KR960010948B1 - Hiv-2 비루스 변이체 - Google Patents
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Abstract
내용없음.
Description
제1도는 람다 D194 및 HIV-2 ROD 27/35의 p 24 및 gp 41 단백질에 대한 염기 서열 및 아미노산 서열의 상이성을 나타낸다.
제2도는 본 발명에 따라 분리한 비루스와 알려진 HIV간의 제한 효소지도의 비교이다.
제3도는 HIV-2 ROD 및 HIV-2 D194의 피복 단백질 gp 120에 대한 염기 서열의 상이성을 나타낸다.
제4도는 클론화된 HIV-D194의 염기 서열이다.
제5도는 제2도의 HIV-2 A7.1 클론에 대한 HIV-D205의 부분적인 염기 서열이다.
제6도는 HIV-D194 및 HIV-2 ROD간의 각 기능 요소에 대한 상동성을 %로 나타낸 것이다.
제7도는 HIV-2 D205.7과 HIV-SIV 군에 대한 염기 서열의 상동성을 나타낸 것이다.
제8도는 HIV-2 D205와 HIV 및 SIV에 대한 염기 서열의 상동성을 나타낸다(5).
제9도는 기능적으로 잘 알려진 안티비루스 항원에 상응하는 열린 발현틀을 나타낸다.
제10도는 프라이머에 의한 적당한 제한효소 단편이 삽입되어진 운반체의 구성을 나타낸다.
본 발명은 HIV-2 비루스 변이체, 즉 당해 분리된 비루스 HIV D194(ECACC V 87122303) 또는 감염된 셀라인(cell line) HUT 194(ECACC V 87122306) 및 분리된 비루스 HIV D205(ECACC V 87122304)로부터 클론(clone)될 수 있는 비루스 HIV D194와 HIV D205에 관한 것이고 RNA 또는 RNA -단편 및 이것으로부터 유도된 DNA 및 DNA-단편 및/또는 단백질 및 진단과 치료에 이것을 사용하는 것에 관한 것이다.
대식세포에서 잘 복제하는 두개의 서아프리카 사람의 면역결핍 유형 2 비루스, 즉 신경병학적 후천성 면역결핍증 경우로부터의 Gambian 분리물과 많이 분리되는 Ghanesian 분리물의 분자 클로닝(Kuhnel, H., V. Briesen, H., Dietrich, U., Adamski, M., Mix, D., Biesert, L. Kreutz, R., Immelmann, A., Henco, K., Meichsner, Ch., Andreesen, R., Glderblom, H. ＆ Rubsamen-Waigmann, H., 1989, Proc. Natl, Acad. Sci. 86, 4, 2383-2387.).
진단학에서, 두개의 범주, 즉 검사될 항원에 대한 특이성과 민감성이 요구된다. AIDS의 진단학에서 기타 감염으로부터 HIV 감염의 한계를 정하여 HIV-2-관련된 감염 또는 HIV-1-관련된 감염의 종류들을 대략적으로 지정하기 위해 분리물 HTLV-ⅢB및 LAV-2를 사용함에 의해(Guyader, M.와 그의 동료, Nature 326, 1987, 662-669) 특이성에 대한 요구가 확실히 응해질 수 있다. 그러나, 진단의 민감성에 의해 문제가 생긴다.
소위 혈청전환, 즉 감염된 사람내 항체의 초기 출현의 범위에서, 민감성의 감소로 부정적테스트 결과의 수가 증가한다. 따라서, 테스트 감도를 증가시킴에 의해 감염과 이러한 감염의 검출 사이의 기간을 가능한 단축시키는 것이 하나의 중요한 목적이다.
널리 이용된 ELISA 진단학의 실행에서, 감소된 교차 반응성은 예를 들어 감소된 민감성으로 증명된다.
그러므로, 기술된 HIV-1의 사용은 100-1000배로 HIV-2 혈청에 대한 테스트 감도의 평균 감소를 의미하는 한편 HTLV-ⅢB는 거의 검출되지 않는다.
HIV에 의해서 발생하는 질병의 원리는 각각의 HIV-1 및 HIV-2 비루스의 표현형과 유전형이 단일한 형태가 아니라는 사실이다. 이것은 다소 큰 연관된 비루스군을 전제로 하면 이들 상호간 엄격히 구분할 수 있는 방법이 없으나 각각이 연속적으로 서로에 속하여 진화적으로 더욱더 다양성이 증가하며 이와 동시에 서로간의 게놈을 교환하는 재조합 현상이 일어난다. 따라서 현존하는 HIV 종은 넓고 연속적인 군락을 형성하고 있어 한 비루스 변이체를 포함시킬 특정 군락이 없다. 따라서 시간에 따라 영원히 변화를 받는 연속체로 정의하는 편이 낫다.
