KR910014514A - 물 샘플내 사람의 배설물로 인한 오염에 대한 지표세균 및 물로 전파되는 병원균을 검출하는 방법 및 이것에 사용되는 키트 - Google Patents

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케이. 베지 애심
에이취. 마부바니 미나
밀러 리챠드
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Abstract

내용 없음

Description

물 샘플내 사람의 배설물로 인한 오염에 대한 지표세균 및 물로 전파되는 병원균을 검출하는 방법 및 이것에 사용되는 키트
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음

Claims (51)

  1. (1) 물 샘플낸 물로 전파되는 모든 병원균 및 지표 미생물을 이러한 물 샘플로 부터 회수하고 적당한 양의 타겟 세균 테스트 샘플로 농축시키며, (2) 농축된 테스트 샘플을 처리하여 타겟 세균을 용해시키고 실질적으로 분해되지않은 타겟 세균 DNA 를 회구하며, (3) 상기 타겟 세균내에 들어있는 타겟 유전자를 선택하고 상기 타겟유전자내 타겟 DNA 누플레오타이스 서열을 선택하며 이러한 타겟 DNA 누클레오타이드 서열을 두개의 선택된 올리고누클레오타이드 프라이머들 및 DNA 중합효소와 함께 증폭 조건하에서 인큐베이팅시키는데 각각의 프라이머가 타겟 DNA 누클레오타이드 서열의 분리된 두개 사슬중 하나에 상보적이어서 이것과 잡종분자를 형성하며 중합효소가 프라이머를 증대시켜 타겟 DNA 누클레오타이드 서열의 완전한 이본쇄 복제체를 형성시키고, (4) 증폭된 타겟 DNA 를 검출하여 테스트 샘플내 선택된 타겟 DNA 누클레오타이드 서열을 갖는 물로 전파되는 병원균이나 지표 미생물의 존재 또는 부재를 검사하는 것으로 구성되는, 물 샘플내 물로 전파되는 병원균 및 주로 배설물에서 생긴 박테리아인 지표 미생물의 존재를 검출하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, lacZ 유전자에 의해 암호화된 타겟 DNA 누클레오타이드 서열을 증폭시켜 Escherichia, Enterogacter, Citrobacter 및 Klebsiella 종 (species)을 검출하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, lamB 유전자에 의해 암호화된 타겟 DNA 누클레오타이드 서열을 증폭시켜 Escherichia coli 및 Salmonella 및 Shigella 종을 검출하는 방법.
  4. 제1항에 있어서, mip 유전자에 의해 암호화된 타겟 DNA 누클레오타이드 서열을 증폭시켜 Legionella pneumophila 를 검출하는 방법.
  5. 제1항에 있어서, 5S 리보솜 RNA 유전자에 의해 암호화된 타겟 DNA 누클레오타이드 서열을 증폭시켜 Legionella 종을 검출하는 방법.
  6. 제1항에 있어서, UidA 유전자에 의해 암호화된 타겟 DNA 누클레오타이드 서열을 증폭시켜 Escherichia coli , Shigella Shigella sonnei 및 Shigella flexineri를 검출하는 방법.
  7. 제1항에 있어서, UidC 유전자에 의해 암호화된 타겟 DNA 누클레오타이드 서열을 증폭시켜 Escherichia coli 및 Shigella sonnei를 검출하는 방법.
  8. 제2항에 있어서, 프라이머 서열이 모든 또는 상당한 부분의 5′-ATGAAAGCTGGCTACAGGAAGGCC 및 5′CACCATGCCGTGGGTTTCAATATT 를 포함하며 증폭된 타겟 DNA가 약 876 bp의 크기를 갖는 방법.
  9. 제2항에 있어서, 프라이머 서열이 모든 또는 상당한 부분의 5′-GGTTTATGCAGCAGCAACGAGACGTCA 및 5′-ATGAAAGCTGGCTACAGGAAGGCC 를 포함하며 증폭된 타겟 PNA 의 크기가 약 326 bp인 방법.
  10. 제2항에 있어서, 증폭된 타겟 DNA 가 모든 또는 상당한 부분의 5′-TGACGTCTCGTTGCTGCATAAACCGACTACACAAATCAGCGATTTCCATT 또는 이 서열의 상보체를 포함하는 프로브와의 잡종형성으로 검출되는 방법.
  11. 제3항에 있어서, 프라이머 서열이 모든 또는 상당한 부분의 5′-CGATATTTCTGCRCCRGGRGCCGG 및 5′-ACTTGGTGGCGTTGTCGTTATCCC 를 포함하며 증폭된 타겟 DNA 의 크기가 약 554 bp 인 방법.
