KR830007828A - 세균성 폴리펩티드를 포현함으로써 인간 인슐린 및 이의 동족체를 제조하는 방법 - Google Patents

세균성 폴리펩티드를 포현함으로써 인간 인슐린 및 이의 동족체를 제조하는 방법 Download PDF

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Abstract

내용 없음

Description

세균성 폴리펩티드를 표현함으로써 인간 인슐린 및 이의 동족체를 제조하는 방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도 본 발명에 의해 제조되는 인간 프로인슐린용 유전자의 뉴클레오티드 연속 결합체 배열도.
제2도 역전사를 이용하여 mRNA로부터 유도되는 제1도의 유전자 분절을 함유하는 플라스미드의 생성 경로를 도시한 개략도.
제3도 인간 프로인슐린 표현용 대장균(E.Coli)의 전형에 적당한 제1도의 유전자를 함유하는 플라스미드의 생성 경로를 도시한 개략도.

Claims (20)

  1. 2개 이상의 아미노산 단위들로 구성되며 각 말단에는 인간 인슐린의 A사슬과 B사슬 사이에서 절단 될 수 있는 부위들을 갖는 가교 사슬에 의해 결합되는 상기 A사슬과 B사슬들로 구성되는 프로인슐린의 폴리펩티드 연속결합체, 또 하나의 추가 단백질 및 상기 또 하나의 추가 단백질과 상기 프로인슐린의 폴리펩티드 연속 결합체에 인접한 분열 부위와로 구성됨을 특징으로 하는 키메라 폴리펩티드.
  2. 제1항에 있어서 가교사슬의 아미노산 연속 결합체가 인간 프로인슐린 C펩티드의 아미노산 연속 결합체에 상당하는 것임을 특징으로 하는 키메라 폴리펩티드.
  3. 제1항에 있어서 가교사슬의 아미노산 연속결합체가 Arg-Arg-Gly-Ser-Lys-Arg임을 특징으로 하는 키메라 폴리펩티드.
  4. 제1항에 있어서 가교사슬의 아미노산 연속결합체가 Arg-Arg임을 특징으로 하는 키메라 폴리펩티드.
  5. 제1항에 있어서 가교사슬의 절단될 수 있는 부위가 B 사슬 말단에 위치하는 아미노산 단위 Arg-Arg 및 A사슬 말단에 위치에는 Lys-Arg임을 특징으로 하는 키메라 폴리펩티드.
  6. 제1항, 제2항, 제3항, 제4항 또는 제5항에 있어서 상기 분열 부위가 메티오닌임을 특징으로 하는 키메라 폴리펩티드.
  7. 제6항에 있어서 메티오닌단위가 상기 프로인슐린 N-말단에 인접한 부위임을 특징으로 하는 키메라 폴리펩티드.
  8. 제1항, 제2항, 제3항, 제4항 또는 제5항에 있어서 또 하나의 추가 단백질이 β-갈락토시다제의 적어도 상당한 양의 부위, 또는 trp E폴리펩티드의 일부에 융합되는 trp전구체 폴리펩티드의 분절임을 특징으로 하는 키메라 폴리펩티드.
  9. 제1항에 있어서 프로인슐린용 암호와 유전자를 상기 또 하나의 추가 단백질 및 상기 분열 부위용 암호화 DNA연속 결합체와 함께 유전자가 해독상을 이루는 세균성 영양생식 용액중에 삽입시키고, 상기 삽입된 유전자를 함유하는 영양생식 용액을 키메라 폴리펩티드 표현용 세균 숙주로 전형시킨 다음, 키메라 폴리펩티드를 표현하여 표현되는 키메라 폴리펩티드를 단리시킴을 특징으로 하는 키메라 폴리펩티드의 제조방법.
  10. 제9항에 있어서 상기 프로인슐린을 탈리시키기 위한 또 하나의 키메라 폴리펩티드 분열조작을 추가로 포함하는 방법.
  11. 제10항에 있어서 상기 가교 사슬을 상기 프로인슐린과 절단시키는 또 하나의 조작을 포함함을 특징으로 하는 방법.
  12. 제11항에 있어서 가교사슬의 절제 조작을 행한 다음 A사슬과 B사슬사이에 디술피드 결합을 형성시키고, 또 절제 생성물이 인간 인슐린임을 특징으로 하는 방법.
  13. 제10항의 방법에 의해 제조한 인간 프로인슐린.
  14. 제12항의 방법에 제조한 인간 프로인슐린.
  15. 제1항에 따른 키메라 폴리펩티드 표현에 사용하고 또 세균숙주의 전형에 적합한 영양 생식용액.
  16. 플리스미드 pHI7
  17. 플라스미드 pBCA5
  18. 제15항에 따른 영양생식 용액을 함유하는 세균 전형체의 생균배치.
  19. 제18항에 따른 배지를 배양시키고, 생성되는 세포상괴상체를 분리시킨 다음, 제1항에 따른 키메라 폴리펩티드로 구성되는 인간 인슐린 전구체를 단리시키고, 이 전구체로부터 또 하나의 추가 단백질을 분열시킨 후, A사슬과 B사슬의 중첩 및 결합을 행하고, 가교사슬을 절단시킴을 특징으로 하는 인간인슐린의 제조방법.
  20. 2개 이상의 아미노산 단위들로 구성되는 가교사슬에 의해 결합되는 가교사슬의 절단에 의해 유도될 수 있는 인간 인슐린의 A사슬과 B사슬로 구성되는 프로인슐린의 폴리펩티드 연속결합체로 구성됨을 특징으로 하는 세균에 의한 표현 생성물.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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