KR20230105053A

KR20230105053A - 금교맥 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전성 질환의 예방 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20230105053A
Application number: KR1020220000160A
Authority: KR
Inventors: 이만휘; 김성대
Original assignee: 경북대학교 산학협력단
Priority date: 2022-01-03
Filing date: 2022-01-03
Publication date: 2023-07-11
Also published as: KR102701914B1

Abstract

본 발명은 금교맥(Fagopyrum dibotrys) 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전성 질환 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 금교맥 추출물은 콜라겐에 의해 유도된 혈소판 응집반응을 억제함에 따라 혈전 형성을 효과적으로 억제할 수 있으므로, 혈소판 또는 혈전 응집의 효과적인 억제제로 작용하여 다양한 혈전성 질환을 예방 또는 치료하는 데에 유용하게 이용할 수 있다.

Description

금교맥 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전성 질환의 예방 또는 치료용 조성물{Composition for prevention or treatment of thrombotic diseases, comprising an extract of Fagopyrum Dibotrys as an active ingredient}

본 발명은 금교맥(Fagopyrum dibotrys) 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전성 질환의 예방 또는 치료용 조성에 관한 것이다.

현대사회는 산업화로 인한 생활수준의 향상과 라이프 스타일의 변화로 전통적인 식생활이 위협받고 있으며, 이러한 식생활 변화에 따라, 혈액 관련 질환인 비만, 고혈압, 고지혈증 등의 다양한 성인병이 급증하고 있는 실정이다.

인체 구성성분으로 혈액은 산소, 영양분, 노폐물의 운반 기능과 완충작용, 체온유지, 삼투압 조절 및 이온 평형 유지, 수분 일정유지, 액성 조절작용, 혈압의 유지 및 조절, 생체 방어 등 다양한 중요 기능들을 가지고 있다. 따라서 혈액 및 혈액 순환은 인간의 생존에 필수사항이며, 혈관의 손상시에는 재빨리 혈전을 생성하여 혈액 손실을 방지해야 한다. 혈액은 응고반응과 용해반응이 평행을 이루고 있으며, 정상적인 혈액 순환 동안에는 혈전(핏덩어리)이 생성되지 않는다. 그러나 외부 혈관손상, 내부적 혈액응고인자, 혈전 용해인자의 불균형으로 인해 혈전이 생성되면 혈관은 막히게 되고 혈액순환은 방해된다. 이 경우, 혈액의 중요기능들이 작동하지 않아 인체는 심각한 손상을 입게 된다.

혈액 응고 반응은 혈관손상, 또는 내부적 혈액응고인자/용해인자의 불균형으로 혈관벽에 혈소판이 점착, 응집하여 혈소판 혈전을 형성한 후, 혈액 응고계가 활성화되어 혈소판 응집괴를 중심으로 피브린 혈전이 형성된다. 이때 수많은 혈액 응고인자들의 여러 단계의 반응을 거쳐 트롬빈이 활성화되어, 피브리노겐으로부터 피브린 단량체를 생성하게 하며, 피브린 단량체들은 칼슘에 의해 중합되어, 혈소판과 내피세포에 결합하게 되며 XIII 인자에 의해 교차 결합된 피브린 폴리머를 형성하면서 영구적인 혈전을 생성하게 된다.

