KR20230134505A

KR20230134505A - Kras-g12c 억제제로서의 스피로 고리 화합물

Info

Publication number: KR20230134505A
Application number: KR1020237025454A
Authority: KR
Inventors: 수싱 첸; 징 리; 얀홍 첸; 자오 자오
Original assignee: 상하이 유레겐 바이오파마 코., 엘티디.; 상하이 율리 바이오파마 코., 엘티디.
Priority date: 2020-12-25
Filing date: 2021-12-23
Publication date: 2023-09-21
Also published as: JP2024509330A; CA3202917A1; EP4265616A1; AU2021408227A9; WO2022135546A1; CN116710457A; TW202229279A; TWI811912B; MX2023007554A; AU2021408227B2; CN114685502A; AU2021408227A1

Abstract

본 발명은 KRAS G12C 매개 종양의 치료를 위한 약물을 제조할 수 있는 KRAS-G12C 억제제로서의 식 (I)로 표시되는 스피로 고리 화합물에 관한 것이다.

Description

KRAS-G12C 억제제로서의 스피로사이클릭 화합물

본 발명은 의약 화학 분야에 관한 것으로, 보다 구체적으로 본 발명은 KRAS-G12C 억제제로서 KRAS G12C 매개 종양의 치료를 위한 약물을 제조할 수 있는 스피로 고리 화합물에 관한 것이다.

Kirsten 래트 육종 2 바이러스 종양유전자 동족체(Kirsten Rat Sarcoma 2 Viral Oncogene Homolog, “KRAS”)는 구아노신삼인산(Guanosine triphosphate, GTP) 효소이고 RAS 종양유전자 패밀리의 구성원이다. KRAS는 비활성(구아노신이인산(Guanosine diphosphate, GDP) 결합형) 상태와 활성(GTP 결합형) 상태 사이를 순환하는 분자 스위치 역할을 하고, 다양한 티로신 키나아제에서 받은 상류 세포 신호를 하류 이펙터로 형질도입하여 세포 증식을 비롯한 다양한 과정을 조절한다(Current Opin Pharmcol. 2013(13): 394-401).

KRAS는 암에서 가장 흔히 보는 변이체 중 하나이다. 암 환자의 약 22%는 KRAS 돌연변이를 가지고, 특히 췌장암(68%), 담관암(27%) 및 폐암(17%)이 있다. 여기서 비소세포폐암, 결직장암, 췌장암에서 KRAS G12C의 발생률은 각각 48%, 10% 및 1%이다. KRAS 단백질은 이상적인 저분자 결합 포켓이 없고, 세포 내 풍부한 GTP는 매우 높은 친화력을 가지며, 이는 특이적 저분자 약물의 설계를 어렵게 한다. 알려진 상이한 돌연변이에서, KRAS G12C 돌연변이는 가장 가능성이 높은 의약품 표적으로 간주된다. 현재 일부 KRAS G12C를 표적화하는 공유원자가 억제제는 Amgen의 AMG 510 및 Mirati Therapeutics의 MRTX849와 같이 임상시험 중에 있다. 이러한 화합물은 시스테인 잔기 12에서 KRAS G12C에 공유 결합하여 KRAS G12C가 비활성 GDP 결합 상태로 유지하고 KRAS 의존 신호 전달을 억제하도록 한다.

30년 이상의 연구 노력 끝에, KRAS 억제제는 일정한 진전을 이루었지만 여전히 충분한 안전성과 효능을 나타내는 KRAS 억제제는 규제기관의 승인을 받지 못하였다. 따라서 제약사들은 새로운 KRAS 억제제를 개발하고 이를 암과 같은 다양한 질환의 치료에 활용하기 위한 지속적인 노력이 필요하다.

WO2020/236940는 화합물 819를 공개하였고, MMGBSA 및 CovDock의 두 가지 방법에 기반한 소프트웨어를 사용하여 화합물 819와 KRAS G12C의 결합력을 예측하였지만 상기 화합물의 합성 방법, 특성화 데이터 및 임의의 생물학적 테스트 결과를 제공하지 않았다.

본 발명의 목적은 스피로 고리 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 스피로 고리 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 항종양 약물의 제조에서 상기 스피로 고리 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 상기 스피로 고리 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조성물의 응용을 제공하는 것이다.

본 발명의 제1 양태에서, 식 I로 표시되는 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체, 시스트랜스이성질체, 용매화물, 다형체, 중수소화물 또는 이들의 조합을 제공하며,

상기 식에서,

A는 4-12원 포화 또는 부분 포화된 단일 고리, 접합 고리, 브리지 고리 또는 스피로 고리이되, 상기 포화 또는 부분 포화된 단일 고리, 접합 고리, 브리지 고리 또는 스피로 고리는 선택적으로 하나 이상의 R³에 의해 치환되고;

각각의 R³은 각각 독립적으로 옥소, C1-C3 알킬, C2-C4 알케닐, C2-C4 알키닐, 시아노, -C(O)OR⁴, -CON(R⁴)₂ 또는 -N(R⁴)₂이되, 상기 C1-C3 알킬은 선택적으로 시아노, 할로겐, -OR⁴ 또는 -N(R⁴)₂에 의해 치환되며;

각각의 R⁴는 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이고;

U는 N 또는 CH이며;

L¹은 부재 또는 NR^N이고, U가 N인 경우 L¹은 부재이고, U가 CH인 경우 L¹은 NR^N이며;

R^N은 수소 또는 C1-C3 알킬이고;

R¹은

R^a는 수소, 할로겐, 선택적으로 치환된 C1-C3 알킬, -N(R⁵)₂, 선택적으로 치환된 4-6원 포화 헤테로 고리기, C1-C3 알콕시, C1-C3 알킬티오 또는 아세틸이되, R^a에 따른 선택적으로 치환된 치환기는 메틸, 에틸, -N(R⁵)₂, 할로겐, C1-C3 알콕시, 4-6원 포화 헤테로 고리기로 이루어진 군으로부터 선택되며;

각각의 R⁵는 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이고;

R^a', R^b는 각각 독립적으로 수소, 할로겐 또는 C1-C3 알킬이며;

L²는 부재, -O-, -S-, -NR⁶-, -SO-, -SO₂- 또는 -CO-이되, R⁶은 수소 또는 C1-C4 알킬이고;

R²는 수소, 선택적으로 치환된 C1-C4 알킬, 선택적으로 치환된 포화 또는 불포화 3-8원 탄소 고리기, 선택적으로 치환된 포화 또는 불포화 4-12원 헤테로 고리기, 선택적으로 치환된 포화 또는 불포화 3-8원 탄소 고리 접합 6-10원 방향족 고리기, 선택적으로 치환된 포화 또는 불포화 3-8원 탄소 고리 접합 5-10원 헤테로 방향족 고리기, 선택적으로 치환된 포화 또는 불포화 3-8원 헤테로 고리 접합 6-10원 방향족 고리기, 선택적으로 치환된 포화 또는 불포화 3-8원 헤테로 고리 접합 5-10원 헤테로 방향족 고리기, 선택적으로 치환된 6-10원 방향족 고리기 또는 선택적으로 치환된 5-10원 헤테로 방향족 고리기이되; R²에 따른 선택적으로 치환된 치환기는 중수소, 할로겐, 히드록실, 시아노, 옥소, C1-C3 알콕시, -NR^cR^d, -CO₂R⁷, -CONR^eR^f, C1-C4 알킬술폭시드기, C1-C4 알킬술포닐, -SO₂NR^gR^h, 선택적으로 치환된 3-8원 포화 또는 불포화 탄소 고리기, 및 선택적으로 치환된 4-8원 포화 또는 불포화 헤테로 고리기로부터 선택되며;

R^c 및 R^d는 각각 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 3-8원 탄소 고리기 및 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리기로부터 선택되거나, 또는 R^c와 R^d는 이들에 연결된 N과 함께 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리를 형성하고;

R^e 및 R^f는 각각 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 3-8원 탄소 고리기 및 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리기로부터 선택되거나, 또는 R^e와 R^f는 이들에 연결된 N과 함께 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리를 형성하며;

R^g 및 R^h는 각각 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 3-8원 탄소 고리기 및 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리기로부터 선택되거나, 또는 R^g와 R^h는 이들에 연결된 N과 함께 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리를 형성하고;

R⁷은 수소 또는 선택적으로 치환된 C1-C4 알킬이며;

W는 -(CR⁸R⁹)-, -NR¹⁰-, O 또는 S이되, R⁸, R⁹ 및 R¹⁰은 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이고;

X는 -(CR¹¹R¹²)_m- 또는 -(C=O)-이되, 각각의 R¹¹은 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이며, 각각의 R¹²는 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이고;

m = 1, 2 또는 3이며;

B는 6-10원 방향족 고리 또는 5-8원 헤테로 방향족 고리이되, 상기 6-10원 방향족 고리 또는 5-8원 헤테로 방향족 고리는 치환되지 않거나 선택적으로 하나 이상의 R¹³에 의해 치환되고;

각각의 R¹³은 각각 독립적으로 할로겐, 히드록실, 아미노, C1-C3 알킬아미노, (C1-C3 알킬)₂아미노, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, C3-C6 탄소 고리기, C1-C3 알콕시 또는 할로겐화 C1-C3 알콕시이며;

Y는 -NR¹⁴-이되, R¹⁴는 수소, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬 또는 C3-C6 탄소 고리기이고;

Z는 -(CR¹⁵R¹⁶)-이되, R¹⁵ 및 R¹⁶은 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이다.

일 바람직한 예에서, R²는 수소, 선택적으로 치환된 C1-C4 알킬, 선택적으로 치환된 포화 또는 불포화 3-8원 탄소 고리기, 선택적으로 치환된 포화 또는 불포화 4-12원 헤테로 고리기, 선택적으로 치환된 포화 또는 불포화 3-8원 헤테로 고리 접합 6-10원 방향족 고리기, 선택적으로 치환된 포화 또는 불포화 3-8원 헤테로 고리 접합 5-10원 헤테로 방향족 고리기, 선택적으로 치환된 6-10원 방향족 고리기 또는 선택적으로 치환된 5-10원 헤테로 방향족 고리기이되, R²에 따른 선택적으로 치환된 치환기는 중수소, 할로겐, 히드록실, 시아노, 옥소, C1-C3 알콕시, -NR^cR^d, -CO₂R⁷, -CONR^eR^f, C1-C4 알킬술폭시드기, C1-C4 알킬술포닐, -SO₂NR^gR^h, 선택적으로 치환된 3-8원 포화 또는 불포화 탄소 고리기 및 선택적으로 치환된 4-8원 포화 또는 불포화 헤테로 고리기로부터 선택되고;

R^c 및 R^d는 각각 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 3-8원 탄소 고리기 및 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리기로부터 선택되거나, 또는 R^c와 R^d는 이들에 연결된 N과 함께 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리를 형성하며;

R^e 및 R^f는 각각 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 3-8원 탄소 고리기 및 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리기로부터 선택되거나, 또는 R^e와 R^f는 이들에 연결된 N과 함께 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리를 형성하고;

R^g 및 R^h는 각각 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 3-8원 탄소 고리기 및 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리기로부터 선택되거나, 또는 R^g와 R^h는 이들에 연결된 N과 함께 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리를 형성하며;

R⁷은 수소 또는 선택적으로 치환된 C1-C4 알킬이고;

바람직하게는, 상기 L²는 부재, -O-, -S-, 또는 -NR⁶-이되, R⁶은 수소 또는 C1-C4 알킬이며;

바람직하게는, 상기 R^a는 수소, 불소, 선택적으로 치환된 C1-C3 알킬, 선택적으로 치환된 4-6원 포화 헤테로 고리기 또는 아세틸이되;

R^a에 따른 선택적으로 치환된 치환기는 메틸, 에틸, -N(R⁵)₂, 할로겐, C1-C3 알콕시, 4-6원 포화 헤테로 고리기로 이루어진 군으로부터 선택되고;

각각의 R⁵는 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이며;

바람직하게는, 상기 R^a', R^b는 각각 독립적으로 수소, 불소 또는 C1-C3 알킬이고;

바람직하게는, 상기 W는 -(CR⁸R⁹)- 또는 -NR¹⁰-이되, R⁸, R⁹ 및 R¹⁰은 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이며;

바람직하게는, 상기 X는 -(CR¹¹R¹²)_m-이되; 각각의 R¹¹은 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이고, 각각의 R¹²는 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이고; m은 1, 2 또는 3이고; 보다 바람직하게는, m은 1 또는 2이다.

다른 바람직한 예에서,로 나타내는 일부는,

n은 치환기 R³의 개수를 나타내며, n은 0, 1, 2 또는 3이고;

각각의 R³은 각각 독립적으로 옥소, C1-C3 알킬, C2-C4 알케닐, C2-C4 알키닐, 시아노, -C(O)OR⁴, -CON(R⁴)₂ 또는 -N(R⁴)₂이되, 상기 C1-C3 알킬은 선택적으로 시아노, 할로겐, -OR⁴ 또는 -N(R⁴)₂에 의해 치환될 수 있으며;

각각의 R⁴는 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이고;

다른 바람직한 예에서, R¹은,

다른 바람직한 예에서, R²는 수소, 선택적으로 치환된 C1-C4 알킬, 선택적으로 치환된 6-10원 방향족 고리기 또는 선택적으로 치환된 5-10원 헤테로 방향족 고리기이되; R²에 따른 선택적으로 치환된 치환기는 할로겐, 히드록실, 시아노, 옥소, C1-C3 알콕시, -NR^cR^d, -CO₂R⁷, -CONR^eR^f, C1-C4 알킬술폭시드기, C1-C4 알킬술포닐, -SO₂NR^gR^h, 선택적으로 치환된 3-8원 포화 또는 불포화 탄소 고리기, 및 선택적으로 치환된 4-8원 포화 또는 불포화 헤테로 고리기로부터 선택되고;

R⁷은 수소 또는 선택적으로 치환된 C1-C4 알킬이다.

이되; n은 치환기 R^2'의 수를 나타내며, 0, 1, 2 및 3으로부터 선택되고; 각각의 R^2'는 각각 독립적으로 할로겐, C1-C3 알킬, 할로겐화 C1-C3 알킬, 히드록실, 시아노, 옥소, C1-C3 알콕시, -NR^cR^d, -CO₂R⁷, -CONR^eR^f, C1-C4 알킬술폭시드기, C1-C4 알킬술포닐, -SO₂NR^gR^h, 선택적으로 치환된 3-8원 포화 또는 불포화 탄소 고리기 또는 선택적으로 치환된 4-8원 포화 또는 불포화 헤테로 고리기이며;

R⁷은 수소 또는 선택적으로 치환된 C1-C4 알킬이다.

다른 바람직한 예에서,로 나타내는 스피로 고리는,

R¹⁰은 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이며;

o는 치환기 R¹³의 수를 나타내고, 0, 1, 2 또는 3이며;

R¹³은 각각 독립적으로 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, C3-C6 탄소 고리기, C1-C3 알콕시 또는 할로겐화 C1-C3 알콕시이다.

다른 바람직한 예에서, 상기 화합물은 하기 구조로 이루어진 군으로부터 선택된다:

본 발명의 화합물은 실시예의 합성 방법 또는 이와 유사한 방법에 따라 제조될 수 있다.

본 발명의 제2 양태에서, 약학적 조성물을 제공하며, 상기 약학적 조성물은,

(1) 활성 성분으로서 치료적 유효량의 본 발명에 따른 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체, 시스트랜스이성질체, 용매화물, 다형체, 중수소화물로부터 선택되는 하나 이상; 및

(2) 선택적으로, 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다.

이 밖에, 상기 약학적 조성물은 또한 다른 약학적으로 허용 가능한 치료제를 추가로 포함할 수 있거나 다른 약학적으로 허용 가능한 치료제, 특히 다른 항종양 약물과 병용할 수 있다. 상기 치료제는 시스플라틴과 같은 DNA 화학 구조에 작용하는 항종양 약물; 메토트렉세이트(MTX), 5-플루오로우라실(5FU)과 같은 핵산 합성에 영향을 미치는 항종양 약물; 독소루비신, 에피루비신, 아클라시노마이신, 미트라마이신과 같은 핵산 전사에 영향을 미치는 항종양 약물; 파클리탁셀, 비노렐빈과 같은 튜불린 합성에 작용하는 항종양 약물; 아미노글루테치마이드, 렌타론(Lentaron), 레트로졸, 아나스트로졸과 같은 아로마타제 억제제; 표피 성장 인자 수용체 억제제 제피티닙(Gefitinib), 엘로티닙(Erlotinib), 라파티닙(Lapatinib)과 같은 세포 신호 전달 경로 억제제, 트라메티닙(Trametinib), 코비메티닙(Cobimetinib)과 같은 미토겐 활성화 세포외 신호 조절 키나아제(MEK) 억제제, 팔보시클립(Palbociclib)과 같은 사이클린 의존성 키나아제 4/6(CDK4/6) 억제제, Src 상동성 포스포티로실 포스파타제(SHP2) 억제제, SOS1 억제제; 니볼루맙(Nivolumab), 펨브로리주맙(Pembrolizumab)과 같은 프로그래밍된 사멸 수용체-1/프로그래밍된 사멸 리간드-1(PD-1/PD-L¹) 억제제를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 제3 양태에서, KRAS G12C 돌연변이 매개 암의 예방 또는 치료용 약물의 제조를 위한 본 발명의 상기 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체, 시스트랜스이성질체, 용매화물, 다형체, 중수소화물 또는 이의 약학적 조성물의 용도를 제공한다. 일 바람직한 예에서, 상기 KRAS G12C와 관련된 암은 폐암(비소세포폐암 포함), 췌장암, 결직장암, 백혈병, 유잉육종, 유방암, 전립선암, T 세포 림프종, B 세포 림프종, 악성 횡문근종, 활막육종, 자궁내막종, 위암, 간암, 신장암, 흑색종, 난소암, 뇌 신경교종, 담관암, 비인두암, 자궁경부암, 두경부암, 식도암, 갑상선암 및 방광암으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 다른 바람직한 예에서, 상기 KRAS G12C와 관련된 암은 비소세포폐암, 췌장암 또는 결직장암으로부터 선택된다.

본 발명의 범위 내에서, 본 발명의 상기 각 기술특징과 하기(예를 들어, 실시예)에서 구체적으로 설명되는 각 기술특징 사이는 서로 조합되어, 새로운 또는 바람직한 기술적 해결수단을 구성할 수 있음을 이해해야 한다. 편폭에 한하여, 여기서 더 이상 일일이 설명하지 않는다.

유익한 효과

1. 식 I로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.

2. KRAS G12C 돌연변이와 관련된 질환의 예방 및 치료를 위한 새로운 구조의 약학적 조성물을 제공한다.

도 1은 NCI-H358 종양 피하 이식 암컷 BALB/c 누드 마우스 모델에서 시험물의 체내 약효 결과를 보여준다.
도 2는 BALB/c 누드 마우스 NCI-H1373-luc 두개내 접종 모델에서 시험물의 체내 약효 결과를 보여준다.

용어 설명

달리 정의되지 않는 한, 본문에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 의미와 동일한 의미를 갖는다.

본문에 사용된 바와 같이, 용어 “함유” 또는 “포괄(포함)”은 개방형, 반폐쇄형 및 폐쇄형일 수 있다. 즉, 상기 용어는 또한 “기본적으로 ...으로 구성” 또는 “...으로 구성”을 포함한다.

기(group) 정의

참고문헌(Carey and Sundberg "ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4TH ED." Vols. A (2000) and B (2001), Plenum Press, New York 포함)에서 표준 화학 용어의 정의를 찾을 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, 본 분야의 기술범위 내의 일반적인 방법, 예를 들어 질량 스펙트럼, NMR, IR 및 UV/VIS 분광법 및 약리학적 방법을 사용한다. 구체적인 정의가 제시되지 않는 한, 분석 화학, 유기 합성 화학, 약학 및 의약 화학의 관련 설명에서 본문에 사용된 용어는 본 분야에 공지된 것이다. 화학 합성, 화학 분석, 약물 제조, 제제 및 전달, 및 환자 치료에서 표준 기술을 사용할 수 있다. 예를 들어, 키트에 대한 제조업체의 지침을 이용하거나 본 분야에 공지된 방식 또는 본 발명의 설명에 따라 반응을 실시하고 정제를 수행할 수 있다. 통상적으로 본 명세서에서 인용되고 논의되는 다양한 개략적 및 구체적 문헌에 기재된 바와 같이 본 분야에 잘 알려진 일반적인 방법에 따라 상기 기술 및 방법을 수행할 수 있다. 본 명세서에서, 안정적인 구조 모이어티 및 화합물을 제공하기 위해 기 및 이의 치환기는 당업자에 의해 선택될 수 있다.

왼쪽에서 오른쪽으로 표기되는 일반적인 화학식으로 치환기를 설명하는 경우, 상기 치환기는 또한 구조식을 오른쪽에서 왼쪽으로 표기할 때 획득하는 화학적으로 동등한 치환기를 포함한다. 예를 들어, -CH₂O-는 -OCH₂-와 같다.

본문에 사용된 섹션 제목은 문장을 구성하기 위한 목적으로만 사용되고, 상기 주제에 대한 한정으로 해석되어서는 아니 된다. 본문에 인용된 모든 문헌 또는 문헌의 일부는 특허, 특허출원, 문장, 서적, 매뉴얼 및 논문을 포함하지만 이에 한정되지 않고, 인용 방식을 통해 본문에 모두 인용된다.

본문에 정의된 일부 화학 기는 앞에 부호를 간소화하여 상기 기에 존재하는 총 탄소원자수를 나타낸다. 예를 들어, C1-C6 알킬은 총 1개 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 아래에 정의된 알킬을 의미한다. 간소화된 부호에서 총 탄소원자수는 상기 기의 치환기에 존재할 수 있는 탄소를 포함하지 않는다.

전술한 것 이외에, 본 발명의 명세서 및 특허청구범위에 사용되는 경우, 특별한 언급이 없는 한 하기 용어는 하기와 같은 의미를 갖는다.

본 발명에서, 용어 “할로겐”은 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 의미한다.

“히드록실”은 -OH기를 의미한다.

“히드록시알킬”은 히드록실(-OH)에 의해 치환된 아래에 정의된 바와 같은 알킬을 의미한다.

“카르보닐”은 -C(=O)-기를 의미한다.

“니트로”는 -NO₂를 의미한다.

“시아노”는 -CN을 의미한다.

“아미노”는 -NH₂를 의미한다.

“치환된 아미노”는 아래에 정의된 바와 같은 1개 또는 2개의 알킬, 알킬카르보닐, 방향족 시클릴알킬, 헤테로 방향족 시클릴알킬에 의해 치환된 아미노, 예를 들어 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 알킬아미도, 방향족 시클릴알킬아미노, 헤테로 방향족 시클릴알킬아미노를 의미한다.

“카르복실”은 -COOH를 의미한다.

본 발명에서, 기 또는 다른 기의 일부(예를 들어, 할로겐에 의해 치환된 알킬 등 기에서 사용)로서, 용어 “알킬”은 탄소 원자 및 수소 원자로만 구성되고 예를 들어 1개 내지 12개(바람직하게는 1개 내지 8개, 보다 바람직하게는 1개 내지 6개)의 탄소 원자를 가지며 단일 결합에 의해 분자의 나머지 부분에 연결되는 완전히 포화된 직쇄 또는 분지쇄의 탄화수소사슬기를 의미하고, 예를 들어 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 헵틸, 2-메틸헥실, 3-메틸헥실, 옥틸, 노닐 및 데실 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 경우, 용어 “알킬”은 바람직하게는 1개 내지 6개의 탄소 원자를 포함하는 알킬을 의미한다.

본 발명에서, 기 또는 다른 기의 일부로서, 용어 “알케닐”은 탄소 원자 및 수소 원자로만 구성되고 적어도 하나의 이중 결합을 포함하며 예를 들어 2개 내지 14개(바람직하게는 2개 내지 10개, 보다 바람직하게는 2개 내지 6개)의 탄소 원자를 가지고 단일 결합에 의해 분자의 나머지 부분에 연결되는 직쇄 또는 분지쇄의 탄화수소사슬기를 의미하며, 예를 들어 비닐, 프로페닐, 알릴, 부트-1-에닐, 부트-2-에닐, 펜트-1-에닐, 펜트-1,4-디에닐 등이지만 이에 한정되지 않는다.

본문의 기 또는 다른 기의 일부로서, 용어 “알키닐”은 탄소 원자 및 수소 원자로만 구성되고 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하며 예를 들어 2개 내지 14개(바람직하게는 2개 내지 10개, 보다 바람직하게는 2개 내지 6개)의 탄소 원자를 가지고 단일 결합에 의해 분자의 나머지 부분에 연결되는 직쇄 또는 분지쇄의 탄화수소사슬기를 의미하며, 예를 들어 에티닐, 1-프로피닐, 1-부티닐, 헵티닐, 옥티닐 등이지만 이에 한정되지 않는다.

본 발명에서, 기 또는 다른 기의 일부로서, 용어 “탄소 고리기”는 탄소 원자 및 수소 원자로만 구성된 안정적인 비방향족 단일 고리 또는 다중 고리 탄화수소기를 의미하고, 이는 축합 고리 시스템, 브리지 고리 시스템 또는 스피로 고리 시스템을 포함하며, 3개 내지 15개의 탄소 원자를 가지고, 바람직하게는 3개 내지 10개의 탄소 원자를 가지며, 보다 바람직하게는 3개 내지 8개의 탄소 원자를 가지고, 포화 또는 불포화로 임의의 적합한 탄소 원자를 통해 단일 결합에 의해 분자의 나머지 부분에 연결될 수 있다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 탄소 고리기 중의 탄소 원자는 선택적으로 산화될 수 있다. 탄소 고리기의 구현예는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 시클로옥틸, 아다만틸, 2,3-인다닐, 옥타히드로-4,7-메틸렌-1H-인데닐, 1,2,3,4-테트라히드로-나프틸, 5,6,7,8-테트라히드로-나프틸, 시클로펜테닐, 시클로헥세닐, 시클로헥사디에닐, 1H-인데닐, 8,9-디히드로-7H-벤조시클로헵텐-6-일, 6,7,8,9-테트라히드로-5H-벤조시클로헵테닐, 5,6,7,8,9,10-헥사히드로-벤조시클로옥테닐, 플루오레닐, 비시클로[2.2.1]헵틸, 7,7-디메틸-비시클로[2.2.1]헵틸, 비시클로[2.2.1]헵테닐, 비시클로[2.2.2]옥틸, 비시클로[3.1.1]헵틸, 비시클로[3.2.1]옥틸, 비시클로[2.2.2]옥테닐, 비시클로[3.2.1]옥테닐 및 옥타히드로-2,5-메틸렌-병환펜틸렌（octahydro-2, 5-methylene-cyclopentadienyl）등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

본 발명에서, 기 또는 다른 기의 일부로서, 용어 “헤테로 고리기”는 2개 내지 14개의 탄소 원자 및 질소, 인, 산소 및 황으로부터 선택되는 1개 내지 6개의 헤테로 원자로 구성된 안정적인 3원 내지 20원 비방향족 고리형 기를 의미한다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 헤테로 고리기는 단일 고리, 이중 고리, 삼중 고리 또는 다중 고리의 고리 시스템일 수 있고, 이는 축합 고리 시스템, 브리지 고리 시스템 또는 스피로 고리 시스템을 포함할 수 있으며; 헤테로 고리기 중의 질소, 탄소 또는 황 원자는 선택적으로 산화될 수 있고; 질소 원자는 선택적으로 4차화될 수 있으며; 헤테로 고리기는 부분 또는 완전 포화일 수 있다. 헤테로 고리기는 탄소 원자 또는 헤테로 원자를 통해 단일 결합에 의해 분자의 나머지 부분에 연결될 수 있다. 축합 고리를 포함하는 헤테로 고리기에서, 하나 이상의 고리는 아래에 정의된 방향족 고리기 또는 헤테로 방향족 고리기일 수 있고, 조건은 분자의 나머지 부분과의 연결점이 비방향족 고리 원자인 것이다. 본 발명의 목적상, 헤테로 고리기는 바람직하게는 질소, 산소 및 황으로부터 선택되는 1개 내지 3개의 헤테로 원자를 포함하는 안정적인 4원 내지 11원 비방향족 단일 고리, 이중 고리, 브리지 고리 또는 스피로 고리 기이고, 보다 바람직하게는 질소, 산소 및 황으로부터 선택되는 1개 내지 3개의 헤테로 원자를 포함하는 안정적인 4원 내지 8원 비방향족 단일 고리, 이중 고리, 브리지 고리 또는 스피로 고리 기이다. 헤테로 고리기의 구현예는 피롤리디닐, 모르폴리닐, 피페라지닐, 호모피페라지닐, 피페리딜, 티오모르폴리닐, 2,7-디아자-스피로[3.5]노난-7-일, 2-옥사-6-아자-스피로[3.3]헵탄-6-일, 2,5-디아자-비시클로[2.2.1]헵탄-2-일, 아제티디닐, 피라닐, 테트라히드로피라닐, 티아피라닐, 테트라히드로푸라닐, 옥사지닐, 디옥솔라닐, 테트라히드로이소퀴놀리닐, 데카히드로이소퀴놀리닐, 이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 퀴나지닐, 티아졸리디닐, 이소티아졸리디닐, 이속사졸리디닐, 인돌리닐, 옥타히드로인돌릴, 옥타히드로이소인돌릴, 피롤리디닐, 피롤리디닐, 프탈이미도 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

본 발명에서, 기 또는 다른 기의 일부로서, 용어 “방향족 고리(기)”는 6개 내지 18개의 탄소 원자(바람직하게는 6개 내지 10개의 탄소 원자를 가짐)를 갖는 공액 탄화수소 고리 시스템 기를 의미한다. 본 발명의 목적상, 방향족 고리(기)는 단일 고리, 이중 고리, 삼중 고리 또는 다중 고리의 고리 시스템일 수 있고, 위에 정의된 탄소 고리기 또는 헤테로 고리기에 축합될 수도 있으며, 조건은 방향족 고리(기)가 방향족 고리 상의 원자를 통해 단일 결합에 의해 분자의 나머지 부분에 연결되는 것이다. 방향족 고리(기)의 구현예는 페닐, 나프틸, 안트릴, 페난트릴, 플루오레닐, 2,3-디히드로-1H-이소인돌릴, 2-벤족사졸리논, 2H-1,4-벤족사진-3(4H)-온-7-일 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

본 발명에서, 용어 “방향족 시클릴알킬”은 위에 정의된 방향족 고리기에 의해 치환된 위에 정의된 알킬을 의미한다.

본 발명에서, 기 또는 다른 기의 일부로서, 용어 “헤테로 방향족 고리(기)”는 고리 내에 1개 내지 15개의 탄소 원자(바람직하게는 1개 내지 10개의 탄소 원자를 가짐) 및 질소, 산소 및 황으로부터 선택되는 1개 내지 6개의 헤테로 원자를 갖는 5원 내지 16원 공액 고리 시스템 기를 의미한다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 헤테로 방향족 고리(기)는 단일 고리, 이중 고리, 삼중 고리 또는 다중 고리의 고리 시스템일 수 있고, 위에 정의된 탄소 고리기 또는 헤테로 고리기에 축합될 수도 있으며, 조건은 헤테로 방향족 고리(기)가 헤테로 방향족 고리 상의 원자를 통해 단일 결합에 의해 분자의 나머지 부분에 연결되는 것이다. 헤테로 방향족 고리(기) 중의 질소, 탄소 또는 황 원자는 선택적으로 산화될 수 있고; 질소 원자는 선택적으로 4차화될 수 있다. 본 발명의 목적상, 헤테로 방향족 고리(기)는 바람직하게는 질소, 산소 및 황으로부터 선택되는 1개 내지 5개의 헤테로 원자를 포함하는 안정적인 5원 내지 12원 방향족 기이고, 보다 바람직하게는 질소, 산소 및 황으로부터 선택되는 1개 내지 4개의 헤테로 원자를 포함하는 안정적인 5원 내지 10원 방향족 기 또는 질소, 산소 및 황으로부터 선택되는 1개 내지 3개의 헤테로 원자를 포함하는 5원 내지 6원 방향족 기이다. 헤테로 방향족 고리(기)의 구현예는 티에닐, 이미다졸릴, 피라졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 옥사디아졸릴, 이속사졸릴, 피리딜, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 벤즈이미다졸릴, 벤조피라졸릴, 인돌릴, 푸라닐, 피롤릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 트리아지닐, 인돌리지닐, 이소인돌릴, 인다졸릴, 이소인다졸릴, 퓨리닐, 퀴놀릴, 이소퀴놀릴, 디질화나프탈렌（diazanaphthalenyl）, 나프티리디닐, 퀴녹살리닐, 프테리디닐, 카바졸릴, 카볼리닐, 페난트리디닐, 페난트롤리닐, 아크리디닐, 페나지닐, 이소티아졸릴, 벤조티아졸릴, 벤조티에닐, 옥사트리아졸릴, 신놀리닐, 퀴나졸리닐, 티오페닐, 인돌리지닐, o-페난트롤리닐, 이속사졸릴, 페녹사지닐, 페노티아지닐, 4,5,6,7-테트라히드로벤조[b]티에닐, 나프토피리딜, [1,2,4]트리아졸로[4,3-b]피리다진, [1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진, [1,2,4]트리아졸로[4,3-c]피리미딘, [1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리딘, 이미다조[1,2-a]피리딘, 이미다조[1,2-b]피리다진, 이미다조[1,2-a]피라진 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

본 발명에서, 용어 “헤테로 방향족 시클릴알킬”은 위에 정의된 헤테로 방향족 고리기에 의해 치환된 위에 정의된 알킬을 의미한다.

본 발명에서, 용어 “부재”는 위에 정의된 기의 양측이 화학 결합에 의해 직접 연결됨을 의미한다. 예를 들어, “A-B-C에서 B는 부재”는 “A-C”를 나타낸다.

본 발명에서, “” 중의 “”는 기 R의 연결 위치를 나타낸다.

본 발명에서, 특허청구범위에 달리 명시되지 않는 한, “선택적으로”, “선택적으로 치환된”은 추후 설명되는 이벤트 또는 상황이 발생하거나 발생하지 않을 수 있고 상기 설명이 상기 이벤트 또는 상황이 발생하는 경우와 발생하지 않은 경우를 동시에 포함함을 나타낸다. 예를 들어, “선택적으로 치환된 방향족 고리기”는 방향족 고리기 상의 수소가 치환되거나 치환되지 않고 상기 설명이 치환된 방향족 고리기와 치환되지 않은 방향족 고리기를 동시에 포함함을 나타낸다. 예를 들어, 치환기가 명시적으로 나열되지 않은 경우, 본문에 사용된 용어 “선택적으로 치환된”, “치환된” 또는 “...에 의해 치환”은 주어진 원자 또는 기 상의 하나 이상의 수소 원자가 독립적으로 하나 이상, 예를 들어 1, 2, 3 또는 4개의 치환기에 의해 치환됨을 의미하고, 상기 치환기는 독립적으로 중수소(D), 할로겐, -OH, 메르캅토, 시아노, -CD₃, -C₁-C₆ 알킬(바람직하게는, -C_1-3 알킬), C₂-C₆ 알케닐, C₂-C₆ 알키닐, 시클로알킬(바람직하게는, 3-8원 시클로알킬), 방향족 고리기, 헤테로 고리기(바람직하게는, 3-8원 헤테로 고리기), 헤테로 방향족 고리기, 방향족 고리기-C₁-C₆ 알킬-, 헤테로 방향족 고리기-C₁-C₆ 알킬-, C₁-C₆ 할로알킬-, -OC₁-C₆ 알킬(바람직하게는, -OC₁-C₃ 알킬), -OC₂-C₆ 알케닐, -OC₁-C₆ 알킬페닐, -C₁-C₆ 알킬-OH(바람직하게는, -C₁-C₄ 알킬-OH), -C₁-C₆ 알킬-SH, -C₁-C₆ 알킬-O-C₁-C₆ 알킬, -OC₁-C₆ 할로알킬, -NH₂, -C₁-C₆ 알킬-NH₂(바람직하게는, -C₁-C₃ 알킬-NH₂), -N(C₁-C₆ 알킬)₂(바람직하게는, -N(C₁-C₃ 알킬)₂), -NH(C₁-C₆ 알킬)(바람직하게는, -NH(C₁-C₃ 알킬)), -N(C₁-C₆ 알킬)(C₁-C₆ 알킬페닐), -NH(C₁-C₆ 알킬페닐), 니트로, -C(O)-OH, -C(O)OC₁-C₆ 알킬(바람직하게는, -C(O)OC₁-C₃ 알킬), -CONRⁱRⁱⁱ(여기서 Rⁱ 및 Rⁱⁱ는 H, D 및 C_1-6 알킬이고, 바람직하게는 C_1-3 알킬임), -NHC(O)(C₁-C₆ 알킬), -NHC(O)(페닐), -N(C₁-C₆ 알킬)C(O)(C₁-C₆ 알킬), -N(C₁-C₆ 알킬)C(O)(페닐), -C(O)C₁-C₆ 알킬, -C(O)헤테로 방향족 고리기(바람직하게는, -C(O)-5-7원 헤테로 방향족 고리기), -C(O)C₁-C₆ 알킬페닐, -C(O)C₁-C₆ 할로알킬, -OC(O)C₁-C₆ 알킬(바람직하게는, -OC(O)C₁-C₃ 알킬), -S(O)₂-C₁-C₆ 알킬, -S(O)-C₁-C₆ 알킬, -S(O)₂-페닐, -S(O)₂-C₁-C₆ 할로알킬, -S(O)₂NH₂, -S(O)₂NH(C₁-C₆ 알킬), -S(O)₂NH(페닐), -NHS(O)₂(C₁-C₆ 알킬), -NHS(O)₂(페닐) 및 -NHS(O)₂(C₁-C₆ 할로알킬)로부터 선택되고, 여기서 상기 알킬, 시클로알킬, 페닐, 방향족 고리기, 헤테로 고리기 및 헤테로 방향족 고리기 중 각각은 선택적으로 할로겐, -OH, -NH₂, 시클로알킬, 3-8원 헤테로 고리기, C₁-C₄ 알킬, C₁-C₄ 할로알킬-, -OC₁-C₄ 알킬, -C₁-C₄ 알킬-OH, -C₁-C₄ 알킬-O-C₁-C₄ 알킬, -OC₁-C₄ 할로알킬, 시아노, 니트로, -C(O)-OH, -C(O)OC₁-C₆ 알킬, -CON(C₁-C₆ 알킬)₂, -CONH(C₁-C₆ 알킬), -CONH₂, -NHC(O)(C₁-C₆ 알킬), -NH(C₁-C₆ 알킬)C(O)(C₁-C₆ 알킬), -SO₂(C₁-C₆ 알킬), -SO₂(페닐), -SO₂(C₁-C₆ 할로알킬), -SO₂NH₂, -SO₂NH(C₁-C₆ 알킬), -SO₂NH(페닐), -NHSO₂(C₁-C₆ 알킬), -NHSO₂(페닐) 및 -NHSO₂(C₁-C₆ 할로알킬)로부터 선택되는 하나 이상의 치환기에 의해 추가로 치환된다. 하나의 원자 또는 기가 다수의 치환기에 의해 치환되는 경우, 상기 치환기는 동일하거나 상이할 수 있다. 본문에 사용된 용어 “모이어티”, “구조 모이어티”, “화학 모이어티”, “기”, “화학 기”는 분자 중의 특정 단편 또는 관능기를 의미한다. 화학 모이어티는 통상적으로 분자에 삽입되거나 부착된 화학 실체로 간주된다.

