KR20230137340A - 폴리시스트로닉 발현 카세트를 포함하는 재조합 벡터및 이의 사용 방법 - Google Patents
폴리시스트로닉 발현 카세트를 포함하는 재조합 벡터및 이의 사용 방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20230137340A KR20230137340A KR1020237025886A KR20237025886A KR20230137340A KR 20230137340 A KR20230137340 A KR 20230137340A KR 1020237025886 A KR1020237025886 A KR 1020237025886A KR 20237025886 A KR20237025886 A KR 20237025886A KR 20230137340 A KR20230137340 A KR 20230137340A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- amino acid
- seq
- acid sequence
- polynucleotide
- sequence
- Prior art date
Links
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title claims abstract description 253
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims abstract description 222
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 139
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 684
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 684
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 684
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 205
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 187
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims abstract description 108
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 51
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 51
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 51
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 claims abstract description 46
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 claims abstract description 45
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 770
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 373
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 claims description 188
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 179
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 176
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 105
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 claims description 95
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 94
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 94
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 79
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 79
- 102000008579 Transposases Human genes 0.000 claims description 75
- 108010020764 Transposases Proteins 0.000 claims description 75
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 68
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 claims description 59
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 claims description 59
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 57
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 53
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 45
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 45
- 240000007019 Oxalis corniculata Species 0.000 claims description 42
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 41
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 38
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims description 38
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 25
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 claims description 24
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 24
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 claims description 21
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 claims description 21
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 claims description 21
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 claims description 21
- 108700029229 Transcriptional Regulatory Elements Proteins 0.000 claims description 20
- 101100067974 Arabidopsis thaliana POP2 gene Proteins 0.000 claims description 17
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 claims description 17
- 101100118549 Homo sapiens EGFR gene Proteins 0.000 claims description 17
- 101100123851 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) HER1 gene Proteins 0.000 claims description 17
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 16
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 16
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 claims description 16
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 16
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 13
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 12
- 101000851370 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Proteins 0.000 claims description 10
- 102100036856 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Human genes 0.000 claims description 10
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 8
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 8
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 4
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 claims description 4
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 claims description 4
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 claims description 4
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 claims description 4
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 claims description 4
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 claims description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 4
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims description 4
- 102100038078 CD276 antigen Human genes 0.000 claims description 3
- 101710185679 CD276 antigen Proteins 0.000 claims description 3
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100027208 T-cell antigen CD7 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100025237 T-cell surface antigen CD2 Human genes 0.000 claims description 3
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 claims description 3
- 238000001246 colloidal dispersion Methods 0.000 claims description 3
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 3
- 101000914496 Homo sapiens T-cell antigen CD7 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000934346 Homo sapiens T-cell surface antigen CD2 Proteins 0.000 claims description 2
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010064548 Lymphocyte Function-Associated Antigen-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000010292 Peptide Elongation Factor 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010077524 Peptide Elongation Factor 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100021244 Integral membrane protein GPR180 Human genes 0.000 claims 1
- 102100022339 Integrin alpha-L Human genes 0.000 claims 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 abstract description 25
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 abstract description 25
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 abstract description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 abstract description 4
- 108010005327 CD19-specific chimeric antigen receptor Proteins 0.000 abstract 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 153
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 76
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 75
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 75
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 74
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 56
- 101100383038 Homo sapiens CD19 gene Proteins 0.000 description 49
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 29
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 28
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 26
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 25
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 24
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 24
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 23
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 22
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 22
- 239000000047 product Substances 0.000 description 22
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 21
- 208000025324 B-cell acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 18
- 101001055157 Homo sapiens Interleukin-15 Proteins 0.000 description 17
- 230000006870 function Effects 0.000 description 17
- 102000056003 human IL15 Human genes 0.000 description 17
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 16
- 208000029052 T-cell acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 16
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 16
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 15
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 15
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 15
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 description 14
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 14
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 13
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 13
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 13
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 13
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 12
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 description 12
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 12
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 12
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 12
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 11
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 11
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 11
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 11
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 101100166600 Homo sapiens CD28 gene Proteins 0.000 description 10
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 10
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 10
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 9
- -1 CD86 Proteins 0.000 description 9
- 208000031671 Large B-Cell Diffuse Lymphoma Diseases 0.000 description 9
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 9
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 9
- 206010012818 diffuse large B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 9
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 9
- 201000003444 follicular lymphoma Diseases 0.000 description 9
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 9
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 9
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 9
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 9
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 8
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 8
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 8
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 8
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 8
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 8
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 8
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 7
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 7
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 7
- 101000851181 Homo sapiens Epidermal growth factor receptor Proteins 0.000 description 7
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 7
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 7
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 7
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 7
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 7
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 7
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 7
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101100043687 Caenorhabditis elegans stim-1 gene Proteins 0.000 description 6
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 6
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 6
- 102100022103 Histone-lysine N-methyltransferase 2A Human genes 0.000 description 6
- 101001045846 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase 2A Proteins 0.000 description 6
- 101100495232 Homo sapiens MS4A1 gene Proteins 0.000 description 6
- 101000780650 Homo sapiens Protein argonaute-1 Proteins 0.000 description 6
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 description 6
- 208000007660 Residual Neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 6
- 238000011304 droplet digital PCR Methods 0.000 description 6
- 102000045108 human EGFR Human genes 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 6
- 108010078373 tisagenlecleucel Proteins 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 5
- 238000002617 apheresis Methods 0.000 description 5
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 5
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 5
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 5
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 5
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 5
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 5
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 4
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 4
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Natural products OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 4
- 206010038111 Recurrent cancer Diseases 0.000 description 4
- 206010070308 Refractory cancer Diseases 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 4
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 4
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 4
- 229960000390 fludarabine Drugs 0.000 description 4
- GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N fludarabine phosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC(F)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N 0.000 description 4
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 4
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 208000016691 refractory malignant neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 208000036170 B-Cell Marginal Zone Lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 208000032568 B-cell prolymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 3
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000035462 Biphenotypic Acute Leukemia Diseases 0.000 description 3
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010061850 Extranodal marginal zone B-cell lymphoma (MALT type) Diseases 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 description 3
- 101001003140 Homo sapiens Interleukin-15 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 3
- 101000946860 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain Proteins 0.000 description 3
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 3
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 3
- 206010052178 Lymphocytic lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 201000003791 MALT lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 208000025205 Mantle-Cell Lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 208000035416 Prolymphocytic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102100035794 T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain Human genes 0.000 description 3
- 208000033559 Waldenström macroglobulinemia Diseases 0.000 description 3
- 208000036677 acute biphenotypic leukemia Diseases 0.000 description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 3
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 3
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 3
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 3
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 3
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 3
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 3
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 3
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 3
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 201000007924 marginal zone B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 208000021937 marginal zone lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 3
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 3
- 210000005134 plasmacytoid dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 3
- 108010057840 ALT-803 Proteins 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 2
- 102100036301 C-C chemokine receptor type 7 Human genes 0.000 description 2
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 102100025466 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 3 Human genes 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 2
- 108090000331 Firefly luciferases Proteins 0.000 description 2
- 102000004961 Furin Human genes 0.000 description 2
- 108090001126 Furin Proteins 0.000 description 2
- 206010066476 Haematological malignancy Diseases 0.000 description 2
- 102100026122 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Human genes 0.000 description 2
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 2
- 101000716065 Homo sapiens C-C chemokine receptor type 7 Proteins 0.000 description 2
- 101000914337 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 3 Proteins 0.000 description 2
- 101000913074 Homo sapiens High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102100030703 Interleukin-22 Human genes 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 241001071864 Lethrinus laticaudis Species 0.000 description 2
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 102100034183 Protein argonaute-1 Human genes 0.000 description 2
- 239000008156 Ringer's lactate solution Substances 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011467 adoptive cell therapy Methods 0.000 description 2
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 2
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 2
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 2
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 2
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AFYNADDZULBEJA-UHFFFAOYSA-N bicinchoninic acid Chemical compound C1=CC=CC2=NC(C=3C=C(C4=CC=CC=C4N=3)C(=O)O)=CC(C(O)=O)=C21 AFYNADDZULBEJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 2
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 201000009277 hairy cell leukemia Diseases 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 2
- 229940045426 kymriah Drugs 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000003589 local anesthetic agent Substances 0.000 description 2
- 229960005015 local anesthetics Drugs 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N pentan-3-ol Chemical compound CCC(O)CC AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 2
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000003352 sequestering agent Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 229950007137 tisagenlecleucel Drugs 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000017105 transposition Effects 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 229940045208 yescarta Drugs 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 2-methylphenol;3-methylphenol;4-methylphenol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1.CC1=CC=CC(O)=C1.CC1=CC=CC=C1O QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ALEVUYMOJKJJSA-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-2-propylbenzoic acid Chemical class CCCC1=CC(O)=CC=C1C(O)=O ALEVUYMOJKJJSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-2-n,2-n-diethylpyrimidine-2,4-diamine Chemical compound CCN(CC)C1=NC(N)=CC(Cl)=N1 XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010000830 Acute leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 241000702423 Adeno-associated virus - 2 Species 0.000 description 1
- 239000012099 Alexa Fluor family Substances 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000711404 Avian avulavirus 1 Species 0.000 description 1
- 101710117995 B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 238000011523 CAR-T cell immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 101150018757 CD19 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000016778 CD4+/CD56+ hematodermic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102100037904 CD9 antigen Human genes 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 241000709687 Coxsackievirus Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 108020005208 DNA Transposable Elements Proteins 0.000 description 1
- 241000710829 Dengue virus group Species 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 1
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 102100029360 Hematopoietic cell signal transducer Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000738354 Homo sapiens CD9 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000746373 Homo sapiens Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- 101000990188 Homo sapiens Hematopoietic cell signal transducer Proteins 0.000 description 1
- 101001002470 Homo sapiens Interferon lambda-1 Proteins 0.000 description 1
- 101001010621 Homo sapiens Interleukin-21 Proteins 0.000 description 1
- 101000853002 Homo sapiens Interleukin-25 Proteins 0.000 description 1
- 101000853000 Homo sapiens Interleukin-26 Proteins 0.000 description 1
- 101000998139 Homo sapiens Interleukin-32 Proteins 0.000 description 1
- 101000777628 Homo sapiens Leukocyte antigen CD37 Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 1
- 101001128431 Homo sapiens Myeloid-derived growth factor Proteins 0.000 description 1
- 101001109503 Homo sapiens NKG2-C type II integral membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000797623 Homo sapiens Protein AMBP Proteins 0.000 description 1
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- 101000638251 Homo sapiens Tumor necrosis factor ligand superfamily member 9 Proteins 0.000 description 1
- 241001135569 Human adenovirus 5 Species 0.000 description 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 1
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical class C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100025390 Integrin beta-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 1
- 101800003050 Interleukin-16 Proteins 0.000 description 1
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 description 1
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 description 1
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 description 1
- 108050009288 Interleukin-19 Proteins 0.000 description 1
- 108010065637 Interleukin-23 Proteins 0.000 description 1
- 108010066979 Interleukin-27 Proteins 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 101710181613 Interleukin-31 Proteins 0.000 description 1
- 108010067003 Interleukin-33 Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- LCPYQJIKPJDLLB-UWVGGRQHSA-N Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C LCPYQJIKPJDLLB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031586 Leukocyte antigen CD37 Human genes 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 1
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108091092878 Microsatellite Proteins 0.000 description 1
- 108010050619 Monokines Proteins 0.000 description 1
- 102000013967 Monokines Human genes 0.000 description 1
- 101100341510 Mus musculus Itgal gene Proteins 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 1
- 241000608621 Myotis lucifugus Species 0.000 description 1
- 102100022683 NKG2-C type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 1
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 1
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 206010034016 Paronychia Diseases 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 description 1
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 description 1
- HCBIBCJNVBAKAB-UHFFFAOYSA-N Procaine hydrochloride Chemical compound Cl.CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 HCBIBCJNVBAKAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100032859 Protein AMBP Human genes 0.000 description 1
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 1
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 1
- 108091081062 Repeated sequence (DNA) Proteins 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- 238000010459 TALEN Methods 0.000 description 1
- 108010043645 Transcription Activator-Like Effector Nucleases Proteins 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- XEFQLINVKFYRCS-UHFFFAOYSA-N Triclosan Chemical compound OC1=CC(Cl)=CC=C1OC1=CC=C(Cl)C=C1Cl XEFQLINVKFYRCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100032101 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 9 Human genes 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 241000021375 Xenogenes Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000003510 anti-fibrotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 description 1
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 1
- 230000009227 antibody-mediated cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229950009579 axicabtagene ciloleucel Drugs 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- XMQFTWRPUQYINF-UHFFFAOYSA-N bensulfuron-methyl Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1CS(=O)(=O)NC(=O)NC1=NC(OC)=CC(OC)=N1 XMQFTWRPUQYINF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H bis[(2-oxo-1,3,2$l^{5},4$l^{2}-dioxaphosphaplumbetan-2-yl)oxy]lead Chemical compound [Pb+2].[Pb+2].[Pb+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N butyl alcohol Substances CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I calcium;potassium;disodium;(2s)-2-hydroxypropanoate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].C[C@H](O)C([O-])=O BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I 0.000 description 1
- BMLSTPRTEKLIPM-UHFFFAOYSA-I calcium;potassium;disodium;hydrogen carbonate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].OC([O-])=O BMLSTPRTEKLIPM-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 208000024207 chronic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012411 cloning technique Methods 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- 229930003836 cresol Natural products 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000008355 dextrose injection Substances 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 238000000375 direct analysis in real time Methods 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000012063 dual-affinity re-targeting Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229940082789 erbitux Drugs 0.000 description 1
- 238000011124 ex vivo culture Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000007667 floating Methods 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000011134 hematopoietic stem cell transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000046157 human CSF2 Human genes 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 108090000681 interleukin 20 Proteins 0.000 description 1
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 description 1
- 108010074109 interleukin-22 Proteins 0.000 description 1
- 108090000237 interleukin-24 Proteins 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012004 kinetic exclusion assay Methods 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108010091798 leucylleucine Proteins 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- FVVLHONNBARESJ-NTOWJWGLSA-H magnesium;potassium;trisodium;(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoate;acetate;tetrachloride;nonahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[Mg+2].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[K+].CC([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O FVVLHONNBARESJ-NTOWJWGLSA-H 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Chemical class 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000009126 molecular therapy Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002687 nonaqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N p-hydroxybenzoic acid methyl ester Natural products COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-N phosphoramidic acid Chemical compound NP(O)(O)=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 208000007525 plasmablastic lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 238000010149 post-hoc-test Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 229960001309 procaine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 201000000443 refractory hairy cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 231100000205 reproductive and developmental toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000009394 selective breeding Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- WBHQBSYUUJJSRZ-UHFFFAOYSA-M sodium bisulfate Chemical compound [Na+].OS([O-])(=O)=O WBHQBSYUUJJSRZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000342 sodium bisulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000008354 sodium chloride injection Substances 0.000 description 1
- 238000003980 solgel method Methods 0.000 description 1
- 239000008137 solubility enhancer Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 229940035044 sorbitan monolaurate Drugs 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 1
- 238000000528 statistical test Methods 0.000 description 1
- SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M stearalkonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000002483 superagonistic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 229960003500 triclosan Drugs 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 239000012808 vapor phase Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 239000008136 water-miscible vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
- A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
- A61K39/464412—CD19 or B4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/5443—IL-15
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70521—CD28, CD152
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
- C07K14/7155—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for interleukins [IL]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2207/00—Modified animals
- A01K2207/12—Animals modified by administration of exogenous cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
- A01K2267/0331—Animal model for proliferative diseases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
- A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
CD19 특이적 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 사이토카인을 암호화하는 및 마커 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 폴리시스트로닉 발현 카세트를 포함하는 벡터가 본 명세서에 제공되되, CD19-특이적 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 및 사이토카인 코딩 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 F2A 요소를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 분리되고, 사이토카인을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열 및 마커 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열은 T2A 요소를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 분리된다.
Description
서열 목록의 통합
2022년 1월 7일에 생성되고 261,925바이트(MS-Windows®에서 측정됨)인 "P35188WO00_SL.TXT"라는 이름의 파일에 포함된 서열 목록이 여기에 전자적으로 제출되고 전체가 참조에 의해 원용된다.
기술 분야
본 개시내용은 적어도 3개의 시스트론을 포함하는 폴리시스트로닉 벡터 및 이의 사용 방법에 관한 것이다.
집단의 각 세포에서 다중 유전자의 공동 발현은 입양 세포 요법, 예를 들어, 키메라 항원 수용체 T-세포(CAR T-세포) 요법을 포함하는 다양한 생의학적 적용에 중요하다. 다중유전자 발현을 위한 표준 전략은 이식유전자를 다중 벡터에 혼입시키고, 각 벡터를 세포에 도입하는 것이다. 그러나, 다중 벡터의 사용은 종종 조작된 세포의 실질적으로 이종인 집단을 생성하며, 여기서 모든 세포가 각각의 이식유전자를 발현하지 않거나 또는 유사한 정도로 각각의 이식유전자를 발현하지 않는다. 이러한 이종성은, 예를 들어, 조작된 세포 생성물의 목적하는 조작된 세포 표현형의 생체내 지속성의 감소, 복잡한 제조 및 정제 요구사항 및 로트간 변동성을 포함하여 특히 치료적 적용에 있어서 여러 가지 문제를 야기한다.
단일 세포에서 다중 유전자를 공동 발현시키기 위해 다중 벡터를 사용하는 것과 관련된 문제를 고려할 때, 단일 세포에서 복수의 이식유전자를 발현할 수 있을 뿐만 아니라 세포 집단에 걸쳐 유사한 정도로 일부 또는 모든 이식유전자를 발현하여 치료용으로 최적화된 조작된 세포 집단을 생성할 수 있는 단일 폴리시스트로닉 벡터에 대한 충족되지 않은 요구가 있다.
본 개시내용은 항-CD19 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor: CAR)를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, IL-15 및 IL-15Rα를 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 및 마커 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 폴리시스트로닉 발현 카세트를 포함하는 벡터를 제공하되, 항-CD19 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 F2A 요소를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 융합 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드로부터 분리되고, 융합 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 T2A 요소를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 마커 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열로부터 분리된다. 또한, 본 명세서에 기재된 벡터 벡터를 사용하여 조작된 세포, 예를 들어, 면역 효과기 세포를 포함하는 약제학적 조성물 및 이러한 약제학적 조성물을 사용하여 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 본 명세서에 개시된 재조합 벡터는 입양 세포 요법에 사용하기 위한 면역 효과기 세포(예를 들어, T 세포)를 변형시키는 데 특히 유용하다.
따라서, 일 양태에서, 본 개시내용은 폴리시스트로닉 발현 카세트를 포함하는 재조합 벡터를 제공하되, 상기 폴리시스트로닉 발현 카세트는, 5'에서 3'로, CD19에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-결합 도메인, 막횡단 도메인 및 세포질 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제1 폴리뉴클레오타이드 서열; F2A 요소를 포함하는 제2 폴리뉴클레오타이드 서열; IL-15 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체 및 IL-15Rα 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체를 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 제3 폴리뉴클레오타이드 서열; T2A 요소를 포함하는 제4 폴리뉴클레오타이드 서열; 및 마커 단백질을 암호화하는 제5 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드에 작동 가능하게 연결된 전사 조절 요소를 포함한다.
일부 실시형태에서, 상기 F2A 요소 서열번호 137의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 137의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 F2A 요소는 서열번호 141의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 F2A 요소는 서열번호 138의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 138의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 F2A 요소는 서열번호 142의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 상기 T2A 요소는 서열번호 139의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 139의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 T2A 요소는 서열번호 143의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 T2A 요소는 서열번호 140 또는 182의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 140 또는 182의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 T2A 요소는 서열번호 144, 145 또는 165의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 상기 항원-결합 도메인은 상보성 결정 영역 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 상보성 결정 영역 VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 항원-결합 도메인은 제1 펩타이드 링커를 통해 작동 가능하게 연결된 상기 VH 및 상기 VL을 포함하는 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, 상기 VH는 서열번호 2에 제시된 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 VH CDR1은 서열번호 6의 아미노산 서열; 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH CDR2는 서열번호 7의 아미노산 서열; 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하며; 상기 VH CDR3은 서열번호 8의 아미노산 서열; 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 상기 VL은 서열번호 1에 제시된 VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 VL CDR1은 서열번호 3의 아미노산 서열; 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL CDR2는 서열번호 4의 아미노산 서열; 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하며; 상기 VL CDR3은 서열번호 5의 아미노산 서열; 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 상기 VH는 서열번호 2의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 VH는 서열번호 20의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 상기 VL은 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 VL은 서열번호 19의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 상기 제1 펩타이드 링커는 서열번호 9 또는 서열번호 17의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 9 또는 17의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 제1 펩타이드 링커는 서열번호 27 또는 서열번호 35의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 상기 제1 펩타이드 링커는 서열번호 27의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 상기 CAR은 상기 CAR의 상기 항원-결합 도메인과 상기 막횡단 도메인 사이에 위치한 힌지 영역을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 힌지 영역은 서열번호 37, 38 또는 39의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 37, 38 또는 39의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 힌지 영역은 서열번호 40, 41 또는 42의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 상기 CAR의 상기 막횡단 도메인은 서열번호 43, 44 또는 45의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 43, 44 또는 45의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 CAR의 상기 막횡단 도메인은 서열번호 49, 50, 51 또는 52의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 상기 힌지 영역 및 상기 막횡단 도메인은 함께 서열번호 46, 47 또는 48의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 46, 47 또는 48의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 힌지 영역 및 상기 막횡단 도메인은 함께 서열번호 53, 54, 55 또는 56의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 상기 세포질 도메인은 인간 CD3ζ의 1차 신호전달 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 세포질 도메인은 서열번호 60의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 세포질 도메인은 서열번호 67 또는 68의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 상기 세포질 도메인은 CD28, 4-1BB, OX40, CD2, CD7, CD27, CD30, CD40, CDS, ICAM-1, LFA-1, B7-H3 및 ICOS로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질의 공동 자극 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 단백질은 CD28 또는 4-1BB이다.
일부 실시형태에서, 상기 단백질은 CD28이다. 일부 실시형태에서, 상기 세포질 도메인은 서열번호 57 또는 58의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 57 또는 58의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 세포질 도메인은 서열번호 64 또는 65의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 상기 단백질은 4-1BB이다. 일부 실시형태에서, 상기 세포질 도메인은 서열번호 59의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 세포질 도메인은 서열번호 66의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 상기 세포질 도메인은 서열번호 61, 62 또는 63의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 61, 62 또는 63의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 세포질 도메인은 서열번호 69, 70 또는 71의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 상기 CAR은 서열번호 72, 74, 76, 77, 78, 79, 80 또는 81의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 CAR은 서열번호 82, 83, 86, 87, 90, 91, 92, 93, 94 또는 95의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 상기 IL-15 또는 상기 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체는 제2 펩타이드 링커를 통해 상기 IL-15Rα 또는 상기 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체에 작동 가능하게 연결된다. 일부 실시형태에서, 상기 융합 단백질 서열번호 119, 121 또는 180의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 융합 단백질은 서열번호 126, 127, 130, 131 또는 181의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 상기 마커 단백질은 HER1의 도메인 III 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체; HER1의 도메인 IV의 N-말단 부분; 및 CD28의 막횡단 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체를 포함한다.
일부 실시형태에서, 상기 HER1의 도메인 III 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체는 서열번호 98의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 HER1의 도메인 III 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체는 서열번호 110 또는 164의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 상기 HER1의 도메인 IV의 N-말단 부분은 서열번호 99의 1번 내지 40번, 1번 내지 39번, 1번 내지 38번, 1번 내지 37번, 1번 내지 36번, 1번 내지 35번, 1번 내지 34번, 1번 내지 33번, 1번 내지 32번, 1번 내지 31번, 1번 내지 30번, 1번 내지 29번, 1번 내지 28번, 1번 내지 27번, 1번 내지 26번, 1번 내지 25번, 1번 내지 24번, 1번 내지 23번, 1번 내지 22번, 1번 내지 21번, 1번 내지 20번, 1번 내지 19번, 1번 내지 18번, 1번 내지 17번, 1번 내지 16번, 1번 내지 15번, 1번 내지 14번, 1번 내지 13번, 1번 내지 12번, 1번 내지 11 또는 1번 내지 10번 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 HER1의 도메인 IV의 N-말단 부분은 서열번호 99의 1번 내지 21번 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 HER1의 도메인 IV의 N-말단 부분은 서열번호 100의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 HER1의 도메인 IV의 N-말단 부분은 서열번호 112의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 상기 CD28의 막횡단 영역은 서열번호 101의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 CD28의 막횡단 영역은 서열번호 113의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 상기 마커 단백질은 서열번호 96, 97, 166 또는 167의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 마커 단백질은 서열번호 107, 108, 109, 162, 173 또는 174의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 상기 조절 요소는 프로모터를 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 프로모터는 인간 신장 인자 1-알파(human elongation factor 1-alpha: hEF-1α) 하이브리드 프로모터이다. 일부 실시형태에서, 상기 프로모터는 서열번호 146의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 상기 벡터는 상기 제5 폴리뉴클레오타이드 서열의 3' 폴리A 서열을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 폴리A 서열은 서열번호 148의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 폴리시스트로닉 발현 카세트를 포함하는 재조합 벡터를 제공하되, 상기 폴리시스트로닉 발현 카세트는, 5'에서 3'로, 아미노산 서열 서열번호 72 또는 74의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 제1 폴리뉴클레오타이드 서열; F2A 요소를 포함하는 제2 폴리뉴클레오타이드 서열; 서열번호 119, 121 또는 180의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 제3 폴리뉴클레오타이드 서열; T2A 요소를 포함하는 제4 폴리뉴클레오타이드 서열; 서열번호 96 또는 97의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 마커 단백질을 암호화하는 제5 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드에 작동 가능하게 연결된 전사 조절 요소를 포함한다.
일부 실시형태에서, 상기 F2A 요소는 서열번호 137의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 137의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 F2A 요소는 서열번호 141의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 F2A 요소는 서열번호 138의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 138의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 F2A 요소는 서열번호 142의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 상기 T2A 요소는 서열번호 139의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 139의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 T2A 요소는 서열번호 143의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 T2A 요소는 서열번호 140 또는 182의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 140 또는 182의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 T2A 요소는 서열번호 144, 145 또는 165의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 폴리시스트로닉 발현 카세트를 포함하는 재조합 벡터를 제공하되, 상기 폴리시스트로닉 발현 카세트는, 5'에서 3'로, 서열번호 82, 83, 86 또는 87의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 제1 폴리뉴클레오타이드 서열; F2A 요소를 포함하는 제2 폴리뉴클레오타이드 서열; 서열번호 126, 127, 130, 131 또는 181의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 제3 폴리뉴클레오타이드 서열; T2A 요소를 포함하는 제4 폴리뉴클레오타이드 서열; 및 서열번호 107, 108, 109 또는 162의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 제5 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드에 작동 가능하게 연결된 전사 조절 요소를 포함한다.
일부 실시형태에서, 상기 F2A 요소는 서열번호 137의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 137의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 F2A 요소는 서열번호 141의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 F2A 요소는 서열번호 138의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 138의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 F2A 요소는 서열번호 142의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 상기 T2A 요소는 서열번호 139의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 139의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 T2A 요소는 서열번호 143의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 T2A 요소는 서열번호 140 또는 182의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 140 또는 182의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 T2A 요소는 서열번호 144, 145 또는 165의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 재조합 벡터, 벡터는 좌측 역 말단 반복(inverted terminal repeat: ITR) 및 우측 ITR을 추가로 포함하되, 상기 좌측 ITR 및 상기 우측 ITR은 상기 폴리시스트로닉 발현 카세트의 측면에 있다. 일부 실시형태에서, 재조합 벡터는, 5'에서 3'로, 상기 좌측 ITR; 상기 전사 조절 요소; 상기 제1 폴리뉴클레오타이드 서열; 상기 제2 폴리뉴클레오타이드 서열; 상기 제3 폴리뉴클레오타이드 서열; 상기 제4 폴리뉴클레오타이드 서열; 상기 제5 폴리뉴클레오타이드 서열; 및 상기 우측 ITR을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 폴리시스트로닉 발현 카세트를 포함하는 재조합 벡터를 제공하되, 상기 폴리시스트로닉 발현 카세트는 서열번호 149의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 작동 가능하게 연결된 전사 조절 요소를 포함한다. 또 다른 양태에서, 본 개시내용은 폴리시스트로닉 발현 카세트를 포함하는 재조합 벡터를 제공하되, 상기 폴리시스트로닉 발현 카세트는 서열번호 152의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드에 작동 가능하게 연결된 전사 조절 요소를 포함한다.
일부 실시형태에서, 임의의 본 명세서에 기재된 재조합 벡터는 좌측 역 말단 반복(ITR) 및 우측 ITR을 추가로 포함하되, 상기 좌측 ITR 및 상기 우측 ITR은 상기 폴리시스트로닉 발현 카세트의 측면에 있다. 일부 실시형태에서, 상기 좌측 ITR 및 상기 우측 ITR은 슬리핑 뷰티(Sleeping Beauty) 트랜스포존, piggyBac 트랜스포존, TcBuster 트랜스포존 및 Tol2 트랜스포존으로 이루어진 군으로부터 선택되는 DNA 트랜스포존의 ITR이다. 일부 실시형태에서, 상기 DNA 트랜스포존은 상기 슬리핑 뷰티 트랜스포존이다.
본 명세서에 기재된 재조합 벡터의 일부 실시형태에서, 상기 벡터는 비바이러스 벡터이다. 일부 실시형태에서, 상기 비바이러스 벡터는 플라스미드이다. 본 명세서에 기재된 재조합 벡터의 일부 실시형태에서, 상기 벡터는 바이러스 벡터이다. 본 명세서에 기재된 재조합 벡터의 일부 실시형태에서, 상기 벡터는 폴리뉴클레오타이드이다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 서열번호 152의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 바와 같은 벡터를 포함하는 세포 집단을 제공한다. 일부 실시형태에서, 상기 벡터는 상기 세포 집단의 게놈에 통합된다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 서열번호 152의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 세포 집단을 제공한다. 일부 실시형태에서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 상기 세포 집단의 게놈에 통합된다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 서열번호 152의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함하는 세포 집단을 제공한다.
본 명세서에 기재된 세포 집단의 일부 실시형태에서, 세포는 서열번호 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80 또는 81의 아미노산 서열을 포함하는 CAR; 서열번호 119, 120, 121, 122, 180 또는 183의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질; 및 서열번호 96, 97, 166 또는 167의 아미노산 서열을 포함하는 마커 단백질을 포함한다. 본 명세서에 기재된 세포 집단의 일부 실시형태에서, 세포는 서열번호 74의 아미노산 서열을 포함하는 CAR; 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질; 및 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 마커 단백질을 포함한다. 본 명세서에 기재된 세포 집단의 일부 실시형태에서, 세포는 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함하는 CAR; 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질; 및 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 마커 단백질을 포함한다.
본 명세서에 기재된 세포 집단의 일부 실시형태에서, 세포는 면역 효과기 세포이다. 일부 실시형태에서, 상기 면역 효과기 세포는 T 세포, 자연 살해(natural killer: NK) 세포, B 세포, 비만 세포 및 골수-유래 식세포로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 상기 면역 효과기 세포는 T 세포이다. 일부 실시형태에서, T 세포 집단은 알파/베타 T 세포, 감마/델타 T 세포 또는 자연 살해 T(NK-T) 세포를 포함한다. 일부 실시형태에서, T 세포 집단은 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 또는 CD4+ T 세포와 CD8+ T 세포 둘 다를 포함한다.
본 명세서에 기재된 세포 집단의 일부 실시형태에서, 세포는 생체외에 있다. 본 명세서에 기재된 세포 집단의 일부 실시형태에서, 세포는 인간이다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 조작된 세포 집단을 생성하는 방법을 제공하되, 상기 방법은 세포 집단에 좌측 ITR 및 우측 ITR을 포함하는 재조합 벡터를 도입하는 단계로서, 상기 좌측 ITR 및 상기 우측 ITR은 상기 폴리시스트로닉 발현 카세트의 측면에 있는, 상기 도입하는 단계 및 상기 트랜스포세이즈가 폴리시스트로닉 발현 카세트를 상기 세포 집단의 게놈에 통합시키는 조건하에서 상기 세포 집단을 배양하는 단계를 포함함으로써, 조작된 세포 집단을 생산한다. 일부 실시형태에서, 재조합 벡터는, 5'에서 3'로, 상기 좌측 ITR; 상기 전사 조절 요소; 상기 제1 폴리뉴클레오타이드 서열; 상기 제2 폴리뉴클레오타이드 서열; 상기 제3 폴리뉴클레오타이드 서열; 상기 제4 폴리뉴클레오타이드 서열; 상기 제5 폴리뉴클레오타이드 서열; 및 상기 우측 ITR을 포함한다.
일부 실시형태에서, 상기 좌측 ITR 및 상기 우측 ITR은 슬리핑 뷰티 트랜스포존, piggyBac 트랜스포존, TcBuster 트랜스포존 및 Tol2 트랜스포존으로 이루어진 군으로부터 선택된 DNA 트랜스포존의 ITR이다. 일부 실시형태에서, 상기 DNA 트랜스포존은 상기 슬리핑 뷰티 트랜스포존이다. 일부 실시형태에서, 상기 트랜스포세이즈는 슬리핑 뷰티 트랜스포세이즈이다. 일부 실시형태에서, 상기 슬리핑 뷰티 트랜스포세이즈는 SB11, SB100X, hSB110 및 hSB81로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 상기 슬리핑 뷰티 트랜스포세이즈는 SB11이다. 일부 실시형태에서, 상기 SB11은 서열번호 160의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 SB11은 적어도 서열번호 161의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 상기 DNA 트랜스포세이즈를 암호화하는 상기 폴리뉴클레오타이드는 DNA 벡터 또는 RNA 벡터이다.
일부 실시형태에서, 상기 좌측 ITR은 서열번호 155 또는 156의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하고; 상기 우측 ITR은 서열번호 157, 159 또는 184의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 상기 재조합 벡터 및 상기 DNA 트랜스포세이즈 또는 상기 DNA 트랜스포세이즈를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 전기-전달((electro-transfer)), 칼슘 포스페이트 침전, 리포펙션, 유전자총(particle bombardment), 미세주입, 미세유체 장치를 통한 기계적 변형 또는 콜로이드성 분산 시스템을 사용하여 상기 세포 집단에 도입된다. 일부 실시형태에서, 상기 재조합 벡터 및 상기 DNA 트랜스포세이즈 또는 상기 DNA 트랜스포세이즈를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 전기-전달을 사용하여 상기 세포 집단에 도입된다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 2일 이내에 완료된다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 1일 내지 2일에 완료된다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 2일 이상에 완료된다.
일부 실시형태에서, 상기 세포 집단은 동결보존되고, 상기 재조합 벡터 및 상기 DNA 트랜스포세이즈 또는 상기 DNA 트랜스포세이즈를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드의 도입 전에 해동된다. 일부 실시형태에서, 상기 세포 집단은 상기 재조합 벡터 및 상기 DNA 트랜스포세이즈 또는 상기 DNA 트랜스포세이즈를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드의 도입 전에 휴지된다(rested). 일부 실시형태에서, 상기 세포 집단은 인간 생체외 세포를 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 세포 집단은 생체외에서 활성화되지 않는다. 일부 실시형태에서, 상기 세포 집단은 T 세포를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 치료학적 유효량의 본 명세서에 기재된 세포 집단을 대상체에게 투여함으로써, 암을 치료하는 단계를 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 조작된 세포 집단을 생성하는 방법에 의해 생성된 치료학적 유효량의 조작된 세포 집단을 투여함으로써, 암을 치료하는 단계를 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 치료학적 유효량의 본 명세서에 기재된 세포 집단을 대상체에게 투여함으로써, 자가면역 질환 또는 장애를 치료하는 단계를 포함하는, 자가면역 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에서 자가면역 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 조작된 세포 집단을 생성하는 방법에 의해 생성된 치료학적 유효량의 조작된 세포 집단을 대상체에게 투여함으로써, 자가면역 질환 또는 장애를 치료하는 단계를 포함하는, 자가면역 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에서 자가면역 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드 서열(예를 들어, 표 1 내지 표 7, 표 10, 표 11 및 표 13에 제시된 폴리뉴클레오타이드 서열) 다음에는 개재하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 포함하지 않고 3' 말단에 종결 코돈(예를 들어, TAA, TAG 또는 TGA)이 올 수 있다.
도 1a는, N 말단에서 C 말단으로, N-말단 신호 서열; 항-인간 CD19 VL; 펩타이드 링커; 항-인간 CD19 VH; 인간 CD8α 힌지 도메인; 인간 CD8α 막횡단(transmembrane: TM) 도메인; 인간 CD28 세포질 도메인; 및 인간 CD3ζ 세포질 도메인을 포함하는 CD19-특이적 CAR CD19CAR의 도식이다. 도 1b는, N 말단에서 C 말단으로, N-말단 신호 서열; 인간 IL-15; 링커 펩타이드; 및 인간 IL-15Rα를 포함하는 막-결합 IL-15/IL-15Rα 융합 단백질 mbIL15의 도식이다. 도 1c는, N 말단에서 C 말단으로, N-말단 신호 서열; 인간 HER1의 도메인 III; 인간 HER1의 절단된 도메인 IV; 펩타이드 링커; 및 인간 CD28 TM 도메인을 포함하는 마커 단백질 HER1t의 도식이다.
도 2는 CD19CAR, mbIL15 및 HER1t를 발현하는 CAR-T 세포를 생성하기 위해 SB11 트랜스포존/트랜스포세이즈 시스템을 사용하는 이중 전위(double transposition: dTp) 및 단일 전위(single transposition: sTp) 접근법을 도시하는 개략도이다.
도 3a 내지 도 3e는 플라스미드(음성 대조군), 플라스미드 DP1 및 DP2(dTp 대조군)의 1:1 조합 또는 플라스미드 A 내지 플라스미드 F가 없는 3명의 별도의 공여자로부터의 T 세포-풍부 동결 보존된 세포 생성물의 전기천공 후 제1일에 세포 생존율(도 3a), CD3 빈도(도 3b), CD19CAR 발현(도 3c), mbIL15 발현(도 3d) 및 HER1t 발현(도 3e)의 퍼센트를 보여주는 그래프이다.
도 4a 내지 도 4f는 공여자 A로부터의 dTp 대조군-변형된 T 세포에 대해 제1일 및 AaPC 자극 주기("Stim") 1, 2, 3 및 4의 종료 시에 평가된 바와 같은 이식유전자 공동 발현을 보여주는 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포의 퍼센트는 각 사분면에 나타나 있다. 구체적으로, 도 4a는 CD19CAR 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 4b는 HER1t 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 4c는 mbIL15 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 4d는 CD19CAR 발현 대 HER1t 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 4e는 CD19CAR 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 4f는 HER1t 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 4d 내지 도 4f의 흐름도는 CD3+-게이팅된 세포에서의 이식유전자 발현을 보여준다.
도 5a 내지 도 5f는 공여자 A로부터의 플라스미드 A-변형된 T 세포에 대해 제1일 및 Stim 1, 2, 3 및 4의 종료 시 평가된 바와 같은 이식유전자 공동 발현을 보여주는 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포의 퍼센트는 각 사분면에 나타나 있다. 구체적으로, 도 5a는 CD19CAR 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 5b는 HER1t 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 5c는 mbIL15 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 5d는 CD19CAR 발현 대 HER1t 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 5e는 CD19CAR 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 5f는 HER1t 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 5d 내지 도 5f의 흐름도는 CD3+-게이팅된 세포에 대한 이식유전자 발현을 보여준다.
도 6a 내지 도 6f는 공여자 A로부터의 플라스미드 B-변형된 T 세포에 대해 제1일 및 Stim 1, 2, 3 및 4의 종료 시 평가된 바와 같은 이식유전자 공동 발현을 보여주는 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포의 퍼센트는 각 사분면에 나타나 있다. 구체적으로, 도 6a는 CD19CAR 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 6b는 HER1t 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 6c는 mbIL15 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 6d는 CD19CAR 발현 대 HER1t 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 6e는 CD19CAR 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 6f는 HER1t 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 6d 내지 도 6f의 흐름도는 CD3+-게이팅된 세포에 대한 이식유전자 발현을 보여준다.
도 7a 내지 도 7f는 공여자 A로부터의 플라스미드 C-변형된 T 세포에 대해 제1일 및 Stim 1, 2, 3 및 4의 종료 시에 평가된 바와 같은 이식유전자 공동 발현을 보여주는 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포의 퍼센트는 각 사분면에 나타나 있다. 구체적으로, 도 7a는 CD19CAR 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 7b는 HER1t 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 7c는 mbIL15 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 7d는 CD19CAR 발현 대 HER1t 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 7e는 CD19CAR 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 7f는 HER1t 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 7d 내지 도 7f의 흐름도는 CD3+-게이팅된 세포에 대한 이식유전자 발현을 보여준다.
도 8a 내지 도 8f는 공여자 A로부터의 플라스미드 D-변형된 T 세포에 대해 제1일 및 Stim 1, 2, 3 및 4의 종료 시에 평가된 바와 같은 이식유전자 공동 발현을 보여주는 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포의 퍼센트는 각 사분면에 나타나 있다. 구체적으로, 도 8a는 CD19CAR 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 8b는 HER1t 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 8c는 mbIL15 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 8d는 CD19CAR 발현 대 HER1t 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 8e는 CD19CAR 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 8f는 HER1t 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 8d 내지 도 8f의 흐름도는 CD3+-게이팅된 세포에 대한 이식유전자 발현을 보여준다.
도 9a 내지 도 9f는 공여자 A로부터의 플라스미드 E-변형된 T 세포에 대해 제1일 및 Stim 1, 2, 3 및 4의 종료 시에 평가된 바와 같은 이식유전자 공동 발현을 보여주는 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포의 퍼센트는 각 사분면에 나타나 있다. 구체적으로, 도 9a는 CD19CAR 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 9b는 HER1t 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 9c는 mbIL15 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 9d는 CD19CAR 발현 대 HER1t 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 9e는 CD19CAR 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 9f는 HER1t 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 9d 내지 도 9f의 흐름도는 CD3+-게이팅된 세포에 대한 이식유전자 발현을 보여준다.
도 10a 내지 도 10f는 공여자 A로부터의 플라스미드 F-변형된 T 세포에 대해 제1일 및 Stim 1, 2, 3 및 4의 종료 시에 평가된 바와 같은 이식유전자 공동 발현을 보여주는 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포의 퍼센트는 각 사분면에 나타나 있다. 구체적으로, 도 10a는 CD19CAR 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 10b는 HER1t 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 10c는 mbIL15 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 10d는 CD19CAR 발현 대 HER1t 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 10e는 CD19CAR 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 10f는 HER1t 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 10d 내지 도 10f는 CD3+-게이팅된 세포에 대한 이식유전자 발현을 보여준다.
도 11a 내지 도 11c는 dTp 대조군 또는 플라스미드 A 내지 플라스미드 F로 형질감염된 공여자 A로부터의 CD3-풍부 T 세포에 대해 제1일 및 Stim 1, 2, 3 및 4의 종료 시 평가된 바와 같은 이식유전자 발현을 보여주는 막대 그래프이다. 막대 그래프는 CD19CAR(도 11a), mbIL15(도 11b) 및 HER1t(도 11c)의 발현(CD3+-게이팅됨)을 보여준다.
도 12a 내지 도 12c는 생체외 확장된 CD19CAR-mbIL15-CAR-T 세포로부터의 세포 용해물에서 CD19CAR(도 12a), mbIL15(도 12b) 및 HER1t(도 12c)의 발현을 확인하는 웨스턴 블롯의 이미지이다. (Z로 표지된 샘플에서) 추가적인 공여자가 표시된 경우를 제외하고, 하나의 정상적인 공여자로부터의 세포가 표시된다.
도 13a 내지 도 13c는 dTp 대조군 또는 플라스미드 A 내지 플라스미드 F로 형질감염되고 생체외 확장된 공여자 A로부터의 T 세포-풍부 출발 생성물에 대해 제1일 및 Stim 1, 2, 3 및 4의 종료 시 평가된 바와 같은 추론된 세포수를 보여주는 그래프이다. CD3-게이팅된 CD19CAR+(도 13a), mbIL15+(도 13b) 및 HER1t+(도 13c)에 대한 추론된 세포수는 시간 경과에 따라 플로팅되었다.
도 14a 내지 도 14h는 방사성 표지된(51Cr) 표적 세포의 용해를 측정함으로써 상이한 효과기 대 표적(E:T) 비의 CD19+(Daudi β2M, NALM-6 및 CD19 EL-4) 및 CD19neg(모 EL-4) 표적 세포에 대해 크로뮴 방출 검정에 의해 결정된 바와 같은 형질감염되지 않거나(음성 대조군)(도 14a) 또는 dTp 대조군(도 14b), 플라스미드 A(도 14c), 플라스미드 B(도 14d), 플라스미드 C(도 14e), 플라스미드 D(도 14f), 플라스미드 E(도 14g) 및 플라스미드 F(도 14h)로 형질감염된 생체외 확장된 CD19 특이적 T 세포의 세포독성을 보여주는 그래프이다. 여러 E:T의 3중 웰의 용해 퍼센트의 평균±표준 편차(SD)는 공여자 A로부터 유래된 세포에 대해 표시된다. 오차 막대는 SD를 나타내며, 기호로 가려질 수 있다.
도 15는 생체외 확장된 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포의 항체-의존적 세포독성(antibody-dependent cellular cytotoxicity: ADCC)을 보여주는 그래프이다. 유전적으로 변형된 T 세포는 세툭시맙(EGFR-특이적 항체) 또는 리툭시맙(CD20-특이적 항체; 음성 대조군)의 존재하에 Fc 수용체-발현 NK 세포를 효과기로서 사용하는 크로뮴 방출 검정에서 표적의 역할을 하였다. 모의 형질감염된(DNA 없음) T 세포는 음성 대조군으로 사용되었다. 40:1 E:T 비에서의 공여자 A에 대한 데이터가 나타나 있다. 막대는 최대 NK 세포 용해 퍼센트로 정규화된 유전자-변형된 T 세포의 용해 평균값을 나타낸다.
도 16은 이중-트랜스포존 대조군 또는 테스트 플라스미드(각각 dTp 대조군 또는 플라스미드 A 내지 플라스미드 F)로 형질감염된 공여자 A로부터의 생체외 확장된 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포, 모의 형질감염된 CD3(DNA가 없는 음성 대조군), CD19CAR+ Jurkat 세포(CD19CAR에 대한 양성 대조군), mbIL15+ Jurkat 세포(mbIL15에 대한 양성 대조군) 또는 CD19CAR+HER1t+ T 세포(HER1t에 대한 양성 대조군)의 이식유전자 카피 수를 보여주는 그래프이다. 카피 수는 ddPCR을 사용하여 각 샘플에 대해 5회 반복하여 평가되고, 인간 참조 유전자 EIF2C1로 정규화되었다.
도 17a 내지 도 17c는 방사선 조사된 클론 9 AaPC에서 공동 배양을 통해 생체외 확장된 dTp 대조군(도 17a), 플라스미드 A(도 17b) 및 플라스미드 D(도 17c)로 전기천공된 T 세포-풍부 생성물에 대해 제1일 및 Stim 1, 2, 3 및 4의 종료 시 평가된 바와 같은 추론된 세포수를 보여주는 그래프이다. 시간 경과에 따른 총 세포, CD3+, CD3+-게이팅된 CD19CAR+ 및 CD3+-게이팅된 HER1t+의 확장이 플로팅되었으며, 여러 실험으로부터 풀링된 여러 공여자 샘플의 평균±SD로 표시된다. 오차 막대는 SD를 나타내며, 기호로 가려질 수 있다.
도 18a 내지 도 18c는 방사선 조사된 클론 9 AaPC에서 공동 배양을 통해 생체외 확장된 dTp 대조군(도 18a), 플라스미드 A(도 18b) 및 플라스미드 D(도 18c)로 전기천공된 T 세포-풍부 생성물에 대해 전기천공 후 18-시간(제1일) 및 Stim 4 시점에 대해 플로팅된 이식유전자 하위-집단 이종성(CD19CAR+HER1tneg, CD19CAR+HER1t+, CD19CARnegHER1t+, CD19CARnegHER1tneg) 퍼센트를 보여주는 막대 그래프이다. 데이터는 여러 실험으로부터 풀링된 여러 공여자 샘플의 평균±SD로 표시된다.
도 19a 내지 도 19c는 방사성 표지된(51Cr) 표적 세포의 용해를 측정함으로써 상이한 효과기 대 표적(E:T) 비의 CD19+(Daudi β2M, NALM-6 및 CD19 EL-4) 및 CD19neg(모 EL-4) 표적 세포에 대한 크로뮴 방출 검정에 의해 결정된 바와 같은 dTp 대조군(도 19a), 플라스미드 A(도 19b) 또는 플라스미드 D(도 19c)로 형질감염된 생체외 확장된 CD19 특이적 T 세포의 세포독성을 보여주는 그래프이다. 여러 실험으로부터 풀링된 여러 공여자 샘플에 대해 평균±SD 용해 퍼센트가 표시된다. 오차 막대는 SD를 나타내며, 기호로 가려질 수 있다.
도 20은 생체외 확장된 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포의 항체-의존적 세포독성(ADCC)을 보여주는 그래프이다. 유전적으로 변형된 T 세포는 세툭시맙(EGFR-특이적 항체) 또는 리툭시맙(CD20-특이적 항체; 음성 대조군)의 존재하에 Fc 수용체-발현 NK 세포를 효과기로서 사용하는 크로뮴 방출 검정에서 표적의 역할을 한다. 40:1 E:T 비에서의 평균±SD 용해 퍼센트는 여러 실험으로부터 풀링된 여러 공여자에 대해 표시된다. 막대는 최대 NK 세포 용해 퍼센트로 정규화된 유전자-변형된 T 세포의 용해 평균값을 나타낸다.
도 21은 dTp 대조군, 플라스미드 A 또는 플라스미드 D 또는 모의 형질감염된 CD3(DNA가 없는 음성 대조군)으로 형질감염된 생체외 확장된 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포의 이식유전자 카피 수를 보여주는 그래프이다. 카피 수는 ddPCR을 사용하여 각 샘플에 대해 3회 반복하여 평가되었으며, 인간 참조 유전자 EIF2C1로 정규화되었다. 데이터는 세포당 평균±SD 이식유전자 카피로 표시되며, 여러 실험으로부터 풀링된 여러 공여자 샘플을 나타낸다.
도 22a 내지 도 22c는 실시예 4에 정의된 바와 같이 모의 PBMC, dTp 대조군(P, 5e6), 플라스미드 A(P, 5e6) 및 플라스미드 A(T, 1e6)/플라스미드 A(T, 0.5e6)에 대해 평가된 바와 같은 이식유전자 공동 발현을 보여주는 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포의 퍼센트는 각 사분면에 나타나 있다. 구체적으로, 도 22a는 CD19CAR 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 22b는 CD19CAR 발현 대 HER1t 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 22c는 HER1t 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 게이팅 전략: 림프구 > 단일체(singlet) > 생존 가능 > CD3+ 이벤트.
도 23a 내지 도 23c는 모의 PBMC, dTp 대조군(P, 5e6) 및 플라스미드 A(P, 5e6)의 생체외 확장으로부터 생성된 세포에 대해 평가된 바와 같은 이식유전자 공동 발현을 보여주는 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포의 퍼센트는 각 사분면에 나타나 있다. 구체적으로, 도 23a는 CD19CAR 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 23b는 CD19CAR 발현 대 HER1t 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 23c는 HER1t 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 게이팅 전략: 림프구 > 단일체 > 생존 가능 > CD3+ 이벤트.
도 24a 내지 도 24g는 파이어플라이 루시퍼레이스(fLUC)를 발현하는 1.5×104개의 CD19+ NALM-6 백혈병 세포를 정맥내로 주사한 후 제7일에 비처리된 상태(종양 단독; 도 24a)로 두거나 또는 모의 PBMC(도 24b), 모의 CD3(도 24c), dTp 대조군(P, 5e6)(도 24d), 플라스미드 A(P, 5e6)(도 24e), 플라스미드 A(T, 1e6)(도 24f) 또는 플라스미드 A(T, 0.5e6)(도 24g) RPM T 세포로 처리된 NOD.Cg-Prkdc scid Il2rg tm1Wjl /SzJ(NSG) 마우스에 대한 시간 경과에 따른 종양 플럭스를 보여주는 그래프이다. 시간 경과에 따른 종양 플럭스가 각 처리 그룹에 대해 제시되며, 각 선은 개별 동물을 나타낸다. 점선은 결정 무질환 마우스를 결정하기 위한 "2Х 배경" 임계값을 나타낸다.
도 25는 사망 또는 안락사 전 최종 BLI에서 개별 마우스의 종양 플럭스를 보여주는 산점도이다. 막대는 기하 평균 및 SD를 나타내며; 유의성은 일원 ANOVA(Dunnett 사후 테스트)에 의해 결정되었다. 오차 막대는 SD를 나타내며, 기호로 가려질 수 있다.
도 26a 내지 도 26c는 각 마우스 처리 그룹에 대한 전체 생존율(overall survival: OS)을 보여주는 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 생존 곡선이다. 구체적으로, 도 26a는 종양 단독 처리 그룹(그룹 A)에 대한 생존 곡선이다. 도 26b는 모의 PBMC(그룹 B), dTp 대조군(그룹 D) 및 플라스미드 A(P, 5e6)(그룹 E) 처리 그룹에 대한 생존 곡선이다. 도 26c는 모의 CD3(그룹 C), 플라스미드 A(T, 1e6)(그룹 F) 및 플라스미드 A(T, 0.5e6)(그룹 G) 처리 그룹에 대한 생존 곡선이다.
도 27a 내지 도 27c는 각 마우스 처리 그룹에 대한 xGvHD가 없는 생존율을 보여주는 카플란-마이어 생존 곡선이다. xGvHD가 없는 생존 분석은 낮은 종양 부담(즉, 1×108 p/s 미만의 총 플럭스)으로 죽은 마우스를 검열하였으며, 사망은 xGvHD에 기인할 가능성이 높다. 구체적으로, 도 27a는 종양 단독 처리 그룹(그룹 A)에 대한 생존 곡선이다. 도 27b는 모의 PBMC(그룹 B), dTp 대조군(그룹 D) 및 플라스미드 A(P, 5e6)(그룹 E) 처리 그룹에 대한 생존 곡선이다. 도 27c는 모의 CD3(그룹 C), 플라스미드 A(T, 1e6)(그룹 F) 및 플라스미드 A(T, 0.5e6)(그룹 G) 처리 그룹에 대한 생존 곡선이다.
도 28a 내지 도 28c는 각각 종양 단독(그룹 A), 모의 PBMC(그룹 B), 모의 CD3(그룹 C), dTp 대조군(그룹 D), 플라스미드 A(P, 5e6)(그룹 E), 플라스미드 A(T, 1e6)(그룹 F) 및 플라스미드 A(T, 0.5e6)(그룹 G) 처리 그룹에 대해 말초 혈액(peripheral blood: PB)(도 28a), 골수(bone marrow: BM)(도 28b) 및 비장(도 28c)에서 생존 가능 CD45+ 세포의 퍼센트로서 CD3+ 빈도를 보여주는 막대 그래프이다. 세포는 항-CD45 및 항-CD3를 포함하는 항체로 공동 염색된 후, 유세포 분석이 수행되었다. 원은 개별 마우스를 나타내고, 막대는 평균 및 범위를 나타낸다.
도 29a는 7개의 처리 그룹 각각에서 연구의 종료 시에 빈사 상태의 마우스 또는 마우스의 말초 혈액으로부터의 세포에서 CD19CAR 대 CD3의 발현을 보여주는 대표적인 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포는 항-CD3, 항-CD19CAR, 항-HER1t 및 항-IL-15를 포함하는 항체로 공동 염색된 후, 유세포 분석이 수행되었다. 흐름도는 각각의 이식유전자 빈도를 분석하기 위해 단일체, 생존 가능 hCD45+ 및 CD3+ 이벤트에 대해 게이팅되었다. 세포의 퍼센트는 각 게이트에 표시되었다. 도 29b 내지 도 29d는 모의 PBMC(그룹 B), 모의 CD3(그룹 C), dTp 대조군(그룹 D), 플라스미드 A(P, 5e6)(그룹 E), 플라스미드 A(T, 1e6)(그룹 F) 및 플라스미드 A(T, 0.5e6)(그룹 G) 처리 그룹 각각에 대한 말초 혈액(PB)(도 29b), 골수(BM)(도 29c) 및 비장(도 29d)에서의 생존 가능 CD45+CD3+ 세포의 백분율로서 CD19CAR+CD3+ 빈도를 보여주는 막대 그래프이다. 종양 단독(그룹 A) 마우스에서 CD3 생착의 부재로 인해, 이는 그룹은 제시로부터 제외되었다. 원은 개별 마우스를 나타내고, 막대는 평균 및 범위를 나타낸다. 오차 막대는 SD를 나타내며, 기호로 가려질 수 있다.
도 30은 7개의 처리 그룹 각각에서 연구의 종료 시 빈사 상태의 마우스 또는 마우스의 말초 혈액으로부터의 세포에서 CD19CAR 대 HER1t의 발현을 보여주는 대표적인 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포는 항-CD3, 항-CD19CAR, 항-HER1t 및 항-IL-15를 포함하는 항체로 공동 염색된 후, 유세포 분석이 수행되었다. 표시된 흐름도는 단일체, 생존 가능 hCD45+ 및 CD3+ 이벤트에 대해 게이팅되었다. 세포의 퍼센트는 각 사분면에 나타나 있다.
