KR890016175A - 메틸요구 효모내에서 B형 간염 PreS_2 단백질의 발현 방법 - Google Patents
메틸요구 효모내에서 B형 간염 PreS_2 단백질의 발현 방법 Download PDFInfo
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Abstract
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Description
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제 1 도는 HBV 세라형(seratype) adw의 PreS2유전자를 함유하는 HBV를 표시한다. 플라스미드 AM6는PBR 322 플라스미드가 26위치에서BamHT부위에 삽입된 제 1도에서 보여준 HBV 게놈의 유도체이다. 제 2 도는BamHT 부위에 삽입된 피치아 파스토리스 HIS4 유전자를 함유하는 pBR 322 유도된 플라스미드, 플라스미드 pYM4를 표시한다. 브랫킷(brackets)은 부위가 파괴된 것을 나타낸다. HIS 유전자는 pYJ30(NRRLL-15890)내에 기탁되어 있다. NRRL 15890은 1984,10. 1에 기탁되었다. 제 3도는 플라스미드 pYM10을 표시한다. pYM10은 없어진 2959에서BamHI 부위를 갖는 pYJ30(NRRL B-15890)의 유도체이다. 도면의 브랫킷은 없어진 제한 부위를 지시한다. 제 4 도는 Bg1II에서Bg1II까지 시계방향으로 도는 단편의 선형 통합 부위-특이적 벡터를 함유하는 플라스미드 pAO804를 표시한다. 구조 유전자(structuralgene)는 플라스미드의 유일한 EcoRI에 삽입될 수 있다.
Claims (22)
- a) 조절 영역과 3′종결 서열에 실시가능하게 연쇄된, preS2에 대한 구조 유전자를 함유하는 적어도 1개의 발현 카세트를 갖는 적어도 1개의 벡터로 메틸 요구 효모를 형질 전환시킨 다음 b) 결과 형질 전환된 효모 균주를 적당한 조건하에서 배양하여 상기 HBsAg PreS2단백질 생성물을 얻는 것을 포함하는, 항원 HBV 입자의 제조방법.
- 제 1 항에 있어서, 상기 벡터가 플라스미드 또는 선형, 통합 부위-특이적 벡터로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
- 제 2 항에 있어서, 상기 벡터가 선형 통합 부위 특이적 벡터인 방법.
- 제 3 항에 있어서, 상기 선형 통합-부위-특이적 벡터가 a) 첫번째 삽입성 DNA 단편, b) 마아커(marker) 유전자 및 조절 영역과 3′종결 서열에 실시 가능하게 연쇄된 preS2에 대한 구조 유전자를 함유하는 적어도 1개의 발현 카셋트 및 c) 두번째 삽입성 DNA 단편의 연속 배열을 포함하는 방법, 여기서, 성분 b)의 마아커 유전자 및 카셋트의 순서는 교환될 수 있다.
- 제 4 항에 있어서, 첫번째 삽입성 DNA 단편 및 두번째 삽입성 DNA 단편이 피치아 파스토리스(Pichia Pastoris)로부터 분리된 유전자의 DNA 서열로부터 유도되며 AOX1, p40, DHAS 및 HIS4로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
- 제 4 항에 있어서, 상기 발현 카세트가 a) b)에 실시가능하게 연쇄된 사카로마이세스 세레비시에(Saccharomyces cerevisiae)로부터 분리된 글리세르 알데히드 3-포스페이트 탈수소 효소, 알파-교배인자, 시토크롬 C, 알코올 탈수소 효소, 갈락토시다제, 산 포스파타제, 피치아 피스토리스로부터 분리된 DHAS, p40, AOX1로 구성된 군으로부터 선택된 조절 영역, b) c)에 실시가능하게 연쇄된 preS2에 대한 구조 유전자, c) AOX1 유전자, p40 유전자, DHAS 유전자 및 HIS4 유전자로부터 분리된 3' 종결 서열로 구성된 군으로부터 선택된 피치아 파스토리스로부터의 3′종결 서열을 포함하는 방법.
- 제 4 항에 있어서, 상기 마아커 유전자가 피치아 파스토리스로부터 분리된 HIS4 및 ARG4 사카로마이세스 세레비시에로부터 분리된 SUC2 및 Tn903 및 Tn601 의 G418R유전자로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
- 제 4 항에 있어서, 상기 벡터가 a) b)에 실시가능하게 연쇄된 피치아 파스토리스로부터 분리된 5′ AOX1 조절 영역의 약 1킬로베이스인 첫번째 삽입성 DNA 단편, b) c) 실시가능하게 연쇄된 preS2에 대한 구조 유전자, c) d)에 실시가능하게 연쇄된 피치아 파스토리스로부터 분리된 AOX1의 3′종결 서열, d) e)에 실시가능하게 연쇄된 피치아 파스토리스로부터 분리된 HIS4 인 마아커 유전자, e) 3′AOX1 종결 서열의 약 0.65 킬로베이스인 두번째 삽입성 DNA 단편을 포함하는 방법.
