aprotique. De même} lorsque la pénicilline de formule (II) est utilisée sous 25 la forme d'un sel} on utilise de préférence l'eau ou un mélange d'eau et d'un solvant organique. Le solvant le plus avantageux à utiliser pour les réactifs particuliers que l'on choisit peut être déterminé par les méthodes classiques d'appréciation.

30 La durée et la température de la réaction d'acy lation ne sont pas déterminantes. On utilise habituellement des températures se situant dans la plage d'environ -30 à environ +50°C pour des durées de réaction allant de moins de une heure à un jour ou plus. Bien que le contact ini-35 tial des corps réactionnels soit établi de préférence à une température de l'ordre de 0°C pour réduire la formation de sous-produits} il est fréquemment désirable5 après • quelques minutes d'agitation} de laisser le mélange réac- 7 ο i tionnel se réchauffer à la température ambiante jusqu’à ce que la réaction soit terminée.

Les corps réactionnels de formules (II) et (III) sont normalement utilisés en quantités à peu près 5 équimolaires5 bien qu’on puisse utiliser le cas échéant un excès de l'un ou l'autre.

Lorsqu'un groupe protégeant la fonction carbo-xyle est présent dans le produit de la réaction d'acylation5 on peut l'éliminer » le cas échéant» d'une manière classique 10 pour obtenir la pénicilline désirée à fonction acide carbo-xylique en position 3 ou un sel de cette pénicilline.

. Le produit d'acylation est isolé d'une manière classique sous la forme de l'acide libre ou d'un sel ou sous la forme d'un ester physiologiquement hydrolysé (si 15 le groupe ester convenablement choisi a été utilisé dans le processus d'acylation). L'acide libre peut être converti en un sel acceptable du point de vue pharmaceutique par traitement avec une base organique ou Inorganique convenable. Les sels carboxyliques peuvent être convertis en aci-20 des libres par traitement avec un acide ou une résine convenable d'échange ionique. Le produit sous la forme de l'acide libre ou de son sel peut aussi être converti par des opérations connues en un ester physiologiquement hydrolysé correspondant tel que l'ester de pivaloyloxyméthy-25 le» d’acétoxyméthyle» de phtalidyle» de 5-indanyle ou de méthoxyméthyle.

Une variante du procédé de préparation des pénicillines de formule (I) consiste à faire réagir l'acide 6-aminopénicillanique ou un sel ou un ester aisément cli-30 vable de cet acide avec un agent acylant de formule : X* HCl~v /éf3"0“03 0 0 NH Μ j C2H -N N—C=0 \_/ *Dextro λ

V

\ 8.

ayant la configuration D au niveau de l’atome a de carbone ou un dérivé acylant réactif de cet agent et» si le produit réactionnel renferme un groupe aisément clïvable protégeant la fonction ester» à éliminer éventuellement ce 5 groupe protecteur par un procédé connu en soi et» le cas échéantj à convertir par des opérations connues (a) le produit sous la forme d'un acide libre en un sel acceptable du point de vue pharmaceutique ou en un ester physiologiquement hydrolyse de ce produit ou (b) le produit sous 10 la forme d’un sel en l’acide libre ou en un sel acceptable du point de vue pharmaceutique ou en un ester physiologiquement hydrolyse de ce produit.

Les expressions "ester aisément clivable"} "dérivé acylant réactif"} "sel acceptable du point de vue 15 pharmaceutique" et "ester physiologiquement hydrolysé" utilisées ci-dessus dans la description du procédé proposé en variante ont les définitions déjà données.

Les conditions d'acylation» c'est-à-dire les solvants» les températures» les rapports molaires et les 2o opérations d'isolement» pour cette variante du procédé» sont sensiblement les mêmes que celles qui ont été définies ci-dessus à propos du procédé mentionné en premier lieu.

Bien que» comme on l'a indiqué ci-dessus» les 25 dérivés de pénicilline de la présente invention soient en eux-mêmes des agents antibactériens utiles» ils offrent un intérêt particulier lorsqu'on les utilise conjointement avec l'antibiotique aminoglycosidique appelé amikaeina (ou un sel d'addition d'acide acceptable du point de vue 30 pharmaceutique de ce composé)» décrit par exemple dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique n° 3 781 268. En conséquence» selon un autre de ses aspects» la présente invention propose une composition pharmaceutique contenant (A) un dérivé de pénicilline de formule (I) ci-dessus» ou un 35 sel acceptable du point de vue pharmaceutique ou un ester physiologiquement hydrolysé de ce dérivé comme défini ci-dessus» et (B) l'antibiotique aminoglycosidique appelé amikacina ou 1.-[ (L-(-)-'f-amino-a-hydroxybutyryl]-kanamycine 9.

i

Aj ou un sel d'addition d'acide acceptable du point de vue pharmaceutique de cet antibiotique} éventuellement en mélange avec un support ou diluant acceptable du point de vue pharmaceutique.

5 L'expression "sel d'addition d'acide acceptable du point de vue pharmaceutique" utilisée dans le présent mémoire à propos de l'amikacine désigne les sels d'addition d'acides acceptables du point de vue pharmaceutique décrits dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique n° 3 781 268 10 précité et entrant dans le cadre dudit brevet. Ainsi} des sels convenables d'amikacine comprennent les monosels} les diselS} les trisels ou les tétrasels formés avec des acides acceptables du point de vue pharmaceutique tels que les acides acétique} chlorhydrique} sulfurique} maléique9 15 phosphorique} nitrique} bromhydrique; ascorbique} rnalique et citrique. Un sel d'amikacine très apprécié est le bisulfate d'amikacine (sulfate d'amikacine).

