KR20230022829A

KR20230022829A - Rna 결합 단백질 또는 rna 변형 단백질을 표적으로 하는 화합물

Info

Publication number: KR20230022829A
Application number: KR1020227034193A
Authority: KR
Inventors: 안나 엠. 에릭슨; 쇼미르 고쉬; 대런 마틴 하비
Original assignee: 트웬티에잇-세븐, 인크.
Priority date: 2020-03-03
Filing date: 2021-03-02
Publication date: 2023-02-16
Also published as: MX2022010957A; BR112022017574A2; EP4114831A1; WO2021178420A1; CA3170415A1; CN116157392A; TW202146398A; JP2023517539A; IL296137A; AU2021231765A1

Abstract

본 발명은 하기 화학식 (I)로 표시되는 화합물:

또는 그의 약제학상 허용되는 염, 그를 포함하는 조성물 및 그의 제조 및 사용 방법에 관한 것이다. 변수는 본원에 설명되어 있다.

Description

RNA 결합 단백질 또는 RNA 변형 단백질을 표적으로 하는 화합물

관련 출원

본 출원은 2020년 3월 3일에 출원된 미국 가출원 일련 번호 62/984,677의 이익을 주장하며, 그 전체 교시 내용이 본원에 참조로 포함된다.

RNA-결합 단백질 및 RNA-변형 단백질은 RNA 스플라이싱, 수송, 번역 및 국소화와 같은 전사후 유전자 조절 과정에서 중요한 역할을 한다. 최근 연구에 따르면 이러한 단백질 중 일부의 조절되지 않은 발현이 암과 같은 질환 발생을 유발할 수 있음이 입증되었다.

Let 7 miRNA는 종양유전자인 K-Ras, c-myc, 및 HMGA2를 표적으로 하는 miRNA의 종양억제제로 알려져 있다. 다수의 인간 암 세포주 및 원발성 종양은 낮은 수준의 let-7 패밀리 miRNA를 발현한다. 증가된 let-7 발현이 폐암 및 유방암의 마우스 모델에서 암 성장을 효과적으로 억제할 수 있음이 입증되었다. Lin28 단백질은 세포에서 let-7 miRNA 수준을 조절하는 데 중요한 역할을 한다. Lin28B는 핵에서 기능하고 1차 let-7 전사체를 격리함으로써 miRNA 마이크로프로세서를 억제한다. 대조적으로, let-7 발현의 Lin28A 매개 억제는 let-7 전구체 RNA로의 3' 말단 우리딜릴 트랜스퍼라제 (TUTase)(예를 들어, Zcchc11/TUTase4/TUT4/Z11 또는 Zcchc6/TUTase7/TUT7/Z6)의 동원을 포함하여, 세포질에서 Dicer에 의한 처리를 차단한다. TUTase 활성은 let-7 생합성의 Lin28 매개 억제에 필요하다. Zcchc11 발현은 정상 조직과 비교하여 원발성 인간 간 및 결장직장 종양에서 상향 조절되는 것으로 밝혀졌다. 또한 Zcchc11 녹다운은 마우스 이종이식 모델에서 인간 유방, 난소, 흑색종, 전립선, 및 간암 세포의 종양 형성 및 간암 세포의 폐 전이를 억제하는 것으로 나타났다.

이와 같이, let 7 miRNA에 의해 매개되는 질환 또는 장애를 치료하기 위해 TUTase 활성을 조절하는 표적 요법이 필요하다.

본 발명은 TUTase Zcchc11 (또는 Z11) 활성을 조절할 수 있는 화합물을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 Z11 TUTase에 대한 억제 활성을 갖는다. 본 발명의 화합물은 퀴놀론 항생제와 유사한 퀴놀론 코어를 갖는다. 그러나, 본 발명의 특정 화합물은 감소되거나 최소의 항생제 활성을 나타낸다.

제1 측면에서, 본 발명은 하기 화학식 (I)로 표시되는 화합물:

또는 그의 약제학상 허용되는 염에 관한 것이고, 여기서:

W는 -CH₂Y-R³, -S(O)₂R³, -SCH₂R³, Y-R³, -OC(=O)NR¹¹R¹²또는 -N(C=O)NR¹¹R¹²이고;

V는 -C(=O)-, -S(=O)₂- 또는 CR¹³R¹⁴이고;

X는 CR⁴R⁵, NR⁶ 또는 O이고;

Y는 NR⁷ 또는 O이고;

Z는 CR⁸ 또는 N이고;

R¹은 할로, -CN, -OR^1a _,-C≡CH, C_3-6카르보사이클릴, 또는 C_1-6알킬이고, 여기서 C_1-6알킬은 하나 이상의 R¹⁰으로 임의로 치환되고;

R^1a는 H이거나 또는 하나 이상의 R¹⁰으로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;

R¹⁰은, 각각의 경우에 대해, 할로, -CN 및 -OR^10a로부터 독립적으로 선택되고;

R^10a는, 각각의 경우에 대해, H 및 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택되고;

R²는 -CN,-CHR^zCN, -C(O)NH_2,-CHR^zC(O)NH₂, 3- 내지 12-원 카르보사이클릴,-(CHR^z)-(3- 내지 12-원 카르보사이클릴), 3- 내지 12-원 헤테로사이클릴, 또는 -(CHR^z)-(3 내지 12-원 헤테로사이클릴)이고, 여기서 R²로 표시되거나, 또는 R²로 표시되는 기 중 3 내지 12-원 카르보사이클릴 및 3 내지 12-원 헤테로사이클릴은 하나 이상의 R²⁰으로 임의로 치환되고, R^z는 H 또는 메틸이고;

R²⁰은, 각각의 경우에 대해, H, 할로, CN, 옥소, -C(O)R^20a, -C(O)₂R^20a, -C(O)NR^20a, -N(R^20a)₂, -N(R^20a)C(O)R^20a, -N(R^20a)C(O)₂R^20a, -N(R^20a)C(O)N(R^20a)₂, -N(R^20a)S(O)₂R^20a, -OR^20a, -OC(O)R^20a, -OC(O)N(R^20a)₂, -SR^20a, -S(O)₂R^20a, -S(O)N(R^20a) ₂, -S(O)₂N(R^20a)₂, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R²⁰으로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클은 각각 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환되고;

R^20a는, 각각의 경우에 대해, H, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R^20a으로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환되거나, 또는 2개의 R^20a는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환된 4- 내지 7-원 헤테로사이클릴을 형성하고;

R²⁵는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, C_1-6알킬, 할로,-C=O,-C(O)O(C₁-C₆ 알킬), OH로 임의로 치환된 4- 내지 6-원 헤테로사이클릴, -N(R^25a)₂, -OR^25a, C_1-6알킬, 할로, -N(R^25a)₂ 또는 -OR^25a로 임의로 치환된 페닐이고;

R^25a는 H, C_1-6알킬이거나; 또는 2개의 R^25a는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 4- 내지 7-원 헤테로사이클릴을 형성하고, 여기서 C_1-6알킬은 -OCH₃로 임의로 치환되고;

R³은 3 내지 12-원 카르보사이클릴 또는 3 내지 12-원 헤테로사이클릴이고, 여기서 R³으로 표시되는 3 내지 12-원 카르보사이클릴 및 3 내지 12-원 헤테로사이클릴은 하나 이상의 R³⁰으로 임의로 치환되고;

R³⁰은, 각각의 경우에 대해, H, 할로, 옥소, -CN, -C(O)R^30a, -C(O)₂R^30a, -C(O)NR^30a, -N(R^30a)₂, -N(R^30a)C(O)R^30a, -N(R^30a)C(O)₂R^30a, -N(R^30a)C(O)N(R^30a)₂, -N(R^30a)S(O)₂R^30a, -OR^30a, -OC(O)R^30a, -OC(O)N(R^30a)₂, -SR^30a, -S(O)₂R^30a, -S(O)N(R^30a) ₂, -S(O)₂N(R^30a)₂, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R³⁰으로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R³⁵로 임의로 치환되고;

R^30a는, 각각의 경우에 대해, H, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R^30a로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R³⁵로 임의로 치환되고;

R³⁵는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, -NH₂, C_1-6알킬, 할로 및 -OR^35a이고;

R^35a는 H 또는 C_1-6알킬이고;

대안적으로, Y가 NR⁷일 때, R⁷ 및 R³은 R⁷이 부착된 N 원자와 함께 또는 이상의 R³⁰로 임의로 치환된 4 내지 12-원 헤테로사이클릴을 형성할 수 있고;

R⁴, R⁵, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷ 및 R¹⁸은 각각 H, C_1-6알킬, 할로, -NHC(O)CH₃, 4- 내지 6-원 카르보사이클릴, 또는 4- 내지 6-원 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 C_1-6알킬은 할로로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되고, 여기서 헤테로사이클릴 및 카르보사이클릴은 할로, -CN, -OR^4a, C₁-C₆ 알킬 또는 =O (카르보사이클릴 또는 헤테로사이클릴이 비-방향족일 때)로 임의로 치환거나, 또는 여기서 R¹⁵및 R¹⁶을 함께 취하거나 또는 R¹⁷및 R¹⁸을 함께 취하여 =NOH 또는 =NHOCH₃이고;

R^4a는 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;

R⁶은 H이거나 또는 할로, -CN 및 -OR^6a로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;

R^6a는 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;

R⁷은 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;

R⁸은 H, 할로, -CN, -OR^8a 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;

R^8a는 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;

R⁹, R¹³ 및 R¹⁴는 각각 H, C_1-6알킬, 및 C_3-6사이클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 C_1-6알킬 및 C_3-6사이클로알킬은 각각 할로, -CN, -OR^9a및 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되고;

R^9a는 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;

R¹¹ 및 R¹²는 각각 독립적으로 H 또는 C_1-6알킬이거나, 또는 R¹¹ 및 R¹²는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 C_1-6알킬, 할로, -OH, 및 C_1-6알콕시로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴을 형성하거나;

또는 R⁴, R⁵, R⁹, R¹³, R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷ 및 R¹⁸중 임의의 2개가 함께 할로, -OR^a, -N(R^a)₂ 및 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된 -C_1-5알킬렌-을 형성하거나;

또는 R⁴ 및 R¹⁵는 이들의 개재 탄소 원자와 함께 취하여 페닐 또는 6원 헤테로아릴을 형성하고;

R^a는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6 알킬이고;

R^19a및 R^19b는 각각 독립적으로 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이거나, 또는 R^19a 및 R^19b는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 -C(=O)을 형성하거나; 또는

하나의 R²⁰ 기 및 하나의 R³⁰기는 함께 취하여 -O-CH₂CH₂-O- 또는 -O-CH₂CH₂-NH-를 형성하고;

n1은 0, 1 또는 2이고;

n2는 0, 1 또는 2이고, 단 X가 NR⁶ 또는 O일 때, n1 및 n2는 0일 수 없다.

제2 측면에서, 본 발명은 하기 화학식 (I')로 표시되는 화합물,

또는 그의 약제학상 허용되는 염에 관한 것이고, 여기서:

W는 Y-R³, -OC(=O)NR¹¹R¹²또는 -N(C=O)NR¹¹R¹²이고;

V는 -C(=O)-, -S(=O)₂- 또는 CR¹³R¹⁴이고;

X는 CR⁴R⁵, NR⁶ 또는 O이고;

Y는 NR⁷ 또는 O이고;

Z는 CR⁸ 또는 N이고;

R¹은 할로, CN, -OR^1a _,-C≡CH, 또는 C_1-6알킬이고, 여기서 C_1-6알킬은 하나 이상의 R¹⁰으로 임의로 치환되고;

R¹⁰은, 각각의 경우에 대해, 할로, CN 및 OR^10a로부터 독립적으로 선택되고;

R²는 3 내지 12-원 카르보사이클릴 또는 3 내지 12-원 헤테로사이클릴이고, 여기서 R²로 표시되는 3 내지 12-원 카르보사이클릴 및 3 내지 12-원 헤테로사이클릴은 하나 이상의 R²⁰으로 임의로 치환되고;

R²⁰은, 각각의 경우에 대해, H, 할로, CN, 옥소, -C(O)R^20a, -C(O)₂R^20a, -C(O)NR^20a, -N(R^20a)₂, -N(R^20a)C(O)R^20a, -N(R^20a)C(O)₂R^20a, -N(R^20a)C(O)N(R^20a)₂, -N(R^20a)S(O)₂R^20a, -OR^20a, -OC(O)R^20a, -OC(O)N(R^20a)₂, -SR^20a, -S(O)₂R^20a, -S(O)N(R^20a) ₂, -S(O)₂N(R^20a)₂, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R²⁰으로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환되고;

R^20a는, 각각의 경우에 대해, H, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R^20a로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환거나, 또는 2개의 R^20a는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환된 4- 내지 7-원 헤테로사이클릴을 형성하고;

R²⁵는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, C_1-6알킬, 할로, -N(R^25a)₂, -OR^25a, C_1-6알킬, 할로, -N(R^25a)₂ 또는 -OR^25a로 임의로 치환된 페닐이고;

R^25a는 H 또는 C_1-6알킬이고;

R³⁵는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, C_1-6알킬, 할로 및 -OR^35a이고;

R^35a는 H 또는 C_1-6알킬이고;

대안적으로, Y가 NR⁷일 때, R⁷ 및 R³은 R⁷이 부착된 N 원자와 함께 또는 이상의 R³⁰으로 임의로 치환된 4 내지 12-원 헤테로사이클릴을 형성할 수 있고;

R⁴, R⁵, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷ 및 R¹⁸은 각각 H, C_1-6알킬, 할로, -CN 및 -OR^4a로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 C_1-6알킬은 할로, CN 및 -OR^4a로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되고;

R⁶은 H이거나 또는 할로, CN 및 -OR^6a로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;

R⁸은 H, 할로, CN, -OR^8a이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;

R⁹, R¹³ 및 R¹⁴는 각각 H, C_1-6알킬 및 C_3-6사이클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 C_1-6알킬 및 C_3-6사이클로알킬은 각각 할로, CN, -OR^9a,및 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되고;

R¹¹ 및 R¹²는 각각 독립적으로 H 또는 C_1-6알킬이거나, 또는 R¹¹ 및 R¹²는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 C_1-6알킬, 할로, OH, 및 C_1-6알콕시로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴을 형성하거나;

또는 R⁴, R⁵, R⁹, R¹³, R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷ 및 R¹⁸중 임의의 2개가 함께 할로, -OR^a, -N(R^a)₂ 및 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된 -C_1-5알킬렌-을 형성하고;

R^19a및 R^19b는 각각 독립적으로 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이거나, 또는 R^9a 및 R^9b는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 -C(=O)-를 형성하고;

n1은 0, 1 또는 2이고;

제3 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 화합물, 또는 그의 염 (예를 들어, 약제학상 허용되는 염)을 포함하는 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)을 제공한다. 조성물은 또한 담체 (예를 들어, 약제학상 허용되는 담체)를 포함할 수 있다.

제4 측면에서, 본 발명은 또한 치료적 유효량의 본원에 개시된 화합물, 또는 그의 염 (예를 들어, 약제학상 허용되는 염)을 이를 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 포함하고, 여기서 질환 또는 장애는 Z11 TUTase에 의해 매개되는 것이다. 또한, 본 발명은 대상체에서 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 본 명세서에 개시된 화합물 또는 그의 염 (예를 들어, 약제학상 허용되는 염)을 포함하고, 여기서 질환 또는 장애는 Z11 TUTase에 의해 매개되는 것이다. 본 발명은 또한 대상체에서 질환 또는 장애를 치료하기 위한 약제의 제조를 위한 본원에 개시된 화합물 또는 그의 염 (예를 들어, 약제학상 허용되는 염)의 용도를 포함하며, 여기서 질환 또는 장애는 Z11 TUTase에 의해 매개되는 것이다.

이제 본 발명의 특정 실시양태를 상세히 참조할 것이며, 그 예는 첨부된 구조 및 화학식에 예시되어 있다. 본 발명은 열거된 실시양태와 관련하여 설명될 것이지만, 그것들은 본 발명을 그러한 실시양태로 제한하도록 의도되지 않는다는 것이 이해될 것이다. 반대로, 본 발명은 청구범위에 의해 정의된 본 발명의 범위 내에 포함될 수 있는 모든 대안, 수정 및 균등물을 포함하도록 의도된다. 당업자는 본 발명의 실시에 사용될 수 있는 본 명세서에 기재된 것과 유사하거나 등가인 많은 방법 및 재료를 인식할 것이다. 정의된 용어, 용어 사용, 기술된 기술 등을 포함하지만 이에 국한되지 않는 통합된 문헌 참고물, 특허 또는 유사한 자료 중 하나 이상이 본 출원과 상이하거나 모순되는 경우, 본 출원이 우선한다.

본 발명의 상이한 측면 (예를 들어, 화합물, 조성물, 제조 및 사용 방법) 및 명세서의 상이한 부분 하에 기재된 것을 포함하는 본원에 기재된 임의의 실시양태는 명시적으로 부인되거나 부적절하지 않는 한, 하나 이상의 본 발명의 다른 실시양태와 조합될 수 있다. 실시양태의 조합은 다수의 종속항을 통해 청구된 특정 조합으로 제한되지 않는다.

정의 및 일반 용어

본원에 사용된 용어 "알킬"은 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 완전히 포화된 분지형 또는 비분지형 탄화수소 모이어티를 지칭한다. 바람직하게는 알킬은 1 내지 6개의 탄소 원자, 또는 1 내지 4개의 탄소 원자를 포함한다. 알킬의 대표적인 예는 메틸, 에틸, 1-프로필, 2-프로필, 1-부틸, 2-메틸-1-프로필, 2-부틸, 2-메틸-2-프로필, 1-펜틸, 2-펜틸, 3-펜틸, 2-메틸-2-부틸, 3-메틸-2-부틸, 3-메틸-1-부틸, 2-메틸-1-부틸, 1-헥실, 2-헥실, 3-헥실, 2-메틸-2-펜틸, 3-메틸-2-펜틸, 4-메틸-2-펜틸, 3-메틸-3-펜틸, 2-메틸-3-펜틸, 2,3-디메틸- 2-부틸, 3,3-디메틸-2-부틸, 1-헵틸, 1-옥틸 등을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.

기의 탄소 원자의 수는 여기에서 접두사 "C_x-xx"로 지정되며, 여기서 x 및 xx는 정수이다. 예를 들어, "C_1-4알킬"은 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 알킬 기이다.

본 명세서에 사용된 "알킬렌"은 1 내지 20개의 탄소 원자의 포화 선형 또는 분지쇄 2가 탄화수소 라디칼 (C_1-20)을 지칭하며, 그 예로는 상기 예시된 바와 같은 알킬기의 동일한 코어 구조를 갖는 것들이 포함되나 이에 제한되지는 않는다. "2가"는 알킬렌이 분자의 나머지 부분에 대한 2개의 부착 지점을 갖는다는 것을 의미한다. 바람직하게는, 알킬렌은 1 내지 16개의 탄소 원자 (C_1-16) 또는 1 내지 10개의 탄소 원자 (C_1-10)를 갖는다. 보다 바람직하게는, 알킬렌은 1 내지 7개의 탄소 원자 (C_1-7), 1 내지 6개의 탄소 원자 (C_1-6), 1 내지 5개의 탄소 원자 (C_1-5), 1 내지 4개의 탄소 원자 (C_1-4) 또는 1 내지 3개의 탄소 원자 (C_1-3)를 갖는다. 특정 실시양태에서, 알킬렌은 바람직하게는 -(CH₂)-, -(CH₂)₂- 또는 -(CH₂)₃-이다.

본원에 사용된 용어 "카르보사이클릴"은 3 내지 12개의 고리 탄소 원자를 갖는 포화 또는 불포화 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 (예를 들어, 융합, 가교 또는 스피로 바이사이클릭) 탄화수소 고리를 지칭한다. 용어 "카르보사이클릴"은 사이클로알킬 기 및 방향족 기 (즉, 아릴)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 카르보사이클릴은 3- 내지 7-원 모노사이클릭 카르보사이클릴이다. 예시적인 3- 내지 7-원 모노사이클릭 카보사이클릴은 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 사이클로프로페닐, 사이클로부테닐, 사이클로페네틸, 사이클로헥세닐, 사이클로헵테닐, 사이클로부타디에닐, 사이클로펜타디에닐, 사이클로헥사디에닐, 사이클로헵타디에닐, 페닐 및 사이클로헵타트리에닐을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.

용어 "사이클로알킬"은 3 내지 12개의 고리 탄소 원자, 3 내지 8개의 고리 탄소 원자, 3 내지 6개의 고리 탄소 원자, 또는 5 내지 7개의 고리 탄소 원자를 갖는 완전히 포화된 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 (예를 들어, 융합, 가교, 또는 스피로 바이사이클릭) 탄화수소 고리를 지칭한다. 예시적인 바이사이클릭 카르보사이클릴 기는 바이사이클로[2.1.1]헥실, 바이사이클로[2.2.1]헵틸, 바이사이클로[2.2.1]헵테닐, 6,6-디메틸바이사이클로[3.1.1]헵틸, 또는 2,6,6-트리메틸바이사이클로[3.1.1]헵틸, 스피로[2.2]펜타닐, 및 스피로[3.3]헵타닐을 포함한다. 모노사이클릭 사이클로알킬 기의 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 사이클로옥틸, 사이클로노닐, 사이클로데실, 사이클로운데실, 사이클로도데실 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 바람직하게는, 사이클로알킬은 3 내지 8원 모노사이클릭 고리, 3 내지 7원 모노사이클릭 고리 또는 3 내지 6원 모노사이클릭 고리이다. 훨씬 더 바람직하게는, 사이클로알킬은 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 또는 사이클로헥실이다.

용어 "아릴"은 6 내지 14개의 탄소 고리 원자를 갖는 방향족 탄화수소 고리 시스템을 지칭한다. 용어 "아릴"은 용어 "아릴 고리", "방향족 고리", "아릴 기" 및 "방향족 기"와 상호교환적으로 사용될 수 있다. "아릴기"는 또한 사이클로알킬기와 같은 비방향족 카르보사이클릭 고리 시스템에 융합된 방향족 탄화수소 고리 시스템을 포함한다. 예에는 페닐, 나프틸, 안트라세닐, 1,2-디하이드로나프틸, 1,2,3,4-테트라하이드로나프틸, 플루오레닐, 인다닐, 인데닐 등이 포함된다. 아릴 기는 1가, 즉, 분자의 나머지 부분에 대한 하나의 부착 지점이 있다. "치환된 아릴 기"는 수소에 결합된 고리 탄소 원자인 임의의 하나 이상의 치환 가능한 고리 원자에서 치환된다. 바람직하게는, 아릴은 페닐이다.

본원에 사용된 용어 "알콕시"는 R이 상기 정의된 바와 같은 알킬인 -OR 기를 지칭한다. 바람직하게는, 알킬기는 1 내지 16개의 탄소 원자 (C_1-16) 또는 1 내지 10개의 탄소 원자 (C_1-10)를 갖는다. 보다 바람직하게는, 알킬기는 1 내지 8개의 탄소 원자 (C_1-8), 1 내지 7개의 탄소 원자 (C_1-7), 1 내지 6개의 탄소 원자 (C_1-6), 1 내지 4개의 탄소 원자 (C_1-4) 또는 1 내지 3개의 탄소 원자 (C_1-3)를 갖는다. 비제한적인 예는 -OCH₃, -OCH₂CH₃, -OCH₂CH₂CH₃, -OCH(CH₃)₂, -OCH(CH₂)₂, -O-사이클로프로필, -O-사이클로부틸, -O-사이클로펜틸 및 -O-사이클로헥실을 포함한다.

용어 "헤테로사이클", "헤테로사이클릴", "헤테로사이클릭" 및 "헤테로사이클릭 고리"는 본원에서 상호교환가능하게 사용되며 적어도 하나의 헤테로원자, 예를 들어 N, O 또는 S를 함유하고 방향족 (헤테로아릴) 또는 비방향족일 수 있는 사이클릭 기를 지칭한다. 이는 3 내지 12개의 고리 구성원, 바람직하게는 4 내지 12개의 고리 구성원, 3 내지 7개의 고리 구성원, 3 내지 6개의 고리 구성원, 4 내지 7개의 고리 구성원, 5 내지 7개의 고리 구성원, 또는 4 내지 6개의 고리 구성원을 갖는 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 (예를 들어, 융합, 가교 또는 스피로 바이사이클릭 고리)일 수 있으며, 이들 중 적어도 하나는 헤테로원자이고, 그 중 4개까지 (예를 들어, 1, 2, 3, 또는 4개) 헤테로원자일 수 있으며, 여기서 헤테로원자는 O, S 및 N으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 C는 산화 (예를 들어, C(O))될 수 있고, N은 산화 (예를 들어, N(O)) 또는 4차화될 수 있고, S는 임의로 설폭사이드 및 설폰으로 산화될 수 있다. 불포화 헤테로사이클릭 고리는 헤테로아릴 고리를 포함한다.

한 실시양태에서, 헤테로사이클릴은 O, S 및 N으로부터 선택된 1 내지 2개의 헤테로원자를 갖는 3- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴 (포화 또는 부분 불포화 (즉, 비-방향족))이다. 3- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴의 예에는 아지리디닐, 옥시라닐, 티라닐, 옥사지리디닐, 아제티디닐, 옥세타닐, 티에타닐, 피롤리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 티올라닐, 이미다졸리디닐, 피라졸리디닐, 옥사졸리디닐, 이속사졸리디닐, 티아졸리디닐, 이소티아졸리디닐, 디옥솔라닐, 디티올라닐, 옥사티올라닐, 피페리디닐, 테트라하이드로피라닐, 티아닐, 피페라지닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 디옥사닐, 디티아닐, 트리옥사닐, 트리티아닐, 아제파닐, 옥세파닐, 티에파닐, 디하이드로푸라닐, 이미다졸리닐, 및 디하이드로피라닐이 포함되지만 이들로 제한되지는 않는다. 한 실시양태에서, 헤테로사이클릴은 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴 (포화 또는 부분 불포화 (즉, 비-방향족))이다. 한 실시양태에서, 헤테로사이클릴은 5- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴 (포화 또는 부분 불포화)이다.

한 실시양태에서, 헤테로사이클릴은 O, S 및 N으로부터 선택된 1 내지 2개의 헤테로원자를 갖는 4- 내지 6-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴 (포화 또는 부분 불포화)이다. 4- 내지 6-원 모노사이클릭 헤테로사이클릭의 예에는 아제티디닐, 피롤리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 티올라닐, 이미다졸리디닐, 피라졸리디닐, 옥사졸리디닐, 이속사졸리디닐, 티아졸리디닐, 이소티아졸리디닐, 디옥솔라닐, 디티올라닐, 옥사티올라닐, 피페리디닐, 테트라하이드로피라닐, 티아닐, 피페라지닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 디옥사닐, 디티아닐, 디하이드로푸라닐, 이미다졸리닐, 디하이드로피라닐, 피롤릴, 푸라닐, 티오페닐 (또는 티에닐), 이미다졸릴, 피라졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 푸라자닐, 옥사디아졸릴, 티아디아졸릴, 디티아졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 피리디닐, 피라닐, 티오피라닐, 피라지닐, 피리미디닐, 피리다지닐, 옥사지닐, 티아지닐, 디옥시닐, 디티이닐, 옥사티아닐, 트리아지닐, 및 테트라지닐을 포함하지만 이들로 제한되지는 않는다.

또 다른 실시양태에서, 헤테로사이클릴은 4- 내지 6-원 포화 모노사이클릭 헤테로사이클릴이다. 한 실시양태에서, 4- 내지 6-원 포화 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 O, S 및 N으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 2개의 헤테로원자를 함유한다. 포화 4- 내지 6-원 모노사이클릭 헤테로사이클릭 고리 시스템의 예에는 아제티디닐, 피롤리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 티올라닐, 이미다졸리디닐, 피라졸리디닐, 옥사졸리디닐, 이속사졸리디닐, 티아졸리디닐, 이소티아졸리디닐, 디옥솔라닐, 디티올라닐, 옥사티올라닐, 피페리디닐, 테트라하이드로피라닐, 티아닐, 피페라지닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 디옥사닐, 및 디티이닐을 포함하지만 이들로 제한되지는 않는다. 한 실시양태에서, 포화 4- 내지 6-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 아제티디닐, 옥세타닐, 피롤리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 티올라닐, 이미다졸리디닐, 피라졸리디닐, 옥사졸리디닐, 이속사졸리디닐, 티아졸리디닐, 이소티아졸리디닐, 디옥솔라닐, 디티올라닐, 옥사티올라닐, 피페리디닐, 테트라하이드로피라닐, 티아닐, 피페라지닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 또는 디옥시닐이다. 또 다른 실시양태에서, 포화 4- 내지 6-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 옥세타닐, 테트라하이드로푸라닐, 또는 테트라하이드로피라닐이다.

한 실시양태에서, 헤테로사이클릴은 7 내지 10-원 포화 또는 부분 포화 바이사이클릭 (예를 들어, 융합, 가교 또는 스피로) 헤테로사이클릴이다. 한 실시양태에서, 7 내지 10-원 포화 또는 부분 포화 바이사이클릭 헤테로사이클릴은 카르보사이클 또는 헤테로사이클에 융합된 모노사이클릭 헤테로사이클을 갖는 융합된 바이사이클릭 헤테로사이클릴이고, 여기서 고리 중 적어도 하나는 비-방향족이다. 7 내지 10-원 포화 또는 부분 포화 융합된 바이사이클릭 헤테로사이클릴의 예에는 2,3-디하이드로벤조푸라닐, 인돌리닐 (또는 2,3-디하이드로인돌릴), 2,3-디하이드로벤조티오페닐, 2,3-디하이드로벤조티아졸릴, 1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀리닐, 1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀리닐, 5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-b]피라지닐, 1,3-디하이드로이소벤조푸라닐, 및 이소크로마닐을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 한 실시양태에서, 7 내지 10-원 포화 또는 부분 포화 바이사이클릭 헤테로사이클릴은 스피로 바이사이클릭 헤테로사이클릴, 예컨대 옥사스피로[2.4]헵타닐, 2,6-디아자스피로[3.3]헵타닐, 옥사-6-아자스피로[3.3]헵타닐, 2,2,6-디아자스피로[3.3]헵타닐, 3-아자스피로[5.5]운데카닐, 3,9-디아자스피로[5.5]운데카닐, 7-아자스피로[3.5]노나닐, 2,6-디아자스피로[3.4]옥타닐, 8-아자스피로[4.5]데카닐, 1,6-디아자스피로[3.3]헵타닐, 5-아자스피로[2.5]옥타닐, 4,7-디아자스피로[2.5]옥타닐, 5-옥사-2-아자스피로[3.4]옥타닐, 6-옥사-1-아자스피로[3.3]헵타닐, 3-아자스피로[5.5]운데카닐, 3,9-디아자스피로[5.5]운데카닐 등이다. 한 실시양태에서, 7 내지 10-원 포화 또는 부분 포화 바이사이클릭 헤테로사이클릴은 2-아자스피로[3.3]헵탄-6-일이다.

본원에 사용된 "헤테로아릴"은 "헤테로방향족", "헤테로아릴 고리", "헤테로아릴 기", "헤테로방향족 고리" 및 "헤테로방향족 기"와 상호교환적으로 사용될 수 있다. 이는 탄소 및 적어도 하나 (일반적으로 1 내지 4개, 보다 일반적으로 1 또는 2개)의 헤테로원자 (예를 들어 산소, 질소 또는 황)로부터 선택된 5 내지 14개의 고리 원자를 갖는 방향족 고리 시스템을 지칭한다. "헤테로아릴"은 모노사이클릭 고리 및 모노사이클릭 헤테로방향족 고리가 하나 이상의 다른 방향족 또는 헤테로방향족 고리에 융합된 폴리사이클릭 고리 (예를 들어, 바이사이클릭)를 포함한다. 바람직하게는, 헤테로아릴은 5 내지 10-원이다.

한 실시양태에서, 헤테로아릴은 "5 또는 6-원 모노사이클릭 헤테로아릴"이며, 이는 탄소 및 적어도 하나 (일반적으로 1 내지 3개, 보다 일반적으로 1 또는 2개)의 헤테로원자 (예를 들어, 산소, 질소 또는 황)으로부터 선택된 5 또는 6개의 고리 원자를 갖는 모노사이클릭 방향족 고리 시스템을 의미한다. 5 또는 6-원 모노사이클릭 헤테로아릴의 예는 푸라닐 (예를 들어, 2-푸라닐, 3-푸라닐), 이미다졸릴 (예를 들어, N-이미다졸릴, 2-이미다졸릴, 4-이미다졸릴, 5-이미다졸릴), 이속사졸릴 (예를 들어, 3-이속사졸릴, 4-이속사졸릴, 5-이속사졸릴), 옥사디아졸릴 (예를 들어, 2-옥사디아졸릴, 5-옥사디아졸릴), 옥사졸릴 (예를 들어, 2-옥사졸릴, 4-옥사졸릴, 5-옥사졸릴), 피라졸릴 (예를 들어, 3-피라졸릴, 4-피라졸릴), 피롤릴 (예를 들어, 1-피롤릴, 2-피롤릴, 3-피롤릴), 피리디닐 (또는 피리딜, 예를 들어, 2-피리딜, 3-피리딜, 4-피리딜), 피리미디닐 (예를 들어, 2-피리미디닐, 4-피리미디닐, 5-피리미디닐), 피리다지닐 (예를 들어, 3-피리다지닐), 티아졸릴 (예를 들어, 2-티아졸릴, 4-티아졸릴, 5-티아졸릴), 이소티아졸릴, 트리아졸릴 (예를 들어, 2-트리아졸릴, 5-트리아졸릴), 테트라졸릴 (예를 들어, 테트라졸릴), 티에닐 (예를 들어, 2-티에닐, 3-티에닐), 피라닐, 티오피라닐, 피라지닐, 옥사지닐, 티아지닐, 디옥시닐, 디티이닐, 옥사티아닐, 트리아지닐 및 테트라지닐을 포함한다. 바람직하게는, 5 또는 6-원 모노사이클릭 헤테로아릴은 피리디닐, 피리다지닐, 또는 피라지닐이다.

한 실시양태에서, 헤테로아릴은 "9 또는 10-원 바이사이클릭 헤테로아릴"이며, 이는 탄소 및 적어도 하나 (일반적으로 1 내지 3개, 보다 일반적으로 1 또는 2개)의 헤테로원자 (예를 들어, 산소, 질소 또는 황)으로부터 선택된 9 또는 10개의 고리 원자를 갖고, 모노사이클릭 헤테로방향족 고리가 방향족 또는 헤테로방향족 고리에 융합된 바이사이클릭 방향족 고리 시스템을 지칭한다. 9 또는 10-원 바이사이클릭 헤테로아릴의 예에는 아자인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 벤조푸릴, 벤조이속사졸릴, 벤조이소티아졸릴, 벤조티아디아졸릴, 벤조티아졸릴, 벤조티에닐, 벤조트리아졸릴, 벤족사디아졸릴, 벤족사졸릴, 푸로피리디닐, 이미다조피리딜, 이미다조피리미디닐, 인다졸릴, 인돌리지닐, 인돌릴, 이소퀴놀리닐, 옥사졸로피리디닐, 퓨리닐, 피라졸로피리미디닐, 피라졸로피라지닐, 피리도피아지닐, 피리도피리미디닐, 피롤로[2,3]피리미디닐, 피롤로피라졸릴, 피롤로이미다졸릴, 피롤로트리아졸릴, 퀴나졸리닐, 퀴녹살리닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 티아졸로피리디닐, 티에노피리디닐, 티에노피리미디닐, 티에노피라지닐, 나프티리딜 등을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다. 바람직하게는, 9 또는 10-원 바이사이클릭 헤테로아릴은 인돌릴, 인다졸릴, 또는 벤즈이미다졸릴이다.

본원에 사용된 용어 "융합 고리 시스템"은 각각 카르보사이클릴 또는 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되는 2개의 고리를 갖는 고리 시스템이며, 여기서 2개의 고리 구조는 2개의 인접한 고리 원자를 공유한다. 한 실시양태에서, 융합된 고리 시스템은 9 내지 12개의 고리 구성원을 갖는다.

본원에 사용된 용어 "가교된 고리 시스템"은 고리의 인접하지 않은 2개의 원자가 C, N, O, 및 S로부터 선택된 하나 이상 (바람직하게는 1 내지 3개)의 원자에 의해 연결 (가교)된 카르보사이클릴 또는 헤테로사이클릴 고리를 갖는 고리 시스템이다. 한 실시양태에서, 가교된 고리 시스템은 6 내지 12개의 고리 구성원을 갖는다.

본원에 사용된 용어 "스피로 고리 시스템"은 각각 독립적으로 카르보사이클릴 또는 헤테로사이클릴로부터 선택되는 2개의 고리를 갖는 고리 시스템이며, 여기서 2개의 고리 구조는 하나의 고리 원자를 공통으로 갖는다. 한 실시양태에서, 스피로 고리 시스템은 5 내지 12개의 고리 구성원을 갖는다.

헤테로사이클 또는 헤테로아릴 기는 가능한 경우 부착된 탄소 (탄소-결합) 또는 질소 (질소-결합)일 수 있다. 비제한적인 예로서, 탄소 결합된 헤테로사이클 또는 헤테로아릴 기는 피리딘의 위치 2, 3, 4, 5 또는 6, 피리다진의 위치 3, 4, 5 또는 6, 피리미딘의 위치 2, 4, 5 또는 6, 피라진의 위치 2, 3, 5 또는 6, 푸란, 테트라하이드로푸란, 티오펜, 피롤 또는 테트라하이드로피롤의 위치 2, 3, 4 또는 5, 옥사졸, 이미다졸 또는 티아졸의 위치 2, 4 또는 5, 이속사졸, 피라졸 또는 이소티아졸의 위치 3, 4 또는 5, 아지리딘의 위치 2 또는 3, 아제티딘의 위치 2, 3 또는 4, 퀴놀린의 위치 2, 3, 4, 5 , 6, 7 또는 8, 또는 이소퀴놀린의 위치 1, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8에서 결합된다.

비제한적인 예로서, 질소 결합된 헤테로사이클 또는 헤테로아릴 헤테로아릴렌 기는 아지리딘, 아제티딘, 피롤, 피롤리딘, 2-피롤린, 3-피롤린, 이미다졸, 이미다졸리딘, 2-이미다졸린, 3-이미다졸린, 피라졸, 피라졸린, 2-피라졸린, 3-피라졸린, 피페리딘, 피페라진, 인돌, 인돌린, 1H-인다졸의 위치 1, 이소인돌 또는 이소인돌린의 위치 2, 또는 모르폴린의 위치 4에서 결합된다.

헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴에 존재하는 헤테로원자는 NO, SO 및 SO₂와 같은 산화된 형태를 포함할 수 있다.

본원에 사용된 용어 "할로겐" 또는 "할로"는 F, Cl, Br 또는 I를 지칭한다. 바람직하게는, 할로는 F, Cl 또는 Br이다.

기가 "임의로 치환된" 것으로 기술되는 경우, 그 기는 (1) 치환되지 않거나 (2) 치환될 수 있다. 기의 탄소가 치환기 목록 중 하나 이상으로 임의로 치환되는 것으로 기술되는 경우, 탄소 상의 수소 원자 중 하나 이상 (존재하는 정도까지)은 개별적으로 및/또는 함께 독립적으로 선택된 임의의 치환기로 대체될 수 있다. 기가 하나 이상의 치환기로 치환되는 경우, 이는 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 그 이상의 독립적으로 선택된 치환기로 치환될 수 있다. 특정 실시양태에서, 이는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 독립적으로 선택된 치환기로 치환될 수 있다. 특정 실시양태에서, 이는 1, 2 또는 3개의 독립적으로 선택된 치환기로 치환될 수 있다.

알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 카르보사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 및 헤테로사이클릴에 대한 적합한 치환기는 이작용성 화합물의 생물학적 활성에 유의하게 악영향을 미치지 않는 것들이다. 달리 명시되지 않는 한, 이들 기에 대한 예시적인 치환기는 1 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 선형, 분지형 또는 사이클릭 알킬, 알케닐 또는 알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클릴, 할로겐, 구아니디늄 [-NH(C=NH)NH₂], -OR¹⁰⁰, NR¹⁰¹R¹⁰², -NO₂, -NR¹⁰¹COR¹⁰², -SR¹⁰⁰, -SOR¹⁰¹로 표시되는 설폭사이드, -SO₂R₁₀₁로 표시되는 설폰, 설포네이트 -SO₃M, 설페이트 -OSO₃M, -SO₂NR¹⁰¹R¹⁰²로 표시되는 설폰아미드, 시아노, 아지도, -COR¹⁰¹, -OCOR¹⁰¹, -OCONR¹⁰¹R¹⁰² 및 폴리에틸렌 글리콜 단위 (-OCH₂CH₂)_nR¹⁰¹를 포함하고, 여기서, M은 H 또는 양이온 (예를 들어, Na⁺ 또는 K⁺)이고; R¹⁰¹, R¹⁰²및 R¹⁰³은각각 H, 1 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 선형, 분지형 또는 사이클릭 알킬, 알케닐 또는 알키닐, 폴리에틸렌 글리콜 단위 (-OCH₂CH₂)_n-R¹⁰⁴, 여기서 n은 1 내지 24의 정수임, 6 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 아릴, 3 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 헤테로사이클릭 고리 및 5 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되고; R¹⁰⁴는 H이거나 또는 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분지형 알킬이고, 여기서 R¹⁰⁰, R¹⁰¹, R¹⁰², R¹⁰³및 R¹⁰⁴로 표시되는 기의 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릴은 할로겐, -OH, -CN, -NO₂, 및 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 비치환된 선형 또는 분지형 알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6개 또는 그 이상)의 치환기로 임의로 치환된다. 바람직하게는, 전술한 임의로 치환된 알킬, 알킬렌, 사이클로알킬렌, 아릴렌, 및 헤테로아릴렌에 대한 치환기는 할로겐, -CN, -NR¹⁰¹R¹⁰², -CF₃, -OR¹⁰⁰, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클릴, -SR¹⁰¹, -SOR¹⁰¹, -SO₂R¹⁰¹, 및 -SO₃M으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 대안적으로, 적합한 치환기는 -할로겐, -OH, -NO₂, -CN, C_1-4 알킬, -OR¹⁰⁰, NR¹⁰¹R¹⁰², -NR¹⁰¹COR¹⁰², -SR^100, -SO₂R¹⁰¹, -SO₂NR¹⁰¹R¹⁰², -COR¹⁰¹, -OCOR¹⁰¹, 및 -OCONR¹⁰¹R¹⁰²으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 R¹⁰⁰, R¹⁰¹, 및 R¹⁰²는각각 독립적으로 -H 또는 C_1-4 알킬이다.

본원에 사용된 바와 같이, x와 y "사이"의 정수는 달리 명시되지 않는 한 정수 x 및 y를 포함한다. 예를 들어, "1과 5 사이의 정수"는 1, 2, 3, 4 또는 5일 수 있다.

본원에 사용된 용어 "염"은 본 발명의 이작용성 화합물의 유기 또는 무기 염을 지칭한다. 바람직하게는, 염은 약제학상 허용되는 염이다. 다른 약제학상 허용되지 않는 염도 본 발명에 포함된다. 염은 염기성 기를 포함하는 본 발명의 이작용성 화합물을 무기산 또는 유기산 (예를 들어, 카르복실산)과 반응시켜 형성된 염, 및 산성 기를 포함하는 본 발명의 이작용성 화합물을 무기 염기 또는 유기 염기 (예를 들어, 아민)와 반응시켜 형성된 염을 포함한다. 예시적인 염은 바로 하기에 기술되는 약제학상 허용되는 염을 포함한다.

본원에 사용된 용어 "약제학상 허용되는 염"은 본 발명의 이작용성 화합물의 약제학상 허용되는 유기 또는 무기 염을 지칭한다. 예시적인 염은 설페이트, 시트레이트, 아세테이트, 옥살레이트, 클로라이드, 브로마이드, 요오다이드, 니트레이트, 바이설페이트, 포스페이트, 산성 포스페이트, 이소니코티네이트, 락테이트, 살리실레이트, 산성 시트레이트, 타르트레이트, 올레이트, 탄네이트, 판토테네이트, 바이타르트레이트, 아스코르베이트, 석시네이트, 말레에이트, 겐티시네이트, 푸마레이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 사카레이트, 포르메이트, 벤조에이트, 글루타메이트, 메탄설포네이트 "메실레이트," 에탄설포네이트, 벤젠설포네이트, p-톨루엔설포네이트, 파모에이트 (즉, 1,1'-메틸렌-비스-(2-하이드록시-3-나프토에이트)) 염, 알칼리 금속 (예를 들어, 나트륨 및 칼륨) 염, 알칼리 토금속 (예를 들어, 마그네슘) 염, 및 암모늄 염을 포함하지만 이들로 제한되지는 않는다. 약제학상 허용되는 염은 아세테이트 이온, 석시네이트 이온 또는 기타 반대 이온과 같은 다른 분자의 포함을 포함할 수 있다. 반대 이온은 모 화합물의 전하를 안정화시키는 임의의 유기 또는 무기 모이어티일 수 있다. 더욱이, 약제학상 허용되는 염은 그 구조에 하나 이상의 하전된 원자를 가질 수 있다. 여러 개의 하전된 원자가 약제학상 허용되는 염의 일부인 경우는 여러 개의 반대 이온을 가질 수 있다. 따라서, 약제학상 허용되는 염은 하나 이상의 하전된 원자 및/또는 하나 이상의 반대 이온을 가질 수 있다.

본 발명의 화합물이 하나 이상의 염기성 모이어티를 함유하는 경우, 원하는 염 (예를 들어, 약제학상 허용되는 염)은 당업계에서 이용가능한 임의의 적합한 방법, 예를 들어 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 메탄설폰산, 인산 등과 같은 무기산, 또는 아세트산, 말레산, 석신산, 만델산, 푸마르산, 말론산, 피루브산, 옥살산, 글리콜산, 살리실산, 글루쿠론산 또는 갈락투론산과 같은 피라노시딜산, 시트르산 또는 타르타르산과 같은 알파 하이드록시산, 아스파르트산 또는 글루탐산과 같은 아미노산, 벤조산 또는 신남산과 같은 방향족 산, p-톨루엔설폰산 또는 에탄설폰산과 같은 설폰산 등과 같은 유기산으로 유리 염기를 처리하여 제조될 수 있다.

본 발명의 화합물이 하나 이상의 산성 모이어티를 함유하는 경우, 원하는 염 (예를 들어, 약제학상 허용되는 염)은 임의의 적합한 방법, 예를 들어 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물과 같은 무기물, 아민 (1차, 2차 또는 3차) 등과 같은 유기 염기로 유리 산을 처리하여 제조할 수 있다. 적합한 염의 예시적인 예로는 아미노산, 예컨대 글리신 및 아르기닌, 암모니아, 1차, 2차, 및 3차 아민, 및 사이클릭 아민, 예컨대 피페리딘, 모르폴린 및 피페라진에서 유래된 유기 염, 및 나트륨, 칼슘, 칼륨, 마그네슘, 망간, 철, 구리, 아연, 알루미늄 및 리튬에서 유래된 무기 염이 포함되나 이에 제한되지는 않는다.

"약제학상 허용되는"이라는 문구는 물질 또는 조성물이 제제를 포함하는 다른 성분 및/또는 이에 의해 치료되는 포유동물과 화학적 및/또는 독성학적으로 양립가능해야 함을 나타낸다.

용어 "치료하다", "치료" 또는 "치료하는"은 질환 또는 장애, 또는 이의 하나 이상의 증상을 역전시키거나, 완화시키거나, 발병 가능성을 감소시키거나, 진행을 억제하는 것을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 치료는 하나 이상의 증상이 발생한 후에 투여, 즉 치료적 치료일 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료는 증상의 부재하에 투여될 수 있다. 예를 들어, 치료는 (예를 들어, 증상의 이력에 비추어 및/또는 유전적 또는 다른 감수성 인자에 비추어) 증상의 발병 전에 감수성인 대상체에게 투여, 즉 예방적 치료일 수 있다. 예를 들어, 증상의 재발을 예방하거나 지연시키기 위해 증상이 해결된 후에도 치료를 계속할 수 있다.

용어 "유효량"은 구체적으로 언급된 목적, 예를 들어 Z11의 활성 억제를 수행하기에 충분한 활성 화합물의 양을 지칭한다.

용어 "치료학적 유효량"은 대상체에서 원하는 생물학적 반응을 유도, 예를 들어 대상체에서 질환 또는 장애를 "치료"하는 활성 화합물의 양을 의미한다. 이러한 반응에는 치료 중인 질환 또는 장애의 증상 완화, 질환의 증상 또는 질환 자체의 재발 억제 또는 지연, 치료의 부재와 비교하여 대상체의 수명 증가, 또는 질환 또는 질환 자체의 증상 진행의 예방, 억제 또는 지연을 포함한다. 치료적 유효량의 결정은 특히 본원에 제공된 상세한 개시내용에 비추어 당업자의 능력 내에서 충분히 가능하다. 본 발명의 화합물의 독성 및 치료 효능은 세포 배양 및 실험 동물에서 표준 약학적 절차에 의해 결정될 수 있다. 대상체에게 투여되는 본 발명의 화합물 또는 다른 치료제의 치료학적 유효량은 질환의 병기, 범주 및 상태 및 대상체의 특성, 예컨대 일반적인 건강, 연령, 성별, 체중 및 약물 내성에 따라 달라질 것이다. 투여될 본 발명의 화합물 또는 다른 치료제의 치료학적 유효량은 또한 투여 경로 및 투여 형태에 따라 달라질 것이다. 투여량 및 간격은 원하는 치료 효과를 유지하기에 충분한 활성 화합물의 혈장 수준을 제공하도록 개별적으로 조정될 수 있다.

예시적인 화합물

첫 번째 측면에서, 본 발명은 화학식 (I) 또는 (I')로 표시되는 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염에 관한 것이며, 여기서 변수는 화학식 (I) 또는 (I')에 대해 상기 기재된 것이다.

특정 실시양태에서, 상기 기재된 화학식 (I) 및 (I')의 화합물에 대해, R⁴, R⁵, R⁹, R¹³, R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷ 및 R¹⁸중 임의의 2개는 함께 할로 및 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된 -C_1-5알킬렌-을 형성한다. 예를 들어, R¹³ 및 R¹⁵는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 변수 V 및 X를 함유하는 고리와 융합된 사이클로알킬을 형성할 수 있다. 또 다른 예에서, R¹³및 R⁹는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 및 변수 V 및 X를 함유하는 고리는 가교된 바이사이클릭 고리를 형성한다.

제1 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 하기 화학식 (Ia) 또는 (Ib)으로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염이고, 여기서:

X는 CR⁴R⁵, NR⁶ 또는 O이고;

Y는 NR⁷ 또는 O이고;

Z는 CR⁸ 또는 N이고;

R¹은 할로, CN, -OR^1a, -C≡CH, 또는 C_1-6알킬이고, 여기서 C_1-6알킬은 하나 이상의 R¹⁰으로 임의로 치환되고;

R^20a는, 각각의 경우에 대해, H, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R^20a로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환되거나, 또는 2개의 R^20a는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환된 4- 내지 7-원 헤테로사이클릴을 형성하고;

R^25a는 H 또는 C_1-6알킬이고;

R^35a는 H 또는 C_1-6알킬이고;

R⁴ 및 R⁵는 각각 H, C_1-6알킬, 할로, -CN 및 -OR^4a로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 C_1-6알킬은 할로, CN 및 -OR^4a로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되고;

R⁸은 H, 할로, CN, -OR^8a 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;

n1은 0, 1 또는 2이고;

n2는 0, 1 또는 2이거나,

또는, 화학식 (I) 또는 (Ia)의 경우, R⁴, R⁵, R⁹, R¹³, R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷ 및 R¹⁸ 중 임의의 2개는 함께 할로, -OR^a, -N(R^a)₂ 및 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된 -C_1-5알킬렌-을 형성하고; 여기서 R^a는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6 알킬이다.

제2 실시양태에서, 제1 측면 또는 제1 실시양태에 기재된 화학식 (I), (I'), (Ia), 또는 (Ib), 또는 그의 약제학상 허용되는 염의 경우, X는 CH₂이고; 나머지 변수는 제1 측면 또는 제1 실시양태에서 정의된 바와 같다.

제3 실시양태에서, 제1 측면 또는 제1 또는 제2 실시양태에 기재된 화학식 (I), (I'), (Ia), 또는 (Ib), 또는 그의 약제학상 허용되는 염의 경우, n1 및 n2는 둘다 0이거나; n1 및 n2는 둘다 1이거나; n1은 0이고 n2은 1이거나; 또는 n1은 1이고 n2는 0이고; 나머지 변수는 제1 측면 또는 제1 또는 제2 실시양태에서 정의된 바와 같다.

제4 실시양태에서, 제1 측면 또는 제1 또는 제2 실시양태에 기재된 화학식 (I), (I'), (Ia), 또는 (Ib), 또는 그의 약제학상 허용되는 염의 경우, X는 O이고; n1 및 n2는 둘다 1이고; 나머지 변수는 제1 측면 또는 제1 실시양태에서 정의된 바와 같다.

제5 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (IIa) 또는 (IIb)의 화합물:

또는 그의 약제학상 허용되는 염을 제공하고, 여기서 변수는 제1 실시양태에서 화학식 (Ia) 또는 (Ib)에 대해 기술된 것이다.

제6 실시양태에서, 화학식 (IIa) 또는 (IIb)의 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염은 각각 하기 화학식 (II-1a) 또는 (II-1b)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염이고, 여기서 변수는 제5 실시양태에서 화학식 (IIa) 또는 (IIb)에 대해 정의된 바와 같다.

구체적인 실시양태에서, 제5 또는 제6 실시양태에 기재된 화학식 (IIa), (IIb), (II-1a) 또는 (II-1b), 또는 그의 약제학상 허용되는 염의 경우, Y는 NH 또는 O이고; 변수는 제5 또는 제6 실시양태에서와 같다.

제7 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (IIIa) 또는 (IIIb)의 화합물:

또는 그의 약제학상 허용되는 염을 제공하고, 여기서 변수는 제1 실시양태에서 화학식 (Ia) 또는 (Ib)에 대해 정의된 바와 같다.

제8 실시양태에서, 화학식 (IIIa) 또는 (IIIb)의 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염은 각각 하기 화학식 (IIIa-1a) 또는 (III-1b)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염이고, 여기서 변수는 제7 실시양태에서 정의된 바와 같다.

제9 실시양태에서, 제7 실시양태에 기재된 화학식 (IIIa) 또는 (IIIb)의 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염은 하기 화학식 (IVa) 또는 (IVb)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염이고, 여기서 변수는 제7 실시양태에서 화학식 (IIIa) 또는 (IIIb)에 대해 정의된 바와 같다.

제10 실시양태에서, 제9 실시양태에 기재된 화학식 (IVa) 또는 (IVb)의 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염은 하기 화학식 (IV-1a) 또는 (IV-1b)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염이고, 여기서 변수는 제9 실시양태에서 화학식 (IVa) 또는 (IVb)에 대해 정의된 바와 같다.

제11 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 약제학상 허용되는 염 (예를 들어, 화학식 (I), (I'), (Ia), (Ib), (IIa), (IIb), (II-1a), (II-1b), (IIIa), (IIIb), (III-1a), (III-1b), (IVa), (IVb), (IV-1a) 및 (IV-1b)의 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염)의 경우, R⁸은 H, 할로, 또는 OR^8a이고; 나머지 변수는 제1 측면에서 또는 제1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 실시양태 또는 거기에 기재된 임의의 구체적인 실시양태에서 정의된 바와 같다.

제12 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 약제학상 허용되는 염 (예를 들어, 화학식 (I), (I'), (Ia), (Ib), (IIa), (IIb), (II-1a), (II-1b), (IIIa), (IIIb), (III-1a), (III-1b), (IVa), (IVb), (IV-1a) 및 (IV-1b)의 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염)의 경우, R⁸은 H, F, Cl 또는 -OCH₃이고; 나머지 변수는 제1 측면에서 또는 제1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 실시양태 또는 거기에 기재된 임의의 구체적인 실시양태에서 정의된 바와 같다. 구체적인 실시양태에서, R⁸은 H이다.

제13 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 약제학상 허용되는 염 (예를 들어, 화학식 (I), (I'), (Ia), (Ib), (IIa), (IIb), (II-1a), (II-1b), (IIIa), (IIIb), (III-1a), (III-1b), (IVa), (IVb), (IV-1a) 및 (IV-b)의 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염)의 경우, R¹은 F, Cl, Br, CN, -OR⁹또는 C_1-6알킬이고; 나머지 변수는 제1 측면에서 또는 제1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12 실시양태 또는 거기에 기재된 임의의 특정 실시양태에서 정의된 바와 같다. 특정 실시양태에서, R¹은 Cl, Br, CN, -OR⁹또는 C_1-6알킬이다. 보다 구체적인 실시양태에서, R¹는 Cl, CN 또는 CH₃이다.

제14 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식으로 표시되는 화합물:

또는 그의 약제학상 허용되는 염을 제공하고, 여기서 R⁸은 H 또는 F이고; 나머지 변수는 제1 실시양태에서 정의된 바와 같다.

제15 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식으로 표시되는 화합물:

또는 그의 약제학상 허용되는 염을 제공하고, 여기서 변수는 제14 실시양태에서 정의된 바와 같다.

제16 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 약제학상 허용되는 염 (예를 들어, 화학식 (I), (I'), (Ia), (Ib), (IIa), (IIb), (II-1a), (II-1b), (IIIa), (IIIb), (III-1a), (III-1b), (IVa), (IVb), (IV-1a), (IV-1b), (IVAa), (IVBa), (IVCa), (IVDa), (IVAb), (IVBb), (IVCb), (IVDb), (IVA-1a), (IVB-1a), (IVC-1a), (IVD-1a), (IVA-1b), (IVB-1b), (IVC-1b), 또는 (IVD-1b)의 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염)의 경우, R³은 페닐, 5 또는 6-원 모노사이클릭 헤테로아릴 또는 9 또는 10-원 바이사이클릭 헤테로아릴이고, 여기서 R³으로 표시되는 페닐, 5 또는 6-원 모노사이클릭 헤테로아릴 및 9 또는 10-원 바이사이클릭 헤테로아릴은 각각 1 내지 3개의 R³⁰으로 임의로 치환되고; 나머지 변수는 제1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15 실시양태 또는 거기에 기재된 임의의 특정 실시양태에서 정의된 바와 같다.

제17 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 약제학상 허용되는 염 (예를 들어, 화학식 (I), (I'), (Ia), (Ib), (IIa), (IIb), (II-1a), (II-1b), (IIIa), (IIIb), (III-1a), (III-1b), (IVa), (IVb), (IV-1a), (IV-1b), (IVAa), (IVBa), (IVCa), (IVDa), (IVAb), (IVBb), (IVCb), (IVDb), (IVA-1a), (IVB-1a), (IVC-1a), (IVD-1a), (IVA-1b), (IVB-1b), (IVC-1b), 또는 (IVD-1b))의 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염)의 경우, R³은 페닐, 피리디닐, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 1H-피롤로[2,3-c]피리디닐 또는 1H-이미다조[4,5-c]피리디닐이고, 이들 각각은 1 내지 3개의 R³⁰으로 임의로 치환되고; 나머지 변수는 제16 실시양태에서 정의된 바와 같다.

제18 실시양태에서, 제16 또는 제17 실시양태에 기재된 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염의 경우, R³⁰은, 각각의 경우에 대해, H, 할로, CN, -C(O)NR^30a, -N(R^30a)₂, -N(R^30a)C(O)R^30a, -N(R^30a)S(O)₂R^30a, -OR^30a, 및 C_1-6알킬이고, 여기서 C_1-6알킬은 1 내지 3개의 R³⁵로 임의로 치환되고;

R^30a은, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H이거나 또는 1 내지 3개의 R³⁵로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;

R³⁵는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, 할로 및 -OR^35a이고;

R^35a는 H 또는 C_1-3알킬이고; 나머지 변수는 제16 또는 제17 실시양태에서 정의된 바와 같다.

구체적인 실시양태에서, 제18 실시양태에 기재된 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염의 경우, R³⁰은, 각각의 경우에 대해, H, 할로, CN, -OR^30a 및 1 내지 3개의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고; R^30a는 H이거나 또는 1 내지 3개의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고; 나머지 변수는 제18 실시양태에서 정의된 바와 같다.

또 다른 구체적인 실시양태에서, 제18 실시양태에 기재된 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염의 경우, R³⁰은, 각각의 경우에 대해, H, F, Cl, Br, CN, -OCH₃, -CH₃, -CH₂CH₃ 또는 -CF₃이고; 나머지 변수는 제18 실시양태에서 정의된 바와 같다.

제19 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 약제학상 허용되는 염 (예를 들어, 화학식 (I), (I'), (Ia), (Ib), (IIa), (IIb), (II-1a), (II-1b), (IIIa), (IIIb), (III-1a), (III-1b), (IVa), (IVb), (IV-1a), (IV-1b), (IVAa), (IVBa), (IVCa), (IVDa), (IVAb), (IVBb), (IVCb), (IVDb), (IVA-1a), (IVB-1a), (IVC-1a), (IVD-1a), (IVA-1b), (IVB-1b), (IVC-1b), 또는 (IVD-1b)의 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염)의 경우, R³은 3-클로로피리딘-2-일, 3-메틸피리딘-2-일, 3-브로모피리딘-2-일, 3-시아노피리딘-2-일, 3-에틸피리딘-2-일, 3-플루오로피리딘-2-일, 3-메톡시피리딘-2-일, 3-트리플루오로메틸피리딘-2-일, 피리딘-2-일, 1H-피롤로[2,3-c]피리딘-5-일, 1H-피롤로[2,3-c]피리딘-7-일, 1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-일, 1H-이미다조[4,5-c]피리딘-4-일, 2,6-디메틸페닐, 페닐, 피라드진-3-일, 피리미딘-4-일, 5-메틸피리딘-2-일, 4-메틸피리딘-2-일, 피리미딘-2-일, 피라진-2-일, 피리다진-3-일, 및 피리딘-3-일로부터 선택되고, 나머지 변수는 제1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15 실시양태 또는 거기에 기재된 임의의 구체적인 실시양태에서 정의된 바와 같다.

제20 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (Va) 또는 (Vb)로 표시되는 화합물:

또는 그의 약제학상 허용되는 염을 제공하고, 여기서 m은 0, 1 또는 2이고; 나머지 변수는 제1 측면 또는 제1, 11, 12 또는 13 실시양태 또는 거기에 기재된 임의의 구체적인 실시양태에서 정의된 바와 같다.

제21 실시양태에서, 화학식 (Va) 또는 (Vb)의 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염은 하기 화학식 (V-1a) 또는 (V-1b)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염이고, 여기서 변수는 제20 실시양태에서 정의된 바와 같다.

제22 실시양태에서, 화학식 (Va) 또는 (Vb)의 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염은 하기 화학식 (VAa), (VBa), (VCa), (VDa), (VAb), (VBb), (VCb) 또는 (VDb)로 표시되거나:

제23 실시양태에서, 화학식 (Va) 또는 (Vb)의 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염은 하기 화학식 (VA-1a), (VB-1a), (VC-1a), (VD-1a), (VA-1b), (VB-1b), (VC-1b) 또는 (VD-1b)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염이고, 여기서 R⁸은 H 또는 F이고; 나머지 변수는 제20 실시양태에서 정의된 바와 같다.

제24 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (VIa) 또는 (VIb)의 화합물:

또는 그의 약제학상 허용되는 염을 제공하고, 여기서 R³⁰은 H, 할로, CN, -OR^30a, 및 1 내지 3개의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고; R^30a는 H이거나 또는 1 내지 3개의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고; 나머지 변수는 제20 실시양태에서 정의된 바와 같다.

제25 실시양태에서, 화학식 (VIa) 또는 (VIb)의 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염은 하기 화학식 (VI-1a) 또는 (VI-1b)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염이고, 여기서 변수는 제24 실시양태에서 정의된 바와 같다.

제26 실시양태에서, 화학식 (VIa) 또는 (VIb)의 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염은 하기 화학식 (VIAa), (VIBa), (VICa), (VIDa), (VIAb), (VIBb), (VICb) 또는 (VIDb)로 표시되거나:

제27 실시양태에서, 화학식 (VIa) 또는 (VIb)의 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염은 하기 화학식 (VIA-1a), (VIB-1a), (VIC-1a), (VID-1a), (VIA-1b),(VIB-1b), (VIC-1b) 또는 (VID-1b)로 표시되거나:

제28 실시양태에서, 화학식 (Va), (Vb), (V-1a), (V-1b), (VAa), (VAb), (VBa), (VBb), (VCa), (VCb), (VDa), (VDb), (VA-1a), (VA-1b), (VB-1a), (VB-1b), (VC-1a), (VC-1b), (VID-1a), (VID-1b), (VIa), (VIb), (VI-1a), (VI-1b), (VIAa), (VIAb), (VIBa), (VIBb), (VICa), (VICb), (VIDa), (VIDb), (VIA-1a), (VIA-1b), (VIB-1a), (VIB-1b), (VIC-1a), (VIC-1b), (VID-1a) 또는 (VID-1b)의 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염의 경우, R³⁰은, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, F, Cl, Br, CN, -CH₃, -CH₂CH₃, -OCH₃, 또는 -CF₃이고; 나머지 변수는 제20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 또는 27 실시양태 또는 거기에 기재된 임의의 구체적인 실시양태에서 정의된 바와 같다.

제29 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 약제학상 허용되는 염 (예를 들어, 화학식 (I), (I'), (Ia), (Ib), (IIa), (IIb), (II-1a), (II-1b), (IIIa), (IIIb), (III-1a), (III-1b), (IVa), (IVb), (IV-1a), (IV-1b), (IVAa), (IVBa), (IVCa), (IVDa), (IVAb), (IVBb), (IVCb), (IVDb), (IVA-1a), (IVB-1a), (IVC-1a), (IVD-1a), (IVA-1b), (IVB-1b), (IVC-1b), (IVD-1b), (Va), (Vb), (V-1a), (V-1b), (VAa), (VAb), (VBa), (VBb), (VCa), (VCb), (VDa), (VDb), (VA-1a), (VA-1b), (VB-1a), (VB-1b), (VC-1a), (VC-1b), (VID-1a), (VID-1b), (VIa), (VIb), (VI-1a), (VI-1b), (VIAa), (VIAb), (VIBa), (VIBb), (VICa), (VICb), (VIDa), (VIDb), (VIA-1a), (VIA-1b), (VIB-1a), (VIB-1b), (VIC-1a), (VIC-1b), (VID-1a) 또는 (VID-1b)의 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염)의 경우:

R²는 C_3-8사이클로알킬, 페닐, 4 내지 6-원 포화 모노사이클릭 헤테로사이클릴, 7 내지 10-원 포화 또는 부분 포화된 바이사이클릭 헤테로사이클릴, 5 또는 6-원 모노사이클릭 헤테로아릴 또는 9 내지 10-원 포화 바이사이클릭 헤테로아릴이고, 이들 각각은 1 내지 3개의 R²⁰으로 임의로 치환되고;

R²⁰은, 각각의 경우에 대해, H, 할로, -CN, 옥소, -C(O)R^20a, -C(O)NR^20a, -N(R^20a)₂, -N(R^20a)C(O)R^20a, -N(R^20a)S(O)₂R^20a, -OR^20a, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 포화 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R²⁰으로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 포화 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 각각 1 또는 2개의 R²⁵로 임의로 치환되고;

R^20a는, 각각의 경우에 대해, H 및 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R^20a로 표시되는 C_1-6알킬은 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환되고;

R^25a는 H 또는 C_1-6알킬이고; 나머지 변수는 제1 측면 또는 제1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 또는 28 실시양태 또는 거기에 기재된 임의의 구체적인 실시양태에서 정의된 바와 같다.

제30 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 약제학상 허용되는 염 (예를 들어, 화학식 (I), (I'), (Ia), (Ib), (IIa), (IIb), (II-1a), (II-1b), (IIIa), (IIIb), (III-1a), (III-1b), (IVa), (IVb), (IV-1a), (IV-1b), (IVAa), (IVBa), (IVCa), (IVDa), (IVAb), (IVBb), (IVCb), (IVDb), (IVA-1a), (IVB-1a), (IVC-1a), (IVD-1a), (IVA-1b), (IVB-1b), (IVC-1b), (IVD-1b), (Va), (Vb), (V-1a), (V-1b), (VAa), (VAb), (VBa), (VBb), (VCa), (VCb), (VDa), (VDb), (VA-1a), (VA-1b), (VB-1a), (VB-1b), (VC-1a), (VC-1b), (VID-1a), (VID-1b), (VIa), (VIb), (VI-1a), (VI-1b), (VIAa), (VIAb), (VIBa), (VIBb), (VICa), (VICb), (VIDa), (VIDb), (VIA-1a), (VIA-1b), (VIB-1a), (VIB-1b), (VIC-1a), (VIC-1b), (VID-1a) 또는 (VID-1b)의 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염)의 경우, R²는 페닐이거나 또는 1 내지 3개의 질소 원자를 함유하는 6-원 모노사이클릭 헤테로아릴이고, 여기서 페닐 및 6-원 모노사이클릭 헤테로아릴은 각각 1 내지 3개의 R²⁰으로 임의로 치환되고; 나머지 변수는 제29 실시양태에서 정의된 바와 같다.

제31 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 약제학상 허용되는 염 (예를 들어, 화학식 (I), (I'), (Ia), (Ib), (IIa), (IIb), (II-1a), (II-1b), (IIIa), (IIIb), (III-1a), (III-1b), (IVa), (IVb), (IV-1a), (IV-1b), (IVAa), (IVBa), (IVCa), (IVDa), (IVAb), (IVBb), (IVCb), (IVDb), (IVA-1a), (IVB-1a), (IVC-1a), (IVD-1a), (IVA-1b), (IVB-1b), (IVC-1b), (IVD-1b), (Va), (Vb), (V-1a), (V-1b), (VAa), (VAb), (VBa), (VBb), (VCa), (VCb), (VDa), (VDb), (VA-1a), (VA-1b), (VB-1a), (VB-1b), (VC-1a), (VC-1b), (VID-1a), (VID-1b), (VIa), (VIb), (VI-1a), (VI-1b), (VIAa), (VIAb), (VIBa), (VIBb), (VICa), (VICb), (VIDa), (VIDb), (VIA-1a), (VIA-1b), (VIB-1a), (VIB-1b), (VIC-1a), (VIC-1b), (VID-1a) 또는 (VID-1b)의 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염)의 경우, R²은 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 페닐, 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 2-아자스피로[3.3]헵타닐, 1H-인돌릴, 2,3-디하이드로-1H-벤조[d]이미다졸릴, 1H-벤조[d]이미다졸릴, 1,3,4-티아디아졸릴, 인돌리닐, 테트라하이드로-2H-피라닐, 피리디닐, 피리다지닐, 피라지닐, 옥세타닐, 테트라하이드로-2H-피라닐, 1H-벤조[d]이미다졸릴, 1H-인다졸릴, 이소크로마닐, 및 1,3-디하이드로이소벤조푸라닐로부터 선택되고, 이들 각각은 1 또는 2개의 R²⁰으로 임의로 치환되고; 나머지 변수는 제29 실시양태에서 정의된 바와 같다.