- a) 첫번째 삽입성 DNA 단편, b) 마아커(marker) 유전자 및 조절 영역과 3′종결 서열에 실시가능하게 연쇄된 preS2에 대한 구조 유전자를 함유하는 적어도 1개의 발현 카셋트, 및 c) 두번째 삽입성 DNA 단편의 연속 배열을 포함하는 선형 통합 부위- 특이적 벡터: 여기서, 성분(b)의 마아커 유전자와 카세트의 순서는 바뀔수 있다.
- 제 9 항에 있어서, 상기 벡터가 첫번째 삽입성 DNA 단편 및 두번째 삽입성 DNA 단편이 피치아 파스토리스로부터 분리된 유전자의 DNA 서열로부터 유도되며 AOX1, p40, DHAS 및 HIS4로 구성된 군으로부터 선택되는 벡터.
- 제 9 항 또는 제 10 항에 있어서, 상기 발현 카세트가 a) b)에 실시가능하게 연쇄된 사카로마이세스 세레비시에로부터 분리된 글리세르 알데히드 3-포스페이트 탈수소효소, 알파-교배인자,시토크롬 C, 알코올 탈수소 효소, 갈락토시다제, 산 포스파타제, 피치아 피스토리스로부터 분리된 HIS4, DHAS, p40, AOX1로 구성된 군으로부터 선택된 조절 영역, b) c)에 실시가능하게 연쇄된 preS2에 대한 구조 유전자, c) 피치아 파스토리스로부터 분리된 HIS4 유전자, DHAS 유전자 p40 유전자 및 AOX1 유전자로부터 분리된 3′종결 서열로 구성된 군으로 부터 선택된 3′종결 서열을 포함하는 벡터.
- 제 9 항 내지 제 11 항중 어느 한 항에 있어서, 상기 마아커 유전자가 세균성 Tn903 및 Tn601의 G148R유전자, 사카로마이세스 세레비시에로부터 분리된 SUC2 ; 피치아 파스토리스로부터 분리된 HIS4 및 ARG4로 구성된 군으로부터 선택되는 벡터.
- 제 9 항에 있어서, 상기 벡터가, a) b)에 실시가능하게 연쇄되는 피치아 파스토리스로부터 분리된 길이로 약 1킬로베이스인 5′ AOX1 유전자의 실시가능한 조절 영역인 첫번째 삽입성 DNA 단편, b) c)에 실시가능하게 연쇄된 preS2에 대한 구조 유전자, c) d)에 연쇄된 피치아 파스토리스로부터 분리된 AOX1의 3′종결 서열, d) e)에 연쇄된 피치아 파스토리스로부터 분리된 HIS4인 마아커 유전자, e)3′ AOX1 종결 서열의 약 0.65킬로 베이스인 두번째 삽입성 DNA 단편을 포함하는 벡터.
- 3′종결 서열에 실시 가능하게 연쇄되고, preS2에 대한 구조 유전자에 실시가능하게 연쇄된 조절 영역을 포함하는 적어도 1개의 발현 카세트를 함유하는 적어도 1개의 벡터로 형질전환된 메틸 요구 효모,
- 제 14 항에 있어서, 효모가 피치아 파스토리스인 메틸 요구 효모.
- 제 14 항에 있어서, 효모가 피치아 파스토리스 균주 GS115인 메틸 요구 효모.
- 상기 GS115가 a)첫번째 삽입성 DNA단편, b) 마아커 유전자 및 c)에 실기가능하게 연쇄된 PreS2에 대한 구조 유전자를 함유하는 적어도 1개의 피치아 화합성 발현 카셋트, c)피치아 파스토리스로부터 분리된 HIS4 유전자, DHAS 유전자, p40 유전자, AOX1 유전자로부터 분리된 3′종결 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 3′종결 서열, d) 두번째 삽입성 DNA 단편의 연속 배열인 적어도 1개의 선형 통합 부위 특이적 벡터로 형질 전환된 제 16 항의 피치오 파스토리스 GS115 ; 여기서, 성분 b)의 마아커 유전자와 카세트의 순서는 바뀔 수 있다.
- 상기 벡터가 a) b)에 실시가능하게 결합된 피치아 파스토리스로부터 분리된 약 1킬로베이스의 5′AOX1조절 영역인 첫번째 삽입성 DNA 단편, b) c)에 실시가능하게 결합된 preS2에 대한 구조 유전자, c) d)에 실시가능하게 연결된 피치아 파스토리스로부터 분리된 AOX1의 3′종결 서열, d) e)에 실시가능하게 연결된 피치아 파스토리스로부터 분리된 HIS4 인 마아커 유전자, e) 약 65킬로 베이스의 3′ AOX1 종결 서열인 두번째 삽입성 DNA 단편을 포함하는 제 17 항의 선형 부위 특이적 통합 벡터.
- 피치아 파스토리스 GS115/pTBO5A.
- 상기 GS115가 상기 선형 통합 부위 특이적 벡터의 1개 이상의 복사로 형질 전환된 제 17 항과 같이 형질 전환된 피치아 파스토리스 GS115.
- 피치아 파스토리스 GS115/pTBO5A(S10)
- 제 1 항의 방법에 의해 제조된 항원 HBV 입자.※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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