KR20230063478A - 수세미 수액을 포함하는 눈썹 발모 촉진용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 수세미 수액 또는 그 유효성분인 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸을 포함하는 약학 조성물, 화장료 조성물 및 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 수세미 수액 또는 그 유효성분인 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸을 포함하는 조성물은 약학, 화장품, 건강기능식품 분야에서 눈썹의 밀도를 개선하기 위한 눈썹 발모 촉진용 조성물로서 유용하게 사용될 수 있다.

Description

수세미 수액을 포함하는 눈썹 발모 촉진용 조성물{Composition for promoting growth of eyebrow comprising Luffa cylindrica sap}
본 발명은 수세미 수액을 포함하는 눈썹 발모 촉진용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 수세미 수액 또는 그 유효성분을 포함하는 눈썹 발모 촉진용 조성물에 관한 것이다.
최근 미용에 대한 관심이 늘어남에 따라 모발, 특히, 눈썹에 대한 관심도 증가되고 있다. 이에 따라, 색이 짙고 풍성한 눈썹에 대한 외용제, 기능성 화장품 또는 미용 소품에 대한 수요가 커지는 실정이다.
한편, 눈썹은 체모 또는 모발에 속하지만, 두발 등 다른 부위의 모발과 다른 성장기, 휴지기 및 성장 속도를 나타내기 때문에, 종래 모발 촉진을 위하여 사용되어 왔던 조성물 또는 약제를 눈썹 또는 속눈썹의 성장을 위해 적용하는 경우, 기대하는 정도의 눈썹 또는 속눈썹 성장 효과를 나타내지 못할 수 있다.
이에, 본 발명의 발명자들은 이전 연구에서 탈모 예방 및 모발 촉진 효능을 나타내는 것으로 확인되었던 수세미 수액에 대하여 눈썹에 있어서 발모 촉진 활성을 나타내는지 확인해 보고자 하였다.
특허공개 제10-2019-0001854호 (2019.01.07) 특허등록 제10-2305154호 (2021.09.16)
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 눈썹에 있어서 탈모 예방/치료 및 발모/육모/성장 촉진 효과를 나타내는 물질을 제공하는 것이다.
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 이상에서 언급한 해결 과제로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 기술적 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명의 일 측면에 따라, 수세미 수액 또는 그 유효성분을 포함하는 눈썹 발모 촉진용 약학 조성물이 제공된다.
일 구현예에서, 상기 수세미 수액은 조성물 총 부피에 대하여 7.5~100 %(v/v)로 포함될 수 있다.
일 구현예에서, 상기 수세미 수액은 유효성분으로서 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸을 포함하는 것일 수 있으며, 이에 따라, 상기 수세미 수액의 유효성분은 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염일 수 있다.
일 구현예에서, 상기 유효성분은 0.1 μM 이상으로 포함될 수 있다.
일 구현예에서, 상기 눈썹 발모 촉진은 혈관신생 자극을 통한 탈모 완화에 의한 발모 눈썹 촉진일 수 있다.
일 구현예에서, 상기 약학 조성물은 피부 외용제일 수 있으며, 바람직하게는 크림 제형일 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따라, 수세미 수액 또는 그 유효성분을 포함하는 눈썹 발모 촉진용 화장료 조성물이 제공된다.
일 구현예에서, 상기 수세미 수액은 조성물 총 부피에 대하여 7.5~100 %(v/v)로 포함될 수 있다.
일 구현예에서, 상기 수세미 수액은 유효성분으로서 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸을 포함하는 것일 수 있으며, 이에 따라, 상기 수세미 수액의 유효성분은 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염일 수 있다.
일 구현예에서, 상기 유효성분은 0.1 μM 이상으로 포함될 수 있다.
일 구현예에서, 상기 눈썹 발모 촉진은 혈관신생 자극을 통한 탈모 완화에 의한 발모 눈썹 촉진일 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 수세미 수액 또는 그 유효성분을 포함하는 눈썹 발모 촉진용 식품 조성물이 제공된다.
본 발명에 의해, 수세미 수액 및 그 유효성분인 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸을 처리하면 HUVEC 세포의 성장, 이동성, 혈관생성이 촉진되고, 누드마우스에서 뚜렷한 발모 효과를 나타낼 뿐만 아니라, 수세미 줄기 수액을 포함한 외용 크림을 눈썹에 처리한 결과, 눈썹 볼륨(면적)을 증가시켜 수세미 수액 및 이에 함유된 유효성분이 눈썹 발모 촉진 효과를 갖는다는 것이 밝혀졌다.