제32 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 약제학상 허용되는 염 (예를 들어, 화학식 (I), (I'), (Ia), (Ib), (IIa), (IIb), (II-1a), (II-1b), (IIIa), (IIIb), (III-1a), (III-1b), (IVa), (IVb), (IV-1a), (IV-1b), (IVAa), (IVBa), (IVCa), (IVDa), (IVAb), (IVBb), (IVCb), (IVDb), (IVA-1a), (IVB-1a), (IVC-1a), (IVD-1a), (IVA-1b), (IVB-1b), (IVC-1b), (IVD-1b), (Va), (Vb), (V-1a), (V-1b), (VAa), (VAb), (VBa), (VBb), (VCa), (VCb), (VDa), (VDb), (VA-1a), (VA-1b), (VB-1a), (VB-1b), (VC-1a), (VC-1b), (VID-1a), (VID-1b), (VIa), (VIb), (VI-1a), (VI-1b), (VIAa), (VIAb), (VIBa), (VIBb), (VICa), (VICb), (VIDa), (VIDb), (VIA-1a), (VIA-1b), (VIB-1a), (VIB-1b), (VIC-1a), (VIC-1b), (VID-1a) 또는 (VID-1b)의 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염)의 경우, R²는 페닐, 피리디닐, 및 피라지닐로부터 선택되고, 이들 각각은 1 또는 2개의 R²⁰으로 임의로 치환되고; 나머지 변수는 제29 실시양태에서 정의된 바와 같다.

제33 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 약제학상 허용되는 염 (예를 들어, 화학식 (I), (I'), (Ia), (Ib), (IIa), (IIb), (II-1a), (II-1b), (IIIa), (IIIb), (III-1a), (III-1b), (IVa), (IVb), (IV-1a), (IV-1b), (IVAa), (IVBa), (IVCa), (IVDa), (IVAb), (IVBb), (IVCb), (IVDb), (IVA-1a), (IVB-1a), (IVC-1a), (IVD-1a), (IVA-1b), (IVB-1b), (IVC-1b), (IVD-1b), (Va), (Vb), (V-1a), (V-1b), (VAa), (VAb), (VBa), (VBb), (VCa), (VCb), (VDa), (VDb), (VA-1a), (VA-1b), (VB-1a), (VB-1b), (VC-1a), (VC-1b), (VID-1a), (VID-1b), (VIa), (VIb), (VI-1a), (VI-1b), (VIAa), (VIAb), (VIBa), (VIBb), (VICa), (VICb), (VIDa), (VIDb), (VIA-1a), (VIA-1b), (VIB-1a), (VIB-1b), (VIC-1a), (VIC-1b), (VID-1a) 또는 (VID-1b)의 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염)의 경우, R²는 하기 화학식으로 표시되고:

여기서 R²¹은 H, 할로, -CN, -C(O)R^20a, -C(O)NR^20a, -N(R^20a)₂, -N(R^20a)C(O)R^20a, -N(R^20a)S(O)₂R^20a, -OR^21a, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 포화 모노사이클릭 헤테로사이클릴이고, 여기서 R²¹로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 포화 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 각각 1 또는 2개의 R²⁵로 임의로 치환되고;

R^21a는 H 또는 C_1-6알킬이고, 여기서 R^21a로 표시되는 C_1-6알킬은 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환되고;

R²⁵는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 C_1-6알킬, 할로, -N(R^25a)₂, -OR^25a, C_1-6알킬, 할로, -N(R^25a)₂ 또는 -OR^25a로 임의로 치환된 페닐이고;

R^25a는 H 또는 C_1-6알킬이고;

R은 0, 1 또는 2이고; 나머지 변수는 제29 실시양태에서 정의된 바와 같다.

한 실시양태에서, 제33 실시양태에 기재된 화합물 또는 약제학상 허용되는 염의 경우, R^21a는 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고; 나머지 변수는 제33 실시양태에서 정의된 바와 같다.

또 다른 실시양태, 또는 제33 실시양태에 기재된 화합물 또는 약제학상 허용되는 염에서, R²¹은 H, -F, -Cl, -CH₃, -CH₂OH, -OCH₃, -OH, -OCH₂CH₂OCH₃, -OCH₂CH₂OH, -OCH₂CH₂N(CH₃)₂, (4-메톡시벤질)옥시, -NHCH₂CH₂OMe, -NHSO₂CH₃, 또는 -NHC(O)CH₃이고; 나머지 변수는 제33 실시양태에서 정의된 바와 같다.

제34 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 약제학상 허용되는 염 (예를 들어, 화학식 (I), (I'), (Ia), (Ib), (IIa), (IIb), (II-1a), (II-1b), (IIIa), (IIIb), (III-1a), (III-1b), (IVa), (IVb), (IV-1a), (IV-1b), (IVAa), (IVBa), (IVCa), (IVDa), (IVAb), (IVBb), (IVCb), (IVDb), (IVA-1a), (IVB-1a), (IVC-1a), (IVD-1a), (IVA-1b), (IVB-1b), (IVC-1b), (IVD-1b), (Va), (Vb), (V-1a), (V-1b), (VAa), (VAb), (VBa), (VBb), (VCa), (VCb), (VDa), (VDb), (VA-1a), (VA-1b), (VB-1a), (VB-1b), (VC-1a), (VC-1b), (VID-1a), (VID-1b), (VIa), (VIb), (VI-1a), (VI-1b), (VIAa), (VIAb), (VIBa), (VIBb), (VICa), (VICb), (VIDa), (VIDb), (VIA-1a), (VIA-1b), (VIB-1a), (VIB-1b), (VIC-1a), (VIC-1b), (VID-1a) 또는 (VID-1b)의 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염)의 경우, R²⁰은, 각각의 경우에 대해, -F, -OH, -Cl, -CH₃, -CH₂CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH, -CH₂CH₂N(CH₃)₂, -CF₃, -OCH₃, -OCH₂CH₂OCH₃, -OCH₂CH₂OH, -OCH₂CH₂N(CH₃)₂, (4-메톡시벤질)옥시, 옥소, -C(O)CH₃, -NH₂, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -N(CH₃)(CH₂CH₂OCH₃), -NHCH₂CH₂OMe, -NHCH₂CH₂NHCH₃, -NHCH₂CH₂N(CH₃)₂, -NHSO₂CH₃, -NHSO₂CH₂CH₃, -NHC(O)CH₃, 아제틴-일, 3-아미노아제이티딘-1-일, 피페리딘-1-일, 모르폴리닐, 및 피롤리딘-1-일로부터 독립적으로 선택되고; 나머지 변수는 제29, 30, 31, 32 또는 33 실시양태에서 정의된 바와 같다.

제35 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (VIIA-1a), (VIIB-1a), (VIIC-1a), (VIID-1a), (VIIA-1b), (VIIB-1b), (VIIC-1b), (VIID-1b)로 표시되는 화합물:

또는 그의 약제학상 허용되는 염을 제공하고, 여기서:

R³⁰은 H, 할로, CN, -OR^30a, 및 1 내지 3개의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고; R^30a는 H이거나 또는 1 내지 3개의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;

R²는 페닐이거나 또는 1 내지 3개의 질소 원자를 함유하는 6-원 모노사이클릭 헤테로아릴이고, 여기서 페닐 및 6-원 모노사이클릭 헤테로아릴은 각각 1 내지 3개의 R²⁰으로 임의로 치환되고;

R²⁰은, 각각의 경우에 대해, 할로, 및 -N(R^20a)₂로부터 독립적으로 선택되고;

R^20a는, 각각의 경우에 대해, H 및 C_1-3알킬로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 2개의 R^20a는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환된 4- 내지 7-원 헤테로사이클릴을 형성하고;

R²⁵는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, C_1-6알킬, 할로, -N(R^25a)₂, 또는 -OR^25a이고;

R^25a는 H 또는 C_1-6알킬이다.

제36 실시양태에서, 화학식 (VIIA-1a), (VIIB-1a), (VIIC-1a), (VIID-1a), (VIIA-1b), (VIIB-1b), (VIIC-1b), (VIID-1b)의 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염의 경우, R³⁰은 할로 또는 C_1-3알킬이고; R²는 페닐, 피리디닐 또는 피라지닐이고, 이들 각각은 -N(R^20a)₂로 임의로 치환되고; R^20a는, 각각의 경우에 대해, H 또는 메틸이거나, 또는 2개의 R^20a는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 하나의 R²⁵로 임의로 치환된 4- 내지 6-원 헤테로사이클릴을 형성하고; R²⁵는 -N(R^25a)₂이고; R^25a는 H 또는 Me이고; 나머지 변수는 제35 실시양태에서 정의된 바와 같다. 구체적인 실시양태에서, R³⁰은 Cl 또는 메틸이고; R²는 페닐, 피리딘-3-일, 또는 피라진-2-일이고, 이들 각각은 -NH₂, 아제틴-1-일, 3-아미노아제틴-1-일 또는 3-(디메틸아미노)아제틴-1-일로 임의로 치환된다.

제37 실시양태에서, 제5 내지 제36 실시양태 중 어느 하나에 기재된 화학식 (I), (I'), (IIa), (II-1a), (IIIa), (III-1a), (IVa), (IV-1a), (IVAa), (IVBa), (IVCa), (IVDa), (IVA-1a), (IVB-1a), (IVC-1a), (IVD-1a), (Va), (V-1a), (VAa), (VBa), (VCa), (VDa), (VA-1a), (VB-1a), (VC-1a), (VD-1a), (VIa), (VI-1a), (VIAa), (VIBa), (VICa), (VIDa), (VIA-1a), (VIB-1a), (VIC-1a), (VID-1a), (VIIA-1a), (VIIB-1a), (VIIC-1a), 또는 (VIID-1a)의 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염의 경우, R⁴, R⁵, R¹³, R¹⁴, R¹⁷ 및 R¹⁸은 모두 H이고, R⁹는 C_1-6알킬 또는 C_3-6사이클로알킬이고, 여기서 C_1-6알킬 및 C_3-6사이클로알킬은 각각 할로, CN, -OR^9a및 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되고; 여기서 R^9a는 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고; 나머지 변수는 제5 내지 제36 실시양태에서 정의된 바와 같다. 구체적인 실시양태에서, R⁹는 1 내지 3개의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이다. 보다 구체적인 실시양태에서, R⁹는 -CH₃이다.

제38 실시양태에서, 제5 내지 제36 실시양태 중 어느 하나에 기재된 화학식 (I), (I'), (Ia), (IIa), (II-1a), (IIIa), (III-1a), (IVa), (IV-1a), (IVAa), (IVBa), (IVCa), (IVDa), (IVA-1a), (IVB-1a), (IVC-1a), (IVD-1a), (Va), (V-1a), (VAa), (VBa), (VCa), (VDa), (VA-1a), (VB-1a), (VC-1a), (VD-1a), (VIa), (VI-1a), (VIAa), (VIBa), (VICa), (VIDa), (VIA-1a), (VIB-1a), (VIC-1a), (VID-1a), (VIIA-1a), (VIIB-1a), (VIIC-1a), 또는 (VIID-1a)의 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염의 경우, R⁵, R⁹, R¹³, R¹⁴, R¹⁷ 및 R¹⁸은 모두 H이고, R⁴은 C_1-6알킬, 할로, -CN 또는 -OR^4a이고, 여기서 C_1-6알킬은 할로, CN 및 -OR^4a로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되고; R^4a는 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고; 나머지 변수는 제5 내지 제36 실시양태에서 정의된 바와 같다. 구체적인 실시양태에서, R⁴는 할로이다. 보다 구체적인 실시양태에서, R⁴는 F이다.

제39 실시양태에서, 제5 내지 제36 실시양태 중 어느 하나에 기재된 화학식 (I), (I'), (Ia), (IIa), (II-1a), (IIIa), (III-1a), (IVa), (IV-1a), (IVAa), (IVBa), (IVCa), (IVDa), (IVA-1a), (IVB-1a), (IVC-1a), (IVD-1a), (Va), (V-1a), (VAa), (VBa), (VCa), (VDa), (VA-1a), (VB-1a), (VC-1a), (VD-1a), (VIa), (VI-1a), (VIAa), (VIBa), (VICa), (VIDa), (VIA-1a), (VIB-1a), (VIC-1a), (VID-1a), (VIIA-1a), (VIIB-1a), (VIIC-1a), 또는 (VIID-1a)의 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염의 경우, R⁴, R⁵, R¹⁴, R¹⁷ 및 R¹⁸은 모두 H이고, R¹³ 및 R⁹는 함께 할로, -OR^a, -N(R^a)₂ 및 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된 -C_1-3알킬렌-을 형성하고; 여기서 R^a는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6 알킬이고; 나머지 변수는 제5 내지 제36 실시양태에서 정의된 바와 같다. 구체적인 실시양태에서, R¹³ 및 R⁹는 함께 할로, -OR^a, -N(R^a)₂ 및 C_1-3알킬로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 임의로 치환된 -CH₂CH₂-를 형성하고; 여기서 R^a는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-3 알킬이다. 보다 구체적인 실시양태에서, R¹³ 및 R⁹는 함께 -CH₂CH₂-를 형성한다.

제40 실시양태에서, 화합물은 하기 화학식 (IV-1a)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염이고,여기서:

R¹은 F, Cl, CN 또는 CH3이고;

R²는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 페닐, 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 2-아자스피로[3.3]헵타닐, 1H-인돌릴, 2,3-디하이드로-1H-벤조[d]이미다졸릴, 1H-벤조[d]이미다졸릴, 1,3,4-티아디아졸릴, 인돌리닐, 테트라하이드로-2H-피라닐, 피리디닐, 피리미디닐, 피리다지닐, 피라지닐, 옥세타닐, 테트라하이드로-2H-피라닐, 1H-벤조[d]이미다졸릴, 1H-인다졸릴, 이소크로마닐, 및 1,3-디하이드로이소벤조푸라닐로부터 선택되고, 이들 각각은 1 또는 2개의 R²⁰으로 임의로 치환되고;

R²⁰은, 각각의 경우에 대해, H, 할로, -CN, 옥소, -C(O)R^20a, -C(O)NR^20a, -N(R^20a)₂, -N(R^20a)C(O)R^20a, -N(R^20a)S(O)₂R^20a, -OR^20a, C_1-6 알킬, C_3-8 사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 포화 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R20으로 표시되는 C_1-6 알킬, C_3-8 사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 포화 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 각각 1 또는 2개의 R²⁵로 임의로 치환되고;

R^20a은, 각각의 경우에 대해, H 및 C_1-6 알킬로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R^20a로 표시되는 C_1-6 알킬은 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환되고;

R²⁵는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, C_1-6 알킬, 할로, -N(R^25a)₂, -OR^25a, C_1-6 알킬, 할로, -N(R^25a)₂ 또는 -OR^25a로 임의로 치환된 페닐이고;

R^25a는 H, C_1-6 알킬, 또는 -OCH₃로 치환된 C_1-6 알킬이고;

R³은 페닐, 피리디닐, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 1H-피롤로[2,3-c]피리디닐, 1H-이미다조[4,5-c]피리디닐, 1H-피롤로[2,3-b]피리디닐, 1H-이미다조[4,5-b]피리디닐, 1H-피롤로[3,2-b]피리디닐, 3H-이미다조[4,5-b]피리디닐, 또는 1H-이미다조[4,5-c]피리디닐이고, 이들 각각은 1 내지 3개의 R³⁰으로 임의로 치환되고;

R³⁰은, 각각의 경우에 대해, H, 할로, CN, -C(O)NR^30a, -N(R^30a)₂, -N(R^30a)C(O)R^30a, -N(R^30a)S(O)₂R^30a, -OR^30a, 및 C_1-6 알킬이고, 여기서 C_1-6 알킬은 1 내지 3개의 R³⁵로 임의로 치환되고;

R^30a는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, 1 내지 3개의 R³⁵ 또는 C_3-6 사이클로알킬로 임의로 치환된 C_1-6 알킬이고;

R^35a는 H 또는 C_1-3 알킬이고;

R⁴는 H, 할로, CN, -OR^4a, C_1-6 알킬, 피리디닐, 또는 피라졸릴이고, 여기서 C_1-6 알킬은 할로, CN 및 -OR^4a로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되고; 여기서 피리디닐, 또는 피라졸릴은 -OH, -C₁-C₆ 알킬 또는 -O-C₁-C₆ 알킬로 임의로 치환되고;

R^4a는 H, 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6 알킬, 또는 C₃-C₆ 사이클로알킬이고;

R⁵는 H 또는 할로이거나, 또는 R⁴ 및 R⁵는 함께 취하여 =NOH, 또는 =NHOCH₃이거나, 또는 R⁴ 및 R⁵는 이들이 연결된 탄소와 함께 C₃-C₆ 사이클로알킬을 형성하거나, 또는 R⁵ 및 R¹³는 이들의 개재 원자와 함께 사이클로프로필을 형성하고;

R⁸, R¹³ 및 R¹⁴는각각 H이고;

R⁹는 H, C₁-C₆ 알콕시 또는 C₁-C₆ 알킬이거나, 또는 R⁹ 및 R¹³은 함께 할로, OR^a, N(R^a)₂ 및 C_1-6 알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된 C_1-3 알킬렌-을 형성하고; 여기서 R^a는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6 알킬이고;

R¹⁷은 H, 할로 또는 C_1-6 알킬이고;

R¹⁸은 H, -OH, -O(C₁-C₆ 알킬) 또는 C_1-6 알킬이거나, 또는 R¹⁷ 및 R¹⁸은 함께 취하여 =NOH 또는 =NHOCH₃)이다.

제41 실시양태에서, 화합물은 하기 화학식 (IV-1a)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염이고, 여기서:

R¹은 F, Cl, CN 또는 CH₃이고;

R²⁰은, 각각의 경우에 대해, -F, -OH, -Cl, -CH₃, -CH₂CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH, -CH₂CH₂N(CH₃)₂, -CF₃, -OCH₃, -OCH₂CH₂OCH₃, -OCH₂CH₂OH, -OCH₂CH₂N(CH₃)₂, (4-메톡시벤질)옥시, 옥소, -C(O)CH₃, -NH₂, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -N(CH₃)(CH₂CH₂OCH₃), -NHCH₂CH₂OMe, -NHCH₂CH₂NHCH₃, -NHCH₂CH₂N(CH₃)₂, -NHSO₂CH₃, -NHSO₂CH₂CH₃, -NHC(O)CH₃, 아제틴-일, 3-아미노아제이티딘-1-일, 피페리딘-1-일, 모르폴리닐, 피롤리딘-1-일; 및 3-(디메틸아미노)아제틴-1-일 또는

로부터 독립적으로 선택되고;

R³은 페닐, 피리디닐, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 1H-피롤로[2,3-c]피리디닐, 1H-피롤로[3,2-c]피리디닐, 또는 1H-이미다조[4,5-c]피리디닐, 1H-이미다조[4,5-c]피리디닐, 1H-피롤로[2,3-b]피리디닐, 1H-이미다조[4,5-b]피리디닐; 1H-피롤로[3,2-b]피리디닐, 또는 3H-이미다조[4,5-b]피리디닐이고, 이들 각각은 1 내지 3개의 R³⁰으로 임의로 치환되고;

R³⁰은, 각각의 경우에 대해, H, F, Cl, Br, CN, -OCH₃, -O(사이클로프로필), -NH₂, -NH(CH₃)₂, -CH₃, -CH₂CH₃ 또는 -CF₃이고;

R⁴는 H, 할로, -CN, OR^4a, C_1-6알킬, 피리디닐, 또는 피라졸릴이고, 여기서 C_1-6알킬은 할로, CN 및 -OR^4a로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되고; 여기서 피리디닐, 또는 피라졸릴은 -OH, -CH₃ 또는 -OCH₃로 임의로 치환되고;

R^4a는 H, -CH₃,하나 이상의 할로로 임의로 치환된 사이클로프로필 또는 -CH₂CH₃, 또는 사이클로프로필이고;

R⁵는 H 또는 F이거나, 또는 R⁴ 및 R⁵는 함께 취하여 =NHOCH₃이거나, 또는 R⁴ 및 R⁵는 이들이 연결된 탄소와 함께 사이클로프로필을 형성하거나, 또는 R⁵　및 R¹³은 이들의 개재 원자와 함께 사이클로프로필을 형성하고;

R⁸, R¹³ 및 R¹⁴는 각각 H이고;

R⁹는 H 또는 -CH₃이거나, 또는 R⁹ 및 R¹³은 함께 -C₂알킬렌-을 형성하고;

R¹⁷은 H, F 또는 -CH₃이고;

R¹⁸은 H, -OH, -OCH₃또는 -CH₃이거나, 또는 R¹⁷ 및 R¹⁸은 함께 취하여 =NHOCH₃이다.

제42 실시양태에서, 화합물은 하기 화학식 (IV-1a)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염이고, 여기서:

R¹은 F 또는 Cl이고;

R²는 피리디닐, 피리미니디닐 및 피리다지닐로부터 선택되고, 이들 각각은 R²⁰으로 치환되고;

R²⁰은, 각각의 경우에 대해, -NH_2,-NHCH₃, N(CH₃)₂, 및 4- 내지 7-원 포화 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R²⁰으로 표시되는 4- 내지 7-원 포화 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 -N(R^25a)₂로 치환되고;

R^25a는 H, C_1-6알킬, 또는 -OCH₃로 치환된 C_1-6알킬이고;

R³는 피리디닐, 1H-이미다조[4,5-c]피리디닐, 1H-피롤로[2,3-b]피리디닐, 1H-피롤로[3,2-b]피리디닐, 3H-이미다조[4,5-b]피리디닐이고, 이들 각각은 1 내지 3개의 R³⁰으로 임의로 치환되고;

R³⁰은, 각각의 경우에 대해, H, 할로, C₁-C₆알킬, -N(R^30a)₂ 또는 -OR^30a이고;

R^30a는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, C_1-6알킬 또는 C_3-6사이클로알킬이고;

R⁴는 H, 할로, -OR^4a, C_1-6알킬, 피리디닐, 또는 피라졸릴이고, 여기서 피리디닐, 또는 피라졸릴은 -OH, -C₁-C₆알킬 또는 -O-(C₁-C₆알킬)로 임의로 치환되고;

R^4a는 H, C_1-6알킬 또는 C₃-C₆ 사이클로알킬이고;

R⁵는 H 또는 할로이거나, 또는 R⁴ 및 R⁵는 함께 취하여 =NOH 또는 =NHOCH₃이거나, 또는 R⁴ 및 R⁵는 이들이 연결된 탄소와 함께 C₃-C₆ 사이클로알킬을 형성하거나, 또는 R⁵　및 R¹³은 이들의 개재 원자와 함께 사이클로프로필을 형성하고;

R⁸, R¹³ 및 R¹⁴는 각각 H이고;

R⁹는 H 또는 C₁-C₆알킬이고;

R¹⁷은 H, 할로, C₁-C₆알콕시 또는 C_1-6알킬이고;

R¹⁸은 H, 또는 C_1-6알킬이다.

제43 실시양태에서, 화합물은 하기 화학식 (IV-1a)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염이고, 여기서:

R¹은 F 또는 Cl이고;

R²는 피리디닐, 피리미디닐 및 피리다지닐로부터 선택되고, 이들 각각은 R²⁰으로 치환되고;

R²⁰은 -NH₂, -NHCH₃, N(CH₃)₂, 3-(디메틸아미노)아제틴-1-일 또는

이고;

R³은 피리디닐, 1H-이미다조[4,5-c]피리디닐, 1H-피롤로[2,3-b]피리디닐, 1H-피롤로[3,2-b]피리디닐, 또는 3H-이미다조[4,5-b]피리디닐이고, 이들 각각은 1 내지 3개의 R³⁰으로 임의로 치환되고;

R³⁰은, 각각의 경우에 대해, H, Cl, CH₃, -OCH₃, -O(사이클로프로필), -NH₂, -NHCH₃ 또는 -N(CH₃)₂이고;

R⁴는 H, F, OH, -OCH₃, -O-(사이클로프로필), -C₁-C₃알킬, 피리디닐, 또는 피라졸릴이고, 여기서 피리디닐 또는 피라졸릴은 -OH, -CH₃, -OCH₃ 또는 -O(사이클로프로필)로 임의로 치환되고;

R⁵는 H 또는 F이거나, 또는 R⁴ 및 R⁵는 함께 취하여 =NHOCH₃이거나, 또는 R⁴ 및 R⁵는 이들이 연결된 탄소와 함께 사이클로프로필을 형성하고, 또는 R⁵　및 R¹³은이들의 개재 원자와 함께 사이클로프로필을 형성하고;

R⁸, R¹³및 R¹⁴는 각각 H이고;

R⁹는 H 또는 -CH₃이고;

R¹⁷은 H, F, -OCH₃ 또는 -CH₃이고;

R¹⁸은 H 또는 -CH₃이다.

한 실시양태에서, 본 발명은 실시예 섹션, 예를 들어 실시예 1-1 내지 1-43, 실시예 2-1 내지 2-89, 및 실시예 3-1 내지 3-116에 기재된 것들로부터 선택된 화합물을, 그의 약제학상 허용되는 염 및 중성 형태를 포함하여 제공한다.

본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염은 분자 내에 하나 이상의 비대칭 중심을 함유할 수 있다. 본 개시내용에 따르면, 입체화학을 지정하지 않는 임의의 구조는 순수 또는 실질적으로 순수한 형태의 모든 다양한 입체이성질체 (예를 들어, 부분입체이성질체 및 거울상이성질체), 뿐만 아니라 이들의 혼합물 (예를 들어, 라세미 혼합물, 또는 거울상 이성질체가 풍부한 혼합물)을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 이러한 광학 활성 형태를 제조하는 방법 (예를 들어, 재결정화 기술에 의한 라세미 형태의 분리, 광학 활성 출발 물질로부터의 합성, 키랄 합성, 또는 키랄 고정상을 사용한 크로마토그래피 분리)은 당업계에 잘 알려져 있다.

화합물의 특정 입체 이성질체가 명칭 또는 구조로 표시될 때, 화합물의 입체 이성질체 순도는 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 99%, 99.5% 또는 99.9%이다. "입체이성질체 순도"는 모든 입체이성질체의 합한 중량에 대한 원하는 입체이성질체의 중량%를 의미한다.

개시된 화합물의 입체화학이 명명되거나 구조에 의해 도시되고, 명명되거나 도시된 구조가 하나 이상의 입체이성질체를 포함하는 경우 (예를 들어, 부분입체이성질체 쌍에서와 같이), 포함된 입체이성질체 또는 포함된 입체이성질체의 임의의 혼합물중 하나가 포함되는 것으로 이해되어야 한다. 또한 명명되거나 도시된 입체 이성질체의 입체 이성질체 순도는 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 99%, 99.5% 또는 99.9%임을 이해해야 한다. 입체이성질체 순도는 모든 입체이성질체의 합한 중량에 대한 명칭 또는 구조에 의해 포함되는 원하는 입체이성질체의 중량%이다.

개시된 화합물이 입체화학을 나타내지 않고 명명되거나 구조에 의해 도시되고, 화합물이 하나 이상의 키랄 중심을 갖는 경우, 그 명칭 또는 구조가 순수하거나 또는 실질적으로 순수한 형태의 화합물의 하나의 거울상이성질체, 뿐만 아니라 이들의 혼합물 (예를 들어, 화합물의 라세미 혼합물, 상응하는 광학 이성질체에 비해 하나의 거울상이성질체가 풍부한 혼합물, 입체이성질체의 혼합물, 및 하나 이상의 입체이성질체가 다른 입체이성질체(들)에 비해 풍부한 입체이성질체의 혼합물)을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

개시된 화합물은 호변이성질체 형태 및 혼합물로 존재할 수 있고 별개의 개별 호변이성질체가 고려된다. 또한 일부 화합물은 다형성을 나타낼 수 있다.

제약 조성물 및 투여 방법

제2 측면에서, 본원에 개시된 화합물, 및 그의 약제학상 허용되는 염은 제약 조성물 또는 "제형"으로서 제형화될 수 있다.

전형적인 제형은 본원에 기재된 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염, 및 담체, 희석제 또는 부형제를 혼합함으로써 제조된다. 적합한 담체, 희석제 및 부형제는 당업자에게 잘 알려져 있다. 사용되는 특정 담체, 희석제 또는 부형제는 본원에 기재된 화합물이 제형화되는 수단 및 목적에 따라 달라질 것이다.

제형은 통상적인 용해 및 혼합 절차를 사용하여 제조될 수 있다.

본 발명의 화합물, 조성물 또는 투여 형태와 관련하여 용어 "투여하다", "투여하는" 또는 "투여"는 치료를 필요로 하는 대상체 또는 환자의 시스템에 화합물을 도입하는 것을 의미한다. 본 발명의 화합물이 하나 이상의 다른 활성제와 조합되어 제공되는 경우, "투여" 및 그의 변형은 각각 화합물 및 다른 활성제의 동시 및/또는 순차적 도입을 포함하는 것으로 이해된다.

본원에 기재된 조성물은 전신적으로 또는 국소적으로, 예를 들어, 경구 (경질 또는 연질 캡슐 (예를 들어, 젤라틴 캡슐), 정제, 환제, 분말, 설하 정제, 트로키제, 로젠지, 및 과립을 포함하나 이에 제한되지 않는 고체 투여 형태; 및 약제학상 허용되는 에멀젼, 마이크로에멀젼, 수용액 또는 오일 용액, 현탁액, 시럽 및 엘릭시르를 포함하나 이에 제한되지 않는 액체 투여 형태 포함, 흡입 (예를 들어, 에어로졸, 가스, 흡입기, 분무기 등으로), 귀 (예를 들어, 점이제를 사용하여), 국소 (예를 들어, 크림, 젤, 흡입제, 도포제, 로션, 연고, 패치, 페이스트, 분말, 용액, 스프레이, 경피 패치 등을 사용하여), 안과 (예를 들어, 점안제, 안과용 젤, 안과 연고로), 직장 (예를 들어, 관장제 또는 좌약을 사용하여), 비강으로, 협측으로, 질로 (예를 들어, 질세척제, 자궁 내 장치, 질 좌약, 질 고리 또는 정제 등을 사용하여), 점이제를 통해, 이식된 저장소 등을 통해, 또는 중증도 및 치료 중인 질환의 유형에 따라 비경구적으로 투여될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "비경구"는 피하, 정맥내, 근육내, 관절내, 활액내, 흉골내, 척추강내, 간내, 병변내 및 두개내 주사 또는 주입 기술을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 바람직하게는, 조성물은 경구, 복강내 또는 정맥내 투여된다.

또 다른 측면에서, 본원에 기재된 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염은 수의학적 담체를 포함하는 수의학적 조성물로 제형화될 수 있다. 수의학적 담체는 조성물을 투여하는 목적에 유용한 물질이며 그렇지 않으면 불활성인 고체, 액체 또는 기체 물질일 수 있다. 수의학 분야에서 활성 성분과 호환된다. 이들 수의학적 조성물은 비경구, 경구 또는 임의의 다른 원하는 경로에 의해 투여될 수 있다.

치료 방법

제3 측면에서, 본 발명은 또한 대상체에서 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 질환 또는 장애는 Z11 TUTase에 의해 매개된다. 방법은 치료적 유효량의 본원에 기재된 화합물 또는 조성물, 그의 용매화물, 및 그의 염을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.

용어 "질환" 또는 "장애"는 본 명세서에서 상호교환가능하게 사용되며, 신체 또는 일부 기관의 상태의 임의의 변화, 기능의 수행을 방해(interrupting) 또는 방해(disturbing)하고/거나 고통받는 사람이나 사람과 접촉하는 사람에게 불편함, 기능 장애, 고통 또는 심지어 죽음과 같은 증상을 야기하는 것을 지칭한다. 질환 또는 장애는 또한 디스템퍼, 병듬(ailing), 병환(ailment), 질환(malady), 장애, 병(sickness), 질병(illness), 불평, 불쾌감 또는 보살핌과 관련될 수 있다.

용어 "악성" 및 "암"은 본원에서 상호교환적으로 사용되며, 세포의 조절되지 않는 비정상적인 성장을 특징으로 하는 질환을 지칭한다. 암세포는 국소적으로 또는 혈류와 림프계를 통해 신체의 다른 부분으로 퍼질 수 있다. "악성" 또는 "암"이라는 용어는 본원에서 상호교환적으로 사용되며, 그 조직에서 정상 또는 비정상 세포의 제대로 제어되지 않거나 제어되지 않는 증식 및 신체 전체에 대한 이의 영향을 특징으로 하는 포유동물의 기관 또는 조직의 임의의 질환을 지칭한다. 정의의 범위 내의 암 질환은 양성 신생물, 형성이상, 증식증 뿐만 아니라 전이성 성장 또는 예를 들어 종종 암이 발병하기 전에 발생하는 백반증과 같은 임의의 다른 변형을 나타내는 신생물을 포함한다. 용어 "종양" 또는 "종양 세포"는 본원에서 상호교환적으로 사용되며, 비정상적인 증식을 겪고 있는 조직 덩어리 또는 조직 유형의 세포를 지칭한다.

"암 세포"는 생체내, 생체외 및 조직 배양에서 암성, 전암성 또는 형질전환된 세포를 말하며, 이는 반드시 새로운 유전 물질의 흡수를 수반하는 것은 아닌 자발적 또는 유도된 표현형 변화를 갖는다. 형질전환은 형질전환 바이러스 감염 및 새로운 게놈 핵산의 도입, 또는 외인성 핵산의 흡수로 인해 발생할 수 있지만, 자연적으로 발생하거나 발암물질에 노출된 후 내인성 유전자를 돌연변이킴으로써 발생할 수도 있다. 형질전환/암은 예를 들어 시험관내, 생체내 및 생체외에서 누드 마우스 등과 같은 적합한 동물 숙주에서의 형태학적 변화, 세포의 불멸화, 비정상적인 성장 조절, 병소 형성, 고정 의존성, 증식, 악성 종양, 접촉 억제 및 성장의 밀도 제한, 성장 인자 또는 혈청 의존성, 종양 특이적 마커 수준, 침습성, 종양 성장 또는 억제와 관련이 있다. 또한 Freshney, Culture Animal Cells: A Man. Basic Tech. (3rd ed., 1994) 참조.

본원에서 사용된 용어 "생물학적 샘플"은 핵산을 포함하는 생물학적 조직 또는 유체의 샘플을 의미할 수 있다. 이러한 샘플에는 동물에서 단리된 조직이 포함되지만 이에 국한되지는 않는다. 생물학적 샘플에는 생검 및 부검 샘플, 조직학적 목적으로 채취한 냉동 섹션, 혈액, 혈장, 혈청, 가래, 대변, 눈물, 점액, 모발 및 피부와 같은 조직 섹션도 포함될 수 있다. 생물학적 샘플은 또한 환자 조직에서 유래한 외식편 및 1차 및/또는 형질전환된 세포 배양물을 포함한다. 생물학적 샘플은 동물에서 세포 샘플을 제거하여 제공할 수 있지만 이전에 단리된 세포를 사용하거나 (예를 들어, 다른 사람이 다른 시간에 및/또는 다른 목적으로 단리) 생체내에서 본 발명의 방법을 수행하여 제공할 수도 있다. 본원에 사용된 용어 "생물학적 샘플"은 또한 세포 또는 세포 집단 또는 대상체로부터의 조직 또는 체액의 양을 지칭한다. "생물학적 샘플"은 또한 생체내에서, 즉 대상체로부터 제거되지 않고 분석된 세포 또는 조직을 지칭할 수 있다. "조직"이라는 용어는 온전한 세포, 혈액, 혈장 및 혈청과 같은 혈액 제제, 뼈, 관절, 근육, 평활근 및 기관을 포함하는 것으로 의도된다.

용어 "환자", "대상체" 및 "개인"은 본원에서 상호교환적으로 사용되며, 치료가 제공되는 동물, 특히 인간을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "대상체"는 인간 및 비인간 동물, 예컨대 유인원, 원숭이, 말, 소, 양, 염소, 개, 고양이, 토끼, 기니피그, 래트 및 마우스를 지칭한다. 한 실시양태에서, 대상체는 인간이다.

본원에 사용된 "기준 수준"은 본원에 기재된 질환 또는 장애 (예를 들어, 암)가 없는 생물학적 샘플에서 단백질 (예를 들어, Z11, Lin28A, Lin28B) 수준 또는 RNA 수준 (예를 들어, let 7 miRNA)을 말한다. 특정 실시양태에서, 생물학적 샘플은 암이 없는 건강한 대상체 (예를 들어, 건강한 인간)로부터 수득된다. 특정 실시양태에서, 생물학적 샘플은 대상체가 암이 없는 더 이른 시기의 동일한 대상체 (예를 들어, 치료될 환자)로부터 수득된다. 대안적으로, 생물학적 샘플은 바람직하게는 암 조직과 동일한 조직 유형의 동일한 대상체 (예를 들어, 치료될 환자)로부터 수득된 비암성 조직이다.

특정 실시양태에서, 질환 또는 장애는 기준 수준과 비교하여 Lin28A 또는 Lin28B 수준의 증가를 특징으로 한다. 특정 실시양태에서, 질환 또는 장애는 기준 수준과 비교하여 let 7 miRNA 수준의 감소를 특징으로 한다. 또 다른 실시양태에서, let 7 miRNA 수준의 감소는 Z11 TUTase에 의해 매개된다.

특정 실시양태에서, 본 발명의 화합물 또는 조성물은 암세포에서 let 7 miRNA 수준을 증가시키는 방법에 사용될 수 있다.

특정 실시양태에서, 본 발명의 화합물 또는 조성물은 고상 종양/악성종양, 국소 진행성 종양, 인간 연조직 육종, 림프계 전이를 비롯한 전이성 암, 다발성 골수종을 포함한 혈액 세포 악성종양, 급성 및 만성 백혈병, 림프종, 구강암, 후두암 및 갑상선암을 포함한 두경부암, 소세포 암종 및 비소세포암을 포함한 폐암, 소세포 암종 및 관 암종을 포함한 유방암, 식도암, 위암, 결장암, 결장직장암 및 결장직장 신생물과 관련된 폴립을 포함한 위장관암, 췌장암, 간암, 방광암 및 전립선암을 포함한 비뇨기과암, 난소암종, 자궁 (자궁내막 포함) 암 및 난소 여포의 고형 종양을 포함한 여성 생식기의 악성종양, 신세포 암종을 포함한 신장암, 내인성 뇌종양, 신경모세포종, 골세포성 뇌종양, 신경교종을 포함한 뇌암, 중추신경계의 전이성 종양 세포 침윤, 골종을 포함한 골암, 악성 흑색종을 포함한 피부암, 인간 피부 각질세포의 종양 진행, 편평 세포 암종, 기저 세포 암종, 혈관 주위 세포종 및 카포시 육종을 비롯한 성인 및/또는 소아 종양의 치료에 사용될 수 있다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 조성물은 암 치료에 사용될 수 있다. 암에는 담도암; 방광암; 유방암; 교모세포종 및 수모세포종을 포함하는 뇌암; 자궁 경부암; 융모막암종; 결장직장암을 포함하는 결장암; 자궁내막암; 식도암; 위암; 두경부암; 급성 림프구성 및 골수성 백혈병, 다발성 골수종, AIDS-관련 백혈병 및 성인 T-세포 백혈병 림프종을 포함하는 혈액학적 신생물; 보웬병 및 파제트병, 간암을 포함하는 상피내 신생물; 소세포 폐암 및 비-소세포 폐암을 포함하는 폐암; 호지킨병 및 림프구성 림프종을 포함하는 림프종; 신경모세포종; 편평 세포 암종을 포함하는 구강암; 골육종; 상피 세포, 기질 세포, 생식 세포 및 중간엽 세포에서 발생하는 것을 포함하는 난소암; 췌장암; 전립선암; 직장암; 평활근육종, 횡문근육종, 지방육종, 섬유육종, 활액육종 및 골육종을 포함하는 육종; 흑색종, 카포시 육종, 기저세포암 및 편평세포암을 포함하는 피부암; 정상피종, 비정세포종 (기형종, 융모막암종), 기질 종양 및 생식 세포 종양과 같은 배아 종양을 포함하는 고환암; 갑상선 선암종 및 수질암종을 포함하는 갑상선암; 선암종 및 윌름스 종양을 포함하는 이행암 및 신장암이 포함되나 이들로 제한되는 것은 아니다. 특정 실시양태에서, 암은 유방암, 전립선암, 폐암, 난소암, 결장직장암 또는 뇌암이다. 일부 실시양태에서, 암 세포는 전이성이다. 일부 실시양태에서, 암은 LIN28A/B를 발현하지 않는다.

특정 실시양태에서, 본 발명의 화합물 또는 조성물은 유방암을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 화합물 또는 조성물은 폐암, 간암 또는 백혈병, 예를 들어 비제한적으로 폐 암종, 만성 골수성 백혈병 (CML) 및 HCC (간 세포 암종)를 치료하는데 사용될 수 있다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 조성물은 암 퇴행이 있는 대상체에게 투여하는데 유용하다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 조성물은 요법-저항성 암, 예를 들어 화학요법 저항성 암을 갖는 대상체에게 투여하는데 유용하다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 조성물은 암이 있고 보조 암 요법에 노출된 적 있는 대상체에게 투여하기에 유용하다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 조성물은 악성 암이 있는 대상체에게 투여하는데 유용하다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 조성물은 또한 암 줄기 세포를 포함하는 암 또는 종양이 있는 대상체에 투여하고 그의 치료하는 데에 유용하다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 조성물은 또한 비정상적인 세포 증식 또는 줄기 세포의 분화와 관련된 다른 질환 또는 장애의 치료에 유용하다. 따라서 치료는 영향을 받았지만 암의 증상이 없는 대상체, 예를 들어 해당 조직에서 정상 또는 비정상 세포의 제대로 조절되지 않거나 조절되지 않는 증식과 신체 전체에의 영향을 특징으로 하는 대상체의 장기 또는 조직의 질환에 대해 지시될 수 있다. 본원에 기재된 화합물 또는 조성물에 의해 치료될 수 있는 암 질환은 예를 들어 양성종양, 형성이상, 증식증 뿐만 아니라 전이성 성장 또는 임의의 다른 변형, 예를 들어 암의 발병에 앞서 종종 발생하는 백반증을 나타내는 신생물을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 조성물은 염증성 장애, 예컨대 천식 (Kumar, M., Ahmad, T., Sharma, A. 등 Let-7 microRNA-mediated regulation of IL-13 and allergic airway inflammation. J. Allergy Clin. Immunol. 128(5), 1077-1085 (2011)), 만성 폐쇄성 폐질환 (COPD) (Van Pottelberge, G.R., Mestdagh, P., Bracke, K.R. 등 MicroRNA Expression in Induced Sputum of Smokers and Patients with Chronic Obstructive Pulmonary Disease. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 183, 898-906, (2010); Conickx, G., Cogos, F.A., van den Berge, M. 등 Sci Rep 7, 12871 (2017)), 자궁내막증 (Sahin, C., Mamillapalli, R., Yi, K.W., 및 Taylor, H.S. microRNA Let-7b: A Novel treatment for endometriosis. J Cell Mol Med. 22, 5346-5353 (2018)) 등을 치료하는데 사용될 수 있다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 조성물은 동맥경화증, 예컨대 당뇨병-연관 죽상동맥경화증을 치료하는데 사용될 수 있다 (Brennan, E., Wang, Bo., McClelland, A. 등 Protective Effect of let-7 miRNA Family in Regulating Inflammation in Diabetes-Associated Atherosclerosis. Diabetes 66, 2266-2277 (2017)).

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 조성물은 간 질환을 치료하기 위해 사용될 수 있다 (McDaniel, K., Hall, C., Sato, K. 등 Lin28 and let-7: roles and regulation in liver diseases. Am J Physiol Gastrointes Liver Physiol. 310(10), G757 (2016)). 간 질환의 예에는 간 섬유증 (Matsuura K., De Giorgi, V., Schechterly, C. 등 Circulating let-7 levels in plasma and extracellular vesicles correlate with hepatic fibrosis progression in chronic hepatitis C. Hepatology 64(3), 732-745 (2016); Matsuura K., Aizawa, N., Enomoto, H., 등 Circulating let-7 Levels in Serum Correlate With the Severity of Hepatic Fibrosis in Chronic Heptatis C. Open Forum Infectious Diseases 5, 11 (2018); Zhang, Y., Guo, J., Li, Y. 등 let-7a suppresses liver fibrosis via TGFβ/SMAD signaling transduction pathway. Experimental and Therapeutic Medicine 17, 3935-3942 (2019)), 간염, 알코올성 간 질환 (ALD) (McDanile K., Huang L., Sato, K. 등 The let-7/Lin28 axis regulates activation of hepatic stellate cells in alcoholic liver injury. J. Biol. Chem. 292(27), 11336-11347 (2017)), 비알코올성 지방간 질환 (NAFLD), 간세포 암종 (HCC), 담도 질환 (예를 들어, 원발성 담즙성 간경변증 (PBC) 및 원발성 경화성 담관염 (PSC), 다낭성 간 질환 (PCLD) 등을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 조성물은 신장 질환, 예컨대 신장 섬유증 (Wang, B., Ja, J.C., Hagiwara, S. 등 Transforming growth factor-β1-mediated renal fibrosis is dependent on the regulation of transforming growth factor receptor 1 expression by let-7b. Kidney International, 85, 352-361 (2014); Nagai, T., Kanasaki, M., Srivastava, S.P. 등 N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline Inhibits Diabetes-Associated Kidney Fibrosis and Endothelial-Mesenchymal Transition. BioMed Research International, 2014, 696475 (2014); Brenna, E.P., Nolan, K.A., Borgeson, E. 등 Lipoxins Attenuate Renal Fibrosis by Inducing let-7c and Suppressing TGFβR1. J Am Soc Nephrol 24, 627-637 (2013)), 당뇨병성 신장병증 (Bhatt, K., Kato, Mi., 및 Natarajan, R. Mini-review: emerging roles of microRNAs in the pathophysiology of renal diseases. Am J Physiol Renal Physiol 310, F109-F118 (2016); Park, J.T., Kato, M., Lating, L. 등 Repression of let-7 by transforming growth factor-β₁-induced Lin28 upregulates collagen expression in glomerular mesangial cells under diabetic conditions. Am J Physiol Renal Physiol, 307, F1390-F1403 (2014)), 만성 신장 질환 (CKD) (Lv, W., Fan, F., Wang, Y. 등 Therapeutic potential of microRNAs for the treatment of renal fibrosis and CKD. Physiol Genomics. 50(1), 20-34 (2018)), 당뇨병성 신장 질환 (DKD) (Kato, M. Noncoding RNAs as therapeutic targets in early stage diabetic kidney disease. Kidney Res Clin Pract 37, 197-200 (2018))을 치료하는데 사용할 수 있다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 조성물은 전신 경피증 (SSc)을 치료하기 위해 사용될 수 있다 (예를 들어, Makino, K., Jinnin, M., Hirano, A. 등 The Downregulation of microRNA let-7a Contributes to the Excessive Expression of Type I Collagen in Systemic and Localized Scleroderma. J Immunol 190, 3905-3915 (2013) 참조). 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 조성물은 전신 경피증 (SSc) 환자에서 폐 고혈압을 치료하기 위해 사용될 수 있다 (Izumiya, Y., Jinnn, M., Kimura, Y. 등 Expression of Let-7 family microRNAs in skin correlates negatively with severity of pulmonary hypertension in patients with systemic scleroderma. IJC Heart & Vasculature 8, 98-102 (2015)).

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 조성물은 폐 섬유증 (Huleihel, L., Ben-Yehudah, A., Milosevic, J. 등 Let-7d microRNA affects mesenchymal phenotypic properties of lung fibroblasts. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 306, L534-542 (2014)), 예컨대 특발성 폐 섬유증 (IPF) (Liang, H., Liu, S., Chen, Y. 등 miR-26a suppresses EMT by disrupting the Lin28B/let-7d axis: potential cross-talks among miRNAs in IPF. J. Mol. Med. 94, 655-665 (2016); Pandit, K.V., Corcoran, D., Yousef, H. 등 Inhibition and Role of Let-7d in Idiopathic Pulmonary Fibrosis. Am J respire Crit Care Med 182, 220-229 (2010))을 치료하기 위해 사용될 수 있다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 조성물은 다발성 경화증을 치료하기 위해 사용될 수 있다 (Angelou, C.C., Wells, A.C., Vijayaraghavan, J. 등 Differentiation of Pathogenic Th17 Cells Is Negative Regulated by Let-7 MicroRNAs in a Mouse Model of Multiple Sclerosis. Front. Immunol. 10, 3125 (2019); Kimura, K., Hohjoh, H., Fukuoka, M. 등 Circulating exosomes suppress the induction of regulatory T cells via let-7i in multiple sclerosis. Nature Communications 9, 17 (2018)).

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 조성물은 이를 필요로 하는 대상체에서 골 손실을 예방하고/하거나 골 치유를 자극하는데 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 조성물은 큰 골 결손에서의 골 재생, 골관절염 및 기타 골병증-관련 병태 (예를 들어, 노화와 관련된 염증-유도 골 손실 및 류마티스 관절염)의 예방 및/또는 치료, 불완전 골 형성 및 골연화증의 예방 및/또는 치료, 척추 융합, 및 하악, 상악 및 두개골 뼈의 두개안면 재건 (Ansari, M.Y., Khan, N.M., Ahmad, N. 등 Genetic Inactivation of ZCCHC6 Suppresses Interleukin-6 Expression and Reduces the Severity of Experimental Osteoarthritis in Mice. Arthritis & Rheumatology 71 (4), pp583-593 (2019); US2019/0101533; US2019/0101533; WO 2017/156557; 및 WO 2018/005608)을 비롯한 골절 치유를 가속화하는데 사용될 수 있다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 조성물은 IL-6 매개 질환, 예를 들어, 모두가 본원에 참고로 포함되는 US756011, US2012/0253016 및 WO 92/19759에 기재된 것들을 치료하는데 사용될 수 있다. IL-6 매개 질환의 예는 류마티스성 관절염, 소아 특발성 관절염, 전신 소아 특발성 관절염, 캐슬만병, 전신 홍반성 루푸스 (SLE), 루푸스 신염, 크론병, 림프종, 궤양성 대장염, 빈혈, 혈관염, 가와사키병, 스틸병, 아밀로이드증, 다발성 경화증, 이식, 노화 관련 황반변성, 강직성 척추염, 건선, 건선성 관절염, 만성 폐쇄성 폐질환 (COPD), IgA 신병증, 골관절염, 천식, 당뇨병성 신병증, GVHD, 자궁내막증, 간염 (NASH), 심근경색, 동맥경화, 패혈증, 골다공증, 당뇨병, 다발성 골수종, 전립선암, 신장암, B-세포 비-호지킨 림프종, 췌장암, 폐암, 식도암, 결장암, 암 악액질, 암 신경침범, 심근경색, 근시 맥락막 신생혈관, 특발성 맥락막 신생혈관, 포도막염, 만성 갑상선염, 지연성 과민증, 접촉성 피부염, 아토피성 피부염, 중피종, 다발근염, 피부근염, 전포도막염(panuveitis), 전포도막염(anterior uveitis), 중도포도막염, 공막염, 각막염, 안와염, 시신경염, 당뇨망막병증, 증식성 유리체망막병증, 안구 건조, 및 수술 후 염증을 포함하나 이들로 제한되는 것은 아니다.

일부 실시양태에서, IL-6 매개 질환은 류마티스 관절염, 소아 류마티스 관절염, 전신 발병 소아 류마티스 관절염, 건선 관절염, 강직성 척추염, 위궤양, 혈청음성 관절염, 골관절염, 골용해, 정형외과용 임플란트의 무균 이완, 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 전신성 홍반성 루푸스, 피부 홍반성 루푸스, 루푸스 신염, 항인지질 증후군, 홍채모양체염/포도막염/시신경염, 특발성 폐섬유증, 전신 혈관염/베게너 육아종증, 유육종증, 고환염/정관 절제술 반전 시술, 알레르기/아토피 질환, 천식, 알레르기 비염, 습진, 알레르기 접촉 피부염, 알레르기 결막염, 과민성 폐렴, 이식, 장기 이식 거부반응, 이식편대숙주병, 전신 염증 반응 증후군, 패혈증 증후군, 그람 양성 패혈증, 그람 음성 패혈증, 배양 음성 패혈증, 진균성 패혈증, 호중구감소증, 요로감염증, 수막구균혈증, 외상/출혈, 화상, 전리방사선 노출, 급성췌장염, 성인호흡곤란증후군, 류마티스관절염, 알코올성 간염, 만성염증병리, 유육종증, 크론병리, 겸상적혈구빈혈, 당뇨병, 신증, 아토피성 질환, 과민반응, 알레르기성 비염, 꽃가루 알레르기, 다년생 비염, 결막염, 자궁내막증, 천식, 두드러기, 전신성 아나팔락시스, 피부염, 악성빈혈, 용혈성 질환, 혈소판 감소증, 또는 모든 장기 또는 조직의 이식 거부 반응, 신장 이식 거부 반응, 심장 이식 거분 반응, 간 이식 거분 반응, 췌장 이식 거분 반응, 폐 이식 거분 반응, 골수 이식 (BMT) 거분 반응, 피부 동종 이식 거분 반응, 연골 이식 거분 반응, 골 이식 거분 반응, 소장 이식 거분 반응, 태아 흉선 이식 거분 반응, 부갑상선 이식 거분 반응, 모든 장기 또는 조직의 이종이식 거분 반응, 동종이식 거부 반응, 항수용체 과민 반응, 그레이브스병, 레이노병, B형 인슐린 저항성 당뇨병, 천식, 중증 근무력증, 항체 매개 세포독성, III형 과민 반응, POEMS 증후군 (다발성 신경병증, 기관비대, 내분비병증, 단클론성 감마병증, 피부변화 증후군), 다발성신경병증, 기관비대, 내분비병증, 단클론성 감마병증, 피부변화 증후군, 항인지질 증후군, 천포창, 경피증, 혼합 결합 조직 질환, 특발성 애디슨병, 진성 당뇨병, 만성 활동성 간염, 원발성 담도성 간경변증, 백반증, 혈관염, 심근경색 후 증후군, IV형 과민증, 접촉성 피부염, 과민성 폐렴, 동종이식 거부 반응, 세포내 유기체에 의한 육아종, 약물 감수성, 대사/특발성, 윌슨병, 혈색소증, 알파-1-항트립신 결핍, 당뇨망막병증, 하시모토병 골막염, 골다공증, 시상하부-뇌하수체-부신축 평가, 원발성 담즙성 간경변증, 갑상선염, 뇌척수염, 악액질, 낭포성 섬유증, 신생아 만성 폐질환, 만성 폐쇄성 폐질환 (COPD), 가족성 조혈세포 림프조직구증, 피부과적 상태, 건선, 탈모증, 신증후군, 신염, 사구체 신염, 급성 신부전, 혈액 투석, 요독증, 독성 및 자간전증으로부터 선택된 IL-6 매개 면역 관련 질환이다.

일부 실시양태에서, IL-매개 질환은 심혈관 질환, 예컨대 심장 스터닝 증후군(cardiac stun syndrome), 심근경색증, 울혈성 심부전, 뇌졸중, 허혈성 뇌졸중, 출혈, 급성 관상동맥 증후군, 동맥경화증, 죽상동맥경화증, 재협착증, 당뇨병성 동맥경화증, 고혈압, 동맥성 고혈압, 신혈관성 고혈압, 실신, 쇼크, 심혈관계 매독, 심부전, 폐성심장, 원발성 폐고혈압, 심장 부정맥, 심방 이소성 박동, 심방 조동, 심방 세동 (지속 또는 발작), 관류 후 증후군, 심폐 우회 염증 반응, 혼돈 또는 다초점 심방 빈맥, 규칙적인 협소 QRS 빈맥, 특정 부정맥, 심실 세동, 히스 번들 부정맥, 방실 차단, 번들 가지 차단, 심근 허혈 장애, 관상 동맥 질환, 협심증, 심근 경색증, 심근병증, 확장성 울혈성 심근병증, 재 협착성 심근병증, 판막 심장 질환, 심내막염, 심낭 질환, 심장 종양, 대동맥 및 말초 동맥류, 대동맥 박리, 대동맥 염증, 복부 대동맥 및 그 분지의 폐쇄, 말초 혈관 장애, 폐쇄 동맥 장애, 말초 죽상 경화증 질환, 혈전혈관염 폐쇄성, 기능적 말초 동맥 장애, 레이노 현상 및 질환, 선체증, 홍반성 통증, 정맥 질환, 정맥 혈전증, 정맥류, 동정맥루, 림프부종, 지방종, 불안정형 협심증, 재관류 손상, 펌프 후 증후군, 허혈 재관류 손상 등이다.

일부 실시양태에서, IL-매개 질환은 감염성 질환, 예컨대 급성 또는 만성 세균 감염, 급성 및 만성 기생충 또는 감염 과정, 예컨대 세균, 바이러스 및 진균 감염, HIV 감염/HIV 신경병증, 수막염, 간염 (예를 들어, A, B 또는 C 등), 패혈성 관절염, 복막염, 폐렴, 후두개염, 대장균 O157:h7, 용혈성 요독 증후군/혈전 용해성 혈소판 감소성 자반병, 말라리아, 뎅기 출혈열, 독성 리슈만편모충증, 나병, 독성 쇼크 증후군, 연쇄상 구균 근염, 가스 괴저, 결핵균, 세포내 마이코박테리움 아비움, 폐포자충 폐렴, 골반 염증성 질환, 고환염/부고환염, 레지오넬라, 라임병, 인플루엔자 A, 엡스타인-바 바이러스, 바이러스 관련 조혈뇌염 증후군, 바이러스성 뇌염/무균성 뇌수막염 등이다.

일부 실시양태에서, IL-매개 질환은 악성 질환, 예컨대 백혈병, 급성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병(acute lymphoblastic leukemia) (ALL), 급성 림프구성 백혈병(acute lymphocytic leukemia), B-세포, T-세포 또는 FAB ALL, 급성 골수성 백혈병(acute myeloid leukemia) (AML), 급성 골수성 백혈병(acute myelogenous leukemia), 만성(chromic) 골수성 백혈병(CML), 만성 림프성 백혈병 (CLL), 모세포 백혈병, 골수이형성 증후군 (MDS), 림프종, 호지킨병, 악성 림프종, 비-호지킨 림프종, 버킷 림프종, 다발성골수종, 카포시육종, 결장직장암종, 췌장암종, 비인두암종, 악성조직구증, 부종양증후군/악성고칼슘혈증, 고형종양, 방광암, 유방암, 결장직장암, 자궁내막암, 두부암, 경부암, 유전성 비용종증 암, 호지킨 림프종, 간암, 폐암, 비소세포폐암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신세포암종, 고환암, 선암, 육종, 악성 흑색종, 혈관종, 전이성 질환, 암 관련 골 흡수, 암 관련 골 통증 등이다.

일부 실시양태에서, IL-매개 질환은 신경학적 질환, 예컨대 신경퇴행성 질환, 다발성 경화증, 편두통, AIDS 치매 복합체, 탈수초화 질환, 예컨대 다발성 경화증 및 급성 횡단 척수염; 피질척수계의 병변과 같은 추체외로 및 소뇌 장애; 기저핵 장애; 헌팅턴 무도병 및 노인성 무도병과 같은 과다운동성 운동 장애; CNS 도파민 수용체를 차단하는 약물에 의해 유발되는 것과 같은 약물 유발 운동 장애; 파킨슨병과 같은 운동 저하 운동 장애; 진행성 핵상 마비; 소뇌의 구조적 병변; 척수 운동실조, 프리드라이히 운동실조, 소뇌 피질 변성, 다계통 변성 (Mencel, Dejerine-Thomas, Shi-Drager 및 Machado-Joseph)과 같은 척수소뇌 변성; 전신 장애 (레프섬병, 아베탈리포프로테미아, 운동실조, 모세혈관확장증, 및 미토콘드리아 다중계 장애); 다발성 경화증, 급성 횡단 척수염과 같은 탈수초성 핵심 장애; 및 신경성 근위축증 (근위축성 측삭 경화증, 영아 척수 근위축 및 소아 척수 근위축과 같은 전각 세포 변성)과 같은 운동 단위의 장애; 알츠하이머병; 중년의 다운 증후군; 미만성 루이소체병; 루이소체형의 노인성 치매; 베르니케-코르사코프 증후군; 만성 알코올 중독; 크로이츠펠트-야콥병; 아급성 경화성 범뇌염, 할레로덴-스파츠 병; 치매 푸길리스티카; 신경 외상성 손상 (예를 들어, 척수 손상, 뇌 손상, 뇌진탕, 반복적 뇌진탕); 통증; 염증성 통증; 자폐성; 우울증; 뇌졸중; 인지 장애; 간질; 등이다.

일부 실시양태에서, IL-매개 질환은 예를 들어 치주 수술, 발치(들), 근관 치료, 치아 임플란트의 삽입, 치아 보철물의 적용 및 사용을 비롯한 구강 수술과 관련된 신체 손상 또는 외상을 포함하거나; 또는 여기서 상처가 무균 상처, 타박상 상처, 절개 상처, 열상 상처, 비관통 상처, 개방 상처, 관통 상처, 천공 상처, 천자 상처, 패혈성 상처, 경색 및 피하 상처로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는 여기서 상처가 허혈성 궤양, 욕창, 누공, 심한 교상, 열 화상 및 도너 사이트 상처(donor site wounds)로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는 여기서 상처가 아프타 상처, 외상성 상처 또는 헤르페스 관련 상처이다.

상기 본원에 기재된 치료 방법에 대한 용량은 대상체 체중 kg당 1 μg 내지 1000 mg의 화합물 또는 그의 약제학상 허용되는 염의 범위이다.

예증

약어:

d 이중선

dd 이중선의 이중선

m 다중선

s 단일선

t 삼중선

q 사중선

brs/bs 넓은 단일선

dd 이중선의 이중선

td 이중선의 삼중선

dt 삼중선의 이중선

DEAD 디에틸 아자디카르복실레이트

DCM 디클로로메탄

DIPEA N,N -디이소프로필에틸아민

DMF N, N -디메틸 포름아미드

DMSO 디메틸 설폭사이드

eq 당량(들)

g 그램(들)

h 시간(들)

NaH 수소화나트륨

THF 테트라하이드로푸란

BBr ₃ 삼브롬화붕소

CDI 카르보닐 디이미다졸

EtOAc 에틸 아세테이트

ACN 아세토니트릴

TLC 박막 크로마토그래피

RT 실온

℃ 섭씨

mmol 밀리몰

μmol 마이크로몰

ESI 전자분무 이온화

EtOAc 에틸 아세테이트

HCl 염산

IPA 이소프로필 알코올

K ₂ CO ₃ 탄산칼륨

LiOH 수산화리튬

MeOH 메탄올

MS 질량 분석

RBF 둥근 바닥 플라스크

TEA 트리에틸아민

일반 분석 방법

실시예 1: ( R )-1-사이클로프로필-6-플루오로-5-메틸-4-옥소-7-(2-((피리딘-2-일옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1. 3,4,6-트리플루오로-2-메틸벤조일 클로라이드의 합성

DCM (2 mL) 중 3,4,6-트리플루오로-2-메틸벤조산 (100 mg, 0.52 mmol, 1.0 당량) 및 (COCl)₂ (133 mg, 1.05 mmol, 2.0 당량)의 혼합물에 DMF (0.1 mL)를 0℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 25℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 다음 단계에 그대로 사용하였다.

단계 2. 에틸 3-옥소-3-(3,4,6-트리플루오로-2-메틸페닐)프로파노에이트의 합성

MeCN (5 mL) 중 3,4,6-트리플루오로-2-메틸벤조일 클로라이드 (100 mg, 0.48 mmol, 1.0 당량) 및 1-에틸 3-칼륨 프로판디오에이트 (163 mg, 0.96 mmol, 2.0 당량)의 혼합물에 TEA (97 mg, 0.96 mmol, 2.0 당량) 및 MgCl₂ (91 mg, 0.96 mmol, 2.00 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 4시간 동안 25℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. HCl (aq.)을 사용하여 혼합물을 pH 4로 산성화시켰다. 수성층을 메틸벤젠 (10 mL x 3)으로 추출하였다. 유기 용액을 진공에서 농축시켰다. 그 결과 에틸 3-옥소-3-(3,4,6-트리플루오로-2-메틸페닐)프로파노에이트 (100 mg, 80.15%)를 황색 오일로 얻었다.

단계 3. 에틸 1-사이클로프로필-6,7-디플루오로-5-메틸-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

아세트산 무수물 (117 mg, 1.15 mmol, 3.0 당량) 중 에틸 3-옥소-3-(3,4,6-트리플루오로-2-메틸페닐)프로파노에이트 (100 mg, 0.38 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 트리에틸 오르토포르메이트 (85 mg, 0.57 mmol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 100℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 이어서 DMSO (3 mL) 중 생성된 혼합물에 아미노사이클로프로판 (22 mg, 0.38 mmol, 1.0 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 25℃에서 교반하였다. 이어서, 생성된 혼합물에 K₂CO₃(26 mg, 0.19 mmol, 0.5 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 100℃에서 교반하였다. 20 mL 물을 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 침전된 고체를 여과하여 수집하였다. 그 결과 에틸 1-사이클로프로필-6,7-디플루오로-5-메틸-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (100 mg, 84.68%)를 황색 고체로 얻었다.

단계 4. 1-사이클로프로필-6,7-디플루오로-5-메틸-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF (2 mL) 및 H₂O (0.5 mL) 중 에틸 1-사이클로프로필-6,7-디플루오로-5-메틸-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (100 mg, 0.325 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 LiOH (39 mg, 1.62 mmol, 5.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 25℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. HCl (aq.)을 사용하여 혼합물을 pH 4로 산성화시켰다. 침전된 고체를 여과하여 수집하고 물 (10 mL x 3)로 세척하였다. 그 결과 1-사이클로프로필-6,7-디플루오로-5-메틸-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (90 mg, 99.0%)을 황색 고체로 얻었다.

단계 5. 1-사이클로프로필-6-플루오로-5-메틸-4-옥소-7-[(2 R )-2-[(피리딘-2-일옥시)메틸]피롤리딘-1-일]퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (2 mL) 중 1-사이클로프로필-6,7-디플루오로-5-메틸-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (40 mg, 0.14 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 2-[(2R)-피롤리딘-2-일메톡시]피리딘 (25 mg, 0.14 mmol, 1.0 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 100℃에서 교반하였다. 혼합물을 다음 조건 (컬럼: XSelect CSH Prep C18 OBD 컬럼,, 5um,19*150mm ; 이동상 A:물(0.05%FA), 이동상 B:ACN; 유속:25 mL/분; 구배: 8분 후에 48 B에서 67 B로; 254 nm; RT1:7.02; RT2:; 주입 부피: ml; 수행 횟수:;)에서 Prep-HPLC로 정제하여 1-사이클로프로필-6-플루오로-5-메틸-4-옥소-7-[(2R)-2-[(피리딘-2-일옥시)메틸]피롤리딘-1-일]퀴놀린-3-카르복실산 (11.6 mg)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 438.1 ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 15.99 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.14 - 7.99 (m, 1H), 7.75 - 7.63 (m, 1H), 7.19 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.99 - 6.89 (m, 1H), 6.77 - 6.70 (m, 1H), 4.65 (s, 1H), 4.51 - 4.40 (m, 1H), 4.38 - 4.20 (m, 1H), 3.71 (d, J = 25.2 Hz, 2H), 3.53 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 2.74 (d, J = 3.5 Hz, 3H), 2.20 - 1.88 (m, 4H), 1.24 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 1.18 - 0.91 (m, 2H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) +

실시예 2: ( R )-6-클로로-4-옥소-7-(2-((피리딘-2-일옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(피리미딘-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1. 5-클로로-2,4-디플루오로벤조일 클로라이드 의 합성

DCM (50 mL) 중 5-클로로-2,4-디플루오로벤조산 (5.0 g, 26.0 mmol, 1.0 당량) 및 (COCl)₂ (19.8 g, 155.80 mmol, 6.0 당량)의 교반한 용액에 DMF (1 mL)를 0℃에서 대기하에 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 질소 분위기 하에 밤새 교반시켰다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물은 추가 정제없이 다음 단계에 그대로 사용하였다.

단계 2. 에틸 3-(5-클로로-2,4-디플루오로페닐)-3-옥소프로파노에이트의 합성

MeCN (100 mL) 중 1-에틸 3-칼륨 프로판디오에이트 (8.07 g, 47.41 mmol, 2.00 당량) 및 MgCl₂ (5.64 g, 49.25 mmol, 2.5 당량)의 교반한 용액에 TEA (4.80 g, 47.41 mmol, 2.0 당량)를 0℃에서 대기 하에 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 질소 분위기하에 밤새 교반시켰다. 상기 혼합물에 5-클로로-2,4-디플루오로벤조일 클로라이드 (5.0 g, 23.70 mmol, 1.00 당량)를 0℃에서 분할 첨가하였다. 생성된 혼합물을 추가로 2.5시간 동안 실온에서 교반하였다. 진한 HCl을 사용하여 혼합물을 pH 5로 산성화시켰다. 생성된 혼합물을 톨루엔 (40 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기층을 물 (20 mL x 2)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄ 상에서 건조하였다. 여과 후, 여액을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 헥산/ EtOAc (6:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 에틸 3-(5-클로로-2,4-디플루오로페닐)-3-옥소프로파노에이트 (3.1g, 48%)를 백색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 263.1.

단계 3. 에틸 6-클로로-7-플루오로-4-옥소-1-(피리미딘-2-일)퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

Ac₂O (2.3 g, 22.85 mmol, 3.0 당량) 중 에틸 3-(5-클로로-2,4-디플루오로페닐)-3-옥소프로파노에이트 (2.0 g, 7.62 mmol, 1.0 당량) 및 트리에틸오르토포르메이트 (1.7 g, 11.40 mmol, 1.5 당량)의 용액을 100℃에서 질소 분위기 하에 1.5시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 DMSO (20 mL)에 용해시켰다. 상기 혼합물에 2-아미노피리미딘 (720 mg, 7.62 mmol, 1.0 당량)을 실온에서 2분에 걸쳐 분할 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 상기 혼합물에 K₂CO₃ (530 mg, 3.81 mmol, 0.5 당량)를 실온에서 분할 첨가하였다. 생성된 혼합물을 추가로 2시간 동안 40℃에서 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기층을 물 (15 mL x 2)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄상에서 건조하였다. 여과 후, 여액을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 CH₂Cl₂ / MeOH (10:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 에틸 6-클로로-7-플루오로-4-옥소-1-(피리미딘-2-일)퀴놀린-3-카르복실레이트 (500 mg, 19%)를 적색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 348.1.

