RU93032287A - Способ получения окситоцина и рекомбинантные плазмидные днк ptoteilox и штаммы escherichia coli tg1/ptoteilox для его осуществления - Google Patents
Способ получения окситоцина и рекомбинантные плазмидные днк ptoteilox и штаммы escherichia coli tg1/ptoteilox для его осуществленияInfo
- Publication number
- RU93032287A RU93032287A RU93032287/13A RU93032287A RU93032287A RU 93032287 A RU93032287 A RU 93032287A RU 93032287/13 A RU93032287/13 A RU 93032287/13A RU 93032287 A RU93032287 A RU 93032287A RU 93032287 A RU93032287 A RU 93032287A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- ptoteilox
- oxytocin
- amino acid
- strains
- escherichia coli
- Prior art date
Links
- XNOPRXBHLZRZKH-DSZYJQQASA-N Oxytocin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](N)C(=O)N1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(N)=O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 XNOPRXBHLZRZKH-DSZYJQQASA-N 0.000 title claims 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 title claims 6
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 title claims 4
- 101710008205 OXT Proteins 0.000 claims 7
- 102100017240 OXT Human genes 0.000 claims 7
- 229960001723 Oxytocin Drugs 0.000 claims 7
- 101700057139 oxyT Proteins 0.000 claims 7
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims 3
- 241000702374 Enterobacteria phage fd Species 0.000 claims 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims 2
- 229940076264 Interleukin-3 Drugs 0.000 claims 2
- 102000000646 Interleukin-3 Human genes 0.000 claims 2
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 claims 2
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 claims 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims 2
- 230000002255 enzymatic Effects 0.000 claims 2
- 102000037240 fusion proteins Human genes 0.000 claims 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims 2
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 102000003670 Carboxypeptidase B Human genes 0.000 claims 1
- 108090000087 Carboxypeptidase B Proteins 0.000 claims 1
- 102000005572 Cathepsin A Human genes 0.000 claims 1
- 108010059081 Cathepsin A Proteins 0.000 claims 1
- 241000701867 Enterobacteria phage T7 Species 0.000 claims 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 102000006635 beta-Lactamases Human genes 0.000 claims 1
- 108020004256 beta-Lactamases Proteins 0.000 claims 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims 1
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 claims 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims 1
- 230000002906 microbiologic Effects 0.000 claims 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 claims 1
- 239000007320 rich medium Substances 0.000 claims 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims 1
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 claims 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims 1
- 230000001131 transforming Effects 0.000 claims 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 claims 1
Claims (1)
- Способ получения окситоцина, рекомбинатные плазмидные ДНК pTOTEilox и штаммы Escherichia coli TG1/pTOTEilox для его осуществления относятся к биотехнологии, в частности к генной и белковой инженерии, и позволяют получать методом микрообиологического синтеза пептидный гормон окситоцин по упрощенной технологии. Способ получения окситоцина основан на использовании новых рекомбинатных плазмидных ДНК pTOTEilox (3 - 9), кодирующих гибридные белки ILOX, аминокислотная последовательность которых состоит из N-концевой (63 аминокислоты) последовательности человеческого интерлейкина-3 и олигомера окситоцина, содержащего от 3 до 9 мономерных единиц, фланкированных специфическими для ферментативного или химического расщепления аминокислотами, и штаммов-продуцентов E. coli TG1/pTOTEilox (3 - 9), обеспечивающих высокий уровень биосинтеза гибридного белка (до 30% тотального клеточного белка). Рекомбинатные плазмиды pTOTEilox состоят из HindIII/EcoRI-фрагмента ДНК плазмиды pTOTE2IL3, содержащего тандем промоторов P8 фага fd и Ptac, два lac-оператора, усилитель трансляции гена 10 фага T7, терминатор транскрипции фага fd, ген β -лактамазы, и N-концевую часть гена человеческого интерлейкина-3, и HindIII/EcoRI-фрагмента, содержащего синтетический ген олигомера (3 - 9) окситоцина, фланкированного остатками специфических аминокислот. Штаммы Escherichia