“입체이성질체”는 동일한 원자로 구성되고 동일한 결합에 의해 결합되지만 상이한 3차원 구조를 갖는 화합물을 의미한다. 본 발명은 다양한 입체이성질체 및 이의 혼합물을 포함한다.

본 발명의 화합물에 알켄 이중 결합이 포함되는 경우, 달리 명시되지 않는한 본 발명의 화합물은 E- 및 Z- 기하이성질체를 포함하는 것으로 의도된다.

“호변이성질체”는 양성자가 분자의 한 원자에서 동일한 분자의 다른 원자로 전달되어 형성된 이성질체를 의미한다. 본 발명의 화합물의 모든 호변이성질체 형태도 본 발명의 범위 내에 포함된다.

본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 하나 이상의 키랄 탄소 원자를 포함할 수 있고, 따라서 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및 다른 입체이성질체 형태를 생성할 수 있다. 각각의 키랄 탄소 원자는 입체화학에 기반하여 (R)- 또는 (S)-로 정의될 수 있다. 본 발명은 모든 가능한 이성질체 및 이의 라세미체와 광학 순수 형태를 포함하는 것으로 의도된다. 본 발명의 화합물의 제조는 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체를 원료 또는 중간체로 선택할 수 있다. 광학 활성의 이성질체는 키랄 신톤 또는 키랄 시약을 사용하여 제조하거나, 결정화 및 키랄 크로마토그래피 등 방법과 같은 일반적인 기술을 사용하여 분해할 수 있다.

개별 이성질체의 제조/분리를 위한 일반적인 기술은 적합한 광학 순수 전구체로부터의 키랄 합성, 또는 예를 들어 키랄 고성능 액체 크로마토그래피를 사용하여 라세미체(또는 염 또는 유도체의 라세미체)의 분해를 포함하고, 예를 들어 Gerald Gubitz and Martin G. Schmid (Eds.), Chiral Separations, Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology, Vol. 243, 2004; A.M. Stalcup, Chiral Separations, Annu. Rev. Anal. Chem. 3:341-63, 2010; Fumiss et al. (eds.), VOGEL'S ENCYCLOPEDIA OF PRACTICAL ORGANIC CHEMISTRY 5.sup.TH ED., Longman Scientific and Technical Ltd., Essex, 1991, 809-816; Heller, Acc. Chem. Res. 1990, 23, 128을 참조할 수 있다.

본 발명에서, 용어 “약학적으로 허용 가능한 염”은 약학적으로 허용 가능한 산 부가염 및 약학적으로 허용 가능한 염기 부가염을 포함한다.

“약학적으로 허용 가능한 산 부가염”은 다른 부작용 없이 유리염기의 생물학적 유효성을 유지할 수 있는 무기산 또는 유기산과 형성된 염을 의미한다. 무기산염은 염산염, 브롬화수소산염, 황산염, 질산염, 인산염 등을 포함하지만 이에 한정되지 않고; 유기산염은 포름산염, 아세트산염, 2,2-디클로로아세트산염, 트리플루오로아세트산염, 프로피온산염, 카프론산염, 카프릴산염, 카프르산염, 운데실렌산염, 글리콜산염, 글루콜산염, 젖산염, 세바스산염, 아디핀산염, 글루타르산염, 말론산염, 옥살산염, 말레산염, 숙신산염, 푸마르산염, 타타르산염, 시트르산염, 팔미트산염, 스테아르산염, 올레산염, 계피산염, 라우린산염, 말산염, 글루탐산염, 피로글루탐산염, 아스파르트산염, 벤조산염, 메탄술폰산염, 벤젠술폰산염, p-톨루엔술폰산염, 알긴산염, 아스코브산염, 살리실산염, 4-아미노살리실산염, 나프탈렌디술폰산염 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 이러한 염은 본 분야에 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다.

“약학적으로 허용 가능한 염기 부가염”은 다른 부작용 없이 유리산의 생물학적 유효성을 유지할 수 있는 무기염기 또는 유기염기와 형성된 염을 의미한다. 무기염기로부터 유도된 염은 나트륨염, 칼륨염, 리튬염, 암모늄염, 칼슘염, 마그네슘염, 철염, 아연염, 구리염, 망간염, 알루미늄염 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 바람직한 무기염은 암모늄염, 나트륨염, 칼륨염, 칼슘염 및 마그네슘염이다. 유기염기로부터 유도된 염은 1급 아민, 2급 아민 및 3급 아민, 천연 치환된 아민, 고리형 아민 및 염기성 이온 교환 수지를 포함하는 치환된 아민, 예를 들어 암모니아, 이소프로필아민, 트리메틸아민, 디에틸아민, 트리에틸아민, 트리프로필아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 디메틸에탄올아민, 2-디메틸아미노에탄올, 2-디에틸아미노에탄올, 디시클로헥실아민, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 카페인, 프로카인, 콜린, 베타인, 에틸렌디아민, 글루코사민, 메틸글루카민민, 테오브로민, 퓨린, 피페라진, 피페리딘, N-에틸피페리딘, 폴리아민 수지 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 바람직한 유기염기는 이소프로필아민, 디에틸아민, 에탄올아민, 트리메틸아민, 디시클로헥실아민, 콜린 및 카페인을 포함한다. 이러한 염은 본 분야에 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다.

본 발명에서, “약학적 조성물”은 본 발명의 화합물과 포유동물(예를 들어, 인간)에게 생물학적 활성 화합물을 전달하기 위해 본 분야에서 통상적으로 허용되는 비히클의 제제를 의미한다. 상기 비히클은 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다. 약학적 조성물의 목적은 유기체의 투여를 촉진하고 활성 성분의 흡수를 촉진하여 생물학적 활성을 발휘하는 것이다.

본문에 사용된 용어 “약학적으로 허용 가능한”은 본 발명의 화합물의 생물학적 활성 또는 특성에 영향을 미치지 않고 상대적으로 무독성인 물질(예를 들어, 담체 또는 희석제)을 의미하며, 즉 상기 물질은 불리한 생물학적 반응을 일으키거나 조성물에 포함된 임의의 성분과 불리한 방식으로 상호작용하지 않고 개인에게 사용될 수 있다.

본 발명에서, “약학적으로 허용 가능한 담체”는 관련 정부 규제 기관에서 인간 또는 가축 사용에 허용 가능한 것으로 승인된 임의의 보조제, 담체, 부형제, 유동화제, 감미제, 희석제, 방부제, 염료/착색제, 향미제, 계면활성제, 습윤제, 분산제, 현탁화제, 안정화제, 등장화제, 용매 또는 유화제를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

본 발명에 따른 “종양”은 폐암, 췌장암, 결직장암, 백혈병, 유잉육종, 유방암, 전립선암, T 세포 림프종, B 세포 림프종, 악성 횡문근종, 활막육종, 자궁내막종, 위암, 간암, 신장암, 흑색종, 난소암, 뇌 신경교종, 담관암, 비인두암, 자궁경부암, 두경부암, 식도암, 갑상선암 및 방광암 등 질환을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

본문에 사용된 용어 “예방하는”, “예방” 및 “방지”는 환자에서 질환 또는 병증이 발생하거나 악화될 가능성을 감소시키는 것을 포함한다.

본문에 사용된 용어 “치료” 및 다른 유사한 유의어는,

(i) 특히 포유동물이 질환 또는 병증에 걸리기 쉽지만 상기 질환 또는 병증을 앓고 있는 것으로 진단되지 않은 경우, 포유동물에서 질환 또는 병증이 나타나는 것을 예방하는 것;

(ii) 질환 또는 병증을 억제하는 것, 즉 이의 발달을 저지하는 것;

(iii) 질환 또는 병증을 완화하는 것, 즉 상기 질환 또는 병증의 상태를 퇴행시키는 것; 또는

(iv) 상기 질환 또는 병증으로 인한 증상을 경감하는 것을 포함한다.

본문에 사용된 용어 “유효량”, “치료적 유효량” 또는 “약학적 유효량”은 복용 후 치료되는 질환 또는 병증의 하나 이상의 증상을 어느 정도 완화하기에 충분한 적어도 하나의 약제 또는 화합물의 양을 의미한다. 그 결과는 징후, 증상 또는 병인의 감소 및/또는 완화, 또는 생물학적 시스템의 임의의 다른 원하는 변화일 수 있다. 예를 들어, 치료를 위한 “유효량”은 임상적으로 유의한 병증 완화 효과를 제공하는 데 필요한 본문에 공개된 화합물을 포함하는 조성물의 양이다. 용량 증대 시험과 같은 기술을 사용하여 임의의 개체 병례에 적합한 유효량을 측정할 수 있다.

본문에 사용된 용어 “복용”, “사용”, “투여” 등은 화합물 또는 조성물을 생물학적 작용을 하는 원하는 부위에 전달할 수 있는 방법을 의미한다. 이러한 방법은 경구 경로, 십이지장 경로, 비경구 주사(정맥내, 피하, 복막내, 근육내, 동맥내 주사 또는 주입 포함), 국소 투여 및 직장 투여를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 당업자는 본문에 따른 화합물 및 방법에 사용될 수 있는 투여 기술을 잘 알고 있고, 예를 들어 Goodman and Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, current ed.; Pergamon; and Remington's, Pharmaceutical Sciences (current edition), Mack Publishing Co., Easton, Pa에 논의된 것들이다. 바람직한 실시형태에서, 본문에 논의된 화합물 및 조성물은 경구를 통해 투여된다.

본문에 사용된 용어 “약물 조합”, “약물 병용”, “병용”, “다른 치료의 사용”, “다른 치료제의 사용” 등은 하나 이상의 활성 성분을 혼합하거나 조합하여 얻은 약물 치료를 의미하고, 이는 활성 성분의 고정 및 비고정 조합을 포함한다. 용어 “고정 조합”은 적어도 하나의 본문에 따른 화합물 및 적어도 하나의 협동 약제를 단일 실체 또는 단일 제형의 형태로 환자에게 동시에 투여하는 것을 의미한다. 용어 “비고정 조합”은 적어도 하나의 본문에 따른 화합물 및 적어도 하나의 협동 약제를 단일 실체의 형태로 환자에게 동시에 투여, 병용하거나, 가변 간격 시간으로 투여하는 것을 의미한다. 이들은 칵테일 요법, 예를 들어 3가지 또는 그 이상의 활성 성분의 투여에도 적용된다.

당업자는 또한 하기 방법에서 중간체 화합물 관능기를 적절한 보호기로 보호해야 함을 이해해야 한다. 이러한 관능기는 히드록실, 아미노, 메르캅토 및 카르복실산을 포함한다. 적합한 히드록실 보호기는 트리알킬실릴 또는 디방향족 시클릴알킬실릴(예를 들어 tert-부틸디메틸실릴, tert-부틸디페닐실릴 또는 트리메틸실릴), 테트라히드로피라닐, 벤질 등을 포함한다. 적합한 아미노, 아미디노 및 구아니디노의 보호기는 tert-부톡시카르보닐, 벤질옥시카르보닐 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 적합한 메르캅토 보호기는 -C(O)-R”(여기서 R”는 알킬, 방향족 고리기 또는 방향족 시클릴알킬임), p-메톡시벤질, 트리페닐메틸 등을 포함한다. 적합한 카르복실 보호기는 알킬, 방향족 고리기 또는 방향족 시클릴알킬 에스테르류를 포함한다.

보호기는 당업자에게 공지된 본문에 따른 표준 기술에 따라 도입 및 제거될 수 있다. 보호기의 사용은 Greene, T. W.P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organi Synthesis, (1999), 4th Ed., Wiley에 기술되어 있다. 보호기는 또한 폴리머 수지일 수 있다.

유익한 효과

아래에서는 구체적인 실시형태를 통해 본 발명의 기술적 해결수단을 추가로 설명한다. 당업자는 상기 실시예가 본 발명의 이해를 돕기 위한 것일 뿐 본 발명의 구체적인 한정으로 간주해서는 아니 됨을 이해해야 한다.

하기 실시예에서 구체적인 조건을 제시하지 않은 실험 방법은 통상적으로 일반적인 조건을 따르거나, 또는 제조업체에서 권장하는 조건을 따른다. 다른 설명이 없는 한, 백분율 및 분량은 중량백분율 및 중량부이다.

하기 실시예에서 사용되는 실험 재료 및 시약은 특별한 설명이 없는 한 상업적 채널에서 획득할 수 있다.

각 실시예에서, ¹H NMR는 BRUKER AVANCE NEO 400 MHz 핵자기 공명기로 기록하고, 화학 이동은 δ(ppm)으로 나타내며; 액체-질량 분석(LCMS)은 Shimadzu LC-20AD, SIL-20A, CTO-20AC, SPD-M20A, CBM-20A, LCMS-2020 질량 분석기로 기록하고; 분취용 HPLC 분리는 Gilson -281 모델의 액체 크로마토그래피를 사용한다.

중간체의 제조

1, 중간체 A의 제조

중간체 A의 합성 경로는 하기와 같다.

(1) 화합물 A-1(59.9 g, 454 mmol)의 톨루엔(500 mL) 용액에 화합물 A-2(50.0 g, 413 mmol), 테트라에틸티타네이트(188 g, 825 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 130℃에서 12시간 교반하였다. 반응액에 물(400 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(400 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(500 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 0 : 1)로 분리하여 화합물 A-3을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 236, 실측값 236.

(2) 화합물 A-3(50.8 g, 216 mmol), 에틸 아세테이트(95.1 g, 1.08 mol)를 테트라히드로푸란(500 mL)에 용해시키고, -78℃에서 질소 보호하에 리튬 디이소프로필아미드(2 mol/L, 216 mL, 테트라히드로푸란 용액)을 적가하며, 반응액을 -78℃에서 3시간 교반하였다. 0℃로 온도를 올린 후, 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(500 mL)을 첨가하여 반응을 퀀칭하고, 에틸 아세테이트(1000 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 감압 농축하며, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 0 : 1)로 분리하여 화합물 A-4를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 324, 실측값 324.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.18-7.26 (m, 4H), 5.21 (s, 1H), 4.17 (qd, J = 7.2, 3.2 Hz, 2H), 3.17 (ddd, J = 16.4, 8.4, 5.6 Hz, 1H), 2.88-2.93 (m, 1H), 2.73-2.87 (m, 2H), 2.64-2.72 (m, 1H), 2.32 (ddd, J = 13.6, 8.4, 5.6 Hz, 1H), 1.24-1.27 (m, 3H), 1.19 (s, 9H).

(3) 화합물 A-4(15.6 g, 48.2 mmol)의 에탄올(100 mL) 용액에 염산의 디옥산 용액(4 mol/L, 30 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 5시간 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 A-5의 염산염을 얻었다.

MS-ESI [M-NH₂+H]+, 계산값 203, 실측값 203.

(4) 화합물 A-5의 염산염(12.0 g, 46.9 mmol)의 에탄올(50.0 mL) 용액에 화합물 A-6(46.9 g, 469 mmol), 산화구리(373 mg, 4.69 mmol), 트리에틸아민(4.75 g, 46.9 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 85℃의 밀봉된 튜브에서 4시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(500 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(500 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(500 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 0 : 1)로 분리하여 화합물 A-7을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 320, 실측값 320.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.13-7.26 (m, 4H), 4.09-4.15 (m, 4H), 2.87-2.99 (m, 2H), 2.76 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 2.63 (br d, J = 14.8 Hz, 1H), 2.54 (dd, J = 11.2, 6.4 Hz, 1H), 2.42-2.45 (m, 2H), 2.28-2.36 (m, 1H), 2.17 (ddd, J = 13.2, 8.4, 4.8 Hz, 1H), 1.18-1.26 (m, 6H).

(5) 화합물 A-7(13.7 g, 42.9 mmol)의 에탄올(100 mL) 용액에 파라포름알데히드(6.44 g), 나트륨 시아노보로하이드라이드(8.09 g, 129 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(150 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(150 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 3 : 1)로 분리하여 화합물 A-8을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 334, 실측값 334.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.11-7.26 (m, 4H), 4.07-4.12 (m, 2H), 3.81-3.97 (m, 2H), 2.79-3.00 (m, 3H), 2.74-2.78 (m, 1H), 2.57-2.73 (m, 2H), 2.24-2.48 (m, 4H), 2.17 (s, 3H), 1.22-1.26 (m, 3H), 1.01 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

(6) -78℃에서 화합물 A-8(13.4 g, 40.2 mmol)의 테트라히드로푸란(500 mL) 용액에 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드(1 mol/L, 121 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -78℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(500 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(500 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(500 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 A를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 288, 실측값 288.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.19-7.27 (m, 4H), 4.20-4.31 (m, 2H), 3.44-3.61 (m, 1H), 3.18-3.31 (m, 1H), 2.90-2.99 (m, 2H), 2.69 (br t, J = 13.2 Hz, 1H), 2.30-2.44 (m, 1H), 2.16-2.29 (m, 1H), 2.06-2.15 (m, 3H), 1.61-1.96 (m, 2H), 1.30-1.34 (m, 3H).

실시예 1 화합물 1의 합성

(1) 중간체 A(2.0 g, 6.96 mmol)의 에탄올(30.0 mL) 용액에 화합물 1-1(1.06 g, 13.9 mmol) 및 나트륨 에톡시드(1.42 g, 20.9 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 에탄올(15.0 mL) 및 물(5.0 mL)을 첨가하며, 염산(1 mol/L)으로 pH 값을 6으로 조절하였다. 고체 석출 후, 여과하고, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 1-2를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 300, 실측값 300.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.43 (br s, 1H), 12.28 (br s, 1H), 7.23-7.27 (m, 3H), 7.21 (br s, 1H), 3.49 (br d, J = 16.8 Hz, 1H), 3.05 (br d, J = 16.4 Hz, 1H), 2.84-2.95 (m, 2H), 2.57-2.69 (m, 1H), 2.40-2.48 (m, 1H), 2.15 (dt, J = 13.2, 8.4 Hz, 1H), 1.98 (s, 3H), 1.59-1.69 (m, 1H).

(2) 화합물 1-2(1.66 g, 5.54 mmol)의 수용액(15.0 mL) 에 수산화나트륨(443 mg, 11.1 mmol), 디메틸 설페이트(1.93 mg, 15.3 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응액에 물(100 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(100 mL × 3)로 추출하며, 유기상을 병합하고 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 감압 농축하며, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 1 : 2)로 분리하여 화합물 1-3을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 314, 실측값 314.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.66 (br s, 1H), 7.21-7.26 (m, 3H), 7.15-7.20 (m, 1H), 3.55 (br d, J = 17.2 Hz, 1H), 3.12-3.20 (m, 1H), 2.90 (br t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.77 (br d, J = 17.6 Hz, 1H), 2.54 (br d, J = 18.4 Hz, 1H), 2.44 (s, 3H), 2.18 (dt, J = 13.2, 8.4 Hz, 1H), 2.00 (s, 3H), 1.61 (dt, J = 13.2, 6.4 Hz, 1H).

(3) 화합물 1-3(840 mg, 2.68 mmol)의 클로로포름(4.0 mL) 용액에 옥시염화인(6.60 g, 43.0 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 얼음물(50.0 mL)을 첨가하며, 디클로로메탄(50.0 mL × 1)으로 추출하고, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(50.0 mL × 2) 및 포화 식염수(500 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하여, 화합물 1-4를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 332, 실측값 332.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.27 (br s, 1H), 7.18-7.26 (m, 3H), 3.95 (br d, J = 16.8 Hz, 1H), 3.48-3.60 (m, 1H), 3.04-3.22 (m, 1H), 2.97-3.04 (m, 1H), 2.89-2.97 (m, 2H), 2.54 (s, 3H), 2.23-2.31 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 1.65-1.71 (m, 1H).

(4) 화합물 1-4(200 mg, 603 μmol)의 디클로로메탄(5.0 mL) 용액에 m-클로로퍼옥시벤조산(123 mg, 606 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 0℃에서 5시간 교반하였다. 반응액에 포화 아황산나트륨 수용액(30.0 mL)을 첨가하고, 디클로로메탄(20.0 mL)으로 추출하며, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(20.0 mL × 2) 및 포화 식염수(20.0 mL × 1)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 감압 농축하여, 화합물 1-5를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 348, 실측값 348.

(5) 화합물 1-5(206 mg, 592 μmol)의 N,N-디메틸포름아미드(10.0 mL) 용액에 화합물 1-6(552 mg, 2.96 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(30.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 5)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 박층 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 10 : 1)로 분리하여 화합물 1-7을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 498, 실측값 498.

(6) 화합물 1-7(32.0 mg, 64.3 μmol)의 테트라히드로푸란(3.0 mL) 용액에 화합물 1-8(22.2 mg, 193 μmol), 나트륨 tert-부톡시드(18.6 mg, 194 μmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(20.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하여 화합물 1-9를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 549, 실측값 549.

(7) 화합물 1-9(35.0 mg, 63.8 μmol)의 디클로로메탄(3.0 mL) 용액에 트리플루오로아세트산(1.0 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 1-10의 트리플루오로아세트산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 449, 실측값 449.

(8) 화합물 1-10의 트리플루오로아세트산염(35.0 mg, 62.2 μmol)의 디클로로메탄(2.0 mL) 용액에 트리에틸아민(31.5 mg, 331 μmol) 및 화합물 1-11(16.9 mg, 187 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(3_Phenomenex Luna C18, 70 mm × 30 mm 3 μm, A: 물(10 mmol/L의 탄산수소암모늄); B: 아세토니트릴, 20%-70%: 40분)로 분리하여 화합물 1을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 503, 실측값 503.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.20-7.31 (m, 4H), 6.81 (dd, J = 16.8, 10.4 Hz, 1H), 6.26 (dd, J = 16.8, 1.6 Hz, 1H), 5.80 (dd, J = 10.4, 1.6 Hz, 1H), 4.34-4.41 (m, 1H), 4.27-4.33 (m, 1H), 3.85 (br d, J = 3.2 Hz, 2H), 3.74-3.81 (m, 2H), 3.63-3.72 (m, 4H), 3.54 (br s, 2H), 3.08 (dt, J = 9.6, 4.8 Hz, 1H), 2.95-3.04 (m, 2H), 2.82-2.94 (m, 2H), 2.70-2.78 (m, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.39-2.46 (m, 1H), 2.35 (q, J = 8.8 Hz, 1H), 2.20 (s, 3H), 2.05-2.13 (m, 1H), 1.85-1.91 (m, 1H), 1.76-1.84 (m, 2H), 1.65-1.74 (m, 1H).

실시예 2 화합물 2의 합성

화합물 2-1(19.2 mg, 213 μmol)의 디클로로메탄(2.0 mL) 용액에 트리에틸아민(108 mg, 1.07 μmol) 및 2-(7-아자벤조트리아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(81.2 mg, 214 μmol)를 첨가하고, 반응액을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 화합물 1-10의 트리플루오로아세트산염(60.0 mg, 107 μmol)을 첨가하고, 0.5시간 동안 계속 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Luna C18, 70 mm × 30 mm 3 μm, A: 물(0.225% 포름산); B: 아세토니트릴, 0%-30%: 35분)로 분리하여 화합물 2의 포름산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 521, 실측값 521.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.25-7.30 (m, 4H), 5.28-5.35 (m, 1H), 5.24 (dd, J = 19.2, 4.0 Hz, 1H), 4.70 (dt, J = 12.4, 3.6 Hz, 1H), 4.47-4.55 (m, 1H), 3.81-3.90 (m, 3H), 3.73-3.78 (m, 4H), 3.61-3.71 (m, 3H), 3.52-3.61 (m, 2H), 3.21 (dt, J = 11.2, 8.0 Hz, 1H), 3.04-3.12 (m, 1H), 3.02 (s, 3H), 2.95-3.01 (m, 2H), 2.88-2.94 (m, 1H), 2.47 (dt, J = 13.2, 8.4 Hz, 1H), 2.32-2.40 (m, 1H), 2.24 (s, 3H), 2.14-2.20 (m, 1H), 2.09 (br dd, J = 14.4, 7.2 Hz, 1H), 1.97-2.04 (m, 1H), 1.89 (ddd, J = 13.2, 8.4, 4.4 Hz, 1H).

실시예 3 화합물 3의 합성

(1) 중간체 1-2(500 mg, 1.67 mmol)의 수용액(10.0 mL) 에 클로로아세트산(1.27 g, 13.9 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 여액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 pH 값을 8로 조절한 다음, 고체가 석출되었다. 여과 후, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 3-1을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 284, 실측값 284.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.01 (s, 1H), 10.76 (s, 1H), 7.22-7.27 (m, 3H), 7.18-7.22 (m, 1H), 3.41-3.45 (m, 1H), 3.02 (br d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.81-2.93 (m, 2H), 2.56 (br d, J = 17.2 Hz, 1H), 2.32 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 2.16 (dt, J = 13.2, 8.4 Hz, 1H), 1.97 (s, 3H), 1.62 (ddd, J = 13.2, 8.4, 4.4 Hz, 1H).

(2) 화합물 3-1(328 mg, 1.16 mmol)을 옥시염화인(4.95 g, 32.3 mmol)에 용해시키고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 얼음물(50.0 mL)을 첨가하며, 디클로로메탄(50.0 mL × 1)으로 추출하고, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(50.0 mL × 2) 및 포화 식염수(500 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하여, 화합물 3-2를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 320, 실측값 320.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.27 (br d, J = 5.2 Hz, 3H), 7.19 (br d, J = 4.4 Hz, 1H), 3.98 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 3.55 (br d, J = 17.6 Hz, 1H), 3.11-3.22 (m, 1H), 2.91-3.05 (m, 3H), 2.23-2.31 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 1.62 (td, J = 8.8, 4.4 Hz, 1H).

(3) 화합물 3-2(140 mg, 437 μmol)의 N,N-디메틸포름아미드(5.0 mL) 용액에 탄산칼륨(151 mg, 1.09 mmol) 및 화합물 3-3(82.1 mg, 364 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 50℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(30.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(30.0 mL × 5)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 박층 크로마토그래피로 분리(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 1)하여 화합물 3-4를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 509, 실측값 509.

(4) 화합물 3-4(120 mg, 236 μmol)의 디옥산(5.0 mL) 용액에 화합물 3-5(81.5 mg, 708 μmol), 탄산세슘(231 mg, 709 μmol) 및 메탄술포나토(2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-비페닐)(2-아미노-1,1'-비페닐-2-일)팔라듐(39.4 mg, 47.1 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(20.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 박층 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 2)로 분리하여 화합물 3-6을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 588, 실측값 588.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.19-7.29 (m, 4H), 4.59-4.65 (m, 1H), 4.30-4.41 (m, 2H), 3.92-4.16 (m, 3H), 3.68-3.76 (m, 2H), 3.41 (br dd, J = 14.0, 3.6 Hz, 1H), 3.14-3.25 (m, 2H), 2.96-3.11 (m, 4H), 2.73-2.95 (m, 4H), 2.54 (br d, J = 3.6 Hz, 3H), 2.43 (td, J = 13.2, 8.4 Hz, 2H), 2.21 (d, J = 2.8 Hz, 3H), 2.07-2.17 (m, 1H), 1.81-1.92 (m, 3H), 1.67-1.77 (m, 1H), 1.51 (s, 9H).

(5) 화합물 3-6(30.0 mg, 51.0 μmol)의 디클로로메탄(3.0 mL) 용액에 트리플루오로아세트산(1.0 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 3-7의 트리플루오로아세트산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 488, 실측값 488.

(6) 화합물 3-7의 트리플루오로아세트산염(30.0 mg, 49.9 μmol)의 디클로로메탄(2.0 mL) 용액에 트리에틸아민(25.2 mg, 249 μmol) 및 화합물 3-8(13.6 mg, 150 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Luna C18, 100 mm × 30 mm 3 μm, A: 물(0.225% 포름산); B: 아세토니트릴, 0%-30%: 8분)로 분리하여 화합물 3의 포름산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 542, 실측값 542.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.25-7.31 (m, 4H), 6.82 (br d, J = 11.6 Hz, 1H), 6.30 (br d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.84 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.04 (br s, 1H), 4.72 (dt, J = 12.4, 3.2 Hz, 1H), 4.54 (dd, J = 12.4, 7.2 Hz, 1H), 4.18-4.40 (m, 1H), 3.96-4.18 (m, 2H), 3.79-3.88 (m, 3H), 3.65-3.71 (m, 1H), 3.45-3.62 (m, 1H), 3.31-3.44 (m, 1H), 3.13-3.26 (m, 2H), 3.04-3.13 (m, 2H), 3.03 (d, J = 5.2 Hz, 3H), 2.89-3.01 (m, 4H), 2.43-2.52 (m, 1H), 2.32-2.40 (m, 1H), 2.26 (d, J = 2.4 Hz, 3H), 2.14-2.20 (m, 1H), 2.09 (br dd, J = 14.0, 7.6 Hz, 1H), 1.99-2.05 (m, 1H), 1.87-1.96 (m, 1H).

실시예 4 화합물 4의 합성

(1) 화합물 3-2(200 mg, 625 μmol)의 N-메틸피롤리돈(5.0 mL) 용액에 탄산칼륨(259 mg, 1.87 mmol) 및 화합물 4-1(250 mg, 1.25 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 50℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(30.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(30.0 mL × 5)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 박층 크로마토그래피로 분리(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 4 : 1)하여 화합물 4-2를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 484, 실측값 484.

(2) 화합물 4-2(160 mg, 331 μmol)의 디옥산(5.0 mL) 용액에 화합물 4-3(115 mg, 999 μmol), 탄산세슘(323 mg, 991 μmol) 및 메탄술포나토(2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-비페닐)(2-아미노-1,1'-비페닐-2-일)팔라듐(55.3 mg, 66.1 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(20.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 박층 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 10 : 1)로 분리하여 화합물 4-4를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 563, 실측값 563.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.18-7.30 (m, 4H), 4.32-4.40 (m, 2H), 4.21 (br s, 1H), 4.02 (br s, 1H), 3.76-3.98 (m, 2H), 3.50-3.75 (m, 3H), 3.38-3.50 (m, 1H), 3.32-3.38 (m, 1H), 3.07-3.20 (m, 2H), 2.97-3.05 (m, 2H), 2.87-2.96 (m, 2H), 2.84 (br d, J = 2.8 Hz, 1H), 2.54 (s, 2H), 2.38-2.48 (m, 2H), 2.19 (s, 3H), 2.05-2.14 (m, 1H), 1.80-1.93 (m, 3H), 1.68-1.77 (m, 1H), 1.49 (d, J = 0.8 Hz, 9H), 1.17-1.37 (m, 3H).

(3) 화합물 4-4(80.0 mg, 142 μmol)의 디클로로메탄(3.0 mL) 용액에 트리플루오로아세트산(1.0 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 4-5의 트리플루오로아세트산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 463, 실측값 463.

(4) 화합물 4-5의 트리플루오로아세트산염(70.0 mg, 121 μmol)의 디클로로메탄(2.0 mL) 용액에 트리에틸아민(61.4 mg, 607 μmol) 및 화합물 4-6(33.0 mg, 365 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Luna C18, 100 mm × 30 mm 3 μm, A: 물(0.225% 포름산); B: 아세토니트릴, 0%-30%: 8분)로 분리하여 화합물 4의 포름산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 517, 실측값 517.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.23-7.33 (m, 4H), 6.73-6.90 (m, 1H), 6.29 (br dd, J = 16.4, 2.4 Hz, 1H), 5.81 (dd, J = 10.4, 1.6 Hz, 1H), 4.71 (dd, J = 12.4, 3.2 Hz, 1H), 4.40-4.54 (m, 2H), 4.11-4.33 (m, 1H), 3.90-4.02 (m, 1H), 3.64-3.87 (m, 5H), 3.50-3.62 (m, 1H), 3.37-3.49 (m, 1H), 3.09-3.29 (m, 2H), 3.04-3.09 (m, 1H), 3.03 (s, 3H), 2.87-3.02 (m, 3H), 2.43-2.53 (m, 1H), 2.31-2.42 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.14-2.22 (m, 1H), 2.06-2.13 (m, 1H), 1.98-2.05 (m, 1H), 1.88-1.97 (m, 1H), 1.17-1.38 (m, 3H).

실시예 5 화합물 5의 합성

(1) 화합물 5-1(25.0 g, 150 mmol)의 톨루엔(400 mL) 용액에 화합물 5-2(16.6 g, 137 mmol), 테트라에틸티타네이트(62.3 g, 273 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액에 물(200 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(400 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(200 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 2 : 1)로 분리하여 화합물 5-3을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 270, 실측값 270.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.73 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.44 (dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.43-3.53 (m, 1H), 3.10-3.13 (m, 2H), 3.04-3.10 (m, 1H), 1.32 (s, 9H).

(2) 에틸 아세테이트(22.9 g, 260 mmol)를 테트라히드로푸란(300 mL)에 용해시키고, -78℃에서 질소 보호하에 리튬 디이소프로필아미드(2 mol/L, 52.0 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 적가하며, 반응액을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 화합물 5-3(14.0 g, 51.9 mmol)의 테트라히드로푸란(50.0 mL) 용액을 적가하고, -78℃에서 3시간 동안 계속 교반하였다. 0℃로 온도를 올린 후, 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(200 mL)을 첨가하여 반응을 퀀칭하고, 에틸 아세테이트(200 mL × 1)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 염화암모늄 수용액(200 mL × 1) 및 포화 식염수(200 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 4 : 1)로 분리하여 화합물 5-4를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 358, 실측값 358.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.21-7.24 (m, 1H), 7.15-7.20 (m, 2H), 5.24 (s, 1H), 4.15-4.21 (m, 2H), 3.13 (ddd, J = 16.4, 8.8, 5.2 Hz, 1H), 2.83-2.90 (m, 1H), 2.73-2.83 (m, 2H), 2.67-2.73 (m, 1H), 2.33 (ddd, J = 13.2, 8.4, 5.2 Hz, 1H), 1.25-1.28 (m, 3H), 1.20 (s, 9H).

(3) 화합물 5-4(5.10 g, 14.3 mmol)의 에탄올(40.0 mL) 용액에 염산의 디옥산 용액(4 mol/L, 15.0 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 5-5의 염산염을 얻었다.

MS-ESI [M-NH₂+H]+, 계산값 237, 실측값 237.

(4) 화합물 5-5의 염산염(4.0 g, 13.8 mmol)의 에탄올(20.0 mL) 용액에 화합물 5-6(15.7 g, 157 mmol), 산화구리(219 mg, 2.75 mmol), 트리에틸아민(4.18 g, 41.4 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 85℃의 밀봉된 튜브에서 8시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(200 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(200 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 6 : 1)로 분리하여 화합물 5-7을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 354, 실측값 354.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.02-7.25 (m, 3H), 4.07-4.16 (m, 4H), 2.86-2.91 (m, 1H), 2.77-2.85 (m, 1H), 2.69-2.77 (m, 2H), 2.58-2.65 (m, 1H), 2.37-2.58 (m, 4H), 2.32 (dt, J = 13.2, 8.4 Hz, 1H), 2.16 (ddd, J = 13.2, 8.4, 4.4 Hz, 1H), 1.25 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.20 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

(5) 화합물 5-7(1.0 g, 2.83 mmol)의 에탄올(15.0 mL) 용액에 파라포름알데히드(500 mg), 나트륨 시아노보로하이드라이드(533 mg, 8.48 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(50.0 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(50 mL × 1)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(50.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 4 : 1)로 분리하여 화합물 5-8을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 368, 실측값 368.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.13-7.21 (m, 2H), 7.06-7.10 (m, 1H), 4.08-4.16 (m, 2H), 3.87-3.94 (m, 2H), 2.83-2.89 (m, 3H), 2.73-2.77 (m, 1H), 2.59-2.70 (m, 2H), 2.41 (dt, J = 7.6, 6.4 Hz, 2H), 2.31-2.37 (m, 1H), 2.20-2.28 (m, 1H), 2.17 (s, 3H), 1.25 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.04 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

(6) -78℃에서 화합물 5-8(600 mg, 1.63 mmol)의 테트라히드로푸란(10.0 mL) 용액에 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드(1 mol/L, 4.89 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -78℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(50.0 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(50.0 mL × 1)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(50.0 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 6 : 1)로 분리하여 화합물 5-9를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 322, 실측값 322.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.17-7.23 (m, 2H), 7.11-7.15 (m, 1H), 4.22-4.32 (m, 2H), 3.50 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 3.22-3.33 (m, 1H), 3.08-3.16 (m, 1H), 2.86-2.93 (m, 2H), 2.54-2.64 (m, 1H), 2.20-2.37 (m, 2H), 2.09 (s, 3H), 1.78 (ddd, J = 13.2, 8.4, 4.4 Hz, 1H), 1.30-1.34 (m, 3H).

(7) 화합물 5-9(440 mg, 1.37 mmol)의 에탄올(10.0 mL) 용액에 화합물 5-10(208 mg, 2.37 mmol) 및 나트륨 에톡시드(279 mg, 4.10 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 에탄올(15.0 mL) 및 물(5.0 mL)을 첨가하며, 염산(1 mol/L)으로 pH 값을 6으로 조절하였다. 고체 석출 후, 여과하고, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 5-11을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 334, 실측값 334.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.20-12.60 (m, 2H), 7.19-7.36 (m, 3H), 3.36-3.56 (m, 1H), 3.06 (br s, 1H), 2.84-2.94 (m, 2H), 2.65-2.77 (m, 1H), 2.37-2.49 (m, 3H), 2.20 (br s, 1H), 1.99 (br s, 1H), 1.68 (br s, 1H).

(8) 중간체 5-11(360 mg, 1.08 mmol)의 수용액(10.0 mL) 에 클로로아세트산(590 mg, 6.24 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 여액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 pH 값을 8로 조절한 다음, 고체가 석출되었다. 여과 후, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 5-12를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 318, 실측값 318.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.03 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 7.27-7.32 (m, 2H), 7.21 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 3.43 (br d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.01 (br d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.83-2.93 (m, 2H), 2.62 (br d, J = 17.6 Hz, 1H), 2.32 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 2.19 (dt, J = 13.2, 8.4 Hz, 1H), 1.97 (s, 3H), 1.65 (ddd, J = 13.2, 8.4, 4.4 Hz, 1H).

