KR920003666B1

KR920003666B1 - 항생제 a42125 및 이의 제조방법

Info

Publication number: KR920003666B1
Application number: KR1019870003380A
Authority: KR
Inventors: 엘. 해밀 로버트; 에밀 캐스너 랄프
Original assignee: 일라이 릴리 앤드 컴페니; 메리 앤 터커
Priority date: 1986-04-11
Filing date: 1987-04-09
Publication date: 1992-05-06
Also published as: PT84628A; US4870021A; ATA257387A; US4764510A; AT389893B; IE59699B1; DE3779946D1; DK178387D0; IE870942L; IL82119A0; EP0241285B1; CA1265462A; EG18187A; DK166024C; DE3779946T2; HU197941B; DK166024B; PH24808A; PT84628B; CN87102770A

Abstract

내용 없음.

Description

항생제 A42125 및 이의 제조방법

제 1 도는 KBr중에서의 A 42125의 적외선 흡수 스팩트럼을 도시한 것이다.

본 발명은 신규한 항생제인 A 42125 및 이 항생제를 생성하는 신규한 균주인 노카르디아 에어로콜로니게네스(Nocardia aerocolonigenes) NRRL 18049[한국기탁번호:KFCC 제10418호, 기탁기관:한국종균협회(KFCC), 기탁일:1987. 9. 1]에 관한 것이다. A 42125는 메탄을 생성하는 미생물에 대하여 특히 주목할만한 활성을 갖는 항균제이다. A 42125는 전위조건을 모사한 시험에서 메탄생성을 최소화하므로, A 42125는 사료 효율을 증진시키고 따라서 반추동물의 성장을 촉진시킨다.

본 발명의 다른 국면은 액침 호기성 발효 조건하에 실질적인 수준의 항생제가 생성될때까지 신규한 균주인 노카르디아 에어로콜로니게네스 NRRL 18049를 배양하여 A 42125를 제조하는 방법이다. A 42125를 수지에 흡착시키고 극성 유기용매로 수지를 용출시켜서 발효 브로스로부터 A 42125를 추출한다. 이온교환 크로마토그래피 등의 공지의 기술로 A 42125를 분리하고, 또한 정제한다.

노카르디아 에어로콜로니게네스 NRRL 18049는 신규하게 발견된 균주이므로, 본 발명은 또한 이러한 미생물의 생물학적으로 정제된 배양물에 관한 것이다.

첨부한 도면은 KBr중에서의 A 42125의 적외선 흡수 스팩트럼을 나타낸다.

수의학 분야에서 개선된 항생제가 계속해서 필요해 왔다. 동물의 성장촉진은 이러한 항생제의 하나의 목표이다. 질병을 감소시키고 사료-이용효율을 증진시켜 성장을 촉진시킬 수 있다. 반추동물(예 : 소 및 양)의 성장촉진이 특히 통상적으로 주목된다.

반추동물에서, 동물의 전위에 존재하는 미생물은 탄수화물을 분해하여 대사에 의해 전환할 수 있는 화합물(예를 들면, 프로피온산염)을 생성시킨다. 그러나 특정한 미생물은 이러한 시스탬의 효능에 역효과를 미친다. 예를 들면, 메타노겐 또는 메탄-생성 미생물은 반추동물의 사료-이용 효율을 감소시긴다. A 42125의 특별한 장점은 A 42125가 메탄-생성 미생물을 억제하며, 따라서 반추동물의 성장을 촉진시키는데 사용할 수 있다는 점이다.

메탄-생성 미생물[아르카에박테리아(archaebacteria)]은 반추동물의 소화계에서 바람직하지 않지만, 이들은 폐기 바이오매스가 메탄으로 분해되는 최종 단계를 촉진시키므로 세계의 환경에 현저하게 공헌한다. 또한 메탄은 연료로서 유용하므로 에너지원 문제를 해결하는데 도움을 줄 것이다. 따라서, 메타노겐과 메탄생성을 증진시키는 방법은 중요하다.

메탄 생성을 증진시키는 하나의 연구는 메타노겐의 유전적인 교환시스템을 조성하는 것이다. 이를 수행하기 위해, 항생제 내성 등의 선택가능한 특성이 필요하다. 이러한 특성은 대개 정상적으로 미생물을 죽이는 항생제에 대해여 내성이 있는 돌연변이체를 선택하여 찾아낸다. 불행하게도, 메타노겐은 본래 대부분의 항생제에 대하여 내성이 있다. 따라서, A 42125가 메타노겐을 억제한다는 사실은 메타노겐의 유전적 교환을 촉진하는 선택가능한 특성을 찾아내는데 유용하다.

A 42125의 특성

항생제 A 42125의 생리화학적 특성은 다음과 같다.

상태 : 백색 결정(물로부터의)

융점 : 149내지 150℃

UV : 흡수하지 않음

IR(Kbr) : 첨부한 도면을 참고 하면

다음의 파수(cm^-1) 3423, 3413, 3409, 3403, 3398 및 3386 ; 2937, 1720, 1602, 1453, 1408, 1379, 1290, 1192, 1120, 1090, 1064, 971, 870, 830 및 802를 포함하는 광범위한 피크에서 흡수를 나타낸다.

적정(80% 수성 디메틸포름아미드):pKa 5.2, 8.7 및 10.5

분자량:2032(장탈착 질량 분광 분석법)

실험식:C₁₀₁H₁₈₄N₂O₃₈

원소분석:

원소 실측치%

탄소 59.51

수소 9.05

질소 1.44

산소 30.08

아미노산 : 발견되지 않음

용해도 : 물에 가용성

생물학적 자기묘사 : 0.95N Na₂SO₄및 0.05 NaHSO₄로 함침된 와트만(Whatman)여과지 제1호, 1.5% NaCl을 함유하는 80% 수성 에탄올의 용매 시스템을 사용하고 마이크로코커스 루테우스(Micrococcusluteus)로 검출한 결과, A 42125의 Rf치는 약 0.46이다.

적정특성을 기초로 하여, A 42125는 염을 형성할 수 있는 카복실 그룹, 아민 작용 그룹 및 페놀 그룹을 가질 수도 있는 것으로 나타난다.

이러한 염은 항생제를 분리, 정제 및 전달하는데 유용하다. 따라서, A 42125염은 본 발명의 일부분이다. 약제학적으로 허용되는 염이 특히 유용하다. 유용한 염의 예는 알칼리 금속, 알칼리 토금속 아민 및 산부가 염이다.