단계 4. 6-클로로-7-플루오로-4-옥소-1-(피리미딘-2-일)퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF (4.0 mL) 및 H₂O (1.0 mL) 중 에틸 6-클로로-7-플루오로-4-옥소-1-(피리미딘-2-일)퀴놀린-3-카르복실레이트 (300 mg, 0.86 mmol, 1.0 당량) 및 LiOH (83 mg, 3.45 mmol, 4.0 당량)의 혼합물을 5시간 동안 실온에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 진한 HCl을 사용하여 혼합물을 pH 6으로 산성화시켰다. 생성된 혼합물을 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기층을 물 (5 mL x 2)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄상에서 건조하였다. 여과 후, 여액을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물을 (5 mL x 3)의 헥산/ EtOAc (5:1)로 세척하여 6-클로로-7-플루오로-4-옥소-1-(피리미딘-2-일)퀴놀린-3-카르복실산 (160 mg, 58%)을 적색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 320.2.

단계 5. 6-클로로-4-옥소-7-[(2 R )-2-[(피리딘-2-일옥시)메틸]피롤리딘-1-일]-1-(피리미딘-2-일)퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (4.0 mL) 중 6-클로로-7-플루오로-4-옥소-1-(피리미딘-2-일)퀴놀린-3-카르복실산 (80 mg, 0.25 mmol, 1.0 당량) 및 2-[(2R)-피롤리딘-2-일메톡시]피리딘 (357 mg, 2.00 mmol, 8.0 당량)의 용액을 밤새 100℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 조 생성물 (100 mg)을 다음 조건 (컬럼: XSelect CSH Prep C18 OBD 컬럼,, 5um,19*150mm ; 이동상 A:물(0.05%FA), 이동상 B:ACN; 유속:25 mL/분; 구배: 8분 후에 42 B에서 73 B로; 254 nm; RT1:7.67)에서 Prep-HPLC로 정제하여 6-클로로-4-옥소-7-[(2R)-2-[(피리딘-2-일옥시)메틸]피롤리딘-1-일]-1-(피리미딘-2-일)퀴놀린-3-카르복실산 (25.7 mg, 21.5%)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 478.1.¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 14.73 (s, 1H), 9.18 (s, 1H), 8.98 (s, 2H), 8.14 (s, 1H), 8.00 - 7.85 (m, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.67 - 7.53 (m, 1H), 7.47 (s, 1H), 6.87 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.58 (s, 1H), 4.40 - 4.11 (m, 2H), 3.74 (s, 1H), 3.33 - 3.30 (m, 1H), 2.23 (s, 1H), 2.10 - 1.65 (m, 3H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) +++

실시예 3: ( R )-1-사이클로프로필-6-플루오로-8-메톡시-4-옥소-7-(2-((피리딘-2-일옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1. 2,4,5-트리플루오로-3-메톡시벤조일 클로라이드의 합성

톨루엔 (8.0 mL) 중 2,4,5-트리플루오로-3-메톡시벤조산 (500 mg, 2.43 mmol, 1.0 당량)의 용액에 0℃에서 SOCl₂(866 mg, 7.28 mmol, 3.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 밤새 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 그 결과 2,4,5-트리플루오로-3-메톡시벤조일 클로라이드 (500 mg, 조질)를 황색 반-고체로 얻었다 .

단계 2. 에틸 3-옥소-3-(2,4,5-트리플루오로-3-메톡시페닐)프로파노에이트의 합성

무수 아세토니트릴 (10 mL) 중 1-에틸 3-칼륨 프로판디오에이트 (758 mg, 4.45 mmol, 2.0 당량)의 교반한 용액을 질소 하에 10 내지 15℃로 냉각시켰다. 이 혼합물에 TEA (451 mg, 4.45 mmol, 2.0 당량)에 이어서 MgCl₂(530 mg, 5.57 mmol, 2.5 당량)를 첨가하고, 20 내지 25℃에서 2.5시간 동안 계속 교반하였다. 생성된 슬러리를 0℃로 다시 냉각시키고 2,4,5-트리플루오로-3-메톡시벤조일 클로라이드 (500 mg, 2.23 mmol, 1.0 당량)를 15분에 걸쳐 적가한 후 TEA (23 mg, 0.22 mmol, 0.1 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반한 후 감압 하에 농축하여 아세토니트릴을 제거하였다. 톨루엔 (8 mL)을 첨가하고 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 추가의 톨루엔 (8 mL)을 첨가하고 혼합물을 교반하고 10 내지 15℃로 냉각시켰다. 온도를 25℃ 미만으로 유지하면서 수성 HCl (13%, 10 mL)를 첨가하였다. 수성층을 분리하고, 유기층을 수성 HCl (12%, 10 mL)에 이어 물 (8 mL)로 세척한 후 감압 하에 농축하여 에틸 3-옥소-3-(2,4,5-트리플루오로-3-메톡시페닐)프로파노에이트 (1.0 g, 조질)를 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 276.

단계 3. 에틸 1-사이클로프로필-6,7-디플루오로-8-메톡시-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

아세트산 무수물 (1.1 g, 10.86 mmol, 3.0 당량) 중 에틸 3-옥소-3-(2,4,5-트리플루오로-3-메톡시페닐)프로파노에이트 (1.0 g, 3.62 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 트리에틸 오르토포르메이트 (0.8 g, 5.43 mmol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. DMSO (12 mL) 중 생성된 혼합물에 아미노사이클로프로판 (0.2 g, 3.62 mmol, 1.0 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물에 K₂CO₃ (0.3 g, 1.81 mmol, 0.5 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 15 mL 물을 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 침전된 고체를 여과하여 수집하였다. 그 결과 에틸 1-사이클로프로필-6,7-디플루오로-8-메톡시-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (300 mg, 26%)를 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 324.

단계 4. 1-사이클로프로필-6,7-디플루오로-8-메톡시-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF (5.0 mL) 중 에틸 1-사이클로프로필-6,7-디플루오로-8-메톡시-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (300 mg, 0.93 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 LiOH (89 mg, 3.71 mmol, 4.0 당량) 및 H₂O (1.0 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. HCl (aq.)을 사용하여 혼합물을 pH 6으로 중성화시켰다. 생성된 혼합물을 여과하였다. 그 결과 1-사이클로프로필-6,7-디플루오로-8-메톡시-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (250 mg, 91%)을 백색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 296.

단계 5. 1-사이클로프로필-6-플루오로-8-메톡시-4-옥소-7-[(2 R )-2-[(피리딘-2-일옥시)메틸]피롤리딘-1-일]퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (8.0 mL) 중 1-사이클로프로필-6,7-디플루오로-8-메톡시-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (220 mg, 0.75 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 2-[(2R)-피롤리딘-2-일메톡시]피리딘 (199 mg, 1.12 mmol, 1.5 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 48시간 동안 80℃에서 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 다음 조건 (컬럼: XBridge Shield RP18 OBD 컬럼, 5um,19*150mm;이동상 A:물 (0.1%FA), 이동상 B: ACN; 유속: 25 mL/분; 구배: 8분 후 60% B에서 90% B로; 254/220 nm; Rt: 7.31분)에서 Prep-HPLC로 정제하여 1-사이클로프로필-6-플루오로-8-메톡시-4-옥소-7-[(2R)-2-[(피리딘-2-일옥시)메틸]피롤리딘-1-일]퀴놀린-3-카르복실산 (56.9 mg, 16.84%)을 담황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 454.35. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.66 (s, 1H), 8.04 - 7.95 (m, 1H), 7.68 - 7.53 (m, 2H), 6.88 (d, J = 7.1, 5.0, 1.0 Hz, 1H), 6.55 (s, 1H), 4.62 - 4.53 (m, 1H), 4.36 - 4.21 (m, 2H), 4.14 (d, J = 7.4, 4.0 Hz, 1H), 3.92 - 3.83 (m, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.37 (s, 1H), 2.37 - 2.21 (m, 1H), 2.06 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 2.01 - 1.72 (m, 2H), 1.29 - 1.06 (m, 2H), 0.99 - 0.67 (m, 2H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) +

실시예 4: ( R )-6-플루오로-4-옥소-7-(2-(페녹시메틸)피롤리딘-1-일)-1-페닐-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1. tert -부틸 (2 R )-2-(2-클로로페녹시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

THF (50 mL) 중 페놀 (3.0 g, 31.87 mmol, 1.0 당량), tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트 (6.4 g, 31.87 mmol, 1.0 당량) 및 PPh₃ (16.7 g, 63.75 mmol, 2.0 당량)의 혼합물에 DIAD (8.2 g, 63.75 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 용액을 밤새 25℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 물 중 5-60% 아세토니트릴로 용리하는 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (2R)-2-(페녹시메틸)피롤리딘 (1.1 g, 20%)을 무색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 278.1

단계 2. (2 R )-2-(페녹시메틸)피롤리딘의 합성

DCM (10 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-(페녹시메틸)피롤리딘 (500 mg, 1.60 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 TFA (2 mL)를 첨가하였다. 생성된 용액을 1시간 동안 25℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 농축시켰다. 그 결과 (2R)-2-(페녹시메틸)피롤리딘 (840 mg, 조질)을 황색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺:178.1.

단계 3. 6-플루오로-4-옥소-7-[(2 R )-2-(페녹시메틸)피롤리딘-1-일]-1-페닐퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (2 mL) 중 6,7-디플루오로-4-옥소-1-페닐퀴놀린-3-카르복실산 (100 mg, 0.33 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 (2R)-2-(페녹시메틸)피롤리딘 (58 mg, 0.33 mmol, 1.0 당량)을 첨가하였다. 생성된 용액을 1시간 동안 80℃에서 교반하였다. 침전된 고체를 수집하고 다음 조건에서 Prep.-HPLC로 정제하였다 (컬럼: XSelect CSH Prep C18 OBD 컬럼,, 5um,19*150mm ; 이동상 A:물 (0.05%FA), 이동상 B:ACN; 유속:25 mL/분; 구배:8분 후에 50 B에서 75 B로; 254 nm; RT1:6.86). 그 결과 6-플루오로-4-옥소-7-[(2R)-2-(페녹시메틸)피롤리딘-1-일]-1-페닐퀴놀린-3-카르복실산 (59.4 mg 39.0%)을 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 459.1. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 15.41 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.92 (d, J = 14.5 Hz, 1H), 7.66 (m, 4H), 7.41 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.26 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 6.94 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.09 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.34 - 4.24 (m, 1H), 3.90 (q, J = 3.7 Hz, 1H), 3.82 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.38 - 3.36 (m, 1H), 3.27 - 3.14 (m, 1H), 2.20 - 1.76 (m, 4H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) +

실시예 5: ( R )-6-플루오로-7-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1-페닐-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1. 에틸 6,7-디플루오로-4-옥소-1-페닐-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

아세트산 무수물 (6.2 g, 60.93 mmol, 3.0 당량) 중 에틸 3-옥소-3-(2,4,5-트리플루오로페닐)프로파노에이트 (5.0 g, 20.31 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에, 트리에틸 오르토포르메이트 (4.5 g, 30.46 mmol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. DMSO (50 mL) 중 생성된 혼합물에 아닐린 (2.2 g, 24.37 mmol, 1.2 당량)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물에 K₂CO₃ (2.8 g, 20.31 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 500 mL의 물을 첨가하여 반응을 켄칭하였다. 침전된 고체를 여과하여 수집하였다. 그 결과 에틸 6,7-디플루오로-4-옥소-1-페닐-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (4.7 g 70.2%)를 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 330.1.

단계 2. 6,7-디플루오로-4-옥소-1-페닐-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF (100 mL) 및 H₂O (10 mL) 중 에틸 6,7-디플루오로-4-옥소-1-페닐-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (2.0 g, 6.07 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 LiOH (1.1 g, 48.58 mmol, 8.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 밤새 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. HCl (aq.)을 사용하여 혼합물을 pH 4로 산성화시켰다. 침전된 고체를 여과하여 수집하고 물 (50 mL x 3)로 세척하였다. 그 결과 6,7-디플루오로-4-옥소-1-페닐-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (1.6 g 89.6%)을 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 302.1

단계 3. ( R )-6-플루오로-7-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1-페닐-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (10 mL) 중 6,7-디플루오로-4-옥소-1-페닐-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (100 mg, 0.33 mmol, 1.0 당량)의 용액에 (R)-3-메틸-2-(피롤리딘-2-일메톡시)피리딘 (63 mg, 0.33 mmol, 1.0 당량)을 첨가하였다. 생성된 용액을 1시간 동안 100℃에서 교반하였다. 혼합물을 Prep.-HPLC로 정제하였다 (컬럼: SunFire Prep C18 OBD 컬럼, 19Х150mm 5um 10nm; 이동상 A:물(0.05%FA), 이동상 B:ACN; 유속:25 mL/분; 구배: 8분 후에 52 B에서 82 B로; 254/220 nm; RT1:7.77; RT2:; 주입 부피: ml; 수행 횟수:;). 그 결과 (R)-6-플루오로-7-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1-페닐-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (42.6 mg, 27%)을 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 474.1.¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 15.51 - 15.37 (m, 1H), 8.54 - 8.50 (m, 1H), 7.95 - 7.82 (m, 2H), 7.73 - 7.55 (m, 4H), 7.54 - 7.41 (m, 2H), 6.93 - 6.82 (m, 1H), 6.09 - 5.99 (m, 1H), 4.47 - 4.34 (m, 1H), 4.30 - 4.16 (m, 2H), 3.36 - 3.35 (m, 1H), 3.24 - 3.11 (m, 1H), 2.15 - 1.84 (m, 7H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 6: ( R )-7-(2-(((3-에틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-6-플루오로-4-옥소-1-페닐-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1. tert -부틸 (2 R )-2-[[(3-요오도피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤딘-1-카르복실레이트의 합성

THF (50 mL) 중 2-플루오로-3-요오도피리딘 (5.0 g, 22.42 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 NaH (1.6 g, 67.26 mmol, 3.0 당량) 및 tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트 (22.56 g, 112.11 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 70℃에서 교반하였다. 반응을 물로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 수집하고 무수 Na₂SO₄로 건조하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 석유 에테르/EtOAc (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 tert-부틸 (2R)-2-[[(3-요오도피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-카르복실레이트 (5.2 g, 11%)를 무색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 405.0

단계 2. tert -부틸 ( R )-2-(((3-비닐피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

톨루엔 (7 mL), EtOH (2 mL), H₂O (1 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-[[(3-요오도피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-카르복실레이트 (2.0 g, 4.94 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 K₂CO₃ (2.0 g, 14.84 mmol, 3.0 당량), Pd(dppf)Cl₂ (360 mg, 0.49 mmol, 0.1 당량) 및 에테닐트리플루오로-람다4-보란 칼륨 (990 mg, 7.42 mmol, 1.5 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 추가로 1시간 동안 80℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 석유 에테르/EtOAc (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 tert-부틸 (R)-2-(((3-비닐피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트 (1.0 g, 69%)를 무색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 307.1

단계 3. tert -부틸 ( R )-2-(((3-에틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

MeOH (100 mL) 중 tert-부틸 (R)-2-(((3-비닐피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트 (1.0 g, 3.28 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에, Pd/C (349 mg, 0.328 mmol, 0.1 당량, 10%), 생성된 혼합물을 0.5시간 동안 실온에서 수소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 여과하고; 여과 케이크를 DCM (100 mL)으로 세척하였다. 여액을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 석유 에테르/EtOAc (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 tert-부틸 (R)-2-(((3-에틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트 (507 mg, 50%)를 무색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 307.1

단계 4. ( R )-3-에틸-2-(피롤리딘-2-일메톡시)피리딘의 합성

DCM (5 mL) 중 tert-부틸 (R)-2-(((3-에틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.65 mmol, 1.0 당량)의 용액에 TFA (2 mL)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 0.5시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 농축시켰다. 그 결과 (R)-3-에틸-2-(피롤리딘-2-일메톡시)피리딘 (206 mg, 조질)을 무색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 207.1

단계 5. 7-[(2 R )-2-[[(3-에틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-6-플루오로-4-옥소-1-페닐퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (5 mL) 중 3-에틸-2-[(2R)-피롤리딘-2-일메톡시]피리딘 (68 mg, 0.33 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 TEA (100 mg, 0.98 mmol, 3 당량) 및 6,7-디플루오로-4-옥소-1-페닐퀴놀린-3-카르복실산 (99 mg, 0.33 mmol, 1.0 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 추가로 1시간 동안 80℃에서 교반하였다. 침전된 고체를 수집하고 조 생성물을 다음 조건 (컬럼: SunFire Prep C18 OBD 컬럼, 19Х150 mm 5um 10nm; 이동상 A:물(0.1%FA), 이동상 B:ACN; 유속:25 mL/분; 구배: 10분 후에 62 B에서 70 B로; 254 nm; RT1:9.48)으로 Prep.-HPLC에 의해 정제하였다. 그 결과 7-[(2R)-2-[[(3-에틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-6-플루오로-4-옥소-1-페닐퀴놀린-3-카르복실산 (25.1 mg, 15.3%)을 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 488.1¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 15.42 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.99 - 7.81 (m, 2H), 7.76 - 7.55 (m, 4H), 7.49 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 6.90 (dd, J = 7.2, 4.9 Hz, 1H), 6.05 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.50 - 4.33 (m, 1H), 4.17 (qd, J = 10.9, 9.9, 3.4 Hz, 2H), 3.24 - 3.14 (m, 2H), 2.37 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 2.14 - 1.84 (m, 4H), 1.01 (t, J = 7.5 Hz, 3H)

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) +

실시예 7: 6-플루오로-1-(4-하이드록시페닐)-7-((2 R )-4-메틸-2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1. 1- tert -부틸 2-메틸 (2 R )-4-(옥산-2-일옥시)피롤리딘-1,2-디카르복실레이트의 합성

DCM (100.00 mL) 중 1-tert-부틸 2-메틸 (2R)-4-하이드록시피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (10 g, 40.77 mmol)의 혼합물에 DHP (5.14 g, 61.10 mmol) 및 TsOH-Py (1.02 g, 4.05 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 4시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 500 ml H₂O로 희석하였다. 생성된 용액을 DCM (300 mL x 3)로 추출하고 유기층을 합하였다. 유기층을 염수 (200 mL x 2)로 세척하였다. 유기층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. EtOAc/석유 에테르 (0-50%)로 용리하는 실리카겔상의 플래시 크로마토그래피로 잔류물을 정제하여 1-tert-부틸 2-메틸 (2R)-4-(옥산-2-일옥시)피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (13 g, 89.0% 수율)를 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 330.20.

단계 2. tert -부틸 (2 R )-2-(하이드록시메틸)-4-(옥산-2-일옥시)피롤딘-1-카르복실레이트의 합성

THF (50.00 mL) 중 1-tert-부틸 2-메틸 (2R)-4-(옥산-2-일옥시)피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (6 g, 18.21 mmol)의 혼합물에 LiAlH₄ (0.83 g, 21.85 mmol)를 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응을 Na₂SO₄.10 H₂O로 0℃에서 켄칭하였다. 혼합물을 여과하고 여과 케이크를 EtOAc로 세척하였다. 여액을 무수 황산나트륨 상에서 건조하고 진공에서 농축시켰다. EtOAc/석유 에테르 (40%-50%)로 용리하는 실리카겔상의 플래시 크로마토그래피로 잔류물을 정제하여 tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸)-4-(옥산-2-일옥시)피롤리딘-1-카르복실레이트 (2.5 g, 41.0% 수율)를 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 302.21.

단계 3. tert -부틸 (2 R )-2-[(벤질옥시)메틸]-4-(옥산-2-일옥시)피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

THF (30.00 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸)-4-(옥산-2-일옥시)피롤리딘-1-카르복실레이트 (2.50 g, 8.29 mmol)의 혼합물에 NaH (0.80 g, 33.33 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 벤질 브로마이드 (1.70 g, 9.93 mmol)를 첨가하고 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응을 H₂O로 0℃에서 켄칭하였다. 이어서 반응 혼합물을 200 mL H₂O로 희석하였다. 생성된 용액을 EtOAc (200 mL x 3)로 추출하고 유기층을 합하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 Prep.-HPLC로 정제하여 tert-부틸 (2R)-2-[(벤질옥시)메틸]-4-(옥산-2-일옥시)피롤리딘-1-카르복실레이트 (1.3 g, 41.0% 수율)를 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 392.25.

단계 4. tert -부틸 (2 R )-2-[(벤질옥시)메틸]-4-하이드록시피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

THF (4.00 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-[(벤질옥시)메틸]-4-(옥산-2-일옥시)피롤리딘-1-카르복실레이트 (1.3 g, 3.32 mmol)의 혼합물에 AcOH (4 mL) 및 H₂O (4.00 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 50 ml H₂O로 희석하였다. 생성된 용액을 EtOAc (300 mL x 3)로 추출하고 유기층을 합하였다. 유기층을 염수 (200 mL x 2)로 세척하였다. 유기층은 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. EtOAc/석유 에테르 (40-60%)로 용리하는 실리카겔상의 플래시 크로마토그래피로 잔류물을 정제하여 tert-부틸 (2R)-2-[(벤질옥시)메틸]-4-하이드록시피롤리딘-1-카르복실레이트 (800 mg, 70% 수율)를 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 308.15.

단계 5. tert -부틸 (2 R )-2-[(벤질옥시)메틸]-4-옥소피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

ACN (10.00 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-[(벤질옥시)메틸]-4-하이드록시피롤리딘-1-카르복실레이트 (800 mg, 2.60 mmol)의 혼합물에 IBX (1.09 g, 3.90 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 잔류물을 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (2R)-2-[(벤질옥시)메틸]-4-옥소피롤리딘-1-카르복실레이트 (500 mg, 59% 수율(yield))를 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 306.15.

단계 6. tert -부틸 (2 R )-2-[(벤질옥시)메틸]-4-메틸리덴피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

THF (3.00 mL) 중 메틸트리페닐포스포늄 브로마이드 (874 mg, 2.45 mmol)의 혼합물에 t-BuOK (551 mg, 4.91 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서 tert-부틸 (2R)-2-[(벤질옥시)메틸]-4-옥소피롤리딘-1-카르복실레이트 (500 mg, 1.63 mmol)를 첨가하고 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 잔류물을 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (2R)-2-[(벤질옥시)메틸]-4-메틸리덴피롤리딘-1-카르복실레이트 (450 mg, 90% 수율)를 무색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 304.18.

단계 7. tert -부틸 (2 R )-2-(하이드록시메틸)-4-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

수소 하에, MeOH (10 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-[(벤질옥시)메틸]-4-메틸리덴피롤리딘-1-카르복실레이트 (450 mg, 1.48 mmol)의 혼합물에 Pd/C (60 mg, 0.56 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 여과 후, 여액을 농축하여 tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸)-4-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (300 mg, 93%)를 무색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 216.19

단계 8. 3-메틸-2-(((2 R )-4-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리딘의 합성

THF (10 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸)-4-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (300 mg, 1.39 mmol)의 혼합물에 NaH (133 mg, 5.54 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 이어서 2-브로모-3-메틸피리딘을 첨가하고 70℃에서 밤새 교반하였다. 반응을 0℃에서 20 mL의 물로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (200 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기상을 무수 황산나트륨 상에서 건조하고 진공에서 농축시켰다. ACN/H₂O(0.1%FA) (80%~90%)로 용리하는 역상 플래시 크로마토그래피로 잔류물을 정제하여 3-메틸-2-(((2R)-4-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리딘 (200 mg, 69%)을 진황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 307.21

단계 9. 6-플루오로-1-(4-하이드록시페닐)-7-[(2 R )-4-메틸-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (3 mL) 중 6,7-디플루오로-1-(4-하이드록시페닐)-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (150 mg, 0.47 mmol)의 혼합물에 3-메틸-2-[[(2R)-4-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]피리딘 (117 mg, 0.56 mmol) 및 TEA (287 mg, 2.83 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 잔류물을 Prep.-HPLC (컬럼: SunFire Prep C18 OBD 컬럼, 19Х150mm 5um 10nm; 이동상 A:물(0.1%FA), 이동상 B:ACN; 유속:25 mL/분; 구배: 8분 후에 50 B에서 70 B로; 254/220 nm; RT1:7.73/8.22)로 정제하여 6-플루오로-1-(4-하이드록시페닐)-7-[(2R)-4-메틸-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (8.2 mg, 3.4% 수율)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 504.2. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 15.41 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.98 - 7.82 (m, 2H), 7.76 - 7.54 (m, 4H), 7.49 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 7.02 - 6.81 (m, 1H), 6.04 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.39 (m, 1H), 4.29 - 4.04 (m, 2H), 3.23 - 3.12 (m, 2H), 2.36 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 2.14 - 1.85 (m, 4H), 1.00 (t, J = 7.5 Hz, 3H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 8: ( R )-6-클로로-7-(2-(1-((3-클로로피리딘-2-일)옥시)에틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1-페닐-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1. tert -부틸 (2 R )-2-[메톡시(메틸)카르바모일]피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

DMF (12 mL) 중 (2R)-1-(tert-부톡시카르보닐)피롤리딘-2-카르복실산 (1.0 g, 4.65 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 N,O-디메틸하이드록실아민 (0.3 g, 5.58 mmol, 1.2 당량), DIEA (2.4 g, 18.58 mmol, 4.0 당량) 및 HATU (2.7 g, 6.97 mmol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 3시간 동안 실온에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 물 (10 mL)을 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 다음 조건으로 역상 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다: 컬럼, C18 실리카겔; 이동상, 물 중 MeCN, 30분 후에 5%에서 100%로 구배; 검출기, UV 254 nm 및 UV 220 nm. 그 결과 tert-부틸 (2R)-2-[메톡시(메틸)카르바모일]피롤리딘-1-카르복실레이트 (1.0 g, 83.3%)를 무색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 259.

단계 2. tert -부틸 (2 R )-2-아세틸피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

THF (9 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-[메톡시(메틸)카르바모일]피롤리딘-1-카르복실레이트 (900 mg, 3.48 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 -78℃에서 MeMgBr (1.2 g, 10.45 mmol, 3.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 실온에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 물 (8 mL)을 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 생성된 혼합물을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 무수 Na₂SO₄상에서 건조하였다. 농축 후, 잔류물을 석유 에테르/EtOAc (3:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (2R)-2-아세틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (700 mg, 94.2%)를 담황색 오일로 수득하였다.

단계 3. tert -부틸 (2 R )-2-(1-하이드록시에틸) 피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

MeOH (7 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-아세틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (700 mg, 3.28 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 NaBH₄ (248 mg, 6.56 mmol, 2.0 당량)를 0℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 물 (6 mL)을 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 생성된 혼합물을 EtOAc (3 x 8 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 무수 Na₂SO₄상에서 건조하였다. 잔류물을 석유 에테르/EtOAc (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (2R)-2-(1-하이드록시에틸) 피롤리딘-1-카르복실레이트 (600 mg, 84.9%)를 무색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 216.

단계 4. tert -부틸 (2 R )-2-[1-[(3-클로로피리딘-2-일) 옥시] 에틸] 피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

THF (6 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-(1-하이드록시에틸)피롤리딘-1-카르복실레이트 (500 mg, 2.32 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 NaH (167 mg, 6.97 mmol, 3.0 당량)를 0℃에서 질소 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 30분 동안 실온에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 상기 혼합물에 3-클로로-2-플루오로피리딘 (367 mg, 2.79 mmol, 1.2 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 추가로 2.5시간 동안 70℃에서 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 0℃에서 물 (6 mL)을 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 다음 조건에서 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하였다: 컬럼, C18 실리카겔; 이동상, 물 중 MeCN, 30분 후에 5%에서 100%로 구배; 검출기, UV 254 nm UV 220 nm. 그 결과 tert-부틸 (2R)-2-[1-[(3-클로로피리딘-2-일) 옥시] 에틸] 피롤리딘-1-카르복실레이트 (126 mg, 29.6%)를 담황색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 327.

단계 5. 3-클로로-2-[1-[(2 R )-피롤리딘-2-일]에톡시]피리딘의 합성

DCM (3 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-[1-[(3-클로로피리딘-2-일) 옥시] 에틸] 피롤리딘-1-카르복실레이트 (126 mg, 0.39 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 TFA (0.6 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1.5시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 그 결과 3-클로로-2-[1-[(2R)-피롤리딘-2-일]에톡시]피리딘 (100 mg, 조질)을 담황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 227.

단계 6. 6-클로로-7-[(2 R )-2-[1-[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]에틸]피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-페닐퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (3.5 mL) 중 6-클로로-7-플루오로-4-옥소-1-페닐퀴놀린-3-카르복실산 (80 mg, 0.25 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 TEA (127 mg, 1.26 mmol, 5.0 당량) 및 3-클로로-2-[1-[(2R)-피롤리딘-2-일]에톡시]피리딘 (86 mg, 0.38 mmol, 1.5 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 80℃에서 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 다음 조건 (컬럼: XBridge Shield RP18 OBD 컬럼, 5um,19*150mm;이동상 A:물(0.1%FA), 이동상 B: ACN; 유속: 25 mL/분; 구배: 8분 후에 60% B에서 90% B로; 254/220 nm; Rt: 7.31분)에서 Prep.-HPLC로 정제하여 6-클로로-7-[(2R)-2-[1-[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]에틸]피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-페닐퀴놀린-3-카르복실산 (14.4 mg, 10.91%)을 담황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 524.0. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 15.07 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.82 (dd, J = 7.7, 1.7 Hz, 1H), 7.78 - 7.53 (m, 5H), 7.34 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.78 (dd, J = 7.7, 4.9 Hz, 1H), 6.06 (s, 1H), 5.44 - 5.31 (m, 1H), 4.50 - 4.37 (m, 1H), 3.28 - 3.15 (m, 1H), 3.03 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 2.25 - 2.07 (m, 2H), 2.01 (dd, J = 9.9, 4.1 Hz, 1H), 1.81 - 1.66 (m, 1H), 1.17 (d, J = 6.5 Hz, 3H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) +++

실시예 9: ( R )-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-8-플루오로-1-(1-메틸사이클로프로필)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1. 메틸 2,3,4-트리플루오로-5-니트로벤조에이트의 합성

메탄올 (30.0 mL) 중 2,3,4-트리플루오로-5-니트로벤조산 (5.00 g, 22.62 mmol)의 용액에 티오닐클로라이드 (8.07 g, 67.84 mmol)를 첨가하고 60℃에서 4시간 동안 교반하였다. 용매를 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 DCM에 용해시키고 중탄산나트륨 용액으로 세척하였다. 유기층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 진공에서 농축하여 메틸 2,3,4-트리플루오로-5-니트로벤조에이트 (5.1 g, 95.9%)를 담황색 오일로 수득하였다.

단계 2. 메틸 5-아미노-2,3,4-트리플루오로벤조에이트의 합성

수소 하에, 에틸 아세테이트 (100.0 mL) 중 메틸 2,3,4-트리플루오로-5-니트로벤조에이트 (5.80 g, 24.67 mmol)의 용액에 Pd/C (1.00 g, 9.39 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 고체를 여과하였다. 유기층을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc/석유 에테르 (0%-20%)로 용리하는 실리카겔상의 플래시 크로마토그래피로 정제하여 메틸 5-아미노-2,3,4-트리플루오로벤조에이트 (4.5 g, 88.9%)를 백색 고체로 수득하였다. LCMS: m/z = 206 [M+H]⁺

단계 3. 메틸 5-클로로-2,3,4-트리플루오로벤조에이트의 합성

질소 하에, ACN (100.0 mL) 중 메틸 5-아미노-2,3,4-트리플루오로벤조에이트 (5.00 g, 24.37 mmol) 및 CuCl₂ (6.55 g, 48.75 mmol)의 용액에 t-BuONO (5.03 g, 48.78 mmol)를 70℃에서 첨가하였다. 생성된 용액을 70℃에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 냉각시키고 염산 (3 M)을 첨가하여 pH를 3으로 조정하였다. 혼합물을 물로 켄칭하고, DCM으로 추출하고 염수로 세척하였다. 유기층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc/석유 에테르 (0%-10%)로 용리하는 실리카겔상의 플래시 크로마토그래피로 정제하여 메틸 5-클로로-2,3,4-트리플루오로벤조에이트 (3.5 g, 63.9%)를 백색 고체로 수득하였다.

단계 4. 5-클로로-2,3,4-트리플루오로벤조산의 합성

THF (50.0 mL) 중 메틸 5-클로로-2,3,4-트리플루오로벤조에이트 (5.00 g, 22.26 mmol)의 용액에 H₂O (25.0 mL) 중 수산화리튬 수화물 (3.74 g, 89.13 mmol)을 첨가하고 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 물에 용해시켰다. 염산 (3 M)으로 pH를 3으로 조정하였다. 고체를 여과하고, 물로 세척하고 진공에서 농축시켜 5-클로로-2,3,4-트리플루오로벤조산 (3.7 g, 78.9%)을 백색 고체로 얻었다.

단계 5. 5-클로로-2,3,4-트리플루오로벤조일 클로라이드의 합성

티오닐클로라이드 (10.0 mL) 중 5-클로로-2,3,4-트리플루오로벤조산 (600.0 mg, 2.85 mmol)의 용액을 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 진공에서 농축시켜 5-클로로-2,3,4-트리플루오로벤조일 클로라이드 (630 mg, 96.5%)를 담황색 오일로 수득하였다.

단계 6. 에틸 3-(5-클로로-2,3,4-트리플루오로페닐)-3-옥소프로파노에이트의 합성

질소 하에, ACN (50.0 mL) 중 1-에틸 3-칼륨 프로판디오에이트 (936.58 mg, 5.50 mmol) 및 MgCl₂ (654.9 mg, 6.88 mmol)의 용액에 TEA (835.2 mg, 8.25 mmol)를 5℃에서 첨가하고 실온에서 2시간 동안 여과하였다. 이어서 ACN 중 5-클로로-2,3,4-트리플루오로벤조일 클로라이드 (630.0 mg, 2.75 mmol)를 5℃에서 적가하고 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 염산 (3 M)으로 켄칭하여 pH를 3으로 조정하였다. 반응 혼합물을 DCM으로 추출하고 염수로 세척하였다. 유기층은 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc/석유 에테르 (0%-30%)로 용리하는 실리카겔상의 플래시 크로마토그래피로 정제하여 에틸 3-(5-클로로-2,3,4-트리플루오로페닐)-3-옥소프로파노에이트 (450 mg, 58.2%)를 백색 고체로 얻었다.

단계 7. 에틸 ( Z )-2-(5-클로로-2,3,4-트리플루오로벤조일)-3-에톡시아크릴레이트의 합성

아세트산 무수물 (982.2 mg, 9.62 mmol) 중 에틸 3-(5-클로로-2,3,4-트리플루오로페닐)-3-옥소프로파노에이트 (450.0 mg, 1.60 mmol) 및 트리에틸오르토포르메이트 (356.4 mg, 2.41 mmol)의 용액을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 진공에서 농축시켜 에틸 (2Z)-2-[(Z)-5-클로로-2,3,4-트리플루오로벤조일]-3-에톡시프로프-2-에노에이트 (500 mg, 92.6%)를 황색 오일로 수득하였다. LCMS: m/z = 337 [M+H]⁺

단계 8. 에틸 6-클로로-7,8-디플루오로-1-(1-메틸사이클로프로필)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (8.0 mL) 중 에틸 (2Z)-2-[(Z)-5-클로로-2,3,4-트리플루오로벤조일]-3-에톡시프로프-2-에노에이트 (500.0 mg, 1.49 mmol) 및 1-메틸사이클로프로판-1-아민 (105.6 mg, 1.49 mmol)의 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서 K₂CO₃ (205.2 mg, 1.49 mmol)를 첨가하고 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 추출하고 염수로 세척하였다. 유기층은 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc/석유 에테르 (0%-60%)로 용리하는 실리카겔상의 플래시 크로마토그래피로 정제하여 에틸 6-클로로-7,8-디플루오로-1-(1-메틸사이클로프로필)-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (200 mg, 39.4%)를 백색 고체로 수득하였다. LCMS: m/z = 342 [M+H]⁺

단계 9. 6-클로로-7,8-디플루오로-1-(1-메틸사이클로프로필)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

10-mL 밀봉된 튜브에, 에틸 6-클로로-7,8-디플루오로-1-(1-메틸사이클로프로필)-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (100.0 mg, 0.29 mmol), THF (2.0 mL), H₂O (1.0 mL), 수산화리튬 수화물 (61.4 mg, 1.46 mmol)을 넣었다. 생성된 용액을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 고체를 여과하여 수집하였다. 그 결과 90 mg (98.05%)의 6-클로로-7,8-디플루오로-1-(1-메틸사이클로프로필)-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산을 백색 고체로 얻었다. LCMS: m/z = 314 [M+H]⁺

단계 10. ( R )-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-8-플루오로-1-(1-메틸사이클로프로필)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

10-mL 밀봉된 튜브에, 6-클로로-7,8-디플루오로-1-(1-메틸사이클로프로필)-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (80.0 mg, 0.26 mmol), DMSO (2.0 mL), 3-클로로-2-[(2R)-피롤리딘-2-일메톡시]피리딘 (65.1 mg, 0.31 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (98.9 mg, 0.77 mmol)을 넣었다. 생성된 용액을 5시간 동안 60℃에서 교반하였다. 잔류물을 ACN/물 (0%-40%, 염기 시스템)로 용리하는 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 30 mg (20.65%)의 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-8-플루오로-1-(1-메틸사이클로프로필)-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산을 백색 고체로 얻었다. LCMS: m/z = 506 [M+H]⁺. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 14.63 (s, 1H), 8.86 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 8.19 - 7.91 (m, 2H), 7.71 (m, 1H), 6.92 (m, 1H), 4.65 (s, 1H), 4.42 - 4.11 (m, 2H), 3.91 - 3.72 (m, 1H), 3.23 (s, 1H), 2.27 (m, 1H), 2.08 (s, 1H), 2.00 - 1.75 (m, 2H), 1.61 (s, 3H), 1.28 (d, J = 16.3 Hz, 2H), 1.11 (m, 2H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) +++

실시예 10: ( R )-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)(메틸)아미노)메틸)피롤리딘-1-일)-6-플루오로-1-(4-하이드록시페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1. tert -부틸 (2 R )-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)(메틸)아미노]메틸]피롤딘-1-카르복실레이트의 합성

DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일) 아미노] 메틸] 피롤리딘-1-카르복실레이트 (1.0 g, 3.21 mmol, 1.0 당량)의 용액에 NaH (120 mg, 4.81 mmol, 1.5 당량) 및 CH₃I (910 mg, 6.41 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서 물을 첨가하여 반응을 켄칭하였다. 생성된 용액을 30 mL x 3의 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기상을 무수 황산나트륨 상에서 건조하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트/석유 에테르 (1/3)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 적용하였다. 그 결과 tert-부틸 (2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)(메틸)아미노]메틸]피롤리딘-1-카르복실레이트 (850 mg, 81.3%)를 황색 오일로 얻었다.

LCMS (ESI) [M+H]⁺: 326.

단계 2. 3-클로로- N -메틸- N -[(2 R )-피롤리딘-2-일메틸]피리딘-2-아민의 합성

DCM (5 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)(메틸)아미노]메틸]피롤리딘-1-카르복실레이트 (800 mg, 2.46 mmol, 1.0 당량)의 용액에 TFA (1 mL)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용액의 pH 값을 10으로 조정하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 그 결과 3-클로로-N-[(2R)-피롤리딘-2-일메틸] 피리딘-2-아민 (500 mg, 조질)을 황색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 226.

단계 3. 7-[(2 R )-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)(메틸)아미노]메틸]피롤리딘-1-일]-6-플루오로-1-(4-하이드록시페닐) -4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (2 mL) 중 6,7-디플루오로-1-(4-하이드록시페닐)-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (100 mg, 0.32 mmol, 1.0 당량)의 용액에, TEA (96 mg, 0.95 mmol, 3.0 당량) 및 3-클로로-N-메틸-N-[(2R)-피롤리딘-2-일메틸]피리딘-2-아민 (85 mg, 0.38 mmol, 1.2 당량)을 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 다음 조건에서 Prep.-HPLC로 정제하였다: 컬럼: X Bridge Shield RP18 OBD 컬럼, 5um, 19*150mm; 이동상 A: 물 (0.1%FA), 이동상 B: 아세토니트릴; 유속: 25 mL/분; 구배: 15분 후에 25 B에서 45 B로; 254 nm. 그 결과 7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일) 아미노] 메틸] 피롤리딘-1-일]-6-플루오로-1-(4-하이드록시페닐)-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (60.8 mg, 36.88%)을 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI): [M+H]⁺: 523.1. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 15.53 (s, 1H), 10.15 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.84 - 7.72 (m, 2H), 7.49 - 7.35 (m, 3H), 7.01 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.96 - 6.86 (m, 1H), 6.53 - 6.44 (m, 1H), 6.43 - 6.35 (m, 1H), 6.02 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.45 (s, 1H), 3.59 - 3.49 (m, 1H), 3.32 - 3.29 (m, 1H), 3.28 - 3.22 (m, 1H),3.13 - 3.04 (m, 1H), 2.06 - 1.79 (m, 4H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) +++

실시예 11: ( R )-7-(2-((1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-1-일)메틸)피롤딘-1-일)-6-플루오로-1-(4-하이드록시페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1. tert -부틸 (2 R )-2-[[(4-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

DMSO　(2.0 mL) 중 tert-부틸　(2R)-2-[[(4-메틸벤젠설포닐)옥시]메틸]피롤리딘-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.56 mmol, 1.0 당량) 및 4-아자인돌　(133 mg,　1.13　mmol,　2.0 당량)의 혼합물에 Cs₂CO₃　(550　mg,　1.69　mmol,　3.0　당량)를 실온에서 질소 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 밤새 질소 분위기 하에 교반하였다. 0℃에서 물 (1 mL)을 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 다음 조건으로 역상 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다:　컬럼,　C18　실리카겔;　이동상, 물 중 ACN,　30분 후에 5%에서　95%로　구배;　검출기,　UV　254　nm 및 UV　220　nm. 그 결과 tert-부틸 (2R)-2-[[(4-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-카르복실레이트 (100 mg, 59% 수율)를 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 302.1

단계 2. (2 R )-2-[피롤로[3,2- b ]피리딘-1-일메틸]피롤리딘의 합성

DCM　(5 mL)　중 tert-부틸　(2R)-2-[피롤로[3,2-b]피리딘-1-일메틸]피롤리딘-1-카르복실레이트 (100 mg,　0.33　mmol,　1.0 당량)의 혼합물에　TFA　(2 mL)를 0℃에서　질소 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을　1.5시간 동안　실온에서　질소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다.　조 생성물 (2R)-2-[피롤로[3,2-b]피리딘-1-일메틸]피롤리딘　(160　mg,　조질)은 추가의 정제 없이 그대로 다음 단계에 사용하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 202.12.

단계 3. 6-플루오로-1-(4-하이드록시페닐)-4-옥소-7-[(2 R )-2-[피롤로[3,2- b ]피리딘-1-일메틸]피롤리딘-1-일]퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (1.0 mL) 중 (2R)-2-[피롤로[3,2-b]피리딘-1-일메틸]피롤리딘 (60 mg, 0.30 mmol, 1.0 당량) 및 6,7-디플루오로-1-(4-하이드록시페닐)-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (32 mg, 0.10 mmol, 0.3 당량)의 혼합물에 TEA (181 mg, 1.79 mmol, 6.0 당량)를 실온에서 질소 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 80℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 조 생성물 (80 mg)을 다음 조건 (컬럼: XSelect CSH Prep C18 OBD 컬럼,, 5um,19*150mm ; 이동상 A:물 (0.05% FA), 이동상 B:ACN; 유속:25 mL/분; 구배: 8분 후에 9 B에서 30 B로; 254 nm; RT1:7.9)에서 Prep-HPLC로 정제하여 6-플루오로-1-(4-하이드록시페닐)-4-옥소-7-[(2R)-2-[피롤로[3,2-b]피리딘-1-일메틸]피롤리딘-1-일]퀴놀린-3-카르복실산 (46.9 mg, 31.3%)을 백색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 499.20. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 10.24 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.35 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.90 - 7.76 (m, 2H), 7.52 - 7.43 (m, 3H), 7.21 (s, 1H), 7.09 - 6.99 (m, 2H), 6.59 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.12 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.47 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.27 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.15 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 1.94 - 1.72 (m, 3H), 1.71 - 1.60 (m, 1H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 12: ( R )-7-(2-(((1 H -피롤로[3,2- c ]피리딘-6-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-6-플루오로-1-(4-하이드록시페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1. 6-클로로-1-[[2-(트리메틸실릴)에톡시]메틸]피롤로[3,2- c ]피리딘의 합성

DMF (15 mL) 중 6-클로로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (2.0 g, 13.11 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 NaH (0.4 g, 15.73 mmol, 1.2 당량)를 0℃에서 질소 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 15분 동안 실온에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 상기 혼합물에 SEM-Cl (2.6 g, 15.73 mmol, 1.2 당량)를 0℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 추가로 1.5시간 동안 실온에서 교반하였다. 물 (15 mL)을 0℃에서 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 생성된 혼합물을 EtOAc (3 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 (5 x 10 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄상에서 건조하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 석유 에테르/EtOAc (4:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 6-클로로-1-[[2-(트리메틸실릴)에톡시]메틸]피롤로[3,2-c]피리딘 (2.7 g, 72.8%)을 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 283.

단계 2. tert -부틸 (2 R )-2-[[(1-[[2-(트리메틸실릴)에톡시]메틸]피롤로[3,2- c ]피리딘-6-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

톨루엔 (12 mL) 중 6-클로로-1-[[2-(트리메틸실릴)에톡시]메틸]피롤로[3,2-c]피리딘 (1.0 g, 3.54 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트 (4.3 g, 21.21 mmol, 6.0 당량), Cs₂CO₃ (3.5 g, 10.61 mmol, 3.0 당량), Pd₂(알릴)₂Cl₂ (0.1 g, 0.35 mmol, 0.1 당량) 및 t-BuBrettPhos (0.2 g, 0.35 mmol, 0.1 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 3.5시간 동안 80℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 MeOH (3 x 8 mL)로 세척하였다. 여액을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 석유 에테르/EtOAc (2:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (2R)-2-[[(1-[[2-(트리메틸실릴)에톡시]메틸]피롤로[3,2-c]피리딘-6-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-카르복실레이트 (590 mg, 37.3%)를 담황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 448.

단계 3. (2 R )-2-([1 H -피롤로[3,2- c ]피리딘-6-일옥시]메틸)피롤리딘의 합성

1,4-디옥산 (6 mL) 중 HCl (가스) 중 tert-부틸 (2R)-2-[[(1-[[2-(트리메틸실릴)에톡시]메틸]피롤로[3,2-c]피리딘-6-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-카르복실레이트 (590 mg, 1.32 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 0℃에서. 생성된 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 상기 혼합물에 암모니아 용액 (5 mL, MeOH 중 7M)을 0℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 추가로 3.5시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 그 결과 (2R)-2-([1H-피롤로[3,2-c]피리딘-6-일옥시]메틸)피롤리딘 (300 mg, 조질)을 담황색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 218.

단계 4. 6-플루오로-1-(4-하이드록시페닐)-4-옥소-7-[(2 R )-2-([1 H -피롤로[3,2- c ]피리딘-6-일옥시]메틸)피롤리딘-1-일]퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (6 mL) 중 6,7-디플루오로-1-(4-하이드록시페닐)-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (300 mg, 0.95 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 TEA (287 mg, 2.84 mmol, 3.0 당량) 및 (2R)-2-([1H-피롤로[3,2-c]피리딘-6-일옥시]메틸)피롤리딘 (411 mg, 1.89 mmol, 2.0 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 80℃에서 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 다음 조건 (컬럼: XBridge Shield RP18 OBD 컬럼, 5um,19*150mm;이동상 A:물(0.05%FA), 이동상 B: ACN; 유속: 25 mL/분; 구배: 8분 후에 60% B에서 90% B로; 254/220 nm; Rt: 7.31분)으로 Prep.-HPLC에 의해 정제하여 6-플루오로-1-(4-하이드록시페닐)-4-옥소-7-[(2R)-2-([1H-피롤로[3,2-c]피리딘-6-일옥시]메틸)피롤리딘-1-일]퀴놀린-3-카르복실산 (25.0 mg, 5.14%)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 515.25. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 15.49 (s, 1H), 11.12 (s, 1H), 10.16 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.22 (d, J = 19.7 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 14.5 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 8.5, 2.7 Hz, 1H), 7.31 - 7.19 (m, 2H), 6.96 (s, 1H), 6.90 - 6.78 (m, 1H), 6.52 - 6.38 (m, 2H), 6.07 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.45 (s, 1H), 4.25 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 3.13 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 2.13 - 1.87 (m, 4H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 13: ( R )-1-(6-아미노피리딘-3-일)-6-플루오로-7-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1. 에틸 ( R )-1-(6-아세트아미도피리딘-3-일)-6-플루오로-7-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (5 mL) 중 에틸 (R,Z)-2-(2,5-디플루오로-4-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)벤조일)-3-에톡시아크릴레이트 (350 mg, 0.63 mmol)의 혼합물에 N-(5-아미노피리딘-2-일)아세트아미드 (114 mg, 0.75 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 이어서 K₂CO₃ (87 mg, 0.62 mmol)를 첨가하고 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응을 물로 실온에서 켄칭하였다. 고체를 여과하여 수집하고, 물로 세척하고 건조하여 에틸 (R)-1-(6-아세트아미도피리딘-3-일)-6-플루오로-7-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (200 mg, 조질)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 560.3.

단계 2. ( R )-1-(6-아미노피리딘-3-일)-6-플루오로-7-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF (3 mL) 중 에틸 (R)-1-(6-아세트아미도피리딘-3-일)-6-플루오로-7-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (200 mg, 0.12mmol)의 혼합물에 H₂O (1 mL) 중 LiOH.H₂O (131 mg, 3.12 mmol)를 질소 하에 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 잔류물을 Prep.-HPLC (컬럼: Gemini-NX C18 AXAI Packed, 21.2*150mm 5um; 이동상 A:물(0.1%FA), 이동상 B:ACN; 유속:25 mL/분; 구배: 15분 후에 51 B에서 71 B로; 254 nm; RT1:17.1; RT2:; 주입 부피: ml; 수행 횟수:;)로 정제하여 (R)-1-(6-아미노피리딘-3-일)-6-플루오로-7-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (79.2 mg, 29.5% 수율)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 490.15. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 15.41 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.11 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.94 - 7.81 (m, 2H), 7.57 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.93 - 6.79 (m, 1H), 6.71 - 6.36 (m, 3H), 6.16 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.66 - 4.45 (m, 1H), 4.34 - 4.16 (m, 2H), 3.31 - 3.15 (m, 2H), 2.19 - 1.84 (m, 7H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 14: 6-플루오로-7-[(2 R )-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-1-(옥산-4-일)-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1. 3-메틸-2-[(2 R )-피롤리딘-2-일메톡시]피리딘의 합성

THF (20 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트 (10.0 g, 49.71 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 NaH (7.9 g, 199.22 mmol, 4.0 당량)를 0℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다.　이어서 2-브로모-3-메틸피리딘을 첨가하고 70℃에서 밤새 교반하였다.　0℃에서 20 mL의 물을 사용하여 반응을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (200 mL x 3)로 추출하고 유기층을 합하였다. 유기층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 ACN/H₂O(0.1%FA) (80%- 90%)로 용리하는 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하여 3-메틸-2-[(2R)-피롤리딘-2-일메톡시]피리딘　(7.50 g, 78%)을 진황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺:193.1 및 tert-부틸 (2R)-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-카르복실레이트 (1.6 g)를 담황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺:293.1.

단계 2. 3-[2,5-디플루오로-4-[(2 R )-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]페닐]-3-옥소프로파노에이트의 합성

ACN (10 mL) 중 메틸 3-메틸-2-[(2R)-피롤리딘-2-일메톡시]피리딘 (1.00 g, 5.20 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 에틸 3-옥소-3-(2,4,5-트리플루오로페닐)프로파노에이트 (1.28 g, 5.20 mmol, 1.0 당량) 및 TEA (1.58 g, 15.60 mmol, 3.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 80℃에서 교반하였다. 잔류물을 ACN/H₂O (0.05%NH₄HCO₃) (60%-80%)로 용리하는 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하여 에틸 3-[2,5-디플루오로-4-[(2R)-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]페닐]-3-옥소프로파노에이트 (600 mg, 25.4% 수율)를 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 419.17.

단계 3. 에틸 (2 Z )-2-[( Z )-2,5-디플루오로-4-[(2 R )-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]벤조일]-3-에톡시프로프-2-에노에이트의 합성

아세트산 무수물 (146 mg, 1.43 mmol, 2.99 당량) 중 에틸 3-[2,5-디플루오로-4-[(2R)-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]페닐]-3-옥소프로파노에이트 (200 mg, 0.47 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 트리에틸오르토포르메이트 (106 mg, 0.71 mmol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 8시간 동안 80℃에서 교반하였다. 용매를 진공에서 농축시켜 에틸 (2Z)-2-[(Z)-2,5-디플루오로-4-[(2R)-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]벤조일]-3-에톡시프로프-2-에노에이트 (250 mg, 조질)를 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 475.20 .

단계 4. 에틸 6-플루오로-7-[(2R)-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-1-(옥산-4-일)-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (5.00 mL) 중 에틸 (2Z)-2-[(Z)-2,5-디플루오로-4-[(2R)-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]벤조일]-3-에톡시프로프-2-에노에이트 (250 mg, 0.52 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 옥산-4-아민 (64 mg, 0.63 mmol, 1.20 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 이어서 K₂CO₃ (73 mg, 0.52 mmol, 1.00 당량)를 첨가하고 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응을 물로 실온에서 켄칭하였다. 고체를 여과하여 수집하고, 물로 세척하고 건조하여 에틸 6-플루오로-7-[(2R)-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-1-(옥산-4-일)-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (200 mg, 조질)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 510.23.

단계 5. 6-플루오로-7-[(2 R )-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-1-(옥산-4-일)-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF (3.00 mL) 중 에틸 6-플루오로-7-[(2R)-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-1-(옥산-4-일)-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (200 mg, 0.39 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 LiOH.H₂O (131.0 mg,3.12 mmol, 8.0 당량) 및 H₂O (1.00 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 잔류물을 Prep.-HPLC로 정제하여 6-플루오로-7-[(2R)-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-1-(옥산-4-일)-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (34.4 mg, 18%)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 482.20. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 15.52 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 7.92 - 7.81 (m, 2H), 7.48 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.86 - 6.82 (m, 1H), 5.01 (s, 1H), 4.79 (s, 1H), 4.39 - 4.28 (m, 2H), 4.02 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.91 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 3.79 (s, 1H), 3.65 - 3.48 (m, 3H), 2.19 (s, 2H), 2.03 (d, J = 10.4 Hz, 9H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 15: ( R )-6-플루오로-7-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1. 에틸 ( R , Z )-2-(2,5-디플루오로-4-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)벤조일)-3-에톡시아크릴레이트의 합성

아세트산 무수물 (220 mg, 2.65 mmol, 2.99 당량) 중 에틸 (R)-3-(2,5-디플루오로-4-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)페닐)-3-옥소프로파노에이트 (300 mg, 0.69 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 트리에틸오르토포르메이트 (159 mg, 106 mmol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 8시간 동안 80℃에서 교반하였다. 용매를 진공에서 농축시켜 에틸 (R,Z)-2-(2,5-디플루오로-4-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)벤조일)-3-에톡시아크릴레이트 (350 mg, 조질)를 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 475.20.

단계 2. 에틸 ( R )-6-플루오로-7-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (5.00 mL) 중 에틸 (R,Z)-2-(2,5-디플루오로-4-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)벤조일)-3-에톡시아크릴레이트 (350 mg, 0.73 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 2-아미노피라진 (84 mg, 0.88 mmol, 1.20 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 이어서 K₂CO₃ (101 mg, 0.73 mmol, 1.00 당량)를 첨가하고 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응을 물로 실온에서 켄칭하였다. 고체를 여과하여 수집하고, 물로 세척하고 건조하여 에틸 (R)-6-플루오로-7-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (350 mg, 조질)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 504.20.

단계 3. ( R )-6-플루오로-7-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF (5.00 mL) 중 에틸 (R)-6-플루오로-7-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (350 mg, 0.69 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 LiOH.H₂O (233 mg, 5.55 mmol, 7.99 당량) 및 H₂O (1.70 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 잔류물을 얻고, 이를 Prep.-HPLC 로 정제하여 (R)-6-플루오로-7-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (69.7 mg, 23%)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 476.10. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 15.18 (s, 1H), 9.15 (s, 1H), 8.92 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 7.90 (d, J = 14.5 Hz, 1H), 7.85 (dd, J = 5.1, 1.8 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.85 (dd, J = 7.1, 5.0 Hz, 1H), 6.29 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 4.62 - 4.48 (m, 1H), 4.32 - 4.12 (m, 2H), 3.52 - 3.40 (m, 1H), 3.30 - 3.21 (m, 1H), 2.17 - 1.82 (m, 7H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 16: ( R )-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(5-(2-(디메틸아미노)에톡시)피라진-2-일)-6-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1. tert -부틸 N -(5-클로로피라진-2-일)카르바메이트의 합성

디옥산 (50 mL) 중 5-클로로-피라진아민 (5 g, 38.59 mmol)의 혼합물에 Boc₂O (12 g, 54.98 mmol), DMAP (9 g, 73.66 mmol) 및 TEA (3.51 g, 10.78 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 100℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 500 ml H₂O로 희석하였다. 생성된 용액을 EtOAc (300 mL x 3)로 추출하고 유기층을 합하였다. 유기층은 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 ACN/H₂O (0.05% NH₄HCO₃) (80%-100%)로 용리하는 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 N-(5-클로로피라진-2-일)카르바메이트 (8 g, 90% 수율)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 230.27.

단계 2. tert -부틸 N -[5-[2-(디메틸아미노)에톡시]피라진-2-일]카르바메이트의 합성

톨루엔 (10 mL) 중 tert-부틸 N-(5-클로로피라진-2-일)카르바메이트 (1 g, 4.35 mmol)의 혼합물에 디메틸아미노에탄올 (1.55 g, 17.41 mmol), t-BuBrettPhos (211 mg, 0.43 mmol), Pd₂(알릴)₂Cl₂(159 mg, 0.43 mmol) 및 Cs₂CO₃(4.26 g, 13.06 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 80℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 200 mL H₂O로 희석하였다. 생성된 용액을 EtOAc (100 mL x 3)로 추출하고 유기층을 합하였다. 유기층은 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 ACN/H₂O (0.05% NH₄HCO₃) (80%-100%)로 용리하는 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 N-[5-[2-(디메틸아미노)에톡시]피라진-2-일]카르바메이트 (300 mg, 22% 수율)를 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 601.24.

단계 3. 5-[2-(디메틸아미노)에톡시]피라진-2-아민의 합성

DCM (2 mL) 중 tert-부틸 N-[5-[2-(디메틸아미노)에톡시]피라진-2-일]카르바메이트 (180 mg, 0.63 mmol)의 혼합물에 TFA (2 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 여액을 여과하여 수집하고 농축하여 5-[2-(디메틸아미노)에톡시]피라진-2-아민 (200 mg, 조질)을 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 183.24.

단계 4. 에틸 ( R )-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(5-(2-(디메틸아미노)에톡시)피라진-2-일)-6-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (5.00 mL) 중 에틸 (R,Z)-2-(4-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-2,5-디플루오로벤조일)-3-에톡시아크릴레이트 (200 mg, 0.42 mmol)의 혼합물에 5-[2-(디메틸아미노)에톡시]피라진-2-아민 (92 mg, 0.50 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 이어서 K₂CO₃ (58 mg, 0.42 mmol)를 첨가하고 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응을 물로 실온에서 켄칭하였다. 고체를 여과하여 수집하고, 물로 세척하고 건조하여 에틸 (R)-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(5-(2-(디메틸아미노)에톡시)피라진-2-일)-6-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (100 mg, 조질)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 589.24.

단계 5. ( R )-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(5-(2-(디메틸아미노)에톡시)피라진-2-일)-6-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF (3 mL) 중 에틸 (R)-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(5-(2-(디메틸아미노)에톡시)피라진-2-일)-6-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (100 mg, 0.17 mmol)의 혼합물에 LiOH.H₂O (35 mg, 0.83 mmol,) 및 H₂O (1.00 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 잔류물을 Prep.-HPLC (컬럼: YMC-Actus Triart C18, 20*250mm,5um,12nm; 이동상 A:물(10mmol/L NH₄HCO₃), 이동상 B:ACN; 유속:25 mL/분; 구배: 2분 후에 5 B에서 61 B로; 254 nm; RT1:8.72)로 정제하여 (R)-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(5-(2-(디메틸아미노)에톡시)피라진-2-일)-6-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (6.0 mg, 6%)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺:583.25. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.89 - 8.48 (m, 2H), 8.30 (s, 1H), 8.14 - 7.53 (m, 3H), 6.99 (s, 1H), 6.28 - 6.17 (m, 1H), 4.65 - 4.40 (m, 3H), 4.35 - 4.15 (m, 2H), 3.35 (s, 1H), 3.21 (s, 1H), 2.68 (s, 2H), 2.27 - 2.22 (m, 6H), 2.08 (s, 2H), 1.99 - 1.81 (m, 2H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 17: ( R )-1-(4-(2-(디메틸아미노)에톡시)페닐)-6-플루오로-7-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1. 디메틸[2-(4-니트로페녹시)에틸]아민의 합성

DMF (10 mL) 중 4-니트로페놀 (500 mg, 3.59 mmol)의 혼합물에 디메틸아미노에틸 클로라이드 하이드로클로라이드 (776 mg, 5.38 mmol) 및 Cs₂CO₃(3.51 g, 10.78 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 100℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 50 ml H₂O로 희석하였다. 생성된 용액을 EtOAc (100 mL x 3)로 추출하고 유기층을 합하였다. 유기층은 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 ACN/H₂O (0.05% NH₄HCO₃)(80%-100%)로 용리하는 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하여 디메틸[2-(4-니트로페녹시)에틸]아민 (400 mg, 47% 수율)을 백색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 211.24.

단계 2. 4-[2-(디메틸아미노)에톡시]아닐린의 합성

질소 하에, MeOH (10 mL) 중 디메틸[2-(4-니트로페녹시)에틸]아민 (400 mg, 1.90 mmol)의 혼합물에 Pd/C (99 mg, 0.93 mmol)를 첨가하였다. 이어서 질소 분위기를 수소 분위기로 대체하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 여액을 여과하여 수집하고 농축하여 4-[2-(디메틸아미노)에톡시]아닐린 (250 mg, 조질)을 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 181.24.

단계 3. 에틸 1-[4-[2-(디메틸아미노)에톡시]페닐]-6-플루오로-7-[(2 R )-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (5.00 mL) 중 에틸 (2Z)-2-[(Z)-2,5-디플루오로-4-[(2R)-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]벤조일]-3-에톡시프로프-2-에노에이트 (200 mg, 0.42 mmol)의 혼합물에 4-[2-(디메틸아미노)에톡시]아닐린 (91 mg, 0.50 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 이어서 K₂CO₃ (58 mg, 0.42 mmol)를 첨가하고 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응을 물로 실온에서 켄칭하였다. 고체를 여과하여 수집하고, 물로 세척하고 건조하여 에틸 1-[4-[2-(디메틸아미노)에톡시]페닐]-6-플루오로-7-[(2R)-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (250 mg ,조질)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 589.24.

단계 4. ( R )-1-(4-(2-(디메틸아미노)에톡시)페닐)-6-플루오로-7-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF (3 mL) 중 에틸 1-[4-[2-(디메틸아미노)에톡시]페닐]-6-플루오로-7-[(2R)-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (250 mg, 0.42 mmol)의 혼합물에 LiOH.H₂O (142 mg, 3.38 mmol) 및 H₂O (1.00 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 잔류물을 Prep.-HPLC (컬럼: Gemini-NX C18 AXAI Packed, 21.2*150mm 5um; 이동상 A:물(0.1%FA), 이동상 B:ACN; 유속:25 mL/분; 구배: 9분 후에 23 B에서 30 B로; 254 nm; RT1:6.67)로 정제하여 (R)-1-(4-(2-(디메틸아미노)에톡시)페닐)-6-플루오로-7-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (46.2 mg, 19%)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 561.25. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.47 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.94 - 7.83 (m, 2H), 7.57 - 7.45 (m, 3H), 7.21 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.92 - 6.82 (m, 1H), 6.10 (m, 1H), 4.43 (s, 1H), 4.23 (m, 1H), 4.13 (m, 3H), 3.37 (s, 1H), 3.21 (s, 1H), 2.69 (m, 2H), 2.06 (s, 6H), 2.04 (s, 2H), 1.99 - 1.85 (s, 5H)

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 18: ( R )-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(1,3-디하이드로이소벤조푸란5-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1. 에틸 ( R )-3-(5-클로로-4-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-2-플루오로페닐)-3-옥소프로파노에이트(프로노아트)의 합성

ACN (5 mL) 중 에틸 3-(5-클로로-2,4-디플루오로페닐)-3-옥소프로파노에이트 (500 mg, 1.90 mmol)의 혼합물에 3-클로로-2-[(2R)-피롤리딘-2-일메톡시]피리딘 (485 mg, 2.28 mmol) 및 TEA (1.16 g, 11.42 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 80℃에서 교반하였다. 잔류물을 ACN/H₂O (0.05%NH₄HCO₃) (60%-80%)로 용리하는 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하여 에틸 (R)-3-(5-클로로-4-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-2-플루오로페닐)-3-옥소프로파노에이트 (300 mg, 33% 수율)를 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 455.24.

단계 2. 에틸 ( R , Z )-2-(5-클로로-4-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-2-플루오로벤조일)-3-에톡시아크릴레이트의 합성

아세트산 무수물 (146 mg, 1.43 mmol) 중 에틸 (R)-3-(5-클로로-4-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-2-플루오로페닐)-3-옥소프로파노에이트 (300 mg, 0.65 mmol)의 혼합물에 트리에틸오르토포르메이트 (106 mg, 0.71 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 8시간 동안 80℃에서 교반하였다. 용매를 진공에서 농축시켜 에틸 (R,Z)-2-(5-클로로-4-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-2-플루오로벤조일)-3-에톡시아크릴레이트 (360 mg, 조질)를 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 511.24.

단계 3. 에틸 ( R )-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(1,3-디하이드로이소벤조푸란5-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (5.00 mL) 중 에틸 (R,Z)-2-(5-클로로-4-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-2-플루오로벤조일)-3-에톡시아크릴레이트 (360 mg, 0.70 mmol)의 혼합물에 1,3-디하이드로-2-벤조푸란5-아민 (114 mg, 0.84 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 100℃에서 교반하였다. 이어서 K₂CO₃ (97 mg, 0.70 mmol)를 첨가하고 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응을 물로 실온에서 켄칭하였다. 고체를 여과하여 수집하고, 물로 세척하고 건조하여 에틸 (R)-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(1,3-디하이드로이소벤조푸란5-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (350 mg, 조질)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 580.20.

단계 4. ( R )-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(1,3-디하이드로이소벤조푸란5-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF (3 mL) 중 에틸 (R)-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(1,3-디하이드로이소벤조푸란5-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (350 mg, 0.60 mmol)의 혼합물에 LiOH.H₂O (57 mg, 2.38 mmol) 및 H₂O (1.00 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 잔류물을 Prep.-HPLC (컬럼: XSelect CSH Prep C18 OBD 컬럼,, 5um,19*150mm ; 이동상 A:물(0.1%FA), 이동상 B:ACN; 유속:25 mL/분; 구배: 8분 후에 53 B에서 77 B로; 254 nm; RT1:7.2)로 정제하여 (R)-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(1,3-디하이드로이소벤조푸란5-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (70 mg, 21%)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 552.0. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 15.08 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.89 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.83 (dd, J = 7.7, 1.6 Hz, 1H), 7.74 - 7.27 (m, 3H), 7.03 - 6.87 (m, 1H), 6.37 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 5.11 (s, 3H), 5.04 - 4.84 (m, 1H), 4.71 - 4.55 (m, 1H), 4.36 - 4.19 (m, 2H), 3.58 - 3.40 (m, 1H), 3.26 - 3.09 (m, 1H), 2.26 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 2.05 - 1.65 (m, 3H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 19: ( R )-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로-1,8-나프티리딘-3-카르복실산의 합성

단계 1. 에틸 3-옥소-3-(2,5,6-트리클로로피리딘-3-일)프로파노에이트 의 합성

질소 분위기 하에, THF (40 mL) 중 2,5,6-트리클로로피리딘-3-카르복실산 (1.8 g, 7.95 mmol) 및 CDI (1.6 g, 9.54 mmol)의 혼합물을 3시간 동안 60℃에서 교반하였다. 이어서 혼합물을 THF (40 mL) 중 1-에틸 3-칼륨 프로판디오에이트 (1.4 g, 7.93 mmol), Et₃N (116 mg, 1.15 mmol), MgCl₂ (1.1 g, 12.00 mmol)의 현탁액에 첨가하고 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 이어서 1N HCl (aq.)을 사용하여 반응의 pH을 3 내지 4로 조정하였다. 혼합물을 EtOAc (200 mL)로 희석하고, 물 (80 mL), 염수 (80 mL)로 세척하고, Na₂SO₄상에서 건조하고, 여과하고 농축하고, EtOAc/석유 에테르 (0-100%)로 용리하는 실리카겔 상의 플래시 크로마토그래피로 정제하여 에틸 3-옥소-3-(2,5,6-트리클로로피리딘-3-일)프로파노에이트 (300 mg,12.73%)를 담황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 296.

단계 2. 에틸 6,7-디클로로-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,8-나프티리딘-3-카르복실레이트 의 합성

질소 분위기 하에, Ac₂O (620 mg, 6.07 mmol) 중 에틸 3-옥소-3-(2,5,6-트리클로로피리딘-3-일)프로파노에이트 (300 mg, 1.01 mmol) 및 트리에틸오르토포르메이트 (225 mg, 1.52 mmol)의 혼합물을 1시간 동안 100℃에서 교반하였다. 이어서 혼합물을 증발시켜 잔류물을 얻었다. 잔류물을 DMSO (5 mL)에 용해시키고 2-아미노피라진 (96 mg, 1.01 mmol)을 첨가하고 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 이어서 K₂CO₃ (140 mg, 1.01 mmol)를 혼합물에 첨가하고 추가로 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 이어서 1N HCl (aq.)를 사용하여 반응의 pH를 3 내지 4로 조정하였다. 혼합물을 EtOAc (200 mL)로 희석하고, 물 (80 mL), 염수 (80 mL)로 세척하고, Na₂SO₄상에서 건조하고, 여과하고 농축하고, EtOAc/석유 에테르 (0-100%)로 용리하는 실리카겔 상의 플래시 크로마토그래피로 정제하여 에틸 6,7-디클로로-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,8-나프티리딘-3-카르복실레이트 (240 mg, 64.96%)를 적색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 365.

단계 3. 에틸 ( R )-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로-1,8-나프티리딘-3-카르복실레이트 의 합성

질소 분위기 하에, 에틸 6,7-디클로로-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,8-나프티리딘-3-카르복실레이트 (70 mg, 0.19 mmol), 3-클로로-2-[(2R)-피롤리딘-2-일메톡시]피리딘 (61 mg, 0.29 mmol), Et₃N (116 mg, 1.15 mmol) 및 ACN (3 mL)의 혼합물을 밤새 80℃에서 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고 추가 정제 없이 그대로 사용하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 541.