혈관 내의 과다한 혈전 생성은 혈액 순환을 방해하며, 심한 경우 혈관을 막아 심혈관계 및 뇌 조직의 심각한 손상을 나타내어 혈전증(Thrombosis)을 야기한다. 이러한 혈전증은 1) 혈관내피세포의 이상, 2) 혈액응고인자(XII 인자, XI 인자, IX 인자, X 인자 등) 및 혈액응고효소(트롬빈, 프로트롬빈 효소)의 과다한 응고 활성, 3) 혈소판 응집 및 4) 생성된 혈전의 용해 시스템의 비정상적 작용이 그 원인으로 알려져 있다. 이러한 원인들은 개별적, 또는 복합적으로 작용하여 혈관 내 과도한 혈전생성을 야기하며, 혈전생성에 관련되는 효소, 인자 및 혈소판 응집 저해를 나타내는 물질은 과다한 혈액응고 이상으로 발생하는 다양한 혈전성 질환에 매우 유용한 예방 또는 치료제로 사용될 수 있다. 혈소판은 콜라겐, 아데노신 이인산(ADP) 및 트롬빈과 같은 작용제에 의해 활성화될 때 응집체를 형성하는데, 이러한 작용제는 심혈관 질환의 발생에서 흔히 볼 수 있는 활성화된 혈관 내피에서 분비된다. 혈소판은 활성화되면 인테그린 α_IIbβ₃를 통해 다른 혈소판과 결합할 수 있고, 이 과정은 또한 응고 경로를 시작한다. 따라서 혈소판이 응집체를 형성한 후 혈전을 형성하여 혈관 폐색을 유발하는 것이다. 이것은 허혈이나 심지어 뇌졸중으로 이어지므로 혈소판 응집을 억제하는 것이 중요하다.

혈전성 질환의 예방과 치료를 위해, 현재 1) 혈액응고인자의 활성을 저해하여 혈전 생성을 억제하는 헤파린, 쿠마린 등의 다양한 항응고제, 2) 혈소판 응집을 저해하여 혈전 생성을 억제하는 아스피린과 같은 항혈소판제, 3) 이미 생성된 혈전을 녹여 혈전생성을 억제하는 유로키네이즈와 같은 혈전용해제 등이 사용되고 있다. 그러나, 이들은 가격이 매우 높을 뿐 아니라 출혈성 부작용과 위장장해 및 과민반응 등으로 그 사용이 한정되고 있는 실정이다.

최근에는 안전하면서도 항혈전 활성이 있는 식용, 약용작물 유래의 천연물로부터 항혈전제 개발이 집중적으로 진행되고 있는데, 특히 마늘의 아조엔(Ajoene), 은행나무 잎의 플라보노이드, 로즈마리 정유, 밤나무의 아에스신(Aescin) 등이 있다.

금교맥(Fagopyrum dibotrys)은 마디풀과 교맥속에 속한 식물로, 중국, 인도, 태국 등에 널리 분포한다. 금교맥은 폐질환, 부종 등의 치료에 효과가 있다고 알려져 있으나, 아직까지 금교맥(Fagopyrum dibotrys)의 항혈전, 항혈소판 응집 효과에 대한 측면은 연구된 바가 없다. 이에 본 발명자들은 금교맥(Fagopyrum dibotrys) 추출물의 항혈전 효과 및 항혈소판 효과를 확인하여 본 발명을 완성하였다.

KR

10-2021-0122367

A

본 발명의 목적은 금교맥(Fagopyrum dibotrys) 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전성 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 다른 목적은 금교맥(Fagopyrum dibotrys) 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전성 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 금교맥(Fagopyrum dibotrys) 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전성 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 금교맥 추출물은, 바람직하게는 추출용매로 메탄올을 이용한 것일 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 혈전성 질환은, 바람직하게는 혈전증, 고혈압, 뇌졸중, 뇌경색, 협심증, 심근경색, 동맥경화증, 말초동맥폐쇄증, 신장정맥폐쇄증, 중심 망막정맥 폐쇄증, 폐 혈전증, 심부정맥 혈전증, 간문맥 혈전증, 뇌 정맥동 혈전증, 뇌 동맥 경화증, 심장병, 허혈성 심질환, 두개내출혈, 동맥류, 죽상혈전증, 신경화증 및 허파색전증으로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은, 바람직하게는 혈소판 응집 억제 활성을 갖는 것이 좋다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은, 바람직하게는 혈소판 과립 분비 억제 활성을 갖는 것이 좋다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은, 바람직하게는 칼슘이온 동원작용 억제 활성을 갖는 것이 좋다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은, 바람직하게는 MAPK 인산화 또는 PI3K/Akt 인산화 억제 활성을 갖는 것이 좋다.