대표적이고 적합한 알칼리 금속 및 알칼리 토금속염은 나트륨, 칼륨, 리튬, 세슘, 루비듐, 바륨, 칼슘 및 마그네슘염이다. 적합한 아민염은 암모늄 및 1급, 2급 및 3급 C₁-C₄알칼암모늄 및 하이드록시-C₂-C₄알킬암모늄염이다. 구체적인 아민염의 예는 A 42125를 수산화암모늄, 메틸아민, 2급-부틸아민, 이소프로필아민, 디에틸아민, 디이소프로필아민, 에탄올아민, 트리에틸아민, 3-아미노-1-프로파놀 등과 반응시켜 형성된 염이다.

대표적인 산부가염은 유기산 또는 무기산(예:황산, 염산, 인산, 아세트산, 석신산, 시트르산, 락트산, 말레산, 푸마르산, 팔미트산, 콜산, 파모산, 무크산, D-글루탐산, d -캄포르산, 글루타르산, 글리콜산, 프탈산, 타르타르산, 포름산, 라우르산, 스테아르산, 살리실산, 메탄설폰산, 벤젠설폰산, 소르브산, 피크르산, 벤조산, 신남산 등)과 표준 반응시켜 형성된 염이다.

수의학의 약제학적 분야에서, 항생제의 형태는 동물을 항생제로 치료할 경우, 통상적으로 중요하지 않다. 대부분의 경우, 동물의 상태는 약제를 투여하는 다른 형태로 약제를 변화시킨다. 따라서 투여할 수 있는 염의 형태는 일반적으로 중요하지 않다. 그러나 염의 형태는 경제적인 면, 편리성 및 독성을 고려하여 선택할 수 있다.

항생제 A 42125는 액침 호기성 조건하에 적합한 배양재지에서 실제의 활성이 있는 항생제가 생성될때까지 A 42125를 생성하는 균주인 노카르디아 에어로콜로니게네스를 배양하여 생산한다. A 42125는 본 분야에 공지된 각종 분리 및 정제방법을 이용하여 회수할 수 있다.

항생제 A 42125의 생산에 유용한 신규의 노카르디아 에어로콜로니게네스 균주는 브라질의 토양 시료로부터 분리된다. 편의상 엔, 에어로콜로니게네스를 기술할때, A 42125 배양물이라고 한다.

릴리 리서취 라보라토리즈(Lilly Research Laboratories)에 근무하는 프레데릭 피.메르쯔(Frederick P.Nertz)는 상기한 미생물에 대한 분류학적 연구를 행하였다. 이 연구를 건거로 하여, 이 미생물은 프리드함(Pridham) 및 리온(Lyons)[시노부(Shinobu) 및 카와토(Kawato)]에 의해 1970년에 노카르디아 에어로콜로니게네스의 신규한 균주로 분류된다(참조: T.G. Pridham, "New Names and New Combina'ions in the Order Actinomycetales Buchanan 1917, " USDA Tech. Bull. No. 1424:32, Agriculcural Research Service, USDA, Washington, D.C., 1970). 이러한 분류는 유사한 종의 공개된 설명의 조사는 물론 동시의 실험 대조를 근거로 한다[참조: M. Goodfellow and K.P. Schaal, :Identification Methods for Nocardia, Actinomadura and Rhodococcus, "in G.A. Skinner and D.W. Lovelock, ed, "Identification Methods for Microbiologists," 2nd ed., Society for Applied Bacteriology Technical Series No. 14, Academic Press Inc., New York, 1979, p. 261; R.E. Gordon, S.K. Mishra and D.A. Barnett, "some Bits and Pieces of the Genus Nocardia:N. carnea, N. vaccinii., N. transvalensis, N. orientalis, and N. aerocolonigenes," J. Gen. Microbiol. 109, 69-78(1978); S.J. Mishra, R.E.Gordon, and D.A. Barnett, "Identification of Nocardiae and Streptomycetes of Medical Importance," J. Clin. Microbiol 11(6), 728-736(1980); H. Mordarska and M. Mordarski, :Chemotaxonomic Characters and Classification of Some Nocardioform Bacteria," J. Gen. MicroBiology 71; 77-86(1972) ; R.c. Pittenger and R.B. Brigham, "Streptomyces orientalis, n.sp., the Source of Vancomycin,"Antibiotics and Chemotherapy VI(11), 642-647(1956): and S. A. Waksman, "The Actinomycetes, Vol. II", The Williams and Wilkins Co., Baltimore, 1961].

[사용된 방법]

스트랩토마이세스(Streptomyces)종의 특성지적을 위한 인터내셔날 스트랩토마이세스 프로잭드[International Streptomyces Project(ISP)]에 의해 권장되는 방법[참조:E.B. Shirling and D. Gottlieb, "Methods for Characterization of Streptomyces Spacies", Int. J. Syst. Bacteriol. 16(3), 313-340(1966)은 특정한 보충 시험(참조:D.J. Blazevic and G.M. Ederer, "Principles of Biochemical Tests in Diagnostic Microbiology", John Wiley and Sons, Inc., New York, 1975)을 수반한다.

고든(Gordon)등에 의해 노카르디아(Nocardia)종의 특성지적을 위해 권장되는 방법[참조:R.E. Gordon, D.A. Barnett, J.E. Handerham, and C.H. Pang, "Nocardia coeliaca, nocardia autotrophica, and the Nocardin strain, " Int. j. Syst. Bacteriol. 24(1), 54-63(1974)]이 이어진다.

리팜핀 및 라이소자임에 대한 내성은 고든 및 바네트(Barnett)에 의해 권장된 방법[참조:R.E. Gordon and D.A. Barnett, "Resistance to Rifampin and Lysozyme of Strains of Some Species of Mycobacterium and Nocardia as a Taxonomic Tool,"Int. J. Syst. Bacteriol, 27(3), 176-178(1977)]으로 측정한다.

ICSS-NBS[센트로이드 칼라 챠트(Centroid Color Charts)], 표준 샘플 제2106호[참조 : National Bureau of Standards, 1958, U.S. Department of Commerce, Washington, D.C.) 및 칼라 하모니 매뉴얼(Color Harmony Manual)[참조:4th ed., Color Standards Department, Container Corporation of America, chicago, Illinois, 1958]을 사용하여 색명(色名)을 지정한다.

광학 현미경을 사용하여 형태학을 연구한다. 포자표면 장식을 연구하기 위해 주사 전자현자현미경(SEM)을 사용한다.

멜라노이드 색소 생성(색소원)은 IPS 제 1 호(트립톤-효모 추출 브로스), ISP제 6 호(펩톤-효모 추출철 아가), ISP 제 7 호(티로신 아가) 및 제거된 티로신을 갖는 변형된 IPS제 7 호로 측정한다.

