KR940003055B1 - 오보매크로 글로블린을 함유하는 화장품 및 창상치료제 - Google Patents

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Description

오보매크로 글로블린을 함유하는 화장품 및 창상치료제

제1도는 열상을 입은 생쥐를 사용한 상처치료 시험에 있어서의 생쥐의 체중변화를 나타내는 그래프.

제2도는 염증을 일으킨 생쥐에 본 발명의 치료제를 투약한 후, 8일째의 그 조직의 단면도.

제3도는 친수성 연고제를 투약한 대조용 생쥐의 조직 단면도.

제4도는 열상을 입은 생쥐에 본 발명의 치료제를 투약한 후, 6일째의 환부 외관을 나타내는 도면.

제5도는 대조용 생쥐의 환부 외관을 나타내는 도면.

제6도는 열상을 입은 생쥐에 본 발명의 치료제를 투약한 후, 4일째의 그 조직의 단면도.

제7도는 대조용 생쥐의 조직 단면도.

제8도 및 제9도는 각기 피부에 상처를 입은 생쥐에 본 발명의 치료제를 투약한 후, 7일째의 환부 외관을 나타내는 도면.

제10도는 대조용 생쥐의 환부 외관을 나타내는 도면.

제11도 및 제12도는 각기 피부에 상처를 입은 생쥐에 본 발명의 치료제를 투약한 후, 21일째의 환부 외관을 나타내는 도면.

제13도는 대조용 생쥐의 환부 외관을 나타낸 도면.

제14도는 각막상피 세포의 발달을 나타내는 그래프.

제15도는 치추조직에 창상을 입은 생쥐에 본 발명의 치료제를 투약한 후, 7일째의 그 치주조직의 단면도.

제16도는 대조용 생쥐의 조직 단면도.

본 발명은 창상치료제, 발모제, 또는, 화장품에 관한 것으로, 보다 상세하게는 오보매크로 글로블린(overmacroglbulin, 난에서 추출한 거대분자 글로블린)을 유효성분으로 함유하는 창상치료제, 발모제, 또는 화장품에 관한 것이다.

일반적인 외상, 치루, 욕창 등이나 그 정도가 신체의 깊숙이까지 미치는 대수술에 의한 창상 등의 치료에 있어서는, 그 과정에서의 손상부의 육아형성의 촉진 및 표피형성의 촉진이 중요한 과제이다.

현재, 창상치료에 이용될 수 있는 화합물로서, 레티놀산(retino ic acid), 알란 토인(allan toin), 미나리과 식물성분 아시아티코시드(asiaticoside), 아연 등이 이 분야에서 알려져 있다.

그러나, 이들 화합물들은 육아형성과 표피형성의 촉진효과에 있어서 여전히 만족스럽지 못하다.

또한, 열상을 치료하기 위하여 스테로이드계나, 비스테로이드계 소염제의 사용은 오히려 신체의 저항력을 감소시킨다는 사실이 알려져 있으므로, 이들을 투여하는 경우에는, 저항력을 생성시키거나 증강시킬 수 있는 약물과의 병용이 필요하다.

최근에 창상의 치료에 유용한 의약으로서, 포유동물의 체액으로부터 분리한 분자량이 약 5300이고, 52개의 아미노산으로 구성된 폴리펩타이드(일본국 특허공개 No. 38716/1982)와 필수아미노산을 함유한 조성물(일본국 특허공개 No. 80316/1982)이 제안되어 있다.

또한, 요오드를 300㎍ 이상의 고농도로 함유하고 있는 난백이 창상치료의 촉진 및 근육질환의 예방에 효과적이고, (일본국 특허공개 No. 116225/1984)기초재료로서, 난백을 배합하여 제조한 피부화장품(일본국 특허공개 No. 6801/1986)도 제안되어 있다. 그러나, 이들 화합물들과 조성물들은 창상의 치료에 충분한 효과를 갖지 못한다. 난이나 난백 등은 방부제의 존재하에서도 부패하기 쉬우므로, 저장 안정성이 열등한 문제점이 있다.

또한, 난백은 알칼리성 용액에만 녹으므로 창상치료제의 일반적인 제제형태인 연고제나 화장품의 구성원료와의 친화성이 낮고, 단백질을 함유하는 백색침전을 생성시키는 등의 문제도 있다.

또, 한편으로 모근에 작용하여 발모를 촉진하는 발모제나 헤어토닉(hair tonic)도 다양한 종류들이 제안되어 있으나, 지금까지 이러한 화합물들의 어느것도 충분히 효과적이지 못하다.

그리고, 거칠어진 피부에 우수한 피부 보호효과를 갖음과 동시에, 에몰리엔시(emolliency : 윤활보증성), 치료효과 및 우수한 친화성등을 화장품 개발이 요구되고 있다.

본 발명자들은 예의 연구를 거듭한 결과, 난에서 추출한 거대분자 글로브린(이하, 오보매크로 글로블린이라 함)이 우수한 창상치료 촉진효과, 발모촉진효과 및 피부 보호효과를 나타낸다는 점, 그리고 이 화합물을 이용하여 우수한 작용ㆍ효과를 갖는 창상치료제 헤어토닉이나, 육모제와 같은 발모제, 화장품 등을 제조할 수 있다는 점을 발견하여 본 발명을 완성하였다.

즉, 본 발명의 목적은 유효성분으로서 오보매크로 글로블린을 함유하는 창상치료제, 발모제 및 화장품등을 제공하는데 있다.