도 31은 7개의 처리 그룹 각각에서 연구의 종료 시 빈사 상태의 마우스 또는 마우스의 말초 혈액으로부터의 세포에서 HER1t 대 mbIL15의 발현을 보여주는 대표적인 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포는 항-CD3, 항-CD19CAR, 항-HER1t 및 항-IL-15를 포함하는 항체로 공동 염색된 후, 유세포 분석이 수행되었다. 표시된 흐름도는 단일체, 생존 가능 hCD45+ 및 CD3+ 이벤트에 대해 게이팅되었다. 세포의 퍼센트는 각 사분면에 나타나 있다.
도 32a 및 도 32b는 dTp 대조군(P, 5e6)(그룹 D), 플라스미드 A(P, 5e6)(그룹 E), 플라스미드 A(T, 1e6)(그룹 F) 및 플라스미드 A(T, 0.5e6)(그룹 G) 처리 그룹 각각에서 연구의 종료 시 빈사 상태의 마우스 또는 마우스의 말초 혈액으로부터의 세포에서 CD45RO 대 CCR7(도 32a) 또는 CD45RO 대 CD27(도 32b)의 발현을 보여주는 대표적인 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포는 항-CD3, 항-CD19CAR, 항-CD45RO, 항-CCR7 및 항-CD27을 포함하는 항체로 공동 염색된 후, 유세포 분석이 수행되었다. 표시된 흐름도는 단일체, 생존 가능 hCD45+ 및 CD3+CD19CAR+ 이벤트에 대해 게이팅되었다.
도 33a 및 도 33b는 각각 도 32a 및 도 32b에 나타낸 데이터를 나타내는 막대 그래프이다. 원은 개별 마우스를 나타내고, 플로팅 막대는 최소값과 최대값을 나타내며, 선은 평균을 나타낸다.
도 2는 CD19CAR, mbIL15 및 HER1t를 발현하는 CAR-T 세포를 생성하기 위해 SB11 트랜스포존/트랜스포세이즈 시스템을 사용하는 이중 전위(double transposition: dTp) 및 단일 전위(single transposition: sTp) 접근법을 도시하는 개략도이다.
도 3a 내지 도 3e는 플라스미드(음성 대조군), 플라스미드 DP1 및 DP2(dTp 대조군)의 1:1 조합 또는 플라스미드 A 내지 플라스미드 F가 없는 3명의 별도의 공여자로부터의 T 세포-풍부 동결 보존된 세포 생성물의 전기천공 후 제1일에 세포 생존율(도 3a), CD3 빈도(도 3b), CD19CAR 발현(도 3c), mbIL15 발현(도 3d) 및 HER1t 발현(도 3e)의 퍼센트를 보여주는 그래프이다.
도 4a 내지 도 4f는 공여자 A로부터의 dTp 대조군-변형된 T 세포에 대해 제1일 및 AaPC 자극 주기("Stim") 1, 2, 3 및 4의 종료 시에 평가된 바와 같은 이식유전자 공동 발현을 보여주는 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포의 퍼센트는 각 사분면에 나타나 있다. 구체적으로, 도 4a는 CD19CAR 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 4b는 HER1t 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 4c는 mbIL15 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 4d는 CD19CAR 발현 대 HER1t 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 4e는 CD19CAR 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 4f는 HER1t 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 4d 내지 도 4f의 흐름도는 CD3+-게이팅된 세포에서의 이식유전자 발현을 보여준다.
도 5a 내지 도 5f는 공여자 A로부터의 플라스미드 A-변형된 T 세포에 대해 제1일 및 Stim 1, 2, 3 및 4의 종료 시 평가된 바와 같은 이식유전자 공동 발현을 보여주는 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포의 퍼센트는 각 사분면에 나타나 있다. 구체적으로, 도 5a는 CD19CAR 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 5b는 HER1t 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 5c는 mbIL15 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 5d는 CD19CAR 발현 대 HER1t 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 5e는 CD19CAR 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 5f는 HER1t 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 5d 내지 도 5f의 흐름도는 CD3+-게이팅된 세포에 대한 이식유전자 발현을 보여준다.
도 6a 내지 도 6f는 공여자 A로부터의 플라스미드 B-변형된 T 세포에 대해 제1일 및 Stim 1, 2, 3 및 4의 종료 시 평가된 바와 같은 이식유전자 공동 발현을 보여주는 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포의 퍼센트는 각 사분면에 나타나 있다. 구체적으로, 도 6a는 CD19CAR 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 6b는 HER1t 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 6c는 mbIL15 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 6d는 CD19CAR 발현 대 HER1t 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 6e는 CD19CAR 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 6f는 HER1t 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 6d 내지 도 6f의 흐름도는 CD3+-게이팅된 세포에 대한 이식유전자 발현을 보여준다.
도 7a 내지 도 7f는 공여자 A로부터의 플라스미드 C-변형된 T 세포에 대해 제1일 및 Stim 1, 2, 3 및 4의 종료 시에 평가된 바와 같은 이식유전자 공동 발현을 보여주는 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포의 퍼센트는 각 사분면에 나타나 있다. 구체적으로, 도 7a는 CD19CAR 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 7b는 HER1t 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 7c는 mbIL15 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 7d는 CD19CAR 발현 대 HER1t 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 7e는 CD19CAR 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 7f는 HER1t 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 7d 내지 도 7f의 흐름도는 CD3+-게이팅된 세포에 대한 이식유전자 발현을 보여준다.
도 8a 내지 도 8f는 공여자 A로부터의 플라스미드 D-변형된 T 세포에 대해 제1일 및 Stim 1, 2, 3 및 4의 종료 시에 평가된 바와 같은 이식유전자 공동 발현을 보여주는 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포의 퍼센트는 각 사분면에 나타나 있다. 구체적으로, 도 8a는 CD19CAR 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 8b는 HER1t 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 8c는 mbIL15 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 8d는 CD19CAR 발현 대 HER1t 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 8e는 CD19CAR 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 8f는 HER1t 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 8d 내지 도 8f의 흐름도는 CD3+-게이팅된 세포에 대한 이식유전자 발현을 보여준다.
도 9a 내지 도 9f는 공여자 A로부터의 플라스미드 E-변형된 T 세포에 대해 제1일 및 Stim 1, 2, 3 및 4의 종료 시에 평가된 바와 같은 이식유전자 공동 발현을 보여주는 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포의 퍼센트는 각 사분면에 나타나 있다. 구체적으로, 도 9a는 CD19CAR 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 9b는 HER1t 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 9c는 mbIL15 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 9d는 CD19CAR 발현 대 HER1t 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 9e는 CD19CAR 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 9f는 HER1t 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 9d 내지 도 9f의 흐름도는 CD3+-게이팅된 세포에 대한 이식유전자 발현을 보여준다.
도 10a 내지 도 10f는 공여자 A로부터의 플라스미드 F-변형된 T 세포에 대해 제1일 및 Stim 1, 2, 3 및 4의 종료 시에 평가된 바와 같은 이식유전자 공동 발현을 보여주는 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포의 퍼센트는 각 사분면에 나타나 있다. 구체적으로, 도 10a는 CD19CAR 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 10b는 HER1t 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 10c는 mbIL15 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 10d는 CD19CAR 발현 대 HER1t 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 10e는 CD19CAR 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 10f는 HER1t 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 10d 내지 도 10f는 CD3+-게이팅된 세포에 대한 이식유전자 발현을 보여준다.
도 11a 내지 도 11c는 dTp 대조군 또는 플라스미드 A 내지 플라스미드 F로 형질감염된 공여자 A로부터의 CD3-풍부 T 세포에 대해 제1일 및 Stim 1, 2, 3 및 4의 종료 시 평가된 바와 같은 이식유전자 발현을 보여주는 막대 그래프이다. 막대 그래프는 CD19CAR(도 11a), mbIL15(도 11b) 및 HER1t(도 11c)의 발현(CD3+-게이팅됨)을 보여준다.
도 12a 내지 도 12c는 생체외 확장된 CD19CAR-mbIL15-CAR-T 세포로부터의 세포 용해물에서 CD19CAR(도 12a), mbIL15(도 12b) 및 HER1t(도 12c)의 발현을 확인하는 웨스턴 블롯의 이미지이다. (Z로 표지된 샘플에서) 추가적인 공여자가 표시된 경우를 제외하고, 하나의 정상적인 공여자로부터의 세포가 표시된다.
도 13a 내지 도 13c는 dTp 대조군 또는 플라스미드 A 내지 플라스미드 F로 형질감염되고 생체외 확장된 공여자 A로부터의 T 세포-풍부 출발 생성물에 대해 제1일 및 Stim 1, 2, 3 및 4의 종료 시 평가된 바와 같은 추론된 세포수를 보여주는 그래프이다. CD3-게이팅된 CD19CAR+(도 13a), mbIL15+(도 13b) 및 HER1t+(도 13c)에 대한 추론된 세포수는 시간 경과에 따라 플로팅되었다.
도 14a 내지 도 14h는 방사성 표지된(51Cr) 표적 세포의 용해를 측정함으로써 상이한 효과기 대 표적(E:T) 비의 CD19+(Daudi β2M, NALM-6 및 CD19 EL-4) 및 CD19neg(모 EL-4) 표적 세포에 대해 크로뮴 방출 검정에 의해 결정된 바와 같은 형질감염되지 않거나(음성 대조군)(도 14a) 또는 dTp 대조군(도 14b), 플라스미드 A(도 14c), 플라스미드 B(도 14d), 플라스미드 C(도 14e), 플라스미드 D(도 14f), 플라스미드 E(도 14g) 및 플라스미드 F(도 14h)로 형질감염된 생체외 확장된 CD19 특이적 T 세포의 세포독성을 보여주는 그래프이다. 여러 E:T의 3중 웰의 용해 퍼센트의 평균±표준 편차(SD)는 공여자 A로부터 유래된 세포에 대해 표시된다. 오차 막대는 SD를 나타내며, 기호로 가려질 수 있다.
도 15는 생체외 확장된 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포의 항체-의존적 세포독성(antibody-dependent cellular cytotoxicity: ADCC)을 보여주는 그래프이다. 유전적으로 변형된 T 세포는 세툭시맙(EGFR-특이적 항체) 또는 리툭시맙(CD20-특이적 항체; 음성 대조군)의 존재하에 Fc 수용체-발현 NK 세포를 효과기로서 사용하는 크로뮴 방출 검정에서 표적의 역할을 하였다. 모의 형질감염된(DNA 없음) T 세포는 음성 대조군으로 사용되었다. 40:1 E:T 비에서의 공여자 A에 대한 데이터가 나타나 있다. 막대는 최대 NK 세포 용해 퍼센트로 정규화된 유전자-변형된 T 세포의 용해 평균값을 나타낸다.
도 16은 이중-트랜스포존 대조군 또는 테스트 플라스미드(각각 dTp 대조군 또는 플라스미드 A 내지 플라스미드 F)로 형질감염된 공여자 A로부터의 생체외 확장된 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포, 모의 형질감염된 CD3(DNA가 없는 음성 대조군), CD19CAR+ Jurkat 세포(CD19CAR에 대한 양성 대조군), mbIL15+ Jurkat 세포(mbIL15에 대한 양성 대조군) 또는 CD19CAR+HER1t+ T 세포(HER1t에 대한 양성 대조군)의 이식유전자 카피 수를 보여주는 그래프이다. 카피 수는 ddPCR을 사용하여 각 샘플에 대해 5회 반복하여 평가되고, 인간 참조 유전자 EIF2C1로 정규화되었다.
도 17a 내지 도 17c는 방사선 조사된 클론 9 AaPC에서 공동 배양을 통해 생체외 확장된 dTp 대조군(도 17a), 플라스미드 A(도 17b) 및 플라스미드 D(도 17c)로 전기천공된 T 세포-풍부 생성물에 대해 제1일 및 Stim 1, 2, 3 및 4의 종료 시 평가된 바와 같은 추론된 세포수를 보여주는 그래프이다. 시간 경과에 따른 총 세포, CD3+, CD3+-게이팅된 CD19CAR+ 및 CD3+-게이팅된 HER1t+의 확장이 플로팅되었으며, 여러 실험으로부터 풀링된 여러 공여자 샘플의 평균±SD로 표시된다. 오차 막대는 SD를 나타내며, 기호로 가려질 수 있다.
도 18a 내지 도 18c는 방사선 조사된 클론 9 AaPC에서 공동 배양을 통해 생체외 확장된 dTp 대조군(도 18a), 플라스미드 A(도 18b) 및 플라스미드 D(도 18c)로 전기천공된 T 세포-풍부 생성물에 대해 전기천공 후 18-시간(제1일) 및 Stim 4 시점에 대해 플로팅된 이식유전자 하위-집단 이종성(CD19CAR+HER1tneg, CD19CAR+HER1t+, CD19CARnegHER1t+, CD19CARnegHER1tneg) 퍼센트를 보여주는 막대 그래프이다. 데이터는 여러 실험으로부터 풀링된 여러 공여자 샘플의 평균±SD로 표시된다.
도 19a 내지 도 19c는 방사성 표지된(51Cr) 표적 세포의 용해를 측정함으로써 상이한 효과기 대 표적(E:T) 비의 CD19+(Daudi β2M, NALM-6 및 CD19 EL-4) 및 CD19neg(모 EL-4) 표적 세포에 대한 크로뮴 방출 검정에 의해 결정된 바와 같은 dTp 대조군(도 19a), 플라스미드 A(도 19b) 또는 플라스미드 D(도 19c)로 형질감염된 생체외 확장된 CD19 특이적 T 세포의 세포독성을 보여주는 그래프이다. 여러 실험으로부터 풀링된 여러 공여자 샘플에 대해 평균±SD 용해 퍼센트가 표시된다. 오차 막대는 SD를 나타내며, 기호로 가려질 수 있다.
도 20은 생체외 확장된 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포의 항체-의존적 세포독성(ADCC)을 보여주는 그래프이다. 유전적으로 변형된 T 세포는 세툭시맙(EGFR-특이적 항체) 또는 리툭시맙(CD20-특이적 항체; 음성 대조군)의 존재하에 Fc 수용체-발현 NK 세포를 효과기로서 사용하는 크로뮴 방출 검정에서 표적의 역할을 한다. 40:1 E:T 비에서의 평균±SD 용해 퍼센트는 여러 실험으로부터 풀링된 여러 공여자에 대해 표시된다. 막대는 최대 NK 세포 용해 퍼센트로 정규화된 유전자-변형된 T 세포의 용해 평균값을 나타낸다.
도 21은 dTp 대조군, 플라스미드 A 또는 플라스미드 D 또는 모의 형질감염된 CD3(DNA가 없는 음성 대조군)으로 형질감염된 생체외 확장된 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포의 이식유전자 카피 수를 보여주는 그래프이다. 카피 수는 ddPCR을 사용하여 각 샘플에 대해 3회 반복하여 평가되었으며, 인간 참조 유전자 EIF2C1로 정규화되었다. 데이터는 세포당 평균±SD 이식유전자 카피로 표시되며, 여러 실험으로부터 풀링된 여러 공여자 샘플을 나타낸다.
도 22a 내지 도 22c는 실시예 4에 정의된 바와 같이 모의 PBMC, dTp 대조군(P, 5e6), 플라스미드 A(P, 5e6) 및 플라스미드 A(T, 1e6)/플라스미드 A(T, 0.5e6)에 대해 평가된 바와 같은 이식유전자 공동 발현을 보여주는 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포의 퍼센트는 각 사분면에 나타나 있다. 구체적으로, 도 22a는 CD19CAR 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 22b는 CD19CAR 발현 대 HER1t 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 22c는 HER1t 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 게이팅 전략: 림프구 > 단일체(singlet) > 생존 가능 > CD3+ 이벤트.
도 23a 내지 도 23c는 모의 PBMC, dTp 대조군(P, 5e6) 및 플라스미드 A(P, 5e6)의 생체외 확장으로부터 생성된 세포에 대해 평가된 바와 같은 이식유전자 공동 발현을 보여주는 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포의 퍼센트는 각 사분면에 나타나 있다. 구체적으로, 도 23a는 CD19CAR 발현 대 CD3 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 23b는 CD19CAR 발현 대 HER1t 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 도 23c는 HER1t 발현 대 mbIL15 발현을 보여주는 흐름도의 세트이다. 게이팅 전략: 림프구 > 단일체 > 생존 가능 > CD3+ 이벤트.
도 24a 내지 도 24g는 파이어플라이 루시퍼레이스(fLUC)를 발현하는 1.5×104개의 CD19+ NALM-6 백혈병 세포를 정맥내로 주사한 후 제7일에 비처리된 상태(종양 단독; 도 24a)로 두거나 또는 모의 PBMC(도 24b), 모의 CD3(도 24c), dTp 대조군(P, 5e6)(도 24d), 플라스미드 A(P, 5e6)(도 24e), 플라스미드 A(T, 1e6)(도 24f) 또는 플라스미드 A(T, 0.5e6)(도 24g) RPM T 세포로 처리된 NOD.Cg-Prkdc scid Il2rg tm1Wjl /SzJ(NSG) 마우스에 대한 시간 경과에 따른 종양 플럭스를 보여주는 그래프이다. 시간 경과에 따른 종양 플럭스가 각 처리 그룹에 대해 제시되며, 각 선은 개별 동물을 나타낸다. 점선은 결정 무질환 마우스를 결정하기 위한 "2Х 배경" 임계값을 나타낸다.
도 25는 사망 또는 안락사 전 최종 BLI에서 개별 마우스의 종양 플럭스를 보여주는 산점도이다. 막대는 기하 평균 및 SD를 나타내며; 유의성은 일원 ANOVA(Dunnett 사후 테스트)에 의해 결정되었다. 오차 막대는 SD를 나타내며, 기호로 가려질 수 있다.
도 26a 내지 도 26c는 각 마우스 처리 그룹에 대한 전체 생존율(overall survival: OS)을 보여주는 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 생존 곡선이다. 구체적으로, 도 26a는 종양 단독 처리 그룹(그룹 A)에 대한 생존 곡선이다. 도 26b는 모의 PBMC(그룹 B), dTp 대조군(그룹 D) 및 플라스미드 A(P, 5e6)(그룹 E) 처리 그룹에 대한 생존 곡선이다. 도 26c는 모의 CD3(그룹 C), 플라스미드 A(T, 1e6)(그룹 F) 및 플라스미드 A(T, 0.5e6)(그룹 G) 처리 그룹에 대한 생존 곡선이다.
도 27a 내지 도 27c는 각 마우스 처리 그룹에 대한 xGvHD가 없는 생존율을 보여주는 카플란-마이어 생존 곡선이다. xGvHD가 없는 생존 분석은 낮은 종양 부담(즉, 1×108 p/s 미만의 총 플럭스)으로 죽은 마우스를 검열하였으며, 사망은 xGvHD에 기인할 가능성이 높다. 구체적으로, 도 27a는 종양 단독 처리 그룹(그룹 A)에 대한 생존 곡선이다. 도 27b는 모의 PBMC(그룹 B), dTp 대조군(그룹 D) 및 플라스미드 A(P, 5e6)(그룹 E) 처리 그룹에 대한 생존 곡선이다. 도 27c는 모의 CD3(그룹 C), 플라스미드 A(T, 1e6)(그룹 F) 및 플라스미드 A(T, 0.5e6)(그룹 G) 처리 그룹에 대한 생존 곡선이다.
도 28a 내지 도 28c는 각각 종양 단독(그룹 A), 모의 PBMC(그룹 B), 모의 CD3(그룹 C), dTp 대조군(그룹 D), 플라스미드 A(P, 5e6)(그룹 E), 플라스미드 A(T, 1e6)(그룹 F) 및 플라스미드 A(T, 0.5e6)(그룹 G) 처리 그룹에 대해 말초 혈액(peripheral blood: PB)(도 28a), 골수(bone marrow: BM)(도 28b) 및 비장(도 28c)에서 생존 가능 CD45+ 세포의 퍼센트로서 CD3+ 빈도를 보여주는 막대 그래프이다. 세포는 항-CD45 및 항-CD3를 포함하는 항체로 공동 염색된 후, 유세포 분석이 수행되었다. 원은 개별 마우스를 나타내고, 막대는 평균 및 범위를 나타낸다.
도 29a는 7개의 처리 그룹 각각에서 연구의 종료 시에 빈사 상태의 마우스 또는 마우스의 말초 혈액으로부터의 세포에서 CD19CAR 대 CD3의 발현을 보여주는 대표적인 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포는 항-CD3, 항-CD19CAR, 항-HER1t 및 항-IL-15를 포함하는 항체로 공동 염색된 후, 유세포 분석이 수행되었다. 흐름도는 각각의 이식유전자 빈도를 분석하기 위해 단일체, 생존 가능 hCD45+ 및 CD3+ 이벤트에 대해 게이팅되었다. 세포의 퍼센트는 각 게이트에 표시되었다. 도 29b 내지 도 29d는 모의 PBMC(그룹 B), 모의 CD3(그룹 C), dTp 대조군(그룹 D), 플라스미드 A(P, 5e6)(그룹 E), 플라스미드 A(T, 1e6)(그룹 F) 및 플라스미드 A(T, 0.5e6)(그룹 G) 처리 그룹 각각에 대한 말초 혈액(PB)(도 29b), 골수(BM)(도 29c) 및 비장(도 29d)에서의 생존 가능 CD45+CD3+ 세포의 백분율로서 CD19CAR+CD3+ 빈도를 보여주는 막대 그래프이다. 종양 단독(그룹 A) 마우스에서 CD3 생착의 부재로 인해, 이는 그룹은 제시로부터 제외되었다. 원은 개별 마우스를 나타내고, 막대는 평균 및 범위를 나타낸다. 오차 막대는 SD를 나타내며, 기호로 가려질 수 있다.
도 30은 7개의 처리 그룹 각각에서 연구의 종료 시 빈사 상태의 마우스 또는 마우스의 말초 혈액으로부터의 세포에서 CD19CAR 대 HER1t의 발현을 보여주는 대표적인 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포는 항-CD3, 항-CD19CAR, 항-HER1t 및 항-IL-15를 포함하는 항체로 공동 염색된 후, 유세포 분석이 수행되었다. 표시된 흐름도는 단일체, 생존 가능 hCD45+ 및 CD3+ 이벤트에 대해 게이팅되었다. 세포의 퍼센트는 각 사분면에 나타나 있다.
도 31은 7개의 처리 그룹 각각에서 연구의 종료 시 빈사 상태의 마우스 또는 마우스의 말초 혈액으로부터의 세포에서 HER1t 대 mbIL15의 발현을 보여주는 대표적인 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포는 항-CD3, 항-CD19CAR, 항-HER1t 및 항-IL-15를 포함하는 항체로 공동 염색된 후, 유세포 분석이 수행되었다. 표시된 흐름도는 단일체, 생존 가능 hCD45+ 및 CD3+ 이벤트에 대해 게이팅되었다. 세포의 퍼센트는 각 사분면에 나타나 있다.
도 32a 및 도 32b는 dTp 대조군(P, 5e6)(그룹 D), 플라스미드 A(P, 5e6)(그룹 E), 플라스미드 A(T, 1e6)(그룹 F) 및 플라스미드 A(T, 0.5e6)(그룹 G) 처리 그룹 각각에서 연구의 종료 시 빈사 상태의 마우스 또는 마우스의 말초 혈액으로부터의 세포에서 CD45RO 대 CCR7(도 32a) 또는 CD45RO 대 CD27(도 32b)의 발현을 보여주는 대표적인 2-매개변수 흐름도의 세트이다. 세포는 항-CD3, 항-CD19CAR, 항-CD45RO, 항-CCR7 및 항-CD27을 포함하는 항체로 공동 염색된 후, 유세포 분석이 수행되었다. 표시된 흐름도는 단일체, 생존 가능 hCD45+ 및 CD3+CD19CAR+ 이벤트에 대해 게이팅되었다.
도 33a 및 도 33b는 각각 도 32a 및 도 32b에 나타낸 데이터를 나타내는 막대 그래프이다. 원은 개별 마우스를 나타내고, 플로팅 막대는 최소값과 최대값을 나타내며, 선은 평균을 나타낸다.
본 개시내용은 적어도 3개의 시스트론을 포함하는 재조합 폴리시스트로닉 핵산 벡터를 제공하되, 5'에서 3'로, 제1 시스트론은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)(예를 들어, CD19CAR)를 암호화하고, 제2 시스트론은 IL-15 및 IL-15Rα(예를 들어, mbIL15) 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체를 포함하는 융합 단백질을 암호화하며, 제3 시스트론은 마커 단백질(예를 들어, HER1t)을 암호화하고; 제1 및 제2 시스트론은 F2A 요소를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 분리되고, 제2 시스트론 및 제3 시스트론은 T2A 요소를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 분리된다. 또한, 이러한 벡터를 포함하는 면역 효과기 세포, 벡터에 의해 암호화되는 3개의 단백질을 발현시키기 위해 벡터를 이용하여 생체외 조작된 면역 효과기 세포, 이러한 벡터 또는 이러한 벡터를 이용하여 제조된 조작된 면역 효과기 세포를 포함하는 약제학적 조성물 및 이러한 벡터 또는 이러한 벡터를 이용하여 제조된 조작된 면역 효과기 세포를 사용하여 대상체를 치료하는 방법이 제공된다.
본 명세서에 기재된 폴리시스트로닉 벡터는 3개의 단백질의 발현을 위해 적어도 2개의 벡터를 이용한 선행 기술 시스템과 비교하여 실질적으로 동종인 조작된 세포(예를 들어, 면역 효과기 세포)의 집단을 제조하는 방법에 특히 유용하다. 놀랍게도, 시스트론의 5'에서 3' 순서, 즉, 5'-항-CD19 CAR-F2A 요소-IL-15/IL-15Rα 융합-T2A 요소-마커 단백질-3'는 대안적인 배향에 비해 T 세포의 표면에서 3개의 단백질 코딩 폴리뉴클레오타이드 서열, 즉, 항-CD19 CAR, IL-15/IL-15Rα 융합 및 마커 단백질의 우수한 발현을 제공한다는 점을 추가로 보여주었다.
5.1 정의
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 청구된 특허 대상이 속하는 기술 분야의 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 전술한 일반적인 설명 및 다음의 상세한 설명은 단지 예시적이고 설명을 위한 것이며 청구된 특허 대상을 제한하지 않는 것으로 이해되어야 한다. 본 출원에서, 단수의 사용은 특별히 달리 언급하지 않는 한 복수를 포함한다. 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 "단수" 형태는 문맥상 명백하게 달리 지시하지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다는 점에 유의하여야 한다. 본 출원에서, "또는"의 사용은 달리 명시되지 않는 한 "및/또는"을 의미한다. 또한, 용어 "포함하는" 뿐만 아니라 "포함하다(include)", "포함하다(includes)" 및 "포함된(included)"과 같은 다른 형태의 사용은 제한되지 않는다. 본 명세서에 사용된 부문 제목은 구성 목적으로만 사용되며, 설명된 특허 대상을 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "약" 및 "대략"은, 숫자 값 또는 숫자 범위를 수정하기 위해 사용될 때, 5% 내지 10% 이상(예를 들어, 최대 5% 내지 10% 이상) 및 5% 내지 10% 이하(예를 들어, 최대 5% 내지 10% 이하)의 값 또는 범위의 편차는 인용된 값 또는 범위의 의도된 의미 내에서 유지됨을 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "시스트론"은 이식유전자 산물이 생성될 수 있는 폴리뉴클레오타이드 서열을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "폴리시스트로닉 벡터"는 폴리시스트로닉 발현 카세트를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 벡터를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "폴리시스트로닉 발현 카세트"는 3개 이상의 이식유전자의 발현이 공통 전사 조절 요소(예를 들어, 공통 프로모터)에 의해 조절되고 동일한 mRNA로부터의 3개 이상의 개별 단백질을 동시에 발현할 수 있는 폴리뉴클레오타이드 서열을 지칭한다. 예시적인 폴리시스트로닉 벡터는 제한 없이 트라이시스트로닉 벡터(3개의 시스트론 포함) 및 테트라시스트로닉 벡터(4개의 시스트론 포함)를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "전사 조절 요소"는 또 다른 폴리뉴클레오타이드 서열의 전사 조절을 매개하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 지칭한다. 예시적인 전사 조절 요소는 프로모터 및 인핸서를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "F2A 요소"는 (i) 서열번호 141 또는 142의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나; (ii) 서열번호 137 또는 138의 아미노산 서열을 암호화하거나; 또는 (iii) 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 137 또는 138의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 제1 단백질을 암호화하는 제1 폴리뉴클레오타이드 서열과 제2 단백질을 암호화하는 제2 폴리뉴클레오타이드 서열 사이의 벡터에 위치할 때, F2A 요소는, 예를 들어, 끝에서 두 번째의 잔기(예를 들어, 글리신)가 제1 단백질의 C-말단 잔기가 되고 마지막 잔기(예를 들어, 프롤린)가 제2 단백질의 N-말단 잔기가 되도록, 예를 들어, F2A 요소의 번역 산물의 C 말단에 있는 끝에서 두 번째의 잔기(예를 들어, 글리신)와 마지막 잔기(예를 들어, 프롤린) 사이의 펩타이드 결합의 합성을 방지함으로써 동일한 mRNA 분자로부터의 2개의 별개의 폴리펩타이드로서 제1 폴리뉴클레오타이드 서열 및 제2 폴리뉴클레오타이드 서열의 번역을 매개할 수 있다. 일부 실시형태에서, F2A 요소는 이의 5' 말단에 퓨린(furin) 절단 부위를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열, 예를 들어, RAKR(서열번호 187)를 추가적으로 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "T2A 요소"는 (i) 서열번호 143, 144, 145 또는 165의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나; (ii) 서열번호 139, 140 또는 182의 아미노산 서열을 암호화하거나; 또는 (iii) 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 139, 140 또는 182의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 제1 단백질을 암호화하는 제1 폴리뉴클레오타이드 서열과 제2 단백질을 암호화하는 제2 폴리뉴클레오타이드 서열 사이의 벡터에 위치할 때, T2A 요소는, 예를 들어, 끝에서 두 번째의 잔기(예를 들어, 글리신)가 제1 단백질의 C-말단 잔기가 되고 마지막 잔기(예를 들어, 프롤린)가 제2 단백질의 N-말단 잔기가 되도록, 예를 들어, T2A 요소의 번역 산물의 C 말단에 있는 끝에서 두 번째의 잔기(예를 들어, 글리신)와 마지막 잔기(예를 들어, 프롤린) 사이의 펩타이드 결합의 합성을 방지함으로써 동일한 mRNA 분자로부터의 2개의 별개의 폴리펩타이드로서 제1 폴리뉴클레오타이드 서열 및 제2 폴리뉴클레오타이드 서열의 번역을 매개할 수 있다. 일부 실시형태에서, T2A 요소는 이의 5' 말단에 퓨린 절단 부위를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열, 예를 들어, RAKR(서열번호 187)를 추가적으로 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "역 말단 반복", "ITR", "역 반복/직접 반복" 및 "IR/DR"은 상호교환적으로 사용되며, 예를 들어, 발현 카세트(예를 들어, 폴리시스트로닉 발현 카세트)의 반대쪽 말단의 측면에 있는(예를 들어, 개재 폴리뉴클레오타이드 서열이 있거나 또는 없이) 약 230개의 뉴클레오타이드(예를 들어, 220개, 221개, 222개, 223개, 224개, 225개, 226개, 227개, 228개, 229개, 230개, 231개, 232개, 233개, 234개, 235개, 236개, 237개, 238개, 239개 또는 240개의 뉴클레오타이드)의, 예를 들어, 역-상보적(예를 들어, 완전하게 또는 불완전하게 역-상보적) 폴리뉴클레오타이드 서열과 조합하여 사용될 때 트랜스포세이즈 폴리펩타이드에 의해 절단될 수 있는 발현 카세트(예를 들어, 폴리시스트로닉 발현 카세트)의 하나의 말단 측면에 있는(예를 들어, 개재 폴리뉴클레오타이드 서열이 있거나 또는 없이), 예를 들어, 약 230개의 뉴클레오타이드(예를 들어, 220개, 221개, 222개, 223개, 224개, 225개, 226개, 227개, 228개, 229개, 230개, 231개, 232개, 233개, 234개, 235개, 236개, 237개, 238개, 239개 또는 240개의 뉴클레오타이드)의 폴리뉴클레오타이드 서열을 지칭한다(예를 들어, 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Cui et al., J. Mol. Biol. 2002;318(5):1221-35]에 기재된 바와 같음). 일부 실시형태에서, ITR, 예를 들어, DNA 트랜스포존(예를 들어, 슬리핑 뷰티 트랜스포존, piggyBac 트랜스포존, TcBuster 트랜스포존 및 Tol2 트랜스포존)의 ITR은 2개의 직접 반복("DR"), 예를 들어, ITR의 각 말단에 위치한 약 30개의 뉴클레오타이드(예를 들어, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개, 30개, 31개, 32개, 33개, 34개 또는 35개의 뉴클레오타이드)의, 예를 들어, 불완전 직접 반복을 포함한다. 용어 "ITR" 및 "DR"은 단일-가닥 또는 이중-가닥DNA 벡터와 관련하여 사용될 때 센스 가닥의 DNA 서열을 지칭한다. 트랜스포세이즈 폴리펩타이드는 DNA의 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥을 인식할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "좌측 ITR"은 선형 단일-가닥 또는 이중-가닥 DNA 벡터와 관련하여 사용될 때 폴리시스트로닉 발현 카세트의 5'에 위치한 ITR을 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "우측 ITR"은 선형 단일-가닥 또는 이중-가닥 DNA 벡터와 관련하여 사용될 때 폴리시스트로닉 발현 카세트의 3'에 위치한 ITR을 지칭한다. 원형 벡터가 사용될 때, 좌측 ITR은 우측 ITR보다 폴리시스트로닉 발현 카세트의 5' 말단에 더 가깝고, 우측 ITR은 좌측 ITR보다 폴리시스트로닉 발현 카세트의 3' 말단에 더 가깝다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "작동 가능하게 연결된"은 기능적 관계에서 폴리뉴클레오타이드 서열 요소 또는 아미노산 서열 요소의 연결을 지칭한다. 예를 들어, 폴리뉴클레오타이드 서열은 또 다른 폴리뉴클레오타이드 서열과 기능적 관계로 배치될 때 작동 가능하게 연결된다. 일부 실시형태에서, 전사 조절 폴리뉴클레오타이드 서열, 예를 들어, 프로모터, 인핸서 또는 다른 발현 대조군 요소는 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열의 전사에 영향을 미치는 경우 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 작동 가능하게 연결된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "폴리뉴클레오타이드"는 DNA 또는 RNA의 중합체를 지칭한다. 폴리뉴클레오타이드 서열은 단일-가닥 또는 이중-가닥일 수 있으며; 천연, 비천연 또는 변경된 뉴클레오타이드를 포함하고; 비변형된 폴리뉴클레오타이드 서열의 뉴클레오타이드 사이에서 발견되는 포스포다이에스터 대신 포스포로아미데이트 연결 또는 포스포로티오에이트 연결과 같은 천연, 비천연 또는 변경된 뉴클레오타이드간 연결을 포함한다. 폴리뉴클레오타이드 서열은 제한 없이 재조합 수단, 예를 들어, 일반적인 클로닝 기술 및 폴리머레이스 연쇄 반응을 사용한 재조합 라이브러리 또는 세포 게놈으로부터의 폴리뉴클레오타이드 서열의 클로닝 등을 포함하는 당업계에서 이용 가능한 임의의 수단 및 합성 수단에 의해 수득되는 모든 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본 명세서에서 상호교환적으로 사용되는 용어 "아미노산 서열" 및 "폴리펩타이드"는 하나 이상의 펩타이드 결합에 의해 연결된 아미노산의 중합체를 지칭한다.
단백질 또는 폴리펩타이드와 관련하여 본 명세서에서 사용되는 용어 "기능적 변이체"는 적어도 하나의 특정 기능을 유지하는 참조 단백질의 아미노산 서열과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 변형(예를 들어, 치환, 결실, 추가)을 포함하는 단백질을 지칭한다. 일부 실시형태에서, 참조 단백질은 야생형 단백질이다. 예를 들어, IL-2 단백질의 기능적 변이체는 중간 친화성 IL-2 수용체에 결합하는 능력을 유지하지만 고친화성 IL-2 수용체에 결합하는 단백질의 능력을 없애는 야생형 IL-2 단백질과 비교하여 아미노산 치환을 포함하는 IL-2 단백질을 지칭할 수 있다. 참조 야생형 단백질의 모든 기능이 단백질의 기능적 변이체에 의해 유지될 필요는 없다. 일부 예에서, 하나 이상의 기능이 선택적으로 감소되거나 또는 제거된다.
단백질 또는 폴리펩타이드와 관련하여 본 명세서에서 사용되는 용어 "기능적 단편"은 적어도 하나의 특정 기능을 유지하는 참조 단백질의 단편을 지칭한다. 예를 들어, 항-HER2 항체의 기능적 단편은 HER2 항체에 특이적으로 결합하는 능력을 유지하는 항-HER2 항체의 단편을 지칭할 수 있다. 참조 단백질의 모든 기능이 단백질의 기능적 단편에 의해 유지될 필요는 없다. 일부 예에서, 하나 이상의 기능이 선택적으로 감소되거나 또는 제거된다.
폴리뉴클레오타이드 서열과 관련하여 본 명세서에서 사용되는 용어 "변형"은 참조 폴리뉴클레오타이드 서열과 비교하여 뉴클레오타이드의 적어도 하나의 치환, 변경, 역위, 추가 또는 결실을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 지칭한다. 아미노산 서열과 관련하여 본 명세서에서 사용되는 용어 "변형"은 참조 아미노산 서열과 비교하여 아미노산 잔기의 적어도 하나의 치환, 변경, 역위, 추가 또는 결실을 포함하는 아미노산 서열을 지칭한다.
폴리뉴클레오타이드 서열과 관련하여 본 명세서에서 사용되는 용어 "약 로부터 유래된"은 그것이 유래된 참조 자연 발생적 핵산 서열과 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 폴리뉴클레오타이드 서열을 지칭한다. 아미노산 서열과 관련하여 용어 "약 로부터 유래된"은 그것이 유래된 참조 자연 발생적 아미노산 서열과 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "약 로부터 유래된"은 폴리뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열을 얻기 위한 임의의 특정 과정 또는 방법을 나타내지 않는다. 예를 들어, 폴리뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열은 화학적으로 합성될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "항체" 및 "항체들"은 전장 항체, 전장 항체의 항원-결합 단편 및 항체 CDR, VH 영역 및/또는 VL 영역을 포함하는 분자를 포함한다. 항체의 예는 제한 없이 단일클론 항체, 재조합적으로 생산된 항체, 단일특이성 항체, 다중특이성 항체(이중특이성 항체 포함), 인간 항체, 인간화된 항체, 키메라 항체, 면역글로불린, 합성 항체, 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄 분자를 포함하는 4량체 항체, 항체 경쇄 단량체, 항체 중쇄 단량체, 항체 경쇄 이량체, 항체 중쇄 이량체, 항체 경쇄-항체 중쇄 쌍, 인트라바디, 이형접합체 항체, 항체-약물 접합체, 단일 도메인 항체, 1가 항체, 단일쇄 항체 또는 단일쇄 Fv(scFv), 낙타화된 항체, 어피바디, Fab 단편, F(ab')2 단편, 이황화-연결된 Fv(sdFv), 항-이디오타입(항-Id) 항체(예를 들어, 항-항-Id 항체 포함) 및 상기 임의의 것의 항원-결합 단편 및 상기 임의의 것을 포함하는 접합체 또는 융합 단백질을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 다중클론 항체 집단을 지칭한다. 항체는 면역글로불린 분자의 임의의 유형(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY), 임의의 클래스(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 또는 IgA2) 또는 임의의 하위클래스(예를 들어, IgG2a 또는 IgG2b)일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 IgG 항체 또는 이의 클래스(예를 들어, 인간 IgG1 또는 IgG4) 또는 하위클래스이다. 특정 실시형태에서, 항체는 인간화된 단일클론 항체이다. 또 다른 특정 실시형태에서, 항체는 인간 단일클론 항체이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "VH 영역" 및 "VL 영역"은 각각 FR(프레임워크 영역) 1, 2, 3 및 4 및 CDR(상보성 결정 영역) 1, 2 및 3을 포함하는 단일 항체 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 지칭한다(전체가 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Kabat et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest (NIH Publication No. 91-3242, Bethesda)] 참조).
본 명세서에서 사용되는 용어 "CDR" 또는 "상보성 결정 영역"은 중쇄 및 경쇄 폴리펩타이드 둘 다의 가변 영역 내에서 발견되는 비연속 항원 결합 부위를 의미한다. 이러한 특정 영역은 모두 전체가 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Kabat et al., J. Biol. Chem. 252, 6609-6616 (1977) 및 Kabat et al., Sequences of protein of immunological interest. (1991)]에 기술되어 있다. 달리 명시되지 않는 한, 용어 "CDR"은 문헌[Kabat et al., J. Biol. Chem. 252, 6609-6616 (1977) 및 Kabat et al., Sequences of protein of immunological interest. (1991)]에 의해 정의된 바와 같은 CDR이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "프레임워크(framework: FR) 아미노산 잔기"는 항체 가변 영역의 프레임워크 영역에 있는 아미노산을 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "프레임워크 영역" 또는 "FR 영역"은 (예를 들어, CDR의 Kabat 정의를 사용하여) 가변 영역의 일부이지만 CDR의 일부가 아닌 아미노산 잔기를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "가변 영역"은 항체의 일부, 일반적으로 경쇄 또는 중쇄의 일부, 전형적으로 성숙한 중쇄에서 약 아미노-말단 110개 내지 120개의 아미노산 또는 110개 내지 125개의 아미노산 및 성숙한 경쇄에서 약 90개 내지 115개의 아미노산을 지칭하며, 이는 항체 사이에서 광범위하게 서열이 다르며 특정 항원에 대한 특정 항체의 결합 및 특이성에 사용된다. 서열의 가변성은 상보성 결정 영역(CDR)이라고 하는 영역에 집중되어 있는 반면, 가변 도메인에서 보다 고도로 보존된 영역은 프레임워크 영역(FR)이라고 한다. 임의의 특정 메커니즘 또는 이론에 얽매이지 않고, 경쇄 및 중쇄의 CDR은 항원과 항체의 상호작용 및 특이성을 주로 담당하는 것으로 여겨진다. 소정의 실시형태에서, 가변 영역은 인간 가변 영역이다. 소정의 실시형태에서, 가변 영역은 설치류 또는 뮤린 CDR 및 인간 프레임워크 영역(FR)을 포함한다. 특정 실시형태에서, 가변 영역은 영장류(예를 들어, 비인간 영장류) 가변 영역이다. 소정의 실시형태에서, 가변 영역은 설치류 또는 뮤린 CDR 및 영장류(예를 들어, 비인간 영장류) 프레임워크 영역(FR)을 포함한다.
용어 "VL" 및 "VL 도메인"은 항체의 경쇄 가변 영역을 지칭하기 위해 상호교환적으로 사용된다.
용어 "VH" 및 "VH 도메인"은 항체의 중쇄 가변 영역을 지칭하기 위해 상호교환적으로 사용된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "불변 영역" 및 "불변 도메인"은 상호교환적으로 사용되며, 당업계에서 일반적이다. 불변 영역은 항체 부분, 예를 들어, 항원에 대한 항체의 결합에 직접 관여하지 않지만 Fc 수용체(예를 들어, Fc 감마 수용체)와의 상호작용과 같은 다양한 효과기 기능을 나타낼 수 있는 경쇄 및/또는 중쇄의 카복실 말단 부분이다. 면역글로불린 분자의 불변 영역은 일반적으로 면역글로불린 가변 도메인에 비해 더 보존된 아미노산 서열을 갖는다.
항체와 관하여 사용될 때 본 명세서에서 사용되는 용어 "중쇄"는 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 임의의 별개의 유형, 예를 들어, 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ) 및 뮤(μ)를 지칭할 수 있으며, 이는 IgG의 하위클래스, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하여 각각 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 클래스의 항체를 생성한다.
항체와 관하여 사용될 때 본 명세서에서 사용되는 용어 "경쇄"는 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 임의의 별개의 유형, 예를 들어, 카파(κ) 또는 람다(λ)를 지칭할 수 있다. 경쇄 아미노산 서열은 당업계에 잘 알려져 있다. 특정 실시형태에서, 경쇄는 인간 경쇄이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "EU 넘버링 시스템"은 각각 전체가 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Edelman, G.M. et al., Proc. Natl. Acad. USA, 63, 78-85 (1969) 및 Kabat et al, Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Dept. Health and Human Services, 5th edition, 1991]에 기술되어 있는 바와 같은 항체의 불변 영역에 대한 EU 넘버링 규칙을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "특이적으로 결합한다"는 결합이 당업자에 의해 이해되는 바와 같이 항원(예를 들어, 에피토프 또는 면역 복합체)에 결합하는 분자를 지칭한다. 예를 들어, 항원에 특이적으로 결합하는 분자는 일반적으로, 예를 들어, 면역검정, BIAcore®, KinExA 3000 기기(사피다인 인스트루먼츠, 아이다호주 보이시 소재) 또는 당업계에 공지된 다른 검정에 의해 결정되는 바와 같이 더 낮은 친화도로 다른 펩타이드 또는 폴리펩타이드에 결합할 수 있다. 특정 실시형태에서, 항원에 특이적으로 결합하는 분자는 분자가 또 다른 항원에 비특이적으로 결합할 때 KA보다 적어도 2로그(예를 들어, 10의 인수), 2.5로그, 3로그, 4로그 이상인 KA로 항원에 결합한다. 당업자라면 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체가 (예를 들어, 항체 분자의 상이한 영역을 통해) 하나 초과의 항원에 특이적으로 결합할 수 있음을 이해할 것이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "약에 연결된"은 2개의 분자 또는 모이어티 사이의 공유 또는 비공유 결합을 지칭한다. 당업자라면 제1 분자 또는 모이어티가 제2 분자 또는 모이어티에 연결될 때, 연결이 직접적일 필요는 없으나, 대신 개재 분자 또는 모이어티를 통해 이루어질 수 있음을 이해할 것이다. 예를 들어, 전장 항체의 중쇄 가변 영역이 리간드-결합 모이어티에 연결될 때, 리간드-결합 모이어티는 중쇄 가변 영역에 직접 결합하는 대신 (예를 들어, 펩타이드 결합을 통해) 전장 항체의 불변 영역(예를 들어, 중쇄 불변 영역)에 결합할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "키메라 항원 수용체" 또는 "CAR"은 적어도 하나의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 세포질 도메인에 작동 가능하게 연결된 막횡단 도메인에 작동 가능하게 연결된 항원-결합 도메인을 포함하는 막횡단 단백질을 지칭한다. CAR은 생체내에서 표적 항원에 결합할 때 활성화를 매개하기 위해 숙주 세포(예를 들어, 면역 효과기 세포)의 표면에서 발현될 수 있다. 일부 실시형태에서, CAR은 CD19에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, CAR은 인간 CD19(hCD19)에 특이적으로 결합한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "CD19"(B 림프구 항원 CD19, 분화 클러스터 19 및 B 림프구 표면 항원 B4로도 알려져 있음)는 인간에서 CD19 유전자에 의해 암호화된 단백질을 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "인간 CD19" 또는 hCD19는 인간 CD19 유전자(예를 들어, 야생형 인간 CD19 유전자)에 의해 암호화된 CD19 단백질을 지칭한다. 예시적인 야생형 인간 CD19 단백질은 GenBank™ 등록 번호 AAB60697.1, AAA69966.1 및 BAB60954.1에 의해 제공된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "세포외"는 세포 외부에 위치한 막횡단 단백질의 부분 또는 부분들을 지칭한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 단백질은 재조합 막횡단 단백질이다. 일부 실시형태에서, 재조합 막횡단 단백질은 CAR이다.
CAR과 관련하여 본 명세서에서 사용되는 용어 "항원-결합 도메인"은 항원에 특이적으로 결합하는 임의의 적합한 항체-기반 또는 비항체-기반 분자를 포함하는 CAR의 도메인을 지칭한다. 일부 실시형태에서, 항원은 세포의 표면에서 발현된다. 일부 실시형태에서, 항원은 CD19이다. 일부 실시형태에서, 항원은 hCD19이다. 일부 실시형태에서, 항체-기반 분자는 단일쇄 가변 단편(scFv)을 포함한다.
CAR과 관련하여 본 명세서에서 사용되는 용어 "세포외 항원-결합 도메인"은 세포의 외부에 위치한 항원-결합 도메인을 지칭한다. 일부 실시형태에서, 항원-결합 도메인은 적어도 하나의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 세포질 도메인에 작동 가능하게 연결된 막횡단 도메인에 작동 가능하게 연결되고, 항원-결합 도메인은 CAR이 세포에서 발현되는 세포 외부에 위치하도록 배향된다.
CAR과 관련하여 본 명세서에서 사용되는 용어 "막횡단 도메인"은 CAR이 세포에서 발현될 때 세포의 원형질막에 매립된 CAR의 부분 또는 부분들을 지칭한다.
CAR과 관련하여 본 명세서에서 사용되는 용어 "세포질 도메인"은 CAR이 세포에서 발현될 때 세포의 세포질에 위치한 CAR의 부분 또는 부분들을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "세포내 신호전달 도메인"은 1차 신호전달 도메인 및/또는 공동 자극 도메인을 포함하는 CAR의 세포질 도메인의 일부를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "1차 신호전달 도메인"은 세포내 신호전달 이벤트를 매개하는 역할을 하는 신호전달 분자의 세포내 부분을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "공동 자극 도메인"은 세포내 신호전달 이벤트를 매개하는 역할을 하는 공동 자극 분자의 세포내 부분을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "사이토카인"은 생물학적 또는 세포 기능 또는 과정(예를 들어, 면역, 염증 및 조혈)을 매개하고/하거나 조절하는 분자를 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 사이토카인은 림포카인, 케모카인, 모노카인 및 인터류킨을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 본 명세서에서 사용되는 용어 사이토카인은 또한 기능적 변이체 및 야생형 사이토카인의 기능적 변이체를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "마커" 단백질 또는 폴리펩타이드는 마커 단백질 또는 폴리펩타이드를 발현하는 세포를 표시하거나 또는 고갈시키는 데 사용될 수 있는 세포 표면에서 발현될 수 있는 단백질 또는 폴리펩타이드를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질 또는 폴리펩타이드를 발현하는 세포의 고갈은 마커 단백질 또는 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는 분자(예를 들어, 항체 매개성 세포독성을 매개하는 항체)의 투여를 통해 수행된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "면역 효과기 세포"는 면역 효과기 기능의 촉진에 관여하는 세포를 지칭한다. 면역 효과기 세포의 예는 T 세포(예를 들어, 알파/베타 T 세포 및 감마/델타 T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 자연 살해 T(NK-T) 세포), 자연 살해(NK) 세포, B 세포, 비만 세포 및 골수-유래 식세포를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "면역 효과기 기능"은 면역 효과기 세포의 특화된 기능을 지칭한다. 임의의 주어진 면역 효과기 세포의 효과기 기능은 상이할 수 있다. 예를 들어, CD8+ T 세포의 효과기 기능은 세포용해 활성이고, CD4+ T 세포의 효과기 기능은 사이토카인의 분비이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 본 명세서에 기재된 치료적 또는 예방적 조치를 지칭한다. "치료" 방법은 폴리시스트로닉 발현 카세트를 포함하는 재조합 벡터를 세포에 투여하는 것, 일부 실시형태에서, 질환 또는 장애 또는 재발성 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상의 예방, 치유, 지연, 중증도의 감소 또는 개선을 위해 또는 이러한 치료가 없을 때 예상되는 것 이상으로 대상체의 생존을 연장시키기 위해 조작된 세포를 질환 또는 장애가 있거나 또는 이러한 질환 또는 장애를 가질 소인이 있는 대상체에게 투여하는 것을 사용한다.
대상체에 대한 요법의 투여의 맥락에서 본 명세서에서 사용되는 용어 "유효량"은 목적하는 예방적 또는 치료적 효과를 달성하는 요법의 양을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "대상체"는 임의의 인간 또는 비인간 동물을 포함한다. 일 실시형태에서, 대상체는 인간 또는 비인간 포유동물이다. 일 실시형태에서, 대상체는 인간이다.
두 서열(예를 들어, 아미노산 서열 또는 핵산 서열) 사이의 "동일성 퍼센트"의 결정은 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다. 두 서열의 비교에 이용되는 수학적 알고리즘의 특정하고 비제한적인 예는 각각 전체가 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Karlin S & Altschul SF (1993) PNAS 90: 5873-5877]에서와 같이 수정된 문헌[Karlin S & Altschul SF (1990) PNAS 87: 2264-2268]의 알고리즘이다. 이러한 알고리즘은 전체가 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Altschul SF et al., (1990) J Mol Biol 215: 403]의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램에 통합되어 있다. BLAST 뉴클레오타이드 검색은 NBLAST 뉴클레오타이드 프로그램 매개변수 세트, 예를 들어, 점수=100, 워드길이=12로 수행되어 본 명세서에 기재된 핵산 분자와 상동성인 뉴클레오타이드 서열을 얻을 수 있다. BLAST 단백질 검색은 XBLAST 프로그램 매개변수 세트, 예를 들어, 점수 50, 워드길이=3으로 수행되어 본 명세서에 기재된 단백질 분자와 상동성인 아미노산 서열을 얻을 수 있다. 비교 목적을 위한 갭 정렬을 얻기 위해, 갭 BLAST는 전체가 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Altschul SF et al., (1997) Nuc Acids Res 25: 3389-3402]에 기술된 바와 같이 이용될 수 있다. 대안적으로, PSI BLAST는 분자 사이의 원거리 관계를 검출하는 반복 검색을 수행하는 데 사용될 수 있다(Id). BLAST, 갭 BLAST 및 PSI Blast 프로그램을 이용할 때, 각 프로그램(예를 들어, XBLAST 및 NBLAST)의 기본 매개변수가 사용될 수 있다(예를 들어, 월드와이드 웹 ncbi.nlm.nih.gov의 미국 국립생물 공학정보센터(National Center for Biotechnology Information: NCBI) 참조). 서열의 비교에 이용되는 수학적 알고리즘의 또 다른 특정한 비제한적인 예는 전체가 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Myers and Miller, 1988, CABIOS 4:11-17]의 알고리즘이다. 이러한 알고리즘은 GCG 서열 정렬 소프트웨어 패키지의 일부인 ALIGN 프로그램(버전 2.0)에 통합되어 있다. 아미노산 서열을 비교하기 위해 ALIGN 프로그램을 이용하는 경우, PAM120 가중치 잔기 표(weight residue table), 갭 길이 패널티 12 및 갭 패널티 4가 사용될 수 있다.
두 서열 사이의 동일성 퍼센트는 갭을 허용하거나 또는 허용하지 않고 위에 기재된 것과 유사한 기법을 사용하여 결정될 수 있다. 동일성 퍼센트를 계산할 때, 전형적으로 정확히 일치하는 항목만 계산된다.
5.2 키메라 항원 수용체(CAR)
CAR은 적어도 하나의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 세포질 도메인에 작동 가능하게 연결된 막횡단 도메인에 작동 가능하게 연결된 항원-결합 도메인을 포함하는 막횡단 단백질이다. CAR은 생체내에서 표적 항원에 결합 시 활성화를 매개하기 위해 숙주 세포(예를 들어, 면역 효과기 세포)의 표면에서 발현될 수 있다. 일부 실시형태에서, CAR은 CD19에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, CAR은 인간 CD19(hCD19)에 특이적으로 결합한다.
5.2.1 hCD19 결합 도메인
hCD19 결합 도메인은 세포의 표면에서 발현된 hCD19에 특이적으로 결합하는 임의의 적합한 항체 또는 비항체-기반 분자를 포함한다. 예시적인 hCD19 결합 도메인은 항체 및 이의 기능적 단편 및 기능적 변이체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인은 단일쇄 가변 단편(scFv), Fab, F(ab')2, Fv, 전장 항체, 다이어바디 또는 애드넥틴을 포함한다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인은 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인은 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인은 펩타이드 링커를 통해 작동 가능하게 연결된 VH 및 VL을 포함한다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 글리신(G) 및 세린(S)을 포함한다.