전체 세포의 가수분해물질중의 디아미노피멜산(DAP)의 이성체와 탄수화물은 베커(Becker) 및 르슈발리에 (Lechevalier)등의 크로마토그래프법으로 확인된다[참조:B. Becker, M.P. Lechevalier, R.E.Gordon, and H.A. Lechevalier, "Rapid Differentiation between Nocardia and Streptomyces by Paper Chromatography of whole-cell Hydrolysates", Appln. Microbiol. 12, 421-423(1964) and M. P. Lechevalier, Identification of Aerobic Actinomycetes of Clinical Importance," J. Lab. Clin, Med. 71, 934-944(1968)].

미콜산은 민니킨(Minnikin)에 의해 기술된 기술을 기초로 한 방법으로 측정되었다.[참조 : D.E. Minnikin, I.G. Hutchinson and A.B. Caldicott, "Thin-layer Chromatography of Methanolysates of Mycolic Acid-containing Bacteria," J.Chromatography 188; 221-223(1980)].

전분 가수분해는 ISP제 4 호(무기염-전분 아가)플레이트에서 요오드로 전분 존재를 위한 시험으로 측정되었다. [참조 : Blazevic and Ederer,상기 참조)].

NaCl 내성은 필요한 농도와 동일한 ISP 제 2 호 아가에 NaCl을 가하고, 30。에서 14일간 플레이트를 배양하여 측정한다.

항생제에 대한 내성은 접종한 ISP제 2 호 아가 플레이트의 표면에 항생제에 민감한 디스크를 패드하여 측정한다.

포스파타제 및 우레아제는 블라제비크 및 에더러에 의해 기술된 방법으로 측정한다.(상기 참조). 젤라틴액화를 이용하여 프테이나제 활성을 측정한다.

[배양특성]

A 42125의 성장은 일반적으로 브로스 복합물 및 정의한 아가 배치에서 우수하다. 공기중의 마이셀리아는 거의 효모-댁스트로즈 아가에서 생성되었다. 포자군의 색은 회색 내지 백색 계열이다. 트레스너(Tresner)및 바커스(Bachus)의 가장 적합한 색표는 d 연한 회식 및 b 유백색이었다. 뒷면의 색은 황갈색 내지 황백색이다. 연한 갈색의 가용성 색소가 ISP 제 2 호 및 효모-댁스트로즈 아가에서 생성되었다. 표 I은 이들의 배양특성을 요약한 것이다.

[표 1] A42125

^aG=성장, R=역전, Am=공기중 균사체, Sp=가용성 색소

[형태학적 특성]

배양 A 42125는 광범위한 기질을 생성하고 공기중의 마이셀리움을 매우 잘 성장시킨다. 광학 현미경하에 관찰할 경우, 공기중의 균사는 거미줄 형태를 갖는다. 이것은 형태학에서 벌기스 매뉴앨(Bergey's Manual)에 기술된 비스트랩토마이세테스아속으로 분류된다[참조 : R.E. Buchanan, and N.E. Gibbons Eds., "Bergey's Manual of Determinative Bavteriology," 8th ed., The Williams and Wilkins Co., Baltimore, 1974].

ISP 제 4 호 아가 배지를 전자 현미경으로 주사하여 검사할 때 분생포자기가 관찰된다.

포자는 부족하고 불규칙하게 형성된다. 포자 표면은 매끄럽다[참조 : T.G. Pridham, C.W. Hesseltine, and R.C. Benedict, "A Guide for the Classification of Streptomycetes According to Selected Groups,"Appl. Microbiol. 6; 52-79(1957))].

포자형태는 장타원형 내지 원통형이고 수적으로 50이상의 쇄가 형성된다. 포자 크기는 1.2 내지 0.9×0.5 내지 0.4μM이고 평균적으로는 1.1×0.5μM이다.

액침 진탕 조건하에서 성장시킬 경우, 균사는 단편으로 분리된다.

[생리학적 특성]

배지 A 42125 는 카제인, 엘라스틴, 구아닌, 하이포크산틴 및 티로신으로 분해되고; 칼슘 말레이트, DNA, 에스쿨린 및 전분으로 가수분해되며; 아라비노즈, 셀로비오즈, 프럭토즈, 갈락토즈, α-메틸-D-글리코사이드, 글루코즈, 글리세롤, 이노시톨, 락토즈, 말토즈, 만니톨, 만노즈, 멜리비오즈, 라피노즈, 람노즈, 트레할로즈 및 크실로즈로부터 산을 형성하고, ; 아세트산염, 벤조산염, 시트르산염, 말레산염, 옥살 산염, 프로피온산염, 피루브산염, 석신산염 및 타르타르산염을 이용한다.

배양물A 42125 는 카탈라제, 포스파타제, 프로테이나제, 우레아제 및 멜라노이드 색소를 생성하고; 리팜핀에 대한 내성이 없고; 라이소자임, 세팔로틴, 겐타마이신, 린코마이신, 페니실린 및 토브라마이신에 대해 내성이 있다.

배양물 A 42125 SMS 6% NaCl에 견디며 15내지 37℃의 온도에서 성장하며; 50℃에서 8시간 동안 노출시키면 생존할 수 없고 탈지유를 가수분해하거나 질산염을 아질산으로 환원시키는 것은 불가능하다. 이들의 생리학적 특성은 표II 및 표 III에 기재되어 있다.

[표 2] A42125 및 관련된 노카르디아(Nocardia)균주^a의 특정의 형태학 및 생리학적 성질

^a+=특성을 나타낸다 ; -=특성을 나타내지 않는다.

[표 3] A42125의 추가의 성질

^a+=균주가 특성을 갖는다 ; -=균주가 특성을 갖지 않는다.

세포-벽 분석

가수분해된 전체 세포는 디아미노피멜산의 메조 이성체를 함유한다. 전체 세포 가수분해물에 존재하는 당은 아라비노즈, 갈락토즈, 만노즈 및 리보즈이다. 벡커(Becker)에 따른 세포벽 타입(상기 참조)은 타입 IV이고, 당의 패턴은 타입 A[르슈발리에, 상기 참조]이다. 미콜산(LCN-A)는 A 42125 에 의해 생성되지 않는다. 세포는 그람양성으로 분류되지만 내산성은 없다.

