JPS62281889A - 抗生物質ａ４２１２５及びその調製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ３、発明の詳細な説明 本発明は新規な抗生物質、Ａ４２１２５、及び該抗生物
質を生産するノカルジア・アエロコロニゲネス（Ｎｏｃ
ａｒｄｉａ　　ａｅｒｏｃｏｌｏｎｉｇｅｎｅｓ）（Ｎ
　ＲＲＬ１８０４９）の新規な菌株に関するものである
。

Ａ４２１２５は、メタンを産生ずる微生物に対し特に興
味深い活性を有する抗菌剤である。瘤胃（第−胃）状態
の疑似試験に於いてＡ４２１２５はメタン産生を最小限
度に抑えるので、Ａ４２１２５は飼料効率を向上させ、
それに伴い反茹動物の成長を促進させるものと考えられ
る。

本発明はまた、実質的な量のＡ４２１２５が生産される
まで液中の好気的発酵条件でノカルジア・アエロコロニ
ゲネス（ＮＲＲＬ　　１８０４９）の新規な菌株を培養
することによる該抗生物質の生産方法を提供するもので
ある。Ａ４２１２５は、発酵ブロスを樹脂に吸着させ、
その樹脂を極性有機溶媒で溶離することにより、発酵ブ
ロスから抽出される。Ａ４２１２５は、分離された後、
イオン交換クロマトグラフィーなどの周知の技術にょう
て更に精製される。

ノカルジア・アエロコロニゲネス（Ｎ　ＲＲＬ１８０４
９）は、新規に発見された菌株であり、従って本発明は
更に、この微生物の生物学的に純粋な培養物を提供する
ものである。

添付の第１図は、Ａ４２１２５のＫＢｒ法による赤外吸
収スペクトルを示すものである。

獣医学領域に於いては、より優れた抗生物質が絶えず求
められている。動物の発育を促進することがこれら抗生
物質の目的の１つである。発育促進は、疾病を抑制し、
飼料の利用効率を増強させることにより実現される。牛
や羊などの反茹動物に於ける発育促進は、特に商業的な
関心を集めているものである。

反部動物に於ける瘤胃内の微生物は、炭水化物を分解し
、プロピオネートなどの代謝され得ろ化合物を生産する
。しかしながらある種の微生物は、この系に反対に悪影
響を与える。例えば、メタノーゲン類、即ちメタン産生
微生物は、反部動物に於ける飼料の利用効率を減少させ
る。Ａ４２１２５の強調すべき特徴は、メタン産生微生
物の発育を阻害することであり、故にＡ４２１２５は、
反部動物の発育を促進させるために使用することができ
る。

メタン産生微生物（原生細菌）は、反部動物の消化系に
は、望ましいものではないが、これらの微生物は、排泄
物であるバイオマスがメタンに分解される最終段階を触
媒するので、地球の環境保全に貢献する重要な生物であ
る。更にメタンは、燃料としても有用となり得るので、
エネルギー資源における問題を解決させるものである。

従って、メタン生成を促進するメタノーゲン類及びその
ための方法は重要なしのである。

メタン生成を促進させる１つの方法は、メタノーゲン類
の遺伝子変換系を発達させることである。

これを実施するには、抗生物質耐性などの選択可能な特
性が必須である。このような特性は、通常、その微生物
を殺す抗生物質に対して耐性を示す突然変異体を選択す
ることによって見出だされる。

しか１．なめくらメ々ノーゲソは−１堂ぽ２んＦの泣虫
物質に対し耐性である。従って、Ａ４２１２５がメタノ
ーゲンの発育を阻害することは、メタノーゲンに於ける
遺伝子変換を容易にするための選択可能な特性を特定す
るのに有用である。

Ａ４２１２５の特徴 抗生物質Ａ４２１２５は、下記の物理化学的特徴を有し
ている： 形状；白色結晶（水から結晶化） 融点；Ｉ４９−１５０℃ ＵＶ；吸収なし くＲ（ＫＢｒ法）；下記の波数に吸収を示す（添付の第
１図参照）、３４２３．３４１３．３４０９．３４０３
．３３９８及び３３８６を含む広い吸収：２９３７．１
７２０．１６０２、Ｉ４５３．１４０８．１３７９．１
２９０．１１９２．１１２０．１０９０．１０６４．９
７１．８７０．８３０及び８０２゜ 滴定（８０％水性ジメチルホルムアミド）；ｐＫａ＝５
．２．８７、ｌ０１５ 分子量、２０３２（電界脱離質量スペクトル）実験式：
　Ｃ＋　ｏ　＋　ＨＩｓ　ａ　Ｎ　ｔ　Ｏ３ｓ元素分析
；　元　素　　　　実測値（％）炭素　　　　５９．５
１ 水素　　　　　９．０５ 窒素　　　　　１．４４ 酸素　　　　３００８ アミノ酸；測定されず 溶解性；水に可溶。

バイオオートグラフィ；０．９５Ｎ　ＮａｔＳＯａ及び
０．０５Ｎ　ＮａＨＳＯ４・ＨｔＯを含浸させたワット
マン（Ｗｈａｔｍａｎ）Ｎｏ、　　１紙、１．５％のＮ
ａＣ１を含有させた８０％水性エタノールの溶媒系を用
い、ミクロコツカス・ルテウス（Ｍ　１ｃｒｏｃｏｃｃ
ｕＳ　　１ｕｔｅｕｓ）で検出すると、Ａ４２１２５の
Ｒｆ値は約０．４６である。

滴定結果より、Ａ４２１２５は、塩を形成し得るカルボ
キシル基、アミン官能基及びフェノール基を有している
ことが明らかである。

このような塩は、抗生物質を分離、精製、供給するため
に有用である。従って、Ａ４２１２５塩は、本発明の１
部を構成する。医薬的に許容できる塩は、特に有用であ
る。有用な塩の例には、アルカリ金属、アルカリ土類金
属アミン及び酸付加塩がある。

適当なアルカリ金属塩及びアルカリ土類金属塩の代表的
なものには、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、
セシウム塩、ルビジウム塩、バリウム塩、カルシウム塩
及びマグネシウム塩などが含まれる。適当なアミン塩に
は、アンモニウム塩、及び１級、２級、３級Ｃ，−Ｃ４
アルキルアンモニウム塩、及びヒドロキシ−Ｃ２−Ｃ，
アルキルアンモニウム塩などが含まれる。アミン塩の例
には、Ａ４２１２５を水酸化アンモニウム、メチルアミ
ン、５ｅｃ−ブチルアミン、イソプロピルアミン、ノエ
チルアミン、ジイソプロピルアミン、エタノールアミン
、トリエチルアミン、３−アミノ−Ｉ−プロパツールな
どと反応させることにより形成される塩か含まれる。

代表的な酸付加塩には、有機酸及び無機酸、例えば硫酸
、塩酸、リン酸、酢酸、コハク酸、クエン酸、酪酸、マ
レイン酸、フマル酸、パルミチン酸、コール酸、パモイ
ック酸、粘液酸、Ｄ−グルタミン酸、ｄ−樟脳酸、グル
タル酸、グリコール酸、フタル酸、酒石酸、ギ酸、ラウ
リン酸、ステアリン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸
、ベンゼンスルホン酸、ソルビン酸、ピクリン酸、安息
香酸、桂皮酸などの酸類との標準的反応によって形成さ
れる塩類が含まれる。

動物用医薬品業界に於いて、抗生物質を用いて動物を治
療する場合の抗生物質の剤形は、通常たいして重要では
ない。はとんどの場合、動物体内の条件て薬物は、投与
された形以外の形に変化してしまう。従って、投与し得
る塩の形態は、一般にたいして重要なものではない。し
かし、塩形態は、経済性、簡便性、毒性の観点から選ば
れ得るものである。

