LU503629B1 - Ein Bewertungsverfahren und die Anwendung von ADSCs zur Verbesserung des Bluthochdrucks bei Rattennachkommen - Google Patents
Ein Bewertungsverfahren und die Anwendung von ADSCs zur Verbesserung des Bluthochdrucks bei Rattennachkommen Download PDFInfo
- Publication number
- LU503629B1 LU503629B1 LU503629A LU503629A LU503629B1 LU 503629 B1 LU503629 B1 LU 503629B1 LU 503629 A LU503629 A LU 503629A LU 503629 A LU503629 A LU 503629A LU 503629 B1 LU503629 B1 LU 503629B1
- Authority
- LU
- Luxembourg
- Prior art keywords
- adscs
- lps
- evaluation method
- pregnant
- rats
- Prior art date
Links
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 title claims abstract description 21
- 241000700159 Rattus Species 0.000 claims abstract description 43
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 claims abstract description 26
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 9
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims abstract description 8
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 claims abstract description 8
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 5
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 230000005012 migration Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000013508 migration Methods 0.000 claims abstract description 4
- 241000399119 Spio Species 0.000 claims abstract 5
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims description 40
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 claims description 40
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 10
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 claims description 3
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 claims description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims description 3
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 claims description 3
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 claims description 3
- -1 potassium ferricyanide Chemical compound 0.000 claims description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000001113 umbilicus Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 3
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- DCYOBGZUOMKFPA-UHFFFAOYSA-N iron(2+);iron(3+);octadecacyanide Chemical compound [Fe+2].[Fe+2].[Fe+2].[Fe+3].[Fe+3].[Fe+3].[Fe+3].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-] DCYOBGZUOMKFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960003351 prussian blue Drugs 0.000 claims description 2
- 239000013225 prussian blue Substances 0.000 claims description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 abstract description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 3
- WTFXARWRTYJXII-UHFFFAOYSA-N iron(2+);iron(3+);oxygen(2-) Chemical compound [O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[Fe+2].[Fe+3].[Fe+3] WTFXARWRTYJXII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 7
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N Iron oxide Chemical compound [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 4
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 208000007530 Essential hypertension Diseases 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 102000005862 Angiotensin II Human genes 0.000 description 2
- 101800000733 Angiotensin-2 Proteins 0.000 description 2
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 206010005746 Blood pressure fluctuation Diseases 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- CZGUSIXMZVURDU-JZXHSEFVSA-N Ile(5)-angiotensin II Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C([O-])=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=[NH2+])NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC([O-])=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 CZGUSIXMZVURDU-JZXHSEFVSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229950006323 angiotensin ii Drugs 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 230000001364 causal effect Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000036732 histological change Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000005415 magnetization Effects 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000107 myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 230000005408 paramagnetism Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000036454 renin-angiotensin system Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