일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 서열번호 9의 아미노산 서열 또는 서열번호 9의 아미노산 서열에 대해 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커의 아미노산 서열은 서열번호 9의 아미노산 서열 또는 서열번호 9의 아미노산 서열에 대해 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 변형을 포함하는 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 서열번호 17의 아미노산 서열 또는 서열번호 17의 아미노산 서열에 대해 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커의 아미노산 서열은 서열번호 17의 아미노산 서열 또는 서열번호 17의 아미노산 서열에 대해 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 변형을 포함하는 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 링커는 서열번호 27의 폴리뉴클레오타이드와 적어도 75%, 80%, 85%, 90% 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 링커는 서열번호 27의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 링커는 서열번호 35의 폴리뉴클레오타이드와 적어도 75%, 80%, 85%, 90% 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 링커는 서열번호 35의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, VH는 3개의 상보성 결정 영역(CDR): VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3을 포함한다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 2에 제시된 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3을 포함한다. 일부 실시형태에서, VH CDR1의 아미노산 서열은 서열번호 6의 아미노산 서열 또는 서열번호 6의 아미노산 서열에 대해 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고; VH CDR2의 아미노산 서열은 서열번호 7의 아미노산 서열 또는 서열번호 7의 아미노산 서열에 대해 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하며; VH CDR3의 아미노산 서열은 서열번호 8의 아미노산 서열 또는 서열번호 8의 아미노산 서열에 대해 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, VH CDR1의 아미노산 서열은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하고; VH CDR2의 아미노산 서열은 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하며; VH CDR3의 아미노산 서열은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, VH CDR1의 아미노산 서열은 서열번호 6의 아미노산 서열로 구성되고; VH CDR2의 아미노산 서열은 서열번호 7의 아미노산 서열로 구성되며; VH CDR3의 아미노산 서열은 서열번호 8의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, VL은 3개의 CDR: VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3을 포함한다. 일부 실시형태에서, VL은 서열번호 1의 VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3을 포함한다. 일부 실시형태에서, VL CDR1의 아미노산 서열은 서열번호 3의 아미노산 서열 또는 서열번호 3의 아미노산 서열에 대해 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고; VL CDR2의 아미노산 서열은 서열번호 4의 아미노산 서열 또는 서열번호 4의 아미노산 서열에 대해 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하며; VL CDR3의 아미노산 서열은 서열번호 5의 아미노산 서열 또는 서열번호 5의 아미노산 서열에 대해 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, VL CDR1의 아미노산 서열은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고; VL CDR2의 아미노산 서열은 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하며; VL CDR3의 아미노산 서열은 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, VL CDR1의 아미노산 서열은 서열번호 3의 아미노산 서열로 구성되고; VL CDR2의 아미노산 서열은 서열번호 4의 아미노산 서열로 구성되며; VL CDR3의 아미노산 서열은 서열번호 5의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, VH는 서열번호 2의 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3을 포함하고; VL은 서열번호 1의 VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3을 포함한다. 일부 실시형태에서, VH CDR1의 아미노산 서열은 서열번호 6의 아미노산 서열 또는 서열번호 6의 아미노산 서열에 대해 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고; VH CDR2의 아미노산 서열은 서열번호 7의 아미노산 서열 또는 서열번호 7의 아미노산 서열에 대해 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하며; VH CDR3의 아미노산 서열은 서열번호 8의 아미노산 서열 또는 서열번호 8의 아미노산 서열에 대해 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고; VL CDR1의 아미노산 서열은 서열번호 3의 아미노산 서열 또는 서열번호 3의 아미노산 서열에 대해 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하며; VL CDR2의 아미노산 서열은 서열번호 4의 아미노산 서열 또는 서열번호 4의 아미노산 서열에 대해 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고; VL CDR3의 아미노산 서열은 서열번호 5의 아미노산 서열 또는 서열번호 5의 아미노산 서열에 대해 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, VH CDR1의 아미노산 서열은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하고; VH CDR2의 아미노산 서열은 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하며; VH CDR3의 아미노산 서열은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하고; VL CDR1의 아미노산 서열은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고; VL CDR2의 아미노산 서열은 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하며; VL CDR3의 아미노산 서열은 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, VH CDR1의 아미노산 서열은 서열번호 6의 아미노산 서열로 구성되고; VH CDR2의 아미노산 서열은 서열번호 7의 아미노산 서열로 구성되며; VH CDR3의 아미노산 서열은 서열번호 8의 아미노산 서열로 구성되고; VL CDR1의 아미노산 서열은 서열번호 3의 아미노산 서열로 구성되고; VL CDR2의 아미노산 서열은 서열번호 4의 아미노산 서열로 구성되며; VL CDR3의 아미노산 서열은 서열번호 5의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, VH는 서열번호 2의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, VH의 아미노산 서열은 서열번호 2의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, VH의 아미노산 서열은 서열번호 2의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, VL은 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, VL은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, VL의 아미노산 서열은 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, VL의 아미노산 서열은 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, VH는 서열번호 2의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; VL은 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하고; VL은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, VH의 아미노산 서열은 서열번호 2의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성되고; VL의 아미노산 서열은 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, VH의 아미노산 서열은 서열번호 2의 아미노산 서열로 구성되고; VL의 아미노산 서열은 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인은 서열번호 11의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인은 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 11의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 11의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인은 서열번호 12의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인은 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 12의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 12의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인은 서열번호 13의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인은 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 13의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 13의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인은 서열번호 14의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인은 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 14의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 14의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인은 서열번호 15의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인은 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 15의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 15의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인은 서열번호 16의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인은 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 16의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 16의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, VH는 서열번호 24의 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 서열번호 24의 폴리뉴클레오타이드산 서열에 대해 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 또는 9개의 뉴클레오타이드 변형을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH CDR1; 서열번호 25의 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 서열번호 25의 폴리뉴클레오타이드산 서열에 대해 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 또는 9개의 뉴클레오타이드 변형을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH CDR2; 서열번호 26의 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 서열번호 26의 폴리뉴클레오타이드산 서열에 대해 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 또는 9개의 뉴클레오타이드 변형을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH CDR3을 포함한다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 24의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH CDR1; 서열번호 25의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH CDR2; 및 서열번호 26의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH CDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, VL은 서열번호 21의 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 서열번호 21의 폴리뉴클레오타이드산 서열에 대해 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 또는 9개의 뉴클레오타이드 변형을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL CDR1; 서열번호 22의 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 서열번호 22의 폴리뉴클레오타이드산 서열에 대해 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 또는 9개의 뉴클레오타이드 변형을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL CDR2; 서열번호 23의 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 서열번호 23의 폴리뉴클레오타이드산 서열에 대해 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 또는 9개의 뉴클레오타이드 변형을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL CDR3을 포함한다. 일부 실시형태에서, VL은 서열번호 21의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL CDR1; 서열번호 22의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL CDR2; 및 서열번호 23의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL CDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, VH는 서열번호 24의 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 서열번호 24의 폴리뉴클레오타이드산 서열에 대해 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 또는 9개의 뉴클레오타이드 변형을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH CDR1; 서열번호 25의 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 서열번호 25의 폴리뉴클레오타이드산 서열에 대해 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 또는 9개의 뉴클레오타이드 변형을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH CDR2; 서열번호 26의 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 서열번호 26의 폴리뉴클레오타이드산 서열에 대해 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 또는 9개의 뉴클레오타이드 변형을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH CDR3; 및 서열번호 21의 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 서열번호 21의 폴리뉴클레오타이드산 서열에 대해 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 또는 9개의 뉴클레오타이드 변형을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL CDR1; 서열번호 22의 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 서열번호 22의 폴리뉴클레오타이드산 서열에 대해 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 또는 9개의 뉴클레오타이드 변형을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL CDR2; 서열번호 23의 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 서열번호 23의 폴리뉴클레오타이드산 서열에 대해 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 또는 9개의 뉴클레오타이드 변형을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL CDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, VH는 서열번호 24의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH CDR1; 서열번호 25의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH CDR2; 및 서열번호 26의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH CDR3; 및 서열번호 21의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL CDR1; 서열번호 22의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL CDR2; 및 서열번호 23의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL CDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, VH는 서열번호 20의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 20의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, VL은 서열번호 19의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, VL은 서열번호 19의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, VH는 서열번호 20의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되고; VL은 서열번호 19의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 20의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되고; VL은 서열번호 19의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인은 서열번호 29의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인은 서열번호 30의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인은 서열번호 31의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인은 서열번호 32의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인은 서열번호 33의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, hCD19 결합 도메인은 서열번호 34의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
예시적인 hCD19 결합 도메인의 아미노산 서열 및 폴리뉴클레오타이드 서열은 본 명세서의 표 1에 제시되어 있다.
5.2.2 힌지 도메인
일부 실시형태에서, CAR은 항원-결합 도메인과 본 명세서에서 힌지 도메인으로 지칭되는 막횡단 도메인 사이에 위치한 아미노산 서열을 포함한다. 힌지 도메인은 CAR이 세포 표면에서 발현될 때 세포막으로부터 항원-결합 도메인의 최적 거리를 제공할 수 있다. 힌지 도메인은 또한 항원-결합 도메인이 이의 표적 항원에 결합하게 하기 위한 최적의 유연성을 제공할 수 있다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 면역 효과기 세포의 표면에서 발현된 자연 발생적 단백질의 세포외 영역으로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 면역 효과기 세포의 표면에서 발현된 자연 발생적 단백질의 힌지 도메인으로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, 면역 효과기 세포는 T 세포이다. 일부 실시형태에서, T 세포는 CD4+ T 세포이다. 일부 실시형태에서, T 세포는 CD8+ T 세포이다.
일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 항원-결합 도메인의 C 말단에 작동 가능하게 직접 연결된다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 항원-결합 도메인의 C 말단에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 펩타이드 링커를 통해 항원-결합 도메인의 C 말단에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 막횡단 도메인의 N 말단에 작동 가능하게 직접 연결된다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 막횡단 도메인의 N 말단에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 펩타이드 링커를 통해 막횡단 도메인의 N 말단에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다.
일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 인간 CD8α(hCD8α)로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 hCD8α의 힌지 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 서열번호 37의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 37의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 37의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 서열번호 38의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 38의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 38의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 서열번호 40의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 서열번호 40의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 서열번호 41의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 서열번호 41의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 인간 CD28(hCD28)로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 hCD28의 힌지 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 서열번호 39의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 39의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 39의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 서열번호 42의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 힌지 도메인은 서열번호 42의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
예시적인 힌지 도메인의 아미노산 서열 및 폴리뉴클레오타이드 서열이 본 명세서의 표 2에 제시되어 있다.
5.2.3 막횡단 도메인
CAR의 막횡단 도메인은 세포의 원형질막에 CAR을 삽입하는 기능을 한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 항원-결합 도메인의 C 말단에 작동 가능하게 연결된다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 항원-결합 도메인의 C 말단에 작동 가능하게 직접 연결된다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 항원-결합 도메인의 C 말단에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 펩타이드 링커를 통해 항원-결합 도메인의 C 말단에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 힌지 도메인을 통해 항원-결합 도메인의 C 말단에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다.
일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 힌지 도메인의 C 말단에 작동 가능하게 연결된다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 힌지 도메인의 C 말단에 작동 가능하게 직접 연결된다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 힌지 도메인의 C 말단에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 펩타이드 링커를 통해 힌지 도메인의 C 말단에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다.
일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 세포질 도메인의 N 말단에 작동 가능하게 연결된다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 세포질 도메인의 N 말단에 작동 가능하게 직접 연결된다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 세포질 도메인의 N 말단에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 펩타이드 링커를 통해 세포질 도메인의 N 말단에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다.
일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 면역 효과기 세포의 표면에서 발현된 자연 발생적 막횡단 단백질의 막횡단 도메인으로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, 면역 효과기 세포는 T 세포이다. 일부 실시형태에서, T 세포는 CD8+ T 세포이다. 일부 실시형태에서, T 세포는 CD4+ T 세포이다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인 및 힌지 도메인은 면역 효과기 세포의 표면에서 발현된 동일한 자연 발생적 막횡단 단백질로부터 유래된다.
일부 실시형태에서, 막횡단은 CD8α, CD28, TCRα, TCRβ, TCRζ, CD3ε, CD45, CD4, CDS, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 및 CD154로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질의 막횡단 도메인으로부터 유래된다.
대안적으로, 막횡단 도메인은 합성일 수 있다(즉, 자연 발생적 막횡단 단백질로부터 유래되지 않는다). 일부 실시형태에서, 합성 막횡단 도메인은 주로 소수성 아미노산 잔기(예를 들어, 류신 및 발린)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 페닐알라닌, 트립토판 및 발린의 삼중체(triplet)는 합성 막횡단 도메인의 각 말단에서 발견될 것이다.
일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 hCD8α의 막횡단 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 43의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 43의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 43의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 43의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 44의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 44의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 44의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 hCD28의 막횡단 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 45의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 45의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 45의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 45의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 49의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 49의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 50의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 50의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 51의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 51의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 52의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 52의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 46의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 함께 포함하는 힌지 영역 및 막횡단 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 46의 아미노산 서열을 함께 포함하는 힌지 영역 및 막횡단 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역 및 막횡단 도메인의 아미노산 서열은 함께 서열번호 46의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역 및 막횡단 도메인의 아미노산 서열은 함께 서열번호 46의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 47의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 함께 포함하는 힌지 영역 및 막횡단 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 47의 아미노산 서열을 함께 포함하는 힌지 영역 및 막횡단 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역 및 막횡단 도메인의 아미노산 서열은 함께 서열번호 47의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역 및 막횡단 도메인의 아미노산 서열은 함께 서열번호 47의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 48의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 함께 포함하는 힌지 영역 및 막횡단 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 48의 아미노산 서열을 함께 포함하는 힌지 영역 및 막횡단 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역 및 막횡단 도메인의 아미노산 서열은 함께 서열번호 48의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역 및 막횡단 도메인의 아미노산 서열은 함께 서열번호 48의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 힌지 영역 및 막횡단 도메인은 함께 서열번호 53의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역 및 막횡단 도메인은 함께 서열번호 53의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역 및 막횡단 도메인은 함께 서열번호 54의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역 및 막횡단 도메인은 함께 서열번호 54의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역 및 막횡단 도메인은 함께 서열번호 55의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역 및 막횡단 도메인은 함께 서열번호 55의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역 및 막횡단 도메인은 함께 서열번호 56의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역 및 막횡단 도메인은 함께 서열번호 56의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
예시적인 막횡단 도메인 및 힌지와 막횡단 도메인의 아미노산 서열 및 폴리뉴클레오타이드 서열은 본 명세서의 표 3에 제시되어 있다.
5.2.4 세포질 도메인
본 명세서에 기재된 CAR의 세포질 도메인은 항원-의존적 1차 활성화를 개시하는 적어도 1차 신호전달 도메인 및 선택적으로 공동자극 신호를 제공하기 위한 하나 이상의 공동 자극 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 막횡단 도메인의 C 말단에 작동 가능하게 연결된다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 막횡단 도메인의 C 말단에 작동 가능하게 직접 연결된다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 막횡단 도메인의 C 말단에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 펩타이드 링커를 통해 막횡단 도메인의 C 말단에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다.
일부 실시형태에서, 1차 신호전달 도메인은 적어도 하나의 면역수용체 타이로신-기반 활성화 모티프(immunoreceptor tyrosine-based activation motif: ITAM)를 포함한다. 예시적인 1차 신호전달 도메인은 CD3ζ, CD3γ, CD3δ, CD3ε, FcRγ, FcRβ, CDS, CD22, CD79a, CD79b 및 CD66d 및 이의 기능적 단편 및 기능적 변이체의 신호전달 도메인을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 1차 신호전달 도메인은 CD3ζ, CD3γ, CD3δ, CD3ε, FcRγ, FcRβ, CDS, CD22, CD79a, CD79b 또는 CD66d로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, 1차 신호전달 도메인은 CD3ζ 세포내 신호전달 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 1차 신호전달 도메인은 인간 CD3ζ로부터 유래된다.
일부 실시형태에서, 1차 신호전달 도메인을 포함하는 세포질 도메인은 서열번호 60의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 1차 신호전달 도메인을 포함하는 세포질 도메인은 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 1차 신호전달 도메인을 포함하는 세포질 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 60의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 1차 신호전달 도메인을 포함하는 세포질 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 60의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 1차 신호전달 도메인을 포함하는 세포질 도메인은 서열번호 67의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 1차 신호전달 도메인을 포함하는 세포질 도메인은 서열번호 67의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 1차 신호전달 도메인을 포함하는 세포질 도메인은 서열번호 68의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 1차 신호전달 도메인을 포함하는 세포질 도메인은 서열번호 68의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 적어도 하나의 공동 자극 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 복수의 공동자극 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 1차 신호전달 도메인 및 하나의 공동 자극 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 1차 신호전달 도메인 및 2개의 공동 자극 도메인을 포함하되, 2개의 공동 자극 도메인은 동일하거나 또는 상이할 수 있다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 1차 신호전달 도메인 및 3개의 공동 자극 도메인을 포함할 수 있되, 3개의 공동 자극 도메인은 각각 개별적으로 3개의 공동 자극 도메인 중 다른 하나와 동일하거나 또는 상이할 수 있다.
일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 CD28, 4-IBB, OX40, CD27, CD30, CD40, PD-I, ICOS, LFA1, CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3, DAP10 및 DAPI2로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질의 공동 자극 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 단백질은 CD28이다. 일부 실시형태에서, 단백질은 4-1BB이다.
일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 CD28 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체의 공동 자극 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 57의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 58의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 57의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 57의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 58의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 58의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 64의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 64의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 65의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 65의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 4-1BB의 공동 자극 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 59의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 59의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 59의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 66의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 66의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
1차 신호전달 도메인은 하나 이상의 공동 자극 도메인에 작동 가능하게 직접 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 일부 실시형태에서, 1차 신호전달 도메인은 공동 자극 도메인에 작동 가능하게 직접 연결된다. 일부 실시형태에서, 1차 신호전달 도메인은 공동 자극 도메인에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다. 일부 실시형태에서, 1차 신호전달 도메인은 펩타이드 링커를 통해 공동 자극 도메인에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다. 일부 실시형태에서, 공동 자극 도메인은 1차 신호전달 도메인의 N 말단에 작동 가능하게 연결된다. 일부 실시형태에서, 공동 자극 도메인은 1차 신호전달 도메인의 N 말단에 작동 가능하게 직접 연결된다. 일부 실시형태에서, 공동 자극 도메인은 1차 신호전달 도메인의 N 말단에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다. 일부 실시형태에서, 공동 자극 도메인은 펩타이드 링커를 통해 1차 신호전달 도메인의 N 말단에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다.
1차 신호전달 도메인은 막횡단 도메인에 작동 가능하게 직접 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 일부 실시형태에서, 1차 신호전달 도메인은 막횡단 도메인에 작동 가능하게 직접 연결된다. 일부 실시형태에서, 1차 신호전달 도메인은 막횡단 도메인에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다. 일부 실시형태에서, 1차 신호전달 도메인은 펩타이드 링커를 통해 막횡단 도메인에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다.
공동 자극 도메인은 막횡단 도메인에 작동 가능하게 직접 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 일부 실시형태에서, 공동 자극 도메인은 막횡단 도메인에 작동 가능하게 직접 연결된다. 일부 실시형태에서, 공동 자극 도메인은 막횡단 도메인에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다. 일부 실시형태에서, 공동 자극 도메인은 펩타이드 링커를 통해 막횡단 도메인에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다.
일부 실시형태에서, 세포내 신호전달 도메인은 CD28의 공동 자극 도메인 또는 이의 기능적 변이체 또는 기능적 단편 및 CD3ζ의 신호전달 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 61의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 63의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포질 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 61의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 61의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 63의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 63의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 69의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 69의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 71의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 71의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 세포내 신호전달 도메인은 4-1BB의 공동 자극 도메인 또는 이의 기능적 변이체 또는 기능적 단편 및 CD3ζ의 1차 신호전달 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 62의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 62의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 62의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 70의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 세포질 도메인은 서열번호 70의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
1차 신호전달 도메인, 공동 자극 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 예시적인 세포질 도메인의 아미노산 서열 및 폴리뉴클레오타이드 서열은 본 명세서의 표 4에 제시되어 있다.
5.2.5 예시적인 CD19-특이적 CAR
예시적인 CD19 특이적 CAR의 아미노산 및 폴리뉴클레오타이드 서열은 본 명세서의 표 5에 제공된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80 또는 81의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 72의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 73의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 74의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 75의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 76의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 77의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 78의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 79의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 80의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 81의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80 또는 81의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 72의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 73의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 74의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 76의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 78의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 80의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 81의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, CAR의 아미노산 서열은 서열번호 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80 또는 81의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, CAR의 아미노산 서열은 서열번호 72의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, CAR의 아미노산 서열은 서열번호 73의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, CAR의 아미노산 서열은 서열번호 74의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, CAR의 아미노산 서열은 서열번호 75의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, CAR의 아미노산 서열은 서열번호 76의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, CAR의 아미노산 서열은 서열번호 77의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, CAR의 아미노산 서열은 서열번호 78의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, CAR의 아미노산 서열은 서열번호 79의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, CAR의 아미노산 서열은 서열번호 80의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, CAR의 아미노산 서열은 서열번호 81의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, CAR의 아미노산 서열은 서열번호 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80 또는 81의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, CAR의 아미노산 서열은 서열번호 72의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, CAR의 아미노산 서열은 서열번호 73의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, CAR의 아미노산 서열은 서열번호 74의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, CAR의 아미노산 서열은 서열번호 75의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, CAR의 아미노산 서열은 서열번호 76의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, CAR의 아미노산 서열은 서열번호 77의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, CAR의 아미노산 서열은 서열번호 78의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, CAR의 아미노산 서열은 서열번호 79의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, CAR의 아미노산 서열은 서열번호 80의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, CAR의 아미노산 서열은 서열번호 81의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 82, 83, 84, 86, 87, 88, 90, 91, 92, 93, 94 또는 95의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 82의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 83의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 84의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 86의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 87의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 88의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 89의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 90의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 91의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 92의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 93의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 94의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 95의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 82, 83, 84, 86, 87, 88, 90, 91, 92, 93, 94 또는 95의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 82의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 83의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 84의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 86의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 87의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 88의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 90의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 91의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 92의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 93의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 94의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, CAR은 서열번호 95의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, CAR은 CAR CTL019의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 CAR CTL019이다. 일부 실시형태에서, CAR은 CAR T-세포 티사젠렉류셀(tisagenlecleucel)에 의해 발현된 CAR의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 CAR T-세포 티사젠렉류셀에 의해 발현된 CAR이다. 일부 실시형태에서, CAR은 CAR T-세포 KYMRIAH®에 의해 발현된 CAR의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 CAR T-세포 KYMRIAH®에 의해 발현된 CAR이다. 일부 실시형태에서, CAR은 CAR KTE-C19의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 CAR KTE-C19이다. 일부 실시형태에서, CAR은 CAR T-세포 액시캅타진 실로루셀(axicabtagene ciloleucel)에 의해 발현된 CAR의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 CAR T-세포 액시캅타진 실로루셀에 의해 발현된 CAR이다. 일부 실시형태에서, CAR은 CAR T-세포 YESCARTA®에 의해 발현된 CAR의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR은 CAR T-세포 YESCARTA®에 의해 발현된 CAR이다.
추가의 예시적인 CD19 특이적 CAR은, 예를 들어, 각각 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 US89006682, WO2019213282, US20200268860, WO2020227177, US10457730, WO2019159193, US10287350, US10221245, US20190125799, WO2018201794, US20170368098, US20160145337, US9701758, WO2014153270, WO2012079000, WO2019160956, WO2019161796, WO2020222176, WO2020219848, US20190135894, US10774388, WO2020180882, US10765701, WO2020172641, WO2020172440, WO2016149578, WO2020124021, WO2020108646, WO2020108643, WO2020113188, WO2020108644, WO2020108645, WO2020108642, US10669549, WO2020102770, US10501539, WO2020069409, US10603380, US10533055, WO2020010235, WO2019246546에 개시되어 있다.
5.3 사이토카인
본 개시내용은 또한 사이토카인을 포함하는 재조합 벡터를 제공한다. 일부 실시형태에서, 사이토카인은 인터류킨이다. 예시적인 인터류킨은 IL-15, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33 및 이의 기능적 변이체 및 기능적 단편을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 사이토카인은 가용성이다. 일부 실시형태에서, 사이토카인은 막 결합된다.
일부 실시형태에서, 사이토카인은 사이토카인의 동족 수용체 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체의 가용성 형태에 작동 가능하게 연결된 가용성 사이토카인 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체를 포함하는 융합 단백질이다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 인간 IL-15Rα 수용체(hIL-15Rα)의 가용성 형태에 작동 가능하게 연결된 인간 IL-15(hIL-15)를 포함한다. 이러한 융합 단백질은 본 명세서에서 IL-15 슈퍼효능제(superagonist)(IL-15 SA)로도 지칭된다. 일부 실시형태에서, hIL-15는 hIL-15Rα에 작동 가능하게 직접 연결된다. 일부 실시형태에서, hIL-15는 hIL-15Rα의 가용성 형태에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다. 일부 실시형태에서, hIL-15는 펩타이드 링커를 통해 hIL-15Rα의 가용성 형태에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 IL-15/IL-15Ra Fc 융합 단백질인 ALT-803이다. ALT-803은 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 WO 2008/143794에 개시되어 있다.
일부 실시형태에서, 사이토카인은 사이토카인의 동족 수용체 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체의 막 결합된 형태에 작동 가능하게 연결된 가용성 사이토카인 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체를 포함하는 융합 단백질이다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 인간 IL-15Rα 수용체(hIL-15Rα)에 작동 가능하게 연결된 인간 IL-15(hIL-15)를 포함한다. 이러한 융합 단백질은 본 명세서에서 막 결합된 IL-15(mbIL15)로도 지칭된다. 일부 실시형태에서, hIL-15는 hIL-15Rα에 작동 가능하게 직접 연결된다. 일부 실시형태에서, hIL-15는 hIL-15Rα에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다. 일부 실시형태에서, hIL-15는 펩타이드 링커를 통해 hIL-15Rα에 작동 가능하게 간접적으로 연결된다.
일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 서열번호 125의 아미노산 서열 또는 서열번호 125의 아미노산 서열에 대해 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 링커는 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 링커의 아미노산 서열은 서열번호 125의 아미노산 서열 또는 서열번호 125의 아미노산 서열에 대해 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 변형을 포함하는 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 링커의 아미노산 서열은 서열번호 125의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 링커는 서열번호 136의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 링커는 서열번호 136의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, hIL-15는 서열번호 123의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, hIL-15는 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, hIL-15의 아미노산 서열은 서열번호 123의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, hIL-15의 아미노산 서열은 서열번호 123의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, IL-15는 서열번호 134의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, IL-15는 서열번호 134의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, hIL-15Rα는 서열번호 124의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, hIL-15Rα는 서열번호 124의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, hIL-15Rα의 아미노산 서열은 서열번호 124의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, hIL-15Rα의 아미노산 서열은 서열번호 124의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, hIL-15Rα는 서열번호 135의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, hIL-15Rα는 서열번호 135의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, hIL-15Rα는 서열번호 163의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, hIL-15Rα는 서열번호 163의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 119, 120, 121, 122, 180 또는 183과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 119와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 120과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 121과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 122와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 180과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 183과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 119, 120, 121, 122, 180 또는 183의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 119의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 120의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 180의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 183의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 119, 120, 121, 122, 180 또는 183의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 119의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 120의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 121의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 122의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 180의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 183의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 119, 120, 121, 122, 180 또는 183의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 119의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 120의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 121의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 122의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 180의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 183의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132 또는 181의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 126의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 127의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 128의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 129의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 130의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 131의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 132의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 181의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132 또는 181의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 126의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 127의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 128의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 129의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 130의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 131의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 132의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 132의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 181의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
예시적인 사이토카인 융합 단백질 및 이의 성분은 표 6에 개시되어 있다. 추가적인 예시적인 mbIL15 융합은 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Hurton et al., "Tethered IL-15 augments antitumor activity and promotes a stem-cell memory subset in tumor-specific T cells," PNAS, 113(48) E7788-E7797 (2016)]에 개시되어 있다.
예시적인 사이토카인 융합 단백질 및 성분 폴리펩타이드의 아미노산 서열 및 폴리뉴클레오타이드 서열은 본 명세서의 표 6에 제공된다.
5.4 마커 단백질
본 명세서에 기재된 마커 단백질은 작용제, 예를 들어, 마커 단백질에 특이적으로 결합하고 항-CD19 CAR 발현 세포의 살해를 매개하거나 또는 촉매하는 항체의 투여를 통해 생체내에서 항-CD19 CAR 발현 세포의 선택적 고갈을 가능하게 하는 기능을 한다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 항-CD19 CAR을 발현하는 세포의 표면에서 발현된다.
일부 실시형태에서, 마커 단백질은 세포 표면 단백질의 세포외 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포 표면 단백질은 인간 표피 성장 인자 수용체 1(human epidermal growth factor receptor 1: hHER1)이다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 항-hHER1 항체에 의해 결합될 수 있는 절단된 HER1 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 항-hHER1 항체에 의해 결합될 수 있는 절단된 hHER1 단백질의 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, hHER1 마커 단백질은 항-CD19 CAR 발현 세포의 표면에서 발현된 hHER1 마커 단백질을 인식하는 항체의 투여를 통해 주입된 CAR-T 세포의 고갈을 허용함으로써 안전한 메커니즘을 제공한다. hHER1 마커 단백질에 결합하는 예시적인 항체는 세툭시맙이다.
일부 실시형태에서, hHER1 마커 단백질은, N 말단에서 C 말단으로, hHER1의 도메인 III 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체; hHER1의 도메인 IV의 N-말단 부분; 및 인간 CD28의 막횡단 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, hHER1의 도메인 III은 서열번호 98의 아미노산 서열; 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 98의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, hHER1의 도메인 III의 아미노산 서열은 서열번호 98의 아미노산 서열; 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 98의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, hHER1의 도메인 III은 서열번호 110의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, hHER1의 도메인 III은 서열번호 110의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, hHER1의 도메인 III은 서열번호 164의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, hHER1의 도메인 III은 서열번호 164의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, hHER1의 도메인 IV의 N-말단 부분은 서열번호 99의 1번 내지 40번, 1번 내지 39번, 1번 내지 38번, 1번 내지 37번, 1번 내지 36번, 1번 내지 35번, 1번 내지 34번, 1번 내지 33번, 1번 내지 32번, 1번 내지 31번, 1번 내지 30번, 1번 내지 29번, 1번 내지 28번, 1번 내지 27번, 1번 내지 26번, 1번 내지 25번, 1번 내지 24번, 1번 내지 23번, 1번 내지 22번, 1번 내지 21번, 1번 내지 20번, 1번 내지 19번, 1번 내지 18번, 1번 내지 17번, 1번 내지 16번, 1번 내지 15번, 1번 내지 14번, 1번 내지 13번, 1번 내지 12번, 1번 내지 11 또는 1번 내지 10번 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서, hHER1의 도메인 III의 C 말단은 hHER1의 도메인 IV의 N-말단 부분의 N 말단에 직접 융합된다.
일부 실시형태에서, hHER1의 도메인 IV의 N-말단 부분의 C 말단은 펩타이드 링커를 통해 CD28 막횡단 도메인의 N 말단에 간접적으로 융합된다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 글리신 및 세린 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 약 5 내지 25, 5 내지 20, 5 내지 15, 5 내지 10, 10 내지 20 또는 10 내지 15의 아미노산 길이이다.
일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 서열번호 102의 아미노산 서열 또는 서열번호 102의 아미노산 서열에 대해 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커의 아미노산 서열은 서열번호 102의 아미노산 서열 또는 서열번호 102의 아미노산 서열에 대해 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 변형을 포함하는 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커의 아미노산 서열은 서열번호 102의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 서열번호 114의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 서열번호 114의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 96, 97, 103, 104, 166 또는 167의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 96의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 97의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 103의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 104의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 166의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 167의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 96의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 96, 97, 103 또는 104의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 166의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 167의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 96, 97, 103, 104, 166 또는 167의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 96의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 97의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 103의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 104의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 166의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 167의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 96, 97, 103, 104, 166 또는 167의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 96의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 97의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 103의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 104의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 166의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 167의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 107, 162, 108, 109, 115, 116, 173 또는 174의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 107의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 162의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 108의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 109의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 115의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 116의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 173의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 174의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 107, 162, 108, 109, 115, 116, 173 또는 174의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 107의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 162의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 108의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 109의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 115의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 116의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 173의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 174의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 마커 단백질은 인간 CD20(hCD20)으로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 세포외 영역(hCD20t)을 포함하는 절단된 hCD20 단백질 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, hCD20 마커 단백질은 CAR 발현 세포의 표면에서 발현된 hCD20 마커 단백질을 인식하는 항체를 투여함으로써 주입된 CAR-T 세포의 고갈을 허용함으로써 안전한 메커니즘을 제공한다. hCD20 마커 단백질에 결합하는 예시적인 항체는 리툭시맙이다.
일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 105의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 106의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 마커 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 105의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 106의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 105의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 106의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 117 또는 118의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 117의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 118의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 117 또는 118의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 117의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 마커 단백질은 서열번호 118의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
예시적인 마커 단백질의 아미노산 서열 및 폴리뉴클레오타이드 서열은 본 명세서의 표 7에 제공된다.
5.5 벡터
일 양태에서, 적어도 3개의 시스트론을 포함하는 폴리시스트로닉 발현 카세트를 포함하는 재조합 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 발현 카세트는 적어도 4개, 5개 또는 6개의 시스트론을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 발현 카세트는 3개의 시스트론을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 발현 카세트는 4개의 시스트론을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 발현 카세트는 5개의 시스트론을 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 비바이러스 벡터이다. 예시적인 비바이러스 벡터는 플라스미드 DNA, 에피솜 플라스미드, 미니서클, 미니스트링, 올리고뉴클레오타이드(예를 들어, mRNA, 네이키드 DNA)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 벡터는 DNA 플라스미드 벡터이다.
일부 실시형태에서, 벡터는 바이러스 벡터이다. 바이러스 벡터는 복제 가능하거나 또는 복제 불가능할 수 있다. 바이러스 벡터는 통합될 수 있거나 또는 통합되지 않을 수 있다. 포유동물 세포로의 유전자 전달을 위해 다수의 바이러스 기반 시스템이 개발되었으며, 적합한 바이러스 벡터는 당업자에 의해 선택될 수 있다. 예시적인 바이러스 벡터는 아데노바이러스 벡터(예를 들어, 아데노바이러스 5), 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터(예를 들어, AAV2, 3, 5, 6, 8, 9), 레트로바이러스 벡터(MMSV, MSCV), 렌티바이러스 벡터(예를 들어, HIV-1, HIV-2), 감마레트로바이러스 벡터, 헤르페스 바이러스 벡터(예를 들어, HSV1, HSV2), 알파바이러스 벡터(예를 들어, SFV, SIN, VEE, M1), 플라비바이러스(예를 들어, 쿤진(Kunjin), 웨스트 나일(West Nile), 뎅구(Dengue) 바이러스), 랩도바이러스 벡터(예를 들어, 광견병 바이러스, VSV), 홍역 바이러스 벡터(예를 들어, MV-Edm), 뉴캐슬 질환 바이러스 벡터, 폭스바이러스 벡터(예를 들어, VV), 홍역 바이러스 및 피코르나바이러스 벡터(예를 들어, 콕사키바이러스)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일 양태에서, 벡터는, 5'에서 3'로, 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제1 폴리뉴클레오타이드 서열; F2A 요소를 포함하는 제2 폴리뉴클레오타이드 서열; 사이토카인을 암호화하는 제3 폴리뉴클레오타이드 서열; T2A 요소를 포함하는 제4 폴리뉴클레오타이드 서열; 및 마커 단백질을 암호화하는 제5 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리시스트로닉 발현 카세트를 포함한다.
일부 실시형태에서, F2A 요소는 서열번호 137의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, F2A 요소는 서열번호 137의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, F2A 요소는 서열번호 141의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, F2A 요소는 서열번호 141의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, F2A 요소는 서열번호 138의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, F2A 요소는 서열번호 138의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, F2A 요소는 서열번호 142의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, F2A 요소는 서열번호 142의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, T2A 요소는 서열번호 139의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, T2A 요소는 서열번호 139의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, T2A 요소는 서열번호 143의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, T2A 요소는 서열번호 143의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, T2A 요소는 서열번호 140 또는 182의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, T2A 요소는 서열번호 140의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, T2A 요소는 서열번호 182의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, T2A 요소는 서열번호 140 또는 182의 아미노산 서열인 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, T2A 요소는 서열번호 140의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, T2A 요소는 서열번호 182의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, T2A 요소는 서열번호 144, 145 또는 165의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, T2A 요소는 서열번호 144의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, T2A 요소는 서열번호 145의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, T2A 요소는 서열번호 165의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, T2A 요소는 서열번호 144, 145 또는 165의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, T2A 요소는 서열번호 144의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, T2A 요소는 서열번호 145의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, T2A 요소는 서열번호 165의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
F2A 및 P2A 요소를 암호화하는 예시적인 폴리뉴클레오타이드 서열이 본 명세서의 표 8에 제공된다.
일부 실시형태에서, 벡터 또는 폴리시스트로닉 발현 카세트는 하나 이상의 추가적인 요소를 포함한다. 추가적인 요소는 프로모터, 인핸서, 폴리아데닐화(폴리A) 서열 및 선택 유전자를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 벡터는 선별 마커가 발현되어 세포의 인공적인 선택을 가능하게 하는 세포에 특정 형질(trait)을 부여하는 선별 마커를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 예시적인 선별 마커는 항생제 저항성 유전자, 예를 들어, 카나마이신, 암피실린 또는 트라이클로산에 대한 저항성을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 발현 카세트는 전사 조절 요소를 포함한다. 예시적인 전사 조절 요소는 프로모터 및 인핸서를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 발현 카세트는 제1 5' 시스트론의 5' 프로모터 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 프로모터는 서열번호 146의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 프로모터는 서열번호 146의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 프로모터의 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열번호 146의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 프로모터의 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열번호 146의 폴리뉴클레오타이드 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 발현 카세트는 3' 말단 시스트론의 3' 폴리A 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리A 서열은 서열번호 148의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리A 서열은 서열번호 148의 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리A 서열은 서열번호 148의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 폴리A 서열은 서열번호 148의 핵산 서열로 구성된다.
예시적인 프로모터 및 폴리A 서열의 폴리뉴클레오타이드 서열은 본 명세서의 표 9에 제공된다.
예시적인 폴리시스트로닉 발현 카세트의 폴리뉴클레오타이드 서열은 본 명세서의 표 10에 제공된다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 발현 카세트는 서열번호 149, 150 또는 151의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 발현 카세트는 서열번호 149의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 발현 카세트는 서열번호 150의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 발현 카세트는 서열번호 151의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 발현 카세트는 서열번호 149, 150 또는 151의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 발현 카세트는 서열번호 149의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 발현 카세트는 서열번호 150의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 발현 카세트는 서열번호 151의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
예시적인 폴리시스트로닉 발현 카세트의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이 본 명세서의 표 11에 제공된다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 발현 카세트는 서열번호 152, 153 또는 154의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 발현 카세트는 서열번호 152의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 발현 카세트는 서열번호 153의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 발현 카세트는 서열번호 154의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 발현 카세트는 서열번호 152, 153 또는 154의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 발현 카세트는 서열번호 152의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 발현 카세트는 서열번호 153의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 발현 카세트는 서열번호 154의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
5.6 트랜스포존 및 트랜스포세이즈 시스템
일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 벡터의 이식유전자는 합성 DNA 전이성 요소, 예를 들어, DNA 트랜스포존/트랜스포세이즈 시스템, 예를 들어, 슬리핑 뷰티(SB)를 통해 면역 효과기 세포에 도입된다. SB는 DNA 트랜스포존의 Tc1/마리너(mariner) 슈퍼패밀리에 속한다. DNA 트랜스포존 한 DNA 부위에서 또 다른 부위로 간단하게 잘라내어 붙여 넣는(cut-and-paste) 방식으로 전위된다. 전위는 정의된 DNA 분절이 한 DNA 분자에서 절단되어 동일하거나 또는 상이한 DNA 분자 또는 게놈의 또 다른 부위로 이동하는 정확한 과정이다.
예시적인 DNA 트랜스포존/트랜스포세이즈 시스템은 슬리핑 뷰티(예를 들어, 각각의 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 US6489458, US8227432 참조), piggy Bac 트랜스포존 시스템(예를 들어, 각각의 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 US9228180, 문헌[Wilson et al, "PiggyBac Transposon-mediated Gene Transfer in Human Cells," Molecular Therapy, 15:139-145 (2007)] 참조), piggyBat 트랜스포존 시스템(예를 들어, 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Mitra et al., "Functional characterization of piggy Bat from the bat Myotis lucifugus unveils an active mammalian DNA transposon," Proc. Natl. Acad. Sci USA 110:234-239 (2013)] 참조), TcBuster(예를 들어, 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Woodard et al. "Comparative Analysis of the Recently Discovered hAT Transposon TcBuster in Human Cells," PLOS ONE, 7(11): e42666 (Nov. 2012)] 참조) 및 Tol2 트랜스포존 시스템(예를 들어, 각각의 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Kawakami, "Tol2: a versatile gene transfer vector in vertebrates," Genome Biol. 2007; 8(Suppl 1): S7] 참조)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 추가적인 예시적인 트랜스포존/트랜스포세이즈 시스템은 각각의 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 US7148203; US8227432; US20110117072; 문헌[Mates et al., Nat Genet, 41(6):753-61 (2009); 및 Ivies et al., Cell, 91(4):501-10, (1997)]에 제공되어 있다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이식유전자는 SB 트랜스포존/트랜스포세이즈 시스템을 통해 면역 효과기 세포에 도입된다. SB 트랜스포존 시스템은 SB 트랜스포세이즈 및 SB 트랜스포존(들)을 포함한다. SB 트랜스포존 시스템은 자연 발생적 SB 트랜스포세이즈 또는 활성을 유지하는 유도체, 변이체 및/또는 단편 및 자연 발생적 SB 트랜스포존 또는 활성을 유지하는 유도체, 변이체 및/또는 단편을 포함할 수 있다. 예시적인 SB 시스템은 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Hackett et al., "A Transposon and Transposase System for Human Application," Mol Ther 18:674-83, (2010)]에 기술되어 있다.
일부 실시형태에서, 벡터는 좌측 역 말단 반복(ITR), 즉, 발현 카세트에 대해 5'인 ITR 및 우측 ITR, 즉, 발현 카세트에 대해 3'인 ITR을 포함한다. 좌측 ITR 및 우측 ITR은 벡터의 폴리시스트로닉 발현 카세트의 측면에 있다. 일부 실시형태에서, 좌측 ITR은 폴리시스트로닉 발현 카세트에 대해 역 방향이고, 우측 ITR은 폴리시스트로닉 발현 카세트에 대해 동일한 방향이다. 일부 실시형태에서, 우측 ITR은 폴리시스트로닉 발현 카세트에 대해 역 방향이고, 좌측 ITR은 폴리시스트로닉 발현 카세트에 대해 동일한 방향이다.
일부 실시형태에서, 좌측 ITR 및 우측 ITR은 슬리핑 뷰티 트랜스포존, piggyBac 트랜스포존, TcBuster 트랜스포존 및 Tol2 트랜스포존으로 이루어진 군으로부터 선택되는 DNA 트랜스포존의 ITR이다. 일부 실시형태에서, 좌측 ITR 및 우측 ITR은 슬리핑 뷰티 DNA 트랜스포존의 ITR이다.
일부 실시형태에서, 좌측 ITR은 서열번호 155 또는 156의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 좌측 ITR은 서열번호 155의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 좌측 ITR은 서열번호 155의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 좌측 ITR은 서열번호 156의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 좌측 ITR은 서열번호 156의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 우측 ITR은 서열번호 157, 159 또는 184의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 우측 ITR은 서열번호 157의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 우측 ITR은 서열번호 159의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 우측 ITR은 서열번호 184의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 우측 ITR은 서열번호 157의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 우측 ITR은 서열번호 159의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 우측 ITR은 서열번호 184의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
예시적인 SB ITR의 폴리뉴클레오타이드 서열은 본 명세서의 표 12에 제공된다.
일부 실시형태에서, DNA 트랜스포세이즈는 SB 트랜스포세이즈이다. 일부 실시형태에서, SB 트랜스포세이즈는 SB11, SB100X, hSB110 및 hSB81로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, SB 트랜스포세이즈는 SB11이다. 예시적인 SB 트랜스포세이즈는 각각의 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 US9840696, US20160264949, US9228180, WO2019038197, US10174309 및 US10570382에 기술되어 있다.
일부 실시형태에서, DNA 트랜스포세이즈는 서열번호 160의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, DNA 트랜스포세이즈는 서열번호 160의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, DNA 트랜스포세이즈의 아미노산 서열은 서열번호 160의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, DNA 트랜스포세이즈의 아미노산 서열은 서열번호 160의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, DNA 트랜스포세이즈는 N-말단 메티오닌이 결여된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, DNA 트랜스포세이즈는 N-말단 메티오닌, 즉, 서열번호 160의 2번 내지 340번 아미노산이 결여된 서열번호 160의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, DNA 트랜스포세이즈는 N-말단 메티오닌, 즉, 서열번호 160의 2번 내지 340번 아미노산이 결여된 서열번호 160의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, DNA 트랜스포세이즈의 아미노산 서열은 N-말단 메티오닌, 즉, 서열번호 160의 2번 내지 340번 아미노산이 결여된 서열번호 160의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, DNA 트랜스포세이즈의 아미노산 서열은 N-말단 메티오닌, 즉, 서열번호 160의 2번 내지 340번 아미노산이 결여된 서열번호 160의 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, DNA 트랜스포세이즈는 서열번호 161의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, DNA 트랜스포세이즈는 161의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, DNA 트랜스포세이즈는 세포에 도입된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, DNA 트랜스포세이즈를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 DNA 벡터이다. 일부 실시형태에서, DNA 트랜스포세이즈를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 RNA 벡터이다. 일부 실시형태에서, DNA 트랜스포세이즈는 제1 벡터에 암호화되고, 이식유전자는 제2 벡터에 암호화된다. 일부 실시형태에서, DNA 트랜스포세이즈는 폴리펩타이드로서 세포 집단에 직접 도입된다.
예시적인 SB 트랜스포세이즈의 아미노산 및 폴리뉴클레오타이드 서열은 본 명세서의 표 13에 제공된다.
5.7 면역 효과기 세포 및 조작 방법
일 양태에서, 세포, 예를 들어, 폴리시스트로닉 발현 카세트를 포함하는 재조합 벡터(예를 들어, 본 명세서에 기재된 벡터)를 포함하는 면역 효과기 세포가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시형태에서, 면역 효과기 세포는 T 세포이다. 일부 실시형태에서, 면역 효과기 세포는 CD4+ T 세포이다. 일부 실시형태에서, 면역 효과기 세포는 CD8+ T 세포이다. 일 양태에서, 본 명세서에 기재된 폴리시스트로닉 벡터를 포함하는 면역 효과기 세포의 집단이 본 명세서에 제공된다. 일부 실시형태에서, 면역 효과기 세포의 집단은 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 실시형태에서, 면역 효과기 세포의 집단은 생체외 배양물이다.
일 양태에서, 복수의 조작된 세포, 예를 들어, 면역 효과기 세포를 생산하기 위해 본 명세서에 기재된 벡터를 복수의 세포, 예를 들어, 면역 효과기 세포에 도입하는 방법이 본 명세서에 제공된다. 벡터를 세포에 도입하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 발현 벡터의 맥락에서, 벡터는 당업계의 임의의 방법에 의해 숙주 세포, 예를 들어, 포유동물(예를 들어, 인간) 세포에 쉽게 도입될 수 있다. 예를 들어, 발현 벡터는 형질감염 또는 형질도입에 의해 숙주 세포에 전달될 수 있다. 벡터를 숙주 세포에 도입하기 위한 예시적인 방법은 전기천공(본 명세서에서 전기-전달로도 지칭됨), 칼슘 포스페이트 침전, 리포펙션, 유전자총, 미세주입, 미세유체 장치를 통한 기계적 변형 등을 포함하지만 이에 제한되지 않으며, 예를 들어, 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York (2001)]을 참조한다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 벡터는 전기천공을 통해 면역 효과기 세포 또는 면역 효과기 세포의 집단에 도입된다. 대안적인 전달 시스템은, 예를 들어, 콜로이드성 분산 시스템, 예컨대, 거대분자 복합체, 나노캡슐, 마이크로스피어, 비드 및 수중유 에멀션, 마이셀, 혼합 마이셀 및 리포솜을 포함하는 지질-기반 시스템을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 벡터는 생체외, 시험관내 또는 생체내에서 세포 집단, 예를 들어, 면역 효과기 세포에 도입된다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 벡터는 생체외에서 세포 집단, 예를 들어, 면역 효과기 세포에 도입된다.
5.7.1 면역 효과기 세포의 공급원
면역 효과기 세포는 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법에 의해 대상체로부터 얻을 수 있다. 예를 들어, T 세포(예를 들어, CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포)는 말초 혈액 단핵 세포, 골수, 림프절 조직, 제대혈, 흉선 조직, 감염 부위로부터의 조직, 복수, 흉막 삼출액, 비장 조직 및 종양을 포함하는 여러 공급원으로부터 얻을 수 있다. 일부 실시형태에서, 면역 효과기 세포(예를 들어, T 세포)는 당업자에게 공지된 임의의 수의 기법을 사용하여 대상체로부터 수집된 혈액으로부터 얻어진다. 일부 실시형태에서, 개체의 순환 혈액으로부터의 세포는 성분채집술(apheresis)에 의해 얻어진다. 성분채집술 생성물은 전형적으로 T 세포, 단핵구, 과립구, B 세포, 기타 유핵 백혈구, 적혈구 및 혈소판을 포함하는 림프구를 포함한다. T 세포는 적혈구를 용해시키고, 예를 들어, 퍼콜 구배를 통한 원심분리 또는 역류 원심 세정에 의해 단핵구를 고갈시킴으로써 말초 혈액 림프구로부터 단리된다.
성분채집술에 의해 수집된 세포는 혈장 분획을 제거하고 적절한 완충액(예를 들어, 인산 완충 식염수(PBS)) 또는 후속 처리 단계를 위한 배지에 넣기 위해 세척될 수 있다. 세척 단계는 당업계에 공지된 방법, 예컨대, 반자동화된 "병류(flow-through)" 원심 분리기를 사용함으로써 달성될 수 있다. 세척 후, 세포는, 예를 들어, Ca-무함유, Mg-무함유 PBS, PlasmaLyte A 또는 완충액을 포함하거나 또는 포함하지 않은 다른 식염수와 같은 다양한 생체적합성 완충액에 재현탁될 수 있다. 대안적으로, 성분채집술 샘플의 바람직하지 않은 성분은 제거될 수 있고, 세포는 배양 배지에 직접 재현탁된다.
세포의 특정 하위집단은 양성 또는 음성 선택 기법(예를 들어, 항원 코팅된 비드, 유세포 분석 등)에 의해 추가로 단리될 수 있다. 일부 실시형태에서, CD3+, CD28+, CD4+, CD8+, CD45RA+ 및 CD45RO+T 세포와 같은 T 세포의 특정 하위집단은 양성 또는 음성 선택 기법(예를 들어, 항원 코팅된 비드, 유세포 분석 등)에 의해 추가로 단리될 수 있다.
5.7.2 활성화 및 확장
일부 실시형태에서, T 세포는 본 명세서에 기재된 폴리시스트로닉 벡터의 도입 전에 활성화된다. 일부 실시형태에서, T 세포는 세포를 선택적으로 CD28에 특이적으로 결합하는 분자와 함께 CD3에 특이적으로 결합하는 분자와 접촉시킴으로써 활성화된다. 예시적인 활성화 방법은 생체외에서 T 세포를 항-CD3 및 선택적으로 항-CD28 항체와 공유적으로 커플링된 비드와 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, T 세포는 본 명세서에 기재된 폴리시스트로닉 벡터의 도입 후 확장된다. 일부 실시형태에서, 확장은 세포를 선택적으로 CD28에 특이적으로 결합하는 분자와 함께 CD3에 특이적으로 결합하는 분자와 접촉시키는 것을 포함한다. 예시적인 활성화 방법은 생체외에서 T 세포를 항-CD3 및 선택적으로 항-CD28 항체와 공유적으로 커플링된 비드와 함께 접촉시키는 단계를 포함한다.
5.7.3 신속한 개인 맞춤형 제조(Rapid Personalized Manufacture: RPM)
일 양태에서, 조작된 세포 집단을 생성하기 위해 본 명세서에 기재된 폴리시스트로닉 벡터를 세포 집단에 도입하는 방법이 본 명세서에 제공된다. 일부 실시형태에서, 세포 집단은 면역 효과기 세포를 포함한다. 일부 실시형태에서, 면역 효과기 세포는 T 세포이다. 일부 실시형태에서, 세포 집단은 CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포 집단은 CD4+ T 세포를 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포 집단은 CD8+ T 세포 및 CD8+ T 세포를 포함한다.
일부 실시형태에서, 방법은 본 명세서에 기재된 재조합 벡터 및 DNA 트랜스포세이즈(예를 들어, 본 명세서에 기재된 DNA 트랜스포세이즈) 또는 DNA 트랜스포세이즈(예를 들어, 본 명세서에 기재된 DNA 트랜스포세이즈)를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 세포 집단에 도입하는 단계; 및 트랜스포세이즈가 폴리시스트로닉 발현 카세트를 세포 집단의 게놈으로 통합시키는 조건하에 세포 집단을 배양하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 재조합 벡터 및 DNA 트랜스포세이즈 또는 상기 DNA 트랜스포세이즈를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 전기-전달, 칼슘 포스페이트 침전, 리포펙션, 유전자총, 미세주입, 미세유체 장치를 통한 기계적 변형 또는 콜로이드성 분산 시스템을 사용하여 세포 집단에 도입된다.
일부 실시형태에서, 조작된 세포 집단은 약 1일 내지 5일, 1일 내지 4일, 1일 내지 3일 또는 1일 내지 2일 내에 생성된다. 일부 실시형태에서, 조작된 세포 집단은 5일, 4일, 3일, 2일 또는 1일 미만에 생성된다. 일부 실시형태에서, 조작된 세포 집단은 1일, 2일, 3일, 4일 또는 5일 초과에 생산된다.
일부 실시형태에서, 세포는 생체외에서 외인성으로 활성화되지 않는다. 일부 실시형태에서, 세포는 생체외에서 외인성 사이토카인의 존재하에 배양되지 않는다. 일부 실시형태에서, 폴리시스트로닉 벡터는 생체외에서 (예를 들어, 전기천공에 의해) 휴지(resting) T 세포에 도입된다. 일부 실시형태에서, T 세포는 세포 표면에서 CCR7을 발현하고, 검출 가능한 수준의 CD45RO를 발현하지 않는다.
일부 실시형태에서, 세포는 본 명세서에 기재된 폴리시스트로닉 벡터의 도입(예를 들어, 전기천공에 의해) 후 96시간, 72시간, 48시간, 24시간, 12시간 또는 6시간 이내에 생체외에서 배양된다. 일부 실시형태에서, 세포는 본 명세서에 기재된 폴리시스트로닉 벡터의 도입(예를 들어, 전기천공에 의해) 후 약 96시간, 약 72시간, 약 48시간, 약 24시간, 약 12시간 또는 약 6시간 동안 생체외에서 배양된다. 일부 실시형태에서, 세포는 본 명세서에 기재된 폴리시스트로닉 벡터의 도입(예를 들어, 전기천공에 의해) 후 약 6시간 내지 96시간, 약 6시간 내지 72시간, 약 6시간 내지 48시간, 약 6시간 내지 24시간, 약 6시간 내지 12시간, 약 12시간 내지 96시간, 약 12시간 내지 72시간, 약 12시간 내지 48시간, 약 12시간 내지 24시간, 약 24시간 내지 96시간, 약 24시간 내지 72시간, 약 24시간 내지 48시간, 약 48시간 내지 96시간 또는 약 48시간 내지 72시간 동안 생체외에서 배양된다.
일부 실시형태에서, 세포는 본 명세서에 기재된 폴리시스트로닉 벡터의 도입(예를 들어, 전기천공에 의해) 후 96시간, 72시간, 48시간, 24시간, 12시간 또는 6시간 이내에 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시형태에서, 세포는 본 명세서에 기재된 폴리시스트로닉 벡터의 도입(예를 들어, 전기천공에 의해) 후 약 96시간, 약 72시간, 약 48시간, 약 24시간, 약 12시간 또는 약 6시간에 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시형태에서, 세포는 본 명세서에 기재된 폴리시스트로닉 벡터의 도입(예를 들어, 전기천공에 의해) 후 약 6시간 내지 96시간, 약 6시간 내지 72시간, 약 6시간 내지 48시간, 약 6시간 내지 24시간, 약 6시간 내지 12시간, 약 12시간 내지 96시간, 약 12시간 내지 72시간, 약 12시간 내지 48시간, 약 12시간 내지 24시간, 약 24시간 내지 96시간, 약 24시간 내지 72시간, 약 24시간 내지 48시간, 약 48시간 내지 96시간 또는 약 48시간 내지 72시간에 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다.
5.8 약제학적 조성물
생리학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 안정화제 중에 목적하는 정도의 순도를 갖는 본 명세서에 개시된 조작된 면역 효과기 세포의 집단을 포함하는 약제학적 조성물이 본 명세서에 제공된다(예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA] 참조). 허용 가능한 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용된 투여량 및 농도에서 수용자에게 무독성이며, 포스페이트, 시트레이트 및 기타 유기산과 같은 완충액; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 방부제(예컨대, 옥타데실다이메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤잘코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 뷰틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤, 예컨대, 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10개 잔기 미만) 폴리펩타이드; 단백질, 예컨대, 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대, 폴리바이닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 라이신; 단당류, 이당류 및 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 포함하는 기타 탄수화물; 킬레이트제, 예컨대, EDTA; 당, 예컨대, 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대 이온, 예컨대, 소듐; 금속 복합체(예를 들어, Zn-단백질 복합체); 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대, TWEEN™, PLURONICS™ 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다.
본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 대상체에서 면역 반응을 유도하고 암과 같은 병태를 치료하는 데 유용할 수 있다. 일 실시형태에서, 본 개시내용은 약제로서 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 조작된 면역 효과기 세포의 집단을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 암의 치료 방법에 사용하기 위한 약제학적 조성물을 제공한다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체에 본 명세서에 개시된 조작된 면역 효과기 세포의 집단 및 선택적으로 하나 이상의 추가적인 예방제 또는 치료제를 포함한다.
약제학적 조성물은 대상체에 대한 임의의 투여 경로를 위해 제형화될 수 있다. 투여 경로의 특정 예는 비경구 투여(예를 들어, 정맥내, 피하, 근육내)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 정맥내 투여를 위해 제형화된다. 주사제는 액체 용액 또는 현탁액과 같은 기존의 형태로 제조될 수 있다. 주사제는 하나 이상의 부형제를 포함할 수 있다. 예시적인 부형제는, 예를 들어, 물, 식염수, 덱스트로스, 글리세롤 또는 에탄올을 포함한다. 또한, 원하는 경우, 투여될 약제학적 조성물은 또한 소량의 습윤제 또는 유화제, pH 완충제, 안정화제, 용해도 향상제와 같은 무독성 보조 물질 및, 예를 들어, 소듐 아세테이트, 소르비탄 모노라우레이트, 트라이에탄올아민 올리에이트 및 사이클로덱스트린과 같은 기타 작용제를 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 정맥내 투여를 위해 제형화된다. 정맥내 투여에 적합한 담체는 생리학적 식염수 또는 인산 완충 식염수(PBS) 및 글루코스, 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리프로필렌 글리콜 및 이의 혼합물과 같은 증점제 및 가용화제를 포함하는 용액을 포함한다.