분류된 비루스 변종 HIV-1 및 HIV-2는 비교적 적은 관계성을 지닌 광범위하게 한계가 정해진 아집단의 대표이며, 이것은 단지 부분적인 교차 반응성에 의해 입증된다. 다른 한편, HIV-1 그룹의 변종이 있는데(Rubsamen-Waigmann, H.와 그의 동료, AIDS-Forschung 10, 1987, 572-575 ; Rubsamen-Waigmann, H.와 그의 동료, J. Med. Virol, 19, 1986, 335-344 ; V. Briesen, H.와 그의 동료, J. Med. Virol. 23, 1987, 51-66), 이것은 첫번째로 특정된 HIV-1 분리물 자체보다 HIV-2와의 더 강한 교차반응을 한다(Hahn, B.와 그의 동료, Nature 312, 1984, 166-169). 이러한 분리물로 구성된 통상적인 생성물은 HIV-2 양성으로서 상기 기술된 표준 분리물 HTLV-ⅢB보다 더 명확하게 혈청을 진단한다.
이상적인 진단 혹은 치료에 이용되는 물질은 다른 것과 생물학적으로 분명히 특정지울 수 있는 특성을 하나 이상 포함하고 있어야 한다.
매우 다양한 HIV-1 비루스의 유전적 변이체들은 각각 ARC, LAS, AIDS 및 뇌질환등의 서로 다른 질병을 일으킨다(ARC : AIDS-합병증, LAS : 임파선증, AIDS : 후천성면역결핍증). 클론화된 비루스 변이체들은 이같이 같은 시간에 같은 장소에서 같은 환자에게서 조차 분리된 것이라도 염기 서열 및 제한효소 절단 형태가 다르다(Rubsamen, H. et al., 1986).
이것은 HIV-1 비루스 변이체가 어떤 비루스 항원과 약 15% 이상 다르다는 것을 보여준다.
HIV-2의 경우는 어떤 항원과 치환, 삽입, 결손등에 의해 40% 이상 아미노산이 차이가 난다(Guyader, M. et al., 1987 ; Rabson, A. B. ＆ Martin, M. A. Cell 40, 1985, 477-480).
본 발명은 2개의 HIV-2 비루스의 변이체를 제공한다. 한 변이체는 임상적으로 무증후성 환자로부터 분리한 것이고 다른 하나는 소위 신경-AIDS로 불리우는 병의 환자로부터 분리한 것이다.
분리된 비루스는 DNA/RNA에 관련해서뿐 아니라 비루스 항원과 관련한 진단용 시약으로서 혈청학적으로 또는 직접적으로 HIV-2에 감염된 전단계-AIDS 및 AIDS 단계를 진단하는데 이용할 수 있다.
본 발명에 의해서 분리된 비루스는 비루스 및 프로비루스를 포함하며, 이들의 특성은 제한효소지도 및 클론화된 부분의 서열로써 나타내어진다(제2도에서 8도). 더욱더 분리된 비루스는 상기된 비루스 및 프로비루스와 염기 서열이 오직 5% 정도, 바람직하게는 2%, 더욱 바람직하게는 1% 차이를 갖는 비루스를 포함한다.
본 발명에 있어서의 비루스 변이체는 임파선증(앞으로 LAS/AIDS로 표기) 혹은 심각한 신경성 질병(뇌질환증)을 일으킨다. 본 발명에 따른 청구는 언급한 비루스 변이체의 발현 생성물 및 특히 항원, 특별히 응집된 혹은 순수한 형태, 그리고 위의 발현 생성물의 전체적 혹은 부분적 혹은 부분의 조합에 의한 생성 공정을 포함한다. 발현 생성물은 글리코실화된 혹은 메리스틸화된 형태의 클론화된 RNA 및 DNA의 양성 혹은 음성 가닥에 암호화된 모든 폴리 펩티드를 포함하는 경향이 있다.