또한 본 발명은 금교맥(Fagopyrum dibotrys) 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전성 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 금교맥(Fagopyrum dibotrys) 추출물은 혈소판 응집 활성 및 혈전 형성을 효과적으로 억제하므로, 혈전 및 혈소판 응집으로 인한 효과적인 억제제로 작용하여 다양한 혈전성 질환을 예방 또는 치료하는 데에 유용하게 이용할 수 있다.

도 1은 본 발명의 금교맥 잎, 뿌리, 꽃 추출물 각각의 혈소판 응집 억제 효과를 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명의 금교맥 뿌리 추출물의 혈소판 응집 억제 효과를 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명의 금교맥 뿌리 추출물의 ATP 분비반응 억제 효과를 나타낸 도이다.
도 4는 본 발명의 금교맥 뿌리 추출물의 칼슘이온 동원작용 억제 효과를 나타낸 도이다.
도 5는 본 발명의 금교맥 뿌리 추출물의 MAPK 인산화 억제 효과를 나타낸 도이다.
도 6은 본 발명의 금교맥 뿌리 추출물의 PI3K/Akt 인산화 억제 효과를 나타낸 도이다.

또한, 본 발명은 금교맥(Fagopyrum dibotrys) 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전성 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

금교맥(Fagopyrum dibotrys)은 마디풀과 교맥속에 속한 식물로, 중국, 인도, 태국 등에 널리 분포한다. 금교맥은 폐질환, 부종 등의 치료에 효과가 있다고 알려져 있다.

본 발명의 금교맥 추출물은 혈소판 활성화 물질(콜라겐)에 의해 유도되는 혈소판 응집반응을 효과적으로 억제하였으며, 특히 금교맥 뿌리 추출물의 경우 가장 높은 혈소판 응집 억제 효과를 보였다. 또한, 본 발명의 금교맥 뿌리 추출물은 알파과립화 치밀과립내용물(ATP) 분비반응을 억제하여 항혈소판 효과가 있는 것으로 나타났다. 또한, 본 발명의 금교맥 뿌리 추출물 칼슘이온 동원작용을 억제하여 혈소판 응집반응을 억제하는 것으로 나타났다. 또한, 본 발명의 금교맥 뿌리 추출물 처리에 따라 MAPK 인산화 억제 효과, PI3K/Akt 인산화 억제 효과를 확인하였으며, 이로 인한 혈소판 응집반응 억제 효과를 가지는 것으로 나타났다. 즉, 본 발명의 금교맥 추출물은 혈소판 응집반응을 억제함에 따라 혈전 형성을 효과적으로 억제할 수 있으므로, 혈전성 질환을 예방, 치료 또는 개선할 수 있다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명을 구체적으로 설명하기 앞서 본 발명에서 사용되는 용어들은 본 발명의 바람직한 실시예를 적절히 표현하기 위해 사용된 용어들로서, 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 본 발명이 속하는 분야의 관례 등에 따라 달라질 수 있다. 따라서, 본 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 ‘포함’한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.

본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다. 또한 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다. 본 명세서에 참고문헌으로 기재되는 모든 간행물의 내용은 본 발명에 도입된다.

본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 '%'는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (w/w) %, 고체/액체는 (w/v) %, 그리고 액체/액체는 (v/v) %이다.