Des compositions pharmaceutiques renfermant à la fois une pénicilline de formule (I) (ou un sel accep-20 table du point de vue pharmaceutique ou un ester physiologiquement hydrolysé de cette pénicilline) et de l'amikacine (ou un sel d'addition d'acide acceptable du point de vue pharmaceutique de ce composé) possèdent de nombreux avantages par rapport à des compositions ne renfermant que 25 l'un ou l'autre des deux composants antibiotiques. Ainsi} un spectre antibactérien élargi peut être obtenu5 attendu que l'amikacine exerce un effet antibactérien contre des organismes qui ne sont pas affectés par la pénicilline; et vice versa. Les problèmes potentiels de néphrotoxicité 30 et d'ototoxicité associés à l'antibiotique aminoglycosi- dique peuvent être réduits par l'administration d'une combinaison antibactérienne synergique qui permet d'obtenir le même effet thérapeutique avec une dose plus faible d'aminoglycoside. Des doses réduites d'amikacine rendues 35 possibles par le produit combiné à effet synergique permettraient également de traiter des patients atteints d'infections à Pseudomonas avec cette composition antïbio-• tique très efficace pendant une plus longue période que

V

IC.

cela n’est habituellement recommandé pour un traitement a 1'amikacina. (On recommande ordinairement de limiter le traitement à 15 jours).

Les compositions thérapeutiques à base de pé-5 nicilline et d1aminoglycoside de la présente invention peuvent être administrées aux mamifères» y compris l'homme» par injection. Ces compositions peuvent renfermer le cas échéant des supports ou diluants solides ou liquides classiques» acceptables du point de vue pharmaceutique. D'au-10 très formes posologiques unitaires convenables peuvent être préparées conformément aux procédés connus de l'industrie pharmaceutique.

La quantité relative d'ingrédients actifs dans le mélange à effet combiné conforme à l'invention peut va-15 rier entre de larges limites selon l'organisme particulier que l'on traite et selon le choix du médecin» en faveur de l'un ou l'autre des composants antibiotiques» dans le traitement d'un patient particulier. Un rapport en poids apprécié des composants (amikacine : pénicilline)» qui a donné 20 des résultats bactéricides synergiques avantageux contre les souches de Pseudomonas aeruginosa mentionnées plus loin» se situe entre environ 1:2 et 1:100. Toutefois» des compositions s'écartant de cette plage préférée donnent aussi des résultats avantageux et entrant dans la cadre de la 25 présente invention. A titre d'exemple illustrant une dose proposée en médecine humaine» on peut utiliser une préparation parentérale contenant 200 mg de sulfate d'smikacine et 400 mg d'une pénicilline de formule (I). La charge sèche contenant l’amikacine et la pénicilline est dissoute dans 30 de l'eau stérilisée» puis la solution est administrée par injection sous forme d’une dose unique du mélange d’antibiotiques à effet combiné. Cette dose combinée proposée pourrait être administrée environ deux fois par jour en tant que posologie quotidienne proposée pour un être humain. 35 La posologie particulière est naturellement choisie par le médecin compte tenu de l'âge» du poids et de l'état du sujet traité, et elle peut être déterminée par l'homme de * l’art sur la base des données offertes dans le présent 11.

V

» mémoire et de l'expérience acquise avec d'autres mélanges connus à effet combiné de pénicilline et d'aminoglycoside.

L'invention est illustrée par les exemples suivants .

5 EXEMPLE 1. - HO-/' 'N—CHCONH—-[/^SVVT^CH3 J—ù-- 3 · / ο ο NH σ cooh

EtN N-C=0 \_y *Dextro BB-P661

Acide D-a-(4-éthyl-2 ? 3-dioxo-l-pipérazinocar-boxamido)-a~3 ?4-dihydroxyphénylacétique (2a)

On ajoute goutte à goutte à 0-5°C une solution 10 de 7j36 g (0?036 mole) de chlorure de 4-éthyl-2?3-dioxo-l-pipérazinylcarbonyle dans 70 ml de tétrahydrofuranne (THF) anhydre à une solution refroidie (sous agitation) de 5?4 g (0j03 mole) de D-(-)-3?4-dihydroxyphénylglycine dans 60 ml d'hydroxyde de sodium N. On agite le mélange à 5-lO°C pen-15 dant 30 minutes? période pendant laquelle on maintient son pH à 8-9 par addition d'hydroxyde de sodium N. On concentre le mélange réactionnel à un volume de 70 ml?on l'acidifie par addition d'acide chlorhydrique concentré et on l'extrait avec 400 ml de mélange d'acétate d'éthyle et de 20 n-butanol à 10:1. On déshydrate les extraits sur du sulfate de magnésiurrie Après évaporation du solvant? on chromatographie le résidu (environ 6 g) sur du gel de silice (150 g de "Wako-gel C-100") en effectuant l'élution avec du chloroforme puis avec un mélange de chloroforme et de méthanol. 25 Les fractions désirées sont recueillies et évaporées à sec en donnant 870 mg (8 %) du composé 2j. indiqué dans le titre [a]^ = -84° (c = 1? EtOH). Point de fusion = 200-205°C (décomposition).

i 12ο

Spectre infrarouge 1710, 1670» 1610» 1520» 1400» • ΓΠα,Χ λ 1370, 1290, 1190 cm" .

Spectre ultraviolet: ^^ampon ^ 221 nm (€/, 11500) , ^ max 277 nm (&> 4700).