따라서, 본 발명의 수세미 수액 또는 그 유효성분인 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸을 포함하는 조성물은 약학, 화장품, 건강기능식품 분야에서 눈썹의 밀도를 개선하기 위한 눈썹 발모 촉진용 조성물로서 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 설명 또는 특허청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
도 1은 인간배꼽정맥세포(HUVEC)에 수세미 줄기 수액(LuCS)을 0, 1, 3, 5, 10 %(v/v)로 처리한 후, (A) 대조군(0 %) 대비 성장율(viability), (B) 대조군(0 %) 대비 이동한 세포(Migrated cells)의 비율 및 염색 사진, (C) 내피 혈관 형성(Tube formation) 정도를 나타내는 교차점의 수(# of junctions) 및 위상차 현미경 사진이다.
도 2는 인간배꼽정맥세포(HUVEC)에 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸을 0, 0.5, 1, 5, 10 μM로 처리한 후, (A) 대조군(0 μM) 대비 성장율(viability), (B) 대조군(0 μM) 대비 이동한 세포(Migrated cells)의 비율, (C) 내피 혈관 형성(Tube formation) 정도를 나타내는 교차점의 수(# of junctions)이다.
도 3은 LuCS를 함유한 크림 제형을 14일 동안 BALB/c 누드마우스 등에 도포한 결과이다[(A) 무처리: 4마리, (B) LuCS 비포함 크림: 7마리, (C) LuCS 포함 크림: 10마리).
도 4는 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸(10 μM)을 함유한 크림 제형을 30일 동안 1일 2회 BALB/c 누드마우스 등에 도포한 결과이다[(A) 유효성분 비포함 크림: 2마리, (B) 유효성분 포함 크림: 4마리).
도 5는 성인 22명을 대상으로 수세미오이 줄기 수액을 포함한 크림을 눈썹 부위 피부에 8주 동안 도포한 후 눈썹 볼륨(면적) 변화 정도를 측정한 결과이다[(A) 피험자 전체의 결과, (B) 피험자 중 여성의 결과, (C) 피험자 중 남성의 결과, (D) 피험자 중 50세 미만 피험자의 결과, (E) 피험자 중 50세 이상 피험자의 결과].
도 6은 수세미오이 줄기 수액을 포함한 크림을 눈썹 부위 피부에 8주 동안 도포한 피험자 중 일부 피험자의 눈썹 촬영 사진이다.
본 발명은 수세미 수액 또는 그 유효성분을 포함하는 눈썹 발모 촉진용 약학 조성물을 제공한다.
수세미(Luffa cylindrica (L.) Roem)는 박과의 한해살이 식물로, 덩굴성 줄기와 그물 모양의 섬유가 발달하고, 검은 종자가 든 열매를 형성하며 자란다. 아시아의 열대 및 아열대 지방에서 오랜 기간 재배되어 왔으며, 열매, 껍질, 씨앗, 수액 등 부위에 따라 식음료의 재료와 주방 및 목욕용품으로 사용하는 스폰지의 재료뿐 아니라 민간과 전통의학에서 다양한 증상의 치료를 위한 약재 등으로 쓰여왔다. 예컨대, 중국에서는 구충, 해열 및 건위제 등으로 사용되었으며, 한방에서는 생리불순에 효과를 가지며 거담, 지혈, 해독 등을 위한 약재로 알려져 있다.
본 발명의 눈썹 발모 촉진용 약학 조성물에 포함되는 수세미 수액은 수세미로부터 채취하여 얻을 수도 있고, 상업적으로 판매되는 수세미 줄기 수액을 사용할 수도 있다. 수세미 수액을 수세미로부터 채취하는 경우에는 수세미의 뿌리로부터 줄기 수액을 받아낼 수 있는 정도의 거리(예를 들어, 1m 정도)의 윗부분의 줄기를 잘라내고, 절단부로부터 일정 시간 동안(예를 들어, 약 12시간 동안) 받는 방법에 의하여 채취할 수 있다.