- C12N5/0667—Adipose-derived stem cells [ADSC]; Adipose stromal stem cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5082—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms
- G01N33/5088—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms of vertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B5/00—Measuring for diagnostic purposes; Identification of persons
- A61B5/02—Detecting, measuring or recording for evaluating the cardiovascular system, e.g. pulse, heart rate, blood pressure or blood flow
- A61B5/021—Measuring pressure in heart or blood vessels
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/05—Adjuvants
- C12N2501/052—Lipopolysaccharides [LPS]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/30—Synthetic polymers
- C12N2533/32—Polylysine, polyornithine
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf das Gebiet der biomedizinischen Technologie, insbesondere auf das Bewertungsverfahren und die Anwendung von ADSCs zur Verbesserung des Bluthochdrucks bei Rattennachkommen, umfassend die folgenden Schritte: (1) Zellkultur: ADSCs werden in vollständigem Medium für die Kultur platziert; (2) Zellmarkierung: 1mg/ml SPIO wird mit vollständigem Medium auf 50μg/mL verdünnt; gleichzeitig wird Polylysin auf 1.5ug/mL verdünnt. Die beiden Lösungen werden dann im Verhältnis 1:1 bis zu einer Endkonzentration von 25 μg/mL für SPIO und 0.75 μg/mL für Polylysin gemischt, gründlich gemischt und in den Zellkulturbrutschrank gegeben. (3) Schwangerschaftsmodellierung: Es wurden eine LPS-Gruppe, eine LPS+ADSC-Gruppe und eine Kontrollgruppe gebildet; LPS-Gruppe: Trächtigen SD-Ratten wurde an den Tagen 8, 10 und 12 der Trächtigkeit 0.79 mg/kg LPS intraperitoneal injiziert; LPS+ADSC-Gruppe: Trächtigen SD-Ratten wurden 0.79mg/kg LPS an den Tagen 8, 10 und 12 der Trächtigkeit intraperitoneal injiziert, während der in Schritt 2 hergestellten ADSCs3×106 am 15 Tag 8 der Trächtigkeit in die Schwanzvene gegeben wurden; Kontrollgruppe: Trächtigen SD- Ratten wurde an den Tagen 8, 10 und 12 der Trächtigkeit ein gleiches Volumen Kochsalzlösung intraperitoneal injiziert; (4) Beobachtung der Migration von SPIO-ADSCs unter MRI; (5) Beobachtung der Blutdruckveränderungen bei den Nachkommen.
Description
Ein Bewertungsverfahren und die Anwendung von ADSCS zur Verbesserung des LU503629
Bluthochdrucks bei Rattennachkommen
Technischer Bereich
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf das Gebiet der biomedizinischen Technologie, insbesondere auf das Gebiet der Bewertungsverfahren und die Anwendung von ADSCs zur
Verbesserung des Bluthochdrucks bei Rattennachkommen.
Technologie im Hintergrund
Primärer Bluthochdruck ist ein wichtiger Risikofaktor für Herz-Kreislauf-Erkrankungen und stellt eine ernste Gefahr fiir die menschliche Gesundheit dar. Einmal festgestellt, erfordert
Bluthochdruck häufig eine lebenslange Medikation, was die Lebensqualität der Patienten einschränkt und eine große sozioôkonomische Belastung darstellt. Obwohl im In- und Ausland umfangreiche Forschungsarbeiten zur Ätiologie und Prävention durchgeführt wurden, deuten die zunehmende Prävalenz und die unbefriedigende präventive Wirkung bei erwachsenen Patienten stark darauf hin, dass die derzeitigen Überlegungen zur Prävention und Behandlung, die sich nur auf erwachsene Betroffene beziehen, ausgeweitet werden müssen, was auch auf die Existenz anderer wichtiger ursächlicher Faktoren schließen lässt. Daher wird es immer wichtiger, die
Pathogenese des Bluthochdrucks in neue Richtungen zu erforschen. Studien haben gezeigt, dass
Umweltfaktoren, die während der Schwangerschaft auf den Fötus einwirken, nicht nur die
Entwicklung des Fötus, sondern auch die des erwachsenen Nachwuchses mit einer Vielzahl von
Krankheiten wie Bluthochdruck, Diabetes und Fettleibigkeit beeinflussen können.
Lipopolysaccharid (LPS) ist ein toxischer Bestandteil der Zellwand gramnegativer Bakterien und wird üblicherweise als entzündungsförderndes Mittel zur Nachahmung unspezifischer
Entzündungsreaktionen eingesetzt. Aktuellen Forschungsergebnissen zufolge kann die fetale
Exposition gegenüber LPS zur Entwicklung vieler chronischer Krankheiten im Erwachsenenalter, wie z. B. Bluthochdruck, führen.