(9) 화합물 5-12(210 mg, 661 μmol)를 옥시염화인(8.25 g, 53.8 mmol)에 용해시키고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 얼음물(50.0 mL)을 첨가하며, 디클로로메탄(50.0 mL × 1)으로 추출하고, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(50.0 mL × 2) 및 포화 식염수(500 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하여, 화합물 5-13을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 356, 실측값 356.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.28-7.37 (m, 2H), 7.22 (s, 1H), 3.87-4.04 (m, 1H), 3.51 (br d, J = 18.0 Hz, 1H), 3.14 (br d, J = 17.6 Hz, 1H), 2.88-2.96 (m, 3H), 2.23 (dt, J = 13.2, 8.4 Hz, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.58-1.69 (m, 1H).

(10) 화합물 5-13(150 mg, 423 μmol)의 N-메틸피롤리돈(5.0 mL) 용액에 탄산칼륨(292 mg, 2.11 mmol) 및 화합물 5-14의 염산염(126 mg, 636 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 50℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(30.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(30.0 mL × 5)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하여, 화합물 5-15를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 443, 실측값 443.

(11) 화합물 5-15(187 mg, 422 μmol)의 디클로로메탄(10.0 mL) 용액에 트리에틸아민(214 mg, 2.11 mmol) 및 디-tert-부틸 카보네이트(920 mg, 4.22 mmol)를 첨가하고, 반응액을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 농축하며, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 분리(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 6 : 1)하여 화합물 5-16을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 543, 실측값 543.

(12) 화합물 5-16(80.0 mg, 147 μmol)의 디옥산(5.0 mL) 용액에 화합물 5-17(50.9 mg, 442 μmol), 탄산칼륨(61.0 mg, 441 μmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(27.0 mg, 29.5 μmol) 및 2-디시클로헥실포스피노-2,4,6-트리이소프로필비페닐(28.1 mg, 58.9 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(40.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(40.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 박층 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 15 : 1)로 분리하여 화합물 5-18을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 622, 실측값 622.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.18-7.31 (m, 3H), 4.62-4.67 (m, 1H), 4.49 (br s, 1H), 4.39-4.45 (m, 1H), 3.89-4.23 (m, 4H), 3.67-3.77 (m, 2H), 3.43 (br d, J = 14.0 Hz, 2H), 3.24 (br dd, J = 14.0, 3.6 Hz, 2H), 2.88-3.03 (m, 5H), 2.73 (br s, 3H), 2.41-2.50 (m, 1H), 2.24-2.41 (m, 1H), 2.20-2.24 (m, 3H), 2.09-2.20 (m, 1H), 1.93-2.05 (m, 2H), 1.76-1.92 (m, 3H), 1.51 (d, J = 1.6 Hz, 9H).

(13) 화합물 5-18(70.0 mg, 113 μmol)의 디클로로메탄(3.0 mL) 용액에 트리플루오로아세트산(1.0 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 5-19의 트리플루오로아세트산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 522, 실측값 522.

(14) 화합물 5-19의 트리플루오로아세트산염(60.0 mg, 94.3μmol)의 디클로로메탄(2.0 mL) 용액에 트리에틸아민(28.6 mg, 283 μmol) 및 화합물 5-20(17.1 mg, 189 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -78℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Luna C18, 100 mm × 30 mm 3 μm, A: 물(0.225% 포름산); B: 아세토니트릴, 0%-30%: 8분)로 분리하여 화합물 5의 포름산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 576, 실측값 576.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.25-7.30 (m, 2H), 7.22 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 6.80 (br s, 1H), 6.30 (br d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.84 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.03 (br s, 1H), 4.69 (br dd, J = 12.4, 3.6 Hz, 1H), 4.50 (ddd, J = 12.4, 7.2, 1.6 Hz, 1H), 4.17-4.36 (m, 1H), 3.94-4.16 (m, 2H), 3.72-3.84 (m, 3H), 3.59-3.65 (m, 1H), 3.41-3.58 (m, 1H), 3.28 (br d, J = 1.6 Hz, 1H), 3.08-3.18 (m, 2H), 2.97-3.06 (m, 5H), 2.84-2.96 (m, 4H), 2.42-2.51 (m, 1H), 2.30-2.40 (m, 1H), 2.24 (d, J = 1.6 Hz, 3H), 2.11-2.19 (m, 1H), 2.07 (br dd, J = 14.4, 7.6 Hz, 1H), 1.96-2.03 (m, 1H), 1.87-1.95 (m, 1H).

실시예 6 화합물 6 및 7의 합성

(1) 화합물 6-1(25.0 g, 166 mmol)의 톨루엔(400 mL) 용액에 화합물 6-2(18.3 g, 151 mmol), 테트라에틸티타네이트(69.0 g, 302 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액에 물(400 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(400 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(500 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 0 : 1)로 분리하여 화합물 6-3을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 254, 실측값 254.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.42-7.48 (m, 1H), 7.16-7.20 (m, 1H), 6.93-7.00 (m, 1H), 3.46-3.56 (m, 1H), 3.05-3.21 (m, 3H), 1.30-1.36 (s, 9H).

(2) 에틸 아세테이트(22.4 g, 254 mmol)를 테트라히드로푸란(200 mL)에 용해시키고, -78℃에서 질소 보호하에 리튬 디이소프로필아미드(2 mol/L, 50.9 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 적가하며, 반응액을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 화합물 6-3(12.9 g, 50.9 mmol)의 테트라히드로푸란(50.0 mL) 용액을 적가하고, -78℃에서 3시간 동안 계속 교반하였다. 0℃로 온도를 올린 후, 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(200 mL)을 첨가하여 반응을 퀀칭하고, 에틸 아세테이트(200 mL × 1)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 염화암모늄 수용액(200 mL × 1) 및 포화 식염수(200 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 4 : 1)로 분리하여 화합물 6-4를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 342, 실측값 342.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.27-7.30 (m, 1H), 7.01-7.07 (m, 1H), 6.82-6.90 (m, 1H), 5.05-5.11 (s, 1H), 4.15-4.24 (m, 2H), 3.29-3.39 (m, 2H), 2.88-2.98 (m, 1H), 2.64-2.73 (m, 1H), 2.28-2.39 (m, 1H), 1.25-1.30 (t, 3H), 1.16-1.20 (s, 9H).

(3) 화합물 6-4(12.4 g, 36.3 mmol)의 에탄올(120 mL) 용액에 염산의 디옥산 용액(4 mol/L, 40.0 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 6-5의 염산염을 얻었다.

MS-ESI [M-NH₂+H]+, 계산값 221, 실측값 221.

(4) 화합물 6-5의 염산염(9.94 g, 36.3 mmol)의 에탄올(80.0 mL) 용액에 화합물 6-6(37.6 g, 376 mmol), 산화구리(577 mg, 7.26 mmol), 트리에틸아민(3.67 g, 36.3 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 85℃의 밀봉된 튜브에서 8시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(200 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(200 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 6 : 1)로 분리하여 화합물 6-7을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 338, 실측값 338.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.16-7.22 (m, 1H), 6.96-7.01 (m, 1H), 6.80-6.87 (m, 1H), 4.06-4.17 (m, 4H), 2.95-3.07 (m, 2H), 2.86-2.94 (m, 1H), 2.65-2.81 (m, 3H), 2.26-2.51 (m, 5H), 1.22-1.26 (t, 3H), 1.14-1.20 (t, 3H).

(5) 화합물 6-7(3.0 g, 8.89 mmol)의 에탄올(15.0 mL) 용액에 파라포름알데히드(1.33 g), 나트륨 시아노보로하이드라이드(1.68 g, 26.6 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(50.0 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(50 mL × 1)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(50.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 4 : 1)로 분리하여 화합물 6-8을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 352, 실측값 352.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.16-7.22 (m, 1H), 6.93-6.99 (m, 1H), 6.79-6.86 (m, 1H), 4.07-4.14 (m, 2H), 3.88-3.99 (m, 2H), 2.95-3.08 (m, 3H), 2.83-2.92 (m, 1H), 2.72-2.80 (m, 1H), 2.60-2.68 (m, 1H), 2.29-2.46 (m, 4H), 2.19-2.23 (s, 3H), 1.22-1.27 (t, 3H), 1.00-1.06 (t, 3H).

(6) -78℃에서 화합물 6-8(3.00 g, 8.54 mmol)의 테트라히드로푸란(30.0 mL) 용액에 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드(1 mol/L, 25.6 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -78℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(50.0 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(50.0 mL × 1)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(50.0 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 6 : 1)로 분리하여 화합물 6-9를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 306, 실측값 306.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.21-7.26 (m, 1H), 6.99-7.02 (m, 1H), 6.87-6.93 (m, 1H), 4.19-4.36 (m, 2H), 3.58-3.64 (m, 1H), 2.85-3.30 (m, 5H), 2.25-2.35 (m, 2H), 2.18-2.22 (m, 3H), 1.72-1.81 (m, 1H), 1.30-1.35 (m, 3H).

(7) 화합물 6-9(2.00 g, 6.55 mmol)의 에탄올(20.0 mL) 용액에 화합물 6-10(997 mg, 13.1 mmol) 및 나트륨 에톡시드(1.34 g, 19.6 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 에탄올(50.0 mL)을 첨가하며, 염산(1 mol/L)으로 pH 값을 6으로 조절하였다. 고체 석출 후, 여과하고, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 6-11을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 318, 실측값 318.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.61-12.93 (s, 2H), 7.28-7.36 (m, 1H), 7.06-7.14 (m, 1H), 6.97-7.04 (m, 1H), 3.44-3.53 (m, 2H), 2.79-3.04 (m, 4H), 2.16-2.28 (m, 1H), 1.98-2.11 (s, 3H), 1.61-1.70 (m, 1H).

(8) 중간체 6-11(1.90 g, 5.99 mmol)의 수용액(10.0 mL) 에 클로로아세트산(2.26 g, 23.9 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 여액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 pH 값을 8로 조절한 다음, 고체가 석출되었다. 여과 후, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 6-12를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 302, 실측값 302.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.98-11.04 (s, 1H), 10.73-10.80 (s, 1H), 7.29-7.36 (m, 1H), 7.07-7.12 (m, 1H), 6.96-7.04 (m, 1H), 3.39-3.47 (m, 1H), 2.76-3.02 (m, 4H), 2.29-2.37 (m, 1H), 2.18-2.27 (m, 1H), 2.02-2.08 (s, 3H), 1.60-1.68 (m, 1H).

(9) 화합물 6-12(800 mg, 2.66 mmol)를 옥시염화인(13.2 g, 86.0 mmol)에 용해시키고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 얼음물(10.0 mL) 및 포화 탄산수소나트륨 수용액(50.0 mL)을 첨가하며, 디클로로메탄(50.0 mL × 1)으로 추출하고, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(50.0 mL × 2) 및 포화 식염수(50.0 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하여, 화합물 6-13을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 338, 실측값 338.

(10) 화합물 6-13(500 mg, 1.48 mmol)의 N, -메틸피롤리돈(5.0 mL) 용액에 탄산칼륨(1.02 g, 7.39 mmol) 및 화합물 6-14의 염산염(439 mg, 2.22 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 50℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(30.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(30.0 mL × 5)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하여, 화합물 6-15를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 427, 실측값 427.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.26-7.37 (m, 1H), 7.07-7.16 (m, 1H), 6.95-7.05 (m, 1H), 3.36-3.96 (m, 6H), 3.22-3.31 (m, 1H), 2.65-3.11 (m, 8H), 2.23-2.39 (m, 1H), 2.09-2.19 (m, 3H), 1.55-1.83 (m, 1H), 1.19-1.39 (m, 1H).

(11) 화합물 6-15(1.40 g, 3.28 mmol)의 디클로로메탄(20.0 mL) 용액에 트리에틸아민(2.14 g, 21.1 mmol) 및 디-tert-부틸 카보네이트(3.58 mg, 16.4 mmol)를 첨가하고, 반응액을 25℃에서 12시간 동안 교반하며, 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 농축하며, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 분리(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 6 : 1)하여 화합물 6-16을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 527, 실측값 527.

(12) 화합물 6-16(900 mg, 1.71 mmol)의 디옥산(10.0 mL) 용액에 화합물 6-17(590 mg, 5.12 mmol), 탄산세슘(1.67 g, 5.12 mmol) 및 메탄술포나토(2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-비페닐)(2-아미노-1,1'-비페닐-2-일)팔라듐(285.6 mg, 341 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(40.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(40.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 15 : 1)로 분리하여 화합물 6-18을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 606, 실측값 606.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.22-7.26 (m, 1H), 7.01-7.06 (m, 1H), 6.87-6.94 (m, 1H), 4.54-4.64 (m, 1H), 4.24-4.40 (m, 1H), 3.78-4.08 (m, 3H), 3.51-3.77 (m, 3H), 3.19-3.39 (m, 3H), 2.80-3.16 (m, 7H), 2.64-2.73 (m, 3H), 2.29-2.35 (s, 3H), 1.79-1.99 (m, 4H), 1.55-1.75 (m, 4H), 1.49-1.55 (s, 9H).

(13) 화합물 6-18(342 mg, 564 μmol)의 디클로로메탄(3.0 mL) 용액에 트리플루오로아세트산(1.0 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 6-19의 트리플루오로아세트산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 506, 실측값 506.

(14) 화합물 6-19의 트리플루오로아세트산염(110 mg,217 μmol)의 디클로로메탄(2.0 mL) 용액에 트리에틸아민(22.0 mg, 217 μmol) 및 화합물 6-20(29.5 mg, 326 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -78℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 역상 컬럼 크로마토그래피(아세토니트릴/물 = 0 : 1 내지 1 : 19)로 분리하여 화합물 6-21을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 560, 실측값 560.

(15) 화합물 6-21을 키랄 초임계 유체 크로마토그래피로 분해하여 화합물 6 및 7을 얻었다.

분리 조건: 크로마토그래피 컬럼 모델: AD-H; 크로마토그래피 컬럼 사양: 0.46 cm I.D. × 15 cm L; 주입량: 2 μL; 이동상: 이산화탄소 : 에탄올(0.1% 트리에틸아민) = 70 : 30; 검출 파장: 254 nm; 컬럼 온도: 25℃.

화합물 6 유지 시간 4.071분, ee 값 99.42%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 560, 실측값 560.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.31 (td, J = 7.6, 5.2 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.03-6.97 (m, 1H), 6.95-6.78 (m, 1H), 6.19 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.77 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.00-4.72 (m, 1H), 4.24 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.00 (dd, J = 10.8, 6.4 Hz, 2H), 3.93-3.80 (m, 2H), 3.74-3.58 (m, 2H), 3.53-3.45 (m, 1H), 3.29-3.12 (m, 2H), 3.07-2.96 (m, 4H), 2.96-2.89 (m, 2H), 2.84-2.74 (m, 2H), 2.40-2.28 (m, 4H), 2.20-2.08 (m, 4H), 1.91 (dq, J = 12.4, 8.4 Hz, 1H), 1.77-1.68 (m, 1H), 1.68-1.62 (m, 2H), 1.60-1.51 (m, 1H).

화합물 7 유지 시간 4.436분, ee 값 98.76%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 560, 실측값 560.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.31 (dt, J = 12.8, 6.4 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.04-6.95 (m, 1H), 6.91-6.79 (m, 1H), 6.18 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.00-4.55 (m, 1H), 4.27-4.17 (m, 1H), 4.13-3.91 (m, 2H), 3.91-3.72 (m, 2H), 3.67-3.47 (m, 3H), 3.14-2.90 (m, 9H), 2.81 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 2.39-2.24 (m, 4H), 2.16 (s, 3H), 2.09-1.99 (m, 1H), 1.96-1.85 (m, 1H), 1.83-1.70 (m, 1H), 1.69-1.60 (m, 2H), 1.60-1.49 (m, 1H).

실시예 7 화합물 8 및 9의 합성

(1) 화합물 6-19(160 mg, 316 μmol)의 디클로로메탄(2.0 mL) 용액에 트리에틸아민(32.0 mg, 316 μmol) 및 프로필포스포닉산 무수물(503 mg, 791 μmol, 470 μL, 50% 에틸 아세테이트 용액) 및 화합물 7-1의 염산염(600 mg, 4.75 mmol)을 첨가하고, 반응액을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 7-2를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 578, 실측값 578.

(2) 화합물 7-2를 키랄 초임계 유체 크로마토그래피로 분해하여 화합물 8 및 9를 얻었다.

화합물 8 유지 시간 3.689분, ee 값 98.44%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 578, 실측값 578.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.35-7.27 (m, 1H), 7.10 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.02-6.95 (m, 1H), 5.43-5.35 (m, 1H), 5.35-5.20 (m, 1H), 4.30-4.22 (m, 1H), 4.06 (s, 1H), 3.97-3.88 (m, 1H), 3.86-3.83 (m, 1H), 3.71 (d, J = 14.4 Hz, 2H), 3.20 (dd, J = 13.6, 3.6 Hz, 1H), 3.05-2.89 (m, 6H), 2.84-2.75 (m, 1H), 2.44-2.32 (m, 4H), 2.26 (s, 1H), 2.13 (s, 3H), 1.98-1.89 (m, 1H), 1.77-1.65 (m, 3H), 1.65---1.52 (m, 1H), 1.52 - 1.41 (m, 2H), 1.20 (s, 1H), 0.91 (t, J = 6.8 Hz, 2H).

화합물 9 유지 시간 4.059분, ee 값 97.90%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 578, 실측값 578.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.31 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.05-6.92 (m, 1H), 5.39 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 5.35-5.17 (m, 1H), 4.22 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.09-3.98 (m, 1H), 3.90 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.85-3.74 (m, 1H), 3.53 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 3.14-3.06 (m, 2H), 3.06-2.92 (m, 5H), 2.85-2.78 (m, 1H), 2.39-2.28 (m, 4H), 2.22-2.09 (m, 4H), 1.91 (s, 2H), 1.82-1.71 (m, 1H), 1.70-1.62 (m, 2H), 1.58-1.51 (m, 1H), 1.22-1.11 (m, 1H), 1.08-0.77 (m, 2H).

실시예 8 화합물 10의 합성

(1) -78℃에서 화합물 6-7(1.00 g, 2.96 mmol)의 테트라히드로푸란(10.0 mL) 용액에 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드(1 mol/L, 9.0 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -78℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(50.0 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(50.0 mL × 1)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(50.0 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 6 : 1)로 분리하여 화합물 8-1을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 292, 실측값 292.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.18-7.25 (m, 1H), 7.00-7.05 (m, 1H), 6.89 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 4.22-4.29 (m, 2H), 3.35-3.57 (m, 1H), 3.14-3.27 (m, 1H), 3.01-3.14 (m, 1H), 2.85-2.99 (m, 2H), 2.42-2.69 (m, 2H), 2.34 (br d, J = 6.0 Hz, 1H), 2.08-2.20 (m, 2H), 1.30-1.34 (m, 3H).

(2) 화합물 8-1(970 mg, 3.33 mmol)의 에탄올(10.0 mL) 용액에 화합물 8-2(507 mg, 6.66 mmol) 및 나트륨 에톡시드(679 mg, 9.98 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 염산(1 mol/L)으로 pH 값을 6으로 조절하였다. 고체 석출 후, 여과하고, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 8-3을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 304, 실측값 304.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.39 (br s, 1H), 12.25 (br s, 1H), 7.29 (td, J = 7.6, 5.2 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.93-7.01 (m, 1H), 3.50 (br s, 1H), 3.39-3.40 (m, 1H), 3.00-3.08 (m, 1H), 2.81-2.90 (m, 1H), 2.66-2.74 (m, 1H), 2.56 (s, 1H), 1.97-2.16 (m, 2H).

(3) 중간체 8-3(470 mg, 1.55 mmol)의 수용액(10.0 mL) 에 클로로아세트산(560 mg, 5.93 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 여액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 pH 값을 8로 조절한 다음, 고체가 석출되었다. 여과 후, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 8-4를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 288, 실측값 288.

(4) 화합물 8-4(200 mg, 696 μmol)를 옥시염화인(8.25 g, 53.8 mmol)에 용해시키고, 트리에틸아민(141 mg, 1.39 mmol)을 첨가하며, 반응액을 질소 보호하에 85℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액에 얼음물(10.0 mL) 및 포화 탄산수소나트륨 수용액(50.0 mL)을 첨가하고, 디클로로메탄(50.0 mL × 1)으로 추출하며, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(50.0 mL × 2) 및 포화 식염수(50.0 mL × 1)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 감압 농축하여, 화합물 8-5를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 324, 실측값 324.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.29 (td, J = 7.6, 5.2 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.89-7.01 (m, 1H), 3.83-3.96 (m, 1H), 3.66-3.77 (m, 1H), 3.18 (s, 1H), 3.04-3.15 (m, 3H), 2.84-2.96 (m, 1H), 2.03-2.15 (m, 2H).

(5) 화합물 8-5(200 mg, 617 μmol)의 N-메틸피롤리돈(5.0 mL) 용액에 탄산칼륨(426 mg, 3.08 mmol) 및 화합물 8-6의 염산염(183 mg, 924 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 50℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(30.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(30.0 mL × 5)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하여, 화합물 8-7을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 413, 실측값 413.

(6) 화합물 8-7(250 mg, 605 μmol)의 디클로로메탄(10.0 mL) 용액에 트리에틸아민(307 mg, 3.03 mmol) 및 디-tert-부틸 카보네이트(264 mg, 1.21 mmol)를 첨가하고, 반응액을 25℃에서 12시간 동안 교반하며, 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 농축하며, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 분리(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 1 : 1)하여 화합물 8-8을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 513, 실측값 513.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.28-7.43 (m, 1H), 7.03-7.17 (m, 1H), 6.87-6.94 (m, 1H), 4.31-4.95 (m, 2H), 4.18-4.26 (m, 1H), 3.93-4.00 (m, 1H), 3.64-3.91 (m, 2H), 3.32-3.45 (m, 3H), 3.07-3.30 (m, 3H), 2.89-3.07 (m, 2H), 2.66-2.85 (m, 3H), 2.21-2.38 (m, 1H), 1.50-1.52 (m, 9H).

(7) 화합물 8-8(205 mg, 400 μmol)의 디옥산(5.0 mL) 용액에 화합물 8-9(138 mg, 1.20 mmol), 탄산세슘(391 mg, 1.20 mmol) 및 메탄술포나토(2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-비페닐)(2-아미노-1,1'-비페닐-2-일)팔라듐(66.9 mg, 80.0 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(40.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(40.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 박층 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 10 : 1)로 분리하여 화합물 8-10을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 592, 실측값 592.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.25-7.32 (m, 1H), 7.08-7.17 (m, 1H), 6.88-6.98 (m, 1H), 4.62-4.67 (m, 1H), 4.41 (br s, 2H), 3.93-4.08 (m, 3H), 3.77-3.91 (m, 2H), 3.59-3.75 (m, 1H), 3.09-3.17 (m, 2H), 2.97-3.08 (m, 4H), 2.94 (s, 1H), 2.75-2.90 (m, 2H), 2.64 (br s, 3H), 2.13-2.31 (m, 4H), 1.90 (br s, 2H), 1.80 (br s, 1H), 1.58 (br s, 1H), 1.51 (s, 9H).

(8) 화합물 8-10(100 mg, 169 μmol)의 디클로로메탄(3.0 mL) 용액에 트리플루오로아세트산(1.0 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 8-11의 트리플루오로아세트산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 492, 실측값 492.

(9) 화합물 8-11의 트리플루오로아세트산염(40.0 mg, 66.1μmol)의 디클로로메탄(2.0 mL) 용액에 트리에틸아민(20.1 mg, 199 μmol) 및 화합물 8-12(6.6 mg, 72.9 μmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -78℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Luna C18, 100 mm × 30 mm 3 μm, A: 물(0.225% 포름산); B: 아세토니트릴, 0%-30%: 8분)로 분리하여 화합물 10의 포름산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 546, 실측값 546.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.32 (tdd, J = 8.0, 5.2, 3.2 Hz, 1H), 7.15 (dd, J = 7.2, 3.2 Hz, 1H), 6.89-6.98 (m, 1H), 6.72-6.89 (m, 1H), 6.29 (br d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.83 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.04 (br s, 1H), 4.64-4.84 (m, 2H), 4.51-4.57 (m, 1H), 4.07-4.27 (m, 2H), 3.90-4.05 (m, 2H), 3.77-3.90 (m, 2H), 3.52-3.74 (m, 2H), 3.10-3.27 (m, 5H), 3.04 (d, J = 4.4 Hz, 3H), 2.92-3.03 (m, 3H), 2.27-2.43 (m, 3H), 2.18 (br dd, J = 12.8, 6.8 Hz, 1H), 2.10 (br dd, J = 14.4, 7.2 Hz, 1H), 2.01-2.07 (m, 1H).

실시예 9 화합물 11의 합성

(1) 화합물 11-1(30.0 g, 200 mmol)의 톨루엔(400 mL) 용액에 화합물 11-2(29.1 g, 240 mmol), 테트라에틸티타네이트(91.4 g, 401 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액에 물(200 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(200 mL × 5)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(200 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 10 : 1)로 분리하여 화합물 11-3을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 254, 실측값 254.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.41 (dd, J = 8.0, 2.4 Hz, 1H), 7.35 (dd, J = 8.4, 4.8 Hz, 1H), 7.20 (td, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 3.45-3.55 (m, 1H), 3.11-3.17 (m, 1H), 3.07-3.11 (m, 2H), 1.32 (s, 9H).

(2) 에틸 아세테이트(32.9 g, 260 mmol)를 테트라히드로푸란(200 mL)에 용해시키고, -78℃에서 질소 보호하에 리튬 디이소프로필아미드(2 mol/L, 56.0 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 적가하며, 반응액을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 화합물 11-3(18.9 g, 74.6 mmol)의 테트라히드로푸란(100 mL) 용액을 적가하고, -65℃에서 3시간 동안 계속 교반하였다. 0℃로 온도를 올린 후, 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(500 mL)을 첨가하여 반응을 퀀칭하고, 에틸 아세테이트(500 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 염화암모늄 수용액(500 mL × 1) 및 포화 식염수(500 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 1 : 1)로 분리하여 화합물 11-4를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 342, 실측값 342.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.18 (dd, J = 8.4, 5.2 Hz, 1H), 6.92-7.00 (m, 1H), 6.88 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 5.24 (s, 1H), 4.14-4.22 (m, 2H), 3.06-3.17 (m, 1H), 2.82-2.89 (m, 1H), 2.75-2.81 (m, 2H), 2.68-2.74 (m, 1H), 2.34 (ddd, J = 13.2, 8.4, 5.2 Hz, 1H), 1.26 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.20 (s, 9H).

(3) 화합물 11-4(6.90 g, 19.6 mmol)의 에탄올(60.0 mL) 용액에 염산의 디옥산 용액(4 mol/L, 20.0 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 11-5의 염산염을 얻었다.

MS-ESI [M-NH₂+H]+, 계산값 221, 실측값 221.

(4) 화합물 11-5의 염산염(5.37 g, 19.6 mmol)의 에탄올(30.0 mL) 용액에 화합물 11-6(19.9 g, 198 mmol), 산화구리(312 mg, 3.92 mmol), 트리에틸아민(5.96 g, 58.9 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 85℃의 밀봉된 튜브에서 8시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(200 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(200 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 4 : 1)로 분리하여 화합물 11-7을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 338, 실측값 338.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.12 (dd, J = 8.0, 5.2 Hz, 1H), 6.85-6.96 (m, 2H), 4.06-4.15 (m, 4H), 2.81-2.94 (m, 2H), 2.70-2.80 (m, 2H), 2.58-2.70 (m, 2H), 2.49-2.55 (m, 1H), 2.41-2.45 (m, 2H), 2.34 (dt, J = 13.6, 8.4 Hz, 1H), 2.17 (ddd, J = 13.2, 8.4, 4.4 Hz, 1H), 1.25 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.20 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

(5) 화합물 11-7(5.93 g, 17.6 mmol)의 에탄올(80.0 mL) 용액에 파라포름알데히드(5.28 g), 나트륨 시아노보로하이드라이드(3.31 g, 52.7 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(100 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(100 mL × 1)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(100 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 9 : 1)로 분리하여 화합물 11-8을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 352, 실측값 352.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.09 (dd, J = 8.0, 5.2 Hz, 1H), 6.87-6.95 (m, 2H), 4.11 (qd, J = 7.2, 2.0 Hz, 2H), 3.91 (qd, J = 7.2, 1.2 Hz, 2H), 2.82-2.88 (m, 3H), 2.72-2.76 (m, 1H), 2.62 (td, J = 7.2, 3.2 Hz, 2H), 2.38-2.46 (m, 2H), 2.32-2.37 (m, 1H), 2.21-2.28 (m, 1H), 2.18 (s, 3H), 1.25 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.03 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

(6) -78℃에서 화합물 11-8(2.00 g, 5.69 mmol)의 테트라히드로푸란(20.0 mL) 용액에 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드(1 mol/L, 17.1 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -65℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(100 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(100 mL × 1)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(100 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 10 : 1)로 분리하여 화합물 11-9를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 306, 실측값 306.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.10-7.18 (m, 1H), 6.87-7.03 (m, 2H), 4.21-4.32 (m, 2H), 3.49 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 2.92-3.37 (m, 2H), 2.76-2.92 (m, 2H), 2.49-2.67 (m, 1H), 2.33-2.44 (m, 1H), 2.19-2.31 (m, 1H), 2.06-2.13 (m, 3H), 1.76-1.86 (m, 1H), 1.32 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

(7) 화합물 11-9(1.33 g, 4.36 mmol)의 에탄올(15.0 mL) 용액에 화합물 11-10(663 mg, 8.71 mmol) 및 나트륨 에톡시드(889 mg, 13.1 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 염산(1 mol/L)으로 pH 값을 6으로 조절하였다. 고체 석출 후, 여과하고, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 11-11을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 318, 실측값 318.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.27 (dd, J = 8.4, 5.2 Hz, 1H), 7.07 (td, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 3.47 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 3.03 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 2.81-2.92 (m, 2H), 2.62 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 2.41 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 2.19 (dt, J = 13.6, 8.4 Hz, 1H), 1.98 (s, 3H), 1.66 (ddd, J = 13.2, 8.4, 4.4 Hz, 1H).

(8) 화합물 11-11(1.36 g, 1.08 mmol)의 수용액(15.0 mL) 에 클로로아세트산(1.77 g, 18.7 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 여액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 pH 값을 8로 조절한 다음, 고체가 석출되었다. 여과 후, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 11-12를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 302, 실측값 302.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.01 (s, 1H), 10.76 (s, 1H), 7.27 (dd, J = 8.4, 5.2 Hz, 1H), 7.08 (td, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 6.99 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H), 3.44 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.01 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.80-2.91 (m, 2H), 2.61 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 2.33 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 2.21 (dt, J = 13.2, 8.4 Hz, 1H), 1.98 (s, 3H), 1.67 (ddd, J = 13.2, 8.4, 4.4 Hz, 1H).

(9) 화합물 11-12(1.00 g, 3.32 mmol)를 옥시염화인(16.5 g, 108 mmol)에 용해시키고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 얼음물(100 mL)을 첨가하며, 디클로로메탄(100 mL × 1)으로 추출하고, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(100 mL × 2) 및 포화 식염수(100 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 10 : 1)로 분리하여 화합물 11-13을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 338, 실측값 338.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.29 (dd, J = 8.4, 5.2 Hz, 1H), 7.09 (td, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 6.98 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H), 3.93 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 3.51 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 3.12 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 2.87-2.97 (m, 3H), 2.25 (dt, J = 13.2, 8.4 Hz, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.66 (dt, J = 13.2, 6.4 Hz, 1H).

(10) 화합물 11-13(200 mg, 591 μmol)의 N-메틸피롤리돈(5.0 mL) 용액에 탄산칼륨(245 mg, 1.77 mmol) 및 화합물 11-14(200 mg, 888 μmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 50℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(30.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(30.0 mL × 5)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 3 : 1)로 분리하여 화합물 11-15를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 527, 실측값 527.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.21-7.30 (m, 1H), 7.01 (td, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 6.89-6.98 (m, 1H), 4.63 (s, 1H), 4.09-4.28 (m, 1H), 3.92-4.05 (m, 2H), 3.68-3.85 (m, 2H), 3.45 (dd, J = 14.0, 3.6 Hz, 1H), 3.25 (dd, J = 13.6, 3.6 Hz, 1H), 3.06-3.20 (m, 1H), 2.80-3.03 (m, 6H), 2.39-2.50 (m, 1H), 2.23 (d, J = 1.6 Hz, 3H), 1.89 (ddt, J = 13.2, 7.6, 4.0 Hz, 1H), 1.51 (d, J = 1.2 Hz, 9H).

(11) 화합물 11-15(220 mg, 417 μmol)의 디옥산(8.0 mL) 용액에 화합물 11-16(144 mg, 1.25 mmol), 탄산세슘(409 mg, 1.26 mmol) 및 메탄술포나토(2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-비페닐)(2-아미노-1,1'-비페닐-2-일)팔라듐(70.0 mg, 83.7 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(50.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(50.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 9 : 1)로 분리하여 화합물 11-17을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 606, 실측값 606.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.26 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 6.98-7.08 (m, 1H), 6.86-6.98 (m, 1H), 4.63 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.26-4.46 (m, 2H), 3.92-4.17 (m, 3H), 3.65-3.82 (m, 2H), 3.42 (dd, J = 13.6, 3.6 Hz, 1H), 3.14-3.29 (m, 2H), 3.07-3.13 (m, 1H), 2.95-3.06 (m, 3H), 2.88-2.94 (m, 2H), 2.77-2.88 (m, 2H), 2.53 (d, J = 4.0 Hz, 3H), 2.34-2.49 (m, 2H), 2.23 (d, J = 2.0 Hz, 3H), 2.04-2.16 (m, 1H), 1.78-1.94 (m, 3H), 1.67-1.78 (m, 1H), 1.51 (d, J = 1.6 Hz, 9H).

(12) 화합물 11-17(170.0 mg, 281 μmol)의 디클로로메탄(3.0 mL) 용액에 트리플루오로아세트산(1.0 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 11-18의 트리플루오로아세트산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 506, 실측값 506.

(13) 화합물 11-18의 트리플루오로아세트산염(160.0 mg, 258 μmol)의 디클로로메탄(5.0 mL) 용액에 트리에틸아민(78.1 mg, 775 μmol) 및 화합물 11-19(46.7 mg, 516 μmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -65℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(30.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(30.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Luna C18, 100 mm × 30 mm 3 μm, A: 물(0.225% 포름산); B: 아세토니트릴, 0%-30%: 8분)로 분리하여 화합물 11의 포름산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 560, 실측값 560.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.28 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 6.93-7.11 (m, 2H), 6.81 (s, 1H), 6.29 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.84 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.90-5.14 (m, 1H), 4.68-4.75 (m, 1H), 4.55 (dd, J = 12.4, 7.2 Hz, 1H), 4.17-4.38 (m, 1H), 3.89-4.16 (m, 2H), 3.80 (d, J = 15.6 Hz, 3H), 3.65-3.72 (m, 1H), 3.54 (s, 1H), 3.04-3.30 (m, 4H), 3.02 (d, J = 5.2 Hz, 3H), 2.89-3.01 (m, 5H), 2.44-2.54 (m, 1H), 2.32-2.41 (m, 1H), 2.26 (s, 3H), 2.13-2.20 (m, 1H), 2.09 (dd, J = 14.4, 7.6 Hz, 1H), 1.97-2.05 (m, 1H), 1.88-1.96 (m, 1H).

실시예 10 화합물 12의 합성

화합물 12-1(65.4 mg, 726 μmol)의 디클로로메탄(5.0 mL) 용액에 트리에틸아민(73.5 mg, 726 μmol), 화합물 11-18의 트리플루오로아세트산염(150 mg, 242 μmol) 및 프로필포스포닉산 무수물(462 mg, 726 μmol, 50% 에틸 아세테이트 용액)을 첨가하고, 반응액을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Luna C18, 70 mm × 30 mm 3 μm, A: 물(0.225% 포름산); B: 아세토니트릴, 0%-30%: 8분)로 분리하여 화합물 12의 포름산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 578, 실측값 578.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.23-7.31 (m, 1H), 7.02 (td, J = 8.8, 2.0 Hz, 1H), 6.95 (ddd, J = 11.2, 9.2, 2.4 Hz, 1H), 5.21-5.43 (m, 2H), 4.58 (dt, J = 12.0, 4.4 Hz, 1H), 4.43-4.50 (m, 1H), 3.97-4.35 (m, 3H), 3.71-3.82 (m, 2H), 3.39-3.60 (m, 3H), 3.32 (s, 1H), 3.26-3.30 (m, 1H), 3.03-3.23 (m, 2H), 2.88-3.03 (m, 6H), 2.85 (d, J = 7.6 Hz, 3H), 2.43-2.53 (m, 1H), 2.25-2.33 (m, 1H), 2.24 (d, J = 2.0 Hz, 3H), 1.96-2.10 (m, 2H), 1.85-1.95 (m, 2H).

실시예 11 화합물 13의 합성

화합물 13-1(45.3 mg, 435 μmol)의 디클로로메탄(2.0 mL) 용액에 트리에틸아민(14.7 mg, 145 μmol), 화합물 6-19의 트리플루오로아세트산염(90.0 mg, 145 μmol) 및 2-(7-아자벤조트리아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(110 mg, 290 μmol)를 첨가하고, 반응액을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Gemini-NX C18, 70 mm × 30 mm 3 μm, A: 물(10 mmol/L NH4HCO3); B: 아세토니트릴, 35%-75%: 11분)로 분리하여 화합물 13을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 604, 실측값 604.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.28-7.35 (m, 1H), 7.06-7.13 (m, 1H), 6.89-6.98 (t, 1H), 6.10-6.20 (m, 1H), 4.88-5.04 (m, 1H), 4.48-4.54 (m, 1H), 4.29-4.40 (m, 2H), 3.89-4.23 (m, 3H), 3.63-3.71 (m, 5H), 3.40-3.58 (m, 1H), 3.14-3.27 (m, 4H), 2.83-3.13 (m, 7H), 2.71-2.79 (m, 1H), 2.45-2.54 (m, 4H), 2.32-2.39 (m, 1H), 2.25-2.30 (s, 3H), 2.04-2.14 (m, 1H), 1.78-1.93 (m, 3H), 1.66-1.75 (m, 1H).

실시예 12 화합물 14의 합성

(1) 화합물 14-1(1.0 g, 5.18 mmol)의 아세토니트릴(10.0 mL) 용액에 플루오르화은(1.97 g, 15.5 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 감압 농축하여, 화합물 14-2를 얻었다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.90-7.04 (m, 1H), 6.07-6.16 (m, 1H), 5.09-5.14 (m, 1H), 4.98-5.03 (m, 1H), 4.19-4.26 (m, 2H), 1.29-1.33 (m, 3H).

