BE844377R - Peptides - Google Patents

Description

  Compositions  <EMI ID=1.1> 

  
priétés antibiotiques et un procédé pour les préparer.

  
 <EMI ID=2.1> 

  
décrit et revendiqué des peptides de formule générale

  

 <EMI ID=3.1> 


  
 <EMI ID=4.1> 

  
ou un groupe alcoyle inférieur, cycloalcoyle inférieur, cycloalcoyle inférieur-alcoyle inférieur, aryle ou aryl-alcoyle inférieur (lesdits groupes pouvant être, le cas échéant, substitués par un

  
ou plusieurs groupes amino, hydroxy, thio, méthylthio, carboxy ou guanidino pour former le groupe caractéristique d'un L-a-amino-acide existant dans la nature) ; R <2> et R3 représentent individuellement

  
 <EMI ID=5.1> 

  
 <EMI ID=6.1> 

  
peut pas représenter un atome d'hydrogène quand

  
 <EMI ID=7.1> 

  
groupe phényle) ; R4 représente le groupe hydroxy ou méthyle ; n = 0, 1, 2 ou 3 ; un astérisque seul signifie que l'atome de carbone a la configuration

  
 <EMI ID=8.1> 

  
cation autre qu'un atome d'hydrogène ; et un double

  
 <EMI ID=9.1> 

  
tion autre qu'un atome d'hydrogène, la configuration à l'atome de carbone est (R) (comme défini ciaprès),

  
et leurs sels thérapeutiquement compatibles. Ces peptides et leurs sels thérapeutiquement compatibles potentialisent l'activité d'antibiotiques, et possèdent également une activité antibactérienne. 

  
 <EMI ID=10.1> 

  
compositions comprenant un peptide de formule générale I, ou l'un de ses sels d'addition d'acides thérapeutiquement compatibles, et un antibiotique choisi parmi les suivants :
céphalothine,céphal.exine, carbénicilline, ampicilline, pénicilline G, sulbénicilline, céphazoline, céfoxitine,

  
 <EMI ID=11.1> 

  
amino}pénicillanate de (pivaloyloxy)méthyle, céphamandole, céphaloridine, céphaloglycine, phénéthicilline, méthicilline, propicilline, ticarcilline, sel d'amoxycilline-arginine, phosphonomycine, vancomycine et kanamycine sont particulièrement intéressants au point de vue de la potentialisation obtenue

  
de l'antibiotique.

  
La présente invention est basée sur cette découverte

  
et elle a donc trait à une composition ayant des propriétés antibiotiques, cette composition comprenant un peptide de

  
 <EMI ID=12.1> 

  
compatibles,ainsi qu'un antibiotique,comme décrit ci-dessus.

  
Dans le contexte, le terme "alcoyle inférieur" couvre un groupe alcoyle linéaire ou ramifié contenant de préférence 1 à 6 atomes de carbone (par exemple méthyle, éthyle, propyle, isobutyle, etc.). Le terme "cycloalcoyle inférieur" couvre des groupes alcoyle cycliques contenant de 3 à 6 atomes de carbone. Le terme "aryle" couvre de préférence des groupes mononucléaires, tels que phényle, pouvant être substitués

  
en une ou plusieurs positions par un groupe hydroxy, halogéno, nitro, alcoyle inférieur ou alcoxy inférieur. Le terme "halogène" couvre les atomes de fluor, chlore, brome et iode,

  
et le terme "alcoxy inférieur" couvre des groupes de structure -0-(alcoyle inférieur), dans lesquels le groupe alcoyle inférieur a la même signification que ci-dessus. Le terme "groupe caractéristique d'un a-amino-acide du type de ceux

  
se trouvant habituellement dans les protéines" signifie que le radical R d'un a-amino-acide naturel de formule générale
 <EMI ID=13.1> 
  <EMI ID=14.1> 

  
exemple, si l'amino-acide est la glycine, le radical R sera un atome d'hydrogène; dans l'alanine, le radical R représentera le groupe méthyle ; dans la leùcine, le radical

  
R représentera le groupe isobutyle et dans l'acide glutamique, le radical R représentera le groupe 2-carboxyéthyle. R peut aussi représenter un radical relié à l'atome d'azote du groupement amino (avec la perte d'un des atomes d'hydrogène attachés à celui-ci), formant ainsi un cycle azoté comme dans la proline et l'acide pyroglutamique.

  
 <EMI ID=15.1> 

  
autre qu'un atome d'hydrogène, la configuration de l'atome de carbone marqué d'un double astérisque sera R, c'est-à-dire celle que l'on obtiendrait en remplaçant le groupe carboxy d'un L-a-amino-acide existant dans la nature par un atome de phosphore.

  
On notera que dans la formule générale I, lorsque n =

  
 <EMI ID=16.1> 

  
Les peptides de formule générale I préférés sont ceux dans lesquels R2 et R3 représentent indépendamment un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle, isopropyle, isobutyle,

  
 <EMI ID=17.1> 

  
 <EMI ID=18.1> 

  
groupe hydroxy et n = 0 ou 1.