5 Analyse C> % H, % N, % calculé pour C15H17N3°7*H2° 48,78 5,18 11,28 trouvé 48 » 68 4,58 10,87.

BB-P 661 6-ΓD-a-(4-éthyl-2,3-dioxo-l-pipérazinocarbox- 10 amido)-a-(3,4-dihydroxyphényl)-acétamidol-pé- nicillanate de sodium (3a)

On ajoute goutte à goutte à -5°C une solution de 130 mg (1,2 mmole) de chloroformiate d'éthyle dans 5 ml de THF anhydre à une solution refroidie, sous agitation,

15 de 351 mg (1 mmole) de composé 2a et de 224 mg (2,2 mmoles) de N-méthylmorpholine dans 10 ml de THF anhydre et on agite le mélange entre -5 et -10°C pendant une heure. On ajoute au mélange en une seule portion à -10°G une solution de 432 mg (2 mmoles) de 6-APA (acide 6-aminopénicillanique) et 20 de 303 mg (3 mmoles) de triéthylamine dans 10 ml de THF

aqueux à 50 % et on agite le mélange à -5°C pendant 15 minutes et à la température ambiante pendant 30 minutes. On concentre le mélange réactionnel à un volume de 5 ml et on acidifie le concentré avec de l'acide chlorhydrique 6N 25 puis on l'extrait avec 100 ml d'acétate d'éthyle. On lave les extraits avec une solution saturée de NaCl, on les déshydrate sur du sulfate de magnésium et on les concentre à un volume de 30 ml. On ajoute au concentré 1 ml de 2-éthylhexanoate de sodium (SEH) lM dans l'acétate d'éthyle 30 et on recueille par filtration le précipité résultant, on le lave à l'acétate d'éthyle, puis à l'éther et on le sèche sous vide sur du pentoxyde de phosphore pour obtenir 202 mg (35 %) de BB-P661 fondant à 170-180°C en se décomposant.

35 Spectre infrarouge : î)KBr 1770, 1710, 1680, 1610, 1510, max si 1400, 1380, 1260, 1190 cm

Spectre ultraviolet ^amPon ^P^ 220 nm» épaulement ^ max (£-, 14000), 265 nm, épaulement (6, 4600).

* f 13.

Composés comparatifs HO

H0"\ ?HC0NH-

O O NH Cr COOH

MJ

Et -*I N-CO

...w

*Levo BB-P66Q

Acide L-a-(éthyl-2,3-dioxo-l-pipérazinocarbo-xamido)-a-3}4-dihydroxyphénylacétique (2b) ^ On ajoute goutte à goutte entre 0 et 5°C une solution de 4,5 g (O>022 mole) de chlorure de 4-éthyl-2>3-dioxo-l-pipérazinylcarbonyle dans 50 ml de tétrahydrofuran-ne anhydre à une solution refroidie, sous agitation5 de 2>66 g (0>02 mole) de L( + )-3>4-dihydroxyphénylglycine dans 40 ml d’hydroxyde de sodium N. On agite le mélange entre 0 et 5°C pendant 30 minutes) période pendant laquelle on le maintient à un pH de 8-9 par addition d'hydroxyde de sodium N. On concentre le mélange réactionnel à un volume de 40 ml> on l'acidifie par addition d'acide chlorhydrique 15 concentré et on l'extrait avec 300 ml de mélange d'acétate d'éthyle et de n-butanol à 10:1. On déshydrate l'extrait sur du sulfate de magnésium et on l'évapore à sec. Le résidu huileux (environ 4 g) est chromatographié sur du gel de silice (gel "C-200"> 70 g)> l'élution étant effectuée 20 avec du chloroforme) puis avec un mélange de chloroforme et de méthanol. Les fractions intéressantes sont recueillies et évaporées à sec en donnant 1>52 g (21>5 /0 du composé 2b indiqué dans le titre» fondant à 200-205°C en se décomposant ; [a]j^ = +79° (c = 1: EtOH).

25 Spectre infrarouge :^ KBr 1710> 1670, 1610> 1520> 1400> 1370> max λ 1290, 1190 cm

Spectre ultraviolet ; λ ^ 221 nm (€., 10000) 277 nm (£, 4000) ? 14ο

Analyse : C , % H? % N ? % calculé pour C15H17N3°73/2H2° 47,62 5,33 11j11 trouvé 47,45 5,16 9,21.

15 BB-P 660 ; 6-[L-a-(4-éthyl-2,3-dioxo-l-pipérazinocarboxa-mido)-a-3,4-dihydroxyphénylacétamido]pénicillanate de so- dlum (3b)_

On ajoute goutte à goutte, à -5°C, à une solu-5 tion refroidie sous agitation de 351 mg (1 mraole) de composé 21a et 224 mg (2,2 mmoles) de N-méthylmorpholine dans 10 ml de THF anhydre, une solution de 130 mg (1,2 mmole) de chloroforraiate d'éthyle dans 10 ml de THF anhydre et on agite le mélange entre -5 et -10°C pendant 1 heure. On 10 ajoute à la solution d'anhydride mixte, en une seule portion, a —10°C, une solution de 432 mg (2 mmoles) de 6-APA et de 303 mg (3 mmoles) de triéthylamine dans 10 mg de THF aqueux à 50 % et on agite le mélange à -5°C pendant 10 minutes et à la température ambiante pendant 20 minutes. On 15 concentre le mélange réactionnel à un volume de v. 10 ml et on lave le concentré avec de l'éther, on l'acidifie avec de l'acide chlorhydrique dilué et on l'extrait avec 100 ml d'acétate d'éthyle. On lave l'extrait avec une solution aqueuse saturée de NaCl, on le déshydrate sur du sulfate 20 anhydre de magnésium et on le concentre à 30 ml. On ajoute au concentré 0,9 ml (0,9 mmole) de SEH dans l'acétate d’éthyle pour obtenir un précipité que l'on recueille par filtration, qu'on lave à l’acétate d'éthyle et à l’éther et qu'on sèche sous vide sur du pentoxyde de phosphore, ce qui don-25 ne 230 mg (50 %) de BB-P660 fondant à 170-180°C en se décomposant.