(2) 화합물 14-2(400 mg, 3.03 mmol)의 테트라히드로푸란(3.0 mL) 용액에 수산화리튬(381 mg, 9.08 mmol) 및 물(3.0 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액에 염화수소 수용액(20 mL, 1 mol/L)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(50.0 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(50.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하여 화합물 14-3을 얻었다.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.36-12.68 (s, 1H), 6.80-6.96 (m, 1H), 5.88-6.04 (m, 1H), 5.03-5.22 (m, 2H).

(3) 화합물 14-3(45.3 mg, 435 μmol)의 디클로로메탄(2.0 mL) 용액에 트리에틸아민(14.7 mg, 145 μmol), 화합물 6-19의 트리플루오로아세트산염(90.0 mg, 145 μmol) 및 2-(7-아자벤조트리아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(110 mg, 290 μmol)를 첨가하고, 반응액을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Gemini-NX C18, 70 mm × 30 mm 3 μm, A: 물(10 mmol/L NH4HCO3); B: 아세토니트릴, 35%-75%: 11분)로 분리하여 화합물 14를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 592, 실측값 592.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.28-7.35 (m, 1H), 7.06-7.13 (m, 1H), 6.89-6.98 (t, 1H), 6.56-6.84 (m, 1H), 5.02-5.19 (m, 1H), 4.28-4.41 (m, 2H), 3.86-4.19 (m, 3H), 3.65-3.74 (m, 2H), 3.34-3.61 (m, 3H), 2.83-3.28 (m, 10H), 2.70-2.80 (m, 1H), 2.43-2.53 (m, 4H), 2.32-2.40 (m, 1H), 2.25-2.31 (s, 3H), 2.04-2.13 (m, 1H), 1.78-1.94 (m, 3H), 1.65-1.75 (m, 1H).

실시예 13 화합물 15의 합성

화합물 15-1(45.3 mg, 435 μmol)의 디클로로메탄(2.0 mL) 용액에 트리에틸아민(14.7 mg, 145 μmol), 화합물 6-19의 트리플루오로아세트산염(90.0 mg, 145 μmol) 및 2-(7-아자벤조트리아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(110 mg, 290 μmol)를 첨가하고, 반응액을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Luna C18, 100 mm × 30 mm 3 μm, A: 물(0.225% 포름산); B: 아세토니트릴, 0%-20%: 8분)로 분리하여 화합물 15의 포름산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 617, 실측값 617.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.29-7.37 (m, 1H), 7.07-7.15 (m, 1H), 6.73-7.03 (m, 3H), 4.90-5.20 (m, 1H), 4.65-4.73 (m, 1H), 4.51-4.57 (m, 1H), 3.85-4.47 (m, 3H), 3.61-3.82 (m, 6H), 3.42-3.59 (m, 1H), 3.04-3.29 (m, 6H), 2.87-3.03 (m, 6H), 2.67-2.80 (m, 6H), 2.34-2.56 (m, 2H), 2.26-2.33 (m, 3H), 1.88-2.20 (m, 4H).

실시예 14 화합물 16의 합성

화합물 16-1(45.3 mg, 435 μmol)의 디클로로메탄(2.0 mL) 용액에 트리에틸아민(14.7 mg, 145 μmol), 화합물 6-19의 트리플루오로아세트산염(90.0 mg, 145 μmol) 및 2-(7-아자벤조트리아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(110 mg, 290 μmol)를 첨가하고, 반응액을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Luna C18, 100 mm × 30 mm 3 μm, A: 물(0.225% 포름산); B: 아세토니트릴, 0%-20%: 8분)로 분리하여 화합물 16의 포름산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 574, 실측값 574.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.29-7.36 (m, 1H), 7.08-7.14 (m, 1H), 6.90-6.99 (m, 1H), 5.31-5.39 (m, 1H), 5.14-5.24 (m, 1H), 4.89-5.07 (m, 1H), 4.67-4.73 (m, 1H), 4.48-4.56 (m, 1H), 3.89-4.32 (m, 3H), 3.76-3.85 (m, 1H), 3.63-3.74 (m, 3H), 3.34-3.49 (m, 1H), 3.15-3.27 (m, 3H), 2.85-3.14 (m, 9H), 2.45-2.56 (m, 1H), 2.33-2.41 (m, 1H), 2.27-2.32 (m, 3H), 2.02-2.22 (m, 3H), 1.97-2.01 (m, 3H), 1.87-1.95 (m, 1H).

실시예 15 화합물 17의 합성

화합물 17-1(45.3 mg, 435 μmol)의 디클로로메탄(2.0 mL) 용액에 트리에틸아민(14.7 mg, 145 μmol), 화합물 6-19의 트리플루오로아세트산염(90.0 mg, 145 μmol) 및 2-(7-아자벤조트리아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(110 mg, 290 μmol)를 첨가하고, 반응액을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Luna C18, 100 mm × 30 mm 3 μm, A: 물(0.225% 포름산); B: 아세토니트릴, 0%-20%: 8분)로 분리하여 화합물 17의 포름산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 572, 실측값 572.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.29-7.36 (m, 1H), 7.06-7.15 (m, 1H), 6.90-6.99 (m, 1H), 4.66-4.75 (m, 1H), 4.35-4.58 (m, 2H), 4.01-4.32 (m, 2H), 3.66-3.86 (m, 4H), 3.39-3.60 (m, 1H), 2.85-3.27 (m, 12H), 2.34-2.57 (m, 2H), 2.27-2.33 (m, 3H), 2.06-2.21 (m, 5H), 1.87-2.04 (m, 2H), 1.61-1.75 (m, 1H).

실시예 16 화합물 18의 합성

(1) 화합물 18-1(24.0 g, 144 mmol)의 톨루엔(300 mL) 용액에 화합물 18-2(21.0 g, 173 mmol), 테트라에틸티타네이트(65.9 g, 289 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 120℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액에 물(100 mL) 및 에틸 아세테이트(400 mL)를 첨가하고, 여과하며, 필터 케이크를 에틸 아세테이트(400 mL × 4)로 세척한 다음, 유기상을 병합하고 포화 식염수(400 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 5 : 1)로 분리하여 화합물 18-3을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 270, 실측값 270.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.35-7.40 (m, 1H), 7.27-7.32 (m, 2H), 3.45-3.60 (m, 1H), 3.06-3.15 (m, 3H), 1.36 (s, 9H).

(2) 에틸 아세테이트(3.27 g, 37.1 mmol)를 테트라히드로푸란(20.0 mL)에 용해시키고, -65℃에서 질소 보호하에 리튬 디이소프로필아미드(2 mol/L, 7.4 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 적가하며, 반응액을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 화합물 18-3(2.00 g, 7.41 mmol)의 테트라히드로푸란(20.0 mL) 용액을 적가하고, -65℃에서 2시간 동안 계속 교반하였다. 0℃로 온도를 올린 후, 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(50.0 mL)을 첨가하여 반응을 퀀칭하고, 에틸 아세테이트(50.0 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 염화암모늄 수용액(50.0 mL × 1) 및 포화 식염수(50.0 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 3 : 1)로 분리하여 화합물 18-4를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 358, 실측값 358.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.21-7.25 (m, 1H), 7.14-7.19 (m, 2H), 5.14 (s, 1H), 4.11-4.20 (m, 2H), 3.68 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 3.33 (dt, J = 16.4, 8.4 Hz, 1H), 2.90 (ddd, J = 16.4, 9.2, 3.6 Hz, 1H), 2.78 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 2.68 (ddd, J = 13.2, 9.2, 3.6 Hz, 1H), 2.29-2.38 (m, 1H), 1.23-1.27 (m, 3H), 1.20 (s, 9H).

(3) 화합물 18-4(1.40 g, 3.91 mmol)의 에탄올(15.0 mL) 용액에 염산의 디옥산 용액(4 mol/L, 5.0 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 18-5의 염산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 254, 실측값 254.

(4) 화합물 18-5의 염산염(1.14 g, 3.93 mmol)의 에탄올(12.0 mL) 용액에 화합물 18-6(8.17 g, 81.6 mmol), 산화구리(62.5 mg, 786 μmol), 트리에틸아민(1.19 g, 11.8 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 85℃의 밀봉된 튜브에서 8시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(100 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(100 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(100 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 10 : 1)로 분리하여 화합물 18-7을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 354, 실측값 354.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.02-7.18 (m, 3H), 4.09-4.14 (m, 2H), 4.02 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.86-3.03 (m, 3H), 2.72-2.86 (m, 2H), 2.63-2.72 (m, 1H), 2.41-2.50 (m, 4H), 2.29 (m, 1H), 1.22-1.26 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.12 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

(5) 화합물 18-7(900 mg, 2.54 mmol)의 에탄올(15.0 mL) 용액에 파라포름알데히드(900 mg), 나트륨 시아노보로하이드라이드(480 mg, 7.64 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 10시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(30.0 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(30.0 mL × 1)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(30.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 15 : 1)로 분리하여 화합물 18-8을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 368, 실측값 368.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.08-7.16 (m, 2H), 7.01-7.06 (m, 1H), 4.10 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.80 (dtt, J = 10.4, 7.2, 3.6 Hz, 2H), 3.32 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 2.94 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 2.87-2.92 (m, 2H), 2.74 (dt, J = 12.8, 7.2 Hz, 1H), 2.50-2.56 (m, 1H), 2.43-2.49 (m, 2H), 2.35 (dt, J = 14.0, 8.0 Hz, 1H), 2.20-2.28 (m, 1H), 2.14 (s, 3H), 1.24 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.91 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

(6) -78℃에서 화합물 18-8(780 mg, 2.12 mmol)의 테트라히드로푸란(10.0 mL) 용액에 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드(1 mol/L, 6.4 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -65℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(50.0 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(50.0 mL × 1)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(50.0 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 19 : 1)로 분리하여 화합물 18-9를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 322, 실측값 322.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.15-7.20 (m, 2H), 7.10-7.14 (m, 1H), 4.26-4.34 (m, 1H), 4.17-4.25 (m, 1H), 3.61 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 3.04-3.17 (m, 2H), 2.71-3.04 (m, 3H), 2.24-2.30 (m, 1H), 2.15-2.22 (m, 1H), 2.14 (s, 3H), 1.76 (ddd, J = 13.2, 8.4, 2.4 Hz, 1H), 1.31 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

(7) 화합물 18-9(475 mg, 1.48 mmol)의 에탄올(10.0 mL) 용액에 화합물 18-10(225 mg, 2.96 mmol) 및 나트륨 에톡시드(301mg, 4.42 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 염산(1 mol/L)으로 pH 값을 6으로 조절하였다. 고체 석출 후, 여과하고, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 18-11을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 334, 실측값 334.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.41 (s, 1H), 12.27 (s, 1H), 7.23-7.31 (m, 3H), 3.52 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 2.88-3.04 (m, 4H), 2.30-2.37 (m, 1H), 2.16-2.25 (m, 1H), 2.03 (s, 3H), 1.66 (t, J = 10.0 Hz, 1H).

(8) 화합물 18-11(320 mg, 959 μmol)의 수용액(10.0 mL) 에 클로로아세트산(410 g, 4.34 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 여액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 pH 값을 8로 조절한 다음, 고체가 석출되었다. 여과 후, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 18-12를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 318, 실측값 318.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.00 (s, 1H), 10.76 (s, 1H), 7.22-7.33 (m, 3H), 3.47 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 2.85-2.99 (m, 4H), 2.13-2.25 (m, 2H), 2.02 (s, 3H), 1.59-1.69 (m, 1H).

(9) 화합물 18-12(260 mg, 818 μmol)를 옥시염화인(8.25 g, 53.8 mmol)에 용해시키고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응액을 디클로로메탄(30.0 mL)으로 희석하고, 포화 탄산수소나트륨 수용액(30.0 mL)을 첨가하며, 포화 탄산나트륨 수용액으로 pH 값을 8로 조절하고, 유기상을 분리하여 포화 탄산수소나트륨 수용액(30.0 mL × 2) 및 포화 식염수(30.0 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하여 화합물 18-13을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 356, 실측값 356.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.15-7.26 (m, 3H), 3.72-4.23 (m, 2H), 3.43-3.69 (m, 2H), 3.00-3.08 (m, 1H), 2.81-2.96 (m, 2H), 2.31 (s, 3H), 0.77-1.27 (m, 1H).

(10) 화합물 18-13(180 mg, 508 μmol)의 N-메틸피롤리돈(5.0 mL) 용액에 탄산칼륨(211 mg, 1.53 mmol) 및 화합물 18-14(137 mg, 608 μmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 50℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(30.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(30.0 mL × 5)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 6 : 1)로 분리하여 화합물 18-15를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 543, 실측값 543.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.14-7.34 (m, 3H), 4.64 (s, 1H), 4.10-4.25 (m, 1H), 3.88-4.10 (m, 3H), 3.71 (d, J = 9.6 Hz, 2H), 3.33-3.49 (m, 2H), 3.15-3.30 (m, 2H), 3.01 (dt, J = 17.6, 8.8 Hz, 3H), 2.75 (dd, J = 18.0, 3.6 Hz, 1H), 2.38-2.52 (m, 1H), 2.24 (d, J = 0.8 Hz, 3H), 1.78-1.87 (m, 1H), 1.51 (d, J = 1.6 Hz, 9H).

(11) 화합물 18-15(150 mg, 276 μmol)의 디옥산(5.0 mL) 용액에 화합물 18-16(95.4 mg, 828 μmol), 탄산칼륨(115 mg, 832 μmol), 2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐(52.6 mg, 110 μmol) 및 비스(디벤질리덴아세톤)팔라듐(50.6 mg, 55.3 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(20.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 10 : 1)로 분리하여 화합물 18-17을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 622, 실측값 622.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.16-7.31 (m, 3H), 4.62 (s, 1H), 4.38-4.54 (m, 2H), 4.13-4.25 (m, 1H), 3.91-4.12 (m, 3H), 3.62-3.72 (m, 2H), 3.36-3.51 (m, 2H), 3.12-3.20 (m, 2H), 2.91-3.08 (m, 4H), 2.65-2.76 (m, 4H), 2.48 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 2.24 (s, 3H), 2.07-2.22 (m, 2H), 1.93 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 1.77-1.88 (m, 3H), 1.51 (d, J = 2.4 Hz, 9H).

(12) 화합물 18-17(120.0 mg, 193 μmol)의 디클로로메탄(3.0 mL) 용액에 트리플루오로아세트산(1.0 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 18-18의 트리플루오로아세트산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 522, 실측값 522.

(13) 화합물 18-18의 트리플루오로아세트산염(50.0 mg, 78.6 μmol)의 디클로로메탄(2.0 mL) 용액에 트리에틸아민(23.9 mg, 236 μmol) 및 화합물 18-19(14.3 mg, 158 μmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -65℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Luna C18, 100 mm × 30 mm 3 μm, A: 물(0.225% 포름산); B: 아세토니트릴, 0%-30%: 8분)로 분리하여 화합물 18의 포름산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 576, 실측값 576.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.21-7.29 (m, 3H), 6.80 (s, 1H), 6.30 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.84 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.67 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 4.46-4.53 (m, 1H), 4.18-4.38 (m, 1H), 4.00-4.18 (m, 2H), 3.62-3.84 (m, 4H), 3.45-3.62 (m, 2H), 3.33-3.38 (m, 1H), 3.15-3.28 (m, 2H), 2.98-3.14 (m, 4H), 2.96 (d, J = 9.2 Hz, 3H), 2.91 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 2.73 (dd, J = 17.6, 3.2 Hz, 1H), 2.44-2.51 (m, 1H), 2.33 (dt, J = 8.4, 6.4 Hz, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.10-2.17 (m, 1H), 2.02-2.09 (m, 1H), 1.93-2.02 (m, 1H), 1.79-1.88 (m, 1H).

실시예 17 화합물 19의 합성

화합물 19-1(21.3 mg, 237 μmol)의 디클로로메탄(2.0 mL) 용액에 트리에틸아민(23.9 mg, 236 μmol), 화합물 18-18의 트리플루오로아세트산염(90.0 mg, 145 μmol) 및 프로필포스포닉산 무수물 용액(150 mg, 236 μmol, 50% 에틸 아세테이트 용액)을 첨가하고, 반응액을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Luna C18, 100 mm × 30 mm 3 μm, A: 물(0.225% 포름산); B: 아세토니트릴, 0%-20%: 8분)로 분리하여 화합물 19의 포름산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 594, 실측값 595.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.21-7.29 (m, 3H), 5.37 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 5.29 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.64 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.48 (dt, J = 12.0, 5.6 Hz, 2H), 4.34 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.08-4.26 (m, 2H), 4.03 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 3.66-3.73 (m, 2H), 3.48-3.63 (m, 3H), 3.37 (s, 1H), 3.18-3.25 (m, 1H), 2.95-3.07 (m, 4H), 2.92 (d, J = 10.0 Hz, 3H), 2.73 (dd, J = 18.0, 3.6 Hz, 1H), 2.49 (q, J = 10.4 Hz, 1H), 2.28-2.36 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.00-2.12 (m, 2H), 1.92-1.99 (m, 1H), 1.79-1.86 (m, 1H), 1.67 (s, 1H).

실시예 18 화합물 20의 합성

(1) 화합물 20-1(30.0 g, 205 mmol)의 톨루엔(500 mL) 용액에 화합물 20-2(29.9 g, 247 mmol), 테트라에틸티타네이트(93.6 g, 410 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액에 물(200 mL) 및 에틸 아세테이트(300 mL)를 첨가하고, 여과하며, 필터 케이크를 에틸 아세테이트(300 mL × 4)로 세척한 다음, 유기상을 병합하고, 포화 식염수(300 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 11 : 1)로 분리하여 화합물 20-3을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 250, 실측값 250.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.17 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.35-7.42 (m, 1H), 7.22-7.26 (m, 1H), 7.19 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.23-3.34 (m, 1H), 3.06 (m, 1H), 2.85-2.90 (m, 2H), 1.95-2.07 (m, 2H), 1.33 (s, 9H).

(2) 에틸 아세테이트(60.1 g, 682 mmol)를 테트라히드로푸란(400 mL)에 용해시키고, -65℃에서 질소 보호하에 리튬 디이소프로필아미드(2 mol/L, 137 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 적가하며, 반응액을 -65℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 화합물 20-3(34.0 g, 136 mmol)의 테트라히드로푸란(200 mL) 용액을 적가하고, -65℃에서 2시간 동안 계속 교반하였다. 0℃로 온도를 올린 후, 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(500 mL)을 첨가하여 반응을 퀀칭하고, 에틸 아세테이트(500 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고, 포화 염화암모늄 수용액(500 mL × 1) 및 포화 식염수(500 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 2 : 1)로 분리하여 화합물 20-4를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 338, 실측값 338.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.32-7.40 (m, 1H), 7.13-7.21 (m, 2H), 7.08-7.13 (m, 1H), 5.19 (s, 1H), 4.11-4.20 (m, 2H), 2.86-2.98 (m, 1H), 2.80-2.86 (m, 2H), 2.70-2.78 (m, 1H), 2.42-2.51 (m, 1H), 2.04-2.17 (m, 2H), 1.76-1.86 (m, 1H), 1.24-1.28 (m, 3H), 1.23 (s, 9H).

(3) 화합물 20-4(6.0 g, 17.8 mmol)의 에탄올(60.0 mL) 용액에 염산의 디옥산 용액(4 mol/L, 20.0 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 20-5의 염산염을 얻었다.

MS-ESI [M-NH₂+H]+, 계산값 217, 실측값 217.

(4) 화합물 20-5의 염산염(4.80 g, 17.8 mmol)의 에탄올(60.0 mL) 용액에 화합물 5-6(18.2 g, 182 mmol), 산화구리(283 mg, 3.56 mmol), 트리에틸아민(5.40 g, 53.4 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 85℃의 밀봉된 튜브에서 8시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(200 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고, 포화 식염수(200 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 10 : 1)로 분리하여 화합물 20-7을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 334, 실측값 334.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.53 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.09-7.18 (m, 2H), 7.03-7.08 (m, 1H), 4.09-4.15 (m, 4H), 2.73-2.80 (m, 4H), 2.62 (d, J = 14.0 Hz, 2H), 2.40-2.46 (m, 3H), 2.08 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 1.85-1.99 (m, 3H), 1.25 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.21 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

(5) 화합물 20-7(4.32 g, 13.0 mmol)의 에탄올(60.0 mL) 용액에 파라포름알데히드(3.89 g), 나트륨 시아노보로하이드라이드(2.45 g, 38.9 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(100 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(100 mL × 1)로 추출하며, 유기상을 병합하고, 포화 식염수(100 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 10: 1)로 분리하여 화합물 20-8을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 348, 실측값 348.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.43-7.52 (m, 1H), 7.05-7.13 (m, 2H), 6.95-7.04 (m, 1H), 4.04-4.12 (m, 2H), 3.73-3.83 (m, 2H), 2.79 (s, 2H), 2.76 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 2.71 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.56-2.63 (m, 1H), 2.39-2.48 (m, 1H), 2.30-2.38 (m, 1H), 2.21 (s, 3H), 2.10-2.15 (m, 2H), 1.81-1.90 (m, 1H), 1.70-1.80 (m, 1H), 1.22 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.94 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

(6) -65℃에서 화합물 20-8(3.10 g, 8.92 mmol)의 테트라히드로푸란(60.0 mL) 용액에 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드(1 mol/L, 17.8 mL mL, 테트라히드로푸란 용액)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -65℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(100 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(100 mL × 1)로 추출하며, 유기상을 순차적으로 포화 염화암모늄 수용액(100 mL × 1) 및 포화 식염수(100 mL × 1)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 감압 농축하며, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 10 : 1)로 분리하여 화합물 20-9를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 302, 실측값 302.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.49-7.75 (m, 1H), 7.21 (t, J=6.4 Hz, 1H), 7.10-7.17 (m, 1H), 7.05 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.20-4.33 (m, 2H), 3.45-3.63 (m, 1H), 3.14-3.28 (m, 1H), 2.64-2.76 (m, 3H), 2.51-2.63 (m, 1H), 2.01-2.14 (m, 3H), 1.80-2.00 (m, 2H), 1.63-1.80 (m, 3H), 1.30-1.34 (m, 3H).

(7) 화합물 20-9(3.78 g, 12.5 mmol)의 에탄올(70.0 mL) 용액에 화합물 20-10(1.91 g, 25.1 mmol) 및 나트륨 에톡시드(2.56 g, 37.6 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 8시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 염산(1 mol/L)으로 pH 값을 6으로 조절하였다. 고체 석출 후, 여과하고, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 20-11을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 314, 실측값 314.

(8) 중간체 20-11(3.36 g, 10.7 mmol)의 수용액(80.0 mL) 에 클로로아세트산(4.05 g, 42.9 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 여액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 pH 값을 8로 조절한 다음, 고체가 석출되었다. 여과 후, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 20-12를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 298, 실측값 298.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.98 (s, 1H), 10.69 (s, 1H), 7.45-7.51 (m, 1H), 7.17-7.24 (m, 1H), 7.11-7.17 (m, 1H), 7.04-7.10 (m, 1H), 3.46-3.52 (m, 1H), 2.99-3.07 (m, 1H), 2.65-2.72 (m, 2H), 2.52-2.55 (m, 2H), 1.95 (s, 3H), 1.84-1.91 (m, 1H), 1.71-1.80 (m, 1H), 1.51-1.64 (m, 2H).

(9) 화합물 20-12(1.00 g, 3.36 mmol)을 옥시염화인(10 mL)에 용해시키고, 반응액을 질소 보호하에 100℃의 밀봉된 튜브에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 얼음물(100 mL)을 첨가하며, 디클로로메탄(100 mL × 1)으로 추출하고, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(100 mL × 2) 및 포화 식염수(100 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하여 화합물 20-13을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 334, 실측값 334.

(10) 화합물 20-13(782 mg, 2.34 mmol)의 N-메틸피롤리돈(10.0 mL) 용액에 탄산칼륨(970 mg, 7.02 mmol) 및 화합물 20-14(633 mg, 2.81 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 50℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 물(30.0 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트로 추출(30.0 mL× 2)하였다. 유기상을 병합하고, 포화 식염수(30.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 0 : 1)로 분리하여 화합물 20-15를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 523, 실측값 523.

(11) 화합물 20-15(500 mg, 956 μmol)의 디옥산(10.0 mL) 용액에 화합물 20-16(330 mg, 2.87 mmol), 탄산세슘(934 mg, 2.88 mmol) 및 메탄술포나토(2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-비페닐)(2-아미노-1,1'-비페닐-2-일)팔라듐(160 mg, 191 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(50.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(50.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 9 : 1)로 분리하여 화합물 20-17을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 602, 실측값 602.

(12) 화합물 20-17(368 mg, 611 μmol)의 디클로로메탄(6.0 mL) 용액에 트리플루오로아세트산(3.08 g, 27.0 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 20-18의 트리플루오로아세트산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 502, 실측값 502.

(13) 화합물 20-18의 트리플루오로아세트산염(175 mg, 284 μmol)의 디클로로메탄(3.0 mL) 용액에 트리에틸아민(28.8 mg, 284 μmol)을 첨가하고, -78℃로 냉각시키며, 화합물 20-19(38.6 mg, 426 μmol)를 첨가하고, 질소 보호하에 -78℃에서 5분 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(30.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(30.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Xtimate C18, 100 mm × 30 mm 10 μm, A: 물(0.225% 포름산); B: 아세토니트릴, 0%-30%: 10분)로 분리하여 화합물 20의 포름산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 556, 실측값 556.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.47-7.58 (m, 1H), 7.07-7.28 (m, 3H), 6.70-6.95 (m, 1H), 5.84-5.84 (m, 1H), 5.77-5.90 (m, 1H), 4.66-4.67 (m, 1H), 4.46-4.53 (m, 1H), 4.29-4.41 (m, 1H), 3.96-4.25 (m, 3H), 3.72-3.87 (m, 3H), 3.56-3.70 (m, 2H), 3.20-3.28 (m, 1H), 3.09-3.18 (m, 2H), 3.01-3.08 (m, 2H), 2.94-3.00 (m, 3H), 2.85-2.93 (m, 1H), 2.63-2.84 (m, 3H), 2.29-2.40 (m, 1H), 2.11-2.22 (m, 4H), 1.93-2.10 (m, 4H), 1.75-1.87 (m, 2H).

실시예 19 화합물 21의 합성

화합물 20-18의 디클로로메탄 용액에 트리에틸아민을 첨가하여 pH를 7로 조절하였다. 상기 용액을 0℃로 냉각시키고, 화합물 21-1(92.2 mg, 1.02 mmol), 프로필포스포닉산 무수물(279 mg, 438 μmol)을 첨가하며, 25℃로 온도를 올려 0.5시간 동안 반응시켰다. 반응액을 물(30.0 mL)에 붓고, 디클로로메탄으로 추출(30.0 mL× 2)하였다. 유기상을 병합하고, 포화 식염수(30.0 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Xtimate C18, 100 mm × 30 mm 10 μm, A: 물(0.225% 포름산); B: 아세토니트릴, 0%-30%: 10분)로 분리하여 화합물 21의 포름산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 574, 실측값 574.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.52-7.53 (m, 1H), 7.19-7.26 (m, 1H), 7.14-7.18 (m, 1H), 7.09-7.13 (m, 1H), 5.22-5.47 (m, 2H), 4.66-4.70 (m, 1H), 4.46-4.53 (m, 1H), 4.16-4.17 (m, 2H), 3.66-3.86 (m, 4H), 3.46-3.65 (m, 2H), 3.33-3.40 (m, 1H), 3.22-3.29 (m, 1H), 3.05-3.19 (m, 4H), 3.01-3.04 (m, 1H), 2.90-3.00 (m, 4H), 2.72-2.82 (m, 2H), 2.28-2.40 (m, 1H), 2.09-2.15 (m, 4H), 1.92-2.06 (m, 4H), 1.75-1.86 (m, 2H).

실시예 20 화합물 22의 합성

(1) 화합물 22-1(25.0 g, 168 mmol)의 톨루엔(500 mL) 용액에 화합물 22-2(26.5 g, 219 mmol), 테트라에틸티타네이트(77.0 g, 337 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 120℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액에 물(400 mL)을 첨가하고, 여과하며, 필터 케이크를 에틸 아세테이트(400 mL × 2)로 세척하한 다음, 유기상을 병합하고 포화 식염수(500 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 0 : 1)로 분리하여 화합물 22-3을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 252, 실측값 252.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.98-8.03 (m, 1H), 7.35-7.42 (m, 1H), 6.89-7.02(m, 2H), 4.27-4.42 (m, 2H), 3.46-3.56 (m, 1H), 3.22-3.34 (m, 1H) , 1.32-1.34 (s, 9H).

(2) 에틸 아세테이트(54.6 g, 620 mmol)를 테트라히드로푸란(1000 mL)에 용해시키고, -78℃에서 질소 보호하에 리튬 디이소프로필아미드(2 mol/L, 155 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 적가하며, 반응액을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 화합물 22-3(39.0 g, 155 mmol)의 테트라히드로푸란(500 mL) 용액을 첨가하고, -78℃에서 3시간 동안 계속 교반하였다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(2000 mL)을 첨가하여 반응을 퀀칭하고, 에틸 아세테이트(2000 mL)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 염화암모늄 수용액(2000 mL) 및 포화 식염수(2000 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 4 : 1)로 분리하여 화합물 22-4를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 340, 실측값 340.

(3) 화합물 22-4(5.00 g, 14.7 mmol)의 에탄올(50.0 mL) 용액에 염산의 디옥산 용액(4 mol/L, 15.0 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 22-5의 염산염을 얻었다.

MS-ESI [M-NH₂+H]+, 계산값 219, 실측값 219.

(4) 화합물 22-5의 염산염(4.00 g, 14.7 mmol)의 에탄올(40.0 mL) 용액에 화합물 22-6(14.7 g, 147 mmol), 산화구리(234 mg, 2.94 mmol), 트리에틸아민(1.49 g, 14.7 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 85℃의 밀봉된 튜브에서 8시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(100 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(100 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 6 : 1)로 분리하여 화합물 22-7을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 336, 실측값 336.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.34-7.42 (m, 1H), 7.08-7.16 (m, 1H), 6.85-6.95 (m, 1H), 6.77-6.83 (m, 1H), 4.30-4.37 (m, 1H), 4.18-4.26 (m, 1H), 4.11-4.15 (m, 5H), 2.75-2.79 (m, 2H), 2.48-2.59 (m, 2H), 2.42-2.45 (m, 2H), 2.28-2.37 (m, 1H), 2.05-2.12 (m, 1H), 1.25-1.27 (m, 3H), 1.20-1.24 (m, 3H)

(5) 화합물 22-7(3.00 g, 8.94 mmol)의 에탄올(30.0 mL) 용액에 파라포름알데히드(1.34 g), 나트륨 시아노보로하이드라이드(1.69 g, 26.8 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(100 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(100 mL)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(50 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 4 : 1)로 분리하여 화합물 22-8을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 350, 실측값 350.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.33-7.37 (m, 1H), 7.09-7.15 (m, 1H), 6.82-6.88 (m, 1H), 6.74-6.81 (m, 1H), 4.26-4.34 (m, 1H), 4.15-4.23 (m, 1H), 4.06-4.14 (m, 2H), 3.88-3.99 (m, 2H), 2.89-2.98 (m, 1H), 2.70-2.81 (m, 3H), 2.32-2.46 (m, 3H), 2.24-2.30 (m, 1H), 2.22-2.24 (m, 3H), 1.20-1.27 (m, 3H), 1.02-1.08 (t, 3H).

(6) -78℃에서 화합물 22-8(1.75 g, 5.01 mmol)의 테트라히드로푸란(30.0 mL) 용액에 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드(1 mol/L, 15 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -78℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(70 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(500 mL × 1)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(50 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 6 : 1)로 분리하여 화합물 22-9를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 304, 실측값 304.

(7) 화합물 22-9(1.03 g, 3.40 mmol)의 에탄올(30.0 mL) 용액에 화합물 22-10(516 mg, 6.79 mmol) 및 나트륨 에톡시드(693 mg, 10.1 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 염산(1 mol/L)으로 pH 값을 6으로 조절하였다. 고체 석출 후, 여과하고, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 22-11을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 316, 실측값 316.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.54-12.84 (m, 2H), 7.37-7.42 (m, 1H), 7.12-7.18 (m, 1H), 6.92-6.99 (m, 1H), 6.75-6.81 (m, 1H), 4.22-4.31 (m, 1H), 3.92-4.01 (t, 1H), 3.51-3.60 (d, 1H), 3.02-3.11 (d, 1H), 2.70-2.77 (s, 2H), 2.03-2.13 (m, 1H), 1.88-1.96 (m, 3H), 1.54-1.63 (d, 1H) .

(8) 중간체 22-11(1.05 g, 3.33 mmol)의 수용액(100.0 mL)에 클로로아세트산(1.26 g, 13.3 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 여액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 pH 값을 8로 조절한 다음, 고체가 석출되었다. 여과 후, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 22-12를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 300, 실측값 300.

(9) 화합물 22-12(1.70 g, 5.68 mmol)를 옥시염화인(16.5 g, 107 mmol)에 용해시키고, 반응액을 질소 보호하에 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 디클로로메탄(40 mL)으로 추출하며, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(20 mL × 2) 및 포화 식염수(200 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 감압 농축하여, 화합물 22-13을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 336, 실측값 336.

(10) 화합물 22-13(1.00 g, 2.97 mmol)의 N-메틸피롤리돈(10.0 mL) 용액에 탄산칼륨(1.23 g, 8.92 mmol) 및 화합물 22-14(846 mg, 3.57 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 50℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(30.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(30.0 mL × 5)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하여 화합물 22-15를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 525, 실측값 525.

(11) 화합물 22-15(700 mg, 1.33 mmol)의 디옥산(10.0 mL) 용액에 화합물 22-16(460 mg, 4.00 mmol), 탄산세슘(1.30 g, 4.00 mmol) 및 메탄술포나토(2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-비페닐)(2-아미노-1,1'-비페닐-2-일)팔라듐(223 mg, 266 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(40.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(40.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 15 : 1)로 분리하여 화합물 22-17을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 604, 실측값 604.

(12) 화합물 22-17(150.0 mg, 248 μmol)의 디클로로메탄(3.0 mL) 용액에 트리플루오로아세트산(1.54 g)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 에틸 아세테이트(50 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(50 mL × 1) 및 포화 식염수(50 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 22-18의 트리플루오로아세트산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 504, 실측값 504.

(13) 화합물 22-18의 트리플루오로아세트산염(120.0 mg, 194 μmol)의 디클로로메탄(2.0 mL) 용액에 트리에틸아민(14.7 mg, 145 μmol) 및 화합물 22-19(26.3 mg, 291 μmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -78℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Luna C18, 100 mm × 30 mm 3 μm, A: 물(0.225% 포름산); B: 아세토니트릴, 0%-30%: 8분)로 분리하여 화합물 22의 포름산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 558, 실측값 558.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.40-7.46 (m, 1H), 7.13-7.19 (m, 1H), 6.94-7.00 (m, 1H), 6.73-6.90 (m, 2H), 6.22-6.35 (m, 1H), 5.77-5.88 (m, 1H), 4.95-5.12 (m, 1H), 4.67-4.73 (m, 1H), 4.48-4.55 (m, 1H), 3.99-4.39 (m, 5H), 3.56-3.84 (m, 5H), 3.36-3.53 (m, 1H), 3.09-3.28 (m, 5H), 2.97-3.02 (m, 3H), 2.84-2.93 (m, 1H), 2.31-2.44 (m, 2H), 1.97-2.19 (m, 6H), 1.68-1.79 (m, 1H).

실시예 21 화합물 23의 합성

0℃에서 화합물 22-18(220 mg, 356 μmol)의 디클로로메탄(2.0 mL) 용액에 트리에틸아민(14.7 mg, 145 μmol), 화합물 23-1(160.0 mg, 1.78mmol) 및 프로필포스포닉산 무수물 용액(679.98 mg, 1.07mol, 50% 에틸 아세테이트)을 첨가하고, 반응액을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Genimi NX C18, 150mm ×40mm 5um, A: 물(0.05% 염산); B: 아세토니트릴, 58%-35%: 10분)로 분리하여 화합물 23의 염산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 576, 실측값 576.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.83-7.96 (m, 1H), 7.38-7.44 (m, 1H), 7.11-7.19 (m, 1H), 6.97-7.04 (m, 1H), 5.19-5.51 (m, 2H), 4.95-5.16 (m, 2H), 4.37-4.72 (m, 4H), 3.98-4.30 (m, 4H), 3.59-3.82 (m, 5H), 3.19-3.27 (m, 1H), 3.03-3.13 (m, 4H), 2.67-2.76 (m, 4H), 2.37-2.54 (m, 2H), 1.77-2.30 (m, 6H).

실시예 22 화합물 24의 합성

(1) 화합물 24-1(20.0 g, 123 mmol)의 톨루엔(500 mL) 용액에 화합물 24-2(19.4 g, 160 mmol), 테트라에틸티타네이트(56.2 g, 246 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 120℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액에 물(400 mL)을 첨가하고, 여과하며, 필터 케이크를 에틸 아세테이트(400 mL × 2)로 세척한 다음, 유기상을 병합하고 포화 식염수(500 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 0 : 1)로 분리하여 화합물 24-3을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 266, 실측값 266.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.38-7.43 (m, 1H), 7.28-7.34 (m, 1H), 6.93-6.98 (m, 1H), 3.87-3.90 (m, 3H), 3.40-3.51 (m, 1H), 3.01-3.08 (m, 3H), 1.31-1.34 (s, 9H).

(2) 에틸 아세테이트(15.8 g, 179 mmol)를 테트라히드로푸란(500 mL)에 용해시키고, -78℃에서 질소 보호하에 리튬 디이소프로필아미드(2 mol/L, 44.8 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 적가하며, 반응액을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 화합물 24-3(11.9 g, 44.8 mmol)의 테트라히드로푸란(500 mL) 용액을 적가하고, -78℃에서 3시간 동안 계속 교반하였다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(1000 mL)을 첨가하여 반응을 퀀칭하고, 에틸 아세테이트(1000 mL)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 염화암모늄 수용액(1000 mL × 1) 및 포화 식염수(1000 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 4 : 1)로 분리하여 화합물 24-4를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 354, 실측값 354.

(3) 화합물 24-4(8.00 g, 22.6 mmol)의 에탄올(50.0 mL) 용액에 염산의 디옥산 용액(4 mol/L, 15.0 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 24-5의 염산염을 얻었다.

MS-ESI [M-NH₂+H]+, 계산값 233, 실측값 233.

(4) 화합물 24-5의 염산염(6.40 g, 22.4 mmol)의 에탄올(40.0 mL) 용액에 화합물 24-6(22.4 g, 223 mmol), 산화구리(356 mg, 4.48 mmol), 트리에틸아민(2.27 g, 22.4 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 85℃의 밀봉된 튜브에서 8시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(100 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(100 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 6 : 1)로 분리하여 화합물 24-7을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 350, 실측값 350.