일 구현예에서, 상기 수세미 수액은 조성물 총 부피에 대하여 7.5~100 %(v/v), 바람직하게는 8.5~100 %(v/v), 더욱 바람직하게는 9.5~100 %(v/v)로 포함될 수 있다.
본 발명에 포함되는 수세미 수액은 유효성분으로서 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸을 포함하는 것일 수 있다. 이에 따라, 상기 수세미 수액의 유효성분은 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염일 수 있다. 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸(5-amino-4-bromo-3-methylisoxazole)은 하기 화학식 1로 표시할 수 있으며, 4-브로모-3-메틸이속사졸-5-아민(4-bromo-3-methylisoxazol-5-amine)로도 명명된다.
[화학식 1]
Figure pat00001
일 구현예에서, 상기 유효성분은 0.1 μM 이상, 바람직하게 0.5 μM 이상, 더욱 바람직하게 1 μM 이상, 가장 바람직하게 10 μM 이상 100 mM 이하로 포함될 수 있다.
일 구현예에서, 상기 눈썹 발모 촉진은 혈관신생 자극을 통한 탈모 완화에 의한 눈썹 발모 촉진일 수 있다. 상기 눈썹은 눈의 상부에 위치하는 눈썹 및 속눈썹을 포함한다. 본 발명의 수세미 수액 또는 그 유효성분을 처리하면 HUVEC 세포에서 세포의 성장, 이동성, 혈관생성이 촉진되는 것이 확인되었다. 또한, 누드마우스에서 뚜렷한 발모 효과를 나타낼 뿐만 아니라, 수세미 줄기 수액을 포함한 외용 크림을 눈썹에 처리한 결과 눈썹 볼륨(면적)을 증가시켜, 수세미 수액 및 그 유효성분이 눈썹 발모 촉진 효과를 갖는다는 것이 확인되었다.
본 발명의 약학 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함할 수 있으며, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제제화될 수 있다. 상기 약제학적으로 허용가능한 담체는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함한다. 또한, 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 포함한다. 경구용 고형 제제는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등을 포함하며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 포함할 수 있으며, 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제 등을 포함할 수 있다. 경구용 액상 제제는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등을 포함하며, 물, 리퀴드 파라핀 등의 희석제, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 포함할 수 있다. 비경구용 제제는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 크림제, 동결건조 제제, 좌제를 포함하며, 비수성 용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르류 등을 포함한다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
바람직하게는, 본 발명의 약학 조성물은 피부 외용제일 수 있으며, 보다 바람직하게는 크림 제형일 수 있다. 상기 피부외용제는, 예컨대, 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제 등의 제형일 수 있다. 상기 조성물이 피부외용제인 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 유화제, 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 활성제, 친유성 활성제 또는 지질 소낭 등 피부 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물에 함유되는 유효성분의 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 유효성분 형태, 투여 경로 및 기간에 따라 다르며, 환자에 따라 적절하게 조절될 수 있다. 예를 들면, 상기 유효성분은 1일 0.0001 내지 1000 mg/kg으로, 바람직하게는 0.01 내지 1000 mg/kg의 용량으로 투여할 수 있으며, 상기 투여는 하루에 한번 또는 수회 나누어 투여할 수도 있다. 또한, 본 발명의 약학 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 유효성분을 0.001 내지 90 % 중량백분율로 포함할 수 있다.
본 발명의 약학조성물은 랫트, 마우스, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로, 예를 들면, 경구, 피부, 복강, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명은 또한, 수세미 수액 또는 그 유효성분을 포함하는 눈썹 발모 촉진용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 눈썹 발모 촉진용 화장료 조성물에 포함되는 수세미 수액의 제조방법, 조성물 중 함유 비율, 유효성분인 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸에 관한 내용 및 눈썹 발모 촉진 효과는 상기 설명된 바와 동일하다.
본 발명의 수세미 수액 또는 그 유효성분을 포함하는 조성물이 화장료 조성물로 사용되는 경우에는, 기능성 화장품, 헤어 케어 화장품 및 눈썹 케어 화장품으로서 해당 기술 분야에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등을 들 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 상기 유효성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함한다. 본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명은 또한, 수세미 수액 또는 그 유효성분을 포함하는 눈썹 발모 촉진용 식품 조성물을 제공한다.
이하, 본 발명을 실시예를 통하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이에 제한되는 것은 아니다.
