KR910700351A - C-말단 α- 아미드화된 펩타이드의 생산방법 - Google Patents

C-말단 α- 아미드화된 펩타이드의 생산방법 Download PDF

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Abstract

내용 없음.

Description

C-말단 α-아미드화된 펩타이드의 생상방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 hCT-Gly-Lys-Lys-Arg를 카복시펩티다제 B(CpB)로 처리하여 형성된 hCH-Gly의 용출도이다.
제2도는 동물세포내에서 C-말단 α-아미드화 효소 XA 799 Bgl II를 발현하는 플라스미드 pKDPxA 457 또는 pKDPxA 799 Bgl II의 구조도이다. 제3도는 황산 암모늄 침전법에 의한 XA 799 Bgl II의 정제도이다.

Claims (17)

  1. 일반식(I)의 펩타이드 또는 단백질을 카복시펩티다제 B로 가수분해하는 단계를 포함함을 특징으로 하여, 일반식(II)의 펩타이드 또는 단백질을 생산하는 방법.
    R-X-Gly-B (I)
    R-X-Gly (II)
    상기식에서, X는 아미노산 잔기를 나타내고, Gly는 일반식(I)의 경우에는 글리신 기를 나타내고, 일반식(II)의 경우에는 C-말단 글리신 잔기를 나타내며, B는 리신 또는 아르기닌 잔기, 필수적으로 리신 또는 아르기닌 잔기로 이루어진 올리고펩타이드 또는 리신 및 아르기닌 잔기의 배합물을 나타내며, R은 펩타이드 또는 단백질의 잔여 부분을 나타낸다.
  2. 제1항에 있어서, 일반식(II)의 펩타이드 또는 단백질이 사람 캘시토닌의 전구체인 방법.
  3. 일반식 (II)의 펩타이드 또는 단백질을 제노푸스래비스(xemopus laevis)기원의 C-말단 α-아미드화 효소 또는 이의 유도체, 또는 사람 갑상선 기원의 C-말단 α-아미드화 효소 또는 이의 유도체로 처리하는 단계를 포함함을 특징으로 하여, 일반식(III)의 펩타이드 또는 단백질을 생산하는 방법.
    R-X-Gly (II)
    R-X-NH2(II)
    상기식에서 X는 α-아미드화되는 아미노산 잔기를 나타내고, Gly는 C-말단 글리신 잔기를 나타내며, R은 펩타이드 또는 단백질의 잔여부분을 나타내며, X-NH2는 C-말단 α-아미드화된 아미노산을 나타낸다.
  4. 제3항에 있어서, 일반식(III)의 펩타이드 또는 단백질이 사람 캘시토닌인 방법.
  5. 일반식(I)의 펩타이드 또는 단백질을 카복시펩티다제 B로 가수분해시켜 일반식(II)의 중간체 펩타이드 또는 단백질을 생성시키고, (2) 일반식(II)의 중간체 펩타이드 또는 단백질 C-말단 α-아미드화 효소 또는 이의 유도체로 처리하는 단계를 포함함을 특징으로 하여, 일반식(III)의 펩타이드 또는 단백질을 생산하는 방법.
    R-X-Gly-B (I)
    R-X-Gly (II)
    R-X-NH2(III)
    상기식에서, X는 일반식(I)의 경우에는 아미노산 잔기를 나타내고, 일반식(II)의 경우에는, α-아미드화되는 아미노산 잔기를 나타내고, Gly는 일반식(I)의 경우에는 글리신 잔기를 나타내고, 일반식(II)의 경우에는 C-말단 글리신 잔기를 나타내며, B는 리신 또는 아르기닌 잔기 또는 필수적으로 리신 또는 아르기닌 잔기로 이루어진 올리고펩타이드 또는 리신 또는 아르기닌 잔기의 배합물을 나타내며, R은 펩타이드 또는 단백질의 잔여 부분을 나타내며, X-NH2는 C-말단 α-아미드화된 아미노산을 나타낸다.
  6. 제5항에 있어서, 일반식(III)의 펩타이드 또는 단백질이 사람 캘시토닌인 방법.
  7. 제5항에 있어서, C-말단 α-아미드화 효소가 제노푸스래비스 또는 사람 갑상선 기원의 C-말단 α-아미드화 효소인 방법.
  8. 제 C-말단 α-아미드화 효소 또는 이의 유도체를 암호화하는 DNA를 함유하고 이를 발현할 수 있는 플라스미드로 형질전환된 동물 세포를 배양하여 효소 또는 이의 유도체를 회수하는 단계를 포함함을 특징으로하여, C-말단 α-아미드화 효소 또는 이의 유도체를 생산하는 방법.
  9. 제8항에 있어서, C-말단 α-아미드화 효소가 제13-1도 내지 13-3도에 나타낸 바와 같이 -37번 아미노산으로 시작하여 363번 아미노산으로 종결되는 아미노산 서열을 함유하는 XA 457인 방법.