  
Comme exemples de peptides de formule générale I, on peut citer :

  
acide (L-alanylamino)-méthylphosphonique,

  
acide (L-valylamino)-méthylphosphonique, 

  
 <EMI ID=19.1>   <EMI ID=20.1> 

  
spécialement préféré.

  
Les sels thérapeutiquement compatibles de peptides

  
 <EMI ID=21.1> 

  
acides forts tels que les acides méthane-sulfonique, paratoluène-sulfonique, chlorhydrique, bromhydrique, sulfurique, etc., et avec des bases telles que l'hydroxyde de sodium etc.

  
Les antibiotiques mentionnés plus haut sont des substances connues et peuvent être obtenus selon des procédés connus.

  
Le rapport de poids du peptide de formule générale I,  <EMI ID=22.1>  l'antibiotique peut varier dans de larges limites. En général, les compositions peuvent contenir le dérivé peptidique, ou

  
 <EMI ID=23.1> 

  
dans un rapport compris entre environ 100:1 et 1:100, de préférence de 1:64 à 64:1, et spécialement de 1:16 à 16:1.

  
Le procédé de la présente invention pour la préparation des compositions sus-mentionnées consiste à mélanger le peptide de formule générale I, ou l'un de ses sels thêrapeutiquement compatibles,avec l'un des antibiotiques sus-mentionnés. Ce procédé peut être exécuté de manière connue. Dans une mise

  
en oeuvre préférée de 'ce procédé, le peptide de formule générale I, ou l'un de ses sels thérapeutiquement compatibles, et l'antibiotique sont utilisés dans un rapport de poids de 1:100 à 100:1, particulièrement de 1:64 à 64:1 et, de préférence, de 1:16 à 16:1.

  
Les compositicns de la présente invention sont actives contre un large spectre de bactéries à Gram positif et Gram négatif, comme par exemple Escherichia coli, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, 'Streptococcus faecalis, Klebsiella aerogenes et Klebsiella pneumoniae. Ils sont donc utiles pour combattre et prévenir

  
un grand spectre d'infections bactériennes et peuvent être administrés oralement ou parentéralement, la voie orale étant préférée.

  
L'activité in vitro des compositions de la présente invention peut être démontrée comme suit :

  
On prépare des solutions concentrées au rapport désiré des mélanges du peptide de formule générale I et de l'antibiotique. On dilue ensuite afin d'obtenir un spectre approprié de concentration totale des mélanges. Des portions de ces dilutions sont mélangées avec un milieu agar nutritif approprié dans des coupelles de petri, puis on laisse l'agar

  
se déposer. On prépare des coupelles similaires en utilisant

  
le milieu nutritif d'agar contenant le peptide seul et l'antibiotique seul. On inocule ensuite les organismes-test sur

  
i  <EMI ID=24.1> 

  
Les coupelles sont ensuite maintenues à 37[deg.] pendant 24 heures, après quoi la concentration inhibitrice minimum (C.I.M.)

  
est constatée, puis les indices fractionnels de concentration inhibitrice (I.F.C.I.) calculés. Les résultats obtenus au moyen d'un peptide de formule générale I représentatif,

  
 <EMI ID=25.1> 

  
et des antibiotiques représentatifs sus-mentionnés sont donnés dans les tableaux I et II ci-après :

Tableau I

  
Activité de combinaisons de divers antibiotiques avec

  
 <EMI ID=26.1> 

  
Staphylococcus aureus

  

 <EMI ID=27.1> 
 

  
 <EMI ID=28.1> 

  
souches de Klebsiella aerogenes et Proteus mirabilis

  

 <EMI ID=29.1> 


  
L'activité in vivo des compositions selon l'invention peut être démontrée comme suit :

  
Des souris sont infectées par voie intrapéritonéale

  
 <EMI ID=30.1> 

  
intervalles (déterminés à l'avance) après l'infection, on traite des groupes de souris par voie sous-cutanée avec des doses graduelles d'antibiotique, de peptide et de combinaisons

  
des deux. Pour chaque traitement, on compte le nombre de souris survivant 7 jours à compter du début de l'infection, puis calcule la dose empêchant la mort dans 50% des cas (DC50)' boa" 

  
 <EMI ID=31.1> 

  
pour une combinaison d'antibiotique et de peptide est calculé de manière normale. Les résultats obtenus avec l'acide

  
 <EMI ID=32.1> 

  
peptide de formule générale I et les antibiotiques représentatifs sus-mentionnés sont indiqués au tableau III ciaprès : 

  

 <EMI ID=33.1> 


  

 <EMI ID=34.1> 
 

  
 <EMI ID=35.1> 

  
administrées sous forme de préparations pharmaceutiques, qui font également partie de la présente invention et comprennent un peptide de formule générale I, ou un sel thérapeutiquement compatible, un antibiotique comme défini ci-dessus et un support pharmaceutiquement acceptable.