[A 42125 균주의 동정]

A 42125 균주는 타입 IV 세포벽, 타입 A 전체 세포벽 당 패턴을 가지며 미콜산(LCN-A)을 함유하지 않는다. 이러한 화학계통학적 정보 및 일반적인 배양특성은 A 42125 균주를 노카르디아 트레비산(Nocardia Trevisan) 1889 속으로 지정한 것과 일치한다[참조:V.B.D. Skerman, V. Mcgowan, 및 P.H.A. Sneath, Eds., "Approved Lists of Bacterial Names," Int. J. Syst. Bacteriol. 30; 225-420(1980)].

노카르디아(Nocardia)종으로 설명된 A 42125 균주의 특성을 비교하면 다음 종과 유사하다:

노카르디아아 에어로콜로니게네스^a.b.(Nocardia aerocolonigenes)^a.b.

노카르디아아 브라실리엔시스^a.b(Nocardia brasiliensis)^a.b

노카르디아아 오리엔탈리스^a.b.c(Nocardia orientalis)^a.b.c

^a굳펠로우 및 살(Goodfellow and Schaal)상기 참조

^b골돈, 미시라 및 바르네트(Gordon, Mishra and Barnett), 상기 참조

^c피텐거 및 브리켐(Pittenger and Brigham), 상기 참조.

이들 배양물은 A 42125 균주와 동시에 성장한다. 발표된 자료 및 실험자료를 혼합하여 결과를 평가한다.

유사성 계수는 쿠릴로비츠(Kurylowicz)등이 제안한 바와 같이 다음 식을 사용하여 계산한다. (참조 : W. Kurylowicz, A. Paszkiewicz, W. Woznicka, W. Kurzatkowski 및 T. Szulga, "Numerical Taxonomy of Streptomycetes," Polish Medical Publishers, Waraw, 1975, p.37).

상기식에서, Ns⁺는 양성 유사성의 수이고, Ns^-는 음성 유사성의 수이며, Nd는 비유사성(차이)의 수이다.

S_SM을 계산하기 위해 사용되는 특성은 생리학적이며 배양적이거나 형태학적이지 않다. 특성의 총 수는 44이다.

유사성 계수는 다음과 같다.

배양물 S_SM

A42125 100

엔. 에어로콜로니게네스(N. aerocolonigenes) 88

엔. 오리엔탈리스(N.orientalis) 70

엔. 브라실리엔시스(N. brasiliensis) 65

엔. 브라실리엔시스(N. brasiliensis)는 A 42125와 배양적으로 거의 유사하지 않고 낮은 S_SM값을 가지므로, 고려되지 않는다.

엔, 오리엔탈리스(N. orientalis)는 A 42125와 배양특성이 유사하다. 이 유사성은 특히 ISP 배지 제 3 호 및 4 호에서 현저하다. 그러나, 낮은 S_SM으로 나타나는 바와 같이 생리학적 특성이 유사하지 않으므로, 고려되지 않는다.

엔, 에어로콜로니게네스(N. aerocolonigenes)는 공기중의 균사를 갖지 않는다. 따라서 A 42125에의 배양적 비교는 성장, 가역색깔 및 가용성 색소에 대해서만 할 수 있다. 엔. 에에로콜로니게네스가 처음 기술되었을 때[참조: E.B. Shirling, and D. Gottlieb, "Cooperative Description of Type Cultures of Streptomyces 111," Int. J. Syst. Bacteriol, 18(4) ; 279-392(1968)], 그것은 IPS 제 5 호에 백색의 공기중의 균사를 갖는 것으로 보고되었다. 이 보고는 현행의 동시에 한 비교 연구로부터의 관찰과 일치한다. (참조: 표 I, ISP No.5).A 42125및 엔, 에어로콜로니게네스의 성장과 가역샐깔은 수용적으로 조화를 이룬다. 이러한 조화는 특히 크자펙의 용액 아가 및 글로코즈-아스파라진 아가에 잘 나타난다.

골돈(상기 참조)은 공기중의 균사외의 다른 특성을 사용하여 엔, 에어로콜로니게네스로서 균주를 분류했다. A 42125및 엔, 에어로콜로니게네스간의 생리학적이고 화학 계통학적 유사성은 공기중의 균사의 존재에 기인한 차이를 꽤 능가한다. 엔, 에어로콜로니게네스로부터 엔, 오리엔탈리스를 구분하는 세가지 중요한 특성이 고든에 의해 주어졌다. A 42125와 이들 특성을 비교하여 표 IV에 기재하였다 :

[표 4] A 42125, 엔, 오리엔탈리스(N. orientalis)및 엔, 에어로콜로니게네스(N. aerocolonigenes)의 두드러진 특성의 비교

^a+=균주가 특성을 갖는다.

-=균주가 특성을 갖지 않는다.

이들 표시를 관찰한 결과, A 42125가 엔, 에어로콜로니게네스와 가장 밀접한 관련이 있다.

A 42125및 엔, 에어로콜로니게네스는 하나의 탄수화물원만에 의한 탄소 이용이 다르다(성장 및 산 생성으로 측정된다). 노카르디아에종의 잠정적인 확인을 위해 미시라(Mishra)에 의해 고안된 도해(상기 참조)를 사용하여, 배양물A 42125를 엔, 에어로콜로니게네스로 직접 도해한다. 이들을 비교하면 A 42125가 엔, 에어로콜로니게네스에 대해 한정된 배양적인 유사성 및 우수한 생리학적 유사성을 갖는다는 것을 알 수 있다. 가장 중요한 차이는 A 42125에 공기중 균사가 존재한다는 것이다. 엔, 에어로콜로니게네스는 공지중 균사를 생성하는 것으로 공지되어 있으므로, 이러한 차이는 이 분류군에서 A 42125를 제외할 정도로 충분히 고려되지 않는다. 따라서, 배양물A 42125는 1970년 프리드햄 및 라이온(Pridham and Lyons)[시노부 및 카와토(Shinobu and Kawato)]에 의해 노카르디아 에어로콜로니게네스(Nocardia aerocolonigenes)종으로 분류된다. 그러나 엔, 에어로콜로니게네스는 어프루브드 리스츠 오브 박테이얼 네임즈(Approved Lists of Bacterial Names)(상기참조)에 기재되어 있지 않으므로 , 타당하게 알려진 종이 아니다.

다른 미생물의 경우와 같이, A 42125를 생성하는 배양물, 노카르디아 에어로콜로니게네스 NRRL 18049의 특성은 변화한다. 균주의 재결합체, 돌연변이체 또는 변이체는 본 분야에 공지된 방법으로 수득할 수 있다. 예를 들면, 돌연변이체는 여러가지 공지된 물리적 및 화학적 변이유발소(예:자외선, X선, 감마선) 및 화학물질(예:N-메틸-N'-니트로-N-니트로소구아니딘)로 처리하여 수득할 수 있다. A 42125생성의 특성을 보유하는 노카르디아 에어로콜로니게네스의 모든 천연 및 유도된 변이체, 돌연변이체 및 제조결합제는 본 발명의 일부이다.

