KR970707277A - 트리펩티딜 아미노펩티다제(tripeptidyl aminopeptidase) - Google Patents

트리펩티딜 아미노펩티다제(tripeptidyl aminopeptidase)

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KR970707277A
KR970707277A KR1019970703070A KR19970703070A KR970707277A KR 970707277 A KR970707277 A KR 970707277A KR 1019970703070 A KR1019970703070 A KR 1019970703070A KR 19970703070 A KR19970703070 A KR 19970703070A KR 970707277 A KR970707277 A KR 970707277A
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Abstract

다음을 포함하는 DNA 구조체에 의해 코팅되는 트리펩티딜 아미노펩티다제(TPAP).
ⅰ) 서열 1, 2 또는 3에서 보인 DNA 서열, 또는 ⅱ) 부분적 TPAP를 코딩하는 DSM9570의 DNA 서열, 또는 ⅲ) 서열 1, 2 또는 3에서 보인 DNA 서열에 기초하여 또는 서열 4 내지 14에서 보인 아미노산 서열에 기초하여 제조된 올리고누클레오티드 프로브에 혼성화하며, TPAP를 코딩하는 누클레오티드 서열. TPAP는 재조합 DNA 기술을 의하여 얻어진다. TPAP-결함 생산균주는 TPAP-코딩 DNA 서열의 비활성화 또는 변형시킴으로써 제조된다.

Description

트리펩티딜 아미노펩티다제(TRIPEPTIDYL AMINOPEPTIDASE)
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 pH에 따른 트리펩티다제의 상대 활성도를 나타내는 그래프이다.

Claims (37)