더욱 구체적으로 클론화된 DNA 서열이 비루스 변이체의 게놈 RNA 및 DNA와 혼성할 수 있는 것을 포함한다. 본 발명에 따른 청구는 이들 및 다른 HIV 변이체 혹은 관련된 비루스 혹은 DNA 프로비루스를 검출하는데 적당한, 특히 생물학적으로 혹은 반 합성적인 시료에 적당한, DNA서열을 포함하는 안정한 유전자 프로브를 포함한다.
본 발명은 더욱 구체적으로 본 발명에 따른 특정 조건하에서 변이체 비루스와 혼성화되는 비루스 변이체의 RNA/DNA, 좀더 특정적으로 C-DNA, 게놈 DNA, 재조합 DNA, 합성 DNA 혹은 그로부터의 단편들을 포함한다. 이것들은 본 발명에 따른 비루스 변이체와 비교해서 결손 및 삽입됨을 보이는 것으로 이해되어 진다.
혼성화 및 세척의 특정 조건을 실험 혹은 계산을 통해서 이해되어 지는데 만일 100% 동일한 핵산 복합체의 용융점은 사용된 완충용액하에서 혼성화 및 세척의 조건이 5℃ 이하로 내려가지 않는다.
또한 본 발명에 있어서 클론화된 합성 프로브는 상기한 비루스 변이체로부터 유도되어지며 진핵 혹은 원핵 세포의 운반체 시스템으로 사용될 수 있다.
상기한 클론화된 DNA 단편은 비루스 변이체의 검색진단에 이용하기 위해서 상보적인 핵산(DNA/RNA)와 혼성화시키는데 적당하다. 본 발명에 따른 진단시험은 DNA 혹은 RNA 프로브를 가지고 수행할 수 있다.
프로브는 방사선 동위원소 혹은 생물학적 혹은 화학적 발광 물질이나 효소 혹은 특별하게 연계반응계를 통해 검출할 수 있는 효소로 표식되어 진다.
혼성화는 균일하거나 혹은 균일하지 않은 고체-고정화 핵산 용액에 의해 영향을 받으나 고체로 쓰이는 막, 입자, 세포 혹은 조직들은 근본적으로 영향을 미치지 않는다.
본 발명에 따라서 분리된 비루스로부터 이에 상응하는 DNA 서열은 람다-유전자 게놈 집합체의 형성에 의해 E. Coli 세균내에 클론화되고 비루스에 의해 감염된 임파구의 DNA로부터 시작된 DNA 서열을 청구한다. 원하는 클론은 gag-pol 부위의 STLVⅢ 서열에 의한 플라크-검색을 통해 얻을 수 있다. 좀더 구체적으로, 공시된 HIV-2 ROD 서열로부터 유도된 DNA를 프로브로 이용하던가(Guyader, M. et al., Nature 326, 1987, 662-669) 혹은 본 발명에 따른 분리된 HIV-2 D194 및 HIV-2 D-205의 부분적인 서열로부터 유래된 프로브를 사용할 수 있다. 따라서 제3도로부터 엄격한 조건하에서 HIV-2 D194의 변이체에만 혼성화하고 HIV-2 ROD 변이체에는 혼성화하지 않는 프로브가 유도된다.
본 발명에 따른 비루스를 이용한 진단 방법은 다음 단계를 포함한다 : 생물학적인 시료로부터 RNA 혹은 DNA를 추출하고, 가능하면 제한효소에 의한 효소 반응을 시키고, 겔 전기영동 및/또는 핵산 결합 운반체에 직접 블롯팅시키는 방법으로 분리시킨 다음, 본 발명에서 청구하는 비루스의 클론화된 단편 부분과 혼성화시킨다. 혼성화는 화학적으로 처리된 세포 혹은 조직내에서 바로 실행할 수 있을 것이다. 이때 조직 또는 액체의 기원은 문제되지 않는다.
구체적으로, 본 발명 비루스의 발현 생성물에 대한 항체의 시험관내 검출방법은 비루스의 발현 생성물 또는 이들의 일부분이 면역학적 방법에 의해 검출되어지는 것을 특징으로 한다. 이 방법은 발현 생성물이, 본 발명의 특허청구의 범위 제1항에서 특징지워지고 합성 또는 생합성 공정에 의해 제조되는 프로비루스 부분서열의 DNA상에 있는 열린 판독 구조내에 암호화되어 있는 단백질, 펩티드 또는 이들의 일부분이라는 것을 특징으로 한다.