노카르디아 에어로콜로니게네스 NRRL 18049를 성장시키는 데 사용되는 배양배지는 많은 배지중 어느 하나일 수 있다. 그러나 생산 비용, 적합한 수율 및 생성물 분리의 편의를 위하여, 특정한 배양배지가 바람직하다. 예를 들면, 대규모 발효에서, 엔, 에어로콜로니게네스를 위한 탄수화물원으로 다른 당류 또는 당중합체도 사용할 수도 있지만, 글루코즈 및 덱스트린이 바람직하다.

엔, 에어로콜로니게네스의 질소원으로는 증류용성 물질, 효모추출물, 육즙 추출물 등의 다른 질소원도 사용할 수 있지만 콩가루 및 옥수수-침지액이 바람직하다.

배양배지에 유리하게 혼입할 수 있는 미량의 무기염으로는 아연, 나트륨, 마그네슘, 칼슘, 암모늄, 염화물, 탄산염, 황산염, 질산염 및 유사한 이온을 생성할 수 있는 통상적인 가용성 염이 있다.

미생물의 성장 및 발달에 필수적으로 필요한 미량원소도 또한 배양배지에 포함되어야 한다. 이러한 미량원소는 흔히 미생물의 성장 필요량에 충분한 양으로 배지의 다른 성분중의 불순물로서 존재한다. 대개 기포는 문제가 되지 않지만 폴리프로필렌 글리콜과 같은 소량의 기포방지제를 필요시 대규모의 발표배지에 가할 수 있다.

실제적인 양의 항생제 A 42125를 생성하기 위해서는, 수조내에서의 액침 호기성 발효가 바람직하다. 소량의 A 42125를 진탕-플라스크 배양시켜 수득할 수 있다. 커다란 수조에 미생물의 포자형태로 접종하는 것과 연관되어 항생제 생성의 시간이 지체되므로, 증식성 접종물을 사용하는 것이 바람직하다. 적은 부피의 배양배지에 포자형태 또는 균사체단편을 접종시켜 증식성 접종물을 제조하여 신선하고 활성적으로 성장하는 미생물의 배지를 수득한다. 그후 증식성 접종물을 커다란 수조에 옮긴다. 증식성 접종물 배지는 규모가 더 큰 발효를 위해 사용되는 것과 동일할 수 있으나 다른 배지도 또한 적합하다.

A 42125는 약 25°및 약 37℃사이의 온도에서 성장할 경우 노타르디아 에어로콜로니게네스에 의해 생성된다. A 42125의 생서에 바람직한 온도는 약 30℃이다.

액침 호기성 배양 공정에서 통상적인 바와 같이, 배지가 통상의 터빈 임펠러로 교반되는 동안, 바닥으로 부터 용기로 멸균 공기를 불어 넣는다. 이과 같이 사용되는 조건하에, 발효의 최대 산소 흡수량은 약 0.2mM/L/min을 초과하지 않는다. 약 115ℓ의 브로스를 함유하는, 완전히 차폐한 165ℓ의 발효기에서, 교반 속도가 200내지 250rpm인 0.125V/V/m의 통기율은 약 30% 또는 그 이상의 공기포화에 용해되지 않은 산소의 함량을 유지하기에 충분하다. 항생제에 민감한 것으로 알려진 미생물에 대한 항생적인 활성에 대해 브로스 시료를 시험하여 발효하는 동안 항생제 A 42125가 생성될 수 있다. A 42125의 존재를 시험하는데 유용한 하나의 생물 검정 미생물은 마이크로코커스 루테우스(Micrococcus luteus)이다. 이 생물 검정은 아가-웰 플레이트(agar-well plate)시험으로 편리하게 수행된다.

액침 호기성 발효 조건하의 이의 생성에 따라, A 42125는 발효분야에서 사용되는 방법으로 발표시켜 회수할 수 있다. A 42125를 생성하는 생물을 발효하는 동안 생성되는 항생적인 활성은 주로 브로스에서 일어난다. 따라서 초기에 배지를 여과하여 균사체 덩어리로부터 브로스를 분리하여 A 42125가 최대한으로 회수된다. 그후 여과된 브로스를 정제하여 A 42125를 분리할 수 있다. 여러가지 기술이 이 정제에 사용될 수 있다.

A 42125를 분리하는데 바람직한 기술은 브로스의 pH를 약 7로 조정하고 적합한 흡습제[예 : 디아이온(Diaion) HP-20수지]를 가하는 것이다. 수지를 여과하여 분리하고, 아세토니트릴 : 물(1 : 1)등의 적합한 용매로 추출한다. 그후 추출용매를 진공하에 증발시켜 A 42125를 수득할 수 있다.

이러한 방법으로 수득한 A 42125는 공지된 방법으로 더 정제할 수 있다. 바람직한 방법으로는 이온 교환 크로마토그래피(TLC)가 있다.

항생제 A 42125의 분리는 박층 크로마토그래피(TLC)로 이어질 수 있다. 하나의 통상적인 실리카-겔 TLC 용매 시스템으로는 아세토니트릴 : 메탄올 : 물 : 수산화암모늄(4 : 2 : 2 : 1)이다. 이 시스템에서, A 42125는 약 0.43의 Rf치를 갖는다. 항생제는, 예를 들면, 마이크로코커스 루테우스 (Micrococcus luteus)를 사용하는 생물학적 자기묘사로, 또는 예를들면, 바닐린-항산 분무제 등의 다른 방법으로 검출할 수 있다.

또한 A 42125원으로 균사체 성분 및 균사체를 포함하는 배양고체가 추출 또는 분리하지 않고 바람직하게는 물을 제거한 후에 사용될 수 있다. 예를 들면, A 42125를 생성한 후, 전체 발효 브로스를 동결 건조, 드럼건조 또는 공비증류 및 건조시킬 수 있다. 그후 건조된 브로스를 사료 예비 혼합물에 직접 혼합한다.

A 42125는 동물 및 식물 생활에 병원성인 세균의 성장을 억제한다. 표 V는 통상의 아가-희석법으로 측정한 A 42125가 각종 세균을 억제하는 최소 억제농도(MIC)를 요약한 것이다.