coli TG1/pTOTEilox получают трансформацией компетентных клеток E. coli Tg1 соответствующей плазмидой pTOTEilox. Штамм Escherichia coli TG1/pTOTEilox культивируют в богатой среде, выращенные клетки разрушают в буферном растворе, выделяют гибридный белок ILOX, расщепляют его ферментативным или химическим путем с последующим или одновременным восстановлением дисульфидных связей. Удаление С-концевого аминокислотного остатка из окситоцинового декапептида, образующегося при расщеплении гибридного белка, проводят либо с помощью карбоксипептидазы Y ( с одновременным амидированием концевого остатка глицина в окситоцине), либо с помощью карбоксипептидазы B с последующим химическим амидированием концевой аминокислоты (глицина) и получают окситоцин.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU93032287A RU2085585C1 (ru) | 1993-06-18 | 1993-06-18 | Способ получения окситоцина, рекомбинантная плазмидная днк ртотеilox 3, кодирующая гибридный белок ilox3 для получения окситоцина, штамм escherichia coli - продуцент гибридного белка ilox3 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU93032287A RU2085585C1 (ru) | 1993-06-18 | 1993-06-18 | Способ получения окситоцина, рекомбинантная плазмидная днк ртотеilox 3, кодирующая гибридный белок ilox3 для получения окситоцина, штамм escherichia coli - продуцент гибридного белка ilox3 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU93032287A true RU93032287A (ru) | 1996-03-10 |
| RU2085585C1 RU2085585C1 (ru) | 1997-07-27 |
Family
ID=20143616
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU93032287A RU2085585C1 (ru) | 1993-06-18 | 1993-06-18 | Способ получения окситоцина, рекомбинантная плазмидная днк ртотеilox 3, кодирующая гибридный белок ilox3 для получения окситоцина, штамм escherichia coli - продуцент гибридного белка ilox3 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2085585C1 (ru) |
-
1993
- 1993-06-18 RU RU93032287A patent/RU2085585C1/ru active
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR860001305B1 (ko) | 특이적 절단 링커를 사용하는 융합 단백질의 제조방법 | |
| CA2443365A1 (en) | Methods for the recombinant production of antifusogenic peptides | |
| EP0055945A2 (en) | Human proinsulin and analogs thereof and method of preparation by microbial polypeptide expression and conversion thereof to human insulin | |
| GB2272698A (en) | Fusion peptides which bind to streptavidin | |
| IE883612L (en) | Vectors and compounds for direct expression of activated human protein c | |
| CA2195625A1 (en) | Ubiquitin-Lytic Peptide Fusion Gene Constructs, Protein Products Deriving Therefrom, and Methods of Making and Using Same | |
| ATE421977T1 (de) | Reinigung von peptiden unter verwendung von metall-ion-affinitätschromatographie | |
| CA2449747A1 (en) | Use of fkbp chaperones as expression tool | |
| CA2342537A1 (en) | Modified e. coli enterotoxin ii signal peptide and a microorganism expressing a fusion protein of said peptide and a heterologous protein | |
| EP0531530A1 (en) | Process for producing protein | |
| WO1996017941A3 (en) | Production of c-terminal amidated peptides from recombinant protein constructs | |
| CA2273196A1 (en) | Isolated mammalian monocyte cell genes; related reagents | |
| AU590258B2 (en) | A process for producing human growth hormone | |
| AU572171B2 (en) | Polypeptides | |
| CA2324513A1 (en) | Chimeric protein containing an intramolecular chaperone-like sequence and its application to insulin production | |
| AU7873798A (en) | N-terminally extended proteins expressed in yeast | |
| HUT62335A (en) | Process for producing peptides | |
| EP0259891B1 (en) | [Leu 13] motilin, DNAs coding for same and methods for producing same | |
| EP0170266B1 (en) | Process for producing protein, and vector, recombinant dna and transformant used therefor | |
| CA2000309A1 (en) | Recombinant pdgf and methods for production | |
| DE3686365D1 (de) | Herstellungsverfahren fuer humanes atriales natriuretisches polypeptid. | |
| EP0199018B1 (en) | Expression in e.coli of hybrid polypeptides containing the growth hormone releasing factor sequence | |
| RU93032287A (ru) | Способ получения окситоцина и рекомбинантные плазмидные днк ptoteilox и штаммы escherichia coli tg1/ptoteilox для его осуществления | |
| US5620923A (en) | Synthesis of peptides as cloned ubiquitin extensions | |
| EP0750040A3 (en) | Macrophage stimulating protein variant and method for producing the same |