단계 4. 6-클로로-7-[(2 R )-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,8-나프티리딘-3-카르복실산 의 합성

물 중 LiOH^.H₂O (1N, 0.38 mL, 0.38 mmol)를 이전 단계에서의 혼합물에 첨가하고 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 그 다음 반응의 pH를 3 내지 4로 조정하였다. 혼합물을 여과하고, 물 및 ACN으로 세척하였다. 여액을 감압 하에 증발시켜 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,8-나프티리딘-3-카르복실산 (23.4 mg, 22.59%)을 담황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 513.1.¹H NMR (300 MHz, 클로로포름-d) δ 14.60 (s, 1H), 9.09 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.61 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.53 (dd, J = 2.5, 1.5 Hz, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.91 (dd, J = 4.9, 1.7 Hz, 1H), 7.63 (dd, J = 7.6, 1.7 Hz, 1H), 6.85 (dd, J = 7.6, 4.9 Hz, 1H), 4.86 (m, 1H), 4.34 - 4.19 (m, 2H), 4.15 - 3.97 (m, 1H), 3.95 - 3.78 (m, 1H), 2.28 - 2.03 (m, 3H), 2.02 - 1.84(m, J = 7.2 Hz, 1H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 20: ( R )-6,8-디플루오로-1-(2-플루오로-4-하이드록시페닐)-7-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1. 에틸 6,7,8-트리플루오로-1-(2-플루오로-4-하이드록시페닐)-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

에틸 3-옥소-3-(2,3,4,5-테트라플루오로페닐)프로파노에이트 (300 mg, 1.13 mmol), 트리에틸오르토포르메이트 (252 mg, 1.70 mmol) 및 아세트산 무수물 (347 mg, 3.40 mmol)의 혼합물을 100℃에서. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 조 생성물은 추가 정제없이 다음 단계에 그대로 사용하였다. DMSO (5 mL) 중 잔류물에 4-아미노-3-플루오로페놀 (129 mg, 1.02 mmol)을 첨가하고 혼합물을 12시간 동안 실온에서 교반하였다. 이어서 K₂CO₃ (156 mg, 1.13 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 그 다음 반응을 물 (5 mL)로 켄칭하였다. 침전된 고체를 여과하여 수집하고 물 (2x10 mL)로 세척하였다. 그 결과 에틸 6,7,8-트리플루오로-1-(2-플루오로-4-하이드록시페닐)-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (140 mg, 32.4%)를 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 382.

단계 2. 에틸 6,8-디플루오로-1-(2-플루오로-4-하이드록시페닐)-7-[(2 R )-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

3-메틸-2-[(2R)-피롤리딘-2-일메톡시]피리딘 (212 mg, 1.10 mmol), Et₃N (223 mg, 2.20 mmol), DMSO (2 mL) 및 에틸 6,7,8-트리플루오로-1-(2-플루오로-4-하이드록시페닐)-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (210 mg, 0.55 mmol)의 혼합물을 12시간 동안 100℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 원하는 생성물은 LCMS로 검출될 수 있었다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 수성층을 EtOAc (3x10 mL)로 추출하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 ACN/H₂O (0-95%)로 용리하는 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하여 에틸 6,8-디플루오로-1-(2-플루오로-4-하이드록시페닐)-7-[(2R)-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (60 mg, 19.7%)를 담황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 554.

단계 3. 6,8-디플루오로-1-(2-플루오로-4-하이드록시페닐)-7-[(2 R )-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF (2 mL) 중 에틸 6,8-디플루오로-1-(2-플루오로-4-하이드록시페닐)-7-[(2R)-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (60.0 mg, 0.10 mmol)의 교반한 용액에 LiOH^.H₂O (23 mg, 0.54 mmol) 및 H₂O (0.5 mL)를 첨가하고 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 다음 조건 (컬럼: Gemini-NX C18 AXAI Packed, 21.2*150mm 5um; 이동상 A:물(0.1%FA), 이동상 B:ACN; 유속:25 mL/분; 구배: 8분 후에 60 B에서 65 B로; 254 nm)에서 Prep.-HPLC로 정제하여 6,8-디플루오로-1-(2-플루오로-4-하이드록시페닐)-7-[(2R)-2-[[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (10.4 mg, 18.26%)을 담황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 526.2. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 14.75 (s, 1H), 10.51 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.90 - 7.71 (m, 2H), 7.62 - 7.47 (m, 1H), 7.43 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.91 - 6.64 (m, 3H), 4.61 - 4.42 (m, 1H), 4.33 - 4.12 (m, 2H), 3.77 - 3.61 (m, 1H), 3.41 - 3.36 (m, 1H), 2.25 - 2.13 (m, 1H), 2.03 - 1.90 (m, 1H), 1.86 - 1.71 (m, 5H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 21: ( R )-7-(2-(((3-브로모피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-6-플루오로-1-(4-(2-하이드록시에톡시)페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1. 2-(4-니트로페녹시)에탄-1-올 의 합성

DMF (40 mL) 중 1-플루오로-4-니트로벤젠 (3.0 g, 21.27 mmol) 및 에탄-1,2-디올 (2.6 g, 42.55 mmol)의 혼합물에 K₂CO₃ (8.8 g, 63.81 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 빙수에 부었다. 혼합물을 여과하였다. 여액을 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기상을 Na₂SO₄상에서 건조하고, 농축하여 2-(4-니트로페녹시)에탄-1-올 (1.0 g, 26%)을 황색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.26 - 8.16 (m, 2H), 7.21 - 7.12 (m, 2H), 4.97 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.19 - 4.10 (m, 2H), 3.75 (q, J = 5.1 Hz, 2H).

단계 2. 2-(4-아미노페녹시)에탄-1-올 의 합성

MeOH (15 mL) 중 2-(4-니트로페녹시)에탄-1-올 (1.0 g, 5.46 mmol)의 용액에 Pd/C (200 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 탈기하고 실온에서 H₂ 하에 1.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하였다. 여액을 농축하여 2-(4-아미노페녹시)에탄-1-올 (700 mg, 84%)을 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 154.

단계 3. 에틸 6,7-디플루오로-1-(4-(2-하이드록시에톡시)페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 의 합성

DMSO (25 mL) 중 에틸 (Z)-3-에톡시-2-(2,4,5-트리플루오로벤조일)아크릴레이트 (1.2 g, 4.07 mmol)의 용액에 2-(4-아미노페녹시)에탄-1-올 (622 mg, 4.07 mmol)을 첨가하였다. 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 그 후 K₂CO₃ (673 mg, 4.88 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 부었다. 고체를 여과하여 수집하고 건조하여 에틸 6,7-디플루오로-1-(4-(2-하이드록시에톡시)페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (1.4 g, 88%)를 담황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 390.

단계 4. 에틸 ( R )-7-(2-(((3-브로모피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-6-플루오로-1-(4-(2-하이드록시에톡시)페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 의 합성

DMSO (10 mL) 중 에틸 6,7-디플루오로-1-(4-(2-하이드록시에톡시)페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (500 mg, 1.28 mmol) 및 TEA (648 mg, 6.40 mmol)의 용액에 (R)-3-브로모-2-(피롤리딘-2-일메톡시)피리딘 (987 mg, 3.85 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 물 중 40- 80% 아세토니트릴을 사용하는 역상 플래시 컬럼으로 반응 용액을 정제하여 에틸 (R)-7-(2-(((3-브로모피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-6-플루오로-1-(4-(2-하이드록시에톡시)페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (670 mg, 84%)를 담황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 626.

단계 5. ( R )-7-(2-(((3-브로모피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-6-플루오로-1-(4-(2-하이드록시에톡시)페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 의 합성

THF (1 mL) 중 에틸 (R)-7-(2-(((3-브로모피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-6-플루오로-1-(4-(2-하이드록시에톡시)페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (60 mg, 0.10 mmol)의 교반한 용액에 실온에서 질소 하에 물 (1 mL) 중 LiOH ^. H₂O (16 mg, 0.38 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. HOAc를 첨가하여 반응을 켄칭시켜 pH 5로 조정하였다. 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: XSelect CSH Prep C18 OBD 컬럼,, 5um,19*150mm ; 이동상 A:물(0.1%FA), 이동상 B:ACN; 유속:25 mL/분; 구배: 8분 후에 38 B에서 68 B로; 254 nm; RT1:7.65)로 정제하여 (R)-7-(2-(((3-브로모피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-6-플루오로-1-(4-(2-하이드록시에톡시)페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (32.3 mg, 54%)을 회백색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 600.10. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 15.43 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.06 - 7.95 (m, 2H), 7.88 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 7.58 - 7.49 (m, 2H), 7.24 - 7.14 (m, 1H), 7.09 - 6.99 (m, 1H), 6.98 - 6.88 (m, 1H), 6.08 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.97 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.50 - 4.44 (m, 1H), 4.35 - 4.29 (m, 2H), 4.11 - 4.02 (m, 2H), 3.83 - 3.72 (m, 2H), 3.33 - 3.25 (m, 1H), 3.21 - 3.13 (m, 1H), 2.14 - 2.02 (m, 2H), 2.04 - 1.81 (m, 2H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 22: ( R )-6-플루오로-1-(2-플루오로-4-하이드록시페닐)-4-옥소-7-(2-((피리미딘-2-일옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1. 에틸 6,7-디플루오로-1-[2-플루오로-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]페닐]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMF (100 mL) 중 에틸 6,7-디플루오로-1-(2-플루오로-4-하이드록시페닐)-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (10.0 g, 27.53 mmol, 1.0 당량)의 용액에 K₂CO₃ (11.4 g, 82.58 mmol, 3.0 당량) 및 4-메톡시벤질 클로라이드 (6.5 g, 41.29 mmol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 반응을 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서 반응을 물로 켄칭하였다. 생성된 용액을 150 x 3 mL의 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 합하고 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄/에틸 아세테이트 (1/2)를 사용하는 실리카겔 컬럼에 적용하였다. 그 결과 에틸 6,7-디플루오로-1-[2-플루오로-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]페닐]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (4.2 g, 31.6%)를 황색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 484.

단계 2. 에틸 6-플루오로-7-[(2 R )-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-일]-1-[4-[(4-메톡시페닐)메톡시]페닐]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (25 mL) 중 에틸 6,7-디플루오로-1-[4-[(4-메톡시페닐)메톡시]페닐]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (2.0 g, 4.30 mmol, 1.0 당량)의 용액에 K₂CO₃ (1.8 g, 12.89 mmol, 3.0 당량) 및 (R)-피롤리딘-2-일메탄올 (650 mg, 6.45 mmol, 1.5 당량)을 첨가하였다. 반응물을 100℃에서 2시간 동안 N₂ 분위기 하에 교반하였다. 조 생성물을 NH₄HCO₃/아세토니트릴 = 15분 이내에 40%를 50%로 증가; 검출기, 254/220 nm에서 플래시-Prep-HPLC로 정제하였다. 그 결과 에틸 6-플루오로-7-[(2R)-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-일]-1-[4-[(4-메톡시페닐)메톡시]페닐]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (1.5 g, 63.9%)를 황색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 547.

단계 3. ( R )-6-플루오로-1-(2-플루오로-4-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)-4-옥소-7-(2-((피리미딘-2-일옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF (5 mL) 중 에틸 6-플루오로-1-[2-플루오로-4-[(4-메톡시페닐) 메톡시] 페닐]-7-[(2R)-2-(하이드록시메틸) 피롤리딘-1-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (150 mg, 0.27 mmol, 1.0 당량)의 용액에 NaH (10 mg, 0.40 mmol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 이어서, 2-클로로피리미딘 (37 mg, 0.32 mmol, 1.2 당량)을 용액에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서 물을 첨가하여 반응을 켄칭하였다. 잔류물을 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하여 (R)-6-플루오로-1-(2-플루오로-4-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)-4-옥소-7-(2-((피리미딘-2-일옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (12.3 mg, 7.53%)을 담황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI): [M+H]⁺: 615.15. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.52 (d, J = 4.7 Hz, 2H), 8.38 (s, 1H), 7.82 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 7.69 - 7.57 (m, 1H), 7.44 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.34 - 7.26 (m, 0.5H), 7.16 - 7.03 (m, 2H), 7.03 - 6.96 (m, 2H), 6.92 - 6.86 (m, 0.5H), 6.00 - 5.91 (m, 1H), 5.19 - 5.04 (m, 2H), 4.37 - 4.17 (m, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.31 - 3.29 (m, 1H), 3.21 - 3.13 (m, 1H), 2.14 - 1.85 (m, 4H).

단계 4. ( R )-6-플루오로-1-(2-플루오로-4-하이드록시페닐)-4-옥소-7-(2-((피리미딘-2-일옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DCM (2 mL) 중 (R)-6-플루오로-1-(2-플루오로-4-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)-4-옥소-7-(2-((피리미딘-2-일옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (30 mg, 0.05 mmol, 1.0 당량)의 용액에 TFA (0.5 mL)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용액을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 다음 조건에서 prep-HPLC로 정제하였다: 컬럼: X Select CSH Prep C18 OBD 컬럼, 5um, 19*150mm; 이동상 A: 물 (0.05%FA), 이동상 B: 아세토니트릴; 유속: 25 mL/분; 구배: 8분 후에 30 B에서 55 B로; 254 nm. 그 결과 (R)-6-플루오로-1-(2-플루오로-4-하이드록시페닐)-4-옥소-7-(2-((피리미딘-2-일옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (10.3 mg, 42.68%)을 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 495.30. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 15.29 (s, 1H), 10.62 (s, 1H), 8.60 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.52 (dd, J = 4.8, 1.8 Hz, 2H), 7.88 (dd, J = 14.5, 2.2 Hz, 1H), 7.60 - 7.50 (m, 1H), 7.17 - 7.08 (m, 4.8 Hz, 1H), 6.94 - 6.81 (m, 1H), 6.73 - 6.65 (m, 1H), 6.08 - 6.00 (m, 1H), 4.44 (s, 1H), 4.35 - 4.22 (m, 2H), 3.32 - 3.30 (m, 1H), 3.26 - 3.17 (m, 1H), 2.17 - 1.88 (m, 4H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) +++

실시예 23: ( R )-6-플루오로-1-(4-하이드록시페닐)-7-(2-((5-메틸-6-옥소피리다진-1(6 H )-일)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1. 에틸 ( R )-6-플루오로-7-(2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-일)-1-(4-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

10-mL 밀봉된 튜브에, 에틸 6,7-디플루오로-1-(4-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (820.0 mg, 1.762 mmol), DMSO (5.0 mL), Et₃N (1782.7 mg, 17.617 mmol), (R)-피롤리딘-2-일메탄올 (213.8 mg, 2.114 mmol)를 넣었다. 생성된 용액을 15시간 동안 80℃에서 교반하였다. 잔류물을 ACN/물 (0%-70%, 염기성 시스템)로 용리하는 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 780 mg (81.00%)의 에틸 (R)-6-플루오로-7-(2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-일)-1-(4-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 547.

단계 2. 에틸 ( R )-7-(2-(브로모메틸)피롤리딘-1-일)-6-플루오로-1-(4-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

40-mL 밀봉된 튜브에, 에틸 (R)-6-플루오로-7-(2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-일)-1-(4-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (500.0 mg, 0.915 mmol), DCM (10.0 mL), PPh₃ (719.8 mg, 2.744 mmol), CBr₄ (910.1 mg, 2.744 mmol)를 넣었다. 생성된 용액을 2시간 동안 0℃에서 교반하였다. 생성된 용액을 3x50 mL의 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기상을 합하고 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트/석유 에테르 (1:2)로 용리하는 실리카겔 컬럼 상에 적용하였다. 그 결과 400 mg (71.74%, 조질)의 에틸 (R)-7-(2-(브로모메틸)피롤리딘-1-일)-6-플루오로-1-(4-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트를 갈색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 569.

단계 3. 에틸 ( R )-6-플루오로-1-(4-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)-7-(2-((5-메틸-6-옥소피리다진-1(6 H )-일)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

40-mL 밀봉된 튜브에, 에틸 (R)-7-(2-(브로모메틸)피롤리딘-1-일)-6-플루오로-1-(4-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (300.0 mg, 0.492 mmol), DMF (10.0 mL), K₂CO₃ (204.1 mg, 1.477 mmol), 4-메틸피리다진-3-올 (54.2 mg, 0.492 mmol)을 넣었다. 생성된 용액을 2시간 동안 80℃에서 교반하였다. 잔류물을 ACN/물 (0%-50%, 염기성 시스템)로 용리하는 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 200 mg (63.62%, 조질)의 에틸 (R)-6-플루오로-1-(4-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)-7-(2-((5-메틸-6-옥소피리다진-1(6H)-일)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트를 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 639.

단계 4. ( R )-6-플루오로-1-(4-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)-7-(2-((5-메틸-6-옥소피리다진-1(6 H )-일)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

10-mL 밀봉된 튜브에, 에틸 (R)-6-플루오로-1-(4-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)-7-(2-((5-메틸-6-옥소피리다진-1(6H)-일)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (200.0 mg, 0.313 mmol), LiOH.H₂O (65.7 mg, 1.566 mmol), THF (4.0 mL), H₂O (2.0 mL)를 넣었다. 생성된 용액을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. AcOH로 용액의 pH 값을 4 내지 5로 조정하였다. 고체를 여과하여 수집하였다. 그 결과 160 mg (83.68%)의 (R)-6-플루오로-1-(4-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)-7-(2-((5-메틸-6-옥소피리다진-1(6H)-일)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산을 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 611.

단계 5. ( R )-6-플루오로-1-(4-하이드록시페닐)-7-(2-((5-메틸-6-옥소피리다진-1(6 H )-일)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

10-mL 밀봉된 튜브에, (R)-6-플루오로-1-(4-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)-7-(2-((5-메틸-6-옥소피리다진-1(6H)-일)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (80.0 mg, 0.131 mmol) 및 TFA (2.0 mL)를 넣었다. 생성된 용액을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 잔류물을 ACN/물 (0%-40%, 염기성 시스템)로 용리하는 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 20 mg (31.12%)의 (R)-6-플루오로-1-(4-하이드록시페닐)-7-(2-((5-메틸-6-옥소피리다진-1(6H)-일)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산을 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 491. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 15.42 (s, 1H), 10.17 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.80 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 7.45 (s, 2H), 7.20 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 7.00 (m, 2H), 6.31 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.38 (s, 1H), 4.27 - 4.07 (m, 1H), 3.96 - 3.72 (m, 1H), 3.52 (s, 1H), 3.28 (s, 1H), 2.00 (s, 3H), 1.92 (s, 3H), 1.76 (s, 1H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 24: ( R )-6-클로로-1-(1-메틸사이클로프로필)-4-옥소-7-(2-옥소-5-((피리딘-2-일옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1. ( R )-5-((피리딘-2-일옥시)메틸)피롤리딘-2-온의 합성

질소 하에, 40-mL 밀봉된 튜브에, (R)-5-(하이드록시메틸)피롤리딘-2-온 (500.0 mg, 4.343 mmol), DMF (10.0 mL), 2-플루오로피리딘 (506.0 mg, 5.211 mmol), tert-부톡시칼륨 (1462.0 mg, 13.029 mmol)을 넣었다. 생성된 용액을 5시간 동안 80℃에서 교반하였다. 잔류물을 ACN/물 (0%-40%, 염기성 시스템)로 용리하는 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 600 mg (71.9%)의 (R)-5-((피리딘-2-일옥시)메틸)피롤리딘-2-온을 회백색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 193.

단계 2. ( R )-6-클로로-1-(1-메틸사이클로프로필)-4-옥소-7-(2-옥소-5-((피리딘-2-일옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

질소 하에, 10-mL 밀봉된 튜브에 6-클로로-7-플루오로-1-(1-메틸사이클로프로필)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (100.0 mg, 0.338 mmol), DMSO (3.0 mL), (R)-5-((피리딘-2-일옥시)메틸)피롤리딘-2-온 (78.0 mg, 0.406 mmol), tert-부톡시칼륨 (113.9 mg, 1.015 mmol)을 넣었다. 생성된 용액을 15시간 동안 실온에서 교반하였다. 잔류물을 ACN/물 (0%-50%, 염기성 시스템)로 용리하는 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 36.8 mg (23.26%)의 (R)-6-클로로-1-(1-메틸사이클로프로필)-4-옥소-7-(2-옥소-5-((피리딘-2-일옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산을 백색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 468.2. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 14.66 (s, 1H), 8.86 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.40 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.29 - 8.05 (m, 2H), 7.56 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.92 (m, 1H), 6.46 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.71 (s, 1H), 4.54 - 4.19 (m, 2H), 2.82 - 2.55 (m, 3H), 2.12 (m, 1H), 1.42 (m, 4H), 1.22 - 0.90 (m, 3H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) +

실시예 25: 6-플루오로-1-[3-(메톡시메틸) 사이클로부틸]-4-옥소-7-[(2R)-2-[(피리딘-2-일옥시) 메틸] 피롤리딘-1-일]-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산

단계 1: N, N-디벤질-3-(메톡시메틸) 사이클로부탄-1-아민의 합성

THF　(10 mL) 중 수소화나트륨　(63.5 mg,　2.65 mmol)의 교반한 현탁액에, [3-(디벤질아미노) 사이클로부틸] 메탄올　(500 mg,　1.77 mmol)을 0℃에서 첨가하고 30분 동안 동일 온도에서 교반한 후 디메틸 설페이트　(200 μL,　2.12 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 천천히 실온으로 가온하고 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙냉 포화 암모늄 클로라이드 용액으로 켄칭하고 생성물을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 황산나트륨 상에서 건조하고 감압 하에 증발시켰다. 얻은 조물질을 10% EtOAc/헥산을 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 생성물을 함유하는 관련 분획을 합하고 진공에서 증류하여 N, N-디벤질-3-(메톡시메틸) 사이클로부탄-1-아민　(300 mg,　56%)을 무색 액체로 수득하였다. MS (ESI) m/z: 296.5 [M+H]⁺.

단계 2: 3-(메톡시메틸)사이클로부탄-1-아민 하이드로클로라이드의 합성

EtOH　(30 mL) 중 N,N-디벤질-3-(메톡시메틸) 사이클로부탄-1-아민　(2.4 g,　8.12 mmol)의 교반한 용액에, 아세트산　(1 mL)에 이어 10%　Pd/C (864 mg,　8.12 mmol)를 질소 분위기 하에 첨가하였다. 반응 혼합물을 풍선 압력하에 실온에서 16시간 동안 수소화시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 여액을 증발시켜 조 물질을 얻었다. 조 물질을 디옥산에 용해시키고 디옥산 중 4M HCl을 첨가하고 10분 동안 교반하였다. 휘발물을 증발시키고 조질의 잔류물을 디에틸 에테르로 분쇄하고 진공 하에 건조시켜 3-(메톡시메틸) 사이클로부탄-1-아민 하이드로클로라이드　(800 mg,　65%)를 무색의 끈적거리는 검으로 수득하고, 이는 어떤 정제도 없이 다음 단계에 사용하였다.

단계 3: 에틸 6-플루오로-1-[3-(메톡시메틸)사이클로부틸]-4-옥소-7-[(2R)-2-[(피리딘-2-일옥시)메틸]피롤리딘-1-일]-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO　(3 mL) 중 에틸 (R, Z)-2-(2,5-디플루오로-4-(2-((피리딘-2-일옥시) 메틸) 피롤리딘-1-일) 벤조일)-3-에톡시아크릴레이트 (300 mg, 0.652 mmol)의 교반한 용액에, 3-(메톡시메틸) 사이클로부탄-1-아민 하이드로클로라이드　(134 mg,　889 μmol), 트리에틸아민 (0.18 ml, 1.78 mmol)을 첨가한 후 1시간 동안 교반하였다. 탄산칼륨　(153 mg,　1.11 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃로 가열하고 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 빙냉수로 희석하였다. 침전된 고체를 여과로 수집하고 물로 세척하고 진공에서 건조하여　에틸 6-플루오로-1-[3-(메톡시메틸)사이클로부틸]-4-옥소-7-[(2R)-2-[(피리딘-2-일옥시) 메틸]피롤리딘-1-일]-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (77.7 mg,　20.6%)를 회백색 고체로 수득하였다.MS (ESI) m/z: 510.2 [M+H]⁺

단계 4: 6-플루오로-1-[3-(메톡시메틸)사이클로부틸]-4-옥소-7-[(2R)-2-[(피리딘-2-일옥시)메틸]피롤리딘-1-일]-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

상기 기재된 바와 같은 실험 절차로 6-플루오로-1-[3-(메톡시메틸) 사이클로부틸]-4-옥소-7-[(2R)-2-[(피리딘-2-일옥시) 메틸] 피롤리딘-1-일]-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산　(17.4 mg,　23%)을 담갈색 고체로 수득하였다.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) 15.55 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.08-8.05 (m, 1H), 7.84 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 7.69-7.65 (m, 1H), 6.96-6.93 (m, 1H), 6.81 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.00- 4.92 (m, 1H), 4.72-4.64 (m, 1H), 4.45-4.38 (m, 1H), 4.31-4.22 (m, 1H), 3.80-3.70 (m, 1H), 3.54-3.46 (m, 1H), 3.34-3.28 (m, 2H), 3.24 (s, 3H), 2.77-2.67 (m, 2H), 2.43-2.30 (m, 1H), 2.25-1.95 (m, 6H), MS (ESI) m/z: 482.4 [M+H]⁺.

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++

실시예 26: 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일) 옥시] 메틸} 피롤리딘-1-일]-1-(6-메탄설폰아미도피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산

단계 1: 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-[6-(N-메탄설포닐메탄설폰아미도)피리딘-3-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DCM (5 mL) 중 에틸 1-(6-아미노피리딘-3-일)-6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일) 옥시] 메틸} 피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 하이드로클로라이드　(180 mg,　0.304 mmol)의 교반한 용액에, 트리에틸아민　(0.13 mL,　0.914 mmol)을 첨가하고 0℃로 냉각시킨 후 메탄설포닐 클로라이드　(0.03 mL,　0.365 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 천천히 실온으로 가온하고 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고 생성물을 DCM (2 x 10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기상을 무수 황산나트륨 상에서 건조하고 증발시켜 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일) 옥시] 메틸} 피롤리딘-1-일]-1-[6-(N-메탄설포닐메탄설폰아미도) 피리딘-3-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트　(200 mg, 조질)를 담갈색 고체로 수득하였다. MS (ESI) m/z: 710.2 [M+H]⁺ _.

단계 2. 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-(6-메탄설폰아미도피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

상기 기재된 바와 같은 실험 절차로 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일) 옥시] 메틸}- 피롤리딘-1-일]-1-(6-메탄설폰 아미도피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산　(20 mg,　12%)을 회백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) 15.03 (brs, 1H), 11.15 (s, 1H), 8.64 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.54 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.02-7.95 (m, 1H), 7.90-7.89 (dd, J = 5.2, 1.6 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.19-7.03 (m, 1H), 6.94 (dd, J = 7.6, 5.2 Hz, 1H), 6.37 (s, 1H), 4.78 (s, 1H), 4.34-4.25 (m, 2H), 3.51-3.47 (m, 1H), 3.40 (s, 3H), 3.19-3.18 (m, 1H), 2.34-2.24 (m, 1H), 1.99-1.91 (m, 2H), 1.85-1.78 (m, 1H), MS (ESI) m/z: 604.2 [M+H]⁺.

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 27: (R)-6-플루오로-1-(6-하이드록시피라진-2-일)-4-옥소-7-(2-((피리딘-2-일옥시) 메틸) 피롤리딘-1-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: 에틸 6-플루오로-1-(6-하이드록시피라진-2- 일)-4-옥소-7-[(2R)-2-[(피리딘-2-일옥시) 메틸] 피롤리딘-1-일]-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

MeOH (10 mL) 중 에틸 1-[6-(벤질옥시) 피라진-2-일]-6-플루오로-4-옥소-7-[(2R)-2-[(피리딘-2-일옥시) 메틸] 피롤리딘-1-일]-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (300 mg, 503 μmol)의 교반한 용액에, 10% Pd/C (106 mg, 1.00 mmol)를 질소 분위기 하에 첨가하였다. 반응 혼합물에 실온에서 6시간 동안 수소화 (수소 하에, 풍선 압력)를 진행하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 셀라이트 패드를 DCM (100 mL) 중 10% MeOH로 세척하였다. 합한 여액을 감압 하에 농축하여 에틸 6-플루오로-1-(6-하이드록시피라진-2-일)-4-옥소-7-[(2R)-2-[(피리딘-2-일옥시)메틸] 피롤리딘-1-일]-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (140 mg, 55.1%)를 회백색 고체로 수득하였다. MS (ESI) m/z : 506.1 [M+H]⁺

단계 2: 6-플루오로-1-(6-하이드록시피라진-2-일)-4-옥소-7-[(2R)-2-[(피리딘-2-일옥시) 메틸] 피롤리딘-1-일]-1,4- 디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF (5 mL) 및 물 (1 mL) 중 에틸 6-플루오로-1-(6-하이드록시피라진-2-일)-4-옥소-7-[(2R)-2-[(피리딘-2-일옥시) 메틸] 피롤리딘-1-일]-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (150 mg, 296 μmol)의 교반한 용액을 0℃로 냉각시키고, LiOH.H₂O (62.1 mg, 1.48 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 천천히 실온으로 가온하고 16시간 동안 교반하였다. 과량의 용매를 감압하에 증류하였다. 수득된 잔류물을 물로 희석하고 1N HCl을 사용하여 pH 3 내지 4로 산성화하고 생성물을 DCM 중 10% MeOH로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조하고, 여과하고, 감압하에 증발시켰다. 수득된 조 물질을 IPA 및 에테르(1:1 비, 50 mL)로 분쇄하고 진공에서 건조하여 6-플루오로-1-(6-하이드록시피라진-2-일)-4-옥소-7-[(2R)-2-[(피리딘-2-일옥시)메틸]피롤리딘-1-일]-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (58.1 mg, 41.2%)을 연녹색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 15.20 (s, 1H), 12.80 (brs, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.41 (brs, 1H), 8.25 (brs, 1H), 8.01-7.99 (m, 1H), 7.88 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 7.67-7.63 (m, 1H), 6.94-6.91 (m, 1H), 6.66 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.48 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.52-4.48 (m, 1H), 4.27-4.19 (m, 2H), 3.47-3.42 (m, 1H), 3.16 (brs, 1H), 2.09-1.89 (m, 4H), MS: 478.3 [M+H]⁺

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) +++

실시예 28: (R)-1-(6-(3-아미노아제틴-1-일) 피리딘-3-일)-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일) 옥시) 메틸) 피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: tert-부틸 (1-(5-니트로피리딘-2-일) 아제틴-3-일) 카르바메이트의 합성

ACN　(10 mL) 중 2-클로로-5-니트로피리딘　(1 g,　6.30 mmol)의 교반한 용액에　0℃에서, tert-부틸 N-(아제틴-3-일)카르바메이트　(1.30 g,　7.56 mmol) 및 탄산칼륨　(1.74 g,　12.6 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃로 가열하고 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 빙냉수를 첨가하고 생성물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기상을 Na₂SO₄상에서 건조하고 감압 하에 농축하였다. 생성된 조 물질을 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 20-25% EtOAc로 용리함)로 정제하였다. 생성물을 함유하는 관련 분획을 합하고 감압 하에 증발 건조시켜 tert-부틸 (1-(5-니트로피리딘-2-일) 아제틴-3-일) 카르바메이트 (800 mg,　44%)를 황색 고체로 수득하였다, MS (ESI) m/z: 294.9 [M+H]⁺

단계 2: (tert-부틸 (1-(5-아미노피리딘-2-일)아제틴-3-일)카르바메이트)의 합성

MeOH　(20 mL) 중 tert-부틸 N-[1-(5-니트로피리딘-2-일) 아제틴-3-일] 카르바메이트　(800 mg,　2.71 mmol)의 교반한 용액에, Pd/C　(433 mg,　2.71 mmol)를 실온에서 질소 분위기 하에 첨가하였다. 반응 혼합물을 H₂ 풍선을 사용하여 6시간의 기간 동안 수소화시켰다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 셀라이트 패드를 MeOH로 추가 세척하고, 여액을 감압 하에 농축하여 tert-부틸 N-[1-(5-아미노피리딘-2-일) 아제틴-3-일] 카르바메이트 (600 mg, 85%)를 갈색 액체로 수득하고 정제 없이 추가 사용하였다.

단계 3: 에틸 (R)-1-(6-(3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO　(3 mL) 중 에틸 (2Z)-2-[(Z)-5-클로로-4-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일) 옥시] 메틸} 피롤리딘-1-일]-2-플루오로벤조일]-3-에톡시프로프-2-에노에이트　(400 mg,　782 μmol)의 교반한 용액에, tert-부틸 N-[1-(5-아미노피리딘-2-일) 아제틴-3-일] 카르바메이트　(399 mg,　1.51 mmol)를 실온에서 첨가하고 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 탄산칼륨　(161 mg,　1.25 mmol)을 반응 혼합물에 동일 온도에서 첨가하고, 혼합물을 80℃로 가열하고 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 빙냉수를 첨가하고, 침전된 고체를 여과에 의해 수집하고, 물로 세척하고 건조시켰다. 생성된 물질을 에틸 아세테이트 중 목탄으로 처리하고 10분 동안 교반하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 셀라이트 패드를 EtOAc로 세척하였다. 합한 여액을 감압 하에 농축시켜 에틸 1-[6-(3-{[(tert-부톡시) 카르보닐]아미노}아제틴-1-일)피리딘-3-일]-6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트를 갈색 고체 (280 mg, 50%)로 수득하였다. MS (ESI) m/z: 709.3 [M+H]⁺

단계 4: (R)-1-(6-(3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 에틸 1-[6-(3-{[(tert-부톡시) 카르보닐] 아미노} 아제틴-1-일) 피리딘-3-일]-6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일) 옥시] 메틸} 피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트　(250 mg,　352 μmol)의 교반한 용액에, LiOH.H2O　(41.9 mg,　1.75 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 천천히 가온하고 4시간 동안 교반하였다. 과량의 용매를 감압 하에 제거하고, 생성된 조 물질을 물 (5 mL)로 희석하고 1N HCl로 산성화시켰다. 침전된 고체를 여과에 의해 수집하고, 물로 세척하고 진공에서 건조하여 1-[6-(3-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}아제틴-1-일)피리딘-3-일]-6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (200 mg,　74%)을　갈색 고체로 수득하였다, MS m/z: 681.2 [M+H]⁺

단계 5: (R)-1-(6-(3-아미노아제틴-1-일)피리딘-3-일)-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

디옥산　중 4M HCl (2 mL)를 1-[6-(3-{[(tert-부톡시) 카르보닐] 아미노} 아제틴-1-일) 피리딘-3-일]-6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2일) 옥시] 메틸} 피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산　(200 mg,　366 μmol)의 교반한 용액에 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 천천히 가온하고 6시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고 조 물질을 prep-HPLC로 정제하였다. 분획을 동결 건조하여 1-[6-(3-아미노아제틴-1-일) 피리딘-3-일]-6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일) 옥시] 메틸} 피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산.　(50.0 mg, 29%)을 회백색 고체로 수득하였다.

¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 8.48 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.89-7.90 (m, 1H), 7.81 (dd, J = 8.0, 1.60 Hz, 1H), 7.71-7.64 (m, 1H), 6.96-6.91 (m, 1H), 6.58- 6.33 (m, 2H), 4.76-4.66 (m, 1H), 4.36-4.19 (m, 4H), 3.99-3.93 (m, 1H), 3.76-3.72 (m, 2H), 3.57-3.47 (m, 1H), 3.21-3.17 (m, 1H), 2.26-2.24 (m, 1H), 1.98-1.90 (m, 2H), 1.81-1.78(m, 1H). (COOH & NH2 양성자가 관찰되지 않음) MS m/z: 581.3 [M+H]⁺.

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 29: (R)-1-사이클로프로필-6,8-디플루오로-4-옥소-7-(2-((피리다진-3-일옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (4 mL) 중 3-{[(2R)-피롤리딘-2-일] 메톡시} 피리다진 하이드로클로라이드 (200 mg, 927 μmol)의 교반한 용액에, 트리에틸아민 (233 mg, 2.31 mmol)에 이어 1-사이클로프로필-6,7,8-트리플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (131 mg, 463 μmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 그 다음, 실온으로 냉각하고, 물 (10 ml)을 첨가하고, 생성물을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 H₂O (15 mL)에 이어서 염수 용액 (15 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고 감압 하에 농축하였다. 조 생성물을 실리카겔 크로마토그래피(100-200 메쉬)에 적용하고 5-10% MeOH/DCM를 사용하여 컬럼 용리시켰다. 생성물을 함유하는 관련 분획을 합하고 증발 건조시켜 1-사이클로프로필-6,8-디플루오로-4-옥소-7-[(2R)-2-[(피리다진-3-일옥시) 메틸] 피롤리딘-1-일]-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (7.71 mg, 2%)을 담황색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 14.89 (s, 1H), 8.80 (dd, J = 4.4, 1.2 Hz, 1H), 8.63 (s, 1H), 7.71 (dd, J = 12.8, 1.2 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 8.8, 1.2 Hz, 1H), 6.90 (dd, J = 8.8, 1.2 Hz, 1H), 4.67 (brs, 1H), 4.56- 4.54 (m, 1H), 4.49-4.47 (m, 1H), 4.10-4.02 (m, 1H), 3.90-3.82 (m, 1H), 3.50-3.40 (m, 1H), 2.38-2.28 (m, 1H), 2.10-2.00 (m, 1H), 1.92-1.82 (m, 2H), 1.18-1.11 (m, 4H), MS (ESI) m/z: 443.3 [M+H]⁺

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) +++

실시예 30: 3 (R)-6-플루오로-1-(3-메톡시사이클로부틸)-7-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: 에틸 (2Z)-2-[(Z)-2,5-디플루오로-4-[(2R)-2-{[(3-메틸피리딘-2-일) 옥시] 메틸} 피롤리딘-1-일] 벤조일]-3-(디메틸아미노) 프로프-2-에노에이트의 합성

톨루엔　(5 mL) 중 에틸 3-{2,5-디플루오로-4-[(2R)-2-{[(3-메틸피리딘-2-일) 옥시] 메틸} 피롤리딘-1-일] 페닐}-3-옥소프로파노에이트　(300 mg,　716 μmol)의 교반한 용액에, (디메톡시 메틸) 디메틸아민　(85.3 mg,　716 μmol)를 첨가하고,　반응 혼합물을 80℃로 가열하고 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 용매를 증발시키고 수득된 잔류물을 톨루엔 (10 mL)과 공비시켜 에틸 (2Z)-2-[(Z)-2,5-디플루오로-4-[(2R)-2-{[(3-메틸피리딘-2-일) 옥시] 메틸} 피롤리딘-1-일] 벤조일]-3-(디메틸아미노) 프로프-2-에노에이트　 (248 mg,　조질)를 갈색 액체로 수득하였다. 물질은 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. MS (ESI) 474.1 [M+H]⁺.

단계 2: (R)-에틸 6-플루오로-1-(3-메톡시사이클로부틸)-7-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

THF (5 mL) 중 에틸 (2Z)-2-[(Z)-2,5-디플루오로-4-[(2R)-2-{[(3-메틸피리딘-2-일) 옥시] 메틸} 피롤리딘-1-일] 벤조일]-3-(디메틸아미노) 프로프-2-에노에이트　(250 mg,　527 μmol)의 교반한 용액에,　3-메톡시사이클로부탄-1-아민 하이드로클로라이드　(86.9 mg,　632 μmol)　및 트리에틸아민　(95.5 μL,　685 μmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 감압하에서 용매를 제거하였다. 얻어진 조 물질을 DMF (5 mL)에 용해시키고,　탄산칼륨 (72.8 mg,　527 μmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 85℃로 가열하고, 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉각하고,　빙냉수 (10 mL)를 첨가하고 생성물을 에틸 아세테이트 (2 x 30 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 용액 (15 mL)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 45-50% EtOAc/헥산을 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (100-200 메쉬)로 정제하였다. 생성물을 함유하는 관련 분획을 합하고 감압 하에 증류하여 에틸 6-플루오로-1-(3-메톡시사이클로부틸)-7-[(2R)-2-{[(3-메틸피리딘-2-일) 옥시] 메틸} 피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트　(163 mg,　61%)를　갈색 고체로 수득하였다. MS (ESI) 510.2 [M+H]⁺.

단계 3: (R)-6-플루오로-1-(3-메톡시사이클로부틸)-7-(2-(((3-메틸피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF: 물 (1:1, 6 mL) 중 에틸 6-플루오로-1-(3-메톡시사이클로부틸)-7-[(2R)-2-{[(3-메틸피리딘-2-일) 옥시] 메틸} 피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트　(115 mg,　225 μmol)의 교반한 용액에, LiOH.H₂O　(28.3 mg,　675 μmol)를 0℃에서 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 재냉각하고, 1N HCl을 사용하여 pH를 2 내지 3으로 조정하고, 침전된 고체를 여과하고, 디에틸 에테르 중 10% IPA로 세척하고, 진공 하에 건조시켰다. 추가로 고체 물질을 ACN/물을 사용하여 동결 건조시켜 6-플루오로-1-(3-메톡시사이클로부틸)-7-[(2R)-2-{[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산　(50.8 mg 47%)을　담갈색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 15.52 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.89 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.83 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 6.86-6.83 (m, 1H), 6.78 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.73-4.68 (m, 2H), 4.40-4.37 (m, 1H), 4.32-4.28 (m, 1H), 3.83-3.76 (m, 2H), 3.59-3.50 (m, 1H), 3.18 (s, 3H), 3.12-3.03 (m, 2H), 2.32-2.12 (m, 4H), 2.10-2.03 (m, 2H), 2.01 (s, 3H). MS (ESI) m/z: 482.4 [M+H]⁺.

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 31: (R)-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일) 옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(4-(에틸설폰아미도)페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산

단계 1: (R)-에틸 6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(4-(에틸설폰아미도)페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DCM　(5 mL) 중 에틸 1-(4-아미노페닐)-6-클로로-4-옥소-7-[(2R)-2-[(피리딘-2-일옥시) 메틸] 피롤리딘-1-일]-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 하이드로클로라이드 (100 mg, 169 μmol)의 교반한 용액에 0℃에서 피리딘　(41.2 μL,　507 μmol)에 이어　에탄 설포닐 클로라이드　(32.2 μL,　338 μmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 천천히 실온으로 가온하고 3시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 빙냉수 (15 mL)를 첨가하고 생성물을 DCM (2 x 15 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 (15 mL)로 세척하고 황산나트륨 상에서 건조하고 증발 건조시켰다. 생성된 조 물질을 디에틸 에테르 & 펜탄으로 분쇄하여 에틸 (R)-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(4-(에틸설폰아미도)페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (73.3 mg, 71.1%)를 담황색 고체로 수득하였다. MS (ESI) m/z: 645.2 [M+H]⁺ .

단계 2: (R)-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(4-(에틸설폰아미도)페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

상기 기재된 실험 절차를 사용하여 (R)-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일) 옥시) 메틸) 피롤리딘-1-일)-1-(4-(에틸설폰아미도) 페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산　(42.7 mg,　61.2%)을　담황색 고체로 수득하였다.¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ):δ 15.07 (s, 1H), 10.26 (bs, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.87-7.88 (m, 1H), 7.81-7.79 (m, 1H), 7.58-7.46 (m, 3H), 7.35 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.94-6.91 (m, 1H), 6.34 (s, 1H), 4.74 (bs, 1H), 4.29-4.25 (m, 2H), 3.42-3.38 (m, 1H), 3.22 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.14 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 2.33-2.21 (m, 1H), 2.02-1.88 (m, 2H), 1.82-1.75 (m, 1H), 1.23 (t, J = 7.6 Hz, 3H), MS (ESI) m/z: 617.2 [M+H]⁺.

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 32: (R)-6-플루오로-1-(4-플루오로인돌린-5-일)-4-옥소-7-(2-((피리딘-2-일옥시) 메틸) 피롤리딘-1-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산

단계 1: 4-플루오로인돌린-5-아민의 합성

에틸 아세테이트 (5 mL) 및 물 (5 mL) 중 4-플루오로-5-니트로-2,3-디하이드로-1H-인돌 (550 mg, 3.01 mmol, Ref: WO2017/153952)의 교반한 용액에, 철 (670 mg, 12.0 mmol) 및 암모늄 클로라이드 (1.28 g, 24.0 mmol)를 실온에서 첨가하고 반응 혼합물을 60℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 셀라이트 층을 통해 여과하고, 셀라이트 패드를 EtOAc (50 mL)로 세척하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 증발 건조시켰다. 조 생성물을 용리액으로 10-15% EtOAc/헥산을 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (100-200 메쉬)로 정제하였다. 생성물을 함유하는 관련 분획을 합하고 증발 건조시켜 4-플루오로-2,3- 디하이드로-1H-인돌-5-아민 (280 mg, 61%)을 갈색 고체로 수득하였다. MS (ESI) m/z :153.5

단계 2: 에틸 (R)-6-플루오로-1-(4-플루오로인돌린-5-일)-4-옥소-7-(2-((피리딘-2-일옥시) 메틸) 피롤리딘-1-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

상기 기재된 바와 같은 실험 절차로 에틸 (R)-6-플루오로-1-(4-플루오로인돌린-5-일)-4-옥소-7-(2-((피리딘-2-일옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (200 mg, 56.17%)를 갈색 고체로 수득하였다. MS (ESI) m/z: 547.3 [M+H]⁺.

단계 3: (R)-6-플루오로-1-(4-플루오로인돌린-5-일)-4-옥소-7-(2-((피리딘-2-일옥시) 메틸) 피롤리딘-1-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

상기 기재된 바와 같은 실험 절차로 (R)-6-플루오로-1-(4-플루오로인돌린-5-일)-4-옥소-7-(2-((피리딘-2-일옥시) 메틸) 피롤리딘-1-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (45 mg, 23.8%)을 담갈색 고체로 수득하였다. ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 15.32 (bs, 1H), 8.52 (bs, 1H), 8.04 (bs, 1H), 7.88 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 7.68-7.66 (m, 1H), 7.24-7.18 (m, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.72-6.67 (m, 1H), 6.45 (d, J = 8.0 Hz, 0.5H), 6.34 (bs, 1H), 6.26 (d, J = 8.0 Hz, 0.5H), 6.19-6.16 (m, 1H), 4.41-4.33 (m, 1H), 4.23-4.16 (m, 2H), 3.64-3.51 (m, 2H), 3.42 (s, 1H), 3.10-5.08 (m, 1H), 2.93-2.90 (m, 1H), 2.68-2.50 (m, 1H), 2.06-1.93 (m, 4H), MS (ESI) m/z: 519.3 [M+H]⁺ _.

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 33: 6-클로로-1-(5-하이드록시피라진-2-일)-4-옥소-7-[(2R)-2-[(피리딘-2-일옥시)메틸]피롤리딘-1-일]-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산

단계 1: 에틸 1-[5-(벤질옥시)피라진-2-일]-6-클로로-4-옥소-7-[(2R)-2-[(피리딘-2-일옥시)메틸]피롤리딘-1-일]-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (7 mL) 중 에틸 (R,Z)-2-(5-클로로-2-플루오로-4-(2-((피리딘-2-일옥시)메틸)피롤리딘-1-일)벤조일)-3-에톡시아크릴레이트 (450 mg, 1.06 mmol)의 교반한 용액에 5-(벤질옥시)피라진-2-아민 (213 mg, 1.06 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 출발 물질의 완료 후 (TLC로 모니터링함), 탄산칼륨 (146 mg, 1.06 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 빙냉수 (15 mL)에 부어 침전을 초래했다. 침전된 고체를 여과로 수집하고 물 (50 mL) & 헥산 (10 mL)로 세척하여 에틸 1-[5-(벤질옥시)피라진-2-일]-6-클로로-4-옥소-7-[(2R)-2-[(피리딘-2-일옥시)메틸]피롤리딘-1-일]-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (260 mg, 424 μmol, 40%)를 담갈색 고체로 수득하였다.　MS (ESI) m/z: 612.3 [M+H]⁺.

단계 2: [6-클로로-1-(5-하이드록시피라진-2-일)-4-옥소-7-[(2R)-2-[(피리딘-2-일옥시)메틸]피롤리딘-1-일]-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산]의 합성

DCM (30 mL) 중 에틸 1-[5-(벤질옥시)피라진-2-일]-6-클로로-4-옥소-7-[(2R)-2-[(피리딘-2-일옥시)메틸]피롤리딘-1-일]-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (500 mg, 816 μmol)의 교반한 용액에, DCM중 삼브롬화붕소 용액 1.0 M (20.7 mL, 122 mmol)을 0℃에서 N₂ 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후 (TLC로 모니터링함), 반응 혼합물을 빙냉수 (20 mL)로 켄칭하고 EtOAc (3 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 목탄 (200 mg)으로 처리한 다음 셀라이트 패드를 통해 여과하고 감압 하에 농축하여 조 화합물을 얻었고, 이를 Prep HPLC 정제로 정제하여 6-클로로-1-(5-하이드록시피라진-2-일)-4-옥소-7-[(2R)-2-[(피리딘-2-일옥시)메틸]피롤리딘-1-일]-1,4-디하이드로 퀴놀린-3-카르복실산 (27.3 mg, 7%)을 회백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 15.05 (brs, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.08 (brs, 1H), 8.00-7.97 (m, 1H), 7.75 (brs, 1H), 7.65-7.59 (m, 1H), 6.92-6.88 (m, 1H), 6.67 (s, 1H), 6.60 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.70-4.60 (m, 1H), 4.25-4.13 (m, 2H), 3.71-3.67 (m, 1H), 3.53-3.43 (m, 1H), 2.24-2.21 (m, 1H), 1.92-1.89 (m, 1H), 1.88-1.77 (m, 2H); MS (ESI) m/z: 494.3 [M+H]⁺.

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 34: 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-[1-(2-하이드록시에틸)아제틴-3-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산

단계 1: 에틸 1-{1-[(tert-부톡시) 카르보닐] 아제틴-3-일}-6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일) 옥시] 메틸} 피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4- 디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (8 mL) 중 에틸 (2Z)-2-[(Z)-5-클로로-4-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-2-플루오로벤조일]-3-에톡시프로프-2-에노에이트 (800 mg, 1.56 mmol)의 교반한 용액에 tert-부틸 3-아미노아제티딘-1-카르복실레이트 (322 mg, 1.87 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 출발 물질의 완료 후 (TLC로 모니터링함), 탄산칼륨 (538 mg, 3.90 mmol)을 첨가하고 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후 (LCMS로 모니터링함), 반응 혼합물을 서서히 냉각시키고, 빙냉수로 켄칭하고, 침전된 고체를 여과하고 물 (20 ml)로 세척하였다. 수득된 고체 생성물을 EtOAc (25 ml)에 용해시키고 목탄으로 처리하고 셀라이트 베드를 통해 여과하였다. 여액을 진공에서 농축하고 펜탄 중 10% EtOAc (20 ml)로 분쇄하여 에틸 1-{1-[(tert부톡시)카르보닐]아제틴-3-일}-6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (398 mg, 41%)를 갈색 고체로 수득하였다. MS (ESI) m/z 617.3 [M+H]⁺

단계 2: 에틸 1-(아제틴-3-일)-6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

디옥산 (5 mL) 중 에틸 1-{1-[(tert-부톡시) 카르보닐] 아제틴-3-일}-6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일) 옥시] 메틸} 피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (500 mg, 809 μmol)의 교반한 용액을 빙조로 냉각시키고 디옥산 중 4.0 M HCl (5 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 과량의 용매를 진공 하에 제거하고 디에틸 에테르 (2 X 20 ml)로 분쇄하여 에틸 1-(아제틴-3-일)-6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (328 mg, 78%)를 황색 고체로 수득하였다. MS (ESI) m/z 517.2 [M+H]⁺

단계 3: 에틸 1-(1-{2-[(tert-부틸디메틸실릴)옥시] 에틸}아제틴-3-일)-6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

ACN (5 mL) 중 에틸 1-(아제틴-3-일)-6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (150 mg, 289 μmol)의 교반한 용액에, 트리에틸아민 (200 μL, 1.44 mmol)을 첨가하고 실온에서 15분동안 교반하고 (2-브로모에톡시)(tert-부틸)디메틸실란 (82.7 mg, 346 μmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후 (TLC로 모니터링함), 과량의 용매를 진공에서 제거하고 EtOAc (20 ml)로 희석하고 물 (20 ml) 및 염수 (20 ml)로 세척하였다. 유기층은 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 목탄으로 처리하고 셀라이트 층을 통해 여과하고 진공하에 농축하여 에틸 1-(1-{2-[(tert-부틸디메틸실릴)옥시]에틸}아제틴-3-일)-6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (100 mg, 46%)를 황색 오일로 수득하였다. MS (ESI) m/z 675.4 [M+H]⁺ _.

단계 4: 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸} 피롤리딘-1-일]-1-[1-(2-하이드록시에틸)아제틴-3-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DCM (10 mL) 중 에틸 1-(1-{2-[(tert-부틸디메틸실릴)옥시]에틸}아제틴-3-일)-6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (100 mg, 132 μmol)의 교반한 용액에, DCM (1 mL) 중 BBr₃ 1.0 M을 10 내지 15℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후 (TLC로 모니터링함), 과량의 용매를 진공에서 제거하고 EtOAc (30 ml)로 희석하고 물 (2 x 20 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 조질의 화합물을 수득하였다. 조 생성물을 Prep HPLC로 정제하고 수집된 순수한 분획을 동결 건조하여 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-[1-(2-하이드록시에틸)아제틴-3-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (10.6 mg, 15%)을 회백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) 15.25 (brs, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.97 (dd, J = 4.8, 1.6 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 7.9, 1.6 Hz, 1H), 6.98 (brs, 1H), 6.92 (dd, J = 7.6, 4.8 Hz, 1H), 5.265.15, (m, 1H), 4.97-4.92 (m, 1H), 4.48 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.424.36 (m, 2H), 3.95 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 3.883.19 (m, 2H), 3.43-3.28 (m, 5H), 2.68-2.49 (m, 2H), 2.34-2.29 (m, 1H), 2.09-1.85 (m, 3H). MS (ESI) m/z 533.3 [M+H]⁺

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) +++

실시예 35: 6-시아노-1-(1-메틸사이클로프로필)-7-[(2R)-2-{[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산

단계 1: 에틸 3-(5-브로모-2,4-디플루오로페닐)-3-옥소프로파노에이트의 합성

THF (50 mL) 중 5-브로모-2,4-디플루오로벤조산 (2.5 g, 10.5 mmol)의 교반한 용액에 카르보닐디이미다졸 (3.40 g, 21.0 mmol)을 0℃에서 첨가하고 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 트리에틸아민 (4.38 mL, 31.5 mmol), 1-에틸 3-칼륨 프로판디오에이트 (2.67 g, 15.7 mmol) 및 마그네슘 클로라이드 (799 mg, 8.40 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 빙냉수 (50 mL)로 켄칭하고 EtOAc (2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 진공 하에 농축하여 조질의 화합물을 수득하였다. 조질의 화합물을 용리액으로 헥산 중 10% EtOAC을 사용하는 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 에틸 3-(5-브로모-2,4-디플루오로페닐)-3-옥소프로파노에이트 (2.00 g, 62%)를 담황색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 8.20 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.00-6.93 (m, 1H), 4.23 -4.18 (m, 2H), 3.94 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 1.28 (t, J = 3.2 Hz, 3H)

단계 2: 에틸 6-브로모-7-플루오로-1-(1-메틸사이클로프로필)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

트리에틸오르토포르메이트 (1.21 mL, 7.32 mmol) 중 에틸 3-(5-브로모-2,4-디플루오로페닐)-3-옥소프로파노에이트 (1.5 g, 4.88 mmol)의 교반한 용액에 아세트산 무수물 (691 μL, 7.32 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 이어서 반응물을 155℃로 가열하고 4시간 동안 교반하였다. 출발 물질의 완료 후 (TLC로 모니터링함), 반응 혼합물을 감압 하에 농축하고 톨루엔 (2 x 5mL)과 공증류하여 조질의 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 DMSO (15 mL)에 용해시키고, 1-메틸사이클로프로판-1-아민을 첨가하였다. HCl (347 mg, 4.88 mmol) 및 트리에틸아민 (882 μL, 6.34 mmol)을 실온에서 첨가하고 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, 탄산칼륨 (674 mg, 4.88 mmol)을 반응 혼합물에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 빙냉수 (50 mL)로 켄칭하여 침전시켰다. 침전된 고체를 여과하고, 물 및 디에틸 에테르로 세척하고, 감압 하에 건조하여 에틸 6-브로모-7-플루오로-1-(1-메틸사이클로프로필)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (1.47 g, 82%)를 갈색 고체로 수득하였다. MS (ESI) m/z: 367.9 [M+H]⁺

단계 3: 에틸 6-브로모-1-(1-메틸사이클로프로필)-7-[(2R)-2-{[(3-메틸피리딘-2- 일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMF (14 mL) 중 3-메틸-2-{[(2S)-피롤리딘-2-일] 메톡시} 피리딘 하이드로클로라이드 (651 mg, 2.85 mmol)의 교반한 용액에, 트리에틸아민 (264 μL, 1.90 mmol) 및 칼륨 tert-부톡사이드 (639 mg, 5.70 mmol)를 실온에서 첨가하고 10분 동안 교반하였다. 그 다음, 에틸 6-브로모-7-플루오로-1-(1-메틸사이클로프로필)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (700 mg, 1.90 mmol)를 반응 혼합물에 실온에서 첨가하고 반응물을 130℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 빙냉수 (5 mL)로 켄칭하여 침전시켰다. 침전된 고체를 여과하고, 물 & 디에틸 에테르로 세척하고, 감압 하에 건조하여 에틸 6-브로모-1-(1-메틸사이클로프로필)-7-[(2R)-2-{[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (108 mg, 10%)를 갈색 고체로 수득하였다. MS (ESI) m/z: 540.2 [M+H]⁺

단계 4: 에틸 6-시아노-1-(1-메틸사이클로프로필)-7-[(2R)-2-{[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

NMP (3 mL) 중 에틸 6-브로모-1-(1-메틸사이클로프로필)-7-[(2R)-2-{[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (108 mg, 199 μmol)의 교반한 용액에, 시안화구리(I) (35.6 mg, 398 μmol)를 실온에서 첨가하고 밀봉한 튜브에서 10분 동안 아르곤으로 탈기하였다. 반응물을 160℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 빙냉수 (10 mL)로 희석하고 DCM 중 10% MeOH (2 X 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 (15 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 감압 하에 농축하여 에틸 6-시아노-1-(1-메틸사이클로프로필)-7-[(2R)-2-{[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸} 피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (72.0 mg, 74%)를 갈색 고체로 수득하였다. MS (ESI) m/z: 487.4 [M+H]⁺

단계 5: 6-시아노-1-(1-메틸사이클로프로필)-7-[(2R)-2-{[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF (0.72 mL), EtOH (0.72 mL) 및 물 (0.72 mL)의 혼합물 중 에틸 6-시아노-1-(1-메틸사이클로프로필)-7-[(2R)-2-{[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (72 mg, 147 μmol)의 교반한 용액에, LiOH^.H₂O (30.8 mg, 735 μmol)를 했다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 출발 물질의 완료 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축하고 조질의 화합물을 빙냉수로 켄칭하고, 1N HCl (pH~3)로 산성화시켜 침전시켰다. 침전된 고체를 여과하고, 건조하고 prep HPLC로 정제하고, 분획을 동결 건조시켜 6-시아노-1-(1-메틸사이클로프로필)-7-[(2R)-2-{[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (44.5 mg, 66%)을 회백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ , VT): δ 14.78 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.84-7.82 (m, 1H), 7.46-7.43 (m, 1H), 7.14 (s, 1H), 6.80 (dd, J = 6.8, 4.8 Hz 1H), 4.93- 4.90 (m, 1H), 4.50 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.94-3.91 (m, 1H), 3.73-3.69 (m, 1H), 2.35-2.06 (m, 4H), 2.07 (s, 3H), 1.57 (s, 3H), 1.41-1.16 (m, 4H). MS (ESI) m/z: 459.4 [M+H]⁺

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 36: 1-(1-아세틸아제틴-3-일)-6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산

DCM (6 mL) 중 1-(아제틴-3-일)-6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (100 mg, 196 μmol)의 교반한 용액에, 트리에틸아민 (81.9 μL, 588 μmol)에 이어 아세틸 클로라이드 (13.9 μL, 196 μmol)를 0℃에서 첨가한 후, 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 출발 물질의 완료 후, 반응 혼합물을 빙냉수로 켄칭하고 DCM (2 x 50 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 물 (10 mL) 및 염수 (10 mL) 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고 감압 하에 농축하여 조질의 화합물을 얻었다. 조질의 화합물을 prep HPLC로 정제하여 원하는 1-(1-아세틸아제틴-3-일)-6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-메틸피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (19.6 mg, 20%)을 분홍빛을 띤 갈색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, VT) δ 14.90 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.81 (dd, J = 3.6, 1.2 Hz, 1H), 7.39 (dd, J = 7.2, 0.8 Hz, 1H), 6.91 (s, 1H), 6.76 (dd, J = 7.2, 4.8 Hz, 1H), 5.59-5.09 (m, 1H), 4.98-4.91 (m, 1H), 4.69-4.49 (m, 3H), 4.39 (dd, J = 11.2, 4.8 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 11.2, 5.2 Hz, 1H), 3.91-3.82 (m, 1H), 3.46-3.39 (m, 1H), 2.32-2.28 (m, 1H), 2.08-1.92 (m, 4H),1.98 (s, 3H), 1.80 (s, 3H), MS (ESI) m/z: 511.3 [M+H]⁺.

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) +++

실시예 37: 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-[1-(2-메톡시에틸)-3-메틸아제틴-3-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산

단계 1: 에틸 1-{1-[(tert-부톡시)카르보닐]-3-메틸아제틴-3-일}-6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로 퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (6 mL) 중 에틸 (2Z)-2-[(Z)-5-클로로-4-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-2-플루오로벤조일]-3-에톡시프로프-2-에노에이트 (300 mg, 586 μmol)의 교반한 용액에 tert-부틸 3-아미노-3-메틸아제티딘-1-카르복실레이트 (109 mg, 586 μmol)를 첨가하고 실온에서 2시간 동안 N₂ 분위기 하에 교반하였다. 출발 물질의 완료 후, 탄산칼륨 (80.9 mg, 586 μmol)을 첨가하고 생성된 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 빙냉수 (10 mL)로 켄칭하고 EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 빙냉수 (2 x 10 mL), 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 감압 하에 농축하여 에틸 1-{1-[(tert-부톡시)카르보닐]-3-메틸아제틴-3-일}-6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (210 mg, 57%)를 담갈색 고체로 수득하였다. MS (ESI) m/z: 631.3 [M+H]⁺.

단계 2: 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-(3-메틸아제틴-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 HCl의 합성.

디옥산 중 4N HCl을 에틸 1-{1-[(tert-부톡시)카르보닐]-3-메틸아제틴-3-일}-6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로 퀴놀린-3-카르복실레이트 (300 mg, 332 μmol)에 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 조질의 잔류물을 얻고, 이를 디에틸 에테르로 세척하여 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-(3-메틸아제틴-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로 퀴놀린-3-카르복실레이트. HCl (180 mg, 96%)을 회백색 고체로 수득하였다. MS (ESI) m/z: 531.2 [M+H]⁺.

단계 3: 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-[1-(2-메톡시에틸)-3-메틸아제틴-3-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성.

아세토니트릴 (5 mL) 중 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-(3-메틸아제틴-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (250 mg, 338 μmol)의 교반한 용액에 트리에틸아민 (47.1 μL, 338 μmol) 및 1-브로모-2-메톡시에탄 (31.7 μL, 338 μmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 빙냉수 (5 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (2 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 물 (10 mL) 및 염수 용액 (10 mL)으로 세척하고, 여과하고 감압 하에 농축하여 조질의 화합물을 얻었다. 조질의 화합물을 30% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카겔 (60-120 메쉬) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-[1-(2-메톡시에틸)-3-메틸아제틴-3-일]-4-옥소-1,4-디하이드로 퀴놀린-3-카르복실레이트 (250 mg, 93%)를 황색 고체로 수득하였다. MS (ESI) m/z: 589.2 [M+H]⁺.

단계 4: 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸} 피롤리딘-1-일]-1-[1-(2-메톡시에틸)-3-메틸아제틴-3-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF (2.5 mL) 중 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-[1-(2-메톡시에틸)-3-메틸아제틴-3-일]-4-옥소-1,4-디하이드로 퀴놀린-3-카르복실레이트 (250 mg, 317 μmol)의 교반한 용액에 물 (2.5 mL) 중 LiOH.H₂O (66.2 mg, 1.58 mmol)의 용액을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, THF가 제거될 때까지 감압 농축한 후, 수층을 1N HCl (pH>2)로 산성화하여 침전시켰다. 침전된 고체를 여과하고 물에 이어 헥산으로 세척하여 조질의 화합물을 얻었다. 조질의 화합물을 이소프로필 알코올, 디에틸 에테르 및 n-펜탄의 혼합물로 분쇄하여 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸} 피롤리딘-1-일]-1-[1-(2-메톡시에틸)-3-메틸아제틴-3-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (27 mg, 15%)을 회백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 15.16 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.92 (d, J =4.0 Hz, 1H), 7.80 (dd, J = 8.0, 1.6 Hz, 1H), 6.94-6.91 (m, 1H), 6.47 (s, 1H), 4.92-4.87 (m, 1H), 4.38-4.34 (m, 2H), 3.93-3.79 (m, 3H), 3.52-3.38 (m, 5H), 3.21 (s, 3H), 2.67-2.54 (m, 2H), 2.36-2.29 (m, 1H), 2.10-2.01 (m, 2H), 1.99-1.92 (m, 1H), 1.88 (s, 3H). MS (ESI) m/z: 561.3 [M+H]⁺

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) +++

실시예 38: 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}-피롤리딘-1-일]-1-[1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-3-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산

단계 1: tert -부틸 N-[1-(2-메톡시에틸) 피롤리딘-3-일] 카르바메이트의 합성

MeCN (5 mL) 중 tert-부틸 N-(피롤리딘-3-일)카르바메이트 (200 mg, 1.07 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (147 mg, 1.07 mmol), 요오드화칼륨 (177 mg, 1.07 mmol) 및 1-브로모-2-메톡시에탄 (162 mg, 1.17 mmol)을 실온에서 N₂ 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 용액을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 과량의 용매를 감압 하에 농축하고 빙냉수로 켄칭하였다. 수성층을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 황산나트륨 상에서 건조하고 감압 하에 농축하여 tert-부틸 N-[1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-3-일]카르바메이트 (240 mg 조질)를 황색 액체로 수득하였다. 생성물을 정제하지 않고 다음 단계로 진행했다. MS (ESI) m/z: 245.5 [M+H]⁺.

단계 2: 1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-3-아민 하이드로클로라이드의 합성

디옥산 (3 mL) 중 tert-부틸 N-[1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-3-일]카르바메이트 (250 mg, 1.02 mmol)의 교반한 용액에, 1,4-디옥산 중 4M HCl (354 μL, 10.2 mmol)를 0℃에서 N₂ 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 천천히 실온으로 가온하고 6시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 조질의 고체를 디에틸 에테르 (3 x 10 mL)로 분쇄하여 1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-3-아민 하이드로클로라이드 (150 mg, 81%)를 담황색 고체로 수득하였다. MS (ESI) m/z: 145.5 [M+H]⁺.

단계 3: 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-[1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-3-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (4 mL) 중 에틸 (2Z)-2-[(Z)-5-클로로-4-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]-메틸}피롤리딘-1-일]-2-플루오로벤조일]-3-에톡시프로프-2-에노에이트 (300 mg, 586 μmol)의 교반한 용액에 1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-3-아민 하이드로클로라이드 (105 mg, 586 μmol), 이어서 트리에틸아민 (59.2 mg, 586 μmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 N₂ 분위기 하에 첨가하였다. 그 다음, 탄산칼륨 (80.9 mg, 586 μmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후 (TLC로 모니터링함), 반응 혼합물을 빙냉수 (5 mL)로 켄칭하여 침전시켰다. 침전된 고체를 여과에 의해 수집하고 물에 이어 헥산으로 세척한 다음 진공 여과 하에 건조시켜 고체를 얻었다. 고체를 EtOH에 용해시키고, 목탄으로 처리하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-[1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-3-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (114 mg, 33%)를 담갈색 고체로 수득하였다. MS (ESI) m/z: 589.2 [M+H]⁺.

단계 4: 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}-피롤리딘-1-일]-1-[1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-3-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF (3 mL) 중 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}-피롤리딘-1-일]-1-[1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-3-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복스-일레이트 (125 mg, 212 μmol)의 교반한 용액에 물 (2 mL) 중 LiOH.H₂O (44.0 mg, 1.05 mmol)의 용액을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후 (LCMS로 모니터링함), 반응 혼합물을 감압 하에 농축하고, 수성 층을 1N HCl (pH ~3)로 산성화하여 침전시켰다. 침전된 고체를 여과에 의해 수집하고 물에 이어 헥산으로 세척하여 조질의 화합물을 얻었다. 이를 이소프로필 알코올, 디에틸 에테르 및 n-펜탄의 혼합물로 분쇄하여 원하는 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}-피롤리딘-1-일]-1-[1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-3-일]-4-옥소-1,4-디하이드로 퀴놀린-3-카르복실산 (24.0 mg, 20%)을 회백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d _6,VT) δ 8.93 (brs, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.92-7.88 (m, 1H), 7.70 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.26 (brs, 1H), 6.90-6.86 (m, 1H), 5.50 (brs, 1H), 5.04 (brs, 1H), 4.47-4.39 (m, 2H), 3.95-3.90 (m, 1H), 3.75-3.50 (m, 5H), 3.49-3.40 (m, 5H), 3.34-3.20 (m, 2H), 2.65-2.55 (m, 1H), 2.55-2.50 (m, 1H), 2.38-2.30 (m, 1H), 2.17-1.85 (m, 3H). MS (ESI) m/z: 561.3 [M+H]⁺.

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) +++

실시예 39: 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-{1-[2-(디메틸아미노)에틸]피롤리딘-3-일}-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산

단계 1: tert -부틸 N-{1-[2-(디메틸아미노)에틸]피롤리딘-3-일}카르바메이트의 합성

아세토니트릴 (20 mL) 중 tert-부틸 N-(피롤리딘-3-일)카르바메이트 (500 mg, 2.68 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (1.11 mL, 8.04 mmol), 및 1-(2-브로모에틸)디메틸아민 (407 mg, 2.68 mmol)을 실온에서 N₂ 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 80℃에서 8시간 동안 N₂ 분위기 하에 교반하였다. 반응이 완료된 후 (TLC로 모니터링함), 반응 혼합물을 감압 하에 농축하고 빙냉수로 켄칭하였다. 수성층을 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 황산나트륨 상에서 건조하고 감압 하에 농축하여 tert-부틸 N-{1-[2-(디메틸아미노)에틸]피롤리딘-3-일}카르바메이트 (550 mg, 조질)를 황색 액체로 수득하였다. 생성물을 정제하지 않고 다음 단계로 진행했다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 6.91 (s, 1H), 3.93-3.82 (m, 1H), 2.72-2.66 (m, 1H), 2.56-2.40 (m, 4H), 2.30-2.19 (m, 3H), 2.12 (s, 6H), 2.02-1.94 (m, 1H), 1.55-1.48 (m, 1H), 1.37 (s, 9H).