<실시예>
1. 시험관내( in vitro ) 실험 및 동물( in vivo ) 실험
(1) 세포 배양
인간 제대 정맥 내피 세포(human umbilical vein endothelial cell, HUVEC)는 American Type Culture Collection (ATCC, Manassa, VA, USA)에서 구입하였다. HUVEC는 5 % CO2 포함 가습 대기, 37 ℃ 조건으로 EGM-2 Bulletkit 배지(Lonza Biologics, Hopkinton, MA)에서 배양하였다. 모든 실험은 3-6 계대 내의 HUVEC를 사용하여 수행하였다.
(2) 물질 및 시약
수세미(Luffa cylindrica) 줄기 수액(sap)[LuCS]은 농업 생산 기업인 아이셀 팜(i-sel farm, 대한민국 경상북도)에서 입수하였다. 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸(5-amino-4-bromo-3-methylisoxazole)은 시그마 알드리치(SIGMA ALDRICH, St. Louis, MO, USA)에서 구입하였다.
수세미 줄기 수액에는 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸(5-amino-4-bromo-3-methylisoxazole)이 포함되어 있음을 확인하였으며, 확인 방법은 한국 특허공개 제10-2021-0023155호에 기재되어 있다.
(3) 세포 성장율 측정
LuCS 처리 또는 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸(5-amino-4-bromo-3-methylisoxazole) 처리 후 세포 성장율을 측정하기 위하여, WST-1[2-(4-Iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl) -2H-tetrazolium] 시약 (Nalgene, Rochester, NY)을 사용하였다. 요약하면, HUVEC(5×103/웰)를 96웰 플레이트(Nunc, Roskilde, Denmark)에 접종(seed)하고 37 ℃에서 72 시간 동안 다양한 부피의 LuCS 또는 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸을 처리하였다. WST-1 용액 10 μL을 각 웰에 첨가하고 10 분 정도 지난 다음, 450 nm에서 흡광도를 측정하였다(Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA). 수세미 줄기 수액(LuCS) 및 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸의 HUVEC 세포 성장에 대한 효과를 측정하여 각각 도 1A 및 도 2A에 나타내었다.
도 1A에 나타난 바와 같이, LuCS을 처리하면 미처리 대조군(0 %)에 비하여 HUVEC의 성장이 통계적으로 유의하게 촉진되는 것으로 나타났다. 또한, 도 2A에 나타난 바와 같이, 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸을 처리하지 않은 군(0 %)과 대비하여 그 처리 농도가 높아질수록 성장율이 증가하는 경향을 나타내었으며 5 및 10 μM을 처리한 군들에서 유의적으로 증가한 것으로 나타났다.
(4) 세포 이동성(migration) 평가
24-트렌스웰(24-Transwell) 장치(Corning, NY, USA)를 사용하여 제조업체의 프로토콜에 따라 세포 이동성 평가를 수행하였다. 혈청 비포함 RPMI 배지를 포함하는 상부 챔버에 세포를 6 시간 동안 적용하였다. 트렌스웰 필터의 뒷면으로 이동한 세포를 6 시간 동안 염색하였다. 용출된 염료는 ELISA 판독기(Bio-Rad)로 560 nm에서 측정하였다. 수세미 줄기 수액(LuCS) 및 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸의 세포 이동성에 대한 효과를 측정하여 각각 도 1B 및 도 2B에 나타내었다.
도 1B에 나타난 바와 같이, LuCS을 처리하면 미처리 대조군(0 %)에 비하여 HUVEC의 이동이 통계적으로 유의하게 촉진되는 것으로 나타났다. 또한, 도 2B에 나타난 바와 같이, 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸을 처리하지 않은 군(0 %)과 대비하여 그 처리 농도가 높아짐에 따라 세포 이동성이 증가되는 경향을 나타내었고, 특히, 5 및 10 μM을 처리한 군들에서 세포 이동이 유의적으로 증가한 것으로 나타났다.