(5) 화합물 24-7(3.80 g, 10.8 mmol)의 에탄올(30.0 mL) 용액에 파라포름알데히드(1.60 g), 나트륨 시아노보로하이드라이드(2.05 g, 32.6 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(100 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(100 mL)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(50 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 4 : 1)로 분리하여 화합물 24-8을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 364, 실측값 364.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.12-7.21 (m, 1H), 6.82-6.89 (m, 1H), 6.67-6.75 (m, 1H), 4.08-4.16 (m, 3H), 3.91-3.94 (m, 1H), 3.80-3.83 (m, 3H), 2.75-2.94 (m, 4H), 2.60-2.68 (m, 2H), 2.27-2.48 (m, 4H), 2.13-2.21 (m, 3H), 1.24-1.27 (m, 3H), 1.01-1.07 (t, 3H) .

(6) -78℃에서 화합물 24-8(4.60 g, 12.6 mmol)의 테트라히드로푸란(100.0 mL) 용액에 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드(1 mol/L, 38 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -78℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(70 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(200 mL)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(50 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 6 : 1)로 분리하여 화합물 24-9를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 318, 실측값 318.

(7) 화합물 24-9(2.00 g, 6.30 mmol)의 에탄올(30.0 mL) 용액에 화합물 24-10(959 mg, 12.6 mmol) 및 나트륨 에톡시드(1.29 g, 18.9 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 염산(1 mol/L)으로 pH 값을 6으로 조절하였다. 고체 석출 후, 여과하고, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 24-11을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 330, 실측값 330.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.19-12.46 (m, 2H), 7.21-7.27 (m, 1H), 6.83-6.88 (m, 1H), 6.75-6.82 (m, 1H), 3.77-3.81 (m, 3H), 3.43-3.53 (m, 1H), 2.98-3.10 (m, 1H), 2.58-2.83 (m, 3H), 2.38-2.45 (m, 1H), 2.09-2.19 (m, 1H), 1.91-2.02 (s, 3H), 1.58-1.69 (m, 1H).

(8) 중간체 24-11(1.72 g, 5.22 mmol)의 수용액(10.0 mL) 에 클로로아세트산(1.97 g, 20.8 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 여액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 pH 값을 8로 조절한 다음, 고체가 석출되었다. 여과 후, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 24-12를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 314, 실측값 314.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.95-11.02 (s, 1H), 10.70-10.76 (s, 1H), 7.20-7.26 (t, 1H), 6.77-6.87 (dd, 2H), 3.78-3.81 (m, 3H), 3.37-3.46 (m, 1H), 2.96-3.04 (m, 1H), 2.55-2.87 (m, 3H), 2.27-2.35 (m, 1H), 2.09-2.20 (m, 1H), 1.94-1.99 (s, 3H), 1.57-1.68 (m, 1H).

(9) 화합물 24-12(1.34 g, 4.28 mmol)를 옥시염화인(16.5 g, 107 mmol)에 용해시키고, 반응액을 질소 보호하에 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 디클로로메탄(40 mL)으로 추출하며, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(20 mL × 2) 및 포화 식염수(100 mL × 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 감압 농축하여, 화합물 24-13을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 350, 실측값 350.

(10) 화합물 24-13(1.12 g, 3.20 mmol)의 N-메틸피롤리돈(10.0 mL) 용액에 탄산칼륨(1.33 g, 9.59 mmol) 및 화합물 24-14(864 mg, 3.84 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 50℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(30.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(30.0 mL × 5)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하여 화합물 24-15를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 539, 실측값 539.

(11) 화합물 24-15(700 mg, 1.30 mmol)의 디옥산(10.0 mL) 용액에 화합물 24-16(448 mg, 3.90 mmol), 탄산세슘(1.27 g, 3.90 mmol) 및 메탄술포나토(2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-비페닐)(2-아미노-1,1'-비페닐-2-일)팔라듐(217 mg, 259 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(40.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(40.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 15 : 1)로 분리하여 화합물 24-17을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 618, 실측값 618.

(12) 화합물 24-17(430.0 mg, 696 μmol)의 디클로로메탄(3.0 mL) 용액에 트리플루오로아세트산(1.54 g)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 에틸 아세테이트(50 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(50 mL) 및 포화 식염수(50 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 24-18의 트리플루오로아세트산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 518, 실측값 518.

(13) 화합물 24-18의 트리플루오로아세트산염(100.0 mg, 158 μmol)의 디클로로메탄(2.0 mL) 용액에 트리에틸아민(16.0 mg, 158 μmol) 및 화합물 24-19(21.4 mg, 237 μmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -78℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Luna C18, 100 mm × 30 mm ×3 μm, A: 물(0.225% 포름산); B: 아세토니트릴, 0%-30%: 8분)로 분리하여 화합물 24의 포름산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 558, 실측값 572.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.24-7.31 (m, 1H), 6.78-6.94 (m, 3H), 6.23-6.36 (m, 1H), 5.79-5.88 (m, 1H), 4.61-4.86 (m, 2H), 4.52-4.60 (m, 1H), 3.91-4.36 (m, 4H), 3.76-3.90 (m, 6H), 3.58-3.74 (m, 2H), 3.06-3.28 (m, 4H), 3.01-3.04 (m, 3H), 2.86-3.00 (m, 4H), 2.35-2.52 (m, 2H), 2.28-2.32 (m, 3H), 1.92-2.21 (m, 4H).

실시예 23 화합물 25의 합성

0℃에서 화합물 24-18(100 mg, 158 μmol)의 디클로로메탄(2.0 mL) 용액에 트리에틸아민(14.7 mg, 145 μmol), 화합물 25-1(71.2 mg, 791μmol) 및 프로필포스포닉산 무수물 용액(302 mg, 474 μmol, 50% 에틸 아세테이트 용액)을 첨가하고, 반응액을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Luna C18, 100 mm × 30 mm ×3 μm, A: 물(0.225% 포름산); B: 아세토니트릴, 0%-30%: 8분)로 분리하여 화합물 25의 포름산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 590, 실측값 590.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.21-7.32 (m, 1H), 6.83-6.90 (m, 2H), 5.23-5.43 (m, 2H), 4.69-4.74 (m, 1H), 4.50-4.57 (m, 1H), 4.00-4.36 (m, 3H), 3.63-3.88 (m, 8H), 3.40-3.58 (m, 1H), 2.81-3.29 (m, 12H), 2.34-2.50 (m, 2H), 2.23-2.28 (m, 3H), 1.89-2.21 (m, 4H).

실시예 24 화합물 26 및 27의 합성

(1) 화합물 8-8(3.00 g, 5.69 mmol)의 디옥산(80.0 mL) 용액에 화합물 26-1(1.81 mg, 11.4 mmol), 탄산세슘(5.56 g, 17.1 mmol), 메탄술포나토(2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-비페닐)(2-아미노-1,1'-비페닐-2-일)팔라듐(II)(300 mg, 359 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(200 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(200 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 8 : 1)로 분리하여 화합물 26-2를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 650, 실측값 650.

(2) 화합물 26-2(3.24 g, 4.99 mmol)의 디클로로메탄(50.0 mL) 용액에 염산의 디옥산 용액(1.25 mL, 4 mol/L)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 26-3의 염산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 550, 실측값 550.

(3) 화합물 26-3의 염산염(2.60 g, 4.44 mmol)의 디클로로메탄(30.0 mL) 용액에 트리에틸아민(1.35 g, 13.3 mmol) 및 화합물 26-4(803 mg, 8.87 μmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -78℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(60.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(30.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 25 : 1)로 분리하여 화합물 26-5를 얻었다.

(4) 화합물 26-5를 키랄 초임계 유체 크로마토그래피로 분해하여 화합물 26 및 27을 얻었다.

분리 조건: 크로마토그래피 컬럼 모델: Chiralpak OX-3; 크로마토그래피 컬럼 사양: 100 × 4.6 mm I.D., 3 μm; 주입량: 10 μL; 이동상: 이산화탄소:이소프로판올(0.05% 디에틸아민) = 60 : 40; 검출 파장: 254 nm; 컬럼 온도: 35℃.

화합물 6 유지 시간 2.047분, ee 값 99.28%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 604, 실측값 604.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.31 (td, J = 7.6, 5.2 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.91-6.97 (m, 1H), 6.71-6.90 (m, 1H), 6.28 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.83 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.19-5.37 (m, 1H), 5.03 (s, 1H), 4.54 (s, 1H), 4.16-4.22 (m, 1H), 4.10 (d, J = 10.4 Hz, 3H), 3.52-3.79 (m, 3H), 3.39-3.51 (m, 1H), 3.21-3.28 (m, 2H), 3.19 (d, J = 9.6 Hz, 2H), 3.11 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 3.04-3.09 (m, 1H), 2.99-3.04 (m, 2H), 2.89-2.98 (m, 2H), 2.85 (s, 1H), 2.49 (dt, J = 13.2, 8.8 Hz, 1H), 2.27-2.32 (m, 3H), 2.19-2.27 (m, 1H), 2.12-2.19 (m, 1H), 2.05-2.12 (m, 1H), 1.93-2.02 (m, 2H), 1.84-1.93 (m, 2H).

화합물 7 유지 시간 3.558분, ee 값 98.36%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 604, 실측값 604.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.32 (td, J = 7.6, 5.2 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.91-6.97 (m, 1H), 6.72-6.91 (m, 1H), 6.29 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.83 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.22-5.39 (m, 1H), 5.07 (s, 1H), 4.50-4.78 (m, 1H), 4.18-4.27 (m, 2H), 4.14 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 3.91-4.13 (m, 2H), 3.62-3.74 (m, 2H), 3.37-3.61 (m, 1H), 3.25-3.29 (m, 2H), 3.20-3.24 (m, 2H), 3.08-3.20 (m, 3H), 3.06 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 2.98-3.05 (m, 2H), 2.90 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 2.48 (dt, J = 13.2, 8.4 Hz, 1H), 2.28-2.37 (m, 1H), 2.24-2.28 (m, 3H), 2.18-2.24 (m, 1H), 2.10-2.16 (m, 1H), 1.94-2.03 (m, 2H), 1.90 (ddd, J = 13.2, 8.4, 4.4 Hz, 2H).

실시예 25 화합물 28 및 29의 합성

화합물 28-1(848 mg, 9.42 mmol)의 에틸 아세테이트(20.0 mL) 용액에 4A 분자체(1.80 g), 트리에틸아민(1.59 g, 1.57 mmol), 화합물 26-3의 염산염(1.84 g, 3.14 mmol) 및 프로필포스포닉산 무수물 용액(5.99 g, 9.42 mmol, 50% 에틸 아세테이트 용액)을 첨가하고, 반응액을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 필터 케이크를 에틸 아세테이트(10.0 mL × 3)로 세척하며, 여액을 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 감압 농축하며, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 24 : 1)로 분리하여 화합물 28-2를 얻었다.

(4) 화합물 28-2를 키랄 초임계 유체 크로마토그래피로 분해하여 화합물 28 및 29를 얻었다.

분리 조건: 크로마토그래피 컬럼 모델: Chiralpak OX-3; 크로마토그래피 컬럼 사양: 50 × 4.6 mm I.D., 3 μm; 주입량: 10 μL; 이동상: A: 이산화탄소, B: 에탄올(0.05% 디에틸아민), B%: 5%-40% 구배 용리 2.5분, 40% 고정 농도 용리 0.5분, 5% 고정 농도 용리 1분; 검출 파장: 254 nm; 컬럼 온도: 35℃.

화합물 28 유지 시간 1.457분, ee 값 100%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 622, 실측값 622.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.32 (td, J = 7.6, 5.2 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.90-6.97 (m, 1H), 5.34-5.41 (m, 1H), 5.28-5.34 (m, 1H), 5.19-5.28 (m, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.79-4.88 (m, 1H), 4.15-4.23 (m, 1H), 4.13 (s, 1H), 4.06-4.11 (m, 2H), 3.90-4.06 (m, 1H), 3.69 (s, 2H), 3.45 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.23-3.29 (m, 1H), 3.17-3.23 (m, 2H), 3.16 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 3.10-3.15 (m, 1H), 3.06-3.10 (m, 1H), 3.04 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 2.98-3.01 (m, 1H), 2.93-2.98 (m, 1H), 2.87 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 2.49 (dt, J = 13.2, 8.8 Hz, 1H), 2.27-2.32 (m, 3H), 2.19-2.27 (m, 1H), 2.13-2.18 (m, 1H), 2.06-2.12 (m, 1H), 1.96-2.02 (m, 1H), 1.92-1.96 (m, 1H), 1.88-1.92 (m, 1H), 1.79-1.88 (m, 1H).

화합물 29 유지 시간 1.588분, ee 값 95.44%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 622, 실측값 622.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.32 (td, J = 7.6, 5.2 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.91-6.97 (m, 1H), 5.38 (s, 1H), 5.29-5.35 (m, 1H), 5.25 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 4.91 (s, 1H), 4.86-4.87 (m, 1H), 4.24 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 4.14-4.22 (m, 2H), 3.96-4.12 (m, 2H), 3.63-3.71 (m, 2H), 3.27 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 3.24 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 3.20 (s, 1H), 3.13-3.18 (m, 2H), 3.06-3.13 (m, 2H), 2.99-3.06 (m, 2H), 2.89 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 2.44-2.51 (m, 1H), 2.28 (s, 3H), 2.22-2.26 (m, 1H), 2.19 (s, 1H), 2.12 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 1.96-2.04 (m, 2H), 1.90 (td, J = 8.8, 4.4 Hz, 2H).

실시예 26 화합물 30의 합성

(1) 화합물 30-1(20.0 g, 150 mmol)의 톨루엔(500 mL) 용액에 화합물 30-2(21.9 g, 181 mmol), 테트라에틸티타네이트(68.5 g, 300 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액에 물(200 mL) 및 에틸 아세테이트(500 mL)를 첨가하고, 여과하며, 필터 케이크를 에틸 아세테이트(500 mL × 4)로 세척한 다음, 유기상을 병합하고, 포화 식염수(500 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 1 : 2)로 분리하여 화합물 30-3을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 237, 실측값 237.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.71 (dd, J = 4.8, 1.6 Hz, 1H), 8.05 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.28 (dd, J = 8.0, 4.8 Hz, 1H), 3.49-3.59 (m, 1H), 3.25-3.31 (m, 2H), 3.11-3.20 (m, 1H), 1.33 (s, 9H).

(2) 에틸 아세테이트(24.3 g, 276 mmol)를 테트라히드로푸란(150 mL)에 용해시키고, -65℃에서 질소 보호하에 리튬 디이소프로필아미드(2 mol/L, 55 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 적가하며, 반응액을 -65℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 화합물 30-3(13.0 g, 55.0 mmol)의 테트라히드로푸란(150 mL) 용액을 적가하고, -65℃에서 2시간 동안 계속 교반하였다. 0℃로 온도를 올린 후, 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(200 mL)을 첨가하여 반응을 퀀칭하고, 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고, 포화 염화암모늄 수용액(200 mL × 1) 및 포화 식염수(200 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 32 : 1)로 분리하여 화합물 30-4를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 325, 실측값 325.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.42 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.77-7.83 (m, 1H), 7.25-7.33 (m, 1H), 4.08-4.19 (m, 2H), 3.17-3.25 (m, 1H), 2.97-3.15 (m, 2H), 2.85-2.97 (m, 1H), 2.60-2.69 (m, 1H), 2.41-2.54 (m, 1H), 1.17-1.22 (m, 12H).

(3) 화합물 30-4(7.40 g, 22.8 mmol)의 에탄올(60.0 mL) 용액에 염산의 디옥산 용액(4 mol/L, 20.0 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 30-5의 염산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 221, 실측값 221.

(4) 화합물 30-5의 염산염(5.86 g, 22.8 mmol)의 에탄올(50.0 mL) 용액에 화합물 5-6(23.1 g, 231 mmol), 산화구리(363 mg, 4.56 mmol), 트리에틸아민(6.94 g, 68.6 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 85℃의 밀봉된 튜브에서 8시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(200 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고, 포화 식염수(200 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 2 : 1)로 분리하여 화합물 30-7을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 321, 실측값 321.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.37 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.75 (dd, J = 7.6, 1.2 Hz, 1H), 7.26 (dd, J = 7.6, 5.2 Hz, 1H), 4.13 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.06 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.97-3.10 (m, 2H), 2.82-2.87 (m, 1H), 2.75-2.80 (m, 1H), 2.71 (dt, J = 10.8, 6.0 Hz, 1H), 2.48-2.59 (m, 1H), 2.43-2.48 (m, 2H), 2.28-2.39 (m, 2H), 1.24 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.15 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

(5) 화합물 30-7(1.00 g, 3.12 mmol)의 에탄올(15.0 mL) 용액에 파라포름알데히드(937 mg), 나트륨 시아노보로하이드라이드(589 mg, 9.37 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 14시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(100 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(100 mL × 1)로 추출하며, 유기상을 병합하고, 포화 식염수(100 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 3: 1)로 분리하여 화합물 30-8을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 335, 실측값 335 .

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.36 (dd, J = 5.2, 1.6 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.25 (dd, J = 7.6, 5.2 Hz, 1H), 4.07-4.13 (m, 2H), 3.90 (qd, J = 7.2, 1.2 Hz, 2H), 2.98-3.04 (m, 2H), 2.94-2.97 (m, 1H), 2.84-2.89 (m, 1H), 2.64-2.71 (m, 1H), 2.57-2.63 (m, 1H), 2.40-2.46 (m, 3H), 2.25-2.32 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 1.24 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.02 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

(6) -65℃에서 화합물 30-8(900 mg, 2.69 mmol)의 테트라히드로푸란(20.0 mL) 용액에 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드(1 mol/L, 8.0 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -65℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(100 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(100 mL × 1)로 추출하며, 유기상을 순차적으로 포화 염화암모늄 수용액(100 mL × 1) 및 포화 식염수(100 mL × 1)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 감압 농축하며, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 3 : 1)로 분리하여 화합물 30-9를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 289, 실측값 289.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.42 (dd, J = 5.2, 1.6 Hz, 1H), 7.71 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 7.6, 5.2 Hz, 1H), 4.28 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.45 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 3.32-3.39 (m, 1H), 3.22-3.28 (m, 1H), 3.04-3.11 (m, 2H), 2.58-2.69 (m, 1H), 2.44-2.49 (m, 1H), 2.34-2.40 (m, 1H), 2.07 (s, 3H), 1.85-1.93 (m, 1H), 1.32 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

(7) 화합물 30-9(510 mg, 1.77 mmol)의 에탄올(8.0 mL) 용액에 화합물 30-10(269 mg, 3.53 mmol) 및 나트륨 에톡시드(361 mg, 5.30 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 염산(1 mol/L)으로 pH 값을 6으로 조절하였다. 고체 석출 후, 여과하고, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 30-11을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 301, 실측값 301.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.77 (s, 1H), 12.64 (s, 1H), 8.66-8.73 (m, 1H), 8.59 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 4.10 (s, 1H), 3.96 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 3.43 (d, J = 18.8 Hz, 4H), 3.18 (s, 2H), 2.89 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.67 (s, 1H), 2.20 (s, 1H).

(8) 중간체 30-11(531 mg, 1.77 mmol)의 수용액(10.0 mL) 에 클로로아세트산(670 mg, 7.09 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 여액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 pH 값을 8로 조절한 다음, 고체가 석출되었다. 여과 후, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 30-12를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 285, 실측값 285.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.92 (s, 2H), 8.44 (dd, J = 4.8, 1.6 Hz, 1H), 7.58 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.24 (dd, J = 7.6, 4.8 Hz, 1H), 3.39 (s, 1H), 3.07 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.90-2.99 (m, 2H), 2.61 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 2.39 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 2.21 (dt, J = 13.6, 8.4 Hz, 1H), 1.96 (s, 3H), 1.70 (ddd, J = 13.6, 8.0, 5.6 Hz, 1H).

(9) 화합물 30-12(300 mg, 1.06 mmol)를 옥시염화인(9.90 g, 64.6 mmol)에 용해시키고, 반응액을 질소 보호하에 100℃의 밀봉된 튜브에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 얼음물(50 mL)에 천천히 첨가하며, 디클로로메탄(50 mL × 1)으로 추출하고, 유기상을 포화 탄산나트륨 수용액(20 mL × 2) 및 포화 식염수(20 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하여 화합물 30-13을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 321, 실측값 321.

(10) 화합물 30-13(338 mg, 1.05 mmol)의 N-메틸피롤리돈(5.0 mL) 용액에 탄산칼륨(436 mg, 3.15 mmol) 및 화합물 30-14(284 mg, 1.26 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 50℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응액을 물(30.0 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트로 추출(30.0 mL× 2)하였다. 유기상을 병합하고, 포화 식염수(30.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 3: 1)로 분리하여 화합물 30-15를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 510, 실측값 510.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.44 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.65-7.74 (m, 1H), 7.28-7.37 (m, 1H), 4.43 (s, 2H), 3.98-4.08 (m, 2H), 3.87 (d, J = 14.4 Hz, 2H), 3.68-3.80 (m, 2H), 2.97 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 2.93 (s, 2H), 2.83-2.87 (m, 2H), 2.82 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 2.45-2.54 (m, 1H), 2.21 (s, 3H), 1.48 (s, 9H).

(11) 화합물 30-15(300 mg, 588 μmol)의 디옥산(10.0 mL) 용액에 화합물 30-16(203 mg, 1.76 mmol), 탄산세슘(575 mg, 1.76 mmol) 및 메탄술포나토(2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-비페닐)(2-아미노-1,1'-비페닐-2-일)팔라듐(98.4 mg, 118 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(20.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 5 : 1)로 분리하여 화합물 30-17을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 589, 실측값 589.

(12) 화합물 30-17(110 mg, 187 μmol)의 디클로로메탄(3.0 mL) 용액에 트리플루오로아세트산(1.54 g, 13.5 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 30-18의 트리플루오로아세트산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 489, 실측값 489.

(13) 화합물 30-18의 트리플루오로아세트산염(90.0 mg, 149 μmol)의 디클로로메탄(5.0 mL) 용액에 트리에틸아민(45.0 mg, 445 μmol)을 첨가하고, -65℃로 냉각시키며, 화합물 30-19(27.0 mg, 298 μmol)를 첨가하고, 질소 보호하에 -65℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(30.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(30.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Gemini-NX C18 75× 30mm× 3um, A: 물(10 mM 탄산수소암모늄); B: 아세토니트릴, 10%-40%: 10분)로 분리하여 화합물 30을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 543, 실측값 543.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.44 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.62-7.75 (m, 1H), 7.27-7.37 (m, 1H), 6.83 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 6.29 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.84 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.43-4.68 (m, 1H), 4.29-4.41 (m, 2H), 4.19 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 4.10 (s, 1H), 4.00 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 3.71-3.82 (m, 2H), 3.44-3.64 (m, 1H), 3.27 (s, 1H), 3.15-3.23 (m, 1H), 3.04-3.15 (m, 4H), 2.88-2.99 (m, 3H), 2.74 (dt, J = 14.0, 6.8 Hz, 1H), 2.50-2.56 (m, 1H), 2.49 (d, J = 2.4 Hz, 3H), 2.35 (qd, J = 8.8, 2.0 Hz, 1H), 2.21 (s, 3H), 2.09 (dq, J = 12.4, 8.4 Hz, 1H), 1.91-2.01 (m, 1H), 1.77-1.86 (m, 2H), 1.63-1.75 (m, 1H).

실시예 27 화합물 31의 합성

화합물 31-1(58.3 mg, 648 μmol)의 에틸 아세테이트(5.0 mL) 용액에 4A 분자체(130 mg), 트리에틸아민(65.6 mg, 648 μmol), 화합물 30-18의 트리플루오로아세트산염(130 mg, 216 μmol) 및 프로필포스포닉산 무수물 용액(549 mg, 863 μmol, 50% 에틸 아세테이트 용액)을 첨가하고, 반응액을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 필터 케이크를 에틸 아세테이트(10.0 mL × 3)로 세척하며, 여액을 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 감압 농축하며, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Gemini-NX C18, 75 mm × 30 mm 3 μm, A: 물(10 mmol/L 탄산수소암모늄); B: 아세토니트릴, 25%-50%: 8분)로 분리하여 화합물 31을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 561, 실측값 561.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.44 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.69 (ddd, J = 13.2, 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.33 (dt, J = 7.6, 5.2 Hz, 1H), 5.32-5.44 (m, 1H), 5.20-5.32 (m, 1H), 4.28-4.39 (m, 2H), 4.14-4.26 (m, 1H), 4.10 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 3.93-4.07 (m, 1H), 3.63-3.80 (m, 2H), 3.37-3.57 (m, 1H), 3.32-3.34 (m, 1H), 3.20-3.30 (m, 1H), 3.04-3.20 (m, 5H), 2.95-3.04 (m, 1H), 2.94 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 2.76 (dt, J = 13.6, 6.8 Hz, 1H), 2.50 (d, J = 2.4 Hz, 3H), 2.47 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 2.33-2.42 (m, 1H), 2.21 (d, J = 1.2 Hz, 3H), 2.09 (dq, J = 12.4, 8.4 Hz, 1H), 1.91-2.01 (m, 1H), 1.77-1.87 (m, 2H), 1.65-1.76 (m, 1H).

실시예 28 화합물 32 및 33의 합성

(1) 화합물 20-15(800 mg, 1.53 mmol)의 디옥산(15.0 mL) 용액에 화합물 32-1(487 mg, 3.06 mmol), 탄산세슘(382 mg, 2.76 mmol), 메탄술포나토(2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-비페닐)(2-아미노-1,1'-비페닐-2-일)팔라듐(80.0 mg, 95.7 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(80.0 mL)를 첨가하고, 물(50.0 mL × 1) 및 포화 식염수(50.0 mL × 3)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 16 : 1)로 분리하여 화합물 32-2를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 646, 실측값 646.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.53 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.19-7.24 (m, 1H), 7.14 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.06-7.09 (m, 1H), 4.59 (s, 1H), 4.09 (s, 2H), 3.96 (s, 1H), 3.63-3.83 (m, 3H), 3.34 (dd, J = 14.0, 3.2 Hz, 1H), 3.23 (s, 2H), 3.16 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.05-3.14 (m, 3H), 2.79-3.05 (m, 4H), 2.74 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 2.69 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 2.27 (s, 1H), 2.21 (s, 1H), 2.10-2.16 (m, 3H), 1.89-1.99 (m, 4H), 1.84 (d, J = 10.0 Hz, 2H), 1.77 (s, 1H), 1.67-1.76 (m, 2H), 1.51 (s, 9H).

(2) 화합물 32-2(810 mg, 1.25 mmol)의 디클로로메탄(10.0 mL) 용액에 염산의 디옥산 용액(3.12 mL, 4 mol/L)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 32-3의 염산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 546, 실측값 546.

(3) 화합물 32-3의 염산염(830 mg, 1.43 mmol)의 디클로로메탄(3.0 mL) 용액에 트리에틸아민(433 mg, 4.28 mmol) 및 화합물 32-4(258 mg, 2.85 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(60.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(30.0 mL × 3)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 16 : 1)로 분리하여 화합물 32-5를 얻었다.

(4) 화합물 32-5를 키랄 초임계 유체 크로마토그래피로 분해하여 화합물 32 및 33을 얻었다.

화합물 32 유지 시간 1.759분, ee 값 100%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 600, 실측값 600.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.51 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.19-7.25 (m, 1H), 7.13-7.18 (m, 1H), 7.07-7.12 (m, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.29 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.83 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.21-5.42 (m, 1H), 5.02 (s, 1H), 4.23-4.53 (m, 1H), 4.22 (s, 1H), 4.13 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.09 (s, 1H), 3.75-3.87 (m, 2H), 3.57-3.75 (m, 1H), 3.35-3.57 (m, 2H), 3.15 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 3.04-3.12 (m, 2H), 2.93-3.04 (m, 2H), 2.88 (s, 2H), 2.76 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 2.26-2.39 (m, 1H), 2.13-2.26 (m, 2H), 2.12 (s, 3H), 2.03-2.10 (m, 1H), 2.01 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 1.92-1.99 (m, 2H), 1.90 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 1.66-1.84 (m, 2H).

화합물 33 유지 시간 1.966분, ee 값 99.36%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 600, 실측값 600.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.51 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.19-7.25 (m, 1H), 7.13-7.18 (m, 1H), 7.07-7.12 (m, 1H), 6.82 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.29 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.84 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.25-5.43 (m, 1H), 5.07 (s, 1H), 4.32 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 4.18-4.29 (m, 2H), 4.11 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.00 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.70-3.85 (m, 2H), 3.46-3.69 (m, 1H), 3.36-3.45 (m, 2H), 3.20 (dd, J = 14.0, 3.6 Hz, 2H), 3.14 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.07-3.10 (m, 1H), 3.03 (s, 1H), 2.99 (s, 1H), 2.94 (s, 1H), 2.74-2.81 (m, 2H), 2.29-2.43 (m, 1H), 2.23-2.29 (m, 1H), 2.16-2.23 (m, 1H), 2.12 (s, 3H), 2.08 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 2.04 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 1.95-2.00 (m, 2H), 1.92 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 1.71-1.83 (m, 2H).

실시예 29 화합물 34의 합성

(1) 화합물 18-15(500 mg, 920 μmol)의 디옥산(10.0 mL) 용액에 화합물 34-1(220 mg, 1.38 mmol), 탄산칼륨(382 mg, 2.76 mmol), 2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐(176 mg, 369 μmol) 및 비스(디벤질리덴아세톤)팔라듐(169 mg, 185 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(20.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 10 : 1)로 분리하여 화합물 34-2를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 666, 실측값 666.

(2) 화합물 34-2(485 mg, 728 μmol)의 디클로로메탄(6.0 mL) 용액에 트리플루오로아세트산(2.0 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 34-3의 트리플루오로아세트산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 566, 실측값 566.

(3) 화합물 34-3의 트리플루오로아세트산염(150 mg, 221 μmol)의 디클로로메탄(3.0 mL) 용액에 트리에틸아민(67.0 mg, 662 μmol) 및 화합물 34-4(39.9 mg, 441 μmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -65℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Luna C18, 100 mm × 30 mm 3 μm, A: 물(0.225% 포름산); B: 아세토니트릴, 7%-27%: 7분)로 분리하여 화합물 34의 포름산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 620, 실측값 620.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.20-7.30 (m, 3H), 6.82 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 6.29 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.84 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.41-5.64 (m, 1H), 5.03 (s, 1H), 4.38-4.64 (m, 3H), 4.02-4.23 (m, 2H), 3.83-3.95 (m, 1H), 3.76-3.83 (m, 2H), 3.71-3.76 (m, 2H), 3.50-3.70 (m, 1H), 3.32-3.44 (m, 3H), 3.08-3.28 (m, 2H), 2.97-3.08 (m, 2H), 2.76-2.96 (m, 2H), 2.73 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 2.55-2.68 (m, 1H), 2.43-2.55 (m, 2H), 2.28-2.41 (m, 2H), 2.25 (d, J = 2.4 Hz, 3H), 2.10-2.20 (m, 1H), 1.77-1.91 (m, 1H).

실시예 30 화합물 35의 합성

화합물 35-1(108 mg, 1.20 mmol)의 에틸 아세테이트(10.0 mL) 용액에 4A 분자체(270 mg), 트리에틸아민(121 mg, 1.20 mmol), 화합물 34-3의 트리플루오로아세트산염(270 mg, 397 μmol) 및 프로필포스포닉산 무수물 용액(1.02 g, 1.60 mmol, 50% 에틸 아세테이트 용액)을 첨가하고, 반응액을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 필터 케이크를 에틸 아세테이트(10.0 mL × 3)로 세척하며, 여액을 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 감압 농축하며, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Gemini-NX C18, 75 mm × 30 mm 3 μm, A: 물(10 mmol/L 탄산수소암모늄); B: 아세토니트릴, 40%-70%: 10분)로 분리하여 화합물 35를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 638, 실측값 638.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.23-7.30 (m, 3H), 5.28-5.45 (m, 2H), 5.13-5.25 (m, 1H), 3.90-3.98 (m, 2H), 3.83-3.90 (m, 2H), 3.77-3.83 (m, 1H), 3.60-3.77 (m, 1H), 3.50 (dd, J = 14.8, 8.8 Hz, 1H), 3.18-3.23 (m, 1H), 3.13 (dd, J = 18.4, 5.6 Hz, 2H), 3.05 (s, 3H), 2.93-3.01 (m, 4H), 2.77-2.84 (m, 1H), 2.53-2.71 (m, 2H), 2.35-2.43 (m, 1H), 2.28-2.34 (m, 1H), 2.12 (d, J = 4.4 Hz, 3H), 2.06-2.09 (m, 1H), 1.99 (s, 1H), 1.94 (s, 1H), 1.77-1.83 (m, 1H), 1.66-1.76 (m, 3H).

실시예 31 화합물 36 및 37의 합성

(1) 화합물 35-1(1.02 g, 11.3 mmol)의 에틸 아세테이트(20.0 mL) 용액에 4A 분자체(2.0 g), 트리에틸아민(1.15 g, 11.3 mmol), 화합물 32-3의 염산염(2.2 g, 3.78 mmol) 및 프로필포스포닉산 무수물 용액(9.62 g, 15.1 mmol, 50% 에틸 아세테이트 용액)을 첨가하고, 반응액을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 필터 케이크를 에틸 아세테이트(10.0 mL × 3)로 세척하며, 여액을 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 감압 농축하며, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 16 : 1)로 분리하여 화합물 36-2를 얻었다.

(2) 화합물 36-2를 키랄 초임계 유체 크로마토그래피로 분해하여 화합물 36 및 37을 얻었다.

분리 조건: 크로마토그래피 컬럼 모델: Chiralpak OD-3; 크로마토그래피 컬럼 사양: 50 × 4.6 mm I.D., 3 μm; 주입량: 4.0 μL; 이동상: A: 이산화탄소, B: 에탄올(0.05% 디에틸아민), B%: 5%-40% 구배 용리 2.5분, 40% 고정 농도 용리 0.5분, 5% 고정 농도 용리 1분; 검출 파장: 254 nm; 컬럼 온도: 35℃.

화합물 36 유지 시간 1.567분, ee 값 98.46%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 618, 실측값 618.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.51 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.19-7.25 (m, 1H), 7.15 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.07-7.12 (m, 1H), 5.37-5.46 (m, 1H), 5.30-5.36 (m, 1H), 5.25-5.30 (m, 1H), 4.86 (s, 1H), 4.61 (s, 1H), 4.25-4.32 (m, 1H), 4.22 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 4.11-4.19 (m, 2H), 4.10 (s, 1H), 3.77 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 3.51 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 3.39-3.49 (m, 2H), 3.33-3.38 (m, 1H), 3.13 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 3.05-3.12 (m, 2H), 3.00 (s, 2H), 2.90-2.95 (m, 1H), 2.73-2.80 (m, 2H), 2.31-2.45 (m, 1H), 2.30 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 2.18 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 2.12 (s, 3H), 2.07 (s, 1H), 2.04 (s, 1H), 2.00 (s, 1H), 1.97 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 1.75-1.85 (m, 2H).

화합물 37 유지 시간 1.778분, ee 값 99.36%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 618, 실측값 618.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.51 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.17-7.23 (m, 1H), 7.14 (td, J = 7.2, 1.2 Hz, 1H), 7.04-7.10 (m, 1H), 5.34-5.41 (m, 1H), 5.29-5.34 (m, 1H), 5.18-5.28 (m, 1H), 4.27 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 4.10-4.25 (m, 2H), 4.01-4.10 (m, 1H), 3.80-4.01 (m, 1H), 3.74 (q, J = 14.8 Hz, 2H), 3.32-3.62 (m, 1H), 3.25-3.29 (m, 1H), 3.24 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.19-3.22 (m, 2H), 3.17 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 3.08 (s, 1H), 3.01-3.06 (m, 1H), 2.98 (s, 1H), 2.87-2.98 (m, 1H), 2.69-2.79 (m, 2H), 2.20-2.47 (m, 1H), 2.14-2.20 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 2.09 (s, 1H), 1.99-2.07 (m, 1H), 1.98 (s, 1H), 1.95 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 1.87-1.93 (m, 1H), 1.80-1.87 (m, 1H), 1.57-1.80 (m, 2H).

실시예 32 화합물 38의 합성

(1) 화합물 38-1(25.0 g, 168 mmol)의 아세토니트릴(250 mL) 용액에 브롬화벤질(43.3 g, 253 mmol), 탄산세슘(110 g, 338 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 20℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 물(50.0 mL)을 첨가하며, 에틸 아세테이트(40.0 mL × 2)로 추출한 다음, 유기상을 병합하고 포화 식염수(50.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 3 : 1)로 분리하여 화합물 38-2를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 239, 실측값 239.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.32-7.40(m, 4H), 7.30-7.31 (m, 2H), 7.20-7.26 (m, 1H), 7.02-7.04 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.12 (s, 2H), 3.03-3.06 (m, 2H), 2.62-2.65 (m, 2H).

(2) 화합물 38-2(20.0 g, 83.9 mmol)의 톨루엔(200 mL) 용액에 화합물 38-3(13.2 g, 109 mmol), 테트라에틸티타네이트(38.3 g, 168 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 120℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액에 물(400 mL)을 첨가하고, 여과하며, 필터 케이크를 에틸 아세테이트(400 mL × 2)로 세척한 다음, 유기상을 병합하고 포화 식염수(500 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 3 : 1)로 분리하여 화합물 38-4를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 342, 실측값 342.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.26-7.44 (m, 7H), 6.99-7.01 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.15 (s, 2H), 3.42-3.50 (m, 1H), 3.07-3.14 (m, 3H), 1.32 (s, 9H).

(3) 에틸 아세테이트(13.7 g, 156 mmol)를 테트라히드로푸란(50.0 mL)에 용해시키고, -78℃에서 질소 보호하에 리튬 디이소프로필아미드(2 mol/L, 39.0 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 적가하며, 반응액을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 화합물 38-4(13.3 g, 39.0 mmol)의 테트라히드로푸란(500 mL) 용액을 적가하고, -78℃에서 3시간 동안 계속 교반하였다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(1000 mL)을 첨가하여 반응을 퀀칭하고, 에틸 아세테이트(1000 mL)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 염화암모늄 수용액(1000 mL × 1) 및 포화 식염수(1000 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 1 : 1)로 분리하여 화합물 38-5를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 430, 실측값 430.

(4) 화합물 38-5(6.80 g, 15.8 mmol)의 에탄올(54.0 mL) 용액에 염산의 디옥산 용액(4 mol/L, 18.0 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 38-6의 염산염을 얻었다.

MS-ESI [M-NH₂+H]+, 계산값 309, 실측값 309.