또한 이 방법은 미리 일정량의 또는 발현 생성물 또는 이들의 일부분의 조합물을 미세 적정판에 고정시킨 다음 희석시키거나 희석시키지 않은 생물학적 샘플을 상기의 피복된 미세 적정판과 접촉시켜 배양 및 세척시킨 후 검출시약 또는 라벨시킨 항-HIV 항체로서 동정할 수 있음을 특징으로 한다.
이와는 달리 여과 스트립 및 플라스틱 스트립 혹은 로드를 미세 적정판 대신 사용하는데 이때는 이종 항원을 별도로 도포하여 비루스의 발현 생성물을 각각 특정 위치에 고정시킨다. 발현 생성물 또는 이들의 일부분을 겔 전기 영동으로 분리시키고 블롯팅시켜 이동시킨 다음 항-HIV 항체와 배양시켜 검출한다.
검출은 항원 결정인자가 결합된 고체상 운반체상에서 수행하며 고체상 운반체는 입자로 되어 있다.
발현 생성물은 시험관에서 감염된 세포에서 유래된 비루스 항원이며 이 항원은 고정 세포에 결합된 항원으로서 생물학적 시험물질과 접촉하게 되고, 연속하는 항체 결합은 예를들어 세포형광측정기(cytofluorimeter)와 같은 장치를 사용함으로써 또는 발색적으로 면역학적 검출 시약으로 측정가능하다.
항원은 경쟁적인 ELISA에 의해 측정가능하다. HIV-관련 핵산(DNA 또는 RNA)은 생물학적 샘플인 세포내에서 본 발명에 따른 분리된 핵산을 사용함으로써 분리된 형태로 검출할 수 있다.
발현 생성물은 다른 HIV 변이체와 관련이 있지만 본 발명의 분리체의 물질과는 생물학적 성질이 다른 물질에 의해 보충되어질 수 있다.
진단 및 치료의 목적으로 상기한 DNA 단편은 암호화된 항원, 이들의 일부분 또는 다른 항원과의 조합물을 발현시키는데 사용할 수 있을 것이다. 제어 서열의 조절을 목적하여 DNA 단편을 조절하여 원핵 또는 진핵의 표적 세포, 조직 또는 다세포 기관에 첨합시켜 암호화된 항원, 이들의 일부분 또는 다른 항원들과의 조합물을 생성할 수 있도록 자극시킨다. 항원은 항-HIV-2항체에 의해 검출되어지며, 좀더 구체적으로는 환자의 혈청으로부터 검출한다. 긴 열린 판독 구조(50개 이상의 아미노산)를 갖는 항원은 자체가 RNA수준(level)에서 스프라이싱 공정(splicing process)을 거치게 되며 이렇게 함으로써만이 긴 열린 판독구조를 형성하게 된다.
본 발명에 있어서 그외의 청구사항은 검사할 때 물질내에 유사한 항원 결정인자를 함유함으로써 면역학적으로 교차반응하게 되는 항원을 검출하기 위한 본 발명의 클론화된 비루스 변이체로부터 얻은 폴리펩티드이다. 이것은 특별히 AIDS의 진단 및 비루스 운반체의 전구-AIDS, 또는 무증후성 비루스 운반체 또는 비루스 생성물이 적당하며 이들은 혈액으로부터 유래된다. 또한 본 발명에 따른 비루스 발현 생성물로서의 상기 항원성 폴리펩티드에 대한 항체의 혈청학적 검출은 ELISA와 같은 종래의 반응계를 사용함으로써 가능하다. 면역원성 폴리펩티드는 AIDS 감염에 대해 보호를 하는 백신으로 사용되어질 수도 있다.
본 발명에 따른 폴리펩티드는 유전자 공학적 방법에 의해 얻어진 단편을 포함하며 이것은 긴 열린 판독구조로부터 시작되어질 뿐아니라 세균의 스타린(starin) 생성시 단백질 분해효소 또는 프로테아제를 사용함으로써 시험관내에서 얻을 수 있을 것으로 사료되어진다.
본 발명에 따른 비루스 분리체 및 이로부터 얻어진 생성물은 시험계에서 부분적으로 HIV-2 집단의 다른 분리체, 즉 예를들어 분리체 HIV-2 ROD(Guyader, M. 등 1987)와 같이 상기한 집단의 수준에서 가능한 멀리 떨어진 분리체와 혼합시킬 수도 있다. 이로써 하나의 시험으로 연관성이 먼 집단에 대한 선택적인 검출이 가능해진다.