Superparamagnetisches Eisenoxid (Superparamagnetic Iron Oxide, SPIO) ist eine Art intrazelluläres Kontrastmittel auf Eisenoxidbasis. Die Grundstruktur besteht aus glukosebeschichteten Eisenoxidpartikeln mit einem Durchmesser von ca. 80-150nm, wobei die
Eisenoxidpartikel einen Durchmesser von ca. 10-50nm haben und die Penetrations- und
Relaxationsrate etwa 10-mal stärker ist als die einer äquivalenten Konzentration von Gd**. SPIO hat einen hohen Grad an Paramagnetismus und kann die Homogenität des lokalen Magnetfeldes beeinflussen und einen Magnetisierungseffekt und Protonendephasierung erzeugen, wodurch die
T2-Relaxationszeit erheblich verkürzt wird.
Fetthaltige mesenchymale Stammzellen (Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,
ADSCs) sind multipotente mesenchymale Stammzellen, die leicht aus Fettgewebe isoliert und dann in Endothelzellen, Adipozyten und Myozyten differenziert werden können. Sie können auch zur Reparatur und Regeneration von schwer und chronisch geschädigten Geweben beitragen. Noch wichtiger ist, dass es möglich ist, ADSC autolog zu transplantieren; daher ist ihre Anwendung nicht durch moralische und ethische Normen eingeschränkt. Das Risiko einer Abstoßung durch das Immunsystem ist im Vergleich zur Anwendung anderer Arten von Stammzellen deutlich geringer. Bislang wurden mehrere klinische Studien zur Anwendung von ADSCS bei Herz-
Kreislauf-Erkrankungen durchgeführt. Es gibt jedoch nur wenige Daten über die Beteiligung von
MSZ an der Pathophysiologie der primären Hypertonie.
Darüber hinaus wurde noch nicht über die Anwendung von SPIO-Markern in der MRT berichtet, um zu beobachten, ob ADSCS in den Embryo eindringen.
Inhalt der Erfindung LU503629
Der vollständige Text des Patents CN106577509A „Verfahren zur Herstellung eines Modells der durch Lipopolysaccharid verursachten Rattennachkommen-Bluthochdruck während der
Schwangerschaft“ ist hier wiedergegeben.
Der Zweck der vorliegenden Erfindung ist es, ein Bewertungsverfahren und die Anwendung von ADSCs zur Verbesserung des Bluthochdrucks bei Rattennachkommen bereitzustellen, um den
Mangel an Forschung im Stand der Technik auf die Anwendung von mesenchymalen Stammzellen für die Behandlung von essentieller Hypertonie zu beheben.
Um dies zu erreichen, bietet die vorliegende Erfindung die folgende technische Losung:
Ein Bewertungsverfahren von ADSCs zur Verbesserung des Bluthochdrucks bei Ratten-
Nachkommen, dass es die folgenden Schritte umfasst: (1) Zellkultur: Kultivierung der ADSCs in vollstäindigem Medium; (2) Zellmarkierung: 1mg/ml SPIO wurde mit vollstandigem Medium auf 50ug/ml verdünnt; gleichzeitig wurde Polylysin auf 1.5ug/ml verdünnt, und dann wurden die beiden Lösungen 1:1 bis zu einer Endkonzentration von 25ug/ml für SPIO und 0.75ug/ml für Polylysin gründlich gemischt und für 30-60 Minuten in einen Zellinkubator gelegt; (3) Schwangerschaftsmodellierung: LPS-Gruppe, LPS+ADSCs-Gruppe und Kontrollgruppe wurden gebildet; wobei,
LPS-Gruppe: Trächtigen SD-Ratten wurde an den Tagen 8, 10 und 12 der Trächtigkeit intraperitoneal 0.79mg/kg LPS injiziert;
LPS+ADSCs-Gruppe: Trächtigen SD-Ratten wurden 0.79mg/kg LPS an den Tagen 8, 10 und 12 der Trächtigkeit intraperitoneal injiziert, während der in Schritt (2) hergestellten ADSCs3x106 am Tag 8 der Trächtigkeit in die Schwanzvene gegeben wurden;
Kontrollgruppe: Trächtige SD-Ratten, denen am 8, 10. und 12. Trächtigkeitstag intraperitoneal ein gleiches Volumen Kochsalzlôsung injiziert wurde; (4) Beobachtung der Migration von SPIO-ADSCs unter MRI, (5) Beobachtung der Blutdruckveränderungen bei den Nachkommen.