  10. 제8항에 있어서, C-말단 α-아미드화 효소의 유도체가 제14-1도 내지 14-3도에 나타낸 바와 같이 -39번 아미노산으로 시작하여 692번 아미노산으로 종결되는, 아미노산 서열을 함유하는 C-말단 루이신을 함유하는 XA 799 Bgl II인 방법.
  11. 제8GD에 있어서, 형질감염된 동물세포가 SV 40 프로모터, 제14-1도 내지 14-3호에 나타낸 바와 같이 -39번 아미노산으로 시작하여 692번 아미노산으로 종결되고 C-말단 루이신을 함유하는 아미노산 서열을 암호화하고 SV 40 프로모터와 작용적으로 연결된 DNA 및 추가로 dhfr 유전자를 포함하는 플라스미드로 혀일감염된 CHO dhfr (-) 세포이고 형질감염된 동물세포를3μM까지 증가하는 농도로 메타토렉세이트를 함유하는 배지에서 순차적으로 배양시켜 유전자를 증폭시킴으로써 효소 2000단위/㎖ 상등액의 양으로 생산하는 방법.
  12. (1) 융합 단백질을 암호화하는 DNA를 함유하는 발현벡터로 형질전환된 숙주를 배양하여 일반식(O)의 융합 단백질을 수득하고 (2) 융합 단백질을 회수하며 (3) 통상적인 방법으로 융합 단백질을 절단하여 파트너 단백질 (P)와 일반식(I)의 펩타이드 또는 단백질을 형성시킨 다음 (4) 등전점의 차이를 토대로 파트너 단백질(P)로부터 펩타이드 또는 단백질(I)을 분리해내고 (5) 펩타이드 또는 단백질(I)을 카복시펩티다제 B로 가수분해하여 목적 펩타이드 또는 단백질(II)를 형성시키는 단계를 포함함을 특징으로 하여, 일반식(II)의 펩타이드 또는 단백질 생산하는 방법.
    R-X-Gly-B (I)
    R-X-Gly (II)
    P-R-X-Gly-B (O)
    상기식에서, X는 아미노산 잔기를 나타내고, Gly는 일반식(I)의 경우에는 C-말단 글리신 잔기를 나타내고 일반식(O) 및 (I)에서는 글리신 잔기를 나타내며, R은 펩타이드 또는 단백질의 잔여 부분을 나타내며, P는 융합 단백질의 파트너 단백질을 나타내며, B는 C-말단 리신 또는 아르기닌 잔기 또는 필수적으로 리신 또는 아르기닌 잔기로 이루어진 올리고펩타이드 또는 리신 및 아르기닌 잔기의 배합물을 나타낸다.
  13. 제12항에 있어서, 일반식(II)의 펩타이드 또는 단백질이 사람 캘시토닌의 전구체인 방법.
  14. (1) 융합 단백질을 암호화하는 DNA로 함유하는 발현벡터로 형질전환된 숙주를 배양하여 일반식(O)의 융합 단백질을 수득하고 (2) 융합 단백질을 회수하며 (3) 통상적인 방법으로 융합 단백질을 절단하여 파트너 단백질(P)와 일반식(I)의 펩타이드 또는 단백질을 형성시키며 (4) 등전점의 차이를 토대로 파트너 단백질(P)로부터 펩타이드 또는 단백질(I)을 분리해내고 (5) 펩타이드 또는 단백질(I)을 카복시펩티다제 B로 가부순해하여 일반식(II)의 중간체 펩타이드 또는 단백질을 형성시키며 (6) 펩타이드 또는 단백질(II)을 C-말단 α-아미드화 효소 또는 이의 유도체로 처리하는 단계를 포함함을 특징으로 하여, 일반식(III)의 펩타이드 또는 단백질을 생성하는 방법.
    R-X-Gly-B (I)
    R-X-Gly (II)
    P-R-X-Gly-B (O)
    R-X-NH2(III)
    상기식에서, X는 아미노산 잔기를 나타내고, Gly는 일반식(II)의 경우에는 C-말단 글리신 잔기를 나타내고 일반식(O) 및 (I)에서는 글리신 잔기를 나타내며, R은 펩타이드 또는 단백질의 잔여 부분을 나타내며, P는 융합 단백질의 파트너 단백질을 나타내며, B는 C-말단 리신 또는 아르기닌 잔기 또는 필수적으로 리신 또는 아르기닌 잔기로 이루어진 올리로펩타이드 또는 리신 및 아르기닌 잔기의 배합물을 나타내며, X-NH2는 C-말단 α-아미드화된 아미노산을 나타낸다.
  15. 제14항에 있어서, 일반식(III)의 펩타이드 또는 단백질이 사람 캘시토닌인 방법.
  16. 제13-1도 내지 13-3도에 나타낸 바와 같이 -37번 아미노산으로 시작하고 363번 아미노산으로 종결되는 아미노산 서열을 함유하는 C-말단 α-아미드화 효소.
  17. 제14-1도 내지 14-3도에 나타낸 바와 같이 -39번 아미노산으로 시작하고 692번 아미노산으로 종결되는 아미노산 서열을 함유하는 C-말단 α-아미드화 효소.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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