Spectre infrarouge : 01770, 1720, 1680, 1610, 1510, 1400, 1375, 1260, 1190 cm"1.

30 Spectre ultraviolet ï Xmax^00 ^ ^20 nm (£, 13 000), 265 nm (£, 3800).

> 5 16 // \\ (DL) H0\ y--ÇHcoNiî--j—r ^- ο ο NH σ cooh I >1 r\

EtN N-C=0 \_/ BB-P652

Acide DL-a-(4-éthyl-2 , 3-dioxo-l-pipérazinocarboxamido)-g-3,4-dihydroxyphénylacétique (2c)_

On ajoute goutte à goutte à 5-lO°C une solution de 3,1 g (0,014 mole) de chlorure de 4-éthyl-2,3-5 dioxopipérazine-l-carbonyle dans 5 ml de THF anhydre à une solution refroidie, sous agitation, de 2,7 g (0,015 mole) d’acide DL-g-amino-g-3,4-dihydroxyphénylacétique dans 15 ml de solution d'hydroxyde de sodium N_. On agite le mélange réactionnel pendant 1 heure à lo-20°C tout en 10 le maintenant à un pH de 8-9 par addition de 15 ml d’hydroxyde de sodium JN par portions. On concentre le mélange à 20 ml, on l'acidifie par addition d’acide chlorhydrique concentré et on l’extrait avec 400 ml de mélange d’acétate d'éthyle et de n-butanol à 10:1. On déshydrate l'extrait 15 sur du sulfate de sodium et on l'évapore à sec. On triture le résidu dans l'éther pour obtenir 1,8 g du produit brut que l'on chromatographie sur du gel de silice (70 g de gel "C-200"), en effectuant des élutions successives avec du chloroforme et un mélange de chloroforme et de méthanol 20 à 20:1. L'étuat désiré est recueilli et évaporé à sec. Le résidu est trituré à l'éther en donnant 1,21 g (23 %) du produit 2c; pur qui fond à 140°C en se décomposant.

Spectre infrarouge 1710, 1680, 1520, 1400, 1370, 1290, 25 1190 cm .

17

Spectre ultraviolet ; Λ TaI*Pon ^PH 225 nm r max.

(8, 11 800), 277 nm (8, 4600).

RMN îSDMS0"d6 1,07 (3H, t, 7,5 Hz, CH-CH-) ppm 4—3 5 3,35 (2H, q, 2,5 Hz, , 3,3-3,7 (2H, m, N-CH2), 2,7 - 4,1 (2H, m, N-CH2), 5,03 (1H, d, 7 Hz, CH-CO), 6,62 (2H, s, H de phényle), 6,67 (1H, s, 10 H de phényle), 8,5 - 9,1 (2H, large, OH), 9,5 (1H, d, 7 Hz, NH).

Analyse : C % H % N % 15 Calculé pour C15H17N3°7*1/2H2° : 50,00 5,03 11,96

Trouvé : 50, 40 4,87 11,62 BB-P652 : 6-£DL-a-(4-éthyl-2,3-dioxo-l-pipérazinocarboxa-mido)-a-3,4-dihydroxyphény1acétamido]pénicil1anate de 20 sodium (3c)_

On ajoute à -10°C une solution de 65 mg (0,6 mmole) de chloroformiate d'éthyle dans 5 ml de THF anhydre à une suspension refroidie, sous agitation, de 176 mg (0,5 mmole) de composé 2c et de 112 mg (1,1 mmole) 25 de N-méthylmorpholine dans 10 ml de THF anhydre et on agite le mélange entre -5 et -10°C pendant 1 heure. Le mélange réactionnel se transforme en une solution claire.

On ajoute à la solution en une seule portion une solution de 216 mg (1 mmole) de 6-APA et de 150 mg (1,5 mmole) de 30 triéthylamine dans 10 ml de THF aqueux à 50 %. On agite le mélange à -10°C pendant 15 minutes et à la température ambiante pendant 30 minutes. Après concentration à 5 ml du filtrat déshydraté, on acidifie la solution aqueuse avec de l'acide chlorhydrique dilué et on l'extrait avec 35 100 ml d'acétate d'éthyle. On lave l'extrait avec de l'eau, puis avec une solution aqueuse'saturée de NaCl, on le déshydrate sur du sulfate de magnésium et on le concentre à un volume de 50 ml. On ajoute au concentré 0,5 ml (0,5 mmo- » 18 « . le) de SEH dans l'acétate d'éthyle. Le précipité résultant est recueilli par filtration» lavé à l'acétate d'éthyle et à l'éther et déshydraté sous vide sur du pentoxyde de phosphore en donnant 180 mg (63 %) de composé BB-P652 qui fond 5 à 170-180°C en se décomposant.

Spectre infrarouge : ÿ 1770, 1710, 1680, 1610, 1510, 1400, 1370, 1260, 1190 cm"

Spectre ultraviolet :^TamPon ^PH 220 nm max · lo (è, 12 000), 270 nm (£, 2600).