  12. 제3항에 있어서, 프라이머 서열이 모든 또는 상당한 부분의 5′-CTGATCGAATGGCTGCCAGGCTCC 및 5′-CAACCAGACGATAGTTATCCC 를 포함하며 증폭된 타겟 DNA의 크기가 약 309 bp 인 방법.
  13. 제3항에 있어서, 증폭된 타겟 DNA 가 모든 또는 상당한 부분의 5′-TGCGTGATAACTATCGTCTGGTTGATGGCGCATCGAAAGACGGCTGGTTG 또는 이 서열의 상보체를 포함하는 프로브와의 잡종형성으로 검출되는 방법.
  14. 제4항에 있어서, 프라이머 서열이 모든 또는 상당한 부분의 5′-GCTACAGACAAGGATAAGTTG 및 5′-GTTTTGTATGACTTTAATTCA 를 포함하며 증폭된 타겟 DNA의 크기가 약 649 bp 인 방법.
  15. 제4항에 있어서, 증폭된 타겟 DNA 가 모든 또는 상당한 부분의 5′-TTTGGGGAAGAATTTTAAAAATCAAGGCATAGATGTTAATCCGGAAGCAA 또는 이 서열의 상보체를 포함하는 프로브와의 잡종형성으로 검출되는 방법.
  16. 제5항에 있어서, 프라이머 서열이 모든 또는 상당한 부분의 5′-AGAACCGCTGATATCGCTAAAC 및 5′-TAGGACCGCTACTGGATGAA 를 포함하며 증폭된 타겟 DNA의 크기가 약 118 bp 인 방법.
  17. 제5항에 있어서, 증폭된 타겟 DNA 가 모든 또는 상당한 부분의 5′-CTCGAACTCAGAACTGAAACATTTCCGCGCCAATGATAGT 또는 이 서열의 상보체를 포함하는 프로브와의 잡종형성으로 검출되는 방법.
  18. 제5항에 있어서, 증폭된 타겟 DNA 가 모든 또는 상당한 부분의 5′-BCTCGAACTCAGAAGTCAAACATTTCCGCGCCAATGATAGTGTGAGGCTTC (B는 비오틴임) 또는 이 서열의 상보체를 포함하는 프로브와의 잡종형성으로 검출되는 방법.
  19. 제6항에 있어서, 프라이머 서열이 모든 또는 상당한 부분의 5′-AAAACGGCAAGAAAAAGCAG 및 5′-ACGCGTGGTTACAGTCTTGCG 를 포함하며 증폭된 타겟 DNA의 크기가 약 147 bp 인 방법.
  20. 제6항에 있어서, 프라이머 서열이 모든 또는 상당한 부분의 5′-TATGGAATTTCGCCGATTTT 및 5′-TGTTTGCCTCCCTGCTGCGG 를 포함하며 증폭된 타겟 DNA의 크기가 약 166 bp 인 방법.
  21. 제6항에 있어서, 프라이머 서열이 모든 또는 상당한 부분의 5′-AAAACGGCAAGAAAAACAG 및 5′-THTTTHCCTCCCTGCTGCGG 를 포함하며 증폭된 타겟 DNA의 크기가 약 1350 bp 인 방법.
  22. 제6항에 있어서, 증폭된 타겟 DNA 5′-TGCCGGGATCCATCGCAGGCGTAATGCTCTACACCACGCCGAACACCTGGG 또는 5′-AAAGGGATCTTCACTCGCGACCFCAAACCGAAGTCGGCGGCTTTTGTGCT 또는 이들 서열중 하나의 상보체를 포함하는 프로브와의 잡종형성으로 검출되는 방법.
  23. 제1항에 있어서, 프라이머 서열이 모든 또는 상당한 부분의 5′-TGTTACGTCCTGTAGAAAGCCC 및 5′-AAAACTGCCTGGCACAGCAAT 를 포함하며 증폭된 타겟 DNA의 크기가 약 153 bp 인 방법.
  24. 제7항에 있어서, 증폭된 타겟 DNA 가 모든 또는 상당한 부분의 5′-CAACCCGTGAAATCAAAAAACTCGACGGCCTGTGGGCATT 또는 이 서열의 상보체를 포함하는 프로브와의 잡종형성으로 검출되는 방법.