抗生物質Ａ４２１２５は、ノカルジア・アエロコロニゲ
ネス（ＮＲｆｌＬ　　１８０４９）のＡ４２１２５産生
菌株を、実質的に抗菌活性を示すまで液中の好気的条件
にて培養することにより生産される。Ａ、４２１２５は
、当業界に於いて知られている各種の単離、精製方法に
よって回収することができる。

抗生物質Ａ４２１２５の調製に使用される新規なノカル
ンア・アエロコロニゲネス菌株をブラジルから採取した
土壌より分離した。Ｎ、アエロコロニゲネス菌株につい
て記述する上で、Ｎ　アエロコロニゲネスを便宜的にＡ
４２１２５培養と呼ぶことにする。

この微生物に関する分類学的研究は、リリー（Ｌｉ　ｌ
　ｌｙ）・リサーチ・ラボラトリ−のフレードリック・
ピー・メルフ（Ｆ　ｒｅｄｅｒｉｃｋ　Ｐ　、Ｍｅｒｔ
ｚ）によって行なわれた。これらの研究に基づき、この
微生物は新規なＮ、アエロコロニゲホス１株［ン／ブ（
Ｓｈｉｎｏｂｕ）及びカワト（Ｋ　ａｗａｔｏ）プリド
ハン（Ｐｒｉｄｈａｍ）及びライオンズ（Ｌｙｏｎｓ）
　１９７０　］と９分される［プリドハン（Ｔ　、　Ｇ
　、　Ｐ　ｒｉｄｈａｍ）ｒ放線菌目ブッキャナン（Ｂ
ｕｃｈａｎａｎ）　１９１７における新名及び新組み合
わ仕ＪＵＳＤＡ　Ｔｅｃｈ、　Ｂｕｌｌ、　Ｎｏ、　　
ｌ　４２４　：３２、アグリカルチャル・リサーチ・サ
ービス、米国農務省（ＵＳＤＡ）、ワンントンＤ、Ｃ１
１９７０］。この分類は、同時の比較研究及び同様の菌
種に於いて開示されている分類法に基づいている［グツ
ドフェロ−（Ｍ　、　Ｇ　ｏｏｄｆｅｌｌｏｗ）及びシ
ャール（Ｋ、　Ｐ、　５ｃｈａａｌ）の「ノカルジア、
アクチノマデユラ（Ａ　ａｔ　ｉｎｏｍａｄｕｒａ）、
ロドコッカス（Ｒｈｏｄ。

ｃｏｃｃｕｓ）の同定法」、スキーナ−（Ｆ、　Ａ、　
５ｋｉｎｎｅｒ）及びラブロック（ｐ、　Ｗ、　Ｌｏｖ
ｅｋｏｃｋ）編に於ける、「微生物学者のための同定法
」応用微生物学技術協会誌２版、連続番号第１４．２６
１頁、１９７９、アカデミツク・プレス（Ａｃａｄｅｍ
ｉｃ　　Ｐｒｅｓｓｌｎｃ、）、ニューヨーク　：ゴー
トン（Ｒ，Ｅ。

Ｇ　ｏｒｄｏｎ）、ミンチ（Ｓ、　Ｋ、　Ｍｉｓｈｒａ
）、バーネット（Ｄ、　Ａ、　Ｂａｒｎｅｔｔ）のジャ
ーナル・オブ・ジーン・ミクロバイオロジー（Ｊ、　Ｇ
ｅｎ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ。

）、１０９．６９−７８（１９７８）の「ノカルジア属
：Ｎ、カルネラ（Ｎ、　ｃａｒｎｅａ）、Ｎ、バクシニ
ー（Ｎ、　ｖａｃｃｉｎｉｉ）、Ｎ、トランスバレンシ
ス（Ｎ　、　ｔｒａｎｓｖａｌｅｎｓｉｓ）、Ｎ、オリ
エンタリス（Ｎ　、　ｏｒｉｅｎｔａｌｉＳ）及びＮ、
アエロコロニゲネス（Ｎ　、　ａｅｒｏｃｏｌｏｎｉｇ
ｅｎｅｓ）の特定のビット及び種」；ミンチ、ゴートン
及びバーネットのジャーナル・クリニカル・ミクロバイ
オロジー（Ｊ　、　ＣＩｉｎ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ）
　Ｉ　Ｉ　（６）、７２８−７３６（１９８０）の「医
薬的に重要なノカルジア及びストレプトマイセスの同定
」：モルダルスキ（Ｈ、ｍｏｒｄａｒｓｋａ）及びモル
ダルスキ（Ｈ。

ｍｏｒｄａｒｓｋｉ）のジャーナル・オブ・ジーン・ミ
クロバイオロジー（Ｊ、　Ｇｅｎ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌ、　）、Ｌ上、７７−８６（１９７２）の「特定のノ
カルジア品種の細菌に於ける生化学的分類特性及び分類
法」：ピッテンジ＋　　（Ｒ、Ｃ、Ｐ　ｉｔｔｅｎｇｅ
ｒ）及びブリグハム（Ｒ、Ｂ　、　Ｂ　ｒｉｇｈａｍ）
の抗生物質と化学療法（Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　　ａ
ｎｄ　　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒｐｙ）Ｗ（１１）、６４２
−６４７（＋９５６）の「バンコマイシンの供給源、ス
トレプトマイセス・オリエンタリス、ｎ、　ｓｐ　」；
ワックスマン（Ｓ、　Ａ、　Ｗａｋｓｍａｎ）の「アク
チノマデユラ、■巻」、ウィリアムス（Ｗ　ｉ　１１　
ｊａｍｓ）及びウィルキンス（Ｗｉｌｋｉｎｓ）Ｃｏ、
ボルチモア、１９６１］。

使用した方法 国際ストレプトマイセス企画（ＩＳＰ）によって推奨さ
れる、ストレプトマイセス種の特性決定法［シエーリン
グ（Ｅ　、　Ｂ　、　Ｓ　ｈｉｒｌｉｎｇ）及びゴツト
リーブ（Ｄ　、　Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）のＩｎｔ、　　５
ｙｓｔ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ。

１６（３）、３１３−３４０（１９６６）ｒストレプト
マイセス種の特徴付は方法」］を、ある種の補足試験［
ブラゼピック（Ｄ、　　Ｊ、　Ｂｌａｚｅｖｉｃ）とエ
デラ−（Ｇ　、　Ｍ、　Ｅｄｅｒｅｒ）の「診断微生物
学に於ける生化学的規範」、Ｊｏｈｎ　　Ｗｉｌｅｙ　
　ａｎｄ　５ｏｎｓ、Ｉｎｃ、、ニューヨーク、１９７
５］とともに行った。

ゴートン（Ｇ　ｏｒｄｏｎ）らによって推奨される、ノ
カルノア種の特性決定法［、Ｅ、　Ｇｏｒｄｏｎ、　Ｄ
。

Ａ、　ＢａｒｎｅｔｔｌＪ　、　Ｅ、　Ｈａｎｄｅｒｓ
ｏｎＳＣ，Ｈ，ＰａｎｇのＩｎｔ、　　Ｊ、　　５ｙｓ
ｔ、　　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、２４（１）、５４−６３
（＋９７４）ｒノカルジア・コエリアカ（Ｎ、　ｃｏｅ
ｌｉａｃａ）、ノカルジア・オートトロフィカ（Ｎ。

ａｕｔｏｔｒｏｐｉｃａ）及びノカルジン（Ｎｏｃａｒ
ｄｉｎ）種」］に従った。

リフアンビン（ｒｉｆａｍｐｉｎ）及びリゾチームに対
する耐性を、ゴートンとバーネットにより推奨された測
定方法により行った［ゴートン及びバーネットのＩｎｔ
、　　Ｊ、　　５ｙｓｔ、　　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　
　２７（３）。