Activité biologique

Les concentrations inhibitrices minimales de BB-P652, BB-P660 et BB-P661 ont été déterminées par la mé-15 thode de dilution en série d'un facteur 2 en milieu gélosé, en utilisant l'appareil de Steer et des plaques de gélose Mueller-Hinton, vis-à-vis de S_. aureus (6 souches), de · micro-organismes Gram-négatifs sensibles à la céphalothine (Gn-X, 13 souches), de micro-organismes Gram-négatifs ré-20 sistantsà la céphalothine (Gn-II, 6 souches) et de Ps.

aeruginosa (64 souches). Les résultats sont reproduits sur les tableaux I et II qui indiquent également les résultats obtenus avec la pipéracilline et la carbénicilline. Le tableau I reproduit les valeurs de concentration inhibi-25 trice minimale de souches représentatives choisies parmi les organismes d'essai utilisés et le tableau II donne le pourcentage moyen d'activité relative des pénicillines par rapport à la carbénicilline, qui a été calculé d'après la moyenne géométrique des valeurs de concentration inhibitri-30 ce minimale dans chaque groupe d'organismes d'essai.

Les composés BB-P652, BB-P660 et BB-P661 se sont montrés presque aussi actifs l'un que l'autre et moins .puissants que la pipéracilline contre des bactéries Gram-positives. L'activité contre les bactéries Gram-négatives 35 des dihydroxypénicillines dépend de la configuration de l'atome a de carbone dans la chaîne latérale 6-acyle. L'isomère D (BB-P661) a été le plus actif des trois isomères et 19 . l'isomère L (BB-P660) a montré une activité considérable ment réduite. Le composé BB-P661 s'est montré environ huit fois plus actif que la pipéracilline contre des organismes Gram-négatifs sensibles à la céphalothine et légèrement 5 moins actifs contre des souches de Pseudomonas et des souches résistant à la céphalothine.

% 20

’ - TABLEAU I

» , Activité in vitro de pénicillines agissant sur Pseudomonas d’après la technique de dilution en milieu gélose(gélose Mueller-ïïinton)

Concentration inhibitrice minimale (μδ/ml) ,

Pipera- uaroéni-

Organismes_ BB-P 652 BB-P 660 BB-P 661 cilline ..fiilli&g.

S. aureus Smith 6,3 6,3 6,3 0,8 0,2 S. aureus BX-1633 12,5 12,5 12,5 3,1 3,1 E. coli Juhl 0,8 6,3 0,4 1,6 3,1 K. pneumoniae A9977 0,05 0,8 0,025 0,3 1,6 P. mirabilis'A9900 0,8 12,5 0,4 0,8 0,8 P. vulgaris A9539 0,8 >100,0 0,4 0,4 1,6 E. cloacae A9656 1,6 12,5 1,6 1^6 1,6 P. aeruginosa A15150 50,0 >100,0 12,5 3,1 25,0 P. aeruginosa A9843 3,1 >100,0 0,8 6,3 100,0 P. aeruginosa A20717 6,3 >100,0 0,8 25,0 >100,0

TABLEAU II

Activité relative moyenne ($) de BB-P 652, BB-P 660 et BB-P 661

Activité relative moyenne %* (carbénicilline =100$ )

Nombre de BB_P bb_p BB-P Pinéra- Carbéni-G-roupes d’organismes souches 652 660 661 cilline cilline S. aureus 6 25 22 22 56 100

Organisme G-ram-négat if ( Gh-I ) 13 1780 2003030 360 100

Organisme G-ram-négatif(G-n-II) 6 H2 6 178 224 100

Ps. aeruainosa 64 271 26 418 637 100 MMMNi - - -.....

___________________________ . Moyenne géométrique des CBi** • « « , . rs\ de la carbénicilline ^ Activité relative moyenne ($) —-_______ x ^qo Λ * Moyenne géométrique des CIM** • ** = concentration inhibitrice du composé d’essai minimale

TABLEAU III

* 21

Ar.-CH-CÛNH-r-"'''CH ^ ο o Ilïï cr cooh ή

EtN N-CO

w v d^50 (souris» voie Taux sanguin intramusculaire) (voie intramusculaire, U° de S. E. coli Ps. aeruq. Concen- Période

Ar cod-e Smith Juhl A9843 mari male _ mg/kg mg/kg mg /kg ug/ml min.

BB-P 6061 X=/(D) lot 1 0,8 3,3 35 4,9 44 {2) lot 2 45 25 6,2 302 lot 3 40 9 29 HO_ HO^V BB-P 652 4,5 1,8 30 8,3 32 \=/(DL) 4,5 39 BB-P 660 7,3 7,2 >100 4 39 W(L) ΗΟγ”BB-P 661 6,25 1,8 25 4 28 W(D) - pipéracilline (produit Toyama "T-1220" ) 2 voie d'administration sous-cutanée * ’ . 22

TABLEAU IV

Activités bactériostatique. et bactéricide de BB-P661 et de la pipéracilline contre 32 souches d'Entero-bacteriaceae dans le bouillon de Mueller-Hinton

Ν'” de ”” BB-P66Î Pipéracilline Organisme souche A CIM CBM CIM C3M

Escherichia coli 15119 11 11 -- 9660 0,5 1 0,5 0,5 20102 2 2 2 2 20081 2.4 4 4 20766 2 2 2 2 21214 2 2 2 2 21219 2 2 2 2 .

Klebsiella pneumoniae 9977 1 1 1 1 20452 2 2 2 4 20465 2 2 2 4 9867 2 8 8 l6 9662 2 8 16 52 20577 2 2 2 2 20276 12 8 8

Enterobacter cloacae 20650 32 32 88 — - 9453. 4 4 2 * 2 15154 l6 16 44 21029 4 4 4 4

Enterobacter aerogenes 21155 12 44 21044 1 2 4 4 20339 11 4 4

Proteus mirabilis 9900 0,5 1 0,5 0,5 -- 9644 0.5 2 0,5 0,5 20046 1 1 0,25 0,5 20523 0,5 1 0.25 0,5 20122 0,13 0,25 0)25 0,25

Proteus vulgaris 21557 8 250 16 63 -- 21558 2 250 12 21559 2 4 1 1

Proteus rettgeri 9637 0,25 0,5 0,03 0,.03 -- 2q6^5 χ ± 0,25 0,25 15167-2 1 2 0,5 1 CIM = concentration inhibitrice minimale ^g/ml). CBM = concentration bactéricide minimale (ug/ml), déterminée sur la base d'une perte de viabilité de. 99,9ς% à partir d'une population cellulaire initiale moyenne de 2 x 1CT cellules/ml.