  
En tant que support pharmaceutiquement acceptable, on peut utiliser n'importe quel véhicule solide ou liquide compatible avec les peptides de formule générale I, leurs

  
sels thérapeutiquement compatibles, et avec les antibiotiques spécifiés ci-dessus, et appropriés pour l'administration thérapeutique. Il peut s'agire de substances organiques

  
ou inorganiques appropriées pour l'application antérale

  
(par exemple orale) ou parentérale, comme par exemple l'eau,

  
la gélatine, le lactose, les amidons, le stéarate de magnésium, le talc, les huiles végétales, la gomme arabique,

  
les polyalcoylèneglycols, la vaseline etc.

  
Les préparations pharmaceutiques peuvent être préparées de manière connue et peuvent se présenter sous

  
forme solide (par exemple comprimer, dragées, suppositoires

  
ou capsules), ou sous forme liquide (par exemple de solutions suspensions ou émulsions). Ces préparations pharmaceutiques peuvent être soumises à tout traitement pharmaceutique conventionnel tel que stérilisation et peuvent contenir des adjuvants tels que des agents conservateurs, stabilisants, mouillants, émulsifiants, des sels régularisant la pression osmotique ou des composés-tampons. Lorsqu'un tampon est utilisé, le pH de la préparation variera naturellement dans

  
de larges limites bien connues dans la pratique pharmaceutique.

  
La quantité de peptide de formule générale I, ou d'un

  
de ses sels thérapeutiquement compatibles, et d'antibiotique présents dans la préparation pharmaceutique de l'invention variera dans de larges limites en fonction de facteurs tels

  
que le peptide choisi ou son sel, l'antibiotique choisi, la voie d'administration et l'infection à traiter. Le dosage administré quotidiennement variera également dans de larges limites et sera adapté aux besoins individuels et aux conditions  <EMI ID=36.1> 

  
du médecin. Par exemple, un dosage quotidien pour administration orale peut comporter de 750 mg à 1500 mg d'une combinaison d'ingrédients actifs (par exemple un peptide

  
de formule générale I,ou un sel thérapeutiquement compatible de ce dernier,et un antibiotique). En outre, une dose quotidienne parentérale pourra par exemple comporter environ
200 mg à 2000 mg d'une combinaison de substances actives. Les doses quotidiennes peuvent être administrées par dose unique ou subdivisée .

  
Les peptides de formule générale I et leurs sels thérapeutiquement compatibles sont préparés par un procédé caractérisé en ce qu'on a) scinde le(s) groupe(s) protecteur(s) d'un composé de formule générale
 <EMI ID=37.1> 
 dans laquelle R , R et R ont respectivement les mêmes significations que R , R<2> et R<3> sauf que tout groupe amino présent peut être sous forme protégée et tout autre groupe fonctionnel pouvant être présent se présente le cas échéant sous forme

  
40 41 protégée, R représente le groupe méthyle ou R ,  R41 représente un groupe hydroxy ou un groupe alcoxy

  
 <EMI ID=38.1> 

  
drogène ou un groupe protecteur et l'astérisque

  
simple ou double et n ont la même signification

  
que ci-dessus,

  
selon des méthodes connues

  
ou b) sépare un peptide diastéréo-isomère (R,S) de formule générale I en ses diastéréo-isomères et isole le diastéréoisomère (R), et convertit le cas échéant un composé de formule   <EMI ID=39.1>  générale I obtenu en un sel thérapeutique'

  
Le(s) groupe(s) amino éventuellement présent(s) dans

  
 <EMI ID=40.1> 

  
peuvent être protégés par tout groupe protecteur d'amino bien connu en chimie des peptides. Comme groupes protecteurs d'amino particulièrement appropriés aux buts de l'invention, on peut citer les groupes aralcoxycarbonyle, notamment benzyloxycarbonyle, et t.-butoxycarbonyle. Le groupe protecteur d'amino peut aussi être un groupe formyle, trityle, ou trifluercacëtyle. Tout groupe carboxy ou hydroxy pouvant

  
 <EMI ID=41.1> 

  
générale II peut être protégé respectivement par un groupe protecteur classique de carboxy ou d'hydroxy. Un groupe carboxy peut par exemple être protégé par conversion en un ester alcoyliaue (par exemple l'ester t.-butylique) ou un ester aralcoylique (par exemple l'ester benzylique). De plus, un

  
groupe hydroxy peut par exemple être protégé au moyen d'un

  
groupe aralcoxy-carbonyle (par exemple benzyloxy-carbonyle), alcanoyle (par exemple acétyle, propionyle, etc.), aroyle (par exemple benzoyle), alcoyle (par exemple t.-butyle) ou aralcoyle
(par exemple benzyle). La protection d'autres groupes fonctionnels

