KR960703937A - 고체 지지체상에서 핵산을 합성하는 방법 및 이 방법에서 고체 지지체로서 유용한 화합물(process for solid support nucleic acid synthesis and compounds useful as solid supports in said process) - Google Patents

고체 지지체상에서 핵산을 합성하는 방법 및 이 방법에서 고체 지지체로서 유용한 화합물(process for solid support nucleic acid synthesis and compounds useful as solid supports in said process)

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KR960703937A
KR960703937A KR1019960700059A KR19960700059A KR960703937A KR 960703937 A KR960703937 A KR 960703937A KR 1019960700059 A KR1019960700059 A KR 1019960700059A KR 19960700059 A KR19960700059 A KR 19960700059A KR 960703937 A KR960703937 A KR 960703937A
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nucleic acid
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KR1019960700059A
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루드밀라 바라노바
프랑스와 샤트렝
빅토르 쿠마레프
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파스칼 브랑뒤
쟝세
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids

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Abstract

본 발명은 고체상 핵산을 합성하는 방법에 관한 것으로서, 이 방법은 2가의 탄화수소 라디칼에 의해 에폭시 또는 글리콜형 기에 결합된 무기 또는 유기 중합체를 고체 지지체로서 사용하며, 상기 에폭시 또는 글리콜형기는 OH기와 친핵성기가 치환되는 두 개의 인접한 포화 탄소를 포함하는 것을 특징으로 한다. 본 발명은 또한 상기한 바와 같은 에폭시 또는 글리콜형 기를 포함하는 화합물에 관한 것으로서, 이들은 예를 들면 고체 지지체 핵산 합성 방법에서 고체 지지체로서 유용하다.

Description

고체 지지체상에서 핵산을 합성하는 방법 및 이 방법에서 고체 지지체로서 유용한 화합물(PROCESS FOR SOLID SUPPORT NUCLEIC ACID SYNTHESIS AND COMPOUNDS USEFUL AS SOLID SUPPORTS IN SAID PROCESS)
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음

Claims (17)