Das in der vorliegenden Erfindung beschriebene Bewertungsverfahren, wobei das vollständige Medium ein Basalmedium, 10% Serum, doppelte Antikörpern und Glutamin umfasst.
Das Bewertungsverfahren der vorliegenden Erfindung, wobei der Schritt (2) auch die
Färbung mit PreuBischblau umfasst, insbesondere die Entnahme von ADSCs, die mit SPIO ko- inkubiert wurden, das Absaugen der Kulturflüssigkeit, das zweimalige Waschen mit PBS; die
Fixierung mit 4% Paraformaldehyd für 10 min, das zweimalige Spülen mit destilliertem Wasser; 6% verdinnte Salzsäure+2% Kaliumferricyanid in gleichem Volumen, um die Färbung vorzubereiten, die Zugabe in den Kulturkolben, und die Kolben wurden 30 Minuten lang stehen gelassen, dann zweimal mit 5 U/mL Natriumheparin PBS und zweimal mit destilliertem Wasser gewaschen; 0.5% Kernrotfärbung wurde für 1-2 Minuten zugegeben und zweimal mit destilliertem
Wasser gespült; unter dem Mikroskop beobachtet, die Markierungsraten wurden berechnet und fotografiert.
Das Bewertungsverfahren der vorliegenden Erfindung, bei dem die LPS-Lôsung gebrauchsfertig in einem Verhältnis von 0.9 bis 1.1ml Kochsalzlôsung pro 1mg Lipopolysaccharid hergestellt und gründlich gemischt und geschüttelt werden muss.
Das Bewertungsverfahren der vorliegenden Erfindung, wobei die Misch- und Schiittelzeit der
LPS-Lôsung auf etwa 20 Minuten eingestellt wird.
Das Bewertungsverfahren der vorliegenden Erfindung, bei dem das Lipopolysaccharid in einem Verhältnis von Iml Kochsalzlösung für jeweils Img Lipopolysaccharid hergestellt wird. LU503629
Das Bewertungsverfahren der vorliegenden Erfindung, wobei die trächtigen SD-Ratten erwachsene SD-Ratten mit einem Gewicht von 250 bis 270g im Alter von 7 bis 8 Wochen sind.
Das Bewertungsverfahren der vorliegenden Erfindung, wobei in dem Schritt (3) der Punkt 1/3 des Abdomens der trächtigen Ratte außerhalb der Linie, die den Nabel und die vordere obere
Darmbeinstachel verbindet, als Injektionsstelle ausgewählt wird.
Anwendung des in der vorliegenden Erfindung beschriebenen Bewertungsverfahrens bei der
Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung von hypertensiven Störungen bei den
Nachkommen.
Anwendung von ADSCs bei der Herstellung von Medikamenten zur Behandlung von
Bluthochdruckerkrankungen bei Nachkommen.
Anwendung von ADSCs zur Herstellung von Arzneimitteln fiir die Behandlung von
Bluthochdruck bei Nachkommen aufgrund von Lipopolysaccharid während der Schwangerschaft.