본 발명의 창상치료제는, 예를 들면, 찰창, 절상, 화상, 열상, 동상, 피부궤양, 피부건조, 피부각화증, 갈라짐, 터짐, 피부염, 피부사상균증에 의한 통증, 수술상, 각막창상 등의 창상, 또는, 외상의 치료제, 또한 욕창과 치루의 치료제, 치조농루, 여드름, 햇볕에 탄 곳 등에 대한 염증치료제, 헤어토닉과 발모촉진제등의 발모제등을 포함한다.

또한, 본 발명의 화장품은 예를 들면, 헤어토닉이나, 셀트로션(set lotion), 헤어리퀴드(hair liquid), 린스, 샴푸 등과 같은 모발이나 두피에 바르는 다양한 종류의 두발 화장품뿐만 아니라, 화운데이션, 유액, 크림, 로션 등과 같은 다양한 형태의 피부화장품을 포함한다.

이러한 본 발명의 화장품들은 면도후나, 탈모제를 바른 후, 또는 세제의 사용후와 같은 경우의 피부에 사용될 수 있으며, 거칠어진 피부에 사용될 수도 있고, 우수한 피부 보호효과와 개선효과를 발휘하므로서 피부에 보습감과 매끄러운 감촉을 제공하며, 피부에 대한 친화성, 치료효과와 에몰리엔시를 현저히 증가시켜 준다.

본 발명의 창상치료제, 발모제, 그리고 화장품은 그 유효성분으로 오보매크로 글로블린을 포함하는 것이 필수적이다.

오보매크로 글로블린은 난백중에 존재하는 당단백질로서 알려져 있으며, 그 제조방법은 이미 공지되어 있다.

[Feenry R.E. et al, Comp. Biochem. Physiol., 54A, 281(1976) ; Ikari et al, J.Biochem., 92, 1679-1682(1982), Ibid, 93, 121-127(1983) ; and Nagase et al, J.B.C vol. 258, No. 12, 7481-7489(1983).]

그리고, 새포배양배지에 대한 첨가제로서, 오보매크로 글로블린의 이용은 이미 공지되어져 있다(예, 일본국 특허공개 No. 237989/1985).

상기 오보매크로 글로블린은 제조하기 위한 원료물질로서 사용되는 난백에는 특별한 제한은 없고, 각종 동물의 것을 사용할 수 있으나, 일반적으로는 용이하게 입수 가능한 계란, 오리알, 메추리알, 칠면조알 등의 난백이 바람직하다.

그리고, 난백으로부터 오보매크로 글로블린을 제조하는 방법도 또한 특별한 제한은 없고, 단백질 성분의 분리에 일반적으로 이용되고 있는 각종 방법에 따라, 오보매크로 글로블린의 물리화학적 성질 등을 이용하는 각종 조작, 예를 들면, 단백질 침전제처리, 분자체, 크로마토그래피(겔여과), 이온교환 크로마토그래피, 원심분리, 전기영동, 투석 등을 단독, 또는 조합하여 수행할 수 있다.

난백으로부터 오보매크로 글로블린을 제조하는 방법의 한가지 예는, 폴리에칠렌 글리콜 등을 난백에 가하거나, 트리스-Hcl 완충용액과 같은 수용액과 난백을 혼합하여 오보뮤신(ovomucin)과 같은 불용성 단백질을 일차적으로 제거하고, 이어서 겔 여과하는 방법을 들 수 있다. 그렇게 하여 분자량 600,000~800,000의 당단백질로서 오보매크로 글로블린을 얻을 수 있다.

본 발명의 창상치료제는, 상기와 같이해서 얻어지는 오보매크로 글로블린을 유효성분으로 배합하는 것을 제외하고는 공지의 방법에 따라 일반적인 의약제제의 형태로 제조되어질 수 있으며, 적절한 의약제제의 형태는 사용목적에 따라 다양한 형태중에서 선택될 수 있다.

이러한 의약제제의 형태로서는, 예를 들면 액상도포제, 로션, 분무제, 도포제, 연고제, 살포제 등의 통상적인 외용제 외에 주사제, 좌제 등의 제제나 다른 특수한 제제의 형태로 할 수가 있다. 이러한 각종 제제의 형태에는 통상적으로 사용되는 각종의 희석제나 부형제등이 선택 사용될 수 있다.

외용제로서의 연고제의 조제에는 통상의 소수성, 또는 친수성계물질, 예컨데 지방, 지방유, 라놀린, 와세린, 왁스, 글리콜, 고급알코올, 글리세린, 물 등을 사용할 수 있다.

또한, 이들 이외에도 안정제, 향료, 착색제등을 필요에 따라 배합할 수도 있다.

본 발명의 치료제중에 함유되는 유효성분인 오보매크로 글로블린의 양에 대한 제한없이 광범위하게 선택사용되나, 통상은 0.001~30중량%의 범위로 배합된다.

본 발명의 치료제의 적용량 및 방법은 제제의 형태, 제제중의 유효성분의 량, 이것을 적용시키는 환자의 성별 및 연령, 창상이나 환부의 범위 및 정도등에 따라 결정될 수 있다.

예를 들면, 외용제제 형태의 치료제인 경우에 환부 전체부위에 제제가 미칠 수 있는 양을 1일에 한번이나, 여러회에 걸쳐 환부에 살포하거나, 도포할 수 있고, 특히 발모제인 경우에는 모발이나 두피에 바를 수 있다.

또한, 본 발명의 화장품은 예를 들면 위에서 언급한 바와 같이, 화장수, 크림, 유액, 화운데이션 등의 피부에 바르는 형태와 샴푸, 린스, 헤어리퀴드, 셀트로션, 헤어토닉 등과 같은 모발이나, 두피에 바라는 형태등의 다양한 형태로 제조될 수 있다.