１７６−１７８（１９７７）、「特定のミコバクテリウ
ム種及びノカルノア種の菌株に於ける、分類学的な手段
としてのりファンピン及びリゾチームに対する耐性」］ ＩＣ５Ｓ　　ＮＢＳセントロイド・カラー・チャート（
Ｃｅｎｔｒｏｉｄ　　Ｃｏ１ｏｒ　　Ｃｈａｒｔｓ）の
標準品Ｎ０２１０６（Ｎａｔｉｏｎａｌ　　Ｂｕｒｅａ
ｕ　　ｏｆ　　５ｔａｎｄａｒｄｓ。

１９５８、米国デパートメント・オブ・コマース、ワシ
ントンＤ、Ｃ，）及びカラー・ハーモニー・マニュアル
（Ｃｏｌｏｒ　　Ｈａｒｍｏｎｙ　　Ｍａｎｕａｌ）［
４版、カラー・スタンダード・デパートメント、コンテ
イナー・コーポレイション・オブ・アメリカ、ンカゴ、
イリノイ、１９５８］を用いて色名の照合を行なった。

形態は、光学顕微鏡を用いて調べた。走査型電子顕微鏡
（ＳＥＭ）は、胞子表面の状態を調べるために使用した
。

メラニン様色素の生産（発色性）を、ｌ５ＰＮｏ。

１（）リブトン−酵母エキスブロス）、ｌ５ＰＮｏ。

６（ペプトン−酵母エキス鉄寒天）、ｌ５ＰＮｏ。

７（チロシン寒天）、及びチロシンを取り除いて改良し
たｌ５ＰＮｏ、７により検出した。

全細胞の加水分解物中の炭水化物及びジアミノピメリン
酸（ＤＡＰ）の異性体をベラカー（Ｂ　ｅｃｋｅｒ）ら
のクロマトグラフィー法によって確立した［ベラカー、
Ｍ、Ｐ、　　レチェバリー、ゴートン、）（、Ｅ。

レチェバリーのＡｐｐｌ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　　
ｌ　２．４２１６４２３（１９６４）ｒ全細胞加水分解
物のペーパー・クロマトグラフィーによるノカルジア及
びストレプトマイセスの早期識別法玉及びＨ，Ｐ。

レチェバリーのＪ　、　Ｌａｂ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｍｅｄ
、　、７１゜９３４−９４４（１９６８）ｒ臨床的に重
要な好気性アクチノマイセスの識別法」］。

ミコール酸をミンニキン（Ｍ　１ｎｎｉｋｉｎ）によっ
て記載された操作に基づく方法［Ｄ、Ｅ、　ミンニキン
、バー７シンソン（Ｉ　、　Ｇ、　Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏ
ｎ）及びカルシコツト（Ａ　、　Ｂ　、　　Ｃａｌｄｉ
ｃｏｔｔ）のＪ　、　ＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙＳ
　１　８８、２２　１−２３３（１９８０）ｒミコール
酸含有細菌のメタノール産物の薄層クロマトグラフィー
」］によって測定した。

澱粉の加水分解をヨードによってｌ５ＰＮｏ。

４（無機塩−澱粉寒天）平板上の澱粉の存在を確認する
ことにより検定した（ブラゼビック及びエデラー（重連
）を参照）。

ＮａＣ１耐性を、ｌ５ＰＮｏ、２寒天に所望の濃度にだ
けＮａＣ１を加え、平板を３０℃にて１４日間インキュ
ベートすることにより測定した。

抗生物質に対する耐性を、接種したｌ５ＰＮｏ。

２寒天平板に抗生物質感受性用ディスクを当てろことに
より測定した。

フォスファターゼとウレアーゼをブラゼビック及びエデ
ラー（面性）に記載の方法によって測定した。ゼラチン
融解性を用いてプロテイナーゼ活性を測定した。

培養上の特徴 Ａ４２１２５の増殖は、複合培地及び上記定義の寒天培
地の両方に於いて大体良好であった。酵母デキストロー
ス寒天を除く全ての寒天で、気中菌糸体が得られた。胞
子塊の色は、灰色から白色系列であった。トレスナ−（
Ｔ　ｒｅｓｎｅｒ）とバチュス（Ｂ　ａｃｈｕｓ）方法
に於ける色標識（ｃｏｌｏｒ　ｔａｂｓ）に最も近い色
は、ｄ明灰色とｂ淡灰白色であった。反対側の色は、黄
味がかった灰色から黄味がかった白色であった。ｌ５Ｐ
Ｎｏ、２と酵母−デキストロース寒天では、明茶色の色
素が産出された。第１表に、これらの培養上の特徴を一
覧にして示す。

形態学的特徴 Ａ４２１２５培養物は、大量の基質を産生し、明瞭な気
中菌糸体となった。光学顕微鏡で観察すると、気中菌糸
はくもの巣状の外観を呈していた。

この形態によりベルギーズ・マニュアル（Ｂｅｒｇｅｙ
’ｓ　Ｍａｎｕａｌ）Ｃブッチャナン（Ｒ，Ｅ、　Ｂｕ
ｃｈａｎａｎ）及びギボンズ・エドス（Ｎ、　Ｅ、　Ｇ
ｉｂｂｏｎｓ　Ｅｄｓ、　）、「決定微生物学のベルギ
ーズ・マニュアル」８版、ウィリアムズ・アンド・ウィ
ルキンスＣｏ、（Ｗｉｌｌｉａｍｓ　ａｎｄ　Ｗｉｌｋ
ｉｎｓ　Ｃｏ、）、ボルチモア、１９７４］に記載され
１こ非ストレプトマイセス区分に分類される。

［５ＰＮｏ、４寒天培地の気中菌糸を走査電子顕微鏡て
凋へると、分生胞子が観察された。

胞子の形成は僅かであり、不規則であった。胞子の表面
は滑らかであった［プリドハム（Ｔ、Ｇ。

Ｐ　ｒｉｄｈａｍ）、ヘラセルチン（Ｃ，Ｗ、　Ｈｅ５
ｓｅｌｔｉｎｅ）、及びベネンクト（Ｒ、Ｃ、Ｂ　ｅｎ
ｅｄｉｃｔ）のＡｐｐｌ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　６．
５２−７９（１９５７）ｒ選択群に従かったストレプト
マイセスの分類法の手引き」］。

胞子の形状は、楕円から円筒形であり、数にして５０以
上の連鎖群を形成していた。胞子は、１２−０．９ｘＯ
，５−０，４μＭのサイズであり、平均して１．ｌＸ０
．５μＭのサイズであった。

液中撹拌条件下で増殖させると、菌糸は断片に分かれた
。

生理学的特徴 Ａ４２１２５培養物は、カゼイン、エラスチン、グアニ
ン、ヒボキサンチン及びチロシンを分解し、リンゴ酸カ
ルンウム、ＤＮＡ、エスクリン及び澱粉を加水分解し、
アラビノース、セロビオース、フルクトース、ガラクト
ース、α−メチル−〇−グリコシド、グルコース、グリ
セリン、イノシトール、ラクトース、マルトース、マン
ニトール、マンノース、メリビオース、ラフィノース、
ラムノース、トリハロース及びキノロースから酸を生産
し、アセテート、ベンゾエート、ノドレート、マレート
、オキサレート、プロピオネート、ピルベート、スクシ
ネート及びタートレートを利用した。

Ａ４２１２５培養物は、カタラーゼ、フォスファターゼ
、ブロテイナーゼ、ウレアーゼ及びメラニン様色素を産
生じた。Ａ４２１２５培養物はりファンピンに対して耐
性がないが、リゾチーム、セファロチン、ゲンタマイシ
ン、リンコマイシン、ペニシリン及びトブラマイシンに
対しては耐性があった。