Verglichen mit dem Stand der Technik sind die vorteilhaften Wirkungen der vorliegenden
Erfindung: (1) Die Studie in Patent CN106577509A der Erfindung fand heraus, dass Lipopolysaccharid-
Stimulation während der Schwangerschaft einen Anstieg des Blutdrucks in Rattennachkommen verursachte; und verursachte einen Anstieg der renalen Angiotensin-II-Proteinexpression, einen
Anstieg der Anzahl von Angiotensin-II-positiven Zellen und einen Anstieg der Anzahl von
Monozyten/Makrophagen, Lymphozyten, etc. bei Rattennachkommen Woche 7 und 16 erhöht; bei
Rattennachkommen Tag 1, 7 Wochen, verursacht einen Anstieg der Anzahl apoptotischer Zellen in der Niere; und bei Rattennachkommen Woche 16, leichte histologische Veränderungen in der
Niere und im Herzen. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die Stimulation durch
Lipopolysaccharid während der Schwangerschaft einen Anstieg des Blutdrucks in
Rattennachkommen über das RAS-System (Renin-Angiotensin-System) verursachte, dass dieser
Effekt jedoch durch die Behandlung mit ADSCs gemildert wurde, wie in der vorliegenden erfinderischen Studie festgestellt wurde. (2) SPIO (Kontrastmittel) markierte ADSCs (Fetthaltige mesenchymale Stammzellen) wurden trächtigen Ratten über die Schwanzvene injiziert, und unter MRT wurde festgestellt, dass die Zellen in den Embryo der trächtigen Ratten eingedrungen waren, und es wurde festgestellt, dass die injizierten Stammzellen die Blutdruckwerte des Rattennachkommens bei den trächtigen
Ratten senkten.
Beschreibung der beigefügten Zeichnungen
Bild 1 zeigt die Wirkung der Zellmarkierung im Bewertungsverfahren der vorliegenden
Erfindung;
Bild 2 zeigt ein Foto eines trächtigen Mausembryos vor der Injektion von Stammzellen unter
MRI,
Bild 3 zeigt eine Aufnahme eines schwangeren Mäuseembryos unter MRT, 10 Minuten nach der Injektion von Stammzellen;
Bild 4 zeigt die MRI-Signalwerte vor und nach der Injektion von Stammzellen;
Bild 5 zeigt die Veränderung des Blutdrucks bei Rattennachkommen.
Detaillierte Beschreibung
Die technischen Lösungen in den Ausfithrungsformen der vorliegenden Erfindung werden im
Folgenden in Verbindung mit den beigefügten Zeichnungen in den Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung klar und vollständig beschrieben, und es ist klar, dass die beschriebenen
Ausführungsformen nur ein Teil der Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung sind, urkd/203629 nicht alle von ihnen. Ausgehend von den Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung fallen alle anderen Ausführungsformen, die von einem Fachmann ohne schôpferische Arbeit erreicht werden, in den Schutzbereich der vorliegenden Erfindung.
Ein Bewertungsverfahren von ADSCs zur Verbesserung des Bluthochdrucks bei Ratten-
Nachkommen, dass es die folgenden Schritte umfasst: (1) Zellkultur: ADSCs wurden in komplettem Medium (Basalmedium+10%
Serum+doppelten Antikôrpern und Glutamin) kultiviert, ADSCs wurden von Saye Biotech erworben; (2) Zellmarkierung: 1mg/ml SPIO wurde mit vollständigem Medium auf 50ug/ml verdünnt; gleichzeitig wurde Polylysin auf 1.5ug/ml verdünnt, und dann wurden die beiden Lösungen 1:1 bis zu einer Endkonzentration von 25ug/ml für SPIO und 0.75ug/ml für Polylysin gründlich gemischt und für 30-60 Minuten in einen Zellinkubator gelegt; wie in Bild 1 dargestellt;