(5) 화합물 38-6의 염산염(5.70 g, 15.8 mmol)의 에탄올(40.0 mL) 용액에 화합물 38-7(15.8 g, 158 mmol), 산화구리(250 mg, 3.15 mmol), 트리에틸아민(1.60 g, 15.7 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 78℃의 밀봉된 튜브에서 12시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(200 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(100 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(100 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 1 : 1)로 분리하여 화합물 38-8을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 426, 실측값 426.

(6) 화합물 38-8(6.20 g, 14.6 mmol)의 에탄올(60.0 mL) 용액에 파라포름알데히드(2.20 g), 나트륨 시아노보로하이드라이드(2.75 g, 43.7 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 30℃에서 12시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(100 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(200 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 3 : 1)로 분리하여 화합물 38-9를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 440, 실측값 440.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.40-7.45 (m, 2H), 7.34-7.40 (m, 2H), 7.28-7.33 (m, 1H), 7.11-7.16 (t, 1H), 6.86-6.88 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.75-6.77 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.02-5.11 (m, 2H), 4.07-4.13 (m, 2H), 3.83-3.97 (m, 2H), 2.83-2.97 (m, 3H), 2.71-2.81 (m, 2H), 2.61-2.69 (m, 2H), 2.36-2.47 (m, 3H), 2.22-2.35 (m, 2H), 1.79-1.88 (m, 1H), 1.24 (m, 3H), 1.00-1.04 (t, 3H).

(7) -78℃에서 화합물 38-9(5.80 g, 13.2 mmol)의 테트라히드로푸란(60.0 mL) 용액에 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드(1 mol/L, 39.6 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -78℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(300 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(200 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 3 : 1)로 분리하여 화합물 38-10을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 394, 실측값 394.

(8) 화합물 38-10(3.90 g, 9.91 mmol)의 에탄올(40.0 mL) 용액에 화합물 38-11(1.51 g, 11.8 mmol) 및 나트륨 에톡시드(2.02 g, 29.7 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 염산(1 mol/L)으로 pH 값을 6으로 조절하였다. 고체 석출 후, 여과하고, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 38-12를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 406, 실측값 406.

(9) 중간체 38-12(3.50 g, 8.64 mmol)의 수용액(40.0 mL)에 클로로아세트산(7.34 g, 77.6 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 여액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 pH 값을 8로 조절한 다음, 고체가 석출되었다. 여과 후, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 38-13을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 390, 실측값 390.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.37 (s, 1H), 11.17 (s, 1H), 7.45-7.58 (m, 3H), 7.32-7.43 (m, 4H), 7.11 (br s, 1H), 5.17 (s, 2H), 4.05-4.17 (m, 1H), 3.80-3.96 (m, 1H), 3.24-3.29 (m, 1H), 2.88-3.03 (m, 2H), 2.61-2.74 (m, 1H), 2.54-2.60 (m, 1H), 2.43-2.48 (m, 3H), 1.96-2.17 (m, 1H).

(10) 화합물 38-13(1.00 g, 2.57 mmol)을 옥시염화인(16.5 g, 107 mmol)에 용해시키고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 디클로로메탄(100 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(100 mL × 2) 및 포화 식염수(100 mL × 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 감압 농축하여, 화합물 38-14를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 426, 실측값 426.

(11) 화합물 38-14(1.10 g, 2.58 mmol)의 N-메틸피롤리돈(10.0 mL) 용액에 탄산칼륨(1.07 g, 7.74 mmol) 및 화합물 38-15(697 mg, 3.10 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 50℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액에 물(30.0 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(20.0 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(50.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 1 : 1)로 분리하여 화합물 38-16을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 615, 실측값 615.

(12) 화합물 38-16(790 mg, 1.28 mmol)의 디옥산(10.0 mL) 용액에 화합물 38-17(445 mg, 3.85 mmol), 탄산세슘(1.26 g, 3.85 mmol) 및 메탄술포나토(2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-비페닐)(2-아미노-1,1'-비페닐-2-일)팔라듐(215 mg, 257 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응액에 물(30.0 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(40.0 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(40.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 10 : 1)로 분리하여 화합물 38-18을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 694, 실측값 694.

(13) 화합물 38-18(200 mg, 288 μmol)을 트리플루오로아세트산(10.0 mL)에 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 50℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 38-19의 트리플루오로아세트산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 504, 실측값 504.

(14) 화합물 38-19의 트리플루오로아세트산염(70.0 mg, 139 μmol)의 디클로로메탄(1.0 mL) 용액에 트리에틸아민(42.2 mg, 417 μmol) 및 화합물 38-20(15.1 mg, 167 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -78℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Luna C18, 100 mm × 30 mm ×3 μm+YMC AQ, 100 mm × 30 mm ×10 μm, A: 물(0.05%염산); B:메탄올, 0%-40%: 20분)로 분리하여 화합물 38의 염산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 558, 실측값 558.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.24-7.31 (m, 2H), 6.84 (br s, 2H), 6.25-6.37 (m, 1H), 5.82-5.92 (m, 1H), 5.01-5.19 (m, 2H), 4.77 (br s, 3H), 4.13 (br s, 2H), 3.99-4.06 (m, 1H), 3.85 (br d, J = 6.8 Hz, 3H), 3.45-3.68 (m, 2H), 3.33-3.44 (m, 1H), 3.23-3.29 (m, 1H), 3.11-3.22 (m, 2H), 3.10 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 2.98-3.08 (m, 2H), 2.73-2.85 (m, 5H), 2.39-2.52 (m, 2H), 2.14-2.29 (m, 2H), 2.04-2.12 (m, 1H).

실시예 33 화합물 39의 합성

0℃에서 화합물 38-19의 트리플루오로아세트산염(90.0 mg, 180 μmol)의 디클로로메탄(2.0 mL) 용액에 트리에틸아민(18.1 mg, 180 μmol), 화합물 39-1(113 mg, 1.25 mmol) 및 프로필포스포닉산 무수물 용액(341 mg, 536 μmol, 50% 에틸 아세테이트 용액)을 첨가하고, 반응액을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Luna C18, 100 mm × 30 mm ×3 μm, A: 물(0.225% 포름산); B: 아세토니트릴, 0%-30%: 8분)로 분리하여 화합물 39의 포름산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 576, 실측값 576.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 6.95-7.39 (m, 2H), 6.76-6.91 (m, 1H), 5.22-5.47 (m, 2H), 4.54-4.67 (m, 5H), 4.32-4.50 (m, 2H), 3.99-4.26 (m, 3H), 3.68-3.92 (m, 3H), 3.42-3.62 (m, 3H), 3.18-3.27 (m, 2H), 3.10-3.17 (m, 2H), 2.93-3.07 (m, 4H), 2.52-2.86 (m, 3H), 2.37 (br s, 1H), 2.10-2.27 (m, 3H), 1.94-2.08 (m, 1H).

실시예 34 화합물 40 및 41의 합성

(1) 화합물 40-1(100 g, 679 mmol)의 에탄올(1.0 L) 용액에 아세트산 무수물(139 g, 1.36 mol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 30℃에서 1시간 동안 교반하였다. 감압 농축하고 에탄올을 제거하여, 조생성물인 화합물 40-2를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 190, 실측값 190.

(2) 화합물 40-2(101 g, 534 mmol)의 아세톤(1.0 L) 용액에 황산마그네슘(89.1 g, 740 mmol), 물(300 mL) 및 과망간산칼륨(253 g, 1.60 mol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. 여과 후, 물(600 mL)을 첨가하고, 디클로로메탄(500 mL × 1)로 추출하며, 유기상을 포화 식염수(500 mL × 1)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 감압 농축하며, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 10 : 1)로 분리하여 화합물 40-3을 얻었다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.60 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.45 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 7.6, 0.8 Hz, 1H), 2.98 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.66-2.75 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.03-2.15 (m, 2H).

(3) 화합물 40-3(140 g, 689 mmol)의 수용액(1.0 L)에 진한 염산(12 mol/L, 459 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 3시간 동안 교반하였다. 감압 농축하고, 수산화나트륨 수용액(2 mol/L)을 첨가하며, pH 값을 8로 조절하고, 여과하며, 필터 케이크를 물(100 mL × 1)로 세척하여, 화합물 40-4를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 162, 실측값 162.

(4) 화합물 40-4(90.0 g, 558 mmol)의 디클로로메탄(1.0 L) 용액에 삼불화붕소 디에틸에테르(119 g, 838 mmol)를 첨가하고, 0℃에서 20분 동안 교반하였다. 이소아밀 나이트라이트(74.9 g, 726 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 0℃에서 40분 동안 교반하였다. 메틸 tert-부틸 에테르(200 mL)를 첨가하고, 여과하며, 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르(200 mL)로 세척하고, 크실렌(100 mL)으로 용해시키며, 120℃에서 30분 동안 교반하였다. 수산화나트륨 수용액(2 mol/L)을 첨가하고, pH 값을 8로 조절하며, 에틸 아세테이트(200 mL × 3)로 추출한 다음, 유기상을 병합하고 포화 식염수(500 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 10 : 1)로 분리하여 화합물 40-5를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 165, 실측값 165.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.42 (d, J = 8.0, 5.2 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 11.2, 8.4 Hz, 1H), 2.98 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.64-2.69 (m, 2H), 2.09-2.17 (m, 2H).

(5) 화합물 40-5(40.0 g, 244 mmol)의 톨루엔(400 mL) 용액에 tert-부틸술핀아미드(35.4 g, 292 mmol), 테트라에틸티타네이트(111 g, 487 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응액에 물(200 mL)을 첨가하고, 여과하며, 필터 케이크를 에틸 아세테이트(200 mL × 3)로 세척한 다음, 유기상을 병합하고 포화 식염수(300 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 5 : 1)로 분리하여 화합물 40-6을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 268, 실측값 268.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.32 (td, J = 8.0, 5.2 Hz, 1H), 6.93-7.01 (m, 2H), 3.35 (d, J = 17.6, 8.0, 6.0 Hz, 1H), 3.08 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 2.83-2.90 (m, 2H), 1.91-2.01 (m, 2H), 1.34 (s, 9H).

(6) 에틸 아세테이트(49.4 g, 561 mmol)를 테트라히드로푸란(200 mL)에 용해시키고, -78℃에서 질소 보호하에 리튬 디이소프로필아미드(2 mol/L, 112 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 적가하며, 반응액을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 화합물 40-6(30.0 g, 112 mmol)의 테트라히드로푸란(100 mL) 용액을 적가하고, -78℃에서 2시간 동안 계속 교반하였다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(200 mL)을 첨가하여 반응을 퀀칭하고, 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 염화암모늄 수용액(200 mL × 1) 및 포화 식염수(100 mL × 3)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 3 : 1)로 분리하여 화합물 40-7을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 356, 실측값 356.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.25 (d, J = 8.0, 5.6 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 12.4, 8.4 Hz, 1H), 4.01-4.13 (m, 2H), 3.03-3.21 (m, 2H), 2.88 (d, J = 16.8, 4.8 Hz, 1H), 2.70-2.80 (m, 1H), 2.19-2.34 (m, 2H), 2.10 (m, J = 13.6, Hz, 1H), 1.71-1.82 (m, 1H), 1.20 (s, 9H), 1.14 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

(7) 화합물 40-7(20.0 g, 56.3 mmol)의 에탄올(100 mL) 용액에 염산의 디옥산 용액(4 mol/L, 141 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 40-8의 염산염을 얻었다.

(8) 화합물 40-8의 염산염(18.0 g, 62.6 mmol)의 에탄올(200 mL) 용액에 에틸 아크릴레이트(93.9 g, 188 mmol), 산화구리(995 mg, 12.5 mmol), 트리에틸아민(19.0 g, 188 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 85℃의 밀봉된 튜브에서 10시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(100 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(100 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(100 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 2 : 1)로 분리하여 화합물 40-9를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 352, 실측값 352.

(9) 화합물 40-9(15.0 g, 42.7 mmol)의 에탄올(200 mL) 용액에 파라포름알데히드(5.50 g), 아세트산(2.56 g, 42.7 mmol) 및 나트륨 시아노보로하이드라이드(8.05 g, 128 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 30℃에서 12시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(100 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(100 mL)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(50 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 3 : 1)로 분리하여 화합물 40-10을 얻었다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.11 (d, J = 7.6, 5.2 Hz, 1H), 6.76-6.89 (m, 2H), 4.05-4.13 (m, 2H), 3.79-3.93 (m, 2H), 2.68-2.87 (m, 6H), 2.38 (m, J = 14.8, 7.6 Hz, 2H), 2.23 (s, 3H), 2.08-2.18 (m, 2H), 1.69-1.87 (m, 2H), 1.18-1.29 (m, 3H), 0.97 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

(10) -78℃에서 화합물 40-10(10.0 g, 27.4 mmol)의 테트라히드로푸란(100 mL) 용액에 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드(1 mol/L, 82.1 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 0℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(300 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(300 mL)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(300 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 5 : 1)로 분리하여 화합물 40-11을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 320, 실측값 320.

(11) 화합물 40-11(8.00 g, 25.0 mmol)의 에탄올(20.0 mL) 용액에 티오요소(3.81 g, 50.1 mmol) 및 나트륨 에톡시드(5.11 g, 75.2 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 염산(1 mol/L)으로 pH 값을 6으로 조절하였다. 고체 석출 후, 여과하고, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 40-12를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 332, 실측값 332.

(12) 중간체 40-12(9.00 g, 27.2 mmol)의 수용액(60.0 mL)에 클로로아세트산(18.0 g, 190 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 여액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 pH 값을 8로 조절한 다음, 고체가 석출되었다. 여과 후, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 40-13을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 316, 실측값 316.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ7.24 (m, J = 7.6, 5.2 Hz, 1H), 6.89-7.01 (m, 2H), 3.58-3.66 (m, 1H), 3.08-3.26 (m, 2H), 2.60-2.84 (m, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.89-2.02 (m, 2H), 1.61-1.81 (m, 2H).

(13) 화합물 40-13(8.00 g, 25.4 mmol)을 옥시염화인(15.6 g)에 용해시키고, 반응액을 질소 보호하에 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 디클로로메탄(200 mL)으로 추출하며, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(200 mL × 2) 및 포화 식염수(200 mL × 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 감압 농축하여, 화합물 40-14를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 352, 실측값 352.

(14) 화합물 40-14(600 mg, 17.0 mmol)의 N-메틸피롤리돈(50.0 mL) 용액에 탄산칼륨(7.06 g, 51.1 mmol) 및 화합물 40-15(4.99 g, 22.1 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 50℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(200 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(200 mL × 5)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 10 : 1)로 분리하여 화합물 40-16을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 541, 실측값 541.

(15) 화합물 40-16(1.00 g, 1.85 mmol)의 디옥산(20.0 mL) 용액에 화합물 40-17(442 mg, 2.78 mmol), 탄산세슘(1.81 g, 5.54 mmol), 메탄술포나토(2-디시클로헥실포스피노-2,6-디이소프로폭시-1,1-비페닐)(2-아미노-1,1-비페닐-2-일)팔라듐(II)(100 mg, 120 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(50.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(50.0 mL × 3)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 30 : 1)로 분리하여 화합물 40-18을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 664, 실측값 664.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.22 (td, J = 7.6, 5.2 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.91 (dd, J = 12.4, 8.0 Hz, 1H), 5.13-5.43 (m, 1H), 4.60 (d, J = 12.4 Hz, 2H), 4.04-4.23 (m, 3H), 3.84-4.04 (m, 2H), 3.56-3.77 (m, 2H), 3.40 (dd, J = 13.6, 3.6 Hz, 1H), 3.22-3.29 (m, 2H), 3.10-3.22 (m, 3H), 2.94-3.05 (m, 3H), 2.71-2.86 (m, 3H), 2.22-2.36 (m, 1H), 2.13-2.18 (m, 3H), 2.04-2.13 (m, 2H), 1.94-2.02 (m, 3H), 1.83-1.93 (m, 2H), 1.56-1.82 (m, 2H), 1.51 (d, J = 2.4 Hz, 9H).

(16) 화합물 40-18(910 mg, 1.37 mmol)의 디클로로메탄(10.0 mL) 용액에 염산의 디옥산 용액(4 mol/L, 5.0 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 pH 값을 8로 조절하고, 디클로로메탄(20 mL × 2)으로 추출하며, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(20 mL) 및 포화 식염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 감압 농축하여, 화합물 40-19를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 564, 실측값 564.

(17) 화합물 40-19(672 mg, 1.19 mmol)의 디클로로메탄(10.0 mL) 용액에 트리에틸아민(362 mg, 3.58 mmol) 및 아크릴일 클로라이드(216 mg, 2.39 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -65℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(20.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 30 : 1)로 분리하여 화합물 40-20을 얻었다.

(18) 화합물 40-20을 키랄 초임계 유체 크로마토그래피로 분해하여 화합물 40 및 41을 얻었다.

분리 조건: 크로마토그래피 컬럼 모델: (S,S)-Whelk-0-1.8; 크로마토그래피 컬럼 사양: 50 × 4.6 mm I.D., 1.8 μm; 주입량: 10.0 μL; 이동상: A: 이산화탄소, B: 에탄올(0.05% 디에틸아민), B%: 40% 용리 7분; 검출 파장: 254 nm; 컬럼 온도: 35℃.

화합물 40 유지 시간 2.328분, ee 값 100%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 618, 실측값 618.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.22 (m, J = 7.6, 5.2 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.91 (dd, J = 12.4, 8.0 Hz, 1H), 6.28 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.83 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.18-5.37 (m, 1H), 5.03 (s, 1H), 4.70-4.85 (m, 2H), 4.10-4.32 (m, 3H), 3.90-4.10 (m, 2H), 3.65-3.80 (m, 2H), 3.38-3.51 (m, 1H), 3.18-3.28 (m, 3H), 3.08-3.18 (m, 2H), 2.95-3.02 (m, 2H), 2.89 (s, 2H), 2.67-2.84 (m, 2H), 2.16-2.41 (m, 2H), 2.16 (s, 3H), 2.03-2.13 (m, 2H), 1.94-2.03 (m, 3H), 1.85-1.93 (m, 2H), 1.68-1.79 (m, 1H).

화합물 41 유지 시간 1.677분, ee 값 100%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 618, 실측값 618.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.22 (td, J = 7.6, 5.2 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.92 (dd, J = 12.4, 8.0 Hz, 1H), 6.29 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.83 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.14-5.41 (m, 1H), 5.08 (s, 1H), 4.70-4.84 (m, 2H), 4.11-4.40 (m, 3H), 3.92-4.11 (m, 2H), 3.60-3.78 (m, 2H), 3.37-3.60 (m, 1H), 3.21-3.29 (m, 3H), 3.17-3.21 (m, 2H), 3.12-3.17 (m, 2H), 2.94-3.01 (m, 2H), 2.72-2.86 (m, 2H), 2.17-2.34 (m, 2H), 2.16 (s, 3H), 2.03-2.13 (m, 2H), 1.94-2.02 (m, 3H), 1.82-1.92 (m, 2H), 1.68-1.80 (m, 1H).

실시예 35 화합물 42 및 43의 합성

(1) 0℃에서 화합물 40-19(1.50 g, 2.66 mmol)의 에틸 아세테이트(15.0 mL) 용액에 트리에틸아민(809 mg, 7.99 mmol), 화합물 42-1(719 mg, 7.98 mmol), 4A 분자체(1.50 g) 및 프로필포스포닉산 무수물 용액(6.78 g, 10.6 mmol, 50% 에틸 아세테이트 용액)을 첨가하고, 반응액을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(50.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(50.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 30 : 1)로 분리하여 화합물 42-2를 얻었다.

(2) 화합물 42-2를 키랄 초임계 유체 크로마토그래피로 분해하여 화합물 42 및 43을 얻었다.

분리 조건: 크로마토그래피 컬럼 모델: Chiralpak OX-3; 크로마토그래피 컬럼 사양: 100 × 4.6 mm I.D., 3 μm; 주입량: 10.0 μL; 이동상: A: 이산화탄소, B: 에탄올(0.05% 디에틸아민), B%: 40% 고정 농도 용리 4분; 검출 파장: 254 nm; 컬럼 온도: 35℃.

화합물 42 유지 시간 1.385분, ee 값 100%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 636, 실측값 636.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.22 (td, J = 7.6, 5.2 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.92 (dd, J = 12.8, 8.0 Hz, 1H), 5.29-5.44 (m, 2H), 5.18-5.28 (m, 1H), 4.11-4.19 (m, 2H), 4.05-4.11 (m, 2H), 3.71-3.78 (m, 1H), 3.63-3.68 (m, 1H), 3.46 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.32-3.33 (m, 1H), 3.22-3.30 (m, 3H), 3.13-3.22 (m, 2H), 2.99-3.12 (m, 3H), 2.89-2.99 (m, 2H), 2.75-2.88 (m, 2H), 2.22-2.33 (m, 1H), 2.18 (s, 1H), 2.16 (s, 3H), 2.04-2.14 (m, 2H), 1.95-2.04 (m, 3H), 1.88-1.88 (m, 3H), 1.76-1.94 (m, 1H).

화합물 43 유지 시간 2.071분, ee 값 100%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 636, 실측값 636.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.22 (td, J = 7.6, 5.2 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.91 (dd, J = 12.8, 8.0 Hz, 1H), 5.29-5.43 (m, 2H), 5.26 (s, 1H), 4.27 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 4.18 (q, J = 10.4 Hz, 2H), 3.99 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.71-3.79 (m, 1H), 3.59-3.68 (m, 1H), 3.38-3.56 (m, 1H), 3.36 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.27 (d, J = 3.6 Hz, 3H), 3.21-3.27 (m, 2H), 3.05-3.20 (m, 3H), 2.85-3.05 (m, 2H), 2.65-2.84 (m, 2H), 2.26-2.40 (m, 1H), 2.19-2.26 (m, 1H), 2.16 (s, 3H), 2.04-2.15 (m, 2H), 1.96-2.04 (m, 3H), 1.77-1.96 (m, 3H), 1.65-1.77 (m, 1H).

실시예 36 화합물 44 및 45의 합성

(1) 화합물 44-1(5.00 g, 30.0 mmol)의 톨루엔(50.0 mL) 용액에 화합물 44-2(4.36 g, 36.0 mmol), 테트라에틸티타네이트(13.7 g, 60.0 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액에 물(150 mL)을 첨가하고, 여과하며, 필터 케이크를 에틸 아세테이트(150 mL × 2)로 세척한 다음, 유기상을 병합하고 포화 식염수(150 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 10 : 1)로 분리하여 화합물 44-3을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 270, 실측값 270.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.70 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.30 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.46-3.56 (m, 1H), 3.06-3.19 (m, 3H), 1.33 (s, 9H).

(2) 에틸 아세테이트(8.16 g, 92.6 mmol)를 테트라히드로푸란(200 mL)에 용해시키고, -78℃에서 질소 보호하에 리튬 디이소프로필아미드(2 mol/L, 18.5 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 적가하며, 반응액을 -65℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 화합물 44-3(5.0 g, 18.5 mmol)의 테트라히드로푸란(500 mL) 용액을 적가하고, -65℃에서 2시간 동안 계속 교반하였다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(50.0 mL)을 첨가하여 반응을 퀀칭하고, 에틸 아세테이트(100 mL)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 염화암모늄 수용액(100 mL × 1) 및 포화 식염수(100 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 6 : 1)로 분리하여 화합물 44-4를 얻었단.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 358, 실측값 358.

(3) 화합물 44-4(2.30 g, 6.43 mmol)의 에탄올(15.0 mL) 용액에 염산의 디옥산 용액(4 mol/L, 10.0 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 44-5의 염산염을 얻었다.

(4) 화합물 44-5의 염산염(2.30 g, 9.06 mmol)의 에탄올(20.0 mL) 용액에 화합물 44-6(9.08 g, 90.6 mmol), 산화구리(144 mg, 1.81 mmol), 트리에틸아민(2.75 g, 27.2 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 85℃의 밀봉된 튜브에서 12시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(100 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(100 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 6 : 1)로 분리하여 화합물 44-7을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 354, 실측값 354.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.19-7.23 (m, 1H), 7.12-7.19 (m, 2H), 4.06-4.16 (m, 4H), 2.95-3.06 (m, 1H), 2.81-2.93 (m, 1H), 2.67-2.79 (m, 2H), 2.59-2.67 (m, 1H), 2.48-2.55 (m, 1H), 2.42-2.48 (m, 2H), 2.34 (dt, J = 13.6, 8.0 Hz, 1H), 2.19 (ddd, J = 13.6, 8.8, 4.4 Hz, 1H), 1.25 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.20 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

(5) 화합물 44-7(2.00 g, 5.65 mmol)의 에탄올(20.0 mL) 용액에 파라포름알데히드(2.00 g), 나트륨 시아노보로하이드라이드(1.07 g, 17.0 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 10시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(100 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(100 mL)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(50 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 6 : 1)로 분리하여 화합물 44-8을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 368, 실측값 368.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.18-7.24 (m, 1H), 7.12-7.17 (m, 2H), 4.11 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.82-3.98 (m, 2H), 2.83-3.02 (m, 3H), 2.71-2.81 (m, 1H), 2.56-2.68 (m, 2H), 2.23-2.48 (m, 4H), 2.17 (s, 3H), 1.25 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.02 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

(6) -78℃에서 화합물 44-8(1.50 g, 4.08 mmol)의 테트라히드로푸란(15.0 mL) 용액에 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드(1 mol/L, 8.16 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -65℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(50.0 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(50.0 mL)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(50.0 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 6 : 1)로 분리하여 화합물 44-9를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 322, 실측값 322.

(7) 화합물 44-9(1.08 g, 3.36 mmol)의 에탄올(10.0 mL) 용액에 화합물 44-10(510 mg, 6.71 mmol) 및 나트륨 에톡시드(685 mg, 10.1 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 염산(1 mol/L)으로 pH 값을 6으로 조절하였다. 고체 석출 후, 여과하고, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 44-11을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 334, 실측값 334.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.42-12.50 (m, 1H), 12.31 (br d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.13-7.51 (m, 3H), 3.36-3.42 (m, 2H), 2.85-2.99 (m, 2H), 2.63-2.70 (m, 1H), 2.53 (br d, J = 2.0 Hz, 1H), 2.29-2.37 (m, 1H), 2.16-2.28 (m, 1H), 1.88-2.15 (m, 3H).

(8) 중간체 44-11(848 mg, 2.54 mmol)의 수용액(10.0 mL) 에 클로로아세트산(1.20 g, 12.7 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 여액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 pH 값을 8로 조절한 다음, 고체가 석출되었다. 여과 후, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 44-12를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 318, 실측값 318.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.03 (br s, 1H), 10.78 (br s, 1H), 7.28 (s, 2H), 7.15-7.20 (m, 1H), 2.75-3.25 (m, 4H), 2.31-2.40 (m, 2H), 2.20 (dt, J = 13.6, 8.0 Hz, 1H), 1.96 (s, 3H), 1.69 (ddd, J = 13.6, 8.8, 4.8 Hz, 1H).

(9) 화합물 44-12(236 mg, 743 μmol)를 옥시염화인(13.3 g, 86.7 mmol)에 용해시키고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 디클로로메탄(10.0 mL)로 추출하며, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(10.0 mL × 2) 및 포화 식염수(10.0 mL × 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 감압 농축하여, 화합물 44-13을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 354, 실측값 354.

(10) 화합물 44-13(600 mg, 1.69 mmol)의 N-메틸피롤리돈(10.0 mL) 용액에 탄산칼륨(701 mg, 5.08 mmol) 및 화합물 44-14(419 mg, 1.86 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 50℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(30.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(30.0 mL × 5)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 3 : 1)로 분리하여 화합물 44-15를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 543, 실측값 543.

(11) 화합물 44-15(200 mg, 367 μmol)의 디옥산(5.00 mL) 용액에 화합물 44-16(175 mg, 1.10 mmol), 탄산칼륨(127 mg, 1.10 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(67.4 mg, 73.6 μmol), 및 2-디시클로헥실포스피노-2,6-디이소프로폭시-1,1-비페닐(68.6 mg, 147 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(20.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 3 : 1)로 분리하여 화합물 44-17을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 666, 실측값 666.

(12) 화합물 44-17(74.0 mg, 111 μmol)의 디클로로메탄(3.0 mL) 용액에 트리플루오로아세트산(2.85 g, 24.9 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 에틸 아세테이트(50 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(50 mL) 및 포화 식염수(50 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 44-18을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 566, 실측값 566.

(13) 0℃에서 화합물 44-18(65.0 mg, 114 μmol)의 에틸 아세테이트(3.0 mL) 용액에 트리에틸아민(34.8 mg, 344 μmol), 화합물 44-19(31.0 mg, 344 μmol), 4A 분자체(40.0 mg) 및 프로필포스포닉산 무수물 용액(219 mg, 344 μmol, 50% 에틸 아세테이트 용액)을 첨가하고, 반응액을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(10.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(10.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex Luna C18, 75 mm × 30 mm ×3 μm, A: 물(10 mmol/L의 탄산수소암모늄); B: 아세토니트릴, 41%-61%: 11분)로 분리하여 화합물 44-20을 얻었다.

(14) 화합물 44-20을 키랄 초임계 유체 크로마토그래피로 분해하여 화합물 44 및 45를 얻었다.

분리 조건: 크로마토그래피 컬럼 모델: Chiralpak IC-3; 크로마토그래피 컬럼 사양: 50 × 4.6 mm I.D., 3 μm; 주입량: 8.0 μL; 이동상: A: 이산화탄소, B: 에탄올(0.05% 디에틸아민), B%: 40% 고정 농도 용리 4분; 검출 파장: 254 nm; 컬럼 온도: 35℃.

화합물 44 유지 시간 1.342분, ee 값 98.64%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 638, 실측값 638.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.24-7.32 (m, 2H), 7.16 (dd, J = 7.2, 1.2 Hz, 1H), 5.32-5.40 (m, 1H), 5.23-5.31 (m, 1H), 4.09-4.31 (m, 4H), 4.00 (br d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.71 (s, 2H), 3.27 (br s, 2H), 3.20-3.23 (m, 1H), 2.90-3.16 (m, 8H), 2.39-2.50 (m, 1H), 2.16-2.25 (m, 5H), 2.08-2.15 (m, 1H), 1.96-2.04 (m, 2H), 1.91 (ddd, J = 13.6, 8.8, 4.4 Hz, 2H), 1.25-1.36 (m, 4H).

화합물 45 유지 시간 1.807분, ee 값 97.24%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 638, 실측값 638.

실시예 37 화합물 46 및 47의 합성

(1) 화합물 46-1(21.0 g, 140 mmol)의 톨루엔(300 mL) 용액에 화합물 46-2(20.3 g, 168 mmol), 테트라에틸티타네이트(63.8 g, 280 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응액에 물(200 mL)을 첨가하고, 여과하며, 필터 케이크를 에틸 아세테이트(500 mL × 3)로 세척한 다음, 유기상을 병합하고 포화 식염수(150 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 2 : 1)로 분리하여 화합물 46-3을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 254, 실측값 254.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.59 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.28-7.34 (m, 1H), 7.13-7.20 (m, 1H), 3.44-3.55 (m, 1H), 3.10-3.20 (m, 3H), 1.32 (s, 9H).

(2) 에틸 아세테이트(27.0 g, 306 mmol)를 테트라히드로푸란(200 mL)에 용해시키고, -78℃에서 질소 보호하에 리튬 디이소프로필아미드(2 mol/L, 61.2 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 적가하며, 반응액을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 화합물 46-3(15.5 g, 61.2 mmol)의 테트라히드로푸란(200 mL) 용액을 적가하고, -78℃에서 2시간 동안 계속 교반하였다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(200 mL)을 첨가하여 반응을 퀀칭하고, 에틸 아세테이트(100 mL × 3)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 염화암모늄 수용액(200 mL × 1) 및 포화 식염수(100 mL × 3)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 2 : 1)로 분리하여 화합물 46-4를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 342, 실측값 342.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.16-7.24 (m, 1H), 6.91-7.02 (m, 2H), 4.12-4.22 (m, 2H), 3.13-3.24 (m, 1H), 2.83-2.97 (m, 2H), 2.67-2.80 (m, 2H), 2.30-2.41 (m, 1H), 1.25 (t, J = 8.0 Hz, 3H), 1.19 (s, 9H).

(3) 화합물 46-4(4.50 g, 13.2 mmol)의 에탄올(30.0 mL) 용액에 염산의 디옥산 용액(4 mol/L, 10.0 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 46-5의 염산염을 얻었다.

(4) 화합물 46-5의 염산염(6.32 g, 13.2 mmol)의 에탄올(40.0 mL) 용액에 화합물 46-6(13.8 g, 138 mmol), 산화구리(209 mg, 2.63 mmol), 트리에틸아민(2.66 g, 26.3 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 80℃의 밀봉된 튜브에서 12시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(100 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(150 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(100 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 2 : 1)로 분리하여 화합물 46-7을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 338, 실측값 338.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.14-7.21 (m, 1H), 6.98-7.07 (m, 1H), 6.90 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 4.07-4.15 (m, 4H), 2.94-3.06 (m, 1H), 2.84-2.92 (m, 1H), 2.61-2.79 (m, 3H), 2.49-2.56 (m, 1H), 2.40-2.47 (m, 2H), 2.30-2.39 (m, 1H), 2.16-2.25 (m, 1H), 1.22-1.26 (m, 3H), 1.20 (t, J = 8.0 Hz, 3H).

(5) 화합물 46-7(4.10 g, 12.2 mmol)의 에탄올(50.0 mL) 용액에 파라포름알데히드(3.65 g), 나트륨 시아노보로하이드라이드(2.29 g, 36.5 mmol) 및 아세트산(1.46 g, 24.3 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 35℃에서 15시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(30.0 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(100 mL)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(50 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 2 : 1)로 분리하여 화합물 46-8을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 352, 실측값 352.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.12-7.19 (m, 1H), 7.02 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.89 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 4.05-4.15 (m, 2H), 3.84-3.96 (m, 2H), 2.84-2.98 (m, 3H), 2.72-2.81 (m, 1H), 2.56-2.68 (m, 2H), 2.28-2.47 (m, 4H), 2.16 (s, 3H), 1.20-1.27 (m, 3H), 0.99-1.05 (m, 3H).

(6) -78℃에서 화합물 46-8(3.40 g, 9.68 mmol)의 테트라히드로푸란(50.0 mL) 용액에 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드(1 mol/L, 29.0 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -78℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(50.0 mL)을 첨가하고, 디클로로메탄(50.0 mL)으로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(50.0 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 2 : 1)로 분리하여 화합물 46-9를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 306, 실측값 306.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.19-7.26 (m, 1H), 7.02-7.14 (m, 1H), 6.88-7.01 (m, 1H), 4.21-4.32 (m, 2H), 3.47-3.57 (m, 1H), 3.13-3.33 (m, 2H), 2.88-3.06 (m, 2H), 2.61-2.73 (m, 1H), 2.34-2.44 (m, 1H), 2.22-2.33 (m, 1H), 2.06-2.13 (m, 3H), 1.77-1.89 (m, 1H), 1.30-1.34 (m, 3H).

(7) 화합물 46-9(2.50 g, 8.19 mmol)의 에탄올(50.0 mL) 용액에 화합물 46-10(1.25 g, 16.4 mmol) 및 나트륨 에톡시드(1.67 g, 24.6 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 염산(1 mol/L)으로 pH 값을 6으로 조절하였다. 고체 석출 후, 여과하고, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 46-11을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 318, 실측값 318.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.28-7.35 (m, 1H), 7.03-7.12 (m, 2H), 3.41-3.51 (m, 1H), 3.06 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.82-2.99 (m, 2H), 2.59-2.69 (m, 1H), 2.51-2.53 (m, 1H), 2.16-2.27 (m, 1H), 1.98 (s, 3H), 1.68-1.76 (m, 1H).

(8) 중간체 46-11(2.20 g, 6.93 mmol)의 수용액(50.0 mL)에 클로로아세트산(3.30 g, 34.9 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 100℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 여액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 pH 값을 8로 조절한 다음, 고체가 석출되었다. 여과 후, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 46-12를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 302, 실측값 302.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.02 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 7.27-7.35 (m, 1H), 7.02-7.12 (m, 2H), 3.43 (s, 1H), 2.99-3.06 (m, 1H), 2.82-2.96 (m, 2H), 2.54-2.63 (m, 1H), 2.33-2.43 (m, 1H), 2.17-2.27 (m, 1H), 1.97 (s, 3H), 1.65-1.77 (m, 1H).

(9) 화합물 46-12(400 mg, 1.33 mmol)를 옥시염화인(10.0 mL)에 용해시키고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 디클로로메탄(20.0 mL)으로 추출하며, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(20.0 mL × 2) 및 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 감압 농축하여, 화합물 46-13을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 338, 실측값 338.

(10) 화합물 46-13(600 mg, 1.31 mmol)의 N-메틸피롤리돈(20.0 mL) 용액에 탄산칼륨(701 mg, 3.94 mmol) 및 화합물 46-14(444 mg, 1.97 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 50℃에서 5시간 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(50.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(30.0 mL × 5)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 10 : 1)로 분리하여 화합물 46-15를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 527, 실측값 527.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.20-7.26 (m, 1H), 6.93-7.07 (m, 2H), 3.96-4.07 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 3.59-3.85 (m, 2H), 3.38-3.52 (m, 1H), 3.21-3.31 (m, 1H), 2.94-3.12 (m, 6H), 2.61-2.74 (m, 2H), 2.30-2.43 (m, 1H), 2.18-2.28 (m, 3H), 1.82-1.94 (m, 2H), 1.50 (s, 9H).

(11) 화합물 46-15(500 mg, 949 μmol)의 디옥산(15.0 mL) 용액에 화합물 46-16(227 mg, 1.42 mmol), 탄산세슘(927 mg, 2.85 mmol), 메탄술포나토(2-디시클로헥실포스피노-2,6-디이소프로폭시-1,1-비페닐)(2-아미노-1,1-비페닐-2-일)팔라듐(II)(159 mg, 190 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(50.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(50.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 10 : 1)로 분리하여 화합물 46-17을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 650, 실측값 650.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.18-7.25 (m, 1H), 6.90-7.03 (m, 2H), 4.13-4.18 (m, 1H), 3.91-4.08 (m, 2H), 3.73-3.89 (m, 1H), 3.62-3.72 (m, 1H), 3.55 (br d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.13-3.48 (m, 4H), 2.86-3.11 (m, 6H), 2.57-2.78 (m, 2H), 2.28-2.43 (m, 2H), 2.12-2.27 (m, 5H), 1.59-2.02 (m, 8H), 1.42-1.57 (m, 9H).

(12) 화합물 46-17(300 mg, 462 μmol)의 디클로로메탄(5.0 mL) 용액에 트리플루오로아세트산(1.54 g, 13.5 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 에틸 아세테이트(50 mL × 2)로 추출하고, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(50 mL) 및 포화 식염수(50 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 46-18을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 550, 실측값 550.