본 발명에 있어서, 상기 금교맥 추출물은, 당업계에 공지된 추출 및 분리방법을 사용하여 천연으로부터 추출 및 분리하여 수득한 것을 사용할 수 있으며, 본 발명에서 정의된 "추출물"은 적절한 용매를 이용하여 금교맥(Fagopyrum dibotrys)으로부터 추출한 것이며, 예를 들어, 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물을 모두 포함한다. 상기 금교맥(Fagopyrum dibotrys)으로부터 추출물을 추출하기 위한 적절한 용매로는 식품학 또는 약학적으로 허용되는 유기용매라면 어느 것을 사용해도 무방하며, 물 또는 유기용매를 사용할 수 있으며, 이에 제한되지는 않으나, 예를 들어, 정제수, 메탄올(Methanol), 에탄올(Ethanol), 프로판올(Propanol), 이소프로판올(Isopropanol), 부탄올(Butanol) 등을 포함하는 탄소수 1 내지 4의 알콜, 아세톤(Acetone), 에테르(Ether), 벤젠(Benzene), 클로로포름(Chloroform), 에틸아세테이트(Ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(Methylene chloride), 헥산(Hexane) 및 시클로헥산 (Cyclohexane) 등의 각종 용매를 단독으로 혹은 혼합하여 사용할 수 있다. 추출 방법으로는 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 방법 중 어느 하나를 선택하여 사용할 수 있다. 또한, 목적하는 추출물은 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있으며, 통상의 정제 방법을 이용하여 정제될 수도 있다.

본 발명의 추출물의 제조방법에는 제한이 없으며, 공지되어 있는 어떠한 방법도 이용될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 조성물에 포함되는 추출물은 상기한 열수 추출 또는 용매 추출법으로 추출된 1차 추출물을, 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말상태로 제조할 수 있다. 또한 상기 1차 추출물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Silica gel column chromatography), 박층 크로마토그래피(Thin layer chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(High performance liquid chromatography) 등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제된 분획을 얻을 수도 있다. 따라서, 본 발명에 있어서 추출물은 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 개념이다.

본 발명에 있어서, 상기 약학 조성물은, 유효성분 이외에 보조제(Adjuvant)를 추가로 포함할 수 있다. 상기 보조제는 당해 기술분야에 알려진 것이라면 어느 것이나 제한 없이 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물은 유효성분을 약학적으로 허용된 담체에 혼입시킨 형태로 제조될 수 있다. 여기서, 약학적으로 허용된 담체는 제약 분야에서 통상 사용되는 담체, 부형제 및 희석제를 포함한다. 본 발명의 약학 조성물에 이용할 수 있는 약학적으로 허용된 담체는 이들로 제한되는 것은 아니지만, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

제제화할 경우에는 통상 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 그러한 고형 제제는 유효성분에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 칼슘 카르보네이트, 수크로스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 일반적으로 사용되는 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수용성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수용성용제, 현탁제로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브유와 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(Witepsol), 트윈(Tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물은 개체에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식이 예상될 수 있는데, 예를 들면 경구, 정맥, 근육, 피하, 복강내 주사에 의해 투여될 수 있다.

상기 약학 조성물은 다양한 경구 또는 비경구 투여 형태로 제형화 될 수 있다.

경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경질, 연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/또는 폴리에틸렌 글리콜)를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 정제는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제 및 감미제를 함유할 수 있다. 상기 제형은 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다.

또한, 비경구 투여용 제형의 대표적인 것은 주사용 제제이며, 주사용 제제의 용매로서 물, 링거액, 등장성 생리식염수 또는 현탁액을 들 수 있다. 상기 주사용 제제의 멸균 고정 오일은 용매 또는 현탁 매질로서 사용할 수 있으며 모노-, 디-글리세라이드를 포함하여 어떠한 무자극성 고정오일도 이러한 목적으로 사용될 수 있다.

또한, 상기 주사용 제제는 올레산과 같은 지방산을 사용할 수 있다.

또한, 본 발명에 있어서, 상기 건강기능식품 조성물은 유효성분인 추출물을 함유하는 것 외에 통상의 식품 조성물과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 향미제는 천연 향미제(타우마틴), 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 하기 약학적 조성물과 동일한 방식으로 제제화 되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알콜 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등이 있다.