  25. 물로 전파되는 병원균 및 주로 배설물에서 생기 박테리아인 지표 미생물의 조너재를 검출되는 방법에 사용하기 위한 키트에 있어서, 병원균이나 지표 미생물의 유전자내 타겟 DNA 서열의 상보적인 사슬사의 약 10-30개 올리고누클레오타이드 서열에 상보적인 두개의 올리고누클레오타이드 프라이머로 구성된 프라이머 쌍, 증폭된 타겟 DNA 서열의 검출을 위한 프로브 서열, 및 임의로 상기 타겟 DNA 서열의 대조용 DNA 주형을 포함하는 키트.
  26. 제25항에 있어서, 사용설명서 및 기타 중합효소 연결반응 증폭에 의해 타겟 DNA 서열을 증폭시키기 위한 시약을 더 포함하는 키트.
  27. 병원균이나 지표 미생물의 유전자내 타겟 DNA 서열의 중합효소 연결반응 증폭방법에 의해 물로 전파되는 병원균이나 주로 배설물에서 생긴 박테리아인 지표 미생물을 검출하기 위한 키트에 있어서, (a) 사용설명서 및 (b) 타겟 DNA 서열의 PCR 증폭과 증폭된 타겟 DNA 서열의 검출을 위한 시약들을 포함하는 키트.
  28. 제27항에 있어서, (1) 타겟 DNA 서열의 사슬상의 약 10-30개 누클레오타이드 서열에 상보적인 두개의 올리고누클레오타이드 프라이머로 구성된 프라이머 쌍 및 (2) 상기 타겟 DNA 서열의 검출을 위한 프로브 서열 및 임의로 (3) 상기 타겟 DNA 서열의 대조용 DNA 주형을 포함하는 키트.
  29. 제25항에 있어서, lacZ 유전자의 서열을 증폭시키기 위한 프라이머 쌍 및 증폭된 lacZ 유전자 서열을 검출하기 위한 프로브 서열을 포함하는 Escherichia, Enterobacter, Citrobacter 및 Klebsiella 종의 검출을 위한 키트.
  30. 제25항에 있어서, lamB 유전자의 서열을 증폭시키기 위한 프라이머 쌍 및 증폭된 lamB 유전자 서열을 검출하기 위한 프로브 서열을 포함하는 Escherichia coli 및 Salmonella 및 Shigella 의 검출을 위한 키트.
  31. 제25항에 있어서, mip 유전자의 서열을 증폭시키기 위한 프라이머 쌍 및 증폭된 mip 유전자 서열을 검출하기 위한 프로브 서열을 포함하는 Legionella pneumophila 의 검출을 위한 키트.
  32. 제25항에 있어서, 5S 리보솜 RNA 유전자의 서열을 증폭시키기 위한 프라이머 쌍 및 증폭된 5S 리보솜 RNA 유전자 서열을 검출하기 위한 프로브 서열을 포함하는, Legionella 종의 검출을 위한 키트.
  33. 제25항에 있어서, UidA 유전자의 서열을 증폭시키기 위한 프라이머 쌍 및 증폭된 UidA 유전자 서열을 검출하기 위한 프로브 서열을 포함하는 Escherichia coli, Shigella sonnei 및 Shigella Filesxineri의 검출을 위한 키트.
  34. 제24항에 있어서, UidC 유전자의 서열을 증폭시키기 위한 프라이머 쌍 및 증폭된 UidC 유전자 서열을 검출하기 위한 프로브 서열을 포함하는, Fscherichia coli 및 Shigella sonnei의 검출을 위한 키트.
  35. 제29항에 있어서, 프라이머 서열이 모든 또는 상당한 부분의 5′-ATGAAAGCTGGCTACAGGAAGGCC 및 5′-CACCATGCCGTGGGTTTCAATATT 를 포함하며 증폭된 타겟 DNA가 약 876 bp 인 키트.
  36. 제29항에 있어서, 프라이머 서열이 모든 또는 상당한 부분의 5′-GGTTTATGCAGCAACGAGACGTCA 및 5′-ARGAAAGCTGGCTACAGGAAGGCC 를 포함하며 증폭된 타겟 DNA의 크기가 약 326 bp 인 키트.
  37. 제29항에 있어서, 증폭된 타겟 DNA 가 모든 또는 상당한 부분의 5′-TGACGTCTCGTTGCTGCATAAACCGACTACACAAATCAGCGATTTCCATT 또는 이 서열의 상보체를 포함하는 프로브와의 잡종형성으로 검출되는 키트.
  38. 제30항에 있어서, 프라이머 서열이 모든 또는 상당한 부분의 5′-GGATATTTCTGGTCCTGGTGCCGG 및 5′-ACTTGGTGCCGTTGTCGTTATCCC 를 포함하며 증폭된 타겟 DNA의 크기가 약 554 bp 인 키트.
