KR950025101A - 인슐린 융합단백질로부터 인슐린을 생산하는데 있어서 효소적 절단을 가능케하는 인슐린 융합단백질 유전자를 가진 발현벡터 및 이를 이용한 사람 인슐린의 제조방법 - Google Patents

인슐린 융합단백질로부터 인슐린을 생산하는데 있어서 효소적 절단을 가능케하는 인슐린 융합단백질 유전자를 가진 발현벡터 및 이를 이용한 사람 인슐린의 제조방법 Download PDF

Info

Publication number
KR950025101A
KR950025101A KR1019940003391A KR19940003391A KR950025101A KR 950025101 A KR950025101 A KR 950025101A KR 1019940003391 A KR1019940003391 A KR 1019940003391A KR 19940003391 A KR19940003391 A KR 19940003391A KR 950025101 A KR950025101 A KR 950025101A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
fusion protein
insulin
trypsin
human insulin
peptide
Prior art date
Application number
KR1019940003391A
Other languages
English (en)
Other versions
KR100202958B1 (ko
Inventor
고형곤
정근택
이현수
목헌
오명석
안동호
김창호
하병집
이강호
Original Assignee
김정순
제일제당 주식회사
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 김정순, 제일제당 주식회사 filed Critical 김정순
Priority to KR1019940003391A priority Critical patent/KR100202958B1/ko
Publication of KR950025101A publication Critical patent/KR950025101A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR100202958B1 publication Critical patent/KR100202958B1/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/62—Insulins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/50—Fusion polypeptide containing protease site
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/10—Plasmid DNA
    • C12N2800/101—Plasmid DNA for bacteria

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

1. 청구범위에 기재된 발명이 속한 기술분야 ; 사람의 인슐린을 대량 생산하기 위한 유전공학의 응용.
2. 발명이 해결하려고 하는 기술적 과제 ; 유전자 재조합균주에서 생성되는 사람의 인슐린의 수율을 향상시키고자 한다.
3. 발명의 해결방법의 요지 ; (i) 전서열 펩타이드코딩유전자와 프로인슐린코딩유전자사이에 트립신 또는 트립신 유사 단백분해효소에 의해 절단 가능한 아미노산서열의 코딩 염기서열을 삽입 및 (ii) 인슐린 융합단백질의 정제후 재구성 방법.
4. 발명의 중요한 용도 ; 인슐린의 효율적인 대량생산.

Description

인슐린 융합단백질로부터 인슐린을 생산하는데 있어서 효소적 절단을 가능케 하는 인슐린 융합단백질 유전자를 가진 발현벡터 및 이를 이용한 사람 인슐린의 제조방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 인슐린 유전자를 함유하는 파아지미드의 제작 개요도,
제2도는 트립신 절단 부위로 변형된 염기서열을 갖는 파아지미드 벡터의 개발 개요도,
제4도는 트립신 절단 부위를 갖는 인슐린 유압단백질 발현 벡터의 제작 개요도.

Claims (12)

  1. 사람 인슐린을 융합단백질의 형태로 대장균에서 대량 생산함에 있어서, 전서열 펩타이드를 코딩하는 유전자와 프로인슐린 유전자 사이에 트립신 또는 트립신 유사 단백분해효소에 의해 절단 가능한 아미노산 서열을 코딩하는 염기서열을 가지는 사람인슐린 융합단백질 유전자를 포함하는 사람인슐린 융합단백질 발현 벡터를 제조하여, 대장균에서 발현시켜 사람인슐린 융합단벡질을 생산하고, 생산된 사람인슐린 융합단백질을 정제하여 재구성한 후 트립신 또는 트립신 유사 단백분해효소와 카복시펩티다제B에 의해 절단하여 전서열 펩타이드와 프로인슐린을 포함하는 인슐린 융합단백질로부터 전서열 펩타이드와 C-펩타이드를 제거하고 사람인슐린을 수득하는 것을 특징으로 하여, 생물학적으로 활성을 나타내는 사람의 인슐린을 제조하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 생산된 사람인슐린 융합단백질의 재구성을 20mM 내지 100mM 글리신, pH 9내지 11, 단백질 농도 0.1mg 내지 0.5mg, 0.5M 내지 2.5M 우레아, 인슐린 융합단백질의 시스테인잔기의 1 내지 10 당량 β-머캅토메탄올, 2℃ 내지10℃의 조건하에서 수행함을 특징으로 하는 방법.
  3. 제2항에 있어서, pH 가 10.3 내지 10.7인 방법.
  4. 제2항에 있어서, 단백질 농도가 0.2mg 내지 0.4mg인 방법.
  5. 제2항에 있어서, 우레아의 농도가 1.5M 내지 2M인 방법.
  6. 제2항에 있어서, β-머캅토에탄올의 양이 인슐린 융합단백질의 시스테인 잔기의 2 내지 4당량인 방법.
  7. 제1항에 있어서, 재구성이 완료된 인슐린 융합단백질을 트립신과 카복시펩티다제 B를 사용하여 전서열 펩타이드와 C- 펩타이드를 동시에 제거하고 인슐린을 수득하는 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제7항에 있어서, 트립신 대신 트립신 유사 단백분해효소를 사용 하는 방법.
  9. 전서열 펩타이드와 프로인슐린 사이에 트립신 또는 트립신 유사 단벡분해효소에 의해 절단 가능한 아미노산인 아르기닌 또는 라이신을 갖는 인슐린 융합단백질의 유전자가 벡터에 삽입되어 있음을 특징으로 하는, 생물학적으로 활성을 나타내는 사람의 인슐린 융합단백질의 발현 플라스미드.
  10. 제9항에 있어서, 전서열 펩타이드가 친수성을 나타내는 아미노산 서열을 갖는 사람인슐린융합단백질의 발현 플라스미드.
  11. 전서열 펩타이드와 프로인슐린 사이의 절단 부위에 트립신 또는 트립신 유사 단백분해효소에 친화성이 좋은 아미노산 서열인 아르기난과 라이신이 각각 또는 함께 2개가 존재하는 아미노산 서열을 갖는 인슐린 융합단백질의 유전자가 벡터에 삽입되어 있음을 특징으로하는, 생물학적으로 활성을 나타내는 사람 인슐린 융합단백질의 발현 플라스미드.
  12. 제11항에 있어서, 전서열 펩타이드가 친수성을 나타내는 아미노산 서열을 갖는 사람인슐린 융합단백질의 발현 플라스미드.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019940003391A 1994-02-25 1994-02-25 인슐린 융합단백질로부터 인슐린을 생산하는데 있어서 효소적 절단을 가능케하는 인슐린 융합단백질 유전자를 가진 발현벡터 및 이를 이용한 사람 인슐린의 제조방법 KR100202958B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1019940003391A KR100202958B1 (ko) 1994-02-25 1994-02-25 인슐린 융합단백질로부터 인슐린을 생산하는데 있어서 효소적 절단을 가능케하는 인슐린 융합단백질 유전자를 가진 발현벡터 및 이를 이용한 사람 인슐린의 제조방법