또한, 상기 식품 조성물은 유효성분인 추출물 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

본 발명의 건강기능식품 조성물은, 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조 및 가공될 수 있다. 본 발명에서 '건강기능식품 조성물'이라 함은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 말하며, 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다. 본 발명의 건강 기능성 식품은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전처에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다. 상기 '식품 첨가물 공전'에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼슘, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물; 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물; L-글루타민산나트륨 제제, 면류첨가알칼리제, 보존료 제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류 등을 들 수 있다. 예를 들어, 정제 형태의 건강 기능성 식품은 본 발명의 유효성분을 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제와 혼합한 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축 성형할 수 있다. 또한 상기 정제 형태의 건강 기능성 식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수도 있다. 캅셀 형태의 건강 기능성 식품 중 경질 캅셀제는 통상의 경질 캅셀에 본 발명의 유효성분을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질 캅셀제는 본 발명의 유효성분을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 젤라틴과 같은 캅셀 기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질 캅셀제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다. 환 형태의 건강 기능성 식품은 본 발명의 유효성분과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 제피제로 제피할 수 있으며, 또는 전분, 탈크와 같은 물질로 표면을 코팅할 수도 있다. 과립 형태의 건강 기능성 식품은 본 발명의 유효성분의 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다.

이하, 실시예 및 실험예를 통하여 본 발명을 보다 자세히 설명한다. 다만, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 예시로 제시되는 것으로, 당업자에게 주지 저명한 기술 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 수 있고, 이에 의해 본 발명이 제한되지는 않는다. 본 발명은 후술하는 특허청구범위의 기재 및 그로부터 해석되는 균등 범주 내에서 다양한 변형 및 응용이 가능하다.

<실시예 1> 금교맥 추출물의 제조

금교맥(Fagopyrum dibotrys)의 잎, 뿌리, 꽃 20 g에 각각 추출용매 400 ㎖를 가하여 금교맥 추출물을 제조하였다. 추출용매로 80 ℃의 100%(v/v) 메탄올을 이용하여 2시간 추출하였다. 추출물을 여과하고, 회전 증발기를 통해 증발시킨 뒤 -70 ℃에서 동결하였으며, -50 ℃에서 3~4일간 동결건조하여 금교맥 추출물 분말을 제조하였다.

이하, 금교맥 추출물의 항혈전 효과를 확인하기 위해 DMSO에 용해하여 사용하였다.

<실험예 1> 금교맥 추출물의 혈소판 응집 억제 효과 확인

7주령의 Sprague-Dawley 쥐를 병원체가 없는 환경(23 ± 2 ℃, 습도 50 ± 10 %, 12시간 명암 주기)에 수용하고 실험 전 1주일 동안 순응시켰다. 심장 천자를 통해 쥐로부터 혈액을 수집하고 즉시 항응고제로 산 시트르산 덱스트로스(acid citrate dextrose; ACD) 용액에 첨가하였다. 그 다음 1,000 rpm에서 7분 동안 원심분리하였다. 혈소판이 풍부한 혈장을 조심스럽게 분리하고 2,000 rpm에서 7분 동안 원심분리하였다. 펠릿화된 혈소판을 Tyrode 완충액(137 mM NaCl, 12 mM NaHCO₃, 5.5 mM glucose, 2 mM KCl, 1 mM MgCl₂, and 0.3 mM NaHSO₄, pH 7.4)으로 재현탁하고 세척된 혈소판을 얻었다. 동물실험은 경북대학교 동물실험윤리위원회의 승인을 받았다(KNU-2013-001).

혈소판 응집은 혈소판 응집측정기(Chrono-log, Havertown, PA, USA)를 사용하여 평가하였다. 세척된 혈소판은 1 mM CaCl₂의 존재하에 37 ℃에서 2분 동안 금교맥 추출물의 유무에 관계없이 배양되었으며, 배양물을 콜라겐으로 자극하고 계속 교반하면서 5분 동안 추가 배양하였다. 이후 금교맥 잎, 뿌리, 꽃 추출물을 각각 처리하여 혈소판 응집반응을 억제하는지 확인하였다.