23 >

Taux sanguins de BB-P661 et de pipéracilline chez les souris après administration intramusculaire de 40 mg de substance acti've/kg de poids corporel _ , Taux sanguin (μς/ηπΐ)

Compose 15 30 45 60 90 _____minutes après administration_ BB-P66l 20,7 11,5 5 <5 <5

Pipéracilline 12f8 5,9 1,5 <1,5 <1,5

Les valeurs représentent les moyennes d'au moins deux essais ;

Elimination urinaire de BB-P661 et de pipéracilline chez le rat après administration intramusculaire d'une dose de 10 mg/kg

Pourcentage éliminé

Organisme 0-3 3-6 6-24 0-24 ' heures après administration BB-P661 27,5 0,8 <1,2 28,1

Pipéracilline 23 j 9 0,1 <0,6 24^,0

Les valeurs représentent les moyennes de deux essais. Organisme d'épreuve : S_. lutea ATCC 9341 * 24 ω *Η Η ** ι-Ρ /- ° im

m CE

rH Η (U ρ-ν ο η-p σ cm γλ eu eu (v-wd =* «λ <U . !—I Ή ,üj Ρ' "»* ** ·«** ^ ^ ^ ^ hN Tlf3'^,00'^ S9 2 Η c^o co σ\ chchs-h «is· 88 8 HHmn int-inr}.

S" .SV1 ΛΛ Λ co Ο, in .

tu tu Η Q.

C > CM Q

Η ·Η pH 4P pH fÖ •η σ υ ‘‘tu ^ o co (0 C ιΗ η o fOv iÉ SS· °. vo ^ ^

•H S uS OOCOH OOJOH

, ÛO —

«3 4P

5 ι-H tu tu n

Ό <U

>

4-> ·Η JJ

0)44¾

Hm 2 „ ΟΜΠ <J\0\

So 8 H £"· ΓΛΗ Γ<ΛίΛ fT\ VOIS· Γπ C\ 0 | Λ «ta W» ·* ^ «M. ^ ^

ο, I ' p £ -^CO OJ4J- jS--=r O OO OO VQ ΓΛ H CM ff\lT\ft\S

i έ ' ,. ίβ— ^^7 2 H -=tcu^in 03 (0 M cn Λ.

aii ri-p^ ü ; tu , io cn

Ό w CL OE

tu I LTW

tu rH ta pm D ra ' cq m σ -P ; •h c 4P tu 3E ^ d voinin

0) ·Η g; ,_i CU O LPt.OCM CU

Q1hHE*s~' *» ·« — r*.

Iü SU U X ° o w fC\ Η Ο Ο Ο O

Ci Q. Cn MD

su x ! i n s: tu ^

4P

in ;

'tu C

4P Ο λ

H H W

Ü 4P tü

(0 υ e „ A

U 0) 10 CU CU 4j-4i- 4j-.=r pr\ OO ΙΓΟΓι VOIS OO -=ί--=j-.=* 43- •hmh, tUtU-H OO OO OO O OO OO OO OO oooo

4h C ; >C|C HH HH HH H H H HH HH HH rlrlHH

m *H ' D X> (0

ω dl ε P X X Xf-i X X X X X XX NW XX X X X X

W U O Sh

Ci aco CTiCTi CU CU invo H -=r in COCO ΟΛΗ ISIS CU CU ΓΛ-=ΐ· 3 Ci3 '— -

tu V

•H

in 3

rH

aj tu <u tu cd cd cd cd ' en cq cn 0) Μ ·Η Ή ·Η Η Η Ο Ε Ο £ £ £ r-i rH c; w G Ο Ο Ο Ή <H Ή •H « g g g ,3 O bfl C b£333HHcdcd3 Ό O 0) tU 0)0 rH H C?» G SH O Ci cd σι i >;sr £ tn fil· sn OO OH HO HO tu ΓΛ

Ci £JO piX) fliO PH OO OH so Ein cd =3- o o ir\ co |in o in ctn h co ·,σ> ·,σ> · Οι · h · ολ · h · cri · eu · cri cqi<; cnl< wl< xjk p£i|cd h|< cu|< a.|< a.|< 25 fc ί * ! k ' £Q ; d J ; -x

3 10 : C

® *h +> ; o •H d Cl H 03 ΙΛ 3 5 ~ 4J <u 0! 30 <u s ; ® o c · o

rd W C®'-' CO ® <D [J -H

a ^ î in σ ιβ

(0 00 CO-UiH

Φ ι-H tH®\ CD 'Φ -H > (1) 3 d τίΜσι < -u - α u 4J N U^r ε '0 1-t * O) C (U Φ^"·" “ (0 *03 O a d w -u w coin e ÜO Ό n OC'® v< ® Q ^ C O d Φ ul d