Preußischblau-Färbung: Mit SPIO ko-inkubierte ADSCs wurden aspiriert und zweimal mit
PBS gewaschen; 4% Paraformaldehyd wurde für 10 min fixiert und zweimal mit destilliertem
Wasser gespült; 6% verdünnte Salzsäure+2% Kaliumferricyanid wurden in gleichen Volumina gemischt, um eine Färbung zu bilden, und in die Kulturflasche gegeben. Die Kolben wurden 30min stehen gelassen, dann zweimal mit SU/mL Natriumheparin PBS und zweimal mit destilliertem
Wasser gewaschen; 0.5% Nukleosidfärbung wurde für 1-2min zugegeben und zweimal mit destilliertem Wasser gespült; unter dem Mikroskop beobachtet, die Markierungsraten wurden berechnet und fotografiert. (3) Schwangerschaftsmodellierung: Die LPS-Gruppe (d.h. die Gruppe, die durch LPS-
Prägung eine Hypertonie bei den Nachkommen verursacht), die LPS+ADSCs-Gruppe und die
Kontrollgruppe wurden konstruiert, wobei,
LPS-Gruppe: Trächtigen SD-Ratten wurde an den Tagen 8, 10 und 12 der Trächtigkeit 0.79mg/kg LPS intraperitoneal injiziert (für die spezifische Konstruktionsmethode siehe das
Erfindungspatent CN106577509A);
LPS+ADSCs-Gruppe: Trächtigen SD-Ratten wurden an den Tagen 8, 10 und 12 der
Trächtigkeit 0.79mg/kg LPS intraperitoneal injiziert, während der in Schritt (2) hergestellten
ADSCs3x10° am Tag 8 der Trächtigkeit intravenös in die Schwanzvene gegeben wurden;
Kontrollgruppe: Trächtige SD-Ratten, denen an den Tagen 8, 10 und 12 der Trächtigkeit intraperitoneal eine gleiche Menge Kochsalzlösung injiziert wurde;
Als Injektionsstelle wurde der Bauch der trächtigen Ratten auf 1/3 der Linie zwischen Nabel und vorderem Darmbeinstachel gewählt.
Die LPS-Lösung wird in einem Verhältnis von 1ml Kochsalzlösung auf 1 mg
Lipopolysaccharid zubereitet und etwa 20 Minuten lang gemischt und gut geschüttelt.
Trächtige SD-Ratten sind erwachsene SD-Ratten mit einem Gewicht von 250-270g im Alter von 7-8 Wochen. (4) Beobachtung der Migration von SPIO-ADSCs im MRT:
Bei schwangeren Mausembryonen wurde 10 Minuten nach der Zellinjektion ein signifikanter
Rückgang des Signals festgestellt (siehe Bilder 2-3), und die MRT-Signale (Mittelwert +
Standardabweichung) vor und nach der Stammzellinjektion betrugen: 7995.380+346.939 vs 6396.500+494.500, P<0.0101 (wie in Bild 4 gezeigt), mit statistisch signifikanten Unterschieden. (5) Beobachtung der Blutdruckveränderungen bei Rattennachkommen: Die Stammzellen nach der Injektion verringerten die Blutdruckwerte von Rattennachkommen bei trächtigen Ratten,
gemessen ab der 8. Woche der Rattennachkommen bis zur 16. Woche, und es wurde eh)503629 statistischer Unterschied festgestellt (im Vergleich zu der LPS-Pragung, die Bluthochdruck in der
Nachkommengruppe verursacht), siehe Bild 5.
Obwohl Ausführungsformen der Erfindung gezeigt und beschrieben wurden, versteht der 5 Fachmann, dass eine Vielzahl von Variationen, Modifikationen, Ersetzungen und Varianten dieser
Ausführungsformen möglich sind, ohne von den Prinzipien und dem Geist der Erfindung abzuweichen, deren Umfang durch die beigefiigten Anspriiche und deren Aquivalente begrenzt ist.