본 발명에 따른 비루스 변이체들은 HIV-1 변이체 스펙트럼과는 매우 다르며, 상당한 정도까지 차이가 나긴 하지만 Guyader에 의해 기술된 HIV-2 비루스와 분자 연관성이 더 밀접하다(제1, 2, 3도). 또한 생물학적인 특성은 기술된 HIV-2 분리체와 현격히 차이가 난다. 따라서 본 발명에 따른 변이체는 시험관내복제에 효과적이고 골수 세포에 더 바람직하다. 반대로 임파구에서는 잘 복제되지 않는다. 이러한 특성은 특히 HIV-D194에서 잘 나타난다.
본 발명에 따른 HIV-D194 비루스는 단지 감염된 환자에만 뇌질환을 일으키며, 극히 짧은 시간에 병이 급진전되어 환자는 사망하게 된다. 본 발명에 청구된 비루스 샘플은 부다페스트조약에 따라 HIV D194(기탁번호 V 87122303) 및 HIV D205(V 87122304)로 유럽 동물세포 배양협회(ECACC)에 분리체 형태로 기탁되었다.
비루스 분리체 HIV D194로 감염된 셀 라인이 HUT 194(ECACC V 87122306)로 상기 기관에 기탁되었다.
제1도는 람다 D194 및 HIV-2 ROD 27/35의 p 24 및 gp 41 단백질에 대한 누클레오티드 서열 및 아미노산 서열의 상이성을 나타낸다(Guyader, M. 등 1987, Nature 326, pp 662-669).
제2도는 본 발명에 따른 비루스 분리체와 기지의 HIV간의 제한 효소지도의 비교이다.
제3도는 HIV-2 ROD(Guyader, M. 등 1987) 및 HIV-2 D194의 누클레오티드 서열로서, 피막단백질 gp 120의 암호부위에서 본 발명에 따른 HIV-2-D194 변이체와의 상당한 상이성을 나타낸다.
상기 서열의 단면은 누클레오티드 서열과 비교할 때 HIV-2 D194 및 HIV-2 ROD(Guyader, M. 등, 1987)간의 gp 120 분위의 서열과 이에 상응하는 한글자로 나타낸 아미노산 서열을 보여준다. 표시된 위치는 HIV-2 ROD를 나타낸다. (-)는 결실/삽입을 나타낸다. (·)는 동일한 누클레오티드를 나타낸다.
제4도는 HIV-D194 클론을 특정짓는 누클레오티드 서열이다. N 혹은 O로 나타낸 누클레오티드의 위치는 겔 패턴으로부터 명확하게 유도되지 않는 것이다. 이 서열은 LTR의 R/U5 부위에서 시작하고 U5 부위에서 끝난다.
나타난 서열은 서브클론 L10(제한효소지도 참조)으로부터 유래된 것이다. 클론 HIV-D194.5에서 유리된 5kb의 상동서열과 비교하여 측정하였기 때문에 이 클론은 동일한 환자의 혈액 샘플에서 유래한 다른 클론의 누클레오티드 서열과 약 1% 정도 차이가 난다.
제5도는 제2도의 HIV-2 A7.1 클론에 상응한 HIV-D205의 부분적인 누클레오티드 서열이다.
제6도는 HIV-D194 및 HIV-2 ROD간의 각각의 기능 요소에 대한 상동성을 %로 나타낸 것이다. env부위는 제3도에서와 같이 내부 연관성이 없기 때문에 제외된다.
제7도는 HIV-2 D205.7과 HIV/SIV 군에 대한 누클레오티드 서열의 상동성을 나타낸다.
제8도는 HIV 및 SIV 균주와 비교되는 HIV-2 D205의 누클레오티드 서열의 상동성을 나타낸다(%).
제9도는 기능적으로 잘 알려진 항비루스 항원에 상응하는 열린 판독 구조를 나타낸다.
제10도는 당해 제한효소 단편으로서 적당한 벡터로 삽입되어진 프라이머 중개된 구성을 나타낸다.
HIV-D194와 HIV-D205의 실험결과 및 특성은 Kuhnel, H. 등 (1989) Proc, natl, Acad, Sci, 864, 2383-2387에 기술되어 있다.