[표 5] A 42125의 항균 활성

A 42125의 항균활성의 중요한 한가지 국면은 혐기성 세균에 대한 이의 활성에 관한 것이다. A 42125가 각종 혐기성 세균을 억제하는 MIC를 표준 아가-희석 생물 검정으로 측정하여 표 VI에 요약하였다. 종말점은 24시간 동안 배양한 후에 판독한다.

[표 6] A 42125에 대한 혐기성 세균 분리물의 감수성

이의 항균 활성의 다른 중요한 국면에서, A 42125는 메탄-생성 박테리아를 억제한다. 예를들면, A 42125는 A 42125의 한 결정을 24시간 로온(lawn)(최소의 배지)에 두고 억제효과를 3일째에 측정하는 시험에서 0.1mcg/mL와 같이 낮은 농도에서 메타노코커스 바니엘리(Methanococcus vannielli)를 억제 한다.

A 42125의 또다른 중요한 특성은 동물의 사료 이용효능을 증진시키는 능력이다. 예를 들면, A 42125는 전위기능이 발달된 반추동물의 사료 이용 효능을 증진시킨다.

사료 이용효능은 전위에서의 프로피온산염의 생성 및 농도를 관찰하여 기록할 수 있다.

전위액은 전위쪽으로 통하는 외과적으로 장치된 누공(fistula opening)이 있는 소로부터 수득된다. 소는 조성이 다음과 같은 고-그레인 양식으로 유지시킨다.

69.95 거칠게 분쇄한 옥수수

10 분쇄한 옥수수 속대

8 콩가루(50% 단백질)

5 자주개자리

5 당밀

0.6 우레아

0.5 디칼슘 포스페이트

0.5 탄산칼슘

0.3 염

0.07 비타민 A 및 D₂혼합물

0.05 비타민 E 혼합물

0.03 미량의 무기질 혼합물

전위액의 시료를 4층의 치즈크로스(cheese cloth)를 통해 정제하고, 여과물을 진공병에 모은다. 치즈 크로스로 보유된 과립 물질을 충분하 생리학적인 완충액에 재현탁시켜 원래부피의 전위액으로부터 복귀시키고, 현탁액을 다시 치즈 클로스를 통해 정제한다. 사용되는 완충액은 다음과 같다.

0.316g./ℓ Na₂HPO₄

0.152g./ℓ KH₂PO₄

2.260g./ℓ NaHCO₃

0.375g./ℓ KCl

0.375g./ℓ NaCl

0.112g./ℓ MgSO₄

0.038g./ℓ CaCl₂

0.008g./ℓ FeSO₄·7H₂O

0.004g./ℓ MnSO₄

0.004g./ℓ ZnSO₄·7H₂O

0.002g./ℓ CuSO₄·5H₂O

0.001g./ℓ CoCl₂

챙(Cheng)등, 제이. 다이어리 사이언스 38, 1225, (1995).

두 여과물을 분리깔때기에 넣고 과립물질이 꼭대기로 올라올 때까지 방치한다. 그후 투명한 층을 분리하고, 동일한 완충액으로 1:1로 희석한 후, pH를 7.0으로 조정한다.

10ml의 희석된 전위액을 상기에 기술한 것과 동일한 양식 400mg을 넣은 25ml 플라스크에 담는다. 5mg의 콩 단백질도 플라스크마다 가한다. 처리한 화합물을 각 시험 플라스크로 무게를 잰다. 각 처리 화합물에 4개의 모사 플라스크를 사용한다. 0시간 대조물 및 16시간 방치하는 대조물을 사용한다. 모든 시험 플라스크를 38℃에서 16시간동안 방치시킨다. 방치 시간의 마지막에 pH를 측정하고 25ml의 25% 메타인산을 각 플라스크에 가한다. 시료를 침강시킨다. 상등액의 휘발성 지방산에 대해 가스 크로마토그래피법으로 분석한다.

아세테이트, 프로피오네이트 및 부티레이트 화합물을 분석한다. 그 결과는 대조 플라스크의 분석결과와 눈에 띄게 비교된다. 대조물보다 훨씬 높은 프로피오네이트 생성물로 처리하는 것은 활성 처리로 간주한다.

표 VI는 이들 시험에서A 42125로 처리된 플라스크 대 대조 플라스크의 휘발성 지방산(VFA) 농도의 비를 나타낸다.

[표 7] 반추동물 사료 이용효율에 대한 A 42125의 효과

^a5가지 시험

메탄 억제는 또한 아세테이트를 방출되는 메탄 대신에 유용한 에너지로 전환시켜 반추 동물에서 사료 이용을 더 효과적으로 되게 한다. 이 활성은 전위의 작용을 모사한 시험관내 시험을 이용하여 측정한다. 이 시험은 오랜기간에 걸쳐 전위작용을 모사한 연속발효 플라스크에서 수행된다. 각 플라스크는 액체입구, 고체입구, 시료채취입구 및 발효에 의해 생성되는 가스를 모으는 고무낭에 연결된 가스출구 튜브를 갖는 가스-밀집 용기이다. 각 플라스크의 액체부피는 액체 수집용기에 연결된 스탠드 파이프를 사용하여 500ml로 조정한다. 플라스크 온도를 38°내지 40℃에서 조절한다. 각 플라스크를 전자 교반기로 부드럽게 교반한다.

각 실험은 시험에 사용되는 동일한 사료를 섭식시킨 누공을 연결시킨 소로부터 수득한 정제한 전위액 500ml를 플라스크에 가하여 시작한다. 용출액 수집 플라스크를 희석된 메타인산 50ml로 예비충진시켜 플라스크를 밀봉하고 가스 수집낭을 부착한다.

액체는 조성이 다음과 같은 pH6.8 내지 7.0의 완충액을 하루에 1ℓ씩 그것에 침전시키고, 계속해서 각 플라스크에 가한다 :

수소인산나트륨 2.2g/ℓ

염화마그네슘 0.036

중탄산나트륨 5.9

염화칼륨 0.34

욤화나트륨 0.28

우레아 1.0

염화칼슘 0.024

각 플라스크에 급식입구를 통해 매일 두번씩 적절한 사료 10g을 가한다. 각 급식후에, 가스입구를 닫고 플라스크를 이산화탄소로 관류시킨다.

매일 용출액을 모아서 분석하고 플라스크에 남은 가스를 모아서 분석한다.

통상적으로 어떤 처리 화합물을 사료에 가하지 않고 4일간 각 플라스크에 대해 시험한다. 평형된 4일동안에 액체 및 기체 유출액을 분석하기 시작하고 분석적 자료가 비교적 일정하게 될때까지 어떤 처리 화합물을 가하지 않고 플라스크를 작동시킨다. 동시에 처리한 급식을 플라스크에 가하고 최소한 7일간 처리한 급식에 플라스크를 작동시킨다.