Ａ４２１２５培養物は、６％ＮａＣ１まで耐性を示し、
温度１５−３７℃にて増殖し、５０℃に８時間さらすと
生存することができず、脱脂乳を加水分解することがで
きず、硝酸塩を亜硝酸塩に還元することができなかった
。これらの生理学的特徴を第■表、第■表に示す。

第ｍ表　Ａ４２１２Ｆ）のその他の特性第１表（続き） ａ：本−株は特性を有する。

一一株は特性を有していない 細胞壁分析 加水分解された全細胞は、ジアミノピメリン酸のメソ型
異性体を含有していた。全細胞の加水分解物に存在して
いる糖は、アラビノース、ガラクトース、マンノース及
びリボースであった。ベソカー（上述）の方法による細
胞壁型は■型であり、ｔｌｌＳｉ公栢はＡ磨Ｃし千エバ
リー、肝１ホ）であったー　ミコール酸（ＬＣ：Ｎ−Ａ
）は、Ａ４２１２５により産出されなかった。細胞は、
ダラム陽性に染色したが、耐酸性ではなかった。

Ａ４２１２５株の同定 Ａ４２１２５株は、細胞壁■型、全細胞糖分類Ａ型であ
るが、ミコール酸（ＬＣＭ−Ａ）は含有していない。こ
の生化学分類上の知見及び一般的な培養上の特徴から、
Ａ４２１２５株はノカルノア属トレビサン（Ｔｒｅｖｉ
ｓａｎ　　Ｉ　８８９）であるとすることに矛盾はない
［スケルマン（Ｖ、Ｂ、Ｄ、Ｓｋｅｒｍａｎ）、マツク
ゴーワン（Ｖ、　ＭｃＧｏｗａｎ）、スネス。

エドス（Ｐ、　Ｈ，Ａ、　　５ｎｅａｔｈ、　Ｅｄｓ、
　）のＩｎｔ。

Ｊ、　５ｙｓｔ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　　３０．　
２２５−４２０（１９８０）ｒ細菌の認可名一覧」］。

Ａ４２１２５株の特徴をノカルジア種に関する出版物の
記載と比較することにより、下記の種と類似しているこ
とが明らかになった： ノカルジア・アエロコロニゲネス８・ｂノカルジア・ブ
ラシリエンシス８・ｂ ノカルジア・オリエンタリス８°ｂ、ｃａ：グツドフェ
ロ−及びシャーシ、既述ｂ；ゴートン、ミンテ及びバー
ネット、既述Ｃ，ビッテンガー及びブリグハム、既述こ
れらの培養物をＡ４２１２５と同時に増殖させた。公表
されている資料と実験で得られた資料を総合し、結果を
評価した。

クリロビック（Ｋ　ｕｒｙｌｏｗｉｃｚ）らが論じてい
る方法により［Ｗ、　Ｋｕｒｙｌｏｗｉｃｚ、パラキー
ピック（Ａ。

Ｐ　ａｓｚｋｉｅｗｉｃｚ）、ウォツ二カ（Ｗ　、　Ｗ
ｏｚｎｉｃｋａ）、クルザッッコースキ−（Ｗ　、　Ｋ
　ｕｒｚａｔｋｏｗｓｋｉ）及びツルガ（Ｔ　、　Ｓ　
ｚｕｌｇａ）の「ストレプトマイセスの数量分類学玉ボ
ーランド医薬出版社（Ｐｏｌｉｓｈ　Ｍｅｄｉａａｌ　
Ｐ　ｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）、ワルシャワ、１９７５．３
７頁］、下記の等式を用いて、類似係数を計算した：Ｎ
ｓ＋＋ＮＮ５ 一８ｓ　＝　　　　　　　　　　Ｘ！ｏＯＮｓ”　＋Ｎ
ｓ−＋Ｎａ ［式中、Ｎｓ“は正の類似度数、Ｎｓ−は負の類似度数
、Ｎｄは非類似度数（相異性）を表す］ＳＳＭの計算に
使用した固有値は、生理学的なものであり、培養学的又
は形部学的なものではなかった。固有値の総数は４４で
あった。

類似係数を以下に挙げる： Ａ４２１２５　　　　　　１００ Ｎ、アエロコロニゲネス　　８８ Ｎ、オリエンタリス　　　　７Ｏ Ｎ、ブラシリエンシス　　　６５ Ｎ、ブラシリエンシスはＡ４２１２５と培養掌上はとん
ど類似性がなく、低い８８Ｍ値であったので、検討項目
から除外した。

Ｎ、オリエンタリスは、Ａ４２１２５と類似の培養学的
特徴を有していた。この類似性は、ＩＳＰ培地Ｎ０１３
及び４に於いて特に明らかである。

しかし、低い８８Ｍ値が示しているように生理学的特徴
には類似性がないので、これも検討項目から除外した。

Ｎ、アエロコロニゲネスは気中菌糸を有していない。従
って、Ａ４２１２５との比較は増殖状態、反対側の色及
び可溶性色素のみに基づかないと行うことかできなかっ
た。Ｎ、アエロコロニゲネスは最初に禰示された時［ン
ーリングとコツトリーブ（Ｅ、　Ｂ、　Ｓｈｉｒｌｉｎ
ｇ　　ａｎｄ　　Ｄ、　Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）のＩ　ｎｔ
、　　Ｊ　、　　５ｙｓｔ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、上
１（４）、２７９−３９２（１９６８）ｒストレプトマ
イセス１１１の培養型に於ける総説」］、ｌ５ＰＮｏ、
５に於いて白色の気中菌糸を有していると報告された。

この報告は、本比較研究の観察結果（第１表、ＩＳＰ　
Ｎｏ、５を参照）と符合している。Ａ４２１２５とＮ、
アエロコロニゲネスの増殖及び反対側の色は十分に一致
している。この一致は、クザペックス（Ｃｚａｐｅｋ’
　ｓ）溶液寒天及びグルコース−アスパラギン寒天に於
いて特に明瞭に認められる。

ゴートン（既述）は、菌株を気中菌糸以外の特性を用い
て、Ｎ、アエロコロニゲネスとして分類した。Ａ４２１
２５とＮ、アエロコロニゲネスとの生理学的並びに形態
学的類似性は、気中菌糸による相異よりらはるかに重要
である。Ｎ、オリエンタリスをＮ、アエロコロニゲネス
と区別するために、ゴートンは３つの重要特性を提示し
た。Ａ４２１２５のこれらの特性における比較を第■表
に示す。

第■表　Ａ４２１２５、Ｎ、オリエンタリスおよびＮ、
アエロコロニゲネスの顕著な特性の比較ａ：＋＝株は特
性を有している ー＝株は特性を有していない 第■表により、Ａ４２１２５が最ら緊密にＮ　アエロコ
ロニゲネスと関連していることが分かる。

Ａ４２１２５とＮ、アエロコロニゲネスとは、唯一個の
炭水化物供給源での炭素利用性（増殖及び酸生産によっ
て測定）が異なっている。

ノカルジア種を試験的に同定するための、ミンテ（既述
）によって考案された方法を用いると、Ａ４２１２５培
養物はＮ、アエロコロニゲネスに直接調和した。これら
の比較により、Ａ４２＋２５は、Ｎ、アエロコロニゲネ
スと培養学的類似性を限定的に、及び生理学的類似性を
十分に有していることが解る。最も重要な違いは、Ａ４
２１２５には気中菌糸が存在していることである。Ｎ、
アエロコロニゲネスは気中菌糸を産生ずることが知られ
ているので、この相異によってＡ４２１２５をこの分類
群（ｔａｘｏｎ）から除外するには適当でないと思われ
る。従って、Ａ４２１２５培養物は、ノカルノア・アエ
ロコロニゲネス株（ノツプ及びカワトー）、プリドハム
及びりオン１９７０に分類される。しかし、Ｎ　アエロ
コロニゲネスは細菌名の認可された一覧（既述）表に入
っていないので、これは有効に名付けられた種名ではな
い。