HIV-D194 서열에서는 HIV-D205의 단편에서와 같이 소위 '열린 판독 구조'들이 많이 나타난다. 이들 대부분의 판독 구조는 상기한 HIV-비루스와의 상동성 비교에 의해서, 또는 감염된 HUT 78 또는 U937세포로부터 유래된 HIV-D194 및 HIV-D205 항원과의 웨스턴 블롯팅의 비교에 의해서, 또 환자나 비교혈청에 상동하는 혈청과 프로브에 의한 비교에 의해 생체내에서 발현된 단백질/항원과 관계가 있다.
다른 열린 판독 구조는 기능으로 정의된 항원 또는 웨스턴 블롯팅상의 항체 염색에 의한 발현된 하원의 수준에서 확인되지 않는다. 그러나 이들은 생체내에서 특정한 환경에서 발현가능하다. 기타 판독 구조, 심지어 짧은 구조도 핵산서역 데이타에 기준할 때 겹쳐지기 때문에 예견하기 어렵지만 어느 정도 발현될 수 있다.
생물학적 기능, 진단시 표적 항원 또는 면역성 투여에 있어서 중요하기 때문에 발현된 단백질 상의 항원결정인자는 표시된 선형의 단백질 서열 전반에 걸쳐 퍼져 있다. 이들 서열의 부분들은 항원부위에 대한 펩티드 스크리닝/맵핑(screening/mapping)에 의해 표시될 수 있는 다른 것들보다 더 일반적인 항원 특성을 가질 수 있다. 이러한 부위는 단일 항원 결정인자로서 또는 연속 폴리펩티드로서 또는 시험관내나 합성적으로 스프라이싱된 항원의 변형으로 표시될 수 있다. 발현된 생성물의 항원성은 항원 고정 및 웨스턴 블롯팅 분석에 의해 나타낼 수 있다. E. coli내에서 항원 발현의 구성은 합성유전자, 클론화된 비루스 게놈 부위에서 얻은 제한효소 단편, 이들에서 얻은 생성물을, 엑소누클레아제 또는 DNase Ⅰ을 이용함으로써 또는 적당한 제한효소 절단부위와 함께 발현될 단편의 5' 및 3' 말단을 나타내는 서열 특이 합성 프라이머를 이용함으로써 일반적인 기술에 의해 가능하다. 이러한 제한효소 절단 부위는 다수의 클로닝 부위(PEX)를 갖는 PL034(Romault et al 1981 Gene 15, 81-83)로부터 유래된 상이한 세포의 발현 벡터에 있어 접합에 쉽게 이용된다.
발현된 항원은 환자의 혈청과 특이적으로 반응함을 나타낸다. HIV-D205의 gag로부터 얻어진 P27(24)는 전형적인 HIV-1 혈청 및 전형적인 HIV-2 혈청(Kuhnel et al 참조)와 매우 민감하게 반응한다.
제3도에서 나타난 부위와 상응하는 항원성 서열은 HIV-변이체의 특별한 아과에 의해 대해 특이적이다.
[실시예 1]
HIV-D194의 gag-pol 부위로 구성되는 Kpn-Kpn 단편과 같은 클론된 아단편을 30-40℃ 이하 조건에서 혼성화하고 상동 서열에 적당한 조건에서 세척함에 의해 HIV-2 형태 및 SIV 형태 서열에 대한 프로브로서 사용하였다.
HIV-1 서열은 블롯에서는 나타나지 않고 이 부위가 항 HIV-1 혈청과 교차 반응하는 p 24/27 암호 부위를 포함하지만 그 자리 혼성화에서도 명확하게 나타나지 않는다. 그러나 제3도에서 나타난 핵산 프로브는 알려진 모든 HIV 분리체와 비교해서 HIV-D194의 특이적인 아족을 검출하는데 매우 민감하다. 이것은 특별한 부위의 런-오프 RNA(run-off RNA)를 사용한 그자리 혼성화에 의해 나타난다.
Claims (26)
- 비루스 분리물 HIV D194(ECACC V 87122303) 및 비루스 분리물 HIV D205(ECACC V 8712304).
- 제한효소 지도 작성시 형성된, 에러(errors)에 의해 발생할 수 있는 통상적인 변이내에서 다음과 같은 제한효소 엔도누클레아제 절단 부위 특징에 따르는 프로비루스 부분 서열을 갖는 DNA.
- 제1항의 비루스 분리물의 단편 및 cDNA.
- 제1항에 따른 비루스 분리물에서 얻은 단편 및 비루스 RNA.
- 제1항에 따른 비루스 분리물에서 출발하는, DNA 단편을 함유하는 재조합 DNA.