(5) 내피 혈관(endothelial tube) 형성 평가
성장인자-감소 마트리젤(Matrigel, BD Biosciences, San Jose, CA, USA) 250 μL를 사용하여 24웰 플레이트(SPL Life Sciences, Seoul, Korea)를 코팅하고 37 ℃에서 30 분 동안 중합되도록 하였다. 다양한 부피의 LuCS, 및 0.5, 1, 5 및 10 μM 농도의 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸을을 포함하는 500 μL 무혈청 배지에 HUVEC (3 x 104 세포/웰)을 현탁시켰다. 37 ℃에서 16 시간 동안 배양한 후, 위상차 현미경을 이용하여 웰당 4 개의 대표적 필드 사진을 촬영하였다. 내피 혈관(endothelial tube)은 2개 이상 가지 돌출의 시작점으로 정의되는 교차점의 수를 세어 정량하였다. 수세미 줄기 수액(LuCS) 및 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸의 혈관생성 촉진에 대한 효과를 측정하여 각각 도 1C 및 도 2C에 나타내었다.
도 1C에 나타난 바와 같이, LuCS을 처리하면 미처리 대조군(0 %)에 비하여 HUVEC의 혈관생성능이 통계적으로 유의하게 촉진되는 것으로 나타났다. 또한, 도 2C에 나타난 바와 같이, 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸을 처리하지 않은 군(0 %)과 대비하여 그 처리 농도가 높아질수록 교차점의 숫자가 증가하는 경향을 보였고, 특히 5 및 10 μM을 처리한 군들에서 교차점 수가 유의적으로 증가한 것으로 나타났다.
(6) 생체내( in vivo ) 모델 실험: 수세미 줄기 수액
6-8 주령 BALB/c 누드마우스는 오리엔트(한국, 성남)에서 구입하였다. LuCS(수세미 줄기 수액)(유효성분) 비포함 크림 또는 포함 크림, 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸(유효성분) 비포함 크림 또는 포함 크림은 해당 유효성분을 제외한 모든 성분이 동일하도록 제조하였다(정제수, 1.2-헥산다이올, 올리브유, 올리브유화왁스, 몬타왁스, 알로에베라잎즙). 실험 대상 크림을 14일 동안 1일 2회(500 μL씩 2회), 누드마우스 등에 도포하였다. 체중은 정기적으로 기록하였으며, 동물 관리 및 실험은 제주 대학교 동물 생명 윤리위원회에서 승인한 지침에 따라 수행하였다.
(7) 생체내( in vivo ) 모델 실험: 유효성분
5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸 시험의 경우, 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸 비포함 크림(정제수, 1.2-헥산다이올, 올리브유, 올리브유화왁스, 몬타왁스, 알로에베라잎즙) 및 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸 포함 크림(정제수, 1.2-헥산다이올, 올리브유, 올리브유화왁스, 몬타왁스, 알로에베라잎즙, 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸)을, 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸을 제외한 모든 성분이 동일하도록 제조하였다. 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸 함유 크림은 30일 동안 1일 2회(500 μL씩 2회), 누드마우스 등에 도포하여 실험군으로, 비포함 크림 도포군은 대조군(Mock)으로 사용하였다. 이때, 체중은 정기적으로 기록하였으며, 동물 관리 및 실험은 제주 대학교 동물 생명 윤리위원회에서 승인한 지침에 따라 수행하였다.
그 결과, 대조군 누드마우스에서는 육안으로 털을 확인하기 어려운 반면(도 4A), 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸 포함 크림 처리군의 경우 등쪽 전반적으로 털이 나 있는 것이 확인되었다(도 4B).
(8) 통계 분석
데이터는 평균±표준편차(SD)로 표시하였다. 2개의 독립적 샘플 간의 비교를 위한 유의 수준은 t-검정(Student's t-test)를 사용하여 결정하였다. 각 군은 일원 분산분석(analysis of variance, ANOVA)과 Tukey 사후검정(Tukey's post-hoc test) (유의적인 주요 효과에 대하여 적용함)으로 비교하였다(SPSS 12.0K for Windows; SPSS Inc., Chicago, IL, USA).
2. 눈썹 볼륨 및 짙기 개선 효과에 대한 임상 평가 시험
(1) 크림 제형의 제조
임상시험을 수행할 크림 제형을 하기 표 1에 기재된 배합으로 제조하였다.