생체내 투여를 위해 사용되는 조성물은 멸균일 수 있다. 이는, 예를 들어, 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 쉽게 달성된다.
비경구 제제에 사용되는 약제학적으로 허용 가능한 담체는, 예를 들어, 수성 비히클, 비수성 비히클, 항균제, 등장화제, 완충액, 항산화제, 국소 마취제, 현탁제 및 분산제, 유화제, 봉쇄제 또는 킬레이트제 및 기타 약제학적으로 허용 가능한 물질을 포함한다. 수성 비히클의 예는 소듐 클로라이드 주사제, 링거 주사제, 등장성 덱스트로스 주사제, 멸균수 주사제, 덱스트로스 및 젖산 링거 주사제를 포함한다. 비수성 비경구 비히클은 식물성 고정유, 면실유, 옥수수유, 참깨유 및 땅콩유를 포함한다. 정균 또는 정진균 농도의 항균제가 페놀 또는 크레졸, 수은, 벤질 알코올, 클로로뷰탄올, 메틸 및 프로필 p-하이드록시벤조산 에스터, 티메로살, 벤잘코늄 클로라이드 및 벤제토늄 클로라이드를 포함하는 다중-용량 용기에 패키징된 비경구 제제에 추가될 수 있다. 등장화제는 소듐 클로라이드 및 덱스트로스를 포함한다. 완충액은 포스페이트 및 시트레이트를 포함한다. 항산화제는 소듐 바이설페이트를 포함한다. 국소 마취제는 프로카인 하이드로클로라이드를 포함한다. 현탁제 및 분산제는 소듐 카복시메틸셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스 및 폴리바이닐피롤리돈을 포함한다. 유화제는 폴리소르베이트 80(TWEEN® 80)을 포함한다. 금속 이온의 봉쇄제 또는 킬레이트제는 EDTA를 포함한다. 약제학적 담체는 또한 수혼화성 비히클용 에틸 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 프로필렌 글리콜; 및 pH 조정을 위한 소듐 하이드록사이드, 염산, 시트르산 또는 락트산을 포함한다.
약제학적 조성물에 이용되는 정확한 용량은 또한 투여 경로 및 이에 의해 야기되는 병태의 중증도에 따라 달라질 것이며, 실무자의 판단 및 각 대상체의 상황에 따라 결정되어야 한다. 예를 들어, 유효 용량은 또한 투여 수단, 표적 부위, 대상체의 생리학적 상태(연령, 체중 및 건강 포함), 투여되는 기타 약물 또는 치료가 예방적인지 또는 치료적인지 여부에 따라 달라질 수 있다. 치료 투여량은 안전성 및 효능을 최적화하기 위해 최적으로 적정된다.
5.9 치료적 사용 방법 및 적용
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 조작된 면역 효과기 세포의 집단, 벡터, 폴리뉴클레오타이드 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 유도하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 대상체는 암을 갖고 있다. 또 다른 양태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 조작된 면역 효과기 세포의 집단, 벡터, 폴리뉴클레오타이드 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 장애, 예를 들어, 암 또는 자가면역 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 개시내용은 조작된 면역 효과기 세포의 집단, 벡터, 폴리뉴클레오타이드 또는 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 장애, 예를 들어, 암 또는 자가면역 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
일부 실시형태에서, 세포는 상기 조작된 면역 효과기 세포의 집단이 투여되는 대상체에 대해 자가이다. 일부 실시형태에서, 세포는 상기 조작된 면역 효과기 세포의 집단이 투여되는 대상체에 대해 동종이계이다.
일부 실시형태에서, 질환 또는 장애는 암이다. 일부 실시형태에서, 암은 비암성 세포에 비해 암세포 표면 상의 CD19의 발현 또는 과발현과 관련이 있다. 일부 실시형태에서, 질환 또는 장애는 혈액암이다. 일부 실시형태에서, 혈액암은 백혈병 또는 림프종, 예를 들어, 급성 백혈병, 급성 림프종, 만성 백혈병 또는 만성 림프종이다. 예시적인 암은 CD19의 발현과 관련된 암, B-세포 급성 림프구양 백혈병(B-ALL)(B-세포 급성 림프아구성 백혈병 또는 B-세포 급성 림프구성 백혈병으로도 알려져 있음), t(v;11q23.3)를 동반한 B 림프아구성 백혈병; 재배열된 KMT2A, t(v;11q23.3)를 동반한 B 급성 림프아구성 백혈병; 재배열된 KMT2A, T-세포 급성 림프구양 백혈병(T-ALL)(T-세포 급성 림프아구성 백혈병 또는 T-세포 급성 림프구성 백혈병으로도 알려져 있음), 급성 림프구양 백혈병(ALL)(급성 림프아구성 백혈병 또는 급성 림프구성 백혈병으로도 알려져 있음), Ph-유사 급성 림프구양 백혈병(Ph-유사 ALL)(Ph-유사 급성 림프아구성 백혈병 또는 Ph-유사 급성 림프구성 백혈병으로도 알려져 있음), 만성 골수성 백혈병(CML), 만성 림프구양 백혈병(CLL)(만성 림프아구성 백혈병 또는 만성 림프구성 백혈병으로도 알려져 있음), 만성 림프구성 림프종, 소형 림프구성 림프종(SLL), B 세포 전림프구성 백혈병, 아세포성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 원발성 종격동(예를 들어, 흉선) 거대 B-세포 림프종(PMBCL), 여포성 림프종, 털 세포 백혈병, 소세포 여포성 림프종, 거대 세포 여포성 림프종, MALT 림프종, 맨틀 세포 림프종, 변연부 림프종, 다발성 골수종, 골수이형성증, 골수이형성 증후군, 비호지킨 림프종(NHL), 혈장아세포성 림프종, 형질세포양 수지상 세포 신생물, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증 및 최소 잔류 질환을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 혈액암은 B 세포암이다. 일부 실시형태에서, B 세포암은 백혈병 또는 림프종이다. 일부 실시형태에서, 혈액성 악성 종양은 B-ALL, T-ALL, ALL, CLL, SLL, NHL, DLBCL, 급성 이중표현형 백혈병 또는 최소 잔류 질환이다.
일부 실시형태에서, 암은 재발성 암이다. 일부 실시형태에서, 재발성 암은 비암성 세포에 비해 암세포의 표면 상의 CD19의 발현 또는 과발현과 관련이 있다. 일부 실시형태에서, 질환 또는 장애는 재발성 혈액암이다. 일부 실시형태에서, 재발성 혈액암은 재발성 백혈병 또는 재발성 림프종이다. 예시적인 재발성 암은 CD19의 발현과 관련된 재발성 암, 재발성 B-세포 급성 림프구양 백혈병(재발성 B-ALL)(재발성 B-세포 급성 림프아구성 백혈병 또는 재발성 B-세포 급성 림프구성 백혈병으로도 알려져 있음), t(v;11q23.3)를 동반한 재발성 B 림프아구성 백혈병; t(v;11q23.3)를 동반한 재배열된 KMT2A, 재발성 B 급성 림프아구성 백혈병; 재배열된 KMT2A, 재발성 T-세포 급성 림프구양 백혈병(재발성 T-ALL)(재발성 T-세포 급성 림프아구성 백혈병 또는 재발성 T-세포 급성 림프구성 백혈병으로도 알려져 있음), 재발성 급성 림프구양 백혈병(재발성 ALL)(재발성 급성 림프아구성 백혈병 또는 재발성 급성 림프구성 백혈병으로도 알려져 있음), 재발성 Ph-유사 급성 림프구양 백혈병(재발성 Ph-유사 ALL)(재발성 Ph-유사 급성 림프아구성 백혈병 또는 재발성 Ph-유사 급성 림프구성 백혈병으로도 알려져 있음), 재발성 만성 골수성 백혈병(재발성 CML), 재발성 만성 림프구양 백혈병(재발성 CLL)(재발성 만성 림프아구성 백혈병 또는 재발성 만성 림프구성 백혈병으로도 알려져 있음), 재발성 만성 림프구성 림프종, 재발성 소형 림프구성 림프종(재발성 SLL), 재발성 B 세포 전림프구성 백혈병, 재발성 아세포성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 재발성 버킷 림프종, 재발성 미만성 거대 B-세포 림프종(재발성 DLBCL), 재발성 원발성 종격동(예를 들어, 흉선) 거대 B-세포 림프종(재발성 PMBCL), 재발성 여포성 림프종, 재발성 털 세포 백혈병, 재발성 소세포 여포성 림프종, 재발성 거대 세포 여포성 림프종, 재발성 MALT 림프종, 재발성 맨틀 세포 림프종, 재발성 변연부 림프종, 재발성 다발성 골수종, 재발성 골수이형성증, 재발성 골수이형성 증후군, 재발성 비호지킨 림프종(NHL), 재발성 혈장아세포성 림프종, 재발성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 재발성 발덴스트롬 마크로글로불린혈증 및 재발성 최소 잔류 질환을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 재발성 혈액암은 재발성 B 세포암이다. 일부 실시형태에서, 재발성 혈액성 악성 종양은 재발성 B-ALL, 재발성 T-ALL, 재발성 ALL, 재발성 CLL, 재발성 SLL, 재발성 NHL, 재발성 DLBCL, 재발성 급성 이중표현형 백혈병 또는 재발성 최소 잔류 질환이다.
일부 실시형태에서, 암은 난치성 암, 예를 들어, 치료에 저항성인 암, 예를 들어, 표준 치료에 대해 저항성이 있거나 또는 시간 경과에 따라 치료에 저항성이 되는 암이다. 일부 실시형태에서, 난치성 암은 비암성 세포에 비해 암세포의 표면 상의 CD19의 발현 또는 과발현과 관련이 있다. 일부 실시형태에서, 질환 또는 장애는 난치성 혈액암이다. 일부 실시형태에서, 난치성 혈액암은 난치성 백혈병 또는 난치성 림프종이다. 예시적인 난치성 암은 CD19의 발현과 관련된 난치성 암, 난치성 B-세포 급성 림프구양 백혈병(난치성 B-ALL)(난치성 B-세포 급성 림프아구성 백혈병 또는 난치성 B-세포 급성 림프구성 백혈병으로도 알려져 있음), t(v;11q23.3)를 동반한 난치성 B 림프아구성 백혈병; t(v;11q23.3)를 동반한 재배열된 KMT2A, 난치성 B 급성 림프아구성 백혈병; 재배열된 KMT2A, 난치성 T-세포 급성 림프구양 백혈병(난치성 T-ALL)(난치성 T-세포 급성 림프아구성 백혈병 또는 난치성 T-세포 급성 림프구성 백혈병으로도 알려져 있음), 난치성 급성 림프구양 백혈병(난치성 ALL)(난치성 급성 림프아구성 백혈병 또는 난치성 급성 림프구성 백혈병으로도 알려져 있음), 난치성 Ph-유사 급성 림프구양 백혈병(난치성 Ph-유사 ALL)(난치성 Ph-유사 급성 림프아구성 백혈병 또는 난치성 Ph-유사 급성 림프구성 백혈병으로도 알려져 있음), 난치성 만성 골수성 백혈병(난치성 CML), 난치성 만성 림프구양 백혈병(난치성 CLL)(난치성 만성 림프아구성 백혈병 또는 난치성 만성 림프구성 백혈병으로도 알려져 있음), 난치성 만성 림프구성 림프종, 난치성 소형 림프구성 림프종(난치성 SLL), 난치성 B 세포 전림프구성 백혈병, 난치성 아세포성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 난치성 버킷 림프종, 난치성 미만성 거대 B-세포 림프종(난치성 DLBCL), 난치성 원발성 종격동(예를 들어, 흉선) 거대 B-세포 림프종(난치성 PMBCL), 난치성 여포성 림프종, 난치성 털 세포 백혈병, 난치성 소세포 여포성 림프종, 난치성 거대 세포 여포성 림프종, 난치성 MALT 림프종, 난치성 맨틀 세포 림프종, 난치성 변연부 림프종, 난치성 다발성 골수종, 난치성 골수이형성증, 난치성 골수이형성 증후군, 난치성 비호지킨 림프종(NHL), 난치성 혈장아세포성 림프종, 난치성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 난치성 발덴스트롬 마크로글로불린혈증 및 난치성 최소 잔류 질환을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 난치성 혈액암은 난치성 B 세포암이다. 일부 실시형태에서, 난치성 혈액성 악성 종양은 난치성 B-ALL, 난치성 T-ALL, 난치성 ALL, 난치성 CLL, 난치성 SLL, 난치성 NHL, 난치성 DLBCL, 난치성 급성 이중표현형 백혈병 또는 난치성 최소 잔류 질환이다.
일부 실시형태에서, 질환 또는 장애는 자가면역 질환 또는 장애, 예를 들어, 재발성 자가면역 질환 또는 장애 또는 난치성 자가면역 질환 또는 장애이다.
일부 실시형태에서, 조작된 세포 집단은 조혈 줄기 세포 이식 후 대상체에게 투여된다.
일부 실시형태에서, 조작된 세포 집단은 하나 이상의 예방제 또는 치료제와 조합하여(예를 들어, 이전에, 동시에 또는 이후에) 대상체에게 투여된다. 일부 실시형태에서, 치료제는 화학치료제, 항암제, 항혈관신생제, 항섬유화제, 면역치료제, 치료용 항체, 이중특이성 항체, "항체-유사" 치료용 단백질(예컨대, DARTs®, Duobodies®, Bites®, XmAbs®, TandAbs®, Fab 유도체), 항체-약물 접합체(ADC), 방사선치료제, 항신생물제, 항증식제, 종양용해성 바이러스, 유전자 변형제 또는 편집기(예컨대, CRISPR/Cas9, 아연 핑거 뉴클레이스 또는 합성 뉴클레이스 또는 TALEN), CAR T-세포 면역치료제, 조작된 T 세포수용체(TCR-T) 또는 이들의 임의의 조합이다. 일부 실시형태에서, 치료제는 항암제이다. 일부 실시형태에서, 치료제는 화학치료제이다. 이러한 치료제는 화합물, 항체, 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드의 형태일 수 있다.
일부 실시형태에서, 조작된 면역 효과기 세포의 집단, 벡터, 폴리뉴클레오타이드 또는 약제학적 조성물은 림프구 고갈 예비 양생법(lymphodepleting preparative regimen)의 투여 후 대상체에게 투여된다. 일부 실시형태에서, 림프구 고갈 예비 양생법은 적어도 하나의 화학치료제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 림프구 고갈 예비 양생법은 적어도 2개의 상이한 화학치료제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 림프구 고갈 예비 양생법은 사이클로포스파마이드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 림프구 고갈 예비 양생법은 대상체에서 면역 반응을 감소시키기에 충분한 양으로 대상체에게 투여되는 사이클로포스파마이드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 림프구 고갈 예비 양생법은 플루다라빈을 포함한다. 일부 실시형태에서, 림프구 고갈 예비 양생법은 대상체에서 면역 반응을 감소시키기에 충분한 양으로 대상체에게 투여되는 플루다라빈을 포함한다. 일부 실시형태에서, 림프구 고갈 예비 양생법은 사이클로포스파마이드 및 플루다라빈을 포함한다. 일부 실시형태에서, 림프구 고갈 예비 양생법은 각각 대상체에서 면역 반응을 감소시키기에 충분한 양으로 대상체에게 투여되는 사이클로포스파마이드 및 플루다라빈을 포함한다.
5.10 키트
일 양태에서, 본 명세서에 기재된 하나 이상의 약제학적 조성물, 조작된 효과기 세포의 집단, 폴리뉴클레오타이드 또는 벡터 및 사용 지침을 포함하는 키트가 본 명세서에 제공된다. 이러한 키트는, 예를 들어, 바이알, 튜브 등과 같은 하나 이상의 용기를 수용하도록 구획화된 운반체, 패키지 또는 용기를 포함할 수 있다. 적합한 용기는, 예를 들어, 보틀, 바이알, 주사기 및 시험관을 포함한다. 일 실시형태에서, 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 물질로 형성된다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물, 조작된 면역 효과기 세포의 집단, 폴리뉴클레오타이드 또는 벡터의 구성성분 중 하나 이상으로 채워진 하나 이상의 용기를 포함하는 약제학적 키트가 본 명세서에 제공된다. 일 실시형태에서, 키트는 본 명세서에 기재된 조작된 면역 효과기 세포의 집단을 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 일 실시형태에서, 키트는 본 명세서에 기재된 방법에 따라 조작된 면역 효과기 세포의 집단을 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 일부 실시형태에서, 키트는 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물 및 예방제 또는 치료제를 포함한다. 선택적으로 이러한 용기(들)과 관련된 통지는 의약품 또는 생물학적 제품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관에서 규정한 형식의 통지일 수 있으며, 이 통지는 인간 투여를 위한 제조, 사용 또는 판매 기관의 승인을 반영한다.
6. 실시예
이 부문(즉, 부문 6)의 실시예는 제한이 아니라 설명을 위해 제공된다.
6.1 실시예 1: CD19CAR, mbIL15 및 HER1t를 암호화하는 트랜스포존 플라스미드의 작제
다중유전자 공동 발현의 균질성 및 제품의 제조 가능성을 개선하기 위해, 폴리시스트로닉 발현 카세트를 포함하는 재조합 핵산 슬리핑 뷰티 트랜스포존 플라스미드를 작제하였다. 폴리시스트로닉 발현 플라스미드는 각각 서열번호 72의 항-CD19 CAR(CD19CAR), 서열번호 119의 막-결합 IL-15/IL-15Rα 융합 단백질(mbIL15) 및 서열번호 96 또는 서열번호 166의 "살해 스위치(kill switch)" 마커 단백질(HER1t)에 작동 가능하게 연결된 전사 조절 요소를 포함하며, 이들 각각은 별도의 폴리펩타이드 사슬의 발현을 가능하게 하기 위해 리보솜 스키핑(ribosome skipping)을 매개하는 F2A 요소 또는 T2A 요소에 의해 분리된다. 암호화된 단백질 각각의 개략도는 각각 N 말단(좌측)에서 C 말단(우측)으로 도 1a 내지 도 1c에 도시되어 있다.
간략하게는, 뮤린 단일클론 항체 FMC63의 경쇄 가변 영역(VL)(서열번호 1) 및 중쇄 가변 영역(VH)(서열번호 2)을 사용하여 CD19CAR을 생성하였다. VL은 CD19CAR의 성숙 N 말단에 배치하였고, VL에 대해 N-말단에 인간 GM-CSF 수용체 알파-사슬 신호 서열(서열번호 10)을 가지며 Whitlow 링커 펩타이드(서열번호 9)를 통해 VH에 연결하였다. 생성된 scFv를 N 말단에서 C 말단으로 순서대로 인간 CD8α 힌지 도메인(서열번호 37), 인간 CD8α 막횡단 도메인(서열번호 43), 인간 CD28 세포질 도메인(서열번호 57) 및 인간 CD3ζ 세포질 도메인(서열번호 60)에 연결하였다. CAR 발현을 향상시키기 위해, 인간 CD28 세포질 도메인의 아미노산 서열을 변형시켜 서열번호 57의 7번 내지 8번 아미노산에 야생형 서열 Leu-Leu 대신에 아미노산 서열 Gly-Gly를 통합시켰다.
Gly-Ser-풍부 링커 펩타이드(서열번호 125)를 통해 인간 IL-15(서열번호 123)를 인간 IL-15Ra(서열번호 124)에 연결시킴으로써 인간 IL-15에 대해 N-말단에 IgE 신호 서열(서열번호 176)을 갖는 mbIL15를 작제하였다.
인간 HER1의 도메인 III(서열번호 98)을 인간 HER1의 도메인 4의 1번 내지 21번 아미노산(서열번호 100)에 연결시킴으로써 도메인 III에 대해 N-말단에 Igκ 신호 서열(서열번호 169 또는 서열번호 170)을 갖는 HER1t를 작제하였다. 생성된 서열을 Gly-Ser-풍부 링커 펩타이드(서열번호 102)를 통해 인간 CD28 막횡단 도메인(서열번호 101)에 연결시켰다.
발현 및 기능에 대한 유전자/요소 순서의 효과를 조사하기 위해, 3개의 트라이시스트로닉 폴리뉴클레오타이드 발현 카세트인 카세트 1 내지 3을 생성하였다. 각각의 발현 카세트에서 요소의 5'에서 3' 순서는 다음과 같다: 카세트 1: CD19CAR-F2A-mbIL15-T2A-HER1t; 카세트 2: mbIL15-T2A-HER1t-F2A-CD19CAR; 및 카세트 3: HER1t-T2A-mbIL15-F2A-CD19CAR. 각 발현 카세트의 폴리뉴클레오타이드 서열은 표 10에 나타나 있다.
각각의 F2A 및 T2A 부위에서 N-말단 신호 서열 절단 또는 리보솜 스키핑을 고려하지 않고, 각 발현 카세트의 상응하는 이론적 폴리펩타이드 번역 산물이 표 11에 나타나 있다.
전술한 발현 카세트를 포함하는 6개의 재조합 핵산 슬리핑 뷰티 트랜스포존 플라스미드를 생성하였다. 각 플라스미드에서, 카세트 1 내지 3 중 하나뿐만 아니라 적합한 전사 조절 요소는 슬리핑 뷰티 트랜스포세이즈 SB11에 의해 인식되는 한 쌍의 역 말단 반복 서열(ITR)의 측면에 있다. 2쌍의 ITR: ITR 쌍 α 및 ITR 쌍 β를 각각의 발현 카세트에 대해 평가하였다. 생성된 6개의 트랜스포존 플라스미드는 표 14에 요약되어 있다.
대조 목적을 위해, 2개의 추가적인 트랜스포존 플라스미드를 제조하였다: CD19CAR을 암호화하는 플라스미드 DP1 및 N 말단에서 C 말단으로 mbIL15-T2A-HER1t를 암호화하는 발현 카세트를 포함하는 플라스미드 DP192. 플라스미드 DP1 및 플라스미드 DP2는 1:1 비로 조합될 때 본 명세서에서 "dTp 대조군"으로 지칭된다.
6.2 실시예 2: CD19CAR, mbIL15 및 HER1t를 공동 발현하는 T 세포의 생성 및 평가
본 실시예는 실시예 1에 기재된 플라스미드로부터 CD19CAR, mbIL15 및 HER1t를 공동 발현하는 T 세포의 생성 및 평가를 기술한다.
6.2.1 물질 및 방법
6.2.1.1 세포주
CD64, CD86, CD137L 및 절단된 CD19를 발현하는 클론 9로 지정된 K562-유래 활성화 및 증식 세포(AaPC)(예를 들어, 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Denman et al., PLoS One. 2012;7(1):e30264]에 기술되어 있는 바와 같음)를 유전적으로 변형된 T 세포의 확장을 위해 생체외에서 사용하였다. 세포독성 검정을 위한 표적 세포주는 CD19+(NALM-6, Daudi, CD19-EL4) 및 CD19neg(모 EL4) 종양 세포주였으며, 아메리칸 타입 컬처 컬렉션(American Type Culture Collection)(버니지아주 머내서스 소재)(또는, 예를 들어, 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Singh et al., PLoS One. 2013;8(5):e64138]에 기재되어 있는 바와 같이) 얻었다. 세포를 R10(10% 열-불활성화 소태아 혈청(FBS; 하이클론(Hyclone)/지이 헬스케어(GE Healthcare), 유타주 로건 소재) 및 1% Glutamax-100(써모피셔 사이언티픽(ThermoFisher Scientific), 매사추세츠주 월섬 소재)을 포함하는 RPMI 1640)에서 일상적으로 배양하였다. 세포를 37℃, 5% CO2의 표준 조건하에 배양하였다. 세포를 테스트한 결과, 마이코플라스마에 대해 음성인 것으로 나타났다. 짧은 탠덤 반복 DNA 핑거프린팅에 의해 세포주의 정체를 확인하였다.
6.2.1.2 정상적인 공여자 인간 T 세포
말초 혈액 또는 백혈구 성분채집술 생성물을 정상적인 공여자(키 바이오로직스(Key Biologics), 테네시주 멤피스 소재)로부터 얻었다. T-세포가 풍부한 출발 생성물을 사용하였다. 성분채집술 생성물을 0.5%(v/v) HSA가 포함된 CliniMACS® PBS/EDTA 완충액을 사용하여 희석하고, 실온(RT)에서 10분 동안 400Хg에서 원심분리를 통해 혈소판 고갈 단계를 수행한 후 동일한 완충액에 재현탁시켰다. 제조업체의 프로토콜에 따라, CD4-특이적 및 CD8-특이적 CliniMACS® 마이크로비드(CD4 GMP 마이크로비드 #170-076-702, CD8 GMP 마이크로비드 #170-076-703; 밀테니(Miltenyi))를 혼합 조건하에 실온에서 30분 동안 세포와 함께 인큐베이션한 후, CliniMACS Plus에서 상자성 선택을 거쳐 T 세포에 대한 출발 생성물을 농축시켰다. 생존/사멸 세포를 Cellometer 기기(넥셀롬 바이오사이언스(Nexcelom Bioscience); 매사추세츠주 로렌스 소재)에서 계수하였다. 단리된 T 세포를 CryoStor CS10에 동결 보존하고, 액체 질소 탱크의 증기상(vapor phase)에 보관하였다.
6.2.1.3 SB 시스템을 사용한
RPM CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포의 생성
본 실시예에 기술된 CAR-T 세포를 생성하기 위해, Nucleofector™ 2b 장치(론자(Lonza); 스위스 바젤 소재)를 사용하여 실시예 1에 기재된 바와 같은 dTp 대조군 또는 플라스미드 A 내지 플라스미드 F를 T 세포-풍부 출발 생성물에 전달하였다. 트랜스포존의 안정적인 유전적 통합을 가능하게 하기 위해 트랜스포존 형질감염의 각각의 경우에서 SB11 트랜스포세이즈를 암호화하는 플라스미드 TA를 공동 형질감염시켰다. 이중 전위(dTp 대조군 사용) 및 단일 전위(플라스미드 A 내지 플라스미드 F 사용) 모두에 대한 유전자 전달 과정의 개략도는 도 2에 도시되어 있다.
전기천공 전날, 동결 보존된 CD3-풍부 세포를 R10에 해동시키고, 세척하고, R10에 재현탁시키고, 37℃/5% CO2 인큐베이터에 밤새 두었다. 각 테스트 물질의 전기천공에 대한 세부사항은 다음과 같다:
모의 CD3 세포(DNA 없음; 본 명세서에서 "음성 대조군"으로도 지칭됨): 휴지 세포를 수거하고, 회전시키고, 임의의 DNA 플라스미드가 없는 장치-특이적 Nucleofector 완충액(인간 T 세포 Nucleofector 키트; 론자)에 재현탁시켰다.
dTp 대조군 RPM CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포: 휴지 세포를 수거하고, 회전시키고, 트랜스포존 DNA(dTp 대조군) 및 트랜스포세이즈 DNA(SB11 트랜스포세이즈를 암호화하는 플라스미드 TA)를 포함하는 Nucleofector 완충액에 3:1의 최종 트랜스포존:트랜스포세이즈 비로 재현탁시켰다.
sTp RPM CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포: 휴지 세포를 수거하고, 회전시키고, 트랜스포존 DNA(플라스미드 A 내지 플라스미드 F 중 하나) 및 트랜스포세이즈 DNA(플라스미드 TA)를 포함하는 Nucleofector 완충액에 3:1의 최종 트랜스포존:트랜스포세이즈 비로 재현탁시켰다.
전기-전달 직후, 각 큐벳으로부터의 내용물을 재현탁시키고, 37℃/5% CO2 인큐베이터에서 1시간 내지 2시간 인큐베이션을 위해 DNase를 포함하는 R10 배지로 옮겼다. 이어서, R10 배지로 전체 배지 교환을 수행하고, 세포를 37℃/5% CO2 인큐베이터에 밤새 두었다. 전기-전달 후 24시간(및 적어도 16시간)(제1일) 내에, 세포를 배양물로부터 수거하고, 유세포 분석에 의해 샘플링하여 CD19CAR, mbIL15 및 HER1t의 세포 표면 발현을 결정하였다.
1일차 형질감염된 T 세포를 1:1 T 세포/AaPC 비의 γ-방사선 조사된(100Gy) K562-AaPC 클론 9로 자극하였다. 추가적인 γ-방사선 조사된 AaPC 클론 9를 동일한 비로 7일 내지 10일마다 첨가하였다. 가용성 재조합 인간 IL-21(Cat# 34-8219-85, 이바이오사이언스(eBioscience), 캘리포니아주 샌디에고 소재)을 전기천공 다음날부터 30 ng/㎖의 농도로 첨가하고, AaPC의 추가로 표시되는 7일 내지 10일의 자극 주기(각각 이러한 자극 주기는 "Stim"으로 지칭됨) 동안 주당 3회 보충하였다. T 세포를 각 Stim의 종료 시에 계수하고, Cellometer 자동 세포 계수기를 사용하여 AOPI 배제에 기초하여 생존 가능 세포를 계수하였다. T 세포 마커, CD19CAR, mbIL15 및 HER1t의 발현을 7일 내지 10일마다 유세포 분석을 사용하여 평가하였다. 배양물에서 원치 않는 NK 세포의 확장은 제조업체의 지침에 따라 고갈(CD56 마이크로비드를 사용한 양성 선택; 밀테니)을 수행하여 해결하였다. Stim 1, 2, 3 및 4의 종료 시 총, CD3+, CD19CAR+ 및 HER1t+ T 세포의 확장을 결정하였다.
6.2.1.4 유세포 분석
최대 1×106개의 세포를 인간-특이적 형광색소 접합 항체로 염색하였다. 샘플 및 해당 대조군의 세포 표면 마커에 대한 염색은 먼저 FACS 완충액(PBS, 2% FBS, 0.1% 소듐 아자이드)에서 50% 마우스 혈청(잭슨 이뮤노리서치(Jackson ImmunoResearch), 펜실베니아주)과 함께 4℃에서 10분 동안 인큐베이션함으로써 배경 차단을 위해 Fc-수용체 차단 단계를 거쳤다. Brilliant 염색 완충액(비디 바이오사이언시스(BD Biosciences))에 희석된 표 15에 열거된 항체 조합의 100㎕의 항체 마스터 믹스를 첨가하여 면역염색을 수행하였다. 간략하게는, CD19CAR(클론 번호 136.20.1)의 항-CD19 부분에 특이적인 Alexa Fluor®(AF) 488 접합 항-이디오타입 항체(예를 들어, 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Jena et al., PLoS. 2013;8(3):e57838]에 기술되어 있는 바와 같음)를 사용하여 CD19CAR 발현을 검출하였다. CD19CAR 항-이디오타입 항체는 인비트로젠(Invitrogen)/써모피셔 사이언티픽(매사추세츠주 월섬 소재)에 의해 AF-488 형광단에 접합되었다. 형광 접합 세툭시맙 항체를 사용하여 HER1t 분자를 검출하였다. 형광-접합 세툭시맙 시약은 인비트로젠/써모피셔 사이언티픽에서 AF-647에 접합된 얼비툭스(Erbitux)를 상업적으로 구입하였다. 사용된 다른 형광 접합 항체는 CD3(클론 SK7), IL-15(34559), CD45(클론 HI30) 및 CD19-CAR 이디오타입(클론 136.20.1)을 포함하였다(표 15).
표 15의 항체 조합을 포함하는 마스터 믹스를 순차적 방식으로 첨가하고(CD19CAR, mbIL15에 이어 나머지 항체 칵테일), 4℃에서 최대 30분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 FACS 완충액으로 세척한 다음, 고정 가능한 생존성 염색(fixable viability stain)-620 생존성 염료(PBS 중 1:1000; 비디 바이오사이언시스)와 함께 4℃에서 10분 동안 인큐베이션한 후 FACS 완충액으로 세척하였다. FACSDiva 소프트웨어(v.8.0.1, 비디 바이오사이언시스)와 함께 LSR Fortessa(비디 바이오사이언시스)를 사용하여 데이터를 수집하고, FlowJo 소프트웨어(버전 10.4.2; 트리스타(TreeStar), 오리건주 애슐랜드 소재)로 분석하였다. 달리 기술되지 않는 한, 게이팅된 세포 이벤트, 단일체, 생존 가능 이벤트 및 CD3+ 세포에 대해 이식유전자 발현을 평가하였다.
6.2.1.5 웨스턴 블롯 분석
생체외 확장된 CD19CAR-변형된 T 세포를 원심 분리하고, 프로테이스 저해제(Complete Mini, 로슈(Roche))를 포함하는 RIPA 완충액으로 펠릿을 용해시켰다. 용해물을 4℃에서 20분 동안 인큐베이션하고, 상청액을 -20℃에서 보관하였다. 바이신코닌산(BCA) 검정(써모피셔 사이언티픽, 23227)을 수행하여 용해물의 총 단백질 농도를 결정하였다. 제조업체의 지침에 따라 Wes 2010 웨스턴 블롯 플랫폼(프로테인심플(ProteinSimple)), Wes 2010)에서 웨스턴 블롯을 수행하였다. 각 샘플에 대해, 0.1 ㎍/㎖ 내지 0.2 ㎍/㎖의 단백질 용해물을 5×형광 마스터 혼합물(프로테인심플, DM-002)과 혼합하고, 열 변성시키고, 얼음에서 냉각시키고, 카트리지(프로테인심플, SM-W004)에 로딩하였다. CD19CAR 단백질의 검출을 위해, 마우스 항-인간 CD247(비디 바이오사이언시스, 551033) 1차 항체 및 HRP-염소 항-마우스(프로테인심플, DM-002) 2차 항체를 사용하였다. CD19 CAR을 발현하는 Jurkat 세포를 양성 대조군으로 사용하였다. mbIL15 키메라 단백질의 검출을 위해, 1차 항체인 염소 항-인간 IL-15 항체(알앤디(R&D), AF315) 및 2차 항체인 HRP-항염소(프로테인심플, 043-552-2)를 사용하였다. 재조합 인간 IL-15 단백질(알앤디, 247-ILB)을 양성 대조군으로 로딩하였다. HER1t 키메라 단백질의 검출을 위해, 1차 항체인 마우스 항-인간 EGFR(시그마(Sigma), AMAB90819-100㎕) 및 2차 항체 HRP-항마우스 항체(프로테인심플, DM-002)를 사용하였다. 인간 EGFR 단백질(바이오시스템즈 아크로(Biosystems Acro), EGR-H5252-100㎍)을 양성 대조군으로 사용하였다.
6.2.1.6 크로뮴 방출 검정
dTp 대조군, 플라스미드 A 및 플라스미드 D를 사용하여 생성된 생체외 확장된 CD19-특이적 T 세포의 항원 특이적 세포독성을 상이한 효과기 대 표적(E:T) 비(20:1, 10:1, 5:1, 2.5:1 및 1.25:1)에서 방사성 표지된(51Cr) 표적 세포의 용해에 의해 결정하였다. CD19+(NALM-6, Daudi, CD19-EL4) 및 CD19neg(EL4) 종양 세포주를 표적으로 사용하였다. T 세포 및 방사성 표지된 표적 세포를 3회 반복하여 공동 인큐베이션하고, 4-시간 인큐베이션의 종료 시 상청액에서 방사능을 측정함으로써 용해를 결정하였다. TopCount NXT(퍼킨 엘머(Perkin Elmer))를 사용하여 크로뮴 방출을 검출하고, 특이적 용해를 다음과 같이 계산하였다:
배지 및 Triton-X 100-처리된 표적 세포는 각각 배경 및 최대 용해에 대한 대조군 역할을 하였다. 각각의 E:T 비에서 dTp 대조군(N= 6), 플라스미드 A(N=4) 및 플라스미드 D(N=1) 용해에 대한 평균±SD를 계산하였다.
6.2.1.7 항체 의존적 세포독성(ADCC)
mbIL15-HER1t를 발현하는 CD19-특이적 T 세포의 ADCC를 수정된 4-시간 크로뮴 방출 검정에 의해 결정하였으며, 여기서 T 세포(특이적 항체 처리함)는 표적 세포로 작용하고, Fc 수용체를 발현하는 생체외 활성화되고 확장된 NK 세포는 효과기 세포로 사용하였다. 5가지 상이한 효과기 대 표적(E:T) 비의 범위(40:1, 20:1, 10:1, 5:1 및 2.5:1)를 테스트하고, 방사성 표지된 표적 T 세포로부터 51Cr 방출의 검출에 의해 표적 용해량의 측정을 확립하였다. 생체외 확장된(Stim 4) CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포를 HER1t-특이적 항체 세툭시맙(임클론 엘엘씨(Imclone LLC), NDC 66733-948-23) 또는 비특이적(무관한) 항체 리툭시맙(바이오젠 인크.(Biogen Inc.) 및 제넨테크 유에스에이 인크.(Genentech USA Inc.), NDC 50242-051-21) 20 ㎍/㎖과 함께 실온에서 20분 내지 30분 동안 인큐베이션하고, 이들 T 세포를 표적으로 사용하였다. NK 세포의 세포용해 활성을 평가하기 위해 NALM-6 및 K562 세포주를 각각 음성 및 양성 대조군으로 사용하였다(항체 처리하지 않음). 배지 단독 또는 Triton X-100(시그마)으로 처리된 표적 세포를 각각 자발적 및 최대 용해에 대한 대조군으로 사용하였다. 51Cr 용해 퍼센트(%)를 다음과 같이 계산하였다:
용해 퍼센트 데이터를 NK 세포에 의해 관찰된 최대 세포용해로 정규화하였다. dTp 대조군(N= 6), 플라스미드 A(N=4) 및 플라스미드 D(N=1)에 대한 평균±SD를 계산하였다.
6.2.1.8 이식유전자 카피 수를 결정하기 위한 정량적 액적 디지털 PCR(ddPCR)
ddPCR 방법을 사용하여 유전적으로 변형된 T 세포의 세포당 CD19CAR, mbIL15 및 HER1t 평균 이식유전자 통합 이벤트의 존재 및 정량화를 결정하였다. 이중-트랜스포존 대조군 또는 테스트 플라스미드(각각 dTp 대조군 또는 플라스미드 A 내지 플라스미드 F)로 형질감염된 생체외 확장된(Stim 4) CD19-mbIL15-HER1t T 세포, 모의 형질감염된 CD3(DNA가 없는 음성 대조군), CD19CAR+ Jurkat 세포(CD19CAR에 대한 양성 대조군), mbIL15+ Jurkat 세포(mbIL15에 대한 양성 대조군) 및 CD19CAR+HER1t+ T 세포(HER1t에 대한 양성 대조군)로부터의 게놈 DNA(gDNA)를 상업적으로 입수 가능한 키트(퀴아젠(Qiagen))를 사용하여 단리하였다. 프라이머/프로브 서열은 CD19CAR, mbIL15 및 HER1t 이식유전자에 특이적이도록 설계하였다. 표적 프라이머/프로브를 FAM-표지된 프로브가 있는 바이오-래드 시스템(바이오-래드(Bio-Rad))에 의해 합성하였다. HEX-표지된 프로브(바이오-래드)를 사용하여 모든 샘플을 특정 인간 내인성 참조 유전자인 EIF2C1로 이중체화하였다. QX-100 액적 생성기를 사용하여 DG8 카트리지(바이오-래드)에서 제조업체의 프로토콜에 따라 PCR 액적을 생성하였으며, 여기서 각각 20㎕의 PCR 혼합물은 대략 20,000나노리터 크기의 액적으로 분할하였다. PCR 액적을 96-웰 PCR 플레이트로 옮기고, 포일로 밀봉하였다. 바이오-래드 C1000 유전자 증폭기로 PCR을 수행하였다[95℃(10분); 94℃(30초), 58℃(30초) 및 98℃(10분); 12℃(무기한)의 40주기]. QX-100 디지털 액적 PCR 시스템(바이오-래드)을 사용하여 DNA 카피 수를 평가하였다. 모든 샘플을 3회 반복 실행하였다. 유전자증폭기에서 반응 완료 후, PCR 플레이트를 QX200™ Droplet Digital™ PCR 시스템 판독기로 옮겨 데이터를 수집하였다. QuantaSoft™ 소프트웨어(버전 1.7.4, 바이오-래드)를 사용하여 데이터를 분석하였다. 이식유전자 카피 수를 결정하기 위해, 표적(CD19CAR, mbIL15 및 HER1t) 대 참조 유전자(EIF2C1) 비에 2를 곱하였으며, 이는 각 세포가 2 카피의 참조 EIF2C1 유전자를 포함하기 때문이다. 참조 유전자를 2 카피/세포로 설정한 소프트웨어 프로그램에서 카피 수 변이(copy number variant: CNV) 설정을 이용하였다(예를 들어, 각각의 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Belgrader et al., Clinical Chemistry, 2013;59(6):991-994, 및 Hindson et al., Anal Chem. 2011;83:8604-8610] 참조). QuantaSoft™ 소프트웨어에서, 카피 수는 게놈 내 참조 종의 카피 수를 곱한 표적 분자 농도 대 참조 분자 농도의 비를 계산함으로써 자동으로 결정된다.
6.2.1.9 통계적 분석
통계적 테스트를 각 통계의 보고와 함께 명시하였다. 처리 그룹 간의 차이를 비교하기 위해 사후 분석을 수행하였으며, 각 통계 결과와 함께 보고하였다. 오차는 표준 편차(SD)로 보고하였다. 통계적 분석을 수행하기 위해 GraphPad Prism(버전 8) 소프트웨어를 사용하였다. P < 0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주하였다.
6.2.2 CD19CAR, mbIL15 및 HER1t를 공동 발현하는 CAR-T 세포의 유전적 변형, 발현 특성화 및 확장
공여자 T 세포-풍부 출발 생성물을 트랜스포존 플라스미드(음성 대조군), dTp 대조군 또는 플라스미드 A 내지 플라스미드 F 없이 형질감염시켰다. RPM CD19CAR-mbIL15HER1t T 세포를 SB 시스템을 사용하여 전기천공을 통해 3명의 공여자로부터 생성하고, RPM T-세포 생성물에 존재하는 생성된 트랜스제닉 하위집단(CD19CAR+-mbIL15-HER1t+, CD19CAR+mbIL15-HER1tneg, CD19CARneg-mbIL15-HER1t+, CD19CARneg-mbIL15-HER1tneg)의 평가를 형질감염 후 제1일에 수행하였다(표 16).
제1일에, 각각의 RPM CAR-T 세포 그룹은 비슷한 평균 생존율(62% 내지 64%)(표 16 및 도 3a) 및 97%의 평균 CD3+ 빈도(표 16 및 도 3b)를 나타내었다. 개별 이식유전자 발현의 평가와 관련하여, 플라스미드 A(31%±13%), 플라스미드 B(28%±15%) 및 플라스미드 D(28%±17%)는 sTp 변이체 사이에서 가장 큰 CD19CAR 발현을 산출하였고, 이는 dTp 대조군(20%±15%)보다 약 1.5-배 더 큰 발현이었으며 1번(대부분 N-말단) 또는 3번(대부분 C-말단) 위치의 CD19CAR 이식유전자에 해당한다(표 16 및 도 3c). 플라스미드 B(24%±9%) 및 플라스미드 E(20%±11%)는 mbIL15의 가장 높은 발현을 나타내었으며, 플라스미드 A(13%±5%) 및 플라스미드 D(16%±12%)가 그 뒤를 이었고, 이는 dTp 대조군-변형된 T 세포에 의해 관찰된 9%±8% 발현보다 더 높았으며 1번 위치의 mbIL15 이식유전자에 해당하며 2번 위치(중간 위치)에 있을 때 중간 발현이 뒤따랐다(표 16 및 도 3d). 플라스미드 A, 플라스미드 D 및 플라스미드 F는 가장 높은 HER1t 발현(각각 30%±11%, 29%±15% 및 34%±5%)을 보였고, 이는 dTp 대조군(13%±13%)보다 약 2-배 더 큰 발현이었으며 1번 또는 3번 위치의 HER1t에 해당한다(표 16 및 도 3e).
K562-AaPC 클론 9에서 4번의 반복적 자극으로 공여자 A로부터의 세포를 생체외 확장하였다. 도 4a 내지 도 4f, 도 5a 내지 도 5f, 도 6a 내지 도 6f, 도 7a 내지 도 7f, 도 8a 내지 도 8f, 도 9a 내지 도 9f 및 도 10a 내지 도 10f에 도시된 바와 같이, 이식유전자 공동 발현을 2-매개변수 흐름도를 통해 제1일 및 Stim 1, 2, 3 및 4의 종료 시 평가하였다. 제1일의 경우, dTp 대조군-변형된 T 세포는 작은 CD19CAR+HER1t+(5%)/CD19CAR+mbIL15+(3%) T 세포 집단(각각 도 4d 및 도 4e) 및 약 2-배 더 큰 CD19CAR+HER1tneg(9%) T 세포 집단(도 4d)의 표준 이종 이식유전자 발현 패턴을 나타내는 것으로 관찰되었다. HER1t 및 mbIL15에 대해 2%의 낮은-수준의 공동 발현이 관찰되었다(도 4f). 플라스미드 A-변형된 T 세포는 CD19CAR 및 HER1t(17%)뿐만 아니라 8% HER1t+mbIL15+ T 세포(각각 도 5d 및 도 5f)와 12% HER1t+mbIL15neg(도 5f) 및 8% CD19CAR+mbIL15+ 서브세트의 공동 발현을 나타내었다. 플라스미드 B-변형된 T 세포는 mbIL15의 발현을 개선(16% CD19CAR+mbIL15+)하였지만(도 6e 및 도 11b), 불량한 HER1t 발현(21% CD19CAR+HER1tneg 및 5% CD19CAR+HER1t+)을 나타내었다(도 6d 및 도 11c). 플라스미드 C-변형된 T 세포는 CD19CAR 및 HER1t(13%)의 공동 발현을 나타내었지만(도 7d), 플라스미드 A와 비교하여 더 낮은 HER1t+mbIL15+를 나타내었다(도 7f). 플라스미드 D-변형된 T 세포는 27% CD19CAR+HER1t+ 서브세트 및 8% CD19CAR+HER1tneg 서브세트를 나타내었다(도 8d). mbIL15는 또한 18% CD19CAR+mbIL15+ 세포가 검출되어 양호한 발현을 나타내었다(도 8e). mbIL15에 대한 HER1t 발현과 함께 HER1t 및 mbIL15 공동 발현에서 약간의 이질성이 있었다(13% HER1t+mbIL15neg 및 16% HER1t+mbIL15+)(도 8f). 플라스미드 B-변형된 T 세포와 마찬가지로, 플라스미드 E-변형된 T 세포는 불량한 HER1t 발현(20% CD19CAR+HER1tneg 및 5% CD19CAR+HER1t+)을 나타내었지만(도 9d 및 도 11c), mbIL15의 개선된 발현을 나타내었다(16% CD19CAR+mbIL15+)(도 9e 및 도 11b). 플라스미드 C-변형된 T 세포와 유사하게, 플라스미드 F-변형된 T 세포는 CD19CAR 및 HER1t의 공동 발현(25%)(도 10d) 및 13% HER1t+mbIL15+ 발현(도 10f)을 나타내었다. 전반적으로, RPM T 세포에서 1일차에 이식유전자 발현 패턴은 플라스미드 A 및 플라스미드 D에 이어 플라스미드 F에 가장 유리한 CD19CAR/HER1t 공동 발현 및 총 mbIL15 발현을 나타내었다.
Stim 4 생체외 확장된 T 세포는 모든 처리에서 90% 초과의 CAR 발현을 산출하였다. dTp 대조군-변형된 T 세포에서의 63%(도 4c)와 비교하여 가장 큰 mbIL15 발현이 플라스미드 A 및 플라스미드 D-변형된 세포에서 관찰되었다(각각 66% 및 72%)(각각 도 5c 및 도 8c 및 도 11b). 추가적으로, 가장 큰 총 HER1t 발현은 플라스미드 A 및 플라스미드 D-변형된 세포에서만 관찰되었고(각각 95%)(도 5b, 도 8b 및 도 11c), 이는 dTp 대조군(78%)을 능가하였으며(도 4b 및 도 11c), 모두 44% 미만의 발현을 나타낸 다른 sTp 변이체보다 결정적으로 더 우수하였다(도 6b, 도 7b, 도 9b, 도 10b 및 도 11c).
특히, 플라스미드 A-변형된 세포(94%) 및 플라스미드 D-변형된 세포(94%)에서 Stim 4 생체외 확장된 CD19CAR+HER1t+ 공동 발현이 가장 높았을 뿐만 아니라, 추가적으로 CD19CAR 및 HER1t 발현 수준은 고도로 연관되어 균일한 CAR+HER1t+ 발현 패턴으로 이어졌다(도 5d 및 도 8d). 이는 dTp 대조군-변형된 세포에 의해 나타난 확산된(diffuse) CAR+HER1t+ 집단과 대조된다(도 4d). 마찬가지로, 플라스미드 A-변형된 세포 및 플라스미드 D-변형된 세포에서 CAR+mbIL15+ 발현 패턴은 dTp 대조군-변형된 세포에서 관찰된 확산 패턴과 대조적으로 고도로 연관되고 균일하였다(각각 도 5e, 도 8e 및 도 4e).
Stim 4 생체외 확장된 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포로부터의 세포 용해물에 대해 웨스턴 블롯에 의해 단백질 발현의 확인을 수행하였다. 세포를 준비하고, 변형된 세포에서 CD19CAR 단백질의 검출을 위한 항-인간 CD247(도 12a), mbIL15의 검출을 위한 항-인간 IL-15(도 12b) 및 HER1t의 검출을 위한 항-인간 EGFR(도 12c)로 단백질 전달 및 프로빙을 수행하였다. 적절한 특이성을 가진 2차 HRP 항체를 검출에 사용하였다. CD19CAR을 발현하는 Jurkat 세포를 CD19CAR 검출을 위한 양성 대조군으로 사용하였다. 재조합 인간 IL-15(rhIL-15) 및 DNA가 없는(음성 대조군) T 세포는 각각 키메라 IL-15의 검출을 위한 양성 및 음성 대조군의 역할을 하였다. 재조합 인간 EGFR을 절단된 EGFR(tEGFR)의 검출을 위한 양성 대조군으로 사용하였다.
항-CD3ζ 항체를 사용하여 CD3ζ의 웨스턴 블롯 분석에 의해 CD19CAR 발현을 확인하였다. 도 12a에 도시된 바와 같이, 내인성 CD3ζ 밴드(약 16kDa)의 검출이 모든 T 세포 샘플에서 관찰되었다. 약 60kDa 밴드/밴드들은 CD19-특이적 CAR의 키메라 CD3ζ 단백질을 나타낸다. 대조군 rhIL-15의 검출은 예상된 약 15kDa에서 발생하였고, 키메라 mbIL15 밴드는 약 140kDa에서 관찰되었다(도 12b). HER1t(절단된 EGFR, tEGFR) 발현은 약 50kDa에서 변형된 T 세포에서 관찰되었고, 전장 EGFR은 rhEGFR에서 약 190kDa에서 검출되었다(도 12c).
모든 트랜스포존 변이체에 대해 공여자 A에서 수치 확장을 평가하였다. T-세포 풍부 출발 생성물을 해동시키고, 밤새 두었다. dTp 대조군과 함께 Amaxa Nucleofector 용액을 사용하여 세포를 전기천공하고, 공여자 A에 대한 플라스미드 A 내지 플라스미드 F와 비교하였다. 다음날, 세포를 γ-방사선 조사된(100Gy) K562-AaPC 클론 #9로 자극하였다. 추가적인 반복 자극(Stim)은 7일 내지 10일마다 발생하였다. T 세포를 제1일 및 각 Stim의 종료 시에 계수하고, 자동 세포 계수기를 사용하여 AOPI 배제에 기초하여 생존 가능 세포를 계수하였다. 전반적으로, 모든 배양물은 수치 확장을 달성하였다. CD19CAR-특이적 확장은 모든 sTp 변이체에 대해 dTp 대조군보다 약 0.5 로그 내지 1 로그 더 컸다(도 13a). mbIL15-특이적 확장은 dTp 대조군과 비슷한 확장을 보이는 플라스미드 E를 제외한 모든 sTp 변이체에 대해 dTp 대조군보다 약 0.5 로그 내지 1 로그 더 컸다(도 13b). HER1t-특이적 확장은 가변적이었다: 플라스미드 B 및 플라스미드 E는 HER1t+ T 세포의 가장 낮은 확장을 나타내었고, 플라스미드 C 및 플라스미드 F는 dTp 대조군 및 플라스미드 A와 비슷한 확장을 나타내었으며, 플라스미드 D는 가장 큰 수치 확장을 나타내었다(도 13c).
본 실시예는 CD19CAR-mbIL15-HER1t 트라이시스트로닉 트랜스포존 플라스미드를 사용한 T 세포의 유전적 변형, 즉, CD19CAR에 대한 항원 특이의 재지시, mbIL15+ 세포의 조건부 제거를 가능하게 하는 HER1t 공동 발현, mbIL15의 허용 가능한 총 발현 및 3개의 모든 이식유전자의 효율적이고 균일한 공동 발현의 1차 목적을 가장 잘 충족시킴을 입증한다. 이러한 기준을 고려하면, CD19CAR-F2A-mbIL15-T2A-HER1t의 요소 순서를 갖는 플라스미드 A 및 플라스미드 D 단일 트랜스포존 작제물이 목적하는 기준을 가장 잘 충족한다.
6.2.3 CD19CAR, mbIL15 및 HER1t를 공동 발현하는
CAR-T 세포의 기능적 특성화
CD19CAR, mbIL15 및 HER1t를 공동 발현하는 CAR-T 세포의 기능적 특징을 평가하기 위해 검정을 수행하였다.
6.2.3.1 CD19CAR, mbIL15 및 HER1t를 발현하는 CAR-T 세포에 의한 CD19-지시된 세포독성 및 사이토카인 발현의 특이성
CD19+ 종양 세포 표적화의 특이성을 입증하기 위해 세포독성 검정을 수행하였다. CD19-발현 종양 세포주(NALM-6, Daudi β2M 및 조작된 CD19 EL-4) 및 CD19neg 모 EL-4 세포주의 활성을 비교함으로써 CD19+ 종양 표적에 대한 특이성을 입증하였다. 세포독성 검정은 표준 4-시간 크로뮴 방출 검정에서 20:1 내지 1.25:1 범위의 E:T 비로 테스트하였다. 플라스미드 A 내지 플라스미드 F로 형질감염된 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포는 가장 낮은 E:T에서 약 50%의 모든 CD19+ 표적의 특이적 용해를 보여주었으며, 이는 dTp 대조군 세포와 비슷하였다(도 14a 내지 도 14h). CD19neg 표적의 용해는 낮은 E:T에서 최소였다. 단일 트랜스포존으로부터 이식유전자의 공동 발현을 초래하는 플라스미드 A 내지 플라스미드 F를 이용한 T 세포의 변형은 dTp 대조군으로 변형된 세포에 비해 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포의 세포독성 기능을 변경하지 않았다.
6.2.3.2 ADCC를 통한 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포의 HER1t-매개성 고갈
세포 표면에서 mbIL15 및 CD19CAR과 함께 HER1t를 공동 발현하고 선택적으로 주입된 mbIL15+ T 세포를 고갈시키는 메커니즘을 제공하기 위해 HER1t를 트라이시스트로닉 설계에 포함시켰다. HER1t-발현 세포는 HER1t에 결합하고 항체-의존적 세포독성(ADCC)을 매개하는 임상적으로 이용 가능한 단일클론 항체인 세툭시맙의 투여에 의해 제거될 수 있다. 생체외 확장된 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포에 대해 ADCC를 유도하는 세툭시맙의 능력을 확인하기 위해 시험관내 평가를 수행하였다. 유전적으로 변형된 T 세포는 세툭시맙(항-HER1t 항체) 또는 리툭시맙(항-CD20 항체; 음성 대조군)의 존재하에 Fc 수용체-발현 NK 세포를 효과기로 사용하는 표준 4-시간 크로뮴 방출 검정에서 표적의 역할을 하였다. 도 15에 도시된 바와 같이, 세툭시맙의 추가는 dTp 대조군, 플라스미드 A, 플라스미드 C, 플라스미드 D 및 플라스미드 F로 생성된 표적 HER1t-변형된 T 세포의 고갈을 초래하였다. 플라스미드 A 및 플라스미드 D로 생성된 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포는 가장 높은 수준의 선택적 고갈을 나타내었다(각각 약 60% 및 약 50%). 세툭시맙은 음성 대조군(HER1tneg) 세포의 용해를 보여주지 못하여 HER1t-특이적 작용 메커니즘을 확인하였다.
이러한 데이터는 고갈 전략을 필요로 하는 불리한 임상 효과의 경우에, 플라스미드 A 및 플라스미드 D를 사용하여 생성된 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포를 고갈시키기 위한 세툭시맙의 사용을 뒷받침한다.
6.2.3.3 SB 시스템-변형된 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포의 생체외 확장 후 CD19CAR, mbIL15 및 HER1t 이식유전자의 안정적인 통합
생체외 확장된 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포에서 CD19CAR, mbIL15 및 HER1t 이식유전자의 카피 수를 CD19CAR, mbIL15 및 HER1t에 특이적인 ddPCR 및 프라이머/프로브 세트를 사용하여 조사하였다. 결과는 도 16에 도시되어 있다. 카피 수를 2 카피/세포로 존재하는 것으로 알려진 인간 참조 유전자 EIF2C1로 정규화하였다. dTp 대조군은 CD19CAR과 각각의 mbIL15 및 HER1t 사이에 상이한 통합 수준을 갖는 것으로 관찰되었다(CD19CAR의 경우 세포당 약 2.5카피 및 mbIL15 및 HER1t의 경우 세포당 약 8카피). 플라스미드 C- 및 플라스미드 F-생성된 T 세포는 세포당 10 초과의 이식유전자 카피를 나타내었다. 플라스미드 A-, 플라스미드 D- 및 플라스미드 E-생성된 세포는 세포당 약 5의 평균 카피 수를 나타낸 반면, 플라스미드 B-생성된 세포는 세포당 약 7의 평균 카피 수를 나타내었다. 양성 대조군 T 세포(AaPC에서 증식됨)는 세포당 평균 약 1카피의 이식유전자 삽입을 보였다.