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1019940003391A KR100202958B1 (ko) 1994-02-25 1994-02-25 인슐린 융합단백질로부터 인슐린을 생산하는데 있어서 효소적 절단을 가능케하는 인슐린 융합단백질 유전자를 가진 발현벡터 및 이를 이용한 사람 인슐린의 제조방법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR950025101A true KR950025101A (ko) 1995-09-15
KR100202958B1 KR100202958B1 (ko) 1999-06-15

Family

ID=19377736

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1019940003391A KR100202958B1 (ko) 1994-02-25 1994-02-25 인슐린 융합단백질로부터 인슐린을 생산하는데 있어서 효소적 절단을 가능케하는 인슐린 융합단백질 유전자를 가진 발현벡터 및 이를 이용한 사람 인슐린의 제조방법

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR100202958B1 (ko)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20200080747A (ko) * 2018-12-27 2020-07-07 주식회사 폴루스 인슐린 전구체의 인슐린 효소 전환용 조성물 및 이를 이용하여 인슐린 전구체를 인슐린으로 전환하는 방법

Also Published As

Publication number Publication date
KR100202958B1 (ko) 1999-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR0150565B1 (ko) 유전자 조환에 의한 사람 인슐린 전구체의 제조 및 이를 이용한 인슐린의 제조방법
AU693815B2 (en) Enzymatic method for modification of recombinant polypeptides
KR100627590B1 (ko) 보조 펩타이드를 사용하는 펩타이드의 제조방법
CA2443365A1 (en) Methods for the recombinant production of antifusogenic peptides
JPH07108232B2 (ja) ペプチド又は蛋白質の製造方法
ES2279510T5 (es) Generación de insulina humana.
JP3169131B2 (ja) 外在的なペプチド配列を用いた処理による生物学的に活性なポリペプチドの製造方法およびそのポリペプチド
Allen et al. Production of epidermal growth factor in Escherichia coli from a synthetic gene
EP0528686B8 (en) Process for producing peptides
KR970065554A (ko) 프로세싱 효소를 사용한 키메라 단백질의 절단 방법
KR950025101A (ko) 인슐린 융합단백질로부터 인슐린을 생산하는데 있어서 효소적 절단을 가능케하는 인슐린 융합단백질 유전자를 가진 발현벡터 및 이를 이용한 사람 인슐린의 제조방법
EA200101161A1 (ru) Способ получения рекомбинантного инсулина из новых гибридных белков
JP2535398B2 (ja) アミド化ペプチドの製造方法
Ishizaki et al. Production of recombinant human glucagon in the form of a fusion protein in Escherichia coli; recovery of glucagon by sequence-specific digestion
IE883462L (en) A method for the selective cleavage of fusion proteins
Geli et al. Synthesis and sequence-specific proteolysis of a hybrid protein (colicin A:: growth hormone releasing factor) produced in Escherichia coli
RU2143492C1 (ru) Рекомбинантная плазмида, кодирующая гибридный белок - предшественник инсулина человека (варианты), штамм бактерий e.coli - продуцент гибридного белка - предшественника инсулина человека (варианты), способ получения инсулина человека
EA201070372A1 (ru) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО с-ПЕПТИДА ПРОИНСУЛИНА ЧЕЛОВЕКА
Wong et al. Escherichia coli: A versatile platform for recombinant protein expression
KR100251285B1 (ko) 재조합 인간성장호르몬의 정제방법
CN106754842A (zh) 一种胰蛋白酶制备方法
RU2144082C1 (ru) Рекомбинантная плазмида, кодирующая гибридный белок-предшественник инсулина человека (варианты), штамм бактерий e.coli - продуцент гибридного белка-предшественника инсулина человека (варианты) и способ получения инсулина человека
KR100381494B1 (ko) 인간인슐린의제조방법
KR100473443B1 (ko) 단백질의 생산방법
KR100312455B1 (ko) 공유적 결합을 이용한 고정화 유로키나제의 제조방법

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application
J2X1 Appeal (before the patent court)

Free format text: APPEAL AGAINST DECISION TO DECLINE REFUSAL

E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20020116

Year of fee payment: 4

LAPS Lapse due to unpaid annual fee