他の微生物らそうである様に、Ａ４２１２５産生培養物
、ノカルジア・アエロコロニゲネスの特徴は変異を受け
る。この菌株の組み換え体、突然変異体、変異体を当業
界既知の方法によって得ることができる。例えば、突然
変異体は、種々の既知の生理的及び化学的突然変異源、
例えば紫外線、Ｘ線、γ線、及びＮ−メチル−Ｎｏ−二
トローＮ−二トロソグアニジンなどの化学物質等を用い
て処理することによって得ることができる。本発明は、
Ａ４２１２５を産生ずる特性を有するノカルジア・アエ
ロコロニゲネスの天然の、及び誘発された変異体、突然
変異体及び組み換え体の全てを包含するものである。

ノカルジア・アエロコロニゲネスＮＲＲＬ　　１８０４
９を増殖させるための培養培地は、多数の培地のうち任
意の培地を使用することができる。

しかし、生産の経済性、最適収率及び生産物単離の簡便
さを考慮すれば、培養培地には好ましいものがある。例
えば、大規模発酵に於けるＮ、アエロコロニゲネスの好
ましい炭水化物供給源には、グルコース、デキストリン
類があるが、その他の糖または糖重合体なども使用する
ことができる。

Ｎ、アエロコロニゲネスにとって好ましい窒素源には大
豆粗粉（ｓｏｙｂｅａｎ　　ｇｒｉｔｓ）及びトウモロ
コシ漬汁（ｃｏｒｎ−ｓｔｅｅｐ　１ｉｑｕｏｒ）があ
るが、その他の窒素源、例えば蒸留物の可溶成分、酵母
エキス、肉汁エキスなども使用することができる。

培養培地に含有させると都合の良い栄養無機塩類には、
鉛イオン、ナトリウムイオン、マグネシウムイオン、カ
ルシウムイオン、アンモニウムイオン、塩素イオン、炭
酸イオン、硫酸イオン、硝酸イオンなどのイオンを産す
ることができる通常の可溶性塩類がある。

微生物の増殖と発育に必要な必須微量元素も培養培地に
含有させる必要かある。このような微量元素は、培地に
於けるその他の成分中に、不純物として通常、微生物の
増殖に必要なそ、の十分量が、存在する。泡形成は普通
問題にならないが、要すれば、ポリプロピレン・グリコ
ールなどの消泡剤を少量（例えば０　、２　ｍｌ／　ｌ
）大規模発酵培地に加えてらよい。

抗生物質Ａ４２１２５を大量生産するためには、タンク
に於いて液中の好気的発酵を行うことが好ましい。少量
のＡ４２１２５ならば、振盪フラスコ培養によって得る
ことができる。微生物の胞子を大型タンクに接種すると
、通常抗生物質の生産にタイムラグが生じるので、栄養
性の接種物を使用するのが好ましい。栄養性接種物は、
少量の培養培地に微生物の胞子または菌糸片を接種して
調製され、微生物の生存している新鮮な培養物として得
られる。次いて、この栄養性接種物を大型タンクに移す
。この栄養性接種培地はより大量の発酵にも同様に使用
できるが、その他の培地でも行うことができる。

ノカルジア・アエロコロニゲネスを温度約２５℃〜（な
いし）約３７℃にて増殖させ、Ａ４２１２５を生産する
。Ａ４２１２５生産に好適な温度は、約３０°Ｃである
。

通常の液中の好気的培養法のように、普通のタービン回
転翼によって培地を撹拌させながら、無菌空気を漕底か
ら層内へ吹き込む。これまで実施された条件下では、発
酵に於ける取り込まれた酸素のＲ大量は約０．２ｍＭ／
Ｌ／分を越えない。ブロス約１１５リツトルを含有する
十分な水流調節装置を備えた発酵槽では、撹拌速度２０
０−２５０　ｒｐｍにて０．１２５ｖ／ｖ／ｍの割合で
空気を吹き込めば、空気の飽和状態の３０％またはそれ
以上の容存酸素を維持することができる。

発酵中にブロスの試料を取り出し、抗生物質Ａ４２１２
５に感受性であることで知られている微生物に対し抗菌
活性を試験することにより、抗生物質Ａ４２１２５の生
産性を調べることができる。

このＡ４２１２５の試験方法に有用な１つの検定用微生
物は、ミクロコツカス・ルテウスである。

この生物検定は通常、寒天−ウェル平板試験によって行
う。

液中の好気的発酵条件下で生産した後、発酵業界にて行
なわれる方法によって発酵培地からＡ４２１２５を回収
することができる。Ａ４２１２５産生微生物の発酵中に
発現する抗菌活性は主としてブロス中に存在する。従っ
て、最初に培地を濾過し、菌糸塊からブロスを分離する
ことにより、Ａ４２１２５を最大量で回収することがで
きる。

次いで、濾過したブロスを精製し、Ａ４２１２５を分離
できる。この精製は、各種の方法で行なうことができる
。

Ａ４．２１２５を濾過したブロスから分離する好ましい
方法は、ブロスのＩ）Ｈを約７に調節し、例えばダイア
イオン＋４Ｐ−２０（Ｄｉａｉｏｎ　ＨＰ−２０）樹脂
などの好適な吸着剤を加えることである。

樹脂を濾過して分離し、アセトニトリル・水（ｌ：１）
などの適当な溶媒で抽出する。次いで、抽出溶媒を減圧
留去し、Ａ４２１２５を得ることができる。

この方法で得られたＡ４２１２５は更に、周知の方法に
よって精製できる。好ましい方法はイオン交換クロマト
グラフィー法である。

抗生物質Ａ４２１２５の分離は薄層クロマトグラフィ＝
（ＴＬＣ）によっても行なうことができろ。

簡便なシリカゲルＴＬＣの溶媒系は、アセトニトリル：
メタノール；水：水酸化アンモニウム（４：＝２　：２
：ｌ）である。このＴＬＣに於けるＡ４２１２５のＲｆ
値は約０．４３である。この抗生物質の検定は、例えば
ミクロコツカス・ルテウスを用いたバイオオートグラフ
ィー法、または例えばバニリン−硫酸試薬噴霧法などの
他の方法によって行うことができる。

あるいはまた、培地成分及び菌糸を含む培養固形物を抽
出または分離をせずに、Ａ４２１２５の供給源として使
用することもできるが、この場合、水を除去したものが
好ましい。例えば、Ａ４２１２５を生産した後、発酵ブ
ロス全体を凍結乾燥、ドラム乾燥または共沸蒸留による
乾燥によって乾燥するとよく、次いで、乾燥ブロスを直
接、試料プレミックスに混合する。

Ａ４２１２５は、動物及び植物に病原性を示す微生物の
発育を阻害する。以下の第１表は、通常の寒天希釈法に
よって測定した、各種の微生物の発育を阻害するＡ４２
１２５の最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を示すものである
。

Ａ４２１２５の抗菌活性に於いて重要なことは、嫌気性
菌に対する抗菌活性を有することである。

各種の嫌気性菌の発育を阻害するＡ４２１２５のＭｒＣ
（標準的な寒天希釈法により測定）を第■表に示す。イ
ンキューンヨンを２４時間行った後、終点を測定した。

Ａ４２１２５の抗菌活性で更に重要なことは、Ａ４２１
２５がメタン生成菌の発育を阻害することである。例え
ば、Ａ４２１２５は、２４時間培地（最小培地）にＡ４
２１２５の結晶１つを置いて試験し、阻害の状況を３日
間測定すると、０．！ｍｃｇ／ｍｌの低濃度にてメタノ
コツカス・バンニーリ（Ｍｅｔｈａｎｏｃｏｃｃｕｓ　
ｖａｎｎｉｅｌｌｉ）の発育を阻害した。