구분 성분
수상층 정제수, 수세미오이 줄기 수액(크림 제형 총 부피의 20% 이상), 1,2-헥산다이올, 황금추출물, 감초뿌리추출물, 밀리타리스동충하초균사체추출물, 락토바실러스발효물, 글리세린
유상층 하이드로제네이티드호호바오일, 세라마이드이오피, 동백나무씨오일, 시어버터, 달맞이꽃오일, 올리브오일, 베헤닐알코올, 솔비탄올리베이트, 세테아릴올리베이트
첨가물 알로에베라잎즙, 알에이치-폴리펩티드-62, 엘라스틴, 니코티노일트라이펩타이드-1, 검정콩추출물, 쌀겨오일, 향료
상기 표 1의 수상층과 유상층을 70 ℃로 가열한 후, 유상층에 수상층을 혼합하였다. 혼합물을 호모믹서(K&S Corporation)로 유화시켰다. 50 ℃로 유지된 혼합물에 첨가물을 혼합하여 최종 크림 제형을 제조하였다.
(2) 시험 방법
본 임상시험은 시험 제품에 대한 눈썹 볼륨 및 짙기 개선 효과를 인체에서 평가하기 위하여 수행하였다.
선정기준 및 제외기준에 부합하는 22~60세의 남성 및 여성 피험자 22명(평균 연령 47.95±11.81세)을 시험 대상자로 하여, 상기 제조한 크림 제형을 시험하였다. 8주 동안 1일 2회 아침, 저녁 얼굴 세안 후 눈썹 부위 피부에 흡수될 수 있도록 충분히 도포한 후 문지르게 하였다. 눈썹 볼륨(면적), 짙기에 대하여 ① 제품 사용 전, ② 제품 사용 4주 및 ③ 제품 사용 8주 후 시점에 측정하였다. 평가는 상기 각 시점에 눈썹을 사진 촬영한 후 눈썹 볼륨 면적과 짙기를 분석하였고, 피험자에 의한 설문평가 및 이상반응 평가를 실시하였다.
모든 피험자는 방문 시마다 시험부위를 세정한 후 공기의 이동이 없고 직사광선이 없으며 일정한 조도 하의 항온항습 조건(온도 22±2 ℃, 습도 50±5%)에서 20 분간 안정을 취한 후 시험에 참여하도록 하였다.
눈썹 볼륨(면적) 분석은 촬영한 눈썹 이미지를 Image pro® plus (Media Cybernetics, USA)을 이용하여 분석하였으며, 전체적인 눈썹의 면적(area) 값을 분석하였다.
눈썹 짙기 분석은 촬영한 눈썹 이미지를 Image pro® plus (Media Cybernetics, USA)을 이용하여 분석하였으며, 전체적인 눈썹의 짙기(intensity, mean) 값을 분석하였다. 짙기 값이 감소할수록 눈썹의 짙기가 짙어짐을 의미한다.
눈썹 부위 사진은 VISIA® CR (Canfield, USA)을 사용하여 촬영하였다.
효능에 관한 설문평가는 제품 사용 4주 및 8주 후 시점에서, 사용성에 관한 설문평가는 제품 사용 8주 후 시점에서 5지선다(1, 매우 그렇지 않다; 2, 그렇지 않다; 3, 변화 없음; 4, 그렇다; 5, 매우 그렇다/1, 매우 좋지 않다; 2, 좋지 않은 편이다; 3, 보통이다; 4, 좋은 편이다; 5, 매우 좋다) 설문 형태로 실시하여 긍정적인 답변(4, 5)을 분석하였다.
이상반응 평가는 각 평가시점에서 시험자의 문진과 관찰을 통해 피부 자극감과 객관적 피부 자극을 확인하여 기록하였다. 이상반응 발생시 피험자에 대한 의학적 처치나 결정은 의사의 책임 하에 이루어졌다.
모든 데이터는 SPSS Package Program(IBM, USA)을 이용하여 통계적 유의성을 분석하였다. 정규성은 Shapiro-Wilks test 를 통해 검증하였고 p 값이 0.05 이상일 때 정규분포를 만족하는 것으로 판단하였다. 시점별 전후 변화를 분석 하기 위해 모수일 경우는 반복측정 분산 분석법(Repeated Measures ANOVA)을 적용하였고, 비모수일 경우는 Wilcoxon signed-ranks test를 적용하였다. 모든 데이터는 평균(mean)과 표준편차(SD)로 표시하였고 , 통계학적 유의수준은 0.05로 설정하여 유의 확률(p 값)이 0.05 미만일 때 시점 간에 차이가 있다고 판단하였다.