도 1에 금교맥 잎, 뿌리 꽃 추출물 각각의 항혈소판 활성을 나타내었다. 각각 항혈소판 활성은 금교맥 잎 추출물이 78 %, 금교맥 뿌리 추출물이 95 %, 금교맥 꽃 추출물이 75 %로 나타났다.

<실험예 2> 금교맥 추출물의 혈소판 응집 억제 효과 확인

상기 실험예 1과 동일하게 금교맥 뿌리 추출물의 혈소판 응집 억제 효과를 확인하였다. 금교맥 뿌리 추출물을 25, 50, 100 및 200 ㎍/㎖ 처리하여 금교맥의 항혈소판 활성을 확인하였다.

도 2에서 보듯이, 금교맥 뿌리 추출물은 콜라겐 유도 혈소판 응집반응을 농도 의존적으로 억제하는 것으로 나타났으며, 특히 금교맥 뿌리 추출물을 100 ㎍/㎖ 이상 처리할 경우 콜라겐 유도 혈소판 응집반응이 현저하게 억제되는 것을 확인하였다.

<실험예 3> 금교맥 추출물의 혈소판 과립 분비 억제 효과 확인

혈소판이 콜라겐 등의 혈소판 활성화 물질에 의해 자극되면 다양한 신호전달작용에 의해 알파과립과 치밀과립내용물(ATP 등)의 분비반응이 유도된다. 이에 본 실험에서는 금교맥 뿌리 추출물이 콜라겐 유도 ATP 방출반응을 억제하는지 확인하였다.

ATP 분석 키트는 Biomedical Research Service Center (Buffalo, NY, USA)로부터 구입하였다. 세척된 혈소판은 1 mM CaCl₂의 존재하에 37 ℃에서 2분 동안 금교맥 추출물의 유무에 관계없이 배양되었다. 그 후, 배양물을 콜라겐(2.5 ㎍/mL)으로 자극하고 계속 교반하면서 5분 동안 연속 배양하였다. 반응이 종료되면 혈소판을 얼음에 넣어 반응을 즉시 켄칭하고 상청액을 수집했다. 혈소판을 원심분리하고 상층액을 수집하고 제조업체의 프로토콜(Biomedical Research Service Centre, State University of New York at Buffalo)에 따라 ATP 분석 키트를 사용하여 ATP 활성을 측정하였다.

도 3에 금교맥 뿌리 추출물의 혈소판 과립분비 억제 효과를 나타내었다. 금교맥 뿌리 추출물은 콜라겐 유도 ATP 분비반응을 농도 의존적으로 억제하는 경향을 보였으며, 특히 금교맥 뿌리 추출물을 50 ㎍/㎖ 이상 처리할 경우 콜라겐 유도 ATP 분비반응을 우수하게 억제하는 것으로 나타났다.

<실험예 4> 금교맥 추출물의 칼슘이온 동원작용 억제 효과 확인

혈소판 활성물질(ligands)에 의한 혈소판 응집반응은 세포막 수용체로부터 발생하며, 혈소판 내 신호전달물질의 단계적 활성화의 연속적인 결과에 의해 나타나는 현상이다. 특히 세포질 내 칼슘이온은 다양한 신호전달물질의 주요 integrator로 작용한다. 이에 본 실험에서는 금교맥 뿌리 추출물이 칼슘이온 동원작용을 억제하는지 확인하였다.

또한, [Ca²⁺]_i 이동 분석은 다음과 같다. 혈소판 풍부 혈장을 37 °C에서 1시간 Fura-2AM과 함께 사전 인큐베이션한 후 세척된 혈소판을 얻었고, 금교맥 추출물의 처리 유무에 관계없이 1M CaCl₂를 처리한 다음 연속 교반 하에 콜라겐으로 자극하였다. [Ca²⁺]_i는 UV 분광광도계를 이용하여 Fura-2AM의 형광강도를 통해 측정되었다.