이러한 각종 형태로의 제조는 통상적인 방법에 따라 할 수 있고, 그때 공지의 각종 화장품 기초재 및 필요에 따라 각종 향료, 산화방지제, 계면활성제, 방부제등의 첨가제를 사용할 수도 있다.

본 발명의 화장품에 배합되는 오브매크로 글로블린의 량은 화장품의 종류, 목적으로 하는 효과, 형태 등에 따라 적절히 선택할 수 있으나, 일반적으로는 전체조성중에 0.0001~30중량%, 바람직하게는 0.0001~0.1중량% 정도의 범위로 한다.

이하, 참고예 및 실시예를 들어 본 발명을 좀더 상세히 설명한다.

[참고예 1]

오보매크로 글로블린의 제조 :

20㎏의 난백을 이것과 동량의 1% NaCl을 포함하는 10㎜의 트리스염산 완충용액(PH=7.7)에 현탁시킨다.

현탁액에 폴리에칠렌 글리콜(분자량=3,500 : 일본국 도쿄가세이사제품)을 그 농도가 2.5%가 되도록 가한다.

그 혼합물을 10,000rpm으로 연속 원심분리시켜서 상청액을 모으고, 10%의 농도가 되도록 폴리에칠렌글리콜을 더 가한다.

이것을 다시 10,000rpm에서 연속 원심분리하여 침전물을 모은다.

침전물을 위에서와 똑같은 완충용액에 녹이고, 10,000rpm에서 10분 동안 원심분리하여 상청액을 252×900㎜의 세파로스 Cl-6B컬럼(상표명 : 파마시아사제품)을 사용하여 시간당 3.6ℓ의 유속으로 완충용액을 용출시켰다.

키타모또등 [(T. kitamoto, M. Nakashima and A. Ikai, J. Biochem., 92, 1679-1682(1982)]에 의해 제안된 카제인 기질에 근거한 트립신 억제활성 측정법을 사용하여 용출된 분액으로부터 트립신 억제호라성 분획을 모았다.

이렇게 하여 얻어진 활성을 나타내는 분획을 분자체 100,000의 막을 장착한 펠리콘카세트(상표명 : 밀리포어사의 제품)로 농축시키면서 5㎜의 트리스-염산 완충용액(pH=7.7)으로 앞의 완충용액을 교환했다.

이렇게 하여 얻어진 시료를 10㎜ Nacl을 가한 10㎜의 트리스-염산 완충용액(pH=7.7)으로 평형상태화 시킨 50×800㎜의 DEAE 트리스아크릴컬럼(상표명 : LBK사 제품)에 적용시켰다.

동일한 완충용액으로 컬럼을 충분히 세정한 후, 50㎜ Nacl을 함유하는 10㎜ 트리스-염산 완충용액(pH=7.7) 675㎖과 150mH Nacl을 함유하는 10㎜ 트리스-염산 완충용액(pH=7.7) (675㎖)을 각기 2.5시간 동안 컬럼에 용출시켰다.

트립신 억제활성을 나타내는 분획은 이러한 조건에서는 70㎜과 120㎜ Nacl 농도 사이에서 용출되었다.

트립신 억제활성을 나타내는 분획을 모으고, 1㎜의 인산 완충용액(pH=7.4)에 대하여 투석시켰다.

철저히 투석시킨 후에 투석내의 액을 냉동건조기(상표명 : 라보콘산 제품)로 동결건조 시켰다.

이렇게 하여 정제된 오보매크로 글로블린 시료를 얻었다.

이렇게 얻어진 정제된 시료를 24시간 동안 110℃에서 감압하여 밀폐된 용기 속에서 가수분해시키고, 아미노산 분석기(835-50형, 히다찌 고성능 아미노산 분석기 : 상표명 히타찌사제)로 분석하였다.

그 결과를 다음 표 1에 나타냈다.

[표 1]

[실시예 1]

화상에 의한 혈관 투과성의 억제실험 :

본 실험의 목적은 쥐의 화상을 입은 환부에서 용해되어 나오는 체액중의 누출색 소량을 정량하여 혈관투과성을 나타내는 지표로 잡고, 본 발명의 치료제의 창상치료 효과를 측정하는 것이다.

쥐는 미리 전기인두로 화상을 입힌 후, 색소(에반스블루)를 투여한다.

실험은 다음과 같이 행하였다.

사용되는 쥐는 체중 200~250g의 10마리의 위스터 수컷쥐이다.

이들을 5마리씩 2군으로 나누고, 각 군의 쥐들을 헤어커터로 등의 중앙선을 따라 대칭으로 털을 깎았다.

대층으로 털을 제거한 부위의 한쪽면에 직경 1㎝의 원형으로 전기인두(온도 : 100~110℃)로 20초 동안 눌러 화상부위를 만들었다.

다른 한쪽면은 화상을 입히지 않은 상태로 두었다.

첫번째 군의 각 쥐들에는 화상을 입힌 직후, 24시간후에 화상부위 및 다른쪽의 비화상 부위에 각기 생리식염수 0.2㎖을 피 내 주사했다.

이 군을 대조군, 또는 생리식염수 주사군이라 부른다.

다른쪽 군의 쥐들에게는 위에서와 같은 방법으로 10g/㎖ 농도의 오보매크로 글로블린을 0.2㎖ 피 내 주사했다.

이 군은 실험군, 또는 오보매크로 글로블린 주사군이라 부른다.