Φ W *H q7 «HaO^-U

ça) Û4Q σσ> iü < c

•H > 3 U3 W .H

rd ·Η d CO Efl φ ·* ·

rd 4J '-s IDrl (Dit' (!) C

•H® s i—I CO VO β(Μ II u«)rl o

OO HE H < 3 3 00 O *H

(θ'® υ\ · φ ο σ\ > -y de en cu|4-» je w < υ '® ι 3. ® u ® û ε ^ ® oj «) 3) ® 4-ι ή (ο ό ο φ ® a c - ad ο a ·η ·η ο ω <η ® c W ·> © ® σι υ ο ® γη η -y a < ο ® ε'® , ® ο > 3 J) 01 ® 5 3 ® Φ © φ ·Η /φ Ό W g Ο ·Η d c © d ® g w η ·η w a a a y > ® ·η ® <υ ι -a ® '<ΰ -Η +4 ω Λ τ~ι '0) 4J ’Ο'-Ν OjCVJ © ® 3 4J '© φ

V< *Η 5“.en <*> ·ν X)dUU»'4JvH

4-> C U ''v ·Η ΙΠ d rd C Φ (O

3 ® en O ® a î ® ε 3 © cm a © o -y Q ·Η ^ .H<3*CO® ; ® d d W σ<Λ|οθ . d'® 3 ·» ® σι ® 'OQ O (O '© U3 » < d inif+Jd'# 3 -y® ·"> UldDOd J) w m O d C II) H £ '® w ® © cm d © en o

:JJC J < +1 4J c (JH

' Π H S £ H ° ° C50 U*H > d ·Η _j_j ι—ii—ι ·· ®-y 3 a c uu ®e® -y •H® doa * * * * c ; Ή u-ι a c d -f -f k\._i ® μ-i c ω~ ο ΓΛΗ ε ι ω ·η - ® ; Ό -y •Η : ® d cd Cd . ν οο ω « ; ο ο ,2 m C Ö Ό ρ Ή ·Η nj Μ ^ ^ Ε ι C d Κ\ d CTi 1 5 ©sr ©Cn> £ 5> äES ®lo £ d O O q ° dS 0)1¾ 8

Exemple 2. - * t 26 «

La préparation du composé BB-P661, c'est-à-dire l'acide 6-[-D-a-(4-éthyl-2,3-dioxo-l-pipérazinocarboxamido)-a-(3,4-dihydroxyphényl)acétamido]pénicillanique par la mé-5 thode à l'anhydride mixte, a été décrite ci-dessus dans l'exemple 1. L'analyse par chromatographie en phase liquide sous haute pression a récemment révélé que le produit contenait au moins cinq composants. Le produit désiré a été isolé successivement par chromatographie préparative en 10 phase liquide sous haute pression.

Purification du composé BB-P661 brut par chromatographie ; en phase liquide sous haute pression . Attendu qu'un échantillon brut de 19,8 g de BB-P661 préparé par la méthode à l'anhydride mixte illustrée 15 par l'exemple 1 présentait cinq pics A, B, C, D et E sur son Chromatogramme analytique en phase liquide sous haute pression, on l’a fractionné en cinq portions par chromatographie préparative en phase liquide sous haute pression (système "Waters" 500, cartouche jiC1Qf solvant : CH3CN/H20 = 10/90). 20 Le résultat est reproduit ci-dessous : N° de la fraction Pic__Poids (g)

Fraction 1 A, (B, 0,67 mineur)

Fraction 2 B 1,9 BB-P661 25 Fraction 3 C 1,7

Fraction 4 D 1,3

Fraction 5 E 2,8

Parmi ces fractions, les fractions N° 2 et 4 sont douées d'activité contre les organismes du genre 30 Pseudomonas. La fraction 2 a été lyophilisée en donnant 1,9 g du produit désiré (BB-P661) fondant à 205-2l0°C en se décomposant progressivement.

RMN Î SD2° 1,17 (3H, t, 7,5 Hz, N-CH2ÇH3), 1,43 Ppm (6H, s, 2-CH3), 3,25-3,75 (4H, m, 35 N-CH2CH3 et N-CH2-), 3,75-4,10 (2H, m, N-CH2-), 4,16 (1H, s, 3-H), 5,25- 5,50 (3H, m, 5-H, 6-H et CHCO), 6,80- 7,00 (3H, m, H de phényle).

t

V

27

Exemple 3» -

Le procédé à l'ester actif utilisant le N-hydroxysuccinimide (NOS) a été appliqué à la préparation du composé BB-P661 en vue d'obtenir un meilleur rendement 5 que celui que l'on obtient par le procédé à l'anhydride » mixte.

Préparation par le procédé à l'ester actif hcl · ho_ , HO-/ \-CHCOOH ' VfCOtiH-j- JJ 1. NOS, DCC \^=/ | J-»-