  
 <EMI ID=42.1> 

  
 <EMI ID=43.1> 

  
la formule générale II peut être tout groupe protecteur d'amino

  
 <EMI ID=44.1> 

  
La scission du (ou des) groupe(s) protecteur(s) présent(s) dans un composé de formule générale II est effectuée selon des méthodes connues, c'est-à-dire des méthodes effectivement utilisées ou décrites dans la littérature sur la scission de groupes protecteurs. Ainsi,'par exemple, un groupe aralcoxy-carbcnyle
(par exemple benzyloxy-carbonyle) ou t.-butoxycarbonyle peut être scindé par hydrolyse (c'est-à-dire par traitement avec un mélange de bromure d'hydrogène et d'acide acétique glacial). Un groupe aralcoxy-carbonyle (par exemple benzyloxy-carbonyle) peut aussi être scindé par hydrogénolyse (par exemple en présence de charbon palladié ).-Le groupe t.-butoxy-carbonyle peut  <EMI ID=45.1> 

  
Un groupe alcoxy inférieur représenté par R et/ou R peut être converti en un groupe hydroxy par. traitement avec un mélange de bromure d'hydrogène dans de l'acide acétique glacial ou au moyen de triméthylchlorosilane, suivi d'une hydrolyse aqueuse. On notera que la scission des groupes protecteurs peut être effectuée en une seule ou plusieurs phases selon la nature des groupes protecteurs présents.

  
 <EMI ID=46.1> 

  
diastéréo-isomère (R) _peuvent être effectuées selon des méthodes

  
 <EMI ID=47.1> 

  
chromatographie liquide à haute pression.

  
Les substances de départ de formule générale II peuvent par exemple être préparées par condensation d'un composé de formule générale

  

 <EMI ID=48.1> 


  
 <EMI ID=49.1> 

  
double et simple ont la même signification que cidessus,

  
avec un a-amino-acide, un dipeptide, un tripeptide ou un tétrapeptide protégés de manière adéquate, ou un de leurs dérivés réactifs, selon le cas.

  
Ainsi, quand on emploie un composé de formule générale III dans laquelle n = 0, un tel composé peut être condensé avec un a-amino-acide protégé de manière adéquate ou l'un de ses dérivés  <EMI ID=50.1> 

  
laquelle n = 0, ou avec un dipeptide protégé de manière adéquate ou l'un de ses dérivés réactifs pour donner un composé de.formule générale II,dans laquelle n = 1, ou avec un tripeptide protégé de manière adéquate ou l'un de ses dérivés réactifs pour donner un composé de formule générale Il,dans laquelle

  
n = 2, ou avec un tétrapeptide protégé de manière adéquate ou l'un de ses dérivés réactifs,pour donner un composé de formule générale II dans laquelle n = 3.

  
 <EMI ID=51.1> 

  
n = l,peut être condensé avec un a-amino-acide protégé de Tanière approprier ou un de ses dérivés réactifs pour donner un composé de formule générale II,dans laquelle n = 1, ou avec un dipeptide protégé de manière appropriée ou l'un de ses dérivés réactifs, pour donner un composé de formule générale II,dans laquelle

  
n = 2, ou avec un tripeptide protégé de manière appropriée ou l'un de ses dérivés réactifs pour donner un composé de formule 'générale II,dans laquelle n = 3.

  
D'autre part, un composé de formule générale III,dans laquelle n = 2,peut être condensé avec un a-amino-acide protégé de manière adéquate ou l'un de ses dérivés réactifs pour donner un composé de formule générale II,dans laquelle n = 2, ou avec un dipeptide protégé de manière appropriée ou l'un de ses dérivés réactifs pour donner un composé de formule générale II, dans laquelle n = 3.

  
Enfin, un composé de formule générale III,dans laquelle n = 3,peut être condensé avec un a-amino-acide protégé de manière adéquate ou l'un de ses dérivés réactifs pour donner un composé de formule générale II,dans laquelle n = 3:

  
Par ailleurs, on peut préparer les composés de formule générale II en effectuant la condensation ci-dessus au moyen  <EMI ID=52.1> 

  
manière connue le composé (R) du produit (R,S) résultant,

  
par exemple par cristallisation, chromatographie ou cristallisation fractionnée au moyen d'une base appropriée, par exemple

  
 <EMI ID=53.1> 

  
La condensation mentionnée ci-dessus peut être effectuée selon des méthodes connues en chimie des peptides, par exemple par la méthode de l'anhydride mixte, de l'azide, de l'ester activé ou du chlorure d'acide.

  
Selon une méthode, un composé approprié de formule générale III peut être condensé avec un amino-acide (di-, tri- ou tétrapeptidique selon le cas) protégé de manière appropriée, la fonction carboxy terminale étant un radical d'anhydride mixte formé avec un acide organique ou inorganique. Avantageusement, un tel amino-acide di-, tri- ou tétrapeptidique portant une fonction carboxy libre est traité avec une base tertiaire telle qu'une trialcoylamine inférieure (par exemple une triéthylamine) ou une N-éthylmorpholine dans un

  
 <EMI ID=54.1> 

  
1,2-diméthoxyéthane, dichlorométhane, toluène, éther de pétrole ou des mélanges de ceux-ci) et le sel résultant est mis en réaction avec un ester d'acide chloroformique (par exemple ester butylique ou isobutylique) à basse température. L'anhydride mixte obtenu est ensuite condensé avantageusement in situ avec le composé de formule générale III.