생리식염수나 오보매크로 글로블린을 주사한지 23.5시간 후에 각 군의 쥐들에게 0.5% 에반스 블루색소액을 0.5㎖/㎏으로 정맥 내에 투여하였다.

그로부터 30분후, 즉 화상을 입힌지 48시간 후에 각 쥐들을 방혈치사시키고, 털을 제거했던 부위의 피부를 벗겨냈다.

부착되어 있는 지방을 제거한 후, 1㎠의 크기로 벗겨낸 피부를 잘라냈다.

1㎠의 크기로 잘라낸 피부를 1N-KOH 용액 1㎖에 담그고, 37℃에서 20시간 동안 방치시켜 용해시키고, 0.6N-H₃PO₄와 아세톤 혼합용액(5 : 13) 9㎖을 가하여 믹서로 교반시킨 후, 25℃에서 3000rpm으로 원심분리하여 상청액을 모았다.

분광계로 620nm의 파장에서 이 상청액의 흡광도를 측정했다.

측정된 흡광도로부터 미리 작성된 표준곡선을 이용하여 우려나온 에반스 블루색소(㎍)의 량을 구했다.

얻어진 값은(평균값±표준오차)로 하기 표 2에 나타냈다.

[표 2]

상기의 표 2에서 (화상부위)-(비화상부위)의 에반스블루의 누출량 값은 대조군(생리식염수 투여군)에 대하여는 25.0±5.32이며, 실험군(오보매크로 글로블린 투여군)에 대하여는 11.8±3.55였다.

이 결과는 오보매크로 글로블린의 투여에 의하여 혈과투과성이 현저히 억제된다는 것을 증명한다.

[실시예 2]

탈모크림에 의한 피부염증의 회복실험 :

체중 25-30g의 Balb/c계 수컷생쥐 20마리를 실험에 사용했다.

각 생쥐의 등에난 털을 헤어커터로 완전히 제거하고, 0.5g의 탈모크림(마비헤어리무버 : 상표명, 카네보사제)을 털을 제거한 부위에 2.0×2.5㎠되도록 골고루 발랐다.

그로부터 30분후 더운물로 크림을 제거하여 피부염증 모델을 준비하였다.

생쥐들을 4마리씩 5군으로 나누고, 4군의 생쥐들에 피부염증 작성일 다음날 3일후 및 6일후의 각 날짜에 4회식 다음의 연고제 시료를 피부의 염증부위에 0.3g식 도포하여 실험군 1~4로 했다.

나머지 1군의 생쥐들은 대조군으로서 관찰하기 위하여 처리하지 않은 상태로 남겨두었다.

연고를 도포한 후, 매일 육안관찰과 조직학적 관찰로 실험군과 대조군의 생쥐들의 피부상태를 파악했다.

조직학적 관찰은 헤마토실린(hematoxylin)과 에오신(염색) (IE염색)으로 시료를 염색하여 현미경으로 행하였다.

그 결과, 탈모크림 처리후 1일째의 대조군은 표피, 진피층에 염증이 생기고, 조직구, 호중구 등의 염증성 세포가 집결해 있었으며, 특히, 표피 및 그에 인접한 진피부에 강한 염증이 확인되어 졌으며, 에오신에 의해 강하게 염색된 물질이 넓게 퍼져있었다.

또한, 4일째에는 표피 및 그에 인접한 진피부분의 조직상은 염증상으로 바뀌어 있었으며, 염증은 모표전체로 퍼져있었다.

실험군 1(친수성 연고제를 도포한 군)과 대조군 사이에 어떠한 차이점도 발견할 수 없었다.

반면에 실험군 2~4의 생쥐들에 있어서는 표피, 진피, 모포의 염증에 대한 현저한 억제가 관찰되어졌으며, 조직상도 회복되고 있는 것을 확인했다.

단 오보매크로 글로블린의 배합량이 적은 연고를 도포한 군의 생쥐들(실험군 4)에 대하여는 치유나 억제 효과가 적었다.

실험군 3(0.005% 오보매크로 글로블린 농도의 연고제를 도포한 군)의 조직학적 관찰에서는 탈모크림 처리후 8일째의 조직상은 4일째에 관찰했었던 것 보다 더욱 선명하였으며, 피하조직 내에 새로운 모포가 성장하고 있는 것이 확인되었다(제2도).

4일째의 실험군 3에 대하여 관찰한 결과는 실험군 4(오보매크로 글로블린이 포함되지 않은 친수성 연고제를 도포한 군)의 그것과 비슷하였다(제3도).

정상적인 생쥐의 표피부분은 고르지 않은 울퉁불퉁한 모양이다.

실험군 2~4에서는 염증면의 치유가 원래의 표피의 정상적인 울퉁불퉁한 모양으로 됨에 따라 이루어지고, 모발의 발육에 관계되는 세포군의 증식, 발육이 현저히 증가되며, 동시에 모발의 재생이 조기에 확인되었다(제2도 참조).

[실시예 3]

열상회복 실험 :

체중 25~30g의 Balb/c계 수컷생쥐 4마리를 1군으로하여 5군을 실험에 사용하였다.

실험용 생쥐들의 등에 난 털을 헤어커터로 완전히 제거하고, 털을 제거한 피부에 탈모크림을 도포하였다.

5분간 방치(염증을 일으키지 않을 정도)한 후에 크림을 더운물로 씻어냈다.

그후, 털을 제거한 생쥐의 등에 1.5×2.5㎠의 넓이로 5분 동안 350~400℃의 온도로 전기인두(T-27, 파라핀 절단용융 인두, 타카시마 쇼텐제품)을 사용하여 열상을 입힌다.