  39. 제30항에 있어서, 프라이머 서열이 모든 또는 상당한 부분의 5′-CTGATCGAATGGCTGCCAGGCTCC 및 5′-CAACCAGACGATAGTTATCACGGA 를 포함하며 증폭된 타겟 DNA 의 크기가 약 309 bp 인 키트.
  40. 제30항에 있어서, 증폭된 타겟 DNA 가 모든 또는 상당한 부분의 5′-TGCGTGATAACTATCTGGTTGATGGCGCATCGAAAGACGGCTGGTG 또는 이 서열의 상보체를 포함하는 프로브와의 잡종형성으로 검출되는 키트.
  41. 제31항에 있어서, 프라이머 서열이 모든 또는 상당한 부분의 5′-GCTACAGACAAGGATAACTTG 및 5′-GTTTTGTATGACTTTAATTCA 를 포함하며 증폭된 타겟 DNA가 크기가 약 649 bp 인 키트.
  42. 제31항에 있어서, 증폭된 타겟 DNA가 모든 또는 상당한 부분의 5′-TTTGGGGAAGAATTTTAAAAATTCAAGGCATAGATGTTAATCCGGAAGCAA 또는 이 서열의 상보체를 포함하는 프로브와의 잡종형성으로 검출되는 키트.
  43. 제32항에 있어서, 프라이머 서열이 모든 또는 상당한 부분의 5′-ACAACCGCTCATATCGCTAAAC 및 5′-TAGGACCGCTACTGGATGAA 를 포함하며 증폭된 타겟 DNA의 크기가 약 118 bp 인 키트.
  44. 제32항에 있어서, 증폭된 타겟 DNA 가 모든 또는 상당한 부분의 5′-CTCGAACTCAGAACTGAAACATTTTCCGCGCCAATCGTAGT 또는 이 서열의 상보체를 포함하는 프로브와의 잡종형성으로 검출되는 키트.
  45. 제32항에 있어서, 증폭된 타겟 DNA 가 모든 또는 상당한 부분의 5′-BCTCGAACTCAGAAGTCAAACAATTTCCGCGCCAATGATAGTGTGAGGCTTC(B는 비오틴) 또는 이 서열의 상보체를 포함하는 프로브와의 잡종형성으로 검출되는 키트.
  46. 제33항에 있어서, 프라이머 서열이 모든 또는 상당한 부분의 5′-AAAACGGCAAGAAAAAGCAG 및 5′-ACGCGTGGTTACAGTCTTGCG 를 포함하며 증폭된 타겟 DNA의 크기가 약 147 bp 인 키트.
  47. 제33항에 있어서, 프라이머 서열이 모든 또는 상당한 부분의 5′-TATGGAATTTCGCCGATTTT 및 5′-TGTTTGCCTCCCDTGCTGCGG 를 포함하며 증폭된 타겟 DNA의 크기가 약 166 bp 인 키트.
  48. 제33항에 있어서, 프라이머 서열이 모든 또는 상당한 부분의 5′-AAAACGGCAAGAAAAAGCAG 및 5′-TGTTTGCCTCCCTGCTGCGG 를 포함하며 증폭된 타겟 DNA의 크기가 약 1350 bp 인 키트.
  49. 제33항에 있어서, 증폭된 타겟 DNA가 5′-TGCCGGGATCCATCGCAGGCGTAATGCTCTACACCACGCCGAACACCTGGG 또는 5′-AAAGGGATCTTCACTCGCGACCFCAAACCGAAGRCGGCGGCTTTTCTGCT 또는 5′-AAAGGGATCTTCACTCGCGACCFCAAACCGAAGTCGGCGGCTTTTCTGCR 또는 이들 서열중 하나의 상보체를 포함하는 프로브와의 잡종형성으로 검출되는 키트.
  50. 제34항에 있어서, 프라이머 서열이 모든 또는 상당한 부분의 5′-TGTTACGCCTGTAGAAAGCCC 및 5′-AAAACRGCCTGGCACAGCAAT 를 포함하며 증폭된 타겟 DNA의 크기가 약 153 bp 인 키트.
  51. 제34항에 있어서, 증폭된 타겟 DNA 가 모든 또는 상당한 부분의 5′-CAACCCGTGAAATCAAAAAACTCGACGGCCTGTGGGCATT 또는 이 서열의 상보체를 포함하는 프로브와의 잡종형성으로 검출되는 키트.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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