  
Dans une autre méthode, un composé de formule générale III approprié peut être condensé avec un amino-acide (di-,

  
 <EMI ID=55.1> 

  
priée, le groupe carboxy final étant sous forme d'un

  
azide d'acide. Cette condensation est effectuée de préférence dans un solvant organique inerte tel que le diméthylformamide ou l'acétate d'éthyle à basse température. 

  
 <EMI ID=56.1> 

  
formule générale III approprié avec un amino-acide, (di-, tri- ou tétrapeptidique selon le cas) protégé de manière appropriée.. la fonction carboxy finale étant sous forme d'un groupe ester actif (par exemple p-nitrophényle, 2,4,5-trichlorophényle

  
 <EMI ID=57.1> 

  
effectuée avantageusement dans un solvant organique inerte tel

  
 <EMI ID=58.1> 

  
représentent un groupe alcoxy inférieur, dans un'alcanol aqueux (par exemple éthanol aqueux).

  
Selon encore une autre méthode, un composé approprié de formule générale III peut être condensé avec un amino-acide
(di-, tri- ou tétrapeptidique selon le cas), protégé de manière appropriée, la fonction carboxy finale se présentant sous forme de chlorure d'acide. Cette condensation est effectuée

  
 <EMI ID=59.1>  

  
 <EMI ID=60.1> 

  
O* 0 . 90

  
On prépare des capsules de gélatine dure de la teneur suivante :

  

 <EMI ID=61.1> 


  
 <EMI ID=62.1> 

  
la céphalexine sont individuellement moulus, mélangés et granulés avec une pâte à 10% d'amidon de mais contenant l'aérosol OT. Le granulé humide est séché, passé à travers un tamis, mélangé avec l'aérosil et finalement mis en capsules de gélatine dure.

Exemple 2

  
On prépare des caspules de gélatine dure de la teneur suivante :

  

 <EMI ID=63.1> 


  
Ces capsules sont préparées de manière analogue à celle décrit à l'exemple 1. 

  
 <EMI ID=64.1> 

  
Un mélange poudreux pour la préparation d'une solution d'injection contient les ingrédients suivants :

  

 <EMI ID=65.1> 


  
Les ingrédients sont moulus individuellement et bien mélangés. Le mélange est placé dans des récipients appropriés sous conditions stériles, puis les récipients sont scellés.

  
Afin de préparer une solution d'injection, le mélange poudreux ci-dessus est dissous dans 2 ml d'eau pour injection.

Exemple 4

  
On prépare une solution d'injection en dissolvait 1,0 g de pénicilline G dans 2 ml d'une solution contenant 100 mg

  
 <EMI ID=66.1> 

  
tampon approprié. Un tampon approprié contient les ingrédients suivants :

  

 <EMI ID=67.1> 


  
Les exemples suivants illustrent en détail la manière

  
 <EMI ID=68.1>  

  
 <EMI ID=69.1> 

  
14,1 g (0,168 mole) de bicarbonate de sodium solide sont ajoutés à une solution de 7 g (0,056 mole) d'acide
(lR,S)-l-aminoéthylphosphonique dans 280 ml d'eau et 140 ml d'éthanol sous agitation à 0[deg.]. Tandis que l'on agite ce mélange

  
 <EMI ID=70.1> 

  
succinimidique de N-benzyloxycarbonyl-L-alanine dans 140 ml d'éthanol chaud est ajoutée goutte à goutte en l'espace d'environ
15 minutes. Cette dernière solution est rincée avec 70 ml d'éthanol. Le mélange-hétérogène est agité pendant 1 heure

  
à 0[deg.], puis pendant encore 16 heures à la température ambiante,

  
 <EMI ID=71.1>  <EMI ID=72.1>  <EMI ID=73.1> 

  
avec 500 ml, puis 2 fois 250 ml de chloroforme, acidifiée à pH 2 avec environ 80 ml d'acide chlorhy-

  
 <EMI ID=74.1> 

  
puis 2 fois 250 ml de chloroforme. La phase aqueuse

  
est concentrée et passée à travers une colonne de résine échangeuse de cations (B.D.H., Zerolit 225, SRC 13, RS03H ;-750 g ; fraîchement régénéré dans le cycle acide). La colonne est

  
éluée avec de l'eau et l'on recueille 6 fractions de 250 ml.

  
Les 4 premières fractions sont combinées,évaporées et ré-évaporées avec de l'eau pour éliminer l'acide chlorhydrique. On obtient

  
un résidu final d'acide (lR,S)-l-[(N-benzyloxycarbonyl-L-

  
 <EMI ID=75.1> 

  
Ce dernier résidu est dissous dans 400 ml d'eau et titré à pH 4,5 avec de la benzylamine 1M; titre 75 ml ; théorie

  
56 ml. La solution résultante est concentrée et cristallisée dans l'eau pour donner 5,3 g de sel de benzylamine de l'acide

  
 <EMI ID=76.1> 

  
 <EMI ID=77.1> 

  
puis recristallisation dans l'eau, on obtient le sel de

  
 <EMI ID=78.1>  

  
 <EMI ID=79.1>  ........ 