- DNA 또는 RNA가 라벨된 상보적인 DNA 또는 RNA 사슬과 혼성으로 존재하는 제1항 내지 제4항중 어느 한항에 따른 비루스 분리물의 DNA 또는 RNA.
- 비루스 DNA 또는 이들의 일부분에 상보적인 것을 특징으로 하는 제1항 내지 제5항중 어느 한항에 따른 DNA.
- 엄격한 조건하에서 제2항에 따른 핵산과 혼성되는 변형 또는 변형되지 않은 형태의, 특히 HIV 게놈의 과변이 부위에, 더 상세하게는 피복 단백질을 암호화하는 부위에 상응하는 핵산 기술.
- 제1항에 따른 비루스 분리물의 발현 생성물.
- 단백질, 펩티드 또는 단편이 제2항에 따른 DNA 상의 열린 판독구조의 의미에 따라 암호화하는 것을 특징으로 하는 제1항에 따른 발현 생성물.
- 비루스의 발현 생성물 또는 이들의 일부분이 폴리펩티드이고 항체/항원 상호작용으로 검출하는 것을 특징으로 하는 제1항에 따른 비루스의 발현 생성물에 대한 항체의 시험관내 검출방법.
- 제11항에 있어서, 발현 생성물이, 제2항에 따른 DNA 상에서 열린 판독 구조의 의미로 암호화된 단백질, 펩티드 또는 이들의 일부분이고, 세균의 스타린(starin) 생성시 단백질 분해효소에 의해 또는 프로테아제를 사용함으로써 시험관내에서 얻어지는 것 뿐아니라 더 긴 열린 판독구조에서 출발하여, 유전공학적 방법으로 얻어지는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제11항 또는 제12항에 있어서, 발현 생성물 또는 이들의 일부분의 한정량 또는 조합물을 먼저 미세적정판에 고정시킨 다음 이러한 피복된 미세 적정판과 희석시키거나 희석시키지 않은 생물학적 샘플을 접촉시켜 배양 및 세척시킨 후 라벨시킨 항-HIV 항체 또는 검출시약을 사용하여 동정시킬 수 있는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제11항에 있어서, 미세 적정판 대신 여과 스트립(strip) 및 플라스틱 스트립 또는 로드를 사용하는데, 상이한 항체를 별도로 피복시킴으로써 비루스의 발현 생성물이 각각의 특정 위정에 고정되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제11항에 있어서, 발현 생성물 또는 이들의 일부분을 겔 전기 영동시켜 분리시킨 다음 블로팅시켜 이로시키고 항-HIV 항체로 배양시켜 검출시키는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제11항에 있어서, 검출이, 입자로 이루어지고 항체 결정기가 결합되어 있는 고체상 담체에서 수행되는 것을 특징으로 하는 방법/
- 제11항에 있어서, 발현생성물이, 시험관내에서 감염된 세포에서 유도된 비루스 항원인데 이 항원이 고정된 세포에 결합되어 있는 항원으로서 생물학적 시험 물질과 접촉하고, 이에 결합되는 항체가 면역학적 검출시약으로 세포형광 측정기 같은 장치를 사용함으로써 또는 발색적으로 검출되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제11항에 있어서, 상기 항원이 경쟁적인 ELISA에 의해 검출되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제2항에 따른 핵산을 사용하여 생물학적 샘플인 세포에서 HIV 연관된 핵산(DNA 또는 RNA)을 분리된 형태로 검출하는 방법.
- 제11항에 있어서, 이종(異種)의 HIV 변이체와 관련되었지만 제1항에 따른 분리물의 물질과는 생물학적 성질이 다른 물질에 의해 발현생성물이 공급되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항에 따른, 비루스 분리물의 비루스에 의해 암호화된 발현생성물을 함유하는 면역원 조성물(immunogenic composition).
- 제21항에 있어서, 하나의 항원이 전체 막 항원의 일부분을 구성하거나 또는 전체 막 항원 또는 이들의 유도체 또는 막 항원의 일부분의 혼합물인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항에 따른 비루스 분리물의 발현 생성물에 대한 항체.
- 제2항에 따른 DNA로 암세포화된 세포.
- 제1항의 비루스 분리물 HIV D194(ECACC V 87122303) 및 비루스 분리물 HIV D205(ECACC V 87122304)로 감염된 세포.
- 셀라인 HUT 194(ECACC V 87122306).
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