요약하면, RPM하에 제조된 세포의 1차 인간 T 세포 게놈으로의 트랜스포존 삽입 수의 분석에 기초하여, 이러한 세포는 이식유전자의 안정적인 통합을 거치며, 플라스미드 A-, 플라스미드 D- 및 플라스미드 E-생성된 CD19-mbIL15-HER1t T 세포는 다른 sTp 변이체뿐만 아니라 dTp 대조군과 비교하여 가장 유리한(낮은) 통합 값을 나타내었다. 또한, 모든 sTp 변이체에서 생성된 T 세포는 dTp 대조군에서 생성된 T 세포보다 3개의 모든 이식유전자에 걸쳐 훨씬 더 일관된 통합 값을 보여주었다.
6.3 실시예 3: 후보 트라이시스트로닉 sTp SB DNA 플라스미드의 다중-공여자 평가
실시예 2의 sTp 플라스미드의 평가는 다음에 기초하여 추가 테스트를 진행하기 위한 후보로서의 플라스미드 A 및 플라스미드 D를 확인하였다: (i) 유세포 분석에 의해 검출된 바와 같은 제1일 및 Stim 4에서의 이식유전자의 유리한 공동 발현; (ii) 웨스턴 블롯에 의해 검출된 바와 같은 Stim 4에서 전체 이식유전자 발현; (iii) 허용 가능한 이식유전자-특이적 수치 확장; (iv) 영향을 받지 않은 세포독성; 및(v) 유리한 선택적 제거. 본 실시예는 추가적인 공여자에서 후보 플라스미드 A의 지속적인 평가를 기술한다. 단일 공여자에 대한 플라스미드 D 데이터는 참조용으로 포함되며, 이식유전자 순서가 동일하므로 플라스미드 A와 비교할 수 있다.
6.3.1 물질 및 방법
물질 및 방법은 표시된 것을 제외하고는 부문 6.2.1에 기재된 바와 같다.
6.3.2 CD19CAR, mbIL15 및 HER1t를 공동 발현하는 CAR-T 세포의 유전적 변형, 발현 특성화 및 확장
실시예 2와 유사하게, T 세포-풍부 생성물을 dTp 대조군, 플라스미드 A 및 플라스미드 D로 전기천공하고, 방사선 조사된 클론 9 AaPC에서 공동 배양을 통해 생체외 확장하여 RPM T 세포(제1일) 및 Stim 4 증식된 세포를 평가하였다. dTp 대조군(n=10, 제1일; n=5, Stim 1; n=7, Stim 2; n=6, Stim 3; n=5, Stim 4; 도 17a), 플라스미드 A(n=8, 제1일; n=3, Stim 1; n=4, Stim 2; n=4, Stim 3; n=4, Stim 4; 도 17b) 및 플라스미드 D(n=7, 제1일; n=2, Stim 1; n=2, Stim 2; n=1, Stim 3; n=1, Stim 4; 도 17c)를 사용하여 생성된 T 세포의 성장 동역학 및 이식유전자-특이적 확장은 약 1011개의 세포의 처리와 비슷하였다.
유사하게는, T 세포-풍부 생성물을 dTp 대조군(n=6, 제1일; n=3, Stim 4)(도 18a), 플라스미드 A(n=3, 제1일; n=3, Stim 4)(도 18b) 및 플라스미드 D(n=1, 제1일; n=1, Stim 4)(도 18c)로 전기천공하고, 방사선 조사된 클론 9 AaPC에서 공동 배양을 통해 생체외 확장시켰다. 1일차 RPM T 세포에서 CD19CAR/HER1t 공동 발현의 평가는 플라스미드 A 또는 플라스미드 D로 변형된 세포가 dTp 대조군-변형된 세포에 비해 표적 CD19CAR+HER1t+ T-세포 집단의 빈도가 더 높은 것으로 나타났다(각각 7%±9%, 27%±0%, 2%±2%). Stim 4의 종료 시, 플라스미드 A 및 플라스미드 D-변형된 세포는 모두 dTp 대조군-변형된 세포에 비해 표적 CD19CAR+HER1t+ T-세포 집단의 빈도가 더 높았다(각각 67%±27%, 94%±0%, 50%±34%). dTp 대조군 및 플라스미드 A에 대한 추가적인 공여자 평가는 dTp 대조군과 비교하여 이식유전자 공동 발현이 플라스미드 A 및 플라스미드 D(동일한 이식유전자 순서를 공유함)를 사용하여 개선된다는 실시예2의 관찰을 뒷받침한다.
6.3.3 CD19CAR, mbIL15 및 HER1t를 공동 발현하는
CAR-T 세포의 기능적 특성화
CD19CAR, mbIL15 및 HER1t를 공동 발현하는 CAR-T 세포의 기능적 특성을 평가하기 위해 검정을 수행하였다.
6.3.3.1 CD19CAR, mbIL15 및 HER1t를 발현하는 CAR-T 세포를 사용한 CD19-지시된 세포독성 및 사이토카인 발현의 특이성
부문 6.2.3.1과 유사하게, dTp 대조군(n=6), 플라스미드 A(n=4) 및 플라스미드 D(n=1)-생성되고 생체외 확장된 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포에 대한 추가적인 공여자에서의 세포 독성을 표준 4-시간 크로뮴 방출 검정에서 평가하였다. CD19+ 표적 세포주의 세포 독성은 3가지 조건에 걸쳐 비슷하였으며, 1.25:1 E:T 비에서 dTp 대조군(도 19a) 및 플라스미드 A(도 19b)의 경우 약 40% 및 플라스미드 D(도 19c)의 경우 약 50%에서 특이적 용해가 관찰되었다. CD19neg 세포 용해는 무시할만하였다. 요약하면, 이러한 데이터는 플라스미드 A 및 플라스미드 D가 세포독성 능력을 변경하지 않으며 부문 6.2.3.1에서의 관찰을 추가로 뒷받침함을 보여준다.
6.3.3.2 ADCC를 통한 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포의 HER1t-매개성 고갈
부문 6.2.3.2와 유사하게, dTp 대조군(n=6), 플라스미드 A(n=4) 및 플라스미드 D(n=1)-생성되고 생체외 확장된 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포에 대한 추가적인 공여자에서 ADCC를 통한 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포의 선택적 제거를 평가하였다. 3가지 조건에 모두 대해, 세툭시맙 처리는 효과기 NK 세포에 의한 표적 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포의 약 50% 용해를 초래하였다(도 20). 이러한 데이터는 플라스미드 A 및 플라스미드 D가 세툭시맙을 사용하여 ADCC를 통해 선택적으로 고갈될 수 있는 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포를 생성함을 보여주는 부문 6.2.3.2의 데이터에 대한 추가적인 뒷받침을 제공한다.
6.3.3.3 SB 시스템-변형된 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포의 생체외 확장 후 CD19CAR, mbIL15 및 HER1t 이식유전자의 안정적인 통합
부문 6.2.3.3과 유사하게, dTp 대조군(n=7), 플라스미드 A(n=5) 또는 플라스미드 D(n=1)를 사용하여 생성된 생체외 확장된 Stim 4 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포를 도 21에 도시된 바와 같이 CD19CAR, mbIL15 및 HER1t에 특이적인 ddPCR 및 프라이머/프로브 세트를 사용하여 이식유전자 카피 수에 대해 평가하였다. dTp 대조군-생성된 세포는 CD19CAR의 경우 약 3 카피/세포, mbIL15의 경우 약 11 카피/세포 및 HER1t의 경우 약 11 카피/세포의 평균을 나타내었다. 플라스미드 A-생성된 세포는 3개의 이식유전자에 대해 약 6의 평균 카피/세포를 갖고, 플라스미드 D-생성된 세포는 3개의 이식유전자에 대해 약 5의 평균 카피/세포를 갖는다.
요약하면, 이러한 데이터는 플라스미드 A 및 플라스미드 D는 각각 3개의 이식유전자 모두에 대해 거의 동일한 통합 수를 갖는 CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포를 생성한 반면, dTp 대조군은 한편으로는 CD19CAR과 다른 한편으로는 mbIL15 및 HER1t 사이에 실질적으로 상이한 통합 수를 갖는 세포를 생성하였으며, mbIL15 및 HER1t가 실질적으로 더 높은 수준으로 통합하였음을 보여주는 부문 6.2.3.3으로부터의 관찰을 확증하였다.
6.4 실시예 4: CD19CAR, mbIL15 및 HER1t를 공동 발현하는 RPM T 세포의 생성 및 생체내 평가
본 실시예는 dTp 대조군 또는 플라스미드 A로부터 CD19CAR, mbIL15 및 HER1t를 공동 발현하는 RPM T 세포의 생성 및 생체내 평가를 기술한다.
6.4.1 물질 및 방법
6.4.1.1 세포주
인간 종양 세포주 NALM-6/fLUC를 모 전구-B 세포 CD19+ NALM-6 세포주(아메리칸 타입 컬처 컬렉션(ATCC; 버니지아주 머내서스 소재))(또는, 예를 들어, 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Singh et al., Cancer Res. 2011;71(10):3516-3527]에 기술되어 있는 바와 같음)로부터 MD 앤더슨 암센터(MD Anderson Cancer Center: MDACC; 텍사스주 휴스턴 소재)에서 생성하였다. 이 종양 세포는 비침습적 생물발광 영상화(non-invasive bioluminescent imaging: BLI)를 위한 파이어플라이 루시퍼레이스(firefly luciferase: fLUC) 및 형광 영상화를 위한 강화된 녹색 형광 단백질(enhanced green fluorescent protein: EGFP)를 공동 발현한다. 세포를 RPMI 1640 또는 10% FBS(하이클론/지이 헬스케어, 유타주 로건 소재) 및 1% Glutamax-100(써모피셔 사이언티픽, 매사추세츠주 월섬 소재)을 포함하는 하이클론: R10 배지에서 일상적으로 배양하였다. 세포를 37℃, 5% CO2의 정상 조건하에 배양하였다. 세포를 테스트한 결과 마이코플라스마에 대해 음성인 것으로 나타났다. 짧은 탠덤 반복 DNA 핑거프린팅에 의해 세포주의 정체를 확인하였다.
6.4.1.2 정상적인 공여자 인간 T 세포
말초 혈액 또는 백혈구 성분채집술 생성물을 정상적인 공여자(키 바이오로직스, 테네시주 멤피스 소재)로부터 얻었다. 동일한 공여자로부터 여러 수집물을 얻었다. 성분채집술 생성물을 RPM T 세포의 제조를 위한 2개의 출발 세포 제품을 테스트할 수 있도록 분할하였다.
Sepax S-100 세포 분리 시스템(바이오세이프(BioSafe), 델라웨어주 뉴어크 소재)을 사용하여 PBMC를 단리하기 위해 성분채집술의 한 부분을 처리하였다. 생존/사멸 세포를 Cellometer 기기(넥셀롬 바이오사이언스; 매사추세츠주 로렌스 소재)에서 계수하였다. 단리된 PBMC를 CryoStor CS10(바이오라이프 솔루션즈(Biolife Solutions); 워싱턴주 보셀 소재; 또는 이와 동등한 제품)에 동결 보존하고, 액체 질소 탱크의 증기상에 보관하였다.
성분채집술 생성물의 다른 부분인 T 세포-풍부 출발 생성물(CD3 처리 그룹용)의 제조물을 0.5%(v/v) HSA가 포함된 CliniMACS® PBS/EDTA 완충액을 사용하여 희석하고, 실온(RT)에서 10분 동안 400Хg에서 원심분리를 통해 혈소판 고갈 단계를 수행하고, 이후 동일한 완충액에 재현탁시켰다. CD4-특이적 및 CD8-특이적 CliniMACS® 마이크로비드 모두를 혼합 조건하에 실온에서 30분 동안 세포와 함께 인큐베이션하고, CliniMACS Plus에서 상자성 선택을 거쳐 T 세포에 대한 출발 생성물을 농축시켰다. 생존/사멸 세포를 기기(넥셀롬 바이오사이언스; 매사추세츠주 로렌스 소재)에서 계수하였다. 단리된 T 세포를 CryoStor CS10에 동결 보존하고, 액체 질소 탱크의 증기상에 보관하였다.
6.4.1.3 SB 시스템을 사용한
RPM CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포의 생성
본 연구에서 평가된 RPM CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포의 테스트 물질 그룹을 생성하기 위해, 각각 실시예 1에 기재된 바와 같이 Nucleofector™ 2b 장치(론자; 스위스 바젤 소재)와 함께 PBMC 또는 T 세포-풍부 출발 생성물을 사용하였고, 유전자 전달은 dTp 대조군 또는 플라스미드 A를 사용하였다. 각 테스트 물질 생성에 대한 세부사항은 다음과 같다:
모의 PBMC: 전기천공 전날, 동결 보존된 PBMC를 RPMI 1640 배지(페놀 레드 무포함 배지(하이클론), 10% FBS 및 1% Glutamax-100(R10))에 해동시키고, 세척하고, R10에 재현탁시키고, 37℃/5% CO2 인큐베이터에 밤새 두었다. 휴지 세포를 수거하고, 회전시키고, 임의의 트랜스포존 또는 트랜스포세이즈 DNA 플라스미드가 없는 Nucleofector 완충액(인간 T 세포 Nucleofector 키트; 론자)에 재현탁시켰다.
모의 CD3: 동결 보존된 CD3-풍부 세포를 해동시키고, 모의 PBMC에 대해 위에 기재된 바와 같이 처리하였다.
dTp 대조군(P, 5e6): 동결 보존된 PBMC 해동시키고, 1시간 동안 휴지시켰다. 휴지 세포를 수거하고, 회전시키고, dTp 대조군 및 플라스미드 TA(실시예 1에 기재된 바와 같은 SB11 트랜스포세이즈를 암호화함)를 포함하는 Nucleofector 완충액에 3:1의 최종 트랜스포존:트랜스포세이즈 비로 재현탁시켰다(표 17). "(P, 5e6)"은 주입된 5×106 개의 PBMC-유래 세포를 지칭한다.
플라스미드 A(P, 5e6): 동결 보존된 PBMC 해동시키고, 1시간 동안 휴지시켰다. 휴지 세포를 수거하고, 플라스미드 A 및 플라스미드 TA를 포함하는 Nucleofector 완충액에 3:1의 최종 트랜스포존:트랜스포세이즈 비로 재현탁시켰다(표 17). dTp 대조군과 마찬가지로, "(P, 5e6)"은 주입된 5×106개의 PBMC-유래 세포를 지칭한다.
플라스미드 A(T, 1e6) 및 플라스미드 A(T, 0.5e6): 동결 보존된 CD3 세포를 해동시키고, 모의 CD3에 대해 위에 기재된 바와 같이 처리하였다. 휴지 세포를 수거하고, 플라스미드 A 및 플라스미드 TA를 포함하는 Nucleofector 완충액에 3:1의 최종 트랜스포존:트랜스포세이즈 비로 재현탁시켰다(표 17). "(T, 1e6)"은 주입된 1×106개의 CD19CAR+CD3+ 세포를 지칭하고, "(T, 0.5e6)"은 주입된 0.5×106개의 CD19CAR+CD3+ 세포를 지칭한다.
PBMC-유래 RPM 세포의 경우, 전기-전달 직후, 각 큐벳으로부터의 내용물을 재현탁시키고, R10 배지로 옮기고, 37℃/5% CO2 인큐베이터에서 1시간 내지 2시간 동안 휴지시켰다. 이어서, R10 배지로 전체 배지 교환을 수행하고, 세포를 37℃/5% CO2 인큐베이터에 밤새 두었다. 전기-전달 후 24시간 이내에, 세포를 배양물로부터 수거하고, CD19CAR, mbIL15 및 HER1t의 세포 표면 발현뿐만 아니라, 예를 들어, T 세포 기억 서브세트를 특성화하기 위한 다른 T-세포 마커를 결정하기 위해 유세포 분석에 의해 샘플링하였다. 마우스에 주사하기 위해 제형화하기 위해, 각 테스트 물질에 대한 목적하는 세포수를 Plasmalyte A에 재현탁시켜 마우스당 300㎕의 주사 부피를 달성하였다.
T 세포-유래 RPM 세포의 경우, 전기-전달 직후, 각 큐벳으로부터의 내용물을 재현탁시키고, 37℃/5% CO2 인큐베이터에서 1시간 내지 2시간 동안 인큐베이션하는 동안 DNase를 포함하는 R10 배지로 옮겼다. 이어서, R10 배지로 전체 배지 교환을 수행하고, 세포를 37℃/5% CO2 인큐베이터에서 밤새 두었다. 전기-전달 후 24시간 이내에, 세포를 배양물로부터 수거하고, CD19CAR, mbIL15 및 HER1t의 세포 표면 발현뿐만 아니라, 예를 들어, T 세포 기억 서브세트를 특성화하기 위한 다른 T-세포 마커를 결정하기 위해 유세포 분석에 의해 샘플링하였다. 추가적으로, 죽은 세포 및 찌꺼기를 수거된 세포로부터 제거하고, 생존 가능 세포에 대해 세포를 농축시켰다. 마우스에 주사하기 위해 제형화하기 위해, 각 테스트 물질에 대한 목적하는 세포수를 Plasmalyte A에 재현탁시켜 마우스당 300㎕의 주사 부피를 달성하였다.
6.4.1.4 동물
대략 8주령 암컷 NOD/SCID/감마 마우스(NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ, NSG)를 잭슨 래보래토리(Jackson Laboratory)(메인주 바 하버 소재)로부터 구입하였다. NSG 마우스는 B 림프구 및 T 림프구 및 NK 세포가 모두 결여되어 있다(예를 들어, 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Ali et al., PLoS ONE. 2012;7(8):e44219]에 기술되어 있는 바와 같음). 이 균주는 인간 조혈 세포의 우수한 생착뿐만 아니라 말초 혈액에서 아세포를 검출하는 능력을 갖는 ALL을 가지고 있다(예를 들어, 각각의 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Agliano et al., Int J Cancer. 2008;123:2222-2227, 및 Santos et al., Nat Med. 2009;15(3):338-344]에 기술되어 있는 바와 같음). 테스트 물질을 제조하고, 기관 동물 관리 및 사용 위원회(Institutional Animal Care and Use Committee: IACUC) 및 실험실 동물 관리 및 사용에 대한 지침(문헌[Eighth Edition, NRC, 2011, published by the National Academy Press], 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있음) 및 실험실 동물 복지 사무국(Office of Laboratory Animal Welfare), 미국 보건 복지부(Department of Health and Human Services)의 실험실 동물의 인도적 관리 및 사용에 관한 공중보건 서비스 정책(문헌[OLAW/NIH, 2002], 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있음)을 준수하여 MDACC에서 연구를 수행하였다. 이전의 보고는 6주령 내지 12주령 NSG 마우스에서 숙주의 사전 조건화(pre-conditioning) 없이 107개의 인간 PBMC가 효과적으로 생착하였고, 발생한 xGvHD가 일관되게 체중 감소를 가속화시켰으며, 질환 발달이 상당히 더 빨라졌음을 보여주었다(중간 생존 시간(median survival time: MST) = 40일)(예를 들어, 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Ali et al., PLoS ONE. 2012;7(8):e44219]에 기술되어 있는 바와 같음).
6.4.1.5 연구 설계
제1일에, NSG 마우스에 0.2㎖의 멸균 PBS 중 1.5×104개의 생존 가능한 NALM-6/fLUC 세포를 꼬리 정맥을 통해 주사하였다. 제6일에, 종양의 존재를 검출하기 위해 동물에게 생물발광 영상화(BLI)를 수행하였다. 이러한 데이터에 기초하여, 동물을 처리 그룹으로 계층화하였으며, 이들 모두에게서 유사한 평균 종양 플럭스 신호가 관찰되었다. 동물에게 표 18에 나타낸 바와 같이 제7일에 테스트 물질을 처리하였고, 대조군 그룹 B 및 그룹 C의 총 세포수는 상응하는 유전적으로 변형된 T 세포 처리 그룹의 총 세포수와 일치하였다.
6.4.1.6 동물 취급 및 영상화를 위한 방법론
6.4.1.6.1 체중 측정
연구 기간 동안 주당 2회 내지 3회 동물의 체중을 측정하였다.
6.4.1.6.2 생체내 BLI
BLI는 동물의 특정 세포 활성을 시각화, 추적 및 모니터링하는 데 사용되는 고민감도, 저-잡음, 비침습성 기법이다. 발광 신호의 종적 모니터링(Longitudinal monitoring)은 종양 부담의 정량적 평가를 제공한다. NALM 6-유래 파이어플라이 루시퍼레이스(fLUC)를 기질로 제공된 D-루시페린과 함께 생물발광 리포터로 사용하였다. 6일, 14일, 19일, 22일, 25일, 28일, 32일, 35일, 39일, 42일, 43일, 46일, 49일, 53일, 56일, 60일 및 62일에, Xenogen IVIS 스펙트럼 생체내 영상화 시스템(제노젠(Xenogen), 캘리퍼 라이프사이언시스(Caliper LifeSciences), 매사추세츠주 홉킨턴 소재)을 사용하여 BLI를 수행하였다. Living Image 소프트웨어(v.4.5; 제노젠, 캘리퍼 라이프사이언시스, 매사추세츠주 홉킨턴 소재)를 사용하여 생물발광 영상화 데이터 세트를 수집하고 정량화하였다. 영상화 시간 10분 전, 150㎕ PBS 중 214.5㎍ d-루시페린(1.43mg/㎖ 작업 스톡 용액; 캘리퍼)의 단일 피하(s.q) 주사액을 각 마우스에게 투여하였다. 동물을 2% 아이소플루레인으로 유지하고, 생화학 봉쇄 장치 내에 배치하였다(예를 들어, 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Gade et al., Cancer Res. 2005;65(19):9080-9088]에 기술되어 있는 바와 같음). 4-분 노출 획득이 또한 수행된 제6일을 제외하고, 자동 노출에 의해 결정된 노출 시간으로 마우스를 영상화하였다. 각 동물에 대해 복부 이미지를 얻고 정량화하였다. 총 플럭스 값은 각 마우스에 대해 동일한 크기의 관심 영역(region of interest: ROI)을 그림으로써 결정하였으며, 광자/s(p/s)로 표시되었다(예를 들어, 각각의 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Gade et al., Cancer Res. 2005;65(19):9080-9088, 및 Cooke et al., Blood. 1996;8(8):3230-3239]에 기술되어 있는 바와 같음). 종양이 없는 마우스를 정의하는 "배경" BLI(즉, 플럭스≤2X 배경)는 루시페린을 주사한 NSG 마우스를 사용하여 확립하였지만, NALM-6이 없는 마우스(따라서 fLUC 활성이 없음)는 복부 이미지의 캡처로 확립하였다.
6.4.1.6.3 혈액 수집
안구뒤 채혈에 의해 말단 혈액을 수집하여 소듐 헤파린-코팅된 튜브에 수집하였다. CAR+ T 세포 및 종양의 존재는 유세포 분석에 의해 결정하였다. 가능한 한 빈사 상태의 동물로부터 혈액을 수집하였다. 샘플을 ACK 용해 완충액(써모-피셔)에서 인큐베이션하여 적혈구를 용해시키고, PBS 및 2% FBS에 재현탁시키고, 면역염색을 수행할 때까지(전형적으로 조직 수집 4시간 이내) 4℃에서 유지하여 유세포 분석에 의해 T 세포 상의 CD19CAR, mbIL15 및 HER1t의 존재에 대해 평가하였다.
6.4.1.6.4 임상 관찰 및 종점
회복을 돕기 위해 아픈 것으로 보이는 동물의 우리에 하이드라겔을 넣었다. 처리로 인한 통증 또는 기타 불편함의 임의의 징후가 있는지에 대해 마우스를 매일 모니터링하였다. 동물이 고통받고 있는 임의의 적응증을 문서화하였다. IACUC 프로토콜에 따라 PI에게 통지하고 동의를 얻은 후, 다음 적응증을 경험하고 있는 동물은 경추 탈골에 의해 인도적으로 안락사시켰다: 1) 24-시간 내지 48-시간 동안 먹거나 마시지 않아 쇠약해지거나 또는 탈수됨; 2) 처리 전 마우스의 체중 또는 연령-일치, 비히클-처리된 대조군과 비교하여 언제든지 20%에 도달하거나 또는 72시간 동안 15%에 도달하는 일관적이거나 또는 빠른 체중 감소; 3) 지속적인 저체온증; 4) 임의의 구멍으로부터의 피가 섞이거나 또는 점액농성 분비물; 5) 호흡 곤란, 특히 콧물 및/또는 청색증이 동반되는 경우; 6) 확대된 림프절 또는 비장; 7) 뒷다리 마비 또는 쇠약; 8) 상당한 복부 팽만 또는 복수 부담이 연령-일치 대조군의 체중의 10%를 초과하는 경우; 9) 48-시간 동안의 요실금 또는 설사; 10) 자극에 대한 반응 부족.
6.4.1.6.4.1 바이오분석 검정
말초 혈액(PB), 비장 및 BM 샘플을 면역표현형 분석을 수행하고, NALM-6/fLUC 종양 세포 및 유전적으로 변형된 T 세포의 존재에 대해 유세포 분석에 의해 평가하였다.
6.4.1.6.4.2 유세포 분석
최대 2×106개의 세포를 인간-특이적(달리 언급하지 않는 한) 형광색소 접합 항체로 염색하였다. 샘플 및 상응하는 대조군의 세포 표면 마커에 대한 염색은 먼저 FACS 완충액(PBS, 2% FBS, 0.1% 소듐 아자이드) 중 50% 마우스 혈청(잭슨 이뮤노리서치, PA)과 함께 4℃에서 10분 동안 인큐베이션함으로써 배경 염색을 줄이기 위한 Fc-수용체 차단 단계를 거쳤다. Brilliant 염색 완충액(비디 바이오사이언시스)에 희석된 표 19에 열거된 항체 조합의 항체 마스터 믹스 100㎕를 첨가하여 면역염색을 수행하였다. 간략하게는, CD19CAR(클론 번호 136.20.1)의 항-CD19 부분에 특이적인 Alexa Fluor®(AF) 488 접합 항-이디오타입 항체(예를 들어, 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Jena et al., PLoS. 2013;8(3):e57838]에 기술되어 있는 바와 같음)를 사용하여 CD19CAR 발현을 검출하였다. CD19CAR 항-이디오타입 항체는 인비트로젠/써모피셔 사이언티픽(매사추세츠주 월섬 소재)에서 AF-488 형광단에 접합시켰다. 형광 접합 세툭시맙 항체를 사용하여 HER1t 분자를 검출하였다. 형광-접합 세툭시맙 시약은 인비트로젠/써모피셔 사이언티픽에서 AF-647에 접합된 얼비툭스를 상업적으로 구입하였다. 형광 접합 항체는 다음을 포함하였다: CD8(클론 RPA-T8), CD3(클론 SK7), CD45RO(UCHL1), IL-15(34559), CD45(클론 HI30), CCR7(클론 G043H7), CD19CAR 이디오타입(클론 136.20.1) 및 마우스 CD45.1(클론 A20)(표 19).
표 19의 항체 조합을 포함하는 마스터 믹스를 순차적인 방식으로 첨가하고(CD19CAR, mbIL15에 이어서 나머지 항체 칵테일), 4℃에서 각 첨가 시 최대 30분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 FACS 완충액으로 세척한 다음, 고정 가능한 생존성 염색-620 생존성 염료(PBS 중 1:1000; 비디 바이오사이언시스)로 4℃에서 10분 동안 인큐베이션한 후 FACS 완충액으로 세척하였다. FACSDiva 소프트웨어(v.8.0.1, 비디 바이오사이언시스)와 함께 LSR Fortessa(비디 바이오사이언시스)를 사용하여 데이터를 수집하고, FlowJo 소프트웨어(버전 10.4.2; 트리스타, 오리건주 애슐랜드 소재)로 분석하였다.
6.4.1.6.5 통계적 분석
통계적 테스트는 각 통계의 보고와 함께 명시된다. 처리 그룹 간의 차이를 비교하기 위해 사후 분석을 수행하고, 각 통계적 결과와 함께 보고하였다. 오차는 표준 편차(SD)로 보고하였다. GraphPad Prism(버전 8) 소프트웨어를 사용하여 통계적 분석을 수행하였다. P < 0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주하였다. 통계적 분석을 위한 총 플럭스 값의 특정 처리에는 유의성 테스트 전에 이분산성을 해결하기 위해 플럭스 값을 로그 변환하는 것을 포함하였다.
6.4.2 생체내에서 CD19CAR, mbIL15 및 HER1t를 공동 발현하는 RPM T 세포의 생성 및 평가
6.4.2.1 RPM CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포를 제조하기 위한 SB 시스템을 사용한 T 세포의 유전적 변형
세포 처리 제1일에, PBMC-유래 RPM T 세포의 생성은 1시간 동안 휴지시키고 전기천공시킨 총 3.68×109개의 PBMC로 시작하였다. 그룹당 1.12×109개의 PBMC를 사용하여 표 17에 기재된 바와 같은 테스트 물질 dTp 대조군(P, 5e6) 및 PBMC로부터 유래된 플라스미드 A(P, 5e6)를 제조하였다. 제2일(전기-전달 대략 18시간 후)에, 1.25×108개 내지 1.29×108개의 생존 가능 세포를 회수하였다.
T-세포-유래 RPM T 세포 연구 군(arm)의 경우, 3.00×109개의 농축 T 세포를 해동시키고, 밤새 휴지시킨 후 1.70×109개의 세포를 회수하였다. 1.26×109개의 세포를 전기-전달에 사용하여 플라스미드 A(T, 1e6) 및 플라스미드 A(T, 0.5e6)를 제조하였다. 제3일(전기-전달 대략 18시간 후)에, 4.23×108개의 생존 가능 세포를 회수하였다.
전기-전달 대략 18시간 후, T 세포를 단일체/생존 세포/CD3+ 이벤트에 대해 게이팅된 바와 같이 유세포 분석에 의해 이식유전자 발현에 대해 평가하였다(도 22a 내지 도 22c). PBMC-유래 테스트 물질에 대해 낮은 이식유전자 발현이 검출되었기 때문에, 마우스 투여량은 1×106개의 CAR+ 세포가 아닌 5×106개의 총 생존 가능 세포로 설정하였다.
이후에, 나머지 PBMC-유래 테스트 물질을 활성화 및 증식 세포(AaPC)에서 3 반복 자극하여 생체외 확장시키고, IL-21(30 ng/㎖)을 보충하여 유전자 전달을 확인하였다. 이러한 증식된 세포를 이식유전자 양성 T 세포의 예상된 항원-특이적 파생물(outgrowth)이 발생할 것인지에 대해 평가하였다. 전기천공 후 18-시간에 검출된 1% 미만의 CAR+, 1% 미만의 mbIL15+ 및 4% 미만의 HER1t 발현에도 불구하고, 이러한 RPM T 세포는 수치 확장 후 관찰 가능하고 높은 이식유전자 발현을 나타내었다(도 23a 내지 도 23c). 확장된 세포에 대한 CD3+CAR+ 이벤트는 각각 dTp 대조군(P, 5e6) 및 플라스미드 A(P, 5e6) RPM T 세포에 대해 86% 및 98%였다. dTp 대조군(P, 5e6) 세포는 앞선 실시예와 일치하는 집단 이종성을 나타내었다. 도 23b에 도시된 바와 같이, CD19CAR/Her1t 표현형에 대해 다음 백분율이 관찰되었다: CD19CAR+HER1t+(50%), CD19CAR+HER1tneg(27%), CD19CARnegHER1t+(7%) 및 CD19CARnegHER1tneg(16%). 마찬가지로, 도 23c에 도시된 바와 같이, HER1t/mbIL15 표현형에 대해 다음 백분율이 관찰되었다: HER1t+mbIL15neg(49%), HER1t+mbIL15+(7%), HER1tnegmbIL15+(<1%) 및 HER1tnegmbIL15neg(44%).
대조적으로, 도 23b에 도시된 바와 같이, 균일한 CAR 및 HER1t 공동 발현이 플라스미드 A(P, 5e6) 세포에서 관찰되었다: CAR+HER1t+(94%), CAR+HER1tneg(3%), CARnegHER1t+(<1%) 및 CARnegHER1tneg(2%). 마찬가지로, 도 23c에 도시된 바와 같이, HER1t 및 mbIL15 공동 발현이 개선되었다: HER1t+mbIL15neg(69%), HER1t+mbIL15+(26%), HER1tnegmbIL15+(<1%) 및 HER1tnegmbIL15neg(5%).
6.4.2.2 RPM CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포의 항-종양 효능
RPM CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포의 항-종양 효과를 NALM-6 마우스 이종이식 모델에서 조사하였다. 연구 설계는 표 18에 예시되어 있고, 종양 부담 결과는 도 24a 내지 도 24g에 도시되어 있다. 특히, 처리를 하지 않은 종양-보유 마우스는 모두 35일까지 질환으로 죽었다(도 24a). 모의 PBMC를 투여받은 마우스는 주사 합병증으로 인해 제7일에 죽은 한 마리의 마우스와 46에 도달한 한 마리의 마우스를 제외하고는 35일까지 질환으로 죽었다(도 24b). 모의 CD3 처리 그룹에서, 5마리의 마우스 중 3마리가 39일에서 53일 사이에 질환으로 죽었다(1×109 p/s 초과의 종양 플럭스). 2마리의 마우스가 39일 및 49일에 의심되는 xGvHD(6×107 p/s 미만의 종양 플럭스)로 빈사 상태가 되었고, 이는 인간 림프구가 생착된 NSG 모델에서 예상되는 결과였으며, 마우스 중 한 마리는 2Х 배경 플럭스(1.2×106 p/s 미만)에 도달하였다(도 24c). dTp 대조군(P, 5e6)으로 처리된 마우스는 일반적으로 35일에서 62일 사이에 빈사 상태가 되었으며, 10마리의 마우스 중 2마리가 높은 질환 부담(5×109 p/s 초과)을 가지므로 질환-관련 사망의 가능성이 있다. 나머지 마우스는 안정적인 질환 또는 낮은 종양 부담(xGvHD-관련 사망)을 나타내었고, 이들 중 63%는 2Х 배경 플럭스 임계값 미만이거나 또는 이에 근접하였다(도 24d). 플라스미드 A(P, 5e6)로 처리된 마우스는 35일에서 60일 사이에 사망을 나타내었으며, 한 마리의 마우스는 높은 종양 부하를 갖고 나머지 8마리의 마우스는 낮은 종양 부담(7×107 p/s 미만) 및 xGvHD-관련 사망 가능성을 가지며, 이들 중 75%는 2Х 배경 플럭스 임계값 미만이거나 또는 이에 근접하였다(도 24e). 플라스미드 A(T, 1e6)로 처리된 마우스는 35일에서 52일 사이에 생존하였으며, 10마리의 마우스 중 9마리는 종점 이전에 분명한 종양 신호 감소와 함께 낮은 종양 부담(5×107 p/s 미만)을 나타내어 xGvHD-관련 이환(morbidity)을 보였다. 종양이 빠르게 감소하는 9마리의 마우스 중에서, 4마리의 마우스(44%)는 종양 신호가 2Х 배경 플럭스 임계값 미만으로 떨어지는 것을 보여주었다(도 24f). 플라스미드 A(T, 0.5e6)로 처리된 마우스는 32일에서 60일 사이에 생존하였으며, 4마리의 마우스 중 4마리가 종점에서 낮은 종양 부담(8×107 p/s 미만)을 나타내어 xGvHD 관련 이환 가능성을 보였고, 이들 중 50%는 2Х 배경 플럭스 임계값에 접근하였다(도 24g). 요약하면, 모든 RPM CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포 테스트 물질은 처리하지 않은 대조군(모든 그룹에 대해 0.0006 미만, n=4 내지 10, 일원 ANOVA, Dunnett 사후 테스트)과 비교하여 상당한 항종양 활성을 나타내었으며, 테스트된 그룹 크기에서 통계적 유의성이 달성되지 않은 플라스미드 A(T, 0.5e6) 처리를 제외하고, 모두 모의 대조군 세포에 비해 상당히 낮은 종양 부담을 나타내었다(도 25). 항종양 반응의 동역학은 이전 연구와 일치하며, 전형적으로 종양 주입 20일 후, 따라서 T-세포 전달 대략 2주 후에 시작되는 것으로 관찰되었다.
전반적으로, 결과는 ALL의 확립된 CD19+ NALM-6 이종이식 모델에서 RPM CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포에 의한 강력한 항종양 반응을 명확하게 보여준다.
6.4.2.3 RPM CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포로 처리된 동물에서 전체 및 무질환 생존기간
임의의 RPM CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포 테스트 물질(dTp 대조군(P, 5e6), 플라스미드 A(P, 5e6), 플라스미드 A(T, 1e6) 또는 플라스미드 A(T, 0.5e6), 각각 동물 그룹 D 내지 그룹 G에 해당)의 투여는 종양 단독 대조군 그룹과 비교할 때 마우스의 OS를 상당히 향상시켰다(각각 그룹 D 내지 그룹 G의 경우 P=0.0002, P=0.0004, P<0.0002 및 P=0.0098; n=4 내지 10; 로그 순위, Mantel-Cox; 도 26a 내지 도 26c). 종양 부담이 낮은(1×108 p/s 미만의 총 플럭스) 마우스에서 사망이 관찰되었으며, 이는 질환으로 인해 빈사 상태인 종양만 있는 마우스가 5×109 p/s 초과의 총 플럭스를 보였기 때문에 마우스에서 질환 진행이라기보다는 xGvHD로 인한 것일 수 있다.
xGvHD의 유도는 인간 림프구가 생착된 NSG 모델에서 예상되는 과정이다(예를 들어, 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Ali et al., PLoS ONE. 2012;7(8):e44219]에 기술되어 있는 바와 같음). 해당 인자를 고려하여, xGvHD가 없는 생존율을 계산하여 총 플럭스가 1×108 p/s 미만인 동물을 검열하였다. 이 분석에서, 생존율은 종양 단독 대조군 그룹에 비해 모든 RPM CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포 테스트 물질에 대해 증가하였다(각각 그룹 D 내지 그룹 G의 경우 P=0.0002, P<0.0001, P<0.0001 및 P=0.0018; n=4 내지 10; 로그 순위, Mantel-Cox; 도 27a 내지 도 27c).
요약하면, 이러한 결과는 PBMC 및 T 세포-풍부 생성물로부터 유래된 테스트된 RPM CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포가 종양 단독 대조군 그룹과 비교할 때 OS의 현저한 증가를 제공함을 보여준다.
6.4.2.4 마우스에서 RPM CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포의 xGvHD 및 독성 결핍의 결정
xGvHD 과정의 가능한 유도 이전(즉, T-세포 입양 전달 후 1주 이내)에는 RPM CD19-mbIL15-CAR-T 세포 테스트 물질-관련 체중 변화가 관찰되지 않은 반면, 모의 PBMC 및 모의 CD3 처리는 이 기간 동안 체중 감소를 보였다. 추가적으로, 실험 과정에 걸쳐, 모의 PBMC 및 모의 CD3 처리는 마우스에서 점진적인 체중 감소를 일으켰다(즉, 선형 회귀 기울기는 음의 기울기이고 유의차가 0임; 각각 R2=0.14 및 R2=0.44; 기울기 -0.06 및 -0.11; P=0.0123 및 P<0.001). 실험 기간 동안 마우스 체중의 현저한 감소는 그룹 D 내지 그룹 G에서 관찰되지 않았다(즉, 선형 회귀 기울기는 양의 기울기±0의 유의차였고; 그룹 D 내지 그룹 G의 경우 R2<0.05; 기울기 >0.03; P>0.02). 이는 그룹 B 및 그룹 C가 연구의 많은 부분에서 xGvHD 효과를 경험한 반면, 그룹 D 내지 그룹 G는 빈사 상태에 이르기 직전에 더 갑작스러운 이환을 경험하였음을 시사한다. 종양만 있는 마우스는 종양 부담으로 인해 빈사 상태에 이를 때까지 체중 증가를 나타내었다.
요약하면, 마우스 보유 NALM-6 보유 마우스에서 RPM CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포(그룹 D 내지 그룹 G)의 정맥내 투여는 내약성이 우수하였다. RPM 테스트 물질(그룹 D 내지 그룹 G)의 투여 근위부에서 독성은 관찰되지 않았으며, 안락사 시점에 체중 변화는 xGvHD로 인한 것으로 보인다.
6.4.2.5 RPM CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포의 지속성, 국부화 및 기억 표현형
마우스로부터 단리된 말초 혈액(PB), 골수(BM) 및 비장에서 유세포 분석을 수행하여 RPM CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포의 지속성, 국부화 및 기억 표현형을 평가하였다. 마우스가 빈사 상태가 되거나 또는 연구 종료 시(연구 32일 내지 62일)에 샘플을 얻었다. 모든 T 세포-처리된 마우스에서 T-세포 생착이 관찰되었다(모의 PBMC, 모의 CD3, dTp 대조군(P, 5e6), 플라스미드 A(P, 5e6), 플라스미드 A(T, 1e6) 및 플라스미드 A(T, 0.5e6; 각각 그룹 B 내지 그룹 G; 도 28a 내지 도 28c). 생착된 CD3+ 세포 중, CAR+ T 세포는 각각 0% 내지 52%, 2% 내지 100%, 8% 내지 46% 및 15% 내지 74% 범위의 RPM CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포(그룹 D 내지 그룹 G)로 처리된 마우스(도 29a)의 PB, BM 및 비장에서 뚜렷한 수준으로 지속되는 것으로 관찰되었으며, PB(도 29b)에서 모의 PBMC 및 모의 CD3 처리 그룹에서 명백한 CD19CAR+ 집단은 검출되지 않았다. CAR+ T 세포의 유사한 빈도가 BM 및 비장에서 관찰되었다(도 29c 내지 도 29d).
T 세포의 트라이시스트로닉 플라스미드 A 유전적 변형을 도입하기 위한 1차 목적은 이식유전자 집단 이종성을 감소시키는 것이었다. 이는 PB로부터 단리된 세포로부터의 CD19CAR 및 HER1t의 공동 발현에 대해 평가된 샘플에서 관찰되었다. 플라스미드 A 테스트 물질은 dTp 대조군(P, 5e6)과 비교하여 CAR+HER1t+ T 세포 발현의 개선된 균질성을 보여주었다(도 30). HER1t 및 mbIL15의 검출된 공동 발현, 이에 의한 mbIL15의 발현은 보다 가변적이었고(도 31) mbIL15의 순환 동역학에 의해 영향을 받았을 가능성이 있으며, 이는 아마도 제시 세포로부터 절단된 IL-15Rα에 결합된 IL-15를 내재화하기 위해 세포에 반응하는 메커니즘 때문일 것이다(예를 들어, 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Tamzalit et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2014;111(23):8565-8570] 참조). 그럼에도 불구하고, HER1t 및 mbIL15의 높은 공동 발현의 사례가 있었다(예를 들어, 플라스미드 A(T, 0.5e6) 샘플에서). 중요하게는, 생체내 조건하에 존재하는 HER1tnegmbIL15+ 세포의 상당한 집단이 없었다(도 31).
빈사 상태의 마우스의 PB에서 지속되는 CD19CAR+CD3+ T 세포에 대해 기억 표현형을 평가하였다. T-세포 기억 서브세트는 다음과 같이 정의된다: CD45RO+CCR7+: 중심 기억(TCM); CD45ROneg CCR7+: 미경험/줄기 세포 기억(TN/SCM); CD45RO+CCR7neg: 효과기 기억(TEM); 및 CD45ROnegCCR7neg: 효과기 T(TEff,). 추가적으로, T 세포 분화(낮음에서 높음으로)는 다음과 같이 나타낼 수 있다: CD45ROnegCD27+, CD45RO+CD27+, CD45RO+CD27neg 및 CD45ROnegCD27neg. 지속되는 것으로 밝혀진 CD19CAR+CD3+ T 세포는 주로 TEM이었고(도 32a), 분류 기준으로서 CD45RO 및 CCR7을 사용할 때 RPM 테스트 물질(그룹 D 내지 그룹 G)에서 평균은 59% 내지 70% 범위였다(도 33a). 그러나, 우세한 CD27 발현은 그룹 D 내지 그룹 G에서 관찰되었으며(도 32b), CD45RO+CD27+ CD19CAR+CD3+ T 세포의 경우 평균 33% 내지 51% 범위였고 덜 분화된 CD45ROnegCD27+ CAR+CD3+ T 세포의 경우 평균 14% 내지 31% 범위였다(도 33b). CD27의 발현은 최종적으로 분화되지 않는 덜 분화된 기억 표현형을 나타낸다(예를 들어, 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Larbi and Fulop, Cytometry A. 2014;85(1):25-35] 참조).
전반적으로, 이러한 데이터는 평가된 모든 RPM CD19CAR-mbIL15-HER1t T 세포 테스트 물질이 주로 CD27을 발현하는 TEM으로서 종료 시점까지 생체내에서 지속되었음을 보여준다.
*
*
*
본 발명은 본 명세서에 기술된 특정 실시형태에 의해 범위가 제한되지 않는다. 실제로, 기술된 것에 더하여 본 발명의 다양한 수정이 전술한 설명 및 수반되는 도면으로부터 당업자에게 명백해질 것이다. 이러한 수정은 첨부된 청구범위 내에 있는 것으로 의도된다.
본 명세서에 인용된 모든 참고 문헌(예를 들어, 간행물 또는 특허 또는 특허 출원)은 마치 각각의 개별 참고 문헌(예를 들어, 간행물 또는 특허 또는 특허 출원)이 모든 목적을 위해 전체가 참조에 의해 본 명세서에 원용되도록 구체적이고 개별적으로 표시된 것과 같은 정도로 모든 목적을 위해 전체가 참조에 의해 본 명세서에 원용된다.
다른 실시형태는 다음 청구범위 내에 있다.
SEQUENCE LISTING
<110> ALAUNOS THERAPEUTICS, INC.
