KR940000577A - Aids백신에 유용한 키메릭 단백 및 그의 제조방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 AIDS백신의 항원으로서 유용한 재조합 백큘로바이러스로 감염시킨 곤충세포내에서 발현되는 HIV의 gag키메릭 단백 및 그의 제조방법을 개시한다. 본 발명의 HIV의 gag 키메릭 단백은 HIV의 gag와 env를 접합하여 제조한 키메릭 유전자를 백큘로바이러스의 DNA에 삽입시키고 생성된 재조합 바이러스로 곤충세포 또는 곤충을 감염시킨후, 배양하여 HIV gag-env키메릭단백질을 제조할 수 있다.

Description

AIDS백신에 유용한 키메릭 단백 및 그의 제조방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 HIV-2의 gag를 위치 특이적 변이 (site-directed mutagenesis) 도입법으로 절단한 gas단편과 그의 입자형성 여부를 나타낸 것이다.
제2도는 site-specific mutagenesis로 HIV-2 gag단괸의 아미노산의 서열중 어떤 아미노산이 입자형성에 중요한지를 나타낸 것이다.
제3도는 키메릭 gag-env 유전자를 제조하는 기본전략 도면이다.

Claims (30)

  1. 재조합 HIV의 gag-env 키메릭 단백질.
  2. 제1항에 있어서, gag가 HIV-2의 gag인 gag-env 키메릭 단백질.
  3. 제2항에 있어서, gag가 최소한 N-말단부위로 부터 376개 아미노산 이상, 425개 아미노산 이하인 gag-env 키메릭 단백질.
  4. 제3항에 있어서, gag가 HIV 바이러스 유사입자를 헝성함을 톡징으로 하는 gag-env 키메릭 단백질.
  5. 제4항에 있어서, gag의 373번째 프롤린 아미노산이 HIV바이러스 유사입자 형성에 필수적인 gag-env 키메 릭 단백 질.
  6. 제2항에 있어서, env가 HIV gp120의 V3루프인 gag-env 키메릭 단백질.
  7. 제2항에 있어서, env가 HIV gp120의 V3+CD4BD인 gag-env 키메릭 단백질.
  8. 제5항 및 제7항에 있어서, env가 HIV-1 또는 HIV-2의 env인 gag-env 키메릭 단백질.
  9. 제1항에 있어서, 재조합 백큘로바이러스로 부터 발현되는 HIV의 gag-env 키메릭 단백질.
  10. 제9항에 있어서, 기탁번호가 ATCC VR2316인 재조합 백큘로 바이러스로부터 발현되는 gag-env 키메릭 단백질.
  11. 제9항에 있어서, 기탁번호가 ATCC VR2317인 재조합 백큘로 바이러스로 부터 발현되는 gag-env 키메릭 단백질.
  12. 곤충세포에서 HIV의 gag-env 키메릭 단백질을 발현하기 위해 키메릭 HIV gag-env 유전자가 삽입된 재조합 백큘로바이러스.
  13. 제12항에 있어서, 기탁번호가 ATCC VR2316인 재조합 백큘로바인러스.
  14. 제12항에 있어서, 기탁번호가 ATCC VR2317인 재조합 백큘로바이러스.
  15. HlV의 gag와 env를 접합하여 제조한 키메릭 유전자를 백큘로바이러스의 DNA에 삽입시키고 생성된 재조합 바이러스로 곤충세포 또는 곤충을 감염시 킨후 배양하여 정제함을 특징으로 하는 HIV gag-eny 키메릭 단백질의 제조방법.
  16. 제15항에 있어서, N-말단 부위로부터 376개 아미노산 이상, 425개 아미노산 이하의 gag를 코오딩하는 유전자와 HlV env 유전자로 제조되는 키메릭 유전자를 사용함을 특징으로 하는 HIV gag-env 키메릭 단백질 제조방법.
  17. 제16항에 있어서, 키메릭 유전자를 사용하여 HIV 유사입자를 형성함을 특징으로 하는 제조방법.
  18. 제16항에 있어서, HIV env유전자가 gp120의 V3루프나 V3+CD4BD를 코오딩하는 유전자인 HIV gag-env 키메릭 단백질의 제조방법.
  19. 제18항에 있어서, PCR방법을 이용하여 V3루프나 V3+CO4BD유전자 단편을 제조하여 이를 플라스미드에 삽입시킴을 특징으로 하는 제조방법.
  20. 제19항에 있어서, HIV-1 V3 DNA단편을 제조하기 위하여 하기 프라이머를 사용함을 특징으로 하는 제조방법.
    L-1 프라이머(5′-CGAAGATCTGTCAATTTCACGG-3′) , L-2 프라이머(5′-GCAGATCTTTGCTTAAAGATTA-3′)
  21. 제19항에 있어서, HIV-2 V3 DNA단편을 제조하기 위하여 하기 프라이머를 사용함을 특징으로 하는 제조방법.
    L-3 프라이머(5′-CGAGATCTCATTGTAAGAGCC-3′), L-4 프라이머(5′- GCAGATCTTCTGCAGTTAGTCC-3′)
  22. 제19항에 있어서, HIV-2 V3+CD4BD DNA단편을 제조하기 위하여 하기 프라이머를 사용함을 특징으로 하는 제조방법.
    L-3 프라이머(5′-CGAGATCTCATTGTAAGAGCC-3′), L-5 프라이머(5′-GCAGATCTCTTTACTGATFTAG-3′)
  23. 제15항에 있어서, 백큘로바이러스가 오토그라파 캘리포니카 뉴클리어 폴리헤드로시스 바이러스인 것을 특징으로 하는 제조방법.
  24. 제15항에 있어서, 곤충세포가 스포돕테라 푸루지페르다 세포, 마메시트라 브라시카 세포 및 트리코플루시아 니 세포로 구성된 군에서 선택된 세포인 것을 특징으로 하는 제조방법.
  25. 제15항에 있어서, 백큘로바이러스가 봄빅스 이리데센스 바이러스이고, 숙주 세포가 봄빅스 모리 세포나 봄비스 모리 누에인 것을 특징으로 하는 HIV gag-env 키메릭 단백질의 제조방법.
  26. 제15항에 있어서, 불연속 자당구배 원심분리법으로 정제함을 특징으로 하는 제조방법.
  27. 제26항에 있어서, 50∼60%자당농도에서 정제함을 특징으로 하는 제조방법.
  28. 재조합 HIV의 gag-env 키메릭 단백질 및 생리학적으로 허용되는 첨가물을 함유하는 백신 조성물.
  29. 제28항에 있어서, ATCC VR2316인 재조합 백큘로바이러스로 부터 발현되는 gag-env 키메릭 단백질을 함유하는 백신 조성물.
  30. 제28항에 있어서, ATCC VR2317인 재조합 백큘로바이러스로 부터 발현되는 gag-env 키메릭 단백질을 함유하는 백신 조성물.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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