(3) 결과
눈썹 볼륨(면적) 분석 결과를 도 6에 나타냈으며, 일부 피험자의 눈썹 촬영 사진을 도 7에 나타내었다. 도 6에 나타난 바와 같이, 제품 사용 전과 비교시 제품 사용 8주 후 시점에서 눈썹 볼륨이 유의하게 증가하였다(p<0.05). 상세하게는, 여성 피험자의 경우, 눈썹 볼륨(면적)이 사용 4주 후 및 8주 후 모두에서 유의적으로 증가되었으나, 남성의 경우에는 시간이 지남에 따라 눈썹 볼륨(면적)이 증가되는 경향이 보였으나 통계 처리상 유의적인 것으로 나타나지는 않았다.
눈썹 짙기 분석 결과는, 제품 사용 전과 비교시 제품 사용 8주 후 시점에서 개선되는 경향을 보였으나 유의한 차이는 없었다(데이터 미기재).
효능 설문평가 결과, 모든 항목에 대하여 제품 사용 4주 후 시점에서 '눈썹 빠짐' 및 '전체 만족도' 항목에 대하여 피험자의 약 55%가 긍정적으로 응답하였고, 제품 사용 8주 후 시점에서 '눈썹 풍성함', '눈썹 빠짐' 및 '전체 만족도' 항목에 대하여 피험자의 약 64 ~ 73 %가 긍정적으로 응답하였다.
사용성 설문평가 결과, 모든 항목에 대하여 피험자의 약 50 ~ 68 %가 긍정적으로 응답하였다.
본 시험 기간 동안 피험자에게서 이상반응은 관찰되지 않았다.
이상의 결과, 실시예의 크림 제형은 눈썹 볼륨(면적) 개선에 도움을 주는 것으로 나타났다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.
본 발명의 범위는 후술하는 청구범위에 의하여 나타내어지며, 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (15)

  1. 수세미 수액 또는 그 유효성분을 포함하는 눈썹 발모 촉진용 약학 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 수세미 수액이 조성물 총 부피에 대하여 7.5~100 %(v/v)로 포함되는 것을 특징으로 하는 눈썹 발모 촉진용 약학 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 수세미 수액이 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸을 포함하는 것을 특징으로 하는 눈썹 발모 촉진용 약학 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 유효성분이 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염인 것을 특징으로 하는 눈썹 발모 촉진용 약학 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 유효성분이 0.1 μM 이상으로 포함되는 것을 특징으로 하는 눈썹 발모 촉진용 약학 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 눈썹 발모 촉진이 혈관신생 자극을 통한 탈모 완화에 의한 눈썹 발모 촉진인 것을 특징으로 하는 눈썹 발모 촉진용 약학 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 약학 조성물이 피부 외용제인 것을 특징으로 하는 눈썹 발모 촉진용 약학 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 상기 약학 조성물이 크림 제형인 것을 특징으로 하는 눈썹 발모 촉진용 약학 조성물.
  9. 수세미 수액 또는 그 유효성분을 포함하는 눈썹 발모 촉진용 화장료 조성물.
  10. 제9항에 있어서, 상기 수세미 수액이 조성물 총 부피에 대하여 7.5~100 %(v/v)로 포함되는 것을 특징으로 하는 눈썹 발모 촉진용 화장료 조성물.
  11. 제9항에 있어서, 상기 수세미 수액이 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸을 포함하는 것을 특징으로 하는 눈썹 발모 촉진용 화장료 조성물.
  12. 제9항에 있어서, 상기 유효성분이 5-아미노-4-브로모-3-메틸이속사졸 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염인 것을 특징으로 하는 눈썹 발모 촉진용 화장료 조성물.
  13. 제9항에 있어서, 상기 유효성분이 0.1 μM 이상으로 포함되는 것을 특징으로 하는 눈썹 발모 촉진용 화장료 조성물.
  14. 제9항에 있어서, 상기 눈썹 발모 촉진이 혈관신생 자극을 통한 탈모 완화에 의한 눈썹 발모 촉진인 것을 특징으로 하는 눈썹 발모 촉진용 화장료 조성물.
  15. 수세미 수액 또는 그 유효성분을 포함하는 눈썹 발모 촉진용 식품 조성물.
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