열상을 입힌 다음날로부터 3일마다 다음의 연고제를 열상을 입은 부위에 각각 0.2g씩 도포하고, 체중변화, 환부에 대한 육안관찰과 조직학적 관찰을 행하였다.

또한, 나머지 1군은 대조군으로서 관찰하기 위하여 처리하지 않은 상태로 남겨두었다.

실험된 생쥐들의 체중변화의 결과를 제 1 도에 나타냈으며, 날짜와 체중 변화율을 횡축과 종축에 각기 표시하였다.

제 1 도는 열상을 입은 날의 체중(제1도에서 0일)에 대한 열상을 입은 다음날로부터 매일 측정한 체중(제1도에서 1~4일)의 비율로 표시되어 체중의 변화를 나타낸다.

도면에서 일점쇄선(1)은 실험군 4(0.001%의 오보매크로 글로블린을 첨가한 연고제 도포군)에 의해서 얻어진 값을 나타내며, 점선(2)는 실험군 1(오보매크로 글로블린을 첨가않은 친수성 연고제 도포군)에 대한 값을 나타내고, 실선(3)은 대조군의 값을 나타낸다.

이렇게 하여 얻어진 체중변화의 결과는 열상의 정도와 밀접한 관계가 있었다.

즉, 생쥐가 열상을 입은 후에는, 체중이 증가하는데 국소의 염증에 의한 불감증산과 혈관투과성의 항진으로 인한 부종이 생성되고, 열상을 입은 부위의 면적의 크기에 따라 부종이 커지기 때문이다.

제1도는 오보매크로 글로블린이 함유된 연고를 도포한 실험군 4는 대조군 및 오보매크로 글로블린이 함유되지 않은 친수성 연고를 도포한 실험군 1과 비교하여 부종의 성장이 억제되기 때문에 체중의 증가가 없다는 사실을 나타낸다.

상기의 시험에 있어서의 육안적 관찰결과로서, 실험군 2~4의 생쥐들은 실험군 1 및 대조군의 생쥐들과 비교할 때, 현저히 회복되어 졌음을 확인할 수 있었다.

이것은 또한 제4도(열상을 입은지 6일째의 실험군 4의 환부에 대한 사진)와, 제5도(대조군의 사진)의 비교로 명확히 입증된다.

또한, HE 염색에 의한 조직학적 관찰은 실시예 2에서와 같은 방법에 따라 행하여졌다.

그결과, 열상을 입은지 4일째되는 대조군과 실험군 1의 생쥐들은 표피와 진피부분이 열상에 특징적인 에오신 염색성 물질로 대체되어 있었으며, 모포부분은 단지 그 형태로서만 잔존하여 있었다(열상을 입은지 4일째의 대조군에 대한 현미경 사진인 제7도 참조).

이것과 비교하여, 본 발명의 창상치료제를 투여한 군들(예를 들면, 실험군 3)은 진피의 피하조직에 인접한 조직부분부터 회복되고 있었으며, 진피같은 형태의 조직이 형성되기 시작하고, 모근형성이 순조롭게 진행되고 있는 것이 확인되어졌다.

상기 결과로부터, 조직학적으로도 조직형성 촉진효과인 피부와 모발의 회복효과가 명백해졌다.

[실시예 4]

본 발명의 화장품에 대한 관능실험 :

거친피부를 갖고 있는 10명의 여성(나이 : 25~35)을 선정하여 후에 기재하는 처방예 1에 나타낸 본 발명의 화장품(스킨밀크)을 기상후와 취침전의 하루 2회, 피부에 2주간 도포하고, 다음의 표 3에 기재한 항복에 대하여 평가하였다.

대조실험으로서, 오보매크로 글로블린을 첨가하지 않은 것을 제외하고는, 본 발명의 화장품과 동일하게 제조한 대조용 화장품 시료를 사용하여 거친피부를 갖고 있는 5명의 다른 여성에게 같은 방법으로 관능실험을 실시하였다.

관능실험의 결과는 표 3에 나타냈으며, 측정치(분자/분모)는 (평가항목에 대하여 긍정적으로 평가한 평가원의 수/평가원의 전체수)를 나타낸다.

[표 3]

상기 표 3으로부터 오보매크로 글로블린을 첨가한 본 발명의 화장품 시료가 관능시험에서 대단히 우수하다는 것이 입증되었다.

[실시예 5]

피부창상(cut skin) 치료시험 :

(1) 토끼의 등을 은제나이프를 사용하여 크기가 25㎜×25㎜이고, 깊이가 1.2㎜인 5개의 두껍게 갈라진 창상을 형성했다.

창상부위의 각각은 창상들 사이의 상처치유 메카니즘의 영향을 없애기 위하여 최소한 30㎜의 거리를 두었다.

약물로서 하기 (A) ~ (D)의 약제를 1일 1회 도포고, 대조용으로 평가하기 위하여 창상부위의 한곳은 어떠한 처리도 하지 않은 상태로 남겨두었다.

도포후, 거즈(크기 : 25㎜×25㎜)로 창상부위를 덮고, 다른 약물의 혼입을 피하기 위해서 통기성의 나일론 필름(테가당 : 상표명, 쓰리엠사제)등으로 봉하였으며, 창상을 입은 전체부위를 탄력성이 있는 붕대로 봉하였다.

이러한 처치는 관찰기간 동안 계속해서 행하였다.