  1. 고체 지지체상에서의 합성에 의해 핵산을 제조하는 방법에 있어서, 고체 지지체로서 무기 또는 유기 중합체를 사용하며, 이 중합체는 2가의 탄화수소 라디칼을 통해 에폭사이드기 또는 글리콜형기에 연결되고, 글리콜형기는 OH기와 친핵성기가 치환되는 두 개의 인접한 포화 탄소로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
  2. 제 1항에 있어서, 지지체에 결합된 제1뉴클레오티드로 제2뉴클레오티드를 축합시켰을 때와 동일한 단량체 시약 및 동일한 조건하에 제1뉴클레오티드를 고체 지지체에 용이하게 부착시키는데, 상기 조건은 고체 지지체상의 핵산 합성시 사용되는 통상의 조건 및 통상의 단량체 시약일 수 있으며, 상기 제1뉴클레오티드는 상기 핵산의 서열내 제1뉴클레오티드에 상응하는 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법; 1) 제1뉴클레오티드 또는 상기 고체 지지체에 그 다른 3′ 또는 5′ 단부에 연결된 올리고뉴클레오티드의 5′ 또는 OH 기를 커플링제를 사용하여 3′및5′위치에서 보호된 뉴클레오티드 단량체 시약의 3′ 또는 5′위치에서 임의로 치환된 포스페이트 기와 축합시키는 단계; 2) 단계 1)에서 수득한 포스파이트 유형의 뉴클레오티드간 결합을 각각 포스페이트 또는 포스포로티오에이트 결합으로 산화 또는 황화시키는 단계; 3) 단계 2)에서 수득한 생성물의 5′-O 또는 3′-O 단부의 탈보호 단계; 4) 핵산을 합성하기 위하여 첨가하여야 할 뉴클레오티드 수 만큼 단계 1) 내지 3)을 반복하는 단계.
  4. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법; 1) 커플링제를 사용하여 상기 고체 지지체의 글리콜형의 상기 기의 상기 OH 기를 5′-O 및 3′-O 위치에서 보호된 뉴클레오티드 단량체 시약의 3′ 또는 5′위치에서 임의로 치환된 포스페이트 또는 포스파이트 기와 축합시키는 단계; 2) 단계 1)에서 수득한 제1뉴클레오티드와 고체 지지체 사이의 포스파이트 유형의 공유 결합을 산화 또는 황화시키는 단계; 3) 단계 2)에서 수득한 생성물의 5′-O 또는 3′-O 단부의 탈보호 단계; 4) 단계 3)에서 수득한 생성물의 5′OH 또는 3′OH 기를 단계 1)에서의 축합과 동일한 조건하에 상기 커플링제를 사용하여 각각 5′-O 또는 3′-O 위치에서 보호된 뉴클레오티드 단량체 시약의 3′ 또는 5′ 위치에서 임의로 치환된 포스페이트, 포스포로티오에이트 또는 포스파이트 기와 축합시키는 단계; 5) 상기 단계에서 생성된 포스파이트 유형의 뉴클레오티드간 기를 각각 포스페이트 또는 포스포로티오에이트 유형의 기로 산화 또는 황화시키는 단계; 6) 단계 5)에서 수득한 생성물의 5′-O 또는 3′-O 단부의 탈보호 단계; 7) 제조할 핵산을 얻기 위하여 첨가하여야 할 뉴클레오티드 수 만큼 단계 4) 내지 6)을 반복하는 단계.
  5. 제 4항에 있어서, 지지체로부터 핵산을 탈착시키고, 염기로부터 그리고 적합한 경우, 핵산의 2′-O 위치로부터 보호기를 제거하는 최종 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제 4항 또는 제 5항에 있어서, 고체 지지체의 글리콜 유형의 상기 기를 수득하기 위한 5′ 또는 3′OH 기의 탈보호에 통상의 조건하에서, 무수 산성 매질에서 상기 고체 지지체의 상기 에폭사이드 기를 개환하는 사전단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 하기 일반식으로 표시되는 화합물 :
    상기 식에서, R1,R1′,R1″,R2및R2′중 하나는 무기 또는 유기 중합체, 또는 무기 또는 유기 중합체로 치환된 탄화수소 라디칼을 의미하며, 다른 것들은 구체적으로 하나 이상의 할로겐(들)로 임의로 치환되는 알킬기와 같은 불활성기 또는 H를 각각 독립적으로 의미하고, Nu는 NH2, 할로겐, -OAlK, -SAlK, -NHAlK, -NHAc, -OAc, -SAc, 또는 -N(AlK)2와 같은 친핵성 기이며, 이때, AlK 및 Ac는 각각 구체적으로 하나이상의 할로겐(들)로 임의로 치환되는 알킬 및 아실기이다.
  8. 제 7항에 있어서, Nu가 -N(AlK)2, -NHAC, -OAc, -SAc 또는 할로겐을 의미하며, 여기서, AlK 및 Ac는 각각 하나 이상의 할로겐(들)로 임의로 치환되는 C1내지 C4알킬 및 아실기를 의미하는 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제 7항 또는 제 8항에 있어서, 상기 고체 지지체가 하기 일반식의 화합물에 해당하는 것을 특징으로 하는 화합물 :
    상기 식에서, R1, R2및 Nu는 제 7항에 제시한 의미와 동일하다.
  10. 제 9항에 있어서, 상기 화합물이 하기 일반식의 화합물중 하나인 화합물 :
  11. 제 7항 내지 제 9항 중 어느 한 항에 있어서, (R1및 R2) 또는 (R1′ 및 R2′)은 함께 고리, 구체적으로 중합체가 치환된 채로 나타나는 헤테로고리를 형성하는 것을 특징으로 하는 화합물.
  12. 제11항에 있어서, (R1및 R2) 또는 (R1′ 및 R2′)가 함께 리보스를 형성하며 Nu가와 같은 보호기로 보호된 2′-O 작용기를 의미하는 것을 특징으로 하는 화합물.
  13. 제 1항 내지 제 6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 고체 지지체가 제 7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물로 구성되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  14. 제 2항 내지 제 6항 또는 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 뉴클레오티드 단량체 시약이 하기 일반식의 화합물에 해당하는 것을 특징으로 하는 방법 :
    상기 일반식에서, A는 H 또는 임의로 보호된 히드록실기를 의미하고, B는 그 외부고리 아민 작용기가 임의로 보호된 퓨린 또는 피리미딘 염기이며, C는 5′-OH 작용기의 통상의 보호기이고, x는 0 또는 1이며, 이때, ⒜ x가 1이면, R3은 H를 나타내고, R4는 음으로 하전된 산소 원자를 의미하거나, 또는 R3은 산소 원자이고 R4는 산소 원자 또는 보호기를 보유한 산소 원자를 의미하며, ⒝ x가 0이면, R3은 보호기를 보유한 산소 원자이고, R4는 할로겐 또는 이치환된 아민기이다.
  15. 제 1항에 있어서, 단량체 시약이 x가 0이고, R3가 보호기를 보유한 산소 원자이고, R4는 이치환된 아민기인 일반식(Ⅲ)에 해당하는 화합물인 포스포르아미다이트 합성 방법인 방법.
  16. 제 1항 내지 제 6항 또는 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 중합체가 유리 미소비드 또는 미소섬유, 구체적으로 다공성인 유리 미소비드 또는 미소섬유, 실리카, 금속 산화물, 셀룰로스 또는 유기 중합체, 특히 셀룰로스 형태인 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 제 1항 내지 제 6항 또는 제13항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 중합체가 특히 유리 또는 실리카기재로 이루어진 무기 중합체인 것을 특징으로 하는 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019960700059A 1993-07-09 1994-07-07 고체 지지체상에서 핵산을 합성하는 방법 및 이 방법에서 고체 지지체로서 유용한 화합물(process for solid support nucleic acid synthesis and compounds useful as solid supports in said process) KR960703937A (ko)

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