  
 <EMI ID=80.1> 

  
acétique)] et une seconde récolte de 0,825 g [point de fusion

  
 <EMI ID=81.1> 

  
Par recristallisation de la première récolte dans l'eau, on <EMI ID=82.1> 

  
 <EMI ID=83.1> 

  
l'acide acétique).

  
 <EMI ID=84.1> 

  
 <EMI ID=85.1> 

  
est dissous dans 4 ml d'hydroxyde d'ammonium 2N, passé dans une colonne de résine échangeuse de cations (B.D.H.. Zerolit
225, SRC 13, RS03H ; 120 g ; fraîchement regénéré dans le

  
 <EMI ID=86.1> 

  
acide qui est concentré à 100 ml. A ceci, on ajoute successivement 100 ml de méthanol, 0,3 g de catalyseur de charbon palladié à 5% et 3 gouttes d'acide acétique glacial. Le mélange est hydrogéné à la température ambiante et à la pression atmosphérique. Le catalyseur est séparé par filtration et le solvant

  
 <EMI ID=87.1> 

  
50 ml de n-propanol pour donner 0,6 g d'un solide gommeux fondant à environ 275-280[deg.] (déc.). Après une recristallisation ultérieure dans l'eau et l'éthanol, on obtient 0,2 g d'acide
(lR)-l-(L-alanylamino)-éthylphosphonique fondant à 295-296[deg.]

  
 <EMI ID=88.1> 

Exemple B

  
Une solution de 30 g (0,24 mole) d'acide (1R,S)-1-

  
 <EMI ID=89.1> 

  
sodium 4N est agitée à 14[deg.] tandis que 180 ml (0,72 mole) d'une solution d'hydroxyde de sodium 4N et 102 g (0,60 mole) de

  
 <EMI ID=90.1> 

  
est poursuivie et au bout de 2 heures la température atteint

  
rJf,  <EMI ID=91.1> 

  
température ambiante. 600 ml d'éther sont ensuite ajoutés et le mélange est agité vigoureusement pendant 2 heures pour extraire le chloroformiate de benzyle en excès. Les phases

  
 <EMI ID=92.1> 

  
 <EMI ID=93.1> 

  
rature est maintenue en-dessous de 10[deg.] . On concentre fortement la pâte obtenue pour éliminer le gaz carbonique. Le résidu

  
est dissous dans 100 ml d'hydroxyde de sodium 2N et 50 ml d'eau, passé dans une colonne de résine échangeuse de cations
(B.D.H., Zerolit <2><2>5, SRC 13, RS03H ; 750 g ; fraîchement régénéré dans le cycle acide) et élué avec de l'eau. On obtient ainsi environ 3,2 litres d'éluat acide qui sont évaporés à la température ambiante et ré-évaporés avec 3 fois 500 ml d'eau.

  
On dissout le résidu dans l'eau et le laisse cristalliser.

  
Les cristaux sont séparés par filtration, lavés avec de

  
l'eau glacée et séchés ; rendement 39,2 g ; point de fusion
111-113[deg.] (déc. ). Par évaporation des filtrats combinés, puis recristallisation dans 75 ml d'eau et 10 ml de méthanol et réfrigération, on obtient une autre récolte de 6,51 g ; point de fusion 110-112[deg.] (déc.). On obtient un total de 45,71 g

  
 <EMI ID=94.1> 

  
qui est identifié comme étant le sel d.e monobenzylamine fondant à 196-197[deg.] (déc.).

  
42,2 g (163 mmoles) d'acide (lR,S)-l-(benzyloxycarbonylamino)-éthylphosphonique sont dissous dans 100 ml de méthanol. La solution est traitée avec une solution de 30,8 g (81,5 mmoles)

  
 <EMI ID=95.1> 

  
est agité pendant 3 heures à la température ambiante, puis pendant la nuit à 0[deg.]. Le sel de quinine de l'acide (1S)-1'(benzyloxycarbonylamino)-éthylphosphonique est séparé par filtration et lavé avec du méthanol. Les filtrats combinés sont évaporés et le résidu est dissous dans 300'ml d'hydroxyde d'ammonium 2N. La solution est extraite avec 3 fois 300 ml

  
de chloroforme. Chaque extrait de chloroforme est relavé avec
150 ml d'eau. Les extraits aqueux sont combinés, concentrés,  <EMI ID=96.1> 
(B.D.H., Zerolit. 225, SRC 13, RS03H ; 750 g; fraîchement régénéré dans le cycle acide). Par élution avec de l'eau, on obtient environ 2,3 litres d'éluat acide qui sont évaporés. Le résidu est ré-évaporé, d'abord avec 3 fois 200 ml d'eau, puis avec 3 fois 300 ml de méthanol pour donner environ 24 g d'un résidu gommeux. Cette gomme est dissoute dans 100 ml de