단계 2: 1-[2-(디메틸아미노)에틸]피롤리딘-3-아민 하이드로클로라이드의 합성

디옥산 (5 mL) 중 4N HCl을 tert-부틸 N-{1-[2-(디메틸아미노)에틸]피롤리딘-3-일}카르바메이트 (500 mg, 1.94 mmol)에 0℃에서 N₂ 분위기 하에 첨가하고 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후 (TLC로 모니터링함), 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 휘발성 용매를 제거하였다. 조질의 고체를 디에틸 에테르 (3 x 50 mL) 및 n-펜탄으로 세척하여 1-[2-(디메틸아미노)에틸]피롤리딘-3-아민 하이드로클로라이드 (250 mg, 67%)를 갈색 고체로 얻었다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.50 (brs, 2H), 3.93-3.87 (m, 1H), 3.56-3.39 (m, 4H), 3.29-3.21 (m, 4H), 2.81 (s, 6H), 2.33-2.16 (m, 1H), 2.08-1.98 (m, 1H).

단계 3: 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-{1-[2-(디메틸아미노)에틸]피롤리딘-3-일}-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (3 mL) 중 에틸 (2Z)-2-[(Z)-5-클로로-4-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-2-플루오로벤조일]-3-에톡시프로프-2-에노에이트 (300 mg, 586 μmol)의 교반한 용액에 1-[2-(디메틸아미노)에틸]피롤리딘-3-아민 하이드로클로라이드 (138 mg, 878 μmol), 이어서 트리에틸아민 (162 μL, 1.17 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 N₂ 분위기 하에 교반하였다. 출발 물질의 완료 후, 탄산칼륨 (241 mg, 1.75 mmol)을 첨가하고 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 냉각시키고 빙냉수 (5 mL)로 켄칭하여 침전시켰다. 침전된 고체를 여과로 수집하고 물에 이어 헥산로 세척한 후, 진공 여과 하에 건조시켜 고체를 얻었다. 고체를 EtOH에 용해시키고, 목탄으로 처리하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-{1-[2-(디메틸아미노)에틸]피롤리딘-3-일}-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (124 mg, 35%)를 담갈색 고체로 수득하였다. MS (ESI) m/z: 602.3 [M+H]⁺.

단계 4: 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-{1-[2-(디메틸아미노)에틸]피롤리딘-3-일}-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF (3 mL): 물 (3 mL)의 혼합물 중 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-{1-[2-(디메틸아미노)에틸]피롤리딘-3-일}-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (100 mg, 165 μmol)의 교반한 용액에 LiOH.H₂O (34.6 mg, 825 μmol)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후 (TLC로 모니터링함), 반응 혼합물을 감압 하에 농축한 후, 수성층을 1N HCl (pH~3)로 산성화하여 침전시켰다. 침전된 고체를 여과로 수집하고 prep HPLC로 정제하여 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-{1-[2-(디메틸아미노)에틸]피롤리딘-3-일}-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (14.2 mg, 15%)을 황색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d _6,VT) δ 15.31 (brs, 1H), 9.04 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.90-7.88 (m, 1H), 7.73-7.70 (m, 1H), 7.52-7.41 (m, 1H), 6.90-6.86 (m, 1H), 5.41 (brs, 1H), 4.95 (brs, 1H), 4.44-4.41 (m, 2H), 3.92-3.89 (m, 1H), 3.37-3.32 (m, 2H), 3.19-3.15 (m, 1H), 2.68-2.54 (m, 4H), 2.49-2.42 (m, 2H), 2.32-2.27 (m, 3H), 2.19 (s, 6H), 2.07-2.01 (m, 1H), 1.92-1.85 (m, 2H), MS (ESI) m/z: 574.3 [M+H]⁺

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++

실시예 40: (R)-1-(6-아미노피리딘-3-일)-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산

단계 1: 에틸 3-(5-클로로-2,4-디플루오로페닐)-3-옥소프로파노에이트의 합성

THF (1000 mL) 중 5-클로로-2,4-디플루오로벤조산 (100 g, 519 mmol)의 교반한 용액에, THF (1000 mL) 중 CDI (168 g, 1.03 mol)를 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 천천히 실온으로 가온하고 동일 온도에서 1시간 동안 교반하였다. TLC로 반응이 완료되면, 칼륨 모노에틸 말로네이트 (132.6 g, 775 mmol), 마그네슘 클로라이드 (39.4 g, 413 mmol)에 이어 트리에틸아민 (220 mL, 1.57 mmol)을 실온에서 첨가하고 16시간 동안 계속해서 고반하였다. TLC로 반응이 완료되면, 반응 혼합물을 감압 하에 증발시켰다. 생성된 잔류물을 물 (4000 mL)로 희석하고 EtOAc (3 x 3000 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 용액 (2000 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고 증발 건조시켜 끈적한 덩어리를 수득하였다. 추가로 이를 메탄올 (400 mL)로 분쇄하고, 침전된 고체를 여과에 의해 수집하고 진공에서 건조하여 에틸 3-(5-클로로-2,4-디플루오로페닐)-3-옥소프로파노에이트　(85.8 g,　63%)를 회백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.86 (dd, J = 8.8, 1.2 Hz, 1H), 7.47 (t, J = 10.4 Hz, 1H), 5.12 (s, 1H), 4.01 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.16 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

단계 2: (R)-tert-부틸 2-(((3-클로로피리딘-2-일) 옥시) 메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

THF (500 mL) 중 tert-부틸 (R)-2-(하이드록시메틸) 피롤리딘-1-카르복실레이트 (80 g,　397 mmol)를THF　(150 mL)　중 수소화나트륨　(15 g,　357 mmol)의 교반한 현탁액에　0℃에서 첨가하고 동일 온도에서 1시간 동안 계속 교반한 후, THF (30 mL) 중 2,3-디클로로 피리딘　(64.6 g,　437 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 얼음물 (500 mL)에 천천히 붓고, 생성물을 에틸 아세테이트 (2 x 500 mL)로 추출하고, 합한 유기층을 염수 (250 mL)로 연속적으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고 감압하에 증발시켜 조 물질을 수득하였다. 조질의 화합물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(100-200 메쉬)에 적용하고 5-10% EtOAc-헥산으로 용리시켰다. 생성물을 함유하는 관련 분획을 합하고 증발 건조시켜 tert-부틸 (R)-2-(((3-클로로피리딘-2-일) 옥시) 메틸) 피롤리딘-1-카르복실레이트 (61 g, 50%)를 담황색 액체로 수득하였다. MS (ESI) m/z: 313.0 [M+H]⁺

관련 분획을 합하고 감압 하에 농축하여 tert-부틸 (2R)-2-[(피리딘-3-일옥시) 메틸] 피롤리딘-1-카르복실레이트 (2.75 g, 99%)를 회백색 고체로 수득하였다, MS (ESI) m/z: 279.4 [M+H]⁺.

단계 3: (R)-3-클로로-2-(피롤리딘-2-일메톡시) 피리딘. HCl의 합성

4M 1,4 디옥산-HCl (30 mL) 중 tert-부틸 (R)2-{[(3-클로로피리딘-2-일) 옥시] 메틸} 피롤리딘-1-카르복실레이트 (61.0 g, 195.01 mmol)의 0℃에서 교반한 용액에. 반응 혼합물을 천천히 실온으로 가온하고 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 과량의 용매를 감압 하에 제거하여 조 물질을 수득하였다. 추가로 조 물질을 디에틸 에테르 (2x 150 ml) 및 펜탄 (2x 150 ml)으로 분쇄하고, 최종적으로 진공에서 건조시켜 (R)-3-클로로-2-[(피롤리딘-2-일) 메톡시] 피리딘. HCl (49 g, 정량적)을 백색 고체로 수득하였다. MS (ESI) m/z: 213.1 [M+H]⁺(유리 염기의 경우).

단계 4: 에틸 (R)-3-(5-클로로-4-(2-(((3-클로로피리딘-2-일) 옥시) 메틸) 피롤리딘-1-일)-2-플루오로페닐)-3-옥소프로파노에이트의 합성.

트리에틸아민 (28.7 mL, 206.1 mmol)을 ACN (200 mL) 중 에틸 3-(5-클로로-2,4-디플루오로페닐)-3-옥소프로파노에이트 (36 g, 138.679 mmol) 및 (R)-3-클로로-2-(피롤리딘-2-일메톡시) 피리딘 (49 g, 231.132 mmol)의 교반한 용액에 첨가한 후, 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 과량의 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 물 (300 ml)로 희석하고, 생성물을 DCM (2 x 500 ml)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 (500 mL)로 세척하고, Na₂SO₄상에서 건조하고 증발시켰다. 수득된 조 물질을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(100-200 메쉬)에 적용하고 컬럼을 10% EtOAc/헥산으로 용리시켰다. 생성물을 함유하는 관련 분획을 합하고 증발 건조시켜 에틸 3-{5-클로로-4-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-2-플루오로페닐}-3-옥소프로파노에이트 (30 g, 77%)를 녹색 액체로 수득하였다, MS (ESI) m/z: 455.0 [M+H]^+.

단계 5: 에틸 (R,Z)-2-(5-클로로-4-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-2-플루오로벤조일)-3-에톡시아크릴레이트의 합성

아세트산 무수물 (117 μL, 2.07 mmol) 중 에틸 3-{5-클로로-4-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일) 옥시] 메틸} 피롤리딘-1-일]-2-플루오로페닐}-3-옥소프로파노에이트 (900 mg, 1.97 mmol)의 교반한 용액에 실온에서 트리에틸오르토포르메이트 (184 μL, 1.11 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 155℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 용매를 제거하고, 잔류물을 톨루엔 (2 x 10 mL)과 공비하여 에틸 (R,Z)-2-(5-클로로-4-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸) 피롤리딘-1-일)-2-플루오로벤조일)-3-에톡시아크릴레이트 (747 mg, 74%)를 갈색 액체로 수득하였다. 조질의 화합물을 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.

단계 6: (R)-에틸 1-(6-아세트아미도피리딘-3-일)-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (40 mL) 중 에틸 (2Z)-2-[(Z)-5-클로로-4-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일) 옥시] 메틸} 피롤리딘-1-일]-2-플루오로벤조일]-3-에톡시프로프-2-에노에이트 (5 g, 9.77 mmol)의 교반한 용액에 N-(5-아미노피리딘-2-일) 아세트아미드 (1.76 g, 11.7 mmol)를 첨가하고 27℃에서 1시간 동안 교반하였다. 탄산칼륨 (1.35 g, 9.77 mmol)을 상기 반응 혼합물에 첨가하고 반응 혼합물을 90℃로 가열하고 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 반응 혼합물을 빙냉수로 희석하고, 생성물을 에틸 아세테이트 (2 x 150 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 용액 (70 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (100-200 메쉬)로 정제하고 60-70% EtOAc/헥산을 사용하여 컬럼을 용리시켰다. 필요한 생성물을 함유하는 관련 분획을 합하고 감압 하에 증류하여 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일) 옥시] 메틸}피롤리딘-1-일]-1-(6-아세트아미도피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (1.71 g, 29%)를 갈색 고체로 수득하였다. MS (ESI) m/z: 596.5 [M+H]⁺

단계 7: (R)-1-(6-아미노피리딘-3-일)-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF 및 물 (1:1, 50 mL) 중 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일) 옥시] 메틸} 피롤리딘-1-일]-1-(6-아세트아미도피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (2.4 g, 4.02 mmol)의 교반한 용액에 수산화나트륨 (479 mg, 12.0 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 6시간 동안 50℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 과량의 용매를 감압 하에 제거하고, 물 (20 ml)로 희석하고, 수성 층을 0℃에서 1N HCl로 산성화시켰다. 침전된 고체를 여과에 의해 수집하고, 물로 세척하고, 진공 하에 건조시켰다. 생성된 물질을 디에틸 에테르 (50 ml) 및 아세톤 (2 x 50 mL) 중 10% IPA로 세척하여 분쇄하고 진공 하에 건조하고 최종적으로 동결 건조하여 1-(6-아미노피리딘-3-일)-6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (1.23 g, 58%)을 회백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 8.69 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.15 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.95-7.82 (m, 2H), 7.81-7.78 (m, 1H), 7.01-6.89 (m, 2H), 6.45 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.84-4.80 (m, 1H), 4.30 (s, 2H), 3.66-3.52 (m, 1H), 3.25-3.16 (m, 1H), 2.28-2.22 (m, 1H), 2.00-1.91 (m, 2H), 1.89-1.83 (m, 1H) (-CO₂H & -NH₂ 양성자가 관찰되지 않음); MS (ESI) m/z: 526.2 [M+H]⁺.

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 41: 6-클로로-7-[(2R,4S)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}-4-플루오로피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산

단계 1: 1-tert-부틸 2-메틸 (2R,4S)-4-플루오로피롤리딘-1,2-디카르복실레이트의 합성

메틸렌 클로라이드　(30 mL)　중 1-tert-부틸 2-메틸 (2R,4R)-4-하이드록시피롤리딘-1,2-디카르복실레이트　(3 g,　12.2 mmol)의 용액에　-78℃에서 디에틸 아미노 황 트리플루오라이드　(2.40 mL,　18.2 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하한 후 실온에서 추가로 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응을 NH₄Cl　수용액 (5　mL)으로 켄칭하고 DCM (25　mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기상을 무수 Na₂SO₄상에서 건조하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 뉴트럴 알루미나 컬럼 크로마토그래피 (PE/EtOAc(v/v) = 20/1)로 정제하여 1-tert-부틸 2-메틸 (2R,4S)-4-플루오로피롤리딘-1,2-디카르복실레이트　(1.89 g,　7.64 mmol, 63% 수율)를 무색 액체로 수득하였다. TLC 시스템: 10% EtOAc/헥산, R_f: 0.5.¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 5.28-5.13 (m, 1H), 4.49-4.38 (m, 1H), 3.95-3.86 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.69-3.55 (dd, J = 12.8, 3.2 Hz, 1H), 2.62-2.54 (m, 1H), 2.19-2.02 (m, 1H), 1.42 (s, 9H).

단계 2: tert-부틸 (2R,4S)-4-플루오로-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

THF　(50 mL) 중 1-tert-부틸 2-메틸 (2R,4S)-4-플루오로피롤리딘-1,2-디카르복실레이트　(2.1 g,　7.64 mmol)의 교반한 용액에, 리튬 보로하이드라이드　(10.9 mL,　21.8 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 10분 후, 반응 혼합물을 실온이 되도록 하고 5시간 동안 교반하였다.　반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 아세트산 (1 mL) 및 물 (3 mL)로 켄칭하고　에틸　아세테이트로 추출한다.　합한 유기층을 물, 포화 NaHCO₃ 용액 및 염수 용액로 세척하고,　황산나트륨 상에서 건조하고 여과하고 농축하여 　tert-부틸 (2R,4S)-4-플루오로-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트　(1.62 g,　7.38 mmol, 97% 수율)를 무색 액체로 수득하였다. 이를 어떤 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.

TLC 시스템: 20% EtOAc/헥산, R_f: 0.3.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 5.16-5.03 (d, J = 52.8 Hz, 1H), 4.84 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.16-4.14 (m, 1H), 3.89-3.74 (m, 2H), 3.60-3.55 (m, 2H), 2.36-2.29 (m, 1H), 1.81-1.70 (m, 1H), 1.48 (s, 9H).

단계 3: (2R,4S)-4-플루오로피롤리딘-2-일]메탄올 하이드로클로라이드의 합성

1,4-디옥산　(15 mL) 중 tert-부틸 (2R,4S)-4-플루오로-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트　(1.8 g,　7.38 mmol)의 교반한 용액에 염산 (3.67 mL,　14.7 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 실온이 되도록 하고 5시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 모든 휘발성 물질을 진공 하에 제거하고, 수득된 고체를 디에틸에테르 (2 X 15 mL)로 세척하여　[(2R,4S)-4-플루오로피롤리딘-2-일]메탄올 하이드로클로라이드 (888 mg,　5.70 mmol,78%)를 회백색 고체로 수득하였다.

TLC 시스템: DCM 중 5% MeOH, R_f: 0.2.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 9.96 (bs, 1H), 9.33 (bs, 1H), 5.51-5.36 (d, J = 57.2 Hz, 1H), 3.78-3.72 (m, 2H), 3.62-3.53 (m, 1H), 3.51-3.40 (m, 2H), 2.29-2.19 (m, 1H), 2.06-1.88 (m, 1H).

단계 4: 에틸 6-클로로-7-플루오로-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성.

트리에틸오르토포르메이트　(1.88 mL,　11.4 mmol)　중 에틸 3-(5-클로로-2,4-디플루오로페닐)-3-옥소프로파노에이트　(2.0 g,　7.61 mmol)의 교반한 용액에　아세트산 무수물　(1.07 mL,　11.4 mmol)을 첨가하고 생성된 혼합물을 155℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 감압 하에 농축하고 톨루엔 (2 x 25 ml)과 공비하여 조질의 화합물을 갈색 액체로 얻었다.

DMSO　(20 mL) 중 상기 조질의 화합물의 교반한 용액에 피라진-2-아민　(868 mg,　9.13 mmol)을 실온에서 첨가하고 1시간 동안 교반하였다. SM의 완료 후 (TLC로 모니터링함), 탄산칼륨　(1.05 g,　7.61 mmol)을 반응 혼합물에 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃로 가열하고 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 빙냉수 (50 mL)로 켄칭하여 침전시켰다. 침전된 고체를 여과하고 물에 이어 디에틸 에테르로 세척하고 진공 하에 건조시켜 에틸 6-클로로-7-플루오로-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트　(1.98g,　5.69 mmol, 75%)를 담황색 고체로 수득하였다.

TLC 시스템 :헥산 중 70% EtOAc; Rf : 0.3.

C₁₆H₁₁ClFN₃O₃에 대한 계산된 MS (ESI) : 347.05; 확인: 347.9 [M+H]⁺ (rt: 2.74분).

단계 5: 에틸 6-클로로-7-[(2R,4S)-4-플루오로-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성.

디메틸 설폭사이드　(15 mL) 중 [(2R,4S)-4-플루오로피롤리딘-2-일]메탄올 하이드로클로라이드　(1.11 g,　5.70 mmol)의 교반한 용액에, 트리에틸아민 (1.88 mL,　14.3 mmol)을 첨가하고 5분 동안 교반하였다. 5분 후, 에틸 6-클로로-7-플루오로-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트(1g,　2.87 mmol)를 첨가하고 130℃에서 16시간 동안 밀봉된 튜브에서 교반하였다.　반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 물로 켄칭하고 EtOAc (3X 25　mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 냉수, 염수 용액으로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조하고 여과하고 농축하여 조질의 화합물을 얻었다. 수득된 조질의 화합물을 컬럼 크로마토그래피 (DCM 중 5% MeOH로 용리함)로 정제하여 에틸 6-클로로-7-[(2R,4S)-4-플루오로-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트　(445 mg, 995 μmol, 35%)를 황색 고무질 물질로 수득하였다.

TLC 시스템: 5% MeOH/DCM, R_f: 0.5

C₂₁H₂₀ClFN₄O₄에 대해 계산된 MS (ESI): 446.1; 확인: 447.0 [M+H]⁺ (rt: 2.50분).

단계 6: 에틸 6-클로로-7-((2R,4S)-2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-4-플루오로피롤리딘-1-일)-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO　(10 mL) 중 에틸 6-클로로-7-[(2R,4S)-4-플루오로-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트　(500 mg,　995 μmol)의 교반한 용액에 3-클로로-2-플루오로피리딘　(653 mg,　4.97 mmol) 및 탄산칼륨　(686 mg,　4.97 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 130℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 물로 켄칭하고 EtOAc (3X 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 빙수, 염수 용액으로 세척하고, 무수 Na₂SO₄상에서 건조하고 여과하고 농축하여 조질의 화합물을 얻었다. 수득된 조질의 화합물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 에틸 6-클로로-7-[(2R,4S)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}-4-플루오로피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트　(105 mg,　188 μmol, 19%)를 담황색 고무질 물질로 수득하였다.

TLC 시스템: 100% EtOAc, R_f: 0.5

C₂₆H₂₂Cl₂FN₅O₄에 대한 계산된 MS (ESI): 557.10; 확인: 558.1 [M+H]⁺ (rt: 3.21분).

단계 7: 6-클로로-7-[(2R,4S)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}-4-플루오로피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

에틸렌 디클로라이드　(10 mL) 중 에틸 6-클로로-7-[(2R,4S)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}-4-플루오로피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트　(300 mg,　188 μmol)의 교반한 용액에　트리메틸 주석 수산화물(136 mg,　752 μmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃로 가열하고 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 DCM (20 mL)으로 희석하고 유기층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 무수 Na₂SO₄상에서 건조하고 여과하고 농축하여 조 물질을 얻었다. 수득된 조질의 화합물을 역상 prep HPLC로 정제하고 순수한 분획을 동결 건조 하에 건조시켜 6-클로로-7-[(2R,4S)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}-4-플루오로피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (25.4 mg,　48.0 μmol, 25% 수율)을　회백색 고체로 수득하였다.

TLC 시스템: 10% MeOH/DCM, R_f: 0.5

MS (ESI): C₂₄H₁₈Cl₂FN₅O₄에 대한 계산: 529.07; 확인: 530.3 [M+H]⁺ (rt: 5.977분).

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 14.8 (bs, 1H), 9.13 (s, 1H), 8.95 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 8.79 (d, J =1.2 Hz, 2H), 8.21 (s, 1H), 7.86-7.85 (dd, J = 4.8, 1.6 Hz, 1H), 7.80-7.77 (dd, J = 4.0, 1.4 Hz, 1H), 6.94-6.91 (q, J = 5.2 Hz, 1H), 6.67 (s, 1H), 5.46-5.33 (d, J = 53.2 Hz, 1H), 4.85-4.83 (m, 1H), 4.43-4.39 (dd, J = 12.0, 3.8 Hz, 1H), 4.29-4.26 (dd, J = 11.8, 3.4 Hz, 1H), 3.91-3.75 (m, 1H), 2.42-2.40 (m, 1H), 2.24-2.20 (m, 1H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 42: 6-시아노-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-(1-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-7-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-7-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: ( 트랜스 )-4-(( tert -부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실 메탄설포네이트의 합성

DCM (50 mL) 중 tert-부틸 ((트랜스)-4-하이드록시사이클로헥실)카르바메이트 (4.0 g, 18.59 mmol) 및 TEA (5.6 g, 55.77 mmol)의 교반한 용액에 0℃에서 MsCl (3.2 g, 27.89 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 100 mL 물을 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 수성 용액을 DCM (50 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기상을 Na₂SO₄상에서 건조하고, 농축하여 잔류물을 얻었고, 이를 석유 에테르 중 0-50% EtOAc로 플래시 컬럼으로 정제하여 (트랜스)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실 메탄설포네이트 (3.3 g, 61%)를 백색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺:294.

단계 2: tert -부틸 7-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-7-카르복실레이트의 합성

무수 THF (100 mL) 중 (트랜스)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실 메탄설포네이트 (4.0 g, 13.65 mmol)의 교반한 용액에 t-BuOK (4.6 g, 40.94 mmol)를 N₂하에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축하여 잔류물을 얻고, 이를 석유 에테르 중 0- 50% EtOAc로 용리하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 7-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-7-카르복실레이트 (1.5 g, 56%)를 무색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 198.

단계 3: tert -부틸 1-포르밀-7-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-7-카르복실레이트의 합성

무수 THF (20 mL) 중 tert-부틸 7-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-7-카르복실레이트 (1.4 g, 7.10 mmol) 및 TMEDA (989 mg, 8.52 mmol)의 교반한 용액에 -78℃에서 s-BuLi (4.3 mL, 10.65 mmol)를 N₂하에 첨가하였다. 혼합물을 이 온도에서 1시간 동안 교반하였다. DMF (622 mg, 8.52 mmol)를 첨가하였다. 생성물을 1시간 동안 교반하였다. 40 mL 물을 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 수성 용액을 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기상을 Na₂SO₄상에서 건조하고,감압 하에 농축하여 잔류물을 얻고, 이를 석유 에테르 중 0- 50% EtOAc로 용리하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 1-포르밀-7-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-7-카르복실레이트 (700 mg, 44%)를 무색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺:226.

단계 4: tert -부틸 1-(하이드록시메틸)-7-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-7-카르복실레이트의 합성

EtOH (10 mL) 중 tert-부틸 1-포르밀-7-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-7-카르복실레이트 (700 mg, 3.10 mmol)의 교반한 용액에 0℃에서 NaBH₄ (236 mg, 6.20 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 20 mL 물을 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 수성 용액을 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 용액을 Na₂SO₄상에서 건조하고 감압 하에 농축하여 잔류물을 얻고, 이를 석유 에테르 중 0- 50% EtOAc로 용리하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 1-(하이드록시메틸)-7-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-7-카르복실레이트 (500 mg, 71%)를 무색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺:228.

단계 5: tert -부틸 1-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-7-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-7-카르복실레이트의 합성

무수 THF (10 mL) 중 tert-부틸 1-(하이드록시메틸)-7-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-7-카르복실레이트 (500 mg, 2.20 mmol)의 용액에 NaH (264 mg, 6.60 mmol) 및 2,3-디플루오로피리딘 (380 mg, 3.30 mmol)을 N₂하에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 20 mL 물을 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 수성 용액을 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기상을 Na₂SO₄상에서 건조하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 얻고, 이를 석유 에테르 중 0- 50% EtOAc로 용리하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 1-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-7-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-7-카르복실레이트 (520 mg, 73%)를 담황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 323.

단계 6: 1-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-7-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄의 합성

DCM (10 mL) 중 tert-부틸 1-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-7-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-7-카르복실레이트 (520 mg, 1.61 mmol)의 용액에 TFA (5 mL)를 첨가하였다. 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 하에 농축하여 잔류물을 얻고, 이를 MeOH에 용해시켰다. NH₃ ^. H₂O를 첨가하여 pH 9로 조정하였다. 혼합물을 감압 하에 농축하여 잔류물을 얻고, 이를 DCM 중 0- 10% MeOH로 용리하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 1-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-7-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄 (400 mg, 조질)을 담황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 223.

단계 7: 에틸 6-시아노-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-(1-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-7-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-7-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

8-mL 밀봉된 튜브에 에틸 6-시아노-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (200 mg, 0.46 mmol), 1-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-7-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄 (204 mg, 0.92 mmol) 및 DMSO (0.2 mL)를 넣었다. 생성된 혼합물을 진공 하에 약 50℃로 1시간 동안 가열하였다. 그 다음 DIEA (119 mg, 0.92 mmol, 2 당량)를 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 3일 동안 N₂하에 교반하였다. 혼합물을 물 중 20- 80% 아세토니트릴로 용리하는 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하여 에틸 6-시아노-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-(1-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-7-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-7-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (55 mg, 19%)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 638.

단계 8: 6-시아노-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-(1-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-7-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-7-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF (2 mL) 중 에틸 6-시아노-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-(1-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-7-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-7-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (85 mg, 0.13 mmol)의 교반한 용액에 H₂O (2 mL)중 LiOH ^. H₂O (56 mg, 1.33 mmol)의 용액을 실온에서 N₂ 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 AcOH로 산성화시켰다. 혼합물을 Prep.-HPLC로 정제하여 6-시아노-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-(1-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-7-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-7-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (45.5 mg, 57%)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺:610.35.¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.59 (d, J = 14.4 Hz, 2H), 8.24 (m, 1H), 7.89 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 7.78 - 7.52 (m, 2H), 7.10 - 6.96 (m, 1H), 6.74 (s, 1H), 6.42 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.62 (s, 2H), 4.31 (s, 1H), 3.98 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 3.81 - 3.68 (m, 2H), 3.26 - 3.11 (m, 1H), 2.12 (s, 6H), 1.73 (dd, J = 24.4, 14.4 Hz, 6H), 1.54 (d, J = 9.2 Hz, 2H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 43: ( S )-6-시아노-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-(2-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-메틸피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: ( S )-1-( tert -부톡시카르보닐)-2-메틸피롤리딘-2-카르복실산의 합성

DCM (100 mL) 중 (S)-2-메틸피롤리딘-2-카르복실산 (3.6 g, 27.87 mmol)의 교반한 용액에 (Boc)₂O (18.25 g, 83.61 mmol, 3 당량) 및 Et₃N (8.46 g, 83.61 mmol, 3 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 이어서 염수 (200 mL)를 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 혼합물을 DCM (100 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기상을 MgSO₄상에서 건조하였다. 여과 후, 여액을 감압 하에 농축시켰다. 그 결과 조 생성물 (S)-1-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피롤리딘-2-카르복실산 (6.38 g, 27.8 mmol)을 무색 결정으로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺:230.

단계 2: tert -부틸 ( S )-2-(하이드록시메틸)-2-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

무수 THF (100 mL) 중 (S)-1-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피롤리딘-2-카르복실산 (6.38 g, 27.8 mmol)의 용액에 BH₃.Me₂S (10.56 g, 139 mmol, 5 당량)를 실온에서 N₂ 하에 첨가하였다. 그 다음 생성된 혼합물을 70℃에서 1시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후. 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르/EtOAc = 1:1로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (S)-2-(하이드록시메틸)-2-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (4.1 g, 19.04 mmol)를 무색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺:216.

단계 3: tert -부틸 ( S )-2-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

무수 THF (100 mL) 중 tert-부틸 (S)-2-(하이드록시메틸)-2-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (4.1 g, 19.04 mmol)의 교반한 용액에 KO ^t Bu (6.41 g, 57.12 mmol, 3 당량)를 0℃에서 N₂하에 첨가하였다. 10분 후, 2,3-디플루오로피리딘 (2.63 g, 22.85 mmol, 1.2 당량)을 혼합물에 첨가하고 생성된 혼합물을 0℃에서 30분 동안, 이어서 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 그 다음 염수 (200 mL)를 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 혼합물을 EtOAc (100 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기상을 MgSO₄상에서 건조하였다. 여과 후, 여액을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 석유 에테르/EtOAc = 2:1로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (S)-2-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (4.3 g, 13.85 mmol)를 무색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺:311.

단계 4: ( S )-3-플루오로-2-((2-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리딘의 합성

DCM (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-2-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (4.3 g, 13.85 mmol)의 교반한 용액에 TFA (15 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 포화 NaHCO₃ (200 mL)에 용해시키고 EtOAc (100 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기상을 MgSO₄상에서 건조시켰다. 여과 후, 여액을 감압 하에 농축시켰다. 그 결과 (S)-3-플루오로-2-((2-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리딘 (2.6 g, 12.36 mmol)을 무색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺:211.

단계 5: 에틸 ( S )-6-시아노-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-(2-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-메틸피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

8-mL 밀봉된 튜브에 에틸 6-시아노-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (500 mg, 1.148 mmol), (S)-3-플루오로-2-((2-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리딘 (724 mg, 3.445 mmol, 3 당량) 및 DMSO (1 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에 약 50℃에서 1시간 동안 가열하였다. 그 다음 DIEA (297 mg, 2.296 mmol, 2 당량)를 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 48시간 동안 N₂하에 교반하였다. 혼합물을 아세토니트릴/물 = 7:3으로 용리하는 역상 크로마토그래피로 정제하여 에틸 (S)-6-시아노-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-(2-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-메틸피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (150 mg, 0.2397 mmol)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺:626.

단계 6: ( S )-6-시아노-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-(2-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-메틸피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF (4 mL) 중 에틸 (S)-6-시아노-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-(2-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-메틸피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (150 mg, 0.2397 mmol)의 교반한 용액에 H₂O (2 mL) 중 NaOH (19 mg, 0.4794 mmol, 2 당량)의 용액을 실온에서 N₂하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 AcOH로 산성화시켰다. 혼합물을 Prep.-HPLC로 정제하여 (S)-6-시아노-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-(2-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-메틸피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (32.8 mg)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺:598.25.¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.69 (s, 1H), 8.63 - 8.07 (m, 3H), 7.91 - 7.51 (m, 3H), 7.01 (m, 1H), 6.60 - 6.25 (m, 2H), 4.34 (m, 2H), 4.08 - 3.83 (m, 4H), 3.81 - 3.59 (m, 2H), 3.21 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 2.28 - 2.19 (m, 1H), 2.13 (s, 6H), 1.97 (dd, J = 19.6, 9.9 Hz, 3H), 1.22 (d, J = 11.5 Hz, 3H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 44: rac-6-클로로-7-((2R,3S)-2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-3-메틸피롤리딘-1-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: 1-tert-부틸 2-메틸 3-브로모피롤-1,2-디카르복실레이트의 합성

DCM (45 mL) 중 메틸 3-브로모-1H-피롤-2-카르복실레이트 (5.0 g, 24.51 mmol, 1.0 당량), 디-tert-부틸 디카르보네이트 (8.0 g, 36.76 mmol, 1.5 당량), DMAP (299 mg, 2.45 mmol, 0.1 당량) 및 Et₃N (7.4 g, 73.52 mmol, 3 당량)의 혼합물을 1시간 동안 실온에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 PE/EtOAc(5:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 1-tert-부틸 2-메틸 3-브로모피롤-1,2-디카르복실레이트 (6.5 g, 87.21%)를 황색 오일로 수득하였다.

단계 2: 1-tert-부틸 2-메틸 3-메틸피롤-1,2-디카르복실레이트의 합성

디옥산 (50.00 mL, 590.204 mmol, 27.62 당량) 및 H₂O (10.00 mL, 555.084 mmol, 25.97 당량) 중 1-tert-부틸 2-메틸 3-브로모피롤-1,2-디카르복실레이트 (6.50 g, 21.372 mmol, 1.00 당량) 및 트리메틸-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리보리난 (26827.94 g, 213.717 mmol, 10 당량) 및 K₂CO₃ (8861.07 g, 64.115 mmol, 3 당량) 및 Pd(PPh₃)₄ (2469.63 g, 2.137 mmol, 0.1 당량)의 혼합물을 1시간 동안 100℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 PE/EtOAc(5:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 1-tert-부틸 2-메틸 3-메틸피롤-1,2-디카르복실레이트 (2 g, 39.11%)를 황색 오일로 수득하였다.

단계 3: rac-1-(tert-부틸) 2-메틸 (2R,3S)-3-메틸피롤리딘-1,2-디카르복실레이트의 합성

DMSO (3.50 mL, 49.275 mmol, 45.23 당량) 중 에틸 6,7-디클로로-1-(1-메틸피라졸-4-일)-4-옥소-1,8-나프티리딘-3-카르복실레이트 (400.00 mg, 1.089 mmol, 1.00 당량) 및 3-클로로-2-[(2R)-피롤리딘-2-일메톡시]피리딘 (347.53 mg, 1.634 mmol, 1.5 당량) 및 K2CO3 (451.66 mg, 3.268 mmol, 3 당량)의 혼합물을 2시간 동안 50℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 잔류물을 다음 조건: 컬럼, C18 실리카겔; 이동상, 물 중 MeOH, 10분 후 10%에서 50%로 구배; 검출기, UV 254 nm에서 역 플래시 크로마토그래피로 정제하여 rac-1-(tert-부틸) 2-메틸 (2R,3S)-3-메틸피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (300 mg, 50.68%)를 황색 오일로 수득하였다.

단계 4: rac-tert-부틸 (2R,3S)-2-(하이드록시메틸)-3-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

DMSO (2.00 mL, 28.157 mmol, 102.01 당량) 중 rac-1-(tert-부틸) 2-메틸 (2R,3S)-3-메틸피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (150.00 mg, 0.276 mmol, 1.00 당량) 및 Zn(CN)2 (162.09 mg, 1.380 mmol, 5 당량) 및 Pd(PPh3)4 (31.90 mg, 0.028 mmol, 0.1 당량)의 혼합물을 2시간 동안 100℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 잔류물을 다음 조건: 컬럼, C18 실리카겔; 이동상, 물 중 MeOH, 20분 후 10%에서 80%로 구배; 검출기, UV 254 nm에서 역 플래시 크로마토그래피로 정제하여 rac-tert-부틸 (2R,3S)-2-(하이드록시메틸)-3-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (70 mg, 47.49%)를 황색 고체로 수득하였다.

단계 5: rac-tert-부틸 (2R,3S)-2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-3-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

THF (30.00 mL, 370.290 mmol, 79.72 당량) 중 rac-tert-부틸 (2R,3S)-2-(하이드록시메틸)-3-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (1.00 g, 4.645 mmol, 1.00 당량) 및 3-클로로-2-플루오로피리딘 (1221.87 g, 9.290 mmol, 2 당량) 및 NaH (334.40 mg, 13.934 mmol, 3 당량)의 혼합물을 밤새 실온에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 이어서, 30 mL의 MeOH를 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 다음 조건: 컬럼, C18 실리카겔; 이동상, 물 중 MeOH, 20분 후에 10%에서 80%로 구배 ; 검출기, UV 254 nm에서 역 플래시 크로마토그래피로 정제하여 rac-tert-부틸 (2R,3S)-2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-3-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (600 mg, 39.53%)를 황색 오일로 수득하였다.

단계 6: rac-3-클로로-2-(((2R,3S)-3-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리딘의 합성

DCM (2.00 mL, 31.460 mmol, 17.14 당량) 중 rac-tert-부틸 (2R,3S)-2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-3-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (600.00 mg, 1.836 mmol, 1.00 당량) 및 TFA (0.50 mL, 6.732 mmol, 3.67 당량)의 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 수성층을 EtOAc (3 x 5 mL)로 추출하여 rac-3-클로로-2-(((2R,3S)-3-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리딘 (300 mg, 72.08%)을 황색 오일로 수득하였다.

단계 7: rac-에틸 6-클로로-7-((2R,3S)-2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-3-메틸피롤리딘-1-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (2.5 mL) 중 rac-3-클로로-2-(((2R,3S)-3-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리딘 (70 mg, 1.5 당량) 및 에틸 6-클로로-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-7-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (110 mg, 1.00 당량) 및 DIEA (290 mg, 3 당량)의 혼합물을 1시간 동안 80℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 잔류물을 다음 조건: 컬럼, C18 실리카겔; 이동상, 물 중 MeOH, 10분 후에 10%에서 50%로 구배; 검출기, UV 254 nm에서 역 플래시 크로마토그래피로 정제하여 rac-에틸 6-클로로-7-((2R,3S)-2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-3-메틸피롤리딘-1-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (70 mg, 43.45%)를 황색 고체로 수득하였다.

단계 8: rac-6-클로로-7-((2R,3S)-2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-3-메틸피롤리딘-1-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

EtOH (2.00 mL, 34.427 mmol, 320.46 당량) 중 rac-에틸 6-클로로-7-((2R,3S)-2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-3-메틸피롤리딘-1-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (70.00 mg, 0.107 mmol, 1.00 당량) 및 NaOH (12.89 mg, 0.322 mmol, 3 당량)의 혼합물을 1시간 동안 실온에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 잔류물을 Prep-TLC (컬럼: XBridge Prep C18 OBD 컬럼,, 5um,19*150mm ; 이동상 A:물(10MMOL/L NH4HCO3), 이동상 B:ACN; 유속:25 mL/분; 구배: 8분 후에 48 B에서 62 B로; 254 nm; RT1:7.83; RT2:; 주입 부피: ml; 수행 횟수:;)로 정제하여 rac-6-클로로-7-((2R,3S)-2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-3-메틸피롤리딘-1-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (23.8 mg, 35.53%)을 황색 고체로 수득하였다.　　　LCMS (ESI) [M+H]+: 623.2. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 8.43 (s, 2H), 8.11 (s, 1H), 8.06 - 7.91 (m, 4H), 7.79 (s, 2H), 7.55 (s, 2H), 6.98 (s, 2H), 6.52 (s, 1H), 6.31 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.15 (s, 1H), 4.67 (s, 1H), 4.54 (s, 1H), 4.37 (s, 2H), 4.17 (s, 3H), 4.07 - 3.96 (m, 4H), 3.78 (s, 5H), 3.23 (s, 1H), 3.08 (s, 2H), 2.15 (s, 12H), 2.04 (s, 2H), 1.73 (s, 2H), 1.24 (s, 0H), 1.07 (d, J = 6.6 Hz, 6H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 45: 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-1-[5-(2-하이드록시에톡시)피라진-2-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산

단계 1: 2-[(5-아미노피라진-2-일)옥시]에탄올의 합성

5-브로모피라진-2-아민 (500 mg, 2.87 mmol, 1 당량), 에틸렌글리콜 (267 mg, 4.31 mmol, 1.5 당량) 및 tert-부톡시칼륨 (967 mg, 8.62 mmol, 3 당량)의 혼합물을 1시간 동안 160℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 클라이밍 보드로 정제하여 2-[(5-아미노피라진-2-일)옥시]에탄올 (100 mg, 22.43%)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 156.07.

단계 2: 에틸 (2Z)-2-[(Z)-5-클로로-2,4-디플루오로벤조일]-3-에톡시프로프-2-에노에이트의 합성

에틸 3-(5-클로로-2,4-디플루오로페닐)-3-옥소프로파노에이트 (200 mg, 0.76 mmol, 1 당량), Ac₂O (233 mg, 2.28 mmol, 3 당량) 및 트리에틸오르토포르메이트 (169 mg, 1.14 mmol, 1.5 당량)의 혼합물을 1시간 동안 100℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에 의해 농축하여 에틸 (2Z)-2-[(Z)-5-클로로-2,4-디플루오로벤조일]-3-에톡시프로프-2-에노에이트 (150 mg, 조질)를 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 319.05.

단계 3: 에틸 6-클로로-7-플루오로-1-[5-(2-하이드록시에톡시)피라진-2-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (3 mL) 중 에틸 (2Z)-2-[(Z)-5-클로로-2,4-디플루오로벤조일]-3-에톡시프로프-2-에노에이트 (150 mg, 0.47 mmol, 1 당량) 및 2-[(5-아미노피라진-2-일)옥시]에탄올 (109 mg, 0.70 mmol, 1.5 당량)의 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 이어서, 추가의 K₂CO₃ (65 mg, 0.47 mmol, 1 당량)를 공급하고 1시간 동안 유지하고 1시간 동안 반응을 계속하였다. 생성된 혼합물을 ACN/H₂O(0.1%FA) (70%- 80%)로 용리하는 RP-플래시 크로마토그래피로 정제하여 에틸 6-클로로-7-플루오로-1-[5-(2-하이드록시에톡시)피라진-2-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (50 mg, 26.05%)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 408.07.

단계 4: 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-1-[5-(2-하이드록시에톡시)피라진-2-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (1 mL) 중 에틸 6-클로로-7-플루오로-1-[5-(2-하이드록시에톡시)피라진-2-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (50 mg, 0.12 mmol, 1 당량), 3-클로로-2-[(2R)-피롤리딘-2-일메톡시]피리딘 (130 mg, 0.61 mmol, 5 당량) 및 TEA (37 mg, 0.36 mmol, 3 당량)의 혼합물을 3일 동안 110℃에서 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고 물로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 ACN/H₂O(0.1%FA) (40%- 50%)로 용리하는 RP-플래시 크로마토그래피로 정제하여 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-1-[5-(2-하이드록시에톡시)피라진-2-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (30 mg, 40.75%)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 600.13.

단계 5: 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-1-[5-(2-하이드록시에톡시)피라진-2-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

H₂O (0.3 mL) 및 THF (0.9 mL) 중 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2- yl)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-1-[5-(2-하이드록시에톡시)피라진-2-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (50 mg, 0.08 mmol, 1 당량)의 교반한 용액에　LiOH.H₂O (13 mg, 0.33 mmol, 4 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압하에 농축하고 물로 세척하였다. 생성물을 분쇄하여 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-1-[5-(2-하이드록시에톡시)피라진-2-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (9.1 mg, 19.09%)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]+: 572.10. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.59 (d, J = 15.8 Hz, 2H), 8.33 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.92 - 7.84 (m, 1H), 7.83 - 7.74 (m, 1H), 6.97 - 6.87 (m, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.02 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.63 (s, 1H), 4.42 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 4.26 (t, J = 3.9 Hz, 2H), 3.86 - 3.75 (m, 2H), 3.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.17 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 2.30 - 2.19 (m, 1H), 1.98 - 1.74 (m, 3H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 46: 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-1-[5H,7H-푸로[3,4-b]피라진-2-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: 요오도(요오도메톡시)메탄의 합성

트리옥산　(15.0　g,　166.52　mmol)　및 TMSI　(100.0　g,　499.76　mmol)의 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 혼합물을 농축하고 석유 에테르로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 요오도(요오도메톡시)메탄(15　g,　30.24%)을　황색 오일로 수득하였다.

단계 2: 트리부틸([[(트리부틸스탄닐)메톡시]메틸])스탄난의 합성

N₂하에, THF　(120.0　mL)　 중 트리부틸주석 (25.8　g,　88.64　mmol)의 용액에　LDA (44.3　mL,　88.63　mmol)를 첨가하고 혼합물을 30분 동안 -78℃에서 교반하였다. 그 다음 요오도(요오도메톡시)메탄 (12.0　g,　40.28　mmol)을 -78℃에서 첨가하고 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응을 NH₄Cl (240 mL)로 켄칭하고 EtOAc (3*200 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 물 (200 mL), 염수 (200 mL)로 세척하고, 농축하고 석유 에테르로 용리하는 실리카겔 상의 플래시 크로마토그래피로 정제하여 트리부틸([[(트리부틸스탄닐)메톡시]메틸])스탄난　(5.0　g,　19.88%)을　무색 오일로 수득하였다.

단계 3: 5H,7H-푸로[3,4-b]피라진-2-아민의 합성

질소 분위기 하에,　5-브로모-6-클로로피라진-2-아민 (1.6　g,　8.01　mmol), 트리부틸([[(트리부틸스탄닐)메톡시]메틸])스탄난 (5.0　g,　8.01　mmol), Pd₂(dba)₃ ^.CHCl₃(82 mg,　0.08　mmol), XPhos (76　mg,　0.16　mmol)　및 디옥산 (50.0　mL)의 혼합물을 밤새　100℃에서 교반하였다. 반응물을 EtOAc (300 mL)로 희석하고, 물 (50 mL), 염수 (50 mL)로 세척하고, 농축하고, EtOAc/석유 에테르(0-100%)로 용리하는 실리카겔 상의 플래시 크로마토그래피로 정제하여 5H,7H-푸로[3,4-b]피라진-2-아민 (170 mg, 15.66%)을　백색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 138.

단계 4: 에틸 6-클로로-7-플루오로-1-[5H,7H-푸로[3,4-b]피라진-2-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

에틸　(2Z)-2-[(Z)-5-클로로-2,4-디플루오로벤조일]-3-에톡시프로프-2-에노에이트 (181　mg,　0.56　mmol), 5H,7H-푸로[3,4-b]피라진-2-아민 (77　mg,　0.56　mmol), DMSO (5.0　mL)의 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 그 다음 K₂CO₃(78　mg,　0.56　mmol)를 첨가하고 혼합물을 밤새 50℃에서 교반하였다. 혼합물을 RPFC에 의해 정제하여 에틸　6-클로로-7-플루오로-1-[5H,7H-푸로[3,4-b]피라진-2-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트　(160　mg,　72.50%)를　적색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 390.

단계 5: 에틸　6-클로로-7-[(2 R )-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-1-[5 H ,7 H -푸로[3,4- b ]피라진-2-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

에틸　6-클로로-7-플루오로-1-[5H,7H-푸로[3,4-b]피라진-2-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (100　mg,　0.25　mmol), 3-클로로-2-[(2R)-피롤리딘-2-일메톡시]피리딘 (109　mg,　0.51　mmol), Et₃N (103　mg,　1.02　mmol) 및 DMSO　(4.0　mL)의 혼합물을 밤새 80℃에서 교반하였다. 혼합물을 냉각시키고 RPFC에 의해 정제하여 에틸　6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-1-[5H,7H-푸로[3,4-b]피라진-2-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (113 mg, 75.62%)를　담황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 582.

단계 6: 6-클로로-7-[(2 R )-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-1-[5 H ,7 H -푸로[3,4- b ]피라진-2-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

MeOH (2.0　mL) 중 에틸　6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-1-[5H,7H-푸로[3,4-b]피라진-2-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (108　mg,　0.18　mmol)　의 혼합물에　NaOH　(0.93　mL,　0.93　mmol)를 첨가하고 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 반응물을 1N HCl을 사용하여 pH를 3 내지 4로 조정하였다. 그 다음, 혼합물을 농축하고 prep-HPLC로 정제하여 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-1-[5H,7H-푸로[3,4-b]피라진-2-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산　(29.4　mg,　28.29%)을　백색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 554.20.¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 14.83 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.88 (dd, J = 4.9, 1.7 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 7.7, 1.7 Hz, 1H), 6.93 (dd, J = 7.7, 4.9 Hz, 1H), 6.66 (s, 1H), 5.20 (d, J = 1.7 Hz, 2H), 5.12 (d, J = 4.2 Hz, 2H), 4.75 (s, 1H), 4.31 (qd, J = 11.4, 4.3 Hz, 2H), 3.70 - 3.57 (m, 1H), 3.31-3.15 (m, 1H), 2.31 - 2.17 (m, 1H), 2.08 - 1.69 (m, 3H).효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 47: 6-클로로-7-(3-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-1,1-디옥시도이소티아졸리딘-2-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: 3-(하이드록시메틸)이소티아졸리딘 1,1-디옥사이드의 합성

THF (15 mL) 중 이소티아졸리딘-3-카르복실산 1,1-디옥사이드 (600 mg, 3.64 mmol)의 교반한 용액에 BH₃-THF (14.5 mL, 14.5 mmol)를 적가하였다. 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. MeOH를 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 용액을 농축하여 잔류물을 얻었고, 이를 DCM 중 0-10% MeOH로 플래시 컬럼으로 정제하여 3-(하이드록시메틸)이소티아졸리딘 1,1-디옥사이드 (510 mg, 93%)를 무색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 152.

단계 2: 3-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)이소티아졸리딘 1,1-디옥사이드의 합성

DMSO (10 mL) 중 3-(하이드록시메틸)이소티아졸리딘 1,1-디옥사이드 (510 mg, 3.38 mmol) 및 3-클로로-2-플루오로피리딘 (663 mg, 5.07 mmol)의 교반한 용액에 t-BuOK (1.14 g, 10.14 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 중 20-80% 아세토니트릴을 사용하는 역상 플래시 컬럼으로 정제하여 3-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)이소티아졸리딘 1,1-디옥사이드 (280 mg, 32%)를 담황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 263.

단계 3: 에틸 6-클로로-7-(3-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-1,1-디옥시도이소티아졸리딘-2-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (3 mL) 중 혼합물에 에틸 6-클로로-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (100 mg, 0.23 mmol) 및 3-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)이소티아졸리딘 1,1-디옥사이드 (118 mg, 0.45 mmol)의 t-BuOK (76 mg, 0.68 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 중 5-30% 아세토니트릴을 사용하여 역상 플래시 컬럼으로 정제하여 에틸 6-클로로-7-(3-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-1,1-디옥시도이소티아졸리딘-2-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (100 mg, 63%)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 687.

단계 4: 6-클로로-7-(3-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-1,1-디옥시도이소티아졸리딘-2-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

EtOH (1 mL) 중 에틸 6-클로로-7-(3-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-1,1-디옥시도이소티아졸리딘-2-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (60 mg, 0.09 mmol)의 교반한 용액에 질소 하에 H₂O (1 mL) 중 NaOH (14 mg, 0.35 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. HOAc를 첨가하여 pH 5로 조정하였다. 혼합물을 DMSO에 용해시키고 prep-HPLC (컬럼: XSelect CSH Prep C18 OBD 컬럼, 19*150 mm, 5μm; 이동상 A: 물(0.1%FA), 이동상 B: ACN; 유속: 25 mL/분; 구배: 8분 후에 15% B에서 32% B로, 32% B; 파장: 254 nm; RT1(분): 6.70; 수행 횟수: 0)로 정제하여 6-클로로-7-(3-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-1,1-디옥시도이소티아졸리딘-2-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (14.6 mg, 25%)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI): [M+H]+: 659.0. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.54 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.25 - 8.07 (m, 1H), 8.05 - 7.94 (m, 1H), 7.83 - 7.72 (m, 1H), 7.61 - 7.40 (m, 1H), 7.33 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 7.04 - 6.96 (m, 1H), 6.58 - 6.37 (m, 1H), 4.65 - 4.59 (m, 1H), 4.46 - 4.25 (m, 2H), 4.11 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 3.91 - 3.81 (m, 2H), 3.68 - 3.45 (m, 2H), 3.29- 3.23 (m, 1 H), 2.82 - 2.63 (m, 0H), 2.34- 2.25 (m, 1H), 2.19 (s, 6H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 48: 6-클로로-7-(1-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-일)-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: Tert-부틸 2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트의 합성

THF (100 mL)에 tert-부틸 4-클로로피페리딘-1-카르복실레이트 (9.0 g, 40.96 mmol, 1.0 당량)를 넣은 용액에 TMEDA (5.71 g, 49.16 mmol, 1.2 당량), s-BuLi (37.8 mL, 1.3 M, 49.16 mmol, 1.2 당량)를 -78℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 6시간 동안 N₂ 분위기 하에 교반하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 184.

단계 2: Tert-부틸 1-포르밀-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트의 합성

THF (50.00 mL)에 tert-부틸 2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (조질)를 넣은 용액에 TMEDA (11.9 g, 102.32 mmol, 2.5 당량) 및 s-BuLi (78.5 mL, 1.3 M, 102.319 mmol, 2.50 당량)를 -78℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 N₂ 분위기 하에 교반하였다. 그 다음, DMF (3.59 g, 49.115 mmol, 1.20 당량)를 용액에 첨가하고 -78℃에서 15분 동안 N₂ 분위기 하에 교반하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 212.

단계 3: Tert-부틸 1-(하이드록시메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트의 합성

MeOH (100 mL)에 tert-부틸 1-포르밀-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (조질)를 넣은 용액에 NaBH₄ (6.2 g, 162.82 mmol, 4.0 당량)를 첨가하였다. 성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응을 물로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고 건조 (50 mL x 3)하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트/석유 에테르(1/3)가 있는 실리카겔 컬럼에 적용하였다. 그 결과 tert-부틸 1-포르밀-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (260 mg, 3.0%)를 황색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 214.

단계 4: Tert-부틸 1-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트의 합성

THF (2 mL)에 tert-부틸 1-(하이드록시메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (260 mg, 1.22 mmol, 1.0 당량)를 넣은 용액에 NaH (87.76 mg, 3.657 mmol, 3.00 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 그 다음, 3-클로로-2-플루오로피리딘 (240.52 mg, 1.829 mmol, 1.50 당량)을 용액에 첨가하고 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응을 물로 켄칭하였다. 생성된 용액을 진공하에 농축하였다. 조 생성물을 물 (10 mmol/L NH₄HCO₃)/아세토니트릴 = 5분 후에 80%에서 90으로; 220 nm을 사용하여 역상으로 정제하였다. 그 결과 tert-부틸 1-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (100 mg, 25.3%)를 황색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 326.

단계 5: 1-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산의 합성

DCM (2 mL)에 tert-부틸 1-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (100 mg, 0.31 mmol, 1.0 당량)를 넣은 용액에 TFA (0.4 mL)를 첨가하였다. 생성된 용액을 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 물 (10 mmol/L NH₄HCO₃)/아세토니트릴 = 5분 후에 40%에서 50으로; 220 nm을 사용하는 역상으로 정제하였다. 그 결과 1-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산 (40 mg, 57.8%)을 황색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 226.

단계 6: 6-클로로-7-(1-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-일)-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (2 mL)에 6-클로로-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-7-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (75 mg, 0.18 mmol, 1.0 당량)을 넣은 용액에 TEA (55 mg, 0.54 mmol, 3.0 당량) 및 1-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산 (40 mg, 0.18 mmol, 1.0 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 5시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 다음 조건에서 플래시-Prep-HPLC로 정제하였다: (IntelFlash-1) 컬럼: Gemini-NX C18 AXAI Packed, 21.2*150mm 5um; 이동상 A: 물 (0.1%FA), 이동상 B: 아세토니트릴; 유속: 25 mL/분; 구배: 2분 후에 10 B에서 10 B로; 254 nm. 그 결과 2 6-클로로-7-(1-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-일)-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (16.8 mg, 11.27%)을 담황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 621.10. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 15.03 (s, 1H), 8.64 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 8.30 (t, J = 3.3 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.93 - 7.72 (m, 3H), 7.00 - 6.82 (m, 2H), 6.47 (dd, J = 89.5, 8.8 Hz, 1H), 4.69 (dd, J = 18.5, 12.0 Hz, 1H), 4.26 - 3.99 (m, 4H), 3.91 - 3.74 (m, 2H), 2.83 (p, J = 7.7 Hz, 1H), 2.22 (s, 1H), 2.14 (s, 7H), 1.92 - 1.72 (m, 2H), 1.08 - 0.90 (m, 2H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 49: 6-클로로-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-7-[(2R)-2-[[(디메틸카르바모일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: 에틸 6-클로로-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-7-[(2R)-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO 중 에틸　6-클로로-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-7-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트　(200.00　mg,　0.450　mmol,　1.00　당량)　및 Et₃N　(136.47　mg,　1.349　mmol,　3.00　당량)의 교반한 용액에　　(R)-피롤리딘-2-일메탄올　(136.41　mg,　1.349　mmol,　3.00　당량)을 80℃에서　질소 분위기 하에　분할하여　첨가하였다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다.　잔류물을 다음 조건:　컬럼,　C18　실리카겔;　이동상,　물 중 MeOH　,　10분 후에 10%에서　50%로　구배　;　검출기,　UV　254　nm에서 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하여 에틸　6-클로로-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-7-[(2R)-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트　(160　mg,　67.66%)를 수득하였다.

단계 2: 6-클로로-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-7-[(2R)-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

MeOH　(1.50　mL), H₂O　(0.05　mL)　중 에틸 6-클로로-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-7-[(2R)-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (110.00 mg, 0.209 mmol, 1.00 당량) 및 NaOH (25.09 mg, 0.627 mmol, 3.00 당량)의 용액을 1시간 동안 교반하였다. 잔류물을 다음 조건에서 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하였다:　컬럼,　C18　실리카겔;　이동상,　물 중 MeOH,　10분 후에 10%에서　50%로　구배　;　검출기,　UV　254　nm.　그 결과　6-클로로-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-7-[(2R)-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산　(80　mg,　76.82%)을　황색 고체로 얻었다.

단계 3: 6-클로로-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-7-[(2R)-2-[[(디메틸카르바모일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF　중 6-클로로-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-7-[(2R)-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산　(60.00　mg,　0.120　mmol,　1.00　당량)　및 디메틸카르바밀　클로라이드　(38.87　mg,　0.361　mmol,　3.00　당량)의 교반한 용액에　NaH　(14.46　mg,　0.361　mmol,　3.00　당량,　60%)를 실온에서　질소 분위기 하에　분할 첨가하였다.　조 생성물　(60 mg)을　다음 조건 (컬럼: Gemini-NX C18 AXAI Packed, 21.2*150mm 5um; 이동상 A:물(0.1%FA), 이동상 B:ACN; 유속:25 mL/분; 구배: 9분 후에 11 B에서 30 B로; 254 nm; RT1:8.4;)에서 Prep-HPLC로 정제하여　 6-클로로-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-7-[(2R)-2-[[(디메틸카르바모일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산　(15.9　mg)을　황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 569.35. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 15.10 (s, 1H), 8.56 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 8.30 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.84 - 7.71 (m, 1H), 4.46 (d, J = 18.4 Hz, 1H), 4.09 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.02 - 3.90 (m, 1H), 3.90 - 3.70 (m, 3H), 3.47 (s, 1H), 3.26 - 3.19 (m, 2H), 2.69 (d, J = 5.8 Hz, 3H), 2.61 (s, 3H), 2.15 (s, 7H), 1.94 (s, 1H), 1.83 - 1.55 (m, 2H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 50: (R)-7-(2-(((3-(2-아미노에톡시)피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(6-브로모피리딘-3-일)-6-클로로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: 2-((4-메톡시벤질)아미노)에탄-1-올의 합성

MeOH (60 mL) 중 2-아미노에탄-1-올 (3.0 g, 49.4 mmol)의 용액에 4-메톡시벤즈알데하이드 (10.0 g, 73.71 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. NaBH₄ (2.8 g, 73.71 mmol)를 혼합물에 분할하여 첨가하였다. 혼합물을 추가로 1시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 혼합물을 농축하여 잔류물을 얻었고, 이를 물 중 5-50% 아세토니트릴을 사용하는 역상 플래시 컬럼으로 정제하여 2-((4-메톡시벤질)아미노)에탄-1-올 (4.5 g, 56%)을 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 182.

단계 2: tert-부틸 (2-하이드록시에틸)(4-메톡시벤질)카르바메이트의 합성

CHCl₃ (10 mL) 중 2-((4-메톡시벤질)아미노)에탄-1-올 (1.0 g, 5.52 mmol)의 교반한 용액에 Boc₂O (1.32 g, 6.07 mmol)를 첨가하였다. 용액을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 용액을 농축하여 잔류물을 얻었고, 이를 석유 에테르 중 0-40% EtOAc로 플래시 컬럼으로 정제하여 tert-부틸 (2-하이드록시에틸)(4-메톡시벤질)카르바메이트 (1.4 g, 90%)를 무색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 282.

단계 3: tert-부틸 (2-((2-플루오로피리딘-3-일)옥시)에틸)(4-메톡시벤질)카르바메이트의 합성

THF (50 mL) 중 2-플루오로피리딘-3-올 (3.0 g, 26.54 mmol), tert-부틸 (2-하이드록시에틸)(4-메톡시벤질)카르바메이트 (11.2 g, 39.81 mmol) 및 PPh₃ (13.9 g, 53.08 mmol)의 교반한 용액에 0℃에서 DIAD (10.7 g, 53.08 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 100 mL 물을 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 수성 용액을 EtOAc (40 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 용액을 Na₂SO₄상에서 건조하고 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 물 중 5-75% 아세토니트릴을 사용하는 역 플래시 칼럼으로 정제하여 tert-부틸 (2-((2-플루오로피리딘-3-일)옥시)에틸)(4-메톡시벤질)카르바메이트 (4.5 g, 45%)를 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 377.

단계 4: tert-부틸 (R)-(2-((2-((1-아세틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리딘-3-일)옥시)에틸)(4-메톡시벤질)카르바메이트의 합성

THF (40 mL) 중 tert-부틸 (2-((2-플루오로피리딘-3-일)옥시)에틸)(4-메톡시벤질)카르바메이트 (2.0 g, 5.32 mmol) 및 (R)-1-(2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-일)에탄-1-온 (1.1 g, 7.97 mmol)의 혼합물에 t-BuOK (1.8 g, 15.96 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 100 mL 물을 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 수성 용액을 EtOAc (40 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 용액을 Na₂SO₄상에서 건조하고농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 DCM 중 0-8% MeOH를 사용하는 플래시 칼럼으로 정제하여 tert-부틸 (R)-(2-((2-((1-아세틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리딘-3-일)옥시)에틸)(4-메톡시벤질)카르바메이트 (2.4 g, 90%)를 무색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 500.

단계 5: tert-부틸 (R)-(4-메톡시벤질)(2-((2-(피롤리딘-2-일메톡시)피리딘-3-일)옥시)에틸)카르바메이트의 합성

THF (20 mL) 중tert-부틸 (R)-(2-((2-((1-아세틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리딘-3-일)옥시)에틸)(4-메톡시벤질)카르바메이트 (2.3 g, 4.61 mmol)의 교반한 용액에 -78℃에서 MeMgBr (23 mL, 23 mmol)를 적가하였다. 용액을 -78℃에서 실온까지 밤새 교반하였다. 50 mL 물을 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 수성 용액을 EtOAc (40 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 용액을 Na₂SO₄상에서 건조하고 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 prep-HPLC 로 정제하여 tert-부틸 (R)-(4-메톡시벤질)(2-((2-(피롤리딘-2-일메톡시)피리딘-3-일)옥시)에틸)카르바메이트 (560 mg, 27%)를 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 458.

단계 6: 에틸 (R)-1-(6-브로모피리딘-3-일)-7-(2-(((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(4-메톡시벤질)아미노)에톡시)피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-6-클로로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (5 mL) 중 에틸 1-(6-브로모피리딘-3-일)-6-클로로-7-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (200 mg, 0.47 mmol) 및 tert-부틸 (R)-(4-메톡시벤질)(2-((2-(피롤리딘-2-일메톡시)피리딘-3-일)옥시)에틸)카르바메이트 (431 mg, 0.94 mmol)의 혼합물에 TEA (239 mg, 2.36 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 90℃에서 20시간 동안 교반하였다. 용액을 물 중 20-90% 아세토니트릴을 사용하여 역상 플래시 컬럼으로 정제하여 에틸 (R)-1-(6-브로모피리딘-3-일)-7-(2-(((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(4-메톡시벤질)아미노)에톡시)피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-6-클로로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (120 mg, 30%)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 862.

단계 7: 에틸 (R)-7-(2-(((3-(2-아미노에톡시)피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(6-브로모피리딘-3-일)-6-클로로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

TfOH (2 mL) 및 TFA (2 mL)의 혼합 용액을 에틸 (R)-1-(6-브로모피리딘-3-일)-7-(2-(((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(4-메톡시벤질)아미노)에톡시)피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-6-클로로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (120 mg, 0.14 mmol)에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용액을 MeOH(5 mL)로 희석하고 prep-HPLC (컬럼: YMC-Actus Triart C18, 20 *250 mm, 5μm, 12nm; 이동상 A: 물(0.1%FA), 이동상 B: ACN; 유속: 25 mL/분; 구배: 8분 후에 25% B에서 50% B로, 50% B; 파장: 254 nm; RT1(분): 5.65; 수행 횟수: 0)로 정제하여 에틸 (R)-7-(2-(((3-(2-아미노에톡시)피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(6-브로모피리딘-3-일)-6-클로로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (59 mg, 66%)를 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 642.

단계 8: (R)-7-(2-(((3-(2-아미노에톡시)피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(6-브로모피리딘-3-일)-6-클로로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

MeOH (4 mL) 중 에틸 (R)-7-(2-(((3-(2-아미노에톡시)피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(6-브로모피리딘-3-일)-6-클로로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (59 mg, 0.09 mmol)의 교반한 용액에 질소 하에 물 (2 mL) 중 NaOH (37 mg, 0.92 mmol)의 용액을 첨가하였다. 용액을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 1M HCl을 첨가하여 pH 3으로 조정하였다. 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: XSelect CSH Prep C18 OBD 컬럼, 19*150 mm, 5μm; 이동상 A: 물(0.1%FA), 이동상 B: ACN; 유속: 25 mL/분; 구배: 8분 후에 22% B에서 28% B로, 28% B; 파장: 254/220 nm; RT1(분): 6.83; 수행 횟수: 0)로 정제하여 (R)-7-(2-(((3-(2-아미노에톡시)피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(6-브로모피리딘-3-일)-6-클로로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (18.7 mg, 33%)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI): [M+H+2]+: 616.15. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.93 - 8.65 (m, 2H), 8.26 (s, 1H), 8.21 - 7.97 (m, 2H), 7.84 - 7.52 (m, 1H), 7.45 - 7.29 (m, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.31 (s, 1H), 4.89 - 4.61 (m, 1H), 4.49 - 4.32 (m, 1H), 4.23 - 3.99 (m, 3H), 3.74 - 3.53 (m, 2H), 3.26 - 3.01 (m, 2H), 2.34 - 2.18 (m, 1H), 2.15 - 1.75 (m, 3H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 51: (S)-6-시아노-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-(2-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-메틸피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: (S)-1-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피롤리딘-2-카르복실산의 합성

DCM (100 mL) 중 (S)-2-메틸피롤리딘-2-카르복실산 (3.6 g, 27.87 mmol)의 교반한 용액에 (Boc)₂O (18.25 g, 83.61 mmol, 3 당량) 및 Et₃N (8.46 g, 83.61 mmol, 3 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 그 다음 염수 (200 mL)를 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 혼합물을 DCM (100 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기상을 MgSO₄상에서 건조시켰다. 여과 후, 여액을 감압 하에 농축시켰다. 그 결과 조 생성물 (S)-1-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피롤리딘-2-카르복실산 (6.38 g, 27.8 mmol)을 무색 결정으로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺:230.

단계 2: tert-부틸 (S)-2-(하이드록시메틸)-2-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

무수 THF (100 mL) 중 (S)-1-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피롤리딘-2-카르복실산 (6.38 g, 27.8 mmol)의 용액에 BH₃.Me₂S (10.56 g, 139 mmol, 5 당량)를 실온에서 N₂하에 첨가하였다. 그 다음 생성된 혼합물을 70℃에서 1시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후. 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르/EtOAc = 1:1로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (S)-2-(하이드록시메틸)-2-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (4.1 g, 19.04 mmol)를 무색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺:216.

단계 3: tert-부틸 (S)-2-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

무수 THF (100 mL) 중 tert-부틸 (S)-2-(하이드록시메틸)-2-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (4.1 g, 19.04 mmol)의 교반한 용액에 KO ^t Bu (6.41 g, 57.12 mmol, 3 당량)를 0℃에서 N₂ 하에 첨가하였다. 10분 후, 2,3-디플루오로피리딘 (2.63 g, 22.85 mmol, 1.2 당량)을 혼합물에 첨가하고 생성된 혼합물을 0℃에서 30분 동안, 이어서 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 그 다음 염수 (200 mL)를 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 혼합물을 EtOAc (100 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기상을 MgSO₄상에서 건조하였다. 여과 후, 여액을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 석유 에테르/EtOAc = 2:1로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (S)-2-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (4.3 g, 13.85 mmol)를 무색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺:311.

단계 4: (S)-3-플루오로-2-((2-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리딘의 합성

DCM (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-2-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (4.3 g, 13.85 mmol)의 교반한 용액에 TFA (15 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 포화 NaHCO₃ (200 mL)에 용해시키고 EtOAc (100 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기상을 MgSO₄상에서 건조하였다. 여과 후, 여액을 감압 하에 농축시켰다. 그 결과 (S)-3-플루오로-2-((2-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리딘 (2.6 g, 12.36 mmol)을 무색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺:211.

단계 5: 에틸 (S)-6-시아노-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-(2-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-메틸피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

8-mL 밀봉된 튜브에 에틸 6-시아노-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (500 mg, 1.148 mmol), (S)-3-플루오로-2-((2-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리딘 (724 mg, 3.445 mmol, 3 당량) 및 DMSO (1 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에 약 50℃에서 1시간 동안 가열하였다. 그 다음 DIEA (297 mg, 2.296 mmol, 2 당량)를 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N₂하에 100℃에서 48시간 동안 교반하였다. 혼합물을 아세토니트릴/물 = 7:3으로 용리하는 역상 크로마토그래피로 정제하여 에틸 (S)-6-시아노-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-(2-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-메틸피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (150 mg, 0.2397 mmol)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺:626.