(13) 0℃에서 화합물 46-18(150 mg, 273 μmol)의 에틸 아세테이트(3.0 mL) 용액에 트리에틸아민(82.8 mg, 819 μmol), 화합물 46-19(73.7 mg, 819 μmol), 4A 분자체(150 mg) 및 프로필포스포닉산 무수물 용액(521 mg, 819 μmol, 50% 에틸 아세테이트 용액)을 첨가하고, 반응액을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(10.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(10.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 10 : 1)로 분리하여 화합물 46-20을 얻었다.

(14) 화합물 46-20을 키랄 초임계 유체 크로마토그래피로 분해하여 화합물 46 및 47을 얻었다.

분리 조건: 크로마토그래피 컬럼 모델: Chiralpak OX-3; 크로마토그래피 컬럼 사양: 10 × 4.6 mm I.D., 3 μm; 주입량: 8.0 μL; 이동상: A: 이산화탄소, B: 에탄올(0.05% 디에틸아민), B%: 5%-40% 구배 용리 4분, 40% 고정 농도 용리 1분, 10% 고정 농도 용리 1분; 검출 파장: 254 nm; 컬럼 온도: 35℃.

화합물 46 유지 시간 3.680분, ee 값 100%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 622, 실측값 622.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.27-7.34 (m, 1H), 6.98-7.09 (m, 1H), 6.98-7.03 (m, 1H), 5.25-5.45 (m, 3H), 4.89-5.01 (m, 1H), 4.26-4.40 (m, 2H), 4.04-4.23 (m, 3H), 3.69-3.82 (m, 2H), 3.44-3.62 (m, 4H), 3.08-3.29 (m, 3H), 3.03-3.08 (m, 1H), 2.90-3.02 (m, 5H), 2.33-2.53 (m, 3H), 2.23 (s, 4H), 2.10-2.17 (m, 2H), 1.98-2.06 (m, 1H), 1.86-2.06 (m, 1H).

화합물 47 유지 시간 4.052분, ee 값 98.44%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 622, 실측값 622.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.24-7.33 (m, 1H), 6.95-7.08 (m, 2H), 5.19-5.43 (m, 3H), 4.25 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.03-4.22 (m, 3H), 3.96-4.03 (m, 1H), 3.71 (s, 2H), 3.18-3.28 (m, 4H), 3.09-3.17 (m, 2H), 2.96-3.08 (m, 3H), 2.93 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 2.42-2.52 (m, 1H), 2.27-2.39 (m, 1H), 2.16-2.27 (m, 4H), 2.05-2.15 (m, 1H), 1.84-2.03 (m, 4H), 1.29 (s, 3H).

실시예 38 화합물 48 및 49의 합성

(1) 화합물 48-1(5.00 g, 30.4 mmol)의 톨루엔(150 mL) 용액에 화합물 48-2(3.69 g, 30.4 mmol), 테트라에틸티타네이트(13.8 g, 60.9 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 120℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응액에 물(300 mL)을 첨가하고, 여과하며, 필터 케이크를 에틸 아세테이트(300 mL × 3)로 세척한 다음, 유기상을 병합하고 포화 식염수(300 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 0 : 1)로 분리하여 화합물 48-3을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 268, 실측값 268.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.95 (d, J = 7.64 Hz, 1H), 7.18-7.24 (m, 1H), 7.11-7.17 (m, 1H), 3.22-3.32 (m, 1H), 3.03-3.11 (m, 1H), 2.77-2.95 (m, 2H), 1.91-2.10 ( m, 2H) 1.32 (s, 9H).

(2) 에틸 아세테이트(8.57 g, 97.2 mmol)를 테트라히드로푸란(50 mL)에 용해시키고, -78℃에서 질소 보호하에 리튬 디이소프로필아미드(2 mol/L, 19.4 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 적가하며, 반응액을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 화합물 48-3(15.5 g, 61.2 mmol)의 테트라히드로푸란(200 mL) 용액을 적가하고, -78℃에서 2시간 동안 계속 교반하였다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(200 mL)을 첨가하여 반응을 퀀칭하고, 에틸 아세테이트(100 mL × 3)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 염화암모늄 수용액(200 mL × 1) 및 포화 식염수(100 mL × 3)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 0 : 1)로 분리하여 화합물 48-4를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 356, 실측값 356.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.08-7.20 (m, 2H), 6.92 (d, J = 9.2, 1.6 Hz, 1H), 5.17 (s, 1H), 4.13-4.21 (m, 2H), 2.81-2.88 (m, 2H), 2.68-2.80 (m, 2H), 2.39-2.49 (m, 1H), 2.11-2.18 (m, 1H), 2.04-2.10 (m, 1H), 1.74-1.86 (m, 1H), 1.25-1.28 (m, 3H), 1.22-1.24 (m, 9H).

(3) 화합물 48-4(3.70 g, 10.4 mmol)의 에탄올(30.0 mL) 용액에 염산의 디옥산 용액(4 mol/L, 10.0 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 48-5의 염산염을 얻었다.

(4) 화합물 48-5의 염산염(2.60 g, 10.3 mmol)의 에탄올(40.0 mL) 용액에 화합물 48-6(10.3 g, 103 mmol), 산화구리(164 mg, 2.07 mmol), 트리에틸아민(3.14 g, 31.0 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 85℃의 밀봉된 튜브에서 12시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(50.0 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(50.0 mL × 2)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(50.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 0 : 1)로 분리하여 화합물 48-7을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 352, 실측값 352.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.36 (s, 1H), 7.14 (q, 1H), 6.81-6.94 (m, 1H), 4.06-4.19 (m, 4H), 2.72-2.86 (m, 3H), 2.57-2.69 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 2.02-2.11 (m, 1H), 1.94 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 1.84 (d, J = 10.8, 5.6 Hz, 1H) 1.25 (m, 3H), 1.21 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

(5) 화합물 48-7(1.90 g, 5.41 mmol)의 에탄올(30.0 mL) 용액에 파라포름알데히드(1.62 g), 나트륨 시아노보로하이드라이드(1.02 g, 16.2 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 30℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(100 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(100 mL)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(50 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 0 : 1)로 분리하여 화합물 48-8을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 366, 실측값 366.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.31 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.05-7.12 (m, 1H), 6.81-6.88 (m, 1H), 4.09 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.81-3.92 (m, 2H), 2.69-2.81 (m, 4H), 2.54-2.68 (m, 2H), 2.31-2.48 (m, 2H), 2.21 (s, 3H), 2.04-2.13 (m, 2H), 1.81 (q, J = 6.4 Hz, 2H), 1.23 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.01 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

(6) -78℃에서 화합물 48-8(1.70 g, 4.65 mmol)의 테트라히드로푸란(30.0 mL) 용액에 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드(1 mol/L, 9.30 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -78℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(50.0 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(50.0 mL)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(50.0 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 0 : 1)로 분리하여 화합물 48-9를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 320, 실측값 320.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.26-7.56 (m, 1H), 7.13-7.24 (m, 1H), 6.81-7.01 (m, 1H), 4.08-4.36 (m, 2H), 3.42-3.61 (m, 1H), 3.09-3.21 (m, 1H), 2.86-2.96 (m, 1H), 2.49-2.77 (m, 2H), 2.26-2.48 (m, 1H), 2.01 (s, 3H), 1.61-1.81 (m, 3H), 1.59 ( s, 2H), 1.28-1.35 (m, 3H).

(7) 화합물 48-9(1.20 g, 3.76 mmol)의 에탄올(20.0 mL) 용액에 화합물 48-10(572 mg, 7.51 mmol) 및 나트륨 에톡시드(767 mg, 11.2 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 염산(1 mol/L)으로 pH 값을 6으로 조절하였다. 고체 석출 후, 여과하고, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 48-11을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 332, 실측값 332.

(8) 중간체 48-11(1.10 g, 3.25 mmol)의 수용액(30.0 mL)에 클로로아세트산(1.25 g, 13.2 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 여액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 pH 값을 8로 조절한 다음, 고체가 석출되었다. 여과 후, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 48-12를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 316, 실측값 316.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.03 (s, 1H), 10.75 (s, 1H), 7.38 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.20-7.32 (m, 1H), 7.04 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.52 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 3.05 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 2.81 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 2.52-2.59 (m, 2H), 2.40-2.48 (m, 1H), 1.94 (s, 4H), 1.70-1.80 (m, 1H), 1.47-1.61 (m, 2H).

(9) 화합물 48-12(200 mg, 634 μmol)를 옥시염화인(2.0 mL)에 용해시키고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 디클로로메탄(20.0 mL)으로 추출하며, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(20.0 mL × 2) 및 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 감압 농축하여, 화합물 48-13을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 352, 실측값 352.

(10) 화합물 48-13(150 mg, 425 μmol)의 N-메틸피롤리돈(5.0 mL) 용액에 탄산칼륨(176 mg, 1.28 mmol) 및 화합물 48-14(115 mg, 551 μmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 50℃에서 5시간 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(50.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(30.0 mL × 5)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 0 : 1)로 분리하여 화합물 48-15를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 541, 실측값 541.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.35 (s, 1H), 7.20 (s, 1H), 6.83-7.01 (m, 1H), 4.57 (s, 1H), 4.00 (s, 2H), 3.82 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.72 (dd, J = 6.0, 3.2 Hz, 1H), 3.30-3.66 (m, 2H), 3.08-3.29 (m, 3H), 2.80-3.07 (m, 3H), 2.65 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 2.42-2.52 (m, 1H), 2.12 (s, 2H), 2.02 (s, 1H), 1.19-1.94 (m, 1H), 1.64-1.78 (m, 2H), 1.50 (d, J = 2.0 Hz, 9H).

(11) 화합물 48-15(440 mg, 813 μmol)의 디옥산(10.0 mL) 용액에 화합물 48-16(388 mg, 2.44 mmol), 탄산세슘(794 mg, 2.44 mmol), 메탄술포나토(2-디시클로헥실포스피노-2,6-디이소프로폭시-1,1-비페닐)(2-아미노-1,1-비페닐-2-일)팔라듐(II)(136 mg, 162 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(50.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(50.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 10 : 1)로 분리하여 화합물 48-17을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 664, 실측값 664.

(12) 화합물 48-17(270 mg, 406 μmol)의 디클로로메탄(5.0 mL) 용액에 염산의 디옥산 용액(4 mol/L, 36.7 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 pH 값을 8로 조절하고, 디클로로메탄(20 mL × 2)으로 추출하며, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(20 mL) 및 포화 식염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 감압 농축하며, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 10 : 1)로 분리하여 화합물 48-18을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 564, 실측값 564.

(13) 0℃에서 화합물 48-18(200 mg, 354 μmol)의 에틸 아세테이트(1.0 mL) 용액에 트리에틸아민(17.9 mg, 177 μmol), 화합물 48-19(35.9 mg, 354 μmol), 4A 분자체(100 mg) 및 프로필포스포닉산 무수물 용액(677 mg, 1.06 mmol, 50% 에틸 아세테이트 용액)을 첨가하고, 반응액을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(10.0 mL)을 첨가하고, 포화 식염수(10.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 1 : 0 내지 10 : 1)로 분리하여 화합물 48-20을 얻었다.

(14) 화합물 48-20을 키랄 초임계 유체 크로마토그래피로 분해하여 화합물 48 및 49를 얻었다.

분리 조건: 크로마토그래피 컬럼 모델: Chiralpak OD-3; 크로마토그래피 컬럼 사양: 50 × 4.6 mm I.D., 3 μm; 주입량: 8.0 μL; 이동상: A: 이산화탄소, B: 에탄올(0.05% 디에틸아민), B%: 5%-40% 구배 용리 2.5분, 40% 고정 농도 용리 0.5분, 5% 고정 농도 용리 1분; 검출 파장: 254 nm; 컬럼 온도: 35℃.

화합물 48 유지 시간 1.743분, ee 값 98.58%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 636, 실측값 636.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ7.37 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.20-7.27 (m, 1H), 6.94 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 5.24-5.42 (m, 3H), 4.38-4.63 (m, 1H), 4.20-4.25 (m, 1H), 4.08-4.19 (m, 3H), 3.77 (s, 2H), 3.46-3.60 (m, 1H), 3.35 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 3.28 (s, 1H), 3.04-3.14 (m, 3H), 2.89-3.02 (m, 4H), 2.43-2.55 (m, 1H), 2.27-2.39 (m, 1H), 2.15-2.26 (m, 2H), 2.12 (s, 3H), 1.97-2.08 (m, 4H), 1.85-1.97 (m, 2H), 1.70-1.84 (m, 2H), 1.28-1.53 (m, 2H)

화합물 49 유지 시간 1.937분, ee 값 98.18%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 636, 실측값 636.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.39-7.46 (m, 1H), 7.16 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 5.63 (t, J = 3.6 Hz, 0.5H), 5.50 (d, J = 3.2 Hz, 0.5H), 5.30-5.43 (m, 2H), 4.62 (s, 1H), 4.53-4.59 (m, 3H), 3.94-4.03 (m, 2H), 3.83-3.93 (m, 3H), 3.41-3.49 (m, 4H), 3.38 (s, 1H), 3.10-3.28 (m, 2H), 2.87-3.10 (m, 3H), 2.57-2.64 (m, 4H), 2.51-2.57 (m, 1H), 2.40 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 2.25-2.37 (m, 3H), 2.13-2.24 (m, 4H), 1.81-1.91 (m, 1H), 1.28-1.51 (m, 1H).

실시예 39 화합물 50 및 51의 합성

(1) 화합물 50-1(20.0 g, 111 mmol)의 톨루엔(240 mL) 용액에 화합물 50-2(16.1 g, 133 mmol), 테트라에틸티타네이트(50.5 g, 221 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 13시간 동안 교반하였다. 반응액에 물(200 mL)을 첨가하고, 여과하며, 필터 케이크를 에틸 아세테이트(100 mL × 3)로 세척한 다음, 유기상을 병합하고 포화 식염수(100 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 5 : 1)로 분리하여 화합물 50-3을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 284, 실측값 284.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.07-8.14 (m, 1H), 7.49 (dd, J = 7.6, 1.2 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 3.03-3.33 (m, 2H), 2.86-3.02 (m, 2H), 2.05-2.13 (m, 1H), 1.96-2.04 (m, 1H), 1.33 (s, 9H).

(2) 에틸 아세테이트(26.9 g, 305 mmol)를 테트라히드로푸란(320 mL)에 용해시키고, -78℃에서 질소 보호하에 리튬 디이소프로필아미드(2 mol/L, 60.9 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 적가하고, 반응액을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 화합물 50-3(15.5 g, 61.2 mmol)의 테트라히드로푸란(200 mL) 용액을 적가하고, -78℃에서 3시간 동안 계속 교반하였다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(200 mL)을 첨가하여 반응을 퀀칭하고, 에틸 아세테이트(100 mL × 3)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 염화암모늄 수용액(200 mL × 1) 및 포화 식염수(100 mL × 3)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 3 : 1)로 분리하여 화합물 50-4를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 372, 실측값 372.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.31 (dd, J = 17.2, 8.0 Hz, 2H), 7.09-7.16 (m, 1H), 4.11-4.19 (m, 2H), 2.75-2.90 (m, 4H), 2.41-2.49 (m, 1H), 2.06-2.18 (m, 2H), 1.78-1.89 (m, 1H), 1.25-1.28 (m, 3H), 1.24 (s, 9H).

(3) 화합물 50-4(17.1 g, 46.0 mmol)의 에탄올(80.0 mL) 용액에 염산의 디옥산 용액(4 mol/L, 38.9 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하여, 조생성물인 화합물 50-5의 염산염을 얻었다.

(4) 화합물 50-5의 염산염(4.60 g, 15.1 mmol)의 에탄올(30.0 mL) 용액에 화합물 50-6(15.1 g, 151 mmol), 산화구리(241 mg, 3.02 mmol), 트리에틸아민(1.53 g, 15.1 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 85℃의 밀봉된 튜브에서 12시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(90.0 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(40.0 mL × 3)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(30.0 mL × 1)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 3 : 1)로 분리하여 화합물 50-7을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 368, 실측값 368.

(5) 화합물 50-7(2.30 g, 6.25 mmol)의 에탄올(20.0 mL) 용액에 파라포름알데히드(1.88 g), 나트륨 시아노보로하이드라이드(1.18 g, 18.8 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 25시간 동안 반응시켰다. 반응액에 물(30.0 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(15.0 mL × 3)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(15.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 3 : 1)로 분리하여 화합물 50-8을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 382, 실측값 382.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.48 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.20-7.24 (m, 1H), 7.05-7.11 (m, 1H), 4.10 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.79-3.96 (m, 2H), 2.70-2.86 (m, 5H), 2.54-2.65 (m, 1H), 2.31-2.50 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.99-2.16 (m, 2H), 1.84 (quin, J = 6.4 Hz, 2H), 1.24 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.01 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

(6) -78℃에서 화합물 50-8(1.70 g, 4.45 mmol)의 테트라히드로푸란(35.0 mL) 용액에 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드(1 mol/L, 13.4 mL, 테트라히드로푸란 용액)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 -78℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액(15.0 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(50.0 mL)로 추출하며, 유기상을 병합하고 포화 식염수(50.0 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 0 : 1)로 분리하여 화합물 50-9를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 336, 실측값 336.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.47-7.59 (m, 1H), 7.23-7.26 (m, 1H), 7.11-7.22 (m, 1H), 4.20-4.34 (m, 2H), 3.46-3.64 (m, 1H), 2.93-3.32 (m, 3H), 2.44-2.73 (m, 3H), 2.01 (d, J = 14.4 Hz, 4H), 1.66-1.84 (m, 3H), 1.33 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

(7) 화합물 50-9(1.29 g, 3.84 mmol)의 에탄올(25.0 mL) 용액에 화합물 50-10(585 mg, 7.68 mmol) 및 나트륨 에톡시드(784 mg, 11.5 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 염산(1 mol/L)으로 pH 값을 6으로 조절하였다. 고체 석출 후, 여과하고, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 50-11을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 348, 실측값 348.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.54 (dd, J = 7.6, 1.2 Hz, 1H), 7.28-7.33 (m, 1H), 7.20-7.27 (m, 1H), 7.04-7.19 (m, 1H), 3.53 (d, J = 16.4 Hz, 2H), 3.02 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 2.88 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 2.52-2.64 (m, 2H), 1.91-1.96 (m, 1H), 1.89 (s, 3H), 1.47-1.73 (m, 3H).

(8) 중간체 50-11(1.18 g, 3.39 mmol)의 수용액(75.0 mL)에 클로로아세트산(3.21 g, 33.9 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 110℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 여액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 pH 값을 8로 조절한 다음, 고체가 석출되었다. 여과 후, 필터 케이크를 건조시켜 화합물 50-12를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 332, 실측값 332.

(9) 화합물 50-12(1.20 g, 3.62 mmol)를 옥시염화인(10.0 mL)에 용해시키고, 반응액을 질소 보호하에 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고, 디클로로메탄(20.0 mL)으로 추출하며, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(20.0 mL × 2) 및 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 감압 농축하여, 화합물 50-13을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 368, 실측값 368.

(10) 화합물 50-13(520 mg, 1.41 mmol)의 N-메틸피롤리돈(5.0 mL) 용액에 탄산칼륨(585 mg, 4.23 mmol) 및 화합물 50-14(381 mg, 1.69 mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 50℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(50.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(30.0 mL × 5)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1 : 0 내지 4 : 1)로 분리하여 화합물 50-15를 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 557, 실측값 557.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.42-7.56 (m, 1H), 7.29-7.42 (m, 1H), 7.11-7.24 (m, 1H), 4.50-4.68 (m, 1H), 3.92-4.09 (m, 2H), 3.56 (s, 3H), 3.28-3.54 (m, 1H), 2.96-3.26 (m, 5H), 2.44-2.79 (m, 3H), 2.06-2.19 (m, 3H), 1.62-1.99 (m, 4H), 1.51 (d, J = 2.4 Hz, 9H).

(11) 화합물 50-15(230 mg, 412 μmol)의 디옥산(5.00 mL) 용액에 화합물 50-16(197 mg, 1.24 mmol), 탄산칼륨(171 mg, 1.24 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(75.6 mg, 82.5 μmol), 및 2-디시클로헥실포스피노-2,6-디이소프로폭시-1,1-비페닐(77.0 mg, 165 μmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 90℃에서 5시간 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(20.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(20.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Xtimate C18, 150 mm × 40 mm 10 μm, A: 물(0.225% 포름산); B: 아세토니트릴, 20%-50%: 10분)로 분리하여 화합물 50-17의 포름산염을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 680, 실측값 680.

(12) 화합물 50-17의 포름산염(80 mg, 118 μmol)의 디클로로메탄(1.0 mL) 용액에 트리플루오로아세트산(1.0 mL)을 첨가하고, 반응액을 질소 보호하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 감압 농축하고 트리플루오로아세트산을 제거하며, 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 pH 값을 8로 조절하고, 디클로로메탄(20 mL × 2)으로 추출하며, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(20 mL) 및 포화 식염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 감압 농축하여, 화합물 50-18을 얻었다.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 580, 실측값 580.

(13) 0℃에서 화합물 50-18(55.0 mg, 94.8 μmol)의 에틸 아세테이트(1.0 mL) 용액에 트리에틸아민(57.6 mg, 79.2 μmol), 화합물 50-19(25.6 mg, 284 μmol), 4A 분자체(100 mg) 및 프로필포스포닉산 무수물 용액(181 mg, 284 mmol, 50% 에틸 아세테이트 용액)을 첨가하고, 반응액을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 에틸 아세테이트(10.0 mL)를 첨가하고, 포화 식염수(10.0 mL × 2)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(Phenomenex C18, 75 mm × 30 mm 3 μm, A: 물(10 mmol/L 탄산수소아민); B: 아세토니트릴, 38%-78%: 28분)로 분리하여 화합물 50-20을 얻었다.

(14) 화합물 50-20을 키랄 초임계 유체 크로마토그래피로 분해하여 화합물 50 및 51을 얻었다.

화합물 50 유지 시간 1.657분, ee 값 99.30%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 652, 실측값 652.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.53 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.26-7.32 (m, 1H), 7.17-7.25 (m, 1H), 5.11-5.48 (m, 3H), 4.30 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 4.10-4.22 (m, 2H), 4.00 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.70-3.82 (m, 2H), 3.61 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 2.90-3.31 (m, 11H), 2.55 (ddd, J = 17.2, 12.0, 5.2 Hz, 1H), 2.06-2.39 (m, 6H), 1.84-2.06 (m, 5H), 1.77 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 1.15-1.33 (m, 2H)

화합물 51 유지 시간 1.810분, ee 값 100%.

MS-ESI [M+H]⁺, 계산값 652, 실측값 652.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.53 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.26-7.32 (m, 1H), 7.17-7.25 (m, 1H), 5.11-5.48 (m, 3H), 4.30 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 4.10-4.22 (m, 2H), 4.00 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.70-3.82 (m, 2H), 3.61 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 2.90-3.31 (m, 11H), 2.55 (ddd, J = 17.2, 12.0, 5.2 Hz, 1H), 2.06-2.39 (m, 6H), 1.84-2.06 (m, 5H), 1.77 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 1.15-1.33 (m, 2H).

시험예 1

NCI-H358 세포 증식에 대한 화합물의 억제 작용

1. 시험 원리: NCI-H358 세포는 KRAS G12C를 발현하는 인간 비소세포폐암 세포주이다. 본 발명에 관한 화합물은 KRAS G12C와 공유 결합하여 NCI-H358 세포 증식을 억제한다.

2. 시험 재료: NCI-H358 세포는 ATCC에서 구입하고; CellTiter-GloR는 Promega(제품번호 G7571)에서 구입하며; RPMI-1640은 ATCC(제품번호 30-2001)에서 구입하고; 소태아혈청(FBS)은 EXCELL(제품번호 FND500)에서 구입하며; 페니실린-스트렙토마이신은 Gibco(제품번호 15140-122)에서 구입하고; 0.25% 트립신-에틸렌디아민테트라아세트산 소화 용액(Trypsin-EDTA)은 Gibco(제품번호 25200-072)에서 구입하며; 디메틸술폭시드(DMSO)는 Sigma(제품번호 D2650)에서 구입하고; 96웰 플레이트는 Corning(제품번호 3610)에서 구입하며; 인큐베이터는 Thermo(모델 3111)에서 구입하고; 도립현미경은 Nikon(제품번호 TS-100)에서 구입하며; 자동세포계수기는 Life technologies(모델 Countess II)에서 구입하고; 마이크로플레이트 리더는 PerkinElmer(모델 Envision)에서 구입하며; 데이터 처리 소프트웨어는 GraphPad Prism 5.0이다.

3. 시험 방법: 대수성장기의 세포를 성장 배지(RPMI-1640+10% FBS)에 재현탁하고 목표 밀도(2000/mL)로 희석하였다. 상기 세포 현탁액을 웰당 100 μL로 96웰 플레이트에 접종하고; 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 밤새 배양하였다. 배지를 배경 대조군으로 하였다.

시험할 화합물을 DMSO에 용해시키고, 농도가 10 mmol/L인 스톡 용액으로 조제하였다. 먼저 DMSO로 스톡 용액을 2 mmol/L로 희석한 후, 3배 구배 희석하며, 총 10개의 농도로 하였다. 각 농도의 상기 용액 3 μL를 취하고, 각각 197 μL의 성장 배지로 희석하였다. 그런 다음 세포가 접종된 96웰 플레이트에 50 μL/웰로 첨가하였다. 시험할 화합물이 첨가된 세포를 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 72시간 동안 배양하였다. 실온에서 96웰 플레이트를 평형화하고, 각 웰에 40 μL의 CellTiter-Glo 시약을 첨가하며, 볼텍서에서 2분 동안 혼합하고, 실온에서 60분 동안 배양하며, EnVision 마이크로플레이트 리더로 발광값을 판독하고, GraphPad Prism 5.0 소프트웨어로 화합물의 IC₅₀을 계산하였다.

구체적인 테스트 결과는 표 1에 나타낸 바와 같고(각 화합물 번호는 실시예에 기재된 화합물 번호임), 여기서 A는 IC₅₀ < 100 nM를 나타내며, B는 100 nM < IC₅₀ < 1 μM를 나타내고, C는 1 μM < IC₅₀ < 10 μM를 나타낸다.

표 1

표 1의 테스트 데이터로부터 알 수 있다시피, 본 발명에 따른 식 I로 표시되는 화합물은 H358 세포의 성장에 대해 바람직한 억제 작용을 가지고, 암의 치료 및 예방용 약물의 제조에 사용될 가능성이 있다.

시험예 2

화합물의 래트 약동학적 특성 측정

1. 시험 목적: 본 연구는 LC-MS/MS 방법을 통해 단일 정맥 주사(IV) 및 경구 투여(PO) 후 본 발명의 일부 실시예 화합물의 SD 래트 체내의 약동학적 특성을 측정한다.

2. 시험 재료: 시험 의약품은 본 발명의 실시예의 자체 제조 화합물이고; 양성 화합물 AMG-510 및 MRTX-849는 Chengdu Zhihui Zhongxin BioPharmaceutical Co., Ltd.에서 구입하며; SD 수컷 래트는 Shanghai Institute of Planned Parenthood Research(SIPPR) 실험 동물 관리부에서 유래되었다. 동물 생산 허가 번호(SCXK(Shanghai)2018-0006).

3. 시험 방법:

0.5% 메틸셀룰로오스의 조제: 5 g의 메틸셀룰로오스를 칭량하고, 1000 mL의 정제수에 용해시켰다.

경구 처방의 조제: 필요한 양의 시험할 화합물을 칭량하고, 0.5% 메틸셀룰로오스 용액에 용해시켜, 0.5 mg/mL의 현탁액 또는 용액을 얻었다.

정맥 주사 처방의 조제: 필요한 양의 시험할 화합물을 칭량하고, 0.5 mL의 디메틸술폭시드에 용해시켜, 4 mg/mL의 용액을 조제하였다. 0.25 mL의 상기 용액을 취하고, 0.5 mL의 폴리옥실 15 히드록시스테아레이트(solutol) 및 4.25 mL의 생리식염수를 첨가하여, 0.2 mg/mL의 용액을 얻었다.

투여: SD 수컷 래트는 밤새 금식한 후 경구 투여(PO)하고, 단일 정맥 주사(IV)군은 금식이 필요하지 않았다. 투여 용량 및 투여 부피는 하기 표와 같다. 투여 4시간 후에 먹이를 주었다.

샘플 수집: 경정맥 또는 다른 적합한 정맥을 통해 혈액을 수집하고, 각 시점에 0.2 mL를 수집하였다. 샘플을 에틸렌디아민테트라아세트산 이칼륨염이 함유된 시험관에 넣고, 원심분리 전에 얼음 위에서 보관하였다. 혈액 수집 후 1시간 이내에 혈액 샘플을 2-8℃ 및 6800 g의 조건에서 6분 동안 원심분리하고 -80℃에서 보관하였다. 정맥 투여 채혈 시점은 투여 후 0.083, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8 및 24시간이고; 경구 투여 채혈 시점은 투여 후 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8 및 24시간이다. 구체적인 테스트 결과는 표 2에 나타낸 바와 같다.

표 2

표 2의 데이터로부터 볼 수 있다시피, 본 발명의 일부 실시예의 화합물은 우수한 래트 약동학적 특성을 가지고 심지어 양성 화합물보다 우수하다.

시험예 3

화합물의 전혈 안정성 측정

1. 시험 목적: 본 발명의 일부 실시예의 화합물과 개 및 래트의 전혈을 배양한 후 모 화합물의 청소율을 모니터링하여 화합물의 전혈 안정성을 결정한다.

2. 시험 재료: 시험 의약품은 본 발명의 실시예의 자체 제조 화합물이고; 양성 화합물 AMG-510 및 MRTX-849는 Chengdu Zhihui Zhongxin Bio-Pharmaceutical Co., Ltd.에서 구입하였다.

3. 시험 방법:

용액의 조제: 필요한 양의 시험할 화합물을 칭량하고 디메틸술폭시드에 용해시켜, 10 mmol/L의 스톡 용액을 조제하였다. 그런 다음 70% 아세토니트릴 수용액으로 시험할 화합물 스톡 용액을 각각 1 mmol/L 및 0.2 mmol/L로 희석하고, 작업 용액으로 하였다.

작업 용액을 전혈에 첨가하여 시험할 화합물의 농도가 각각 5 μmol/L가 되도록 하였다. 90 μL를 취하고 90 μL의 물을 첨가하여 골고루 혼합하였다. 그런 다음 내부 표준으로 프로프라놀롤이 함유된 아세토니트릴 정지 용액 600 μL를 첨가하였다. 37℃의 수조에서 부드럽게 흔들면서 배양하였다. 30, 60, 120, 240분에 각각 90 μL의 혼합물을 취하여 90 μL의 물이 사전 첨가된 깨끗한 96웰 플레이트에 넣고 골고루 혼합한 다음, 내부 표준으로 프로프라놀롤이 함유된 아세토니트릴 정지 용액 600 μL를 첨가하며, 5000 g의 조건에서 15분 동안 원심분리하였다. 80 μL의 상층액을 취하여 160 μL의 초순수가 사전 첨가된 96웰 플레이트에 넣은 다음 LC-MS/MS로 분석하였다.

구체적인 테스트 결과는 표 3에 나타낸 바와 같다.

표 3

위의 데이터로부터 볼 수 있다시피, 본 발명의 일부 실시예의 화합물은 우수한 전혈 안정성을 갖는다.

시험예 4

H358 pERK 억제 활성

1. 시험 목적: NCI-H358 세포에서 ERK 인산화 수준에 대한 시험할 화합물의 억제 작용을 검출한다.

2. 시험 재료: 시험 의약품은 본 발명의 실시예의 자체 제조 화합물이고; 양성 화합물 AMG-510은 Chengdu Zhihui Zhongxin Bio-Pharmaceutical Co., Ltd.에서 구입하며; NCI-H358 세포는 Procell Life Science&Technology Co.,Ltd.에서 구입하고; 96웰 세포 배양 플레이트는 Corning에서 구입하며; 인큐베이터는 Thermo Fisher Scientific에서 구입하고; PRMI1640 배지는 Biological Industries에서 구입하며; 디메틸술폭시드는 Sinopharm Chemical Reagent Co.Ltd.에서 구입하고; 피펫터는 Thermo Fisher Scientific에서 구입하며; 384 마이크로웰 플레이트는 Greiner에서 구입하고; phospho-ERK (Thr202/Tyr204) 키트는 Cisbio에서 구입하며; 멀티라벨 카운터는 PerkinElmer에서 구입하였다.

3. 시험 방법: NCI-H358 세포 현탁액을 웰당 80 μL로 투명한 96웰 세포 배양 플레이트에 접종하고, 각 웰은 10000개의 세포를 포함하였다. 세포 배양 플레이트를 인큐베이터에 넣고, 37℃, 5% 이산화탄소의 조건에서 밤새 배양하였다. 배양 종료 후, 세포 상층액을 버리고, 각 웰에 0.02% 혈청이 함유된 PRMI1640 배지 80 μL를 첨가하며, 세포 배양 플레이트를 인큐베이터에 넣고, 37℃, 5% 이산화탄소의 조건에서 밤새 배양하였다. 시험할 화합물을 100% DMSO로 4 mmol/L로 희석하여 1차 농도로 한 다음, 피펫터로 8차 농도까지 5배 희석하였다. 2 μL의 화합물 또는 DMSO(음성 대조군)를 취하여 158 μL의 세포 배지에 첨가하고 골고루 혼합한 다음, 20 μL의 화합물 용액을 취하여 대응되는 세포 플레이트 웰에 첨가하며, 블랭크 대조군의 대응되는 세포 웰에 임의의 화합물 및 DMSO를 첨가하지 않고, 세포 플레이트를 인큐베이터에 넣어 37℃, 5% 이산화탄소의 조건에서 1시간 동안 계속 배양하였다. 배양 종료 후, 세포 상층액을 버리고, 각 웰에 50 μL의 1X 세포 용해액을 첨가하며, 실온에서 30분 동안 진탕 배양하였다. 검출 완충액을 사용하여 인산화된 ERK1/2 Eu 크립테이트 화합물 항체 및 인산화된 ERK1/2 d2 항체를 20배 희석하였다. 각 웰에서 16 μL의 세포 용해물을 취하여 새로운 384 화이트 마이크로웰 플레이트에 첨가한 다음, 2 μL의 인산화된 ERK1/2 Eu 크립테이트 화합물 항체 희석액 및 2 μL의 인산화된 ERK1/2 d2 항체 희석액을 첨가하고, 실온에서 4시간 동안 배양하였다. 배양 종료 후, 멀티라벨 카운터를 사용하여 615 nm 및 665 nm에서의 신호를 판독하였다. 하기 공식에 따라 억제 백분율: 비율 = (신호 665nm / 신호 615nm) × 10000; 억제 백분율 = (시험할 화합물 비율 - 음성 대조군 비율) / (블랭크군 비율 - 음성 대조군 비율) × 100%를 계산하였다.

구체적인 테스트 결과는 표 4에 나타낸 바와 같다.

표 4

위의 데이터로부터 볼 수 있다시피, 본 발명의 일부 실시예의 화합물은 H358 ERK 인산화에 대해 우수한 억제 활성을 갖는다.

시험예 5

세포 선택성 시험

1. 시험 목적: NCI-H23, NCI-H2122, HCC827, Mia paca2, A549 및 SW837 세포주에서 시험할 화합물의 증식 억제 작용을 검출한다.

2. 실험 재료: 시험 의약품은 본 발명의 실시예의 자체 제조 화합물이고; 양성 화합물 AMG-510 및 MRTX849는 Chengdu Zhihui Zhongxin Bio-Pharmaceutical Co., Ltd.에서 구입하며; NCI-H23, NCI-H2122, HCC827, Mia paca2, A549 및 SW837 세포주는 ATCC에서 구입하고; CellTiter-Glo는 Promega(제품번호 G7571)에서 구입하며; DMEM 배지는 ATCC(제품번호 30-2002)에서 구입하고; RPMI-1640 배지는 ATCC(제품번호 30-2001)에서 구입하며; F-12K 배지는 ATCC(제품번호 30-2004)에서 구입하고; Leibovitz's L-15 배지는 ATCC(제품번호 30-2008)에서 구입하며; 소태아혈청(FBS)은 EXCELL(제품번호 FND500)에서 구입하고; 페니실린-스트렙토마이신은 Gibco(제품번호 15140-122)에서 구입하며; 0.25% 트립신-에틸렌디아민테트라아세트산 소화 용액(Trypsin-EDTA)은 Gibco(제품번호 25200-072)에서 구입하고; 디메틸술폭시드(DMSO)는 Sigma(제품번호 D2650)에서 구입하며; 96웰 세포 플레이트는 Corning(제품번호 3610)에서 구입하고; 인큐베이터는 NuAire(모델 NU-5700E)에서 구입하며; 생물안전작업대는 AuAire(모델 NU-543-600S)에서 구입하고; 도립현미경은 Nikon(제품번호 TS-100)에서 구입하며; 자동세포계수기는 Life technologies(모델 Countess II)에서 구입하고; 마이크로플레이트 리더는 PerkinElmer(모델 Envision)에서 구입하며; 데이터 처리 소프트웨어는 GraphPad Prism 5.0이다.

3. 실험 방법:

대수성장기의 세포를 성장 배지(NCI-H23, NCI-H2122, HCC827의 성장 배지는 RPMI-1640+10% FBS이고; Mia paca2의 성장 배지는 DMEM+10% FBS+2.5% 말 혈청이며; A549의 성장 배지는 F-12K+10% FBS이고; SW837의 배지는 Leibovitz's L-15+10% FBS임)에서 재현탁하고, 목표 밀도(NCI-H23, NCI-H2122, HCC827, Mia paca2, A549 및 SW837 세포 밀도는 각각 800/웰, 1500/웰, 3000/웰, 2000/웰, 1000/웰 및 2000/웰)로 희석하였다. 상기 세포 현탁액을 웰당 100 μL로 96웰 플레이트에 접종하고; 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 밤새 배양하였다. 배지를 배경 대조군으로 하고; DMSO를 음성 대조군으로 하였다.

시험할 화합물을 DMSO에 용해시키고, 농도가 10 mmol/L인 스톡 용액으로 조제하였다. 먼저 DMSO로 스톡 용액을 2 mmol/L로 희석한 후, 5배 구배 희석하며, 총 8개의 농도로 하였다. 각 농도의 상기 용액 3 μL를 취하고, 197 μL의 성장 배지로 각각 희석하였다. 그런 다음 세포가 접종된 96웰 플레이트에 50 μL/웰로 첨가하였다. 시험할 화합물이 첨가된 세포를 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 72시간 동안 배양하였다. 실온에서 96웰 플레이트를 평형화하고, 각 웰에 40 μL의 CellTiter-Glo 시약을 첨가하며, 볼텍서에서 2분 동안 혼합하고, 실온에서 60분 동안 배양하며, EnVision 마이크로플레이트 리더로 발광값을 판독하고, GraphPad Prism 5.0 소프트웨어로 화합물의 IC₅₀을 계산하였다.