、１２１２５の池の重要な特性は、動物に於ける飼料の
利用効率を改善できることである。例えばＡ４２１２５
は、発達した瘤胃機能を有する反部動物の飼料の利用効
率を改善する。

飼料の利用効率は、瘤胃内にあるプロピオネート化合物
の産生及びその濃度を測定することによりモニターする
ことができる。瘤胃の内容物を、雄の仔牛の瘤胃で開口
している外科的に装着した筒状体により採取した。仔牛
は、下記の組成の高穀類食を与えて飼育した。

荒びきトウモロコノ　　　　　　　６９．９５％粉砕ト
ウモロコノ　　　　　　　　【０　％アルファルファー
ミール　　　　　５　％糖蜜　　　　　　　　　　　　
　　５　％尿素　　　　　　　　　　　　　　０．６％
燐酸二カルシウム　　　　　　　　Ｏ，Ｓ％炭酸カルシ
ウム　　　　　　　　　０．５％塩　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　０．３　％ビタミンＡ　、　Ｄ
　ｔのプレミックス　　０．０７％ビタミンＥプレミッ
クス　　　　　０．０５％微量元素プレミックス　　　
　　　０．０３％瘤胃内容物を４枚重ねのチーズクロス
で濾通し、濾液を恒温類に入れた。チーズクロスに残っ
た粒状物質を十分量の緩衝液に懸濁して瘤胃内容物の元
の容量に戻し、この＠濁液を再びチーズクロスで濾通し
た。緩衝液は以下のものを使用した：ＮａｔＨＰ　Ｏ−
０，３１６ｇ／Ｉ ＫＨｔＰ　０．　　　　　　　０．１５２　ｇ／ＩＮａ
ＨＣＯｓ　　　　　　　　２．２６２８／ＩＫ　Ｃｌ　
　　　　　　　　　　０．３７５　ｇ／ｌＮａＣ１，０
，：（７５ｇ／１ １１６Ｑ（１、ｎ　　ＩＨｃ！／１ ＣａＣ１２０，０３８８／ｌ Ｆｅ５　Ｏ，−７Ｈ，ＯＯ，００８ｇ／ｌＭｎ５０．　
　　　　　　　　　０．００４　ｇ／ｌＺｎＳ　０４　
・７　ＨｔＯＯ，００４ｇ／ｌＣｕＳ　Ｏ４・５　Ｈｔ
ＯＯ，００２ｇ／ＩＣｏＣｌｘ　　　　　　　　　　　
　Ｏ，００１ｇ／ｌヂエンジ（Ｃｈｅｎｇ）らのＪ、Ｄ
ａｉｒｙ　５ｃｉＪ８．１２２５（１９５５）。

得られた２つの濾液を分液ロートにまとめ、粒状物質が
液面に上がるまで放置した。次いで、鮮明層を分離し、
同様の緩衝液で１：ｌに希釈し、ｐＨ７、０に調節した
。

希釈した瘤胃内容物（１０ｍｌ）を、前記と同一の飼料
（４０ｍｇ）を入れておいた２５ｍ１フラスコに加えた
。大豆タンパク質（５ｍｇ）も各フラスコに加えた。処
置されるべき化合物を各々の試験フラスコに計り入れた
。１回の処置には、４つの同様のフラスコ系を使用した
。４つの対照フラスコも各々２組使用した。即ち、０時
間対照フラスコと１６時間インキュベートの対照フラス
コを使用した。

試験フラスコの全てを３８℃にて１６時間インキュベー
トした。インキュベートの終了時点で、ｐＨを測定して
２５％メタ燐酸（２ｍｌ）を各々のフラスコに加え、試
料を沈降させた。上清を分離し、揮発性脂肪酸をガスク
ロマトグラフィーによって分析した。

アセテート、プロピオネート、ブチレート化合物の分析
を行った。得られた分析値を対照フラスコに於ける分析
値と統計的に比較した。プロピオネートの生産量が対照
群よりも有意に高い処置群を、活性処置群とみなす。第
■表に、Ａ４２１２５処置フラスコに於ける揮発性脂肪
酸濃度の対照フラスコの該濃度に対する割合を示す。

メタンの阻害作用も、アセテートが放出されてしまうメ
タンの代わりに有用なエネルギーに転用されることによ
って、反部動物に於いて飼料の利用効率を高める一因と
なる。この活性は、瘤胃に於ける作用を部製したｉｎ　
ｖｉｔｒｏ試験で測定することができる。この試験を、
瘤胃での作用に長時間さらした場合を部製した連続発酵
フラスコに於いて実施した。各フラスコには、液体挿入
部、固体挿入部、サンプリング（試料取り出し）部、及
び発酵により発生するガスを受けるゴム製袋に通じたガ
ス出口管を備えたガス漏れ防止容器を使用した。

各フラスコの液量は、液捕集容器に通じている貯水管に
よって５０’Ｏｍｌに調節した。フラスコの温度は３８
℃−４０℃とした。各フラスコを磁気撹拌子（マグネチ
ック・スターラー）によって静かに撹拌した。

各実験の開始は、この試験で使用したのと同様の飼料を
与えておいた、孔を装備した雄の仔牛から得た濾通した
瘤胃内容物５００ｍ１をフラスコに加えることによって
行った。流水物捕集フラスコに前もってメタ燐酸希釈液
（５０ｍｌ）を加え、フラスコからあふれ出る液体中の
発酵を防止した。フラスコに栓をしてガス捕集袋を備え
着けた。

以下の組成の緩衝液（ｐＨ６，８−７，０）を各フラス
コに連続的に滴下して加えた（１リットル７日）・ 燐酸水素ナトリウム　２．２　ｇ／リットル塩化マグネ
シウム　　０．０３６　ｇ／リットル重炭酸ナトリウム
　　５．９　ｇ／リットル塩化カリウム　　　　０．３
４　ｇ／リットル塩化ナトリウム　　　０．２８　ｇ／
リットル尿素　　　　　　　１．０　ｇ／リットル塩化
カルシウム　　　０．０２４　ｇ／リットル。

各フラスコへの飼料引き入れ口を通して、１日に２回適
当な飼料を１０ｇ追加した。その追加毎にガス出口をふ
さぎ、フラスコを二酸化炭素で充満させた。

毎日、液状物を捕集し、分析し、更にフラスコに残って
いるガスを捕集して分析した。

４日間は飼料に処置化合物をなにも加えずに、各フラス
コを普通に処理した。４日間で平衡にした後、液状及び
ガス流出物の分析を開始し、分析データか比較的安定す
るまで処置化合物は加えずにフラスコを処理した。デー
タが安定化した時点で処置飼料をフラスコに加え、最小
限７日間フラスコを処置飼料にて処理した。

適当量の化合物を飼料に加え、以下の第４表に示す化合
物濃度（フラスコ中のｔｉ、量５００ｍ１）を得た。は
とんどの試験では、各化合物の各処置濃度に対し２つの
フラスコを使用し、全ての処置日に於ける両フラスコの
データをまとめて平均をとった。第４表にＡ４２１２５
のメタン阻害活性を示す。

第■表二反鍔動物のメタン産生 に対するＡ４２１２５の作用１ マウスに於けるＡ４２１２５のＬＤｓｏ値（１回投与） ＬＤｓｏ（腹腔的投与）＝＜　９．３７５ｍｇ／ｋｇＬ
Ｄ１．（経口投与）−８９ｍｇ／ｋｇＡ４２１２５を反
鈴動物に約０　、０５　ｍｇ／ｋｇ／日〜６　、７５　
ｍｇ／ｋｇ／日で経口的に投与すれば、通常効果的にプ
ロピオネートを増加させ、従って飼料の利用効率を増大
させる。好ましい投与の割合は約０　、２　ｍｇ／ｋｇ
／日〜約３　、５　ｍｇ／ｋｇ／日である。