단계 6: (S)-6-시아노-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-(2-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-메틸피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF (4 mL) 중 에틸 (S)-6-시아노-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-(2-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-메틸피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (150 mg, 0.2397 mmol)의 교반한 용액에 H₂O (2 mL) 중 NaOH (19 mg, 0.4794 mmol, 2 당량)의 용액을 실온에서 N₂ 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 AcOH로 산성화시켰다. 혼합물을 Prep.-HPLC로 정제하여 (S)-6-시아노-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-(2-(((3-플루오로피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-메틸피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (32.8 mg)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI): [M+H]+: 598.25. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.69 (s, 1H), 8.69 - 8.08 (m, 3H), 7.94 - 7.51 (m, 3H), 7.07 - 6.91 (m, 1H), 6.61 - 6.27 (m, 2H), 4.46 - 4.22 (m, 2H), 4.06 - 3.87 (m, 3H), 3.80 - 3.61 (m, 2H), 3.26 - 3.12 (m, 1H), 2.35 - 2.22 (m, 1H), 2.13 (d, J = 1.5 Hz, 6H), 2.08 - 1.80 (m, 3H), 1.29 - 1.15 (m, 3H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 52: 1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-6-메틸-4-옥소-7-(2-옥소-4-((피리딘-2-일옥시) 메틸)아제틴-1-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: 4-브로모-2-플루오로-5-메틸벤조일 클로라이드의 합성

DCM 중 4-브로모-2-플루오로-5-메틸벤조산 (5 g, 21.4 mmol, 1 당량) 및 티오닐클로라이드 (15.31 g, 128.7 mmol, 6 당량)의 교반한 용액에 DMF (20 mg, 0.2 mmol, 0.01 당량)를 분할하여 50℃에서 질소 분위기 하에 적가하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 그 결과 4-브로모-2-플루오로-5-메틸벤조일 클로라이드 (5 g, 92.67%)를 황색 고체로 얻었다.

단계 2: 에틸 3-(4-브로모-2-플루오로-5-메틸페닐)-3-옥소프로파노에이트의 합성

아세토니트릴 중 1-에틸 3-칼륨 프로판디오에이트 (6.77 g, 39.7 mmol, 2 당량) 및 TEA (4.02 g, 39.7 mmol, 2 당량)의 교반한 용액에 4-브로모-2-플루오로-5-메틸벤조일 클로라이드 (5 g, 19.8 mmol, 1 당량)를 분할하여 실온에서 질소 분위기 하에 적가하였다. 진한 HCl을 사용하여 혼합물을 pH 5로 산성화/염기화/중화시켰다. 수성층을 EtOAc (3x100 mL)로 추출하였다. 잔류물을 PE/EA (10:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 에틸 3-(4-브로모-2-플루오로-5-메틸페닐)-3-옥소프로파노에이트 (5 g, 82.96%)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 303.

단계 3: 에틸 (Z)-2-(4-브로모-2-플루오로-5-메틸벤조일)-3-에톡시아크릴레이트의 합성

아세트산 무수물 (1 g, 9.8 mmol, 1 당량) 중 에틸 3-(4-브로모-2-플루오로-5-메틸페닐)-3-옥소프로파노에이트 (3 g, 9.8 mmol, 1.00 당량) 및 (디에톡시메톡시)에탄 (1.4 g, 9.8mmol, 1 당량)의 용액을 1시간 동안 100℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 그 결과 에틸 (2Z)-2-[(Z)-4-브로모-2-플루오로-5-메틸벤조일]-3-에톡시프로프-2-에노에이트 (3 g, 84.39%)를 황색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 359.

단계 4: 에틸 7-브로모-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-6-메틸-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO 중 에틸 (2Z)-2-[(Z)-4-브로모-2-플루오로-5-메틸벤조일]-3-에톡시프로프-2-에노에이트 (3 g, 8.352 mmol, 1.00 당량) 및 6-[3-(디메틸아미노) 아제틴-1-일]피리딘-3-아민 (1.6 g, 8.3 mmol, 1 당량)의 용액을 1시간 동안 실온에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 그 다음 용액에 K₂CO₃ (1.1 g, 8.3 mmol, 1 당량)를 실온에서 1시간 첨가하였다. 생성된 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하였다. 침전된 고체를 여과로 수집하고 물 (3x10 mL)로 세척하였다. 그 결과 에틸 7-브로모-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-6-메틸-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (3 g, 86.69%)를 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 485.

단계 5: 7-브로모-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-6-메틸-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

에탄올 및 H₂O 중 에틸 에틸 7-브로모-1-(6-(3-(디메틸아미노) 아제틴-1-일)피리딘-3-일)-6-메틸-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (200 mg, 0.148 mmol, 1 당량) 및 NaOH (23 mg, 0.6 mmol, 2 당량)의 용액을 1시간 동안 실온에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 진한 HCl을 사용하여 혼합물을 pH 7로 산성화/염기화/중화시켰다. 잔류물을 다음 조건에서 역 플래시 크로마토그래피로 정제하였다: 컬럼, 실리카겔; 이동상, 물 중 MeCN, 10분 후 10%에서 50%로 구배; 검출기, UV 254 nm. 그 결과 7-브로모-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-6-메틸-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산(150 mg, 76.6%)을 황색 고체로 얻었다.MS (ESI): m/z 457 [M+H]⁺

단계 6: 4-((피리딘-2-일옥시)메틸)아제틴-2-온의 합성

DMSO (5 mL) 중 4-(하이드록시메틸) 아제틴-2-온 (1 g, 10 mmol, 1 당량) 및 2-플루오로피리딘 (1.16 g, 12 mmol, 1.2 당량), t-BuOK(3.36 g, 30 mmol, 3 당량)의 용액을 1시간 동안 실온에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 잔류물을 다음 조건에서 역 플래시 크로마토그래피로 정제하였다: 컬럼, 실리카겔; 이동상, 물 중 MeCN, 10분 후에 10%에서 50%로 구배; 검출기, UV 254 nm. 그 결과 4-((피리딘-2-일옥시)메틸)아제틴-2-온(200 mg, 16.5%)을 황색 오일로 얻었다.MS (ESI): m/z 179 [M+H]⁺

단계 7: 1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-6-메틸-4-옥소-7-(2-옥소-4-((피리딘-2-일옥시) 메틸)아제틴-1-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

디옥산 중 7-브로모-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-6-메틸-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (30 mg, 0.066 mmol, 1당량) 및 4-[(피리딘-2-일옥시)메틸]아제틴-2-온 (17.53 mg, 0.099 mmol, 1.5 당량), 3세대 RuPhos 전촉매 (5 mg, 0.007 mmol, 0.1 당량), Cs₂CO₃ (64.12 mg, 0.198 mmol, 3 당량)의 용액을 1시간 동안 80℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 조 생성물 (30 mg)을 다음 조건 (컬럼: Welch XB-C18, 21.2*250 mm, 5μm; 이동상 A: 물(0.1%FA), 이동상 B: ACN; 유속: 25 mL/분; 구배: 2분 후에 5% B에서 5% B로, 2.5분 후에 5% B에서 15% B로, 10.5분 후에 15% B에서 40% B로, 40% B; 파장: 254 nm; RT1(분): 8.2; 수행 횟수: 0)에서 Prep-HPLC로 정제하여 1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-6-메틸-4-옥소-7-[2-옥소-4-[(피리딘-2-일옥시)메틸]아제틴-1-일]퀴놀린-3-카르복실산 (27.8 mg, 76.41%)을 황색 고체로 수득하였다.¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 15.08 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.36 - 8.15 (m, 2H), 8.04 - 7.90 (m, 1H), 7.73 - 7.59 (m, 2H), 7.14 (s, 1H), 7.03 - 6.86 (m, 1H), 6.63 - 6.44 (m, 2H), 4.72 - 4.65 (m, 1H), 4.54 - 4.41 (m, 2H), 4.19 - 4.05 (m, 2H), 3.89 - 3.77 (m, 2H), 3.24 - 3.17 (m, 2H), 3.08 - 2.94 (m, 1H), 2.47 (s, 3H), 2.16 (s, 6H). MS (ESI): m/z555.0 [M+H]⁺

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++

실시예 53: 7-[(2R)-2-([[3-(2-아미노에톡시)피리딘-2-일]옥시]메틸)피롤리딘-1-일]-6-클로로-1-[6-(디메틸아미노)피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: N,N-디메틸-5-니트로피리딘-2-아민의 합성

n-BuOH (65 mL) 중 피리딘, 2-클로로-5-니트로- (2.0 g, 12.62 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 클로로디메틸아민 (1.1 g, 13.88 mmol, 1.1 당량) 및 TEA (3.8 g, 37.85 mmol, 3.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 분위기 하에 100℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 CH₂Cl₂ / MeOH (10:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 N,N-디메틸-5-니트로피리딘-2-아민 (2.5 g, 조질)을 적색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 168.1.

단계 2: N2,N2-디메틸피리딘-2,5-디아민의 합성

MeOH (50 mL) 중 N,N-디메틸-5-니트로피리딘-2-아민 (2.5 g, 14.96 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 Pd/C (1.6 g, 14.96 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1.5시간 동안 실온에서 수소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 MeOH (3 x 30 mL)로 세척하였다. 여액을 감압 하에 농축시켰다. 그 결과 N ₂,N ₂-디메틸피리딘-2,5-디아민 (850 mg, 41%)을 적색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 138.1.

단계 3: 에틸 6-클로로-1-[6-(디메틸아미노)피리딘-3-일]-7-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

Ac₂O (1.2 g, 11.42 mmol, 3.0 당량) 중 에틸 3-(5-클로로-2,4-디플루오로페닐)-3-옥소프로파노에이트 (1.0 g, 3.81 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 트리에틸오르토포르메이트 (0.9 g, 5.71 mmol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. DMSO (60 mL) 중 생성된 혼합물에 N ₂,N ₂-디메틸피리딘-2,5-디아민 (0.5 g, 3.81 mmol, 1.0 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물에 K₂CO₃ (0.3 g, 1.90 mmol, 0.5 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 65 mL 물을 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 침전된 고체를 여과하여 수집하였다. 그 결과 에틸 6-클로로-1-[6-(디메틸아미노)피리딘-3-일]-7-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (800 mg, 54%)를 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 390.1.

단계 4: 에틸 7-[(2R)-2-{[(3-{2-[(tert-부톡시카르보닐)[(4-메톡시페닐)메틸]아미노]에톡시}피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-6-클로로-1-[6-(디메틸아미노)피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (15 mL) 중 에틸 6-클로로-1-[6-(디메틸아미노)피리딘-3-일]-7-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (500 mg, 1.28 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 tert-부틸 N-[(4-메톡시페닐)메틸]-N-[2-({2-[(2R)-피롤리딘-2-일메톡시]피리딘-3-일}옥시)에틸]카르바메이트 (704 mg, 1.54 mmol, 1.2 당량) 및 TEA (389 mg, 3.85 mmol, 3.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 100℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 잔류물을 다음 조건에서 역 플래시 크로마토그래피로 정제하였다: 컬럼, C18 실리카겔; 이동상, 물 중 MeCN, 30분 후에 5%에서 100%로 구배; 검출기, UV 254 nm 및 UV 220 nm. 그 결과 에틸 7-[(2R)-2-{[(3-{2-[(tert-부톡시카르보닐)[(4-메톡시페닐)메틸]아미노]에톡시}피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-6-클로로-1-[6-(디메틸아미노)피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (400 mg, 38%)를 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 827.4.

단계 5: 에틸 7-[(2R)-2-({[3-(2-아미노에톡시)피리딘-2-일]옥시}메틸)피롤리딘-1-일]-6-클로로-1-[6-(디메틸아미노)피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

트리플루오로메탄설폰산 (2.5 mL) 중 에틸 7-[(2R)-2-{[(3-{2-[(tert-부톡시카르보닐)[(4-메톡시페닐)메틸]아미노]에톡시}피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-6-클로로-1-[6-(디메틸아미노)피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (360 mg, 0.44 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에. 생성된 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 다음 조건에서 역 플래시 크로마토그래피로 정제하였다: 컬럼, C18 실리카겔; 이동상, 물 중 MeCN, 30분 후에 5%에서 100%로 구배; 검출기, UV 254 nm 및 UV 220 nm. 그 결과 에틸 7-[(2R)-2-({[3-(2-아미노에톡시)피리딘-2-일]옥시}메틸)피롤리딘-1-일]-6-클로로-1-[6-(디메틸아미노)피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (50 mg, 19%)를 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 607.2.

단계 6: 7-[(2R)-2-([[3-(2-아미노에톡시)피리딘-2-일]옥시]메틸)피롤리딘-1-일]-6-클로로-1-[6-(디메틸아미노)피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF (1 mL) 중 에틸 7-[(2R)-2-([[3-(2-아미노에톡시)피리딘-2-일]옥시]메틸)피롤리딘-1-일]-6-클로로-1-[6-(디메틸아미노)피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (40 mg, 0.07 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 NaOH (26 mg, 0.66 mmol, 10.0 당량) 및 H₂O (1 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 실온에서 질소 분위기 하에 교반하였다. HCl(aq.)을 사용하여 혼합물을 pH 5로 중화시켰다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 다음 조건 (컬럼: XBridge Shield RP18 OBD 컬럼, 5um,19*150mm;이동상 A:물(0.1%FA), 이동상 B: ACN; 유속: 25 mL/분; 구배: 8분 후에 60% B에서 90% B로; 254/220 nm; Rt: 7.31분)에서 Prep-HPLC로 정제하였다. 그 결과 7-[(2R)-2-([[3-(2-아미노에톡시)피리딘-2-일]옥시]메틸)피롤리딘-1-일]-6-클로로-1-[6-(디메틸아미노)피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (5.7 mg, 14.94%)을 담황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 579.25. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.59 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 8.34 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.75 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.04 - 6.85 (m, 1H), 6.60 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.46 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.76 (d, J = 27.5 Hz, 1H), 4.45 (s, 1H), 4.21 - 4.03 (m, 3H), 3.74 - 3.53 (m, 1H), 3.17 (d, J = 3.8 Hz, 7H), 2.38 - 2.23 (m, 1H), 2.12 - 1.75 (m, 3H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 54: (R)-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-5-옥소피롤리딘-1-일)-6-시아노-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성:

단계 1: (R)-5-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-2-온의 합성

DMSO　(15 ml) 중 (5R)-5-(하이드록시메틸)피롤리딘-2-온 (6.0 g, 52.11 mmol, 1.0 당량)　및 t-BuOK (17.5 g, 156.34 mmol, 3.0 당량)의 혼합물에　3-클로로-2-플루오로피리딘 (8.2 g, 62.54 mmol, 1.2 당량)을 0℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안　실온에서　질소 분위기 하에 교반하였다. 잔류물을 다음 조건: 컬럼, 실리카겔; 이동상, 물 중 MeCN, 20분 후에 50%에서 70%로 구배; 검출기, UV 254 nm에서 역 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과　((R)-5-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-2-온 (6 g, 50.80%)을　황색 고체로 얻었다.　 LCMS (ESI) [M+H]⁺: 227.1. 단계 2: (R)-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-5-옥소피롤리딘-1-일)-6-시아노-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (1 mL) 중 (5R)-5-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-2-온 (80 mg, 0.35 mmol, 1.0 당량) 및 t-BuOK (119 mg, 1.06 mmol, 3.0 당량)의 혼합물에 30분 후에 에틸 6-시아노-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-7-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (184 mg, 0.42 mmol, 1.20 당량)를 실온에서 질소 분위기 하에 분할하여 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 80℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 혼합물을 아세트산으로 pH 6으로 산성화시켰다. 조 생성물 (80 mg)을 다음 조건 (컬럼: Gemini-NX C18 AXAI Packed, 21.2*150mm 5um; 이동상 A:물(0.1%FA), 이동상 B:ACN; 유속:25 mL/분; 구배: 8분 후에 13 B에서 35 B로; 254 nm; RT1:5.0; RT2:; 주입 부피: ml; 수행 횟수:;)에서 Prep-HPLC로 정제하여 7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-5-옥소피롤리딘-1-일]-6-시아노-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (9.7 mg, 4.48%)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 614.0.¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.99 (s, 1H), 8.27 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 8.08 - 7.97 (m, 1H), 7.88 - 7.76 (m, 1H), 7.67 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 7.30 - 6.92 (m, 2H), 6.62 - 6.15 (m, 2H), 4.46 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.39 - 3.93 (m, 7H), 2.73 (s, 6H), 2.54 (s, 1H), 2.45 - 2.41 (m, 1H), 2.41 - 2.25 (m, 2H), 1.97 (s, 1H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++

실시예 55: (R)-26,63-디클로로-24-옥소-21,24-디하이드로-5,7-디옥사-11-아자-2(1,7)-퀴놀리나-1(5,2),6(2,6)-디피리디나-3(1,2)-피롤리디나사이클로운데카판-23-카르복실산의 합성

단계 1: tert-부틸 (R)-2-(((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

THF 중 tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트 (12. g, 62.183 mmol, 1.2 당량) 및 NaH (2.4 g, 103.6 mmol, 2 당량)의 교반한 용액에 2,6-디클로로-3-니트로피리딘 (10 g, 51.8 mmol, 1 당량)을 0℃에서 질소 분위기 하에 1시간 분할하여 적가하였다. 반응을 물로 실온에서 켄칭하였다. 수성층을 EtOAc (3x100 mL)로 추출하였다. 잔류물을 PE/EA (5:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (2R)-2-[[(6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-카르복실레이트 (13 g, 70.12%)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 358.

단계 2: tert-부틸 (R)-2-(((3-아미노-6-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

에탄올 및 H₂O 중 tert-부틸 (2R)-2-[[(6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-카르복실레이트 (13 g, 36 mmol, 1 당량) 및 Fe (10 g, 181 mmol, 5 당량), NH₄Cl (5.5 g, 109 mmol, 3 당량)의 용액을 1시간 동안 80℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 에탄올 (3x100 mL)로 세척하였다. 여액을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 PE/EA (3:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (2R)-2-[[(3-아미노-6-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-카르복실레이트 (6.6 g, 55.41%)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 328.

단계 3: tert-부틸 (R)-2-(((3,6-디클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

아세토니트릴 중 CuCl (2391.85 mg, 24.161 mmol, 1.2 당량) 및 LiCl (2560.63 mg, 60.402 mmol, 3 당량)의 교반한 용액에 t-BuNO₂ (3.6 g, 35.6 mmol, 1.7 당량) 및 tert-부틸 (2R)-2-[[(3-아미노-6-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-카르복실레이트 (6.6 g, 20.1 mmol, 1 당량)를 60℃에서 질소 분위기 하에 분할 첨가하였다. 반응을 HCL(aq.)로 0℃에서 켄칭하였다. 수성층을 EtOAc (3x100 mL)로 추출하였다. 잔류물을 PE / EA (5:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (2R)-2-[[(3,6-디클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-카르복실레이트 (3.5 g, 50.06%)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 347

단계 4: (R)-3,6-디클로로-2-(피롤리딘-2-일메톡시)피리딘의 합성

DCM 중 tert-부틸 (2R)-2-[[(3,6-디클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-카르복실레이트 (3.5 g, 10 mmol, 1당량) 및 TFA (11.49 g, 100.7 mmol, 10 당량)의 용액을 1시간 동안 실온에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 그 결과 3,6-디클로로-2-[(2R)-피롤리딘-2-일메톡시]피리딘 (2 g, 80.29%)을 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 247.

단계 5: 3-((5-니트로피리딘-2-일)아미노)프로판-1-올의 합성

BuOH 중 피리딘, 2-클로로-5-니트로- (10 g, 63.0 mmol, 1 당량) 및 프로판올아민 (5 g, 75.6 mmol, 1.2 당량),TEA (19 g, 189.2 mmol, 3 당량)의 용액을 1시간 동안 100℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 PE / EA (5:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 3-[(5-니트로피리딘-2-일)아미노]프로판-1-올 (11 g, 88.44%)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 198.

단계 6: 3-((5-아미노피리딘-2-일)아미노)프로판-1-올의 합성

MeOH 중 3-[(5-니트로피리딘-2-일)아미노]프로판-1-올 (4.5 g, 22.820 mmol, 1 당량) 및 Pd/C (242 mg, 2.28 mmol, 0.1 당량)의 용액을 1시간 동안 실온에서 수소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 MeOH (3x100 mL)로 세척하였다. 여액을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 그 결과 3-[(5-아미노피리딘-2-일)아미노]프로판-1-올 (3.8 g, 99.59%)을 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 168.

단계 7: 에틸 (Z)-2-(5-클로로-2,4-디플루오로벤조일)-3-에톡시아크릴레이트의 합성

Ac₂O (5.8 g, 57.111 mmol, 3 당량) 중 에틸 3-(5-클로로-2,4-디플루오로페닐)-3-옥소프로파노에이트 (5 g, 19.03 mmol, 1.00 당량) 및 트리에틸오르토포르메이트 (4.2 g, 28.555 mmol, 1.5 당량)의 용액을 1시간 동안 100℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 그 결과 에틸 (2Z)-2-[(Z)-5-클로로-2,4-디플루오로벤조일]-3-에톡시프로프-2-에노에이트 (5.5 g, 90.65%)를 황색 오일로 얻었다.

단계 8: 에틸 6-클로로-7-플루오로-1-(6-((3-하이드록시프로필)아미노)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO 중 에틸 (2Z)-2-[(Z)-5-클로로-2,4-디플루오로벤조일]-3-에톡시프로프-2-에노에이트 (5.5 g, 17.258 mmol, 1 당량) 및 3-[(5-아미노피리딘-2-일)아미노]프로판-1-올 (2.8 g, 17.25 mmol, 1 당량)의 용액을 1시간 동안 실온에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 그 다음 용액에 K₂CO₃ (2.3 g, 17.25 mmol, 1 당량)를 실온에서 1시간 첨가하였다. 생성된 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하였다. 침전된 고체를 여과하여 수집하고 물 (3x10 mL)로 세척하였다. 그 결과 에틸 6-클로로-7-플루오로-1-[6-[(3-하이드록시프로필)아미노]피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (5 g, 69.01%)를 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 420

단계 9: 에틸 (R)-6-클로로-7-(2-(((3,6-디클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(6-((3-하이드록시프로필)아미노)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO 중 에틸 6-클로로-7-플루오로-1-[6-[(3-하이드록시프로필)아미노]피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (1 g, 2.38 mmol, 1 당량) 및 3,6-디클로로-2-[(2R)-피롤리딘-2-일메톡시]피리딘 (1.7 g, 7.14 mmol, 3 당량), TEA (0.72 g, 7.14 mmol, 3 당량)의 용액을 1시간 동안 100℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 잔류물을 다음 조건에서 역 플래시 크로마토그래피로 정제하였다: 컬럼, 실리카겔; 이동상, 물 중 MeCN, 10분 후에 10%에서 50%로 구배; 검출기, UV 254 nm. 그 결과 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3,6-디클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-1-[6-[(3-하이드록시프로필)아미노]피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (200 mg, 12.98%)를 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 646

단계 10: (R)-26,63-디클로로-24-옥소-21,24-디하이드로-5,7-디옥사-11-아자-2(1,7)-퀴놀리나-1(5,2),6(2,6)-디피리디나-3(1,2)-피롤리디나사이클로운데카판-23-카르복실산의 합성

DMF 중 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3,6-디클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-1-일]-1-[6-[(3-하이드록시프로필)아미노]피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (200 mg, 0.31 mmol, 1.00 당량) 및 NaH (29 mg, 1.23 mmol, 4 당량)의 용액을 1시간 동안 50℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물 (200 mg)을 다음 조건 (컬럼: Gemini-NX C18 AXAI Packed, 21.2*150mm 5um; 이동상 A: 물(0.1%FA), 이동상 B: ACN; 유속: 25 mL/분; 구배: 8분 후에 23% B에서 31% B로, 31% B; 파장: 254 nm; RT1(분): 9.23; 수행 횟수: 0)에서 Prep-HPLC로 정제하여 (R)-26,63-디클로로-24-옥소-21,24-디하이드로-5,7-디옥사-11-아자-2(1,7)-퀴놀리나-1(5,2),6(2,6)-디피리디나-3(1,2)-피롤리디나사이클로운데카판-23-카르복실산 (8.5 mg, 4.72%)을 황색 고체로 수득하였다.¹H NMR (300 MHz, 메탄올-d ₄) δ 9.99 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.64 - 7.35 (m, 1H), 7.27 - 6.93 (m, 2H), 6.63 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.50 - 6.37 (m, 1H), 6.06 - 5.87 (m, 1H), 4.71 - 4.58 (m, 1H), 4.38 - 4.04 (m, 4H), 3.99 - 3.78 (m, 1H), 3.68 - 3.49 (m, 1H), 3.47 - 3.41 (m, 1H), 3.20 - 3.06 (m, 1H), 2.17 - 1.97 (m, 3H), 1.89 - 1.76 (m, 3H), 1.31 (s, 2H). MS (ESI): m/z 581.95 [M+H]⁺

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++

실시예 56: 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-2-메틸피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소-1,8-나프티리딘-3-카르복실산의 합성

단계 1: 에틸 6,7-디클로로-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소-1,8-나프티리딘-3-카르복실레이트의 합성

에틸　(2Z)-3-에톡시-2-[(Z)-2,5,6-트리클로로피리딘-3-카르보닐]프로프-2-에노에이트 (1.0　g,　2.83　mmol), 6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-아민 (0.5　g,　2.86　mmol)　및 DMSO (15.0　mL)의 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다.　그 다음 Et₃N (0.8　g,　8.40　mmol)을 첨가하고 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 RPFC로 정제하여　 에틸　6,7-디클로로-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소-1,8-나프티리딘-3-카르복실레이트　(600　mg,　46.24%)를　황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 462.

단계 2: 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-2-메틸피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소-1,8-나프티리딘-3-카르복실레이트의 합성

에틸　6,7-디클로로-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소-1,8-나프티리딘-3-카르복실레이트 (200　mg,　0.43　mmol)　및 3-클로로-2-[[(2R)-2-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]피리딘 (392　mg,　1.73　mmol)의 혼합물을 2시간 동안 120℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 RPFC로 정제하여　에틸　6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-2-메틸피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소-1,8-나프티리딘-3-카르복실레이트 (60 mg, 21.25%)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 652.

단계 3: 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-2-메틸피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소-1,8-나프티리딘-3-카르복실산의 합성

EtOH (1.0　mL) 중 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-2-메틸피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소-1,8-나프티리딘-3-카르복실레이트 (60 mg, 0.09 mmol)의 용액에 NaOH (0.46 mL, 0.46 mmol)를 첨가하고 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응을 1 mL 1N HCl로 켄칭하고 혼합물을 농축하고 prep-HPLC로 정제하여 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-2-메틸피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소-1,8-나프티리딘-3-카르복실산 (29.5 mg, 50.66%)을　백색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 624.25.¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 15.04 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.20 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.86 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.66 - 5.97(m, 1H), 4.51 (s, 1H), 4.21 - 3.81 (m, 5H), 3.68 (q, J = 6.5 Hz, 2H), 3.18 (s, 1H), 2.23 - 2.07 (m, 7H), 2.06 - 1.65 (m, 3H), 1.15 (s, 3H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 57: 6-클로로-7-(7-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-6-아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: 1-알릴사이클로부탄-1-카르보니트릴의 합성

THF(20 ml) 중 사이클로부탄카르보니트릴 (3 g, 36.98 mmol, 1.0 당량)　및 알릴 브로마이드 (5.37 g, 44.38 mmol, 1.2 당량)의 혼합물에 LDA (7.92 g, 73.97 mmol, 2 당량)를 0℃에서　질소 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안　실온에서　질소 분위기 하에 교반하였다. 잔류물을 PE / EA (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여　1-알릴사이클로부탄-1-카르보니트릴 (1.4 g, 31.24%)을　황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 122.1.

단계 2: (1-알릴사이클로부틸)메탄아민의 합성

THF (5 ml) 중 1-알릴사이클로부탄-1-카르보니트릴 (900 mg, 7.43 mmol, 1.0 당량)의 교반한 용액에 LAH (564 mg, 14.85 mmol, 2.0 당량)를 0℃에서 질소 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 0℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 0℃에서 NaSO₄.10H₂O를 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 생성된 혼합물을 MgSO₄로 건조시켰다. 그리고 이를 진공에서 농축시켰다. 조 생성물은 추가 정제없이 다음 단계에 그대로 사용하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 126.1.

단계 3: Tert-부틸 ((1-알릴사이클로부틸)메틸)카르바메이트의 합성

DCM (5 ml)　 중 1-[1-(프로프-2-엔-1-일)사이클로부틸]메탄아민 (900 mg, 7.19 mmol, 1.0 당량)　및 Boc₂O (3.14 g, 14.38 mmol, 2.0 당량)의 혼합물에　TEA (3.64 g, 35.94 mmol, 5.0 당량)　및 DMAP (88 mg, 0.72 mmol, 0.1 당량)를 0℃에서　질소 분위기 하에 분할하여 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안　실온에서　질소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 PE / EA (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여-부틸 N-{[1-(프로프-2-엔-1-일)사이클로부틸]메틸}카르바메이트 (800 mg, 49.39%)를　담황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 226.2.

단계 4: (6-아자스피로[3.4]옥탄-7-일)메탄올의 합성

MeCN　(5 ml) 중 tert-부틸 N-{[1-(프로프-2-엔-1-일)사이클로부틸]메틸}카르바메이트 (800 mg, 3.55 mmol, 1.0 당량)　및 TsOH (1.22 g, 7.10 mmol, 2.0 당량)의 혼합물에　옥손 (1.79 g, 10.65 mmol, 3.0 당량)을 0℃에서　질소 분위기 하에 첨가하였다.　생성된 혼합물을 2시간 동안 50℃에서　질소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 조 생성물은 추가 정제없이 다음 단계에 그대로 사용하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 142.1.

단계 5: Tert-부틸 7-(하이드록시메틸)-6-아자스피로[3.4]옥탄-6-카르복실레이트의 합성

DCM (5 ml)　중 6-아자스피로[3.4]옥탄-7-일메탄올 (600 mg, 4.25 mmol, 1.0 당량)　및 Boc₂O (1.85 g, 8.50 mmol, 2.0 당량)의 혼합물에　TEA (2.15 g, 21.25 mmol, 5.0 당량)를 0℃에서　질소 분위기 하에 첨가하였다.　생성된 혼합물을　밤새　실온에서　질소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 CH₂Cl₂ / MeOH　(10:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여　tert-부틸 7-(하이드록시메틸)-6-아자스피로[3.4]옥탄-6-카르복실레이트 (240 mg, 23.41%)를　담황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 242.2.

단계 6: Tert-부틸 7-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-6-아자스피로[3.4]옥탄-6-카르복실레이트의 합성

THF (5 ml)　중 tert-부틸 7-(하이드록시메틸)-6-아자스피로[3.4]옥탄-6-카르복실레이트 (230 mg, 0.95 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 NaH (69 mg, 2.86 mmol, 3.0 당량) 및 3-클로로-2-플루오로피리딘 (150 mg, 1.14 mmol, 1.2 당량)을 0℃에서　질소 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안　실온에서　질소 분위기 하에 교반하였다. 반응을 0℃에서 MeOH로 켄칭하였다. 잔류물을 다음 조건: 컬럼, 실리카겔; 이동상, 물 중 MeCN, 10분 후에 50%에서 60%로 구배; 검출기, UV 254 nm에서 역 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과　tert-부틸 7-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}-6-아자스피로[3.4]옥탄-6-카르복실레이트 (140 mg, 41.63%)를　담황색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 353.2.

단계 7: 7-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-6-아자스피로[3.4]옥탄의 합성

DCM (3 ml) 중 t tert-부틸 7-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}-6-아자스피로[3.4]옥탄-6-카르복실레이트 (140 mg, 0.40 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 TFA (2 mL)를 0℃에서 질소 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다.　생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다.　그 결과 7-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-6-아자스피로[3.4]옥탄 (180 mg, 180%)을 황색 고체로 얻었다. 조 생성물은 추가 정제없이 다음 단계에 그대로 사용하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 253.1.

단계 8: 6-클로로-7-(7-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-6-아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (1 mL) 중 1-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-2-아자바이사이클로[2.1.1]헥산 (150 mg, 0.5 mmol, 1.0 당량) 및 6-클로로-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-7-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (280 mg, 0.6 mmol, 1.2 당량)의 혼합물에 TEA (151 mg, 1.5 mmol, 3.0 당량)를 질소 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 100℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 조 생성물 (100 mg)을 다음 조건 (컬럼: Gemini-NX C18 AXAI Packed, 21.2*150mm 5um; 이동상 A: 물(10MMOL/L NH4HCO3), 이동상 B: ACN; 유속: 25 mL/분; 구배: 2분 후에 10% B에서 10% B로, 2.5분 후에 10% B에서 48% B로, 12분 후에 48% B에서 88% B로, 88% B; 파장: 254 nm; RT1(분): 10.98; 수행 횟수: 0)에서 Prep-HPLC로 정제하여 6 6-클로로-7-(7-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-6-아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (59.5 mg, 18.36%)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 649.15.¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 15.08 (s, 1H), 8.51 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 8.25 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.17 (s, 2H), 7.92 - 7.79 (m, 2H), 7.73 - 7.64 (m, 1H), 7.00 - 6.89 (m, 1H), 6.57 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 6.42 (d, J = 13.5 Hz, 2H), 4.56 (s, 1H), 4.45 (s, 2H), 4.37 - 4.22 (m, 2H), 4.14 - 4.01 (m, 2H), 3.88 - 3.77 (m, 2H), 3.52 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 3.25 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 2.15 (s, 13H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 58: 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-4,4-디메틸피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: (5R)-5-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-2-온의 합성

DMSO(50 mL) 중 (5R)-5-(하이드록시메틸)피롤리딘-2-온 (10 g, 86.85 mmol, 1 당량), 3-클로로-2-플루오로피리딘 (17.14 g, 130.31 mmol, 1.5 당량) 및 t-BuOK (29.24 g, 260.57 mmol, 3 당량)의 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하였다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄상에서 건조하고 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 DCM/MeOH(20:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 (5R)-5-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-2-온 (6.8 g, 34.54%)을 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 227.05.

단계 2: tert-부틸 (2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-5-옥소피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

ACN (50 mL) 중 (5R)-5-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]피롤리딘-2-온 (6.7 g, 29.56 mmol, 1 당량), Boc₂O (12.9 g, 59.1 mmol, 2 당량), DMAP (0.72 g, 5.91 mmol, 0.2 당량) 및 DIEA (7.64 g, 59.12 mmol, 2 당량)의 혼합물을 2.5시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 DCM 중 5% MeOH로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-5-옥소피롤리딘-1-카르복실레이트 (6 g, 62.11%)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 327.10.

단계 3: tert-부틸 (5R)-5-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-3,3-디메틸-2-옥소피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

THF (10 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-5-옥소피롤리딘-1-카르복실레이트 (2 g, 6.12 mmol, 1 당량)의 용액에 LiHMDS (12 mL, 12 mmol, 2 당량)를 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 이어서, MeI (1.91 g, 13.46 mmol, 2.2 당량)를 공급하고 혼합물을 2시간 동안 25℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 물로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 물 (3x150 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄상에서 건조하고 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 헥산 중 30% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (5R)-5-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-3,3-디메틸-2-옥소피롤리딘-1-카르복실레이트 (590 mg, 27.17%)를 회색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 355.13.

단계 4: tert-부틸 (2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-4,4-디메틸피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

THF (5 mL) 중 tert-부틸 (5R)-5-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-3,3-디메틸-2-옥소피롤리딘-1-카르복실레이트 (530 mg, 1.49 mmol, 1 당량)의 교반한 용액에 BH₃-Me₂S (0.99 mL, 13.05 mmol, 7 당량)를 실온에서 적가하였다. 혼합물을 18시간 동안 교반하였다. MeOH (5 mL)를 0℃에서 적가하여 생성된 혼합물을 켄칭하고 감압 하에 농축하였다. 생성된 혼합물을 헥산 중 40% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-4,4-디메틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (280 mg, 55%)를 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 341.16.

단계 5: 3-클로로-2-[[(2R)-4,4-디메틸피롤리딘-2-일]메톡시]피리딘의 합성

DCM (6 mL) 및 TFA (2 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-4,4-디메틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (280 mg, 0.82 mmol, 1 당량)의 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 ACN/H₂O(0.1%FA) (10%- 15%)로 용리하는 RP-플래시 크로마토그래피로로 정제하여 3-클로로-2-[[(2R)-4,4-디메틸피롤리딘-2-일]메톡시]피리딘(130 mg, 65.74%)을 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 241.10.

단계 6: 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-4,4-디메틸피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (1 mL) 중 3-클로로-2-[[(2R)-4,4-디메틸피롤리딘-2-일]메톡시]피리딘 (80 mg, 0.33 mmol, 1 당량), 6-클로로-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-7-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (69 mg, 0.16 mmol, 0.5 당량) 및 TEA　(50 mg, 0.49 mmol, 1.5 당량)의 교반한 혼합물을　10시간 동안 100℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 다음 조건 (컬럼: SunFire Prep C18 OBD 컬럼, 19Х150mm 5um 10nm; 이동상 A:물(0.1%FA), 이동상 B:ACN; 유속:25 mL/분; 구배: 8분 후에 25 B에서 45 B로; 254 nm; RT1:6.68; RT2:; 주입 부피: ml; 수행 횟수:;)에서 Prep-HPLC로 정제하여 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-4,4-디메틸피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (6.6 mg, 2.82%)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 637.20. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 15.07 (s, 1H), 8.51 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.25 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.91 - 7.80 (m, 2H), 7.69 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 7.00 - 6.89 (m, 1H), 6.58 (d, J = 8.5 Hz, 0.5H), 6.41 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 6.34 (d, J = 9.1 Hz, 0.5H), 4.67 (d, J = 23.1 Hz, 1H), 4.30 (s, 2H), 4.07 (t, J = 8.2 Hz, 2H), 3.91 - 3.74 (m, 2H), 3.43 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 3.25 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 2.92 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 2.15 (s, 6H), 2.03 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 1.82 (s, 1H), 1.13 (s, 3H), 1.01 (s, 3H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 59: 6-클로로-7-(2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}-3,3-디메틸피롤리딘-1-일)-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: 1,3-디에틸 2-[[(벤질옥시)카르보닐]아미노]프로판디오에이트의 합성

H₂O (150 mL) 중 1,3-디에틸 2-아미노프로판디오에이트 (30 g, 171.24 mmol, 1 당량) 및 Na₂CO₃ (21.78 g, 205 mmol, 1.2 당량)의 혼합물에 CbzCl (43.82 g, 256.87 mmol, 1.5 당량)를 적가하였다. 혼합물을 2시간 동안 0℃에서, 그리고 나서 실온에서 밤새 교반하였다. HCl(aq.)로 생성된 혼합물을 pH 3으로 산성화시키고 EtOAc(200 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세척하고 Na₂SO₄로 건조시켰다. 조 생성물을 다음 조건 (PE:EA/3:1)으로 정제하여 1,3-디에틸 2-[[(벤질옥시)카르보닐]아미노]프로판디오에이트 (30 g, 56.64%)를 무색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 310.12.

단계 2: 1-벤질 2,2-디에틸 3,3-디메틸피롤-1,2,2-트리카르복실레이트의 합성

EtOH (200 mL) 중 1,3-디에틸 2-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}프로판디오에이트 (35 g, 113.15 mmol, 1.00 당량)의 용액에 EtOH (50 mL) 중 EtONa (9.24 g, 135.78 mmol, 1.2 당량)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 이어서, EtOH (100 mL) 중 프레날 (10.47 g, 124.46 mmol, 1.1 당량)의 용액을 공급하였다. 반응물을 24시간 동안 25℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 H₂O로 켄칭하고 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 30% EtOAc로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 1-벤질 2,2-디에틸 3,3-디메틸피롤-1,2,2-트리카르복실레이트 (11.2 g, 26.37%)를 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 376.17.

단계 3: 2,2-디에틸 3,3-디메틸피롤리딘-2,2-디카르복실레이트의 합성

MeOH (150 mL) 중 1-벤질 2,2-디에틸 3,3-디메틸피롤-1,2,2-트리카르복실레이트 (11.2 g, 29.83 mmol, 1 당량) 및 Pd/C (11.2 g)의 혼합물을 1시간 동안 실온에서 수소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 여과하고 여액을 감압 하에 농축하였다. 조 생성물 2,2-디에틸 3,3-디메틸피롤리딘-2,2-디카르복실레이트 (7.2 g, 99.19%)를 추가의 여과 없이 다음 단계에 그대로 사용하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 244.15.

단계 4: 에틸 3,3-디메틸피롤리딘-2-카르복실레이트의 합성

MeOH (7 mL) 및 H₂O (7 mL) 중 2,2-디에틸 3,3-디메틸피롤리딘-2,2-디카르복실레이트 (7.2 g, 29.59 mmol, 1 당량)의 혼합물에 NaOH (11.84 g, 295.93 mmol, 10 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 중간 생성물을 다음 조건에서 역 플래시 크로마토그래피로 정제하였다: 컬럼, C18 실리카겔; 이동상, 물 중 ACN, 10분 후에 2%에서 3% 구배. 이어서, 다이옥산에 분산된 중간 생성물을 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축하여 에틸 3,3-디메틸피롤리딘-2-카르복실레이트 (4.8 g, 94.72%)를 무색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]+: 172.13.

단계 5: 1-tert-부틸 2-에틸 3,3-디메틸피롤리딘-1,2-디카르복실레이트의 합성

DCM (10 mL) 중 에틸 3,3-디메틸피롤리딘-2-카르복실레이트 (900 mg, 5.25 mmol, 1 당량), Boc₂O (1.72 g, 7.88 mmol, 1.5 당량), DMAP (0.13 g, 1.05 mmol, 0.2 당량) 및 TEA (1.6 g, 15.76 mmol, 3 당량)의 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 석유 에테르 중 15% EtOAc로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 1-tert-부틸 2-에틸 3,3-디메틸피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (350 mg, 24.54%)를 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 272.18.

단계 6: 4-[(1E)-3-(4-플루오로페닐)프로프-1-엔-1-일]벤조니트릴의 합성

THF (5 mL) 중 1-tert-부틸 2-에틸 3,3-디메틸피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (350 mg, 1.29 mmol, 1 당량)의 용액에 LAH (1.93 mL, 1.93 mmol, 1.5 당량)를 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 0.5시간 동안 교반하고 Na₂SO₄.10 H₂O로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 여과하고 여액을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 물 중 MeOH (15% -20%) 로 용리하는 RPFC로 정제하여 tert-부틸 2-(하이드록시메틸)-3,3-디메틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (250 mg, 84.52%)를 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 230.17.

단계 7: tert-부틸 2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}-3,3-디메틸피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

THF (5 mL) 중 tert-부틸 2-(하이드록시메틸)-3,3-디메틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.87 mmol, 1 당량)의 용액에 NaH (62 mg, 2.61 mmol, 3 당량)를 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고 물로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 물 중 ACN (30% -35%)으로 용리하는 RPFC로 정제하여 tert-부틸 2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}-3,3-디메틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (55 mg, 18.50%)를 무색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 341.16.

단계 8: 3-클로로-2-[(3,3-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시]피리딘의 합성

DCM (3 mL) 및 TFA (1 mL) 중 tert-부틸 2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}-3,3-디메틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (55 mg, 0.16 mmol, 1 당량)의 혼합물을 5시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 ACN/H₂O(0.1%FA) (5%- 10%)로 용리하는 RP-플래시 크로마토그래피로 정제하여 3-클로로-2-[(3,3-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시]피리딘 (40 mg, 조질)을 황색 오일로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 241.10.

단계 9: 6-클로로-7-(2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}-3,3-디메틸피롤리딘-1-일)-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (1 mL) 중 6-클로로-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-7-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (40 mg, 0.09 mmol, 1 당량), 3-클로로-2-[(3,3-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시]-6-메톡시피리딘 (36 mg, 0.13 mmol, 1.4 당량) 및 TEA (29 mg, 0.28 mmol, 3 당량)의 혼합물을　 2시간 동안 100℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 다음 조건 (컬럼: XBridge Prep C18 OBD 컬럼, 19*150 mm, 5μm; 이동상 A: 물(10MMOL/L NH4HCO3), 이동상 B: ACN; 유속: 25 mL/분; 구배: 2분 후에 10% B에서 10% B로, 2.5분 후에 10% B에서 36% B로, 10.5분 후에 36% B에서 65% B로, 65% B; 파장: 220 nm; RT1(분): 11.2; 수행 횟수: 0)에서 Prep-HPLC로 정제하여 6-클로로-7-(2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}-3,3-디메틸피롤리딘-1-일)-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (1.8 mg, 2.85%)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 637.20. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.46 (s, 1H), 8.32 - 7.70 (m, 4H), 7.68 - 7.15 (m, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.66 - 5.83 (m, 2H), 4.40 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 4.28 - 3.90 (m, 3H), 3.77 (s, 3H), 3.29 - 2.97 (m, 3H), 2.14 (s, 6H), 1.76 (d, J = 36.7 Hz, 2H), 1.25 - 1.15 (m, 3H), 1.10 (s, 3H), 0.95 (s, 1H), 0.90 - 0.72 (m, 1H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 60: 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-4,4-디플루오로피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소-1,8-나프티리딘-3-카르복실산

단계 1: 1-(tert-부틸) 2-메틸 (R)-4,4-디플루오로피롤리딘-1,2-디카르복실레이트의 합성

DCM 중 1-(tert-부틸) 2-메틸 (R)-4-옥소피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (3 g, 12.3 mmol, 1 당량)의 교반한 용액에 　DAST(18 g, 111.1 mmol, 9 당량)를 0℃에서 질소 분위기 하에 1시간 동안 분할하여 첨가하였다. 반응을 0℃에서 물로 켄칭하였다. 수성층을 DCM (3x10 mL)으로 추출하였다. 잔류물을 PE / EA (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여-부틸 (2R)-4,4-디플루오로-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트 (2.3 g, 85.72%)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 266.

단계 2: tert-부틸 (R)-4,4-디플루오로-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

THF 중 1-tert-부틸 2-메틸 (2R)-4,4-디플루오로피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (3 g, 11.3mmol, 1 당량)　의 교반한 용액에 LiBH4 (492 mg, 22.6 mmol, 2 당량)를 0℃에서 질소 분위기 1시간 동안 분할 첨가하였다. 반응을 0℃에서 물로 켄칭하였다. 수성층을 EtOAc (3x10 mL)로 추출하였다. 잔류물을 PE / EA (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (2R)-4,4-디플루오로-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트 (2.3 g, 85.72%)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 238.

단계 3: tert-부틸 (2R)-2-(((3-클로로-1,2-디하이드로피리딘-2-일)옥시)메틸)-4,4-디플루오로피롤리딘-1-카르복실라트의 합성

THF 중 tert-부틸 (2R)-4,4-디플루오로-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트 (2.3 g, 9.6 mmol, 1 당량) 및 NaH (465 mg, 19.3 mmol, 2 당량)의 교반한 용액에 3-클로로-2-플루오로피리딘 (1.5 g, 11.6 mmol, 1.2 당량)을 0℃에서 질소 분위기 하에 1시간 동안 분할 적가하였다. 반응을 0℃에서 물로 켄칭하였다. 수성층을 EtOAc (3x10 mL)로 추출하였다. 잔류물을 PE / EA (3:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (2R)-2-[[(3-클로로-1,2-디하이드로피리딘-2-일)옥시]메틸]-4,4-디플루오로피롤리딘-1-카르복실레이트 (2.3 g, 67.63%)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 351.

단계 4: (R)-3-클로로-2-((4,4-디플루오로피롤리딘-2-일)메톡시)피리딘의 합성

DCM 중 tert-부틸 (2R)-2-[[(3-클로로-1,2-디하이드로피리딘-2-일)옥시]메틸]-4,4-디플루오로피롤리딘-1-카르복실레이트 (1.1 g, 3.1 mmol, 1 당량) 및 TFA (3575.52 mg, 31.3 mmol, 10 당량)의 용액을 1시간 동안 실온에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 그 결과 3-클로로-2-[[(2R)-4,4-디플루오로피롤리딘-2-일]메톡시]피리딘 (700 mg, 89.77%)을 황색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 249.

단계 5: 에틸 (R)-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-4,4-디플루오로피롤리딘-1-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로-1,8-나프티리딘-3-카르복실레이트의 합성

DMSO 중 에틸 6,7-디클로로-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소-1,8-나프티리딘-3-카르복실레이트 (200 mg, 0.433 mmol, 1.00 당량) 및 3-클로로-2-[[(2R)-4,4-디플루오로피롤리딘-2-일]메톡시]피리딘 (129.08 mg, 0.520 mmol, 1.2 당량),　TEA (131.32 mg, 1.299 mmol, 3 당량)의 용액을 1시간 동안 100℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 잔류물을 다음 조건에서 역 플래시 크로마토그래피로 정제하였다: 컬럼, 실리카겔; 이동상, 물 중 MeCN, 10분 후에 10%에서 50%로 구배; 검출기, UV 254 nm. 그 결과 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-4,4-디플루오로피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소-1,8-나프티리딘-3-카르복실레이트 (100 mg, 34.27%)를 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 674.

단계 6: 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-4,4-디플루오로피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소-1,8-나프티리딘-3-카르복실산의 합성

에탄올 및 H₂O 중 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-4,4-디플루오로피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소-1,8-나프티리딘-3-카르복실레이트 (100 mg, 0.148 mmol, 1당량) 및 NaOH (11 mg, 0.3 mmol, 2 당량)의 용액을 1시간 동안 실온에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 진한 HCl을 사용하여 혼합물을 pH 7로 산성화/염기화/중화시켰다. 조 생성물 (100 mg)을 다음 조건 (컬럼: Gemini-NX C18 AXAI Packed, 21.2*150mm 5um; 이동상 A: 물(0.1%FA), 이동상 B: ACN; 유속: 25 mL/분; 구배: 10분 후에 24% B에서 37% B로, 37% B; 파장: 254 nm; RT1(분): 8.97; 수행 횟수: 0)에서 Prep-HPLC로 정제하여6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-4,4-디플루오로피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소-1,8-나프티리딘-3-카르복실산 (38.3. mg, 39.96%)을 황색 고체로 수득하였다.¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 14.62 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.03 - 7.89 (m, 2H), 7.78 - 7.65 (m, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.30 - 6.06 (m, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.41 - 4.12 (m, 4H), 4.03 - 3.76 (m, 2H), 3.76 - 3.59 (m, 2H), 3.22 - 3.09 (m, 1H), 2.78 - 2.68 (m, 1H), 2.61 - 2.57 (m, 1H), 2.13 (s, 6H). MS (ESI): m/z 646.20 [M+H]⁺

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 61: 7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-6-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: 1-Tert-부틸 2-메틸 (2R)-4-(트리플루오로메탄설포닐옥시)-2,3-디하이드로피롤-1,2-디카르복실레이트의 합성

THF (60 mL) 중 1-tert-부틸 2-메틸 (2R)-4-옥소피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (10.0 g, 41.11 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-트리플루오로메탄설포닐메탄설폰아미드 (17.6 g, 49.33 mmol, 1.2 당량) 및 NaHMDS (13.8 g, 82.22 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 15분 동안 0℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 0℃에서 물 (30 mL)을 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 생성된 혼합물을 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 무수 Na₂SO₄상에서 건조하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 PE / EA (3:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 1-tert-부틸 2-메틸 (2R)-4-(트리플루오로메탄설포닐옥시)-2,3-디하이드로피롤-1,2-디카르복실레이트 (5.5 g, 36%)를 황색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]+: 376.1.

단계 2: 1-Tert-부틸 2-메틸 (2R)-4-(피리딘-3-일)-2,3-디하이드로피롤-1,2-디카르복실레이트의 합성

톨루엔 (140 mL) 중 1-tert-부틸 2-메틸 (2R)-4-(트리플루오로메탄설포닐옥시)-2,3-디하이드로피롤-1,2-디카르복실레이트 (5.5 g, 14.65 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 EtOH (40 mL), H₂O (20 mL), 피리딘-3-일붕소산 (1.8 g, 14.65 mmol, 1.0 당량), Na₂CO₃ (4.7 g, 43.96 mmol, 3.0 당량) 및 Pd(dppf)Cl₂ CH₂Cl₂ (6.0 g, 7.33 mmol, 0.5 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1.5시간 동안 60℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 PE / EA (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 1-tert-부틸 2-메틸 (2R)-4-(피리딘-3-일)-2,3-디하이드로피롤-1,2-디카르복실레이트 (1.7 g, 38%)를 황색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]+: 305.1.

단계 3: 1-Tert-부틸 2-메틸 (2R)-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-1,2-디카르복실레이트의 합성

MeOH (25 mL) 중 1-tert-부틸 2-메틸 (2R)-4-(피리딘-3-일)-2,3-디하이드로피롤-1,2-디카르복실레이트 (1.7 g, 5.59 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 Pd/C (0.6 g, 5.59 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 실온에서 수소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 MeOH (3 x 10 mL)로 세척하였다. 여액을 감압 하에 농축시켰다. 그 결과 1-tert-부틸 2-메틸 (2R)-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (1.5 g, 88%)를 황색 조질의 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]+: 307.2.

단계 4: Tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸)-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

THF (20 mL) 중 1-tert-부틸 2-메틸 (2R)-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (1.5 g, 4.90 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 LAH (0.3 g, 7.34 mmol, 1.5 당량)를 0℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 15분 동안 0℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 반응을 황산나트륨 10수화물로 0℃에서 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 무수 MgSO₄상에서 건조하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를EtOAc (3 x 10 mL)로 세척하였다. 여액을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 PE/EtOAc (1:9)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸)-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-1-카르복실레이트 (1.0 g, 73%)를 담황색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]+: 279.2.

단계 5: Tert-부틸 (2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

DMF (12 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸)-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-1-카르복실레이트 (1.0 g, 3.59 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 NaH (0.3 g, 10.78 mmol, 3.0 당량)를 0℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 30분 동안 실온에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 상기 혼합물에 3-클로로-2-플루오로피리딘 (0.7 g, 5.39 mmol, 1.5 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 추가로 1.5시간 동안 실온에서 교반하였다. 0℃에서 물 (10 mL)을 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 생성된 혼합물을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기상 무수 Na₂SO₄상에서 건조하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 PE/EtOAc (5:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 tert-부틸 (2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-1-카르복실레이트 (700 mg, 50%)를 담황색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]+: 390.2.

단계 6: 3-클로로-2-[[(2R)-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-2-일]메톡시]피리딘의 합성

DCM (8 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-1-카르복실레이트 (700 mg, 1.80 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 TFA (4 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 실온에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 다음 조건에서 역 플래시 크로마토그래피로 정제하였다: 컬럼, C18 실리카겔; 이동상, 물 중 MeCN, 30분 후에 5%에서 100%로 구배 검출기, UV 254 nm 및 UV 220 nm. 그 결과 3-클로로-2-[[(2R)-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-2-일]메톡시]피리딘 (350 mg, 67%)을 담황색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]+: 290.1.

단계 7: 3-클로로-2-(((2R,4S)-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-2-일)메톡시)피리딘 및 3-클로로-2-(((2R,4R)-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-2-일)메톡시)피리딘의 합성

3-클로로-2-(((2R)-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-2-일)메톡시)피리딘 (100 mg)을 키랄-HPLC로 분리하여 3-클로로-2-(((2R,4S)-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-2-일)메톡시)피리딘 (70 mg) 및 3-클로로-2-(((2R,4R)-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-2-일)메톡시)피리딘 (10 mg)을 수득하였다.

단계 8: 7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-6-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (3.5 mL) 중 1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-6,7-디플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (65 mg, 0.16 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 TEA (49 mg, 0.49 mmol, 3.0 당량) 및 3-클로로-2-[[(2R,4S)-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-2-일]메톡시]피리딘 (56 mg, 0.19 mmol, 1.2 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 100℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 다음 조건 (컬럼: XBridge Shield RP18 OBD 컬럼, 5um,19*150mm;이동상 A:물(0.1%FA), 이동상 B: ACN; 유속: 25 mL/분; 구배: 8분 후에 60% B에서 90% B로; 254/220 nm; Rt: 7.31분)에서 Prep-HPLC로 정제하였다. 그 결과 7-[(2R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-6-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (29.7 mg, 27.30%)을 담황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]+: 670.25. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 15.32 (s, 1H), 8.56 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.53 - 8.44 (m, 2H), 8.30 - 8.19 (m, 1H), 7.99 - 7.86 (m, 3H), 7.85 - 7.65 (m, 2H), 7.45 - 7.35 (m, 1H), 6.99 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 6.65 - 6.50 (m, 1H), 6.36 - 6.20 (m, 2H), 4.46 (d, J = 9.7 Hz, 3H), 4.18 - 3.94 (m, 2H), 3.88 - 3.67 (m, 3H), 3.58 - 3.44 (m, 2H), 3.21 (s, 1H), 2.67 (m, J = 11.4, 6.7 Hz, 1H), 2.12 (s, 7H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 62: 7-[(2R,4R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-6-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: 7-[(2R,4R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-6-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (2 mL) 중 1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-6,7-디플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (8 mg, 0.02 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 TEA (6 mg, 0.06 mmol, 3.0 당량) 및 3-클로로-2-[[(2R,4R)-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-2-일]메톡시]피리딘 (7 mg, 0.02 mmol, 1.2 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 100℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 다음 조건 (컬럼: XBridge Shield RP18 OBD 컬럼, 5um,19*150mm;이동상 A:물(0.1%FA), 이동상 B: ACN; 유속: 25 mL/분; 구배: 8분 후에 60% B에서 90% B로; 254/220 nm; Rt: 7.31분)에서 Prep-HPLC로 정제하여 7-[(2R,4R)-2-[[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸]-4-(피리딘-3-일)피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-6-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (10.9 mg, 81.40%)을 담황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]+: 670.20. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 15.30 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.54 - 8.45 (m, 2H), 8.25 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.01 - 7.86 (m, 3H), 7.85 - 7.64 (m, 2H), 7.39 (d, J = 7.9, 4.7 Hz, 1H), 7.07 - 6.92 (m, 1H), 6.59 - 6.19 (m, 2H), 4.47 (s, 3H), 4.02 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 3.88 - 3.66 (m, 3H), 3.49 (s, 2H), 3.22 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 2.79 - 2.62 (m, 1H), 2.23 (s, 1H), 2.12 (s, 6H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 63: 6-클로로-7-((2R)-2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-4-사이클로부틸피롤리딘-1-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2R)-4-하이드록시피롤리딘-1,2-디카르복실레이트의 합성

MeOH (50 mL) 중 1-(tert-부틸) 2-메틸 (R)-4-옥소피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (5.0 g, 20.56 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에, NaBH₄ (1.5 g, 41.13 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 물을 사용하여 반응을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc(3*50 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 수집하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시켰다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 PE/EtOAc (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2R)-4-하이드록시피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (2.5g,49.7%)를 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]+: 246.1.

단계 2: 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2R)-4-요오도피롤리딘-1,2-디카르복실레이트의 합성

DCM (20 mL) 중 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2R)-4-하이드록시피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (2.5 g, 10.20 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 이미다졸 (693.8 mg, 30.6 mmol, 3.0 당량), 트리페닐포스페이트 (6.3 g, 30.6 mmol, 3.0 당량) 및 디요오딘 (5.9 g, 30.6 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 밤새 교반하였다. 물을 사용하여 반응을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc(3*50 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 수집하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시켰다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 PE/EtOAc (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2R)-4-요오도피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (2.3 g ,63.8%)를 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 356.1

단계 3: 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2R)-4-사이클로부틸피롤리딘-1,2-디카르복실레이트의 합성

THF (30 mL) 중 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2R)-4-요오도피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (2.3g, 6.47 mmol, 1.0 당량)의 용액에 Co(acac)₂(137.5 mg, 0.38 mmol, 0.6 당량), 테트라메틸에틸렌디아민(1.50 g, 12.9 mmol, 2.0 당량) 및 사이클로부틸마그네슘 브로마이드 (2.4 g, 15.5 mmol, 2.4 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 밤새 교반하였다. 물을 사용하여 반응을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc(3*50 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 수집하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시켰다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 PE/EtOAc (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2R)-4-사이클로부틸피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (979.8 mg, 53.5%)의 황색 고체를 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 284.1.

단계 4: tert-부틸 (2R)-4-사이클로부틸-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

THF (10 mL) 중 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2R)-4-사이클로부틸피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (900 mg, 3.18 mmol, 1.0 당량)의 용액에 리튬 알루미늄 하이드라이드 (1mol/L ,5 mL, 4.77 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 용액을 1시간 동안 0℃에서 교반하였다. 반응을 Na₂SO₄.10H₂O로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 EA (100 mL)로 세척하였다, 여액을 감압 하에 농축하였다. 그 결과 tert-부틸 (2R)-4-사이클로부틸-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트 (429.7 mg, 53.2%)의 황색 고체를 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 256.1.

단계 5: tert-부틸 (2R)-2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-4-사이클로부틸피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

THF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R)-4-사이클로부틸-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트 (350 mg, 1.37 mmol, 1.0 당량)의 용액에 3-클로로-2-플루오로피리딘 (215.3 mg, 1.64 mmol, 1.2 당량) 및 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드 (3 mL, 2.74 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 용액을 1시간 동안 0℃에서 교반하였다. 물을 사용하여 반응을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc(3*20 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 수집하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시켰 다.생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 PE/EtOAc (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 tert-부틸 (2R)-2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-4-사이클로부틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (260.5 mg, 52.1%)의 황색 고체를 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 367.1.

단계 6: 3-클로로-2-(((2R)-4-사이클로부틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리딘의 합성

DCM (3.0 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-4-사이클로부틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (150 mg, 0.40 mmol, 1.0 당량)의 용액에 TFA (2.0 mL)를 첨가하였다. 생성된 용액을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 그 결과 3-클로로-2-(((2R)-4-사이클로부틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리딘 (200 mg, 조질)의 황색 고체를 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 267.1.

단계 7: 6-클로로-7-((2R)-2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-4-사이클로부틸피롤리딘-1-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (2 mL) 중 3-클로로-2-(((2R)-4-사이클로부틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리딘 (100 mg, 0.37 mmol, 1.0 당량)의 용액에 6-클로로-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (231.4 mg, 0.55 mmol, 1.5 당량) 및 TEA (112.1 mg, 1.11 mmol, 3.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 용액을 1시간 동안 100℃에서 교반하였다. 혼합물을 prep-HPLC로 정제하였다 (컬럼: XSelect CSH Prep C18 OBD 컬럼, 19*250 mm, 5μm; 이동상 A: 물(0.05%FA), 이동상 B: ACN; 유속: 25 mL/분; 구배: 7분 후에 25% B에서 55% B로, 55% B; 파장: 254/220 nm; RT1(분): 6.05; 수행 횟수: 0). 그 결과 6-클로로-7-((2R)-2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)-4-사이클로부틸피롤리딘-1-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (4.5 mg, 0.02%)을 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 663.2.¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 15.15 (s, 1H), 8.59 (m, 1H), 8.41 - 8.18 (m, 2H), 8.03 - 7.85 (m, 2H), 7.80 - 7.62 (m, 1H), 7.02 (m, 1H), 6.70 - 6.33 (m, 2H), 4.77 (m, 1H), 4.45 - 4.22 (m, 2H), 4.13 (m, 2H), 3.88 (m, 2H),3.28 (m, 2H), 2.91 (s, 1H), 2.39 (s, 2H), 2.22 (s, 6H), 2.05 - 1.77 (m, 4H), 1.68 (m, 2H),1.35 (s, 1H). 1.31 (s, 1H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 64: 6-클로로-7-(3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[2.1.1]헥산-2-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: 2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자바이사이클로[2.1.1]헥산-3-카르복실산의 합성

디에틸 에테르 (5 mL) 중 tert-부틸 2-아자바이사이클로[2.1.1]헥산-2-카르복실레이트 (600 mg, 3.27 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 CO₂ 가스 차폐하여 s-BuLi (9.8 mL,1mol/L, 9.81 mmol, 3.0 당량) 및 테트라메틸에틸렌디아민 (1.13 g, 9.81 mmol, 3.0 당량)을 합하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응을 MeOH로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 그 결과 2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자바이사이클로[2.1.1]헥산-3-카르복실산 (400 mg, 47.1%)을 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]+: 228.1.

단계 2: 2-(tert-부틸) 3-메틸 2-아자바이사이클로[2.1.1]헥산-2,3-디카르복실레이트의 합성

MeOH (5 mL) 중 2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자바이사이클로[2.1.1]헥산-3-카르복실산 (400 mg, 1.76 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 명칭을 생성할 수 없는 구조 (298.6 mg, 2.64 mmol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 침전된 고체를 수집하고 조 생성물을 다음 조건 (컬럼: XBridge Shield RP18 OBD 컬럼,, 5um,19*150mm; 이동상 A:물(10MMOL/L NH4HCO3), 이동상 B:ACN; 유속:25 mL/분; 구배: 7분 후에 25 B에서 48 B로; 254/220 nm; RT1:5.90; RT2:; 주입 부피: ml; 수행 횟수:;)에서 Prep-HPLC로 정제하였다. 그 결과 2-(tert-부틸) 3-메틸 2-아자바이사이클로[2.1.1]헥산-2,3-디카르복실레이트 (200 mg, 47.1%)를 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]+: 242.1.

단계 3: tert-부틸 3-(하이드록시메틸)-2-아자바이사이클로[2.1.1]헥산-2-카르복실레이트의 합성

THF (2 mL) 중 2-(tert-부틸) 3-메틸 2-아자바이사이클로[2.1.1]헥산-2,3-디카르복실레이트 (200 mg, 0.82 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에, 리튬 알루미늄 하이드라이드 (1mol/L,1.23 mL, 1.23 mmol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 생성된 용액을 1시간 동안 0℃에서 교반하였다. 반응을 Na₂SO₄.10H₂O로 켄칭하였다. 물을 사용하여 반응을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc(3*20 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 수집하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시켰다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 PE/EtOAc (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 tert-부틸 3-(하이드록시메틸)-2-아자바이사이클로[2.1.1]헥산-2-카르복실레이트 (100 mg,57.4%)를 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]+: 214.1.

단계 4: 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2R)-4-요오도피롤리딘-1,2-디카르복실레이트의 합성

THF (3 mL) 중 tert-부틸 3-(하이드록시메틸)-2-아자바이사이클로[2.1.1]헥산-2-카르복실레이트 (100 mg, 0.46 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 2,3-디클로로-6-메톡시피리딘 (122.1 mg, 0.69 mmol, 1.5 당량) 및 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드 (0.1 mL, 0.92 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 용액을 1시간 동안 0℃에서 교반하였다. 물을 사용하여 반응을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc(3*10 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 수집하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시켰다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 PE/EtOAc (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 tert-부틸 3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[2.1.1]헥산-2-카르복실레이트 (90 mg, 55.5%)를 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 355.1

단계 5: 3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[2.1.1]헥산의 합성

DCM (2 mL) 중 tert-부틸 3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[2.1.1]헥산-2-카르복실레이트 (90 mg, 0.25 mmol, 1.0 당량)의 용액에 TFA (2.0 mL)를 첨가하였다. 생성된 용액을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 그 결과 3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[2.1.1]헥산 (100 mg, 조질)의 황색 고체를 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 255.0.

단계 6: 6-클로로-7-(3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[2.1.1]헥산-2-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (2 mL) 중 3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[2.1.1]헥산 (100 mg, 0.39 mmol, 1.0 당량)의 용액에 6-클로로-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-7-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (231.4 mg, 0.55 mmol, 1.5 당량) 및 TEA (112.1 mg, 1.11 mmol, 3.0 당량)를 첨가하였다 첨가하였다. 생성된 용액을 1시간 동안 100℃에서 교반하였다. 혼합물을 prep-HPLC로 정제하였다 (컬럼: XSelect CSH Prep C18 OBD 컬럼, 19*250 mm, 5μm; 이동상 A: 물(0.05%FA), 이동상 B: ACN; 유속: 25 mL/분; 구배: 7분 후에 25% B에서 55% B로, 55% B; 파장: 254/220 nm; RT1(분): 6.05; 수행 횟수: 0). 그 결과 6-클로로-7-(3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[2.1.1]헥산-2-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (3.3 mg, 0.01%)을 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 651.1.¹H NMR (300 MHz, 메탄올-d4) δ 8.64 (s, 1H), 8.25 (m, 2H), 7.62 (m, 2H), 6.74 - 6.18 (m, 3H), 4.55 (m, 4H), 4.19 (m, 2H), 4.05 (s, 1H), 3.95 (m, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.37 (s, 1H), 2.95 (s, 1H), 2.30 (s, 6H), 1.97 (d, J = 8.9 Hz, 3H), 1.47 (s, 1H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 65: 1-(2-아미노피리딘-4-일)-6-클로로-7-[(2R)-2-({[3-클로로-6-(디메틸아미노)피리딘-2-일]옥시}메틸)-3-메틸피롤리딘-1-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: 에틸 1-{2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]피리딘-4-일}-6-클로로-7-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

아세트산 무수물 (1.2 g, 11.42 mmol, 3.0 당량) 중 에틸 3-(5-클로로-2,4-디플루오로페닐)-3-옥소프로파노에이트 (1.0 g, 3.81 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 트리에틸 오르토포르메이트 (0.9 g, 5.71 mmol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. DMSO (70 mL) 중 생성된 혼합물에 tert-부틸 N-(4-아미노피리딘-2-일)카르바메이트 (0.8 g, 3.81 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물에 K₂CO₃ (1.1 g, 7.61 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 80 mL 물을 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 침전된 고체를 여과하여 수집하였다. 그 결과 에틸 1-{2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]피리딘-4-일}-6-클로로-7-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (1.8 g, 조질)를 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]+: 462.1.

단계 2: 1-(2-아미노피리딘-4-일)-6-클로로-7-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

브롬화수소 (10 mL) 중 에틸 1-{2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]피리딘-4-일}-6-클로로-7-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (900 mg, 1.95 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에. 생성된 혼합물을 1.5시간 동안 100℃에서 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 침전된 고체를 여과하여 수집하고 물 (3 x 2 mL)로 세척하였다. 그 결과 1-(2-아미노피리딘-4-일)-6-클로로-7-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (300 mg, 46%)을 백색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]+: 334.0.