구체적인 테스트 결과는 표 5에 나타낸 바와 같다.

표 5

위의 데이터로부터 볼 수 있다시피, 본 발명의 일부 실시예의 화합물은 KRAS G12C 돌연변이 세포주에 대해 우수한 선택성을 갖는다.

시험예 6

마우스 약동학적 연구

1. 시험 목적: 본 연구는 LC-MS/MS 방법을 통해 단일 정맥 주사(IV) 및 경구 투여(PO) 후 본 발명의 일부 실시예 화합물의 ICR 수컷 마우스 체내의 약동학적 특성을 측정한다.

2. 시험 재료: 시험 의약품은 본 발명의 실시예의 자체 제조 화합물이고; 양성 화합물 AMG-510은 Chengdu Zhihui Zhongxin Bio-Pharmaceutical Co., Ltd.에서 구입하며; ICR 수컷 마우스는 Sino-British SIPPR Lab Animal Ltd, Shanghai에서 유래되었다.

3. 시험 방법:

정맥 주사 처방의 조제: 필요한 양의 시험할 화합물을 칭량하고, 0.5 mL의 디메틸술폭시드에 용해시켜, 4 mg/mL의 용액을 조제하였다. 0.06 mL의 상기 용액을 취하고, 0.12 mL의 폴리옥실 15 히드록시스테아레이트(solutol) 및 1.02 mL의 생리식염수를 첨가하여, 0.2 mg/mL의 용액을 얻었다.

투여: ICR 수컷 마우스는 밤새 금식한 후 경구 투여(PO)하고, 단일 정맥 주사(IV)군은 금식이 필요하지 않았다. 투여 용량 및 투여 부피는 하기 표와 같다. 투여 4시간 후에 먹이를 주었다.

샘플 수집: 경정맥 또는 다른 적합한 정맥을 통해 혈액을 수집하고, 각 시점에 0.03 mL를 수집하였다. 샘플을 에틸렌디아민테트라아세트산 이칼륨염이 함유된 시험관에 넣고, 원심분리 전에 얼음 위에서 보관하였다. 혈액 수집 후 1시간 이내에 혈액 샘플을 2-8℃ 및 6800 g의 조건에서 6분 동안 원심분리하고 -80℃에서 보관하였다. 정맥 투여 및 경구 투여 채혈 시점은 투여 후 0.083, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8 및 24시간이다.

구체적인 테스트 결과는 표 6에 나타낸 바와 같다.

표 6

표 6의 데이터로부터 볼 수 있다시피, 본 발명의 일부 실시예의 화합물은 우수한 마우스 약동학적 특성을 가지고 심지어 양성 화합물보다 우수하다.

시험예 7

개 약동학적 연구

1. 시험 목적: 본 연구는 LC-MS/MS 방법을 통해 단일 정맥 주사(IV) 및 경구 투여(PO) 후 본 발명의 일부 실시예 화합물의 비글견 체내의 약동학적 특성을 측정한다.

2. 시험 재료: 시험 의약품은 본 발명의 실시예의 자체 제조 화합물이고; 비글견은 Medicilon Colony: 999M-004에서 유래되었다.

3. 시험 방법:

경구 처방의 조제: 필요한 양의 시험할 화합물을 칭량하고, 0.5% 메틸셀룰로오스 용액에 용해시켜, 1 mg/mL의 현탁액 또는 용액을 얻었다.

정맥 주사 처방의 조제: 적정량의 시험할 화합물을 칭량하고, 디메틸술폭시드에 용해시켜, 10 mg/mL의 용액을 조제하였다. 3 mL의 상기 용액을 취하고, 6 mL의 폴리옥실 15 히드록시스테아레이트(solutol) 및 51mL의 생리식염수를 첨가하여, 0.5 mg/mL의 용액을 얻었다.

투여: 비글견은 밤새 금식한 후 경구 투여(PO)하고, 단일 정맥 주사(IV)군은 금식이 필요하지 않았다. 투여 용량 및 투여 부피는 하기 표와 같다. 투여 4시간 후에 먹이를 주었다.

샘플 수집: 경정맥 또는 다른 적합한 정맥을 통해 혈액을 수집하고, 각 시점에 1 mL를 수집하였다. 샘플을 에틸렌디아민테트라아세트산 이칼륨염이 함유된 시험관에 넣고, 원심분리 전에 얼음 위에서 보관하였다. 혈액 수집 후 1시간 이내에 혈액 샘플을 2-8℃ 및 2200 g의 조건에서 10분 동안 원심분리하고 -80℃에서 보관하였다. 정맥 투여 채혈 시점은 투여 후 0.083, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8 및 24시간이고; 경구 투여 채혈 시점은 투여 후 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8 및 24시간이다. 구체적인 테스트 결과는 표 7에 나타낸 바와 같다.

표 7

표 7의 데이터로부터 볼 수 있다시피, 본 발명의 일부 실시예의 화합물은 우수한 개 약동학적 특성을 갖는다.

시험예 8

뇌 조직 분포 시험

1. 시험 목적: 본 연구는 LC-MS/MS 방법을 통해 경구 투여(PO) 후 본 발명의 일부 실시예 화합물의 혈뇌장벽 통과 능력을 측정한다.

2. 시험 재료: 시험 의약품은 본 발명의 실시예의 자체 제조 화합물이고; 양성 화합물 AMG-510 및 MRTX849는 Chengdu Zhihui Zhongxin Bio-Pharmaceutical Co., Ltd.에서 구입하며; SD 래트는 Sino-British SIPPR Lab Animal Ltd, Shanghai에서 유래되었다.

3. 시험 방법:

5 g의 메틸셀룰로오스를 칭량하고, 1000 mL의 정제수에 용해시켜, 0.5% 메틸셀룰로오스를 얻었다. 필요한 양의 시험할 화합물을 칭량하고, 0.5% 메틸셀룰로오스 용액에 용해시켜, 2 mg/mL의 현탁액을 얻었다.

투여: SD 래트는 밤새 금식한 후 경구 투여(PO)하였다. 투여 용량 및 투여 부피는 하기 표와 같다. 투여 4시간 후에 먹이를 주었다.

샘플 수집: 경정맥을 통해 혈액을 수집하고, 각 시점에 0.5 mL를 수집하였다. 샘플을 에틸렌디아민테트라아세트산 이칼륨염이 함유된 시험관에 넣고, 원심분리 전에 얼음 위에서 보관하였다. 혈액 수집 후 1시간 이내에 혈액 샘플을 2-8℃ 및 6800 g의 조건에서 6분 동안 원심분리하고 -80℃에서 보관하였다. 이산화탄소 흡입 방식을 통해 래트를 안락사시킨 후, 래트의 뇌를 수집하고, 드라이아이스 위에서 급송 동결시키며, 생체 분석 전에 -80℃에서 보관하였다. 경구 투여 채혈 시점은 투여 후 0.5 및 2시간이다. 구체적인 테스트 결과는 표 8에 나타낸 바와 같다.

표 8

표 8의 데이터로부터 볼 수 있다시피, 본 발명의 일부 실시예의 화합물은 우수한 뇌 내 노출량을 갖는다.

시험예 9

CYP 억제 실험

1. 시험 목적: 인간 간 마이크로솜을 통해 CYP1A2, 2B6, 2C8, 2C9, 2C19, 2D6 및 3A4에 대한 본 발명의 일부 실시예의 화합물의 억제 능력을 평가한다.

2. 시험 재료: 시험 의약품은 본 발명의 실시예의 자체 제조 화합물이고; 양성 화합물 AMG-510 및 MRTX849는 Chengdu Zhihui Zhongxin Bio-Pharmaceutical Co., Ltd.에서 구입하며; 인간 간 마이크로솜은 Xenotech에서 구입하였다.

3. 시험 방법:

용액의 조제:

1. K/Mg 완충액: 성분은 0.1 mol/L 인산칼륨 및 5 mmol/L 염화마그네슘이고, pH 값은 7.4±0.1이며, 예열하였다.

2. 시험할 화합물 용액: 시험할 화합물을 디메틸술폭시드에 용해시켜, 10 mmol/L 스톡 용액을 제조하였다. 8 μL 10 mmol/L 스톡 용액을 12 μL 아세토니트릴이 함유된 96웰 플레이트에 옮겨, 최고 농도점으로 하고, 8개의 농도로 3배 희석하였다.

3. NADPH 용액: 66.7 mg NADPH를 10 mL 0.1 mol/L K/mg 완충액에 용해시켜, 8 mmol/L NADPH 용액을 얻고, pH 7.4이다.

4. 인간 간 마이크로솜 스톡 용액: 인간 간 마이크로솜을 0.1 mol/L K/mg 완충액에 용해시켜, 20 mg/mL 인간 간 마이크로솜 스톡 용액을 얻었다.

5. 인간 간 마이크로솜 작업 용액: 10 μL 20 mg/mL 인간 간 마이크로솜 스톡 용액을 990 μL 0.1 mol/L K/mg 완충액에 첨가하여, 0.2 mg/mL 인간 간 마이크로솜 용액을 제조하였다.

6. 기질 용액:

CYP 1A2 기질 용액(120 μM): 8 μL 30 mmol/L 페나세틴 스톡 용액을 취하고, 1992 μL K/Mg 완충액으로 희석하며;

CYP 2B6 기질 용액(280 μM): 40 μL 14 mmol/L 부프로피온 스톡 용액을 취하고, 1960 μL K/Mg 완충액으로 희석하며;

CYP 2C8 기질 용액(40 μM, 1.6 mg/ml 인간 간 마이크로솜 함유); 8 μL 10 mmol/L 파클리탁셀 스톡 용액을 취하고, 160 μL 인간 간 마이크로솜 스톡 용액 및 1832 μL K/mg 완충액을 첨가하며;

CYP 2C9 기질 용액(40 μM): 8 μL 10 mmol/L 디클로페낙 스톡 용액을 취하고, 1992 μL K/Mg 완충액으로 희석하며;

CYP 2C19 기질 용액(140 μM, 1.6 mg/ml HLM 함유); 40 μL 7 mmol/L 메페니토인 스톡 용액을 취하고, 160 μL 인간 간 마이크로솜 스톡 용액 및 1800 μL K/mg 완충액을 첨가하며;

CYP 2D6 기질 용액(20 μM); 8 μL 5 mmol/L 덱스트로메토르판 스톡 용액을 취하고, 1992 μL K/Mg 완충액으로 희석하며;

CYP 3A4M 기질 용액(20 μM); 8 μL 5 mmol/L 미다졸람 스톡 용액을 취하고, 1992 μL K/Mg 완충액으로 희석하며;

CYP 3A4T 기질 용액(320 μM); 40 μL 16 mmol/L 테스토스테론 스톡 용액을 취하고, 1960 μL K/Mg 완충액으로 희석하였다.

배양 및 검출:

96웰 플레이트에 600 μL 0.2 mg/mL 인간 간 마이크로솜 용액 및 3 μL 연속 희석된 시험할 화합물 용액을 첨가하였다. 30 μL의 상기 용액을 취하여 96웰 플레이트에 넣고, 15 μL의 대응되는 기질 용액을 첨가하였다. 96웰 플레이트 및 NADPH 용액을 37℃에서 5분 동안 사전 배양하고, 96웰 플레이트에 15 μL의 NADPH 용액을 첨가하여, 반응을 시작하였다. 분석 플레이트를 37℃에서 배양하고, 3A4는 5분 동안 배양하며, 1A2, 2B6 및 2C9는 10분 동안 배양하고, 2C8 및 2D6은 20분 동안 배양하며, 2C19는 45분 동안 배양하였다. 내부 표준 물질이 함유된 아세토니트릴 180 μL를 첨가하여 반응을 종료하였다. 퀀칭 후, 분석 플레이트를 10분(600 rpm/min) 동안 진탕한 다음, 6000 rpm에서 15분 동안 원심분리하였다. 각 웰에서 80 μL의 상층액을 취하고, 120 μL의 초순수가 함유된 96웰 샘플 플레이트에 옮겨, LC-MS/MS 분석에 사용하였다.

구체적인 테스트 결과는 표 10에 나타낸 바와 같다.

표 10

표 10의 데이터로부터 볼 수 있다시피, 본 발명의 일부 실시예의 화합물은 각 아형 CYP 효소에 대해 억제 활성이 없고, 약물-약물 상호작용의 위험이 없다.

시험예 10

혈장 단백질 결합 실험

1. 시험 목적: 평형 투석 방법을 통해 인간, 개, 원숭이, 래트 및 마우스 혈장에서 시험할 화합물의 단백질 결합률을 평가하였다.

2. 실험 재료: 시험 의약품은 본 발명의 실시예의 자체 제조 화합물이고; 양성 화합물 AMG-510 및 MRTX849는 Chengdu Zhihui Zhongxin Bio-Pharmaceutical Co., Ltd.에서 구입하였다.

3. 실험 방법: 0.1 mol/L의 인산나트륨 및 0.15 mol/L의 염화나트륨 완충액을 예열하고, pH는 7.4±0.1이며;

시험 물질이 함유된 혈장의 제조: 시험할 화합물을 DMSO에 용해시켜, 10 mmol/l의 스톡 용액을 제조하고; 5 μL의 스톡 용액을 취하고, 95 μL의 아세토니트릴로 희석하여, 용액 A(0.5 mmol/L)를 얻으며; 8 μL의 용액 A를 취하고, 192 μL 0.1mol/L 인산나트륨 완충액으로 희석하여, 용액 B(0.02 mmol/l)를 얻었다. 96웰 플레이트에 570 μL의 혈장을 첨가한 다음, 30 μL의 용액 B를 첨가하였다. 최종 농도는 1 μmol/l이고, 0.01% DMSO를 함유한다.

T0 혈장 샘플(in triplicate) 의 제조: 시험 물질이 함유된 혈장 25 μL를 취하여 96웰 플레이트에 첨가하고, 완충액 25 μL 및 내부 표준 물질(MRTX849 및 화합물 28의 내부 표준 물질은 톨부타미드이고; AMG510의 내부 표준 물질은 베라파밀임)이 함유된 아세토니트릴 용액 200 μL를 첨가하였다. 600 rpm의 회전 속도로 10분 동안 진탕하고, 덮개를 덮어 냉동실(-20℃)에 저장하였다.

T5 샘플 제조(in triplicate): 투석 장치의 수신측에 완충액 100 μL를 첨가하고, 공급측에 시험할 화합물이 함유된 혈장 100 μL를 첨가하며, 37℃, 120 rpm에서 5시간 진탕하였다. 배양 종료 후, 혈장 일측에서 시험 물질이 함유된 혈장 25 μL를 취하여 96웰 플레이트에 첨가하고, 완충액 25 μL 및 내부 표준 물질이 함유된 아세토니트릴 용액 200 μL를 첨가하며; 완충액 일측에서 완충액 25 μL를 취하여 96웰 플레이트에 첨가하고, 블랭크 혈장 25 μL 및 내부 표준 물질이 함유된 아세토니트릴 용액 200 μL를 첨가하였다. 모든 샘플을 600 rpm의 조건에서 10분 동안 회전시킨 다음, 6000 rpm의 조건에서 원심분리하였다. 각 웰에서 100 μL의 상층액을 취하고, 100 μL의 초순수가 함유된 96웰 샘플 플레이트에 첨가하여, LC-MS/MS 분석을 수행하였다. 구체적인 테스트 결과는 표 11에 나타낸 바와 같다.

표 11

시험예 11

hERG 실험

1. 시험 목적: 수동 패치 클램프를 통해 hERG 칼륨 채널로 안정적으로 형질감염된 HEK293 세포에서 hERG 전류에 대한 시험할 화합물의 억제 작용을 테스트한다.

2. 실험 재료: 양성 화합물 AMG-510 및 MRTX849는 Chengdu Zhihui Zhongxin Bio-Pharmaceutical Co., Ltd.에서 구입하고; HEK293 세포는 군사의학과학원에서 유래되었다. 수동 패치 클램프 시스템 증폭기는 Molecular Devices(모델 MultiClamp700B)에서 구입하고; 수동 패치 클램프 시스템 디지털-아날로그 변환기는 Molecular Devices(모델 Axon Digidata1550B)에서 구입하며; 급속 관류 시스템은 ALA Scientific Ins.(모델 ALA-VM8)에서 구입하고; 미세조작기는 Sutter Instrument Co.(모델 MP-225)에서 구입하며; 도립현미경은 Nikon(모델 Ti2-U)에서 구입하고; 미세전극 풀러는 NARISHIGE(모델 PC-10)에서 구입하였다.

3. 실험 방법:

전기생리학적 용액의 조제:

세포외액: N-2-히드록시에틸피페라진-N'-2-에탄술폰산 10 mmol/L, 염화나트륨 145 mmol/L, 염화칼륨 4 mmol/L, 염화칼슘 2 mmol/L, 염화마그네슘 1 mmol/L, 포도당 10 mmol/L, 수산화나트륨으로 pH를 7.3~7.4로 조절하고; 삼투압을 290-310 mOsm으로 조절하며; 여과 후 4℃에서 보관하였다.

전극내액(mM): 염화칼륨 120 mmol/L, 수산화칼륨 31.25 mmol/L, 염화칼슘 5.374 mmol/L, 염화마그네슘 1.75 mmol/L, 에틸렌 글리콜 비스(β-아미노에틸 에테르)-N,N,N',N'-테트라아세트산 10 mmol/L, N-2-히드록시에틸피페라진-N'-2-에탄술폰산 10 mmol/L, 아데노신삼인산이나트륨염 4 mmol/L, 수산화칼륨으로 pH를 7.2~7.3으로 조절하고; 삼투압을 290-310 mOsm으로 조절하며; 여과 후 소분하여 -20℃에서 보관하였다.

세포 준비:

HEK-293-hERG 세포를 적합한 상태로 계대 배양한 후, 세포를 인산완충식염수로 세척하고, Tryple 용액으로 소화 및 분리하며, 배지로 세포를 재현탁하고 원심분리관에 보관하며, 원심분리 후 상층액을 버리고, 세포외액으로 세포를 재현탁하여 비축하며, 2-8℃에서 보관하였다. 패치 클램프 기록 전에, 세포를 배양 접시에 적가하여 세포가 특정 밀도를 가지고 세포가 단일 분리 상태를 나타내도록 확보하였다.

전기생리학적 실험:

전체 세포 패치 클램프 기술을 사용하여 hERG 전류를 기록하였다. 세포 현탁액을 취하여 작은 배양 접시에 첨가하고, 도립현미경 스테이지에 놓았다. 세포가 벽에 부착된 후, 세포외액으로 관류하고, 권장 유속은 1-2 mL/min이다. 유리 미세전극은 미세전극 풀러에 의해 두 단계 당겨지고, 전극 내액을 채운 후 내수성 값은 2-5 MΩ이다.

전체 세포 기록 모드를 설정한 후, 홀딩 전위(holding potential)를 -80 mV로 유지하였다. 탈분극 전압을 +60 mV로 850 ms 동안 유지한 다음, -50 mV로 재분극하여 1275 ms 동안 유지하여 hERG 테일 전류를 유도하였다. 이러한 세트의 펄스 프로그램은 전체 실험을 거쳐 15초마다 반복되었다. 전류가 안정화된 후 저농도에서 고농도(0.3, 1, 3, 10 및 30 μmol/L)로 세포외 연속 관류 투여 방식을 사용하였다. 저농도에서 시작하여 약효가 안정될 때까지 관류를 계속한 후 다음 농도의 관류를 수행하였다.

데이터 수집 및 분석:

PatchMaster 소프트웨어를 통해 자극 해제 및 신호 수집을 수행하고; 패치 클램프 증폭기로 신호를 증폭하였다. FitMaster, EXCEL, Graphpad Prism 또는 SPSS 21.0 등을 사용하여 추가 데이터 분석 및 곡선 피팅을 수행하였다. 데이터는 평균값, 표준차로 나타낸다. IC₅₀ 값은 Hill 방정식으로 피팅하여 얻고(적용되는 경우), 시험물의 모든 농도의 최대 억제율이 50% 미만이면, IC₅₀ 값을 계산하지 않았다.

테스트 결과: AMG510, MRTX849 및 화합물 28의 IC₅₀은 각각 ＞30μM, 0.99μM 및 ＞30μM이다.

시험예 12

H358 체내 약효 실험

1. 시험 목적: NCI-H358 종양 피하 이식 암컷 BALB/c 누드 마우스 모델에서 시험물의 체내 약효를 평가한다.

2. 실험 재료: 시험 의약품은 본 발명의 실시예의 자체 제조 화합물이고; 양성 화합물 AMG-510 및 MRTX849는 Chengdu Zhihui Zhongxin Bio-Pharmaceutical Co., Ltd.에서 구입하며; BALB/c nude 마우스는 Shanghai Lingchang Biotechnology Co., Ltd.에서 구입하였다.

3. 실험 방법:

BALB/c 누드 마우스, 암컷, 6-8주령, 체중 18-22그램. NCI-H358 종양 세포를 인산완충액에 재현탁하여 0.1 mL(5 × l0⁶ 개)의 세포 현탁액을 제조하고, 각 마우스의 우측 목덜미(5 × 10⁶/마리)(+50% Matrigel)에 피하 접종하였다. 종양 평균 부피가 약 150-200 mm³에 달할 때 무작위로 그룹을 나누어 위관 투여하기 시작하고, 투여 빈도는 1일 1회이다. 버니어 캘리퍼스로 종양 직경을 매주 2회 측정하였다. 종양 부피의 계산 공식은 V = 0.5 a × b²이고, a 및 b는 각각 종양의 긴 직경 및 짧은 직경을 나타낸다.

실험 결과는 도 1에 도시된 바와 같고, 결과에 따르면 본 발명의 화합물 28은 NCI-H358 종양 피하 이식 동물 모델에서 양성 대조 약물 MRTX849와 상당한 치료 효과를 나타내고 양성 대조 약물 AMG510보다 우수하다.

시험예 13

NCI-H1373-luc 폐암 뇌전이 모델의 약효 실험

1. 시험 목적: BALB/c 누드 마우스 NCI-H1373-luc 두개내 접종 모델에서 시험물의 체내 약효를 평가한다.

2. 실험 재료: 시험 의약품은 본 발명의 실시예의 자체 제조 화합물이고; 양성 화합물 MRTX849는 Chengdu Zhihui Zhongxin Bio-Pharmaceutical Co., Ltd.에서 구입하며; BALB/c 누드 마우스(암컷, 6-8주령, 체중 18-22그램)는 Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.에서 구입하였다.

3. 실험 방법:

NCI-H1373-luc 세포는 시험관내에서 배양하고, 배양 조건은 10％ 소태아혈청이 첨가된 배지, 37℃, 5% CO₂이다. 일주일에 일상적인 계대를 2번 진행하였다. 세포가 지수 성장 단계에서 유지되는 경우, 세포를 수집하고 계수 및 접종하였다. BALB/c 누드 마우스를 마취시키고, 입체 정위 기구에 고정시키며, 뇌의 피부를 소독하였다. 두정골 및 후두골에서 약 2 mm의 시상절개를 하여 두개고를 노출시키고, 25G 바늘을 사용하여 브레그마 우측 2 mm 및 관상 봉합사 전방 1 mm에서 두개골에 천공하였다. 주사기로 세포 현탁액을 흡인하고, 이전의 천공 3 mm 깊이로 바늘을 수직으로 삽입하며, 세포 현탁액(3 μL, 3 × 105개 NCI-H1373-luc 세포 및 20% Matrigel 함유, 주사 3분)을 천천히 주사하였다. 주사 종료 후, 주사기를 1분 동안 정체한 다음 천천히 빼내어 세포액의 역류를 줄이고, 접착제로 천공을 밀봉하며, 두피를 리셋하고, 절개 부위를 봉합하며, 수술 후 동물이 완전히 깨어날 때까지 계속 관찰해야 한다. 종양 형광값이 약 3E+08에 도달하면, 무작위로 그룹을 나누어 위관 투여하기 시작하고, 투여 빈도는 1일 1회이다. 버니어 캘리퍼스로 종양 직경을 매주 2회 측정하였다. IVIS로 매주 1회 이미징하였다.

실험 결과는 도 2에 도시된 바와 같고, 결과에 따르면 BALB/c 누드 마우스 NCI-H1373-luc 두개내 접종 동물 모델에서 본 발명의 화합물 28의 치료 효과는 양성 대조 약물 MRTX849보다 우수하다.

출원인은 본 발명이 상기 실시예를 통해 상기 스피로 고리 화합물, 이를 포함하는 약학적 조성물 및 이의 응용을 설명하지만 본 발명이 상기 실시예에 한정되지 않고, 즉 본 발명이 상기 실시예에 의존하여 실시됨을 의미하지 않는다고 성명한다. 당업자는 본 발명의 임의의 개진, 본 발명의 제품의 각 원료의 등가 대체 및 보조 성분의 첨가, 구체적인 실시형태의 선택 등이 모두 본 발명의 보호범위 및 공개범위 내에 포함됨을 이해해야 한다.

Claims

식 I로 표시되는 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체, 시스트랜스이성질체, 용매화물, 다형체, 중수소화물 또는 이들의 조합으로서,

상기 식에서,
A는 4-12원 포화 또는 부분 포화된 단일 고리, 접합 고리, 브리지 고리 또는 스피로 고리이되, 상기 포화 또는 부분 포화된 단일 고리, 접합 고리, 브리지 고리 또는 스피로 고리는 선택적으로 하나 이상의 R³에 의해 치환되고;
각각의 R³은 각각 독립적으로 옥소, C1-C3 알킬, C2-C4 알케닐, C2-C4 알키닐, 시아노, -C(O)OR⁴, -CON(R⁴)₂ 또는 -N(R⁴)₂이되, 상기 C1-C3 알킬은 선택적으로 시아노, 할로겐, -OR⁴ 또는 -N(R⁴)₂에 의해 치환되며;
각각의 R⁴는 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이고;
U는 N 또는 CH이며;
L¹은 부재 또는 NR^N이고, U가 N인 경우 L¹은 부재이고, U가 CH인 경우 L¹은 NR^N이며;
R^N은 수소 또는 C1-C3 알킬이고;
R¹은
,,,, 또는 이되;
R^a는 수소, 할로겐, 선택적으로 치환된 C1-C3 알킬, -N(R⁵)₂, 선택적으로 치환된 4-6원 포화 헤테로 고리기, C1-C3 알콕시, C1-C3 알킬티오 또는 아세틸이되, R^a에 따른 선택적으로 치환된 치환기는 메틸, 에틸, -N(R⁵)₂, 할로겐, C1-C3 알콕시, 4-6원 포화 헤테로 고리기로 이루어진 군으로부터 선택되며;
각각의 R⁵는 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이고;
R^a', R^b는 각각 독립적으로 수소, 할로겐 또는 C1-C3 알킬이며;
L²는 부재, -O-, -S-, -NR⁶-, -SO-, -SO₂- 또는 -CO-이되, R⁶은 수소 또는 C1-C4 알킬이고;
R²는 수소, 선택적으로 치환된 C1-C4 알킬, 선택적으로 치환된 포화 또는 불포화 3-8원 탄소 고리기, 선택적으로 치환된 포화 또는 불포화 4-12원 헤테로 고리기, 선택적으로 치환된 포화 또는 불포화 3-8원 탄소 고리 접합 6-10원 방향족 고리기, 선택적으로 치환된 포화 또는 불포화 3-8원 탄소 고리 접합 5-10원 헤테로 방향족 고리기, 선택적으로 치환된 포화 또는 불포화 3-8원 헤테로 고리 접합 6-10원 방향족 고리기, 선택적으로 치환된 포화 또는 불포화 3-8원 헤테로 고리 접합 5-10원 헤테로 방향족 고리기, 선택적으로 치환된 6-10원 방향족 고리기 또는 선택적으로 치환된 5-10원 헤테로 방향족 고리기이되; R²에 따른 선택적으로 치환된 치환기는 중수소, 할로겐, 히드록실, 시아노, 옥소, C1-C3 알콕시, -NR^cR^d, -CO₂R⁷, -CONR^eR^f, C1-C4 알킬술폭시드기, C1-C4 알킬술포닐, -SO₂NR^gR^h, 선택적으로 치환된 3-8원 포화 또는 불포화 탄소 고리기, 및 선택적으로 치환된 4-8원 포화 또는 불포화 헤테로 고리기로부터 선택되며;
R^c 및 R^d는 각각 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 3-8원 탄소 고리기 및 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리기로부터 선택되거나, 또는 R^c와 R^d는 이들에 연결된 N과 함께 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리를 형성하고;
R^e 및 R^f는 각각 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 3-8원 탄소 고리기 및 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리기로부터 선택되거나, 또는 R^e와 R^f는 이들에 연결된 N과 함께 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리를 형성하며;
R^g 및 R^h는 각각 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 3-8원 탄소 고리기 및 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리기로부터 선택되거나, 또는 R^g와 R^h는 이들에 연결된 N과 함께 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리를 형성하고;
R⁷은 수소 또는 선택적으로 치환된 C1-C4 알킬이며;
W는 -(CR⁸R⁹)-, -NR¹⁰-, O 또는 S이되, R⁸, R⁹ 및 R¹⁰은 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이고;
X는 -(CR¹¹R¹²)_m- 또는 -(C=O)-이되, 각각의 R¹¹은 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이며, 각각의 R¹²는 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이고;
m = 1, 2 또는 3이며;
B는 6-10원 방향족 고리 또는 5-8원 헤테로 방향족 고리이되, 상기 6-10원 방향족 고리 또는 5-8원 헤테로 방향족 고리는 선택적으로 하나 이상의 R¹³에 의해 치환되고;
각각의 R¹³은 각각 독립적으로 할로겐, 히드록실, 아미노, C1-C3 알킬아미노, (C1-C3 알킬)₂아미노, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, C3-C6 탄소 고리기, C1-C3 알콕시 또는 할로겐화 C1-C3 알콕시이며;
Y는 -NR¹⁴-이되, R¹⁴는 수소, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬 또는 C3-C6 탄소 고리기이고;
Z는 -(CR¹⁵R¹⁶)-이되, R¹⁵ 및 R¹⁶은 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬인 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체, 시스트랜스이성질체, 용매화물, 다형체, 중수소화물 또는 이들의 조합.
제1항에 있어서,
R²는 수소, 선택적으로 치환된 C1-C4 알킬, 선택적으로 치환된 포화 또는 불포화 3-8원 탄소 고리기, 선택적으로 치환된 포화 또는 불포화 4-12원 헤테로 고리기, 선택적으로 치환된 포화 또는 불포화 3-8원 헤테로 고리 접합 6-10원 방향족 고리기, 선택적으로 치환된 포화 또는 불포화 3-8원 헤테로 고리 접합 5-10원 헤테로 방향족 고리기, 선택적으로 치환된 6-10원 방향족 고리기 또는 선택적으로 치환된 5-10원 헤테로 방향족 고리기이되, R²에 따른 선택적으로 치환된 치환기는 중수소, 할로겐, 히드록실, 시아노, 옥소, C1-C3 알콕시, -NR^cR^d, -CO₂R⁷, -CONR^eR^f, C1-C4 알킬술폭시드기, C1-C4 알킬술포닐, -SO₂NR^gR^h, 선택적으로 치환된 3-8원 포화 또는 불포화 탄소 고리기 및 선택적으로 치환된 4-8원 포화 또는 불포화 헤테로 고리기로부터 선택되고;
R^c 및 R^d는 각각 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 3-8원 탄소 고리기 및 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리기로부터 선택되거나, 또는 R^c와 R^d는 이들에 연결된 N과 함께 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리를 형성하며;
R^e 및 R^f는 각각 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 3-8원 탄소 고리기 및 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리기로부터 선택되거나, 또는 R^e와 R^f는 이들에 연결된 N과 함께 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리를 형성하고;
R^g 및 R^h는 각각 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 3-8원 탄소 고리기 및 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리기로부터 선택되거나, 또는 R^g와 R^h는 이들에 연결된 N과 함께 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리를 형성하며;
R⁷은 수소 또는 선택적으로 치환된 C1-C4 알킬이고;
바람직하게는, 상기 L²는 부재, -O-, -S-, 또는 -NR⁶-이되, R⁶은 수소 또는 C1-C4 알킬이며;
바람직하게는, 상기 R^a는 수소, 불소, 선택적으로 치환된 C1-C3 알킬, 선택적으로 치환된 4-6원 포화 헤테로 고리기 또는 아세틸이되;
R^a에 따른 선택적으로 치환된 치환기는 메틸, 에틸, -N(R⁵)₂, 할로겐, C1-C3 알콕시, 4-6원 포화 헤테로 고리기로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 R⁵는 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이며;
바람직하게는, 상기 R^a', R^b는 각각 독립적으로 수소, 불소 또는 C1-C3 알킬이고;
바람직하게는, 상기 W는 -(CR⁸R⁹)- 또는 -NR¹⁰-이되, R⁸, R⁹ 및 R¹⁰은 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이며;
바람직하게는, 상기 X는 -(CR¹¹R¹²)_m-이되; 각각의 R¹¹은 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이고, 각각의 R¹²는 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이며; m은 1, 2 또는 3이고; 보다 바람직하게는, m은 1 또는 2인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체, 시스트랜스이성질체, 용매화물, 다형체, 중수소화물 또는 이들의 조합.
제1항 또는 제2항에 있어서,
로 나타내는 일부는,
,,,,,,,,,,,,,로 이루어진 군으로부터 선택되고;
n은 치환기 R³의 개수를 나타내며, n은 0, 1, 2 또는 3이고;
각각의 R³은 각각 독립적으로 옥소, C1-C3 알킬, C2-C4 알케닐, C2-C4 알키닐, 시아노, -C(O)OR⁴, -CON(R⁴)₂ 또는 -N(R⁴)₂이되, 상기 C1-C3 알킬은 선택적으로 시아노, 할로겐, -OR⁴ 또는 -N(R⁴)₂에 의해 치환될 수 있으며;
각각의 R⁴는 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이고;

바람직하게는,로 나타내는 일부는,
,,,,,로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체, 시스트랜스이성질체, 용매화물, 다형체, 중수소화물 또는 이들의 조합.
제1항에 있어서,
R¹은,
,,,,,,,,,,, , , , , , , , 또는 이고;
바람직하게는, R¹은 , , , , ,,,,, , 또는 인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체, 시스트랜스이성질체, 용매화물, 다형체, 중수소화물 또는 이들의 조합.
제1항에 있어서,
R²는 수소, 선택적으로 치환된 C1-C4 알킬, 선택적으로 치환된 6-10원 방향족 고리기 또는 선택적으로 치환된 5-10원 헤테로 방향족 고리기이되;
R²에 따른 선택적으로 치환된 치환기는 할로겐, 히드록실, 시아노, 옥소, C1-C3 알콕시, -NR^cR^d, -CO₂R⁷, -CONR^eR^f, C1-C4 알킬술폭시드기, C1-C4 알킬술포닐, -SO₂NR^gR^h, 선택적으로 치환된 3-8원 포화 또는 불포화 탄소 고리기, 및 선택적으로 치환된 4-8원 포화 또는 불포화 헤테로 고리기로부터 선택되고;
R^c 및 R^d는 각각 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 3-8원 탄소 고리기 및 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리기로부터 선택되거나, 또는 R^c와 R^d는 이들에 연결된 N과 함께 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리를 형성하며;
R^e 및 R^f는 각각 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 3-8원 탄소 고리기 및 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리기로부터 선택되거나, 또는 R^e와 R^f는 이들에 연결된 N과 함께 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리를 형성하고;
R^g 및 R^h는 각각 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 3-8원 탄소 고리기 및 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리기로부터 선택되거나, 또는 R^g와 R^h는 이들에 연결된 N과 함께 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리를 형성하며;
R⁷은 수소 또는 선택적으로 치환된 C1-C4 알킬이고;
바람직하게는, R²는 , , , , , , , , , , , , 또는 , , 이되; n은 치환기 R^2'의 수를 나타내며, 0, 1, 2 및 3으로부터 선택되고; 각각의 R^2'는 각각 독립적으로 할로겐, C1-C3 알킬, 할로겐화 C1-C3 알킬, 히드록실, 시아노, 옥소, C1-C3 알콕시, -NR^cR^d, -CO₂R⁷, -CONR^eR^f, C1-C4 알킬술폭시드기, C1-C4 알킬술포닐, -SO₂NR^gR^h, 선택적으로 치환된 3-8원 포화 또는 불포화 탄소 고리기 또는 선택적으로 치환된 4-8원 포화 또는 불포화 헤테로 고리기이며;
R^c 및 R^d는 각각 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 3-8원 탄소 고리기 및 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리기로부터 선택되거나, 또는 R^c와 R^d는 이들에 연결된 N과 함께 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리를 형성하고;
R^e 및 R^f는 각각 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 3-8원 탄소 고리기 및 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리기로부터 선택되거나, 또는 R^e와 R^f는 이들에 연결된 N과 함께 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리를 형성하며;
R^g 및 R^h는 각각 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 3-8원 탄소 고리기 및 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리기로부터 선택되거나, 또는 R^g와 R^h는 이들에 연결된 N과 함께 선택적으로 치환된 4-8원 헤테로 고리를 형성하고;
R⁷은 수소 또는 선택적으로 치환된 C1-C4 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체, 시스트랜스이성질체, 용매화물, 다형체, 중수소화물 또는 이들의 조합.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
로 나타내는 스피로 고리는,
,,,, , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , 로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R¹⁰은 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이며;
o는 치환기 R¹³의 수를 나타내고, 0, 1, 2 또는 3이며;
R¹³은 각각 독립적으로 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, C3-C6 탄소 고리기, C1-C3 알콕시 또는 할로겐화 C1-C3 알콕시인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체, 시스트랜스이성질체, 용매화물, 다형체, 중수소화물 또는 이들의 조합.
제1항에 있어서,
상기 화합물은 하기 구조로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체, 시스트랜스이성질체, 용매화물, 다형체, 중수소화물 또는 이들의 조합:
약학적 조성물로서,
상기 약학적 조성물은,
(1) 활성 성분으로서 치료적 유효량의 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체, 시스트랜스이성질체, 용매화물, 다형체 및 중수소화물로부터 선택되는 하나 이상; 및
(2) 선택적으로, 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
KRAS G12C 돌연변이 매개 암의 예방 또는 치료용 약물의 제조를 위한 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체, 시스트랜스이성질체, 용매화물, 다형체 또는 중수소화물 또는 제8항에 따른 약학적 조성물의 용도.
제9항에 있어서,
상기 암은 폐암, 췌장암, 결직장암, 백혈병, 유잉육종, 유방암, 전립선암, T 세포 림프종, B 세포 림프종, 악성 횡문근종, 활막육종, 자궁내막종, 위암, 간암, 신장암, 흑색종, 난소암, 뇌 신경교종, 담관암, 비인두암, 자궁경부암, 두경부암, 식도암, 갑상선암 및 방광암으로부터 선택되고, 특히 비소세포폐암, 췌장암 및 결직장암으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.