KR960705932A - 신규 세팔로스포린 C 아실라아제(A New Cephalosporin C Acylase) - Google Patents

신규 세팔로스포린 C 아실라아제(A New Cephalosporin C Acylase)

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KR960705932A
KR960705932A KR1019960702230A KR19960702230A KR960705932A KR 960705932 A KR960705932 A KR 960705932A KR 1019960702230 A KR1019960702230 A KR 1019960702230A KR 19960702230 A KR19960702230 A KR 19960702230A KR 960705932 A KR960705932 A KR 960705932A
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KR
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acylase
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met
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KR1019960702230A
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미네오 니와
요시마사 사이또
다까오 후지무라
요시노리 이시이
유지 노구찌
Original Assignee
후지야마 아끼라
후지사와 야꾸힝고교 가부시끼가이샤
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P35/00—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin
    • C12P35/02—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin by desacylation of the substituent in the 7 position
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Abstract

본 발명은 자연형 세팔로스포린 C(CC) 아실라아제의 아미노산 서열의 Ala49, Net164, Ser166, Met174, Glu358, Met465, Met506또는 Met750위치에 있는 아미노산 중 하나 이상이 다른 아미노산에 의해 대체된 돌연변이 CC 아실라아제, 그를 코딩하는 DNA, 이 DNA를 함유하는 발현 벡터, 이 발현 벡터로 형질전환된 미생물, 이 형질전환체의 배양에 의한 상기 CC 아실라아제의 생산 및 화합물의 생산을 위한 그의 용도를 제공한다. 본 발명의 돌연변이 CC 아실라아제는 효소 효력, pH 프로필의 변화, 프로세싱의 효율 등의 면에서 바람직한 성질을 가진다.

Description

신규 세팔로스포린 C 아실라아제(A New Cdphalosporin C Acylase)
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제 1도는 본 명세서에 기재된 실시예에 사용된 DNA 올리고머를 나타낸 것이다, 제 2도는 pCC001A의 구성을 도식적으로 나타낸 것이다, 제 3도는 pCC002A의 구성을 도식적으로 나타낸 것이다, 제 7도는 p△N176 및 pCK013의 구성을 도식적으로 나타낸 것이다, 제 14도는 p269I358K, p269I358S 및 p269I358L의 제조를 도식적으로 나타낸 것이다.

Claims (8)

  1. 자연형 세팔로스포린 C 아실라아제의 아미노산 서열의 Ala49, Net164, Ser166, Met174, Glu358, Met465, Met506또는 Met750위치에 있는 아미노산 중 하나 이상이 다른 아미노산에 의해 대체된 돌연변이 세팔로스포린 C(CC) 아실라아제.
  2. 제 1항에 있어서, α서브유닛과 β서브유닛으로 프로세싱되기 전의 전구체 형태에서는 하기 식으로 표현되는 돌연변이 CC 아실라아제.
    A1-48-X1-A50-163-X2-Gly-X3-A167-173-X4-357-X5-A359-464-X6-1466-505-X7-A507-749-X8-A751-773
    식 중, A1-48은 자연형 CC 아실라아제의 Thr1에서 Glu48까지와 동일한 아미노산 서열이고, A50-163은 자연형 CC 아실라아제의 Asp50에서 Leu163까지와 동일한 아미노산 서열이고, A167-173은 자연형 CC 아실라아제의 Val167에서 Arg173까지와 동일한 아미노산 서열이고, A175-357은 자연형 CC 아실라아제의 Leu175에서 Ala464까지와 동일한 아미노산 서열이고, A466-505는 자연형 CC 아실라아제의 Pro466에서 Ile749까지와 동일한 아미노산 서열이고, A507-749는 자연형 CC 아실라아제의 Lys507에서 Ala749까지와 동일한 아미노산 서열이고, A751-773은 자연형 CC 아실라아제의 Val751에서 Ala773까지와 동일한 아미노산 서열이고, X1은 Ala 또는 다른 아미노산이고, X2, X4, X6, X7 및 X8은 각각 Met 또는 다른 아미노산이고, X3는 Ser 또는 다른 아미노산이고, X5는 Glu 또는 다른 아미노산이며, 단, Met269및(또는) Cys305는 상기 식 중의 다른 아미노산(들)로 대체될 수 있고, X1이 Ala이면 X2, X4, X6, X7 및 X8은 각각 Met이고, X3는 Ser이며 X5는 Glu가 아닌 아미노산이다.
  3. 제 2항에 있어서, X1이 류신이고, X3가 알라닌이며, Met269가 티로신에 의해 대체된 돌연변이 CC 아실라아제.
  4. 제 1항의 CC 아실라아제를 코딩하는 DNA.
  5. 제 4항의 DNA를 함유하는 발현 벡터.
  6. 제 5항의 발현 벡터에 의해 형질전환된 숙주 세포.
  7. 제 6항의 숙주 세포를 수성 영양 배지에서 배양시키고 배양액으로부터 돌연변이 CC 아실라아제를 회수하는 것으로 이루어지는, 제 1항의 돌연변이 CC 아실라아제의 생산 방법.
  8. 하기 일반식(Ⅱ)의 화합물 또는 그의 염을 제 6항의 형질전환체의 배양액 또는 이를 가공한 물질과 접촉시키는 것으로 이루어지는 하기 일반식(I)의 화합물 또는 그의 염의 제조 방법.
    식 중, R1은 아세톡시, 히드록시 또는 수소이고, R2는 카르복실 아실이다.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019960702230A 1993-11-01 1994-10-26 신규 세팔로스포린 C 아실라아제(A New Cephalosporin C Acylase) KR960705932A (ko)

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GB939322508A GB9322508D0 (en) 1993-11-01 1993-11-01 A new cephalosporin c acylase
GB9326519A GB9326519D0 (en) 1993-12-29 1993-12-29 A new cephalosporin C acylase
GB9326519.7 1993-12-29
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