0 0^ 2· δ-ΑΡΑ 0 0 HH <T C00H

* nji ' j_li c2hsV VJ-o CjHj-/ nJ-0 2, 3B-?66l

On agite à la .température ambiante pendant 2 heures un mélange de 42,1 g (0,12 mole) d'acide D-a-(4-10 éthyl-2,3-dioxo-l-pipérazinocarboxamido)-a-(3,4-dihydroxy-phényl)acétique (t)t 16,56 g (0,144 mole) de N-hydroxy-succinimide et 29,7 g (0,144 mole) de dicyclohexylcarbo-diimide (DCC) dans 600 ml de tétrahydrofuranne (THF) anhydre et on recueille par filtration l'urée précipitée. On 15 ajoute le filtrat en une seule portion à une solution refroidie sous agitation de 38,9 g (0,18 mole) d'acide 6-aminopénicillanique et de 33 ml (0,234 mole) de triéthyl-amine dans 400 ml d'eau. On agite le mélange à la température ambiante pendant 3 heures et on le concentre à un 20 volume de 400 ml en vue d'éliminer la majeure partie du THF. On traite le concentré avec du carbone activé et on acidifie le filtrat à un pH égal à 3 par addition d'acide phosphorique à 40 %, ce qui donne le produit sous la forme d'un précipité huileux que l'on sépare et que l'on triture 25 avec de l'eau. La substance solide résultante est recueillie par filtration, lavée à l'eau et déshydratée sous vide ( 28 sur du pentoxyde de phosphore en donnant 29,0 g de produit brut (£ ). La liqueur-mère est extraite avec deux fois 500 ml d’acétate d'éthyle. Les extraits rassemblés sont lavés successivement avec de l'eau et avec une solution aqueuse sa-5 turée de NaCl, déshydratés sur du sulfate de magnésium anhydre et évaporés à sec. Le résidu est trituré avec de l’éther, ce qui donne un supplément (4,8 g) de composé (2_). Une portion du produit brut (1,3 g) est chromatographiée sur 30 g de gel de silice (gel ”C-200”, Wako), l’élution 10 étant effectuée successivement avec du chloroforme et un mélange à 10:1 de chloroforme et de méthanol. Les fractions * intéressantes sont recueillies et évaporées à sec en don- * nant 420 mg du composé 2_ qui présente un seul pic à 1 ' ana- 9 lyse par chromatographie en phase liquide sous haute pres-15 sion.

Le procédé de l’invention se prête à une application industrielle.

Claims

1. L'acide de formule : ΠΟ ο o 1IH σ cooh C,H,--N N-0=0 \_/ » * ayant la configuration D dans la chaîne latérale en position 6, ou un sel acceptable du point de vue pharmaceuti-5 que ou un ester aisément hydrolysé de cet acide.

2. Le sel de sodium ou de potassium de l'acide suivant la revendication 1.

3. L'ester de pivaloyloxyméthyle, d'acétoxy-méthyle, de méthoxyméthyle, de. 3-phtalidyle ou de 5-inda- 10 nyle de l'acide suivant la revendication 1.

4. Procédé de production de l'acide de formule : H<^. ho—// \\_ch-c-nh-^ |S:h | J—A— oo NH cr cooh ΛΛ C-H^-N N-C=0 \_y 1 ayant la configuration D dans la chaîne latérale en position 6, ou d'un sel acceptable du point de vue pharmaceu-15 tique ou d'un ester aisément hydrolysé de cet acide, caractérisé en ce qu'il consiste à faire réagir un composé de « 30 » è * formule : HO m-Û \\-CH-C-NH-t-[Χ6'"^<^Η3 j-N NH2 cr COOH II ayant la configuration D dans la chaîne latérale en position 6, ou un sel ou ester aisément clivable de ce composé, * avec un agent acylant de formule : * » o g Λ C-jHg-N_yï-COOH III ou avec un dérivé réactif acylant de cet agent et, si le 5 produit réactionnel renferme un groupe aisément clivable protégeant la fonction ester, à éliminer éventuellement ce groupe protecteur et, le cas échéant, à convertir (a) le produit sous la forme d’un acide libre en un sel acceptable du point de vue pharmaceutique ou en un ester physio-; 10 logiquement hydrolysé de ce produit, ou (b) le produit . sous la forme d’un sel en l’acide libre ou en un sel acceptable du point de vue pharmaceutique ou un ester physiologiquement hydrolysé de ce produit.

5. Procédé suivant la revendication 4, carac-15 térisé en ce qu’un acide libre de formule I est converti en un ester choisi entre les esters d’acétoxyméthyle, de pivaloyloxyméthyle, de méthoxyméthyle, de phtalidyle et de 5-indanyle.

6. Procédé de production de l’acide de for- 20 mule : 31 4 » •Λ * « l\ // Λ ο Η0-<^ CH-C-NH-- | 9 ΝΗ COOH ,/\ C2H5"H N-C=0 \_y $ 4 ayant la configuration D dans la chaîne latérale en posi- * tion 6, ou d'un sel pharmaceutiquement acceptable ou d'un ester aisément hydrolyse de cet acide, caractérisé en ce qu'il consiste à faire réagir l'acide 6-aminopénicillani-5 que ou un sel ou un ester aisément clivable de cet acide avec un agent acylant de formule : >V . n0—<9 Λ-ch-c-oh 0 0 : y—Il iv

25 W ayant la configuration D au niveau de l'atome a de carbone, ou avec un dérivé réactif acylant de cet agent et, si le produit réactionnel renferme un groupe aisément clivable 10 protégeant la fonction ester, à éliminer éventuellement ce groupe protecteur et, le cas échéant, à convertir (a) le produit sous la forme d'un acide libre en un sel acceptable * du point de vue pharmaceutique ou un ester physiologiquement hydrolysé de ce produit ou (b) le produit sous la forme d'un 15 sel en l'acide libre ou un sel acceptable du point de vue X * *1 ψ 4 « 32 » pharmaceutique ou en un ester physiologiquement hydrolyse de ce produit.

7. Procédé suivant la revendication 6, caractérisé en ce qu’un acide libre de formule I est 5 converti en un ester choisi dans le groupe comprenant les esters d'acétoxyméthyle, pivaloyloxyméthyle, méthoxyméthyle, phtalidyle et 5-indanyle.

8. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle renferme une quantité antibactérienne efficace 10 (a) du composé de formule I ou d'un sel acceptable du point de vue pharmaceutique ou d'un ester physiologiquement hy-drolysé de ce composé, comme défini ci-dessus, et (b) de „ la l-[L-(-)-'o-amino-a-hydroxybutyryljkanamycine A, ou un sel d'addition d'acide acceptable du point de vue pharma- 15 ceutique de ce composé, éventuellement en mélange avec un support ou diluant acceptable du point de vue pharmaceutique.

9. Composition pharmaceutique suivant la revendication 8, sous une forme propre à l'administration 20 parentérale. Λ •i