Claims (10)
1. Ein Bewertungsverfahren von ADSCs zur Verbesserung des Bluthochdrucks bei Rattennachkommen, dadurch gekennzeichnet, dass es die folgenden Schritte umfasst: (1) Zellkultur: Kultivierung der ADSCs in vollständigem Medium; (2) Zellmarkierung: 1mg/ml SPIO wurde mit vollständigem Medium auf 50ug/ml verdünnt; gleichzeitig wurde Polylysin auf 1.5ug/ml verdünnt, und dann wurden die beiden Lösungen 1:1 bis zu einer Endkonzentration von 25ug/ml für SPIO und 0.75ug/ml für Polylysin gründlich gemischt und für 30-60 Minuten in einen Zellinkubator gelegt; (3) Schwangerschaftsmodellierung: LPS-Gruppe, LPS+ADSCs-Gruppe und Kontrollgruppe wurden gebildet; wobei, LPS-Gruppe: Trächtigen SD-Ratten wurde an den Tagen 8, 10 und 12 der Trächtigkeit intraperitoneal 0.79mg/kg LPS injiziert; LPS+ADSCs-Gruppe: Trächtigen SD-Ratten wurden 0.79mg/kg LPS an den Tagen 8, 10 und 12 der Trächtigkeit intraperitoneal injiziert, während der in Schritt (2) hergestellten ADSCs3x10° am Tag 8 der Trächtigkeit in die Schwanzvene gegeben wurden; Kontrollgruppe: Trächtige SD-Ratten, denen am 8, 10. und 12. Trächtigkeitstag intraperitoneal ein gleiches Volumen Kochsalzlôsung injiziert wurde; (4) Beobachtung der Migration von SPIO-ADSCs unter MRI, (5) Beobachtung der Blutdruckveränderungen bei den Nachkommen.
2. Bewertungsverfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das vollständige Medium aus Basalmedium, 10% Serum, doppelten Antikörpern und Glutamin besteht.
3. Bewertungsverfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass der Schritt (2) auch die Färbung mit PreuBischblau umfasst, insbesondere die Entnahme von ADSCs, die mit SPIO ko- inkubiert wurden, das Absaugen der Kulturflüssigkeit, das zweimalige Waschen mit PBS; die Fixierung mit 4% Paraformaldehyd für 10 min, das zweimalige Spülen mit destilliertem Wasser; 6% verdinnte Salzsäure+2% Kaliumferricyanid in gleichem Volumen, um die Färbung vorzubereiten, die Zugabe in den Kulturkolben, und die Kolben wurden 30 Minuten lang stehen gelassen, dann zweimal mit 5 U/mL Natriumheparin PBS und zweimal mit destilliertem Wasser gewaschen; 0.5% Kernrotfärbung wurde für 1-2 Minuten zugegeben und zweimal mit destilliertem Wasser gespült; unter dem Mikroskop beobachtet, die Markierungsraten wurden berechnet und fotografiert.
4. Bewertungsverfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass die LPS-Lôsung gebrauchsfertig in einem Verhältnis von 0.9 bis 1.1ml Kochsalzlôsung pro 1mg Lipopolysaccharid hergestellt und gründlich gemischt und geschüttelt werden muss; die Misch- und Schüttelzeit der LPS-Lôsung auf etwa 20 Minuten eingestellt wird.
5. Bewertungsverfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass das Lipopolysaccharid in einem Verhältnis von 1ml Kochsalzlosung für jeweils Img Lipopolysaccharid hergestellt wird.
6. Bewertungsverfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass die trächtigen SD- Ratten erwachsene SD-Ratten mit einem Gewicht von 250 bis 270g im Alter von 7 bis 8 Wochen sind.
7. Bewertungsverfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass in dem Schritt (3) der Punkt 1/3 des Abdomens der trächtigen Ratte außerhalb der Linie, die den Nabel und die vordere obere Darmbeinstachel verbindet, als Injektionsstelle ausgewählt wird.
8. Anwendung des Bewertungsverfahrens nach einem der Ansprüche 1-7 bei der Herstellurg/>03629 eines Arzneimittels zur Behandlung von hypertensiven Störungen bei Nachkommen.