하기 표 VIII에 나타낸 50ml 액체부피의 플라스크에 화합물 농도를 수득하기에 적합한 양으로 화합물을 급식에 가한다. 대부분의 시험에서, 각 화합물의 각 처리농도를 위해 2개의 플라스크를 사용하고 모든 처리일의 두 플라스크로부터의 자료를 계산하여 평균을 낸다. 표 VIII는 A 42125의 메탄-억제 활성을 요약한 것이다.

[표 8] 반추동물의 메탄생성에 대한 A 42125의 효과

^a세가지 시험

쥐에 A 42125를 단일-용량으로 투여한 후에 평가한 LD₅₀는 다음과 같다.

LD₅₀(복강내)=9.375mg/kg

LD₅₀(경구)=89mg/kg

A 42125는 프로피오네이트를 증가시키는데 대표적으로 효과적이므로 반추동물에 0.05mg/kg/일 내지 약 6.75mg/kg/일의 비율로 경구투여할 경우, 사료 이용 효과를 증가시킨다. 바람직한 투여량은 약0.2mg/kg/일 내지 약3.5mg/kg/일이다.

바람직한 투여방법은 화합물을 동물사료와 혼합하는 것이다; 그러나, 다른 방법, 예를 들면, 정제, 음약, 거환약 또는 캅셀제로 투여할 수 있다. 이들 여러가지 형태의 제제는 수의학의 약제학적 분야에 널리 공지된 방법으로 제조할 수 있다. 각 개별용량 단위는 치료되는 동물에 적절한 일일용량에 직접 관련된 양의 본 발명의 화합물을 함유해야 한다.

본 발명은 또한 사료 양식 및 톤당 6내지 60g의 A 42125 화합물을 함유하는 사료 이용을 증가시키기 위해 채택된 사료 조성물에 관한 것이다.

A 42125는 동물에게 경구 또는 비경구로 투여할 수 있다. A 42125를 투여하는 가장 실제적인 방법은 급식 공급으로 제형화하는 것이다. 바람직한 투여방법은 그것과 동물 사료의 혼합에 의한 것이지만, 다른 방법, 예를들면, 정제, 음약, 거환약 또는 캅셀제로도 투여할 수 있다. 각 개별용량 단위는 치료되는 동물을 위한 적절한 일일용량에 직접 관련된 양의 A 42125를 함유해야 한다.

동물사료로 약을 제형화하는 방법은 널리 공지되어 있다. 바람직한 방법은 농축된 약제 예비 혼합물을 제조한 다음, 이를 사용하여 약물을 첨가한 사료를 제조하는 것이다. 대표적인 예비 혼합물은 예비 혼합물 파운드 당 약 1내지 200g의 약제를 함유할 수 있다. 예비 혼합물은 액체 또는 고체 제제일 수 있다.

동물 사료의 마지막 제형은 투여되는 약제의 양에 따라 정해진다. 제형, 혼합 및 펠레트화하는 통상적인 약제를 이용하여 A 42125를 함유하는 사료를 제조할 수 있다.

A 42125는 수의학의 약제학적 분야에 공지된 방법으로 제형화할 수 있다. A 42125를 함유하는 효과적인 주입 조성물은 현탁액 또는 용액 형태일 수 있다. 용액 형태에서, A 42125는 생리학적으로 허용되는 담체에 용해된다. 이러한 담체는 적절한 용매, 필요시, 벤질알코올 등의 방부제 및 완충제를 함유한다. 유용한 용매로는, 예를 들면, 물, 알코올, 글리콜 또는 불활성 오일(예: 식물성 오일 또는 매우 많이 정제된 광물성 오일)이 있다.

주입 현탁액 조성물은 화합물용 비용매를 담체로서 보조제와 함께 사용하여 제조한다. 비용매는, 예를들면, 물 또는 폴리에틸렌 글리콜 등의 글리콜일 수 있다.

적절한 생리학적으로 허용되는 보조제가 현탁액 조성물에 현탁된 화합물을 우지하기 위해 필요하다. 보조제는 카복시메틸셀롤로즈, 폴리비닐피롤리돈, 젤라틴 및 알기네이트 등의 농조화제중에서 선택할 수 있다. 다수의 계면활성제도 또한 화합물을 현탁시키는데 유용하다. 레시틴, 알킬페놀 폴리에틸렌 옥사이드 부가물, 나프탈렌설포네이트, 알킬벤젠 설포네이트 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르가 액체비용매에 유용한 현탁제이다.

약제비용매의 친수성, 밀도 및 표면장력에 영향을 주는 많은 물질이 각 경우에 주입 현탁액을 만드는데 도움을 줄 수 있다. 예를들면, 실리콘 기포방지제, 글리콜, 소르비톨 및 당이 유용한 현탁제일 수 있다.

본 발명의 실시를 더 자세히 설명하기 위하여, 다음 실시예를 제공한다.

[실시예 1]

항생제 A 42125의 제조

A. 진탕-플라스크 발효

액화질소에 유지된 현탁액 또는 동결된 펠레트로서 배양물 노카르디아 에어로콜로니게네스(Nocardia aerocolonigenes) NRRL 18049를 조성이 다음과 같은 사면배지에 접종시킨다.

*N-Z 아민(Amine)A, 훔코 쉐필드 케미칼 코포레이티드(Humko Sheffield Chemical Co.), 린드허스트(Lyndhurst) NJ pH는 NaOH를 사용하여 ~6.2 내지 7.0으로 조정한다.

접종된 사면배지를 30℃에서 약 7일간 배양한다. 성숙한 사면 배양물을 살균시킨 도구로 긁어 모으고, 포자를 떼내어 제거하여 균사매트를 부드럽게 한다. 이렇게 수득한 떼어낸 포자 및 배양 성장물의 1/4을 조성이 다음과 같은 영양배지 50ml에 접종시킨다.

*스타덱스(stadex)11, 에이.이.스텔리 코포레이션(A.E. Staley Co.), 데카투르(Decatur) IL. pH는 NaOH를 사용하여 ~5.5 내지 6.5로 조정한다.

접종된 영양배지를 250rpm에서 2inch(5.08cm)의 원을 선회하는 교반기에서 30℃에서 약 72시간 동안 250ml들이 엘렌마이어 플라스크에서 배양시킨다.

배양된 배지(1.25ml)를 사용하여 조성이 다음과 같은 50ml의 생성배지에 접종시킨다.