  1. 분리된 분류의 트리펩티딜 아미노펩티다제.
  2. 다음을 포함하는 DNA 구조체에 의해 코딩되는 트리펩티딜 아미노펩티다제(TPAP). ⅰ) 서열 1, 2 또는 3에서 보인 DNA 서열, 또는 ⅱ) 부분적 TPAP를 코딩하는 DSM 9570의 DNA 서열, 또는 ⅲ) 서열 1, 2 또는 3에서 보인 DNA 서열에 기초하여 또는 서열 4 내지 14에서 보인 아미노산 서열에 기초하여 제조된 올리고누클레오티드 프로브에 혼성화하며, TPAP를 코딩하는 누클레오티드 서열
  3. 정제된 A. niger TPAP 또는 정제된 A. oryzae TPAP와 면역적으로 교차-반응하는 기질 Phe-Pro-Ala-pNA을 전달하는 능력이 있으며, 그리고/또는 이하의 N-말단 서열 Ala-Xaa(1)-Asn-Xaa(2)-Ser-His-Cys-Asp-Ser-Ile-Ile-Thr-Pro-Xaa(3)-Cys-Leu-Lys-Xaa(4)-Leu-Try-Asn-Ile--Gly-Asp-Tyr-Gln-Ala-Asp-Xaa(5)-Xaa(6) (서열 15) (여기서, Xaa(1), Xaa(2), Xaa(3), Xaa(4), Xaa(5) 및 Xaa(6)중의 어느 하나는 다르거나 같으며 자연 발생 아미노산 잔기 중의 어느 것으로부터 선택된다)을 포함하는 분리된 TPAP.
  4. 제3항에 있어서, Xaa(1)이 Lys 또는 Gln, Xaa(2)가 Ile 또는 Thr, Xaa(3)이 Pro 또는 His, Xaa(4)가 Glu 또는 Gln, Xaa(5)가 Pro 또는 Ala 그리고/또는 Xaa(6)이 Lys 또는 Asn인 것을 특징으로 하는 TPAP.
  5. 제1항 내지 제4항 중의 어느 한 항에 있어서, 최적 pH가 5.0 내지 7.5의 범위인 것을 특징으로 하는 TPAP.
  6. 제1항 내지 제5항 중의 어느 한 항에 있어서, 서열 4 내지 9에서 보인 부분적 아미노산 서열 중의 적어도 하나를 포함하며 그리고/또는 약 5.0 내지 5.5의 최적 pH를 가지는 것을 특징으로 하는 TPAP.
  7. 제1항 내지 제5항 중의 어느 한 항에 있어서, 부분적 아미노산 서열 서열 10 내지 14중의 적어도 하나를 포함하며 그리고/또는 약 5.5 내지 7.5의 범위내의 최적 pH를 가지는 것을 특징으로 하는 TPAP.
  8. 제2항 내지 제7항 중의 어느 한 항에 있어서, 미생물 기원인 것을 특징으로 하는 트리펩티딜 아미노펩티다제.
  9. 제8항에 있어서, 균류 기원인 것을 특징으로 하는 트리펩티닐 아미노펩티다제.
  10. 제9항에 있어서, Aspergillus의 균주, 구체적으로 A. oryzae, A. niger, A. japonicus 또는 A. foetidus로부터 유도되는 것을 특징으로 하는 트리펩티딜 아미노펩티다제.
  11. 균류 기원의 TPAP를 코딩하는 DNA 서열을 포함하는 DNA 구조체.
  12. ⅰ) 서열 1, 2 및 3에서 보인 DNA 서열 중의 적어도 하는, 또는 ⅱ) DSM 9570의 TPAP 관련 DNA 서열, 또는 ⅲ) 서열 1, 2 또는 3에서 보인 DNA 서열에 기초하여 또는 서열 4 내지 14에서 보인 아미노산 서열 중의 어떤 것에 기초하여 제조되는 올리고누클레오티드프로브에 혼성화하고, TPAP를 코딩하는 누클레오티드 서열, 또는 ⅳ), ⅰ), ⅱ) 또는 ⅲ)의 DNA 서열에 상보적인 DNA 서열을 포함하는, TPAP를 코딩하는 DNA 구조체.
  13. 제11 또는 제12항에 따른 DNA 구조체를 포함하는 발현벡터.
  14. 제11 또는 12항에 따른 DNA 구조체 또는 제13항에 따른 발현벡터를 포함하는 숙주 세포.
  15. TPAP를 발현하기에 적합한 조건하에서 제14항에 따른 숙주 세포를 배양하는 것, 및 배양물로부터 TPAP를 회수하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 TPAP 제조방법.
  16. TPAP 생산 세포로부터 TPAP 생산을 감소 또는 제거하는 방법에 있어서, 상기 세포에 존재하며 TPAP 발현에 필요한 DNA 서열을 변형 또는 비활성화시켜 상기 세포로부터 감소된 또는 제거된 TPAP 생산을 초래하도록 하는 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 제16항에 있어서, DNA 서열이 TPAP 또는 이것의 TPAP 활성의 발현에 필수적인 부분을 코딩하는 것을 특징으로 하는 방법.
  18. 제16항에 있어서, DNA 서열이 TPAP를 코딩하는 DNA 서열로부터의 TPAP의 발현에 필요한 조절 서열인 것을 특징으로 하는 방법.
  19. 제18항에 있어서, DNA 서열이 촉진유전자 서열 또는 이것의 기능 부분인 것을 특징으로 하는 방법.
  20. 제16항 내지 제19항 중의 어느 한 항에 있어서, TPAP 생산 세포를 돌연변이유발시키는 것 및 TPAP 생산능이 감소 또는 제거된 세포를 선택하는 것에 의해 DNA 서열의 변형 또는 비활성화를 얻는 것을 특징으로 하는 방법.