  
 <EMI ID=97.1> 

  
[82 mmoles ; fraîchement régénéré dans 28,4 g (82 mmoles) d'acé-

  
 <EMI ID=98.1> 

  
monium/éther de pétrole]. Le mélange est laissé au repos

  
à 0[deg.], filtré et le filtrat est lavé avec du méthanol et de 

  
 <EMI ID=99.1> 

  
brut d'acide (lR)-l-(benzyloxycarbonylamino)-éthylphosphonique

  
 <EMI ID=100.1> 

  
le méthanol). Par recristallisation ultérieure dans du méthanol et de l'eau, on obtient 33,0 g de sel de déhydroabiétylamine

  
de l'acide (lR)-l-(benzyloxycarbonyl-amino)-éthylphosphonique

  
 <EMI ID=101.1> 

  
le méthanol).

  
8,0 g (14 mmoles) de l'acide obtenu au paragraphe précédent sont répartis entre 100 ml d'hydroxyde d'ammonium 2N et 100 ml d'éther de pétrole (domaine d'ébullition 60-80[deg.]). Le mélange est agité vigoureusement, puis les phases sont . séparées. La phase aqueuse est extraite avec deux fois 50 ml d'éther de pétrole. Chaque extrait d'éther de pétrole est ré-extrait avec deux fois 50 ml d'eau. Les extraits aqueux sont combinés et évaporés à la température ambiante pour donner une huile. Cette huile est dissoute dans de l'eau, passée dans une colonne de résine échangeuse de cations
(B.D.H., Zerolit 225, SRC 13, RS03H ; 250 g fraîchement régénéré dans le cycle acide) et éluée avec de l'eau. On obtient 800 ml d'une fraction acide qui est ensuite concentrée à 400 ml. A ce concentré, on ajoute successivement 2 g de

  
 <EMI ID=102.1> 

  
0,2 ml d'acide acétique glacial. Le-mélange est ensuite hydro-&#65533; &#65533; &#65533; fc &#65533; 

  
 <EMI ID=103.1> 

  
a et 6  évaporé. Le résidu est ré-évaporé avec 3 fois 100 ml de n-propanol et trituré avec de l'éther pour donner un solide fondant à environ 285-288[deg.] (déc.). Par recristallisation dans l'eau et

  
 <EMI ID=104.1> 

  
 <EMI ID=105.1> 

  
 <EMI ID=106.1> 

  
0,4 g (3,2 mmoles) de l'acide obtenu au paragraphe précédent dans 14 ml d'eau et 7 ml d'éthanol est agité à

  
10[deg.] tandis que 0,806 g (9,6 mmoles) de bicarbonate de sodium sont ajoutés graduellement. Le mélange est ensuite agité à 0[deg.] , tandis qu'une solution chaude de 1,024 g (3,2 mmoles) d'ester N--hydroxysuccinimique de N-benzyloxycarbonyl-L-alanine dans

  
 <EMI ID=107.1> 

  
est agité pendant 3 heures à 0[deg.], puis pendant 16 heures à la température ambiante. Le mélange est élaboré d'une manière analogue à celle de l'exemple A) par passage dans une colonne de résine échangeuse de cations et conversion en sel de benzylamine. On obtient 0,26 g de sel de benzylamine de

  
 <EMI ID=108.1> 

  
 <EMI ID=109.1> 

  
 <EMI ID=110.1> 

  
D'une manière analogue à celle de l'exemple A), à partir de l'acide obtenu au paragraphe précédent, on obtient  l'acide (lR)-l-(L-alanylamino)-éthylphosphonique fondant à 295-

  
 <EMI ID=111.1>  

  
 <EMI ID=112.1> 

  
139,7 g (0,5 mole) de chlorhydrate de 1-benzylaminoéthyl-phosphonate de diméthyle sont dissous dans 1000 ml de méthanol. La solution est hydrogénée à la température. ambiante et à la pression atmosphérique en présence de 15 g de charbon

  
 <EMI ID=113.1> 

  
l'absorption d'hydrogène. Le catalyseur est séparé par filtration et le filtrat évaporé sous vide. Le résidu de chlorhydrate de 1-aminoéthylphosphonate de diméthyle est dissous dans
500 ml de diméthylformamide sec, puis traité avec 160 g (0,5 mole) d'ester N-hydroxysuccinimidique de N-benzyloxycarbonylL-alanine. Tandis que l'on agite et maintient la température en-dessous de 0[deg.], on ajoute goutte &#65533; goutte 70 ml de triéthylamine sèche. Le mélange est ensuite agité pendant 16 heures

  
à la température ambiante, le chlorhydrate de triéthylamine

  
est séparé par filtration et lavé avec un peu de diméthylformamide. Le filtrat est évaporé sous le vide d'une pompe

  
à huile et à une température de bain inférieure à 40[deg.]. L'huile résiduelle est traitée avec 40 ml d'eau et le mélange résultant extrait avec 4 fois 40 ml de chloroforme. Les phases organiques combinées sont lavées avec du carbonate de potassium, puis séchées sur du sulfate de sodium et concentrées

  
à siccité.