[약제]

(A) 친수성 바세린연고

표백된 밀랍 8g

스테아릴알코올 3g

콜레스테롤 3g

백색바세린 86g

프로필파라벤 0.0625g

(100g)

(B) 오보매크로 글로블린이 1% 첨가된 친수성 바세린연고

5%의 오보매크로 글로블린 수용액(40㎎의 메칠파라벤함유) 20g

친수성 바세린계 물질 80g

(C) 오보매크로 글로블린이 0.1% 첨가된 친수성 바세린연고

0.5% 오보매크로 글로블린 수용액(40㎎의 메칠파레벤 함유) 20g

친수성 바세린계 물질 80g

(D) 오보매크로 글로블린이 0.01% 첨가된 친수성 바세린연고

0.05%의 오보매크로 글로블린 수용액(40㎎의 메칠파라벤 함유) 20g

친수성 바세린계 물질 80g

(2) 창상치료제에 대한 평가는 창상을 입은 즉시, 7일,14일,21일후에 다음의 항목에 대한 관찰에 의하여 행하여졌다.

(a) 창상의 상피형성

각시기에서의 창상의 치료과정을 사진촬영하여 평가했다.

(b) 조직학적 관찰

창상을 입은면을 생검하고, 육아조직중의 콜라겐 섬유의 양과 형태, 그리고 형성된 상피를 관찰하였다.

(c) 부작용의 평가

정상적인 피부에 대한 자극(발적)과 피부염증의 유무를 관찰하였다.

[결과]

상기의 실험에서 오보매크로 글로블린을 0.01% 및 0.1% 함유하는 연고제를 도포한 후, 7일째의 창상의 크기는 친수성 연고도포군(제10도 참조)에 비하여 약간 축소되어 있고(제8도 및 제9도 참조), 조직학적 소견에서도 육아조직의 형성이 관찰되었다.

14일째의 오보매크로 글로블린의 창상치료 효과의 더 큰 진전이 관찰되어 졌는데, 오보매크로 글로블린을 0.01% 및 0.1% 함유하는 연고제를 도포한 창상의 크기는 친수성 연고제를 도포한 창상의 크기보다 현저히 작았다.

또한, 이들 사이의 차이점은 육아조직의 형성, 콜라겐의 양, 그리고 상피조직의 발육등의 측면과 같은 조직학적 관찰에서도 명백했다.

창상을 입은후, 21일째의 관찰은 오보매크로 글로블린을 0.01% 및 0.1% 함유한 연고제를 도포한 경우 창상부위의 치유기간을 현저히 단축시킨다는 그 효과는 조직학적 관찰에 의해서도 유사하게 관찰되어 졌으며, 즉 육아의 형성, 클라겐섬유의 증가 그리고 상피세포의 발육이 현저하였다.

또한, 정상피부에 대한 오보매크로 글로블린 연고제를 도포하고 그 부작용을 관찰했으나, 정상적인 피부에 대한 어떠한 발작이나 염증에 대한 증가도 확인되지 않았다. 또한 1.0%의 오보매크로 글로블린을 함유하는 연고를 도포한 군도 0.1%의 오보매크로 글로블린을 함유하는 연고를 도포한 군과 유사한 결과를 얻었다.

[실시예 6]

각막 상피세포에 대한 신장실험 :

체중 2.5㎏~3.0㎏의 토끼를 30㎎/㎏의 양으로 펜토발비탈(비트말-무어사제)을 정맥내로 투여하여 마취시켰다.

그 다음에 각막을 적출하고 2×4㎜ 절편의 각막편을 만들었다. 이렇게 얻은 각막편은 오보매크로 글로블린이 0.05㎍/㎖, 0.5㎍/㎖ 그리고, 5㎍/㎖의 농도로 녹아있는 TC-199 배양용액속에서 28시간동안 배양시킨후 이 조직편을 5% 빙초산과 95% 에탄올의 혼합액으로 고정시키고, 파라핀속에 묻어끼워서 4μ의 절편을 제조했다.

이 절편을 통상적인 HE 염색을 시키고, 신장된 각막상피세포들의 길이를 현미경을 사용하요 측정하였다.

그 결과로서 제14도에 표시한 바와 같이 오보매크로 글로블린은 투여량에 의존적으로 각막상피세포의 신장을 촉진한다는 것을 발견하였으며, 도면중에은 A는 C-199배양 용액만의 대조군을 나타내며, B,C와 D는 각각 오보매크로 글로블린을 0.05㎍/mk, 0.5㎍/㎖, 그리고 5㎍/㎖가한 TC-199 배양 용액의 시험군을 나타낸다.

[실시예 7]

치주조직의 창상에 대한 치료실험 :

본 발명의 치료제의 치료작용을 연구하기 위하여 다음의 방법 1과, 2에 따라 쥐의 치주조직에 창상을 만들었다.

[창상의 형성]

1. 낚시 바늘모먕의 탐침을 쥐(나이 : 12주)의 구개방향으로부터 우측과 좌측의 상단 후방치아들의 중간부분에 삽입한다.

탐침이 뼈에 닿은후, 창상을 입히기 위하여 치관을 따라 수차례 왕복시킨다.

그후, 근관치료용 K 파일 40호를 촤측의 후방 제2치아의 접촉점 밑으로 삽입하여 빰측과 구개측 사이에 통로를 만든다.

명주실(블레이드실크) 4-0을 후방 제2치아를 한바퀴 감고 빰측에서 결색(knot)한다.

지혈을 확인한 후 페이스트를 도포했다.

이와 같은 모든 조작은 케타랄(ktaral)을 사용한 복강내 마취하에 수행했다.