好ましい投与方法は動物用飼料に化合物を混合すること
であるが、他の方法、例えば錠剤、水剤、火剤、または
カプセル剤としても投与することができる。これらの各
種の投与形態は、獣医薬分野にて周知の方法によって製
剤化することができる。

個々の投与薬剤には、処置すべき動物の正確な１日投与
量に相当する量の本発明化合物を含有させる必要がある
。

本発明は更に、飼料量１トン当たりにＡ４２１２５化合
物を６〜６０グラム含有する飼料の利用効率を改善する
のに適した飼料組成物をも提供するものである。

Ａ４２１２５は経口的または非経口的に動物へ投与でき
る。Ａ４２１２５を投与する最も実際的な方法は、飼料
に入れて製剤化することである。

通常の乾燥飼料、液状飼料及びペレット状飼料などの各
種の飼料を使用できる。好ましい投与方法は、動物用飼
料に混合することであるが、池の方法、例えば錠剤、水
剤、火剤、またはカプセル剤としても投与することがで
きる。各個々の投与薬８１＋には　ＭＬ苫オペ去翻噛ｌ
、−於い１丁確か１目叫斗量に相当する量の本発明化合
物を含有させる必要がある。

薬剤を動物用飼料に入れて製剤化する方法はよく知られ
ている。好ましい方法は、濃厚医薬プレミックスを作成
することであり、次に該プレミックスを医療用飼料を調
製するのに使用する。代表的なプレミックスには、プレ
ミックスの１ボンド当たり約１〜約２００グラムの薬剤
を含有させる。

プレミックスは、液体または固体のいずれの形態でもよ
い。

動物用飼料の最終形態は投与する薬剤の量に左右される
ものである。Ａ４２１２５を含有する飼料を調製するた
めには、通常の作成法、混合法及びペレット法で行うこ
とができる。

Ａ４２１２５は、獣医薬業界にて周知の方法によって非
経口用の製剤にすることができる。Ａ４２１２５を含有
する注射用組成物の効果的なものは、懸濁剤または溶液
剤である。溶液剤の場合、Ａ４２１２５を医薬的に許容
できる担体に溶解する。このような担体は、適当な溶媒
、例えばベンノルアルコールなどの保存剤、及び要すれ
ば緩衝液を含有している。有用な溶媒には、例えば水、
アルコール、グリセリン、あるいは植物油または高精製
鉱油などの不活性油がある。

注射用懸濁剤は、担体としてアジュバント（補助剤）と
ともに化合物の非溶剤を用いて調製する。

非溶剤には、例えば水、またはポリエチレングリコール
などのケリセリンを用いることができる。

医薬的に許容できる適当なアジュバントは、化合物を懸
濁剤中に懸濁させておく必要がある。アジュバントはカ
ルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ゼ
ラチン及びアルギナートなどの増粘剤の中から選ぶこと
ができる。多数の界面活性剤が化合物を懸濁させるため
に有用である。

レノチン、ポリエチレンオキサイドのアルキルフェノー
ル付加物、ナフタレンスルフォネート、アルキルベンゼ
ンスルフォネート、及びポリオキンエチレン・ソルビタ
ン・エステルが、液状非溶剤に於ける有用な懸濁化剤で
ある。

液状非溶剤の親水性、密度及び表面張力に影響を及ぼす
多くの物質が、個々の場合に注射用懸濁剤を調製するの
に役立つ。例えば、シリコン消泡剤、グリセリン類、ソ
ルビトール及び糖などが有用な懸濁化剤となり得る。

本発明の操作を更に十分に説明するために、以下に実施
例を挙げる。

凍結乾燥されたベレットまたは液体窒素中の懸濁物のい
ずれかのノカルジア・アエロコロニゲネスＮＲＲＬ　１
８０４９の培養物を使用し、以下の組成を有する傾斜培
地に接種する： 傾斜培地 成　　分　　　　　　　　　容　量（ｇ／ｌ）ジャガイ
モデキストリン　　　　　ｌＯ肉汁エキス　　　　　　
　　　　　　　１ＣＯＣ１，・６Ｈ２００，０１ 寒天　　　　　　　　　　　　　　２０脱イオン水　　
　　　　　　　適量加え全量ｌＱ＊Ｎ−ＺアミンＡ１フ
ムコ・シェフイールド・ケミカルＧｏ、（Ｈｕｍｋｏ　
５ｈｅｆｒｉｅｌｄ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）リン
トバースト（Ｌ　ｙｎｄｈｕｒｓｔ）Ｎ　ＪＮａＯＨを
用いてｐ　Ｉ−１を〜６．２から７．０に調節する。

接種した傾斜培地を３０°Ｃにて約７日間インキュベー
トする。成熟した傾斜培地を、胞子をばらばらにし、菌
糸のマットを取り出し、ふやかすために無菌器具で掻き
取る。このようにして得た約１／４のばらばらにした胞
子と培養増殖物を、以下の組成を有する栄養性培地（５
０ｍｌ）に接種した栄養性培地 成　　分　　　　　　　容　、量（ｇ／ｌ）グルコース
　　　　　　　　　　（５ 、＊ タピオカ・デキストリン　　　２０ 大豆グリツド　　　　　　　　１５ コーン・ステーブ・リカー　　ＩＯ 酵母エキス　　　　　　　　　　ｌ Ｃａ　ＣＯ３２ 水道水　　　　　　　　　適量加え全量ＩＱ＊セタデッ
クスｌ　１（Ｓｊａｄｅｘｌ　Ｉ）、Ａ、Ｅ　　スタレ
イＣｏ、　（Ａ、　Ｅ、　５ｔａｌｅｙ　Ｃｏ、　）、
デカツー（ＤｅｃａＬｕｒ）　Ｔ　Ｌ ＮａＯＨを用いてｐＨを〜５．５から６．５に調節する
。

接種した栄養性培地を２５０ｍ１エーレンマイヤーフラ
スコに入れ、３０℃にて７２時間インキュベートする（
２インチ（５，０８ｃ＋ｎ）の軌道内にて２５Ｏｒｐｍ
で回転させた撹拌機を使用）。

このインキュベートした栄養性培地（１，２５ｍ１）を
、以下の組成を有する生産用培地（５０ｍｌ）に接種し
た： 成　　分　　　　　　　　　　　　　　容　！（ｇ／Ｉ
）グルコース　　　　　　　　　　　　　　　２５カゼ
インを加水分解した酵素＊＊４ 廃糖蜜　　　　　　　　　　　　　　　　５Ｍｇ５Ｏ＋
・７　Ｈ，ＯＯ、５ ＣａＣＯａ　　　　　　　　　　　　　　　　２．０ク
ザベツク・ミネラル・ストック＊＊＊　　２ｍｌ脱イオ
ン水　　　　　　　　　　　適量加え全量１ｇＩ ＊＊Ｎ−Ｚ　アミンＡ ＊＊＊以下の組成を有する： １００ｇＫＣＬ　　１００ｇＭｇ５ｏａ−７ＨｔＯ。

２ｇＦｅＳＯ４・７Ｈ２０，脱イオン水を適量加え全量
を１リツトルにする。

接種した生産用培地を２５０ｍ１広ロエーレンマイヤー
フラスコに入れ、３０℃にて３から７日間インキュベー
トする（２インチの軌道内にて２５Ｏｒｐｍで回転させ
た撹拌機を使用）。

Ｂ、タンク発酵 大容量の接種物を得るために、Ａ項に記載のように調製
したインキュベートした栄養性培地（ｌＯｍｌ）を使用
し、前記の栄養性培地と同一の組成を有する第２段階の
増殖用培地（２５０ｍｌ）に接種する。この第２段階培
地を２リツトル広ロエーレンマイヤーフラスコに入れ、
２インチの軌道内にて２５　Ｏｒｐｍで回転させた撹拌
機を使用して３０℃にて７０時間インキュベートする。