9. Anwendung von ADSCs bei der Herstellung von Medikamenten zur Behandlung von Bluthochdruckerkrankungen bei Nachkommen.
10. Anwendung von ADSCs zur Herstellung von Arzneimitteln für die Behandlung von Bluthochdruck bei Nachkommen aufgrund von Lipopolysaccharid während der Schwangerschaft.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| LU503629A LU503629B1 (de) | 2023-03-13 | 2023-03-13 | Ein Bewertungsverfahren und die Anwendung von ADSCs zur Verbesserung des Bluthochdrucks bei Rattennachkommen |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| LU503629A LU503629B1 (de) | 2023-03-13 | 2023-03-13 | Ein Bewertungsverfahren und die Anwendung von ADSCs zur Verbesserung des Bluthochdrucks bei Rattennachkommen |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| LU503629B1 true LU503629B1 (de) | 2023-09-14 |
Family
ID=88068148
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| LU503629A LU503629B1 (de) | 2023-03-13 | 2023-03-13 | Ein Bewertungsverfahren und die Anwendung von ADSCs zur Verbesserung des Bluthochdrucks bei Rattennachkommen |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| LU (1) | LU503629B1 (de) |
-
2023
- 2023-03-13 LU LU503629A patent/LU503629B1/de active IP Right Grant
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Aterman | The structure of the liver sinusoids and the sinusoidal cells | |
| DE69935999T2 (de) | Methoden zur introduktion heterologer zellen in fische | |
| DE3650219T2 (de) | Verwendung von nichtradioaktiv gekennzeichnete Mikrokügelchen zur Blutströmungsmessung. | |
| DE1648999B2 (de) | Verfahren zur immunochemischen Bestimmung von Antigenen und Antikörpern | |
| LU503629B1 (de) | Ein Bewertungsverfahren und die Anwendung von ADSCs zur Verbesserung des Bluthochdrucks bei Rattennachkommen | |
| DE2833545A1 (de) | Hochmolekulare meningokokken- gruppe c-vaccine und verfahren zu ihrer herstellung | |
| DE102018221838B3 (de) | Mikrophysiologisches Choroidea-Modell | |
| DE1643196C2 (de) | Wasserlösliche aus Stärke, Amylose oder Amylopektin und einem Farbstoff bestehende Verbindungen sowie Verfahren zu deren Herstellung | |
| Braekevelt | Retinal photoreceptor fine structure in the red‐tailed hawk (Buteo jamaicensis) | |
| CN117752685A (zh) | 基于间充质干细胞用于延缓衰老的应用 | |
| Sasaki et al. | Toxicity of heparinoids, with special reference to the precipitation of fibrinogen | |
| CN115518077A (zh) | 一种治疗炎症性肠病的细胞药物 | |
| CN108853519A (zh) | 一种ADSCs用于改善子代大鼠高血压的评价方法及应用 | |
| CN115053864A (zh) | 一种构建绵羊肠炎动物模型的方法及其应用 | |
| Haust et al. | Heparitin sulfate mucopolysaccharidosis (Sanfilippo disease): A case study with ultrastructural, biochemical, and radiological findings | |
| CH667204A5 (de) | Pharmazeutisches praeparat enthaltend lebende vermehrungsfaehige embryonalzellen, verfahren zu dessen herstellung und verfahren zum testen der pharmazeutischen wirksamkeit. | |
| DE60017136T2 (de) | Behandlung von angiogenese-abhängigen erkrankungen mit dextrinsulphat | |
| DE2840259A1 (de) | Cytostatische mittel und ihre verwendung | |
| DE10195824T5 (de) | Verfahren zur Bestimmung der Fähigkeit der Reaktion der Reaktion der Lymphozyten im Blut auf spezifisches Antigen | |
| DE238162C (de) | ||
| DE655140C (de) | Verfahren zur gewerblichen Herstellung und Reinigung von Zubereitungen eines Wirkstoffes | |
| Shevchenko et al. | Histophysiology of submandibular salivary glands end pieces in rats with chronic ethanol intoxication | |
| DE588142C (de) | Verfahren zur Herstellung eines Anginaserums | |
| Pauli et al. | «Farmer’s Lung» beim Pferd: ‘Farmer’s Lung’in Horse | |
| Müller | Klinische Wertigkeit des kontrastmittelverstärkten Ultraschalls in der Diagnostik von Nierenraumforderungen |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG | Patent granted |
Effective date: 20230914 |