*O.M. 펩톤, 앰버 레보러토리스(Amber Lboratories), 주노우(Juneau) WI

**N-Z 아민 A

***크자펙의 무기질 저장물의 조성은 다음과 같다 : 100 KCl ; 100g MgSO₄·7H₂O; 2g FeSO₄·7H₂O; 탈이온수 약 1ℓ

접종된 생성배지를 250rpm에서 2in의 원으로 선회하는 교반기에 30℃에서 3내지 5일간 250ml들이 광구(wide-mouth)엘렌마이어 플라스크에서 배양시킨다.

B. 탱크발효

큰 부피의 접종물을 제공하기 위해, 진탕-플라스크 발효(A)에서 기술한 바와 같이 제조한 10ml의 배양된 영양배지를 사용하여 조성이 영양배지와 동일한 2단계 성장배지 250ml를 접종시킨다. 2단계 배지를 250rpm에서 2in의 원으로 선회하는 교반기에서 약 30℃에서 70시간 동안 2ℓ들이 광구(wide-mouth) 엘렌마이어 플라스크중에서 배양한다.

이렇게 하여 제조한 배양된 2단계 배지(400ml)를 사용하여 진탕-플라스크 발효(A)에서 기술한 바와 같이 제조한 살균된 생성배지 100ℓ에 접종시킨다. 접종된 생성배지를 30℃에서 3내지 5일간 165ℓ들이 교반 발효 탱크중에서 발효시킨다. 교반되는 용기중의 저기류(0.12 내지 0.25V/V/m)및 적절한 rpm(200내지250)은 30%이상의 공기 포화의 용해된 산소 수준을 유지한다.

[실시예 2]

[A 42125의 분리]

3%의 하이플로 슈퍼셀(Hyflo Supercel)을 함유하는 전체 발효 브로스(92ℓ)를 여과 압착기를 통해 여과시킨다. NaOH를 사용하여 브르스 여과물(74ℓ)을 pH 7로 조정한다. 다이아이온(Diaion) HP-20수지(9.4ℓ)를 가한다. 혼합물을 45분간 교반하고, 여과한다. 여액을 버리고, 수지를 재현탁, 교반 및 여과시켜 물(각 10ℓ)로 세번, 아세토니트릴 : 물(3:17, 각10ℓ)로 세번 세척한다. 세척물을 버린다. 아세토니트릴 : 물(1:1, 각 10ℓ)중에 수지를 현탁시키고, 교반한 다음, 여과하여A 42125를 용출시킨다. 4회 계속 용출시킨다음, 각 용출 분획을 마이크로코커스 루테우스 디스크-플레이트 검정으로 검정한다. 처음의 두 용출물을 혼합하고, 진공중에서 농축시켜 아세토니트릴을 제거한 다음, 동결건조시켜 조A 42125을 94.9g 수득한다. 세번째 용출물로 조 A 42125을 20.8g을 수득한다.

[실시예 3]

[A 42125의 정제 및 결정화]

실시예 2에서 수득한 조 A 42125제제를 혼합하고(115.2g), 물(3ℓ)에 용해 시킨다. 용액을 여과하여 침전물을 제거하고, 여액을 3ℓ의 도웩스(Dowex) 50×2(NH₄+), 100 내지 200메쉬 수지를 함유하는 컬럼에 적용한다. 컬럼을 5컬럼 부피의 물과 0.1N NH₄OH로 계속해서 세척한다. 가장 많은 양의 A 42125를 함유하는 2N NH₄OH용출물로부터의 분획을 혼합하고, 약3ℓ의 부피로 농축시킨다. A 42125를 침전시키고, 여과시켜 분리한다. 침전물을 메탄올(300ml)에 용해시키고, 이 용액을 에테르(6ℓ)에 가하여 A 42125를 침전시킨다. 이 침전물을 여과하고, 건조시켜 무정형 분말로서 A 42125를 16.6g 수득한다. 수용액을 더 농축시키고, 동일한 방법으로 처리하여 두번째 침전물을 수득하여 덜 정제된 A 42125 20.7g을 수득한다.

수득된 처음의 A 42125(16.6g)를 온수(800ml)에 용해시킨다. 이 용액을 실혼에서 밤새 방치시킨다. A 42125가 결정화된다. 결정을 여과시켜 분리하고, 진공중에서 건조시켜 결정성 A 42125(융점 149내지 150℃)을 10.6 g및 2.3g(두번재 소낭) 수득한다.

[실시예 4]

[A 42125-강화된 소 급식]

성숙한 소에 급식하는 균형 잡힌, 곡물 함량이 많은 급식은 다음 처방으로 제조한다 :

¹미량의 무기밀 예비배합물 조성 : 산화망간으로서의 망간 2.50%, 요오드화 칼륨으로서의 요오드 0.07%, 탄산코발트로서의 코발트 0.30%, 산화 구리로서의 구리 0.50% 및 황산아연으로서의 아연 20.00%.

²비타민 A 및 D 3 예비배합물의 각 파운드는 비타민 A 2,000,000 usp 단위 및 비타민 D 3 225,750usp단위를 함유한다.

³비타민 E 예비배합물의 각 파운드는 비타민 E 20,000IU를 함유한다.

Claims

다음과 같은 특성을 갖는 항생제 A 42125, 및 이의 염.

상태 : 백색결정(물로부터)

융점 : 149내지 150℃

UV : 비흡수

IR(Kbr) : 첨부된 도면에 도시된 바와 같음

적정(80% 수성 디메틸포름아미드) : pKa값 5.2, 8.7 및 10.5

분자량 : 2032(장 탈착 질량 분광분석법)

실험식 : C₁₀₁H₁₈₄N₂O₃₈

아미노산 : 없음

용해도 : 물에 가용성
제 1 항에 있어서, A 42125 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염인 화합물.
액침 호기성 발효조건하에 탄소, 질소 및 무기염의 동화성 공급원을 함유하는 배양배지중에서, 항생제 A 42125가 생성될때까지 노카르디아 에어로콜로니게네스(Nocardia aerocolonigenes) NRRL 18049[한국기탁번호:KFCC 제10418호, 기탁기관 : 한국종균협회(KFCC), 기탁일 : 1987. 9. 1]를 배양함을 특징으로 하여 항생제 A 42125를 제조하는 방법.
제 3 항에 있어서, 배양배지로부터 A 42125를 분리하는 추가의 단계를 포함하는 방법.
동물사료와 제 2 항에서 청구한 화합물의 유효량으로 이루어진, 반추동물의 사료이용효율을 증가시키기 위한 사료조성물.