도 4에서 보듯이, 금교맥 뿌리 추출물은 콜라겐 유도 세포질내 칼슘이온 동원작용을 효과적으로 억제하는 것으로 나타났다.

<실험예 5> 금교맥 추출물의 MAPK 인산화 억제 효과 확인

Mitogen-activated protein kinases(MAPK)는 세포 내 신호전달에 작용하는 것으로 알려진 인산화 효소로서, extracellular signal-regulated kinase(ERK), c-Jun Nterminal kinase(JNK) 및 p38 MAPK로 구성된다. 이들은 다양한 외부자극에 의해 활성화되어 세포의 신호전달작용을 매개하는데, 이러한 신호전달 분자의 인산화는 혈소판 과립 분비를 유도하는 데 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 또한, PI3K/Akt는 혈소판 응집반응에서 초기단계의 신호전달작용에 중요한 역할을 하며, 다양한 항혈소판제들은 이들 단백질의 인산화를 억제시키는 것으로 알려져 있다.

세척된 혈소판을 37 ℃에서 2분 동안 1 mM CaCl₂의 존재하에서 금교맥 뿌리 추출물과 미리 배양한 다음 5분간 콜라겐으로 자극시켰다. 이 혼합물에 lysis buffer(PRO-PREP; iNtRON Biotechnology, Seoul, Korea)를 첨가하여 혈소판 응집반응을 종결시켰다. BCS 분석(PRO-MEASURE; iNtRON Biotechnology, Seoul, Korea)을 이용하여 단백질 농도를 측정하였다. 총 혈소판 단백질을 10 % SDS-PAGE를 사용하여 분리하고 PVDF 멤브레인으로 옮겼다. 멤브레인을 5 % 탈지유로 차단하고, 각 항체로 프로빙한 다음 항체 결합을 강화된 화학 발광(iNtRON Biotechnology, Seoul, Korea)을 사용하여 시각화하였다.

도 5에 금교맥 뿌리 추출물의 MAPK 인산화 억제 효과를 나타내었다. 금교맥 뿌리 추출물은 콜라겐에 의해 활성화된 ERK, JNK, p38 MAPK 단백질 인산화 반응 중 특히 JNK 단백질 인산화를 억제하는 것으로 나타났다.

도 6에 금교맥 뿌리 추출물의 PI3K/Akt 인산화 억제 효과를 나타내었다. 금교맥 뿌리 추출물은 콜라겐에 의해 활성화된 PI3K 및 Akt 단백질 인산화를 억제하는 것으로 나타났다.

Claims

금교맥(Fagopyrum dibotrys) 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전성 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 금교맥 추출물은,
추출용매로 메탄올을 이용한 것을 특징으로 하는 혈전성 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 혈전성 질환은,
혈전증, 고혈압, 뇌졸중, 뇌경색, 협심증, 심근경색, 동맥경화증, 말초동맥폐쇄증, 신장정맥폐쇄증, 중심 망막정맥 폐쇄증, 폐 혈전증, 심부정맥 혈전증, 간문맥 혈전증, 뇌 정맥동 혈전증, 뇌 동맥 경화증, 심장병, 허혈성 심질환, 두개내출혈, 동맥류, 죽상혈전증, 신경화증 및 허파색전증으로 이루어진 군에서 선택된 것인, 혈전성 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은,
혈소판 응집 억제 활성을 갖는 것인, 혈전성 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은,
혈소판 과립 분비 억제 활성을 갖는 것인, 혈전성 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은,
칼슘이온 동원작용 억제 활성을 갖는 것인, 혈전성 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은,
MAPK 인산화 또는 PI3K/Akt 인산화 억제 활성을 갖는 것인, 혈전성 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
금교맥(Fagopyrum dibotrys) 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전성 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.