<120> RECOMBINANT VECTORS COMPRISING POLYCISTRONIC EXPRESSION CASSETTES
AND METHODS OF USE THEREOF
<130> WO2022/147444
<140> PCT/US2021/073145
<141> 2021-12-29
<150> US 63/132,434
<151> 2020-12-30
<160> 187
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 1
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr
100 105
<210> 2
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 2
Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 3
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 3
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 4
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 4
His Thr Ser Arg Leu His Ser
1 5
<210> 5
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 5
Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr
1 5
<210> 6
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 6
Asp Tyr Gly Val Ser
1 5
<210> 7
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 7
Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 8
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 8
His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 9
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 9
Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 10
<211> 22
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 10
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro
20
<210> 11
<211> 267
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 11
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser
20 25 30
Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser
35 40 45
Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly
50 55 60
Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val
65 70 75 80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr
85 90 95
Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln
100 105 110
Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
115 120 125
Thr Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser
130 135 140
Thr Lys Gly Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala
145 150 155 160
Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu
165 170 175
Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu
180 185 190
Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser
195 200 205
Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln
210 215 220
Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr
225 230 235 240
Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
245 250 255
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
260 265
<210> 12
<211> 245
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 12
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly
100 105 110
Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys
115 120 125
Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser
130 135 140
Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser
145 150 155 160
Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile
165 170 175
Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn
195 200 205
Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr
210 215 220
Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
225 230 235 240
Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 13
<211> 267
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 13
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly
20 25 30
Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly
35 40 45
Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg
50 55 60
Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser
85 90 95
Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr
100 105 110
Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala
115 120 125
Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Ser
130 135 140
Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly
145 150 155 160
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
165 170 175
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
180 185 190
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
195 200 205
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
210 215 220
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
225 230 235 240
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
245 250 255
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr
260 265
<210> 14
<211> 245
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 14
Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys
115 120 125
Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln
130 135 140
Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser
145 150 155 160
Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln
165 170 175
Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu
180 185 190
His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp
195 200 205
Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr
210 215 220
Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr
225 230 235 240
Lys Leu Glu Ile Thr
245
<210> 15
<211> 263
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 15
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu
20 25 30
Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln
35 40 45
Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr
50 55 60
Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro
65 70 75 80
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile
85 90 95
Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly
100 105 110
Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu
130 135 140
Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser
145 150 155 160
Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly
165 170 175
Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly
180 185 190
Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
195 200 205
Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys
210 215 220
Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys
225 230 235 240
His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
245 250 255
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
260
<210> 16
<211> 242
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 16
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Gln Glu
115 120 125
Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys
130 135 140
Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg
145 150 155 160
Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser
165 170 175
Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile
180 185 190
Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln
195 200 205
Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly
210 215 220
Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val
225 230 235 240
Ser Ser
<210> 17
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 17
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 18
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 18
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro
20
<210> 19
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 19
gacatccaga tgacccagac cacctccagc ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc 60
atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaagccc 120
gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 180
cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggagcag 240
gaggacatcg ccacctactt ttgccagcag ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc 300
ggaacaaagc tggagatcac c 321
<210> 20
<211> 360
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 20
gaggtgaagc tgcaggagag cggccctggc ctggtggccc ccagccagag cctgagcgtg 60
acctgtaccg tgtccggcgt gtccctgccc gactacggcg tgtcctggat ccggcagccc 120
cctaggaagg gcctggagtg gctgggcgtg atctggggca gcgagaccac ctactacaac 180
agcgccctga agagccggct gaccatcatc aaggacaaca gcaagagcca ggtgttcctg 240
aagatgaaca gcctgcagac cgacgacacc gccatctact actgtgccaa gcactactac 300
tacggcggca gctacgccat ggactactgg ggccagggca ccagcgtgac cgtgtccagc 360
<210> 21
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide"
<400> 21
cgggccagcc aggacatcag caagtacctg aac 33
<210> 22
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide"
<400> 22
cacaccagcc ggctgcacag c 21
<210> 23
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide"
<400> 23
cagcagggca acacactgcc ctacacc 27
<210> 24
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide"
<400> 24
gactacggcg tgtcc 15
<210> 25
<211> 48
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide"
<400> 25
gtgatctggg gcagcgagac cacctactac aacagcgccc tgaagagc 48
<210> 26
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide"
<400> 26
cactactact acggcggcag ctacgccatg gactac 36
<210> 27
<211> 54
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide"
<400> 27
ggcagcacct ccggcagcgg caagcctggc agcggcgagg gcagcaccaa gggc 54
<210> 28
<211> 66
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 28
atgctgctgc tggtgaccag cctgctgctg tgtgagctgc cccaccccgc ctttctgctg 60
atcccc 66
<210> 29
<211> 801
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 29
atgctgctgc tggtgaccag cctgctgctg tgtgagctgc cccaccccgc ctttctgctg 60
atccccgaca tccagatgac ccagaccacc tccagcctga gcgccagcct gggcgaccgg 120
gtgaccatca gctgccgggc cagccaggac atcagcaagt acctgaactg gtatcagcag 180
aagcccgacg gcaccgtcaa gctgctgatc taccacacca gccggctgca cagcggcgtg 240
cccagccggt ttagcggcag cggctccggc accgactaca gcctgaccat ctccaacctg 300
gagcaggagg acatcgccac ctacttttgc cagcagggca acacactgcc ctacaccttt 360
ggcggcggaa caaagctgga gatcaccggc agcacctccg gcagcggcaa gcctggcagc 420
ggcgagggca gcaccaaggg cgaggtgaag ctgcaggaga gcggccctgg cctggtggcc 480
cccagccaga gcctgagcgt gacctgtacc gtgtccggcg tgtccctgcc cgactacggc 540
gtgtcctgga tccggcagcc ccctaggaag ggcctggagt ggctgggcgt gatctggggc 600
agcgagacca cctactacaa cagcgccctg aagagccggc tgaccatcat caaggacaac 660
agcaagagcc aggtgttcct gaagatgaac agcctgcaga ccgacgacac cgccatctac 720
tactgtgcca agcactacta ctacggcggc agctacgcca tggactactg gggccagggc 780
accagcgtga ccgtgtccag c 801
<210> 30
<211> 735
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 30
gacatccaga tgacccagac cacctccagc ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc 60
atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaagccc 120
gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 180
cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggagcag 240
gaggacatcg ccacctactt ttgccagcag ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc 300
ggaacaaagc tggagatcac cggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360
ggcagcacca agggcgaggt gaagctgcag gagagcggcc ctggcctggt ggcccccagc 420
cagagcctga gcgtgacctg taccgtgtcc ggcgtgtccc tgcccgacta cggcgtgtcc 480
tggatccggc agccccctag gaagggcctg gagtggctgg gcgtgatctg gggcagcgag 540
accacctact acaacagcgc cctgaagagc cggctgacca tcatcaagga caacagcaag 600
agccaggtgt tcctgaagat gaacagcctg cagaccgacg acaccgccat ctactactgt 660
gccaagcact actactacgg cggcagctac gccatggact actggggcca gggcaccagc 720
gtgaccgtgt ccagc 735
<210> 31
<211> 801
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 31
atgctgctgc tggtgaccag cctgctgctg tgtgagctgc cccaccccgc ctttctgctg 60
atccccgagg tgaagctgca ggagagcggc cctggcctgg tggcccccag ccagagcctg 120
agcgtgacct gtaccgtgtc cggcgtgtcc ctgcccgact acggcgtgtc ctggatccgg 180
cagcccccta ggaagggcct ggagtggctg ggcgtgatct ggggcagcga gaccacctac 240
tacaacagcg ccctgaagag ccggctgacc atcatcaagg acaacagcaa gagccaggtg 300
ttcctgaaga tgaacagcct gcagaccgac gacaccgcca tctactactg tgccaagcac 360
tactactacg gcggcagcta cgccatggac tactggggcc agggcaccag cgtgaccgtg 420
tccagcggca gcacctccgg cagcggcaag cctggcagcg gcgagggcag caccaagggc 480
gacatccaga tgacccagac cacctccagc ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc 540
atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaagccc 600
gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 660
cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggagcag 720
gaggacatcg ccacctactt ttgccagcag ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc 780
ggaacaaagc tggagatcac c 801
<210> 32
<211> 735
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 32
gaggtgaagc tgcaggagag cggccctggc ctggtggccc ccagccagag cctgagcgtg 60
acctgtaccg tgtccggcgt gtccctgccc gactacggcg tgtcctggat ccggcagccc 120
cctaggaagg gcctggagtg gctgggcgtg atctggggca gcgagaccac ctactacaac 180
agcgccctga agagccggct gaccatcatc aaggacaaca gcaagagcca ggtgttcctg 240
aagatgaaca gcctgcagac cgacgacacc gccatctact actgtgccaa gcactactac 300
tacggcggca gctacgccat ggactactgg ggccagggca ccagcgtgac cgtgtccagc 360
ggcagcacct ccggcagcgg caagcctggc agcggcgagg gcagcaccaa gggcgacatc 420
cagatgaccc agaccacctc cagcctgagc gccagcctgg gcgaccgggt gaccatcagc 480
tgccgggcca gccaggacat cagcaagtac ctgaactggt atcagcagaa gcccgacggc 540
accgtcaagc tgctgatcta ccacaccagc cggctgcaca gcggcgtgcc cagccggttt 600
agcggcagcg gctccggcac cgactacagc ctgaccatct ccaacctgga gcaggaggac 660
atcgccacct acttttgcca gcagggcaac acactgccct acacctttgg cggcggaaca 720
aagctggaga tcacc 735
<210> 33
<211> 789
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 33
atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60
ccggacatcc agatgacaca gactacatcc tccctgtctg cctctctggg agacagagtc 120
accatcagtt gcagggcaag tcaggacatt agtaaatatt taaattggta tcagcagaaa 180
ccagatggaa ctgttaaact cctgatctac catacatcaa gattacactc aggagtccca 240
tcaaggttca gtggcagtgg gtctggaaca gattattctc tcaccattag caacctggag 300
caagaagata ttgccactta cttttgccaa cagggtaata cgcttccgta cacgttcgga 360
ggggggacca agctggagat cacaggtggc ggtggctcgg gcggtggtgg gtcgggtggc 420
ggcggatctg aggtgaaact gcaggagtca ggacctggcc tggtggcgcc ctcacagagc 480
ctgtccgtca catgcactgt ctcaggggtc tcattacccg actatggtgt aagctggatt 540
cgccagcctc cacgaaaggg tctggagtgg ctgggagtaa tatggggtag tgaaaccaca 600
tactataatt cagctctcaa atccagactg accatcatca aggacaactc caagagccaa 660
gttttcttaa aaatgaacag tctgcaaact gatgacacag ccatttacta ctgtgccaaa 720
cattattact acggtggtag ctatgctatg gactactggg gccaaggaac ctcagtcacc 780
gtctcctca 789
<210> 34
<211> 726
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 34
gacatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 60
atcagttgca gggcaagtca ggacattagt aaatatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gatggaactg ttaaactcct gatctaccat acatcaagat tacactcagg agtcccatca 180
aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccattagcaa cctggagcaa 240
gaagatattg ccacttactt ttgccaacag ggtaatacgc ttccgtacac gttcggaggg 300
gggaccaagc tggagatcac aggtggcggt ggctcgggcg gtggtgggtc gggtggcggc 360
ggatctgagg tgaaactgca ggagtcagga cctggcctgg tggcgccctc acagagcctg 420
tccgtcacat gcactgtctc aggggtctca ttacccgact atggtgtaag ctggattcgc 480
cagcctccac gaaagggtct ggagtggctg ggagtaatat ggggtagtga aaccacatac 540
tataattcag ctctcaaatc cagactgacc atcatcaagg acaactccaa gagccaagtt 600
ttcttaaaaa tgaacagtct gcaaactgat gacacagcca tttactactg tgccaaacat 660
tattactacg gtggtagcta tgctatggac tactggggcc aaggaacctc agtcaccgtc 720
tcctca 726
<210> 35
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide"
<400> 35
ggtggcggtg gctcgggcgg tggtgggtcg ggtggcggcg gatct 45
<210> 36
<211> 63
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide"
<400> 36
atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60
ccg 63
<210> 37
<211> 47
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 37
Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr
1 5 10 15
Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala
20 25 30
Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
35 40 45
<210> 38
<211> 45
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 38
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
1 5 10 15
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
20 25 30
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
35 40 45
<210> 39
<211> 42
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 39
Ala Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu
1 5 10 15
Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro
20 25 30
Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro
35 40
<210> 40
<211> 141
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 40
aagcccacca ccacccctgc ccctagacct ccaaccccag cccctacaat cgccagccag 60
cccctgagcc tgaggcccga agcctgtaga cctgccgctg gcggagccgt gcacaccaga 120
ggcctggatt tcgcctgcga c 141
<210> 41
<211> 135
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 41
accacgacgc cagcgccgcg accaccaaca ccggcgccca ccatcgcgtc gcagcccctg 60
tccctgcgcc cagaggcgtg ccggccagcg gcggggggcg cagtgcacac gagggggctg 120
gacttcgcct gtgat 135
<210> 42
<211> 126
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 42
gcggccgcaa ttgaagttat gtatcctcct ccttacctag acaatgagaa gagcaatgga 60
accattatcc atgtgaaagg gaaacacctt tgtccaagtc ccctatttcc cggaccttct 120
aagccc 126
<210> 43
<211> 28
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 43
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn
20 25
<210> 44
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 44
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys
20
<210> 45
<211> 27
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 45
Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25
<210> 46
<211> 75
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 46
Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr
1 5 10 15
Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala
20 25 30
Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile
35 40 45
Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser
50 55 60
Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn
65 70 75
<210> 47
<211> 69
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 47
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
1 5 10 15
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
20 25 30
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile
35 40 45
Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val
50 55 60
Ile Thr Leu Tyr Cys
65
<210> 48
<211> 69
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 48
Ala Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu
1 5 10 15
Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro
20 25 30
Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val
35 40 45
Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe
50 55 60
Ile Ile Phe Trp Val
65
<210> 49
<211> 84
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 49
atctacatct gggcccctct ggccggcacc tgtggcgtgc tgctgctgag cctggtcatc 60
accctgtact gcaaccaccg gaat 84
<210> 50
<211> 84
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 50
atctacatct gggcacctct ggccggcacc tgtggcgtgc tgctgctgag cctggtcatc 60
accctgtact gcaaccaccg gaat 84
<210> 51
<211> 72
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide"
<400> 51
atctacatct gggcgccctt ggccgggact tgtggggtcc ttctcctgtc actggttatc 60
accctttact gc 72
<210> 52
<211> 81
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 52
ttttgggtgc tggtggtggt tgggggagtc ctggcttgct atagcttgct agtaacagtg 60
gcctttatta ttttctgggt g 81
<210> 53
<211> 225
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 53
aagcccacca ccacccctgc ccctagacct ccaaccccag cccctacaat cgccagccag 60
cccctgagcc tgaggcccga agcctgtaga cctgccgctg gcggagccgt gcacaccaga 120
ggcctggatt tcgcctgcga catctacatc tgggcccctc tggccggcac ctgtggcgtg 180
ctgctgctga gcctggtcat caccctgtac tgcaaccacc ggaat 225
<210> 54
<211> 225
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 54
aagcccacca ccacccctgc ccctagacct ccaaccccag cccctacaat cgccagccag 60
cccctgagcc tgaggcccga agcctgtaga cctgccgctg gcggagccgt gcacaccaga 120
ggcctggatt tcgcctgcga catctacatc tgggcacctc tggccggcac ctgtggcgtg 180
ctgctgctga gcctggtcat caccctgtac tgcaaccacc ggaat 225
<210> 55
<211> 207
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 55
accacgacgc cagcgccgcg accaccaaca ccggcgccca ccatcgcgtc gcagcccctg 60
tccctgcgcc cagaggcgtg ccggccagcg gcggggggcg cagtgcacac gagggggctg 120
gacttcgcct gtgatatcta catctgggcg cccttggccg ggacttgtgg ggtccttctc 180
ctgtcactgg ttatcaccct ttactgc 207
<210> 56
<211> 207
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 56
gcggccgcaa ttgaagttat gtatcctcct ccttacctag acaatgagaa gagcaatgga 60
accattatcc atgtgaaagg gaaacacctt tgtccaagtc ccctatttcc cggaccttct 120
aagccctttt gggtgctggt ggtggttggg ggagtcctgg cttgctatag cttgctagta 180
acagtggcct ttattatttt ctgggtg 207
<210> 57
<211> 41
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 57
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 58
<211> 41
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 58
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 59
<211> 42
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 59
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 60
<211> 112
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 60
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 61
<211> 153
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 61
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser
35 40 45
Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu
50 55 60
Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg
65 70 75 80
Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln
85 90 95
Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr
100 105 110
Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp
115 120 125
Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala
130 135 140
Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
145 150
<210> 62
<211> 154
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 62
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg
35 40 45
Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn
50 55 60
Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg
65 70 75 80
Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro
85 90 95
Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala
100 105 110
Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His
115 120 125
Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp
130 135 140
Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
145 150
<210> 63
<211> 153
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 63
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser
35 40 45
Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu
50 55 60
Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg
65 70 75 80
Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln
85 90 95
Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr
100 105 110
Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp
115 120 125
Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala
130 135 140
Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
145 150
<210> 64
<211> 123
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 64
aggagcaagc ggagcagagg cggccacagc gactacatga acatgacccc ccggaggcct 60
ggccccaccc ggaagcacta ccagccctac gcccctccca gggacttcgc cgcctaccgg 120
agc 123
<210> 65
<211> 123
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 65
aggagtaaga ggagcaggct cctgcacagt gactacatga acatgactcc ccgccgcccc 60
gggcccaccc gcaagcatta ccagccctat gccccaccac gcgacttcgc agcctatcgc 120
tcc 123
<210> 66
<211> 126
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 66
aaacggggca gaaagaaact cctgtatata ttcaaacaac catttatgag accagtacaa 60
actactcaag aggaagatgg ctgtagctgc cgatttccag aagaagaaga aggaggatgt 120
gaactg 126
<210> 67
<211> 336
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 67
cgggtgaagt tcagccggag cgccgacgcc cctgcctacc agcagggcca gaaccagctg 60
tacaacgagc tgaacctggg ccggagggag gagtacgacg tgctggacaa gcggagaggc 120
cgggaccctg agatgggcgg caagccccgg agaaagaacc ctcaggaggg cctgtataac 180
gaactgcaga aagacaagat ggccgaggcc tacagcgaga tcggcatgaa gggcgagcgg 240
cggaggggca agggccacga cggcctgtac cagggcctga gcaccgccac caaggatacc 300
tacgacgccc tgcacatgca ggccctgccc cccaga 336
<210> 68
<211> 336
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 68
agagtgaagt tcagcaggag cgcagacgcc cccgcgtacc agcagggcca gaaccagctc 60
tataacgagc tcaatctagg acgaagagag gagtacgatg ttttggacaa gagacgtggc 120
cgggaccctg agatgggggg aaagccgaga aggaagaacc ctcaggaagg cctgtacaat 180
gaactgcaga aagataagat ggcggaggcc tacagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc 240
cggaggggca aggggcacga tggcctttac cagggtctca gtacagccac caaggacacc 300
tacgacgccc ttcacatgca ggccctgccc cctcgc 336
<210> 69
<211> 459
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 69
aggagcaagc ggagcagagg cggccacagc gactacatga acatgacccc ccggaggcct 60
ggccccaccc ggaagcacta ccagccctac gcccctccca gggacttcgc cgcctaccgg 120
agccgggtga agttcagccg gagcgccgac gcccctgcct accagcaggg ccagaaccag 180
ctgtacaacg agctgaacct gggccggagg gaggagtacg acgtgctgga caagcggaga 240
ggccgggacc ctgagatggg cggcaagccc cggagaaaga accctcagga gggcctgtat 300
aacgaactgc agaaagacaa gatggccgag gcctacagcg agatcggcat gaagggcgag 360
cggcggaggg gcaagggcca cgacggcctg taccagggcc tgagcaccgc caccaaggat 420
acctacgacg ccctgcacat gcaggccctg ccccccaga 459
<210> 70
<211> 462
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 70
aaacggggca gaaagaaact cctgtatata ttcaaacaac catttatgag accagtacaa 60
actactcaag aggaagatgg ctgtagctgc cgatttccag aagaagaaga aggaggatgt 120
gaactgagag tgaagttcag caggagcgca gacgcccccg cgtaccagca gggccagaac 180
cagctctata acgagctcaa tctaggacga agagaggagt acgatgtttt ggacaagaga 240
cgtggccggg accctgagat ggggggaaag ccgagaagga agaaccctca ggaaggcctg 300
tacaatgaac tgcagaaaga taagatggcg gaggcctaca gtgagattgg gatgaaaggc 360
gagcgccgga ggggcaaggg gcacgatggc ctttaccagg gtctcagtac agccaccaag 420
gacacctacg acgcccttca catgcaggcc ctgccccctc gc 462
<210> 71
<211> 459
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 71
aggagtaaga ggagcaggct cctgcacagt gactacatga acatgactcc ccgccgcccc 60
gggcccaccc gcaagcatta ccagccctat gccccaccac gcgacttcgc agcctatcgc 120
tccagagtga agttcagcag gagcgcagac gcccccgcgt accagcaggg ccagaaccag 180
ctctataacg agctcaatct aggacgaaga gaggagtacg atgttttgga caagagacgt 240
ggccgggacc ctgagatggg gggaaagccg agaaggaaga accctcagga aggcctgtac 300
aatgaactgc agaaagataa gatggcggag gcctacagtg agattgggat gaaaggcgag 360
cgccggaggg gcaaggggca cgatggcctt taccagggtc tcagtacagc caccaaggac 420
acctacgacg cccttcacat gcaggccctg ccccctcgc 459
<210> 72
<211> 495
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 72
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser
20 25 30
Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser
35 40 45
Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly
50 55 60
Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val
65 70 75 80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr
85 90 95
Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln
100 105 110
Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
115 120 125
Thr Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser
130 135 140
Thr Lys Gly Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala
145 150 155 160
Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu
165 170 175
Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu
180 185 190
Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser
195 200 205
Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln
210 215 220
Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr
225 230 235 240
Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
245 250 255
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Lys Pro Thr Thr Thr
260 265 270
Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro
275 280 285
Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val
290 295 300
His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro
305 310 315 320
Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu
325 330 335
Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser
340 345 350
Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His
355 360 365
Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg
370 375 380
Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln
385 390 395 400
Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp
405 410 415
Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro
420 425 430
Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp
435 440 445
Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg
450 455 460
Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr
465 470 475 480
Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485 490 495
<210> 73
<211> 519
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 73
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser
20 25 30
Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser
35 40 45
Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly
50 55 60
Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val
65 70 75 80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr
85 90 95
Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln
100 105 110
Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
115 120 125
Thr Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser
130 135 140
Thr Lys Gly Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala
145 150 155 160
Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu
165 170 175
Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu
180 185 190
Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser
195 200 205
Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln
210 215 220
Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr
225 230 235 240
Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
245 250 255
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Lys Pro Thr Thr Thr
260 265 270
Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro
275 280 285
Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val
290 295 300
His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro
305 310 315 320
Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu
325 330 335
Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser
340 345 350
Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His
355 360 365
Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg
370 375 380
Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln
385 390 395 400
Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp
405 410 415
Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro
420 425 430
Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp
435 440 445
Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg
450 455 460
Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr
465 470 475 480
Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Gly
485 490 495
Ser Gly Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly
500 505 510
Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly
515
<210> 74
<211> 473
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 74
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly
100 105 110
Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys
115 120 125
Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser
130 135 140
Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser
145 150 155 160
Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile
165 170 175
Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn
195 200 205
Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr
210 215 220
Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
225 230 235 240
Val Thr Val Ser Ser Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro
245 250 255
Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu
260 265 270
Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp
275 280 285
Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly
290 295 300
Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn
305 310 315 320
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
325 330 335
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
340 345 350
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser
355 360 365
Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu
370 375 380
Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg
385 390 395 400
Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln
405 410 415
Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr
420 425 430
Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp
435 440 445
Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala
450 455 460
Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
465 470
<210> 75
<211> 497
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 75
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly
100 105 110
Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys
115 120 125
Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser
130 135 140
Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser
145 150 155 160
Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile
165 170 175
Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn
195 200 205
Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr
210 215 220
Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
225 230 235 240
Val Thr Val Ser Ser Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro
245 250 255
Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu
260 265 270
Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp
275 280 285
Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly
290 295 300
Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn
305 310 315 320
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
325 330 335
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
340 345 350
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser
355 360 365
Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu
370 375 380
Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg
385 390 395 400
Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln
405 410 415
Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr
420 425 430
Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp
435 440 445
Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala
450 455 460
Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Gly Ser Gly Val Lys Gln Thr
465 470 475 480
Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro
485 490 495
Gly
<210> 76
<211> 495
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 76
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly
20 25 30
Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly
35 40 45
Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg
50 55 60
Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser
85 90 95
Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr
100 105 110
Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala
115 120 125
Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Ser
130 135 140
Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly
145 150 155 160
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
165 170 175
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
180 185 190
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
195 200 205
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
210 215 220
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
225 230 235 240
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
245 250 255
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Lys Pro Thr Thr Thr
260 265 270
Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro
275 280 285
Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val
290 295 300
His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro
305 310 315 320
Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu
325 330 335
Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser
340 345 350
Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His
355 360 365
Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg
370 375 380
Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln
385 390 395 400
Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp
405 410 415
Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro
420 425 430
Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp
435 440 445
Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg
450 455 460
Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr
465 470 475 480
Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485 490 495
<210> 77
<211> 473
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 77
Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys
115 120 125
Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln
130 135 140
Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser
145 150 155 160
Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln
165 170 175
Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu
180 185 190
His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp
195 200 205
Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr
210 215 220
Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr
225 230 235 240
Lys Leu Glu Ile Thr Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro
245 250 255
Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu
260 265 270
Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp
275 280 285
Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly
290 295 300
Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn
305 310 315 320
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
325 330 335
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
340 345 350
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser
355 360 365
Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu
370 375 380
Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg
385 390 395 400
Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln
405 410 415
Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr
420 425 430
Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp
435 440 445
Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala
450 455 460
Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
465 470
<210> 78
<211> 486
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 78
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu
20 25 30
Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln
35 40 45
Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr
50 55 60
Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro
65 70 75 80
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile
85 90 95
Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly
100 105 110
Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu
130 135 140
Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser
145 150 155 160
Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly
165 170 175
Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly
180 185 190
Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
195 200 205
Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys
210 215 220
Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys
225 230 235 240
His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
245 250 255
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro
260 265 270
Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu
275 280 285
Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp
290 295 300
Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly
305 310 315 320
Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg
325 330 335
Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln
340 345 350
Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu
355 360 365
Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala
370 375 380
Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu
385 390 395 400
Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp
405 410 415
Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu
420 425 430
Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile
435 440 445
Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr
450 455 460
Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met
465 470 475 480
Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485
<210> 79
<211> 465
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 79
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Gln Glu
115 120 125
Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys
130 135 140
Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg
145 150 155 160
Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser
165 170 175
Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile
180 185 190
Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln
195 200 205
Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly
210 215 220
Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val
225 230 235 240
Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr
245 250 255
Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala
260 265 270
Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile
275 280 285
Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser
290 295 300
Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr
305 310 315 320
Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu
325 330 335
Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu
340 345 350
Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln
355 360 365
Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu
370 375 380
Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly
385 390 395 400
Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln
405 410 415
Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu
420 425 430
Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr
435 440 445
Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro
450 455 460
Arg
465
<210> 80
<211> 489
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 80
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser
20 25 30
Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser
35 40 45
Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly
50 55 60
Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val
65 70 75 80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr
85 90 95
Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln
100 105 110
Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
115 120 125
Thr Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser
130 135 140
Thr Lys Gly Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala
145 150 155 160
Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu
165 170 175
Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu
180 185 190
Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser
195 200 205
Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln
210 215 220
Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr
225 230 235 240
Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
245 250 255
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Ile Glu
260 265 270
Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr
275 280 285
Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro
290 295 300
Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu
305 310 315 320
Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
325 330 335
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
340 345 350
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
355 360 365
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser
370 375 380
Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu
385 390 395 400
Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg
405 410 415
Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln
420 425 430
Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr
435 440 445
Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp
450 455 460
Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala
465 470 475 480
Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485
<210> 81
<211> 467
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 81
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly
100 105 110
Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys
115 120 125
Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser
130 135 140
Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser
145 150 155 160
Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile
165 170 175
Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn
195 200 205
Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr
210 215 220
Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
225 230 235 240
Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro
245 250 255
Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly
260 265 270
Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe
275 280 285
Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu
290 295 300
Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg
305 310 315 320
Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro
325 330 335
Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala
340 345 350
Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr
355 360 365
Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg
370 375 380
Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met
385 390 395 400
Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu
405 410 415
Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys
420 425 430
Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu
435 440 445
Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu
450 455 460
Pro Pro Arg
465
<210> 82
<211> 1485
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 82
atgctgctgc tggtgaccag cctgctgctg tgtgagctgc cccaccccgc ctttctgctg 60
atccccgaca tccagatgac ccagaccacc tccagcctga gcgccagcct gggcgaccgg 120
gtgaccatca gctgccgggc cagccaggac atcagcaagt acctgaactg gtatcagcag 180
aagcccgacg gcaccgtcaa gctgctgatc taccacacca gccggctgca cagcggcgtg 240
cccagccggt ttagcggcag cggctccggc accgactaca gcctgaccat ctccaacctg 300
gagcaggagg acatcgccac ctacttttgc cagcagggca acacactgcc ctacaccttt 360
ggcggcggaa caaagctgga gatcaccggc agcacctccg gcagcggcaa gcctggcagc 420
ggcgagggca gcaccaaggg cgaggtgaag ctgcaggaga gcggccctgg cctggtggcc 480
cccagccaga gcctgagcgt gacctgtacc gtgtccggcg tgtccctgcc cgactacggc 540
gtgtcctgga tccggcagcc ccctaggaag ggcctggagt ggctgggcgt gatctggggc 600
agcgagacca cctactacaa cagcgccctg aagagccggc tgaccatcat caaggacaac 660
agcaagagcc aggtgttcct gaagatgaac agcctgcaga ccgacgacac cgccatctac 720
tactgtgcca agcactacta ctacggcggc agctacgcca tggactactg gggccagggc 780
accagcgtga ccgtgtccag caagcccacc accacccctg cccctagacc tccaacccca 840
gcccctacaa tcgccagcca gcccctgagc ctgaggcccg aagcctgtag acctgccgct 900
ggcggagccg tgcacaccag aggcctggat ttcgcctgcg acatctacat ctgggcccct 960
ctggccggca cctgtggcgt gctgctgctg agcctggtca tcaccctgta ctgcaaccac 1020
cggaatagga gcaagcggag cagaggcggc cacagcgact acatgaacat gaccccccgg 1080
aggcctggcc ccacccggaa gcactaccag ccctacgccc ctcccaggga cttcgccgcc 1140
taccggagcc gggtgaagtt cagccggagc gccgacgccc ctgcctacca gcagggccag 1200
aaccagctgt acaacgagct gaacctgggc cggagggagg agtacgacgt gctggacaag 1260
cggagaggcc gggaccctga gatgggcggc aagccccgga gaaagaaccc tcaggagggc 1320
ctgtataacg aactgcagaa agacaagatg gccgaggcct acagcgagat cggcatgaag 1380
ggcgagcggc ggaggggcaa gggccacgac ggcctgtacc agggcctgag caccgccacc 1440
aaggatacct acgacgccct gcacatgcag gccctgcccc ccaga 1485
<210> 83
<211> 1485
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 83
atgctgctgc tggtgaccag cctgctgctg tgtgagctgc cccaccccgc ctttctgctg 60
atccccgaca tccagatgac ccagaccacc tccagcctga gcgccagcct gggcgaccgg 120
gtgaccatca gctgccgggc cagccaggac atcagcaagt acctgaactg gtatcagcag 180
aagcccgacg gcaccgtcaa gctgctgatc taccacacca gccggctgca cagcggcgtg 240
cccagccggt ttagcggcag cggctccggc accgactaca gcctgaccat ctccaacctg 300
gagcaggagg acatcgccac ctacttttgc cagcagggca acacactgcc ctacaccttt 360
ggcggcggaa caaagctgga gatcaccggc agcacctccg gcagcggcaa gcctggcagc 420
ggcgagggca gcaccaaggg cgaggtgaag ctgcaggaga gcggccctgg cctggtggcc 480
cccagccaga gcctgagcgt gacctgtacc gtgtccggcg tgtccctgcc cgactacggc 540
gtgtcctgga tccggcagcc ccctaggaag ggcctggagt ggctgggcgt gatctggggc 600
agcgagacca cctactacaa cagcgccctg aagagccggc tgaccatcat caaggacaac 660
agcaagagcc aggtgttcct gaagatgaac agcctgcaga ccgacgacac cgccatctac 720
tactgtgcca agcactacta ctacggcggc agctacgcca tggactactg gggccagggc 780
accagcgtga ccgtgtccag caagcccacc accacccctg cccctagacc tccaacccca 840
gcccctacaa tcgccagcca gcccctgagc ctgaggcccg aagcctgtag acctgccgct 900
ggcggagccg tgcacaccag aggcctggat ttcgcctgcg acatctacat ctgggcacct 960
ctggccggca cctgtggcgt gctgctgctg agcctggtca tcaccctgta ctgcaaccac 1020
cggaatagga gcaagcggag cagaggcggc cacagcgact acatgaacat gaccccccgg 1080
aggcctggcc ccacccggaa gcactaccag ccctacgccc ctcccaggga cttcgccgcc 1140
taccggagcc gggtgaagtt cagccggagc gccgacgccc ctgcctacca gcagggccag 1200
aaccagctgt acaacgagct gaacctgggc cggagggagg agtacgacgt gctggacaag 1260
cggagaggcc gggaccctga gatgggcggc aagccccgga gaaagaaccc tcaggagggc 1320
ctgtataacg aactgcagaa agacaagatg gccgaggcct acagcgagat cggcatgaag 1380
ggcgagcggc ggaggggcaa gggccacgac ggcctgtacc agggcctgag caccgccacc 1440
aaggatacct acgacgccct gcacatgcag gccctgcccc ccaga 1485
<210> 84
<211> 1557
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 84
atgctgctgc tggtgaccag cctgctgctg tgtgagctgc cccaccccgc ctttctgctg 60
atccccgaca tccagatgac ccagaccacc tccagcctga gcgccagcct gggcgaccgg 120
gtgaccatca gctgccgggc cagccaggac atcagcaagt acctgaactg gtatcagcag 180
aagcccgacg gcaccgtcaa gctgctgatc taccacacca gccggctgca cagcggcgtg 240
cccagccggt ttagcggcag cggctccggc accgactaca gcctgaccat ctccaacctg 300
gagcaggagg acatcgccac ctacttttgc cagcagggca acacactgcc ctacaccttt 360
ggcggcggaa caaagctgga gatcaccggc agcacctccg gcagcggcaa gcctggcagc 420
ggcgagggca gcaccaaggg cgaggtgaag ctgcaggaga gcggccctgg cctggtggcc 480
cccagccaga gcctgagcgt gacctgtacc gtgtccggcg tgtccctgcc cgactacggc 540
gtgtcctgga tccggcagcc ccctaggaag ggcctggagt ggctgggcgt gatctggggc 600
agcgagacca cctactacaa cagcgccctg aagagccggc tgaccatcat caaggacaac 660
agcaagagcc aggtgttcct gaagatgaac agcctgcaga ccgacgacac cgccatctac 720
tactgtgcca agcactacta ctacggcggc agctacgcca tggactactg gggccagggc 780
accagcgtga ccgtgtccag caagcccacc accacccctg cccctagacc tccaacccca 840
gcccctacaa tcgccagcca gcccctgagc ctgaggcccg aagcctgtag acctgccgct 900
ggcggagccg tgcacaccag aggcctggat ttcgcctgcg acatctacat ctgggcccct 960
ctggccggca cctgtggcgt gctgctgctg agcctggtca tcaccctgta ctgcaaccac 1020
cggaatagga gcaagcggag cagaggcggc cacagcgact acatgaacat gaccccccgg 1080
aggcctggcc ccacccggaa gcactaccag ccctacgccc ctcccaggga cttcgccgcc 1140
taccggagcc gggtgaagtt cagccggagc gccgacgccc ctgcctacca gcagggccag 1200
aaccagctgt acaacgagct gaacctgggc cggagggagg agtacgacgt gctggacaag 1260
cggagaggcc gggaccctga gatgggcggc aagccccgga gaaagaaccc tcaggagggc 1320
ctgtataacg aactgcagaa agacaagatg gccgaggcct acagcgagat cggcatgaag 1380
ggcgagcggc ggaggggcaa gggccacgac ggcctgtacc agggcctgag caccgccacc 1440
aaggatacct acgacgccct gcacatgcag gccctgcccc ccagaggctc cggagtgaag 1500
cagaccctga atttcgacct gctgaagctg gccggggacg tggagagcaa ccctggc 1557
<210> 85
<400> 85
000
<210> 86
<211> 1419
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 86
gacatccaga tgacccagac cacctccagc ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc 60
atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaagccc 120
gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 180
cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggagcag 240
gaggacatcg ccacctactt ttgccagcag ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc 300
ggaacaaagc tggagatcac cggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360
ggcagcacca agggcgaggt gaagctgcag gagagcggcc ctggcctggt ggcccccagc 420
cagagcctga gcgtgacctg taccgtgtcc ggcgtgtccc tgcccgacta cggcgtgtcc 480
tggatccggc agccccctag gaagggcctg gagtggctgg gcgtgatctg gggcagcgag 540
accacctact acaacagcgc cctgaagagc cggctgacca tcatcaagga caacagcaag 600
agccaggtgt tcctgaagat gaacagcctg cagaccgacg acaccgccat ctactactgt 660
gccaagcact actactacgg cggcagctac gccatggact actggggcca gggcaccagc 720
gtgaccgtgt ccagcaagcc caccaccacc cctgccccta gacctccaac cccagcccct 780
acaatcgcca gccagcccct gagcctgagg cccgaagcct gtagacctgc cgctggcgga 840
gccgtgcaca ccagaggcct ggatttcgcc tgcgacatct acatctgggc ccctctggcc 900
ggcacctgtg gcgtgctgct gctgagcctg gtcatcaccc tgtactgcaa ccaccggaat 960
aggagcaagc ggagcagagg cggccacagc gactacatga acatgacccc ccggaggcct 1020
ggccccaccc ggaagcacta ccagccctac gcccctccca gggacttcgc cgcctaccgg 1080
agccgggtga agttcagccg gagcgccgac gcccctgcct accagcaggg ccagaaccag 1140
ctgtacaacg agctgaacct gggccggagg gaggagtacg acgtgctgga caagcggaga 1200
ggccgggacc ctgagatggg cggcaagccc cggagaaaga accctcagga gggcctgtat 1260
aacgaactgc agaaagacaa gatggccgag gcctacagcg agatcggcat gaagggcgag 1320
cggcggaggg gcaagggcca cgacggcctg taccagggcc tgagcaccgc caccaaggat 1380
acctacgacg ccctgcacat gcaggccctg ccccccaga 1419
<210> 87
<211> 1419
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 87
gacatccaga tgacccagac cacctccagc ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc 60
atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaagccc 120
gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 180
cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggagcag 240
gaggacatcg ccacctactt ttgccagcag ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc 300
ggaacaaagc tggagatcac cggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360
ggcagcacca agggcgaggt gaagctgcag gagagcggcc ctggcctggt ggcccccagc 420
cagagcctga gcgtgacctg taccgtgtcc ggcgtgtccc tgcccgacta cggcgtgtcc 480
tggatccggc agccccctag gaagggcctg gagtggctgg gcgtgatctg gggcagcgag 540
accacctact acaacagcgc cctgaagagc cggctgacca tcatcaagga caacagcaag 600
agccaggtgt tcctgaagat gaacagcctg cagaccgacg acaccgccat ctactactgt 660
gccaagcact actactacgg cggcagctac gccatggact actggggcca gggcaccagc 720
gtgaccgtgt ccagcaagcc caccaccacc cctgccccta gacctccaac cccagcccct 780
acaatcgcca gccagcccct gagcctgagg cccgaagcct gtagacctgc cgctggcgga 840
gccgtgcaca ccagaggcct ggatttcgcc tgcgacatct acatctgggc acctctggcc 900
ggcacctgtg gcgtgctgct gctgagcctg gtcatcaccc tgtactgcaa ccaccggaat 960
aggagcaagc ggagcagagg cggccacagc gactacatga acatgacccc ccggaggcct 1020
ggccccaccc ggaagcacta ccagccctac gcccctccca gggacttcgc cgcctaccgg 1080
agccgggtga agttcagccg gagcgccgac gcccctgcct accagcaggg ccagaaccag 1140
ctgtacaacg agctgaacct gggccggagg gaggagtacg acgtgctgga caagcggaga 1200
ggccgggacc ctgagatggg cggcaagccc cggagaaaga accctcagga gggcctgtat 1260
aacgaactgc agaaagacaa gatggccgag gcctacagcg agatcggcat gaagggcgag 1320
cggcggaggg gcaagggcca cgacggcctg taccagggcc tgagcaccgc caccaaggat 1380
acctacgacg ccctgcacat gcaggccctg ccccccaga 1419
<210> 88
<211> 1491
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 88
gacatccaga tgacccagac cacctccagc ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc 60
atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaagccc 120
gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 180
cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggagcag 240
gaggacatcg ccacctactt ttgccagcag ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc 300
ggaacaaagc tggagatcac cggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360
ggcagcacca agggcgaggt gaagctgcag gagagcggcc ctggcctggt ggcccccagc 420
cagagcctga gcgtgacctg taccgtgtcc ggcgtgtccc tgcccgacta cggcgtgtcc 480
tggatccggc agccccctag gaagggcctg gagtggctgg gcgtgatctg gggcagcgag 540
accacctact acaacagcgc cctgaagagc cggctgacca tcatcaagga caacagcaag 600
agccaggtgt tcctgaagat gaacagcctg cagaccgacg acaccgccat ctactactgt 660
gccaagcact actactacgg cggcagctac gccatggact actggggcca gggcaccagc 720
gtgaccgtgt ccagcaagcc caccaccacc cctgccccta gacctccaac cccagcccct 780
acaatcgcca gccagcccct gagcctgagg cccgaagcct gtagacctgc cgctggcgga 840
gccgtgcaca ccagaggcct ggatttcgcc tgcgacatct acatctgggc ccctctggcc 900
ggcacctgtg gcgtgctgct gctgagcctg gtcatcaccc tgtactgcaa ccaccggaat 960
aggagcaagc ggagcagagg cggccacagc gactacatga acatgacccc ccggaggcct 1020
ggccccaccc ggaagcacta ccagccctac gcccctccca gggacttcgc cgcctaccgg 1080
agccgggtga agttcagccg gagcgccgac gcccctgcct accagcaggg ccagaaccag 1140
ctgtacaacg agctgaacct gggccggagg gaggagtacg acgtgctgga caagcggaga 1200
ggccgggacc ctgagatggg cggcaagccc cggagaaaga accctcagga gggcctgtat 1260
aacgaactgc agaaagacaa gatggccgag gcctacagcg agatcggcat gaagggcgag 1320
cggcggaggg gcaagggcca cgacggcctg taccagggcc tgagcaccgc caccaaggat 1380
acctacgacg ccctgcacat gcaggccctg ccccccagag gctccggagt gaagcagacc 1440
ctgaatttcg acctgctgaa gctggccggg gacgtggaga gcaaccctgg c 1491
<210> 89
<400> 89
000
<210> 90
<211> 1485
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 90
atgctgctgc tggtgaccag cctgctgctg tgtgagctgc cccaccccgc ctttctgctg 60
atccccgagg tgaagctgca ggagagcggc cctggcctgg tggcccccag ccagagcctg 120
agcgtgacct gtaccgtgtc cggcgtgtcc ctgcccgact acggcgtgtc ctggatccgg 180
cagcccccta ggaagggcct ggagtggctg ggcgtgatct ggggcagcga gaccacctac 240
tacaacagcg ccctgaagag ccggctgacc atcatcaagg acaacagcaa gagccaggtg 300
ttcctgaaga tgaacagcct gcagaccgac gacaccgcca tctactactg tgccaagcac 360
tactactacg gcggcagcta cgccatggac tactggggcc agggcaccag cgtgaccgtg 420
tccagcggca gcacctccgg cagcggcaag cctggcagcg gcgagggcag caccaagggc 480
gacatccaga tgacccagac cacctccagc ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc 540
atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaagccc 600
gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 660
cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggagcag 720
gaggacatcg ccacctactt ttgccagcag ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc 780
ggaacaaagc tggagatcac caagcccacc accacccctg cccctagacc tccaacccca 840
gcccctacaa tcgccagcca gcccctgagc ctgaggcccg aagcctgtag acctgccgct 900
ggcggagccg tgcacaccag aggcctggat ttcgcctgcg acatctacat ctgggcacct 960
ctggccggca cctgtggcgt gctgctgctg agcctggtca tcaccctgta ctgcaaccac 1020
cggaatagga gcaagcggag cagaggcggc cacagcgact acatgaacat gaccccccgg 1080
aggcctggcc ccacccggaa gcactaccag ccctacgccc ctcccaggga cttcgccgcc 1140
taccggagcc gggtgaagtt cagccggagc gccgacgccc ctgcctacca gcagggccag 1200
aaccagctgt acaacgagct gaacctgggc cggagggagg agtacgacgt gctggacaag 1260
cggagaggcc gggaccctga gatgggcggc aagccccgga gaaagaaccc tcaggagggc 1320
ctgtataacg aactgcagaa agacaagatg gccgaggcct acagcgagat cggcatgaag 1380
ggcgagcggc ggaggggcaa gggccacgac ggcctgtacc agggcctgag caccgccacc 1440
aaggatacct acgacgccct gcacatgcag gccctgcccc ccaga 1485
<210> 91
<211> 1419
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 91
gaggtgaagc tgcaggagag cggccctggc ctggtggccc ccagccagag cctgagcgtg 60
acctgtaccg tgtccggcgt gtccctgccc gactacggcg tgtcctggat ccggcagccc 120
cctaggaagg gcctggagtg gctgggcgtg atctggggca gcgagaccac ctactacaac 180
agcgccctga agagccggct gaccatcatc aaggacaaca gcaagagcca ggtgttcctg 240
aagatgaaca gcctgcagac cgacgacacc gccatctact actgtgccaa gcactactac 300
tacggcggca gctacgccat ggactactgg ggccagggca ccagcgtgac cgtgtccagc 360
ggcagcacct ccggcagcgg caagcctggc agcggcgagg gcagcaccaa gggcgacatc 420
cagatgaccc agaccacctc cagcctgagc gccagcctgg gcgaccgggt gaccatcagc 480
tgccgggcca gccaggacat cagcaagtac ctgaactggt atcagcagaa gcccgacggc 540
accgtcaagc tgctgatcta ccacaccagc cggctgcaca gcggcgtgcc cagccggttt 600
agcggcagcg gctccggcac cgactacagc ctgaccatct ccaacctgga gcaggaggac 660
atcgccacct acttttgcca gcagggcaac acactgccct acacctttgg cggcggaaca 720
aagctggaga tcaccaagcc caccaccacc cctgccccta gacctccaac cccagcccct 780
acaatcgcca gccagcccct gagcctgagg cccgaagcct gtagacctgc cgctggcgga 840
gccgtgcaca ccagaggcct ggatttcgcc tgcgacatct acatctgggc acctctggcc 900
ggcacctgtg gcgtgctgct gctgagcctg gtcatcaccc tgtactgcaa ccaccggaat 960
aggagcaagc ggagcagagg cggccacagc gactacatga acatgacccc ccggaggcct 1020
ggccccaccc ggaagcacta ccagccctac gcccctccca gggacttcgc cgcctaccgg 1080
agccgggtga agttcagccg gagcgccgac gcccctgcct accagcaggg ccagaaccag 1140
ctgtacaacg agctgaacct gggccggagg gaggagtacg acgtgctgga caagcggaga 1200
ggccgggacc ctgagatggg cggcaagccc cggagaaaga accctcagga gggcctgtat 1260
aacgaactgc agaaagacaa gatggccgag gcctacagcg agatcggcat gaagggcgag 1320
cggcggaggg gcaagggcca cgacggcctg taccagggcc tgagcaccgc caccaaggat 1380
acctacgacg ccctgcacat gcaggccctg ccccccaga 1419
<210> 92
<211> 1458
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 92
atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60
ccggacatcc agatgacaca gactacatcc tccctgtctg cctctctggg agacagagtc 120
accatcagtt gcagggcaag tcaggacatt agtaaatatt taaattggta tcagcagaaa 180
ccagatggaa ctgttaaact cctgatctac catacatcaa gattacactc aggagtccca 240
tcaaggttca gtggcagtgg gtctggaaca gattattctc tcaccattag caacctggag 300
caagaagata ttgccactta cttttgccaa cagggtaata cgcttccgta cacgttcgga 360
ggggggacca agctggagat cacaggtggc ggtggctcgg gcggtggtgg gtcgggtggc 420
ggcggatctg aggtgaaact gcaggagtca ggacctggcc tggtggcgcc ctcacagagc 480
ctgtccgtca catgcactgt ctcaggggtc tcattacccg actatggtgt aagctggatt 540
cgccagcctc cacgaaaggg tctggagtgg ctgggagtaa tatggggtag tgaaaccaca 600
tactataatt cagctctcaa atccagactg accatcatca aggacaactc caagagccaa 660
gttttcttaa aaatgaacag tctgcaaact gatgacacag ccatttacta ctgtgccaaa 720
cattattact acggtggtag ctatgctatg gactactggg gccaaggaac ctcagtcacc 780
gtctcctcaa ccacgacgcc agcgccgcga ccaccaacac cggcgcccac catcgcgtcg 840
cagcccctgt ccctgcgccc agaggcgtgc cggccagcgg cggggggcgc agtgcacacg 900
agggggctgg acttcgcctg tgatatctac atctgggcgc ccttggccgg gacttgtggg 960
gtccttctcc tgtcactggt tatcaccctt tactgcaaac ggggcagaaa gaaactcctg 1020
tatatattca aacaaccatt tatgagacca gtacaaacta ctcaagagga agatggctgt 1080
agctgccgat ttccagaaga agaagaagga ggatgtgaac tgagagtgaa gttcagcagg 1140
agcgcagacg cccccgcgta caagcagggc cagaaccagc tctataacga gctcaatcta 1200
ggacgaagag aggagtacga tgttttggac aagagacgtg gccgggaccc tgagatgggg 1260
ggaaagccga gaaggaagaa ccctcaggaa ggcctgtaca atgaactgca gaaagataag 1320
atggcggagg cctacagtga gattgggatg aaaggcgagc gccggagggg caaggggcac 1380
gatggccttt accagggtct cagtacagcc accaaggaca cctacgacgc ccttcacatg 1440
caggccctgc cccctcgc 1458
<210> 93
<211> 1395
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 93
gacatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 60
atcagttgca gggcaagtca ggacattagt aaatatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gatggaactg ttaaactcct gatctaccat acatcaagat tacactcagg agtcccatca 180
aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccattagcaa cctggagcaa 240
gaagatattg ccacttactt ttgccaacag ggtaatacgc ttccgtacac gttcggaggg 300
gggaccaagc tggagatcac aggtggcggt ggctcgggcg gtggtgggtc gggtggcggc 360
ggatctgagg tgaaactgca ggagtcagga cctggcctgg tggcgccctc acagagcctg 420