  
On obtient un résidu qui, traité avec_600 ml d'éther

  
 <EMI ID=114.1> 

  
amino]-éthylphosphonate de diméthyle fondant à 134-1350 [a] = + 14,9[deg.] (c = 1% dans le méthanol). L'évaporation des liqueur-mères donne environ 100 g de gomme composée en majeure partie de l'isomère R correspondant. 

  
 <EMI ID=115.1> 

  
traités pendant 5 heures à la température ambiante avec 250 ml

  
 <EMI ID=116.1> 

  
acétique glacial. 750 ml d'éther sont ensuite ajoutés sous agitation, puis l'éther est décanté. Ce procédé est répété avec deux fois 250 ml d'éther. Le résidu es-- dissous dans

  
250 ml de méthanol et à la solution résultante, on ajoute une
-solution de 50 ml d'oxyde de propylène dans 50 ml de méthanol. Un repos de plusieurs heures, le précipité obtenu est séparé par filtration et lavé avec du méthanol et de l'éther. Le produit séché a un poids constant de 46,1 g et un point de fusion de 283-285 (déc.). La recristallisation dans le mélange <EMI ID=117.1> 

  
 <EMI ID=118.1> 

  
1% dans l' eau) .

Claims (1)

1. Une composition ayant des propriétés antibiotiques et contenant un peptide de formule générale <EMI ID=119.1> <EMI ID=120.1>

ou un groupe alcoyle inférieur, cycloalcoyle inférieur, cycloalcoyle inférieur-alcoyle inférieur, aryle ou aryl-alcoyle inférieur (lesdits groupes pouvant être, le cas échéant, substitués par un ou plusieurs groupes amino, hydroxy, thio, méthylthio, carboxy ou guanidino pour former le groupe caractéristique d'un L-a-amino-acide existant dans la nature) ; R<2> et R<3> représeritent individuellement le groupe caractéristique d'un a-aminoacide du type habituel dans les protéines (sauf que R<3> ne peut pas représenter un atome d'hydro-

<EMI ID=121.1>

drogène ou le groupe phényle) ; R4 représente le

<EMI ID=122.1>

un astérisque seul signifie que l'atome de

carbone a la configuration L lorsque, selon le

cas, R2 ou R3 ont une signification autre qu'un atome d'hydrogène ; et un double astérisque signifie

<EMI ID=123.1>

atome d'hydrogène) la configuration à l'atome de carbone est (R) (comme défini ci-dessus),

ou un de ses sels thérapeutiquement compatibles, et un antibiotique choisi parmi les suivants : céphalothine, céphalexine, <EMI ID=124.1>

........ céphazoline, céfoxitine, rifampicine, [(R)-1-(2-furoyloxy)- <EMI ID=125.1>

de (pivaloyloxy)-méthyle, céphamandole, céphaloridine, céphaloglycine, phénéthicilline, méthicilline, propicilline, ticarcilline, sel d'amoxycilline-arginine, phosphonomycine, vancomycine et kanamycine.

2. Compositions selon la revendication 1, caractérisées en ce que dans le peptide de formule générale I les groupes R2 et R3 représentent un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle, isopropyle, isobutyle, benzyle, 4-aminobutyle ou

<EMI ID=126.1>

ou un groupe méthyle, R4 représente un groupe hydroxy et n = 0 ou 1.

3. Compositions selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisées en ce que dans ledit peptide la valeur de n est 0.

4. Compositions selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisées en ce que ledit peptide est l'acide (1R)-1- (L-alanylamino)-éthylphosphonique.

5. Une composition selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que l'antibiotique est la céphalexine.

<EMI ID=127.1>

caractérisée en ce que l'antibiotique est l'acide (6R)-6-

<EMI ID=128.1>

<EMI ID=129.1>

<EMI ID=130.1>

<EMI ID=131.1>

(pivaloyloxy)méthyle.

8. Une composition selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que le rapport peptide (ou sel thérapeuti-&#65533; &#65533; &#65533; " &#65533; &#65533;

<EMI ID=132.1>

*&#65533;.&#65533; : . ".. 100:1.

9. Une composition selon la revendication.8, caractérisée en ce que le rapport peptide (ou sel thérapeutiquement compatible de celui-ci) /antibiotique est de 1:64 à 64:1.

10. Une composition selon la revendication 9, caractérisée en ce que le rapport peptide (ou sel thérapeutiquement compatible de celui-ci)/antibiotique est de 1:16 à 16:1.

11. Procédé pour la préparation d'une composition antibiotique selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisé en ce qu'on mélange le peptide avec l'antibiotique.

12. Une composition pharmaceutique contenant un peptide et un antibiotique comme définis dans les revendications 1 à 10, ainsi qu'un support pharmaceutiquement acceptable.