단계 3: 1-(2-아미노피리딘-4-일)-6-클로로-7-[(2R)-2-({[3-클로로-6-(디메틸아미노)피리딘-2-일]옥시}메틸)-3-메틸피롤리딘-1-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (6 mL) 중 1-(2-아미노피리딘-4-일)-6-클로로-7-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (100 mg, 0.17 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 TEA (104 mg, 1.03 mmol, 6.0 당량) 및 5-클로로-N,N-디메틸-6-[(3-메틸피롤리딘-2-일)메톡시]피리딘-2-아민 (55 mg, 0.21 mmol, 1.2 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 100℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 조 생성물을 Prep-HPLC로 정제하였다. 그 결과 1-(2-아미노피리딘-4-일)-6-클로로-7-[(2R)-2-({[3-클로로-6-(디메틸아미노)피리딘-2-일]옥시}메틸)-3-메틸피롤리딘-1-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (96.3 mg)을 담황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]+: 583.15. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 15.05 (s, 1H), 8.55 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.29 - 7.93 (m, 2H), 7.42 (s, 1H), 6.78 - 6.46 (m, 4H), 6.36 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 6.14 - 5.71 (m, 1H), 5.01 - 4.77 (m, 1H), 4.72 - 3.91 (m, 2H), 3.47 (d, J = 29.4 Hz, 1H), 3.27 - 3.02 (m, 1H), 2.78 (d, J = 25.1 Hz, 6H), 2.60 (s, 1H), 2.19 - 2.02 (m, 1H), 1.52 (s, 1H), 1.27 - 1.08 (m, 3H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 66: 1-(2-아미노피리딘-4-일)-7-((3R)-3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-일)-6-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: Tert-부틸 N-(4-아미노피리딘-2-일)카르바메이트의 합성

MeOH (20 ml)　중 tert-부틸 N-(4-니트로피리딘-2-일)카르바메이트 (2.7 g, 11.29 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에　Pd/C (200 mg)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안　실온에서　수소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 MeOH　(3x20　mL)로 세척하였다. 여액을 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물은 추가 정제없이 다음 단계에 그대로 사용하였다.

단계 2: 에틸 1-{2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]피리딘-4-일}-6,7-디플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

1-에톡시-3-(2,4,5-트리플루오로페닐)프로판-1,3-디올 (85.0 g, 0.34 mol, 1.0 당량)　및 트리에틸 오르토포르메이트 (2.71 g, 18.279 mmol, 1.5 당량)의 혼합물에　Ac₂O (3.73 g, 36.56 mmol, 3.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 100℃에서　질소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 상기 혼합물에 DMSO (10 ml) 중 tert-부틸 N-(4-아미노피리딘-2-일)카르바메이트 (3.82 g, 18.28 mmol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안　실온에서　질소 분위기 하에 교반하였다. 상기 혼합물에 K₂CO₃ (228.6 g, 1.66 mol, 5.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응을 물로 실온에서 켄칭하였다. 침전된 고체를 여과하여 수집하고 물로 세척하였다. 잔류물을 석유 에테르 / EtOAc　(5:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 에틸 1-{2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]피리딘-4-일}-6,7-디플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (1.32 g, 24.32%)를　황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 446.1.

단계 3: 1-(2-아미노피리딘-4-일)-6,7-디플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

HBr (5 mL)　 중 에틸 1-{2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]피리딘-4-일}-6,7-디플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실레이트 (1.32 g, 2.96 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에　0℃에서　　질소 분위기 하에. 최종 반응 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 마이크로파 방사선으로 조사하였다. 침전된 고체를 여과하여 수집하고 물　(3x10　mL)로 세척하였다. 그 결과　1-(2-아미노피리딘-4-일)-6,7-디플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (630 mg, 67.01%)을　담황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 318.1.

단계 4: 1-(2-아미노피리딘-4-일)-7-((3R)-3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-일)-6-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (1 mL) 중 1-(2-아미노피리딘-4-일)-6,7-디플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (40 mg, 0.13 mmol, 1.0 당량) 및 (3R)-3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산 (38 mg, 0.15 mmol, 1.2 당량)의 혼합물에 TEA (40 mg, 0.39 mmol, 3.0 당량)를 질소 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 80℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 조 생성물 (80 mg)을 다음 조건 (컬럼: XSelect CSH Prep C18 OBD 컬럼, 19*250 mm, 5μm; 이동상 A: 물(0.1%FA), 이동상 B: ACN; 유속: 25 mL/분; 구배: 7분 후에 35% B에서 61% B로, 61% B; 파장: 254/220 nm; RT1(분): 6.97; 수행 횟수: 0)에서 Prep-HPLC로 정제하여 1-(2-아미노피리딘-4-일)-7-((3R)-3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-일)-6-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (12.4 mg, 17.34%)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 552.15.¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 15.28 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.89 (d, J = 14.2 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 6.64 (s, 1H), 6.52 (s, 2H), 6.42 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.46 (d, J = 12.4 Hz, 3H), 3.77 (s, 3H), 3.09 (s, 1H), 2.33 - 2.20 (m, 1H), 2.05 (s, 1H), 1.79 (s, 1H), 0.90 - 0.81 (m, 1H), 0.39 (s, 1H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 67: 1-(5-아미노피리다진-3-일)-6-클로로-7-(2-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-3,3-디메틸피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산

단계 1: 1-(5-아미노피리다진-3-일)-6-클로로-7-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

HBr (0.5 mL) 중 에틸 1-(5-아미노피리다진-3-일)-6-클로로-7-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (120 mg, 0.33 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에　0℃에서　　질소 분위기 하에. 최종 반응 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 마이크로파 방사선으로 조사하였다. 침전된 고체를 여과하여 수집하고 물　(3x10　mL)로 세척하였다. 그 결과　1-(5-아미노피리다진-3-일)-6-클로로-7-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (68 mg,60.9%)을 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 335.0.

단계 2: 1-(5-아미노피리다진-3-일)-6-클로로-7-(2-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-3,3-디메틸피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (1 mL) 중 1-(5-아미노피리다진-3-일)-6-클로로-7-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (60 mg, 0.17 mmol, 1.0 당량) 및 3-클로로-2-((3,3-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6-메톡시피리딘 (58 mg, 0.21 mmol, 1.2 당량)의 혼합물에 TEA (52 mg, 0.51 mmol, 3.0 당량)를 질소 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 80℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 조 생성물 (80 mg)을 다음 조건 (컬럼: XSelect CSH Prep C18 OBD 컬럼, 19*250 mm, 5μm; 이동상 A: 물(0.1%FA), 이동상 B: ACN; 유속: 25 mL/분; 구배: 7분 후에 35% B에서 61% B로, 61% B; 파장: 254/220 nm; RT1(분): 6.97; 수행 횟수: 0)에서 Prep-HPLC로 정제하여 1-(5-아미노피리다진-3-일)-6-클로로-7-(2-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-3,3-디메틸피롤리딘-1-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (30.4 mg, 30.71%)을 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 585.15.¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.95 (s, 1H), 8.74 - 8.61 (m, 2H), 8.12 (s, 1H), 7.60 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.04 (s, 2H), 6.33 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.61 (s, 1H), 4.46 (d, J = 4.5 Hz, 2H), 3.69 (s, 4H), 3.22 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 1.97 (s, 1H), 1.82 - 1.67 (m, 1H), 1.18 (d, J = 12.4 Hz, 6H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 68: 7-((1R,3R,5R)-3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-6-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: 3-클로로-6-메톡시피리딘-2-아민의 합성

500 mL 3구 둥근 바닥 플라스크에 에탄올 (200 mL) 및 H₂O (20 mL) 중 3-클로로-6-메톡시-2-니트로피리딘 (20.0 g, 106.06 mmol)를 넣고 Fe (29.62 g, 530.32 mmol) 및 NH₄Cl (34.04 g, 636.38 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 5시간 동안 80℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여액을 감압 하에 증발시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트/석유 에테르 (1:2)로 용리하는 실리카겔 컬럼에 적용하였다. 그 결과 13.75 g (81.75%)의 3-클로로-6-메톡시피리딘-2-아민을 갈색 고체로 얻었다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.22 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.64 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.97 (s, 2H), 3.73 (s, 3H).

단계 2: 2,3-디클로로-6-메톡시피리딘의 합성

진한 염산 (160 mL) 중 3-클로로-6-메톡시피리딘-2-아민 (10.0 g, 63.06 mmol)의 용액을 -5℃로 냉각시켰다. 이 온도에서 물 (80 mL) 중 NaNO₂ (17.40 g, 252.23 mmol)의 용액을 30분 이내에 첨가하였다. 30분 동안 교반한 후, CuCl (49.94 g, 504.46 mmol)를 30분 이내에 천천히 첨가하였다. 실온에서 16시간 동안 계속 교반하고 암모니아 (25% 수용액, 300 mL)를 10℃에서 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 그 다음, 혼합물 용매를 감압 하에 증발시키고 잔류물을 석유 에테르를 사용하여 실리카겔 컬럼에 적용하였다. 그 결과 5.2 g (46.33%)의 2,3-디클로로-6-메톡시피리딘을 백색 고체로 얻었다. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.00 (dd, J = 8.6, 2.5 Hz, 1H), 6.93 (dd, J = 8.5, 2.3 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H).

단계 3: 1-(tert-부틸) 2-메틸 (R)-2,3-디하이드로-1H-피롤-1,2-디카르복실레이트의 합성

톨루엔 (1 L) 중 1-(tert-부틸) 2-메틸 (R)-5-옥소피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (550 g, 2.26 mol)의 교반한 용액에 트리-에틸 리튬 보란 (THF 중 1 M) (2.5 L, 2.5 mol)을 -78℃에서 첨가하고 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 -78℃로 재냉각시키고, 4-디메틸아미노피리딘 (5.5 g, 45.05 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (2.25 L, 13.60 mol)에 이어 트리플루오로아세트산 무수물 (380 mL, 5.65 mol)을 첨가하고 혼합물을 -78℃ 내지 15℃에서 16시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 물로 켄칭하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기상을 Na₂SO₄상에서 건조하고, 여과하고 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 헥산 중 5% EtOAc로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 1-(tert-부틸) 2-메틸 (R)-2,3-디하이드로-1H-피롤-1,2-디카르복실레이트 (270 g, 53%)를 황색 오일로 수득하였다. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 6.64 - 6.45 (m, 1H), 5.09 - 4.91 (m, 1H), 4.60 (dd, J = 12.0, 5.2 Hz, 1H), 3.68 (d, J = 7.7 Hz, 3H), 3.14 - 2.95 (m, 1H), 2.65 - 2.53 (m, 1H), 1.39 (d, J = 19.1 Hz, 9H).

단계 4: 2-(tert-부틸) 3-메틸 (1R,3R,5R)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2,3-디카르복실레이트의 합성

3000 mL 3구 둥근 바닥 플라스크에, 디클로로메탄 (1000 mL) 중 1-(tert-부틸) 2-메틸 (R)-2,3-디하이드로-1H-피롤-1,2-디카르복실레이트 (50.0 g, 220.01 mmol)를 넣고, 디에틸아연 (헵탄 중　1M, 484.04 mL, 484.04 mmol)의 용액을 0℃에서 첨가하고, 디요오도메탄 (235.7 g, 880.05 mmol)을 30분에 걸쳐서 첨가하고 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 서서히 실온으로 가온하고 16시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 상기 혼합물에 1000 mL 디클로로메탄, Boc₂O (72.03 g, 330.03 mmol) 및 Et₃N (66.79 g, 660.06 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물 용매를 감압 하에 증발시키고 잔류물을 에틸 아세테이트/석유 에테르 (1:5)로 용리하는 실리카겔 컬럼 상에 적용하였다. 그 결과 2-(tert-부틸) 3-메틸 (1R,3R,5R)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2,3-디카르복실레이트 (13.5 g, 25.43%, TLC에서 더 높은 지점)를 황색 오일로 얻고 부산물 2-(tert-부틸) 3-메틸 (1S,3R,5S)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2,3-디카르복실레이트 (5.3 g, 9.98%, TLC에서 더 낮은 지점)를 황색 오일로 얻었다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.55 - 4.44 (m, 1H), 3.62 (d, J = 9.7 Hz, 3H), 3.43 - 3.33 (m, 1H), 2.68 - 2.52 (m, 1H), 1.94 - 1.83 (m, 1H), 1.60 - 1.45 (m, 1H), 1.37 (d, J = 39.6 Hz, 9H), 0.75 - 0.62 (m, 2H).

단계 5: tert-부틸 (1R,3R,5R)-3-(하이드록시메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트의 합성

질소 하에, 500 mL 3구 둥근 바닥 플라스크에 건조 THF (100 mL) 중 2-(tert-부틸) 3-메틸 (1R,3R,5R)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2,3-디카르복실레이트 (9.7 g, 40.20 mmol)를 넣고 LiAlH₄ (THF 중 1M, 48.24 mL, 48.24 mmol)의 용액을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 그 다음 반응을 Na₂SO₄.10H₂O로 0℃에서 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여액을 감압 하에 증발시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트/석유 에테르 (1:2)로 용리하는 실리카겔 컬럼에 적용하였다. 그 결과 7.3 g (85.14%)의 tert-부틸 (1R,3R,5R)-3-(하이드록시메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트를 황색 오일로 얻었다. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 4.78 - 4.68 (m, 1H), 4.03 - 3.88 (m, 1H), 3.48 - 3.34 (m, 2H), 3.22 - 3.10 (m, 1H), 2.31 - 2.14 (m, 1H), 1.97 - 1.82 (m, 1H), 1.52 - 1.29 (m, 10H), 0.69 - 0.57 (m, 2H).

단계 6: tert-부틸 (1R,3R,5R)-3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트의 합성

질소 하에, 500 mL 3구 둥근 바닥 플라스크에, 건조 THF (100 mL) 중 tert-부틸 (1R,3R,5R)-3-(하이드록시메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (7.3 g, 34.23 mmol)를 넣고 2,3-디클로로-6-메톡시피리딘 (6.07 g, 37.65 mmol)을 0℃에서 첨가한 후, KHMDS (THF　중 1M, 68 mL, 68.00 mmol)를 첨가하고 20분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc로 추출하였다.　유기층을 에틸 아세테이트/석유 에테르 (1:4)로 용리하는 실리카겔 컬럼에 적용하였다. 그 결과 8.2 g (67.52%)의 tert-부틸 (1R,3R,5R)-3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트를 황색 오일로 얻었다. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 7.76 (dd, J = 8.5, 2.7 Hz, 1H), 6.42 (dd, J = 8.6, 2.7 Hz, 1H), 4.48 - 4.20 (m, 3H), 3.84 (s, 3H), 3.53 - 3.40 (m, 1H), 2.49 - 2.32 (m, 1H), 1.99 - 1.86 (m, 1H), 1.56 - 1.46 (m, 1H), 1.38 (d, J = 24.1 Hz, 9H), 0.94 - 0.84 (m, 1H), 0.79 - 0.66 (m, 1H).

단계 7: (1R,3R,5R)-3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산 하이드로클로라이드의 합성

500 mL 3구 둥근 바닥 플라스크에, 디옥산 (100 mL) 중 tert-부틸 (1R,3R,5R)-3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (8.2 g, 23.16 mmol)를 넣고 HCl (디옥산 중 4M, 150 mL)의 용액을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 서서히 실온으로 가온하하고 1시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 상기 혼합물을 Et₂O로 세척하였다. 이어서 생성된 혼합물을 여과하고, 그 결과 6.5 g (96.06%)의 (1R,3R,5R)-3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산 하이드로클로라이드를 백색 고체로 얻었다. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10.50 (s, 1H), 9.25 (s, 1H), 7.81 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.49 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.56 - 4.29 (m, 3H), 3.86 (s, 3H), 3.34 - 3.23 (m, 1H), 2.60 - 2.52 (m, 1H), 1.95 - 1.77 (m, 2H), 1.14 - 0.99 (m, 2H).

단계 8: 7-((1R,3R,5R)-3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-6-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (60 mL) 중 1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-6,7-디플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (4.0 g, 10.00 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 (1R,3R,5R)-3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산 하이드로클로라이드 (3.2 g, 11.00 mmol, 1.1 당량) 및 Et₃N (7.1 g, 70.00 mmol, 7.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 교반하였다. 용액을 물 (NH₄HCO₃) 중 20%- 80% 아세토니트릴로 용리하는 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하여 7-((1R,3R,5R)-3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-6-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (1.0838 g, 17%)을 담황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 635.20. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 15.34 (s, 1H), 8.52 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 8.32 - 8.23 (m, 1H), 7.88 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 7.82 - 7.63 (m, 2H), 6.62 - 6.33 (m, 3H), 4.79 - 4.73 (m, 1H), 4.31 - 4.14 (m, 2H), 4.11 - 4.00 (m, 2H), 3.87 - 3.75 (m, 2H), 3.73 (d, J = 2.1 Hz, 3H), 3.28 - 3.13 (m, 2H), 2.70 - 2.59 (m, 1H), 2.14 (s, 6H), 2.10 - 1.99 (m, 1H), 1.65 - 1.59 (m, 1H), 1.03 - 0.91 (m, 1H), 0.77 - 0.69 (m, 1H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 69: 6-클로로-7-[(2R,4Z)-2-[[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸]-4-(메톡시이미노)피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: 1-tert-부틸 2-메틸 (2R)-4,4-디메톡시피롤리딘-1,2-디카르복실레이트의 합성

MeOH (5 mL) 중 1-tert-부틸 2-메틸 (2R)-4-옥소피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (1.0 g, 4.11 mmol, 1.0 당량)의 용액에 TsOH (35.3 mg, 0.20 mmol, 0.05 당량) 및 트리메톡시메탄 (510.1mg, 4.93 mmol, 1.20당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 추가로 1시간 동안 80℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 PE/EtOAc (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 1-tert-부틸 2-메틸 (2R)-4,4-디메톡시피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (780.2 mg, 65.58%)의 황색 오일을 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 290.1.

단계 2: tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸)-4,4-디메톡시피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

THF (5 mL) 중 1-tert-부틸 2-메틸 (2R)-4,4-디메톡시피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (770.0 mg, 2.661 mmol, 1.0 당량)의 교반한 용액에 LAH (121.2 mg, 3.19 mmol, 1.2 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 추가로 1시간 동안 0℃에서 교반하였다. 물을 사용하여 반응을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (3*50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 수집하고 무수 Na₂SO₄로 건조시켰다. 여과 후, 여액을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 석유 에테르 /EtOAc (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸)-4,4-디메톡시피롤리딘-1-카르복실레이트 (500 mg,71.9%)의 황색 오일을 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]+: 262.1.

단계 3: tert-부틸 (2R)-2-[[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸]-4,4-디메톡시피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

THF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸)-4,4-디메톡시피롤리딘-1-카르복실레이트 (500.0 mg, 1.91 mmol, 1.0 당량)의 교반한 용액에 2,3-디클로로-6-메톡시피리딘 (408.7 mg, 2.29 mmol, 1.2 당량) 및 KHMDS (763.3 mg, 3.82 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 추가로 1시간 동안 0℃에서 교반하였다. 물을 사용하여 반응을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc(3*10 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 수집하고 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 PE/EtOAc (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 tert-부틸 (2R)-2-[[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸]-4,4-디메톡시피롤리딘-1-카르복실레이트 (300 mg, 38.9%)의 황색 오일을 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]+: 403.1.

단계 4: 3-클로로-2-[[(2R)-4,4-디메톡시피롤리딘-2-일]메톡시]-6-메톡시피리딘의 합성

MeOH (2 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-[[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸]-4,4-디메톡시피롤리딘-1-카르복실레이트 (300.0 mg, 0.74 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 TsOH (128.2 mg, 0.74 mmol, 1.0 당량) 및 트리메틸 오르토포르메이트 (39.5 mg, 0.37 mmol, 0.5 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 추가로 2시간 동안 60℃에서 교반하였다. 물을 사용하여 반응을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc(3*10 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 수집하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시켰다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 PE/EtOAc (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 3-클로로-2-[[(2R)-4,4-디메톡시피롤리딘-2-일]메톡시]-6-메톡시피리딘 (282 mg, 98.2%)을 황색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 303.1.

단계 5: 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸]-4,4-디메톡시피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (2 mL) 중 3-클로로-2-[[(2R)-4,4-디메톡시피롤리딘-2-일]메톡시]-6-메톡시피리딘 (120.0 mg, 0.39 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 TEA (120.3 mg, 1.18 mmol, 3.0 당량) 및 6-클로로-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-7-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (165.2 mg, 0.39 mmol, 1.0 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 추가로 1시간 동안 100℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 물 중 5- 60% 아세토니트릴을 사용하여 잔류물을 역상 플래시 컬럼으로 정제하였다. 그 결과 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸]-4,4-디메톡시피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (130 mg, 46.8%)의 황색 고체를 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]+: 699.2.

단계 6: 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸]-4-옥소피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

THF (5 mL) 중 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸]-4,4-디메톡시피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (120.0 mg, 0.17 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 H₂O (2 mL) 및 HCl (5 mL)을 첨가하였다. 생성된 용액을 1시간 동안 25℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 물 중 5- 60% 아세토니트릴을 사용하여 잔류물을 역상 플래시 컬럼으로 정제하였다. 그 결과 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸]-4-옥소피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (38 mg, 33.90%)을 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]+: 653.1.

단계 7: 6-클로로-7-[(2R,4Z)-2-[[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸]-4-(메톡시이미노)피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

EtOH (2 mL) 중 6-클로로-7-[(2R)-2-[[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸]-4-옥소피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (38.0 mg, 0.05 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 K₂CO₃ (16.0 mg, 0.11 mmol, 2.0 당량) 및 O-메틸하이드록실아민 하이드로클로라이드 (19.4 mg, 0.23 mmol, 4.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 농축시켰다. 그 결과 6-클로로-7-[(2R,4Z)-2-[[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸]-4-(메톡시이미노)피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (3.2 mg, 8.0%)을 백색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 682.1. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.57 (m, 1H), 8.30 - 8.14 (m, 2H), 7.79 - 7.54 (m, 2H), 6.50 (m, 2H), 6.37 (m, 1H), 5.16 (m, 1H), 4.45 (m, 1H), 4.37 - 4.18 (m, 2H), 4.11 (m, 2H), 3.94 - 3.74 (m, 6H), 3.67 (s, 4H), 3.27 - 3.20 (m, 1H), 3.06 (s, 1H), 2.68 (s, 1H), 2.16 (s, 6H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 70: 7-[(3R)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-일]-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-6-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: (5R)-5-[[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸]피롤리딘-2-온의 합성

디클로로메탄(100 mL) 중 5-하이드록시메틸피롤리딘-2-온 (30.0 g, 260.57 mmol，1.0 당량)의 용액에 이미다졸 (19.5 g, 286.62 mmol, 1.10 당량), 4- 디메틸아미노피리딘 (3.1 g, 26.05 mmol, 0.10 당량)을 첨가한 후 tert-부틸디페닐실릴 클로라이드 (157.5 g, 573.25 mmol, 2.20 당량)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 서서히 실온으로 가온하고 2시간 완료시, 디클로로메탄으로 희석하고, 물, 염수로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 그 결과 (5R)-5-[[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸]피롤리딘-2-온 (92.1 g, 99.98%)을 황색 오일로 얻었다, LCMS (ESI) [M+H]⁺: 354.1. ¹H NMR (300 MHz, 클로로포름-d) δ 7.73 - 7.60 (m, 4H), 7.48 - 7.34 (m, 6H), 5.65 - 5.32 (m, 1H), 4.10 - 3.49 (m, 3H), 1.52 (m, 2H), 1.35 - 1.23 (m, 2H), 1.13 - 1.01 (m, 9H).

단계 2: tert-부틸 (2R)-2-[[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸]-5-옥소피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

아세토니트릴 (200 mL) 중 상기 수득한 화합물 (92.1 g, 260.51 mmol, 1.0 당량)의 교반한 용액에 4-디메틸아미노피리딘 (35.0 g, 286.56 mmol, 1.1 당량) 및 tert-부틸디카르보네이트 (62.5 g, 286.56 mmol, 1.1 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 물을 사용하여 반응을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (3*300 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 수집하고 무수 Na₂SO₄로 건조시켰다. 여과 후, 여액을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 석유 에테르 /EtOAc (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 tert-부틸 (2R)-2-[[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸]-5-옥소피롤리딘-1-카르복실레이트 (79.8 g, 67.5%)를 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 454.2.¹H NMR (300 MHz, 클로로포름-d) δ 7.70 - 7.59 (m, 4H), 7.50 - 7.35 (m, 6H), 4.28 - 4.18 (m, 1H), 3.91 (dd, J = 10.4, 4.2 Hz, 1H), 3.72 (dd, J = 10.4, 2.5 Hz, 1H), 2.81 (dt, J = 17.6, 10.4 Hz, 1H), 2.53 - 2.38 (m, 1H), 2.25 - 2.04 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.07 (s, 9H).

단계 3: tert-부틸 (2R)-2-[[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸]-2,3-디하이드로피롤-1-카르복실레이트의 합성

리튬 트리에틸보로하이드라이드 (11 mL of 1.0 M/THF, 11.40 mmol, 1.0 당량)를 톨루엔 (20 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-[[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸]-5-옥소피롤리딘-1-카르복실레이트 (5.0 g, 11.02 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 -50℃에서 질소 분위기 하에 30분에 걸쳐서 적가하고, 내부 온도를 -50℃ 내지 -45℃로 유지하면서 혼합물을 추가로 35분 동안 교반하였다. 후니그 염(Hunig's base) (3.7 g, 28.6 mmol, 2.0 당량)을 10분에 걸쳐 적가하였다. 그런 다음, DMAP (20.0 mg, 0.14 mmol, 0.01 당량)를 한 배치로 첨가한 다음, 내부 온도를 -50℃ 내지 -45℃로 유지하면서 트리플루오로아세트산 무수물 (2.6 g, 12.7 mmol, 1.1 당량)을 15분에 걸쳐 첨가하였다. 냉욕을 10분 후에 제거하고, 반응 혼합물을 주위 온도로 상승시키면서 14시간 동안 교반하였다. 이것을 톨루엔 (20 mL)으로 희석하고, 빙수욕으로 냉각시키고, 물 (40 mL)로 5분에 걸쳐 천천히 처리하였다. 상을 분리하고, 유기층을 물 (100 mL, 2x)로 세척하고 진공에서 농축하였다. 조 물질을 플래시 크로마토그래피 (실리카겔; 헥산 중 5% EtOAc)로 정제하였다. 그 결과 tert-부틸 (2R)-2-[[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸]-2,3-디하이드로피롤-1-카르복실레이트 (2.5 g, 52.0%)를 황색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 438.2.¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 7.60 m, 4H), 7.44 (m, 6H), 6.48 (s, 1H), 5.05 (m, 1H), 4.12 (m, 1H), 3.69 (s, 2H), 2.74 (m, 2H), 1.32 (m, 9H), 0.99 (m, 9H).

단계 4: tert-부틸 (3R)-3-[[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸]-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트의 합성

디클로로메탄 (20 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-[[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸]-2,3-디하이드로피롤-1-카르복실레이트 (2.5 g, 5.68 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 디에틸아연 (헥산 중 1M, 6.2 mL, 1.4 당량)의 용액을 첨가한 후 디요오도메탄 (0.68 mL, 8.55 mmol, 1.5 당량)을 15분에 걸쳐서 첨가하고 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 서서히 실온으로 가온하고 3시간 동안 교반하였다. 포화 중탄산나트륨 용액을 첨가하여 반응 혼합물의 pH를 8로 조정하였다. 물을 사용하여 반응을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (3*200 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 수집하고 무수 Na₂SO₄로 건조시켰다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 석유 에테르 /EtOAc (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 (1.7 g, 65.8%) of tert-부틸 (3R)-3-[[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸]-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트를 황색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 452.2.¹H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.69 - 7.62 (m, 4H), 7.39 (m, 6H), 3.92 - 3.61 (m, 3H), 3.18 (s, 1H), 2.33 (s, 1H), 2.04 (m, 1H), 1.51 (m, 1H), 1.48 - 1.22 (m, 9H), 1.05 (s, 9H), 0.87 (m, 1H), 0.34 (s, 1H).

단계 5: tert-부틸 (3R)-3-(하이드록시메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트의 합성

건조 테트라하이드로푸란 (20 mL) 중 tert-부틸 (3R)-3-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (1.5 g, 3.32 mmol, 1.00 당량)의 혼합물에 테트라부틸암모늄 플루오라이드 (테트라하이드로푸란 중 1M, 3.3 mL, 1.00 당량)를 10분에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물을 서서히 실온으로 가온하고 30분 동안 교반하였다. 물을 사용하여 반응을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (3*50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 수집하고 무수 Na₂SO₄로 건조시켰다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 석유 에테르 /EtOAc (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 tert-부틸 (3R)-3-(하이드록시메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (618 mg, 90.50%)를 황색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 214.1.¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 4.86 - 4.60 (m, 1H), 3.71 - 3.53 (m, 1H), 3.52 - 3.42 (m, 1H), 3.30 - 3.18 (m, 1H), 3.06 (s, 1H), 2.08 (s, 1H), 2.00 - 1.78 (m, 1H), 1.55 - 1.46 (m, 1H), 1.40 (d, J = 2.1 Hz, 9H), 0.84 - 0.68 (m, 1H), 0.37 - 0.07 (m, 1H).

단계 6: tert-부틸 (3R)-3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트의 합성

THF (5 mL) 중 tert-부틸 (3R)-3-(하이드록시메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (500.0 mg, 2.34 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 2,3-디클로로-6-메톡시피리딘 (623.2 mg, 3.52 mmol, 1.5 당량)을 첨가하였다. 생성된 용액을 1시간 동안 0℃에서 교반하였다. 물을 사용하여 반응을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (3*10 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 수집하고 무수 Na₂SO₄로 건조시켰다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 석유 에테르 /EtOAc (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 tert-부틸 (3R)-3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (432.2 mg, 51.7%)를 황색 오일로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 355.1. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 6.97 m, 1H), 6.17 (m, 1H), 4.36 - 4.26 (m, 2H), 4.11 - 3.94 (m, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.17 - 3.04 (m, 1H), 2.21 - 1.99 (m, 2H), 1.49 - 1.26 (m, 9H), 0.90 - 0.75 (m, 1H), 0.42 - 0.24 (m, 1H).

단계 7: (3R)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산의 합성

1,4-디옥산 (3 mL) 중 tert-부틸 (3R)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (200 mg, 0.56 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 1,4-디옥산 (1 mL) 중 4 M HCl을 0℃에서 첨가하고 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 물을 사용하여 반응을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (3*10 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 수집하고 무수 Na₂SO₄로 건조하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 석유 에테르 /EtOAc (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 그 결과 (3R)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로 [3.1.0]헥산 (121.6 mg, 84.5%)을 백색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 255.1.

단계 8: 7-[(3R)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-일]-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-6-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (2 mL) 중 (3R)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산 (100 mg, 0.39 mmol, 1.0당량)의 교반한 용액에 트리에틸아민 (118.8 mg, 1.17 mmol, 3.0 당량) 및 1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-6,7-디플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (172 mg, 0.43 mmol, 1.1 당량)을 첨가하고 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 침전된 고체를 수집하고 조 생성물을 다음 조건 (컬럼: XBridge Shield RP18 OBD 컬럼,, 5um,19*150mm; 이동상 A:물(10MMOL/L NH₄HCO₃), 이동상 B:ACN; 유속:25 mL/분; 구배: 7분 후에 25 B에서 48 B로; 254/220 nm; RT1:5.90; RT2:; 주입 부피: ml; 수행 횟수:;)에서 Prep-HPLC로 정제하였다. 그 결과 7-[(3R)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-일]-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-6-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (9.3 mg, 3.7%)을 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 635.2 ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 8.68 - 7.92 (m, 2H), 8.56 - 7.52 (m, 3H), 6.85 - 6.25 (m, 3H), 4.65 - 4.23 (m, 3H), 4.15 - 3.87 (m, 2H), 3.79 - 3.65 (m, 5H), 3.30 - 3.11 (m, 2H), 2.31 - 1.92 (m, 8H), 1.82 -1.62 (m, 1H), 0.62 - 0.95(m, 1H), 0.36 - 0.28 (m, 1H).

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 71: 7-[(2R)-2-[[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸]-4-(1H-피라졸-4-일)피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-6-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: 1-tert-부틸 2-메틸 (2R)-4-[1-(옥산-2-일)피라졸-4-일]-2,3-디하이드로피롤-1,2-디카르복실레이트의 합성

1,4-디옥산 중 1-tert-부틸 2-메틸 (2R)-4-(트리플루오로메탄설포닐옥시)-2,3-디하이드로피롤-1,2-디카르복실레이트 (3 g, 7.993 mmol, 1.00 당량) 및 1-(옥산-2-일)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸 (2.22 g, 7.993 mmol, 1 당량), Na₂CO₃ (2.54 g, 23.979 mmol, 3 당량), Pd(dppf)Cl₂ CH₂Cl₂ (651 mg, 0.8 mmol, 0.1 당량)의 혼합물을 1시간 동안 100℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 에탄올 (3x10 mL)로 세척하였다. 여액을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 PE / EA (5:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 1-tert-부틸 2-메틸 (2R)-4-[1-(옥산-2-일)피라졸-4-일]-2,3-디하이드로피롤-1,2-디카르복실레이트 (3 g, 99.44%)를 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 378.

단계 2: 1-tert-부틸 2-메틸 (2R)-4-[1-(옥산-2-일)피라졸-4-일]피롤리딘-1,2-디카르복실레이트의 합성

MeOH 중 1-tert-부틸 2-메틸 (2R)-4-[1-(옥산-2-일)피라졸-4-일]-2,3-디하이드로피롤-1,2-디카르복실레이트 (3 g, 7.9 mmol, 1 당량)의 용액을 1시간 동안 실온에서 수소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 MeOH (3x10 mL)로 세척하였다. 여액을 감압 하에 농축시켰다. 그 결과 1-tert-부틸 2-메틸 (2R)-4-[1-(옥산-2-일)피라졸-4-일]피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (2.8 g, 92.84%)를 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 380.

단계 3: tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸)-4-[1-(옥산-2-일)피라졸-4-일]피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

THF 중 1-tert-부틸 2-메틸 (2R)-4-[1-(옥산-2-일)피라졸-4-일]피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (2.8 g, 7.3 mmol, 1 당량)의 교반한 용액에 LiBH₄ (241 mg, 11 mmol, 1.5 당량)를 0℃에서 질소 분위기 하에 분할하여 적가하였다. 반응을 물로 실온에서 켄칭하였다. 수성층을 EtOAc (3x100 mL)로 추출하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 PE / EA (1:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸)-4-[1-(옥산-2-일)피라졸-4-일]피롤리딘-1-카르복실레이트 (1.5 g, 57.84%)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 352.

단계 4: tert-부틸 (2R)-2-[[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸]-4-[1-(옥산-2-일)피라졸-4-일]피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

DMSO 중 tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸)-4-[1-(옥산-2-일)피라졸-4-일]피롤리딘-1-카르복실레이트 (400 mg, 1.1 mmol, 1 당량) 및 3-클로로-2-플루오로-6-메톡시피리딘 (220 mg, 1.3 mmol, 1.2 당량)의 교반한 용액에 t-BuOK (383 mg, 3.4 mmol, 3 당량)를 80℃에서 질소 분위기 하에 분할하여 적가하였다. 잔류물을 다음 조건에서 역 플래시 크로마토그래피로 정제하였다: 컬럼, 실리카겔; 이동상, 물 중 MeCN, 10분 후에 10%에서 50%로 구배; 검출기, UV 254 nm. 그 결과 tert-부틸 (2R)-2-[[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸]-4-[1-(옥산-2-일)피라졸-4-일]피롤리딘-1-카르복실레이트 (130 mg, 23.17%)를 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 493.

단계 5: 3-클로로-6-메톡시-2-[[(2R)-4-(1H-피라졸-4-일)피롤리딘-2-일]메톡시]피리딘의 합성

DCM 중 tert-부틸 (2R)-2-[[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸]-4-[1-(옥산-2-일)피라졸-4-일]피롤리딘-1-카르복실레이트 (60 mg, 0.1 mmol, 1 당량) 및 TFA (1 mL)의 용액을 1시간 동안 실온에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 그 결과 3-클로로-6-메톡시-2-[[(2R)-4-(1H-피라졸-4-일)피롤리딘-2-일]메톡시]피리딘 (30 mg, 79.83%)을 황색 고체로 얻었다. LCMS (ESI) [M+H]⁺: 393.

단계 6: 7-[(2R)-2-[[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸]-4-(1H-피라졸-4-일)피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-6-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO 중 3-클로로-6-메톡시-2-[[(2R)-4-(1H-피라졸-4-일)피롤리딘-2-일]메톡시]피리딘 (55.53 mg, 0.180 mmol, 1.2 당량) 및 1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-6,7-디플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (60 mg, 0.15 mmol, 1 당량),　TEA (45 mg, 0.45 mmol, 3 당량)의 용액을 1시간 동안 100℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 조 생성물 (mg)을 다음 조건 (컬럼: Gemini-NX C18 AXAI Packed, 21.2*150mm 5um; 이동상 A: 물(0.1%FA), 이동상 B: ACN; 유속: 25 mL/분; 구배: 12분 후에 24% B에서 44% B로, 44% B; 파장: 220 nm; RT1(분): 11.68; 수행 횟수: 0)에서 Prep-HPLC로 정제하여 7-[(2R)-2-[[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸]-4-(1H-피라졸-4-일)피롤리딘-1-일]-1-[6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일]-6-플루오로-4-옥소퀴놀린-3-카르복실산 (31.2 mg, 30.21%)을 황색 고체로 수득하였다.¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 12.53 (s, 1H) 8.58 - 8.35 (m, 1H), 8.34 - 8.07 (m, 1H), 7.76 - 7.29 (m, 5H), 6.67 - 6.28 (m, 2H), 6.17 - 5.99 (m, 1H), 4.66 - 4.26 (m, 3H), 4.08 - 3.94 (m, 2H), 3.90 - 3.75 (m, 2H), 3.66 - 3.47 (m, 5H), 3.28 - 3.10 (m, 2H), 2.72 - 2.54 (m, 1H), 2.13 (s, 7H).. MS (ESI): m/z 689.25 [M+H]⁺

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 72: 7-[(3R)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-일]-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-6-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: 1-tert-부틸 2-에틸 (2R)-2,3-디하이드로-1H-피롤-1,2-디카르복실레이트의 합성

톨루엔 (10 mL) 중 1-tert-부틸 2-에틸 (2R)-5-옥소피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (6 g, 23.3 mmol)의 교반한 용액에 트리에틸 리튬 보란 (THF 중 1 M) (25.6 mL, 25.6 mmol)을 -78℃에서 첨가하고 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 -78℃로 재냉각시키고, 4-디메틸아미노피리딘 (56.9 mg, 466 μmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (25.5 mL, 139 mmol)에 이어서 트리플루오로아세트산 무수물 (3.92 mL, 27.9 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온이 되도록 하고 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 물 (50 mL) (0℃에서 천천히 첨가함)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (2 X 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고 농축하여 조질의 화합물을 얻었다. 조 생성물을 용리액으로 5% EtOAc/헥산을 사용하는 100-200 메쉬 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 1-tert-부틸 2-에틸 (2R)-2,3-디하이드로-1H-피롤-1,2-디카르복실레이트 (4.05 g, 72%)를 무색 액체로 수득하였다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.66-6.51 (m, 1H), 4.96-4.90 (m, 1H), 4.70-4.54 (m, 1H), 4.28-4.15 (m, 2H), 3.12-3.00 (m, 1H), 2.69-2.60 (m, 1H), 1.48-1.44 (m, 9H), 1.31-1.24 (m, 3H).

단계 2: 2-tert-부틸 3-에틸 (3R)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2,3-디카르복실레이트의 합성

톨루엔 (30 mL) 중 디요오도메탄(8.86 g, 33.1 mmol) 의 교반한 용액을 -40℃로 냉각시키고, 디에틸아연 (헥산 중 1 M) (18.2 mL, 18.2 mmol)를 천천히 첨가하고 60분 동안 교반하였다. 이어서 1-tert-부틸 2-에틸 (2R)-2,3-디하이드로-1H-피롤-1,2-디카르복실레이트 (2 g, 8.28 mmol)를 첨가하고 혼합물을 6시간 동안 실온이 되도록 하였다. 반응 덩어리를 포화 중탄산 암모늄 (20 mL)로 켄칭하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고 여액을 에틸 아세테이트 (2 x 35 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 (30 mL)로 세척하고 황산나트륨 상에서 건조하고, 감압 하에 농축하여 조물질을 얻었다. 용리액으로 7% EtOAc/헥산을 사용하는 100-200 메쉬 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 조 생성물을 정제하여 2-tert-부틸 3-에틸 (3R)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2,3-디카르복실레이트 (510 mg, 24%)를 황색 액체 (이성질체 혼합물)로 얻었다.

1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.61-4.51 (m, 1H), 4.25-4.09 (m, 2H), 3.56-3.52 (m, 1H), 2.65-2.58 (m, 1H), 2.04-2.00 (m, 1H), 1.46-1.40 (m, 10H), 1.31-1.24 (m, 3H) 0.92-0.88 (m, 1H), 0.75-0.73 (m, 1H).

단계 3: tert-부틸 (3R)-3-(하이드록시메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트의 합성

THF (10 mL) 중 2-tert-부틸 3-에틸 (3R)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2,3-디카르복실레이트 (550 mg, 2.15 mmol)의 교반한 용액에, 리튬 보로하이드라이드 (THF 중 1 M) (3.22 mL, 3.22 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 6시간 동안 유지하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 포화 암모늄 클로라이드 (10 mL) (0℃에서 천천히 첨가함)로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (2 X 40 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고 농축하여 tert-부틸 (3R)-3-(하이드록시메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (410 mg)를 황색 액체로 수득하고, 이는 다음 단계로 진행하기에 충분히 순수하다.

1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.86-4.85 (m, 1H), 4.40-4.34 (m, 1H), 3.62-3.61 (m, 1H), 3.50-3.47 (m, 2H), 2.47-2.41 (m, 1H), 1.78-1.71 (m, 1H), 1.47-1.43 (m, 10H), 0.89-0.85 (m, 1H), 0.40-0.39 (m, 1H).

단계 4: tert-부틸 (3R)-3-{[(6-메톡시-3-니트로피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트의 합성

THF (15 mL) 중 tert-부틸 (3R)-3-(하이드록시메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (800 mg, 3.75 mmol)의 교반한 용액을 0℃로 냉각시키고, 수소화나트륨 (223 mg, 5.62 mmol)을 천천히 첨가하고 5분 동안 교반하였다. 이어서, 2-클로로-6-메톡시-3-니트로피리딘 (848 mg, 4.50 mmol)을 첨가하고 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 덩어리를 포화 염화암모늄 (5 mL)으로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (2 x 40 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 (40 mL)로 세척하고 황산나트륨 상에서 건조하였다. 감압 하에 농축하여 조물질을 얻었다. 용리액으로 7% EtOAc/헥산을 사용하는 100-200 메쉬 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 조 생성물을 정제하여 tert-부틸 (3R)-3-{[(6-메톡시-3-니트로피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (720 mg, 52%)를 황색 액체로 얻었다.

MS (ESI): m/z 366.0 [M+H]⁺

단계 5: tert-부틸 (3R)-3-{[(3-아미노-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트의 합성

tert-부틸 (3R)-3-{[(6-메톡시-3-니트로피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (600 mg, 1.64 mmol)의 교반한 용액에, 탄소 상 10% 팔라듐 (174 mg, 1.64 mmol)을 첨가하고 혼합물을 수소 분위기 (풍선 압력)에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 셀라이트 패드를 EtOAc: MeOH (1:1, 40 mL)로 수차례 세척하고 합한 여액을 감압 하에 농축하여 tert-부틸 (3R)-3-{[(3-아미노-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (342 mg, 62%)를 갈색 액체로 얻었다.

MS (ESI) 336.0 m/z [M+H]+

단계 6: tert-부틸 (3R)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트의 합성

ACN (5 mL) 중 tert-부틸 (3R)-3-{[(3-아미노-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (500 mg, 1.49 mmol)의 교반한 용액을 0 내지 5℃로 냉각시키고, 2-메틸-2-프로필니트리트 (263 μL, 2.23 mmol)를 첨가하고 10분 동안 교반하고, 이 반응 혼합물에, 염화구리(II) (299 mg, 2.23 mmol)를 첨가하고 혼합물을 25 내지 30℃에서 10분 동안 교반한 후, 50 내지 55℃에서 30분 동안 교반하였다. 염화리튬 (126 mg, 2.98 mmol)을 첨가하고 30분 동안 계속 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하고, 헥산 중 5% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카겔 (100-200 메쉬) 컬럼 크로마토그래피를 사용하여 정제하여 tert-부틸 (3R)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (138 mg, 26%)를 담황색 검으로 얻었다.

MS (ESI): m/z 355.0 [M+H]+

단계 7: (3R)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산의 합성

1,4-디옥산 (1 mL) 중 tert-부틸 (3R)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (150 mg, 422 μmol)의 교반한 용액에, 1,4-디옥산 (0.5 mL) 중 4 M HCl을 0℃에서 첨가하고 혼합물을 6시간 동안 실온에서 교반하였다. 휘발물을 감압 하에 증발시키고, 조질의 화합물을 디에틸 에테르 (20 mL)로 분쇄하여 (3R)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산 (102 mg, 95%)을 회백색 고체로 수득하였다.

MS (ESI): m/z 255.0 [M+H]⁺

단계 8: 7-[(3R)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-일]-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-6-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (0.5 mL) 중 (3R)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산 (83.5 mg, 328 μmol)의 교반한 용액을 0℃로 냉각시키고, 트리에틸아민 (195 μL, 1.36 mmol)을 천천히 첨가하고 5분 동안 교반하였다. 이어서 1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-6,7-디플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (110 mg, 274 μmol)을 첨가하고 130℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙냉수 (10 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (2 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 (10 mL)로 세척하고 황산나트륨 상에서 건조하였다. 감압 하에 농축하여 조물질을 얻었다. 조 생성물을 디에틸 에테르로 분쇄하고 진공 하에서 건조하였다. 수득된 고체를 분취용 RP HPLC로 정제하였다. 생성물을 함유하는 관련 분획을 동결 건조하여 7-[(3R)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-일]-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-6-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (34.3 mg, 20%)을 담황색 고체로 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 15.40 (br s, 1H), 8.51 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.28-8.26 (m, 1H), 7.87 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 7.78-7.73 (m, 1H), 7.71-7.66 (m, 1H), 6.58-6.47 (m, 2H), 6.37-6.34 (m, 1H), 4.78-4.71 (m, 1H), 4.26-4.12 (m, 2H), 4.09-4.03 (m, 2H), 3.84-3.77 (m, 2H), 3.72 (d, J = 3.2 Hz, 3H), 3.22-3.13 (m, 2H), 2.61-2.58 (m, 1H), 2.13 (s, 6H), 2.08-2.02 (m, 1H), 1.63-1.60 (m, 1H), 0.97-0.94 (m, 1H), 0.74-0.70 (m, 1H); MS (ESI): m/z 635.4 [M+H]⁺

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 73: 7-((1R,3R,5R)-3-(((3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시)메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-일)-1-(6-(3-(디메틸아미노)아제틴-1-일)피리딘-3-일)-6-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: 3-클로로-6-메톡시피리딘-2-아민의 합성

H2O (75 mL) 및 EtOH (75 mL) 중 2-클로로-6-메톡시-3-니트로피리딘 (15 g, 79.5 mmol)의 교반한 용액에 암모늄 클로라이드 (21.2 g, 397 mmol)를 첨가하고 0℃로 냉각시켰다. 이어서 철 (22.1 g, 397 mmol) 분말을 분할하여 첨가하고 80℃로 가열하고 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 여액을 증발시켰다. 조질의 잔류물을 DCM (500 mL)에 용해시키고 물 (2 x 100 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 황산나트륨 상에서 건조하고 증발 건조하여 조물질을 수득하였다. 조질의 화합물을 용리액으로 5% EtOAc/헥산을 사용하는 100-200 메쉬 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수집한 순수 분획을 증발 건조하여 2-클로로-6-메톡시피리딘-3-아민 (12.0 g, 95%)을 황색 고체로 얻었다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.08 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.88 (brs, 2H).

단계 2: 2,3-디클로로-6-메톡시피리딘의 합성

ACN (50 mL) 중 2-클로로-6-메톡시피리딘-3-아민 (8 g, 50.4 mmol)의 교반한 용액을 0 내지 5℃로 냉각시키고, 2-메틸-2-프로필니트리트 (8.95 mL, 75.6 mmol)를 첨가하고 10분 동안 교반하였다. 동시에 ACN (30 mL) 중 염화구리(II) (10.1 g, 75.6 mmol) 및 염화리튬 (4.23 g, 100 mmol)의 혼합물을 55 내지 60℃로 20분 동안 가열하고, 상기에서 얻어진 용액에 첨가하고 동일 온도에 추가로 30분 동안 유지하였다. RM을 TLC로 모니터링하였다. RM을 감압 하에 농축하고, 헥산 중 5% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카겔 (100-200 메쉬) 컬럼 크로마토그래를 사용하여 정제하고, 각각의 분획을 농축하여 2,3-디클로로-6-메톡시피리딘 (2.80 g, 31%)을 회백색 고체로 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.64 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H).

톨루엔 (400 mL) 중 1-tert-부틸 2-에틸 (2R)-5-옥소피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (50 g, 194 mmol)의 교반한 용액에 리튬 트리에틸보로하이드라이드 (213 mL, 213 mmol) (THF 중 1 M)를 -78℃에서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 유지하였다. 4-디메틸아미노피리딘 (709 mg, 5.81 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (212 mL, 1.16 mol)에 이어, 트리플루오로아세트산 무수물 (32.6 mL, 232 mmol)을 -78℃에서 첨가한 후, 천천히 실온이 되도록 하고 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 물 (150 mL) (0℃에서 천천히 첨가함)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (2 X 200 mL)로 추출하고, 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고 농축하여 조질의 화합물을 얻었다. 용리액으로 5% EtOAc/헥산을 사용하는 100-200 메쉬 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 조 생성물을 정제하여 1-tert-부틸 2-에틸 (2R)-2,3-디하이드로-1H-피롤-1,2-디카르복실레이트 (27.0 g, 58%)를 무색 액체로 얻었다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 6.65-6.51 (m, 1H), 4.95-4.90 (m, 1H), 4.66-4.54 (m, 1H), 4.28-4.15 (m, 2H), 3.12-3.00 (m, 1H), 2.69-2.60 (m, 1H), 1.48-1.44 (m, 9H), 1.31-1.24 (m, 3H).

톨루엔 (300mL) 중 1-tert-부틸 2-에틸 (2R)-2,3-디하이드로-1H-피롤-1,2-디카르복실레이트 (20 g, 82.8 mmol)의 교반한 용액을 -40℃로 냉각시키고, 디에틸아연 (헥산 중 1 M) (182 mL, 182 mmol)을 천천히 첨가하고 60분 동안 교반하였다. 이어서 톨루엔 (100 mL) 중 디요오도메탄 (26.6 mL, 331 mmol)을 첨가하고 (백색 현탁액이 형성됨), -40℃에서 실온 (RT가 되도록 하는 동안, 본질적으로 반응은 약한 발열이 있다)으로 6시간 동안 교반하였다. 반응은 TLC로 모니터링하였다. 반응 덩어리를 포화 NaHCO3 (200 mL)로 켄칭하고 셀라이트 패드를 통해 여과하고 여액을 에틸 아세테이트 (2 x 250 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 (100 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고 감압 하에 농축하여 조질을 얻었다. 용리액으로 2-3% EtOAc/헥산을 사용하는 230-400 메쉬 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 조 생성물을 정제하여 2-tert부틸 3-에틸 (1R,3R,5R)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2,3-디카르복실레이트 (6.30 g, 24.6 mmol, 상부점) 및 2-tert-부틸 3-에틸 (1S,3R,5S)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산2,3-디카르복실레이트 (3.00 g, 11.7 mmol, 바닥점)를 황색 액체로 얻었다. 주요 이성질에 대한 ¹H NMR: (400 MHz, 90℃에서의 VT, DMSO-d ₆) δ 4.45 (dd, J = 3.2, 11.6 Hz, 1H), 4.10 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 3.42-3.37 (m, 1H), 2.56-2.46 (m, 1H), 1.92-1.86 (m, 1H), 1.58-1.50 (m, 1H), 1.37 (s, 9H), 1.18 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 0.75-0.70 (m, 1H), 0.69-0.62 (m, 1H).

THF (25 mL ) 중 2-tert-부틸 3-에틸 (1R,3R,5R)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2,3디카르복실레이트 (3.3 g, 12.9 mmol)의 교반한 용액에 리튬보로하이드라이드 (9.65 mL, 19.3 mmol) (THF 중 2 m)를 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 6시간 동안 유지하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 (20mL) (0℃에서 천천히 첨가함)으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (2 X 50 mL)로 추출하고, 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고 농축하여 조질의 tert-부틸 (1R,3R,5R) 3-(하이드록시메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (2.70 g))를 황색 액체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃-d) δ 4.87-4.85 (m, 1H), 4.36-4.32 (m, 1H), 3.53-3.42 (m, 4H), 2.49-2.42 (m, 1H), 1.50-1.49 (m, 10H), 0.82-0.77 (m, 1H), 0.41-0.40 (m, 1H)

THF (80 mL) 중 tert-부틸 (1R,3R,5R)-3-(하이드록시메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (8 g, 37.5 mmol)의 교반한 용액에 2,3-디클로로-6-메톡시피리딘 (8.01 g, 45.0 mmol) 및 칼륨 비스(트리메틸실릴)아자니드 (75.0 mL, 75.0 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 실온이 되도록 1시간 동안 두었다. 반응은 TLC로 모니터링하였다. 반응 덩어리를 물 (50 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (2 x 70 mL)로 추출하고, 유기층을 염수 (50 mL)로 세척하고 황산나트륨 상에서 건조하였다. 감압 하에 농축하여 조물질을 얻었다. 용리액으로 7% EtOAc/헥산을 사용하는 100-200 메쉬 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 조 생성물을 정제하여 tert-부틸 (1R,3R,5R)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (6.40 g, 48%)를 황색 액체로 수득하였다. MS (ESI): m/z 355.0 [M+H]⁺

1,4-디옥산 (30 mL) 중 tert-부틸 (1R,3R,5R)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (10 g, 28.1 mmol)의 교반한 용액에, 1,4-디옥사 중 4 M HCl (40 mL)을 0℃에서 첨가하고 혼합물을 6시간 동안 실온에서 교반하였다. 휘발물을 감압 하에 증발시키고, 조질의 화합물을 디에틸 에테르 (100 mL)로 분쇄하여 (1R,3R,5R)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산 하이드로클로라이드 (7.51 g, 92%)를 회백색 고체로 얻었다. MS (ESI): m/z 255.0 [M+H]⁺(유리 염기의 경우).

DMSO (100 mL) 중 (1R,3R,5R)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산 (6.52 g, 22.5 mmol)의 교반한 용액을 0℃로 냉각시키고, 트리에틸아민 (15.65 mL, 112.5 mmol)을 천천히 첨가하고 5분 동안 교반하였다. 이어서 1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-6,7-디플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (9 g, 22.5 mmol)을 첨가하고 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응은 TLC로 모니터링하였다. 반응 덩어리를 빙냉수 (20 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (2 x 50 mL)로 추출하고, 유기층을 염수 (20 mL)로 세척하고 황산나트륨 상에서 건조하였다. 감압 하에 농축하여 조물질을 얻었다. 조 생성물을 디에틸 에테르로 세척하고 진공 하에 건조한 후, prep HPLC로 추가로 정제하고 분획을 동결 건조하여 7-[(1R,3R,5R)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-일]-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-6-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (5.65 g, 39.6%)을 담갈색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 15.40 (br s, 1H), 8.51 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.27-8.26 (m, 1H), 7.87 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 7.73-7.71 (m, 1H), 7.69-7.65 (m, 1H), 6.58-6.52 (m, 1H), 6.49-6.33 (m, 2H), 4.78-4.71 (m, 1H), 4.24-4.14 (m, 2H), 4.07-4.03 (m, 2H), 3.81-3.78 (m, 2H), 3.72 (d, J = 3.2 Hz, 3H), 3.22-3.13 (m, 2H), 2.61-2.58 (m, 1H), 2.13 (s, 6H), 2.08-2.02 (m, 1H), 1.63-1.60 (m, 1H), 0.97-0.94 (m, 1H), 0.74-0.70 (m, 1H); MS (ESI) : m/z 635.1. [M+H]⁺.

Prep-HPLC 조건: Kinetex, C-18 컬럼, 250 x 21.2 x 5 μm, A: 0.1% FA 완충액, B: ACN, 0/10, 10/30,20/40; 희석제: 물/아세토니트릴.

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 74: 7-[(1S,3R,5S)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-일]-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-6-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: (5R)-5-{[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸}피롤리딘-2-온의 합성

DCM (150 mL) 중 (5R)-5-(하이드록시메틸)피롤리딘-2-온 (5 g, 43.4 mmol)의 교반한 용액에 이미다졸 (6.5 g, 95.4 mmol)에 이어 4-디메틸아미노피리딘 (530 mg, 4.33 mmol)을 첨가하고 0℃로 냉각시켰다. 이어서 tert-부틸(클로로)디페닐 실란 (11.8 mL, 45.4 mmol)를 적가하고 천천히 실온에서 16시간 동안 교반되도록 하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고 DCM으로 추출하였다. 유기층을 염수 용액으로 세척하고 무수 황산나트륨상에서 건조하고, 증발 건조하여 조질의 (5R)-5-{[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸}피롤리딘-2-온 (18.0 g)을 고무질 액체로 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에 진행하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.78-7.72 (m, 1H), 7.68-7.60 (m, 3H), 7.48-7.34 (m, 6H), 5.78 (s, 1H), 3.64-3.61 (m, 1H), 3.52-3.51 (m, 1H), 3.50-3.48 (m, 1H), 2.36-2.31 (m, 2H), 2.16-2.01 (m, 1H), 1.73-1.61 (m, 1H), 1.05 (s, 9H).

단계 2: tert-부틸 (2R)-2-{[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸}-5-옥소피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

ACN (180 mL) 중 (5R)-5-{[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸}피롤리딘-2-온 (18 g, 50.9 mmol)의 교반한 용액에 4-디메틸아미노피리딘 (7.45 g, 61.0 mmol)을 첨가하고 0℃로 냉각시켰다. 이어서 디-tert-부틸 디 카르보네이트 (12.8 mL, 55.9 mmol)를 적가하고 실온에서 16시간 동안 교반되도록 하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고 물에 이어 염수 용액으로 세척하였다. 유기층을 무수 황산나트륨 상에서 건조하고 증발시켜 조물질을 얻었다. 용리액으로 2-5% EtOAc/헥산을 사용하는 100-200 메쉬 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 조 생성물을 정제하였다. 수집한 순수 분획을 증발 건조시켜 tert-부틸 (2R)-2-{[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸}-5-옥소피롤리딘-1-카르복실레이트 (16.0 g, 69%)를 백색 결정질 고체로 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.65-7.59 (m, 4H), 7.44-7.26 (m, 6H), 4.22-4.19 (m, 1H), 3.91-3.87 (m, 1H), 3.72-3.68 (m, 1H), 2.81-2.77 (m, 1H), 2.44-2.38 (m, 1H), 2.15-2.10 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.04 (s, 9H).

단계 3: tert-부틸 (2R)-2-{[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸}-5-하이드록시피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

THF (160 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-{[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸}-5-옥소피롤리딘-1-카르복실레이트 (16 g, 35.2 mmol)의 교반한 용액에 리튬 트리에틸보로하이드라이드 (38.7 mL, 38.7 mmol)를 -78℃에서 적가하고 동일 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액 (60 mL)으로 켄칭하고 천천히 0℃에서 교반되도록 한 후, 과산화수소 (1.14 mL, 48.9 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 동일 온도에서 추가로 30분 동안 교반하고 DCM으로 희석하였다. 유기층을 물에 이어 염수 용액으로 세척하고 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 증발 건조시켜 조질의 tert-부틸 (2R)-2-{[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸}-5-하이드록시피롤리딘-1-카르복실레이트 (14.0 g, 88%)를 담황색 검으로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.68-7.66 (m, 4H), 7.45-7.26 (m, 6H), 5.56-5.42 (m, 1H), 4.05-3.96 (m, 1H), 3.90-3.82 (m, 1H), 3.76-3.52 (m, 2H), 2.25-2.12 (m, 1H), 2.10-1.92 (m, 1H), 1.88-1.82 (m, 2H), 1.52 (s, 3H), 1.34 (s, 6H), 1.06 (s, 9H).

단계 4: tert-부틸 (2R)-2-{[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸}-2,3-디하이드로-1H-피롤-1-카르복실레이트의 합성

톨루엔 (100 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-{[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸}-5-하이드록시피롤리딘-1-카르복실레이트 (14 g, 30.7 mmol)의 교반한 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (53.3 mL, 307 mmol)을 첨가하고 0℃로 냉각시켰다. 트리플루오로아세트산 무수물 (6.48 mL, 46.0 mmol)을 천천히 적가하고 1시간 동안 실온에서 교반한 후 110℃로 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 EtOAc로 희석하였다. 유기층을 물에 이어 염수 용액으로 세척하고 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 증발시켜 조 물질을 수득하였다. 용리액으로 2% EtOAc/헥산을 사용하는 100-200 메쉬 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 조질의 화합물을 정제하였다. 수집한 순수 분획을 증발 건조시켜 tert-부틸 (2R)-2-{[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸}-2,3-디하이드로-1H-피롤-1-카르복실레이트 (10.0 g, 75%)를 담갈색 액체로 수득하였다. MS (ESI): m/z 438 [(M+H]+

단계 5: tert-부틸 (1S,3R,5S)-3-{[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트의 합성

DCM (20 mL) 중 디요오도메탄(5.0 mL, 59.2 mmol)의 교반한 용액에 비스(에틸) 아연 (헥산 중 1M, 27.3 mL, 27.3 mmol)을 0℃에서 적가하고 30분 동안 교반하였다. 이어서 DCM (80 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-{[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸}-2,3-디하이드로-1H-피롤-1-카르복실레이트 (10 g, 22.8 mmol)의 용액을 동일 온도에서 적가하고, 천천히 실온에서 3시간 동안 교반되도록 하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고 포화 NaHCO3 용액으로 천천히 켄칭시킨 후, DCM으로 희석하였다. 유기층을 분리하고 염수 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 증발시켜 조 물질을 수득하였다. 용리액으로 2% EtOAc/헥산을 사용하는 100-200 메쉬 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 조질의 화합물을 정제하였다. 수집한 순수 분획을 증발 건조시켜 tert-부틸 (1S,3R,5S)-3-{[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (6.5 g, 63%)를 담황색 검으로 수득하였다. 1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.68-7.62 (m, 4H), 7.44-7.34 (m, 6H), 3.92-3.80 (m, 1H), 3.74-3.68 (m, 2H), 3.22-3.13 (m, 1H), 2.40-2.27 (m, 1H), 2.10-1.96 (m, 1H), 1.54-1.48 (m, 1H), 1.40 (s, 9H), 1.05 (s, 9H), 0.90-0.78 (m, 1H), 0.38-0.30 (m, 1H); MS (ESI): m/z 452 [M+H]+.

단계 6: tert-부틸 (1S,3R,5S)-3-(하이드록시메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트의 합성

THF (40 mL) 중 tert-부틸 (3R)-3-{[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (6.5 g, 14.3 mmol)의 교반한 용액에 THF 중 1M 테트라-n-부틸암모늄 플루오라이드 (54.3 mL, 54.3 mmol)를 실온에서 첨가하고 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 증발시키고, 조질의 물질을 용리액으로 15% EtOAc/헥산을 사용하는 100-200 메쉬 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 적용하였다. 수집한 순수 분획을 증발시켜 tert-부틸 (1S,3R,5S)-3-(하이드록시메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (2.80 g, 92%)를 갈색 오일로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.85 (bs, 1H), 3.72-3.68 (m, 1H), 3.64-3.58 (m, 2H), 3.28-3.21 (m, 1H), 2.18-2.12 (m, 1H), 1.80-1.72 (m, 1H), 1.58-1.42 (m, 10H), 0.78-0.64 (m, 1H), 0.42-0.38 (m, 1H).

단계 7: T-902-int-01B [tert-부틸 [(1S,3R,5S)-3-{[(6-메톡시-3-니트로피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트]의 합성

THF (30 mL) 중 tert-부틸 (1S,3R,5S)-3-(하이드록시메틸)-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (2.8 g, 13.1 mmol)의 교반한 용액에 수소화나트륨 (626 mg, 15.7 mmol)을 0℃에서 첨가한 후, 2-클로로-6-메톡시-3-니트로피리딘 (2.47 g, 13.1 mmol)을 첨가하고 실온에서 3시간 동안 교반되도록 하였다. 반응은 TLC로 모니터링하였다. 반응 혼합물을 빙냉수로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (2 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고 감압 하에 농축하여 조물질을 얻었다. 용리액으로 10% EtOAc/헥산을 사용하여 100-200 메쉬 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 조 생성물을 정제하여 tert-부틸 (1S,3R,5S)-3-{[(6-메톡시-3-니트로피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (3.50 g, 73%)를 황색 액체로 얻었다. MS (ESI): m/z 266 [(M-Boc)+H]+ .

단계 8: tert-부틸 (1S,3R,5S)-3-{[(3-아미노-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트의 합성

메탄올 (20 mL) 중 tert-부틸 (1S,3R,5S)-3-{[(6-메톡시-3-니트로피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (1.1 g, 3.01 mmol)의 교반한 용액에 10% 탄소상 팔라듐 (500 mg, 469 μmol)을 첨가하고 H2 풍선 압력 하에 실온에서 3시간 동안 수소화시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트 층을 통해 여과하고, EtOAc로 세척하고, 여액을 증발시켜 조 물질을 수득하였다. 조질의 화합물을 용리액으로 50% EtOAc/헥산을 사용하여 100-200 메쉬 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수집한 순수 분획을 증발 건조시켜 tert-부틸 (1S,3R,5S)-3-{[(3-아미노-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (587 mg, 59%)를 갈색 검으로 수득하였다. MS (ESI): m/z 336.1 [M+H]+ .

단계 9: tert-부틸 (1S,3R,5S)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트의 합성

ACN (6 mL) 중 tert-부틸 (1S,3R,5S)-3-{[(3-아미노-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (1.1 g, 3.27 mmol)의 교반한 용액에 2-메틸-2-프로필니트리트 (582 μL, 4.90 mmol)를 0℃에서 적가하고 동일 온도에서 15분 동안 교반하였다. ACN (4 mL) 중 염화구리 (II) (658 mg, 4.90 mmol) 및 염화리튬 (415 mg, 9.80 mmol)의 현탁액을 60℃에서 5분 동안 가열한 다음 실온으로 냉각시켰다. 용액을 0℃에서 상기 반응 혼합물에 적가하고 실온에서 2시간 동안 교반되도록 하였다. 과량의 용매를 감압 하에 증발시키고, 수득된 조 물질을 용리액으로 2% EtOAc/헥산을 사용하는 100-200 메쉬 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수집한 순수 분획을 증발 건조시켜 tert-부틸 (1S,3R,5S)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (560 mg, 48%) 황색 고체로 얻었다. MS (ESI): m/z 355 [(M+H]+.

단계 10: (1S,3R,5S)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산 하이드로클로라이드의 합성

1,4-디옥산 (5 mL) 중 tert-부틸 (1S,3R,5S)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (560 mg, 1.57 mmol)의 교반한 용액에 1,4-디옥산 (1.96 mL, 7.84 mmol)중 4M 하이드로클로라이드를 첨가하고 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시키고, 수득된 고체를 디에틸 에테르로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 (1S,3R,5S)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산 하이드로클로라이드 (380 mg, 83%)를 담황색 고체로 수득하였다. MS (ESI): m/z 255 [(M-HCl)+H]+.

단계 11: 7-[(1S,3R,5S)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-일]-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-6-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

DMSO (0.5 mL) 중 1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-6,7-디플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (180 mg, 449 μmol)의 교반한 용액에 (1S,3R,5S)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산 (114 mg, 449 μmol)을 첨가한 후, 트리에틸아민 (311 μL, 2.24 mmol)을 밀봉된 튜브에서 첨가하고 120℃로 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 빙냉수로 희석한 다음, 10% MeOH/DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 차가운 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조물질을 수득하였다. 조질의 화합물을 Prep HPLC로 정제하고 수집된 순수한 분획을 동결 건조하여 7-[(1S,3R,5S)-3-{[(3-클로로-6-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}-2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-일]-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-6-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (64.1 mg, 22%)을 회백색 고체로 얻었다. Prep HPLC 조건: Gemini, C-18 컬럼, 250 x 21.2 x 5 μm, A: 0.1% FA 완충액, B: ACN, 0/20, 10/40, 20/60, 25/90; 희석제: ACN/MeOH. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 15.36 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.34-8.25 (m, 1H), 7.95-7.84 (m, 1H), 7.84-7.72 (m, 2H), 6.58-6.34 (m, 3H), 4.50-4.30 (m, 3H), 4.12-3.98 (m, 2H), 3.90-3.80 (m, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.18-3.05 (m, 2H), 2.33-2.18 (m, 6H), 2.12-2.07 (m, 2H), 1.82-1.74 (m, 1H), 0.82-0.74 (m, 1H), 0.38 (d, J = 14.0 Hz, 1H); MS (ESI): m/z 635.4 [(M+H]+.

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 75: 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로-4-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-4-옥소-1,4- 디하이드로퀴놀린- 3-카르복실산의 합성

단계 1: 2-클로로-4-메톡시-3-니트로피리딘의 합성

10 mL 밀봉된 튜브에 MeOH (5 mL) 중 2,4-디클로로-3-니트로피리딘 (500 mg, 2.59 mmol)의 교반한 용액에 나트륨 메톡사이드 (167 mg, 3.10 mmol)를 첨가하고 실온에서 2시간 동안 N₂ 하에 교반하였다. 출발 물질이 완료된 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축하고, 조질의 화합물을 EtOAc (100 mL)에 용해시켰다. 유기층을 물(20 mL) 및 염수 용액 (20 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축하여 조질의 화합물을 얻었다. 용리액으로 헥산 중 완충액 10% EtoAC를 사용하여 실리카겔 (100-200 메쉬) 컬럼 크로마토그래피로 조질의 화합물을 정제하여 2-클로로-4-메톡시-3-니트로피리딘 (400 mg, 2.12 mmol, 81%)을 담황색 고체로 얻었다.

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 8.37 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.00 (s, 3H).

단계 2: tert-부틸 (2R)-2-{[(4-메톡시-3-니트로피리딘-2-일)옥시] 메틸}피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

DMF (5 mL) 중 2-클로로-4-메톡시-3-니트로피리딘 (400 mg, 2.12 mmol)의 교반한 용액에, 수소화나트륨 (127 mg, 3.18 mmol)에 이어 tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸) 피롤리딘-1-카르복실레이트 (511 mg, 2.54 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 실온이 되도록 한 다음, 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 빙냉수 (20 mL)로 켄칭하고 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 감압 하에 농축하여 조질의 화합물을 얻었다. 용리액으로 헥산 중 30% EtOAc를 사용하는 실리카겔 (100-200 메쉬) 컬럼 크로마토그래피로 조질의 화합물을 정제하여 tert-부틸 (2R)-2-{[(4-메톡시-3-니트로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-카르복실레이트 (285 mg, 806 μmol, 38%)를 오일 화합물로 수득하였다. MS (ESI): m/z 354 [M+H]⁺.