tccgtcacat gcactgtctc aggggtctca ttacccgact atggtgtaag ctggattcgc 480
cagcctccac gaaagggtct ggagtggctg ggagtaatat ggggtagtga aaccacatac 540
tataattcag ctctcaaatc cagactgacc atcatcaagg acaactccaa gagccaagtt 600
ttcttaaaaa tgaacagtct gcaaactgat gacacagcca tttactactg tgccaaacat 660
tattactacg gtggtagcta tgctatggac tactggggcc aaggaacctc agtcaccgtc 720
tcctcaacca cgacgccagc gccgcgacca ccaacaccgg cgcccaccat cgcgtcgcag 780
cccctgtccc tgcgcccaga ggcgtgccgg ccagcggcgg ggggcgcagt gcacacgagg 840
gggctggact tcgcctgtga tatctacatc tgggcgccct tggccgggac ttgtggggtc 900
cttctcctgt cactggttat caccctttac tgcaaacggg gcagaaagaa actcctgtat 960
atattcaaac aaccatttat gagaccagta caaactactc aagaggaaga tggctgtagc 1020
tgccgatttc cagaagaaga agaaggagga tgtgaactga gagtgaagtt cagcaggagc 1080
gcagacgccc ccgcgtacaa gcagggccag aaccagctct ataacgagct caatctagga 1140
cgaagagagg agtacgatgt tttggacaag agacgtggcc gggaccctga gatgggggga 1200
aagccgagaa ggaagaaccc tcaggaaggc ctgtacaatg aactgcagaa agataagatg 1260
gcggaggcct acagtgagat tgggatgaaa ggcgagcgcc ggaggggcaa ggggcacgat 1320
ggcctttacc agggtctcag tacagccacc aaggacacct acgacgccct tcacatgcag 1380
gccctgcccc ctcgc 1395
<210> 94
<211> 1467
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 94
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccagaca tccagatgac acagactaca tcctccctgt ctgcctctct gggagacaga 120
gtcaccatca gttgcagggc aagtcaggac attagtaaat atttaaattg gtatcagcag 180
aaaccagatg gaactgttaa actcctgatc taccatacat caagattaca ctcaggagtc 240
ccatcaaggt tcagtggcag tgggtctgga acagattatt ctctcaccat tagcaacctg 300
gagcaagaag atattgccac ttacttttgc caacagggta atacgcttcc gtacacgttc 360
ggagggggga ctaagttgga aataacaggc tccacctctg gatccggcaa gcccggatct 420
ggcgagggat ccaccaaggg cgaggtgaaa ctgcaggagt caggacctgg cctggtggcg 480
ccctcacaga gcctgtccgt cacatgcact gtctcagggg tctcattacc cgactatggt 540
gtaagctgga ttcgccagcc tccacgaaag ggtctggagt ggctgggagt aatatggggt 600
agtgaaacca catactataa ttcagctctc aaatccagac tgaccatcat caaggacaac 660
tccaagagcc aagttttctt aaaaatgaac agtctgcaaa ctgatgacac agccatttac 720
tactgtgcca aacattatta ctacggtggt agctatgcta tggactactg gggtcaagga 780
acctcagtca ccgtctcctc agcggccgca attgaagtta tgtatcctcc tccttaccta 840
gacaatgaga agagcaatgg aaccattatc catgtgaaag ggaaacacct ttgtccaagt 900
cccctatttc ccggaccttc taagcccttt tgggtgctgg tggtggttgg gggagtcctg 960
gcttgctata gcttgctagt aacagtggcc tttattattt tctgggtgag gagtaagagg 1020
agcaggctcc tgcacagtga ctacatgaac atgactcccc gccgccccgg gcccacccgc 1080
aagcattacc agccctatgc cccaccacgc gacttcgcag cctatcgctc cagagtgaag 1140
ttcagcagga gcgcagacgc ccccgcgtac cagcagggcc agaaccagct ctataacgag 1200
ctcaatctag gacgaagaga ggagtacgat gttttggaca agagacgtgg ccgggaccct 1260
gagatggggg gaaagccgag aaggaagaac cctcaggaag gcctgtacaa tgaactgcag 1320
aaagataaga tggcggaggc ctacagtgag attgggatga aaggcgagcg ccggaggggc 1380
aaggggcacg atggccttta ccagggtctc agtacagcca ccaaggacac ctacgacgcc 1440
cttcacatgc aggccctgcc ccctcgc 1467
<210> 95
<211> 1401
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 95
gacatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 60
atcagttgca gggcaagtca ggacattagt aaatatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gatggaactg ttaaactcct gatctaccat acatcaagat tacactcagg agtcccatca 180
aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccattagcaa cctggagcaa 240
gaagatattg ccacttactt ttgccaacag ggtaatacgc ttccgtacac gttcggaggg 300
gggactaagt tggaaataac aggctccacc tctggatccg gcaagcccgg atctggcgag 360
ggatccacca agggcgaggt gaaactgcag gagtcaggac ctggcctggt ggcgccctca 420
cagagcctgt ccgtcacatg cactgtctca ggggtctcat tacccgacta tggtgtaagc 480
tggattcgcc agcctccacg aaagggtctg gagtggctgg gagtaatatg gggtagtgaa 540
accacatact ataattcagc tctcaaatcc agactgacca tcatcaagga caactccaag 600
agccaagttt tcttaaaaat gaacagtctg caaactgatg acacagccat ttactactgt 660
gccaaacatt attactacgg tggtagctat gctatggact actggggtca aggaacctca 720
gtcaccgtct cctcagcggc cgcaattgaa gttatgtatc ctcctcctta cctagacaat 780
gagaagagca atggaaccat tatccatgtg aaagggaaac acctttgtcc aagtccccta 840
tttcccggac cttctaagcc cttttgggtg ctggtggtgg ttgggggagt cctggcttgc 900
tatagcttgc tagtaacagt ggcctttatt attttctggg tgaggagtaa gaggagcagg 960
ctcctgcaca gtgactacat gaacatgact ccccgccgcc ccgggcccac ccgcaagcat 1020
taccagccct atgccccacc acgcgacttc gcagcctatc gctccagagt gaagttcagc 1080
aggagcgcag acgcccccgc gtaccagcag ggccagaacc agctctataa cgagctcaat 1140
ctaggacgaa gagaggagta cgatgttttg gacaagagac gtggccggga ccctgagatg 1200
gggggaaagc cgagaaggaa gaaccctcag gaaggcctgt acaatgaact gcagaaagat 1260
aagatggcgg aggcctacag tgagattggg atgaaaggcg agcgccggag gggcaagggg 1320
cacgatggcc tttaccaggg tctcagtaca gccaccaagg acacctacga cgcccttcac 1380
atgcaggccc tgccccctcg c 1401
<210> 96
<211> 264
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 96
Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Ser Gly Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe
20 25 30
Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn
35 40 45
Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg
50 55 60
Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp
65 70 75 80
Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala
85 90 95
Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile
100 105 110
Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val
115 120 125
Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser
130 135 140
Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn
145 150 155 160
Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys
165 170 175
Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val
180 185 190
Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg
195 200 205
Asp Cys Val Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly
225 230 235 240
Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile
245 250 255
Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser
260
<210> 97
<211> 244
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 97
Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu
1 5 10 15
Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile
20 25 30
Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe
35 40 45
Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr
50 55 60
Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn
65 70 75 80
Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg
85 90 95
Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile
100 105 110
Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val
115 120 125
Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp
130 135 140
Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn
145 150 155 160
Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu
165 170 175
Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser
180 185 190
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
195 200 205
Gly Gly Gly Ser Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala
210 215 220
Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg
225 230 235 240
Ser Lys Arg Ser
<210> 98
<211> 171
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 98
Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu
1 5 10 15
Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile
20 25 30
Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe
35 40 45
Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr
50 55 60
Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn
65 70 75 80
Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg
85 90 95
Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile
100 105 110
Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val
115 120 125
Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp
130 135 140
Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn
145 150 155 160
Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln
165 170
<210> 99
<211> 141
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 99
Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro
1 5 10 15
Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val
20 25 30
Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn
35 40 45
Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn
50 55 60
Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His
65 70 75 80
Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met
85 90 95
Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val
100 105 110
Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly
115 120 125
Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser
130 135 140
<210> 100
<211> 21
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 100
Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro
1 5 10 15
Arg Asp Cys Val Ser
20
<210> 101
<211> 32
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 101
Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser
20 25 30
<210> 102
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 102
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 103
<211> 355
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 103
Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Ser Gly Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe
20 25 30
Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn
35 40 45
Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg
50 55 60
Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp
65 70 75 80
Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala
85 90 95
Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile
100 105 110
Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val
115 120 125
Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser
130 135 140
Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn
145 150 155 160
Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys
165 170 175
Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val
180 185 190
Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg
195 200 205
Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp
210 215 220
Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser
225 230 235 240
Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile
245 250 255
Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr
260 265 270
Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly
275 280 285
Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys
290 295 300
His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu
305 310 315 320
Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly
325 330 335
Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly
340 345 350
Leu Phe Met
355
<210> 104
<211> 335
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 104
Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu
1 5 10 15
Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile
20 25 30
Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe
35 40 45
Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr
50 55 60
Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn
65 70 75 80
Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg
85 90 95
Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile
100 105 110
Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val
115 120 125
Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp
130 135 140
Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn
145 150 155 160
Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu
165 170 175
Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser
180 185 190
Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu
195 200 205
Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln
210 215 220
Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly
225 230 235 240
Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro
245 250 255
His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr
260 265 270
Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His
275 280 285
Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro
290 295 300
Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala
305 310 315 320
Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met
325 330 335
<210> 105
<211> 297
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 105
Met Thr Thr Pro Arg Asn Ser Val Asn Gly Thr Phe Pro Ala Glu Pro
1 5 10 15
Met Lys Gly Pro Ile Ala Met Gln Ser Gly Pro Lys Pro Leu Phe Arg
20 25 30
Arg Met Ser Ser Leu Val Gly Pro Thr Gln Ser Phe Phe Met Arg Glu
35 40 45
Ser Lys Thr Leu Gly Ala Val Gln Ile Met Asn Gly Leu Phe His Ile
50 55 60
Ala Leu Gly Gly Leu Leu Met Ile Pro Ala Gly Ile Tyr Ala Pro Ile
65 70 75 80
Cys Val Thr Val Trp Tyr Pro Leu Trp Gly Gly Ile Met Tyr Ile Ile
85 90 95
Ser Gly Ser Leu Leu Ala Ala Thr Glu Lys Asn Ser Arg Lys Cys Leu
100 105 110
Val Lys Gly Lys Met Ile Met Asn Ser Leu Ser Leu Phe Ala Ala Ile
115 120 125
Ser Gly Met Ile Leu Ser Ile Met Asp Ile Leu Asn Ile Lys Ile Ser
130 135 140
His Phe Leu Lys Met Glu Ser Leu Asn Phe Ile Arg Ala His Thr Pro
145 150 155 160
Tyr Ile Asn Ile Tyr Asn Cys Glu Pro Ala Asn Pro Ser Glu Lys Asn
165 170 175
Ser Pro Ser Thr Gln Tyr Cys Tyr Ser Ile Gln Ser Leu Phe Leu Gly
180 185 190
Ile Leu Ser Val Met Leu Ile Phe Ala Phe Phe Gln Glu Leu Val Ile
195 200 205
Ala Gly Ile Val Glu Asn Glu Trp Lys Arg Thr Cys Ser Arg Pro Lys
210 215 220
Ser Asn Ile Val Leu Leu Ser Ala Glu Glu Lys Lys Glu Gln Thr Ile
225 230 235 240
Glu Ile Lys Glu Glu Val Val Gly Leu Thr Glu Thr Ser Ser Gln Pro
245 250 255
Lys Asn Glu Glu Asp Ile Glu Ile Ile Pro Ile Gln Glu Glu Glu Glu
260 265 270
Glu Glu Thr Glu Thr Asn Phe Pro Glu Pro Pro Gln Asp Gln Glu Ser
275 280 285
Ser Pro Ile Glu Asn Asp Ser Ser Pro
290 295
<210> 106
<211> 263
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 106
Met Thr Thr Pro Arg Asn Ser Val Asn Gly Thr Phe Pro Ala Glu Pro
1 5 10 15
Met Lys Gly Pro Ile Ala Met Gln Ser Gly Pro Lys Pro Leu Phe Arg
20 25 30
Arg Met Ser Ser Leu Val Gly Pro Thr Gln Ser Phe Phe Met Arg Glu
35 40 45
Ser Lys Thr Leu Gly Ala Val Gln Ile Met Asn Gly Leu Phe His Ile
50 55 60
Ala Leu Gly Gly Leu Leu Met Ile Pro Ala Gly Ile Tyr Ala Pro Ile
65 70 75 80
Cys Val Thr Val Trp Tyr Pro Leu Trp Gly Gly Ile Met Tyr Ile Ile
85 90 95
Ser Gly Ser Leu Leu Ala Ala Thr Glu Lys Asn Ser Arg Lys Cys Leu
100 105 110
Val Lys Gly Lys Met Ile Met Asn Ser Leu Ser Leu Phe Ala Ala Ile
115 120 125
Ser Gly Met Ile Leu Ser Ile Met Asp Ile Leu Asn Ile Lys Ile Ser
130 135 140
His Phe Leu Lys Met Glu Ser Leu Asn Phe Ile Arg Ala His Thr Pro
145 150 155 160
Tyr Ile Asn Ile Tyr Asn Cys Glu Pro Ala Asn Pro Ser Glu Lys Asn
165 170 175
Ser Pro Ser Thr Gln Tyr Cys Tyr Ser Ile Gln Ser Leu Phe Leu Gly
180 185 190
Ile Leu Ser Val Met Leu Ile Phe Ala Phe Phe Gln Glu Leu Val Ile
195 200 205
Ala Gly Ile Val Glu Asn Glu Trp Lys Arg Thr Cys Ser Arg Pro Lys
210 215 220
Ser Asn Ile Val Leu Leu Ser Ala Glu Glu Lys Lys Glu Gln Thr Ile
225 230 235 240
Glu Ile Lys Glu Glu Val Val Gly Leu Thr Glu Thr Ser Ser Gln Pro
245 250 255
Lys Asn Glu Glu Asp Ile Glu
260
<210> 107
<211> 792
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 107
atgaggctcc ctgctcagct cctggggctg ctaatgctct gggtgccagg atccagtggg 60
cgcaaagtgt gtaacggaat aggtattggt gaatttaaag actcactctc cataaatgct 120
acgaatatta aacacttcaa aaactgcacc tccatcagtg gcgatctcca catcctgccg 180
gtggcattta ggggtgactc cttcacacat actcctcctc tggatccaca ggaactggat 240
attctgaaaa ccgtaaagga aatcacaggg tttttgctga ttcaggcttg gcctgaaaac 300
aggacggacc tccatgcctt tgagaaccta gaaatcatac gcggcaggac caagcaacat 360
ggtcagtttt ctcttgcagt cgtcagcctg aacataacat ccttgggatt acgctccctc 420
aaggagataa gtgatggaga tgtgataatt tcaggaaaca aaaatttgtg ctatgcaaat 480
acaataaact ggaaaaaact gtttggtacc tccggtcaga aaaccaaaat tataagcaac 540
agaggtgaaa acagctgcaa ggccacaggc caggtctgcc atgccttgtg ctcccccgag 600
ggctgctggg gcccggagcc cagggactgc gtctctggtg gcggtggctc gggcggtggt 660
gggtcgggtg gcggcggatc tggtggcggt ggctcgtttt gggtgctggt ggtggttggt 720
ggagtcctgg cttgctatag cttgctagta acagtggcct ttattatttt ctgggtgagg 780
agtaagagga gc 792
<210> 108
<211> 732
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 108
cgcaaagtgt gtaacggaat aggtattggt gaatttaaag actcactctc cataaatgct 60
acgaatatta aacacttcaa aaactgcacc tccatcagtg gcgatctcca catcctgccg 120
gtggcattta ggggtgactc cttcacacat actcctcctc tggatccaca ggaactggat 180
attctgaaaa ccgtaaagga aatcacaggg tttttgctga ttcaggcttg gcctgaaaac 240
aggacggacc tccatgcctt tgagaaccta gaaatcatac gcggcaggac caagcaacat 300
ggtcagtttt ctcttgcagt cgtcagcctg aacataacat ccttgggatt acgctccctc 360
aaggagataa gtgatggaga tgtgataatt tcaggaaaca aaaatttgtg ctatgcaaat 420
acaataaact ggaaaaaact gtttggtacc tccggtcaga aaaccaaaat tataagcaac 480
agaggtgaaa acagctgcaa ggccacaggc caggtctgcc atgccttgtg ctcccccgag 540
ggctgctggg gcccggagcc cagggactgc gtctctggtg gcggtggctc gggcggtggt 600
gggtcgggtg gcggcggatc tggtggcggt ggctcgtttt gggtgctggt ggtggttggt 660
ggagtcctgg cttgctatag cttgctagta acagtggcct ttattatttt ctgggtgagg 720
agtaagagga gc 732
<210> 109
<211> 732
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 109
cgcaaagtgt gtaacggaat aggtattggt gaatttaaag actcactctc cataaatgct 60
acgaatatta aacacttcaa aaactgcacc tccatcagtg gcgatctcca catcctgccg 120
gtggcattta ggggtgactc cttcacacat actcctcctc tggatccaca ggaactggat 180
attctgaaaa ccgtaaagga aatcacaggg tttttgctga ttcaggcttg gcctgaaaac 240
aggacggacc tccatgcctt tgagaaccta gaaatcatac gcggcaggac caagcaacat 300
ggtcagtttt ctcttgcagt cgtcagcctg aacataacat ccttgggatt acgctccctc 360
aaggagataa gtgatggaga tgtgataatt tcaggaaaca aaaatttgtg ctatgcaaat 420
acaataaact ggaaaaaact gtttgggacc tccggtcaga aaaccaaaat tataagcaac 480
agaggtgaaa acagctgcaa ggccacaggc caggtctgcc atgccttgtg ctcccccgag 540
ggctgctggg gcccggagcc cagggactgc gtctctggtg gcggtggctc gggcggtggt 600
gggtcgggtg gcggcggatc tggtggcggt ggctcgtttt gggtgctggt ggtggttggt 660
ggagtcctgg cttgctatag cttgctagta acagtggcct ttattatttt ctgggtgagg 720
agtaagagga gc 732
<210> 110
<211> 513
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 110
cgcaaagtgt gtaacggaat aggtattggt gaatttaaag actcactctc cataaatgct 60
acgaatatta aacacttcaa aaactgcacc tccatcagtg gcgatctcca catcctgccg 120
gtggcattta ggggtgactc cttcacacat actcctcctc tggatccaca ggaactggat 180
attctgaaaa ccgtaaagga aatcacaggg tttttgctga ttcaggcttg gcctgaaaac 240
aggacggacc tccatgcctt tgagaaccta gaaatcatac gcggcaggac caagcaacat 300
ggtcagtttt ctcttgcagt cgtcagcctg aacataacat ccttgggatt acgctccctc 360
aaggagataa gtgatggaga tgtgataatt tcaggaaaca aaaatttgtg ctatgcaaat 420
acaataaact ggaaaaaact gtttggtacc tccggtcaga aaaccaaaat tataagcaac 480
agaggtgaaa acagctgcaa ggccacaggc cag 513
<210> 111
<211> 423
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 111
gtctgccatg ccttgtgctc ccccgagggc tgctggggcc cggagcccag ggactgcgtc 60
tcttgccgga atgtcagccg aggcagggaa tgcgtggaca agtgcaacct tctggagggt 120
gagccaaggg agtttgtgga gaactctgag tgcatacagt gccacccaga gtgcctgcct 180
caggccatga acatcacctg cacaggacgg ggaccagaca actgtatcca gtgtgcccac 240
tacattgacg gcccccactg cgtcaagacc tgcccggcag gagtcatggg agaaaacaac 300
accctggtct ggaagtacgc agacgccggc catgtgtgcc acctgtgcca tccaaactgc 360
acctacggat gcactgggcc aggtcttgaa ggctgtccaa cgaatgggcc taagatcccg 420
tcc 423
<210> 112
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 112
gtctgccatg ccttgtgctc ccccgagggc tgctggggcc cggagcccag ggactgcgtc 60
tct 63
<210> 113
<211> 96
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 113
ttttgggtgc tggtggtggt tggtggagtc ctggcttgct atagcttgct agtaacagtg 60
gcctttatta ttttctgggt gaggagtaag aggagc 96
<210> 114
<211> 60
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide"
<400> 114
ggtggcggtg gctcgggcgg tggtgggtcg ggtggcggcg gatctggtgg cggtggctcg 60
<210> 115
<211> 1065
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 115
atgaggctcc ctgctcagct cctggggctg ctaatgctct gggtgccagg atccagtggg 60
cgcaaagtgt gtaacggaat aggtattggt gaatttaaag actcactctc cataaatgct 120
acgaatatta aacacttcaa aaactgcacc tccatcagtg gcgatctcca catcctgccg 180
gtggcattta ggggtgactc cttcacacat actcctcctc tggatccaca ggaactggat 240
attctgaaaa ccgtaaagga aatcacaggg tttttgctga ttcaggcttg gcctgaaaac 300
aggacggacc tccatgcctt tgagaaccta gaaatcatac gcggcaggac caagcaacat 360
ggtcagtttt ctcttgcagt cgtcagcctg aacataacat ccttgggatt acgctccctc 420
aaggagataa gtgatggaga tgtgataatt tcaggaaaca aaaatttgtg ctatgcaaat 480
acaataaact ggaaaaaact gtttgggacc tccggtcaga aaaccaaaat tataagcaac 540
agaggtgaaa acagctgcaa ggccacaggc caggtctgcc atgccttgtg ctcccccgag 600
ggctgctggg gcccggagcc cagggactgc gtctcttgcc ggaatgtcag ccgaggcagg 660
gaatgcgtgg acaagtgcaa ccttctggag ggtgagccaa gggagtttgt ggagaactct 720
gagtgcatac agtgccaccc agagtgcctg cctcaggcca tgaacatcac ctgcacagga 780
cggggaccag acaactgtat ccagtgtgcc cactacattg acggccccca ctgcgtcaag 840
acctgcccgg caggagtcat gggagaaaac aacaccctgg tctggaagta cgcagacgcc 900
ggccatgtgt gccacctgtg ccatccaaac tgcacctacg gatgcactgg gccaggtctt 960
gaaggctgtc caacgaatgg gcctaagatc ccgtccatcg ccactgggat ggtgggggcc 1020
ctcctcttgc tgctggtggt ggccctgggg atcggcctct tcatg 1065
<210> 116
<211> 1005
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 116
cgcaaagtgt gtaacggaat aggtattggt gaatttaaag actcactctc cataaatgct 60
acgaatatta aacacttcaa aaactgcacc tccatcagtg gcgatctcca catcctgccg 120
gtggcattta ggggtgactc cttcacacat actcctcctc tggatccaca ggaactggat 180
attctgaaaa ccgtaaagga aatcacaggg tttttgctga ttcaggcttg gcctgaaaac 240
aggacggacc tccatgcctt tgagaaccta gaaatcatac gcggcaggac caagcaacat 300
ggtcagtttt ctcttgcagt cgtcagcctg aacataacat ccttgggatt acgctccctc 360
aaggagataa gtgatggaga tgtgataatt tcaggaaaca aaaatttgtg ctatgcaaat 420
acaataaact ggaaaaaact gtttgggacc tccggtcaga aaaccaaaat tataagcaac 480
agaggtgaaa acagctgcaa ggccacaggc caggtctgcc atgccttgtg ctcccccgag 540
ggctgctggg gcccggagcc cagggactgc gtctcttgcc ggaatgtcag ccgaggcagg 600
gaatgcgtgg acaagtgcaa ccttctggag ggtgagccaa gggagtttgt ggagaactct 660
gagtgcatac agtgccaccc agagtgcctg cctcaggcca tgaacatcac ctgcacagga 720
cggggaccag acaactgtat ccagtgtgcc cactacattg acggccccca ctgcgtcaag 780
acctgcccgg caggagtcat gggagaaaac aacaccctgg tctggaagta cgcagacgcc 840
ggccatgtgt gccacctgtg ccatccaaac tgcacctacg gatgcactgg gccaggtctt 900
gaaggctgtc caacgaatgg gcctaagatc ccgtccatcg ccactgggat ggtgggggcc 960
ctcctcttgc tgctggtggt ggccctgggg atcggcctct tcatg 1005
<210> 117
<211> 891
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 117
atgacaacac ccagaaattc agtaaatggg actttcccgg cagagccaat gaaaggccct 60
attgctatgc aatctggtcc aaaaccactc ttcaggagga tgtcttcact ggtgggcccc 120
acgcaaagct tcttcatgag ggaatctaag actttggggg ctgtccagat tatgaatggg 180
ctcttccaca ttgccctggg gggtcttctg atgatcccag cagggatcta tgcacccatc 240
tgtgtgactg tgtggtaccc tctctgggga ggcattatgt atattatttc cggatcactc 300
ctggcagcaa cggagaaaaa ctccaggaag tgtttggtca aaggaaaaat gataatgaat 360
tcattgagcc tctttgctgc catttctgga atgattcttt caatcatgga catacttaat 420
attaaaattt cccatttttt aaaaatggag agtctgaatt ttattagagc tcacacacca 480
tatattaaca tatacaactg tgaaccagct aatccctctg agaaaaactc cccatctacc 540
caatactgtt acagcataca atctctgttc ttgggcattt tgtcagtgat gctgatcttt 600
gccttcttcc aggaacttgt aatagctggc atcgttgaga atgaatggaa aagaacgtgc 660
tccagaccca aatctaacat agttctcctg tcagcagaag aaaaaaaaga acagactatt 720
gaaataaaag aagaagtggt tgggctaact gaaacatctt cccaaccaaa gaatgaagaa 780
gacattgaaa ttattccaat ccaagaagag gaagaagaag aaacagagac gaactttcca 840
gaacctcccc aagatcagga atcctcacca atagaaaatg acagctctcc t 891
<210> 118
<211> 789
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 118
atgaccacac cacggaactc tgtgaatggc accttcccag cagagccaat gaagggacca 60
atcgcaatgc agagcggacc caagcctctg tttcggagaa tgagctccct ggtgggccca 120
acccagtcct tctttatgag agagtctaag acactgggcg ccgtgcagat catgaacgga 180
ctgttccaca tcgccctggg aggactgctg atgatcccag ccggcatcta cgcccctatc 240
tgcgtgaccg tgtggtaccc tctgtggggc ggcatcatgt atatcatctc cggctctctg 300
ctggccgcca cagagaagaa cagcaggaag tgtctggtga agggcaagat gatcatgaat 360
agcctgtccc tgtttgccgc catctctggc atgatcctga gcatcatgga catcctgaac 420
atcaagatca gccacttcct gaagatggag agcctgaact tcatcagagc ccacacccct 480
tacatcaaca tctataattg cgagcctgcc aacccatccg agaagaattc tccaagcaca 540
cagtactgtt attccatcca gtctctgttc ctgggcatcc tgtctgtgat gctgatcttt 600
gccttctttc aggagctggt catcgccggc atcgtggaga acgagtggaa gaggacctgc 660
agccgcccca agtccaatat cgtgctgctg tccgccgagg agaagaagga gcagacaatc 720
gagatcaagg aggaggtggt gggcctgacc gagacatcta gccagcctaa gaatgaggag 780
gatatcgag 789
<210> 119
<211> 395
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 119
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp
20 25 30
Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp
35 40 45
Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu
50 55 60
Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr
65 70 75 80
Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly
85 90 95
Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys
100 105 110
Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe
115 120 125
Ile Asn Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln Ile Thr
145 150 155 160
Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser
165 170 175
Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys
180 185 190
Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala
195 200 205
Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp
210 215 220
Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr Thr
225 230 235 240
Ala Gly Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu
245 250 255
Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala
260 265 270
Ala Ile Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr
275 280 285
Gly Thr Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser
290 295 300
Gln Thr Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His Gln
305 310 315 320
Pro Pro Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Val Ala Ile
325 330 335
Ser Thr Ser Thr Val Leu Leu Cys Gly Leu Ser Ala Val Ser Leu Leu
340 345 350
Ala Cys Tyr Leu Lys Ser Arg Gln Thr Pro Pro Leu Ala Ser Val Glu
355 360 365
Met Glu Ala Met Glu Ala Leu Pro Val Thr Trp Gly Thr Ser Ser Arg
370 375 380
Asp Glu Asp Leu Glu Asn Cys Ser His His Leu
385 390 395
<210> 120
<211> 417
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 120
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp
20 25 30
Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp
35 40 45
Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu
50 55 60
Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr
65 70 75 80
Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly
85 90 95
Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys
100 105 110
Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe
115 120 125
Ile Asn Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln Ile Thr
145 150 155 160
Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser
165 170 175
Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys
180 185 190
Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala
195 200 205
Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp
210 215 220
Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr Thr
225 230 235 240
Ala Gly Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu
245 250 255
Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala
260 265 270
Ala Ile Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr
275 280 285
Gly Thr Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser
290 295 300
Gln Thr Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His Gln
305 310 315 320
Pro Pro Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Val Ala Ile
325 330 335
Ser Thr Ser Thr Val Leu Leu Cys Gly Leu Ser Ala Val Ser Leu Leu
340 345 350
Ala Cys Tyr Leu Lys Ser Arg Gln Thr Pro Pro Leu Ala Ser Val Glu
355 360 365
Met Glu Ala Met Glu Ala Leu Pro Val Thr Trp Gly Thr Ser Ser Arg
370 375 380
Asp Glu Asp Leu Glu Asn Cys Ser His His Leu Leu Glu Gly Gly Gly
385 390 395 400
Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro
405 410 415
Gly
<210> 121
<211> 377
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 121
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln Ile Thr Cys Pro
130 135 140
Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser
145 150 155 160
Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys
165 170 175
Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn
180 185 190
Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp Pro Ala
195 200 205
Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr Thr Ala Gly
210 215 220
Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu Pro Ala
225 230 235 240
Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala Ala Ile
245 250 255
Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr Gly Thr
260 265 270
Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser Gln Thr
275 280 285
Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His Gln Pro Pro
290 295 300
Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Val Ala Ile Ser Thr
305 310 315 320
Ser Thr Val Leu Leu Cys Gly Leu Ser Ala Val Ser Leu Leu Ala Cys
325 330 335
Tyr Leu Lys Ser Arg Gln Thr Pro Pro Leu Ala Ser Val Glu Met Glu
340 345 350
Ala Met Glu Ala Leu Pro Val Thr Trp Gly Thr Ser Ser Arg Asp Glu
355 360 365
Asp Leu Glu Asn Cys Ser His His Leu
370 375
<210> 122
<211> 399
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 122
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln Ile Thr Cys Pro
130 135 140
Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser
145 150 155 160
Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys
165 170 175
Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn
180 185 190
Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp Pro Ala
195 200 205
Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr Thr Ala Gly
210 215 220
Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu Pro Ala
225 230 235 240
Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala Ala Ile
245 250 255
Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr Gly Thr
260 265 270
Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser Gln Thr
275 280 285
Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His Gln Pro Pro
290 295 300
Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Val Ala Ile Ser Thr
305 310 315 320
Ser Thr Val Leu Leu Cys Gly Leu Ser Ala Val Ser Leu Leu Ala Cys
325 330 335
Tyr Leu Lys Ser Arg Gln Thr Pro Pro Leu Ala Ser Val Glu Met Glu
340 345 350
Ala Met Glu Ala Leu Pro Val Thr Trp Gly Thr Ser Ser Arg Asp Glu
355 360 365
Asp Leu Glu Asn Cys Ser His His Leu Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly
370 375 380
Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly
385 390 395
<210> 123
<211> 114
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 123
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 124
<211> 237
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 124
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val
65 70 75 80
Thr Thr Ala Gly Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly
85 90 95
Lys Glu Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr
100 105 110
Thr Ala Ala Ile Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro
115 120 125
Ser Thr Gly Thr Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr
130 135 140
Pro Ser Gln Thr Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser
145 150 155 160
His Gln Pro Pro Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Val
165 170 175
Ala Ile Ser Thr Ser Thr Val Leu Leu Cys Gly Leu Ser Ala Val Ser
180 185 190
Leu Leu Ala Cys Tyr Leu Lys Ser Arg Gln Thr Pro Pro Leu Ala Ser
195 200 205
Val Glu Met Glu Ala Met Glu Ala Leu Pro Val Thr Trp Gly Thr Ser
210 215 220
Ser Arg Asp Glu Asp Leu Glu Asn Cys Ser His His Leu
225 230 235
<210> 125
<211> 26
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 125
Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln
20 25
<210> 126
<211> 1185
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 126
atggattgga cctggattct gtttctggtg gccgctgcca caagagtgca cagcaactgg 60
gtgaatgtga tcagcgacct gaagaagatc gaggatctga tccagagcat gcacattgat 120
gccaccctgt acacagaatc tgatgtgcac cctagctgta aagtgaccgc catgaagtgt 180
tttctgctgg agctgcaggt gatttctctg gaaagcggag atgcctctat ccacgacaca 240
gtggagaatc tgatcatcct ggccaacaat agcctgagca gcaatggcaa tgtgacagag 300
tctggctgta aggagtgtga ggagctggag gagaagaaca tcaaggagtt tctgcagagc 360
tttgtgcaca tcgtgcagat gttcatcaat acaagctctg gcggaggatc tggaggaggc 420
ggatctggag gaggaggcag tggaggcgga ggatctggcg gaggatctct gcagattaca 480
tgccctcctc caatgtctgt ggagcacgcc gatatttggg tgaagtccta cagcctgtac 540
agcagagaga gatacatctg caacagcggc tttaagagaa aggccggcac ctcttctctg 600
acagagtgcg tgctgaataa ggccacaaat gtggcccact ggacaacacc tagcctgaag 660
tgcattagag atcctgccct ggtccaccag aggcctgccc ctccatctac agtgacaaca 720
gccggagtga cacctcagcc tgaatctctg agcccttctg gaaaagaacc tgccgccagc 780
tctcctagct ctaataatac cgccgccaca acagccgcca ttgtgcctgg atctcagctg 840
atgcctagca agtctcctag cacaggcaca acagagatca gcagccacga atcttctcac 900
ggaacacctt ctcagaccac cgccaagaat tgggagctga cagcctctgc ctctcaccag 960
cctccaggag tgtatcctca gggccactct gatacaacag tggccatcag cacatctaca 1020
gtgctgctgt gtggactgtc tgccgtgtct ctgctggcct gttacctgaa gtctagacag 1080
acacctcctc tggcctctgt ggagatggag gccatggaag ccctgcctgt gacatgggga 1140
acaagcagca gagatgaaga cctggagaat tgttctcacc acctg 1185
<210> 127
<211> 1185
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 127
atggattgga cctggattct gtttctggtg gccgctgcca caagagtgca cagcaactgg 60
gtgaatgtga tcagcgacct gaagaagatc gaggatctga tccagagcat gcacattgat 120
gccaccctgt acacagaatc tgatgtgcac cctagctgta aagtgaccgc catgaagtgt 180
tttctgctgg agctgcaggt gatttctctg gaaagcggag atgcctctat ccacgacaca 240
gtggagaatc tgatcatcct ggccaacaat agcctgagca gcaatggcaa tgtgacagag 300
tctggctgta aggagtgtga ggagctggag gagaagaaca tcaaggagtt tctgcagagc 360
tttgtgcaca tcgtgcagat gttcatcaat acaagctctg gcggaggatc tggaggaggc 420
ggatctggag gaggaggcag tggaggcgga ggatctggcg gaggatctct gcagattaca 480
tgccctcctc caatgtctgt ggagcacgcc gatatttggg tgaagtccta cagcctgtac 540
agcagagaga gatacatctg caacagcggc tttaagagaa aggccggcac ctcttctctg 600
acagagtgcg tgctgaataa ggccacaaat gtggcccact ggacaacacc tagcctgaag 660
tgcattagag atcctgccct ggtccaccag aggcctgccc ctccatctac agtgacaaca 720
gccggagtga cacctcagcc tgaatctctg agcccttctg gaaaagaacc tgccgccagc 780
tctcctagct ctaataatac cgccgccaca acagccgcca ttgtgcctgg atctcagctg 840
atgcctagca agtctcctag cacaggcaca acagagatca gcagccacga atcttctcac 900
ggaacacctt ctcagaccac cgccaagaat tgggagctga cagcctctgc ctctcaccag 960
cctccaggag tgtatcctca gggccactct gatacaacag tggccatcag cacatctaca 1020
gtgctgctgt gtggactgtc tgccgtgtct ctgctggcct gttacctgaa gtctagacag 1080
acacctcctc tggcctctgt ggagatggag gccatggaag ccctgcctgt gacatgggga 1140
acaagcagca gagatgagga cctggagaat tgttctcacc acctg 1185
<210> 128
<211> 1251
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 128
atggattgga cctggattct gtttctggtg gccgctgcca caagagtgca cagcaactgg 60
gtgaatgtga tcagcgacct gaagaagatc gaggatctga tccagagcat gcacattgat 120
gccaccctgt acacagaatc tgatgtgcac cctagctgta aagtgaccgc catgaagtgt 180
tttctgctgg agctgcaggt gatttctctg gaaagcggag atgcctctat ccacgacaca 240
gtggagaatc tgatcatcct ggccaacaat agcctgagca gcaatggcaa tgtgacagag 300
tctggctgta aggagtgtga ggagctggag gagaagaaca tcaaggagtt tctgcagagc 360
tttgtgcaca tcgtgcagat gttcatcaat acaagctctg gcggaggatc tggaggaggc 420
ggatctggag gaggaggcag tggaggcgga ggatctggcg gaggatctct gcagattaca 480
tgccctcctc caatgtctgt ggagcacgcc gatatttggg tgaagtccta cagcctgtac 540
agcagagaga gatacatctg caacagcggc tttaagagaa aggccggcac ctcttctctg 600
acagagtgcg tgctgaataa ggccacaaat gtggcccact ggacaacacc tagcctgaag 660
tgcattagag atcctgccct ggtccaccag aggcctgccc ctccatctac agtgacaaca 720
gccggagtga cacctcagcc tgaatctctg agcccttctg gaaaagaacc tgccgccagc 780
tctcctagct ctaataatac cgccgccaca acagccgcca ttgtgcctgg atctcagctg 840
atgcctagca agtctcctag cacaggcaca acagagatca gcagccacga atcttctcac 900
ggaacacctt ctcagaccac cgccaagaat tgggagctga cagcctctgc ctctcaccag 960
cctccaggag tgtatcctca gggccactct gatacaacag tggccatcag cacatctaca 1020
gtgctgctgt gtggactgtc tgccgtgtct ctgctggcct gttacctgaa gtctagacag 1080
acacctcctc tggcctctgt ggagatggag gccatggaag ccctgcctgt gacatgggga 1140
acaagcagca gagatgaaga cctggagaat tgttctcacc acctgctgga gggcggcgga 1200
gagggcagag gaagtcttct aacatgcggt gacgtggagg agaatcccgg c 1251
<210> 129
<211> 1254
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 129
cccatggatt ggacctggat tctgtttctg gtggccgctg ccacaagagt gcacagcaac 60
tgggtgaatg tgatcagcga cctgaagaag atcgaggatc tgatccagag catgcacatt 120
gatgccaccc tgtacacaga atctgatgtg caccctagct gtaaagtgac cgccatgaag 180
tgttttctgc tggagctgca ggtgatttct ctggaaagcg gagatgcctc tatccacgac 240
acagtggaga atctgatcat cctggccaac aatagcctga gcagcaatgg caatgtgaca 300
gagtctggct gtaaggagtg tgaggagctg gaggagaaga acatcaagga gtttctgcag 360
agctttgtgc acatcgtgca gatgttcatc aatacaagct ctggcggagg atctggagga 420
ggcggatctg gaggaggagg cagtggaggc ggaggatctg gcggaggatc tctgcagatt 480
acatgccctc ctccaatgtc tgtggagcac gccgatattt gggtgaagtc ctacagcctg 540
tacagcagag agagatacat ctgcaacagc ggctttaaga gaaaggccgg cacctcttct 600
ctgacagagt gcgtgctgaa taaggccaca aatgtggccc actggacaac acctagcctg 660
aagtgcatta gagatcctgc cctggtccac cagaggcctg cccctccatc tacagtgaca 720
acagccggag tgacacctca gcctgaatct ctgagccctt ctggaaaaga acctgccgcc 780
agctctccta gctctaataa taccgccgcc acaacagccg ccattgtgcc tggatctcag 840
ctgatgccta gcaagtctcc tagcacaggc acaacagaga tcagcagcca cgaatcttct 900
cacggaacac cttctcagac caccgccaag aattgggagc tgacagcctc tgcctctcac 960
cagcctccag gagtgtatcc tcagggccac tctgatacaa cagtggccat cagcacatct 1020
acagtgctgc tgtgtggact gtctgccgtg tctctgctgg cctgttacct gaagtctaga 1080
cagacacctc ctctggcctc tgtggagatg gaggccatgg aagccctgcc tgtgacatgg 1140
ggaacaagca gcagagatga agacctggag aattgttctc accacctgct ggagggcggc 1200
ggagagggca gaggaagtct tctaacatgc ggtgacgtgg aggagaatcc cggc 1254
<210> 130
<211> 1131
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 130
aactgggtga atgtgatcag cgacctgaag aagatcgagg atctgatcca gagcatgcac 60
attgatgcca ccctgtacac agaatctgat gtgcacccta gctgtaaagt gaccgccatg 120
aagtgttttc tgctggagct gcaggtgatt tctctggaaa gcggagatgc ctctatccac 180
gacacagtgg agaatctgat catcctggcc aacaatagcc tgagcagcaa tggcaatgtg 240
acagagtctg gctgtaagga gtgtgaggag ctggaggaga agaacatcaa ggagtttctg 300
cagagctttg tgcacatcgt gcagatgttc atcaatacaa gctctggcgg aggatctgga 360
ggaggcggat ctggaggagg aggcagtgga ggcggaggat ctggcggagg atctctgcag 420
attacatgcc ctcctccaat gtctgtggag cacgccgata tttgggtgaa gtcctacagc 480
ctgtacagca gagagagata catctgcaac agcggcttta agagaaaggc cggcacctct 540
tctctgacag agtgcgtgct gaataaggcc acaaatgtgg cccactggac aacacctagc 600
ctgaagtgca ttagagatcc tgccctggtc caccagaggc ctgcccctcc atctacagtg 660
acaacagccg gagtgacacc tcagcctgaa tctctgagcc cttctggaaa agaacctgcc 720
gccagctctc ctagctctaa taataccgcc gccacaacag ccgccattgt gcctggatct 780
cagctgatgc ctagcaagtc tcctagcaca ggcacaacag agatcagcag ccacgaatct 840
tctcacggaa caccttctca gaccaccgcc aagaattggg agctgacagc ctctgcctct 900
caccagcctc caggagtgta tcctcagggc cactctgata caacagtggc catcagcaca 960
tctacagtgc tgctgtgtgg actgtctgcc gtgtctctgc tggcctgtta cctgaagtct 1020
agacagacac ctcctctggc ctctgtggag atggaggcca tggaagccct gcctgtgaca 1080
tggggaacaa gcagcagaga tgaagacctg gagaattgtt ctcaccacct g 1131
<210> 131
<211> 1131
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 131
aactgggtga atgtgatcag cgacctgaag aagatcgagg atctgatcca gagcatgcac 60
attgatgcca ccctgtacac agaatctgat gtgcacccta gctgtaaagt gaccgccatg 120
aagtgttttc tgctggagct gcaggtgatt tctctggaaa gcggagatgc ctctatccac 180
gacacagtgg agaatctgat catcctggcc aacaatagcc tgagcagcaa tggcaatgtg 240
acagagtctg gctgtaagga gtgtgaggag ctggaggaga agaacatcaa ggagtttctg 300
cagagctttg tgcacatcgt gcagatgttc atcaatacaa gctctggcgg aggatctgga 360
ggaggcggat ctggaggagg aggcagtgga ggcggaggat ctggcggagg atctctgcag 420
attacatgcc ctcctccaat gtctgtggag cacgccgata tttgggtgaa gtcctacagc 480
ctgtacagca gagagagata catctgcaac agcggcttta agagaaaggc cggcacctct 540
tctctgacag agtgcgtgct gaataaggcc acaaatgtgg cccactggac aacacctagc 600
ctgaagtgca ttagagatcc tgccctggtc caccagaggc ctgcccctcc atctacagtg 660
acaacagccg gagtgacacc tcagcctgaa tctctgagcc cttctggaaa agaacctgcc 720
gccagctctc ctagctctaa taataccgcc gccacaacag ccgccattgt gcctggatct 780
cagctgatgc ctagcaagtc tcctagcaca ggcacaacag agatcagcag ccacgaatct 840
tctcacggaa caccttctca gaccaccgcc aagaattggg agctgacagc ctctgcctct 900
caccagcctc caggagtgta tcctcagggc cactctgata caacagtggc catcagcaca 960
tctacagtgc tgctgtgtgg actgtctgcc gtgtctctgc tggcctgtta cctgaagtct 1020
agacagacac ctcctctggc ctctgtggag atggaggcca tggaagccct gcctgtgaca 1080
tggggaacaa gcagcagaga tgaggacctg gagaattgtt ctcaccacct g 1131
<210> 132
<211> 1197
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 132
aactgggtga atgtgatcag cgacctgaag aagatcgagg atctgatcca gagcatgcac 60
attgatgcca ccctgtacac agaatctgat gtgcacccta gctgtaaagt gaccgccatg 120
aagtgttttc tgctggagct gcaggtgatt tctctggaaa gcggagatgc ctctatccac 180
gacacagtgg agaatctgat catcctggcc aacaatagcc tgagcagcaa tggcaatgtg 240
acagagtctg gctgtaagga gtgtgaggag ctggaggaga agaacatcaa ggagtttctg 300
cagagctttg tgcacatcgt gcagatgttc atcaatacaa gctctggcgg aggatctgga 360
ggaggcggat ctggaggagg aggcagtgga ggcggaggat ctggcggagg atctctgcag 420
attacatgcc ctcctccaat gtctgtggag cacgccgata tttgggtgaa gtcctacagc 480
ctgtacagca gagagagata catctgcaac agcggcttta agagaaaggc cggcacctct 540
tctctgacag agtgcgtgct gaataaggcc acaaatgtgg cccactggac aacacctagc 600
ctgaagtgca ttagagatcc tgccctggtc caccagaggc ctgcccctcc atctacagtg 660
acaacagccg gagtgacacc tcagcctgaa tctctgagcc cttctggaaa agaacctgcc 720
gccagctctc ctagctctaa taataccgcc gccacaacag ccgccattgt gcctggatct 780
cagctgatgc ctagcaagtc tcctagcaca ggcacaacag agatcagcag ccacgaatct 840
tctcacggaa caccttctca gaccaccgcc aagaattggg agctgacagc ctctgcctct 900
caccagcctc caggagtgta tcctcagggc cactctgata caacagtggc catcagcaca 960
tctacagtgc tgctgtgtgg actgtctgcc gtgtctctgc tggcctgtta cctgaagtct 1020
agacagacac ctcctctggc ctctgtggag atggaggcca tggaagccct gcctgtgaca 1080
tggggaacaa gcagcagaga tgaagacctg gagaattgtt ctcaccacct gctggagggc 1140
ggcggagagg gcagaggaag tcttctaaca tgcggtgacg tggaggagaa tcccggc 1197
<210> 133
<400> 133
000
<210> 134
<211> 342
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 134
aactgggtga atgtgatcag cgacctgaag aagatcgagg atctgatcca gagcatgcac 60
attgatgcca ccctgtacac agaatctgat gtgcacccta gctgtaaagt gaccgccatg 120
aagtgttttc tgctggagct gcaggtgatt tctctggaaa gcggagatgc ctctatccac 180
gacacagtgg agaatctgat catcctggcc aacaatagcc tgagcagcaa tggcaatgtg 240
acagagtctg gctgtaagga gtgtgaggag ctggaggaga agaacatcaa ggagtttctg 300
cagagctttg tgcacatcgt gcagatgttc atcaatacaa gc 342
<210> 135
<211> 711
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 135
attacatgcc ctcctccaat gtctgtggag cacgccgata tttgggtgaa gtcctacagc 60
ctgtacagca gagagagata catctgcaac agcggcttta agagaaaggc cggcacctct 120
tctctgacag agtgcgtgct gaataaggcc acaaatgtgg cccactggac aacacctagc 180
ctgaagtgca ttagagatcc tgccctggtc caccagaggc ctgcccctcc atctacagtg 240
acaacagccg gagtgacacc tcagcctgaa tctctgagcc cttctggaaa agaacctgcc 300
gccagctctc ctagctctaa taataccgcc gccacaacag ccgccattgt gcctggatct 360
cagctgatgc ctagcaagtc tcctagcaca ggcacaacag agatcagcag ccacgaatct 420
tctcacggaa caccttctca gaccaccgcc aagaattggg agctgacagc ctctgcctct 480
caccagcctc caggagtgta tcctcagggc cactctgata caacagtggc catcagcaca 540
tctacagtgc tgctgtgtgg actgtctgcc gtgtctctgc tggcctgtta cctgaagtct 600
agacagacac ctcctctggc ctctgtggag atggaggcca tggaagccct gcctgtgaca 660
tggggaacaa gcagcagaga tgaagacctg gagaattgtt ctcaccacct g 711
<210> 136
<211> 78
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide"
<400> 136
tctggcggag gatctggagg aggcggatct ggaggaggag gcagtggagg cggaggatct 60
ggcggaggat ctctgcag 78
<210> 137
<211> 22
<212> PRT
<213> Foot-and-mouth disease virus
<400> 137
Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20
<210> 138
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 138
Gly Ser Gly Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala
1 5 10 15
Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20 25
<210> 139
<211> 18
<212> PRT
<213> Thosea asigna virus
<400> 139
Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro
1 5 10 15
Gly Pro
<210> 140
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 140
Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp
1 5 10 15
Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg
20
<210> 141
<211> 66
<212> DNA
<213> Foot-and-mouth disease virus
<400> 141
gtgaagcaga ccctgaattt cgacctgctg aagctggccg gggacgtgga gagcaaccct 60
ggcccc 66
<210> 142
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide"
<400> 142
ggctccggag tgaagcagac cctgaatttc gacctgctga agctggccgg ggacgtggag 60
agcaaccctg gcccc 75
<210> 143
<211> 54
<212> DNA
<213> Thosea asigna virus
<400> 143
gagggcagag gaagtcttct aacatgcggt gacgtggagg agaatcccgg ccct 54
<210> 144
<211> 72
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide"
<400> 144
ctggagggcg gcggagaggg cagaggaagt cttctaacat gcggtgacgt ggaggagaat 60
cccggcccta gg 72
<210> 145
<211> 72
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide"
<400> 145
ctcgagggcg gcggagaggg cagaggaagt cttctaacat gcggtgacgt ggaggagaat 60
cccggcccta gg 72
<210> 146
<211> 551
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 146
ggatctgcga tcgctccggt gcccgtcagt gggcagagcg cacatcgccc acagtccccg 60
agaagttggg gggaggggtc ggcaattgaa ccggtgccta gagaaggtgg cgcggggtaa 120
actgggaaag tgatgtcgtg tactggctcc gcctttttcc cgagggtggg ggagaaccgt 180
atataagtgc agtagtcgcc gtgaacgttc tttttcgcaa cgggtttgcc gccagaacac 240
agctgaagct tcgaggggct cgcatctctc cttcacgcgc ccgccgccct acctgaggcc 300
gccatccacg ccggttgagt cgcgttctgc cgcctcccgc ctgtggtgcc tcctgaactg 360
cgtccgccgt ctaggtaagt ttaaagctca ggtcgagacc gggcctttgt ccggcgctcc 420
cttggagcct acctagactc agccggctct ccacgctttg cctgaccctg cttgctcaac 480
tctacgtctt tgtttcgttt tctgttctgc gccgttacag atccaagctg tgaccggcgc 540
ctacctgaga t 551
<210> 147
<400> 147
000
<210> 148
<211> 231
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 148
gatctgctgt gccttctagt tgccagccat ctgttgtttg cccctccccc gtgccttcct 60
tgaccctgga aggtgccact cccactgtcc tttcctaata aaatgaggaa attgcatcgc 120
attgtctgag taggtgtcat tctattctgg ggggtggggt ggggcaggac agcaaggggg 180
aggattggga agacaatagc aggcatgctg gggatgcggt gggctctatg g 231
<210> 149
<211> 3609
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 149
atgctgctgc tggtgaccag cctgctgctg tgtgagctgc cccaccccgc ctttctgctg 60
atccccgaca tccagatgac ccagaccacc tccagcctga gcgccagcct gggcgaccgg 120
gtgaccatca gctgccgggc cagccaggac atcagcaagt acctgaactg gtatcagcag 180
aagcccgacg gcaccgtcaa gctgctgatc taccacacca gccggctgca cagcggcgtg 240
cccagccggt ttagcggcag cggctccggc accgactaca gcctgaccat ctccaacctg 300
gagcaggagg acatcgccac ctacttttgc cagcagggca acacactgcc ctacaccttt 360
ggcggcggaa caaagctgga gatcaccggc agcacctccg gcagcggcaa gcctggcagc 420
ggcgagggca gcaccaaggg cgaggtgaag ctgcaggaga gcggccctgg cctggtggcc 480
cccagccaga gcctgagcgt gacctgtacc gtgtccggcg tgtccctgcc cgactacggc 540
gtgtcctgga tccggcagcc ccctaggaag ggcctggagt ggctgggcgt gatctggggc 600
agcgagacca cctactacaa cagcgccctg aagagccggc tgaccatcat caaggacaac 660
agcaagagcc aggtgttcct gaagatgaac agcctgcaga ccgacgacac cgccatctac 720
tactgtgcca agcactacta ctacggcggc agctacgcca tggactactg gggccagggc 780
accagcgtga ccgtgtccag caagcccacc accacccctg cccctagacc tccaacccca 840
gcccctacaa tcgccagcca gcccctgagc ctgaggcccg aagcctgtag acctgccgct 900
ggcggagccg tgcacaccag aggcctggat ttcgcctgcg acatctacat ctgggcccct 960
ctggccggca cctgtggcgt gctgctgctg agcctggtca tcaccctgta ctgcaaccac 1020
cggaatagga gcaagcggag cagaggcggc cacagcgact acatgaacat gaccccccgg 1080
aggcctggcc ccacccggaa gcactaccag ccctacgccc ctcccaggga cttcgccgcc 1140
taccggagcc gggtgaagtt cagccggagc gccgacgccc ctgcctacca gcagggccag 1200
aaccagctgt acaacgagct gaacctgggc cggagggagg agtacgacgt gctggacaag 1260
cggagaggcc gggaccctga gatgggcggc aagccccgga gaaagaaccc tcaggagggc 1320
ctgtataacg aactgcagaa agacaagatg gccgaggcct acagcgagat cggcatgaag 1380
ggcgagcggc ggaggggcaa gggccacgac ggcctgtacc agggcctgag caccgccacc 1440
aaggatacct acgacgccct gcacatgcag gccctgcccc ccagaggctc cggagtgaag 1500
cagaccctga atttcgacct gctgaagctg gccggggacg tggagagcaa ccctggcccc 1560
atggattgga cctggattct gtttctggtg gccgctgcca caagagtgca cagcaactgg 1620
gtgaatgtga tcagcgacct gaagaagatc gaggatctga tccagagcat gcacattgat 1680
gccaccctgt acacagaatc tgatgtgcac cctagctgta aagtgaccgc catgaagtgt 1740
tttctgctgg agctgcaggt gatttctctg gaaagcggag atgcctctat ccacgacaca 1800
gtggagaatc tgatcatcct ggccaacaat agcctgagca gcaatggcaa tgtgacagag 1860
tctggctgta aggagtgtga ggagctggag gagaagaaca tcaaggagtt tctgcagagc 1920
tttgtgcaca tcgtgcagat gttcatcaat acaagctctg gcggaggatc tggaggaggc 1980
ggatctggag gaggaggcag tggaggcgga ggatctggcg gaggatctct gcagattaca 2040
tgccctcctc caatgtctgt ggagcacgcc gatatttggg tgaagtccta cagcctgtac 2100
agcagagaga gatacatctg caacagcggc tttaagagaa aggccggcac ctcttctctg 2160
acagagtgcg tgctgaataa ggccacaaat gtggcccact ggacaacacc tagcctgaag 2220
tgcattagag atcctgccct ggtccaccag aggcctgccc ctccatctac agtgacaaca 2280
gccggagtga cacctcagcc tgaatctctg agcccttctg gaaaagaacc tgccgccagc 2340
tctcctagct ctaataatac cgccgccaca acagccgcca ttgtgcctgg atctcagctg 2400
atgcctagca agtctcctag cacaggcaca acagagatca gcagccacga atcttctcac 2460
ggaacacctt ctcagaccac cgccaagaat tgggagctga cagcctctgc ctctcaccag 2520
cctccaggag tgtatcctca gggccactct gatacaacag tggccatcag cacatctaca 2580
gtgctgctgt gtggactgtc tgccgtgtct ctgctggcct gttacctgaa gtctagacag 2640
acacctcctc tggcctctgt ggagatggag gccatggaag ccctgcctgt gacatgggga 2700
acaagcagca gagatgaaga cctggagaat tgttctcacc acctgctgga gggcggcgga 2760
gagggcagag gaagtcttct aacatgcggt gacgtggagg agaatcccgg ccctaggatg 2820
aggctccctg ctcagctcct ggggctgcta atgctctggg tgccaggatc cagtgggcgc 2880
aaagtgtgta acggaatagg tattggtgaa tttaaagact cactctccat aaatgctacg 2940
aatattaaac acttcaaaaa ctgcacctcc atcagtggcg atctccacat cctgccggtg 3000
gcatttaggg gtgactcctt cacacatact cctcctctgg atccacagga actggatatt 3060
ctgaaaaccg taaaggaaat cacagggttt ttgctgattc aggcttggcc tgaaaacagg 3120
acggacctcc atgcctttga gaacctagaa atcatacgcg gcaggaccaa gcaacatggt 3180
cagttttctc ttgcagtcgt cagcctgaac ataacatcct tgggattacg ctccctcaag 3240
gagataagtg atggagatgt gataatttca ggaaacaaaa atttgtgcta tgcaaataca 3300
ataaactgga aaaaactgtt tggtacctcc ggtcagaaaa ccaaaattat aagcaacaga 3360
ggtgaaaaca gctgcaaggc cacaggccag gtctgccatg ccttgtgctc ccccgagggc 3420
tgctggggcc cggagcccag ggactgcgtc tctggtggcg gtggctcggg cggtggtggg 3480
tcgggtggcg gcggatctgg tggcggtggc tcgttttggg tgctggtggt ggttggtgga 3540
gtcctggctt gctatagctt gctagtaaca gtggccttta ttattttctg ggtgaggagt 3600
aagaggagc 3609
<210> 150
<211> 3609
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 150
atggattgga cctggattct gtttctggtg gccgctgcca caagagtgca cagcaactgg 60
gtgaatgtga tcagcgacct gaagaagatc gaggatctga tccagagcat gcacattgat 120
gccaccctgt acacagaatc tgatgtgcac cctagctgta aagtgaccgc catgaagtgt 180
tttctgctgg agctgcaggt gatttctctg gaaagcggag atgcctctat ccacgacaca 240
gtggagaatc tgatcatcct ggccaacaat agcctgagca gcaatggcaa tgtgacagag 300
tctggctgta aggagtgtga ggagctggag gagaagaaca tcaaggagtt tctgcagagc 360
tttgtgcaca tcgtgcagat gttcatcaat acaagctctg gcggaggatc tggaggaggc 420
ggatctggag gaggaggcag tggaggcgga ggatctggcg gaggatctct gcagattaca 480
tgccctcctc caatgtctgt ggagcacgcc gatatttggg tgaagtccta cagcctgtac 540
agcagagaga gatacatctg caacagcggc tttaagagaa aggccggcac ctcttctctg 600
acagagtgcg tgctgaataa ggccacaaat gtggcccact ggacaacacc tagcctgaag 660
tgcattagag atcctgccct ggtccaccag aggcctgccc ctccatctac agtgacaaca 720
gccggagtga cacctcagcc tgaatctctg agcccttctg gaaaagaacc tgccgccagc 780
tctcctagct ctaataatac cgccgccaca acagccgcca ttgtgcctgg atctcagctg 840
atgcctagca agtctcctag cacaggcaca acagagatca gcagccacga atcttctcac 900
ggaacacctt ctcagaccac cgccaagaat tgggagctga cagcctctgc ctctcaccag 960
cctccaggag tgtatcctca gggccactct gatacaacag tggccatcag cacatctaca 1020
gtgctgctgt gtggactgtc tgccgtgtct ctgctggcct gttacctgaa gtctagacag 1080
acacctcctc tggcctctgt ggagatggag gccatggaag ccctgcctgt gacatgggga 1140
acaagcagca gagatgagga cctggagaat tgttctcacc acctgctcga gggcggcgga 1200
gagggcagag gaagtcttct aacatgcggt gacgtggagg agaatcccgg ccctaggatg 1260
aggctccctg ctcagctcct ggggctgcta atgctctggg tcccaggatc cagtgggcgc 1320
aaagtgtgta acggaatagg tattggtgaa tttaaagact cactctccat aaatgctacg 1380
aatattaaac acttcaaaaa ctgcacctcc atcagtggcg atctccacat cctgccggtg 1440
gcatttaggg gtgactcctt cacacatact cctcctctgg atccacagga actggatatt 1500
ctgaaaaccg taaaggaaat cacagggttt ttgctgattc aggcttggcc tgaaaacagg 1560
acggacctcc atgcctttga gaacctagaa atcatacgcg gcaggaccaa gcaacatggt 1620
cagttttctc ttgcagtcgt cagcctgaac ataacatcct tgggattacg ctccctcaag 1680
gagataagtg atggagatgt gataatttca ggaaacaaaa atttgtgcta tgcaaataca 1740
ataaactgga aaaaactgtt tgggacctcc ggtcagaaaa ccaaaattat aagcaacaga 1800
ggtgaaaaca gctgcaaggc cacaggccag gtctgccatg ccttgtgctc ccccgagggc 1860
tgctggggcc cggagcccag ggactgcgtc tctggtggcg gtggctcggg cggtggtggg 1920
tcgggtggcg gcggatctgg tggcggtggc tcgttttggg tgctggtggt ggttggtgga 1980
gtcctggctt gctatagctt gctagtaaca gtggccttta ttattttctg ggtgaggagt 2040
aagaggagcg gctccggagt gaagcagacc ctgaatttcg acctgctgaa gctggccggg 2100
gacgtggaga gcaaccctgg ccccatgctg ctgctggtga ccagcctgct gctgtgtgag 2160
ctgccccacc ccgcctttct gctgatcccc gacatccaga tgacccagac cacctccagc 2220
ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc 2280
aagtacctga actggtatca gcagaagccc gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac 2340
accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac 2400
tacagcctga ccatctccaa cctggagcag gaggacatcg ccacctactt ttgccagcag 2460
ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc ggaacaaagc tggagatcac cggcagcacc 2520
tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag ggcagcacca agggcgaggt gaagctgcag 2580
gagagcggcc ctggcctggt ggcccccagc cagagcctga gcgtgacctg taccgtgtcc 2640
ggcgtgtccc tgcccgacta cggcgtgtcc tggatccggc agccccctag gaagggcctg 2700
gagtggctgg gcgtgatctg gggcagcgag accacctact acaacagcgc cctgaagagc 2760
cggctgacca tcatcaagga caacagcaag agccaggtgt tcctgaagat gaacagcctg 2820
cagaccgacg acaccgccat ctactactgt gccaagcact actactacgg cggcagctac 2880
gccatggact actggggcca gggcaccagc gtgaccgtgt ccagcaagcc caccaccacc 2940
cctgccccta gacctccaac cccagcccct acaatcgcca gccagcccct gagcctgagg 3000
cccgaagcct gtagacctgc cgctggcgga gccgtgcaca ccagaggcct ggatttcgcc 3060
tgcgacatct acatctgggc acctctggcc ggcacctgtg gcgtgctgct gctgagcctg 3120
gtcatcaccc tgtactgcaa ccaccggaat aggagcaagc ggagcagagg cggccacagc 3180
gactacatga acatgacccc ccggaggcct ggccccaccc ggaagcacta ccagccctac 3240
gcccctccca gggacttcgc cgcctaccgg agccgggtga agttcagccg gagcgccgac 3300
gcccctgcct accagcaggg ccagaaccag ctgtacaacg agctgaacct gggccggagg 3360
gaggagtacg acgtgctgga caagcggaga ggccgggacc ctgagatggg cggcaagccc 3420
cggagaaaga accctcagga gggcctgtat aacgaactgc agaaagacaa gatggccgag 3480
gcctacagcg agatcggcat gaagggcgag cggcggaggg gcaagggcca cgacggcctg 3540
taccagggcc tgagcaccgc caccaaggat acctacgacg ccctgcacat gcaggccctg 3600
ccccccaga 3609
<210> 151
<211> 3612
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 151
atgaggatga ggctccctgc tcagctcctg gggctgctaa tgctctgggt cccaggatcc 60
agtgggcgca aagtgtgtaa cggaataggt attggtgaat ttaaagactc actctccata 120
aatgctacga atattaaaca cttcaaaaac tgcacctcca tcagtggcga tctccacatc 180
ctgccggtgg catttagggg tgactccttc acacatactc ctcctctgga tccacaggaa 240
ctggatattc tgaaaaccgt aaaggaaatc acagggtttt tgctgattca ggcttggcct 300
gaaaacagga cggacctcca tgcctttgag aacctagaaa tcatacgcgg caggaccaag 360
caacatggtc agttttctct tgcagtcgtc agcctgaaca taacatcctt gggattacgc 420
tccctcaagg agataagtga tggagatgtg ataatttcag gaaacaaaaa tttgtgctat 480
gcaaatacaa taaactggaa aaaactgttt gggacctccg gtcagaaaac caaaattata 540
agcaacagag gtgaaaacag ctgcaaggcc acaggccagg tctgccatgc cttgtgctcc 600
cccgagggct gctggggccc ggagcccagg gactgcgtct ctggtggcgg tggctcgggc 660
ggtggtgggt cgggtggcgg cggatctggt ggcggtggct cgttttgggt gctggtggtg 720
gttggtggag tcctggcttg ctatagcttg ctagtaacag tggcctttat tattttctgg 780
gtgaggagta agaggagcct cgagggcggc ggagagggca gaggaagtct tctaacatgc 840
ggtgacgtgg aggagaatcc cggccctatg gattggacct ggattctgtt tctggtggcc 900
gctgccacaa gagtgcacag caactgggtg aatgtgatca gcgacctgaa gaagatcgag 960
gatctgatcc agagcatgca cattgatgcc accctgtaca cagaatctga tgtgcaccct 1020
agctgtaaag tgaccgccat gaagtgtttt ctgctggagc tgcaggtgat ttctctggaa 1080
agcggagatg cctctatcca cgacacagtg gagaatctga tcatcctggc caacaatagc 1140
ctgagcagca atggcaatgt gacagagtct ggctgtaagg agtgtgagga gctggaggag 1200
aagaacatca aggagtttct gcagagcttt gtgcacatcg tgcagatgtt catcaataca 1260
agctctggcg gaggatctgg aggaggcgga tctggaggag gaggcagtgg aggcggagga 1320
tctggcggag gatctctgca gattacatgc cctcctccaa tgtctgtgga gcacgccgat 1380
atttgggtga agtcctacag cctgtacagc agagagagat acatctgcaa cagcggcttt 1440
aagagaaagg ccggcacctc ttctctgaca gagtgcgtgc tgaataaggc cacaaatgtg 1500
gcccactgga caacacctag cctgaagtgc attagagatc ctgccctggt ccaccagagg 1560
cctgcccctc catctacagt gacaacagcc ggagtgacac ctcagcctga atctctgagc 1620
ccttctggaa aagaacctgc cgccagctct cctagctcta ataataccgc cgccacaaca 1680
gccgccattg tgcctggatc tcagctgatg cctagcaagt ctcctagcac aggcacaaca 1740
gagatcagca gccacgaatc ttctcacgga acaccttctc agaccaccgc caagaattgg 1800
gagctgacag cctctgcctc tcaccagcct ccaggagtgt atcctcaggg ccactctgat 1860
acaacagtgg ccatcagcac atctacagtg ctgctgtgtg gactgtctgc cgtgtctctg 1920
ctggcctgtt acctgaagtc tagacagaca cctcctctgg cctctgtgga gatggaggcc 1980
atggaagccc tgcctgtgac atggggaaca agcagcagag atgaggacct ggagaattgt 2040
tctcaccacc tgggctccgg agtgaagcag accctgaatt tcgacctgct gaagctggcc 2100
ggggacgtgg agagcaaccc tggccccatg ctgctgctgg tgaccagcct gctgctgtgt 2160
gagctgcccc accccgcctt tctgctgatc cccgacatcc agatgaccca gaccacctcc 2220
agcctgagcg ccagcctggg cgaccgggtg accatcagct gccgggccag ccaggacatc 2280
agcaagtacc tgaactggta tcagcagaag cccgacggca ccgtcaagct gctgatctac 2340
cacaccagcc ggctgcacag cggcgtgccc agccggttta gcggcagcgg ctccggcacc 2400
gactacagcc tgaccatctc caacctggag caggaggaca tcgccaccta cttttgccag 2460
cagggcaaca cactgcccta cacctttggc ggcggaacaa agctggagat caccggcagc 2520
acctccggca gcggcaagcc tggcagcggc gagggcagca ccaagggcga ggtgaagctg 2580
caggagagcg gccctggcct ggtggccccc agccagagcc tgagcgtgac ctgtaccgtg 2640
tccggcgtgt ccctgcccga ctacggcgtg tcctggatcc ggcagccccc taggaagggc 2700
ctggagtggc tgggcgtgat ctggggcagc gagaccacct actacaacag cgccctgaag 2760
agccggctga ccatcatcaa ggacaacagc aagagccagg tgttcctgaa gatgaacagc 2820
ctgcagaccg acgacaccgc catctactac tgtgccaagc actactacta cggcggcagc 2880
tacgccatgg actactgggg ccagggcacc agcgtgaccg tgtccagcaa gcccaccacc 2940
acccctgccc ctagacctcc aaccccagcc cctacaatcg ccagccagcc cctgagcctg 3000
aggcccgaag cctgtagacc tgccgctggc ggagccgtgc acaccagagg cctggatttc 3060
gcctgcgaca tctacatctg ggcacctctg gccggcacct gtggcgtgct gctgctgagc 3120
ctggtcatca ccctgtactg caaccaccgg aataggagca agcggagcag aggcggccac 3180
agcgactaca tgaacatgac cccccggagg cctggcccca cccggaagca ctaccagccc 3240
tacgcccctc ccagggactt cgccgcctac cggagccggg tgaagttcag ccggagcgcc 3300
gacgcccctg cctaccagca gggccagaac cagctgtaca acgagctgaa cctgggccgg 3360
agggaggagt acgacgtgct ggacaagcgg agaggccggg accctgagat gggcggcaag 3420
ccccggagaa agaaccctca ggagggcctg tataacgaac tgcagaaaga caagatggcc 3480
gaggcctaca gcgagatcgg catgaagggc gagcggcgga ggggcaaggg ccacgacggc 3540
ctgtaccagg gcctgagcac cgccaccaag gatacctacg acgccctgca catgcaggcc 3600
ctgcccccca ga 3612
<210> 152
<211> 1203
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 152
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser
20 25 30
Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser
35 40 45
Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly
50 55 60
Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val
65 70 75 80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr
85 90 95
Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln
100 105 110
Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
115 120 125
Thr Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser
130 135 140
Thr Lys Gly Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala
145 150 155 160
Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu
165 170 175
Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu
180 185 190
Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser
195 200 205
Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln
210 215 220
Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr
225 230 235 240
Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
245 250 255
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Lys Pro Thr Thr Thr
260 265 270
Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro
275 280 285
Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val
290 295 300
His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro
305 310 315 320
Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu
325 330 335
Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser
340 345 350
Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His
355 360 365
Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg
370 375 380
Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln
385 390 395 400
Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp
405 410 415
Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro
420 425 430
Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp
435 440 445
Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg
450 455 460
Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr
465 470 475 480
Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Gly
485 490 495
Ser Gly Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly
500 505 510
Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe
515 520 525
Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val His Ser Asn Trp Val Asn Val Ile
530 535 540
Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp
545 550 555 560
Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr
565 570 575
Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser
580 585 590
Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala
595 600 605
Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys
610 615 620
Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser
625 630 635 640
Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser Ser Gly Gly Gly
645 650 655
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
660 665 670
Gly Gly Gly Ser Leu Gln Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu
675 680 685
His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg
690 695 700
Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu
705 710 715 720
Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr
725 730 735
Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro
740 745 750
Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr Thr Ala Gly Val Thr Pro Gln Pro Glu
755 760 765
Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ser Ser
770 775 780
Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala Ala Ile Val Pro Gly Ser Gln Leu
785 790 795 800
Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr Gly Thr Thr Glu Ile Ser Ser His
805 810 815
Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser Gln Thr Thr Ala Lys Asn Trp Glu
820 825 830
Leu Thr Ala Ser Ala Ser His Gln Pro Pro Gly Val Tyr Pro Gln Gly
835 840 845
His Ser Asp Thr Thr Val Ala Ile Ser Thr Ser Thr Val Leu Leu Cys
850 855 860
Gly Leu Ser Ala Val Ser Leu Leu Ala Cys Tyr Leu Lys Ser Arg Gln
865 870 875 880
Thr Pro Pro Leu Ala Ser Val Glu Met Glu Ala Met Glu Ala Leu Pro
885 890 895
Val Thr Trp Gly Thr Ser Ser Arg Asp Glu Asp Leu Glu Asn Cys Ser
900 905 910
His His Leu Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr
915 920 925
Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg Met Arg Leu Pro Ala
930 935 940
Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Pro Gly Ser Ser Gly Arg
945 950 955 960
Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser
965 970 975
Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser
980 985 990
Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr
995 1000 1005
His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr
1010 1015 1020
Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu
1025 1030 1035
Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg
1040 1045 1050
Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser
1055 1060 1065
Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser
1070 1075 1080
Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala
1085 1090 1095
Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys
1100 1105 1110
Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr
1115 1120 1125
Gly Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly
1130 1135 1140
Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
1145 1150 1155
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Phe Trp
1160 1165 1170
Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu
1175 1180 1185
Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser
1190 1195 1200
<210> 153
<211> 1203
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 153
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp
20 25 30
Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp
35 40 45
Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu
50 55 60
Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr
65 70 75 80
Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly
85 90 95
Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys
100 105 110
Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe
115 120 125
Ile Asn Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln Ile Thr
145 150 155 160
Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser
165 170 175
Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys
180 185 190
Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala
195 200 205
Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp
210 215 220
Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr Thr
225 230 235 240
Ala Gly Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu
245 250 255
Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala
260 265 270
Ala Ile Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr
275 280 285
Gly Thr Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser
290 295 300
Gln Thr Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His Gln
305 310 315 320
Pro Pro Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Val Ala Ile
325 330 335
Ser Thr Ser Thr Val Leu Leu Cys Gly Leu Ser Ala Val Ser Leu Leu
340 345 350
Ala Cys Tyr Leu Lys Ser Arg Gln Thr Pro Pro Leu Ala Ser Val Glu
355 360 365
Met Glu Ala Met Glu Ala Leu Pro Val Thr Trp Gly Thr Ser Ser Arg
370 375 380
Asp Glu Asp Leu Glu Asn Cys Ser His His Leu Leu Glu Gly Gly Gly
385 390 395 400
Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro
405 410 415
Gly Pro Arg Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu
420 425 430
Trp Val Pro Gly Ser Ser Gly Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile
435 440 445
Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His
450 455 460
Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val
465 470 475 480
Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln
485 490 495
Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu
500 505 510
Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn
515 520 525
Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu
530 535 540
Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys
545 550 555 560
Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys
565 570 575
Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln
580 585 590
Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr
595 600 605
Gly Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro
610 615 620
Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
625 630 635 640
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Phe Trp Val Leu Val
645 650 655
Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala
660 665 670
Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Gly Ser Gly Val Lys
675 680 685
Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser
690 695 700
Asn Pro Gly Pro Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu
705 710 715 720
Leu Pro His Pro Ala Phe Leu Leu Ile Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln
725 730 735
Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser
740 745 750
Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln
755 760 765
Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu
770 775 780
His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp
785 790 795 800
Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr
805 810 815
Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr
820 825 830
Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser
835 840 845
Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro
850 855 860
Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser
865 870 875 880
Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro
885 890 895
Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr
900 905 910
Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn
915 920 925
Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp
930 935 940
Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr
945 950 955 960
Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Lys
965 970 975
Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile
980 985 990
Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala
995 1000 1005
Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile
1010 1015 1020
Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
1025 1030 1035
Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys
1040 1045 1050
Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg
1055 1060 1065
Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro
1070 1075 1080
Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser
1085 1090 1095
Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn
1100 1105 1110
Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys
1115 1120 1125
Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys
1130 1135 1140
Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met
1145 1150 1155
Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg
1160 1165 1170
Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr
1175 1180 1185
Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
1190 1195 1200
<210> 154
<211> 1204
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 154
Met Arg Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp
1 5 10 15
Val Pro Gly Ser Ser Gly Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly
20 25 30
Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe
35 40 45
Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala
50 55 60
Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu
65 70 75 80
Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile
85 90 95
Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu
100 105 110
Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala
115 120 125
Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu
130 135 140
Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr
145 150 155 160
Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys
165 170 175
Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly
180 185 190
Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu
195 200 205
Pro Arg Asp Cys Val Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Phe Trp Val Leu Val Val
225 230 235 240
Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe
245 250 255
Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Leu Glu Gly Gly Gly Glu
260 265 270
Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly
275 280 285
Pro Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg
290 295 300
Val His Ser Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu
305 310 315 320
Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser
325 330 335
Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu
340 345 350
Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp
355 360 365
Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn
370 375 380
Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu
385 390 395 400
Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met
405 410 415
Phe Ile Asn Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
420 425 430
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln Ile
435 440 445
Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys
450 455 460
Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe
465 470 475 480
Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys
485 490 495
Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg
500 505 510
Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr
515 520 525
Thr Ala Gly Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys
530 535 540
Glu Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr
545 550 555 560
Ala Ala Ile Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser
565 570 575
Thr Gly Thr Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro
580 585 590
Ser Gln Thr Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His
595 600 605
Gln Pro Pro Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Val Ala
610 615 620
Ile Ser Thr Ser Thr Val Leu Leu Cys Gly Leu Ser Ala Val Ser Leu
625 630 635 640
Leu Ala Cys Tyr Leu Lys Ser Arg Gln Thr Pro Pro Leu Ala Ser Val
645 650 655
Glu Met Glu Ala Met Glu Ala Leu Pro Val Thr Trp Gly Thr Ser Ser
660 665 670
Arg Asp Glu Asp Leu Glu Asn Cys Ser His His Leu Gly Ser Gly Val
675 680 685
Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu
690 695 700
Ser Asn Pro Gly Pro Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys
705 710 715 720
Glu Leu Pro His Pro Ala Phe Leu Leu Ile Pro Asp Ile Gln Met Thr
725 730 735
Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile
740 745 750
Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln
755 760 765
Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg
770 775 780
Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
785 790 795 800
Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr
805 810 815
Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly
820 825 830
Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly
835 840 845
Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly
850 855 860
Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val
865 870 875 880
Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro
885 890 895
Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr
900 905 910
Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp
915 920 925
Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp
930 935 940
Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser
945 950 955 960
Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
965 970 975
Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr
980 985 990
Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala
995 1000 1005
Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
1010 1015 1020
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu
1025 1030 1035
Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser
1040 1045 1050
Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro
1055 1060 1065
Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
1070 1075 1080
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg
1085 1090 1095
Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr
1100 1105 1110
Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp
1115 1120 1125
Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg
1130 1135 1140
Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys
1145 1150 1155
Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg
1160 1165 1170
Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
1175 1180 1185
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro
1190 1195 1200
Arg
<210> 155
<211> 226
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 155
agttgaagtc ggaagtttac atacacttaa gttggagtca ttaaaactcg tttttcaact 60
actccacaaa tttcttgtta acaaacaata gttttggcaa gtcagttagg acatctactt 120
tgtgcatgac acaagtcatt tttccaacaa ttgtttacag acagattatt tcacttataa 180
ttcactgtat cacaattcca gtgggtcaga agtttacata cactaa 226
<210> 156
<211> 246
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 156
atatcaattg agttgaagtc ggaagtttac atacacttaa gttggagtca ttaaaactcg 60
tttttcaact acaccacaaa tttcttgtta acaaacaata gttttggcaa gtcagttagg 120
acatctactt tgtgcatgac acaagtcatt tttccaacaa ttgtttacag acagattatt 180
tcacttataa ttcactgtat cacaattcca gtgggtcaga agtttacata cactaacaat 240
tgatat 246
<210> 157
<211> 228
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 157
ttgagtgtat gtaaacttct gacccactgg gaatgtgatg aaagaaataa aagctgaaat 60
gaatcattct ctctactatt attctgatat ttcacattct taaaataaag tggtgatcct 120
aactgaccta agacagggaa tttttactag gattaaatgt caggaattgt gaaaaagtga 180
gtttaaatgt atttggctaa ggtgtatgta aacttccgac ttcaactg 228
<210> 158
<400> 158
000
<210> 159
<211> 248
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 159
atatctcgag ttgagtgtat gttaacttct gacccactgg gaatgtgatg aaagaaataa 60
aagctgaaat gaatcattct ctctactatt attctgatat ttcacattct taaaataaag 120
tggtgatcct aactgacctt aagacaggga atctttactc ggattaaatg tcaggaattg 180
tgaaaaagtg agtttaaatg tatttggcta aggtgtatgt aaacttccga cttcaactct 240
cgagatat 248
<210> 160
<211> 340
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 160
Met Gly Lys Ser Lys Glu Ile Ser Gln Asp Leu Arg Lys Lys Ile Val
1 5 10 15
Asp Leu His Lys Ser Gly Ser Ser Leu Gly Ala Ile Ser Lys Arg Leu
20 25 30
Lys Val Pro Arg Ser Ser Val Gln Thr Ile Val Arg Lys Tyr Lys His
35 40 45
His Gly Thr Thr Gln Pro Ser Tyr Arg Ser Gly Arg Arg Arg Val Leu
50 55 60
Ser Pro Arg Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Lys Val Gln Ile Asn Pro
65 70 75 80
Arg Thr Thr Ala Lys Asp Leu Val Lys Met Leu Glu Glu Thr Gly Thr
85 90 95
Lys Val Ser Ile Ser Thr Val Lys Arg Val Leu Tyr Arg His Asn Leu
100 105 110
Lys Gly Arg Ser Ala Arg Lys Lys Pro Leu Leu Gln Asn Arg His Lys
115 120 125
Lys Ala Arg Leu Arg Phe Ala Arg Ala His Gly Asp Lys Asp Arg Thr
130 135 140
Phe Trp Arg Asn Val Leu Trp Ser Asp Glu Thr Lys Ile Glu Leu Phe
145 150 155 160
Gly His Asn Asp His Arg Tyr Val Trp Arg Lys Lys Gly Glu Ala Cys
165 170 175
Lys Pro Lys Asn Thr Ile Pro Thr Val Lys His Gly Gly Gly Ser Ile
180 185 190
Met Leu Trp Gly Cys Phe Ala Ala Gly Gly Thr Gly Ala Leu His Lys
195 200 205
Ile Asp Gly Ile Met Arg Lys Glu Asn Tyr Val Asp Ile Leu Lys Gln
210 215 220
His Leu Lys Thr Ser Val Arg Lys Leu Lys Leu Gly Arg Lys Trp Val
225 230 235 240
Phe Gln Gln Asp Asn Asp Pro Lys His Thr Ser Lys His Val Arg Lys
245 250 255
Trp Leu Lys Asp Asn Lys Val Lys Val Leu Glu Trp Pro Ser Gln Ser
260 265 270
Pro Asp Leu Asn Pro Ile Glu Asn Leu Trp Ala Glu Leu Lys Lys Arg
275 280 285
Val Arg Ala Arg Arg Pro Thr Asn Leu Thr Gln Leu His Gln Leu Cys
290 295 300
Gln Glu Glu Trp Ala Lys Ile His Pro Thr Tyr Cys Gly Lys Leu Val
305 310 315 320
Glu Gly Tyr Pro Lys Arg Leu Thr Gln Val Lys Gln Phe Lys Gly Asn
325 330 335
Ala Thr Lys Tyr
340
<210> 161
<211> 1020
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 161
atgggaaaat caaaagaaat cagccaagac ctcagaaaaa aaattgtaga cctccacaag 60
tctggttcat ccttgggagc aatttccaaa cgcctgaaag taccacgttc atctgtacaa 120
acaatagtac gcaagtataa acaccatggg accacgcagc cgtcataccg ctcaggaagg 180
agacgcgttc tgtctcctag agatgaacgt actttggtgc gaaaagtgca aatcaatccc 240
agaacaacag caaaggacct tgtgaagatg ctggaggaaa caggtacaaa agtatctata 300
tccacagtaa aacgagtcct atatcgacat aacctgaaag gccgctcagc aaggaagaag 360
ccactgctcc aaaaccgaca taagaaagcc agactacggt ttgcaagagc acatggggac 420
aaagatcgta ctttttggag aaatgtcctc tggtctgatg aaacaaaaat agaactgttt 480
ggccataatg accatcgtta tgtttggagg aagaaggggg aggcttgcaa gccgaagaac 540
accatcccaa ccgtgaagca cgggggtggc agcatcatgt tgtgggggtg ctttgctgca 600
ggagggactg gtgcacttca caaaatagat ggcatcatga ggaaggaaaa ttatgtggat 660
atattgaagc aacatctcaa gacatcagtc aggaagttaa agcttggtcg caaatgggtc 720
ttccaacaag acaatgaccc caagcatact tccaaacacg tgagaaaatg gcttaaggac 780
aacaaagtca aggtattgga gtggccatca caaagccctg acctcaatcc tatagaaaat 840
ttgtgggcag aactgaaaaa gcgtgtgcga gcaaggaggc ctacaaacct gactcagtta 900
caccagctct gtcaggagga atgggccaaa attcacccaa cttattgtgg gaagcttgtg 960
gaaggctacc cgaaacgttt gacccaagtt aaacaattta aaggcaatgc taccaaatac 1020
<210> 162
<211> 792
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 162
atgaggctcc ctgctcagct cctggggctg ctaatgctct gggtcccagg atccagtggg 60
cgcaaagtgt gtaacggaat aggtattggt gaatttaaag actcactctc cataaatgct 120
acgaatatta aacacttcaa aaactgcacc tccatcagtg gcgatctcca catcctgccg 180
gtggcattta ggggtgactc cttcacacat actcctcctc tggatccaca ggaactggat 240
attctgaaaa ccgtaaagga aatcacaggg tttttgctga ttcaggcttg gcctgaaaac 300
aggacggacc tccatgcctt tgagaaccta gaaatcatac gcggcaggac caagcaacat 360
ggtcagtttt ctcttgcagt cgtcagcctg aacataacat ccttgggatt acgctccctc 420
aaggagataa gtgatggaga tgtgataatt tcaggaaaca aaaatttgtg ctatgcaaat 480
acaataaact ggaaaaaact gtttgggacc tccggtcaga aaaccaaaat tataagcaac 540
agaggtgaaa acagctgcaa ggccacaggc caggtctgcc atgccttgtg ctcccccgag 600
ggctgctggg gcccggagcc cagggactgc gtctctggtg gcggtggctc gggcggtggt 660
gggtcgggtg gcggcggatc tggtggcggt ggctcgtttt gggtgctggt ggtggttggt 720
ggagtcctgg cttgctatag cttgctagta acagtggcct ttattatttt ctgggtgagg 780
agtaagagga gc 792
<210> 163
<211> 711
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 163
attacatgcc ctcctccaat gtctgtggag cacgccgata tttgggtgaa gtcctacagc 60
ctgtacagca gagagagata catctgcaac agcggcttta agagaaaggc cggcacctct 120
tctctgacag agtgcgtgct gaataaggcc acaaatgtgg cccactggac aacacctagc 180
ctgaagtgca ttagagatcc tgccctggtc caccagaggc ctgcccctcc atctacagtg 240
acaacagccg gagtgacacc tcagcctgaa tctctgagcc cttctggaaa agaacctgcc 300
gccagctctc ctagctctaa taataccgcc gccacaacag ccgccattgt gcctggatct 360
cagctgatgc ctagcaagtc tcctagcaca ggcacaacag agatcagcag ccacgaatct 420
tctcacggaa caccttctca gaccaccgcc aagaattggg agctgacagc ctctgcctct 480
caccagcctc caggagtgta tcctcagggc cactctgata caacagtggc catcagcaca 540
tctacagtgc tgctgtgtgg actgtctgcc gtgtctctgc tggcctgtta cctgaagtct 600
agacagacac ctcctctggc ctctgtggag atggaggcca tggaagccct gcctgtgaca 660
tggggaacaa gcagcagaga tgaggacctg gagaattgtt ctcaccacct g 711
<210> 164
<211> 513
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 164
cgcaaagtgt gtaacggaat aggtattggt gaatttaaag actcactctc cataaatgct 60
acgaatatta aacacttcaa aaactgcacc tccatcagtg gcgatctcca catcctgccg 120
gtggcattta ggggtgactc cttcacacat actcctcctc tggatccaca ggaactggat 180
attctgaaaa ccgtaaagga aatcacaggg tttttgctga ttcaggcttg gcctgaaaac 240
aggacggacc tccatgcctt tgagaaccta gaaatcatac gcggcaggac caagcaacat 300
ggtcagtttt ctcttgcagt cgtcagcctg aacataacat ccttgggatt acgctccctc 360
aaggagataa gtgatggaga tgtgataatt tcaggaaaca aaaatttgtg ctatgcaaat 420
acaataaact ggaaaaaact gtttgggacc tccggtcaga aaaccaaaat tataagcaac 480
agaggtgaaa acagctgcaa ggccacaggc cag 513
<210> 165
<211> 69
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide"
<400> 165
ctcgagggcg gcggagaggg cagaggaagt cttctaacat gcggtgacgt ggaggagaat 60
cccggccct 69
<210> 166
<211> 266
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 166
Met Arg Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp
1 5 10 15
Val Pro Gly Ser Ser Gly Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly
20 25 30
Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe
35 40 45
Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala
50 55 60
Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu
65 70 75 80
Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile
85 90 95
Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu
100 105 110
Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala
115 120 125
Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu
130 135 140
Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr
145 150 155 160
Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys
165 170 175
Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly
180 185 190
Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu
195 200 205
Pro Arg Asp Cys Val Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Phe Trp Val Leu Val Val
225 230 235 240
Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe
245 250 255
Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser
260 265
<210> 167
<211> 266
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 167
Pro Arg Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp
1 5 10 15
Val Pro Gly Ser Ser Gly Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly
20 25 30
Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe
35 40 45
Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala
50 55 60
Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu
65 70 75 80
Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile
85 90 95
Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu
100 105 110
Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala
115 120 125
Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu
130 135 140
Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr
145 150 155 160
Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys
165 170 175
Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly
180 185 190
Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu
195 200 205
Pro Arg Asp Cys Val Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Phe Trp Val Leu Val Val
225 230 235 240
Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe
245 250 255
Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser
260 265
<210> 168
<400> 168
000
<210> 169
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 169
Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Ser Gly
20
<210> 170
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 170
Met Arg Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp
1 5 10 15
Val Pro Gly Ser Ser Gly
20
<210> 171
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 171
Pro Arg Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp
1 5 10 15
Val Pro Gly Ser Ser Gly
20
<210> 172
<400> 172
000
<210> 173
<211> 798
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 173
atgaggatga ggctccctgc tcagctcctg gggctgctaa tgctctgggt cccaggatcc 60
agtgggcgca aagtgtgtaa cggaataggt attggtgaat ttaaagactc actctccata 120
aatgctacga atattaaaca cttcaaaaac tgcacctcca tcagtggcga tctccacatc 180
ctgccggtgg catttagggg tgactccttc acacatactc ctcctctgga tccacaggaa 240
ctggatattc tgaaaaccgt aaaggaaatc acagggtttt tgctgattca ggcttggcct 300
gaaaacagga cggacctcca tgcctttgag aacctagaaa tcatacgcgg caggaccaag 360
caacatggtc agttttctct tgcagtcgtc agcctgaaca taacatcctt gggattacgc 420
tccctcaagg agataagtga tggagatgtg ataatttcag gaaacaaaaa tttgtgctat 480
gcaaatacaa taaactggaa aaaactgttt gggacctccg gtcagaaaac caaaattata 540
agcaacagag gtgaaaacag ctgcaaggcc acaggccagg tctgccatgc cttgtgctcc 600
cccgagggct gctggggccc ggagcccagg gactgcgtct ctggtggcgg tggctcgggc 660
ggtggtgggt cgggtggcgg cggatctggt ggcggtggct cgttttgggt gctggtggtg 720
gttggtggag tcctggcttg ctatagcttg ctagtaacag tggcctttat tattttctgg 780
gtgaggagta agaggagc 798
<210> 174
<211> 798
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 174
cctaggatga ggctccctgc tcagctcctg gggctgctaa tgctctgggt gccaggatcc 60
agtgggcgca aagtgtgtaa cggaataggt attggtgaat ttaaagactc actctccata 120
aatgctacga atattaaaca cttcaaaaac tgcacctcca tcagtggcga tctccacatc 180
ctgccggtgg catttagggg tgactccttc acacatactc ctcctctgga tccacaggaa 240
ctggatattc tgaaaaccgt aaaggaaatc acagggtttt tgctgattca ggcttggcct 300
gaaaacagga cggacctcca tgcctttgag aacctagaaa tcatacgcgg caggaccaag 360
caacatggtc agttttctct tgcagtcgtc agcctgaaca taacatcctt gggattacgc 420
tccctcaagg agataagtga tggagatgtg ataatttcag gaaacaaaaa tttgtgctat 480
gcaaatacaa taaactggaa aaaactgttt ggtacctccg gtcagaaaac caaaattata 540
agcaacagag gtgaaaacag ctgcaaggcc acaggccagg tctgccatgc cttgtgctcc 600
cccgagggct gctggggccc ggagcccagg gactgcgtct ctggtggcgg tggctcgggc 660
ggtggtgggt cgggtggcgg cggatctggt ggcggtggct cgttttgggt gctggtggtg 720
gttggtggag tcctggcttg ctatagcttg ctagtaacag tggcctttat tattttctgg 780
gtgaggagta agaggagc 798
<210> 175
<400> 175
000
<210> 176
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 176
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser
<210> 177
<211> 54
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide"
<400> 177
atggattgga cctggattct gtttctggtg gccgctgcca caagagtgca cagc 54
<210> 178
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide"
<400> 178
atgaggatga ggctccctgc tcagctcctg gggctgctaa tgctctgggt cccaggatcc 60
agtggg 66
<210> 179
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide"
<400> 179
cctaggatga ggctccctgc tcagctcctg gggctgctaa tgctctgggt gccaggatcc 60
agtggg 66
<210> 180
<211> 396
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 180
Pro Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg
1 5 10 15
Val His Ser Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu
20 25 30
Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser
35 40 45
Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu
50 55 60
Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp
65 70 75 80
Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn
85 90 95
Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu
100 105 110
Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met
115 120 125
Phe Ile Asn Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln Ile
145 150 155 160
Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys
165 170 175
Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe
180 185 190
Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys
195 200 205
Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg
210 215 220
Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr
225 230 235 240
Thr Ala Gly Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys
245 250 255
Glu Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr
260 265 270
Ala Ala Ile Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser
275 280 285
Thr Gly Thr Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro
290 295 300
Ser Gln Thr Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His
305 310 315 320
Gln Pro Pro Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Val Ala
325 330 335
Ile Ser Thr Ser Thr Val Leu Leu Cys Gly Leu Ser Ala Val Ser Leu
340 345 350
Leu Ala Cys Tyr Leu Lys Ser Arg Gln Thr Pro Pro Leu Ala Ser Val
355 360 365
Glu Met Glu Ala Met Glu Ala Leu Pro Val Thr Trp Gly Thr Ser Ser
370 375 380
Arg Asp Glu Asp Leu Glu Asn Cys Ser His His Leu
385 390 395
<210> 181
<211> 1188
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 181
cccatggatt ggacctggat tctgtttctg gtggccgctg ccacaagagt gcacagcaac 60
tgggtgaatg tgatcagcga cctgaagaag atcgaggatc tgatccagag catgcacatt 120
gatgccaccc tgtacacaga atctgatgtg caccctagct gtaaagtgac cgccatgaag 180
tgttttctgc tggagctgca ggtgatttct ctggaaagcg gagatgcctc tatccacgac 240
acagtggaga atctgatcat cctggccaac aatagcctga gcagcaatgg caatgtgaca 300
gagtctggct gtaaggagtg tgaggagctg gaggagaaga acatcaagga gtttctgcag 360
agctttgtgc acatcgtgca gatgttcatc aatacaagct ctggcggagg atctggagga 420
ggcggatctg gaggaggagg cagtggaggc ggaggatctg gcggaggatc tctgcagatt 480
acatgccctc ctccaatgtc tgtggagcac gccgatattt gggtgaagtc ctacagcctg 540
tacagcagag agagatacat ctgcaacagc ggctttaaga gaaaggccgg cacctcttct 600
ctgacagagt gcgtgctgaa taaggccaca aatgtggccc actggacaac acctagcctg 660
aagtgcatta gagatcctgc cctggtccac cagaggcctg cccctccatc tacagtgaca 720
acagccggag tgacacctca gcctgaatct ctgagccctt ctggaaaaga acctgccgcc 780
agctctccta gctctaataa taccgccgcc acaacagccg ccattgtgcc tggatctcag 840
ctgatgccta gcaagtctcc tagcacaggc acaacagaga tcagcagcca cgaatcttct 900
cacggaacac cttctcagac caccgccaag aattgggagc tgacagcctc tgcctctcac 960
cagcctccag gagtgtatcc tcagggccac tctgatacaa cagtggccat cagcacatct 1020
acagtgctgc tgtgtggact gtctgccgtg tctctgctgg cctgttacct gaagtctaga 1080
cagacacctc ctctggcctc tgtggagatg gaggccatgg aagccctgcc tgtgacatgg 1140
ggaacaagca gcagagatga agacctggag aattgttctc accacctg 1188
<210> 182
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 182
Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp
1 5 10 15
Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 183
<211> 418
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 183
Pro Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg
1 5 10 15
Val His Ser Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu
20 25 30
Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser
35 40 45
Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu
50 55 60
Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp
65 70 75 80
Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn
85 90 95
Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu
100 105 110
Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met
115 120 125
Phe Ile Asn Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln Ile
145 150 155 160
Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys
165 170 175
Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe
180 185 190
Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys
195 200 205
Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg
210 215 220
Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr
225 230 235 240
Thr Ala Gly Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys
245 250 255
Glu Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr
260 265 270
Ala Ala Ile Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser
275 280 285
Thr Gly Thr Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro
290 295 300
Ser Gln Thr Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His
305 310 315 320
Gln Pro Pro Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Val Ala
325 330 335
Ile Ser Thr Ser Thr Val Leu Leu Cys Gly Leu Ser Ala Val Ser Leu
340 345 350
Leu Ala Cys Tyr Leu Lys Ser Arg Gln Thr Pro Pro Leu Ala Ser Val
355 360 365
Glu Met Glu Ala Met Glu Ala Leu Pro Val Thr Trp Gly Thr Ser Ser
370 375 380
Arg Asp Glu Asp Leu Glu Asn Cys Ser His His Leu Leu Glu Gly Gly
385 390 395 400
Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn
405 410 415
Pro Gly
<210> 184
<211> 228
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 184
ttgagtgtat gttaacttct gacccactgg gaatgtgatg aaagaaataa aagctgaaat 60
gaatcattct ctctactatt attctgatat ttcacattct taaaataaag tggtgatcct 120
aactgacctt aagacaggga atctttactc ggattaaatg tcaggaattg tgaaaaagtg 180
agtttaaatg tatttggcta aggtgtatgt aaacttccga cttcaact 228
<210> 185
<211> 60
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide"
<400> 185
atgaggctcc ctgctcagct cctggggctg ctaatgctct gggtgccagg atccagtggg 60
<210> 186
<211> 60
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide"
<400> 186
atgaggctcc ctgctcagct cctggggctg ctaatgctct gggtcccagg atccagtggg 60
<210> 187
<211> 4
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Unknown:
Furin cleavage site"
<400> 187
Arg Ala Lys Arg
1
Claims (132)
- 폴리시스트로닉 발현 카세트를 포함하는 재조합 벡터로서, 상기 폴리시스트로닉 발현 카세트는, 5'에서 3'로,
a. CD19에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-결합 도메인, 막횡단 도메인 및 세포질 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor: CAR)를 암호화하는 제1 폴리뉴클레오타이드 서열;
b. F2A 요소를 포함하는 제2 폴리뉴클레오타이드 서열;
c. IL-15 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체 및 IL-15Rα 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체를 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 제3 폴리뉴클레오타이드 서열;
d. T2A 요소를 포함하는 제4 폴리뉴클레오타이드 서열; 및
e. 마커 단백질을 암호화하는 제5 폴리뉴클레오타이드 서열
을 포함하는 폴리뉴클레오타이드에 작동 가능하게 연결된 전사 조절 요소를 포함하는, 재조합 벡터. - 제1항에 있어서, 상기 F2A 요소는 서열번호 137의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 137의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제1항에 있어서, 상기 F2A 요소는 서열번호 141의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제1항에 있어서, 상기 F2A 요소는 서열번호 138의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 138의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제1항에 있어서, 상기 F2A 요소는 서열번호 142의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T2A 요소는 서열번호 139의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 139의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T2A 요소는 서열번호 143의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T2A 요소는 서열번호 140 또는 182의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 140 또는 182의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T2A 요소는 서열번호 144, 145 또는 165의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원-결합 도메인은 상보성 결정 영역 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 상보성 결정 영역 VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3을 포함하는 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제10항에 있어서, 상기 항원-결합 도메인은 제1 펩타이드 링커를 통해 작동 가능하게 연결된 상기 VH 및 상기 VL을 포함하는 scFv를 포함하는, 재조합 벡터.
- 제10항 또는 제11항에 있어서, 상기 VH는 서열번호 2에 제시된 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제10항 또는 제11항에 있어서,
a. 상기 VH CDR1은 서열번호 6의 아미노산 서열; 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하고;
b. 상기 VH CDR2는 서열번호 7의 아미노산 서열; 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
c. 상기 VH CDR3은 서열번호 8의 아미노산 서열; 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 벡터. - 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL은 서열번호 1에 제시된 VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
a. 상기 VL CDR1은 서열번호 3의 아미노산 서열; 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고;
b. 상기 VL CDR2는 서열번호 4의 아미노산 서열; 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
c. 상기 VL CDR3은 서열번호 5의 아미노산 서열; 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 벡터. - 제10항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VH는 서열번호 2의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제10항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VH는 서열번호 20의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된, 재조합 벡터.
- 제10항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL은 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제10항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL은 서열번호 19의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된, 재조합 벡터.
- 제11항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 펩타이드 링커는 서열번호 9 또는 서열번호 17의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 9 또는 17의 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제11항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 펩타이드 링커는 서열번호 27 또는 서열번호 35의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된, 재조합 벡터.
- 제21항에 있어서, 상기 제1 펩타이드 링커는 서열번호 27의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CAR은 상기 항원-결합 도메인과 상기 CAR의 상기 막횡단 도메인 사이에 위치한 힌지 영역을 추가로 포함하는, 재조합 벡터.
- 제23항에 있어서, 상기 힌지 영역은 서열번호 37, 38 또는 39의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 37, 38 또는 39의 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제23항에 있어서, 상기 힌지 영역은 서열번호 40, 41 또는 42의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CAR의 상기 막횡단 도메인은 서열번호 43, 44 또는 45의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 43, 44 또는 45의 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CAR의 상기 막횡단 도메인은 서열번호 49, 50, 51 또는 52의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된, 재조합 벡터.
- 제23항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 힌지 영역 및 상기 막횡단 도메인은 함께 서열번호 46, 47 또는 48의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 46, 47 또는 48의 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제23항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 힌지 영역 및 상기 막횡단 도메인은 함께 서열번호 53, 54, 55 또는 56의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포질 도메인은 인간 CD3ζ의 1차 신호전달 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체를 포함하는, 재조합 벡터.
- 제30항에 있어서, 상기 세포질 도메인은 서열번호 60의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제30항에 있어서, 상기 세포질 도메인은 서열번호 67 또는 68의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포질 도메인은 CD28, 4-1BB, OX40, CD2, CD7, CD27, CD30, CD40, CDS, ICAM-1, LFA-1, B7-H3 및 ICOS로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질의 공동 자극 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하는, 재조합 벡터.
- 제33항에 있어서, 상기 단백질은 CD28 또는 4-1BB인, 재조합 벡터.
- 제33항 또는 제34항에 있어서, 상기 단백질은 CD28인, 재조합 벡터.
- 제33항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포질 도메인은 서열번호 57 또는 58의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 57 또는 58의 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제33항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포질 도메인은 서열번호 64 또는 65의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된, 재조합 벡터.
- 제33항 또는 제34항에 있어서, 상기 단백질은 4-1BB인, 재조합 벡터.
- 제33항, 제34항 및 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포질 도메인은 서열번호 59의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제33항, 제34항, 제38항 및 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포질 도메인은 서열번호 66의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포질 도메인은 서열번호 61, 62 또는 63의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 61, 62 또는 63의 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포질 도메인은 서열번호 69, 70 또는 71의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CAR은 적어도 서열번호 72, 74, 76, 77, 78, 79, 80 또는 81의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CAR은 서열번호 82, 83, 86, 87, 90, 91, 92, 93, 94 또는 95의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IL-15 또는 상기 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체는 제2 펩타이드 링커를 통해 상기 IL-15Rα 또는 상기 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체에 작동 가능하게 연결된, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 융합 단백질은 서열번호 119, 121 또는 180의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 융합 단백질은 서열번호 126, 127, 130, 131 또는 181의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제47 중 어느 한 항에 있어서, 상기 마커 단백질은 HER1의 도메인 III 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체; HER1의 도메인 IV의 N-말단 부분; 및 CD28의 막횡단 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체를 포함하는, 재조합 벡터.
- 제48항에 있어서, 상기 HER1의 도메인 III 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체는 서열번호 98의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제48항에 있어서, 상기 HER1의 도메인 III 또는 이의 기능적 단편 또는 기능적 변이체는 서열번호 110 또는 164의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된, 재조합 벡터.
- 제48항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 HER1의 도메인 IV의 N-말단 부분은 서열번호 99의 1번 내지 40번, 1번 내지 39번, 1번 내지 38번, 1번 내지 37번, 1번 내지 36번, 1번 내지 35번, 1번 내지 34번, 1번 내지 33번, 1번 내지 32번, 1번 내지 31번, 1번 내지 30번, 1번 내지 29번, 1번 내지 28번, 1번 내지 27번, 1번 내지 26번, 1번 내지 25번, 1번 내지 24번, 1번 내지 23번, 1번 내지 22번, 1번 내지 21번, 1번 내지 20번, 1번 내지 19번, 1번 내지 18번, 1번 내지 17번, 1번 내지 16번, 1번 내지 15번, 1번 내지 14번, 1번 내지 13번, 1번 내지 12번, 1번 내지 11번 또는 1번 내지 10번 아미노산을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제48항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 HER1의 도메인 IV의 N-말단 부분은 서열번호 99의 1번 내지 21번 아미노산을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제48항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 HER1의 도메인 IV의 N-말단 부분은 서열번호 100의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제48항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 HER1의 도메인 IV의 N-말단 부분은 서열번호 112의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된, 재조합 벡터.
- 제48항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD28의 막횡단 영역은 서열번호 101의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제48항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD28의 막횡단 영역은 서열번호 113의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 마커 단백질은 아미노산 서열 서열번호 96, 97, 166 또는 167의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 마커 단백질은 서열번호 107, 108, 109, 162, 173 또는 174의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조절 요소는 프로모터를 포함하는, 재조합 벡터.
- 제59항에 있어서, 상기 프로모터는 인간 신장 인자 1-알파(human elongation factor 1-alpha: hEF-1α) 하이브리드 프로모터인, 재조합 벡터.
- 제59항 또는 제60항에 있어서, 상기 프로모터는 서열번호 146의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터는 상기 제5 폴리뉴클레오타이드 서열의 3' 폴리A 서열을 추가로 포함하는, 재조합 벡터.
- 제62항에 있어서, 상기 폴리A 서열은 서열번호 148의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 폴리시스트로닉 발현 카세트를 포함하는 재조합 벡터로서, 상기 폴리시스트로닉 발현 카세트는, 5'에서 3'로,
a. 서열번호 72 또는 74의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 제1 폴리뉴클레오타이드 서열;
b. F2A 요소를 포함하는 제2 폴리뉴클레오타이드 서열;
c. 아미노산 서열 서열번호 119, 121 또는 180의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질을 포함하는 제3 폴리뉴클레오타이드 서열;
d. T2A 요소를 포함하는 제4 폴리뉴클레오타이드 서열; 및
e. 서열번호 96 또는 97의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 마커 단백질을 암호화하는 제5 폴리뉴클레오타이드 서열
을 포함하는 폴리뉴클레오타이드에 작동 가능하게 연결된 전사 조절 요소를 포함하는, 재조합 벡터. - 제64항에 있어서, 상기 F2A 요소는 서열번호 137의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 137의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제64항에 있어서, 상기 F2A 요소는 번호 141의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제64항에 있어서, 상기 F2A 요소는 서열번호 138의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 138의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제64항에 있어서, 상기 F2A 요소는 서열번호 142의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제64항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T2A 요소는 서열번호 139의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 139의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제64항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T2A 요소는 서열번호 143의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제64항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T2A 요소는 서열번호 140 또는 182의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 140 또는 182의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제64항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T2A 요소는 서열번호 144, 145 또는 165의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 폴리시스트로닉 발현 카세트를 포함하는 재조합 벡터로서, 상기 폴리시스트로닉 발현 카세트는, 5'에서 3'로,
a. 서열번호 82, 83, 86 또는 87의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 제1 폴리뉴클레오타이드 서열;
b. F2A 요소를 포함하는 제2 폴리뉴클레오타이드 서열;
c. 서열번호 126, 127, 130, 131 또는 181의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 제3 폴리뉴클레오타이드 서열;
d. T2A 요소를 포함하는 제4 폴리뉴클레오타이드 서열; 및
e. 서열번호 107, 108, 109 또는 162의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 제5 폴리뉴클레오타이드 서열
을 포함하는 폴리뉴클레오타이드에 작동 가능하게 연결된 전사 조절 요소를 포함하는, 재조합 벡터. - 제73항에 있어서, 상기 F2A 요소는 서열번호 137의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 137의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제73항에 있어서, 상기 F2A 요소는 서열번호 141의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제73항에 있어서, 상기 F2A 요소는 서열번호 138의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 138의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제73항에 있어서, 상기 F2A 요소는 서열번호 142의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제73항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T2A 요소는 서열번호 139의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 139의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제73항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T2A 요소는 서열번호 143의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제73항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T2A 요소는 서열번호 140 또는 182의 아미노산 서열 또는 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 140 또는 182의 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제73항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T2A 요소는 서열번호 144, 145 또는 165의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 좌측 역 말단 반복(inverted terminal repeat: ITR) 및 우측 ITR을 추가로 포함하되, 상기 좌측 ITR 및 상기 우측 ITR은 상기 폴리시스트로닉 발현 카세트의 측면에 있는, 재조합 벡터.
- 제82항에 있어서, 5'에서 3'로,
a. 상기 좌측 ITR;
b. 상기 전사 조절 요소;
c. 상기 제1 폴리뉴클레오타이드 서열;
d. 상기 제2 폴리뉴클레오타이드 서열;
e. 상기 제3 폴리뉴클레오타이드 서열;
f. 상기 제4 폴리뉴클레오타이드 서열;
g. 상기 제5 폴리뉴클레오타이드 서열; 및
h. 상기 우측 ITR
을 포함하는, 재조합 벡터. - 폴리시스트로닉 발현 카세트를 포함하는 재조합 벡터로서, 상기 폴리시스트로닉 발현 카세트는 서열번호 149의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 작동 가능하게 연결된 전사 조절 요소를 포함하는, 재조합 벡터.
- 폴리시스트로닉 발현 카세트를 포함하는 재조합 벡터로서, 상기 폴리시스트로닉 발현 카세트는 서열번호 152의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드에 작동 가능하게 연결된 전사 조절 요소를 포함하는, 재조합 벡터.
- 제84항 또는 제85항에 있어서, 좌측 역 말단 반복(ITR) 및 우측 ITR을 추가로 포함하되, 상기 좌측 ITR 및 상기 우측 ITR은 상기 폴리시스트로닉 발현 카세트의 측면에 있는, 재조합 벡터.
- 제82항, 제83항 및 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 좌측 ITR 및 상기 우측 ITR은 슬리핑 뷰티(Sleeping Beauty) 트랜스포존, piggyBac 트랜스포존, TcBuster 트랜스포존 및 Tol2 트랜스포존으로 이루어진 군으로부터 선택된 DNA 트랜스포존의 ITR인, 재조합 벡터.
- 제87항에 있어서, 상기 DNA 트랜스포존은 상기 슬리핑 뷰티 트랜스포존인, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터는 비바이러스 벡터인, 재조합 벡터.
- 제89항에 있어서, 상기 비바이러스 벡터는 플라스미드인, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터는 바이러스 벡터인, 재조합 벡터.
- 제1항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터는 폴리뉴클레오타이드인, 재조합 벡터.
- 서열번호 152의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드.
- 제1항 내지 제92항 중 어느 한 항의 벡터를 포함하는 세포 집단.
- 제94항에 있어서, 상기 벡터는 상기 세포 집단의 게놈에 통합되는, 세포 집단.
- 제93항의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 세포 집단.
- 제96항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 상기 세포 집단의 게놈에 통합되는, 세포 집단.
- 제93항의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함하는 세포 집단.
- 제94항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80 또는 81의 아미노산 서열을 포함하는 CAR; 서열번호 119, 120, 121, 122, 180 또는 183의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질; 및 서열번호 96, 97, 166 또는 167의 아미노산 서열을 포함하는 마커 단백질을 포함하는, 세포 집단.
- 제94항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 74의 아미노산 서열을 포함하는 CAR; 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질; 및 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 마커 단백질을 포함하는, 세포 집단.
- 제94항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함하는 CAR; 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질; 및 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 마커 단백질을 포함하는, 세포 집단.
- 제94항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포는 면역 효과기 세포인, 세포 집단.
- 제102항에 있어서, 상기 면역 효과기 세포는 T 세포, 자연 살해(natural killer: NK) 세포, B 세포, 비만 세포 및 골수-유래 식세포로 이루어진 군으로부터 선택된, 세포 집단.
- 제103항에 있어서, 상기 면역 효과기 세포는 T 세포인, 세포 집단.
- 제104항에 있어서, 알파/베타 T 세포, 감마/델타 T 세포 또는 자연 살해 T(NK-T) 세포를 포함하는, 세포 집단.
- 제104항 또는 제105항에 있어서, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 또는 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포 둘 다를 포함하는, 세포 집단.
- 제94항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포는 생체외에 있는, 세포 집단.
- 제94항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포는 인간인, 세포 집단.
- 조작된 세포 집단을 생산하는 방법으로서,
a. 제82항, 제83항 및 제86항 내지 제88항 중 어느 한 항의 재조합 벡터 및 DNA 트랜스포세이즈 또는 DNA 트랜스포세이즈를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 세포 집단에 도입하는 단계; 및
b. 상기 트랜스포세이즈가 폴리시스트로닉 발현 카세트를 상기 세포 집단의 게놈에 통합시키는 조건하에 상기 세포 집단을 배양하는 단계
를 포함함으로써, 상기 조작된 세포 집단을 생산하는, 조작된 세포 집단을 생산하는 방법. - 제109항에 있어서, 상기 좌측 ITR 및 상기 우측 ITR은 슬리핑 뷰티 트랜스포존, piggyBac 트랜스포존, TcBuster 트랜스포존 및 Tol2 트랜스포존으로 이루어진 군으로부터 선택된 DNA 트랜스포존의 ITR인, 조작된 세포 집단을 생산하는 방법.
- 제109항 또는 제110항에 있어서, 상기 DNA 트랜스포존은 상기 슬리핑 뷰티 트랜스포존인, 조작된 세포 집단을 생산하는 방법.
- 제109항 내지 제111항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 트랜스포세이즈는 슬리핑 뷰티 트랜스포세이즈인, 조작된 세포 집단을 생산하는 방법.
- 제112항에 있어서, 상기 슬리핑 뷰티 트랜스포세이즈는 SB11, SB100X, hSB110 및 hSB81로 이루어진 군으로부터 선택되는, 조작된 세포 집단을 생산하는 방법.
- 제112항 또는 제113항에 있어서, 상기 슬리핑 뷰티 트랜스포세이즈는 SB11인, 조작된 세포 집단을 생산하는 방법.
- 제114항에 있어서, 상기 SB11은 서열번호 160의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 조작된 세포 집단을 생산하는 방법.
- 제114항 또는 제115항에 있어서, 상기 SB11은 서열번호 161의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된, 조작된 세포 집단을 생산하는 방법.
- 제109항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 DNA 트랜스포세이즈를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 DNA 벡터 또는 RNA 벡터인, 조작된 세포 집단을 생산하는 방법.
- 제109항 내지 제117항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 좌측 ITR은 서열번호 155 또는 156의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하고; 상기 우측 ITR은 서열번호 157, 159 또는 184의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 조작된 세포 집단을 생산하는 방법.
- 제109항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 벡터 및 상기 DNA 트랜스포세이즈 또는 상기 DNA 트랜스포세이즈를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 전기-전달(electro-transfer), 칼슘 포스페이트 침전, 리포펙션, 유전자총, 미세주입, 미세유체 장치를 통한 기계적 변형 또는 콜로이드성 분산 시스템을 사용하여 상기 세포 집단에 도입되는, 조작된 세포 집단을 생산하는 방법.
- 제119항에 있어서, 상기 재조합 벡터 및 상기 DNA 트랜스포세이즈 또는 상기 DNA 트랜스포세이즈를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 전기-전달을 사용하여 상기 세포 집단에 도입되는, 조작된 세포 집단을 생산하는 방법.
- 제109항 내지 제120항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 2일 이내에 완료되는, 조작된 세포 집단을 생산하는 방법.
- 제109항 내지 제120항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 1일 내지 2일에 완료되는, 조작된 세포 집단을 생산하는 방법.
- 제109항 내지 제120항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 2일 초과에 완료되는, 조작된 세포 집단을 생산하는 방법.
- 제109항 내지 제123항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포 집단은 동결보존되고, 상기 재조합 벡터 및 상기 DNA 트랜스포세이즈 또는 상기 DNA 트랜스포세이즈를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드의 도입 전에 해동되는, 조작된 세포 집단을 생산하는 방법.
- 제109항 내지 제124항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포 집단은 상기 재조합 벡터 및 상기 DNA 트랜스포세이즈 또는 상기 DNA 트랜스포세이즈를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드의 도입 전에 휴지되는(rested), 조작된 세포 집단을 생산하는 방법.
- 제109항 내지 제125항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포 집단은 인간 생체외 세포를 포함하는, 조작된 세포 집단을 생산하는 방법.
- 제109항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포 집단은 생체외에서 활성화되지 않는, 조작된 세포 집단을 생산하는 방법.
- 제109항 내지 제127항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포 집단은 T 세포를 포함하는, 조작된 세포 집단을 생산하는 방법.
- 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서,
치료학적 유효량의 제94항 내지 제108항 중 어느 한 항의 세포 집단을 상기 대상체에게 투여함으로써, 암을 치료하는 단계를 포함하는, 암을 치료하는 방법. - 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서,
치료학적 유효량의 제109항 내지 제128항 중 어느 한 항의 방법에 의해 생산된 조작된 세포 집단을 상기 대상체에게 투여함으로써, 암을 치료하는 단계를 포함하는, 암을 치료하는 방법. - 자가면역 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에서 자가면역 질환 또는 장애를 치료하는 방법으로서,
치료학적 유효량의 제94항 내지 제108항 중 어느 한 항의 세포 집단을 상기 대상체에게 투여함으로써, 자가면역 질환 또는 장애를 치료하는 단계를 포함하는, 자가면역 질환 또는 장애를 치료하는 방법. - 자가면역 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에서 자가면역 질환 또는 장애를 치료하는 방법으로서,
치료학적 유효량의 제109항 내지 제128항 중 어느 한 항의 방법에 의해 생산된 조작된 세포를 상기 대상체에게 투여함으로써, 자가면역 질환 또는 장애를 치료하는 단계를 포함하는, 자가면역 질환 또는 장애를 치료하는 방법.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US202063132434P | 2020-12-30 | 2020-12-30 | |
US63/132,434 | 2020-12-30 | ||
PCT/US2021/073145 WO2022147444A2 (en) | 2020-12-30 | 2021-12-29 | Recombinant vectors comprising polycistronic expression cassettes and methods of use thereof |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20230137340A true KR20230137340A (ko) | 2023-10-04 |
Family
ID=80933661
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020237025886A KR20230137340A (ko) | 2020-12-30 | 2021-12-29 | 폴리시스트로닉 발현 카세트를 포함하는 재조합 벡터및 이의 사용 방법 |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP4271817A2 (ko) |
JP (1) | JP2024502094A (ko) |
KR (1) | KR20230137340A (ko) |
CN (1) | CN117396607A (ko) |
AU (1) | AU2021413365A1 (ko) |
CA (1) | CA3203531A1 (ko) |
IL (1) | IL304112A (ko) |
TW (1) | TW202242117A (ko) |
WO (1) | WO2022147444A2 (ko) |
Family Cites Families (51)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6489458B2 (en) | 1997-03-11 | 2002-12-03 | Regents Of The University Of Minnesota | DNA-based transposon system for the introduction of nucleic acid into DNA of a cell |
US8227432B2 (en) | 2002-04-22 | 2012-07-24 | Regents Of The University Of Minnesota | Transposon system and methods of use |
CN108948177B (zh) | 2007-05-11 | 2022-04-22 | 阿尔托生物科学有限公司 | 融合分子与il-15变异体 |
US9228180B2 (en) | 2007-07-04 | 2016-01-05 | Max-Delbruck-Centrum Fur Molekulare Medizin | Polypeptide variants of sleeping beauty transposase |
KR20230133410A (ko) | 2010-12-09 | 2023-09-19 | 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 | 암을 치료하기 위한 키메릭 항원 수용체 변형 t 세포의 용도 |
KR102247979B1 (ko) | 2012-05-25 | 2021-05-04 | 셀렉티스 | 면역요법을 위한 동종이형 및 면역억제제 저항성인 t 세포의 조작 방법 |
ES2528892T3 (es) | 2012-07-30 | 2015-02-13 | Nbe-Therapeutics Llc | Identificación mediada por trasposición de proteínas de unión o funcionales específicas |
TWI654206B (zh) | 2013-03-16 | 2019-03-21 | 諾華公司 | 使用人類化抗-cd19嵌合抗原受體治療癌症 |
AU2014268364A1 (en) | 2013-05-24 | 2015-12-10 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Chimeric antigen receptor-targeting monoclonal antibodies |
KR102668549B1 (ko) | 2014-06-02 | 2024-05-22 | 더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카, 애즈 리프리젠티드 바이 더 세크러테리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비씨즈 | Cd19를 표적화하는 키메라 항원 수용체 |
TWI751102B (zh) | 2014-08-28 | 2022-01-01 | 美商奇諾治療有限公司 | 對cd19具專一性之抗體及嵌合抗原受體 |
CA2963935A1 (en) | 2014-10-08 | 2016-04-14 | Novartis Ag | Biomarkers predictive of therapeutic responsiveness to chimeric antigen receptor therapy and uses thereof |
US11253546B2 (en) | 2014-12-15 | 2022-02-22 | The Regents Of The University Of California | Bispecific OR-gate chimeric antigen receptor responsive to CD19 and CD20 |
GB201503742D0 (en) | 2015-03-05 | 2015-04-22 | Ucl Business Plc | Chimeric antigen receptor |
US10570382B2 (en) | 2015-03-11 | 2020-02-25 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Transposase polypeptides and uses thereof |
WO2016149578A1 (en) | 2015-03-19 | 2016-09-22 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Dual specific anti-cd22-anti-cd19 chimeric antigen receptors |
US20190135894A1 (en) | 2015-06-25 | 2019-05-09 | iCell Gene Therapeuticics LLC | COMPOUND CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR (cCAR) TARGETING MULTIPLE ANTIGENS, COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
SG11201808411RA (en) | 2016-04-01 | 2018-10-30 | Kite Pharma Inc | Chimeric antigen and t cell receptors and methods of use |
WO2018045177A1 (en) | 2016-09-01 | 2018-03-08 | Chimera Bioengineering, Inc. | Gold optimized car t-cells |
CA3049652A1 (en) * | 2017-01-10 | 2018-07-19 | Intrexon Corporation | Modulating expression of polypeptides via new gene switch expression systems |
CN108728459B (zh) * | 2017-04-24 | 2023-08-04 | 上海恒润达生生物科技股份有限公司 | 靶向cd19的嵌合抗原受体并联合表达il-15的方法和用途 |
SG11201910127XA (en) | 2017-05-02 | 2019-11-28 | Chongqing Prec Biotech Company Limited | Chimeric antigen receptor against human cd19 antigen and its application |
CA3065930A1 (en) * | 2017-06-07 | 2018-12-13 | Intrexon Corporation | Expression of novel cell tags |
US11441132B2 (en) | 2017-08-21 | 2022-09-13 | European Molecular Biology Laboratory | Mutated sleeping beauty transposase |
CN114533863A (zh) | 2017-09-15 | 2022-05-27 | 凯德药业股份有限公司 | 用于进行具有监管链和身份链生物样品跟踪的患者特异性免疫疗法规程的方法和系统 |
CA3075915A1 (en) | 2017-09-15 | 2019-03-21 | Lentigen Technology, Inc. | Compositions and methods for treating cancer with anti-cd19 immunotherapy |
SG11202003849VA (en) | 2017-10-31 | 2020-05-28 | Allogene Therapeutics Inc | Methods and compositions for dosing of allogeneic chimeric antigen receptor t cells |
SG11202005173SA (en) * | 2017-12-22 | 2020-06-29 | Fate Therapeutics Inc | Enhanced immune effector cells and use thereof |
WO2019159193A1 (en) | 2018-02-13 | 2019-08-22 | Indian Institute Of Technology Bombay | Novel humanized anti-cd19 chimeric antigen receptor, its nucelic acid sequence and its preparation |
WO2019160956A1 (en) | 2018-02-13 | 2019-08-22 | Novartis Ag | Chimeric antigen receptor therapy in combination with il-15r and il15 |
CN108383914A (zh) | 2018-02-23 | 2018-08-10 | 北京美康基免生物科技有限公司 | 一种基于cd19的嵌合抗原受体及其应用 |
EP3561053A1 (en) * | 2018-04-26 | 2019-10-30 | Baylor College of Medicine | Immune effector cells and molecular adaptors with an antigen cytokine complex for effective cancer immunotherapy |
EP3788369A1 (en) | 2018-05-01 | 2021-03-10 | Novartis Ag | Biomarkers for evaluating car-t cells to predict clinical outcome |
CN112292140A (zh) | 2018-06-22 | 2021-01-29 | 综合医院公司 | 靶向cd37和cd19的嵌合抗原受体 |
WO2020010235A1 (en) | 2018-07-05 | 2020-01-09 | H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute Inc. | Car t cells that target b-cell antigens |
US20210347851A1 (en) | 2018-09-28 | 2021-11-11 | Novartis Ag | Cd19 chimeric antigen receptor (car) and cd22 car combination therapies |
KR20230150399A (ko) | 2018-10-31 | 2023-10-30 | 난트퀘스트, 인크. | Cd19-car 발현 nk 세포에 의한 cd19-양성 림프성 악성종양의 제거 |
US20220008465A1 (en) | 2018-11-16 | 2022-01-13 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods of dosing engineered t cells for the treatment of b cell malignancies |
CN109468284A (zh) | 2018-11-30 | 2019-03-15 | 北京美康基免生物科技有限公司 | 一种基于cd19和psma的双重嵌合抗原受体基因修饰的免疫细胞及其应用 |
CN110951689A (zh) | 2018-11-30 | 2020-04-03 | 北京美康基免生物科技有限公司 | 一种基于cd19和cd30的双重嵌合抗原受体基因修饰的免疫细胞及其应用 |
CN109468283A (zh) | 2018-11-30 | 2019-03-15 | 北京美康基免生物科技有限公司 | 一种基于cd19和bcma的双重嵌合抗原受体基因修饰的免疫细胞及其应用 |
CN109517799B (zh) | 2018-11-30 | 2022-07-26 | 北京美康基免生物科技有限公司 | 一种基于cd19和cd22的双重嵌合抗原受体基因修饰的免疫细胞及其应用 |
SG11202105380RA (en) | 2018-11-30 | 2021-06-29 | Juno Therapeutics Inc | Methods for dosing and treatment of b cell malignancies in adoptive cell therapy |
CN109880802B (zh) | 2018-11-30 | 2022-12-13 | 北京美康基免生物科技有限公司 | 一种基于cd19和cd70的双重嵌合抗原受体基因修饰的免疫细胞及其应用 |
US20220047636A1 (en) | 2018-12-13 | 2022-02-17 | The General Hospital Corporation | Chimeric antigen receptors targeting cd79b and cd19 |
JP2022521240A (ja) | 2019-02-20 | 2022-04-06 | シティ・オブ・ホープ | Baff-r/cd19を標的としたキメラ抗原受容体修飾t細胞とその使用 |
WO2020172641A1 (en) | 2019-02-21 | 2020-08-27 | Arbele Limited | Artificial immunosurveillance chimeric antigen receptor and cells expressing the same |
SG11202109057XA (en) | 2019-03-05 | 2021-09-29 | Nkarta Inc | Cd19-directed chimeric antigen receptors and uses thereof in immunotherapy |
CA3134308A1 (en) | 2019-04-26 | 2020-10-29 | Thomas Charles PERTEL | Rituximab-resistant chimeric antigen receptors and uses thereof |
JP2022531185A (ja) | 2019-04-30 | 2022-07-06 | クリスパー セラピューティクス アクチェンゲゼルシャフト | 遺伝子改変t細胞を標的化するcd19を使用するb細胞悪性病変の同種細胞療法 |
BR112021021996A2 (pt) | 2019-05-03 | 2022-01-11 | Kite Pharma Inc | Métodos para administração de imunoterapia com receptores de antígeno quimérico |
-
2021
- 2021-12-29 CN CN202180094825.2A patent/CN117396607A/zh active Pending
- 2021-12-29 WO PCT/US2021/073145 patent/WO2022147444A2/en active Application Filing
- 2021-12-29 CA CA3203531A patent/CA3203531A1/en active Pending
- 2021-12-29 JP JP2023540746A patent/JP2024502094A/ja active Pending
- 2021-12-29 AU AU2021413365A patent/AU2021413365A1/en active Pending
- 2021-12-29 EP EP21857007.5A patent/EP4271817A2/en active Pending
- 2021-12-29 TW TW110149286A patent/TW202242117A/zh unknown
- 2021-12-29 KR KR1020237025886A patent/KR20230137340A/ko unknown
-
2023
- 2023-06-28 IL IL304112A patent/IL304112A/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2022147444A3 (en) | 2022-08-18 |
CA3203531A1 (en) | 2022-07-07 |
JP2024502094A (ja) | 2024-01-17 |
AU2021413365A1 (en) | 2023-07-20 |
IL304112A (en) | 2023-09-01 |
TW202242117A (zh) | 2022-11-01 |
EP4271817A2 (en) | 2023-11-08 |
CN117396607A (zh) | 2024-01-12 |
WO2022147444A2 (en) | 2022-07-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11865167B2 (en) | Treatment of cancer using humanized anti-EGFRvIII chimeric antigen receptor | |
AU2022231783A1 (en) | Methods for improving the efficacy and expansion of chimeric antigen receptor-expressing cells | |
KR102612313B1 (ko) | 인간화 항-bcma 키메라 항원 수용체를 사용한 암의 치료 | |
KR20220104217A (ko) | Cd19 및 cd22 키메라 항원 수용체 및 이의 용도 | |
CA3057306A1 (en) | Biomarkers and car t cell therapies with enhanced efficacy | |
US20230074800A1 (en) | Car-t cell therapies with enhanced efficacy | |
KR20210116562A (ko) | Gprc5d 키메라 항원 수용체 및 이를 발현하는 세포 | |
KR20190036551A (ko) | Pro-m2 대식세포 분자의 억제제를 병용하는, 키메라 항원 수용체를 이용한 암의 치료 | |
KR20210102888A (ko) | G 단백질 결합 수용체 c 클래스 5 그룹 d 멤버(gprc5d)에 특이적인 키메라 항원 수용체 | |
KR20200089285A (ko) | Bcma-표적화 키메라 항원 수용체, cd19-표적화 키메라 항원 수용체, 및 병용 요법 | |
KR20180134385A (ko) | 선택적 단백질 발현을 위한 조성물 및 방법 | |
KR20190034588A (ko) | 키메라 항원 수용체 및 pd-1 억제제의 조합 요법 | |
CA2999070A1 (en) | Car t cell therapies with enhanced efficacy | |
JP2019535275A (ja) | TGFβシグナルコンバーター | |
KR20180118175A (ko) | 다중 키메라 항원 수용체 (car) 분자를 발현하는 세포 및 그에 따른 용도 | |
KR20180099768A (ko) | 증진된 효능을 갖는 면역 이펙터 세포 요법 | |
KR20170134642A (ko) | Cd20 요법, cd22 요법, 및 cd19 키메라 항원 수용체 (car) - 발현 세포와의 조합 요법 | |
AU2016297014A1 (en) | Methods for improving the efficacy and expansion of immune cells | |
CA2958553A1 (en) | Anti-cd123 chimeric antigen receptor (car) for use in cancer treatment | |
KR20210089712A (ko) | 항-cd33 면역세포 암 치료법 | |
KR20170029009A (ko) | Cd33 키메라 항원 수용체를 사용한 암의 치료 | |
KR20230147109A (ko) | Her2 양성 암을 치료하기 위한 조성물 및 방법 | |
TW202214846A (zh) | 用於治療egfr陽性癌症之組合物及方法 | |
KR20230137340A (ko) | 폴리시스트로닉 발현 카세트를 포함하는 재조합 벡터및 이의 사용 방법 | |
KR20230143135A (ko) | Cd19+, cd20+ 또는 cd22+ 종양 또는 b-세포 유래 자가-면역질환을 치료하기 위한 car t-세포 |