このように調製したインキュベート済み第２段階培地（
４００ｍ１）をＡ項に記載のように調製した無菌の生産
用培地（１００リツトル）に接種した。

接種した生産用培地を１６５リツトルの撹拌用発酵タン
クにて温度３０℃で３から５日間発酵させる。この撹拌
用容器に少最の空気を送り（０，１２−０゜２５ｖ／ｖ
／ｍ）、適当に回転させ（２００−２５Ｏｒｐｍ）、空
気の飽和溶存濃度の３０％以上の溶存酸素量を維持する
。

実施例２　　Ａ４２１２５の分離 ３％ヒフロ・スペルセル（Ｈｙｆｌｏ　５ｕｐｅｒｃｅ
ｌ）を含有した発酵ブロス（９２リツトル）の全量を圧
縮ろ逸機に通してろ過した。このブロスろ液（７４リツ
トル）をＮａＯＨを用いてｐＨ７に調節した。

ダイアイオン（Ｄ　１ａｉｏｎ）　ＨＰ　−２０樹脂（
９，４リツトル）を加えた。得られた混合物を４５分間
撹拌し、ろ過した。ろ液を除去し、水（各１０リツトル
）で３回、アセトニトリル：水（３：１７、各１０リツ
トル）で３回樹脂を、再懸濁、撹拌、及びろ過し、洗浄
した。洗浄液は捨てた。樹脂をアセトニトリル：水（ｔ
ｉｔ、ｔｏリットル）に懸濁し、撹拌してろ過すること
により、Ａ４２１２５を溶離した。

この溶離処理を連続して４回行い、各溶離画分を、ミク
ロコツカス・ルテウスのディスク−平板法に上って掩宝
１．ｆ−碍ｍの２つの瀉鮒画分木第２め一減圧濃縮して
アセトニトリルを除去し、凍結乾燥することにより、粗
Ａ４２１２５（９４，９ｇ）を得た。３番目の溶離画分
からは、粗Ａ４２１２５を２０．８ｇ得た。

実施例３　　Ａ４２１２５の精製及び結晶化実施例２に
於いて得られた祖Ａ４２１２５調製物を一緒にしく１１
５．２ｇ）、水（３リツトル）に溶解した。この溶液を
ろ過して沈澱物を取り除き、ろ液をダウエックス（Ｄｏ
ｗｅｘ）５０　Ｘ　２　（ＮＨ４）の１００−２００メ
ツシユ樹脂（３リツトル）を含有するカラムにかけた。

このカラムを５カラム容量の水と０．１Ｎ　ＮＨ，ＯＨ
を用いて連続して洗浄した。最大量のＡ４２１２５を含
んだ２ＮＮＨ４０１−１溶離溶媒の両分をまとめ、約３
リツトルの量まで１ｌｌＫ縮した。沈澱したＡ４２１２
５をろ過して分離した。沈澱物をメタノール（３００ｍ
ｌ）に溶解し、この溶液をエーテル（６リツトル）に加
えてＡ４２１２５を沈澱させた。この沈澱物をろ過して
乾燥し、無定形粉末のＡ４２１２５（１６，６ｇ）を得
た。更に水溶液を濃縮して、２番晶を得、これを同様に
処理してや々純粋なＡ４２１２５（２０、７ｇ）を得た
。

最初に得られたＡ４２１２５（１６，６ｇ）を温水（８
００ｍｌ）に溶解した。この溶液を室温にて一夜放置し
、Ａ４２１２５を結晶化させた。結晶をろ過して分離し
、減圧乾燥して結晶化Ａ４２１２５の１０．６ｇと２．
３ｇ（２番晶）とを得た（融点１４９−１５０℃）。

実施例４　牛用Ａ４２１２５−強化飼料中を仕上げるの
に適したバランスのとれた高穀物飼料は、以下の配合に
よって：Ｆ］１１Ｊする：成　分　　　　　　　　パー
セント　ボンドトーモロコン（黄色）　　　　　　　５
０．２５　　　　　１００５．０トーモロコシの穂軸　
　　　　　３４．９２７　　　　６９８．５４アルファ
ルファ−ミール　　　　　４．００　　　　　　８０．
０（加水分解、１７％） 大豆油ミール　　　　　　　　　　４．００　　　　　
ｇｏ．０（溶媒抽出） 尿素（飼料用等＠）　　　　　　　　０．３５　　　　
　　？．０塘蜜（茎）　　　　　　　　　　　　　５．
００　　　　　１００．０燐酸二カルンウム　　　　　
　　　０．６５　　　　　１３．０塩　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　０．３５　　　　　　　７．０
炭酸カルシウム　　　　　　　　　０．３０　　　　　
　６．０微量元素プレミックス’　　　　　　０．０３
　　　　　　０．６ビタミンＡ＋Ｄ３プレミツクス２　
０．０？　　　　　　１．４ビタミンＥプレミックス３
０．０？　　　　　　１．４１・酸化マク゛ネシウムと
して２．５０９マンカ゛ン、ヨウ化カリウムとして０．
０７９ヨウ素、炭酸コバルトとしてＯＪＯ９コバルト、
酸化銅として０．５０９銅、硫酸鉛として２０．００９
鉛２：ヒ゛タミンＡ、２．０００，ＯＯＯＵ　Ｓ　Ｐユ
ニット及びビタミンＤ３２２５、７５０Ｕ　Ｓ　Ｐユニ
ット ３：ビタミンＥ，　２０．０００１　Ｕ

【図面の簡単な説明】

第１図は、Ａ４２１２５のＫＢｒ法による赤外吸収スペ
クトルを示すグラフである。 特許出願人　イーライ・リリー・アンド・カンパニー

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の特徴を有する抗生物質Ａ４２１２５及びその
   塩： 形状；白色結晶（水から結晶化） 融点、１４９−１５０℃ ＵＶ；吸収なし ＩＲ（ＫＢｒ法）；第１図に示す吸収を示す滴定（８０
   ％水性ジメチルホルムアミド）；ｐＫａ＝５．２、８．
   ７、１０．５ 分子量；２０３２（電界脱離質量スペクトル）実験式；
   Ｃ＿１＿０＿１Ｈ＿１＿６＿４Ｎ＿２Ｏ＿３＿８アミノ
   酸；測定されず 溶解性；水に可溶。 ２、Ａ４２１２５またはその医薬的に許容できる塩であ
   る第１項に記載の化合物。 ３、ノカルジア・アエロコロニゲネス、ＮＲＲＬ１８０
   ４９、あるいはＡ４２１２５を産生するノカルジア・ア
   エロコロニゲネスの変異体、突然変異体または組み換え
   体を同化し得る炭素、窒素及び無機塩供給源を含有する
   培養培地にて、Ａ４２１２５が産生されるまで液中の好
   気的発酵条件下で培養することからなる抗生物質Ａ４２
   １２５の生産方法。 ４、培養培地からＡ４２１２５を分離する工程を更に含
   む第３項に記載の方法。 ５、動物用飼料と有効量の第２項に記載の化合物を含有
   する、反芻動物の飼料利用効率を増大させる飼料混合物
   。 ６、微生物ノカルジア・アエロコロニゲネス、ＮＲＲＬ
   １８０４９、あるいはＡ４２１２５を産生するノカルジ
   ア・アエロコロニゲネスの変異体、突然変異体または組
   み換え体の生物学的に純粋な培養物。 ７、第１項に記載の抗生物質Ａ４２１２５に対して耐性
   を示す突然変異体を選別し、遺伝子組み換え操作に該突
   然変異体を使用することからなるメタノーゲン類の遺伝
   子変換系を開発する方法。