2. 치육의 절제는 #12의 버드비크(bird beak) 칼날 가위를 사용하여 후방 제3치아의 원심으로부터, 후방 제1치아의 근심가지 절개하고, 낚시바늘 모양의 탐침을 삽입하고 왕복시켜 절제했다.

골면을 약 0.5㎜ 노출시켰다.

[시험페이스트]

(A) 대조용 페이스트

친수성 바세린 기제＊ 10g

(B) 0.005%의 오보매크로 글로블린 함유 페이스트

0.025%의 오보매크로 글로블린 수용액(40㎖의 메칠파라벤함유) 20g

친수성 바세린기제＊ 80g

(C) 0.1%의 오보매크로 글로블린 함유 페이스트

0.5%의 오보매크로 글로블린 수용액(40㎎ 메칠파라벤 함유) 20g

친수성 바세린 80g

＊친수성 바세린의 조성(100g당)

표백된 밀랍 8g

스테아릴 알코올 3g

콜레스테롤 3g

백색바세린 86g

프로필라라벤 0.0625g

[투여방법]

각각의 페이스트를 쟁반에 담아, 하루 한차례 15분간 도표하였으며, 그 양은 대략 평균 0.32g이다.

첫번째의 도표는 지혈이 확인된 후에 행하였으며, 도포후 2시간 동안은 마실물을 주지 않았다.

상기의 조작은 넨부탈(Nenbutal : 0.1㎖)의 복강내 마취하에서 행하였다.

[평가]

치료한 쥐들은 실험시작후, 첫째날, 2일째, 그리고 7일째에 도살하였다.

환부에 도려내어 부앵고정액(Bouin fixative)으로 고정하고, 트리클로로, 아세트산으로 탈회하고, 파라핀속에 묻어끼워서, HE나 아잔(azan)으로 염색하여, 염증성 세포의 수, 콜라겐 섬유의 변화를 면밀히 관찰하였다.

[결과]

창상형성과 본 발명 치료제의 도포후, 1일째에 있어서의 창상치료 효과에 대하여, 염증성 세포침윤, 조직내의 출혈상태, 콜라겐섬유의 상태를 관찰하였으며 다음과 같다.

(1) 염증성 세포의 침윤과 조직내의 출혈상태 :

대조군의 관출에 의하면, 치육구상피로부터 치조골 정부까지의 치육고유층의 영역에 걸쳐 강한 모세혈관 확장과 출혈상이 있었으며, 상기의 영역주위에 피브린층 및 산재된 호중구의 침윤이 확인되었다(제16도).

한편, 본 발명의 외용제를 투여한 창상 부위에서는 고유층에서의 혈관 확장이 관찰되기는 하였지만, 출혈 상태는 크지 않았고, 고유층은 피브린츠응로 이미 덮히기 시작하는 경향이 있었다.

또한, 고유층내의 호중구의 침윤은 치육극 상피와 부착상피부의 피브린층 표면에 국소저인 호중구의 강한 침윤상이 관찰되기는 하였지만, 대조군 보다도 적었다.

0.005%와 0.1%의 오보매크로 글로블린 함유 페이스트 도포군을 서로 비교할때, 표후자는 전자보다 고유층에서의 모세혈관 확장과 출혈상이 적었으며, 상피부에서의 호중구의 침윤이 적은 경향이 있었다.

제15도는 0.005% 오보매크로 글로블린 함유페이스트 도포군의 조직의 단면사진을 나타낸다.

(2) 콜라겐 섬유의 상태 :

콜라겐 섬유의 착색은 아잔염색에 의해서 이루어졌다.

HE 염색으로 대조군은 창상부 부근 및 그 주위의 콜라겐 섬유에 단열(plasmotomy), 변성등이 관찰된 반면에 본 발명의 외용제를 투여한 군에서는 창상부 부근의 콜라겐 섬유는 단열되어 있었지만, 주위까지로는 확장되지 않는 경향이 있었다.

0.1% 오보매크로 글로블린 함유 페이스트군 쪽이 0.005% 오보매크로 글로블린 함유 페이스트군 보다 이러한 경향이 더욱 강하였다.

[실시예 8]

다음에 본 발명의 치료제의 제제 처방예를 나타낸다.

다음의 제제 처방식에서의 각 성분에 대한 수치는 중량부를 나타낸다.

[처방예 1 : 본 발명 화장품]

유동 파라핀(100-100cp) 7

세틸알코올 0.5

85% 글리세린 7

오보매크로 글로블린 0.01

다이메칠아미노프로필 라놀린산 아미이드

다이셀페이트 0.03

방부제(메칠 파라벤) 0.2

향료 적량

물 나머지

100

상기 조성에 기초하여, 우선 오보매크로 글로블린, 다이메칠아미노프로필 라놀린산 아미이드 샐페이트와, 글리세롤을 혼합하여 균일 혼합액을 제조하고, 75℃에서 교반하면서 물을 가한다.

한편, 유동파라핀, 세틸알코올과 메칠파라벤을 75℃로 가열교반하여 균일 혼합액을 제조하고, 75℃의 온도로 유지하면서 앞서 제조한 균일 혼합액을 천천히 가해 교반혼합하고, 실온까지 방냉했다.

이렇게 하여 제조된 액에 최종적으로 향료를 가하여 본 발명의 스킨밀크를 얻는다.

[처방예 2 : 본 발명 화장품]

[스킨크림의 조제]

유동파라핀(100-100cp) 5

아이소프로필미리스테이트 10

스테아린산 3

세틸알코올 2

85% 글리세린 10

폴리옥시에칠렌(ED=4) 스테아레이트 1

오보매크로 글로블린 0.001

다이메칠아미노크로필 라놀린산

아미이드 다이셀페이트 0.04

방부제(메칠 파라벤) 0.2

향료 적량

물 나머지

100

상기 조성에 기초하여, 처방예 1과 같이 하여 본 발명의 스킨ㆍ크림을 제조했다.

