KR960001122A - 재조합 단일사슬 Fv 항체 절편과 B형 간염 바이러스 표면 항원의 면역정제를 위한 그 용도 - Google Patents

재조합 단일사슬 Fv 항체 절편과 B형 간염 바이러스 표면 항원의 면역정제를 위한 그 용도 Download PDF

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KR960001122A
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coli
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아얄라 아빌라 마르타
빅토르 가빌론도 코울리 죠르지
엘레나 페르난데즈 드 코시오 도르타-두퀴 마리아
미구엘 카난-하덴 프리아스 레온라도
델 카르멘 도밍구에즈 호르타 마리아
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엠. 리몬타 비달
센트로 드 잉게니에리아 제네티카 와이 바이오테크놀로지아
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    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)

Abstract

본 발명은 B형 간염 바이러스 표면 항원(HBaAg)에 특이성을 가지는 재조합 단일사슬 Fv(scFv) 항체 절편 및 재조합 DNA 기술을 이용하여 E.coli에서 scFv 절편을 제조하는 방법에 관한 것이다. 이 scFv는 이러한 항원을 제조하기 위한 공지의 방법의 정제단계중 하나에 사용되는 마우스 모노클로날 항체(MAb)CB-Hep.1을 대체할 수 있다. scFv항체 절편은 DNA 재조합 기술에 의해 MAb CB-Hep.1의 헤비사슬과 라이트사슬가변영역을 코드하는 유전자를 클로닝하고 변성하여 제조된다. scFv 절편은 HBsAg에 특이성을 나타내며 MAb보다 작은 크기이고, 박테리아 배양물(E.coli)로부터 제조된다. scFv는 백신 제조의 활성 원료물질로 사용되는 재조합 HBsAg의 정제에서 면역흡착제로써 이를 이용하기 위하여 상기한 배양체로부터 수집된 물질로부터 정제되고 크로마토그래피 지지체상에 고정화된다. HBsAg에 대한 그 특이성 때문에, 절편은 HBsAg를 인지하거나 검출하는 면역에세이에 사용될 수 있다. MAb CB-Hep.1의 헤비사슬 가변영역의 단백질 시퀀스의 일부는 박테리아의 내부막과 결합하여 이러한 방법으로 정제를 촉진하는 E.coli에서의 발현을 위해 융합 단백질을 구성하는데 사용될 수 있다.

Description

재조합 단일사슬 Fv항체 절편과 B형 간염 바이러스 표면 항원의 면역정제를 위한 그 용도
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 15% SDS-폴리아크릴 아미드 겔 조건하에서 32 내지 33 kDa의 새로운 단백질이 발현되어 불용화되고 세포 구조물과 결합된 것을 나타내는 상기한 겔에서의 생체량 샘플 분석을 나타낸 것이다. MM294에서 그 발현정도는 총 박테리아 단백질의 약 15 내지 20%였다.

Claims (9)

  1. B형 간염 바이러스 표면 항원에 대한 특이성을 가지고, 본질적으로 시퀀스 리스트에서 번호 1과 2로 확인되는 시퀀스로 이루어진 가변영역 시퀀스를 가지는 것을 특징으로 하는 단일 사슬 Fv형의 재조합 항체 절편.
  2. HBsAg의 면역정체를 위한 제1항에 따른 scFv의 용도.
  3. B형 간염 바이러스 표면 항원을 인지하고 검출하는 면역에세이를 위한 제1항에 따른 scFv의 용도.
  4. 재조합 또는 천연 HBsAg의 면역정제를 위한, 제1항에 따른 가변영역시퀀스 또는 그 일부를 함유하는 천연, 합성 또는 재조합 항체 절편 또는 펩티드의 용도.
  5. 재조합 또는 천연 HBsAg를 인지하고 검출하는 면역에세이를 위한, 제1항에 따른 가변영역시퀀스 또는 그 일부를 함유하는 천연, 합성 또는 재조합 항체 절편 또는 펩티드의 용도.
  6. E.coli에서 발현된 이종 융합 단백질의 불용화를 위한, 제1항에 따른 가변영역 시퀀스 또는 그 일부를 함유하는 천연, 합성 또는 재조합 항체 절편 또는 펩티드의 용도.
  7. scFv항체 절편은 코드하는 뉴클레오티드 시퀀스와 특정한 숙주세포에서 scFv항체 절편을 발현할 수 있는 조절 시퀀스를 함유하는 재조합 핵산을 제조하여, 이 재조합 핵산으로 상기한 특정 숙주세포를 형질전환하고, 형질전환된 숙주 세포를 배양하여 여기에서 제조된 scFv항체 절편을 단리하는 것으로 이루어진 제1항에 따른 scFv항체 절편을 제조하는 방법.
  8. 제7항에 있어서, 상기 숙주 세포가 원핵 숙주 세포, 예를 들면, E.coli인 것인 방법.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서, 제조된 scFv항체 절편이 불용성 숙주분획에서 단리되는 것인 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019950015455A 1994-06-09 1995-06-09 재조합 단일사슬 Fv 항체 절편과 B형 간염 바이러스 표면 항원의 면역정제를 위한 그 용도 KR960001122A (ko)

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