단계 3: tert-부틸 (2R)-2-{[(3-아미노-4-메톡시피리딘-2-일)옥시] 메틸}피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

MeOH (5 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-{[(4-메톡시-3-니트로피리딘-2-일)옥시]메틸} 피롤리딘-1-카르복실레이트 (300 mg, 806 μmol)의 교반한 용액에 10% Pd-C (85.7 mg, 80.6 μmol)를 실온에서 첨가하고 16시간 동안 수소 분위기 하에 교반하였다. 반응 완료 후 (TLC로 모니터링함), 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 메탄올로 세척하였다. 여액을 감압 하에 농축하고 조질의 화합물을 얻고 이를 n-펜탄으로 분쇄하여 tert-부틸 (2R)-2-{[(3-아미노-4-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-카르복실레이트 (88.7 mg, 274 μmol, 34%)를 갈색 오일 화합물로 수득하였다. MS (ESI): m/z 324.0 [M+H]⁺

단계 4: tert-부틸 (2R)-2-{[(3-클로로-4-메톡시피리딘-2-일)옥시] 메틸}피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

ACN (10 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-{[(3-아미노-4-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸} 피롤리딘-1-카르복실레이트 (500 mg, 1.54 mmol)의 교반한 용액에 tert 부틸 아질산염 (274 μL, 2.31 mmol)을 첨가하고 0℃에서 10분 동안 교반하였다. 염화구리 (II) (310 mg, 2.31 mmol)를 반응 혼합물에 N2 하에 첨가하고 생성된 혼합물을 30분 동안 50℃에서 교반하였다. 생성된 용액을 에틸 아세테이트 및 물로 추출하였다. 유기상을 농축하고 잔류물을 에틸 아세테이트/헥산 (1:5)으로 용리하는 실리카겔 (100-200 메쉬) 컬럼에 적용하여 tert-부틸 (2R)-2-{[(3-클로로-4-메톡시피리딘-2- 일)옥시] 메틸}피롤리딘-1-카르복실레이트 (127 mg, 371 μmol, 24%)를 오일 화합물로 수득하였다. MS (ESI): m/z 342.9 [M+H]⁺

단계 5: 3-클로로-4-메톡시-2-{[(2R)-피롤리딘-2-일]메톡시} 피리딘의 합성

DCM (0.5 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-{[(3-클로로-4-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸} 피롤리딘-1-카르복실레이트 (30 mg, 71.7 μmol)의 교반한 용액에 트리플루오로아세트산 (13.6 μL, 179 μmol)을 0℃에서 N2 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응의 진행은 (TLC로 모니터링함)이었다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 DCM이 제거될 때까지 감압 하에 농축하였다. 이어서, 잔류물을 디에틸 에테르로 분쇄하여 3-클로로-4-메톡시-2-{[(2R)-피롤리딘-2-일]메톡시}피리딘 (14.5 mg, 59.9 μmol, 83%)를 갈색 오일 화합물로 수득하였다. MS (ESI): m/z 242.9 [M+H]⁺(유리 염기의 경우).

단계 6: 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로-4-메톡시피리딘-2-일)옥시] 메틸}피롤리딘-1-일]-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-4-옥소-1,4- 디하이드로 퀴놀린- 3-카르복실산의 합성

10 mL 밀봉 튜브에서 DMSO (3 mL) 중 6-클로로-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-7-플루오로-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (150 mg, 347 μmol)의 용액을 트리에틸아민 (241 μL, 1.73 mmol)에 이어 3-클로로-4-메톡시-2-{[(2R)-피롤리딘-2-일]메톡시}피리딘 (100 mg, 416 μmol)을 실온에서 첨가하였다. 이어서 반응물을 100℃고 가열하고 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 빙냉수 (10 mL)로 켄칭하고 5% MeOH/DCM (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 용액 (10 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 감압 하에 농축하여 조질의 화합물을 얻었다. 조질의 화합물을 Prep HPLC 정제에 의해 정제하여 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로-4-메톡시피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린 -3-카르복실산 (51.4 mg, 80.4 μmol, 23%)을 회백색 고체로 수득하였다. Prep HPLC 조건: Atlantis, C-18 컬럼, 250 x 21.2 x 5 μm, A: 0.1% FA 완충액, B: ACN, 0/10, 10/40,20/60 ; 희석제: MeOH/물/아세토니트릴. ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 15.11 (s, 1H), 8.52 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 8.24 (dd, J = 11.6, 6.0 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.83-7.77 (m, 1H), 7.68-7.64 (m, 1H), 6.85-6.80 (m, 1H), 6.53 (d, J = 9.2 Hz, 0.5H), 6.38 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 6.23 (d, J = 8.8 Hz, 0.5H), 4.74 (br s, 0.5H), 4.58 (br s, 0.5H), 4.43-4.31 (m, 1H), 4.20-4.01 (m, 3H), 3.87 (s, 3H), 3.85-3.77 (m, 2H), 3.58-3.47(m, 1H), 3.28-3.16 (m, 2H), 2.32-2.24 (m, 1H), 2.14 (s, 6H), 2.01-192 (m, 1H), 1.88-1.76 (m, 2H); MS (ESI): m/z 639.3 [M+H]⁺. 효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 76: (R)-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(6,7-디하이드로-4H-피라졸로[5,1-c][1,4]옥사진-2-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: (3-니트로-1H-피라졸-5-일)메탄올의 합성

THF (40 mL) 중 3-니트로-1H-피라졸-5-카르복실산 (5 g, 31.8 mmol)의 교반한 용액에 1M THF 중 보란 (8.10 g, 95.4 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 유지하였다. 이 시간 후, 얼음/아세톤 조를 사용하여 반응물을 0℃로 냉각시키고, 물 (1.5 mL) 및 4N 염산 (1.5 mL)을 첨가하고, 피라졸과의 보란 착물을 파괴하기 위해 반응물을 1시간 동안 환류 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고 감압 하에 약 5mL의 부피로 농축시켰다. 에틸 아세테이트 (50 mL)를 첨가하고 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 수성층을 분리하고 에틸 아세테이트 (4 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 포화 수성 중탄산나트륨 (2 x 20 mL), 염수 (20 mL)로 세척하고 황산나트륨 상에서 건조하고, 건조제를 여과로 제거하고, 여액을 감압 하에 농축하여 (3-니트로-1H-피라졸-5-일)메탄올 (2.30 g, 16.0 mmol)을 회백색 고체로 얻었다. 1HNMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 13.90 (bs, 1H), 6.87 (s, 1H), 4.53 (s, 2H) (-OH 양성자는 관찰되지 않음).

단계 2: (1-(2-브로모에틸)-3-니트로-1H-피라졸-5-일)메탄올의 합성

DMF (1 mL) 중 (3-니트로-1H-피라졸-5-일)메탄올 (100 mg, 698 μmol)의 교반한 용액에 탄산세슘 (272 mg, 837 μmol) 및 1,2-디브로모에탄 (1.30 g, 6.97 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 1시간 동안 교반하고 실온 4시간 동안 교반하였다. 그 다음 에틸 아세테이트 (20 mL) 및 물 (15 mL)을 첨가하였다. 수성층을 분리하고 에틸 아세테이트 (2 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 물 (10 mL), 염수 (10 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고 감압 하에 농축하여 조 생성물을 수득하고, 이를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 [1-(2-브로모에틸)-3-니트로-1H-피라졸-5-일]메탄올 (80.0 mg, 319 μmol)을 황색 액체로 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ 6.85 (s, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.66 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.83 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.15 (bs, 1H).

단계 3: 2-니트로-6,7-디하이드로-4H-피라졸로[5,1-c][1,4]옥사진의 합성

NMP (3.2 mL) 중 [1-(2-브로모에틸)-3-니트로-1H-피라졸-5-일]메탄올 (800 mg, 3.19 mmol)의 용액을 130℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시킨 후, 물 (60 mL)을 첨가하고 60 mL의 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기층을 염수 용액으로 세척하고, Na₂SO₄상에서 건조하고, 여과하고 농축하고 조질의 화합물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 2-니트로-4H,6H,7H-피라졸로[3,2-c][1,4]옥사진 (380 mg, 2.24 mmol)을 회백색 고체로 수득하였다. 1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 6.88 (s, 1H), 4.83 (s, 2H), 4.24 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 4.13 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.15 (bs, 1H).

단계 4: 6,7-디하이드로-4H-피라졸로[5,1-c][1,4]옥사진-2-아민의 합성

MeOH (5 mL) 중 2-니트로-4H,6H,7H-피라졸로[3,2-c][1,4]옥사진 (300 mg, 1.77 mmol)의 교반한 용액에, Pd/C (100 mg, 625 μmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응물을 H2 풍선 하에서 3시간 동안 실온에서 유지하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여액을 농축하여 4H,6H,7H-피라졸로[3,2-c][1,4]옥사진-2-아민 (220 mg, 1.58 mmol)을 황색 액체로 수득하였다. MS (ESI): m/z 140.4 [M+H]+.

단계 5: 에틸 (R)-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(6,7-디하이드로-4H-피라졸로[5,1-c][1,4]옥사진-2-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (0.5 mL) 중 에틸 (2Z)-2-[(Z)-5-클로로-4-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-2-플루오로벤조일]-3-에톡시프로프-2-에노에이트 (50 mg, 97.7 μmol)의 교반한 용액에, 4H,6H,7H-피라졸로[3,2- c][1,4]옥사진-2-아민 (16.2 mg, 117 μmol)을 실온에서 첨가하고 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 출발 물질의 완료 후, 탄산칼륨 (20.1 mg, 146 μmol)을 반응 혼합물에 동일 온도에서 첨가하고, 반응물을 80℃에서 6시간 동안 유지하였다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 빙수를 반응 혼합물에 첨가하고, 침전된 고체를 여과하고 건조하여 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-{4H,6H,7H-피라졸로[3,2-c][1,4]옥사진-2-일}-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (20.0 mg, 34.2 μmol)를 갈색 고체로 얻었다. 이 고체를 목탄으로 처리하였다. MS (ESI): m/z 584.2 [M+H]+.

단계 6: (R)-6-클로로-7-(2-(((3-클로로피리딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-1-(6,7-디하이드로-4H-피라졸로[5,1-c][1,4]옥사진-2-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산]의 합성

THF (2 mL) & 물 (2 mL) 중 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-{4H,6H,7H-피라졸로[3,2-c][1,4]옥사진-2-일}-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (280 mg, 479 μmol)의 교반한 용액에, 수산화리튬 (57.2 mg, 2.39 mmol)을 실온에서 첨가하고 혼합물을 동일 온도에서 6시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 용매를 증발시키고 1N HCl을 사용하여 산성화시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기상을 Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고 농축하여 조질의 화합물을 얻었다. 조질의 화합물을 Prep-HPLC로 정제하고 분획을 동결 건조하여 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-{4H,6H,7H-피라졸로[3,2-c][1,4]옥사진-2-일}-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (30.0 mg, 53.9 μmol)을 회백색 고체로 수득하였다. Prep-HPLC 조건: Gemini, C-18 컬럼, 250 x 21.2 x 5 μm, A: 0.1% 포름산 완충액, B: ACN, 0/50, 20/70,25/95; 희석제: THF/ACN+WATER

1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.98 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.87 (dd, J = 4.8, 1.6 Hz, 1H), 7.77 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.90 (dd, J = 8.0, 5.2 Hz, 1H), 6.51 (s, 1H), 4.85 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 4. 80-4.73 (m, 1H), 4.34 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 4.22-4.13 (m, 4H), 3.70-3.62 (m, 1H), 3.35-3.24 (m, 1H), 2.34-2.25 (m, 1H), 2.08-1.90 (m, 2H), 1.88-1.70 (m, 1H); MS (ESI): m/z 556.3 [M+H]+.

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 77: 6-클로로-7-[(2S,4S)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}-4-플루오로피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: 1-tert-부틸 2-메틸 (2S,4S)-4-플루오로피롤리딘-1,2-디카르복실레이트의 합성

디클로로메탄 (25 mL) 중 1-tert-부틸 2-메틸 (2S,4R)-4-하이드록시피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (5 g, 20.3 mmol)의 교반한 용액에, 디에틸 아미노 황 트리플루오라이드 (3.98 mL, 30.4 mmol)를 -78℃에서 적가하고 2시간 동안 교반한 후, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 출발 물질이 완료된 후, 반응 혼합물을 포화 NH4Cl 수용액으로 켄칭하고 DCM (2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 물 (10 mL) 및 염수 용액 (10 mL)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고 진공에서 농축하여 조질의 화합물을 얻었다. 조질의 화합물을 헥산 중 에틸아세테이트로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 화합물 함유 분획을 농축하여 1-tert-부틸 2-메틸 (2S,4S)-4-플루오로피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (3.00 g, 12.1 mmol, 54%)를 담황색 오일로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 5.33 - 5.19 (m, 1H), 4.42 - 4.36 (m, 1H), 3.67 (s, 3H), 3.62 -3.51 (m, 2H), 2.56 - 2.40 (m, 1H), 2.27 - 2.17 (m, 1H), 1.42 (s, 9H).

단계 2: tert-부틸 (2S,4S)-4-플루오로-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성

THF (10 mL) 중 1-tert-부틸 2-메틸 (2S,4S)-4-플루오로피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (3.0 g, 12.1 mmol)의 교반한 용액에 0℃에서, 리튬 보로하이드라이드 (9.05 mL, 18.1 mmol)를 천천히 10분 동안 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온이 되도록 하고 6시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고 희석한 아세트산으로 켄칭한 후, EtOAc (2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 포화 NaHCO3 및 포화 NaCl 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고 농축하여 tert-부틸 (2S,4S)-4-플루오로-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트 (2.30 g, 10.4 mmol, 68%)를 담황색 오일로 얻었다.

1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 5.33 - 5.17 (m, 1H), 4.45 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 3.86 - 3.81 (m, 1H), 3.72 - 3.59 (m, 1H), 3.49 - 3.40 (m, 1H), 3.30 - 3.27 (m, 1H), 2.31 - 2.11 (m, 3H), 1.45 (s, 9H).

단계 3: (2S,4S)-4-플루오로피롤리딘-2-일]메탄올 하이드로클로라이드의 합성

디옥산 (5 mL) 중 4N HCl 중 tert-부틸 (2S,4S)-4-플루오로-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트 (1.7 g, 7.75 mmol)의 용액을 N2 분위기 하에 0℃에서 15분 동안 교반한 후, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 출발 물질의 완료 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 조질의 화합물을 얻고, 이를 디에틸 에테르 및 n-펜탄으로 분쇄하여 [(2S,4S)-4-플루오로피롤리딘-2-일]메탄올 하이드로클로라이드 (1 g, 6.42 mmol, 83%)를 백색 고체로 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.19 (brs, 1H), 9.19 (brs, 1H), 5.47-5.32 (d, J = 63.2 Hz, 1H), 3.69-3.47 (m, 5H), 2.42-2.31 (m, 1H), 2.01-1.89 (m, 1H).

단계 4: 에틸 6-클로로-7-[(2S,4S)-4-플루오로-2-(하이드록시 메틸) 피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

디메틸 설폭사이드 (10 mL) 중 에틸 6-클로로-7-플루오로-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (500 mg, 1.43 mmol)의 교반한 용액에 트리에틸아민 (796 μL, 5.72 mmol)에 이어 [(2R,4R)-4-플루오로피롤리딘-2-일]메탄올 (511 mg, 4.29 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 이어서 반응물을 130℃로 가열하고 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 빙냉수 (20 mL)로 켄칭하고 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 감압 하에 농축하여 조질의 화합물을 얻었다. 용리액으로 DCM 중 2% MeOH를 사용하는 컬럼 크로마토그래피로 조질의 화합물을 정제하여 에틸 6-클로로-7-[(2S,4S)-4-플루오로-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (216 mg, 483 μmol, 34%)를 황색 오일 화합물을 수득하였다. MS (ESI): m/z 447.1 [M+H]+

단계 5: 에틸 6-클로로-7-[(2S,4S)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}-4-플루오로피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (5 mL ) 중 에틸 6-클로로-7-[(2S,4S)-4-플루오로-2-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (200 mg, 362 μmol)의 교반한 용액에 탄산칼륨 (248 mg, 1.80 mmol)에 이어 3-클로로-2-플루오로피리딘 (157 μL, 1.80 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 이어서 반응물을 130℃로 가열하고 3시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 빙냉수 (10 mL)로 켄칭하고 EtOAc (2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 용액 (10 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 감압 하에 농축하여 조질의 화합물을 얻었다. 용리액으로 DCM 중 2% MeOH를 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 조질의 화합물을 정제하여 에틸 6-클로로-7-[(2S,4S)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}-4-플루오로피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (36.0 mg, 64.4 μmol, 26%)를 황색 고체로 얻었다.

MS (ESI): m/z 558.2 [M+H]+

단계 6: 6-클로로-7-[(2S,4S)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}-4-플루오로피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

1,2-디클로로에탄 (5 mL) 중 에틸 6-클로로-7-[(2S,4S)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}-4-플루오로피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (100 mg, 109 μmol)의 교반한 용액에 트리메틸 수산화주석 (196 mg, 1.08 mmol)을 실온에서 첨가한 후, 100℃로 가열되도록 두고 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 빙냉수 (10 mL)로 켄칭하고 DCM (2 x 50 mL) 중 5% MeOH로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 감압 하에 농축하여 조질의 화합물을 얻었다. 조질의 화합물을 prep HPLC 정제로 정제하여 6-클로로-7-[(2S,4S)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}-4-플루오로피롤리딘-1-일]-4-옥소-1-(피라진-2-일)-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (39.6 mg,74.6 μmol, 68%)을 회백색 고체로 얻었다.

Prep HPLC 조건: Gemini, C-18 컬럼, 250 x 21.2 x 5 μm, A: 0.1% 포름산 완충액, B: ACN, 0/5, 20/50; 희석제: MeOH/CAN. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.77 (brs, 1H), 9.11 (s, 1H), 8.92 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.77 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.89 (dd, J = 4.8, 1.6 Hz, 1H), 7.70 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 6.95 - 6.92 (m, 1H), 6.65 (s, 1H), 5.46 - 5.32 (m, 1H), 4.93 - 4.91 (m, 1H), 4.45 - 4.41 (m, 1H), 4.31 - 4.27 (m, 1H), 3.94 - 3.87 (m, 1H), 3.62 - 3.52 (m, 1H), 2.55 - 2.37 (m, 1H), 2.19 - 2.05 (m, 1H); MS (ESI): m/z 530.2. [M+H]+

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

실시예 78: 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산의 합성

단계 1: 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-(6-클로로피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (70 mL) 중 에틸 (2Z)-2-[(Z)-5-클로로-4-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-2-플루오로벤조일]-3-에톡시프로프-2-에노에이트 (21 g, 41.0 mmol)의 교반한 용액에, 6-클로로피리딘-3-아민 (5.27 g, 41.0 mmol)을 실온에서 첨가하고 1시간 동안 교반하였다. 1시간 후, 탄산칼륨 (8.49 g, 61.5 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 빙냉수로 희석하고 생성된 고체를 여과하고 진공에서 건조하여 조질의 화합물을 얻었다. 조질의 화합물을 10% 메탄올-DCM (250 mL)에 가용시키고 목탄으로 (5 g) 처리하고 40분 동안 교반하고 셀라이트 패드를 통해 여과하고 감압 하에 농축하고 생성된 고체를 n-펜탄 및 MTBE (2 X 40 mL)로 분쇄시키고 고체를 고진공에서 건조시켜 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-(6-클로로피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (12.2 g, 52%)를 황색 고체로 수득하여다. MS (ESI): m/z 579.4 [M+H]+

단계 2 : 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트의 합성

DMSO (50 mL) 중 N,N-디메틸아제틴-3-아민 디하이드로클로라이드 (2.87 g, 16.6 mmol)의 교반한 용액에, 탄산칼륨 (2.87 g, 20.8 mmol)을 0℃에서 첨가하고 5분 동안 교반한 후, 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-(6-클로로피리딘-3-일)-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (8 g, 13.9 mmol)를 첨가하였다. 이어서 반응물을 90℃로 가열하고 8시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙냉수로 켄칭하고 EtOAc (2 x 150 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 물 (80 mL), 염수 용액 (80 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 감압 하에 농축하였다. 조질의 화합물을 MTBE (3 X 50 mL) 중 20% 아세톤으로 세척하고 진공에서 건조하여 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (6.97 g, 78%)를 담갈색 고체로 얻었다. MS (ESI): m/z 637.1 [M+H]+

단계 3: 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 하이드로클로라이드의 합성

THF:물 (1:1, 200 mL) 중 에틸 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실레이트 (17 g, 26.6 mmol)의 교반한 용액에, 수산화나트륨 (3.19 g, 79.8 mmol)을 0℃에서 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하고 반응 덩어리를 얼음 조로 재냉각시키고, 물 (30 mL)로 희석하고, 1N HCl을 사용하여 pH를 4 내지 5로 조정하고, DCM 중 10% MeOH (2 x 250 mL)로 추출하고, 유기층을 염수 (100 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고. 감압 하에 농축하여 조질을 얻었다. 조물질을 MTBE (3 X 50 mL) 중 50% 아세톤으로 세척하고 진공에서 건조하고 동결 건조하여 6-클로로-7-[(2R)-2-{[(3-클로로피리딘-2-일)옥시]메틸}피롤리딘-1-일]-1-{6-[3-(디메틸아미노)아제틴-1-일]피리딘-3-일}-4-옥소-1,4-디하이드로퀴놀린-3-카르복실산 (9.76 g, 60%)을 담갈색 고체로 수득하였다. 화합물은 하이드로클로라이드 염의 형태이다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 15.07 (s, 1H), 11.00 (s, 1H), 8.51 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.90-7.89 (m, 1H), 7.82-7.74 (m, 2H), 6.96-6.92 (m, 1H), 6.66-6.46 (m, 1H), 6.37-6.36 (m, 1H), 4.77-4.68 (m, 1H), 4.35-4.25 (m, 7H), 3.52-3.46 (m, 1H), 3.18-3.16 (m, 1H), 2.75 (bs, 6H), 2.26-2.24 (m, 1H), 1.96-1.90 (m, 2H), 1.82-1.78 (m, 1H); MS (ESI): m/z 609.3 [M+H]⁺.

효능 Lin28a-dep Z11 IC₅₀ (μM) ++++

하기 화합물을 실시예 1 내지 78에 기재된 것과 유사한 절차에 따라 합성하-였다.

표 1.

실시예 4-1. TUTase 검정

Zcchc11 검정의 목적은 IC₅₀의 측정을 통해 Zcchc11 효소에 대한 화합물 효능을 결정하는 것이다. 화합물 억제는 활성 TUTase, UTP, 및 억제제의 존재 하에 RNA 기질에 첨가된 폴리우리딘 꼬리의 함수로 측정된다. Zcchc11 검정은 검정색의 비결합 384 웰 플레이트 (Corning #3575)에서 수행되었다. 모든 단계는 실온에서 수행되었다. 일반적인 검정의 경우 LIN28A 단백질을 함유하는 검정 완충액 (50 mM HEPES pH 7.3, 150 mM KCl, 5 mM MgCl2, 10 mM DTT, 0.01% Triton X-100, 40 U/ml RNAsin (Promega))의 29 ul 분취량 (최종 농도: 10 nM)을 각 웰에 첨가한다. 다음으로, 100% DMSO 중 화합물 1 ul를 화합물이 연속적으로 희석되는 화합물 희석 플레이트로부터 옮긴다. 다음으로, Zcchc11 및 RNA 기질 (5'-플루오레세인 표지된 pre-let-7 miRNA (Dharmacon))의 5X 혼합물 10 ul를 첨가한다 (최종 농도: 각각 0.2 nM 및 2 nM). 플레이트를 30초 동안 플레이트 쉐이커에 놓고 혼합을 생성한 다음 30분 동안 인큐베이션한다. 다음으로, UTP와 켄칭 프로브 (3'-로다민 표지 A₂₀, 폴리아데노신 뉴클레오티드, (IDT))의 5X 혼합물 10 ul를 첨가한다 (최종 농도: 각각 5 uM 및 4 nM). 플레이트를 즉시 Biotek Cytation 5 플레이트 판독기에 넣고 A₂₀ 프로브를 폴리우리딘 꼬리에 어닐링함으로써 발생하는 플루오레세인 형광의 시간에 따른 감소를 판독기의 동역학 모드를 사용하여 기록한다. 반응 속도는 진행 곡선의 초기 부분에 선형 맞춤을 사용하여 얻는다. IC₅₀ 값은 DMSO 대조군으로부터 결정된 100% 효소 활성 및 UTP가 없는 대조군 샘플로부터의 0% 활성을 갖는 4개의 매개변수 적합을 사용하여 계산된다.

LIN28A 단백질은 대장균, 균주 Rosetta II (Novagen)에서 발현 및 정제되었다. 인간 야생형 단백질의 전체 코딩 서열을 말토스-결합 단백질 태그의 다운스트림인 발현 벡터 pMAL (NEB)에 클로닝하였다. 링커 서열은 TEV 프로테아제 절단 부위를 함유하였다. MBP-Trap 컬럼 (GE Healthcare Life Sciences)을 사용하여 박테리아 추출물로부터 단백질을 정제한 후, 태그 절단 및 이온 교환 크로마토그래피로 태그를 제거하였다. 필요한 경우 Faehnle CR. 등 (2017) Multi-domain utilization by TUT4 and TUT7 in control of let-7 biogenesis. Nat Struct Mol Biol, 24:658-665에 설명하는 절차를 사용하여 오염된 박테리아 RNA를 제거했다.

Zcchc11 단백질은 HEK293 세포에서 발현되고 정제되었다. 인간 서열의 잔기 212-1420을 포함하는 절단된 단백질을 말토스-결합 단백질 태그의 다운스트림인 발현 벡터 pTT5 (Viva Biotech)에 클로닝하였다. 링커 서열은 TEV 프로테아제 절단 부위를 함유하고, FLAG 태그는 단백질의 카르복실 말단에 추가되었다. MBP-Trap 컬럼 (GE Healthcare Life Sciences)을 사용하여 세포 추출물로부터 단백질을 정제한 다음, 태그 절단 및 항-FLAG 친화성 배지 (Sigma Aldrich)를 사용하여 전장 작제물의 추가 농축을 수행했다.

Zcchc11 효소에 대한 본원에 기재된 화합물의 효능은 상기 표 1에 제시되어 있다. "+"는 50 μM보다 큰 IC₅₀ 값을 나타내고; "++"는 10 μM보다 크고 50 μM 이하인 IC₅₀ 값을 나타내고; "+++"는 1 μM보다 크고 10 μM 이하인 IC₅₀ 값을 나타내고; "++++"는 1 μM 이하의 IC₅₀ 값을 나타낸다.

Claims

제1 측면에서, 본 발명은 하기 화학식 (I)로 표시되는 화합물:

또는 그의 약제학상 허용되는 염에 관한 것으로, 여기서:
W는 -CH₂Y-R³, -S(O)₂R³, -SCH₂R³, Y-R³, -OC(=O)NR¹¹R¹²또는 -N(C=O)NR¹¹R¹²이고;
V는 -C(=O)-, -S(=O)₂- 또는 CR¹³R¹⁴이고;
X는 CR⁴R⁵, NR⁶ 또는 O이고;
Y는 NR⁷ 또는 O이고;
Z는 CR⁸ 또는 N이고;
R¹은 할로, -CN, -OR^1a _,-C≡CH, C_3-6카르보사이클릴, 또는 C_1-6알킬이고, 여기서 C_1-6알킬은 하나 이상의 R¹⁰으로 임의로 치환되고;
R^1a는 H이거나 또는 하나 이상의 R¹⁰으로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R¹⁰은, 각각의 경우에 대해, 할로, -CN 및 -OR^10a로부터 독립적으로 선택되고;
R^10a는, 각각의 경우에 대해, H 및 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
R²는 -CN,-CHR^zCN, - C(O)NH_2,-CHR^zC(O)NH₂, 3- 내지 12-원 카르보사이클릴,-(CHR^z)-(3- 내지 12-원 카르보사이클릴), 3- 내지 12-원 헤테로사이클릴, 또는 -(CHR^z)-(3 내지 12-원 헤테로사이클릴)이고, 여기서 R²로 표시되거나, 또는 R²로 표시되는 기 중 3 내지 12-원 카르보사이클릴 및 3 내지 12-원 헤테로사이클릴은 하나 이상의 R²⁰으로 임의로 치환되고, R^z는 H 또는 메틸이고;
R²⁰은, 각각의 경우에 대해, H, 할로, CN, 옥소, -C(O)R^20a, -C(O)₂R^20a, -C(O)NR^20a, -N(R^20a)₂, -N(R^20a)C(O)R^20a, -N(R^20a)C(O)₂R^20a, -N(R^20a)C(O)N(R^20a)₂, -N(R^20a)S(O)₂R^20a, -OR^20a, -OC(O)R^20a, -OC(O)N(R^20a)₂, -SR^20a, -S(O)₂R^20a, -S(O)N(R^20a) ₂, -S(O)₂N(R^20a)₂, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R²⁰으로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환되고;
R^20a는, 각각의 경우에 대해, H, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R^20a로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환되거나, 또는 2개의 R^20a는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환된 4- 내지 7-원 헤테로사이클릴을 형성하고;
R²⁵는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, C_1-6알킬, 할로,-C=O,-C(O)O(C₁-C₆ 알킬), OH로 임의로 치환된 4- 내지 6-원 헤테로사이클릴, -N(R^25a)₂, -OR^25a, C_1-6알킬, 할로, -N(R^25a)₂ 또는 -OR^25a로 임의로 치환된 페닐이고;
R^25a는 H, C_1-6알킬이거나; 또는 2개의 R^25a는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 4- 내지 7-원 헤테로사이클릴을 형성하고, 여기서 C_1-6알킬은 -OCH₃로 임의로 치환되고;
R³은 3 내지 12-원 카르보사이클릴 또는 3 내지 12-원 헤테로사이클릴이고, 여기서 R³으로 표시되는 3 내지 12-원 카르보사이클릴 및 3 내지 12-원 헤테로사이클릴은 하나 이상의 R³⁰으로 임의로 치환되고;
R³⁰은, 각각의 경우에 대해, H, 할로, 옥소, -CN, -C(O)R^30a, -C(O)₂R^30a, -C(O)NR^30a, -N(R^30a)₂, -N(R^30a)C(O)R^30a, -N(R^30a)C(O)₂R^30a, -N(R^30a)C(O)N(R^30a)₂, -N(R^30a)S(O)₂R^30a, -OR^30a, -OC(O)R^30a, -OC(O)N(R^30a)₂, -SR^30a, -S(O)₂R^30a, -S(O)N(R^30a) ₂, -S(O)₂N(R^30a)₂, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R³⁰으로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R³⁵로 임의로 치환되고;
R^30a는, 각각의 경우에 대해, H, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R^30a로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R³⁵로 임의로 치환되고;
R³⁵는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, -NH₂, C_1-6알킬, 할로 및 -OR^35a이고;
R^35a는 H 또는 C_1-6알킬이고;
대안적으로, Y가 NR⁷일 때, R⁷ 및 R³은 R⁷가 부착된 N 원자와 함께 또는 이상의 R³⁰로 임의로 치환된 4 내지 12-원 헤테로사이클릴을 형성할 수 있고;
R⁴, R⁵, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷ 및 R¹⁸는각각 H, C_1-6알킬, 할로, -NHC(O)CH₃, 4- 내지 6-원 카르보사이클릴, 또는 4- 내지 6-원 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 C_1-6알킬은 할로로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되고, 여기서 헤테로사이클릴 및 카르보사이클릴은 할로, -CN, -OR^4a, C₁-C₆ 알킬 또는 =O (상기 카르보사이클릴 또는 헤테로사이클릴이 비-방향족일 때)로 임의로 치환되거나, 또는 여기서 R¹⁵및 R¹⁶은 함께 취하거나 또는 R¹⁷및 R¹⁸은 함께 취하여 =NOH 또는 =NHOCH₃이고;
R^4a는 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R⁶은 H이거나 또는 할로, -CN 및 -OR^6a로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R^6a는 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R⁷은 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R⁸은 H, 할로, -CN, -OR^8a 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R^8a는 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R⁹, R¹³ 및 R¹⁴는 각각 H, C_1-6알킬, 및 C_3-6사이클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 C_1-6알킬 및 C_3-6사이클로알킬은 각각 할로, -CN, -OR^9a및 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되고;
R^9a는 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R¹¹ 및 R¹²는 각각 독립적으로 H 또는 C_1-6알킬이거나, 또는 R¹¹ 및 R¹²는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 C_1-6알킬, 할로, -OH, 및 C_1-6알콕시로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴을 형성하거나;
또는 R⁴, R⁵, R⁹, R¹³, R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷ 및 R¹⁸중 임의의 2개는 함께 할로, -OR^a, -N(R^a)₂ 및 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된 -C_1-5알킬렌-을 형성하거나;
또는 R⁴ 및 R¹⁵는 이들의 개재 탄소 원자와 함께 취하여 페닐 또는 6원 헤테로아릴을 형성하고;
R^a는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6 알킬이고;
R^19a및 R^19b는 각각 독립적으로 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이거나, 또는 R^19a 및 R^19b는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 -C(=O)을 형성하거나; 또는
하나의 R²⁰ 기 및 하나의 R³⁰기는 함께 취하여 -O-CH₂CH₂-O- 또는 -O-CH₂CH₂-NH-를 형성하고;
n1은 0, 1 또는 2이고;
n2는 0, 1 또는 2이고, 단 X가 NR⁶ 또는 O일 때, n1 및 n2는 0일 수 없는, 화합물.
제1항에 있어서, 하기 화학식 (I')로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염으로서, 여기서:
W는 Y-R³, -OC(=O)NR¹¹R¹²또는 -N(C=O)NR¹¹R¹²이고;
V는 -C(=O)-, -S(=O)₂- 또는 CR¹³R¹⁴이고;
X는 CR⁴R⁵, NR⁶ 또는 O이고;
Y는 NR⁷ 또는 O이고;
Z는 CR⁸ 또는 N이고;
R¹은 할로, CN, -OR^1a- _,-C≡CH, 또는 C_1-6알킬이고, 여기서 C_1-6알킬은 하나 이상의 R¹⁰으로 임의로 치환되고;
R^1a는 H이거나 또는 하나 이상의 R¹⁰으로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R¹⁰은, 각각의 경우에 대해, 할로, CN 및 OR^10a로부터 독립적으로 선택되고;
R^10a는, 각각의 경우에 대해, H 및 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
R²는 3 내지 12-원 카르보사이클릴 또는 3 내지 12-원 헤테로사이클릴이고, 여기서 R²로 표시되는 3 내지 12-원 카르보사이클릴 및 3 내지 12-원 헤테로사이클릴은 하나 이상의 R²⁰으로 임의로 치환되고;
R²⁰은, 각각의 경우에 대해, H, 할로, CN, 옥소, -C(O)R^20a, -C(O)₂R^20a, -C(O)NR^20a, -N(R^20a)₂, -N(R^20a)C(O)R^20a, -N(R^20a)C(O)₂R^20a, -N(R^20a)C(O)N(R^20a)₂, -N(R^20a)S(O)₂R^20a, -OR^20a, -OC(O)R^20a, -OC(O)N(R^20a)₂, -SR^20a, -S(O)₂R^20a, -S(O)N(R^20a) ₂, -S(O)₂N(R^20a)₂, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R²⁰으로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환되고;
R^20a는, 각각의 경우에 대해, H, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R^20a로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환되거나, 또는 2개의 R^20a는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환된 4- 내지 7-원 헤테로사이클릴을 형성하고;
R²⁵는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, C_1-6알킬, 할로, -N(R^25a)₂, -OR^25a, C_1-6알킬, 할로, -N(R^25a)₂ 또는 -OR^25a로 임의로 치환된 페닐이고;
R^25a는 H 또는 C_1-6알킬이고;
R³는 3 내지 12-원 카르보사이클릴 또는 3 내지 12-원 헤테로사이클릴이고, 여기서 R³으로 표시되는 3 내지 12-원 카르보사이클릴 및 3 내지 12-원 헤테로사이클릴은 하나 이상의 R³⁰으로 임의로 치환되고;
R³⁰은, 각각의 경우에 대해, H, 할로, 옥소, -CN, -C(O)R^30a, -C(O)₂R^30a, -C(O)NR^30a, -N(R^30a)₂, -N(R^30a)C(O)R^30a, -N(R^30a)C(O)₂R^30a, -N(R^30a)C(O)N(R^30a)₂, -N(R^30a)S(O)₂R^30a, -OR^30a, -OC(O)R^30a, -OC(O)N(R^30a)₂, -SR^30a, -S(O)₂R^30a, -S(O)N(R^30a) ₂, -S(O)₂N(R^30a)₂, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R³⁰으로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R³⁵로 임의로 치환되고;
R^30a은, 각각의 경우에 대해, H, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R^30a로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R³⁵로 임의로 치환되고;
R³⁵는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, C_1-6알킬, 할로 및 -OR^35a이고;
R^35a는 H 또는 C_1-6알킬이고;
대안적으로, Y가 NR⁷일 때, R⁷ 및 R³은 R⁷이 부착된 N 원자와 함께 또는 이상의 R³⁰으로 임의로 치환된 4 내지 12-원 헤테로사이클릴을 형성할 수 있고;
R⁴, R⁵, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷ 및 R¹⁸은 각각 H, C_1-6알킬, 할로, -CN 및 -OR^4a로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 C_1-6알킬은 할로, CN 및 -OR^4a로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되고;
R^4a는 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R⁶은 H 또는 C_1-6알킬이고 여기서 C1-6 알킬은 할로, CN 및 -OR4a로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되고;
R^6a는 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R⁷은 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R⁸는 H, 할로, CN, -OR^8a 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R^8a는 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R⁹, R¹³ 및 R¹⁴는 각각 H, C_1-6알킬 및 C_3-6사이클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 C_1-6알킬 및 C_3-6사이클로알킬은 각각 할로, CN, -OR^9a및 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되고;
R^9a는 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R¹¹ 및 R¹²는 각각 독립적으로 H 또는 C_1-6알킬이거나, 또는 R¹¹ 및 R¹²는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 C_1-6알킬, 할로, OH, 및 C_1-6알콕시로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴을 형성하거나;
또는 R⁴, R⁵, R⁹, R¹³, R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷ 및 R¹⁸중 임의의 2개는 함께 할로, -OR^a, -N(R^a)₂ 및 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된 -C_1-5알킬렌-을 형성하고;
R^a는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6 알킬이고;
R^19a및 R^19b는 각각 독립적으로 H, 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이거나, 또는 R^19a 및 R^19b는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 -C(=O)-를 형성하고;
n1은 0, 1 또는 2이고;
n2는 0, 1 또는 2이고, 단 X가 NR⁶ 또는 O일 때, n1 및 n2은 0일 수 없는, 화합물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식 (Ia) 또는 (Ib)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염이고, 여기서:
X는 CR⁴R⁵, NR⁶ 또는 O이고;
Y는 NR⁷ 또는 O이고;
Z는 CR⁸ 또는 N이고;
R¹은 할로, CN, -OR^1a, -C≡CH, 또는 C_1-6알킬이고, 여기서 C_1-6알킬은 하나 이상의 R¹⁰으로 임의로 치환되고;
R^1a는 H이거나 또는 하나 이상의 R¹⁰으로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R¹⁰는, 각각의 경우에 대해, 할로, CN 및 OR^10a로부터 독립적으로 선택되고;
R^10a는, 각각의 경우에 대해, H 및 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
R²는 3 내지 12-원 카르보사이클릴 또는 3 내지 12-원 헤테로사이클릴이고, 여기서 R²로 표시되는 3 내지 12-원 카르보사이클릴 및 3 내지 12-원 헤테로사이클릴은 하나 이상의 R²⁰으로 임의로 치환되고;
R²⁰은, 각각의 경우에 대해, H, 할로, CN, 옥소, -C(O)R^20a, -C(O)₂R^20a, -C(O)NR^20a, -N(R^20a)₂, -N(R^20a)C(O)R^20a, -N(R^20a)C(O)₂R^20a, -N(R^20a)C(O)N(R^20a)₂,--N(R^20a)S(O)₂R^20a, -OR^20a, -OC(O)R^20a, -OC(O)N(R^20a)₂, -SR^20a, -S(O)₂R^20a, -S(O)N(R^20a) ₂, -S(O)₂N(R^20a)₂, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R²⁰으로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환되고;
R^20a는, 각각의 경우에 대해, H, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R^20a로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환되거나, 또는 2개의 R^20a는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환된 4- 내지 7-원 헤테로사이클릴을 형성하고;
R²⁵는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, C_1-6알킬, 할로, -N(R^25a)₂, -OR^25a, C_1-6알킬, 할로, -N(R^25a)₂ 또는 -OR^25a로 임의로 치환된 페닐이고;
R^25a는 H 또는 C_1-6알킬이고;
R³은 3 내지 12-원 카르보사이클릴 또는 3 내지 12-원 헤테로사이클릴이고, 여기서 R³으로 표시되는 3 내지 12-원 카르보사이클릴 및 3 내지 12-원 헤테로사이클릴은 하나 이상의 R³⁰으로 임의로 치환되고;
R³⁰은, 각각의 경우에 대해, H, 할로, 옥소, -CN, -C(O)R^30a, -C(O)₂R^30a, -C(O)NR^30a, -N(R^30a)₂, -N(R^30a)C(O)R^30a, -N(R^30a)C(O)₂R^30a, -N(R^30a)C(O)N(R^30a)₂, -N(R^30a)S(O)₂R^30a, -OR^30a, -OC(O)R^30a, -OC(O)N(R^30a)₂, -SR^30a, -S(O)₂R^30a, -S(O)N(R^30a) ₂, -S(O)₂N(R^30a)₂, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R³⁰으로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R³⁵로 임의로 치환되고;
R^30a는, 각각의 경우에 대해, H, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R^30a로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬 및 4- 내지 7-원 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R³⁵로 임의로 치환되고;
R³⁵는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, C_1-6알킬, 할로 및 -OR^35a이고;
R^35a는 H 또는 C_1-6알킬이고;
대안적으로, Y가 NR⁷일 때, R⁷ 및 R³은 R⁷이 부착된 N 원자와 함께 또는 이상의 R³⁰으로 임의로 치환된 4 내지 12-원 헤테로사이클릴을 형성할 수 있고;
R⁴ 및 R⁵는 각각 H, C_1-6알킬, 할로, -CN 및 -OR^4a로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 C_1-6알킬은 할로, CN 및 -OR^4a로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되고;
R^4a는 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R⁶는 H이거나 또는 할로, CN 및 -OR^6a로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R^6a는 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R⁷은 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R⁸은 H, 할로, CN, -OR^8a 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R^8a는 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
n1은 0, 1 또는 2이고;
n2는 0, 1 또는 2이거나,
또는, 화학식 (Ia)에 대해, R⁴, R⁵, R⁹, R¹³, R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷ 및 R¹⁸중 임의의 2개는 함께 할로, -OR^a, -N(R^a)₂ 및 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된 -C_1-5알킬렌-을 형성하고; 여기서 R^a는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6 알킬인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, X가 CH₂인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, n1 및 n2가 모두 0이거나; n1 및 n2가 모두 1이거나; 또는 n1은 1이고 n2는 0인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제1항, 제2항, 또는 제3항에 있어서, X가 O이고; n1 및 n2이 모두 1인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식 (IIa) 또는 (IIb)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제6항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식 (II-1a) 또는 (II-1b)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, Y가 NH 또는 O인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식 (IIIa) 또는 (IIIb)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제10항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식 (III-1a) 또는 (III-1b)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제10항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식 (IVa) 또는 (IVb)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제12항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식 (IV-1a) 또는 (IV-1b)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, R⁸이 H, 할로, 또는 OR^8a인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제14항에 있어서, R⁸이 H, F, Cl 또는 -OCH₃인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제14항에 있어서, R⁸이 H인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, R¹이 Cl, Br, CN, -OR⁹ 또는 C_1-6알킬인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제17항에 있어서, R¹이 Cl, CN 또는 CH₃인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제1항 내지 제7항, 제9항, 제10항, 제12항, 제14항 및 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식 (IVAa), (IVBa), (IVCa), (IVDa), (IVAb), (IVBb), (IVCb) 또는 (IVDb)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염이고, 여기서 R⁸은 H 또는 F인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제19항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식 (IVA-1a), (IVB-1a), (IVC-1a), (IVD-1a ), (IVA-1b), (IVB-1b), (IVC-1b), 또는 (IVD-1b)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, R³이 페닐, 5 또는 6-원 모노사이클릭 헤테로아릴 또는 9 또는 10-원 바이사이클릭 헤테로아릴이고, 여기서 R³으로 표시되는 페닐, 5 또는 6-원 모노사이클릭 헤테로아릴 및 9 또는 10-원 바이사이클릭 헤테로아릴은 각각 1 내지 3개의 R³⁰으로 임의로 치환된, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제21항에 있어서, R³이 페닐, 피리디닐, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 1H-피롤로[2,3-c]피리디닐 또는 1H-이미다조[4,5-c]피리디닐이고, 이들 각각은 1 내지 3개의 R³⁰으로 임의로 치환된, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, R³⁰은, 각각의 경우에 대해, H, 할로, CN, -C(O)NR^30a, -N(R^30a)₂, -N(R^30a)C(O)R^30a, -N(R^30a)S(O)₂R^30a, -OR^30a, 및 C_1-6알킬이고, 여기서 C_1-6알킬은 1 내지 3개의 R³⁵로 임의로 치환되고;
R^30a는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H이거나 또는 1 내지 3개의 R³⁵로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R³⁵는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, 할로 및 -OR^35a이고;
R^35a는 H 또는 C_1-3알킬인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제23항에 있어서, R³⁰은, 각각의 경우에 대해, H, 할로, CN, -OR^30a 및 1 내지 3개의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R^30a은 H이거나 또는 1 내지 3개의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제24항에 있어서, R³⁰이, 각각의 경우에 대해, H, F, Cl, Br, CN, -OCH₃, -CH₃, -CH₂CH₃ 또는 -CF₃인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제22항에 있어서, R³이 3-클로로피리딘-2-일, 3-메틸피리딘-2-일, 3-브로모피리딘-2-일, 3-시아노피리딘-2-일, 3-에틸피리딘-2-일, 3-플루오로피리딘-2-일, 3-메톡시피리딘-2-일, 3-트리플루오로메틸피리딘-2-일, 피리딘-2-일, 1H-피롤로[2,3-c]피리딘-5-일, 1H-피롤로[2,3-c]피리딘-7-일, 1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-일, 1H-이미다조[4,5-c]피리딘-4-일, 2,6-디메틸페닐, 페닐, 피라드진-3-일, 피리미딘-4-일, 5-메틸피리딘-2-일, 4-메틸피리딘-2-일, 피리미딘-2-일, 피라진-2-일, 피리다진-3-일, 및 피리딘-3-일로부터 선택되는, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제1항 내지 제7항, 제9항, 제10항, 제12항, 제14항 및 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식 (Va) 또는 (Vb)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염이고, 여기서 m은 0, 1 또는 2인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제27항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식 (V-1a) 또는 (V-1b)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제27항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식 (VAa), (VBa), (VCa), (VDa), (VAb), (VBb), (VCb) 또는 (VDb)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제29항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식 (VA-1a), (VB-1a), (VC-1a), (VD-1a), (VA-1b), (VB-1b), (VC-1b) 또는 (VD-1b)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염이고, 여기서 R⁸은 H 또는 F인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제27항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식 하기 화학식 (VIa) 또는 (VIb)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염이고, 여기서 R³⁰은 H, 할로, CN, -OR^30a, 및 1 내지 3개의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고; R^30a은 H이거나 또는 1 내지 3개의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제31항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식 (VI-1a) 또는 (VI-1b)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제31항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식 (VIAa), (VIBa), (VICa), (VIDa), (VIAb), (VIBb), (VICb) 또는 (VIDb)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제33항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식 (VIA-1a),(VIB-1a), (VIC-1a), (VID-1a), (VIA-1b), (VIB-1b), (VIC-1b) 또는 (VID-1b)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제27항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, R³⁰이, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, F, Cl, Br, CN, -CH₃, -CH₂CH₃, -OCH₃, 또는 -CF₃인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, R²는 C_3-8사이클로알킬, 페닐, 4 내지 6-원 포화 모노사이클릭 헤테로사이클릴, 7 내지 10-원 포화 또는 부분 포화된 바이사이클릭 헤테로사이클릴, 5 또는 6-원 모노사이클릭 헤테로아릴 또는 9 내지 10-원 포화 바이사이클릭 헤테로아릴이고, 이들 각각은 1 내지 3개의 R²⁰으로 임의로 치환되고;
R²⁰은, 각각의 경우에 대해, H, 할로, -CN, 옥소, -C(O)R^20a, -C(O)NR^20a, -N(R^20a)₂, -N(R^20a)C(O)R^20a, -N(R^20a)S(O)₂R^20a, -OR^20a, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 포화 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R²⁰으로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 포화 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 각각 1 또는 2개의 R²⁵로 임의로 치환되고;
R^20a는, 각각의 경우에 대해, H 및 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R^20a로 표시되는 C_1-6알킬은 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환되고;
R²⁵는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, C_1-6알킬, 할로, -N(R^25a)₂, -OR^25a, C_1-6알킬, 할로, -N(R^25a)₂ 또는 -OR^25a로 임의로 치환된 페닐이고;
R^25a는 H 또는 C_1-6알킬인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제36항에 있어서, R²이 페닐 또는 1 내지 3개의 질소 원자를 함유하는 6-원 모노사이클릭 헤테로아릴이고, 여기서 페닐 및 6-원 모노사이클릭 헤테로아릴은 각각 1 내지 3개의 R²⁰으로 임의로 치환된, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제36항에 있어서, R²가 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 페닐, 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 2-아자스피로[3.3]헵타닐, 1H-인돌릴, 2,3-디하이드로-1H-벤조[d]이미다졸릴, 1H-벤조[d]이미다졸릴, 1,3,4-티아디아졸릴, 인돌리닐, 테트라하이드로-2H-피라닐, 피리디닐, 피리다지닐, 피라지닐, 옥세타닐, 테트라하이드로-2H-피라닐, 1H-벤조[d]이미다졸릴, 1H-인다졸릴, 이소크로마닐, 및 1,3-디하이드로이소벤조푸라닐로부터 선택되고, 이들 각각은 1개 또는 2개의 R²⁰으로 임의로 치환된, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제38항에 있어서, R²가 페닐, 피리디닐, 및 피라지닐로부터 선택되고, 이들 각각은 1 또는 2개의 R²⁰으로 임의로 치환된, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제37항에 있어서, R²는 하기 화학식으로 표시되고:

여기서 R²¹은 H, 할로, -CN, -C(O)R^20a, -C(O)NR^20a, -N(R^20a)₂, -N(R^20a)C(O)R^20a, -N(R^20a)S(O)₂R^20a, -OR^21a, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 포화 모노사이클릭 헤테로사이클릴이고, 여기서 R²¹로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 포화 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 각각 1 또는 2개의 R²⁵로 임의로 치환되고;
R^21a는 H 또는 C_1-6알킬이고, 여기서 R^21a로 표시되는 C_1-6알킬은 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환되고;
R²⁵는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 C_1-6알킬, 할로, -N(R^25a)₂, -OR^25a, C_1-6알킬, 할로, -N(R^25a)₂ 또는 -OR^25a로 임의로 치환된 페닐이고;
R^25a는 H 또는 C_1-6알킬이고;
r은 0, 1 또는 2인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제40항에 있어서, R^21a가 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환된 C_1-6알킬인, 화합물.
제40항에 있어서, R²¹이 H, -F, -Cl, -CH₃, -CH₂OH, -OCH₃, -OH, -OCH₂CH₂OCH₃, -OCH₂CH₂OH, -OCH₂CH₂N(CH₃)₂, (4-메톡시벤질)옥시, -NHCH₂CH₂OMe, -NHSO₂CH₃, 또는 -NHC(O)CH₃인, 화합물.
제36항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, R²⁰이, 각각의 경우에 대해, -F, -OH, -Cl, -CH₃, -CH₂CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH, -CH₂CH₂N(CH₃)₂, -CF₃, -OCH₃, -OCH₂CH₂OCH₃, -OCH₂CH₂OH, -OCH₂CH₂N(CH₃)₂, (4-메톡시벤질)옥시, 옥소, -C(O)CH₃, -NH₂, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -N(CH₃)(CH₂CH₂OCH₃), -NHCH₂CH₂OMe, -NHCH₂CH₂NHCH₃, -NHCH₂CH₂N(CH₃)₂, -NHSO₂CH₃, -NHSO₂CH₂CH₃, -NHC(O)CH₃, 아제틴-일, 3-아미노아제이티딘-1-일, 피페리딘-1-일, 모르폴리닐, 및 피롤리딘-1-일로부터 독립적으로 선택되는, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염..
제1항에 있어서, 상기 화합물이 화학식 (VIIA-1a), (VIIB-1a), (VIIC-1a), (VIID-1a), (VIIA-1b), (VIIB-1b), (VIIC-1b) 또는 (VIID-1b)로 표시되거나:

또는 그의 약제학상 허용되는 염이고, 여기서:
R³⁰은 H, 할로, CN, -OR^30a, 및 1 내지 3개의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고; R^30a는 H이거나 또는 1 내지 3개의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;
R²는 페닐 또는 1 내지 3개의 질소 원자를 함유하는 6-원 모노사이클릭 헤테로아릴이고, 여기서 페닐 및 6-원 모노사이클릭 헤테로아릴은 각각 1 내지 3개의 R²⁰으로 임의로 치환되고;
R²⁰은, 각각의 경우에 대해, 할로, 및 -N(R^20a)₂로부터 독립적으로 선택되고;
R^20a은, 각각의 경우에 대해, H 및 C_1-3알킬로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 2개의 R^20a는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환된 4- 내지 7-원 헤테로사이클릴을 형성하고;
R²⁵는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, C_1-6알킬, 할로, -N(R^25a)₂, 또는 -OR^25a이고;
R^25a는 H 또는 C_1-6알킬인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제44항에 있어서,
R³⁰은 할로 또는 C_1-3알킬이고;
R²은 페닐, 피리디닐 또는 피라지닐이고, 이들 각각은 -N(R^20a)₂로 임의로 치환되고;
R^20a은, 각각의 경우에 대해, H 또는 메틸이거나, 또는 2개의 R^20a는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 하나의 R²⁵로 임의로 치환된 4- 내지 6-원 헤테로사이클릴을 형성하고;
R²⁵는 -N(R^25a)₂이고;
R^25a는 H 또는 Me인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제45항에 있어서, R³⁰은 Cl 또는 메틸이고; R²는 페닐, 피리딘-3-일, 또는 피라진-2-일이고, 이들 각각은 -NH₂, 아제틴-1-일, 3-아미노아제틴-1-일 또는 3-(디메틸아미노)아제틴-1-일로 임의로 치환된, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제7항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IIa), (II-1a), (IIIa), (III-1a), (IVa), (IV-1a), (IVAa), (IVBa), (IVCa), (IVDa), (IVA-1a), (IVB-1a), (IVC-1a), (IVD-1a), (Va), (V-1a), (VAa), (VBa), (VCa), (VDa), (VA-1a), (VB-1a), (VC-1a), (VD-1a), (VIa), (VI-1a), (VIAa), (VIBa), (VICa), (VIDa), (VIA-1a), (VIB-1a), (VIC-1a), (VID-1a), (VIIA-1a), (VIIB-1a), (VIIC-1a), 또는 (VIID-1a)에 대해, R⁴, R⁵, R¹³, R¹⁴, R¹⁷ 및 R¹⁸은 모두 H이고, R⁹는 C_1-6알킬 또는 C_3-6사이클로알킬이고, 여기서 C_1-6알킬 및 C_3-6사이클로알킬은 각각 할로, CN, -OR^9a및 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되고; 여기서 R^9a는 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제47항에 있어서, R⁹가 1 내지 3개의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제47항에 있어서, R⁹가 -CH₃인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제7항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IIa), (II-1a), (IIIa), (III-1a), (IVa), (IV-1a), (IVAa), (IVBa), (IVCa), (IVDa), (IVA-1a), (IVB-1a), (IVC-1a), (IVD-1a), (Va), (V-1a), (VAa), (VBa), (VCa), (VDa), (VA-1a), (VB-1a), (VC-1a), (VD-1a), (VIa), (VI-1a), (VIAa), (VIBa), (VICa), (VIDa), (VIA-1a), (VIB-1a), (VIC-1a), (VID-1a), (VIIA-1a), (VIIB-1a), (VIIC-1a), 또는 (VIID-1a)에 대해, R⁵, R⁹, R¹³, R¹⁴, R¹⁷ 및 R¹⁸은 모두 H이고, R⁴는 C_1-6알킬, 할로, -CN 또는 -OR^4a이고, 여기서 C_1-6알킬은 할로, CN 및 -OR^4a로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되고; R^4a는 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제50항에 있어서, R⁴가 할로인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제50항에 있어서, R⁴가 F인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제7항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IIa), (II-1a), (IIIa), (III-1a), (IVa), (IV-1a), (IVAa), (IVBa), (IVCa), (IVDa), (IVA-1a), (IVB-1a), (IVC-1a), (IVD-1a), (Va), (V-1a), (VAa), (VBa), (VCa), (VDa), (VA-1a), (VB-1a), (VC-1a), (VD-1a), (VIa), (VI-1a), (VIAa), (VIBa), (VICa), (VIDa), (VIA-1a), (VIB-1a), (VIC-1a), (VID-1a), (VIIA-1a), (VIIB-1a), (VIIC-1a), 또는 (VIID-1a)에 대해, R⁴, R⁵, R¹⁴, R¹⁷ 및 R¹⁸는 모두 H이고, R¹³ 및 R⁹는 함께 할로, -OR^a, -N(R^a)₂ 및 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된 -C_1-3알킬렌-을 형성하고; 여기서 R^a는 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6 알킬인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제53항에 있어서, R¹³ 및 R⁹는 함께 할로, -OR^a, -N(R^a)₂ 및 C_1-3알킬로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 임의로 치환된 -CH₂CH₂-를 형성하고; 여기서 R^a는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-3 알킬인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제53항에 있어서, R¹³ 및 R⁹가 함께 -CH₂CH₂-를 형성하는, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제1항 내지 제55항 또는 제62항 내지 제65항 중 어느 한 항의 화합물 및 약제학상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
치료적 유효량의 제1항 내지 제55항 또는 제62항 내지 제65항 중 어느 한 항의 화합물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 질환 또는 장애를 치료하는 방법으로서, 여기서 질환 또는 장애는 RNA-변형 단백질 Z11에 의해 매개되는 것인, 방법.
제57항에 있어서, 상기 질환 또는 장애가 기준 수준과 비교하여 Lin28A 또는 Lin28B 수준의 증가를 특징으로 하는, 방법.
제57항에 있어서, 상기 질환 또는 장애가 기준 수준과 비교하여 let 7 miRNA 수준의 감소를 특징으로 하는, 방법.
제57항에 있어서, let 7 miRNA 수준의 감소가 Z11에 의해 매개되는 것인, 방법.
제57항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 암을 치료하기 위한 것인, 방법.
제1항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식 (IV-1a)로 표시되고:

여기서:
R¹은 F, Cl, CN 또는 CH₃이고;
R²는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 페닐, 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 2-아자스피로[3.3]헵타닐, 1H-인돌릴, 2,3-디하이드로-1H-벤조[d]이미다졸릴, 1H-벤조[d]이미다졸릴, 1,3,4-티아디아졸릴, 인돌리닐, 테트라하이드로-2H-피라닐, 피리디닐, 피리미디닐, 피리다지닐, 피라지닐, 옥세타닐, 테트라하이드로-2H-피라닐, 1H-벤조[d]이미다졸릴, 1H-인다졸릴, 이소크로마닐, 및 1,3-디하이드로이소벤조푸라닐로부터 선택되고, 이들 각각은 1 또는 2개의 R²⁰으로 임의로 치환되고;
R²⁰은, 각각의 경우에 대해, H, 할로, -CN, 옥소, -C(O)R^20a, -C(O)NR^20a, -N(R^20a)₂, -N(R^20a)C(O)R^20a, -N(R^20a)S(O)₂R^20a, -OR^20a, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 포화 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R²⁰으로 표시되는 C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬, 및 4- 내지 7-원 포화 모노사이클릭 헤테로사이클은 각각 1 또는 2개의 R²⁵로 임의로 치환되고;
R^20a은, 각각의 경우에 대해, H 및 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R^20a로 표시되는 C_1-6알킬은 하나 이상의 R²⁵로 임의로 치환되고;
R²⁵는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, C_1-6알킬, 할로, -N(R^25a)₂, -OR^25a, C_1-6알킬, 할로, -N(R^25a)₂ 또는 -OR^25a로 임의로 치환된 페닐이고;
R^25a은 H, C_1-6알킬, 또는 -OCH₃로 치환된 C_1-6알킬이고;
R³은 페닐, 피리디닐, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 1H-피롤로[2,3-c]피리디닐, 1H-이미다조[4,5-c]피리디닐, 1H-피롤로[2,3-b]피리디닐, 1H-이미다조[4,5-b]피리디닐, 1H-피롤로[3,2-b]피리디닐, 3H-이미다조[4,5-b]피리디닐, 또는 1H-이미다조[4,5-c]피리디닐이고, 이들 각각은 1 내지 3개의 R³⁰으로 임의로 치환되고;
R³⁰은, 각각의 경우에 대해, H, 할로, CN, -C(O)NR^30a, -N(R^30a)₂, -N(R^30a)C(O)R^30a, -N(R^30a)S(O)₂R^30a, -OR^30a, 및 C_1-6알킬이고, 여기서 C_1-6알킬은 1 내지 3개의 R³⁵로 임의로 치환되고;
R^30a는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, C_1-6알킬은 1 내지 3개의 R³⁵또는 C_3-6사이클로알킬로 임의로 치환되고;
R³⁵는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, 할로 또는 -OR^35a이고;
R^35a는 H 또는 C_1-3알킬이고;
R⁴는 H, 할로, -CN, -OR^4a, C_1-6알킬, 피리디닐, 또는 피라졸릴이고, 여기서 C_1-6알킬은 할로, CN 및 -OR^4a로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되고; 여기서 피리디닐, 또는 피라졸릴은 -OH, -C₁-C₆알킬 또는 -O-C₁-C₆알킬로 임의로 치환되고;
R^4a는 H, 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6알킬이거나, 또는 C₃-C₆ 사이클로알킬이고;
R⁵는 H 또는 할로이거나, 또는 R⁴ 및 R⁵는 함께 취하여 =NOH, 또는 =NHOCH₃이거나, 또는 R⁴ 및 R⁵는 이들이 연결된 탄소와 함께 C₃-C₆ 사이클로알킬을 형성하거나, 또는 R⁵　및 R¹³은 이들의 개재 원자와 함께 사이클로프로필을 형성하고;
R⁸, R¹³ 및 R¹⁴는 각각 H이고;
R⁹는 H, C₁-C₆ 알콕시 또는 C₁-C₆알킬이거나, 또는 R⁹ 및 R¹³은 함께 할로, -OR^a, -N(R^a)₂ 및 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된 -C_1-3알킬렌-을 형성하고; 여기서 R^a는, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H이거나 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C_1-6 알킬이고;
R¹⁷은 H, 할로 또는 C_1-6알킬이고
R¹⁸은 H, -OH, -O(C₁-C₆ 알킬) 또는 C_1-6알킬이거나, 또는 R¹⁷ 및 R¹⁸는 함께 취하여 =NOH 또는 =NHOCH₃)인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제1항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식 (IV-1a)로 표시되고:

여기서:
R¹은 F, Cl, CN 또는 CH₃이고;
R²는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 페닐, 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 2-아자스피로[3.3]헵타닐, 1H-인돌릴, 2,3-디하이드로-1H-벤조[d]이미다졸릴, 1H-벤조[d]이미다졸릴, 1,3,4-티아디아졸릴, 인돌리닐, 테트라하이드로-2H-피라닐, 피리디닐, 피리미디닐, 피리다지닐, 피라지닐, 옥세타닐, 테트라하이드로-2H-피라닐, 1H-벤조[d]이미다졸릴, 1H-인다졸릴, 이소크로마닐, 및 1,3-디하이드로이소벤조푸라닐로부터 선택되고, 이들 각각은 1 또는 2개의 R²⁰으로 임의로 치환되고;
R²⁰은, 각각의 경우에 대해, -F, -OH, -Cl, -CH₃, -CH₂CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH, -CH₂CH₂N(CH₃)₂, -CF₃, -OCH₃, -OCH₂CH₂OCH₃, -OCH₂CH₂OH, -OCH₂CH₂N(CH₃)₂, (4-메톡시벤질)옥시, 옥소, -C(O)CH₃, -NH₂, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -N(CH₃)(CH₂CH₂OCH₃), -NHCH₂CH₂OMe, -NHCH₂CH₂NHCH₃, -NHCH₂CH₂N(CH₃)₂, -NHSO₂CH₃, -NHSO₂CH₂CH₃, -NHC(O)CH₃, 아제틴-일, 3-아미노아제이티딘-1-일, 피페리딘-1-일, 모르폴리닐, 피롤리딘-1-일; 및 3-(디메틸아미노)아제틴-1-일 또는
로부터 독립적으로 선택되고;
R³은 페닐, 피리디닐, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 1H-피롤로[2,3-c]피리디닐, 1H-피롤로[3,2-c]피리디닐, 또는 1H-이미다조[4,5-c]피리디닐, 1H-이미다조[4,5-c]피리디닐, 1H-피롤로[2,3-b]피리디닐, 1H-이미다조[4,5-b]피리디닐; 1H-피롤로[3,2-b]피리디닐, 또는 3H-이미다조[4,5-b]피리디닐이고, 이들 각각은 1 내지 3개의 R³⁰으로 임의로 치환되고;
R³⁰은, 각각의 경우에 대해, H, F, Cl, Br, CN, -OCH₃, -O(사이클로프로필), -NH₂, -NH(CH₃)₂, -CH₃, -CH₂CH₃ 또는 -CF₃이고;
R⁴는 H, 할로, -CN, OR^4a, C_1-6알킬, 피리디닐, 또는 피라졸릴이고, 여기서 C_1-6알킬은 할로, CN 및 -OR^4a로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되고; 여기서 피리디닐, 또는 피라졸릴은 -OH, -CH₃ 또는 -OCH₃로 임의로 치환되고;
R^4a는 H, -CH₃,사이클로프로필 또는 하나 이상의 할로, 또는 사이클로프로필로 임의로 치환된 -CH₂CH₃이고;
R⁵는 H 또는 F이거나, 또는 R⁴ 및 R⁵는 함께 취하여 =NHOCH₃이거나, 또는 R⁴ 및 R⁵는 이들이 연결된 탄소와 함께 사이클로프로필을 형성하거나, 또는 R⁵　및 R¹³은 이들의 개재 원자와 함께 사이클로프로필을 형성하고;
R⁸, R¹³ 및 R¹⁴는 모두 H이고;
R⁹는 H 또는 -CH₃이거나, 또는 R⁹ 및 R¹³은 함께 -C₂알킬렌-을 형성하고;
R¹⁷은 H, F 또는 -CH₃이고;
R¹⁸은 H, -OH, -OCH₃또는 -CH₃이거나, 또는 R¹⁷ 및 R¹⁸은 함께 취하여 =NHOCH₃인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제1항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식 (IV-1a)로 표시되고:

여기서:
R¹은 F 또는 Cl이고;
R²는 피리디닐, 피리미니디닐 및 피리다지닐로부터 선택되고, 이들 각각은 R²⁰으로 치환되고;
R²⁰은, 각각의 경우에 대해, -NH_2,-NHCH₃, N(CH₃)₂, 및 4- 내지 7-원 포화 모노사이클릭 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R²⁰으로 표시되는 4- 내지 7-원 포화 모노사이클릭 헤테로사이클릴은 -N(R^25a)₂로 치환되고;
R^25a는 H, C_1-6알킬, 또는 -OCH₃로 치환된 C_1-6알킬이고;
R³은 피리디닐, 1H-이미다조[4,5-c]피리디닐, 1H-피롤로[2,3-b]피리디닐, 1H-피롤로[3,2-b]피리디닐 또는 3H-이미다조[4,5-b]피리디닐이고, 이들 각각은 1 내지 3개의 R³⁰으로 임의로 치환되고;
R³⁰은, 각각의 경우에 대해, H, 할로, C₁-C₆알킬, -N(R^30a)₂ 및 -OR^30a이고;
R^30a은, 각각의 경우에 대해, 독립적으로 H, C_1-6알킬 또는 C_3-6사이클로알킬이고;
R⁴는 H, 할로, -OR^4a, C_1-6알킬, 피리디닐, 또는 피라졸릴이고, 여기서 피리디닐, 또는 피라졸릴은 -OH, -C₁-C₆알킬 또는 -O-(C₁-C₆알킬)로 임의로 치환되고;
R^4a는 H, C_1-6알킬 또는 C₃-C₆ 사이클로알킬이고;
R⁵는 H 또는 할로이거나, 또는 R⁴ 및 R⁵는 함께 취하여 =NOH 또는 =NHOCH₃이거나, 또는 R⁴ 및 R⁵는 이들이 연결된 탄소와 함께 C₃-C₆ 사이클로알킬을 형성하거나, 또는 R⁵　및 R¹³은 이들의 개재 원자와 함께 사이클로프로필을 형성하고;
R⁸, R¹³ 및 R¹⁴는 각각 H이고;
R⁹는 H 또는 C₁-C₆알킬이고;
R¹⁷은 H, 할로, C₁-C₆알콕시 또는 C_1-6알킬이고;
R¹⁸은 H, 또는 C_1-6알킬인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.
제1항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식 (IV-1a)로 표시되고:

여기서:
R¹은 F 또는 Cl이고;
R²는 피리디닐, 피리미디닐 및 피리다지닐로부터 선택되고, 이들 각각은 R²⁰으로 치환되고;
R²⁰은 -NH₂, -NHCH₃, N(CH₃)₂, 3-(디메틸아미노)아제틴-1-일 또는
이고;
R³은 피리디닐, 1H-이미다조[4,5-c]피리디닐, 1H-피롤로[2,3-b]피리디닐, 1H-피롤로[3,2-b]피리디닐, 또는 3H-이미다조[4,5-b]피리디닐이고, 이들 각각은 1 내지 3개의 R³⁰으로 임의로 치환되고;
R³⁰은, 각각의 경우에 대해, H, Cl, CH₃, -OCH₃, -O(사이클로프로필), -NH₂, -NHCH₃ 또는 -N(CH₃)₂이고;
R⁴는 H, F, OH, -OCH₃, -O-(사이클로프로필), -C₁-C₃알킬, 피리디닐, 또는 피라졸릴이고, 여기서 피리디닐 또는 피라졸릴은 -OH, -CH₃, -OCH₃ 또는 -O(사이클로프로필)로 임의로 치환되고;
R⁵는 H 또는 F이거나, 또는 R⁴ 및 R⁵는 함께 취하여 =NHOCH₃이거나, 또는 R⁴ 및 R⁵는 이들이 연결된 탄소와 함께 사이클로프로필을 형성하거나, 또는 R⁵　및 R¹³은 이들의 개재 원자와 함께 사이클로프로필을 형성하고;
R⁸, R¹³및 R¹⁴는 각각 H이고;
R⁹는 H 또는 -CH₃이고;
R¹⁷은 H, F, -OCH₃ 또는 -CH₃이고;
R¹⁸은 H 또는 -CH₃인, 화합물, 또는 그의 약제학상 허용되는 염.