[처방예 3 : 본 발명 화장품]

[스킨ㆍ로션의 조제]

95% 에칠 알코올 20

85% 글리세린 5

폴리옥시에칠렌(ED=20) 솔비탄

라놀린산 모노에스테르 0.2

오보매크로 글로블린 다이메칠 아미노

프로필 라놀린산 아미이드 다이셀페이트 0.04

방부제(메칠 파레벤) 0.2

향료 및 색소 적량

물 나머지

100

상기 조성에 기초하여, 우선 오보매크로 글로블린, 다이메칠아미노프로필 라놀린산 아미이드 다이셀페이트와 글리세린을 철저히 혼합한 후, 물을 가해 균일 혼합액을 제조했다.

한편, 에칠알코올에 향료와 색소, 그리고 방부제를 용해하여 균일 혼합액을 제조하고, 앞서 얻은 혼합액을 교반하면서 가한 후 여과하여 본 발명의 스킨 로션을 얻었다.

[처방예 4 : 본 발명 화장품]

[스킨로션의 제조]

처방예 3에서, 오보매크로 글로블린의 양을 0.010중량부로 가하는 것을 제외하고는 처방예 3의 스킨로션의 처방과 같은 방법으로 스킨로션을 제조한다.

[처방예 5 : 본 발명 치료제]

글로블린 0.01g

방부제 적량

향료 적량

증류수 나머지

100㎖

오보매크로 글로블린, 방부제와 향료에 증류수를 가하여 전페 부피를 100㎖로 만든 후, 멸균하여 분무용액 형태의 본 발명의 창상치료제를 제조한다.

[처방예 6 : 본 발명 치료제]

오보매크로 글로블린 0.05g

방부제 적량

향료 적량

증류수 나머지

100㎖

처방예 5와 같이하여, 상기 조성의 분무용액 형태의 본 발명 청상치료제를 조제한다.

[처방예 7 : 본 발명 치료제]

[친수성 연고재의 제조]

오보매크로 글로블린 0.5g

백색 바세린 250g

스테아릴 알코올 220g

프로필렌 글리콜 120g

라우릴황산 나트륨 15g

에칠(또는, 메칠) p-옥시벤조에이트 0.25g

프로필 p-옥시벤조에이트 0.15g

정제수 적량

1000g

상기 성분을 배합하여 오보매크로 글로블린을 함유하는 본 발명의 친수성 연고형태의 창상치료제를 제조한다.

[처방예 8~11 : 본 발명 치료제]

처방예 7에서, 오보매크로 글로블린의 배합량을 0.01g, 0.05g, 0.1g 그리고 1g으로 바꾸고, 처방예 7과 같이 하여 본 발명의 친수성 연고형태의 창상치료제를 제조한다.

이렇게 하여 제조된 본 발명의 치료제를 창상치료제로 이용할 경우, 이것은 다른 종류의 창상치료제나 방법에 비하여 매우 탁월한 창상치료 촉진효과를 발휘한다.

또한, 본 발명의 치료제를 발모제로 사용할 경우에는 모발 성장촉진 효과 뿐만 아니라 모발의 보호 및 개선효과를 나타내며, 예컨대 모발에 윤기를 주고, 모발의 거칠음을 해소시키는 등의 개선효과를 나타낸다.

더우기 화장품으로서 사용할 경우, 피부와 모발에 대한 보호 내지 개선효과를 나타내며, 종래 사용된 이러한 종류의 다른 화장품들보다 여러가지의 장점을 갖는다.

본 발명의 치료제 및 화장품은 매우 우수한 보존안정성 및 안정성을 갖고 있다.

Claims (15)

1. 오보매크로 글로블린(overmacroglobulin)을 유효성분으로 함유하는 창상치료제.
2. 제1항에 있어서, 창상이 찰창, 절상, 화상, 열상, 동상, 피부궤양, 피부건조, 피부각화증, 피부의 갈라짐, 터짐, 피부염, 피부사상균에 의한 진무름, 수술상, 각막창상, 치루 및 옥창으로부터 선정되는 창상치료제.
3. 제1항에 있어서, 창상이 열상 또는 화상인 창상치료제.
4. 제1항에 있어서, 창상이 각막 창상인 창상치료제.
5. 제1항에 있어서, 창상치료제가 염증치료제인 창상치료제.
6. 제5항에 있어서, 염증치료제가 치조농루 치료제인 창상치료제.
7. 오보매크로 글로블린을 유효성분으로 함유하는 발모제.
8. 제7항에 있어서, 오보매크로 글로블린 함량이 0.0001~30중량%인 발모제.
9. 유효성분으로서 오보매크로 글로블린을 함유하는 화장품.
10. 제9항에 있어서, 화장품이 피부화장품인 화장품.
11. 제10항에 있어서, 화장품이 로션, 크림, 유제, 화운데이션에서 선택되는 화장품.
12. 제9항에 있어서, 화장품이 두발용 화장품인 화장품.
13. 제12항에 있어서, 화장품이 샴푸, 린스, 헤어리퀴드, 셋드로션, 헤어토닉에서 선택되는 화장품.
14. 제9항에 있어서, 오보매크로 글로블린의 함량이 0.0001~0.1중량%인 화장품.
15. 제1항에 있어서, 오보매크로 글로블린의 함량이 0.0001~30중량%인 창상치료제.

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