  21. 제20항에 있어서, 돌연변이유발이 무작위 또는 부위 특이적 돌연변이유발에 의해 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
  22. TPAP 생산 세포로부터 TPAP 생산을 감소 또는 제거하는 방법에 있어서, TPAP를 코딩하는 서열에 충분히 상보적이고 따라서 세포내에서 생산된 TPAP mRNA에 혼성화가 가능한 누클레오티드 서열을, 누클레오티드 서열이 TPAP mRNA로 혼성화하고 따라서 상기 mRNA로부터의 번역된 TPAP 양을 감소시키거나 그러한 번역을 제거하는 것을 허용하는 조건하에서 누클레오티드 서열이 세포내에서 전사되는 그러한 방식으로 세포내로 도입하는 것을 특징으로 하는 방법.
  23. 제16항 내지 제23항 중의 어느 한 항에 따라 제조되는 숙주 세포.
  24. 제23항에 있어서, 미생물 세포인 것을 특징으로 하는 숙주 세포.
  25. 제24항에 있어서, 균류 세포인 것을 특징으로 하는 숙주 세포.
  26. 제25항에 있어서, Aspergillus 종, Trichoderma 종 또는 Fusarium 종의 세포로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 숙주 세포.
  27. 본질적으로 TPAP 활성이 없는 산물을 제조하는 방법에 있어서, 제23항 내지 제26항 중의 어느 한 항에 따른 숙주세포를 산물을 코딩하는 DNA 서열로 형질전환시키는 것, 형질전환된 세포를 산물의 발현에 적합한 조건하에서 배양하는 것, 및 배양물로부터 산물을 회수하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  28. 본질적으로 TPAP 활성이 없는 산물을 제조하는 방법에 있어서, 산물이 TPAP를 발현하는 세포내에 존재하는 DNA 서열에 의해 코딩되며, 방법이 제16항 내지 제22항 중의 어느 한 항에 따라는 방법에 따라 상기 세포내에 존재하고 TPAP 발현에 필요한 DNA 서열을 변형 또는 비활성화시키고 이어서 산물의 발현에 적합한 조건하에서 세포를 배양하고, 배양물로부터 산물을 회수하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  29. 산물도 생산하는 TPAP-생산 세포의 발효에 의해 본질적으로 TPAP가 없는 산물을 제조하는 방법에 있어서, 발효 중이든지 발효가 완료된 후이든지 발효 육즙에 TPAP 활성을 저해할 수 있는 저해제의 유효량을 첨가하는 것, 발효 육즙으로부터 목적 산물을 회수하는 것, 및 선택적으로 회수된 산물을 추가로 정제하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  30. 산물도 생산하는 TPAP-생산 세포의 발효에 의해 본질적으로 TPAP가 없는 산물을 제조하는 방법에 있어서, 발효 육즙 또는 TPAP 및 목적 산물을 함유하는 것으로부터 분리된 효소 제제를 TPAP 활성을 감소시키기에 충분한 시간동안 pH 및 온도의 조합된 처리를 하는 것, 및 선택적으로 처리된 육즙으로부터 산물을 회수하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  31. 제30항에 있어서, TPAP 감소 처리가 6.5 내지 7의 범위의 pH에서 그리고 25 내지 40℃의 범위의 온도에서 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
  32. 제27항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 산물이 효소인 것을 특징으로 하는 방법.
  33. 제32항에 있어서, 산물이 녹말분해성 효소, 지방분해성 효소, 단백질분해성 효소, 셀룰로스분해성 효소, 산화환원 효소, 및 식물 세포벽 분해 효소로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  34. 제33항에 있어서, 산물이 AMG, 리파제, 큐티나제, 셀룰라제, 아밀라제, 프로테아제, 과산화효소, 트랜스글루타미나제, 라카제, 카탈라제, 글루코스 산화효소, 또는 피타제인 것을 특징으로 하는 방법.
  35. 제27항에 내지 제34항 중의 어느 한 항에 따른 방법에 의해 생산되는 것을 특징으로 하는 본질적으로 TPAP 활성이 없는 단백질 산물.
  36. 제35항에 있어서, AMG인 것을 특징으로 하는 산물.
  37. 서열 1에서 보인 DNA 서열의 유사체를 포함하는 DSM 9570 또는 그것의 돌연변이.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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